JP6430258B2 - ヒトｃｓｆ−１ｒに対する抗体の併用療法及びその使用 - Google Patents

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Description

本発明は、とりわけ、（二量化）ドメインＤ４からＤ５への結合を特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合するヒトＣＳＦ−１Ｒに対する抗体と、化学療法剤、放射線、及び／又は癌免疫療法との組み合わせに関連する。
発明の背景
ヒトＣＳＦ−１受容体（ＣＳＦ−１Ｒ；コロニー刺激因子１受容体；同義語：Ｍ−ＣＳＦ受容体；マクロファージコロニー刺激因子１受容体、Ｆｍｓ癌原遺伝子、ｃ−ｆｍｓ、配列番号６２）は、１９８６年から公知である(Coussens, L., et al., Nature 320 (1986) 277-280)。ＣＳＦ−１Ｒは増殖因子であり、ｃ−ｆｍｓ癌原遺伝子によりコードされる（Roth, P., and Stanley, E.R., Curr. Top. Microbiol. Immunol. 181 (1992) 141-167に総説される）。
ＣＳＦ−１Ｒは、ＣＳＦ−１の受容体（コロニー刺激因子１、Ｍ−ＣＳＦ、マクロファージコロニー刺激因子とも呼ばれる）であり、このサイトカインの生物学的作用を媒介する(Sherr, C.J., et al., Cell 41 (1985) 665-676)。コロニー刺激因子（ＣＳＦ−１Ｒ）（Ｃ−ｆｍｓとも呼ばれる）のクローニングは、最初にRoussel, M.F., et al., Nature 325 (1987) 549-552に記載された。この刊行物では、ＣＳＦ−１Ｒは、Ｃｂｌと結合し、それによって受容体のダウンレギュレーションを調節する、抑制性チロシン９６９リン酸化の喪失を含む、タンパク質のＣ末端尾部の変化に依存した形質転換能を有することが示された(Lee, P.S., et al., Embo J. 18 (1999) 3616-3628)。最近、インターロイキン３４（ＩＬ−３４）と呼ばれるＣＳＦ−１Ｒの第二のリガンドが同定された (Lin, H., et al, Science 320 (2008) 807-811)。
現在、ＣＳＦ−１Ｒの細胞外ドメインに結合する２つのＣＳＦ−１Ｒリガンドが知られている。最初のものは、ＣＳＦ−１（コロニー刺激因子１、Ｍ−ＣＳＦ、マクロファージとも呼ばれる；配列番号８６）であり、ジスルフィド結合したホモ二量体として細胞外に見いだされる(Stanley, E.R. et al., Journal of Cellular Biochemistry 21 (1983) 151-159; Stanley, E.R. et al., Stem Cells 12 Suppl. 1 (1995) 15-24)。第二のものは、ＩＬ−３４である（ヒトＩＬ−３４；配列番号８７） (Hume, D. A. , et al, Blood 119 (2012) 1810-1820)。ＣＳＦ−１Ｒシグナル伝達の主な生物学的作用は、造血前駆細胞のマクロファージ系統（破骨細胞含む）への分化、増殖、遊走、及び生存である。ＣＳＦ−１Ｒの活性化は、そのＣＳＦ−１Ｒリガンド、ＣＳＦ−１（Ｍ−ＣＳＦ）及びＩＬ−３４によって媒介される。ＣＳＦ−１ＲへのＣＳＦ−１（Ｍ−ＣＳＦ）の結合は、ホモ二量体の形成及びチロシンリン酸化によるキナーゼの活性化を誘導する(Li, W. et al, EMBO Journal.10 (1991) 277-288; Stanley, E.R., et al., Mol. Reprod. Dev. 46 (1997) 4-10)。
生物学的に活性なホモ二量体のＣＳＦ−１は、そのＣＳＦ−１受容体の細胞外ドメインのサブドメインのＤ１からＤ３内でＣＳＦ−１Ｒに結合する。ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤは、５つの免疫グロブリン様サブドメインを含む（Ｄ１からＤ５で示す）。細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）のサブドメインＤ４からＤ５は、ＣＳＦ−１結合に関与していない(Wang, Z., et al Molecular and Cellular Biology 13 (1993) 5348-5359)。サブドメインＤ４は、二量体化に関与している (Yeung, Y-G., et al Molecular & Cellular Proteomics 2 (2003) 1143−1155; Pixley, F. J., et al., Trends Cell Biol 14 (2004) 628-638)。
更なるシグナル伝達は、ＰＩ３Ｋ経路及びＲａｓ／ＭＡＰＫ経路にそれぞれ連結するＰＩ３Ｋ及びＧｒｂ２のｐ８５サブユニットによって媒介される。これらの二つの重要なシグナル伝達経路は、増殖、生存およびアポトーシスを調節することができる。ＣＳＦ−１Ｒのリン酸化された細胞内ドメインに結合する他のシグナル伝達分子は、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ３、ＰＬＣｙ、及びＣｂｌが含まれる(Bourette, R.P. and Rohrschneider, L.R., Growth Factors 17 (2000) 155-166)。
ＣＳＦ−１Ｒシグナル伝達は、骨リモデリング及び生殖系における免疫応答において生理的役割を有する。ＣＳＦ−１(Pollard, J.W., Mol. Reprod. Dev. 46 (1997) 54-61)又はＣＳＦ−１Ｒ(Dai, X.M., et al., Blood 99 (2002) 111-120)のどちらかのノックアウト動物は、大理石骨病、造血性、組織マクロファージ、及びそれぞれの細胞型におけるＣＳＦ−１Ｒの役割と一致した生殖表現型を有することが示されている。
Sherr, C.J., et al., Blood 73 (1989) 1786-1793は、ＣＳＦ−１活性を阻害するＣＳＦ−１Ｒに対する幾つかの抗体に関する。Ashmun, R.A., et al., Blood 73 (1989) 827-837は、ＣＳＦ−１Ｒ抗体に関する。Lenda, D., et al., Journal of Immunology 170 (2003) 3254-3262は、腎臓の炎症時に尿細管のアポトーシスの減少を生じるＣＳＦ−１欠損マウスにおけるマクロファージの動員、増殖、及び活性化に関する。Kitaura, H., et al., Journal of Dental Research 87 (2008) 396-400は、歯科矯正の歯の移動を阻害する抗ＣＳＦ−１抗体を言及している。国際公開第２００１／０３０３８１号は、アンチセンスヌクレオチド及び抗体を含むＣＳＦ−１活性阻害剤を言及しているが、ＣＳＦ−１アンチセンスヌクレオチドのみを開示している。国際公開第２００４／０４５５３２号は、ＣＳＦ−１アンタゴニストによる転移性癌の転移及び骨量減少の予防及び治療に関連し、抗ＣＳＦ−１抗体のみ開示している。国際公開第２００５／０４６６５７号は、抗ＣＳＦ−１抗体抗体による炎症性腸疾患の治療に関連する。米国特許出願公開第２００２／０１４１９９４号は、コロニー刺激因子の阻害剤に関連する。国際公開第２００６／０９６４８９号は、抗ＣＳＦ−１抗体抗体による炎関節リウマチの治療に関連する。国際公開第２００９／０２６３０３号及び国際公開第２００９／１１２２４５号は、ＣＳＦ−１Ｒにその細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）の最初の３つのサブドメイン（Ｄ１からＤ３）内で結合する所定の抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体に関連する。国際公開第２０１１／１２３３８１（Ａ１）号は、ＣＳＦ−１Ｒに対する抗体に関連する。
発明の概要
本発明は、
ａ）ＣＳＦ−１Ｒリガンド依存性及び／又はＣＳＦ−１リガンド非依存性ＣＳＦ−１Ｒ発現腫瘍細胞における細胞増殖の阻害；
ｂ）ＣＳＦ−１Ｒリガンド依存性及び／又はＣＳＦ−１Ｒリガンド非依存性ＣＳＦ−１Ｒ発現マクロファージ浸潤物を含む腫瘍の細胞増殖の阻害；
ｃ）（ＣＳＦ−１Ｒリガンド依存性及び／又はＣＳＦ−１Ｒリガンド非依存性）ＣＳＦ−１Ｒ発現単球及びマクロファージにおける細胞生存の阻害；及び／又は
ｄ）（ＣＳＦ−１Ｒリガンド依存性及び／又はＣＳＦ−１Ｒリガンド非依存性）ＣＳＦ−１Ｒ発現単球のマクロファージへの細胞分化の阻害、
において使用のための、ヒトＣＳＦ−１Ｒの細胞外ドメインの（二量体化）ドメインＤ４からＤ５（配列番号８５）への結合を特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体を含み、
ここで、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、化学療法剤、放射線、及び／又は癌免疫療法と併用して投与される。
（二量化）ドメインＤ４からＤ５への結合を特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法は、ＣＳＦ−１Ｒ活性化につながる活性化の可能性が低く、その結果、（例えば、ドメインＤ１からＤ３への結合を特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒへ結合する抗体との併用療法と比較して）毒性が減少し、ＣＳＦ−１Ｒ受容体を刺激しない等の価値ある特性を有する。
本明細書で使用される用語「リガンド依存性」は、細胞外ＥＣＤを介したリガンド非依存性シグナル伝達を意味する（細胞内キナーゼドメインにおける活性化点変異により媒介されるリガンド非依存性シグナル伝達を含まない）。一実施態様において、これに関連したＣＳＦ−１Ｒリガンドは、ヒトＣＳＦ−１（配列番号８６）及びヒトＩＬ−３４（配列番号８７）から選択されるＣＳＦ−１Ｒリガンドを意味し；一実施態様において、ＣＳＦ−１ＲリガンドはヒトＣＳＦ−１（配列番号８６）であり；一実施態様において、ＣＳＦ−１ＲリガンドはヒトＩＬ−３４（配列番号８７）である。
本発明は、ＣＳＦ−１Ｒ発現腫瘍を有する又はＣＳＦ−１Ｒ発現マクロファージ浸潤物を含む腫瘍を有する患者の治療において使用のための、ヒトＣＳＦ−１Ｒの細胞外ドメインの（二量体化）ドメインＤ４からＤ５（配列番号８５）への結合を特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体を含み、ここで腫瘍はＣＳＦ−１Ｒリガンドの増加により特徴づけられ（一実施態様において、ＣＳＦ−１ＲリガンドはヒトＣＳＦ−１（配列番号８６）及びヒトＩＬ−３４（配列番号８７）から選択され；一実施態様において、ＣＳＦ−１ＲリガンドはヒトＣＳＦ−１（配列番号８６）であり；一実施態様において、ＣＳＦ−１ＲリガンドはヒトＩＬ−３４（配列番号８７）であり（血清、尿または腫瘍生検において検出可能）、
ここで、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、化学療法剤、放射線、及び／又は癌免疫療法と併用して投与される。用語「ＣＳＦ−１Ｒリガンドの増加」は、（正常組織と比較して）治療前のヒトＣＳＦ−１Ｒリガンドの過剰発現を言及し（一実施態様において、ＣＳＦ−１ＲリガンドはヒトＣＳＦ−１（配列番号８６）及びヒトＩＬ−３４（配列番号８７）から選択され）；一実施態様において、ＣＳＦ−１ＲリガンドはヒトＣＳＦ−１（配列番号８６）であり；一実施態様において、ＣＳＦ−１ＲリガンドはヒトＩＬ−３４（配列番号８７）であり、又は（治療前の発現レベルと比較して）抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体による治療により誘導されるヒトＣＳＦ−１Ｒリガンドの過剰発現を言及する。ある実施態様において、用語「増加（increase）」又は「上回る（above）」は、参照サンプルからのＣＳＦ−１Ｒリガンドのレベルに比較した場合に、本明細書に記載される方法により検出されるＣＳＦ−１Ｒリガンドのレベルにおいて、参照レベルを上回るレベルを言及するか、又は５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％又はそれ以上の全体的な増加を言及する。ある実施態様において、その用語は、ＣＳＦ−１Ｒリガンドのレベルの増加を言及し、ここで増加は、例えば参照サンプルから予め決定されたＣＳＦ−１Ｒリガンドのレベルと比較した場合に、少なくとも約１．５倍、約１．７５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約４０倍、約５０倍、約６０倍、約７０倍、約７５倍、約８０倍、約９０倍、又は約１００倍高い。好ましい一実施態様において、増加したレベルなる用語は、参照レベルでの値又は参照レベルを上回る値に関する。
本発明の一実施態様において、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、該抗体がヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号６４）（ドメインＤ１からＤ５を含む）に結合し、ヒトＣＳＦ−１Ｒの細胞外ドメインのドメインＤ１からＤ３（配列番号６６）に結合しないことを特徴とする。
一実施態様において、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体とともに投与されうる化学療法剤は、限定されないが、メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン及びクロラムブシルなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、及びセムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）などのニトロソ尿素；テモダール（ＴＭ）（テモゾロミド）；トリエチレンメラミン（ＴＥＭ）、トリエチレン、チオホスホルアミド（チオテパ）、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ、アルトレタミン）などのエチレンイミン／メチルメラミン；ブスルファンなどのスルホン酸アルキル；ダカルバジンなどのトリアジン（ＤＴＩＣ）を含むアルキル化剤；メトトレキサート及びトリメトレキサートなどの葉酸類似体、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、フルオロデオキシウリジン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド（ＡｒａＣ、シタラビン）、５−アザシチジン、２，２’−ジフルオロデオキシシチジンなどのピリミジン類似体；６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アザチオプリン、２’−デオキシコフォルマイシン（ペントスタチン）、エリスロヒドロキシノニルアデニン（ＥＨＮＡ）、リン酸フルダラビン及び２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン、２−ＣｄＡ）などのプリン類似体を代謝拮抗剤；パクリタキセル、ビンブラスチン（ＶＬＢ）、ビンクリスチン、及びビノレルビンなどのビンカアルカロイド、タキソテール、エストラムスチン、及びリン酸エストラムスチンなどの抗有糸分裂薬；エトポシド及びテニポシドなどのポドフィロトキシン（ｐｐｉｐｏｄｏｐｈｙｌｏｔｏｘｉｎ）；ダウノマイシン（ルビドマイシン）、ドキソルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、マイトマイシンＣ及びアクチノマイシンなどの抗生物質；Ｌ−アスパラギナーゼなどの酵素；インターフェロン−α、ＩＬ−２、Ｇ−ＣＳＦ及びＧＭ−ＣＳＦなどの生物学的応答調節剤を含む天然物；オキサリプラチン、シスプラチン及びカルボプラチンなどの白金配位錯体、ミトキサントロンなどのアントラセンジオン、ヒドロキシ尿素などの置換尿素、Ｎ−メチルヒドラジン（ＭＩＨ）及びプロカルバジンを含むメチルヒドラジン誘導体、ミトタン（Ｏ、Ｐ−ＤＤＤ）及びアミノグルテチミドなどの副腎皮質抑制剤を含むその他の薬剤；プレドニゾン及び等価物などの副腎皮質ステロイドアンタゴニスト、デキサメタゾン及びアミノグルテチミド；ジェムザール（ＴＭ）（ゲムシタビン）、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロンおよび酢酸メゲストロールなどのプロゲスチン；ジエチルスチルベストロール及びエチニルエストラジオール等価物などのエストロゲン；タモキシフェンなどの抗エストロゲンを含むホルモン及びアンタゴニスト；プロピオン酸テストステロン及びフルオキシメステロン／等価物を含むアンドロゲン；フルタミド、ゴナドトロピン放出ホルモン類似体およびロイプロリドなどの抗アンドロゲン；及びフルタミドなどの非ステロイド性抗アンドロゲン、を含む抗腫瘍剤が含まれる。エピジェネティックな機構を標的とする治療薬（Therapies）は、限定されないが、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、脱メチル化剤（例えば、Ｖｉｄａｚａ）を含み、そして転写抑制（ＡＴＲＡ）治療薬の放出は、抗原結合タンパク質と組み合わせることができる。
一実施態様において、化学療法剤は、タキサン（例えば、パクリタキセル（タキソール）、ドセタキセル（タキソテール））、修飾パクリタキセル（例えば、アブラキサン及びオパキシオ）、ドキソルビシン、スニチニブ（スーテント）、ソラフェニブ（ネクサバール）、及びその他のマルチキナーゼ阻害剤、オキサリプラチン、シスプラチン及びカルボプラチン、エトポシド、ゲムシタビン、及びビンブラスチンからなる群から選択される。一実施態様において、化学療法剤は、タキサン（例えばタキソール（パクリタキセル）、ドセタキセル（タキソテール）、修飾パクリタキセル（例えばアブラキサン及びオパキシオ）からなる群から選択される。
一実施態様において、化学療法剤は、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、イリノテカン、又はオキサリプラチンから選択される。一実施態様において、化学療法剤は、５−フルオロウラシル、ロイコボリン及びイリノテカン（ＦＯＬＦＩＲＩ）である。一実施態様において、化学療法剤は、５−フルオロウラシル、ロイコボリン及びオキサリプラチン（ＦＯＬＦＯＸ）である。
化学療法剤との併用療法の具体的な例は、例えば、乳癌の治療用に、タキサン（例えば、ドセタキセル又はパクリタキセル）又は修飾パクリタキセル（例えば、アブラキサン又はオパキシオ）、ドキソルビシン）、カペシタビン及び／又はベバシズマブ（アバスチン）とＣＳＦ−１Ｒ抗体；卵巣癌には、カルボプラチン、オキサリプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ドキソルビシン（または修飾ドキソルビシン（Ｃａｅｌｙｘ又はＤｏｘｉｌ））、又はトポテカン（ハイカムチン）とヒトＣＳＦ−１Ｒ抗体；腎臓癌の治療用に、マルチキナーゼ阻害剤、ＭＫＩ、（スーテント、ネクサバール、又は７０６）及び／又はドキソルビシンとヒトＣＳＦ−１Ｒ抗体；扁平上皮癌の治療用にオキサリプラチン、シスプラチン及び／又は放射線とヒトＣＳＦ−１Ｒ抗体；肺癌の治療用に、タキソール及び／又はカルボプラチンとＣＳＦ−１Ｒ抗体が含まれる。
従って、一実施態様において、化学療法剤は、乳癌の治療用に、タキサン（ドセタキセル又はパクリタキセル又は修飾パクリタキセル（アブラキサン又はオパキシオ）、ドキソルビシン、カペシタビン及び／又はベバシズマブの群から選択される。
一実施態様において、化学療法剤は、卵巣癌の治療用に、カルボプラチン、オキサリプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ドキソルビシン（または修飾ドキソルビシン（Ｃａｅｌｙｘ又はＤｏｘｉｌ））、又はトポテカン（ハイカムチン）の群から選択される。
一実施態様において、化学療法剤は、腎臓癌の治療用に、腎臓癌の治療用に、マルチキナーゼ阻害剤（スニチニブ（スーテント）、ソラフェニブ（ネクサバール）、又はモテサニブ二リン酸塩（ＡＭＧ７０６）及び／又はドキソルビシンの群から選択される。
一実施態様において、化学療法剤は、扁平上皮癌の治療用に、オキサリプラチン、シスプラチン及び／又は放射線の群から選択される。
一実施態様において、化学療法剤は、肺癌の治療用に、タキソール及び／又はカルボプラチンの群から選択される。
一実施態様において、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体とともに投与され得る癌免疫療法は、限定されないが、Ｔ細胞を活性化する又はＴｒｅｇ細胞を阻害する、抗原提示細胞を活性化する、腫瘍微小環境において免疫抑制細胞を阻害する、癌ワクチン及び養子細胞移入、Ｔ細胞結合剤が含まれる。
一実施態様において、癌免疫療法は、
ａ）ヒトＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、又は４−１ＢＢに結合するアゴニスト抗体、及びＴ細胞二重特異性抗体（例えば、Ｔ細胞結合性ＢｉＴＥＴＭ抗体ＣＤ３−ＣＤ１９、ＣＤ３ＥｐＣａｍ、ＣＤ３−ＥＧＦＲ）、ＩＬ−２（プロロイキン）、インターフェロン（ＩＦＮ）アルファ；ヒトＣＴＬＡ−４（例えばイピリムマブ）、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、又はＣＤ２５に結合する拮抗性抗体から選択されるＴ細胞結合剤、
ｂ）標的免疫抑制：ＳＴＡＴ３又はＮＦｋＢシグナル伝達を標的とし、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＴＮＦαの機能を遮断する抗体又は小分子、
ｃ）癌ワクチン／樹状細胞機能の増強：ＯｎｃｏＶｅｘ（ＧＭ−ＣＳＦを分泌する腫瘍退縮ウイルス）、アゴニストＣＤ４０抗体、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンド、ＴＬＲアゴニスト、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＰＲＯＳＴＶＡＣをコードする組換え融合タンパク質；又は
ｄ）養子細胞移入：ＧＶＡＸ（ＧＭ−ＣＳＦを発現する前立腺癌細胞株）、樹状細胞ワクチン、養子Ｔ細胞療法、養子ＣＡＲ Ｔ細胞療法
の群から選択される。
一実施態様において、癌免疫療法は、ＩＬ−２（プロリュウキン）及びヒトＣＴＬＡ−４（例えばイピリムマブ）、ＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する拮抗性抗体から選択されるＴ細胞結合剤から選択される。
一実施態様において、癌免疫療法は、ＩＬ−２（プロロイキン）である。一実施態様において、癌免疫療法は、ヒトＣＴＬＡ−４（例えばイピリムマブ）に結合する拮抗性抗体である。
本発明の更なる一態様は、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体（ドメインＤ１−Ｄ３に結合する抗体及びドメインＤ４−Ｄ５に結合する抗体を含む）の癌免疫療法との併用療法であり、
ここで癌免疫療法は、
ａ）ヒトＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、又は４−１ＢＢに結合するアゴニスト抗体、及びＴ細胞二重特異性抗体（例えば、Ｔ細胞結合性ＢｉＴＥＴＭ抗体ＣＤ３−ＣＤ１９、ＣＤ３−ＥｐＣａｍ、ＣＤ３−ＥＧＦＲ）、ＩＬ−２（プロロイキン）、インターフェロン（ＩＦＮ）アルファ；ヒトＣＴＬＡ−４（例えばイピリムマブ）、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、又はＣＤ２５に結合する拮抗性抗体から選択されるＴ細胞結合剤、
ｂ）標的免疫抑制：ＳＴＡＴ３又はＮＦｋＢシグナル伝達を標的とし、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＴＮＦαの機能を遮断する抗体又は小分子、
ｃ）癌ワクチン／樹状細胞機能の増強：ＯｎｃｏＶｅｘ（ＧＭ−ＣＳＦを分泌する腫瘍退縮ウイルス）、アゴニストＣＤ４０抗体、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンド、ＴＬＲアゴニスト、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＰＲＯＳＴＶＡＣをコードする組換え融合タンパク質；又は
ｄ）養子細胞移入：ＧＶＡＸ（ＧＭ−ＣＳＦを発現する前立腺癌細胞株）、樹状細胞ワクチン、養子Ｔ細胞療法、養子ＣＡＲ Ｔ細胞療法
の群から選択される。
本発明の更なる一態様は、癌の治療において使用のための、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体（ドメインＤ１−Ｄ３に結合する抗体及びドメインＤ４−Ｄ５に結合する抗体を含む）の併用療法であり、ここでＣＳＦ−１Ｒ抗体は二重特異性抗体ＡＮＧ−２−ＶＥＧＦ抗体（例えば、国際公開第２０１０／０４０５０８号又は国際公開第２０１１／１１７３２９号に記載されるＡＮＧ２−ＶＥＧＦ抗体、好ましい一実施態様においては、国際公開第２０１１／１１７３２９号に記載される二重特異性ＡＮＧ−２−ＶＥＧＦ抗体のＸＭａｂ１）と併用で投与される。一実施態様において、癌の治療において使用のために、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体は、ドメインＤ４−Ｄ５への結合を特徴とする。一実施態様において、その併用療法は、重鎖可変ドメインは配列番号３９及び軽鎖可変ドメインは、配列番号４０であることを特徴とするヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体、及び国際公開第２０１１／１１７３２９号に記載される二重特異性ＡＮＧ−２−ＶＥＧＦ抗体を含む。
本発明の更なる一態様は、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体（ドメインＤ１−Ｄ３に結合する抗体及びドメインＤ４−Ｄ５に結合する抗体を含む）の癌免疫療法との併用療法であり、
ここで癌免疫療法は、
癌ワクチン／樹状細胞機能の増強：ＯｎｃｏＶｅｘ（ＧＭ−ＣＳＦを分泌する腫瘍退縮ウイルス）、アゴニストＣＤ４０抗体、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンド、ＴＬＲアゴニスト、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＰＲＯＳＴＶＡＣをコードする組換え融合タンパク質の群から選択される。
本発明の好ましい一実施態様は、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体（ドメインＤ１−Ｄ３に結合する抗体及びドメインＤ４−Ｄ５に結合する抗体、好ましくは本明細書に記載されるようにドメインＤ４−Ｄ５に結合する抗体）の癌免疫療法との併用療法であり、ここで癌免疫療法とはアゴニスト性ＣＤ４０抗体である。ヒトＣＳＦ−１ＲのドメインＤ１−Ｄ３へ結合するＣＳＦ−１Ｒ抗体は、例えば、ＣＳＦ−１Ｒにその細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）の最初の３つのサブドメイン（Ｄ１からＤ３）内で結合する所定の抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体に関連して、国際公開第２００９／０２６３０３号及び国際公開第２００９／１１２２４５号に記載される。国際公開第２０１１／１２３３８１（Ａ１）号は、ＣＳＦ−１Ｒに対する抗体、及びSherr, C.J., et al., Blood 73 (1989) 1786-1793に関連する（典型的にはこれらの抗体は、ＣＳＦ−１Ｒリガンド非依存性でなくＣＳＦ−１Ｒリガンド依存性である、ＣＳＦ−１Ｒの増殖及び／又はシグナル伝達を阻害することにより特徴づけられる）。
ヒトＣＳＦ−１ＲのドメインＤ４−Ｄ５に結合するＣＳＦ−１Ｒは、例えば、本発明中に、ＰＣＴ／ＥＰ２０１２／０７５２４１に、及びSherr, C.J., et al., Blood 73 (1989) 1786-1793に記載される（典型的にはこれらの抗体は、ＣＳＦ−１Ｒリガンド非依存性でなくＣＳＦ−１Ｒリガンド依存性である、ＣＳＦ−１Ｒの増殖及び／又はシグナル伝達を阻害することにより特徴づけられる）。
従って、本発明の一態様において、癌の治療において使用のための、ヒトＣＳＦ−１Ｒへ結合する抗体を含み、ここで、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、化学療法剤、放射線、及び／又は癌免疫療法と併用して投与される。一実施態様において、癌免疫療法は、ａ）ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、又は４−１ＢＢに対するアゴニスト抗体、及びＴ細胞二重特異性抗体（例えば、Ｔ細胞結合性ＢｉＴＥＴＭ抗体ＣＤ３−ＣＤ１９、ＣＤ３−ＥｐＣａｍ、ＣＤ３−ＥＧＦＲ）、ＩＬ−２（プロロイキン）、インターフェロン（ＩＦＮ）アルファ；ヒトＣＴＬＡ−４（例えばイピリムマブ）、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、又はＣＤ２５に結合する拮抗性抗体から選択されるＴ細胞結合剤、ｂ）標的免疫抑制：ＳＴＡＴ３又はＮＦｋＢシグナル伝達を標的とし、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＴＮＦαの機能を遮断する抗体又は小分子（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＴＮＦαに対する抗体、又はそれぞれの受容体、例えばＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−２３Ｒに対する抗体）、ｃ）癌ワクチン／樹状細胞機能の増強：ＯｎｃｏＶｅｘ（ＧＭ−ＣＳＦを分泌する腫瘍退縮ウイルス）、アゴニストＣＤ４０抗体（例えば、Beatty et al., Science 331 (2011) 1612-1616, R. H. Vonderheide et al., J Clin Oncol 25, 876 (2007); Khalil, M, et al., Update Cancer Ther. 2007 June 1; 2(2): 61-65に記載される；臨床試験の実施例は、例えばＣＰ−８７０，８９３及びダセツズマブ（アゴニストＣＤ４０抗体、ＣＡＳ番号８８０４８６−５９−９，ＳＧＮ−４０；ヒト化Ｓ２Ｃ６抗体）（Khalil, M, et al, Update Cancer Ther. 2007 June 1; 2(2): 61-65；モデル抗体としてのアゴニストＣＤ４０ラット抗マウスＩｇＧ２ａ ｍＡｂ ＦＧＫ４５は、S. P. Schoenberger, et al, Nature 393, 480 (1998)に記述される）。ＣＰ−８７０，８９３はファイザーにより開発された完全ヒトＩｇＧ２ ＣＤ４０アゴニスト抗体である。それはＣＤ４０にＫＤが３．４８×１０−１０Ｍで結合するが、ＣＤ４０Ｌの結合を遮断しない（例えば、米国特許第７，３３８，６６０号又は欧州特許第１４７６１８５号を参照。ここでＣＰ−８７０，８９３は抗体２１．４．１として記載される）。ＣＰ−８７０，８９３（米国特許第７，３３８，６６０号の抗体２１．４．１）は、（ａ）ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８８）（米国特許第７，３３８，６６０号の配列番号４２に相当する）の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、（ｂ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＹＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＮＬＬＩＹＴＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＮＩＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８９）（米国特許第７，３３８，６６０号の配列番号４４に相当する）の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含むこと；及び／又はアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）受託番号ＰＴＡ−３６０５を有するハイブリドーマ２１．４．１により生成される抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を有することによて特徴づけられる。
ダセツズマブ及び他のヒト化Ｓ２Ｃ６抗体は、米国特許第６９４６１２９号及び米国特許第８３０３９５５号に記載されているヒト化Ｓ２Ｃ６抗体は、例えば、マウスｍＡＢ Ｓ２Ｃ６（ＡＴＣＣにＰＴＡ−１１０として寄託）の重鎖及び軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１、２及び３に基づいている。マウスｍＡＢ Ｓ２Ｃ６の重鎖及び軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１、２及び３は、米国特許第６９４６１２９号に開示されている。一実施態様において、アゴニストＣＤ４０抗体はダセツズマブである。一実施態様において、アゴニストＣＤ４０抗体は、（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＳＦＴＧＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＶＩＰＮＡＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧＲＦＴＬＳＶＤＮＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＩＹＷＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ（配列番号９０）の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、（ｂ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＦＬＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＴＶＳＮＲＦＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＳＱＴＴＨＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号９１）の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含むことにより特徴づけられる。Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンド、ＴＬＲアゴニスト、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＰＲＯＳＴＶＡＣをコードする組換え融合タンパク質；又はｄ）養子細胞移入：ＧＶＡＸ（ＧＭ−ＣＳＦを発現する前立腺癌細胞株）、樹状細胞ワクチン、養子Ｔ細胞療法、養子ＣＡＲ Ｔ細胞療法一実施態様において、癌免疫療法は、ＩＬ−２（プロリュウキン）及びヒトＣＴＬＡ−４（例えばイピリムマブ）に特異的に結合する拮抗性抗体から選択されるＴ細胞結合剤から選択される。一実施態様において、癌免疫療法は、ＩＬ−２（プロロイキン）である。一実施態様において、癌免疫療法は、ヒトＣＴＬＡ−４（例えばイピリムマブ）に結合する拮抗性抗体である。
一実施態様において、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体と投与されうる癌免疫療法は、限定されないが、標的療法を含む。標的療法の例は、限定されないが、治療用抗体の使用を含む。例示的治療用抗体は、限定されないが、抗体ライブラリーをスクリーニングすることによって選択されたものを含み、限定されないが、マウス、マウス−ヒトのキメラ、ＣＤＲ移植型、ヒト化及び完全ヒト抗体、及び合成抗体を含む。例示的な抗体は、限定されないが、細胞表面タンパク質のＨｅｒ２、ＣＤＣ２０、ＣＤＣ３３、ムチン様糖タンパク質、及び腫瘍細胞上に存在する上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に結合するものを含み、場合によっては、これらのタンパク質を呈する腫瘍細胞に細胞増殖抑制性及び／又は細胞傷害性作用を誘導する。例示的な抗体はまた、乳癌又は他の癌の形態を治療するために使用され得るハーセプチン（トラスツズマブ）、及び非ホジキンリンパ腫及び他の形態の癌を治療するために使用され得るリツキサン（リツキシマブ）、ゼバリン（イブリツモマブチウキセタン）、グリベック（メシル酸イマチニブ）、及びＬＹＭＰＨＯＣＩＤＥ（エプラツズマブ）を含む。所定の例示的な抗体はまた、アービタックス（ＥＲＢＩＴＵＸ）（セツキシマブ）（ＥＭＣ−Ｃ２２５）；ｅｒｔｉｎｏｌｉｂ（イレッサ）；ＢＥＸＸＡＲ（商標）（ヨウ素１３１トシツモマブ）；ＫＤＲ（キナーゼドメイン受容体）阻害剤；抗ＶＥＧＦ抗体及びアンタゴニスト（例えば、アバスチン（ベバシズマブ）及びＶＥＧＡＦ−ＴＲＡＰ）；抗ＶＥＧＦ受容体抗体及び抗原結合領域；抗Ａｎｇ−１及びＡｎｇ−２抗体及び抗原結合領域；Ａｎｇ−２−ＶＥＧＦ二重特異性抗体（例えば国際公開第２０１０／０４０５０８号又は国際公開第２０１１／１１７３２９号に記載）、Ｔｉｅ−２及び他のＡｎｇ−１及びＡｎｇ−２受容体に対する抗体；Ｔｉｅ−２リガンド；Ｔｉｅ−２キナーゼ阻害剤に対する抗体；Ｈｉｆ−ｌａの阻害剤、及びキャンパス（商標）（アレムツズマブ）を含む。ある実施態様において、癌治療剤は、限定されないが、ＴＮＦ−関連ポリペプチドＴＲＡＩＬを含む、腫瘍細胞において選択的にアポトーシスを誘導するポリペプチドである。
限定されないが、ＭＡＰＫ経路阻害剤（例えば、ＥＲＫ、ＪＮＫ及びｐ３８の阻害剤）、ＰＢキナーゼ／ＡＫＴ阻害剤及びピム阻害剤を含む、他のキナーゼの特異的な阻害剤はまたＣＳＦ−１Ｒ抗体との併用に用いることができる。他の阻害剤は、Ｈｓｐ９０阻害剤、プロテアソーム阻害剤（例えば、ベルケイド）、及びトリセノックスなどの複数の作用機序の阻害剤を含む。
一実施態様において、癌免疫療法は、血管形成を減少させる一以上の抗血管新生薬を含む。その特定の薬剤は、限定されないが、ＩＬ−８アンタゴニスト；キャンパス（Ｃａｍｐａｔｈ）、Ｂ−ＦＧＦ；ＦＧＦ１９アンタゴニスト；Ｔｅｋアンタゴニスト（Ｃｅｒｒｅｔｔｉら、米国特許出願公開第２００３／０１６２７１２号；Ｃｅｒｒｅｔｔｉら、米国特許第６，４１３，９３２号、及びＣｅｒｒｅｔｔｉら、米国特許第６，５２１，４２４号、これらのそれぞれは、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる）；抗ＴＷＥＡＫ剤（それは、限定されないが、抗体及び抗原結合領域を含む）；可溶性ＴＷＥＡＫ受容体アンタゴニスト（Ｗｉｌｅｙ、米国特許第６，７２７，２２５号）；そのリガンドへのインテグリンの結合を拮抗するＡＤＡＭディスインテグリンドメイン（Ｆａｎｓｌｏｗら、米国特許出願公開第２００２／００４２３６８号）；抗Ｅｐｈ受容体及び抗エフリン抗体；抗原結合領域、またはアンタゴニスト（米国特許第５，９８１，２４５号；第５，７２８，８１３号；第５，９６９，１１０号；第６，５９６，８５２号；第６，２３２，４４７号；第６，０５７，１２４号及びその特許ファミリーのメンバー）；アバスチン（ベバシヅマブ）又はＶＥＧＦ−ＴＲＡＰなどの抗ＶＥＧＦ薬（例えば、ＶＥＧＦ、又は可溶性ＶＥＧＦ受容体又はそのリガンド結合領域に特異的に結合する抗体又は抗原結合領域）及び抗ＶＥＧＦ受容体薬（例えば、それに対して特異的に結合する抗体又は抗原結合領域）パニツムマブ、イレッサ（ゲフィチニブ）、タルセバ（エルロチニブ）などＥＧＦＲ阻害剤（例えば、それに対して特異的に結合する抗体又は抗原結合領域）、抗Ａｎｇ−１薬及び抗Ａｎｇ−２薬（例えば、それに対して又はそれらの受容体、例えばＴｉｅ−２／ＴＥＫに特異的に結合する抗体又は抗原結合領域）、抗Ｔｉｅ−２キナーゼ阻害剤（例えば、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ、散乱係数（Scatter Factor）としても知られる）のアンタゴニストなどの増殖因子に特異的に結合しその活性を阻害する抗体又は抗原結合領域）、その受容体「ｃ−ｍｅｔ」に特異的に結合する抗体又は抗原結合領域；抗ＰＤＧＦ−ＢＢアンタゴニスト；ＰＤＧＦ−ＢＢリガンドに対する抗体及び抗原結合領域；及びＰＤＧＦＲキナーゼ阻害剤を含む。
