CN111278459A - 组合疗法 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及抗CSF‑1R抗体或抗CSF‑1抗体或其抗原结合片段或者CSF‑1R活性的抑制剂与HDAC抑制剂例如恩替司他的组合，以及使用该组合施用给有此需要的受试者用于治疗癌症的方法。

Description

组合疗法
相关申请
本申请要求2017年5月19日提交的美国临时申请号62/508,842的权益和优先权，其内容通过引用整体并入本文。
序列表
本申请包含序列表，该序列表已经以ASCII格式电子提交，并且通过引用整体并入本文。所述ASCII副本创建于2018年5月3日，名为SYND-039_001WO_327830-2173_SL.txt，大小为59,194字节。
公开领域
本公开内容涉及疗法，包括抗CSF-1R抗体，或抗CSF-1抗体，或其抗原结合片段，或者CSF-1R活性的抑制剂，例如小化学实体或小分子CSF-1R抑制剂，与HDAC抑制剂例如恩替司他组合，以及治疗癌症的方法。
技术背景
对免疫肿瘤微环境理解的加深使得对新的基于免疫的生物标记物进行研究并开发用于治疗的靶向免疫途径的新试剂。集落刺激因子1(CSF-1)，也称为巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)，是由多种细胞(包括巨噬细胞、内皮细胞和成纤维细胞)产生的细胞因子。CSF-1通过在应答细胞上的特定受体刺激巨噬细胞的存活、增殖和功能。在许多癌症类型中，CSF-1和CSF-1R的表达与肿瘤进展和诊断不佳相关。肿瘤相关巨噬细胞(TAM)可能是肿瘤基质的主要组分，并且在许多肿瘤类型中，高水平的CSF-1和CSF-1R与高TAM浸润和不良预后有关。因此，由CSF-1介导的免疫抑制性肿瘤环境可以限制肿瘤免疫疗法的抗肿瘤活性，并导致低应答率。
HDAC抑制剂是一类发展中的治疗剂，其通过染色质重塑和基因表达来调节血液和实体恶性肿瘤。
发明概述
在一方面，本公开内容提供了治疗癌症的方法。方法包括向患者施用包含HDAC抑制剂和选自抗CSF-1R抗体或其结合片段、抗CSF-1抗体或其抗原结合片段以及CSF-1R活性的抑制剂的第二试剂的组合。
在另一方面，本公开内容提供了用于治疗癌症的试剂盒。试剂盒包括HDAC抑制剂和抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂的组合。例如，试剂盒还可以包括有关如何使用试剂盒的说明书。
在一些实施方案中，HDAC抑制剂是恩替司他。
在一些实施方案中，抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段包含重链，其中重链的可变结构域包含具有用于CDR-H1的SEQ ID NO：4给出的序列的CDR、具有用于CDR-H2的SEQ IDNO：5给出的序列的CDR以及具有用于CDR-H3的SEQ ID NO：6给出的序列的CDR中的至少一个；和/或轻链，其中轻链的可变结构域包含具有用于CDR-L1的SEQ ID NO：1给出的序列的CDR、具有用于CDR-L2的SEQ ID NO：2给出的序列的CDR以及具有用于CDR-L3的SEQ ID NO：3给出的序列的CDR中的至少一个。
在一些实施方案中，抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，其中重链的可变结构域包含三个CDR并且CDR-H1的序列与SEQ ID NO：4给出的序列具有至少60％的同一性或相似性，CDR-H2的序列与SEQ ID NO：5给出的序列具有至少60％的同一性或相似性以及CDR-H3的序列与SEQ ID NO：6给出的序列具有至少60％的同一性或相似性；并且其中轻链的可变结构域包含三个CDR并且CDR-L1的序列与SEQ ID NO：1给出的序列具有至少60％的同一性或相似性，CDR-L2的序列与SEQ ID NO：2给出的序列具有至少60％的同一性或相似性以及CDR-L3的序列与SEQ ID NO：3给出的序列具有至少60％的同一性或相似性。
在一些实施方案中，抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段包含重链，其中重链包含SEQID NO：23给出的序列；和轻链，其中轻链包含SEQ ID NO：15给出的序列。
在一些实施方案中，抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段选自具有全长重链和轻链的完整抗体分子、其Fab、修饰的Fab’、Fab’、F(ab’)2、Fv、VH、VL和scFv片段。
在一些实施方案中，抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO：27给出的序列的重链和含有SEQ ID NO：19给出的序列的轻链。
在一些实施方案中，其中抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段交叉阻断包含以下序列给出的6个CDR的抗体的结合：用于CDR-L1的SEQ ID NO：1、用于CDR-L2的SEQ ID NO：2、用于CDR-L3的SEQ ID NO：3、用于CDR-H1的SEQ ID NO：4、用于CDR-H2的SEQ ID NO：5以及用于CDR-H3的SEQ ID NO：6。
在一些实施方案中，抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段通过结合与其阻断的抗体相同的表位来交叉阻断结合。
在一些实施方案中，抗CSF-1抗体或其抗原结合片段通过结合与其阻断的抗体相同的表位来交叉阻断结合。
在一些实施方案中，抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段包括对人CSF-1R的结合亲和力是100pM或更小，或者10pM或更小。
在一些实施方案中，抗CSF-1抗体或其抗原结合片段包括对人CSF-1的结合亲和力是100pM或更小，或者10pM或更小。
在一些实施方案中，癌症的特征在于CSF-1R的过度表达。
在一些实施方案中，癌症是胰腺癌、结肠直肠癌、间皮瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、卵巢癌、胶质母细胞瘤、骨髓增生异常综合征(MDS)、乳腺癌、前列腺癌、皮肤癌、食道癌、胃癌、星形细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、肾癌、肺癌、肝癌、甲状腺癌或头颈癌。
在一些实施方案中，癌症是结肠直肠癌和/或胰腺癌。
在一些实施方案中，抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R的抑制剂每周一次施用。
在一些实施方案中，抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R的抑制剂每两周一次施用。
在一些实施方案中，抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R的抑制剂每周两次施用。
在一些实施方案中，抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R的抑制剂每周三次施用。
在一些实施方案中，抗CSF-1R抗体或其抗CSF-1抗体其抗原结合片段或者CSF-1R的抑制剂以范围是约0.01mg/kg至约1000mg/kg(例如约0.1-750mg/kg或约1-100mg/kg)的剂量施用。
在一些实施方案中，抗CSF-1R抗体或其抗CSF-1抗体其抗原结合片段或者CSF-1R的抑制剂以范围是约0.1mg/kg至约30mg/kg的剂量施用。
在一些实施方案中，抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂以范围是约0.1mg/kg至约10mg/kg的剂量施用。
在一些实施方案中，抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂以约0.1mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、1.5mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7.5mg/kg或约10mg/kg的剂量施用。
在一些实施方案中，CSF-1R活性的抑制剂是小化学实体或小分子CSF-1R抑制剂。例如，小化学实体或小分子CSF-1R抑制剂具有不大于5kDa的分子量，例如≤约4kDa、≤约3kDa、≤约1.5kDa或≤约1kDa。
在一些实施方案中，恩替司他口服施用。
在一些实施方案中，恩替司他每周一次或每周两次施用。
在一些实施方案中，恩替司他每周施用。在一些实施方案中，恩替司他每两周施用。
在一些实施方案中，恩替司他以3mg的剂量每周一次施用。
在一些实施方案中，恩替司他以5mg的剂量每周一次施用。
在一些实施方案中，恩替司他以10mg的剂量每两周一次施用。
在一些实施方案中，恩替司他首先施用。
在一些实施方案中，恩替司他和第二试剂(例如抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段，或者CSF-1R活性的抑制剂)同时施用。
在一些实施方案中，HDAC抑制剂(例如恩替司他)和第二试剂(例如抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段，抗CSF-1抗体或其抗原结合片段，或者CSF-1R活性的抑制剂)在时间上邻近施用，例如在时间上邻近治疗癌症。
在一些实施方案中，本公开内容提供了HDAC抑制剂(例如恩替司他)和第二试剂(例如抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段，抗CSF-1抗体或抗原结合片段，或者CSF-1R活性的抑制剂)的协同组合物，其中HDAC抑制剂和第二试剂在人体中(例如，仅在人体中)相互接触。
在一些实施方案中，本公开内容提供了制备组合物的方法，通过使HDAC抑制剂(例如恩替司他)和第二试剂(例如抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段，抗CSF-1抗体或其抗原结合片段，或者CSF-1R活性的抑制剂)在位点相互接触。
附图说明
本专利或申请文件包含至少一个彩色的附图。提交要求并缴纳必要的费用，专利局将提供带有彩色附图的本专利或专利申请公开的副本。
图1是存活图，显示恩替司他和Ab535疗法的组合改善了动物存活。
图2是条形图，显示恩替司他和Ab535的组合导致在第15天的肿瘤生长抑制。
图3是一对条形图，显示恩替司他和Ab535的组合增加了肿瘤中CD8/T调节细胞的比率。
图4是一对条形图，显示恩替司他和Ab535的组合显著地降低了肿瘤内T调节细胞。
图5是一对条形图，显示抗体Ab535的组合耗尽了肿瘤相关的巨噬细胞(TAM)。
发明详述
本公开内容至少部分基于以下概念，可以组合使用抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂和HDAC抑制剂以治疗癌症，与单独使用抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂或者单独使用HDAC抑制剂相比，具有更好的结果(例如，肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)或副作用减少)。方法可以进一步包括其中组合补充有一种或多种治疗剂或疗法的治疗。
在一方面，本公开内容提供了包含抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段、CSF-1R活性的抑制剂和HDAC抑制剂的组合，以及使用组合以治疗疾病的方法，所述疾病例如那些可以通过调控肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的免疫细胞谱和/或其他蛋白质来影响其病因的疾病，例如癌症。在一些实施方案中，本公开内容的特征为包含抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂和包括苯甲酰胺的HDAC抑制剂(例如恩替司他)的组合。
方法包括向有此需要的受试者施用有效量的抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂和HDAC抑制剂，例如通过抑制肿瘤生长、减少肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)和肿瘤内T调节细胞群体和/或增加肿瘤中CD8/T调节细胞的比率。
本文公开的试剂盒、组合和方法适用于治疗癌症或抑制癌细胞增殖，例如腺癌，例如结肠直肠癌和/或胰腺癌。
本公开内容进一步提供本文所述的任何组合物或组合在制备用于治疗疾病的药物中的用途。这样的疾病包括例如癌症、癌前病况或通过调控肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的免疫细胞谱或其他蛋白质而影响的疾病。
本公开内容提供了在组合疗法中的用途，其中化合物包含抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂和HDAC抑制剂(例如，恩替司他)。
集落刺激因子-1(CSF-1)是由包括黑素瘤的几种癌症经常产生的细胞因子。分泌的CSF-1结合在髓样细胞上的酪氨酸激酶受体CSF-1R，这导致髓样细胞的增殖增加以及向M2型巨噬细胞和髓样衍生的抑制细胞(MDSC)的分化增加，以及它们募集入肿瘤。(Mok等人，Mol Cancer Res 2014 74(1):153-161)。已建立的实体瘤由转化的赘生性细胞和未转化的宿主细胞，例如基质细胞、淋巴细胞、树突状细胞、巨噬细胞和MDSC组成。为了避开免疫应答，肿瘤细胞通过产生抑制溶细胞性T细胞并募集免疫抑制细胞的细胞因子来操纵周围的肿瘤微环境。(Mok等人)。因此，由CSF-1介导的免疫抑制性肿瘤环境可以限制肿瘤免疫疗法的抗肿瘤活性并导致低应答率。
已显示组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂影响人单核细胞对集落刺激因子CSF-1和CSF-2的应答。报告表明，同类最优的选择性IIa类组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂，TMP195，在体外影响人单核细胞对集落刺激因子CSF-1和CSF-2的应答，并且该IIa类HDAC抑制通过抗肿瘤巨噬细胞可减少乳腺肿瘤和转移(Guerriero等人,Nature,2017 543,428-432)。
抗CSF-1R抗体
CSF-1受体(CSF-1R)也被称为c-fms基因产物或CD115。CSF-1R是165kDa的1型TM糖蛋白，属于III型受体酪氨酸激酶家族。除CSF-1外，还已经显示结构相似但序列无关的分子IL-34是CSF-1R的配体(Lin等人,2008,Science 320:807-811)。CSF-1R的表达仅限于单核细胞-巨噬细胞谱系的细胞的循环和驻留组织群体，以及破骨细胞。另外，它在女性生殖系统的许多细胞中表达，包括卵母细胞、蜕膜细胞和滋养细胞。
配体CSF-1与CSF-1受体的结合通过酪氨酸激酶结构域的作用而导致受体在一个或多个酪氨酸残基上的磷酸化。可以检测到这种磷酸化，因为只有在磷酸化之后才有与受体结合的抗体(例如，Cell Signaling Technology的Phospho-M-CSF-Receptor(Tyr546)抗体#3083)。
在许多癌症类型中，CSF-1和CSF-1R的表达与肿瘤进展和诊断不良有关。肿瘤相关巨噬细胞(TAM)可以是肿瘤基质的主要组分，并且在许多类型的肿瘤中，高水平的CSF-1和CSF-1R与高TAM浸润和不良预后有关。已经发现肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)在肿瘤细胞上的高表达与多种其他实体瘤类型的不良预后和存活相关。需要提供适用于治疗应用的新的抗CSF-1R抗体。不受任何理论的束缚，考虑到CSF-1/CSF-1R途径在肿瘤免疫逃逸中起关键作用，并且可以认为是在几种实体器官类型中进行治疗干预的有吸引力的靶标。
针对CSF-1R的抗体是本领域已知的。Sherr，C.J.等人,1989,Blood 73:1786-1793描述了针对抑制CSF-1活性的CSF-1R的抗体(Sherr，C.J.等人,1989,Blood 73:1786-1793)。WO2009/026303公开了结合人CSF-1R的抗CSF-1R抗体和使用抗鼠CSF-1R抗体的体内小鼠肿瘤模型。WO2011/123381公开了内在化CSF-1R并具有ADCC活性的抗CSF-1R抗体。WO2011/123381还公开了使用抗鼠CSF-1R抗体的体内小鼠肿瘤模型。WO2011/140249公开了抗CSF-1R抗体，其阻断CSF-1与CSF-1R的结合并且据称可用于治疗癌症。WO2009/112245公开了抑制CSF-1与CSF-1R结合的抗CSF-1R IgG1抗体并且据称可用于治疗癌症、炎性肠病和类风湿关节炎。WO2011/131407公开了抑制CSF-1与CSF-1R的结合的抗CSF-1R抗体并据称可用于治疗骨质流失和癌症。WO2011/107553公开了抑制CSF-1与CSF-1R的结合的抗CSF-1R抗体，其被认为可用于治疗骨质流失和癌症。WO2011/070024公开了与人CSF-1R片段delD4结合的抗CSF-1R抗体。
在一些实施方案中，本公开内容提供的抗体能够阻断配体结合CSF-1R。本文所用的阻断是指物理阻断例如封闭受体，但也包括抗体或片段结合表位的地方，引起例如构象变化，这意味着受体的天然配体不再结合(在本文中称为变构阻断或变构抑制)。在一个实施方案中，本公开内容的抗体结合CSF-1R的所有同种型，例如在ECD结构域中具有变异的那些，例如V23G、A245S、H247P、V279M以及所述变异的两个、三个或四个的组合。
CSF-1和IL-34都是CSF-1R的配体，并且本公开内容的抗体优选地在功能性细胞筛选中抑制CSF-1和IL-34两者的活性。根据本公开内容的抗体还优选地不引起CSF-1R活化和/或CSF-1R内在化。根据本公开内容的抗体还优选地在体内选择性地消耗单核细胞的非经典群体。
非经典单核细胞通常是指CD14低表达和CD16高表达的单核细胞。单核细胞的这种群体被认为是肿瘤相关巨噬细胞的前体。
本公开的抗体分子合适地具有高结合亲和力。亲和力可以使用本领域中已知的任何合适方法来测量，包括如本文实施例中所述的技术，诸如表面等离振子共振，例如BIAcore，使用分离的天然或重组CSF-1R或者合适的融合蛋白/多肽。在一个实例中，使用本文实施例中所述的重组人CSF-1R胞外结构域来测量亲和力。在一个实例中，使用的重组人CSF-1R细胞外结构域是单体。合适地，本公开内容的抗体分子具有对分离的人CSF-1R的结合亲和力是约1nM或小于1nM。在一个实施方案中，本公开内容的抗体分子具有约500pM或更低的结合亲和力。在一个实施方案中，本公开内容的抗体分子具有约250pM或更低的结合亲和力。在一个实施方案中，本公开内容的抗体分子具有约200pM或更低的结合亲和力。在一个实施方案中，本公开内容提供了具有约100pM或更低的结合亲和力的抗CSF-1R抗体。在一个实施方案中，本公开内容提供了具有约100pM或更低，优选地约10pM或更低，更优选地约5pM或更低的结合亲和力的人源化的抗CSF-1R抗体。在一些实施方案中，本公开内容提供了具有约100pM或更低，优选地约10pM或更低，更优选地约5pM或更低的结合亲和力的人源化的抗CSF-1R抗体。
亲和力的数值越低，抗体或片段对抗原的亲和力越高。
本文所用的人CSF-1R是指名为CSF-1R的人蛋白质或其生物活性片段。
本公开内容提供了抗CSF-1R抗体，包括人源化的抗体。通过用表达CSF-1R胞外结构域的载体转染的大鼠成纤维细胞对大鼠进行免疫来产生抗体。
本公开内容提供了包含重链和/或轻链的抗体，其中重链和/或轻链包含至少一个衍生自抗CSF-1R抗体969.2的CDR。
Ab969.2是全长人源化的IgG4分子；轻链包含人κ链恒定区(Km3同种异型)并且重链包含人γ-4重链恒定区，其具有铰链稳定化突变S241P(Angal等人,1993)。潜在的DG异构化基序存在于轻链可变区内CDR-L2与框架的连接处。Ab969.2全抗体重链和轻链的序列显示在SEQ ID NO：27和19中。
抗体可变结构域中的残基通常根据由Kabat等人，1987设计的系统编号。该系统在Kabat等人，1987，Sequences of Proteins of Immunological Interest,US Departmentof Health and Human Services,NIH,USA中提出(以下称“Kabat等人(同上)”)。除非另有说明，否则在本说明书中使用该编号系统。
Kabat残基名称并不总是直接对应于氨基酸残基的线性编号。实际的线性氨基酸序列可以包含比在严格的Kabat编号中更少或额外的氨基酸，其对应于基本可变结构域结构的结构组分(框架或互补决定区(CDR))的缩短或插入。可以通过将抗体序列中的同源残基与“标准”Kabat编号序列进行比对来确定给定抗体的残基的正确Kabat编号。
根据Kabat编号系统，重链可变结构域的CDR位于残基31-35(CDR-H1)、残基50-65(CDR-H2)和残基95-102(CDR-H3)。然而，根据Chothia(Chothia,C.和Lesk,A.M.，J.Mol.Biol,196,901-917(1987))，等同于CDR-H1的环从残基26延伸至残基32。因此，除非另有说明，否则本文所用的“CDR-H1”是指残基26至35，如由Kabat编号系统和Chothia的拓扑环定义的组合所描述的。
根据Kabat编号系统，轻链可变结构域的CDR位于残基24-34(CDR-L1)、残基50-56(CDR-L2)和残基89-97(CDR-L3)。
可使用本领域已知的任何合适方法获得用于本公开内容的抗体。包括融合蛋白的CSF-1R多肽/蛋白，(重组地或天然地)表达多肽的细胞可用于产生特异性识别CSF-1R的抗体。多肽可以是“成熟”多肽或者其生物活性片段或衍生物。人蛋白已在UniProt中注册，编号为P07333。
