CN105636653A - 圭亚那塔皮漆木提取物的化妆品或皮肤病学用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及圭亚那塔皮漆木提取物通过局部途径施用的化妆品的用途,用于刺激基底膜蛋白聚糖和/或营养不良聚糖和/或胶原蛋白XVIII和/或VE-钙粘附蛋白和/或紧密连接蛋白-5的表达,特别在细胞外基质和/或在上皮基底膜中的表达,尤其是在真皮表皮连接处。本发明还涉及化妆品护理方法,该方法包括将圭亚那塔皮漆木提取物或含有此类提取物的化妆品组合物施用于至少一个健康皮肤和/或健康粘膜和/或健康头皮的相关区域,用于刺激基底膜蛋白聚糖、营养不良聚糖和VE-钙粘附蛋白和紧密连接蛋白-5的表达,特别是在细胞外基质和/或在上皮基底膜中,尤其是在真皮表皮连接处。另外,本发明还涉及化妆品组合物,其含有圭亚那塔皮漆木提取物和局部应用可接受的化妆品载体。最后,本发明还涉及圭亚那塔皮漆木提取物或含有圭亚那塔皮漆木提取物和皮肤病学可接受的载体的皮肤病学组合物,其通过局部途径用于治疗和/或预防酒糟鼻、毛细血管扩张和/或口腔和/或眼睛粘膜的病理状态。
Description
本发明涉及圭亚那塔皮漆木(Tapiriraguianensis)提取物通过局部途径施用的化妆品或皮肤病学用途,用于刺激基底膜蛋白聚糖和/或营养不良聚糖和/或胶原蛋白XVIII和/或VE-钙粘附蛋白和/或紧密连接蛋白-5的表达,特别在细胞外基质和/或在上皮基底膜中的表达,尤其是在真皮表皮连接处,和/或还涉及含有它的化妆品组合物。
在基底层的硫酸类肝素蛋白多糖(HSPGs)中,基底膜蛋白聚糖不仅在上皮特别是在表皮的形态形成中具有重要作用,而且在角质细胞和内皮细胞的生存、增殖和分化中也具有重要作用,特别是皮肤角质细胞和内皮细胞。基底膜蛋白聚糖能够通过控制生长因子的生物利用度而调节这些过程。
营养不良聚糖是糖蛋白,是基底膜蛋白聚糖的潜在受体。
基底膜蛋白聚糖和营养不良聚糖在基底膜上表达,它们是位于各种组织中的普遍存在的结构,例如上皮和内皮组织,同样也存在于各种细胞类型中,例如角质细胞、成纤维细胞和内皮细胞。它们一起相互作用并有助于保证皮肤、粘膜和头皮结构的坚固和稳定,特别是上皮,尤其是表皮和真皮。事实上,在衰老期间,特别是时间生物学衰老,基底膜蛋白聚糖和营养不良聚糖的表达显著减少。
具体地讲,随着年龄的增长,基底膜蛋白聚糖的表达在真皮表皮连接处和真皮毛细血管中大幅减少。这种减少并非是由于蛋白质的退化,而是由于角质细胞和内皮细胞对其表达的减少,特别是其转录调节的原因。此外,本发明者已经发现,基底膜蛋白聚糖合成的匮乏与皮肤和/或粘膜和/或头皮的厚度之间存在相关性,特别是上皮的厚度,尤其是表皮的厚度。因此,基底膜蛋白聚糖和营养不良聚糖的表达在皮肤和/或粘膜和/或头皮的体内平衡中以及保持其坚固性方面具有非常重要的意义,它们随着年龄增长而降低,特别是时间生物学老化。
胶原蛋白为细胞外基质(ECM)的构成蛋白,以非常大的量存在于脊椎动物组织中。它包括由29种不同类型蛋白组成的大家族,包括胶原蛋白XVIII。后者已知与硫酸类肝素蛋白多糖(HSPGs)结合,因此能够参与上皮的形态形成,特别是表皮,更特别是在粘膜中。
钙粘附蛋白为糖蛋白一族,包括包括VE-钙粘附蛋白,特别是能够在内皮细胞的表面表达。VE-钙粘附蛋白在组织中的细胞粘附中起着重要作用,因此,在细胞间连接处有重要作用。
同样,紧密连接蛋白是“紧密”连接处的构成性跨膜蛋白,其在细胞粘附中起作用。
这两个蛋白家族是细胞存活所必需的,对液体的保留具有作用,因此也影响了皮下脂肪团和眼袋。
令人惊奇的是,本发明者发现,圭亚那塔皮漆木提取物能够刺激HSPGs和基底层糖蛋白的表达,更特别是基底膜蛋白聚糖和营养不良聚糖,尤其是在细胞外基质和/或上皮基底膜中,特别是真皮表皮连接处,更特别是皮肤和/或粘膜和/或头皮的角质细胞和/或内皮细胞,尤其是皮肤角化细胞(skinkeratonicytes)和/或内皮细胞。靶向角质细胞和内皮细胞(特别是皮肤的)使其能够具有双重作用:1)改善营养皮肤、粘膜和/或头皮的微血管通路,和2)改善肤色,特别是皮肤光亮度方面。
另外,靶向基底膜蛋白聚糖以及营养不良聚糖使其能够完全作用于表达通路和基底膜蛋白聚糖的活性。
本发明者还发现,圭亚那塔皮漆木提取物能够增强皮肤和/或粘膜和/或头皮(优选皮肤角质细胞和/或内皮细胞)的VE-钙粘附蛋白和紧密连接蛋白-5的表达,特别是在真皮表皮连接处,更特别是在角质细胞和/或内皮细胞中,尤其是在内皮细胞中。因此,该提取物使其能够减少、抑制或防止液体的滞留以及由此带来的皮下脂肪团和眼袋的外观。
最后,本发明者发现,圭亚那塔皮漆木提取物能够增强胶原蛋白XVIII的表达。
圭亚那塔皮漆木属于无患子目(Sapindalesorder)和漆树科家族(Anacardiaceaefamily),是南美洲广泛生长的树木,特别是在亚马逊流域,尤其是在法属圭亚那地区。
地方药典已经描述了该树木的某些部位的特定治疗作用。因此,其通常用作口服施用的抗感染药。同样,在具体药物应用中,其树皮对口腔和阴道粘膜的用途也已有描述,特别是作为冷浸产品或作为煎煮汤剂以止血漱口剂施用于治疗腹泻和呕吐,或者施用于阴道粘膜以防止分娩导致的出血和感染,在精细搓碎并压榨之后,树皮也可以以含潄剂使用以对抗良性口腔鹅口疮(Etudephytochimiquedeplantesamazoniennesd’activitéantiplasmodiale[具有抗疟原虫廓形的亚马逊植物的植物化学研究(PhytochemicalstudyonAmazonianplantshavingantiplasmodialactivity)],VincentROUMY,July2007)。
然而,现有技术公开的特性中没有一个能够预料其在化妆品组合物中的优点或其具有刺激基底膜蛋白聚糖和/或营养不良聚糖和/或VE-钙粘附蛋白和/或紧密连接蛋白-5和/或胶原蛋白XVIII表达的特性。
因此,本发明涉及圭亚那塔皮漆木提取物通过局部途径施用的化妆品或皮肤病学用途,用于刺激基底膜蛋白聚糖和/或营养不良聚糖和/或胶原蛋白XVIII和/或VE-钙粘附蛋白和/或紧密连接蛋白-5的表达,特别在细胞外基质和/或在上皮基底膜中的表达,尤其是在真皮表皮连接处的表达。
优选本发明的用途为化妆品,通过局部应用于至少健康皮肤和/或健康粘膜和/或健康头皮的一处相关区域,特别是人类的。
优选圭亚那塔皮漆木提取物获自地上部分,特别是叶子,优选通过水提工艺获得。
优选圭亚那塔皮漆木的用途是刺激皮肤和/或粘膜和/或头皮的角质细胞和/或内皮细胞中的基底膜蛋白聚糖和/或营养不良聚糖的表达,优选皮肤的内皮细胞中的表达。
本发明还涉及化妆品组合物,其包含圭亚那塔皮漆木提取物和局部应用可接受的化妆品赋形剂。
在本发明的意义中,术语“化妆品用途和/或组合物”应当理解为是指非药物用途和/或组合物,也就是说该用途和/或组合物不应当用于治疗应用,其目的在于提高魅力和/或舒适,其可以施用于/应用于机体的健康部位,特别是健康粘膜、健康皮肤和/或健康头皮。
在本发明的意义中,术语“健康皮肤、健康粘膜和/或健康头皮”应当理解为是指本发明提取物所应用的皮肤、粘膜或头皮的区域,皮肤科医师称其为非病理性的区域,也就是说没有显示皮肤感染、疾病或病症,例如鹅口疮、脓疱病、银屑病、湿疹、痤疮或皮炎或创伤或损害。
在本发明的意义中,术语“局部应用可接受的化妆品和/或皮肤病学成分”应当理解为是指适合于局部途径应用的原料,其是无毒性的,不会刺激皮肤和/或粘膜,其不会诱导过敏性反应并且在化学上是稳定的。
在本发明的意义中,术语“局部途径应用”应当理解为是指所述成分在局部的直接应用和/或将所述成分喷雾到皮肤和/或粘膜和/或头皮的表面。
