CN105555285B - 用于促进生发及毛发生长的组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明的用于促进生发及毛发生长的组合物包含较高含量的Rb2、Rc及Rg1，因而与通过现有技术制造的毛发生长剂相比可提供更好的生发及毛发生长的效果。此外，所述组合物由利用植物为基础的天然产品制成，因而可用作用于促进生发及毛发生长的皮肤外用制剂，且可以广泛地应用于化妆品组合物、药物组合物和食品组合物，等等。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于促进生发(hair sprouting)和毛发生长(hair growth)的组合物，该组合物包含人参皂苷的含量得到提高的人参提取物且通过加速从休止期到生长期的过渡期来促进毛发的生长。
背景技术
最近，由于社会压力的增加、环境污染，如便利食品的西洋化饮食习惯、频繁的烫发及染发等原因，饱受脱发之扰的人在增多。毛发分各周期进行生长：生长期，为毛发生长周期；退行期，为停止生长且毛球会退缩的时期；休止期，为毛乳头停止工作且使毛发留在头皮上的时期；和形态发生期，为毛乳头开始工作或形成新的毛发并使旧发脱落的时期。
毛发会生长的生长期(2-7年)又分成头发由毛球长到毛囊的阶段和在毛囊内形成硬角蛋白的阶段。毛发继续生长至到退行期为止。退行期(2-3周)为生长期结束且毛发的形状会随着代谢过程变慢而保持不变。在该时期不会产生角蛋白。全部毛发的约1％会处于退行期。在该期间内，毛球会退缩并被分裂成毛乳头。被毛囊包裹而向上移动，且细胞分裂会停止。在休止期(3个月)，毛乳头会萎缩且毛囊逐渐皱缩。毛根被向上推移，毛发会脱落。该周期会持续约3-4个月，直到下一次的生长期开始。
正常人具有大量的处于生长期的毛发，而那些饱受脱发(脱毛症)之苦的人具有大量的处于休止期的毛发。随着脱发的进行，生长期会缩短且毛发将变短。因此，为了治疗脱发，重要的是加速让休止期的毛囊转向生长期并延长生长期。
男性型脱发是因为被称作睾酮的男性激素而发生的。睾酮会被叫作5α还原酶的酶转变成更强的激素，双氢睾酮(DHT)。该激素作用在毛囊上，致使毛囊从生长期转到退行期，从而引向脱发。因此，治疗男性型脱发中的主要目标在于抑制通过5α还原酶合成DHT。
女性型脱发主要是绝经之后因雌激素的减少而发生的。为了治疗女性型脱发，经常会使用米诺地尔或雌激素。
斑秃(Alopecia areata)是一种由心理紧张或遗传因素引起的自身免疫性疾病。在致病原因上，斑秃根本有别于雄激素脱发，且两者的治疗方法也不同。会使用肾上腺皮质激素治疗、在患部涂抹米诺地尔或在患部给予人为刺激。
在市面上可购买到缓解脱发为目的的用于促进血液循环、抑制雄性激素的作用、加强发根等的药物。然而，没有一种展示出显著的效果，而某一些则具有副作用。例如，米诺地尔会粘手，且有报告称会引起皮肤刺激。非那雄胺，是当前用于口服的制剂，但有报告称具有副作用，如性功能障碍。此外，因为必需要口服，使用起来不便。
【现有技术文献】
【专利文献】
韩国专利公开号10-2011-0000433。
发明内容
技术问题
本发明涉及提供一种人参皂苷的含量得到提高的人参提取物和一种安全性得到证明的用于促进生发和毛发生长的组合物，该组合物包含所述人参提取物且通过加速从休止期到生长期的过渡期来促进毛发的生长。
技术方案
一方面，本发明提供一种人参提取物，该人参提取物包含占所述人参提取物总重量的2.5wt％或以上的人参皂苷Rb2、3wt％或以上的人参皂苷Rc及2wt％或以上的人参皂苷Rg1。
另一方面，本发明提供一种人参提取物，该人参提取物进一步包含6wt％或以上的人参皂苷Re。
另一方面，本发明提供一种制备所述人参提取物的方法，该方法包括；
通过添加水、有机溶剂、或水和有机溶剂的混合物且重复加压再减压来提取物人参的步骤；和
通过将所获得的人参提取物溶解于水中、用有机溶剂进行提取、去除所述有机溶剂层、然后用有机溶剂再次提取水层来制备人参提取物的步骤。
又一方面，本发明提供一种用于促进生发和毛发生长的组合物，该组合物包含人参皂苷的含量得到提高的所述人参提取物。
有益效果
本发明的用于促进生发和毛发生长的的组合物包含浓度得到提高的人参皂苷Rb2、Rc和Rg1或者人参皂苷Rb2、Rc、Rg1和Re，该组合物与现有的生发刺激剂相比可以展示更好的促进生发和毛发生长的效果。
此外，所述组合物展示出优异的安全性，因为该组合物使用来自植物的天然产物，从而可用作促进生发及毛发生长的皮肤外用组合物。此外，本发明的组合物可以广泛地用于化妆品组合物、药物组合物将、食品组合物等。
附图说明
