TW400334B

TW400334B - Novel non-reducing oligosaccharide having a structure represented by the formula of alpha-d-oligoglucosyl alpha-d-oligoglucosides, processes and uses thereof

Info

Publication number: TW400334B
Application number: TW083105867A
Authority: TW
Inventors: Takahiko Bandai; Takashi Shibuya; Toshiyuki Sugimoto; Toshio Miyake
Original assignee: Hayashibara Biochem Lab
Priority date: 1993-06-28
Filing date: 1994-06-28
Publication date: 2000-08-01
Also published as: ATE186542T1; US5780620A; KR950000723A; EP0636632A3; DE69421569D1; DE69421569T2; KR100334056B1; EP0636632B1; JPH0770165A; JPH08127587A; CN1054855C; CN1123793A; IL110122A; CA2126929C; AU6601894A; DK0636632T3; ES2140507T3; AU685799B2; IL110122A0; JP3182679B2

Description

A7 B7 五、發明説明（1 ) 發明之背登 1 .發明之範醻 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明有關於新穎的糖類以及其製法與用途，特別是有關於以通式α—D-寡葡萄糖基α-D-寡葡萄糖苷爲代表的非還原寡糖，及其製法與用途。 2.先前技藝槪沭經濟部中夬揉準局貝工消費合作社印11 習知數種清楚的非還原寡糖形式：其中一種爲葡荀糖與果糖以a — 1，/5 — 2結合，換言之，其分子具有蔗糖結構的寡糖，主要發現於蔗糖、愛爾糖（ er 1 ose )、蜜二糖、松三糖，、卡斯托糖（kestose );糖醇，例.如麥芽蓆醇，麥芽三糖醇以及乳糖醇；海藻糖，其中葡萄糖間互以a- 1，a- 1結合·然而分子帶有蔗糖結構者則很容易在酸性溶液下分解，因爲蔗糖結構是不穩定的，這些會限制食品、飲料等之加工。糖醇，通常是在髙壓下以氫化反應製備，有較好的穩定性，但是過度食用時也會有導致腹瀉之缺點，因爲糖醇在人體內較不易消化與吸收。至於海藻糖則非常穩定，同時本發明也發現其極易被人髖消化與吸收轉化爲能量，然而也發現海藻糖分子量低，黏度較差，以及髙度結晶性，所以當以濃縮液形式使用時，在貯存狀態下會有結晶析出，這些均會限制食品工業上时· 用途•所以發展更髙級的非還原寡糖，便有極大的需求，此種非還原寡糖需有更佳安定性，更佳消化與吸收效果，適當的黏度，以及當其爲結晶形式時較不易或不會結晶· 本纸張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4规格（210X297公釐）

A7 B7 五、發明説明（1 ) 發明之背登 1 .發明之範醻 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明有關於新穎的糖類以及其製法與用途，特別是有關於以通式α—D-寡葡萄糖基α-D-寡葡萄糖苷爲代表的非還原寡糖，及其製法與用途。 2.先前技藝槪沭經濟部中夬揉準局貝工消費合作社印11 習知數種清楚的非還原寡糖形式：其中一種爲葡荀糖與果糖以a — 1，/5 — 2結合，換言之，其分子具有蔗糖結構的寡糖，主要發現於蔗糖、愛爾糖（ er 1 ose )、蜜二糖、松三糖，、卡斯托糖（kestose );糖醇，例.如麥芽蓆醇，麥芽三糖醇以及乳糖醇；海藻糖，其中葡萄糖間互以a- 1，a- 1結合·然而分子帶有蔗糖結構者則很容易在酸性溶液下分解，因爲蔗糖結構是不穩定的，這些會限制食品、飲料等之加工。糖醇，通常是在髙壓下以氫化反應製備，有較好的穩定性，但是過度食用時也會有導致腹瀉之缺點，因爲糖醇在人體內較不易消化與吸收。至於海藻糖則非常穩定，同時本發明也發現其極易被人髖消化與吸收轉化爲能量，然而也發現海藻糖分子量低，黏度較差，以及髙度結晶性，所以當以濃縮液形式使用時，在貯存狀態下會有結晶析出，這些均會限制食品工業上时· 用途•所以發展更髙級的非還原寡糖，便有極大的需求，此種非還原寡糖需有更佳安定性，更佳消化與吸收效果，適當的黏度，以及當其爲結晶形式時較不易或不會結晶· 本纸張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4规格（210X297公釐）經濟部中夬搮準局貝工消費合作社印«. 年月α7 [8^7.30^ ^_ 五、發明説明（2 ) 本發明之曰的本發明爲提供一種分子中帶有海藻糖結構，並且不易或是不會結晶，或是當其爲結晶形式時，有較佳溶解度之新穎非還原寡糖，並提供該非還原寡糖之製法與用途· 本發明之镰沭爲了建立此類非還原果糖及其製法，本發明之發明人研究許多可以在海藻糖的二個葡萄糖基團結合外加糖類的方法。本研究終於發現該目的可以藉由糖轉化酶的作用下，在含有海藻糖及α -葡萄糖基糖類之溶液或是含有帶末端非還原糖溶液中達到（該糖在本發明提及，爲 -寡葡萄糖基α-D—寡葡萄糖替〃，此已在日本專利公報No. 362，131/92由該發明人提出，本發明則使之更完善•特別地*本發明建立一種海藻糖的兩個葡萄糖基團上結合一或數個葡萄糖基的非還原糖，以及建立一種製造該非還原寡糖的方法，本發明更進一步提供該非還原寡糖的數種用途，所利用的特性包括較佳的安定性，適t當的黏度，不易或不結晶或是在結晶狀態下有較佳的溶解度，食用時無味或較低的甜度，以及可消化轉換爲熱置〇圖式之槪述圖一表示溫度對根瘤菌（Rhizobium ) Μ — 1 1之非還原糖產生酵索之活性的影響β 圖二表示ρ Η值對根癥菌Μ_ 1 1之非還原糖產生酵本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先鬩讀背面之注f項再填寫本頁) ------------—-L------訂 —r----L—— 經濟部中夬搮準局貝工消費合作社印«. 年月α7 [8^7.30^ ^_ 五、發明説明（2 ) 本發明之曰的本發明爲提供一種分子中帶有海藻糖結構，並且不易或是不會結晶，或是當其爲結晶形式時，有較佳溶解度之新穎非還原寡糖，並提供該非還原寡糖之製法與用途· 本發明之镰沭爲了建立此類非還原果糖及其製法，本發明之發明人研究許多可以在海藻糖的二個葡萄糖基團結合外加糖類的方法。本研究終於發現該目的可以藉由糖轉化酶的作用下，在含有海藻糖及α -葡萄糖基糖類之溶液或是含有帶末端非還原糖溶液中達到（該糖在本發明提及，爲 -寡葡萄糖基α-D—寡葡萄糖替〃，此已在日本專利公報No. 362，131/92由該發明人提出，本發明則使之更完善•特別地*本發明建立一種海藻糖的兩個葡萄糖基團上結合一或數個葡萄糖基的非還原糖，以及建立一種製造該非還原寡糖的方法，本發明更進一步提供該非還原寡糖的數種用途，所利用的特性包括較佳的安定性，適t當的黏度，不易或不結晶或是在結晶狀態下有較佳的溶解度，食用時無味或較低的甜度，以及可消化轉換爲熱置〇圖式之槪述圖一表示溫度對根瘤菌（Rhizobium ) Μ — 1 1之非還原糖產生酵索之活性的影響β 圖二表示ρ Η值對根癥菌Μ_ 1 1之非還原糖產生酵本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先鬩讀背面之注f項再填寫本頁) ------------—-L------訂 —r----L—— 年月日修正ά補充

Α7 Β7 經濟部中央梯率局貝工消费合作社印装五、發明説明（3 ) 素之活性的影舂· 圓三表示根瘤菌Μ-11之非還原糖產生酵索的熱穩定性。圖四表示根瘤菌Μ - 1 1之非還原糖產生ρ康鳥.卞办邊穩定性。 :許:-外：餐圖五爲α -D -麥芽三糖基a -D —麥芽三#苷‘體 .......... 之紅外線吸收光譜· .... 圖六爲a-D_麥芽三糖基α — D —麥每€糖苷晶體 - 之粉末X —光繞射圖· * 本發明之詳撒雖然本發明之非還原寡糖可用化學方法合成，但是若能以工業上的觀點以提供生化反應，是更有幫助的；特別是糖轉移酶可作用於含有海藻糖及α -葡萄糖基糖類，或是作用於含有末端帶海藻糖結構的非還原糖的生化反應。較好的海藻糖來源爲具有可能的最高含置的海藻糖，通常在重置百分率5 %或以上，較好爲2 0%或以上的糖漿及粉末，更好爲海藻糖佔重置百分率5 0%或以上之粉末（ ' ·. 以下除特別指出外，百分率代表重置百分率。）爲了製備上述的糖漿或粉末，以酵素性轉化還原部份澉粉水解產物（ruduing partial starch hydrolyeis )的方法，特別是該申請者發表的日本專利公報N ο . ·' 362，131/92，156，338/93 及 199 ，9 7 1/9 3之方法是可行的*因爲道些方法更容易大置生產，如果必要時，商業上有用的海裹糖也可任意使用 JIt$k 面κ Γ s 再旁 % 訂本纸張尺度逋用中國國家揉準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 6 年月日修正ά補充

Α7 Β7 經濟部中央梯率局貝工消费合作社印装五、發明説明（3 ) 素之活性的影舂· 圓三表示根瘤菌Μ-11之非還原糖產生酵索的熱穩定性。圖四表示根瘤菌Μ - 1 1之非還原糖產生ρ康鳥.卞办邊穩定性。 :許:-外：餐圖五爲α -D -麥芽三糖基a -D —麥芽三#苷‘體 .......... 之紅外線吸收光譜· .... 圖六爲a-D_麥芽三糖基α — D —麥每€糖苷晶體 - 之粉末X —光繞射圖· * 本發明之詳撒雖然本發明之非還原寡糖可用化學方法合成，但是若能以工業上的觀點以提供生化反應，是更有幫助的；特別是糖轉移酶可作用於含有海藻糖及α -葡萄糖基糖類，或是作用於含有末端帶海藻糖結構的非還原糖的生化反應。較好的海藻糖來源爲具有可能的最高含置的海藻糖，通常在重置百分率5 %或以上，較好爲2 0%或以上的糖漿及粉末，更好爲海藻糖佔重置百分率5 0%或以上之粉末（ ' ·. 以下除特別指出外，百分率代表重置百分率。）爲了製備上述的糖漿或粉末，以酵素性轉化還原部份澉粉水解產物（ruduing partial starch hydrolyeis )的方法，特別是該申請者發表的日本專利公報N ο . ·' 362，131/92，156，338/93 及 199 ，9 7 1/9 3之方法是可行的*因爲道些方法更容易大置生產，如果必要時，商業上有用的海裹糖也可任意使用 JIt$k 面κ Γ s 再旁 % 訂本纸張尺度逋用中國國家揉準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 6

本發明之可行的α —葡萄糖基糖類，爲帶有α —葡荀糖苷結合的糖類，例如澱粉、糊化澱粉、液化激粉、溶解激粉、直-鍵澱粉、還原部份澱粉水解產物、糖轉化激粉,、環狀糊精、環糊、麥芽寡糖及蔗糖· - · 'i * 經濟部中央標準扃貝工消费合作社印策；··，；Α:. 適用於本發明的非還原性糖，爲本申請者.發表於日本專利公報No. 362，131/92之非還原性糖，ϋ備乃盛將還原部份激粉水解產物於酵素作用下，以形成一種宋端帶有;來自還原部份澱粉水解產赞之葙荀糖聚合·度爲3或更髙之海藻糖結構的非還原寡糖（該酵索在本發明中可以標明爲'"非還原寡糖產生酵素'）·根據本申請者所發表於日本專利公報No. 349，216/93，此非還原糖產生酵素可以由可產生該酵素之微生物的培養，或是.由傳統方法任 ....... 意地純化該培養物而得到酵素之製備；舉例而言，可產生該酵素的微生物包括根瘤菌M_ll( Rhizobium sp. M-11)及節桿菌Q 3 6 ( Arthrobacter Q36*已貯存於國家失物科學及人類技術，研究所之專利微生物庫，地址爲 1—3， H-igashi 1 Chome,Tsukuba-shi, Ibaraki-ken, Japan;登錄號碼分別爲F E RMB P — 4130， FERMBP-4316)，並於民國83年6月21日寄存於食品工業發展研究所，寄存編號爲9 1 0 0 0 1释 9 1 0 0 0 2，以及傳統的微生物，包括Breuibacterium helovolum ( ATCC 1 1 822 )，水生黄質菌（卩187〇5&(^61：卜 am aquatile ( IFO 3772) ) ' Micrococcus luteus ( 尺度適用中國國家揉準（CNS ) Λ4规格（210X297公釐) (請先閲讀清面之注f項再填寫本頁) 钉 •rv