抗原結合タンパク質と併用して使用することができる他の抗血管新生剤には、ＭＭＰ−２（マトリックス−メタロプロテイナーゼ２）阻害剤、ＭＭＰ−９（マトリックス−メタロプロテイナーゼ９）阻害剤、及びＣＯＸ−ＩＩ（シクロオキシゲナーゼＩＩ）阻害剤などの薬剤を含む。有用なＣＯＸ−ＩＩ阻害剤の例には、ＣＥＬＥＢＲＥＸ（セレコキシブ）、バルデコキシブ、及びロフェコキシブが含まれる。ある実施態様において、癌治療薬は血管新生阻害剤である。ある種のこのような阻害剤としては、以下に限定されないが、ＳＤ−７７８４（Ｐｆｉｚｅｒ、ＵＳＡ）；シレンギチド（ｃｉｌｅｎｇｉｔｉｄｅ）（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ、Ｇｅｒｍａｎｙ、ＥＰＯ７７０６２２）；ペガプタニブ ８ナトリウム（Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳＡ）；アルファスタチン（ＢｉｏＡｃｔａ、ＵＫ）；Ｍ−ＰＧＡ（Ｃｅｌｅｇｅｎｅ、ＵＳＡ、ＵＳ５７１２２９１）；イロマスタット（Ａｒｒｉｖａ、ＵＳＡ、ＵＳ５８９２１１２）；セマキサニブ（Ｐｆｉｚｅｒ、ＵＳＡ、ＵＳ５７９２７８３）；バタラニブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）；２−メトキシエストラジオール（ＥｎｔｒｅＭｅｄ、ＵＳＡ）；ＴＬＣ ＥＬ１−１２（Ｅｌａｎ、Ｉｒｅｌａｎｄ）；酢酸アネコルタブ（Ａｌｃｏｎ、ＵＳＡ）；α−Ｄ１４８Ｍａｂ（Ａｍｇｅｎ、ＵＳＡ）；ＣＥＰ−７０５５（Ｃｅｐｈａｌｏｎ、ＵＳＡ）；抗ＶｎＭａｂ（Ｃｒｕｃｅｌｌ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）ＤＡＣ：抗血管形成（ＣｏｎｊｕＣｈｅｍ、Ｃａｎａｄａ）；アンジオシジン（ＩｎＫｉｎｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ、ＵＳＡ）；ＫＭ−２５５０（協和発酵、日本）；ＳＵ−０８７９（Ｐｆｉｚｅｒ、ＵＳＡ）；ＣＧＰ−７９７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ、ＥＰ９７００７０）；ＡＲＧＥＮＴ技術（Ａｒｉａｄ、ＵＳＡ）；ＹＩＧＳＲ−Ｓｔｅａｌｔｈ（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ、ＵＳＡ）；フィブリノーゲンＥ断片（ＢｉｏＡｃｔａ、ＵＫ）；血管形成阻害剤（Ｔｒｉｇｅｎ、ＵＫ）；ＴＢＣ−１６３５（Ｅｎｃｙｓｉｖｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＵＳＡ）；ＳＣ−２３６（Ｐｆｉｚｅｒ、ＵＳＡ）；ＡＢＴ−５６７（Ａｂｂｏｔｔ、ＵＳＡ）；メタスタチン（ＥｎｔｒｅＭｅｄ、ＵＳＡ）；血管形成阻害剤（Ｔｒｉｐｅｐ、Ｓｗｅｄｅｎ）；マスピン（Ｓｏｓｅｉ、日本）；２−メトキシエストラジオール（Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＵＳＡ）；ＥＲ−６８２０３−００（ＩＶＡＸ、ＵＳＡ）；ベネフィン（Ｌａｎｅ Ｌａｂｓ、ＵＳＡ）；Ｔｚ−９３（ツムラ、日本）；ＴＡＮ−１１２０（武田薬品工業、日本）；ＦＲ−１１１１４２（藤沢薬品工業、日本、ＪＰ０２２３３６１０）；血小板第４因子（ＲｅｐｌｉＧｅｎ、ＵＳＡ、ＥＰ４０７１２２）；血管内皮増殖因子アンタゴニスト（Ｂｏｒｅａｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）；癌治療（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｏｕｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ、ＵＳＡ）；ベバシズマブ（ｐＩＮＮ）、（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、ＵＳＡ）；血管形成阻害剤（ＳＵＧＥＮ、ＵＳＡ）；ＸＬ７８４（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ、ＵＳＡ）；ＸＬ６４７（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ、ＵＳＡ）；ＭＡｂ、α５β３インテグリン、第二世代（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ、ＵＳＡ及びＭｅｄＩｍｍｕｎｅｌ、ＵＳＡ）；遺伝子治療、網膜症（Ｏｘｆｏｒｄ ＢｉｏＭｅｄｉｃａ、ＵＫ）；エンザスタウリン塩酸塩（ＵＳＡＮ）、（Ｌｉｌｌｙ、ＵＳＡ）；ＣＥＰ７０５５（Ｃｅｐｈａｌｏｎ、ＵＳＡ及びＳａｎｏｆｉ−Ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏ、Ｆｒａｎｃｅ）；ＢＣ１（Ｇｅｎｏａ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｉｔａｌｙ）；血管形成阻害剤（Ａｌｃｈｅｍｉａ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）；ＶＥＧＦアンタゴニスト（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ、ＵＳＡ）；ｒＢＰＩ２１及びＢＰＩ−由来抗血管形成物質（ＸＯＭＡ、ＵＳＡ）；ＰＩ８８（Ｐｒｏｇｅｎ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）；シレンジチド（ｐＩＮＮ）、（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ；Ｍｕｎｉｃｈ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｇｅｒｍａｎｙ、Ｓｃｒｉｐｐｓ Ｃｌｉｎｉｃ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、ＵＳＡ）；セツキシマブ（ＩＮＮ）（Ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｃｅ）；ＡＶＥ８０６２（味の素、日本）；ＡＳ１４０４（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ）；ＳＧ２９２（Ｔｅｌｉｏｓ、ＵＳＡ）；エンドスタチン（Ｂｏｓｔｏｎ Ｃｈｉｌｄｒｅｎｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ、ＵＳＡ）；ＡＴＮ１６１（Ａｔｔｅｎｕｏｎ、ＵＳＡ）；アンジオスタチン（Ｂｏｓｔｏｎ Ｃｈｉｌｄｒｅｎｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ、ＵＳＡ）；２−メトキシエストラジオール（Ｂｏｓｔｏｎ Ｃｈｉｌｄｒｅｎｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ、ＵＳＡ）；ＺＤ６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ、ＵＫ）；ＺＤ６１２６（Ａｎｇｉｏｇｅｎｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＵＫ）；ＰＰＩ２４５８（Ｐｒａｅｃｉｓ、ＵＳＡ）；ＡＺＤ９９３５（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ、ＵＫ）；ＡＺＤ２１７１（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ、ＵＫ）；バタラニブ（ｐＩＮＮ）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ及びＳｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ、Ｇｅｒｍａｎｙ）；組織因子経路阻害剤（ＥｎｔｒｅＭｅｄ、ＵＳＡ）；ペガプタニブ（Ｐｉｎｎ）（Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳＡ）；キサントリゾール（Ｙｏｎｓｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｓｏｕｔｈ Ｋｏｒｅａ）；ワクチン、遺伝子利用、ＶＥＧＦ−２（Ｓｃｒｉｐｐｓ Ｃｌｉｎｉｃ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、ＵＳＡ）；ＳＰＶ５．２（Ｓｕｐｒａｔｅｋ、Ｃａｎａｄａ）；ＳＤＸ１０３（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ａｔ Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＵＳＡ）；ＰＸ４７８（ＰｒｏＩＸ、ＵＳＡ）；メタスタチン（ＥｎｔｒｅＭｅｄ、ＵＳＡ）；トロポニンＩ（Ｈａｒｖａｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＵＳＡ）；ＳＵ６６６８（ＳＵＧＥＮ、ＵＳＡ）；ＯＸＩ４５０３（ＯｘｉＧＥＮＥ、ＵＳＡ）；ｏ−グアニジン（Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＵＳＡ）；モツポラミンＣ（Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｃａｎａｄａ）；ＣＤＰ７９１（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ Ｇｒｏｕｐ、ＵＫ）；アチプリモド（ｐＩＮＮ）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ、ＵＫ）；Ｅ７８２０（エーザイ、日本）；ＣＹＣ３８１（Ｈａｒｖａｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＵＳＡ）；ＡＥ９４１（Ａｅｔｅｒｎａ、Ｃａｎａｄａ）；ワクチン、血管形成（ＥｎｔｒｅＭｅｄ、ＵＳＡ）；ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化物質阻害剤（Ｄｅｎｄｒｅｏｎ、ＵＳＡ）；オグルファニド（ｐＩＮＮ）（Ｍｅｌｍｏｔｔｅ、ＵＳＡ）；ＨＩＦ−１α阻害剤（Ｘｅｎｏｖａ、ＵＫ）；ＣＥＰ５２１４（Ｃｅｐｈａｌｏｎ、ＵＳＡ）；ＢＡＹ ＲＥＳ２６２２（Ｂａｙｅｒ、Ｇｅｒｍａｎｙ）；アンジオシジン（ＩｎＫｉｎｅ、ＵＳＡ）；Ａ６（Ａｎｇｓｔｒｏｍ、ＵＳＡ）；ＫＲ３１３７２（Ｋｏｒｅａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓｏｕｔｈ Ｋｏｒｅａ）；ＧＷ２２８６（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ、ＵＫ）；ＥＨＴ０１０１（ＥｘｏｎＨｉｔ、Ｆｒａｎｃｅ）；ＣＰ８６８５９６（Ｐｆｉｚｅｒ、ＵＳＡ）；ＣＰ５６４９５９（ＯＳＩ、ＵＳＡ）；ＣＰ５４７６３２（Ｐｆｉｚｅｒ、ＵＳＡ）；７８６０３４（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ、ＵＫ）；ＫＲＮ６３３（キリンビール、日本）；薬物送達系、眼内、２−メトキシエストラジオール（ＥｎｔｒｅＭｅｄ、ＵＳＡ）；アンギネックス（Ｍａａｓｔｒｉｃｈｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ及びＭｉｎｎｅｓｏｔａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＵＳＡ）；ＡＢＴ５１０（Ａｂｂｏｔｔ、ＵＳＡ）；ＡＡＬ９９３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）；ＶＥＧＩ（ＰｒｏｔｅｏｍＴｅｃｈ、ＵＳＡ）；腫瘍壊死因子−α阻害剤（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｎ Ａｇｉｎｇ、ＵＳＡ）；ＳＵ１１２４８（Ｐｆｉｚｅｒ、ＵＳＡ及びＳＵＧＥＮ、ＵＳＡ）；ＡＢＴ５１８（Ａｂｂｏｔｔ、ＵＳＡ）；ＹＨＩ６（Ｙａｎｔａｉ Ｒｏｎｇｃｈａｎｇ、Ｃｈｉｎａ）；Ｓ−３ＡＰＧ（Ｂｏｓｔｏｎ Ｃｈｉｌｄｒｅｎｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ、ＵＳＡ及びＥｎｔｒｅＭｅｄ、ＵＳＡ）；ＭＡｂ、ＫＤＲ（ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＳＡ）；ＭＡｂ、α５β１、（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ、ＵＳＡ）；ＫＤＲキナーゼ阻害剤（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ Ｇｒｏｕｐ、ＵＫ及びＪｏｈｎｓｏｎ＆ＪｏｈｎｓｏｎＵＳＡ）；ＧＦＢ１１６（Ｓｏｕｔｈ Ｆｌｏｒｉｄａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＵＳＡ及びＹａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＵＳＡ）；ＣＳ７０６（三共、日本）；コンブレタスタチンＡ４プロドラッグ（Ａｒｉｚｏｎａ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＵＳＡ）；コンドロイチナーゼＡＣ（ＩＢＥＸ、Ｃａｎａｄａ）；ＢＡＹ ＲＥＳ２６９０（Ｂａｙｅｒ、Ｇｅｒｍａｎｙ）；ＡＧＭ１４７０（Ｈａｒｖａｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＵＳＡ、武田薬品工業、日本及びＴＡＰ、ＵＳＡ）；ＡＧ１３９２５（Ａｇｏｕｒｏｎ、ＵＳＡ）；テトラチオモリブデート（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｉｃｈｉｇａｎ、ＵＳＡ）；ＧＣＳ１００（Ｗａｙｎｅ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＵＳＡ）ＣＶ２４７（Ｉｖｙ Ｍｅｄｉｃａｌ、ＵＫ）；ＣＫＤ７３２（Ｃｈｏｎｇ Ｋｕｎ Ｄａｎｇ、Ｓｏｕｔｈ Ｋｏｒｅａ）；ＭＡｂ、血管内皮増殖因子（Ｘｅｎｏｖａ、ＵＫ）；イルソグラジン（ＩＮＮ）（日本新薬、日本）；ＲＧ１３５７７（Ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｃｅ）；ＷＸ３６０（Ｗｉｌｅｘ、Ｇｅｒｍａｎｙ）；スクアラミン（ｐＩＮＮ）（Ｇｅｎａｅｒａ、ＵＳＡ）；ＲＰＩ４６１０（Ｓｉｒｎａ、ＵＳＡ）；癌治療剤（Ｍａｒｉｎｏｖａ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）；ヘパラナーゼ阻害剤（ＩｎＳｉｇｈｔ、Ｉｓｒａｅｌ）；ＫＬ３１０６（Ｋｏｌｏｎ、Ｓｏｕｔｈ Ｋｏｒｅａ）；Ｈｏｎｏｋｉｏｌ（Ｅｍｏｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＵＳＡ）；ＺＫ ＣＤＫ（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ、Ｇｅｒｍａｎｙ）；ＺＫ Ａｎｇｉｏ（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ、Ｇｅｒｍａｎｙ）；ＺＫ２２９５６１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ及びＳｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ、Ｇｅｒｍａｎｙ）；ＸＭＰ３００（ＸＯＭＡ、ＵＳＡ）；ＶＧＡ１１０２（大正製薬、日本）；ＶＥＧＦ受容体調節物質（Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ、ＵＳＡ）；ＶＥ−カドヘリン−２アンタゴニスト（ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＳＡ）；バソスタチン（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、ＵＳＡ）；ワクチン、Ｆｌｋ−１（ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＳＡ）；ＴＺ９３（ツムラ、日本）；ＴｕｍＳｔａｔｉｎ（Ｂｅｔｈ Ｉｓｒａｅｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ、ＵＳＡ）；短縮型可溶性ＦＬＴ１（血管内皮増殖因子受容体１）（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．、ＵＳＡ）；Ｔｉｅ−２リガンド（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ、ＵＳＡ）；トロンボスポンジン１阻害剤（Ａｌｌｅｇｈｅｎｙ Ｈｅａｌｔｈ、Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、ＵＳＡ）；２−ベンゼンスルホンアミド、４−（５−（４−クロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−；Ａｒｒｉｖａ；及びＣ−Ｍｅｔ．ＡＶＥ８０６２（（２Ｓ）−２−アミノ−３−ヒドロキシ−Ｎ−［２−メトキシ−５−［（ＩＺ）−２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）エテニル］フェニル］プロパンアミド一塩酸塩）；メテリムマブ（ｐＩＮＮ）（免疫グロブリンＧ４、抗−（ヒト形質転換成長因子β１（ヒトモノクローナルＣＡＴ１９２．γ．４−鎖））、ヒトモノクローナルＣＡＴ１９２．κ．４−鎖二量体を伴うジスルフィド）；Ｆｌｔ３リガンド；ＣＤ４０リガンド；インターロイキン−２；インターロイキン−１２；４−１ＢＢリガンド；抗４−１ＢＢ抗体；ＴＮＦＲ／Ｆｃを含む、ＴＮＦアンタゴニスト及びＴＮＦ受容体アンタゴニスト、ＴＷＥＡＫアン
タゴニスト及び、ＴＷＥＡＫ−Ｒ／Ｆｃを含むＴＷＥＡＫ−Ｒアンタゴニスト；ＴＲＡＩＬ；抗ＶＥＧＦ抗体を含むＶＥＧＦアンタゴニスト；ＶＥＧＦ受容体（Ｆｌｔ１及びＦｌｋ１又はＫＤＲとしても知られている、ＶＥＧＦ−Ｒ１及びＶＥＧＦ−Ｒ２を含む。）アンタゴニスト；ＣＤ１４８（ＤＥＰ−１、ＥＣＲＴＰ及びＰＴＰＲＪとも呼ばれる。Ｔａｋａｈａｓｈｉら、Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１０：２１３５−４５（１９９９）（あらゆる目的のために本明細書中に参照により組み込む。）を参照のこと。）アゴニスト；トロンボスポンジン１阻害剤及び、Ｔｉｅ−２又はＴｉｅ−２リガンドの一方もしくは両方の阻害剤（Ａｎｇ−２など）が挙げられる。公開された米国特許出願公開第２００３／０１２４１２９号（ＰＣＴ出願番号ＷＯ２００３／０３０８３３号に相当する）、及び米国特許第６，１６６，１８５号（これらの内容は、その全体が本明細書中に参考として援用される）に記載された抗Ａｎｇ−２抗体を含む、数多くのＡｎｇ−２の阻害剤が当該技術分野で公知である。更に、Ａｎｇ−２ペプチボディが当該技術分野で公知であり、例えば、公開された米国特許出願公開第２００３／０２２９０２３号（ＰＣＴ出願番号ＷＯ２００３／０５７１３４号に相当する）、及び公開された米国特許出願公開第２００３／０２３６１９３号（これらの内容は、その全体が本明細書中に参考として援用される）に見いだすことができる。
ある種の癌治療剤としては、以下に限定されないが、：サリドマイド及びサリドマイド類似体（Ｎ−（２，６−ジオキソ−３−ピペリジル）フタルイミド）；テコガランナトリウム（硫酸化多糖ペプチドグリカン）；ＴＡＮ１１２０（８−アセチル−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−１０−［［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−２−（２−ヒドロキシプロピル）−４，１０−ジメチルピラノ［３，４−ｄ］−１，３，６−ジオキサゾシン−８−イル］オキシ］−５，１２−ナフタセンジオン）；スラジスタ（７，７’−［カルボニルビス［イミノ（１−メチル−１Ｈ−ピロール−４，２−ジイル）カルボニルイミノ（１−メチル−１Ｈ−ピロール−４，２−ジイル）カルボニルイミノ］］ビス−１，３−ナフタレンジスルホン酸四ナトリウム塩）；ＳＵ３０２；ＳＵ３０１；ＳＵ１４９８（（Ｅ）−２−シアノ−３−［４−ヒドロキシ−３，５−ビス（１−メチルエチル）フェニル］−Ｎ−（３−フェニルプロピル）−２−プロペンアミド）；ＳＵ１４３３（４−（６，７−ジメチル−２−キノキサリニル）−１，２−ベンゼンジオール）；ＳＴ１５１４；ＳＲ２５９８９；可溶性Ｔｉｅ−２；ＳＥＲＭ誘導体、Ｐｈａｒｍｏｓ；セマキサニブ（ｐＩＮＮ）（３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチレン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン）；Ｓ８３６；ＲＧ８８０３；ＲＥＳＴＩＮ；Ｒ４４０（３−（１−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）−４−（１−メチル−６−ニトロ−１Ｈ−インドール−３−イル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン）；Ｒ１２３９４２（１−［６−（１，２，４−チアジアゾール−５−イル）−３−ピリダジニル］−Ｎ−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−４−ピペリジンアミン）；ピロリルヒドロキシラーゼ阻害剤；進行上昇遺伝子（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ）；プリノマスタット（ＩＮＮ）（（Ｓ）−２，２−ジメチル−４−［［ｐ−（４−ピリジルオキシ）フェニル］スルホニル］−３−チオモルホリンカルボヒドロキサミン酸）；ＮＶ１０３０；ＮＭ３（８−ヒドロキシ−６−メトキシ−α−メチル−１−オキソ−１Ｈ−ベンゾピラン−３−酢酸）；ＮＦ６８１；ＮＦ０５０；ＭＩＧ；ＭＥＴＨ２；ＭＥＴＨ１；マナサンチンＢ（α−［１−［４−［５−［４−［２−（３，４−ジメトキシフェニル）−２−ヒドロキシ−１−メチルエトキシ］−３−メトキシフェニル］テトラヒドロ−３，４−ジメチル−２−フラニル］−２−メトキシフェノキシ］エチル］−１，３−ベンゾジオキソール−５−メタノール）；ＫＤＲモノクローナル抗体；α５β３インテグリンモノクローナル抗体；ＬＹ２９０２９３（２−アミノ−４−（３−ピリジニル）−４Ｈ−ナフト［１，２−ｂ］ピラン−３−カルボニトリル）；ＫＰ０２０１４４８；ＫＭ２５５０；インテグリン−特異的ペプチド；ＩＮＧＮ４０１；ＧＹＫＩ６６４７５；ＧＹＫＩ６６４６２；グリーンスタチン（１０１−３５４−プラスミノーゲン（ヒト））；関節リウマチ、前立腺癌、卵巣癌、グリオーマ、エンドスタチン、結腸直腸癌、ＡＴＦ、ＢＴＰＩ、抗血管形成遺伝子、血管形成阻害剤又は血管形成に対する遺伝子治療；ゲラスチナーゼ阻害剤、ＦＲ１１１１４２（４，５−ジヒドロキシ−２−へキセン酸５−メトキシ−４−［２−メチル−３−（３−メチル−２−ブテニル）オキシラニル］−１−オキサスピロ［２．５］オクト−６−イルエステル）；フォルフェニメクス（ｐＩＮＮ）（Ｓ）−α−アミノ−３−ヒドロキシ−４−（ヒドロキシメチル）ベンゼン酢酸）；フィブロネクチンアンタゴニスト（１−アセチル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−セリル−Ｌ−システニル−Ｌ−アスパルタミド）；繊維芽細胞増殖因子受容体阻害剤；繊維芽細胞増殖因子アンタゴニスト；ＦＣＥ２７１６４（７，７’−［カルボニルビス［イミノ（１−メチル−１Ｈ−ピロール−４，２−ジイル）カルボニルイミノ（１−メチル−１Ｈ−ピロール−４，２−ジイル）カルボニルイミノ］］ビス−１，３，５−ナフタレントリスルホン酸六ナトリウム塩）；ＦＣＥ２６７５２（８，８’−［カルボニルビス［イミノ（１−メチル−１Ｈ−ピロール−４，２−ジイル）カルボニルイミノ（１−メチル−１Ｈ−ピロール−４，２−ジイル）カルボニルイミノ］］ビス−１，３，６−ナフタレントリスルホン酸）；内皮単球活性化ポリペプチドＩＩ；ＶＥＧＦＲアンチセンスオリゴヌクレオチド；抗血管形成及び栄養因子；ＡＮＣＨＯＲ血管形成抑制剤；エンドスタチン；Ｄｅｌ−１血管形成タンパク質；ＣＴ３５７７；コントートロスタチン（ｃｏｎｔｏｒｔｒｏｓｔａｔｉｎ）；ＣＭ１０１；コンドロイチナーゼＡＣ；ＣＤＰ８４５；ＣａｎＳｔａｔｉｎ；ＢＳＴ２００２；ＢＳＴ２００１；ＢＬＳ０５９７；ＢＩＢＦ１０００；ＡＲＲＥＳＴＩＮ；アポミグレン（１３０４−１３８８−ＸＶ型コラーゲン（ヒト遺伝子ＣＯＬ１５Ａ１α１鎖前駆体））；アンジオインヒビン；ａａＡＴＩＩＩ；Ａ３６；９α−フルオロメドロキシプロゲステロンアセテート（（６−α）−１７−（アセチルオキシ）−９−フルオロ−６−メチル−プレグン−４−エン−３，２０−ジオン）；２−メチル−２−フタルイミド−グルタル酸（２−（１，３−ジヒドロ−１−オキソ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−２−メチルペンタンジオン酸）；Ｙｔｔｒｉｕｍ９０標識モノクローナル抗体ＢＣ−１；セマキサニブ（３−（４，５−ジメチルピロール−２−イルメチレン）インドリン−２−オン）（Ｃ１５Ｈ１４Ｎ２Ｏ）；ＰＩ８８（ホスホマンノペンタオース硫酸塩）；アルボシジブ（４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン，２−（２−クロロフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（３−ヒドロキシ−１−メチル−４−ピペリジニル）−シス−（−）−）（Ｃ２１Ｈ２０ＣｌＮＯ５）；Ｅ７８２０；ＳＵ１１２４８（５−［３−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロル−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド）（Ｃ２２Ｈ２７ＦＮ４Ｏ２）；スクアラミン（コレスタン−７，２４−ジオール，３−［［３−［（４−アミノブチル）アミノプロピル］アミノ］−，２４−（硫酸水素塩）、（３β、５α、７α）−）（Ｃ３４Ｈ６５Ｎ３Ｏ５Ｓ）；Ｅｒｉｏｃｈｒｏｍｅ Ｂｌａｃｋ Ｔ；ＡＧＭ１４７０（カルバミン酸、（クロロアセチル）−，５−メトキシ−４−［２−メチル−３−（３−メチル−２−ブテニル）オキシラニル］−１−オキサスピロ［２，５］オクト−６−イルエステル，［３Ｒ−［３α，４α（２Ｒ，３Ｒ），５β，６β］］）（Ｃ１９Ｈ２８ＣｌＮＯ６）；ＡＺＤ９９３５；ＢＩＢＦ１０００；ＡＺＤ２１７１；ＡＢＴ８２８；ＫＳ−インターロイキン−２；ウテログロビン；Ａ６；ＮＳＣ６３９３６６（１−［３−（ジエチルアミノ）−２−ヒドロキシプロピルアミノ］−４−（オキシラン−２−イルメチルアミノ）アントラキノンフメレート）（Ｃ２４Ｈ２９Ｎ３Ｏ４．Ｃ４Ｈ４Ｏ４）；ＩＳＶ６１６；抗ＥＤ−Ｂ融合タンパク質；ＨＵＩ７７；トロポニンＩ；ＢＣ−１モノクローナル抗体；ＳＰＶ５．２；ＥＲ６８２０３；ＣＫＤ７３１（３−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−２（Ｅ）−プロペン酸（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−４−［２（Ｒ）−メチル−３（Ｒ）−３（Ｒ）−（３−メチル−２−ブテニル）オキシラン−２−イル］−５−メトキシ−１−オキサスピロ［２．５］オクト−６−イルエステル）（Ｃ２８Ｈ３８Ｏ８）；ＩＭＣ−１Ｃ１１；ａａＡＴＩＩＩ；ＳＣ７；ＣＭ１０１；アンジオコール；クリングル５；ＣＫＤ７３２（３−［４−［２−（ジメチルアミノ）エトキシ］フェニル］−２（Ｅ）−プロペン酸）（Ｃ２９Ｈ４１ＮＯ６）；Ｕ９９５；カンスタチン；ＳＱ８８５；ＣＴ２５８４（１−［１１−（ドデシルアミノ）−１０−ヒドロキシウンデシル］−３，７−ジメチルキサンチン）（Ｃ３０Ｈ５５Ｎ５Ｏ３）；サルモシン；ＥＭＡＰ ＩＩ；ＴＸ１９２０（１−（４−メチルピペラジノ）−２−（２−ニトロ−１Ｈ−１−イミダゾイル）−１−エタノン）（Ｃ１０Ｈ１５Ｎ５Ｏ３）；α−ｖβ−ｘ阻害剤；ＣＨＩＲ１１５０９（Ｎ−（Ｉ−プロピニル）グリシル−［Ｎ−（２−ナフチル）］グリシル−［Ｎ−（カルバモイルメチル）］グリシンビス（４−メトキシフェニル）メチルアミド）（Ｃ３６Ｈ３７Ｎ５Ｏ６）；ＢＳＴ２００２；ＢＳＴ２００１；Ｂ０８２９；ＦＲ１１１１４２；４，５−ジヒドロキシ−２（Ｅ）−へキセン酸（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−４−［１（Ｒ），２（Ｒ）−エポキシ−１，５−ジメチル−４−へキセニル］−５−メトキシ−１−オキサスピロ［２．５］オクタン−６−イルエステル（Ｃ２２Ｈ３４Ｏ７）；及び、以下に限定されないがＮ−（４−クロロフェニル）−４−（４−ピリジニルメチル）−１−フタラジンアミンを含むキナーゼ阻害剤；４−［４−［［［［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］カルボニル］アミノ］フェノキシ］−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキシアミド；Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−１，２−ジヒドロ−２−オキソ−３Ｈ−インドール−３−イリデン）メチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキシアミド；３−［（４−ブロモ−２，６−ジフルオロフェニル）メトキシ］−５−［［［［４−（１−ピロリジニル）ブチル］アミノ］カルボニル］アミノ］−４−イソチアゾールカルボキシアミド；Ｎ−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−６−メトキシ−７−［（１−メチル−４−ピペリジニル）メトキシ］−４−キナゾリンアミン；３−［５，６，７，１３−テトラヒドロ−９−［（１−メチルエトキシ）メチル］−５−オキソ−１２Ｈ−インデノ［２，１−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−１２−イル］プロピルエステルＮ，Ｎ−ジメチル−グリシン；Ｎ−［５−［［［５−（１，１−ジメチルエチル）−２−オキサゾリル］メチル］チオ］−２−チアゾリル］−４−ピペリジンカルボキシアミド；Ｎ−［３−クロロ−４−［（３−フルオロフェニル）メトキシ］フェニル］−６−［５−［［［２−（メチルスルホニル）エチル］アミノ］メチル］−２−フラニル］−４−キナゾリンアミン；４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］アミノ］−フェニル］ベンズアミド；Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］−４−キナゾリンアミン；Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン；Ｎ−（３−（（（（２Ｒ）−１−メチル−２−ピロリジニル）メチル）オキシ）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−２−（（３−（１，３−オキサゾール−５−イル）フェニル）アミノ）−３−ピリジンカルボキシアミド；２−（（（４−フルオロフェニル）メチル）アミノ）−Ｎ−（３−（（（（２Ｒ）−１−メチル−２−ピロリジニル）メチル）オキシ）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−３−ピリジンカルボキシアミド；Ｎ−［３−（アゼチジン−３−イルメトキシ）−５−トリフルオロメチル−フェニル］−２−（４−フルオロ−ベンジルアミノ）−ニコチンアミド；６−フルオロ−Ｎ−（４−（１−メチルエチル）フェニル）−２−（（４−ピリジニルメチル）アミノ）−３−ピリジンカルボキシアミド；２−（（４−ピリジニルメチル）アミノ）−Ｎ−（３−（（（２Ｓ）−２−ピロリジニルメチル）オキシ）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−３−ピリジンカルボキシアミド；Ｎ−（３−（１，１−ジメチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−２−（（４−ピリジニルメチル）アミノ）−３−ピリジンカルボキシアミド；Ｎ−（３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロ−１−ベンゾフラン−６−イル）−２−（（４−ピリジニルメチル）アミノ）−３−ピリジンカルボキシアミド；Ｎ−（３−（（（（２Ｓ）−１−メチル−２−ピロリジニル）メチル）オキシ）−５−（トリフルオ
ロメチル）フェニル）−２−（（４−ピリジニルメチル）アミノ）−３−ピリジンカルボキシアミド；２−（（４−ピリジニルメチル）アミノ）−Ｎ−（３−（（２−（１−ピロリジニル）エチル）オキシ）−４−（トリフルオロメチル）フェニル）−３−ピリジンカルボキシアミド；Ｎ−（３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−イル）−２−（（４−ピリジニルメチル）アミノ）−３−ピリジンカルボキシアミド；Ｎ−（４−（ペンタフルオロエチル）−３−（（（２Ｓ）−２−ピロリジニルメチル）オキシ）フェニル）−２−（（４−ピリジニルメチル）アミノ）−３−ピリジンカルボキシアミド；Ｎ−（３−（（３−アゼチジニルメチル）オキシ）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−２−（（４−ピリジニルメチル）アミノ）−３−ピリジンカルボキシアミド；Ｎ−（３−（４−ピペリジニルオキシ）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−２−（（２−（３−ピリジニル）エチル）アミノ）−３−ピリジンカルボキシアミド；Ｎ−（４，４−ジメチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−７−イル）−２−（１Ｈ−インダゾール−６−イルアミノ）−ニコチンアミド；２−（１Ｈ−インダゾール−６−イルアミノ）−Ｎ−［３−（１−メチルピロリジン−２−イルメトキシ）−５−トリフルオロメチル−フェニル］−ニコチンアミド；Ｎ−［１−（２−ジメチルアミノ−アセチル）−３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−イル］−２−（１Ｈ−インダゾール−６−イルアミノ）−ニコチンアミド；２−（１Ｈ−インダゾール−６−イルアミノ）−Ｎ−［３−（ピロリジン−２−イルメトキシ）−５−トリフルオロメチル−フェニル］−ニコチンアミド；Ｎ−（１−アセチル−３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−イル）−２−（１Ｈ−インダゾール−６−イルアミノ）−ニコチンアミド；Ｎ−（４，４−ジメチル−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−７−イル）−２−（１Ｈ−インダゾール−６−イルアミノ）−ニコチンアミド；Ｎ−［４−（ｔｅｒｔ−ブチル）−３−（３−ピペリジルプロピル）フェニル］［２−（１Ｈ−インダゾール−６−イルアミノ）（３−ピリジル）］カルボキシアミド；Ｎ−［５−（ｔｅｒｔ−ブチル）イソオキサゾール−３−イル］［２−（１Ｈ−インダゾール−６−イルアミノ）（３−ピリジル）］カルボキシアミド；及びＮ−［４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェニル］［２−（１Ｈ−インダゾール−６−イルアミノ）（３−ピリジル）］カルボキシアミド及び、米国特許第６，２５８，８１２号；同第６，２３５，７６４号；同第６，６３０，５００号；同第６，５１５，００４号；同第６，７１３，４８５号；同第５，５２１，１８４号；同第５，７７０，５９９号；同第５，７４７，４９８号；同第５，９９０，１４１号；米国公開ＵＳ２００３０１０５０９１；及び特許協力条約公開番号：国際公開第０１／３７８２０号；国際公開第０１／３２６５１号；国際公開第０２／６８４０６号；国際公開第０２／６６４７０号；国際公開第０２／５５５０１号；国際公開第０４／０５２７９号；国際公開第０４／０７４８１号；国際公開第０４／０７４５８号；国際公開第０４／０９７８４号；国際公開第０２／５９１１０号；国際公開第９９／４５００９号；国際公開第９８／３５９５８号；国際公開第００／５９５０９号；国際公開第９９／６１４２２号；国際公開第００／１２０８９号；及び国際公開第００／０２８７１号（これらの公表物はそれぞれ、あらゆる目的のために、参照により本明細書中に組み込む。）で開示されているキナーゼ阻害剤が挙げられる。
一実施態様において、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体と投与されうる癌免疫療法は、限定されないが、増殖因子阻害剤を含む。その薬剤の例は、限定されないが、ＥＧＦ−Ｒ（上皮成長因子受容体）応答を阻害することができる薬剤、例えばＥＧＦ−Ｒ抗体、ＥＧＦ抗体、及びＥＧＦ−Ｒ阻害剤である分子など；ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）阻害剤、例えばＶＥＧＦ受容体及びＶＥＧＦを阻害し得る分子など；及びｅｒｂＢ２受容体阻害剤、例えばｅｒｂＢ２受容体に結合する有機分子又は抗体、例えば、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（トラスツズマブ）（ジェネンテック社）を含む。ＥＧＦ−Ｒ阻害剤は、例えば、米国特許第５，７４７，４９８号、国際公開第９８／１４４５１号、国際公開第９５／１９９７０号、及び国際公開第９８／０２４３４号に記載される。
本発明の一実施態様において、放射線が行われてもよく、及び／又は放射性医薬品は、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体に加えて使用することができる。放射線源は、治療される患者の外部又は内部のいずれかであり得る。放射線源が患者の外部にあるとき、治療は外照射療法（ＥＢＲＴ）として知られている。放射線源が患者の内部にあるとき、治療は密封小線源治療（ＢＴ）と称される。本発明との関連において使用するための放射性原子は、ラジウム、セシウム−１３７、イリジウム−１９２、アメリシウム−２４１、金−１９８、コバルト−５７、銅−６７、テクネチウム−９９、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、及びインジウム−１１１を含む群から選択されるが、これらに限定されない。その放射性同位体で抗体を標識することも可能である。
放射線療法は、切除不能または手術不可能な腫瘍及び／又は腫瘍転移を制御するための標準的な治療である。放射線療法が化学療法と併用されたときに改善された結果が見られた。放射線療法は、標的領域に送達される高線量放射線が腫瘍及び正常組織の両方において生殖細胞の死をもたらすという原理に基づいている。放射線量のレジメンは、一般に、放射線吸収線量（Ｇｙ）、時間及び分画の観点で定義され、腫瘍学者によって慎重に定義されなければならない。患者が受ける放射線の量は様々な考慮事項に依存するが、最も重要な二点は、身体の他の重要な構造又は臓器に関連して腫瘍の位置、及び腫瘍が広がった程度である。放射線治療を受けている患者の典型的な治療経過は、患者に対して１日あたりの分割線量約１．８〜２．０Ｇｙが週５日投与され、１０〜８０Ｇｙの間の総線量を伴う１〜６週間にわたる治療スケジュールとなる。本発明の好ましい実施態様において、ヒト患者の腫瘍が放射線とともに本発明の併用治療で治療された場合相乗効果がある。別の言葉では、本発明の併用を含む薬剤を用いた腫瘍増殖の阻害は、放射線、任意で追加の化学療法剤又は抗癌剤と組み合わせた場合に増強される。アジュバント放射線療法のパラメーターは、例えば、国際公開第９９／６００２３号に含まれる。
本発明の一実施態様において、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、抗体が、ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４（配列番号６５）及びヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号６４）に１：５０又はそれ未満の比率で結合することを特徴とする。
本発明の一実施態様において、抗体は、その抗体がヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４（配列番号６５）に結合しないことを特徴とする。
本発明の一実施態様において、抗体は、
ａ）重鎖可変ドメインは配列番号７、及び軽鎖可変ドメインは配列番号８であり、
ｂ）重鎖可変ドメインは配列番号１５、及び軽鎖可変ドメインは配列番号１６であり；
ｃ）重鎖可変ドメインは配列番号７５、及び軽鎖可変ドメインは配列番号７６であり；
ｄ）重鎖可変ドメインは配列番号８３、及び軽鎖可変ドメインは配列番号８４であり；
又はそれについてのヒト化バージョン
であることを特徴とする。
本発明の一実施態様において、抗体は、
ａ）重鎖可変ドメインは配列番号７、及び軽鎖可変ドメインは配列番号８であり、
ｂ）重鎖可変ドメインは配列番号１５、及び軽鎖可変ドメインは配列番号１６であり； 又はそれについてのヒト化バージョン
であることを特徴とする。
本発明の一実施態様において、抗体は、
ａ）重鎖可変ドメインは配列番号２３、及び軽鎖可変ドメインは配列番号２４であり、又は
ｂ）重鎖可変ドメインは配列番号３１、及び軽鎖可変ドメインは配列番号３２であり、又は
ｃ）重鎖可変ドメインは配列番号３９、及び軽鎖可変ドメインは配列番号４０であり、又は
ｄ）重鎖可変ドメインは配列番号４７、及び軽鎖可変ドメインは配列番号４８であり、又は
ｅ）重鎖可変ドメインは配列番号５５、及び軽鎖可変ドメインは配列番号５６である
ことを特徴とする。
本発明の一実施態様において、抗体は、
ａ）重鎖可変ドメインは、配列番号１のＣＤＲ３領域、配列番号２のＣＤＲ２領域、及び配列番号３のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号４のＣＤＲ３領域、配列番号５のＣＤＲ２領域、及び配列番号６のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｂ）重鎖可変ドメインは、配列番号９のＣＤＲ３領域、配列番号１０のＣＤＲ２領域、及び配列番号１１のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号１２のＣＤＲ３領域、配列番号１３のＣＤＲ２領域、及び配列番号１４のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｃ）重鎖可変ドメインは、配列番号１７のＣＤＲ３領域、配列番号１８のＣＤＲ２領域、及び配列番号１９のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２０のＣＤＲ３領域、配列番号２１のＣＤＲ２領域、及び配列番号２２のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｄ）重鎖可変ドメインは、配列番号２５のＣＤＲ３領域、配列番号２６のＣＤＲ２領域、及び配列番号２７のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２８のＣＤＲ３領域、配列番号２９のＣＤＲ２領域、及び配列番号３０のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｅ）重鎖可変ドメインは、配列番号３３のＣＤＲ３領域、配列番号３４のＣＤＲ２領域、及び配列番号３５のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号３６のＣＤＲ３領域、配列番号３７のＣＤＲ２領域、及び配列番号３８のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｆ）重鎖可変ドメインは、配列番号４１のＣＤＲ３領域、配列番号４２のＣＤＲ２領域、及び配列番号４３のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号４４のＣＤＲ３領域、配列番号４５のＣＤＲ２領域、及び配列番号４６のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｇ）重鎖可変ドメインは、配列番号４９のＣＤＲ３領域、配列番号５０のＣＤＲ２領域、及び配列番号５１のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号５２のＣＤＲ３領域、配列番号５３のＣＤＲ２領域、及び配列番号５４のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｈ）重鎖可変ドメインは、配列番号６９のＣＤＲ３領域、配列番号７０のＣＤＲ２領域、及び配列番号７１のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号７２のＣＤＲ３領域、配列番号７３のＣＤＲ２領域、及び配列番号７４のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｉ）重鎖可変ドメインは、配列番号７７のＣＤＲ３領域、配列番号７８のＣＤＲ２領域、及び配列番号７９のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号８０のＣＤＲ３領域、配列番号８１のＣＤＲ２領域、及び配列番号８２のＣＤＲ１領域を含む
ことを特徴とする。
本発明の一実施態様において、抗体はヒトＩｇＧ１サブクラス又はヒトＩｇＧ４サブクラスのものである。
本発明の更なる実施態様は、本発明による抗体を含む薬学的組成物である。
本発明は、ＣＳＦ−１Ｒ媒介性疾患の治療のための医薬の製造のための、本発明による抗体の使用を含む。
本発明は、癌の治療のための医薬の製造のための、本発明による抗体の使用を含む。
本発明は、骨量減少の治療のための医薬の製造のための、本発明による抗体の使用を含む。
本発明は、転移の治療のための医薬の製造のための、本発明による抗体の使用を含む。
本発明は、炎症性疾患の治療のための医薬の製造のための、本発明による抗体の使用を含む。
本発明は、ＣＳＦ−１Ｒ媒介性疾患の治療のための、本発明による抗体を含む。
本発明は、癌の治療のための、本発明による抗体を含む。
本発明は、骨量減少の治療のための、本発明による抗体を含む。
本発明は、転移の治療のための、本発明による抗体を含む。
本発明は、炎症性疾患の治療のための、本発明による抗体を含む。
本明細書に記載される抗体の併用療法は、ＣＳＦ−１Ｒ標的治療を必要とする患者のための利益を示す。本発明による抗体は、リガンド非依存性及びリガンド依存性増殖に対する有効な抗増殖活性を示し、従って、化学療法剤、放射線及び／又は癌免疫療法と併用して、癌及び転移の治療に特に有用である。
本発明は、癌疾患を有すると診断され（従って、そのような治療を必要としている）患者に、本発明の抗体の有効量を、化学療法剤、放射線及び／又は癌免疫療法と併用して、投与することを含む、癌に罹患している患者を治療するための方法を更に提供する。抗体は、薬学的組成物中で好ましくは投与される。
驚くべきことに、ヒトＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤのＤ４サブドメインが欠失したヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４を用いて、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体を選択できることが見いだされている。これらの抗体は、完全長野生型ＣＳＦ−１Ｒ（配列番号６２）又は変異ＣＳＦ−１Ｒ Ｌ３０１Ｓ Ｙ９６９Ｆ（配列番号６３）のどちらかの発現ベクターでレトロウイルス性感染された、ＮＩＨ３Ｔ３細胞の、優れたリガンド依存性細胞増殖阻害及び同時にリガンド非依存性細胞増殖阻害などの価値ある特性を示し、それによって変異ＣＳＦ１Ｒ組換え細胞はＣＳＦ−１リガンドと無関係にスフェロイドを形成することができる。更に、これらの抗体は、ヒト及びカニクイザル単球の生存を阻害するので、ヒトおよびカニクイザル（の両方の）マクロファージ分化を阻害する。
（二量体化）ドメインＤ４からＤ５に結合する更なる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒの完全細胞外ドメイン（配列番号６４）に結合し、ヒトＣＳＦ−１Ｒの細胞外ドメインのドメインＤ１からＤ３（配列番号６６）に結合しない、抗体をスクリーニングすることによって選択することができる。
