JPH08208424A - ベツリン酸を含む化粧品組成物 - Google Patents

ベツリン酸を含む化粧品組成物

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JPH08208424A JP7325652A JP32565295A JPH08208424A JP H08208424 A JPH08208424 A JP H08208424A JP 7325652 A JP7325652 A JP 7325652A JP 32565295 A JP32565295 A JP 32565295A JP H08208424 A JPH08208424 A JP H08208424A
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 コラーゲンの合成を高度に刺激する化粧品組
成物の提供。 【解決手段】 化粧品組成物は、少なくとも６μＭのベ
ツリン酸を、好ましくはアスコルビン酸とともに含む。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ベツリン酸を含む
ヒトの皮膚に局所塗布するための組成物ならびに皮膚の
治療およびコンディショニングのための該組成物の使用
法に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】皮膚
の主要基質蛋白質であるコラーゲンが皮膚に引張強さを
付与することは知られている。コラーゲンは、年齢およ
びＵＶ照射とともにかなり減少することが分かってい
る。これらの蛋白質の構成が分解または破壊すると皮膚
の引張強さが減少し、皺やたるみが生ずる。ヒトを対象
とする多くの研究により、Ｉ型コラーゲンが光線障害が
進行すると減少することが分かっており（Kligman, A.,
JAMA,(1969), 210, pp.2377-2380; lavker, R., J. In
v. Derm., (1979), 73, 79-66; Smith, J. et al., J.
Inv. Derm., (1962), 39, pp.347-350;および Shuster,
S. et al., Br. J. Dermatol., (1975), 93, pp.639-6
43 参照）、皺の組織学と太陽光線を浴びた皮膚のコラ
ーゲンレベルの減少とにいくつかの相関性があることが
報告されている（Chen, S., Kiss, I., J. Inv. Derm.,
(1992), 98, 975-978）。Voorheesらは、これらの知見
を、光線障害を受けたヒトの皮膚をトレチノインで局所
的に治療することによってＩ型コラーゲンが回復するこ
とを示すことにより裏付けた（Christopher, E., et a
l., The New Eng. Jou. of Medicine(1993), 329, pp.
530-535 参照）。これらの結果から、まず、レチン酸が
Ｉ型コラーゲンを回復させるというｉｎ ｖｉｖｏの証
拠が得られる。多くの病因研究により、コラーゲン合成
と皺の消滅との間の対応作用が示された。また、コラー
ゲンの刺激による皮膚基質の強化が、蜂巣炎（cellulit
e ）の治療に何らかの有益な効果を及ぼすと考えられ
る。
【０００３】コラーゲンの合成を刺激することが知られ
ている２、３の天然物質がある。これらの一つはコラー
ゲン合成の補助因子であるアスコルビン酸であり、酵素
のプロリル−ヒドロキシラーゼを活性化し（Peterkofsk
y, B., Arch. Biochem. Biophys., (1972), 152, pp.31
8-328 参照）、プロコラーゲンｍＲＮＡを増加させるこ
とが知られている（Cardinale, G. et al., Adv. Enzym
ol., (1974), 41, p.425; Geesin, J. et al., J. Inv.
Derm., (1988), 90, p.420; Tajima, S. ら，Biochem.
Biophys. Res. Comm., (1982), 106, pp.632-637 参
照）。ビンロウの実のアルカロイド、アレコリンおよび
アレカイジンによるコラーゲン合成の刺激も記載されて
いる（Vermillo, A. et al., Arch. Oral Biol., (198
6), 31, pp.819-823参照。）。Coleus forskolliの一般
成分であるフォルスコリンは、クローン化された骨芽細
胞でのコラーゲンの産生を増加させることが分かってい
る（Hakeda, Y. et al., J. Biochem., (1987), 101, p
p.1463-1469 参照）。アスコルビン酸を除いて、これら
の物質は、毒性を示す可能性があることから、化粧品ま
たはパーソナルケアの用途に対しては許容されない。
【０００４】いくつかの研究により、Centella asiatic
a が、線維芽細胞によるコラーゲンの合成に対して作用
することにより、皮膚に対して高い弾性および優れたし
なやかさを与えることが示されている（Tenni, R. et a
l., J. Biochem. (1988), 38. pp.69-77; Maquart, F.