图1展示了本发明一个示例性实施例的人参皂苷的化学结构。
图2展示了根据本发明一个示例性实施例的人参提取物中含有的人参皂苷的HPLC分析。
图3展示了作为对比示例性实施例的普通的人参提取物中含有的人参皂苷的HPLC分析。
图4展示了根据本发明一个示例性实施例(示例性实施例1)的人参提取物、作为对比示例性实施例的(对比示例性实施例1)普通的人参提取物使毛乳头细胞中的毛发生长因子VEGF的表达得到提高。
图5展示了根据本发明一个示例性实施例(示例性实施例1)的人参提取物、作为对比示例性实施例的(对比示例性实施例1)普通的人参提取物对毛乳头细胞(hDPc)的增殖的效果。
图6展示了根据本发明一个示例性实施例的人参提取物中含有的人参皂苷对毛乳头细胞(hDPc)的增殖的效果。
图7展示了根据本发明一个示例性实施例(示例性实施例1)的人参提取物、作为对比示例性实施例的(对比示例性实施例1)普通的人参提取物对促进人毛囊中毛发生长的效果。
图8展示了根据本发明一个示例性实施例(示例性实施例1)的人参提取物、作为对比示例性实施例的(对比示例性实施例1)普通的人参提取物以及人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re和Rg1对促进人毛囊中毛发生长的效果。
具体实施方式
下面，将具体描述本发明。
在一个示例性实施例中，本发明提供一种人参提取物，该人参提取物包含占所述人参提取物总重量的2.5wt％或以上的人参皂苷Rb2、3wt％或以上的人参皂苷Rc及2wt％或以上的人参皂苷Rg1。
在一个示例性实施例中，本发明提供一种人参提取物，该人参提取物进一步包含6wt％或以上的人参皂苷Re。
人参皂苷为被称为皂甙的糖苷基糖脂中的一种，源自人参的根、茎、叶子、果皮、种子等。人参皂苷具有许多种类，如人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1等。植物中存在的人参皂苷的种类和含量会根据人参的种类、栽培条件、提取方法、人参的部位等因素而不同。不同的人参皂苷的化学结构如图1中展示。
人参皂苷基于结构可分类成PPT(Re,Rg1)和PPD(Rb1,Rb2,Rc,Rd)。人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re和Rg1是存在于未被加工成红参的未加工人参中的人参皂苷，为水溶性极性物质。在另一个示例性实施例中，本发明提供一种从人参根部获得的人参提取物。具体地，本发明提供一种从人参支根中获得的人参提取物，该提取物包含高含量的上述人参皂苷。
在一个示例性实施例中，本发明提供一种人参提取物，该提取物包含占所述人参提取物总重量的2.5wt％或以上的人参皂苷Rb2、3wt％或以上的人参皂苷Rc、6wt％或以上的人参皂苷Re和2wt％或以上的人参皂苷Rg1。更具体地，所述人参提取物可包含2.5-4.5wt％的人参皂苷Rb2、3-7.5wt％的人参皂苷Rc、6-20wt％的人参皂苷Re及2-5wt％的人参皂苷Rg1。
在本发明的一个示例性实施例中，可通过能从人参中提取人参皂苷或其他成分的任一种方法制备所述人参提取物，该人参提取物包含占所述人参提取物总重量的2.5wt％或以上的人参皂苷Rb2、3wt％或以上的人参皂苷Rc、6wt％或以上的人参皂苷Re和2wt％或以上的人参皂苷Rg1。例如，所述人参提取物可通过轮流进行加压再减压的变压提取、溶剂分馏等、或者依此进行它们的组合来制备。具体地，所述变压提取可通过在人参中加入水、有机溶剂或它们的混合物之后每隔一段时间进行加压再减压来进行的。
更具体地，在本发明的一个示例性实施例中，包含高浓度的人参皂苷Rb2、Rc和Rg1的人参提取物可如下制备。
所述人参提取物可通过以下方法制备，该方法包括：
通过添加水、有机溶剂、或水和有机溶剂的混合物且重复加压再减压来提取物人参的步骤；和
通过将所获得的人参提取物溶解于水中、用有机溶剂进行提取、去除所述有机溶剂层、然后用有机溶剂再次提取水层来制备人参提取物的步骤。
在本发明的一个示例性实施例中所用的溶剂不受特别限制。例如，所述溶剂可以为水、有机溶剂或水合有机溶剂的混合物。例如，所述有机溶剂可以为选自乙醇、甲醇、丁醇、乙醚、乙酸乙酯和氯仿中的一种或多种物质例如，在水和有机溶剂的混合溶剂中，所述有机溶剂的比例可以为10-90％(v/v)。更具体地，作为溶剂，所述提取物可通过使用10-90％(v/v)的乙醇，更具体为70％(v/v)的乙醇而获得。
在本发明的一个示例性实施例中，通过利用变压提取装置重复进行各20-40分钟的加压和减压，所述变压提取可总共进行1.5-2.5小时。在本发明的一个示例性实施例中，加压时的压力可以为1-3kgf/cm2，而减压时的压力可以为550-650mmHg。提取温度可以为65-85℃。
