DK165416B - Fremgangsmaade til fremstilling af derivater af det antibiotisk virksomme cycliske peptid a-21978c - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af derivater af det antibiotisk virksomme cycliske peptid a-21978c Download PDFInfo
- Publication number
- DK165416B DK165416B DK457585A DK457585A DK165416B DK 165416 B DK165416 B DK 165416B DK 457585 A DK457585 A DK 457585A DK 457585 A DK457585 A DK 457585A DK 165416 B DK165416 B DK 165416B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- fermentation
- acid
- hours
- culture
- medium
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Treating Waste Gases (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
Description
i
DK 165416 B
Den foreliggende opfindelse angår en forbedret fremgangsmåde til fremstilling af kendte og hidtil ukendte derivater af det antibiotisk virksomme cycliske peptid benævnt A-21978C, som har den almene formel i r s.y* ΛΛ å i v ” /Vy-vj „ ^
Ht/»K ηλ'ΝΛΛΑ' y Y λ )~° Μ η ί-, j ./ > k« γχ/
0=· /e=0 H
P o w hX;
I i M
HOsC
25 hvori R betegner Cg-C^2-alJcanoyl · Fremgangsmåden er ejendommelig ved, at man leder den tilsvarende Cg-C^-a^-ken-syre eller en ester eller et salt deraf til dyrkningsmediet af en voksende A-21978C - producerende Strepto-myces roseosporus kultur udvalgt blandt NRRL 11379, NRRL 30 15998 eller en mutant deraf med væsentligt samme egenska ber, under produktionstrinnet af fermenteringen. Fordelene ved den omhandlede fremgangsmåde er, (1) at der er involveret færre reaktionstrin end i de kendte processer, (2) at produktudbyttet er forøget, og (3) at der kræves 35 mindre tid til gennemførelse af fremgangsmåden.
DK 165416 B
2 A-21978C-familien af antibiotika er fremragende antibak-terielle midler (se også Bernard J. Abbott, David, David S. Fukuda og Manuel Debono, US patentskrift nr.
4 537 717). Tidligere krævede fremstillingen af disse de-5 rivater en proces i adskillige trin, som var tidsforbrugende og kostbar, og som gav ringe udbytter. Med den foreliggende opfindelse tilvejebringes en forbedret fremgangsmåde, hvormed man direkte kan fremstille disse A-21978C-derivater. Den kendte fremgangsmåde til fremstil-10 ling af et derivat med formel I, såsom n-decanoyl-deriva-tet af A-21978C, krævede de følgende reaktionstrin: 1. Fermentering af den A-21978C-producerende kultur.
a. Opstart med en ampul med flydende nitrogen.
15 b. Primært podningstrin (48 timer).
c. Sekundært podningstrin (24 timer).
d. Tertiært podningstrin (24 timer).
e. Fermentering (140 timer).
20 2. Filtrering, adsorption på harpiks og eluering samt koncentrering.
3. Fremstilling af t-Boc (t-butoxycarbonyl-beskyttet) kompleks.
25 4. Koncentrering af det beskyttede kompleks.
5. Fermentering af den deacylerende kultur ved brug af f.eks. Actinoplanes utahensis.
30 a. Opstart med en ampul med flydende nitrogen.
b. Primært podningstrin (72 timer).
c. Sekundært podningstrin (48 timer).
d. Fermentering (67 timer).
35 6. Deacylering af komplekset med den deacylerende kultur.
DK 165416 B
3 7. Filtrering, adsorption på harpiks og eluering samt koncentration.
8. Reacylering.
5 9. Hydrolyse af den beskyttende gruppe.
10. Endelig rensning.
10 Ved den omhandlede nye fremgangsmåde sætter man en Cg-C^2~alkansYre (en ROH-forbindelse, hvori R har den ovenfor angivne betydning), eller en ester eller et salt deraf, til den A-21978C-producerende kultur under produktionstrinnet af fermenteringen (trin le) til dannelse af 15 den tilsvarende forbindelse med formel I. Med den omhandlede fremgangsmåde kan man eliminere trinnene 3, 4, 5, 6, 7, 8 og 9 i den kendte proces. Desuden bevirker den nye fremgangsmåde en væsentlig forøgelse af de opnåede udbytter i forhold til de udbytter, som kan opnås ved den 20 kendte fremgangsmåde.
Streptomyces roseosporus stammerne NRRL 11379 (A-21978.6) og NRRL 15998 (A-21978.65), en mutantstamme af NRRL 11379, er nyttige A-21978C-producerende kulturer. Disse 25 kulturer indgår i samlingen af stamkulturer hos the Northern Regional Research Center, US Department of Agriculture, Agricultual Research Service, Peoria Illinois 61604, hvorfra de er tilgængelige for offentligheden under deponeringsnumrene NRRL 11379 og NRRL 15998. S.
30 roseosporus NRRL 11379 kulturen og betingelserne for dennes anvendelse ved produktion af A-21978C-antibiotika er beskrevet af Robert L. Hamill og Marvin M. Hoehn i US patentskrift nr. 4 331 594.
35 S. roseosporus NRRL 15998 kulturen og betingelserne for dennes anvendelse ved produktion af A-21978C-antibiotikum er beskrevet i den af foreliggende patentansøgning af-
DK 165416B
4 delte danske patentansøgning nr. 1487/91. Yderligere skal det nævnes at NRRL 15998 kulturen er deponeret den 5. september 1985 i henhold til Budapesttraktaten.