在需要对动物进行免疫的情况下，可以通过使用众所周知的常规方法对动物，优选地非人动物施用多肽来获得针对CSF-1R多肽产生的抗体，参见例如Handbook ofExperimental Immunology,D.M.Weir(ed.)，Vol 4，Blackwell Scientific Publishers,Oxford,Engliand,1986。可以免疫许多温血动物，例如兔、小鼠、大鼠、绵羊、牛、骆驼或猪。但是，小鼠、兔、猪和大鼠通常是最合适的。
可以使用测量与人CSF-1R的结合的测定法和/或测量阻断配体结合受体的能力的测定法来进行抗体的筛选。合适的测定法的实例在本文实施例中描述。
在一些实施方案中，抗体是包含重链的抗CSF-1R抗体或其结合片段，其中重链的可变结构域包含具有用于CDR-H1的SEQ ID NO：4给出的序列的CDR，具有用于CDR-H2的SEQID NO：5给出的序列的CDR以及具有用于CDR-H3的SEQ ID NO：6给出的序列的CDR中的至少一个。优选地，重链的可变结构域包含用于CDR-H1的SEQ ID NO：4给出的序列，用于CDR-H2的SEQ ID NO：5给出的序列和用于CDR-H3的SEQ ID NO：6给出的序列。
在一些实施方案中，本公开内容的抗体是抗CSF-1R抗体或其结合片段，其包含如上所定义的重链并且另外地包含轻链，其中轻链的可变结构域包含具有用于CDR-L1的SEQID NO：1给出的序列的CDR，具有用于CDR-L2的SEQ ID NO：2给出的序列的CDR以及具有用于CDR-L3的SEQ ID NO：3给出的序列的CDR中的至少一个。轻链的可变结构域优选地包含用于CDR-L1的SEQ ID NO：1给出的序列，用于CDR-L2的SEQ ID NO：2给出的序列以及用于CDR-L3的SEQ ID NO：3给出的序列。
单克隆抗体可以通过本领域已知的任何方法来制备，例如杂交瘤技术(Kohler&Milstein,1975,Nature,256:495-497)、三瘤技术、人B细胞杂交瘤技术(Kozbor等人,1983,Immunology Today 4:72)和EBV杂交瘤技术(Cole等人,1985,Monoclonal Antibodies andCancer Therapy,pp77-96,Alan R Liss,Inc.)。
在一个实施方案中，在选自独立地以下的一个或多个CDR中，至少一个氨基酸被保守取代所替换：CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3中的任何一个；组合CDR-H1和H2、CDR-H1和H3、CDR-H1和L1、CDR-H1和L2、CDR-H1和L3、CDR-H2和H3、CDR-H2和L1、CDR-H2和L2、CDR-H2和L3、CDR-H3和L1、CDR-H3和L2、CDR-H3和L3、CDR-L1和L2、CDR-L1和L3、CDR-L2和L3中的任何一个；CDR-H1、H2和H3，CDR-H1、H2和L1，CDR-H1、H2和L2，CDR-H1、H2和L3，CDR-H2、H3和L1，CDR-H2、H3和L2，CDR-H2、H3和L3，CDR-H3、L1和L2，CDR-H3、L1和L3，CDR-L1、L2、L3；组合CDR-H1、H2、H3和L1，CDR-H1、H2、H3和L2，CDR-H1、H2、H3和L3，CDR-H2、H3、L1和L2，CDR-H2、H3、L2和L3，CDR-H3、L1、L2和L3，CDR-L1、L2、L3和H1，CDR-L1、L2、L3和H2，CDR-L1、L2、L3和H3，CDR-L2、L3、H1和H2，CDR-H1、H2、H3、L1和L2，CDR-H1、H2、H3、L1和L3，CDR-H1、H2、H3、L2和L3，CDR-L1、L2、L3、H1和H2，CDR-L1、L2、L3、H1和H3，CDR-L1、L2、L3、H2和H3中的任何一个；以及CDR-H1、H2、H3、L1、L2和L3的组合。
在一些实施方案中，提供了抗CSF-1R抗体或其结合片段，其中重链的可变结构域包含三个CDR并且CDR-H1的序列与SEQ ID NO：4给出的序列具有至少60％、70％、80％，90％或95％的同一性或相似性，CDR-H2的序列与SEQ ID NO：5给出的序列具有至少60％、70％、80％、90％或95％的同一性或相似性以及CDR-H3的序列与SEQ ID NO：6给出的序列具有至少60％、70％、80％、90％或95％的同一性或相似性。优选地，抗CSF-1R抗体或其结合片段另外地包含轻链，其中轻链的可变结构域包含三个CDR并且CDR-L1的序列与SEQ ID NO：1给出的序列具有至少60％、70％、80％、90％或95％的同一性或相似性，CDR-L2的序列与SEQ IDNO：2给出的序列具有至少60％、70％、80％、90％或95％的同一性或相似性以及CDR-L3的序列与SEQ ID NO：3给出的序列具有至少60％的同一性或相似性。
在一些实施方案中，抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段交叉阻断包含以下序列给出的6个CDR的抗体的结合：用于CDR-L1的SEQ ID NO：1、SEQ用于CDR-L2的ID NO：2、用于CDR-L3的SEQ ID NO：3、用于CDR-H1的SEQ ID NO：4、用于CDR-H2的SEQ ID NO：5以及用于CDR-H3的SEQ ID NO：6，例如亲和力是100pM或更低，特别是其中交叉阻断是变构的。在一些实施方案中，抗CSF-1R抗体或其结合片段抑制，或与CSF-1和/或IL-34与CSF-1R受体的细胞外结构域的结合相重叠。
在一个实施方案中，提供了抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段，其交叉阻断包含以下序列给出的6个CDR的抗体的结合：用于CDR-L1的SEQ ID NO：1、用于CDR-L2的SEQ ID NO：2、用于CDR-L3的SEQ ID NO：3、用于CDR-H1的SEQ ID NO：4、用于CDR-H2的SEQ ID NO：5以及用于CDR-H3的SEQ ID NO：6，例如亲和力是100pM或更低，特别是其中抗体通过结合与其阻断的抗体相同的表位来交叉阻断结合。
在一些实施方案中，抗体具有包含SEQ ID NO：27给出的序列的重链和包含SEQ IDNO：19给出的序列的轻链。还提供了抗CSF-1R抗体或其结合片段，其中重链和轻链与包含SEQ ID NO：27给出的序列的重链和包含SEQ ID NO：19给出的序列的轻链至少80％(优选地85％、90％、95％或98％)相同或相似。在一个实施方案中，轻链具有或由SEQ ID NO：19给出的序列组成并且重链具有或由SEQ ID NO：27给出的序列组成。在另一个实施方案中，轻链具有或由SEQ ID NO：19的序列组成并且重链具有或由SEQ ID NO：27的序列组成，其中在SEQ ID NO：27的位置453的氨基酸缺失或删除。
本公开还提供了人CSF-1R的特定区域或表位，其被本公开内容的抗体结合，特别是包含重链序列gH2(SEQ ID NO：27)和/或轻链序列gL7(SEQ ID NO：19)的抗体969.g2。
人CSF-1R多肽的特定区域或表位可以通过本领域已知的任何合适的表位作图方法与本公开内容提供的任何一种抗体相组合来鉴定。此类方法的实例包括针对与本公开的抗体的结合来筛选衍生自CSF-1R的长度可变的肽，其中能够特异性结合抗体的最小片段包含被抗体识别的表位序列(例如约5至20个氨基酸，优选地约7个氨基酸长度区域内的肽)。CSF-1R肽可以合成产生或通过对CSF-1R多肽的蛋白水解消化产生。结合抗体的肽可以通过例如质谱分析来鉴定。在另一个实例中，NMR光谱法或X射线晶体学可以用于鉴定被本公开内容的抗体结合的表位。一旦被鉴定，结合本公开内容的抗体的表位片段可以在需要时用作免疫原以获得结合相同表位的另外的抗体。
生物分子，例如抗体或片段，包含酸性和/或碱性官能团，从而使分子具有净正电荷或负电荷。整体“观察到”的电荷量将取决于实体的绝对氨基酸序列、3D结构中带电基团的局部环境以及分子的环境条件。等电点(pI)是特定分子或其溶剂可及表面在其中不带净电荷的pH。在一个实例中，本公开内容的CSF-1R抗体和片段可经工程改造以具有适当的等电点。这可以导致抗体和/或片段具有更强的特性，特别是合适的溶解度和/或稳定性谱和/或改善的纯化特性。
在一些实施方案中，本公开内容提供了人源化的CSF-1R抗体，其被工程改造成具有与最初鉴定的抗体不同的等电点。抗体可以例如通过替换氨基酸残基来进行工程改造，例如用一个或多个碱性氨基酸残基替换酸性氨基酸残基。备选地，可以引入碱性氨基酸残基或可以除去酸性氨基酸残基。备选地，如果分子具有不可接受的高pI值，则可以根据需要引入酸性残基以降低pI。重要的是，在操作pI时必须注意保持抗体或片段的理想活性。因此，在一个实施方案中，工程改造的抗体或片段具有与“未修饰的”抗体或片段相同或基本相同的活性。
可以在互联网上的expasy.ch/tools/pi_tool.html和iut-arles.up.univ-mrs.fr/w3bb/d_abim/compo-p.html上找到诸如**ExPASY之类的程序，用于预测抗体或片段的等电点。应当理解，可以使用本领域已知的任何合适方法来改变本文公开的抗体的亲和力。因此，本公开内容还涉及本公开内容的抗体分子的变体，其对CSF-1R具有改善的亲和力。这样的变体可以通过许多亲和力成熟方案获得，包括使CDR突变(Yang等人，1995，J.Mol.Biol.，254：392-403)，链改组(Marks等人，1992，Bio/Technology,10:779-783)，大肠杆菌(E.coli)突变株的使用(Low等人,1996,J.Mol.Biol.，250:359-368)，DNA改组(Patten等人,1997,Curr.Opin.Biotechnol.,8:724-733)，噬菌体展示(Thompson等人,J.Mol.Biol.,256,77-88,1996)和性PCR(Crameri等人,1998,Nature,391:288-291)。Vaughan等人(同上)讨论了亲和力成熟的这些方法。
如本文所用，“嵌合抗体”是这样的抗体分子，其中(a)恒定区或其部分被改变、替换或交换，使得抗原结合位点(可变区)与不同的或改变的类别、效应子功能和/或物种的恒定区或者赋予嵌合抗体新特性的完全不同的分子连接，所述完全不同的分子例如酶、毒素、激素、生长因子、药剂等；或(b)可变区或其部分被具有不同的或改变的抗原特异性的可变区改变、替换或交换。根据本公开内容的并且根据本公开使用的优选抗体包括人源化和/或嵌合单克隆抗体。
本公开的抗体可以缀合至一个或多个效应子分子。将理解的是，效应子分子可以包括单个效应子分子或者两个或更多个这样的分子，其被连接从而形成可以附着至本公开的抗体的单个部分。当需要获得与效应子分子连接的抗体片段时，可以通过标准的化学或重组DNA程序制备，其中抗体片段直接或通过缀合试剂与效应子分子连接。将这种效应子分子与抗体缀合的技术是本领域众所周知的(参见，Hellstrom等人，Controlled DrugDelivery,2nd Ed.,Robinson等人,eds.，1987,pp.623-53；Thorpe等人,1982,Immunol.Rev.,62:119-58和Dubowchik等人,1999,Pharmacology and Therapeutics,83,67-123)。具体的化学程序包括，例如，在WO93/06231、WO92/22583、WO89/00195、WO89/01476和WO03/031581中描述的那些。备选地，在效应子分子是蛋白质或多肽的情况下，可以使用重组DNA程序来实现连接，例如WO86/01533和EP0392745中所述。
本文所用的术语效应子分子包括例如抗肿瘤剂，药剂，毒素，生物活性蛋白例如酶，其他抗体或抗体片段，合成或天然存在的聚合物，核酸及其片段例如DNA、RNA及其片段，放射性核素尤其是放射性碘化物，放射性同位素，螯合金属，纳米颗粒和报告基团例如荧光化合物，或者可通过NMR或ESR光谱法检测的化合物。
效应子分子还包括但不限于抗代谢物(例如甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、达卡巴嗪)、烷化剂(例如甲氧乙胺、噻替哌、苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀(BSNU)和洛莫司汀(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲佐菌素、丝裂霉素C和顺式二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂)、蒽环类(例如柔红霉素(daunorubicin)(以前为多诺霉素(daunomycin))和阿霉素)、抗生素类(例如更生霉素(dactinomycin)以前为放线菌素(actinomycin))、博来霉素、光神霉素、蒽霉素(AMC)、卡奇霉素或倍癌霉素)和抗有丝分裂剂(例如长春新碱和长春碱)。
其他效应子分子包括蛋白质、肽和酶。目的酶包括但不限于蛋白水解酶、水解酶、裂解酶、异构酶、转移酶。目的蛋白质、多肽和肽包括但不限于免疫球蛋白，毒素(如相思豆毒素、蓖麻毒蛋白A、假单胞菌外毒素或白喉毒素)，蛋白质(如胰岛素，肿瘤坏死因子、α-干扰素、β-干扰素、神经生长因子、血小板衍生的生长因子或组织纤溶酶原激活剂)、血栓形成剂或抗血管生成剂，例如血管抑素或内皮抑素，或者生物应答修饰剂，例如淋巴因子、白介素-1(IL-1)、白介素-2(IL-2)、神经生长因子(NGF)或其他生长因子和免疫球蛋白。
效应子分子可以增加抗体在体内的半衰期，和/或降低抗体的免疫原性和/或增强抗体穿过上皮屏障向免疫系统的递送。这种类型的合适效应子分子的实例包括聚合物、白蛋白和白蛋白结合蛋白或白蛋白结合化合物，例如WO05/117984中所述的那些。在一些实施方案中，由效应子分子提供的半衰期(独立于CSF-1R)是有利的。
在一些实施方案中，提供了纯化的抗CSF-1R抗体或片段，例如人源化的抗体或片段，特别是本文公开的抗体或片段，其基本上是纯化形式的，特别是不含或基本不含内毒素和/或宿主细胞蛋白质或DNA。如上文所用的纯化形式旨在是指至少90％w/w的纯度，例如91、92、93、94、95、96、97、98、99％w/w或更高的纯度。
基本上不含内毒素通常旨在是指内毒素含量是1EU每mg抗体产品或更低，例如0.5或0.1EU每mg产品。
基本上不含宿主细胞蛋白质或DNA通常旨在是指宿主细胞蛋白质和/或DNA的含量合适地是400μg每mg抗体产物或更低，例如350μg每mg或更低，300μg每mg或更低，250μg每mg或更低，200μg每mg或更低，150μg每mg或更低，100μg每mg或更低，50μg每mg或更低，40μg每mg或更低，特别是20μg每mg或更低。
抗CSF-1R抗体和效应子分子的其他实例在WO 2015/028455中描述，其内容通过引用整体并入本文。
核酸，多肽
CDR-L1：LASEDIYDNLA(SEQ ID NO:1)
CDRL2：YASSLQD(SEQ ID NO:2)
CDR-L3：LQDSEYPWT(SEQ ID NO:3)
CDR-H1：GFSLTTYGMGVG(SEQ ID NO:4)
CDR-H2：NIWWDDDKYYNPSLKN(SEQ ID NO:5)
CDR-H3：IGPIKYPTAPYRYFDF(SEQ ID NO:6)
Rat Ab 969 VL区：DIQMTQSPAS LSASLGETVS IECLASEDIYDNLAWYQKKP GKSPHLLIYYASSLQDGVPS RFSGSGSGTQYSLKINSLES EDAATYFCLQ DSEYPWTFGG GTKLELK(SEQ ID NO:7)
Rat Ab 969 VL区：
Figure BDA0002337235330000161
Figure BDA0002337235330000162
Rat Ab 969 VL区，信号序列下划线并斜体：
Figure BDA0002337235330000163
Figure BDA0002337235330000164
Rat Ab 969 VL区，信号序列下划线并斜体：
Figure BDA0002337235330000165
Figure BDA0002337235330000166
Figure BDA0002337235330000171
Rat Ab 969 VH区：QVTLKESGPG ILQPSQTLSL TCTFSGFSLTTYGMGVGWIRQPSGKGLEWLANIWWDDDKY YNPSLKNRLTISKDTSNNQA FLKLTNVHTSDSATYYCARIGPIKYPTAPYRYFDFWGPGT MVTVS(SEQ ID NO:11)
Rat Ab 969 VH区：
Figure BDA0002337235330000172
Figure BDA0002337235330000173
Rat Ab 969 VH区，信号序列下划线并斜体：MDRLTSSFLL LIVPAYVLSQVTLKESGPGILQPSQTLSLT CTFSGFSLTT YGMGVGWIRQPSGKGLEWLA NIWWDDDKYY NPSLKNRLTISKDTSNNQAFLKLTNVHTSD SATYYCARIG PIKYPTAPYR YFDFWGPGTM VTVS(SEQ ID NO:13)
Rat Ab 969 VH区，信号序列下划线并斜体：
Figure BDA0002337235330000174
Figure BDA0002337235330000175
969 gL7 V-区：DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCLASEDIY DNLAWYQQKPGKAPKLLIYYASSLQDGVPS RFSGSGSGTD YTLTISSLQP EDFATYYCLQDSEYPWTFGG GTKVEIK(SEQ ID NO:15)
969 gL7 V-区：
Figure BDA0002337235330000176
Figure BDA0002337235330000181
969 gL7 V-区，信号序列下划线并斜体：
Figure BDA0002337235330000182
Figure BDA0002337235330000183
969 gL7 V-区，信号序列下划线并斜体：
Figure BDA0002337235330000184
Figure BDA0002337235330000185
969 gL7轻链(V+恒定)：DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCLASEDIYDNLAWYQQKPGKAPKLLIYY ASSLQDGVPS RFSGSGSGTDYTLTISSLQP EDFATYYCLQ DSEYPWTFGG GTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQESVTEQDSKD STYSLSSTLTLSKADYEKHK VYACEVTHQGLSSPVTKSFN RGEC(SEQ ID NO:19)
969 gL7轻链(V+恒定)：
Figure BDA0002337235330000186
Figure BDA0002337235330000187
Figure BDA0002337235330000191
969 gL7轻链(V+恒定)，信号序列下划线并斜体：
Figure BDA0002337235330000192
969 gL7(V+恒定)，信号序列下划线并斜体：
Figure BDA0002337235330000194
Figure BDA0002337235330000195
969 gH2 V-区：EVTLKESGPA LVKPTQTLTL TCTFSGFSLT TYGMGVGWIRQPPGKALEWLANIWWDDDKY YNPSLKNRLT ISKDTSKNQVVLTMTNMDPV DTATYYCARI GPIKYPTAPY RYFDFWGQGTMVTVS(SEQ ID NO:23)
969 gH2 V-区：
Figure BDA0002337235330000196
Figure BDA0002337235330000197
Figure BDA0002337235330000201
969 gH2 V-区，信号序列下划线并斜体：
Figure BDA0002337235330000202
Figure BDA0002337235330000203
969 gH2 V-区，信号序列下划线并斜体：
Figure BDA0002337235330000204
Figure BDA0002337235330000205
969 gH2重链(V+恒定–hu IgG4P)：EVTLKESGPA LVKPTQTLTLTCTFSGFSLTTYGMGVGWIR QPPGKALEWL ANIWWDDDKYYNPSLKNRLT ISKDTSKNQV VLTMTNMDPVDTATYYCARIGPIKYPTAPY RYFDFWGQGT MVTVSSASTK GPSVFPLAPCSRSTSESTAA LGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSVVTVPSS SLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEF LGGPSVFLFP PKPKDTLMIS RTPEVTCVVVDVSQEDPEVQ FNWYVDGVEV HNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWL NGKEYKCKVS NKGLPSSIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPS QEEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTT PPVLDSDGSF FLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO:27)
969 gH2重链(V+恒定–hu IgG4P,外显子下划线)：
Figure BDA0002337235330000206
Figure BDA0002337235330000211
969 gH2重链(V+恒定–hu IgG4P)，信号序列下划线并斜体：
Figure BDA0002337235330000212
Figure BDA0002337235330000213
Figure BDA0002337235330000221