如上所述，当通过重复进行加压再减压来提取人参时，可最大程度降低人参的热变性，从而最大程度降低人参皂苷的变性，如人参皂苷Rb1向Rg3的糖酵解。结果可见，当与通过使用现有的简单提取装置没有重复进行提取相比，提取率可提高25-30％。此外，通过使用有机溶剂如乙酸乙酯来去除非极性物质之后使用有机溶剂如丁醇所述水层来进行提取时，可使人参皂苷的含量最大化。具体地，根据这种溶剂分馏方法，所述人参提取物中的人参皂苷的总含量可从1.5-2wt％提高到10倍或以上，具体地可提高至15-25wt％。
在一个示例性实施例中，本发明提供一种用于促进生发及毛发生长的组合物，该组合物包含所述人参提取物。与含有通常的人参提取物的组合物相比，所述组合物通过加速毛发生长周期中从休止期到生长期的过渡来展示显著优异的促进毛发生长的效果。因此，可获得空前、显著的促进生发及毛发生长的效果。
在一个示例性实施例中，本发明提供根据本发明的人参提取物用于促进生发及毛发生长中用途、或包含所述人参提取物的组合物用于促进生发及毛发生长中用途。
在一个示例性实施例中，本发明提供一种用于促进生发及毛发生长的方法，该方法包括：将有效量的作为活性成分的本发明人参提取物向受试者给药。所述人参提取物可通过将该提取物包含在组合物中来进行给药。
在另一个示例性实施例中，本发明提供本发明的人参提取物用于促进生发及毛发生长。所述人参提取物可包含在组合物中使用。
在另一个示例性实施例中，包含在所述组合物中的含有人参皂苷Rb2、Rc和Rg1的人参提取物的量不受特别限制。例如，所述人参提取物的含量可以占所述组合物总重量的2wt％或以上，例如，2-20wt％。当所述人参提取物的含量少于2wt％时，无法期待足够的促进毛发生长的效果。此外，当所述人参提取物的含量超过20wt％时，在安全性或制备上可能存在困难。例如，根据本发明一个示例性实施例的组合物可以为药物组合物、化妆品组合物或保健食品组合物。
本发明一个示例性实施例的用于促进生发及毛发生长的药物组合物可进一步包含药物辅助剂，如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、用于控制渗透压的盐和/或缓冲剂等、或者其他有助于治疗的物质，且所述药物组合物可制备成各种用于口服或肠胃外给药的剂型。
用于口服给药的剂型包括，例如，片剂、丸剂、硬或软胶囊、液体、悬浮液、乳化剂、糖浆、粉末、粉剂、微粒剂、颗粒剂、丸粒剂等，且除了所述活性成分之外还可以包含表面活性剂、稀释剂(例如，乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和甘氨酸)或润滑剂(例如，二氧化硅、滑石粉、硬脂酸及其镁或钙盐、和聚乙二醇)。所述片剂可进一步包含粘合剂，如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和聚乙烯吡咯烷酮，且如有需要可进一步包含如崩解剂的药物添加剂，例如，淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐、湿润剂、着色剂、调味剂、甜味剂等。所述片剂可通过常用的混合、制粒或包衣的方法进行制备。而且，用于肠胃外给药的剂型可以为用于经皮给药的剂型。例如，该剂型可以为注射剂、滴剂、软膏、洗剂、凝胶、霜剂、喷雾、悬浮液、乳剂、栓剂、贴剂等，但不限于此。
本发明一个示例性实施例的药物组合物可以肠胃外给药，例如，直肠给药、局部给药、经皮歌谣、皮下给药等。例如，本发明一个示例性实施例的药物组合物可向头皮局部给药。
所述活性成分的给药剂量的确定在本领域技术人员的水平范围内。每日给药剂量会根据相关病症的严重程度、病症的进展、年龄、身体状况、并发症的存在与否等各种因素而有所不同。对于一个成年人，所述组合物的给药剂量可以为1μg/kg-200mg/kg，具体为50μg/kg-50mg/kg，且一天给药1-3次。然而，所述给药剂量不会以任何方式限制本发明的范围。
本发明一个示例性实施例的用于促进生发及毛发生长的组合物可以为化妆品组合物。所述化妆品组合物包含化妆品上或皮肤病学上可接受的介质或基体。所述组合物可被制成任一种可局部涂抹的剂型，例如，溶液、凝胶、固体、无水糊剂、水包油型乳液、悬浮液、微乳液、微胶囊剂、微粒剂、阴离子(脂质体)或非离子型囊泡分散剂、霜剂、皮肤洗剂、粉末、软膏、喷雾剂或遮瑕棒。所述组合物可根据本领域常用的方法制备。本发明的组合物可以泡沫剂组合物或进一步含有压缩推进剂的气溶胶组合物的形式得以使用。