在本发明中,术语“粘膜”是指眼睛粘膜、阴道粘膜、泌尿生殖道粘膜、肛门粘膜、鼻腔粘膜和/或口腔粘膜(特别是口腔、唇和/或牙龈粘膜),优选眼睛和/或口腔粘膜,还优选唇和/或眼睛粘膜。
本发明的圭亚那塔皮漆木植物提取物可以提取自完整的植物,或者提取自该植物的一或多个部分,特别是选自根、茎、树皮、花、种子、胚芽、果实和/或叶子以及它们的混合物。本发明的提取物优选提取自该植物的上部区域,也就是果实、叶子和树枝,更优选提取自地上部分,也就是叶子和树枝。特别有利的是,本发明的活性成分是圭亚那塔皮漆木叶子的提取物。这是因为叶子构成了该植物具有最大活性的部分,它们的收获方式也有利于可持续的发展。
本发明的提取物可以根据本领域中已知的植物提取方法获得,例如通过植物的至少一个部位的浸渍,优选1-10%(w/w)在溶剂或溶剂混合物中浸渍,优选极性质子溶剂,最好是水、醇、多元醇或100/0至0/100(v/v)的水/醇、水/二醇或水/多元醇的混合物(例如水与乙醇、丙三醇、丁二醇或其它二醇类,例如木糖醇等)。该提取物优选通过水提法获得。
在本发明的意义中,术语“通过水提法获得的圭亚那塔皮漆木提取物”应当理解为是指通过采用水溶液提取的任何提取物,相对于水溶液的总重量而言,所述水溶液含有大于60%重量比,最好是至少70%重量比,特别是至少80%重量比,更特别是至少90%重量比或尤其是至少95%重量比的水,更有利的是不含丁二醇,尤其是不含醇,更特别的是仅含有水。
根据一个有益的实施方案,本发明的提取物于0-30℃通过提取获得,特别是通过冷浸法获得,优选的温度为4℃或者于室温下,也就是18-25℃,优选20℃,进行冷浸,任选在植物干燥后进行。
根据一个优选的实施方案,本发明的提取物可以通过浸渍30分钟至24小时的时间而获得,优选1至20小时,更优选2至16小时,特别是16小时。
根据一个有益的实施方案,本发明的提取物为通过冷浸法和/或通过于室温下浸渍获得的提取物,优选茎和叶的混合物的提取物,更优选叶子的提取物,任选将植物干燥后的提取物。
根据一个特别有益的实施方案,本发明的圭亚那塔皮漆木提取物获自地上部分,最好是叶子,其采用在水、丁二醇或水/醇介质中的冷浸法获得,优选在水中冷浸,优选在下列条件下进行:
-优选温度在0至20℃之间,特别是在0至10℃之间,最好于约4℃
和/或
-提取时间在2至20小时之间,最后在4至20小时之间,优选约16小时。
这是因为该提取工艺具有能够提供具有最大活性的活性成分的优点,该活性能够刺激HSPGs的表达,特别是基底膜蛋白聚糖、营养不良聚糖和/或胶原蛋白XVIII的表达和/或具有能够增加VE-钙粘附蛋白和/或紧密连接蛋白-5表达的活性。
然后将该提取物溶于水性介质中,优选水。随后将该提取物根据本发明使用,任选在过滤后使用。
随后将获得的提取物优选离心和/或过滤和/或蒸馏以便于回收活性可溶性组分。优选将其以0.45μm的截滤阈值(cutoffthreshold)过滤,更优选0.22μm的阈值。对提取物进行的其它脱色和/或除味阶段可以根据本领域技术人员已知的技术在提取的任何阶段进行。
本发明的提取物最后也可以通过溶剂蒸发而浓缩,例如通过冷冻干燥或通过雾化方法。
特别有益的是,提取过程中植物(优选植物的上部区域,最好是地上部分,特别是叶子)的量为相对于植物/提取溶剂混合物的总重量的1%(重量比),所述溶剂优选为水溶液。特别需要注意,所述植物在提取前应当磨碎。
获得的提取物优选为可溶的和/或可以溶于溶剂,特别是极性溶剂,例如水、醇、多元醇、二醇或它们的混合物之一,优选水/二醇混合物,更优选含有选自下列的二醇:辛二醇、戊二醇、己二醇及其混合物。
有益的是,该提取物可以溶解和/或溶于含有己二醇和/或戊二醇的水溶液中,特别是含有相对于水溶液总重量的0.1-10%重量比的己二醇和/或戊二醇,更特别是含有相对于水溶液总重量的1-5%重量比的己二醇和/或戊二醇。有益的是,该提取物可溶于含有辛二醇的水溶液中,特别是含有相对于水溶液总重量的0.01-5%重量比的辛二醇,更特别是含有相对于水溶液总重量0.1-1%重量比的辛二醇。有益的是,所述水溶液不含丁二醇。
特别有益的是,如此获得的提取物可以调节至和/或保持于中性pH以避免HI指数的增加,当提取物为碱性pH时可能出现不受欢迎的情况。
在本发明的意义中,术语“刺激基底膜蛋白聚糖和/或营养不良聚糖和/或VE-钙粘附蛋白和/或紧密连接蛋白-5和/或胶原蛋白XVIII的表达”应当理解为分别是指基底膜蛋白聚糖和/或营养不良聚糖和/或VE-钙粘附蛋白和/或紧密连接蛋白-5和/或胶原蛋白XVIII的基因和/或蛋白表达的增加,优选基底膜蛋白聚糖和/或营养不良聚糖和/或VE-钙粘附蛋白和/或紧密连接蛋白-5的基因和/或蛋白表达的增加,更优选蛋白表达的增加。该增加可以在包含至少一种细胞类型的模型中测定,当与本发明的圭亚那塔皮漆木提取物接触时,该细胞类型显示基底膜蛋白聚糖和/或营养不良聚糖和/或VE-钙粘附蛋白和/或紧密连接蛋白-5和/或胶原蛋白XVIII的表达,最好是角质细胞和/或内皮细胞,优选皮肤角质细胞和/或内皮细胞,该增长通过基底膜蛋白聚糖和/或营养不良聚糖各自的基因和/或蛋白的表达体现,相对于对照模型中基因和/或蛋白表达的水平而言,其等于或大于10%,最好等于或大于20%,对照模型相当于没有与本发明的圭亚那塔皮漆木提取物接触的模型。在该表达中的增长优选蛋白表达中的增长。该模型描述于实施例中。
有益的是,本发明的用途是用于防止和/或对抗皮肤和/或粘膜和/或头皮老化,特别是时间生物学和/或光生物学老化;用于防止和/或对抗皮肤和/或粘膜和/或头皮体内平衡的降低和/或用于改善它们,特别是在表皮中的平衡;用于增强皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮基底膜,优选真皮表皮连接处的上皮基底膜;用于改善角化细胞增殖和/或分化,特别是在表皮层面上改善,尤其是与皮肤和/或粘膜和/或头皮的老化相关的改善;用于防止和/或对抗皮肤和/或粘膜和/或头皮的血管形成的减少和/或改善它们,特别是用于改善皮肤和/或粘膜和/或头皮的毛细血管的结构,特别是皮肤毛细血管;用于改善皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮细胞的形态形成,优选表皮的上皮细胞;用于恢复皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮架构,优选表皮架构,特别是正在老化的皮肤和/或粘膜和/或头皮,尤其是时间生物学老化;用于改善皮肤和/或粘膜的肤色,特别是使其均匀一致;用于改善皮肤和/或粘膜和/或头皮的坚固性和/或密度;和/或用于对抗皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮的厚度降低,优选表皮厚度;和/或用于增加皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮的厚度,优选表皮厚度;和/或用于治疗或预防皲裂和/或用于对抗、治疗和/或预防水潴留和/或脂肪团和/或眼袋和/或用于增强和/或保持细胞粘附。
