JP2003012532A - ヒアルロニダーゼ阻害剤、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害剤、サイクリックａｍｐホスホジエステラーゼ阻害剤及び肌荒れ改善化粧料 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 新規なヒアルロニダーゼ阻害剤、ヘキソサミ
ニダーゼ遊離阻害剤、サイクリックＡＭＰホスホジエス
テラーゼ阻害剤及び肌荒れ改善化粧料。 【解決手段】 新規なヒアルロニダーゼ阻害剤、ヘキソ
サミニダーゼ遊離阻害剤、サイクリックＡＭＰホスホジ
エステラーゼ阻害剤及び肌荒れ改善化粧料に、藤茶から
の抽出物を含有せしめる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ヒアルロニダーゼ
阻害剤、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害剤、サイクリック
ＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤及び肌荒れ改善化粧
料に関する。

【０００２】具体的に言うと、炎症性の疾患、例えば接
触性皮膚炎、乾癬、尋常性天疱瘡等による肌荒れ症状の
他、乾燥や洗浄剤等によって惹起される健常人の肌荒
れ、荒れ性に対して改善・予防効果を有するヒアルロニ
ダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害作用、サ
イクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を有す
る植物抽出物よりなる新規なヒアルロニダーゼ阻害剤、
ヘキソサミニダーゼ遊離阻害剤、サイクリックＡＭＰホ
スホジエステラーゼ阻害剤を利用した肌荒れ改善化粧料
に関する。

【０００３】

【従来の技術】従来より、皮膚疾患や肌荒れに対して改
善・予防効果を有するものとして、種々の治療薬、皮膚
外用剤、化粧料等が知られている。

【０００４】これら従来の薬剤や化粧料等における有効
成分としては、抗炎症作用を有する成分や動植物エキ
ス、あるいは保湿効果の高いアミノ酸や、多糖、脂質、
動植物抽出エキス等が皮膚の炎症や角質層の水分の消失
を防ぐ能力に優れているために用いられてきた。しかし
ながらいずれにおいてもその肌荒れ改善・予防効果は必
ずしもすべての事例において十分ではなかった。

【０００５】体組織への親和性を保つヒアルロン酸塩
は、含水系の中では紫外線や酵素などによって分解さ
れ、分子量の低下に伴って保水効果も減少する。また、
ヒアルロン酸は細胞間組織として存在し、血管透過性と
も関与している。更に、ヒアルロニダーゼは肥満細胞中
にあって活性化により、肥満細胞から脱顆粒に関与して
いると言われている。従ってヒアルロン酸の加水分解酵
素であるヒアルロニダーゼの活性を阻害することによ
り、ヒアルロン酸の安定化をはかり、肥満細胞からの種
々ケミカルメディエーターの放出を防ぐことができ、保
湿の強化あるいは抗炎症が期待できる。

【０００６】ヒスタミンはマストセルに抗原が一度感作
し、IgE抗体をセル膜に標識する。次に再度抗原が侵入
した場合、抗原抗体反応により即座に脱顆粒反応が生
じ、ヒスタミン遊離が起こる。このときヒスタミンとパ
ラレルにヘキソサミニダーゼの遊離が起こるため、ヒス
タミン遊離の指標となる。このヒスタミンは毛細血管拡
張、平滑筋収縮、胃酸分泌など多くの薬理作用を持つ。

【０００７】中国では古来藤茶の枝葉部を飲料として利
用する地方がある他は、風邪、のどの痛み、急性結膜炎
等に民間薬として利用されてきた。藤茶はぶどう科に属
し、中国の中部から南部にわたる広い地域に自生する多
年生の植物であり、台湾等では栽培もされている。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、古来
食品や民間薬等の分野で使用されて安全性が確認されて
いる天然物由来の物質の中から、ヒアルロニダーゼ阻害
作用、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害作用、サイクリック
ＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を有するものを見
出し、それらを有効成分としたヒアルロニダーゼ阻害
剤、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害剤、サイクリックＡＭ
Ｐホスホジエステラーゼ阻害剤を提供することを目的と
する。

【０００９】更に、皮膚疾患や肌荒れといった頭皮又は
皮膚のトラブルの改善・予防効果に優れた肌荒れ改善化
粧料を提供することを目的とする。

【００１０】

【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に、本発明は、藤茶からの抽出物を有効成分として含有
するヒアルロニダーゼ阻害剤、ヘキソサミニダーゼ遊離
阻害剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害
剤を提供するとともに、これらの作用剤を含有する肌荒
れ改善化粧料を提供する。

【００１１】

【発明の実施の形態】以下に、本発明について更に詳細
に説明すると、本発明に係るヒアルロニダーゼ阻害剤
は、藤茶抽出物からなるものであって、ヒアルロニダー
ゼ阻害物質を有効成分として含有するものである。