本发明一个示例性实施例的化妆品组合物不受剂型的特别限制。例如，所述化妆品组合物可制备成如柔肤化妆水、收敛化妆水、滋养乳液、营养霜、按摩霜、精华、眼霜、眼部精华、洁面霜、洁面泡沫、洁面水、面膜、粉饼、身体乳液、身体霜、身体油、身体精华等的化妆品剂型。
当本发明的化妆品组合物的剂型为贴剂、霜或凝胶时，作为载体可以使用动物油、植物油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、二氧化硅、滑石粉、氧化锌等。
当本发明的化妆品组合物的剂型为粉饼或喷雾剂时，作为载体可以使用乳糖、滑石粉、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙、聚酰胺粉末。尤其，所述喷雾剂可进一步包含推进剂，如氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚。
当本发明的化妆品组合物的剂型为溶液或乳液时，作为载体可使用溶剂、增溶剂或乳化剂。例如，包括水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇或失水山梨醇脂肪酸酯。
当本发明的化妆品组合物的剂型为悬浮液时，作为载体可使用如水、乙醇或丙二醇的液体稀释剂、如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯和聚氧乙烯失水山梨醇酯的悬浮剂、微晶纤维素、铝金属氢氧化物、膨润土、琼脂、西黄蓍等。
当本发明的化妆品组合物的剂型为含有表面活性剂的清洗剂时，作为载体可使用脂族醇硫酸盐、脂族醇醚硫酸盐、磺胺丁二酸单酯、羟乙基磺酸盐、咪唑啉衍生物、甲基牛磺酸盐、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰氨基甜菜碱、脂族醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物、乙氧基化甘油脂肪酸酯等。
在本发明的一个示例性实施例中，所述活性成分的含量不受特别限制。所述组合物可包含占所述组合物总重量的0.001-20wt％的作为活性成分的所述提取物。当满足上述含量时，可以获得优异的效果，而没有副作用。
除了作为活性成分的所述提取物，本发明一个示例性实施例的化妆品组合物可进一步包含功能性添加剂和在化妆品组合物中通常所包含的成分。所述功能性添加剂可包含选自水溶性维生素、脂溶性维生素、多肽、多糖、鞘脂和海藻提取物中的成分。
如有需要，本发明的一方面的化妆品组合物可进一步包含所述功能性添加剂和在化妆品组合物中通常所包含的成分。这类成分可包括油、脂肪、保湿剂、润肤剂、表面活性剂、有机或无机颜料、有机粉末、紫外线吸收剂、防腐剂、灭菌剂、抗氧化剂、植物提取物、pH调节剂、醇、着色剂、芳香剂、血液循环刺激剂、冷却剂、止汗剂、纯净水等。
此外，本发明一个示例性实施例的用于促进生发及毛发生长的组合物可以为皮肤外用组合物。所述皮肤外用组合物为一种对任何可涂抹于皮肤外部的物质的总称。其中可包括各种剂型的化妆品和药物。
此外，本发明一个示例性实施例的用于促进生发及毛发生长的组合物可以为保健食品组合物。具体地，本发明的哦保健食品组合物可以包含占所述组合物总重量的0.001-20wt％人参提取物，该人参提取物包含作为活性成分的人参皂苷Rb2、Rc、Re和Rg1。当所述提取物的含量少于0.001wt％时，可能无法充分地获得所要的效果。而且，当所述提取物的含量超过20wt％时，因所述活性成分的添加所带来的效率可能会下降。
本发明一个示例性实施例的保健食品组合物可制备成液体或固体剂型，如片剂、胶囊剂、软胶囊剂、丸剂、颗粒剂、饮剂、减肥棒、巧克力、焦糖、糕点等，但不会特别限制于这些剂型。除了所述活性成分外，如有需要，本发明的保健食品组合物可进一步包含赋形剂、糖、香料、着色剂、油、脂肪、蛋白质等。
实施例
下面，本发明将通过实施例和测试实施例更为详细地进行说明。然而，以下实施例和测试实施例仅用于说明为目的而使用，不会限制本发明的范围。
此外，对本领域的技术人员显而易见的是，在不脱离权利要求书中所限定的本发明的范围内，可以进行各种改变及修改。
【实施例1】含有浓度得到提高的人参皂苷Rb2、Rc、Rg1和Re的人参提取物的制备用纯净水清洗人参(Geumsan人参，从Geumsaninsam Nonghyup购买)，干燥，然后碎成细粉。将2g所获的人参粉加入到20mL的50％乙醇中，然后利用变压提取装置通过重复进行加压再减压来提取，其中加压和减压各进行30分钟，整个提取进行2小时。加压时的压力为2kgf/cm2和减压时的压力为600±50mmHg。将提取温度设定为75℃。对从所述变压提取装置中获得的人参提取物进行过滤，然后在减压下干燥上清。将所获的干燥产品(干重＝0.57g)溶解于水中，然后用乙酸乙酯进行提取。待去除所述乙酸乙酯层后，用丁醇提取所述水层，然后在减压下进行干燥(干重＝2.7g)。