在一个具体的实施方案中,本发明用途的目的在于改善皮肤的肤色,可以方便地通过消除红斑和/或通过使得肤色均匀和/或通过使其有光泽、健康和/或滋润而进行,呈现好看的效果和/或呈现粉红色光泽。这是因为肤色的光泽通常反映了皮肤的健康情况。许多内在或外在的因素都可能导致不均匀、晦暗的肤色。在影响皮肤肤色光泽的因素中,可以述及的包括压力、疲劳、激素变化、上皮(优选表皮)脱水、污染物和时间生物学和光生物学老化。这些因素有可能使得肤色晦暗,使其不均匀、阴暗、苍白、甚至是病态。基底膜蛋白聚糖和营养不良聚糖的表达对微血管通路有影响,因而通过滋养使得皮肤更好并且通过解毒使其更好,所以使其具有滋润和健康的外观。此外,皮肤的色泽受微循环的影响:当到达微血管时,光线与红细胞接触,其在绿色区域(greenregion)中特别吸收光线。红色在表面反射,使得皮肤呈现粉红肤色,因此皮肤具有粉红光泽。肤色的光泽也取决于皮肤反射的能力。该反射能力受皮肤质地的影响。因此较柔和、弹性质地的皮肤具有更好的反射性。因此,通过刺激基底膜蛋白聚糖和/或营养不良聚糖的表达获得的表皮结构的修复和上皮(优选表皮)形态形成的改善也能够改善皮肤的肤色。
肤色的光泽和发光的改善具体可以通过客观的仪器分析方法测定。该体内测定方法主要在于:在应用试验产品之前和之后,采用交叉-偏振光于45°处摄取志愿者面部高分辨率照片。根据这些数码照片,影像分析能够提取并量化与皮肤的色泽、光泽、均匀性和质地相关的特定的参数(例如:L*、a*、b*、C、h°)。
同样,光泽度具体也可以根据该方法测定,在应用试验产品之前和之后,采用交叉-偏振光和平行偏振光于45°处摄取志愿者面部高分辨率照片。根据这些数码照片,影像分析能够提取并量化与光泽度相关的特定参数,例如表面光泽度(speculargloss)和对比光泽度。
在另一个特定实施方案中,本发明用途的目的在于防止和/或对抗皮肤和/或粘膜和/或头皮的老化,特别是时间生物学或光生物学老化,其通过减少或抑制皱纹和/或细线,特别是对于成熟性皮肤和/或显示初步老化迹象的皮肤。
在本发明的意义中,术语“成熟性皮肤”应当理解为是指至少50岁的男性或女性的皮肤,优选绝经期女性的皮肤。
在本发明的意义中,术语“显示初步老化迹象的皮肤”应当理解为是指28-40岁之间的男性或女性的皮肤,优选初步显示皱纹的皮肤。
在另一个特定的实施方案中,本发明的用途的目的在于防止和/或对抗皮肤和/或粘膜和/或头皮体内平衡的下降和/或改善它们,特别在表皮中。
体内平衡,特别是皮肤体内平衡并且尤其是表皮体内平衡,源自皮肤细胞(特别是角质细胞)的增殖和分化过程之间的细微调节的平衡。这些增殖和分化过程参与了皮肤的更新和/或再生,结果是维护了皮肤的恒定厚度,特别是上皮的恒定厚度,优选表皮的恒定厚度。该体内平衡也参与了皮肤、粘膜和头皮的机械性能的维护。
然而,该皮肤体内平衡可以受到某些生理学的因素(年龄、更年期、激素、压力等)和外在因素(污染物等)的破坏。上皮(特别是表皮)再生的可能性变低:基底层细胞分化的性能变低,导致特别是表皮更新减慢和/或下降。因此,细胞更新不再能够弥补表面被消除的细胞损失,导致上皮特别是表皮的萎缩和/或皮肤和/或粘膜和/或头皮的厚度降低和/或皮肤和/或粘膜和/或头皮的密度和/或坚固性下降。这种现象在更年期加重。与更年期有关的激素缺乏特别伴随着代谢活动的下降,这可能导致角化细胞增殖的减少以及表皮分化的增加。因此,本发明的用途使其能够促进体内平衡以便于保持和/或增加皮肤和/或粘膜和/或头皮的厚度,因而能够保持和/或改善皮肤和/或粘膜和/或头皮的机械性能和/或改善皮肤和/或粘膜和/或头皮的坚固性和/或密度,特别是在更年期女性中。
上皮(优选表皮)厚度的增加可以在存活条件下通过离体皮肤和/或粘膜和/或头皮活组织检查模型进行评价。上皮(优选表皮)厚度可以在试验开始时在使用试验产品之前测定,然后在试验产品的试验期结束时测定,例如4天,优选7天。使用产品后,如果试验期结束时测定值等于或大于5%,优选等于或大于10%,则上皮(优选表皮)厚度可以说是增加的。
在另一个特定的实施方案中,本发明用途的目的在于对抗、治疗和/或防止水潴留和/或脂肪团和/或眼袋和/或增加和/或保持细胞粘附,特别是用于对抗、治疗和/或预防眼袋的目的。
这是因为眼袋总是被认为是不雅观的,总是希望能够掩盖它们,甚至是消除它们。事实上,本发明者发现,本发明的提取物具有降低血管舒张的作用和减少淋巴淤积导致的过度水肿的作用,特别是在眼眶周围,因此具有预防或治疗眼袋的作用。
在本发明的意义中,术语“眼袋”应当理解为是指眼睛周围的区域,特别是眼睛的下方和内侧,呈现出脸部皮肤的不连续的浮肿,也就是凹陷或袋(肿胀区)。
眼袋不同于黑眼圈,因为其具有不同的体积。黑眼圈通常较眼袋更暗。它们的位置和外观是不同的。它们的稳定性以及它们随着时间的发展也是不同的。
它们通过临床检查可被确定为三个阶段:观察期、触诊期和问题期。
对眼袋的作用可以通过简单的目测法测定,或者通过图像比较分析测定。
有利的是,本发明的圭亚那塔皮漆木提取物或含有它们的化妆品或皮肤病学组合物所应用的皮肤(特别是人类皮肤)的相关区域选自脸部、颈部、颈线、胸部和/或手,特别是鼻唇沟皱褶和/或眼眶周围,特别是黑眼圈和眼角鱼尾纹和/或唇线和/或前额。然而,提取物也可以用于机体,特别是胃、大腿、臀部和/或腰部、显示坚固性和/或密度降低的机体区域。另外,在用于对抗和/或预防眼袋的治疗中,应用的区域明显的是眼眶周围。
根据本发明,本发明的圭亚那塔皮漆木植物提取物可以单独使用,或者在化妆品或皮肤病学组合物中使用,相对于组合物总重量而言,使用的浓度为1×10-4至10%(重量比),最好是1×10-4至5%(重量比),更特别是1×10-3至3%(重量比),特别是相当于组合物总重量的0.001至0.1%(重量比)。其含量也可以是相当于组合物总重量的0.01至10%(重量比)。
在本发明的一个实施方案中,圭亚那塔皮漆木提取物可以用于生产皮肤病学组合物,用于酒糟鼻或毛细血管扩张的皮肤病学关怀和/或治疗,和/或用于口腔和/或眼睛粘膜的病理状态的皮肤病学关怀和/或治疗,特别是用于与口腔粘膜坚固性和/或密度下降相关的口腔粘膜病理状态的关怀和/或治疗,和/或用于改善口腔血管结构,和/或用于眼睛粘膜坚固性和/或密度下降相关的眼睛粘膜病理状态的关怀和/或治疗,和/或用于改善眼睛血管结构,和/或用于治疗涉及细胞粘附中过度或病理性恶化的病理状态和/或与水或液体潴留相关的病理状态。
在本发明的另一个实施方案中,本发明的圭亚那塔皮漆木提取物存在于化妆品或皮肤病学组合物中,该组合物还含有局部应用可接受的化妆品或皮肤病学赋形剂。
该化妆品或皮肤病学组合物预期方便地通过局部途径施用。
因此,本发明的化妆品或皮肤病学组合物含有局部应用可接受的化妆品或皮肤病学赋形剂以及本发明的提取物。所述赋形剂为例如至少一种选自下列的化合物:防腐剂、软化剂、乳化剂、表面活性剂、保湿剂、增稠剂、调节剂、吸油剂、稳定剂、抗氧剂、质感调节剂(texturingagents)、光泽剂、成膜剂、增溶剂、色素、染料、芳香剂和遮光剂。这些赋形剂优选选自氨基酸及其衍生物、聚甘油类、酯类、纤维素聚合物及其衍生物、羊毛脂衍生物、磷脂、乳铁蛋白、乳过氧化酶、蔗糖类稳定剂、维生素E及其衍生物、天然和合成的蜡类、植物油、甘油三酯类、未皂化的化合物、植物甾醇、植物酯类、硅酮及其衍生物、蛋白水解物、荷荷巴油及其衍生物、脂溶性/水溶性酯类、甜菜碱类、氨基氧化物(aminoxides)、植物提取物、蔗糖酯类、二氧化钛、甘氨酸和对羟基苯甲酸酯类,更优选选自硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚-21、乙二醇-15硬脂醇醚、鲸蜡硬脂醇、苯氧基乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、丁二醇、辛二醇、天然生育酚、甘油、二羟鲸蜡醇磷酸酯钠、异丙基羟鲸蜡基醚、硬脂酸乙二醇酯、三异壬精、椰子油酸辛基酯、聚丙烯酰胺、异石蜡烃、月桂醇聚醚-7、卡波姆、丙二醇、己二醇、丙三醇、没药醇、二甲硅油、氢氧化钠、PEG-30二聚羟基硬脂酸酯、癸酸/辛酸甘油三酯、辛酸十六酯、己二酸二丁基酯、葡萄籽油、荷荷巴油、硫酸镁、EDTA、环甲硅油、黄原胶、柠檬酸、十二烷基硫酸钠、矿蜡和油、异硬脂酸异硬脂醇酯、丙二醇二壬酸酯、丙二醇异硬脂酸酯、PEG-8、蜂蜡、氢化棕榈仁油甘油酯、羊毛脂油、芝麻油、乳酸鲸蜡酯、羊毛脂醇、蓖麻油、二氧化钛、乳糖、蔗糖、低密度聚乙烯和等渗生理盐水溶液。