【００１２】また、本発明に係るヘキソサミニダーゼ遊
離阻害剤は、藤茶抽出物からなるものであって、ヘキソ
サミニダーゼ遊離阻害物質を有効成分として含有するも
のである。

【００１３】なお、本発明に係るサイクリックＡＭＰホ
スホジエステラーゼ阻害剤は、藤茶抽出物からなるもの
であって、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻
害物質を有効成分として含有するものである。

【００１４】更に、本発明に係る肌荒れ改善化粧料は、
ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離阻
害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害
作用を有する藤茶抽出物を配合してなるものである。

【００１５】本発明における藤茶は、学名〔Ampelopsis
cantoniensis(Hook.e t Arn.)Planch、 Ampelopsis gr
ossedentata(Hand.−Mazz.)W.T.Wang CV〕であり、その
他Ampelopsis属のうち、藤茶と呼ばれているものは全て
含まれる。

【００１６】抽出原料としての藤茶の使用部位は、枝、
葉、樹皮、根部であるが、枝葉部が好適に使用され、採
取後ただちに乾燥し粉砕したものが適当である。乾燥は
天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて
行ってもよい。藤茶は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性
溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料とし
て使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、
藤茶の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことがで
きる。

【００１７】また、藤茶から得られるヒアルロニダーゼ
阻害物質、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害物質、サイクリ
ックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害物質の詳細は不明
であるが、藤茶から各種の溶媒を用いて得られた抽出物
に阻害活性が認められる。

【００１８】本発明に係る抽出物は、水、エタノールや
イソプロパノールなどの各種脂肪族低級アルコール、
１,３−ブチレングリコール、エチレングリコール、グ
リセリン、イソプレングリコールなどの親水性有機溶
媒、これら各種親水性有機溶媒又は水との混液などの各
種水系有機溶媒を用いて得られ、この藤茶抽出物が、高
いヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離
阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻
害作用を示す。しかも、これらの水系溶媒は取扱いが容
易で、抽出作業が比較的容易に行える。

【００１９】２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒と
して使用する場合、その混合比は、適宜調製することが
できる。例えば水と低級脂肪族アルコールとの混合液を
使用する場合には、水と低級脂肪族アルコールとの混合
比は自由に調製することができるが、７：３〜２：8
（質量比）が好適である。

【００２０】抽出方法や抽出条件等も特に限定されるも
のではないが、好適には質量比で用いる藤茶量の５〜１
５倍量の前記抽出溶媒に浸漬し、常温ないし９０℃程度
の加熱・加温下で、ゆるやかに攪拌しながら可溶性成分
を溶出させる。この後、当該抽出液をろ過又は遠心分離
し、固液分離して目的となる抽出物を得る。

【００２１】こうして得られた抽出液はそのまま、本発
明に係るヒアルロニダーゼ阻害剤、ヘキソサミニダーゼ
遊離阻害剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ
阻害剤として用いることもできるが、活性が低い場合も
あるため、適宜濃縮したエキス状物、あるいは、例えば
スプレードライ、真空乾燥、熱風乾燥などの方法を用い
て更に乾固させ、乾燥エキスとして用いることも可能で
ある。また、上記活性を阻害しない範囲で、必要に応じ
て簡単な精製処理を施してもよい。このエキス状物や乾
燥エキスもそのまま用いたり、あるいはデンプンや乳糖
などの各種賦形剤を添加して用いることができるのは言
うまでもない。

【００２２】また、藤茶抽出物は、一般的な植物抽出物
の製剤化による公知の方法により単独で、あるいは適当
な助剤を用いて、例えば軟膏、パップ、クリーム、乳
液、ローション、パック、ゼリー、浴用剤、液体石鹸、
固形石鹸等、頭皮・頭髪に対するものとして、トニッ
ク、リンス、シャンプー、アストリンゼント等、いずれ
の形で適用することもでき、剤型は特に問わない。

【００２３】製剤中における藤茶抽出物の配合量は、適
宜、使用目的、性別、症状等を考慮して検討すればよい
が、藤茶抽出物の量として約０．００５〜１０質量％で
あり、好ましくは０．０５〜５質量％である。また、藤
茶枝葉は古来より飲料や民間薬として使用されてきてお
り、その安全性は確認されているものであって、副作用
なく使用できるものである。

【００２４】更に、本発明に係る肌荒れ改善化粧料に
は、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊
離阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ
阻害作用を妨げない限り、化粧料の製造に通常用いられ
る各種主剤及びその他の任意の助剤を適宜使用すること
ができる。

