JP2004315543A - 化粧品組成物中の乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

【課題】老化及び／若しくは光損傷を受けたヒトの皮膚、毛髪又は爪に局所的に適用するための組成物並びに該組成物の製造法を提供すること。
【解決手段】乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤と特定のカルボン酸とのある種の組み合わせは皮膚の表皮ケラチン細胞の増殖及びコラーゲン合成を刺激する。
【選択図】なし

Description

本発明は、乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤とカルボン酸との特定の組み合わせを含む、ヒトの皮膚、毛髪又は爪に局所的に適用するための組成物、並びに皮膚、毛髪又は爪を治療及びコンディショニングするための該組成物の使用法に関する。

近年、皮膚の外観を改善する化粧品組成物が消費者に好まれるようになっている。現在では、老化及び／又は乾燥した肌の視覚的兆候を治療又は予防する化粧品組成物が要望されている。

皮膚細胞の増殖は成長及び修復に必要な過程であるが、増殖は老化又は光損傷に伴って減少する。コラーゲン（主要皮膚タンパク質）の合成も老化又は光損傷に伴って減少する。本発明は少なくとも部分的には、局所治療用組成物に乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤とカルボン酸との特定の組み合わせを配合すると、 皮膚の状態及び外観を改善する皮膚細胞の増殖及びコラーゲンの合成が増大され得るという知見に基づいている。

皮膚組織（皮膚細胞、毛包、爪）は、主として血液からグルコース（生物エネルギー源）を得る。次いでグルコースは酵素によりピルベートに分解される。次いでピルベートは少なくとも３つの経路を介して皮膚組織内で代謝される。第１の経路では、ピルベートは酸化を受けてアセチル−補酵素Ａのアセチル基を形成し、次いで該アセチル−補酵素Ａがクレブス回路を介してＣＯ_２及びＨ_２Ｏに完全に酸化される。第２の経路では、ピルベートはラクテートに還元される。第３の経路では、ピルベートは３種のアミノ酸（バリン、アラニン及びロイシン）の生合成用前駆体としての役割を果たす。

第２の経路ではエネルギーが十分に生成されない。特に、１個のグルコース分子がラクテートに変換されても、グルコースがクレブス回路を介してＣＯ_２とＨ_２Ｏに完全に酸化されたときに放出され得る総エネルギーの約５〜７％が得られるに過ぎない。

ピルベートが少なくとも３つの経路を介して皮膚組織内で代謝され、ピルベートからラクテートへの変換が主要経路らしいということは公知であるが、ピルベートのどのフラクションがこれら３つの経路のいずれを介して代謝されるのかは解明されていない。皮膚組織における老化とエネルギー生成との関係は完全には理解されていないが、細胞の生体エネルギーが老化に伴って失われるという示唆はなされている。例えば、Ｌｉｎｎａｎｅ，Ａｎｔｈｏｎｙ Ｗ．ら，“Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ａｇｅｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ：ｂｉｏｅｎｅｒｇｙ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ，”Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，第２７５巻（１９９２）１９５−２０８ページを参照されたい。

本発明に用いられている特定の乳酸デヒドロゲナーゼは局所的治療用組成物に用いることが開示されている。例えば、Ｙｕらの米国特許第５，０９１，１７１号明細書を参照されたい。しかし、Ｙｕらはこれらの成分を乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤として用いていないし、該成分を本発明に含まれる特定の補活性成分と共に用いることも示唆していない。Ｗｉｌｄｎａｕｅｒの米国特許第４，２９４，８５２号は、α−及びβ−炭素のいずれか又は両方が、ヒドロキシル又はケト官能基で置換されている酸、例えば、シュウ酸、コハク酸、２−ケトマロン酸、２−ケトグルタル酸、リンゴ酸、β−ヒドロキシ酪酸、グリオキシル酸、ピルビン酸及びアセト酢酸を含む、２〜１０個の炭素原子を有する飽和脂肪酸を皮膚治療用組成物に用いることを開示している。

Ｙｕらと同様にＷｉｌｄｎａｕｅｒは、開示されている酸を乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤としては用いていない。さらに、Ｗｉｌｄｎａｕｅｒは、本発明の目的を達成するために必要な成分の特定の組み合わせをを教示しておらず、Ｗｉｌｄｎａｕｅｒにより教示されている酸の全てが本発明に使用するのに適当であるわけではない。