本发明的化妆品组合物可以选自水性或油性溶液、水性乳膏或凝胶或油性凝胶,特别是沐浴乳;香波;乳液;乳剂;微乳剂或纳米乳剂,特别是水包油型或油包水型或多相的或硅酮类的;面膜;精华液(serum);洗液;洗手液(liquidsoap);润肤皂(dermatologicalbar);软膏;泡沫剂(foam);贴剂;无水产品,优选液体、半固体(pasty)或固体,例如化妆粉(makeuppowders)、棒(wand)或条的形式,特别是唇膏形式。有利的是,其为乳膏或精华液,特别是眼或唇精华乳。
本发明的组合物更特别的是可以施用于脸部,优选每天一次,优选每天一或两次,优选在早上和/或晚上施用。
有利的是,本发明的化妆品组合物含有其它相关成分,特别是相关化妆品成分,优选具有相似性质的成分。优选它们是抗衰老组合物和/或改善皮肤和/或粘膜密度和/或坚固的组合物和/或改善皮肤肤色和/或皮肤体内平衡的组合物的常规成分,特别是选自下列的成分:填充剂、紧致剂、保湿剂以及用于刺激细胞外基质分子的成分。
本发明的化妆品组合物还可以含有产生补充作用或任选的协同作用的化妆品活性成分,例如保湿活性成分、抗衰老活性成分、清除自由基的活性成分、成纤维细胞生长因子(FGF)保护剂、刺激成纤维细胞活性和/或增殖的成分和/或温泉水(thermalwaters)。因此,它们可以是例如皮肤着色剂或色素(propigmentingagents)、NO-合成酶抑制剂、用于油性皮肤护理的抗皮肤脂溢的成分、刺激真皮或表皮大分子合成(特别是细胞外基质)和/或防止其降解的成分(用于协同或补充作用)、刺激成纤维细胞或角化细胞增殖和/或角化细胞分化的成分(用于协同或补充作用)、抗微生物成分、紧致剂、抗污染成分或自由基清除剂、用于舒缓、镇静或放松的成分、作用于微循环以改善肤色光泽度(特别是脸部)的成分(用于协同或补充作用)、光防护成分、修复成分、减肥成分、抗衰老成分(用于协同或补充作用)或任选的保湿剂和/或强化表皮屏障的成分。
保湿、润肤或润湿成分可以强化屏障功能并减少极细微的水分流失和/或增加皮肤和/或粘膜的水分含量或者刺激皮脂腺的分泌活性和/或刺激水通道蛋白的合成从而改善细胞中水的流通。通过非限定性示例,可以述及的活性成分包括下列成分:丝氨酸、尿素及其衍生物;以下列名称销售的产品:MarineFillingSpheresTM、AdvancedMoisturizingComplexTM、HyaluronicFillingSpheresTM、VegetalFillingSpheresTM、OsmogellineTM或MicropatchTM;烷基纤维素、卵磷脂、鞘氨醇类、神经酰胺类、磷脂、胆固醇及其衍生物、鞘糖脂类、植物甾醇类(豆甾醇和β-谷甾醇、菜油甾醇)、必需脂肪酸、1,2-二酰基甘油、4-苯并二氢呋喃酮;五环三萜类,例如熊果酸、凡士林、羊毛脂;糖类,特别是海藻糖及其衍生物、鼠李糖、果糖、麦芽糖、乳糖、赤藓糖醇、甘露醇、D-木糖和葡萄糖;腺苷及其衍生物;山梨醇;多羟基醇类,优选C2-C6并且更优选C3-C6多羟基醇类,例如丙三醇、丙二醇、二丙二醇、双甘油、聚甘油及其混合物、甘油及其衍生物;甘油基聚丙烯酸酯、乳酸钠、戊二醇、丝氨酸、乳酸、AHAs、BHAs、吡酮酸钠(sodiumpidolate)、木糖醇、乳酸钠、海藻酶(ectoin)及其衍生物、壳聚糖及其衍生物、胶原蛋白、浮游生物(plankton)、甾体衍生物(包括DHEA、其7-氧化的和/或17-烷基化的衍生物和皂甙元(sapogenins))、二氢茉莉酮酸甲酯、维生素D及其衍生物、锦葵(Malvasylvestris)提取物或积雪草(Centellaasiatica)提取物、丙烯酸均聚物、β-葡聚糖并且特别是羧甲基β-葡聚糖钠;C-糖苷衍生物,例如WO02/051828公开中所述的那些;麝香玫瑰油;富含锌的微藻紫球藻(microalgaPorphyridiumcruentum)提取物,由Vincience以AlgualaneZincTM的商品名销售;精氨酸;乙酰基六肽,由Lipotech以DiffuporineTM的商品名销售;三色堇水解物,由Silab以AquaphylineTM的商品名销售。
活性成分也可以选自:抗衰老成分,也就是对皮肤屏障特别具有重建功能的成分;防止和/或减少皮肤蛋白糖化的成分,特别是真皮蛋白,例如胶原蛋白;刺激细胞能量代谢的活性成分以及它们的混合物;具有全身抗衰老作用的成分,特别是烟酰胺或维生素B3和衍生物。对皮肤屏障具有重建功能的成分可以选自下列之一:酵母提取物,例如BASFBeautyCareSolutionsFranceSAS的RelipidiumTM;鞘氨醇类,例如水杨酰基鞘氨醇;木糖醇、木糖醇葡萄糖苷(polyglycoside)和木糖醇苷的混合物;茄科(Solanaceae)提取物,例如BASFBeautyCareSolutionsFranceSAS的LipidessenceTM以及它们的混合物。还特别包括神经酰胺类、鞘氨醇类化合物、鞘糖脂类、磷脂、胆固醇及其衍生物、植物甾醇、必需脂肪酸、二酰基甘油、4-苯并二氢呋喃酮和色酮衍生物及其混合物、维生素B5或泛酸和衍生物。
刺激细胞能量代谢的活性成分可以例如选自:生物素;吡咯烷酮羧酸的钠、锰、锌和镁盐;葡萄糖酸锌、葡萄糖酸铜和葡萄糖酸镁的混合物;以及它们的混合物。
本发明组合物中的抗皮脂溢成分可以是5α-还原酶抑制剂,例如维A酸类、肌氨酸、锌盐(特别是葡萄糖酸锌或水杨酸锌)、壬二酸和/或其衍生物和/或它们的混合物,还包括肾茶(Orthosiphonstamineus)提取物,其由BASFBeautyCareSolutionsFranceSAS以MATXSTMBright的商品名销售。
该组合物也可以含有:皮脂吸收剂,特别是滑石粉和/或吸收聚合物;抗菌剂,特别是那些描述于专利公开FR2863893的那些成分;特别是波尔多叶(Boldo)提取物,此类提取物由申请人公司以BetapurTM的商品名销售;特别是粉刺溶解剂,尤其是维A酸及其衍生物之一,例如异维甲酸、阿达帕林(adapalene)和/或13-顺式-维甲酸和苯甲酰过氧化物;局部抗生素,特别是红霉素和/或克林霉素磷酸盐以及它们的混合物。
在刺激皮肤大分子合成或者防止其降解的活性成分中,可以述及的包括作为下列成分的那些成分:
-刺激纤连蛋白合成的成分,特别是玉米提取物(该提取物特别由申请人公司以DelinerTM的商品名销售)和棕榈酰五肽(由Sederma以MatrixilTM的商品名销售);
-保护细胞外基质成纤维细胞生长因子(FGF2)免于降解和/或变性的成分,特别是以申请人公司的名义提交的编号为FR0654316的专利申请中描述的黄葵(Hibiscusabelmoschus)提取物,和/或刺激成纤维细胞生长的成分,例如含有肽类的发酵大豆提取物,由申请人公司以PhytokineTM的名称销售,描述于专利申请EP1119344B1(LaboratoiresExpanscience),优选这两种提取物的组合;
-刺激层粘连蛋白的成分,特别是通过生物技术修饰的麦芽提取物,该提取物特别由申请人公司以BasalineTM的商品名销售;
-刺激透明质酸合酶2(HAS2)表达和/或活性的成分,例如描述于专利申请FR2893252A1中的植物提取物,特别是高良姜(良姜属高良姜(Alpiniagalanga))的水提取物;