正如同實施例A- 1之產品，上述粉末^用於許多食品、飮料、化粧品、槊品及成型物之組成份。經濟部中央橾準局貝工消费合作社印製奮例A - 1 Π 將1份重實驗A—6方法製備之海藻糖與2. 5份重之澱粉糊精（DE 15)溶於4份重的水，同時加熱，將生成的糊精調至63°C，pH5. 5，加入20單位/ 克糊精之cyclomatodextrin糖基轉移酶，此酶之來源爲 Bacillus stearothermonhiIns ，購自 Hayashibara Bio-shemical Laboratories, Inc. Okayama, Japan ，反應 3 0小時，加熱以鈍化殘留酵素。隨後以活性碳將溶液脫色’以離子交換物（H +—及OH-—型）去離化子化與純化’以習知方法濃縮而得7 8%產量之糖漿，約佔9 0% 乾固重。含有佔乾固重6 0%非還原醣的產物，該非還原醣例如麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷基麥芽四糖基麥芽三糖苷、麥芽四糖基麥芽四糖苷、麥芽五糖基麥芽四糖苷、麥芽五糖基麥芽五糖苷、麥芽六糖基麥芽五糖苷、麥芽六糖基麥芽六糖苷、麥芽七糖基麥芽六糖苷、麥芽七糖基麥芽七糖苷、麥芽八糖基麥芽七糖Μ、麥芽八糖基麥芽八糖苷、麥芽九糖基麥芽八糖苷及麥芽九糖基麥芽九糖苔，此產物之甜度減低且具適當黏度，可隨意用於食品、飲料、化粧品、藥品與成型物等組成物。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） --- - n - - m H Λ n I m m n I (請先閲讀背面之注意事項再4f寫本頁) - - A7 B7 五、發明説明（5 ) I F 0 3 0 6 4 ) ' Micrococcusroseus ( ATCC186)， Curtobacterium citreum ( IFO 15231) ' Mycobacteri- um smegmatis (ATCC 19420)及 Terrabacter tumescens (IFO 1 296 0 )，或是以傅統方法任窟地純化該培養物，以得到酵素製劑，該培養物或酵素製劑有形成非還原糖的特性，此非還原糖具有源自還原性部份澱粉水解產物之葡荷糖聚合度爲3或更髙的海藻糖結構。 ' 此類的非還原糖之製造，加入前述非還原糖產生酵素以作用於非還原性部份澱粉水_產物，是有所助益的；該非還原性部份澱粉水解產物之製備，乃是將α -葡荀糖基糖類（例如還原部份澱粉產物、澱粉、糊化澱粉、液化澱粉、榕化澱粉、直鍵澱粉、支鍵澱粉及糊精）於α -澱粉酶或澱粉去支鍵酶之作用下而得· 經濟部中央梯準局員工消费合作社印装 (請先閲讀背*之f項再填寫本頁) 至於糖轉移酶，則以環狀麥芽糊精聚葡萄糖轉移酶（ EC 2.4.1.19)最好，必要時可使用其他酵索，例如α —澱粉酶、α -葡萄糖苷酶•使用環狀麥芽糊精聚«萄糖轉移酶的情形，爲任意選自傳統的微生物芽胞桿菌靥（Bacillus )或克雷伯氏菌屬（Klebsiella ) · 該α -澱粉酶包括由微生物芽胞桿菌屬所得者（例如糖化的α-澱粉海），α—葡萄糖苷海則包括由盤尼西林（ senicillium )屬及毛徽菌屬（.Mucor )等傅統微生.物/ 所得酵索，以及由米及麥種子等植物所得之酵索· 任一糖轉移反應可在本發明中使用，只要這些反應可以產生本發明之非還原寡糖，並且視使用的酵素而選擇反本纸張尺度逋用中國國家標隼（CNS ) A4规格（210X297公釐）經濟部中央橾準局貝工消費合作社印製 A7 _ B7_ 五、發明説明（42) $9.月19日修正 . 啻施例B - 1 _補充甜味劑以實施例A - 6的方法所製得之晶髖麥芽三糖基麥芽三糖Ml份重，與〇 ._ 〇 5份重的’alpha G Sweet# ( T o g o S u g a r R e f i n i n g C ο. , L t d.，T o k y ο, J a p a η 之商業用α —葡萄糖基甜菊精苷）混合至均質，將該混合物通入造粒機，以得到粒狀的甜味劑。此種甜味劑具有較好的味道，並且具有比蔗糖強2倍的甜度，並且在相同甜度時，其熱量約爲蔗糖的一半。對於飲食，之卡路里受限制的肥胖症或糖尿病人而言，此種甜味劑適用於賦予低卡路里食品及飲料甜味。進一步而言，此種甜味劑也適用於賦予與妨止牙齒保護直接有關的食品及飲料甜味，因爲此種甜味劑經促進蛀牙的微生物作用產生的酸及不可溶性聚葡萄糖是很少的* 實施例Β — 2 硬糖 1 0 0份重的5 5%蔗糖溶液，與含有由實施例Α — 1之方法所得到的麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷之非還原寡糖3 0份重，共同混合並加熱，所得混合物於真空下加熱澳縮至水含量小於 2%，加入1份重的擰檬酸、適量的檸檬味、著色劑，並以一般方式成型。該產品爲酥脆、口感佳、不具蔗糖結晶的高品質硬糖本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） ---------V' 裝 —I (請先閲讀背面之注意事項再4ί寫本頁) -β -45 - 經濟部中央樣準局貝工消费合作社印製 A7 B7 五、發明説明（6 ) 應。例如於使用環狀麥芽糊精轉移酶或α -澱粉酶之情形，可以選用容許兩種酵素之任一種作用於含海藻糖及-葡荀糖基糖類之溶液（例如液化澱粉及還原之部份澱粉水解產物）之反應，以致於一或更多的α —葡荀糖基團可由 α —葡萄糖基糖類轉移到海藻糖的兩個葡荀糖基國，而得到本發明之非還原寡糖。在此狀況下，葡荀糖基糖類對海藻糖之重置比爲0. 1 — 1 0 0，較好爲0. 2 — 2 0。另一代替的方法爲，or — D —寡葡荀糖基α—D — 寡葡萄糖苷之製備，可將末端帶有海藻糖結構的非還原糖，於環狀麥芽糊精聚葡荀糖轉移酶作用而得。使用α —葡萄糖苷酶的情形，舉例而言，可以選用容許該酵素作用於含海藻糖及α -葡荀糖基糖類（例如具相當低分子量的糊精、麥芽寡糖及蔗糖）之溶液的反應，以致於α-葡荀糖基_由α —葡萄糖基糖類轉移到海藻糖之兩個葡萄糖基圃，在此狀況下，α -葡荀糖基糖類對海藻糖之重量比通常爲 0. 1 — 100，較好爲 0· 2 — 20〇這些酵素性反應通常在溫度2 0 — 8 0 °C，ρΗ3_ 9下完成，而且此類酵素及微生物在本質上，當以傅統方法固定化時，可以用連嫌式或批式法重覆使用，傳統固定的方法，舉例而言，包括載體吸附法、交聯法及誘補法（ entrapped method )。就前述的糖轉移反應中，使用環狀麥芽糊精聚葡萄糖轉移酶之反應，以工業上的觀點，是最有用的反應，因其容許使用較便宜的α —菊萄糖基糖類作爲糖的給予體，並且得到更高產率的《 - D —寡葡萄糖本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4说格（210X297公釐）-9 (請先《讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 A 7 ___B7_ 五、發明説明（43) ° ‘充實施例Β — 3 萆巷睡 1 5 0份重的新鮮草莓，60份重的蔗糖、20份重的麥芽糖、4 0份重含有實施例Α_ 2之方法得到的麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖Μ、麥芽三糖基麥芽三糖苷之糖漿及5份重的果膠，以及1份重的檸檬酸，於鍋子中煮沸，並將產物裝罐。該，產品爲風味佳且顏色佳的果醬。實施例Β — 4 乳酸飲料 1 0份重的脫脂牛奶於8 0°C滅菌2 0分鐘，冷卻至 40°0，加入0· 3份重的菌朊，於約37 °C下醱酵10 經濟部中央標準局貝工消费合作社印装小時。產物經均質，加入4份重含有實施例A - 8之方法所得之麥芽糖基麥芽糖Μ、麥芽三糖基麥芽糖苷及麥芽三糖基麥芽三糖苷之粉末，加入1份重的蔗糖及2份重的異構糖，混合物保持7 0°C以滅菌，此後將該混合物冷卻，加入適量的風味劑並裝罐* 本產品爲風味、甜味及口感相當調合的高品質乳酸飮料。窗施例B - 5 本紙張尺度逍用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ~~ 經濟部中央梂準局貝工消費合作社印裂 A7 B7 五、發明説明（7 ) 基α — D —寡菊萄糖苷。特別是，由嗜熱性芽胞桿菌（ Bacillus stearothermophilus )所得的環狀麥芽糊精聚葡萄糖轉移酶是極有效的，因其可在高溫下使用，並且此可抑制澱粉物質之老化以及反應混合物的微生物污染，也會加速酵素反應。在此狀況下，當含有結合α —葡萄糖基糖類之海藻糖的溶液（例如葡萄糖當置DE 1〜5 0的糊化澱粉、液化澱粉、還原之部份澱粉水解產物，濉粉糊精及環狀糊精），以及末端帶有海藻糖結構之糖類，於 0. 1單位/克or —葡萄糖基糖類或更多，最好是1 一 2 5單位/克π —葡萄糖基糖類的該種環狀麥芽糊精聚葡萄糖轉移酶作用下，反應1 — 1 0 0小時，較好是4 — 7 0小時，則可形成非還原寡糖（縮寫爲％Gm_T — G η "，其中"分別表示葡萄糖殘基及海藻糖，則表示1至8的整數），例如麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷、麥芽四糖基麥芽三糖苷、麥芽四糖基麥芽四糖苷、麥芽五糖基麥芽四糖替，以及麥芽五糖基麥芽五糖苷，其中一或數個α —葡萄糖基團轉移至海藻糖的兩個葡萄糖基團。必要時，這些非還原糖可進一步置於一或更多的水解酶中，特別是/3—澱粉酶（EC3. 2 . 1. 2)或彡一澱粉酶與澱粉去支鍵酶（例如聚三葡萄糖酶）及異構酶，進而聚集麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖苷，以及麥芽三糖基麥芽三糖苷爲主要產物，繼而收集之。由前述的糖轉移反應，或合併水解反應所形成的四糖本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS M4规格（210X：297公釐） ------------裝------tr------Μ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

A7 与7 五、發明説明（44 澹縮乳 1 0 0份重的鮮乳，溶解3份重含有實施例A - 1之方法所得之麥芽糖基麥芽糖替、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷之非還原寡糖的糖漿，所生溶液以板式加熱器加熱滅菌，濃縮至約7 0%，無菌裝罐。該產品非常適用於嬰兒食品及水果、咖啡、可樂之調味料，因其具溫和甜味及較好的風味》實施例B - fi 粉末果件 3 0份重經噴露乾燥的柳橙汁，加入5 0份重由實施例A - 9之方法所得之高純度麥芽糖基麥芽糖苷粉末、 10份重的蔗糖、0. 65份重的檸檬酸酐、0.1份重蘋果酸、0. 1份重的L —抗壊血酸、〇. 1份重的檸檬酸鈉、0. 5份重的聚三葡萄糖及適量的風味劑，將混合物均質，研磨爲細粉末，通入流體化床造粒機於通風的溫度4 0°C下造粒3 0分鐘；至於以實施例A- 4之方法所得含有高含量麥芽糖基麥芽糖替、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷之糖漿，則作爲黏著劑，噴入粉末上，隨即分成指定的量並包裝。該產品爲具有天然果汁成份約3 0%之粉末果汁。該產品於長期間貯藏下，不會有不良味道及氣味，也不會吸濕及凝固，是非常穩定的。本紙張尺度適用中國围家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、·ιτ 經濟部中央揉準局員工消费合作杜印製經濟部中央橾準局員工消費合作社印装 A7 ____B7_ 五、發明説明（8 ) (或更髙）α—D—寡葡萄糖基α—寡葡荀糖苷佔乾重5 一 6 0%的溶液，可以以液態、糖漿或是經過濾、純化、澳縮以及使用噴露乾燥或冷凍乾燥後之固態等形式被利用 Ο 通常爲了充分發揮較低級的α — D _寡葡萄糖基α — D -寡葡荀糖苷之特性，當完成糖轉移反應以及隨後的水解反應之後，含有四糖、五糖、六糖的產物溶液可以直接利用，或是在使用之前，進行進一步的分離及純化爲富含四糖、五糖、六糖之產物。爲了完成上述的分離及純化，可以任意選用傳統的方法以分離並去除伴隨的糖類，例如以酵母菌醱酵、膜過濾、部份沈降法、鹸處理及（或）管柱層析法。特別是，發表於日本專利公開公報N 〇 . 23，799/83及No.148，794/84所使用以鹽形式之强酸陽離子交換之管柱層析法，對於伴隨的糖類之去除，以收集《含非還原之四糖、五糖或非還原之四糖、五糖、六糖之部份，是相當可行的。該種層析法，任意使用固定床法、移動床法及仿移動床法，均是具實用性的。如果必要時，可以分別收集道些四糖、五糖及六糖 Ο 本發明之α — D -寡葡萄糖基α — D —寡葡萄糖砮，是一種非常穩定、無甜味或低甜度、適當黏度、不易或不結晶或是在結晶形式時爲可溶的非還原寡糖。除此之外，本發明之寡糖是一種很有效的熱量來源，因爲當食用後，寡糖在活體中對消化酶很敏感且容易吸收。進一步而言，本紙張尺度適用中國國家搮準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -11 - (請先閲讀背面之注f項再填寫本頁) ，?τ •Μ 經濟部中央揉準局負工消费合作社印装 A7 B7 五、發明説明（45 ) % % 4修正童施例B - 7 _:補充巧克力 4 0份重的可可簧、1 0份重的可可奶油、3 0份重的蔗糖以及2 0份重含有實施例A - 9之方法所得之高純度麥芽糖基麥芽糖苷粉末共同混合，所得之混合物通入精製器以降低粒子大小，再行通入精磨機於5 0°C揉捏2天，此混合物加入0. 5份重的卵磷脂，並分充混合及分散。此後該混合物以熱控制器調至3 1°C，在奶油凝固之前迅速倒入模子中，以振動器脫氣，並通過1 〇°C的冷卻隧道（Qooling tunnel ) 2 0分鐘以上，以達到完全凝固。隨後將模子內的內容物取出並包裝。具有較佳顏色、光滑表面及質地，且不具吸濕性的上述產品，可柔和地溶於口中，並顯現出溫和的甜味及風味〇眚施例B — 8 口香糖 3份重的膠主要成份以加熱軟化，加入4份重的蔗糖及3份重含有以實施例A-8之方法所製得之麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖苷及麥芽三糖基麥芽三糖苷之粉末，與適量的風味劑及賦色劑混合，以迴轉機揉捏，並以一般方式成型及包裝。該產味爲具有較佳質地、風味及味道的口香糖。本紙張尺度適用中困國家標準（cns )Α4規格（210x297公釐），衣-- (請先鬩讀背面之注意事項再填寫本頁)