本発明は、ヒトの皮膚、毛髪又は爪に局所的に適用するための新規な組成物を含み、該組成物は、
（ｉ）タルトロン酸、ピルビン酸、ピルビン酸アルキルエステル、グリオキシル酸、シュウ酸、２−ケトマロン酸及びそれらの混合物からなる群から選択される乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤約０．００１〜約２０％；
（ｉｉ）酢酸、アセト酢酸、コハク酸、フマル酸、ｃｉｓ−アコニット酸、β−ヒドロキシ酪酸及びそれらの混合物からなる群から選択される補活性成分約０．０１〜約２０％；
（ｉｉｉ）化粧品上許容し得るビヒクル
からなる。

補活性成分は、最適な効能、安定性、及びコストを達成するために、コハク酸、フマル酸、酢酸又はｃｉｓ−アコニット酸から選択するのが最も好ましい。

本発明はさらに、皮膚、毛髪及び爪の状態の治療及びコンディショニング用薬剤を製造するための上記組成物の使用をも含む。

本発明組成物は、しわが多く、かさかさして、老化し、光損傷を受けた皮膚の外観、しみの外観の治療、及び皮膚障害の治療用薬剤の製造に用いるのが特に好ましい。本発明組成物は、既に乾燥し、かさかさして、しわが多く、老化し、光損傷を受けた状態、又は皮膚障害にかかっている哺乳動物の皮膚に局所的に適用することを意図しているが、本発明組成物は、劣化性病変を予防又は軽減するべく正常で健康な皮膚に予防的に適用してもよい。

（発明の実施の形態）
乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤
乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤は本発明組成物の必須成分である。

乳酸デヒドロゲナーゼは動物の組織中に５種の異なるアイソザイムとして存在する。全ての乳酸デヒドロゲナーゼアイソザイムは、それぞれ約３３，５００の分子量の４個のポリペプチド鎖を含んでいるが、該５種のアイソザイムは、組成及び配列の点で異なる２種類のポリペプチド鎖を異なる量で含んでいる。Ａ鎖（筋肉の場合にはＭとも称される）及びＢ鎖（心臓の場合にはＨとも称される）は、２個の異なる遺伝子によってコードされる。骨格筋においては、乳酸デヒドロゲナーゼアイソザイムは４個のＡ鎖を含んでいる。心臓では主要アイソザイムは４個のＢ鎖を含んでいる。他の組織中の乳酸デヒドロゲナーゼアイソザイムは、Ａ４、Ａ３Ｂ、Ａ２Ｂ２、ＡＢ３及びＢ４で示し得る５種の形態の混合物である。各乳酸デヒドロゲナーゼアイソザイムはそれぞれ顕著に異なっている。例えば、ＬＤＨアイソザイムＡ４は骨格筋でピルベートのラクテートへの急速な還元を促進するが、アイソザイムＢ４は心臓でラクテートのピルベートへの急速な酸化を促進する傾向がある。皮膚に存在する主要なアイソザイムはＡ４であるが、他のアイソザイムも少なくともある程度存在することが実証されている。Ｎｉｓｈｉｔａｎｉ，Ｋｏｊｉら，“Ｌａｃｔａｔｅ Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ Ｉｓｏｚｙｍｅ Ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ Ｎｏｒｍａｌ Ｈｕｍａｎ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ−ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ Ｃｏｕｎｔｅｒｐａｒｔｓ Ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ Ｃｏ−６０ Ｇａｍｍａ−Ｒａｙｓ，ＳＶ４０ ｏｒ ４−Ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｌｉｎｅ １−ｏｘｉｄｅ”，Ｇａｎｎ，７２，Ａｐｒｉｌ １９８１，３００−３０４ページ；Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｊｅｒ，Ｒａｕｌ，Ｍ．Ｄ．ら，“Ｌａｃｔａｔｅ Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ Ｉｓｏｚｙｍｅ Ｐａｔｔｅｒｎｓ ｉｎ Ｂｌｉｓｔｅｒ Ｆｌｕｉｄｓ”，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，第５０巻，Ｎｏ．５（１９６８），４０５−４０８ページを参照されたい。しかし、乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤は、乳酸デヒドロゲナーゼの全てのアイソザイムを少なくともある程度阻害すると考えられる。

