JP3182679B2 - 非還元性オリゴ糖とその製造方法並びに用途 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規糖質とその製造方
法並びに用途、更に詳細には、一般式α−Ｄ−オリゴグ
ルコシル α−Ｄ−オリゴグルコシドで表される非還元
性オリゴ糖とその製造方法並びに用途に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来知られている非還元性オリゴ糖は、
蔗糖、エルロース、ラフィノース、メレチトース、ケス
トースなどのグルコースとフルクトースとがα−１，β
−２結合したタイプ、すなわち分子内に蔗糖構造を含む
オリゴ糖、マルチトール、マルトトリイトール、ラクチ
トールなどの糖アルコール、さらにグルコース同士がα
−１，α−１結合したトレハロースなどが知られてい
る。しかしながら、分子内に蔗糖構造を含むオリゴ糖
は、その蔗糖構造の安定性が悪く、特に酸性溶液中では
容易に分解してしまう。そのため食品その他の加工には
多くの制限を受けることとなる。また糖アルコールは高
圧下で水素添加して製造されるものであり、安定性に優
れているが人の体内で消化・吸収されにくく、大量摂取
した場合、下痢を誘発する欠点を持っている。またトレ
ハロースはそれ自身安定であり、本発明者等が先に、人
の体内で速やかに消化・吸収されエネルギーとなること
を見い出している。しかしながら、トレハロースは分子
量が比較的小さく粘性に劣り、加えて、結晶性が良過ぎ
るため、高濃度の水溶液として利用した場合、保存中に
結晶が析出し易く、食品工業などへの利用に制限を受け
ることが判明した。そこで安定性に優れ、より高分子で
適度な粘性を有し、消化・吸収性も良く、非結晶性乃至
難結晶性又は溶解性良好な結晶性の非還元性オリゴ糖の
開発が望まれている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】分子内にトレハロース
構造を有する非結晶性乃至難結晶性又は溶解性良好な結
晶性の新規非還元性オリゴ糖とその製造方法並びに用途
を提供する。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者等は、新規非還
元性オリゴ糖とその製造方法を確立するため、トレハロ
ースを構成する両グルコシル基へ新たに糖を結合させる
ことに着目し、鋭意研究してきた。その結果、トレハロ
ースとα−グルコシル糖質とを含有する水溶液、又は、
本発明者等が特願平４−３６２１３１号明細書（特開平
７−１４３８７６号公報）で開示した末端にトレハロー
ス構造を有する非還元性糖質を含有する水溶液に糖転移
酵素を作用させることにより、目的を達成しうることを
見いだし、本発明を完成した。即ち、本発明は、トレハ
ロースの両グルコシル基へ新たにグルコシル基がそれぞ
れ１乃至数個結合した一般式α−Ｄ−オリゴグルコシル
α−Ｄ−オリゴグルコシドで表される新規な非還元性オ
リゴ糖（本明細書では、単に「α−Ｄ−オリゴグルコシ
ルα−Ｄ−オリゴグルコシド」と称することがある。）
とその製造方法を確立するものであり、併せて、この新
規非還元性オリゴ糖が安定性に優れ、適度な粘性を有
し、非結晶性乃至難結晶性又は溶解性良好な結晶性で、
無味乃至低甘味であり、経口摂取してカロリー源として
利用されるなどの特性を有し、これらの特性を利用して
その用途を確立するものである。

【０００５】本発明の非還元性オリゴ糖は、化学的に合
成することも可能であるが、工業的には、生化学反応、
とりわけ、トレハロースとα−グルコシル糖質とを含有
する水溶液、又は末端にトレハロース構造を有する非還
元性糖質を含有する水溶液に糖転移酵素を作用させるこ
とにより生成させるのが有利である。トレハロースとし
ては、その含量ができるだけ高いものが適しており、一
般的には、固形物当たり５ｗ／ｗ％以上（以下、本明細
書に於いては特にことわらないかぎり、ｗ／ｗ％を％で
示す。）の糖質、望ましくは、２０％以上の糖質、更に
好ましくは、５０％以上の高含有糖質が好適である。そ
の製造方法としては、還元性を示す澱粉部分分解物（本
明細書では、還元性澱粉部分分解物と呼ぶこともあ
る。）から酵素的に調製する方法、例えば、本発明者等
が、特願平４−３６２１３１号明細書（特開平７−１４
３８７６号公報）、特願平５−１５６３３８号明細書
（特開平７−２１３２８３号公報）、特願平５−１９９
９７１号明細書（特開平７−１７０９７７号公報）など
で開示した澱粉部分分解物から酵素反応により製造する
方法が容易に大量生産できるので、工業的生産方法とし
てきわめて有利である。必要ならば、市販の高純度トレ
ハロースを用いることも随意である。

【０００６】α−グルコシル糖質としては、例えば、澱
粉、糊化澱粉、液化澱粉、可溶性澱粉、アミロース、ア
ミロペクチン、還元性澱粉部分分解物、澱粉糖転移物、
シクロデキストリン、デキストリン、マルトオリゴ糖、
蔗糖などのα−グルコシド結合を有する糖質が適宜使用
される。

【０００７】末端にトレハロース構造を有する非還元性
糖質としては、本発明者等が、特願平４−３６２１３１
号明細書（特開平７−１４３８７６号公報）で開示した
ように、還元性澱粉部分分解物に重合度３以上の還元性
澱粉部分分解物から末端にトレハロース構造を有する非
還元性糖質を生成する酵素（本明細書では、「非還元性
糖質生成酵素」と略称することがある。）を作用させて
生成されるものが有利に利用できる。本発明に用いる非
還元性糖質生成酵素としては、例えば、本発明者等が、
先に、特願平５−３４９２１６号明細書（特開平７−１
４３８７６号公報）で記載したように、既に、茨城県つ
くば市東１丁目１番３号にある通商産業省工業技術院生
命工学工業技術研究所、特許微生物寄託センターに寄託
しているリゾビウム・スピーシーズ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕ
ｍ ｓｐ．）Ｍ−１１『受託番号、微工研条寄第４１３
０号（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１３０）』やアルスロバクタ
ー・スピーシーズ（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｓ
ｐ．）Ｑ３６『受託番号、ＦＥＲＭ ＢＰ−４３１６』
などの微生物、更には、公知の、例えば、ブレビバクテ
リウム・ヘロボルム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｈｅｌｏｖｏｌｕｍ）ＡＴＣＣ１１８２２、フラボバク
テリウム・アクアティレ（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ ａｑｕａｔｉｌｅ）ＩＦＯ３７７２、ミクロコッカ
ス・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｕｔｅｕ
ｓ）ＩＦＯ３０６４、ミクロコッカス・ロゼウス（Ｍｉ
ｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｒｏｓｅｕｓ）ＡＴＣＣ１８６、
クルトバクテリウム・シトレウム（Ｃｕｒｔｏｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ ｃｉｔｒｅｕｍ）ＩＦＯ１５２３１、マイ
コバクテリウム・スメグマチス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍｓｍｅｇｍａｔｉｓ）ＡＴＣＣ１９４２０、テラ
バクター・ツメスセンス（Ｔｅｒｒａｂａｃｔｅｒ ｔ
ｕｍｅｓｃｅｎｓ）ＩＦＯ１２９６０などの非還元性糖
質生成酵素産生能を有する微生物を栄養培地に培養し、
この培養物を採取し利用することもできるが、必要なら
ば、公知の方法で適宜精製して利用してもよい。このよ
うにして得られる非還元性糖質生成酵素は、グルコース
重合度３以上から選ばれる１種又は２種以上の還元性澱
粉部分分解物から末端にトレハロース構造を有する非還
元性糖質を生成する作用を有する。

【０００８】末端にトレハロース構造を有する非還元性
糖質を製造するには、通常、澱粉、糊化澱粉、液化澱
粉、溶性澱粉、アミロース、アミロペクチン、デキスト
リンなどのα−グルコシル糖質に、例えば、α−アミラ
ーゼ又はα−アミラーゼとともに澱粉枝切酵素を作用さ
せて得られる還元性澱粉部分分解物に、前述の方法で調
製される非還元性糖質生成酵素を作用させて製造するの
が好都合である。

【０００９】糖転移酵素としては、例えば、シクロマル
トデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ（ＥＣ
２．４．１．１９）の使用が望ましいが、必要に応じて
α−アミラーゼ（ＥＣ３．２．１．１）、α−グルコシ
ダーゼ（ＥＣ３．２．１．２０）なども使用できる。シ
クロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ
を使用する場合には、公知のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ）属、クレブシーラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属など
に属する微生物由来の酵素が適宜使用できる。α−アミ
ラーゼとしては、例えば、バチルス属に属する微生物由
来の酵素、とりわけ糖化型α−アミラーゼが使用され
る。α−グルコシダーゼとしては、例えば、公知のペニ
シリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、ムコール（Ｍ
ｕｃｏｒ）属などに属する微生物又はこれら微生物由来
の酵素又はイネ種子、小麦種子などの植物由来の酵素が
使用される。

【００１０】糖転移反応は、本発明の非還元性オリゴ糖
が生成する方法であればよく、使用する酵素によって適
宜選ばれる。例えば、シクロマルトデキストリン・グル
カノトランスフェラーゼ又はα−アミラーゼを使用する
場合には、トレハロースと液化澱粉、還元性澱粉部分分
解物などのα−グルコシル糖質とを含有する水溶液に作
用させて、トレハロースの両グルコシル基へα−グルコ
シル糖質からα−グルコシル基を１個又は２個以上転移
し、本発明の非還元性オリゴ糖を生成させればよい。こ
の際、トレハロースに対するα−グルコシル糖質の重量
比は、通常、０．１乃至１００倍、望ましくは、０．２
乃至２０倍が好適である。また、末端にトレハロース構
造を有する非還元性糖質にシクロマルトデキストリン・
グルカノトランスフェラーゼを作用させてα−Ｄ−オリ
ゴグルコシル α−Ｄ−オリゴグルコシドを生成するこ
とも有利に実施できる。α−グルコシダーゼを使用する
場合には、トレハロースとα−グルコシル糖質、例えば
デキストリン、マルトオリゴ糖、蔗糖などの比較的低分
子量のα−グルコシル糖質とを含有する水溶液に作用さ
せて、トレハロースの両グルコシル基へα−グルコシル
糖質からα−グルコシル基を転移し、本発明の非還元性
オリゴ糖を生成させればよい。この際、トレハロースに
対するα−グルコシル糖質の重量比は、通常、０．１乃
至１００倍、望ましくは、０．２乃至２０倍が好適であ
る。