*1T -48 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 A7 B7 五、發明説明（9 ) 本發明之寡糖，有降低甜味能力及減少蛀牙的特性，是有效的糖甜味料物質，因爲促進蛀牙的微生物不易在此醱酵 °更近一步而言，本發明之寡糖可以和極易與糖類產生褐變反應之胺基酸、多肽類合併使用，因其具化學安定性。另外正如同具適當的黏度、減低的醱酵能力、控制滲透壓的特性，提供形狀與光滑表面，防止其他糖類之結晶，以及防止澱粉物質之老化等，本發明之寡糖穩定了極易失去活性的生物活性物質。 a - D —寡葡萄糖基a — D —寡葡荀糖苷的道些特性，對於食品、飲料、飼料、寵物食品之製造，以及在化粧品、藥品、成型物等之許多成份之製造，有很大的责用性。根據本發明之α—D—寡葡萄糖基α—D—寡葡萄糖苷，具相當低的分子量，產生甜味的能力低，但卻可完整地作爲甜味劑。此類寡糖可以與適量的一或數種甜味料合併使用，例如粉狀澱粉糖漿、菊萄糖、麥芽糖、蔗糖、異構糖、蜂蜜、楓糖、山梨糖醇、二氫査耳酮（dihydrocha-lcone )、甜菊精、α -糖基甜菊精、瑞巴二苜（reba-udioside )、甘草酸甙、L—天門冬胺醯基一L-苯基丙胺酸甲基酯、糖精、甘油、丙胺酸，並且必要時可以和糊精、澱粉、乳糖等塡充劑合併使用。粉末的—寡葡萄糖基α-D—寡葡萄糖基可完整地用於塡充劑、載色劑、黏合劑；或者必要時，與其他塡充劑、載色劑及（或）黏合劑混合後，接下來將其成型爲顆粒狀、球形、短棒狀、板狀、立方體或藥錠狀，因爲本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) Α4规格（210X297公釐） -12 - -------------- (請先閲讀背面之注f項再填寫本頁) .tr Μ A7 A7

五、發明説明（46) 窗施例B - 9 卡士達乳品（Custand Milk )

1 Ο 0份重的玉米澱粉、1 Ο 0份重含有以實施例A 請先閱讀背之注意事項再窝本頁一 3的方法所製得之麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷之粉末、8 0份重的麥芽糖、2 0份重的蔗糖及1份重的氯化鈉混合均勻，所生之混合物加入2 8 0份新鮮蛋，攪拌使混合，逐漸加入 1 ，0 0 0份重的沸騰牛奶，隨後加熱持績攪拌，直到玉米澱粉糊化以及整個混合物變爲半透明狀，冷卻，加入適置香草味，將其分爲指定的量，並包裝。該產品具有光滑表面，溫和的甜味及可口的味道。訂眚施例B — 1 0 速食優筋乳C Uiro-no-moto) 經濟部中央標準局貝工消费合作社印裝 9 0份重的米粉末與2 0份重的玉米澱粉、1 2 0份重由實施例A - 9所得之高純度麥芽糖基麥芽糖苷粉末、及4份重的聚三葡萄糖混合均勻，以得到’uiro-no-ra〇i；o '。將 tuiro-noioto^"與適量的 ’maccha (—種綠茶 )^ 、水共同揉捏，所得產物裝瓶並蒸煮60分鐘，以得到 'maccha-uiro’ 。該產品有較好的光滑表面，以及刺激性。進一步地，該產品有較長的保存時間，因爲澱粉老化受到抑制。實施例Β - 1 本紙張尺度適用中囷國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -49 - 經濟部中央橾準局員工消費合作社印製 A7 ________B7____ 五、發明説明（10) 粉末是相當不具吸濕性的、具高的抗熱性，並且是非常穩定的°此種粉末是相當具實用性的，例如可作爲糖果及焙培產品的原料，其中麵粉、玉米燕麥及澱粉則部份或完全以上述粉末取代。進—步而言，本發明之β — D —寡葡萄糖基《 — D — 寡葡荀糖苷賦予食品及飲料略具甜味，是具實用性的，並且能改善食品及飲料的味道及品質，因爲其味道能與其他味道調和，例如酸味、鹹味、澀味、美味及苦味，並且因爲其具高的抗强酸性及抗熱性。舉例而言，本發明之寡糖非常逋用於許多調味料，例如醬酒、粉狀醬酒、皤酒粉、味增、味增粉、、moromi，、，hishio，、，furikake，、蛋黃费、調味油、醋 ' ’sanbaizu* 、、funmatsu_su-shi_su 、 chuka_no-moto’ 、、tentsuyu( soup for tenpura ) ’ 、’mentsuyu (作爲日氏麵條的湯），、蛋糕、蕃前醬、lyakiniku-no-tare (烤肉番）# 、咖哩溶融乳酷、傲湯預調物、湯預調物、’dashi-no-iBoto’ ，混合調味料、(强烈甜清酒），、，shiniir-in (人造mirin ) #餐桌砂糖及咖啡用糖。除此之外，本發明之寡糖非常適合賦予甜味，例如日氏點心（例如、 senbei (米製脆餅）^ 、、arare (片狀 senbei )# 、 ’ okoshi (粟及米製脆餅），）、米糕、(豆餐塡充之甜麵包）’ 、^uiro (甜米果凍），、，大豆管，、yokan (丑製甜果凍）、、mizu-yokan (軟質紅豆果凍〉# 、"kingyokiT 、果凍、及、amedama (日氏太本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公羞） -13 - ------------d------IT-------4. (請先閱讀背面之注f項再填寫本頁) A7 B7 五、發明説明（47

年月曰修正I 时9· U補H 經濟部中央梂準局負工消費合作社印裝 3 _ 丁二醇及 0 . 5份重的聚氧乙嫌一十一酸（？〇17〇\76"^71611- e behenyl ether ) ，1份重的四油酸聚氧乙山梨糖醋（ polyoxyethylene sorbitol tetrao 1 eate ) ，1 份重的

油溶性一硬脂酸甘油酯，〇· 5份重的廿二醇、1份重的鳄梨油（avocado oil )、3 . 5份重含有以實施例A —7的方法所得之麥芽糖基麥芽糖Μ、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷之糖漿，1份重的α-葡萄糖基芸香式（α — glycosyl rutin )、適量的維生素Ε及殺蟲齊（，以一般形式加熱溶解，混合物加入5份重的1， 3 — 丁二醇.、0. 1份重的狻乙基聚合物、85. 3份的蒸餾水，並以均質機乳化。此種保水的乳液*適用於作爲防曬劑或皮虜漂白劑。實施例B - 1 2 皮虜乳霜 2份重的一硬脂酸聚氧乙二醋（p〇ly〇xyietene glycol monostearate )， 5 份重的自乳化之一硬脂酸甘油酯、2份重的葡萄糖基芸香甙、1份重的液體石獵、 1 0份重的三辛酸甘油酯、4份重以實施例Α - 9的方法所得之高純度麥芽糖基麥芽糖苷粉末，及適量的防腐劑，以一般型式加熱互溶，所生溶液加入 6 6份重的蒸餾水’以均質機乳化，並混合適量的風味劑，持績攪拌。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） ^-- (請先閲讀背面之注意事項再Μ寫本頁) 訂 -50 - 經濟部中央梯準局員工消費合作社印裝 A7 B7 五、發明説明（11 ) 妃糖）：西氏點心（例如甜麵包、餅乾、脆胼、小甜胼、狐、布丁、奶油牛奶、卡氏達牛乳、膨發麵糊、華夫胼乾、海綿蛋糕、油炸圈餅、巧克力、口香糖、牛奶糖；冷凍甜點（例如冰淇霖及雪果霜）：糖漿（例如保存水果之糖漿、laki-gori (鉋冰:塗醬及糊（例如麵粉糊、花生醬及水果醬）：加工水果及蔬菜（例如果醬、橘皮果簪、糖漿保存水果、結晶水果）：醃渍物（例如* fuk-ujin-zuke (於番油中醃濟之薄片蔬菜）、、bettara-zu-ke (新鮮箱葡酸潰物）# 、'''senmai-zuke# 、、rakky〇- zuke (醃溃冬葸）：醃潰物之預調物（例如~。1^&11-211-ke-n〇-raoto# 、'"'kaltusai-zuke-no-nioto’ ；肉製品（例如火腿、香腸）：魚肉製品（例如魚肉火腿、魚肉香腸、 Mamaboko (煮過的魚醤）# 、^chikuwa (竹輪），、 ♦ tenpura (深烤食物）# :甜碎溃瓜（例如Ή - ηο-β h i o ka r a ( 海星鹽醃肉臟） # 、 M ka - η 〇 - s h i o ka r a (烏賊鹽鹿肉臟 # 、 '"'su-konbu* 、 '"'saki-sururae·及、fu- gu-no-mirinboshi# : '"tsukudani (醬油中蒸煮之食物 )(例如、nori (乾燥海草）'、、sansai (山蔬菜）〃、’sururae (乾燥烏賊）〃、小魚及介殼類：日常菜（例如、nimame (煮過的豆子）'、馬鈴薯沙拉及，konbu-mak i (海帶捲）# :乳製品：瓶裝及螬裝食品（例如肉、魚肉、水果、蔬菜）：酒精飮料（例如人造清酒、澳酒、葡萄酒及威士忌）••飲料（例如咖啡、可可、果汁、碳酸飲料、乳酪飲料及乳酸菌飲料：預調物或速食食品（例如 ( CNS ) ( 210X297^* ) -14 - ------------^— <請先閱讀背面之注意事項再填寫本I)

*1T d

五、發明説明（4士}· 該產品爲極佳的塗敷乳霜，適用於作爲齒曬乳霜皮經濟部中央揉準局貝工消費合作社印裝虜清潔劑及皮虜漂白劑。宣施例B - 1 3 a_s_ 45份重的磷酸氫鈣，1. 5份重的月桂酸，鈉，2 5 份重的甘油’ 0 . 5份重的肉桂酸聚氧乙聚山梨糖酯（

Polyoxylene sorbitan lausate ) ，1 5 份重以實施例 A ~ 4的方法所得具高含量麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥$糖替、麥芽三糖基麥芽三糖替之糖漿、〇 . 0 2份重的糖精、0· 05份重的防腐劑，與13份重的水共同混合。該項具有較光滑表面及較佳清潔效果的產品，適合作爲牙育。實施例B _ 1 4 插管漕食品組成包括：20份重以實施例A—8之方法所得含有麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷，1.1份重的甘油、1份重的麩胺酸鈉、 0. 4份重的乳酸鈣、0.1份重的碳酸鎂、0. 01份重的維生素81及0. 01份重的維生素B2 ，以小層鋁薄包裝分裝成24g，隨後加熱密封。將一包該產品溶於3 3 - 5 0 0 m又的水，採非經口本紙浪尺度逋用中國國家梯準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） (诗先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -51 經濟部中央榇準局貝工消費合作杜印聚本紙張尺度逍用t國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） A7 ____B7_ 五、發明説明（l2) 布丁預調物、熱蛋糕預調物、"^sokuseki-shiruko〃（紅豆湯與米糕的預調物）|以及即食湯；嬰兒食品：以及治療性飲料，並且適於改善它們的味道及品質。進一步而言，本發明之寡糖可作爲家禽或家畜（包括蜜蜂、蠶、魚）之飼料及寵物食品，以改善它們的味道品質。更進一步地，本發明之寡糖非常逋用於固髖、漿狀或液態形式用於口的甜味劑，包括化粧品及藥品（例如雪茄、香煙、牙育、口紅、唇育、內服藥錠劑、魚肝油、口腔清新劑、口香丸及嗽口劑），除此之外也可以作爲味道品質改良劑、味道掩藏劑及品質改良劑。更進一步而言，本發明之寡糖非常適用於化粧品製造之安定劑、滲透壓控制劑、載色劑、水份控制劑、黏度控制劑及品質改良劑，例如肥岂、皮膺乳液、沐浴乳、洗髮乳、唇賣、皮虜清潔劑及生髮劑。本發明之α - D —寡葡萄糖基a -D —寡葡萄糖苷也適用於藥品製造中，扮演生物活性物質中，安定活性或活性成份的安定劑，例如組織介素（包括干擾素-α、干擾索一 /?、干擾素一r、腫瘤壞死因子一α、腫瘤壞死因子一 /?、病毒遷移抑制因子、菌落刺激因子、轉移因子、內白血球素2 :賀爾蒙（例如胰島素、生長激素、泌乳激素、血紅素沈澱素、濾泡激素；疫苗（例如BCG疫苗、日本腦炎疫苗、麻疹疫苗、脊髓灰白質炎疫苗、牛痘病素疫苗、破傷風類毒素、蛇毒抗毒素、人體免疫球蛋白；抗生素（例如盤尼西林、紅黴素、氯徽素、四環素、鍵徽素及 -15 - ~~ - IT.4 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

