JP6278446B2 - ダイズイベントｓｙｈｔ０ｈ２及びその組成物並びにその検出方法 - Google Patents

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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N2300/00—Combinations or mixtures of active ingredients covered by classes A01N27/00 - A01N65/48 with other active or formulation relevant ingredients, e.g. specific carrier materials or surfactants, covered by classes A01N25/00 - A01N65/48

Description

本発明は、概して、除草剤耐性を有するトランスフェニック植物に関する。特に、本発明は、ＨＰＰＤ阻害剤除草剤及びグルホシネートに対する抵抗性を賦与する、形質転換イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を含むダイズ植物を提供する。また、形質転換イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を検出する方法、並びに開示される植物及び植物部分を用いる方法も提供される。
植物における異種遺伝子の発現は、恐らく、クロマチン構造によるか、又は組込み部位に近い転写調節エレメントの近接性のために、植物ゲノム中の位置に影響を受けることが知られている。同時に、ゲノム中の様々な位置でのトランスジーンの存在は、植物の全体的な表現型に様々な様式で影響を及ぼす。このため、導入された目的の遺伝子の最適な発現を特徴とするイベントを同定するためには、往々にして、多数のイベントをスクリーニングする必要がある。例えば、植物及び他の生物において、イベント間で、導入された遺伝子の発現レベルに大きな差が存在しうることが観察されている。空間的又は時間的な発現パターン（これは、導入遺伝子構築物中に存在する転写調節エレメントから予想されるパターンに一致しない場合がある）の相違、例えば、各種植物組織中のトランスジーンの相対的発現における相違が生じうる。また、トランスジーンの挿入は、内在性遺伝子発現に作用しうることも観察されている。こうした理由から、数百から数千もの異なるイベントを作製し、これらのイベントを、商業的目的のために所望されるトランスジーン発現のレベル及びパターンを有する単一のイベントについて、スクリーニングすることが一般的である。トランスジーン発現の所望されるレベル及びパターンのを有するイベントは、従来の育種方法を用いた有性異系交配によって、トランスジーンを他の遺伝的背景に移入するのに有用である。このような交配の子孫は、もとの形質転換体のトランスジーン発現特性を維持している。この戦略は、局地的な生育条件に十分に適応したいくつかの変種において信頼性の高い遺伝子発現を確実にするために用いられている。
有性異系交配の子孫が、目的のトランスジーンを含むか否かを決定するために、特定のイベントの存在を検出することができれば、有利であろう。さらに、特定のイベントを検出する方法は、遺伝子組換え作物に由来する食品の市販前承認及び表示を要する規定を遵守するために、あるいは、環境モニタリング、圃場での作物の特徴のモニタリング、収穫作物に由来する製品のモニタリングに用いるために、及び／又は規制条項若しくは契約条項の対象になる当事者の遵守を保証するのに用いるために、役立つであろう。除草剤耐性を示す植物におけるイベントの迅速な同定を可能にする方法及び組成物は、例えば、圃場で雑草を抑制するのに必要な除草剤の適用回数を減らす、圃場で雑草を抑制するのに必要な除草剤の量を低減する、作物を生産するのに必要な耕耘量を低減する、及び／又は遅延している計画を展開させる、又は除草剤抵抗性雑草の出現を予防するために、作物保護及び雑草管理に用いることも可能である。特定の除草剤の組合せの標的型使用を可能にする作物保護及び雑草管理の方法及び組成物、並びにこのようなイベントの効率的検出が引き続き求められている。
この課題を解決するために、本発明は、ＨＰＰＤ阻害剤除草剤及びグルホシネートに対する抵抗性を賦与する、形質転換イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を含むダイズ植物を提供する。また、形質転換イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を検出するための組成物及び方法も提供される。
本発明は、植物又は植物部分が、配列番号１及び配列番号２のポリヌクレオチド配列を含み、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２に特徴的なアンプリコンを生成する、ダイズ植物又は植物部分を提供する。また、上記のダイズ植物又は植物部分から生産されるダイズ製品も提供される。
本発明は、ダイズイベントＳＹＨＴ０Ｈ２に特徴的な、単離された核酸、例えば、配列番号１〜６及び９〜１０のいずれか１つ、又はそれらの特徴的なフラグメントをさらに提供する。
生物学的サンプル中のイベントＳＹＨＴ０Ｈ２を同定するためのキットもさらに提供される。本発明の一態様では、このキットは、第１及び第２プライマーを含み、第１及び第２プライマーは、ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を含むポリヌクレオチドを増幅する。本発明の別の態様では、キットは、ストリンジェントな条件下で、ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域にハイブリダイズする少なくとも１つの核酸プローブを含む。
さらに、サンプル中のイベントＳＹＨＴ０Ｈ２を同定するための方法も提供される。本発明の一態様では、この方法は、（ａ）サンプルを第１及び第２プライマーと接触させるステップ；及び（ｂ）ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を含む核酸を増幅するステップを含む。本発明の別の態様では、本方法は、（ａ）ストリンジェントな条件下で、ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域にハイブリダイズする少なくとも１つの核酸プローブと、サンプルを接触させるステップ；及び（ｂ）少なくとも１つの核酸プローブとＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域とのハイブリダイゼーションを検出するステップを含む。
さらにまた、ＨＰＰＤ阻害剤及び／又はグルホシネートに対して抵抗性のダイズ植物を生産する方法も提供され、この方法は、ダイズ植物のゲノムにイベントＳＹＨＴ０Ｈ２を導入するステップを含む。また、このような植物を用いて、ダイズ製品を生産する方法も提供される。
さらにまた、ダイズ植物及び雑草を含む場所での雑草を抑制する方法も提供され、ここで、ダイズ植物は、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を含み、この方法は、１種以上のＨＰＰＤ阻害剤を含有する、雑草抑制量の除草剤組成物を上記の場所に適用するステップを含む。
さらに、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を用いて、ダイズ収量を改善する方法も提供される。
任意の場所でボランティアＳＹＨＴ０Ｈ２作物を抑制する方法も提供され、この方法は、ダイズに有効で、しかもＨＰＰＤの阻害以外の作用機序を有する１種以上の除草剤を上記の場所に適用するステップを含む。
さらにまた、ＳＹＨＴ０Ｈ２作物を含む場所でのボランティアトランスジェニックイベントを抑制する方法も提供され、ここで、ボランティアイベントは、１種以上の除草剤に対する抵抗性を含むが、ＨＰＰＤ阻害剤に対する抵抗性は含んでおらず、この方法は、１種以上のＨＰＰＤ阻害剤を含有する、抑制量の除草剤組成物を上記の場所に適用するステップを含む。