【００１１】これら酵素反応は、通常、温度２０乃至８
０℃、ｐＨ３乃至９から選ばれる条件で反応させればよ
く、更に酵素又はこれを含む微生物を、例えば、担体結
合法、架橋法、包括法などの公知方法により固定化して
連続反応させることも回分反応で繰り返し利用すること
も随意である。また、これら糖転移反応のうち、より安
価なα−グルコシル糖質を糖供与体にし得ること、α−
Ｄ−オリゴグルコシルα−Ｄ−オリゴグルコシドの生成
率が高いことなどから、一般的には、シクロマルトデキ
ストリン・グルカノトランスフェラーゼの使用が好都合
であり、とりわけ、より高温で作用させることのできる
バチルス・ステアロサーモフィラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）由来の酵素
が、反応液中のα−グルコシル糖質の老化を抑制し、微
生物の汚染を抑制でき、反応を容易に進めることができ
るので工業的に極めて有利である。この場合には、通
常、トレハロースと、例えば糊化澱粉、液化澱粉、ＤＥ
１乃至５０程度の還元性澱粉部分分解物、アミロデキス
トリン、シクロデキストリンなどのα−グルコシル糖質
とを含有する水溶液又は末端にトレハロース構造を有す
る非還元性オリゴ糖を含有する水溶液にシクロマルトデ
キストリン・グルカノトランスフェラーゼをα−グルコ
シル糖質ｇ当たり０．１単位以上、望ましくは、１乃至
２５単位程度を１乃至１００時間、望ましくは、４乃至
７０時間程度作用させると、トレハロースの両グルコシ
ル基へα−グルコシル基がそれぞれ１乃至数個結合した
非還元性オリゴ糖、例えばマルトシルマルトシド、マル
トトリオシルマルトシド、マルトトリオシルマルトトリ
オシド、マルトテトラオシルマルトトリオシド、マルト
テトラオシルマルトテトラオシド、マルトペンタオシル
マルトテトラオシド、マルトペンタオシルマルトペンタ
オシドなどのα−Ｄ−オリゴグルコシル α−Ｄ−オリ
ゴグルコシド（Ｇ_m−Ｔ−Ｇ_n：但し、Ｇはグルコース残
基を意味し、ｍ、ｎは１乃至８から選ばれる整数を意味
し、Ｔはα，α−トレハロースを意味する。）が生成
し、これを採取すれば良い。必要ならば、更に、これに
加水分解酵素、望ましくは、β−アミラーゼ（ＥＣ
３．２．１．２）、又はβ−アミラーゼとともにプルラ
ナーゼ、イソアミラーゼなどの澱粉枝切酵素を作用させ
ると、非還元性糖質として主としてマルトシルマルトシ
ド、マルトトリオシルマルトシド及びマルトトリオシル
マルトトリオシドが蓄積されることとなり、このマルト
シルマルトシド、マルトトリオシルマルトシド及びマル
トトリオシルマルトトリオシドを採取することもでき
る。

【００１２】以上述べたような、糖転移反応、又は糖転
移反応と加水分解反応によって生成される４糖類以上の
α−Ｄ−オリゴグルコシル α−Ｄ−オリゴグルコシド
含有溶液は、通常、固形物当たり、それを５乃至６０％
程度含有しており、これを濾過、精製して液状で利用す
ることも、また、濃縮してシラップ状で利用すること
も、更に、噴霧乾燥、真空乾燥などで乾燥して固状で利
用することも随意である。

【００１３】一般的には、比較的低分子のα−Ｄ−オリ
ゴグルコシル α−Ｄ−オリゴグルコシドの特徴を生か
すため、糖転移反応後、加水分解して得られる４糖類、
５糖類及び６糖類含有水溶液を利用するか、更に分離、
精製して、４糖類、５糖類及び６糖類高含有物にして利
用される。その方法としては、例えば、酵母醗酵法、膜
濾過法、分別沈澱法、アルカリ処理法、カラムクロマト
グラフィーなどにより夾雑糖類を分離除去する方法が適
宜採用できる。とりわけ、特開昭５８−２３７９９号公
報、特開昭５９−１４８７９４号公報などに開示されて
いる塩型強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマ
トグラフィーにより、夾雑糖類を除去して、例えば、４
糖類及び５糖類非還元性オリゴ糖高含有画分、又は４糖
類、５糖類及び６糖類非還元性オリゴ糖高含有画分を採
取する方法が有利に実施できる。この際、固定床方式、
移動床方式、擬似移動床方式のいずれの方式を採用する
ことも随意である。また必要ならば、これら４糖類、５
糖類又は６糖類をそれぞれに分離して採取することも随
意である。

【００１４】本発明のα−Ｄ−オリゴグルコシル α−
Ｄ−オリゴグルコシドは、非還元性オリゴ糖で極めて安
定であり、また、無味又は低甘味であり、適度な粘性を
有し、非結晶性乃至難結晶性又は溶解性良好な結晶性で
ある。また経口摂取により消化酵素の作用を受け、体内
で吸収されるのでカロリー源としても有効である。更
に、虫歯誘発菌などによって、醗酵されにくいことよ
り、虫歯を起しにくい低甘味糖質材料としても利用でき
る。また、化学的に安定であり、糖類と褐変反応を起し
易いアミノ酸、オリゴペプチドなどと共用できる。更に
は、活性の失われやすい生理活性物質などを安定化し得
ると共に、浸透圧調節性、賦形性、照り付与性、保湿
性、他の糖の晶出防止性、難醗酵性、澱粉の老化防止性
などの性質を具備している。

【００１５】α−Ｄ−オリゴグルコシル α−Ｄ−オリ
ゴグルコシドの持つこれら諸性質は、食品、嗜好物、飼
料、餌料などの飲食物、更には、化粧品、医薬品、成形
物など各種組成物の製造に有利に利用できる。本発明の
α−Ｄ−オリゴグルコシルα−Ｄ−オリゴグルコシドの
比較的低分子のものは、甘味度が低いものの、そのまま
で甘味付けのための調味料として使用することができ
る。必要ならば、例えば、粉飴、ブドウ糖、マルトー
ス、蔗糖、異性化糖、蜂蜜、メープルシュガー、ソルビ
トール、ジヒドロカルコン、ステビオシド、α−グリコ
シルステビオシド、レバウディオシド、グリチルリチ
ン、Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエ
ステル、サッカリン、グリシン、アラニンなどのような
他の甘味料の１種又は２種以上の適量と混合して使用し
てもよく、また必要ならば、デキストリン、澱粉、乳糖
などのような増量剤と混合して使用することもできる。

【００１６】また、α−Ｄ−オリゴグルコシル α−Ｄ
−オリゴグルコシド粉末品は、実質的に難吸湿性の粉末
で、耐熱性が大きく、安定性も良いので、増量剤、賦形
剤、粉末基剤などとして、そのままで、又は必要に応じ
て、他の増量剤、賦形剤、結合剤などと混合して、顆
粒、球状、短棒状、板状、立方体、錠剤など各種形状に
成形して使用することも随意である。また、本粉末品
は、小麦粉、コーングリッツ、澱粉などの粉類の一部又
は全量に置き換えて、例えば、製菓材料、製パン材料な
どに利用することも有利に実施できる。

【００１７】また、α−Ｄ−オリゴグルコシル α−Ｄ
−オリゴグルコシドの呈味は、酸味、塩から味、渋味、
旨味、苦味などの他の呈味を有する各種物質とよく調和
し、耐酸性、耐熱性も大きいので、一般の飲食物の甘味
付け、呈味改良に、また品質改良などに有利に利用でき
る。例えば、醤油、粉末醤油、味噌、粉末味噌、もろ
み、ひしお、ふりかけ、マヨネーズ、ドレッシング、食
酢、三杯酢、粉末すし酢、中華の素、天つゆ、麺つゆ、
ソース、ケチャップ、焼肉のタレ、カレールウ、シチュ
ーの素、スープの素、ダシの素、複合調味料、みりん、
新みりん、テーブルシュガー、コーヒーシュガー、など
各種調味料として有利に使用できる。さらに、例えば、
せんべい、あられ、おこし、餅類、まんじゅう、ういろ
う、あん類、羊羮、水羊羮、錦玉、ゼリー、カステラ、
飴玉などの各種和菓子、パン、ビスケット、クラッカ
ー、クッキー、パイ、プリン、バタークリーム、カスタ
ードクリーム、シュークリーム、ワッフル、スポンジケ
ーキ、ドーナツ、チョコレート、チューインガム、キャ
ラメル、キャンデーなどの各種洋菓子、アイスクリー
ム、シャーベットなどの氷菓、果実のシロップ漬、氷蜜
などのシロップ類、フラワーペースト、ピーナッツペー
スト、フルーツペースト、スプレッドなどのペースト
類、ジャム、マーマレード、シロップ漬、糖果などの果
実、野菜の加工食品類、福神漬、べったら漬、千枚漬、
らっきょう漬などの漬物類、たくあん漬の素、白菜漬の
素などの漬物の素類、ハム、ソーセージなどの畜肉製品
類、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、かまぼこ、ちくわ、天
ぷらなどの魚肉製品、ウニ、イカの塩辛、酢コンブ、さ
きするめ、ふぐみりん干しなどの各種珍味類、のり、山
菜、するめ、小魚、貝などで製造されるつくだ煮類、煮
豆、ポテトサラダ、こんぶ巻などのそう菜食品、乳製
品、魚肉、畜肉、果実、野菜のビン詰、缶詰類、合成
酒、洋酒などの酒類、コーヒー、ココア、ジュース、炭
酸飲料、乳酸飲料、乳酸菌飲料などの清涼飲料水、プリ
ンミックス、ホットケーキミックス、即席しるこ、即席
スープなどの即席食品、更には、離乳食、治療食、ドリ
ンク剤などの各種飲食物への甘味付けに、呈味改良に、
また、品質改良などに有利に利用できる。

【００１８】また、家畜、家禽、その他蜂、蚕、魚など
の飼育動物のために飼料、餌料などの嗜好性を向上させ
る目的で使用することもできる。その他、タバコ、練歯
磨、口紅、リップクリーム、内服薬、トローチ、錠剤、
肝油ドロップ、口中清涼剤、口中香剤、うがい薬など各
種固形状、ペースト状、液状などで嗜好物、化粧品、医
薬品などの口中使用物への甘味剤として、又は呈味改良
剤、矯味剤として、更には品質改良剤として有利に利用
できる。

【００１９】また、α−Ｄ−オリゴグルコシル α−Ｄ
−オリゴグルコシドは、例えば、石鹸、スキンクリー
ム、ボディシャンプー、ヘアクリーム、リップクリー
ム、美肌剤、育毛剤などへの安定剤、浸透圧調節剤、賦
形剤、保湿調節剤、粘度調節剤、品質改良剤などとして
化粧品製造に有利に利用できる。