適当な乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤は以下の通りである：タルトロン酸、ピルビン酸、ピルビン酸アルキルエステル、グリオキシル酸、シュウ酸、２−ケトマロン酸及びそれらの混合物。

乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤は、本発明組成物中に該組成物の約０．００１〜約２０重量％の量で存在する。効能を最大にし且つコストを最小にするためには、該阻害剤の量は、好ましくは約１〜約１０％、最も好ましくは約４〜約８％である。

特定の皮膚組織を治療するための特定の阻害剤の適合性は、本明細書の実施例１に記載のようにして、乳酸デヒドロゲナーゼの活性を測定することにより調べ得る。

本発明の好ましい実施態様において、本発明組成物は皮膚治療用組成物であり、該組成物中の乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤は、効能及び安定性を最大にし且つコストを最適化するために、タルトロン酸及び２−ケトマロン酸からなる群から選択される。本発明組成物中の阻害剤はタルトロン酸であるのが最も好ましい。

補活性成分
酢酸、アセト酢酸、コハク酸、フマル酸、ｃｉｓ−アコニット酸、３−ヒドロキシ酪酸及びそれらの混合物からなる群から選択される補活性成分は本発明組成物の第２の必須成分である。

本発明組成物に含まれる好ましい補活性成分は、効能、安定性及びコストを最適化するために、フマル酸、酢酸又はｃｉｓ−アコニット酸から選択される。

補活性成分は、本発明組成物中に、該組成物の約０．０１〜約２０重量％の量で存在する。効能を最大にし且つコストを最小にするためには、該量が約１〜約１０％の範囲であるのが好ましく、約４〜約８％の範囲であれば最も好ましい。

化粧品上許容し得るビヒクル
本発明組成物はさらに、該組成物を、皮膚、毛髪及び／又は爪に適用したときに該組成物の分配を容易にするように、該組成物中の活性成分に対する希釈剤、分散剤又はキャリヤーとしての役割を果たす化粧品上許容し得るビヒクルを含んでいる。

水以外のビヒクルとしては、脂質若しくは固体皮膚軟化剤、溶媒、湿潤剤、増粘剤及び粉末が例示される。特に好ましい非水性キャリヤーはポリジメチルシロキサン及び／又はポリジメチルフェニルシロキサンである。本発明のシリコーンは、２５℃で約１０〜１０，０００，０００センチストークの範囲の粘度を有するものであってよい。特に望ましいシリコーンは、低粘度シリコーンと高粘度シリコーンとの混合物である。これらのシリコーンは、Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ ＣｏｍｐａｎｙからＶｉｃａｓｉｌ，ＳＥ及びＳＦという商標名で、Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙから２００及び５００ Ｓｅｒｉｅｓという商標名で入手し得る。本発明組成物に用い得るシリコーンの量は、該組成物の５〜９５重量％、好ましくは２５〜９０重量％の範囲である。

化粧品上許容し得るビヒクルは、通常、エマルジョンの５〜９９．９重量％、好ましくは２５〜８０重量％の範囲であり、他の化粧品添加物が存在しない場合には、該組成物の残りの部分を形成し得る。

組成物のｐＨ
本発明組成物のｐＨは、活性成分を皮膚に浸透させるために重要である。一般に本発明組成物のｐＨは、約３〜約８の範囲である。浸透を最大にするには、ｐＨは約３〜約５の範囲が好ましく、３．５〜４．５の範囲が最も好ましい。

本発明に用いられる乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤のいくつか及び補活性成分は酸である。乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤として機能させるためには、これらの酸のあるものは塩形態でなければならないことに留意されたい。しかし、組成物のｐＨ及び用いられる特定の酸のｐＫａによっては、塩が組成物中に酸の形態又は酸／塩混合物の形態で存在してもよい。組成物中の塩／酸混合物中の塩及び酸の相対比率は、組成物が一旦皮膚に適用されると、皮膚のｐＨ（典型的には、６〜７程度のわずかに酸性であるが、個体により又は皮膚の状態により異なる）と組成物のｐＨとの差に応じて異なり得ることを理解されたい。さらに、化合物が実施例１に記載のようなｐＨ７．０〜７．５で行われる乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤テストを満足する場合には、該化合物は組成物に配合するのに適当であることも理解されたい。例えば、組成物のｐＨが約３〜４の場合、組成物中のグリオキシレート塩の主要フラクションは組成物中にグリオキシル酸の形態で存在する。しかしそのような組成物は、皮膚に適用した後でグリオキシル酸の少なくとも一部が塩に変換されて乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤として機能し得るので、該組成物も本発明の範囲内に包含される。言い換えれば、組成物中に存在する化合物がｐＨ７．０〜７．５での乳酸デヒドロゲナーゼ阻害テストを満足するなら、該組成物はそのｐＨのいかんに拘わらず本発明の範囲内に包含される。