5 De naturligt forekommende A-21978C-£aktorer beskrevet i US patentskrift nr. 4 331 594 er faktorerne Cq, C^, Cg,
Cg, C4, og Cg. I faktorerne C^, Cg/ Cg, C^ og Cg betegner R i formel I en specifik C^-C^-alkanoylgruppe. A-21978C faktor Cq, som tidligere formodedes at indeholde en 10 enkelt forgrenet C^-alkanoyl-sidekæde, har vist sig at bestå af en blanding af to komponenter i et omtrentligt forhold på 2:1. Hovedkomponenten indeholder en forgrenet C1Q-sidekæde, mens den mindre betydende komponent indeholder en ligekædet C^-sidekæde.
15 Når en forbindelse med formel I fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, betegnes den af bekvemmelighedsgrunde også som en A-21978C-faktor. Med undtagelse af de naturligt forekommende faktorer benytter man læng-20 den af sidekæden til at betegne faktoren. Eksempelvis vil en forbindelse med formel I, hvori R betegner octanoyl, blive benævnt en A-21978Cg-faktor, når den er fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen.
25 Alkyl-delen af Cg-C^-alkansyren, eller af esteren eller saltet deraf (substratet), som benyttes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, kan være en ligekædet eller forgrenet gruppe. Til fremstilling af de naturligt forekommende A-21978C-faktorer C^, Cg, Cg vil man f. eks. an-30 vende en 8-methyldecan-, 10-methyldodecan- eller 10-me-thylundecansyre eller en ester eller et salt deraf. Det foretrækkes at anvende de ligekædede Cg-C^g-syrer, estere og salte deraf ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, fordi de er let tilgængelige og billige. Et særligt fore-35 trukkent substrat er n-decansyre samt estere og salte deraf.
DK 165416B
5 Når man anvender en ester af en Cg-C^-alkansyre, foretrækker man C^-C^-alkylestere. I en sådan ester kan C^-C4-alkylgruppen også være ligekædet eller forgrenet.
5 Repræsentative egnede salte af Cg-C^-alkansyrer, som kan anvendes ved fremgangsmåden, omfatter salte dannet med alkalimetaller og jordalkalimetaller, såsom natrium, kalium, lithium, cæsium, rubidium, barium, calcium eller magnesium. Egnede aminsalte omfatter ammoniumsalte, pri-10 mære, sekundære og tertiære C-^-C^-alkyl ammoniumsal te og hydroxy-C2-C^-alkylammoniumsalte.
Fortrinsvis sættes substratet til fermenteringsmediet i form af en steril opløsning. Et særligt nyttigt opløs-15 ningsmiddel til dette er methyloleat, selv om man også kan anvende andre opløsningsmidler, såsom ethanol, ethyl-acetat og C^-C^-estere af umættede fedtsyrer. Hvis substratet er tilstrækkeligt flydende ved fermenteringstemperaturen, kan det tilsættes direkte.
20
Den hastighed, hvormed man tilsætter substratet, skal være tilstrækkeligt lav til, at man undgår at frembringe en toxisk indvirkning på fermenteringen, men også tilstrækkeligt højt til at forøge udbyttet af den ønskede forbin-25 delse med formel I. Tilsætningshastigheder på mellem ca.
0,05 og ca. 0,5 ml pr. liter fermenteringsvæske pr. time er at foretrække. En hastighed på mellem ca. 0,1 og ca.
0,2 ml pr. liter fermenteringsvæske er særligt foretruk-ken.
30
Substratet sættes til den voksende A-21978C-producerende kultur under produktionstrinnet af fermenteringen, idet tilsætningen påbegyndes efter mellem ca. 15 og ca. 32 timer og fortsættes indtil fermenteringen er tilendebragt.
35 Substratet kan tilsættes ved forskellige metoder, men det tilsættes fortrinsvis ved en metode, som giver den bedste tilnærmelse til en stabil strømning.
DK 165416B
6
Efter fermenteringen kan man, om ønsket, udvinde den frembragte forbindelse med formel I ved anvendelse af i sig selv kendte procedurer (se f. eks. US patentskrift nr. 4 331 594).
5
Dyrkningsmediet, som benyttes til dyrkning af kulturen Streptomyces roseosporus NRRL 15998, kan være valgt blandt en række forskellige medier. Af hensyn til en økonomisk produktion, et optimalt udbytte og en bekvem iso-10 lation af produktet foretrækker man imidlertid bestemte dyrkningsmedier. En foretrukken carbon-kilde til fermentering i stor målestok er således tapioca-dextrin, selv om man også kan anvende glucose, fructose, galactose, maltose, mannose, bomuldsfrøolie, methyloleat, glycerol, 15 raffineret sojabønneolie og lignende. En foretrukken nitrogen-kilde er enzym-hydrolyseret casein, selv om man også kan anvende opløseligt kød-pepton, sojabønnemel, sojabønnehydrolysat, grovmalede sojabønner, gær, aminosyrer, såsom L-asparagin og DL-leucin, og lignende. Næ-20 rende uorganiske salte, som kan inkorporeres i dyrkningsmediet, er opløselige salte, som kan tilvejebringe kaliumioner, ammoniumioner, chloridioner, sulfationer, nitrationer og lignende. Blandt disse salte er K2S04 særligt nyttigt til antibiotisk produktion. Melasse-aske, 25 aske-dialysater og syntetiske mineralblandinger er ligeledes nyttige.
Til produktion af A-21978C-antibiotika foretrækker man at anvende destilleret eller demineraliseret vand i fermen-30 teringsmediet. Visse af de mineraler, som findes i almindeligt ledningsvand, såsom calcium og carbonat, synes at påvirke den antibiotiske produktion i uheldig retning.