et al., Actualite Therapeutique, (1989), pp.1571-1
574 参照）。Centella asiatica も、結合組織において
調節剤として作用し、その再生を促進し、過剰な増殖を
防止して、しなやかで健康な結合組織を作っている（La
wrence J. Eur. J. Pharmacol., (1967), pp. 414-425;
Rosen, H. etal., J. Proc. Soc. Exp. Biol. Med.,
(1967), 125, pp.279-280; Bosse, J. et al., Ann. Pl
ast. Surg., (1979), 3, pp.13-21 参照）。Vogel et a
l.は、瘢痕組織のコラーゲンがかなり増加すると牽引お
よび破壊に対する耐性が増加することを示した（Vogel,
H. et al., Acta Therapeutica, (1990) 16, pp.285-2
96参照）。コラーゲン線維のこの耐性の増加は、ある成
熟段階に達したコラーゲンで顕著であるにすぎない。Ce
ntella asiatica のトリテルペンは、コラーゲンの合成
およびその成熟レベルの両方を増加させる。
【０００５】Centella asiatica 植物は、マダガスカル
およびインド洋の周りに成育している。従来、この植物
は、傷の治療に使用されてきた（Chopra, R. et al.,"I
ndigenous Drugs of India", Dhur & Sons Pvt. ltd.
(1985), Calcutta 参照）。ヨーロッパでは、この植物
から得られた薬物が、癌および傷の治療に使用される。
Centella asiatica は、化粧品用途、すなわち皮膚状態
の改善、抗蜂巣炎作用、および皮膚の色の改善にも適し
ている（Adolphe, M. et al., Int. J. CosmeticSoc.,
(1984), 6, pp.55-58参照）。Centella asiatica は、
アジア酸、マデカシ（madecassic）酸、アジアチコシド
およびマデカシド（madecaside）を含む。それらは全て
トリテルペノイドの類に属する。 Maquart et al., Con
n. TissueRes., (1990), 24 pp.107-120 は、Centella
asiatica からのトリテルペン抽出物が線維芽細胞単層
培養においてコラーゲンの合成を刺激することを示し、
アジア酸がコラーゲン合成刺激に関与する主な成分であ
ることが見出された。
【０００６】
【発明を解決するための手段】本発明の少なくとも一部
は、ベツリン酸がCentella asiatica 抽出物またはCent
ella asiatica の活性成分よりも好ましいコラーゲン刺
激活性を有するという発見に基づくものである。アジア
酸またはアジアチコシドなどのトリテルペンの構造上の
立体配置と違って、ベツリン酸は、下記図に示すよう
に、縮合した５員環を有し、エキソ−ビニル基を含む。
ベツリン酸およびベツリン酸を含む植物の食物および香
料での用途は開示されている（ＪＰ０５１７７６６８８
Ａ、ＪＰ５７０３１６２０Ａ、ＪＰ８２０２２０参
照）。
【０００７】本発明は、薬剤的にまたは化粧品として許
容されうる担体および少なくとも６μＭの濃度のベツリ
ン酸を含む新規組成物に関する。本発明は、少なくとも
一部が、ベツリン酸がCentella asiatica 抽出物または
Centella asiatica 活性成分よりコラーゲンの合成を高
度に刺激するという発見に基づくものである。
【０００８】本発明の好ましい態様では、組成物がさら
に、酸として、またはエステルもしくは塩の形態で存在
することができるアスコルビン酸を含む。アスコルビン
酸の存在はベツリン酸がコラーゲンの合成を刺激するの
に必要であることが本発明の一部として見出された。し
かし、ヒトの皮膚組織には、コラーゲンの合成を刺激す
るために外から加えたベツリン酸とともに作用するのに
十分な量のアスコルビン酸が存在する。にもかかわら
ず、本発明組成物にさらにアスコルビン酸を含めること
は、特に有益である。
【０００９】本発明はまた、ベツリン酸を含む本発明組
成物を皮膚に局所的に塗布して皮膚を治療する方法に関
する。本発明はまた、本発明組成物を皮膚に塗布するこ