【００２５】これらの肌荒れ改善化粧料の主剤として併
用可能なものとして具体的に挙げると次のとおりであ
る。

【００２６】収斂剤として、クエン酸又はその塩類、酒
石酸又はその塩類、乳酸又はその塩類、塩化アルミニウ
ム、硫酸アルミニウムカリウム、アラントインクロルヒ
ドロキシアルミニウム、アラントインジヒドロキシアル
ミニウム、パラフェノールスルホン酸亜鉛、硫酸亜鉛、
ジユエキス、エイジツエキス、ハマメリスエキス、ゲン
ノショウコエキス、茶カテキン類、プロアントシアニジ
ン類、ガイヨウエキス、オドリコソウエキス、オトギリ
ソウエキス、ダイオウエキス、ヤグルマソウエキス、ス
ギナエキス、キズタエキス、キューカンバーエキス、マ
ロニエエキス、サルビアエキス、メリッサエキス、タマ
リンドハスクエキス等が挙げられる。

【００２７】また、殺菌・抗菌剤として、安息香酸、安
息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル、塩化
ジステアリルメチルアンモニウム、塩化ベンゼトニウ
ム、塩化アルキルジアミノエチルグリシン液、塩酸クロ
ルヘキシジン、オルトフェニルフェノール、感光素１０
１号、感光素２０１号、サリチル酸、サリチル酸ナトリ
ウム、ソルビン酸、ハロカルバン、レゾルシン、パラク
ロロフェノール、フェノキシエタノール、ビサボロー
ル、ヒノキチオール、メントール、キトサン、キトサン
分解物、ジユエキス、クジンエキス、エンメイソウエキ
ス、ビワエキス、ウワウルシエキス、ホップエキス、ユ
ッカエキス、アロエエキス、ケイヒエキス、ガジュツエ
キス、油溶性甘草エキス（カンゾウ疎水性フラボノイ
ド、グラブリジン、グラブレン、リコカルコンＡ）等が
挙げられる。

【００２８】また、紫外線吸収剤として、β−イソプロ
ピルフラノン誘導体、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチ
ル、オキシベンゾン、オキシベンゾスルホン酸、テトラ
ヒドロキシベンゾフェノン、ジヒドロキシジメトキシベ
ンゾフェノン、ジヒドロキシベンゾフェノン、シノキサ
ート、ジイソプロピルケイヒ酸メチル、メトキシケイヒ
酸オクチル、パラアミノ安息香酸グリセリル、パラジメ
チルアミノ安息香酸アミル、パラジメチル安息香酸オク
チル、パラアミノ安息香酸オクチル、パラアミノ安息香
酸、パラアミノ安息香酸エチル、ブチルメトキシジベン
ゾイルメタン、酸化チタン、β−カロチン、γ−オリザ
ノール、コメヌカエキス、アロエエキス、カバノキエキ
ス、シラカンバエキス、カミツレエキス、コゴメグサエ
キス、セイヨウサンザシエキス、ヘンナエキス、チョウ
チグルミエキス、マロニエエキス、イチョウ葉エキス、
カミツレエキス、油溶性カンゾウエキス等が挙げられ
る。

【００２９】更に保湿剤として、セリン、グリシン、ス
レオニン、アラニン、コラーゲン、加水分解コラーゲ
ン、ヒドロネクチン、フィブロネクチン、ケラチン、エ
ラスチン、ローヤルゼリー、コンドロイチンヘパリン、
グリセロリン酸脂質、スフィンゴリン脂質、スフィンゴ
糖脂質、リノール酸又はそのエステル類、エイコサペン
タエン酸又はそのエステル類、ペクチン、アルゲコロイ
ド、ビフィズス菌発酵物、乳酸発酵物、酵母抽出物、レ
イシ菌糸体培養物又はその抽出物、小麦胚芽油、アボガ
ド油、米胚芽油、ホホバ油、ダイズリン脂質、γ−オリ
ザノール、ビロウドアオイエキス、ヨクイニンエキス、
ジオウエキス、タイソウエキス、カイソウエキス、キダ
チアロエエキス、ゴボウエキス、マロニエエキス、マン
ネンロウエキス、アルニカエキス、小麦フスマ、コメヌ
カエキス等が挙げられる。

【００３０】また、細胞賦活剤として、胎盤抽出物、リ
ボフラビン又はその誘導体、ピリドキシン又はその誘導
体、ニコチン酸又はその誘導体、パントテン酸又はその
誘導体、α−トコフェロール又はその誘導体、アルニカ
エキス、ニンジンエキス、オタネニンジンエキス、エゾ
ウコギエキス、ヘチマエキス（サポニン）、シコンエキ
ス、シラカンバエキス、オウバクエキス、ボタンピエキ
ス、シャクヤクエキス、ムクロジエキス、ベニバナエキ
ス、アシタバエキス、ビワ葉エキス、ヒキオコシエキ
ス、ユキノシタエキス、黄杞エキス、サルビアエキス、
ニンニクエキス、マンネンロウエキス等が挙げられる。