Væsentlige sporstoffer, som er nødvendige for organismens 35 vækst og udvikling, bør også forefindes i dyrkningsmediet. Sådanne sporstoffer optræder sædvanligvis som urenheder i de øvrige bestanddele af mediet i mængder,
DK 165416B
7 som er tilstrækkelige til at imødekomme organismens vækstkrav.
Det kan være nødvendigt at tilsætte små mængder (eksem-5 pelvis 0,2 ml/liter) af et anti-skummiddel, såsom poly-propylenglycol, ved fermentering i stor målestok, hvis skumning bliver et problem.
For at opnå tilpas store mængder A-21978C-antibiotika 10 foretrækker man submers aerob fermentering i tanke. Imidlertid kan man også opnå små mængder A-21978C-antibiotika ved rystef laskedyrkning. På grund af den tidsforsinkelse, i den antibiotiske produktion, som sædvanligvis er forbundet med podning af store tanke med en sporeform af or-15 ganismen, foretrækkes det at anvende et vegetativt podestof. Dette vegetative podestof fremstilles ved at pode et lille volumen af dyrkningsmediet med spore formen eller med myceliske fragmenter af organismen med henblik på at opnå en frisk, aktivt voksende kultur af organismen. Det 20 vegetative podestof overføres derefter til en større tank.
Den A-21978C-producerende organisme kan dyrkes ved temperaturer på mellem ca. 20 og ca. 40 °C. Den optimale A-25 21978C-produktion synes at optræde ved temperaturer på omkring 30 - 32 °C.
Som det er sædvane ved aerobe submerse dyrkningsprocesser, dispergerer man steril luft i dyrkningsmediet. For 30 at opnå en effektiv produktion af A-21978C-antibiotikum-met bør den procentvise luftmætning ved tankproduktion være over 20%, fortrinsvis over 30% (ved 30 "C og et tryk på 1 atmosfære).
35 Ved tankfermentering foretrækkes det at holde fermenteringsmediets pH-niveau i et område fra omkring 6,5 til omkring 7,0. Dette kan gøres ved at tilsætte passende
DK 165416B
8 mængder af eksempelvis natriumhydroxid (i de tidlige trin) og saltsyre (i de senere trin).
Produktionen af A-21978C-antibiotikummet kan følges under 5 fermenteringen ved at teste prøver af væsken eller af ekstrakter af myceliets faste bestanddele for antibiotisk aktivitet over for organismer, som vides at være sensitive over for disse antibiotika. En sådan prøveorganisme, som er nyttig til at teste disse antibiotika, er 10 Micrococcus luteus. Prøven gennemføres fortrinsvis som en papirskive-prøve på agarplader.
Alternativt kan de faste bestanddele fra dyrkningen, herunder bestanddele af mediet og myceliet, benyttes uden 15 ekstraktion eller separation, men fortrinsvis efter fjer nelse af vand, som en kilde for de omhandlede A-21978C-antibiotika. Efter produktion af den antibiotiske A-21978C-aktivitet kan man f. eks. tørre dyrkningsmediet ved lyofilisering og blande det direkte med en foderblan-20 ding.
De ved den omhandlede fremgangsmåde fremstillede forbindelser med formel I er fremragende antibakterielle midler.
25
Opfindelsen illustreres nærmere ved de følgende eksempler. 1 35 9
DK 165416 B
EKSEMPEL 1
Fremstilling af A-21978C-komplekset 5
Man fremstillede en stamkultur, som holdes i dampfasen af flydende nitrogen. Streptomyces roseosporus NRRL 15998, som indtil anvendelsen var blevet opbevaret i dampfasen af flydende nitrogen, benyttedes til at pode 50 ml af et 10 vegetativt medium med følgende sammensætning:
Ingrediens Mængde (%)
Trypticase-soj avæske| 3,0 15 Dextrin 2,5
Vand (demineraliseret) 94,5 IBaltimore Biological Laboratories, Cockeysville, MD.
20 Det podede medium blev inkuberet i en 250 ml Erlenmeyer-kolbe ved 30 °C i 48 timer på et rysteapparat, der roterede i en bue med diameter 5 cm og med en omdrejningshastighed på 250 omdr./min. Den modne vegetative kultur blev fordelt i et antal beholdere (0,5 ml/beholder) og 25 opbevaret i dampfasen af flydende nitrogen.
Med henblik på at opnå en større ensartet forsyning af opbevaret materiale benyttede man 1 ml af kulturen, som opbevaredes i flydende nitrogen, til at pode 80 ml af det 30 ovenfor beskrevne vegetative medium. Det podede vegetative medium blev inkuberet i en 250 ml Erlenmeyer-kolbe ved 30 °C i 48 timer på et rysteapparat, der roterede i en bue med en diameter på 5 cm og en omdrejningshastighed på 250 ommdr./min.
10 ml af en sådan kultur blev benyttet til at pode 450 ml af et vegetativt vækstmedium i andet trin, hvilket medi- 35
DK 165416 B
10 um havde samme sammensætning som det primære vegetative medium beskrevet ovenfor. Dette medium i andet trin blev inkuberet i 2 liter Erlenmeyer-kolbe i 24 timer ved 30 °C på et rysteapparat, der roterede i en cirkelbue med en 5 diameter på 5 cm og med en omdrejningshastighed på 250 omdr./min.
1 liter af den vegetative kultur i andet trin blev benyttet til at pode 39 liter af et sterilt tertiært udvik-10 lingsmedium med følgende sammensætning:
Ingrediens Mængde (%)
Soj abønnemel 0,5 15 Gærekstrakt 0,5
Calciumgluconat 1,0 KClb 0,02
MgS04.7H20b 0,02
FeS04.7H20b 0,0004 20 Sag 471 (antiskummiddel)c 0,03
Vand 97,9296 g
Difco Laboratories, Detroit MI
25 b Spormineralerne fremstilledes som følger: FeS04.7H20 (7,6 g) blev opløst i koncentreret HC1 (76 ml).