１０μｇ／ｍｌの異なる抗ＣＳＦ−１Ｒモノクローナル抗体による処置下で、３Ｄ培養中のＢｅＷｏ腫瘍細胞の増殖阻害。Ｘ軸：細胞のＡＴＰ含有量に対応する生存率正規化平均相対光単位（ＲＬＵ）（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏアッセイ）。Ｙ軸：試験されたプローブ：最小培地（０．５％ ＦＢＳ）、マウスＩｇＧ１（ｍＩｇＧ１、１０μｇ／ｍｌ）、マウスＩｇＧ２ａ（ｍＩｇＧ２ａ １０μｇ／ｍｌ）、ＣＳＦ−１のみ、Ｍａｂ ２Ｆ１１、Ｍａｂ ２Ｅ１０、Ｍａｂ２Ｈ７、Ｍａｂ１Ｇ１０及びＳＣ ２−４Ａ５。ＣＳＦ−１誘発性増殖の最も高い阻害は、本発明の抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体で観察された。 異なる抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の、固定化ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４（細胞外サブドメインＤ１−Ｄ３及びＤ５を含む）（配列番号６５）に対する結合のビアコアセンソグラム（ｙ軸：応答単位（ＲＵ）での結合シグナル、ベースライン＝０ＲＵ、ｘ軸：時間（秒））：抗体Ｍａｂ３９２１及びｓｃ ２−４Ａ５は、このｄｅｌＤ４断片への結合を明らかに示すが、一方本発明による抗体、例えば、Ｍａｂ ２Ｆ１１及びＭａｂ ２Ｅ１０はＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４に結合しなかった。またコントロールの抗ＣＣＲ５抗体ｍ＜ＣＣＲ５＞Ｐｚ０３．１Ｃ５は、ＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４に結合しなかった。 異なる抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の、固定化ヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）（細胞外サブドメインＤ１−Ｄ５を含む）（配列番号６４）に対する結合のビアコアセンソグラム（ｙ軸：応答単位（ＲＵ）での結合シグナル、ベースライン＝０ＲＵ、ｘ軸：時間（秒））：全ての抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤへの結合を示す。コントロールの抗ＣＣＲ５抗体ｍ＜ＣＣＲ５＞Ｐｚ０３．１Ｃ５は、ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤに結合しなかった。 異なる抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の、固定化ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４（細胞外サブドメインＤ１−Ｄ３及びＤ５を含む）（配列番号６５）に対する結合のビアコアセンソグラム（ｙ軸：応答単位（ＲＵ）での結合シグナル、ベースライン＝０ＲＵ、ｘ軸：時間（秒））：Ｍａｂ １Ｇ１０、Ｍａｂ ２Ｈ７及びヒト化ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７は、ＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４に結合しなかった。またコントロールの抗ＣＣＲ５抗体ｍ＜ＣＣＲ５＞Ｐｚ０３．１Ｃ５は、ＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４に結合しなかった。 異なる抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の、固定化ヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）（細胞外サブドメインＤ１−Ｄ５を含む）（配列番号６４）に対する結合のビアコアセンソグラム（ｙ軸：応答単位（ＲＵ）での結合シグナル、ベースライン＝０ＲＵ、ｘ軸：時間（秒））：全ての抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体Ｍａｂ １Ｇ１０、Ｍａｂ ２Ｈ７及びヒト化ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７は、ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤへの結合を示した。コントロールの抗ＣＣＲ５抗体ｍ＜ＣＣＲ５＞Ｐｚ０３．１Ｃ５は、ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤに結合しなかった。 異なる抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の、固定化ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４（細胞外サブドメインＤ１−Ｄ３及びＤ５を含む）（配列番号６５）に対する結合のビアコアセンソグラム（ｙ軸：応答単位（ＲＵ）での結合シグナル、ベースライン＝０ＲＵ、ｘ軸：時間（秒））：全ての抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体１．２．ＳＭ、ＣＸＩＩＧ６、ａｂ１０６７６及びＭＡＢ３２９１は、ＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４への結合を示す。またコントロールの抗ＣＣＲ５抗体ｍ＜ＣＣＲ５＞Ｐｚ０３．１Ｃ５は、ＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４に結合しなかった。 異なる抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の、固定化ヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）（細胞外サブドメインＤ１−Ｄ５を含む）（配列番号６４）に対する結合のビアコアセンソグラム（ｙ軸：応答単位（ＲＵ）での結合シグナル、ベースライン＝０ＲＵ、ｘ軸：時間（秒））：全ての抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体１．２．ＳＭ、ＣＸＩＩＧ６、ａｂ１０６７６及びＭＡＢ３２９１は、ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤへの結合を示す。コントロールの抗ＣＣＲ５抗体ｍ＜ＣＣＲ５＞Ｐｚ０３．１Ｃ５は、ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤに結合しなかった。 カニクイザルにおいて、本発明による抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の異なる投与量を適用後の、ＣＳＦ−１のレベル。 インビボでの有効性−乳癌ＢＴ２０異種移植片における、本発明による抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の腫瘍増殖阻害。 ５ａ：ヒト単球は、ＧＭ−ＣＳＦ又はＣＳＦ−１（１００ｎｇ／ｍｌのリガンド）の共培養によりマクロファージへ分化した。分化の６日後、ＲＯ７１５５の添加。細胞生存率は、ＣＴＧ生存度アッセイ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（登録商標）Ｐｒｏｍｅｇａ）における抗体処置の７日目に測定した。細胞生存率（％）の計算：抗体無しの未処置コントロールからのＲＬＵシグナルで割った処置された細胞からのＲＬＵシグナル。（ｎ＝４）５ｂ：７日間、ＧＭ−ＣＳＦ（Ｍ１）又はＭ−ＣＳＦ（Ｍ２）によりマクロファージに分化したヒト単球。間接蛍光分析により分析した表現型−抗ＣＤ１６３−ＰＥ、抗ＣＤ８０−ＰＥ、又は標識した抗ＨＬＡ−ＤＲ／ＤＱ／ＤＰ−ゼノン−Ａｌｅｘａ６４７による染色。各ヒストグラム内の数字は、平均蛍光強度比（ＭＲＦＩ）に対応する：選択された抗体で染色された細胞（空のヒストグラム）と対応するアイソタイプコントロール（陰性コントロール；灰色で満たされたヒストグラム）の平均蛍光強度（ＭＦＩ）の間の計算された比（平均±ＳＤ；ｎ≧５）。 インビボモデルにおけるＭＣ３８マウスＣＲＣにおける＜マウスＣＳＦ１Ｒ＞抗体併用のインビボでの有効性。 ＜ＣＳＦ１Ｒ＞抗体及び＜ＣＤ４０＞抗体の併用のインビボでの有効性。ＣＳＦ１Ｒ ｍＡｂ＋ＣＤ４０ ｍＡｂ ＦＧＫ４５の併用は、同質遺伝子的ＭＣ３８マウスの結腸癌モデルにおける単剤療法において改善された抗腫瘍効果を示している。
本発明の詳細な記述
多くの腫瘍は、マクロファージなを含む、免疫細胞の顕著な浸潤によって特徴付けられる。最初は、免疫細胞は、腫瘍に対する防御機構の一部であると考えられたが、最近のデータは、マクロファージを含む幾つかの免疫細胞集団は、実際には、腫瘍の進行を促進し得るという考えを支持している。マクロファージは、その可塑性によって特徴付けられる。サイトカイン微小環境に応じて、マクロファージは、いわゆるＭ１又はＭ２−サブタイプを示すことができる。Ｍ２マクロファージは、腫瘍免疫の抑制に関与している。それらはまた、増殖を支援するために、腫瘍によって取り込まれる、血管新生及び組織リモデリングなどの組織修復機能に重要な役割を果たしている。腫瘍促進性Ｍ２マクロファージとは対照的に、Ｍ１マクロファージは、炎症性サイトカインの分泌を介する抗腫瘍活性及び抗原提示と食作用におけるそれらの関与を示している（Mantovani, A. et al., Curr. Opin. Immunol. 2 (2010) 231-237）。
コロニー刺激因子１（ＣＳＦ−１）及びＩＬ−１０などの様々なサイトカインを分泌することにより、腫瘍細胞は、マクロファージをを動員して、Ｍ２−サブタイプに成形することができるが、一方、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＩＦＮ−γなどのサイトカインは、Ｍ１サブタイプに向けてマクロファージをプログラミングする。免疫組織化学を使用して、ＣＤ６８及びＣＤ１６３を共発現するマクロファージの亜集団（Ｍ２マクロファージについて濃縮される可能性が高い）と、ＣＤ６８＋／ＭＨＣＩＩ＋、又はＣＤ６８＋／ＣＤ８０＋免疫表現型を示すサブセット（Ｍ１マクロファージが含まれる可能性が高い）とを区別することが可能である。細胞の形状、大きさ、そしてＣＤ６８及びＣＤ１６３陽性マクロファージの空間分布は、例えば、間質を交差する腫瘍における優先的位置、及び生存腫瘍領域によって、Ｍ２マクロファージの腫瘍促進の役割に関する公開仮説と一致している。対照的に、ＣＤ６８＋／ＭＨＣクラスＩＩ＋マクロファージは普遍的に見出される。食作用におけるそれらの仮想的な役割は、アポトーシス細胞と壊死腫瘍領域近傍の、ＣＤ１６３−を除くＣＤ６８＋／ＭＨＣクラスＩＩ＋の免疫表現型のクラスターにより反映される。
異なるマクロファージ集団のサブタイプとマーカー発現は、それらの機能状態と連結している。Ｍ２マクロファージは、腫瘍形成を支援することができる。
ａ）ＶＥＧＦやｂＦＧＦなどの血管新生因子の分泌を介して血管新生を増強し、
ｂ）マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、増殖因子、及び血流に腫瘍細胞を導いて転移性ニッチを設定する遊走因子の分泌を介して転移形成を支援し（Wyckoff, J. et al., Cancer Res. 67 (2007) 2649-2656）、
ｃ）ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−１ｒａ及びＩＬ−１０などの免疫抑制サイトカイン（それらは次にＴ調節細胞機能を調節する）を分泌することにより、免疫抑制環境を構築する役割を果たす、逆に、ＣＤ４陽性Ｔ細胞は、前臨床モデルにおいて腫瘍促進性マクロファージの活性を増強することが示されている(Mantovani, A. et al., Eur. J. Cancer 40 (2004) 1660-1667; DeNardo, D. et al., Cancer Cell 16 (2009) 91-102)。
従って、いくつかの癌の型（例えば、乳癌、卵巣癌、ホジキンリンパ腫）において、Ｍ２サブタイプの腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の蔓延は予後不良と関連している(Bingle, L. et al., J. Pathol. 3 (2002) 254-265; Orre, M., and Rogers, P.A., Gynecol. Oncol. 1 (1999) 47-50; Steidl, C. et al., N. Engl. J. Med. 10 (2010) 875-885)。最近のデータは、腫瘍におけるＣＤ１６３陽性マクロファージ浸潤物と腫瘍悪性度の相関を示している(Kawamura, K. et al., Pathol. Int. 59 (2009) 300-305)。患者の腫瘍から単離されたＴＡＭは耐性表現型を持っており、腫瘍細胞に対して細胞傷害性ではなかった(Mantovani, A. et al., Eur. J. Cancer 40 (2004) 1660-1667)。しかし、細胞傷害性Ｔ細胞の存在下でのＴＡＭの浸潤は、非小細胞肺癌における生存率の改善と相関し、従って、この腫瘍型においてより顕著なＭ１マクロファージ浸潤物を反映している(Kawai, O. et al., Cancer 6 (2008) 1387-1395)。
近年、細胞傷害性ＣＤ８陽性Ｔ細胞の数は少ないが、多数のマクロファージおよびＣＤ４陽性Ｔ細胞を含む、いわゆる免疫シグネチャは、乳癌患者における全生存（ＯＳ）の低下と相関し、独立した予後因子を表わすことが示された (DeNardo, D. et al., Cancer Discovery 1 (2011) 54-67)。
Ｍ２マクロファージの、腫瘍形成を支持する機能の駆動におけるＣＳＦ−１の役割と一致して、ＣＳＦ−１遺伝子の転座に一部起因する、色素性絨毛結節性滑膜炎（ＰＶＮＳ）と腱鞘巨細胞腫（ＴＧＣＴ）などの希な肉腫或いは局所侵襲性結合組織腫瘍における高ＣＳＦ−１発現は、ＣＳＦ−１受容体、コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ−１Ｒ）を発現し、腫瘍塊の大部分を形成する単球及びマクロファージの蓄積をもたらす(West, R.B. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 3 (2006) 690-695)。これらの腫瘍は、その後、遺伝子発現プロファイリングによるＣＳＦ−１依存性マクロファージシグネチャを定義するために用いられた。乳癌及び平滑筋肉腫の患者の腫瘍において、このＣＳＦ−１応答遺伝子シグネチャーは予後不良を予測する(Espinosa, I. et al., Am. J. Pathol. 6 (2009) 2347-2356; Beck, A. et al., Clin. Cancer Res. 3 (2009) 778-787)。
ＣＳＦ−１Ｒは、受容体チロシンキナーゼのクラスＩＩＩファミリーに属し、ｃ−ｆｍｓの癌原遺伝子によってコードされる。ＣＳＦ−１又はＩＬ−３４の結合は、受容体二量体化を誘導し、続いて自己リン酸化および下流シグナル伝達カスケードを活性化する。ＣＳＦ−１Ｒの活性化は、単球及びマクロファージの生存、増殖及び分化を調節する (Xiong, Y. et al., J. Biol. Chem. 286 (2011) 952-960)。
マクロファージと同じ造血前駆体から派生する単球系統及び破骨細胞の細胞に加えて、ＣＳＦ−１Ｒ／ｃ−ｆｍｓはまた、マクロファージと比べて低い発現レベルではあるが、卵巣癌及び乳癌などの幾つかのヒト上皮癌によって、及び及び平滑筋肉腫及びＴＧＣＴ／ＰＶＮＳにおいて発現することが見出されている。ＴＧＣＴ／ＰＶＮＳと同様に、ＣＳＦ−１ＲのリガンドであるＣＳＦ−１のレベルの上昇は、卵巣癌患者の血清ならびに腹水において、予後不良と相関している(Scholl, S. et al., Br. J. Cancer 62 (1994) 342-346; Price, F. et al., Am. J. Obstet. Gynecol. 168 (1993) 520-527)。更に、ＣＳＦ１Ｒの構成的に活性な変異体は、癌遺伝子の特性の一つである、ＮＩＨ３Ｔ３細胞を形質転換することができる（Chambers, S., Future Oncol 5 (2009) 1429-1440）。
前臨床モデルは、腫瘍学の標的として、ＣＳＦ−１Ｒの検証を提供する。ＣＳＦ−１並びにＣＳＦ−１Ｒ活性の遮断は、ＴＡＭの動員の減少をもたらす。化学療法は、ＴＡＭの動員強化につながる腫瘍細胞におけるＣＳＦ−１発現の上昇をもたらした。自発的トランスジェニック乳癌モデルにおいて、パクリタキセルを併用したＣＳＦ−１Ｒの遮断は、腫瘍増殖および転移負荷の減少につながるＣＤ８陽性細胞傷害性Ｔ細胞の活性化を生じた(DeNardo, D. et al., Cancer Discovery 1 (2011) 54-67)。
本発明に記載の抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、受容体の二量体化インターフェースを構成する、膜近傍細胞外ドメインＤ４とＤ５に結合する。これらは、ＣＳＦ−１は、ＩＬ−３４媒介性、並びにリガンド非依存性の受容体活性化を遮断し、Ｍ１様ＧＭ−ＣＳＦ分化型マクロファージを残しつつ、ＣＳＦ−１の存在下でインビトロで分化した、Ｍ２様マクロファージのアポトーシスの誘導をもたらす。ヒト乳癌組織では、Ｍ２（ＣＤ６８＋／ＣＤ１６３＋）マクロファージ及びＣＳＦ１Ｒを発現するマクロファージは共局在化している。カニクイザルにおいて、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７による１３週間の処置は、肝臓と大腸内でＣＤ１６３陽性マクロファージを減少させたが、肺のマクロファージは減少させなかった。
いくつかの新しい薬剤の導入にもかかわらず、多くの先進的な固形腫瘍の臨床的対応は依然として困難である。分子癌生物学の理解の進歩は、転帰の向上を目指して、より多くの標的療法にむけた研究を刺激してきた。
ＣＳＦ−１Ｒは、ＣＳＦ−１Ｒ遺伝子によりコードされるタンパク質である。これは、Ｍ２マクロファージの生産、分化、及び機能を制御し、次いで、腫瘍増殖と転移形成を支援し、患者の予後不良につながる、免疫抑制性サイトカインを分泌する。さらに、（例えば卵巣癌および乳癌のような）いくつかのヒト癌におけるＣＳＦ−１Ｒ陽性マクロファージの存在は、血管密度の増加のみならずより悪い臨床転帰と相関することが示されている。選択的にＭ２−様ＴＡＭを阻害するＣＳＦ−１Ｒ阻害剤は、前臨床モデルにおいて活性を示した (DeNardo, D. et al., Cancer Discovery 1 (2011) 54-67; Lin, E. et al., J. Exp. Med. 193 (2001) 727-740)。ＣＳＦ−１Ｒの活性の遮断は、ＴＡＭの動員の減少を生じ、そして化学療法との併用で、相乗作用は、腫瘍の増殖及び転移負荷の減少をもたらす。最近のデータは、ＰＶＮＳとＴＧＣＴを有する患者において、ＣＳＦ−１の過剰発現が検出され、一部はＣＳＦ−１Ｒ遺伝子の転座によって媒介されることを示している (West, R.B. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 3 (2006) 690-695)。乳癌において、ＣＳＦ−１応答遺伝子シグネチャーの存在は、再発及び転移のリスクを予測する(Beck, A. et al., Clin. Cancer Res. 3 (2009) 778-787)。
本発明に記載される抗体の抗腫瘍単剤有効性に基づいて、タキサン（例えば、パクリタキセル（タキソール）、ドセタキセル（タキソテール）、修飾型パクリタキセル（例えば、アブラキサン及びオパキシオ）、ドキソルビシン、スニチニブ（スーテント）、ソラフェニブ（ネクサバール）、及びその他のマルチキナーゼ阻害剤、オキサリプラチン、オキサリプラチン、シスプラチン及びカルボプラチン、エトポシド、ゲムシタビン、及びビンブラスチンと併用して、腫瘍関連マクロファージの遮断、及び腫瘍を支持するそれらの生物活性の仮説を検証することは合理的と思われる。一実施態様において、化学療法剤は、タキサン（例えばタキソール（パクリタキセル）、ドセタキセル（タキソテール）、修飾パクリタキセル（例えばアブラキサン及びオパキシオ）からなる群から選択される。
本発明は、抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号６４）（ドメインＤ１からＤ５を含む）に結合し、ヒトＣＳＦ−１Ｒの細胞外ドメインのドメインＤ１からＤ３（配列番号６６）に結合しないことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明は、抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４（配列番号６５）及びヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号６４）に１：５０又はそれ未満の比率で結合することを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を更に含む。
本発明は、配列番号１、配列番号９、配列番号２３、配列番号３１、配列番号３９、配列番号４７，又は配列番号５５の重鎖可変ドメインＣＤＲ３領域を含むことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を更に含む。
本発明は、
ａ）重鎖可変ドメインは配列番号７、及び軽鎖可変ドメインは配列番号８であり、
ｂ）重鎖可変ドメインは配列番号１５、及び軽鎖可変ドメインは配列番号１６であり； 又はそれについてのヒト化バージョンである
ことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を更に含む。
本発明は、
ａ）重鎖可変ドメインは配列番号７、及び軽鎖可変ドメインは配列番号８であり、
ｂ）重鎖可変ドメインは配列番号１５、及び軽鎖可変ドメインは配列番号１６であり；
ｃ）重鎖可変ドメインは配列番号７５、及び軽鎖可変ドメインは配列番号７６であり；
ｄ）重鎖可変ドメインは配列番号８３、及び軽鎖可変ドメインは配列番号８４であり；
又はそれについてのヒト化バージョンである
ことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を更に含む。
本発明は、重鎖可変ドメインは配列番号７、及び軽鎖可変ドメインは配列番号８であり、又はそれについてのヒト化バージョンであることをを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を更に含む。
一実施態様において、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法は、
ａ）重鎖可変ドメインは配列番号２３、及び軽鎖可変ドメインは配列番号２４であり、又は
ｂ）重鎖可変ドメインは配列番号３１、及び軽鎖可変ドメインは配列番号３２であり、又は
ｃ）重鎖可変ドメインは配列番号３９、及び軽鎖可変ドメインは配列番号４０であり、又は
ｄ）重鎖可変ドメインは配列番号４７、及び軽鎖可変ドメインは配列番号４８であり、又は
ｅ）重鎖可変ドメインは配列番号５５、及び軽鎖可変ドメインは配列番号５６である
ことを特徴とする。
一実施態様において、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法は、
ａ）重鎖可変ドメインは配列番号２３、及び軽鎖可変ドメインは配列番号２４であり、又は
ｂ）重鎖可変ドメインは配列番号３１、及び軽鎖可変ドメインは配列番号３２であり、又は
ｃ）重鎖可変ドメインは配列番号３９、及び軽鎖可変ドメインは配列番号４０であり、又は
ｄ）重鎖可変ドメインは配列番号４７、及び軽鎖可変ドメインは配列番号４８である
ことを特徴とする。
一実施態様において、本発明による抗体は、
重鎖可変ドメインは配列番号２３、及び軽鎖可変ドメインは配列番号２４である
ことを特徴とする。
一実施態様において、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法は、
重鎖可変ドメインは配列番号３１、及び軽鎖可変ドメインは配列番号３２である
ことを特徴とする。
一実施態様において、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法は、
重鎖可変ドメインは配列番号３９、及び軽鎖可変ドメインは配列番号４０である
ことを特徴とする。
一実施態様において、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法は、
重鎖可変ドメインは配列番号４７、及び軽鎖可変ドメインは配列番号４８である
ことを特徴とする。
本発明は、
重鎖可変ドメインは配列番号１５、及び軽鎖可変ドメインは配列番号１６であり、又はそれについてのヒト化バージョンである
ことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を更に含む。
本発明は、
重鎖可変ドメインは配列番号７５、及び軽鎖可変ドメインは配列番号７６であり、又はそれについてのヒト化バージョンである
ことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を更に含む。
本発明は、
重鎖可変ドメインは配列番号８３、及び軽鎖可変ドメインは配列番号８４であり、又はそれについてのヒト化バージョンである
ことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を更に含む。
本発明は、
ａ）重鎖可変ドメインは、配列番号１のＣＤＲ３領域、配列番号２のＣＤＲ２領域、及び配列番号３のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号４のＣＤＲ３領域、配列番号５のＣＤＲ２領域、及び配列番号６のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｂ）重鎖可変ドメインは、配列番号９のＣＤＲ３領域、配列番号１０のＣＤＲ２領域、及び配列番号１１のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号１２のＣＤＲ３領域、配列番号１３のＣＤＲ２領域、及び配列番号１４のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｃ）重鎖可変ドメインは、配列番号１７のＣＤＲ３領域、配列番号１８のＣＤＲ２領域、及び配列番号１９のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２０のＣＤＲ３領域、配列番号２１のＣＤＲ２領域、及び配列番号２２のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｄ）重鎖可変ドメインは、配列番号２５のＣＤＲ３領域、配列番号２６のＣＤＲ２領域、及び配列番号２７のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２８のＣＤＲ３領域、配列番号２９のＣＤＲ２領域、及び配列番号３０のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｅ）重鎖可変ドメインは、配列番号３３のＣＤＲ３領域、配列番号３４のＣＤＲ２領域、及び配列番号３５のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号３６のＣＤＲ３領域、配列番号３７のＣＤＲ２領域、及び配列番号３８のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｆ）重鎖可変ドメインは、配列番号４１のＣＤＲ３領域、配列番号４２のＣＤＲ２領域、及び配列番号４３のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号４４のＣＤＲ３領域、配列番号４５のＣＤＲ２領域、及び配列番号４６のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｇ）重鎖可変ドメインは、配列番号４９のＣＤＲ３領域、配列番号５０のＣＤＲ２領域、及び配列番号５１のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号５２のＣＤＲ３領域、配列番号５３のＣＤＲ２領域、及び配列番号５４のＣＤＲ１領域を含む
ことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を更に含む。
本発明は、
ａ）重鎖可変ドメインは、配列番号１のＣＤＲ３領域、配列番号２のＣＤＲ２領域、及び配列番号３のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号４のＣＤＲ３領域、配列番号５のＣＤＲ２領域、及び配列番号６のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｂ）重鎖可変ドメインは、配列番号９のＣＤＲ３領域、配列番号１０のＣＤＲ２領域、及び配列番号１１のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号１２のＣＤＲ３領域、配列番号１３のＣＤＲ２領域、及び配列番号１４のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｃ）重鎖可変ドメインは、配列番号１７のＣＤＲ３領域、配列番号１８のＣＤＲ２領域、及び配列番号１９のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２０のＣＤＲ３領域、配列番号２１のＣＤＲ２領域、及び配列番号２２のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｄ）重鎖可変ドメインは、配列番号２５のＣＤＲ３領域、配列番号２６のＣＤＲ２領域、及び配列番号２７のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２８のＣＤＲ３領域、配列番号２９のＣＤＲ２領域、及び配列番号３０のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｅ）重鎖可変ドメインは、配列番号３３のＣＤＲ３領域、配列番号３４のＣＤＲ２領域、及び配列番号３５のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号３６のＣＤＲ３領域、配列番号３７のＣＤＲ２領域、及び配列番号３８のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｆ）重鎖可変ドメインは、配列番号４１のＣＤＲ３領域、配列番号４２のＣＤＲ２領域、及び配列番号４３のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号４４のＣＤＲ３領域、配列番号４５のＣＤＲ２領域、及び配列番号４６のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｇ）重鎖可変ドメインは、配列番号４９のＣＤＲ３領域、配列番号５０のＣＤＲ２領域、及び配列番号５１のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号５２のＣＤＲ３領域、配列番号５３のＣＤＲ２領域、及び配列番号５４のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｈ）重鎖可変ドメインは、配列番号６９のＣＤＲ３領域、配列番号７０のＣＤＲ２領域、及び配列番号７１のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号７２のＣＤＲ３領域、配列番号７３のＣＤＲ２領域、及び配列番号７４のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｉ）重鎖可変ドメインは、配列番号７７のＣＤＲ３領域、配列番号７８のＣＤＲ２領域、及び配列番号７９のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号８０のＣＤＲ３領域、配列番号８１のＣＤＲ２領域、及び配列番号８２のＣＤＲ１領域を含む
ことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を更に含む。
一実施態様において、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法は、
ａ）重鎖可変ドメインは、配列番号６９のＣＤＲ３領域、配列番号７０のＣＤＲ２領域、及び配列番号７１のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号７２のＣＤＲ３領域、配列番号７３のＣＤＲ２領域、及び配列番号７４のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｂ）重鎖可変ドメインは、配列番号７７のＣＤＲ３領域、配列番号７８のＣＤＲ２領域、及び配列番号７９のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号８０のＣＤＲ３領域、配列番号８１のＣＤＲ２領域、及び配列番号８２のＣＤＲ１領域を含む
ことを特徴とする。
一実施態様において、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法は、
ａ）重鎖可変ドメインは、配列番号１７のＣＤＲ３領域、配列番号１８のＣＤＲ２領域、及び配列番号１９のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２０のＣＤＲ３領域、配列番号２１のＣＤＲ２領域、及び配列番号２２のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｂ）重鎖可変ドメインは、配列番号２５のＣＤＲ３領域、配列番号２６のＣＤＲ２領域、及び配列番号２７のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２８のＣＤＲ３領域、配列番号２９のＣＤＲ２領域、及び配列番号３０のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｃ）重鎖可変ドメインは、配列番号３３のＣＤＲ３領域、配列番号３４のＣＤＲ２領域、及び配列番号３５のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号３６のＣＤＲ３領域、配列番号３７のＣＤＲ２領域、及び配列番号３８のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｄ）重鎖可変ドメインは、配列番号４１のＣＤＲ３領域、配列番号４２のＣＤＲ２領域、及び配列番号４３のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号４４のＣＤＲ３領域、配列番号４５のＣＤＲ２領域、及び配列番号４６のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｅ）重鎖可変ドメインは、配列番号４９のＣＤＲ３領域、配列番号５０のＣＤＲ２領域、及び配列番号５１のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号５２のＣＤＲ３領域、配列番号５３のＣＤＲ２領域、及び配列番号５４のＣＤＲ１領域を含む
ことを特徴とする。
一実施態様において、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法は、
ａ）重鎖可変ドメインは、配列番号１７のＣＤＲ３領域、配列番号１８のＣＤＲ２領域、及び配列番号１９のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２０のＣＤＲ３領域、配列番号２１のＣＤＲ２領域、及び配列番号２２のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｂ）重鎖可変ドメインは、配列番号２５のＣＤＲ３領域、配列番号２６のＣＤＲ２領域、及び配列番号２７のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２８のＣＤＲ３領域、配列番号２９のＣＤＲ２領域、及び配列番号３０のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｃ）重鎖可変ドメインは、配列番号３３のＣＤＲ３領域、配列番号３４のＣＤＲ２領域、及び配列番号３５のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号３６のＣＤＲ３領域、配列番号３７のＣＤＲ２領域、及び配列番号３８のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｄ）重鎖可変ドメインは、配列番号４１のＣＤＲ３領域、配列番号４２のＣＤＲ２領域、及び配列番号４３のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号４４のＣＤＲ３領域、配列番号４５のＣＤＲ２領域、及び配列番号４６のＣＤＲ１領域を含む
ことを特徴とする。
一実施態様において、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法は、
重鎖可変ドメインは、配列番号１７のＣＤＲ３領域、配列番号１８のＣＤＲ２領域、及び配列番号１９のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２０のＣＤＲ３領域、配列番号２１のＣＤＲ２領域、及び配列番号２２のＣＤＲ１領域を含む
ことを特徴とする。
一実施態様において、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法は、
重鎖可変ドメインは、配列番号２５のＣＤＲ３領域、配列番号２６のＣＤＲ２領域、及び配列番号２７のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２８のＣＤＲ３領域、配列番号２９のＣＤＲ２領域、及び配列番号３０のＣＤＲ１領域を含む
ことを特徴とする。
一実施態様において、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法は、
重鎖可変ドメインは、配列番号３３のＣＤＲ３領域、配列番号３４のＣＤＲ２領域、及び配列番号３５のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号３６のＣＤＲ３領域、配列番号３７のＣＤＲ２領域、及び配列番号３８のＣＤＲ１領域を含む
ことを特徴とする。
一実施態様において、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法は、
重鎖可変ドメインは、配列番号４１のＣＤＲ３領域、配列番号４２のＣＤＲ２領域、及び配列番号４３のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号４４のＣＤＲ３領域、配列番号４５のＣＤＲ２領域、及び配列番号４６のＣＤＲ１領域を含む
ことを特徴とする。
一実施態様において、抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４（配列番号６５）及びヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号６４）に１：５０又はそれ未満の比率で結合することを特徴する、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片Ｄ１−Ｄ３（配列番号６６）に結合しないことを更に特徴とする。
本発明の別の態様は、単独で、又は化学療法剤、又は癌免疫療法、又は放射線と併用して投与される（ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する全てのＣＳＦ−１Ｒ抗体を含む）、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体（ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する全てのＣＳＦ−１Ｒ抗体を含む）による治療から利益を受ける可能性のある患者の選択である。一実施態様において、その患者選択は、細胞外ドメインのドメインＤ４からＤ５に結合する、ヒトＣＳＦ−１Ｒの細胞外ドメインのドメインＤ４からＤ５に結合する抗体による治療に関する。以下の一以上のバイオマーカーは、そのような治療へ応答する可能性がある患者の選択のためのその方法において有用である。
バイオマーカーの評価の原理
バイオマーカーは、診断の戦略を成形し、治療管理に影響を与える可能性を有する。将来は、バイオマーカーは、個別化医療のアプローチを促進することができる、例えば、癌の型によってよりも、患者の腫瘍及び血液中のマーカーの分子シグネチャーによって患者のグループ化につながる。私たちは、その治療の有効性の可能性と安全性に関する情報を提供する、予測的バイオマーカーを識別する取り組みに集中している。
腫瘍に対する薬物のＰＤ及び機序効果を評価するために、腫瘍生検がしばしば必要とされる。
臨床試験での新鮮な治療前及び治療中の腫瘍生検の原理
ＴＡＭ浸潤および分化は、原発性および転移性病変におけるそれぞれの腫瘍微小環境に依存している。更に、患者の各免疫状態および前処置は、患者の腫瘍微小環境に影響を与えることができる。したがって、全ての患者は、ベースラインにおけるＴＡＭ浸潤及びＣＳＦ−１Ｒの発現レベルを定義するために強制的に治療前生検を受けるが、治験のために患者の適格性を判断するために使用されることはない。加えて、治療中の強制的な生検は、ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＤ６８／ＣＤ１６３、ＣＤ６８／ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ３１（微小血管密度）、Ｋｉ６７及び他の免疫浸潤細胞（例えばＴ細胞）の前後の投与量レベルを比較することにより、ＣＳＦ−１Ｒ抗体のＰＤ活性の評価を可能にする。マクロファージの亜集団分布は組織で評価する必要があるので、細針吸引（ＦＮＡ）は、腫瘍生検の代わりには適していない。
マクロファージ浸潤及び分化は微小環境に依存するため、アーカイブ腫瘍組織は、新鮮な生検の代わりにすることはできない。腫瘍微小環境は、患者の前治療に起因して原発腫瘍で変わりやすくてもく、並びに転移病巣で変わり得る。しかし、アーカイブ腫瘍組織が利用可能な場合は、臨床サンプル操作（ＣＳＯ）への提出が促される。サンプルは、新鮮な生検によるデータの探索的遡及的相関のために使用される。
臨床試験における負傷した皮膚生検についての原理
創傷治癒の異なる段階は多くのプロセス（例えば好中球動員、マクロファージ浸潤、血管新生(Eming, S.A., et al., Prog. Histochem. Cytochem. 42 (2007) 115-170)を必要とする。皮膚創傷アッセイは、例えば抗血管新生療法のＰＤマーカーを決定するための代用組織を得るために使用されている(Zhang, D. et al., Invest. New Drugs 25 (2006) 49-55; Lockhart, A.C. et al., Clin. Cancer Res. 9 (2003) 586-593)。創傷治癒の間に、マクロファージは、実質的な役割を果たし、創傷関連マクロファージ（ＷＡＭ）の表現型の変化は、皮膚修復の段階における異なる役割を説明する（例えば初期の炎症期＝強い食作用活性；中期組織リモデリング段階：血管新生促進因子の過剰発現を有する免疫調節状態）(Adamson, R., Journal of Wound Care 18 (2009) 349-351; Rodero, M.P. et al., Int. J. Clin. Exp. Pathol. 25 (2010) 643-653; Brancato, S.K. and Albina, J.E., Wound Macrophages as Key Regulators of Repair, Origin, Phenotype, and Function, AJP (2011) Vol. 178, No.1)。
実際、マクロファージの欠如は、遺伝子改変マウスにおいて創傷治癒の遅延をもたらした(Rodero, M.P. et al., Int. J. Clin. Exp. Pathol. 25 (2010) 643-653)。前臨床実験は、ＣＳＦ−１Ｒで処置したＭＤＡ−ＭＢ２３１異種移植マウスモデルの皮膚において、有意な（Ｆ４／８０陽性）マクロファージの減少を示した。しかし、マウスとヒトとの間の種特異的な差異が報告されている(Daley, J.M. et al., J. Leukoc. Biol. 87 (2009) 1-9)。
ＷＡＭ及びＴＡＭは、同一の前駆細胞に由来し、類似機能や表現型を共有するため、創傷治癒過程においてＷＡＭに関する、ＣＳＦ−１Ｒ抗体治療の薬力学効果を分析するために、処置前及び処置中（合計でｎ＝４）の一連の皮膚生検が使用できる。新鮮な腫瘍生検中のＴＡＭについて、ＣＳＦ−１Ｒ抗体治療のＰＤ効果と皮膚データとの相関は、ＣＳＦ−１Ｒ抗体がどのように動作するか、及びどのように腫瘍が応答しているのかの分子基盤に関する知識を著しく増やすことができる。
加えて、負傷した皮膚組織のマクロファージの評価は、治療中の腫瘍生検に代わる可能性がある。後の治験において、ＷＡＭの評価は、それゆえ、ＣＳＦ−１Ｒ抗体の有効性の評価における代用組織としての役目を果たし得る。
バイオマーカー又はＰＤマーカーを測定する全血サンプルにおけるバイオマーカーの測定の原理
前臨床実験は、循環性ＣＳＦ−１、ＴＲＡＰ５ｂ単球亜集団及び組織マクロファージの変化は、抗ＣＳＦ−１Ｒ治療薬の薬物活性に関連していることを示している。更に、ＣＳＦ−１Ｒ抗体治療カニクイザルからのＧＬＰ−Ｔｏｘデータは、骨形成のバイオマーカー（オステオカルシン、Ｐ１ＮＰ）、破骨細胞活性（ＴＲＡＰ５ｂ）及び副甲状腺ホルモンにおける変化（これらは全て骨代謝に相関した）を明らかにした。
従って、これらのマーカーと更なる循環性免疫刺激又は免疫阻害要因、並びに例えば水溶性ＣＤ１６３は（単球／マクロファージの活性化をモニターするため）、薬力学的変化を監視するため、及び抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体治療に良好に応答する可能性が高い患者の選択のために有用であり得る。
これらの代用組織標本は、（用量、安全性及び耐容性の観点で）ＣＳＦ−１Ｒ抗体治療に対する応答を予測するバイオマーカーを同定するための研究目的のために使用され、癌及び関連疾患の病因、経過及び転帰を理解するのに役立つであろう。分析は、ＣＳＦ−１Ｒ抗体のＰＤ活性に関連する循環マーカーの測定（サイトカインレベル、循環性免疫細胞及び免疫エフェクター細胞の枯渇の評価など）を含む。前臨床実験は、循環性ＣＳＦ−１、ＴＲＡＰ５ｂ単球亜集団及び組織マクロファージの変化は、薬物活性に関連していることを示している。更に、ＣＳＦ−１Ｒ抗体治療カニクイザルからのＧＬＰ−Ｔｏｘデータは、骨の形成のバイオマーカー（オステオカルシン、Ｐ１ＮＰ）、破骨細胞活性（ＴＲＡＰ５ｂ）及び副甲状腺ホルモンにおける変化（これらは全て破骨細胞数の減少に相関した）を明らかにした。
従って、これらのマーカー及び更なる循環性免疫刺激又は免疫阻害要因は、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体治療に良好に応答するであろう患者の選択に有用であり得る。
本発明の一態様は、癌を有する被験体が、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体に基づく癌治療レジメンの候補であるかどうかを決定するための方法であって、前記抗体は、
次のマーカー：ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＤ６８／ＣＤ１６３、ＣＤ６８／ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ３１（微小血管密度）、及びＫｉ６７、及び免疫浸潤物等の他のマーカー
の一以上のレベルを、被験体のサンプルにおいて、エキソビボ又はインビトロで決定することを含む、本発明の記載の抗体であり、
ここでサンプルは、組織、血液、血清、血漿、腫瘍細胞及び循環腫瘍細胞からなる群から選択され；
ここで、ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＤ６８／ＣＤ１６３、ＣＤ６８／ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ３１（微小血管密度）、及びＫｉ６７、及び免疫浸潤物（例えば、Ｔ細胞（例えばＣＤ４−Ｔ細胞及び／又はＣＤ８−Ｔ細胞）の一以上のレベルの変化は、癌に罹患していない個体における対応するレベルと比較して、被験体が抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ベースの癌治療レジメンの候補であることを示す。
一実施態様において、この方法は、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ベースの癌治療レジメンのための実施され、前記レジメンにおいて使用される抗体は、本発明の抗体である。
この方法の一実施態様において、ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＤ６８／ＣＤ１６３、ＣＤ６８／ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ３１（微小血管密度）、及びＫｉ６７、及び免疫浸潤物（例えば、Ｔ細胞（例えばＣＤ４−Ｔ細胞及び／又はＣＤ８−Ｔ細胞）の一以上のレベルの変化は、癌に罹患していない個体におけるレベルと比較して、これらのマーカーの一以上のレベルの増加である。
