JP2010520232A - 玄参抽出物を含有する外用剤組成物及びその皮膚保湿化粧料としての用途 - Google Patents
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Abstract
Description
また、本発明による組成物は、玄参抽出物に白茯苓抽出物をさらに含有する。
上記皮膚保湿外用剤組成物は、玄参抽出物を0.0001〜30重量%含有することを特徴とする。
上記皮膚保湿外用剤組成物は、皮膚障壁機能強化用、角質形成細胞分化促進用、セラマイド生成促進用、PPAR-α活性化剤組成物であることを特徴とする。
また、本発明は、玄参抽出物を有効成分として含有する外用剤組成物の皮膚保湿化粧料としての用途を提供する。
以下、本発明を詳しく説明する。
本発明の前述の玄参抽出物、白茯苓抽出物を含有する組成物が添加された化粧料は、溶液、乳化物、粘性混合物などの形状を取ることができる。
大韓民国の漢薬材商であるKunwha薬品から購入した凍結乾燥した玄参及び白茯苓を各々200g粉砕し、重量比で10倍の水を入れて、よく攪拌しながら80℃で18時間抽出した。各々の抽出物について、室温まで冷却した後、濾過紙を通じて濾過し、得られた各濾液にエタノール4kgを入れて室温で48時間放置した。その後、さらに濾過して得られた各々の沈殿物をそれぞれ蒸留水2kgに溶解した後、再び濾過した。得られた濾液の各々を減圧蒸発器で濃縮することによって、玄参及び白茯苓の水抽出物を得た。
凍結乾燥した玄参及び白茯苓を各々200gに重量(kg)比で10倍量の70%エタノールを加えた後、80℃で2時間加熱して有効成分を抽出した。これを一日間常温で放置して不純物を沈殿させた後、濾過紙を利用して2回濾過した濾液を減圧蒸発器を使用して完全に蒸発させて濃縮することによって、玄参及び白茯苓のエタノール抽出物を得た。
凍結乾燥した玄参、白茯苓各200gに重量(kg)比で10倍量のメタノールを加えた後、70℃で2時間加熱して有効成分を抽出した。これを一日間常温で放置して不純物を沈殿させた後、濾過紙を利用して2回濾過した濾液を減圧蒸発器を使用して完全に蒸発させて濃縮することによって、玄参及び白茯苓のメタノール抽出物を得た。
上記参考例3の玄参及び白茯苓のメタノール抽出物各々に水とヘキサンを1:1で混合した混合溶媒を20倍量加えて完全に懸濁させた後、常温で一日間放置させて層を分離する。上層液であるヘキサン層のみを分離し、減圧蒸発器で減圧濃縮させて、玄参、白茯苓抽出物の各々ヘキサン層分画を得た。
上記参考例4のエチルアセテート層分画過程中の下層液である水層に2倍量のブタノールを添加し、上記参考例4と同様に行い、ブタノール層分画を得た。
上記参考例5で得られた最終の水層を減圧蒸発器で濃縮し、玄参、白茯苓各々の水層分画を得た。
玄参及び白茯苓抽出物の細胞分化促進効果を調べるために、第一に、角質形成細胞の分化時に生成される角質細胞膜(Cornified Envelop;CE)の量を吸光度を利用して測定する方法と、第二に、人間皮膚細胞株(HaCaT)の分化時に生成される角質細胞膜の量を同位元素を利用して測定する2つの方法で試験した。
第1の吸光度を利用した試験では、一次培養した人間の角質形成細胞を培養用フラスコに入れて底に付着させた後、下記表2の試験物質を表に提示した濃度で培養液に添加し、細胞が底面積の70〜80%程度成長するまで5日間培養した。この細胞を収獲し、リン酸緩衝食塩水(Phosphate Buffered Saline;PBS)で洗浄した後、2%ドデシル硫酸ナトリウム(Sodium Dodecyl Sulfate;SDS)と20mM濃度のジチオスレイトール(Dithiothreitol;DTT)を含有する10mM濃度のトリス−塩酸緩衝液(Tris-HCl、pH 7.4)1mLを加えてソニケイション(sonication)、ボイリング(boiling)、及び遠心分離した沈殿物をさらにPBS 1mLに懸濁させて、340nmでの吸光度を測定した。これと別に、上記ソニケイション後の溶液の一部を取ってタンパク質含量を測定し、細胞分化程度の評価時に基準とした。低カルシウム(0.03mM)処理群と高カルシウム(1.2 mM)処理群を各々陰性/陽性対照群とし、低カルシウム濃度に試験物質を添加して実施した試験結果を下記表2及び図1に示した。