MgS04.7H20 (380 g), KC1 (380 g) og demineraliseret vand tilsattes til opnåelse af et totalt volumen på 3800 ml.
Til opnåelse af de specificerede mineraler benyttes 80 ml 30 af opløsningen pr. 39 liter tertiært podningsmedium.
c Union Carbide, Danbury CT.
Det podede medium blev inkuberet i 24 timer i en rustfri 35 stålbeholder ved 30 °C. Beholderen blev beluftet med steril luft i en mængde på 0,85 v/v/min. og omrørt med konventionelle omrøringsorganer, der roterede med 350 - 450
DK 165416B
11 omdr./min. Trykket i beholderen blev holdt på 0,35 kg/cm2.
1 liter af det inkuberede tertiære podningstrin blev be-5 nyttet til at pode 119 liter af et sterilt produktionsmedium med følgende sammensætning:
Ingrediens Mængde (%) 10 Sojabønnemel 2,2
Fe(NH4)2S04.6H20 0,066
Dextrose 0,825
Sag 471 0,022
Kartoffeldextrin 3,3 15 Melasse (mørk sirup) 0,275
Ledningsvand 93,312
Efter tilsætning af de første 2 ingredienser blev pH indstillet til 7,0, og denne indstilling blev gentaget, e£-20 ter at alle ingredienser var blevet tilsat umiddelbart før sterilisation.
Det podede produktionsmedium blev inkuberet i 6 dage i en rustfri stålbeholder ved 30 °C og beluftet med steril 25 luft i en mængde på 0,5 v/v/min. Mediet blev omrørt ved hjælp af konventionelle omrøringsorganer, der roterede med en omdrejningshastighed på 250 omdr./min. i de første 15 timer og derefter med 350 omdr./min. Blandingens pH-værdi blev holdt på eller over 6,5 ved tilsætning af en 30 s ammoniumhydroxidopløsning. Udbyttet af A-21978C-komplek- set var 0,282 g pr. liter fermenteringsvæske ved afslutningen af fermenteringen. Fordelingen af faktorer fremgår af den efterfølgende tabel 1.
35
DK 165416B
12 EKSEMPEL 2
Forøget produktion af A-21978Cg 5
Det primære, sekundære og tertiære væksttrin blev gennemført som beskrevet i eksempel 1. Produktionstrinnet blev iværksat som beskrevet i eksempel 1 med den undtagelse, at man efter 28 timers forløb begyndte at lede en steril 10 opløsning, der bestod af 50% (v/v) caprylsyre (octansyre) og methyloleat, til fermenteringsvæsken med en hastighed på 0,13 ml pr. liter fermenteringsvæske pr. time, idet man opretholdt denne tilsætningshastighed indtil afslutningen af fermenteringen efter 144 timers forløb. Udbyt-15 tet af A-21978C-komplekset var 1,255 g pr. liter væske svarende til en udbyttestigning på 445% i forhold til udbyttet fra eksempel 1. Faktor A-21978Cg (forbindelsen med formel I, hvori R er octanoyl) repræsenterede 9% af det totale A-21978C-kompleks fremstillet ved denne metode.
20 Der kunne ikke påvises nogen faktor A-21978Cg i det A-21978C-kompleks, der fremstilledes ved metoden fra eksempel 1.
EKSEMPEL 3 25
Forøget produktion af A-2l978Cg
De primære, sekundære og tertiære podnings- og udvik-30 lingstrin blev gennemført som beskrevet i eksempel 1. Produktionstrinnet blev påbegyndt som beskrevet i eksempel 1 med den undtagelse, at man efter 28 timers forløb begyndte at lede en steril opløsning, der bestod af 25% (v/v) nonansyre og 75% methyloleat, til fermente-35 ringsvæsken i en mængde på 0,13 ml pr. liter fermenteringsvæske pr. time, idet man opretholdt denne tilledningshastighed indtil afslutningen af fermenteringen ef-
DK 165416B
13 ter 144 timers forløb. Udbyttet af A-21978C-komplekset var 0,821 g pr. liter væske, hvilket svarede til en forøgelse på 293% i forhold til det udbytte, der opnåedes i eksempel 1. Faktor A-21978Cg (formel I, hvor R er 5 nonanoyl) repræsenterede 10% af det totale A-21978C-kom- pleks fremstillet ved denne metode. Der kunne ikke påvises nogen faktor A-21978Cg i det A-21978C-kompleks, der blev fremstillet ved metoden ifølge eksempel 1.
10 EKSEMPEL 4
Forøget produktion af A-21978C^Q-faktoren (formel I, hvor R er n-decanoyl) 15
De primære og sekundære vegetative væksttrin blev dyrket som beskrevet i eksempel 1. I det tertiære trin benyttedes 800 ml af den sekundære podekultur til at pode 950 liter af et sterilt tertiært udviklingsmedium med føl-20 gende sammensætning:
Ingrediens Mængde (%)
Dextrose 2,0 25 Calciumcarbonat 0,2
Sojabønnemel 2,0 Gærekstrakt 0,1 KCla 0,02
MgSO4.7H20a 0,02 30 FeS04.7H2Oa 0,0004
Sag 471 (antiskummiddel) 0,02
Vand 95,6396 a Opløsningen af spormineraler fremstilledes som beskre-35 vet i eksempel 1.