さらには、任意の場所に、除草剤混合物を適用する方法も提供され、除草剤混合物は、ＨＰＰＤ阻害剤と、有害生物（雑草、病害、昆虫、センチュウ）防除の目的で、ＳＹＨＴ０Ｈ２が耐性を持たない可能性がある少なくとも１種の別の化学物質を含むが、ＳＹＨＴ０Ｈ２イベントが存在するために、残留ＨＰＰＤ活性から保護することによって、作付け前又は出芽前のいずれかに上記混合物の適用が可能になる。さらにまた、異種核酸の挿入のためのダイズ染色体標的部位も提供されるが、これは、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２の挿入部位に相当する。また、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２の染色体部位に異種核酸を含む、ダイズ植物、植物部分、及び日用製品、並びにそれらの製造方法も提供される。
ダイズコドン最適化アベナ（Ａｖｅｎａ）ＨＰＰＤ遺伝子を含有するバイナリーベクター１５９５４を表す図である。
配列一覧における配列の簡単な説明
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トランスジェニックＨＰＰＤ阻害剤耐性ダイズ植物に関する組成物及び方法が提供される。本発明の組成物は、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を含むダイズ植物及び植物部分、それらに由来する食品及び飼料製品、並びにこれを検出するための試薬を含む。イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を含むダイズ植物は、実施例１で説明するように、アベナ（Ａｖｅｎａ）由来の突然変異体ＨＰＰＤ遺伝子及びストレプトミセス・ビドリクロモゲネス（Ｓ．ｖｉｒｉｄｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ）由来のホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ遺伝子の挿入によって作製される。
本明細書で用いる略語「ＨＰＰＤ」は、ヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼを意味する。ＨＰＰＤポリヌクレオチドは、ヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ酵素の酵素活性を有するポリペプチドをエンコードする。
ＨＰＰＤ阻害剤耐性を賦与するポリヌクレオチドは、ダイズゲノムにおいて特性決定された位置に挿入され、これにより、ＳＹＨＴ０Ｈ２ダイズイベントを生成する。実施例３を参照されたい。イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を保有するダイズ植物は、少なくとも配列番号１又は２のポリヌクレオチドを有するゲノム／トランスジーン結合部を含む。イベントＳＹＨＴ０Ｈ２のゲノム挿入部位の特性決定により、育種効率が増大すると共に、分子マーカーを用いて、育種集団へのトランスジーン挿入断片及びその子孫を追跡することが可能になる。実施例４を参照されたい。本明細書では、ダイズＳＹＨＴ０Ｈ２イベントの同定、検出、及び使用のための様々な方法及び組成物が提供される。例えば、実施例２を参照されたい。本明細書において、核酸又はヌクレオチド配列を説明するのに用いられる「ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的」という表現は、植物、植物材料、又は、限定されないが、植物材料を含む、又はこれに由来する食品若しくは飼料製品（生鮮若しくは加工済）中のベントＳＹＨＴ０Ｈ２を差別的に同定する特性を指す。
組成物はさらに、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）寄託番号ＰＴＡ−１１２６として寄託された種子、並びにこれに由来する植物、植物細胞、及び種子も包含する。出願人は、２０１０年７月２１日付けで、ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ ２０１１０−２２０９ Ｕ．Ｓ．Ａに、ダイズイベントＳＹＨＴ０Ｈ２を含む少なくとも２５００の種子を寄託した。これらの寄託物は、Ｂｕｄａｐｅｓｔ Ｔｒｅａｔｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｄｅｐｏｓｉｔ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｕｒｐｏｓｅｓ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅの条件下で維持される。
本明細書で用いる場合、用語「ダイズ」は、ダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ）を意味し、ダイズを用いて育種することができるあらゆる植物変種を包含する。本明細書で用いる場合、用語「植物」は、以下を含む：植物細胞、植物器官、植物プロトプラスト、植物を再生させることができる植物細胞組織培養物、植物カルス、植物群、並びに植物においてインタクトな植物細胞、又は植物の部分、例えば、胚、花粉、胚珠、種子、葉、花、枝、果実、茎、根、根冠、葯など。穀粒は、それら種の栽培又は繁殖以外の目的のために栽培業者によって生産される成熟種子を意味するものとする。再生された植物の子孫、変異体、及び突然変異体は、これらの部分がイベントＳＹＨＴ０Ｈ２を含有する限り、本発明の範囲に含まれる。
本発明の組成物は、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を含有するダイズ植物の以下の製品の１つ以上を含む、又はこれらに由来する商品、例えば、食品若しくは飼料製品も含む：レシチン、脂肪酸、グリセロール、ステロール、食用油、脱脂ダイズフレーク、脱脂及び焼き焦がしダイズミールなどのダイズミール、豆乳おから、豆腐、ダイズ粉、ダイズタンパク質濃縮物、単離されたダイズタンパク質、加水分解植物タンパク質、組織化ダイズタンパク質、及びダイズタンパク質繊維。
トランスジェニック「イベント」は、異種ＤＮＡ構築物を用いた植物細胞の形質転換、例えば、目的のトランスジーンを含む核酸発現カセット、植物のゲノムへのトランスジーンの挿入によって得られる植物の集団の再生、及び特定のゲノム位置への挿入によって特徴付けられる特定の植物の選択などによって作製される。イベントは、トランスジーンの発現により、表現型的に特徴付けられる。遺伝子レベルでは、イベントは、植物の遺伝子構造の一部である。用語「イベント」は、形質転換体と、異種ＤＮＡを含む別の変種との間の有性異系交配によって作製される子孫を指す。反復親との戻し交配が繰り返された後であっても、形質転換親由来の挿入ＤＮＡ及びフランキングＤＮＡは、同じ染色体位置で、交配の子孫に存在する。用語「イベント」はまた、挿入ＤＮＡと挿入ＤＮＡに直接隣接したフランキング配列を含む、もとの形質転換体由来のＤＮＡを指し、このフランキング配列は、挿入ＤＮＡを含む親株（例えば、もとの形質転換体及び自殖から生じる子孫）と、挿入ＤＮＡを含まない親株との有性交配の結果として、目的のトランスジーンを含む挿入ＤＮＡを受け取る子孫に移入されることが予想される。
様々な一次植物形質転換イベントの除草剤耐性又は抵抗性レベルの平均及び分布を、いずれか所定の除草剤の様々な濃度で、植物損傷、分裂組織退色症状などに基づいて、通常の方法で評価する。これらのデータは、例えば、用量／応答曲線から得られるＧＲ５０値として表すことができ、この曲線は、ｘ軸に「用量」をプロットし、ｙ軸に「死滅率（％）」、「除草効果」、「出芽した緑色植物の数」などをプロットしたものであり、ＧＲ５０値の増加は、固有の阻害剤耐性のレベル増加（例えば、Ｋｉ／ＫｍHPP値の増加）及び／又は発現ＨＰＰＤポリペプチドの発現のレベル増加に相当する。
本明細書で用いる場合、「挿入ＤＮＡ」とは、植物材料を形質転換するのに用いられる発現カセット内の異種ＤＮＡを指し、また、「フランキングＤＮＡ」は、植物などの生物中に天然に存在するゲノムＤＮＡか、又は元の挿入ＤＮＡ分子（例えば、形質転換事象に関連するフラグメント）にとっては外来性の、形質転換プロセスにより導入された外来（異種）ＤＮＡのいずれかを含みうる。本明細書で用いる「フランキング領域」又は「フランキング配列」とは、元の外来挿入ＤＮＡ分子のすぐ上流に隣接して位置するか、又はそのすぐ下流に隣接して位置する、少なくとも２０、５０、１００、２００、３００、４００、１０００、１５００、２０００、２５００、若しくは５０００塩基対又はこれを超える塩基対の配列を指す。イベントＳＹＨＴ０Ｈ２のフランキング領域の非制限的例としては、配列番号７及び８に示されるもの、並びにその変異体及びフラグメントがある。
