JPH037232B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

（産業上の利用分野） 本発明は、天然の植物体成分を主成分とする食
品、医薬品、化粧品等の抗酸化剤に関する。 （従来の技術） 油脂または油脂を含む食品、医薬品、化粧品等
は空気酸化を受けやすく、この空気酸化によつて
これらの品質が著しく劣化するので、その防止の
ために抗酸化剤が用いられる。 従来使用されている抗酸化剤には、ブチルヒド
ロキシトルエン（BHT）、ブチルヒドロキシアニ
ソール（BHA）等の合成抗酸化剤、またはdl−
α−トコフエロール、グアヤク脂等の天然抗酸化
剤がある。 （発明が解決しようとする問題点） 上記抗酸化剤のうち、合成抗酸化剤は毒性が強
いことから安全性の面で問題があり、また天然抗
酸化剤は効力が弱い、あるいは効力が持続しない
などの問題があるため、抗酸化剤として安全性の
面で心配がなく、しかも効力ならびにその持続性
において優れた天然抗酸化剤の開発が要望されて
いる。 （問題点を解決するための手段） 本発明者らは植物体より抽出して得られるプロ
アントシアニジンについて研究中、種々のプロア
ントシアニジンが強い抗酸化作用を有することを
新規に見出し本発明を完成した。 すなわち本発明は、プロアントシアニジンを主
成分とすることを特徴とする抗酸化剤である。 本発明のプロアントシアニジンは、各種の植物
体中に存在する縮合型タンニン、すなわちフラバ
ン−３−オールまたはフラバン−３，４−ジオー
ルを構成単位として縮合もしくは重合により結合
した化合物群であつて、これらは酸処理によりシ
アニジン、デルフイニジン、ペラルゴニジン等の
アントシアニジンを生成するところから、この名
称が与えられているものである。 従つて該プロアントシアニジンとしては、上記
構成単位の２量体、３量体、４量体さらに10量体
以上の高分子のプロシアニジン、プロデルフイニ
ジン、プロペラルゴニジン等のプロアントシアニ
ジンおよびそれらの立体異性が全て含まれるので
あるが、溶解性ならびに効力の優れている次の一
般式 （式中、R₁は水素または水酸基、R₂、R₃、R₄は
水素、水酸基またはメトキシル基、R₅は水素、
ガロイル基またはグリコピラノシル基である。）
で示されるフラバン−３−オールまたはフラバン
−３，４−ジオールを構成単位とした２〜10量
体、好ましくは２〜４量体のプロアントシアニジ
ンが適している。 そしてこれらのプロアントシアニジンは、その
構成単位であり、かつ抗酸化作用を有することが
知られている単量体カテキンとの比較において、
より強い抗酸化作用を有する点に著しい特徴があ
る。 前記の如き本発明のプロアントシアニジンは、
公知の方法、すなわち各種の植物体を溶剤を用い
て抽出し、抽出物をさらに液体クロマトグラフイ
ー等により分別精製するか、あるいは植物体を原
料とした果実酒、ビール等の２次加工品をプロア
ントシアニジンの選択的吸着剤で処理して該プロ
アントシアニジン区分を濃縮し、濃縮物をさらに
向流分配法、液体クロマトグラフイー等により分
別精製することによつて得られる。 すなわち、先ず植物体よりの抽出物を分別精製
して得られるプロアントシアニジンの具体例とし
ては、式(1) で表わされる２量体プロシアニジンＢ−２および 式(2) で表わされる２量体プロシアニジンは、本発明者
らのアグリカルチユラル・バイオロジカル・ケミ
ストリー（Agric.Biol.Chem.）第45巻、2709〜
2712頁（1981年）記載の方法で、アズキ（Vigna
angularis Ohwi et Ohashi）の70％水性アセト
ン抽出物をポリアミドＣ−200およびセフアデツ
クスLH−20のカラムを用いた液体クロマトグラ
フイーにより分別精製することにより得られ、ま
た同様に 式(3) で表わされる２量体プロアントシアニジンＡ−２
は、D.JACQUESらのジヤーナル・オブ・ケミカ
ル・ソサイテイー・パーキン（J.C.S.Perkin
）2663〜2671（1974年）記載の方法でトチ
（Aesculus hippocastanum）の実の殻を原料と
して得られ、 式(4) で表わされる２量体プロシアニジンは、R.W.
