CN103037880B

CN103037880B - 含有构树的提取物的组合物

Info

Publication number: CN103037880B
Application number: CN201180038032.5A
Authority: CN
Inventors: 李真锳; 崔向兑; 金寒星; 金智晟
Original assignee: Amorepacific Corp
Current assignee: Amorepacific Corp
Priority date: 2010-07-02
Filing date: 2011-07-04
Publication date: 2015-09-16
Anticipated expiration: 2031-07-04
Also published as: JP5944896B2; US20130101689A1; WO2012002784A2; JP2013530219A; WO2012002784A3; CN103037880A; US20140356468A1

Abstract

本发明涉及一种含有构树的提取物的组合物，以及更具体地含有构树的提取物作为活性成分，因此能够更好的增加皮肤水分、改善抗衰老效果，提供更好感染救助、抗菌效果、以及降低毛孔尺寸和控制皮脂的效果，改善血液循环，分解皮下脂肪，以及通过刺激黑色素合成来预防毛发变白。

Description

含有构树的提取物的组合物

技术领域

本发明涉及一种含有构树（paper mulberry）的提取物的组合物，以及更具体地，涉及一种能够对皮肤产生多种效果的组合物。

背景技术

皮肤为人体的主要屏障，其用于保护身体的器官免于外部环境刺激，例如温度和湿度的变化、紫外线和污染物。然而，由于内在和外在的因素皮肤的功能有所降低。关于内在因素，调节新陈代谢的各种激素的分泌随着老化而降低，以及免疫细胞的功能和细胞的活性随着老化而降低，因此身体所需的免疫蛋白和身体的组成蛋白的生物合成有所降低。关于外在因素，由于因暴露于紫外线的增加、环境污染（例如臭氧层破坏）引起的自由基和活性氧（reactive oxygen species）的增加而引起的理化性刺激（physical and chemicalstimuli）和应力，可在皮肤中发生多种变化，包括降低皮肤功能、刺激皮肤老化、不好的肤色和较暗的皮肤色调。

目前，由于多数人想要看起来年轻和漂亮，他们对预防或改善或解决由于内在和外在因素引起的皮肤的变化有强烈地需求。因此，已开发了除皱（wrinkle-reducing）的试剂和改善弹性（elasticity-improving）的试剂等。

同时，由皮肤中的胶原、弹性蛋白、透明质酸、蛋白多糖、葡糖氨基葡聚糖、粘连蛋白和糖蛋白的含量和排列的变化或降低而引起的皮肤状况（包括皱纹、弹性流失、干燥病（干燥皮肤）等）以及结合水的能力的降低导致了皮肤的基质（matrix）的降低和皮肤的保湿能力的丢失。此外，已知在构成皮肤的大多数细胞中，产生前炎性细胞因子（包括肿瘤坏死因子-α（TNFα）、白细胞介素-1β（IL-1β）和前列腺素）的环加氧酶-2（Cox-2）的生物合成提高，通过这些炎性因子也会提高降解皮肤组织的基质金属蛋白酶（MMP）的生物合成。

因此，能够通过增殖皮肤细胞或增加皮肤的基质使皮肤变厚的物质、能抑制环加氧酶-2（Cox-2）的生物合成的物质、能抑制肿瘤坏死因子的生物合成的物质，以及刺激在成纤维细胞中产生弹性蛋白原和肌原纤蛋白的物质等的开发使得改善多种皮肤状况（包括皱纹、弹性流失和干燥病）成为可能。

发明内容

技术问题

因此，本发明人已进行了研究以寻找能够改善多种皮肤状况的天然物质，结果，发现了构树的提取物能够改善与皮肤保湿、皮肤弹性等相关的多种皮肤状况，并且具有分解皮下脂肪和预防灰发的效果，从而完成了本发明。

因此，本发明的目的是提供一种组合物，所述组合物含有能够改善通常的皮肤状况的天然物质，具有分解脂肪的优良的效果并且能够预防灰发。

技术方案

为了实现上述目的，本发明提供了一种含有构树的提取物的组合物。

本发明还提供了含有用于皮肤保湿、抗老化、抗炎症、减肥和预防灰发的构树的提取物的组合物的应用。

有益效果

本发明的组合物含有构树的提取物，所述提取物具有皮肤保湿、抗老化、抗氧化和抗炎症的效果，因此能够改善通常的皮肤状况。此外，本发明的组合物具有降低毛孔尺寸、控制皮脂、缓解粉刺状况和改善肤色的效果。此外，本发明的组合物能够通过刺激黑色素合成而预防灰发，并且能够通过降低体脂含量使皮肤有弹性和光滑。

具体实施方式

本发明的组合物含有作为活性成分的构树的提取物。

在本发明中用作活性成分的属于构树属（genus Broussonetia）（构树）的植物包括小构树（Broussonetia kazinoki Sieb）、构树（Broussonetia papyriferaVent）、矮生构树（Broussonetia kazinoki var. humilis）等。这些植物为分布在韩国（主要是南部地区）、中国、台湾、日本等大部分地区的落叶宽叶灌木，并且在山脉向阳的地方、田间周围的地方等生长。构树的的韧皮纤维已用作造纸的原料，并且已知构树具有多种药用功效，包括滋补、提高视力、缓解阳痿、治疗浮肿、益气、去除麻痹、增生（augmentation）、血液净化等。

用于本发明的构树的提取物的定义不仅包括通过提取构树得到的提取物，而且还包括通过浓缩部分或全部提取物得到的浓缩物，和干燥所述浓缩物后得到的浸渍（infusion）、煎剂（decoction）、酊剂（tincture）和流浸膏剂（fluid extract），以及构树中所含的活性成分，以及植物本身。此外，用于本发明的提取物可为由构树的所有部分（包括茎、根、叶、花、果实等）得到的提取物，并不局限于构树的任何具体部分的提取物。

用于本发明的构树的提取物可以根据本领域已知的任意方法制备。例如，通过任意方法（例如自然干燥或强制干燥）将构树干燥，并精细切割，随后通过任意方法提取，例如使用极性溶剂（例如水、乙醇、丁醇或丙酮）或非极性溶剂（例如醚、己烷、苯、氯仿或乙酸乙酯）或非极性溶剂和极性溶剂的混合溶剂，或溶剂（例如碱性水）或植物油（例如大豆油或芝麻油）的冷浸法（cold maceration）、渗滤法或温浸法（warm maceration），从而得到含有活性成分的提取物。根据提取工艺，冷浸法和渗滤法优选进行12-96小时，而温浸法优选在接近溶剂的回流温度的温度下进行0.5-24小时，这取决于所用的溶剂的种类和浸渍的温度。特别地，优选使用通过在水合醇中提取得到的酊剂、提取物或流浸膏剂。

根据本发明的化妆品组合物，基于所述组合物的总重量，含有的构树的提取物的量可以为0.0001-90重量%，例如，0.1-70重量%，优选1-50重量%，更优选1-20重量%。当组合物中构树的提取物的含量在上述范围内时，能够得到改善皮肤状况的效果，而不存在关于皮肤安全性和制剂稳定性的担忧。

根据本发明的组合物能够用作皮肤保湿组合物。所述皮肤保湿组合物能够用于增强皮肤屏障功能和诱导皮肤角质形成细胞分化。因此，本发明的组合物能够预防或改善由不完善的表皮分化引起的干燥病、特应性皮炎（atopicdermatitis）、接触皮炎或牛皮癣。

