JPH05506859A - 血液―脳関門透過性の増加方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 神経系およびそれの関連疾病の我々の理解力が増大するにつれて、より広範囲の 治療および診断剤が入手可能になるであろう。これらの試剤が同定されると、そ れらを中枢神経系中の疾病組織部位に分配させることが必要となろう。残念なこ とに、血液−脳関門（ｂｌｏｏｄ、−ｂｒａｉｎ　ｂａｒｒｉｅｒ）の存在が血 液から中枢神経系細胞への多くの型の分子の自由な通過を制限している。

血液−脳関門に関する生理学的基礎は、内皮細胞を含んでいる脳毛管である（ゴ ールドスタイン（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ）他、サイエンティフの間で複雑な密な連 結を形成している。実際の血液−脳関門は、血液から脳への多くの分子の通過運 動に対する連続壁を形成しているこれらの高い抵抗性の密な細胞内連結により形 成されている。これらの細胞はそれらが２．３個の吸水細胞小胞を有する点にお いても異なっており、それらは他の組織中では毛管壁を越える幾分かの非選択的 輸送を可能にしている。さらに、非拘束的な通過を可能にするであろう細胞中を 走行している連続的な隙間または溝も存在していない。

血液−脳関門の一機能は、脳を血液化学における波動から保護することである。

しかしながら、この血液流からの脳の遮断は完全ではない。

栄養分および廃棄生成物の交換がある。毛管内皮細胞内の特異的な輸送系の存在 により、脳が調節された方法で正常な成長および機能に必要な全ての化合物を確 実に受けることができる。血液−脳関門により生じる障害は、脳を保護する工程 においてそれが多くの見込みのある有用な治療および診断剤を除外してしまうと いうことである。

血液−脳関門を物理的に切り抜けるかまたはそれを迂回して治療または診断剤を 分配させる数種の技術が存在している。これらの中には、包膜内注射、外科的移 植物、および浸透技術がある。

包膜内注射は脳を包囲している膜に穿刺することにより脳室および髄液中への試 剤の直接的投与を可能にしている。藪液中への試剤のｉｌ！接的な持続的分配は 、外科的に移植された潅流ポンプの使用により行うことができる。これらの髄液 分配技術を使用して、脳の癌、感染症、炎症および疼痛を処置する。しかしなが ら、それらはしばしば脳への物質の深い浸透はもたらさない。

包膜内注射はしばしば効果的でなく且つ危険性があるため、臨床医は包膜内注射 を避ける傾同がある。包膜内注射された物質は脳の中に不均一にゆっくりとそし て不完全に分配される。髄液の量は少ないため、繰り返しの注射で包膜内圧力の 増加が起こることがある。さらに、不適切な針またはカテーテル設置が発作、出 血、脳炎および種々の他の重大な副作用をもたらすこともある。

浸透方式は、脳中の腫瘍に化学治療剤および造影用の抗体を分配させるためにオ レゴン大学のニドワード・ノイヴエルト博士により用いられている（ノイヴエル ト（Ｎｅ　ｕｗｅ　ｌ　ｔ）　、Ｅ、　Ａ、、、血液−脳関門の意味およびそれ の操作（Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｂｌｏｏｄ−Ｂｒａｉｎ　Ｂ ａｒｒｉｅｒ　ａｎｄ　ｉｔｓ　Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ）、１および２巻、 プレナム・プレス、ニューヨーク（１９８９））。この技術は高浸透性マンニト ール溶液の巨火剤の動脈注射を含んでいる。マンニトールにより及ぼされた浸透 差が関門を形成している内皮細胞を収縮させて、それらの間の隙間を短時間にわ たり開かせる。この期間中に、薬品を動脈系中に投与してそれを脳に直接送る。

浸透方式は、関門を越えると治療剤は島全体に効果的に分布可能であることを示 している。

包含されている多（の危険性のために、浸透処置後に集中治療室中での２４−４ ８時間の期間が必要である。マンニトールは眼に対して永久的損傷（失明も含む ）を起こすこともある。関門があまり長く透過性でありすぎると、脳の浮腫が生 じる。通常では脳に達しない血液中の神経毒性物質が関門を越えられる時には、 脳細胞も損傷を受けることがある。

最後に、工程中および工程後に患者にかなりの発作の発生もある。

発明の要旨 本発明は、宿主の血液流中に含まれている分子に対する宿主の血液−脳関門の透 過性を増加させる方法に関するものである。この方法は宿主に有効量の血液−脳 関門透過性を有するブラジキニン作用薬（ｂｒ’ｉｉ’ｄｙｋｉｎｉｎ　ａｇｏ ｎｉｓｔ）を静脈内に共投与すること（ｃｏａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）から なっている。脳に分配しようとする分子は内因性分子または外因性分子のいずれ であってもよくそれは血液−脳関門透過性を有するブラジキニン作用薬と連続的 にまたは同時に共投与本発明の利点は、治療的、予防的または診断的価値を有す る分子を共に投与しながら血液−脳関門透過性を有するブラジキニン作用薬を静 脈内投与することによりそれが血液−脳関門の透過性を増加させる実用的手段を 与えることである。浸透技術または包膜内分配とは対照的に、血液−脳関門透過 性を有するブラジキニン作用薬の静脈内注射は外傷が少なく、手術を必要とせず 、そして麻酔も必要ないようである。さらに、血液中に存在している蛋白質を含 む大きい種類の分子の脳への添加を可能にする浸透技術とは対照的に、血液−脳 関門透過性を有するブラジキニン作用薬は小さい分子の血液−脳関門中の通過を 好適に誘導させる。

血液−脳関門透過性を有するブラジキニン作用薬の静脈内投与方式は他の投与方 式（皮下または筋肉内注射、並びに比較的激しい包膜内または頚動脈注射方法） より多（のかなりの利点を与える。例えば、静脈内投与方式は急速な薬品作用を 与えるためのより簡便な方法を供する。静脈内方式はまた薬品の投与速度に関し て比較的良好な調節性も与え、注入物を間欠的にまたは長期間にわたり投与する ことにより長期活性を与えることができる。また、薬品の遅い静脈内投与は鋭敏 性が生じた場合には注入の終了を可能にする。さらに、ある種の薬品はそれらの 刺激性のために筋肉内または皮下方式により供される時には疼痛および外傷を生 じ、そしてそれらは静脈投与しなければならない。さらに、ある種の薬品は池の 方式によっては吸収されなかったりまたは胃液の存在下では不安定である。静脈 内方式は胃腸方式では流体および薬品に耐えられない患者用の投与手段を供する ものでもある。静脈内技術により脳に治療剤および診断剤を配送することは独特 であり、そして医師が中枢神経系の疾病を理解し、診断しそして処置する能力を 劇的に且つ直ちに改良することとなろう。

図面の簡単な説明 図１は、数種の投与量のブラジキニン（μｇ／ハツカネズミ）におけるブラジキ ニンと共に投与されたスクロースおよび牛血清アルブミン（Ｂ　Ｓ　Ａ）の脳吸 収（μｍ／ｇ）のグラフ表示である。

図２は、異なる動物中への指定量（１０μｇ）のブラジキニン同族体の投与後の スクロースの脳吸収の時間工程のグラフ表示である。

図３は、指定量（１００μｇ）のブラジキニン同族体の投与後のスクロースの脳 吸収の時間工程のグラフ表示である。

図４ａは、ブラジキニンおよびカプトプリルまたはブラジキニン同族体の投与後 の、注射投与量の百分率として示されている、スクロースの脳吸収のグラフ表示 である。

図４ｂは、ブラジキニンおよびカプトプリルまたはブラジキニン同族体の投与後 の、最大吸収の百分率として示されている、スクロースの脳吸収のグラフ表示で ある。

図５は、ハツカネズミの尾のゆれ評価におけるロペラミドの抗有害受容器活性に 対する共に投与されたブラジキニンの効果を説明しているヒストグラムである。

図６は、ハツカネズミの尾のゆれ評価におけるロペラミドの抗有害受容器活性に 対する共に投与されたブラジキニン同族体の効果を説明しているヒストグラムで ある。

図７は、単独で、ブラジキニンと共にまたはブラジキニンおよびハロペリドール （ハルドール）と共に投与された時の、ネズミの運動活性に対するドーパミン同 族体であるジアセチルドーパミン（ＡｃＤＡ）の効果のグラフ表示である。

図８は、腫瘍移植後４および６日目に処置を行った脳腫瘍移植ネズミの生存時間 （日数）における、処置なしく対照）、シスプラチンを用いる処置、カプトグリ ルを用いそしてブラジキニンを共に投与する処置、並びにシスプラチン、カプト プリルを用いそしてブラジキニンを共に投与する処置の効果のグラフ表示である 。

図９は、処置期間が４−１４日に持続した脳腫瘍移植ネズミの生存時間（日数） における、処置なしく対照）、シスプラチンを用いる処！、並びにシスプラチン 、カプトプリルを用いそしてブラジキニンを共に投与する処置の効果のグラフ表 示である。

図１０は、脳腫瘍移植ネズミの生存時間（日数）に対する、処置なし、シスプラ チンを用いる処置、ブラジキニン、カプトプリルおよびシスプラチンを用いる処 置、並びにブラジキニン同族体およびシスプラチンを用いる処置の効果のグラフ 表示である。