HEMINGWAYらのフイトケミストリー（Phyto
chemistry）第22巻、275〜281頁（1983年）記載
の方法でマツ（Lobololly pine）の樹皮を原料と
して得られ、 式(5) で表わされる２量体プロデルフイニジンは、
BYUNG−ZUN AHNらのアーカイブ・デル・
フアーマチー・ウント・ベリヒテ・デル・ドイチ
エン・フアーマゾイテイシエン・ゲゼルシヤフト
（Arch.Pharmaz.）666〜673頁（1970年）記載の
方法でカシ（Oak）の樹皮を原料として得られ、 式(6) および 式(7) で表わされる２種の２量体プロシアニジンＢ−１
没食子酸エステルは、野中らのフイトケミストリ
ー（Phytochemistry）第21巻、429〜432頁
（1982年）記載の方法でミチヤナギ（Polygonum
multiflorum）の根を原料として得られ、 式(8) で表わされる２量体プロデルフイニジンＢ−２没
食子酸エステルは、野中らのフイトケミストリー
（Phytochemistry）第22巻、237〜241頁（1983
年）記載の方法でヤマモモ（Myricarubra）の樹
皮を原料として得られ、 式(9) で表わされる２量体プロペラルゴニジンおよび 式(10) で表わされる３量体プロデルフイニジンは、I.
MCMURROUGHらのジヤーナル・オブ・サイ
エンス・オブ・フード・アグリカルチヤー（J.
Sci.Food Agric.）第34巻、62〜72頁（1983年）
記載の方法により大麦および麦芽を原料として得
られ、 式(11) で表わされる２量体プロシアニジンＢ−４ラムノ
サイドはメヒルギの皮部を原料として特開昭59−
59638号記載の方法で得られ、 式(12) で表わされるプロペラルゴニジンは、F.D.
Monacheらのアナリ・デイ・キミカ〔Ann.
Chim.（Rome）〕第57巻、1364〜1371頁（1967年）
記載の方法によりオウラテイー（Ouratea）の根
の皮を原料として得られる。 一方、植物体を原料とした２次加工品の選択吸
着剤処理濃縮物を分別精製して得られるプロアン
トシアニジンの具体例として、 式（13） で表わされる４量体プロアントシアニジンは、
A.G.H.LEAのジヤーナル・オブ・サイエンス・
オブ・フード・アグリカルチヤー（J.Sci.Food
Agric.）第29巻、471〜477頁（1978年）記載の方
法で、リンゴ酒をセフアデツクスLH−20で処理
して得られるプロアントシアニジンの濃縮物を、
酢酸エチルおよび水を用いた向流分配法ならびに
セフアデツクスLH−20のカラムを用いた液体ク
ロマトグラフイーにより分別精製することによつ
て得られる。 なお、上記プロアントシアニジンのうち、たと
えば式(1)で表わされる２量体プロシアニジンＢ−
３およびＢ−４は、G.FONKNECHTENらのジ
ヤーナル・オブ・インステイテユート・ブルーイ
ング（J.Inst.Brew.）第89巻、424〜431頁（1983
年）記載の方法によりジヒドロクエルセチンおよ
びカテキンまたはエピカテキンを原料として合成
法によつても得られ、このようにして得られたプ
ロアントシアニジンも本発明に用いることができ
る。 （作用） 本発明では上記プロアントシアニジンを抗酸化
作用剤として使用する。 すなわち、上記プロアントシアニジンの単離精
製物をそのまま、あるいは水、アルコールまたは
アルコール水溶液に溶解し、これを油脂あるいは
油脂を含む食品、医薬品、化粧品等に直接または
その原料に0.001〜２重量％添加するのであるが、
この場合プロアントシアニジンとしては単離精製
物に限定されることなく、実質的にこれらを主体
として構成された混合物もプロアントシアニジン
の添加量が上記範囲内となるような条件で本発明
に用いることができ、また溶解性の劣る場合は界
面活性剤を混用することによつて本発明の効果を
より高めることができる。 次に本発明のプロアントシアニジンの製造例な
