JPS61502214A - 免疫アツセイ方法と器具 - Google Patents
免疫アツセイ方法と器具Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
免疫アッセイ方法と器具
発明の分野
本発明はりガント−受容体(receptor)免疫アッセイに係る。
特に、本発明は免疫アッセイプロセスに係り、その中でも特に、モノクローナル
抗体を使用するものに係る。本発明はまた、このようなアッセイを実施する為の
器具に係るものである。
乳l止員匁」1
本出願は1984年5月11日付出願の出願番号609,395の出願の一部継
続出願であり、該出願の開示内容は本明細書中に参照として記載するものである
。
先及盈I
最近の?O年間に亘り、免疫アッセイ操作は、病気や臨床上重要な他の生理的条
件に関連のある様々な抗原をイン・ヴイトロにて高感度で診断する手段を提供し
て来た。元々、このようなヘテロジーナス(heterogeneous)なア
ッセイは固相に結合したポリクローナル抗体調製物を使用していた。これらのア
ッセイに於いては、標識抗原溶液は、同相の抗体に対して分析試料中の抗原と直
接競合させられるか、又は引き続く操作にて抗体に加えられるかする。標識抗原
が固相に結合する程度、又はそれが液相中で検出れされる程度によって、分析試
料中の抗原の存在及びはを測定することができる。
これらのアッセイに続いて、非競合的な免疫測定アッセイ(immunoiet
ric assay)が用いられるようになった。これらのアッセイに於いても
同相に結合したポリクローナル抗体調製物が使用された。抗原を含有すると予想
される試料は固相と接触させられ、該抗原が同相上の抗体と結合されられた。典
型的には、インキュベーションステップ後に、該試料を固相から分離し、固相を
洗浄し、例えば、放射性核種、酵素又は蛍光部分で標識この第二番目のインキュ
ベーション後に、未結合の標識抗体を固相から分離し、液相中の、又は抗体:抗
原:抗体のサンドウィッチ状で固相に結合している標識抗体を測定し、検査試料
中の抗原の存在及び/又は1度をめた。
極く最近では、モノクローナル抗体を用いるように免疫アッセイ操作が変更され
て来た。例えば、米国特許第4.376、110号明細書には、モノクローナル
抗体の組を使った2部位免疫測定アッセイ(two−site imiunom
etric assays)であり、そのうちの1つのモノクローナル抗体は固
相に結合しており、他のモノクローナル抗体は検出用に標識が付されているもの
が記載されている。抗原上の責なる抗原決定部位(epitopic 5ite
lをn識するモノクローナル抗体の組を使用することによって、抗原と標識抗体
のインキ1ベーシヨンの間に先行操作に於ける洗浄を行なう必要がなく同時の免
疫測定アッセイを行なうことが可能になった。
前記の操作に於いては、同相抗体は、典型的にはビーズ又は微粒子に結合されて
いるか、表面上を覆っていた。これらの操作は全て、その特徴として固相及び標
識抗体の両者に対するインキ1ベーシヨン期間を必要とし、その結果、たとえこ
れらのインキュベーションが同時に行なわれるとしても、時間のかかるものであ
る。実際、一つのアッセイ操作を完遂するのに数時間を要するのはよくあること
である。更に、限定された時間のインキj−ベーションステップ及び計量された
試薬による複数回の洗浄の必要性がある為に、これら操作の使用は大幅に制限さ
れ、高度に訓練された人間及び優れた装置を該アッセイを行なう為に利用し得る
ような大病院やそれと関係のある臨床研究所に限られてしまっている。その結果
、こうしたアッセイを医師のオフィス内で使用でき、更には家庭での健康管理プ
ログラムに使えるように処方箋なしで人々に販売できるようなものにする為に、
比較的簡単な器具を用いて、免疫アッセイを簡潔且つ迅速に操作するということ
の必要性が満されて来ていなかった。
11里LI上
本発明は、リガンド−受容体アッセイ、例えば免疫及び免疫測定アッセイ並びに
核酸オリゴマーのハイブリダイゼーションを利用するアッセイを簡潔且つ迅速に