第83105867號專利案中文説明軎修哑頁民國89年05月修正 B7 五、發明說明（49 ) 投與法注入鼻腔、胃、腸。該產品非常適用於以非經口方式插管灌食於家禽，以及人類。實施例B — 1 5 插管灌食品組成包括：5 8 0份重的由實施例A - 6之方法所得之晶體麥芽三糖基麥芽三糖苷、1 9 0份重乾燥後的蛋黃、209份重的脫脂牛乳、4. 4份重的氯化鈉、 1. 85份重的氯化鉀、4份重的硫酸鎂、0. 01份重的維生素Βι 、〇. 1份重的抗壞血酸鈉、0. 6份重的維生素E乙酸鹽及〇. 04份重的菸驗醯胺，以小層鋁薄包裝分裝成2 5 g，隨後加熱密封。將一包該產品溶於約1 50_300mj?的水，採非經口投與法注入鼻腔、胃、腸》實施例B — 1 6 液體干擾素藥劑由 Hayash i bar a Biochemical Laboratories, Inc., Dkayama, Japan 及 Cosmo Bio Co.， Ltd., Tokyo, Jap- an製造之商業化的天然人體干擾素-r製劑，以一般型式固定於抗人體干擾素一 r抗體管柱，以便吸收製劑中的天然人體干擾素一 r ，並通入小腿血漿蛋白，作爲去除的安定劑，將含有以實施例A — 5的方法所製之高純度麥芽本紙張尺度滷用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂---------線經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -52 - 經濟部中央梂準局貝工消費合作社印裝 A7 B7 五、發明説明（13) 康徽素，維生素（例如維生素Βχ 、維生索B2 、維生素 C、魚肝油、類胡蘿葡素、麥角脂醇及生育酵：酵索（例如脂肪酶、彈性蛋白酵素、尿激酶、蛋白酶、聚葡萄糖海 :萃出物（例如人參萃出物、彈響龜萃出物、細肋球藻萃出物、蜂膠萃出物、皇家果凍：活菌（例如病毒、乳酸菌、雙叉样菌及酵母菌），除此之外，也可作爲滲透壓控制劑、黏著劑、插管灌食及糖漿。合併本發明之α — D—寡葡萄糖基α — D —寡葡萄糖苷，於上述含於食品、飲料、化粧品、藥品、成型物之成份中，在完成其加工之前可任意使用俥統的加工方法，例如混合、揉揑、溶解、融化、浸溃、滲透、塗抹、貼敷、塗佈、噴霧、注射及凝固。所合併之α - D -寡葡荀糖基a — D—寡葡萄糖苷之用置，設定在使a -D —寡菊萄糖基α - D —寡葡萄糖表現其特徴的範園，通常爲0. 1%或更高，較好佔產品的5%或更高。所得之成份將可發現其顯著的用途，例如用於家庭、農業、森林及化學工業產品中，並且用於食品、飲料、化粧品及內服或外用的薬品。以下實驗將詳細解釋本發明，特別地，實驗Α首先解釋由根瘤菌屬Μ - 1 1之非還原糖生產酵素之製備、純化及特徵，其次舉例說明使用此酵素，由還原性部份澱粉水解產物中，有關海藻糖及末端帶有海藻糖結構之非還原糖之製備。至於實驗Β則解釋本發明中許多《 _D —寡葡萄糖基α - D -寡葡萄糖苷之製備與物化性質。本紙張尺度適用中困國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） -16 - -----------ιλ------IT------ix (請先閱讀背面之注$項再填寫本頁)

經濟部中央揉準局貝工消費合作社印«. 五、發明説明（5Q) 糖基麥芽糖苷糖漿之生理食鹽水通過管柱，豳整生理食鹽水之pH，可洗提7% (乾基）的天然人體干擾素_r。此後將洗提液經膜過濾，並滅菌裝入藥瓶中，以得到含有 1 05單位天然人體干擾素_r之液體薬劑· 此液體藥劑非常適用於病毒性疾病、過敏、風濕症、糖尿病、惡性腫瘤之治療，其中該液體藥劑可經口服或非經口服，劑量爲1 一 2 OmJ? /天/成人》此液體藥劑於 4 °C或2 5 °C下靜置2 0天，依然可保持其最初的活性，因爲上述麥芽糖基麥芽糖苷可作爲安定劑。窗施例B - 1 7 液體腫瘤壊死因子薬劑由 Hayashibara Biochemical Laborator i es, Inc. Okayama，Japan 製造，以及 Cosmo Bio Co., Ltd., To-kyo, Japan出售之天然人體腫瘤壞死因子一α藥劑，以一般方式固定於抗人體腫瘤壞死因子一 α抗體管柱，以吸附製劑中的天然人體腫瘤壤死因子一 α，並通入小腿血漿蛋白，作爲去除的安定劑；將含有以實施例Α — 5所得之高純度麥芽三糖基麥芽糖苷糖漿之生理食鹽水通過管柱，調整生理食鹽水之p Η，可洗提1 〇%吸附的人體腫瘤壞死因子- α。所生之洗提液以膜過濾，並滅菌裝入藥瓶中 ’以得到含有1 04單位/ mj?之天然人體腫瘤壞死因子一 α之液體薬劑。此液體藥劑非常適用於病毒性疾病、過敏、風濕症、本纸張尺度適用中國國家揉牟（CNS ) A4规格（210X297公釐） ----------- 束II (請先聞讀背面之注意事項再4ί寫本頁) ,ιτ -53 - 經濟部中央揉率局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4规格（210X297公釐） A7 B7__ 五、發明説明（14) 賨驗A — 1 根瘤苗牖M_ 1 1之非潇Μ糖牛声酴棄之製備一種液態的培養基，含有2. OW/V%的麥芽糖， 0. 5W/V%蛋白陳，0·1W/V%酵母抽出物， 0.1W/V%磷酸氫鈉，0.1W/V%磷酸二氫鉀，以及水，pH調至7. 0。胲液態培養基分成數個1 〇〇 mj?，並隨即放入5 0 0m)2燒瓶，在1 2 0°C下滅菌 20分鏡，冷卻。然後在27°C，130rpm，24小時培養，而後得到種子培養物（seed culture )。將約2 0升與用於該種子培養物相同組成的培養基，放入3 0升的醱酵缸中，滅菌、冷卻至3 0°C，在通氣與攪拌的狀況下，與1 v/v%的種子培養物於3 0°C， p Η 6 . 0 - 8 . 0下，培養2 4小時。所生培養液之酵素活性約1. 5單位/mj?。部份培養物以離心分離爲細胞及上清液，細胞則隨後懸浮於5 OmM磷酸鹽緩衝液（ p Η 7 . 0)以達到最初的體稹，隨後檢測所生的細胞懸浮液及上清液的酵素活性。結果發現，細胞懸浮液之酵素活性的0. 6單位/mj?，上清液之酵素活性則約爲 0. 9 單位/ m)?。此非還原糖生產酵素之檢測如下：5 OmM的磷酸Μ 緩衝液（ρΗ7· 0)中，加入 4mil. 25W/V% 麥芽五糖作爲受質，再加入1 m艾的酵素溶液，將該混合物於4 0°C下培養6 0分鐘，然後以1 〇〇°C加熱1 0分鐘，使酵素失活，正確地以去碘水稀釋1 0倍，並且以 :17 : (請先聞讀背面之注$項再填寫本頁) 袭· 訂經濟部中央橾準局貝工消費合作社印製五、發明説明（ 51 ) 糖尿病、惡性腫瘤之治療，其中該液饅藥劑岢經口服或非經 □ 服，劑量爲 1 - 2 0 m父/ 天 / 成人。此液體藥劑於 4 °C 或2 5 0C下靜置 2 0天，依然可保持其最初的活性，因爲麥芽三糖基麥芽糖苷可作爲安定劑。施例B - 18 干择素藥錠由 H a y a s h i bara B iochemical Laboratories, I nc,, Okayama, Japan 所製 * Cosmo B i ο Co·， Ltd·， Tokyo, Japan所出售之天然人體干擾素- -ί 藥劑，以一般型式固定於抗人體干擾素一 α抗體管柱以便吸收製劑中的天然人體干擾素一 a , 並通入小腿血漿蛋白於管柱作爲去除的安定劑；將含有實施例Β - 1 的方法所得的高純度麥芽三糖基麥芽糖苷粉末之生理食鹽水通過管柱，調整生理食鹽水之Ρ Η 值，可洗提 5 % (乾基 ) 之天然人體干擾素— a 0 所得洗提液加入 2 0倍量的晶體麥芽糖苷粉末 ( Ha- yashibara Sho j i Co • » Ltd. , Okayma, Japan 之商品，註冊商標^ Fine tose Τ')，隨後將所生的粉末通入製錠機以製得每片約 2 0 0 g的藥錠其中每片藥錠含有 1 5 0單位的天然人體干擾素一 a 0 該藥錠非常適於作爲治療病毒性疾病、過敏、風濕症糖尿病、惡性腫瘤之糖錠，其中該藥錠以口服授與方式 1 劑量約爲 1 - 10 錠 /天/成人 ύ 特別是針對近年來迅速增加的A ID S患者，該藥錠是非常有用的。本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4洗格（210X297公釐） -54 - 經濟部中央梂準局貝工消費合作社印笨 A7 _B7_ 五、發明説明（1δ)

Soraogyi-Nelson法測定還原力。控制組爲，先製備相同的還原糖生產酵素，1 〇〇°C下加熱1 0分鐘使酵素失活，然後以上述方法測試。一單位酵素定義爲：減少1#莫耳還尿力之酵索的量，以上述情況中麥芽五糖1分鐘減少的量代表還原力。實驗A — 2 酵素純化約1 8升實驗A - 1得到的培養液以'MINI — LAR#處理以壓碎細胞（'MINI— LAB"是Da-inippon Pharmaceutical Co., Ltd., Osaka, Japan 生產的商業用的超高壓細胞均質機），產物在1 0，0 0 0 r pm下離心3 0分鐘，以得到約1 6升的上清液。硫酸銨溶解於上清液，以達到0. 2的飽和程度，將生成物於 4 °C下靜置1小時，然後在1 0，0 0 0 r p m下離心 3 0分鐘，隨後收集新形成的上清液。上清液中，更進一步溶解硫酸銨，達到〇. 6的飽和程度，生成物在4 °C下靜置2 4小時，然後以 1 0，0 0 0 r pm離心3 0分鐘，隨後收集生成的沈澱物，該沈澱物溶解於1OmM的磷酸鹽緩衝液（PH 7 . 0 )，以相同的緩衝液滲析2 4小時，並且以 1 0，0 0 0 r pm離心3 0分鐘，以去除不溶性物質。該滲析液（3 6 Omi )以離子交換管柱厝析，使用 3 0 0 m ί 的、DEAE Τ0Υ0 PearT 膠（Tosoh Corpora- -----------Id------IT------d. (請先s讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -18 - 89. 5. Γ2 年月曰修正補充 A7 B7 五、發明說明（52 ) 該藥劑於室溫下靜置長期間，依然可以保持其最初活性，因爲加入作爲安定劑的麥芽三糖基麥芽糖苷及麥芽糖之功能非常好。實施例B — 1 9 肥料塊肥料組成爲 N=1 4%，P205 = 8%，K20 = 1 2%，聚三葡萄糖含有由實施例Α - 3的方法所得麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苜的粉末、硫酸鈣及水，以肥料、聚三葡萄糖、粉末、硫酸鈣、水重量比爲70:5:5:15:5之比例混合均勻，所生成之混合物通入擠壓機，L/D = 20，壓縮比=1 : 8，模口內徑爲30mm，於80 °C下加熱，擠出短肥料塊。此產品具有較佳的操作特性且不需包裝》該產品是非常僵硬的，以致可以整片利用，而且藉由改變組成份，可以控制成份的擠壓速率。該產品於必要時亦可與植物激素、農藥以及土壤調質物合併使用。顯然地由以上的描述，本發明之α — D _寡葡萄糖基 α — D-寡葡萄糖苷，爲一種非常穩定且易溶於水之非還原寡糖，而且具有較佳的品質及減低的甜味。更進一步而言，本發明之a — D_寡葡萄糖基a — D —寡葡萄糖苷具有很高的化學安定性，及安定極易產生褐變的胺基酸、低肽類的特性，而且也可安定某些本身活性或活性成份極易本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐) ~ ~ -55 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝---- 訂---------線經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部中央梂準局員工消費合作社印装 A7 B7 五、發明説明（16) tion, Tokyo, Japan )將其分爲二個部份。吸附於上述膠體的目檩酵素，則以另含氣化鈉與上述相同的緩衝液，由管柱中洗提而出。所得的酵素存活部份，則以含有2M硫酸銨與上述相同的緩衝液，進行滲析，然後在1 0，0 〇〇 r pm下離心3 0分鐘以去除不溶性物質，所得的上清液則以3 0 0 m芡* Butyl Toy〇 Pearl 6 5 0 ·膠體進行疏水性管柱層析，所用之 'Butyl Toyo Pearl 6 5 0 # 爲 Tosoh C-orporation, Tokyo Japan之產品。吸附於管柱之酵素，則以2M至0M線性遞減的方式進行洗提，隨後收集酵素存活部份。此後將該酵素存活部份以3 0 OmJ? %Toyo earl HW— 5 5 ( Tosoh Corporation, Tokyo, Ja pan 生產之商業用樹脂）進行膠過濾層析，隨後收集酵素存活部份，表一爲以特殊純化步驟之酵素活性、比活性及產率。如表一以膠過濾洗提而得之純化酵素之製劑，則以 7. 5W/V%的聚丙醯胺膠體之電泳，決定其純度。電泳得到單一的蛋白質帶，確定該酵素製劑方式爲電泳上均質且高純度的。本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4规格（210X297公釐） -19 - (請先闖讀背面之注$項再填寫本頁)