此外，根据本发明的组合物能够用作抗老化组合物。所述抗老化组合物能够抑制胶原酶的表达，以提高皮肤弹性和减少皱纹。

此外，根据本发明的组合物能够用作抗菌和抗炎组合物。所述抗菌和抗炎组合物具有非常优良的抗菌效果，特别是针对引起粉刺的微生物，并且还具有降低发炎因子的表达的效果以提供抗炎效果。因此，其能够用于抑制皮肤病和缓解粉刺。

此外，根据本发明的组合物能够用作用于降低毛孔尺寸和控制皮脂的组合物。所述用于降低毛孔尺寸和控制皮脂的组合物有助于刺激胶原的合成，以降低毛孔尺寸和抑制皮脂的过量分泌。此外，所述组合物具有除去活性氧的优良的抗氧化活性，因此能保护皮肤免于刺激。

此外，根据本发明的组合物能够用作用于改善肤色和皮肤色调的组合物。当将所述组合物施用于皮肤时，其扩大毛细血管并且促进血液循环，以能够向皮肤顺利的供应营养物质和抑制皮肤老化，以改善肤色和皮肤色调。

此外，根据本发明的组合物能够用作减肥组合物。所述减肥组合物有效分解甘油三酯和降低脂肪团（cellulite），以使得体型苗条。因此，当将组合物施用于皮肤时，其呈现非常优良的分解皮下脂肪的减肥效果。

另外，根据本发明的组合物能够用作用于预防灰发和治疗粘膜白斑病的组合物。

已表明灰发是由黑色素细胞干细胞的失去和黑色素细胞活性的降低引起的。具体地，已知由于老化的灰发主要是由干细胞的失去引起的，并且灰发（包括过早灰发）的出现归因于环境和精神压力引起的黑色素细胞活性的降低。

用于合成黑色素的黑色素细胞的活性大大地受到MITF的活性的影响，根据本发明的含有构树的提取物的组合物能够显著提高MITF在黑色素细胞中的表达，从而抑制灰发和刺激诱导黑发。

本发明的组合物能够用作皮肤外用组合物，并且能够作为化妆品组合物或药物组合物制备。

可以配制含有化妆品上和皮肤学上（dermatologically）可接受的介质（medium）或基质（base）的根据本发明的皮肤外用组合物。所述组合物可作为用于局部施用的制剂配制。用于局部施用的制剂（formulation）的实例包括溶液、凝胶、固体或面酐（doug anhydride）、通过在水相中分散油相而制备的乳液、悬浮液、微乳液、微胶囊、微颗粒、离子（脂质体）和/或非离子囊泡、霜、护肤品（skin）、洗液、粉末、软膏、喷雾、面膜（pack）、皮肤粘合剂和遮瑕贴（conceal stick）。另外，根据本发明的皮肤外用组合物还可配制为还含有压缩推进剂（compressed propellant）的泡沫组合物或气溶胶组合物。此外，根据本发明的组合物可以根据本领域已知的常规的方法制备。

根据本发明的化妆品组合物可以含有常规的用于化妆品领域或皮肤科学领域的添加剂，例如，脂肪物质、有机溶剂、溶剂、增稠剂、凝胶剂、软化剂、抗氧化剂、悬浮剂、稳定剂、发泡剂、芳香剂、表面活性剂、水、离子或非离子乳化剂、填料、多价螯合剂、螯合剂、防腐剂、维生素、阻断剂（blocker）、润湿剂、精油、染料、色素、亲水性或疏水性活化剂、脂质囊泡或其它常规的组分。这些添加剂的含量为通常用于化妆品领域或皮肤科学领域的含量。

当本发明的组合物用于药物时，通过向活性成分构树的提取物中加入常用的无机或有机载体制备成肠胃外给药形式的固体、半固体或液体（用于经皮给药或外用）。用于肠胃外给药的制剂的实例包括软膏、洗液、喷雾、悬浮液等。本发明的组合物可以根据本领域公知的常规的方法配制。对于制剂，可适当的使用表面活性剂、赋形剂、着色剂、香料、防腐剂、稳定剂、缓冲液、悬浮液或其它常规的添加剂。

根据本发明的组合物的剂量可根据需要治疗的受试者的年龄、性别和体重、待治疗的具体疾病或状况、疾病或状况的严重程度、给药途径或处方者的决定而变化。本领域技术人员将容易理解考虑这些因素的给药剂量的决定。组合物可以外用于待治疗的区域。所述组合物的给药剂量通常可以为约0.001mg/kg/天到约2,000mg/kg/天。更优选地，给药剂量可为200μg/kg/天到约5mg/kg/天。

此外，根据本发明的用于预防灰发和治疗粘膜白斑病的组合物能够容易配制为施用于毛发或头皮上的洗发剂、染发剂（rinse）、护发素（conditioner）、滋补或头皮精华。根据本发明的组合物可以含有化妆品领域常规使用的添加剂，例如，脂肪物质、有机溶剂、溶剂、增稠剂、凝胶剂、软化剂、抗氧化剂、悬浮剂、稳定剂、防腐剂、维生素、阻断剂、润湿剂、精油、染料、色素、亲水性或疏水性活化剂、脂质囊泡或其它常规的组分。这些添加剂的含量为通常用于化妆品领域的含量。

此外，除了构树的提取物作为必要成分以外，根据本发明的皮肤外用组合物还可以含有能与构树的提取物呈现协同效应的组分。根据制剂的预期用途，本领域技术人员能够适当选择这些其它组分。另外，本发明的组合物还可以含有促进吸收进皮肤内的物质，以提高其效果。

实施例

下文中将参考实施例和测试例进一步详细地描述本发明。然而，应理解的是，这些实施例仅用于说明的目的，不旨在限定本发明的范围。

制备例1：构树的提取物的制备

将1kg干燥的整株构树植物加入到10L纯水中，并加热至沸腾，然后将其另外加热10分钟。随后，将水除去，将残渣洗涤，然后通过加入10L纯水进行洗涤。将残渣晾干，并加入到与回流系统连接的20L70%的乙醇中，加热，并回流提取24小时。将提取物通过80目筛网过滤以除去固体，并将剩余的滤液再次过滤，并使用真空蒸发器浓缩，以除去溶剂，从而得到约50g绿色固体粉末。

制备例2：构树的提取物的制备

将1kg构树的的茎、根、叶、花和果实加入到10L干净的水中，并通过在配备有冷凝器的提取器中煮沸5小时进行提取。将提取物通过300目滤布过滤，并且在5-15℃下静置5天，随后通过滤纸将其过滤。将滤液在具有冷凝器的蒸馏装置系统中减压浓缩，从而得到70g构树的的花和果实的提取物。

测试例1：对角质形成细胞分化的刺激效果的测量

为了检验在制备例1中得到的构树的提取物对角质形成细胞分化的刺激效果，采用以下方式，基于吸光度，测量在角质形成细胞分化期间产生的角化的外壳（cornified envelop）（CE）的量。