【００３１】消炎・抗アレルギー剤としてアズレン、ア
ラントイン、アミノカプロン酸、インドメタシン、塩化
リゾチーム、イプシロンアミノカプロン酸、オキシベン
ゾン、グリチルリチン酸又はその誘導体、グリチルレチ
ン酸又はその誘導体、感光素３０１号、感光素４０１
号、塩酸ジフェンヒドラミン、トラネキサム酸又はその
誘導体、アデノシンリン酸、エストラジオール、エスロ
ン、エチニルエストラジオール、コルチゾン、ヒドロコ
ルチゾン、プレドニゾン、プロゲステロン、コルチコス
テロン、アルニカエキス、インチンコウエキス、サンシ
シエキス、ジュウヤクエキス、セイヨウトチノキエキ
ス、カンゾウエキス、トウキエキス、ヨモギエキス、ワ
レモコウエキス、リンドウエキス、サイコエキス、セン
キュウエキス、ボウフウエキス、セイヨウノコギリソウ
エキス、オウレンエキス、シソエキス、マロニエエキ
ス、オウゴンエキス等が挙げられる。

【００３２】抗酸化・活性酸素消去剤としてジブチルヒ
ドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、没子
食酸プロピル、バイカリン、バイカレイン、スーパーオ
キサイドディスムターゼ、カタラーゼ、ローズマリーエ
キス、メリッサエキス、オウゴンエキス、エイジツエキ
ス、ビワ葉エキス、ホップエキス、ハマメリスエキス、
シャクヤクエキス、セージエキス、キナエキス、カミツ
レエキス、ユーカリエキス、シソエキス、イチョウ葉エ
キス、タイムエキス、カルダモンエキス、キャラウェイ
エキス、ナツメグエキス、メースエキス、ローレルエキ
ス、クローブエキス、ターメリックエキス、ヤナギタデ
エキス等が挙げられる。

【００３３】更に、助剤として併用可能なものを次に挙
げると、油脂類として大豆油、アマニ油、キリ油、ゴマ
油、ヌカ油、綿実油、ナタネ油、サフラワー油、トウモ
ロコシ油、オリーブ油、ツバキ油、アーモンド油、ヒマ
シ油、落花生油、カカオ油、モクロウ、ヤシ油、パーム
核油、牛脂、ミンク油、卵黄油、ホホバ油、月見草油、
馬油等が挙げられる。

【００３４】ロウ類としてカルナウバロウ、キャンデリ
ラロウ、蜜ロウ、サラシ蜜ロウ、鯨ロウ、セラックス、
ラノリン類等が挙げられる。

【００３５】また、炭化水素類として、流動パラフィ
ン、ワセリン、マイクロスリスタリンワックス、セレシ
ン、スクワラン、ポリエチレン末が挙げられる。

【００３６】脂肪酸類としては、ステアリン酸、リノー
ル酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ヘベ
ニン酸、ラノリン酸、オレイン酸、ウンデシレン酸、イ
ソステアリン酸等が挙げられる。

【００３７】更に、アルコール類として、ラウリルアル
コール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ラ
ノリンアルコール、水添ラノリンアルコール、オレイル
アルコール、ヘキサデシルアルコール、２−オクチルド
デカノール、グリセリン、ソルビトール、プロピレング
リコール、１,３−ブチレングリコール、エチレングリ
コール又はその重合体、ブドウ糖、白糖、コレステロー
ル、フィトステロール、セトステアリルアルコール等が
挙げられる。

【００３８】また、エステル類としてオレイン酸デシ
ル、ステアリン酸ブチル、ミリスチン酸ミリスチル、ラ
ウリン酸ヘキシル、パルミチン酸イソプロピル、ミリス
チン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシル、
ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、ジオレイン酸プロ
ピレングリコール、フタル酸ジエチル、モノステアリン
酸プロピレングリコール、モノステアリン酸エチレング
リコール、モノステアリン酸グリセリン、トリミリスチ
ン酸グリセリン、酢酸ラノリン、乳酸セチル等が挙げら
れる。

【００３９】また、界面活性剤として、陰イオン性界面
活性剤、陽イオン性界面活性剤、両イオン性界面活性
剤、非イオン性界面活性剤が挙げられる。

【００４０】そして香料にはメントール、カルボン、オ
イゲノール、アネトール、ハッカ油、スペアミント油、
ペパーミント油、ユーカリ油、アニス油その他各種動植
物からのオイル状香料が挙げられる。