969 gH2重链(V+恒定–hu IgG4P,外显子下划线)信号序列下划线并斜体：
Figure BDA0002337235330000222
Figure BDA0002337235330000231
人VK1 2-1-(1)O12 JK4受体框架：DIQMTQSPSS LSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKP GKAPKLLIYA ASSLQSGVPS RFSGSGSGTDFTLTISSLQP EDFATYYCQQ SYSTPLTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:31)人VK1 2-1-(1)O12 JK4受体框架：
Figure BDA0002337235330000232
Figure BDA0002337235330000233
人VH2 3-1 2-70 JH3受体框架：QVTLKESGPA LVKPTQTLTL TCTFSGFSLSTSGMRVSWIRQPPGKALEWL ARIDWDDDKF YSTSLKTRLTISKDTSKNQV VLTMTNMDPV DTATYYCARI AFDIWGQGTMVTVS(SEQ ID NO:33)
人VH2 3-1 2-70 JH3受体框架：
Figure BDA0002337235330000234
Figure BDA0002337235330000235
Figure BDA0002337235330000241
用于CSF-1R的氨基酸序列：MGPGVLLLLL VATAWHGQGI PVIEPSVPELVVKPGATVTLRCVGNGSVEW DGPPSPHWTL YSDGSSSILSTNNATFQNTG TYRCTEPGDP LGGSAAIHLYVKDPARPWNVLAQEVVVFED QDALLPCLLT DPVLEAGVSL VRVRGRPLMRHTNYSFSPWH GFTIHRAKFIQSQDYQCSAL MGGRKVMSISIRLKVQKVIP GPPALTLVPA ELVRIRGEAA QIVCSASSVDVNFDVFLQHNNTKLAIPQQS DFHNNRYQKV LTLNLDQVDF QHAGNYSCVASNVQGKHSTS MFFRVVESAYLNLSSEQNLI QEVTVGEGLNLKVMVEAYPG LQGFNWTYLG PFSDHQPEPK LANATTKDTYRHTFTLSLPRLKPSEAGRYS FLARNPGGWR ALTFELTLRY PPEVSVIWTFINGSGTLLCA ASGYPQPNVT WLQCSGHTDRCDEAQVLQVWDDPYPEVLSQ EPFHKVTVQS LLTVETLEHN QTYECRAHNSVGSGSWAFIP ISAGAHTHPPDEFLFTPVVV ACMSIMALLLLLLLLLLYKY KQKPKYQVRW KIIESYEGNS YTFIDPTQLPYNEKWEFPRNNLQFGKTLGA GAFGKVVEAT AFGLGKEDAVLKVAVKMLKS TAHADEKEAL MSELKIMSHLGQHENIVNLLGACTHGGPVL VITEYCCYGD LLNFLRRKAE AMLGPSLSPGQDPEGGVDYK NIHLEKKYVRRDSGFSSQGV DTYVEMRPVSTSSNDSFSEQ DLDKEDGRPL ELRDLLHFSS QVAQGMAFLASKNCIHRDVAARNVLLTNGH VAKIGDFGLA RDIMNDSNYIVKGNARLPVK WMAPESIFDC VYTVQSDVWSYGILLWEIFSLGLNPYPGIL VNSKFYKLVK DGYQMAQPAF APKNIYSIMQACWALEPTHR PTFQQICSFLQEQAQEDRRE RDYTNLPSSS RSGGSGSSSSELEEESSSEH LTCCEQGDIA QPLLQPNNYQ FC(SEQ IDNO:35)
用于CSF-1R的氨基酸序列：
MRHTNYSFSPWHGFTIHRAKFIQSQDYQCSALMGGRKVMSISIRLKVQK(SEQ ID NO:36)
用于CSF-1R的氨基酸序列：(SNP V32G,A245S,H247P,V279M,位置下划线)
IPVIEPSVPELVVKPGATVTLRCVGNGSVEWDGPPSPHWTLYSDGSSSILSTNNATFQNTGTYRCTEPGDPLGGSAAIHLYVKDPARPWNVLAQEVVVFEDQDALLPCLLTDPVLEAGVSLVRVRGRPLMRHTNYSFSPWHGFTIHRAKFIQSQDYQCSALMGGRKVMSISIRLKVQKVIPGPPALTLVPAELVRIRGEAAQIVCSASSVDVNFDVFLQHNNTKLAIHQQSDFHNNRYQKVLTLNLDQVDFQHAGNYSCVASNVQGKHSTSMFFRVVESAYLNLSSEQNLIQEVTVGEGLNLKVMVEAYPGLQGFNWTYLGPFSDHQPEPKLANATTKDTYRHTFTLSLPRLKPSEAGRYSFLARNPGGWRALTFELTLRYPPEVSVIWTFINGSGTLLCAASGYPQPNVTWLQCSGHTDRCDEAQVLQVWDDPYPEVLSQEPFHKVTVQSLLTVETLEHNQTYECRAHNSVGSGSWAFIPISAGAHTHPPDE(SEQ IDNO:37)
MGPGVLLLLL VATAWHGQGI PVIEPSVPEL VVKPGATVTLRCVGNGSVEW DGPPSPHWTLYSDGSSSILS TNNATFQNTGTYRCTEPGDP LGGSAAIHLY VKDPARPWNV LAQEVVVFEDQDALLPCLLTDPVLEAGVSL VRVRGRPLMR HTNYSFSPWHGFTIHRAKFI QSQDYQCSAL MGGRKVMSIS IRLKVQKVIPGPPALTLVPAELVRIRGEAA QIVCSASSVD VNFDVFLQHN NTKLAIPQQSDFHNNRYQKV LTLNLDQVDFQHAGNYSCVA SNVQGKHSTSMFFRVVESAY LNLSSEQNLI QEVTVGEGLN LKVMVEAYPGLQGFNWTYLGPFSDHQPEPK LANATTKDTY RHTFTLSLPRLKPSEAGRYS FLARNPGGWR ALTFELTLRYPPEVSVIWTFINGSGTLLCA ASGYPQPNVT WLQCSGHTDR CDEAQVLQVWDDPYPEVLSQ EPFHKVTVQSLLTVETLEHN QTYECRAHNSVGSGSWAFIP ISAGAHTHPP DE(SEQ ID NO:38)
抗CSF-1抗体
本公开还提供了适用于本文公开的任何方法和组合疗法的抗体及其抗原结合片段，其特异性结合CSF-1，优选地人CSF-1，并且具有抑制CSF-1的功能。CSF-1表达与许多癌症类型的不良诊断和肿瘤进展相关。CSF-1的水平升高与肿瘤相关巨噬细胞的水平升高相关，这是肿瘤基质和疾病预后不良的主要因素。在一些实施方案中，抗CSF-1抗体或其抗原片段抑制CSF-1的活性。在一些实施方案中，抗CSF-1抗体抑制CSF-1与c-fms受体的结合并阻断或阻止c-fms的活化。在一些实施方案中，抗CSF-1抗体或其抗原结合片段是人源化的和/或人抗CSF-1抗体或其片段。在一些实施方案中，人抗CSF-1抗体通过免疫非人转基因动物例如啮齿动物而产生，其基因组包含人免疫球蛋白基因，从而使啮齿动物产生人抗体。CSF-1的抗体是本领域已知的。优选地抑制CSF-1活性的抗体包括在US8652469B2和WO2013068902中公开的那些，其各自的内容通过引用整体并入本文。例如，抑制CSF-1的抗体包括MCS110。
在一些实施方案中，抗CSF-1抗体或其抗原结合片段包括对人CSF-1的结合亲和力是100pM或更低，或者10pM或更低。在一些实施方案中，抗CSF-1抗体或其抗原结合片段以范围是约0.1mg/kg至约30mg/kg的剂量施用。
CSF-1R的抑制剂
本公开内容还提供适用于本文公开的任何方法和组合疗法的、具有抑制CSF-1R活性的功能的CSF-1R(优选地人CSF-1R)活性的抑制剂。如本文所用，术语“CSF-1R活性”是指本领域对于CSF-1R理解的活性谱，特别是人CSF-1R及其同工型，例如1、2、3或所有同工型的活性。例如，配体与受体的结合在特定的酪氨酸残基上诱导对CSF-1R的磷酸化(BouretteRP和Rohrschneider LR,2000,Growth Factors17:155-166)并且随后的信号传导事件的级联介导细胞迁移、存活、分化和增殖(Suzu Setal，1997,J Immunol，159，1860-7；Yeung Y-G和Stanley ER，2003，Mol Cell Proteomics，2，1143-55；Yu W等人2008,J Leukoc 25Biol84(3),852-63)。包含苯丙氨酸残基替换选定的酪氨酸残基的突变型CSF-1R受体分子在转染细胞中的表达揭示了特定的酪氨酸残基与例如存活、增殖和形态的细胞结果的关系(Yu等人J Leukoc Biol 2008 Sep 84(3):852-863)。使用抗磷酸酪氨酸抗体以及分子特异性抗体的蛋白质组学方法和免疫印迹技术已经鉴定了在受体的配体刺激后参与介导这些细胞功能的许多细胞内分子(Yeung Y-G等人,1998,J Biol Chem,13,273(46):17128-37；Husson H等人,1997,Oncogenel5,14(19):2331-8。
根据本公开内容的CSF-1R活性的抑制剂是干扰例如降低/抑制或阻断CSF-1R的活性的试剂。特别优选的是干扰CSF-1R的活性的试剂。根据本公开内容的抑制剂可以部分地或完全地抑制CSF-1R活性。适用于本公开内容的方法和组合疗法的抑制剂包括但不限于能够与IL-34、CSF-1或CSF-1受体(CSF-1R)或者编码IL-34、CSF-1或CSF-1R的核酸分子相互作用(例如结合或识别)，或者能够抑制IL-34、CSF-1或CSF-1R的表达或者能够抑制CSF-1R与CSF-1和/或IL-34之间相互作用的抑制剂。这样的抑制剂可以是但不限于抗体、核酸(例如DNA、RNA、反义RNA和siRNA)、碳水化合物、脂质、蛋白质、多肽、肽、拟肽、小分子和其他药剂。
在一些实施方案中，CSF-1R活性的抑制剂是小化学实体或小分子CSF-1R抑制剂。在一个实施方案中，抑制剂阻断CSF-1与受体CSF-1R的结合。在一些实施方案中，抑制剂是高选择性小分子CSF-1R抑制剂。小分子CSF-1R抑制剂的实例包括但不限于DCC-3014、ARRY-382、GW2580、BLZ94、PLX3397、PLX7386、JNJ-40346527、伊马替尼、达沙替尼、舒尼替尼、CEP-701和PKC-412。小分子CSF-1R抑制剂的其他实例描述于例如Ramachandran等人,Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters,2017,27(10):2153-2160；Mashkani等人,Bioorganic&Medicinal Chemistry,2010,18(5):1789-1797；和Patel等人,Curr Top MedChem.2009,9(7):599-610，其每一个的内容通过引用整体并入本文。
合适的抑制剂的实例包括但不限于结合CSF-1并干扰与天然CSF-1受体的结合的CSF-1受体的合成功能片段，结合CSF-1受体并干扰与天然CSF-1受体的结合的CSF-1的合成功能片段，结合CSF-1受体并干扰与天然CSF-1受体的结合的IL-34的合成功能片段，结合CSF-1或IL-34或者CSF-1受体并干扰CSF-1受体-配体相互作用的抗体，特异性杂交编码CSF-1、IL-34或CSF-1受体的mRNA的反义核酸分子，或者抑制IL-34、CSF-1或CSF-1R的活性的小分子或其他药剂。CSF-1受体活性的抑制剂以及鉴定和产生此类抑制剂的方法是本领域已知的。中和抗CSF-1抗体已经描述在例如Weir等人,1996,J Bone Miner Res.1471-1481和Haran-Ghera等人,1997,Blood,89,2537-2545中，其也描述了抗CSF-1R抗体。还描述了CSF-1的反义拮抗剂(EP1223980)。
可以是合适抑制剂的试剂可以选自广泛多种候选试剂。候选试剂的实例包括但不限于核酸(例如DNA和RNA)、碳水化合物、脂质、蛋白质、多肽、肽、拟肽、小分子和其他药剂。可以使用本领域已知的组合文库方法中的多种方法中的任何一种来获得试剂，所述方法包括：生物文库；空间可寻址的平行固相或溶液相文库；需要反卷积的合成文库方法；“单珠单化合物”文库方法；和使用亲和色谱选择的合成文库方法。生物文库方法适用于肽文库，而其他四种方法适用于化合物的肽、非肽寡聚物或小分子文库(Lam,1997,Anticancer DrugDes.12:145；US 5,738,996和US 5,807,683)。基于本说明书的用于分子文库合成的合适方法的实例可以在本领域中找到，例如在：DeWitt等人,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6909；Erb等人,1994,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91:11422；Zuckermann等人,1994,J.Med.Chem.37:2678；Cho等人,1993,Science 261:1303；Carrell等人,1994,Angew.Chem.hit.Ed.Engl.33:2059；Carell等人,1994,Angew.Chem.Int.Ed.Engl.33:2061；和Gallop等人,1994,J.Med.Chem.37:1233.化合物的文库可以在溶液中(例如Houghten，1992，Bio/Techniques 13:412-421)或在珠(Lam，1991，Nature 354：82-84)、芯片(Fodor,1993,Nature 364:555-556)、细菌(US 5,223,409)、孢子(US 5,571,698、5,403,484和5,223,409)、质粒(Cull等人，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：1865-1869)或噬菌体(Scott和Smith，1990，Science 249:386-390；Devlin,1990,Science 249：404-406；Cwirla等人，1990，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:6378-6382和Felici,1991,J.Mol.Biol.222:301-310)上。
组蛋白脱乙酰酶
癌症、肿瘤、肿瘤相关病症和赘生性疾病状态是严重的和常常危及生命的病况。这些以迅速增殖细胞生长为特征的疾病和病症一直是致力于鉴定在其治疗中有效的治疗剂的研究工作的主题。这样的试剂延长患者的存活，抑制与赘生物有关的快速增殖细胞生长，或实现赘生物的消退。
HDAC是包括至少十八种酶的家族，分为三类(I类、II类和III类)。I类HDAC包括但不限于HADC 1、2、3和8。I类HDAC可在细胞核中发现，并被认为与转录控制阻遏物有关。II类HDAC包括但不限于HDACS 4、5、6、7和9，并且可在细胞质以及细胞核中发现。III类HDAC被认为是NAD依赖性蛋白，并且包括但不限于Sirtuin蛋白家族的成员。Sirtuin蛋白的非限制性实例包括SIRT1-7。如本文所用，术语“选择性HDAC”是指不与所有三种HDAC类别相互作用的HDAC抑制剂。
HDAC抑制剂
HDAC抑制剂是一类新兴的治疗剂，其通过染色质重塑和基因表达调节来促进血液和实体恶性肿瘤的分化和细胞凋亡。已鉴定出几种HDAC抑制剂，包括苯甲酰胺(例如恩替司他)、短链脂肪酸(例如苯基丁酸钠)；异羟肟酸(例如辛二酰苯胺异羟肟酸和曲古抑菌素A)；含有2-氨基-8-氧代-9、10-环氧-癸酰基部分的环状四肽(例如曲霉毒素A)和不含2-氨基-8-氧代-9、10-环氧-癸酰基部分的环状肽(例如，FK228)。恩替司他是一种苯甲酰胺HDAC抑制剂，正在多种类型的实体瘤和血液癌症中进行临床研究。恩替司他被迅速吸收并具有约100小时的半衰期，而且重要的是，在施用恩替司他后，组蛋白乙酰化的变化持续数周。
HDAC抑制剂可大致分为泛HDAC抑制剂和选择性HDAC抑制剂。尽管已知的HDAC抑制剂具有很大的结构多样性，但它们具有共同的特征：与酶活性位点相互作用的部分和位于通向活性位点的通道内的侧链。这可以从异羟肟酸酯如SAHA中看出，其中据信异羟肟酸酯基团与活性位点相互作用。在缩酚酸肽的情况下，据信二硫键的细胞内还原产生附着至4-碳烯基链的游离巯基(其与活性位点相互作用)。HDAC抑制剂之间的区别在于它们与HDAC通道边缘相互作用的方式，边缘位于通道中与活性部位相对的末端。正是这种HDAC抑制剂与通道边缘之间的相互作用被认为至少部分解释了泛HDAC抑制剂(例如SAHA)和选择性HDAC抑制剂(例如缩酚酸肽)之间在HDAC选择性方面观察到的一些差异。特别优选的HDAC抑制剂是恩替司他。恩替司他的化学名称为N-(2-氨基苯基)-4-[N-(吡啶-3-基)甲氧基羰基氨基-甲基]-苯甲酰胺，并且化学结构如下所示。一方面，本公开内容提供了包含抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂和HDAC抑制剂例如恩替司他的组合。
Figure BDA0002337235330000301
恩替司他的化学结构
制剂和治疗方法
本文公开的任何抗体(例如，抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体)可以用于本公开内容的方法、试剂盒、组合物或组合疗法。
在一些实施方案中，本公开内容的药物组合物包含抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂和药学上可接受的载体。
抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或CSF-1R活性的抑制剂适合作为与HDAC抑制剂的组合疗法的一部分进行施用。例如，抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂适合作为与一种或多种HDAC抑制剂(例如恩替司他)的组合疗法的一部分进行施用，适合一起、依次或交替施用。本公开内容还涉及包含治疗有效量的抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂与药学上可接受的载体的药物组合物以及包含治疗有效量的HDAC抑制剂和可药用载体的药物组合物的组合。
在一些实施方案中，将抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂和HDAC抑制剂(例如恩替司他)配制为单一治疗组合物，并且同时施用抗CSF-1R或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂和HDAC抑制剂(例如恩替司他)。
在一些实施方案中，抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂和HDAC抑制剂(例如恩替司他)彼此分开，例如，将各自配制为单独的治疗组合物，并且同时施用抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂和HDAC抑制剂(例如恩替司他)，或者在治疗方案的不同时间施用抗CSF-1R或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂和包含恩替司他的HDAC抑制剂。
例如，在施用HDAC抑制剂(例如恩替司他)之前或与之同时施用抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂，例如以治疗癌症。在另一个实例中，在施用HDAC抑制剂(例如恩替司他)之后施用抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂，例如以治疗癌症。备选地，以交替的方式施用抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂和HDAC抑制剂(例如恩替司他)。如本文所述，以单剂量或多剂量施用抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂和包含恩替司他的HDAC抑制剂。
在某些实施方案中，本文所述的组合用于在有此需要的受试者中治疗癌症或细胞增殖性病症。
如本文所用，“异常细胞生长”是指独立于正常调节机制(例如失去接触抑制)的细胞生长，包括正常细胞的异常生长和异常细胞的生长。
如本文所述，“赘生”是细胞的异常、不受调节和无组织的增殖，其与正常细胞的区别在于自主生长和体细胞突变。随着赘生细胞的生长和分裂，它们将其遗传突变和增殖特征传递给子代细胞。赘生物或肿瘤是赘生细胞的积聚。在一些实施方案中，肿瘤可以是良性的或恶性的。
如本文所用，“转移”是指经由淋巴管或血管的肿瘤细胞的传播。转移还指通过浆液腔或者蛛网膜下腔或其他间隙直接扩展而引起的肿瘤细胞迁移。通过转移过程，肿瘤细胞向机体其他部位的迁移在远离最初出现位点的区域建立赘生物。
如本文所讨论，“血管生成”在肿瘤形成和转移中是突出的。已经发现血管生成因子与几种实体瘤相关，例如横纹肌肉瘤、视网膜母细胞瘤、尤因肉瘤、神经母细胞瘤和骨肉瘤。没有供血以提供营养和清除细胞废物，肿瘤就无法扩展。其中血管生成很重要的肿瘤包括实体瘤，例如肾细胞癌、肝细胞癌，和良性肿瘤，例如听神经瘤和神经纤维瘤。血管生成与血源性肿瘤如白血病有关。据信，血管生成在引起白血病的骨髓异常中起作用。预防血管生成可阻止癌性肿瘤的生长以及由于肿瘤的存在而对受试者造成的损害。
如本文所用，术语“细胞增生性病症”是指其中细胞的失调或异常生长或两者均可导致不希望的病况或疾病(其可能是或可能不是癌性的)的发展的病况。示例性的细胞增殖性病症包括其中细胞分裂失调的多种病况。示例性的细胞增殖性病症包括但不限于赘生物、良性肿瘤、恶性肿瘤、癌前病况、原位肿瘤、包膜肿瘤、转移性肿瘤、液体肿瘤、实体瘤、免疫肿瘤、血液肿瘤、癌症(cancer)、癌(carcinomas)、白血病、淋巴瘤、肉瘤和快速分裂的细胞。如本文所用，术语“快速分裂的细胞”定义为以超过或大于相同组织内的相邻或并置的细胞中预期或观察到的速率分裂的任何细胞。