首先，将通过从新生儿的表皮分离的细胞进行初代培养得到的人角质形成细胞放置在培养瓶中并贴附于底部，随后用5ppm的下表1所示的每种测试材料处理细胞培养物，随后培养所述细胞5天至约70-80%的汇合。此处，低钙（0.03mM）处理组和高钙（1.2mM）处理组分别用作阴性对照组和阳性对照组。随后，收获培养的细胞，并用PBS（磷酸盐缓冲盐水）洗涤，随后将1mL含有2%的SDS（十二烷基硫酸钠）和20mM的DTT（二硫苏糖醇）的Tris-HCl（pH7.4）加入到所述细胞中。随后，将细胞超声处理，煮沸并离心分离，并将沉淀物悬浮于1mL的PBS中，测量在340nm处的吸光度。同时，取一部分超声处理后的溶液，并测量所取部分的蛋白含量，用作细胞分化的评价标准。测量结果示于下表1中。

表1

测试材料	角质形成细胞分化（%）
		低钙（0.03mM）溶液（阴性对照）	100
高钙（1.2mM）溶液（阳性对照）	210
		构树的提取物（制备例1）	140

由上表1可见，使用制备例1的构树的提取物的处理对角质形成细胞分化的刺激显示了优良的效果。

测试例2：对皮肤屏障功能恢复效果的测量

为了测量构树的提取物对由于皮损而损害的皮肤屏障功能的恢复效果，进行以下测试。使用胶带剥脱方法损害10个成年男人和女人中每个人上臂的皮肤屏障，将下表2所示的实施例1和对比例1的每种组合物施用于损伤的部位，同时使用水分计（Vapometer）（Delfin，芬兰）测量经表皮水分流失（TEWL）的恢复程度，一天一次，共7天。此处，实施例1为含有制备例1的提取物的组合物，对比例1为介质（vehicle）并作为阴性对照。测量结果示于下表3中。表3中的结果以相对于处理前为100%的处理后的百分比表示。

表2

组分	实施例1	对比例1
			纯水	69	70
丙二醇	30	30
			构树的提取物（制备例1）	1	-

表3

由上表3可见，当用制备例1的构树的提取物处理皮肤时，经表皮水分流失恢复至正常水平，并且受损的屏障得到恢复。

参考例1：实施例2和对比例2的制剂的制备

使用在制备例1中得到的构树的提取物，根据下表4中的组分和含量制备实施例2和对比例2的滋养霜制剂。表4中的量是基于重量%。

表4

测试例3：对提高皮肤保湿效果的测量

为了测量构树的提取物提高皮肤保湿的效果，采用以下方式，使用上表4的实施例2和对比例2的制剂，检测皮肤保湿的改善效果。

将六十个40-50岁的男人和女人分成两组（分别为实施例2和对比例2），每组由30人组成。将每种滋养霜制剂施用于面部，一天两次，共4周。施用前，施用后1周、2周和4周，和停止施用后2周（施用后6周），在恒定温度和恒定湿度（24℃，40%相对湿度）的条件下，使用皮肤水分测试仪（Corneometer）CM825（C+K Electronic Co.，德国）测量皮肤水分含量。测量结果示于下表5中。表5中的结果以相对于刚处理前的皮肤水分含量处理后皮肤水分含量提高的百分比表示。

表5

由上表5中的结果可见，当将对比例2的霜施用于皮肤时，在施用后长达4周显示水分含量提高了约30%，但是在停止施用后皮肤水分含量降低了。然而，在施用含有构树的提取物的实施例2的霜的情况下，即使在停止施用后，也显示皮肤水分含量提高了30%或以上的。这表明本发明含有构树的提取物的组合物具有优良的皮肤保湿效果。

测试例4：对弹性蛋白酶活性抑制效果的测量

与EGCG比较，测量在制备例1中制备的构树的提取物的弹性蛋白酶抑制活性。所用的弹性蛋白酶和基底商购于Sigma Aldrich（登记号E0127，USA）。

采用以下方法测量弹性蛋白酶抑制活性。

在96孔板中，将50μL溶于10mg/L的Tris-HCL缓冲液（pH8.0）中的制备例1的提取物的溶液与50μL20μg/mL的弹性蛋白酶III型溶液混合。250μM的EGCG作为阳性对照，蒸馏水作为阴性对照。随后，将100μL0.4514mg/mL的溶于以上所用相同的缓冲液中的N-琥珀酰-ALA-ALA-ALA-对硝基苯胺（N-SUCCINYL-ALA-ALA-ALA-p-NITROANILIDE）加入到板中，并且于25℃下反应15分钟。反应完成后，测量在415nm处的吸光度。采用相同的方法进行空白测试以用于校正。

使用以下方程式计算弹性蛋白酶抑制活性。计算结果示于下表6中。

弹性蛋白酶活性抑制（%）={1-(C-D)/(A-B)}×100

其中，A：在不加入测试样品并且加入酶的情况下在415nm处的吸光度；

B：在不加入测试样品并且不加入酶的情况下在415nm处的吸光度；

C：在加入测试样品并且加入酶的情况下在415nm处的吸光度；和

D：在加入测试样品并且不加入酶的情况下在415nm处的吸光度。

表6

测试材料	表达（%）
		阴性对照（未经处理）	100
EGCG	90±1.2
		构树的提取物（制备例1）	85±3.2

由上表6可见，构树的提取物的弹性蛋白酶抑制活性与已知的作为弹性蛋白酶活性抑制剂的EGCG的弹性蛋白酶抑制活性类似或更高，表明本发明的构树的提取物具有优良的抑制弹性蛋白酶活性的效果。

测试例5：胶原酶（MMP-1）抑制能力

与视黄酸的胶原酶生成抑制能力相比较，测量在制备例1中制备的构树的提取物的胶原酶生成抑制能力。

以5,000个细胞/孔的密度将人成纤维细胞加入到含有2.5%的含有胎牛血清的DMEM（Dulbecco改性高糖培养基（Dulbecco’s Modified Eagle’sMedia））的96孔微量滴定板中，并且在37℃、5%CO₂孵育下培养至约70-80%的汇合。随后，用10μg/mL的制备例1的构树的提取物处理所述细胞培养物24小时，并收集。

使用市售可得的胶原酶测量仪（登记号：RPN2610，AmershamPharmacia，USA）测量收集的细胞培养物中胶原酶的产量。首先，将收集的细胞培养物加入到已均匀施用初级胶原酶抗体的96孔板中，随后将所述培养物在孵育器中进行抗原-抗体反应3小时。3小时后，将标记发色团的二级胶原抗体加入到96孔板中，进行反应15分钟。15分钟后，将显色剂（3,3',5,5'-四甲基联苯胺，Sigma）加入到板中，并且在室温下诱导显色15分钟。随后，将1M硫酸加入到板中，以终止显色反应，同时，反应溶液为黄色。黄色的程度根据反应的进展程度而变。

使用分光光度计测量在405nm处淡黄色的96孔板的吸光度，并且基于测量值，使用以下方程式1计算胶原酶的合成程度。计算结果示于下表7中。此处，将由未经测试样品处理的组收集的细胞培养物的吸光度作为对照。

方程式1

胶原酶表达（%）=（使用材料处理的细胞组的吸光度/对照的吸光度）×100

表7

测试材料	表达（%）
		对照	100
视黄酸	75±3.4
		构树的提取物（制备例1）	72±2.1

由上表7可见，在使用构树的提取物处理的细胞中胶原酶的表达与使用已知的作为胶原酶抑制剂的视黄酸处理的细胞中胶原酶的表达类似，表明构树的提取物的胶原酶表达抑制效果与视黄酸的类似。