とによりコラーゲンの合成を刺激する方法に関する。
【００１０】本発明はまた、皺、たるみ、蜂巣炎および
光線障害などの皮膚の症状を治療して弾性の大きい、な
めらかでしなやかな皮膚を作るための薬物の製造におけ
るベツリン酸の使用に関する。本発明はまた、皮膚での
コラーゲンの合成を刺激するための薬物の製造における
ベツリン酸の使用に関する。
【００１１】
【発明の実施の形態】ベツリン酸は、本発明組成物の必
須成分である。ベツリン酸は、下記式を有する。
【００１２】
【化１】
【００１３】本発明によれば、ベツリン酸は、組成物中
に少なくとも６μＭの量で存在しなければならない。好
ましくは、最少のコストで最適のコラーゲン刺激活性を
得るために、本発明組成物中のベツリン酸の濃度が６μ
Ｍ〜１００ｍＭ、好ましくは６μＭ〜５０ｍＭの範囲で
ある。
【００１４】ベツリン酸は、純粋なベツリン酸（Aldric
h 製の９０％純度のベツリン酸）として市販されてお
り、または植物抽出物として得ることができる。
【００１５】“Handbook of Phytochemical Constituen
ts of GRAS（一般に安全であると認められているものと
して知られている）herbs and Other economic plants
”，James Duke 1992, CRC Pressによれば、下記の植
物がベツリン酸を含むことが分かる。
【００１６】 カジノキ（Broussonetia papyrifera ） クマコケモモ（Arctostaphylos uva-ursi ） レモンユーカリ（Eucalyptus citriodora ） Carya ovata ヤドリギ（Viscum alkeem ） ブドウ（Vitis vinifera） ミツガシワ（Menyanthes trifoliata ） テウチグルミ（Jugalns negia ） シチヘンゲ（Lantana camara） カバノキ科Betula spp. （例えば、silver birch）。
【００１７】本発明組成物での使用に適する、ベツリン
酸を含む植物抽出物は、有機溶媒抽出物、例えばアルコ
ール抽出物、酢酸エチル抽出物、プロピレングリコール
抽出物、エチレングリコール抽出物、エーテル抽出物で
ある。植物抽出物をベツリン酸源として使用する場合
は、植物抽出物を充分な量存在させて、組成物中のベツ
リン酸濃度が少なくとも６μＭになるようにしなければ
ならない。Dukeによれば、植物中のベツリン酸濃度は、
１ｐｐｍ〜８０００ｐｐｍ（重量）の範囲である。ま
た、その濃度は、他の変数（植物の部位、気候、生育
地、土壌の状態、および抽出物の処理法など）の影響を
受ける。
【００１８】また、本発明の組成物は、組成物を皮膚、
髪および／または爪に塗布する場合その分布が容易にな
るように、組成物中の活性成分の希釈剤、分散剤または
担体として作用する、化粧品として許容されうるビヒク
ルを含む。
【００１９】水以外のビヒクルとしては、液体または固
体の皮膚軟化剤、溶媒、保湿剤、増粘剤、および粉末を
挙げることができる。特に好ましい非水性担体は、ポリ
ジメチルシロキサンおよび／またはポリジメチルフェニ
ルシロキサンである。本発明のシリコーンは、粘度が２
５℃で約１０〜１０，０００，０００センチストローク
の範囲であるものである。特に好ましいのは、低粘度シ
リコーンと高粘度シリコーンとの混合物である。これら
の混合物は、Vicasil 、ＳＥおよびＳＦの商標でGenera
l Electric Companyから、ならびに２００および５５０
Series の商標で Dow Corning Companyから入手でき
る。本発明の組成物中に使用できるシリコーンの量は、
組成物の５〜９５重量％、好ましくは２５〜９０重量％
である。
【００２０】化粧品として許容できるビヒクルは、通
常、エマルジョンの５〜９９．９重量％、好ましくは２
５〜８０重量％を占め、他の化粧品添加物がない場合
は、組成物の残部を構成することができる。
【００２１】本発明組成物に存在する好ましい任意成分
はアスコルビン酸である。アスコルビン酸を併存させる
ことは、コラーゲン合成刺激活性を得るのに必要である
が、ヒトの皮膚には、ベツリン酸の補助活性剤として作
用するのに十分なアスコルビン酸が存在する。しかし、
本発明組成物にアスコルビン酸を含めることは、最適な
コラーゲン合成刺激活性を得る上で好ましい。アスコル