明確にするために、以下の成分が本発明組成物中に塩の形態で存在してよい；タルトロン酸、ピルビン酸、グリオキシル酸、シュウ酸、２−ケトマロン酸、酢酸、アセト酢酸、コハク酸、フマル酸、ｃｉｓ−アコニット酸、β−ヒドロキシ酪酸。

組成物中に存在し得る適当な塩には、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエタノールアミン塩、カルシウム塩、リチウム塩が含まれるが、それらには限定されない。該塩は、市販物から得てもよいし、当業界において公知の方法、例えば、酸をアンモニウム、カルシウム、ナトリウムの水酸化物のような適当な塩基で中和することにより製造してもよい。

任意の皮膚有効物質及び化粧品添加物
主として、用いられる乳化剤の平均親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）に応じて、水中油滴型エマルジョン又は油中水滴型エマルジョンを提供する乳化剤と共に、油又は油性物質が存在してもよい。

本発明の化粧品組成物には種々のタイプの活性成分が存在してよい。活性成分は、皮膚軟化剤及び組成物の物理特性を改善するに過ぎない成分以外の皮膚又は毛髪に有効な薬剤と定義される。一般的な例には、サンスクリーン、日焼け剤、ふけ止め剤、ヘアコンディショナー及び育毛刺激剤が含まれるが、このカテゴリーには限定されない。

サンスクリーンには、紫外光をブロックするのに一般的に用いられている物質が含まれる。そのような化合物の例としては、ＰＡＢＡ誘導体、シンナメート及びサリチレートが挙げられる。例えば、オクチルメトキシシンナメート及び２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン（オキシベンゾンとしても知られている）を用いてよい。オクチルメトキシシンナメート及び２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンはそれぞれＰａｒｓｏｌ ＭＣＸ及びＢｅｎｚｏｐｈｅｎｏｎｅ−３という商標名で市販されている。エマルジョンに用いるサンスクリーンの正確な量は、太陽の紫外線からどの程度保護したいかにより異なり得る。

本発明組成物に混入し得る好ましい任意活性成分は、皮膚の透水障壁層の形成及び維持に重要な役割を果たすセラミドである。適当なセラミド及びその合成アナログが、欧州特許出願第５３４２８６号、欧州特許出願第２８２８１６号、欧州特許出願第２２７９９４号、米国特許第５，１７５，３２１号、同第４，９８５，５４７号、同第５，０２８，４１６号、同第５，０７１，９７１号、同第４，４６８，５１９号、同第４，９５０，６８８号及び特願昭第６３１９２７０３号の各明細書に開示されており、これら全ての開示は本明細書に参照として組み込まれるものとする。セラミド又はそれらの合成アナログは、本発明組成物中に約０．００００１〜約５％の範囲、好ましくは約０．０００１〜約１％の範囲、最適には約０．０１〜０．５％の範囲の量で存在してよい。

他の好ましい任意成分は、必須脂肪酸（ＥＦＡ）、即ち、全ての細胞の形質膜の形成に必須である脂肪酸から選択され、表皮ケラチン細胞にＥＦＡが欠失すると細胞が過剰増殖する。ＥＦＡを補給して細胞の過剰増殖を調整する。さらにＥＦＡは表皮の脂質生合成を増強させ、表皮の障壁層を形成するための脂質を供給する。必須脂肪酸は、リノール酸、γ−リノール酸、ホモ−γ−リノール酸、コロンビン酸、エイコサ−（ｎ−６，９，１３）−トリエン酸、アラキドン酸、γ−リノール酸、チムノドン酸（ｔｉｍｎｏｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、ヘキサエン酸及びそれらの混合物から選択するのが好ましい。