示例性癌症包括但不限于肾上腺皮质癌、AIDS相关癌症、AIDS相关淋巴瘤、肛门癌、肛肠癌、肛管的癌症、阑尾癌、儿童小脑星形细胞瘤、儿童脑星形细胞瘤、基底细胞癌、皮肤癌(非黑素瘤)、胆道癌、肝外胆管癌、肝内胆管癌、膀胱癌、尿道膀胱癌、骨和关节癌、骨肉瘤和恶性纤维组织细胞瘤、脑癌、脑瘤、脑干神经胶质瘤、小脑星形细胞瘤、脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤、视觉通路和下丘脑神经胶质瘤、乳腺癌、支气管腺瘤/类癌、类癌肿瘤、胃肠道、神经系统癌症、神经系统淋巴瘤、中枢神经系统癌症、中枢神经系统淋巴瘤、子宫颈癌、儿童期癌症、慢性淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、慢性骨髓增生性病症、结肠癌、结肠直肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、淋巴样赘生物、蕈样真菌病、Sezary综合征、子宫内膜癌、食道癌、颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、肝外胆管癌、眼睛癌症、眼内黑色素瘤、视网膜母细胞瘤、胆囊癌、胃(腹部)癌、胃肠道类癌肿瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、生殖细胞肿瘤、卵巢生殖细胞肿瘤、妊娠滋养细胞肿瘤神经胶质瘤、头颈癌、肝细胞(肝)癌、霍奇金淋巴瘤、下咽癌、眼内黑色素瘤、眼癌、胰岛细胞肿瘤(内分泌胰腺)、卡波济肉瘤、肾脏癌症、肾癌、肾脏癌症、喉癌、急性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、毛细胞白血病、嘴唇和口腔癌症、肝癌、肺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、AIDS相关淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、Waldenstram巨球蛋白血症、髓母细胞瘤、黑色素瘤、眼内(眼睛)黑色素瘤、默克尔细胞癌、间皮瘤恶性、间皮瘤、转移性鳞状颈癌、嘴癌、舌头的癌症、多发性内分泌赘生物综合征、蕈样真菌病、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常/骨髓增生性疾病、慢性骨髓性白血病、急性髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤、慢性骨髓增生性病症、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口癌、口腔癌、口咽癌、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢低恶性潜在肿瘤、胰腺癌、胰岛细胞胰腺癌、鼻旁窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽喉癌、嗜铬细胞瘤、胚母细胞瘤和幕上原始神经外胚层肿瘤、垂体肿瘤、浆细胞赘生物/多发性骨髓瘤、胸膜肺母细胞瘤、前列腺癌、直肠癌、肾盂和输尿管、移行细胞癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、尤文氏肉瘤肿瘤家族、卡波济肉瘤、软组织肉瘤、子宫癌、子宫肉瘤、皮肤癌(非黑素瘤)、皮肤癌(黑素瘤)、默克尔细胞皮肤癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、腹(胃)癌、幕上原始神经外胚层肿瘤、睾丸癌、喉癌、胸腺瘤、胸腺瘤和胸腺癌、甲状腺癌、肾盂和输尿管及其他泌尿器官的移行细胞癌、妊娠滋养细胞肿瘤、尿道癌、子宫内膜子宫癌、子宫肉瘤、子宫体癌、阴道癌、外阴癌和肾母细胞瘤。
在一些实施方案中，癌症是急性髓细胞性白血病(AML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CALL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、多发性骨髓瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、弥漫性大b细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔b细胞淋巴瘤(PFBC)或转化滤泡性淋巴瘤(TFF)。在一些实施方案中、癌症是间皮瘤、胰腺癌、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、卵巢癌、成胶质细胞瘤、骨髓增生异常综合征(MDS)、乳腺癌、前列腺癌、结肠直肠癌、皮肤癌、食道癌、食道癌、胃癌、星形细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、肾癌、肺癌、肝癌、甲状腺癌或头颈癌。
术语“治疗”(treat,treating,treatment)旨在包括缓解或取消病症、疾病或病况；或者与病症、疾病或病况相关的一种或多种症状；或者缓解或取消疾病、疾病或病况本身的原因。如本文所用，“预防”或“防止”描述了减轻或消除疾病、病况或病症的症状或并发症的发作。
如本文所用，术语“缓解”旨在描述降低病症的征兆或症状的严重性的过程。重要的是，可以缓解而不消除征兆或症状。在优选的实施方案中，本文公开的药物组合物的施用导致征兆或症状的消除，但是，不需要消除。预期有效剂量可降低征兆或症状的严重程度。例如，如果癌症的严重性在多个位置中的至少一个内降低，则可以减轻在多个位置可能发生的诸如癌症的病症的征兆或症状。
治疗癌症可导致肿瘤尺寸的减小。肿瘤尺寸的减小也可以称为“肿瘤消退”。优选地，在治疗之后，相对于治疗之前的肿瘤尺寸，肿瘤尺寸减小了5％或更多；更优选地，肿瘤尺寸减小了10％或更多；更优选地，减少了20％或更多；更优选地，减少了30％或更多；更优选地，减少了40％或更多；甚至更优选地，减少了50％或更多；并且最优选地，减少了大于75％或更多。肿瘤的尺寸可以通过任何可重复的测量手段来测量。肿瘤的尺寸可以测量为肿瘤的直径。
与未治疗的受试者群体相比，治疗癌症可以导致治疗的受试者群体的平均存活时间增加。优选地，平均存活时间增加超过30天；更优选地，超过60天；更优选地，超过90天；并且最优选地，超过120天。群体的平均存活时间的增加可以通过任何可重复的手段来测量。群体的平均存活时间的增加可以例如通过为群体计算在开始用活性化合物治疗之后的平均存活长度来测量。还可通过例如为群体计算在用包含抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂和HDAC抑制剂(例如恩替司他)的本公开内容的组合的第一轮治疗完成后的平均存活长度来测量群体的平均存活时间的增加。
“药物组合物”或“治疗组合物”是含有活性成分的制剂，所述活性成分例如本文公开的抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂或HDAC抑制剂，以适合于施用给受试者的形式。在一些实施方案中，药物组合物为散装或单位剂型。单位剂型是以下多种形式中的任一种，包括例如胶囊、IV袋、片剂、气雾吸入器上的单个泵或小瓶。单位剂量组合物中的活性成分(例如，所公开的化合物或其盐、水合物、溶剂化物或异构体的制剂)的量是有效量，并根据所涉及的特定治疗而变化。本领域的技术人员将理解，有时需要根据患者的年龄和状况对剂量进行常规改变。剂量也将取决于施用途径。考虑了多种途径，包括口服、肺、直肠、肠胃外、透皮、皮下、静脉内、肌内、腹膜内、吸入、颊、舌下、胸膜内、鞘内、鼻内等。用于本公开的化合物的局部或透皮施用的剂型包括粉末、喷雾剂、软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、溶液、贴剂和吸入剂。在一个实施方案中，将活性化合物在无菌条件下与药学上可接受的载体并且与所需的任何防腐剂、缓冲液或推进剂混合。
如本文所用，“活性成分”是指在相关剂量下具有药理作用，例如治疗作用的成分。
“药学上可接受的载体”是指可用于制备通常是安全、无毒且无生物学上或其他不期望的方面的药物组合物的载体，并且包括对于兽医使用以及人类药学使用可接受的赋形剂。例如，药学上可接受的载体本身不应该诱导产生对接收该组合物的个体有害的抗体并且应该是无毒的。合适的载体可以是大的，缓慢代谢的大分子，例如蛋白质、多肽、脂质体、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚氨基酸、氨基酸共聚物和无活性的病毒颗粒。
可以使用药学上可接受的盐，例如矿物酸盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐和硫酸盐、或有机酸的盐，例如乙酸盐、丙酸盐、丙二酸盐和苯甲酸盐。
治疗性组合物中的药学上可接受的载体可以另外地包含液体，例如水、盐水、甘油和乙醇。另外，这样的组合物中可以存在辅助物质，例如湿润剂或乳化剂或pH缓冲物质。这样的载体使药物组合物能够被配制成片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液和悬浮液，以供患者摄取。
用于施用的合适形式包括适于肠胃外施用的形式，例如通过注射或输注，例如通过推注或连续输注。当产品用于注射或输注时，它可以采取在油性或水性介质中的悬浮液、溶液或乳液形式，并且可以包含配制剂，例如助悬剂、防腐剂、稳定剂和/或分散剂。备选地，抗体分子可以是干燥形式，以便在与适当的无菌液体一起使用之前进行重构。
一旦配制，可以将本公开内容的组合物直接施用给受试者。
在某些实施方案中，最终制剂的pH与抗体或片段的等电点(pI)的值不相似，例如，如果制剂的pH为7，则pI为8-9或以上可以是合适的。尽管不希望受到理论的束缚，但是认为这可以最终提供具有改善的稳定性的最终制剂，例如抗体或片段保留在溶液中。
在一个实例中，在4.0至7.0范围内的pH的药物制剂包含：1至200mg/mL的根据本公开内容的抗体，1至100mM的缓冲液，0.001至1％的表面活性剂，a)10至500mM的稳定剂，b)10至500mM的稳定剂和5至500mM的张度剂，或c)5至500mM的张度剂。
本公开内容的药物组合物可以通过许多途径施用，包括但不限于口服、静脉内、肌内、动脉内、髓内、鞘内、心室内、透皮、经皮(例如，参见WO98/20734)、皮下、腹膜内、鼻内、肠内、局部、舌下、阴道内或直肠途径。皮下注射器也可用于施用本公开内容的药物组合物。通常，治疗组合物可以制备成注射剂，作为液体溶液或悬浮液。也可以制备适于在注射之前溶解或悬浮在液体媒介物中的固体形式。
组合物的直接递送通常将通过注射、皮下、腹膜内、静脉内或肌内，或者递送至组织的间隙来实现。组合物也可以施用到病灶中。剂量治疗可以是单剂量方案或多剂量方案。
应当理解，组合物中的活性成分将是抗体分子。这样，它将易于在胃肠道中降解。因此，如果组合物要通过使用胃肠道的途径施用，则组合物将需要包含保护抗体免于降解，但一旦其已从胃肠道吸收后就释放抗体的试剂。
Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company,N.J.1991)中提供了药学上可接受的载体的详尽讨论。
在一个实施方案中，提供制剂作为用于局部施用包括吸入的制剂。
合适的可吸入制备物包括可吸入粉末，含推进剂气体的计量气雾剂或不含推进剂气体的可吸入溶液。包含活性物质的根据本公开内容的可吸入粉末可以仅由上述活性物质组成或由上述活性物质与生理学上可接受的赋形剂的混合物组成。
这些可吸入粉末可以包括单糖(例如葡萄糖或阿拉伯糖)、二糖(例如乳糖、蔗糖和麦芽糖)、寡糖和多糖(例如右旋糖酐)、多元醇(例如山梨糖醇、甘露糖醇和木糖醇)、盐(例如氯化钠、碳酸钙)或这些与另外一种的混合物。适合地使用单糖或二糖，使用乳糖或葡萄糖，特别是但不限于以其水合物形式。
用于沉积在肺中的颗粒需要小于10微米的颗粒尺寸，例如1-9微米，例如0.1至5μm，特别是1至5μm。活性成分(例如抗体或片段)的颗粒尺寸至关重要。
可用于制备可吸入气雾剂的推进剂气体是本领域已知的。合适的推进剂气体选自碳氢化合物，例如正丙烷、正丁烷或异丁烷，以及卤代烃，例如甲烷、乙烷、丙烷、丁烷、环丙烷或环丁烷的氯化和/或氟化衍生物。上述推进剂气体可以单独使用或以其混合物使用。
特别合适的推进剂气体是选自TG 11、TG 12、TG 134a和TG227的卤代烷烃衍生物。在上述卤代烷烃中，TG134a(1,1,1,2-四氟乙烷)和TG227(1,1,1,2,3,3,3,3-七氟丙烷)及其混合物是特别合适的。
含推进剂气体的可吸入气雾剂还可以含有其他成分，例如助溶剂、稳定剂、表面活性试剂(表面活性剂)、抗氧化剂、润滑剂和调节pH的手段。所有这些成分是本领域已知的。
根据本公开内容的含推进剂气体的可吸入气雾剂可以含有高至5％重量的活性物质。根据本发明的气雾剂含有例如0.002至5％重量，0.01至3％重量，0.015至2％重量，0.1至2％重量，0.5至2％重量或0.5至1％重量的活性成分。
备选地，向肺部的局部施用也可以通过施用液体溶液或悬浮液制剂，例如采用诸如喷雾器之类的装置，例如连接至压缩机的喷雾器(例如，连接到
Figure BDA0002337235330000371
压缩机上的Pari LC-Jet Plus(R)喷雾器,由Pari Respiratory Equipment，Inc.,Richmond,Va制造)。
本发明的抗体可以分散在溶剂中进行递送，例如以溶液或悬浮液的形式。可以将其悬浮在适当的生理溶液中，例如盐水或其他药学上可接受的溶剂或缓冲溶液。本领域已知的缓冲溶液可以含有0.05mg至0.15mg乙二胺四乙酸二钠，8.0mg至9.0mg NaCl，0.15mg至0.25mg聚山梨酸酯，0.25mg至0.30mg无水柠檬酸和0.45mg至0.55mg柠檬酸钠每1ml的水，以达到约4.0至5.0的pH值。悬浮液可以使用例如冻干的抗体。
治疗性悬浮液或溶液制剂也可以含有一种或多种赋形剂。赋形剂是本领域众所周知的并且包括缓冲液(例如柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液和碳酸氢盐缓冲液)，氨基酸、尿素、醇、抗坏血酸、磷脂、蛋白质(例如血清白蛋白)、EDTA、氯化钠、脂质体、甘露醇、山梨糖醇和甘油。溶液或悬浮液可以封装在脂质体或生物可降解的微球中。通常将采用无菌制造方法以基本上无菌的形式提供制剂。
这可以包括通过过滤用于制剂的缓冲的溶剂/溶液来生产和灭菌，将抗体在无菌的缓冲的溶剂溶液中无菌悬浮，以及通过本领域技术人员熟悉的方法将制剂分配到无菌的容器中。
可以例如以包装在箔袋中的单剂量单位(例如，密封的塑料容器或小瓶)的形式提供根据本公开内容的可雾化制剂。每个小瓶含有在例如2mL的体积的溶剂/溶液缓冲液中的单位剂量。
本文公开的抗体可以适于通过雾化的递送。
还设想可以通过使用基因疗法来施用本公开内容的抗体。为了实现这一点，将编码抗体分子的重链和轻链的DNA序列在适当的DNA组分的控制下引入患者，使得抗体链从DNA序列中表达并原位组装。
药物组合物适当地包含治疗有效量的抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂和HDAC抑制剂(例如恩替司他)。如本文所用，术语“治疗有效量”是指治疗、缓解或预防靶向疾病或病况，或者表现出可检测的治疗、药理学或预防作用所需的治疗剂的量。例如，对于本文公开的任何抗体或HDAC抑制剂(例如恩替司他)，治疗有效量可以最初在细胞培养测定法(例如肿瘤细胞)中或动物模型(通常是大鼠、小鼠、兔、狗、猪或灵长类动物)中进行评估。动物模型还可用于确定合适的浓度范围和施用的途径。然后可以将此类信息用于确定在人中施用的有用剂量和途径。
治疗/预防功效和毒性可以通过在细胞培养物或实验动物中的标准药学方法来确定，例如ED50(在50％的群体中治疗有效的剂量)和LD50(对50％的群体致死的剂量)。毒性和治疗作用之间的剂量比是治疗指数，并且可以表示为比率LD50/ED50。显示大治疗指数的药物组合物是优选的。剂量可以在此范围内变化，这取决于所采用的剂型、患者的敏感性和施用的途径。
调整剂量和施用以提供足够水平的活性剂或保持所需的效果。可考虑的因素包括疾病状态的严重性，受试者的总体健康状况，受试者的年龄、体重和性别，饮食，施用的时间和频率，药物相互作用，反应敏感性和对治疗的耐受性/应答。通常，剂量应足以导致减缓并且优选地使肿瘤的生长消退并且优选地导致癌症的完全消退。剂量可以在每天约0.01mg/kg每天至约10mg/kg每天的范围内。在一些实施方案中，剂量可以是约0.1mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、1.5mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7.5mg/kg或约10mg/kg。在一些实施方案中，剂量将在约0.1mg/天至约5mg/kg；约0.1mg/天至约10mg/kg；约0.1mg/天至约20mg/kg；约0.1mg至约30mg/kg；或约0.1mg至约40mg/kg或约0.1mg至约50mg/kg的范围内或者单次、分次或连续剂量(可根据患者的体重(kg)，体表面积(m2)和年龄来调整剂量)。如临床医师或其他合格的观察者所指出的，有效量的药学试剂是提供客观可识别的改善的试剂。例如，可以参考肿瘤的直径来测量患者的肿瘤消退。肿瘤直径的减小表明消退。停止治疗后肿瘤再发失败也表明消退。如本文所用，术语“剂量有效方式”是指在受试者或细胞中产生所需生物学效应的活性化合物的量。
对人类受试者的确切治疗有效量将取决于疾病状态的严重性，受试者的总体健康状况，受试者的年龄、体重和性别，饮食，施用的时间和频率，药剂组合，反应敏感性和对疗法的耐受性/应答。该量可以通过常规实验确定，并且在临床医师的判断之内。通常，本公开内容的抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂的治疗有效量将是约0.01mg/kg至约500mg/kg，例如，约0.1mg/kg至约200mg/kg(例如约100mg/kg)，或约0.1mg/kg至约10mg/kg(例如约0.1mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、1.5mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7.5mg/kg或约10mg/kg)。在某些实施方案中，抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂的有效量是约3mg/kg或约6mg/kg。
在一些实施方案中，恩替司他在治疗周期中定期施用。在一些实施方案中，恩替司他在治疗周期的第1天施用。在一些实施方案中，恩替司他口服施用。在一些实施方案中，恩替司他每周施用。在一些实施方案中，恩替司他每两周施用。在一些实施方案中，恩替司他以3mg的剂量施用。在一些实施方案中，恩替司他以5mg的剂量施用。在一些实施方案中，恩替司他以10mg的剂量施用。在一些实施方案中，恩替司他以3mg的剂量在治疗周期期间每周一次口服施用。在一些实施方案中，恩替司他以5mg的剂量在治疗周期期间每周一次口服施用。在一些实施方案中，恩替司他以10mg的剂量在治疗周期期间每两周一次口服施用。在一些实施方案中，在施用抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂之前施用恩替司他。在一些实施方案中，在施用抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段之后施用恩替司他。在一些实施方案中，与施用抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂同时施用恩替司他。
药物组合物可以方便地以单位剂量形式存在，每剂量包含预定量的本公开内容的活性剂。
根据本公开内容的抗体(例如，抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体)的治疗剂量在体内没有显示出明显的或显示出有限的毒理学作用。
长效药物组合物可以每3至4天、每周或每两周一次施用，取决于特定制剂的半衰期和清除率。在一些实施方案中，至少每隔一天、每周、每2周或每月施用抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂。在某些实施方案中，每周或每2周施用脉冲剂量(例如抗CSF-1R抗体)。在某些实施方案中，以相同的频率，同时或依次施用抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂和HDAC抑制剂(例如恩替司他)，例如，每1或2周一次但是每种疗法的施用间隔至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、8小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天或至少7天。
在某些实施方案中，抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂和HDAC抑制剂(例如恩替司他)以不同的频率施用并且各自独立地每天、每隔一天、每周、每2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周或每20周或每月进行施用。
剂量的频率将取决于抗体分子的半衰期及其作用的持续时间。如果抗体分子具有短的半衰期(例如2至10小时)，则可能需要每天给予一个或多个剂量。备选地，如果抗体分子具有长的半衰期(例如2至15天)和/或长的持久药效学(PD)特性，则可能仅需要每天一次、每周一次或者甚至每1或2个月一次给予剂量。本文所用的半衰期旨在是指分子在循环中，例如在血清/血浆中的持续时间。
本文公开的组合物或疗法可单独地施用给患者或可以组合施用(例如，同时、顺序或分开)。
在一些实施方案中，HDAC抑制剂(例如恩替司他)和第二试剂(例如抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段，或者CSF-1R活性的抑制剂)在时间上邻近进行施用(例如，可以同时使用HDAC抑制剂(例如，恩替司他)和第二试剂(例如，抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段，或者CSF-1R活性抑制剂)。因此，本公开内容提供了治疗或预防癌症的方法，包括在时间上邻近施用HDAC抑制剂(例如恩替司他)和第二试剂(例如抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段、抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂)。
