SE460564B - Testsats och foerfarande foer immunanalys med prefabricerade komplex av maerkt antikropp och analytspecifik antikropp - Google Patents
Testsats och foerfarande foer immunanalys med prefabricerade komplex av maerkt antikropp och analytspecifik antikroppInfo
- Publication number
- SE460564B SE460564B SE8501441A SE8501441A SE460564B SE 460564 B SE460564 B SE 460564B SE 8501441 A SE8501441 A SE 8501441A SE 8501441 A SE8501441 A SE 8501441A SE 460564 B SE460564 B SE 460564B
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- antibodies
- specific
- enzyme
- analyte
- antigens
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/535—Production of labelled immunochemicals with enzyme label or co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or enzyme substrates
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
Description
460 564* 10 l5 20 25 30 35 2 klonala antikroppar genom användning av modern gentek- nologi. Monoklonala antikroppar är antikroppar som producerats av en enda cellpopulation som härrör från 5 en cell, en enkelklon. Dessa antikroppar är således antikroppar av en enda typ som inte är förorenade med andra antikroppar, såsom i antisera.
Pávisande och kvantitativ bestämning av antikroppar har även stor medicinsk betydelse. Till exempel kan närvaron av specifika antikroppar mot ett visst virus indikera en pågående infektion med detta virus eller närvaron av immunitet (skyddsförmàga) mot denna mikro- organism.
Olika sätt att påvisa antigen-antikroppsreaktioner är kända. Nedan ges en sammanfattning av de olika metoder som f n används.
Agglutination: Antikroppar binds till ett antigen som är beläget på partiklar, vilket resulterar i en synlig aggregation av partiklarna. Uppträdandet av aggregat påvisas med blotta ögat eller i mikroskop. Detta är en mycket snabb metod (kan genomföras på några minuter) och är enkel att genomföra. Den har hög känslighet för små substansmängder och få möjligheter till felaktiga reaktioner. Nackdelarna är bl a att det inte är möjligt att genomföra en exakt kvantitativ analys och att tolk- ningen är subjektiv.
Fällnino: Lösliga antigener och antikroppar reagerar med varandra och ger upphov till ett "nätverk“, dvs ett stort komplex som består av många underenheter av antigen och antikropp. Komplexet sedimenterar och blir synligt som en (i allmänhet) vit fällning. Fällningen kan påvisas i ett transparent rör eller i en transparent fastagel. I det senare fallet får antikroppar och anti- gener diffundera mot varandra från olika platser i gelen eller tvingas möta varandra genom anbringande av elektrisk ström. Fällning kan även kombineras med märkta antikroppar (se nedan) för att öka känsligheten (förmågan att påvisa ¿ små mängder antigen eller antikropp). 10 15 20 25 30 35 460 564 3 Denna metod är relativt enkel men långsam (tar minst 1 h). Kvantitativ analys är möjlig men känslig- heten är dålig för små substansmängder. Tolkningen är subjektiv eller objektiv och det föreligger få möjligheter till felaktiga reaktioner.
Metoder som använder sig av märkta antikroppar: Anti- kroppsfraktionen i ett serum kan renas och "märkas" med radioaktivitet (radioimmunoassay = RIA), fluorescer- ande föreningar eller enzymer. "Märkningen" förbindes med antikroppen medelst en kemisk reaktion. Radioaktivitet och fluorescens påvisas med användning av specifik ut- rustning, utformad för respektive ändamål. Närvaron av enzymmärkta antikroppar påvisas genom tillsats av ett substrat, dvs ett ämne som spjälkas av enzymet och därigenom förorsakar en färgförändring. Färgförändringen kan påvisas kvantitativt med användning av en spektro- fotometer. Denna metod kallas ELISA (Enzyme-Linked- -Immunosorbent-Assay).
ELISA har fördelen av att möjliggöra exakt kvanti- tativ analys och har dessutom mycket hög känslighet för små substansmängder. Tolkningen av resultaten är objektiv. Nackdelarna är dock flera. Således är reaktionen långsam (minst 1 h) och förfarandet är komplicerat och ger upphov till falska reaktioner.
ELISA-metoden används ofta för kvantitativ bestämning av antikroppar enligt följande schema (se fig 1): (a) antigenet binds till innerväggen i ett provrör; (b) vätskan (vanligen serum) som skall testas med avseende pá antikroppar tillsättes; (c) ej bundna antikroppar och andra serumkomponenter avlägsnas genom tvättning av provröret flera gånger med exempelvis saltlösning: (d) enzymmärkta antikroppar från ett djur som har exponerats för mänskliga antikroppar tillsättes (anti-antikroppar); (e) ej reagerande enzymmärkta antikroppar avlägsnas genom tvättning; 460 564 10 15 25 30 35 4 (f) slutligen tillsättes substratet och färgför- ändringen mäts medelst en spektrofotometer.