ビン酸は、塩（例えば、アスコルビン酸ナトリウム、ア
スコルビン酸カルシウム）またはエステル（アスコルビ
ン酸パルミテート、アスコルビン酸アセテート）または
酸として存在させることができる。本発明組成物中にお
けるアスコルビン酸の範囲は、０．０１％〜１５％、好
ましくは０．０５％〜１０％、最も好ましくは０．１％
〜５％である。好ましい物質は、組成物の均一性および
安定性を改善するために、アスコルビン酸パルミテート
である。
【００２２】油中水型エマルジョンまたは水中油型エマ
ルジョンを作るために、使用する乳化剤の平均親水性−
親油性バランス（ＨＬＢ）にかなり依存して、油または
油性物質を乳化剤とともに存在させることができる。
【００２３】種々の活性成分を本発明の化粧品組成物に
存在させることができる。活性剤は、皮膚および毛髪に
有益な、乳化剤以外および組成物の物理的特性を改善す
るにすぎない成分以外の物質として定義される。この種
類に限定されないが、一般例として、脂肪分解剤、血管
拡張剤、日焼け止め剤および日焼け剤が挙げられる。
【００２４】本発明のコラーゲン合成刺激活性により、
本発明組成物に脂肪分解剤および血管拡張剤を含めるこ
とは、最大の抗蜂巣炎効果を得るために特に好ましい。
【００２５】適する脂肪分解剤としては、カフェイン、
テオフィリン、エピネフィリン、イソプロテレノール、
フォルスコリン、ヨヒンビン、およびホスホジエステラ
ーゼ阻害剤、β−作用薬、α−２−アドレナリン拮抗
薬、ｃＡＭＰ類似体またはアデニレートシクラーゼ活性
剤として作用する他の物質が挙げられるが、これらに限
定されない。
【００２６】適する血管拡張剤としては、エスシン、イ
チョウ、キヅタ、ミノキシジル、ニコチネート、サリチ
ル酸メチル、またはα−アドレナリン拮抗薬、β−アド
レナリン作用薬もしくはニトロオキシド放出剤として作
用する他の物質が挙げられるが、これらに限定されな
い。
【００２７】日焼け止め剤としては、通常、紫外線の遮
蔽に使用される物質が挙げられる。化合物の例として
は、ＰＡＢＡ、桂皮酸エステルおよびサリチル酸エステ
ルの誘導体がある。例えば、メトキシ桂皮酸オクチルお
よび２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン（オ
キシベンゾンとしても知られている）を使用することが
できる。メトキシ桂皮酸オクチルおよび２−ヒドロキシ
−４−メトキシベンゾフェノンは、各々、Parsol MCXお
よび Benzophenone-3 の商標で市販されている。エマル
ジョンに使用される日焼け止め剤の正確な量は、日光の
紫外線放射からどの程度の保護を所望するかによって変
化しうる。
【００２８】乳化剤と称されることもある界面活性剤
を、本発明の化粧品組成物に混入してもよい。界面活性
剤は、組成物全体の約０．５重量％〜約３０重量％、好
ましくは約１重量％〜約１５重量％の量で含むことがで
きる。界面活性剤は、陽イオン、非イオン、陰イオンま
たは両イオン性であり、それらの組み合わせを使用する
こともできる。
【００２９】非イオン界面活性剤の例としては、脂肪ア
ルコール、脂肪酸およびソルビタンをベースとするアル
コキシ化合物がある。これらの物質は、例えば、Shell
Chemical Companyから、Neodolの商品名で入手できる。
場合によっては、Pluronicの商標でＢＡＳＦ Corporati
onから市販されているポリオキシプロピレン−ポリオキ
シエチレンのコポリマーも有用である。Henkel Corpora
tion から市販されているアルキルポリグリコシドも同
様に、本発明の目的に利用できる。
【００３０】陰イオン界面活性剤としては、脂肪酸石
鹸、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルエーテル硫酸ナ
トリウム、アルキルベンゼンスルホン酸塩、モノおよび
／またはジアルキルリン酸塩および脂肪アシルイセチオ
ン酸ナトリウムが挙げられる。
【００３１】両イオン界面活性剤としては、酸化ジアル
キルアミンおよび種々のベタイン（ココアミドプロピル
ベタインなど）等の物質が挙げられる。
【００３２】皮膚軟化剤がしばしば本発明の化粧品組成
物に混入される。皮膚軟化剤の量は、組成物全体の約
０．５重量％〜約５０重量％、好ましくは約５重量％〜
３０重量％である。皮膚軟化剤は、化学的にエステル、