、1T

Α7 Β7 五、發明説明（…厂

失活的生物性活化物質·更進一步而言，本畚明之α — D -寡葡荀糖基a- D -寡葡萄糖苷也有其他特徵，例如具活化特性、適當黏度以及較低的醱酵能力，並且具有控制滲透壓、提供光滑表面、保濕、避免其他糖類結晶，以及避免澱粉物質老化的特性•這些特性使其作爲許多食品、飲料、化粧品、藥品及成型物之成份製備上，非常有用。這些對本技藝有很大貢獻。所以本發明中，非還原寡糖（包括α - D -寡葡萄糖基寡葡萄糖苷）以及其製法與用途之建立，將對於食品、飲料、化粧品及藥品等領域，具有工業上的重大意義。 ----------------訂 (請先閲讀背面之注意事項再'本頁) - 經濟部中央標準局負工消资合作社印製本紙張尺度逋用中國固家標準（CNS ) A4说格（2丨OX297公釐） _ 56 _ A7B7 五、發明説明（l7) 表一經濟部中央棣準局員工消費合作社印裝純化步驟酵素活性 (單位）比活性 (單位/mg蛋白質）產率 (%) 培養物 26，800 100 經細胞壓碎後之上清液 20,300 0.10 76 鹽析後之滲析液 16,100 0.32 60 離子交換管柱之洗提液 11,300 5.5 42 疏水性管柱之洗提液 5,730 98 21 膠過濾之洗提液 3 ,890 195 15 (請先閲讀背面之注$項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -20 - 經濟部中央樣準局負工消費合作社印装 A7 _B7_ 五、發明説明（is) 窗驗3 酵棄的特性部份以實驗A_ 2純化製備之酵索，則進行SDS — 聚丙醢胺膠體電泳，膠體濃度爲1 OW/V%，隨後與檩準分子纛記號進行比較，以決定分子量，棋準分子置爲商業上由Nippon Bi ο - Rad Laboratories RK, Tokyo Japan 所製者，該檩準分子量在同一膠體進行電泳，比較後發現該酵素的分子量約77，000 — 87，000(^11:〇1^ Ο 分別地將純化酵素製劑的另外部份，以2W/V% ' Arapho line"於聚丙醢胺膠體進行等電點電泳，接著測置電泳膠體的pH以決定等電點，、Ampholin，爲Pharro-acia LKB, Upsala, Sweden之產品，結果發現該酵素的等電點爲3· 6—4. 6。溫度及P Η對酵素活性的影響，以上述鑑定方法進行測試。結果依次如圖一、圖二。當以ΡΗ7. 0培養60 分鏟時，最適溫度約爲4 0°C，當4 0eC培養6 0分鏟時，最適pH約7. 0°酵素之熱安定性的決定方式，則是將該酵素於5 0mM磷酸鹽緩衝液（PH7. 0)培養在不同溫度下6 0分鐘，然後以水浴冷卻並測定殘餘的酵素活性。至於pH安定性的決定，則是將該酵素於5 OmM 磷酸鹽緩衢液，在不同的PH大小，培養於2 5 °C下1 6 小時，然後調整緩衝液至ΡΗ7· 0,並測定殘餘的酵素活性。結果分別如圖三、圇四所示。該酵素在溫度高達本紙張尺度適用中國國家揲準（CNS ) A4规格（210X297公釐）_ 21 - ------------^装------ΤΓ------d. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本貫) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（l9) 4 0°C，pH範圍約6 — 9時，是安定的。賨驗A — 4 非還原糖之製備含有2 OW/V%作爲基質的葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、麥芽四糖、麥芽五糖、麥芽六糖或麥芽七糖之水溶液，加入2單位/g基質固體由實驗A — 2所得之純化酵素，在4 0°C，pH7. 0下反應4 8小時，生成物去除碘，並且將反應產物以lako Beads WB-T-3 0 0 ’管柱（W a lc ο P u r e C h e m i c a 1 I n d u s t r i e s , L T d . , 0 s a-ka, Japan之產品）進行高效能液相層析之分析。高效能液相層析在室溫下完成，並以流速0. 5mi/分的純水作爲洗提液通入管柱，洗出液以商業用示差折射計'I —8012^ ( Tosoh Corporation, Tokyo, Japan ) 偵測。結果如表二所示。顛然由表二之結果，反應產物含有殘餘受質及新形成的糖類PI，PI I，PI I I，PIV及PV，並且大致上沒有其他糖類被偵測到。PI I、PI I I、PIV 、PV之葡萄糖聚合度爲4或更高，其產率則相當高，例如8 5%或更髙：至於p I的菊荀糖聚合度爲3，產率則相當低，而且也發現由葡萄糖及麥芽糖無法形成糖類。爲了純化這些新形成的糖類，反應產物經脫色、去碘、澳縮，並使用¾XT—1016(Na*形式）# (由 Tokyo Organic Chemical Industries, Ltd, Tokyo, J- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4规格（210X297公釐） -22 - (請先聞讀背面之注f項再填寫本頁)

<1T 線 A7 B7 五、發明説明（2〇) apaii製造之商業用鹸金族强酸性陽離交換樹脂）進行管柱分雔。 ----------1 裝-- (請先閲讀背面之注意Ϋ項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製本紙張尺度逋用中國國家橾準（CNS〉A4规格（210X297公釐〉-23 - A7B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印11 、發明説明（ 21) 表二受質反應 Η P L C洗提組成產物時間（分） (% ) 葡萄糖葡萄糖 33.4 100.0 麥芽糖麥芽糖 28.5 100.0 麥芽三糖 P I + 23 . 3 35.0 麥芽三糖 25.9 65.0 麥芽四糖 P II + 21.6 85.6 麥芽四糖 24 . 1 14.4 麥芽五糖 ΡΙΠ + 19 . 7 92.7 麥芽五糖 22.6 7.3 麥芽六糖 PIV + 18.7 93 . 5 麥芽六糖 21.4 6.5 麥芽七糖 P V + 17.8 93.4 麥芽七糖 21.0 6.6 ----------—襞------訂------線 (請先聞讀背面之注意Ϋ項再填寫本頁) ' 本紙張尺度逍用中國國家揉準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -24 - 經濟部中央標率局貝工消費合作杜印製 A7 __B7 _ 五、發明説明（22 ) 注意：表中P I ，PII，Pin，PIV，PV表示依次由受質麥芽三糖、麥芽四糖、麥芽五糖、麥芽六糖、麥芽七糖所新形生的產物。特別地，該陽離子交換樹脂塡充於以3根不銹鋼串級套管（每根內徑爲2. Ocm，長度爲lm)，然後將管柱負載5 V/V% (佔離子交換樹脂的體積）的反應產物，然後通入5 5°C的水，以SV0. 13下進行分離，隨後收集含9 7 %或更多的新形成糖之分離部份，所得分離部份則分別進行冷凍乾燥，以得到高純度的製劑。佔特別原料受質的產率，P I.約9%，P II約6 5%，P III約 8 2%，P IV約8 0%，PV則約7 7% (乾基）。最後的純度，PI 爲 97. 5%，P II 爲 98. 6%，PH1 爲 99. 5%，PIV 爲 98. 4%，PV 則爲 98. 4 % Ο 此後這些高純度的糖類製劑，以Soraogyi-Nelson法測試其還原力，並且其還原力以D E代表，結果如表三所示。顯然地由表三之結果，所有的薬劑顯示出極弱的還原力。此結果暗示還原力是由於製劑中存在的或合併的受質而來的還原性麥芽寡糖的追踪置。本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）-25 _ I J ^—11— — !'^ (請先聞讀背面之注$項再填寫本頁) 五、發明説明（23) 表三糖製劑純度（％ ) D E P I 97.5 0 _ 83 P II 98.6 0.35 P III 99 . 5 0.10 P IV 98.4 0 .27 P V 98.4 0.23 ----------裝-- (請先閱讀背面之注意Ϋ項再填寫本頁) 訂 -.il 經濟部中央揉率局員工消費合作社印製窗驗A — 5 使用葙葙糖濂粉醅之酵素降解 5 Omg實驗A—4製備的非還原糖製劑P I ，PII ，ΡΠΙ，PIV或PV，溶於lmj? 5 OmM的磷酸鹽緩衝液（PH4. 5)，並且於生成溶液加入1單位的商用的葡萄糖澱粉酶（S e i k a g a k u C 〇 r ρ 〇 r a t i ο π，T 〇 k y 〇 , J a p a-n )，在4 O °C培養6小時，以便使酵素降解，並以高效能液相層析分析降解產物。結果所有降解產物中，僅測得本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -26 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（24) 葡萄糖及海藻糖。葡萄糖及海藻糖之含置及其莫耳比例則如表四所示。表四糖製劑葡萄糖海藻糖莫耳比例 (% ) (% ) (葡萄糖/海藻糖） Ρ I 36.2 63.8 1 . 07 Ρ II 52.0 48.0 2.06 Ρ III 61.4 38.6 3 .02 Ρ IV 68.3 31.7 4 . 09 Ρ V 72.9 27.1 5.11 由表四之結果，顯然地P I經葡萄糖澱粉酶降解至1 分子葡萄糖及1分子海藻糖；P II降解爲2分子葡萄糖及 1分子海藻糖：P III降解爲3分子葡萄糖及1分子海藻糖 ;P IV降解爲4分子葡萄糖及1分子海藻糖；PV則降解 (請先《讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 汰本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 27 經濟部中央標準局員工消費合作社印装 A7 __B7 五、發明説明（25 ) 爲5分子葡荀糖及1分子海藻糖。考慮葡荀糖澱粉酶之反應特性，這些非還原糖將具有葡萄糖分子與海藻糖分子以α_1，4或α—l，6結合之鍵結的結構：特別地，Ρ I是葡荀糖聚合度3的非還原糖，其中1個葡萄糖分子與1分子海藻糖結合：Ρ II是葡荀糖聚合度4的非還原糖，有2分子葡荀糖與1分子海藻糖結合：Ρ III是聚合度5的非還原糖，其中有3分子葡荀糖與1分子海藻糖結合；Ρ IV是葡萄糖聚合度6的還原糖，其中4分子葡萄糖與1分子海藻糖結合；PV是葡萄糖聚合度7的非還原糖，其中5分子葡萄糖與1分子海藻糖結合。PI、PI I、PI I I、PIV 及 PV 經一澱粉酶作用後，PI，PI I沒有降解，然而PI I I降解爲1分子麥芽糖及1分子P I : P IV降解爲1分子麥芽糖及1分子Ρ I I ; PV降解爲2分子麥芽糖及1分子 P I。上述結果顯示，根據本發明之非還原生產酵素之反應將是一種分子間轉化反應，既不是受質的降解，也不是聚合，換言之，該反應不會改變葡萄糖的聚合程度。所以以該酵索產生的PI ，PI I ，PI I I ，PIV，PV爲 α —葡萄糖基海藻糖（以％Gn— T#表示，其中' 、分別表示葡萄糖殘基及—海藻糖，爲整數1或更大値），特別是α —葡萄糖基海藻糖（或一麥芽糖基葡荀糖《) ，^_麥芽糖基海藻糖（或β—麥芽三糖基葡萄糖苷），α-麥芽三糖基海藻糖（或α-麥 ---------—裝------訂------線 (請先聞讀背面之注f項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X297公釐） -28 - 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（26 ) 芽四糖基葡萄糖替），α —麥芽四糖基海藻糖（或α —麥芽五糖基葡萄糖砮）以及α -麥芽五糖基海藻糖（或麥芽六糖基葡萄糖苷）。 n ^ a , -.6 海蓬耱及末端帶海荡糖結檐之還原耱的斛備 4 0份重的、？1\£-〇£乂#4，（》^亡31]1&11-i C h e m i c a 1 I π d . , C 〇 . , L t d . , K g 〇 t 〇 , J a p a η 之商業用部份澱粉水解產物）溶於5 0份重熱水，所生的溶液調整爲4 5°C，ρΗ6 . 5，每克還原部份澱粉水解產物加入 1單位的非還原糖生產酵素，該酵素以實驗A — 2的方法製得；反應9 6小時以形成末端帶一個海藻糖結構的非還原糖，隨後於1 0 〇°C下加熱1 0分鐘使酵素失活。反應混合物稀釋至約2 0%，每克部份澱粉水解產物加入1 0 單位的Huco zyme# ( Nagas e Biocheinicals Ltd., K -yoto, Japan之商業用葡萄糖澱粉酶），反應4 0小時並加熱使酵素失活。所生的溶液以活性碳脫色，以離子交換樹脂去碘，並澳縮至一般型式約6 0 %。所得的糖溶液含有2 9. 5%的海藻糖（乾基計算）。上述澳縮物隨後以充塡*CG6 0 0 0 (Na*形式）'之不銹鋼管柱通電處理（其中’CGGOOO (Na*形式爲Japan Organo Co., Ltd.，Tokyo, Japan生產之商業用强酸之賜離子交換），於6 0°C，SV0. 4進行，並收集富含海藻糖之部份，該部份含有約9 0 %海藻糖（以乾基計算本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -----------d------ΐτ------^ (請先《讀背面之注意事項再填窝本頁) 經濟部中央標準局貝工消费合作社印聚 A7 B7 五、發明説明（27) )。隨後將此部份澳縮至約75%，引入結晶器，加入約 2 %作爲晶種的晶髖海藻糖水合物，並逐渐冷卻得到結晶度約4 5%的糖寶，糖育隨後由上方乾燥塔，以喷嘴壓力 1 5 Okg/cirf進行噴霧乾燥，同時由乾燥塔上方送入8 5°C空氣至底部，並且結晶粉末聚集於乾燥塔底部之输送帶的金屬網上，並逐漸地將結晶粉末以输送帶送出乾燥塔，同時將4 5 °C的空氣經由金屬網送入乾燥塔的上方。此後將結晶粉未送入晶體熟成塔（aging tower )，並通入一道熱空氣流，進行熟成1 0小時，以完成結晶及乾燥，故得到晶體海藻糖粉末。奮驗B — 1 α — D—S葡菊糖某α — D —真葡萄糖符之製備 4 0份重的由實驗Α — 6之方法所製備的海藻糖及 PINE — DEX 并 1# ( M a t s u t a n i C h e m i c a 1 I π d .,

Co., Ltd., Kyoto ，Japan之商業用還原性部份澱粉水解產物（DE8 ))溶解於1 5 0份的熱水，所生的溶液調至6 0°C，pH6. 0，於每克還原性部份澱粉水解產物加入1 0單位的環狀麥芽糊精聚葡萄糖轉移酶（由Bacillus stearothermophi lus 而來 » Hayash i bara Bioch-omical Laboratories, Inc., Okayama, Japan 產品)» 反應4 0小時後，1 0 0°C下加熱3 0分鐘使酵素失活。上述溶液隨後調至5 5eC，ρΗ5 · 0，並於每克還原性部份澱粉水解產物加入2 0單位的％/?-araylase 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） -30 - ----------—裝------訂------秦 (請先《讀背面之注意事項再填寫本頁) Α7 Β7 五、發明説明（28) #1500^ ( Nagase Biochemical Ltd., Kyoto,