14
DK 165416 B
Det podede medium blev inkuberet i 24 timer i en rustfri stålbehodler ved 30 °C. Beholderen blev beluftet med steril luft i en mængde på 0,8 v/v/min. og omrørt med konventionelle omrøringsorganer. 1 liter af dette ter-5 tiære podningsmedium blev benyttet til at pode 119 liter af et produktionsmedium med den i eksempel 1 beskrevne sammensætning. Produktionstrinnet blev også påbegyndt som beskrevet i eksempel 1 med den undtagelse, at man efter 28 timers forløb begyndte at lede en steril opløsning, 10 der bestod af 50% (v/v) caprinsyre (decansyre) og 50% me-thyloleat, til fermenteringsvæsken i en mængde på 0,26 ml pr. liter fermenteringsvæske pr. time, idet man opretholdt denne tilledningshastighed, indtil fermenteringen blev afsluttet efter 283 timers forløb. Udbyttet af A-15 21978C-komplekset var 1,94 g pr. liter fermenteringsvæske, hvilket svarede til en forøgelse på 687% i forhold til udbyttet opnået i eksempel 1. Koncentrationen af faktor A-21978C^q (formel I, hvor R er n-decanoyl) var 1,63 g pr. liter eller 84% af det totale A-21978C-kompleks.
20 Denne mængde var 13583% større end den mængde A-21978C^q, som opnåedes ved anvendelse af proceduren fra eksempel 1.
EKSEMPEL 5 25 Alternativ metode til forøget produktion af A-21978C^q
De primære, sekundære og tertiære podnings- og udviklingstrin blev gennemført som beskrevet i eksempel 1.
30 Produktionstrinnet blev iværksat som beskrevet i eksempel 1 med den undtagelse, at man efter 28 timers forløb begyndte at lede en steril opløsning, der bestod af 25% (v/v) caprinsyreethylester (ethylcaprat) og 75% methyl-oleat, til fermenteringsvæsken med en hastighed på 0,13 35 ml pr. liter fermenteringsvæske pr. time. Man opretholdt denne tilledningshastighed, indtil fermenteringen blev afsluttet efter 144 timers forløb. Udbyttet af A-21978C-
DK 165416 B
15 komplekset var 1,022 g pr. liter væske, hvilket var en forøgelse på 362% i forhold til udbyttet fra eksempel 1. Koncentrationen af faktor A-21978C1q var 0,202 g pr. liter eller 20% af det totale A-21978C-kompleks. Denne 5 koncentration var 1683% større end koncentrationen af A-21978C10 opnået ved metoden fra eksempel 1.
EKSEMPEL 6 10 Alternativ metode til forøgelse af produktionen af A-21978C10 i
De primære og sekundære vegetative væksttrin blev dyrket 15 som beskrevet i eksempel 1. Det tertiære podestof blev dyrket som beskrevet i eksempel 4 med den undtagelse, at mediets volumen var 1900 liter, og at varigheden af dette trin blev forøget til 48 timer. Beluftningshastigheden var 0,3 v/v/min. i timerne 0 - 24, 0,45 v/v/min. i timer-20 ne 24 - 40 og 0,90 v/v/min. i timerne 40 - 48. Produktionstrinnet blev iværksat som beskrevet i eksempel 1.
Efter 23 timers forløb blev en steril opslæmning af 0,004% gærekstrakt portionsvis sat til fermenteringsmediet. Efter 36 tiemrs forløb begyndte man at tilsætte en 25 opløsning af glycerol og ammoniumdecanoat, som tilførtes med en hastighed på 0,84 ml pr. liter fermenteringsvæske pr. time. Denne fødeopløsning indeholdt glycerol (3600 g), demineraliseret vand (9000 ml), caprinsyre (1 liter) og en koncentreret ammoniumhydroxidopløsning (620 ml).
30 Tilledningen fortsattes med denne hastighed, indtil fermenteringen afsluttedes efter 143 timers forløb. Udbyttet af A-21978C-komplekset var 1,772 g pr. liter, hvilket svarede til en forøgelse på 628% i forhold til udbyttet fra eksempel 1. Koncentrationen af faktor A-21978C^q blev 35 bestemt til at være 0,739 g pr. liter eller 42% af det totale A-21978C-kompleks. Denne koncentration var 6158% større end koncentrationen af A-21978C1q fremstillet ved 16
DK 165416 B
metoden beskrevet i eksempel 1.
EKSEMPEL 7 5 Forøget produktion af A-21978C^
De primære, sekundære og tertiære podningstrin blev gennemført som beskrevet i eksempel 1. Produktionstrinnet 10 blev iværksat som beskrevet i eksempel 1 med den undtagelse, at man efter 28 timers forløb begyndte at lede en steril opløsning, der bestod af 25% (v/v) undecansyre og 75% methyoleat, til fermenteringsmediet med en hastighed på 0,13 ml pr. liter fermenteringsvæske pr. time, idet 15 man fortsatte denne tilledning, indtil fermenteringen blev afsluttet efter 144 timers forløb. Udbyttet af A-21978C-komplekset var 1,62 g pr. liter væske, hvilket svarede til en forøgelse på 574% i forhold til udbyttet opnået i eksempel 1. Faktor A-21978C11 (formel I, hvor R 20 er undecanoyl) blev bestemt til at være 0,70 g pr. liter eller 43% af det totale A-21978C-kompleks. Faktor A-219780^ kunne ikke påvises i det A-21978C-kompleks, som fremstilledes ved metoden ifølge eksempel 1.