【００４１】

【実施例】以下、本発明に係る実施例を示し、本発明に
ついて更に詳細に説明する。

【００４２】〔製造例１〕乾燥した藤茶枝葉部の粗砕物
５００ｇを水５リットルに投入し、還流加熱下に４時間
抽出した。その後、濾過して得られた抽出液を減圧下に
濃縮してペースト状物を得、それを凍結乾燥して、粉末
状抽出物９７ｇを得た。

【００４３】〔製造例２〕乾燥した藤茶技葉部の粗砕物
５００ｇを５０容量％含水エタノール５リットルに投入
し、還流加熱下に４時間抽出した。その後、濾過して得
られた抽出液を減圧下に濃縮してペースト状物を得、そ
れを凍結乾燥して、粉末状抽出物１３０ｇを得た。

【００４４】〔製造例３〕乾操した藤茶技葉部の粗砕物
５００ｇをエタノール５リットルに投入し、還流加熱下
に４時間抽出した。その後、濾過して得られた抽出液を
減圧下に濃縮してペースト状物を得、それを凍結乾燥し
て、粉末状抽出物７９ｇを得た。

【００４５】〔製造例４〕乾燥した藤茶枝葉部の粗砕物
５００ｇを１，３−ブチレングリコール ７リットルに
投入し、９５℃で５時間抽出した。冷却後、濾過して得
られた濾液を５℃に５日間静置し、生じたオリや沈殿を
ケイソウ土濾過により除去し、澄明な抽出液（固形分濃
度１．０５質量％）６リットルを得た。

【００４６】〔製造例５〕乾燥した藤茶技葉部の粗砕物
５００ｇを８０容量％エタノール５リットルに投入し、
還流加熱下に４時間抽出した。得られた抽出液を濾過
し、減圧下に濃縮してペースト状物を得、それを凍結乾
操して、粉末状抽出物１００ｇを得た。

【００４７】〔製造例６〕乾操した藤茶枝葉部の粗砕物
５００ｇをプロピレングリコール ７リットルに投入
し、９５℃で５時間抽出した。冷却後、濾過して得られ
た濾液を５℃に５日間静置し、生じたオリや沈殿をケイ
ソウ土濾過により除去し、澄明な抽出液（固形分濃度
０．２６質量％）６リットルを得た。

【００４８】〔試験例１〕ヒアルロニダーゼ阻害作用の
試験 ヒアルロニダーゼ溶液（４００ユニット／ｍＬ，ｐＨ
３．５酢酸緩衝液）０．１ｍＬと試料溶液０．２ｍＬを
混合し、３７℃で２０分間インキュベーションしたの
ち、活性化剤溶液(２．５ｍＭ−ＣａＣｌ_２)０．２ｍＬ
を加え、３７℃で２０分間インキュベーションして酵素
を活性化した。ヒアルロン酸カリウム緩衝液０．５ｍＬ
を加え、３７℃で４０分間インキュベーションした後、
０．４Ｎ水酸化ナトリウム０．２ｍｌを加えると共に氷
冷して反応を停止させた。次いで０．８Ｍホウ酸溶液
（ｐＨ９．１）０．２ｍＬを加え、沸騰浴中で３分間加
熱後、直ちに２０分間氷冷した。ｐ−ＤＡＢＡ試薬（ｐ
−ジメチルアミノベンズアルデヒド１０ｇを１０Ｎ塩酸
１２．５ｍＬと酢酸８７．５ｍＬの混合液に溶解し、酢
酸で１０倍に希釈したもの）６．０ｍＬを加えて３７℃
で２０分間インキュベーションしたことにより、上記酵
素反応で遊離したＮ−アセチルグルコサミンを発色さ
せ、波長５８５ｎｍの吸光度を測定した。同様の操作と
吸光度測定を、酵素を添加せずに行った。更に、試料溶
液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の
測定を行い、次式によりヒアルロニダーゼの阻害率を求
めた。

【００４９】

【式１】 阻害率（％）＝{１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）}×１００ 但し Ａ：酵素添加, 試料溶液添加時の吸光度 Ｂ：酵素無添加, 試料溶液添加時の吸光度 Ｃ：酵素添加, 試料溶液無添加時の吸光度 Ｄ：酵素無添加, 試料溶液無添加時の吸光度