以上结果表明，根据本发明的构树的提取物具有抑制基质金属蛋白酶（MMP-1）的效果。

测试例6：对改善皮肤弹性效果的检测

为了测量构树的提取物对皮肤弹性的改善效果，采用以下方式，使用表4的实施例3和对比例2的制剂，评价皮肤弹性的改善效果。

将四十个30-40岁健康的女人分成两组（分别对应实施例3和对比例2），每组由20人组成。将每种滋养霜制剂施用于面部，一天一次，共12周，随后使用皮肤弹性测量仪（Cutometer）SEM575（C+K Electronic Co.，德国）测量皮肤弹性。测量结果示于下表8中。表8中的结果用ΔR8（R8（左）-R8（右））值表示，其中R8值表示粘弹性。

表8

测试材料	皮肤弹性效果
		实施例3	0.42
对比例2	0.10

由上表8可见，与对比例2的制剂相比，含有本发明的构树的提取物的实施例3的制剂显示了提高的皮肤弹性。

这表明含有本发明的构树的提取物的化妆品组合物在改善皮肤弹性方面非常有效。

测试例7：对减少皮肤皱纹效果的评价

为了测量构树的提取物减少皮肤皱纹的效果，采用以下方式，使用表4的实施例3和对比例2的制剂，检测减少皱纹的效果。

将四十个40几岁的健康的女人分成两组（分别对应实施例3和对比例2），每组由20人组成。将每种霜制剂施用于每个人的面部，一天一次，共12周，随后通过向皮肤施用硅橡胶，得到皮肤复制品。将复制品拍照，并且通过能见度仪（Visiometer）SV600（Courage+Khazaka electronic GmbH，德国）分析皱纹。分析结果示于下表9中。表9中的结果以通过将施用12周后的参数值减去施用前的参数值得到的值的平均值表示。

表9

施用8周后的结果	R1	R2	R3	R4	R5
						实施例3	-0.19	-0.18	-0.10	-0.03	-0.03
对比例2	0.27	0.26	0.21	0.03	0.03

R1：皱纹等高线的最高值和最低值之间的差值；

R2：随机分成5部分的皱纹等高线的五个Rl值的平均值；

R3：五个Rl值的最高值；

R4：在皱纹等高线的基线上，峰值和谷值之间的差值的平均值；和

R5：皱纹等高线的基线和皱纹等高线之间的差值。

由上表9可见，实施例2的皮肤外用组合物具有非常优良的减少皮肤皱纹的效果。

参考例2：实施例4和对比例3和4的制剂的制备

使用在制备例1中得到的构树的提取物，根据下表10中的组分和含量，制备实施例4和对比例3和4的外用制剂。表10中的含量是基于重量%。

具体地，实施例4的制剂含有制备例1的构树的提取物，对比例3的制剂不含有有效缓解粉刺的组分，而对比例4的制剂含有用于抗菌活性的标准的且常用作粉刺治疗剂的红霉素。

采用以下方式制备实施例4和对比例3和4的制剂。将表10中的A相的组分完全溶解，并且在单独的容器中将B相的组分完全溶解。随后，将B相加入到A相中并与之混合。将C相的组分以表10所示的量加入到混合物中，并混合均匀。随后，将所述混合物过滤，从而制备制剂。

表10

测试例8：对抗痤疮丙酸杆菌的抗菌活性的测试

使用实施例4和对比例3和4的化妆品组合物，测试抗引起粉刺的痤疮丙酸杆菌（ATCC6919：BHI肉汤培养基）的抗菌活性。

采用以下方式测试抗痤疮丙酸杆菌的抗菌活性。

（1）微生物测试溶液的制备

使用通过在BHI肉汤中接种痤疮丙酸杆菌并且厌氧培养痤疮丙酸杆菌得到的培养物。

（2）稀释液的制备

通过将0.15mL的微生物测试溶液与15mL的BHI肉汤（pH6.8）或LB肉汤（pH4.5）混合，得到稀释液。

（3）样品的制备

将实施例3和对比例3和4的化妆品组合物用作未稀释的样品。

（4）抗菌活性的测试

1）根据起始浓度将每种样品加入到96孔板的第1排中，并向其中加入稀释液，至总体积为200μl。

2）将第1排的混合物充分混合，取100μl并加入到第2排并充分混合，随后取100μl并加入到第3排。采用这种方式，进行了双倍稀释。

3）将混合物于32℃下静止孵育24小时和48小时，基于悬浮的程度确定微生物是否繁殖，微生物不繁殖的最小浓度确定为MIC（最小抑制浓度）。如果混合物不澄清使得难以确定微生物是否繁殖，则进行显微镜观察。

抗痤疮丙酸杆菌属的抗菌活性的测试结果示于下表11中。MIC以制剂中活性成分的浓度来表示。

表11

	pH	痤疮丙酸杆菌
			实施例4	5.7	<87ppm
对比例3	5.7	>最大浓度（无抗菌活性）
			对比例4	5.7	<100ppm

在MIC中，ppm浓度越低，抗痤疮丙酸杆菌的抗菌活性越高。因此，可以看出实施例4的制剂显示了低于含有红霉素（已知的粉刺治疗剂）的对比例4的制剂的ppm浓度，表明其具有优良的抗痤疮丙酸杆菌的抗菌活性。

测试例9：抑制脂肪生成的测试

以1×10⁵个细胞/孔的密度，将小鼠成纤维细胞3T3-L1细胞接种在含有10%的含有胎牛血清（FBS）的DMEM（Dulbeco改性高糖培养基，GIBCOBRL，Life Technologes）的6孔培养板中。2天后，用新鲜的DMEM（含有10%的FBS）更换培养基，接着培养2天。随后，用含有1μg/ml胰岛素、0.5mM IBMX和0.25μM地塞米松的DMEM（含有10%FBS）处理培养的细胞，以诱导分化，2天后，用含有胰岛素的DMEM更换培养基，接着孵育5天。5天后，用正常的培养基（含有10%FBS的DMEM）更换培养基，将细胞孵育，直至细胞在形态上分化成为脂肪细胞。

为了测量构树的提取物对脂肪细胞中脂肪累积的抑制效果，将分化的3T3-L1脂肪细胞进行苏丹三号（Sudan III）染色（S4136，Sigma-Aldrich）。在室温下，将脂肪细胞用4%的溶于磷酸盐缓冲液中的多聚甲醛（pH7.2）固定，随后使用PBS（磷酸盐缓冲盐水）洗涤，随后细胞使用Sudan III染色，并拍照用于视觉对比。使用培养基（未经测试材料或阳性对照处理）作为对照，并且使用50μM咖啡因作为阳性对照。根据染色的程度，脂肪累积的抑制程度用+++、++和+表示。结果示于下表12中。