在一些实施方案中，“时间上邻近”是指一种治疗剂的施用在另一种治疗剂的施用之前或之后的一段时间内发生，使得一种治疗剂的治疗作用与所述另一种治疗剂的治疗作用重叠。在一些实施方案中，一种治疗剂的治疗作用与另一种治疗剂的治疗作用完全重叠。在一些实施方案中，“时间上邻近”是指一种治疗剂的施用在另一种治疗剂的施用之前或之后的一段时间内发生，使得一种治疗剂与另一种治疗剂之间具有协同作用。“时间上邻近”可以根据多种因素而变化，包括但不限于待施用治疗剂的受试者的年龄、性别、体重、遗传背景、医学状况、疾病史和治疗史；待治疗或缓解的疾病或病况；要达到的治疗结果；治疗剂的剂量、给药频率和给药持续时间；治疗剂的药代动力学和药效学；以及施用治疗剂的途径。在一些实施方案中，“时间上邻近”是指在15分钟内、30分钟内、1小时内、2小时内、4小时内、6小时内、8小时内、12小时内、18小时内、24小时内、36小时内、2天内、3天内、4天内、5天内、6天内、1周内、2周内、3周内、4周内、6周内或8周内。在一些实施方案中，一种治疗剂的多次施用可以在时间上邻近于另一种治疗剂的单次施用发生。在一些实施方案中，时间上邻近可以在治疗周期内或在给药方案内改变。
“组合疗法”旨在包括以顺序或同时方式施用本文公开的治疗剂，其中每种治疗剂在不同时间施用，以及这些治疗剂或至少两种治疗剂的施用同时或以基本上同时的方式进行。同时施用可以例如通过向受试者施用具有固定比例的每种治疗剂的单一胶囊或以用于每种治疗剂的多个单一胶囊来实现。每种治疗剂的顺序或基本同时施用可以通过任何合适的途径进行，包括但不限于口服途径、静脉内途径、肌内途径以及通过粘膜组织的直接吸收。可以通过相同途径或不同途径来施用治疗剂。例如，所选择的组合的第一治疗剂可以通过静脉内注射进行施用，而组合的其他治疗剂可以口服施用。备选地，例如，所有治疗剂可以口服施用或所有治疗剂可以通过静脉内注射施用。施用治疗剂的顺序不是很严格的。治疗剂也可以交替施用。
本文公开的组合和方法(例如，包含抗CSF-1R或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂和HDAC抑制剂的组合和方法)可进一步包括治疗，其中它们补充有一种或多种治疗剂或疗法，例如放射疗法、手术或抗癌剂或化学疗法。可用于补充本文公开的组合和方法的治疗包括但不限于烷基化/DNA损伤剂(例如卡铂、顺铂)，抗代谢物(例如卡培他滨、吉西他滨、5-氟尿嘧啶)，有丝分裂抑制剂(例如紫杉醇、长春新碱)，IL-2、sipuleucel-T、talimogene laherparepvec、peginterferon alfa-2a以及抗体成分(例如表皮生长因子受体家族(EGFR，HER-2)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)抗体、例如纳武单抗(nivolumab)、伊匹单抗(Ipilimumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、埃罗单抗(elotuzumab)、达雷木单抗(daratumumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、雷莫芦单抗(ramucirumab)、本妥昔单抗(brentuximab)、本妥昔单抗(brentuximab vedotin)、奥法木单抗(ofatumumab)、地诺单抗(denosumab)及其组合)，或非抗体成分，例如伊马替尼(imatinib)、达沙替尼(dasatinib)、尼洛替尼(nilotinib)、博舒替尼(bosutinib)、吉非替尼(gefitinib)、厄洛替尼(erlotinib)、替西罗莫司(temsirolimus)、凡德他尼(vandetanib)、维罗非尼(vemurafenib)、克唑替尼(crizotinib)、伏立诺他(vorinostat)、罗米地平(romidepsin)、硼替佐米(bortezomib)、索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、雷戈拉非尼(regorafenib)、卡博替尼(cabozantinib)、吡非尼酮(pirfenidone)、类固醇或其他药物分子，特别是半衰期与CSF-1R结合无关的药剂分子。
如本文所用，“有此需要的受试者”是相对于整个群体患有细胞增殖性病症或具有增加的发展这种病症的风险的受试者。有此需要的受试者可以患有癌前病况。“受试者”包括哺乳动物。哺乳动物可以是例如任何哺乳动物，例如人、灵长类动物、鸟、小鼠、大鼠、家禽、狗、猫、牛、马、山羊、骆驼、绵羊或猪。优选地，哺乳动物是人。
术语“抗体”根据其在本领域中通常已知的含义使用。本公开内容的抗体分子可以包含具有全长重链和轻链的完整抗体分子或其结合片段，并且可以是但不限于Fab，修饰的Fab、Fab’、修饰的Fab’、F(ab’)2、Fv、单域抗体(例如VH或VL或VHH)、scFv、双价抗体、三价抗体或四价抗体、Bis-scFv、双抗体、三抗体、四抗体和以上任何的表位结合片段(参见例如Holliger和Hudson,2005,Nature Biotech.23(9):1126-1136；Adair和Lawson,2005,DrugDesign Reviews-Online 2(3),209-217)。用于产生和制造这些抗体片段的方法是本领域众所周知的(参见例如Verma等人,1998,Journal of Immunological Methods,216:165-181)。用于本公开内容的其他抗体片段包括在国际专利申请WO05/003169、WO05/003170和WO05/003171中描述的Fab和Fab’片段。多价抗体可以包含多种特异性，例如双特异性，或者可以是单特异性的(例如参见WO92/22853、WO05/113605、WO2009/040562和WO2010/035012)。
如本文所用，抗体的结合片段是指能够以将片段表征为对抗原具有特异性的亲和力结合抗原的片段。
在一个实施方案中，以CSF-1R结合抗体融合蛋白提供根据本公开内容的抗体，其包含免疫球蛋白部分，例如Fab或Fab’片段，以及与其直接或间接地连接的一个或两个单结构域抗体(dAb)，例如在WO2009/040562、WO2010/035012、WO2011/030107、WO2011/061492和WO2011/086091中所述，全部通过引用并入本文。
在一些实施方案中，融合蛋白包含两个结构域抗体，例如可变重链(VH)和可变轻链(VL)配对，任选地通过二硫键连接。在一些实施方案中，融合蛋白的Fab或Fab’元件与一个或多个单结构域抗体具有相同或相似的特异性。在一个实施方案中，Fab或Fab’对一个或多个单结构域抗体具有不同的特异性，也就是说，融合蛋白是多价的。在一个实施方案中，根据本发明的多价融合蛋白具有白蛋白结合位点，例如其中的VH/VL对提供白蛋白结合位点。
本公开内容的抗体分子的恒定区结构域，如果存在的话，可以考虑抗体分子的建议功能并且特别是可能需要的效应子功能来选择。例如，恒定区结构域可以是人IgA、IgD、IgE、IgG或IgM结构域。特别地，当抗体分子旨在用于治疗用途并且需要抗体效应子功能时，可以使用人IgG恒定区结构域，特别是IgG1和IgG3同种型的恒定区结构域。备选地，当抗体分子旨在用于治疗目的并且不需要抗体效应子功能时，可以使用IgG2和IgG4同种型。
本领域技术人员还将理解，抗体可以经历多种翻译后修饰。这些修饰的类型和程度通常取决于用于表达抗体的宿主细胞系以及培养条件。这样的修饰可以包括糖基化、甲硫氨酸氧化、二酮哌嗪形成、天冬氨酸异构化和天冬酰胺脱酰胺中的变化。频繁的修饰是由于羧肽酶的作用而使羧基末端碱性残基(例如赖氨酸或精氨酸)缺失(如Harris，RJ.Journal of Chromatography 705：129-134,1995中所述)。因此，抗体重链的C末端赖氨酸可以不存在。
如本文所用，术语“人源化的抗体”是指抗体或抗体分子，其中重链和/或轻链含有来自供体抗体(例如，小鼠单克隆抗体)的一个或多个CDR(如果需要，包括一个或多个修饰的CDR)移植到受体抗体(例如人抗体)的重链和/或轻链可变区框架中(参见，例如，US 5,585,089；WO91/09967)。作为综述，参见Vaughan等人,Nature Biotechnology,16,535-539,1998。在一个实施方案中，不是转移整个CDR，而是仅将来自上述任何一个CDR的一个或多个特异性决定残基转移至人抗体框架(参见，例如，Kashmiri等人,2005,Methods,36:25-34)。在一实施方案中，仅将来自本文上述一个或多个CDR的特异性确定残基被转移至人抗体框架。在另一个实施方案中，仅将来自本文上述每个CDR的特异性确定残基转移至人抗体框架。当移植CDR或特异性决定残基时，考虑到CDR来源的供体抗体的种类/类型，可以使用任何合适的受体可变区框架序列，包括小鼠、灵长类和人框架区。
如本文使用的，应用于一个或多个目的值的术语“大约”和“约”是指类似于所述参考值的值。在某些实施例中，术语“大约”或“约”是指落入所述参考值的任一方向(大于或小于)的25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更少内的值的范围，除非另有说明或从上下文中可以明显看出(除非该数字超过可能值的100％)。例如，当在纳米颗粒组合物的脂质组分中一定量的给定化合物的上下文中使用时，“约”可以表示所述值的+/-10％。
在权利要求和说明书中使用的冠词，例如“一个”、“一种”和“该”可以表示一个或多个，除非相反地指出或从上下文中可以明显看出。如果组成员的一个、多于一个或所有在给定的产品或过程中存在、使用或与之相关，则在组的一个或多个成员之间包括“或”的权利要求或描述将被认为是满足要求的，除非相反地指出或从上下文中可以明显看出。本公开内容包括其中恰好组的一个成员在给定的产品或过程中存在、使用或与之相关的实施方案。本公开内容包括其中组成员的一个、多于一个或所有在给定的产品或过程中存在、使用或与之相关的实施方案。
还应注意，术语“包括”旨在是开放的并且允许但不要求包括另外的元件或步骤。当在本文中使用术语“包括”时，因此也涵盖和公开了术语“基本上由...组成”和“由...组成”。在整个说明书中，当组合物或组合被描述为具有、包括或包含特定的组分或步骤时，可以预期组合物或组合也基本上由所列举的组分组成或由所列举的组分组成。类似地，在将方法或过程描述为具有、包括或包含特定过程步骤的情况下，过程也基本上由所列举的处理步骤组成或由其组成。此外，应当理解，只要本发明保持可操作，步骤的顺序或执行某些动作的顺序就无关紧要。而且，可以同时进行两个或更多个步骤或动作。
在给出范围的地方，包括端点。此外，应当理解，除非另有说明或从上下文和本领域普通技术人员的理解中可以明显看出，否则在本公开内容的不同的实施方案中，表示为范围的值可以假定为所述范围内的任何特定值或子范围，至范围的下限的十分之一单位，除非上下文另有明确规定。
当技术上适当的时候，可以组合本发明的实施方案。本文中具体和明确叙述的任何实施方案可以单独或者与一个或多个其他实施方案组合以形成权利声明的基础。
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实施例
实施例1
在CT26结肠癌模型中评估恩替司他与抗CSF-1R(Ab535)组合的首次分析，并评估肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的免疫细胞谱。在临床前模型中已显示恩替司他减少宿主免疫抑制细胞的数量并抑制其功能，以增强免疫检查点阻断(immune checkpoint blockade)的抗肿瘤活性。进行这项研究是为了测试恩替司他与鼠抗CSF-1R(Ab535)组合是否使得组合比单独使用任何一种试剂都导致提高的总应答率。
实验设计与结果
为了评估抗肿瘤功效，在CT26结肠癌模型(n＝9)中进行每两周肿瘤体积测量。如图1中的Kaplan-Meir存活曲线所示，与1)PBS对照、2)同种型+媒介物对照、3)恩替司他(5mg/kg，po，每天)、4)Ab535(30mg/kg，ip，每周3次)和5)Ab535(20mg/kg，ip，每周2次)相比，恩替司他(5mg/kg)+Ab535(30mg/kg，每周3次)的组合疗法改善动物存活率。结果代表6个独立实验。与图2类似，与测试的所有其他实验条件相比，恩替司他(5mg/kg)+Ab535(30mg/kg，每周3次)的组合在第15天显著降低了生长。
为了评价CT26结肠癌模型(n＝4)中的肿瘤免疫谱，在用1)PBS对照、2)同种型+媒介物对照、3)恩替司他(5mg/kg，po，每天)、4)Ab535(30mg/kg，ip，每周3次)、5)Ab535(20mg/kg，ip，每周2次)和6)恩替司他(5mg/kg)+Ab535(30mg/kg，每周3次)治疗后第8天收集肿瘤。与所有其他实验条件相比，恩替司他(5mg/kg)+Ab535(30mg/kg，每周3次)的组合显著增加肿瘤中CD8/Treg表达的比率(图3)。在图4中，结果表明与图5中测试的所有其他实验条件相比，恩替司他(5mg/kg)+Ab535(30mg/kg，每周3次)的组合显著降低肿瘤内Treg，并且恩替司他(5mg/kg)+Ab535(30mg/kg，每周3次)显著消耗肿瘤相关的巨噬细胞。
等价物
在以上所附的描述中阐述了本发明的一个或多个实施方案的细节。尽管与本文描述的那些方法或材料相似或等同的任何方法和材料都可以用于本发明的实践或测试中，但是现在描述优选的方法和材料。通过说明书和权利要求书，本发明的其他特征、目的和优点将变得显而易见。在说明书和所附权利要求书中，单数形式包括复数对象，除非上下文另外明确指出。除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。
在不脱离本发明的精神或基本特征的情况下，本发明可以以其他特定形式来实施。仅出于示例说明的目的给出了前面的描述，并且不旨在将本发明限制为所公开的精确形式，而是由所附的权利要求书来限定。
序列表
<110> SYNDAX PHARMACEUTICALS, INC.
<120> 组合治疗
<130> SYND-039/001WO 327830-2173
<140>
<141>
<150> 62/508,842
<151> 2017-05-19
<160> 38
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的肽”
<400> 1
Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asp Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的肽”
<400> 2
Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Asp
1 5
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的肽”
<400> 3
Leu Gln Asp Ser Glu Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 4
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的肽”
<400> 4
Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr Gly Met Gly Val Gly
1 5 10
<210> 5
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的肽”
<400> 5
Asn Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn
1 5 10 15
<210> 6
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的肽”
<400> 6
Ile Gly Pro Ile Lys Tyr Pro Thr Ala Pro Tyr Arg Tyr Phe Asp Phe
1 5 10 15
<210> 7
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多肽”
<400> 7
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Ser Ile Glu Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asp Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Lys Ser Pro His Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gln Asp Ser Glu Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 8
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多核苷酸”
<400> 8
gacatccaga tgacacagtc tccagcttcc ctgtctgcat ctctgggaga aactgtctcc 60
atcgaatgtc tagcaagtga ggacatttac gataatttag cgtggtacca gaagaagcca 120
ggaaaatctc ctcacctcct catctattat gcaagtagct tgcaagatgg ggtcccatca 180
cggttcagtg gcagtggatc tggcacacag tattctctca aaatcaacag cctggaatct 240
gaagatgctg cgacttattt ctgtctacag gattctgagt atccgtggac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaattgaa a 321
<210> 9
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多肽”
<400> 9
Met Gly Val Pro Thr Gln Leu Leu Val Leu Leu Leu Leu Trp Ile Thr
1 5 10 15
Asp Ala Ile Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Leu Gly Glu Thr Val Ser Ile Glu Cys Leu Ala Ser Glu Asp
35 40 45
Ile Tyr Asp Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Lys Ser Pro
50 55 60
His Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn
85 90 95
Ser Leu Glu Ser Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gln Asp Ser
100 105 110
Glu Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
115 120 125
<210> 10
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多核苷酸”
<400> 10
atgggtgtcc ccactcagct cttggtgttg ttgctgctgt ggattacaga tgccatatgt 60
gacatccaga tgacacagtc tccagcttcc ctgtctgcat ctctgggaga aactgtctcc 120
atcgaatgtc tagcaagtga ggacatttac gataatttag cgtggtacca gaagaagcca 180
ggaaaatctc ctcacctcct catctattat gcaagtagct tgcaagatgg ggtcccatca 240
cggttcagtg gcagtggatc tggcacacag tattctctca aaatcaacag cctggaatct 300
gaagatgctg cgacttattt ctgtctacag gattctgagt atccgtggac gttcggtgga 360
ggcaccaagc tggaattgaa a 381
<210> 11
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多肽”
<400> 11
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Asn Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Asn Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Asn Asn Gln Ala
65 70 75 80
Phe Leu Lys Leu Thr Asn Val His Thr Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Ile Gly Pro Ile Lys Tyr Pro Thr Ala Pro Tyr Arg Tyr
100 105 110
Phe Asp Phe Trp Gly Pro Gly Thr Met Val Thr Val Ser
115 120 125
<210> 12
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多核苷酸”
<400> 12
caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 60
acttgcactt tctctgggtt ttcactgacc acttatggta tgggtgtggg ctggattcgt 120