本発明の一態様は、癌を有する被験体が、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体に基づく癌治療レジメンの候補であるかどうかを決定するための方法であって、前記抗体は、次のマーカー：ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＤ６８／ＣＤ１６３、ＣＤ６８／ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ３１（微小血管密度）、及びＫｉ６７の一以上のレベルを、被験体のサンプルにおいて、エキソビボ又はインビトロで決定することを含む本発明の記載の抗体であり、
ここでサンプルは、血液、血清、血漿、腫瘍細胞及び循環腫瘍細胞からなる群から選択され；
ここで、ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＤ６８／ＣＤ１６３、ＣＤ６８／ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ３１（微小血管密度）、及びＫｉ６７のレベルの変化は、癌に罹患していない個体における対応するレベルと比較して、被験体が抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ベースの癌治療レジメンの候補であることを示す。
本発明の一態様は、癌を有する被験体が、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体に基づく癌治療レジメンの候補であるかどうかを決定するための方法であって、前記抗体は、次のマーカー：ＣＳＦ−１、Ｔｒａｐ５ｂ、ｓＣＤ１６３、ＩＬ−３４の一以上のレベルを、被験体のサンプルにおいて、エキソビボ又はインビトロで決定することを含む本発明の記載の抗体であり、
ここでサンプルは、血液、血清、血漿、腫瘍細胞（例えば、腫瘍組織のサンプルの形で）及び循環腫瘍細胞からなる群から選択され；
ここで、ＣＳＦ−１、Ｔｒａｐ５ｂ、ｓＣＤ１６３、ＩＬ−３４の一以上のレベルの変化は、癌に罹患していない個体における対応するレベルと比較して、被験体が抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ベースの癌治療レジメンの候補であることを示す。
一実施態様において、この方法は、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ベースの癌治療レジメンのための実施され、前記レジメンにおいて使用される抗体は、本発明の抗体である。
この発明の一実施態様において、ＣＳＦ−１、Ｔｒａｐ５ｂ、ｓＣＤ１６３、ＩＬ−３４のレベルの変化は、癌に罹患していない個体における対応するレベルと比較して、これらのバイオマーカーの一以上のレベルの変化である。
本発明の一態様は、癌を有する被験体が、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体に基づく癌治療レジメンの候補であるかどうかを決定するための方法であって、前記抗体は、
次のマーカー：ＣＳＦ−１、Ｔｒａｐ５ｂ、ｓＣＤ１６３、ＩＬ−３４の一以上のレベルを、被験体のサンプルにおいて、エキソビボ又はインビトロで決定することを含む本発明の記載の抗体であり、
ここでサンプルは、血液、血清、血漿、腫瘍細胞及び循環腫瘍細胞からなる群から選択され；
ここで、ＣＳＦ−１、Ｔｒａｐ５ｂ、ｓＣＤ１６３、ＩＬ３４のレベルの変化は、癌に罹患していない個体における対応するレベルと比較して、被験体が抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ベースの癌治療レジメンの候補であることを示す。
本発明の一態様は、癌を有する被験体が、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体に基づく癌治療レジメンの候補であるかどうかを決定するための方法であって、前記抗体は、マーカー：ｓＣＤ１６３の一以上のレベルを、被験体のサンプルにおいて、エキソビボ又はインビトロで決定することを含む本発明の記載の抗体であり；
ここでサンプルは、血液、血清、血漿、腫瘍細胞及び循環腫瘍細胞からなる群から選択され；
ここで、ｓＣＤ１６３のレベルの変化は、癌に罹患していない個体における対応するレベルと比較して、被験体が抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ベースの癌治療レジメンの候補であることを示す。
一実施態様において、この方法は、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ベースの癌治療レジメンのための実施され、前記レジメンにおいて使用される抗体は、本発明の抗体である。
本発明の一実施態様においてｓＣＤ１６３のレベルの変化は、癌に罹患していない個体における対応するレベルと比較して、このバイオマーカーのレベルの増加である。
本発明の一態様は、癌を有する被験体が、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体に基づく癌治療レジメンの候補であるかどうかを決定するための方法であって、前記抗体は、次のマーカー：ｓＣＤ１６３の一以上のレベルを、被験体のサンプルにおいて、エキソビボ又はインビトロで決定することを含む本発明の記載の抗体であり；
ここでサンプルは、血液、血清、血漿、腫瘍細胞及び循環腫瘍細胞からなる群から選択され；
ここで、ｓＣＤ１６３のレベルの変化は、癌に罹患していない個体における対応するレベルと比較して、被験体が抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ベースの癌治療レジメンの候補であることを示す。
本発明の一態様は、癌を有する被験体が、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体に基づく癌治療レジメンの候補であるかどうかを決定するための方法であって、前記抗体は、
次のマーカー：ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＭＣＰ−１、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ２２、ＭＩＰ−１、ガレクチン３、ＩＬ１Ｒａ、ＴＧＦアルファの一以上のレベルを、被験体のサンプルにおいて、エキソビボ又はインビトロで決定することを含む本発明の記載の抗体であり；
ここでサンプルは、血液、血清、血漿、腫瘍細胞及び循環腫瘍細胞からなる群から選択され；
ここで、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＭＣＰ−１、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ２２、ＭＩＰ−１、ガレクチン３、ＩＬ１Ｒａ、ＴＧＦアルファの一以上のレベルの変化は、癌に罹患していない個体における対応するレベルと比較して、被験体が抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ベースの癌治療レジメンの候補であることを示す。
一実施態様において、この方法は、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ベースの癌治療レジメンのための実施され、前記レジメンにおいて使用される抗体は、本発明の抗体である。
本方法の一実施態様において、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＭＣＰ−１、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ２２、ＭＩＰ−１、ガレクチン３、ＩＬ１Ｒａ、ＴＧＦアルファのレベルの変化は、癌に罹患していない個体における対応するレベルと比較して、これらのバイオマーカーの一以上のレベルの増加である。
本発明の一態様は、癌を有する被験体が、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体に基づく癌治療レジメンの候補であるかどうかを決定するための方法であって、前記抗体は、次のマーカー：ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＭＣＰ−１、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ２２、ＭＩＰ−１、ガレクチン３、ＩＬ１Ｒａ、ＴＧＦアルファの一以上のレベルを、被験体のサンプルにおいて、エキソビボ又はインビトロで決定することを含む本発明の記載の抗体であり；
ここでサンプルは、血液、血清、血漿、腫瘍細胞及び循環腫瘍細胞からなる群から選択され；
ここで、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＭＣＰ−１、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ２２、ＭＩＰ−１、ガレクチン３、ＩＬ１Ｒａ、ＴＧＦアルファのレベルの変化は、癌に罹患していない個体における対応するレベルと比較して、被験体が抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ベースの癌治療レジメンの候補であることを示す。
「抗体」なる用語は、様々な形態の抗体を包含し、限定するものではないが、完全抗体、抗体断片、ヒト化抗体、キメラ抗体、Ｔ細胞エピトープ欠失抗体、及び発明による特性が保持されるならば、更なる遺伝子組み換え抗体を含む。「抗体断片」とは、完全長抗体の一部を含み、好ましくはその可変ドメイン、又は少なくともその抗原結合部位を含む。抗体断片の例は、ダイアボディ、単鎖抗体分子、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体を含む。ｓｃＦｖ抗体は、例えばHuston, J.S., Methods in Enzymol. 203 (1991) 46-88に記載されている。更に、抗体断片は、機能的抗原結合部位に、ＣＳＦ−１Ｒに結合するＶＨドメインの特性（すなわちＶＬドメインと組み合わさることが可能）、又はＣＳＦ−１Ｒに結合するＶＬドメインの特性（すなわちＶＨドメインと組み合わさることが可能）を有する単鎖ポリペプチドを含み、これにより特性を与える。
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」は、単一アミノ酸組成物の抗体分子の調製物を意味する。
「キメラ抗体」なる用語は、マウスからの可変領域、すなわち結合領域、及び異なる共有源又は種由来の定常領域の少なくとも一部を含んでなるモノクローナル抗体を指し、通常、組換えＤＮＡ技術によって調製される。マウス可変領域及びヒト定常領域を含んでなるキメラ抗体が特に好ましい。このようなラット／ヒトキメラ抗体は、ラット免疫グロブリン可変領域をコードするＤＮＡセグメント、及びヒト免疫グロブリン定常領域をコードするＤＮＡセグメントを含んでなる免疫グロブリン遺伝子の発現産物である。本発明に包含される「キメラ抗体」の他の形態は、クラス又はサブクラスが元の抗体の形態から修飾又は変更されたものである。このような「キメラ」抗体は、「クラススイッチ抗体」とも呼ばれる。キメラ抗体の生産方法は、一般的な組換えＤＮＡ及び現在当分野でよく知られている遺伝子トランスフェクション技術を含む。例えば、Morrison, S.L., et al., Proc. Natl. Acad Sci. USA 81 (1984) 6851-6855；米国特許第５，２０２，２３８号及び第５，２０４，２４４号を参照のこと。
用語「ヒト化抗体」は、フレームワーク又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）が、親免疫グロブリンのものと比較して、異なる特異性の免疫グロブリンのＣＤＲを含むように修飾された抗体を意味する。好ましい実施態様では、マウスＣＤＲが、「ヒト化抗体」を調製するためのヒト抗体のフレームワーク領域に移植される。例えば、Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327; and Neuberger, M.S., et al., Nature 314 (1985) 268-270を参照。任意で、フレームワーク領域は、更なる突然変異によって改変することができる。また、ＣＤＲは、本発明による抗体を生成するために、例えば、Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327 及びQueen, C., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 (1989) 10029-10033、その他により記述されるように、分子モデリングに基づいた変異誘発により、一以上の変異により改変されうる。特に好ましいＣＤＲは、キメラ抗体について上記のように抗原を認識する配列を表すものに対応する。「本発明による抗体のヒト化バージョン」（例えば、マウス起源である）は、ＶＨ及びＶＬが標準的技術によりヒト化されたマウス抗体配列に基づいた（ＣＤＲ移植、及び任意でフレームワーク領域及びＣＤＲの所定のアミノ酸のその後の変異誘発を含む）抗体を意味する。好ましくは、そのヒト化バージョンは、ヒト定常領域とキメラ化される（例えば、配列の配列番号５７−６１を参照）。
本発明により包含される「ヒト化抗体」の他の形態は、特にＣ１ｑ結合及び／又はＦｃ受容体（ＦｃＲ）結合に関する本発明の特性を生成するために、定常領域が元の抗体のそれから更に修飾または変更されているものである。
以下の実施例においては、用語「Ｍａｂ」又は「ｍｕＭＡｂ」は、Ｍａｂ ２Ｆ１１又はＭａｂ ２Ｅ１０などのマウスモノクローナル抗体を指し、一方、用語「ｈＭＡｂ」は、Ｍａｂ ２Ｆ１１−ｃ１１、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｄ８、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｆ１２などのマウス抗体のヒト化モノクローナルバージョンを指す。
本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列から由来する可変及び定常領域を有する抗体を含むことを意図している。ヒト抗体は従来技術でよく知られている（van Dijk, M.A.及び van de Winkel, J.G., Curr. Opin. Chem. Biol. 5(2001) 368-374）。またヒト抗体は、免疫時に、内在性免疫グロブリン産生の欠損下において、ヒト抗体の選択、又は全レパートリーを生成可能なトランスジェニック動物（例えばマウス）で産生可能である。このような生殖系列変異マウスにおける、ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移動により、抗原曝露でヒト抗体が産生される（例えば、Jakobovits, A., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 2551-2555; Jakobovits, A., et al., Nature 362 (1993) 255-258; Brueggemann, M., et al., Year Immunol. 7 (1993) 33-40を参照）。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーで産生することができる（Hoogenboom, H.R., and Winter, G., J. Mol. Biol. 227 (1992) 381-388; Marks, J.D., et al., J. Mol. Biol. 222 (1991) 581-597）。ヒトモノクローナル抗体の調製について、ＣｏｌｅらとＢｏｅｒｎｅｒらの技術も利用可能である(Cole, S.P.C., et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985)；及びBoerner, P., et al., J. Immunol. 147 (1991) 86-95）。本発明に係るキメラ及びヒト化抗体について既に述べたように、本発明で使用される「ヒト化抗体」はまた、とりわけＣ１ｑ結合及び／又はＦｃＲ結合に関して、例えば「クラススイッチ」即ちＦｃ部分の変化又は変異（例えばＩｇＧ１からＩｇＧ４及び／又はＩｇＧ１／ＩｇＧ４変異）によって、本発明に係る特性を生み出すために、定常領域で修飾された抗体を含む。
本発明で使用される場合、用語「組換えヒト抗体」は、宿主細胞に形質移入された組換え発現ベクターを使用して発現したヒト免疫グロブリン遺伝子又は抗体用にトランスジェニックである動物（例えばマウス）から、又はＮＳ０又はＣＨＯ細胞等の宿主細胞から単離された抗体等、組換え手段により調製、発現、生成又は単離された全てのヒト抗体を含むことを意図している。このような組換えヒト抗体は、再配列された形態で、可変及び定常領域を有する。本発明の組換えヒト抗体は、インビボ体細胞突然変異を受ける。従って、組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒトの生殖系列のＶＨ及びＶＬ配列に由来し関連しているが、インビボでヒト抗体生殖系列のレパートリーのうちに存在しない可能性がある配列である。
本発明による抗体は更に、本発明による抗体の上記特性に影響しない又は変更しない「保存配列修飾」、ヌクレオチド及びアミノ酸配列修飾を有する抗体を含む。改変は当分野で知られている標準的な技術、例えば部位特異的変異誘発及びＰＣＲ変異誘発によって導入されることができる。保存アミノ酸置換は、アミノ酸残基が、類似な側鎖を有するアミノ酸残基で置換されるものを含む。類似な側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当分野で定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。このように、ヒト抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体における予測非必須アミノ酸残基は、好ましくは同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置換される。
アミノ酸置換は、Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327 及びQueen, C., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 (1989) 10029-10033に記載される分子モデリングに基づく変異誘発によって実施されうる。
ヒトＣＳＦ−１Ｒ（ＣＳＦ−１受容体；同義語：Ｍ−ＣＳＦ受容体；マクロファージコロニー刺激因子１受容体、Ｆｍｓ癌原遺伝子、ｃ−ｆｍｓ、配列番号２２）は、１９８６年から公知である（Coussens, L., et al., Nature 320 (1986) 277-280）。ＣＳＦ−１Ｒは増殖因子であり、ｃ−ｆｍｓ癌原遺伝子によってコードされている（例えばRoth, P. and Stanley, E.R., Curr. Top. Microbiol. Immunol. 181 (1992) 141-67に概説される）。
ＣＳＦ−１Ｒは、ＣＳＦ−１ＲリガンドのＣＳＦ−１（マクロファージコロニー刺激因子、ＣＳＦ−１とも呼ばれる）（配列番号８６）及びＩＬ−３４（配列番号８７）の受容体であり、このサイトカインの生物学的効果を媒介する（Sherr, C.J., et al., Cell 41 (1985) 665-676; Lin, H., et al., Science 320 (2008) 807-811）。コロニー刺激因子（ＣＳＦ−１Ｒ）（ｃ−ｆｍｓとも呼ばれる）のクローニングは、最初にRoussel, M.F., et al., Nature 325 (1987) 549-552に記載された。この刊行物では、ＣＳＦ−１Ｒは、Ｃｂｌと結合し、それによって受容体のダウンレギュレーションを調節する、抑制性チロシン９６９リン酸化の喪失を含む、タンパク質のＣ末端尾部の変化に依存した形質転換能を有することが示された（Lee, P.S., et al., Embo J. 18 (1999) 3616-3628）。
ＣＳＦ−１Ｒは単鎖の、膜貫通受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）であり、受容体の細胞外部分における反復Ｉｇドメインによって特徴付けられるＲＴＫを有する免疫グロブリン（Ｉｇ）モチーフのファミリーのメンバーである（Wang, Z., et al Molecular and Cellular Biology 13 (1993) 5348-5359）。ヒトＣＳＦ−１Ｒの細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）（配列番号６４）は、５つ全ての細胞外Ｉｇ様サブドメインＤ１−Ｄ５を含む。ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４（配列番号６５）は、細胞外Ｉｇ様サブドメインＤ１−Ｄ３及びＤ５を含むが、Ｄ４サブドメインが欠損している。ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片のＤ１−Ｄ３（配列番号６６）は、それぞれのサブドメインＤ１−Ｄ３を含む。その配列は、シグナルペプチドＭＧＳＧＰＧＶＬＬＬＬＬＶＡＴＡＷＨＧＱＧを含まずに一覧される（配列番号６７）。ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片のＤ４−Ｄ３（配列番号８５）は、それぞれのサブドメインＤ４−Ｄ３を含む。
現在、ＣＳＦ−１Ｒの細胞外ドメインに結合する２つのＣＳＦ−１Ｒリガンドが知られている。最初のものは、ＣＳＦ−１（コロニー刺激因子１、Ｍ−ＣＳＦ、マクロファージとも呼ばれる；ヒトＣＳＦ−１、配列番号８６）であり、ジスルフィド結合したホモ二量体として細胞外に見いだされる（Stanley, E.R. et al., Journal of Cellular Biochemistry 21 (1983) 151-159; Stanley, E.R. et al., Stem Cells 12 Suppl. 1 (1995) 15-24）。第二のものは、ＩＬ−３４である（ヒトＩＬ−３４；配列番号８７）（Hume, D. A. , et al, Blood 119 (2012) 1810-1820）。このように、一実施態様において、用語「ＣＳＦ−１Ｒリガンド」は、ヒトＣＳＦ−１（配列番号８６）及び／又はヒトＩＬ−３４（配列番号８７）を指す。
実験には、しばしば、ヒトＣＳＦ−１の活性な１４９アミノ酸（ａａ）断片（配列番号８６のａａ３３−１８１）が用いられる。ヒトＣＳＦ−１のこの活性な１４９ａａ断片（配列番号８６のａａ３３−１８１）は、ＣＳＦ−１の３つ全ての主要な形態に含まれる (Hume, D. A. , et al, Blood 119 (2012) 1810-1820)。
ＣＳＦ−１Ｒシグナル伝達の主な生物学的作用は、造血前駆細胞のマクロファージ系統（破骨細胞含む）への分化、増殖、遊走、及び生存である。ＣＳＦ−１Ｒの活性化は、そのＣＳＦ−１Ｒリガンド、ＣＳＦ−１（Ｍ−ＣＳＦ）及びＩＬ−３４によって媒介される。ＣＳＦ−１ＲへのＣＳＦ−１（Ｍ−ＣＳＦ）の結合は、ホモ二量体の形成及びチロシンリン酸化によるキナーゼの活性化を誘導する（Li, W. et al, EMBO Journal.10 (1991) 277-288; Stanley, E.R., et al., Mol. Reprod. Dev. 46 (1997) 4-10）。
細胞内タンパク質チロシンキナーゼドメインは、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、幹細胞増殖因子受容体（ｃ−Ｋｉｔ）及びｆｉｎｓ様サイトカイン受容体（ＦＬＴ３）を含む他の関連ＲＴＫクラスＩＩＩファミリーにも存在する特有な挿入ドメインを挟む。増殖因子受容体のこのファミリー間の構造的相同性にもかかわらず、それらは異なる組織特異的機能を有する。
ＣＳＦ−１Ｒは、単球系の細胞上及び女性生殖器官及び胎盤に主に発現される。更に、ＣＳＦ−１Ｒの発現は、皮膚のランゲルハンス細胞、平滑筋細胞のサブセット（Inaba, T., et al., J. Biol. Chem. 267 (1992) 5693-5699）、Ｂ細胞（Baker, A.H., et al., Oncogene 8 (1993) 371-378）及びマイクログリア（Sawada, M., et al., Brain Res. 509 (1990) 119-124）において報告されている。変異体ヒトＣＳＦ−１Ｒ（配列番号２３）を含む細胞は、独立して、リガンド刺激を増殖することが知られている。
本明細書で使用されるように、「ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する」又は「ヒトＣＳＦ−１Ｒに特異的に結合する」とは、ヒトＣＳＦ−１Ｒ抗原に対して、３５℃でＫＤ値が１．０ｘ１０−８ｍｏｌ／ｌ以下、一実施態様においては３５℃でＫＤ値が１．０ｘ１０−９ｍｏｌ／ｌ以下の結合親和性で特異的に結合する抗体を言う。結合親和性は、３５℃で標準的な結合アッセイ、例えば表面プラズモン共鳴法（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）、GE-Healthcare Uppsala, Sweden）により決定される。結合親和性のＫＤ−値を決定するための方法は、実施例９に記載されている。本明細書で使用される「ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体」は、ヒトＣＳＦ−１Ｒ抗原に対して、３５℃で、ＫＤ １．０ｘ１０−８ｍｏｌ／ｌ以下（好ましくは１．０ｘ１０−８ｍｏｌ／ｌ−１．０ｘ１０−１２ｍｏｌ／ｌ））の結合親和性で、好ましくは３５℃でＫＤ １．０ｘ１０−９ｍｏｌ／ｌ以下（好ましくは、１．０ｘ１０−９ｍｏｌ／ｌ−１．０ｘ１０−１２ｍｏｌ／ｌ）の結合親和性で、特異的に結合する抗体を言う。
「ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４（配列番号６５）及びヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号６４）への結合」は、実施例４に記載されるように表面プラズモン共鳴アッセイ（Ｂｉａｃｏｒｅアッセイ）により測定される。ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４（配列番号６５）及びヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号６４）は、それぞれ、表面に（別の面にそれぞれ）捕獲され、そして試験抗体が加えられ（各々は別の測定で）、それぞれの結合シグナル（応答単位（ＲＵ））が決定された。参照シグナル（ブランク面）を差し引いた。非結合性試験抗体のシグナルが僅かに０未満である場合、値は０に設定された。次いで、それぞれの結合シグナルの比率（ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４への結合シグナル（ＲＵ）／ヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）への結合シグナル（ＲＵ））が決定される。本発明による抗体は、結合シグナルの比率（ＲＵ（ｄｅｌＤ４）／ＲＵ（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）が１：５０以下、好ましくは、１：１００以下を有する（含まれる下限は０である（例えば、ＲＵが０であれば、比率は０：５０又は０：１００）である）。
これは、本発明によるその抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４に結合せず（抗ＣＣＲ５抗体ｍ＜ＣＣＲ５＞Ｐｚ０３．１Ｃ５（ＤＳＭＺに２００４年８月１８日にＤＳＭ ＡＣＣ ２６８３として寄託）など）、実施例４に示すように、表面プラズモン共鳴（ビアコア）アッセイで２０ＲＵ（応答単位）未満、好ましくは１０ＲＵ未満である、抗ＣＣＲ５抗体ｍ＜ＣＣＲ５＞Ｐｚ０３．１Ｃ５の範囲内で、ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４に対する結合の結合シグナルを有している。
用語「ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片Ｄ１−Ｄ３への結合」は、表面プラズモン共鳴アッセイ（ビアコアアッセイ）による結合親和性の決定を言う。試験抗体は、表面に捕獲され、ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片Ｄ１−Ｄ３（配列番号６６）が添加され、各結合親和性が決定された。用語「ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片Ｄ１−Ｄ３に結合しない」又は「ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片Ｄ１−Ｄ３に結合しない」は、そのアッセイで、検出されたシグナルが、バックグランドシグナルの僅か１．２倍の範囲であり、従って、有意な結合が検出できず、結合親和性を決定できなかった示している（実施例１０）。
本発明の一実施態様は、以下の工程：
ａ）表面プラズモン共鳴アッセイ（ビアコアアッセイ）により、ヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）（配列番号６４）に対する抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の結合を測定し、
ｂ）抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の、ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片Ｄ１−Ｄ３（配列番号６６）（Ｄ１−Ｄ３）に対する抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の結合を測定し、
ｃ）ヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）に特異的に結合し、ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片Ｄ１−Ｄ３（配列番号６６）（Ｄ１−Ｄ３）に結合しない抗体を選択すること
を含む本発明による併用療法に有用な抗体の選択のためのスクリーニング法である。
本発明の一実施態様は、以下の工程：
ａ）抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の、ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４（配列番号６５）に対する、及びＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）（配列番号６４）に対する結合シグナル（応答単位）を、表面プラズモン共鳴アッセイ（ビアコアアッセイ）により決定し、
ｂ）結合シグナルの比率（ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４／ヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ））が５０：１以下である抗体を選択すること
を含む本発明による抗体の選択のためのスクリーニング法である
一実施態様において、決定は２５℃で実施される。
一実施態様において、スクリーニング法は、更なる工程として、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体のヒトＣＳＦ−１Ｒ断片Ｄ１−Ｄ３（配列番号６６）（Ｄ１−Ｄ３）への結合を測定し、そして前記断片に結合を示さない抗体を選択することを含む。
「エピトープ」なる用語は、抗体に特異的に結合することが可能なタンパク質決定因子を意味する。エピトープは、通常、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面のグルーピングからなり、通常エピトープは特異的な３次元構造の特徴並びに特異的な電荷特性を有する。コンホメーション及び非コンホメーションエピトープは、変性溶媒の存在において、後者ではなく、前者への結合が失われることにおいて区別される。好ましくは、本発明による抗体は、天然型及び変性ＣＳＦ−１Ｒに特異的に結合する。
本明細書で使用される「可変ドメイン」（軽鎖の可変ドメイン（ＶＬ）、重鎖の可変ドメイン（ＶＨ））は、抗体を抗原に結合させることに直接関与する軽鎖及び重鎖の対のそれぞれを示す。軽鎖及び重鎖ドメインは同じ一般構造を有し、各ドメインは、その配列が広範囲に保存され、３つの「高頻度可変領域」（又は相補性決定領域、ＣＤＲ）により結合されている４つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含む。フレームワーク領域はβシート立体構造を採り、ＣＤＲはβシート構造を連結するループを形成しうる。各鎖のＣＤＲは、フレームワーク領域によりその３次元構造で保持され、他の鎖のＣＤＲと共に抗原結合部位を形成する。抗体の重鎖及び軽鎖ＣＤＲ３領域は、本発明に係る抗体の結合特異性／親和性に特に重要な役割を果たし、よって本発明の更なる目的を提供する。
「抗体の抗原結合部位」は、本明細書で使用されるとき、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。抗体の抗原結合部位は、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基を含む。「フレームワーク」又は「ＦＲ」領域は、ここで定義する高頻度可変領域の残基以外の可変ドメイン残基である。従って、抗体の軽鎖及び重鎖可変ドメインは、ＮからＣ末端に、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４を含む。特に、重鎖のＣＤＲ３は、抗原結合に最も寄与する領域であり、抗体の特性を定める。ＣＤＲ及びＦＲは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)の標準的定義に従って決定され、及び／又は「超可変ループ」からの残基である。
本発明で使用される「核酸」又は「核酸分子」なる用語は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含むことを意図している。核酸分子は一本鎖又は二本鎖であってよいが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
この出願中において使用される「アミノ酸」なる用語は、アラニン（３文字コード：ａｌａ、１文字コード：Ａ）、アルギニン（ａｒｇ、Ｒ）、アスパラギン（ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（ａｓｐ、Ｄ）、システイン（ｃｙｓ、Ｃ）、グルタミン（ｇｌｎ、Ｑ）、グルタミン酸（ｇｌｕ、Ｅ）、グリシン（ｇｌｙ、Ｇ）、ヒスチジン（ｈｉｓ、Ｈ）、イソロイシン（ｉｌｅ、Ｉ）、ロイシン（ｌｅｕ、Ｌ）、リジン（ｌｙｓ、Ｋ）、メチオニン（ｍｅｔ、Ｍ）、フェニルアラニン（ｐｈｅ、Ｆ）、プロリン（ｐｒｏ、Ｐ）、セリン（ｓｅｒ、Ｓ）、スレオニン（ｔｈｒ、Ｔ）、トリプトファン（ｔｒｐ、Ｗ）、チロシン（ｔｙｒ、Ｙ）、及びバリン（ｖａｌ、Ｖ）を含む天然に生じるカルボキシα−アミノ酸の群を示す。
一実施態様において、本発明による抗体は、ＣＳＦ−１ＲへのＣＳＦ−１の結合を阻害する。一実施態様においてはＩＣ５０が２００ｎｇ／ｍｌ以下で、一実施態様においてはＩＣ５０が５０ｎｇ／ｍｌ以下で。ＣＳＦ−１ＲへのＣＳＦ−１の結合の阻害のＩＣ５０は、実施例２に示されるように決定することができる。
一実施態様において、本発明による抗体は、ＣＳＦ−１誘導性ＣＳＦ−１Ｒリン酸化を（ＮＩＨ３Ｔ３−ＣＳＦ−１Ｒ組換え細胞で）阻害する。
一実施態様においては、ＩＣ５０が８００ｎｇ／ｍｌ以下で、一実施態様においてはＩＣ５０が６００ｎｇ／ｍｌ以下で、一実施態様においてはＩＣ５０が２５０ｎｇ／ｍｌ以下で。ＣＳＦ−１誘導性ＣＳＦ−１Ｒリン酸化のＩＣ５０は、実施例３に示されるように決定することができる。
一実施態様において、本発明による抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒ（配列番号６２）を発現する組換えＮＩＨ３Ｔ３の増殖を阻害する。一実施態様においては、ＩＣ５０が１０μｇ／ｍｌ以下で、一実施態様においてはＩＣ５０が５μｇ／ｍｌ以下で、一実施態様においてはＩＣ５０が２μｇ／ｍｌ以下で。一実施態様においては、ＩＣ３０が１０μｇ／ｍｌ以下で、一実施態様においてはＩＣ３０が５μｇ／ｍｌ以下で、一実施態様においてはＩＣ３０が２μｇ／ｍｌ以下で。ＩＣ５０の値、ＩＣ３０の値又は増殖阻害の％は、実施例３に示されるように決定される。
一実施態様において、本発明による抗体は、ヒト変異体ＣＳＦ−１Ｒ Ｌ３０１Ｓ Ｙ９６９Ｆ（配列番号６３）を発現する組換えＮＩＨ３Ｔ３の増殖を阻害する。一実施態様においてはＩＣ５０が１５μｇ／ｍｌ以下で、一実施態様においてはＩＣ５０が１０μｇ／ｍｌ以下で。一実施態様においては、ＩＣ３０が１０μｇ／ｍｌ以下で、一実施態様においてはＩＣ５０が５μｇ／ｍｌ以下で、一実施態様においてはＩＣ５０が２μｇ／ｍｌ以下で。ＩＣ５０の値、ＩＣ３０の値又は増殖阻害の％は、実施例５に示されるように決定される。
一実施態様において、本発明による抗体は、ＢｅＷｏ腫瘍細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ−９８）の増殖を（抗体濃度が１０μｇ／ｍｌで；抗体非存在下と比較した場合）６５％阻害する。増殖阻害の％は、実施例８に示すように決定される。例えば、Ｍａｂ ２Ｆ１１は、ＢｅＷｏ腫瘍細胞の７０％の増殖阻害を示す。
一実施態様において、本発明による抗体は、ヒト及びカニクイザル（両方の）マクロファージ分化を阻害する（実施例７および８に示すように、ヒトおよびカニクイザル単球の生存の抑制によって示される）。一実施態様においては、本発明による抗体は、ＩＣ５０が０．１５μｇ／ｍｌ以下で、一実施態様においてはＩＣ５０が０．１０μｇ／ｍｌ以下で、ヒト単球の生存を阻害する。ヒト単球の生存の阻害は、実施例７に示すように決定される。一実施態様において、本発明による抗体は、カニクイザル単球の生存を（抗体濃度が５μｇ／ｍｌで；抗体非存在下と比較した場合）８０％以上、一実施態様においては９０％以上阻害する。ヒト単球の生存の阻害は、実施例８に示すように決定される。
本発明の更なる実施態様は、本発明によるヒトＣＳＦ−１Ｒに結合するヒトＩｇＧ１クラスの抗体の重鎖をコードする核酸、及び前記抗体の軽鎖をコードする核酸の配列が発現ベクターに挿入され、前記ベクターが真核生物宿主細胞に挿入され、コードされたタンパク質が発現されて宿主細胞又は上清から回収されることを特徴とするＣＳＦ−１Ｒに対する抗体の生成の方法である。
本発明による抗体は、好ましくは組換え手段によって生成される。従って、抗体は、好ましくは単離されたモノクローナル抗体である。そうした組換え法は先端技術で広く知られており、原核細胞および真核細胞におけるタンパク質の発現を含み、その後の抗体ポリペプチドの単離、及び通常は薬学的に許容される純度までの精製を伴う。タンパク質発現のために、軽鎖および重鎖またはその断片をコードする核酸は標準的な方法によって発現ベクターに挿入される。発現は、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ細胞、酵母、または大腸菌細胞などの適当な原核生物または真核生物宿主細胞中で行われ、抗体は細胞（上清または溶解後の細胞）から回収される。
組換えによる抗体の生成は、最新技術分野において周知であり、例えば、Makrides, S.C., Protein Expr. Purif. 17 (1999) 183-202; Geisse,S., et al., Protein Expr. Purif. 8 (1996) 271-282; Kaufman, R.J., Mol.Biotechnol. 16 (2000) 151-161; Werner, R.G., Drug Res. 48 (1998) 870-880の総説に記載されている。
抗体は、細胞全体に、細胞溶解物中に、又は部分精製形態あるいは実質的に純粋な形態で存在してもよい。細胞成分又は他の汚染物、例えば他の細胞核酸又はタンパク質を除去するために、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンド形成、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動、及び当技術分野で周知の他のものを含む標準的な技術によって、精製が行われる。Ausubel, F., et al., ed. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York (1987)を参照。
ＮＳ０細胞における発現は、例えば、Barnes, L.M., et al., Cytotechnology 32 (2000) 109-123；及びBarnes, L.M., et al., Biotech. Bioeng. 73 (2001) 261-270に記述される。一過性発現は、例えばDurocher, Y., et al., Nucl. Acids. Res. 30 (2002) E9に記述される。可変ドメインのクローニングは、Orlandi, R., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 (1989) 3833-3837; Carter, P., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 (1992) 4285-4289；及びNorderhaug, L., et al., J. Immunol. Methods 204 (1997) 77-87に記述される。好適な一過性発現系（ＨＥＫ２９３）は、 Schlaeger, E.-J., and Christensen, K., in Cytotechnology 30 (1999) 71-83及びSchlaeger, E.-J., in J. Immunol. Methods 194 (1996) 191-199により記述される。
原核生物に適している制御配列は、例えば、プロモーター、必要に応じてオペレーター配列、及びリボソーム結合部位を含む。真核細胞は、プロモーター、エンハンサーおよびポリアデニル化シグナルを利用することが知られている。
核酸は、他の核酸配列と機能的な関係にあるときに「操作可能に結合し」ている。例えば、プレ配列又は分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に参画するプレタンパク質として発現されている場合、そのポリペプチドのＤＮＡに操作可能に結合している；プロモーター又はエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に操作可能に結合している；又はリボソーム結合部位は、もしそれが翻訳を容易にするような位置にある場合、コード配列と操作可能に結合している。一般に、「作動可能に連結した」とは、連結しているＤＮＡ配列は連続しており、分泌リーダーの場合には、リーディング・フレームにあり連続している。しかし、エンハンサーは連続している必要はない。連結は、好都合な制限部位での連結反応によって達成される。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプター又はリンカーは、従来の慣例に従って使用される。
モノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製手順、例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、又はアフィニティークロマトグラフィーなどによって培養培地から適切に分離される。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡ及びＲＮＡは容易に単離され、従来の手順を用いて配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、ＤＮＡとＲＮＡの供給源として機能することができる。一度単離されると、ＤＮＡは、発現ベクターに挿入することができ、これらは次いで、本来ならば免疫グロブリンタンパク質を生成しないＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞、またはミエローマ細胞などの宿主細胞中にトランスフェクトされ、宿主細胞中で組換えモノクローナル抗体の合成を得る。
本明細書中で用いる「細胞」、「細胞株」及び「細胞培養物」なる表現は相互に交換可能に用いられ、かかる標記は子孫を含む。よって、「形質転換体」や「形質転換細胞」のような用語には、初代対象細胞と何世代移行したかを問わずそれから由来した培養物とを含む。全ての子孫が、意図的な突然変異あるいは意図せざる突然変異のため、正確に同一のＤＮＡ内容であるわけではないことも理解される。最初に形質転換された細胞に対してスクリーニングされたものと同じ機能あるいは生物的活性を有する変異型子孫も含まれる。