表12

样品	抑制（%）
		对照	+++
阳性对照	+
		构树的提取物（制备例1）	+

由图表12可见，根据本发明的构树的提取物具有抑制脂肪生成的效果。因此，其能够通过抑制脂肪生成而降低皮脂，从而抑制粉刺的出现。

测试例10：缓解粉刺、降低皮脂分泌以及刺激的测试

让患有粉刺的12个人使用实施例4和对比例3和4的化妆品组合物一个月。用五点等级（five-point scale）评价粉刺的缓解：1=无效；3=适度有效；5=非常有效。测试结果以12个人的平均值示于表13中。

粉刺消失的计时是以当观察到消失时的日期为基准，并且粉刺是否再发生基于1个月后的结果。用五点等级评价皮脂分泌的降低：1=无效；3=适度有效；5=非常有效。测试结果以12个人的平均值示于表13。皮肤刺激以（显示刺激的受试者的数量）/（受试者的总数量）表示。

表13

由上表13可见，与对比例3的组合物不同，实施例4的组合物未显示粉刺的复发，并且具有优良的粉刺缓解的效果。同时，含有用于抗菌活性的标准物质的对比例4的组合物显示了与实施例4类似的抗菌活性，但是在使用期间显示了强烈的刺激，表明当其长时间使用时能引起皮肤刺激。

测试例11：炎症的缓解效果

基于抑制前列腺素产生来评价抗炎效果。使用巨噬细胞测量制备例1的构树的提取物的抗炎效果。首先，向从小鼠腹腔收集的小噬细胞中加入阿司匹林，至500M的终浓度，以不可逆地抑制细胞中环加氧酶（COX）的活性。随后，将100μL细胞悬浮液加入到96孔板的每个孔中，并且在37℃下在5%的CO₂孵育器中培养2小时，使得巨噬细胞贴于板表面。随后，将贴于板表面的巨噬细胞使用PBS洗涤三次，用于测试提取物的效果。以5×10⁴个细胞/ml的浓度，将培养的巨噬细胞加入到含有1%（w/v）LPS的RPMI培养基中，并且培养12小时，以诱导前列腺素的产生，随后使用100μl的提取物处理。通过ELISA定量分析释放的前列腺素。

此处，提取物的前列腺素产生抑制活性以使用LPS以及样品共同处理的组中前列腺素产生的百分比（相对于经LPS处理的组和未经LPS处理的组之间前列腺素产生的差值为100%）表示。结果（前列腺素产生的抑制效果）示于下表14中。

表14

空白	100%
		对照（使用阿司匹林处理）	25.0%
构树的提取物（制备例1）	26.1%

由上表14可见，使用构树的提取物的处理显示了非常高的抑制前列腺素产生的效果，与使用阿司匹林处理的对照一样。

这表明本发明的构树的提取物显示了优良的缓解炎症的效果。

测试例12：5α-还原酶的抑制效果

为了检测5α-还原酶活性的抑制效果，测量在HEK293-5αR2细胞中[¹⁴C]睾酮向[¹⁴C]二氢睾酮转化的比例。以2.5×10⁵个细胞/孔的密度，将使用p3×FLAG-CMV-5αR2转染的HEK293细胞加入到24孔板中，并培养（Park等，2003，JDS.，第31卷，第91-98页）。第二天，用含有酶底物和抑制剂的新鲜的培养基更换培养基。使用0.05μCi[¹⁴C]睾酮（Amersham Pharmaciabiotech，UK）作为培养基的底物。为了测量抑制的程度，将10μg/mL的制备例2的构树的提取物加入到细胞中，随后在37℃下，在5%的CO₂孵育器中孵育2小时。使用非那雄胺作为阳性对照。收集培养基，并使用800μl乙酸乙酯提取类固醇。将上层有机溶剂层分离并干燥，将剩余的物料溶解于50μl的乙酸乙酯中，并且使用乙酸乙酯-己烷（1:1）作为展开剂在二氧化硅塑料片材硅胶60F254上展开。

将塑料样品在空气中干燥，并且使用血管系统（Vas system）测量同位素的量。具体地，将干燥的塑料片材以及X-射线胶片放置在Vas盒中，1周后，测量睾酮和二氢睾酮同位素的量。测量结果示于下表15中。

表15

样品	转化率（%）	抑制率（%）
			构树的提取物	32.1	33.1
对照	48.0	-
			阳性对照（非那雄胺）	27.6	42.5

（1）转化率：在DHT区域的放射性/总放射性

（2）抑制率：100×（对照的转化率样品的转化率）/对照的转化率

由上表15中的结果可见，本发明的构树的提取物通过有效地抑制将睾酮转化为二氢睾酮的5α-还原酶的活性，阻断了睾酮向二氢睾酮的转化，二氢睾酮通过结合细胞质中的受体蛋白进入细胞核，以激活皮脂腺细胞并刺激细胞分化，以诱导皮脂腺过量地分泌皮脂。

这表明本发明的构树的提取物具有优良的5α-还原酶的抑制效果，因此在抑制皮脂的过量分泌上是有效。

参考例3：实施例4和对比例5的制剂的制备

使用制备例2的构树的提取物，根据下表16所示的组分和含量制备实施例4和对比例5的洗液制剂。表16中的含量是基于重量%。

表16

组分	实施例5	对比例5
			1.鲸蜡硬脂醇	1.0	1.0
2.亲油性甘油硬脂酸酯（lipophilic glyceryl stearate）	1.0	1.0
			3.甘油硬脂酸酯SE	1.5	1.5
4.角鲨烯（Phytosqualane）	3	3
			5.氢化聚癸烯（Hydeogenated polydecene）	2	2
6.聚二甲基硅氧烷（Dimethicone）	0.5	0.5
			7.聚山梨酸酯60	1	1
8.失水山梨糖醇倍半油酸酯	0.4	0.4
			9.羟苯甲酸甲酯	0.1	0.1
10.对羟苯甲酸丙酯	0.05	0.05
			11.纯水	至100	至100
12.丁二醇	5	5
			13.聚丙烯酸酯-13聚异丁烯聚山梨酸酯20	0.5	0.5
14.构树的提取物	1	-

实施例5和对比例5的制剂的制备方法

1）将组分11-14均匀地彼此混合，同时将它们加热至70℃，从而制备水相。

2）将组分1-10均匀地彼此混合，同时将它们加热至70℃，从而制备油相。

3）将油相2）加入到水相1）中，并且于7,200rpm下均匀混合6分钟。

4）将混合物3）冷却至室温。

测试例13：对皮脂分泌的抑制效果

为了测量构树的提取物对皮脂分泌的抑制效果，采用以下方式，使用表16的实施例5和对比例5的制剂，评价对皮脂分泌的抑制效果。

选择分泌大量皮脂的10个男人和女人，将实施例5和对比例5的洗液每天施用于指定的区域，共4周。为了测定皮脂降低的效果，使用皮脂计测量皮脂的量，测量结果示于下表17中。