らびに、これらを抗酸化剤として油脂に直接添加
溶解せしめた場合の油脂酸化防止効果を実施例に
て示す。 （実施例） 製造例 １ 新鮮なトチの木（Aesculus hippocastanum）
の外皮１Kgをメタノール２×３とともにワーリ
ングブレンダー中で磨砕抽出し、水性メタノール
抽出液５を得た。これを石油エーテル３×５
にて洗浄したのち、30℃以下で減圧濃縮し、濃縮
液100mlを得た。これを蒸留水400mlに溶解したの
ち、酢酸エチル８×300mlにて抽出し、抽出液を
30℃以下で減圧濃縮して粗フエノール抽出物20ｇ
を得た。これをメタノールに転溶し、ポリアミド
樹脂（Polyamide Woelm）のカラム（60×3.5
cm）を用い、メタノールを展開溶媒する液体クロ
マトグラフイーを行い、15mlずつ400本の試験管
に分取した。 このうち、プロシアニジンを含むフラクシヨン
No.19〜152を集め濃縮乾固して粗プロシアニジン
画分4.8ｇを得た。 これをエタノールに転溶し、セフアデツクス
LH−20のカラム（60×2.5cm）を用いエタノール
を展開溶媒とする液体クロマトグラフイーを行
い、15mlずつ200本の試験管に分取した。 このうちフラクシヨンNo.70〜85を集め濃縮乾固
することにより、前記式(1)で表わされる２量体プ
ロシアニジンＢ−２の黄白色粉末0.96ｇが得ら
れ、またフラクシヨンNo.85〜160を濃縮乾固する
ことによつて、前記式(3)で表わされる２量体プロ
シアニジンＡ−２の黄白色粉末2.31ｇが得られ
た。 製造例 ２ 大麦（Hordeum Vulgare）１Kgを12メツシユ
以下の粒度に粉砕したのち、これに４の75％水
性アセトンを加え、常温で３時間撹拌、抽出し
た。抽出液に食塩を飽和させ振盪してアセトン層
と水層を分離し、アセトン層を25℃にて150mlま
で減圧濃縮した。 これを凍結乾燥したのち、メタノール４×25ml
にて抽出し、抽出液を10mlに濃縮し、これをセフ
アデツクスLH−20のカラム（20×2.5cmおよび
100×2.5cm）を２段にして用いた液体クロマトグ
ラフイーにより分別した。 すなわち、展開溶媒としてメタノールを用い、
先ずメタノールを500ml流したところで１段目の
カラムをはずし、２段目のカラムにつきさらにメ
タノール500mlを流して溶出区分を除き、次のメ
タノール1.5で溶出してくるところを10mlずつ
150本の試験管に分取した。 このうち、フラクシヨンNo.60〜74を集め濃縮乾
固することにより、前記式(5)で表わされる２量体
プロデルフイニジンＢ−３の黄白色粉末85mgが得
られ、またフラクシヨンNo.75〜90を集め濃縮乾固
することにより、前記式(10)で表わされる３量体プ
ロデルフイニジンの黄白色粉末48mgが得られた。 製造例 ３ リンゴ酒１をセフアデツクスLH−20のカラ
ム（3.2×10cm）を用いて濾過してポリフエノー
ルをカラムに吸着せしめ、吸着部を20％水性メタ
ノール250mlを用いて洗浄したのち、75％水性ア
セトン200mlを用いて溶離し、溶離液を濃縮乾固
して粗ポリフエノール画分3.6ｇを得た。 これを酢酸エチルおよび水を用いた向流分配法
でNo.０〜７の８つの区分に分画し、No.２の画分を
濃縮乾固して同様の向流分配法による分画を繰返
し、同じくNo.２の画分を濃縮乾固して前記式
（13）で表わされる４量体プロシアニジンを主体
とする黄色粉末120mgが得られた。 製造例 ４ ミチヤナギ（Polygonum Multiflorum）の根
の乾燥物１Kgを粉砕したのち、これに４の80％
水性アセトンを加え、室温で１晩抽出した。抽出
液を30℃以下で減圧濃縮してアセトンを留去し、
残渣の水溶液をジエチルエーテルにて洗浄したの
ち、酢酸エチル（３×400ml）を用いて抽出し、
抽出液より溶媒を留去して抽出物45ｇを得た。こ
れを水450mlに転溶し、セフアデツクスLH−20
のカラム（60×3.5cm）を用いた液体クロマトグ