抗体の「Ｆｃ部分」は、抗体の抗原への結合に直接的にかかわらないが、様々なエフェクター機能を示す。「抗体のＦｃ部分」は当業者に良く知られており、抗体のパパイン切断に基づいて定義される。重鎖の定常領域のアミノ酸配列に応じて、抗体又は免疫グロブリンは、クラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭに分けられ、これらの幾つかはサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、ＩＧＡ１、及びＩｇＡ２に更に分けられる。重鎖の定常領域に従って、免疫グロブリンの異なるクラスは、それぞれα、δ、ε、γ及びμと呼ばれる。抗体のＦｃ部分は、補体活性化は、Ｃ１ｑの結合及びＦｃ受容体結合に基づいて、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害）及びＣＤＣ（補体依存性細胞傷害）に直接関与している。補体活性（ＣＤＣ）は、ほとんどのＩｇＧ抗体サブクラスの定常領域に対する補体因子Ｃ１ｑの結合により開始される。補体系に対する抗体の影響は、特定の状態に依存するが、Ｃ１ｑへの結合は、Ｆｃ部分に定められた結合部位により引き起こされる。そのような結合部位は、当技術分野において公知であり、例えばBoackle, R.J., et al., Nature 282 (1979) 742-743; Lukas, T.J., et al., J. Immunol. 127 (1981) 2555-2560; Brunhouse, R., and Cebra, J.J., Mol. Immunol. 16 (1979) 907-917; Burton, D.R., et al., Nature 288 (1980) 338-344; Thommesen, J.E., et al., Mol. Immunol. 37 (2000) 995-1004; Idusogie, E.E., et al., J. Immunol.164 (2000) 4178-4184; Hezareh, M., et al., J. Virology 75 (2001) 12161-12168; Morgan, A., et al., Immunology 86 (1995) 319-324；及び欧州特許第０３０７４３４号により記載される。このような結合部位は、例えば、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｄ２７０、Ｎ２９７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ｐ３３１及びＰ３２９である（Ｋａｂａｔ，Ｅ．ＡのＥＵ指標に従い番号付け、下記参照）。通常、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２及びＩｇＧ３の抗体は、補体活性化及びＣ１ｑ及びＣ３結合を示すが、ＩｇＧ４は補体系を活性化させず、Ｃ１ｑ及びＣ３に結合しない。
一実施態様では、発明による抗体はヒト起源由来のＦｃ部分、及び好ましくはヒト定常領域の他の部分全てを含む。本明細書で使用される場合、用語「ヒト起源由来のＦｃ部分」とは、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のヒト抗体のＦｃ部分の何れか、好ましくはヒトＩｇＧ１サブクラスからのＦｃ部分、ヒトＩｇＧ１サブクラスからの変異Ｆｃ部分（好ましくはＬ２３４Ａ＋Ｌ２３５Ａにおける変異）、ヒトＩｇＧ４サブクラスからのＦｃ部分又はヒトＩｇＧ４サブクラスからの変異Ｆｃ部分（好ましくはＳ２２８Ｐにおける変異）であるＦｃ部分を意味する。最も好ましいのは、配列番号５８（ヒトＩｇＧ１サブクラス）、配列番号５９（変異Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａを有するヒトＩｇＧ１サブクラス）、配列番号６０（ヒトＩｇＧ４サブクラス）、又は配列番号６１（変異Ｓ２２８Ｐを有するヒトＩｇＧ４サブクラス）の重鎖定常領域である。
好ましくは、本発明による抗体は、ヒトＩｇＧ１サブクラス又はヒトＩｇＧ４サブクラスのものである。一実施態様において、本発明による抗体は、ヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。一実施態様において、本発明による抗体は、ヒトＩｇＧ４サブクラスのものである。
一実施態様において、本発明による抗体は、定常領域がヒト起源であることを特徴とする。そのような定常鎖は、当技術分野の現状において周知であり、例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．によって説明されている（例えば、Johnson, G. and Wu, T.T., Nucleic Acids Res. 28 (2000) 214-218を参照のこと）。例えば、有用なヒト重鎖定常領域は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む。例えば、有用なヒト重鎖定常領域は、配列番号５７のカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。
本発明の別の態様は、
ａ）重鎖可変ドメインは配列番号７、及び軽鎖可変ドメインは配列番号８であり、
ｂ）重鎖可変ドメインは配列番号１５、及び軽鎖可変ドメインは配列番号１６であり； 又はそれについてのヒト化バージョンである
ことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明の別の態様は、
ａ）重鎖可変ドメインは配列番号７、及び軽鎖可変ドメインは配列番号８であり、
ｂ）重鎖可変ドメインは配列番号１５、及び軽鎖可変ドメインは配列番号１６であり；
ｃ）重鎖可変ドメインは配列番号７５、及び軽鎖可変ドメインは配列番号７６であり；
ｄ）重鎖可変ドメインは配列番号８３、及び軽鎖可変ドメインは配列番号８４であり；
又はそれについてのヒト化バージョンである
ことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明の別の態様は、重鎖可変ドメインは配列番号７、及び軽鎖可変ドメインは配列番号８であり、又はそれについてのヒト化バージョンであることを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明の別の態様は、
ａ）重鎖可変ドメインは配列番号２３、及び軽鎖可変ドメインは配列番号２４であり、又は
ｂ）重鎖可変ドメインは配列番号３１、及び軽鎖可変ドメインは配列番号３２であり、又は
ｃ）重鎖可変ドメインは配列番号３９、及び軽鎖可変ドメインは配列番号４０であり、又は
ｄ）重鎖可変ドメインは配列番号４７、及び軽鎖可変ドメインは配列番号４８であり、又は
ｅ）重鎖可変ドメインは配列番号５５、及び軽鎖可変ドメインは配列番号５６である
ことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明の別の態様は、
ａ）重鎖可変ドメインは配列番号２３、及び軽鎖可変ドメインは配列番号２４であり、又は
ｂ）重鎖可変ドメインは配列番号３１、及び軽鎖可変ドメインは配列番号３２であり、又は
ｃ）重鎖可変ドメインは配列番号３９、及び軽鎖可変ドメインは配列番号４０であり、又は
ｄ）重鎖可変ドメインは配列番号４７、及び軽鎖可変ドメインは配列番号４８である
ことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明の別の態様は、重鎖可変ドメインは配列番号２３、及び軽鎖可変ドメインは配列番号２４であることを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明の別の態様は、重鎖可変ドメインは配列番号３１、及び軽鎖可変ドメインは配列番号３２であることを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明の別の態様は、重鎖可変ドメインは配列番号３９、及び軽鎖可変ドメインは配列番号４０であることを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明の別の態様は、重鎖可変ドメインは配列番号４７、及び軽鎖可変ドメインは配列番号４８であることを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明の別の態様は、重鎖可変ドメインは配列番号１５、及び軽鎖可変ドメインは配列番号１６であり、又はそれについてのヒト化バージョンであることを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明の別の態様は、重鎖可変ドメインは配列番号７５、及び軽鎖可変ドメインは配列番号７６である、又はそれについてのヒト化バージョンであることを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明の別の態様は、重鎖可変ドメインは配列番号８３、及び軽鎖可変ドメインは配列番号８４である、又はそれについてのヒト化バージョンであることを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明の別の態様は、
ａ）重鎖可変ドメインは、配列番号１のＣＤＲ３領域、配列番号２のＣＤＲ２領域、及び配列番号３のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号４のＣＤＲ３領域、配列番号５のＣＤＲ２領域、及び配列番号６のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｂ）重鎖可変ドメインは、配列番号９のＣＤＲ３領域、配列番号１０のＣＤＲ２領域、及び配列番号１１のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号１２のＣＤＲ３領域、配列番号１３のＣＤＲ２領域、及び配列番号１４のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｃ）重鎖可変ドメインは、配列番号１７のＣＤＲ３領域、配列番号１８のＣＤＲ２領域、及び配列番号１９のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２０のＣＤＲ３領域、配列番号２１のＣＤＲ２領域、及び配列番号２２のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｄ）重鎖可変ドメインは、配列番号２５のＣＤＲ３領域、配列番号２６のＣＤＲ２領域、及び配列番号２７のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２８のＣＤＲ３領域、配列番号２９のＣＤＲ２領域、及び配列番号３０のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｅ）重鎖可変ドメインは、配列番号３３のＣＤＲ３領域、配列番号３４のＣＤＲ２領域、及び配列番号３５のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号３６のＣＤＲ３領域、配列番号３７のＣＤＲ２領域、及び配列番号３８のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｆ）重鎖可変ドメインは、配列番号４１のＣＤＲ３領域、配列番号４２のＣＤＲ２領域、及び配列番号４３のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号４４のＣＤＲ３領域、配列番号４５のＣＤＲ２領域、及び配列番号４６のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｇ）重鎖可変ドメインは、配列番号４９のＣＤＲ３領域、配列番号５０のＣＤＲ２領域、及び配列番号５１のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号５２のＣＤＲ３領域、配列番号５３のＣＤＲ２領域、及び配列番号５４のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｈ）重鎖可変ドメインは、配列番号６９のＣＤＲ３領域、配列番号７０のＣＤＲ２領域、及び配列番号７１のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号７２のＣＤＲ３領域、配列番号７３のＣＤＲ２領域、及び配列番号７４のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｉ）重鎖可変ドメインは、配列番号７７のＣＤＲ３領域、配列番号７８のＣＤＲ２領域、及び配列番号７９のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号８０のＣＤＲ３領域、配列番号８１のＣＤＲ２領域、及び配列番号８２のＣＤＲ１領域を含む
ことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明の別の態様は、
ａ）重鎖可変ドメインは、配列番号１７のＣＤＲ３領域、配列番号１８のＣＤＲ２領域、及び配列番号１９のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２０のＣＤＲ３領域、配列番号２１のＣＤＲ２領域、及び配列番号２２のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｂ）重鎖可変ドメインは、配列番号２５のＣＤＲ３領域、配列番号２６のＣＤＲ２領域、及び配列番号２７のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２８のＣＤＲ３領域、配列番号２９のＣＤＲ２領域、及び配列番号３０のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｃ）重鎖可変ドメインは、配列番号３３のＣＤＲ３領域、配列番号３４のＣＤＲ２領域、及び配列番号３５のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号３６のＣＤＲ３領域、配列番号３７のＣＤＲ２領域、及び配列番号３８のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｄ）重鎖可変ドメインは、配列番号４１のＣＤＲ３領域、配列番号４２のＣＤＲ２領域、及び配列番号４３のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号４４のＣＤＲ３領域、配列番号４５のＣＤＲ２領域、及び配列番号４６のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｅ）重鎖可変ドメインは、配列番号４９のＣＤＲ３領域、配列番号５０のＣＤＲ２領域、及び配列番号５１のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号５２のＣＤＲ３領域、配列番号５３のＣＤＲ２領域、及び配列番号５４のＣＤＲ１領域を含む
ことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明の別の態様は、
ａ）重鎖可変ドメインは、配列番号１７のＣＤＲ３領域、配列番号１８のＣＤＲ２領域、及び配列番号１９のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２０のＣＤＲ３領域、配列番号２１のＣＤＲ２領域、及び配列番号２２のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｂ）重鎖可変ドメインは、配列番号２５のＣＤＲ３領域、配列番号２６のＣＤＲ２領域、及び配列番号２７のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２８のＣＤＲ３領域、配列番号２９のＣＤＲ２領域、及び配列番号３０のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｃ）重鎖可変ドメインは、配列番号３３のＣＤＲ３領域、配列番号３４のＣＤＲ２領域、及び配列番号３５のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号３６のＣＤＲ３領域、配列番号３７のＣＤＲ２領域、及び配列番号３８のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｄ）重鎖可変ドメインは、配列番号４１のＣＤＲ３領域、配列番号４２のＣＤＲ２領域、及び配列番号４３のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号４４のＣＤＲ３領域、配列番号４５のＣＤＲ２領域、及び配列番号４６のＣＤＲ１領域を含む
ことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明の別の態様は、
重鎖可変ドメインは、配列番号１７のＣＤＲ３領域、配列番号１８のＣＤＲ２領域、及び配列番号１９のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２０のＣＤＲ３領域、配列番号２１のＣＤＲ２領域、及び配列番号２２のＣＤＲ１領域を含む
ことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明の別の態様は、 重鎖可変ドメインは、配列番号２５のＣＤＲ３領域、配列番号２６のＣＤＲ２領域、及び配列番号２７のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２８のＣＤＲ３領域、配列番号２９のＣＤＲ２領域、及び配列番号３０のＣＤＲ１領域を含む
ことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明の別の態様は、
重鎖可変ドメインは、配列番号３３のＣＤＲ３領域、配列番号３４のＣＤＲ２領域、及び配列番号３５のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号３６のＣＤＲ３領域、配列番号３７のＣＤＲ２領域、及び配列番号３８のＣＤＲ１領域を含む
ことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明の別の態様は、
重鎖可変ドメインは、配列番号４１のＣＤＲ３領域、配列番号４２のＣＤＲ２領域、及び配列番号４３のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号４４のＣＤＲ３領域、配列番号４５のＣＤＲ２領域、及び配列番号４６のＣＤＲ１領域を含む
ことを特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体との併用療法を含む。
本発明は、本発明による抗体の治療的有効量を患者に投与することにより特徴付けられる、治療法を必要としている患者の治療のための方法を含む。
本発明は、記述された治療法のための本発明による抗体の使用を含む。
発明の好ましい実施態様は、「ＣＳＦ−１Ｒ媒介疾患」の治療における使用のための本発明のＣＳＦ−１Ｒ抗体、又は「ＣＳＦ−１Ｒ媒介疾患」の治療における医薬の製造に対する使用のための本発明のＣＳＦ−１Ｒ抗体であり、以下のように説明されうる。
それによりＣＳＦ−１Ｒシグナル伝達が腫瘍増殖及び転移に関与すると思われる３つの異なるメカニズムがある。一つ目は、ＣＳＦ−リガンド及び受容体の発現が、女性生殖器系（胸、卵巣、子宮内膜、子宮頸部）に起因する腫瘍細胞に見つけられ（Scholl, S.M., et al., J. Natl. Cancer Inst. 86 (1994) 120-126; Kacinski, B.M., Mol. Reprod. Dev. 46 (1997) 71-74; Ngan, H.Y., et al., Eur. J. Cancer 35 (1999) 1546-1550; Kirma, N., et al., Cancer Res 67 (2007) 1918-1926）、発現が乳癌異種移植片増殖並びに乳癌患者における予後不良に関連したことである。２つの点変異が、一研究において試験された、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病及び骨髄形成異常患者の約１０−２０％におけるＣＳＦ−１Ｒに見られ、変異の一つが受容体ターンオーバーを妨害することが分かった（Ridge, S.A., et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA 87 (1990) 1377-1380）。しかしながら、変異の出現は後の研究で確認されることができなかった（Abu-Duhier, F.M., et al., Br. J. Haematol. 120 (2003) 464-470）。変異は肝細胞癌（Yang, D.H., et al., Hepatobiliary Pancreat.Dis.Int. 3 (2004) 86-89）及び特発性骨髄線維症（Abu-Duhier, F.M., et al., Br. J. Haematol.120 (2003) 464-470）の幾つかのケースにおいても見られた。近年、骨髄単芽球性白血病の患者に由来するＧＤＭ−１細胞株において、ＣＳＦ−１ＲのＹ５７１Ｄ変異が同定された（Chase, A., et al., Leukemia 23 (2009) 358-364）。
色素性絨毛結節性滑膜炎（ＰＶＮＳ）及び腱しょう巨細胞腫（ＴＧＣＴ）は、Ｍ−ＣＳＦ遺伝子をコラーゲン遺伝子ＣＯＬ６Ａ３に融合させ、Ｍ−ＣＳＦの過剰発現をもたらすトランスロケーションの結果として生じうる（West, R.B., et al., Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103 (2006) 690-695）。ランドスケープ効果が、生じた腫瘍体積に関与することが提案され、それはＭ−ＣＳＦを発現する細胞によって誘因される単球系細胞からなる。ＴＧＣＴは小さい腫瘍であり、それらの主に生じる指から比較的容易に除去されることができる。ＰＶＮＳはより浸潤性であり、大関節において再発し得、外科的に容易にコントロールされない。
２つ目のメカニズムは、破骨細胞形成、骨吸収及び溶骨性病変を誘発する、骨の転移部位でのＭ−ＣＳＦ／ＣＳＦ−１Ｒを介したシグナル伝達の阻害に基づく。乳癌、多発性骨髄腫及び肺癌は、骨に転移することが分かった癌の例であり、骨格合併症をもたらす溶骨性病変を引き起こす。腫瘍細胞及びストローマにより放出されるＭ−ＣＳＦは、核内因子κＢ活性化受容体リガンド−ＲＡＮＫＬのとの協調において、造血骨髄性単球前駆体の成熟破骨細胞への分化を誘発する。このプロセスの間、破骨細胞に生存シグナルを与えることにより、Ｍ−ＣＳＦは許容因子として作用する（Tanaka, S., et al., J. Clin.Invest.91 (1993) 257-263）。抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体での、破骨細胞の分化及び成熟中のＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害は、溶骨性疾患及び転移性疾患における関連骨関連事象を引き起こす破骨細胞の不均衡な活性を防止すると思われる。乳癌、肺癌及び多発性骨髄腫は典型的には溶骨性病変となるが、前立腺癌における骨への転移は最初は造骨性の様子を有し、そこでは増加した骨形成活性が線維性骨をもたらし、これは正常な骨の典型的な層状組織と異なる。疾患進行の間、骨病変は、著しい溶骨性成分並びに高血清レベルの骨吸収を示し、抗吸収性治療が有用でありうることを示唆する。ビスホスホネートは溶骨性病変の形成を阻害することが示され、ホルモン不応性転移性前立腺癌を有する男性においてのみ骨関連事象の数を低減するが、現時点では、造骨性病変におけるそれらの効果は議論の余地があり、ビスホスホネートはこれまで、骨転移又はホルモン応答性前立腺癌を防止することに有益ではなかった。混合溶骨性／造骨性前立腺癌における抗吸収剤の効果は臨床において依然として研究中である（Choueiri, M.B., et al., Cancer Metastasis Rev. 25 (2006) 601-609; Vessella, R.L. and Corey, E., Clin. Cancer Res. 12 (20 Pt 2) (2006) 6285s-6290s）。
３つ目のメカニズムは、乳癌、前立腺癌、卵巣癌及び子宮頸癌の固形腫瘍において見られる腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）が予後不良に相関するという最近の観察に基づく（Bingle, L., et al., J. Pathol.196 (2002) 254-265; Pollard, J.W., Nat. Rev. Cancer 4 (2004) 71-78）。マクロファージは、Ｍ−ＣＳＦ及び他のケモカインによって腫瘍に動員される。マクロファージは次いで、血管新生因子、プロテアーゼ及び他の増殖因子及びサイトカインの分泌により腫瘍進行に貢献し得、ＣＳＦ−１Ｒシグナル伝達の阻害によってブロックされうる。最近、Zins, K., et a1 (Zins, K., et al., Cancer Res. 67 (2007) 1038-1045)によって、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦアルファ）、Ｍ−ＣＳＦ又は双方の組合せのｓｉＲＮＡの発現が、それぞれのｓｉＲＮＡの腫瘍内投与の後、３４％〜５０％で、マウス異種移植片モデルにおける腫瘍増殖を低減させることが示された。ヒトＳＷ６２０細胞により分泌されるＴＮＦアルファを標的にするＳｉＲＮＡはマウスＭ−ＣＳＦレベルを低減させ、腫瘍におけるマクロファージの減少を導いた。更に、Ｍ−ＣＳＦに対する抗原結合断片によるＭＣＦ７腫瘍異種移植片の処置は、４０％の腫瘍増殖阻害をもたらし、化学療法への抵抗性を逆転させ、化学療法との組合せにおいて与えられた場合、マウスの生存度を改善した（Paulus, P., et al., Cancer Res. 66 (2006) 4349-4356）。
ＴＡＭは慢性炎症及び癌の間の新たな関連の一例にすぎない。炎症及び癌の間の関連に対する更なるエビデンスがあり、多くの慢性疾患は癌のリスクの増大と関連し、癌は慢性炎症の部位で生じ、炎症の化学伝達物質は多くの癌において見つけられ；炎症の細胞性又は化学伝達物質の欠失は実験癌の発生を阻害し、抗炎症剤の長期の使用は幾つかの癌のリスクを低減させる。癌への関連は、多くの炎症性疾患に対し存在し、胃癌に対するＨ．ピロリ誘発による胃炎、膀胱癌に対する住血吸虫症、カポジ肉腫に対するＨＨＶＸ、卵巣癌に対する子宮内膜症及び前立腺癌に対する前立腺炎がある（Balkwill, F., et al., Cancer Cell 7 (2005) 211-217）。マクロファージは慢性炎症において鍵となる細胞であり、それらの微小環境に対して異なって応答する。機能状態の連続においてエクストリームであると考えられる２タイプのマクロファージがある：Ｍ１マクロファージは１型反応に関与する。これらの反応は、微生物産物による活性化、及び活性酸素中間体を生じる病原微生物の結果としての殺傷を含む。エクストリームの対極は、細胞増殖を促進し、炎症及び適応免疫を調整し、組織リモデリング、血管新生及び修復を促進する２型反応に関与するＭ２マクロファージである（Mantovani, A., et al., Trends Immunol. 25 (2004) 677-686）。確立した新生物をもたらす慢性炎症は通常、Ｍ２マクロファージに関連する。炎症反応を媒介する中心的なサイトカインはＴＮＦアルファであり、その名の通り高用量で抗腫瘍免疫及び出血性壊死を刺激するが、近年、腫瘍細胞によって発現され、腫瘍プロモーターとして作用することが見出された（Zins, K., et al., Cancer Res. 67 (2007) 1038-1045; Balkwill, F., Cancer Metastasis Rev. 25 (2006) 409-416）。腫瘍に対するマクロファージの具体的な役割は依然として更に理解される必要があり、それらの機能における空間的及び時間的潜在依存、及び特定の腫瘍タイプへの関連を含む。
従って、発明の一実施態様は、癌の治療における使用のための本発明のＣＳＦ−１Ｒ抗体である。ここで使用される「癌」なる用語は、例えば、肺癌、非小細胞肺（ＮＳＣＬ）癌、細気管支肺胞細胞肺癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭部もしくは頚部の癌、皮膚もしくは眼内メラノーマ、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部の癌、胃癌（stomach cancer、gastric cancer）、結腸癌、乳癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜の癌腫、子宮頚部の癌腫、膣癌、外陰癌、ホジキン病、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟組織の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓もしくは尿道の癌、腎細胞癌、腎盂癌、中皮腫、肝細胞癌、胆道癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、脊髄軸腫瘍、脳幹膠腫、多形膠芽腫、星状細胞腫、シュワン腫、上衣腫、髄芽腫、髄腹腫、扁平上皮癌、下垂体腺腫、リンパ腫、リンパ性白血病、例えば上記癌の何れかの難治性型、又は上記癌の一又は複数の組み合わせでありうる。好ましくは、このような癌は、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌又は前立腺癌である。好ましくは、このような癌は、ＣＳＦ−１又はＣＳＦ−１Ｒ発現又は過剰発現によって更に特徴付けられる。更なる一実施態様では、発明は、原発腫瘍及び新しい転移の同時治療における使用のための、本発明のＣＳＦ−１Ｒ抗体である。
従って、発明の別の実施態様は、歯周炎、ヒスチオサイトーシスＸ、骨粗鬆症、骨パジェット病（ＰＤＢ）、癌治療による骨量減少、プロテーゼ周囲骨溶解、グルココルチコイド誘発性骨粗しょう症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、炎症性関節炎、及び炎症の治療における使用のための、本発明のＣＳＦ−１Ｒ抗体である。
Rabello, D., et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 347 (2006) 791-796は、ＣＳＦ１遺伝子におけるＳＮＰが、侵襲性歯周炎：歯槽骨の吸収による歯欠損を引き起こす歯周組織の炎症性疾患とポジティブ相関を示すことを実証した。
ヒスチオサイトーシスＸ（ランゲルハンス細胞組織球症、ＬＣＨとも呼ばれる）は、骨及び骨外ＬＣＨ病変において破骨細胞に分化すると思われるランゲルハンス樹状細胞の増殖性疾患である。ランゲルハンス細胞は、循環単球由来である。血清及び病変において測定されたＭ−ＣＳＦの増加レベルが、疾患重症度と相関することが分かった（da Costa, C.E., et al., J. Exp. Med. 201 (2005) 687-693）。該疾患は小児患者集団において主に生じ、疾患が全身性になった場合、又は再発性である場合、化学療法で治療されなければならない。
骨粗鬆症の病態生理は、骨形成骨芽細胞の欠如及び増加した破骨細胞依存骨吸収によって媒介される。裏付けデータがＣｅｎｃｉらによって記述され、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体インジェクションが骨密度を保護し、卵巣摘出マウスにおける骨吸収を阻害することを示した（Cenci, S., et al., J. Clin. Invest. 105 (2000) 1279-1287）。近年、エストロゲン欠乏に起因する閉経後の骨量減少の潜在的な関連が同定され、Ｔ細胞を産生するＴＮＦアルファの存在が骨代謝に影響することがわかった（Roggia, C., et al., Minerva Med. 95 (2004) 125-132）。考えられるメカニズムは、インビボでのＴＮＦαによるＭ−ＣＳＦの誘発である。ＴＮＦ−アルファ誘発破骨細胞形成におけるＭ−ＣＳＦの重要な役割が、マウスにおけるＴＮＦ−アルファ誘発骨溶解をブロックするＭ−ＣＳＦに対する抗体の効果によって確認され、そして炎症性関節炎のためのＣＳＦ−１Ｒシグナル伝達潜在標的の阻害剤が作成された（Kitaura, H., et al., J. Clin. Invest. 115 (2005) 3418-3427）。
骨パジェット病（ＰＤＢ）は、骨粗鬆症後の２番目に一般的な骨代謝障害であり、増加した骨ターンオーバーの局限性異常が、骨痛、奇形、病的骨折及び難聴等の合併症を引き起こす。正常な破骨細胞機能を制御し、個体をＰＤＢ及び関連疾患に掛かりやすくさせる４つの遺伝子における変異が同定された：破骨細胞機能の重要な制御因子である核内因子（ＮＦ）κＢ活性化受容体（ＲＡＮＫ）をコードするＴＮＦＲＳＦ１１Ａにおける挿入変異、オステオプロテゲリン（ＲＡＮＫリガンドに対するデコイ受容体）をコードするＴＮＦＲＳＦ１１Ｂの不活性化変異、ＮＦカッパＢ経路における重要なスカフォールドタンパク質をコードするｓｅｑｕｅｓｔｏｓｏｍｅ １ ｇｅｎｅ（ＳＱＳＴＭ１）の変異、及びバロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）遺伝子における変異。この遺伝子は、プロテアソームによる分解に対するＮＦカッパＢのインヒビターを標的にすることにおいて役割を果たすＶＣＰをコードする（Daroszewska, A. and Ralston, S.H., Nat. Clin. Pract. Rheumatol. 2 (2006) 270-277）。標的化ＣＳＦ−１Ｒインヒビターは、ＲＡＮＫＬシグナル伝達の脱制御を間接的にブロックする機会を提供し、現在使用されているビスホスホネートに更なる治療選択を加える。
特に乳癌及び前立腺癌患者における、癌治療誘発骨量減少は、標的化ＣＳＦ−１Ｒインヒビターが骨量減少を防止しうる更なる適応症である（Lester, J.E., et al., Br. J. Cancer 94 (2006) 30-35）。早期乳癌の改善された予後によりアジュバント療法の長期的結果がより重要になり、これは、化学療法、放射線療法、アロマターゼ阻害剤及び卵巣切除を含む療法の幾つかは、骨ミネラル濃度を低下されることにより骨代謝に影響し、骨粗鬆症及び関連骨折をもたらすからである（Lester, J.E., et al., Br. J. Cancer 94 (2006) 30-35）。乳癌におけるアジュバントアロマターゼ阻害剤に相応するものは、前立腺癌におけるアンドロゲン除去療法であり、これは、骨ミネラル濃度の欠乏を導き、骨粗鬆症関連骨折のリスクを著しく増加させる（Stoch, S.A., et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 86 (2001) 2787-2791）。
ＣＳＦ−１Ｒシグナル伝達の標的化阻害は、標的化細胞タイプが破骨細胞及びマクロファージを含む場合、他の適応症においても有益であり得、例えば、関節リウマチの結果としての関節置換による特定の合併症の治療に有用である。プロテーゼ周囲骨量減少によるインプラントの失敗及び義肢の結果としての緩みは、関節置換の主な合併症であり、それぞれの患者及び医療制度に対し高い社会経済的負担を伴う度重なる手術を必要とする。これまでに、プロテーゼ周囲骨溶解を防止又は阻害する承認された薬物療法はない（Drees, P., et al., Nat. Clin. Pract. Rheumatol. 3 (2007) 165-171）。
グルココルチコイド誘発性骨粗鬆症（ＧＩＯＰ）は別の適応症であり、ＣＳＦ−１Ｒインヒビターが、慢性閉塞性肺疾患、喘息及び関節リウマチにおける様々な状態の結果として与えられる長期のグルココルチコステロイドの使用後の骨量減少を防止しうる（Guzman-Clark, J.R., et al., Arthritis Rheum. 57 (2007) 140-146; Feldstein, A.C., et al., Osteoporos. Int. 16 (2005) 2168-2174）。
関節リウマチ、乾癬性関節炎及び炎症性関節炎はそれ自体、それらがマクロファージ成分から成るとういう点において、また様々な程度の骨破壊に対し、ＣＳＦ−１Ｒシグナル伝達阻害剤の潜在的適応症である（Ritchlin, C.T., et al., J. Clin. Invest. 111 (2003) 821-831）。骨関節炎及び関節リウマチは、結合組織におけるマクロファージの蓄積、及び滑液へのマクロファージの浸潤によって引き起こされる炎症性自己免疫疾患であり、少なくとも部分的にＭ−ＣＳＦにより媒介される。Campbell, I., K., et al., J. Leukoc. Biol. 68 (2000) 144-150は、Ｍ−ＣＳＦがインビトロでヒト関節組織細胞によって産生され、関節リウマチを有する患者の滑液に見られることを示し、それが、疾患の病変形成と関連する滑膜組織増殖及びマクロファージ浸潤の一因となることを示唆した。ＣＳＦ−１Ｒシグナル伝達の阻害は、関節におけるマクロファージの数を制御し、関連する骨破壊からの疼痛を軽減すると考えられる。副作用を最小限にし、これらの適応症におけるＣＳＦ−１Ｒシグナル伝達の影響を更に理解するために、一方法は、Ｒａｆキナーゼなどの無数の他のキナーゼを標的にすることなく、ＣＳＦ−１Ｒを特異的に阻害する。
最近の文献報告は、増加した循環Ｍ−ＣＳＦと、慢性冠動脈疾患における予後不良及びアテローム硬化性進行とを相関させる（Saitoh, T., et al., J. Am. Coll. Cardiol. 35 (2000) 655-665; Ikonomidis, I., et al., Eur. Heart. J. 26 (2005) p. 1618-1624）；Ｍ−ＣＳＦは、ＣＳＦ−１Ｒを発現し初期プラークを呈する泡沫細胞（摂取された酸化ＬＤＬを有するマクロファージ）の形成を支援することによってアテローム硬化性プロセスに影響する（Murayama, T., et al., Circulation 99 (1999) 1740-1746）。
Ｍ−ＣＳＦ及びＣＳＦ−１Ｒの発現及びシグナル伝達は、活性化マイクログリアに見られる。中枢神経系の常在マクロファージであるマイクログリアは、感染及び外傷を含む様々な侵襲によって活性化される。Ｍ−ＣＳＦは脳における炎症反応の鍵となる制御因子と考えられており、Ｍ−ＣＳＦレベルは、ＨＩＶ−１、脳炎、アルツハイマー病（ＡＤ）及び脳腫瘍において増加する。Ｍ−ＣＳＦ／ＣＳＦ−１Ｒによる自己分泌シグナル伝達の結果として生じる小膠細胞症は炎症性サイトカイン及び一酸化窒素を誘導し、例えば実験神経損傷モデルを使用して示されるように放出される（Hao, A.J., et al., Neuroscience 112 (2002) 889-900; Murphy, G.M., Jr., et al., J. Biol. Chem. 273 (1998) 20967-20971）。ＣＳＦ−１Ｒの増加発現を有するマイクログリアは、ＡＤ及びＡＤのアミロイド前駆体タンパク質Ｖ７１７Ｆトランスジェニックマウスモデルにおいて周囲プレークに見られる（Murphy, G.M., Jr., et al., Am. J. Pathol. 157 (2000) 895-904）。一方、脳に少ないマイクログリアを有するｏｐ／ｏｐマウスは、ノーマルコントロールと比較してＡ−ベータの線維性沈着及びニューロン欠失を生じ、マイクログリアが、ｏｐ／ｏｐマウスにおいて欠失しているＡＤの発生において神経保護機能を持つことを示唆する（Kaku, M., et al., Brain Res. Brain Res. Protoc. 12 (2003) 104-108）。
Ｍ−ＣＳＦ及びＣＳＦ−１Ｒの発現及びシグナル伝達は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）に関連する（国際公開第２００５／０４６６５７号）。「炎症性腸疾患」なる用語は、胃腸管の様々な部位での慢性炎症により特徴付けられる腸管の重篤な慢性疾患を指し、具体的には、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）及びクローン病を含む。
本発明は、上記エピトープ結合特性によって、あるいは上記アミノ酸配列及びアミノ酸配列断片によって特徴付けられるヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体による、癌の治療のための併用療法を含む。
本発明は、上記エピトープ結合特性によって、あるいは上記アミノ酸配列及びアミノ酸配列断片によって特徴付けられるヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体による、骨量減少の治療のための併用療法を含む。
本発明は、上記エピトープ結合特性によって、あるいは上記アミノ酸配列及びアミノ酸配列断片によって特徴付けられるヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体による、転移の予防又は治療のための併用療法を含む。
本発明は、上記エピトープ結合特性によって、あるいは上記アミノ酸配列及びアミノ酸配列断片によって特徴付けられるヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体による、炎症性疾患の治療のための併用療法を含む。
本発明は、上記エピトープ結合特性によって、あるいは上記アミノ酸配列及びアミノ酸配列断片によって特徴付けられるヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体を含むことを特徴とする、本明細書に記載される癌の併用治療のための、あるいは本明細書に記載される癌の併用治療のための医薬の製造のための抗体の使用を含む。
本発明は、上記エピトープ結合特性によって、あるいは上記アミノ酸配列及びアミノ酸配列断片によって特徴付けられるヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体を含むことを特徴とする、本明細書に記載される骨量減少の併用治療のための、あるいは本明細書に記載される骨量減少の併用治療のための抗体の使用を含む。
本発明は、上記エピトープ結合特性によって、あるいは上記アミノ酸配列及びアミノ酸配列断片によって特徴付けられるヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体を含むことを特徴とする、本明細書に記載される併用による転移の予防又は治療のための、あるいは明細書に記載される併用による転移の予防又は治療のための医薬の製造のための抗体の使用を含む。
本発明は、上記エピトープ結合特性によって、あるいは上記アミノ酸配列及びアミノ酸配列断片によって特徴付けられるヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体を含むことを特徴とする、本明細書に記載される炎症性疾患の併用治療のための、あるいは本明細書に記載される炎症性疾患の併用治療のための医薬の製造のための抗体の使用を含む。
本発明による抗体は、好ましくは組換え手段によって生成される。そのような方法は先端技術で広く知られており、原核細胞および真核細胞におけるタンパク質の発現を含み、その後の抗体ポリペプチドの単離、及び通常は薬学的に許容される純度までの精製を伴う。タンパク質発現のために、軽鎖および重鎖またはその断片をコードする核酸は標準的な方法によって発現ベクターに挿入される。発現は、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ細胞、酵母、または大腸菌細胞などの適当な原核生物または真核生物宿主細胞中で行われ、抗体は細胞（上清から又は細胞溶解後）回収される。
組換えによる抗体の生成は、最新技術分野において周知であり、例えば、Makrides, S.C., Protein Expr. Purif. 17 (1999) 183-202; Geisse,S., et al., Protein Expr. Purif. 8 (1996) 271-282; Kaufman, R.J., Mol.Biotechnol. 16 (2000) 151-161; Werner, R.G., Drug Res. 48 (1998) 870-880の総説に記載されている。
抗体は、細胞全体に、細胞溶解物中に、又は部分精製形態あるいは実質的に純粋な形態で存在してもよい。細胞成分又は他の汚染物、例えば他の細胞核酸又はタンパク質を除去するために、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンド形成、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動、及び当技術分野で周知の他のものを含む標準的な技術によって、精製が行われる。Ausubel, F., et al., ed. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York (1987)を参照。
ＮＳ０細胞における発現は、例えば、Barnes, L.M., et al., Cytotechnology 32 (2000) 109-123; Barnes, L.M., et al., Biotech. Bioeng. 73 (2001) 261-270に記述される。一過性発現は、例えばDurocher, Y., et al., Nucl. Acids. Res. 30 (2002) E9に記述される。可変ドメインのクローニングは、Orlandi, R., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 (1989) 3833-3837; Carter, P., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 (1992) 4285-4289; Norderhaug, L., et al., J. Immunol. Methods 204 (1997) 77-87に記述される。好適な一過性発現系（ＨＥＫ２９３）は、Schlaeger, E.-J., and Christensen, K., in Cytotechnology 30 (1999) 71-83及びSchlaeger, E.-J., in J. Immunol. Methods 194 (1996) 191-199により記述される。
抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体のアミノ酸配列変異体をコードしている核酸分子は当該分野で知られている様々な方法により調製される。これらの方法は、限定されないが、天然源からの単離（天然に存在するアミノ酸配列変異体の場合）又はオリゴヌクレオチド媒介（又は部位特異的）突然変異誘発、ＰＣＲ突然変異誘発、そしてヒト化抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の以前に調製された変異体又は非変異体バージョンのカセット変異誘発による調製を含む。
発明による重及び軽鎖可変ドメインは、プロモーター、翻訳開始、定常領域、３’非翻訳領域、ポリアデニル化、及び転写終結の配列と組み合わせられ、発現ベクターコンストラクトが形成される。重及び軽鎖発現コンストラクトは単一ベクターに組み入れられ、宿主細胞に同時に、連続的に、又は別々にトランスフェクトされ、次いでそれは融合され両鎖を発現する単一宿主細胞が形成される。