-刺激赖氨酸氧化酶样(lysyloxidaselike)(LOXL)合成的成分,例如爱地草属心叶羊耳蒜(Geophilacordifolia)提取物以及描述于专利申请FR285568中的成分,特别是莳萝提取物;
-刺激细胞内ATP合成的成分,特别是水藻掌状海带(algaLaminariadigitata)的提取物;
-刺激粘多糖合成的成分,例如牛奶发酵产物;
-胶原蛋白-刺激活性成分,例如维生素A和/或维生素C;
-抑制金属蛋白酶(MMPs)的活性成分,例如更特别是MMP1、2、3和9,例如维A酸类及其衍生物;寡肽和脂肽类;脂氨基酸;麦芽提取物,由BASFBeautyCareSolutionsFrance以CollaliftTM的商品名销售;水解的土豆提取物,由BASFBeautyCareSolutionsFranceSAS以ExtracelliumTM的商品名销售;番茄红素、异黄酮、槲皮黄酮(quercetin)、山奈酚和芹黄素。
-可以用于本发明组合物中的刺激角化细胞增殖的成分特别包括:维A酸,例如视黄醇及其酯,包括棕榈酸视黄醇酯和间苯三酚。刺激角化细胞分化的成分包括例如矿物质(例如钙)和木质素类(例如开环异落叶松脂素(secoisolariciresinol)),还包括欧蓍草(Achilleamillefolium)提取物,由BASFBeautyCareSolutionsFrance以NeurobioxTM的商品名销售。
能够用于本发明组合物中的抗微生物成分可以特别选自:2,4,4'-三氯-2'-羟基二苯基醚(或三氯生)、3,4,4'-三氯代双苯基脲、苯氧基乙醇、苯氧基丙醇、苯氧基异丙醇、己脒定二羟乙基磺酸盐、甲硝哒唑及其盐、咪康唑及其盐、伊曲康唑、特康唑、益康唑、酮康唑、沙康唑、氟康唑、克霉唑、布康唑、奥昔康唑、sulfaconazole、硫康唑、特比萘芬、十一碳烯酸及其盐、苯甲酰基过氧化物、3-羟基苯甲酸、4-羟基苯甲酸、植酸、N-乙酰基-L-半胱氨酸、硫辛酸、壬二酸及其盐、花生四烯酸、间苯二酚、辛氧基甘油(octoxyglycerin)、辛酰基甘氨酸、辛二醇、10-羟基-2-癸酸、法尼醇、植物鞘氨醇以及它们的混合物。
可以用于本发明组合物中的紧致剂特别包括:合成的聚合物,例如聚氨酯乳液或丙烯酸乳液;天然存在的聚合物,特别是聚低聚糖(polyholosides),其淀粉形式或下列形式:角叉菜胶、海藻酸盐、琼脂、结冷胶(gellans)、纤维素类聚合物和果胶;大豆植物蛋白和蛋白水解物;混合硅酸盐;蜡微粒;无机填料的胶粒,它们选自例如二氧化硅和二氧化硅-氧化铝复合材料;以及它们的混合物。
该组合物可以含有“抗污染”成分,特别是臭氧清除剂,它们是例如维生素C及其衍生物,包括抗坏血酸葡萄糖苷;酚类和多酚类,特别是单宁、鞣花酸和单宁酸;表焙儿茶素以及含有它的天然提取物,特别是绿茶提取物;花青素;酚酸;芪类;作为单或多环芳族混合物的清除剂的活性成分(单宁,例如鞣花酸和吲哚衍生物)和/或能够清除重金属的活性成分,例如EDTA;自由基清除活性成分,例如维生素E及其衍生物,例如生育酚乙酸酯;生物黄酮素;辅酶Q10或泛醌。
可以用于本发明组合物中的舒缓剂包括:五环三萜类、熊果酸及其盐、齐墩果酸及其盐、白桦脂酸及其盐、水杨酸盐(特别是水杨酸锌)、没药醇、尿囊素、不饱和的Ω-3油类、可的松、氢化可的松、吲哚美辛和倍他米松,抗炎活性成分,特别是那些描述于FR2847267公开中的,尤其是葛根提取物,由BASFBeautyCareSolutionsFranceSAS以InhipaseTM的商品名销售,可可(Theobromacacao)提取物。
作用于微循环的活性成分(血管保护剂或血管扩张剂)可以选自黄酮类、鲁斯可皂甙元(ruscogenins)、烟酸盐(nicotinates)和基础油类。
可以用于本发明的光保护活性成分或UV-A-和/或UV-B-遮蔽剂成分特别为光保护剂,其在UV-A和/或UV-B区域均有活性,例如对-氨基苯甲酸衍生物,特别是UvinulP25TM(BASF销售);水杨酸衍生物,特别是水杨酸三甲环己酯,其可以单独使用或者与二氧化钛结合使用;二苯甲酰基甲烷衍生物;苯乙烯衍生物;二苯基丙烯酸酯衍生物,包括氰双苯丙烯酸辛酯(octocrylene),由BASF以UvinulN539TM的商品名销售;二苯甲酮衍生物,特别是二苯甲酮-1,由BASF以Uvinul400TM的商品名销售;亚苄基樟脑衍生物;苯并咪唑衍生物;三嗪衍生物,包括乙基己基三嗪酮,由BASF以UvinulT150TM的商品名销售;苯并三唑衍生物;氨茴香衍生物;咪唑啉衍生物;亚苄基丙二酸酯衍生物;4,4-二芳基丁二烯衍生物;以及它们的混合物。
提供幸福感作用的活性成分:例如那些能够模拟β-内啡肽用于改善皮肤屏障功能的成分,例如专利申请US2006069032中所述成分;能够刺激β-内啡肽合成的活性成分,例如植物灰毛豆(Tephrosiapurpurea)的提取物。
减肥活性成分可以特别选自:能够抑制脂蛋白脂肪酶的成分,例如专利US2003086949中描述的成分(Coletica),特别是秘鲁藤本植物(钩藤(Uncariatomentosa));排水活性成分,特别是月桂酸橙皮甙(FlavagrumTM)或辛酸槲皮素(FlavengerTM);抑制磷酸二酯酶的成分;激活腺苷酸环化酶的成分;cAMP和/或能够俘获精胺和/或亚精胺的活性成分。这些活性成分的示例包括:毛喉鞘蕊花(Coleusforskohlii)的根的提取物、天蚕扁柏(Cecropiaobtusa)的提取物、Uva莴苣(Uvalactuca)提取物、咖啡因、毛喉素、茶碱、可可碱和/或其衍生物、水解的κ(kappa)角叉菜胶产品(称为SlimexcessTM,由BASFBeautyCareSolutionsFranceSAS销售)和/或其混合物。
在一个具体的实施方案中,本发明的化妆品组合物不含任何脱色和/或抗-酪氨酸酶和/或抑制黑素原生成的成分。
许多局部应用可接受的和活性的化妆品成分均是本领域技术人员已知的,可以用于改善皮肤和/或粘膜和/或头皮的健康和/或外貌。本领域技术人员知道如何配制化妆品组合物以便于获得最好的效果。
此外,当它们彼此组合使用时,本发明中描述的化合物具有协同作用。本发明也涵盖了这些组合。CTFA化妆品成分手册第二版(CTFACosmeticIngredientHandbook,SecondEdition)(1992)描述了化妆品工业中常用的各种化妆品和药用成分,它们特别适合于局部应用。这些类型的成分的示例包括但不限于下列化合物:磨砂剂(abrasive);吸收剂;用于美学目的的化合物,例如芳香剂;色素;染料;基础油类;收敛剂,例如丁香油、薄荷醇、樟脑、桉叶油、丁香酚、乳酸薄荷酯或金缕梅蒸馏物(witchhazeldistillate);抗痤疮成分;抗絮凝剂;消泡剂;抗微生物成分,例如碘丙基丁基氨基甲酸酯;抗氧剂,例如抗坏血酸;粘合剂;生物学添加剂;缓冲剂;膨化剂;螯合剂;添加剂;杀生物剂;变性剂;增稠剂;维生素;成膜材料;聚合物;遮光剂;pH调节剂;减肥成分;调节剂(conditioningagents),例如保湿剂;和它们的衍生物或类似物。
在本发明的另一个具体的实施方案中,将优选通过水提获得的本发明的圭亚那塔皮漆木提取物溶于溶剂中,特别是极性溶剂,例如水、醇、多元醇、二醇或它们的混合物之一,优选水/二醇混合物,更优选含有选自辛二醇、己二醇及其混合物的二醇。