Härav framgår att denna metod kräver flera pipet- teringssteg. Av denna anledning finns det många olika ' maskiner för automatisering av metoden på marknaden.
Anordningar har konstruerats för tvättningsförfarandena, för samtidig "avläsning" av ett stort antal provrör i spektrofotometern, såväl som för pipetterings- och utspädningsstegen. Alla produkter är dyra och utformade för samtidig test av många prover. Ingen anordning för automatiska test av enkelprover har hittills konstruerats.
Om istället en känd mängd antikroppar används i testsystemet kan denna metod även användas för kvantitativ bestämning av antigener.
Märkta antigener¿ Istället för märkning av antikropparna kan antigenerna märkas med radioaktivitet (radioimmuno assay = RIA), fluorescerande föreningar eller enzymer.
Den grundläggande metoden är i huvudsak densamma som beskrivits för de metoder som använder sig av märkta antikroppar- Även andra metoder är kända,vilka endast äger till- lämpning i ett fåtal specialiserade test.
Sammanfattningsvis kan nämnas att "testsatser“ baserade på påvisande av agglutination, fällning eller ELISA-tekniken finns i handeln. Även andra testsatser finns på marknaden, vilka inte använder sig av ovanstående metoder, men dessa har i allmänhet mycket begränsad användning.
Särskilt ELISA-systemet används i stor utsträckning p g a dess höga känslighet, dvs dess förmåga att påvisa små substansmängder. Emellertid kan dessa test endast användas på större laboratorier beroende på att endast speciellt utbildad personal kan hanterafdessa.
Då man inte har tillgång till kvalificerad personal används ofta agglutination och utfällning i stor ut- sträckning där man inte kräver hög noggrannhet. Dessa r 460 564 5 metoder är lättare att genomföra. Särskilt agglutinations- reaktioner har kunnat decentraliseras till smà kliniska enheter.
Fördelar och nackdelar med de olika metoderna summeras i nedanstående tabell 1. 460 564 A: ~ umcqäv ^<~mV >mmmm mmwfififixmøw >wuxwwno man ~wxu>e mn umhmuwfinsox swwmcmfi ucassflofiumm >fi»xmfiQ0 Hufifim ufiwxcm ^c~e om Umcdev mucmum mmflflfiwxwym >M»xwwn:w man hm wwzcmsflflw « ~>«~mHmu emmmcflfl mxwcmm |mHo:H@nc:&e~ A; fi Uwcwev wpmfiu >H@xmfino wa: ~wxu>e mfi umumuflfinsox ewmmcflä >Hu1mfiQ° uwflfim yfimxcw A: ~ umcflev Wu >*~x@~n=m mflfifln mn u>~Uw_mH Emmwcqfl @=fic_fimm Ahmuacqe mamma socwv au >fl»xwfin:m mm; wmc ufiwxcw nnmcm ~mxu>s co«ßwc@#:~om< Hmcoflpxmmu Rmumcms mmfißxmfiwß fifiwu ~@~w;@~fi.@z wwcmmfipcm cmflfims umcofiuxmww >m mncwwH>«a »nu wcumnoums mncmx mn Ume Hm~muxumc :us hmfimunmu pmgfiammußmwu >m mcflcxfioh lmcmumnnw new nam umcmwfimcmx mmfiflfime mcficemumwn >fi~m~M~Cm>x »xmxw 0UCmhDLEOCmU Qmßmfiuwmfl mcmüøuwí Doumz kmanokxflurm Luo .A Hfimnmh 10 15 20 25 30 35 460 564 7 Genom föreliggande uppfinning åstadkommes en testsats och ett förfarande för kvalitativ och/eller kvantitativ analys av en analyt bestående av antigener, antikroppar, mikroorganismer eller andra celler i ett vätskeformigt prov. Genom uppfinningen uppnås en snabb och mycket känslig analys som kan utföras av personer utan särskild utbildning.