【００２０】更に、生理活性物質、例えば、インターフ
ェロン−α、−β、−γ、ツモア・ネクロシス・ファク
ター−α、−β、マクロファージ遊走阻止因子、コロニ
ー刺激因子、トランスファー・ファクター、インターロ
イキン２などのサイトカイン、インシュリン、成長ホル
モン、プロラクチン、エリトロポエチン、卵胞刺激ホル
モンなどのホルモン、ＢＣＧワクチン、日本脳炎ワクチ
ン、はしかワクチン、ポリオ生ワクチン、痘苗、破傷風
菌トキソイド、ハブ抗毒素、ヒト免疫グロブリンなどの
ワクチン、ペニシリン、エリスロマイシン、クロラムフ
ェニコール、テトラサイクリン、ストレプトマイシン、
硫酸カナマイシンなどの抗生物質、チアミン、リボフラ
ビン、Ｌ−アスコルビン酸、肝油、カロチノイド、エル
ゴステロール、トコフェロールなどのビタミン、リパー
ゼ、エステラーゼ、ウロキナーゼ、プロテアーゼ、グル
カナーゼなどの酵素、薬用人参エキス、スッポンエキ
ス、クロレラエキス、プロポリス、ローヤルゼリーなど
のエキス類、ウイルス、乳酸菌、ビフィズス菌、酵母な
どの生菌類などの有効成分、活性の安定剤として、更に
は、浸透圧調節剤、賦形剤、経管栄養剤、シロップ剤な
どとして医薬品製造に有利に利用できる。以上述べたよ
うな飲食物、化粧品、医薬品、成形物など各種組成物に
本発明のα−Ｄ−オリゴグルコシル α−Ｄ−オリゴグ
ルコシドを含有せしめる方法は、その組成物が完成する
までの工程に含有せしめればよく、例えば、混和、混
捏、溶解、融解、浸漬、浸透、散布、塗布、被覆、噴
霧、注入、固化など公知の方法が適宜選ばれる。その含
有せしめる量は、組成物によっても異なるが、一般的に
は、α−Ｄ−オリゴグルコシル α−Ｄ−オリゴグルコ
シドとして、０．１％以上、望ましくは０．５％以上の
量が好適である。このようにして得られる組成物は、経
口的又は非経口的に利用される飲食物、化粧品、医薬品
のみならず、それ以外にも、例えば、生活用品、農林水
産用品、化学工業用品など広範な用途を有する。

【００２１】次に、実験により本発明を更に詳細に説明
する。

【００２２】まず、実験Ａで、非還元性糖質生成酵素の
一例として、リゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１１から
の酵素の生産、精製及び性質について説明し、その後、
該酵素を用いた還元性澱粉部分分解物から末端にトレハ
ロース構造を有する非還元性糖質及びトレハロースの調
製例について説明する。次に、実験Ｂで、本発明のα−
Ｄ−オリゴグルコシル α−Ｄ−オリゴグルコシドの調
製例とその理化学的性質について述べる。

【００２３】

【実験Ａ−１ リゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１１か
らの非還元性糖質生成酵素の生産】マルトース２．０ｗ
／ｖ％、ペプトン０．５ｗ／ｖ％、酵母エキス０．１ｗ
／ｖ％、リン酸二ナトリウム０．１ｗ／ｖ％、リン酸一
カリウム０．１ｗ／ｖ％及び水からなる液体培地をｐＨ
７．０に調整した。５００ｍｌ容三角フラスコにこの培
地を約１００ｍｌずつ入れ、オートクレーブで１２０℃
で２０分間滅菌し、冷却して、リゾビウム・スピーシー
ズ Ｍ−１１（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１３０）を接種し、
２７℃、１３０ｒｐｍで２４時間培養したものを種培養
液とした。

【００２４】容量３０ｌのファーメンターに種培養の場
合と同組成の培地約２０ｌを入れて滅菌、冷却して温度
３０℃とした後、種培養液１ｖ／ｖ％を接種し、温度３
０℃、ｐＨ６．０乃至８．０に保ちつつ、約２４時間通
気撹拌培養した。培養液の本酵素活性は約１．５単位／
ｍｌであった。培養液の一部を採り遠心分離して菌体と
培養液上清とに分離し、更に菌体を５０ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ７．０）で元の培養液と同じ液量の懸濁液とし
た後、菌体懸濁液と培養液上清の酵素活性を測定したと
ころ、菌体懸濁液には約０．６単位／ｍｌの酵素活性
が、また、培養液上清には約０．９単位／ｍｌの酵素活
性が認められた。

【００２５】非還元性糖質精製酵素の活性測定方法は、
基質としてマルトペンタオース１．２５ｗ／ｖ％（５０
ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７．０）４ｍｌに酵素液を１ｍ
ｌ加え４０℃で６０分間反応させた後、１００℃で１０
分間加熱して反応を停止させ、その反応液を正確に脱イ
オン水で１０倍に希釈し、その希釈液の還元力をソモギ
ー・ネルソン法にて測定する。対照として、あらかじめ
１００℃で１０分間加熱させることにより失活させた酵
素液を用いて同様に測定する。上記の測定方法を用い
て、１分間に１μｍｏｌｅのマルトペンタオースに相当
する還元力を減少させる酵素量を１単位と定義した。

【００２６】

【実験Ａ−２ 酵素の精製】実験Ａ−１で得られた培養
液約１８ｌを超高圧菌体破砕装置ミニラボ（大日本製薬
株式会社製）で処理し、含まれる菌体を破砕した。処理
液を遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、３０分間）するこ
とにより、約１６ｌの上清を得た。その液に飽和度０．
２になるように硫安を溶解させ、４℃、１時間放置した
後、遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、３０分間）するこ
とにより上清を回収した。

【００２７】更に、その液に飽和度０．６になるように
硫安を溶解させ、４℃、２４時間放置した後、遠心分離
（１０，０００ｒｐｍ、３０分間）して硫安塩析物を回
収した。得られた硫安塩析物を１０ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ７．０）に溶解させた後、同じ緩衝液に対して２
４時間透析し、遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、３０分
間）して不溶物を除いた。その透析液（３６０ｍｌ）を
２回に分けて、ＤＥＡＥ−トヨパールゲル（東ソー株式
会社製造）を用いたイオン交換カラムクロマトグラフィ
ー（ゲル量３００ｍｌ）を行った。

【００２８】本酵素はＤＥＡＥ−トヨパールゲルに吸着
し、食塩を含む同緩衝液でカラムから溶出した。得られ
る酵素活性画分を、２Ｍ硫安を含む同緩衝液に対して透
析し、その透析液を遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、３
０分間）して不溶物を除き、得られる上清をブチルトヨ
パール６５０ゲル（東ソー株式会社製造）を用いた疎水
カラムクロマトグラフィー（ゲル量３００ｍｌ）を行っ
た。吸着した本酵素を硫安２Ｍから０Ｍのリニアグラジ
エントによりカラムから溶出させ、酵素活性画分を回収
した。続いて、トヨパールＨＷ−５５樹脂（東ソー株式
会社製造）を用いたゲル濾過クロマトグラフィー（ゲル
量３００ｍｌ）を行い、酵素活性画分を回収した。精製
の各工程における酵素活性量、比活性、収率を表１に示
す。

【００２９】

【表１】

【００３０】表１の工程でゲル濾過溶出液として得られ
た精製酵素標品をポリアクリルアミドゲル（ゲル濃度
７．５ｗ／ｖ％）を用いる電気泳動法で純度を検定した
ところ、蛋白バンドは単一であることが示され、得られ
た酵素標品は電気泳動的に単一な純度の高い標品であっ
た。

【００３１】

【実験Ａ−３ 酵素の性質】実験Ａ−２で得られた精製
酵素標品をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル（ゲル濃度
１０ｗ／ｖ％）を用いる電気泳動法に供し、同時に泳動
した標準分子量マーカー（日本バイオ・ラド・ラボラト
リーズ株式会社製）と比較して本酵素の分子量を測定し
たところ、分子量約７７，０００乃至８７，０００ダル
トンであった。

【００３２】精製酵素標品をポリアクリルアミドゲル
（２ｗ／ｖ％アンフォライン含有、スウエーデン国、フ
ァルマシア・エルケイビー社製）を用いる等電点電気泳
動法に供し、泳動後、ゲルのｐＨを測定して本酵素の等
電点を求めたところ、等電点は約３．６乃至４．６であ
った。

【００３３】本酵素活性に対する温度の影響、ｐＨの影
響は活性測定方法に準じて調べた。結果を図１（温度の
影響）、図２（ｐＨの影響）に示した。酵素の至適温度
は、ｐＨ７．０、６０分間反応で、４０℃付近、至適ｐ
Ｈは、４０℃、６０分間反応で、約７．０であった。本
酵素の温度安定性は、酵素溶液（５０ｍＭリン酸緩衝液
を含む、ｐＨ７．０）を各温度に６０分間保持し、水冷
した後、残存する酵素活性を測定することにより求め
た。また、ｐＨ安定性は、本酵素を各ｐＨの５０ｍＭ緩
衝液中で２５℃、１６時間保持した後、ｐＨを７に調整
し、残存する酵素活性を測定することにより求めた。そ
れぞれの結果を図３（温度安定性）、図４（ｐＨ安定
性）に示した。本酵素の温度安定性は４０℃付近まで安
定であり、ｐＨ安定性は約６乃至９であった。

【００３４】

【実験Ａ−４ 非還元性糖質の調製】基質として、グル
コース、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラ
オース、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、又
はマルトヘプタオースの２０％水溶液を調製し、それぞ
れに実験Ａ−２で得られた精製酵素を基質固形物グラム
当たり２単位の割合で加え、４０℃、ｐＨ７．０で４８
時間作用させた後、脱塩し、ワコービーズ ＷＢ−Ｔ−
３３０カラム（和光純薬工業株式会社製）を用いた高速
液体クロマトグラフィーで反応生成物を分析した。高速
液体クロマトグラフィーは、室温下で行い、溶離液とし
て水を流速０．５ｍｌ／分で流し、示差屈折計ＲＩ−８
０１２（東ソー株式会社製造）で分析した。その結果を
表２に示す。