25 EKSEMPEL 8
Forøget produktion af A-21978C,- 30 De primære, sekundære og tertiære podningstrin blev gennemført som beskrevet i eksempel 1. Produktionstrinnet blev iværksat som beskrevet i eksempel 1 med den undtagelse, at man efter 28 timers forløb begyndte at lede en steril opløsning, der bestod af 25% (v/v) laurinsyre og 35 75% methyoleat, til fermenteringsmediet med en hastighed på 0,13 ml pr. liter fermenteringsvæske pr. time. Man fortsatte tilledningen indtil fermenteringens afslutning
DK 165416B
17 efter 144 timers forløb. Udbyttet af A-21978C-komplekset var 1,12 g pr. liter væske, svarende til en forøgelse på 400% i forhold til udbyttet opnået i eksempel 1. Koncentrationen af faktor A-21978Cg (formel I, hvor R er dode-5 canoyl) blev bestemt til at være 0,372 g pr. liter eller 33% af det totale A-21978C-kompleks. Denne koncentration var 5314% større end koncentrationen af A-21978Cg,som blev fundet i A-21978CgC-komplekset fremstillet ved metoden fra eksempel 1.
10 15 20 25 1 35
DK 165416 B
18 μ
<D
to
H
Φ
Hil Ό
Hil β
O I O I · H
I I i I I I O i n c Λ
I I I I I I Γ*· I ·© 0 M
I Λ H O
i -μ tu O I o Ό Ό Ό Ό a h icmooocmo'coco φ μ ιι O IHE^O'OOOCOHIS >0
I H VO CM C*·· Η H CO H
I Η μ J3 H
i E (0 U
i Φ w o> i i -μ -μ οι X O I I CO to φ o
Φ I I 00 1 I I I I φ H
H I I I I I I I i} o o
a I HH
ΕΛ I > > O
0 v I φ (0 X (0 CO I CO H μ < I"" u IIHIIIIII Λ-μ σ'
OH IIHIIIIII H O
oo E i Φ 3
0s· S I X
σ> O) i to Ό oo ·
Η Λ LO I IS Si 0) UH
Nw o i in is s h co n n >> >i 1 i s O' s in o is ts *«>0 < μ i HH cm n η Φ-μ μ β β i Ό co Φ Φ HQ) I φ Η μ Jd cofi co icm^iocoococoh μ> oh o o iNHN'tfinNinni φ »co μ <d β a i η η h cn η η μ a λ: i φ ε i μ co η
β O I H > HH
0 I Η φ I U
•Η I I (H i—i y Η μ U CM I OOCMISOlOHvOvO λ oo 0)
X CO U IHHISW^ISOCO β ISO
H 3 IS IHCOH CM CO CM CM φμ O'
φ Ό O' I Ό Φ Η I
λ ο η ι -μ cm ο (0 μ CM I Η .μ I Η Ε-. a I η ι svosincoinco'M' β < ο < U ItSIS^COOCOOO μφ Η •(0 I CMHHHC0HCM Φβ Φ» ΪΝ a -μ ο ό ι ο β a β σ' β μ φ ε φ ο to φ β ο ε ο μ ο X ε » Φ to a ο ι ό μ ε φ χ οο ι •μ ο Ο) φ ο β CG X Η μ
Λ Η 0 W II
3 Φ Η Η Η ω χ φ > οί
1 CQ X μ CD
Ό Η CO Ο) Ό Φ Η -μ μ Η Η 0) a μ ο ο η ο η Η Φ Η Η μ X! Η η -μ λ 3 β -μ CQ Η φ μ φ β φ φμ μ-ΟΦΛΦ o» μ η «ο β β to ned >ιθ to ·*> μ s Η μ .β β Η II Φ > η μ μ cd Φ η Φ II) ΦΟΦ Ocd met; μ χ si φφφφμφ μ ο φ co 3 μ φ μ μ ό ί* μ η οι η ο ό μ ω >ι μ >ι >i ε w >ι cd ο ο μ υ ΟΙ Μ >< 0) Μ 3 β CQ μ ΟΟ Η η ό η co β β ·η cd β β® >μ Η μ^βΗΗβΟΗ ΦΕ OJS 0 Φ na φμιομμοομ βο ο μμ «π μaβaaε¾3 ομ * æ J ficdOtdCOEfiiO ·ΗΛ - Η (0 > en huzuu<dj μο cm η β (d φ υ Η μ η μ χ φ ο to β · μ to » ε η λ μ fi æ η μ η μ μβ φ>υομφ η ο C0 Η 3 Ό > β χ * μ β Ό CO Ο >ι Ο Ό (0 3 c χ «μοΦΕΗ η ω HCMCo-'tfinvotsco co μ ΛΕΟΌ 19 EKSEMPEL 9
Alternativ fremstilling af A-21978C-komplekset 5
Man fremstiller A-21978C-komplekset ved anvendelse af proceduren fra eksempel 1, idet man dog benytter kulturen Streptomyces roseosporus NRRL 11379.
10 EKSEMPEL 10
Alternativ metode til forøget A-21978C^Q-produktion 15 Man fremstiller A-21978C^q ved anvendelse af fremgangs måden ifølge eksempel 6, idet man benytter kulturen Streptomyces roseosporus NRRL 11379.
EKSEMPEL 11 20
Rysteflaske-produktion af A-2l978C-komplekset
Man benytter den generelle procedure beskrevet i eksempel 25 1, idet man dog anvender rysteflaske-betingelser med føl gende fermenteringsmedium:
Ingrediens Mængde (g/1) 30 Glucose 7,5
Dextrin3 30
Enzym-hydrolyseret casein*3 5
Pepton 5
Melasse 2,5 35 Demineraliseret vand op til 1 liter 20
DK 165416 B
aStadex 11, A.E. Staley Co., Decatur IL
^NZ Amine A, Humko Sheffield Chemical, Lyndhurst NJ
5 cBiosate, Baltimore Biological Laboratories, Cockeysville MD.