表17：对皮脂分泌的抑制效果

由上表17中的结果可见，与不含构树的提取物的对比例5的制剂相比，含有本发明的构树的提取物作为活性成分的实施例5的制剂有效地抑制了皮脂的过量分泌。

这表明含有本发明的构树的提取物的皮肤外用组合物具有优良的抑制皮脂分泌的效果。

测试例14：对活性氧产生的抑制效果

以5×10⁴个细胞/孔的密度，将从人表皮组织分离的角质形成细胞接种到24孔细胞培养板中，并且培养24小时。16小时后，以1%的浓度，使用制备例2的构树的提取物处理细胞。2小时后，将培养基除去，将100μl的磷酸盐缓冲盐水（PBS）加入到每个孔中。使用UV B灯（型号：F15T8，UV B15W，Sankyo Dennki，日本），以30mJ/cm²的UV光照射角质形成细胞，随后将PBS除去，将200μl的的角质形成细胞培养物加入到每个孔中。使用构树的提取物处理细胞，在不同的时间点测量通过UV照射增加的活性氧（ROS）的量。参考Tan的测量由ROS氧化的DCF-DA（二氯荧光素二乙酸盐）的荧光的方法测量ROS的量（Tan等，1998，J.Cell Biol.，第141卷，第1423-1432页）。测量结果示于表18中。表18中的结果以相对于对照的ROS的百分比表示。

表18

由上表18可见，本发明的构树的提取物具有优良的有效抑制ROS（已知通过UV射线引起皮肤损害）产生的抗氧化效果。

这表明本发明的构树的提取物能够通过抑制氧化和预防老化来预防毛孔的扩大并保护皮肤免于刺激。

测试例15：胶原生物合成的刺激

与TGF-β相比，测量构树的提取物对胶原生物合成的效果。

首先，以10⁵个细胞/孔的密度，将成纤维细胞接种在24孔板中，并且在不含血清的DMEM培养基中培养24小时，至约90%的汇合。随后，使用每种溶于不含血清的培养基中的本发明的构树的提取物和10ng/m的LTGF-β的溶液处理细胞，并且在CO₂孵育器中孵育24小时。收集细胞培养物的上清液，并且使用原胶原类型（I）ELISA试剂盒测量原胶原的量。测量结果示于表19中。在表19中胶原合成的值（%）以相对于对照为100的百分比表示。

表19

样品	胶原合成（%）
		对照	100
TGF-β	183.5±13.1
		构树的提取物	142.1±5.2

由上表19中的结果可见，本发明的构树的提取物显示了较高的合成胶原的能力，与阳性对照TGF-β一样。

这表明本发明的构树的提取物能够通过提高毛孔周围胶原的产生来降低毛孔尺寸。

测试例16：对毛孔尺寸降低的效果的测试

为了测量构树的提取物对毛孔尺寸降低的效果，采用以下方式，使用表16的实施例5和对比例5的制剂，评价对毛孔尺寸降低的效果。

选择具有大的毛孔尺寸的10个男人和女人，将实施例5和对比例5的洗液每天施用于面部，共4周。为了判断毛孔尺寸降低的效果，在施用之前和施用4周之后进行拍照，并由专家进行视觉评价。用六点等级进行评价（0-5；0：未降低；5：非常降低），评价结果示于下表20中。

表20

测试材料	分数
		实施例5	3.2
对比例5	0.8

由上表20中的结果可见，本发明的构树的提取物具有优良的降低毛孔尺寸的效果。

测试例17：对降低皮肤炎性因子的表达的效果

为了测量本发明的构树的提取物对皮肤炎性因子PGE-2的表达的抑制效果，进行ELISA（酶连免疫吸附法）（SE Dunsmore，等，J Biol Chem，271：24576-24582，1996）。

将细胞在含有黄沙（yellow dust）（0.1ppm）的培养基中培养24小时，并用新鲜的培养基更换培养基。使用构树的提取物处理细胞，并且培养24小时。随后，收集培养基，将细胞涂覆在96孔板上。将初级抗体（单克隆抗体）加入到板中，并且在37℃下反应90分钟。随后，使细胞与二级抗体碱性磷酸酶标记的抗小鼠二抗IgG反应约90分钟，使用缓冲液洗涤，随后在室温下与碱性磷酸酶底物溶液（1mg/ml的溶于二乙醇胺缓冲液中的对硝基苯基磷酸酯）反应30分钟，并且使用分光光度计测量在405nm处的吸光度。使用未经本发明的构树的提取物处理的细胞培养物作为对照。使用以下方程式2计算PGE-2表达的抑制率，计算结果示于下表21中。

方程式2

PGE-2表达的抑制率（%）=（A-B）/A×100

其中

A：不含样品的孔的吸光度；

B：含有样品的孔的吸光度。

表21

测试材料	PGE-2表达抑制率（%）
		对照	-
构树的提取物（制备例2）	26.1

由上表21可见，本发明的构树的提取物有效地抑制皮肤炎性因子PGE-2的表达。

这表明本发明的构树的提取物通过抑制皮肤炎性因子的表达，具有优良的预防皮肤病的效果。

测试例18：对肤色改善的效果

为了测量构树的提取物对肤色改善的效果，采用以下方式，使用表16的实施例5和对比例5的制剂，评价对血液循环刺激的效果。

使用LDPI（激光多普勒血液成像仪（Laser Doppler Perfusion Imager）），通过测量皮肤中血液循环的程度，评价对皮肤血液循环的刺激效果。LDPI是广为人知的用于测量皮肤中血液循环的装置，并且为非常敏感的装置，不仅能够测量皮肤的毛细血管中血液的速度和量，而且还能够测量小动脉和小静脉中的血流量。

在恒温和恒湿室中，使用肥皂洗涤面部，并且适应30分钟，使用LDPI测量初始值。手和脚通常冰冷的20个女人参与该测试，使用LDPI测量参与者前额以下部分中初始血流速率。

将实施例5和对比例5的制剂施用于受试者1周，随后与初始测量值比较血流速率和皮肤温度，比较结果示于下表22中。

表22

	实施例5	对比例5
			施用1周后的变化（%）	16.3%	1.9%

由表22上中的结果可见，与不含构树的提取物的对比例5的制剂相比，含有本发明的构树的提取物的实施例5的制剂通过更加有效地刺激血液循环改善肤色。

这最终表明含有本发明的构树的提取物的组合物能够有助于将营养物质有效转移至皮肤并且抑制和延缓老化。

测试例19：对皮肤色调的改善效果

为了测量构树的提取物对皮肤色调改善的效果，采用以下方式，使用表16的实施例5和对比例5的制剂，评价对皮肤色调改善的效果。

在晚上将实施例5和对比例5的每种制剂施用于10个受试者，一天一次，共1周，随后使用Facial Stage DM-3（Moritex，日本）评价皮肤色调改善的程度。基于皮肤的亮度和饱和度值的变化，判断皮肤色调改善的程度。

结果示于下表23中。

表23

由上表23中的结果可见，不含本发明的构树的提取物的对比例5的制剂对皮肤色调的改善未显示显著的效果，但是与施用前相比，在施用含有构树的提取物的实施例5的制剂后对皮肤色调显示了显著的改善。

测试例20：对刺激脂肪细胞中甘油三酯分解的效果

以1×10⁵个细胞/孔的密度，将小鼠成纤维细胞3T3-L1细胞接种在含有10%的含有胎牛血清（FBS）的DMEM（Dulbeco改性高糖培养基，GIBCOBRL，Life Technologes）的6孔培养板中。2天后，用新鲜的DMEM（含有10%FBS）更换培养基，接着培养2天。随后，用含有1μg/ml胰岛素、0.5mMIBMX和0.25μM地塞米松的DMEM（含有10%FBS）处理培养的细胞，以诱导分化，2天后，用含有胰岛素的DMEM更换培养基，接着孵育5天。5天后，用正常的培养基（含有10%FBS的DMEM）更换培养基，将细胞孵育，直至细胞在形态上分化成为脂肪细胞。