図１１は、食塩水または３種のうちの１種の量のブラジキニン同族体をネズミに 静脈内注射した３分後に静脈内注射された造影剤の脳吸収のグラフ表示である。

図１２は、注射後の種々の時間における脳への造影剤の吸収に対する造影剤と共 に投与されたブラジキニン同族体の効果を説明するヒストグラムである。

図１３は、ネズミのアポモルフイン−誘発性の運動活性に対するブラジキニン同 族体が共に投与されたドーパミン受容体拮抗作用薬（ドンペリドシ）の効果のグ ラフ表示である。

図１４は、ネズミにおける飲み行動に対するブラジキニン同族体と共に投与され たアンギオテンシンＩＩ同族体の効果のグラフ表示である。

図１５は、ネズミにおける飲み行動に対するブラジキニン同族体と共に投与され たアンギオテンシンＩＩ同族体および抑制剤の効果を説明するヒストグラムであ る。

発明の詳細な記載 本発明は、宿主の血液流中に存在している分子に対する宿主の血液−脳関門の透 過性を増加させる方法に関するものである。血液−脳関門の透過性における増加 は、宿主に対する血液−脳関門の透過性を有するブラジキニン作用薬を静脈内に 共に投与することにより、達成される。

「血液−脳関門の透過性を有するブラジキニン作用薬」という句は、ブラジキニ ン方法において血液−脳関門の透過性の増加を誘発させる化合物を意味する。

宿主は、中枢神経系（すなわち脳）を有する動物であることができる。

宿主の例には、哺乳動物、例えば人間、家畜動物（例えば、犬、猫、牛または馬 ）、および実験目的を意図する動物（例えば、ハッカ不ズミ、ネズミ、兎）が包 含される。

宿主の血液流中の分子は宿主に対して外因性であってもよい。例えば、それは神 経疾病に対する治療または予防効果を有する神経薬剤であることができる。神経 病学的疾病の例には、癌（例えば脳腫瘍）、自己免疫不全症候群（エイズ）、癲 癌、パーキンソン病、多発性硬化症、アルツハイマー病、片頭痛、疼痛、または 発作障害が包含される。

本発明で使用できる種類の神経薬剤には、抗微生物剤、抗寄生虫剤、アドレナリ ン剤およびカテコールアミン剤を含む自律神経系に作用する剤、抗痩掌剤、ヌク レオチド同族体、抗新生物剤、抗−外傷剤、興奮性アミノ酸類および抑制剤並び に神経病学的疾病の治療および予防用に使用される他の種類の試剤が包含される 。抗生物質の例には、アンフォテリシンＢ、硫酸ゲンタマイシン、ピリメタミン およびペニシリンが包含される。アドレナリン剤（遮蔽剤も含む）の例はアテノ ロールである。

カテコールアミン剤の例には、ドーパミン、ジアセチルドーパミンおよびトンベ リトンが包含される。抗新生物剤の例には、アドリアマイシン、メトトレキセー ト、シクオフォスファミド、エトポシド、カルポプラチンおよびンスプラチンが 包含される。使用できる抗痩章剤の例はパルプロエートである。使用できる抗− 外傷剤の例には、カルペイン抑制剤、通路遮蔽剤、グルタメートキレート剤およ び酸素基食細胞が包含される。使用できるヌクレオチド同族体には、アジドチミ ジン（ＡＺＴ）、ンデオキシイノンン（ｄｄｌ）およびジデオキシシチジン（ｄ 　ｄ　ｅ）が包含される。

宿主の血液流中の分子は診断用造影剤および対比剤であることもできる。診断剤 の例には、放射活性で標識が付けられた物質、例えば９９ｍ−Ｔｃグルコヘプト ネート、または磁気共鳴造影（ＭＨＩ）工程で使用される物質、例えばガドリニ ウムが投与されたキレート剤（例えば、Ｇｄ−ＤＴＦＡ）　、が包含される。

宿主の血液流への外因性分子の投与方式は、皮下、静脈内もしくは筋肉的注射に よりまたは例えば消化管、呼吸系もしくは皮膚の如き身体組織を通しての吸収に より、非経口的であることができる。分子の投与形（例えば、カプセル、錠剤、 溶液、乳化液）は、少なくとも一部は、それの投与方式に依存している。

宿主の血液流への外因性分子の投与および血液−脳関門透過性を有するブラジキ ニン作用薬の静脈内注射は時間的に同時にまたは連続的に行うことができる。例 えば、治療薬を経口的に錠剤形で投与しながらその後に（例えば３０分後）血液 −脳関門透過性を有するブラジキニン作用薬を静脈内投与することができる。こ れにより、薬品が胃腸管中で吸収されそして血液流により吸収される時間の後に 作用薬を供して薬品に対する血液−脳関門の透過性を増加させることができる。

他方では、血液−脳関門透過性を有するブラジキニン作用薬を薬品の静脈内注射 の前にまたは同時に投与することもできる。従って、「共に投与」という語はこ こでは血液−脳関門透過性を有するブラジキニン作用薬および外因性分子が血液 中で意義ある濃度を得て同時に血液−脳関門透過性を増加させそして血液から中 枢神経系の間隙流体への外因性分子の最大通過を可能とするであろう時間で投与 されることを意味する。

さらに、宿主の血液流を介して脳に分配させようとする分子は宿主に対して内因 性であってもよい。すなわち、それは宿主により自然に合成されそして製造され る生物学的生成物であることができる。そのような生物学的生成物の例には、糖 類、例えばグルコース、および小さいペプチド類、例えばエンケファリン類、並 びにチロイド刺激性ホルモン放出因子が包含される。

化合物が身体の特定の解剖学的領域における構造部分との相互作用により生理学 的応答を増加または誘発させる時には、それらは作用薬と称される。本発明の目 的用には、化合物が血液−脳関門と解剖学的に関連している構造部分と相互作用 して当該分子の血液−脳関門の透過性を相当増加させる時には、それは血液−脳 関門の作用薬である。この血液−脳関門の透過性増加の効果は、多分Ｂ２受容体 を通しての組織−関連受容体介在事象により操作されていると信じられている。

特にペプチド類またはブラジキニンもしくはブラジキニン同族体以外の化合物を 血液−脳関門透過性を有する作用薬として使用する時には、他の組織−関連受容 体も同様にこの方法に含まれているかもしれず血液−脳関門の透過性を増加させ る。当該分子に対する血液−脳関門の透過性増加を開始させる作用薬化合物の例 には、ブラジキニン、ブラジキニン同族体、他のペプチド類、およびブラジキニ ンにより誘発される方法で血液−脳関門の透過性における増加を模倣する他の化 合物が包含される。これらの物質は明らかに組織−関連受容体と相互作用して当 該分子に対する血液−脳関門の透過性増加を生じるため、これらの物質は集合的 に「受容体介在透過剤」と称することができる。

ブラジキニンは、下記の配列を有する９個のアミノ酸類を含んでなる天然産出ペ プチドである：ＮＨ２−アルギニンーブロリンーブロリンーグリシンーフェニル アラニンーセリンープロリンーフェニルアラニンーアルギニン−ＣＯＯＨ（レー ニンゲル（Ｌｅｈｎｉｎ４ｅｒ）、Ａ。

Ｌｌ、バイオケミストリー（Ｂｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、９７頁（１９７５） ）。ブラジキニン同族体はブラジキニンの構造的誘導体であることができる。そ のような同族体は、血液−脳関門の透過性に対する同様なまたは強化された効果 を有する上記のブラジキニン構造中のある数および／または配列の誘導体類であ る化合物であることができる。ブラジキニン同族体には、正常なアミン酸類を変 化または化学的に改質させ、ペプチド結合を改質させ、Ｃ−末端および／もしく はＮ−末端延長剤などを加えることにより行われるブラジキニン分子に対する改 質も包含される。

ブラジキニン同族体を製造する方法は、固相ペプチド合成のメリフィールド工程 である（メリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）、Ｒ，Ｂ。

、ザ・ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル・ソサイエテイ（Ｊ、Ａｍ 、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、）　、８６　：３０４　（１９６４）　；　ドラプラウ（ Ｄｒａｐｒａｕ）　、Ｇ、およびレゴリ（Ｒｅ　ｇｏ　１　ｉ）　、Ｄ、、メソ ッズ拳イン會エンチモロジ−（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ） 、よ旦旦；　２６３−２７２　（１９８８））。ブラジキニン同族体の固相合成 の第一段階は、選択されたペプチド配列のＣ−末端保護されたアミノ酸と固体担 体または樹脂との間の共有結合の生成である。

ペプチド鎖は保護基除去の繰り返しサイクルにより残基を増強し、その間にＮ− 末端Ｂｏａ−保護（Ｎ−ターシャリーーブトキシ力ルポニル）基がトリフルオロ 酢酸（ＴＦＡ）により除去される。この後に、塩として残っているアミン基のジ イソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて中和しそして次のアミノ酸を配 列中に結合させる。配列が完成するまでサイクルを繰り返す。それの完全な組み 立て後に、ペプチドが樹脂から分裂されそして精製される。

血液−脳関門の透過性においてブラジキニンのような増加を誘発する化合物を、 ポリペプチド類として合成することも、天然産出ポリペプチド類の混合物から精 製することも、該ポリペプチド類の化学的に改質された形であることも、または 血液−脳関門透過性を有するブラジキニン作用薬として作用する化学的に合成さ れた構造体であることもできる。

