WO2013012197A2

WO2013012197A2 - 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 예방 또는 개선용 조성물

Info

Publication number: WO2013012197A2
Application number: PCT/KR2012/005503
Authority: WO
Inventors: 채성욱; 최화정; 송재형; 최고야; 이미영
Original assignee: 한국한의학연구원
Priority date: 2011-07-18
Filing date: 2012-07-11
Publication date: 2013-01-24
Also published as: EP2735304A4; KR101295368B1; US20140127189A1; US9439849B2; EP2735304A2; ES2604709T3; WO2013012197A3; EP2735304B1; KR20130010250A

Abstract

본 발명은 허니부쉬(Cyclopia intermedia, honeybush) 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효액을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 예방 또는 개선용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액이 자외선 조사에 의해 증가된 피부 주름의 길이, 깊이 및 표피층의 두께를 감소시키고, 콜라겐 조직 의 파괴 반응을 억제하여 피부 주름 개선 효과가 우수하므로, 피부 주름 예방 또는 개선용 조성물에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

【명세서】

【발명의명칭】

허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 예방 또는 개선용 조성물

【기술분야】

<ι> 본 발명은 허니부쉬 c/i¾9/a intermedia, honeybush) 추출물 또는 이의 발 효액을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 예방 또는 개선용 조성물에 관한 것이다.

<2> ^"

【배경기술】

<3> 사람은 나이가 들면서 피부노화가 일어나게 되는데 그 대표적인 증상이 주름

(wrinkle)이다. 주름은 나이를 나타내는 하나의 현상으로서， 피부 주름 생성과 관 련된 주요 기작은 피부가 대기오염, 자외^ 노출, 스트레스 또는 질병 등의 유해환 경으로부터 산화적 스트레스 (oxidative stress)에 계속적으로 노출되어 체내의 라 디칼이 증가되고， 진피의 결합조직인 콜라겐 (collagen), 엘라스틴 (elast in)， 히아 루론산 (hyaluronic aicd) 등을 파괴하여 피부의 일정 부위 침하 현상 (주름)을 일으 킬 수 있는 것으로 설명된다. 또한 이러한 기작들은 세포막의 지질 부분을 산화시 켜 세포의 파괴 현상을 일으켜 피부염, 여드름 또는 피부암 등의 질병을 유발할 수 있다.

<4>

<5> 피부의 구조에 따라 주름 발생 원인을 촘 더 자세히 설명하면， 다음과 같다. 피부는 크게 표피와 진피로 나뉜다. 표피는 주로 케라티노사이트 (keratinocytes), 멜라닌세포 (melanocytes) 및 랑게르한스 세포 (Langerhans eel Is)로 구성되는 얇은 보호층이고， 진피는 콜라겐과 탄력섬유로 구성되는 섬유조직 및 결합조직의 두껍고 복잡한 층이다. 콜라겐은 피부의 주요 구조 단백질로 피부의 인장강도 (tensile strength) 및 인성 (toughness)을 결정하며， 탄력섬유는 피부탄성 (skin resilience) 및 피부탄력 (skin elasticity)에 중요하다.

<6> 표피에서는 각질 형성 세포의 턴 -오버 (turn-over)의 감소로 각질층의 누적과 이로 인해 각질층이 두꺼워지고， 각질층의 수분 함유 능력이 감소되며， 각질이 경 화되어 주름이 발생하게 된다. 표피와 진피의 경계부위는 표피세포 지지, 부착， 영 ' 양물질의 이동, 표피 분화의 조절 등에 관여하는데， 각종 노화 요인으로 특히， UV 에 인하여 콜라겐 IV, VII가 감소되어 표피， 진피 지지기능이 감소되고， 선별 투과 기능이 약화되어 해로운 성분이 쉽게 진피에 영향을 미치게 되어 주름이 생성된다 (Keene DR et al . , The Journal of Cell Biology 1987 104(3) :611-621) .

<7> 진피는 표피의 아래에 있는 결합조직으로 이루어지는 조직으로 표피 세포인 케라티노사이트처럼 치밀하게 채워져 있지 않고 세포외 공간이 많으며 세포외 간질

(extracellular^, matrix)이라 불리는 거대 분자의 망상 구조에 의해 채워져 있다. 이 세포외 간질은 진피 내의 섬유아세포에서 만들어지며， 콜라겐， 엘라스틴 등의 섬유상 단백질과 히알루론산 등의 산성 뮤코다당체라 불리는 다당류로 이루어져 있 다. 피부 주름 형성에 관련이 있는 결합 조직은 주로 콜라겐 섬유 (collagen fiber), 세망 섬유 (reticular fiber), 엘라스틴 섬유 (elastic fiber) 등의 섬유 성 분으로 구성되어 있다. 진피 조직 내에 있는 콜라겐과 엘라스틴은 서로 긴밀하게 관련되어 작용함으로써 피부의 유연성과 탄력을 유지하게 하는 중요한 섬유 조직이 다.

<8> 콜라겐은 피부의 유연성을 주는 섬유 조직으로서 진피 조직의 약 70%를 차지 하는 주요 구성 요소로 피부 진피층에서 피부의 기계적 견고성， 조직의 결합력 세 포와의 부착 및 세포 분화 등에 관여한다.

<9>

<10> 피부의 가장 기본적인 역할은 우리 몸으로부터 수분이 증발되는 것을 막아주 며 외부로부터 유해성분이 침입하는 것을 막아주는 역할을 한다. 이러한 피부는 항상 외부 자극으로부터 노출되어 있기 때문에 다양한 방어 능력을 가지고 있다. 또한， 피부는 아름다움을 나타내는 표정으로써 피부가 건강하고 깨끗함은 곧 사람 의 아름다움과 연관되어 있다고 할 수 있다. 최근 들어， 여성 뿐 아니라 남성들도 피부 노화 등 여러 가지 피부 트러블들에 대한 관심이 많아지면서 이와 관련된 제 품들이 많이 개발되고 있다 .

<1!>

<12> 이러한 피부 주름 개선을 위해서 기존에는 아스코르브산， α -토코페를, 레티 놀 및 그 유도체， 수퍼옥사이드 디스뮤타아제 (Super Oxide Dismutase, SOD) 등이 자유 라디칼 소거 기능 또는 피부 주름 개선을 위한 물질로 화장료 또는 의약품에 배합되어 주름 및 기타 피부 질환을 방지하기 위하여 이용되어 왔으나， 이들은 가 격이 고가일 뿐만 아니라 화학적 안정성이 좋지 못하여 실질적인 효과를 기대하기 가 어려운 문제점이 있다. 이러한 이유로 보다 안전하면서 피부 주름 개선에 효과 가 높은 물질을 개발하는 것이 의약품이나 식품 분야뿐만 아니라 화장품 산업 분야 에서도 중요한 과제로 대두되어 많은 연구가 진행되고 있다. 피부 주름 개선 화장료에 사용되는 레티노이드에는 레티놀 (retinol), 레티날 (retinal), 레틴산 (retinoic acid), 레티닐 아세테이트 (retinyl acetate), 레티닐 리놀리에이트 (retinyl linoleate) 및 레티닐 팔미테이트 (retinyl palmitate) 등이 있다. 이들 중 레티놀은 인체에 자연적으로 존재하는 내인성 화합물로서 상피 조 직의 분화와 성장에 필수적인 물질이며, 레틴산 등의 레티노이드에 비해 매우 높은 안전성을 가지고 있어 피부 주름 개선 화장료의 원료로서 매우 적합하다고 할 수 있다.