ラフイーにより分別した。 すなわち、展開溶媒として水および水性メタノ
ールを用い、水→40％水性メタノールの系で勾配
溶出法（gradient elution）により展開溶出せし
め、溶出液量1.2毎に分取し、No.１〜４の４つ
の区分に分画した。 このうち、最後に溶出してくるNo.４の区分を濃
縮乾固し、これをエタノールに転溶してセフアデ
ツクスLH−20のカラム（60×3.5cm）およびエタ
ノールを溶媒として用いた液体クロマトグラフイ
ーにより再び分別を繰返し、溶出液量4.2〜5.0
の画分を分取し、これを濃縮乾固することによ
つて前記式(7)で表わされる２量体プロシアニジン
Ｂ−２没食子酸ジエステルの黄白色粉末175mgが
得られた。 製造例 ５ ヤマモモ（Myrica rubra）の新鮮な樹皮１Kg
に４の80％水性アセトンを加え、室温で１晩抽
出した。抽出液を30℃以下で減圧濃縮してアセト
ンを留去し、残渣の水溶液中に析出する黄色粗結
晶物を遠心分離（3000r.p.m.、10分）して除いて
上澄液を得、これを酢酸エチル（３×400ml）を
用いて抽出し、抽出液を濃縮乾固して抽出物14.3
ｇを得た。これをエタノール100mlに転溶し、セ
フアデツクスLH−20のカラム（60×2.5cm）を用
いた液体クロマトグラフイーにより分別した。 すなわち、展開溶媒としてエタノールおよび水
性エタノールを用い、エタノール→80％水性エタ
ノールの系で勾配溶出法（gradient elution）に
より展開溶出せしめ、流出液量300ml毎に分取し、
No.１〜５の５つの区分に分画した。 このうち、最初から４番目のNo.４の溶出区分を
濃縮乾固し、これを80％水性メタノールに転溶し
たのち、セフアデツクスLH−20のカラム（60×
3.5cm）および80％水性メタノールを溶媒として
用いた液体クロマトグラフイーにより再び分別を
繰返し、溶出液量600〜900mlの画分を分取し、こ
れを濃縮乾固することによつて前記式(8)で表わさ
れる２量体プロデルフイニジンＢ−２没食子酸ジ
エステルの白色粉末260mgが得られた。 なお、上記の最初の液体クロマトグラフイーに
よる分画区分のうち、最初から２番目のNo.２の流
出区分を濃縮乾固し、これをシリカゲルのカラム
（60×3.5cm）および酢酸エチル、ベンゼン（１：
１→２：１）の混合溶媒を用いた液体クロマトグ
ラフイーを行うことによりガロカテキン95mgが得
られ、また同様に上記の最初の液体クロマトグラ
フイーによる分画区分のうち、最初から３番目の
No.３の溶出区分を濃縮乾固し、これをポリアミド
のカラムおよび水→メタノールの溶媒を用いた液
体クロマトグラフイーを行うことにより、エピガ
ロカテキン没食子酸エステル620mgが得られた。 製造例 ６ アズキ（Vigna angularis Ohwi et Ohashi）
１Kgを粉砕して12メツシユ以下の粒度の粉末と
し、これをｎ−ヘキサン（２×10）にて１時間
加熱抽出して脱脂したのち、70％水性アセトン
（２×10）を用いて加熱抽出した。抽出液を40
℃以下で減圧濃縮してアセトンを留去し、残渣に
水を加えて４の水溶液とし、これをジエチルエ
ーテル（３×３）にて洗浄したのち、これに食
塩を加えて飽和状態とし、酢酸エチル（３×４
）を用いて抽出した。 抽出液を40℃以下で減圧下に濃縮乾固し、残留
物に10mlの酢酸エチルを加え、不溶部分を濾過に
よつて除去し、このようにして得られた濾過清澄
液に２倍容量のクロロホルムを滴下し、生じた白
色沈澱物を濾過により採取し、乾燥して２〜４量
体のプロアントシアニジンの混合物を主体とした
黄白色粉末550mgが得られた。 次にこのように製造したプロアントシアニジン
の抗酸化作用効果を試験例にて示す。 試験例 １ 市販サラダオイル（昭和産業社製）５mlずつを
試験管に分注し、これに下記第１表に示す各種プ
ロアントシアニジンを0.2mg／mlの濃度となるよ
うに添加し、撹拌して溶解せしめ、この試験管を