これらの化合物の本質的特徴は、それらがブラジキニンと同様な方法で血液−脳 関門透過性における増加を誘発させるそれらの能力である。

血液−脳関門透過性を有するブラジキニン作用薬の有効量とは、当該分子に関す る血液−脳関門透過性をかなり増加させるであろう量である。

換言すると、それは血液−脳関門の透過性を増加させて充分な量の分子を血液か ら脳の間隙流体に通過させて治療もしくは予防効果を及ぼすかまたは診断工程を 可能にするであろう。有効量は個別基礎に基づき決められそしてそれは少な（と も一部は宿主の大きさ、特定の疾病、処置しようとする兆候の重さ請求められる 成果および使用される血液−脳関門透過性を有する特定のブラジキニン作用薬に 依存しているであろう。従って、有効量は当技術の専門家によりそのような要素 を使用し且つ日常的な実験だけを用いて決めることができる。

ブラジキニン作用薬に応答する血液−脳関門透過性の増加は、血液から脳の間隙 流体へ通過している分子の量にだけでなく血液から脳の間隙流体に通過するであ ろう分子の型にも関連している。血液−脳関門透過性を有するブラジキニン作用 薬の効果は、小さい分子量の物質の通過を好ましく増加させることである。例え ば、表ＶＩＩに挙げられているデータは４０．０００の分子量の分子に対するハ ッカネズミの血液−脳関門の透過性は実質的に影響を受けなかったが１，０００ 以下の分子量を有する分子の透過性は満足のいくほど相当増加した。従って、小 さい分子量の物質の透過性を増加させながら、かなり高分子量の物質に対する血 液−脳関門の除外性は実質的に保有されている。（さらに詳細には実施例ＶＩＩ を参照のこと）。

当技術の専門家は、ブラジキニン同族体類の混合物も血液−脳関門透過性を有す る作用薬として投与できることを理解するであろう。例えば、ブラジキニンおよ びブラジキニン同族体、例えばＡ−７、を−緒に投与することができる。同様な 方法で、Ａ−７を１種以上の他のブラジキニン同族体と共にまたはボンベノンも しくはＶＩＰと共にまたは血液−脳関門透過性を有する他の作用薬と共に投与す ることができる。

当技術の専門家は、血液−脳関門透過性を有する作用薬は宿三に対して非−毒性 でなければならないことも理解するであろう。治療的に有効な量が宿主に死をも たらさないなら、作用薬は非−毒性である。

本発明の特定適用では、有効量の抗−寄生虫剤、例えばクリンダマインンまたは ゲンタマイシン、を投与しそして血液−脳関門透過性を有する作用薬を共に投与 することによりトキソプラズマ性脳炎患者を処置することができる。血液−脳関 門透過性を有する作用薬の共投与が血液−脳関門中での抗寄生虫剤の通過を可能 にして寄生性感染症を処置する。

本発明を下記の特定実施例によりさらに説明する。

約２０ｇの体重の雌のバルブ／Ｃハツカネズミを使用した。全ての溶液は殺菌性 ＰＢＳ中で製造された。静脈注射（１００μｌ）を尾の静脈内で行った。３Ｈ− スクロース（１０’ｃｐｍ）を巨火剤状で前記のブラジキニンなしでまたはそれ と共に注射した。注射から２０分後にハツカネズミを殺害した。血液をヘパリン が加えられている管の中で集め、そして蛋白質の可溶化を確実にするための１ｍ ｌの１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）　、３００μｌの漂白剤としての３ ７％過酸化水素および１５ｍ１のアクアゾル−２（デュポン）の添加後に、１０ ０μｍの部分試料を液体シンチレーション計中で計測した。脳を取り出し、５ｍ ｌのＨ２Ｏ中で均質化し、そして１ｍｌの均質物を（１ｍｌの１％ＳＤＳおよび １５ｍ１のアクアゾル−２の添加後に）液体ンンチレーノヨン計用の部分標本と した。相対的脳吸収を脳中で回収された放射活性対血液中で回収されたものとの 比として計算し、そして［１μｌの血液中の放射活性］　（μｍ／ｇ）／　［１ ｇの脳中の放射活性コとして表示した。いくつかの実験では、”Ｃ−ＢＳＡ　（ ５ｘｌＯ５ｃｐｍ）を３Ｈ−スクロース（１０’ｃｐｍ）と−緒に、ブラジキニ ンなしにまたはそれと共に、共に注射し、そして二重アイソトープシンチレーシ ョン計測後に１４ｃｍＢ５λおよび３Ｈ−スクロースの相対的脳吸収を計算した 。

結果は図１に示されている。この図が示している如く、注射から１０分後の３Ｈ −スクロースの相対的脳吸収はブラジキニンが３Ｈ−スクロースと共に１０．３ ０．１００および３００μｇの投与量で投与された時にはかなり増加しそして３ ３μｌ／ｇの値に達した。ブラジキニンの限界投与量は１０μｇであったが、１ ００および３００μｇの２種の最高投与量は３Ｈ−スクロースの相対的脳吸収に おいてはほとんど同一の増加を生じた。対照的に、１００μｇまでの投与量での ブラジキニンは１４および１８μｍ／ｇの間にとどまっている１４Ｃ−ＢＳＡの 相対的脳吸収に対する限界効果を有していた。３００μｇのブラジキニン投与量 では、１４ｃｍＢＳＡの相対的脳吸収は２３μｌ／ｇに増加した。

実施例Ｉ１．ハツカネズミの血液−脳関門に対するブラジキニン、ブラジキニン 同族体および他のペプチド類の効果の薬学的特性世惰 これらの実験に関する処方は下記の事項以外は実施例１中に記されているものと 同じであった。薬品をハツカネズミに表１中に挙げられている濃度で投与した。

ブラジキニンおよびブラジキニン同族体に対しては、処置から１０分後に３Ｈ− スクロースの脳水準を測定した。ポンベシンおよび血管作用性腸ベブチドに対し ては、処！から１０分後に１４０−スクロースの脳水準を測定した。脳吸収デー タは平均上標準偏差として表示され、そして２回の独立実験から誘導されたが、 ｄｅｓＡｒｇ’−ブラジキニン、ボンベシンおよび血管作用性腸ペプチドの結果 は各ペプチドに関する１回の実験から誘導された。１回の実験当たり１種の薬品 に関して４匹のハツカネズミが使用された。結果は下記の如《であった：表１ ハッカ　の脳吸収　対する 処置　ネズミ　Ｎ（％対照）　％増加 なし（対照）　８　１００±９０ ブラジキニン　３００μｇ　８　１７７±２４７７［Ｐｈｅ’▼（ＣＨｒＮＨ） Ａｒｇ’］ブラジキニン２５ｕｇ　８　１７４±１５７４Ｎ−アセチル［Ｐｈｅ ’▼（Ｃｌｌ２−ＮＨ）Ａｒｇ’］ブラジキニン　１００μｇ　５　２３叶２６ 　１３０ｄｅｓＡｒｇ”−ブラジキニン　３００ｔｔｇ　４　９０±１５　−１ （１ボンベシンｌｈｇ　４　２０７土１４　１０７血管作用性腸ペプチド　ｌｈ ｇ　４　２０９±７１０９ブラジキニンは３Ｈ−スクロースの脳吸収をかなり増 加させた。さらに、Ｂ２受容体に関して特異的であると信じられているブラジキ ニン同族体および作用薬［Ｐｈｅ”曹（ＣＩｈ−ＮＨ）Ａｒｇ”］ブラジキニン も脳吸収を増加させた。この作用薬はブラジキニンとは、ブラジキニンを減成か ら保護するために第８　（Ｐｈｅ）および第９（Ａｒｇ）アミノ酸類の間のペプ チド結合が同配体ＣＨ．−ＮＨ結合で置換されている点において、異なウている 。この作用薬をさらにＮ−アセチル化で処理してＮ−アセチル［Ｐ　ｈ　ｅ　” ＩＦ　（Ｃ　Ｈ２−ＮＨ）　Ａ　ｒ　ｇ’］ブラジキニンを与える時には、脳吸 収に対する効果はブラジキニンまたは元の同族体をキニン自身とは異なり、ヒス タミンー放出活性も全くなかった。ブラジキニン減成の一生成物はｄｅｓＡ．ｒ ｇ’−ブラジキニンである。この減成副生物は、Ｃ一末端アルギニンを除去する 蛋白分解酵素であるキニナーゼ１（カルポキンペプチダーゼＮ）の活性から生じ た。このブラジキニン同族体はＢ１受容体に対する生物学的活性を保有すると信 じられているが、血液一脳関門を通るスクロースの脳吸収には実質的に影響しな かった。

ベブチド類であるボンベシン（ｐグルタメートーグルタミンーアルギニンーロイ シンーグリシンーアスパラギンーグルタミンートリブトファンーアラニンーバリ ンーグリシンーヒスチジンーロインンーメチオニン−ＮＨ２）および血管作用性 腸ベブチド（ヒスチジンーセリンーアスバルテートーアラニンーバリンーフェニ ルアラニンースレオニンーアスバルテートーアスパラギンーチロシンースレオニ ンーアルギニンーロイシンーアルギニンーリシンーグルタミンーメチオニンーア ラニンーバリンーリシンーリシンートリブトファンーロイシンーアスバラギンー セリンーイソロイシンーロイシン〜アスパラギン・一ＭＨｚ）はＩ４０−スクロ ースの脳吸収をかなり増加させた。これは、これらのべブチド類が受容体介在透 過剤であることを示していた。