이러한 레티노이드는 피부 주름 개선에 효능이 있는 것으로 피부 임상을 통 하여 검증되었지만 제품에 처방될 경우 변색, 변취 현상이 발생하고, 소량 사용시 에도 피부 자극이 유발되는 부작용이 있으며， 경시적인 변화에 의한 역가 감소와 이에 따른 효과 감소 등이 큰 문제점으로 인식되고 있다. 이러한 레티노이드의 문제점들을 극복하기 위해 천연물 유래 생리 활성 물질 들을 이용한 주름 개선용 화장료의 개발이^' 필요하다. 이는 레티노이드에 비하여 피부 부작용이 적고， 경시적인 화학적 변화가 적어 화장료의 안전성 및 안정성이 우수하다는 장점이 있다. 따라서, 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료로 약용 식 물 자원들에 대한 연구가 지속되고 있다. 허니부쉬 (d/op/a intermedia, honeybush)는 멜리안투스과 (—科 Melianthaceae)에 속하는 상록관목으로， 남아프리카의 케이프지역 (Cape region)의 서동쪽 해안의 산등성의 좁은 지역에서만 자라는 식물로， 루이보스와 매우 비슷한 점이 많은 허브이다. '허니부쉬'라는 이름은 그 꽃에서 꿀 향기가 난다해서 붙여 진 이름으로 먹는 방법이나 효능은 투이보스와 비슷하지만 맛은 그보다 훨씬 더 달 콤한 맛이 나는 식물이다. 허니부쉬는 주로 차로 이용되고， 탄닌이 적고 카페인이 전혀 없으며， 다양한 무기질 (예: 철분,포타시움， 칼슘, 동， 아연， 마그네슘 등)이 함유되어 있다, 오래전부터 감기， 불면증, 배탈을 치료할 때 이용되어 왔고， 혈당 을 낮추는 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 이와 관련하여, PCT/EP2008/052863호 에 허니부쉬 추출물의 항당뇨 효과에 대해 나와있고, Sissing L et al . , Nutrition and cancer 2011 63(4) :60으610에 허니부쉬 추출물이 샥도 유두종의 분화를 조절할 수 있음이 기재되어 있으나, 아직까지 그 피부 주름 개선 효과에 대해서는 알려져 있지 않다. <21> 이에， 본 발명자들은 피부 주름 개선을 위한 천연 식물 추출물을 개발하고자 연구한 결과， 허니부쉬에서 추출한 추출물， 또는 상기 추출물을 발효시킨 발효액이 자외선 조사에 의해 증가된 피부 주름의 길이， 깊이 및 표피층의 두께를 감소시키 고， 콜라겐 조직의 파괴 반응을 억제하여 피부 주름 개선 효과가 우수한 것을 확인 하여, 피부 주름 예방 또는 개선용 조성물의 유효성분으로서 유용하게 사용될 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.

<22>

【발명의 내용】

【기술적 과제】^'

<23> 본 발명의 목적은 허니부쉬 (C C/OP/S intermedia, honeybush) 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 예방 또는 개선용 조 성물을 제공하는 것이다.

<24> 또한， 본 발명의 다른 목적은 허니부쉬 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효 액을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 피부 주름 예방 방법을 제공하는 것이다.

<25> 또한， 본 발명의 다른 목적은 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효 액을 피부 주름이 있는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 피부 주름 개선 방법을 제공하는 것이다.

<26> 아을러, 본 발명의 다른 목적은 피부 주름 예방 또는 개선을 위한 조성물의 제조에 사용하기 위한 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액의 용도를 제공하는 것이다.

<27>

【기술적 해결방법】

<28> 상기 과제를 해결하기 위하여 , 본 발명은 허니부쉬 (Cyc/Qp/a intermedia, honeybush) 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효액을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

<29> 또한， 본 발명은 허니부쉬 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효액을 유효성 분으로 함유하는 피부 주름 예방또는 개선용 피부 외용제를 제공한다.

<30> 또한, 본 발명은 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액을 유효성 분으로 함유하는 피부 주름 예방 또는 개선용 약학적 조성물을 제공한다.

<31> 또한， 본 발명은 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액을 유효성 분으로 함유하는 피부 주름 예방 또는 개선용 건강식품을 제공한다.

<32> 또한, 본 발명은 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 피부 주름 예방 방법을 제공한다.

또한， 본 발명은 허니부쉬 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효액을 피부 주 름이 있는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 피부 주름 개선 방법을 제공한다. 또한， 본 발명은 피부 주름 예방 또는 개선을 위한 화장료 조성물의 제조에 사용하기 위한 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액의 용도를 제공한 다.

또한， 본 발명은 피부 주름 예방 또는 개선을 위한 피부 외용제의 제조에 사 용하기 위한 허니부쉬 추출물ᅳ 이의 분획물 또는 이의 발효액의 용도를 제공한다. 또한， 본 발명은 피부 주름 예방 또는 개선을 위한 약학적 조성물의 제조에 사용하기 위한 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액의 용도를 제공한 다.

아을러， 본 발명은 피부 주름 예방 또는 개선을 위한 건강식품용 조성물의 제조에 사용하기 위한 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액의 용도를 제공한다.

【유리한 효과】

본 발명의 허니부쉬 ( r/o /a intermedia, honeybush) 추출물 또는 이의 발 효액은 자외선 조사에 의해 증가된 피부 주름의 길이， 깊이 및 표피층의 두께를 감 소시키고, 콜라겐 조직의 파괴 반웅을 억제하여 피부 주름 개선 효과가 우수하므 로, 피부 주름 예방 또는 개선용 조성물에 유용하게 사용될 수 있다.

【도면의 간단한 설명】

도 1은 허니부쉬 추출물 (Or/o /a intermedia, honeybush) 및 이의 발효액 의 주름 개선 효과를 모사판 분석을 통해 확인한 결과이다.

도 2는 허니부쉬 추출물 및 이의 발효액의 주름 개선 효과를 주름의 평균 길 이 분석을 통해 확인한 결과이다.

도 3은 허니부쉬 추출물 및 이의 발효액의 주름 개선 효과를 주름의 평균 깊 이 분석을 통해 확인한 결과이다.

도 4는 허니부쉬 추출물 및 이의 발효액의 주름 개선 효과를 Hematoxylin & Eosin(H&E) 조직 염색을 통해 확인한 결과이다.

도 5는 허니부쉬 추출물 및 이의 발효액의 주름 개선 효과를 Masson's trichome 조직 염색을 통해 확인한 결과이다. <46> 도 6은 허니부쉬 추출물 및 이의 발효액의 주름 개선 효과를 표피 두께 변화 측정을 통해 확인한 결과이다.

<47>

【발명의 실시를 위한 최선의 형태】

<48> 이하， 본 발명을 상세히 설명한다.

<49>

<50> 본 발명은 허니부쉬 c/o /a intermedia, honeybush) 추출물， 이의 분획물 또는^'이의 발효액을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조 성물을 제공한다.

<51>

<52> 상기 허니부쉬 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조되 는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다:

<53> 1) 허니부쉬에 추출 용매를 가하여 추출하는 단계 ;

<54> 2) 단계 1)의 추출물을 식힌 후 여과하는 단계 ;

<55> 3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압농축하는 단계; 및

<56> 4) 단계 3)의 농축된 추출물을 건조 분말화하는 단계 .