行なう為の、簡単な器具を使い、良時間のインキコベーションステップを必要と
しないプロセスを提供するものである。本発明の器具は、第1部材として、アッ
セイすべき目標分析物(リガンド)に対する受容体又は抗受容体が結合ないしは
固定されているか、又は分析試料から、アッセイすべきリガンドが会合している
ところの細胞又は細胞デブリス(debris)を分離し、それによって該リガ
ンドをその多孔質部材に固定し得るような膜又はフィルターのような多孔質部材
を含んでいるものである。例えば、リガンドが抗原であるような免疫及び免疫測
定アッセイの場合には、抗体、好適にはモノクローナル抗体を受容体として多孔
質部材に結合させる。本発明に係わる器具は更に、第2部材として、その部材の
中を通り上部表面及び下部表面とを通常横断しているキャピラリー通路(Cat
)illarypaむhways)を備えた吸収部材を含んでいる。本明細書中
、′キャピラリー”なる用語は、キャピラリー、又は液体が吸収部材を横断し得
るような他のチャンネル又は通路を包含するものである。第2部材は第1部材と
キャピラリーによって連絡しており、アッセイで用いられる試料及びその後の加
数@ (acldends)の静水圧が第1部材を通る流れを生起せしめるのに
充分でない時に、外部手段を用いずに第1部材を通る液体の流れを生起し得るよ
うなキャピラリ一孔径を持つように第2部材は選択される。第2部材は第1部材
の支持としても機能し得る。
本発明のアッセイは、液体試料を多孔質部材に添加するステップを含み、このス
テップにより、該液体が該部材を通過して流れる際に、多孔質部材に結合してい
る受容体が、可溶又は懸濁状の試料中のリガンドと該部材を通過する流れが存在
しない場合に認められる速度よりも実質的に速い速度で結合するか、又は、リガ
ンドが細胞物質の表面上に存在する場合には、該細胞物質は多孔質部材に固定さ
れている受容体と結合するが、あるいは試料が通過して流れていく時に部材によ
って捕捉される。
本発明の好適な具体例に依れば、試料添加に続いて、検出用に標識された、リガ
ンドに対するもう一つの受容体の溶液を添加する。例えば、抗原に対する免疫測
定アッセイに於いては、第1受容体の結合を干渉しない抗原決定基(epito
pf3)に於いて該抗原に結合する抗体、好適にはモノクローナル抗体溶液を用
いる。好適な標識は酵素であるが、他の標識、例えば放射性核種又は蛍光標識も
同様に使用し得る。先に試料から抽出した抗原に対して、結合抗体によるか、又
は1ilIa物質を捕捉することによって抗体は結合する。標識抗体の添加直後
に、又は抗原と標識抗体とのより強力な結合により感度を増大させる為の短時間
のインキュベーションを行った後に、洗浄ステップによって未結合の標識抗体を
除去する。次いで、多孔質部材上の標識抗体の存在を測定し、試料中の抗原の存
在を示す指標とする。酵素標識の場合には、この操作は、色素形成基質(col
or torminasubstrate)溶液を該多孔質部材に添加し、該基
質を酵素と反応せしめることで達成される。
図面の簡単な説明
第1図は本発明に従う免疫アッセイを行なう為の器具の断面図である。
第2図は、本発明に於いてアッセイされる試料から抗原を除去する為に用いられ
る多孔質部材を上から見た図である。
好適具体例の記載
上述した如くに、本発明の器具は、第1部材として、リガンドに対する受容体又
は抗受容体が結合しているか、あるいは該リガンドが細胞物質ど会合Ll“Cい
る場合には、該細胞物質をアッセイすべき試料から濾過し得るような多孔質膜又
はフ、イルターを含む。後者の場合には、膜又はフィルターは上記の分離を可能
にし得るような孔経を持つように選択される。ガラスファイバーフィルター及び
多種の合成又は天然物質から成るフィルターを含む様々な種類のフィルタ一部材
のどれでも使用することがぐきる。
多孔質部材に受容体を結合させるときは、その受容体は目標リガンドと直接選択
的に結合する能力があるかどうかで選択される。例えば、リガンドが抗原の場合
は、受容体は抗体、好ましくはモノクローナル抗体であり得る。リガンドが酵素