特别有益的是,可以将本发明的提取物溶于含有己二醇、辛二醇或其混合物的水溶液中,最好是己二醇和辛二醇。有利的是,溶解本发明的圭亚那塔皮漆木提取物的水溶液含有己二醇,特别是相当于水溶液总重量0.1-10%重量比的己二醇,更特别相当于水溶液总重量1-5%重量比的己二醇。
特别的是,溶解本发明的圭亚那塔皮漆木提取物的水溶液含有辛二醇,特别是相当于水溶液总重量0.01-5%重量比的辛二醇,更特别相当于水溶液总重量0.1-1%重量比的己二醇。
特别有利的是,溶解本发明的圭亚那塔皮漆木提取物的水溶液含有己二醇和辛二醇,其比例如上所述。
有利的是,优选将通过水提获得的本发明的圭亚那塔皮漆木提取物溶于水溶液中,提取物的含量为相当于水溶液总重量的0.1-10%(重量比),特别为相当于水溶液总重量的0.5-5%(重量比)。特别的是,该水溶液含有己二醇和辛二醇,其比例有利地为这些成分的上述比例。
溶解本发明提取物的水溶液可以包含增稠剂和/或构建剂(structuringagent),例如黄原胶,其有利的含量为相对于水溶液总重量的0.01-5%(重量比),特别为相当于水溶液总重量的0.1-1%(重量比)。
本发明还涉及化妆护理方法,其特征在于其将圭亚那塔皮漆木提取物或含有此类提取物的化妆品组合物应用于特别是人类的健康皮肤和/或健康粘膜和/或健康头皮的至少一个相关区域,用于刺激基底膜蛋白聚糖和/或营养不良聚糖和/或胶原蛋白XVIII和/或VE-钙粘附蛋白和/或紧密连接蛋白-5的表达,特别是细胞外基质和/或上皮基底膜中的表达,尤其是真皮表皮连接处的表达。
有利的是,该化妆护理方法用于防止和/或对抗皮肤和/或粘膜和/或头皮老化,特别是时间生物学和/或光生物学老化;特别是用于防止和/或对抗皮肤和/或粘膜和/或头皮体内平衡的降低和/或用于改善它们的方法,特别是在表皮中;用于增强皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮基底膜,优选在真皮表皮连接处;用于改善角化细胞增殖和/或分化,尤其是在表皮水平上,特别是与皮肤和/或粘膜和/或头皮相关的表皮;用于防止和/或对抗皮肤和/或粘膜和/或头皮的血管形成的减少和/或改善它们,特别是用于改善皮肤和/或粘膜和/或头皮的毛细血管的结构,尤其是皮肤毛细血管;用于改善皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮细胞的形态形成,优选表皮;用于恢复皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮结构,优选表皮结构,特别是已经老化的皮肤和/或粘膜和/或头皮,尤其是时间生物学老化;用于改善皮肤和/或粘膜的肤色,特别是使其均匀一致;用于改善皮肤和/或粘膜和/或头皮的坚固性和/或密度;和/或用于对抗皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮的厚度降低,优选表皮;和/或用于增加皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮的厚度,优选表皮;和/或用于治疗和/或预防皲裂;和/或用于对抗和/或治疗和/或预防水潴留和/或脂肪团和/或眼袋;和/或用于增强和/或保持细胞粘附。
本发明还涉及化妆品组合物,优选通过局部途径施用,特征在于其含有特别是如上文所定义的圭亚那塔皮漆木提取物和有益的局部应用可接受的化妆品赋形剂。优选该化妆品组合物如上文所定义。
本发明的另一个主旨是细胞培养基(特别是用于培养已培养的内皮细胞和/或角质细胞的培养基)和/或含有它们的三维模型,例如重建的表皮、毛细血管、血管或皮肤模型,其包含特别如上文所定义的本发明的圭亚那塔皮漆木提取物以及适当的选自下列的成分:胎牛血清、垂体提取物或激素、氨基酸、糖、生长因子、重组蛋白以及它们的混合物。
在本发明的第一个特定实施方案中,在所述培养基的制备期间,将本发明的提取物直接添加至本发明的培养基中。
在本发明的第二个特定实施方案中,将本发明的提取物临时(extemporaneously)添加至本发明的培养基中。
在本发明的第三个特定实施方案中,将本发明的提取物与选自下列的成分组合临时添加:胎牛血清、垂体提取物、激素、氨基酸、糖、生长因子、重组蛋白以及它们的混合物。
本发明的培养基可以用于培养角质细胞或内皮细胞,用于医学、制药或皮肤病学的应用。
圭亚那塔皮漆木提取物的添加有可能促进和/或缩短培养阶段和/或改善培养质量和细胞构建(细胞层、伪表皮、重建的上皮)。
优选本发明的培养基含有圭亚那塔皮漆木提取物,其浓度为相对于培养基总重量的1×10-4至10%(重量比),优选为相对于培养基总重量的0.001至0.1%(重量比)。
因此,本发明的主旨为本发明的圭亚那塔皮漆木提取物在培养基中的用途和/或含有该提取物的培养基,用于刺激基底膜蛋白聚糖和/或营养不良聚糖和/或VE-钙粘附蛋白和/或紧密连接蛋白-5和/或胶原蛋白XVIII的表达,特别是在细胞外基质和/或上皮基底膜中的表达,特别是在真皮表皮连接处,优选在培养的细胞中,尤其是选自内皮细胞和角质细胞。
通过阅读理解附图以及解释性的说明书,本发明的其它目的、特征和优点对于本领域技术人员而言是显而易见的,参考的实施例仅用于说明而非以任何方式限定本发明的范围。
实施例构成了本发明的不可分割的部分,根据说明书作为一个整体纳入的相对于任何现有技术而言为新的任何特征(包括示例)以其功能及其通用性质构成本发明的不可分割的部分。
因此,每个实例具有一般性范围。
此外,在实施例中,除非另有说明,温度以摄氏度表示,压力为大气压。
图1表示本发明的圭亚那塔皮漆木提取物对表皮厚度的作用(实施例5)。图1A表示在显微镜中观察到的未经处理的重建皮肤模型的截面,图1B表示上述截面和采用0.05%(w/w)圭亚那塔皮漆木提取物处理的相同模型的截面,图1C表示采用0.1%(w/w)圭亚那塔皮漆木提取物处理的模型的截面。
图2表示免疫标记(A和C:未经处理的细胞;B和D:采用本发明的0.8%圭亚那塔皮漆木提取物处理的细胞)(实施例6)后,本发明的圭亚那塔皮漆木提取物对人类微血管内皮细胞的细胞连接处的VE-钙粘附蛋白(图2A和B)和紧密连接蛋白-5(图2C和D)的蛋白表达的作用。
实施例1:通过水提法制备本发明的圭亚那塔皮漆木提取物
a)将圭亚那塔皮漆木叶子磨碎,然后于室温(即18-25℃,在此情况下约20℃)下在水中浸渍2小时,磨碎的圭亚那塔皮漆木叶子的含量为相当于植物/水总重量的1%(重量比)。
通过0.45μm滤孔过滤分离不溶性组分,回收含有本发明水性提取物的液体。
b)将圭亚那塔皮漆木叶子磨碎,然后以1%(w/w)的含量在水中浸渍,温度优选在0-20℃之间,优选于4℃。
浸渍时间优选在30分钟至24小时,此时为16小时,浸渍在搅拌下进行。
将溶液离心,优选于8000rpm离心10分钟,回收上清液。将上清液在具有不同截滤阈值的滤器上超声过滤,特别是0.22μm的滤器。
如此获得的提取物为液体形式,可以直接使用。该提取物在下面的实施例2-6中以不同的剂量在最终培养基中测试。
该提取物也可以以化妆品原料的形式配制,如实施例7中所示。
c)将圭亚那塔皮漆木叶子磨碎,然后以1%(w/w)的量在75%/25%的水/丁二醇混合物中于优选温度0-20℃(此时为4℃)浸渍。浸渍时间优选在30分钟至24小时,此时为10小时,浸渍在搅拌下进行。
将溶液离心,优选于8000rpm离心10分钟,回收上清液。将上清液在具有不同截滤阈值的滤器上超声过滤,特别是0.45μm的滤器。
随后将如此获得的提取物干燥,特别是在麦芽糊精类型的载体上干燥,然后以1%(w/w)的量再溶于水。
实施例2:本发明的圭亚那塔皮漆木提取物对角质细胞中基底膜蛋白聚糖的蛋白表达的作用
方案:
进行萦光免疫分析(FIA)试验,主要在于通过萦光反应方法研究相关抗原,此处为基底膜蛋白聚糖。该方法为半定量、高灵敏度和可重复的方法,具有在其环境中以其原始形式检测相关蛋白的优点,没有变性过程。自年龄为30、50和61岁的供体的腹部皮肤活检提取角质细胞,以每孔5000个细胞的密度将其附着于孔的底部,在完全培养基(即含有胎牛血清(FCS)的培养基)中生长3天,然后在没有FCS的已知成分培养基中生长16小时。随后将其与实施例1b)获得的提取物一起培养48小时,测试相对于最终培养基重量比的不同剂量的提取物,或者不与提取物一起的培养,称为对照。然后将细胞在磷酸盐缓冲的生理盐水(PBS)中洗涤,最后固化,透化处理并去遮蔽(unmasked)。将细胞以1%的量采用BSA(牛血清白蛋白)饱和1小时,然后施用(抗基底膜蛋白聚糖)一级抗体90分钟。在PBS缓冲液中洗涤后,将与萤色物FITC(异硫氰酸萦光素)连接的二级抗体温育2小时。然后将细胞在PBS缓冲液中洗涤,随后采用20mM氢氧化铵和0.5%的100%Triton溶解。然后在配备适当的滤波器的萦光分光计上读取萦光。结果如下面表1所示。将该试验进行六次(n=6)。表中的数值表示相对于未经处理的对照细胞的百分值。该值表示不同批次的提取物的多个试验的平均值。“平均”表示平均值,“SD”表示标准差。
表1:年龄为30、50和61岁的供体的角质细胞中基底膜蛋白聚糖的蛋白表达百分率作为使用的提取物剂量的函数
结论:
本发明的提取物诱导了角质细胞中基底膜蛋白聚糖的蛋白表达的显著增加。观察到在蛋白表达中的这种增加与供体的年龄无关。
因此,本发明的提取物能够诱导上皮(优选表皮)结构凝聚力的提高。
实施例3:本发明的圭亚那塔皮漆木提取物对内皮细胞中基底膜蛋白聚糖的蛋白表达的作用
该技术与实施例2相同,但是采用提取自年龄为38或28岁的供体的腹部皮肤活检的内皮细胞进行。
结果如下面表2和3所示。“平均”表示平均值,“SD”表示标准差。
表2:年龄为38岁的供体的内皮细胞中基底膜蛋白聚糖的蛋白表达百分率作为使用的提取物剂量的函数
n=6;圭亚那塔皮漆木提取物根据实施例1b)获得,以相对于最终培养基重量百分比的不同剂量测试。
表3:年龄为28岁的供体的内皮细胞中基底膜蛋白聚糖的蛋白表达百分率作为使用的活性成分的函数
n=6;圭亚那塔皮漆木提取物根据实施例1b)获得,以相对于最终培养基重量百分比的不同剂量测试。
结论:
本发明的提取物在试验剂量下能够显著增加内皮细胞中基底膜蛋白聚糖的蛋白表达,这说明其具有提高微血管结构凝聚力的性能。这种增加与供体的年龄无关。
实施例4:本发明的圭亚那塔皮漆木提取物对角质细胞中营养不良聚糖的蛋白表达的作用
该技术与实施例2相同,但是此时相关抗原采用营养不良聚糖,使用的抗体为抗营养不良聚糖。
结果如下面表4所示。“平均”表示平均值,“SD”表示标准差。
表4:年龄为50岁的供体的角质细胞中营养不良聚糖的蛋白表达百分率作为使用的提取物的剂量的函数
n=6;圭亚那塔皮漆木提取物根据实施例1b)获得,以相对于最终培养基重量百分比的不同剂量测试。
结论:
本发明的提取物在试验剂量下能够显著增加角质细胞中营养不良聚糖的蛋白表达。因此,本发明的提取物能够诱导上皮(优选表皮)结构凝聚力的改善。
实施例5:本发明的圭亚那塔皮漆木提取物对表皮厚度的作用
根据实施例1b)制备的圭亚那塔皮漆木水体物以相对于培养基总重量的0.05%-0.1%的终浓度测试,用于测试其对表皮的形态形成的作用。
本发明的提取物采用本领域技术人员已知的类型的重建皮肤模型测试。
简言之,该皮肤模型可以通过将成纤维细胞培养35天获得,在此阶段分化开始发生,成纤维细胞分化获得角质细胞。
培养35后,将细胞采用含有钙、镁和抗生素的磷酸盐缓冲的生理盐水(PBS)缓冲液洗涤,然后在冷甲醇中固化10分钟。
在采用本发明提取物处理的样品或者没有处理的样品(对照)中,获取截面,测定表皮厚度的μm数(表5)。
表5:采用本发明提取物处理的样品或者没有处理的样品的表皮厚度(μm);“平均”表示平均值,“SD”表示标准差。
结论:
当分化获得角质细胞的细胞采用本发明提取物处理时,观察到表皮厚度的增加(图1)。在每个实验浓度均观察到该作用(所述浓度为相对于本发明培养基总重量的重量比百分浓度)。
实施例6:本发明的圭亚那塔皮漆木提取物对人微血管内皮细胞的细胞连接处的VE-钙粘附蛋白和紧密连接蛋白-5的蛋白表达的作用
材料和方法:
将获自年龄为50岁的成人供体的血液活检的微血管内皮细胞接种于含有5%FBS(胎牛血清)的完全培养基10天。
当细胞达到亚融合时,该融合相当于100%的培养细胞彼此粘附的细胞阶段,将细胞接种于培养室中48小时,该培养室含有EGM2-MV培养基(内皮细胞培养基),其中含有1%的FBS(重量比,相当于培养基总重量的比例),其中有或无本发明的圭亚那塔皮漆木提取物存在(提取物根据实施例1b)制备),提取物的终浓度为相当于培养基重量的0.8%(重量比)。
然后将细胞在磷酸盐缓冲的生理盐水缓冲液中洗涤,然后采用冰甲醇固化10min。向培养基中加入抗-VE-钙粘附蛋白抗体,目的在于进行免疫标记。随后将载玻片(slides)与二级抗体一起温育,该抗体与抗-紧密连接蛋白-5抗体直接偶合。
在PBS中洗涤三次后,在共聚焦显微镜中观察细胞。
结论:
共聚焦显微镜结果如图2所示。
结果显示:本发明的圭亚那塔皮漆木提取物能够增加细胞间连接处VE-钙粘附蛋白和紧密连接蛋白-5的蛋白的表达。因此,圭亚那塔皮漆木提取物能够促进真皮表皮连接处的细胞粘附。
实施例7:将含有本发明提取物的组合物结合到化妆品组合物中(化妆品成分)
圭亚那塔皮漆木提取物根据实施例1b)获得,与下列制剂的其它成分混合:
成分 | 相对于组合物总重量的%(重量比) |
水 | >50% |
圭亚那塔皮漆木水提物(Ex.1b)) | 0.5-5% |
己二醇 | 1-5%17 --> |
辛二醇 | 0.1-1% |
黄原胶 | 0.1-1% |
实施例8:含有本发明的圭亚那塔皮漆木提取物的组合物
采用本领域技术人员已知的方法将不同部分A、B、C、D、E或F混合到一起以便于制备本发明的组合物。
“本发明的产品”表示优选根据实施例1b)获得的圭亚那塔皮漆木提取物。
本发明的产品也可以以脂质体的形式提供,其可以根据下列制备方法获得,含有5%大豆卵磷脂并结合了季铵化的(quaternized)大豆溶液(最后共600g):
将30g大豆卵磷脂、12g季铵化的大豆溶液和1.5g根据实施例1b)制备的圭亚那塔皮漆木提取物置于样品试管中,采用447g纯实验水稀释。
于室温下磁力搅拌10分钟后,将混合物剧烈均化10分钟,从而获得脂质体溶液,其中脂质体的平均直径可以在100-800纳米之间变化,这取决于均化的准确条件。
随后将悬浮液温和搅拌1小时。然后加入90g丁二醇、6g苯氧基乙醇和6g羟乙基纤维素(胶凝剂)。
*圭亚那塔皮漆木提取物描述于实施例1b),随后灭菌并干燥。
Claims (25)