Udbyttet af A-21978C-kompleks ved denne fermentering er 1800 ug pr. ml fermenteringsvæske.
10 15 20 25 30 35
Claims (6)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af derivater af et an-5 tibiotisk virksomt cyclisk peptid benævnt A-21978C, hvilke derivater har den almene formel I r 10 /*\ /ch° / \/ \ HC./ V Λ v K i l H /0Nfte is > H . d K l Η A ί—j/xr > / io2H VV 20 °“*\ =° A η°<Π7* Γ ! X./\/\/H* \/ \ / \ / x# i i J 1 o, 25 hvori R betegner en Cg-C^2_alkan°y1gruPPe/ kendetegnet ved, at man leder den tilsvarende Cg-C12-alkansyre eller en ester eller et salt deraf til dyrk-30 ningsmediet af en voksende A-21978C-producerende Strep-tomyces roseosporus kultur udvalgt blandt NRRL 11379, NRRL 15998 eller en mutant deraf med væsentligt samme egenskaber, under produktionstrinnet af fermenteringen.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man anvender en Cg-C12-alkansyre. DK 165416 B
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man anvender en C^-C^-alkylester af en Cg-C-^-al-kansyre.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man anvender et salt af en Cg-C^2_alkansyre.
5. Fremgangsmåde ifølge ethvert af kravene 1-4, kendetegnet ved, at man anvender caprinsyre eller en 10 ester eller et salt deraf.
6. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den anvendte C8-Ci2~alkansyre er caprylsyre, no-nansyre, undecansyre, laurinsyre eller en ester eller et 15 salt af en af disse syrer. 20 25 1 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US65897984A | 1984-10-09 | 1984-10-09 | |
| US65897984 | 1984-10-09 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK457585D0 DK457585D0 (da) | 1985-10-08 |
| DK457585A DK457585A (da) | 1986-04-10 |
| DK165416B true DK165416B (da) | 1992-11-23 |
| DK165416C DK165416C (da) | 1993-04-05 |
Family
ID=24643546
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK457585A DK165416C (da) | 1984-10-09 | 1985-10-08 | Fremgangsmaade til fremstilling af derivater af det antibiotisk virksomme cycliske peptid a-21978c |
| DK148791A DK165757C (da) | 1984-10-09 | 1991-08-21 | Biologisk ren kultur af mikroorganismen streptomyces roseosporus nrrl 15998 samt en fremgangsmaade til fremstilling af det antibiotisk virksomme a-21978c kompleks eller en eller flere af dettes faktorer co' c1' c2' c3' c4' og c5' under anvendelse af mikroorganismen |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK148791A DK165757C (da) | 1984-10-09 | 1991-08-21 | Biologisk ren kultur af mikroorganismen streptomyces roseosporus nrrl 15998 samt en fremgangsmaade til fremstilling af det antibiotisk virksomme a-21978c kompleks eller en eller flere af dettes faktorer co' c1' c2' c3' c4' og c5' under anvendelse af mikroorganismen |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0178152B1 (da) |
| JP (1) | JPH0787796B2 (da) |
| KR (1) | KR890000800B1 (da) |
| CN (2) | CN1013120B (da) |
| AT (1) | ATE67788T1 (da) |
| AU (2) | AU4837785A (da) |
| BG (1) | BG47040A3 (da) |
| CS (2) | CS276983B6 (da) |
| CY (1) | CY1633A (da) |
| DD (2) | DD238068A5 (da) |
| DE (1) | DE3584218D1 (da) |
| DK (2) | DK165416C (da) |
| EG (1) | EG17619A (da) |
| ES (2) | ES8700862A1 (da) |
| FI (1) | FI82075C (da) |
| GR (1) | GR852432B (da) |
| HK (1) | HK24292A (da) |
| HU (1) | HU196845B (da) |
| IE (1) | IE58655B1 (da) |
| IL (1) | IL76608A (da) |
| NZ (1) | NZ213731A (da) |
| PH (1) | PH21217A (da) |
| PL (1) | PL152359B1 (da) |
| PT (1) | PT81265B (da) |
| SG (1) | SG3292G (da) |
| SU (1) | SU1452484A3 (da) |
| ZA (1) | ZA857759B (da) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0294990A3 (en) * | 1987-06-10 | 1990-05-09 | Eli Lilly And Company | Chromatographic purification process |
| US4930494A (en) * | 1988-03-09 | 1990-06-05 | Olympus Optical Co., Ltd. | Apparatus for bending an insertion section of an endoscope using a shape memory alloy |
| US4977083A (en) * | 1988-04-11 | 1990-12-11 | Eli Lilly And Company | Processes for preparing A54145 compounds |
| DE3832362A1 (de) * | 1988-09-23 | 1990-03-29 | Sandoz Ag | Neue cyclopeptolide, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| MXPA02006030A (es) * | 1999-12-15 | 2004-08-23 | Cubist Pharm Inc | Lipopeptidos como agentes antibacterianos. |
| AU784755B2 (en) | 1999-12-15 | 2006-06-08 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Daptomycin Analogs as antibacterial agents |
| US6696412B1 (en) | 2000-01-20 | 2004-02-24 | Cubist Pharmaceuticals, Inc. | High purity lipopeptides, Lipopeptide micelles and processes for preparing same |
| US20060014674A1 (en) | 2000-12-18 | 2006-01-19 | Dennis Keith | Methods for preparing purified lipopeptides |
| RU2512396C2 (ru) | 2008-12-22 | 2014-04-10 | Кьюбист Фармасьютикалз, Инк. | Новые противобактериальные средства для лечения грамположительных инфекций |
| PE20151717A1 (es) | 2009-11-23 | 2015-11-19 | Cubist Pharm Inc | Compuestos lipopeptidos y metodos relacionados |
| MX2013015434A (es) | 2011-06-22 | 2014-10-14 | Vyome Biosciences Pvt Ltd | Profarmacos antifungicos y antibacterianos a base de conjugado. |