の場合には、受容体はその酵素に対する受容体であり得る。リガンドが核酸、例
えばRNA又はDNAの場合には、受容体はDNA又はRNAの相補的オリゴマ
ーであり得る。好適具体例では、第1部材は抗体調製物が共有結合している膜又
はフィルターである。好ましくはこの抗体ll製物はモノクローナル抗体を含む
が、抗血清由来のポリクローナル抗体でも使用し得る。ポリクローナル及びモノ
クローナル抗体の11製技術は公知でありここに引用する必要はない。
多孔質部材の材質は受容体、又は杭受容体を用いるならそれ′IN衣昭61−5
02214 (5)が結合し得る材質の中から選択される。タンパク質受容体又
は抗受容体、例えば抗体又は抗原のような場合は、アミノ残基を持っているか又
は化学的手段によってこのような基を導入されたナイロンが好適であり、良く知
られたグルタルアルデヒド法によってこれにタンパク質をカップリングさせるこ
とができる。
抗体はアミノシランを介()てガラスファイバーにカップリングさせられる。直
接又は媒体を介して受容体とカップリングをすることのできる他の天然又は合成
物質も使用し得る。
上記の方法は受容体又は抗受容体を多孔質部材に化学的に結合させることを強調
しているものである。が、しかし、適当な場合には、受容体又は抗受容体は多孔
質部材上を覆っているか、又は多孔質部材の相互作用間に捕捉される粒子(pa
rticulate)であっても良い。従って、本明細書に於いて、′結合(b
ound)”という用語は受容体又は杭受容体を多孔質部材に固定する為のあら
ゆる手段を包含するものとして用いられる。
第2部材は、上部表面及び下部表面とを通常横断しているギヤピラリ−通路を持
つ吸収部材である。第1部材と第2部材とは、第1部材の孔(pore)又は隙
間(interst+ce)と第2部材のキャピラリーとが直接部がるように組
み合わされている。従って、液体を第1部材に作用させこの液体で満たすと、該
液体は吸収部材内に吸入される。その結果、補助なしには、液体を流すような圧
力又は液体を吸入する為の真空を備けることなしでは第1部材を通過して流れる
ことが出来ない程該流体の静水圧が低いような場合でも、液体試料を第1部材の
上部表面に作用させた時に第1部材を通過する流れが生起される。
第2部材用材質の選択は決定的に重要なものではなく、様々な繊維状フィルター
物質を使用し得る。タバコフィルター用に作られる酢酸セルロース繊維が便利で
ある。この酢酸セルロースの代りにポリエステル、ポリオレフィン又は他の物質
から成る他の吸収部材を用い得ることは当業者には明らかなことであろう。
第1図には、アッセイを行なう際に本発明の器具と一緒に使用し得る装置の断面
図が示されている。すなわち、第1図に於いて、側壁14によって限定されてい
る上部開口部12を持つ円筒状コンテナー10(他の如何なる適当な形状のもの
でも良い)が示される。このコンテナーはガラス、プラスチック又は他の適当な
物質より成り得る。
第1図に示すように、コンテナー10には下部開口部16もあり、その中には可
動プラグ18が挿入されており、多孔質部材20.円形膜又はフィルターディス
ク及び円筒状吸収部材22上に設置され、同じく開口部16を通して挿入される
任意の部材21(機能は以下に述べる)が挿入され得るようにしている。
第1図に於いて、番号24で示されるものでコンテナー10はすぼめられており
、これは構成要素の−っである漏斗(integralfunnel)を形成し
、試料を直接部材2o上に提供し、部材2o上に添加された試料や他の加数量の
効果的洗浄を確実に達成し得るようにしている。
部材22の大きさ、すなわち、すぼめられ、ている場所より下のコンテナー10
の部分体積は、好ましくは、アッセイの最中に器具に加えられる全液体をその中
に受け止め吸収部材22内に保持し得るように選択される。追われた空気を逃す
為の空気排出用手段、例えば、小さい出入口(small ports)がコン
テナー10の底部近傍に具備されている。適宜コンテナー10の底部は取りはず
され、液体は部材2o及び22を通って通過しその底部を通ってコンテナーから