【００３５】

【表２】

【００３６】表２の結果から明らかなように、反応物中
には残存するそれぞれの基質と新たに生成したそれぞれ
の糖質ＰＩ、ＰＩＩ、ＰＩＩＩ、ＰＩＶ、ＰＶからな
り、それ以外の糖質はほとんど検出されない。それぞれ
の生成率はグルコース重合度３のＰＩが比較的低いもの
の、グルコース重合度４以上のＰＩＩ、ＰＩＩＩ、ＰＩ
Ｖ、ＰＶは８５％以上の高い生成率であることが判明し
た。なお、グルコース、マルトースからは、新たな糖質
を生成しないことが判明した。

【００３７】それぞれの反応物から新たに生成した糖質
を精製するため、脱色、脱塩、濃縮後、アルカリ金属型
強酸性カチオン交換樹脂（ＸＴ−１０１６、Ｎａ⁺型、
架橋度４％、東京有機化学工業株式会社製造）を用いた
カラム分画を行った。樹脂を内径２．０ｃｍ、長さ１ｍ
のジャケット付きステンレス製カラム３本に充填し、直
列につなぎ、カラム内温度を５５℃に維持しつつ、反応
糖液を樹脂に対して５ｖ／ｖ％加え、これに５５℃の温
水をＳＶ０．１３で流して分画し、新たに生成した糖質
含量９７％以上の高純度画分を採取した。得られた高純
度画分を真空乾燥し、それぞれ高純度糖質標品を調製し
た。基質原料に対する収率は、固形物換算で、それぞれ
ＰＩで約９％、ＰＩＩで約６５％、ＰＩＩＩで約８２
％、ＰＩＶで約８０％、ＰＶで約７７％であった。その
純度は、それぞれＰＩで９７．５％、ＰＩＩで９８．６
％、ＰＩＩＩで９９．５％、ＰＩＶで９８．４％、ＰＶ
で９８．４％であった。

【００３８】またこれらの新たに生成した高純度糖質標
品の還元力をソモギー・ネルソン法で測定し、ＤＥで表
した。結果は表３にまとめた。

【００３９】

【表３】

【００４０】表３の結果から明らかなように、いずれの
標品にも僅かな還元力しか認めらなかった。その僅かな
還元力は、その標品中に微量に混入、残存している基質
由来の還元性マルトオリゴ糖に起因するものと推定さ
れ、新たに生成した糖質はいずれも実質的に非還元性で
あると判断される。

【００４１】

【実験Ａ−５ グルコアミラーゼによる酵素分解】実験
Ａ−４において調製した非還元性糖質標品、ＰＩ、ＰＩ
Ｉ、ＰＩＩＩ、ＰＩＶ又は、ＰＶのそれぞれ５０ｍｇ
を、５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）１ｍｌに溶解
し、１単位のグルコアミラーゼ（生化学工業株式会社製
造）を加え、４０℃で６時間保ち、酵素分解した後、高
速液体クロマトグラフィーで分解物を分析したところ、
いずれの標品からも分解物としてグルコースとトレハロ
ースのみが検出された。検出されたグルコース含量、ト
レハロース含量、その組成モル比の結果を表４に示す。

【００４２】

【表４】

【００４３】表４の結果から明らかなように、グルコア
ミラーゼにより、非還元性糖質ＰＩはグルコース１分子
とトレハロース１分子に分解され、非還元性糖質ＰＩＩ
はグルコース２分子とトレハロース１分子に分解され、
非還元性糖質ＰＩＩＩはグルコース３分子とトレハロー
ス１分子に分解され、非還元性糖質ＰＩＶはグルコース
４分子とトレハロース１分子に分解され、非還元性糖質
ＰＶはグルコース５分子とトレハロース１分子に分解さ
れることが判明した。

【００４４】また、グルコアミラーゼの反応特性を考慮
すると、これら非還元性糖質の構造はトレハロース分子
にグルコース分子がα−１，４結合、もしくはα−１，
６結合で結合した糖質で、それぞれ、ＰＩはトレハロー
ス１分子にグルコース１分子が結合したグルコース重合
度３の非還元性糖質で、ＰＩＩはトレハロース１分子に
グルコース２分子が結合したグルコース重合度４の非還
元性糖質で、ＰＩＩＩはトレハロース１分子にグルコー
ス３分子が結合したグルコース重合度５の非還元性糖質
で、ＰＩＶはトレハロース１分子にグルコース４分子が
結合したグルコース重合度６の非還元性糖質で、ＰＶは
トレハロース１分子にグルコース５分子が結合したグル
コース重合度７の非還元性糖質であると判断される。な
お、同様に、非還元性糖質標品、ＰＩ、ＰＩＩ、ＰＩＩ
Ｉ、ＰＩＶ、又はＰＶにβ−アミラーゼを作用させたと
ころ、非還元性糖質ＰＩ、ＰＩＩは分解されず、ＰＩＩ
Ｉはマルトースの１分子とＰＩの１分子に分解され、Ｐ
ＩＶはマルトースの１分子とＰＩＩの１分子に分解さ
れ、ＰＶはマルトースの２分子とＰＩの１分子に分解さ
れることが判明した。

【００４５】以上の結果から、本発明の非還元性糖質生
成酵素による反応は、基質の低分子化及び高分子化を伴
わない、換言すれば、グルコース重合度の変化を伴わな
い、分子内変換反応と判断され、また、この非還元性糖
質生成酵素によって生成した非還元性糖質、ＰＩ、ＰＩ
Ｉ、ＰＩＩＩ、ＰＩＶ及びＰＶは、それぞれ、α−グル
コシルトレハロース（別名、α−マルトシルグルコシ
ド）、α−マルトシルトレハロース（別名、α−マルト
トリオシルグルコシド）、α−マルトトリオシルトレハ
ロース（別名、α−マルトテトラオシルグルコシド）、
α−マルトテトラオシルトレハロース（別名、α−マル
トペンタオシルグルコシド）及びα−マルトペンタオシ
ルトレハロース（別名、α−マルトヘキサオシルグルコ
シド）で示されるα−グリコシルトレハロース（Ｇ_n−
Ｔ：但し、 Ｇはグルコース残基を意味し、ｎは１以上
の整数を意味し、Ｔはα，α−トレハロースを意味す
る。）であると判断される。

【００４６】

【実験Ａ−６ 末端にトレハロース構造を有する非還元
性糖質とトレハロースの調製】澱粉部分分解物（松谷化
学工業株式会社製造、商品名パインデックス＃４）４０
重量部を水６０重量部に加熱溶解し、この溶液を４５
℃、ｐＨ６．５に調整した後、実験Ａ−２の方法で調製
した非還元性糖質生成酵素を還元性澱粉部分分解物ｇ当
たり１単位の割合になるように加えて９６時間反応さ
せ、末端にトレハロース構造を有する非還元性糖質を生
成させ、次いで１００℃で１０分間加熱して、酵素を失
活させた。本反応液を濃度約２０％まで希釈し、グルコ
アミラーゼ（ナガセ生化学工業株式会社製造、商品名グ
ルコチーム）を澱粉部分分解物ｇ当たり１０単位加えて
４０時間反応させ、次いで加熱して、酵素を失活させ
た。本溶液を、常法にしたがって、活性炭にて脱色し、
イオン交換樹脂にて脱塩し、濃度約６０％に濃縮した。
本糖液中には固形物当たり２９．５％のトレハロースを
含有していた。この濃縮液を塩型強酸性カチオン交換樹
脂（オルガノ株式会社販売、商品名ＣＧ６０００、Ｎａ
型）が充填されたジャケット付きステンレス製カラム
に、６０℃、ＳＶ ０．４でチャージし、トレハロース
高含有画分を採取した。本高含有液は、固形物当たり約
９０％のトレハロースを含有していた。本溶液を濃度約
７５％に濃縮した後、助晶缶にとり、種晶としてトレハ
ロース含水結晶を約２％加えて徐冷し、晶出率約４５％
のマスキットを得た。本マスキットを乾燥塔上のノズル
より１５０ｋｇ／ｃｍ²の高圧にて噴霧した。これと同
時に８５℃の熱風を乾燥塔の上部より送風し、底部に設
けた移送金網コンベア上に結晶粉末を補集し、コンベア
の下より４５℃の温風を送りつつ、該粉末を乾燥塔外に
徐々に移動させて、取り出した。この結晶粉末を熟成塔
に充填して温風を送りつつ、１０時間熟成させ、結晶化
と乾燥を完了し、トレハロース含水結晶粉末を得た。

【００４７】

【実験Ｂ−１ α−Ｄ−オリゴグルコシル α−Ｄ−オ
リゴグルコシドの調製】実験Ａ−６の方法で調製したト
レハロース５０重量部及び還元性澱粉部分分解物（ＤＥ
８、松谷化学工業株式会社製造、商品名パインデックス
＃１）５０重量部を水１５０重量部に加熱溶解し、この
溶液を温度６０℃、ｐＨ６．０にして、バチルス・ステ
アロサーモフィラス由来のシクロマルトデキストリン・
グルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研
究所販売）を還元性澱粉部分分解物ｇ当たり１０単位加
えて４０時間反応させ、次いで１００℃で３０分間加熱
して、酵素を失活させた。この溶液を温度５５℃、ｐＨ
５．０にして、β−アミラーゼ（ナガセ生化学工業株式
会社販売、商品名β−アミラーゼ＃１５００）を還元性
澱粉部分分解物ｇ当たり２０単位加えて１６時間反応さ
せ、次いで１００℃で１５分間加熱して酵素を失活させ
た。本溶液には、本発明のα−Ｄ−オリゴグルコシル
α−Ｄ−オリゴグルコシドとして物質１、物質２及び物
質３をそれぞれ固形物当たり約１５％、約１５％及び約
４％含有していた。本溶液を活性炭で脱色し、イオン交
換樹脂（Ｈ型及びＯＨ型）にて脱塩し、濃度約４５％に
濃縮して、カラムクロマトグラフィーを行い、物質１、
物質２及び物質３高含有画分を採取した。分画用樹脂
は、塩型強酸性カチオン交換樹脂（オルガノ株式会社販
売、商品名ＸＴ−１０１６Ｎａ型）を使用し、内径５．
４ｃｍのジャケット付きステンレス製カラムに水懸濁状
で充填した。この際、樹脂層長５ｍのカラム４本を接続
して樹脂層全長を約２０ｍになるようにした。カラム内
温度を５５℃に維持しつつ、原料の糖溶液を５ｖ／ｖ％
加え、これに５５℃の温水をＳＶ ０．３の流速で流し
て分画し、物質１、物質２及び物質３高含有画分を採取
した。採取された物質１、物質２及び物質３高含有液を
さらにオクタデシルシリカゲルを担体とした分取用液体
クロマトグラフィー（分取用カラムとしてＹＭＣ−Ｐａ
ｃｋＲ−３５５−１５（株式会社ＹＭＣ販売）を使用
し、溶離液は水を用いた。）にかけ、それぞれ純度９７
％以上の高含有画分を採取し、真空乾燥、粉末化して、
粉末状の物質１、物質２及び物質３の高純度標品を得
た。