Förfarandet enligt uppfinningen kännetecknas av att provet bringas i kontakt med en lösning innehållande en viss mängd av ett prefabricerat komplex av analyspeci- fika antikroppar och enzymmärkta antikroppar mot immuno- globuliner, och, med undantag av när analyten består av stora mikroorganismer eller celler, analytspecífika bindande inerta partiklar, varvid ett ytterligare komplex bildas mellan analyten och nämnda komplex av de analyt- specifika antikropparna och de enzymmärkta anti-antikrop- parna och eventuellt de analytspecifika bindande inerta partiklarna, varpå lösningen bringas att passera genom ett filter som kvarhåller de komplexbundna partiklarna och stora mikroorganismerna eller cellerna men släpper igenom de obundna komplexen av analytspecifika antikroppar och enzymmärkta anti-antikroppar, vilka därefter påvisas genom att lösningen bringas i kontakt med ett specifikt substrat som sönderdelas av enzymet till produkter som kan påvisas färgmässigt.
Uttrycken "analytspecifika bindande partiklar" eller "inerta partiklar" såsom de används här avser analytspecifika bindande partiklar/makromolekyler som är inerta mot alla andra reaktioner utom den specifika bindningen.
Uppfinningen belyses närmare i de bifogade rit- ningarna, där fig l visar den kända ELISA-metoden, varifrån föreliggande uppfinning ufgàr; fig 2 visar schematiskt förfarandet enligt uppfinningen; fig 3 visar framställning av de prefabricerade komplex av analytspecifika antikroppar och enzymmärkta antikroppar 460 5 10 15 20 25 30 35 564 8 mot immunoglobuliner, eller de s k specifika, enzymmärkta anti-antikroppar (eller FASSEL-antikroppar) som används vid uppfinningen; och fig 4 visar en utföringsform av en anordning för använd- ning vid uppfinningen.
En anordning för genomförande av förfarandet kan t ex vara den anordning som visas i fig 4. Denna omfattar en rörformíg, lockförsedd behållare l, som är uppdelad 4 och en undre i en övre kammare 2, en filterkammare 3, kammare 5, av att den övre kammaren 2 är avskild från filterkammaren 3, 4 av ett membran 6, av att i filter- kammaren 3, 4 är anordnat ett filter 7, såsom ett ste- rilfilter, samt av att filterkammaren 3, 4 är avskild från den undre kammaren 5 medelst en löstagbart anordnad förslutning 8.
Anordningen omfattar vidare lås 10 för den övre kam- maren 2 och lås ll för förslutningen 8, liksom tätnings- ringar 12, 13 för att ett vakuum skall kunna upprätthållas i behållaren l. Làsen 10 resp ll kan pâverkas mekaniskt.
Filtret 7 uppbärs lämpligen av ett filterstöd 14.
Metoden enligt föreliggande uppfinning betecknas FASSEL, vilket är en förkortning av Filtration of Anti- body, Separated, Specific and Labelled.
Principen för metoden enligt uppfinningen visas schematiskt i fig 2 med påvisande av antigener som exempel på tillämpningen. Eftersom antigener i allmänhet är mycket små partiklar kopplas de först till större, inerta partiklar. Därefter bringas de i kontakt med en bestämd mängd specifika, enzymmärkta anti-antikroppar (FASSEL- -antikroppar). Därefter bringas lösningen att passera genom ett filter med en sådan porstorlek att det kvar- häller partiklarna med komplexbundna FASSEL-antikroppar.
De eš komplexbundna FASSEL-antikropparna passerar genom filtret och ner i en substratlösning, där enzymet spjälkar substratet under'alstring av en färgförändring. Denna färgförändring kan avläsas visuellt eller spektrofoto- metriskt. Genom jämförelse med kalibrerade färgskalor 10 15 20 25 30 35 460 564 9 kan mängden FASSEL-antikroppar som har passerat filtret avläsas. Genom att en bestämd mängd FASSEL-antikroppar tillsatts från början kan man således dels pávisa närvaron av ett specifikt antigen i provet och dels mängden av detta.
Komplexet av analytspecifika antikroppar och enzym- märkta antikroppar mot immunoglobuliner som används vid föreliggande uppfinning framställs på följande sätt: Man använder välkända s k affinitetskromatografiprinciper.
Avsikten är att separera de specifika antikroppar som skall användas i metoden enligt uppfinningen, dvs att avlägsna alla andra antikroppar och serumkomponenter från de spe- cifika antikropparna. Vidare skall de specifika antikrop- parna märkas med enzym, vilket åstadkommes med användning av enzymmärkta anti-antikroppar. Enzymmärkta ämnen som inte är bundna till de specifika antikropparna avlägsnas.
Samtliga dessa steg genomföres i ett förfarande, vilket är en helt ny princip som inte tidigare har använts inom affinitetskromatografin.