为了评价构树的提取物对脂肪细胞中甘油三酯分解的刺激效果，使用分化的3T3-L1脂肪细胞进行测试。使用PBS（磷酸盐缓冲盐水）洗涤3T3-L1脂肪细胞两次，将含有0.5%的不含脂肪酸的牛血清白蛋白（BSA）的无色的DMEM加入到细胞中，取一部分细胞并用于测试。使用未经测试材料或阳性对照处理的培养基作为对照。将对照的值设为100%作为比较的标准。此外，50μM的咖啡因用作阳性对照。通过测量由脂肪细胞向培养基中释放的甘油的水平，测定脂解作用（lypolysis）的程度。使用GPO-trinder试剂盒（Sigma，St。Louis，MO，U.S.A.）对培养物进行显色反应以测量甘油的水平，使用ELISA读数器测量在540nm处的吸光度。结果示于下表24中。

表24

	对照	咖啡因	构树的提取物（制备例2）
				释放的甘油的水平	100%	115%	140%

由上表24可见，与对照组相比，使用本发明的构树的提取物处理的组中，由脂肪细胞向培养基中释放的甘油的水平明显更高。此外，与使用阳性对照咖啡因处理的组相比，使用本发明的构树的提取物处理的组显示出明显高的脂解作用。

参考例4：实施例6和对比例6的制剂的制备

使用在制备例2中得到的构树的提取物，根据下表25所示的组分和含量，制备实施例6和对比例6的洗液制剂。表25中的含量是基于重量%。

表25

测试例21：减肥效果

采用以下方式，使用表25的实施例6和对比例6的制剂，测量构树的提取物的减肥效果。

对于具有局部肥胖或脂肪团和21-27的BMI（身体质量指数，重量（kg）/高度（m）²）的四十个25-46岁的女人，将实施例6和对比例6的制剂施用于一条大腿，并在家一天按摩两次（早晨和晚上），共4周。通过为期8周的仪器评价、研究者（皮肤科医师）评价和问卷评价，分析制剂的效果。

使用Ultrasound-EuB415US扫描仪进行皮下脂肪层厚度（单位：mm）的超声测量，使用t分布检验（Student-t test）或秩合检验（Wilcoxon test）比较在施用之前和之后之间得到值，以分析统计显著性（显著水平α=0.05）。结果示于下表26中。

表26

	实施例6	对比例6
			皮下脂肪厚度的降低（%）	26.4%	9.1%

由表26可见，与不含构树的提取物的对比例6的制剂相比，使用含有本发明的构树的提取物的实施例6的制剂在大腿周长上显示了显著的降低。在测试阶段期间，未观察到受试者体重的变化。

此外，使用皮肤弹性测量仪SEM575（C+K Electronic Co.，德国）测量受试者的皮肤弹性。由专业研究者视觉评价脂肪团的程度。使用t分布检验或秩合检验比较在施用之前和之后之间得到值，以分析统计显著性（显著水平α=0.05）。在评价指数中，基于表示总弹性的R2值的变化（越接近1越好）评价弹性，通过视觉评价，用五点等级评价脂肪团的程度（0-4；0=非常多的脂肪团；4=没有脂肪团）。评价结果示于下表27中。

表27

	实施例6	对比例6
			脂肪团分数的变化（施用前分数-施用后分数）	1.7	0.4
弹性变化：△R2（施用前R2-施用后R2）	0.368	0.099

由上表27可见，研究者的评价结果显示，与使用对比例6的区域相比，在使用实施例6的区域中，脂肪团在统计学上有显著地降低，并且在使用实施例6的区域中，皮肤弹性提高了。

因此，含有根据本发明的构树的提取物的皮肤外用组合物通过有效地降低皮下脂肪和脂肪团显示了优良的减肥效果，并且也提高了皮肤弹性。

测试例22：构树的提取物对转化细胞中MITF表达的刺激效果

为了检验构树的提取物的预防灰发的效果，按照韩国专利申请号10-2007-0072182（题为“使用转化的细胞株和粘膜白斑病小鼠筛选预防灰发的物质的方法和含有所述预防灰发的物质的用于预防灰发的组合物”）公开的方法检验构树的提取物对MITF表达的刺激效果。在37℃和10%CO₂的条件下，在含有10%胎牛血清（FBS）、100单位/ml青霉素-链霉素（Gibco）、0.1μM TPA（Sigma）和400μg/ml G418的RPMI1640培养基中，培养使用表达载体pMITF-GLuc转化的Melan-a黑色素细胞细胞株MITF-GLuc（编号：KCLRF-BP-00162）。阳性对照IBMX购自Sigma，并且以100μM的浓度使用。以50,000个细胞/孔的密度，将转化的黑色素细胞（melan-a）分散在24孔微量滴定板中。第二天，以10和50ppm的终浓度，使用制备例1的构树的提取物（1000×储备液（stock））处理分散的细胞，阴性对照组用0.1%的DMSO处理，而阳性对照组用100μM的IBMX处理，随后将细胞在37℃温度下孵育3天。孵育后，取少量的培养基，转移至测量板中，并且与底物反应，以定量GLuc的量。具体地，从细胞培养盘取少量的培养基，并转移至测量板中，随后将1X GLuc的检测工作液（NEB）以4:1的比例加入到培养基中，并且使用光度计测量在470nM处发射的光的量。测试结果示于下表28中。

表28

由上表28可见，构树的提取物刺激了转化的黑色素细胞中MITF表达。

测试例23：在刺激出现灰毛的粘膜白斑病的小鼠中，构树的提取物预防灰发和诱导黑发的效果的评价

从The Jackson Lab（USA）购买并使用粘膜白斑病小鼠（C57bl/6-Mitf^mi-vit）。采用以下方式测试构树的提取物在小鼠中预防灰发的效果。将12周龄小鼠的背部脱毛，使得在小鼠之间脱毛的面积相同。从脱毛那天开始，将预防灰发的物质施用于脱毛的区域，一天两次。使用乙醇（EtOH）：1.3-丁二醇（1,3-BG）：去离子水（DW）=3:2:5（体积比）的混合物作为用于预防灰发的物质的介质。所述介质用作阴性对照，含有50mMIBMX的介质用作阳性对照，含有2.5%制备例1的构树的提取物的介质用作测试样品。约3周后，已能够区别材料之间灰发预防效果的差别，收集新生长的毛发，并且使用益瑞蛋白酶（esperase）（Novozyme）测量毛发中黑色素的量。具体地，以1NPU/ml的浓度将益瑞蛋白酶溶解于缓冲液（50mMTris-HCl，5mM DTT，pH9.3）中，以制备反应缓冲液。将5mg小鼠毛发加入到1mL反应缓冲液中，使混合物于37℃、1,000rpm的搅拌下反应13小时，随后通过瞬时离心分离将混合物分离成毛发和反应溶液。将这样得到的反应溶液加入到96孔板中，并且测量在405nm处的吸光度，从而测量在反应溶液中黑色素的量。如上所述，各自使用阴性对照、阳性对照和测试样品处理粘膜白斑病小鼠模型（已刺激出现灰发），并视觉和通过测量毛发中黑色素的量，测量阴性对照、阳性对照和测试样品的效果。测量结果示于下表29中。