【００４８】

【実験Ｂ−２ α−Ｄ−オリゴグルコシル α−Ｄ−オ
リゴグルコシドの理化学的性質】実験Ｂ−１の方法で調
製した物質１、物質２及び物質３の高純度標品を試料と
して、下記の理化学的性質を調べた。 （１） 元素分析 物質１ 測定値 Ｃ＝４４．３％ Ｈ＝６．２％ 理論値 Ｃ＝４３．２５％ Ｈ＝６．３５％ （分子式：Ｃ₂₄Ｈ₄₂Ｏ₂₁） 物質２ 測定値 Ｃ＝４３．７％ Ｈ＝６．０％ 理論値 Ｃ＝４３．４８％ Ｈ＝６．３２％ （分子式：Ｃ₃₀Ｈ₅₂Ｏ₂₆） 物質３ 測定値 Ｃ＝４３．８％ Ｈ＝６．１％ 理論値 Ｃ＝４３．６４％ Ｈ＝６．３１％ （分子式：Ｃ₃₆Ｈ₆₂Ｏ₃₁） （２） 分子量 物質１ ６６６．６ 物質２ ８２８．７ 物質３ ９９０．９ （３） 紫外線吸収 いずれの試料も特徴ある吸収は示さない。 （４） 呈色反応 いずれの試料もアントロン−硫酸反応で緑色を呈し、フ
ェーリング氏液還元反応、ヨウ素反応は陰性。 （５） 構造 （ａ）１Ｎ−硫酸で加水分解すると、いずれの試料とも
Ｄ−グルコースのみを生成する。 （ｂ）グルコアミラーゼの作用により、物質１はグルコ
ース２モルとトレハロース１モルを、物質２はグルコー
ス３モルとトレハロース１モルを、物質３はグルコース
４モルとトレハロース１モルを生成した。 （ｃ）炭素核磁気共鳴分析（¹³Ｃ−ＮＭＲ）により、物
質１は、異なる１２本の¹³Ｃシグナルが得られた。本物
質は２４個の炭素を持っており、１２組の２個ずつ等価
な炭素原子の存在が分かった。クラウス・ボック（ＫＬ
ＡＵＳ ＢＯＣＫ）等が、『アドバンシス・イン・カー
ボハイドレート・ケミストリー・アンド・バイオケミス
トリー（Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ
ａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ）』、第４２巻、第１９３乃至２２５頁（１
９８４年）で報告している標準物質、α−Ｄ−グルコピ
ラノース、α，α−トレハロース及びマルトオリゴ糖の
化学シフトより、各炭素を帰属し、本物質は、Ｏ−α−
Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル α−Ｄ−マルトシドの構造を有しているもの
と判断される。また物質２は、異なる１９本の¹³Ｃシグ
ナルが得られた。本物質は炭素原子を３０個持ってお
り、７組の２個ずつ等価な炭素原子と１組の５個等価な
炭素原子の存在が明らかとなった。物質１の場合と同様
にクラウス・ボック等が報告している標準物質の化学シ
フトより、各炭素を帰属し、本物質は、Ｏ−α−Ｄ−グ
ルコピラノシル−（１→４）−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル α−
Ｄ−マルトシドの構造を有しているものと判断される。
また、物質３は異なる１６本の¹³Ｃシグナルが得られ
た。本物質は炭素原子を３６個持っており、１５組の２
個ずつ等価な炭素原子と１組の６個等価な炭素原子の存
在が明らかとなった。物質１の場合と同様にクラウス・
ボック等が報告している標準物質の化学シフトより、各
炭素を帰属し、本物質は、Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシ
ル−（１→４）−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１
→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル α−Ｄ−マルトト
リオシドの構造を有しているものと判断される。以上の
結果より、物質１、物質２及び物質３の化学構造は、そ
れぞれ化１、化２及び化３に示す。

【００４９】

【化１】

【００５０】

【化２】

【００５１】

【化３】

【００５２】これらの構造から、物質１をα−Ｄ−マル
トシル α−Ｄ−マルトシド（別名、マルトシルマルト
シド）、物質２をα−Ｄ−マルトトリオシル α−Ｄ−
マルトシド（別名、マルトトリオシルマルトシド）及び
物質３をα−Ｄ−マルトトリオシル α−Ｄ−マルトト
リオシド（別名、マルトトリオシルマルトトリオシド）
と命名する。以上の結果より、これらの物質はいずれ
も、分子内にトレハロース構造を有する従来全く知られ
ていない新規非還元性オリゴ糖である。

【００５３】

【実験Ｂ−３ 急性毒性試験】マウスを使用して、実験
Ｂ−１の方法で調製した高純度マルトシルマルトシド、
マルトトリオシルマルトシド及びマルトトリオシルマル
トトリオシドをそれぞれに経口投与して急性毒性テスト
を行った。その結果、マルトシルマルトシド、マルトト
リオシルマルトシド及びマルトトリオシルマルトトリオ
シドは低毒性の物質で、いずれも投与可能な最大投与量
においても死亡例は認められなかった。したがって、正
確な値はいえないが、そのＬＤ _５０ 値は、いずれも５０
ｇ／ｋｇ以上であった。

【００５４】

【実験Ｂ−４ 結晶α−Ｄ−マルトトリオシル α−Ｄ
−マルトトリオシドの調製と理化学的性質】実験Ｂ−１
の方法で調製した純度９７％以上のα−Ｄ−マルトトリ
オシル α−Ｄ−マルトトリオシド（物質３）を常法に
したがって、脱色、脱塩し、濃度７０％に濃縮し、ビー
カーに入れ、４℃の冷室に２ヶ月間放置したものから結
晶の析出が認められた。本結晶を遠心分離して集め、少
量の水で洗浄し、純度９９．０％の結晶を得た。

【００５５】本結晶の理化学的性質を調べたところ、次
の通りであった。 （１） 物質の色 無色の透明な結晶 （２） 溶解度 溶解度は比較的高く、２５℃の水１００ｍｌに対して約
９１ｇ溶解する。 （３） 融点 ｍ．ｐ． ２１５℃ （４） 赤外線吸収スペクトル 結晶粉末１ｍｇと乾燥ＫＢｒ２００ｍｇを混合し、透明
なタブレットを作成して、赤外線吸収スペクトルを測定
した。結果は図５に示す。 （５） 粉末Ｘ線回折 エフ・エイチ・ストドーラ（Ｆ．Ｈ．Ｓｔｏｄｏｌａ）
等が、『ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル
・ソサイエティー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａ
ｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔ
ｙ）』、第７８巻、第２５１４乃至２５１８頁（１９５
６年）に報告している方法に準じて、結晶α−Ｄ−マル
トトリオシル α−Ｄ−マルトトリオシドのＣｕＫα線
を使用した粉末Ｘ線回折図形を測定した。結果を図６に
示した。図６の結果より明らかなように、結晶α−Ｄ−
マルトトリオシル α−Ｄ−マルトトリオシドは、粉末
Ｘ線回折法における主な回折角（２θ）として７．８
゜、１０．０゜、１３．１゜、１７．５゜及び１８．２
゜を有する。 以上の結果より、この結晶は、新規α−Ｄ−マルトトリ
オシル α−Ｄ−マルトトリオシドの結晶である。

【００５６】本結晶の製造方法は、α−Ｄ−マルトトリ
オシル α−Ｄ−マルトトリオシドの過飽和溶液から結
晶を晶出させ、これを採取する方法であればよく、公知
の方法、例えば、分蜜方法、ブロック粉砕方法、流動造
粒方法、噴霧乾燥方法などの方法が適宜採用できる。こ
のようにして得られる結晶α−Ｄ−マルトトリオシルα
−Ｄ−マルトトリオシドは、α−Ｄ−マルトトリオシル
α−Ｄ−マルトトリオシドの純度によってその吸湿性
が多少変動するが、実質的に非吸湿性であり、流動性で
あり、粘着、固着の懸念もなく、取扱い容易なので、例
えば、飲食物、化粧品、医薬品、成形物などの各種組成
物、更には、化学原料などの各種用途に有利に利用でき
る。また、結晶α−Ｄ−マルトトリオシル α−Ｄ−マ
ルトトリオシドは、その純度の違いにより、融点、比旋
光度が変化する。このうち融点は、通常、その純度の低
下にともなって低下し、融解温度の幅も広くなる。した
がって、結晶α−Ｄ−マルトトリオシル α−Ｄ−マル
トトリオシドは、必要性に応じて、その純度を適宜選択
して利用すればよい。

【００５７】以下、本発明の若干の実施例として、α−
Ｄ−オリゴグルコシル α−Ｄ−オリゴグルコシドの製
造方法を実施例Ａで、α−Ｄ−オリゴグルコシル α−
Ｄ−オリゴグルコシドの用途を実施例Ｂで示す。

【００５８】

【実施例Ａ−１】実験Ａ−６の方法で調製したトレハロ
ース１重量部及びデキストリン（ＤＥ１８、松谷化学工
業株式会社販売、商品名パインデックス＃４）２重量部
を水３．７重量部に加熱溶解し、この溶液を温度６０
℃、ｐＨ５．６にして、バチルス・ステアロサーモフィ
ラス由来のシクロマルトデキストリン・グルカノトラン
スフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所販売）をデ
キストリンｇ当たり１５単位加えて２４時間反応させ、
次いで加熱して酵素を失活させた。本溶液を常法にした
がって、活性炭にて脱色、イオン交換樹脂（Ｈ型及びＯ
Ｈ型）にて脱塩して精製し、濃縮して、濃度７５％のシ
ラップを、固形物当たり収率約９２％で得た。

【００５９】本品は、マルトシルマルトシド、マルトト
リオシルマルトシド、マルトトリオシルマルトトリオシ
ド、マルトテトラオシルマルトトリオシド及びマルトテ
トラオシルマルトテトラオシドなどの非還元性オリゴ糖
を固形物当たり約６５％含有しており、低い甘味、適度
の粘度、保湿性を有し、飲食物、化粧品、医薬品、成形
物などの各種組成物に有利に利用できる。