FASSEL-antikroppar mot lösliga antigener framställs enligt följande metod (se fig 3): a) antigenet binds till en kolhydratpolymer, en latex- partikel eller annan partikel genom i och för sig kända metoder; b) det antiserum, från vilket specifika antikroppar skall avlägsnas, blandas med partiklarna; c) partiklarna tvättas fria från ej bundna serumkompo- nenter med användning av en neutral hypertonisk eller lätt sur isotonisk lösning för att avlägsna specifika antikroppar med låg affinitet för antigenet (buffert- exempel: 2,5 M NaC1, 0,03 M fosfatbuffert, pH 7,2; eller 0,15 M NaCl, 0,03 M fosfatbuffert, pH 5); d) enzymmärkt antiimmunoglobulin (fràn någon djurart eller människa, mot något mänskligt eller animaliskt immunoglobulin; exempel pà enzymer: pepparrotsperoxidas) tillsättes; många olika preparat av enzymmärkt anti- immunoglobulin finns allmänt tillgängliga; borttvättning av ej bundet enzymmärkt antiimmunoglobulin; 460 564 10 15 20 25 30 35 10 e) antikropparna som är bundna till partiklarna elueras med användning av en lösning med lågt pH-värde (t ex 2,5) eller med 3M KSCN vid neutralt pH-värde; f) partiklarna avlägsnas genom centrifugering eller filtrering. Lösningen av FASSEL-antikroppar neutraliseras eller díalyseras mot en buffert för att återupprätta antikropparnas reaktivitet.
FASSEL-antikropparna är sålunda färdiga prefabri- cerade analytspecifika enzymmärkta komplex som skall bringas i kontakt med provet.
FASSEL-antikroppar mot mikroorganismer, såsom bak- terier eller svampar eller andra celler kan framställas med användning av de intakta mikroorganismerna eller cellerna istället för inerta partiklar som uppbär renade antigener.
Principen enligt föreliggande uppfinning kan användas på ett enda antigen-antikroppssystem, s k singel-FASSEL, eller i förbindelse med flera FASSEL-system, s k multi- -FASSEL-system. I singel-FASSEL utnyttjas ett enda anti- gen-antikroppssystem. I multi-FASSEL anbringas provet på ett ställe, som delar sig i två eller flera linjer, var och en förbunden med sitt eget FASSEL-system. Multi- -FASSEL gör det möjligt att analysera ett prov med av- seende på tvâ eller flera parametrar.
Nedan följer en närmare beskrivning av en anordning som kan användas vid uppfinningen. Denna utgöres av en rörformig behållare 1 som är försedd med ett lock 9.
Behållaren är uppdelad i tre kamrar. Den övre kammaren 2 innehåller FASSEL-antikropparna (ocn när sä behövs ett desinfektionsmedel), den mellersta kammaren (filter- kammaren) 3, 4 innehåller ett filter 7 och den nedre kammaren 5 innehåller substratet. FASSEL-antikropparna i den övre kammaren 2 är fràn början separerade från filterkammaren 3, 4 medelst ett membran 6. Mellan filter- kammaren 3, 4 och den undre kammaren 5 finns en löstagbart anordnad förslutning 8. Membranet 6 och förslutningen 8 kan förstöras respektive avlägsnas på mekanisk väg l0 15 20 25 30 35 460 564 ll vid genomförande av förfarandet. Behållaren är tätad medelst lämpliga tätningsorgan. Den undre kammaren 5 innehåller ett specifikt substrat som kan sönderdelas av de specifika, enzymmärkta anti-antikropparna i den övre kammaren 2.
Tätningarna mellan kamrarna bryts genom anbringande av ett positivt tryck i den övre kammaren 2 eller ett negativt tryck (vakuum) i den undre kammaren 5. Det positiva trycket i den övre kammaren 2 kan t ex erhållas genom att tvinga en cylinder nedåt i kammaren. Negativt tryck kan skapas i systemet genom närvaro av vakuum i den nedre kammaren 5.
Provet som skall analyseras införes i den övre kammaren 2, där FASSEL-antikropparna komplexbindes till de substanser eller organismer som skall analyseras, vilka substanser i förekommande fall är bundna till inerta partiklar med en sådan storlek att de ej kan passera filtret 7 i filterkammaren 3, 4. Därefter bryts membranet 6, t ex genom att utifrån trycka pà behållaren l, som företrädesvis är utformad i ett något böjligt material. Lösningen tvingas därefter igenom filtret 7 antingen genom att ett tryck anbringas ovanför filtret eller genom att vakuum är anbringat i den undre kammaren 5. Endast de ej komplexbundna, specifika, enzymmärkta anti-antikropparna kan passera genom filtret och kommer därigenom i kontakt med substratet i den undre kammaren 5. De enzymmärkta antikropparna spjälkar det specifika substratet i färgade produkter, vilka kan avläsas visuellt eller spektrofotometriskt.