乳化剤と称される場合もある界面活性剤を本発明の化粧品組成物に配合してもよい。界面活性剤は、組成物全体の約０．５〜約３０重量％、好ましくは約１〜約１５重量％の範囲で含まれていてよい。界面活性剤は、カチオン性、非イオン性、アニオン性又は両性のものであってよく、それらの組み合わせを用いてもよい。

非イオン界面活性剤の例としては、脂肪アルコール、脂肪酸及びソルビタンをベースとするアルコキシル化化合物がある。これらの物質は、例えば、Ｓｈｅｌｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙから“Ｎｅｏｄｏｌ”という商標名で市販されている。ＢＡＳＦ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎからＰｌｕｒｏｎｉｃという商標名で市販されているポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンコポリマーも有用な場合がある。同様に、Ｈｅｎｋｅｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手し得るアルキルポリグリコシドも本発明に使用し得る。

アニオンタイプの界面活性剤には、脂肪酸セッケン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム、アルキルベンゼンスルホネート、モノアルキル及び／又はジアルキルホスフェート並びに脂肪族アシルイセチオン酸ナトリウムが含まれ得る。

両性界面活性剤には、ジアルキルアミンオキシド及び種々のタイプのベタイン（例えばココアミドプロピルベタイン）のような物質が含まれる。

本発明の化粧品組成物には皮膚軟化剤がしばしば配合される。そのような皮膚軟化剤の量は、組成物全体の約０．５〜約５０重量％、好ましくは、約５〜３０重量％の範囲であってよい。皮膚軟化剤は、化学的に、エステル、脂肪酸、脂肪アルコール、ポリオール並びに炭化水素に分類され得る。

エステルは、モノエステルでもジエステルでもよい。脂肪族ジエステルの許容し得る例には、アジピン酸ジブチル、セバシン酸ジエチル、ダイマー酸ジイソプロピル（ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌ ｄｉｍｅｒａｔｅ）及びコハク酸ジオクチルが含まれる。許容し得る分枝鎖脂肪族エステルには、ミリスチン酸２−エチル−ヘキシル、ステアリン酸イソプロピル及びパルミチン酸イソステアリルが含まれる。許容し得る三塩基酸エステルには、トリリノール酸トリイソプロピル及びクエン酸トリラウリルが含まれる。許容し得る直鎖脂肪族エステルには、パルミチン酸ラウリル、乳酸ミリスチル、エルカ酸オレイル（ｏｌｅｙｌ ｅｕｒｃａｔｅ）及びオレイン酸ステアリルが含まれる。好ましいエステルには、ココ−カプリレート／カプレート（ココ−カプリレートとココ−カプレートとのブレンド）、酢酸プロピレングリコールミリスチルエーテル、アジピン酸ジイソプロピル及びオクタン酸セチルが含まれる。

適当な脂肪アルコール及び脂肪酸には、１０〜２０個の炭素原子を有する化合物が含まれる。特に好ましいのは、セチル、ミリスチル、パルミチン及びステアリルのアルコール及び酸のような化合物である。

皮膚軟化剤としての役割を果たし得るポリオールには、直鎖及び分枝鎖アルキルポリヒドロキシル化合物が含まれる。例えば、プロピレングリコール、ソルビトール及びグリセリンが好ましい。ポリプロピレングリコール及びポリエチレングリコールのような高分子ポリオールも有用であり得る。ブチレン及びプロピレングリコールも浸透増強剤として特に好ましい。

皮膚軟化剤としての役割を果たし得る炭化水素の例は、１２〜３０個の範囲の炭素原子を含む炭化水素鎖を有する化合物である。具体的な例としては、鉱油、石油ゼリー、スクアレン及びイソパラフィンが挙げられる。

本発明の化粧品組成物中の他の機能性成分は増粘剤である。増粘剤は通常、組成物の０．１〜２０重量％の範囲、好ましくは約０．５〜１０重量％の範囲で存在する。増粘剤の例は、Ｂ．Ｆ．Ｇｏｏｄｒｉｃｈ ＣｏｍｐａｎｙからＣａｒｂｏｐｏｌという商標名で市販されている架橋ポリアクリレート材料である。キサンタン、カラゲナン、ゼラチン、カラヤ、ペクチン及びローカストガムのようなガム類を用いてもよい。状況によっては、シリコーン又は皮膚軟化剤としての役割をも果たす物質から増粘機能を得てもよい。例えば、１０センチストークを上回るシリコーンゴム及びステアリン酸グリセロールのようなエステルは両方の機能を有する。