排出され得る。しかしながら、この器具は、使い捨て式で、試料を簡潔且つ衛生
的な方法で容易に捨てることを意図している為に、第1図で示した構造を使用す
るのが好ましい。
前に記述したように、部材2oは試料から細胞物質を濾過するか、又はアッセイ
されるリガンドに対する結合受容体を支持ずるものとして用いられる。どららの
場合も、液体試料は開口部12を通って部材20に導入され得る。該液体試料が
部材20に浸透し、そこを通過して吸収部材22内に吸入された後、標識受容体
溶液を間口部12を通して部材20に添加する。
標識受容体は次いで部材20十の受容体に結合しているリガンド、又は20の表
面上に捕捉されている細胞物質と関連のあるリガンドのいずれかに結合する。免
疫測定アッセイの場合には、この部材20にモノクローナル抗体が結合しており
、ぞして標識抗体もまたモノクローナル抗体であるときは、この一つの抗体は、
米国特許第4,376.110号明細書の記載(1981年6月6日出願、出願
番号323,498号、その開示内容は本明細書中に参照されテイル〉)ように
、非干渉抗原結合部位(non−+nterrerr+ngantigen b
indeng 5iteS)に結合するように選択される。
好ましくは、可溶性受容体は酵素標識され、しかしながら従来の他のアッセイ標
識も適当な状況下で使用できる。例えばフルオレセインのような蛍光I!識又は
フィコエリトリン又は放射性核種が用いられる。色素染料又は蛍光粒子を負荷さ
れた微小球(micro 5pheres)もまた有用な標識となり得る。その
他の有用な標識とし又は、色素染料又は蛍光粒子を負荷されたリポソーム、又は
他の小胞を挙げることができる。
標識受容体溶液が部材20を通過した後、洗浄液体を部材20にかけ、部材20
から未結合の標識受容体を部材22内にどっと流し込ませる。壁24のスロープ
構造によって構成要素の一つである漏斗が提供され、標識受容体溶液の固着して
いる残漬を除去する為に洗浄液体を該壁にかける操作が容易に成し得る。
標識受容体溶液及び洗浄液体を部材20に添加するに先立つC1短時間のインキ
ュベーション期間を設け、部材20の隙間の中又は部材20上に捕捉されている
溶液中の受容体又はリガンドによる結合をより長大なものにし、そうすることで
アッセイの感度を増大させても良い。しかしながら、こρようなインキュベーシ
ョンステップは不必要なものであるか、又は非常に短時間、例えば一般に約60
秒以下であり得ることを本発明者等は知見した。標識受容体又はリガンドを含む
溶液の部材20を通過する流れによって、その流れがない場合に観察される結合
速度よりも実質的に速い結合速度が生じるものである。
受容体の標識が酵素である場合は、未結合受容体を部材20から洗浄して除去し
た後に、酵素基質溶液を部材20に添加する。
もし、目標リガンドが、部材20に結合している受容体、又は部材20上の細胞
物質に結合すると、そのリガンドはそれに標識受容体の一部分を結合させること
になる。該酵素は基質を反応させ、もし適当に選択されたならば、可視色変化を
生起せしめるであろう。
酢酸セルロースを吸収部材22葉の物質として使用すると、その上部表面に標識
受容体が非特異的に結合してしまうことを発明者らは見い出した。従って、部材
20の直下に於いて、この酢酸セルロースの表面に成る可視色変化が起り得る。
この色変化が部材20を通して見えてしまうのを防ぐ為に、多孔質ポリウレタン
又は受容体と非特異的に結合しないような他の物質から成る分離部材(第1図に
於いて21と標記される)を部材20及び22の間に設けることが好ましい。
次に第2図を見てみると、そこには部材20を上から見た図が示されている。破
線26は好適具体例に於いてリガンドが結合する領域28の外円周を表わしてい
る。この領域の直径は、壁24によって制限される最ら狭い地点に於ける直径よ
りも小さいものである。よって、酵素を受容体標識として用いると、以下の結果
が生じる;り1)部材20の周辺部に較べて領域28に於いて色がより発現する