在以下分析仪器和分析条件下，通过利用HPLC分析实施例1的人参提取物中所含有的人参皂苷。基于其结果，将所述提取物中含有的各人参皂苷成分的含量以单位wt％进行计算。其结果在表2和图2中展示。
HPLC分析仪器及分析条件
仪器：Waters 2998PDA检测仪、1525泵、2707自动进样器；
柱：Sun fire C18 305μm，4.6x 150mm；
检测仪：UV 203nm；
流量：1mL/分钟；
注射量：20μL；
条件：梯度(A：水，B：乙腈)。
【表1】
| 时间(分钟) | A(水) | B(乙腈) |
| 0 | 82 | 18 |
| 22 | 82 | 18 |
| 32 | 70 | 30 |
| 60 | 50 | 50 |
【表2】
如表2和图2中所示，本发明的实施例1的人参提取物包含2.91wt％(即，2.5wt％或以上)人参皂苷Rb2、3.14wt％(即，3wt％或以上)人参皂苷Rc、6.23wt％(即，6wt％或以上)人参皂苷Re及2.1wt％(即，2.0wt％或以上)人参皂苷Rg1。
【对比实施例1】普通的人参提取物的制备
用水清洗人参(Geumsan人参，从Geumsaninsam Nonghyup购买)，干燥，然后碎成细粉。在75℃下，用100mL的50％乙醇提取2g所获的人参粉，提取两小时。待过滤之后，在减压下干燥上清(干重＝0.30g)。
在实施例1中使用的分析仪器和分析条件下，通过利用HPLC分析对比实施例1的人参提取物中所含有的人参皂苷。基于其结果，将所述提取物中含有的各人参皂苷成分的含量以单位wt％进行计算。其结果在表3和图3中展示。
【表3】
如表3和图3中所示，对比实施例1的人参提取物包含0.33wt％人参皂苷Rb2、0.55wt％人参皂苷Rc、0.16wt％人参皂苷Re及0.14wt％人参皂苷Rg1。由此可确定，本发明的实施例1的人参提取物中各人参皂苷的含量比普通的人参提取物多出5-15倍。此外，可以确定在本发明的实施例1的人参提取物中所含有的人参皂苷的总重量比对比实施例1多出很多。
【测试实施例1】毛乳头细胞中毛发生长因子VEGF的表达的评估
通过采用体外系统涂抹所述人参提取物之后，评估血管内皮生长因子(VEGF)，VEGF是过渡到毛发周期中的生长期时所必要的用于血管形成的生长因子。
将47岁成年男性的4x105毛乳头细胞(DPC)(P.11)接种于12孔板上，且在含有10％胎牛血清(FBS)的DMEM培养基(Dulbecco's modified Eagle's medium)内培养一晚上。然后，用实施例1或对比实施例1的20ppm人参提取物处理所述细胞。DMSO被用作阴性对照组。待24小时后，收集(soup collect)经由实施例1或对比实施例1的提取物处理过的细胞培养基，然后通过利用VEGF ELISA试剂盒(血管内皮生长因子的酶联免疫吸附检测；R&DBiosystems)研究VEGF的表达水平。其结果在图4中展示。
如图4中所示，对比实施例1的普通人参提取物与未经人参提取物处理的对照组相比没有显示出显著差异。反之，与对比实施例1中的人参提取物处于相同浓度的本发明实施例1的人参提取物使毛乳头细胞中毛发生长因子VEGF的表达提高了约3倍。也就是说，与对比实施例1的普通人参提取物相比，含有大量的人参皂苷Rb2、Rc、Rg1等的实施例1的人参提取物有效地提高了所述毛乳头细胞中毛发生长因子VEGF的表达。由此可确认，本发明的人参提取物具有优异的促进生发的效果。
【测试实施例2】对毛乳头细胞的增殖的评估
组成毛发的蛋白质，角蛋白，是由毛发根部的角质形成细胞所生成，且角质形成细胞是从毛乳头细胞分化而来的。因此，如若本发明的人参提取物可以促进毛乳头细胞的活性，则所述人参提取物也能促进从毛乳头细胞中分化而来的角质形成细胞的活性并可以促进生发。
因此，如下评估所述人参提取物对所述毛乳头细胞的活性的促进效果。
该实验中使用人毛乳头细胞株。在保持有5％CO2和37℃的孵化器内，在含有10％胎牛血清(FBS)的DMEM培养基(Gibco BRL,Gaithersburg,MD,USA)中培养所述细胞株24小时，然后用10ppm或20ppm的实施例1的人参提取物或者用20ppm的对比实施例1的人参提取物进行处理。DMSO用作阴性对照组。待用所述测试物质处理经过24小时后，通过使用WST-1试剂盒(Roche)测量细胞增殖率(％)。其结果在图5中展示。