多くの化粧品組成物、特に水を含むものは、潜在的に有害な微生物の増殖から保護されなければならない。従って、保存料も必要である。適当な保存料には、ｐ−ヒドロキシ安息香酸アルキルエステル、ヒダントイン誘導体、プロピオン酸塩及び種々の第四級アンモニウム化合物が含まれる。

本発明の特に好ましい保存料は、メチルパラベン、プロピルパラベン、イミダゾリジニル尿素、デヒドロキシ酢酸ナトリウム及びベンジルアルコールである。保存料は通常、組成物の約０．５〜２重量％の範囲の量で用いられる。

本発明の化粧品組成物には粉末を配合してもよい。これらの粉末には、チョーク、タルク、フーラー土、カオリン、スターチ、スメクタイト粘土、化学的に変性された珪酸マグネシウムアルミニウム、有機的に変性されたモンモリロナイト粘土、水和珪酸アルミニウム、燻蒸シリカ、コハク酸アルミニウムスターチオクテニル及びそれらの混合物が含まれる。

他の微量添加成分を化粧品組成物に配合してもよい。これらの成分には、着色料、乳白剤及び香料が含まれ得る。これらの材料の量は、組成物の０．００１〜２０重量％の範囲であってよい。

組成物の使用
本発明組成物は、特に皮膚が乾燥していたり又は損傷を受けている場合に、皮膚の状態及び外観を改善するために、特に細胞の増殖及びコラーゲンの合成を増強する薬剤として、ヒトの皮膚に局所的に適用するための製品として用いることを主たる目的とする。該組成物は毛髪及び爪にも適用し得る。

使用の際には、少量の組成物、例えば１〜５ｍｌを、適当な容器又はアプリケーターから皮膚の露出領域に適用し、必要なら、さらに該組成物を手若しくは指又は適当な器具を用いて皮膚に展ばしたり及び／又は擦り込んだりする。

製品の形態及び包装
本発明の局所的皮膚及び／又は毛髪治療用組成物は、４，０００〜１０，０００ｍＰａｓの粘度を有するローションとして、１０，０００〜２０，０００ｍＰａｓの粘度を有する液体クリームとして、又は２０，０００〜１００，０００ｍＰａｓ以上の粘度を有するクリームとして調剤し得る。該組成物は、その粘度及び消費者による使用目的に合った適当な容器内に包装し得る。例えば、ローション又は液体クリームは、びん、ロールボールアプリケーター、噴射式エーロゾル装置、又は指で操作するのに適当なポンプを備えた容器内に包装し得る。組成物がクリームの場合、該組成物は変形不能なびん、チューブのような絞り出し容器又は蓋付きジャーに貯蔵するだけでよい。

従って本発明はさらに、本明細書に定義の化粧品上許容し得る組成物を含有する密閉容器を提供する。

以下の特定の実施例により本発明をさらに説明するが、本発明は該実施例に限定されるものではない。

（実施例１）
乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）阻害のテスト手順
試薬は全てＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡから購入した。本発明用にＳｉｇｍａ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ Ｎｏ．５００に修正を加えた。１ｍｇのＮＡＤＨ（Ｓｉｇｍａ ３４０−１０１）を含むバイアルにピルベート（ｐＨ＝７．５）基質（Ｓｉｇｍａ ５００Ｌ−１）を加えた。９６ウエルプレート中の各テストウエルに、以下の成分：ピルベート／ＮＡＤＨ混合物１０μｌ及び細胞溶解物１０μｌを加えた。細胞溶解物の調製には、ヒト新生児表皮ケラチン細胞又は線維芽細胞（Ｃｌｏｎｅｔｉｃ Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＵＳＡ）中で培養した。細胞をＰＢＳ（ｐＨ＝７．４）中にならし、この溶液をＬ−乳酸デヒドロゲナーゼ源として用いた。そのような細胞溶解物が手に入らない場合には、該細胞溶解物の代わりにブタ心臓由来の市販のＬ−乳酸デヒドロゲナーゼ（Ｅ．Ｃ．１．１．１．２７）Ｓｉｇｍａ Ｌ９８８９を用いてもよい。陽性対照には、阻害剤を１０μｌのＰＢＳに取り替えた。ブランクとして、溶解物又はエンザイムを１０ｍｌのＰＢＳに取り替えたものを用意した。混合後、プレートを３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、カラー試薬（Ｓｉｇｍａ ５０５−２）２０μｌを各ウエルに加えた。室温で２０分後、０．４ＮのＮａＯＨ１５０μｌを加え、Ｄｙｎａｔｅｃｈ ＭＲ７０００ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒでプレートから４９０ｎｍでの吸光度を読み取った。