<57> 상기 방법에 있어서， 단계 1)의 허니부쉬는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 상기 허니부쉬는 잎， 종자， 열매, 뿌리 또는 지상부

(aerial part)를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

<58> 상기 추출 용매는 물， d 내지 C₂의 저급 알코을， 메탄을， 핵산， 아세톤， 에 틸아세테이트， 포화노말부탄올, 클로로포름， 메틸렌클로라이드 및 이들의 흔합용매 로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나를 사용하는 것이 바람직하나， 이에 한정 하지 않는다. 상기 알코을로는 d 내지 C₂의 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직 하고， 저급 알코을로는 에탄올 또는 메탄을을 이용하는 것이 바람직하며， 물이 가 장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다.

<59> 추출 방법으로는 진탕 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하고 , 환 류 넁각 추출을 이용하는 것이 더욱 바람직하나， 이에 한정하지 않는다 . 상기 추 출 용매를 허니부쉬 분량에 2 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하고， 5 내 지 10배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하며， 10배 첨가하는 것이 가장 바람 직하나, 이에 한정하지 않는다. 추출은도는 상온 내지 100 °C인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한， 추출시간은 1 내지 3시간인 것이 바람직하고， 1시간 인 것이 더욱 바람직하나， 이에 한정하지 않는다. 아울러， 추출 회수는 1 내지 3 회인 것이 바람직하고， 2회인 것이 더욱 바람직하나， 이에 한정하지 않는다.

<60> 상기 방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증 발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 단계 4)의 건조는 감압건조， 진공건조， 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

<61> 상기 허니 부쉬 추출물의 분획물은 상기 추출물을 분획한 것이고, 이때 분획 에 쓰인 용매는 물， d 내지 C₂의 저급 알코올， 메탄올 핵산, 아세톤， 에틸아세테 이트， 포화노말부탄을， 클로로포름， 메틸렌클로라이드 및 이들의 흔합용매로 구성 된 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있으나， 이에 한정하지 않는다.

<62> 상기 허니부쉬 발효액은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조되 는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다：

<63> 1) 동물성 밀크에 유산균을 접종하는 단계 ;

<64> 2) 단계 1)의 접종액에 탄소원 및 허니부쉬 추출물 또는 이의 분획물을 흔합 하는 단계 ; 및

<65> 3) 단계 2)의 흔합물을 발효시키는 단계.

<66> 상기 단계 1)의 유산균은 스트랩토코커스 써모필러스 SYre/^oa ra/s t hemophilus)인 것이 바람직하나， 이에 한정되지 않고, 발효를 위해 이용되는 유 산균이라면 모두 사용가능하다.

<67> 상기 단계 1)의 유산균은 MRS(de Man, Rogosa, & Sharpe) 배지에서 배양되는 것이 바람직하나， 이에 한정되지 않고， 발효를 위한 유산균의 배양에 이용되는 배 지라면 모두 사용 가능하다.

<68> 상기 단계 1)의 유산균은 3 X 10⁴내지 3 X 10⁶ CFU/ml 접종되는 것이 바람 직하고， 3 X 10⁵ CFU/ml 접종되는 것이 더욱 바람직하나， 이에 한정되지 않는다.

<69> 상기 단계 2)의 탄소원은 글루코오스 (glucose), 또는 설탕인 것이 바람직하 나, 이에 한정되지 않는다.

<70> 상기 단계 2)의 허니부쉬 추출물 또는 이의 분획물은 전체 접종액 기준으로

3 내지 10¾)(v/v) 첨가하는 것이 바람직하고， 5 내지 6%(v/v) 첨가하는 것이 더욱 바람직하며， 5¾(v/v) 첨가하는 것이 가장 바람직하나， 이에 한정하지 않는다.

<7i> 상기 단계 3)의 발효는 35 내지 38 ^°C의 배양기에서 1 내지 3일 동안 발효시 키는 것이 바람직하고 37 내지 38 ^°C의 배양기에서 1일 동안 발효시키는 것이 더 욱 바람직하나， 이에 한정하지 않는다. <72>

<73> 본 발명의 구체적인 실시예에서， 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효 액은 자외선 조사에 의해 증가된 피부 주름의 길이， 깊이 및 표피층의 두께를 감소 시키고， 콜라겐 조직의 파괴 반웅을 억제하여 우수한 피부 주름 개선 효과를 나타 내므로, 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 유용하게 사용될 수 있다 (도

1 내지 도 6 참조).

<74>

<75> 상기 화장료 조성물은， 예를 들면 용액, 겔， 고체 또는 반죽 무수 생성물， 수상에 유싱:을 분산시켜 얻은 에멀견， 현탁액, 마이크로에멀견, 마이크로캡술， 미 세과립구 또는 이온형 (리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨， 로 션, 파우더， 연고, 에센스ᅳ 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한， 포말 (foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태 로도 제조될 수 있다.

<76> 또한， 상기 화장료 조성물은 본 발명의 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액에 추가로 지방 물질, 유기 용매， 용해제， 농축제 및 겔화제， 연화제， 항산화제， 현탁화제， 안정화제， 발포제 (foaming agent), 방향제, 계면활성제， 물, 이온형 또는 비이은형 유화제， 층전제， 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민， 차단제， 습윤화제, 필수 오일， 염료， 안료, 친수성 또는 친유성 활성제， 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분 야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.

<77> 본 발명의 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액을 함유하는 화장 료 조성물에 있어서, 통상적으로 함유되는 화장료 조성물에 본 발명의 추출물이 1 내지 15중량 바람직하게는 2 내지 10중량 %의 양으로 첨가될 수 있다.

<78> 본 발명의 허니부쉬 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효액을 피부 외용제로 사용하는 경우， 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제， 농축제 및 겔화제, 연화제， 항산화제， 현탁화제， 안정화제， 발포제 (foaming agent), 방향제， 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제， 층전제， 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제， 보존제， 비타민， 차단제， 습윤화제， 필수 오일， 염료， 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피 부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성 분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

<79> 본 발명의 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물은 상기 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액 외에 공지의 주름 개선 성분을 추가로 포함할 수 있 다. 추가적인 피부 건강에 도움을 주는 원료를 포함하게 되면 본 발명의 조성물의 주름 예방 또는 개선 효과는 더욱 증진될 수 있을 것이며， 피부 건강에 도움을 주 는 원료의 추가시에는 복합 사용에 따른 피부 안전성， 제형화의 용이성， 유효성분 들의 안정성을 고려할 수 있다. 상기 추가적인 주름 개선 성분은 바람직하게는 식 품의약품안전청에서 고시된 기능성 원료이고， 구체적으로 예를 들면， 레티놀， 레티 닐팔미테이트， 아데노신, 폴리에특실레이티드레틴마이드， 콜라겐， TGF 및 동물태반 유래의 단백질 등이며, 상기 고시 원료는 피부 건강에 도움을 주는 고시 원료에만 국한되지 않는다. 추가의 주름 개선 성분은 조성물의 총 중량에 대하여 0.0001 중 량% 내지 10중량 %로 포함될 수 있을 것이며, 상기 중량 %는 콜라겐 합성 촉진 또는 콜라게나제 억제 활성， 피부 안전성 등의 요건에 따라 조절될 수 있다.

<80>

<S1> 또한， 본 발명은 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액을 유효성 분으로 함유하는 피부 주름 예방 또는 개선용 피부 외용제를 제공한다.