如图5中所示，本发明的实施例1的人参提取物在10ppm和20ppm下显著地提高了所述细胞的增殖。尤其，当所述细胞被10ppm的实施例1的人参提取物处理时与所述细胞被20ppm的实施例1的人参提取物处理时相比，前者能使所述毛乳头细胞的增殖率提高了约1.5倍。本发明的人参提取物要比现有的普通人参提取物更能促进毛乳头细胞的增殖的这一事实，意味着本发明的人参提取物可以更为有效地促进角质形成细胞的活性并毛发的生成。
【测试实施例3】通过使用人毛囊对毛发生长促进效果的评估
通过使用人毛囊，对本发明的人参提取物的毛发生长促进效果进行评估。
首先，根据与测试实施例2相同的方法，分别用0.1μM或1μM的作为所述人参提取物的主要成分的人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re和Rg1处理毛乳头细胞。待24小时后，通过使用WST-1试剂盒(Roche)测量细胞增殖率(％)。其结果在图6中展示。
然后，从55岁成年男性的枕区的头皮组织中一个接一个分离出毛囊，并在William’s培养基(2mM的L-谷氨酰胺、10μg/mL胰岛素、40ng/mL氢化可的松、1％抗生素、1％抗真菌剂)中进行培养。待3天后，将已成长的毛囊组织切成3mm的大小，然后分别用无处理(对照组)、2ppm或5ppm的实施例1的人参提取物、或者5ppm的对比实施例1的人参提取物进行处理。待所述处理经过8天之后，测量并拍摄所述毛囊组织。此外，根据与如上所述的方法相同的方法，分别用5ppm的人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re和Rg1，对比实施例1的人参提取物以及实施例1的人参提取物处理毛囊组织。其结果在图7和8中展示。
如图6中所示，人参皂苷Rb1、Rc和Rg1在所述人参皂苷中展示出清晰的且统计学上显著的毛发生长促进效果。
此外，如图7中展示，与对比实施例1的人参提取物或所述对照组相比，经由5ppm的实施例1的人参提取物处理的毛囊组织展示出优异的毛发生长促进效果，即：毛发长度增加。尤其，对比实施例1比对照组展示出更少的平均生长长度。如图8中所示，尽管人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re和Rg1也比对比实施例1具有更长的平均生长长度，但实施例1展示了最长的平均生长长度。
因此，从图6、图7和图8的结果可见，本发明的人参提取物提供优异的促进毛囊中的毛发生长的效果，因为本发明的人参提取物与所述现有的人参提取物相比包含浓度得到提高的具有毛发生长促进效果的人参皂苷Rb1、Rc和Rg1。
【测试实施例4】对脱发患者的临床试验
将患有脱发的年龄在20～60岁之间的成年女性分成测试组(实施例1)和对照组，每组各有23名患者。要求每组在脱毛区涂抹含有2％实施例1的人参提取物的头皮精华或未含该提取物的对照头皮精华，且每天晚上涂抹一次。在16周内，根据测试受试者的主观判断、基于照片的研究人员的客观判断、以及通过使用作为无创毛发评价方法的毛发摄像图(phototrichograms)来对作为生物变量的毛发密度、毛发粗大程度、毛发生长速率和毛发脱落数量，评估防止脱发及促进毛发生长的效果。所述测试被设计成随机的、双盲性的、对照性的临床研究。其结果在表4-8中展示。
在表4中比较了实施例1和对照组之间的毛发密度。对实施例1而言，经过8周和16周后，毛发密度分别显著地提高了5.485％和7.409％。经过8周和16周后，体验到有所改善的受试者的比例分别为86.364％和86.364％。反之，对对照组而言，经过8周和16周后，毛发密度分别提高了1.615％和1.334％。
在表4中比较了实施例1和对照组之间的毛发生长速率。对实施例1而言，经过8周和16周后，毛发生长速率分别显著地提高了3.218％和8.783％。经过8周和16周后，体验到有所改善的受试者的比例分别为68.182％和81.818％。反之，对对照组而言，经过8周后毛发生长速率提高了2.480％，而经过16周后毛发生长速率下降了1.142％。
【表4】
*：配对样本t-测试，p<0.05；
**：独立样本t-测试，p<0.05；
#：Mann-Whitney U测试，p<0.05。
在表5中比较了实施例1和对照组之间的毛发粗大程度。对实施例1而言，经过2周、4周、8周和16周后，毛发粗大程度分别显著地提高了1.526％、2.611％、4.782％和7.178％。经过2周、4周、8周和16周后，体验到有所改善的受试者的比例分别为72.727％、81.818％、95.455％和95.455％。反之，对对照组而言，经过2周、4周、8周和16周后，毛发粗大程度分别下降了0.903％、0.765％、0.595％和1.084％。