人間の皮膚細胞株を96ウェル型の細胞培養プレートの各ウェルに5×104個を入れ、24時間付着させた。付着させた皮膚細胞株に試験物質を処理した後、2日が経過してから、培地を除去し、−20℃の冷蔵庫に保管した。凍結−解凍を2回繰り返して物質処理した細胞を破壊させた後、アセトン:エタノール=1:1(v/v)の割合で処理し、4℃で30分間放置して細胞を固定させた。その後、室温に放置し、有機溶媒が蒸発されるようにし、ブロッキング(1%牛血清アルブミン)、トランスグルルタミネイズ抗体(primary antibody)、HRP(horseradish peroxidase;西洋ワサビペルオキシダーゼ)アンチ−マウス抗体(secondary antibody)を行い、発色は、オルソ−フェニルジアミン(o-phenyldiamine;OPD)を添加して行った。発現量は、490nmで吸光度を測定し、補正は、630nmでバックグラウンドを測定して行った。低カルシウム(0.03 mM)処理群及び高カルシウム(1.2 mM)処理群を各々陰性/陽性対照群にし、低カルシウム濃度に試験物質を添加して実施した試験結果を下記表3及び図3に示した。
本発明者は、玄参及び白茯苓抽出物が長期間の皮膚損傷による皮膚障壁の回復に及ぶ効果を評価するための試験を実施した。生まれ後8乃至10週が経過した若い無毛マウスの背中にアセトンを1日2回ずつ5日間周期的に塗布し、実験動物の背中の皮膚の障壁機能を損傷させた後、蒸発計で経皮水分損失量(Transepidermal water loss;TEWL)を測定し、40g/m2/hr以上の 経皮水分損失を示す皮膚を有する実験動物のみを対象にしてビヒクル(プロピレングリコール:エタノール=7:3)と玄参抽出物及び白茯苓抽出物の混合物5%を含有する試験物質を皮膚面積5cm2当たり200μLの用量で1日2回ずつ3日間連続塗布しながら一定時間ごとにTEWLを測定した。その結果を図4に示した。
玄参及び白茯苓抽出物が実際人間皮膚での脂質合成増加に及ぶ効果を評価するために試験を実施した。試験物質組成は、Carbopol ETD 2020 0.5%、TEA0.45%、試験物質5%、及び脱イオン化された水で100を合わせて使用した。12名の成人男女を対象にして下腕(forearm)に50mLのポリプロピレンコニカルチューブの直径分の領域を表示した後、毎日2回ずつ対照群と玄参抽出物、白茯苓抽出物、玄参抽出物及び白茯苓抽出物の混合物を20μLずつ塗布しながら被験者を2つの群に分けて3日目と11日目の生成脂質量を下記のような方法で脂質を抽出して分析した。水道水を利用して下腕を洗浄した後、Scotch(登録商標)810 Magic tapeで1回テープストリッピングをした後、切った50mLのポリプロピレンコルニカルチューブを貯蔵所として使用して、1mLのシクロヘキサン/エタノールを4:1の割合で添加した後、約1分間攪拌した後、これを新しいチューブに移した。さらに1mLのシクロヘキサン/エタノールを1:1の割合で添加して約1分間攪拌した後、これを新しいチューブに集めた。その後、これを50℃で窒素ガスを利用して乾燥させた後、500μLのクロロホルム:メタノール=2:1の一定量の溶液に溶解して保管した。各試料をCAMAG社のAutomated TLC sampler-4を利用してSilicagel TLC(Thin Layer chromatography)板に点滴し、AMD(Automated Multiple Development)を利用して下記表4のような組成比の展開溶媒で展開した。
a)活性化試験