Behållaren med de specifika FASSEL-antikropparna är lämpligen försedd med information för tolkningen och ändamålet med testet.
Vid helt manuell analys enligt föreliggande uppfin- ning pàvisas substratets nedbrytning som en färgförändring som är synlig för blotta ögat och denna färgförändring jämförs med en standardfärgskala.
Man kan även använda en dator ("Computer-FASSEL") 460 10 15 20 25 30 35 564 12 för tolkning av färgförändringen via en spektrofotometer.
Tolkningsgränser, som är unika för varje sats av FASSEL- -rör, finns på röret för avläsning av datorn.
Provet som skall testas införes i den övre kammaren i en FASSEL-behållare, vilken placeras i ett applicerings- utrymme på datorn. Datorn är lämpligen programmerad för att fråga efter identifieringsdata för patienten.
När identifieringen är klar accepterar datorn provet och ger patientdata, testtyp och tidàtgång för det test som skall genomföras. Efter en viss inkubering (tid och temperatur är specifika för varje test) bryter ma- skinen förseglingen mellan kamrarna. Efter ytterligare inkubering (som också är specifik för varje test) tolkar datorn resultaten i förhållande till gränserna för positiva och negativa resultat eller den kvantitativa formel som ges på testbehállaren. Andra upplysningar som kan ges av datorn är gränser för pålitliga test- resultat, råd beträffande kompletterande laboratorietest i förhållande till det erhållna resultatet eller klinisk bakgrundinformation.
Varje sådan "Computer-FASSEL" kan tolka alla olika FASSEL-rör. Datorn är utformad så att den accepterar testen ett och ett oberoende av ändamålet av testet.
Kalibrering av spektrofotometern genomföres med två standardfärgrör (ett för "högt värde" och ett för "lågt värde“). Provrören är märkta med information om kalibreringen. En skrivare kan även vara kopplad till datorn. Likaså kan datorn vara förbunden med ett central- laboratorium för utväxling av löpande information.
I det följande ges nâgra exempel på tillämpningen av förfarandet enligt uppfinningen, vilka exempel inte är avsedda att vara begränsande. åh: 1 Kvalitativ och kvantitativ analys av bakterier, svampar och andra celler (t ex lymfocyter) Provet som skall testas blandas med det prefabri- cerade komplexet av analytspecifika antikroppar och 10 15 20 25 30 35 460 564 13 specifika enzymmärkta antikroppar mot immunoglobuliner i den övre kammaren i en anordning enligt fig 4. Om sådana bakterier, svampar eller celler som reagerar med det prefabricerade komplexet är närvarande kommer FASSEL-antikropparna att kvarhållas i den övre kammaren då en tryckskillnad alstras över filtret. Detta filter har således så små porer att bakterier, svampar eller andra celler inte kan passera därigenom.
För att undvika ospecifika reaktioner från bakterier som reagerar med antikroppar oberoende av deras speci- ficitet, kan normalt serum tíllsättas för blockering.
De ej bundna FASSEL-antikropparna spjälkar därefter substratet i den undre kammaren i anordningen, vilken spjälkning visar sig i form av en färgförändring. Genom att en förutbestämd mängd av det prefabricerade komplexet används blir färgförändringen i den undre kammaren även ett mått på mängden bakterier, svampar resp andra celler som är närvarande i provet.
EXEMPEL 2 Kvalitativ och kvantitativ analys av virus Virus är i allmänhet alltför små för att kvarhàllas på filter som är lämpliga för denna uppfinning. Följande modifiering används därför. Den övre kammaren innehåller inerta partiklar, till vilka lämpliga antivirusantikroppar är bundna, såväl som ett komplex av virusspecifika anti- kroppar och enzymmärkta antikroppar. När viruset blandas med dessa reagens kommer det att bindas till partiklarna och partiklarna kommer därefter att täckas med komplexet av virusspecifika antikroppar och enzymmärkta antikroppar som reagerar med viruset. Dessa komplex av virus, inert partikel och komplex av virusspecifik antikropp och enzymmärkt antikropp kvarhàlles på filtret.
Liksom i exempel 1 kan man ävcn_här erhålla en kvantitativ bestämning av viruset genom avläsning av färgintensiteten i substratlösningen i den undre kammaren.