Japan )，反應1 6小時後，隨即於1 0 0 °C加熱1 5分鐘使酵素失活。該溶液含有、物質1# 、、物質2# 、、物質3# — D -寡葡萄糖基α-D —寡葡萄糖苷，其量分別爲約15%，約15%及約4% (以乾基計算）。上述溶液鼸即以活性碳脫色，以離子交換（H +和OH_ 型）去碘，澳縮至約4 5%，並進行管柱層析，隨後收集當含物質1、2、3之部份。作爲分離的離子交換樹脂爲，ΧΤ-1 0 1 6 (Na + 型）#(_往11〇1往11〇，（：〇· ,Ltd., Tokyo Japan生產之鹽形式的强酸陽離子交換樹脂，充塡於4根內徑5. 4cm，長度5m之套管式不銹鋼管柱之懸浮液中），在本狀況下，4根管柱之串級總長約爲2 0m，管柱的溫度保持在5 5°C，並通入5V/V %的原料糖溶液，並在SV0. 3之分離部份通入5 5 °C 的水，隨後收集富含物質1、2、3之部份。此部份進一步以使用，YMC-Pack R-35 — 15，( 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 YMC Co., Ltd.，Kyoto Japan生產，以十八碳矽膠爲載體塡充之初步的液相層析管柱）進行初步的液相層析，並使用水作爲洗提劑：收集純度爲9 7%或以上的部份，隨後冷凍乾燥並硏磨得到高純度的粉末狀物質1、2、3。窗驗B — 2 g _ D。一塞葡葡糖基α — D -寡葡萄糖替之物化性質使用以實驗Β— 1之方法製備之高純度物質1、2、 -31 - (請先閱讀背面之注$項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4规格（210Χ297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（29 ) 3，下列爲所決定之物化性質。 (1 )元素分析物質1 發現：C 二 43. 23%，Η=6· 35% (分子式爲：C24H42O21 ) 物質2 發現：C=43. 7%，Η=6. Ο % 測得：C=43. 4 8 % * Η = 6 . 3 2 % (分子式爲：C3〇H52〇26 ) 物質3 發現：C=43. 8 % » Η = 6 . 1 % 測得：C=43. 6 4 % » Η = 6 . 3 1 % (分子式爲：C36H62O31 ) (2 )分子置物質1 666.6 物質2 8 2 8，7 物質3 9 9 0.9 (3 )紫外線吸收該三種物質均無顯示明顯吸收 ----------P裝------訂------線 (請先閲讀背面之注$項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -32 - 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（30) (4〉顏色反應此三種物質於Μ酮-硫酸反應染成綠色，但對斐林反應（Feh ling’s reaction )及碘反應均爲負反應。 (5 )結構 (a )經1 N硫酸水解，此三種物質形成唯一產物 D —葡萄糖 (b )當以葡萄糖澱粉酶作用下，物質1形成2莫耳葡萄糖及1莫耳海藻糖，物質2形成3莫耳葡萄糖及1莫耳海藻糖；物質3則形成4 莫耳葡萄糖及1分子海藻糖 (c )碳核磁共振分析（13C — NMR)，物質 1產生12條明顯的13C訊號，此暗示物質1帶有2 4個碳原子，同樣的存在1 2對 2個相當的碳原子。碳原子的分配則參考 Klaus Bock 等所著的 Advances in Carbo-hydrate Chemistry and Biochemistry V o J2 . 42，pp. 1 9 2 - 2 2 5 ( 1 9 8 4 )有關化學移位的報告，以a — D 一葡吡喃糖，αβ —海藻糖及麥芽糖爲槺準物，結果顯示物質1之結構式爲〇_« — D —葡耻喃糖基一（1 — 4 ) — or — D —葡吡喃糖基a- D —麥芽糖基至於物質2則得到1 2條明顯的1 3 C訊號本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X 297公釐） -33 - -------------裝-- (請先《讀背面之注意事項再填寫本頁) ,rr 經濟部中央標準局貝工消費合作社印裝 A7 B7 五、發明説明（31) ，此暗示物質2带有3 0個碳原子，以及存在7對2個相當的碳原子及一組5個相當的碳原子。碳原子之分配情形，與物質1相似地，參照Klaus Bock等人之化學移位報告，此暗示物質2之結構表示爲0_a_D-葡耻喃糖基—（1—>4 ) — O—tf - D —葡吡喃糖基）-(1 — 4 ) 一 α — D-葡吡晡糖基a — D -麥芽糖苷。物質3則得到1 6條明顯13 C訊號，此暗示物質3帶有3 6個碳原子，以及存在1 5 對2個相當的碳原子及一組6個相當的碳原子。碳原子的分配情形，與物質1相似地，參照Klaus Bock等人之化學移位報告，發現物質3之結構表示爲：0—α—D—葡吡晡糖基一（1 — 4 ) 一 0— α-D—葡吡哺糖基一（1 — 4 ) — or - D - 葡 Dtt 喃基 α — D —麥芽三糖替。根據上述結果，物質1、2、3之結構式可分別以化學式1、2、3表示。化學式1 : ----------d------IT------^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4规格（210X297公釐） -34 - A7 B7 五、發明説明（32 ) 化學式

OH Η H OH

—.1 I ^ · —11 —-! I ^^1 I (锖先聞讀背面之注$項再璘寫本頁) 化學式3 : 訂 Η OH Η 〇Η

經濟部中央標準局員工消费合作社印11 由於這些結構式，物質1、2、3可分別以，α — D 一麥芽糖基α — D -麥芽糖苷（或麥芽糖基麥芽糖苷），，、α — D —麥芽三糖基α — D -麥芽糖苷（或麥芽三糖基麥芽糖Μ) #及— D —麥芽三糖基《 — D —麥芽三糖苷（或麥芽三糖基麥芽三糖苷表示。上述結果顯示這些物質迄今還未知，爲分子式帶有海藻糖的完全新穎的非還原寡糖。啻驗Β — 3_ 本紙張尺度適用中國國家揉率（CNS)A4規格U10X297公釐）-35 - 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 __B7 五、發明説明（33 ) 魚件審件由實驗B_1製備的高純度麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖替及麥芽三糖基麥芽三糖替，以老鼠的經口授與法（oral administration )作急性毒性試驗。結果發現麥芽糖基麥芽糖奋、麥芽三糖基麥芽糖苷及麥芽三糖基麥芽三糖苷爲低毒性，並且以最高劑置未發現老鼠死亡，道些結果顯示其LD5〇簡言之爲5 0 g/k g或更髙。窗驗B — 4 晶髗g - D —麥芽三糖基α - D —麥芽三糖益之製備及物化性質由實驗Β— 1之方法製備純度爲9 7%或更高的 D_麥芽三糖基a_D_麥芽三糖苷（物質三），經脫色，去碘，以及溴縮至一般型式7 0 %，澳縮物轉移至燒杯，然後靜置冷藏庫2個月以引發晶體形成。晶體經離心收集，以最少董水水洗，然後得到純度爲99. 0%的晶體 Ο 上述晶體的物化性質，經測定後如下： (1 )顔色無色、透明晶體 (2 )溶解度相當高，每lOOmi?，2 5°C的水可溶解約9 1 g I------------，裝------IT-------線 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X2SI7公釐） -36 - 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 A7 _B7 五、發明説明（34) (3 )熔點 2 15。。 (4 )紅外線吸收光譜 lmg的粉末狀晶體與2 0 Omg乾燥的KBr混合，並製備成透明錠劑狀，隨後分析紅外線吸收光譜。結果顯示如圖五。 (5 )粉末X -光繞射使用CuKe -光，以F. H. Stodola等人於J-ournal of the American Chemical Society V o it . 78，pp. 2，514-2，518( 1 9 5 6 )發表之方法，以決定a— D —麥芽三糖基π — D —麥芽三糖苷晶體之粉末X -光繞射圖，結果如圖六所示。顯然由圖六之結果，a — D —麥芽三糖基α—D—麥芽三糖苷之粉未X—光繞射分析之主要繞射角（20)爲7. 8° 、10. 〇。 '13. 1° 、17. 5° 及 18. 20 〇以上結果顯示上述晶體爲新穎的晶體e _D ~麥芽三糖基α—D—麥芽三糖砮。適用於本發明之任一方法爲，只要能夠使α — D —麥芽三糖基a _ D —麥芽三糖苷由上清液引發及收集晶糖之方法，以及俥統方法（例如糖資分離法、成塊粉碎法、流體化床造粒法及噴费乾燥法）可任意選擇。晶體本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS > A4規格（210X297公釐）—γ, ' -----------裝------訂------線一一 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央橾準局貝工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（35) 麥芽三糖基or — D —麥芽三糖苷顯現極弱的吸濕性，吸濕性則與其純度有關，但是α - D —麥芽三糖基麥芽三糖苷在作爲許多食品、飲料、化粧品、篥品、成型物及化學原料之組成，則是相當有用的，因爲它是相當不具吸濕性、自由流動、不黏著、不黏固且容易操作的。晶體a — D _ 麥芽三糖基a _D -麥芽三糖苷之熔點及比旋光度，則受純度影響而變化，特別是隨著純度減少，其熔點通常減少且範園變廣。所以晶體α - D —麥芽三糖基α — D —麥芽三糖苷之純度可任意選擇以滿足最後使用的目的。以下實施例Α及實施例Β將指出α—D—寡葡萄糖基 β — D —寡葡萄糖苷之製法，及彼之數種用途。眚施例A _ 1 1份重由實驗A — 6製備之海藻糖，與2份重的' PINE—DEX#4# ( Matsutani Chemical Ind., Co., Ltd.，Koyto, Japan 之商業用糊精產品（DEI 8 ))，溶於3· 7份重的熱水，所生溶液調至6 0 °C， p Η 5 . 6，並於毎克糊精加入1 5單位的環狀麥芽糊精轉移酶（由 B a c i 丨 1 u s s t e a r 〇 t h e r m 〇 p h i I u s 而得，H a y a-sh i bara Biochemical Laboratories, Inc., Okayama , Japan之商業用菌種），反應2 4小時，並加熱使酵素失活。此後該溶液以活性碳脫色，以離子交換（H +及 OH —型）去碘及純化，並且澳縮至一般形式之7 5 %的糖漿，產率9 2% (乾基計算）。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4规格（210XW公釐）-38 - (請先Μ讀背面之注$項再填寫本頁)

、1T 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（36) 含有約6 5% (乾基）之非還原寡糖，例如麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷、麥芽四糖基麥芽三糖苷、麥芽四糖基麥芽四糖苷、則有較低的甜度，逋當的黏度及保水活性，使得該產品作爲許多食品、飲料、化粧品、藥品及成型物的組成非常有用。實施例A — 2 1 份重的海藻糖（W a k ο P u r e C h e m i c a 丨 I n d u s t r i e s Ltd., Osaka, Japan )與1. 5份重的a —環狀糊精，溶於4份重的熱水，所生溶液調至6 5 °C，pH5. 6，於每克a—環狀糊精加入10單位與實施例A—1所用同類型的環狀麥芽糊精聚葡萄糖轉移酶，反應2 4小時，並且加熱使酵素失活。該溶液隨後調至溫度5 5 °C，pH 5 . 6，並於每克固體加入2 0單位的— amylase # 1 5 0 0 ^ ( Nagase B i o c h e in i c a 1 s Ltd., Kyoto, J- apan之商業化酵素），反應16小時，並加熱使酵素失活。產物以類似實施例A-1的方法純化、澳縮，以得到 75%的糖漿，產率約93%(乾基）。含有麥芽糖基麥芽糖《，麥芽三糖基麥芽糖苷及麥芽三糖基麥芽三糖苷的量分別約爲1 5%、1 5%、4% ( 乾基）之產品，具有與實施例A — 1之產品相似的性質，例如較低的甜度、適當的黏度與保水活性，使得該產品作爲許多食品、飲料、化粧品、藥品、成型物之組成非常有用。本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4规格（210X297公釐） -39 - -----------裝------訂------線 (請先閱讀背面之注f項再填寫本頁) 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 A7 _B7_ 五、發明説明（37 ) 眚施例A - 3 20%澱粉懸浮液中加入佔澱粉固«〇. 〇15%之 'Termamyl 6 0 L# ( Novo Nordisk Industry, Cope-nhagen, Denmark之商業用or —澱粉酶）’在9 δ-χ 0 0°C 下液化，並加熱使酵素失活，而得到 DE3 之液化澱粉溶液。上述溶液加入由實驗A — 6之方法製備與濉粉物質同置（乾基）之海藻糖，調至溫度5 5 °C，pH 5. 3,每克澱粉加入5 0單位的異構酶（Hayashibar- a Biochemical Laboratories, Inc., Okayama, Japan 之商業用異構酶）以及10單位與實施例A—1所用同型的環狀麥芽糊精聚葡萄糖轉移酶，反應4 0小時，加熱使薛素失活。該溶液隨後加入水稀釋至約爲2 5%，調至 5 5 °C » p Η 5 . 3，於毎克固形物加入2 0單位的彡一澱粉酶，反應1 6小時，並加熱使酵素失活。此後該溶液以類似實施例Α — 1之方法純化、濃縮，並以一般型式噴费乾燥，以得到7 5 %糖漿，水含量小於2 %，產率約 9 〇 % (乾基）。含有麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷的含量分別約爲2 0%、2 0%、6% (乾基）之產品，具有與實施例A — 1之產品相似的較低的甜度、適當的黏度及保水活性，使得該產品作爲許多食 •品、飲料、化粧品、藥品及成型物之成份，非常有用。窗例A ~ 4 本紙張从適用中鬮國家梯準（CNS )从胁（2Η)χ297公羡）~ -----------f ^------IT------♦ (請先W讀背面之注f項再填寫本Jr) 經濟部中央標準局貝工消費合作杜印製 A7 B7 五、發明説明（38) 含有由實施例A — 2之方法製備之麥芽糖基麥芽糖替、麥芽三糖基麥芽糖苷及麥芽三糖基麥芽三糖砮之原料糖溶液濃縮至約4 5 %，爲了提高麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖苷及麥芽三糖基麥芽三糖苷之含置，該溶液以類似實驗B — 1之方法進行層析分離，但作爲分離之離子交換樹脂則以lowex 50WX4 (Ca2*形式取代（D 〇 w C h e m i c a 1 C 〇 . , M i d 1 a π d，M i c h i g a n , U S A 之商業用以鹽形式之强酸陽離子交換樹脂），收集富含麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷之部份，隨即以類似實施例A _ 1之純化、濃縮，以得到6 5%的糖漿，產率約4 5% (乾基）。含有麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷的含置分別約3 5%、3 5%、1 〇% (乾基）之糖漿，具有與實施例A — 1之產品相似的較低的甜度、適當的黏度與保水活性，使得該糖漿作爲許多食品、飲料、化粧品、藥品及成型物之成份，非常有用。窗施例A — 5 含有由實例A_ 3之方法所製備之麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖替、麥芽三糖基麥芽三糖苷之原料糖溶液澳縮至約5 0%，滴縮物隨後以實驗B — 1的方法進行層析分離，收集富含麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖替、麥芽三糖基麥芽三糖苷之部份，並以類似寅施例 A— 1之純化、澳縮，以得到6 5%的糖漿，其產率分別本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -41 - ----------裝— (請先閏讀背面之注$項再填寫本頁) 訂線經濟部中央標準局負工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（39) 約爲15%、15%及4%(乾基）。含有約9 7% (乾基）高純度的麥芽糖基麥芽糖替、麥芽三糖基麥芽糖苷或麥芽三糖基麥芽三糖奋的糖漿，具有與實施例A — 1產品相似的較低的甜度、逋當的黏度與保水活性，以致於該糖漿非常適用於許多食品、飲料、化粧品、蕹品及成型物之組成份。窗施例A _ 6 由寅施例A — 6之方法所得之髙純度的麥芽三糖基麥芽三糖苷，濃縮至約8 5%，通入結晶器，並加入2%的麥芽三糖基麥芽三糖Μ晶體作爲晶種，逐渐攪拌以便結晶，移至水浴並於室溫下靜置2天以完成結晶及老化，將塊狀的部份通入磨粉機，乾燥，過篩，以得到粉末狀的麥芽三糖基麥芽三糖苷晶體。該產品是非常不具吸濕性，並且容易操作的。更進一步而言，該產品作爲許多產品、飲料、化粧品、藥品及成型物之組成是非常有用的，因爲該產品具有較好的溶解度和安定性、較低的甜度、適當的黏度和保水活性。苷施例Α — 7 含有由實驗A - 6之方法所製備之未端帶海藻糖結構之非還糖的2 0%糖混合液，每克固形物加入1 0單位的環狀麥芽糊精聚葡萄糖轉移酶，反應2 4小時並加熱使酵索失活。上述溶液隨後調至5 5°C、pH5. 3，毎克糊本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 42 (請先閱讀背面之注意Ϋ項再填寫本頁) 訂線經濟部中央標準局貝工消費合作社印裝五、發明説明（4〇) 精加入2 〇單位的冷一澱粉酶，反應1 6小時，並加熱使酵素失活。此後該溶液以類似實施例A — 1的方法經純化、澳縮’以得到7 5%的糖漿、產率約9 2% (乾基）。含有麥芽糖基麥芽糖替、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖笹之含置分別約2 5%、2 5%、8%之糖號，具有如實施A — 1之產品之較低的甜度、逋當的黏度及保水活性，以致該糖漿作爲許多食品、飲料、化粧品 '藥品及成型物之組成份，是非常有用的。實施例A — 8 以實施例A - 4的方法所製備的糖漿，具有很高的麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷之含量，該糖漿以一般方式噴霧乾燥，得到水含量約1%，產率約9 0%的粉末。正如同實施例A — 1的產品，上述粉末作爲許多食品 '飲料、化粧品、藥品及成型物的組成份，是非常有用的實施例A — 9 以實施例A - 5的方法所製備的高純度麥芽糖基麥芽糖苷，在6 0 °C下冷凍乾燥2 4小時。所得之乾燥產品以磨粉機處理，得到水含量約0. 5%，產率約93%之粉末0 (請先閎讀背面之注意事項再填寫本頁)