阻害％を計算するために、先ず、ブランクから陽性対照の吸光度を減算して対照活性（ＣＡ）を測定した。次いでブランクから適切な吸光度を減算して、阻害剤の存在下の活性（ＩＡ）を計算した。次いで阻害％を［（ＣＡ−ＩＡ）／ＣＡ］＊１００として計算した。

表１及び表２の結果は、化合物が乳酸デヒドロゲナーゼを阻害するかどうかを確認するための有効な手順を示している。該結果は、化合物Ａ〜Ｃ（表１及び表２）はＬＤＨの有効な阻害剤であったが、化合物Ｄ〜Ｌ（表２）はＬＤＨを阻害しなかったことを示している。

（実施例２）
表皮ケラチン細胞の増殖に対するＬＤＨ阻害剤の効果
表皮ケラチン細胞増殖の測定手順
全ての実験に新生児包皮由来の正常なヒト表皮ケラチン細胞（ＮＨＥＫ）を用いた。培地は、Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから購入した。２継代の凍結細胞ストックをＫｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｍｅｄｉｕｍ（ＫＧＭ）中で増殖させ、７０〜８０％集密した時点で継代した。細胞を９６ウエルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）にＫＧＭ中７５００細胞／ウエルの密度で接種した。２４時間後、細胞をリンスし、テスト化合物と共にＫｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍ（ＫＢＭ）に加えた。プレートを５％ＣＯ_２インキュベーター中３７℃で３日間インキュベートした。Ｒａｇｏら（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９１：３１−３４，１９９０）により記載の蛍光定量法を用いてＤＮＡ含量のアッセイを行って細胞の増殖を予測した。培地を取り出し、細胞をリン酸緩衝塩水溶液でリンスした。各ウエルに滅菌蒸留水１００μｌを加え、プレートを−７０℃で１時間半凍結した。プレートを１時間融解し、その後で各ウエルにＢｉｓｂｅｎｚｉｍｉｄｅ Ｈ３３２５８フルオロクローム（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ Ｃｏｒｐ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）の２０μｇ／ｍｌ溶液１００μｌを加えた。該フルオロクロームは、１０ｍＭのトリス、１ｍＭのＥＤＴＡ、４ＭのＮａＣｌ（ｐＨ７．４）中で使用直前に調製した。プレートをＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒ蛍光プレート読取り機で読み取って、ＤＮＡ（励起３６０ｎｍ、発光４６０ｎｍ）を定量した。ブランク補正読み取り値から、対照を上回る増大パーセントを（処理−非処理）／（非処理）＊１００として計算した。以下の表の各データポイントは、５又は６回の反復実験の平均値を表す。得られた結果を表３に要約する。

表３の結果は、ＬＤＨ阻害剤が表皮ケラチン細胞の増殖を刺激することを示している。用量応答は「ベル型曲線」応答のように見える。特定の濃度で得られる応答は、異なる代謝要件を有する異なる実験における細胞の結果としてテスト毎に異なることに留意されたい。従って、種々の活性成分は同一実験の範囲内でのみ比較すべきである。

（実施例３）
実施例２の手順を繰り返したが、但し、種々の補活性成分を表皮ケラチン細胞増殖を刺激するそれらの能力についてテストした。得られた結果を表４及び表５に要約する。