Detta system kan dock ge upphov till felaktigt positiva reaktioner om ovanligt höga virusnivàer är 460 564 10 l5 20 30 35 14 närvarande i provet. Om en dator används kan denna programmeras så att den rekommenderar användaren att även testa ett utspätt prov för erhållande av negativa resultat.
EXEMPEL 3 Kvalitativ och kvantitativ analys av lösliga antigener Dessa antigener kan vara strukturer som är närvarande i kroppsvätska eller -vävnad eller i miljön. Exempel på antigener är serumkomponenter, som vanligen påvisas genom klinisk kemi, hormoner, lösliga antigener till mikroorganismer inklusive hepatit- och AIDS-virus. Detta test genomföres huvudsakligen såsom enligt exempel 2.
EXEMPEL 4 Kvalitativ och kvantitativ analys av antikroppar För analys av antikroppar i ett prov blandas provet dels med inerta partiklar, till vilka antigener mot- svarande de antikroppar som skall påvisas har kopplats och dels för de antikroppar som skall påvisas och enzymmärkta med ett komplex av antikroppar som är specifikt antikroppar. Antikroppar som är närvarande i provet kommer då att bindas till antigenerna på partiklarna, varefter komplexet i sin tur binds till antikropparna från provet. Så stor mängd av FASSEL-antikroppar som motsvaras av den närvarande mängden antikroppar från provet kommer således att kvarhållas på filtret, medan den resterande delen av FASSBL-antikropparna passerar filtret och reagerar med substratet.
Genom testsatsen och förfarandet enligt uppfinningen kombineras ELTSA-systemets höga känslighet med mycket lätta operationer ur teknisk synpunkt och eliminerar de många möjligheterna till felaktiga reaktioner som är allvarliga nackdelar i det kända ELISA-systemet.
Dessutom ger möjligheten att koppla förfarandet och anordningen till en dator många fördelar framför nuvarande metoder: (a) “Computer-FASSEL" är en apparat som kan genomföra ett stort antal olika test, som nu används på många 10 15 20 25 460 564 15 olika laboratorier och inom olika medicinska discipliner. (b) Testsystemet är helt automatiserat. Varje persom som kan uppsamla ett prov,kan genomföra ett test enligt uppfinningen, utan särskild utbildning eller speciella mannualer.
(C) Förfarandet enligt uppfinningen betyder decentra- lisering och medför att test som hittills varit mycket avancerade numera kan utföras i små laboratorieenheter. (d) Man erhåller snabba resultat, även i högt specia- liserade test, vilka resultat blir tillgängliga redan medan patienten är kvar på laboratoriet. (e) Förutom testresultaten kan datorn programmeras att ge viktig bakgrundsinformation, t ex det aktuella epi- demiologiska läget i samhället.
Förfarandet enligt uppfinningen utan koppling till någon dator (s k "Color-FASSEL") är mycket enkelt att genomföra och tolka och kan därför utföras av vem som helst som kan ta ett prov och läsa en kort instruktion utanpå ett provrör. Testet kan även genomföras hemma hos en patient under de mest primitiva betingelser utan någon annan utrustning än testsatsen enligt uppfinningen.
Några av fördelarna med denna metod med direkt avläsning med blotta ögat är följande: (a) den är snabb; (b) den är mycket litet arbetskrävande; (c) den kan användas för test av ett enda prov i flera olika antigen-antikroppssystem samtidigt.
Claims (5)
1. PATENTKRAV l- Testsats för kvalitativ och/eller kvantitativ analys av en analyt bestående av antigener, antikroppar, mikroorganismer eller andra celler i ett vätskeformigt prov, k ä n n e t e c k n a d av att den omfattar ett prefabricerat komplex av analytspecifika antikroppar och enzymmärkta antikroppar mot immunoglobuliner, och ett specifikt substrat som kan sönderdelas av enzymet på de enzymmärkta antikropparna.
2. Förfarande för kvalitativ och/eller kvantitativ analys av en analyt bestående av antigener, antikroppar, mikroorganismer eller andra celler i ett vätskeformigt k ä n n e t e c k n a t av att provet bringas prov, i kontakt med en lösning innehållande en viss mängd av ett prefabricerat komplex av analytspecifika anti- kroppar och enzymmärkta antikroppar mot immunoglobu- liner, och, med undantag av när analyten består av stora mikroorganismer eller celler, analytspecifika bindande ínerta partiklar, varvid ett ytterligare komplex bildas mellan analyten och nämnda komplex av de analytspecifika antikropparna och de enzymmärkta anti-antikropparna och eventuellt de analytspecifika bindande inerta partiklarna, varpå lösningen bringas att passera genom ett filter som kvarhäller de komplex- bundna partiklarna och stora mikroorganismerna eller cellerna men släpper igenom de obundna komplexcn av analytspecifika antikroppar och enzymmärkta anti-anti- kroppar, vilka därefter påvisas genom att lösningen bringas i kontakt med ett specifikt substrat som sönder- delas av enzymet till produkter som kan påvisas färg- mässigt. R
3. Förfarande enligt krav 2, k ä n n e t e c k - n a t av att de färgmässigt påvisbara produkterna avläses visuellt eller spektrofotometriskt.