，tT < 本紙張尺度適用中國國家#準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -43 -

正如同實施例A- 1之產品，上述粉末^用於許多食品、飮料、化粧品、槊品及成型物之組成份。經濟部中央橾準局貝工消费合作社印製奮例A - 1 Π 將1份重實驗A—6方法製備之海藻糖與2. 5份重之澱粉糊精（DE 15)溶於4份重的水，同時加熱，將生成的糊精調至63°C，pH5. 5，加入20單位/ 克糊精之cyclomatodextrin糖基轉移酶，此酶之來源爲 Bacillus stearothermonhiIns ，購自 Hayashibara Bio-shemical Laboratories, Inc. Okayama, Japan ，反應 3 0小時，加熱以鈍化殘留酵素。隨後以活性碳將溶液脫色’以離子交換物（H +—及OH-—型）去離化子化與純化’以習知方法濃縮而得7 8%產量之糖漿，約佔9 0% 乾固重。含有佔乾固重6 0%非還原醣的產物，該非還原醣例如麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷基麥芽四糖基麥芽三糖苷、麥芽四糖基麥芽四糖苷、麥芽五糖基麥芽四糖苷、麥芽五糖基麥芽五糖苷、麥芽六糖基麥芽五糖苷、麥芽六糖基麥芽六糖苷、麥芽七糖基麥芽六糖苷、麥芽七糖基麥芽七糖苷、麥芽八糖基麥芽七糖Μ、麥芽八糖基麥芽八糖苷、麥芽九糖基麥芽八糖苷及麥芽九糖基麥芽九糖苔，此產物之甜度減低且具適當黏度，可隨意用於食品、飲料、化粧品、藥品與成型物等組成物。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） --- - n - - m H Λ n I m m n I (請先閲讀背面之注意事項再4f寫本頁) - - 經濟部中央橾準局貝工消費合作社印製 A7 _ B7_ 五、發明説明（42) $9.月19日修正 . 啻施例B - 1 _補充甜味劑以實施例A - 6的方法所製得之晶髖麥芽三糖基麥芽三糖Ml份重，與〇 ._ 〇 5份重的’alpha G Sweet# ( T o g o S u g a r R e f i n i n g C ο. , L t d.，T o k y ο, J a p a η 之商業用α —葡萄糖基甜菊精苷）混合至均質，將該混合物通入造粒機，以得到粒狀的甜味劑。此種甜味劑具有較好的味道，並且具有比蔗糖強2倍的甜度，並且在相同甜度時，其熱量約爲蔗糖的一半。對於飲食，之卡路里受限制的肥胖症或糖尿病人而言，此種甜味劑適用於賦予低卡路里食品及飲料甜味。進一步而言，此種甜味劑也適用於賦予與妨止牙齒保護直接有關的食品及飲料甜味，因爲此種甜味劑經促進蛀牙的微生物作用產生的酸及不可溶性聚葡萄糖是很少的* 實施例Β — 2 硬糖 1 0 0份重的5 5%蔗糖溶液，與含有由實施例Α — 1之方法所得到的麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷之非還原寡糖3 0份重，共同混合並加熱，所得混合物於真空下加熱澳縮至水含量小於 2%，加入1份重的擰檬酸、適量的檸檬味、著色劑，並以一般方式成型。該產品爲酥脆、口感佳、不具蔗糖結晶的高品質硬糖本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） ---------V' 裝 —I (請先閲讀背面之注意事項再4ί寫本頁) -β -45 - A 7 ___B7_ 五、發明説明（43) ° ‘充實施例Β — 3 萆巷睡 1 5 0份重的新鮮草莓，60份重的蔗糖、20份重的麥芽糖、4 0份重含有實施例Α_ 2之方法得到的麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖Μ、麥芽三糖基麥芽三糖苷之糖漿及5份重的果膠，以及1份重的檸檬酸，於鍋子中煮沸，並將產物裝罐。該，產品爲風味佳且顏色佳的果醬。實施例Β — 4 乳酸飲料 1 0份重的脫脂牛奶於8 0°C滅菌2 0分鐘，冷卻至 40°0，加入0· 3份重的菌朊，於約37 °C下醱酵10 經濟部中央標準局貝工消费合作社印装小時。產物經均質，加入4份重含有實施例A - 8之方法所得之麥芽糖基麥芽糖Μ、麥芽三糖基麥芽糖苷及麥芽三糖基麥芽三糖苷之粉末，加入1份重的蔗糖及2份重的異構糖，混合物保持7 0°C以滅菌，此後將該混合物冷卻，加入適量的風味劑並裝罐* 本產品爲風味、甜味及口感相當調合的高品質乳酸飮料。窗施例B - 5 本紙張尺度逍用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ~~

A7 与7 五、發明説明（44 澹縮乳 1 0 0份重的鮮乳，溶解3份重含有實施例A - 1之方法所得之麥芽糖基麥芽糖替、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷之非還原寡糖的糖漿，所生溶液以板式加熱器加熱滅菌，濃縮至約7 0%，無菌裝罐。該產品非常適用於嬰兒食品及水果、咖啡、可樂之調味料，因其具溫和甜味及較好的風味》實施例B - fi 粉末果件 3 0份重經噴露乾燥的柳橙汁，加入5 0份重由實施例A - 9之方法所得之高純度麥芽糖基麥芽糖苷粉末、 10份重的蔗糖、0. 65份重的檸檬酸酐、0.1份重蘋果酸、0. 1份重的L —抗壊血酸、〇. 1份重的檸檬酸鈉、0. 5份重的聚三葡萄糖及適量的風味劑，將混合物均質，研磨爲細粉末，通入流體化床造粒機於通風的溫度4 0°C下造粒3 0分鐘；至於以實施例A- 4之方法所得含有高含量麥芽糖基麥芽糖替、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷之糖漿，則作爲黏著劑，噴入粉末上，隨即分成指定的量並包裝。該產品爲具有天然果汁成份約3 0%之粉末果汁。該產品於長期間貯藏下，不會有不良味道及氣味，也不會吸濕及凝固，是非常穩定的。本紙張尺度適用中國围家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、·ιτ 經濟部中央揉準局員工消费合作杜印製經濟部中央揉準局負工消费合作社印装 A7 B7 五、發明説明（45 ) % % 4修正童施例B - 7 _:補充巧克力 4 0份重的可可簧、1 0份重的可可奶油、3 0份重的蔗糖以及2 0份重含有實施例A - 9之方法所得之高純度麥芽糖基麥芽糖苷粉末共同混合，所得之混合物通入精製器以降低粒子大小，再行通入精磨機於5 0°C揉捏2天，此混合物加入0. 5份重的卵磷脂，並分充混合及分散。此後該混合物以熱控制器調至3 1°C，在奶油凝固之前迅速倒入模子中，以振動器脫氣，並通過1 〇°C的冷卻隧道（Qooling tunnel ) 2 0分鐘以上，以達到完全凝固。隨後將模子內的內容物取出並包裝。具有較佳顏色、光滑表面及質地，且不具吸濕性的上述產品，可柔和地溶於口中，並顯現出溫和的甜味及風味〇眚施例B — 8 口香糖 3份重的膠主要成份以加熱軟化，加入4份重的蔗糖及3份重含有以實施例A-8之方法所製得之麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖苷及麥芽三糖基麥芽三糖苷之粉末，與適量的風味劑及賦色劑混合，以迴轉機揉捏，並以一般方式成型及包裝。該產味爲具有較佳質地、風味及味道的口香糖。本紙張尺度適用中困國家標準（cns )Α4規格（210x297公釐），衣-- (請先鬩讀背面之注意事項再填寫本頁)

*1T -48 - A7 A7

五、發明説明（46) 窗施例B - 9 卡士達乳品（Custand Milk )

1 Ο 0份重的玉米澱粉、1 Ο 0份重含有以實施例A 請先閱讀背之注意事項再窝本頁一 3的方法所製得之麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷之粉末、8 0份重的麥芽糖、2 0份重的蔗糖及1份重的氯化鈉混合均勻，所生之混合物加入2 8 0份新鮮蛋，攪拌使混合，逐漸加入 1 ，0 0 0份重的沸騰牛奶，隨後加熱持績攪拌，直到玉米澱粉糊化以及整個混合物變爲半透明狀，冷卻，加入適置香草味，將其分爲指定的量，並包裝。該產品具有光滑表面，溫和的甜味及可口的味道。訂眚施例B — 1 0 速食優筋乳C Uiro-no-moto) 經濟部中央標準局貝工消费合作社印裝 9 0份重的米粉末與2 0份重的玉米澱粉、1 2 0份重由實施例A - 9所得之高純度麥芽糖基麥芽糖苷粉末、及4份重的聚三葡萄糖混合均勻，以得到’uiro-no-ra〇i；o '。將 tuiro-noioto^"與適量的 ’maccha (—種綠茶 )^ 、水共同揉捏，所得產物裝瓶並蒸煮60分鐘，以得到 'maccha-uiro’ 。該產品有較好的光滑表面，以及刺激性。進一步地，該產品有較長的保存時間，因爲澱粉老化受到抑制。實施例Β - 1 本紙張尺度適用中囷國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -49 - A7 B7 五、發明説明（47

油溶性一硬脂酸甘油酯，〇· 5份重的廿二醇、1份重的鳄梨油（avocado oil )、3 . 5份重含有以實施例A —7的方法所得之麥芽糖基麥芽糖Μ、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷之糖漿，1份重的α-葡萄糖基芸香式（α — glycosyl rutin )、適量的維生素Ε及殺蟲齊（，以一般形式加熱溶解，混合物加入5份重的1， 3 — 丁二醇.、0. 1份重的狻乙基聚合物、85. 3份的蒸餾水，並以均質機乳化。此種保水的乳液*適用於作爲防曬劑或皮虜漂白劑。實施例B - 1 2 皮虜乳霜 2份重的一硬脂酸聚氧乙二醋（p〇ly〇xyietene glycol monostearate )， 5 份重的自乳化之一硬脂酸甘油酯、2份重的葡萄糖基芸香甙、1份重的液體石獵、 1 0份重的三辛酸甘油酯、4份重以實施例Α - 9的方法所得之高純度麥芽糖基麥芽糖苷粉末，及適量的防腐劑，以一般型式加熱互溶，所生溶液加入 6 6份重的蒸餾水’以均質機乳化，並混合適量的風味劑，持績攪拌。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） ^-- (請先閲讀背面之注意事項再Μ寫本頁) 訂 -50 -