表29

	相对于阴性对照，毛发中黑色素的量的比例（%）
		阴性对照	100
阳性对照（IBMX）	105.9
		构树的提取物（制备例1）	110.1

由上表29可见，构树的提取物通过抑制灰发和提高毛发中黑色素的量，能够刺激粘膜白斑病小鼠模型中黑发的诱导。

制剂例1：牛奶洗液

根据常规的方法，使用下表30所示的组分，制备牛奶洗液。

表30

组分	含量（重量%）
		纯水	余量
甘油	8.0
		丁二醇	4.0
透明质酸提取物（Hyaluronic acid extract）	5.0
		β-葡聚糖	7.0
卡波姆	0.1
		构树的提取物（制备例1）	0.05
辛酸/癸酸甘油三酯	8.0
		异三十烷	5.0

鲸蜡硬脂基葡糖苷	1.5
		失水山梨糖醇硬脂酸酯	0.4
鲸蜡硬脂醇	1.0
		防腐剂	适量
香料	适量
		色素	适量
三（羟乙基）胺	0.1

制剂例2：滋养洗液

根据常规的方法，使用下表31所示的组分，制备滋养洗液。

表31

组分	含量（重量%）
		纯水	余量
甘油	3.0
		丁二醇	3.0
液体石蜡	5.0
		β-葡聚糖	7.0
卡波姆	0.1
		构树的提取物（制备例1）	3.0
辛酸/癸酸甘油三酯	3.0
		异三十烷	5.0
鲸蜡硬脂基葡糖苷	1.5
		失水山梨糖醇硬脂酸酯	0.4
聚山梨酸酯60	1.5
		防腐剂	适量
香料	适量
		色素	适量
三（羟乙基）胺	0.1

制剂例3：滋养霜

根据常规的方法，使用下表32所示的组分，制备滋养霜。

表32

组分	含量（重量%）
		纯水	余量
甘油	3.0
		丁二醇	3.0
液体石蜡	7.0
		β-葡聚糖	7.0
卡波姆	0.1
		构树的提取物（制备例1）	3.0
辛酸/癸酸甘油三酯	3.0
		异三十烷	5.0
鲸蜡硬脂基葡糖苷	1.5
		失水山梨糖醇硬脂酸酯	0.4
聚山梨酸酯60	1.2
		防腐剂	适量
香料	适量
		色素	适量
三（羟乙基）胺	0.1

制剂例4：面膜（pack）

根据常规的方法，使用下表33所示的组分，制备面膜。

表33

组分	含量（重量%）
		纯水	余量
甘油	4.0
		聚乙烯醇	15.0
透明质酸提取物	5.0
		β-葡聚糖	7.0
1-脲基间二氮杂环戊烷-2,4-二酮	0.1
		构树的提取物（制备例1）	0.5
壬基苯基醚（Nonylphenyl ether）	0.4
		聚山梨酸酯60	1.2
防腐剂	适量
		香料	适量
色素	适量
		乙醇	6.0

制剂例5：软膏

根据常规的方法，使用下表34所示的组分，制备软膏。

表34

组分	含量（重量%）
		纯水	余量
甘油	8.0
		丁二醇	4.0
液体石蜡	15.0
		β-葡聚糖	7.0
卡波姆	0.1
		构树的提取物（制备例1）	1.0
辛酸/癸酸甘油三酯	3.0
		异三十烷	1.0
鲸蜡硬脂基葡糖苷	1.5
		失水山梨糖醇硬脂酸酯	0.4
鲸蜡硬脂醇（Cetearyl alcohol）	1.0
		防腐剂	适量
香料	适量
		色素	适量
蜂蜡	4.0

制剂例6：按摩霜

根据常规的方法，使用下表35所示的组分，制备按摩霜。

表35

组分	含量（重量%）
		纯水	余量
甘油	8.0
		丁二醇	4.0
液体石蜡	45.0
		β-葡聚糖	7.0
卡波姆	0.1
		构树的提取物（制备例1）	1.0
辛酸/癸酸甘油三酯	3.0
		蜂蜡	4.0

鲸蜡硬脂基葡糖苷	1.5
		失水山梨糖醇倍半油酸酯	0.9
凡士林	3.0
		防腐剂	适量
香料	适量
		色素	适量
石蜡	1.5

制剂例7：毛发洗发剂

根据常规的方法，使用下表36所示的组分，制备毛发洗发剂。

表36

组分	含量（重量%）
		十二烷基硫酸钠（30%）溶液	20.0
椰油脂肪酸二乙醇酰胺（Coconut oil fatty acid diethanolamide）	5.0
		聚季铵盐-10（Polyquartemium-10）	0.3
丙二醇	2.0
		构树的提取物（制备例1）	0.1
吡啶酮乙醇胺盐（piroctone olamine）	0.5
		黄色203号	适量
对羟苯甲酸酯	0.2
		组合香料	适量
柠檬酸	适量
		纯水	余量

制剂例8：毛发调理剂

根据常规的方法，使用下表37所示的组分，制备毛发调理剂。

表37

组分	含量（重量%）
		十六烷基三甲基氯化铵（Cetyltrimethylammonium chloride）（29%）	7.0
双硬脂基二甲基氯化铵（Distearyldimethylammonium chloride）（75%）	4.0
		十六醇十八醇混合物	3.5
聚氧乙烯硬脂醚	1.0
		液体石蜡	2.0
丙二醇	1.5

构树的提取物（制备例1）	0.1
		组合香料	适量
柠檬酸	适量
		纯水	余量

制剂例9：头皮护发素（hair tonic）

根据常规的方法，使用下表38所示的组分，制备头皮毛发滋补。

表38

组分	含量（重量%）
		薄荷醇	0.1
D-泛醇	0.6
		水杨酸	0.05
甘油	1.0
		聚氧乙烯氢化蓖麻油	0.8
醋酸生育酚酯（Tocopherol acetate）	0.03
		组合香料	适量
构树的提取物（制备例1）	0.1
		乙醇	30.0
纯水	余量

制剂例10：头皮精华

根据常规的方法，使用下表39所示的组分，制备头皮精华。

表39

组分	含量（重量%）
		乙醇	30.0
聚山梨酸酯60	1.5
		甘油	3.0
聚羧乙烯（Carboxyvinyl polymer）	0.1
		三乙醇胺	0.2
构树的提取物（制备例1）	0.1
		防腐剂	适量
香料和色素	适量
		纯水	余量

Claims

1.含有构树的提取物作为唯一活性成分的皮肤外用组合物在制备用于改善弹性、减少皱纹、降低毛孔尺寸、控制皮脂分泌、预防皮肤病、保护皮肤免于刺激、减肥、缓解粉刺、预防灰发或治疗粘膜白斑病的产品中的应用，所述提取物为构树植物的茎、根、叶、花和果实的水提取物。

2.根据权利要求1所述的皮肤外用组合物的应用，其中，所述组合物为化妆品组合物。

3.根据权利要求1所述的皮肤外用组合物的应用，其中，所述组合物为药物组合物。

4.根据权利要求1所述的皮肤外用组合物的应用，其中，基于所述组合物的总重量，所述提取物的含量为0.0001-90重量％。