4. Förfarande enligt krav 2 eller 3, k ä n n e - 10 15 460 564 17 t e c k n a t av att när analyten består av antikroppar komplexbindes antikropparna dels till nämnda partiklar, på vilka bundits antigener som är specifika för de antikroppar som skall analyseras, och dels till ett komplex av antikroppar som är specifika för dessa antikroppar och enzymmärkta antikroppar mot immuno- globuliner.
5. Förfarande enligt krav 2 eller 3, k ä n n e - t e c k n a t eller små mikroorganismer av att när analyten består av antigener såsom virus, komplexbindes antigenerna eller virusen dels till partiklar, på som är specifika för de och dels vilka bundits antikroppar antígener eller virus som skall analyseras, till ett komplex av antikroppar som är specifika för nämnda antigener respektive virus, och enzymmärkta antikroppar mot immunoglobuliner.
Priority Applications (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SE8501441A SE460564B (sv) | 1985-03-25 | 1985-03-25 | Testsats och foerfarande foer immunanalys med prefabricerade komplex av maerkt antikropp och analytspecifik antikropp |
PCT/SE1986/000309 WO1988000345A1 (en) | 1985-03-25 | 1986-06-26 | Method and apparatus for qualitative and/or quantitative analysis of antigens, antibodies, mircroorganisms or other cells |
DE86904435T DE3684607D1 (sv) | 1985-03-25 | 1986-06-26 | |
EP86904435A EP0311604B1 (en) | 1985-03-25 | 1986-06-26 | Method and apparatus for qualitative and/or quantitative analysis of antigens, antibodies, mircroorganisms or other cells |
NO88880835A NO880835L (no) | 1985-03-25 | 1988-02-25 | Fremgangsmaate og anordning for kvalitativ og/eller kvantitativ analyse av antigener, antistoffer, mikroorganismer eller andre celler. |
DK104988A DK104988D0 (da) | 1985-03-25 | 1988-02-26 | Fremgangsmaade og apparat til kvalitativ og/eller kvantitativ analyse af antigener, antistoffer, mikroorganismer eller andre celler |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SE8501441A SE460564B (sv) | 1985-03-25 | 1985-03-25 | Testsats och foerfarande foer immunanalys med prefabricerade komplex av maerkt antikropp och analytspecifik antikropp |
PCT/SE1986/000309 WO1988000345A1 (en) | 1985-03-25 | 1986-06-26 | Method and apparatus for qualitative and/or quantitative analysis of antigens, antibodies, mircroorganisms or other cells |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SE8501441D0 SE8501441D0 (sv) | 1985-03-25 |
SE8501441L SE8501441L (sv) | 1986-09-26 |
SE460564B true SE460564B (sv) | 1989-10-23 |
Family
ID=26658917
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SE8501441A SE460564B (sv) | 1985-03-25 | 1985-03-25 | Testsats och foerfarande foer immunanalys med prefabricerade komplex av maerkt antikropp och analytspecifik antikropp |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0311604B1 (sv) |
DE (1) | DE3684607D1 (sv) |
DK (1) | DK104988D0 (sv) |
NO (1) | NO880835L (sv) |
SE (1) | SE460564B (sv) |
WO (1) | WO1988000345A1 (sv) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5358690A (en) * | 1989-01-10 | 1994-10-25 | Lamina, Ltd. | Environmental sample collection and membrane testing device |
US4961432A (en) * | 1989-01-10 | 1990-10-09 | Cancer Diagnostics, Inc. | Modular fluid sample preparation assembly |
US5003988A (en) * | 1989-06-21 | 1991-04-02 | La Mina Ltd. | Modular multiple fluid sample preparation assembly |
JP3093833B2 (ja) * | 1991-01-22 | 2000-10-03 | 長瀬産業株式会社 | う蝕原性菌の検出定量方法 |
WO2016117701A1 (ja) * | 2015-01-22 | 2016-07-28 | Necソリューションイノベータ株式会社 | ターゲット分析用具およびターゲット分析方法 |
US20210187499A1 (en) * | 2016-07-20 | 2021-06-24 | Nec Solution Innovators, Ltd. | Target analysis kit and target analysis method |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4407943A (en) * | 1976-12-16 | 1983-10-04 | Millipore Corporation | Immobilized antibody or antigen for immunoassay |