表４及び表５の結果は、本発明の範囲内の種々の補活性成分が表皮ケラチン細胞の増殖を刺激したことを示している。

（実施例４）
コラーゲン合成についてのアッセイ
ヒト新生児皮膚線維芽細胞は、Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから購入した。細胞を培養するための材料は全てＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＮＹから購入した。細胞を１０％ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭに維持し、５〜１０回継代して用いた。線維芽細胞を含む集密９６−ウエルプレートを無血清培地中で４８時間活性成分（０．２〜２０ｍＭ）で処理した。培地を回収し、プロコラーゲン１（ＭＡＢ １９１２，Ｃｈｅｍｉｃｏｎ，Ｔｅｍｅｃｕｌａ，ＣＡ）に特異的なモノクローナル抗体を用いてイムノアッセイを行い、培地中に分泌されたプロコラーゲンの量を予測した。この操作は、製造業者（ＢｉｏＲａｄ Ｌａｂｓ，ＣＡ）の指示により、ＢｉｏＤｏｔ ＳＦ装置でおこなわれ、ブロットは製造業者の指示によりＶｅｃｔａｓｔａｉｎ Ｋｉｔ（ＰＫ６１０４，Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ，ＣＡ）を用いて行った。色強度はＵｌｔｒｏｓｃａｎ ＸＬデンシトメーター（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ）を用いて定量した。増大倍率を（処理物の密度）／非処理物として計算した。得られた結果を表６に要約する。

（実施例５）
実施例２の手順を繰り返して、表皮ケラチン細胞の増殖に対するＬＤＨ阻害剤と補活性成分との組み合わせの効果をテストした。得られた結果を表７及び表８に要約する。

（実施例６）
この実施例は、本発明による高分散相油中水滴型エマルジョンを示す。

（実施例７）
この実施例も本発明による高分散相油中水滴型エマルジョンを示しており、該エマルジョンにおいては実施例６の配合物を調製するが、以下の変更を行う：
（ｉ）完全水素化ヤシ油の代わりに液体パラフィンを用い、
（ｉｉ）タルトロネートの代わりにオキサレートを用いる。

（実施例８）
この実施例も本発明による高分散相油中水滴型エマルジョンを示すが、該エマルジョンにおいては、実施例６の配合物を調製するが、以下の変更を行う：
タルトロネートの代わりにグリオキシレートを用いる。

（実施例９）
この実施例は、本発明の乳酸デヒドロゲナーゼ及び別のカルボン酸を含む水中油滴型クリームを示す。

（実施例１０及び実施例１１）
本発明の以下の組成物は、乾皮症の治療に用い得るローションを表す。

（実施例１２）
この実施例は、爪に適用するのに好適な本発明の乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤を含むアルコール性ローションを示す。

（実施例１３及び実施例１４）
以下の本発明組成物は、乾燥し、まとまりにくい毛髪のトリートメントに用い得るローションを表す。

本明細書に例示且つ記載されている本発明の特定の形態は代表的なものを示すに過ぎないことを理解されたい。変更は、本明細書に記載されているものを含むがそれらには限定されず、本発明の開示の明確な教示から逸脱しない限り、例示された実施態様で行ってよい。従って、本発明の全範囲の決定には以下の請求の範囲を参照されたい。

Claims (7)

1. ヒトの皮膚、毛髪又は爪に局所的に適用するための組成物であって、
   （ｉ）タルトロン酸および２−ケトマロン酸からなる群から選択される乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤０．００１％から２０％；
   （ｉｉ）酢酸およびコハク酸からなる群から選択される補活性成分０．０１％から２０％；及び
   （ｉｉｉ）化粧品上許容し得るビヒクル
   を含む、前記組成物。
2. 乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤が２−ケトマロン酸であり、補活性成分が酢酸である、請求項１に記載の組成物。
3. 乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤がタルトロン酸であり、補活性成分がコハク酸である、請求項１に記載の組成物。
4. 乳酸デヒドロゲナーゼ阻害剤が、組成物の０．１重量％から１０重量％の量で存在する、請求項１から３のいずれか１項に記載の組成物。
5. 補活性成分が組成物の４重量％から８重量％の量で存在する請求項１から４のいずれか１項に記載の組成物。
6. 組成物のｐＨが３から５である請求項１から５のいずれか１項に記載の組成物。
7. しわが多い、かさかさした、老化した、光損傷を受けたおよびしみの外観の皮膚からなる群から選択される皮膚障害の治療用薬剤を製造するための、請求項１から６のいずれか１項に記載の組成物の使用。