| IT201600127655A1 (it) | 2016-12-16 | 2018-06-16 | Gnosis Spa | Processo per la purificazione di antibiotici lipopolipeptidici |
| CN107964557B (zh) * | 2018-01-17 | 2020-11-20 | 自然资源部第三海洋研究所 | 一种提高芽孢杆菌抗菌脂肽产量的发酵方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4208403A (en) * | 1978-10-16 | 1980-06-17 | Eli Lilly And Company | A-21978 Antibiotics and process for their production |
| IL68700A0 (en) * | 1982-05-21 | 1983-09-30 | Lilly Co Eli | Improvements relating to a-21978c cyclic peptide derivatives and their production |
-
1985
- 1985-10-08 PL PL1985255683A patent/PL152359B1/pl unknown
- 1985-10-08 KR KR1019850007397A patent/KR890000800B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 NZ NZ213731A patent/NZ213731A/en unknown
- 1985-10-08 DK DK457585A patent/DK165416C/da not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 JP JP60225925A patent/JPH0787796B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-10-08 AT AT85307185T patent/ATE67788T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 EP EP85307185A patent/EP0178152B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-10-08 HU HU853912A patent/HU196845B/hu unknown
- 1985-10-08 PT PT81265A patent/PT81265B/pt unknown
- 1985-10-08 IL IL76608A patent/IL76608A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 CN CN85107552A patent/CN1013120B/zh not_active Expired
- 1985-10-08 CS CS868192A patent/CS276983B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 ZA ZA857759A patent/ZA857759B/xx unknown
- 1985-10-08 CN CN90109304A patent/CN1051200A/zh active Pending
- 1985-10-08 PH PH32894A patent/PH21217A/en unknown
- 1985-10-08 FI FI853910A patent/FI82075C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 SU SU853964395A patent/SU1452484A3/ru active
- 1985-10-08 GR GR852432A patent/GR852432B/el unknown
- 1985-10-08 DE DE8585307185T patent/DE3584218D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-10-08 DD DD85281515A patent/DD238068A5/de not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 ES ES547689A patent/ES8700862A1/es not_active Expired
- 1985-10-08 AU AU48377/85A patent/AU4837785A/en not_active Abandoned
- 1985-10-08 IE IE246685A patent/IE58655B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 EG EG634/85A patent/EG17619A/xx active
- 1985-10-08 CS CS857198A patent/CS276978B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 BG BG71957A patent/BG47040A3/xx unknown
-
1986
- 1986-03-25 DD DD86288284A patent/DD247023A5/de unknown
- 1986-04-01 ES ES553603A patent/ES8800362A1/es not_active Expired
-
1990
- 1990-04-20 AU AU53752/90A patent/AU634766B2/en not_active Expired
-
1991
- 1991-08-21 DK DK148791A patent/DK165757C/da not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-01-11 SG SG32/92A patent/SG3292G/en unknown
- 1992-04-02 HK HK242/92A patent/HK24292A/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-11-06 CY CY1633A patent/CY1633A/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1313155C (en) | Antibiotic compounds and their preparation | |
| TWI291464B (en) | Methods for the preparation, isolation and purification of epothilone B, and X-ray crystal structures of epothilone B | |
| DK165416B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af derivater af det antibiotisk virksomme cycliske peptid a-21978c | |
| WO1994023056A1 (en) | Process for isolating a83543 and its components | |
| JPH05130860A (ja) | Ｆｋ−５０６の新規な製造方法 | |
| JPH05178895A (ja) | シクロヘキサペプチド化合物 | |
| US5089521A (en) | 10-membered ring lactones, a process for the preparation thereof, and the use thereof | |
| WO2006011156A1 (en) | Process for producing tacrolimus (fk - 506) using vegetable oil as sole source of carbon | |
| JP2746372B2 (ja) | Ｆ−０３６８物質 | |
| JP2828343B2 (ja) | 天然アベルメクチンの沈殿方法 | |
| US4202819A (en) | 2-(3-Alanyl)clavam antibiotic | |
| JPH0460474B2 (da) | ||
| US2695261A (en) | Production of polymyxins a, b, and e | |
| EP0034009B1 (en) | Process for preparing polyether antibiotic | |
| US4360593A (en) | Process of producing a peptide antibiotic with Bacillus circulans | |
| CS207693B2 (en) | Method of making the antibiotic a 40104 | |
| NO880590L (no) | Hoeyere alkylpyrrolidon-ekstraksjonsmidler for vannopploeselige fenoliske eller karbocykliske antibiotika. | |
| NO127316B (da) | ||
| CA1271440A (en) | Process for the production of a-21978c derivatives | |
| US3745158A (en) | Antiviral antibiotic | |
| EP0037736A1 (en) | Mycoplanecin derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions containing them | |
| EP0786471A1 (en) | Arthrichitin, a process for its production and its use | |
| US3182004A (en) | Production of fungimycin | |
| SU1377290A1 (ru) | Штамм бактерий ALcaLIGeNeS FaecaLIS, используемый дл очистки сточных вод от 2-хлор-цис,цис-муконовой кислоты | |
| US3907988A (en) | Antibiotic complex A 21101 and process for producing same |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |