MX2014010341A - Terapia combinada de anticuerpos contra el csf-1r humano y las utilizaciones de la misma. - Google Patents

Terapia combinada de anticuerpos contra el csf-1r humano y las utilizaciones de la misma.

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MX2014010341A
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MX
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csf
seq
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cancer
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Michael Cannarile
Dominik Ruettinger
Katharina Wartha
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Hoffmann La Roche
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Abstract

La presente invención hace referencia a la terapia combinada de anticuerpos que se unen al CSF-1R humano, que se caracteriza por la unión a los dominios D4-D5 (dimerización) (Id. de Sec. N° 85) del dominio extracelular del CSF-1R humano en combinación con un agente quimioterapéutico, radiación, y/o inmunoterapia para el cáncer.

Description

TERAPIA COMBINADA DE ANTICUERPOS CONTRA EL CSF-1R HUMANO Y LAS UTILIZACIONES DE LA MISMA Entre otros, la presente invención hace referencia a la combinación de anticuerpos contra el CSF-1R humano que se unen al CSF-1R humano, que se caracteriza por unirse a los dominios D4 y D5 (dimerización) , con un agente quimioterapéutico, radiación, y/o inmunoterapia para el cáncer .
Antecedentes de la invención El receptor humano del CSF-1 (CSF-1R; receptor del factor estimulante de colonias 1; sinónimos: receptor de M-CSF; receptor del factor estimulante de colonias de macrófagos, protooncogén Fms, c-fms, Id. de Sec. N° 62) se conoce desde 1986 (Coussens, L. , et al., Nature 320 (1986) 277-280) . El CSF-1R es un factor de crecimiento y está codificado por el protooncogén c-fms (revisado, por ejemplo, en Roth, P. , y Stanley, E.R., Curr. Top. Microbiol. Immunol . 181 (1992) 141-167) .
El CSF-1R es el receptor para el CSF-1 (factor estimulante de colonias 1, también conocido como M-CSF, factor estimulante de colonias de macrófagos) y modula los efectos biológicos de esta citoquina (Sherr, C.J., et al., Cell 41 (1985) 665-676) . La clonación del receptor del factor estimulante de colonias-1 (CSF-IR) (también llamado c-fms) se describió por primera vez en Roussel, M.F., et al., Nature 325 (1987) 549-552. En esa publicación, se mostró que el CSF-IR tenía un potencial de transformación en relación a los cambios en el extremo C-terminal de la proteína, incluyendo la pérdida de la fosforilación inhibitoria de la tirosina 969, que se une a Cbl y, por lo tanto, modula la regulación del receptor (Lee, P.S., et al., Embo J. 18 (1999) 3616-3628). Recientemente se identificó un segundo ligando para el CSF-IR llamado interleucina-34 (IL-34) (Lin, H., et al, Science 320 (2008) 807-811) .
Actualmente, se conocen dos ligandos del CSF-IR que se unen al dominio extracelular del CSF-IR. El primero es el CSF-1 (factor estimulante de colonias 1, también conocido como M-CSF, macrófagos; Id. de Sec . N° 86) y se encuentra extracelularmente en forma de homodímero enlazado por un enlace disulfuro (Stanley, E.R. et al., Journal of Cellular Biochemistry 21 (1983) 151-159; Stanley, E.R. et al., Stem Cells 12 Supl. 1 (1995) 15-24) . El Segundo es la IL-34 (IL-34 humana; Id. de Sec. N° 87) (Hume, D. A., et al, Blood 119 (2012) 1810-1820) . Los principales efectos biológicos de la señalización mediante el CSF-IR son la diferenciación, la proliferación, la migración, y la supervivencia de las células hematopoyéticas precursoras de la línea de los macrófagos (incluyendo los osteoclastos) . La activación del CSF-IR está mediada por los ligandos del CSF-IR, CSF-1 (M-CSF) y IL-34. La unión del CSF-1 (M-CSF) al CSF-IR induce la formación de homodímeros y la activación de la quinasa mediante la fosforilación de la tirosina (Li, W. et al, EMBO Journal.10 (1991) 277-288; Stanley, E.R., et al., Mol. Reprod. Dev. 46 (1997) 4-10) .
El homodímero CSF-1 biológicamente activo se une al CSF- IR en los subdominios D1-D3 del dominio extracelular del receptor del CSF-1 (CSF-IR-ECD) . El CSF-IR-ECD incluye cinco subdominios de tipo inmunoglobulina (designados D1-D5) . Los subdominios D4-D5 del dominio extracelular (CSF 1R-ECD) no están involucrados en la unión al CSF-1 (Wang, Z., et al Molecular and Cellular Biology 13 (1993) 5348-5359) . El subdominio D4 está involucrado en la dimerización (Yeung, Y-G., et al Molecular & Cellular Proteomics 2 (2003) 1143-1155; Pixley, F. J., et al., Trends Cell Biol 14 (2004) 628-638).
La señalización adicional está mediada por la subunidad p85 de la PI3K y Grb2 en conexión con las vías PI3K/AKT y Ras/MAPK, respectivamente. Estas dos importantes vías de señalización pueden regular la proliferación, la supervivencia y la apoptosis. Otras moléculas de señalización que se unen al dominio intracelular fosforilado del CSF-IR incluyen STAT1, STAT3 , PLCy, y Cbl (Bourette, R.P. y Rohrschneider, L.R., Growth factors 17 (2000) 155-166).
La señalización mediante el CSF-IR tiene un papel fisiológico en las respuestas inmunitarias, en el remodelado óseo y en el sistema reproductivo. Los animales knockout para el CSF-1 (Pollard, J.W. , Mol. Reprod. Dev. 46 (1997) 54-61) o para el CSF-IR (Dai, X.M. , et al., Blood 99 (2002) 111-120) han demostrado tener fenotipos osteopetroicos, hematopoyéticos , macrófagos tisulares, y fenotipos reproductivos coherentes con el papel del CSF-IR en los respectivos tipos celulares .
Sherr, C.J., et al., Blood 73 (1989) 1786-1793 hacen referencia a algunos anticuerpos contra el CSF-IR que inhiben la actividad del CSF-1. Ashmun, R.A. , et al., Blood 73 (1989) 827-837 hacen referencia a anticuerpos contra el CSF-IR. Lenda, D., et al., Journal of Immunology 170 (2003) 3254-3262 hace referencia a que un reclutamiento, una proliferación y una activación reducidas en los ratones deficientes para el CSF-1 resulta en una menor apoptosis tubular durante la inflamación renal. Kitaura, H., et al., Journal de Dental Research 87 (2008) 396-400 hacen referencia a un anticuerpo anti-CSF-1 que inhibe el movimiento ortodóntico de los dientes. La patente WO 2001/030381 menciona los inhibidores de la actividad del CSF-1, incluyendo los nucleótidos antisentido y los anticuerpos, y sólo describe los nucleótidos antisentido del CSF-1. La patente WO 2004/045532 hace referencia a la prevención de las metástasis, de la pérdida ósea y al tratamiento del cáncer metastásico mediante los antagonistas del CSF-1, y sólo describe como antagonistas a los anticuerpos anti-CSF-1. La patente WO 2005/046657 hace referencia al tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal mediante los anticuerpos anti-CSF-1. La patente US 2002/0141994 hace referencia a los inhibidores del factor estimulante de colonias. La patente WO 2006/096489 hace referencia al tratamiento de la artritis reumatoide mediante los anticuerpos anti-CSF-1. Las patentes WO 2009/026303 y WO 2009/112245 hacen referencia a ciertos anticuerpos anti-CSF-1R que se unen al CSF-1R en los tres primeros subdominios (D1-D3) del dominio extracelular (CSF-1R-ECD) . La patente WO 2011/123381 (Al) hace referencia a anticuerpos contra el CSF-IR.
Compendio de la invención La invención incluye un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, caracterizado de tal manera que se une a los dominios D4-D5 (dimerización) (Id. de Sec . N° 85) del dominio extracelular del CSF- IR humano, para su utilización en a) la inhibición de la proliferación celular de células tumorales con una expresión del CSF-IR dependiente del ligando del CSF-IR y/o independiente del ligando del CSF-1R; b) la inhibición de la proliferación celular de tumores con un infiltrado de macrófagos con una expresión del CSF- IR dependiente del ligando CSF-1 y/o independiente del ligando CSF-1; c) la inhibición de la supervivencia celular en monocitos y macrófagos con expresión del CSF-IR (dependiente del ligando del CSF-IR y/o independiente del ligando del CSF-1R) ; y/o d) la inhibición de la diferenciación celular en monocitos y macrófagos con expresión del CSF- IR (dependiente del ligando del CSF- IR y/o independiente del ligando del CSF-1R) ; en el que el anticuerpo anti-CSF-lR se administra en combinación con un agente quimioterapéutico, radiación, y/o inmunoterapia para el cáncer.
Esta terapia combinada con anticuerpos que se unen al CSF-IR humano, y que se caracteriza por la unión a los dominios D4-D5 (dimerización) , tiene propiedades valiosas, tales como un menor potencial de activación de la activación de CSF-IR y, como consecuencia, una toxicidad reducida y una no estimulación del receptor CSF-IR (por ejemplo, en comparación con una terapia combinada con anticuerpos que se unen al CSF-IR humano, caracterizada por la unión a los dominios D1-D3) .
El término "dependiente de ligando" , tal y como se utiliza aquí, hace referencia a una señalización independiente de ligando a través del ECD extracelular (y no incluye la señalización independiente de ligando mediada por la activación de mutaciones puntuales en el dominio quinasa intracelular) . En una realización, el ligando del CSF-IR, en este contexto, hace referencia a un ligando del CSF-IR seleccionado a partir del CSF-1 (Id. de Sec . N° 86) y la IL-34 humana (Id. de Sec. N° 87); en una realización, el ligando del CSF-IR es el CSF-1 humano (Id. de Sec. N° 86); en una realización el ligando del CSF-IR es la IL-34 humana (Id. de Sec. N° 87) ) .
La invención incluye un anticuerpo que se une al CSF-IR humano, caracterizado por unirse a los dominios D4-D5 (dimerización) (Id. de Sec. N° 85) del dominio extracelular del CSF-IR humano para la utilización en el tratamiento de un paciente que tiene un tumor que expresa el CSF- IR o que tiene un tumor con un infiltrado de macrofagos que expresa el CSF-IR, en el que el tumor se caracteriza por un incremento del ligando del CSF-IR (en una realización el ligando del CSF-IR se selecciona a partir del CSF-1 humano (Id. de Sec . N° 86) y la IL-34 humana (Id. de Sec. N° 87) ; en una realización, el ligando del CSF-IR es el CSF-1 humano (Id. de Sec. N° 86); en una realización, el ligando del CSF-IR es la IL-34 humana (Id. de Sec. N° 87)) (detectable en suero, orina o en las biopsias del tumor) , en el que el anticuerpo anti-CSF-lR se administra en combinación con un agente quimioterapéutico, radiación y/o inmunoterapia para el cáncer. El término "aumento del ligando del CSF-IR" hace referencia a la sobrexpresión del ligando del CSF-IR humano (en una realización, el ligando del CSF-IR se selecciona a partir de CSF-1 humano (Id. de Sec. N° 86) e IL-34 humana (Id. de Sec. N° 87); en una realización, el ligando del CSF-IR es el CSF-l humano (Id. de Sec. N° 86) ; en una realización, el ligando del CSF-IR es la IL-34 humana (Id. de Sec. N° 87)) (en comparación con el tejido normal) antes del tratamiento, o la sobrexpresión del ligando del CSF- IR humano inducido por el tratamiento con un anticuerpo anti-CSF-1R (y en comparación con los niveles de expresión previos al tratamiento) .
En una realización de la invención, el anticuerpo anti-CSF-1R se caracteriza por la unión del anticuerpo al dominio extracelular del CSF-1R humano (Id. de Sec. N° 64) (incluyendo los dominios D1-D5) y no se une a los dominios D1-D3 (Id. de Sec. N° 66) del dominio extracelular del CSF-1R humano .
En una realización, los agentes quimioterapéuticos, que pueden administrarse con un anticuerpo anti-CSF-lR, incluyen pero no se limitan a, agentes antineoplásicos, que incluyen agentes alquilantes tales como: mostazas nitrogenadas, tales como la mecloretamina, la ciclofosfamida, la ifosfamida, el melfalán y el clorambucilo; nitrosureas, tales como la carmustina (BCNU) , la lomustina (CC U) , y la semustina (metil-CCNU) ; el Temodal (TM) (temozolamida) , etileniminas/metilmelamina tales como la trietilenmelamina (TEM) , el trietileno, la tiofosforamida (tiotepa) , la hexametilmelamina (HMM, altretamina) ; alquilsulfonatos tales como el busulfán; triazinas tales como la dacarbazina (DTIC) ; antimetabolitos, incluyendo análogos del ácido fólico tales como el metotrexato y el trimetrexato, análogos de pirimidinas tales como el 5-fluorouracilo (5FU) , la fluorodesoxiuridina, la gemcitabina, la citosina arabinósido (AraC, citarabina) , la 5-azacitidina, la 2,2'-difluorodesoxicitidina, análogos de las purinas tales como la 6-mercaptopurina, la 6-tioguamina, la azatioprina, la T-desoxicoformicina (pentostatina) , la eritrohidroxinoniladenina (EHNA) , el fosfato de fludarabina, y la 2-clorodesoxiadenosina (cladribina, 2-CdA) ; productos naturales, incluyendo fármacos antimitóticos tales como el paclitaxel, los alcaloides de la vinca, incluyendo la vinblastina (VLB) , la vincristina, y la vinorelbina, el taxotere, la estramustina, y el fosfato de estramustina; pipodofilotoxinas tales como el etopósido y el tenipósido; antibióticos tales como la actinomicina D, la daunomicina (rubidomicina) , la doxorrubicina, la mitoxantrona, la idarrubicina, las bleomicinas, la plica icina (mitramicina) , la mitomicina C, y la actinomicina; enzimas tales como la L-asparaginasa; modificadores de la respuesta biológica tales como el interferón-alfa, la IL-2, el G-CSF y el GM-CSF; agentes misceláneos, incluyendo complejos en coordinación con el platino, tales como el oxaliplatino, el cisplatino y el carboplatino, antracendionas tales como la mitoxantrona, ureas sustituidas tales como la hidroxiurea, derivados de la metilhidracina incluyendo la N-metilhidracina (MIH) y la procarbacina, supresores adrenocorticales tales como el raitotano (o, p-DDD) y la aminoglutetimida; hormonas y antagonistas, incluyendo antagonistas de los adrenocorticosteroides tales como la prednisona y equivalentes, dexametasona y aminoglutetimida; el Gemzar(TM) (gemcitabina) , progestinas tales como el caproato de hidroxiprogesterona, acetato de medroxiprogesterona y acetato de megestrol estrógenos tales como el dietilestilbestrol y los equivalentes al etinilestradiol ; antiestrégenos tales como el tamoxifeno; andrógenos, incluyendo el propionato de testosterona y la fluoximesterona/equivalentes ; antiandrógenos tales como la flutamida, análogos de la hormona liberadora de gonadotrofinas y el leuprolide; y antiandrógenos no esteroideos tales como la flutamida. Las terapias que tiene como diana mecanismos epigenéticos, que incluyen pero no se limitan a los inhibidores de la desacetilasa de las histonas, agentes desmetilantes (por ejemplo, Vidaza) y las terapias de liberación de la represión transcripcional (ATRA) , también pueden combinarse con las proteínas que se unen al antígeno.
En una realización, el agente quimioterapéutico se selecciona a partir del grupo que incluye los taxanos (como, por ejemplo, el paclitaxel (Taxol) , el docetaxel (Taxotere) , el paclitaxel modificado (por ejemplo, Abraxane y Opaxio) , la doxorrubicina, el sunitinib (Sutent) , el sorafenib (Nexavar) , y otros inhibidores de múltiples quinasas, el oxaliplatino, el cisplatino y el carboplatino, el etopósido, la gemcitabina, y la vinblastina. En una realización, el agente quimioterapéutico se selecciona a partir de un grupo que incluye taxanos (como por ejemplo, el taxol (paclitaxel) , el docetaxel (Taxotere) , el paclitaxel modificado (por ejemplo, Abraxane y Opaxio) .
En una realización, el agente quimioterapéutico se selecciona a partir del 5-fluorouracilo (5 -FU) , la leucovorina, el irinotecán, o el oxaliplatino. En una realización, el agente quimioterapéutico es el 5-fluorouracilo, la leucovorina y el irinotecán (FOLFIRI) . En una realización, el agente quimioterapéutico es el 5-fluorouracilo, y el oxaliplatino (FOLFOX) .
Algunos ejemplos específicos de las terapias combinadas con agentes quimioterapéuticos incluyen, por ejemplo, un anticuerpo para el CSF-1R con taxanos (por ejemplo, el docetaxel o el paclitaxel) o un paclitaxel modificado (por ejemplo, Abraxane o Opaxio) , doxorrubicina, capecitabina y/o bevacizumab (Avastin) para el tratamiento del cáncer de mama; el anticuerpo humano para el CSF-1R con carboplatino, oxaliplatino, cisplatino, paclitaxel, doxorrubicina (o doxorrubicina modificada (Caelyx o Doxil) ) , o topotecán (Hycamtin) para el cáncer ovárico, el anticuerpo humano para el CSF-1R con un inhibidor de múltiples quinasas, MKI, (Sutent, Nexavar, o 706) y/o doxorrubicina para el tratamiento del cáncer renal; el anticuerpo para el CSF-1R con oxaliplatino, cisplatino y/o radiación para el tratamiento del carcinoma de células escamosas; el anticuerpo para el CSF-1R con taxol y/o carboplatino para el tratamiento del cáncer pulmonar.
Por consiguiente, en una realización, el agente quimioterapéutico se selecciona a partir del grupo que incluye taxanos (docetaxel o paclitaxel o un paclitaxel modificado (Abraxane o Opaxio) , doxorrubicina, capecitabina y/o bevacizumab para el tratamiento del cáncer de mama.
En una realización, el agente quimioterapéutico se selecciona del grupo que incluye carboplatino, oxaliplatino, cisplatino, paclitaxel, doxorrubicina (o doxorrubicina modificada (Caelyx o Doxil) ) , o topotecán (Hycamtin) para el tratamiento del cáncer ovárico .
En una realización, el agente quimioterapéutico se selecciona a partir del grupo que incluye un inhibidor de múltiples quinasas (sunitinib (Sutent) , sorafenib (Nexavar) o motesanib difosfato (AMG 706) y/o doxorrubicina para el tratamiento del cáncer renal.
En una realización, el agente quimioterapéutico se selecciona a partir del grupo que incluye oxaliplatino, cisplatino y/o radiación para el tratamiento del carcinoma de célula escamosa.
En una realización, el agente quimioterapéutico se selecciona a partir del grupo que incluye taxol y/o carboplatino para el tratamiento del cáncer pulmonar.
En una realización, la inmunoterapia para el cáncer, que puede administrarse con un anticuerpo anti-CSF-lR, incluye, pero no se limita a, la activación de células T o la inhibición de células T reguladoras, la activación de las células presentadoras de antígenos, la inhibición de células inmunosupresoras en el microambiente del tumor, vacunas para el cáncer y transferencia de células adoptivas, agente enlazante de células T.
En una realización, la inmunoterapia para el cáncer se selecciona del grupo que incluye: a) Agentes enlazantes de las células T seleccionados a partir de anticuerpos agonistas que se unen a 0X 0, a GITR, a CD27, o a 4-lBB humanas, y anticuerpos biespecífieos para las células T (por ejemplo, anticuerpos CD3-CD19 BiTE™ que se enlazan a las células T, CD3-EpCam, CD3-EGFR) , IL-2 (proleucina) , interferón (IFN) alfa, anticuerpos antagonistas que se unen a CTLA-4 (por ejemplo, ipilimumab) , a PD-1, a PD-Ll, a TIM-3, a BTLA, a VISTA, a LAG-3, o a CD25 humanos, b) Inmunosupresión dirigida: anticuerpos o moléculas pequeñas que tienen como diana la señalización mediante STAT3 o NFkB, el bloqueo de la función de IL-6, IL-17, IL-23, TNFa, c) Vacunas para el cáncer/la potenciación de la función de las células dendríticas: OncoVex (virus oncolíticos que secretan GM-CSF) , un anticuerpo agonista del CD40, ligandos para el receptor de tipo Toll (TLR) , agonista de TLR, proteínas de fusión recombinantes que codifican para AGE-A3, PROSTVAC; o d) Transferencia de células adoptivas: GVAX (línea celular de cáncer prostático que expresa el GM-CSF) , vacuna de células dendríticas, terapia con células T adoptivas, terapia con células T CAR adoptivas .
En una realización, la inmunoterapia para el cáncer se selecciona a partir de agentes enlazantes de células T seleccionados a partir de IL-2 (proleucina) , y anticuerpos antagonistas que se unen a CTLA-4 (por ejemplo, ipilimumab) , a PD-1, o a PD-L1 humanas.
En una realización, la inmunoterapia para el cáncer es IL-2 (proleucina) . En una realización la inmunoterapia para el cáncer es un anticuerpo antagonista que se une al CTLA-4 humano (por ejemplo, ipilimumab) .
Un aspecto adicional de la invención es la terapia combinada de un anticuerpo que se une al CSF-1R humano (incluyendo los anticuerpos que se unen a los dominios D1-D3 y los anticuerpos que se unen a los dominios D4-D5) con una inmunoterapia para el cáncer, en el que la inmunoterapia para el cáncer se selecciona a partir del grupo que incluye : a) Agentes enlazantes de células T seleccionados a partir de anticuerpos antagonistas que se unen a 0X 0, a GITR, a CD27, o a 4-1BB humanas, y anticuerpos biespecíficos para las células T (por ejemplo, anticuerpos CD3-CD19 BiTE™ que se enlazan a las células T, CD3-EpCam, CD3-EGFR) , IL-2 (proleucina) , interferón (IFN) alfa, anticuerpos antagonistas que se unen a CTLA-4 (por ejemplo, ipilimumab) , a PD-1, a PD-Ll, a TIM-3, a BTLA, a VISTA, a LAG-3, o a CD25 humanos, b) Inmunosupresión dirigida: anticuerpos o moléculas pequeñas que tienen como diana la señalización mediante STAT3 o NFkB, el bloqueo de la función de IL-6, IL-17, IL-23, TNFa, c) Vacunas para el cáncer/la potenciación de la función de las células dendríticas : OncoVex (virus oncolíticos que secretan GM-CSF) , un anticuerpo agonista del CD40, ligandos para el receptor de tipo Toll (TLR) , agonista de TLR, proteínas de fusión recombinantes que codifican para AGE-A3, PROSTVAC; O d) Transferencia de células adoptivas: GVAX (línea celular de cáncer prostático que expresa el GM-CSF) , vacuna de células dendríticas, terapia con células T adoptivas, terapia con células T CAR adoptivas .
Otro aspecto adicional de la invención es la terapia combinada de un anticuerpo que se une al CSF-IR humano para la utilización en el tratamiento del cáncer (incluyendo los anticuerpos que se unen a los dominios D1-D3 y los anticuerpos que se unen a los dominios D4-D5) , en el que el anticuerpo para el CSF-IR se administra en combinación con un anticuerpo biespecífico para ANG-2-VEGF (por ejemplo, un anticuerpo para ANG2-VEGF tal y como se describe en las patentes O 2010/040508 o WO 2011/117329, en una realización preferible con el anticuerpo biespecífico para A G-2-VEGF Xmabl, tal y como se describe en la patente WO 2011/117329) . En una realización, el anticuerpo que se une al CSF-IR humano para la utilización en el tratamiento del cáncer se caracteriza por su unión a los dominios D4-D5. En una realización, tal terapia combinada incluye un anticuerpo que se une al CSF-IR humano, que se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 39 y tener el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 40, y el anticuerpo biespecífico para A G-2-VEGF Xmabl, tal y como se describe en la patente WO 2011/117329.
Otro aspecto adicional de la invención es la terapia combinada de un anticuerpo que se une al CSF-1R humano (incluyendo los anticuerpos que se unen a los dominios D1-D3 y los anticuerpos que se unen a los dominios D4-D5) con una inmunoterapia para el cáncer, en el que la inmunoterapia para el cáncer se selecciona a partir del grupo que incluye: vacunas para el cáncer/la potenciación de la función de las células dendríticas : OncoVex (virus oncolíticos que secretan GM-CSF) , un anticuerpo agonista del CD40, ligandos para el receptor de tipo Toll (TLR) , agonista de TLR, proteínas de fusión recombinantes que codifican para MAGE-A3, PROSTVAC .
Una realización preferible de la invención es la terapia combinada de un anticuerpo que se une al CSF-1R humano (incluyendo anticuerpos que se unen a los dominios D1-D3 y anticuerpos que se unen a los dominios D4-D5, preferiblemente anticuerpos que se unen a los dominios D4-D5, tal y como se describen aquí) con una inmunoterapia para el cáncer, en el que la inmunoterapia para el cáncer es un anticuerpo agonista del CD40. Los anticuerpos para el CSF-IR que se unen a los dominios D1-D3 del CSF-IR humano que se describen, por ejemplo, en las patentes WO 2009/026303 y WO 2009/112245 hacen referencia a ciertos anticuerpos anti-CSF-lR que se unen al CSF-IR en los primeros tres subdominios (D1-D3) del dominio extracelular (CSF-1R-ECD) . La patente WO 2011/123381 (Al) hace referencia a anticuerpos contra el CSF-IR. Y Sherr, C.J., et al., Blood 73 (1989) 1786-1793 (habitualmente, estos anticuerpos se caracterizan por inhibir la proliferación y/o señalización mediante el CSF-IR dependiente de ligando pero no mediante el CSF-IR independiente del ligando) .
Los anticuerpos para el CSF-IR que se unen a los dominios D4-D5 del CSF-IR humano se describen, por ejemplo, en la presente invención, en la patente PCT/EP2012/075241 y en Sherr, C.J., et al., Blood 73 (1989) 1786-1793 (habitualmente, estos anticuerpos se caracterizan por inhibir la proliferación y/o señalización mediante el CSF-IR dependiente de ligando y mediante el CSF-IR independiente del ligando) .
Así, un aspecto de la invención también incluye un anticuerpo que se une al CSF-IR humano, para la utilización en el tratamiento del cáncer, en el que el anticuerpo anti-CSF-1R se administra en combinación con un agente quimioterapéutico, radiación, y/o inmunoterapia para el cáncer. En una realización, la inmunoterapia para el cáncer se selecciona a partir del grupo que incluye: a) agentes enlazantes de células T seleccionados a partir de anticuerpos agonistas, a GITR, a CD27, o a 4-1BB, y anticuerpos biespecífieos para células T (por ejemplo, anticuerpos CD3-CD19 BiTE™ que se enlazan a las células T, CD3-EpCam, CD3-EGFR) , IL-2 (proleucina) , interferón (IFN) alfa, anticuerpos antagonistas que se unen a CTLA-4 (por ejemplo, ipilimumab) , a PD-1, a PD-L1, a TIM-3, a BTLA, a VISTA, a LAG-3 , o a CD25 humanos, b) inmunosupresión dirigida: anticuerpos o moléculas pequeñas que tienen como diana la señalización mediante STAT3 o NFkB, el bloqueo de la función de IL-6, IL-17, IL-23, TNFa, c) vacunas para el cáncer/la potenciación de la función de las células dendríticas: OncoVex (virus oncolíticos que secretan GM-CSF) , un anticuerpo agonista del CD40 (como se describe, por ejemplo, en Beatty et al., Science 331 (2011) 1612-1616, R. H. Vonderheide et al., J Clin Oncol 25, (2007); Khalil, M, et al., Update Cáncer Ther. 1 de junio de 2007; 2(2): 61-65, los ejemplos en los ensayos clínicos son, por ejemplo, CP-870.893 y SGN-40 (Khalil, M, et al, Update Cáncer Ther. 1 de junio de 2007; 2(2): 61-65; Se describe un mAb FGK45 IgG2a murino anti-murino agonista del CD40 como modelo de anticuerpo en S. P. Schoenberger, et al, Nature 393, 480 (1998)), ligandos para el receptor de tipo Toll (TLR) , agonista de TLR, proteínas de fusión recombinantes que codifican para MAGE-A3, PROSTVAC; o d) transferencia de células adoptivas: GVAX (línea celular de cáncer prostático que expresa el GM-CSF) , vacuna de células dendríticas, terapia con células T adoptivas, terapia con células T CAR adoptivas. En una realización la inmunoterapia para el cáncer se selecciona a partir de agentes enlazantes de células T seleccionados a partir de IL-2 (proleucina) , y anticuerpos antagonistas que se unen al CTLA-4 humano (por ejemplo, ipilimumab) . En una realización, la inmunoterapia para el cáncer es IL-2 (proleucina) . En una realización, la inmunoterapia para el cáncer es un anticuerpo antagonista que se une al CTLA-4 humano (por ejemplo, ipilimumab) .
En una realización, la inmunoterapia para el cáncer, que puede administrarse con un anticuerpo anti-CSF-lR, incluye, pero no se limita a, terapias dirigidas. Algunos ejemplos de terapias dirigidas incluyen, pero no se limitan a, la utilización de anticuerpos terapéuticos. Algunos anticuerpos terapéuticos incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos murinos, quiméricos mu ino-humanos , injertados a CDR, humanizados y completamente humanos, y anticuerpos sintéticos, incluyendo, pero sin limitarse a, los que se seleccionan mediante el cribado de bibliotecas de anticuerpos . Algunos anticuerpos ejemplares incluyen, pero no se limitan a, los que se unen a las proteínas de superficie celular Her2 , CDC20, CDC33, glicoproteínas de tipo mucina, y el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) presente en las células tumorales, y de manera opcional inducen un efecto citostático y/o citotóxico sobre las células tumorales que presentan estas proteínas. Algunos anticuerpos ejemplares también incluyen HERCEPTIN (trastuzumab) , que puede utilizarse en el tratamiento del cáncer de mama y otras formas de cáncer, y RITUXAN (rituximab) , ZEVAL1N (ibritumomab tiuxetano) , GLEEVEC (imatinib mesilato) , y LYMPHOCIDE (epratuzumab) , que pueden utilizarse para tratar el linfoma no Hodgkin y otros tipos de cáncer. Ciertos anticuerpos ejemplares también incluyen ERBITUX (cetuximab) (EMC-C225) ; ertinolib (Iressa) ,- BEXXAR(TM) (yodo 131 tositumomab) ; inhibidores del KDR (receptor del dominio quinasa) ; antagonistas y anticuerpos anti-VEGF (por ejemplo, Avastin (bevacizumab) y VEGAF-TRAP) ; anticuerpos anti receptor del VEGF y regiones enlazantes de antígeno; anticuerpos anti-Ang- 1 y Ang-2 y regiones enlazantes de antígeno; anticuerpos biespecíficos para Ang-2-VEGF (tal y como se describe, por ejemplo, en las patentes WO 2010/040508 o WO 2011/117329), anticuerpos para Tie-2 y otros receptores Ang-1 y Ang-2 ; ligandos para Tie-2; anticuerpos contra los inhibidores de la quinasa de Tie-2; inhibidores de Hif-la, y Campath (TM) (Alemtuzumab) . En ciertas realizaciones, los agentes de la terapia contra el cáncer son polipéptidos que, selectivamente, inducen apoptosis en las células tumores, incluyendo, pero sin limitarse a, el polipéptido relacionado con el TNF TRAIL.
Los inhibidores específicos de otras quinasas también pueden utilizarse en combinación con el anticuerpo para el CSF-1R, incluyendo, pero sin limitarse a, inhibidores de la vía MAPK (por ejemplo, inhibidores de ERK, JNK y p38) , inhibidores de PBquinasa/AKT e inhibidores de Pim. Otros inhibidores incluyen inhibidores de Hsp90, inhibidores del proteosoma (por ejemplo, Velcade) e inhibidores con múltiples mecanismos de acción, tales como el Trisenox.
En una realización, la inmunoterapia para el cáncer incluye uno o más agentes anti-angiogénicos que disminuyen la angiogénesis . Algunos de estos agentes incluyen, pero no se limitan a, antagonistas de la IL-8; Campath, B-FGF; antagonistas del FGF; antagonistas de Tek (Cerretti et al., publicación de EE.UU. N° 2003/0162712; Cerretti et al., patente de EE.UU. N° 6.413.932, y Cerretti et al., patente de EE.UU. N° 6.521.424, cada uno de los cuales se incorpora aquí como referencia a todos los efectos) ; agentes anti-TWEAK (que incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos y regiones enlazantes de antígeno) ; antagonistas del receptor soluble de TWEAK (Wiley, patente de EE.UU N° 6.727.225); un dominio distintegrina ADAM para antagonizar la unión de la integrina a sus ligandos (Fanslow et al., publicación de EE.UU. N° 2002/0042368); anticuerpos anti-receptor de efrina y anti-efrina; regiones enlazantes de antígeno, o antagonistas (patentes de EE.UU. N° 5.981.245; 5.728.813; 5.969.110; 6.596.852; 6.232.447; 6.057.124 y los miembros de la misma familia de estas patentes) ; agentes anti-VEGF (por ejemplo, anticuerpos o regiones enlazantes de antígeno que se unen específicamente al VEGF, o receptores solubles para el VEGF o un ligando que se unen a las regiones de unión del mismo) tales como Avastin (bevacizumab) o VEGF-TRAP y agentes antireceptor del VEGF (por ejemplo, anticuerpos o regiones enlazantes de antígeno que se unen específicamente a éste) , agentes inhibidores del EGFR (por ejemplo, anticuerpos o regiones enlazantes de antígeno que ae unen específicamente a éste) tales como panitumumab, IRESSA (gefitinib) , TARCEVA (erlotinib) , agentes anti-Ang-1 y anti-Ang-2 (por ejemplo, anticuerpos o regiones enlazantes de antígeno que se unen específicamente a estos o a sus receptores, por ejemplo, Tie-2/TEK) , y agentes inhibidores de la quinasa anti-Tie-2 (por ejemplo, anticuerpos o regiones enlazantes de antigeno que se unen e inhiben específicamente la actividad de los factores de crecimiento, tales como antagonistas del factor de crecimiento del hepatocito (HGF, también conocido como factor Scatter) , y anticuerpos o regiones enlazantes de antígeno que se unen específicamente a su receptor "c-raet" ; antagonistas anti-PDGF-BB; anticuerpos y regiones enlazantes de antígeno de los ligandos de PDGF-BB; e inhibidores de la quinasa PDGFR.
Otros agentes anti-angiogénicos que pueden utilizarse en combinación con una proteína enlazante de antígeno incluyen agentes tales como los inhibidores de la MMP-2 (metaloproteinasa de matriz 2), los inhibidores de la M P-9 (metaloproteinasa de matriz 9) , y los inhibidores de la COX-II (ciclooxigenasa II) . Algunos ejemplos de inhibidores de la COX-II útiles incluyen CELEBREX (celecoxib) , valdecoxib, y rofecoxib. En ciertas realizaciones, los agentes para la terapia contra el cáncer son inhibidores de la angiogénesis . Algunos de tales inhibidores incluyen, pero no se limitan a, SD-7784 (Pfizer, EE.UU.); cilengitide (Merck KGaA, Alemania, EP O 770 622) pegaptanib octasódico, (Gilead Sciences, EE.UU); alfastatina, (BioActa, RU) ; M-PGA, (Celgene, EE.UU., patente de EE.UU. N° 5.712.291); ilomastat, (Arriva, EE.UU., patente de EE.UU. N° 5.892.112); semaxanib, (Pfizer, EE.UU, patente de EE.UU. N° 5.792.783); vatalanib, (Novartis, Suiza) ,-2-metoxiestradiol, (EntreMed, EE.UU); TLC ELL-12, (Elan, Irlanda) ; acetato de anecortave, (Alcon, EE.UU) ; Mab alfa-D148, (Amgen, EE.UU.); CEP-7055, (Cephalon, EE.UU.); Mab anti-Vn, (Crucell, Holanda) DACrantiangiogenic, (ConjuChem, Canadá); Angiocidin, (Inciné farmacológica, EE.UU.); M-2550, (Kyowa Hakko, Japón); SU-0879, (Pfizer, EE.UU.); CGP-79787, (Novartis, Suiza, EP 0 970 070) ; tecnología ARGENT, (Ariad, EE.UU.); YIGSR-Stealth, (Johnson & Johnson, EE.UU.); fragmento de fibrinógeno-E, (BioActa, RU) ; inhibidor de la angiogénesis , (Trigen, RU) ; TBC-1635, (Encysive Pharmaceticals, EE.UU.); SC-236, (Pfizer, EE.UU.); ABT-567, (Abbott, EE.UU.); Metastatina, (EntreMed, EE.UU.); inhibidor de la angiogénesis, (Tripep, Suecia) ; maspin, (Sosei, Japón) ; 2-metoxiestradiol, (Oncology Sciences Corporation, EE.UU.); ER-68203-00, (IVAX, EE.UU.); Benefin, (Lañe Labs, EE.UU.); Tz-93, (Tsumura, Japón); TAN-1120, (Takeda, Japón); FR-111142, (Fujisawa, Japón, JP 02233610); factor plaquetario 4, (RepliGen, EE.UU., EP 407122); antagonista del factor de crecimiento endotelial vascular, (Borean, Dinamarca) ; terapia para el cáncer, (Universidad de Carolina del Sur, EE.UU.); bevacizumab (pINN) , (Genentech, EE.UU.); inhibidores de la angiogénesis, (SUGEN, EE.UU.); XL 784, (Exelixis, EE.UU.); XL 647, (Exelixis, EE.UU.); MAb, alfa5beta3 integrina, segunda generación, (Applied Molecular Evolution, EE.UU. y Medlmmune, EE.UU.); terapia génica, retinopatía, (Oxford BioMedica, RU) ,-hidrocloruro de enzastaurina (USAN), (Lilly, EE.UU.); CEP 7055, (Cephalon, EE.UU. y Sanofi-Synthelabo, Francia) ; BC 1, (Genoa Institute of Cáncer Research, Italia) ; inhibidores de la angiogénesis, (Alchemia, Australia) ; antagonistas del VEGF, (Regeneron, EE.UU.); rBPI 21 y derivados de la BPI antiangiogénicos, (XOMA, EE.UU.); PI 88, (Progen, Australia) ,-cilengitide (pINN) , (Merck KGaA, Alemania; Munich Technical University, Alemania, Scripps Clinic and Research Foundation, EE.UU.); cetuximab (INN) , (Aventis, Francia); AVE 8062, (Ajinomoto, Japón) AS 1404, (Cáncer Research Laboratory, Nueva Zelanda); SG 292, (Telios, EE.UU.); Endostatina, (Boston Childrens Hospital, EE.UU.); ATN 161, (Attenuon, EE.UU.); ANGIOSTATINA, (Boston Childrens Hospital, EE.UU.); 2-metoxiestradiol, (Boston Childrens Hospital, EE.UU.); ZD 6474, (AstraZeneca, RU) ; ZD 6126, (Angiogene Pharmaceuticals , RU) ; PPI 2458, (Praecis, EE.UU.); AZD 9935, (AstraZeneca, RU) ; AZD 2171, (AstraZeneca, RU) ; vatalanib (pI N) , (Novartis, Suiza y Schering AG, Alemania) ; inhibidores de la vía del factor tisular, (EntreMed, EE.UU.); pegaptanib (Pinn) , (Gilead Sciences, EE.UU.); xantorrizol, (Yonsei University, Corea del Sur); vacuna, en base génica, VEGF-2, (Scripps Clinic and Research Foundation, EE.UU.); SPV5.2 , (Supratek, Canadá); SDX 103, (Universidad de California en San Diego, EE.UU.); PX 478, (ProIX, EE.UU.); METASTATINA, (EntreMed, EE.UU.); troponina 1, (Universidad de Harvard, EE.UU.); SU 6668, (SUGEN, EE.UU.); OXI 4503, (OXiGENE, EE.UU.); o-guanidinas, (Dimensional Pharmaceuticals , EE.UU.); motuporamina C, (Universidad de British Columbia, Canadá) ,-CDP 791, (Celltech Group, RU) ; atiprimod (PINN) , (GlaxoSmithKline, RU) ; E 7820, (Eisai, Japón); CYC 381, (Universidad de Harvard, EE.UU.); AE 941, (Aeterna, Canadá); vacuna, angiogénesis, (EntreMed, EE.UU.); inhibidor del activador del plasminógeno o uroquinasa, (Dendreon, EE.UU. ); oglufanide ( INN) , (Melmotte, EE.UU.); inhibidores del HIF-I alfa, (Xenova, RU) ; CEP 5214, (Cephalon, EE.UU.); BAY RES 2622, (Bayer, Alemania); Angiocidina, (Inciné, EE.UU.); A6, (Angstrom, EE.UU.); KR 31372, (Corea Research Institute of Chemical Technology, Corea del Sur) ,- G 2286, (GlaxoSmithKline, RU) ,- EHT 0101, (ExonHit, Francia) ,- CP 868596, (Pfizer, EE.UU.); CP 564959, (OSI, EE.UU.); CP 547632, (Pfizer, EE.UU.); 786034, (GlaxoSmithKline, RU) ; KRN 633, (Kirin Brewery, Japón) ; sistema de liberación de fármacos, intraocular, 2-metoxiestradiol, (EntreMed, EE.UU.); anginex, (Universidad de Maastricht, Holanda, y Universidad de Minnesota, EE.UU.); ABT 510, (Abbott, EE.UU.); ML 993, (Novartis, Suiza); VEGI, (Proteom Tech, EE.UU.); inhibidores del factor de necrosis tumoral alfa, (National Institute on Aging, EE.UU.); SU 11248, (Pfizer, EE.UU. y SUGEN EE.UU.); ABT 518, (Abbott, EE.UU.); YH1 6, (Yantai Rongchang, China); S-3APG, (Boston Childrens Hospital, EE.UU. y EntreMed, EE.UU.); MAb, KDR, (ImClone Systems, EE.UU.); MAb, alfa5 betal, (Protein Design, EE.UU.); inhibidor de la quinasa de KDR, (Celltech Group, RU, y Johnson & Johnson, EE.UU.); GFB 116, (Universidad del Sur de Florida, EE.UU. y Universidad de Yale, EE.UU.); CS 706, (Sankyo, Japón); profármaco de la combretastatina A4 , (Universidad del Estado de Arizona, EE.UU.); condroitinasa AC, (IBEX, Canadá); BAY RES 2690, (Bayer, Alemania); AGM 1470, (Universidad de Harvard, EE.UU., Takeda, Japón, y TAP, EE.UU.); AG 13925, (Agouron, EE.UU.); Tetratiomolibdato, (Universidad de Michigan, EE.UU.); GCS 100, (Universidad del Estado de ayne, EE.UU.) CV 247, (Ivy Medical, UK) ; CKD 732, (Chong Kun Dang, Corea del Sur); MAb, factor de crecimiento del endotelio vascular, (Xenova, RU) ; irsogladina (I ) , (Nippon Shinyaku, Japón); RG 13577, (Aventis, Francia); WX 360, ( ilex, Alemania); escualamina (pINN) , (Genaera, EE.UU.); RPI 4610, (Sima, EE.UU.); terapia contra el cáncer, (Marinova, Australia) ; inhibidores de la heparanasa, (InSight, Israel) ; KL 3106, (Kolon, Corea del Sur); Honokiol, (Universidad de Emory, EE.UU.); ZK CDK, (Schering AG, Alemania) ; ZK Angio, (Schering AG, Alemania) ; ZK 229561, (Novartis, Suiza, y Schering AG, Alemania) ,- XMP 300, (XOMA, EE.UU.); VGA 1102, (Taisho, Japón); moduladores del receptor del VEGF, (Pharmacopeia, EE.UU.); antagonista de la VE-cadherina-2 , (ImClone Systems, EE.UU.); Vasostatina, (National Institutes of Health, EE.UU.); vacuna, Flk-I, (ImClone Systems, EE.UU.); TZ 93, (Tsumura, Japón); TumStatina, (Beth Israel Hospital, EE.UU.); FLT 1 soluble truncado (receptor del factor de crecimiento endotelial vascular 1), (Merck & Co, EE.UU.); ligandos de Tie-2, (Regeneron, EE.UU.); inhibidor de la trombospondina 1, (Allegheny Health, Education and Research Foundation, EE.UU. ); 2-bencensulfonamida, 4- (5- (4-clorofenil) -3- (trifluorometil) -lH-pirazol-l-il) - ,· Arriva; y C-MeL AVE 8062 (monohidrocloruro de (2S) -2-amino-3-hidroxi-N- [2-metoxi-5- [ (1Z) -2- (3,4, 5-tri-metoxifenil) etenil] fenil] propanamida) ; metelimumab (pI N) (inmunoglobulina G4 , anti- (factor de crecimiento beta-1 transformante humano (cadena 192. gamma.4 CAT monoclonal humana)), disulfuro con el dímero de la cadena 192.kappa CAT monoclonal humana); ligando de Flt3; ligando de CD40; interleucina-2 ; interleucina-12 ; ligando de 4-1BB; anticuerpos anti-4-???; antagonistas del TNF y antagonistas del receptor del TNF incluyendo TNFR/Fc, antagonistas de TWEAK y antagonistas del TWEAK-R incluyendo TWEAK-R/Fe ; TRAIL; antagonistas del VEGF incluyendo anticuerpos anti-VEGF; antagonistas del receptor VEGF (incluyendo VEGF-Rl y VEGF-R2, también conocidos como Fltl y Flkl o KDR) ; agonistas de CD1 48 (también llamado DEP-I, ECRTP, y PTPRJ, véase Takahashi et al., J. Am. Soc. Nephrol . 10 (1999) 2135-1245, incorporados aquí como referencia a todos los efectos) ; inhibidor de la trombospondina 1, e inhibidores de uno o ambos ligandos de Tie-2 o Tie-2 (tales como Ang-2) . También se conocen varios inhibidores de Ang-2 en la materia, incluyendo anticuerpos anti-Ang-2 descritos en la solicitud de patente de EE.UU. publicada N° 2003/0124129 (correspondiente a la solicitud de PCT N° WO 2003/030833), y la patente de EE.UU. N° 6.166.185, el contenido de las cuales se incorpora íntegramente aquí como referencia. Adicionalmente, los pepticuerpos Ang-2 también se conocen en la materia, y pueden encontrarse en, por ejemplo, la solicitud de patente de EE.UU publicada N° 2003/0229023 (correspondiente a la solicitud de PCT N° O 2003/057134) , y la solicitud de patente de EE.UU publicada N° 2003/0236193, los contenidos de las cuales se incorporan aquí en su integridad como referencia a todos los efectos .
Ciertos agentes de terapia quimioterapéutica incluyen, pero no se limitan a: talidomida y análogos de la talidomida (N- (2, 6-dioxo-3-piperidil) ftalimida) ; tecogalán sódico (peptidoglicán polisacárido sulfatado) ; TAN 1120 (S-acetil-V-l-O-tetrahidro-l-l-trihidroxi-l-metoxi-10- [ [octahidro-5-hidroxi-2- (2-hidroxipropil) 4 , 10-dimetilpirano [3,4-d] -1,3,6-dioxazocin-8-il] oxi] -5 , 12-naftacendiona) ; suradista (sal tetrasódica de ácido 7, 7 ' - [carbonilbis [imino (1-metil-lH-pirrol-4 , 2-diil) carbonilimino (l-metil-lH-pirrol-4 , 2-diil) carbonilimino] ] bis-1, 3 -naftalendisulfónico) ; SU 302; SU 301; SU 1498 ((E) -2-ciano-3 - [4-hidroxi-3 , 5-bis (1-metiletil) fenil] - N- (3-fenilpropil) -2-propenamida) ,- SU 1433 (4- (6, 7-dimetil-2-quinoxalinil) -1- , 2-bencendiol) ; ST 1514; SR 25989; Tie-2 soluble; derivados de SERM, Pharmos; semaxanib (pINN) (3- [ (3, 5-dimetil-lH-pirrol-2-il)metilen] -1 , 3 "dihidro- 2H-indol-2-ona) ; S 836; RG 8803; RESTIN; R 440 (3-(l-metil-lH-indol-3-il) -4- (l-metil-6-nitro-lH-indol-3-il) -lH-pirrol-2,5-diona); R 123942 (1- [6- (1, 2 , 4- tiadiazol-5-il) -3- piridazinil] -N- [3- (t-rifluorometil) fenil] -4 -piperidinamina) ; inhibidor de la prolilhidroxilasa; genes de progresión elevada; prinomastato (I ) (ácido (S) -2, 2-dimetil-4- [ [p- (4-piridiloxi) fenil] sulfonil] -3-tiomorfolincarbohidroxámico) ; NV 1030; NM 3 (ácido 8-hidroxi-6-metoxi-alfa-metil-l-oxo-lH-2-benzopiran-3-acetico) ; NF 681; NF 050; MIG; METH 2; METH 1; manassantina B (alfa- [1- [4- [5- [4- [2- (3 , 4-dimetoxifenil) -2-hidroxi-l-metiletoxi] -3-ra-etoxifenil] tetrahidro-3 , 4-dimetil-2-furanil] -2-metoxifenoxi] etil] -1, -3-benzodioxol-5-metanol) ; anticuerpo monoclonal para KDR; anticuerpo monoclonal para la integrina alfa5beta3; LY 290293 (2-amino-4- (3 -piridinil) -4H-nafto [1, 2-b] - piran-3-carbonitrilo) ; KP 0201448; KM 2550; péptidos específicos de integrina; INGN 401; GYKI 66475; GYKI 66462; greenstatina (101-354-plasminógeno (humano)); terapia génica para la artritis reumatoide, el cáncer de próstata, el cáncer ovárico, el glioma, endostatina, cáncer colorrectal, ATF BTPI, genes de antiangiogénesis , inhibidores de la angiogénesis, o angiogénesis; inhibidor de la gelatinasa, FR 111142 (5-metoxi-4- [2-metil-3- (3-metil-2-butenil) oxiranil] -1-oxaspiro [2.5] oct-6-iléster del ácido , 5-dihidroxi-2-hexenoico) ,- forfenimex (PINN) ácido (S) -alfa-amino-3-hidroxi-4- (hidroximetil) bencenacético) ; antagonista de la fibronectina (1-acetil-L-prolil-L-histidil-L-seril-L- cisteinil-L-aspartamida) ; inhibidor del receptor del factor de crecimiento de los fibroblastos; antagonista del factor de crecimiento de los fibroblastos; FCE 27164 (sal hexasódica del ácido 7 , 7 ' - [carbonilbis [imino (l-metil-lH-pirrol- , 2-diil) carbonilimino (l-metil-lH-pirrol-4 , 2-diil) carbonilimino] -] bis-1, 3, 5-naftalentrisulfónico) ; FCE26752 (ácido 8,8'- [carbonilbis [imino (l-metil-lH-pirrol-4 , 2-diil) carbonilimino (l-metil-lH-pirrol-4 , 2-diil) carbonilimino] ] bis-1 , 3 , 6-naftalentrisulfónico) ; polipéptido activador de los monocitos endoteliales II; oligonucleótido antisentido del VEGFR; factores antiangiogénicos y tróficos; agente angiostático ANCHOR; endostatina; proteína angiogénica Del-I; CT 3577; contortrostatina; CM 101; condroitinasa AC; CDP 845; CanStatina; BST 2002; BST 2001; BLS 0597; BIBF 1000; ARRESTIN; apomigrén (1304-1388-colágeno de tipo XV (precursor de la cadena alfa del gen humano del COL15A1) ) ,- angioinhibina; aaATIII; A 36; acetato de 9alfa- fluoromedroxiprogesterona ( (6-alfa) -17- (acetiloxi) -9-fluoro-6-metil-pregn-4-en-3 , 20-diona) ; ácido 2-metil-2-ftalimidino-glutárico (ácido 2- (1,3-dihidro-l-oxo-2H-isoindol-2-il) -2-metilpentanedioico) ; anticuerpo monoclonal BC-I marcado con itrio 90; Semaxanib (3- (4 , 5-dimetilpirrol-2-ilmetilen) indolin-2-ona) (C15 H14 N2 O) ; PI 88 (sulfato de fosfomanopentosa) ; Alvocidib (4H-1-benzopiran-4-ona, 2- (2-clorofenil) -5, 7-dihidroxi-8- (3-hidroxi-l-metil-4-piperidinil) -cis- (-) -) (C2i-H20 Cl N 05) ; E 7820; SU 11248 ( (2-dietilaminoetil) amida del ácido 5- [3-fluoro-2-oxo-l , 2-di idroindol- (3Z) -ilidenemetil] -2 , -dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico) (C22 H27 F N4 02) ; Escualamina (colestan-7 , 24-diol, 3- [ [3- [ (4-aminobutil) aminopropil] amino] - , 24- (sulfato de hidrógeno), (3.beta. , 5.alfa. , 7.alfa. ) -) (C34 H65 N3 O.sub.5 S) ; Eriocromo negro T; AGM 1470 (ácido carbámico, (cloroacetil) - , 5-metoxi-4- [2-metil-3- (3-metil-2-butenil) oxiranil] -1-oxaspiro [2 , 5] oct-6-il-éster, [3R- [3alfa, 4alfa(2R, 3R) , 5beta, 6beta] ] ) (C 19 H28 Cl N 06); AZD 9935; BIBF 1000; AZD 2171; ABT 828; KS-interleucina-2 ; Uteroglobina; A 6; NSC 639366 (fumarato de 1- [3- (dietilamino) -2-hidroxipropilamino] -4-- (oxiran-2-ilmetilamino) antra-quinona) (C24 H29 N3 04. C4 H4 04); ISV 616; proteínas de fusión anti-ED-B; HUI 77; troponina I; anticuerpo monoclonal BC-I; SPV 5.2; ER 68203; CKD 731 ( (3R, 4S, 5S, 6R) -4- [2 (R) -metil-3 (R) -3 (R) - (3-metil-2-butenil) oxiran-2-il] -5-metoxi-l-oxaspiro- [2.5] oct-6-il-éster del ácido 3 - (3 , 4 , 5- trimetoxifenil) -2 (E) -propenoico) (C28 H38 08); IMC-IC1 1; aaATIII; SC 7; CM 101 ; Angiocol; Kringle 5; CKD 732 (ácido 3- [4- [2- (dimetilamino) etoxi] fenil] -2 (E) -propenoico) (C29 H41 N 06) ; U - 995; canstatina SQ 885; CT 2584 (1- [1 1- (dodecilamino) -10-hidroxiun-decil] -3 , 7-dimetilxantina) (C30H55 N5 03); salmosina; EMAP II; TX 1920 (1- (4 -tnetilpiperazino) -2- (2-nitro-lH-l-imidazoil) -1-etanona) (CIO Hl 5 N5 03); inhibidor alfa-v Beta-x; CHER. 11509 (N- (I-Propinil) glicil- [N- (2-naftil) ] glicil- [N- (carbamoilmetil) ] glicin-bis (4-metoxifenil)metilamida) (C36 H37 N5 06) ; BST 2002; BST 2001; B 0829; FR 111142; (3R, 4S, 5S, 6R) -4- [1 (R) , 2 (R) -epoxi-1, 5-dimetil-4 -hexenil] -5-metoxi-l-oxaspiro [2.5] octan-6-il-éster del ácido 4 , 5-dihidroxi-2 (E) -hexenoico (C22 H34 07); e inhibidores de la quinasa, incluyendo, pero sin limitarse a, N- (4-clorofenil) -4- (4-piridinilmetil) -1-ftalacinamina; 4- [4- [ [ [ [4-cloro-3- (trifluorometil) fenil] amino] carbonil] amino] fenoxi] -N-metil-2-piridincarboxamida; N- [2- (dietilamino) etil] -5- [ (5-fluoro-l, -2-dihidro-2-oxo-3H-indol-3-iliden)metil] -2 , 4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxamida; 3- [(4-bromo-2, 6-difluorofenil) metoxi] -5-[[[[4-(l-pirrolidinil) butil] amino] carbonil] amino] -4-isotiazolcarboxamida; N- (4-bromo-2-fluorofenil) -6-metoxi-7- [ (l-metil-4-piperidinil) metoxi] -4 -quinazolinamina; 3- [5, 6,7, 13-tetrahidro-9- [ (1-metiletoxi) metil] -5-oxo-12H-indeno [2 , 1-a] pirrólo [3 , 4-c] carbazol-l-2-il] propiléster de ?,?-dimetilglicina; N- [5- [ [ [5- (1, 1-dimetiletil) -2- oxazolil] metil] tio] -2-tiazolil] -4 -piperidincarboxamida; N- [3-cloro-4- [ (3-fluorofenil) metoxi] fenil] -6- [5- [ [ [2- (metilsulfonil) etil] amino] metil] -2-furanil] -quinazolinamina; 4- [ (4-metil-l-piperacinil)metil] -N- [4-metil-3- [ [4- (3-piridinil) -2-pirimidinil] amino] -fenil] benzamida; N- (3-cloro-4-fluorofenil) -7-metoxi-6- [3- (4-morfolinil) propoxi] -4-quinazolinamina; N- (3- etinilfenil ) -6 , 7 -bis (2 -metoxietoxi) -4 -quinazolinamina;N- (3- ( ( ( (2R) -l-metil-2 -pirrolidinil) metil) -oxi) -5- (trifluorometil) fenil) -2- ( (3- (1, 3-oxazol-5-il) fenil) amino) -3-piridincarboxamida; 2-(((4-fluorofenil) metil) amino) -N- (3- ( ( ( (2R) -l-metil-2-pirrolidinil) metil) oxi) -5- (trifluorometil) fenil) -3-piridincarboxamida; N- [3- (acetidin-3 -ilmetoxi) -5-trifluorometil-fenil] -2- (4-fluoro-bencilamino) -nicotinamida; 6-fluoro-N- (4- (1-metiletil) fenil) -2- ( (4-piridinilmetil) amino) -3-piridincarboxamida; 2- ( (4-piridinilmetil) amino) -N- (3- ( ( (2S-) -2-pirrolidinilmetil) oxi) -5- (trifluorometil) fenil) -3 piridincarboxamida; N- (3- (1, 1-dimetiletil) -1H-pirazol-5-il) -2- ( (4-piridinilmetil) amino) -3-piridincarboxamida; N- (3 , 3-dimetil-2 , 3-dihidro-l-benzofuran-6-il) -2- (- (4 -piridinilmetil) amino) -3-piridincarboxamida; N- (3- ( ( ( (2S) -l-metil-2-pirrolidinil) metil) oxi) -5- (trifluorometil) fenil) -2- ( (4-piridinilmetil) amino) -3- piridincarboxamida; 2- ( (4-piridinilmetil) amino) -N- (3- ( (2- (1-pirrolidinil) etil) oxi) -4- (trifluorometil) fenil) -3-piridincarboxamida; N- (3 , 3 -dimetil-2 , 3 -dihidro-lH-indol-6-il) -2- ( (4-piridinilmetil) amino) -3-piridincarboxamida; N- (4-(pentafluoroetil) -3- ( ( (2S) -2-pirrolidinilmeti-l) oxi) fenil) -2-( (4-piridinilmetil) amino) -3-piridincarboxamida; N- (3- ( (3-acetidinilmetil) oxi) -5- (trifluorometil) fenil) -2- { (4-piridinil-metil) mino) -3-piridincarboxamida; N- (3- (4-piperidiniloxi) -5- (trifluorometil) fenil) -2- ( (2- (3-piridinil) etil) amino) -3-piridincarboxamida; N- (4 , 4-dimetil-1,2,3, 4 -tetrahidroisoquinolin-7-il) -2- (lH-indazol-6-ilamino) -nicotinamida; 2- (lH-indazol-6-ilamino) -N- [3- (1-metilpirrolidin-2-ilmetoxi) -5-trifluorometil-fenil] -nicotinamida; N- [1- (2-dimetilamino-acetil) -3 , 3-dimetil-2 , 3-dihidro-lH-indol-6-il] -2- (lH-indazol-6-ilamino) -nicotinamida; 2- (lH-indazol-6-ilamino) -N- [3- (pirrolidin-2-ilmetoxi) -5-trifluoro-metil-fenil] -nicotinamida; N- (I-acetil-S^-dimetil-AS-dihidro-lH-indol-6-il) -2- (lH-indazol-6-ilamino) -nicotinamida; N- (4 , -dimetil-l-oxo-l, 2 , 3 , 4 -tetrahidro-isoquinolin-7-il) -2- (lH-indazol-6-ilamino) -nicotinamida; N-[4- (terbutil) -3- (3-piperidilpropil) fenil] [2- (lH-indazol-6-ilamino) (3- piridil) ] carboxamida; N- [5- (terbutil) isoxazol-3-il] [2- (lH-indazol-6-ilamino) (3-piridil) ] carboxamida; y N- [4- (terbutil) fenil] [2- (lH-indazol-6-ilamino) (3-piridil) ] carboxamida, y los inhibidores de la quinasa descritos en las patentes de EE.UU. N° 6.258.812; 6.235.764; 6.630.500; 6.515.004; 6.713.485; 5.521.184; 5.770.599; 5.747.498; 5.990.141; la publicación de EE.UU. N° U.S. 2003/0105091; y las publicaciones del Tratado de Cooperación de Patentes N° WO 01/37820; WO 01/32651; WO 02/68406; WO 02/66470; WO 02/55501; WO 04/05279; WO 04/07481; WO 04/07458; WO 04/09784; WO 02/59110; WO 99/45009; WO 98/35958; WO 00/59509; WO 99/61422; WO 00/12089; y WO 00/02871, cada una de las cuales se incorporan aquí como referencia a todos los efectos .
En una realización, la inmunoterapia para el cáncer, que puede administrarse con un anticuerpo anti-CSF-lR, incluye, pero no se limita a, un inhibidor de un factor de crecimiento. Algunos ejemplos de tales agentes, incluyen, pero no se limitan a, agentes que pueden inhibir las respuestas del EGF-R (receptor del factor de crecimiento epidérmico) , tales como anticuerpos para el EGF-R, anticuerpos para el EGF, y moléculas que son inhibidoras del EGF-R; inhibidores del VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular) , tales como receptores del VEGF y moléculas que pueden inhibir el VEGF; e inhibidores del receptor erbB2, tales como moléculas orgánicas o anticuerpos que se unen al receptor erbB2, por ejemplo, HERCEPTIN (trastuzumab) (Genentech, Inc.). Los inhibidores del EGF-R se describen, por ejemplo, en la patente de EE.UU. N° 5.747.498, WO 98/14451, O 95/19970, y WO 98/02434.
En una realización de la invención, además del anticuerpo anti-CSF-lR, se puede utilizar radiación y/o un radiof rmaco . La fuente de la radiación puede ser externa o interna al paciente tratado. Cuando la fuente es externa al paciente, la terapia se conoce como terapia con un haz de radiación externo (EBRT) . Cuando la fuente de radiación es interna al paciente, el tratamiento se llama braquiterapia (BT) . Se pueden seleccionar átomos radioactivos para su utilización en el contexto de esta invención a partir del grupo que incluye, pero no se limita a, radio, cesio-137, iridio-192, americio-241 , oro-198, cobalto-57, cobre-67, tecnecio-99, yodo-123, yodo-131, e indio-111. También es posible marcar el anticuerpo con tales isótopos radioactivos.
La terapia con radiación es un tratamiento estándar para el control de tumores y/o tumores metastásicos irresecables o inoperables. Se han observado resultados mejorados cuando se combina la terapia con radiación y la quimioterapia. La terapia con radiación se basa en el principio de que la liberación de una alta dosis de radiación en una área diana resultará en la muerte de las células reproductivas, tanto en el tumor como en los tejidos normales El régimen de dosificación de la radiación se define generalmente en términos de dosis de radiación absorbida (Gy) , tiempo y fraccionamiento, y debe definirse cuidadosamente por el oncólogo. La cantidad de radiación que un paciente recibe dependerá de varias consideraciones, pero las dos más importantes son la localización del tumor en relación a otras estructuras críticas u órganos del cuerpo, y la extensión a la que ha llegado el tumor. Un curso habitual de tratamiento para un paciente que recibe terapia con radiación será un esquema de tratamiento de una duración de entre 1 y 6 semanas, con una dosis total de entre 10 y 80 Gy, administrados al paciente en una única fracción diaria de aproximadamente 1,8-2,0 Gy, 5 días por semana. En una realización preferible de esta invención, existe una sinergia cuando se tratan los tumores en pacientes humanos con la combinación de tratamiento de la invención y radiación. En otras palabras, la inhibición del crecimiento del tumor mediante los agentes que se incluyen en la combinación de la invención se potencia cuando se combina con radiación, de manera opcional, con agentes quimioterapéuticos o anticancerosos adicionales. Los parámetros de las terapias de radiación adyuvantes se describen, por ejemplo, en la patente WO 99/60023.
En una realización de la invención, el anticuerpo anti-CSF-1R se caracteriza por unirse al fragmento delD4 del CSF-IR humano (Id. de Sec . N° 65) y al dominio extracelular del CSF-1R humano (Id. de Sec. N° 64) con una proporción de 1:50 o menor.
En una realización de la invención, el anticuerpo se caracteriza por no unirse al fragmento delD4 del CSF-1R humano (Id. de Sec. N° 65).
En una realización de la invención, el anticuerpo se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 7 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 8, b) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 15 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 16; c) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 75 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 76; d) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 83 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 84; o una versión humanizada del mismo.
En una realización de la invención, el anticuerpo se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 7 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 8, b) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 15 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 16; o una versión humanizada del mismo.
En una realización de la invención, el anticuerpo se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 23 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 24, o b) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 31 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 32, o c) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 39 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 40, o d) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec . N° 47 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 48, o e) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 55 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 56.
En una realización de la invención, el anticuerpo se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 1, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 2, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 3, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 4, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 5, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 6, o b) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 9, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 10, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 11, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 12, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 13, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 14, o c) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 17, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 18, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 19, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec . N° 20, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 21, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 22, o d) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 25, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 26, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 27, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 28, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 29, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 30, o e) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 33, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 34, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 35, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 36, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 37, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 38, o f) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 41, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 42, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 43, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N" 44, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 45, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 46, o g) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 49, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 50, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 51, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec . N° 52, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 53, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 54; o h) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 69, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 70, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 71, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 72, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 73, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 74, o i) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 77, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 78, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 79, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 80, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 81, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 82.
En una realización de la invención, el anticuerpo es de la subclase IgGl humana o de la subclase IgG4 humana.
Una realización de la invención es una composición farmacológica que incluye un anticuerpo de acuerdo con la invención.
La invención también incluye la utilización de un anticuerpo de acuerdo con la invención para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad mediada por el CSF-1R.
La invención también incluye la utilización de un anticuerpo de acuerdo con la invención para la elaboración de un medicamento para el tratamiento del cáncer.
La invención también incluye la utilización de un anticuerpo de acuerdo con la invención para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de la pérdida ósea.
La invención también incluye la utilización de un anticuerpo de acuerdo con la invención para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de las metástasis.
La invención también incluye la utilización de un anticuerpo de acuerdo con la invención para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de las enfermedades inflamatorias .
La invención también incluye un anticuerpo de acuerdo con la invención para el tratamiento de una enfermedad mediada por el CSF-1R.
La invención también incluye un anticuerpo de acuerdo con la invención para el tratamiento del cáncer.
La invención también incluye un anticuerpo de acuerdo con la invención para el tratamiento de la pérdida ósea.
La invención también incluye un anticuerpo de acuerdo con la invención para el tratamiento de las metástasis.
La invención también incluye un anticuerpo de acuerdo con la invención para el tratamiento de las enfermedades inflamatorias .
Las terapias combinadas de los anticuerpos descritos aquí muestran beneficios en los pacientes que necesitan una terapia dirigida contra el CSF-IR. Los anticuerpos de acuerdo con la invención muestran una actividad antiproliferativa eficiente contra la proliferación independiente de ligando y la dependiente de ligando, y por lo tanto, son especialmente útiles en el tratamiento del cáncer y las metástasis, en combinación con un agente quimioterapéutico, radiación y/o inmunoterapia para el cáncer.
La invención también proporciona un método para el tratamiento de un paciente que padece de cáncer, incluyendo la administración al paciente diagnosticado de padecer tal enfermedad (y por consiguiente, que necesita tal terapia) de una cantidad efectiva de un anticuerpo de acuerdo con la invención, en combinación con un agente quimioterapéutico, radiación y/o inmunoterapia para el cáncer. El anticuerpo se administra, preferiblemente, en una composición farmacológica.
Sorprendentemente, se ha observado que, mediante la utilización del fragmento delD4 del CSF-IR humano en el que se sustrajo el subdominio D4 del CSF-IR humano-ECD (Id. de Sec. N° 65) , puede seleccionarse el anticuerpos anti-CSF-lR. Estos anticuerpos muestran propiedades valiosas, tal como una excelente inhibición del crecimiento celular dependiente de ligando y, a la misma vez, inhibición del crecimiento celular independiente de ligando de las células NIH 3T3 , infectadas retroviralmente con un vector de expresión para el CSF-1R salvaje de longitud completa (Id. de Sec . N° 62) o el CSF-1R mutante L301S Y969F (Id. de Sec. N° 63), con lo cual, las células recombinantes del CSF-1R mutante pueden formar esferoides independientes del ligando CSF-1. Además, estos anticuerpos inhiben tanto la diferenciación de macrófagos cinomolgos como humanos, dado que inhiben la supervivencia de los monocitos cinomolgos y humanos .
Se pueden seleccionar anticuerpos adicionales que se unen a los dominios D4-D5 (dimerización) mediante el cribado de anticuerpos que se unen al dominio extracelular completo del CSF-1R humano (Id. de Sec. N° 64) (incluyendo los dominios D1-D5) , y no se unen a los dominios D1-D3 (Id. de Sec. N° 66) del dominio extracelular del CSF-1R humano.
Descripción de las figuras Figura la-lb Inhibición del crecimiento de las células tumorales BeWo en cultivo 3D bajo tratamiento con diferentes anticuerpos monoclonales anti-CSF-lR a una concentración de 10pg/ml .
Eje X: viabilidad normalizada mediante unidades de luz relativas (RLU) correspondiente al contenido de ATP de las células (ensayo CellTiterGlo) .
Eje Y: sondas evaluadas: medio mínimo (FBS al 0,5%), IgGl murina (mlgGl, 10pg/ml) , IgG2a murina (mIgG2a, 10pg/ml) , sólo CSF-1, Mab 2F11, Mab 2E10, Mab2H7, MablGlO y SC 2-4A5.
La máxima inhibición del crecimiento inducido por el CSF-1 se observó con los anticuerpos anti-CSF-lR de acuerdo con la invención.
Figura 2a Sensograma Biacore de la unión de diferentes anticuerpos anti-CSF-lR al fragmento delD4 del CSF-IR humano inmovilizado (incluyendo los subdominios extracelulares D1-D3 y D5) (Id. de Sec. N° 65) (eje y: señal de unión en unidades de respuesta (RU) , basal = 0 RU, eje x: tiempo en segundos (s) ) : mientras los anticuerpos Mab 3291 y se 2-4A5 muestran claramente la unión a este fragmento delD4, los anticuerpos de acuerdo con la invención, por ejemplo, Mab 2F11, y Mab 2E10, no se unen al fragmento delD4 del CSF-IR. El anticuerpo anti-CCR5 m<CCR5>Pz03.1C5 de control no se unió al fragmento delD4 del CSF-IR.
Figura 2b Sensograma Biacore de unión de diferentes anticuerpos anti-CSF-lR a el dominio extracelular del CSF-IR humano inmovilizado (CSF-1R-ECD) (incluyendo los subdominios extracelulares D1-D5) (Id. de Sec. N° 64) (eje y: señal de unión en unidades de respuesta (RU) , basal = 0 RU, eje x: tiempo en segundos (s) ) : todos los anticuerpos anti-CSF-lR muestran unión al CSF-1R-ECD. El anticuerpo anti-CCR5 anticuerpo m<CCR5>Pz03.1C5 de control no se unió al CSF-1R-ECD.
Figura 2c Sensograma Biacore de unión de diferentes anticuerpos anti-CSF-lR al fragmento delD4 del CSF-1R humano inmovilizado (incluyendo los subdominios extracelulares D1-D3 y D5) (Id. de Sec. N° 65) (eje y: señal de unión en unidades de respuesta (RU) , basal = 0 RU, eje x: tiempo en segundos (s) ) : Mab 1G10, Mab 2H7 y hMab 2Fll-e7 humanizado no se unió al fragmento delD4 del CSF-1R. El anticuerpo anti-CCR5 m<CCR5>Pz03.1C5 de control tampoco se unió al fragmento delD4 del CSF-1R.
Figura 2d Sensograma Biacore de unión de diferentes anticuerpos anti-CSF-lR al dominio extracelular del CSF-1R humano inmovilizado (CSF-1R-ECD) (incluyendo los subdominios extracelulares D1-D5) (Id. de Sec. N° 64) (eje y: señal de unión en unidades de respuesta (RU) , basal = 0 RU, eje x: tiempo en segundos (s) ) : todos los anticuerpos anti-Mab para el CSF-1R 1G10, Mab 2H7 y hMab 2Fll-e7 humanizado mostraron unión al CSF-1R-ECD. El anticuerpo anti-CCR5 m<CCR5>Pz03.1C5 de control no se unieron al CSF-1R-ECD.
Figura 2e Sensograma Biacore de unión de diferentes anticuerpos anti-CSF-lR al fragmento delD4 del CSF-IR humano inmovilizado (incluyendo los subdominios extracelulares D1-D3 y D5) (Id. de Sec . N° 65) (eje y: señal de unión en unidades de respuesta (RU) , basal = 0 RU, eje x: tiempo en segundos (s)): todos los anticuerpos anti-CSF-lR 1.2.SM, CXIIG6, abl0676 y MAB3291 muestran unión al fragmento delD4 del CSF-IR. El anticuerpo anti-CCR5 m<CCR5>Pz03.1C5 de control no se unió al fragmento delD4 del CSF- IR.
Figura 2f Sensograma Biacore de unión de diferentes anticuerpos anti-CSF-lR al dominio extracelular del CSF- IR humano inmovilizado (CSF-1R-ECD) (incluyendo los subdominios extracelulares D1-D5) (Id. de Sec. N° 64) (eje y: señal de unión en unidades de respuesta (RU) , basal = 0 RU, eje x: tiempo en segundos (s) ) : todos los anticuerpos anti-CSF-lR 1.2.SM, CXIIG6, abl0676 y MAB3291 muestran unión al CSF-1R-ECD. El anticuerpo anti-CCR5 m<CCR5>Pz03.1C5 de control no se unieron al CSF-1R- ECD.
Figura 3a-3d Niveles del CSF-1 en mono cinomolgo tras la aplicación de diferentes dosis del anticuerpo anti-CSF-lR de acuerdo con la invención.
Figura 4 Eficacia in vivo - inhibición del crecimiento tumoral de los anticuerpos anti-CSF-lR de acuerdo con la invención en el xenoinjerto BT20 del cáncer de mama.
Figura 5a-5b 5a: monocitos humanos diferenciados en macrófagos con cocultivo de GM-CSF o CSF-1 (100ng/ml del ligando) . Tras 6 días de diferenciación se añadió R07155. La viabilidad celular se midió el día 7 del tratamiento con el anticuerpo en un ensayo de viabilidad CTG (CellTiterGlo® Promega) . Cálculo del % de viabilidad celular: señal de RLU de las células tratadas dividido por la señal de RLU de los controles no tratados, sin el anticuerpo, (n =4) 5b: monocitos humanos diferenciados en macrófagos con GM-CSF (MI) o M-CSF (M2) durante 7 días. Fenotipo analizado mediante análisis indirecto de la fluorescencia - tinción con mareaje anti CD163-PE, anti CD80-PE o anti HLA-DR/DQ/DP-Zenon-Alexa647. El número en cada histograma corresponde a la proporción media de intensidad de la fluorescencia (MRFI) ; proporción calculada entre la intensidad de fluorescencia media (MFI) de las células marcadas con el anticuerpo seleccionado (histograma vacío) y el correspondiente isótopo de control (control negativo; histograma rellenado en gris) (media + SD; n = 5 ) Figura 6a-6c La eficacia in vivo de las combinaciones del anticuerpo <CSF-1R murino> en el modelo in vivo del CRC murino MC38.
Descripción detallada de la invención Muchos tumores se caracterizan por un infiltrado celular inmunológico prominente, incluyendo macrófagos. Inicialmente, se pensó que las células inmunológicas eran parte de un mecanismo de defensa contra el tumor, pero los datos recientes apoyan la noción de que varias poblaciones de células inmunológicas, incluyendo macrófagos pueden, de hecho, promover la progresión tumoral . Los macrófagos se caracterizan por su plasticidad. En relación al microambiente de las citoquinas, los macrófagos pueden exhibir los subtipos llamados MI o M2. Los macrófagos M2 están involucrados en la supresión de la inmunidad de los tumores. También juegan un papel importante en las funciones de reparación de tejidos tales como la angiogénesis y el remodelado de tej idos cooptados por el tumor para apoyar el crecimiento. A diferencia de los macrófagos M2 promotores de los tumores, los macrófagos MI exhiben actividad antitumoral mediante la secreción de citoquinas inflamatorias y su participación en la presentación de antígenos y la fagocitosis (Mantovani, A. et al., Curr. Opin. Immunol. 2 (2010) 231-237).
Mediante el cribado de varias moléculas, tales como el factor estimulante de colonias 1 (CSF-1) y la IL-10, las células tumorales son capaces de reclutar y dar forma a los macrofagos hacia el subtipo M2, mientras que las citoquinas tales como el factor estimulante de colonias de granulocitos macrofagos (G -CSF) y el IF -gamma programan los macrofagos hacia el subtipo MI. Mediante la utilización de la inmunohistoquímica, es posible distinguir entre una subpoblación de macrofagos que coexpresa CD68 y CD163, que puede enriquecerse en los macrofagos M2, y un subgrupo que muestra el inmunofenotipo CD68+/MHC 11+ o CD68+/CD80+, que puede incluir los macrofagos MI. La forma celular, el tamaño y la distribución espacial de los macrofagos positivos para CD68 y CD163 es consistente con las hipótesis publicadas sobre el papel promotor de tumores de los macrofagos M2, por ejemplo, dada su localización preferente en el estroma de intersección del tumor y en las áreas vitales del tumor. Por contra, los macrofagos CD68+/MHC de clase 11+ se encuentran ubicuamente. Su papel hipotético en la fagocitosis se refleja mediante agrupaciones de inmunofenotipos CD68+/MHC clase 11+ pero CD163- cerca de las células apoptóticas y las áreas tumorales necróticas .
El subtipo y marcador de expresión de diferentes subpoblaciones de macrofagos está relacionado con su estado funcional. Los macrofagos pueden promocionar la tumorogénesis mediante : a) la potenciación de la angiogénesis mediante la secreción de factores angiogénicos tales como el VEGF o el bFGF, b) la promoción de la formación de metástasis mediante la secreción de metaloproteinasas de matriz (MMP) , factores de crecimiento y factores migratorios que guían las células tumorales hacia el torrente sanguíneo y establecen los nichos metastásicos (Wyckoff, J. et al., Cáncer Res. 67 (2007) 2649-2656) , c) su papel en la construcción de un medio inmunosupresor mediante la secreción de citoquinas inmunosupresoras tales como IL-4, IL-13, IL-lra e IL-10, que a su vez regulan la función de las células reguladoras T. Por el contrario, las células T positivas CD4 han demostrado que potencian la actividad de los macrofagos promotores de tumores en los modelos preclínicos (Mantovani, A. et al., Eur J. Cáncer 40 (2004) 1660-1667; DeNardo, D. et al., Cáncer Cell 16 (2009) 91-102) .
De acuerdo con esto, en varios tipos de cáncer (por ejemplo, de mama, de ovario, linfoma de Hodgkin) la prevalencia de macrófagos asociados a tumores del subtipo M2 (TAM) se ha asociado a un pronóstico pobre (Bingle, L. et al., J. Pathol. 3 (2002) 254-265; Orre, M. , y Rogers, P.A., Gynecol. Oncol. 1 (1999) 47-50; Steidl, C. et al., N. Engl . J. Med. 10 (2010) 875-885) . Los datos recientes muestran una correlación entre el infiltrado de macrófagos positivos para CD163 y el grado tumoral (Kawamura, K. et al., Pathol. Int. 59 (2009) 300-305) . Los TAM aislados de los tumores de los pacientes tienen un fenotipo tolerante y no fueron citotóxicos para las células tumorales (Mantovani, A. et al., Eur. J. Cáncer 40 (2004) 1660-1667) . No obstante, la infiltración de TAM en presencia de células T citotóxicas se correlaciona con supervivencia mejorada en el cáncer pulmonar de célula no pequeña y, por consiguiente, refleja un infiltrado más prominente de macrófagos MI en este tipo de tumor (Kawai, O. et al., Cáncer 6 (2008) 1387-1395).
Recientemente, se mostró que la llamada firma inmunológica, que incluye un alto número de macrófagos y células T CD4 positivas, pero un número bajo de células T citotóxicas CD8 positivas, se correlaciona con una supervivencia global reducida (OS) en los pacientes con cáncer de mama y representa un factor pronóstico independiente (DeNardo, D. et al., cáncer Discovery 1 (2011) 54-67) .
En consonancia con el papel del CSF-1 en la dirección de la función protumorogénica de los macrófagos M2 , la expresión elevada del CSF-1 en los sarcomas raros o en tumores del tejido conectivo localmente agresivos, tales como la sinovitis vellonodular pigmentada (PVNS) y el tumor de célula gigante teñosinovial (TGCT) , debido en parte a una translocación del gen del CSF-1, lleva al cúmulo de monocitos y macrófagos que expresan el receptor para el CSF-1, el receptor del factor estimulante de colonias 1 (CSF-1R) , formando así la mayoría de la masa tumoral (West, R.B. et al., Proc. Nati. Acad. Sci. EE.UU. 3 (2006) 690-695). Subsiguientemente, estos tumores se utilizaron para definir una firma de macrófagos dependientes del CSF-1 mediante el análisis del perfil de la expresión génica. En los tumores de los pacientes con cáncer de mama y leiomiosarcoma, esta firma génica de respuesta al CSF-1 predice un pronóstico pobre (Espinosa, I. et al., Am. J. Pathol . 6 (2009) 2347-2356; Beck, A. et al., Clin. Cáncer Res. 3 (2009) 778-787).
El CSF-1R pertenece a la subfamilia de clase III del receptor tirosina quinasa y se codifica por el protooncogén c-fms. La unión del CSF-1 o la IL-34 induce la dimerización del receptor, seguida de la autofosforilación y la activación de las cascadas de señalización. La activación del CSF-1R regula la supervivencia, proliferación y diferenciación de monocitos y macrófagos (Xiong, Y. et al., J. Biol. Chem. 286 (2011) 952-960) .
Se ha observado que, además de en las células de la línea monicítica y los osteoclastos , que derivan del mismo precursor hematopoyético que los macrófagos, el CSF-lR/c-fms también se expresan en varios cánceres epiteliales humanos tales como el cáncer ovárico y el cáncer de mama, y en el leiomiosarcoma y la TGCT/PVNS, aunque a niveles de expresión menores en comparación con los macrófagos. Tal como con en el TGCT/la PVNS, los niveles elevados de CSF-1 (el ligando del CSF-1R) en el suero así como en la ascitis de las pacientes con cáncer ovárico, se ha correlacionado con un peor pronóstico (Scholl, S. et al . , Br. J. Cáncer 62 (1994) 342-346; Price, F. et al., Am. J. Obstet . Gynecol. 168 (1993) 520-527) . Además, una forma mutante constitutivamente activa del CSF IR es capaz de transformar las células NIH3T3, y esta es una de las propiedades de un oncogén (Chambers, S., Future Oncol 5 (2009) 1429-1440) .
Los modelos preclínicos proporcionan una validación del CSF-IR como diana oncológica. El bloqueo de la actividad del CSF-1, así como del CSF- IR resulta en un reclutamiento reducido de los TAM. La quimioterapia resultó en una expresión aumentada del CSF-1 en las células tumorales, que lleva a un reclutamiento potenciado de los TAM. El bloqueo del CSF-1R en combinación con paclitaxel resultó en la activación de las células T citotóxicas CD8 positivas, lo que llevó a un crecimiento tumoral y una carga metastática reducida en un modelo de cáncer de mama transgénico espontáneo (DeNardo, D. et al., Cáncer Discovery 1 (2011) 54-67) .
Los anticuerpos anti-CSF-lR descritos en la invención se unen al los dominios extracelulares proximales de la membrana D4 y D5, que constituyen la interfaz de dimerización del receptor. Estos bloquean la activación del receptor mediada por CSF-1, IL-34 así como la independiente de ligando, dando como resultado la inducción de la apoptosis de los macrófagos de tipo M2 diferenciados in vitro en presencia del CSF-1 mientras se preservan los macrófagos diferenciados por el GM-CSF de tipo MI . En los tej idos humanos del cáncer de mama se localizan simultáneamente los macrófagos M2 (CD68+/CD163+) y los macrófagos que expresan el CSF-1R. En el mono cinomolgo, el tratamiento de 13 semanas con hMab 2Fll-e7 redujo los macrófagos positivos para CD163 en el hígado y el colon pero no los macrófagos del pulmón.
Pese a la introducción de varios agentes nuevos, el manejo clínico de muchos tumores sólidos avanzados sigue siendo difícil. Los avances en el entendimiento de la biología molecular del cáncer han estimulado la búsqueda de más terapias dirigidas con la intención de mejorar los resultados .
El CSF-IR es una proteína codificada por el gen del CSF-IR. Ésta controla la producción, la diferenciación, y la función de macrófagos M2, que a su vez ayudan al crecimiento tumoral, a la formación de metástasis y a la secreción de citoquinas inmunosupresoras, lo que lleva a un peor pronóstico para los pacientes. Además, se ha observado que la presencia de macrófagos positivos para el CSF-IR en varios cánceres humanos (tales como el carcinoma ovárico y de mama) se correlaciona, no solo con una densidad vascular aumentada, sino que también lo hace con unos peores resultados clínicos. Los inhibidores del CSF-IR, que inhiben selectivamente a los TAM de tipo M2, han demostrado poseer actividad en los modelos preclínicos (DeNardo, D. et al., Cáncer Discovery 1 (2011) 54-67; Lin, E. et al., J. Exp. Med. 193 (2001) 727-740) . El bloqueo de la actividad del CSF- IR resulta en un reclutamiento reducido de los TAM y, en combinación con la quimioterapia, una acción sinérgica resulta en un crecimiento tumoral y una carga tumoral reducidos. Los datos recientes muestran que en los paciente con PVNS y TGCT se detecta una sobrexpresión del CSF-1 que, en parte está mediada por una translocación del gen del CSF-1R (West, R.B. et al., Proc. Nati. Acad. Sci. EE.UU. 3 (2006) 690-695). En el cáncer de mama, la presencia de una firma génica de respuesta al CSF-1 predice el riesgo de recurrencias y de metástasis (Beck, A. et al., Clin. Cáncer Res. 3 (2009) 778-787).
En base a la eficacia del agente único tumoral de los anticuerpos descritos en la invención, parece razonable evaluar la hipótesis de que el bloqueo de los macrófagos asociados a tumores y su bioactividad protumoral en combinación con los taxanos (como por ejemplo, paclitaxel (Taxol) , docetaxel (Taxotere) , paclitaxel modificado (por ejemplo, Abraxane y Opaxio) , doxorrubicina, sunitinib (Sutent) , sorafenib (Nexavar) , y otros inhibidores de múltiples quinasas, oxaliplatino, oxaliplatino, cisplatino y carboplatino, etopósido, gemcitabina, y vinblastina. En una realización, el agente quimioterapéutico se selecciona a partir de un grupo que incluye taxanos (como por ejemplo, taxol (paclitaxel) , docetaxel (Taxotere) , paclitaxel modificado (por ejemplo, Abraxane y Opaxio) .
La invención incluye la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-IR humano, que se caracteriza en que el anticuerpo se une al dominio extracelular del CSF-IR humano (Id. de Sec . N° 64) (incluyendo los dominios D1-D5) y no se une a los dominios D1-D3 (Id. de Sec. N° 66) del dominio extracelular del CSF-IR humano.
La invención también incluye la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-IR humano, que se caracteriza en que el anticuerpo se une al fragmento delD4 del CSF-IR humano (incluyendo los subdominios extracelulares D1-D3 y D5) (Id. de Sec. N° 65) y al dominio extracelular del CSF-IR humano (CSF-1R-ECD) (incluyendo los subdominios extracelulares D1-D5) (Id. de Sec. N° 64) con una proporción de 1:50 o menor.
La invención también incluye la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-IR humano, que se caracteriza por incluir como región CDR3 del dominio variable de la cadena pesada una región CDR3 con las Id. de Sec. N° 1, Id. de Sec. N° 9, Id. de Sec. N° 23, Id. de Sec. N° 31, Id. de Sec. N° 39, Id. de Sec. N° 47 o Id. de Sec. N° 55.
La invención también incluye la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-IR humano, que se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 7 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 8, b) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 15 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 16; o una versión humanizada del mismo.
La invención también incluye la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 7 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 8, b) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 15 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 16; c) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 75 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 76; d) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 83 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 84; o una versión humanizada del mismo.
La invención también incluye la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 7 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 8, o una versión humanizada del mismo.
En una realización, la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-IR humano se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 23 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 24, o b) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 31 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 32, o c) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 39 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 40, o d) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 47 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 48, o e) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 55 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 56.
En una realización, la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-IR humano se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec . N° 23 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 24, o b) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 31 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 32, o c) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 39 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 40, o d) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 47 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 48.
En una realización, el anticuerpo de acuerdo con la invención se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec.
N° 23 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 24.
En una realización, la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec.
N° 31 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 32.
En una realización, la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec . N° 39 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 40.
En una realización, la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 47 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 48.
La invención también incluye la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 15 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 16, o una versión humanizada del mismo.
La invención también incluye la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 75 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 76; o una versión humanizada del mismo.
La invención también incluye la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec . N° 83 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 84; o una versión humanizada del mismo.
La invención también incluye la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 1, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 2, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 3, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 4, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 5, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 6, o, b) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N" 9, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 10, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 11, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 12, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 13, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 14, o c) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 17, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 18, y una región CDR1 con el Id. de Sec . N° 19, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 20, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 21, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 22, o d) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 25, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 26, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 27, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 28, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 29, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 30, o e) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 33, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 34, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 35, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 36, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 37, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 38, o f) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 41, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 42, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 43, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 44, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 45, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 46, o g) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec . N° 49, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 50, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 51, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 52, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 53, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 54.
La invención también incluye la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 1, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 2, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 3, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 4, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 5, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 6, o b) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 9, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 10, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 11, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 12, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 13, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 14, o c) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 17, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 18, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 19, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec . N° 20, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 21, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 22, o d) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 25, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 26, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 27, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 28, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 29, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 30, o e) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 33, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 34, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 35, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 36, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 37, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 38, o f) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 41, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 42, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 43, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 44, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 45, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 46, o g) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 49, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 50, y una región CDR1 con el Id. de Sec . N° 51, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 52, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 53, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 54; o h) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 69, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 70, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 71, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 72, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 73, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 74, o i) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 77, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 78, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 79, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 80, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 81, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 82.
En una realización, la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-IR humano se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 69, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 70, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 71, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 72, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 73, y una región CDR1 con el Id. de Sec . N° 74, o b) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 77, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 78, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 79, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 80, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 81, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 82.
En una realización, la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 17, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 18, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 19, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 20, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 21, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 22, o b) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 25, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 26, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 27, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 28, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 29, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 30, o c) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 33, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 34, y una región CDR1 con el Id. de Sec . N° 35, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 36, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 37, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 38, o d) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 41, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 42, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 43, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 44, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 45, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 46, o e) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 49, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 50, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 51, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 52, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 53, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 54.
En una realización, la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-IR humano se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 17, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 18, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 19, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 20, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 21, y una región CDR1 con el Id. de Sec . N° 22, o b) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 25, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 26, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 27, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 28, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 29, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 30, o c) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 33, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 34, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 35, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 36, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 37, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 38, o d) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 41, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 42, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 43, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 44, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 45, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 46.
En una realización, la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 17, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 18, y una región CDR1 con el Id. de Sec . N° 19, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 20, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 21, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 22.
En una realización, la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-IR humano se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 25, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 26, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 27, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 28, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 29, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 30.
En una realización, la terapia ~ combinada con un anticuerpo que se une al CSF-IR humano se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 33, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 34, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 35, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 36, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 37, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 38.
En una realización, la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-IR humano se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec . N° 41, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 42, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 43, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 44, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 45, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 46.
En una realización, el anticuerpo que se une al CSF-IR humano, que se caracteriza en que el anticuerpo se une al fragmento delD4 del CSF-IR humano (Id. de Sec. N° 65) y al ECD del CSF-IR humano (Id. de Sec. N° 64) con una proporción de 1:50 o menor; también se caracteriza por no unirse al fragmento D1-D3 del CSF-IR humano (Id. de Sec. N° 66) .
Otro aspecto de la invención es la selección de pacientes que con probabilidad se pueden beneficiar del tratamiento con un anticuerpo anti-CSF-lR (incluyendo todos los anticuerpos para el CSF-IR que se unen al CSF-IR humano) , administrado solo o en combinación con un agente quimioterapéutico, o una inmunoterapia para el cáncer, o irradiación, (incluyendo todos los anticuerpos para el CSF-IR que se unen al CSF-IR humano) . En una realización, tal selección de pacientes guarda relación con el tratamiento con anticuerpos para el CSF-IR que se unen a los dominios D4-D5 del dominio extracelular del CSF-IR humano. Uno o más de los siguientes biomarcadores son útiles en tal método de selección de un paciente que probablemente responda a tal tratamiento.
Justi icación del análisis de biomarcadores Los biomarcadores tienen el potencial de dar forma a las estrategias diagnósticas e influencian el manejo terapéutico. En el futuro, los biomarcadores podrán promover un enfoque del tipo medicina personalizada, por ejemplo, llevando al agrupamiento de los pacientes en relación a las firmas molecular de sus tumores y a los marcadores en su sangre en vez de por el tipo de cáncer. Estamos concentrando nuestros esfuerzos en identificar biomarcadores predictivos que proporcionen información acerca de la probabilidad de eficacia y seguridad de la terapia.
Habitualmente, se requiere una biopsia tumoral para evaluar la PD y el (los) efecto (s) mecánico (s) de un fármaco en el tumor.
Justificación de la biopsia fresca tumoral previa al tratamiento y durante éste en la evaluación clínica La infiltración y diferenciación de los TAM depende del microambiente respectivo del tumor en las lesiones primarias y las metastásicas . Además, el estado inmunitario respectivo y el tratamiento previo del paciente pueden influenciar en el microambiente del tumor del paciente. Por consiguiente, todos los pacientes se someterán a una biopsia obligatoria previa al tratamiento para definir la infiltración por TAM y los niveles de expresión del CSF-1R básales, pero no se utilizará para determinar la elegibilidad del paciente para el ensayo. Además, las biopsias obligatorias durante el tratamiento permitirán la evaluación de la actividad PD de los anticuerpos para el CSF-1R mediante la comparación de los niveles de CSF-1R, CD68/CD163, CD68/MHC de clase II, CD31 (densidad en los microvasos) , Ki67 y otras células inmunológicas infiltrantes (por ejemplo, células T) antes de la dosis con los niveles de después de ésta. La aspiración con aguja fina (PAAF) no será adecuada para las biopsias tumorales, dado que la distribución de la subpoblación de macrófagos debe evaluarse en el tejido.
Los tejidos tumorales de archivo no pueden sustituir las biopsias frescas, dado que la infiltración y la diferenciación de los macrófagos dependen del microambiente . El microambiente tumoral puede ser variable en el tumor primario debido al tratamiento previo del paciente y también puede estar alterado en las lesiones metastásicas . No obstante, si el tejido tumoral de archivo está disponible, se alenta para que se envíe a Operaciones de Muestras Clínicas (CSO) . Las muestras se utilizarán para una correlación retrospectiva exploratoria de los datos con las biopsias frescas .
Justificación de las biopsias de pieles heridas en la evaluación clínica Las distintas fases de la curación de las heridas requieren muchos procesos (por ejemplo, el reclutamiento de neutrófilos, la infiltración de macrófagos, la angiogénesis (Eming, S.A., et al., Prog. Histochem. Cytochem. 42 (2007) 115-170) ) . Los ensayos que hieren la piel se han utilizado para obtener tejido sustitutivo para determinar los marcadores PD, por ejemplo, en las terapias antiangiogénicas (Zhang, D. et al., Invest. New Drugs 25 (2006) 49-55; Lockhart, A.C. et al., Clin. Cáncer Res. 9 (2003) 586-593). Durante la curación de las heridas, los macrófagos juegan un papel esencial y los cambios fenotípicos de los macrófagos asociados a heridas (WAM) dan cuenta de los diferentes roles en las fases de la reparación de la piel (por ejemplo, fase inflamatoria precoz=actividad fagocítica intensa; fase de remodelamiento del tejido medio: estado inmunorregulador con sobrexpresión de los factores proangiogénicos) (Adamson, R. , Journal of Wound Care 18 (2009) 349-351; Rodero, M.P. et al., Int. J. Clin. Exp. Pathol. 25 (2010) 643-653; Brancato, S.K. y Albina, J.E., Wound Macrophages as Key Regulators of Repair, Origin, Phenotype, and Function, AJP (2011) Vol . 178, No.1).
De hecho, la ausencia de macrófagos resultó en un retraso de la curación de las heridas en los ratones modificados genéticamente (Rodero, M.P. et al., Int. J. Clin. Exp. Pathol . 25 (2010) 643-653). Los experimentos preclínicos mostraron una reducción significativa de macrófagos (F4/80 positivos) en la piel de un modelo murino de xenoinjerto MDA-MB231 tratado con el CSF-IR. No obstante, se han descrito diferencias específicas de especie entre los ratones y los humanos (Daley, J.M. et al., J. Leukoc. Biol. 87 (2009) 1-9).
Dado que los WAM y TAM se originan a partir de las mismas células progenitoras y comparten fenotipos y funciones similares, se podrán utilizar biopsias cutáneas seriadas pre-tratamiento y durante el tratamiento (total de n=4) para analizar los efectos farmacodinámicos del tratamiento con el anticuerpo para el CSF-IR sobre los WAM durante el proceso de curación de las heridas. La correlación de los datos cutáneos con los efectos PD del tratamiento con el anticuerpo para el CSF-IR sobre los TAM en las biopsias frescas del tumor puede incrementar significativamente el conocimiento de la base molecular del f ncionamiento del anticuerpo para el CSF-IR y de cómo responde el tumor.
Además, la evaluación de los macrófagos del tejido cutáneo herido puede sustituir potencialmente las biopsias del tumor durante el tratamiento. Por consiguiente, en ensayos posteriores, la evaluación de los WAM puede servir como tejido sustituto para la evaluación de la eficacia del anticuerpo para el CSF-1R.
Justificación de la medición de los biornarcadores en muestras de sangre total para medir los biomareadores o los marcadores PD Los experimentos preclínicos mostraron que los cambios en, por ejemplo, el CSF-1 circulante, las subpoblaciones de monocitos TRAP5b y los macrófagos tisulares se asocian con la actividad farmacológica de los agentes terapéuticos anti-CSF-1R. Además, los datos de GLP-Tox de los monos cinomolgos tratados con el anticuerpo para el CSF-1R mostraron alteraciones en los biomareadores de la formación ósea (osteocalcina, P1NP) , la actividad osteoclástica (TRAP5b) y la hormona paratoidea, y todos ellos se correlacionan con el metabolismo óseo.
Por consiguiente, estos marcadores y factores inmunoestimuladores o inmunoinhibidores circulantes adicionales, así como, por ejemplo, el CD163 soluble (para monitorizar la activación de monocitos/macrófagos) pueden ser útiles para la monitorización de los cambios farmacodinámicos y para la selección de pacientes que probablemente responderán favorablemente al tratamiento con un anticuerpo anti-CSF-lR.
Estos especímenes tisulares sustitutos podrán utilizarse con fines de investigación para identificar biomarcadores predictores de la respuesta al tratamiento con el anticuerpo para el CSF-1R (en términos de dosis, seguridad y tolerabilidad) y ayudarán a entender mejor la patogénesis, el curso y el resultado del cáncer y de enfermedades relacionadas. Los análisis pueden incluir la determinación de marcadores circulantes asociados a la actividad PD de los anticuerpos para el CSF-1R (por ejemplo, la evaluación de los niveles de citoquinas, de las células inmunológicas circulantes y de la depleción de células efectoras inmunológicas) . Los experimentos preclínicos mostraron que los cambios en, por ejemplo, el CSF-1 circulante, las subpoblaciones de monocitos TRAP5b y los macrófagos tisulares se asocian con la actividad farmacológica. Además, los datos de GLP-Tox de los monos cinomolgos tratados con el anticuerpo para el CSF-1R mostraron alteraciones en los biomarcadores de la formación ósea (osteocalcina, P1NP) , la actividad osteoclástica (TRAP5b) y la hormona paratoidea, y todos ellos se correlacionaron con números reducidos de osteoclastos .
Por consiguiente, estos marcadores y factores inmunoestimuladores o inmunoinhibidores circulantes adicionales pueden ser útiles para la selección de pacientes que responderán favorablemente al tratamiento con un anticuerpo anti-CSF-lR.
Un aspecto de la presente invención es un método para determinar si un sujeto con cáncer es candidato para el régimen de tratamiento contra el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR, donde dicho anticuerpo es el anticuerpo de la presente invención, incluyendo: - la determinación ex vivo o in vitro de los niveles de uno o más de los siguientes marcadores : CSF-IR, CD68/CD163, CD68/MHC de clase II, CD31 (densidad en los microvasos) , y Ki67 y otros marcadores como por ejemplo, inmunoinfiltrantes ; en una muestra del sujeto, donde la muestra se selecciona a partir de un grupo que incluye tejido, sangre, suero, plasma, células tumorales y células tumorales circulantes; y - en el que un cambio en el nivel de uno o más de CSF-IR, CD68/CD163, CD68/MHC de clase II, CD31 (densidad en los microvasos) y Ki67 y otros marcadores, como por ejemplo, inmunoinfiltrantes (por ejemplo, células T CD4- y/o CD8-) , en comparación con los niveles correspondientes a un individuo que no padece de cáncer, es indicativo de que el sujeto es un candidato para el régimen de tratamiento contra el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR.
En una realización, éste método se practica para el régimen de tratamiento contra el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR, en el que el anticuerpo utilizado en dicho régimen es un anticuerpo de acuerdo con la presente invención.
En una realización de este método, el cambio en el nivel de CSF-1R, CD68/CD163, CD68/ HC de clase II, CD31 (densidad en los microvasos) y Ki67 y otros marcadores, como por ejemplo, inmunoinfiltrantes (por ejemplo, células T CD4- y/o CD8) , en comparación con el nivel de un individuo que no padece de cáncer, es un incremento del nivel de uno o más de estos marcadores .
Un aspecto de la presente invención es un método para determinar si un sujeto con cáncer es un candidato para el régimen de tratamiento para el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR, donde dicho anticuerpo es el anticuerpo de la presente invención, incluyendo: - la determinación ex vivo o in vitro de los niveles de uno o más de los siguientes marcadores: CSF-1R, CD68/CD163, CD68/MHC de clase II, CD31 (densidad en los microvasos) , y ??67; en una muestra del sujeto, donde la muestra se selecciona a partir de un grupo que incluye tejido, sangre, suero, plasma, células tumorales y células tumorales circulantes; y - en el que un cambio en el nivel de uno o más de CSF-1R, CD68/CD163, CD68/MHC de clase II, CD31 (densidad en los microvasos) y Ki67, en comparación con los niveles correspondientes a un individuo que no padece de cáncer, es indicativo de que el sujeto es un candidato para el régimen de tratamiento contra el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-1R.
Un aspecto de la presente invención es un método para determinar si un sujeto con cáncer es un candidato para el régimen de tratamiento para el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR, donde dicho anticuerpo es el anticuerpo de la presente invención, incluyendo: - la determinación ex vivo o in vitro de los niveles de uno o más de los siguientes marcadores: CSF-l, Trap5b, SCD163, IL-34; en una muestra del sujeto, donde la muestra se selecciona a partir de un grupo que incluye sangre, suero, plasma, células tumorales (por ejemplo, en forma de una muestra del tejido tumoral) y células tumorales circulantes; Y - en el que un cambio en el nivel de uno o más de CSF-1, Trap5b, sCD163, IL-34, en comparación con los niveles correspondientes a un individuo que no padece de cáncer, es indicativo de que el sujeto es un candidato para el régimen de tratamiento contra el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-1R.
En una realización, éste método se practica para un régimen de tratamiento contra el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR, en el que el anticuerpo utilizado en dicho régimen es un anticuerpo de acuerdo con la presente invención.
En una realización de este método, el cambio en el nivel de CSF-1, Trap5b, SCD163, IL-34, en comparación con el nivel en un individuo que no padece de cáncer, es un cambio en el nivel de uno o más de estos marcadores .
Un aspecto de la presente invención es un método para determinar si un sujeto con cáncer es un candidato para el régimen de tratamiento para el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR, donde dicho anticuerpo es el anticuerpo de la presente invención, incluyendo: - la determinación ex vivo o in vitro de los niveles de uno o más de los siguientes marcadores: CSF-1, Trap5b, SCD163, IL-34; en una muestra del sujeto, donde la muestra se selecciona a partir de un grupo que incluye sangre, suero, plasma, células tumorales y células tumorales circulantes; y - en el que un cambio en el nivel de de CSF-1, Trap5b, SCD163, IL-34, en comparación con los niveles correspondientes a un individuo que no padece de cáncer, es indicativo de que el sujeto es un candidato para el régimen de tratamiento contra el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-1R.
Un aspecto de la presente invención es un método para determinar si un sujeto con cáncer es un candidato para el régimen de tratamiento para el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR, donde dicho anticuerpo es el anticuerpo de la presente invención, incluyendo: - la determinación ex vivo o in vitro de los niveles de uno o más de los siguientes marcadores: SCD163; en una muestra del sujeto, donde la muestra se selecciona a partir de un grupo que incluye sangre, suero, plasma, células tumorales y células tumorales circulantes; y - en el que un cambio en el nivel de de SCD163 en comparación con los niveles correspondientes a un individuo que no padece de cáncer, es indicativo de que el sujeto es un candidato para el régimen de tratamiento contra el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR.
En una realización, este método se practica para un régimen de tratamiento contra el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR, en el que el anticuerpo utilizado en dicho régimen es un anticuerpo de acuerdo con la presente invención.
En una realización de este método, el cambio en el nivel de sCD163, en comparación con el nivel en un individuo que no padece de cáncer, es un aumento del nivel de estos marcadores ün aspecto de la presente invención es un método para determinar si un sujeto con cáncer es un candidato para el régimen de tratamiento para el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR, donde dicho anticuerpo es el anticuerpo de la presente invención, incluyendo: - la determinación ex vivo o in vitro de los niveles de uno o más de los siguientes marcadores: SCD163 ; en una muestra del sujeto, donde la muestra se selecciona a partir de un grupo que incluye sangre, suero, plasma, células tumorales y células tumorales circulantes; y - en el que un cambio en el nivel de de sCD163, en comparación con los niveles correspondientes a un individuo que no padece de cáncer, es indicativo de que el sujeto es un candidato para el régimen de tratamiento contra el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR.
Un aspecto de la presente invención es un método para determinar si un sujeto con cáncer es un candidato para el régimen de tratamiento para el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR, donde dicho anticuerpo es el anticuerpo de la presente invención, incluyendo: - la determinación ex vivo o in vitro de los niveles de uno o más de los siguientes marcadores: IFNy, TNFOÍ, IL-?ß, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, GM-CSF, VEGF, MCP-1, CCL18 , CCL22, MIP-1, galectina 3, ILIRa, TGF alfa; en una muestra del sujeto, donde la muestra se selecciona a partir de un grupo que incluye sangre, suero, plasma, células tumorales y células tumorales circulantes; y - en el que un cambio en el nivel de uno o más de IFNy, TNFa, IL-?ß, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, GM-CSF, VEGF, MCP-1, CCL18, CCL22, MIP-1, galectina 3, ILIRa, TGF alfa, en comparación con los niveles correspondientes a un individuo que no padece de cáncer, es indicativo de que el sujeto es un candidato para el régimen de tratamiento contra el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR.
En una realización, este método se practica para un régimen de tratamiento contra el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR, en el que el anticuerpo utilizado en dicho régimen es un anticuerpo de acuerdo con la presente invención.
En una realización de este método, el cambio en el nivel de IFNy, TNFOÍ, IL-?ß, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, GM-CSF, VEGF, MCP-1, CCL18, CCL22, MIP-1, galectina 3, ILIRa, TGF alfa, en comparación con el nivel en un individuo que no padece de cáncer, es un aumento del nivel de uno o más de estos marcadores .
Un aspecto de la presente invención es un método para determinar si un sujeto con cáncer es un candidato para el régimen de tratamiento para el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR, donde dicho anticuerpo es el anticuerpo de la presente invención, incluyendo: - la determinación ex vivo o in vitro de los niveles de uno o más de los siguientes marcadores: IFNY, TNFOÍ, IL-?ß, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, GM-CSF, VEGF, MCP-1, CCL18, CCL22, MIP-1, galectina 3, ILIRa, TGF alfa; en una muestra del sujeto, donde la muestra se selecciona a partir de un grupo que incluye sangre, suero, plasma, células tumorales y células tumorales circulantes; y - en el que un cambio en el nivel de IFNy, TNFa, IL-?ß, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, GM-CSF, VEGF, MCP-1, CCL18, CCL22, MIP-1, galectina 3, ILIRa, TGF alfa, en comparación con los niveles correspondientes a un individuo que no padece de cáncer, es indicativo de que el sujeto es un candidato para el régimen de tratamiento contra el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR.
El término "anticuerpo" incluye las diferentes formas de anticuerpos, incluyendo, pero sin limitarse a, anticuerpos enteros, fragmentos de anticuerpo, anticuerpos humanos, anticuerpos humanizados, anticuerpos quiméricos, anticuerpos deplecionados para el epítopo de las células T, y otros anticuerpos modificados genéticamente siempre que se mantengan las propiedades características de acuerdo con la invención. Los "fragmentos de anticuerpo" incluyen una porción de un anticuerpo de longitud completa, preferiblemente el dominio variable del mismo, o al menos el lugar de unión al antígeno de éste. Algunos ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluyen diacuerpos, moléculas monocatenarias de anticuerpo, y anticuerpos multiespecificos formados a partir de fragmentos de anticuerpo. Los anticuerpos scFv se describen, por ejemplo, en Houston, J.S., Methods in Enzymol. 203 (1991) 46-88) . Además, los fragmentos de anticuerpo incluyen polipéptidos monocatenarios que tienen las características de un dominio VH que se une al CSF-1R, es decir, que es capaz de unirse a un dominio VL; o de un dominio VL que se une al CSF-1R, es decir, que es capaz de unirse al dominio VH en el sitio de unión al antígeno funcional y, por consiguiente, puede proporcionar la propiedad.
Los términos "anticuerpo monoclonal" o "composición de anticuerpo monoclonal", tal y como se utilizan aquí, hacen referencia a una preparación de moléculas de anticuerpo de una composición de un solo aminoácido.
El término "anticuerpo quimérico" hace referencia a un anticuerpo monoclonal murino que incluye una región variable, es decir, la región de unión, y al menos una porción de una región constante derivada de una fuente o especie distinta, habitualmente preparado mediante técnicas de DNA recombinante Los anticuerpos quiméricos que incluyen una región variable murina y una región constante humana son especialmente preferibles . Tales anticuerpos quiméricos murino/humano son el producto de genes de inmunoglobulinas expresados, incluyendo segmentos de DNA que codifican para las regiones variables de la inmunoglobulina murina y segmentos de DNA que codifican para las regiones constantes de la inmunoglobulina humana. Otras formas de "anticuerpos quiméricos" incluidos en la presente invención son aquellos en los que se ha modificado o cambiado la clase o subclase del anticuerpo original. Tales anticuerpos "quiméricos" también se denominan "anticuerpos de clase modificada" . Los métodos para la producción de los anticuerpos quiméricos incluyen técnicas convenciones de DNA recombinante y de transfección génica conocidas correctamente en la materia. Véase, por ejemplo, Morrison, S.L., et al., Proc. Nati. Acad Sci . EE.UU. 81 (1984) 6851-6855; las patentes US 5.202.238 y US 5.204.244.
El término "anticuerpo humanizado" hace referencia a anticuerpos en los que se han modificado las "regiones determinantes de complementariedad" (CDR) o marco para formar la CDR de una inmunoglobulina de diferente especificidad, en comparación con la de la inmunoglobulina madre. En una realización preferible, se injerta una CDR murina en la región marco de un anticuerpo humano para preparar el "anticuerpo humanizado." Véase, por ejemplo, Riechmann, L. , et al., Nature 332 (1988) 323-327; y Neuberger, M.S., et al., Nature 314 (1985) 268-270. De manera opcional, la región marco puede modificarse mediante mutaciones adicionales. Las CDR también pueden modificarse mediante una o más mutaciones para generar anticuerpos de acuerdo con la invención, por ejemplo, mediante la mutagénesis basada en el modelado molecular tal y como se describe en Riechmann, L. , et al . , Nature 332 (1988) 323-327 y Queen, C, et al., Proc . Nati. Acad. Sci. EE.UU. 86 (1989) 10029-10033, u otros. Las CDR particularmente preferibles se corresponden con las secuencias representantes que reconocen los antígenos descritos anteriormente para los anticuerpos quiméricos. Una "versión humanizada de un anticuerpo de acuerdo con la invención" (que es, por ejemplo, de origen murino) hace referencia a un anticuerpo que se basa en las secuencias murinas del anticuerpo en las que VH y VL están humanizadas mediante técnicas estándar (incluyendo el injerto de CDR y, de manera opcional, la subsiguiente mutagénesis de ciertos aminoácidos en la región marco y las CDR) . Preferiblemente, tal versión humanizada se quimeriza con una región constante (véanse, por ejemplo, las secuencias Id. de Sec. N° 57-61).
Otras formas de "anticuerpos humanizados" incluidos en la presente invención son aquellos en los que la región constante del anticuerpo original se ha modificado o cambiado adicionalmente para generar las propiedades de acuerdo con la invención, especialmente en relación a la unión a Clq y/o la unión al receptor de Fe (FcR) .
En los ejemplos siguientes, los términos "Mab" o "muMab" hacen referencia a anticuerpos monoclonales murinos, tales como Mab 2F11 o Mab 2E10, mientras que el término "hMab" hace referencia a versiones monoclonal humanizadas de tales anticuerpos murinos, tales como hMab 2Fll-cll, hMab 2Fll-d8, hMab 2Fll-e7, hMab 2Fll-fl2, etc..
El término "anticuerpo humano", tal y como se utiliza aquí, tiene la intención de incluir los anticuerpos que tienen regiones variables y constantes derivadas de las secuencias de inmunoglobulina de la línea germinal humana. Los anticuerpos humanos se conocen bien en la materia (van Dijk, M.A. , y van de Winkel, J.G., Curr. Opin. Chem. Biol. 5 (2001) 368-374) . Los anticuerpos humanos también pueden producirse en animales transgénicos (por ejemplo, ratones) que son capaces, tras la inmunización, de producir un repertorio completo o una selección de anticuerpos humanos en ausencia de producción de inmunoglobulina endógena. La transferencia de la matriz genética de inmunoglobulina de la línea germinal humana en tal ratón de línea germinal mutante resultará en la producción de anticuerpos humanos tras la exposición al antígeno (véase, por ejemplo, Jakobovits, A., et al., Proc. Nati. Acad. Sci. EE.UU. 90 (1993) 2551-2555; Jakobovits, A., et al., Nature 362 (1993) 255-258; Brueggemann, M . , et al . , Year Immunol . 7 (1993) 33-40). Los anticuerpos humanos también pueden producirse en bibliotecas de presentación a fagos (Hoogenboom, H.R., y Winter, G.J. Mol Biol. 227 (1992) 381-388; Marks, J.D. , et al., J. Mol. Biol. 222 (1991) 581-597). Las técnicas de Colé, et al., y Boerner, et al., también están disponibles para la preparación de los anticuerpos monoclonales humanos (Colé, S.P.C., et al., Monoclonal Antibodies and Cáncer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); y Boerner, P., et al., J. Immunol. 147 (1991) 86-95). Tal y como ya se ha mencionado para los anticuerpos humanizados y los quiméricos de acuerdo con la invención, el término "anticuerpo humano", tal y como se utiliza aquí, también incluye tales anticuerpos modificados en la región constante para generar las propiedades de acuerdo con la invención, especialmente en relación con la unión a Clq y/o la unión al receptor de Fe (FcR) , por ejemplo, mediante el "cambio de clase", es decir, el cambio o mutación de las partes del Fe (por ejemplo, de IgGl a IgG4 y/o la mutación IgGl/IgG4) .
El término "anticuerpo recombinante humano", tal y como se utiliza aquí, pretende incluir todos los anticuerpos humanos que se preparan, expresan, crean o aislan mediante medios recombinantes, tales como los anticuerpos aislados a partir de una célula huésped, como una célula NSO o CHO, o a partir de un animal (por ejemplo, un ratón) transgénico para los genes de la inmunoglobulina humana, o los anticuerpos expresados mediante la utilización de un vector de expresión recombinante transfectado a la célula huésped. Tales anticuerpos recombinantes humanos tienen las regiones variables y constantes en una forma reorganizada. Los anticuerpos recombinantes humanos de acuerdo con la invención han sido sometidos a la hipermutación somática in vivo. Por consiguiente, las secuencias de aminoácidos de las regiones VH y VL del anticuerpo recombinante son secuencias que, aunque se derivan y están relacionas con las secuencias VH y VL de la línea germinal humana, pueden no existir de manera natural en el repertorio in vivo de la línea germinal humana de anticuerpos .
Además, los anticuerpos de acuerdo con la invención incluyen los anticuerpos que tienen "modificaciones conservativas de la secuencia", modificaciones de la secuencia de nucleótidos y aminoácidos que no afectan o alteran las características mencionadas con anterioridad del anticuerpo de acuerdo con la invención. Las modificaciones pueden introducirse mediante técnicas estándar conocidas en la materia, tales como la mutagénesis dirigida y la mutagénesis mediada por PCR. Las sustituciones conservativas de aminoácidos incluyen aquellas en las que el residuo de aminoácido se sustituye con un residuo de aminoácido que tiene una cadena lateral similar. En la materia se han descrito las familias de residuos de aminoácidos con cadenas laterales similares. Estas familias incluyen aminoácidos con cadenas laterales básicas (por ejemplo, lisina, arginina, histidina) , cadenas laterales acídicas (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutámico) , cadenas laterales polares no cargadas (por ejemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteina, triptófano) , cadenas laterales no polares (por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina) , cadenas laterales beta-ramificadas (por ejemplo, treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas (por ejemplo, tirosina, fenilalanina, triptófano, histidina) . Por consiguiente, se puede sustituir preferiblemente un residuo de aminoácido no esencial predicho en un anticuerpo humano anti-CSF-lR por otro residuo de aminoácido de la misma familia de cadenas laterales .
Las substituciones de aminoácidos pueden llevarse a cabo mediante mutagénesis basada en el remodelado molecular, tal y como se describe en Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327 y Queen, C. , et al., Proc . Nati. Acad. Sci. EE.UU. 86 (1989) 10029-10033.
El CSF-1R humano (receptor del CSF-1; sinónimos: receptor M-CSF; receptor del factor estimulante de colonias de macrófagos 1, protooncogén Fms, c-fms, Id. de Sec . N° 22) se conoce desde 1986 (Coussens, L. , et al., Nature 320 (1986) 277-280) . El CSF-IR es un factor de crecimiento y está codificado por el protooncogén c-fms (revisado, por ejemplo, en Roth, P. y Stanley, E.R., Curr. Top. Microbiol . Immunol . 181 (1992) 141-167) .
El CSF-IR es el receptor para el ligando de los CSF-lRs CSF-1 (factor estimulante de colonias de macrófagos, también llamado M-CSF) (Id. de Sec. N° 86) y la IL-34 (Id. de Sec. N° 87) , y media los efectos biológicos de estas citoquinas (Sherr, C. J. , et al., Cell 41 (1985) 665-676; Lin, H., et al., Science 320 (2008) 807-811) . La clonación del receptor del factor estimulante de colonias-1 (también conocido como c-fms) se describió por primera vez en Roussel, M.F., et al., Nature 325 (1987) 549-552. En tal publicación se mostró que el CSF-IR tenía potencial de transformación dependiente de los cambios en el extremo C-terminal de las proteínas, incluyendo la pérdida de la fosforilación inhibitoria de la tirosina 969 que se une a la Cbl y, por consiguiente, regula la regulación del receptor (Lee, P.S., et al., Embo J. 18 (1999) 3616-3628).
El CSF-1R es un receptor tirosina quinasa (RTK) transmembrana monocatenario y es un miembro de la familia de los RTK que contienen motivos de inmunoglobulina (Ig) caracterizados por 5 subdominios D1-D5 repetidos de tipo Ig en el dominio extracelular (ECD) del receptor (Wang, Z., et al Molecular and Cellular Biology 13 (1993) 5348-5359) . El dominio extracelular del CSF-1R humano (CSF-1R-ECD) (Id. de Sec. N° 64) incluye los cinco subdominios D1-D5 repetidos de tipo Ig. El fragmento delD4 del CSF-1R humano (Id. de Sec. N° 65) incluye los subdominios extracelulares D1-D3 y D5 de tipo Ig, pero no tiene el subdominio D4. El fragmento D1-D3 del CSF-1R humano (Id. de Sec. N° 66) incluye los respectivos subdominios D1-D3. Las secuencias se enumeran sin el péptido señal MGSGPGVLLLLLVATAWHGQG (Id. de Sec. N° 67) . El fragmento D4-D3 CSF-1R humano (Id. de Sec. N° 85) incluye los subdominios D4-D3 respectivos.
Actualmente se conocen dos ligando del CSF-1R que se unen al dominio extracelular del CSF-1R. El primero es el CSF-1 (factor estimulante de colonias 1, también conocido como M-CSF, macrofagos; CSF-1 humano, Id. de Sec. N° 86) y se encuentra extracelularmente en forma de homodímero unido por disulfuros (Stanley, E.R. et al., Journal of Cellular Biochemistry 21 (1983) 151-159; Stanley, E.R. et al., Stem Cells 12 Supl. 1 (1995) 15-24) . El segundo es la IL-34 (IL-34 humana; Id. de Sec. N° 87) (Hume, D. A., et al, Blood 119 (2012) 1810-1820). Por consiguiente, en una realización el término "ligando del CSF-1R" hace referencia al CSF-1 humano (Id. de Sec. N° 86) y/o a la IL-34 humana (Id. de Sec. N° 87).
Habitualmente, para los experimentos se utiliza el fragmento activo del CSF-1 humano de 149 aminoácidos (aa) (aa 33-181 del Id. de Sec. N° 86) . Este fragmento activo de 149 aa del CSF-1 humano (aa 33-181 del Id. de Sec. N° 86) está contenido en las tres formas mayores del CSF-1 y es suficiente para mediar la unión al CSF-1R (Hume, D. A., et al, Blood 119 (2012) 1810-1820) .
Los efectos biológicos principales de la señalización mediante CSF-1R son la diferenciación, la proliferación, la migración, y la supervivencia de las células hematopoyéticas precursoras de la línea de macrófagos (incluyendo los osteoclastos) . La activación del CSF-1R esta mediada por los ligandos del CSF-1R, el CSF-1 (M-CSF) y la IL-34. La unión del CSF-1 (M-CSF) al CSF-1R induce la formación de homodímeros y la activación de la quinasa mediante fosforilación de la tirosina (Li, W. et al, EMBO Journal.10 (1991) 277-288; Stanley, E.R., et al., Mol. Reprod. Dev. 46 (1997) 4-10) .
El dominio intracelular de la proteína tirosina quinasa está interrumpida por un dominio único de inserción que también está presente en los otros miembros de la familia de la RT de clase III relacionados que incluyen los receptores para el factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGFR) , el receptor del factor de crecimiento de las células madre (c-Kit) y el receptor de la citoquina de tipo fins (FLT3) . A pesar de la homología estructural entre esta familia de receptores de factores de crecimiento, estos tienen diferentes funciones específicas de tejido.
El CSF-1R se expresa principalmente en las células de la línea monocítica y en el tracto reproductivo femenino y la placenta. Además, la expresión del CSF-1R se ha descrito en las células de Langerhans de la piel, un subtipo de células de músculo liso (Inaba, T., et al., J. Biol . Chem. 267 (1992) 5693-5699), las células B (Baker, A.H., et al., Oncogene 8 (1993) 371-378) y la microglía (Sawada, M. , et al . , Brain Res 509 (1990) 119-124) . Se sabe que las células con el CSF-1R humano mutante (Id. de Sec . N° 23) proliferan de manera independiente a la estimulación del ligando.
Tal y como se utiliza aquí, "que se unen al CSF-1R humano" o "que se unen específicamente al CSF-IR humano" hace referencia a un anticuerpo que se une específicamente al antígeno del CSF-IR humano con una afinidad de unión con un valor KD de 1,0 x 10-8 mol/1 o menor, a 35°C; en una realización, con un valor KD de 1,0 x 10-9 mol/1 o menor, a 35 °C. La afinidad de unión se determina con un ensayo de unión estándar a 35 °C, tal como la técnica de resonancia de plasmón en superficie (BIAcore®, GE-Healthcare Uppsala, Suecia) . Se describe un método para la determinación del valor KD de la afinidad de unión en el ejemplo 9. Por consiguiente, un "anticuerpo que se une al CSF-IR humano", tal y como se utiliza aquí, hace referencia a un anticuerpo que se une específicamente al antígeno del CSF- IR con una afinidad de unión con un KD de 1,0 x 10-8 mol/1 o menor (preferiblemente 1,0 x 10-8 mol/1 - 1,0 x 10-12 mol/1) a 35°C, preferiblemente con un KD de 1,0 x 10-9 mol/1 o menor, a 35°C (preferiblemente 1,0 x 10-9 mol/1 - 1,0 x 10-12 mol/1).
El grado en el "que se unen al fragmento delD4 del CSF-IR humano (Id. de Sec . N° 65) y al dominio extracelular del CSF-IR humano (Id. de Sec. N° 64)", tal y como se utiliza aquí, se mide mediante un ensayo de resonancia de plasmón en superficie (ensayo Biacore) , tal y como se describe en el ejemplo 4. El fragmento delD4 del CSF-IR humano (Id. de Sec.
N° 65) o dominio extracelular del CSF-IR humano (Id. de Sec . N° 64) , respectivamente, se quedan capturados en la superficie (cada uno en una superficie separada) y se añadieron los anticuerpos del test (cada uno en una medida separada) y se determinaron las señales de unión respectivas (unidades de respuesta (RU) ) . Se sustrajeron las señales de referencia (superficie blanca) . Las señales de los anticuerpos del test que no se unen que fueron ligeramente menores a 0 se configuraron como valores de 0. Entonces se determinó la .proporción de las señales de unión respectivas (señal de unión (RU) al fragmento delD4 del CSF-IR humano/señal de unión (RU) al dominio extracelular del CSF-IR humano (CSF-1R-ECD) ) . Los anticuerpos de acuerdo con la invención tienen una proporción de señales de unión (RU(delD4) / RU(CSF-IR-ECD) de 1:50 o menor, preferiblemente de 1:100 o menor (el límite menor incluido es 0 (por ejemplo, si la RU es 0 , la proporción es de 0:50 o 0:100)) .
Esto significa que tales anticuerpos anti-CSF-lR de acuerdo con la invención no se unen al fragmento delD4 del CSF-IR humano (como el anticuerpo anti-CCR5 m<CCR5>Pz03.1C5 (depositado como DS ACC 2683 el 18/08/2004 en DS Z) y que tienen señales de unión al fragmento delD4 del CSF-IR humano del rango del anticuerpo anti-CCR5 m<CCR5>Pz03.1C5 , que es menor a 20 RU (unidades de respuesta) , preferiblemente menor a 10 RU en un ensayo de resonancia de plasmón en superficie (BIAcore) , tal y como se muestra en el ejemplo 4.
El término "que se unen al fragmento D1-D3 del CSF-1R humano" hace referencia a una determinación de afinidad de unión mediante un ensayo de resonancia de plasmón en superficie (ensayo Biacore) . El anticuerpo del test se captura en la superficie, se añadió el fragmento D1-D3 del CSF-1R humano (Id. de Sec . N° 66) , y se determinaron las respectivas afinidades de unión. Los términos "que no se unen al fragmento D1-D3 del CSF-1R humano" o "que no hay unión al fragmento D1-D3 del CSF-1R humano" denotan que, en tal ensayo, la señal detectada estuvo en el área de no más de 1,2 veces la señal basal y, por consiguiente, no se pudo detectar unión significativa y no se pudo determinar la afinidad de unión (véase el ejemplo 10) .
Una realización de la invención es un método de cribaje para seleccionar anticuerpos útiles en una terapia combinada de acuerdo con la invención, y el método incluye los pasos siguientes pasos: a) medición de la unión de los anticuerpos anti-CSF-lR al dominio extracelular del CSF-1R humano (CSF-1R-ECD) (Id. de Sec. N° 64) mediante un ensayo de resonancia de plasmón en superficie (ensayo Biacore) , b) medición de la unión de los anticuerpos anti-CSF-lR al fragmento D1-D3 del CSF-IR humano (Id. de Sec . N° 66) (Dl-D3) , c) selección de los anticuerpos que se unen específicamente al dominio extracelular del CSF-IR humano (CSF-1R-ECD) y que no se unen al fragmento D1-D3 del CSF-IR humano (Id. de Sec. N° 66) (D1-D3) .
Una realización de la invención es un método de cribaje para seleccionar anticuerpos de acuerdo con la invención, y el método incluye los siguientes pasos: a) determinar la señal de unión (unidades de respuesta (RU) ) de los anticuerpos anti-CSF-lR al fragmento delD4 del CSF-IR humano (Id. de Sec. N° 65) y al dominio extracelular del CSF-IR humano (CSF-1R-ECD) (Id. de Sec. N° 64) mediante un ensayo de resonancia de plasmón en superficie (ensayo Biacore) , b) seleccionar los anticuerpos con una proporción de las señales de unión (fragmento delD4 del CSF-IR humano/dominio extracelular del CSF-IR humano (CSF-1R-ECD) ) de 50:1 o menor.
En una realización, la determinación se realiza a 25 °C. En una realización, el método de cribado incluye como pasos adicionales la medición de la unión de los anticuerpos anti-CSF-lR al fragmento D1-D3 del CSF-IR humano (Id. de Sec . N° 66) (D1-D3) y la selección de los anticuerpos que no muestran unión a dicho fragmento.
El término "epítopo" denota un determinante proteico del CSF-IR humano capaz de unirse específicamente a un anticuerpo Los epítopos habitualmente consisten en agrupaciones de moléculas de superficie químicamente activas, tales como cadenas laterales de aminoácidos o glucídicas y, habitualmente los epítopos tienen características estructurales tridimensionales específicas, así como características de carga específicas. Los epítopos conformacionales y los no conformacionales se distinguen porque el primero se pierde en presencia de disolventes desnaturalizantes y el segundo no. Preferiblemente, un anticuerpo de acuerdo con la invención se une específicamente al CSF-IR nativo y al desnaturalizado.
El "dominio variable" (dominio variable de una cadena ligera (VL) , dominio variable de una cadena pesada (VH) ) , tal y como se utiliza aquí, denota cada uno del par de dominios de las cadenas ligera y pesada que están involucrados directamente en la unión del anticuerpo al antígeno. Los dominios variables de las cadenas ligera y pesada tienen la misma estructura general y cada dominio incluye cuatro regiones marco (FR) , las secuencias de las cuales están ampliamente conservadas, conectadas mediante tres "regiones hipervariables " (o regiones determinantes de complementariedad, CDR) . Las regiones marco adoptan una conformación en lámina ß y las CDR pueden formar bucles que conectan la estructura de lámina ß. Las CDR en cada cadena se mantienen en su estructura tridimensional mediante las regiones marco y, junto a las CDR de la otra cadena, forman el sitio de unión al antígeno. Las regiones CDR3 de las cadenas pesada y ligera del anticuerpo juegan un papel particularmente importante en la afinidad/especifidad de unión de los anticuerpos de acuerdo con la invención y, consecuentemente proporcionan un objetivo adicional de la invención.
El término "porción de unión al antígeno de un anticuerpo", cuando se utiliza aquí, hace referencia a los residuos de aminoácidos de un anticuerpo que son responsables de la unión al antígeno. La porción de unión al antígeno de un anticuerpo incluye residuos de aminoácidos de las "regiones determinantes de complementariedad" o "CDR" . Las regiones "marco" o "FR" son esas regiones del dominio variable diferentes a los residuos de la región hipervariable, tal y como se define aquí. Por consiguiente, el dominio variable de las cadenas pesada y ligera de un anticuerpo abarca del extremo N al C terminal los dominios FR1, CDR1, FR2, CDR2 , FR3 , CDR3 , y FR4. Especialmente, la CDR3 de la cadena pesada es la región que más contribuye a la unión al antígeno y define las propiedades del anticuerpo. Las regiones CDR y FR se determinan de acuerdo con la definición estándar de Kabat et al . , Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991) y/o los residuos del "bucle hipervariable" .
Los términos "ácido nucleico" o "molécula de ácido nucleico", tal y como se utiliza aquí, tienen la intención de incluir moléculas de DNA y moléculas de RNA. Una molécula de ácido nucleico puede ser monocatenaria o bicatenaria, pero preferiblemente es DNA bicatenario.
El término " aminoácido" , tal y como se utiliza en esta solicitud, denota el grupo de carboxi-aminoácidos que ocurren de forma natural, incluyendo alanina (código de tres letras: ala, código de una letra: A), arginina (arg, R) , asparagina (asn, N) , ácido aspártico (asp, D) , cisteína (cys, C) , glutamina (gln, Q) , ácido glutámico (glu, E) , glicina (gli, G) , histidina (his, H) , isoleucina (ile, I), leucina (leu, L) , lisina (lys, K) , metionina (met, ) , fenilalanina (phe, F) , prolina (pro, P) , serina (ser, S) , treonina (thr, T) , triptófano (trp, W) , tirosina (tyr, Y) , y valina (val, V) .
En una realización, los anticuerpos de acuerdo con la invención inhiben la unión del CSF-1 al CSF-IR. En una realización, con una CI50 de 200 ng/ml o inferior, en una realización con una CI50 de 50 ng/ml o inferior. La CI50 de inhibición de la unión del CSF-1 al CSF-IR puede determinarse tal y como se muestra en el ejemplo 2.
En una realización, los anticuerpos de acuerdo con la invención inhiben la fosforilación del CSF-IR inducida por el CSF-1 (en células T recombinantes NIH3T3 -CSF- IR) .
En una realización, con una CI50 de 800 ng/ml o inferior, en una realización con una CI50 de 600 ng/ml o inferior, en una realización con una CI50 de 250 ng/ml o inferior. La CI50 de la fosforilación del CSF-IR inducida por el CSF-1 puede determinarse tal y como se muestra en el ejemplo 3.
En una realización, los anticuerpos de acuerdo con la invención inhiben el crecimiento de células NIH3T3 recombinantes que expresan el CSF-IR humano (Id. de Sec . N° 62) . En una realización con una CI50 de 10 pg/ml o inferior, en una realización con una CI50 de 5 pg/ml o inferior, en una realización con una CI50 de 2 g/ml o inferior. En una realización con una CI30 de 10 pg/ml o inferior, en una realización con una CI30 de 5 g/ml o inferior, en una realización con una CI30 de 2 g/ml o inferior. El valor CI50, el valor CI30 o el % de inhibición del crecimiento se determina tal y como se muestra en el ejemplo 5.
En una realización, los anticuerpos de acuerdo con la invención inhiben el crecimiento de células NIH3T3 recombinantes que expresan el CSF-1R L301S Y969F humano mutante (Id. de Sec. N° 63). En una realización con una CI50 de 15 µg/ml o inferior, en una realización con una CI50 de 10 pg/ml o inferior. En una realización con una CI30 de 10 g/ml o inferior, en una realización con una CI50 de 5 pg/ml ng/ml o inferior; en una realización con una CI50 de 2 pg/ml o inferior. El valor CI50, el valor CI30 o el % de inhibición del crecimiento se determina tal y como se muestra en el ejemplo 5.
En una realización, los anticuerpos de acuerdo con la invención inhiben el crecimiento de células tumorales BeWo (ATCC CCL-98) en un 65 % o más (a una concentración de anticuerpo de 10 g/ml; y en comparación con la ausencia de anticuerpo) . El % de inhibición de crecimiento se determina es tal y como se muestra en el ejemplo 8. Por ejemplo, elMab 2F11 muestra una inhibición del crecimiento de las células tumorales BeWo del 70 %.
En una realización, los anticuerpos de acuerdo con la invención inhiben tanto la diferenciación de los macrófagos humanos como los cinomolgos (que se indica mediante la inhibición de la supervivencia de los monocitos humanos y cinomolgos, tal y como se muestra en los ejemplos 7 y 8) . En una realización, los anticuerpos de acuerdo con la invención inhiben la supervivencia de los monocitos humanos con una CI50 de 0,15 pg/ml o inferior, en una realización, con una CI50 de 0,10 g/ml o inferior. La inhibición de la supervivencia de los monocitos humanos se determina tal y como se muestra en el ejemplo 7. En una realización, los anticuerpos de acuerdo con la invención inhiben la supervivencia de los monocitos cinomolgos en un 80 % o más, en una realización en un 90 % o más (a una concentración de anticuerpo del 5 g/ml; y en comparación con la ausencia de anticuerpo) . La inhibición de la supervivencia de los monocitos humanos se determina tal y como se muestra en el ejemplo 8.
Una realización adicional de la invención es un método para la producción de un anticuerpo contra el CSF-IR que se caracteriza por la secuencia de un ácido nucleico que codifica la cadena pesada de un anticuerpo humano de clase IgG. El CSF-1R de acuerdo con la invención, dicho ácido nucleico modificado y el ácido nucleico que codifica la cadena ligera de dicho anticuerpo se insertan en un vector de expresión y dicho vector se inserta en una célula eucariota huésped, se expresa la proteína codificada y se recupera de la célula huésped o del sobrenadante.
Los anticuerpos de acuerdo con la invención se producen, preferiblemente, mediante medios recombinantes . Por consiguiente, el anticuerpo es, preferiblemente, un anticuerpo monoclonal aislado. Tales métodos recombinantes se conocen bien en la materia e incluyen la expresión proteica en células procariotas y eucariotas con el subsiguiente aislamiento del polipéptido del anticuerpo y, habitualmente , la purificación hasta una pureza aceptable de forma farmacológica. Para la expresión proteica, se insertan ácidos nucleicos que codifican para las cadenas pesada y ligera o fragmentos de las mismas en vectores de expresión mediante métodos estándar. La expresión se lleva a cabo en células huésped adecuadas procariotas o eucariotas como las células CHO, células NSO, células SP2/0, células HEK293, células COS, levaduras, o células de E.coli, y el anticuerpo se recupera de las células (sobrenadante o células tras la lisis) .
La producción de anticuerpos recombinantes se conoce bien en la materia y se describe, por ejemplo, en los artículos de revisión de Makrides, S.C., Protein Expr. Purif. 17 (1999) 183-202; Geisse, S., et al., Protein Expr. Purif. 8 (1996) 271-282; Kaufman, R.J., Mol. Biotechnol. 16 (2000) 151-161; Werner, R.G., Drug Res. 48 (1998) 870-880.
Los anticuerpos pueden estar presentes en células enteras, en un lisado celular, o en una forma parcialmente purificada o esencialmente pura. La purificación se lleva a cabo para eliminar otros componentes celulares u otros contaminantes, por ejemplo, otras proteínas o ácidos nucleicos celulares, mediante técnicas estándar, incluyendo el tratamiento alcalino/SDS , el bandeo CsCl, la cromatografía en columna, la electroforesis en gel de agarosa, y otras bien conocidas en la materia. Véase Ausubel, F. , et al., ed. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, Nueva York (1987) .
La expresión en las células NSO se describe, por ejemplo, en Barnes, L.M. , et al., Cytotechnology 32 (2000) 109-123; y Barnes, L.M., et al., Biotech. Bioeng. 73 (2001) 261-270. La expresión transitoria se describe, por ejemplo, en Durocher, Y., et al., Nucí. Acids . Res. 30 (2002) E9. La clonación de los dominios variables se describe en Orlandi, R., et al., Proc. Nati. Acad. Sci. EE.UU. 86 (1989) 3833-3837; Cárter, P., et al., Proc. Nati. Acad. Sci. EE.UU. 89 (1992) 4285-4289; y Norderhaug, L., et al., J. Immunol . Methods 204 (1997) 77-87. Se describe un sistema de expresión transitoria preferible (HEK 293) en Schlaeger, E.-J., y Christensen, K. , in Cytotechnology 30 (1999) 71-83 y en Schlaeger, E.-J., in J. Immunol. Methods 194 (1996) 191-199.
Las secuencias de control que son adecuadas para los procariotas incluyen, por ejemplo, un promotor, y de manera opcional, una secuencia operadora y un sitio de unión al ribosoma. Se sabe que las células eucariotas utilizan señales promotoras, potenciadoras y de poliadenilación.
Los ácido nucleicos están "operativamente unidos" cuando se colocan en relación funcional con otra secuencia de ácido nucleico. Por ejemplo, el DNA de una presecuencia o un líder secretor se une operativamente a un DNA para un polipéptido si éste se expresa como preproteína que participa en la secreción del polipéptido. Un promotor o potenciador se enlaza operativamente a un secuencia codificante si éste afecta a la transcripción de la secuencia; o un lugar de unión al ribosoma se enlaza operativamente a una secuencia codificante se éste se coloca de manera que facilita la traducción. Generalmente, "enlazado operativamente" significa que las secuencias de DNA que se enlazan son contiguas, y en el caso del líder secretor, son contiguas y en el marco de lectura. No obstante, los potenciadores no tienen que ser contiguos. El enlace se logra mediante la ligación a los lugares de restricción convenientes. Si tales lugares no existen, se utilizan enlazantes o adaptadores oligonucleótidos sintéticos de acuerdo con la práctica convencional .
Los anticuerpos monoclonales se separan adecuadamente del medio de cultivo mediante procedimientos de purificación de inmunoglobulinas convencionales, tales como por ejemplo, proteína A-sefarosa, cromatografía con hidroxilapatita, electroforesis en gel, diálisis, cromatografía por afinidad. Los DNA y RNA que codifican por los anticuerpos monoclonales se aislan y secuencian fácilmente mediante la utilización de procedimientos convencionales . Las células del hibridoma pueden servir como fuente de DNA y RNA. Una vez se ha aislado, el DNA puede insertarse en vectores de expresión, que se transfectan en las células huésped tales como las células HEK 293, células CHO, o células de mieloma que no producen la proteína inmunoglobulina de otro modo, para obtener la síntesis de anticuerpos recombinantes monoclonales en las células huésped.
Tal y como se utiliza aquí, las expresiones "célula", "línea celular", y "cultivo celular" se utilizan indistintamente y todas estas designaciones incluyen la progenie. Por consiguiente, las palabras "transformantes" y "células transformadas" incluyen la célula sujeto primaria y los cultivos derivados de la misma sin tener en cuenta el número de transferencias. También se entiende que no toda la progenie tiene que ser precisamente idéntica en cuanto al contenido de DNA, debido a mutaciones deliberadas o inadvertidas. Se incluyen las variantes de la progenie que tienen la misma función o actividad biológica que se criba para la célula transformada originalmente.
La "parte Fe" de un anticuerpo es está involucrada directamente en la unión de un anticuerpo a un antígeno, pero exhibe varias funciones efectoras. Una "parte Fe de un anticuerpo" es un término bien conocido por los expertos en la materia y definido en base a la escisión con papaína de los anticuerpos. En relación a la secuencia de aminoácidos de la región constante de sus cadenas pesadas, los anticuerpos o inmunoglobulinas se dividen en las clases: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, y algunos de estas pueden estar divididas en subclases (isotipos) , por ejemplo, IgGl, IgG2, IgG3, e IgG4, IgAl, y IgA2. De acuerdo con las regiones constantes de la cadena pesada, las diferentes clases de inmunoglobulinas se llaman a, d, e, ?, y µ, respectivamente. La parte Fe de un anticuerpo está directamente involucrada en la ADCC (citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos) y la CDC (citotoxicidad dependiente del complemente) en base a la activación del complemento, la unión a Clq la unión al receptor de Fe. La activación del complemento (CDC) se inicia mediante la unión del factor del complemento Clq a la parte Fe de la mayoría de las subclases de IgG. Mientras que la influencia de un anticuerpo en el sistema del complemento depende de ciertas condiciones, la unión a Clq está causada por los lugares de unión definidos de la parte Fe. Tales sitios de unión se conocen en el estado de la materia y se describen, por ejemplo, en Boackle, R.J., et al., Nature 282 (1979) 742-743; Lukas , T.J., et al., J. Immunol. 127 (1981) 2555-2560; Brunhouse, R. , y Cebra, J. J. , Mol. Immunol. 16 (1979) 907-917; Burton, D.R., et al., Nature 288 (1980) 338-344; Thommesen, J.E., et al., Mol. Immunol. 37 (2000) 995-1004; Idusogie, E.E., et al., J. Immunol.164 (2000) 4178-4184; Hezareh, M. , et al., J. Virology 75 (2001) 12161-12168; Morgan, A., et al., Immunology 86 (1995) 319-324; la patente EP 0 307 434. Tales lugares de unión son, por ejemplo, L234, L235, D270, N297, E318, K320, K322, P331 y P329 (numeración de acuerdo con índice de Kabat de la UE, E.A., véase más abajo) . Los anticuerpos de subclase IgGl, IgG2 e IgG3 habitualmente presentan activación del complemento y la unión a Clq y C3, mientras que la IgG4 no activa el sistema del complemento y no se une a Clq y C3.
En una realización, el anticuerpo de acuerdo con la invención incluye una parte Fe derivada de un origen humano y, preferiblemente, todas las otras partes de las regiones constantes humanas. Tal y como se utiliza aquí, el término "parte Fe derivada de un origen humano" denota una parte Fe que es una parte Fe de un anticuerpo humano de las subclases IgGl, IgG2, IgG3 o IgG4 , preferiblemente una parte Fe de la subclase IgGl humana; o bien una parte Fe mutada de la subclase IgGl humana (preferiblemente con una mutación en L234A + L235A) , una parte Fe de subclase IgG4 humana o una parte Fe mutada de la subclase IgG4 humana (preferiblemente con una mutación en S228P) . Lo más preferible son las regiones constantes de la cadena pesada humana con el Id. de Sec. N° 58 (subclase IgGl humana), el Id. de Sec . N" 59 (subclase IgGl humana con las mutaciones L234A y L235A) , el Id. de Sec. N° 60 (subclase IgG4 humana), o el Id. de Sec. N° 61 (subclase IgG4 humana con la mutación S228P) .
Preferiblemente, el anticuerpo de acuerdo con la invención es de subclase IgGl humana o de subclase IgG4 humana. En una realización, el anticuerpo de acuerdo con la invención es de subclase IgGl humana. En una realización, el anticuerpo de acuerdo con la invención es de subclase IgG4 humana .
En una realización, el anticuerpo de acuerdo con la invención se caracteriza porque las cadenas constantes son de origen humano. Tales cadenas constantes se conocen bien en el estado de materia y se describen, por ejemplo, en Kabat, E.A., (véase, por ejemplo, Johnson, G. y Wu, T.T., Nucleic Acids Res. 28 (2000) 214-218) . Por ejemplo, una región constante de la cadena pesada humana útil incluye una secuencia de aminoácidos con el Id. de Sec . N° 58. Por ejemplo, una región constante de la cadena ligera humana útil incluye una secuencia de aminoácidos de una región constante de cadena ligera kappa con el Id. de Sec. N° 57.
Otro aspecto de la invención es la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-IR humano, que se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 7 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 8, b) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 15 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 16; o una versión humanizada del mismo.
Otro aspecto de la invención es la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1 humano, que se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 7 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 8, b) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 15 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 16; c) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 75 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 76; d) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 83 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 84; o una versión humanizada del mismo.
Otro aspecto de la invención es la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza por el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec.
N° 7 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 8, o una versión humanizada del mismo Otro aspecto de la invención es la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 23 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 24, o b) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 31 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 32, o c) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 39 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 40, o d) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 47 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 48, o e) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 55 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 56.
Otro aspecto de la invención es la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec . N° 23 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 24, o b) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 31 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 32, o c) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 39 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 40, o d) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 47 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 48.
Otro aspecto de la invención es la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 23 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 24.
Otro aspecto de la invención es la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 31 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 32.
Otro aspecto de la invención es la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec.
N° 39 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 40.
Otro aspecto de la invención es la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 47 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 48.
Otro aspecto de la invención es la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 15 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 16, o una versión humanizada del mismo.
Otro aspecto de la invención es la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec.
N° 75 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 76; o una versión humanizada del mismo.
Otro aspecto de la invención es la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 83 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 84; o una versión humanizada del mismo.
Otro aspecto de la invención es la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 1, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 2, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 3, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 4, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 5, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 6, o, b) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 9, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 10, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 11, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec . N° 12, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 13, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 14, o c) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 17, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 18, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 19, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 20, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 21, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 22, o d) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 25, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 26, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 27, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 28, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 29, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 30, o e) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 33, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 34, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 35, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 36, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 37, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 38, o f) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 41, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 42, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 43, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec . N° 44, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 45, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 46, o g) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 49, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 50, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 51, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 52, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 53, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 54; o h) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 69, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 70, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 71, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 72, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 73, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 74, o i) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 77, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 78, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 79, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 80, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 81, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 82.
Otro aspecto de la invención es la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec . N° 17, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 18, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 19, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 20, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 21, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 22, o b) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 25, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 26, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 27, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 28, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 29, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 30, o c) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 33, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 34, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 35, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 36, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 37, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 38, o d) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 41, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 42, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 43, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec . N° 44, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 45, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 46, o e) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 49, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 50, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 51, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 52, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 53, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 54.
Otro aspecto de la invención es la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 17, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 18, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 19, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 20, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 21, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 22, o b) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 25, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 26, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 27, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 28, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 29, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 30, o c) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 33, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 34, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 35, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 36, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 37, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 38, o d) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 41, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 42, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 43, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 44, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 45, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 46.
Otro aspecto de la invención es la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 17, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 18, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 19, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 20, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 21, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 22.
Otro aspecto de la invención es la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec . N° 25, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 26, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 27, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 28, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 29, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 30.
Otro aspecto de la invención es la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 33, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 34, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 35, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 36, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 37, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 38.
Otro aspecto de la invención es la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-1R humano, que se caracteriza en que el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 41, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 42, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 43, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec . N° 44, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 45, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 46.
La invención incluye un método para el tratamiento de un paciente que necesita terapia, que se caracteriza por la administración al paciente de una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo de acuerdo con la invención.
La invención incluye la utilización de un anticuerpo de acuerdo con la invención para la terapia descrita.
Una realización preferible de la invención es los anticuerpos para el CSF-IR de la presente invención para la utilización en el tratamiento de "enfermedades mediadas por el CSF-IR" o los anticuerpos para el CSF-IR de la presente invención para la utilización en la elaboración de un medicamento en el tratamiento de "enfermedades mediadas por el CSF-1R", que se puede describir como sigue: Existen tres mecanismos diferentes mediante los cuales la señalización mediada por el CSF-1R está probablemente involucrada en el crecimiento tumoral y las metástasis . El primero es que se ha observado la expresión del ligando CSF y su receptor en las células tumorales que se originan en el sistema reproductivo femenino (mama, ovario, endometrio, cervical) (Scholl, S.M., et al., J. Nati. Cáncer Inst . 86 (1994) 120-126; Kacinski, B.M., Mol. Reprod. Dev. 46 (1997) 71-74; Ngan, H.Y., et al., Eur. J. Cáncer 35 (1999) 1546-1550; Kirma, N. , et al., Cáncer Res 67 (2007) 1918-1926) y la expresión se ha asociado con el crecimiento del xenoinjerto del cáncer de mama así como con un pronóstico pobre de las pacientes del cáncer de mama. Se observaron dos mutaciones puntuales del CSF-1R en aproximadamente el 10-20% de los pacientes con leucemia miocítica aguda, leucemia mielocítica crónica y mielodisplasia evaluados en una estudio, y se observó que una de las mutaciones interrumpe el recambio del receptor (Ridge, S.A., et al., Proc . Nati. Acad. Sci EE.UU. 87 (1990) 1377-1380) . No obstante, la incidencia de las mutaciones no pudo confirmarse en estudios posteriores (Abu-Duhier, F.M. , et al., Br. J. Haematol . 120 (2003) 464-470). Las mutaciones también se encontraron en algunos casos de cáncer hepatocelular (Yang, D.H., et al., Hepatobiliary Pancreat. Dis. Int. 3 (2004) 86-89) y mielofibrosis idiopática (Abu-Duhier, F.M., et al., Br. J. Haematol. 120 (2003) 464-470) . Recientemente, se identificó la mutación Y571D en la línea celular GDM-1 derivada de un paciente con leucemia miélomonoblástica (Chase, A., et al., Leukemia 23 (2009) 358-364) .
La sinovitis vellonodular pigmentada (PVNS) y los tumores de células gigantes tenosinoviales (TGCT) puede ocurrir como resultado de una translocación que fusiona el gen del M-CSF con el gen del colágeno COL6A3 y resulta en la sobreexpresión del M-CSF (West, R.B., et al., Proc . Nati. Acad. Sci. EE.UU. 103 (2006) 690-695). Se ha propuesto que un efecto paisaje como el responsable de la masa tumoral resultante que consiste en células monocíticas atraídas por las células que expresan el M-CSF. Las TGCT son tumores menores que puedes extraerse de manera relativamente fácil de los dedos, que es donde ocurren mayoritariamente . La PVNS es más agresiva, ya que puede recurrir en las articulaciones grandes y no se puede controlar fácilmente de manera quirúrgica.
El segundo mecanismo se basa en el bloqueo de la señalización mediante M-CSF/CSF-1R en los sitios metastásicos de los huesos que inducen la osteoclastogénesis , la resorción ósea y las lesiones óseas osteolíticas . Los cánceres de mama, de pulmón y el mieloma múltiple son ejemplos de cánceres en los que se ha visto que metastatizan en el hueso y que causan enfermedad ósea osteolítica, lo que resulta en complicaciones esqueléticas. El M-CSF liberado por las células tumorales y el estroma induce la diferenciación de progenitores monocitomieloides hematopoyéticos hacia osteoclastos maduros en colaboración con el ligando del receptor activador del factor nuclear kappa-B (RANKL) . Durante este proceso, el M-CSF actúa como factor permisivo mediante la aportación de señales de supervivencia a los osteoclastos (Tanaka, S., et al., J. Clin. Invest. 91 (1993) 257-263). La inhibición de la actividad del CSF-1R durante la diferenciación y la maduración de los osteoclastos con un anticuerpo anti-CSF-lR tiene probabilidades de prevenir la actividad desequilibrada de los osteoclastos que causan las enfermedades osteolíticas y los acontecimientos esqueléticos relacionados asociados en la enfermedad metastásica. Mientras que, habitualmente, el cáncer de mama, el de pulmón y el mieloma múltiple resultan en lesiones osteolíticas, las metástasis óseas del cáncer de próstata inicialmente tienen una apariencia osteoblástica en las que la actividad aumentada de formación ósea da como resultado 'hueso reticular', que es diferente a la estructura lamelar típica de los huesos normales. Durante la progresión de la enfermedad, las lesiones óseas muestran un componente osteolítico significativo, así como unos niveles séricos elevados de resorción ósea, y esto sugiere que la terapia antiresortiva puede ser útil. Se ha observado que los bifosfonatos inhiben la formación de lesiones osteolíticas y reducen el número de acontecimientos esqueléticos relacionados solamente en los hombres con cáncer prostático metastásico refractario a las hormonas, pero en este punto su efecto sobre las lesiones osteoblásticas es controvertido y, hasta la fecha, los bifosfonatos no han sido beneficiosos en la prevención de las metástasis óseas o en el cáncer de próstata que responde a hormonas. El efecto de los agentes antiresortivos en el cáncer prostático mixto osteolítico/osteoblástico aún se está estudiando en la clínica (Choueiri, M.B., et al., Cáncer Metástasis Rev. 25 (2006) 601-609; Vessella, R.L. y Corey, E. , Clin. Cáncer Res. 12 (20 Pt 2) (2006) 6285s-6290s) .
El tercer mecanismo se basa en la reciente observación de que los macrofagos asociados al tumor (TAM) que se encuentran en los tumores sólidos del cáncer de mama, próstata, ovario y cervical se correlacionan con un pronóstico pobre (Bingle, L . , et al., J. Pathol . 196 (2002) 254-265; Pollard, J. ., Nat . Rev. Cáncer 4 (2004) 71-78). Los macrofagos se reclutan en el tumor mediante el M-CSF y otras quimiocinas. Los macrofagos pueden contribuir a la progresión del tumor mediante la secreción de factores angiogénicos, proteasas y otros factores de crecimientos y citoquinas, y ésta puede bloquearse mediante la inhibición de la señalización del CSF-1R. Recientemente, Zins et al (Zins, K., et al., Cáncer Res. 67 (2007) 1038-1045) han observado que la expresión del siR A del facto de necrosis tumoral alfa (TNF alfa) , el M-CSF o la combinación de ambos reduciría el crecimiento tumoral en un modelo de xenoinjerto murino entre el 34% y el 50% tras la inyección intratumoral del siRNA respectivo. El SiRNA dirigido a la secreción del TNF alfa de las células humanas SW620 redujo los niveles del M-CSF murino y llevo a la reducción de los macrófagos en el tumor. Además, el tratamiento de los xenoinjertos MCF7 del tumor con un fragmento de unión del antígeno dirigido contra el M-CSF resultó en una inhibición del 40% del crecimiento tumoral, inhibición, invirtió la resistencia a los quimioterápeuticos y mejoró la supervivencia de los ratones cuando se les administró en combinación con quimioterapéuticos (Paulus, P., et al., Cáncer Res. 66 (2006) 4349-4356).
Los TAM son sólo un ejemplo de un enlace emergente entre la inflamación crónica y el cáncer. Existen evidencias adicionales de ese enlace entre la inflamación y el cáncer dado que muchas enfermedades crónicas se asocian a un riego aumentado de cáncer, los cánceres aparecen en lugares de inflamación crónica, los mediadores químicos de la inflamación se encuentran en muchos cánceres,- la deleción de los mediadores celulares o químicos de la inflamación inhibe el desarrollo de cánceres experimentales y el uso prolongado de agentes antiinflamatorios reduce el riesgo de algunos cánceres. Existe un enlace entre el cáncer y varias condiciones inflamatorias entre las que encontramos la gastritis inducida por H.pilori y el cáncer gástrico, la esquistosomiasis y el cáncer de vejiga, el HHVX y el sarcoma de Kaposi, la endometriosis y el cáncer de ovario, y la prostatitis y el cáncer de próstata (Balkwill, F . , et al., cáncer Cell 7 (2005) 211-217) . Los macrofagos son células clave en la inflamación crónica y responden de manera diferencial a su microambiente . Existen dos tipos de macrofagos que se consideran extremos dentro de un continuo de estados funcionales: los macrofagos MI están relacionados con las reacciones de tipo 1. Estas reacciones incluyen la activación mediante los productos microbiales y el consecuente ataque a los microorganismos patogénicos, lo que resulta en la producción de intermediarios del oxígeno reactivos . En el otro extremo están los macrofagos M2 involucrados en las reacciones de tipo 2, que promocionan la proliferación celular, ajustan la inflamación y la inmunidad adaptativa y promueven el remodelado tisular, la angiogénesis y la reparación (Mantovani, A., et al., Trends Immunol . 25 (2004) 677-686) . La inflamación crónica que resulta en una neoplasia establecida está asociada, habitualmente, a los macrófagos M2. Una citoquina esencial que media las reacciones inflamatorias es el TNF alfa que, como su nombre bien indica, puede estimular la inmunidad antitumoral y la necrosis hemorrágica a altas dosis, pero que recientemente se ha observado que se expresa en las células tumorales y que actúa como un promotor tumoral (Zins, K. , et al., Cáncer Res. 67 (2007) 1038-1045; Balkwill, F., Cáncer Metástasis Rev. 25 (2006) 409-416) . El papel específico de los macrófagos en relación a los tumores aún debe comprenderse mejor, incluyendo la potencial dependencia espacial y temporal de su función y la relevancia en cuanto a tipos tumorales específicos .
De este modo, una realización de la invención son los anticuerpos para el CSF-1R de la presente invención para la utilización en el tratamiento del cáncer. El término "cáncer", tal y como se utiliza aquí, puede ser, por ejemplo, cáncer de pulmón, cáncer de pulmón de célula no pequeña (NSCL) , cáncer de pulmón de célula bronquioloalveolar, cáncer óseo, cáncer pancreático, cáncer de piel, cáncer de cabeza o cuello, melanoma cutáneo o intraocular, cáncer uterino, cáncer ovárico, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer gástrico, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer uterino, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma de endometrio, carcinoma de cérvix, carcinoma de vagina, carcinoma de vulva, enfermedad de Hodgkin, cáncer de esófago, cáncer de intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de glándula tiroidea, cáncer de la glándula paratiroidea, cáncer de la glándula adrenal, sarcoma de tejidos blandos, cáncer de uretra, cáncer de pene, cáncer de próstata, cáncer de vejiga, cáncer de riñon o de uréter, carcinoma de célula renal, carcinoma de pelvis renal, mesotelioma, cáncer hepatocelular, cáncer biliar, neoplasias del sistema nervioso central (SNC) , tumores del eje espinal, glioma cerebral, glioblastoma multiforme, astrocitomas , sch anomas, ependimonas, meduloblastomas , meningiomas, carcinomas de célula escamosa, adenoma hipofisario, linfoma, leucemia linfocítica, incluyendo las versiones refractarias de cualquiera de los cánceres anteriores, o una combinación de uno o más de los cánceres anteriores. Preferiblemente, tal cáncer es un cáncer de mama, un cáncer de ovario, un cáncer de cérvix, un cáncer de pulmón o un cáncer de próstata. Preferiblemente, tales cánceres se caracterizan adicionalmente por la expresión o sobreexpresion del CSF-1 o el CSF-1R. Una realización adicional de la invención son los anticuerpos para el CSF-1R de la presente invención para su utilización en el tratamiento simultáneo de los tumores primarios y las metástasis nuevas.
Por consiguiente, otra realización de la invención son los anticuerpos para el CSF-1R de la presente invención para la utilización en el tratamiento de la periodontitis, la histiocitosis X, la osteoporosis, la enfermedad ósea de Paget (PDB) , la pérdida ósea debida a la terapia contra el cáncer, la osteolisis periprostética, la osteoporosis inducida por glucocorticoides, la artritis reumatoide, la artritis psoriásica, la artrosis, las artítides inflamatorias y la inflamación.
Rabello, D. , et al., Biochem. Biophys . Res. Commun. 347 (2006) 791-796 demostraron que los SNPs en el gen del CSF1 mostraron una asociación positiva con la periodontitis agresiva: una enfermedad inflamatoria de los tejidos periodontales que causa pérdida dental a casa déla resorción del hueso alveolar.
La histiocitosis X (también llamada histiocitosis de las células de Langerhans, LCH) es una enfermedad proliferativa de las células dendríticas de Langerhans que parecen diferenciarse en osteoclastos en el hueso y en las lesiones del LCH extraóseas. Las células de Langerhans derivan de los monocitos circulantes . Se observó que los niveles aumentados del M-CSF medidos en el suero y en las lesiones se correlacionan con la severidad de la enfermedad (da Costa, CE., et al., J. Exp. Med. 201 (2005) 687-693). La enfermedad aparece principalmente en la población de pacientes pediátricos y debe tratarse con quimioterapia cuando la enfermedad se vuelve sistémica o recurrente.
La fisiopatología de la osteoporosis está mediada por la pérdida de los osteoblastos formadores de hueso y un aumento de la resorción ósea dependiente de los osteoclastos . Se han descrito datos que apoyan esto en Cenci et al . , donde se muestra que la inyección del anticuerpo anti-M-CSF preserva la densidad ósea e inhibe la resorción en los ratones ovariectomizados (Cenci, S., et al., J. Clin. Invest. 105 (2000) 1279-1287) . Recientemente, se identificó un enlace potencial con la pérdida ósea postmenopáusica debida a la deficiencia de estrógenos y se vio que la presencia de células T productoras de TNF alfa afectaba al metabolismo óseo (Roggia, C, et al., Minerva Med. 95 (2004) 125-132). Un mecanismo posible podría ser la inducción del M-CSF por parte del TNF alfa in vivo. Se confirmó un papel importante del M-CSF en la osteoclastogénesis inducida por el TNF alfa mediante el efecto de un anticuerpo dirigido contra el M-CSF, que bloqueó la osteolisis inducida por el TNF alfa en ratones, lo que, por consiguiente, convierte a los inhibidores de la señalización mediante el CSF-IR en dianas potenciales para la artritis inflamatoria (Kitaura, H., et al., J. Clin. Invest. 115 (2005) 3418-3427) .
La enfermedad ósea de Paget (PDB) es el segundo trastorno más común del metabolismo óseo, después de la osteoporosis , en la que anormalidades focales del aumento del recambio óseo lleva a complicaciones tales como el dolor óseo, la deformidad, las fractures patológicas y la sordera. Se han identificado mutaciones en cuatro genes que regulan la función normal de los osteoclastos y que predispone a la PDB y enfermedades relacionados: la inserción de mutaciones en TNFRSFllA, que codifica para el receptor activador del factor nuclear (NF) kappaB (RANK) , un regulador critico de la función de los osteoclastos; las mutaciones inactivantes de TNFRSF11B que codifica para la osteoprotegerina (un receptor señuelo para el ligando del RANK) ; las mutaciones del gen del secuestosoma 1 (SQSTM1) , que codifica para una proteína estructural importante en la vía del NfkappaB; y las mutaciones en el gen de la proteína que contiene valosina (VCP) . Este gen codifica para la VCP, que tiene un papel en la dirección del inhibidor del NFkappaB para la degradación mediada por el proteasoma (Daroszewska, A. y Ralston, S.H., Nat. Clin. Pract. Rheumatol . 2 (2006) 270-277) . Los inhibidores del CSF-IR dirigidos proporcionan una oportunidad de bloquear la desregulación de la señalización del RANKL indirectamente y, añaden una opción de tratamiento adicional a los bifosfonatos utilizados en la actualidad.
La pérdida ósea inducida por la terapia contra el cáncer, especialmente en los pacientes con cáncer de mama y próstata es una indicación adicional donde un inhibidor de la CSF-IR dirigido puede prevenir la pérdida ósea (Lester, J.E., et al., Br. J. Cáncer 94 (2006) 30-35). Con el pronóstico mejorado del cáncer de mama precoz, las consecuencias a largo plazo de las terapia adyuvantes cobran más importante, dado que algunas de las terapias, incluyendo la quimioterapia, la irradiación, los inhibidores de la aromatasa y la ablación ovárica, afectan el metabolismo óseo mediante la disminución de la densidad mineral ósea, lo que resulta en un riesgo incrementado de osteoporosis y de fracturas asociadas (Lester, J.E., et al., Br. J. Cáncer 94 (2006) 30-35). El equivalente a la terapia adyuvante con un inhibidor de la aromatasa en el cáncer de mama es la terapia de ablación androgénica en el cáncer de próstata, que lleva a la pérdida de densidad mineral ósea y a un incremento significativo del riesgo de fracturas relacionadas con la osteoporosis (Stoch, S.A., et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 86 (2001) 2787-2791).
Probablemente, la inhibición dirigida de la señalización mediada por el CSF-1R es beneficiosa en otras indicaciones así como cuando los tipos celulares dirigidos incluyen los osteoclastos y los macrófagos, por ejemplo, en el tratamiento de complicaciones específicas en respuesta a la sustitución articular como consecuencia de la artritis reumatoide. El fallo del implante debido a la pérdida ósea periprostética y el consecuente aflojamiento de la prótesis es una complicación mayor de la sustitución articular y requiere una repetición de la cirugía con una carga socioeconómica para el paciente individual y el sistema sanitario. Hasta la fecha, no se ha aprobado ninguna terapia farmacológica para prevenir o inhibir la osteolisis periprostética (Drees, P. , et al., Nat. Clin. Pract. Rheumatol. 3 (2007) 165-171).
La osteoporosis inducida por los glucocorticoides (GIOP) es otra indicación en la que un inhibidor del CSF-1R puede prevenir la pérdida ósea tras la utilización a largo plazo de glucocorticocosteroides que se da como resultado de varias condiciones entre las cuales están la enfermedad pulmonar obstructiva crónica, el asma y la artritis reumatoide (Guzman-Clark, J.R. , et al., Arthritis Rheum. 57 (2007) 140-146; Feldstein, A.C., et al., Osteoporos. Int. 16 (2005) 2168-2174) .
La artritis reumatoide, la artritis psoriásica y las artrítides inflamatorias son de por si indicaciones potenciales para los inhibidores de la señalización mediada por el CSF-IR dado que incluyen un componente de macrofágos y un grado variable de destrucción ósea (Ritchlin, C.T. , et al., J. Clin. Invest. 111 (2003) 821-831) . La artrosis y la artritis reumatoide son enfermedades autoinmunitarias inflamatorias causadas por la acumulación de macrofágos en el tejido conectivo y la infiltración por macrofágos en el fluido sinovial, que está, al menos, parcialmente mediada por el M-CSF. Campbell, I., K. , et al., J. Leukoc . Biol. 68 (2000) 144-150, demostraron que el M-CSF se produce en las células del tejido articular humano (condrocitos, fibroblastos sinoviales) in vitro y se encuentra en el fluido sinovial de los pacientes con artritis reumatoide, lo que sugiere que contribuye a la proliferación del tejido sinovial y a la infiltración por macrofágos, que se asocia a la patogénesis de la enfermedad. La inhibición de la señalización mediada por el CSF-IR probablemente controla el número de macrofágos en la articulación y alivia el dolor de la destrucción ósea asociado. Con tal de minimizar los efectos adversos y para comprender mejor el impacto de la señalización mediada por el CSF-IR en estas indicaciones, un método es para la inhibición específica del CSF-IR sin dirigirse a otras muchas quinasas, tales como la quinasa Raf .
Las descripciones recientes de la literatura correlacionan un M-CSF circulante aumentado con un pronóstico pobre y con la progresión ateroesclerótica en la enfermedad arterial coronaria crónica (Saitoh, T., et al., J. Am. Coll. Cardiol. 35 (2000) 655-665; Ikonomidis, I., et al., Eur. Heart. J. 26 (2005) p. 1618-1624); El M-CSF influencia el proceso aterosclerótico colaborando en la formación de células espumosas (macrófagos con LDL oxidados ingeridos) que expresan el CSF-IR y representan la placa inicial (Murayama, T., et al., Circulation 99 (1999) 1740-1746).
La expresión y la señalización mediadas por el M-CSF y el CSF-IR se observa en la microglía activada. La microglía, que son macrófagos residentes del sistema nerviosos central, puede activarse mediante varios estímulos, incluyendo la infección y la herida traumática. El M-CSF se considera un regulador clave de las respuestas inflamatorias en el cerebro y los niveles del M-CSF aumentan en el VIH-l, la encefalitis, la enfermedad de Alzheimer (AD) y los tumores cerebrales. La microgliosis como consecuencia de una señalización autocrina mediada por M-CSF/CSF-1R resulta en la inducción de citoquinas inflamatorias y en la liberación de óxido nítrico, tal y como se demuestra, por ejemplo, utilizando un modelo de daño neuronal experimental (Hao, A.J., et al., Neuroscience 112 (2002) 889-900; Murphy, G.M., Jr. , et al., J. Biol . Chem. 273 (1998) 20967-20971) . La microglía con una expresión aumentada del CSF-1R se encuentra alrededor de las placas del AD y en el modelo de AD murino transgénico de la proteína precursora del amiloide V717F (Murphy, G.M., Jr., et al., Am. J. Pathol. 157 (2000) 895-904) . Por otro lado, los ratones op/op con menos microglía cerebral dieron como resultado una deposición fibrilar de A-beta y un pérdida neuronal en comparación con los controles normales, lo que sugiere que la microglía tiene una función neuroprotectora en el desarrollo de la AD que no presentan los ratones op/op (Kaku, M. , et al . , Brain Res. Brain Res. Protoc. 12 (2003) 104-108).
La expresión y la señalización mediadas por el M-CSF y el CSF-1R se asocia a la enfermedad inflamatoria intestina (IBD) (WO 2005/046657) . El término "enfermedad inflamatoria intestina" hace referencia a enfermedades crónicas graves del tracto intestinal que se caracterizan por la inflamación crónica en varios puntos del tracto gastrointestinal, e incluye específicamente la colitis ulcerosa (CU) y la enfermedad de Crohn.
La invención incluye la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-IR humano que se caracteriza por las propiedades de unión al epítopo mencionadas con anterioridad o, alternativamente, por las secuencias de aminoácidos y los fragmentos de las secuencias de aminoácidos mencionadas con anterioridad para el tratamiento de cáncer.
La invención incluye la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-IR humano que se caracteriza por las propiedades de unión al epítopo mencionadas con anterioridad o, alternativamente, por las secuencias de aminoácidos y los fragmentos de las secuencias de aminoácidos mencionadas con anterioridad para el tratamiento de la pérdida ósea.
La invención incluye la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-IR humano que se caracteriza por las propiedades de unión al epítopo mencionadas con anterioridad o, alternativamente, por las secuencias de aminoácidos y los fragmentos de las secuencias de aminoácidos mencionadas con anterioridad parar la prevención o el tratamiento de las metástasis.
La invención incluye la terapia combinada con un anticuerpo que se une al CSF-IR humano que se caracteriza por las propiedades de unión al epítopo mencionadas con anterioridad o, alternativamente, por las secuencias de aminoácidos y los fragmentos de las secuencias de aminoácidos mencionadas con anterioridad para el tratamiento de las enfermedades inflamatorias.
La invención incluye la utilización de un anticuerpo que se caracteriza por incluir el anticuerpo que se une al CSF-IR humano que se caracteriza por las propiedades de unión al epítopo mencionadas con anterioridad o, alternativamente, por las secuencias de aminoácidos y los fragmentos de las secuencias de aminoácidos mencionadas con anterioridad para el tratamiento combinado del cáncer, tal y como se describe aquí, o alternativamente para la elaboración de un medicamento para el tratamiento combinado del cáncer, tal y como se describe aquí .
La invención incluye la utilización de un anticuerpo que se caracteriza por incluir el anticuerpo que se une al CSF-IR humano que se caracteriza por las propiedades de unión al epítopo mencionadas con anterioridad o, alternativamente, por las secuencias de aminoácidos y los fragmentos de las secuencias de aminoácidos mencionadas con anterioridad para el tratamiento combinado, tal y como se describe aquí, de pérdida ósea o, alternativamente para la elaboración de un medicamento para el tratamiento combinado, tal y como se describe aquí, de la pérdida ósea.
La invención incluye la utilización de un anticuerpo que se caracteriza por incluir el anticuerpo que se une al CSF-IR humano que se caracteriza por las propiedades de unión al epí opo mencionadas con anterioridad o, alternativamente, por las secuencias de aminoácidos y los fragmentos de las secuencias de aminoácidos mencionadas con anterioridad para la prevención o el tratamiento de las metástasis con la combinación, tal y como se describe aquí, o alternativamente para la elaboración de un medicamento para la prevención o el tratamiento de las metástasis con la combinación, tal y como se describe aquí .
La invención incluye la utilización de un anticuerpo que se caracteriza por incluir el anticuerpo que se une al CSF-IR humano que se caracteriza por las propiedades de unión al epítopo mencionadas con anterioridad o, alternativamente, por las secuencias de aminoácidos y los fragmentos de las secuencias de aminoácidos mencionadas con anterioridad para el tratamiento combinado de enfermedades inflamatorias, tal y como se describe aquí, o alternativamente para la elaboración de un medicamento para el tratamiento combinado de enfermedades inflamatorias, tal y como se describe aquí.
Los anticuerpos de acuerdo con la invención se producen, preferiblemente, mediante medios recombinantes . Tales métodos se conocen bien en el estado de la materia e incluyen la expresión proteica en células procariotas y eucariotas con el subsiguiente aislamiento del polipéptido del anticuerpo y, habitualmente, la purificación hasta una pureza aceptable de forma farmacológica. Para la expresión proteica se insertan ácidos nucleicos que codifican para las cadenas ligera y pesada, o fragmentos de las mismas, en vectores de expresión mediante métodos estándar. La expresión se lleva a cabo en células huésped adecuadas, procariotas o eucariotas, tales como células CHO, células NSO, células SP2/0, células HEK293, células COS, levaduras, o células de E.coli, y el anticuerpo se recupera de las células (sobrenadante o células tras la lisis) .
La producción recombinante de anticuerpos se conoce bien en el estado de la materia y se describe, por ejemplo, en los artículos de revisión de Makrides, S.C., Protein Expr. Purif. 17 (1999) 183-202; Geisse, S., et al . , Protein Expr. Purif. 8 (1996) 271-282; Kaufman, R.J., Mol. Biotechnol . 16 (2000) 151-161; Werner, R.G., Drug Res. 48 (1998) 870-880.
Los anticuerpos pueden presentarse en células completas, en un lisado celular, o en un forma parcialmente purificada o esencialmente pura. La purificación se lleva a cabo para eliminar otros componentes celulares u otros contaminantes, por ejemplo, otros ácidos nucleicos o proteínas celulares, mediante técnicas estándar, incluyendo el tratamiento alcalino/SDS, el bandeo CsCl, la cromatografía en columna, la electroforesis en gel de agarosa, y otras bien conocidas en la materia. Véase Ausubel, F., et al., ed. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience , Nueva York (1987) .
La expresión en las células NSO se describe, por ejemplo, en Barnes, L.M., et al., Cytotechnology 32 (2000) 109-123; Barnes, L.M., et al., Biotech. Bioeng. 73 (2001) 261-270. La expresión transitoria se describe, por ejemplo, en Durocher, Y., et al., Nucí. Acids . Res. 30 (2002) E9. La clonación de los dominios variables se describe en Orlandi, R. , et al., Proc. Nati. Acad. Sci. EE.UU. 86 (1989) 3833-3837; Cárter, P., et al., Proc. Nati. Acad. Sci. EE.UU. 89 (1992) 4285-4289; y Norderhaug, L. , et al., J. Immunol. Methods 204 (1997) 77-87. Se describe un sistema de expresión transitoria preferible (HEK 293) en Schlaeger, E.-J., y Christensen, K. , in Cytotechnology 30 (1999) 71-83 y en Schlaeger, E.-J., in J. Immunol. Methods 194 (1996) 191-199.
Las moléculas de ácido nucleico que codifican para las variantes de la secuencia de aminoácidos del anticuerpo anti-CSF-1R se preparan mediante varios métodos conocidos en la materia. Estos métodos incluyen, pero no se limitan a, el aislamiento de una fuente natural (en el caso de las variantes de la secuencia de aminoácidos que ocurren en la naturaleza) o la preparación mediante la mutagénesis mediada por oligonucleótidos (o dirigida al sitio) , la mutagénesis mediante PCR, y la mutagénesis en cassette de una variante preparada previamente o una versión no variante de una anticuerpo humanizado anti-CSF-lR.
Los dominios variables de las cadenas pesada y ligera de acuerdo con la invención se combinan con secuencias promotoras, de iniciación de la traducción, la región constante, la región 3' no traducida, la poliadenilación, y la terminación de transcripción para formar las construcciones de los vectores de vector de expresión. La expresión de las construcciones de las cadenas pesada y ligera puede combinarse en un solo vector, cotransfectado, transfectedo en serie, o transfectado separadamente en las células huésped que luego se fusionan para formar una sola célula huésped que expresa ambas cadenas .
En otro aspecto, la presente invención proporciona una composición, por ejemplo, una composición farmacológica, que incluye un o una combinación de anticuerpos monoclonales, o la porción de unión al antígeno del mismo, de la presente invención, formulada junto a un transportador aceptable de forma farmacológica.
Tal y como se utiliza aquí, "un transportador aceptable de forma farmacológica" incluye cualquiera de los disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y de retraso de la absorción/resorción, y similares fisiológicamente compatibles. Preferiblemente, el transportador es una inyección o infusión adecuada.
Una composición de la presente invención puede administrarse mediante varios métodos conocidos en la materia. Como apreciarán los expertos en la materia, la vía y/o el modo de administración variará en relación a los resultados deseados .
Los transportadores aceptables de forma farmacológica incluyen las soluciones o dispersiones acuosas y los polvos estériles para la preparación de soluciones o dispersiones estériles inyectables. La utilización de tales medios y agentes para las sustancias farmacológicamente activas se conocen en la materia. Además del agua, el transportador puede ser, por ejemplo, una solución salina tamponada isotónica .
Sin tener en cuenta la vía de administración seleccionada, los compuesto de la presente invención, que pueden utilizarse en una forma hibridada adecuada, y/o las composiciones farmacológicas de la presente invención, se formulan en forma de dosis aceptables de forma farmacológica mediante los métodos convencionales conocidos por los expertos en la materia.
Los niveles de dosificación reales de los ingredientes activos en las composiciones farmacológicas de la presente invención pueden variar para obtener una cantidad del ingrediente activo efectiva para la respuesta terapéutica deseada para un paciente, composición y modo de administración particulares, sin ser tóxico para el paciente (cantidad efectiva) . El nivel de dosificación seleccionado dependerá de varios factores farmacocinéticos, incluyendo la actividad de las composiciones particulares de la presente invención empleadas, o el éster, la sal o la amida de las mismas; la vía de administración, el tiempo de administración, la proporción de excreción del compuesto particular que se emplea, otros fármacos, compuestos y/o materiales utilizados en combinación con las composiciones particulares utilizadas, la edad, el sexo, el peso, la condición, la salud general y la historia médica previa del paciente tratado, de factores bien conocidos en la materia médica.
El término "un método de tratamiento" o su equivalente, cuando se aplica al cáncer, por ejemplo, hace referencia a un procedimiento o curso de acción que se diseña para reducir o eliminar el número de células cancerosas en un paciente, o para aliviar los síntomas de un cáncer. "Un método de tratamiento" contra el cáncer u otros trastornos proliferativos no implica necesariamente que las células cancerosas o que otros trastornos desaparecerán de hecho, que el número de células o el trastorno, de hecho, se reducirán, o que los síntomas de un cáncer u otro trastorno, de hecho, se aliviarán. A menudo, se llevará a cabo un método de tratamiento del cáncer incluso con una expectativa de éxito baja, pero que, sin embargo y dada la historia médica y la expectativa de supervivencia esperada de un paciente, se considera que inducirá un beneficio global en el curso de acción.
Los términos "administrado en combinación con" o "coadministración", "coadministrado" hacen referencia a la administración del anti-CSF-lR y el agente quimioterapéutico, la radioterapia y/o la inmunoterapia para el cáncer por ejemplo, como formulaciones/aplicaciones separadas (o en forma de una sola formulación/aplicación) . La coadministración puede ser simultánea o secuencial en cualquier orden, donde preferiblemente existe un periodo en el cual ambos (o todos) los agentes activos ejercen sus actividades biológicas simultáneamente. Tal anticuerpo y tal agente adicional se coadministran simultáneamente o secuencialmente (por ejemplo, por vía intravenosa (i.v.) mediante una infusión continua. Cuando ambos agentes terapéuticos se coadministran secuencialmente, la dosis se administra en el mismo día en dos administraciones separadas, o uno de los agentes se administra en el día 1 y el segundo se coadministra entre el día 2 y el día 7, preferiblemente entre los días 2 y 4. Así, en una realización, el término "secuencialmente" significa en los 7 días posteriores a la dosis del primer componente, preferiblemente en los 4 días posteriores a la dosis del primer componente; y el término "simultáneamente" significa al mismo tiempo. Los términos "coadministración" en relación a las dosis de mantenimiento del anticuerpo anti-CSF-lR significan que las dosis de mantenimiento pueden coadministrarse simultáneamente, si el ciclo de tratamiento es apropiado para ambos fármacos, por ejemplo, cada semana; o el agente adicional se administra, por ejemplo, entre los días primero y tercero y dicho anticuerpo se administra cada semana; o las dosis de mantenimiento se coadministran secuencialmente en un o varios días .
Es evidente que los anticuerpos se administran al paciente en una "cantidad terapéuticamente efectiva" (o simplemente "cantidad efectiva") que es la cantidad del compuesto o combinación respectiva que inducirá la respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal o humano que busca el investigador, el veterinario, el médico u otro clínico .
La cantidad de coadministración y el tiempo de la coadministración dependerá del tipo (especie, género, edad, peso, etc.), de la condición del paciente tratado y la gravedad de la enfermedad o condición tratada. Dicho anticuerpo anti-CSF-lR y el agente adicional se coadministran adecuadamente al paciente de una vez o en una serie de tratamientos, por ejemplo, el mismo día o el día posterior.
En relación del tipo y la gravedad de la enfermedad, aproximadamente entre 0,1 mg/kg y 50 mg/kg (por ejemplo, 0,1-20 mg/kg) de dicho anticuerpo anti-CSF-lR es una dosis candidata inicial para la coadministración de ambos fármacos al paciente. La invención incluye la utilización de los anticuerpos de acuerdo con la invención para el tratamiento de un paciente que padece de cáncer, especialmente de cáncer de colon, pulmón o páncreas.
La invención también incluye un método para el tratamiento de un paciente que padece de tal enfermedad.
La invención también proporciona un método para la elaboración de una composición farmacológica, lo que incluye una cantidad efectiva de un anticuerpo de acuerdo con la invención junto con un transportador aceptable de forma farmacológica y la utilización del anticuerpo de acuerdo con la invención para tal método.
La invención también proporciona la utilización de un anticuerpo de acuerdo con la invención en una cantidad efectiva para la elaboración de un agente farmacológico, preferiblemente junto a un transportador aceptable de forma farmacológica, para el tratamiento de un paciente que padece de cáncer.
La invención también proporciona la utilización de un anticuerpo de acuerdo con la invención en una cantidad efectiva para la elaboración de un agente farmacológico, preferiblemente junto a un transportador aceptable de forma farmacológica, para el tratamiento de un paciente que padece de cáncer .
Los siguientes ejemplos, listado de secuencias y figuras se proporcionan para facilitar la comprensión de la presente invención, el verdadero ámbito de la cual se describe en las reivindicaciones anejadas. Debe entenderse que pueden hacerse modificaciones en los procedimientos descritos sin alejarse del espíritu de la invención.
Descripción de las secuencias Id. de Sec. N° 1 CDR3 de la cadena pesada, Mab 2F11 Id. de Sec. N° 2 CDR2 de la cadena pesada, Mab 2F11 Id. de Sec. N° 3 CDR1 de la cadena pesada, Mab 2F11 Id. de Sec. N° 4 CDR3 de la cadena ligera, Mab 2F11 Id. de Sec. N° 5 CDR2 de la cadena ligera, Mab 2F11 Id. de Sec. N° 6 CDR1 de la cadena ligera, Mab 2F11 Id. de Sec. N° 7 dominio variable de la cadena pesada, Mab 2F11 Id. de Sec. N° 8 dominio variable de la cadena ligera, Mab 2F11 Id. de Sec. N° 9 CDR3 de la cadena pesada, Mab 2E10 Id. de Sec. N° 10 CDR2 de la cadena pesada, Mab 2E10 Id. de Sec. N° 11 CDR1 de la cadena pesada, Mab 2E10 Id. de Sec. N° 12 CDR3 de la cadena ligera, Mab 2E10 Id. de Sec. N° 13 CDR2 de la cadena ligera, Mab 2E10 Id. de Sec. N° 14 CDR1 de la cadena ligera, Mab 2E10 Id. de Sec. N° 15 dominio variable de la cadena pesada, Mab 2E10 Id. de Sec. N° 16 dominio variable de la cadena ligera, Mab 2E10 Id. de Sec. N° 17 CDR3 de la cadena pesada, hMab 2F11-cll Id. de Sec. N° 18 CDR2 de la cadena pesada, hMab 2F11-cll Id. de Sec. N° 19 CDR1 de la cadena pesada, hMab 2F11-cll Id. de Sec. N° 20 CDR3 de la cadena ligera, hMab 2F11-cll Id. de Sec. N° 21 CDR2 de la cadena ligera, hMab 2F11-cll Id. de Sec. N° 22 CDR1 de la cadena ligera, hMab 2F11-cll Id. de Sec. N° 23 dominio variable de la cadena pesada, hMab 2F11-C11 Id. de Sec. N° 24 dominio variable de la cadena ligera, hMab 2F11-C11 Id. de Sec. N° 25 CDR3 de la cadena pesada, hMab 2F11-d8 Id. de Sec. N° 26 CDR2~ de la cadena pesada, hMab 2F11-d8 Id. de Sec. N° 27 CDR1 de la cadena pesada, hMab 2F11- d8 Id. de Sec. N° 28 CDR3 de la cadena ligera, hMab 2F11-d8 Id. de Sec. N° 29 CDR2 de la cadena ligera, hMab d8 Id. de Sec. N° 30 CDR1 de la cadena ligera, hMab 2F11-d8 Id. de Sec. N° 31 dominio variable de la cadena pesada, h ab 2Fll-d8 Id. de Sec. N° 32 dominio variable de la cadena ligera, hMab 2Fll-d8 Id. de Sec. N° 33 CDR3 de la cadena pesada, hMab 2F11-el Id. de Sec. N° 34 CDR2 de la cadena pesada, hMab 2F11-e7 Id. de Sec. N° 35 CDR1 de la cadena pesada, hMab 2F11-e7 Id. de Sec. N° 36 CDR3 de la cadena ligera, hMab 2F11-e7 Id. de Sec. N° 37 CDR2 de la cadena ligera, hMab 2F11-e7 Id. de Sec. N° 38 CDR1 de la cadena ligera, hMab 2F11- Id. de Sec . N° 39 dominio variable de la cadena pesada, hMab 2Fll-e7 Id. de Sec. N° 40 dominio variable de la cadena ligera, hMab 2Fll-e7 Id. de Sec. N° 41 CDR3 de la cadena pesada, hMab 2F11-fl2 Id. de Sec . N° 42 CDR2 de la cadena pesada, hMab 2F11-fl2 Id. de Sec. N° 43 CDR1 de la cadena pesada, hMab 2F11-fl2 Id. de Sec . N° 44 CDR3 de la cadena ligera, hMab 2F11-fl2 Id. de Sec. N° 45 CDR2 de la cadena ligera, hMab 2F11-fl2 Id. de Sec. N° 46 CDR1 de la cadena ligera, hMab 2F11-fl2 Id. de Sec . N° 47 dominio variable de la cadena pesada, hMab 2Fll-fl2 Id. de Sec. N° 48 dominio variable de la cadena ligera, hMab 2Fll-fl2 Id. de Sec. N° 49 CDR3 de la cadena pesada, hMab 2F11-gi Id. de Sec . N° 50 CDR2 de la cadena pesada, hMab 2F11- gi Id. de Sec. N° 51 CDR1 de la cadena pesada, hMab 2F11-gi Id. de Sec. N° 52 CDR3 de la cadena ligera, hMab 2F11-gl Id. de Sec. N° 53 CDR2 de la cadena ligera, hMab 2F11-gi Id. de Sec. N° 54 CDR1 de la cadena ligera, hMab 2F11-gi Id. de Sec. N° 55 dominio variable de la cadena pesada, hMab 2Fll-gl Id. de Sec. N° 56 dominio variable de la cadena ligera, hMab 2Fll-gl Id. de Sec. N° 57 región constante de la cadena ligera kappa humana Id. de Sec. N° 58 región constante de la cadena pesada humana derivada de la IgGl Id. de Sec. N° 59 región constante de la cadena pesada humana derivada de la IgGl mutada en L234A y L235A Id. de Sec. N° 60 región constante de la cadena pesada humana derivada de la IgG4 Id. de Sec. N° 61 región constante de la cadena pesada humana derivada de la IgG4 mutada en S228P Id. de Sec. N° 62 CSF-1R salvaje humano (wt CSF-1R) Id. de Sec. N° 63 CSF-1R mutante humana L301S Y969F Id. de Sec. N° 64 dominio extracelular del CSF-1R humano (dominios D1-D5) Id. de Sec. N° 65 fragmento delD4 del CSF-1R humano Id. de Sec. N° 66 fragmento con los dominios D1-D3 del CSF-1R Id. de Sec. N° 67 péptido señal Id. de Sec. N° 68 Cebador Id. de Sec. N° 69 CDR3 de la cadena pesada, Mab 1G10 Id. de Sec. N° 70 CDR2 de la cadena pesada, Mab 1G10 Id. de Sec. N° 71 CDR1 de la cadena pesada, Mab 1G10 Id. de Sec. N° 72 CDR3 de la cadena ligera, Mab 1G10 Id. de Sec. N° 73 CDR2 de la cadena ligera, Mab 1G10 Id. de Sec. N° 74 CDR1 de la cadena ligera, Mab 1G10 Id. de Sec. N° 75 dominio variable de la cadena pesada, Mab 1G10 Id. de Sec. N° 76 dominio variable de la cadena ligera, Mab 1G10 Id. de Sec. N° 77 CDR3 de la cadena pesada, Mab 2H7 Id. de Sec. N° 78 CDR2 de la cadena pesada, Mab 2H7 Id. de Sec. N° 79 CDR1 de la cadena pesada, Mab 2H7 Id. de Sec. N° 80 CDR3 de la cadena ligera, Mab 2H7 Id. de Sec. N° 81 CDR2 de la cadena ligera, Mab 2H7 Id. de Sec. N° 82 CDR1 de la cadena ligera, Mab 2H7 Id. de Sec. N° 83 dominio variable de la cadena pesada, Mab 2H7 Id. de Sec. N° 84 dominio variable de la cadena ligera, Mab 2H7 Id. de Sec. N° 85 el fragmento con los dominios D4-D5 del CSF-IR humano Id. de Sec. N° 86 CSF-1 humano Id. de Sec. N° 87 IL-34 humana En la siguiente realización de la invención se describen: 1. A) un anticuerpo que se une al CSF-IR humano, que se caracteriza por la unión a los dominios D4-D5 (dimerización) (Id. de Sec. N° 85) del dominio extracelular del CSF-IR humano para la utilización en a) la inhibición de la proliferación celular en células tumoral que expresan el CSF-IR dependiente de ligando y/o el CSF-IR independiente del ligando del CSF-IR; b) la inhibición de la proliferación celular de tumores con un infiltrado de macrofagos que expresa el CSF-IR dependiente de ligando y/o el CSF-IR independiente del ligando del CSF-IR; c) la inhibición de la supervivencia celular de macrófagos y monocitos que expresan el CSF-IR (CSF-IR dependiente de ligando y/o CSF-IR independiente de ligando) ; y/o d) la inhibición de la diferenciación celular de macrófagos y monocitos que expresan el CSF-IR (CSF-IR dependiente de ligando y/o CSF-IR independiente de ligando) ; en el que el anticuerpo anti-CSF-lR se administra en combinación con un agente quimioterapéutico, radiación, y/o inmunoterapia para el cáncer; o B) un anticuerpo que se une al CSF-IR humano, que se caracteriza por unirse a los dominios D4-D5 (Id. de Sec . N° 85) del dominio extracelular del CSF-IR humano para la utilización en el tratamiento de un paciente que tiene un tumor que expresa el CSF-IR o que tiene un tumor con un infiltrado de macrófagos que expresa el CSF-IR, en el que el tumor se caracteriza por un aumento del ligando del CSF-IR. en el que el anticuerpo anti-CSF-lR se administra en combinación con un agente quimioterapéutico, radiación y/o inmunoterapia para el cáncer. 2. A) La utilización de un anticuerpo que se une al CSF-IR humano, que se caracteriza por la unión a los dominios D4-D5 (dimerización) (Id. de Sec. N° 85) del dominio extracelular del CSF-IR humano para la utilización en la elaboración de un medicamento para a) la inhibición de la proliferación celular en células tumoral que expresan el CSF-IR dependiente de ligando y/o el CSF-IR independiente del ligando del CSF-IR; b) la inhibición de la proliferación celular de tumores con un infiltrado de macrofagos que expresa el CSF-IR dependiente de ligando y/o el CSF-IR independiente del ligando del CSF-IR; c) la inhibición de la supervivencia celular de macrofagos y monocitos que expresan el CSF-IR (CSF-IR dependiente de ligando y/o CSF-IR independiente de ligando) ,-y/o d) la inhibición de la diferenciación celular de macrofagos y monocitos que expresan el CSF-IR (CSF-IR dependiente de ligando y/o CSF-IR independiente de ligando) ; en el que el anticuerpo anti-CSF-lR se administra en combinación con un agente quimioterapéutico, radiación, y/o inmunoterapia para el cáncer; o B) La utilización de un anticuerpo que se une al CSF-IR humano, que se caracteriza por unirse a los dominios D4-D5 (Id. de Sec . N° 85) del dominio extracelular del CSF-IR humano para la utilización en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de un paciente que tiene un tumor que expresa el CSF-IR o que tiene un tumor con un infiltrado de macrófagos que expresa el CSF-IR, en el que el tumor se caracteriza por un aumento del ligando del CSF-IR en el que el anticuerpo anti-CSF-lR se administra en combinación con un agente quimioterapéutico, radiación y/o inmunoterapia para el cáncer. 3. El anticuerpo o la utilización de acuerdo con las realizaciones 1 o 2, en el que el agente quimioterapéutico se selecciona a partir de un grupo que incluye taxanos (paclitaxel (Taxol) , docetaxel (Taxotere) , paclitaxel modificado (Abraxane y Opaxio) ) , doxorrubicina, doxorrubicina modificada (Caelyx o Doxil) ) , sunitinib (Sutent) , sorafenib (Nexavar) , y otros inhibidores de múltiples quinasas, oxaliplatino, cisplatino y carboplatino, etopósido, gemcitabina, y vinblastina. 4. El anticuerpo o la utilización de acuerdo con las realizaciones 1 o 2, en el que la inmunoterapia para el cáncer se selecciona a partir del grupo que incluye: a) agentes enlazantes de las células T seleccionados a partir de anticuerpos agonistas que se unen a OX40, a GITR, a CD27, o a 4-1BB humanos, y anticuerpos biespecífieos de células T (por ejemplo, anticuerpos enlazantes de células T BiTE™ CD3-CD19, CD3-EpCam, CD3-EGFR) , IL-2 (proleucina) , interferón (IFN) alfa, anticuerpos antagonistas que se unen al CTLA-4 humano (por ejemplo, ipilimumab) , a PD-1, a PD-L1, a TIM-3, a BTLA, a VISTA, a LAG-3 , o a CD25, b) Inmunosupresión dirigida: anticuerpos o moléculas pequeñas que tienen como diana la señalización mediante STAT3 o NFkB, el bloqueo de la función de IL-6, IL-17, IL-23, TNFa, c) Vacunas para el cáncer/la potenciación de la función de las células dendríticas: OncoVex (virus oncolíticos que secretan GM-CSF) , un anticuerpo agonista del CD40, ligandos para el receptor de tipo Toll (TLR) , agonista de TLR, proteínas de fusión recombinantes que codifican para MAGE-A3 , PROSTVAC; o d) Transferencia de células adoptivas: GVAX (línea celular de cáncer prostático que expresa el GM-CSF) , vacuna de células dendríticas, terapia con células T adoptivas, terapia con células T CAR adoptivas . 5. El anticuerpo o la utilización de acuerdo con la realización 4, en el que la inmunoterapia para el cáncer es un anticuerpo agonista de CD40 (en una realización, el anticuerpo agonista de CD40 es CP-870.893 o SGN-40) . 6. El anticuerpo o la utilización de acuerdo con las realizaciones 1 o 2, en el que el agente quimioterapéutico se selecciona a partir del grupo que incluye taxanos (docetaxel, paclitaxel o un paclitaxel modificado (Abraxane o Opaxio) ) , doxorrubicina, capecitabina y/o bevacizumab para el tratamiento del cáncer de mama. 7. El anticuerpo o la utilización de acuerdo con las realizaciones 1 o 2, en el que el agente quimioterapéutico se selecciona a partir del grupo que incluye carboplatino, oxaliplatino, cisplatino, paclitaxel, doxorrubicina (o doxorrubicina modificada (Caelyx o Doxil) ) , o topotecán (Hycamtin) para el tratamiento del cáncer de ovario. 8. El anticuerpo o la utilización de acuerdo con las realizaciones 1 o 2, en el que el agente quimioterapéutico se selecciona a partir del grupo que incluye un inhibidor de múltiples quinasas (sunitinib (Sutent) , sorafenib (Nexavar) o motesanib difosfato (A G 706) y/o doxorrubicina para el tratamiento del cáncer renal . 9. El anticuerpo de acuerdo con las realizaciones 1 o 2, en el que el agente quimioterapéutico se selecciona a partir del grupo que incluye oxaliplatino, cisplatino y/o radiación para el tratamiento de carcinoma de célula escamosa 10. El anticuerpo o la utilización de acuerdo con las realizaciones 1 o 2, en el que el agente quimioterapéutico se selecciona a partir del grupo que incluye taxol y/o carboplatino para el tratamiento del cáncer de pulmón. 11. El anticuerpo de acuerdo con cualquier realización precedente de acuerdo con cualquier realización precedente, en el que el anticuerpo se caracteriza en que el anticuerpo no se une al fragmento delD4 del CSF-1R humano (Id. de Sec . N° 65) . 12. El anticuerpo o la utilización de acuerdo con cualquier realización precedente, en el que el anticuerpo se caracteriza en que el anticuerpo se une al fragmento delD4 del CSF-1R humano (Id. de Sec. N° 65) y al dominio extracelular del CSF-1R humano (Id. de Sec. N° 64) con una proporción de 1:50 o menor . 13. El anticuerpo de acuerdo con cualquier realización precedente, que se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 7 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 8, b) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 15 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 16; c) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 75 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 76; d) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 83 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 84; o una versión humanizada del mismo. 14. El anticuerpo de acuerdo con cualquier realización precedente, que se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 23 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec . N° 24, o b) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 31 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec . N° 32, o c) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 39 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec . N° 40, o d) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 47 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec . N° 48, o e) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 55 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec . N° 56. 15. El anticuerpo de acuerdo con cualquier realización precedente, que se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 1, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 2, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 3, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 4, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 5, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 6, o b) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 9, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 10, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 11, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 12, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 13, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 14, o c) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 17, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 18, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 19, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 20, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 21, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 22, o d) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 25, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 26, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 27, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec . N° 28, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 29, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 30, o e) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 33, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 34, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 35, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 36, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 37, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 38, o f) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 41, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 42, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 43, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 44, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 45, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 46, o g) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 49, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 50, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 51, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 52, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 53, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 54; o h) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 69, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 70, y una región CDR1 con el Id. de Sec . N° 71, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 72, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 73, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 74, o i) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 77, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 78, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 79, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 80, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 81, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 82. 16. El anticuerpo de acuerdo con cualquier realización precedente, que se caracteriza en que dicho anticuerpo es de la subclase IgGl humana o es de la subclase IgG4 humana. 17. El anticuerpo o la utilización de acuerdo con cualquier realización precedente para su utilización en un método de tratamiento contra el cáncer, de la pérdida ósea, de las metástasis, de enfermedades inflamatorias, o para la utilización en la prevención de las metástasis. 18. A) Un método para a) la inhibición de la proliferación celular en células tumoral que expresan el CSF-IR dependiente de ligando y/o el CSF-IR independiente del ligando del CSF-IR; b) la inhibición de la proliferación celular de tumores con un infiltrado de macrofagos que expresa el CSF-IR dependiente de ligando y/o el CSF-IR independiente del ligando del CSF-IR; c) la inhibición de la supervivencia celular de macrofagos y monocitos que expresan el CSF-IR (CSF-IR dependiente de ligando y/o CSF-IR independiente de ligando) ; y/o d) la inhibición de la diferenciación celular de macrofagos y monocitos que expresan el CSF-IR (CSF-IR dependiente de ligando y/o CSF-IR independiente de ligando) ; en el que un anticuerpo que se une al CSF-IR humano, que se caracteriza por la unión a los dominios D4-D5 (dimerización) (Id. de Sec . N° 85) del dominio extracelular del CSF-IR humano, se administra en combinación con un agente quimioterapéu ico, radiación, y/o inmunoterapia para el cáncer; o B) Un método de tratamiento de un paciente que tiene un tumor que expresa el CSF-IR o que tiene un tumor con un infiltrado de macrofagos que expresa el CSF-IR, en el que el tumor es que se caracteriza por un incremento del ligando del CSF-IR en el que un anticuerpo que se une al CSF-IR humano, que se caracteriza por unirse a los dominios D4-D5 (Id. de Sec.
N° 85) del dominio extracelular del CSF-IR humano, para su utilización, se administra en combinación con un agente quimioterapéutico, radiación y/o inmunoterapia para el cáncer 19. Un anticuerpo que se une al CSF-IR humano, para la utilización en el tratamiento de un paciente que tiene un tumor que expresa el CSF-IR o que tiene un tumor con un infiltrado de macrófagos que expresa el CSF-IR, en el que el tumor es que se caracteriza por un incremento del ligando del CSF-IR en el que el anticuerpo anti-CSF-lR se administra en combinación con una inmunoterapia para el cáncer. en el que la inmunoterapia para el cáncer se selecciona a partir del grupo que incluye : a) agentes enlazantes de las células T seleccionados a partir de anticuerpos agonistas que se unen a 0X40, a GITR, a CD27, o a 4-1BB humanos, y anticuerpos biespecífieos de células T (por ejemplo, anticuerpos enlazantes de células T BiTE™ CD3-CD19, CD3-EpCam, CD3-EGFR) , IL-2 (proleucina) , interferón (IFN) alfa, anticuerpos antagonistas que se unen al CTLA-4 humano (por ejemplo, ipilimumab) , a PD-1, a PD-L1, a TIM-3, a BTLA, a VISTA, a LAG-3, o a CD25, b) Inmunosupresión dirigida: anticuerpos o moléculas pequeñas que tienen como diana la señalización mediante STAT3 o NFkB, el bloqueo de la función de IL-6, IL-17, IL-23, TNFa, c) Vacunas para el cáncer/la potenciación de la función de las células dendríticas: OncoVex (virus oncolíticos que secretan GM-CSF) , un anticuerpo agonista del CD40, ligandos para el receptor de tipo Toll (TLR) , agonista de TLR, proteínas de fusión recombinantes que codifican para AGE-A3, PROSTVAC; O d) Transferencia de células adoptivas: GVAX (línea celular de cáncer prostático que expresa el GM-CSF) , vacuna de células dendríticas, terapia con células T adoptivas, terapia con células T CAR adoptivas . 20. El anticuerpo de acuerdo con realización 19 en el que la inmunoterapia para el cáncer se selecciona a partir del grupo que incluye: vacunas para el cáncer/la potenciación de la función de las células dendríticas: OncoVex (virus oncolíticos que secretan GM-CSF) , un anticuerpo agonista del CD40, ligandos para el receptor de tipo Toll (TLR) , agonista de TLR, proteínas de fusión recombinantes que codifican para MAGE-A3, PROSTVAC . 21. El anticuerpo o la utilización de acuerdo con la realización 19, en el que la inmunoterapia para el cáncer es un anticuerpo agonista del CD40 (en una realización un anticuerpo agonista del CD40 es CP-870.893 o SGN-40) . 22. Un método para determinar si un sujeto con cáncer es un candidato para el régimen de tratamiento para el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR, y el método incluye: - la determinación ex vivo o in vitro de los niveles de uno o más de los siguientes marcadores: CSF-IR, CD68/CD163, CD68/MHC de clase II, CD31 (densidad en los microvasos) , y Ki67 y otros marcadores, como por ejemplo, inmunoinfiltrantes ; en una muestra del sujeto, donde la muestra se selecciona a partir de un grupo que incluye tejido, sangre, suero, plasma, células tumorales y células tumorales circulantes; y - en el que un cambio en el nivel de uno o más de CSF-IR, CD68/CD163, CD68/ HC de clase II, CD31 (densidad en los microvasos) y Ki67 y otros marcadores, como por ejemplo, inmunoinfiltrantes (por ejemplo, células CD4- y/o CD8-T) , en comparación con los niveles correspondientes a un individuo que no padece de cáncer, es indicativo de que el sujeto es un candidato para el régimen de tratamiento contra el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR. 23. El método de la realización 22, en el que el anticuerpo utilizado en dicho régimen es un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las realizaciones precedentes. 24. El método de las realizaciones 21 o 22 donde, en este método, el cambio en el nivel de CSF-1R, CD68/CD163, CD68/MHC de clase II, CD31 (densidad en los microvasos) y Ki67 y otros marcadores, como por ejemplo, inmunoinfiltrantes (por ejemplo, células T CD4- y/o CD8) , en comparación con el nivel en un individuo que no padece de cáncer es un aumento del nivel de uno o más de estos marcadores . 25. Un método para determinar si un sujeto con cáncer es un candidato para el régimen de tratamiento para el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR, y el método incluye: - la determinación ex vivo o in vitro de los niveles de uno o más de los siguientes marcadores: CSF-1, Trap5b, SCD163, IL-34; en una muestra del sujeto, donde la muestra se selecciona a partir de un grupo que incluye tejido, sangre, suero, plasma, células tumorales (por ejemplo, en forma de una muestra del tejido tumoral) y células tumorales circulantes; y - en el que un cambio en el nivel de uno o más de CSF-1, Trap5b, sCD163, IL-34, en comparación con los niveles correspondientes a un individuo que no padece de cáncer, es indicativo de que el sujeto es un candidato para el régimen de tratamiento contra el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-1R. 26. El método de la realización 25, en el que el anticuerpo utilizado en dicho régimen es un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las realizaciones precedentes. 27. El método de las realizaciones 25 o 26 donde, en este método, el cambio en el nivel de CSF-1, Trap5b, SCD163, IL-34, en comparación con el nivel en un individuo que no padece de cáncer es un aumento del nivel de uno o más de estos marcadores. 28. El método de cualquiera de las realizaciones 25-27 donde, en este método, se determina ex vivo o in vitro el nivel y el cambio del de sCD163. 29. Un método para determinar si un sujeto con cáncer es un candidato para el régimen de tratamiento para el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR, y el método incluye: - la determinación ex vivo o in vitro de los niveles de uno o más de los siguientes marcadores: IFNy, TNFa, IL-?ß, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, GM-CSF, VEGF, MCP-1, CCL18 , CCL22, MIP-1, Galectin 3, ILIRa, TGF alfajen una muestra del sujeto, donde la muestra se selecciona a partir de un grupo que incluye tejido, sangre, suero, plasma, células tumorales y células tumorales circulantes; y - en el que un cambio en el nivel de uno o más de IFNy, TNFa, IL-?ß, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, GM-CSF, VEGF, MCP-1, CCL18, CCL22, MIP-1, galectina 3, ILIRa, TGF alfa, en comparación con los niveles correspondientes a un individuo que no padece de cáncer, es indicativo de que el sujeto es un candidato para el régimen de tratamiento contra el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR. 30. El método de realización 29, en el que el anticuerpo utilizado en dicho régimen es un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las realizaciones precedentes. 31. El método de las realizaciones 29 o 30 donde, en este método, el cambio en el nivel de IFNy, TNFa, IL-?ß, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, GM-CSF, VEGF, MCP-1, CCL18, CCL22, MIP-1, galectina 3, ILIRa, TGF alfa, en comparación con el nivel en un individuo que no padece de cáncer es un aumento del nivel de uno o más de estos marcadores . 32. Un anticuerpo que se une al CSF-1R humano para la utilización en el tratamiento de cáncer, en el que el anticuerpo se administra en combinación con un anticuerpo biespecífico para ANG-2-VEGF.
Los siguientes ejemplos, listado de secuencias y figuras se proporcionan para facilitar la comprensión de la presente invención, el verdadero ámbito de la cual se describe en las reivindicaciones anejadas. Debe entenderse que pueden hacerse modificaciones en los procedimientos descritos sin alejarse del espíritu de la invención.
Ejemplos Ejemplo 1 Generación de una linea celular de hibridoma que produce anticuerpos anti-CSF-lR Procedimiento de inmunización de ratones MRI Los ratones NMRI se inmunizaron con un vector de expresión pDisplay™ (Invitrogen, EE.UU.) que codifica para el dominio extracelular del huCSF-lR mediante la utilización de la electroporación. Cada ratón se inmunizó 4 veces con lOC^g de DNA. Cuando se consideró que los títulos séricos del anti-huCSF-lR fueron suficientes, se potenció adicionalmente a los ratones con 50 g de una mezcla 1:1 de la quimera huCSF-lR ECD/huCSF-lR ECDhuFc en 200 µ? de PBS por vía intravenosa (i.v.), 4 y 3 días antes de la infusión.
ELISA especifico de antigeno Se determinaron los títulos séricos del anti-CSF-lR en los ratones inmunizados mediante un ELISA específico de antígeno .
Se capturaron 0,3 µg/ml de la quimera huCSF-lR-huFc (dominio soluble extracelular) en una placa de estreptavidina (MaxiSorb; MicroCoat, DE, de Ca . 11974998/MC1099) con 0,1 mg/ml de anti-Fc · biotinilado (Jackson ImmunoResearch. , N-Cat. 109-066-098) y se añadió IgG anti-murina F(ab')2 conjugada con peroxidasa de rábano picante (HRP) (GE Healthcare, RU, N° Cat. NA9310V) diluida en 1/800 de PBS/Tween20 al 0,05% /BSA al 0,5%. Los sueros se diluyeron a 1/40 en PBS/Tween20 al 0,05%/BSA al 0,5% y se diluyó de forma seriada hasta 1/1638400. Los sueros diluidos se añadieron a los pocilios. El suero pre-tratamiento se utilizó como control negativo. Se utilizó una serie de diluciones del Mab3291 anti-CSF-lR humano murino (R&D-Systems , RU) desde 500 ng/ml hasta 0,25 ng/ml como control positivo. Todos los componentes se incubaron conjuntamente durante 1,5 horas. Los pocilios se lavaron 6 veces con PBST (PBS/Tween20 al 0,2%) y se desarrollaron ensayos con la soluci ó n ABTS® recién preparada (1 mg/ml) (ABTS: ácido 2,2 ' -acino-bis-3-etilbenztiazolin-6-sulfónico) durante 10 minutos a temperatura ambiente (RT) . Se midió la absorbancia a 405 nm.
Generación del hibridoma Los linfocitos murinos pueden aislarse y fusionarse con una línea celular de mieloma murino mediante la utilización de los protocolos estándar basados en PEG para la generación de hibridomas. Entonces se criban los hibridomas resultantes para la producción de anticuerpos específicos de antígeno. Por ejemplo, las suspensiones celulares únicas de linfocitos derivados del bazo de ratones inmunizados se fusionan con células de mieloma murino no secretoras de Ag8 P3X63Ag8.653 (ATCC, CRL-1580) con PEG al 50%. Las células se colocan en placas a aproximadamente 104 en una placa de microtitulación de 96 pocilios con fondo llano, seguido de aproximadamente dos semanas de incubación en un medio selectivo. Entonces, los pocilios individuales se criban mediante un ELISA para los anticuerpos monoclonales IgM e IgG anti-CSF-lR humanos. Una vez aparece el crecimiento extensivo del hibridoma, los hibridomas secretores de anticuerpos se recolocan en una placa, se criban otra vez, y si aún son positivos para los anticuerpos monoclonales IgG anti-CSF-lR humanos, se pueden subclonar mediante FACS. Entonces, los subclones estables se cultivan in vitro para producir anticuerpos en el medio de cultivo tisular para la caracterización. Los anticuerpos de acuerdo con la invención pueden seleccionarse mediante la utilización de la determinación de la de los anticuerpos anti-CSF-lR al fragmento delD4 del CSF-IR humano y al dominio extracelular del CSF-IR humano (CSF-1R-ECD) , tal y como se describe en ejemplo 4, así como la determinación de la inhibición del crecimiento de las células NIH3T3 transfectadas con el CSF-IR salvaje (señalización dependiente de ligando) o el CSF-IR mutante L301S Y969F (señalización independiente de ligando) bajo el tratamiento con los anticuerpos monoclonales anti-CSF-lR, tal y como se describe en ej emplo 5.
Cultivo de hibridomas Los hibridomas muMAb generados se cultivaron en RPMI 1640 ( PAN - N° de catálogo (N° Cat . ) PO4-17500) suplementado con 2 mM de L-glutamina (GIBCO - BB35050-038) , 1 mM de Na-piruvato (GIBCO - N° Cat. 11360-039), lx NEAA (GIBCO - N° Cat. 11140-035), FCS al 10% (PAA - N° Cat. A15-649) , lx Pen Strep (Roche - N° Cat. 1074440), lx Nutridoma CS (Roche - N° Cat. 1363743), 50 µ? de mercaptoetanol (GIBCO - N° Cat. 31350-010) y 50 U/ml de IL-6 murina (Roche - N° Cat. 1 444 581) a 37°C y C02 al 5%. Algunos de los anticuerpos murinos se han humanizado (por ejemplo, Mab 2F11) y se han expresado de manera recombinante .
Ejemplo 2 Inhibición de la unión del CSF-1 al CSF-IR (ELISA) Mediante el establecimiento de este ensayo para que primero se pueda unir el anticuerpo anti-CSF-lR al CSF-IR-ECD seguido de la detección de ligando no unido al receptor, se pueden evaluar tanto los anticuerpos que desplazan el ligando como la dimerización de los anticuerpos anti-CSF-lR inhibidores. El test se llevó a cabo en placas de microtitulación de 384 pocilios (MicroCoat, DE, N° Cat. 464718) a RT. Después de cada paso de incubación se lavaron las placas 3 veces con PBST.
Al inicio, las placas se recubrieron con 0,5 mg/ml de anti-Fcy F(ab')2 biotinilado caprino (Jackson ImmunoResearch. , Nr Cat .109-006-170) durante 1 hora (h) .
Entonces se bloquean los pocilios con PBS suplementado con Tween®-20 al 0,2% y BSA al 2% (Roche Diagnostics GmbH, DE) durante 0,5 h. se inmovilizaron 75 ng/ml de la quimera huCSF-lR-huFc (que forma el dominio extracelular del huCSF-lR dimérico soluble) en una placa durante 1 h. Entonces las diluciones de los anticuerpos purificados en PBS/Tween20 al 0,05%/BSA al 0,5% se incubaron durante 1 h. Tras la adición de una mezcla de 3 ng/ml hu CSF-1 fragmento activo de 149 aa del CSF-1 humano (aa 33-181 del Id. de Sec. N° 86) ;Biomol, DE, N° Cat. 60530), 50 ng/ml del clon BAF216 anti-CSF-1 biotinilado (R&D-Systems, RU) y estreptavidina HRP diluida a 1:5000 (Roche Diagnostics GmbH, DE, N° Cat . 11089153001) durante lh., las placas se lavaron 6 veces con PBST. El SC 2- 4A5 anti-CSF-lR (Santa Cruz Biotechnology, EE.UU.), que inhibe la interacción ligando-receptor, se utilizó como control positivo. Las placas se desarrollaron con la solución de sustrato POD B blue® recién preparada (BM blue®: 3,3'- 5 , 5 ' -tetrametilbencidina, Roche Diagnostics GmbH, DE, N" Cat. 11484281001) durante 30 minutos a RT. La absorbancia se midió a 370 nm. Se observa una disminución si el anticuerpo anti- CSF-1R causa la liberación del CSF-1 des del complejo dimérico. Todos los anticuerpos anti-CSF-lR mostraron un inhibición significativa de la interacción del CSF-1 con el CSF-1R (véase tabla 1) . El SC 2-4A5 anti-CSF-lR (Santa Cruz Biotechnology, EE.UU., véase también Sherr, C.J. et al., Blood 73 (1989) 1786-1793) , que inhibe la interacción ligando-receptor, se utilizó como control de referencia.
Tabla 1: Valores de CI50 calculados para la inhibición de la interacción CSF-l/CSF-lR Ejemplo 3 Inhibición de la fosforilación del CSF-IR inducida por el CSF-1 en células T recombinantes NIH3T3-CSF-1R. 4.5x103 células NIH 3T3 infectadas retroviralmente con un vector de expresión para el CSF-IR de longitud completa se cultivaron en DMEM (PAA N° Cat. E15-011) , 2mM de L-glutamina (Sigma, N° Cat. G7513, 2mM de piruvato sódico, lx aminoácidos no esenciales, FKS al 10% (PAA, N° Cat. A15-649) y 100pg/ml de PenStrep (Sigma, N° Cat. P4333 [10mg/ml] ) hasta que llegaron a la confluencia. Después de esto, las células se lavaron con un medio DMEM libre de suero (PAA N° Cat. E15-011) suplementado con selenuro sódico [5ng/ml] (Sigma, N° Cat. S9133), transferrina [10 g/ml] (Sigma, N° Cat. T8158) , BSA [400pg/ml] (Roche Diagnostics GmbH, N° Cat. 10735078), 4mM de L-glutamina (Sigma, N° Cat.G7513), 2mM de piruvato sódico (Gibco, N° Cat. 11360), lx aminoácidos no esenciales (Gibco, Cat: 11140-035), 2 -mercaptoetanol [0,05mM] (Merck, N° Cat. M7522), y 100pg/ml de PenStrep (Sigma, N° Cat. P4333) y se incubaron en 30 µ? del mismo medio durante 16 horas para permitir la regulación del receptor. Se añadieron a las células 10 µ? de anticuerpos anti-CSR-lR durante 1,5 h. Entonces se estimularon las células con 10 µ? de hu-CSF-1 a 100 ng/ml (fragmento activo de 149 aa del CSF-1 humano (aa 33-181 del Id. de Sec . N° 86); Biomol, DE, N° Cat . 60530) durante 5 min. Tras la incubación, se sustrajo el sobrenadante, se lavaron las células dos veces con 80 µ? de PBS helado y se añadieron 50 µ? de tampón Utico recién preparado (150mM de NaCl/20mM de Tris a pH 7,5/lmM de EDTA/lmM de EGTA/Tritón X-100 al 1%/1 tableta inhibidora de la proteasa (Roche Diagnostics GmbH N° Cat. 1 836 170) por cada 10 mi de tampón/??µ?/mi de la mezcla inhibidora de la fosfatasa 1 (Sigma N° Cat. P-2850, solución de reserva lOOx) / ??µ?/ml del inhibidor de la proteasa 1 (Sigma N° Cat. P-5726, solución de reserva ????) /10µ1/p?1 1 M de NaF) . Después de estar 30 minutos en el hielo, las placas se sacudieron vigorosamente en una mesa agitadora durante 3 minutos y, entonces, se centrifugó 10 minutos a 2200 rpm (Heraeus Megafuge 10) .
La presencia del receptor del CSF-1 fosforilado y total en el lisado celular se analizó mediante un Elisa. Para la detección del receptor fosforilado se utilizó el kit de R&D-Systems (N° Cat. DYC3268-2) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Para la detección del CSF-1R total se inmovilizaron 10 µ? del lisado en una placa mediante la utilización del anticuerpo de captura que contiene el kit. Después se añadieron el anticuerpo anti-CSF-lR BAF329 diluido a 1:750 (R&D-Systems) y di conjugado de estreptavidina-HRP diluido a 1:1000. Después de 60 minutos, las placas se prepararon con una solución ABTS · recién preparada y se detectó la absorbancia. Los datos se calcularon en forma de % respecto al control positivo sin anticuerpo y se expresó el valor de proporción del receptor fosfo/total. El control negativo se definió por la no adición del M-CSF-l . Se utilizó el SC 2-4A5 anti-CSF-lR (Santa Cruz Biotechnology, EE.UU., véase también Sherr, C.J. et al., Blood 73 (1989) 1786-1793), que inhibe la interacción ligando-receptor, como control de referencia.
Tabla 2: Valores de CI50 calculados para la inhibición de fosforilación del receptor del CSF-1.
Ejemplo 4 Determinación de la unión de los anticuerpos anti-CSF-lR al fragmento delD4 del CSF-1R humano y al dominio extracelular del CSF-1R humano (CSF-1R-ECD) Preparación del dominio extracelular del CSF-1R humano (CSF-1R-ECD) (incluyendo los subdominios extracelulares DI - D5, hCSF-lR-ECD) con el Id. de Sec. N° 64: pCMV-preS-Fc-hCSF-lR-ECD (7836 pb) codifica para el ECD completo del CSF-1R humano (Id. de Sec. N° 64) fusionado en el extremo C-terminal a un lugar de escisión por la proteasa PreScission, seguido de los aalOO-330 de la IgGl humana y un marcador 6xHis-Tag, bajo el control del promotor CMV. El péptido señal natural tiene se ha modificado mediante la inserción de los aminoácidos G y S tras la primera M para crear un sitio de restricción BamHI.
Preparación del fragmento delD4 del CSF-1R humano (incluyendo los subdominios extracelulares D1-D3 y D5, hCSF- lR-delD4) con el Id. de Sec. N° 65: hCSF-lR-delD4-Vl-PreSc-hFc-His se clonó a partir de pCMV-preS-Fc-hCSF-lR-ECD mediante el protocolo de mutagénesis dirigido Stratagene QuikChange XL, utilizando como el cebador directo delD4-for con la secuencia CACCTCCATGTTCTTCCGGTACCCCCCAGAGGTAAG (Id. de Sec . N° 68) y delD4-rev como la secuencia complementaria inversa que hace de cebador inverso. Se utilizó una variante del protocolo, publicada en Biotechniques 26 (1999) 680, para extender ambos cebadores en reacciones separadas en tres ciclos precedentes al protocolo Stratagene regular: Se prepararon dos mezclas de reacción de 50 µ? de acuerdo con el manual del fabricante, y cada una contenía 10 ng del plásmido pCMV-preS-Fc-hCSF-lR-ECD como plantilla y 10 pM de uno de los cebadores delD4-for o delD4-rev, y 0,5 µ? de la polimerasa de DNA Pfu, tal y como se proporciona en el kit Se realizaron tres ciclos de PCR 95 °C 30 s. / 55 °C 60 s. / 68 °C 8 min. , entonces se combinaron 25 µ? de cada una de las mezclas de reacción en un nuevo tubo y se añadieron 0,5 µ? de la polimerasa de DNA Pfu. Se llevo a cabo el protocolo regular de PCR con 18 ciclos de temperatura, tal y como se especifica en el manual del kit Stratagene, seguidos de 2 h. de digestión final con la enzima de restricción Dpnl proporcionada en el kit. Los clones que contienen las deleción se detectaron mediante la digestión con Cel II y Not I y se verificaron mediante secuenciación.
La proteína se preparó mediante la transfección transitoria en e sistema de suspensión celular Hek293 FreeStile (Invitrogen) de acuerdo con las especificaciones del fabricante. Tras una semana, se filtraron los 500 mi de sobrenadante y se cargaron en una columna de proteína A HiTrap MabSelect Xtra (GE healthcare) de lml (0,2 ml/min) . La columna se lavó con PBS, luego con 50 mM de Tris/150 mM de NaCl/ 1 mM de EDTA/ pH 7,3. Se cargaron 75 µ? de la proteasa PreScission (GE #27-0843-01) diluidos en 375 µ? del mismo tampón en otra columna y la columna cerrada se incubó durante la noche a 4 oC en rotación. La columna se montó sobre una columna de 1 mi GSTrap FF (GE helthcare) y se eluyó la proteína deseada (0,2 ml/min, fracciones de 0,2 mi) . Las fracciones agrupadas se concentraron desde los 1,8 mi a los 0,4 mi mediante la ultrafiltración centrífuga mediante un 3k Nanosep y se cromatografiaron con S200 HR SEC en PBS (0,5 ml/min) .
El fragmento delD4 del CSF-1R humano se obtuvo en dos fracciones en forma de una molécula dimérica (agrupaciónl , V=l,5 mi; c= 0,30 mg/ml; masa aparente en SDS page de 83 kDa, reducido a 62 kDa) y en forma de monómero (agrupación 2, V=l,4 mi; c = 0,25 mg/ml masa aparente en SDS page de 62 kDa) La forma dimérica se utilizó en todos los experimentos.
Determinación de la unión de los anticuerpos anti-CSF-lR al fragmento delD4 del CSF-IR humano y al dominio extracelular del CSF-IR humano (CSF-1R-ECD) (señales de unión como unidades de respuesta (RU) : Instrumento: Biacore T100 (GE Healthcare) Programa: T100 Control, Versión 2.0.1 T100 Evaluation, Versión 2.0.2 Formato de ensayo Chi : CM5 Temperatura: 25°C Los fragmentos del CSF-IR se inmovilizaron mediante el acoplamiento a aminas . Para comparar la unión de diferentes anticuerpos anti-CSF-lR de acuerdo con la invención, se inyectó una concentración del anticuerpo de ensayo. El Mab3291 anti-CSF-lR (R&D-Systems) y SC 2-4A5 (Santa Cruz Biotechnology, EE.UU., véase también Sherr, C.J. et al., Blood 73 (1989) 1786-1793) , se utilizaron como controles de referencia, el anti-CCR5 m<CCR5>Pz03.1C5 (depositado como DSM ACC 2683 el 18/08/2004 en DSMZ) como control negativo, todos ellos bajo las mismas condiciones que las de los anticuerpos anti-CSF-lR de acuerdo con la invención.
Acoplamiento a aminas de los fragmentos del CSF-IR El acoplamiento a aminas estándar de acuerdo con las instrucciones del fabricante: tampón de desplazamiento: PBS-T (Roche: 11 666 789 + Tween20 al 0,05%: 11 332 465), activación mediante una mezcla de EDC/NHS, inyección del fragmento delD4 del CSF-IR humano (incluyendo los subdominios extracelulares DI -D3 y D5) (Id. de Sec . N° 65) y el dominio extracelular del CSF-IR humano (CSF-1R-ECD) (incluyendo los subdominios extracelulares DI -D5) (Id. de Sec. N° 64) durante 600 segundos a una tasa de flujo de ??µ?/min; diluido en el tampón de acoplamiento NaAc, pH 5,0, c = 10 pg/mL; los grupos carboxilo activados que finalmente permanecen se bloquearon mediante la inyección de 1 M de etanolamina.
Unión de Mab 2F11, Mab 2E10, Mab 3291 y sc2-4A5 <CSF-1R> y otros anticuerpos anti-CSF-lR al fragmento delD4 del CSF-IR humano y al dominio extracelular del CSF-IR humano (CSF-1R-ECD) a 25°C Tampón de desplazamiento: PBS-T (Roche: 11 666 789 + Tween20 al 0,05%: 11 332 465) Muestra del analito: La unión se midió a una tasa de flujo de 30 pL/min mediante una inyección del analito con una concentración c = 10 nM (para los Mab 1G10, Mab 2H7 y hMab 2Fll-e7 humanizados en un segundo experimento) . Cada inyección duró 700 segundos, seguida de una fase de disociación de 180 segundos. La regeneración final se llevó a cabo después de cada ciclo utilizando 50 mM de NaOH, con un tiempo de contacto de 60 segundos, una tasa de flujo de 30 L/min.
Las señales se midieron mediante un punto de informe 10 segundos después del final de la inyección. Las señales de referencia (señales de un flujo celular de referencia en blanco (tratadas solamente con EDC/NHS y etanolamina) se sustrajeron para proporcionar las señales de unión (en forma de RU) . Si las señales de unión de los anticuerpos que no se unen fueron ligeramente inferiores a 0 (Mab 2F11 = -3; Mab 2E10 = -2; Mab 1G10 = -6, Mab 2H7 =- 9; y hMab 2Fll-e7 humanizado = -7) se redondearon a 0.
Tabla 3a: Unión de los Mabs <CSF-1R> al fragmento delD4 del CSF-IR humano y al CSF-1R-ECD y la proporción a 25°C, medidas mediante SPR Los Mab 2F11 y Mab 2E10 mostraron unión al dominio extracelular del CSF-1R humano (CSF-IR-ECD) (véase la Fig. 2b) ; no obstante, no se detectó unión al fragmento delD4 del CSF-1R. (véase la Fig. 2a) .
Los Sc2-4A5 y MAB3291 mostraron unión al CSF-IR-ECD y al delD4 (véase la Fig. 2b y 2a) .
Así, la proporción de unión a los anticuerpos anti-CSF- 1R Mab 2F11 y Mab 2E10 al fragmento delD4 del CSF-1R / al CSF-IR-ECD fue claramente inferior a 1:50 (= 0,02), mientras que la proporción de unión de MAB3291 y Sc2-4A5 fue de 1,61 y 1,50, respectivamente fue muy superior de 1:50 (= 0,02). El anticuerpo m<CCR5>Pz03.1C5 como control negativo no se unió (tal y como se esperaba) .
Los Mab 1G10, Mab 2H7 y hMab 2Fll-e7 humanizado mostró unión al dominio extracelular del CSF-1R humano (CSF-IR-ECD) (véase la Fig. 2d) ; no obstante, no se detectó unión al fragmento delD4 del CSF-1R. (véase la Fig. 2c) . De este modo, la proporción de unión de los anticuerpos anti-CSF-lR Mab 1G10, Mab 2H7 y hMab 2Fll-e7 humanizado al fragmento delD4 del CSF-IR / al CSF-IR-ECD fue claramente inferior a 1:50 (= 0.02) .
En un experimento adicional, se investigaron los anticuerpos anti-CSF-lR 1.2.SM (anticuerpo que desplaza el ligando para el CSF-IR, descrito en la patente WO 2009/026303) , CXIIG6 (anticuerpo que desplaza el ligando para el CSF-IR, descrito en la patente WO 2009/112245) , el anticuerpo anti-CSF-lR abl0676 caprino policlonal (abcam) . El anticuerpo anti-Mab para el CSF-1R3291 (R&D-Systems) se utilizó como control de referencia. El m<CCR5>Pz03.1C5 anti- CCR5 (depositado como DSM ACC 2683 el 18/08/2004 en DSMZ) se utilizó como control negativo.
Tabla 3b: Unión de los Mabs <CSF-1R> al fragmento delD4 del CSF-IR humano y al CSF-IR-ECD y proporción a 25°C, medida mediante SPR 1.2.SM, CXIIG6, abl0676 y MAB3291 mostraron unión CSF-1R-ECD y al delD4 (véase las Fig. 2f y 2e) .
La proporción de unión de 1.2.SM, CXIIG6, abl0676 y MAB3291 fue muy superior a 1:50 (= 0.02) . El anticuerpo m<CCR5>Pz03.1C5 como control negativo no se unió (tal y como se esperaba) .
Ejemplo 5 Inhibición del crecimiento de las células recombinantes NIH3T3-CSF-1R en un cultivo 3D bajo tratamiento con anticuerpos monoclonales anti-CSF-lR (ensayo CellTiterGlo) Las células NIH 3T3 infectadas retroviralmente con un vector de expresión para el CSF-1R salvaje de longitud completa (Id. de Sec. N° 62) o el CSF-1R mutante L301S Y969F (Id. de Sec. N° 63), se cultivaron en el medio hiperglucosado DMEM (PAA, Pasching, Austria) suplementado con 2mM de L- glutamina, 2mM de piruvato sódico y aminoácidos no esenciales y suero bovino fetal al 10% (Sigma, Taufkirchen, Alemania) sobre discos recubiertos con poli-HEMA (poli (2- hidroxietilmetacrilato) ) (Polysciences , Warrington, PA, EE.UU.)) para prevenir la adherencia de la superficie plástica. Las células se siembran en un medio que sustituye el suero con 5ng/ml de selenuro sódico, 10mg/ml de transíerrina, 400pg/ml de BSA y 0,05 mM de 2-mercaptoetanol. Cuando se tratan con 100ng/ml del hu-CSF-1 (fragmento activo de 149 aa del CSF-1 humano (aa 33-181 del Id. de Sec . N° 86); Biomol, DE, N° Cat. 60530) las células que expresan el wtCSF-1R forman esferoides densos que crecen en tres dimensiones, una propiedad que se denomina independencia de anclaje. Estos esferoides se asemejan bastante a la arquitectura tridimensional y la organización de los tumores sólidos in situ. Las células recombinantes mutantes para CSF-1R son capaces de formar esferoides independientes del ligando CSF-1 Los cultivos de los esferoides se incubaron durante 3 días en presencia de diferentes concentraciones del anticuerpo para determinar una CI50 (concentración con un 50 por ciento de inhibición de la viabilidad celular) . El ensayo CellTiterGlo se utilizó para detectar la viabilidad celular mediante la medida del contenido de ATP de las células .
Tabla 5a: Mab para el CSF-1R CI50 del wtCSF-lR CI50 del CSF-1R Los Mab controles de referencia de R&D-Systems 3291 no mostraron inhibición del la proliferación de las células recombinantes para el CSF-1R mutante.
En un experimento adicional, se investigaron el anticuerpo anti-CSF-lR de acuerdo con la invención hMab 2F11- e7 y los anticuerpos anti-CSF-lR 1.2.SM (anticuerpo que desplaza el ligando para el CSF-1R, descrito en la patente WO 2009/026303) , CXIIG6 (anticuerpo que desplaza el ligando para el CSF-1R, descrito en la patente WO 2009/112245) , el anticuerpo anti-CSF-lR abl0676 caprino policlonal (abeam) y SC 2-4A5 (Santa Cruz Biotechnology, EE.UU., véase también Sherr, C.J. et al., Blood 73 (1989) 1786-1793).
Los cultivos de los esferoides se incubaron durante 3 días en presencia de diferentes concentraciones del anticuerpo para determinar una CI30 (concentración con un 30 por ciento de inhibición de la viabilidad celular) . La máxima concentración fue de 20 g/ml. El ensayo CellTiterGlo se utilizó para detectar la viabilidad celular mediante medida del contenido de ATP de las células.
Tabla 5b: Ejemplo 6 Inhibición del crecimiento de las células tumorales BeWo en un cultivo 3D bajo tratamiento con anticuerpos monoclonales anti-CSF-lR (ensayo CellTiterGlo) Las células de coriocarcinoma BeWo (ATCC CCL-98) se cultivaron en el medio F12K (Sigma, Steinheim, Alemania) suplementado con FBS al 10% (Sigma) y 2mM de L-glutamina. Se sembraron 5x104 células/pocilio en un placas recubiertas con poli-HEMA (poli (2-hidroxietilmetacrilat) ) de 96 pocilios que contenían el medio suplementado con FBS al 0,5 % y BSA al 5%. De manera concomitante, se añadieron 200 ng/ml del huCSF-1 (fragmento activo de 149 aa del CSF-1 humano (aa 33-181 del Id. de Sec. N° 86)) y 10µ9/p?1 de diferentes anticuerpos monoclonales anti-CSF-lR y se incubaron durante 6 días. Se utilizó el ensayo CellTiterGlo para detectar la viabilidad celular mediante la medida del contenido de ATP de las células en unidades de luz relativas (RLU) . Cuando los cultivos de esferoides de BeWo se trataron con diferentes anticuerpos anti-CSF-lR (10 pg/ml) se observó la inhibición del crecimiento inducido por el CSF-1. Para calcular la inhibición mediada por el anticuerpo se sustrajo el valor de RLU medio de las células BeWo no estimuladas de todas las muestras. El valor medio de RLU de las células estimuladas con el CSF-1 se determinó arbitrariamente al 100%. Los valores de RLU medios de las células estimuladas con el CSF-1 y tratadas con anticuerpos anti-CSF-lR se calcularon en % de las RLU estimuladas por el CSF-1. La tabla 6 muestra los datos calculados de inhibición del crecimiento de las células tumorales BeWo en un cultivo 3D bajo tratamiento con anticuerpos monoclonales anti-CSF-lR; Las Fig.la y b ilustran los valores normalizados medios de RLU.
Tabla 6: Ejemplo 7 Inhibición de la diferenciación de macrófagos humanos bajo tratamiento con anticuerpos monoclonales anti-CSF-lR (ensayo CellTiterGlo) Se aislaron monocitos humanos a partir de sangre periférica utilizando la mezcla de enriquecimiento de monocitos humanos RosetteSepTM (StemCell Tech. - N° Cat. 15028) . Las poblaciones de monocitos enriquecidos se sembraron en placas de microtitulación de 96 pocilios (2,5x104 células/pocilio) en 100 µ? de RPMI 1640 (Gibco - N° Cat. 31870) suplementado con FCS al 10% (GIBCO - N° Cat. 011- 090014M) , 4 mM de L-glutamina (GIBCO - N° Cat. 25030) y lx PenStrep (Roche N° Cat. 1 074 440) a 37°C y C02 al 5% en una atmósfera humidificada . Cuando se añadieron al medio 150 ng/ml de huCSF-1 se pudo observar una clara diferenciación hacia los macrófagos adherentes . Esta diferenciación se pudo inhibir mediante la adición de anticuerpos anti-CSF-lR. Además, la supervivencia de los monocitos se afectó y pudo analizarse con un análisis CellTiterGlo (CTG) . Se calculó CI50 a partir de la inhibición de la supervivencia de los monocitos dependiente de la concentración mediada por un tratamiento con un anticuerpo (véase tabla 7) .
Tabla 7: En una serie de ensayos separados, las versiones humanizadas del Mab 2 Fll, por ejemplo, hMab 2F11-C11, hMab 2Fll-d8, hMab 2Fll-e7, hMab 2F11-Í12, mostraron valores de CI50 de 0,07 g/ml (hMab 2Fll-cll) , 0, 07 g/ml (hMab 2Fll-d8) , 0,04 g/ml (hMab 2Fll-e7) y 0,09 g/ml (hMab 2Fll-fl2) .
Ejemplo 8 Inhibición de la diferenciación de macrófagos cinomolgos tratamiento con anticuerpos monoclonales anti-CSF-lR (ensayo CellTxterGlo) Se aislaron monocitos cinomolgos de la sangre periférica utilizando un kit de primates no humanos CD14 MicroBeads (Miltenyi Biotec - N° Cat. 130-091-097) de acuerdo con la descripción del fabricante. Las poblaciones de monocitos enriquecidos se sembraron en placas de microtitulación de 96 pocilios (1-3x104 células/pocilio) en 100 µ? de RPMI 1640 (Gibco - N° Cat. 31870) suplementado con FCS al 10% (GIBCO -N° Cat. 011-090014 ) , 4 mM de L-glutamina (GIBCO - N° Cat. 25030) y lx PenStrep (Roche N° Cat. 1 074 440) a 37°C y C02 al 5% en una atmósfera humidificada . Cuando se añadieron al medio 150 ng/ml de huCSF-1 se pudo observar una clara diferenciación hacia los macrófagos adherentes. Esta diferenciación se pudo inhibir mediante la adición de anticuerpos anti-CSF-lR. Además, la supervivencia de los monocitos se afectó y pudo analizarse con un análisis CellTiterGlo (CTG) . La viabilidad se analizó a una concentración de 5 g/ml del tratamiento con anticuerpo (véase la tabla 8) .
Tabla 8: Mab para el % supervivencia % inhibición (de la CSF-1R supervivencia) = (100% - % media de cuatro experimentos (3 exp. utilizan mAb murino, 1 exp. utiliza el mAb quimérico) ** media de dos experimentos que utilizan en solamente el mAb murino Ejemplo 9 Inhibición de la diferenciación de macrófagos humanos Mi y M2 bajo -tratamiento con anticuerpos monoclonales anti-CSF- 1R (ensayo CellTiterGlo) Se aislaron monocitos humanos a partir de sangre periférica utilizando la mezcla de enriquecimiento de monocitos humanos RosetteSepTM (StemCell Tech. - N° Cat . 15028) . Las poblaciones de monocitos enriquecidos se sembraron en placas de microtitulación de 96 pocilios (2,5x104 células/pocilio) en 100 µ? de RPMI 1640 (Gibco - N° Cat. 31870) suplementado con FCS al 10% (GIBCO - N° Cat. 011- 090014M) , 4 mM de L-glutamina (GIBCO - N° Cat. 25030) y lx PenStrep (Roche N° Cat. 1 074 440) a 37°C y C02 al 5% en una atmósfera humidificada . Cuando se añadieron al medio 100 ng/ml de huCSF-1 durante 6 días se pudo observar una clara diferenciación hacia macrofagos adherentes M2 de morfología alargada. Cuando se añadieron al medio 100 ng/ml de huGM-CSF durante 6 días se pudo observar una clara diferenciación hacia macrofagos adherentes Mi de morfología redondeada. Esta diferenciación se asoció a la expresión de ciertos marcadores, tales como el CD163 macrofagos M2 y el CD80 o el MHC de clase II elevado para los macrofagos Mi, tal y como se evaluó mediante citometría de flujo. Las células se lavaron con PBS y, si permanecían adheridas se desprendieron mediante la utilización de 5mM de la solución EDTA en PBS (20 min. a 37 °C) . Entonces se resuspendieorn las células, se lavaron con el tampón de tinción (FCS al 5% en PBS) y se centrifugaron a 300xg durante 5min. Los precipitados se resuspendieron en lml de tampón de tinción y se contaron las células en una cámara Neubauer. Aproximadamente se transfirieron Ixl0e5 células en cada tubo FACS, se centrifugaron a 300xg durante 5 min. y se resuspendieron en el tampón de tinción. Los receptores Fcy receptores se bloquearon mediante la incubación con liq de IgG humana/2, 5xl0e4 células (JIR N° Cat . 009-000-003) en el tampón de tinción durante 20 min. en hielo. Entonces se mezclaron las células con 1,5µ1 de anticuerpo/2 , 5xl0e4 células para la detección de CD80 y CD163, y se utilizaron 5 µ? de anticuerpo/2, 5xl0e4 células para la detección de MHC de clase II: CD163 anti-human murino marcado con PE (BD Bioscience N° Cat. 556018) , CD80 anti-human murino marcado con PE (BD Bioscience N° Cat. 557227) y MHC de clase II anti-human murino marcado con Alexa 647 (Dako- N° Cat. M0775) . El marcador Alexa 647 se conjugó con el anticuerpo mediante la utilización de un kit de mareaje de IgG murina Zenon Alexa 647 (Invitrogen N° Cat. Z25008) Después de 1 hora de incubación en hielo, las células se lavaron dos veces con el tampón de tinción, se resuspendieron y se midieron en un FACS Canto II.
Exclusivamente, se pudo inhibir la diferenciación de los macrófagos M2, que se caracterizan por la expresión de CD163, la ausencia de CD80 y la baja expresión del MHC de clase II, mediante la adición del anticuerpo humanizado anti-CSF-lR hMab 2Fll-e7. Además, se afecta la supervivencia de los macrófagos M2 , pero no la de los MI, y se puede analizar mediante un análisis CellTiterGlo (CTG) . La inhibición de la supervivencia dependiente de la concentración mediante el tratamiento con un anticuerpo durante 7 días se describe en la figura 5a. La expresión de los marcadores de los macrófagos MI y M2, que se evaluó mediante citometría de flujo, se muestra en la figura 5b.
Ejemplo 10 Determinación de la afinidad de unión de los anticuerpos anti-CSF-lR al CSF-1R humano Instrumento: BIACORE · A100 Chip: CM5 (Biacore BR-1006-68) Acoplamiento: acoplamiento de aminas Tampón: PBS (Biacore BR-1006-72) , pH 7,4, 35°C Para las mediciones de afinidad se han acoplado 36 µg/ml de anticuerpos Fcy antimurinos (de cabra, Jackson Immuno Research JIR115-005-071) a la superficie del chip para la captura de los anticuerpos contra el CSF-1R. El dominio extracelular del CSF-1R humano (CSF-1R-ECD) (incluyendo los subdominios extracelulares D1-D5) (Id. de Sec . N° 64) (R&D-Systems 329-MR o pCMV-presS-HisAvitag-hCSF-lR-ECD subclonado) se añadió en varias concentraciones en la solución. La asociación se midió mediante una inyección de CSF-1R de 1,5 minutos a 35 °C; la disociación se midió mediante el lavado de la superficie del chip con tampón durante 10 minutos a 35 °C. Se utilizó el modelo 1:1 Langmuir para el cálculo de los parámetros cinéticos .
Tabla 9: Datos de afinidad medidos mediante SPR En un ensayo de unión biacore separado que utiliza el CSF-IR ECD (no se muestran los datos) se observó cierta competición entre los anticuerpos Mab 2F11 y Mab 2E10 y el anticuerpo Ab SC-2-4A5. No obstante Mab 2F11/Mab 2E10 no se unen al fragmento delD4 DEL CSF-IR humano (véase el ejemplo 4 y la Fig 2a) . Así, la región de unión de Mab 2F11/Mab 2E10 es claramente distinta de la región de unión del Ab SC-2-4A5, pero probablemente está localizada en un área colindante. En tal ensayo de competición, ambos anticuerpos Mab 2F11 y Mab 2E10 no compitieron con el Mab3291 de R&D-Systems (no se muestran los datos) .
Ejemplo 11 Determinación de la unión de los anticuerpos anti-CSF-lR al fragmento D1-D3 del CSF-IR humano Instrumento: Biacore T100 (GE Healthcare) Programa: T100 Control, Versión 1.1.11 B3000 Evaluation, Versión 4.01 Scrubber, Versión 2.0a Formato de ensayo Chi : CM5-Chip Los anticuerpos contra el CSF-1R se capturaron mediante moléculas de captura acopladas a aminas. Utilizando las cinéticas de un solo ciclo, se inyectaron cinco concentraciones crecientes del fragmento D1-D3 del CSF-1R humano (Id. de Sec . N° 66). El fragmento D1-D3 del CSF-1R humano se subclonó en el vector de expresión pCMV-presS-HisAvitag .
El SC 2-4A5 anti CSF-1R (Santa Cruz Biotechnology, EE.UU.; Sherr, C.J. et al., Blood 73 (1989) 1786-1793), que inhibe la interacción ligando-receptor, el y Mab 3291 (R&D-Systems) se utilizaron como controles de referencia.
Moléculas de captura: anticuerpos Fe · · anti-murinos (de cabra, Jackson Immuno Reasearch JIR115-005-071) para los anticuerpos de acuerdo con la invención y el Mab de control 3291 de R&D-Systems y los anticuerpos Fe · anti-rata (de cabra, Jackson Immuno Reasearch JIR112-005-071) para el SC 2-4A5 anti-CSF-lR que hace de control de referencia.
Acoplamiento de aminas de las moléculas de captura Acoplamiento de aminas de acuerdo con las instrucciones del fabricante: tampón de desplazamiento: tampón HBS-N, activación mediante una mezcla de EDC/NHS, con el propósito de densidad de ligando de 2000 RU; los Abs de captura se diluyeron en el tampón de acoplamiento NaAc, pH 4,5, c = 10 pg/mL; los grupos carboxilos activados que finalmente quedaron se bloquearon mediante la inyección de 1 M de etanolamina .
Caracterización cinética de los fragments D1-D3 del CSF-1R humano que se unen a los MAbs <CSF-1R> a 37°C Tampón de desplazamiento: PBS (Biacore BR-1006-72) La captura de los Mabs <CSF-1R> en las celdas de flujo 2-4: flujo 20 µ??/p???. , tiempo de contacto de 90 segundo, c (Abs<CSF-lR>) = 50 nM, diluidos con el tampón de desplazamiento + 1 mg/mL de BSA; Muestra del analito: Las cinéticas de un solo ciclo se midieron a una tasa de flujo de 30 L/min. Mediante cinco inyecciones consecutivas del analito con las concentraciones, c = 7,8, 31,25, 125 500 y 2000 nM, sin regeneración. Cada inyección duró 30 segundos y se siguió de una fase de disociación de 120 segundos para las primeras cuatro inyecciones, y finalmente, 1200 segundos para la concentración mayor (=última inyección) .
La regeneración final se llevó a cabo después de cada ciclo mediante la utilización de 10 mM de glicina a pH 1,5 (Biacore BR-1003-54) , con un tiempo de contacto de 60 segundos y una tasa de flujo de 30 L/min.
Los parámetros cinéticos se calcularon mediante la utilización del referenciado doble usual (referencia control: unión del analito a la molécula de captura; Celda de flujo: concentración del subdominio del CSF-IR "0" como blanco) y el cálculo con un modelo "cinéticas de titulación 1:1 que se unen con una muestra" .
Tabla 10: Datos de afinidad para la unión del fragmento D1-D3 del CSF-IR humano medida mediante SPR Los anticuerpos Mab 2F11, Mab 2E10 y Mab mostraron unión al fragmento D1-D3 del CSF-IR humano.
El Ab SC-2-4A5 que hace de control de referencia tampoco se unió al fragmento D1-D3 del CSF-IR humano.
El Mab R&D-Systems 3291 que hace de control de referencia mostró unión al fragmento D1-D3 del CSF-IR humano.
Ejemplo 12 Alimento del nivel del CSF-1 durante la inhibición del CSF-IR en mono cinomolgo Los niveles séricos del CSF-1 proporcionan un marcador farmacodinámico de la actividad neutralizadora de CSF-IR del hMab 2Fll-e7 inhibidor de la dimerización anti-CSF-lR humano. El anticuerpo hMab 2Fll-e7 anti-CSF-lR se administró por vía intravenosa a un macho y a una hembra de mono cinomolgos de cada grupo de dosificación (1 y 10 mg/kg) . Se recogieron muestras de sangre para el análisis de los niveles del CSF-1 1 semana antes del tratamiento (pre-dosis) , 2, 24, 48, 72, 96, 168 horas post-dosis y semanalmente durante dos semanas más. Los niveles del CSF-1 se determinaron mediante la utilización de un kit de ELISA disponible comercialmente (M-CSF humano Quanticiné®) , de acuerdo con las instrucciones del fabricante (R&D-Systems, RU) . Los niveles del CSF-1 de mono se determinaron mediante la comparación con las muestras de la curva estándar del CSF-1 proporcionadas en el kit.
La administración del hMab 2Fll-e7 indujo un aumento espectacular del CSF-1, de unas ~ 1000 veces más, que, en relación a la dosis administrada, duró 48 h. (lmg/kg) o 15 días (10mg/kg) . Por consiguiente, un inhibidor de la dimerización del CSF-1R ofrece la ventaja de no competir directamente con el ligando altamente regulado que se une al receptor, a diferencia de un anticuerpo que desplaza el ligando .
Ejemplo 13 Eficacia in vivo — inhibición del crecimiento tumoral de anticuerpos anti-CSF-lR en células tumorales de xenoinjerto BT20 del cáncer de mama en ratones SCID beige La línea celular BT20 del cáncer de mama humano expresa el CSF-1R humano pero no tiene expresión del CSF-1 (Sapi, E. et al Cáncer Res 59 (1999) 5578-5585) . Dado que el CSF-1 derivado de ratón no puede activar el CSF-1R humano en las células del tumor, se suplemento el CSF-1 humano recombinante (fragmento activo de 149 aa del CSF-1 humano (aa 33-181 del Id. de Sec. N° 86) (Biomol, Hamburg, Alemania) mediante minibombeos osmóticos (ALZET, Cupertino, CA) , lo que proporcionó una tasa de infusión continua de CSF-1 de 2pg/día (Martin, T.A. , Carcinogenesis 24 (2003) 1317-1323).
Para comparar directamente la eficacia de un anticuerpo que interfiere en la dimerización del CSF-1R con un anticuerpo que desplaza el ligando para el CSF-IR, se evaluaron el anti-Mab 2F11 quimérico para el CSF-IR (anticuerpo que interfiere en la dimerización del CSF-IR) y el 1.2.SM (anticuerpo que desplaza el ligando para el CSF-IR descrito en la patente O 2009/026303) en el modelo de xenoinjerto BT-20.
A los ratones SCID beige (Charles River, Sulzfeld, Alemania) se les coinyectó subcutáneamente lx 107 células BT-20 (ATCC HTB-19) y ???µ? de Matrigel . El tratamiento de los animales empezó el día de la aleatorización con un valor medio del volumen tumoral de 100 mm3. Los ratones fueron tratados una vez por semana i.p. con los anticuerpos respectivos (véase la figura 4) en 20mM de histidina, 140 mM de tampón NaCl a pH 6,0. Las dimensiones del tumor se midieron mediante un calibrador, empezando el día de la estadificación y luego 2 veces por semana durante todo el periodo de tratamiento. El volumen tumoral se calculó de acuerdo con el protocolo NCI (peso tumoral = l/2ab2, donde "a" y "b" son los diámetros largo y corto del tumor, respectivamente) .
El análisis del crecimiento tumoral se muestra en la figura 4. La inhibición del CSF-IR humano en las células tumorales con el anti-Mab 2F11 quimérico para el CSF-IR fue estadísticamente más eficaz en la mediación de la inhibición del crecimiento tumoral que el anticuerpo anti-CSF-lR 1.2.SM (anticuerpo para el CSF-1R descrito en la patente WO 2009/026303) .
En un experimento separado se combinó el tratamiento con 3 mg/kg i.v. de docetaxel (Taxotere® Sanofi Aventis, RU) y el anticuerpo anti-murino para el CSF-1R (30mg/kg i .p/semanalmente) . El docetaxel se administró 3 veces por semana y cada ciclo se siguió de 3 semanas libres de fármaco. Después de dos ciclos del tratamiento con docetaxel, la monoterapia con el anticuerpo inhibió el crecimiento del tumor primario (TGI : 83%, npTCR: 0,5, CI: 0,1-1,8) en comparación con el grupo de docetaxol a 3 mg/kg (TGI: 75%, npTCR: 0,55, CI : 0,2-1,5). La combinación de docetaxol y el anticuerpo anti-CSF-lR resultó en una eficacia superior que las monoterapias (TGI: 94%, npTCR: 0,3, CI: 0,1-0,8). En un punto temporal posterior, las diferencias de TGI entre los grupos de combinación y monoterapia fueron menos pronunciadas, debido a la fuerte inhibición de cada monoterapia. Sin embargo, el análisis del tiempo de supervivencia medio fue superior en la combinación (anticuerpo 159d, docetaxel 154d, combinación 18Od) .
Ejemplo 14 Tratamiento combinado de un anticuerpo anti-CSF-lR que se une a los dominios D4-D5 del dominio extracelular del CSF-1R humano con paclitaxel . 2.1 Objetivos principales Parte I (Brazo A: versión humanizada del Mab anti-CSF-lR 2F11 (hMab 2Fll-e7) , aumento de la dosis de un solo agente [SA] ; Brazo B: anticuerpo Mab humanizado 2F11 para el CSF-1R (hMab 2Fll-e7) , aumento de la dosis en combinación [CD] con una dosis fija de paclitaxel) : · Evaluar la seguridad, tolerabilidad y PK de la versión humanizada del Mab 2F11 cuando se administra solo y en combinación con paclitaxel .
• Determinar la dosis máxima tolerada (MTD) y/o la dosis biológica óptima (OBD) del Mab humanizado 2F11, cuando se administra solo (MTD1/OBD1) y en combinación con paclitaxel (MTD2/OBD2) , mediante la observación las toxicidades limitantes de la dosis (DLT) .
Parte II (Cohortes de expansión/agente único Mab humanizado 2F11) : aumentar la evaluación seguridad e investigarla actividad clínica del Mab humanizado 2F11 en pacientes con una entidad tumoral de particular interés en base a las observaciones de la parte I del estudio, de las cuales no todas son susceptibles del tratamiento estándar. 2.2 Objetivos secundarios Parte I (Aumento de dosis/Brazo A+B) • Explorar los efectos PK y PD del ab humanizado 2F11 solo y en combinación con paclitaxel en el tumor y el tejido sustitutivo.
• Evaluar los efectos PD y de biomarcador del Mab humanizado 2F11 solo y en combinación con paclitaxel mediante la medición de los cambios en la tomografía por emisión de positrones con 18F-fluoro-desoxiglucosa (FDG-PET) y la ecografía dinámica potenciada con contraste (DCE-US) (si está disponible) .
• Identificar la dosis recomendada de fase 2 (RP2D) y las pautas para el anticuerpo humanizado Mab 2F11 para el CSF-1R, solo y en combinación con paclitaxel.
· Explorar la actividad clínica preliminar del Mab humanizado 2F11 solo y en combinación con paclitaxel, utilizando la tasa de respuesta objetiva (ORR) , la tasa de beneficio clínico (CBR) , la supervivencia libre de progresión (PFS) y la duración de la respuesta.
Parte II (Cohortes de expansión/solo el Brazo A) • Caracterizar adicionalmente los efectos PK y PD efectos del Mab humanizado 2F11 en el tumor y el tejido sustitutivo . 2.3 Objetivos exploratorios Los especímenes de los pacientes recogidos se analizarán para : • Identificar retrospectivamente los tumores dependientes de TAM.
• Explorar los posibles marcadores predictores de respuesta en el tejido sustitutivo, como la piel y la sangre.
• Estudiar la asociación de los biomarcadores con la eficacia y/o los efectos adversos (EA) asociados a los productos médicos; y/o • Desarrollar ensayos diagnósticos o de biomarcador; 3. DISEÑO DEL ESTUDIO 3.1 Visión general del diseño del estudio Éste es un estudio abierto, multicéntrico de aumento de dosis en fase Ia/b diseñado para evaluar la seguridad, tolerabilidad y efectos PK y PD cada dos semana (Q2W) dosificando i.v. el Mab humanizado 2F11. El Mab humanizado 2F11 se administrará solo, en los pacientes con tumores sólidos (que no son susceptibles al tratamiento estándar) , y en combinación con paclitaxel, en los carcinomas avanzados localmente y/o metastásicos que no son susceptibles al tratamiento estándar.
Parte I - aumento de la dosis Todos los pacientes enrolados en las cohortes de aumento de la dosis serán evaluados en relación a las DLT durante un periodo de evaluación de la DLT de 28 dias, seguido de la primera administración del Mab humanizado 2F11 en el ciclo 1. Los pacientes que no continúan por cualquier motivo distinto a la DLT durante el periodo de evaluación de la DLT serán sustituidos .
En el modo de administración de monoterapia con Mab humanizado 2F11, Se administrará Q2 el Mab humanizado 2F11 en forma de infusión i.v. Durante 1,5 h., a menos que el paciente experimente una reacción relacionada con la infusión (IRR) , lo que requeriría la ralentización o la parada temporal de la infusión. El tratamiento se administrará hasta la progresión de la enfermedad, una toxicidad inaceptable, la muerte o la renuncia del paciente, sea lo que sea que ocurra primero .
El modo de administración de la combinación del Mab humanizado 2F11 y el paclitaxel (Parte I, Brazo B solo) Se administrará Q2W el Mab humanizado 2F11 en forma de infusión i.v. Durante 1,5 h. , a menos que el paciente experimente una IRR, lo que requeriría la ralentización o la parada temporal de la infusión. El tratamiento se administrará hasta la progresión de la enfermedad, una toxicidad inaceptable, la muerte o la renuncia del paciente, sea lo que sea que ocurra primero.
Se administrará Q paclitaxel, a una dosis de 80 mg/m2, durante hasta 12 semanas en combinación con el Mab humanizado 2F11. La infusión de paclitaxel se comenzará al acabar la infusión del Mab humanizado 2F11 infusión y se administrará de acuerdo con la información de prescripción local. Si un paciente experimenta toxicidad directamente atribuible al paclitaxel, éste puede detener el tratamiento con paclitaxel pero puede continuar recibiendo el Mab humanizado 2F11.
Parte I de la definición del estudio de MTD1/OBD1 y MTD2/OBD2 Los primeros 28 días siguientes a la primera administración del Mab humanizado 2F11 en el ciclo 1 serán considerados el intervalo del tratamiento para la determinación de DLT, para definir la MTD1 y la MTD2.
La MTD se define como el (los) nivel (es) de dosis máximo (s) en el que no más de 1 de cada 6 pacientes experimenta una DLT .
Los datos de seguridad y de PK/PD disponibles se recogerán de manera continua y se revisarán antes de cada decisión de aumento de la dosis para la siguiente cohorte. 3.1.1 Justificación del diseño del estudio El cribado casero de las muestras de las biopsias tumorales de diferentes pacientes con diferentes malignidades ha mostrado una heterogeneidad significativa en la densidad de macrofagos infiltrantes y de la expresión coincidente del CSF-1R (véase, por favor, la sección farmacológica no clínica del IB) . La disposición de fármacos dirigida (TMDD) , es decir, la distribución y eliminación mediante la unión a la diana farmacológica, también fue claramente evidente en el mono y en los ratones que tenía un tumor como en los que no tenían un tumor. Dado que la farmacocinética del Mab humanizado 2F11 se afecta por su unión a la diana, puede utilizarse la cuantificación de la PK no lineal como biomarcador para aproximar la saturación de la diana. Para caracterizar la influencia de los factores demográficos de la extensión basal del paciente (incluyendo la masa tumoral y la densidad de TAM) sobre la farmacocinética no lineal del Mab humanizado 2F11, los primeros días se medirán los niveles sanguíneos después de una dosis única inicial ("run-in") baja (100 mg) (ciclo 0) en todos los pacientes de la cohorte 2 en adelante (es decir, una semana previa a su dosis del ciclo 1, que será de al menor 200 mg o superior) . Con esta dosis baja, se espera una PK no lineal y esto permitirá la cuantificación de la TMDD en los pacientes con cáncer. El valor de la dosis inicial es que proporciona una mejor comprensión sobre si, en la fase de extensión del ensayo (o en estudios posteriores) , dosis diferentes pueden ser más efectivas en los diferentes brazos de extensión (es decir diferentes malignidades) en base a los factores demográficos y básales del paciente (incluyendo el tipo de tumor, el tamaño y el estado inflamatorio) . Dado que el bloqueo del CSF-IR ha demostrado que inhibe selectivamente los TAM, ofreciendo así el potencial de prevenir o incluso invertir la quimiorresistencia mediada por los TAM [10] , se iniciará una evaluación concurrente del Mab humanizado 2F11 en combinación con paclitaxel. Se escogió el paclitaxel como quimioterapia prescrita habitualmente en estos grupos de pacientes y se espera que no se produzca toxicidad de solapamiento significativa, ya que las toxicidades más comunes descritas con el paclitaxel (mielosupresión, neurotoxicidad y artralgia o mialgia) no se han descrito en los estudios de toxicidad. Se investigará una dosis fija de paclitaxel, administrado QW durante hasta 12 semanas, en combinación con dosis ascendentes del Mab humanizado 2F11 para los pacientes con un cáncer de ovario o de mama avanzados . Los datos recientes muestran que en los pacientes con PV S y TGCT se detecta sobreexpresión del CSF-1 y ésta está mediada, en parte, por una translocación que involucra el gen del CSF-1R gene en el 30-60% de los casos. Además, se ha observado que la presencia de macrofagos positivos para el CSF-1R en muchos otros cánceres humanos (tal como el carcinoma ovárico y de mama) carcinoma) se correlaciona, no sólo con una densidad vascular aumentada, sino también con un resultado clínico peor. En el cáncer de mama, la presencia de una firma génica de respuesta al CSF-1 predice el riesgo de recurrencia y de metástasis. Es base a estos descubrimientos y a nuestros modelos preclínicos, parece razonable evaluar la hipótesis de que el bloqueo de los macrofagos asociados al tumor y su bioactividad protumoral con el Mab humanizado 2F11 solo o en combinación con paclitaxel tiene el potencial de mostrar una actividad clínica en los pacientes con ciertos tipos de tumores sólidos.
Este estudio incluye varias extracciones de sangre para la evaluación de los parámetros PK y PD, así como la recogida obligatoria de tejido tumoral activo y fresco. Esto es importante para permitir un mejor entendimiento de las propiedades PK, el mecanismo de acción y el potencial de los biomarcadores predictores de respuesta. 3.1.4 Justificación de la evaluación del biomarcador Los biomarcadores tienen el potencial de dar forma a las estrategias diagnósticas e influencian el manejo terapéutico.
En el futuro, los biomarcadores podrán promover un enfoque del tipo medicina personalizada, agrupando a los pacientes por la firma molecular de sus tumores y por los marcadores en su sangre en vez de por el tipo de cáncer. Estamos concentrando nuestros esfuerzos en identificar biomarcadores predictivos que proporcionen información acerca de la probabilidad de eficacia y seguridad de la terapia. Habitualmente, se requiere una biopsia tumoral para evaluar la PD y el (los) efecto (s) mecánico (s) de un fármaco en el tumor. 3.1.4.1 Justificación de la biopsia tumoral previa al tratamiento y durante éste en la evaluación clínica La infiltración y diferenciación de los TAM depende del microambiente respectivo del tumor en las lesiones primarias y las metastásicas . Además, el estado inmunitario respectivo y el pre-tratamiento del paciente pueden influenciar en el microambiente del tumor del paciente. Por consiguiente, todos los pacientes se someterán a una biopsia obligatoria previa al tratamiento para definir la infiltración por TAM y los niveles de expresión del CSF-IR básales, pero no se utilizará para determinar la elegibilidad del paciente para el ensayo. Además, las biopsias obligatorias durante el tratamiento permitirán la evaluación de la actividad PD del Mab 2F11 humanizado mediante la comparación de los niveles antes de la dosis con los niveles de después de ésta. La aspiración con aguja fina (PAAF) no será adecuada para sustituir las biopsias tumorales, dado que la distribución de la subpoblacion de macrofagos debe evaluarse en el tejido.
Los tejidos tumorales de archivo no pueden sustituir las biopsias frescas, dado que la infiltración y la diferenciación de los macrofagos dependen del microambiente . El microambiente tumoral puede ser variable en el tumor primario debido al pre-tratamiento del paciente y también puede estar alterado en las lesiones metastásicas . No obstante, si el tejido tumoral de archivo está disponible, se utilizarán muestras para una correlación retrospectiva exploratoria de los datos con las biopsias frescas. 3.1.4.2 Justificación de las biopsias de piel herida Las distintas fases de la curación de las heridas requieren muchos procesos (por ejemplo, el reclutamiento de neutrófilos, la infiltración de macrofagos, la angiogénesis (Eming, S.A., et al., Prog. Histochem. Cytochem. 42 (2007) 115-170)). Los ensayos que hieren la piel se han utilizado para obtener tejido prestado para determinar los marcadores PD, por ejemplo, en las terapias antiangiogénicas (Zhang, D. et al., Invest. New Drugs 25 (2006) 49-55; Lockhart, A.C. et al., Clin. Cáncer Res. 9 (2003) 586-593). Durante la curación de las heridas, los macrófagos juegan un papel esencial y los cambios fenotípicos de los macrófagos asociados a heridas (WAM) dan cuenta de los diferentes roles en las fases de la reparación de la piel (por ejemplo, fase inflamatoria precoz=actividad fagocítica intensa; fase de remodelamiento del tejido medio: estado inmunoregulador con sobrexpresión de los factores proangiogénicos) (Adamson, R. , Journal of Wound Care 18 (2009) 349-351; Rodero, M.P. et al., Int. J. Clin. Exp. Pathol. 25 (2010) 643-653; Brancato, S.K. y Albina, J.E., Wound Macrophages as Key Regulators of Repair, Origin, Phenotype, and Function, AJP (2011) Vol . 178, No.l).
De hecho, la ausencia de macrófagos resultó en un retraso de la curación de las heridas en los ratones modificados genéticamente (Rodero, M.P. et al., Int. J. Clin. Exp. Pathol. 25 (2010) 643-653). Los experimentos preclínicos mostraron una reducción significativa de macrófagos (F4/80 positivos) en la piel de un modelo murino de xeroinjerto MDA-MB231 tratado con el CSF-1R. No obstante, se han descrito diferencias específicas de especie entre los ratones y los humanos (Daley, J.M. et al., J. Leukoc . Biol . 87 (2009) 1-9).
Dado que los WAM y TAM se originan de las mismas células progenitoras y comparten fenotipos y funciones similares, se podrán utilizar biopsias cutáneas seriadas pre-tratamiento y durante el tratamiento (total de n=4) para analizar los efectos farmacodinámicos del tratamiento con el anticuerpo para el CSF-1R tratamiento sobre los WAM durante el proceso de curación de las heridas . La correlación de los datos cutáneos con los efectos PD del tratamiento con el Mab humanizado 2F11 sobre los TAM en las biopsias frescas del tumor puede incrementar significativamente el conocimiento de la base molecular del funcionamiento del Mab humanizado 2F11 y de como responde el tumor.
Además, la evaluación de los macrófagos del tejido cutáneo herido puede sustituir potencialmente las biopsias del tumor durante el tratamiento en ensayos posteriores, y, por consiguiente, puede servir como tejido sustituto para la evaluación de la eficacia del Mab humanizado 2F11. 3.1.4.3 Justificación de las muestras de sangre total para medir los marcadores PD Estos especímenes tisulares sustitutos podrán utilizarse con fines de investigación para identificar biomarcadores predictores de la respuesta al tratamiento con el Mab humanizado 2F11 (en términos de dosis, seguridad y tolerabilidad) y ayudarán a entender mejor la patogénesis, el curso y el resultado del cáncer y de enfermedades relacionadas . Los análisis pueden incluir la determinación de marcadores circulantes asociados a la actividad PD del ab humanizado 2F11 (por ejemplo, la evaluación de los niveles de citoquinas, de las células inmunológicas circulantes y de la depleción de células efectoras inmunológicas) . Los experimentos preclínicos mostraron que los cambios en, por ejemplo, el CSF-1 circulante, las subpoblaciones de monocitos TRAP5b y los macrofagos tisulares se asocian con la actividad farmacológica. Además, los datos de GLP-Tox de los monos cinomolgos tratados con el anticuerpo para el CSF-1R mostraron alteraciones en los biomarcadores de la formación ósea (osteocalcina, P1NP) , la actividad osteoclástica (TRAP5b) y la hormona paratoidea, y todo ellos se correlacionaron con números reducidos de osteoclastos .
Por consiguiente, estos marcadores PD y factores inmunoestimuladores o inmunoinhibidores circulantes adicionales se evaluarán durante el estudio.
Criterios de respuesta tumoral La respuesta tumoral se evaluará de acuerdo con los criterios RECIST 1.1. En este estudio, la respuesta tumoral se mediará utilizando escáneres de TC espirales (incluyendo un escáner torácico) o un escáner de TC. Los rayos X y las ecografías no son aceptables para la monitorización de las lesiones diana. A lo largo del estudio completo, debe utilizarse la misma evaluación y la misma técnica para evaluar cada lesión en cada paciente. Si se utiliza más de un método, se debe seleccionar el método más preciso, de acuerdo con RECIST, cuando se registren los datos.
La respuesta tumoral se confirmará después de un mínimo de 4 semanas de que se observe el inicio de la respuesta inicial, o en la próxima evaluación tumoral programada, si ésta ocurre después de más de 4 semanas de la respuesta inicial.
Se realizará una evaluación de la cinética del crecimiento tumoral mediante la comparación de los escáneres post-tratamiento con el último escáner previo al estudio disponible, si es que está disponible.
Evaluación farmacocinética (PK) / farmacodinámica (PD) Se recogerán muestras de sangre para evaluar la farmacocinética PK y /o PD, tal y como se describe en la tabla de abajo El volumen total de sangre perdida para la evaluación de la PK, hasta el final del ciclo 4, será de aproximadamente 58 mi para la Parte I, Brazo A y la Parte II, y de aproximadamente 86 mi para la Parte I, Brazo B. En cada ciclo subsiguiente se recogerán 6 mi adicionales de sangre para la evaluación de la PK en cada grupo de tratamiento. El volumen total de sangre perdida para la evaluación de la PD, hasta el final del ciclo 4 (8 semanas después del tratamiento) será de aproximadamente 161 mi. En cada ciclo subsiguiente se recogerán muestras de sangre de 9 mi (1x5 mi, lx2ml y 2xlml; véase la tabla 2 para los detalles) para la evaluación pre-dosis de la PD.
Evaluaciones de la PK Se recogerá sangre para el análisis de las concentraciones del Mab humanizado 2F11, el anticuerpo antihumano humanizado (HAHA) , el Mab humanizado 2F11 y del paclitaxel. Además, se recogerá una muestra de sangre única en el momento de una reacción relacionada con la infusión de magnitud considerable y si se interrumpe de infusión o la tasa de infusión se ralentiza a discreción del investigador.
Los Mab humanizado 2F11 y HAHA séricos se medirán mediante la utilización de ensayos validados. Todas las muestras de suero que se recogieron para la determinación de HAHA también se analizarán para RO5509554. Todas las muestras de sangre para la evaluación de la PK se recogerán de una vía i.v. diferente a la que recibe la infusión. La muestras destinadas a la exposición al Mab humanizado 2F11 y al análisis del HAHA se dividirán en dos alícuotas separadas, una para cada determinación de Mab humanizado 2F11 y HAHA determinación.
Las concentraciones plasmáticas de paclitaxel se mediarán utilizando el método validado de espectrometría de masas en tándem con una cromatografía líquida (LC/MS/MS) .
Evaluaciones de la PD En todos los sujetos que participan en el ensayo se recogerán especímenes para el descubrimiento y validación de biomarcadores dinámicos (no heredados) y genéticos.
Muestras de sangre total para la PD y biomarcadores Se recogerá sangré como tej ido fuente para determinar los efectos PD del Mab humanizado 2F11. Todas las muestras de sangre para la evaluación de la PD se recogerán de una vía i.v. diferente a la que recibe la infusión. Las evaluaciones de las PD de las muestras de sangre total incluirán, pero no se limitarán a: • Inmunofenotipado (subpoblaciones de monocitos/macrófagos y linfocitos) utilizando la citometría de flujo. En las subpoblaciones de monocitos/macrófagos , estos marcadores incluyen, pero no se limitan a, CD14, CD16, CD45, MHC de clase II y, para los linfocitos, CD3 , CD4 , CD8 , CD16, CD19, CD45, CD56.
• El volumen total de sangre perdida para las evaluaciones de la farmacodinámica de las poblaciones de células monocitos/macrófagos y linfocitos será de aproximadamente 17x 5ml = 85 mi para los primeros cuatro ciclos .
· Tres muestras de sangre adicionales se utilizarán para la preparación del suero y la determinación de la PD en relación a los cambios de los marcadores solubles. Estos marcadores incluyen, pero no se limitan a: Evaluación de citocinas A: CSF-1, Trap5b, SCD163, IL-34 El volumen total de sangre perdida para la evaluación de la PD de las citocinas A será de aproximadamente 25x 2ml = 50 mi para los primeros cuatro ciclos .
Evaluación de citocinas B: IFNy, TNFOÍ, IL-?ß, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, GM- CSF, VEGF, MCP-1, CCL18 , CCL22, MIP-1, galectina 3, ILIRa, TGF alfa El volumen total de sangre perdida para la evaluación de la PD de las citocinas B será de aproximadamente 21x lml = 21 mi para los primeros cuatro ciclos .
Biomarcadores óseos : Se evaluaran los biomarcadores óseos como la osteocalcina, el P1NP y la hormona paratiroidea (PTH) .
El volumen total de sangre perdida para será de aproximadamente 5x lml = 5 mi para los primeros cuatro ciclos La mayor cantidad de volumen total de sangre perdida por cada ciclo, en las evaluaciones de la PD/biomarcador será de aproximadamente 51 mi.
Curación de las heridas de las biopsias de tejido cutáneo La curación de las heridas de tejido cutáneo sustitutivo será analizada para los análisis exploratorios de la PD/biomarcador asociados al proceso de curación de las heridas, incluyendo, pero sin limitarse a, el reclutamiento de neutrófilos, la infiltración de macrófagos y la angiogénesis (véase también 3.1.5).
Se tomaran dos muestras de piel aparejadas, bajo anestesia local, de las áreas especulares de la piel normal (preferiblemente, localizadas en la espalda, sin folículos pilosos) . Se obtendrán mediante la utilización de un aparato de biopsia con un sacabocados de 2 y de 4 mm de diámetro para obtener 2 muestras superpuestas, y que no requerirá sutura.
Los 2 mm de biopsia crearán la herida y la biopsia de 4 mm totalmente superpuesta, 7 días después, recuperará el material de la curación de las heridas.
El intervalo de tiempo escogido entre las dos biopsias se considera adecuado, en base al entendimiento del curso temporal de los cambios en los biomarcadores relevantes (reclutamiento de neutrófilos, infiltración de macrófagos y endogénesis) asociados al proceso de curación de las heridas (Eming, S.A. et al., Prog. Histochem. Cytochem. 42 (2007) 115-170; Zhang, D. et al., Invest. New Drugs 25 (2006) 49-55; Lockhart, A.C. et al., Clin. Cáncer Res. 9 (2003) 586-593).
Todas las muestras cutáneas se someterán al análisis de: • Tinción con hematoxilina & eosina (H&E) · Los marcadores inmunohistoquímicos (IHC) se analizarán en relación a los siguientes parámetros: CSF-1R, CD68/CD163, CD68/MHC de clase II, CD31 (densidad en los microvasos) y Ki67.
Los especímenes se fijarán con formalina, se embeberán en parafina y se enviarán a un laboratorio central para el análisis .
Biopsias tumorales Biopsias tumorales frescas Se recogerán biopsias tumorales pre-tratamiento y durante el tratamiento para evaluar los cambios farmacodinámicos de la infiltración de TAM y marcadores tumorales adicionales (véase 3.1.3).
Las biopsias deberían tomarse preferiblemente de la lesión metastática mayor, pueden ser del tumor primario o, si es posible, tanto del tumor primario como de las lesiones metastásicas y deberán biopsiarse en la interfaz entre tumor y estroma, si es posible.
La recogida de las biopsias tumorales se guiará por ecografía o escáner TC utilizando una aguja de calibre 18 para proporcionar núcleos de, al menos, 20 mm de longitud. Se obtendrán, al menos, 2 e idealmente 4 biopsias nucleares en cada momento.
La mitad del espécimen se fijarás con formalina y se embeberá en parafina. La segunda mitad se congelará en fresco y se recogerá para el almacenamiento a largo plazo para el análisis exploratorio retrospectivo de biomarcadores (véase la sección 5.5.3.1.2).
Las muestras de biopsia fijadas con formalina y embebidas en parafina se analizarán en relación a: • Tinción con hematoxilina y eosina (H&E) • Las evaluaciones inmunohistoquímicas (IHC) incluyen, pero no se limitan a, los siguientes parámetros: CSF-1R, CD68/CD163, CD68/MHC de clase II, CD31 (densidad en los microvasos) , Ki67 y otros marcadores exploratorios.
Modalidades de imagen para los biomarcadores Ultrasonidos DCE En base a los resultados preclínicos, esperamos que el tratamiento con el Mab humanizado 2F11 puede modular la densidad en los microvasos y la luz de los vasos en el tumor y, por consiguiente la angiogénesis y el transporte transcapilar de nutrientes hacia el tumor. Para monitorizar estas variables, proponemos la utilización de ultrasonidos DCE como modalidad de imagen de elección, donde sea posible.
FDG-PET La FDG-PET puede mejorar el manejo del paciente mediante la identificación de los respondedores precoces, antes de que se reduzca el tamaño del tumor; los no respondedores pueden detener la terapia fútil (Weber, W.A. , J. Nucí. ed. 50 (2009) 1S-10S) . Además, una reducción en la señal de la FDG-PET a los días o semanas del inicio de la terapia (por ejemplo, en el cáncer de mama (Avril, N. et al., J. Nucí. Med. 50 (2009) 55S-63S) , de ovario (Schwarz, J.K. et al., J. Nucí. Med. 50 (2009) 64S-73S) , y pulmonar de célula no pequeña (Zander, T. et al., J. Clin. Oncol . (2011) 1701-1708)) se correlaciona significativamente con una supervivencia prolongada y otras variables que se utilizan actualmente. Los cambios inducidos por el tratamiento con el Mab humanizado 2F11 en el metabolismo tumoral pueden evaluarse mediante la FDG-PET. Además, la depleción de macrófagos inducida por el Mab humanizado 2F11 puede resultar en la disminución de la SUVmax en los escáneres de FDG-PET.
Ejemplo 15 Inhibición de crecimiento tumoral bajo tratamiento con el anticuerpo monoclonal anti-CSF-lR en combinación con quimioterapia o inmunoterapia para el cáncer en modelos de carcinoma colónico MC38 singénicos subcutáneos Se cultivaron células de la línea celular MC-38 murina de adenocarcinoma colorrectal (obtenidas de Beckman Research Institute of the City of Hope, California, EE.UU.) en le Medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM, PAN Biotech) suplementado con FCS al 10% y 2mM de L-glutamina a 37 °C en una atmósfera saturada de humedad al 5% de C02. El día de la inoculación, se recolectaron las células tumorales MC38 con PBS desde los frascos de cultivo y se transfirieron en un medio de cultivo, se centrifugaron, se lavaron una vez y se resuspendieron en PBS. Para la inyección de las células, se ajustó el título final a 1x107 células/ml. Subsiguientemente, se inocularon subcutáneamente 100 µ? de esta suspensión (1x106 células) en ratones hembra C57BL/6N de 7-9 semanas de edad (obtenidas de Charles River, Sulzfeld, Alemania) . El tratamiento con el anticuerpo de control (MOPC-21; Bio X Cell, Líbano Oeste) , el Mab anti-murino para el CSF-1R (el anticuerpo <CSF-1R murino>) a una dosis semanal de 30 mg/kg i.p. solo o en combinación con la IL-2 (proleucina, Novartis, 100.000 IU/animal i.p. dos veces al día), o FOLFIRI (5-fluorouracilo, Medac, 100 mg/kg, i.p., lx / leucovorina, Pfizer, 40 mg/kg, i.p., lx / irinotecán, HEXAL, 20 mg/kg, i.p., lx ) o oxaliplatino (Eloxatin, Sanofi-Aventis 5 mg/kg, i.p. lx) , empezó después de los tumores estuvieran establecidos y hubieran alcanzado un tamaño medio de 50 mm3. El volumen tumoral se midió dos veces por semana y se monitorizaron los pesos de los animales en paralelo. En un estudio separado con una configuración comparable, se extirparon los tumores primarios de los grupos de tratamiento indicados, se pesaron y se sometieron al análisis FACS . Se recogió el material tumoral primario entre el día del estudio 20-25, tal y como se indica. Para obtener una suspensión celular única susceptible de análisis mediante citometría de flujo, se trituraron los tumores mediante la utilización de la trituradora tisular Mcllwain. Subsiguientemente, las piezas del tumor se resuspendieron en el medio RPMI suplementado con colagenasa I, dispasa II y DNAsa I, incubadas a 37°C, y la suspensión celular se pasó a través de una malla. Se enriquecieron las células positivas para el CD45 mediante la separación celular magnética, de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Miltenyi) . De manera breve, se marcaron las células con el CD45 anti-murino con APC (BD, N° Cat . 559864) y se separaron con microcuentas anti-APC. Para analizar las células T CD8+, estas células positivas para CD45 se marcaron con 0,2 pg/ml de DAPI (Roche, N° Cat. 0236276001 y el anticuerpo CD8 conjugado con P (eBioscience N° Cat. 12-0081-83) o el anticuerpo CD4 conjugado con PE (eBioscience, N° Cat. 2-0041-83). La adquisición de datos se llevó a cabo con FACS Canto II y, subsiguientemente, se analizaron con el programa FlowJo. Sólo se analizaron las células viables (seleccionando las células DAPI-negativas) para excluir los residuos celulares y las células muertas.
La monoterapia con el anticuerpo <C£F-1R murino inhibió el crecimiento del tumor primario en comparación con el tratamiento del anticuerpo de control (TGI: 61%, TCR: 0,39 CI : 0,15-0,68). La monoterapia con IL2 también tuvo un efecto sobre el crecimiento del tumor primario MC38 (TGI: 47%, TCR: 0,53 CI: 0,27-0,85). La adición del anticuerpo <CSF-1R murino a la terapia con IL-2 llevó a una mejor eficacia antitumoral en comparación con el tratamiento solo con la IL-2 (TGI: 78%, TCR: 0,21 CI : 0,02-0,48). El tratamiento con el régimen de quimioterapéutico FOLFIRI también inhibió significativamente el crecimiento tumoral (TGI: 66%, TCR: 0,34 CI: 0,11-0,61) y la adición del anticuerpo <CSF-1R murino> llevó a un resultado incluso mejor (TGI: 77%, TCR: 0,23 CI: 0,001-0,48). El oxaliplatino también mostró cierta eficacia pronunciada, aunque menos, sobre el crecimiento tumoral de MC38 (TGI: 46%, TCR: 0,54 CI : 0,29-0,86) que, sin embargo, puede potenciarse con la combinación con el anticuerpo <CSF-1R murino (TGI: 69%, TCR: 0,31 CI : 0,07- 0,59). Cuando se observa la progresión de los tumores individuales con un tamaño superior a los 700 mm3 , el tiempo medio de progresión de los animales tratados con la combinación del anticuerpo <CSF-1R murino con la IL-2 fue de superior a la combinación con las quimioterapias en este modelo (véase la tabla 11) .
Tabla 11: Eficacia anti umoral de las combinaciones del anticuerpo <CSF-1R murino> en el modelo in vivo de CRC murino MC38 El análisis mediante la citometria de flujo de los tumores tratados con el <anticuerpo CSF-IR murino> reveló un incremento de 3 veces en el número de células T CD8+ , en comparación con la monoterapia con oxaliplatino, así como un aumento ligero de las células t CD4+. Los tumores tratados con la combinación de anticuerpos neutralizantes del CSF-IR y oxaliplatino mostraron un aumento en comparación con las células T tratadas solo con el anticuerpo. Se obtuvieron resultados similares con la combinación con FOLFIRI. Los resultados también se muestran en la figura 5.
Ejemplo 16 Inhibición del crecimiento tumoral bajo tratamiento con el anticuerpo monoclonal anti-CSF-lR en combinación con el anticuerpo monoclonal anti-CD40 en el modelo de carcinoma colónico MC38 singénico subcutáneo Se cultivaron células de la línea celular MC-38 murina de adenocarcinoma colorrectal (obtenidas de Beckman Research Institute of the City of Hope, California, EE.UU.) en le Medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM, PAN Biotech) suplementado con FCS al 10% y 2mM de L-glutamina a 37 °C en una atmósfera saturada de humedad al 5% de C02. El día de la inoculación, se recolectaron las células tumorales MC38 con PBS desde los frascos de cultivo y se transfirieron en un medio de cultivo, se centrifugaron, se lavaron una vez y se resuspendieron en PBS. Para la inyección de las células, se ajustó el título final a 1x107 células/ml. Subsiguientemente, se inocularon subcutáneamente 100 µ? de esta suspensión (1x106 células) en ratones hembra C57BL/6N de 6-10 semanas de edad. El tratamiento con el anticuerpo de control (MOPC-21; Bio X Cell, Líbano Oeste) , el Mab anti-murino para el CSF-1R (el anticuerpo <CSF-1R murino) a una dosis semanal de 30 mg/kg i.p. solo o en combinación con el anticuerpo monoclonal FGK45 anti-CD40 (mAb FGK45 IgG2a murino anti-murino agonista del CD40 (S. P. Schoenberger, et al, Nature, 393, 480 (1998), disponible de BioXcell) (FGK45) CD40) (100 g, i.p., lx) , empezó después de los tumores estuvieran establecidos y hubieran alcanzado un tamaño medio de 50 mm3. El volumen tumoral se midió dos veces por semana y se monitorizaron los pesos de los animales en paralelo.
Ejemplo 17 Inhibición de crecimiento tumoral bajo tratamiento con el anticuerpo monoclonal anti-CSF-lR en combinación con el anticuerpo monoclonal anti-Ang2/VEGF y/o FOLFIRI en el modelo de carcinoma colónico MC38 singénico subcutáneo Se cultivaron células de la linea celular C-38 murina de adenocarcinoma colorrectal (obtenidas de Beckman Research Institute of the City of Hope, California, EE.UU.) en le Medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM, PAN Biotech) suplementado con FCS al 10% y 2mM de L-glutamina a 37 °C en una atmósfera saturada de humedad al 5% de C02. El día de la inoculación, se recolectaron las células tumorales MC38 con PBS desde los frascos de cultivo y se transfirieron en un medio de cultivo, se centrifugaron, se lavaron una vez y se resuspendieron en PBS. Para la inyección de las células, se ajustó el titulo final a 1x107 células/ml. Subsiguientemente, se inocularon subcutáneamente 100 µ? de esta suspensión (1x106 células) en ratones hembra C57BL/6N de 7 semanas de edad. El tratamiento con el anticuerpo de control (MOPC-21; Bio X Cell, Líbano Oeste) , el Mab anti-murino para el CSF-1R (el anticuerpo <CSF-1R murino>) a una dosis semanal de 30 mg/kg i.p. solo o en combinación con FOLFIRI (5-fluorouracilo, Medac, 100 mg/kg, i.p., lx / leucovorina, Pfizer, 40 mg/kg, i.p., lx / irinotecán, HEXAL, 20 mg/kg, i.p., lx ) o el anticuerpo monoclonal anti-Ang2/VEGF (el anticuerpo biespecífico A G-2-VEGF Xmabl, tal y como se describe en la patente WO 2011/117329) (10 mg/kg, i.p., lx semanalmente) , empezó después de los tumores estuvieran establecidos y hubieran alcanzado un tamaño medio de 50 mm3. El tratamiento combinado triple se llevó a cabo tal y como se describe en la tabla 13. El volumen tumoral se midió dos veces por semana y se monitorizaron los pesos de los animales en paralelo.
La monoterapia con el anticuerpo <CSF-1R murino>, el anticuerpo anti-Ang2/VEGF o FOLFIRI inhibió mínimamente el crecimiento del tumor primario en comparación con el tratamiento del anticuerpo de control (TGI: 28%, 35% o 11%, respectivamente) . La combinación del anticuerpo <CSF-1R murino> con el anticuerpo anti-Ang2/VEGF o con FOLFIRen comparación con el anticuerpo de control (TGI: 64% o 67%) . El tratamiento combinado triple con el anticuerpo <CSF-1R murino> y FOLFIRI, seguido del tratamiento con el anticuerpo Ang2/VEGF 2 días o 9 días después, mostró la mejor actividad antitumoral (TGI: 68% o 70%). El tratamiento concurrente con los 3 compuestos o la combinación del anticuerpo anti- Ang2/VEGF con FOLFIRI, seguido del tratamiento con el anticuerpo <CSF-1R murino> 9 días después, produjo una actividad antitumoral del 61% o 56%, respectivamente. Cuando se observa la progresión de los tumores individuales con un tamaño superior a los 700 mm3 , el tiempo medio de progresión de los animales tratados con la combinación del anticuerpo <CSF-1R murino> con FOLFIRI, seguido del tratamiento con el anticuerpo anti-Ang2/VEGF 2 días o 9 días después, también fue superior al tiempo medio de progresión de todos los otros tratamientos en este modelo (véase la tabla 12) .
Tabla 13: Eficacia antitumoral de las combinaciones del anticuerpo <CSF-1R murino> en combinación con el anticuerpo monoclonal anti-Ang2/VEGF y/o FOLFIRI en el modelo in vivo de CRC murino

Claims (30)

REIVINDICACIONES
1. Un anticuerpo que se une al CSF-IR humano, que se caracteriza por la unión a los dominios D4-D5 (dimerización) (Id. de Sec. N° 85) del dominio extracelular del CSF-IR humano para la utilización en a) la inhibición de la proliferación celular de células tumorales con una expresión del CSF-IR dependiente del ligando del CSF-IR y/o independiente del ligando del CSF-IR; b) la inhibición de la proliferación celular de tumores con un infiltrado de macrófagos con una expresión del CSF-IR dependiente del ligando CSF-1 y/o independiente del ligando CSF-1; c) la inhibición de la supervivencia celular en monocitos y macrófagos con expresión del CSF-IR (dependiente del ligando del CSF-IR y/o independiente del ligando del CSF-IR) ; y/o d) la inhibición de la diferenciación celular en monocitos y macrófagos con expresión del CSF-IR (dependiente del ligando del CSF-IR y/o independiente del ligando del CSF-IR) ; en el que el anticuerpo anti-CSF-lR se administra en combinación con un agente quimioterapéutico, radiación, y/o inmunotera ia para el cáncer.
2. Un anticuerpo que se une al CSF-IR humano, que se caracteriza por unirse a los dominios D4-D5 (Id. de Sec . N° 85) del dominio extracelular del CSF-IR humano para la utilización en el tratamiento de un paciente que tiene un tumor que expresa el CSF-IR o que tiene un tumor con un infiltrado de macrófagos que expresa el CSF-IR, en el que el tumor es que se caracteriza por un incremento de ligando del CSF-IR en el que el anticuerpo anti-CSF-lR se administra en combinación con un agente quimioterapéutico, radiación y/o inmunoterapia para el cáncer.
3. El anticuerpo de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, en el que el agente quimioterapéutico se selecciona a partir del grupo que incluye taxanos (paclitaxel (Taxol) , docetaxel (Taxotere) , paclitaxel modificado (Abraxane y Opaxio) ) , doxorrubicina, doxorrubicina modificada (Caelyx o Doxil) ) , sunitinib (Sutent) , sorafenib (Nexavar) , y otros inhibidores de múltiples quinasas, oxaliplatino, cisplatino, carboplatino, etopósido, gemcitabina, y vinblastina.
4. El anticuerpo o la utilización de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, en el que la inmunoterapia para el cáncer se selecciona a partir del grupo que incluye: a) Agentes enlazantes de las células T seleccionados a partir de anticuerpos agonistas que se unen a 0X40, a GITR, a CD27, o a 4-1BB humanas, y anticuerpos biespecífieos para las células T (por ejemplo, anticuerpos CD3-CD19 BiTE™ que se enlazan a las células T, CD3-EpCam, CD3-EGFR) , IL-2 (proleucina) , interferón (IF ) alfa, anticuerpos antagonistas que se unen a CTLA-4, a PD-1, a PD Ll, a TIM-3, a BTLA, a VISTA, a LAG-3 , o a CD25 humanos, b) Inmunosupresión dirigida: anticuerpos o moléculas pequeñas que tienen como diana la señalización mediante STAT3 o NFkB, el bloqueo de la función de IL-6, IL-17, IL-23, TNFa, c) Vacunas para el cáncer/la potenciación de la función de las células dendríticas: virus oncolíticos que secretan GM-CSF (OncoVex) , un anticuerpo agonista del CD40, ligandos para el receptor de tipo Toll (TLR) , agonista de TLR, proteínas de fusión recombinantes que codifican para MAGE-A3 , PROSTVAC; o d) Transferencia de células adoptivas: GVAX (línea celular de cáncer prostático que expresa el GM-CSF) , vacuna de células dendríticas, terapia con células T adoptivas, terapia con células T CAR adoptivas.
5. El anticuerpo o la utilización de acuerdo con la reivindicación 4, en el que la inmunoterapia para el cáncer es un anticuerpo agonista del CD40.
6. El anticuerpo de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, en el que el agente quimioterapéutico se selecciona a partir del grupo que incluye taxanos (docetaxel o paclitaxel) o un paclitaxel modificado (Abraxane o Opaxio) , doxorrubicina, capecitabina y/o bevacizumab para el tratamiento de cáncer de mama .
7. El anticuerpo de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, en el que el agente quimioterapéutico se selecciona a partir del grupo que incluye carboplatino, oxaliplatino, cisplatino, paclitaxel, doxorrubicina (o doxorrubicina modificada (Caelyx o Doxil) ) , o topotecán (Hycamtin) para el tratamiento del cáncer de ovario.
8. El anticuerpo de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, en el que el agente quimioterapéutico se selecciona a partir del grupo que incluye un inhibidor de múltiples quinasas (sunitinib (Sutent) , sorafenib (Nexavar) o motesanib difosfato (AMG 706) y/o doxorrubicina para el tratamiento del cáncer renal .
9. El anticuerpo de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, en el que el agente quimioterapéutico se selecciona a partir del grupo que incluye oxaliplatino, cisplatino, y/o radiación para el tratamiento del carcinoma celular escamoso.
10. El anticuerpo de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, en el que el agente quimioterapéutico se selecciona a partir del grupo que incluye taxol y/o carboplatino para el tratamiento del cáncer de pulmón.
11. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el anticuerpo se caracteriza en que el anticuerpo no se une al fragmento delD4 del CSF-1R humano (Id. de Sec . N° 65).
12. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el anticuerpo se caracteriza en que el anticuerpo se une al fragmento delD4 del CSF-1R humano (Id. de Sec. N° 65) y al dominio extracelular del CSF-1R humano (Id. de Sec. N° 64) con una proporción de 1:50 o menor .
13. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 7 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 8, b) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec . N° 15 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 16; c) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 75 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 76; d) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 83 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 84; o una versión humanizada del mismo.
14. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 23 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 24, o b) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 31 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 32, o c) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 39 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N" 40, o d) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec. N° 47 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 48, o e) el dominio variable de la cadena pesada es el Id. de Sec . N° 55 y el dominio variable de la cadena ligera es el Id. de Sec. N° 56.
15. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que se caracteriza en que a) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 1, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 2, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 3, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 4, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 5, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 6, o b) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 9, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 10, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 11, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 12, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 13, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 14, o c) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 17, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 18, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 19, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 20, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 21, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 22, o d) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 25, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 26, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 27, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 28, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 29, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 30, o e) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 33, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 34, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 35, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 36, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 37, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 38, o f) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 41, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 42, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 43, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 44, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 45, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 46, o g) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 49, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 50, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 51, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 52, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 53, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 54; o h) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 69, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 70, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 71, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 72, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 73, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 74, o i) el dominio variable de la cadena pesada incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 77, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 78, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 79, y el dominio variable de la cadena ligera incluye una región CDR3 con el Id. de Sec. N° 80, una región CDR2 con el Id. de Sec. N° 81, y una región CDR1 con el Id. de Sec. N° 82.
16. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que se caracteriza en que dicho anticuerpo es de subclase IgGl humana o es de subclase IgG4 humana .
17. Un anticuerpo que se une al CSF-IR humano, para la utilización en el tratamiento de un paciente que tiene un tumor que expresa el CSF-IR o que tiene un tumor con un infiltrado de macrófagos que expresa el CSF-IR, en el que el tumor es que se caracteriza por un incremento de ligando del CSF-IR, en el que el anticuerpo anti-CSF-lR se administra en combinación con una inmunoterapia para el cáncer. en el que la inmunoterapia para el cáncer se selecciona a partir del grupo que incluye: a) Agentes enlazantes de las células T seleccionados a partir de anticuerpos agonistas que se unen a 0X40, a GITR, a CD27, o a 4-1BB humanas, y anticuerpos biespecífieos para las células T (por ejemplo, anticuerpos CD3-CD19 BiTE™ que se enlazan a las células T, CD3-EpCam, CD3-EGFR) , IL-2 (proleucina) , interferón (IFN) alfa, anticuerpos antagonistas que se unen a CTLA- 4 (por ejemplo, ipilimumab) , a PD-1, a PD Ll, a TIM-3, a BTLA, a VISTA, a LAG-3, o a CD25 humanos, b) Inmunosupresión dirigida: anticuerpos o moléculas pequeñas que tienen como diana la señalización mediante STAT3 o NFkB, el bloqueo de la función de IL-6, IL-17, IL-23, TNFa, c) Vacunas para el cáncer/la potenciación de la función de las células dendríticas : OncoVex (virus oncolíticos que secretan GM-CSF) , un anticuerpo agonista del CD40, ligandos para el receptor de tipo Toll (TLR) , agonista de TLR, proteínas de fusión recombinantes que codifican para MAGE-A3, PROSTVAC; o d) Transferencia de células adoptivas: GVAX (línea celular de cáncer prostático que expresa el GM-CSF) , vacuna de células dendríticas, terapia con células T adoptivas, terapia con células T CAR adoptivas.
18. El anticuerpo de acuerdo con reivindicación 17 en el que la inmunoterapia para el cáncer se selecciona a partir del grupo que incluye: vacunas para el cáncer/la potenciación de la función de las células dendríticas : OncoVex (virus oncolíticos que secretan GM-CSF) , un anticuerpo agonista del CD40, ligandos para el receptor de tipo Toll (TLR) , agonista de TLR, proteínas de fusión recombinantes que codifican para MAGE-A3, PROSTVAC.
19. El anticuerpo o la utilización de acuerdo con reivindicación 17, en el que la inmunoterapia para el cáncer es un anticuerpo agonista del CD40.
20. Un método para determinar si un sujeto con cáncer es un candidato para el régimen de tratamiento para el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR, y el método incluye: - la determinación ex vivo o in vitro de los niveles de uno o más de los siguientes marcadores: CSF-1R, CD68/CD163, CD68/MHC de clase II, CD31 (densidad en los microvasos) , y Ki67 y otros marcadores como por ejemplo, inmunoinfiltrantes ; en una muestra del sujeto, donde la muestra se selecciona a partir de un grupo que incluye tejido, sangre, suero, plasma, células tumorales y células tumorales circulantes; y - en el que un cambio en el nivel de uno o más de CSF-1R, CD68/CD163, CD68/MHC de clase II, CD31 (densidad en los microvasos) y Ki67 y otros marcadores, como por ejemplo, inmunoinfiltrantes (por ejemplo, células T CD4- y/o CD8-) , en comparación con los niveles correspondientes a un individuo que no padece de cáncer, es indicativo de que el sujeto es un candidato para el régimen de tratamiento contra el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR.
21. El método de reivindicación 20, en el que el anticuerpo utilizado en dicho régimen es un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes .
22. El método de las reivindicaciones 20 o 21, donde en este método, el cambio en el nivel de CSF-1R, CD68/CD163, CD68/MHC de clase II, CD31 (densidad en los microvasos) y Ki67 y otros marcadores, como por ejemplo, inmunoinfiltrantes (por ejemplo, células T CD4- y/o CD8-), en comparación con el nivel en un individuo que no padece de cáncer es un aumento del nivel de uno o más de estos marcadores .
23. Un método para determinar si un sujeto con cáncer es un candidato para el régimen de tratamiento para el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR, y el método incluye: - la determinación ex vivo o in vitro de los niveles de uno o más de los siguientes marcadores: CSF-1, Trap5b, SCD163, IL-34; en una muestra del sujeto, donde la muestra se selecciona a partir de un grupo que incluye tejido, sangre, suero, plasma, células tumorales (por ejemplo, en forma de una muestra del tejido tumoral) y células tumorales circulantes; y - en el que un cambio en el nivel de uno o más de CSF-1, Trap5b, sCD163, IL-34, en comparación con los niveles correspondientes a un individuo que no padece de cáncer, es indicativo de que el sujeto es un candidato para el régimen de tratamiento contra el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-1R.
24. El método de reivindicación 23, en el que el anticuerpo utilizado en dicho régimen es un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes .
25. El método de reivindicaciones 23 o 24, donde en este método, el cambio en el nivel de CSF-1, Trap5b, sCD163, IL-34, en comparación con el nivel en un individuo que no padece de cáncer es un aumento del nivel de uno o más de estos marcadores .
26. El método de cualquiera de las reivindicaciones 23-25, donde en este método se determina ex vivo o in vitro el nivel y el cambio del nivel de SCD163.
27. Un método para determinar si un sujeto con cáncer es un candidato para el régimen de tratamiento para el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR, y el método incluye: - la determinación ex vivo o in vitro de los niveles de uno o más de los siguientes marcadores : IFNy, TNFOÍ, IL-?ß, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, GM- CSF, VEGF, MCP-1, CCL18 , CCL22, MIP-1, galectina 3, ILIRa, TGF alfa; en una muestra del sujeto, donde la muestra se selecciona a partir de un grupo que incluye tejido, sangre, suero, plasma, células tumorales y células tumorales circulantes; y - en el que un cambio en el nivel de uno o más de IFNy, TNF , IL-?ß, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, GM-CSF, VEGF, MCP-1, CCL18, CCL22, MIP-1, galectina 3, ILIRa, TGF alfa, en comparación con los niveles correspondientes a un individuo que no padece de cáncer, es indicativo de que el sujeto es un candidato para el régimen de tratamiento contra el cáncer basado en un anticuerpo anti-CSF-lR.
28. El método de reivindicación 27, en el que el anticuerpo utilizado en dicho régimen es un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes .
29. El método de las reivindicaciones 27-28, donde en este método, el cambio en el nivel de IFNy, TNFa, IL-?ß, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, GM-CSF, VEGF, MCP-1, CCL18, CCL22 , MIP-1, galectina 3, ILIRa, TGF alfa, en comparación con el nivel en un individuo que no padece de cáncer es un aumento del nivel de uno o más de estos marcadores .
30. Un anticuerpo que se une al CSF-1R humano para la utilización en el tratamiento de cáncer en el que el anticuerpo se administra en combinación con un anticuerpo biespecifico para el ANG-2-VEGF.
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