脂肪酸、アルコール、ポリオールおよび炭化水素などに
大別することができる。
【００３３】エステルは、モノまたはジエステルであ
る。脂肪酸ジエステルの許容されうる例としては、アジ
ピン酸ジブチル、セバシン酸ジエチル、ジメリト酸ジイ
ソプロピルおよびコハク酸ジオクチルが挙げられる。許
容されうる分岐鎖脂肪酸エステルとしては、ミリスチン
酸２−エチル−ヘキシル、ステアリン酸イソプロピルお
よびパルミチン酸イソステアリルが挙げられる。許容さ
れうる三塩基酸エステルとしては、トリリノール酸トリ
イソプロピルおよびクエン酸トリラウリルが挙げられ
る。許容されうる直鎖脂肪酸エステルとしては、パルミ
チン酸ラウリル、乳酸ミリスチル、ｏｌｅｙｌ ｅｕｒ
ｃａｔｅおよびオレイン酸ステアリルが挙げられる。好
ましいエステルとしては、ココ−カプリル酸エステル／
カプリン酸エステル（ココカプリル酸エステルおよびコ
コ−カプリン酸エステルの混合物）、ミリスチルエーテ
ル酢酸プロピレングリコール、アジピン酸ジイソプロピ
ルおよびオクタン酸セチルが挙げられる。
【００３４】適する脂肪アルコールおよび脂肪酸として
は、１０〜２０個の炭素原子を有する化合物が挙げられ
る。特に好ましいのは、セチル、ミリスチル、パルミチ
ルおよびステアリルアルコールおよび対応する酸などの
化合物である。
【００３５】皮膚軟化剤として作用するポリオールに
は、直鎖および分岐鎖のアルキルポリヒドロキシ化合物
がある。例えば、プロピレングリコール、ソルビトール
およびグリセリンが好ましい。また、ポリプロピレング
リコールおよびポリエチレングリコールなどの高分子ポ
リオールも有用である。ブチレングリコールおよびプロ
ピレングリコールも浸透増進剤として特に好ましい。
【００３６】皮膚軟化剤として作用する炭化水素の例と
しては、１２〜３０個の炭素原子の炭化水素鎖を有する
ものが挙げられる。特定の例としては、鉱油、ワセリ
ン、スクアレンおよびイソパラフィンが挙げられる。
【００３７】本発明の化粧品組成物に含まれる機能性成
分の他の種類は、増粘剤である。増粘剤は、通常、組成
物の０．１重量％〜２０重量％、好ましくは約０．５重
量％〜１０重量％の量で存在する。増粘剤の例として
は、B.F. Goodrich Company から Carbopol の商標で市
販されている架橋ポリアクリレートがある。キサンタ
ン、カラゲナン、ゼラチン、カラヤ、ペクチンおよびロ
ーカストゴムなどのゴムも使用できる。ある環境下で
は、増粘機能を、シリコーンまたは皮膚軟化剤としても
作用する物質によって達成することができる。例えば、
１０センチストローク以上のシリコーンゴムおよびステ
アリン酸グリセロールなどのエステルは二重の機能を有
する。
【００３８】多くの化粧品組成物、特に水を含む組成物
は、有害な微生物の増殖から保護されなければならな
い。従って、保存剤が必要である。適する保存剤として
は、ｐ−ヒドロキシ安息香酸のアルキルエステル、ヒダ
ントイン誘導体、プロピオン酸エステルの塩および種々
の第四アンモニウム化合物が挙げられる。本発明におけ
る特に好ましい保存剤は、メチルパラベン、プロピルパ
ラベン、イミダゾリジニルウレア、デヒドロキシ酢酸ナ
トリウムおよびベンジルアルコールである。保存剤は、
通常、組成物の約０．５重量％〜２重量％の量で使用さ
れる。
【００３９】粉末も本発明の化粧品組成物に混入するこ
とができる。これらの粉末としては、チョーク、タル
ク、フラー土、カオリン、澱粉、スメクタイト粘土、化
学修飾されたケイ酸アルミニウムマグネシウム、有機的
に修飾されたモンモリロナイト粘土、水和ケイ酸アルミ
ニウム、ヒュームドシリカ、コハク酸オクテニルアルミ
ニウム澱粉およびそれらの混合物が挙げられる。
【００４０】他の少量の付加成分も化粧品組成物に混入
することができる。これらの成分としては、着色剤、乳
白剤および香料が挙げられる。これらの物質の量は、組
成物の０．００１〜２０重量％の範囲である。
【００４１】本発明の組成物は、主に、ヒトの皮膚に局
所塗布するための製品を意図しており、特に、皮膚の質
および柔軟性を高めるために、光線障害を受けた皮膚や
老化した皮膚の状態を改善し、蜂巣炎を減少させ、弾性
を改善し、皮膚の水分に対する透過性を低下させる製品
を意図している。該組成物はまた、毛髪および爪にも塗
布することができる。
【００４２】使用の際は、少量の組成物、例えば１〜５