別の態様では、本発明は、本発明の、モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分の一又は複数のの組合せを含有し、薬学的に許容可能な担体と共に製剤化された、組成物、例えば薬学的組成物を提供する。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な担体」は、生理学的適合性の、ありとあらゆる溶剤、分散媒、コーティング、抗菌及び抗真菌剤、等張剤及び吸収／再吸収遅延剤、及び同様なものを含む。好ましくは、担体は注射又は注入に適している。
本発明の組成物は、当該技術で知られているの種々の方法で投与することができる。当業者に理解されているように、投与の経路及び／又は方式は、所望する結果に応じて変えられるであろう。
薬学的に許容可能な担体は、無菌の水溶液又は分散系及び無菌の注射可能溶液又は分散系の調製のための無菌粉末を含む。薬学的に活性な物質に対するこのような媒体及び薬剤の使用は当分野で知られている。水に加えて、担体は、例えば、等張緩衝生理食塩水でありうる。水に加えて、担体は、例えば、等張緩衝生理食塩水でありうる。
選択された投与経路にかかわらず、適切な水和形態、及び／又は本発明の薬学的組成物で使用される本発明の化合物は、当業者に知られている一般的な方法により、薬学的に許容可能な剤形に処方される。
本発明の薬学的組成物における活性成分の実際の投与量レベルは、患者にとって毒性であること無く、特定の患者、組成物、および投与の形式について所望の治療応答を達成するのに有効である活性成分の量を得るために、変更されてもよい（有効量）。選択された投与量レベルは、使用された本発明の特定の組成物、またはそれらのエステル、塩、もしくはアミドの活性、投与の経路、投与の時間、使用された特定の化合物、使用された特定の組成物と組み合わせて使用された他の薬物、化合物及び／又は材料の排出速度、処置される患者の年齢、性別、体重、状態、一般健康状態および事前治療歴、ならびに、医療技術分野において周知である同様の因子を含む様々な薬物動態因子に依存するであろう。
用語「治療の方法」又はその等価物は、例えば、癌に適用される場合、患者において癌細胞の数を減少又は除外するように又は癌の症状を緩和する設計されている手順若しくは採るべき道を指す。癌又は別の増殖性疾患を「治療する方法」は、癌細胞もしくは他の疾患が実際に排除されること、細胞の数もしくは疾患が実際に減ること、又は癌もしくは他の疾患の症状が実際に緩和されることを必ずしも意味しない。しばしば、癌を治療する方法は、成功の可能性が低いが、それにも関わらず、患者の病歴及び推定生存年数を所与として、全体的に有益な採るべき道を誘導するとみなされて実施されることとなる。
用語「併用して投与される」又は「共投与」、「共投与する」は、抗ＣＳＦ−１Ｒ、及び化学療法剤、放射線療法及び／又は癌免疫療法の、例えば別々の処方／適用（又は単一の処方／適用）としての投与を言う。共投与は、同時もしくはいずれかの順序で逐次的であることができ、好ましくは両方（又は全て）の活性薬剤がその生物学的活性を同時に発揮する期間がある。前記抗体及び前記追加薬剤は、点滴を介して（例えば、静脈内に（ｉｖ））同時に又は逐次的に共投与される。両方の治療薬が逐次的に共投与される場合、投与量は同日に別々の投与で投与され、又は薬剤の一つが第１日に、２番目のが第２日から第７日に、好ましくは第２日から第４日に共投与される。従って、一実施態様において、用語「連続的に（逐次的に）」は、第一成分の投与後７日以内に、好ましくは第一成分の投与後４日以内を意味し；用語「同時に」は同時刻でを意味する。抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の維持（投与）量に関する用語「共投与」は、維持投与量は、治療サイクルが両方の薬剤で適切である場合、例えば毎週、両方を共投与することができることを意味する。又は、更なる薬剤が、例えば初日から第３日おきに、投与され、前記抗体は毎週投与される。又は維持投与量は、１日以内又は数日以内の何れかで逐次的に共投与される。
抗体は、患者に対して、研究者、獣医、医師または他の臨床医によって求められている、組織、系、動物又はヒトの生物学的又は医学的応答を惹起するであろうそれぞれの化合物もしくはそれらの組み合わせの量である「治療的有効量」（又は単に「有効量」）で投与されるのは自明である。
共投与の量及び共投与のタイミングは、タイプ（種、性別、年齢、体重など）、及び治療される患者の状態、及び治療される疾患又は状態の重症度に依存するであろう。前記抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体と更なる薬剤は、患者に対して、一時に又は一連の治療にわたって、例えば同じ日に、又は翌日に適切に共投与される。
疾患のタイプ及び重症度に依存して、前記抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の約０．１ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１−２０ｍｇ／ｋｇ）が、患者への両方の薬剤の共投与のための初期候補投与量である。本発明は、癌、とりわけ結腸癌、肺癌又は膵臓癌に罹患した患者の治療のための、本発明による抗体の使用を含む。
本発明はまた、そのような疾患に罹患した患者の治療のための方法を含む。
本発明は、本発明による抗体の有効量を薬学的に許容される担体と一緒に含む薬学的組成物の製造法、及びその方法のための本発明による抗体の使用を提供する。
本発明は、癌に罹患した患者の治療のために、好ましくは薬学的に許容される担体と一緒に、医薬品の製造のための本発明による抗体の有効量での使用を更に提供する。
本発明はまた、癌に罹患した患者の治療のために、好ましくは薬学的に許容される担体と一緒に、医薬品の製造のための本発明による抗体の有効量での使用を提供する。
以下の実施例、配列表及び図面は、本発明、添付の特許請求の範囲に記載されている真の範囲の理解を助けるために提供される。変更は、本発明の精神を逸脱することなく、記載された手順で行うことができることが理解される。
配列の説明
配列番号１ 重鎖ＣＤＲ３、Ｍａｂ ２Ｆ１１
配列番号２ 重鎖ＣＤＲ２、Ｍａｂ ２Ｆ１１
配列番号３ 重鎖ＣＤＲ１、Ｍａｂ ２Ｆ１１
配列番号４ 軽鎖ＣＤＲ３、Ｍａｂ ２Ｆ１１
配列番号５ 軽鎖ＣＤＲ２、Ｍａｂ ２Ｆ１１
配列番号６ 軽鎖ＣＤＲ１、Ｍａｂ ２Ｆ１１
配列番号７ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２Ｆ１１
配列番号８ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２Ｆ１１
配列番号９ 重鎖ＣＤＲ３、Ｍａｂ ２Ｅ１０
配列番号１０ 重鎖ＣＤＲ２、Ｍａｂ ２Ｅ１０
配列番号１１ 重鎖ＣＤＲ１、Ｍａｂ ２Ｅ１０
配列番号１２ 軽鎖ＣＤＲ３、Ｍａｂ ２Ｅ１０
配列番号１３ 軽鎖ＣＤＲ２、Ｍａｂ ２Ｅ１０
配列番号１４ 軽鎖ＣＤＲ１、Ｍａｂ ２Ｅ１０
配列番号１５ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２Ｅ１０
配列番号１６ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２Ｅ１０
配列番号１７ 重鎖ＣＤＲ３、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｃ１１
配列番号１８ 重鎖ＣＤＲ２、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｃ１１
配列番号１９ 重鎖ＣＤＲ１、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｃ１１
配列番号２０ 軽鎖ＣＤＲ３、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｃ１１
配列番号２１ 軽鎖ＣＤＲ２、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｃ１１
配列番号２２ 軽鎖ＣＤＲ１、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｃ１１
配列番号２３ 重鎖可変ドメイン、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｃ１１
配列番号２４ 軽鎖可変ドメイン、 ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｃ１１
配列番号２５ 重鎖ＣＤＲ３、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｄ８
配列番号２６ 重鎖ＣＤＲ２、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｄ８
配列番号２７ 重鎖ＣＤＲ１、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｄ８
配列番号２８ 軽鎖ＣＤＲ３、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｄ８
配列番号２９ 軽鎖ＣＤＲ２、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｄ８
配列番号３０ 軽鎖ＣＤＲ１、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｄ８
配列番号３１ 重鎖可変ドメイン、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｄ８
配列番号３２ 軽鎖可変ドメイン、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｄ８
配列番号３３ 重鎖ＣＤＲ３、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７
配列番号３４ 重鎖ＣＤＲ２、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７
配列番号３５ 重鎖ＣＤＲ１、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７
配列番号３６ 軽鎖ＣＤＲ３、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７
配列番号３７ 軽鎖ＣＤＲ２、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７
配列番号３８ 軽鎖ＣＤＲ１、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７
配列番号３９ 重鎖可変ドメイン、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７
配列番号４０ 軽鎖可変ドメイン、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７
配列番号４１ 重鎖ＣＤＲ３、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｆ１２
配列番号４２ 重鎖ＣＤＲ２、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｆ１２
配列番号４３ 重鎖ＣＤＲ１、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｆ１２
配列番号４４ 軽鎖ＣＤＲ３、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｆ１２
配列番号４５ 軽鎖ＣＤＲ２、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｆ１２
配列番号４６ 軽鎖ＣＤＲ１、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｆ１２
配列番号４７ 重鎖可変ドメイン、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｆ１２
配列番号４８ 軽鎖可変ドメイン、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｆ１２
配列番号４９ 重鎖ＣＤＲ３、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｇ１
配列番号５０ 重鎖ＣＤＲ２、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｇ１
配列番号５１ 重鎖ＣＤＲ１、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｇ１
配列番号５２ 軽鎖ＣＤＲ３、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｇ１
配列番号５３ 軽鎖ＣＤＲ２、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｇ１
配列番号５４ 軽鎖ＣＤＲ１、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｇ１
配列番号５５ 重鎖可変ドメイン、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｇ１
配列番号５６ 軽鎖可変ドメイン、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｇ１
配列番号５７ ヒトカッパ軽鎖定常領域
配列番号５８ ＩｇＧ１から由来するヒト重鎖定常領域
配列番号５９ Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａについて変異されたＩｇＧ１から由来するヒト重鎖定常領域
配列番号６０ ＩｇＧ４から由来するヒト重鎖定常領域
配列番号６１ Ｓ２２８Ｐについて変異されたＩｇＧ４から由来するヒト重鎖定常領域
配列番号６２ ヒト野生型ＣＳＦ−１Ｒ （ｗｔ ＣＳＦ−１Ｒ）
配列番号６３ ヒト変異体ＣＳＦ−１Ｒ Ｌ３０１Ｓ Ｙ９６９Ｆ
配列番号６４ ヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（ドメインＤ１−Ｄ５）
配列番号６５ ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４
配列番号６６ ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ドメインＤ１−Ｄ３
配列番号６７ シグナルペプチド
配列番号６８ プライマー
配列番号６９ 重鎖ＣＤＲ３、Ｍａｂ １Ｇ１０
配列番号７０ 重鎖ＣＤＲ２、Ｍａｂ １Ｇ１０
配列番号７１ 重鎖ＣＤＲ１、Ｍａｂ １Ｇ１０
配列番号７２ 軽鎖ＣＤＲ３、Ｍａｂ １Ｇ１０
配列番号７３ 軽鎖ＣＤＲ２、Ｍａｂ １Ｇ１０
配列番号７４ 軽鎖ＣＤＲ１、Ｍａｂ １Ｇ１０
配列番号７５ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ １Ｇ１０
配列番号７６ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ １Ｇ１０
配列番号７７ 重鎖ＣＤＲ３、Ｍａｂ ２Ｈ７
配列番号７８ 重鎖ＣＤＲ２、Ｍａｂ ２Ｈ７
配列番号７９ 重鎖ＣＤＲ１、Ｍａｂ ２Ｈ７
配列番号８０ 軽鎖ＣＤＲ３、Ｍａｂ ２Ｈ７
配列番号８１ 軽鎖ＣＤＲ２、Ｍａｂ ２Ｈ７
配列番号８２ 軽鎖ＣＤＲ１、Ｍａｂ ２Ｈ７
配列番号８３ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２Ｈ７
配列番号８４ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２Ｈ７
配列番号８５ ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ドメインＤ４−Ｄ５
配列番号８６ ヒトＣＳＦ−１
配列番号８７ ヒトＩＬ−３４
配列番号８８ ＣＰ−８７０，８９３の重鎖可変ドメイン（米国特許第７，３３８，６６０号の抗体２１．４．１）
配列番号８９ ＣＰ−８７０，８９３の軽鎖可変ドメイン（米国特許第７，３３８，６６０号の抗体２１．４．１）
配列番号９０ ヒト化Ｓ２Ｃ６重鎖可変ドメインバリアント
配列番号９１ ヒト化Ｓ２Ｃ６軽鎖可変ドメインバリアント
以下に本発明の実施態様を記載する：
１．
Ａ）ａ）ＣＳＦ−１Ｒリガンド依存性及び／又はＣＳＦ−１Ｒリガンド非依存性ＣＳＦ−１Ｒ発現腫瘍細胞における細胞増殖の阻害；
ｂ）ＣＳＦ−１Ｒリガンド依存性及び／又はＣＳＦ−１Ｒリガンド非依存性ＣＳＦ−１Ｒ発現マクロファージ浸潤物を含む腫瘍の細胞増殖の阻害；
ｃ）（ＣＳＦ−１Ｒリガンド依存性及び／又はＣＳＦ−１Ｒリガンド非依存性）ＣＳＦ−１Ｒ発現単球及びマクロファージにおける細胞生存の阻害；及び／又は
ｄ）（ＣＳＦ−１Ｒリガンド依存性及び／又はＣＳＦ−１Ｒリガンド非依存性）ＣＳＦ−１Ｒ発現単球のマクロファージへの細胞分化の阻害；
に使用のためのヒトＣＳＦ−１Ｒの細胞外ドメインの（二量体化）ドメインＤ４からＤ５（配列番号８５）への結合を特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体であって、
ここで、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、化学療法剤、放射線、及び／又は癌免疫療法と併用して投与される；
又は、Ｂ）腫瘍がＣＳＦ−１Ｒリガンドの増加により特徴づけられる、ＣＳＦ−１Ｒ発現腫瘍を有する又はＣＳＦ−１Ｒ発現マクロファージ浸潤物を含む腫瘍を有する患者の治療に使用のためのヒトＣＳＦ−１Ｒの細胞外ドメインのドメインＤ４からＤ５（配列番号８５）への結合を特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体であって、
ここで、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、化学療法剤、放射線、及び／又は癌免疫療法と併用して投与される抗体。
２．
Ａ）ａ）ＣＳＦ−１Ｒリガンド依存性及び／又はＣＳＦ−１Ｒリガンド非依存性ＣＳＦ−１Ｒ発現腫瘍細胞における細胞増殖の阻害；
ｂ）ＣＳＦ−１Ｒリガンド依存性及び／又はＣＳＦ−１Ｒリガンド非依存性ＣＳＦ−１Ｒ発現マクロファージ浸潤物を含む腫瘍の細胞増殖の阻害；
ｃ）（ＣＳＦ−１Ｒリガンド依存性及び／又はＣＳＦ−１Ｒリガンド非依存性）ＣＳＦ−１Ｒ発現単球及びマクロファージにおける細胞生存の阻害；及び／又は
ｄ）（ＣＳＦ−１Ｒリガンド依存性及び／又はＣＳＦ−１Ｒリガンド非依存性）ＣＳＦ−１Ｒ発現単球のマクロファージへの細胞分化の阻害；
のための医薬の製造において使用のための、ヒトＣＳＦ−１Ｒの細胞外ドメインの（二量体化）ドメインＤ４からＤ５（配列番号８５）への結合を特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体の使用であって、
ここで、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、化学療法剤、放射線、及び／又は癌免疫療法と併用して投与される；
又は、Ｂ）腫瘍がＣＳＦ−１Ｒリガンドの増加により特徴づけられる、ＣＳＦ−１Ｒ発現腫瘍を有する又はＣＳＦ−１Ｒ発現マクロファージ浸潤物を含む腫瘍を有する患者の治療のための医薬の製造において使用のための、ヒトＣＳＦ−１Ｒの細胞外ドメインのドメインＤ４からＤ５（配列番号８５）への結合を特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体の使用であって、
ここで、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、化学療法剤、放射線、及び／又は癌免疫療法と併用して投与される、抗体の使用。
３．
化学療法剤は、タキサン（パクリタキセル（タキソール）、ドセタキセル（タキソテール））、修飾パクリタキセル（アブラキサン及びオパキシオ）、ドキソルビシン、修飾ドキソルビシン（Ｃａｅｌｙｘ又はＤｏｘｉｌ）、スニチニブ（スーテント）、ソラフェニブ（ネクサバール）、及びその他のマルチキナーゼ阻害剤、オキサリプラチン、シスプラチン及びカルボプラチン、エトポシド、ゲムシタビン、及びビンブラスチンからなる群から選択される、実施態様１又は２に記載の抗体又は使用。
４．
癌免疫療法は、
ａ）ヒトＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、又は４−１ＢＢに結合するアゴニスト抗体、及びＴ細胞二重特異性抗体（例えば、Ｔ細胞結合性ＢｉＴＥＴＭ抗体ＣＤ３−ＣＤ１９、ＣＤ３−ＥｐＣａｍ、ＣＤ３−ＥＧＦＲ）、ＩＬ−２（プロロイキン）、インターフェロン（ＩＦＮ）アルファ；ヒトＣＴＬＡ−４（例えばイピリムマブ）、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、又はＣＤ２５に結合する拮抗性抗体から選択されるＴ細胞結合剤、
ｂ）標的免疫抑制：ＳＴＡＴ３又はＮＦｋＢシグナル伝達を標的とし、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＴＮＦαの機能を遮断する抗体又は小分子、
ｃ）癌ワクチン／樹状細胞機能の増強：ＯｎｃｏＶｅｘ（ＧＭ−ＣＳＦを分泌する腫瘍退縮ウイルス）、アゴニストＣＤ４０抗体、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンド、ＴＬＲアゴニスト、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＰＲＯＳＴＶＡＣをコードする組換え融合タンパク質；又は
ｄ）養子細胞移入：ＧＶＡＸ（ＧＭ−ＣＳＦを発現する前立腺癌細胞株）、樹状細胞ワクチン、養子Ｔ細胞療法、養子ＣＡＲ Ｔ細胞療法
の群から選択される、実施態様１又は２に記載の抗体又は使用。
５．
癌免疫療法は、アゴニストＣＤ４０抗体である（一実施態様では、アゴニストＣＤ４０抗体は、ＣＰ−８７０８９３又はＳＧＮ−４０である）、実施態様４に記載の抗体又は使用。
６．
化学療法剤は、乳癌の治療用に、タキサン（ドセタキセル又はパクリタキセル又は修飾パクリタキセル（アブラキサン又はオパキシオ）、ドキソルビシン、カペシタビン及び／又はベバシズマブの群から選択される、実施態様１又は２に記載の抗体又は使用。
７．
化学療法剤は、卵巣癌の治療用に、カルボプラチン、オキサリプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ドキソルビシン（または修飾ドキソルビシン（Ｃａｅｌｙｘ又はＤｏｘｉｌ））、又はトポテカン（ハイカムチン）の群から選択される、実施態様１又は２に記載の抗体又は使用。
８．
化学療法剤は、腎臓癌の治療用に、腎臓癌の治療用に、マルチキナーゼ阻害剤（スニチニブ（スーテント）、ソラフェニブ（ネクサバール）、又はモテサニブ二リン酸塩（ＡＭＧ７０６）及び／又はドキソルビシンの群から選択される、実施態様１又は２に記載の抗体又は使用。
９．
化学療法剤は、扁平上皮癌の治療用に、オキサリプラチン、シスプラチン及び／又は放射線の群から選択される、実施態様１又は２に記載の抗体又は使用。
１０．
一実施態様において、化学療法剤は、肺癌の治療用に、タキソール及び／又はカルボプラチンの群から選択される、実施態様１又は２に記載の抗体又は使用。
１１．
抗体は、その抗体がヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４（配列番号６５）に結合しないことを特徴とする、実施態様１から１０の何れか一項に記載の抗体。
１２．
抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４（配列番号６５）及びヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号６４）に１：５０又はそれ未満の比率で結合することを特徴する、実施態様１から１１の何れか一項に記載の抗体又は使用。
１３．
ａ）重鎖可変ドメインは配列番号７、及び軽鎖可変ドメインは配列番号８であり、
ｂ）重鎖可変ドメインは配列番号１５、及び軽鎖可変ドメインは配列番号１６であり； ｃ）重鎖可変ドメインは配列番号７５、及び軽鎖可変ドメインは配列番号７６であり； ｄ）重鎖可変ドメインは配列番号８３、及び軽鎖可変ドメインは配列番号８４であり；
又はそれについてのヒト化バージョンである
ことを特徴する、実施態様１から１２の何れか一項に記載の抗体。
１４．
ａ）重鎖可変ドメインは配列番号２３、及び軽鎖可変ドメインは配列番号２４であり、又は
ｂ）重鎖可変ドメインは配列番号３１、及び軽鎖可変ドメインは配列番号３２であり、又は
ｃ）重鎖可変ドメインは配列番号３９、及び軽鎖可変ドメインは配列番号４０であり、又は
ｄ）重鎖可変ドメインは配列番号４７、及び軽鎖可変ドメインは配列番号４８であり、又は
ｅ）重鎖可変ドメインは配列番号５５、及び軽鎖可変ドメインは配列番号５６である
ことを特徴する、実施態様１から１３の何れか一項に記載の抗体。
１５．
ａ）重鎖可変ドメインは、配列番号１のＣＤＲ３領域、配列番号２のＣＤＲ２領域、及び配列番号３のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号４のＣＤＲ３領域、配列番号５のＣＤＲ２領域、及び配列番号６のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｂ）重鎖可変ドメインは、配列番号９のＣＤＲ３領域、配列番号１０のＣＤＲ２領域、及び配列番号１１のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号１２のＣＤＲ３領域、配列番号１３のＣＤＲ２領域、及び配列番号１４のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｃ）重鎖可変ドメインは、配列番号１７のＣＤＲ３領域、配列番号１８のＣＤＲ２領域、及び配列番号１９のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２０のＣＤＲ３領域、配列番号２１のＣＤＲ２領域、及び配列番号２２のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｄ）重鎖可変ドメインは、配列番号２５のＣＤＲ３領域、配列番号２６のＣＤＲ２領域、及び配列番号２７のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号２８のＣＤＲ３領域、配列番号２９のＣＤＲ２領域、及び配列番号３０のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｅ）重鎖可変ドメインは、配列番号３３のＣＤＲ３領域、配列番号３４のＣＤＲ２領域、及び配列番号３５のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号３６のＣＤＲ３領域、配列番号３７のＣＤＲ２領域、及び配列番号３８のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｆ）重鎖可変ドメインは、配列番号４１のＣＤＲ３領域、配列番号４２のＣＤＲ２領域、及び配列番号４３のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号４４のＣＤＲ３領域、配列番号４５のＣＤＲ２領域、及び配列番号４６のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｇ）重鎖可変ドメインは、配列番号４９のＣＤＲ３領域、配列番号５０のＣＤＲ２領域、及び配列番号５１のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号５２のＣＤＲ３領域、配列番号５３のＣＤＲ２領域、及び配列番号５４のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｈ）重鎖可変ドメインは、配列番号６９のＣＤＲ３領域、配列番号７０のＣＤＲ２領域、及び配列番号７１のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号７２のＣＤＲ３領域、配列番号７３のＣＤＲ２領域、及び配列番号７４のＣＤＲ１領域を含み、又は
ｉ）重鎖可変ドメインは、配列番号７７のＣＤＲ３領域、配列番号７８のＣＤＲ２領域、及び配列番号７９のＣＤＲ１領域を含み、及び軽鎖可変ドメインは、配列番号８０のＣＤＲ３領域、配列番号８１のＣＤＲ２領域、及び配列番号８２のＣＤＲ１領域を含む
ことを特徴する、実施態様１から１４の何れか一項に記載の抗体。
１６．
前記抗体は、ヒトＩｇＧ１サブクラスのものであるか又はヒトＩｇＧ４サブクラスのものであることを特徴とする、実施態様１から１５の何れか一項に記載の抗体。
１７．
癌、骨量減少、転移、炎症性疾患の治療の方法において使用のための、又は転移の予防において使用のための、実施態様１から１６の何れか一項に記載の抗体又は使用。
１８．
Ａ）ａ）ＣＳＦ−１Ｒリガンド依存性及び／又はＣＳＦ−１Ｒリガンド非依存性ＣＳＦ−１Ｒ発現腫瘍細胞における細胞増殖の阻害；
ｂ）ＣＳＦ−１Ｒリガンド依存性及び／又はＣＳＦ−１Ｒリガンド非依存性ＣＳＦ−１Ｒ発現マクロファージ浸潤物を含む腫瘍の細胞増殖の阻害；
ｃ）（ＣＳＦ−１Ｒリガンド依存性及び／又はＣＳＦ−１Ｒリガンド非依存性）ＣＳＦ−１Ｒ発現単球及びマクロファージにおける細胞生存の阻害；及び／又は
ｄ）（ＣＳＦ−１Ｒリガンド依存性及び／又はＣＳＦ−１Ｒリガンド非依存性）ＣＳＦ−１Ｒ発現単球のマクロファージへの細胞分化の阻害；
のための方法であって、
ここで、ヒトＣＳＦ−１Ｒの細胞外ドメインの（二量体化）ドメインＤ４からＤ５（配列番号８５）への結合を特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体は、化学療法剤、放射線、及び／又は癌免疫療法と併用して投与される方法；
又はＢ）腫瘍がＣＳＦ−１Ｒリガンドの増加により特徴づけられる、ＣＳＦ−１Ｒ発現腫瘍を有する又はＣＳＦ−１Ｒ発現マクロファージ浸潤物を含む腫瘍を有する患者の治療の方法であって、
ここで、使用のためのヒトＣＳＦ−１Ｒの細胞外ドメインのドメインＤ４からＤ５（配列番号８５）への結合を特徴とする、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体は、化学療法剤、放射線、及び／又は癌免疫療法と併用して投与される方法。
１９．
腫瘍がＣＳＦ−１Ｒリガンドの増加により特徴づけられる、ＣＳＦ−１Ｒ発現腫瘍を有する又はＣＳＦ−１Ｒ発現マクロファージ浸潤物を含む腫瘍を有する患者の治療において使用のための、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体であって、
ここで、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、癌免疫療法と併用して投与され、
ここで癌免疫療法は、
ａ）ヒトＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、又は４−１ＢＢに結合するアゴニスト抗体、及びＴ細胞二重特異性抗体（例えば、Ｔ細胞結合性ＢｉＴＥＴＭ抗体ＣＤ３−ＣＤ１９、ＣＤ３−ＥｐＣａｍ、ＣＤ３−ＥＧＦＲ）、ＩＬ−２（プロロイキン）、インターフェロン（ＩＦＮ）アルファ；ヒトＣＴＬＡ−４（例えばイピリムマブ）、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、又はＣＤ２５に結合する拮抗性抗体から選択されるＴ細胞結合剤、
ｂ）標的免疫抑制：ＳＴＡＴ３又はＮＦｋＢシグナル伝達を標的とし、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＴＮＦαの機能を遮断する抗体又は小分子
ｃ）癌ワクチン／樹状細胞機能の増強：ＯｎｃｏＶｅｘ（ＧＭ−ＣＳＦを分泌する腫瘍退縮ウイルス）、アゴニストＣＤ４０抗体、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンド、ＴＬＲアゴニスト、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＰＲＯＳＴＶＡＣをコードする組換え融合タンパク質；又は
ｄ）養子細胞移入：ＧＶＡＸ（ＧＭ−ＣＳＦを発現する前立腺癌細胞株）、樹状細胞ワクチン、養子Ｔ細胞療法、養子ＣＡＲ Ｔ細胞療法
の群から選択される抗体。
２０．
癌免疫療法は、癌ワクチン／樹状細胞機能の増強：ＯｎｃｏＶｅｘ（ＧＭ−ＣＳＦを分泌する腫瘍退縮ウイルス）、アゴニストＣＤ４０抗体、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンド、ＴＬＲアゴニスト、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＰＲＯＳＴＶＡＣをコードする組換え融合タンパク質の群から選択される、実施態様１９に記載の抗体。
２１．
癌免疫療法は、アゴニストＣＤ４０抗体である（一実施態様では、アゴニストＣＤ４０抗体は、ＣＰ−８７０８９３又はＳＧＮ−４０である）、実施態様１９に記載の抗体又は使用。
２２．
癌を有する被験体が、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ベースの癌治療レジメンの候補であるかどうかを決定するための方法であって、該方法は、次のマーカー：
ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＤ６８／ＣＤ１６３、ＣＤ６８／ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ３１（微小血管密度）、及びＫｉ６７、及び免疫浸潤物等の他のマーカーの一以上のレベルを、被験体のサンプルにおいて、エキソビボ又はインビトロで決定することを含み、
ここでサンプルは、組織、血液、血清、血漿、腫瘍細胞及び循環腫瘍細胞からなる群から選択され；
ここで、ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＤ６８／ＣＤ１６３、ＣＤ６８／ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ３１（微小血管密度）、及びＫｉ６７、及び免疫浸潤物（例えば、Ｔ細胞（例えばＣＤ４−Ｔ細胞及び／又はＣＤ８−Ｔ細胞）の一以上のレベルの変化は、癌に罹患していない個体における対応するレベルと比較して、被験体が抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ベースの癌治療レジメンの候補であることを示す方法。
２３．
前記レジメンで使用される抗体は、実施態様１から２３の何れか一項に記載の抗体である、実施態様２２に記載の方法。
２４．
ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＤ６８／ＣＤ１６３、ＣＤ６８／ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ３１（微小血管密度）、及びＫｉ６７、及び免疫浸潤物（例えば、Ｔ細胞（例えばＣＤ４−Ｔ細胞及び／又はＣＤ８−Ｔ細胞）の一以上のレベルの変化は、癌に罹患していない個体におけるレベルと比較して、これらのマーカーの一以上のレベルの増加である、実施態様２１又は２２に記載の方法。
２５．
癌を有する被験体が抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ベースの癌治療レジメンの候補であるかどうかを決定するための方法であって、該方法は、次のマーカー：
ＣＳＦ−１、Ｔｒａｐ５ｂ、ｓＣＤ１６３、ＩＬ−３４の一以上のレベルを、被験体のサンプルにおいて、エキソビボ又はインビトロで決定することを含み；
ここでサンプルは、組織、血液、血清、血漿、腫瘍細胞及び循環腫瘍細胞からなる群から選択され；
ここで、ＣＳＦ−１、Ｔｒａｐ５ｂ、ｓＣＤ１６３、ＩＬ３４の一以上のレベルの変化は、癌に罹患していない個体における対応するレベルと比較して、被験体が抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ベースの癌治療レジメンの候補であることを示す方法。
２６．
前記レジメンで使用される抗体は、実施態様１から２３の何れか一項に記載の抗体である、実施態様２５に記載の方法。
２７．
ＣＳＦ−１、Ｔｒａｐ５ｂ、ｓＣＤ１６３、ＩＬ−３４のレベルの変化は、癌に罹患していない個体における対応するレベルと比較して、これらのバイオマーカーの一以上のレベルの増加である、実施態様２５又は２６に記載の方法。
２８．
本方法において、ｓＣＤ１６３のエキソビボ又はインビトロのレベル及びレベルの変化が決定される、実施態様２５から２７の何れか一項に記載の方法。
２９．
癌を有する被験体が抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ベースの癌治療レジメンの候補であるかどうかを決定するための方法であって、該方法は、次のマーカー：
ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＭＣＰ−１、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ２２、ＭＩＰ−１、ガレクチン３、ＩＬ１Ｒａ、ＴＧＦアルファの一以上のレベルを、被験体のサンプルにおいて、エキソビボ又はインビトロで決定することを含み；
ここでサンプルは、組織、血液、血清、血漿、腫瘍細胞及び循環腫瘍細胞からなる群から選択され；
ここで、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＭＣＰ−１、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ２２、ＭＩＰ−１、ガレクチン３、ＩＬ１Ｒａ、ＴＧＦアルファの一以上のレベルの変化は、癌に罹患していない個体における対応するレベルと比較して、被験体が抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ベースの癌治療レジメンの候補であることを示す方法。
３０．
前記レジメンで使用される抗体は、実施態様１から２３の何れか一項に記載の抗体である、実施態様２９に記載の方法。
３１．
ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＭＣＰ−１、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ２２、ＭＩＰ−１、ガレクチン３、ＩＬ１Ｒａ、ＴＧＦアルファのレベルの変化は、癌に罹患していない個体における対応するレベルと比較して、これらのバイオマーカーの一以上のレベルの増加である、実施態様２９又は３０に記載の方法。
３２．
抗体は、二重特異性ＡＮＧ２−ＶＥＧＦ抗体と併用して投与される、癌の治療において使用のための、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体。
３３．
抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、アゴニストＣＤ４０抗体と併用して投与さえれる、癌の治療において使用のための、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体。
３４．抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、（ａ）配列番号３９の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号４０の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含み；ここでアゴニストＣＤ４０抗体はＣＰ−８７０，８９３（米国特許第７，３３８，６６０号の抗体２１．４．１）である、実施態様３３に記載の、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体。
３５．
ｉ）抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、（ａ）配列番号３９の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号４０の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含み；及びｉｉ）アゴニストＣＤ４０抗体は（ａ）配列番号８８の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号８９の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、実施態様３３に記載の、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体。
３６．
抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、（ａ）配列番号３９の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号４０の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含み；ここでアゴニストＣＤ４０抗体はダセツズマブである、実施態様３３に記載の、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体。
３７．
ｉ）抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、（ａ）配列番号３９の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号４０の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含み；及びｉｉ）アゴニストＣＤ４０抗体は（ａ）配列番号９０の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号９１の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、実施態様３３に記載の、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体。
３８．
アゴニストＣＤ４０抗体は、
ｉ）ＣＰ−８７０，８９３であり；
ｉｉ）（ａ）配列番号８８の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号８９の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含み；
ｉｉｉ）ダセツズマブであり；又は
ｉｖ）（ａ）配列番号９０の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号９１の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、実施態様３３に記載の、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体。
３９．
抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体が、アゴニストＣＤ４０抗体と併用して投与さえれる、癌の治療において使用のための医薬の製造のための、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体の使用。
４０．
抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、（ａ）配列番号３９の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号４０の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含み；ここでアゴニストＣＤ４０抗体ＣＰ−８７０，８９３（米国特許第７，３３８，６６０号の抗体２１．４．１）である、実施態様３９に記載の使用。
４１．
ｉ）抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、（ａ）配列番号３９の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号４０の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含み；及び
ｉｉ）アゴニストＣＤ４０抗体は、（ａ）配列番号８８の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号８９の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む
実施態様３９に記載の使用。
４２．
抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、（ａ）配列番号３９の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号４０の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含み；ここでアゴニストＣＤ４０抗体はダセツズマブである、実施態様３９に記載の使用。
４３．
ｉ）抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、（ａ）配列番号３９の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号４０の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含み；及び
ｉｉ）アゴニストＣＤ４０抗体は、（ａ）配列番号９０の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号９１の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、
実施態様３９に記載の使用。
４４．
アゴニストＣＤ４０抗体は、
ｉ）ＣＰ−８７０，８９３であり；
ｉｉ）（ａ）配列番号８８の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号８９の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含み；
ｉｉｉ）ダセツズマブであり；又は
ｉｖ）（ａ）配列番号９０の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号９１の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む
実施態様３９に記載の使用。