【表5】
*：配对样本t-测试，p<0.05；
独立样本t-测试，p<0.05；
#：Mann-Whitney U测试，p<0.05。
在表6中比较了实施例1和对照组之间的毛发脱落数量。对实施例1而言，经过4周后毛发脱落数量上升了1.589％，经过8周后毛发脱落数量下降了4.849％，且经过16周后毛发脱落数量下降了33.278％。经过16周后的下降程度最显著。经过4周、8周和16周后，体验到有所改善的受试者的比例分别为50.000％、54.545％和72.727％。反之，对对照组而言，经过4周后毛发脱落数量上升了26.721％，经过8周后毛发脱落数量下降了1.953％，而经过16周后毛发脱落数量上升了2.364％。
【表6】
*：配对样本t-测试，p<0.05；
**：独立样本t-测试，p<0.05；
在表7中比较了实施例1和对照组之间的脱发的视觉评估的结果。对实施例1而言，经过4周、8周和16周后，脱发改善分数分别提高了0.045、0.318和0.364。经过4周、8周和16周后，体验到有所改善的受试者的比例分别为9.091％、22.727％和36.364％。反之，对对照组而言，经过4周后脱发改善分数下降了0.130，经过8周后提高了0.087，而经过16周后下降了0.087。经过4周、8周和16周后，体验到有所改善的受试者的比例分别为0.000％、17.391％和17.39％。【表7】
Wilcoxon符号秩检验，p<0.05；
※脱发改善的视觉评估：大有改善(3)、有改善(2)、稍有改善(1)、没变化(0)、稍有恶化(-1)、恶化(-2)、严重恶化(-3)；
※由于使用前的脱发改善分数为0，改善比率无法计算。因此，代替改善比率，对体验到有所改善的受试者的比例进行评估。
在表8中比较了实施例1和对照组之间的受试者对改善与否的主观评估的结果。对实施例1而言，经过8周和16周后分别有40.9％和63.6％的受试者给予正面评价，而经过8周和16周后分别只有0.0％和4.4％的受试者给予负面评价。对对照组而言，经过8周和16周后分别有52.1％和39.1％的受试者给予正面评价，而经过8周和16周后分别只有0.0％和8.7％的受试者给予负面评价。
【表8】
※受试者对改善程度的主观评估：极好(4)、良好(3)、中等(2)、差(1)、极差(0)；
※正面评价(％)：受试者给予极好(4)或良好(3)的比率；
※负面评价(％)：受试者给予差(1)或极差(0)的比率。
综上，通过一天仅涂抹一次，本发明的实施例1的人参提取物也能展示出优异的房子脱发及促进毛发生长的效果。
下面，本发明将通过剂型实施例进行详细说明。然而，以下实施例仅用作说明为目的，不会限制本发明的范围。
【剂型实施例1】作为皮肤外用剂型的洗发剂
根据常用方法，通过使用表9中所述的组合制备洗发剂。
【表9】
| 成分 | 含量(wt％) |
| 实施例1的提取物 | 2.00 |
| 月桂基硫酸钠 | 10.00 |
| 椰油酰胺丙基甜菜碱 | 3.00 |
| 聚羧乙烯 | 0.30 |
| 聚季铵盐-10 | 0.20 |
| 十六烷基三甲基氯化铵 | 0.10 |
| 纯净水 | 余量 |
| 总计 | 100.00 |
【剂型实施例2】作为皮肤外用剂型的柔顺剂
根据常用方法，通过使用表10中所述的组合制备柔顺剂。
【表10】
| 成分 | 含量(wt％) |
| 实施例1的提取物 | 2.00 |
| 十六醇 | 2.00 |
| 硬脂醇 | 2.50 |
| 二十二醇 | 0.50 |
| 硅酮乳液 | 0.40 |
| 环二甲基硅氧烷 | 1.00 |
| 二甲基硬脂酰氯化铵 | 0.10 |
| 纯净水 | 余量 |
| 总计 | 100.00 |
【剂型实施例3】作为皮肤外用剂型的软膏
根据常用方法，通过使用表11中所述的组合制备软膏。
【表11】
| 成分 | 含量(wt％) |
| 实施例1的提取物 | 2.00 |
| 甘油 | 8.00 |
| 丁二醇 | 4.00 |
| 液体石蜡 | 15.00 |
| β-葡聚糖 | 7.00 |
| 卡波姆 | 0.10 |
| 辛酸/癸酸甘油三酯 | 3.00 |
| 角鲨烷 | 1.00 |
| 鲸蜡硬脂基葡糖苷 | 1.50 |
| 山梨糖醇硬脂酸 | 0.40 |
| 鲸蜡硬脂醇 | 1.00 |
| 蜂蜡 | 4.00 |
| 纯净水 | 余量 |
| 总计 | 100.00 |
【剂型实施例4】化妆水
根据常用方法，通过使用表12中所述的组合制备化妆水。
【表12】