Polyoxylene sorbitan lausate ) ，1 5 份重以實施例 A ~ 4的方法所得具高含量麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥$糖替、麥芽三糖基麥芽三糖替之糖漿、〇 . 0 2份重的糖精、0· 05份重的防腐劑，與13份重的水共同混合。該項具有較光滑表面及較佳清潔效果的產品，適合作爲牙育。實施例B _ 1 4 插管漕食品組成包括：20份重以實施例A—8之方法所得含有麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苷，1.1份重的甘油、1份重的麩胺酸鈉、 0. 4份重的乳酸鈣、0.1份重的碳酸鎂、0. 01份重的維生素81及0. 01份重的維生素B2 ，以小層鋁薄包裝分裝成24g，隨後加熱密封。將一包該產品溶於3 3 - 5 0 0 m又的水，採非經口本紙浪尺度逋用中國國家梯準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） (诗先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -51

第83105867號專利案中文説明軎修哑頁民國89年05月修正 B7 五、發明說明（49 ) 投與法注入鼻腔、胃、腸。該產品非常適用於以非經口方式插管灌食於家禽，以及人類。實施例B — 1 5 插管灌食品組成包括：5 8 0份重的由實施例A - 6之方法所得之晶體麥芽三糖基麥芽三糖苷、1 9 0份重乾燥後的蛋黃、209份重的脫脂牛乳、4. 4份重的氯化鈉、 1. 85份重的氯化鉀、4份重的硫酸鎂、0. 01份重的維生素Βι 、〇. 1份重的抗壞血酸鈉、0. 6份重的維生素E乙酸鹽及〇. 04份重的菸驗醯胺，以小層鋁薄包裝分裝成2 5 g，隨後加熱密封。將一包該產品溶於約1 50_300mj?的水，採非經口投與法注入鼻腔、胃、腸》實施例B — 1 6 液體干擾素藥劑由 Hayash i bar a Biochemical Laboratories, Inc., Dkayama, Japan 及 Cosmo Bio Co.， Ltd., Tokyo, Jap- an製造之商業化的天然人體干擾素-r製劑，以一般型式固定於抗人體干擾素一 r抗體管柱，以便吸收製劑中的天然人體干擾素一 r ，並通入小腿血漿蛋白，作爲去除的安定劑，將含有以實施例A — 5的方法所製之高純度麥芽本紙張尺度滷用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂---------線經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -52 -

經濟部中央揉準局貝工消費合作社印«. 五、發明説明（5Q) 糖基麥芽糖苷糖漿之生理食鹽水通過管柱，豳整生理食鹽水之pH，可洗提7% (乾基）的天然人體干擾素_r。此後將洗提液經膜過濾，並滅菌裝入藥瓶中，以得到含有 1 05單位天然人體干擾素_r之液體薬劑· 此液體藥劑非常適用於病毒性疾病、過敏、風濕症、糖尿病、惡性腫瘤之治療，其中該液體藥劑可經口服或非經口服，劑量爲1 一 2 OmJ? /天/成人》此液體藥劑於 4 °C或2 5 °C下靜置2 0天，依然可保持其最初的活性，因爲上述麥芽糖基麥芽糖苷可作爲安定劑。窗施例B - 1 7 液體腫瘤壊死因子薬劑由 Hayashibara Biochemical Laborator i es, Inc. Okayama，Japan 製造，以及 Cosmo Bio Co., Ltd., To-kyo, Japan出售之天然人體腫瘤壞死因子一α藥劑，以一般方式固定於抗人體腫瘤壞死因子一 α抗體管柱，以吸附製劑中的天然人體腫瘤壤死因子一 α，並通入小腿血漿蛋白，作爲去除的安定劑；將含有以實施例Α — 5所得之高純度麥芽三糖基麥芽糖苷糖漿之生理食鹽水通過管柱，調整生理食鹽水之p Η，可洗提1 〇%吸附的人體腫瘤壞死因子- α。所生之洗提液以膜過濾，並滅菌裝入藥瓶中 ’以得到含有1 04單位/ mj?之天然人體腫瘤壞死因子一 α之液體薬劑。此液體藥劑非常適用於病毒性疾病、過敏、風濕症、本纸張尺度適用中國國家揉牟（CNS ) A4规格（210X297公釐） ----------- 束II (請先聞讀背面之注意事項再4ί寫本頁) ,ιτ -53 - 經濟部中央橾準局貝工消費合作社印製五、發明説明（ 51 ) 糖尿病、惡性腫瘤之治療，其中該液饅藥劑岢經口服或非經 □ 服，劑量爲 1 - 2 0 m父/ 天 / 成人。此液體藥劑於 4 °C 或2 5 0C下靜置 2 0天，依然可保持其最初的活性，因爲麥芽三糖基麥芽糖苷可作爲安定劑。施例B - 18 干择素藥錠由 H a y a s h i bara B iochemical Laboratories, I nc,, Okayama, Japan 所製 * Cosmo B i ο Co·， Ltd·， Tokyo, Japan所出售之天然人體干擾素- -ί 藥劑，以一般型式固定於抗人體干擾素一 α抗體管柱以便吸收製劑中的天然人體干擾素一 a , 並通入小腿血漿蛋白於管柱作爲去除的安定劑；將含有實施例Β - 1 的方法所得的高純度麥芽三糖基麥芽糖苷粉末之生理食鹽水通過管柱，調整生理食鹽水之Ρ Η 值，可洗提 5 % (乾基 ) 之天然人體干擾素— a 0 所得洗提液加入 2 0倍量的晶體麥芽糖苷粉末 ( Ha- yashibara Sho j i Co • » Ltd. , Okayma, Japan 之商品，註冊商標^ Fine tose Τ')，隨後將所生的粉末通入製錠機以製得每片約 2 0 0 g的藥錠其中每片藥錠含有 1 5 0單位的天然人體干擾素一 a 0 該藥錠非常適於作爲治療病毒性疾病、過敏、風濕症糖尿病、惡性腫瘤之糖錠，其中該藥錠以口服授與方式 1 劑量約爲 1 - 10 錠 /天/成人 ύ 特別是針對近年來迅速增加的A ID S患者，該藥錠是非常有用的。本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4洗格（210X297公釐） -54 - 89. 5. Γ2 年月曰修正補充 A7 B7 五、發明說明（52 ) 該藥劑於室溫下靜置長期間，依然可以保持其最初活性，因爲加入作爲安定劑的麥芽三糖基麥芽糖苷及麥芽糖之功能非常好。實施例B — 1 9 肥料塊肥料組成爲 N=1 4%，P205 = 8%，K20 = 1 2%，聚三葡萄糖含有由實施例Α - 3的方法所得麥芽糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽糖苷、麥芽三糖基麥芽三糖苜的粉末、硫酸鈣及水，以肥料、聚三葡萄糖、粉末、硫酸鈣、水重量比爲70:5:5:15:5之比例混合均勻，所生成之混合物通入擠壓機，L/D = 20，壓縮比=1 : 8，模口內徑爲30mm，於80 °C下加熱，擠出短肥料塊。此產品具有較佳的操作特性且不需包裝》該產品是非常僵硬的，以致可以整片利用，而且藉由改變組成份，可以控制成份的擠壓速率。該產品於必要時亦可與植物激素、農藥以及土壤調質物合併使用。顯然地由以上的描述，本發明之α — D _寡葡萄糖基 α — D-寡葡萄糖苷，爲一種非常穩定且易溶於水之非還原寡糖，而且具有較佳的品質及減低的甜味。更進一步而言，本發明之a — D_寡葡萄糖基a — D —寡葡萄糖苷具有很高的化學安定性，及安定極易產生褐變的胺基酸、低肽類的特性，而且也可安定某些本身活性或活性成份極易本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐) ~ ~ -55 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝---- 訂---------線經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Α7 Β7 五、發明説明（…厂

失活的生物性活化物質·更進一步而言，本畚明之α — D -寡葡荀糖基a- D -寡葡萄糖苷也有其他特徵，例如具活化特性、適當黏度以及較低的醱酵能力，並且具有控制滲透壓、提供光滑表面、保濕、避免其他糖類結晶，以及避免澱粉物質老化的特性•這些特性使其作爲許多食品、飲料、化粧品、藥品及成型物之成份製備上，非常有用。這些對本技藝有很大貢獻。所以本發明中，非還原寡糖（包括α - D -寡葡萄糖基寡葡萄糖苷）以及其製法與用途之建立，將對於食品、飲料、化粧品及藥品等領域，具有工業上的重大意義。 ----------------訂 (請先閲讀背面之注意事項再'本頁) - 經濟部中央標準局負工消资合作社印製本紙張尺度逋用中國固家標準（CNS ) A4说格（2丨OX297公釐） _ 56 _

Claims

A:第 8 31058 中文申請專利範ί 公告本I A8 B8 C8 D8 t、申請專利範圍 6 7號專利申請案修正本民國8 9年5月修正 1 . 一種非還原糖，其爲a — D —寡葡萄糖基a-D —寡葡萄糖苷，以通式Gm — T — G η表示，其中G與T 分別表示葡萄糖殘基與a，a -海藻糖，該葡萄糖殘基彼此之間及該葡萄糖殘基與海藻糖殘基之間係經由， 4或a-1，6鍵結，且m與η表示整數1 — 8。 2.如申請專利範圍第1項之非還原寡糖，爲a-D 一麥芽糖基a- D —麥芽糖苷、a-D —麥芽三糖基a — D —麥芽糖苷，或a - D -麥芽三糖基a — D —麥芽三糖 -μ 甘。 3 .如申請專利範圍第1項之非還原寡糖，其爲晶體 α-D—麥芽三糖基麥芽三糖苷。 4. 如申請專利範圍第3項之非還原寡糖，其中該晶體以粉末Χ_光繞射分析，得到主要繞射角（2 0 )爲 7.8° 、10.0°、13.1°、17.5°、 1 8 · 2 0 。 5. —種製備如申請專利範圍第1項之非還原寡糖的方法，該方法包括：將含有海藻糖與a -葡萄糖基醣類之溶液，或含有末端具海藻糖結構之非還原糖的水溶液，於糖轉移酶之作用下，或持續且依序於糖轉移酶與水解酶之作用下，形成該本紙張尺度適用中國國家椟準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ. 峡! 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -1 -

A:第 8 31058 中文申請專利範ί 公告本I A8 B8 C8 D8 t、申請專利範圍 6 7號專利申請案修正本民國8 9年5月修正 1 . 一種非還原糖，其爲a — D —寡葡萄糖基a-D —寡葡萄糖苷，以通式Gm — T — G η表示，其中G與T 分別表示葡萄糖殘基與a，a -海藻糖，該葡萄糖殘基彼此之間及該葡萄糖殘基與海藻糖殘基之間係經由， 4或a-1，6鍵結，且m與η表示整數1 — 8。 2.如申請專利範圍第1項之非還原寡糖，爲a-D 一麥芽糖基a- D —麥芽糖苷、a-D —麥芽三糖基a — D —麥芽糖苷，或a - D -麥芽三糖基a — D —麥芽三糖 -μ 甘。 3 .如申請專利範圍第1項之非還原寡糖，其爲晶體 α-D—麥芽三糖基麥芽三糖苷。 4. 如申請專利範圍第3項之非還原寡糖，其中該晶體以粉末Χ_光繞射分析，得到主要繞射角（2 0 )爲 7.8° 、10.0°、13.1°、17.5°、 1 8 · 2 0 。 5. —種製備如申請專利範圍第1項之非還原寡糖的方法，該方法包括：將含有海藻糖與a -葡萄糖基醣類之溶液，或含有末端具海藻糖結構之非還原糖的水溶液，於糖轉移酶之作用下，或持續且依序於糖轉移酶與水解酶之作用下，形成該本紙張尺度適用中國國家椟準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ. 峡! 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -1 - Α8 Β8 C8 D8 六、申請專利範圍非還原寡糖；該糖轉移酶爲環狀麥芽糊精聚葡萄糖轉移酶 ' α -澱粉酶、葡萄糖替酶或其混合物，且該水解酶爲Θ -澱粉酶，澱粉去分支酶，或其混合物，並且回收該非還原寡糖。 6 ·如申請專利範圍第5項之方法，其中該非還原糖之形成，乃是將一種還原部份澱粉水解產物於非還原糖生產酵素之作用而得。 7 ·如申請專利範圍第6項之方法，其中該非還原糖生產酵素，具有由3個或3個以上葡萄糖聚合度的還原部份澱粉水解產物，以形成末端帶有海藻糖結構之非還原糖之特性。― 8. 如申請專利範圍第5項之方法，其中該非還原寡糖爲a — D —麥芽糖基α-D-麥芽糖苷、a — d 一麥芽三糖基麥芽糖苷、或是a -D —麥芽三糖基α — D -麥芽二糖甘。 9. 製備如申請專利範圔第5項之方法，該方法包括將含有該非還原寡糖及其他醣類之醣混合物，饋至使用強酸性陽離子交換樹脂或十八矽膠之層析法；並收集富含該非還原寡糖之流份》 1 〇 .如申請專利範圍第9項之方法，其中該非還原寡糖爲a— D-麥芽糖基a — D -麥芽糖苷、a — D —麥芽三糖基α — D -麥芽糖苷、或a — D-麥芽三糖基麥芽本紙張尺度適用中國國家梂準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注$項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製

A8 B8 C8 D8 七、申請專利範圍糖苷。 1 1 .如申請專利範圍第1項之非還原寡糖，其係用於食品與飮料，包括甜味劑、硬糖、巧克力、果醬、乳酸飲料、甜味濃縮乳、果汁、口香糖、卡士達乳品（custard mi lk )、及優酪乳，該非還原寡糖佔該食品與飮料至少約0.lw/w%。 1 2 .如申請專利範圍第1項之非還原寡糖，其係用於化粧品包括乳液、皮虜乳霜及牙育，該非還原寡糖佔該化粧品至少約0. lw/w%。 1 3 ·如申請專利範圍第1項之非還原寡糖，其係用於藥物包括插管灌食品、干擾素藥劑、腫瘤壞死因子藥劑及千擾素藥錠，該非還原糖佔該藥品至少約〇.lw/w %。 14·如申請專利範圍第1項之非還原寡糖，其係用於成型物包括肥料塊，該非還原寡糖佔該成型物至少約 0 . 1 w / w % 。 (請先閲讀背面之注$項再填寫本頁) 、1T. 峡！經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -3 -