実施例Ｉ　Ｉ　Ｉ．Ｂｏａ−４−ＭｅＴｙｒ　（ｔＦｃＨ．ＮＡｒｇ　（Ｔｏｓ ）一〇一樹脂の合成 Ｎ−ＢＯＣ−０−メチルーＬ−チロシンＮ−メトキシーＮ−メチルアミ氷上の３ ５０ｍｌの無水ＴＨＦに３．６３５ｇ　（３７．２ミリモル）のＮ．Ｏ−ジメチ ルヒドロキシルアミン塩酸塩を加えた。混合物を１０分間撹拌してＮ．Ｏ−ジメ チルヒドロキシルアミン塩酸塩の大部分を溶解させた。次に、下記の成分類を連 続的にフラスコに加えた・１０ｇ（３　３．　８ミリモル）のＮ−Ｂｏｃ−０− メチルーＬ−チロシン、６．９７７ｇ（３３．８ミリモル）のジシクロへキシル カルポジイミド、１，９６ｇ　（１６．０４ミリモル）の４−ジメチルアミノピ リジン、および６．２０９ｍｌ　（３５．６４ミリモル）ノＮ，Ｎ−シイソブ口 ヒルエチルアミン。試薬の全てが加えられた時に、反応フラスコを冷たい部屋（ ４℃）中に入れそして１２時間撹拌した。フラスコの内容物をホヮブトマン定性 ＃１濾紙を用いて重力で濾過した。濾液を回転蒸発器により濃縮して粘着性の油 とし、それを次に２００ｍｌの塩化メチレン中に再溶解させた。この粗製反応混 合物を４℃に１時間放置しそして次に残存ジシクロヘキシル尿素を除去するため に前記の如く濾過した。濾液を再び回転蒸発器により濃縮しモしてカラムクロマ トグラフィー用の調合物中で５０ｍｌの塩化メチレン中に再溶解させた。カラム クロマトグラフィーは吸着剤としてシリカ（２３０−４００メッシュ、６０Ａ） をモして溶離剤として５　０／５　０酢酸エチル／ヘキサンを用いて実施された 。この計測反応用に使用されたカラムは長さが７０ｃｍでありそして直径が１０ ｃｍであった。約４００ｍｌの溶離剤がカラム中を走行した後に生成物が溶離さ れた。留分類をＴＬＣによりシリカゲル６０Ｆ−２５４ガ値）を貯蔵しそして真 空中で濃縮した。濃縮すると透明な無色の油が得られ、それを高真空下に数時装 置いた。この時間の終了時に、生成物は半一固体物質として残存しており、そし て時間につれて完全な固体になった。

５８−６２℃の融点を有する５、７３ｇ　（５０，２％）の白色固体が残存した ；　ＩＲ（ｃｒｒｒ’、ＫＢｒ）３３２０．２９８０．２８４０゜３３８．４　 （Ｍ＋）：’Ｈ（ＣＤＣＩｇ、３００ＭＨｚ）　δ７．０８　（ｄ。

２Ｈ，Ｊ＝８．５０Ｈｚ）　、６６．８２　（ｄ、２ＨＳＪ＝８．５０Ｈｚ）、 ６５．１５（広いｄ、ＬＨ，Ｊ＝８．９０Ｈｚ）　、δ４．８９（広いｍ、ＩＨ ）、６３．７８（ｓ、３Ｈ）、６３．６６（Ｓ、３Ｈ）、６３．１７（広いｓ′ ５３Ｈ）、６２．９９（ｄのｄ、ＩＨ，Ｊ＝６．０Ｈ２）、−δ２．８３（ｄの ｄ、　ＩＨ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）　、６１．３９　（ｓ、　９Ｈ）、分析、計算値 ：Ｃ，６０，３５；Ｈ，７，６９：Ｎ、８．２８゜実測値：Ｃ，６０，５８；Ｈ ，８，０２：Ｎ、８．３１゜１５０ｍ１の無水エチルエーテルに１．０４ｇ　（ ２７，３７ミリモル）の水素化アルミニウムリチウムを加え、そして懸濁液を静 かに３０分間還流させた。４℃に冷却した時に、還流コンデンサーを１００ｍ１ の無水エチルエーテル中に溶解された７、４ｇ（２１，９ミリモル）のＮ−（ｔ −ブトキンカルボニル）−〇−メトキンーし一チロシンＮ−メトキシーＮ−メチ ルアミドを含有している圧力均等化滴下漏斗により交換した。漏斗の内容物を１ 時間にわたり加えた。反応混合物をさらに２時間そのまま反応させた。この時間 の終了時に、Ｋ、Ｈ８Ｏ４の冷たい溶液（２３０ｍｌのＨ２０中５．４３３　ｇ ）を反応容器に加えた。層を分離し、そして水層を各回とも１５０ｍ１のエーテ ルで抽出した。エーテル層を一緒にし、そして下記の如く処理した＋２００ｍ１ の３ＮＨＣＩで３回洗浄し、２００ｍ１の飽和炭酸水素ナトリウムで３回洗浄し 、２００ｍ１の食塩水で３回洗浄し、そして硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過 し、そして真空中で濃縮した。６９−７２℃の融点を有する３、７８ｇ（６１， ６％）の白色固体が残存した：Ｒｆ＝０．６５．５０１５０酢酸エチル／ヘキサ ン中；　ＩＲ（ｃｍ−’５ＫＢｒ）３３６０．２８４０．１７４０．１６９５． １５３０．１２５臥１１８０；ＭＳｍ／ｅ２７９．３　（Ｍ＋）：’　Ｈ（ＣＤ ＣＩ、、３００ＭＨｚ）６９．６３　（ｓ。

ＩＨ）、６７．０８　（ｄ、２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）　、６６．８４（ｄ。

２Ｈ，Ｊ＝８．５）、６５．０５（広い３％　ＩＨ）　、６４．４０（ｍ。

ＩＨ）、６３．７９　（ｓ、３Ｈ）　、δ３．０６　（ｄ１２Ｈ％Ｊ＝６．５０ ）、６１．４４　（ｓ１９Ｈ）；　１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣ１ｓ、７５．４７ＭＨ ｚ）δ２００．１５８．７９．１３０．２ｇ、１２７．６９．１１４．２７．６ １．０５．５５．２９．３４．７０．２８．２６；分析、計算値：Ｃ１６４゜５ １　；）！、　７．５２　：Ｎ、　５．０１゜実測値：Ｃ，６４，６０：Ｈ，７ ，８６；Ｎ、４．９３゜ Ｎ−ＢＯＣ−４ＭｅＴｙｒ　（ｔＦｃＨ２ＮＨ）Ａｒｇ　（Ｔｏｓ）−ＯＨｌｏ ｏｍｌのメタノール：酢酸（９９・１）を含有しているフラスコに４．．９２ｇ （１５ミリモル）のＮ１−トシル−アルギニンを加え、次に１．１５ｇ（１８ミ リモル）の水素化シアノホウ素ナトリウムを加えた。

試薬を５分間撹拌し、次に４．４．６ｇのＮ−ＢＯＣ−４−Ｍｅ−チロシナール を加えた。３０分後に、さらに１．１５ｇ（１８ミリモル）の水素化シアノホウ 素ナトリウムを反応容器に加えた。さらに３部分の水素化シアノホウ素ナトリウ ムを３０分間隔で加え、そして反応物を一夜撹拌した。溶媒を蒸発させることに より、反応物を処理した。残渣をヘプタン中に溶解させそして乾燥し、次にエー テル中に溶解させそして乾燥した。水（２００ｍｌ）をフラスコに加え、そして 固体を濾過により集めた。ＴＬＣ分析は０．３５のＲＦ　（ＣＨＣＩｓ：ＭｅＯ Ｈ，４：　１中）を有する均質生成物を示した。ＮＭＲは予期した生成物と一致 した。

Ｎ−ＢＯＣ−４ＭｅＴｙｒ　（マＣＨｚＮ［Ｚ］）Ａｒｇ　（Ｔｏｓ）−ＯＨ２ ，１４ｇ（３，６１ミリモル）の上記の擬ジペプチドに、１００ｍ１の１：１ジ オキサン／水中の１．６５ｇ　（１９，６ミリモル）のＮ　ａ　ＨＣＯｓを加え た。クロロ蟻酸ベンジル（０，６ｍｌ、４ミリモル）を加え、そして反応物を一 夜撹拌した。溶媒を真空中で除去すると、ゴム状残渣が残つた。残渣を１００ｍ １の水中に懸濁させ、そしてこれをＨＣＩを用いてｐＨ２に酸性化し、そして酢 酸エチルで３回抽出した。

−緒にした酢酸エチル留分を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、そして蒸発 させて、２．３５ｇ（９０％）の希望する物質を粗製の非晶質白色固体としてで 与えた。塩化メチレン／ヘキサンからの再結晶化で２．１８ｇ（８３％）の生成 物を白色固体としてで与えた。

ポリスチレン樹脂に対する保護された擬ジペプチドの結合保護された擬ジペプチ ドをジシクロへキシルカルボジイミドおよび４−ジメチル−アミノピリジンを用 いてヒドロキシメチル樹脂（ポリスチレン−１％ジビニルベンゼン、０．７ミリ 当量／ｇ）に結合させた。

５Ｑｍｌポリプロピレン管の中で、１．８７ｇのヒドロキシメチル樹脂（１，３ １ミリモル）に２．２８ｇ　（３，２８ミリモル）の保護された擬ジペプチド、 ４１０ｍｇ　（３，３３ミリモル）の４−ジメチルアミノピリジン、および２５ ｍ１の無水ジメチルホルムアミドを加えた。これに６８０ｍｇ　（３，３ミリモ ル）のジシクロへキシルカルボジイミドを加え、そして容器を室温で一夜振った 。樹脂を濾過により集め、そしてそれぞれ塩化メチレンおよびメタノールを用い て連続的に３回洗浄し、そして真空中で一夜乾燥して、２．６ｇの樹脂を与えた 。重量増加による置換度は０．５４ミリモル／ｇであると計算された。