以下の実施例、配列表及び図面は、本発明、添付の特許請求の範囲に記載されている真の範囲の理解を助けるために提供される。変更は、本発明の精神を逸脱することなく、記載された手順で行うことができることが理解される。
実施例１
抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体を産生するハイブリドーマ細胞株の生成
ＮＭＲＩマウスの免疫化方法
ＮＭＲＩマウスを、エレクトロポレーションを使用して、ｈｕＣＳＦ−１Ｒの細胞外ドメインをコードする発現ベクターｐＤｉｓｐｌａｙＴＭ（Invitrogen, USA）を用いて免疫化した。全てのマウスを１００μｇのＤＮＡで４回免疫化した。抗ｈｕＣＳＦ−１Ｒの血清力価が十分であった場合、マウスを、融合の４及び３日前に、静脈内に（ｉ．ｖ．）、２００μｌのＰＢＳ中に５０μｇの１：１混合ｈｕＣＳＦ−１Ｒ ＥＣＤ／ｈｕＣＳＦ−１Ｒ ＥＣＤｈｕＦｃキメラを用いて１回更にブーストした。
抗原特異的ＥＬＩＳＡ
免疫化マウスの血清中における抗ＣＳＦ−１Ｒ力価を、抗原特異的ＥＬＩＳＡによって決定した。
０．３μｇ／ｍｌのｈｕＣＳＦ−１Ｒ−ｈｕＦｃキメラ（可溶性細胞外ドメイン）を、ストレプトアビジンプレート（ＭａｘｉＳｏｒｂ；MicroCoat, DE、カタログ番号１１９７４９９８／ＭＣ１０９９）において、０．１ｍｇ／ｍｌのビオチン化抗Ｆｃ（Jackson ImmunoResearch、カタログ番号１０９−０６６−０９８）を用いて捕獲し、ＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０／０．５％ＢＳＡにおいて１／８００に希釈された西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲート化Ｆ（ａｂ’）２抗マウス（GE Healthcare, UK、カタログ番号ＮＡ９３１０Ｖ）を加えた。全タップからの血清をＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０／０．５％ＢＳＡにおいて１／４０に希釈し、段階的に１／１６３８４００まで希釈した。希釈血清をウェルに加えた。プレタップ血清ををネガティブコントロールとして使用した。５００ｎｇ／ｍｌ〜０，２５ｎｇ／ｍｌのマウス抗ヒトＣＳＦ−ＩＲ Ｍａｂ３２９１（R&D Systems, UK）の希釈系列をポジティブコントロールとして使用した。全要素を共に１，５時間インキュベートし、ウェルをＰＢＳＴ（ＰＢＳ／０．２％Ｔｗｅｅｎ２０）を用いて６回洗浄し、アッセイを新鮮に調製されたＡＢＴＳ溶液（１ｍｇ／ｍｌ）（ＡＢＴＳ：２，２’−アジノ ビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−スルホン酸）を用いて１０分間室温で展開させた。吸光度を４０５ｎｍで測定した。
ハイブリドーマ生成
マウスリンパ球は単離され、ＰＥＧに基づく標準プロトコルを使用してマウス骨髄腫細胞株を用いて融合されハイブリドーマが生成されうる。得られたハイブリドーマは次いで、抗原特異的抗体の産生に対しスクリーニングされる。例えば、免疫化マウスからの脾臓由来リンパ球の単一細胞懸濁液は、５０％ＰＥＧを用いてＡｇ８非分泌マウス骨髄腫細胞Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３（ＡＴＣＣ，ＣＲＬ−１５８０）と融合される。細胞は、平底９６ウェルマイクロタイタープレートにおよそ１０４でプレーティングされ、次いで選択培地において約２週間インキュベートされる。個々のウェルは次いで、ＥＬＩＳＡによって、ヒト抗ＣＳＦ−１ＲモノクローナルＩｇＭ及びＩｇＧ抗体に対してスクリーニングされる。一旦大規模なハイブリドーマ増殖が生じたら、抗体分泌ハイブリドーマは再プレーティングされ、再度スクリーニングされ、もしヒトＩｇＧ抗ＣＳＦ−１Ｒモノクローナル抗体に対して依然として陽性である場合には、ＦＡＣＳによってサブクローニングされうる。安定サブクローンは次いで、特徴づけのために組織培養培地において抗体を生産するためにインビトロで培養される。本発明による抗体は、実施例４に記載されるように、ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４及びヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）に対する抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の結合の決定と、並びに実施例５に記載されるように、抗ＣＳＦ−１Ｒモノクローナル抗体による処置の元で、野生型ＣＳＦ−１Ｒ（リガンド依存性シグナル伝達）又は変異型ＣＳＦ−１Ｒ Ｌ３０１Ｓ Ｙ９６９Ｆ（リガンド非依存性シグナル伝達）でトランスフェクトされたＮＩＨ３Ｔ３細胞の増殖阻害の決定を用いて選択することができた。
ハイブリドーマの培養
生成されたｍｕＭＡｂハイブリドーマを、２ｍＭのＬ−グルタミン（ＧＩＢＣＯ−カタログ番号３５０５０−０３８）、１ｍＭのＮａ−Ｐｙｒｕｖａｔ（ＧＩＢＣＯ−カタログ番号１１３６０−０３９）、１ｘＮＥＡＡ（ＧＩＢＣＯ−カタログ番号１１１４０−０３５）、１０％ＦＣＳ（ＰＡＡ−カタログ番号Ａ１５−６４９）、１ｘＰｅｎ Ｓｔｒｅｐ（Ｒｏｃｈｅ−Ｃａｔ．Ｎｏ．１０７４４４０）、１ｘＮｕｔｒｉｄｏｍａ ＣＳ（Ｒｏｃｈｅ−カタログ番号１３６３７４３）、５０μＭのメルカプトエタノール（ＧＩＢＣＯ−カタログ番号３１３５０−０１０）及び５０Ｕ／ｍｌのＩＬ６マウス（Ｒｏｃｈｅ−カタログ番号１４４４５８１）で補充されたＲＰＭＩ １６４０（ＰＡＮ−カタログ番号ＰＯ４−１７５００）において、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。得られたマウス抗体の幾つかは、ヒト化され（例えば、Ｍａｂ ２Ｆ１１）、組換え的に発現された。
実施例２
ＣＳＦ−１ＲへのＣＳＦ−１の結合の阻害（ＥＬＩＳＡ）
最初に、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体をＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤに結合させ、その後受容体に結合していないリガンドを検出する本アッセイを設定することにより、リガンド置換抗体及び二量体化阻害抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の両方を試験することができる。試験を、３８４ウェルマイクロタイタープレート（MicroCoat,DE、カタログ番号４６４７１８）において室温で実施した。各インキュベーション工程後、プレートをＰＢＳＴで３回洗浄した。
初めに、プレートを、０．５ｍｇ／ｍｌのヤギＦ（ａｂ’）２ビオチン化抗Ｆｃ（Jackson ImmunoResearch., カタログ番号１０９−００６−１７０）で、１時間（ｈ）コートした。
その後、ウェルを、０．２％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−２０及び２％ＢＳＡ（Roche Diagnostics GmbH, DE）で補充されたＰＢＳで０．５ｈブロックした。７５ｎｇ／ｍｌのｈｕＣＳＦ−１Ｒ−ｈｕＦｃキメラ（ｈｕＣＳＦ−１Ｒの可溶性細胞外ドメインを形成する）を、１ｈ、プレートに固定化した。次いで、ＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０／０．５％ＢＳＡ中における精製抗体の希釈を、１ｈ、インキュベートした。３ｎｇ／ｍｌのＣＳＦ−１（ヒトＣＳＦ−１の活性な１４９アミノ酸断片（配列番号８６のアミノ酸３３−１８１；Biomol, DE, カタログ番号６０５３０））、５０ｎｇ／ｍｌのビオチン化抗ＣＳＦ−１クローンＢＡＦ２１６（R&D Systems,UK）及び１：５０００に希釈されたストレプトアビジンＨＲＰ（Roche Diagnostics GmbH, DE, カタログ番号１１０８９１５３００１）の混合物を１ｈ加えた後、プレートをＰＢＳＴで６回洗浄した。リガンド−受容体相互作用を阻害する抗ＣＳＦ−１Ｒ ＳＣ ２−４Ａ５（Santa Cruz Biotechnology, US）を、ポジティブコントロールとして使用した。プレートを、新鮮に調製されたＢＭブルー（登録商標）ＰＯＤ基質溶液（ＢＭブルー：３，３´−５，５´−テトラメチルベンジジン、Roche Diagnostics GmbH, DE, カタログ番号１１４８４２８１００１）を用いて３０分間室温で展開させた。吸光度を３７０ｎｍで測定した。抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体が二量体複合体からのＣＳＦ−１の放出を生じる場合に、吸光の減少が観察される。全ての抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、ＣＳＦ−１ＲとのＣＳＦ−１の相互作用の有意な阻害を示した（表１を参照）。リガンド−受容体相互作用を阻害する抗ＣＳＦ−１Ｒ ＳＣ２−４Ａ５（Santa Cruz Biotechnology, Sherr, C.J. et al., Blood 73 (1989) 1786-1793も参照）を基準コントロールとして使用した。
実施例３
ＮＩＨ３Ｔ３−ＣＳＦ−１Ｒ組換え細胞におけるＣＳＦ−１誘発ＣＳＦ−１Ｒリン酸化の阻害
完全長ＣＳＦ−１Ｒに対する発現ベクターでレトロウイルス性感染された４．５ｘ１０３のＮＩＨ ３Ｔ３細胞を、ＤＭＥＭ（PAAカタログ番号Ｅ１５−０１１）、２ｍＭのＬ−グルタミン（Sigma、カタログ番号Ｇ７５１３、２ｍＭのピルビン酸ナトリウム、１ｘ非必須アミノ酸、１０％ＦＫＳ（PAA、カタログ番号Ａ１５−６４９）及び１００μｇ／ｍｌのＰｅｎＳｔｒｅｐ（Sigma、カタログ番号Ｐ４３３３［１０ｍｇ／ｍｌ］）において、それらがコンフルエンシーに達するまで培養した。その後、細胞を、亜セレン酸ナトリウム［５ｎｇ／ｍｌ］（Sigma、カタログ番号Ｓ９１３３）、トランスフェリン［１０μｇ／ｍｌ］（Sigma、カタログ番号Ｔ８１５８）、ＢＳＡ［４００μｇ／ｍｌ］（Roche Diagnostics GmbH、カタログ番号１０７３５０７８）、４ｍＭのＬ−グルタミン（Sigma、カタログ番号Ｇ７５１３）、２ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Gibco、カタログ番号１１３６０）、１ｘ非必須アミノ酸（Gibco、カタログ：１１１４０−０３５）、２−メルカプトエタノール［０，０５ｍＭ］（Merck、カタログ番号Ｍ７５２２）、１００μｇ／ｍｌ及びＰｅｎＳｔｒｅｐ（Sigma、カタログ番号Ｐ４３３３）で補充された無血清ＤＭＥＭで洗浄し、３０μｌの同じ培地において１６時間インキュベートし、受容体をアップレギュレーションさせた。１０μｌの希釈抗ＣＳＲ−１Ｒ抗体を細胞に１．５ｈ加えた。次いで、細胞を５分間、１０μｌの１００ｎｇ／ｍｌのｈｕＣＳＦ−１（ヒトＣＳＦ−１の活性１４９アミノ酸断片（配列番号８６のアミノ酸３３−１８１）；Biomol, DE、カタログ番号６０５３０）で刺激した。インキュベーション後、上澄みを取り除き、細胞を８０μｌの氷冷ＰＢＳで２回洗浄し、５０μｌの新鮮に調製された氷冷溶解バッファー（１５０ｍＭのＮａＣｌ／２０ｍＭのＴｒｉｓ ｐＨ７．５／１ｍＭのＥＤＴＡ／１ｍＭのＥＧＴＡ／１％トリトンＸ１００／１プロテアーゼインヒビタータブレット（Roche Diagnostics GmbHカタログ番号１８３６１７０）ｐｅｒ１０ｍｌのバッファー／１０μｌ／ｍｌのホスファターゼインヒビターカクテル１（Sigma カタログ番号Ｐ−２８５０、１００ｘＳｔｏｃｋ）／１０μｌ／ｍｌのプロテアーゼインヒビター１（Sigma カタログ番号Ｐ−５７２６、１００ｘＳｔｏｃｋ）／１０μｌ／ｍｌ １ＭのＮａＦ）を加えた。氷上に３０分後、プレートをプレートシェイカー上で３分間勢いよく振とうさせ、次いで２２００ｒｐｍで１０分間遠心分離させた（Ｈｅｒａｅｕｓ Ｍｅｇａｆｕｇｅ １０）。
細胞溶解物におけるリン酸化及び全ＣＳＦ−１受容体の存在を、Ｅｌｉｓａで分析した。リン酸化受容体の検出のために、R&D Systems （カタログ番号ＤＹＣ３２６８−２）からのキットを、サプライヤーの指示に従って使用した。全ＣＳＦ−１Ｒの検出のために、１０μｌの溶解物を、キットに含まれる捕獲抗体の使用によりプレートに固定化した。その後、１：７５０に希釈されたビオチン化抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ＢＡＦ３２９（R&D Systems）及び１：１０００に希釈されたストレプトアビジン−ＨＲＰコンジュゲートを加えた。６０分後、プレートを新鮮に調製されたＡＢＴＳ（登録商標）溶液で展開させ、吸光度を検出した。データを、抗体を用いないポジティブコントロールの％、及び発現されたリン酸／全受容体の比率として算出した。ネガティブコントロールを、Ｍ−ＣＳＦ−１を加えずに定義した。リガンド−受容体相互作用を阻害する抗ＣＳＦ−１Ｒ ＳＣ２−４Ａ５（Santa Cruz Biotechnology, Sherr, C.J. et al., Blood 73 (1989) 1786-1793も参照）を基準コントロールとして使用した。
実施例４
抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の、ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４及びヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）への結合の決定
配列番号６４のヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）（細胞外サブドメインＤ１−Ｄ５を含む、ｈＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）の調製
ｐＣＭＶ−ｐｒｅＳ−Ｆｃ−ｈＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ（７８３６塩基対）は、ＣＭＶプロモーターの制御下で、Ｃ末端がＰｒｅＳｃｉｓｓｉｏｎプロテアーゼ切断部位に融合し、続いてヒトＩｇＧ１のアミノ酸１００−３３０及び６ｘヒスタグが続く、ヒトＣＳＦ−１Ｒの完全なＥＣＤ（配列番号６４）をコードする。天然のシグナルペプチドは、ＢａｍＨＩ制限酵素部位をつくるために、最初のＭの後にアミノ酸のＧ及びＳを挿入することにより変えられている。
配列番号６５のヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４（細胞外サブドメインＤ１−Ｄ３、及びＤ５を含む、ｈＣＳＦ−１Ｒ−ｄｅｌＤ４）の調製：
ｈＣＳＦ１Ｒ−ｄｅｌＤ４−Ｖ１−ＰｒｅＳｃ−ｈＦｃ−Ｈｉｓは、ストラタジーン社のＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ ＸＬ部位特異的突然変異誘発のプロトコルを用いて、フォワードプライマーとして配列ＣＡＣＣＴＣＣＡＴＧＴＴＣＴＴＣＣＧＧＴＡＣＣＣＣＣＣＡＧＡＧＧＴＡＡＧ（配列番号６８）を有するｄｅｌＤ４−ｆｏｒを使用し、リバースプライマーとして逆相補配列を有するｄｅｌＤ４−ｒｅｖを使用して、ｐＣＭＶ−ｐｒｅＳ−Ｆｃ−ｈＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤからクローニングされた。BioTechniques 26(1999)680に出版されたプロトコールの変法が使用され、ストラタジーン社の正規プロトコルに先行する３つのサイクルにおいて別々反応で両方のプライマーを拡張した。
２つの独立した５０μｌの反応混合物が製造者のマニュアルに従い設定され、各々は鋳型としてプラスミドｐＣＭＶ−ｐｒｅＳ−Ｆｃ−ｈＣＳＦ１Ｒ−ＥＣＤを１０ｎｇ、プライマーのｄｅｌＤ４−ｆｏｒ又はｄｅｌＤ４−ｒｅｖの一方を１０ｐＭ，及びキットで提供されたＰｆｕ ＤＮＡポリメラーゼを０．５μｌ含有する。３回のＰＣＲサイクル、９５ｏＣで３０秒／５５ｏＣで６０秒／６８ｏＣで８分が実行され、その後両方の反応混合物の各々２５μｌが新しいチューブに混合され、０．５μｌの新鮮なＰｆｕ ＤＮＡポリメラーゼが添加された。ストラタジーン社によってキットのマニュアルに指定された１８の温度サイクルによる正規のＰＣＲプロトコールが実施され、続いてキットに提供されたＤｐｎ１制限酵素で２時間最終の消化を行った。欠失を有するクローンはＣＥＬ ＩＩ及びＮｏｔ Ｉによる消化によって検出され、シークエンシングにより確認された。
タンパク質は、製造元の仕様に従って、Ｈｅｋ２９３ ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ懸濁細胞システム（Invitrogen）中で一過性トランスフェクションによって調製した。１週間後、５００ｍｌの上清が濾過され、１ｍｌのＨｉＴｒａｐ ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｘｔｒａ（GE healthcare）プロテインＡカラムへロードされた（０．２ｍｌ／分）。カラムは最初にＰＢＳで洗浄され、その後５０ｍＭのＴｒｉｓ／１５０ｍＭのＮａＣｌ／１ｍＭのＥＤＴＡ／ｐＨ７，３で洗浄された。同じバッファーの３７５μｌに希釈された７５μｌのＰｒｅＳｃｉｓｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｅａｓｅ（GE ＃２７−０８４３−０１）がカラムにロードされて、クローズドカラムは４℃でローリングさせながら一晩インキュベートした。カラムは１ｍｌのＧＳＴｒａｐ ＦＦカラム（GE helthcare）の上にマウントされ、望みのタンパク質が溶出された（０．２ｍｌ／分，０．２ｍｌフラクション）。プールされたフラクションは、３ｋナノセップ（Ｎａｎｏｓｅｐ）での遠心限外ろ過により、１．８ｍｌから０．４ｍｌへ濃縮され、ＰＢＳ中でＳ２００ ＨＲ ＳＥＣ上でクロマトグラフされた（０．５ｍｌ／分）。
ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４は２つのフラクションで得られ、二量体分子として（プール１、Ｖ＝１．５ｍｌ；ｃ＝０．３０ｍｇ／ｍｌ；ＳＤＳページでの見かけの質量は８３ｋＤａ，換算質量６２ｋＤａ）、及び単量体として（プール２、Ｖ＝１．４ｍｌ；ｃ＝０．２５ｍｇ／ｍｌ；ＳＤＳページでの見かけの質量は６２ｋＤａ）。二量体形態が全ての実験で使用された。
抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体のヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４への結合及びヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）への結合の決定（反応単位（ＲＵ）としての結合シグナル）：
機器：ビアコアＴ１００（GE Healthcare）
ソフトウエア：Ｔ１００コントロール、バージョン２．０．１
Ｔ１００エバリュエーション、バージョン２．０．２
アッセイ形式 チップ：ＣＭ５
温度：２５°Ｃ
ＣＳＦ−１Ｒ断片はアミンカップリングを介して固定された。本発明による抗体による異なる抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の結合を比較するため、試験抗体の一つの濃度が注入された。抗ＣＳＦ−１ＲのＭａｂ３２９１（R&D-Systems）及びＳＣ ２−４Ａ５（Santa Cruz Biotechnology,US- Sherr, C.J. et al., Blood 73 (1989) 1786-1793も参照）が、参照コントロールとして使用され、抗ＣＣＲ５の＜ＣＣＲ５＞Ｐｚ０３．１Ｃ５（２００４年８月１８日にＤＳＭＺにＤＳＭ ＡＣＣ ２６８３として寄託された）が陰性コントロールとして使用され、全ては本発明による抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体と同じ条件下で使用された。
ＣＳＦ−１Ｒ断片のアミンカップリング
製造者の指示に従った標準的なアミンカップリング：ランニングバッファー：ＰＢＳ−Ｔ（Roche：１１ ６６６ ７８９＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０：１１ ３３２ ４６５）、ＥＤＣ／ＮＨＳの混合物による活性化、ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４（細胞外サブドメインＤ１−Ｄ３及びＤ５を含む）（配列番号６５）及びヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）（細胞外サブドメインＤ１−Ｄ５を含む）（配列番号６４）を６００秒、流速１０μｌ／分で注入；カップリングバッファーＮａＡｃ、ｐＨ５．０、ｃ＝１０μｇ／ｍＬで希釈し；最後に残りの活性化カルボキシル基は、１Ｍのエタノールアミンの注入によってブロックされた。
＜ＣＳＦ−１Ｒ＞Ｍａｂ２Ｆ１１、Ｍａｂ２Ｅ１０、Ｍａｂ３２９１及びｓｃ２−４Ａ５、及び他の抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体のヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４及びヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）への２５℃における結合
ランニングバッファー：ＰＢＳ−Ｔ（Ｒｏｃｈｅ： １１ ６６６ ７８９＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０：１１ ３３２ ４６５）
分析物サンプル：
結合は、分析物を濃度ｃ＝１０ｎＭで１回の注入により、３０μＬ／分の流速で測定された。（Ｍａｂ １Ｇ１０、Ｍａｂ ２Ｈ７及びヒト化ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７については第二の実験で）。各注入は７００秒の長さであり、その後１８０秒の分離段階が続いた。最終の再生は、各サイクル後に５０ｍＭのＮａＯＨを用い、接触時間６０秒、流速３０μＬ／分で行われた。
シグナルは注入終了後１０秒の報告点により測定された。参照シグナル（空の参照フローセル（ＥＤＣ／ＮＨＳ及びエタノールアミンのみで処置）由来のシグナル）が差し引かれて、結合シグナルを（ＲＵとして）与えた。非結合抗体の結合シグナルがわずかに０未満であった場合には（Ｍａｂ ２Ｆ１１＝−３；Ｍａｂ ２Ｅ１０＝−２；Ｍａｂ １Ｇ１０＝−６，Ｍａｂ ２Ｈ７＝−９；及びヒト化ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７＝−７）、値は０に設定された。
Ｍａｂ ２Ｆ１１及びＭａｂ ２Ｅ１０はヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）への結合を示した（図２ｂを参照）；しかし、ＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４に対しては結合は検出されなかった（図２ａ参照）。
Ｓｃ２−４Ａ５およびＭＡＢ３２９１はＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ及びｄｅｌ Ｄ４への結合を示した（図２ｂ及び２ａを参照）。
従って、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体Ｍａｂ ２Ｆ１１及びＭａｂ ２Ｅ１０のＣＳＦ１Ｒ断片ｄｅｌＤ４への結合／抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体Ｍａｂ ２Ｆ１１及びＭａｂ ２Ｅ１０のＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤへの結合の比率は明らかに１：５０（＝０．０２）未満であったが、ＭＡＢ３２９１及びＳｃ２−４Ａの結合比率はそれぞれ１．６１及び１．５０であって、１：５０（＝０．０２）を超えて大きかった。陰性コントロール抗体ｍ＜ＣＣＲ５＞Ｐｚ０３．１Ｃ５はいかなる結合をも示さなかった（予想された通り）。
Ｍａｂ １Ｇ１０、Ｍａｂ ２Ｈ７及びヒト化ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７はヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）への結合を示したが（図２ｄを参照）；しかしＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４に対して、結合は検出されなかった（図２ｃを参照）。従って、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体のＭａｂ １Ｇ１０、Ｍａｂ ２Ｈ７及びヒト化ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７のＣＳＦ１Ｒ断片ｄｅｌＤ４への結合／抗ＣＳＦ１Ｒ抗体のＭａｂ １Ｇ１０、Ｍａｂ ２Ｈ７及びヒト化ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７のＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤへの結合の比率は、明らかに１：５０（＝０．０２）未満であった。
更なる実験にて、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体１．２．ＳＭ（国際公開第２００９０２６３０３号に記載されたリガンド置換ＣＳＦ−１Ｒ抗体）、ＣＸＩＩＧ６（国際公開第２００９／１１２２４５号に記載されたリガンド置換ＣＳＦ−１Ｒ抗体）、ヤギポリクローナル抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ａｂ１０６７６（abcam）が調べられた。抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体のＭａｂ３２９１（R&D-Systems）が参照コントロールとして用いられた。抗ＣＣＲ５ ｍ＜ＣＣＲ５＞Ｐｚ０３．１Ｃ５（ＤＳＭＺに２００４年８月１８日にＤＳＭ ＡＣＣ ２６８３として寄託された）が陰性コントロールとして使用された。
１．２．ＳＭ、ＣＸＩＩＧ６、ａｂ１０６７６及びＭＡＢ３２９１は、ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤへ及びｄｅｌ Ｄ４への結合を示した（図２ｆ及び２ｅを参照）。
１．２．ＳＭ、ＣＸＩＩＧ６、ａｂ１０６７６及びＭＡＢ３２９１の結合比率は１：５０（＝０．０２）を超えて大きかった。陰性コントロール抗体ｍ＜ＣＣＲ５＞Ｐｚ０３．１Ｃ５はいかなる結合をも示さなかった（予想された通り）。
実施例５
抗ＣＳＦ−１Ｒモノクローナル抗体による処置下での３次元培養におけるＮＩＨ３Ｔ３−ＣＳＦ−１Ｒ組換え細胞の増殖阻害（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ−アッセイ）
全長の野生型ＣＳＦ−１Ｒ（配列番号６２）又は変異体ＣＳＦ−１Ｒ Ｌ３０１Ｓ Ｙ９６９Ｆ（配列番号６３）の何れかでレトロウイルス性に感染させたＮＩＨ ３Ｔ３細胞が、プラスチック表面への付着を防ぐためにポリ−ＨＥＭＡ（ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート））（Polysciences,Warrington,PA,USA））でコーティングされたディッシュ上で、２ｍＭのＬ−グルタミン、２ｍｍのピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸及び１０％ウシ胎児血清（Sigma,Taufkirchen,Germany）を補充されたＤＭＥＭ高グルコース培地（PAA,Pasching,Austria）で培養された。細胞は、血清を５ｎｇ／ｍｌ亜セレン酸ナトリウム、１０ｍｇ／ｍｌトランスフェリン、４００μｇ／ｍｌＢＳＡ及び０．０５ｍＭの２−メルカプトエタノールで置き換えた培地に播種される。１００ｎｇ／ｍｌのｈｕＣＳＦ−１（ヒトＣＳＦ−１の活性な１４９アミノ酸断片（配列番号８６のアミノ酸３３−１８１）； Biomol, DE、カタログ番号６０５３０）で処置されると、ｗｔＣＳＦ−１Ｒ発現細胞は、足場非依存性と呼ばれている性質である、３次元的に成長する密集したスフェロイドを形成する。これらのスフェロイドはインサイツで固形腫瘍の３次元的な構築と組織化に密接に類似している。変異体ＣＳＦ−１Ｒ組換え細胞はＣＳＦ−１リガンドと無関係な球状体を形成する。球状体培養物はＩＣ５０（細胞生存率の５０パーセント阻害の濃度）を決定するため、異なる濃度の抗体の存在下、３日間インキュベートされた。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏアッセイは、細胞のＡＴＰ含有量の測定により細胞生存率を検出するために用いられた。
参照コントロールのＭａｂ R&D-Systems ３２９１は変異体ＣＳＦ−１Ｒ組換え細胞増殖の阻害を示さなかった。
さらなる実験では、本発明による抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７、及び抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体、１．２．ＳＭ（国際公開第２００９０２６３０３号に記載されたリガンド置換ＣＳＦ−１Ｒ抗体）、ＣＸＩＩＧ６（国際公開第２００９／１１２２４５号に記載されたリガンド置換ＣＳＦ−１Ｒ抗体）、ヤギポリクローナル抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体のａｂ１０６７６（abcam）、及び２−４Ａ５（Santa Cruz Biotechnology,US- Sherr, C.J. et al., Blood 73 (1989) 1786-1793も参照）が調べられた。
スフェロイド培養物はＩＣ３０（細胞生存率の３０パーセント阻害の濃度）を決定するため、異なる濃度の抗体の存在下、３日間インキュベートされた。最大濃度は２０μｇ／ｍｌであった。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏアッセイは、細胞のＡＴＰ含有量の測定により細胞生存率を検出するために用いられた。
実施例６
抗ＣＳＦ−１Ｒモノクローナル抗体で処置下の３次元培養物におけるＢｅＷｏ腫瘍細胞の増殖阻害（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ−アッセイ）
ＢｅＷｏ絨毛癌細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ−９８）が、１０％ＦＢＳ及び２ｍＭのＬ−グルタミンを補充されたＦ１２Ｋ培地（Sigma,Steinheim,Germany）で培養された。５ｘ１０４細胞／ウエルが９６穴のポリＨＥＭＡ（ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート））でコーティングされた、０．５％ＦＢＳ及び５％ＢＳＡを補充されたＦ１２Ｋ培地を含むプレートに播種された。付随して、２００ｎｇ／ｍｌのｈｕＣＳＦ−１（ヒトＣＳＦ−１の活性な１４９アミノ酸断片（配列番号８６のアミノ酸３３−１８１））及び１０μｇ／ｍｌの異なる抗ＣＳＦ−１Ｒモノクローナル抗体が添加され、６日間インキュベートされた。細胞生存率を、その細胞のＡＴＰ含有量を測定することにより相対発光量（ＲＬＵ）で検出するために、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏアッセイが用いられた。ＢｅＷｏ球状体培養物が別々の抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体（１０μｇ／ｍｌ）で処置されると、ＣＳＦ−１誘導性増殖の阻害が観察された。抗体媒介性阻害を計算するために、非刺激ＢｅＷｏ細胞の平均のＲＬＵ値が全てのサンプルから差し引かれた。ＣＳＦ−１刺激細胞の平均のＲＬＵ値は任意で１００％に設定された。ＣＳＦ−１で刺激され、かつ抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体で処置された細胞の平均のＲＬＵ値は、ＣＳＦ−１で刺激されたＲＬＵの％で計算された。表６は、抗ＣＳＦ−１Ｒモノクローナル抗体で処置される３次元培養におけるＢｅＷｏ腫瘍細胞の増殖阻害についての計算されたデータを示す；図１ａ及びｂは規格化された平均のＲＬＵ値を表わす。
実施例７
抗ＣＳＦ−１Ｒモノクローナル抗体による処置下でのヒトマクロファージ分化の阻害（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ−アッセイ）
ヒトの単球がＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐＴＭヒト単球濃縮カクテル（Human Monocyte Enrichment Cocktail）（StemCell Tech.カタログ番号１５０２８）を用いて末梢血から単離された。濃縮された単球個体群は、３７℃、５％のＣＯ２の加湿した大気中で、１０％ＦＣＳ（ＧＩＢＣＯ−カタログ番号０１１−０９００１４Ｍ），４ｍＭのＬ−グルタミン（ＧＩＢＣＯ−カタログ番号２５０３０）及び１ｘＰｅｎＳｔｒｅｐ（Roche カタログ番号１ ０７４ ４４０）を補充された１００μｌのＲＰＭＩ １６４０（Ｇｉｂｃｏ−カタログ番号３１８７０）を含む９６穴のマイクロタイタープレートへ播種された（２．５ｘ１０４細胞／ウエル）。培地に１５０ｎｇ／ｍｌのｈｕＣＳＦ−１が添加されると、接着性マクロファージへの明確な分化が観察された。この分化は抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の添加で阻害された。更に、単球の生存が影響を受けており、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（ＣＴＧ）分析により分析することができた。抗体処置による単球の生存の濃度依存性阻害からＩＣ５０が計算された（図７を参照）。
別の試験シリーズにおいて、Ｍａｂ ２ Ｆ１１のヒト化型、例えば、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｃ１１、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｄ８、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７、ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｆ１２、は、ＩＣ５０の値として、０．０７μｇ／ｍｌ（ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｃ１１）、０．０７μｇ／ｍｌ（ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｄ８）、０．０４μｇ／ｍｌ（ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７）及び０．０９μｇ／ｍｌ（ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｆ１２）を示した。
実施例８
抗ＣＳＦ−１Ｒモノクローナル抗体による処置下でのカニクイザルマクロファージ分化の阻害（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ−アッセイ）
カニクイザル単球は、ＣＤ１４ ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓの非ヒト霊長類キット（Miltenyi Biotec−カタログ番号１３０−０９１−０９７）を製造者の記述に従って使用して、末梢血から単離された。濃縮された単球個体群は、３７℃、５％のＣＯ２の加湿した大気中で、１０％ＦＣＳ（GIBCO−カタログ番号０１１−０９００１４Ｍ），４ｍＭのＬ−グルタミン（GIBCO−カタログ番号２５０３０）及び１ｘＰｅｎＳｔｒｅｐ（Roche カタログ番号１ ０７４ ４４０）を補充された１００μｌのＲＰＭＩ １６４０（Ｇｉｂｃｏ−カタログ番号３１８７０）を含む９６穴のマイクロタイタープレートへ播種された（１−３ｘ１０４細胞／ウエル）。培地に１５０ｎｇ／ｍｌのｈｕＣＳＦ−１が添加されると、接着性マクロファージへの明確な分化が観察された。この分化は抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の添加で阻害された。更に、単球の生存が影響を受けており、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（ＣＴＧ）分析により分析することができた。生存率は５ μｇ／ｍｌ 濃度の抗体処置で分析された（図８を参照）。
実施例９
抗ＣＳＦ−１Ｒモノクローナル抗体を用いた処置下での、ヒトＭ１及びＭ２の阻害（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏアッセイ）
ヒト単球をＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐＴＭヒト単球濃縮カクテルを使用して、末梢血から単離した（StemCell Tech. −カタログ番号１５０２８）。濃縮された単球集団は、加湿大気中、３７℃、５％ＣＯ２で、１０％ＦＣＳ（GIBCO−カタログ番号０１１−０９００１４Ｍ）、４ ｍＭのＬ−グルタミン（GIBCO−カタログ番号２５０３０）及び１×ＰｅｎＳｔｒｅｐ（ロシュカタログ番号１０７４４４０）を補充した１００μｌのＲＰＭＩ１６４０（Gibco−カタログ番号３１８７０）中で、９６ウェルマイクロタイタープレートに播種した（２．５ｘ１０４細胞／ウェル）。１００ｎｇ／ｍｌのｈｕＣＳＦ−１を６日間培地に添加した場合、細長い形態を有する、接着性のＭ２マクロファージへの明らかな分化を観察することができた。１００ｎｇ／ｍｌのｈｕＧＭ−ＣＳＦを６日間培地に添加した場合、丸い形態を有する、接着性のＭ１マクロファージへの明らかな分化を観察することができた。フローサイトメトリーによって評価される場合、この分化は、Ｍ２マクロファージに対してＣＤ１６３、Ｍ１マクロファージに対してＣＤ８０または高ＭＨＣクラスＩＩなど特定のマーカーの発現と関連していた。細胞をＰＢＳで洗浄し、接着する場合には、５ｍＭのＥＤＴＡのＰＢＳ溶液を用いて剥離した（３７℃で２０分）。細胞は、その後、十分に再懸濁し、染色緩衝液（ＰＢＳ中の５％ＦＣＳ）で洗浄し、５分間３００×ｇで遠心分離した。ペレットを１ｍｌの染色緩衝液に再懸濁し、そして細胞をノイバウアーチャンバー中で計数した。約１ｘ１０ｅ５細胞を各ＦＡＣＳチューブに移し、５分間３００×ｇで遠心分離し、染色緩衝液に再懸濁した。Ｆｃγレセプターは、氷上で２０分間、染色緩衝液中で１μｇのヒトＩｇＧ／２，５ｘ１０ｅ４細胞（ＪＩＲカタログ番号００９−０００−００３）とのインキュベーションによりブロックした。次に、細胞をＣＤ８０及びＣＤ１６３を検出するために１，５μｌ抗体／２，５ｘ１０ｅ４細胞と混合し、一方ＭＨＣクラスＩＩを検出するために５μｌの抗体／２，５ｘ１０ｅ４細胞を使用した：ＰＥ標識化マウス抗ヒトＣＤ１６３（BD Bioscienceカタログ番号５５６０１８）、ＰＥ標識化マウス抗ヒトＣＤ８０（BD Bioscience カタログ番号５５７２２７）及びアレクサ６４７（Ａｌｅｘａ ６４７）標識化マウス抗ヒトＭＨＣクラスＩＩ（Dako−カタログ番号Ｍ０７７５）。アレクサ６４７（Ａｌｅｘａ ６４７）標識を、ゼノンのアレクサ６４７抗マウスＩｇＧ標識キットを使用して抗体にコンジュゲートさせた（Invitrogen、カタログ番号Ｚ２５００８）。氷上で１時間インキュベート後に、細胞は染色緩衝液で２回洗浄し、再度懸濁し、ＦＡＣＳ ＣａｎｔｏＩＩで測定した。
排他的に、ＣＤ１６３の発現、ＣＤ８０の欠如及び低ＭＨＣクラスＩＩ発現を特徴としている、Ｍ２マクロファージ分化は、ヒト抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ｈＭａｂ２Ｆ１１−Ｅ７の添加により阻害され得る。更に、Ｍ１でなくＭ２マクロファージの生存が影響を受け、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（ＣＴＧ）分析によって分析することができた。７日間の抗体処理によるマクロファージの生存の濃度依存性阻害は、図５ａに示される。フローサイトメトリーによって評価されるＭ１及びＭ２マクロファージマーカーの発現は、図５ｂに示される。
実施例１０
ヒトＣＳＦ−１Ｒへの抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の結合親和性の決定
機器：ビアコア（登録商標）Ａ１００
チップ：ＣＭ５（ビアコアＢＲ−１００６−６８）
カップリング：アミンカップリング
緩衝液：（ビアコアＢＲ−１００６−７２）、ｐＨ７．４、３５℃
親和性の測定において、３６μｇ／ｍｌの抗マウスＦｃｇ抗体（ヤギ由来、Jackson Immuno Reasearch ＪＩＲ１１５−００５−０７１）が、ＣＳＦ−１Ｒに対する抗体を捕獲するためにチップ表面へ結合された。ヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（ＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）（細胞外サブドメインＤ１−Ｄ５を含む）（配列番号６４）（R&D-Systems ３２９−ＭＲ又はサブクローニングされたｐＣＭＶ−ｐｒｅｓＳ−ＨｉｓＡｖｉｔａｇ−ｈＣＳＦ−１Ｒ−ＥＣＤ）が、様々な濃度で溶液に添加された。会合は３５℃で１．５分のＣＳＦ−１Ｒ注入により測定された；解離は３５℃で１０分間、バッファーでチップ表面を洗浄することで測定された。反応速度論的パラメーターの計算についてはラングミュア１：１モデルが使用された。
ＣＳＦ−１Ｒ ＥＣＤを使用する別のビアコア結合アッセイにおいて（データ非公開）、抗体Ｍａｂ ２Ｆ１１及びＭａｂ ２Ｅ１０の抗体Ａｂ ＳＣ−２−４Ａ５との一部の競合が示された。しかし、Ｍａｂ ２Ｆ１１／Ｍａｂ ２Ｅ１０はヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４に結合せず、一方Ａｂ ＳＣ−２−４Ａ５はこのｄｅｌＤ４断片に結合する（実施例４及び図２ａを参照）。従って、Ｍａｂ ２Ｆ１１／Ｍａｂ ２Ｅ１０の結合領域はＡｂ ＳＣ−２−４Ａ５の結合領域とは明らかに異なるが、恐らく近傍領域に位置している。そうした競合アッセイにおいて、抗体Ｍａｂ ２Ｆ１１及びＭａｂ ２Ｅ１０の両方ともR&D-SystemsのＭａｂ３２９１と競合しなかった（データ非公開）。
実施例１１
抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体のヒトＣＳＦ−１Ｒ断片Ｄ１−Ｄ３への結合の決定
機器：ビアコアＴ１００（GE Healthcare）
ソフトウエア：Ｔ１００コントロール，バージョン１．１．１１
Ｂ３０００エバリュエーション、バージョン４．０１
スクラバー、バージョン２．０ａ
アッセイ形式 チップ：ＣＭ５−チップ
ＣＳＦ−１Ｒに対する抗体は、アミン結合の捕獲分子を介して捕獲された。単一サイクル反応速度論を用い、ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片Ｄ１−Ｄ３（配列番号６６）が、濃度を増加させながら５回注入された。ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片Ｄ１−Ｄ３は、ｐＣＭＶ−ｐｒｅｓＳ−ＨｉｓＡｖｉｔａｇ発現ベクターにサブクローニングされた。
抗ＣＳＦ−１Ｒ ＳＣ ２−４Ａ５（Santa Cruz Biotechnology,US;Sherr, C.J. et al., Blood 73 (1989) 1786-1793）（リガンド−レセプター相互作用を阻害する）及びＭａｂ３２９１（R&D-Systems）が参照コントロールとして用いられた。
捕獲分子：本発明による抗体として抗マウスＦｃｇ抗体（ヤギ由来、Jackson Immuno Reasearch ＪＩＲ１１５−００５−０７１）、及び参照コントロールの抗ＣＳＦ−１Ｒ ＳＣ ２−４Ａ５としてR&D-SystemsのコントロールＭａｂ３２９１及び抗ラットＦｃｇ抗体（ヤギ由来、Jackson Immuno Reasearch ＪＩＲ１１５−００５−０７１）。
捕獲分子のアミンカップリング
製造者の指示に従った標準的なアミンカップリング：ランニングバッファー：ＨＢＳ−Ｎ緩衝液：ＥＤＣ／ＮＨＳの混合物による活性化、リガンド密度２０００ＲＵを目標；捕獲抗体（Ａｂ）はカップリング緩衝液：ＮａＡｃ、ｐＨ４．５、ｃ＝１０μｇ／ｍＬで希釈された；最後に、残りの活性化カルボキシル基が１Ｍのエタノールアミンの注入によってブロックされた。
３７℃におけるＭＡｂｓ＜ＣＳＦ−１Ｒ＞へのヒトＣＳＦ−１Ｒ断片Ｄ１−Ｄ３の結合の反応速度論的特性評価
ランニングバッファー：ＰＢＳ（ビアコアＢＲ−１００６−７２）
フローセル２から４におけるＭａｂｓ＜ＣＳＦ−１Ｒ＞の捕獲：流速２０μＬ／分、接触時間９０秒、ｃ（Ａｂｓ＜ＣＳＦ−１Ｒ＞）＝５０ｎＭ、ランニングバッファー＋１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡで希釈
分析物サンプル：
単一サイクル反応速度論が、再生無しで、濃度ｃ＝７．８、３１．２５、１２５ ５００および２０００ｎＭでの５回の連続した注入により、流速３０μＬ／分で測定された。各注入は３０秒の長さで、続いて最初の４回の注入については１２０秒の解離段階が続き、最終的に最高濃度において（最後の注入）１２００秒の分離段階が続いた。
最後の再生が各サイクル後、１０ｍＭのグリシンｐＨ１．５（ビアコアＢＲ−１００３−５４）、接触時間６０秒、流速３０μＬ／分を用いて実施された。
反応速度論パラメーターは、通常の二重の参照（コントロール参照：分析物の捕獲分子への結合；フローセル：ブランクとしてサブドメインＣＳＦ−１Ｒの濃度「０」）及び「ドリフトを考慮した１：１結合の滴定反応速度論」モデルによる計算を使用することにより計算された。
抗体のＭａｂ ２Ｆ１１、Ｍａｂ ２Ｅ１０及びＭａｂ １Ｇ１０はヒトＣＳＦ−１Ｒ断片Ｄ１−Ｄ３への結合を示さなかった。
また、参照コントロールのＡｂ ＳＣ−２−４Ａ５はヒトＣＳＦ−１Ｒ断片Ｄ１−Ｄ３へ結合しなかった。
参照コントロールのＭａｂ R&D-Systems ３２９１はヒトＣＳＦ−１Ｒ断片Ｄ１−Ｄ３への結合を示した
実施例１２
カニクイザルにおいてＣＳＦ−１Ｒ阻害の間ＣＳＦ−１レベルは増大する。