1.通过局部途径施用的圭亚那塔皮漆木提取物的化妆品用途,用于刺激基底膜蛋白聚糖和/或营养不良聚糖和/或VE-钙粘附蛋白和/或紧密连接蛋白-5的表达,特别是在细胞外基质和/或在上皮基底膜中,特别在真皮表皮连接处;和/或用于防止和/或对抗皮肤和/或粘膜和/或头皮的老化,特别是时间生物学和/或光生物学老化的老化;和/或用于防止和/或对抗皮肤和/或粘膜和/或头皮体内平衡的降低和/或用于改善它们,特别是在表皮中;和/或用于增强皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮基底膜,优选真皮表皮连接处;和/或用于改善角化细胞增殖和/或分化,特别是在表皮水平上,尤其是与皮肤和/或粘膜和/或头皮的老化相关的分化;和/或用于防止和/或对抗皮肤和/或粘膜和/或头皮的血管形成的减少和/或改善它们,特别是用于改善皮肤和/或粘膜和/或头皮的毛细血管的结构,特别是皮肤毛细血管;和/或用于改善皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮的形态形成,优选表皮;和/或用于恢复皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮结构,优选表皮结构,特别是已经老化的皮肤和/或粘膜和/或头皮,尤其是时间生物学老化;和/或用于改善皮肤和/或粘膜的肤色,特别是使其均匀一致;和/或用于改善皮肤和/或粘膜和/或头皮的坚固性和/或密度;和/或用于对抗皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮的厚度降低,优选表皮;和/或用于增加皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮的厚度,优选表皮,用于治疗和/或预防皲裂;和/或用于对抗和/或治疗和/或预防水潴留和/或脂肪团和/或眼袋;和/或用于增强和/或保持细胞粘附。
2.权利要求1所要求保护的用途,特征在于所述圭亚那塔皮漆木提取物通过水提法获得。
3.权利要求1和2之一所要求保护的用途,特征在于所述圭亚那塔皮漆木提取物通过提取圭亚那塔皮漆的地上部分获得。
4.权利要求1-3中任一项所要求保护的用途,用于刺激基底膜蛋白聚糖和/或营养不良聚糖和/或VE-钙粘附蛋白和/或紧密连接蛋白-5的蛋白表达,特别是在细胞外基质和/或在上皮基底膜中,特别是在真皮表皮连接处。
5.权利要求1-4中任一项所要求保护的用途,用于通过消除红斑和/或通过使得肤色均匀一致和/或通过使其明亮、光泽、健康和/或滋润、漂亮和/或粉红色外貌而改善皮肤的肤色。
6.权利要求1-4中任一项所要求保护的用途,通过减少或抑制皱纹和/或细线,特别是对于成熟性皮肤和/或显示初步老化迹象的皮肤,用于防止和/或对抗皮肤的老化,特别是时间生物学老化。
7.权利要求1-4中任一项所要求保护的用途,用于防止和/或对抗皮肤和/或粘膜和/或头皮体内平衡的降低和/或用于改善皮肤和/或粘膜和/或头皮的体内平衡,特别是在表皮中。
8.权利要求1-4中任一项所要求保护的用途,用于增强和/或保持细胞粘附,并且用于对抗和/或治疗和/或预防水潴留和/或脂肪团和/或眼袋。
9.权利要求1-8中任一项所要求保护的用途,特征在于圭亚那塔皮漆木提取物通过局部途径施用于至少一个健康皮肤和/或健康粘膜和/或健康头皮的相关的区域,特别是人类的。
10.权利要求9所要求保护的用途,特征在于所述皮肤的相关区域选自脸部、颈部、颈线、胸部和/或手,特别是鼻唇沟皱褶和/或眼眶周围,和/或唇线和/或前额。
11.权利要求1-10中任一项所要求保护的用途,特征在于圭亚那塔皮漆木提取物存在于化妆品组合物中,该组合物含有局部应用可接受的化妆品赋形剂,优选圭亚那塔皮漆木提取物存在的量为相对于组合物总重量的1×10-4至10%的重量比。
12.权利要求1-11中任一项所要求保护的用途,特征在于圭亚那塔皮漆木提取物溶于含有己二醇、辛二醇或它们混合物的水溶液中。
13.权利要求12所要求保护的用途,特征在于圭亚那塔皮漆木提取物溶解的量为相对于水溶液总重量0.1-10%的重量比,特别是为相对于水溶液总重量0.5-5%的重量比。
14.权利要求1-13中任一项所要求保护的用途,用于刺激皮肤和/或粘膜和/或头皮的角质细胞和/或内皮细胞中的基底膜蛋白聚糖和/或营养不良聚糖的蛋白表达,优选皮肤内皮细胞。
15.化妆品组合物,优选通过局部途径应用,特征在于其含有圭亚那塔皮漆木提取物和局部应用可接受的化妆品赋形剂。
16.权利要求15所要求保护的化妆品组合物,其中所述提取物存在的量为相对于组合物总重量的1×10-4至10%的重量比。
17.权利要求15和16所要求保护的化妆品组合物,其中所述提取物如权利要求2、3、12和13所定义。
18.权利要求15-17中任一项所要求保护的化妆品组合物,特征在于其选自水性或油性溶液、水性乳膏或凝胶或油性凝胶,特别是沐浴乳;香波;乳液;乳剂、微乳剂或纳米乳剂,其特别是水包油型或油包水型或多相的或硅酮类的;面膜;精华液;洗液;洗手液;润肤皂;软膏;泡沫剂;贴剂;无水产品,优选液体、半固体或固体,例如化妆粉、棒或条的形式,特别是唇膏形式。
19.化妆品护理方法,特征在于其包括将圭亚那塔皮漆木提取物或特别是权利要求15-18中任一项所要求保护的含有它的化妆品组合物施用于至少一个健康皮肤和/或健康粘膜和/或健康头皮的相关区域,用于刺激基底膜蛋白聚糖、营养不良聚糖和VE-钙粘附蛋白和紧密连接蛋白-5的表达,特别是在细胞外基质和/或在上皮基底膜中,尤其是在真皮表皮连接处。
20.权利要求19所要求保护的方法,用于防止和/或对抗皮肤和/或粘膜和/或头皮的老化,特别是时间生物学和/或光生物学老化;用于防止和/或对抗皮肤和/或粘膜和/或头皮体内平衡的降低和/或用于改善它们,特别是在表皮处;用于增强皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮基底膜,优选在真皮表皮连接处;用于改善角化细胞增殖和/或分化,特别是在表皮水平上,尤其是与皮肤和/或粘膜和/或头皮的老化相关的分化;和/或用于防止和/或对抗皮肤和/或粘膜和/或头皮的血管形成的减少和/或改善它们,特别是用于改善皮肤和/或粘膜和/或头皮的毛细血管的结构,特别是皮肤毛细血管;和/或用于改善皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮的形态形成,优选表皮;和/或用于恢复皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮结构,优选表皮结构,特别是已经老化的皮肤和/或粘膜和/或头皮,尤其是时间生物学老化;和/或用于改善皮肤和/或粘膜的肤色,特别是使其均匀一致;用于改善皮肤和/或粘膜和/或头皮的坚固性和/或密度;和/或用于对抗皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮的厚度降低,优选表皮;和/或用于增加皮肤和/或粘膜和/或头皮的上皮的厚度,优选表皮,用于治疗和/或预防皲裂;和/或用于对抗和/或治疗和/或预防水潴留和/或脂肪团和/或眼袋;和/或用于增强和/或保持细胞粘附。
21.圭亚那塔皮漆木提取物或含有圭亚那塔皮漆木提取物和皮肤病学可接受的赋形剂的皮肤病学组合物,通过局部途径用于治疗和/或预防酒糟鼻、毛细血管扩张和/或口腔和/或眼睛粘膜的病理状态。
22.权利要求21所要求保护的提取物,特征在于其如权利要求2、3、12和13所定义。
23.细胞培养基,特征在于其包含优选权利要求2和3所定义的圭亚那塔皮漆木提取物以及优选选自下列的成分:胎牛血清、垂体提取物或激素、氨基酸、糖、生长因子、重组蛋白以及它们的混合物。
24.权利要求23所要求保护的培养基,特征在于所述提取物存在的浓度为相当于培养基总重量重量比的1×10-4至10%,优选0.001-0.1%。
25.权利要求23和24所要求保护的培养基的用途,用于刺激选自内皮细胞和/或角质细胞的待培养细胞的基底膜蛋白聚糖和/或营养不良聚糖和/或VE-钙粘附蛋白和/或紧密连接蛋白-5的表达,特别是在细胞外基质和/或在上皮基底膜中,尤其是在真皮表皮连接处。
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