実施例ＩＶ、　Ａ　−７の合成および精製固相ペプチド合成により残存アミノ酸 ｆｆ（Ｃ−ないしＮ一方式における）を樹脂結合された擬ジペプチド上で順次組 み立てることにより、Ａ−７を製造した。ペプチドをベックマン９９０ペプチド 合成器上でそれぞれの結合サイクルに関する下記のプログラムを用いて合成した ＝１−洗浄、ＣＨｚＣｌ　ｔ　（３Ｘ　１分）；２−保護基除去４０％ＴＦＡ／ ＣＨ，ＣＩ□（２Ｘ１０分）：３−洗浄、ＣＨ，Ｃｈ（３ｓ１分）；４−洗浄、 イソプロパツール（２×１分）：５−洗浄、ＣＨＩＣＩ。

（３Ｘ１分）：６一中和５％Ｄ　Ｉ　ＥＡ／ＣＩｈＣ１２（３Ｘ　２分）：７− 洗浄、ＣＨＩＣＩ　！　（５Ｘ　１分）；８−結合（３当量のＢｏａ−アミノ酸 、３当量のＢＯＰ）　、ｌＸ６０分：９−洗浄、ＣＨｚＣ１２（３ｘ１分）：１ 〇−洗浄、イソプロパツール（２Ｘ１分）；１１−洗浄、ＣＨ２Ｃｌ　２　（３ Ｘ　１分）：１２−ニンヒドリンによる結合に関する試験。

陽性ニンヒドリン試験により判断して再結合が必要なら、段階６から終わりまで の部分的なサイクルを開始した。完全に保護されたペプチドの組み立て後に、Ｎ −末端ＢＯＣ基をサイクル中の段階１−５の使用により除去しそして樹脂を乾燥 した。

保護されたペプチド−樹脂を、１０％アニソールを含有している無水ＨＦで０℃ において１時間処理することにより、粗製ペプチドを樹脂から単離した。ＨＦを 真空中で除去し、そして粗製樹脂／ペプチドをエーテルで３回洗浄した。ペプチ ドを１０％酢酸で抽出し、そして凍結乾燥して粗製ペプチドを生じた。

ペプチドをＨＰＬＣによりｃｐｓ逆転相担体上で０．１％ＴＦＡ／アセトニトリ ル勾配（３０分にわたる１０−４０％）を使用して部分的に精製した。ペプチド をさらにＣｌ１ｌ担体上で溶離剤として０．１％ＴＦＡ中で同等の１５％アセト ニトリルを用いて精製した。主ピークからの留分類を一緒にして精製したＡ−７ を与え、それはＴＬＣ１電気泳動、およびＨＰＬＣによると均質のようであった 。ＦＡＢ／ＭＳ分析は予期した１０９８の分子量を生じた。６ＮＨＣ１加水分解 （２４時間＠１１０℃）後のアミノ酸分析は下記の組成を与えた：　（Ｓｅｒ　 （１）０．８９、Ｐｒｏ　（２）２．００、Ｇｌｙ　（１）０．９７、Ａｒｇ　 （１）１．０３、Ｔｈｉ　（１）０．７３ｇ、別の方法により検出された４Ｍｅ −Ｔｙｒ　−（曹ＣＨ４ＮＨ）−Ａｒｇ　（１）は加水分解で部分的に破壊され ていた。

実施例Ｖ、ハツカネズミおよびネズミにおける血液−脳関門解放の時間工程 約２０ｇの体重の雌のバルブ／Ｃハツカネズミを使用した。全ての溶液を殺菌性 の燐酸塩で緩衝された食塩水中で製造した。１００μｍのブラジキニン同族体お よび作用薬［Ｈｙｐ３、Ｔｈｉ’、４Ｍｅ−Ｔｙｒ’”Ｆ　（ＣＨ２ＮＨ）Ａｒ ｇ”〕ブラジキニン（以下ではＡ−７と表示されている）を尾の静脈内に時間＝ ０において与えた。この作用薬はブラジキニンとは、第３（Ｐｒｏ）アミノ酸が ヒドロキシプロリンにより置換されており、＄５’（Ｐｈｅ）アミノ酸がチェニ ルアラニンにより置換されており、第８（Ｔｙｒ）アミノ酸が４位置でメチル基 で置換されており、そして第８　（４−Ｍｅ−Ｔｙ　ｒ）および第９（Ａｒｇ） アミノ酸類の間のペプチド結合が同配体ＣＨＩ−ＮＨ結合で置換されているとい う点で、異なっていた。Ａ−７の注射後の種々の指定時間において、′４Ｃ−ス クロース（３Ｘ１０’ｃｐｍ）の注射も尾の静脈中で行った。２分、５分または １０分後に、ハツカネズミを殺害した。血液をヘパリンが加えられている管の中 で集め、そして遠心して生じた小球から血漿を分離した。１５ｍ１のアクアゾル −２（デュポン）の添加後に１００μＩの血漿の部分試料を液体シンチレーショ ン計中で計測した。脳を取り出し、２．５ｍｌのＨ２Ｏおよび２．５ｍｌの１％ ＳＤＳ中で均質化した。１ｍｌの均質物を部分標本とし、そして１５ｍ１のアク アゾル−２に計測用に加えた。スクロースの脳吸収を計算しそして注射投与量× １００の百分率として表示した。

結果は図２に示されている。この図でわかる如く、１０および２０分におけるｌ ４Ｃ−スクロースの吸収はＡ−７の存在下ではかなり高くなった。血液−脳関門 はＡ−７の注射から少なくとも２０分後にはスクロースに対して透過性もままで あったが、４０分後には開いたままではなかった。各データ点は８匹のハツカネ ズミからの平均上標準偏差を表している。

ネズミにおける血液−脳関門解放の時間工程は図３に示されている。

雌のハルラン・スプラグーダウリーネズミ（１５０−２００ｇ）を使用しそして ６Ｘ１０’ｄｐｍの＋４ｃｍスクロースを使用したこと以外は、方法論は以上の 記載と本質的に同じであった。ネズミにおけるＡ−７注射から２０分後に関して は血液−脳関門は開いたままであった。各データ点は６匹のネズミからの平均± 標準偏差を表している。

数種の実験では、全血試料および無傷の脳組織をパッカートモデル３０７酸化器 中で燃焼し、そして放射活性を集めそして液体シンチレーション計測器中で計測 した。試料の均質化または燃焼により得られた結果は同等であった。

実施例ＶＩ、ブラジキニンおよび同族体類の投与量応答関係、スクロースブラジ キニン（ＢＫ）またはブラジキニン同族体と同時に１４０−スクロースを１回尾 に注射して１０分後に全てのハツカネズミを殺害したこと以外は、これらの実験 に関する方法論は上記の２種の時間工程研究と同様であった。図４ａは、１０分 後のブラジキニンおよびブラジキニン同族体類の種々の濃度に対する１００×百 分率の注射投与量として表示されている１４ｃｍスクロース吸収量を示している 。図４ｂは示されているブラジキニンまたはブラジキニン同族体の投与量範囲に わたるる百分率最大応答（スクロース吸収）を表している。ブラジキニン同族体 および作用薬（［Ｔｈｉ’、Ｐｈｅ”Ｆ　（ＣＨ２−ＮＨ）Ａｒｇ’］ブラジキ ニン）（Ａ−４）　、そして特に［Ｈｙｐ”、Ｔｈｅ’、４−Ｍｅ−Ｔｙｒ’Ｗ （ＣＨ２−ＮＨ）Ａｒｇ’］ブラジキニン）（Ａ−７）、はブラジキニンとカプ トグリル（ＢＫ＋Ｃａｐ）の組み合わせより有効である。１個のデータ点当たり のハツカネズミ数は１２−１６匹である。

実施例ＶＩ１．　Ａ　−７と共に投与された時のハツカネズミの脳中での異なる 分子量の物質の吸収 これらの実験の方法論は上記の２種の実施例のものと同様である。異なる分子量 および構造の特異的に放射活性標識の付けられた分子を、食塩水と共にまたは１ ０ｇｇのＡ−７と共に、／’ｖツカネズミに尾の静脈を介して静脈注射した。動 物を注射から１０分後に殺害し、そして脳中に存在している放射活性を前記の１ ４Ｃスクロースに関するものの如くして測定した。これらの研究の結果は表■に 示されている。

表１ 脳中での放射標識の付いた物質の吸収 ＋４（−スクロース　３４２　５．９±１．４　１６．５±４９”Ｈ−イヌ’） ン５，０００　０．０７５±０．０１８　０．１１ＯｆＯ，０１６３Ｈ−Ｒす一 セ１２．６００　０．１２３”０．０３９　０．１１７”０．０３０！Ｈ−ミオ クｏヒン１４．０００　０．０９２±０．０２２　０．０７３±０．０１４３Ｈ −カーボニックアンヒドラーゼ　３０，０００　０．０９０±０．０１３　．０ ．１０６±０．０１５’Ｈ−、ｔバルブミニ／　４６．０００　０．０７９±０ ．０１６　０．０９３ｆ０．０１７３Ｈ−生血清アルプミン６８．０００　０． ３３３ｔ０．０９８　０．２０９±０．０５６データは各群において７−１５匹 のハッカネズミに対する平均上標準偏差として表示されている。

Ａ−７と共に注射された時には比較的大きい分子量を有する物質は血液−脳関門 を容易に越えないようである。これは、Ａ−７の血液−脳関門透過列特性指摘は 比較的低分子量物質に制限されることを示唆している。

