JP2007530531A - ジンセノサイドf1及びegcgを含有する皮膚損傷防止用組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
また、本発明は、ジンセノサイドF1とEGCG混合物を有効成分として含有する、紫外線によりその発現が減少されるBcl−2のための発現調節剤を提供する。
また、本発明は、ジンセノサイドF1とEGCG混合物を有効成分として含有する、紫外線により減少されるBrn−3a発現調節剤を提供する。
紅参(タバコ人参公社、6年産紅参)2Kgに水を含むメタノール4Lを入れ、3回還流抽出した後、15℃で6日間沈積させた。その後、濾過布を用いた濾過と遠心分離を通じて残渣と濾液を分離し、分離された濾液を減圧濃縮した。濃縮液を水に懸濁した後、エーテル1Lで5回抽出して色素を除去した。水層を1−ブタノール500mLで3回抽出して得た1−ブタノール層全体を5%KOHで処理した後、蒸留水で洗浄した。次に、減圧濃縮して1−ブタノール抽出液を得、これを少量のメタノールに溶解した後、大量のエチルアセテートに追加した。得られた沈殿物を乾燥し、人参精製サポニン70gを得た。
参照例1の人参精製サポニン10gをシトレート緩衝溶液(pH4.0)1000mLに溶解させ、これにペニシリウム属から分離したナリンジナーゼ(Sigma、St.Louis、MO)15gを添加し、40℃の水浴上で48時間攪拌させながら反応させた。反応が終了した後、10分間加熱して酵素を失活させ、反応液は、同量のエチルアセテートで3回抽出して濃縮した。得られた生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム:メタノール=9:1)で分離し、ジンセノサイドF1を1.5g得た。
[段階1]細胞株と細胞培養
人体皮膚細胞株(human keratinocyte)であるHaCaT(Dr.N.E.Fusenig(DeutschesKrebsforschungszentrum(DKFZ)、Heidelberg、Germany)から入手した)を10%牛血清を含むDMEM培地(Dulbecco’s modified
Eagle’s medium、Gibco1210−0038)で培養した。培
養は、いずれも37℃、5%CO2培養器で行った。
段階1で培養された細胞株をトリプシンで処理し、単一細胞の懸濁液を作った後、6−wellに2×105個ずつ分株し、24時間培養した。次に、牛血清が含まれないDMEM培地に交換し、さらに24時間培養した後、2μMのジンセノサイドF1;10μMのEGCG;2μMのジンセノサイドF1と10μMのEGCGを混合したもの;5μMのジンセノサイドF1;及び50μMのEGCGを各々処理した。
参考として、ジンセノサイドF1は、100%エタノールに溶解し、常に培地の1/1000の濃度で準備し、EGCG(Sigma)は、ジメチルスルホキサイド(DMSO)に溶解し、培地の1/1000の濃度で準備し、各培養液に必要な量だけ添加することによって、添加量を調節した。
[段階1]細胞株と細胞培養
実験に利用された細胞株と細胞培養は、実施例1の段階1と同様である。
段階1で培養された細胞株をトリプシンで処理して単一細胞の懸濁液を作った後、6−wellに2×105個ずつ分株し、24時間培養した。次に、牛血清が含まれないDMEM培地に交換し、さらに24時間培養した後、2μMのジンセノサイドF1;10μMのEGCG;2μMのジンセノサイドF1と10μMのEGCGを混合したもの;5μMのジンセノサイドF1;及び50μMのEGCGを各々処理した。ジンセノサイドF1は、100%エタノールに溶解し、常に培地の1/1000の濃度が含まれるようにし、EGCG(Sigma)は、DMSOに溶解し、培地の1/1000の濃度が含まれるようにした。24時間にわたって各化合物を処理した後、PBSで洗浄し、PBSを入れた状態で60mJ/cm2濃度のUVBを照射した。次に、PBSを捨てて、さらに同じ濃度の各化合物が含まれた培地に交換した。薬物を処理しない細胞を対照区として同一に培養した。
[段階1]細胞株と細胞培養
実験に利用された細胞株と細胞培養は、実施例1の段階1と同様である。