| 成分 | 含量(wt％) |
| 实施例1的提取物 | 2.00 |
| L-抗坏血酸-2-磷酸镁的盐 | 1.00 |
| 水溶性胶原(1％水溶液) | 1.00 |
| 柠檬酸钠 | 0.10 |
| 柠檬酸 | 0.05 |
| 甘草提取物 | 0.20 |
| 1,3-丁二醇 | 3.00 |
| 纯净水 | 余量 |
| 总计 | 100.00 |
【剂型实施例5】霜
根据常用方法，通过使用表13中所述的组合制备霜。
【表13】
| 成分 | 含量(wt％) |
| 实施例1的提取物 | 2.00 |
| 聚乙二醇单硬脂酸酯 | 2.00 |
| 自乳化单硬脂酸甘油酯 | 5.00 |
| 十六醇 | 4.00 |
| 角鲨烷 | 6.00 |
| 甘油基三(2-乙基己酸) | 6.00 |
| 鞘糖脂 | 1.00 |
| 1,3-丁二醇 | 7.00 |
| 纯净水 | 余量 |
| 总计 | 100.00 |
【剂型实施例6】面膜
根据常用方法，通过使用表14中所述的组合制备面膜。
【表14】
| 成分 | 含量(wt％) |
| 实施例1的提取物 | 2.00 |
| 聚乙烯醇 | 13.00 |
| L-抗坏血酸-2-磷酸镁的盐 | 1.00 |
| 月桂酰羟脯氨酸 | 1.00 |
| 水溶性胶原(1％水溶液) | 2.00 |
| 1,3-丁二醇 | 3.00 |
| 乙醇 | 5.00 |
| 纯净水 | 余量 |
| 总计 | 100.00 |
【剂型实施例6】美容液
根据常用方法，通过使用表15中所述的组合制备美容液。
【表15】
| 成分 | 含量(wt％) |
| 实施例1的提取物 | 2.00 |
| 羟基亚乙基纤维素(2％水溶液) | 12.00 |
| 黄原胶(2％水溶液) | 2.00 |
| 1,3-丁二醇 | 6.00 |
| 浓甘油 | 4.00 |
| 透明质酸钠(1％水溶液)5.00 | 5.00 |
| 纯净水 | 余量 |
| 总计 | 100.00 |
【剂型实施例8】软胶囊剂
根据常用的方法，混合50mg实施例1的提取物、80-140mg左旋肉碱、180mg豆油、2mg棕榈油、8mg氢化植物油、4mg黄蜂蜡和6mg卵磷脂并将该混合物填充于胶囊内，制备软胶囊剂。
【剂型实施例9】片剂
根据常用的方法，混合50mg实施例1的提取物、200mg低聚半乳糖、60mg乳糖和140mg麦芽糖并用流化床干燥机进行制粒。待添加完6mg糖酯后，通过利用制片机将所述颗粒制成片剂。
【剂型实施例10】颗粒剂
根据常用的方法，混合50mg实施例1的提取物、250mg无水结晶葡萄糖和550mg淀粉并用流化床干燥机进行制粒。将所得颗粒进行装袋。
【剂型实施例11】饮料
根据常用的方法，混合50mg实施例1的提取物、10g葡萄糖、0.6g柠檬酸和25g低聚糖糖浆。待添加完300mL纯净水后酯，将所述混合液装入瓶内。在130℃下，对所得饮料进行灭菌4-5秒。
Claims (7)
1.一种用于促进生发及毛发生长的人参提取物，包含占所述人参提取物总重量的2.91wt％以上的人参皂苷Rb2、3.14wt％以上的人参皂苷Rc、6.23wt％以上的人参皂苷Re、3.52wt％以上的人参皂苷Rb1、1.58wt％以上的人参皂苷Rd、以及2.1wt％以上的人参皂苷Rg1；
其中，所述人参提取物通过包括如下步骤的方法制得：
通过添加水、有机溶剂、或水和有机溶剂的混合物且重复加压再减压来提取物人参的步骤；和
通过将以上步骤获得的产物溶解于水中、用有机溶剂进行提取、去除有机溶剂层、然后用有机溶剂再次提取水层来制备人参提取物的步骤。
2.根据权利要求1所述的人参提取物，其特征在于，所述人参提取物是从人参根部获得的。
3.根据权利要求1所述的人参提取物，其特征在于，所述人参提取物是从人参的支根中获得的。
4.一种用于促进生发及毛发生长的组合物，其包含作为活性成分的根据权利要求1～3中任一项所述的人参提取物。
5.根据权利要求4所述的用于促进生发及毛发生长的组合物，其特征在于，所述组合物包含占所述组合物总重量的2wt％或以上的所述人参提取物。
6.根据权利要求4所述的用于促进生发及毛发生长的组合物，其特征在于，所述组合物为药物组合物。
7.根据权利要求4所述的用于促进生发及毛发生长的组合物，其特征在于，所述组合物为化妆品组合物。
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| GR01 | Patent grant | ||
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