実施例ＶＩＩＩ、脳吸収に対する血液−髄液および同族体の効果並びにロベラミ ドの抗有害受容器効果、尾のゆれ評価的２０ｇの体重の雌のバルブ／Ｃハッカネ ズミを使用した。尾のゆれ評価は尾のゆれ装置モデルＴＦ６　（エンディ・イン ストルメンツ、マイデンス、バージニア州）を用いて行った。そのままの未処置 のハッカネスミ中における２−３５秒間の間の反応時間を生じるように輻射熱の 強度を毎日調節した。７５秒に遮断時間を設定した。ハッカネズミの尾の引っ張 り反応時間を静脈注射の直前に１０秒間隔で３回測定した。

これらの３回の値を平均化しそして基本［（Ｖｏ）として採用した。他の３回の 測定を静脈注射から１０分後に採取しそして平均化した（　Ｖ　１゜）。ある実 験では、ブラジキニンおよびロベラミド（ＢＫ＋ＬＯＰ）の静脈投与の１５分前 に阿片剤受容体拮抗作用薬であるナロキソン（ＮＡＬ）を腹腔内投与シタ。結果 ハ式：　１００　Ｘ　（Ｖ＋ｏ　Ｖｏ）　／　（７，５−Ｖａ）に従い百分率抗 有害受容器応答として表示された。

図５は、抗有害受容器効果の指示による阿片剤受容体作用薬ロベラミド（ＬＯＰ ）の脳吸収に対するブラジキニンの効果を示している。１匹のハツカネズミ当た り２５μｇの投与量で静脈注射されたロベラミドは活性を有していなかったが、 ブラジキニン（３０μｇ）を阿片剤と共に注射した時には完全な抗有害受容体応 答が観察され、尾の引っ張り期間は全てのハツカネズミにおいて７．５秒の遮断 限界に達した。ナロキソン（１０ｍｇ／ｋｇ）を用いるハッカネズミの予備処理 はこの抗有害受容体活性に完全に拮抗した。

研究Ｂ：［Ｈｙｐ”、Ｔｈ　ｉ’、４−Ｍｅ−Ｔｙｒ’ｔＦ　（ＣＨ２ＮＨ）Ａ ｒｇ’］ブラジキニン 約２０ｇの体重の雌のバルブ／Ｃハツカネズミを使用した。尾のゆれ評価は尾の ゆれ装置モデルＴＦ６　（エンディ・インストルメンツ、マイデンス、バージニ ア州）を用いて行った。そのままの未処置のハツカネズミ中における２、０−３ ．２秒間の間の反応時間を生じるように熱源の強度を毎日調節した。熱源に対す る許容最高露呈時間は７５秒であった。ハッカネズミの尾の引っ張り反応時間を 静脈注射の直前に１０秒間隔で４回測定した。最後の３回の値を平均化しそして 基本値（Ｖｏ）として採用した。他の組の測定を静脈注射後に下記の間隔で行っ た　直後、５分、１０分、１５分、３０分、および６０分。これらの時間点のそ れぞれに対する最後の３個の値を平均化した（ｖ）。ある実験では、Ａ−７（０ ，１μｇ）およびロベラミド（２５μｇ）の投与の１５分前に阿片剤受容体拮抗 作用薬であるナロキソン（１０ｍｇ／ｋｇ、食塩水中１００μｌ）を腹腔的投与 した。結果は式：　１００Ｘ　（Ｖ−ＶＯ）／（７，５−ＶＯ）に従い百分率抗 有害受容器応答として表示された。

図７は、％抗有害受容器応答における増加により証明されているようなロペラミ ドに対する血液−脳関門の透過性を促進させるためのＡ−７の能力を示している 。各点は、ナロキソン予備処理をしてまたはしないで、ロベラミド、Ａ−７、並 びにＡ−７およびロベラミドの注射から３０分後における４匹のハツカネズミを 用いる２回の実験（合計８匹のハツカネズミ）からの蓄積されたデータを表して いる。Ａ−７をロベラミドと共に注射した時に完全な抗有害受容器応答が得られ た。ナロキソンを用いる予備処理により、効果は完全に拮抗された。

実施例ＩＸ、ネズミの運動活性に対するブラジキニンと共に投与された時のドー パミン剤ジアセチルドーパミンの効果５匹のスプラグーダウリーネズミ（１２５ −１５０ｇ）を実験前に２日間にわたり活動ケージに慣らした。活動ケージはそ れぞれのケージの床を越えて走行する２本の光電池光線付きの標準寸法のネズミ ケージであった。光線を横切るネズミの運動はコンピューターにより記録された 。

運動活性は、２時間にわたる１０分間隔の工程中の光線横断数として測定された 。

試験日数にわたり、全てのネズミをモノアミンオキシダーゼ抑制剤であるニアラ ミド（１００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）で予備処理した。これはモノアミンオキシダ ーゼによるジアセチルドーパミン（ＡｃＤＡ）の酵素性減成を予防するために行 われた。それらを次に活動ケージ中に慣らすために入れた。２時間後に、ネズミ をケージから短時間取り出しそして尾の静脈注射を介してＡｃＤＡ　（２ｍｇ） またはＡｃＤＡ　（２ｍｇ）＋ブラジキニン（ＢＫ）（１ｍｇ）を静脈注射した 。ネズミを直ちに活動ケージに戻しそして次の２時間にわたり１０分間隔で運動 活性を記録した。

結果は図７に示されている。この図が示している如く、ＡｃＤＡだけを摂取した ネズミは２時間にわたる試験期間中に運動活性の増加を示さなかった。しかしな がら、ＡｃＤＡ＋ブラジキニンを注射した時には、ネズミの運動行動におけるか なりの増加があった。これらのデータは、ブラジキニンがＡｃＤＡが脳に入るの を可能にして中枢神経系ドーパミン受容体を刺激したことを示唆している。

観察された運動増加がドーパミン受容体の直接的刺激によることを証明するため に、１群のネズミにＡｃＤＡ＋ブラジキニンの他にドーパミン拮抗作用薬である ハロペリドールを摂取させた。ハロペリドール（０，２ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）は ＡｃＤＡ／ブラジキニン注射の１５分前に投与された。図かられかる如く、増加 した運動活性はハロペリドール予備処理で完全になくなった。

実施例Ｘ、ネネズの運動活性に対するＡ−７と共に投与された時のドーパミン性 拮抗作用薬の効果 トンベリトンは、血液−脳関門外のボストレマ（ｐｏｓｔｒｅｍａ）部分におけ るそれの活性のために抗吐剤として臨床的に使用されているドーパミン受容体拮 抗作用薬である。文献中の報告は、トンベリトンは血液−脳関門を越えないが脳 室中への注射として供された時にはそれはドーパミン受容体に対する例えばアポ モルフインの如きドーパミン性化合物の結合を効果的に遮断することを示してい た。適している試験は、トンベリトンがＡ−７と共に投与された時に運動活性に おけるドーパミン受容体作用薬で誘導された増加を拮抗できるかどうかであるが Ａ−７なしで投与された時には有効でなかった。

スプラグーダウリーネズミ（１２５−１５０ｇ）を実験前に２日間にわたり活動 ケージに慣らした。活動ケージはそれぞれのケージの床を越えて走行する２本の 光電池光線付きの標準寸法のネズミケージであった。

光線を横切るネズミの運動はコンピューターにより記録された。運動活性は、２ 時間にわたる１０分間隔の工程中の光線横断数として測定された。

ドーパミン作用薬であるアポモルフイン（０，７５ｍｇ／ｋｇ）の皮下注射の１ 時間前に、ネズミに１０μｇのＡ−７および３００ｇｇのトンベリトンを共に注 射するか、またはトンベリトンだけを与えた。ネズミの運動活性をアポモルフイ ン注射から２時間後まで１０分間隔で活動ケージ中で測定した。

各処置群において３匹のネズミを用いたこの実験の結果を図８に示す。

Ａ−７およびトンベリトンの組み合わせがアポモルフインに関連する運動活性に おける増加に拮抗した。トンベリトンだけでは、たとえあるとしても、アポモル フインにより誘導される運動活性に対してほとんど影響を与えず、それは容易に 血液−脳関門を越えた。

雄のフィッシャー３４４ネズミ（２００−２５０ｇ）にケタミンＭＣＩ　（１０ ０ｍｇ／ｋｇ）およびアセプ０７ジン（１０ｍｇ／ｋｇ）で麻酔をかけた。動物 を同着性枠の中に入れた。動物の頭を剃りそして中心線切開を行って頭蓋を露呈 した。小さい穴を右感覚運動皮質上で開けた。最後に、１００μｍの細胞懸濁液 （９Ｌグリオマ細胞、２．５×１０６個の細胞／ｍｌ）を５分間にわたり各動物 の右の尾形被殻の中に注射しそして頭皮を縫合した。１日後に、動物に下記の如 き処置を行った。４日目から研究の最後または死亡時まで、動物を儂康損失の兆 候に関して毎日観察した。非常に劣った健康の兆候（眼の出血、正向反射の損失 ）が観察された時、動物を殺害しそして腫瘍の存在を証明するためのその後の組 織学的検討用にバラホルムアルデヒドを潅流させた。

研匹Ａ ネズミを腫瘍の移植から４および６日後に６００ｇｇのシスプラチンで尾の静脈 を介して静脈内処置しく１８匹のネズミ、Ｃ１５Ｌまたは１ｍｇのカプトプリル で腹腔内処置しそれから１５分後に１ｍｇのブラジキニンで静脈内処置しく１８ 匹のネズミ、Ｃａｐ−Ｂｋ）　、または１ｍｇのカプトグリルで静脈内処置しそ の直後に６００ｇｇのシスプラチンで静脈内処置した（１８匹のネズミ、Ｃｉｓ ／ｃａｐ−ｂｋ）。他の群のネズミは処置を受けなかった（１７匹、対照用）。