【００６０】

【実施例Ａ−２】市販のトレハロース（和光純薬製）１
重量部及びα−シクロデキストリン１．５重量部を水４
重量部に加熱溶解し、温度６５℃、ｐＨ５．６にして、
実施例Ａ−１の場合と同じシクロマルトデキストリン・
グルカノトランスフェラーゼをα−シクロデキストリン
ｇ当たり１０単位加えて２４時間反応させ、次いで酵素
を加熱失活させた。この溶液を温度５５℃、ｐＨ５．６
にして、β−アミラーゼ（ナガセ生化学工業株式会社販
売＃１５００）を固形物ｇ当たり２０単位加えて１６時
間反応させ、次いで酵素を加熱失活させた。本溶液を実
施例Ａ−１と同様に精製、濃縮して、濃度７５％のシラ
ップを、固形物当たり収率約９３％で得た。

【００６１】本品は、マルトシルマルトシド、マルトト
リオシルマルトシド及びマルトトリオシルマルトトリオ
シドを固形物当たりそれぞれ約１５％、約１５％及び約
４％含有しており、実施例Ａ−１の場合と同様に、低い
甘味、適度の粘度、保湿性を有し、飲食物、化粧品、医
薬品、成形物などの各種組成物に有利に利用できる。

【００６２】

【実施例Ａ−３】濃度２０％澱粉乳にα−アミラーゼ
（ノボ・ノルディスク・インダストリー社販売、商品名
ターマミール６０Ｌ）を澱粉固形物当たり０．０１５％
加え、９５乃至１００℃に加熱して液化し、酵素を加熱
失活させてＤＥ３の液化液を得た。本液に固形物として
澱粉質と等重量の実験Ａ−６の方法で調製したトレハロ
ースを溶解し、温度５５℃、ｐＨ５．３にして、イソア
ミラーゼ（株式会社林原生物化学研究所販売）を澱粉ｇ
当たり５０単位及び実施例Ａ−１の場合と同じシクロマ
ルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼを澱粉
ｇ当たり１０単位加えて４０時間反応させ、次いで酵素
を加熱失活させた。この溶液に水を加えて濃度約２５％
に希釈した後、温度５５℃、ｐＨ５．３に維持して、β
−アミラーゼを固形物ｇ当たり２０単位加えて１６時間
反応させ、次いで酵素を加熱失活させた。本溶液を実施
例Ａ−１と同様に精製、濃縮し、常法にしたがい噴霧乾
燥して、水分約２％未満の粉末を収率約９０％で得た。

【００６３】本品は、マルトシルマルトシド、マルトト
リオシルマルトシド及びマルトトリオシルマルトトリオ
シドを固形物当たりそれぞれ約２０％、約２０％及び約
６％含有しており、実施例Ａ−１の場合と同様に、低い
甘味、適度の粘度、保湿性を有し、飲食物、化粧品、医
薬品、成形物などの各種組成物に有利に利用できる。

【００６４】

【実施例Ａ−４】実施例Ａ−２の方法で調製したマルト
シルマルトシド、マルトトリオシルマルトシド及びマル
トトリオシルマルトトリオシド含有溶液を原料糖液と
し、これを濃縮して濃度約４５％にした。本液のマルト
シルマルトシド、マルトトリオシルマルトシド及びマル
トトリオシルマルトトリオシド含量を高めるため、分画
用樹脂として、塩型強酸性カチオン交換樹脂（ダウケミ
カル社販売、商品名ダウエックス５０Ｗ−Ｘ４、Ｃａ
型）を用いた以外は、実験Ｂ−１の方法にしたがってカ
ラムクロマトグラフィーを行い、マルトシルマルトシ
ド、マルトトリオシルマルトシド及びマルトトリオシル
マルトトリオシド高含有画分を採取し次いで、本画分を
実施例Ａ−１と同様に精製、濃縮して濃度６５％のシラ
ップを固形物当たり収率約４５％で得た。

【００６５】本品は、マルトシルマルトシド、マルトト
リオシルマルトシド及びマルトトリオシルマルトトリオ
シドをそれぞれ固形物当たり約３５％、約３５％及び約
１０％含有しており、実施例Ａ−１の場合と同様に低い
甘味、適度の粘度、保湿性を有し、飲食物、化粧品、医
薬品、成形物などの各種組成物に有利に利用できる。

【００６６】

【実施例Ａ−５】実施例Ａ−３の方法で調製したマルト
シルマルトシド、マルトトリオシルマルトシド及びマル
トトリオシルマルトトリオシド含有溶液を原料糖液と
し、これを濃縮して濃度約５０％にした。本液を実験Ｂ
−１の方法にしたがってカラムクロマトグラフィーを行
い、マルトシルマルトシド高含有画分、マルトトリオシ
ルマルトシド高含有画分及びマルトトリオシルマルトト
リオシド高含有画分のそれぞれを採取し次いで、これら
画分を実施例Ａ−１と同様に精製、濃縮して濃度６５％
のシラップを、それぞれ固形物当たり収率約１５％、約
１５％及び約４％で得た。

【００６７】これらは、高純度マルトシルマルトシド、
高純度マルトトリオシルマルトシド又は高純度マルトト
リオシルマルトトリオシドを、それぞれ固形物当たり約
９７％含有しており、実施例Ａ−１の場合と同様に低い
甘味、適度の粘度、保湿性を有し、飲食物、化粧品、医
薬品、成形物などの各種組成物に有利に利用できる。

【００６８】

【実施例Ａ−６】実施例Ａ−５の方法で得た高純度マル
トトリオシルマルトトリオシドを濃度約８５％に濃縮
し、この濃縮液を助晶缶にとり、結晶マルトトリオシル
マルトトリオシドを種晶として２％加えて徐冷しながら
撹拌して助晶し、次いでバットに取り出し、室温で２日
間放置して晶出、熟成させ、得られたブロックを切削機
で粉砕し、乾燥、分級して、結晶マルトトリオシルマル
トトリオシド含有粉末を得た。

【００６９】本品は、実質的に吸湿性を示さず、取扱い
容易である。また、溶解性良好で、低い甘味、適度の粘
度、保湿性、安定性を有し、飲食物、化粧品、医薬品、
成形物などの各種組成物に有利に利用できる。

【００７０】

【実施例Ａ−７】実験Ａ−６の方法で調製した末端にト
レハロース構造を有する非還元性糖質を含む糖混合物２
０％溶液にシクロマルトデキストリン・グルカノトラン
スフェラーゼを固形物ｇ当たり１０単位加えて２４時間
反応させ、次いで酵素を加熱失活させた。この溶液を温
度５５℃、ｐＨ５．３に維持して、β−アミラーゼをデ
キストリンｇ当たり２０単位加えて１６時間反応させ、
次いで酵素を加熱失活させた。本溶液を実施例Ａ−１と
同様に精製、濃縮して濃度７５％のシラップを、固形物
当たり収率約９２％で得た。

【００７１】本品は、マルトシルマルトシド、マルトト
リオシルマルトシド及びマルトトリオシルマルトトリオ
シドを固形物当たりそれぞれ約２５％、約２５％及び約
８％含有しており、実施例Ａ−１の場合と同様に、低い
甘味、適度の粘度、保湿性を有し、飲食物、化粧品、医
薬品、成形物などの各種組成物に有利に利用できる。

【００７２】

【実施例Ａ−８】実施例Ａ−４の方法で調製したマルト
シルマルトシド、マルトトリオシルマルトシド及びマル
トトリオシルマルトトリオシド高含有シラップを、常法
に従い噴霧乾燥し、水分約１％の粉末を、収率約９０％
で得た。

【００７３】本品は、実施例Ａ−１の場合と同様に、飲
食物、化粧品、医薬品、成形物などの各種組成物に有利
に利用できる。

【００７４】

【実施例Ａ−９】実施例Ａ−５の方法で調製した高純度
マルトシルマルトシドシラップを６０℃で２４時間真空
乾燥を行った。得られた乾燥物を粉砕機にて粉砕し、水
分約０．５％の粉末を収率約９３％で得た。

【００７５】本品は、実施例Ａ−１の場合と同様に、飲
食物、化粧品、医薬品、成形物などの各種組成物に有利
に利用できる。

【００７６】

【実施例Ｂ−１ 甘味料】 実施例Ａ−６の方法で得
た結晶マルトトリオシルマルトトリオシド含有粉末１重
量部に、α−グリコシルステビオシド（東洋精糖株式会
社販売、商品名αＧスイート）０．０５重量部を均一に
混合し、顆粒成形機にかけて、顆粒状甘味料を得た。

【００７７】本品は、溶解性良好で甘味の質が優れ、蔗
糖の約２倍の甘味度を有し、甘味度当たりカロリーは、
蔗糖の約１／２に低下している。本甘味料は、低カロリ
ー甘味料として、カロリー摂取を制限している肥満者、
糖尿病者などのための低カロリー飲食物などに対する甘
味付けに好適である。また、本甘味料は、虫歯誘発菌に
よる酸の生成が少なく、不溶性グルカンの生成も少ない
ことより、虫歯を抑制する飲食物などに対する甘味付け
にも好適である。

【００７８】

【実施例Ｂ−２ ハードキャンデー】５５％蔗糖溶液１
００重量部に実施例Ａ−１の方法で得たマルトシルマル
トシド、マルトトリオシルマルトシド及びマルトトリオ
シルマルトトリオシドなどの非還元性オリゴ糖含有シラ
ップ３０重量部を加熱混合し、次いで減圧下で水分２％
未満になるまで加熱濃縮し、これにクエン酸１重量部及
び適量のレモン香料と着色料とを混和し、常法にしたが
って成形し、製品を得た。

【００７９】本品は、歯切れ、呈味良好で、蔗糖の晶出
も起こらない高品質のハードキャンデーである。

【００８０】

【実施例Ｂ−３ いちごジャム】生いちご１５０重量
部、蔗糖６０重量部、マルトース２０重量部、実施例Ａ
−２の方法で得たマルトシルマルトシド、マルトトリオ
シルマルトシド及びマルトトリオシルマルトトリオシド
含有シラップ４０重量部、ペクチン５重量部及びクエン
酸１重量部をなべで煮詰め、ビン詰して製品を得た。

【００８１】本品は、風味、色調とも良好なジャムであ
る。

【００８２】

【実施例Ｂ−４ 乳酸飲料】脱脂乳１０重量部を８０℃
で２０分間加熱殺菌した後、４０℃に冷却し、これにス
ターター０．３重量部を加えて約３７℃で１０時間醗酵
させた。次いで、これをホモゲナイズした後、実施例Ａ
−８の方法で得たマルトシルマルトシド、マルトトリオ
シルマルトシド及びマルトトリオシルマルトトリオシド
含有粉末４重量部、蔗糖１重量部及び異性化糖シラップ
２重量部を加えて７０℃に保って殺菌した。これを冷却
し、適量の香料を加え、ビン詰して製品を得た。