cagccttcag ggaagggtct ggagtggctg gcaaacattt ggtgggatga tgataagtat 180
tacaatccat ctctgaaaaa ccggctcaca atctccaagg acacctccaa caaccaagca 240
ttcctcaagc tcaccaatgt acacacttca gattctgcca catactactg tgctcggata 300
gggccgatta aatacccgac ggccccctac cggtactttg acttctgggg cccaggaacc 360
atggtcaccg tctcg 375
<210> 13
<211> 144
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多肽”
<400> 13
Met Asp Arg Leu Thr Ser Ser Phe Leu Leu Leu Ile Val Pro Ala Tyr
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln
20 25 30
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu
35 40 45
Thr Thr Tyr Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Leu Ala Asn Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr
65 70 75 80
Asn Pro Ser Leu Lys Asn Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Asn
85 90 95
Asn Gln Ala Phe Leu Lys Leu Thr Asn Val His Thr Ser Asp Ser Ala
100 105 110
Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ile Gly Pro Ile Lys Tyr Pro Thr Ala Pro
115 120 125
Tyr Arg Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Pro Gly Thr Met Val Thr Val Ser
130 135 140
<210> 14
<211> 432
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多核苷酸”
<400> 14
atggacaggc ttacttcctc attcctactg ctgattgtcc ctgcatatgt cctgtctcag 60
gttactctga aagagtctgg ccctgggata ttgcagccct cccagaccct cagtctgact 120
tgcactttct ctgggttttc actgaccact tatggtatgg gtgtgggctg gattcgtcag 180
ccttcaggga agggtctgga gtggctggca aacatttggt gggatgatga taagtattac 240
aatccatctc tgaaaaaccg gctcacaatc tccaaggaca cctccaacaa ccaagcattc 300
ctcaagctca ccaatgtaca cacttcagat tctgccacat actactgtgc tcggataggg 360
ccgattaaat acccgacggc cccctaccgg tactttgact tctggggccc aggaaccatg 420
gtcaccgtct cg 432
<210> 15
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多肽”
<400> 15
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asp Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Ser Glu Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 16
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多核苷酸”
<400> 16
gacatacaga tgactcagtc accctcaagc ctgagtgcca gtgtgggaga cagggtgaca 60
atcacctgtc tggcctccga ggatatctac gataacctgg catggtatca gcagaaacct 120
ggaaaggctc ccaagctcct gatttattat gcctcctctc tccaagacgg cgttccatct 180
cggttcagcg gaagcggctc cgggacggat tacacactga caattagctc tctgcaaccg 240
gaggattttg ctacttacta ctgcctgcaa gactccgaat acccatggac cttcggtggt 300
ggcaccaaag tggaaatcaa g 321
<210> 17
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多肽”
<400> 17
Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr
1 5 10 15
Asp Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp
35 40 45
Ile Tyr Asp Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Ser
100 105 110
Glu Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
115 120 125
<210> 18
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多核苷酸”
<400> 18
atgagcgtgc ctactcaagt cttggggctg ctcttgcttt ggcttaccga cgcaagatgc 60
gacatacaga tgactcagtc accctcaagc ctgagtgcca gtgtgggaga cagggtgaca 120
atcacctgtc tggcctccga ggatatctac gataacctgg catggtatca gcagaaacct 180
ggaaaggctc ccaagctcct gatttattat gcctcctctc tccaagacgg cgttccatct 240
cggttcagcg gaagcggctc cgggacggat tacacactga caattagctc tctgcaaccg 300
gaggattttg ctacttacta ctgcctgcaa gactccgaat acccatggac cttcggtggt 360
ggcaccaaag tggaaatcaa g 381
<210> 19
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多肽”
<400> 19
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asp Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Ser Glu Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 20
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多核苷酸”
<400> 20
gacatacaga tgactcagtc accctcaagc ctgagtgcca gtgtgggaga cagggtgaca 60
atcacctgtc tggcctccga ggatatctac gataacctgg catggtatca gcagaaacct 120
ggaaaggctc ccaagctcct gatttattat gcctcctctc tccaagacgg cgttccatct 180
cggttcagcg gaagcggctc cgggacggat tacacactga caattagctc tctgcaaccg 240
gaggattttg ctacttacta ctgcctgcaa gactccgaat acccatggac cttcggtggt 300
ggcaccaaag tggaaatcaa gcgtacggta gcggccccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 21
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多肽”
<400> 21
Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr
1 5 10 15
Asp Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp
35 40 45
Ile Tyr Asp Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Ser
100 105 110
Glu Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 22
<211> 702
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多核苷酸”
<400> 22
atgagcgtgc ctactcaagt cttggggctg ctcttgcttt ggcttaccga cgcaagatgc 60
gacatacaga tgactcagtc accctcaagc ctgagtgcca gtgtgggaga cagggtgaca 120
atcacctgtc tggcctccga ggatatctac gataacctgg catggtatca gcagaaacct 180
ggaaaggctc ccaagctcct gatttattat gcctcctctc tccaagacgg cgttccatct 240
cggttcagcg gaagcggctc cgggacggat tacacactga caattagctc tctgcaaccg 300
gaggattttg ctacttacta ctgcctgcaa gactccgaat acccatggac cttcggtggt 360
ggcaccaaag tggaaatcaa gcgtacggta gcggccccat ctgtcttcat cttcccgcca 420
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 702
<210> 23
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多肽”
<400> 23
Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Asn Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Asn Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Ile Gly Pro Ile Lys Tyr Pro Thr Ala Pro Tyr Arg Tyr
100 105 110
Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser
115 120 125
<210> 24
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多核苷酸”
<400> 24
gaagtgacac tcaaggagtc tggacccgct ctggtgaaac caacccaaac actcactttg 60
acatgtactt ttagtggctt ctcattgact acctatggaa tgggcgtggg atggatcaga 120
cagccacctg gcaaggctct ggaatggctg gccaacatct ggtgggatga cgacaagtac 180
tataacccgt ccctgaaaaa ccggctgacc attagcaagg atacttctaa aaatcaagtg 240
gtgctgacca tgacaaatat ggatcccgtt gacaccgcaa cctactactg cgcccgcatt 300
ggtcccataa agtaccctac ggcaccttac cgatatttcg acttttgggg ccaagggaca 360
atggttactg tctcg 375
<210> 25
<211> 144
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多肽”
<400> 25
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys
20 25 30
Pro Thr Gln Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu
35 40 45
Thr Thr Tyr Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys
50 55 60
Ala Leu Glu Trp Leu Ala Asn Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr
65 70 75 80
Asn Pro Ser Leu Lys Asn Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys
85 90 95
Asn Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala
100 105 110
Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ile Gly Pro Ile Lys Tyr Pro Thr Ala Pro
115 120 125
Tyr Arg Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser
130 135 140
<210> 26
<211> 432
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多核苷酸”
<400> 26
atggagtggt cctgggtgtt tctgttcttc ctgagtgtga ccaccggggt ccactccgaa 60
gtgacactca aggagtctgg acccgctctg gtgaaaccaa cccaaacact cactttgaca 120
tgtactttta gtggcttctc attgactacc tatggaatgg gcgtgggatg gatcagacag 180
ccacctggca aggctctgga atggctggcc aacatctggt gggatgacga caagtactat 240
aacccgtccc tgaaaaaccg gctgaccatt agcaaggata cttctaaaaa tcaagtggtg 300
ctgaccatga caaatatgga tcccgttgac accgcaacct actactgcgc ccgcattggt 360
cccataaagt accctacggc accttaccga tatttcgact tttggggcca agggacaatg 420
gttactgtct cg 432
<210> 27
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多肽”
<400> 27
Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Asn Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Asn Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Ile Gly Pro Ile Lys Tyr Pro Thr Ala Pro Tyr Arg Tyr
100 105 110
Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr
130 135 140
Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr
195 200 205
Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val
210 215 220
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
325 330 335
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Gly Lys
450
<210> 28
<211> 1966
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多核苷酸”
<400> 28
gaagtgacac tcaaggagtc tggacccgct ctggtgaaac caacccaaac actcactttg 60
acatgtactt ttagtggctt ctcattgact acctatggaa tgggcgtggg atggatcaga 120
cagccacctg gcaaggctct ggaatggctg gccaacatct ggtgggatga cgacaagtac 180
tataacccgt ccctgaaaaa ccggctgacc attagcaagg atacttctaa aaatcaagtg 240
gtgctgacca tgacaaatat ggatcccgtt gacaccgcaa cctactactg cgcccgcatt 300
ggtcccataa agtaccctac ggcaccttac cgatatttcg acttttgggg ccaagggaca 360
atggttactg tctcgagcgc ttctacaaag ggcccatccg tcttccccct ggcgccctgc 420
tccaggagca cctccgagag cacagccgcc ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc 480
gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg 540
gctgtcctac agtcctcagg actctactcc ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc 600
agcttgggca cgaagaccta cacctgcaac gtagatcaca agcccagcaa caccaaggtg 660
gacaagagag ttggtgagag gccagcacag ggagggaggg tgtctgctgg aagccaggct 720
cagccctcct gcctggacgc accccggctg tgcagcccca gcccagggca gcaaggcatg 780
ccccatctgt ctcctcaccc ggaggcctct gaccacccca ctcatgccca gggagagggt 840
cttctggatt tttccaccag gctccgggca gccacaggct ggatgcccct accccaggcc 900
ctgcgcatac aggggcaggt gctgcgctca gacctgccaa gagccatatc cgggaggacc 960
ctgcccctga cctaagccca ccccaaaggc caaactctcc actccctcag ctcagacacc 1020
ttctctcctc ccagatctga gtaactccca atcttctctc tgcagagtcc aaatatggtc 1080
ccccatgccc accatgccca ggtaagccaa cccaggcctc gccctccagc tcaaggcggg 1140
acaggtgccc tagagtagcc tgcatccagg gacaggcccc agccgggtgc tgacgcatcc 1200
acctccatct cttcctcagc acctgagttc ctggggggac catcagtctt cctgttcccc 1260
ccaaaaccca aggacactct catgatctcc cggacccctg aggtcacgtg cgtggtggtg 1320
gacgtgagcc aggaagaccc cgaggtccag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg 1380
cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagttcaaca gcacgtaccg tgtggtcagc 1440
gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aacggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 1500