ｍｌを、適当な容器またはアプリケータから出して皮膚
の露出した部分に塗布し、必要であれば、次いで、手や
指、または適当な器具を使用して皮膚に展開し、および
／または皮膚に擦り込む。
【００４３】本発明組成物は、４，０００〜１０，００
０ｍＰａｓの粘度を有するローション、１０，０００〜
２０，０００ｍＰａｓの粘度を有する流動性クリームま
たは２０，０００〜１００，０００ｍＰａｓもしくはそ
れ以上の粘度を有するクリームとして作ることができ
る。該組成物は、その粘度および消費者の意図する用途
に適する適切な容器に入れて保存することができる。例
えば、ローションまたは流動性クリームは、瓶、ロール
ボールアプリケータ、推進体により作動するエーロゾル
容器または指による操作に適したポンプを備えた容器に
保存することができる。組成物がクリームの場合は、変
形しない瓶または絞り出し容器、例えばチューブまたは
ふた付の瓶などに簡単に保存することができる。本発明
の組成物がアスコルビン酸を含む場合は、保存中にアス
コルビン酸を残りの組成物から分離することができるよ
うにしてアスコルビン酸をさらに安定化するために、二
つに仕切られたパッケージが好ましい。
【００４４】従って、本発明は、本明細書で定義した化
粧品として許容されうる組成物を含む閉じた容器、好ま
しくは二つに仕切られた容器も提供する。
【００４５】
【実施例】本発明を次の実施例によりさらに説明する
が、本発明は以下の実施例に限定されない。
【００４６】材料および方法 細胞培養 Nakagawa, et al., J. Inv. Derm., (1989), 93, pp.79
2-798 および Jutley,J. K. et al., Matrix, (1993),
13, pp.235-41に概説されたプロトコールにかなり厳密
に従ったが、２、３の小さい修正を加えた。培養培地は
ＧＩＢＣＯ製であり、プラスチック製の培養皿（未処理
の９６ウェルプレート）は Costar 製であった。ヒトの
皮膚の線維芽細胞(CloneticsまたはＡＴＣＣ）を最少必
須培地（ＭＥＭ）＋１０％牛胎児血清（ＦＢＳ）で培養
した。典型的には、６〜９継代に対して実験を行った。
皮膚同等物を Celtrix Corp 製のVitrogen 100（精製さ
れた、ペプシン可溶の牛の皮膚コラーゲン）を使用して
作った。腺維芽細胞を中和したコラーゲンと混合して、
最終濃度を２．５×１０5 細胞／ｍｌおよび１．５ｍｇ
コラーゲン／ｍｌゲルとした。次いで、混合物を１００
μｌ／ウェルのアリコートで未処理の９６ウェルプレー
トに接種した。ゲルを３７℃で６０分重合させた後、Ｍ
ＥＭ＋１０％ＦＢＳを１００μｌアリコートの各ウェル
に添加した。培養物の無菌性を定期的にチエックし、細
胞の計数を標準的な方法により行った。
【００４７】インキュベーション 細胞を３７℃で２４時間、５％のＣＯ2 および９５％の
空気雰囲気中でインキュベートした。２４時間後、培養
物にＦＢＳを含まない新しいＭＥＭおよび５０μｇ／ｍ
ｌのアスコルビン酸および抽出物または活性物質を添加
した。テスト皿に種々の濃度の活性物質を追加した。１
０ｎｇ／ｍｌのトランスフォーミング成長因子Ｂ１（Ｔ
ＧＦ−β）をコラーゲンアッセイの陽性コントロールと
して使用した。インキュベーションをさらに１日行った
後、培養物に２０μＣｉ／ｍｌの〔２，３− 3Ｈ〕また
は２μＣｉ／ｍｌの14Ｃプロリンおよび５０μｇ／ｍｌ
の新しいアスコルビン酸を添加した。次いで、テストプ
レートをさらに２４時間インキュベートした。
【００４８】コラーゲンおよび蛋白質合成の測定 インキュベーションの終わりに、ゲルを１００μｌの５
０ｍＭ−ＨＣｌを使用して溶解し、３７℃で６０分間ま
たはゲルが完全に溶解するまで加熱した。ＮａＯＨで中
和した後、サンプルを最初の培養プレートから丸底の高
蛋白結合Ｅｌｉｓａ ９６ウェルプレート（Corning ）
に移した。サンプルを分割し、トリス−ＨＣｌ（１２０
ｍＭ、ｐＨ７．２）および酢酸カルシウム（２４ｍＭ）
を含む緩衝液Ａを各ウェルに添加して、全体積を１５０
μｌにした。サンプルの他の半分を細菌性コラゲナーゼ
（Worthington ）および緩衝液Ａで処理し、両組のサン
プルを３７℃で１８〜２４時間放置した。牛血清アルブ
ミン（ＢＳＡ）（３ｍｇ／ｍｌ）をサンプルに添加して
担体蛋白として作用させた。次いで、サンプルを４℃で