外来ＤＮＡのランダムな組込みをもたらす形質転換方法により、各形質転換体に特徴的かつ特有の異なるフランキング領域を含む形質転換体が得られる。組換えＤＮＡを従来の交配によって植物に導入する場合、そのフランキング領域は、一般に変化しない。形質転換体はまた、１つの異種挿入ＤＮＡの断片とゲノムＤＮＡとの間に、又は２つのゲノムＤＮＡの断片間に、若しくは２つの異種ＤＮＡの断片間に、特有の結合部を含む。「結合部」とは、２つの特定のＤＮＡフラグメントが結合する点である。例えば、結合部は、挿入ＤＮＡがフランキングＤＮＡと結合する箇所に存在する。２つのＤＮＡフラグメントが、天然の生物に見出される様式から改変された様式で互いに結合する、形質転換生物に結合点が存在する。本明細書で用いる場合、「結合部ＤＮＡ」とは、結合点を含むＤＮＡを指す。前述のイベントＳＹＨＴ０Ｈ２由来の結合部ＤＮＡの非制限的例としては、配列番号１〜６に示されるもの、並びにその変異体及びフラグメントがある。
イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を含む植物は、トランスジェニックＳＹＨＴ０Ｈ２ダイズ植物から生育した第１親ダイズ植物と、除草剤耐性表現型が欠如した第２親ダイズと植物の最初の有性交配を実施して、これにより、複数の第１子孫植物を作製するステップ；次に、所望の除草剤耐性を呈示する第１子孫植物を選択するステップ；そして、第１子孫植物を自殖させることにより、複数の第２子孫植物を生産するステップ；及び、第２子孫植物から、所望の除草剤耐性を呈示するものを選択するステップによって、育種することができる。これらのステップは、除草剤耐性子孫植物と、第２親ダイズ植物又は第３親ダイズ植物との戻し交雑により、所望の除草剤耐性を呈示するダイズ植物を作製することをさらに含んでもよい。また、表現型について子孫をアッセイするステップは必要ないことが認識されよう。本明細書の他所で開示するように、様々な方法及び組成物を用いて、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を検出及び／又は同定することができる。
２つの異なるトランスジェニック植物を有性交配させて、２つの独立に分離した付加外来性遺伝子を含む子孫を作製することができる。適切な子孫の自殖により、付加された外来性遺伝子の両方について同型接合の植物を作製することができる。親植物との戻し交雑及び非トランスジェニック植物との異系交配は、栄養繁殖であることから、これらも考慮される。様々な特徴及び作物を目的として一般に用いられるその他の育種方法の記載は、複数の参照文献、例えば、Ｆｅｈｒ，ｉｎ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｃｕｌｔｉｖａｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，１９８７，Ｗｉｌｃｏｓ，Ｊ．（ｅｄ．），Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｇｒｏｎｏｍｙ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩに見出すことができる。
用語「生殖質」とは、ある遺伝子型を表す個体、個体群、又はクローン、変種、種若しくは培養物、又はその遺伝物質を指す。
「系」又は「系統」は、一般に、ある程度まで近親交配させ、概して同質遺伝子又はほぼ同質遺伝子である同じ親子関係の個体群である。
近親交配ダイズ系は、典型的には、ダイズハイブリッドの生産に用いるため、及び新規かつ異なる近親交配ダイズ系の作出のための集団を育種する上での生殖質として使用するために開発される。近親交配ダイズ系は、従来の育種及び／又は分子移入技術による新規の特徴の移入のための標的として用いられることが多い。近親交配ダイズ系は、商業的ハイブリッドの親として有用であるために、高度に均質、同型接合で、しかも再現性である必要がある。近親交配系の同型接合性及び表現型安定性を決定するのに、様々な分析方法が利用可能である。
「ハイブリッド植物」というフレーズは、遺伝子的に異なる個体同士の交配によって得られる植物を指す。
本発明において、「交配した」又は「交配」という用語は、配偶子の融合、例えば、植物の場合、子孫（すなわち、細胞、種子、若しくは植物）を生産するための受粉を意味する。この用語は、有性交配（一植物の別の植物による受粉）と、自殖（自家受粉、すなわち、花粉及び胚珠が同一の植物由来である場合）の両方を包含する。
「（遺伝子）移入」という用語は、ある遺伝的背景から別の背景への遺伝子座の所望の対立遺伝子の伝達を指す。一つの方法では、所望の対立遺伝子を２つの親同士の有性交配から移入させることができ、その際、親の少なくとも一方は、そのゲノムに所望の対立遺伝子を有する。
本発明のある態様では、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を賦与するポリヌクレオチドは、分子積層に作製される。別の態様では、分子積層は、第３除草剤に対する耐性を賦与する少なくとも１つの別のポリヌクレオチドをさらに含む。例えば、上記配列は、グリホサートに対する耐性を賦与することができ、この配列は、ＥＰＳＰＳを含んでもよい。
本発明の別の態様では、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２は、目的とする１つ以上の別の特徴、例えば、特徴の所望の組合せを有する植物を作出するために、目的のポリヌクレオチド配列の任意の組合せを用いた積層を含むことができる。本明細書で用いる場合、「特徴（ｔｒａｉｔ）」とは、特定の配列又は配列群に由来する表現型を指す。例えば、除草剤耐性ポリヌクレオチドを、有害生物防除及び／又は殺虫活性を有するポリペプチドをエンコードする任意の別のポリヌクレオチドと一緒に積層してもよく、こうしたポリペプチドとして、以下のものがある：バチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）毒性タンパク質（米国特許第５，３６６，８９２号明細書；同第５，７４７，４５０号明細書；同第５，７３７，５１４号明細書；同第５，７２３，７５６号明細書；及び同第５，５９３，８８１号明細書；Ｇｅｉｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，１９８６ ４８：１０９；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，２００３，６９：４６４８−４６５７（Ｖｉｐ３Ａ）；Ｇａｌｉｔｚｋｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ．Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇ．，２００１，５７：１１０１−１１０９（Ｃｒｙ３Ｂｂｌ）；及びＨｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．，２００４，５２：２７２６−２７３４（ＣｒｙｌＦ）に記載）、レクチン（Ｖａｎ Ｄａｍｍｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．，１９９４，２４：８２５、ペンチン（米国特許第５，９８１，７２２号明細書に記載）など。作製される組合せは、目的のポリヌクレオチドのいずれか１つの複数のコピーを含んでもよい。これらの組合せはまた、これらの遺伝子を含む既存又は新規のイベントを用いた育種積層により作製してもよい。育種積層に用いてよい既存のイベントの例としては、限定されないが、ＭＯＮ８７７０１−鱗翅類抵抗性がある。
本発明のある態様では、さらに改善された特性を有する本発明のトランスジェニック植物を作出するために、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を、別の除草剤耐性特徴と一緒に積層してもよい。例えば、突然変異体ＨＰＰＤポリペプチドをエンコードするポリヌクレオチド、又はＨＰＰＤ酵素活性を保持するその変異体を、望ましい特徴を賦与するポリペプチドをエンコードするいずれか他のポリヌクレオチドと一緒に積層してもよく、こうした望ましい特徴として、限定されないが、以下のものがある：病害、昆虫、及び除草剤に対する抵抗性、熱及び干ばつに対する耐性、作物成熟までの時間短縮、工業的加工性（例えば、デンプン又はバイオマスの発酵性糖への変換）の改善、並びに農学的品質（例えば、高含油量及び高タンパク質含量）の向上。
突然変異体ＨＰＰＤポリペプチドをエンコードする本発明のポリヌクレオチド、又はＨＰＰＤ酵素活性を保持するその変異体と一緒に積層することができるポリヌクレオチドの例として、有害生物／病原体、例えば、ウイルス、センチュウ、昆虫又は真菌などに対する抵抗性を賦与するポリペプチドをエンコードするポリヌクレオチドがある。本発明のポリヌクレオチドと一緒に積層してよいポリヌクレオチドの例として、以下をエンコードするポリヌクレオチドがある：有害生物防除及び／又は殺虫活性を有するポリペプチド、例えば、他のバチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）毒性タンパク質（米国特許第５，３６６，８９２号明細書；同第５，７４７，４５０号明細書；同第５，７３７，５１４号明細書；同第５，７２３，７５６号明細書；及び同第５，５９３，８８１号明細書；及びＧｅｉｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，１９８６ ４８：１０９に記載）、レクチン（Ｖａｎ Ｄａｍｍｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９４，２４：８２５、ペンチン（米国特許第５，９８１，７２２号明細書に記載）など；病害又は除草剤抵抗性に望ましい特徴（例：フモニシン解毒遺伝子（米国特許第５，７９２，９３１号明細書）；非病原性及び病害抵抗性遺伝子（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４，２６６：７８９；Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９３，２６２：１４３２；Ｍｉｎｄｒｉｎｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１９９３，７８：１０８９）；Ｓ４及び／又はＨｒａ突然変異のような除草剤抵抗性（（スルホニル尿素、イミダゾリノン、トリアゾロピリミジン、ピリミジニルチオベンゾエートを含む除草剤に対する抵抗性）をもたらすアセト乳酸シンターゼ突然変異体；グリホサート抵抗性（例：５−エノール−ピロビル−シキミ酸−３−リン酸−シンターゼ（ＥＰＳＰＳ）遺伝子、例えば、限定されないが、以下の文献に記載されているもの：米国特許同第４，９４０，９３５号明細書、同第５，１８８，６４２号明細書、同第５，６３３，４３５号明細書、同第６，５６６，５８７号明細書、同第７，６７４，５９８号明細書、並びに関連する全ての出願；又は以下の文献に記載されているグリホサートＮ−アセチルトランスフェラーゼ（ＧＡＴ）遺伝子：Ｃａｓｔｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００４，３０４：１１５１〜１１５４；及び米国特許出願公開第２００７０００４９１２号明細書、同第２００５０２４６７９８号明細書、及び同第２００５００６０７６７号明細書））；グルホシネート抵抗性（例：ＢＡＲ；例えば、米国特許第５，５６１，２３６号明細書を参照）；２，４−Ｄ抵抗性（例：アリールオキシアルカノエートジオキシゲナーゼ、すなわちＡＡＤ−１、ＡＡＤ−２、若しくはＡＡＤ−１３）、ＨＰＰＤ抵抗性（例：シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ＨＰＰＤ）及びＰＰＯ抵抗性（例：ホメサフェン、アシフルオルフェン−ナトリウム、オキシフルオルフェン、ラクトフェン、フルチアセト−メチル、サフルフェナシル、フルミオキサジン、フルミクロラク−ペンチル、カルフェントラゾンーエチル、スルフェントラゾン）；中でも、ＨＰＰＤ阻害除草剤、ＰＰＯ阻害除草剤及びＡＬＳ阻害除草剤に対する除草剤抵抗性又は耐性を賦与するシトクロムＰ４５０若しくはその変異体（米国特許出願公開第２００９００１１９３６号明細書；米国特許第６，３８０，４６５号明細書；同第６，１２１，５１２号明細書；同第５，３４９，１２７号明細書；同第６，６４９，８１４号明細書；及び同第６，３００，５４４号明細書；並びに国際公開第２００７／００００７７号パンフレット）；ジカンバ抵抗性（例：ジカンバモノオキシゲナーゼ）、及び製品（例えば、高油）の加工又は処理に望ましい特徴（例：米国特許第６，２３２，５２９号明細書）；変性油（例：脂肪酸デサチュラーゼ遺伝子（米国特許第５，９５２，５４４号明細書；国際公開第９４／１１５１６号パンフレット））；変性デンプン（例：ＡＤＰＧピロホスホリラーゼ（ＡＧＰａｓｅ）、デンプンシンターゼ（ＳＳ）、デンプン分枝酵素（ＳＢＥ），及びデンプン枝切り酵素（ＳＤＢＥ））；並びにポリマー若しくはバイオプラスチック（例：米国特許第５，６０２，３２１号明細書；β−ケトチオラーゼ、ポリヒドロキシ酪酸シンターゼ、及びアセトアセチル−ＣｏＡレダクターゼ（Ｓｃｈｕｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１９８８，１７０：５８３７−５８４７）は、ポリヒドロキシアルカノエート（ＰＨＡ）の発現を促進する；上記文献の開示内容は、本明細書に参照として組み込むものとする。
従って、本発明の一態様では、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２は、除草剤、例えば、ＨＰＰＤ阻害剤、グリホサート、２，４−Ｄ、ジカンバ又はグルホシネートに対する抵抗性又は耐性を賦与するポリペプチドをエンコードする１つ以上のポリヌクレオチドと一緒に積層する。
本発明のこのような態様で用いることができるその他の除草剤耐性ポリヌクレオチドとしては、他の遺伝子又は作用機序によってＨＰＰＤ阻害剤に対する耐性を賦与するものがある。ダイズＳＹＨＴ０Ｈ２イベントと組み合わせることができるその他の特徴としては、植物に、より高レベルの５−エノールピルビルシキミ酸−３−リン酸シンターゼ（ＥＰＳＰＳ）を生成する能力を賦与するポリヌクレオチドに由来するものがあり、これについては、例えば、以下の文献により詳しく記載されている：米国特許第６，２４８，８７６号明細書；同第５，６２７，０６１号明細書；同第５，８０４，４２５号明細書；同第５，６３３，４３５号明細書；同第５，１４５，７８３号明細書；同第４，９７１，９０８号明細書；同第５，３１２，９１０号明細書；同第５，１８８，６４２号明細書；同第４，９４０，８３５号明細書；同第５，８６６，７７５号明細書；同第６，２２５，１１４号明細書；同第６，１３０，３６６号明細書；同第５，３１０，６６７号明細書；同第４，５３５，０６０号明細書；同第４，７６９，０６１号明細書；同第５，６３３，４４８号明細書；同第５，５１０，４７１号明細書；同第ＲＥ３６，４４９号明細書；同第ＲＥ３７，２８７号明細書；及び同第５，４９１，２８８号明細書；並びに国際公開第９７／０４１０３号パンフレット；国際公開第００／６６７４６号パンフレット；国際公開第０１／６６７０４号パンフレット；及び国際公開第００／６６７４７号パンフレット。イベントＳＹＨＴ０Ｈ２と組み合わせることができるその他の特徴としては、スルホニル尿素、イミダゾリノン、トリアゾロピリミジン、及び／又はピリミジニルチオベンゾエートに対する耐性を賦与するものがあり、これらについては、例えば、以下の文献に、より詳しく記載されている：米国特許第５，６０５，０１１号明細書；同第５，０１３，６５９号明細書；同第５，１４１，８７０号明細書；同第５，７６７，３６１号明細書；同第５，７３１，１８０号明細書；同第５，３０４，７３２号明細書；同第４，７６１，３７３号明細書；同第５，３３１，１０７号明細書；同第５，９２８，９３７号明細書；及び同第５，３７８，８２４号明細書；並びに国際公開第９６／３３２７０号パンフレット。
本発明のある態様では、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２は、ヒドロキシフェニルピルビン酸オキシゲナーゼと一緒に積層してもよく、これは、パラ−ヒドロキシフェニルピルビン酸（ＨＰＰ）がホモゲンチジン酸に変換される反応を触媒する酵素である。この酵素を阻害し、この酵素と結合することにより、ＨＰＰのホモゲンチジン酸への変換を阻害する分子が、除草剤として有用である。植物にこのような除草剤に対する耐性を賦与する特徴については、米国特許第６，２４５，９６８号明細書；同第６，２６８，５４９号明細書；及び同第６，０６９，１１５号明細書；並びに国際公開第９９／２３８８６号パンフレットに記載されている。イベントＳＹＨＴ０Ｈと一緒に積層することができる好適な除草剤耐性の特徴としては、以下のものがある：アリールオキシアルカノエートジオキシゲナーゼポリヌクレオチド（以下の文献に記載されるように、２，４−Ｄ及びその他のフェノキシオーキシン除草剤、並びにアリールオキシフェノキシプロピオン酸除草剤に対する耐性を賦与しうる：国際公開第２００５／１０７４３７号パンフレット、国際公開第２００７／０５３４８２号パンフレット、及び国際公開第２００８／１４１１５４号パンフレット、及び米国特許第７，８２０，８８３号明細書、並びに関連出願及び特許明細書）、ホモゲンチジン酸ソランシルトランスフェラーゼ（ＨＳＴ）（例えば、国際公開第１０／０２９３１１号パンフレットに記載されている、及びジカンバ（モノオキシゲナーゼ）抵抗性ポリヌクレオチド（例えば、Ｈｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００５，２８０：２４７５９〜２４７６７及び米国特許第７，８１２，２２４号明細書、並びに関連出願及び特許明細書に記載されている）。
イベントＳＹＨＴ０Ｈ２と組み合わせることができる除草剤耐性の特徴のその他の例としては、以下の文献に記載されているように、外性ホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼをエンコードするポリヌクレオチドによって賦与されるものがある：米国特許第５，９６９，２１３号明細書；同第５，４８９，５２０号明細書；同第５，５５０，３１８号明細書；同第５，８７４，２６５号明細書；同第５，９１９，６７５号明細書；同第５，５６１，２３６号明細書；同第５，６４８，４７７号明細書；同第５，６４６，０２４号明細書；同第６，１７７，６１６号明細書；及び同第５，８７９，９０３号明細書。外性ホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼを含む植物は、酵素グルタミンシンターゼを阻害するグルホシネート除草剤に対する改善された耐性を呈示しうる。イベントＳＹＨＴ０Ｈ２と組み合わせることができる除草剤耐性の特徴のその他の例としては、以下の文献に記載されているように、改変されたプロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ（ｐｒｏｔｏｘ）活性を賦与するポリヌクレオチドによって賦与されるものがある：米国特許第６，２８８，３０６号明細書；同第６，２８２，８３７号明細書；及び同第５，７６７，３７３号明細書；並びに国際公開第０１／１２８２５号パンフレット。このようなポリヌクレオチドを含む植物は、ｐｒｏｔｏｘ酵素を標的とする様々な除草剤（「ｐｒｏｔｏｘ阻害剤」と呼ばれる）のいずれに対しても改善された耐性を呈示することができる。
イベントＳＹＨＴ０Ｈ２と組み合わせることができる除草剤耐性の特徴のその他の例としては、ダイズ植物又はヒメムカシヨモギなどの植物における少なくとも１種の除草剤に対する耐性を賦与するものがある。除草剤耐性雑草は、当分野において公知であり、特定の除草剤に対してそれらの耐性は異なる。例えば、以下の文献を参照されたい：Ｇｒｅｅｎ ＆ Ｗｉｌｌｉａｍｓ，“Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏｒｎ （Ｚｅａ ｍａｙｓ） Ｉｎｂｒｅｄ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ Ｎｉｃｏｓｕｌｆｕｒｏｎ ａｎｄ Ｍｅｓｏｔｒｉｏｎｅ，”ｐｏｓｔｅｒ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ａｔ ｔｈｅ ＷＳＳＡ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ ｉｎ Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ９−１２，２００４；Ｇｒｅｅｎ（１９９８） Ｗｅｅｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２： ４７４−４７７；Ｇｒｅｅｎ ＆ Ｕｌｒｉｃｈ，Ｗｅｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００３，４１：５０８−５１６。これらの耐性の原因となる特徴を、育種又はその他の方法によって、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２と組み合わせて、本発明の植物、及びその使用方法を提供することができる。
前述した遺伝子を遺伝子改変して、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２にしてもよいし、又は、前述した遺伝子の１つに耐性を賦与する新規若しくは既存のイベントを用いた育種積層により、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２と組み合わせてもよい。育種積層に用いることが可能なイベントとしては、限定されないが、以下のものが挙げられる：ＭＯＮ８９７８８−グリホサート耐性（米国特許第７，６３２，９８５号明細書並びに関連出願及び特許明細書）、ＭＯＮ８７７０８−ジカンバ耐性（米国特許出願公開第２０１１／００６７１３４号明細書並びに関連出願及び特許明細書）、ドイツ国特許第３５６０４３−５号明細書−グリホサート及びＡＬＳ耐性（米国特許出願公開第２０１０／０１８４０７９号明細書並びに関連出願及び特許明細書）、Ａ２７０４−１２−グルホシネート耐性（米国特許出願公開第２００８／０３２０６１６号明細書並びに関連出願及び特許明細書）、ドイツ国特許第３０５４２３−１号明細書−ＡＬＳ耐性（米国特許出願公開第２００８／０３１２０８２号明細書並びに関連出願及び特許明細書）、Ａ５５４７−１２７−グルホシネート耐性（米国特許出願公開第２００８／０１９６１２７号明細書並びに関連出願及び特許明細書）、ドイツ国特許出願第Ｓ−４０２７８−９号明細書−２，４−ジクロロフェノキシ酢酸及びアリールオキシフェノキシプロピオン酸に対する耐性（国際公開第２０１１／０２２４６９号パンフレット、国際公開第２０１１／０２２４７０号パンフレット、及び国際公開第２０１１／０２２４７１号パンフレット、並びに関連出願及び特許明細書）、１２７−ＡＬＳ耐性（国際公開第２０１０／０８０８２９号パンフレット、並びに関連出願及び特許明細書）、ＧＴＳ４０−３−２ −グリホサート耐性、ドイツ国特許出願第Ｓ−６８４１６−４号明細書−２，４−ジクロロフェノキシ酢酸及びグルホシネート耐性、ＦＧ７２−グリホサート及びイソキサフルトール耐性、ＢＰＳ−ＣＶ１２７−９−ＡＬＳ耐性、並びにＧＵ２６２−グルホシネート耐性、ＳＹＨＴ０４Ｒ−ＨＰＰＤ耐性。
イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を、少なくとも１つの他の特徴と組み合わせることにより、様々な所望の特徴の組合せをさらに含む本発明の植物を作製することができ、こうした特徴としては、限定されないが、以下のものがある：高油分など、動物飼料に望ましい特徴（例えば、米国特許第６，２３２，５２９号明細書）；バランスの取れたアミノ酸含量（例：ホルドチオニン（米国特許第５，９９０，３８９号明細書；同第５，８８５，８０１号明細書；同第５，８８５，８０２号明細書；及び同第５，７０３，４０９号明細書；米国特許第５，８５０，０１６号明細書）；わずかに高いリシン（Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９８７，１６５：９９−１０６；及び国際公開第９８／２０１２２号パンフレット）及び高メチオニンタンパク質（Ｐｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９８６，２６１：６２７９； Ｋｉｒｉｈａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，１９８８，７１：３５９；及びＭｕｓｕｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９８９，１２：１２３））；消化性の増加（例：改変貯蔵タンパク質（米国特許第６，８５８，７７８号明細書）；並びにチオレドキシン（米国特許第７，００９，０８７号明細書）；これらの文献の開示内容は、参照として本明細書に組み込むものとする。所望の特徴の組合せには、ＬＬＮＣ（低リノレン酸含量；例えば、Ｄｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００２，５９：２２４−２３０を参照）及びＯＬＣＨ（高オレイン酸含量；例えば、Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｍｏｙａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．，２００５，５３：５３２６−５３３０）が含まれる。
イベントＳＹＨＴ０Ｈ２は、以下のような他の望ましい特徴と組み合わせることができる：例えば、フモニシン解毒遺伝子（米国特許第５，７９２，９３１号明細書））、非病原性及び病害抵抗性遺伝子（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４，２６６：７８９；Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９３，２６２：１４３２；Ｍｉｎｄｒｉｎｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１９９４，７８：１０８９）、並びに変性油のような製品の加工又は処理に望ましい特徴（例：脂肪酸デサチュラーゼ遺伝子（米国特許第５，９５２，５４４号明細書；国際公開第９４／１１５１６号パンフレット））；変性デンプン（例：ＡＤＰＧピロホスホリラーゼ（ＡＧＰａｓｅ）、デンプンシンターゼ（ＳＳ）、デンプン分枝酵素（ＳＢＥ），及びデンプン枝切り酵素（ＳＤＢＥ））；並びにポリマー若しくはバイオプラスチック（例：米国特許第５，６０２，３２１号明細書；β−ケトチオラーゼ、ポリヒドロキシ酪酸シンターゼ、及びアセトアセチル−ＣｏＡレダクターゼ（Ｓｃｈｕｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１９８８，１７０：５８３７−５８４７）は、ポリヒドロキシアルカノエート（ＰＨＡ）の発現を促進する；尚、上記文献の開示内容は、参照として本明細書に組み込まれる。また、除草剤耐性ポリヌクレオチドを、農学的特徴を賦与するポリヌクレオチドと組み合わせることも可能であり、このような特徴として、例えば、雄性不稔（例えば、米国特許第５，５８３，２１０号明細書を参照）、茎強度、開花時期、又は形質転換技術による特徴、例えば、細胞周期調節若しくは遺伝子ターゲティング（例えば、国際公開第９９／６１６１９号パンフレット、同第００／１７３６４号パンフレット、及び同第９９／２５８２１号パンフレットを参照）；尚、上記文献の開示内容は、参照として本明細書に組み込まれる。
本発明の別の態様では、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２をＲｃｇ１配列又はその生物学的に活性の変異体若しくはフラグメントと組み合わせることができる。Ｒｃｇ１配列は、トウモロコシにおける炭そ性茎腐敗病耐性遺伝子である、例えば、米国特許出願公開第２００６０２２５１５１号明細書、同第２００６０２２３１０２号明細書、及び同第２００６０２２５１５２号明細書を参照されたい。尚、これらの文献の各々は、本明細書に参照として組み込むものとする。
前述した積層組合せは、任意の方法により作出することができ、このような方法として、限定されないが、あらゆる従来の又はＴｏｐＣｒｏｓｓ方法による植物の育種、又は遺伝子形質転換がある。植物の遺伝子形質転換により、配列を積層する場合には、目的のポリヌクレオチドを、任意の時点及び任意の順序で組み合わせることができる。形質転換カセットの任意の組合せによって提供される目的のポリヌクレオチドと一緒に、上記の特徴を共形質転換プロトコルに同時に導入することができる。例えば、２つの配列を導入する場合には、２つの配列を個別の形質転換カセットに含有させる（ｔｒａｎｓ）か、又は同じ形質転換カセットに含有させる（ｃｉｓ）ことができる。配列の発現は、同じプロモーター又は異なるプロモーターによって駆動することができる。特定の態様では、目的のポリヌクレオチドの発現を抑制する形質転換カセットを導入することが望ましい。これを他の抑制カセット又は過剰発現カセットの任意の組合せと組み合わせて、植物中に所望の特徴の組合せを生成することもできる。さらに、部位特異的組換えシステムを用いて、ポリヌクレオチド配列を所望のゲノム位置に積層してもよいことは認識されよう。例えば、国際公開第９９／２５８２１号パンフレット、同第９９／２５８５４号パンフレット、同第９９／２５８４０号パンフレット、同第９９／２５８５５号パンフレット、及び同第９９／２５８５３号パンフレットを参照されたい。尚、これらの文献はすべて、本明細書に参照として組み込むものとする。
本明細書で用いる場合、用語「ポリヌクレオチド」の使用は、リボヌクレオチド及び／又はデオキシリボヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを包含し、天然に存在する分子及び合成類似体の両方を含むものとする。ポリヌクレオチドは、あらゆる形態の配列を包含し、こうした形態として、限定されないが、一本鎖形態、二本鎖形態、ヘアピン、ステム及びループ構造などがある。
ＳＹＨＴ０Ｈ２植物は、突然変異体ＨＰＰＤ遺伝子と、突然変異体ＨＰＰＤ遺伝子に機能的に連結された５’及び３’調節配列を有する発現カセットを含む。「機能的に連結された」とは、２つ以上のエレメント同士の機能性連結を意味するものとする。例えば、目的のポリヌクレオチドと調節配列（すなわち、プロモーター）同士の機能的連結は、目的のポリヌクレオチドの発現を可能にする機能性連結である。機能的に連結したエレメントは、連続的又は非連続的のいずれであってもよい。機能的連結による、２つのタンパク質コード領域の結合を指すのに用いる場合には、コード領域は、同じリーディングフレーム内にあることが意図される。カセットは、生物に共形質転換しようとする少なくとも１つの別の遺伝子をさらに含んでいてもよい。あるいは、上記の別の遺伝子を複数の発現カセットに提供することもできる。こうした発現カセットは、調節領域の転写調節下に置こうとするポリヌクレオチドの挿入のための複数の制限部位及び／又は組換え部位を備えている。発現カセットは、選択マーカー遺伝子をさらに含んでもよい。
発現カセットは、５’から３’の転写方向に、植物における転写及び翻訳開始領域（すなわち、プロモーター）、コード領域、並びに転写及び翻訳終結領域機能を含む。「プロモーター」とは、コード配列又は機能性ＲＮＡの発現を制御することができるヌクレオチド配列を指す。一般に、コード配列は、プロモーター配列に対して３側に位置する。プロモーター配列は、近位の上流エレメント及びより遠位の上流エレメントを含んでもよく、後者のより遠位のエレメントは、エンハンサーと呼ばれることが多い。従って、「エンハンサー」は、プロモーター活性を刺激することができるヌクレオチド配列であり、プロモーターの内在的エレメントであってもよいし、又はプロモーターのレベル又は組織特異性を増強するために挿入される異種エレメントであってもよい。プロモーターは、その全体が、天然型遺伝子に由来するものであっても、天然に存在する様々なプロモーター由来の様々なエレメントから構成されるものであってもよく、さらには、合成ヌクレオチドセグメントを含んでいてもよい。様々なプロモーターが、様々な組織型若しくは細胞型において、あるいは様々な発生段階で、又は様々な環境条件に応答して、遺伝子の発現を指令しうることが、当業者には理解される。核酸フラグメントを、ほとんどの細胞型においてほとんどいつでも発現させるプロモーターは、一般に、「構成的プロモーター」と呼ばれている。植物細胞に有用な様々なタイプの新規プロモーターは、常に発見され続けており；多数の例を、Ｏｋａｍｕｒｏ及びＧｏｌｄｂｅｒｇによる編纂物、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｌａｎｔｓ，１９８９ １５：１−８２に見出すことができる。さらに、ほとんどの場合、調節配列の正確な境界は完全には規定されていないため、様々な長さの核酸フラグメントが、同じプロモーター活性を有しうることも認識される。
発現カセットは、５’リーダー配列を含んでもよい。このようなリーダー配列は、翻訳を促進するように作用することができる。調節配列（すなわち、プロモーター、転写調節領域、ＲＮＡプロセシング又は安定領域、イントロン、ポリアデニル化シグナル、及び翻訳終結領域）及び／又はコード領域は、宿主細胞に対して、又は互いに天然／類似若しくは異種のいずれであってもよい。
「翻訳リーダー配列」とは、遺伝子のプロモーター配列とコード配列の間に位置するヌクレオチド配列を指す。翻訳リーダー配列は、翻訳開始配列の上流の完全にプロセシングされたｍＲＮＡに存在する。翻訳リーダー配列は、ｍＲＮＡの一次転写物のプロセシング、ｍＲＮＡ安定性及び／又は翻訳効率など、多くのパラメーターに影響を与えうる。翻訳リーダー配列の例は、記載されている（Ｔｕｒｎｅｒ ＆ Ｆｏｓｔｅｒ，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９５，３：２２５−２３６）。「３’非コード配列」とは、コード配列の下流に位置するヌクレオチド配列を指し、ポリアデニル化認識配列、及びｍＲＮＡプロセシング又は遺伝子発現に影響を与えることができる調節シグナルをエンコードする他の配列を含む。ポリアデニル化シグナルは、通常、ｍＲＮＡ前駆体の３’末端へのポリアデニル酸部分の付加に影響を与えることを特徴とする。様々な３’非コード配列の使用が、Ｉｎｇｅｌｂｒｅｃｈｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ，１９８９，１：６７１−６８０によって例示されている。
本明細書において、配列に関して用いる「異種」とは、外来種が起源であるか、又は同じ種に由来する場合には、意図的な人為的介入によって、組成及び／又はゲノム遺伝子座がその天然型から実質的に改変されている配列である。例えば、異種ポリヌクレオチドに機能的に連結されたプロモーターは、このポリヌクレオチドが由来する種とは異なる種に由来するか、あるいは、同じ／類似の種に由来する場合には、一方又は両方が、その本来の型及び／若しくはゲノム遺伝子座から実質的に改変されているか、又は、このプロモーターは、機能的に連結されたポリヌクレオチドの天然のプロモーターではない。
発現カセットの作製に際して、適正な配向の、また必要に応じて、適正なリーディングフレーム内のＤＮＡ配列を提供するように、様々なＤＮＡフラグメントを操作することもできる。その終点に向けて、アダプター若しくはリンカーを使用して、ＤＮＡフラグメントを結合してもよいし、又は好都合な制限部位の付与、過剰なＤＮＡの除去、制限部位の除去などのために他の操作を実施してもよい。この目的のために、ｉｎ ｖｉｔｒｏ突然変異誘発、プライマー修復、制限、アニーリング、再置換、例えば、トランジション及びトランスバージョンを含んでもよい。発現カセットは、形質転換細胞の選択のための選択マーカー遺伝子を含むことができる。選択マーカー遺伝子は、形質転換細胞又は組織の選択のために用いられる。
ダイズＳＹＨＴ０Ｈ２イベントの検出及び／又は同定のための様々な方法に用いることができる単離ポリヌクレオチドが提供される。「単離（された）」若しくは「精製（された）」ポリヌクレオチド、又はその生物学的に活性の部分は、それが天然に存在する環境に見出されるようなポリヌクレオチドに、通常、付随するか、又はこれと相互作用する成分を実質的に、若しくはほとんど含まない。従って、単離又は精製ポリヌクレオチドは、組換え技術で作製される場合には、他の細胞材料、若しくは培地を実質的に含まず、あるいは、化学的に合成される場合には、化学的前駆物質若しくはその他の化学物質を実質的に含まない。最適には、「単離」ポリヌクレオチドは、このポリヌクレオチドが由来する生物のゲノムＤＮＡ内のポリヌクレオチドに天然にフランキングする配列（最適には、タンパク質コード配列）（すなわち、上記ポリヌクレオチドの５’及び３’末端に位置する配列）を含まない。例えば、本発明の様々な態様では、単離ポリヌクレオチドは、このポリヌクレオチドが由来する生物のゲノムＤＮＡ内のポリヌクレオチドに天然にフランキングするヌクレオチド配列の約５ｋｂ、４ｋｂ、３ｋｂ、２ｋｂ、１ｋｂ、０．５ｋｂ、又は０．１ｋｂ未満を含みうる。誤解のないように言うと、「単離」配列は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏのいずれでも、依然として他のＤＮＡに関連している可能性があり、例えば、トランスジェニック細胞又は生物に存在しうる。
本発明の特定の態様では、ポリヌクレオチドは、配列番号１〜６に示される結合部ＤＮＡ配列を含む。本発明の別の態様では、ポリヌクレオチドは、配列番号１１〜１２に示されるＤＮＡ配列並びにその変異体及びフラグメントを含む。結合部ＤＮＡのフラグメント及び変異体は、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を差別的に同定するのに好適である。本明細書の他所で述べるように、このような配列は、プライマー及び／又はプロモーターとして有用である。
本発明の別の態様では、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２又はＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を検出することができるポリヌクレオチドが提供される。このような配列は、配列番号１〜２０に示されるあらゆるポリヌクレオチド並びにその変異体及びフラグメントを含む。本発明の特定の態様では、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を検出するのに用いられるポリヌクレオチドは、配列番号１０に示される配列、又は少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、若しくは１８０ヌクレオチドを有する配列番号１０のフラグメントを含む。イベントＳＹＨＴ０Ｈ２又はＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を検出するポリヌクレオチドのフラグメント及び変異体は、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を差別的に同定するのに好適である。本明細書の他所で述べるように、このような配列は、プライマー及び／又はプローブとして有用である。さらに、（ａ）配列番号１１〜１２、１４〜１５、及び１７〜２１のいずれか１つに示される配列、並びに（ｂ）配列番号１０の変異体及びフラグメント若しくはその相補体を含む、又はこれらから構成される単離ＤＮＡヌクレオチドプライマー配列も提供される。
「変異体」とは、実質的に類似した配列を意味する。ポリヌクレオチドについては、変異体は、５’及び／若しくは３’末端に欠失（すなわち切断部分）；天然のポリヌクレオチド内の１つ以上の内部部位に１つ以上のヌクレオチドの欠失及び／若しくは付加；並びに／又は天然のポリヌクレオチド内の１つ以上の内部部位に１つ以上のヌクレオチドの置換を有するポリヌクレオチドを含む。
本明細書で用いる「プローブ」とは、従来の検出可能な標識又はレポーター分子、（例えば、放射性同位元素、リガンド、化学発光剤、酵素など）を結合させた、単離ポリヌクレオチドである。このようなプローブは、標的ポリヌクレオチドの鎖（本発明の場合には、ダイズ植物に由来するか、又はイベント由来のＤＮＡを含むサンプルに由来するかにかかわらず、ダイズイベントＳＹＨＴ０Ｈ２由来の単離ＤＮＡの鎖）に相補的である。プローブは、デオキシリボ核酸又はリボ核酸だけではなく、ポリアミド及び標的ＤＮＡ配列の存在を特異的に検出することができる他のプローブ材料も含む。