のが観察されたならば、陽性の結果と判断される;■もし色の発現が部材20に
於いて観察されなかったならば、陰性の結果と判断される;(3)もし、洗浄後
に成る量の標識受容体が部材20に残ると、目に見える全表面に亘って均一で穏
やかな色変化が起り得る。このような結果もまた陰性と判断される。
以上の記載は本発明に係るプロセス及び器具の一般的記載である。本発明者等は
それが免疫アッセイを試料の導入から陽性の結果を読み取るまで5分間以内で実
施するのに有用であることを見い出した。つまり、一つの特定実施例に於いて、
妊娠女性の尿中で増加する抗原であるヒト絨毛性性腺刺激ホルモン(HCG)に
対するモノクローナル抗体をグルタルアルデヒド法により多孔質ナイロン膜に結
合させ、第1図の10のようなコンテナーに設置し、多孔質ポリエチレンのディ
スクを介して酢酸セルロースの吸収部材によって支持する。
尿試Fl (0及ヒ5mIU/d(7)HCGを含む4m)は上記の器具に添加
され、部材20及び21を通過して吸収部材22内に吸込まれた。HCGに対す
るアルカリホスファターゼ結合第2モノクローナル抗体の溶液3滴をその次に添
加した。上記酵素−抗体複合体(COnjtl!Jate)が部材20を通過し
て吸込まれる間の約1分間という短時間のインキュベーション後に、水4dを添
加し、未結合抗体を部材20から除去した。この後に、アルカリホスフ7クター
ゼの基質であるリン酸インドキシルを含む溶液を3滴添加した。2分後に、HC
Gを含まない(OmIU/m )試料を検査した装置では色の発現は見られなか
った。50mIU/adのHCGを含む試料を検査したhは、30秒以内にディ
スクの中央に鮮明な青色が発現し、それが2分以内には暗青色に変化した。ディ
スクの周辺部では色の発現は見られなかった1、全アッセイに約5分間費した。
体積及びインキlベージ32時間を変えることでアッセイの感度は調節され得る
ことは理解されよう。
本発明は、実施例としてHCGに対するアッセイを使って記載されてきたが、他
の抗原に対しても類似のアッセイを実施し得るということは理解されよう。目標
となり得る抗原を全て挙げると、余りに長大となる為不可能であるが、IgE、
前立腺酸ホスファターゼ、前立腺特異抗原、α−フェトプロティン。
癌胎児性抗原、リューテノイジングホルモン(Ieutenizing hor
none)クレアチンキナーゼMB及び血清、血漿、尿又は他の液体媒体に含ま
れる他の抗原も検出され得る。更に、細菌、奇生生物、真菌、又はウィルスであ
り、例えば、グループAストレ(Chlamydia trachomatis
)、 3肝炎、及びサイトメガロウィルスに関連した抗原のような関連抗原を持
つ物質を含む液体試料も、細胞を捕捉するフィルター又は該抗原に特異的な抗体
が結合されているフィルターを部材20として使用することによって検出され得
る。例えば、酵素によって標証されているモノク[〕−ナル抗体の溶液を添加す
ることによって該抗体が該抗原と結合する。洗浄し、基質を添加することで、細
胞上に標識抗体が存在すると色変化が生起し、この変化は肉眼又は機器の助けに
より検出され得る。
もし、酵素以外の標識を用いる場合には、アッセイの操作は変り得る。もし蛍光
標識が使用されたならば、膜の蛍光が測定され、 ■のような放射性核種を用い
る場合には膜を取り出し計測づる。
上記の記載は本発明をモノクローナル抗体を用いた一連の免疫測定アッセイ、す
なわち、多孔質部材上の第1モノクローナル抗体受容体及び標識された第2のモ
ノクローナル抗体受容体を用いる免疫アッセイに適用することに重点が画かれて
いた。
試料は多孔質部材に添加されその後標識抗体が加えられる。他のアッセイ変法も
可能である。例えば、免疫測定アッセイの場合には、標識抗体と試料を多孔質部
材に添加する前にあらかじめ混合しておくことができる。
本発明の器具は、第1受容体として固相上の抗原を用い、第2受容体として標識
抗原又は標識抗−抗体を用いた抗体のアッセイにも使用し得る。後者は、第1受
容体が多孔質部材に結合したアレルゲンであり第2受容体がIgEに対する抗体