【００８３】本品は、風味、甘味が酸味とよく調和した
高品質の乳酸飲料である。

【００８４】

【実施例Ｂ−５ 加糖練乳】原乳１００重量部に実施例
Ａ−１の方法で得たマルトシルマルトシド、マルトトリ
オシルマルトシド及びマルトトリオシルマルトトリオシ
ドなどの非還元性オリゴ糖含有シラップ３重量部及び蔗
糖１重量部を溶解し、プレートヒーターで加熱殺菌し、
次いで濃度約７０％に濃縮し、無菌状態で缶詰して製品
を得た。

【００８５】本品は、温和な甘味で、風味もよく、乳幼
児食品、フルーツ、コーヒー、ココア、紅茶などの調味
用に有利に利用できる。

【００８６】

【実施例Ｂ−６ 粉末ジュース】噴霧乾燥により製造し
たオレンジ果汁粉末３３重量部に対し、実施例Ａ−９の
方法で得た高純度マルトシルマルトシド粉末５０重量
部、蔗糖１０重量部、無水クエン酸０．６５重量部、リ
ンゴ酸０．１重量部、Ｌ−アスコルビン酸０．１重量
部、クエン酸ソーダ０．１重量部、プルラン０．５重量
部、粉末香料適量をよく混合撹拌し、粉砕し微粉末にし
てこれを流動層造粒機に仕込み、排風温度４０℃とし、
これに、実施例Ａ−４の方法で得たマルトシルマルトシ
ド、マルトトリオシルマルトシド及びマルトトリオシル
マルトトリオシド高含有シラップをバインダーとしてス
プレーし、３０分間造粒し、計量、包装して製品を得
た。

【００８７】本品は、果汁含有率約３０％の粉末ジュー
スである。また、本品は異味、異臭がなく、吸湿固結も
起こさず長期に安定であった。

【００８８】

【実施例Ｂ−７ チョコレート】カカオペースト４０重
量部、カカオバター１０重量部、蔗糖３０重量部、実施
例Ａ−９の方法で得た高純度マルトシルマルトシド粉末
２０重量部を混合してレファイナーに通して粒度を下げ
た後、コンチェに入れて５０℃で２昼夜練り上げる。こ
の間に、レシチン０．５重量部を加え充分に混和分散さ
せた。次いで、温度調節機で３１℃に調節し、バターの
固まる直前に型に流し込み、振動機でアワ抜きを行い、
１０℃の冷却トンネルを２０分間くぐらせて固化させ
た。これを型抜きして包装し製品を得た。

【００８９】本品は、吸湿性がなく、色、光沢共によ
く、内部組織も良好で、口中でなめらかに溶け、上品な
甘味とまろやかな風味を有する。

【００９０】

【実施例Ｂ−８ チューインガム】ガムベース３重量部
を柔らかくなる程度に加熱溶融し、これに蔗糖４重量部
及び実施例Ａ−８の方法で得たマルトシルマルトシド、
マルトトリオシルマルトシド及びマルトトリオシルマル
トトリオシド含有粉末３重量部とを加え、更に適量の香
料と着色料とを混合し、常法にしたがって、ロールによ
り練り合わせ、成形、包装して製品を得た。

【００９１】本品は、テクスチャー、風味とも良好なチ
ューインガムである。

【００９２】

【実施例Ｂ−９ カスタードクリーム】コーンスターチ
１００重量部、実施例Ａ−３の方法で得たマルトシルマ
ルトシド、マルトトリオシルマルトシド及びマルトトリ
オシルマルトトリオシド含有粉末１００重量部、マルト
ース８０重量部、蔗糖２０重量部及び食塩１重量部を充
分に混合し、鶏卵２８０重量部を加えて撹拌し、これに
沸騰した牛乳１，０００重量部を徐々に加え、更に、こ
れを火にかけて撹拌を続け、コーンスターチが完全に糊
化して全体が半透明になった時に火を止め、これを冷却
して適量のバニラ香料を加え、計量、充填、包装して製
品を得た。

【００９３】本品は、なめらかな光沢を有し、温和な甘
味で美味である。

【００９４】

【実施例Ｂ−１０ ういろうの素】米粉９０重量部に、
コーンスターチ２０重量部、実施例Ａ−９の方法で得た
高純度マルトシルマルトシド粉末１２０重量部、プルラ
ン４重量部を均一に混合してういろうの素を製造した。
ういろうの素と適量の抹茶と水とを混練し、これを容器
に入れて６０分間蒸し上げて抹茶ういろうを製造した。

【００９５】本品は、照り、口当たりも良好で、風味も
良い。また、澱粉の老化も抑制され、日持ちもよい。

【００９６】

【実施例Ｂ−１１ 乳液】ポリオキシエチレンベヘニル
エーテル０．５重量部、テトラオレイン酸ポリオキシエ
チレンソルビトール１重量部、親油型モノステアリン酸
グリセリン１重量部、ベヘニールアルコール０．５重量
部、アボカド油１重量部、実施例Ａ−７の方法で得たマ
ルトシルマルトシド、マルトトリオシルマルトシド及び
マルトトリオシルマルトトリオシド含有シラップ３．５
重量部、α−グリコシルルチン１重量部、ビタミンＥ及
び防腐剤の適量を、常法にしたがって加熱溶解し、これ
に１，３−ブチレングリコール５重量部、カルボキシビ
ニルポリマー０．１重量部及び精製水８５．３重量部を
加え、ホモゲナイザーにかけ、乳化し、乳液を製造し
た。

【００９７】本品は、保湿性ある乳液で、日焼け止め、
色白剤などとして有利に利用できる。

【００９８】

【実施例Ｂ−１２ スキンクリーム】モノステアリン酸
ポリオキシエチレングリコール２重量部、自己乳化型モ
ノステアリン酸グリセリン５重量部、α−グリコシルル
チン２重量部、流動パラフィン１重量部、トリオクタン
酸グリセリル１０重量部、実施例Ａ−９の方法で得た高
純度マルトシルマルトシド粉末４重量部及び防腐剤の適
量を、常法にしたがって加熱溶解し、これに１，３−ブ
チレングリコール５重量部及び精製水６６重量部を加
え、ホモゲナイザーにかけて乳化し、更に、香料の適量
を加えて撹拌混合し、クリームを製造した。

【００９９】本品は、伸びの良いクリームで、日焼け止
め、美肌剤、色白剤などとして有利に使用できる。

【０１００】

【実施例Ｂ−１３ 練歯磨】第二リン酸カルシウム４５
重量部、ラウリル硫酸ナトリウム１．５重量部、グリセ
リン２５重量部、ポリオキシエチレンソルビタンラウレ
ート０．５重量部、実施例Ａ−４の方法で得たマルトシ
ルマルトシド、マルトトリオシルマルトシド及びマルト
トリオシルマルトトリオシド高含有シラップ１５重量
部、サッカリン０．０２重量部及び防腐剤０．０５重量
部を水１３重量部と混合して練歯磨を得た。

【０１０１】本品は、光沢、洗浄力も良好で、練歯磨と
して好適である。

【０１０２】

【実施例 Ｂ−１４ 経管栄養剤】実施例Ａ−８の方法
で得たマルトシルマルトシド、マルトトリオシルマルト
シド及びマルトトリオシルマルトトリオシド含有粉末２
０重量部、グリシン１．１重量部、グルタミン酸ナトリ
ウム１重量部、乳酸カルシウム０．４重量部、炭酸マグ
ネシウム０．１重量部、チアミン０．０１重量部及びリ
ボフラビン０．０１重量部からなる配合物を調製する。
この配合物２４ｇずつをラミネートアルミ製小包に充填
し、ヒートシールして製品を得た。

【０１０３】本品は、１袋分を約３３乃至５００ｍｌの
水に溶解して栄養補給液とし、経管方法により、鼻腔、
胃腸などへ投与して使用する。

【０１０４】本品は、ヒトのみならず、家畜などへの非
経口的栄養補給液としても有利に利用できる。

【０１０５】

【実施例Ｂ−１５ 経管栄養剤】実施例Ａ−６の方法で
得た結晶マルトトリオシルマルトトリオシド含有粉末５
８０重量部、乾燥卵黄１９０重量部、脱脂粉乳２０９重
量部、塩化ナトリウム４．４重量部、塩化カリウム１．
８５重量部、硫酸マグネシウム４重量部、チアミン０．
０１重量部、アスコルビン酸ナトリウム０．１重量部、
ビタミンＥアセテート０．６重量部及びニコチン酸アミ
ド０．０４重量部からなる配合物を調製する。この配合
物２５ｇずつを、ラミネートアルミ製小包に充填し、ヒ
ートシールして製品を得た。

【０１０６】本品は、１袋分を約１５０乃至３００ｍｌ
の水に溶解して、栄養補給液とし、経管方法により鼻
腔、食道、胃などへ投与して使用する。

【０１０７】

【実施例Ｂ−１６ インターフェロン液剤】ヒト天然型
インターフェロン−γ標品（株式会社林原生物学研究所
製造、コスモ・バイオ株式会社販売）を、常法にしたが
って、固定化抗ヒトインターフェロン−γ抗体カラムに
かけ、該標品に含まれるヒト天然型インターフェロン−
γを吸着させ、安定剤である牛血清アルブミンを素通り
させて除去し、次いで、ｐＨを変化させて、ヒト天然型
インターフェロン−γを実施例Ａ−５の方法で得た高純
度マルトシルマルトシドシラップを固形物として７％含
有する生理食塩水を用いて溶出した。本液を精密濾過
し、無菌的にバイアルビンに充填して、ｍｌ当たりヒト
天然型インターフェロン−γを１０⁵単位含有する液剤
を得た。

【０１０８】本品は、１日当たり、大人１乃至２０ｍｌ
程度が経口的又は非経口的に投与され、ウイルス性疾
患、アレルギー性疾患、リューマチ、糖尿病、悪性腫瘍
などの治療に有利に利用できる。本品は、マルトシルマ
ルトシドが安定剤として作用し、４℃又は２５℃で２０
日間放置しても、その活性をよく維持している。

【０１０９】

【実施例Ｂ−１７ ツモア・ネクロシス・ファクター液
剤】ヒト天然型ツモア・ネクロシス・ファクター−α標
品（株式会社林原生物化学研究所製造、コスモ・バイオ
株式会社販売）を、常法にしたがって、固定化抗ヒトツ
モア・ネクロシス・ファクター−α抗体カラムにかけ、
該標品に含まれるヒト天然型ツモア・ネクロシス・ファ
クター−αを吸着させ、安定剤である牛血清アルブミン
を素通りさせて除去し、次いで、ｐＨを変化させて、ヒ
ト天然型ツモア・ネクロシス・ファクター−αを実施例
Ａ−５の方法で得た高純度マルトトリオシルマルトシド
シラップを固形物として１０％含有する生理食塩水を用
いて溶出した。本液を精密濾過し、無菌的にバイアルビ
ンに充填して、ｍｌ当たりヒト天然型ツモア・ネクロシ
ス・ファクター−αを１０^４単位含有する液剤を得た。