結果を図９に示したが、そこには生存時間対生存ネズミ数がプロブトされている 。カプトプリルおよびブラジキニンを用いる処置は生存時間に効果を与えなかっ た。しかしながら、抗新生物剤であるシスプラチンを用いる処置は生存時間をか なり増加させ、そしてシスプラチンの投与前のカプトグリルおよびブラジキニン を用いる予備処置はこの効果をかなり増加させた。曲線はそれらがワイブル分布 に従うという仮定と合致していた。平均生存時間および対応する標準偏差は下表 に日数で示されている。

表ＩＩ シスプラチン　１３．１　２．９０ カプトプリル−ブラジキニン　１０．０　１．８４シスプラチン／カプトプリル −ブラジキニン　１６．５　５．７７抗−腫瘍剤であるシスプラチンを単独で投 与した時には、生存時間は１０．０から１３．１日に増加した。しかしながら、 シスプラチンをブラジキニンおよびカプトプリルと共に投与した時には、生存時 間はさらに１６．５日に増加した。これらのデータは、ブラジキニン（それの減 成を防止するためのカプトグリルと共に）の予備処置がシスプラチンへの血液− 脳関門の透過性を増加させそしてそれにより脳中の抗−腫瘍剤の効果を増加させ ることを示唆している。Ｃｉｓ／Ｃａｐ−Ｂｋ群は０．０２５以下のｐ値を有す るＣｉｓ群とは統計学的に相当異なっていた。

更容旦 ネズミを腫瘍の移植から４−１４日後に２００ｇｇのシスプラチンで静脈内処置 しく９匹のネズミ、Ｃ１５）、または１ｍｇのカプトプリルで腹腔内処置しそれ から１５分後に１ｍｇのブラジキニンで静脈内処置および２００ｇｇのシスプラ チンで静脈内処置した（１０匹のネズミ、Ｃｉ　ｓ／Ｃａｐ−Ｂｋ）。他の群は 、シスプラチンなしで、カブトプリルおよびブラジキニンを摂取した（９匹、対 照用）。

結果は図１０に示されており、そしてそれはブラジキニンおよびカプトプリルを 用いる予備処置が脳腫瘍移植物を有するネズミの生存時間に対するシスプラチン の効果をかなり増加させることを示している研究Ａ中のこれまでの結果を確認し た。平均生存数および対応する標準偏差は下表に日数で示されている。

対照　８．１　２．０５ シスプラチン　１１．９　２．６２ シスプラチン／カプトプリル−ブラジキニン　１９．７　２．４５シスプラチン をブラジキニンおよびカプトプリルと共に摂取したネズミの生存時間はシスプラ チンだけを摂取したネズミよりかなり高かった。

Ｃｉｓ／Ｃａｐ−Ｂｋ群はｏ、ｏｏｓ以下のｐ値を有ｔ　ルＣｉ　ｓ　ｎトハ統 計学的に相当具なっていた。ブラジキニンの投与（それの減成を防止するための カプトグリルと共に）により生じる血液−脳関門の透過性増加はシスプラチンの 脳吸収を明らかに増加させそしてそれによりそれの治療効果を増加させた。

雄のフィッシャー３４４ネズミ（２’ＯＯ−２５０ｇ）にケタミンＨＣＬ　（１ ００ｍｇ／ｋｇ）およびアセプロ？ジン（１０ｍｇ／ｋｇ）で麻酔をかけた。動 物を同着性枠の中に入れた。動物の頭を剃りそして中心線切開を行って頭蓋を露 呈した。小さい穴を右感覚運動皮質上で開けた。最後に、１００μＩの細胞懸濁 液（２５０，ＯＯ０個の９Ｌグリオマ細胞）を５分間にわたり各動物の右の尾形 被殻の中に注射しそして頭皮を縫合した。動物を健康損失の兆候に関して毎日観 察した。非常に劣った健康の兆候（眼の出血または正同反射の損失）が観察され た時、動物を殺害しそして脳を腫瘍の存在に関して試験した。

５−１４日目に、動物に下記の尾の静脈処置を行った：処置なし；シスプラチン ２００μｇ／ネズミ；Ａ−７（５０μｇ）および５分後のシスプラチン：または カプトプリル予備処置およびその１５分後の１ｍｌのブラジキニンおよびブラジ キニン後１５分のシスプラチン。結果を表ＩＶに範囲と共に平均値として示す。

対照　１４、範囲１０−１６　６ シスプラチン　１３、範囲９−１８　９ＢＫ＆カプトプリル＋シスプラチン　１ ６　、範囲１０−２１　９Ａ−７＋シスプラチン　２０，５、範囲１０−６２　 ９図１１は、研究における全動物の生存時間を示している。Ａ−７＋シスプラチ ン処置における２匹の動物は生存時間を伸ばし、１匹の動物は３８日目に死亡し そして他方は６２日目に殺害されたことに注意すべきである。２匹の動物とも腫 瘍成長の証拠を有していた。

実施例ＸＩＩ種々の分子の脳分配に対するブラジキニンの効果これらの実験に関 する処方は下記の事項以外は実施例■中に記されているものと同じであった。放 射標識の付いた化合物（すなわち分子）を、３００ｇｇのブラジキニンと共にま たはそれなしで、ハツカネズミに静脈内投与した。脳水準を処置から１０分後に 測定した。データは、各化合物に関する２−３回の独立実験から誘導された。１ 回の実験当たりそれぞれ異なる分子に関して４匹のハツカネズミを使用した。結 果は下記の如（であった： 表Ｖ 分子量　脳吸収における　対照の 分子　ダルトン　増加（μｌ／ｇ）　％増加３Ｈ−スクロース　３４２　＋７． ５土２．５本　７７±２４％＊３Ｈ−ＡＺＴ　２６７　＋６．５土２．６零　３ ４±ｌＯ％本＋　４０−　Ｎ−アセチル− アンフォテリシンＢ　１．０００　＋２．９±０．９ネ　２４±７％＊”　Ｃ− ＣＤ　−４４０，０００＋１．９±１．３　１９±１３％零ブラジキニンなしの 脳吸収より統計学的にかなり高いブラジキニンはスクロース、ＡＺＴおよびＮ− アセチルーアンフオテリンンの脳吸収をかなり増加させた。しかしながら、４０ ．０００の分子量では、ＣＤ−４の吸収は意義あるほど影響を受けなかった。デ ータは、ブラジキニンは小さい分子量の物質に対する血液−脳関門透過性を好ま しく増加させることを示している。

実施例Ｘｌｌ１．ネズミにおける頭領域（脳）中へのｅｓｔ″Ｔｃ−ＤＩＳＩＤ Ａ　（Ｎ−［２，６−ジイツブロビルアセトアニリドコイミノ二酢酸）吸収 雌のスプラグーダウリーネズミ（２５０−３００ｇ）にペンタオバルビタール（ ６０ｍｇ／ｋｇ）およびケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ）で麻酔をかけた。大腿静 脈を外科的に露呈しそして右静脈に食塩水またはある濃度範囲のＡ−７を注射し た。３分後に、９９″″Ｔｃ−ＤＩＳＩＤＡの巨丸剤を左大腿静脈中に注射した 。ネズミを直ちにガンマカメラの上に置き、そして放射活性を最初は１分間隔で そして次に５分間隔で１時間計測した。脳が主要器官である頭領域を同定し、そ してこの領域中に存在している放射活性の量を図１２にＡ−７の試験した各濃度 に関して示した。各濃度に関するデータは、１匹のネズミからの放射活性測定値 である。非常に早い時間ではＡ−７はこの領域において対照動物と比べて””Ｔ 　ｃ　−Ｄ　Ｉ　Ｓ　Ｉ　ＤＡの吸収を促進させた。この実験は２種の同様な研 究の代表的なものである。

他の組の実験では、Ａ−７の１回の静脈注射を麻酔がかけられたネズミの大腿静 脈中で行った。２分後に、””Ｔ　ｃ−Ｄ　Ｉ　Ｓ　Ｉ　ＤＡの注射を対側の大 腿静脈中で行った。対照動物では、Ａ−７は注射しなかった（虚偽注射）　。” ”Ｔ　ｃ　−Ｄ　Ｉ　Ｓ　Ｔ　ＤＡ＋７）注射から２．１ｏ、３０．＊たは６０ 分後の時間間隔で、ネズミを殺害し、それらの脳を取り出しそしてガンマ計測器 中で計測した。…Ｔｃ−ＤＩＳＩＤＡの脳吸収を計算しそして１個の器官当たり の注射投与量の百分率として表示した。注射後の選択された時間における未処置 のおよびＡ−７で処置されたネズミの全血における９９′″Ｔｃ−ＤＩＳ［）Ａ の生分布は表ＶＩおよび図１３に示されている。

時　間　％注射投与量／脳 （””Ｔ　ｃ−Ｄ　Ｉ　Ｓ　Ｉ　ＤＡ注射後）　ｔ４Ｎ　＋１０μｇＡ−７２分 　０．０４ＯｆＯ，０１３０，０７５±０．０１９５分　００３２±０．００３ 　０．０４６±０．００６１０分　０．０２２±０．００５　Ｃ１，０２８±０ ．００３６０分　０．００４士０．００１　０．０１０±０．００３データは、 １群当たり３匹の動物に関する平均上標準偏差として表示されている。