、好ましくはモノクローナル抗体であるアレルギー特異アッセイに特に適してい
る。他の場合には、アレルゲンに対する■gG応答も同様に測定し得る。すなわ
ち、■gGに対する七ツクローナル抗体のような抗体を第2受容体として使用す
ることによってである。この方法で実施し得る他の抗体検査には、ヘルペス。
風疹、肝炎、サイトメガロウィルス及びHTL−IIIに対する抗体の検査が含
まれる。
本発明のもう一つの具体例では、本発明の器具は競合アッセイを実施する為に使
用する。競合アッセイとは、リガンド受容体が多孔質部材に結合しており、それ
に対して試料中のリガンドと試料溶液に添加されるか又は試料添加後に添加され
る固定量の標識リガンドが競合するものである。競合免疫アッセイは、同相に結
合した受容体として抗体、例えばポリクローナル又はモノクローナル抗体調製物
を用いたこの方法によって便利に行なわれる。標識抗原を多孔質部材に試料を添
加する前に該試料に添加することも可能である。そうではなく、試料添加の後に
又はそれと同時に添加することもできる。
本発明の器具によって、アッセイ受容体としである酵素の受容体を多孔質部材に
結合させて該酵素を検出することもできる。
該酵素に対する標識抗体を使って多孔質部材上の受容体−酵素複合体の形成を検
出し得る。
多孔質部材に、試料中の核酸物質に対するプローブ受容体(probe−rec
eptor)としての核酸オリゴマーを具備することもできる。このプローブは
DNAのオリゴマー、例えば、問題となる核酸中の配列と相補的なものであり、
場合によっては、RNA又はDNAのいずれかをリガンドとして結合し得る。リ
ガンド−受容体複合体の検出は、問題となる核酸リガンドの非干渉領域と相補的
な第2核酸オリゴマーによってなされ得、この第2核酸オリゴマーは検出され得
るように標識を付されている。
本発明の更にもう一つの具体例では、多孔質部材に大麦容体が結合されている。
本明細書に於いて、“大麦容体”という用語は、リガンド−受容体に選択的に結
合するようf−、試薬を意味するものである。例えば、リガンドが抗原で受容体
が抗体、例えばマウスIQG抗体(好ましくは、モノクローナル抗体)の場合、
大麦容体はマウスIQGに対する抗体、好ましくはモノクローナル抗体であり得
る。他の場合には、受容体が抗受容体と選択的に結合する部分と複合体を作るか
も知れない。例えば、その部分はハブテンであり、大麦容体は該ハブテンに対す
る抗体ぐあり得る。好適なこのようなハブテンはフルオロセインである。他の場
合は、大麦容体はアビジンであり得る。この場合に受容体にはビオチンが結合し
ている。他の場合には、受容体は核酸オリゴマー、又はこのようなオリゴマーが
結合したものであり得、大麦容体は、リガンドと受容体との結合を損なわないよ
うな受容体オリゴマー部位と相補的な核酸セグメントであり得る。以上の記載よ
り、当業者には様々な種類の大麦容体:受容体の組合せを採り得るということが
理解されよう。
大麦容体を用いる場合、様々な方法で試料はアッセイされ得る。例えば“サンド
ウィッチアッセイ”に於いては、第1受容体及び標識第2受容体は多孔質部材に
添加される前に試料と一緒にされリガンドと結合し得る。一方、多孔質部材に添
加する以前に第1受容体及び試料を一緒にするか、又は第1受容体次に試料の順
で添加し、その後に標識受容体を添加しても良い。
このようなサンドウィッチアッセイに於いては、第1受容体と結合し、標識受容
体とは結合しないように大麦容体を選択する。
多孔質部材に結合した大麦容体を使うことによって、リガンド−受容体アッセイ
の際に有用な多孔質部材を簡単に開発・調製することが可能になる。例えば、も
し受容体が多孔質部材と結合しているならば、アッセイのパネル(pane l
)に要求される各受容体の結合を最適化する為に結合操作を変更する必要があ
る。しかしながら、多孔質部材に結合している単一の大麦容体によって複数のア
ッセイを行ない得る。その結果、このような“ユニバーサル”な多孔質部材が可
能な時は、開発努力(developsent e4fort)及び製造操作が
非常に簡素化され得る。
XBb?