【０１１０】本品は、１日当たり、大人１乃至２０ｍｌ
程度が経口的又は非経口的に投与され、ウイルス性疾
患、アレルギー性疾患、リューマチ、糖尿病、悪性腫瘍
などの治療に有利に利用できる。本品は、マルトトリオ
シルマルトシドが安定剤として作用し、４℃又は２５℃
で２０日間放置しても、その活性をよく維持している。

【０１１１】

【実施例 Ｂ−１８ インターフェロン錠剤】ヒト天然
型インターフェロン−α標品（株式会社林原生物化学研
究所製造、コスモ・バイオ株式会社販売）を、常法にし
たがって、固定化抗ヒトインターフェロン−α抗体カラ
ムにかけ、該標品に含まれるヒト天然型インターフェロ
ン−αを吸着させ、安定剤である牛血清アルブミンを素
通りさせて除去し、次いでｐＨを変化させて、ヒト天然
型インターフェロン−αを実験Ｂ−１の方法で得た高純
度マルトトリオシルマルトシド粉末を５％含有する生理
食塩水を用いて溶出した。本液を精密濾過し、約２０倍
量の無水結晶マルトース粉末（株式会社林原商事販売、
商品名ファイントースＴ）に加えて脱水、粉末化し、こ
れを打錠機にて打錠し、１錠（約２００ｍｇ）当たりヒ
ト天然型インターフェロン−αを約１５０単位含有する
錠剤を得た。

【０１１２】本品は、舌下錠などとして、１日当たり、
大人１乃至１０錠程度が経口的に投与され、ウイルス性
疾患、アレルギー性疾患、リューマチ、糖尿病、悪性腫
瘍などの治療に有利に利用できる。とりわけ、近年、患
者数の急増しているエイズ、肝炎などの治療剤として有
利に利用できる。本品は、マルトトリオシルマルトシド
と共にマルトースが安定剤として作用し、室温で放置し
てもその活性を長期間よく維持する。

【０１１３】

【実施例Ｂ−１９ 肥料杭】配合肥料（Ｎ＝１４％、Ｐ
₂Ｏ₅＝８％、Ｋ₂Ｏ＝１２％）、プルラン、実施例Ａ−
３の方法で得たマルトシルマルトシド、マルトトリオシ
ルマルトシド及びマルトトリオシルマルトトリオシド含
有粉末、硫酸カルシウム及び水の割合を重量でそれぞれ
７０、５、５、１５及び５として充分混合した後、押出
機（Ｌ／Ｄ＝２０、圧縮比＝１．８、ダイスの口径＝３
０ｍｍ）で８０℃に加熱して肥料杭を製造した。

【０１１４】本品は、肥料用容器が不要で取扱い容易で
あり、全層施肥に適した強度を有し、更に配合割合を変
えることにより肥料成分の溶出速度を調節できる。必要
ならば、この肥料杭に植物ホルモン、農業用薬剤及び土
壌改良剤等の混合も容易である。

【０１１５】

【発明の効果】上記から明らかなように、本発明のα−
Ｄ−オリゴグルコシル α−Ｄ−オリゴグルコシドは非
還元性オリゴ糖で、極めて安定であり、水に溶解し易い
物質であり、適度な粘性を有し、良質で低甘味を有して
いる。また、α−Ｄ−オリゴグルコシル α−Ｄ−オリ
ゴグルコシドは、化学的に安定であり、褐変反応を起し
易いアミノ酸、オリゴペプチド、更には、有効成分、活
性の失われ易い生理活性物質などを安定化し得る性質を
有している。加えて、浸透圧調節性、賦活性、照り付与
性、保湿性、他糖の晶出防止、難醗酵性、澱粉の老化防
止性などの性質を具備している。これら諸性質は、飲食
物、化粧品、医薬品、成形物など各種組成物の製造に有
利に利用できる。したがって、関係業界に与える影響は
きわめて大きい。

【０１１６】したがって、本発明のα−Ｄ−オリゴグル
コシル α−Ｄ−オリゴグルコシドを含む非還元性オリ
ゴ糖とその製造方法並びに用途の確立は、飲食物、化粧
品、医薬品分野における産業的意義が極めて大きい。

【図面の簡単な説明】

【図１】リゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１１由来の非
還元性糖質生成酵素の活性に及ぼす温度の影響を示す図
である。

【図２】リゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１１由来の非
還元性糖質生成酵素の活性に及ぼすｐＨの影響を示す図
である。

【図３】リゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１１由来の非
還元性糖質生成酵素の温度安定性を示す図である。

【図４】リゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１１由来の非
還元性糖質生成酵素のｐＨ安定性を示す図である。

【図５】結晶α−Ｄ−マルトトリオシル α−Ｄ−マル
トトリオシドの赤外線吸収スペクトルを示す図である。

【図６】結晶α−Ｄ−マルトトリオシル α−Ｄ−マル
トトリオシドの粉末Ｘ線回折図形を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/715 Ａ６１Ｋ 31/715 Ｃ０８Ｂ 37/00 Ｃ０８Ｂ 37/00 Ｇ Ｃ１２Ｐ 19/18 Ｃ１２Ｐ 19/18 Ｃ１３Ｋ 13/00 Ｃ１３Ｋ 13/00 (56)参考文献 特開 平５−70472（ＪＰ，Ａ) 特公 昭54−37211（ＪＰ，Ｂ１) 米国特許4359458（ＵＳ，Ａ) 国際公開92／3565（ＷＯ，Ａ１) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07H 3/06 C08B 37/00 C12P 19/18 A23L 1/236 A61K 7/00 - 7/50 A61K 31/702 715 C13K 13/00 ＣＡ（ＳＴＮ) ＣＡＯＬＤ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (19)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 構成糖としてのグルコースの結合様式が
   α−結合のみからなる、一般式α−Ｄ−オリゴグルコシ
   ル α−Ｄ−オリゴグルコシドで表される非還元性オリ
   ゴ糖。
2. 【請求項２】 非還元性オリゴ糖が、４糖類以上の糖質
   である請求項１記載の非還元性オリゴ糖。
3. 【請求項３】 非還元性オリゴ糖が、α−Ｄ−マルトシ
   ル α−Ｄ−マルトシド、α−Ｄ−マルトトリオシル
   α−Ｄ−マルトシド又はα−Ｄ−マルトトリオシル α
   −Ｄ−マルトトリオシドである請求項１又は２記載の非
   還元性オリゴ糖。
4. 【請求項４】 α−Ｄ−マルトトリオシル α−Ｄ−マ
   ルトトリオシドが、結晶である請求項３記載の非還元性
   オリゴ糖。
5. 【請求項５】 結晶が、粉末Ｘ線回折法における主な回
   折角（２θ）として、７．８゜、１０．０゜、１３．１
   ゜、１７．５゜及び１８．２゜を有していることを特徴
   とする請求項４記載の非還元性オリゴ糖。
6. 【請求項６】 トレハロースとα−グルコシル糖質とを
   含有する水溶液若しくは末端にトレハロース構造を有す
   る非還元性糖質を含有する水溶液に、糖転移酵素を作用
   させるか又は糖転移酵素を作用させた後加水分解酵素を
   作用させて、請求項１乃至５のいずれかに記載の非還元
   性オリゴ糖を生成せしめ、これを採取することを特徴と
   する非還元性オリゴ糖の製造方法。
7. 【請求項７】 末端にトレハロース構造を有する非還元
   性糖質が、還元性澱粉部分分解物に非還元性糖質生成酵
   素を作用させて生成される非還元性糖質であることを特
   徴とする請求項６記載の非還元性オリゴ糖の製造方法。
8. 【請求項８】 非還元性糖質生成酵素が、グルコース重
   合度３以上の還元性澱粉部分分解物から末端にトレハロ
   ース構造を有する非還元性糖質を生成する酵素であるこ
   とを特徴とする請求項７記載の非還元性オリゴ糖の製造
   方法。
9. 【請求項９】 糖転移酵素が、シクロマルトデキストリ
   ン・グルカノトランスフェラーゼ、α−アミラーゼ又は
   α−グルコシダーゼであることを特徴とする請求項６、
   ７又は８記載の非還元性オリゴ糖の製造方法。
10. 【請求項１０】 加水分解酵素が、β−アミラーゼであ
    るか、又はβ−アミラーゼと澱粉枝切酵素であることを
    特徴とする請求項６、７、８又は９記載の非還元性オリ
    ゴ糖の製造方法。
11. 【請求項１１】 請求項１乃至５のいずれかに記載の非
    還元性オリゴ糖と他の糖質とを含有する糖混合溶液を強
    酸性カチオン交換樹脂又はオクタデシルシリカゲルを用
    いるクロマトグラフィーにかけ、該非還元性オリゴ糖高
    含有画分を採取することを特徴とする非還元性オリゴ糖
    の製造方法。
12. 【請求項１２】 請求項１乃至５のいずれかに記載の非
    還元性オリゴ糖を含有してなる飲食物。
13. 【請求項１３】 非還元性オリゴ糖の含有量が０．１ｗ
    ／ｗ％以上であることを特徴とする請求項１２記載の非
    還元性オリゴ糖を含有してなる飲食物。
14. 【請求項１４】 請求項１乃至５のいずれかに記載の非
    還元性オリゴ糖を含有してなる化粧品。
15. 【請求項１５】 非還元性オリゴ糖の含有量が０．１ｗ
    ／ｗ％以上であることを特徴とする請求項１４記載の非
    還元性オリゴ糖を含有してなる化粧品。
16. 【請求項１６】 請求項１乃至５のいずれかに記載の非
    還元性オリゴ糖を含有してなる医薬品。
17. 【請求項１７】 非還元性オリゴ糖の含有量が０．１ｗ
    ／ｗ％以上であることを特徴とする請求項１６記載の非
    還元性オリゴ糖を含有してなる医薬品。
18. 【請求項１８】 請求項１乃至５のいずれかに記載の非
    還元性オリゴ糖を含有してなる成型物。
19. 【請求項１９】 非還元性オリゴ糖の含有量が０．１ｗ
    ／ｗ％以上であることを特徴とする請求項１８記載の非
    還元性オリゴ糖を含有してなる成型物。