aacaaaggcc tcccgtcctc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg tgggacccac 1560
ggggtgcgag ggccacatgg acagaggtca gctcggccca ccctctgccc tgggagtgac 1620
cgctgtgcca acctctgtcc ctacagggca gccccgagag ccacaggtgt acaccctgcc 1680
cccatcccag gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt 1740
ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa 1800
gaccacgcct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca ggctaaccgt 1860
ggacaagagc aggtggcagg aggggaatgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct 1920
gcacaaccac tacacacaga agagcctctc cctgtctctg ggtaaa 1966
<210> 29
<211> 472
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多肽”
<400> 29
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys
20 25 30
Pro Thr Gln Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu
35 40 45
Thr Thr Tyr Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys
50 55 60
Ala Leu Glu Trp Leu Ala Asn Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr
65 70 75 80
Asn Pro Ser Leu Lys Asn Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys
85 90 95
Asn Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala
100 105 110
Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ile Gly Pro Ile Lys Tyr Pro Thr Ala Pro
115 120 125
Tyr Arg Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser
130 135 140
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser
145 150 155 160
Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
165 170 175
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
180 185 190
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
195 200 205
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys
210 215 220
Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
225 230 235 240
Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala
245 250 255
Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
260 265 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
275 280 285
Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
290 295 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305 310 315 320
Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
325 330 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
340 345 350
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
355 360 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr
370 375 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385 390 395 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
405 410 415
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
420 425 430
Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
435 440 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
450 455 460
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
465 470
<210> 30
<211> 2023
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多核苷酸”
<400> 30
atggagtggt cctgggtgtt tctgttcttc ctgagtgtga ccaccggggt ccactccgaa 60
gtgacactca aggagtctgg acccgctctg gtgaaaccaa cccaaacact cactttgaca 120
tgtactttta gtggcttctc attgactacc tatggaatgg gcgtgggatg gatcagacag 180
ccacctggca aggctctgga atggctggcc aacatctggt gggatgacga caagtactat 240
aacccgtccc tgaaaaaccg gctgaccatt agcaaggata cttctaaaaa tcaagtggtg 300
ctgaccatga caaatatgga tcccgttgac accgcaacct actactgcgc ccgcattggt 360
cccataaagt accctacggc accttaccga tatttcgact tttggggcca agggacaatg 420
gttactgtct cgagcgcttc tacaaagggc ccatccgtct tccccctggc gccctgctcc 480
aggagcacct ccgagagcac agccgccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 540
ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 600
gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 660
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aagagagttg gtgagaggcc agcacaggga gggagggtgt ctgctggaag ccaggctcag 780
ccctcctgcc tggacgcacc ccggctgtgc agccccagcc cagggcagca aggcatgccc 840
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cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaggc taaccgtgga 1920
caagagcagg tggcaggagg ggaatgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca 1980
caaccactac acacagaaga gcctctccct gtctctgggt aaa 2023
<210> 31
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多肽”
<400> 31
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 32
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多核苷酸”
<400> 32
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
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gggaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 33
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多肽”
<400> 33
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Met Arg Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Arg Ile Asp Trp Asp Asp Asp Lys Phe Tyr Ser Thr Ser
50 55 60
Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Ile Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
100 105 110
Val Ser
<210> 34
<211> 342
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多核苷酸”
<400> 34
caggtcacct tgaaggagtc tggtcctgcg ctggtgaaac ccacacagac cctcacactg 60
acctgcacct tctctgggtt ctcactcagc actagtggaa tgcgtgtgag ctggatccgt 120
cagcccccag ggaaggccct ggagtggctt gcacgcattg attgggatga tgataaattc 180
tacagcacat ctctgaagac caggctcacc atctccaagg acacctccaa aaaccaggtg 240
gtccttacaa tgaccaacat ggaccctgtg gacacagcca cgtattactg tgcacggata 300
gcttttgata tctggggcca agggacaatg gtcaccgtct ct 342
<210> 35
<211> 972
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多肽”
<400> 35
Met Gly Pro Gly Val Leu Leu Leu Leu Leu Val Ala Thr Ala Trp His
1 5 10 15
Gly Gln Gly Ile Pro Val Ile Glu Pro Ser Val Pro Glu Leu Val Val
20 25 30
Lys Pro Gly Ala Thr Val Thr Leu Arg Cys Val Gly Asn Gly Ser Val
35 40 45
Glu Trp Asp Gly Pro Pro Ser Pro His Trp Thr Leu Tyr Ser Asp Gly
50 55 60
Ser Ser Ser Ile Leu Ser Thr Asn Asn Ala Thr Phe Gln Asn Thr Gly
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Cys Thr Glu Pro Gly Asp Pro Leu Gly Gly Ser Ala Ala
85 90 95
Ile His Leu Tyr Val Lys Asp Pro Ala Arg Pro Trp Asn Val Leu Ala
100 105 110
Gln Glu Val Val Val Phe Glu Asp Gln Asp Ala Leu Leu Pro Cys Leu
115 120 125
Leu Thr Asp Pro Val Leu Glu Ala Gly Val Ser Leu Val Arg Val Arg
130 135 140
Gly Arg Pro Leu Met Arg His Thr Asn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His
145 150 155 160
Gly Phe Thr Ile His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Ser Gln Asp Tyr Gln
165 170 175
Cys Ser Ala Leu Met Gly Gly Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg
180 185 190
Leu Lys Val Gln Lys Val Ile Pro Gly Pro Pro Ala Leu Thr Leu Val
195 200 205
Pro Ala Glu Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys
210 215 220
Ser Ala Ser Ser Val Asp Val Asn Phe Asp Val Phe Leu Gln His Asn
225 230 235 240
Asn Thr Lys Leu Ala Ile Pro Gln Gln Ser Asp Phe His Asn Asn Arg
245 250 255
Tyr Gln Lys Val Leu Thr Leu Asn Leu Asp Gln Val Asp Phe Gln His
260 265 270
Ala Gly Asn Tyr Ser Cys Val Ala Ser Asn Val Gln Gly Lys His Ser
275 280 285
Thr Ser Met Phe Phe Arg Val Val Glu Ser Ala Tyr Leu Asn Leu Ser
290 295 300
Ser Glu Gln Asn Leu Ile Gln Glu Val Thr Val Gly Glu Gly Leu Asn
305 310 315 320
Leu Lys Val Met Val Glu Ala Tyr Pro Gly Leu Gln Gly Phe Asn Trp
325 330 335
Thr Tyr Leu Gly Pro Phe Ser Asp His Gln Pro Glu Pro Lys Leu Ala
340 345 350
Asn Ala Thr Thr Lys Asp Thr Tyr Arg His Thr Phe Thr Leu Ser Leu
355 360 365
Pro Arg Leu Lys Pro Ser Glu Ala Gly Arg Tyr Ser Phe Leu Ala Arg
370 375 380
Asn Pro Gly Gly Trp Arg Ala Leu Thr Phe Glu Leu Thr Leu Arg Tyr
385 390 395 400
Pro Pro Glu Val Ser Val Ile Trp Thr Phe Ile Asn Gly Ser Gly Thr
405 410 415
Leu Leu Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Asn Val Thr Trp Leu
420 425 430
Gln Cys Ser Gly His Thr Asp Arg Cys Asp Glu Ala Gln Val Leu Gln
435 440 445
Val Trp Asp Asp Pro Tyr Pro Glu Val Leu Ser Gln Glu Pro Phe His
450 455 460
Lys Val Thr Val Gln Ser Leu Leu Thr Val Glu Thr Leu Glu His Asn
465 470 475 480
Gln Thr Tyr Glu Cys Arg Ala His Asn Ser Val Gly Ser Gly Ser Trp
485 490 495
Ala Phe Ile Pro Ile Ser Ala Gly Ala His Thr His Pro Pro Asp Glu
500 505 510
Phe Leu Phe Thr Pro Val Val Val Ala Cys Met Ser Ile Met Ala Leu
515 520 525
Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Tyr Lys Tyr Lys Gln Lys Pro
530 535 540
Lys Tyr Gln Val Arg Trp Lys Ile Ile Glu Ser Tyr Glu Gly Asn Ser
545 550 555 560
Tyr Thr Phe Ile Asp Pro Thr Gln Leu Pro Tyr Asn Glu Lys Trp Glu
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Phe Pro Arg Asn Asn Leu Gln Phe Gly Lys Thr Leu Gly Ala Gly Ala
580 585 590
Phe Gly Lys Val Val Glu Ala Thr Ala Phe Gly Leu Gly Lys Glu Asp
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Ala Val Leu Lys Val Ala Val Lys Met Leu Lys Ser Thr Ala His Ala
610 615 620
Asp Glu Lys Glu Ala Leu Met Ser Glu Leu Lys Ile Met Ser His Leu
625 630 635 640
Gly Gln His Glu Asn Ile Val Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr His Gly
645 650 655
Gly Pro Val Leu Val Ile Thr Glu Tyr Cys Cys Tyr Gly Asp Leu Leu
660 665 670
Asn Phe Leu Arg Arg Lys Ala Glu Ala Met Leu Gly Pro Ser Leu Ser
675 680 685
Pro Gly Gln Asp Pro Glu Gly Gly Val Asp Tyr Lys Asn Ile His Leu
690 695 700
Glu Lys Lys Tyr Val Arg Arg Asp Ser Gly Phe Ser Ser Gln Gly Val
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Asp Thr Tyr Val Glu Met Arg Pro Val Ser Thr Ser Ser Asn Asp Ser
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Phe Ser Glu Gln Asp Leu Asp Lys Glu Asp Gly Arg Pro Leu Glu Leu
740 745 750
Arg Asp Leu Leu His Phe Ser Ser Gln Val Ala Gln Gly Met Ala Phe
755 760 765
Leu Ala Ser Lys Asn Cys Ile His Arg Asp Val Ala Ala Arg Asn Val
770 775 780
Leu Leu Thr Asn Gly His Val Ala Lys Ile Gly Asp Phe Gly Leu Ala
785 790 795 800
Arg Asp Ile Met Asn Asp Ser Asn Tyr Ile Val Lys Gly Asn Ala Arg
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Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Pro Glu Ser Ile Phe Asp Cys Val Tyr
820 825 830
Thr Val Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Leu Leu Trp Glu Ile
835 840 845
Phe Ser Leu Gly Leu Asn Pro Tyr Pro Gly Ile Leu Val Asn Ser Lys
850 855 860