<82> 본 발명의 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액은, 그대로 혹은 필요에 따라서， 피부 외용제로서 제제학적으로 허용되는 성분을 1종 또는 2종 이상 배합해서 되는 피부 외용제용의 첨가제의 형태로 피부 외용제에 배합할 수 있다. 이 첨가제에 사용하는 피부 외용제로서 제제학적으로 허용되는 성분으로서는， 다음 에 설명하는 피부 외용제에 사용되는 물질이면 특히 제한은 없는데, .예를 들면， 환 원성 당질， 비환원성 당질， 당 알코을， 수용성 다당， 합성 고분자 폴리머， 항산화 작용을 가진 물질 및 유화 작용을 가진 물질 등을 들 수 있다. 그 중에서도 α， α -트레할로오스나， 동일한 출원인에 의한 일본국의 특개평그 143876호 공보， 특허 제 3182679호 명세서 등에 개시된 . α-글루코실 α, α-트레할로오스， α-말토실 α, α- 트레할로오스, α-말토트리오실 α , αᅳ트레할로오스 등의 α， αᅳ트레할로오스의 당 질 유도체 및 이 당질 유도체를 함유하는 당질 (이하， 아을러 ^Γα , α-트레할로오스 의 당질 유도체」 라고 할 경우가 있다.)은 비타민 배당체의 열화를 억제하는 작용 이 강하고， 또한 분체의 고결을 방지하며， 흡습 억제 작용도 강하므로 특히 바람직 하다. 이렇게 하여 제조한 피부 외용제용의 첨가제는， 본 발명의 허니부쉬 추출 물, 이의 분획물 또는 이의 발효액 단독의 경우보다도， 보존이나 이송시에 있어서 의 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액의 기능 저하나 고결이 방지된 다고 하는 특징이 있다.

<83> 본 발명의 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액 혹은 이것을 함 유하는 피부 외용제용의 첨가제의 피부 외용제에 대한 배합량은 허니부쉬 추출물 또는 발효액의 기능을 발휘할 수 있는 양이면 특히 제한은 없고， 발휘되는 기능의 정도와 사용감의 장점의 점에서는， 통상적으로， 피부 외용제의 총 질량에 대하여, 그 허니부쉬 추출물 또는 발효액으로서 합계로 0.이〜 20%， 바람직하게는 0.1~10 , 보다 바람직하게는 0.5%〜： L0%가 되도록 하면 좋다.

<84> 본 발명의 피부 외용제를 제조할 경우， 본 발명의 허니부쉬 추출물, 이의 분 획물 또는 이의 발효액 혹은 이것을 함유하는 피부 외용제용의 첨가제는, 대상으로 하는 피부 외용제에 원료 단계부터 제품 단계에 이르기까지의 적당한 공정에서 함 유시킬 수 있다. 그 구체적인 방법으로서는， 예를 들면， 흔화， 흔날 (混程), 용해， 융해， 분산, 현탁， 유화， 역 (逆) 미셀화， 침투， 결정 석출， 살포， 도포， 분무， 주 입， 침지， 고화 등의 공지의 방법이 적절히 선택된다. 또한 이들 방법은 단독으 로， 혹은 2종 이상을 적당히 조합하는 것도 마음대로이다.

<85> 본 발명에서 말하는 피부 외용제라 함은， 피부에 사용하는 화장품， 의약 부 외품， 의약품 등을 말하고, 피부와 직접 접촉할 가능성이 있는 화학품， 공업품， 일 용품， 잡화 등을 포함한다. 이들 피부 외용제 제형에는 특히 제한은 없고， 용액계， 가용화계， 유화계 (乳化系)， 분말 분산계， 물ᅳ기름 2상계， 물 -분체 2상계, 물ᅳ기름- 분말 3상계 등의 어떤 제형이라도 좋다. 또한 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 발 효액의 용도도 임의인데， 예를 들면， 화장수 로션， 유액 (乳液), 크림， 연고, 연제 (練劑)， 현탁제， 에멀견， 페이스트， 무스， 코스메틱， 고형， 반고형， 분말， 고형분 말， 젤리， 젤， 에어로졸， 스프레이, 트로치， 팩， 페이스 마스크 등의 형태로 해서, 기초 화장품， 마무리 화장품, 피부 화장품， 세정용 화장품， 세안료， 화장수， 크림， 유액， 팩， 파운데이션, 백분 타분， 파우더류， 입술 연지， 눈 화장품， 향수, 목욕용 화장품， 입욕용 화장품, 구강 화장품， 햇볕에 탐，햇볕에 그을림 방지용 화장품， 메이크업 화장품， 손톱 화장품, 아이 라이너 화장품， 입술 화장품, 구강 화장품， 페이셜 화장품， 화장 기름， 방향 화장품， 보디용 화장품, 두발용 화장품， 세발용 화장품, 화장용 비누， 약용 비누， 치약, 입안 청량제， 액취 방지제， 첨가분， 육모 ( 育毛) ^*양모제, 면도용제， 햇볕에 그을림 방지제, 진양제, 청식제， 청정제， 살균 소독제， 탈색제, 탈모제， 더욱이는， 무좀, 치질， 여드름, 창상， 화상， 동상， 옻에 의한 피부병， 진물림, 염증， 감염증， 알레르기， 아토피， 궤양， 종양 등의 각종 질 환의 예방제 흑은 치료제 등으로서 이용할 수 있다.

<86> 구체적으로는 화장 비누， 세안 크림， 세안 품， 클렌징 크림, 클렌징 밀크， 클렌징 로션, 클렌징 오일， 마사지 크림， 콜드크림, 모이스처 크림， 배니싱 크림, 핸드 크림， 모이스처 로션， 화장 기름， 리퀴드 파운데이션， 파우더 파운데이션， 케 이크상 파운데이션， 스틱 파운데이션， 유성 콤팩트 파운데이션， 크림상 파운데이 션, 치이크 브러시， 유화 (乳化) 파운데이션， 밑바탕 화장료， 보디 파우더， 크림상 백분, 분 백분， 물 백분， 고형 백분, 연 (練)백분 탤컴 파우더， 루즈 새도우， 베이 비 파우더， 볼 연지, 눈썹을 그리는 먹， 마스카라， 입술 연지， 립 크림， 팩， 세이 빙 크림， 애프터 쉐이빙 크림， 로션， 핸드 로션， 셰이빙， 로션 , 애프터 쉐이빙 로 션， 햇볕에 탐 방지용 크림， 선탠 오일, 햇볕에 탐 방지용 로션, 선탠 로션, 유연 화 화장수, 수렴 화장수 세정 화장수， 다층식 화장수， 페이셜 샴푸， 보디 샴푸， 헤어 샴푸， 세발용 분말， 핸드 소프， 페이셜 린스， 보디 린스， 해어, 린스， 헤어 트리트먼트, .양모료 (養毛料)， 육모료 (育毛料)， 코스메틱.， 포마드， 헤어 크림， 헤어 리퀴드， 헤어 토닉， 세트 로션， 머리 빗을 때 쓰는 밑기름， 살쩍 고정용 머릿기름， 해어 스프레이， 해어 무스， 헤어 토닉， 헤어 다이， 헤어 브리치， 컬러 린스， 컬러 스프레이， 퍼머넌트 웨이브액， 프레스 파우더， 루스 파우더， 아이 크림, 아이 새도 우， 크림 아이 새도우, 파우더 아이 새도우， 아이 라이너， 아이 브로우 펜슬， 마스 카라, 탈모 크림, 일반 향수, 연 (練)향수， 분말 향수， 오데코통, 디오더런트， 목욕 용제， 바스 오일, 바스 솔트， 화장용 기름， 베이비 오일， 네일 컬러， 에나멜， 에나 델 제거액， 네일 트리트먼트， 마우스 워쉬， 치약, 분말 치약, 인섹트 리펠러 (벌레 제거제)， 외상 치료용 연고， 항균 크림, 스테로이드 연고 등의 외에， 구강 내나 피 부의 환부에 붙이는 시트상 혹은 필름상의 퍼프제， 의류 등의 세탁용 비누나 세제， 바닥용 세제， 부엌용 세제， 클렌저 등을 말한다.