【００５０】試料濃度を段階的に減少させて上記阻害率
の測定を行い、阻害率が５０％になる試料濃度(ｐｐｍ)
を内挿法により求めた。

【００５１】 ＜表１＞ 抽 出 溶 媒 ５０％阻害濃度（ｐｐｍ） 水 ２５６ エタノール／水（１／１） ２４５ エタノール ＞４００

【００５２】表１に示される結果より、藤茶抽出物がヒ
アルロニダーゼ活性を阻害する作用を有することが確認
された。

【００５３】〔試験例２〕ヒスタミン遊離抑制試験 細胞内のヒスタミンが遊離されると同時にヘキソサミニ
ダーゼも遊離されることから、ヘキソサミニダーゼ遊離
を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価する。２５ｍＬ
の培養フラスコに入れた培地（１５％ＦＢＳ添加Ｓ−Ｍ
ＥＭ培地；以下同じ）にＲＢＬ−２Ｈ３細胞１．０×１
０^６個を播種し、３７℃、５％ＣＯ_２−９５％ａｉｒの
下で４日間培養した。次いでトリプシン処理し、遠心分
離（８００ｒｐｍ，４分間）して細胞を集めた。得られ
た細胞を４．０×１０^５ｃｅｌｌ／ｍＬで培地に懸濁
し、そこにマウスモノクロナール抗ジニトロフェニル基
ＩｇＥ（ＤＮＰ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＩｇＥ）を０．５
μｇ／ｍＬの濃度で添加した。この細胞浮遊液を９６穴
プレートの１穴に付き１００μＬずつ播種し、３７℃、
５％ＣＯ_２−９５％ａｉｒの下で２４時間培養した。培
養終了後、各穴中の培地を除去し、シラガニアン緩衝液
で２回洗浄した。次に上記緩衝液３０μＬ及び試料溶液
１０μＬを加え、３７℃で１０分間インキュベーション
した。次にジニトロフェニル化ウシ血清アルブミン（Ｄ
ＮＰ−ＢＳＡ）１０μＬを加え、更に３７℃で１５分間
インキュベーションした。その後、氷冷下で上清１０μ
Ｌを新たな９６穴プレートに移し替え、これに１ｍｍｏ
ｌ／Ｌ ｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−
グルコサミド溶液１０μＬを加え、３７℃で１時間イン
キュベーションした。反応終了後、０．１ｍｏｌ／Ｌ
ＮａＣＯ−Ｎａ_２ＨＣＯ _３溶液２５０μＬを加え、マイ
クロプレートリーダーにて６５０ｎｍを対照に４１５ｎ
ｍにおける吸光度Ａを測定した。試料溶液の代りにシラ
ガニアン緩衝液を添加した細胞上清についても同様の処
理と吸光度測定を行った（このとき測定された吸光度を
Ｂとした）。また、細胞上清と０．１ｍｏｌ／Ｌ Ｎａ
ＣＯ−Ｎａ _２ＨＣＯ_３溶液を同様の処理で反応させたも
のについても、吸光度測定を行った（このとき測定され
た吸光度をＣとした）。同様の操作をＤＮＰ−ＢＳＡの
かわりにシラガニアン緩衝液を加えたものについても行
った(このとき、測定された吸光度をＤとした)。そし
て、次式によりへキソサミニダーゼ遊離抑制率を求め
た。

【００５４】

【式２】遊離抑制率（％）＝〔１−｛（Ａ−Ｃ−Ｄ）／
（Ｂ−Ｄ）｝〕×１００

【００５５】試料濃度を段階的に減少させて上記抑制率
の測定を行い、ヘキソサミニダーゼの遊離を５０％阻害
する試料濃度(ｐｐｍ)を内挿法により求めた。

【００５６】 ＜表２＞ 抽 出 溶 媒 ５０％阻害濃度（ｐｐｍ） 水 ７１ エタノール／水（１／１） ５４ エタノール ３８

【００５７】表２に示される結果より、藤茶抽出物がへ
キソサミニダーゼ遊離を阻害する作用を有することが確
認された。

【００５８】〔試験例３〕サイクリックＡＭＰホスホジ
エステラーゼ阻害試験 ５ｍＭの塩化マグネシウムを含有するトリス塩酸緩衝液
（ｐＨ７．５）０．２ｍＬに胎児血清アルブミン溶液
０．１ｍＬ及びサイクリックＡＭＰホスホジエステラー
ゼ溶液０．１ｍＬを加え、更に試料溶液０．０５ｍＬを
加え、３７℃で５分間プレインキュベーションした。次
いでサイクリックＡＭＰ溶液０．０５ｍＬを加え、３７
℃で６０分間インキュベーションした。 沸騰浴中で３
分間煮沸して反応を停止させ、４℃で３５００ｒｐｍ遠
心分離し、上清中の反応基質・５′−ＡＭＰを高速液体
クロマトグラフィーにより定量した。試料溶液を添加せ
ずに同様の酵素反応と反応基質の分析を行い、試料無添
加時の反応基質量に対する試料添加時の反応基質量の比
率より、試料のサイクリックＡＭＰホスホジエステラー
ゼ阻害率を求めた。