これらの結果は、標識のついた試薬の注射後の早い時間において対照ネズミと比 較した時にＡ−７で処！されたネズミの脳中では比較的大量の”’Ｔｃ−ＤｒＳ ＩＤＡが見いだされたことを示している。

生理学的濃度以上のアンギオテンシンＩＩは水で満腹となったネズミにおける飲 み行動を誘発するということが示されている。この行動は脳静脈器官と関連して いない脳の部分内でのアンギオテンシンＩＩ受容体の刺激の結果として生じるこ とが示唆されている。高い投与量で投与された時に飲み行動を起こすことが可能 なアンギオテンシンＩＩ同族体と共に行われるＡ−７の投与の効果を評価するた めに研究が行われた。

ネズミに尾の静脈注射により１０μｇのＡ−７および０．１．０．３．３．１０ または３０μｇのβ−アンギオテンシンＩＩを共に注射するか、またはβ−アン ギオテンンンＩＩだけを注射した。１時間の間隔にわたり各ネズミにより消費さ れた水の量を測定した。

各投与量群において６匹のネズミを用いるこの研究の結果は図１４に示されてい る。Ａ−７およびアンギオテンシンＩＩ同族体の共投与は、同族体だけの投与と 比べて、投与量応答曲線を左に移行させるかまたはそれより低い投与量の同族体 に向かって移行させた。

他の研究では、ネズミに尾の静脈注射により食塩水、１μｇのβ−アンギオテン シンＩＩおよび１０μｇのＡ−７，１μｇのβ−アンギオテンシンＩＩおよび８ μｇのサララシン、または１μｇのｐｆβ−アンギオテンンンＩＩおよび１０μ ｇのＡ−７および８μｇのサララシンを与えた。

サララシンは既知のアンギオテンシンＩＩ受容体拮抗作用薬であるため与えられ た。再び、１時間にわたり各ネズミにより消費された水の量を測定した。

各投与量群において３匹のネズミを用いるこの研究の結果は図１５に示されてい る。Ａ−７およびβ−アンギオテンシンエエの共投与は、アンギオテンシンＩＩ 同族体だけまたはサララシンとの共投与と比べて、水の消費量をかなり増加させ た。サララシンをＡ　−７および同族体と共に投与する時には、水の消費量は通 常範囲内であり、それはアンギオテンノンＩＩ受容体拮抗作用薬の添加によるア ンギオテンシンＩＩ同族体−誘発性の飲み行動の抑制を示している。

分布量　（μｍ１９） Ｆ工ＧＵＲＥ　１ １００Ｘ１４ｃスクロースの百分率注射投与量Ｆ工ＧＵＲＥ　２ １００Ｘ１４ｃスクロースの百分率注射投与量ローＮｃ＆）ゐｃｎ　ｃｒ）ＳＪ ωロ Ｆ工ＧＵＲＥ　３ １００×百分率注射投与量 Ｗ　＋　Ｗ　Ｗ　＋−〜 切ｑリー−りｑ穆←− Ｆ工ＧＯＲＥ　４ａ 百分率最大値 Ｆ工ＧＵＲＥ　４ｂ ％抗有害受容器応答 ＋ Ｆ工ＧｔＪＲＥ　５ ％抗有害受容器応答 ＦＩＧＵＲＥ　６ 運動活性（１０分当りの数） ＋ ２゜ ＦＩＧＵＲＥ　７ 運動活性（１０分当りの数） −〜　ω　ム　Ｑ　■ ＋ ＦＩＧＵＲＥ　８ 生存ネズミ数 −−〜 ０　０１　０　（Ｊ’ｌ　Ｏ Ｆ工ＧＵＲＥ９ 生存ネズミ数 Ｑ　Ｎｌ　Ａ　Φ　ｃｏ　Ｑ ！　＼′ ＋ Ｆ工ＧＵＲＥ　１０ 生存数 Ｆ工ＧＵＲＥ　１１ ＰＭ Ｆ工ＧＵＲＥ　１２ Ｔｃ−９９ｍ　ＤＩＳＩＤＡ　（％投与量／ｉｔ）水の消費量（ｍｌ／時） Ｆ工ＧＯＲＥ　１４ 補正書の写しく翻訳文）提出書　（特許法第１８４条の８）平成４年１０月２１ ０ 特詐庁長官　麻　生　渡　殿 １、特許出願の表示 ＰＣＴ／ＵＳ　９１１０２７７２ ２、発明の名称 血液−脳関門透過性の増加方法 ３、特許出願人 住　所　アメリカ合衆国マサチュセツツ州０２１３９ケンブリッジ・ランスダウ ンストリート２６ 名　称　アルカ−メス・インコーホレーテッド４、代理人　〒１０７ 電話　３５８５−２２５６ ５、補正書の提出年月日 １９９２年７月１日 ６、添付書類の目録 ２０、トキソブラスマ脳炎に苦しんでいる患者に治療的有効量の抗−寄生虫剤を 投与しそしてそれと共に血液−脳関門透過性を有するブラジキニン作用薬を投与 することによる、トキソブラスマ脳炎に苦しんでいる患者の処置方法。

２１、該抗−寄生虫剤がゲンタマイシンからなる請求の範囲２０に記載の方法。

２２、該抗−寄生虫剤がクリンダマイシンである請求の範囲２０に記載の方法。

２３、分子に対する血液−脳関門の透過性を増加させる目的のための人間に対す る静脈内投与用の薬学的組成物の製造のための、ａ）血液から脳に配送される分 子、 ｂ）血液−脳関門透過性を有するブラジキニン作用薬、およびＣ）薬学的に許容 可能な担体 の使用。

国際調査報告 Ｆ６１％　ＰＣＴｌｌＳＡ＋２１０　（ｗ−−１−ｖｍｇ　１２１１　；ｔｉｊ ＋）８刺１

Claims (23)

【特許請求の範囲】
1. １．宿主にの血液一脳関門透過性を有するブラジキニン作用薬の有効量を静脈内 に共投与することからなる、宿主の血液流中に存在する分子に対する宿主の血液 一脳関門の透過性を増加させる方法。
2. ２．宿主が人間である請求の範囲１に記載の方法。
3. ３．血液一脳関門透過性を有するブラジキニン作用薬がブラジキニンを含んでな る、請求の範囲２に記載の方法。
4. ４．血液一脳関門透過性を有するブラジキニン作用薬がブラジキニン同族体をよ りなる請求の範囲２に記載の方法。
5. ５．該ブラジキニン同族体が人間の血液流中でのブラジキニンに関する蛋白分解 減成に対するかなり増大された抵抗性を有する請求の範囲４に記載の方法。
6. ６．血液一脳関門透過性を有するプラジキニン作用薬がブラジキニンのように血 液一脳関門の透過性における増加を模倣する化合物よりなる請求の範囲２に記載 の方法。
7. ７．血液一脳関門透過性を有するブラジキニン作用薬がブラジキニン２（Ｂ２） 受容体に関して選択的である請求の範囲１に記載の方法。
8. ８．血液一脳関門透過性を有するブラジキニン作用薬および該分子が櫨主に同時 に静脈内投等される請求の範囲２に記載の方法。
9. ９．分子が診断用の造影剤よりなる請求の範囲１に記載の方法。
10. １０．診断用の造影剤に放射標識が付けられているかまたは磁気性共鳴造影対比 物質が投与される請求の範囲９に記載の方法。
11. １１．宿主に受容体介在透過剤からなる血液一脳関門透過剤の有効量を静脈内に 共投与することからなる、宿主の血液流中に存在する分子に対する宿主の血液一 脳関門の透過性を増加させる方法。
12. １２．宿主に血液一脳関門透過性を有するブラジキニン作用薬の有効量を静脈内 に共投与することからなる、宿主の血液流中に存在する神経薬剤に対する宿主の 血液一脳関門透過性を増加させる方法。
13. １３．血液一脳関門透過性を有するプラジキニン作用薬および該神経薬剤を宿主 に同時に且つ静脈内に投与する請求の範囲１２に記載の方法。
14. １４．該神経薬剤がシスプラチンである請求の範囲１２に記載の方法。
15. １５．該神経薬剤がアンファチリシンＢである請求の範囲１２に記載の方法。
16. １６．該神経薬剤がアジドチミジンである請求の範囲１２に記載の方法。
17. １７．該神経薬剤がクリンダマイシンである請求の範囲１２に記載の方法。
18. １８．該神経薬剤がゲンタマイシンである請求の範囲１２に記載の方法。
19. １９．宿主に血液一脳関門透過性を有するブラジキニン作用薬の有効量を静脈内 に共投与することからなる、人間の血液流中に存在する治療薬に対する人間の血 液一脳開門透過性を増加させる方法。
20. ２０．トキソプラズマ脳炎に苦しんでいる患者に治療的有効量の抗−寄生虫剤を 投与しそしてそれと共に血液一脳関門透過性を有するプラジキニン作用薬を投与 することによる、トキソプラズマ脳炎に苦しんでいる患者の処置方法。
21. ２１．該抗−寄生虫剤がゲンタマイシンよりなる請求の範囲２０に記載の方法。
22. ２２．該抗−寄生虫剤がクリンダマイシンである請求の範囲２０に記載の方法。
23. ２３．ａ）血液から脳に配送される分子、ｂ）血液一脳関門透過性を有するプラ ジキニン作用薬、およびｃ）薬学的に許容可能な担体 からなる、分子に対する血液一膳開門の透過性を増加させる目的のための人間に 対する静脈内投与用の薬学的組成物。