<87>

<88> 또한, 본 발명은 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액을 유효성 분으로 함유하는 피부 주름 예방 또는 개선용 약학적 조성물을 제공한다.

<89> 또한， 본 발명은 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 피부 주름 예방 방법을 제공한다.

<90> 아울러, 본 발명은 허니부쉬 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효액을 피부 주름이 있는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 피부 주름 개선 방법을 제공한다. <91> 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액은 자외선 조사에 의해 증가된 피부 주름의 길이， 깊이 및 표피층의 두께를 감소시키고， 콜라겐 조직의 파괴 반응 을 억제하여 우수한 피부 주름 개선 효과를 나타내므로， 피부 주름 예방 또는 개선 용 약학적 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다 .

<92> 본 발명의 약학적 조성물은 통상적으로 사용되는 부형제， 붕해제, 감미제， 활택제， 향미제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 통상적인 방법에 의해 정제， 캅셀 제, 산제, 과립제， 현탁제， 유제， 시럽제， 기타 액제로 제형화될 수 있다.

<93> 구체적으로 본 발명의 약학적 조성물은 경구 투여용 제형， 예를 들면 정제, 트로치제 (troches), 로젠지 (lozenge), 수용성 또는 우성현탁액， 조제분말 또는 과 립， 에멀젼, 하드 또는 소프트 캡슐， 시럽 또는 엘릭시르제 (elixirs)로 제제화된 다. 정제 및 캡슐 등의 제형으로 제제하기 위해 락토오스， 사카로오스， 솔비를， 만니롤， 전분， 아밀로펙틴, 셀롤로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제， 디칼슘 포스페 이트와 같은 부형제, 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕해제, 스테아르산 마 그네슘， 스테아르산 칼슴， 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활유가 함유된다. 캡슬제형의 경우는 상기에서 언급한 물질 이외에도 자방 유와 같은 액체 담체를 함유한다.

<94> 또한， 본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경 구 투여시 피하주사， 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하 는 것이 바람직하다. 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위해서는 본 발명의 허 니부쉬 추출물 또는 이의 발효액을 안정제 또는 완층제와 함께 물에서 흔합하여 현 탁액으로 제조하고 이를 염플 또는 바이알의 단위 투여형으로 제제한다.

<95> 본 발명의 약학적 조성물은 이에 제한되는 것은 아니나， 비경구 투여 중 경 피투여， 보다 바람직하게는 도포에 의한 국부 투여 (topical application) 경로로 적용될 수 있다.

<96> 본 발명에 따른 유효성분의 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 불활성화 율 및 배설속도， 환자의 연령， 성별 및 상태， 치료할 질병의 중증 정도에 따라 적 절히 선택되나， 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1 당 본 발명 의 추출물을 0.01 - 500 mg의 양으로 1회 내지 수회 나누어 투여할 수 있으며， 1 ~ 100 rag의 양으로 투여하는 것이 바람직하다. 또한 외용제인 경우에는 성인 기준 으로 1일당 0.5 ml 내지 5.0 ml의 양으로 1일 1회 내지 5회 도포하여 1개월 이상 계속 하는 것이 좋다.

<97>

<98> 아을러， 본 발명은 허니부쉬 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효액을 유효 성분으로 함유하는 피부 주름 예방 또는 개선용 건강식품을 제공한다.

<99> 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액은 자외선 조사에 의해 증가된 피부 주름의 길이, 깊이 및 표피충의 두께를 감소시키고， 콜라겐 조직의 파괴 반웅 을 억제하여 우수한 피부 주름 개선 효과를 나타내므로， 피부 주름 예방 또는 개선 용 건강식품에 유용하게 사용될 수 있다.

<100>

<101> 본 발명의 건강식품은 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액을 그 대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고， 통상적인 방법 에 따라 적절하게 사용될 수 있다.

<102> 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 허니부쉬 추출물， 이의 분 획물 또는 이의 발효액을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 카라멜， 육류， 소시지, 빵 ， 초콜릿， 캔디류, 스넥류， 과자류， 피자， 라면， 기타 면류， 껌류， 아이스크림류를 포함한 낙농제품， 각종 스프, 음료수， 차, 드링크제， 알코올음료 및 비타민 복합제 등이 있으며， 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

<103> 본 발명의 건강 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포 도당， 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스， 슈크로스와 같은 디사카라이드， 및 덱 스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드， 자일리를， 소르비를， 에리트리 를 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미 제나, 사카린， 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직 하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.

<104> 상기 외에 본 발명의 허니부쉬 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효액은 여 러 가지 영양제， 비타민， 전해질， 풍미제， 착색제， 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염， 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제， 안정화제， 방부제， 글리세 린， 알코올， 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발 명의 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액은 천연 과일 주스， 과일 주 스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립 적으로 또는 흔합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하잔않 지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 - 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것 이 일반적이다.

<105> 본 발명의 피부 주름 예방 또는 개선용 건강식품은 상기 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액 외에 공지의 주름 개선 성분을 추가로 포함할 수 있 다. 추가적인 피부 건강에 도움을 주는 원료를 포함하게 되면 본 발명의 건강식품 의 주름 개선 효과는 더욱 증진될 수 있을 것이며, 피부 건강에 도움을 주는 원료 의 추가시에는 복합 사용에 따른 피부 안전성， 제형화의 용이성， 유효성분들의 안 정성을 고려할 수 있다. 상기 추가적인 주름 개선 성분은 바람직하게는 식품의약 품안전청의 건강기능식품으로 고시된 기능성 원료이고， 구체적으로 예를 들면， 클 로텔라, 스피루리나， N-아세틸글루코사민 및 알로에겔 등이며， 상기 고시 원료는 피부 건강에 도움을 주는 고시 원료에만 국한되지 않는다. 추가의 주름 개선 성분 은 조성물의 총 중량에 대하여 0.0001 증량 ¾ 내지 10 중량 %로 포함될 수 있을 것이 며， 상기 중량 %는 콜라겐 ^"합성 촉진 또는 콜라게나제 억제 활성， 피부 안전성 등의 . 요건에 따라 조절될 수 있다.

<106>

<Ό7> 또한， 본 발명은 피부 주름 예방 또는 개선을 위한 화장료 조성물의 제조에 사용하기 위한 허니부쉬 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효액의 용도를 제공한 다.

<108> 또한, 본 발명은 피부 주름 예방 또는 개선을 위한 피부 외용제의 제조에 사 용하기 위한 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액의 용도를 제공한다. <109> 또한, 본 발명은 피부 주름 예방 또는 개선을 위한 약학적 조성물의 제조에 사용하기 위한 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액의 용도를 제공한 다.

<1' > 아울러, 본 발명은 피부 주름 예방 또는 개선을 위한 건강식품용 조성물의 제조에 사용하기 위한 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액의 용도를 제공한다.

<πι> 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액은 자외선 조사에 의해 증가된 피부 주름의 길이， 깊이 및 표피층의 두께를 감소시키고， 콜라겐 조직의 파괴 반웅 을 억제하여 우수한 피부 주름 개선 효과를 나타내므로， 피부 주름 예방 또는 개선 방법 및 피부 주름 예방또는 개선용 조성물에 유용하게 사용될 수 있다.