３０分、１０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）の存在下で沈
澱させ、２７５０ｒｐｍで１０分遠心した。５％ＴＣＡ
で２回洗浄を行い、最終ペレットを５０℃で６０分間、
１００μｌの０．１Ｍ−ＮａＯＨに溶解した。１００μ
ｌのサンプルを５ｍｌのシンチヴァースに添加し、ベッ
クマンのシンチレーターで計数した。新しいコラーゲン
の合成の割合（％）を、 Martens et al., Gut, (199
2), 33,pp.1664-1670に記載の式と同様の式を使用して
計算した。式は次の通りである。
【００４９】コラーゲン（％）＝１００％×（ｂ−ｃ）
／［ｃ×５．４＋（ｂ−ｃ）］ ［式中、ｂ＝混入した全プロリン；ｃ＝コラーゲン様蛋
白以外に混入したプロリン］。
【００５０】次いで、そのデータをＴＧＦ−βとの相対
的比較のために等式化した。式は次の通りである。
【００５１】全コラーゲンの増加＝平均の全プロリン混
入（活性）×上記式から計算した相対的なコラーゲンの
増加（％）／平均の全プロリン（コントロール）×上記
式から計算した相対的なコラーゲンの増加（％）実施例１ 植物のCentella asiatica 由来のトリテルペンおよびCe
ntella Asiatica で処理した線維芽細胞による、コラー
ゲン合成に対する刺激活性を調べた。Centellaasiatica
は Sigmaから購入し、アジア酸およびアジチコシドは
ＭＭＰ（Mountainside, New Jersey）から得た。種々の
濃度のアジア酸、アジチコシドおよびCentella asiatic
a を皮膚等価アッセイでテストした。結果を規格化する
ために、各実験をコントロールと比較した。得られた結
果を表１にまとめる。
【００５２】
【表１】
【００５３】表１の結果は、アジチコシド、アジア酸お
よびCentella asiatica がコラーゲンの刺激において正
の反応をしたことを示すが、この反応は、コントロール
と比較して有意なものではなかった。
【００５４】実施例２ ベツリン酸のコラーゲン合成刺激に対する効果を調べた
ことを除いて、実施例１を繰り返した。ベツリン酸は、
Aldrich から購入したが、９０％純度のものであった。
アスコルビン酸は Sigmaから購入し、９９％純度のもの
であった。得られた結果を表２にまとめる。
【００５５】
【表２】
【００５６】表２の結果は、ベツリン酸による刺激レベ
ルが、Centella asiatica またはその成分を使用した実
施例１で観察された刺激よりもかなり高いことを示す。
コラーゲンの合成において、ほぼ５〜６倍の増加が認め
られた。明らかに、ベツリン酸と他のトリテルペン（例
えば、Centella asiatica に存在するトリテルペン）と
の間の構造上の違いが、コラーゲン合成において、より
大きい反応を誘発した。
【００５７】実施例３ 表３は、コラーゲン合成刺激に対するベツリン酸の用量
応答を示す。
【００５８】
【表３】
【００５９】表３の結果は、ベツリン酸が、約６μＭの
濃度でコラーゲン合成を刺激し始めることを示す。
【００６０】実施例４ この実施例では、粗植物抽出物のコラーゲン合成に対す
る効果を調べる。ユーカリ、チョウセンニンジン、キン
センカおよびカバノキの抽出物を調べた。ユーカリは、
Botanicals International（Long Beach, CA）から入手
し、チョウセンニンジンは Weinstein Nutritional Pro
ducts （Costa Mesa, CA）から、キンセンカはＭＭＰか
ら、カバノキは Ichimura (Japan) から入手した。カバ
ノキおよびユーカリは、ベツリン酸を含むことが知られ
ているが、ここで調べた他の抽出物には含まれない。カ
バノキ抽出物のみがわずかに正の反応を示した。
【００６１】カバノキ抽出物に関して得られた結果を表
４にまとめる。
【００６２】
【表４】
【００６３】応答は、純粋なベツリン酸と比較して最小
であり（実施例２および３参照）、これは、恐らく、粗
抽出物中のベツリン酸が非常に低濃度であることによ
る。
【００６４】実施例５ コラーゲン合成に対する他のトリテルペンの効果を調べ
た。フリーデリン（friedelin ）およびオレアノール酸
を Aldrichから購入した。得られた結果を表５にまとめ
る。
【００６５】
【表５】
【００６６】表５の結果は、どのトリテルペンもコラー