180℃の油浴恒温槽中に保持し、毎秒２mlの割合
で酸素ガスを通気し、40分後におけるサラダオイ
ル中の過酸化脂質量を八木のビタミン、第49巻、
403〜405頁記載の方法により測定して第１表に示
す結果が得られた。 また、対照としてプロアントシアニジン無添加
のもの（対照）およびプロアントシアニジンの
代りにプロアントシアニジンの構成単位である単
量体として、市販のカテキンならびに製造例５に
おいて副産物として得られたガロカテキン、およ
びエピガロカテキン没食子酸エステル添加のもの
（対照）につき、上記と同様の処理時における
過酸化脂質量を同様の方法で測定して第１表に示
す結果が得られた。 なお、これらの結果より上記処理時における本
発明ならびに対照の添加物の過酸化脂質抑制率を
算出し、同じく第１表に示す結果が得られた。

【表】 試験例 ２ 市販天ぷら油（昭和産業社製）50Kgを100ml容
太型試験管にとり、これにツイーン80 3.5ｇおよ
び製造例６で調製したアズキ２〜４量体プロアン
トシアニジン混合物0.1ｇを添加し撹拌して溶解
せしめ、この試験管を100℃の油浴恒温槽中に保
持し、エアーポンプで通気し、３時間経過ごとに
サンプリングして18時間経過後迄の各試料の過酸
化物価（POV値）を日本薬学会編、繁用衛生試
験法と解説、第６版、61〜62頁、南山堂（1976
年）記載の方法で測定して第２表に示す結果が得
られた。 また対照としてアズキ２〜４量体プロアントシ
アニジン無添加のものにつき、上記と同様の処理
時における各試料のPOV値を同様の方法で測定
し第２表に示す結果が得られた。 なお、18時間後の本発明ならびに対照試料の
POV値より、18時間後の本発明の添加物のPOV
上昇抑制率を算出し、同じく第２表に示す結果が
得られた。

【表】 試験例 ３ ラード300ｇを加熱して液状としたものに、製
造例６で調製したアズキ２〜４量体プロアントシ
アニジン混合物0.6ｇを添加溶解せしめ、これと
小麦粉1.5Kg、砂糖600ｇ、食塩7.5ｇ、重炭酸ナ
トリウム7.5ｇ、炭酸アンモニウム7.5ｇを水と共
によく混和して硬目のドウをつくり、直径４cm、
厚さ0.3cmに型抜きし、180℃で５分間焙焼してビ
スケツトをつくつた。 この試験ビスケツトならびに上記においてアズ
キ２〜４量体プロアントシアニジン混合物無添加
のラードを用いた以外は、同様に処理して焼き上
げた対照ビスケツト各１Kg宛をポリエチレンフイ
ルムの袋に入れ、37℃の恒温器中に放置して33日
毎に香味の劣化の有無につき官能的に検査した。 この結果、対照ビスケツトは６日後にラードの
酸化に起因する明瞭な香味の劣化が認められたの
に対し、試験ビスケツトは12日経過後も香味の劣
化は認められなかつた。 （発明の効果） 第１表および第２表の結果より、本発明のプロ
アントシアニジンは、その構成単位であり、かつ
抗酸化作用を有することが知られている単量体、
カテキン等との比較において、油脂に対しより強
い抗酸化作用を有すること、ならびにその作用に
持続性があることが明らかであり、また本発明の
プロアントシアニジンは、天然物より得られるも
のであるところから安全性についても心配がな
く、しかも試験例３の結果より明らかな如く、油
脂を含む食品等の保存時の品質劣化を防止する優
れた抗酸化剤であることがわかる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ プロアントシアニジンを主成分とすることを
   特徴とする抗酸化剤。 ２ プロアントシアニジンが、一般式 （式中、R₁は水素または水酸基、R₂、R₃、R₄は
   水素、水酸基またはメトキシル基、R₅は水素、
   ガロイル基またはグリコピラノシル基である。）
   で示されるフラバン−３−オールまたはフラバン
   −３，４−ジオールを構成単位として結合した２
   −10量体の群より選ばれた少なくとも１種である
   特許請求の範囲第１項記載の抗酸化剤。