<112>

【발명의 실시를 위한 형태】

<1'3> 이하， 본 발명을 실시예， 실험예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다.

<"4> 단， 하기 실시예， 실험예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐， 본 발명 의 내용이 하기 실시예， 실험예 및 제조예에 의해 한정되는 것은 아니다.

<115>

<Π6> <실시예 1> 허니부쉬 추출물의 제조

<Π7> 허니부쉬 ( r ¾o/a intermedia, honeybush)는 리뉴얼라이프

(http://www.renewallife.com)로부터 구입하였고， 구입한 시료는 온도 5.5±0.3^°C 습도 50±5¾>로 유지되는 약재보관용 넁장고에서 보관하였다. 허니부쉬 추출물은 허니부쉬 총중량 25 g에 물 220 ml을 사용하여， 1 시간씩 2회 환류 냉각 추출하여 제조하였다. 이후， 제조된 추출물을 여과지를 이용하여 얻어진 여액올 감압농축기 를 이용하여 용매를 제거한 후， 본 발명의 허니부쉬 추출물 4.3 g을 수득하였다.

<119> <실시예 2> 허니부쉬 발효액의 제조

<120> 본 발명의 허니부쉬 발효액을 제조하기 위해 동물성 밀크 (흰우유) 100 mL에

MRS(de Man, Rogosa, & Sharpe) 배지에서 배양한 스트렙토코커스 써모필러스

{Streptococcus therwophi lus) 유산균 1 mL(3xi0⁵ CFU/ml)을 접종하였고， 이후 접 종액에 설탕 3 g과 상기 <실시예 1>에서 제조된 허니부시 추출물 5 %(w/v)를 첨가 하였다. 그 다음, 상기 흔합물을 37 ^°C 배양기에서 1일 동안 발효시켜 허니부쉬 발효액 100 g을 제조하였다.

<121>

<122> <실험예 1> 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액의 모사판 분석을 통한 주름 개선 효능 평가

<123> 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액의 주름 개선 효능을 평가하기 위하여， 모사판 분석을 수행하였다.

<124>

<125> <1-1> 실험동물 및 시료투여

<126> 실험동물로는 7주령의 수컷 무모쥐 (male HR-1, hairless mice, Japan SIX,

Inc.)를 이용하였고， 중앙실험동물로부터 구입하여 1주 동안 적응시킨 후 사용하였 다. 적웅기간 중 일반 상태를 관찰하여 건강한 상태의 동물을 시험에 사용하였으 몌 사육환경은 온도 23±3^°C, 습도 50±5%， 명암주기 12시간 (07 :00—19 :00/조명시 간)으로 유지하였다. 실험기간 중 실험동물은 폴리카보네이트 (polycarbonate) 케 이지 (200X320X450 讓， Three-shine Co. , Dae j eon, Korea)에 군당 5마리로 사육하 였고， 사료는 마우스 전용사료 5L79(Charles river, USA)를 자유 급이하였으며， 음 수는 자외선으로 소독한 상수도수를 자유 급이하였다.

<127> 시료의 투여는 하기 [표 1]에 제시된 바와 같이， 대조군 (control), 자외선 조사군 (UV), 허니부쉬 투여군 (HB), 허니부쉬 발효액 투여군 (STC HB) 4개의 군으로 나누어 실험하였다. 시료의 투여는 마우스 존대를 이용하여 경구투여하였으며, 투 여기간은 총 8주로 주 5일 동안 투여하였다.

【표 1】 실험군별 자외선 조사 및 용량

<l-2>자외선 조사

자외선조사는 대조군을 제외한 실험군에 8주 동안 주 3회 실시하였고， 자외 선은 UVB 램프 (Mineralight UV Display lamp, UVP, USA)를 사용하여 조사하였다. 자외선 조사량은 1-2주간은 60 mJ/cm², 3-5주는 90 mJ/cm², 6ᅳ 8주는 120 mJ/cm²로 8 주 동안 조사하였다. 자외선 조사량은 광측정기 (Delta OHM, Italy)를 이용하여 광 량을 측정한후 조사시간으로 조절하였다.

<1-3>모사판 분석을 통한 주름 개선 효능 평가

허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액의 주름 개선 효능을 측정하기 위하여， 상 기 <실험예 1-1〉의 각 무모 생쥐군의 등피부 부위에 실리콘고무로 모사판을 제작하 여 주름의 형성 정도를 확인하였다.

구체적으로， 모사판 제작은 Repliflo Cartridge it(CuDerm Corporation, USA)를 사용하였고, 등 부분에 얇게 펴 바르고 완전히 말린 다음 디스크를 조심스 럽게 떼어서 모사판을 제작하였다. 모사판 제작은 온도 20-22 ^°C , 습도 40-50%의 항온항습 상태에서 실시하였다.

그 결과， 도 1에서 보는 바와 같이， 자외선 조사군은 정상 대조군에 비해 굵 고 깊게 패인 주름과 잔주름이 유발되었고, 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액 투 여군은 자외선 조사군에 비해 굵은 주름이 완화되었음을 확인할 수 있었다 (도 1).

아을러， 허니부쉬 발효액 투여군은 자외선 처리군에 비해 굵은 주름이 완화 되었을 뿐만 아니라, 허니부쉬 추출물 투여군보다 굵은 주름이 더욱 완화되어 정상 대조군에 가까운 양상을 듸었다.

이를 통해， 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액은 자외선 조사로 인해 생성된 피부 주름에 대해 현저한 개선 효과가 있음을 확인하였다.

<1-4> 주름의 길이 및 깊이 분석을 통한 주름 개선 효능 평가

본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액에 의한 주름 개선 효과를 정량 적으로 확인하기 위하여， 주름의 길이 및 깊이 분석을 수행하였다. <)4i> 구체적으로， 상기 <실험예 1-3>에서 제작된 모사판을 Visioline VL650 장비 를 이용하여 주름의 깊이， 길이를 측정하였다. 특별한 광원이 통과되도록 제작된 표준 카트리지에 모사판을 끼우고 광원을 입사각 35도로 통과시켜 모사판의 두께에 따라 생성되는 그림자 명암 영상을 CCD카메라를 이용하여 파일화한 후 컴퓨터 영상 분석 시스템인 Skin Visiometer VL650 소프트웨어를 이용하여 주름의 깊이와 길이 를 측정하였다. 이후, 얻어진 결과치는 oneᅳ way AN0VA와 Student t-test를 이용하 여 대조군과 실험군간의 유의성을 검정하였다 (ρθ.05).

<142> 그 결과， 도 2에서 보는 바와 같이， 자외선 조사군은 대조군에 비해 주름의 길이가 증가하였고， 이에 반해 허니부쉬 추출물 투여군은 자외선 조사군에 비해 0.89%의 주름 감소 효과가 나타났고， 허니부쉬 발효액 투여군은 자외선 조사군에 비해 주름 길이가 28% 감소했으며， 이는 통계적으로 유의한 결과였다 ^0.05) (도 2).

<143> 또한， 도 3에서 보는 바와 같이, 자외선 조사군은 대조군에 비해 피부 주름 의 깊이가 증가하였고， 이에 반해 허니부쉬 발효액 투여군은 자외선 조사군에 비해 주름 깊이가 17% 감소했으며, 이는 통계적으로 유의한 결과였다 ^0.05) (도 3).