GB2084317B (en) * | 1980-09-30 | 1984-01-18 | Erba Farmitalia | Antigen-linked competitive enzymeimmunoassay |
FR2514367A1 (fr) * | 1981-10-08 | 1983-04-15 | Pasteur Institut | Procede pour la detection de germes pathogenes dans des fluides par filtration sur des immunoadsorbants, et application a la determination de la potabilite d'une eau |
US4459361A (en) * | 1982-06-04 | 1984-07-10 | Angenics, Inc. | Ligand assay with one or two particulate reagents and filter |
US4786471A (en) * | 1983-10-21 | 1988-11-22 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Heterogeneous immunoassay method and assembly |
US4632901A (en) * | 1984-05-11 | 1986-12-30 | Hybritech Incorporated | Method and apparatus for immunoassays |
EP0227679A1 (en) * | 1984-09-26 | 1987-07-08 | ANDERSSON, Jan Peter | Device and method for trapping and analyzing particles |
-
1985
- 1985-03-25 SE SE8501441A patent/SE460564B/sv not_active IP Right Cessation
-
1986
- 1986-06-26 DE DE86904435T patent/DE3684607D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1986-06-26 WO PCT/SE1986/000309 patent/WO1988000345A1/en active IP Right Grant
- 1986-06-26 EP EP86904435A patent/EP0311604B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-02-25 NO NO88880835A patent/NO880835L/no unknown
- 1988-02-26 DK DK104988A patent/DK104988D0/da not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE3684607D1 (sv) | 1992-04-30 |
DK104988A (da) | 1988-02-26 |
WO1988000345A1 (en) | 1988-01-14 |
EP0311604A1 (en) | 1989-04-19 |
EP0311604B1 (en) | 1992-03-25 |
SE8501441D0 (sv) | 1985-03-25 |
NO880835L (no) | 1988-04-25 |
SE8501441L (sv) | 1986-09-26 |
NO880835D0 (no) | 1988-02-25 |
DK104988D0 (da) | 1988-02-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Ritchie et al. | Automated quantitation of proteins in serum and other biologic fluids | |
US4290997A (en) | Apparatus for automatic measurement of the results of agglutination tests | |
US4639419A (en) | Immunological color change test involving two differently colored reagent spots | |
JP3969722B2 (ja) | カンジダの検出 | |
CN102147409B (zh) | 一种测定抗核小体抗体IgG的方法及试剂装置 | |
CN1088310A (zh) | 血样的间接荧光鉴定 | |
US4757002A (en) | Method and kit for the estimation of serum immunoglobulin | |
AU621310B2 (en) | Immunometric assay kit and method applicable to whole cells | |
US6046013A (en) | Process for identifying specific antibodies associated with HLA | |
US4314987A (en) | Method for diagnosing rheumatological diseases | |
EP0350233B1 (en) | An article for performing immunological assays utilizing organic dyes and methods for producing and utilizing same | |
JPS61228351A (ja) | 糞便中のヘモグロビンの検出方法 | |
SE460564B (sv) | Testsats och foerfarande foer immunanalys med prefabricerade komplex av maerkt antikropp och analytspecifik antikropp | |
US5721105A (en) | Method for the immunological determination of proteins and kit for carrying out the method | |
CN113156143A (zh) | 血型不规则抗体特异性鉴定方法及其试剂 | |
CN103384826A (zh) | 一种测定抗RA33抗体IgG的方法及试剂装置 | |
CA1279818C (en) | Diagnostic testing for micro-organisms | |
JP2553852B2 (ja) | サンプル中の生物学的物質の免疫学的測定法 | |
Trudell | Detection and identification of antibodies | |
AU770649B2 (en) | Container for holding biologic fluid for analysis | |
EP0222781A1 (en) | Microtiter - surface - flocculation assay for antigen or antibody screening | |
WO2011039775A1 (en) | A modified method of agglutination to detect infections caused by microorganisms | |
US3733398A (en) | Determining and reversing anticomplementary activity in complement fixation test for australia antigen | |
Ohgama et al. | A new solid‐phase assay system using magnetic force on blood group serology | |
SU899043A1 (ru) | Способ вы влени менингококкового антигена |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
NUG | Patent has lapsed |
Ref document number: 8501441-3 Effective date: 19931008 Format of ref document f/p: F |