血清のＣＳＦ−１レベルは、抗ヒトＣＳＦ−１Ｒ二量体阻害剤ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７のＣＳＦ−１Ｒ中和活性の薬物動態マーカーを提供する。投与グループあたり一匹のオス及び一匹のメスのカニクイザル（１および１０ｍｇ／ｋｇ）に、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７が静脈内投与された。ＣＳＦ−１レベルの分析のために血液サンプルが、処置の前（投与前）の１週間採取され、投与後２、２４、４８、７２、９６、１６８時間、及びその後の２週間について毎週採取された。ＣＳＦ−１レベルは市販のＥＬＩＳＡキット（Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ（登録商標）ヒトＭ−ＣＳＦ）を使用して、製造業者（R&D Systems,UK）の指示に従って決定された。サルのＣＳＦ−１レベルは、キットに与えられたＣＳＦ−１の標準的な曲線サンプルと比較して決定された。
ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７の投与はおよそ１０００倍というＣＳＦ−１の劇的な増大を誘導し、それは４８時間（１ｍｇ／ｋｇ）又は１５日間（１０ｍｇ／ｋｇ）続いて投与された量に依存する。従って、ＣＳＦ−１Ｒの二量体化阻害剤は、リガンド置換抗体とは対照的に、レセプターへの結合について劇的に上方制御されたリガンドと直接的には競合しないという利点を与える。
実施例１３
インビボでの有効性−ＳＣＩＤベージュマウスにおける乳癌ＢＴ２０の異種移植片腫瘍細胞における抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の腫瘍増殖阻害
ヒト乳癌細胞株ＢＴ−２０はヒトＣＳＦ−１Ｒを発現するが、ＣＳＦ−１の発現を欠いている（Sapi, E. et al Cancer Res 59 (1999) 5578-5585）。ＣＳＦ−１由来のマウスは腫瘍細胞でヒトＣＳＦ−１Ｒを活性化できないため、組換えヒトＣＳＦ−１（ヒトＣＳＦ−１の活性な１４９アミノ酸断片（配列番号８６のアミノ酸３３−１８１）（Biomol,Hamburg,Germany）は、連続的なＣＳＦ−１注入速度として２μｇ／日をもたらす浸透圧ミニポンプ（ALZET,Cupertino,CA）を介してを補充された（Martin,T.A.,Carcinogenesis 24(2003)1317-1323）。
リガンド置換ＣＳＦ−１Ｒ抗体によるＣＳＦ−１Ｒの２量体化を妨げる抗体の有効性を直接比較するため、我々は、ＢＴ−２０異種移植モデルにおいて、キメラ抗ＣＳＦ−１Ｒ Ｍａｂ ２Ｆ１１（ＣＳＦ−１Ｒの２量体化を妨げる抗体）及び１．２．ＳＭ（国際公開第２００９／０２６３０３号に記載されたリガンド置換ＣＳＦ−１Ｒ抗体）を調べた。
ＳＣＩＤベージュマウス（Charles River,Sulzfeld,Germany）に、１ｘ１０７細胞のＢＴ２０細胞（ＡＴＣＣ ＨＴＢ−１９）および１００μｌのマトリゲルを一緒に皮下注射した。動物の治療は、平均的な腫瘍体積が１００ｍｍ３である、無作為の日に開始した。マウスは毎週１回、２０ｍＭのヒスチジン、１４０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．０のバファー中のそれぞれの抗体を腹腔内に処置される（図４参照）。腫瘍の寸法は、全治療期間中、診断日と、その後週に２回ノギスで測定される。腫瘍体積はＮＣＩのプロトコールに従って計算される（腫瘍重量＝１／２ａｂ２、ここで「ａ」及び「ｂ」はそれぞれ腫瘍の長径と短径である）。
腫瘍増殖の分析は図４に示される。キメラ抗ＣＳＦ−１Ｒ Ｍａｂ ２Ｆ１１による腫瘍細胞のヒトＣＳＦ−１Ｒの阻害は、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体１．２．ＳＭ（国際公開第２００９／０２６３０３号に記載のＣＳＦ−１Ｒ抗体）よりも、腫瘍増殖阻害の媒介において統計的にさらに有効であった。
別の実験において、３ｍｇ／ｋｇ静脈注ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標） Sanofi Aventis, UK）処置が、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体と併用された（３０ｍｇ／ｋｇ静脈注／週）。ドセタキセルは１サイクルとして週３回投与され、その後３週間投薬休期間が続いた。２サイクルのドセタキセル処置の後、抗体単剤療法は、３ｍｇ／ｋｇのドセタキセル群に匹敵して（ＴＧＩ：７５％、ｎｐＴＣＲ：０．５５、ＣＩ：０．２−１．５）、原発腫瘍の増殖を阻害した（ＴＧＩ：８３％、ｎｐＴＣＲ：０．５、ＣＩ：０．１−１．８）。ドセタキセルと抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の併用は、単剤療法よりも優れた有効性を生じた（ＴＧＩ：９４％、ｎｐＴＣＲ：０．３、ＣＩ：０．１−０．８）。後の時点で、併用群と単剤療法群の間のＴＧＩの相違は、単剤療法のそれぞれの強力な阻害に起因して、それほど顕著ではなかった。にも関わらず、生存時間の中央値の分析は、併用の優位性を明らかにした（抗体１５９日、ドセタキセル１５４日、併用１８０日）。
実施例１４
ヒトＣＳＦ−１Ｒの細胞外ドメインのドメインＤ４からＤ５に結合する抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の、パクリタキセルとの併用治療
２．１ 主な目的
第Ｉ部（治療群Ａ：抗ＣＳＦ−１Ｒ Ｍａｂ ２Ｆ１１のヒト化バージョン（ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７）単剤［ＳＡ］の用量漸増；治療群Ｂ：パクリタキセルの固定投与量と併用した［ＣＤ］、ヒト化ＣＳＦ−１Ｒ抗体Ｍａｂ ２Ｆ１１（ｈＭａｂ ２Ｆ１１−ｅ７）の用量漸増）：
・単独、及びパクリタキセルとの併用で投与された場合の、Ｍａｂ２Ｆ１１のヒト化バージョンの安全性、容認性及びＰＫを評価する。
・単独で（ＭＴＤ１／ＯＢＤ１）、及びパクリタキセルと併用して（ＭＴＤ２／ＯＢＤ２）投与された場合に、用量規制毒性（ＤＬＴ）を観察することによって、ヒト化Ｍａｂを２Ｆ１１の最大許容用量（ＭＴＤ）、及び／又は最適な生物学的用量（ＯＢＤ）を決定する。
第ＩＩ部（拡張コホート／ヒト化Ｍａｂを２Ｆ１１単剤のみ）：第Ｉ部の試験の観察に基づいて、特に関心のある腫瘍実体を有する患者において、安全性評価を拡張し、ヒトＭａｂを２Ｆ１１臨床活性を調べるために、その全員が標準治療に適しているわけではない。
２．２ 二次的な目的
第Ｉ部（用量漸増／治療群Ａ＋Ｂ）
・腫瘍および代用組織において、ヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１単独及びパクリタキセルとの併用のＰＫとＰＤ効果を調査する。
・１８Ｆフルオロデオキシグルコース陽電子放出断層撮影（ＦＤＧ−ＰＥＴ）とダイナミック造影超音波（ＤＣＥ−ＵＳ）（入手可能な場合）の変化により測定される場合の、単独及びパクリタキセルと併用したヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１のＰＫ及びバイオマーカー作用を評価する。
・単独及びパクリタキセルと併用したヒト化ＣＳＦ−１Ｒ抗体Ｍａｂ ２Ｆ１１について推奨されるフェーズ２の用量（ＲＰ２Ｄ）及びスケジュールを同定する。
・客観的奏効率（ＯＲＲ）、臨床的有用率（ＣＢＲ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、応答の継続時間を使用して、単独及びパクリタキセルと併用したヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１の予備的な臨床活性を調査する。
第ＩＩ部（拡張コホート／治療群Ａのみ）
・腫瘍および代用組織において、ヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１のＰＫとＰＤ効果を更に特徴付ける。
２．３ 調査目的
採取された患者検体は以下のために分析される：
・ＴＡＭ依存性腫瘍を遡及的に同定する。
・皮膚や血液などの代用組織で可能な応答予測マーカーを調査する。
・医薬品に関連した有効性及び／又は有害事象（ＡＥ）とバイオマーカーの関連性を研究；及び／又は
・バイオマーカー又は診断的アッセイを開発する。
３． 試験設計
３．１ 試験設計の概略
これは、ヒトＭａｂ２Ｆ１１の隔週の（Ｑ２Ｗ）静脈内投与の、安全性、忍容性、ＰＫおよびＰＤを評価するために設計された、非盲検、多施設フェーズＩａ／ｂの用量漸増試験である。ヒト化Ｍａｂ２Ｆ１１は、（標準的な治療に適していない）固形腫瘍を有する患者のために単独で、及び標準的な治療に適していない局所進行性及び／又は転移性の癌ではパクリタキセルと併用して投与される。
第Ｉ部−用量漸増
用量漸増コホートに登録された全ての患者は、サイクル１におけるヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１の最初の投与に続く、２８日間のＤＬＴ評価期間中にＤＬＴについて評価されるであろう。のＤＬＴ評価期間中にＤＬＴ以外の任意の理由で中断する患者は、置き換えられるであろう。
ヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１単一療法投与モードヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１は、患者が注入に伴う反応（ＩＲＲ）（注入の遅延又は一時的な停止を必要とするであろう）を経験していない限り、２週間毎に（Ｑ２Ｗ）、１．５時間かけて静脈内注入として投与されるであろう。治療は、疾患の進行、許容できない毒性、死亡又は患者に拒否されるまで（どれが最初に発生しようが）投与されるであろう。
ヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１とパクリタキセルの併用投与モード（第Ｉ部、治療群Ａのみ）。
ヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１は、患者が、ＩＲＲ（注入の遅延又は一時的な停止を必要とするであろう）を経験していない限り、２週間毎に（Ｑ２Ｗ）、１．５時間かけて静脈内注入として投与されるであろう。治療は、疾患の進行、許容できない毒性、死亡又は患者に拒否されるまで（どれが最初に発生しようが）投与されるであろう。
パクリタキセルは、８０ｍｇ／ｍ２の用量で、ヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１と併用して、最大１２週間、週１回投与されるであろう。パクリタキセルの注入は、ヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１の注入が終了して直ちに開始され、ローカル処方情報に応じて投与されるであろう。患者が、パクリタキセルに直接起因する毒性を経験する場合、彼／彼女はパクリタキセルによる治療を中止しても良いが、ヒト化Ｍａｂ２Ｆ１１を受け続けることができる。
ＭＴＤ１／ＯＢＤ１及びＭＴＤ２／ＯＢＤ２の治験の第Ｉ部
サイクル１中のヒト化Ｍａｂ２Ｆ１１の最初の投与後の最初の２８日間は、ＭＴＤ１とＭＴＤ２を定めるため、ＤＬＴを決定するための治療間隔と見なされるであろう。
ＭＴＤは、６人の患者のうちせいぜい１人がＤＬＴを経験する最高投与量レベル（複数可）として定義される。
安全性データ及び任意の利用可能なＰＫ／ＰＤデータは、継続的に収集され、次のコホートのための各投与量漸増の決断に先立って見直されるであろう。
３．１．１−３．１．３ 試験デザインの根拠
異なる悪性腫瘍を持つ異なる患者からの腫瘍生検試料の社内スクリーニングは、浸潤性マクロファージの密度の有意な不均一性及び同時発生的なＣＳＦ−１Ｒの発現を示す（ＩＢの非臨床的薬理学の項を参照）。標的媒介性薬物動態（ＴＭＤＤ）、すなわち薬理学的標的への結合を介した配布及び消失はまた、サル及び担癌と非担癌マウスの両方において明らかに明白であった。ヒト化Ｍａｂ２Ｆ１１の薬物動態は、標的へのその結合に影響されるので、非線形ＰＫの定量化は、標的飽和を近似するためのバイオマーカーとして使用することができる。ベースラインの患者の人口統計学的要因（腫瘍量とＴＡＭ密度を含む）が、ヒト化Ｍａｂ２Ｆ１１の非線形薬物動態にどの程度影響を及ぼし得るかを特徴づけるために、血中濃度が、コホート２以降の全ての患者において、単一の低い（１００ｍｇ）「導入（run-in）」用量（サイクル０）後の最初の数日以内に（即ち、少なくとも２００ｍｇ以上であろうサイクル１の投与前の１週間）測定されることになる。この低用量では、非線形のＰＫが期待され、これは癌患者においてＴＭＤＤの定量化を可能にすることとなる。導入用量の値は、治験（又は将来の研究）の延長段階において、患者の人口統計及びベースラインの要因（腫瘍のタイプ、サイズ、及び炎症状態を含む）に基づいて、異なる用量は、異なる延長治療群（すなわち、異なる悪性腫瘍）においてより効果的であり得るかどうかの理解を提供するであろう。ＣＳＦ−１Ｒの遮断は、ＴＡＭを選択的に阻害することが実証されているので、従って、ＴＡＭ媒介性化学療法耐性［１０］を防止ないし反転する可能性を提供し、パクリタキセルと併用して与えたヒト化Ｍａｂ２Ｆ１１の同時的な評価が開始されることとなる。パクリタキセルは、これらの患者群のために一般的に処方される化学療法として選択され、パクリタキセルによる最も多く報告される毒性（骨髄抑制、神経毒性及び関節痛又は筋肉痛）は、毒性試験で報告されていないので、有意な重複毒性をもたらすことは予想されていない。固定用量でのパクリタキセルが、最大１２週間、週１回与えられ、進行乳癌又は卵巣癌の患者において、漸増用量のヒトＭａｂ２Ｆ１１との併用で、調査された。最近のデータは、ＰＶＮＳとＴＧＣＴを有する患者において、ＣＳＦ−１の過剰発現が検出され、症例の３０〜６０％において、一部はＣＳＦ−１Ｒ遺伝子の関与する転座によって媒介されることを示している。さらに、（例えば卵巣癌および乳癌のような）幾つかの他のヒト癌におけるＣＳＦ−１Ｒ陽性マクロファージの存在は、血管密度の増加のみならずより悪い臨床転帰と相関することが示されている。乳癌においては、ＣＳＦ−１応答遺伝子シグネチャーの存在は、再発や転移のリスクを予測する。これらの知見と我々の前臨床モデルに基づいて、ヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１単独又はパクリタキセルとの併用による腫瘍関連マクロファージ及びそれらの腫瘍促進性生物活性の遮断は、固形腫瘍の特定のタイプを持つ患者において臨床活性を示すという仮説を検証することは合理的と思われる。
本研究では、ＰＫ及びＰＤパラメータの評価のために多くの採血、並びに必須である新鮮に保存された腫瘍組織コレクションを含む。これらは、予測応答バイオマーカーのＰＫ特性、作用機序、潜在力の完全な理解を可能にする上で重要である。
３．１．４ バイオマーカーの評価の原理
バイオマーカーは、診断の戦略を成形し、治療管理に影響を与える可能性を有する。将来は、バイオマーカーは、個別化医療のアプローチを促進することができ、癌の型によってよりも、患者の腫瘍及び血液中のマーカーの分子シグネチャーによって患者をグループ分けする。私たちは、その治療の有効性の可能性と安全性に関する情報を提供する、予測的バイオマーカーを識別する取り組みに集中している。腫瘍に対する薬物のＰＤ及び機序効果を評価するために、腫瘍生検がしばしば必要とされる。
３．１．４．１ 治療前及び治療中の腫瘍生検の原理
ＴＡＭ浸潤および分化は、原発性および転移性病変におけるそれぞれの腫瘍微小環境に依存している。更に、患者の各免疫状態および前処置は、患者の腫瘍微小環境に影響を与え得る。従って、全ての患者は、ベースラインにおけるＴＡＭ浸潤及びＣＳＦ−１Ｒの発現レベルを定義するために強制的に治療前生検を受けるが、治験のために患者の適格性を判断するために使用されることはない。加えて、必須である治療中の生検は、投与前後のレベルを比較することによって、ヒト化Ｍａｂ２Ｆ１１のＰＤ活性の評価を可能にするであろう。マクロファージの亜集団分布は組織で評価する必要があるので、細針吸引（ＦＮＡ）は、腫瘍生検の代わりには適していないであろう。
マクロファージ浸潤及び分化は微小環境に依存するため、アーカイブ腫瘍組織は、新鮮な生検の代わりにすることはできない。腫瘍微小環境は、患者の前治療に起因して原発腫瘍で変わりやすくてもく、並びに転移病巣で変わり得る。しかしながら、もし保存された腫瘍組織が利用可能であれば、サンプルは新鮮な生検によるデータの探索的遡及的相関のために使用されるであろう。
３．１．４．２ 負傷した皮膚組織生検の原理
創傷治癒の異なる段階は多くのプロセス（例えば好中球動員、マクロファージ浸潤、血管新生（Eming, S.A., et al., Prog. Histochem. Cytochem. 42 (2007) 115-170）を必要とする。皮膚創傷アッセイは、例えば抗血管新生療法のＰＤマーカーを決定するための代用組織を得るために使用されている（Zhang, D. et al., Invest. New Drugs 25 (2006) 49-55; Lockhart, A.C. et al., Clin. Cancer Res. 9 (2003) 586-593）。創傷治癒の間に、マクロファージは、実質的な役割を果たし、創傷関連マクロファージ（ＷＡＭ）の表現型の変化は、皮膚修復の段階における異なる役割を説明する（例えば初期の炎症期＝強い食作用活性；中期組織リモデリング段階：血管新生促進因子の過剰発現を有する免疫調節状態）（Adamson, R., Journal of Wound Care 18 (2009) 349-351; Rodero, M.P. et al., Int. J. Clin. Exp. Pathol. 25 (2010) 643-653; Brancato, S.K. and Albina, J.E., Wound Macrophages as Key Regulators of Repair, Origin, Phenotype, and Function, AJP (2011) Vol. 178, No.1）。
実際、マクロファージの欠如は、遺伝子改変マウスにおいて創傷治癒の遅延をもたらした（Rodero, M.P. et al., Int. J. Clin. Exp. Pathol. 25 (2010) 643-653）。前臨床実験は、ＣＳＦ−１Ｒで処置したＭＤＡ−ＭＢ２３１異種移植マウスモデルの皮膚において、有意な（Ｆ４／８０陽性）マクロファージの減少を示した。しかし、マウスとヒトとの間の種特異的な差異が報告されている（Daley, J.M. et al., J. Leukoc. Biol. 87 (2009) 1-9）。
ＷＡＭ及びＴＡＭは、同一の前駆細胞に由来し、類似機能や表現型を共有するため、創傷治癒過程においてＷＡＭに関する、ヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１治療の薬力学効果を分析するために、処置前及び処置中（合計でｎ＝４）の一連の皮膚生検が使用されるであろう。新鮮な腫瘍生検中のＴＡＭについて、ヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１治療のＰＤ効果と皮膚データとの相関は、ヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１がどのように動作するか、及びどのように腫瘍が応答しているのかの分子基盤に関する知識を著しく増やすことができる。
加えて、負傷した皮膚組織の評価は、後の治験で、治療中の腫瘍生検に代わる可能性があり、従って、ヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１の有効性を評価するための代用組織としての機能を果たす可能性がある。
３．１．４．３ ＰＤマーカーを測定する全血サンプルための原理
これらの代用組織標本は、（用量、安全性及び耐容性の観点で）ヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１治療に対する応答を予測するバイオマーカーを同定するための研究目的のために使用され、癌及び関連疾患の病因、経過及び転帰を理解するのに役立つであろう。分析は、ヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１のＰＤ活性に関連する循環マーカーの測定（サイトカインレベル、循環性免疫細胞及び免疫エフェクター細胞の枯渇の評価など）を含む。前臨床実験は、循環性ＣＳＦ−１、ＴＲＡＰ５ｂ単球亜集団及び組織マクロファージの変化は、薬物活性に関連していることを示している。更に、ヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１治療カニクイザルからのＧＬＰ−Ｔｏｘデータは、骨の形成のバイオマーカー（オステオカルシン、Ｐ１ＮＰ）、破骨細胞活性（ＴＲＡＰ５ｂ）及び副甲状腺ホルモンにおける変化（これらは全て破骨細胞数の減少に相関した）を明らかにした。
従って、これらの探索的ＰＤマーカーと更なる循環性免疫刺激要因又は免疫阻害要因が、試験中に評価される。
腫瘍応答基準
腫瘍応答は、ＲＥＣＩＳＴ１．１の基準に従って評価される。この研究では、腫瘍応答は（胸部スキャンを含む）スパイラルＣＴスキャンまたはＣＴスキャンを使用して測定される。Ｘ線及び超音波は標的病変をモニタリングするためには許容されない。各被験者について、研究全体を通じて各病変を評価するために、評価の同一方法及び同じ手法を、使用しなければならない。複数の方法が使用される場合、データを記録するときには、ＲＥＣＩＳＴに従って最も正確な方法を選択する。
腫瘍応答は、初期応答が認められた後の４週間の最小値が確認され、又は仮に最初の応答の後に４週間以上生じる場合、スケジュールされた次の腫瘍評価での最小値が確認されるであろう。
腫瘍増殖速度論の評価は、利用可能な場合、最後の利用可能な試験前のスキャンと治療後のスキャンを比較することによって行われる。
薬物動態（ＰＫ）／薬力学（ＰＤ）評価
以下の表に記載されるように、血液サンプルは薬物動態ＰＫ及び／又はＰＤを評価するために採取されるであろう。
サイクル４の終了までのＰＫ評価における総血液損失は、第Ｉ部、治療群Ａ及び第ＩＩ部で、およそ５８ｍＬで、第Ｉ部、治療群Ｂでおよそ８６ｍＬであろう。続く各サイクルで、更なる６ｍＬの血液が、各治療群についてＰＫ評価のために採取されるであろう。サイクル４（治療後８週間）までのＰＤ評価の血液損失の総容量は、およそ１６１ｍＬであろう。続く各サイクルで、更に９ｍＬの血液サンプル（１ｘ５ｍｌ、１ｘ２ｍｌ及び２ｘ１ｍｌ；詳細は表２を参照）が投与前にＰＤ評価用に採取されるであろう。
ＰＫ評価
血液が、ヒト化Ｍａｂ Ｆ２１１、ヒト化Ｍａｂ Ｆ２１１とパクリタキセルに対するヒト化抗ヒト抗体（ＨＡＨＡ）の濃度の解析のために採取されるであろう。更に、単一血液サンプルが、著しい規模の注入関連反応時に、及び注入が中断された場合、又は注入速度が、治験責任医師の裁量で遅延される場合、採取されるであろう。
血清のヒト化Ｍａｂ２Ｆ１１及びＨＡＨＡは、検証済みのアッセイを用いて測定されるであろう。ＨＡＨＡの測定のために採取した全血清サンプルはまた、ＲＯ５５０９５５４について分析される。ＰＫ評価のための全ての血液サンプルは、注入を受けるものとは異なる静脈内ラインから採取されるであろう。ヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１への曝露とＨＡＨＡ分析を対象としたサンプルは、２つの別々の一定分量に、各々はヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１とＨＡＨＡの測定用に分割されるであろう。
血漿中のパクリタキセル濃度は、検証済みの液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）法を用いて測定される。
ＰＤ評価
動的な（非遺伝的）及び遺伝的バイオマーカー（遺伝的）の発見と検証のための検体は、治験に参加しているすべての被験者から採取することができる。
ＰＤ及びバイオマーカーのための全血液サンプル
起源組織としての血液は、ヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１のＰＤ効果を決定するために採取されるであろう。ＰＤ評価のための全ての血液サンプルは、注入を受けるものとは異なる静脈内ラインから採取されるであろう。全血液サンプルのＰＤ評価は、限定されないが、
・フローサイトメトリーを用いた免疫表現型検査（単球／マクロファージ及びリンパ球サブセット）を含むであろう。単球／マクロファージのサブセットについては、これらのマーカーは、限定されないが、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ４５、ＭＨＣクラスＩＩを、及びリンパ球については、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ４５、ＣＤ５６が含まれる。
・単球／マクロファージ及びリンパ球細胞集団の薬力学評価のための血液損失の総容量は、最初の４サイクルにおいて、およそ１７ｘ５ｍｌ＝８５ｍＬであろう。
・３つの追加血液サンプルが、可溶性マーカーのＰＤに関連する変化を決定するための血清の調製のために使用される。これらのマーカーは、限定するものでないが、以下のものを含む：
サイトカイン評価Ａ：
ＣＳＦ−１、Ｔｒａｐ５ｂ、ｓＣＤ１６３、ＩＬ−３４；
サイトカインのＰＤ評価Ａについての血液損失の総容量は、最初の４サイクルにおいて、およそ２５ｘ２ｍｌ＝５０ｍＬであろう。
サイトカイン評価Ｂ：
ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＭＣＰ−１、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ２２、ＭＩＰ−１、ガレクチン３、ＩＬ１Ｒａ、ＴＧＦアルファ
サイトカインのＰＤ評価Ｂについての血液損失の総容量は、最初の４サイクルにおいて、およそ２１ｘ１ｍｌ＝２１ｍＬであろう。
骨バイオマーカー：
オステオカルシン、Ｐ１ＮＰ及び副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）などの骨バイオマーカーが評価される。
血液損失の総容量は、最初の４サイクルにおいて、およそ５ｘ１ｍｌ＝５ｍＬであろう。
ＰＤ／バイオマーカー評価のサイクルあたりの血液損失の総容量の最高量はおよそ５１ｍＬであろう。
皮膚組織生検創傷治癒
皮膚組織の代替創傷治癒は、限定されないが、好中球動員、マクロファージ浸潤及び血管新生を含む、創傷治癒プロセスに関連した探索的ＰＤマーカー分析のために、分析されるであろう（下記も参照）。
二つの皮膚対のサンプルは、正常な皮膚（好ましくは、毛嚢のない背面にある）のミラー領域から、局所麻酔後に採取される。これらは、縫合を必要としない２重複サンプルを得るための、２〜４ｍｍの直径のパンチ生検装置を用いて得られる。
２ｍｍの生検は外傷を作り出し、７日後に、完全に重複する４ｍｍの生検は、創傷治癒物質を採取するであろう。
２つの生検の間に選択される時間間隔は、創傷治癒プロセスに関連する関連するバイオマーカーの変化（好中球動員、マクロファージ浸潤、血管新生）の時間経過を理解した上で、適切であると考えられる（Eming, S.A. et al., Prog. Histochem. Cytochem. 42 (2007) 115-170; Zhang, D. et al., Invest. New Drugs 25 (2006) 49-55; Lockhart, A.C. et al., Clin. Cancer Res. 9 (2003) 586-593）。
全ての皮膚サンプルは、
・ヘマトキシリン＆エオシン染色（Ｈ＆Ｅ）
・免疫組織化学（ＩＨＣ）マーカー（以下のパラメータ：ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＤ６８／ＣＤ１６３、ＣＤ６８／ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ３１（微小血管密度）、及びＫｉ６７について分析されることになる）
の分析を受けることになる。
検体をホルマリン固定し、パラフィンに包埋し、分析のために中央検査室に発送される。
腫瘍生検
新鮮な腫瘍生検
処置前及び処置中の新鮮な腫瘍生検が、ＴＡＭの浸潤及び追加の腫瘍マーカーの薬力学の変化を評価するために採取されることになる（上記も参照）。
生検は、原発性腫瘍から、若しくは可能であれば、原発性腫瘍と転移部位との両方からであり得る、最大の転移性病変から優先的に採取するべきであり、可能ならば、腫瘍−間質界面において生検をすべきである。
腫瘍生検のコレクションは、１８ゲージ針を用いて超音波またはＣＴスキャンによって導かれ、長さが少なくとも２０ｍｍのコアを提供する。少なくとも２つ、理想的には４つのコア生検が、各時点で得られる。
検体の半分はホルマリン固定され、パラフィンに包埋される。２番目の半分は新鮮凍結され、バイオマーカーの遡及的探索的分析のための長期保存のために収集されるであろう（セクション５．５．３．１．２を参照）。
ホルマリン固定、パラフィン包埋生検サンプルは、
・ヘマトキシリン及びエオシン染色（Ｈ＆Ｅ）。
・免疫組織化学（ＩＨＣ）の評価（限定されないが、以下のバイオマーカー：ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＤ６８／ ＣＤ１６３、ＣＤ６８／ ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ３１（微小血管密度）、Ｋｉ６７、及び他の探索的マーカーを含む）のために分析される。
バイオマーカーのための画像モダリティー
ＤＣＥ−超音波
前臨床結果に基づいて、我々は、ヒト化Ｍａｂ ２Ｆ１１による治療は、腫瘍内の微小血管密度と血管内腔を調節することができ、従って、血管新生及び腫瘍への栄養の経毛細管性輸送を調節しうると期待する。これらのエンドポイントをモニターするために、我々は、可能な場合には、画像モダリティの選択肢としてＤＣＥ−超音波を使用することを提案する。
ＦＤＧ−ＰＥＴ
ＦＤＧ−ＰＥＴは、腫瘍サイズが縮小される前の早期に応答者を同定することによって患者の管理を完全することができる；非応答者は無益な治療を中止することが可能であろう（Weber, W.A., J. Nucl. Med. 50 (2009) 1S-10S）。更に、治療開始の数日ないしは数週間以内でのＦＤＧ−ＰＥＴシグナルの減少（例えば、乳房（Avril, N. et al., J. Nucl. Med. 50 (2009) 55S-63S）、卵巣（Schwarz, J.K. et al., J. Nucl. Med. 50 (2009) 64S-73S）、及び非小細胞肺（Zander, T. et al., J. Clin. Oncol. (2011) 1701-1708））は、生存の延長、及びここで使用される他の臨床的エンドポイントと有意に相関する。腫瘍代謝におけるヒト化Ｍａｂ２Ｆ１１の治療によって誘導される変化は、ＦＤＧ−ＰＥＴを用いて評価することができる。更に、ヒト化Ｍａｂ２Ｆ１１が誘導するマクロファージの枯渇は、ＦＤＧ−ＰＥＴスキャンにおいてＳＵＶｍａｘの減少をもたらす場合がある。
実施例１５
皮下同系ＭＣ３８結腸癌モデルにおける、化学療法又は癌免疫療法と併用した、抗ＣＳＦ−１Ｒモノクローナル抗体を用いた治療下での腫瘍増殖の阻害
マウス結腸直腸腺癌細胞株の細胞ＭＣ−３８（ホープ市のベックマン研究所、米国カリフォルニア州から入手）を、５％ＣＯ２で水分飽和大気中、３７℃で、１０％のＦＣＳ及び２ｍＭのＬ−グルタミンを補充したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ、PAN Biotech）で培養した。播種の日に、ＭＣ３８腫瘍細胞を培養フラスコからＰＢＳで回収し、培地中に移し、遠心分離し、一回洗浄し、ＰＢＳに再懸濁した。細胞の注入のため、最終力価を１×１０７細胞／ｍｌに調整した。その後、この懸濁液（１×１０６細胞）の１００μｌを、７〜９週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス（Charles River, Sulzfeld, Germanyから入手）に対して皮下に接種した。腫瘍が確証され、平均の大きさが５０ｍｍ３に達した後で、コントロール抗体（ＭＯＰＣ−２１； Bio X Cell, West Lebanon）、抗マウスＣＳＦ−１Ｒ ｍＡｂ ＜マウスＣＳＦ１Ｒ＞抗体の、単独又はＩＬ−２（プロロイキン、Novartis, １００ ０００ ＩＵ／動物、１日２回腹腔内投与）、又はＦＯＬＦＩＲＩ（５−フルオロウラシル、Medac, １００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内投与、１ｘ／ロイコボビン、Pfizer, ４０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内投与、１ｘ／イリノテカン、HEXAL, ２０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内投与、１ｘ）オキサリプラチン（エロキサチン、 Sanofi-Aventis ５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内投与、１ｘ）と併用した処置を開始した。腫瘍体積を週に２回測定し、動物の体重を並行してモニターした。比較可能な設定を持つ別の研究では、示された処置群からの原発性腫瘍を切除し、秤量し、ＦＡＣＳ分析に供した。原発性腫瘍材料は、示されるように研究の第２０日〜２５日の間に採取した。フローサイトメトリー分析のために適した単一細胞懸濁液を得るために、腫瘍は、マッキルウェーン組織チョッパーを用いて切り刻んだ。その後、腫瘍片を、コラゲナーゼＩ、ディスパーゼＩＩ及びＤＮアーゼＩを補充したＲＰＭＩ培地に再懸濁し、３７℃でインキュベートし、細胞懸濁液をマッシュに通した。ＣＤ４５陽性細胞を、製造業者の説明書（Miltenyi）に従って、磁気細胞分離により濃縮した。簡潔には、細胞を、ＡＰＣとコンジュゲートした抗マウスＣＤ４５（BD、カタログ番号５５９８６４）で標識し、抗ＡＰＣマイクロビーズで分離した。ＣＤ８＋ Ｔ細胞を分析するため、これらのＣＤ４５陽性細胞を、０，２μｇ／ｍｌのＤＡＰＩ（Roche、カタログ番号１０２３６２７６００１）及びＰＥコンジュゲートＣＤ８抗体（eBioscience カタログ番号１２−００８１−８３）又はＰＥコンジュゲートＣＤ４抗体（eBioscience，カタログ番号２−００４１−８３）で染色した。データの取得は、ＦＡＣＳカントＩＩを用いて実施し、続いてＦｌｏｗＪｏソフトソフトウェアで分析した。生存細胞のみ（ＤＡＰＩ陰性細胞にゲートする）細胞残屑及び死細胞を除外するために分析した。
＜マウスＣＳＦ１Ｒ＞抗体による単剤療法は、コントロール抗体治療と比較した場合、原発性腫瘍増殖を阻害した（ＴＧＩ：６１％、ＴＣＲ：０．３９ ＣＩ：０．１５−０．６８）。また、ＩＬ２単剤療法はＭＣ３８原発性腫瘍増殖に影響を及ぼした（ＴＧＩ：４７％、ＴＣＲ：０．５３ ＣＩ：０．２７−０．８５）。ＩＬ−２療法への＜マウスＣＳＦ１Ｒ＞抗体の追加は、ＩＬ−２治療単独に比較して優れた抗腫瘍効果をもたらした（ＴＧＩ：７８％、ＴＣＲ：０．２１ ＣＩ：０．０２−０．４８）。また、化学療法レジメンＦＯＬＦＩＲは、腫瘍の増殖を有意に阻害し（ＴＧＩ：６６％、ＴＣＲ：０．３４ＣＩ：０．１１−０．６１）、そして＜マウスＣＳＦ１Ｒ＞抗体の追加は更に改善された転帰へとつながった（ＴＧＩ：７７％、ＴＣＲ：０．２３ ＣＩ：０．００１−０．４８）。オキサリプラチンはまた、ＭＣ３８腫瘍増殖に関して若干のしかしあまり顕著でない効力を示したが（ＴＧＩ：４６％、ＴＣＲ：０．５４ ＣＩ：０．２９−０．８６）、それでもなおその効力は＜マウスＣＳＦ１Ｒ＞抗体との併用により強化することができるであろう（ＴＧＩ：６９％、ＴＣＲ：０．３１ ＣＩ：０．０７−０．５９）。７００ｍｍ３の大きさを超える個々の腫瘍の増悪を見ると、ＩＬ−２と＜マウスＣＳＦ−１Ｒ＞抗体の併用で処置した動物の増悪までの期間の中央値は、このモデルにおいて化学療法との併用よりも優れていた（表１１を参照）。
＜マウスＣＳＦ−１Ｒ抗体＞で処置された腫瘍のフローサイトメトリー分析は、オキサリプラチン単剤療法と比較して、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の数の３倍の増加並びにＣＤ４＋ Ｔ細胞の僅かな増加を明らかにした。ＣＳＦ−１Ｒ中和抗体とオキサリプラチンとの併用で処置した腫瘍は、抗体単独で処置した場合のＴ細胞と同等の増加を示した。同様の結果がＦＯＬＦＩＲＩとの併用において得られた。結果は図５にも示す。
実施例１６
皮下同系ＭＣ３８結腸癌モデルにおける、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体と併用した、抗ＣＳＦ−１Ｒモノクローナル抗体を用いた治療下での腫瘍増殖の阻害
マウス結腸直腸腺癌細胞株の細胞ＭＣ−３８（ホープ市のベックマン研究所、米国カリフォルニア州から入手）を、５％ＣＯ２で水分飽和大気中、３７℃で、１０％のＦＣＳ及び２ｍＭのＬ−グルタミンを補充したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ，PAN Biotech）で培養した。播種の日に、ＭＣ３８腫瘍細胞を培養フラスコからＰＢＳで回収し、培地中に移し、遠心分離し、一回洗浄し、ＰＢＳに再懸濁した。細胞の注入のため、最終力価を１×１０７細胞／ｍｌに調整する。続いて、この懸濁液（１×１０６細胞）の１００μｌを、６〜１０週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウスに対して皮下に接種した。動物の群は、コントロール抗体（ＭＯＰＣ−２１（３０ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与、週１回）及び２Ａ３（１００μｇを腹腔内投与、１回）； Bio X Cell, West Lebanon）、抗マウスＣＳＦ−１Ｒ ｍＡｂ ＜マウスＣＳＦ１Ｒ＞抗体（３０ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与、週１回）を、単独又は抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＦＧＫ４５（アゴニストＣＤ４０ラット抗マウスＩｇＧ２ａ ｍＡｂ ＦＧＫ４５（S. P. Schoenberger, et al, Nature, 393, 480 (1998)、BioXcellから入手可）ＣＤ４０（ＦＧＫ４５））（１００μｇ、腹腔内投与、１ｘ）と併用して処置された。治療は、腫瘍が確認され、５０ｍｍ３の平均サイズに達した後で開始した。腫瘍体積を週に２回測定し、動物の体重を並行してモニターした。結果は図７に示す。ＣＳＦ１Ｒ ｍＡｂ＋ＣＤ４０ｍＡｂ ＦＧＫ４５の併用は、同質遺伝子的ＭＣ３８マウスの結腸癌モデルにおける単剤療法において改善された抗腫瘍効果を示している。
実施例１７
皮下同系ＭＣ３８結腸癌モデルにおける、抗Ａｎｇ２／ＶＥＧＦモノクローナル抗体及び／又はＦＯＬＦＩＲＩと併用した、抗ＣＳＲ−１Ｒモノクローナル抗体を用いた治療下での腫瘍増殖の阻害
マウス結腸直腸腺癌細胞株の細胞ＭＣ−３８（ホープ市のベックマン研究所、米国カリフォルニア州から入手）を、５％ＣＯ２で水分飽和大気中、３７℃で、１０％のＦＣＳ及び２ｍＭのＬ−グルタミンを補充したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ、PAN Biotech）で培養する。播種の日に、ＭＣ３８腫瘍細胞を培養フラスコからＰＢＳで回収し、培地中に移し、遠心分離し、一回洗浄し、ＰＢＳに再懸濁する。細胞の注入のため、最終力価を１×１０ ７ 細胞／ｍｌに調整する。続いて、この懸濁液（１×１０６細胞）の１００μｌを、７週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウスに対して皮下に接種する。単独又はＦＯＬＦＩＲＩ（５−フルオロウラシル、Medac、１００ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与、１ｘ／ロイコボビン、Pfizer、４０ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与、１ｘ／イリノテカン、HEXAL、２０ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与、１ｘ）又は抗Ａｎｇ２／ＶＥＧＦモノクローナル抗体（二重特異性ＡＮＧ−２−ＶＥＧＦ抗体 ＸＭａｂ１（国際公開第２０１１／１１７３２９号に記載される）（１０ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与、１ｘ毎週）と併用した、コントロール抗体（ＭＯＰＣ−２１； Bio X Cell, West Lebanon）、抗マウスＣＳＦ−１Ｒ ｍＡｂ ＜マウスＣＳＦ１Ｒ＞抗体の３０ｍｇ／ｋｇの用量を毎週腹腔内投与による処置は、腫瘍が確認され、５０ｍｍ３の平均サイズに達した後で開始する。表１３に記載したように、三剤併用治療が行われる。腫瘍体積を週に２回測定し、動物の体重を並行してモニターする。
＜マウスＣＳＦ１Ｒ＞抗体、抗Ａｎｇ２／ＶＥＧＦ抗体又はＦＯＬＦＩＲＩによる単剤療法は、コントロール抗体処置と比較した場合、原発性腫瘍増殖を最小に阻害したｔ（ＴＧＩ：それぞれ２８％、３５％又は１１％）。抗Ａｎｇ２／ＶＥＧＦ抗体又はＦＯＬＦＩＲＩとの＜マウスＣＳＦ１Ｒ＞抗体の併用は、コントロール抗体と比較して、より顕著で統計学的に有意な抗腫瘍効果をもたらした（ＴＧＩ：６４％又は６７％）。＜マウスＣＳＦ−１Ｒ＞抗体の、ＦＯＬＦＩＲＩと、続くその後２日間又は９日間の抗Ａｎｇ２／ＶＥＧＦ抗体による治療との三剤併用治療は、最良の抗腫瘍活性を示した（ＴＧＩ：６８％又は７０％）。抗Ａｎｇ２／ＶＥＧＦ抗体の、ＦＯＬＦＩＲＩと、続くその後９日間の＜マウスＣＳＦ−１Ｒ＞抗体による治療による３化合物の併用治療又は併用は、それぞれ６１％又は５６％の抗腫瘍活性をもたらした。７００ｍｍ３の大きさを超える個々の腫瘍の増悪を見ると、＜マウスＣＳＦ−１Ｒ＞抗体の、ＦＯＬＦＩＲＩと、続いてその後２日間又は９日間の抗Ａｎｇ２／ＶＥＧＦ抗体による処置の併用で処置されるマウスの増悪までの時間の中央値はまた、このモデルにおける他の全ての治療の増悪までの時間の中央値よりも優れていた（表１２を参照）。

Claims (11)

  1. ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合しＣＳＦ−１Ｒの活性化をブロックする抗体を含む医薬であって、二重特異性ＡＮＧ２−ＶＥＧＦ抗体と併用で、がんを治療するための医薬。
  2. 二重特異性ＡＮＧ２−ＶＥＧＦ抗体を含む医薬であって、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合しＣＳＦ−１Ｒの活性化をブロックする抗体と併用で、がんを治療するための医薬。
  3. ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合しＣＳＦ−１Ｒの活性化をブロックする抗体を含む医薬であって、アゴニストＣＤ４０抗体と併用で、がんを治療するための医薬。
  4. アゴニストＣＤ４０抗体を含む医薬であって、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合しＣＳＦ−１Ｒの活性化をブロックする抗体と併用で、がんを治療するための医薬。
  5. ｉ）抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、（ａ）配列番号３９の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号４０の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含み、且つ
    ｉｉ）アゴニストＣＤ４０抗体は（ａ）配列番号８８の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号８９の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、
    請求項３又は４に記載の医薬。
  6. 抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、（ａ）配列番号３９の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号４０の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含み、且つ
    アゴニストＣＤ４０抗体はダセツズマブである、
    請求項３又は４に記載の医薬。
  7. ｉ）抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体は、（ａ）配列番号３９の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号４０の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含み、且つ
    ｉｉ）アゴニストＣＤ４０抗体は（ａ）配列番号９０の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び（ｂ）配列番号９１の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、
    請求項３又は４に記載の医薬。
  8. 抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体とアゴニストＣＤ４０抗体は同時に投与される、請求項３から７の何れか一項に記載の薬剤。
  9. 抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体とアゴニストＣＤ４０抗体は逐次的に投与される、請求項３から７の何れか一項に記載の薬剤。
  10. 抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体と二重特異性ＡＮＧ２−ＶＥＧＦ抗体は同時に投与される、請求項１又は２に記載の薬剤。
  11. 抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体と二重特異性ＡＮＧ２−ＶＥＧＦ抗体は逐次的に投与される、請求項１又は２に記載の薬剤。
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