ゲン合成を刺激するとは限らないことを示す。フリーデ
リンおよびオレアノール酸は何らかの反応を示したが、
アジア酸またはアジアチコシドとあまり違わなかった
（実施例１参照）。ベツリン酸の意味のある効果は、粗
抽出物または純粋なトリテルペンでは認められなかっ
た。
【００６７】実施例６ アスコルビン酸が存在しない場合のベツリン酸のコラー
ゲン合成に対する効果を調べた、得られた結果を表６に
まとめる。
【００６８】
【表６】
【００６９】表６の結果は、アスコルビン酸が存在しな
い場合、ベツリン酸およびカバノキ抽出物がコラーゲン
合成および他の蛋白質合成に対してあまり効果がなかっ
たことを示す。しかし、いったん皮膚に塗布されると、
本発明組成物に存在するベツリン酸がヒトの皮膚に存在
するアスコルビン酸と共に作用する。最低濃度のビタミ
ンＣを有する成人では、血漿中の濃度が約４５μＭのア
スコルビン酸に達する。従って、ベツリン酸は、アスコ
ルビン酸が組成物に存在しない場合であっても、コラー
ゲンの合成を刺激することができるであろう。
【００７０】実施例７ 本発明の典型的な化粧品組成物は次の通りである。
【００７１】
【表７】
【００７２】実施例８ この実施例では、本発明に係る水中油型クリームを説明
する。
【００７３】
【表８】
【００７４】実施例９および１０ 本発明に係る下記組成物はローションの例であり、乾皮
症の治療に使用することができる。
【００７５】
【表９】
【００７６】実施例１１ 本発明に係るアルコール性スリミング（抗蜂巣炎）ゲル
は次の通りである。
【００７７】
【表１０】
【００７８】実施例１２ 本発明に係る別のスリミング（抗蜂巣炎）ゲル組成物は
次の通りである。
【００７９】
【表１１】
【００８０】実施例１３ 本発明に係る別のスリミング（抗蜂巣炎）ゲル組成物は
次の通りである。
【００８１】
【表１２】
【００８２】理解されるように、本明細書で説明し、記
載した本発明の特定の態様は、単に例として挙げたもの
である。本発明の開示から逸脱しないならば、本明細書
で示唆した変更に限定されないが、そのような変更を含
む変更を、例示した態様で行うことができる。従って、
本発明の完全な範囲の規定には、特許請求の範囲を参照
すべきである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 35/78 Ｍ ＡＤＡ Ｃ Ｃ０７Ｊ 63/00 (72)発明者 ユマ・サンサナム アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07570、テナフライ、ノース・ブロウニン グ・アベニユー・14

Claims (10)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 化粧品としてまたは薬剤的に許容されう
    る担体および少なくとも６μＭの濃度のベツリン酸を含
    む化粧品組成物。
  2. 【請求項２】 組成物中のベツリン酸の濃度が６μＭ〜
    １００ｍＭであることを特徴とする請求項１に記載の組
    成物。
  3. 【請求項３】 アスコルビン酸、アスコルビン酸パルミ
    テート、アスコルビン酸ナトリウムおよびそれらの混合
    物から成る群から選択される成分をさらに含むことを特
    徴とする請求項１に記載の組成物。
  4. 【請求項４】 アスコルビン酸が０．０１％〜１５％の
    量で存在することを特徴とする請求項３に記載の組成
    物。
  5. 【請求項５】 ベツリン酸源が植物の抽出物であること
    を特徴とする請求項１に記載の組成物。
  6. 【請求項６】 植物の抽出物が有機溶媒抽出物であるこ
    とを特徴とする請求項５に記載の組成物。
  7. 【請求項７】 組成物がさらに脂肪分解剤を含むことを
    特徴とする請求項１に記載の組成物。
  8. 【請求項８】 組成物がさらに血管拡張剤を含むことを
    特徴とする請求項７に記載の組成物。
  9. 【請求項９】 皮膚の皺、皮膚のたるみ、蜂巣炎および
    光線障害の治療薬の製造におけるベツリン酸の使用。
  10. 【請求項１０】 皮膚でのコラーゲン合成を刺激する薬
    物の製造におけるベツリン酸の使用。
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