猿腎臓上皮細胞株であるCV-1細胞(ATCCCCL70)をチャコール/デクストラン処理10%牛胎児血清を含有するDMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)培地に継代培養し、フェノールレッドのエストロゲンによる効果を除去するために、ダイコン−フェノールレッド培地を使用した。プラスミドは、一般的な培養条件でも発現されるユニバーサルプローモータ後にPPAR-(遺伝子を有するものとリガンド結合型のPPAR−)が結合して活性化されるPPRE(PPARs Response Element)をプローモータとして有し、後にレポータとして役目をする蛍ルシフェラーゼ遺伝子を有するもの、そして参照として使用されるユニバーサルプローモータにレニラルシフェラーゼ遺伝子が結合されたプラスミドが使用された。
下記生薬材抽出物は、実施例1〜3のうちいずれか1つの抽出物である。
生薬材抽出物:1.00(%)
油脂:適量
水酸化ナトリウム:適量
塩化ナトリウム:適量
香料:少量
精製水で全量を100(%)にし、上記の配合比によってせっけんを製造した。
生薬材抽出物:3.00(%)
L-アスコルビン酸-2-リン酸マグネシュム塩:1.00
水溶性コラーゲン(1%水溶液):1.00
クエン酸ナトリウム:0.10
クエン酸:0.05
甘草抽出物:0.20
1,3-ブチレングリコール:3.00
精製水で全量を100(%)にし、上記の配合比(%)によってローションを製造した。
生薬材抽出物:1.00(%)
ポリエチレングリコールモノステアルレート:2.00
自己乳化型モノステアル酸グリセリン:5.00
セチルアルコール:4.00
スクアレン:6.00
トリ2-エチルヘキサングリセリル:6.00
スフィンゴ糖脂質:1.00
1,3-ブチレングリコール:7.00
精製水で全量を100(%)にし、上記の配合比(%)でクリームを製造した。
生薬材抽出物:5.00(%)
ポリビニルアルコール:13.00
L-アスコルビン酸-2-リン酸マグネシュム塩:1.00
ラウロイルヒドロキシフロリン:1.00
水溶性コラーゲン(1%水溶液):2.00
1,3-ブチレングリコール:3.00
エタノール:5.00
精製水で全量を100(%)にし、上記の配合比(%)でパックを製造した。
生薬材抽出物:2.00(%)
ヒドロキシエチレンセルロース(2%水溶液):12.00
キサンタンガム(2%水溶液):2.00
1,3-ブチレングリコール:6.00
濃グリセリン:4.00
ヒアルロン酸ナトリウム(1%水溶液):5.00
精製水で全量を100(%)にし、上記の配合比(%)で美容液を製造した。
Claims (10)
- 玄参抽出物を有効成分として含有する外用剤組成物。
- 上記組成物に白茯苓抽出物をさらに含有することを特徴とする請求項1に記載の外用剤組成物。
- 上記組成物は、皮膚障壁機能を強化するものであることを特徴とする請求項1又は2に記載の外用剤組成物。
- 上記組成物は、角質形成細胞分化を促進するものであることを特徴とする請求項1又は2に記載の外用剤組成物。
- 上記組成物は、セラマイド生成を促進するものであることを特徴とする請求項1又は2に記載の外用剤組成物。
- 上記組成物は、PPAR-αを活性化するものであることを特徴とする請求項1又は2に記載の外用剤組成物。
- 上記抽出物は、0.0001〜30重量%の量で含有されることを特徴とする請求項1又は2に記載の外用剤組成物。
- 上記抽出物は、玄参を水、エタノール、メタノール、ヘキサン、エチルアセテート及びブタノールで構成された群から選択された溶媒を使用して抽出するか、又は分画することによって製造されることを特徴とする請求項1又は2に記載の外用剤組成物。
- 玄参抽出物を有効成分として含有する外用剤組成物の皮膚保湿化粧料としての用途。
- 上記組成物に白茯苓抽出物をさらに含有することを特徴とする請求項9に記載の外用剤組成物の皮膚保湿化粧料としての用途。
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