国際11交報告
い7..1゜All+え、、、工。、。、No、PCT/す585100870
特表昭61−502214 (9)
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.a)目標リガンドに対する受容体がそれに結合しているか、又は流体試料か らリガンドが関連している細胞物質を分離することのできる、多孔質で、上部表 面及び下部表面を持つ第1部材;及び b)吸収物質から成る物体でありその表面上に該第1部材が設置され、該第1部 材がその上に設置されている該表面に対して通常横断しているキャピラリーを持 ち、該キヤピラリーが該第1部材の下部表面上の孔と連絡しており、該上部表面 に添加され該第1部材に浸透した流体を該第2部材の該キャピラリー内に吸入す ることができるように、該キャピラリーが該第1部材の下部表面上の孔と連絡し ている第2部材を含む、流体試料中の目標リガンドを検出する為のリガンドー受 容体アッセイプロセスに使用する器具。 2.該第1部材が該リガンドに対する受容体が結合している部材である請求の範 囲第1項記載の器具。 3.該第1部材が膜又はフィルターである請求の範囲第1項記載の器具。 4.該リガンドが抗原、抗体、酵素、及び核酸オリゴマーから成る群から選択さ れる請求の範囲第1項乃至第3項のいずれかに記載の器具。 5.該多孔質部材に受容体が結合しており、該受容体が抗体、抗原、酵素受容体 及び核酸オリゴマーから成る群から選択されるものである請求の範囲第1項乃至 第3項のいずれかに記載の器具。 6.該受容体が核酸オリゴマーである請求の範囲第5項記載の器具。 7.該核酸オリゴマーがDNAオリゴマーである請求の範囲第6項記載の器具。 8.該受容体が抗体である請求の範囲第5項に記載の器具。 9.該受容体がポリクローナル抗体調製物である請求の範囲第8項記載の器具。 10.該抗体がモノクローナル抗体である請求の範囲第8項記載の器具。 11.該受容体が抗原であり、該目標リガンドが該受容体に対する抗体である請 求の範囲第5項記載の器具。 12.該抗原がアレルゲンであり、該抗体が該アレルゲンに対する抗体である請 求の範囲第11項記載の器具。 13.該抗体がIgEである請求の範囲第12項記載の器具。 14.該抗体がIgGである請求の範囲第12項記載の器具。 15.該多孔質部材がガラス又はナイロンから選択された物質である請求の範囲 第1項乃至第3項のいずれかに記載の器具。 16.該多孔質部材が該流体試料から細胞物質を分離することのできる部材であ る請求の範囲第1項記載の器具。 17.該多孔質部材が膜又はフィルターである請求の範囲第16項記載の器具。 18.該器具が更に、アッセイ試薬が該第1部材の上部表面に添加され得るよう な開口部を持つ、該第1及び第2部材用のコンテナーを含む請求の範囲第1項、 第2項、第3項、第15項又は第16項のいずれかに記載の器具。 19.該開口部が更に、内部に傾斜しており添加試薬を該第1部材の上部表面上 に方向づける漏斗を限定するような側部を持つ区画を含む請求の範囲第18項記 載の器具。 20.該コンテナーの底部が閉じられており、該コンテナーに排出孔が設けられ ており添加試薬に置換された空気を逃がすことのできる請求の範囲第18項記載 の器具。 21.目標リガンドを含有すると考えられる流体試料を試料が添加された請求の 範囲第2項又は第3項のいずれかの器具の第1部材の上部表面に導入するか、又 は該多孔質部材に対する前記添加後に該目標リガンドを検出する為のそれに対す る標識第2受容体を添加し、その後に未結合の標識受容体を分離し、第1受容体 に結合しているリガンドに結合している標識第2受容体を、それがもし存在して いるならば、検出することを含む、該流体試料中の該目標リガンド検出用アッセ イプロセス。 22.未結合第2受容体の分離を洗浄によって行なう請求の範囲第21項記載の プロセス。 23.該多孔質部材に結合している該受容体が抗原,抗体,酵素受容体及び核酸 オリゴマーから選択される請求の範囲第21項記載のプロセス。 24.該多孔質部材に結合している該受容体及び標識受容体が該リガンドに非干 渉部位で結合する請求の範囲第22項記載のプロセス。25.