段階1で培養された細胞株をトリプシンで処理して単一細胞の懸濁液を作った後、6−wellに2×105個ずつ分株し、24時間培養した。次に、牛血清が含まれないDMEM培地に交換し、さらに24時間培養した後、2μMのジンセノサイドF1;10μMのEGCG;2μMのジンセノサイドF1と10μMのEGCGを混合したもの;5μMのジンセノサイドF1;及び50μMのEGCGを各々処理した。ジンセノサイドF1は、100%エタノールに溶解し、常に培地の1/1000の濃度が含まれるようにし、EGCG(Sigma)は、DMSOに溶解し、培地の1/1000の濃度が含まれるようにした。24時間にわたって各化合物を処理した後、PBSで洗浄し、PBSを入れた状態で60mJ/cm2濃度のUVBを照射した。次に、PBSを捨てて、さらに同じ濃度の各化合物が含まれた培地に交換した。薬物を処理しない細胞を対照区として同一に培養した。
[段階1]細胞株と細胞培養
実験に利用された細胞株と細胞培養は実施例1の段階1と同様である。
段階1で培養された細胞株をトリプシンで処理して単一細胞の懸濁液を作った後、6−wellに2×105個ずつ分株し、24時間培養した。次に、牛血清が含まれないDMEM培地に交換し、さらに24時間培養した後、2μMのジンセノサイドF1;10μMのEGCG;2μMのジンセノサイドF1と10μMのEGCGを混合したもの;5μMのジンセノサイドF1;及び50μMのEGCGを各々処理した。ジンセノサイドF1は、100%エタノールに溶解し、常に培地の1/1000の濃度が含まれるようにし、EGCG(Sigma)は、DMSOに溶解し、培地の1/1000の濃度が含まれるようにした。24時間にわたって各化合物を処理した後、PBSで洗浄し、PBSを入れた状態で60mJ/cm2濃度のUVBを照射した。次に、PBSを捨てて、さらに同じ濃度の各化合物が含まれた培地に交換した。薬物を処理しない細胞を対照区として同一に培養した。
[段階1]細胞株と細胞培養
実験に利用された細胞株と細胞培養は、実施例1の段階1と同様である。
段階1で培養された細胞株をトリプシンで処理して単一細胞の懸濁液を作った後、6−wellに2×105個ずつ分株し、24時間培養した。次に、牛血清が含まれないDMEM培地に交換し、さらに24時間培養した後、2μMのジンセノサイドF1;10μMのEGCG;2μMのジンセノサイドF1と10μMのEGCGを混合したもの;5μMのジンセノサイドF1;及び50μMのEGCGを各々処理した。ジンセノサイドF1は、100%エタノールに溶解し、常に培地の1/1000の濃度が含まれるようにし、EGCG(Sigma)は、DMSOに溶解し、培地の1/1000の濃度が含まれるようにした。24時間にわたって各化合物を処理した後、PBSで洗浄し、PBSを入れた状態で60mJ/cm2濃度のUVBを照射した。次に、PBSを捨てて、さらに同じ濃度の各化合物が含まれた培地に交換した。薬物を処理しない細胞を対照区として同一に培養した。
Claims (10)
- 20−O− β −D−グルコピラノシル−20(S)−プロトパナックサトリオール(ジンセノサイドF1)及び(−)エピガロカテキン−3−ガレート(EGCG)を有効成分として含有する皮膚保護用組成物。
- 前記皮膚保護は、前記有効成分による細胞死滅抑制による皮膚保護であることを特徴とする請求項1に記載の組成物。
- 前記細胞死滅抑制は、低線量の紫外線の照射により誘導される細胞死滅の抑制であることを特徴とする請求項2に記載の組成物。
- 前記細胞死滅抑制は、Bcl−2発現調節によるものであることを特徴とする請求項2又は3に記載の組成物。
- 前記Bcl−2発現調節は、Brn−3a発現調節によるものであることを特徴とする請求項4に記載の組成物。
- 前記ジンセノサイドF1及びEGCGは、組成物の総重量に対して0.0001〜10重量%の量で含有されることを特徴とする請求項1〜5のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記ジンセノサイドF1とEGCGの比率は、重量比で1:0.1〜10の範囲であることを特徴とする請求項1〜5のいずれか1項に記載の組成物。
- ジンセノサイドF1及びEGCGを有効成分として含有することを特徴とするRb蛋白質の脱リン酸化抑制剤。
- 低濃度のジンセノサイドF1とEGCG混合物を有効成分として含有し、紫外線の露出による細胞損傷を防止することを特徴とする皮膚損傷抑制剤。
- ジンセノサイドF1とEGCG混合物を有効成分として含有することを特徴とする皮膚外用剤組成物。
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