【００５９】試料溶液の試料濃度を段階的に減少させて
上記の測定を繰り返し、サイクリックＡＭＰホスホジエ
ステラーゼの活性を５０％阻害する試料濃度ＩＣ
_５０(ｐｐｍ)を内挿法により求めた。その結果を表３に
示す。

【００６０】 ＜表３＞ 抽 出 溶 媒 ５０％阻害濃度（ｐｐｍ） 水 １７１ エタノール／水（１／１） １１０ エタノール １５７

【００６１】表３に示される結果より、藤茶抽出物がサ
イクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性を阻害する
作用を有することが確認された。

【００６２】〔配合例〕次に上記で得られた藤茶抽出物
を用いて以下の配合例を製造したところ、いずれの場合
においても、良好な製剤を得ることができた。

【００６３】(配合例１)下記組成の化粧水を常法により
製造した。 グリセリン ３．０ｇ １，３−ブチレングリコール ３．０ｇ グリチルリチン酸ジカリウム ０．５ｇ オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O） ０．５ｇ パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ クエン酸 ０．１ｇ クエン酸ソーダ １．０ｇ アスコルビン酸リン酸マグネシウム ０．１ｇ オウゴン抽出物 ０．５ｇ オウレン抽出物 ０．５ｇ 製造例１の藤茶抽出物 １．０ｇ 香料 ０．０５ｇ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）

【００６４】(配合例２)下記組成の化粧水を常法により
製造した。 グリセリン ５．０ｇ プロピレングリコール ４．０ｇ ポリオキシエチレンセチルエーテル ２．０ｇ エタノール １０．０ｇ クエン酸・リン酸塩緩衝剤 微量 パラオキシ安息香酸メチル 適量 アントラニル酸メチル 適量 ビワ抽出物 ０．５ｇ レイシ抽出物 ０．５ｇ 製造例３の藤茶抽出物 １．０ｇ 香料 ０．１ｇ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）

【００６５】(配合例３)下記組成の洗浄用化粧水を常法
により製造した。 プロピレングリコール ８．０ｇ ポリエチレングリコール１５００ ５．０ｇ ヒドロキシメチルセルロース ０．１ｇ ポリオキシエチレンモノオレイルエーテル １．０ｇ 水酸化カリウム ０．０５ｇ エタノール ２０．０ｇ サリチル酸 ０．１ｇ グリチルリチン酸ジカリウム ０．５ｇ アロエ抽出物 ０．５ｇ インチンコウ抽出物 ０．５ｇ 黄杞抽出物 ０．５ｇ 製造例２の藤茶抽出物 １．０ｇ 香料 ０．２ｇ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）

【００６６】（配合例４）下記組成のクリームを常法に
より製造した。 流動パラフィン ５．０ｇ サラシミツロウ ４．０ｇ セタノール ３．０ｇ スクワラン １０．０ｇ ラノリン ２．０ｇ ステアリン酸 １．０ｇ オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O） １．５ｇ 自己乳化型ステアリン酸グリセリン ３．０ｇ １，３−ブチレングリコール ６．０ｇ パラオキシ安息香酸メチル ０．５ｇ 油溶性甘草エキス ０．５ｇ ジュ抽出液 ０．３ｇ 製造例５の藤茶抽出物 １．０ｇ 香料 ０．１ｇ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）

【００６７】（配合例５）下記組成のクリームを常法に
より製造した。 流動パラフィン ５．０ｇ サラシミツロウ ４．０ｇ セタノール ３．０ｇ スクワラン １０．０ｇ ラノリン ２．０ｇ ステアリン酸 １．０ｇ オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O） １．５ｇ 自己乳化型ステアリン酸グリセリン ３．０ｇ １，３−ブチレングリコール ６．０ｇ ヒノキチオール ０．５ｇ イチョウ抽出物 ０．５ｇ エンメイソウ抽出物 ０．３ｇ 製造例３の藤茶抽出物 １．０ｇ 香料 ０．１ｇ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）

【００６８】（配合例６）下記組成のクリームを常法に
より製造した。 ステアリン酸 １４．０ｇ ワセリン ２．０ｇ モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン １．５ｇ 自己乳化型ステアリン酸グリセリン ２．５ｇ プロピレングリコール １０．０ｇ パラオキシ安息香酸ナトリウム 適量 酢酸トコフェロール 適量 ウコン抽出物 ０．３ｇ コウボ抽出物 ０．３ｇ 製造例４の藤茶抽出物 １．０ｇ 香料 ０．３ｇ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）