該目標リガンドが 核酸オリゴマーであり、該多孔質部材に結合している受容体及び該標識受容体が 相補的核酸オリゴマーである請求の範囲第23項記載のプロセス。 26.該受容体がDNAオリゴマーである請求の範囲第25項記載のプロセス。 27.該目標リガンドがDNAオリゴマーである請求の範囲第26項記載のプロ セス。 28.該目標リガンドがRNAオリゴマーである請求の範囲第26項記載のプロ セス。 29.該目標リガンドが抗原であり、該受容体がモノクローナル抗体である請求 の範囲第23項記載のプ口セス。 30.該目標リガンドが抗体であり、該受容体が抗原である請求の範囲第23項 記載のプロセス。 31.該目標リガンドが抗体であり、該多孔質部材に結合している該受容体が抗 原であり、そして該標識受容体が該目標抗体に対する抗体である請求の範囲第2 3項記載のプロセス。 32.該抗原がアレルゲンであり、該目標リガンドがIgEである請求の範囲第 31項記載のプロセス。 33.該抗原がアレルゲンであり、該目標リガンドがIgGである請求の範囲第 31項記載のプロセス。 34.該標識受容体がモノクローナル抗−IgEである請求の範囲第32項記載 のプロセス。 35.該標識受容体がモノクローナル抗−IgGである請求の範囲第33項記載 のプロセス。 36.細胞物質上のリガンドを含有すると考えられる流体試料を、試料が添加さ れた請求の範囲16の該多孔質部材の上部表面に導入し、該試料から該細胞物質 を分離するか、又は該多孔質部材に対する前記添加後に該目標リガンドを検出す る為のそれに対する標識受容体を添加し、その後に未結合の標識受容体を分離し 、該多孔質部材によって該流体試料から分離された細胞物質上のリガンドに結合 している標識受容体を、それがもし存在しているならば、検出することを含む、 細胞物質に関連した目標リガンド検出用アッセイプロセス。 37.未結合標識受容体の分離を洗浄によって行なう請求の範囲第36項記載の プロセス。 38.該目標リガンドが抗原であり、該受容体がそれに対する抗体である請求の 範囲第36項又は第37項のいずれかに記載のプロセス。 39.該抗体がモノクローナル抗体である請求の範囲第38項記載のプロセス。 40.該第1部材に抗受容体が結合している請求の範囲第1項記載の器具。 41.該受容体が抗体であり、該抗受容体が該受容体に対する抗体である請求の 範囲第40項記載の器具。 42.該受容体にハプテンが結合しており、該抗受容体が該ハプテンに対する抗 体である請求の範囲第40項記載の器具。 43.該ハプテンがフルオレセインである請求の範囲第42項記載の器具。 44.該抗受容体がアビジンであり、該受容体がビオチンに結合している請求の 範囲第40項記載の器具。 45.該抗受容体がモノクローナル抗体である請求の範囲第40項乃至第43項 のいずれかに記載の器具。 46.該抗体がモノクローナル抗体である請求の範囲第45項記載の器具。 47.目標リガンドに対する第1受容体に対する抗受容体を結合させた多孔質部 材をもつ請求の範囲第40項の器具を用い、該第1受容体,流体試料及び第2標 識受容体を該多孔質部材の上部表面に添加し、その後未結合標識受容体を分離し 、第1受容体に結合したリガンドに結合した標識受容体を検出することを含む、 該流体試料中の該目標リガンドの検出用アッセイプロセス。 48.該第1受容体の添加後に該流体試料を添加する請求の範囲第47項記載の プロセス。 49.該第1受容体及び流体試料を、該多孔質部材に添加する前に予め混合する 請求の範囲第47項記載のプロセス。 50.該流体試料添加後に、該標識受容体を該多孔質部材に添加する請求の範囲 第48項又は第49項のいずれかに記載のプロセス。 51.該標識受容体を、該流体試料の該多孔質部材への添加に先立って、該流体 試料に添加する請求の範囲第48項又は第49項のいずれかに記載のプロセス。 52.該抗受容体が抗体である請求の範囲第47項乃至第49項のいずれかに記 載のプロセス。 53.該抗受容体が抗体である請求の範囲第50項記載のプロセス。 54.該抗受容体が抗体である請求の範囲第51項記載のプロセス。
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