<144> 이러한 결과를 통해， 본 발명의 허니부쉬 추출물 및 이의 발효액의 투여는 자외선 조사에 의해 증가된 피부 주름에 대한 억제 효과가 있으며， 허니부쉬 발효 액의 투여가 허니부쉬 추출물의 투여에 비해 우수한 주름 억제 효능이 있음을 확인 하였다. _,

<145>

<146> <실험예 2>조직 염색에 의한 주름 개선 효능 평가

<147> ^' 본 발명의 허니부쉬 추출물 및 이의 발효액의 주름 개선 효과를 피부의 조직 학적 관찰을 통해 확인하기 위해 무모생쥐의 피부조직을 떼어낸 후， 조직 염색을 수행하였다. ᅳ

<148> 구체적으로， 상기 <실험예 1ᅳ1>의 각 무모생쥐군의 피부조직을 적출하고 10% 중성 포르말린 용액에 고정한 후 통상적인 방법으로 수세， 탈수, 투명, 침투과정을 거친 후， 파라핀으로 포매하고 4 urn 두께로 절편을 만든 다음 Hematoxylin & Eosin (H&E) 염색, Masson's trichome 염색을 실시하였다.

<149> 그 결과， H&E 염색 결과인 도 4에서 보는 바와 같이, 자외선 조사군은 대조 군에 비해서 각질층이 일어났고, 표피 두께 또한 증가된 것을 확인할 수 있었으나， 이에 반해 허니부쉬 추출물 투여군 및 허니부쉬 발효액 투여군은 자외선 조사군에 비해 각질층이 완화되었고， 표피 두께 또한 감소함을 확인할 수 있었다 (도 4). ci50> 또한， Masson's trichome 염색 결과인 도 5에서 보는 바와 같이， 대조군은 각질층이 거의 관찰되지 않았고， 표피층의 두께도 두껍지 않은 것으로 나타났으며， 조직의 대부분은 진피층으로 콜라겐부위가 골고루 분포하고 있는 것을 관찰할 수 있었다. 이에 비해 자외선 조사군은 각질층이 굵게 형성되었고， 콜라겐 섬유가 관 찰되지 않았고， 반면에 허니부쉬 추출물 투여군 및 허니부쉬 발효액 투여군은 콜라 겐 섬유가 자외선조사군에 비해서 증가되었음이 관찰되었다 (도 5).

l51> 아을러， 2가지 조직 염색 결과 모두에서 허니부쉬 발효액 .투여군이 허니부쉬 추출물 투여군에 비해 각질층 완화, 표피 두께 감소 효과 및 콜라겐 섬유의 증가에 효과적임을 확인하였다.

<152> 이를 통해, 조직염색의 결과에서도 본 발명의 허니부쉬 추출물 및 허니부쉬 발효액이 피부 주름 개선에 효과적임을 알 수 있었고， 또한 허니부쉬 추출물에 비 해 허니부쉬 발효액이 더욱 효과적임을 확인하였다.

<153>

<154> <실험예 3>표피 두께 변화 변화에 의한 주름 개선 효능 평가

<155> 본 발명의 허니부쉬 추출물 및 이의 발효액의 주름 개선 효과를 표피 두께 변화 측정을 통해 확인하였다.

<156> 구체적으로， 표피 두께는 상기 <실험예 2〉의 H&E 염색을 실시한 조직의 케라 틴 층 (keratin layer)에서 표피 기저 막까지의 두께를 현미경에 장착된 자를 이용 하여 측정하였다. 이후 얻어진 결과는 one-way AN0VA와 Student t-test를 이용하여 대조군과 실험군간의 유의성을 검정하였다 (ρθ.05).

<157> 그 결과， 도 6에서 보는 바와 같이, 자외선 조사군은 대조군에 비해 표피 두 께가 증가되었고， 이에 반해， 허니부쉬 추출물 및 허니부쉬 발효액 투여군의 표피 두께는 자외선 조사군에 비해 각각 40% 및 56%로 현저히 감소하였음을 관찰하였다 ( 도 6).

<158> 또한， 허니부쉬 발효액 투여군은 허니부쉬 추출물 투여군에 비해서는 유의성 있는 주름 억제 효능을 나타내었다 (p < 0.05).

<159> 따라서， 본 발명의 허니부쉬 추출물 및 이의 발효액은 표피 두께를 현저히 감소시키므로， 피부 주름 개선에 효과적임을 알 수 있었고， 또한 허니부쉬 추출물 에 비해 허니부쉬 발효액이 더욱 효과적임을 확인하였다.

<160>

<161> <제조예 1>허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액을 유효성분으로 함유하는 화 장료의 제조 <162> <1-1>유연 화장수의 제조

<163> 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액을 유효성분으로 함유하는 유연 화장수는 하기 [표 2]와 같이 제조하였다 .

<164> 【표 2】

165> <1-2> 영양 크림의 제조

166> 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액을 유효성분으로 함유한 영양크 림은 하기 [표 3]의 조성과 같이 제조하였다.

!67> 【표 3】

<168> <1-3> 에센스의 제조

<16 > 【표 4】

<170> 상기 [표 4]의 조성비에 따라, 정제수， 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액， 메틸파라벤, 하이알루론산 추출물， 글리세린을 계량하여 80±2^°C에서 흔합하여， 수 상 (water phase)을 완성하였다. 또한， 프로필파라벤， 레시틴, 마카데이마 넛 오일 을 계량하여 80±2^°C에서 흔합하여 유상 (oil phase)을 완성하였다.

<i7i> 다음으로, 상기 유상을 수상에 첨가하면서 두 개의 상 (phase)이 서로 섞이도 록 하여 에멀젼 형태의 흔합물을 만들었고, 상기 흔합물에 향료를 첨가하고 35 ^°C 까지 넁각시켜 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액을 함유하는 에센스를 제조하였 다.

<172>

<173> <제조예 2> 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액을 유효성분으로 함유하는 약 제의 제조

<174> <2-1> 시럽제의 제조

<175> 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액을 유효성분으로 함유하는 시럽 제는 하기 [표 5]의 조성과 같이 제조하였다.

<176> 【표 5】

<177> <2-2> 정제의 제조

<178> 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액을 유효성분으로 함유하는 정제 는 하기 [표 6]의 조성과 같이 제조하였다.

<179> 【표 6】

<180> 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액 250 중량부， 락토오스 175.9 중량부， 감자전분 180 중량부 및 콜로이드성 규산 32 중량부와 흔합하였다. 상기 흔합물에 10% 젤라틴 용액올 첨가시킨 후, 분쇄하여 14 매쉬체를 통과시켰다. 이 것을 건조하고 여기에 감자전분 160 중량부， 활석 50 중량부 및 스테아린산 마그네 슘 5 중량부를 첨가하여 얻은 흔합물을 정제로 제조하였다.

<181> <182> <제조예 3> 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액을 유효성분으로 함유하는 건 강식품의 제조

<183> 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액을 유효성분으로 함유하는 식품 들을 다음과 같이 제조하였다.

<184> <3-1> 밀가루 식품의 제조

<185> 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액 0.5~5.0 중량부를 밀가루에 첨 가하고, 이 흔합물을 이용하여 빵， 케이크, 쿠키， 크래커 및 면류를 제조하였다.

<186>

<iS7> <3-2> 스프 및 육즙 (gravies)의 제조

=>88> 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액 0.1~5.0 중량부를 스프 및 육 즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품， 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.

:189>

：190> <3-3> 그라운드 비프 (ground beef)의 제조

: M> 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액 10 증량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.

192>

193> <3-4>유제품 (dairy products)의 제조

'94> 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액 5~10 증량부를 우유에 첨가하 고， 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였 다.