Phe Tyr Lys Leu Val Lys Asp Gly Tyr Gln Met Ala Gln Pro Ala Phe
865 870 875 880
Ala Pro Lys Asn Ile Tyr Ser Ile Met Gln Ala Cys Trp Ala Leu Glu
885 890 895
Pro Thr His Arg Pro Thr Phe Gln Gln Ile Cys Ser Phe Leu Gln Glu
900 905 910
Gln Ala Gln Glu Asp Arg Arg Glu Arg Asp Tyr Thr Asn Leu Pro Ser
915 920 925
Ser Ser Arg Ser Gly Gly Ser Gly Ser Ser Ser Ser Glu Leu Glu Glu
930 935 940
Glu Ser Ser Ser Glu His Leu Thr Cys Cys Glu Gln Gly Asp Ile Ala
945 950 955 960
Gln Pro Leu Leu Gln Pro Asn Asn Tyr Gln Phe Cys
965 970
<210> 36
<211> 49
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多肽”
<400> 36
Met Arg His Thr Asn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His Gly Phe Thr Ile
1 5 10 15
His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Ser Gln Asp Tyr Gln Cys Ser Ala Leu
20 25 30
Met Gly Gly Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg Leu Lys Val Gln
35 40 45
Lys
<210> 37
<211> 493
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多肽”
<400> 37
Ile Pro Val Ile Glu Pro Ser Val Pro Glu Leu Val Val Lys Pro Gly
1 5 10 15
Ala Thr Val Thr Leu Arg Cys Val Gly Asn Gly Ser Val Glu Trp Asp
20 25 30
Gly Pro Pro Ser Pro His Trp Thr Leu Tyr Ser Asp Gly Ser Ser Ser
35 40 45
Ile Leu Ser Thr Asn Asn Ala Thr Phe Gln Asn Thr Gly Thr Tyr Arg
50 55 60
Cys Thr Glu Pro Gly Asp Pro Leu Gly Gly Ser Ala Ala Ile His Leu
65 70 75 80
Tyr Val Lys Asp Pro Ala Arg Pro Trp Asn Val Leu Ala Gln Glu Val
85 90 95
Val Val Phe Glu Asp Gln Asp Ala Leu Leu Pro Cys Leu Leu Thr Asp
100 105 110
Pro Val Leu Glu Ala Gly Val Ser Leu Val Arg Val Arg Gly Arg Pro
115 120 125
Leu Met Arg His Thr Asn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His Gly Phe Thr
130 135 140
Ile His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Ser Gln Asp Tyr Gln Cys Ser Ala
145 150 155 160
Leu Met Gly Gly Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg Leu Lys Val
165 170 175
Gln Lys Val Ile Pro Gly Pro Pro Ala Leu Thr Leu Val Pro Ala Glu
180 185 190
Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys Ser Ala Ser
195 200 205
Ser Val Asp Val Asn Phe Asp Val Phe Leu Gln His Asn Asn Thr Lys
210 215 220
Leu Ala Ile His Gln Gln Ser Asp Phe His Asn Asn Arg Tyr Gln Lys
225 230 235 240
Val Leu Thr Leu Asn Leu Asp Gln Val Asp Phe Gln His Ala Gly Asn
245 250 255
Tyr Ser Cys Val Ala Ser Asn Val Gln Gly Lys His Ser Thr Ser Met
260 265 270
Phe Phe Arg Val Val Glu Ser Ala Tyr Leu Asn Leu Ser Ser Glu Gln
275 280 285
Asn Leu Ile Gln Glu Val Thr Val Gly Glu Gly Leu Asn Leu Lys Val
290 295 300
Met Val Glu Ala Tyr Pro Gly Leu Gln Gly Phe Asn Trp Thr Tyr Leu
305 310 315 320
Gly Pro Phe Ser Asp His Gln Pro Glu Pro Lys Leu Ala Asn Ala Thr
325 330 335
Thr Lys Asp Thr Tyr Arg His Thr Phe Thr Leu Ser Leu Pro Arg Leu
340 345 350
Lys Pro Ser Glu Ala Gly Arg Tyr Ser Phe Leu Ala Arg Asn Pro Gly
355 360 365
Gly Trp Arg Ala Leu Thr Phe Glu Leu Thr Leu Arg Tyr Pro Pro Glu
370 375 380
Val Ser Val Ile Trp Thr Phe Ile Asn Gly Ser Gly Thr Leu Leu Cys
385 390 395 400
Ala Ala Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Asn Val Thr Trp Leu Gln Cys Ser
405 410 415
Gly His Thr Asp Arg Cys Asp Glu Ala Gln Val Leu Gln Val Trp Asp
420 425 430
Asp Pro Tyr Pro Glu Val Leu Ser Gln Glu Pro Phe His Lys Val Thr
435 440 445
Val Gln Ser Leu Leu Thr Val Glu Thr Leu Glu His Asn Gln Thr Tyr
450 455 460
Glu Cys Arg Ala His Asn Ser Val Gly Ser Gly Ser Trp Ala Phe Ile
465 470 475 480
Pro Ile Ser Ala Gly Ala His Thr His Pro Pro Asp Glu
485 490
<210> 38
<211> 512
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成的多肽”
<400> 38
Met Gly Pro Gly Val Leu Leu Leu Leu Leu Val Ala Thr Ala Trp His
1 5 10 15
Gly Gln Gly Ile Pro Val Ile Glu Pro Ser Val Pro Glu Leu Val Val
20 25 30
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35 40 45
Glu Trp Asp Gly Pro Pro Ser Pro His Trp Thr Leu Tyr Ser Asp Gly
50 55 60
Ser Ser Ser Ile Leu Ser Thr Asn Asn Ala Thr Phe Gln Asn Thr Gly
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Cys Thr Glu Pro Gly Asp Pro Leu Gly Gly Ser Ala Ala
85 90 95
Ile His Leu Tyr Val Lys Asp Pro Ala Arg Pro Trp Asn Val Leu Ala
100 105 110
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355 360 365
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485 490 495
Ala Phe Ile Pro Ile Ser Ala Gly Ala His Thr His Pro Pro Asp Glu
500 505 510

Claims (51)

1.治疗癌症的方法，其中方法包括向患者施用包含HDAC抑制剂和选自抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段、抗CSF-1抗体或其抗原结合片段以及CSF-1R活性的抑制剂的第二试剂的组合。
2.权利要求1的方法，其中HDAC抑制剂是恩替司他。
3.权利要求1或2的方法，其中抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段包含重链，其中重链的可变结构域包含具有用于CDR-H1的SEQ ID NO：4给出的序列的CDR，具有用于CDR-H2的SEQID NO：5给出的序列的CDR以及具有用于CDR-H3的SEQ ID NO：6给出的序列的CDR中的至少一个；和/或
轻链，其中轻链的可变结构域包含具有用于CDR-L1的SEQ ID NO：1给出的序列的CDR，具有用于CDR-L2的SEQ ID NO：2给出的序列的CDR，以及具有用于CDR-L3的SEQ ID NO：3给出的序列的CDR中的至少一个。
4.权利要求1或2的方法，其中抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，其中重链的可变结构域包含三个CDR并且CDR-H1的序列与SEQ ID NO：4给出的序列具有至少60％的同一性或相似性，CDR-H2的序列与SEQ ID NO：5给出的序列具有至少60％的同一性或相似性以及CDR-H3的序列与SEQ ID NO：6给出的序列具有至少60％的同一性或相似性；并且其中轻链的可变结构域包含三个CDR并且CDR-L1的序列与SEQ ID NO：1给出的序列具有至少60％的同一性或相似性，CDR-L2的序列与SEQ ID NO：2给出的序列具有至少60％的同一性或相似性以及CDR-L3的序列与SEQ ID NO：3给出的序列具有至少60％的同一性或相似性。
5.前述权利要求中任一项的方法，其中抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段包含
重链，其中重链包含SEQ ID NO：23给出的序列；和
轻链，其中轻链包含SEQ ID NO：15给出的序列。
6.前述权利要求中任一项的方法，其中抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段选自具有全长重链和轻链的完整抗体分子、其Fab、修饰的Fab’、Fab’、F(ab’)2、Fv、VH、VL和scFv片段。
7.前述权利要求中任一项的方法，其中抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段包含含有SEQID NO：27给出的序列的重链和含有SEQ ID NO：19给出的序列的轻链。
8.权利要求1或2的方法，其中抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段交叉阻断包含以下序列给出的6个CDR的抗体的结合：用于CDR-L1的SEQ ID NO：1、用于CDR-L2的SEQ ID NO：2、用于CDR-L3的SEQ ID NO：3、用于CDR-H1的SEQ ID NO：4、用于CDR-H2的SEQ ID NO：5以及用于CDR-H3的SEQ ID NO：6。
9.前述权利要求中任一项的方法，其中抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段通过结合与其阻断的抗体相同的表位来交叉阻断结合。
10.前述权利要求中任一项的方法，其中CSF-1R活性的抑制剂降低或阻断CSF-1R的活性。
11.前述权利要求中任一项的方法，其中抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段包括对人CSF-1R的结合亲和力是100pM或更小，或者10pM或更小。
12.前述权利要求中任一项的方法，其中抗CSF-1抗体或其抗原结合片段包括对人CSF-1的结合亲和力是100pM或更小，或者10pM或更小。
13.前述权利要求中任一项的方法，其中癌症的特征在于CSF-1R的过表达。
14.前述权利要求中任一项的方法，其中癌症是胰腺癌、结肠直肠癌、间皮瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、卵巢癌、胶质母细胞瘤、骨髓增生异常综合征(MDS)、乳腺癌、前列腺癌、皮肤癌、食道癌、胃癌、星形细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、肾癌、肺癌、肝癌、甲状腺癌或头颈癌。
15.前述权利要求中任一项的方法，其中癌症是结肠直肠癌或胰腺癌。
16.前述权利要求中任一项的方法，其中抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂以每三周一次至每周四次施用。
17.前述权利要求中任一项的方法，其中抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂以每两周一次、每周一次、每周两次或每周三次施用。
18.前述权利要求中任一项的方法，其中抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂以范围是约0.1mg/kg至约30mg/kg的剂量施用。
19.前述权利要求中任一项的方法，其中抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂以范围是约0.1mg/kg至约10mg/kg的剂量施用。
20.前述权利要求中任一项的方法，其中抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF的抑制剂以约0.1mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、1.5mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7.5mg/kg或约10mg/kg的剂量施用。
21.前述权利要求中任一项的方法，其中CSF-1R活性抑制剂是小化学实体。
22.前述权利要求中任一项的方法，其中HDAC抑制剂或恩替司他口服施用。
23.前述权利要求中任一项的方法，其中恩替司他每周一次或每周两次施用。
24.前述权利要求中任一项的方法，其中恩替司他每周施用。
25.前述权利要求中任一项的方法，其中恩替司他每两周施用。
26.前述权利要求中任一项的方法，其中恩替司他以3mg的剂量每周一次施用。
27.前述权利要求中任一项的方法，其中恩替司他以5mg的剂量每周一次施用。
28.前述权利要求中任一项的方法，其中恩替司他以10mg的剂量每两周一次施用。
29.权利要求1的方法，其中恩替司他首先施用。
30.权利要求1的方法，其中恩替司他和抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段或者CSF-1R活性的抑制剂同时施用。
31.前述权利要求中任一项的方法，其中HDAC抑制剂和第二试剂在时间上邻近施用。
32.权利要求31的方法，其中HDAC抑制剂是恩替司他。
33.用于治疗癌症的试剂盒，其包括HDAC抑制剂和选自抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段、抗CSF-1抗体或其抗原结合片段以及CSF-1R活性的抑制剂的第二试剂的组合。
34.权利要求31的试剂盒，其中HDAC抑制剂是恩替司他。
35.权利要求31或32的试剂盒，其中癌症是结肠直肠癌或胰腺癌。
36.前述权利要求中任一项的试剂盒，其中抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段包含：
重链，其中重链的可变结构域包含具有用于CDR-H1的SEQ ID NO：4给出的序列的CDR，具有用于CDR-H2的SEQ ID NO：5给出的序列的CDR以及具有用于CDR-H3的SEQ ID NO：6给出的序列的CDR中的至少一个；和/或
轻链，其中轻链的可变结构域包含具有用于CDR-L1的SEQ ID NO：1给出的序列的CDR，具有用于CDR-L2的SEQ ID NO：2给出的序列的CDR，以及具有用于CDR-L3的SEQ ID NO：3给出的序列的CDR中的至少一个。
37.权利要求31或32的试剂盒，其中抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，其中重链的可变结构域包含三个CDR并且CDR-H1的序列与SEQ ID NO：4给出的序列具有至少60％的同一性或相似性，CDR-H2的序列与SEQ ID NO：5给出的序列具有至少60％的同一性或相似性以及CDR-H3的序列与SEQ ID NO：6给出的序列具有至少60％的同一性或相似性；并且其中轻链的可变结构域包含三个CDR并且CDR-L1的序列与SEQ ID NO：1给出的序列具有至少60％的同一性或相似性，CDR-L2的序列与SEQ ID NO：2给出的序列具有至少60％的同一性或相似性以及CDR-L3的序列与SEQ ID NO：3给出的序列具有至少60％的同一性或相似性。
38.前述权利要求中任一项的试剂盒，其中抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段包含
重链，其中重链包含SEQ ID NO：23给出的序列；和
轻链，其中轻链包含SEQ ID NO：15给出的序列。
39.前述权利要求中任一项的试剂盒，其中抗CSF-1R抗体或抗CSF-1抗体或其抗原结合片段选自具有全长重链和轻链的完整抗体分子、其Fab、修饰的Fab’、Fab’、F(ab’)2、Fv、VH、VL和scFv片段。
40.前述权利要求中任一项的试剂盒，其中抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO：27给出的序列的重链和含有SEQ ID NO：19给出的序列的轻链。
41.前述权利要求中任一项的试剂盒，其中抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段交叉阻断包含以下序列给出的6个CDR的抗体的结合：用于CDR-L1的SEQ ID NO：1、用于CDR-L2的SEQID NO：2、用于CDR-L3的SEQ ID NO：3、用于CDR-H1的SEQ ID NO：4、用于CDR-H2的SEQ IDNO：5以及用于CDR-H3的SEQ ID NO：6。
42.前述权利要求中任一项的试剂盒，其中抗CSF-1R抗体或抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段通过结合与其阻断的抗体相同的表位来交叉阻断结合。
43.前述权利要求中任一项的试剂盒，其中CSF-1R活性的抑制剂降低或阻断CSF-1R的活性。
44.前述权利要求中任一项的试剂盒，其中抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段包括对人CSF-1R的结合亲和力是100pM或更小，或者10pM或更小。
45.前述权利要求中任一项的试剂盒，其中抗CSF-1抗体或其抗原结合片段包括对人CSF-1的结合亲和力是100pM或更小，或者10pM或更小。
46.前述权利要求中任一项的试剂盒，其中CSF-1R活性的抑制剂是小化学实体。
47.前述权利要求中任一项的试剂盒，还包括关于如何使用试剂盒的说明书。
48.在癌症治疗中，HDAC抑制剂和选自抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段、抗CSF-1抗体或其抗原结合片段和CSF-1R活性的抑制剂的第二试剂的协同组合物，其中HDAC抑制剂和第二试剂在人体中(例如，仅在人体中)相互接触。
49.权利要求48的组合物，其中HDAC抑制剂是恩替司他。
50.制备组合物的方法，通过使HDAC抑制剂和选自抗CSF-1R抗体或其抗原结合片段、抗CSF-1抗体或其抗原结合片段和CSF-1R活性的抑制剂的第二试剂在位点相互接触。
51.权利要求50的方法，其中HDAC抑制剂是恩替司他。
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BAUER S等: "Phase I study of panobinostat and imatinib in patients with treatment-refractory metastatic gastrointestinal stromal tumors" *

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