【００６９】（配合例７）下記組成のパックを常法によ
り製造した。 カオリン ４６．５ｇ タルク １８．０ｇ 酸化亜鉛 １８．０ｇ オリーブ油 ２．０ｇ モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン １．０ｇ プロピレングリコール ８．０ｇ パラオキシ安息香酸エチル 適量 プルーン抽出物 ０．５ｇ ユキノシタ抽出物 ０．５ｇ 製造例４の藤茶抽出物 ５．０ｇ 香料 ０．５ｇ

【００７０】（配合例８）下記組成のパックを常法によ
り製造した。 ポリビニルアルコール １５．０ｇ カルボメキシメチルセルロース ５．０ｇ グリセリン ３．０ｇ エタノール １０．０ｇ パラオキシ安息香酸エチル ０．０５ｇ 酢酸トコフェロール 適量 ワレモコウ抽出物 ０．３ｇ 緑茶抽出物 ０．３ｇ ニンジン抽出物 ０．３ｇ 製造例５の藤茶抽出物 ５．０ｇ 香料 ０．０５ｇ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）

【００７１】（配合例９）下記組成のシャンプーを常法
により製造した。 ラウリン酸トリエタノールアミン塩 １６．０ｇ ラウリン酸ジエタノールアミド ４．０ｇ エチレングリコールジステアレート ２．０ｇ エチレングリコールモノステアレート ２．０ｇ パラヒドロキシ安息香酸ブチル ０．２ｇ エンメイソウ抽出物 ０．３ｇ イチョウ抽出物 ０．３ｇ アロエ抽出物 ０．２ｇ 製造例１の藤茶抽出物 ０．５ｇ 香料 ０．１ｇ 着色料 ０．１ｇ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）

【００７２】（配合例１０）下記組成の浴用剤(粉末状)
を常法により製造した。 硫酸ナトリウム ４５．０ｇ 炭酸水素ナトリウム ５１．０ｇ ホウ砂 ２．０ｇ 色素 適量 香料 適量 製造例１の藤茶抽出物 １．０ｇ オウバク抽出物 ０．１ｇ ガイヨウ抽出物 ０．１ｇ カミツレ抽出物 ０．１ｇ

【００７３】（配合例１１）下記組成の浴用剤(顆粒状)
を常法により製造した。 硫酸ナトリウム ４５．０ｇ 炭酸水素ナトリウム ５０．０ｇ ホウ砂 ２．０ｇ カルボキシメチルセルロース １．０ｇ 色素 適量 香料 適量 製造例２の藤茶抽出物 １．０ｇ ショウブ抽出物 ０．１ｇ センキュウ抽出物 ０．１ｇ チンピ抽出物 ０．１ｇ トウキ抽出物 ０．１ｇ

【００７４】（配合例１２）下記組成の浴用剤(錠剤)を
常法により製造した。 硫酸ナトリウム ５０．０ｇ 炭酸水素ナトリウム １６．０ｇ 炭酸ナトリウム ５．０ｇ クエン酸 ２７．０ｇ トウヒ抽出物 ０．１ｇ グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ モモ抽出物 ０．１ｇ ユズ抽出物 ０．１ｇ 製造例３の藤茶抽出物 １．０ｇ 色素 適量 香料 適量

【００７５】

【発明の効果】本発明によれば安全で新規なヒアルロニ
ダーゼ阻害剤、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害剤、サイク
リックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤及び肌荒れ改
善化粧料を提供することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4C083 AA08 AA11 AA12 AB03 AB21 AB27 AB31 AB35 AB43 AC02 AC07 AC10 AC12 AC18 AC24 AC30 AC39 AC42 AC44 AC47 AC48 AC54 AC55 AD04 AD09 AD11 AD27 AD51 AD53 AD55 AD64 AD66 CC02 CC04 CC05 CC07 CC25 CC38 4C088 AB56 AC05 BA08 CA05 CA08 MA28 MA63 NA14 ZA89 ZC20

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】藤茶抽出物よりなるヒアルロニダーゼ阻害
   剤。
2. 【請求項２】藤茶抽出物よりなるヘキソサミニダーゼ遊
   離阻害剤。
3. 【請求項３】藤茶抽出物よりなるサイクリックＡＭＰホ
   スホジエステラーゼ阻害剤。
4. 【請求項４】請求項１記載のヒアルロニダーゼ阻害剤及
   び／又は請求項２記載のヘキソサミニダーゼ遊離阻害剤
   及び／又は請求項３記載のサイクリックＡＭＰホスホジ
   エステラーゼ阻害剤を配合してなる肌荒れ改善化粧料。