195>

196> <3-5> 선식의 제조

97> 현미, 보리, 찹쌀， 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전 한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

98> 검정콩， 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 찌서 건조시킨 것을 배전한 후 분 쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

99> 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액을 진공 농축기에서 감압농축하 고， 분무， 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하 여 건조분말을 얻었다.상기에서 제조한 곡물류， 종실류， 및 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.

)> 곡물류 (현미 30 중량부， 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),

M> 종실류 (들깨 7 중량부， 검정콩 8 중량부， 검정깨 7 중량부)， ^' <202> 허 니부쉬 추출물 또는 이의 발효액 (3 중량부)，

<203> 영지 (0.5 중량부)，

<204> 지황 (0.5 중량부)

<205>

<206> <3-6> 초콜릿 (chocolate)의 제조

<207> 카카오버터 30.0 중량부

<208> 전지분유 30.0 중량부

<209> 분당 41.85 증량부

<210> 레시 틴 0.45 중량부

<21 1 > 향료 0. 1 중량부

<212> 허 니부쉬 추출물 또는 이의 발효액 0.6 중량부

<213> 상기와 같은 제조비로 흔합하여， 허 니부쉬 추출물 또는 이 의 발효액을 하 초콜릿을 제조하였다 .

<214>

<215> <3-7> 카라멜의 제조

<216> 물엿 37.43 중량부

<21 7> 정 백당 5.33 중량부

<218> 식물성 유지 9.35 중량부

<219> 유화제 0.018 중량부

<220> 소 /금 0.056 중량부

<221 > 탈지분유 28.07 중량부

<222> 가당연유 3.74 중량부

<223> 생크림 5.61 중량부

<224> 항료 0.07 중량부

<225> 허 니부쉬 추출물 또는 이의 발효액 10.326 중량부

<226> 상기와 같은 제조비로 흔합하여， 허니부쉬 추출물 또는 이 의 발효액을 카라멜을 제조하였다 .

<227>

<228> <3-8> 캔디의 제조

<229> 설탕 50.0 중량부

<230> 물엿 33.0 중량부

<231 > 구연산 1.0 중량부 <232> 향료 0.2 중량부

<233> 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액 0.4 중량부

<234> 물 15.4 중량부

<235> 상기와 같은 제조비로 흔합하여， 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액을 함유 하 캔디를 제조하였다.

<236>

<237> <3-9> 빵의 제조

<238> 계란 2 개

<239> 설탕 50 중량부

<240> 33.5 중량부

<241> 옥수수녹말 . 6.6 중량부

<242> 베이킹파우더 3.3 중량부

<243> 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액 6.6 중량부

<244> 상기와 같은 성분들을 균일하게 흔합하고 반죽하여 오븐에서 적당히 익힘으 로써 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액을 함유하는 빵을 제조하였다.

<245>

<246> <제조예 4> 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액을 유효성분으로 함유하는 음 료의 제조

<247> <4-1> 건강음료의 제조

<248> 액상과당 (0.5%), 을리고당 (2%), 설탕 (2%)， 식염 (0.5%), 물 (75%)과 같은 부재 료와 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액 5 g을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.

<249>

<250> <4-2> 야채 주스의 제조

<251> 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의 발효액 5 g을 토마토 또는 당근 주스

1,000 m£에 가하여 야채 주스를 제조하였다.

<252>

<253> <4-3> 과일 주스의 제조

<254> 본 발명의 허니부쉬 추출물 또는 이의

g을 사과 또는 포도 주스

1,000 에 가하여 과일 주스를 제조하였다.

<255>

【산업상 이용 가능성】 상기에서 보는 바와 같이， 본 발명의 허니부쉬 ^출^ {Cyclopia intermedia, honeybush) , 이의 분획물 또는 이의 발효액은 자외선 조사에 따른 피 부 주름 형성 억제 효과를 나타내므로， 피부 주름 예방 또는 개선올 위한 화장품， 피부 외용제， 약제 또는.건강식품의 개발 및 제품 생산에 유용하게 이용될 수 있 다.

Claims

【청구의 범위】

【청구항 1】

허니부쉬 (0^· /op/a intermedia, honeybus ) 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.

【청구항 2】

거 1 1항에 있어서, 상기 허니부쉬 추출물은 물, 내지 C₂의 저급 알코올， 메탄을， 핵산, 아세톤， 에틸아세테이트， 포화노말부탄을， 클 ^로포름， 메틸렌클로 라이드 및 이들의 흔합용매로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나로 추출한 것을 특징으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.

【청구항 3]

제 2항에 있어서, 상기 저급 알코을은 에탄올 또는 메탄을인 것을 특징으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.

【청구항 4】

제 1항에 있어서， 상기 발효액은

1) 동물성 밀크에 유산균을 접종하는 단계;

2) 단계 1)의 접종액에 탄소원 및 허니부쉬 추출물 또는 이의 분획물을 흔합 하는 단계 ; 및

3) 단계 2)의 흔합물을 발효시키는 단계로 제^'조되는 것을 특징으로 하는 피 부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.

【청구항 5】

제 4항에 있어서， 상기 단계 1)의 유산균은 스트렙토코커스 써모필러스

{Streptococcus thermophi lusY^ 것을 특징으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.

【청구항 6]

제 4항에 있어서， 상기 단계 1)의 유산균은 3 X10⁴ 내지 3 X10⁶ CFU/ml 접 종되는 것을 특징으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.

【청구항 7】

제 4항에 있어서, 상기 단계 2)의 허니羊쉬 추출물은 전체 접종액 기준으로 3 내지 10 %(v/v) 첨가하는 것을 특징으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 화장 료 조성물.

【청구항 8】

제 4항에 있어서， 상기 단계 3)의 발효는 35 내지 38 ^°C의 배양기에서 1 내 지 3일 동안 발효시키는 것을 특징으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.

【청구항 9】

제 1항에 있어서, 상기 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 ^'이의 발효액은 다른 주름 개선 성분을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.

【청구항 10]

제 9항에 있어서， 상기 다른 주름 개선 성분은 레티놀， 레티닐팔미테이트， 아데노신， 폴리에록실레이티드레틴마이드， 콜라겐， TGF 및 동물태반 유래의 단백질 로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.

【청구항 11】

허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 예방 또는 개선용 피부 외용제.

【청구항 12】

허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 예방 또는 개선용 약학적 조성물.

【청구항 13】

허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 예방 또는 개선용 건강식품. 28

【청구항 14】

제 13항에 있어서， 상기 허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액은 다른 주름 개선 성분을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 건강식품.

【청구항 15】

제 14항에 있어서， 상기 다른 주름 개선 성분은 클로텔라， 스피루리나， N-아 세틸글루코사민 및 알로에겔로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징 으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 건강식품.

【청구항 16】

허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 피부 주름 예방 방법 .

【청구항 17】

허니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액을 피부 주름이 있는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 피부 주름 개선 방법.

【청구항 18】

피부 주름 예방 또는 개선을 위한 화장료 조성물의 제조에 사용하기 위한 허 니부쉬 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효액의 용도.

【청구항 19】

피부 주름 예방 또는 개선을 위한 피부 외용제의 제조에 사용하기 위한 허니 부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액의 용도.

【청구항 20】

피부 주름 예방또는 개선을 위한 약학적 조성물의 제조에 사용하기 위한 허 니부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액의 용도.

【청구항 21】 피부 주름 예방 또는 개선을 위한 건강식품용 조성물의 제조에 사용하기 위¬부쉬 추출물， 이의 분획물 또는 이의 발효액의 용도 .