本明細書で用いる「プライマー」とは、核酸ハイブリダイゼーションによって相補的な標的ＤＮＡ鎖にアニールさせて、プライマーと標的ＤＮＡ鎖との間にハイブリッドを形成し、次いで、ポリメラーゼ（例えば、ＤＮＡポリメラーゼ）によって標的ＤＮＡ鎖に沿って伸長される、単離ポリヌクレオチドである。プライマー対とは、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）又は他の従来の核酸増幅方法による、標的ポリヌクレオチドの増幅のためのそれらの使用を指す。「ＰＣＲ」又は「ポリメラーゼ連鎖反応」は、特異的ＤＮＡセグメントの増幅に用いられる技術である（米国特許第４，６８３，１９５号明細書及び同第４，８００，１５９号明細書を参照；尚、これらの文献は参照として本明細書に組み込まれる）。本明細書に開示するプライマーの任意の組合せを用いて、それらの対により、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２の検出を可能にすることができる（例えば、配列番号１１〜１２、１４〜１５、及び１７〜２１、並びに配列番号１０の変異体若しくはフラグメント又はその相補体を含むプライマー）。開示される方法に有用なプライマー対の非制限的例として、以下のものが挙げられる：（ａ）配列番号１１のポリヌクレオチド配列を含む第１プライマーと、配列番号１２のポリヌクレオチド配列を含む第２プライマー（これは、ダイズゲノムＤＮＡのＬＢ１（左ボーダー１）結合部と、アベナ（Ａｖｅｎａ）ＨＰＰＤ配列を含む挿入異種配列とをつなぐ配列を増幅するのに用いられうる）；（ｂ）配列番号１４のポリヌクレオチド配列を含む第１プライマーと、配列番号１５のポリヌクレオチド配列を含む第２プライマー（これは、ダイズゲノムＤＮＡのＬＢ２（左ボーダー２）結合部と、アベナ（Ａｖｅｎａ）ＨＰＰＤ配列を含む挿入異種配列とをつなぐ配列を増幅するのに用いられうる）；（ｃ）配列番号１７のポリヌクレオチド配列を含む第１プライマーと、配列番号１８又は配列番号１９のポリヌクレオチド配列を含む第２プライマー（これは、ダイズゲノムＤＮＡのＬＢ１結合部と、アベナ（Ａｖｅｎａ）ＨＰＰＤ配列を含む挿入異種配列とをつなぐ配列を増幅するのに用いられうる）；（ｄ）配列番号１７ポリヌクレオチド配列を含む第１プライマーと、配列番号２０又は配列番号２１のポリヌクレオチド配列を含む第２プライマー（これは、ダイズゲノムＤＮＡのＬＢ１結合部と、アベナ（Ａｖｅｎａ）ＨＰＰＤ配列を含む挿入異種配列とをつなぐ配列を増幅するのに用いられうる）。「ＬＢ１」は、挿入断片結合部又はフランキング配列を説明するのに用いられる場合、挿入及び隣接フランキング配列の３’末端を指し、「ＬＢ２」は、挿入断片結合部又はフランキング配列を説明するのに用いられる場合、挿入断片及び隣接フランキング配列の５’末端を指す。
プローブ及びプライマーは、標的ＤＮＡ配列に結合して、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を有するポリヌクレオチドを特異的に検出及び／又は同定するのに十分なヌクレオチド長さである。ハイブリダイゼーション条件又は反応条件は、操作者が、この結果を達成するように、決定することができることは認識されよう。この長さは、選択した検出方法に役立つのに十分な任意の長さであってよい。一般に、８、１１、１４、１６、１８、２０、２４、２６、２８、３０、４０、５０、７５、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００ヌクレオチド以上、又は約１１〜２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜１００、１００〜２００、２００〜３００、３００〜４００、４００〜５００、５００〜６００、６００〜７００、７００〜８００ヌクレオチド以上の長さを用いる。このようなプローブ及びプライマーは、高ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下で標的配列に特異的にハイブリダイズすることができる。本発明の態様に従うプローブ及びプライマーは、標的配列と隣接ヌクレオチドの完全なＤＮＡ配列同一性を有していてもよいが、標的ＤＮＡ配列とは異なり、かつ標的ＤＮＡ配列を特異的に検出及び／又は同定する能力を保持するプローブを、従来の方法により設計することもできる。従って、プローブ及びプライマーは、標的ポリヌクレオチド（すなわち、配列番号１〜１２）に対して、約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性又は相補性を共有してもよいし、標的配列（すなわち、配列番号１〜１２）と、１、２、３、４、５、６ヌクレオチド以上異なっていてもよい。プローブは、プライマーとして用いることができるが、一般に、標的ＤＮＡ又はＲＮＡと結合するように設計されており、増幅プロセスでは用いられない。
特異的プライマーは、生物学的サンプル中のイベントＳＹＨＴ０Ｈ２を同定するための「特異的プローブ」として用いることができるか、又はそれ自体が検出されうるアンプリコンを生成するために、組込みフラグメントを増幅するのに用いることができる。あるいは、増幅イベントの検出を可能にするために、プローブをＰＣＲ反応中に用いることもできる（すなわち、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）プローブ又はＭＧＢ（商標）プローブ）（いわゆるリアルタイムＰＣＲ）。プローブとサンプルとの結合を可能にする条件下で、プローブを生物学的サンプルのポリヌクレオチドとハイブリダイズする場合には、この結合は検出することができるため、生物学的サンプル中のイベントＳＹＨＴ０Ｈ２の存在を示すことが可能になる。このような結合プローブの同定は、当分野で記載されている。本発明の一態様では、特異的プローブは、最適化条件下で、イベントの５’又は３’フランキング領域内の領域に特異的にハイブリダイズすると共に、この領域と隣接する外来ＤＮＡの一部を含む配列である。特異的プローブは、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２の特定の領域に対して、少なくとも８０％、８０％〜８５％、８５％〜９０％、９０％〜９５％、及び９５〜１００％の同一性（又は相補性）を有する配列を含みうる。
本明細書で用いる場合、「増幅ＤＮＡ」又は「アンプリコン」は、核酸鋳型の一部である標的ヌクレオチドのポリヌクレオチド増幅の産物を指す。例えば、有性交配によって得られるダイズ植物が、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を含むか否かを決定するために、挿入された異種ＤＮＡの挿入部位に隣接するフランキング配列に由来する第１プライマーと、挿入された異種ＤＮＡに由来する第２プライマーとを含むＤＮＡプライマー対を用いて、ダイズ植物組織サンプルから抽出されたＤＮＡをポリヌクレオチド増幅方法に付すことにより、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２のＤＮＡの存在に特徴的なアンプリコンを生成する。イベントＳＹＨＴ０Ｈ２に「特徴的」という表現によって、生物学的サンプル中のイベントＳＹＨＴ０Ｈ２の存在又は非存在を識別する任意の方法又はアッセイの使用が意図される。上記に代わり、第２プライマーは、フランキング配列に由来するものであってもよい。本発明のさらに別の態様では、プライマー対は、発現構築物の挿入ポリヌクレオチド全体と、トランスジェニック挿入断片にフランキングする配列を含むアンプリコンを生成するように、挿入ＤＮＡの両側のフランキング配列に由来するものであってよい。アンプリコンは、イベントに特徴的な長さであり、かつこれに特徴的な配列を有する（すなわち、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２由来の結合部ＤＮＡを有する）。アンプリコンの長さは、プライマー対に１ヌクレオチド塩基対を加えた合計長さから、ＤＮＡ増幅プロトコルにより生成可能なアンプリコンのあらゆる長さまで変動しうる。フランキング配列に由来するプライマー対のメンバーは、挿入ＤＮＡ配列から、一定の距離に位置しうるが、この距離は、１ヌクレオチド塩基対から、増幅反応の限界、すなわち、約２万ヌクレオチド塩基対まで変動しうる。用語「アンプリコン」の使用は、ＤＮＡ熱増幅反応で形成されうるプライマー二量体を除外する。
プローブ及びプライマーを作製及び使用する方法は、例えば、以下の文献に記載されている：Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２nd ｅｄ，ｖｏｌ．１−３，１９８９，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ａｕｓｅｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９２，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；及びＩｎｎｉｓ ｅｔ ａｌ．，ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，１９９０，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ。ＰＣＲプライマー対は、例えば、Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩバージョン６（Ｉｎｆｏｒｍａｘ Ｉｎｃ．，Ｂｅｔｈｅｓｄ，ＭＤ．）；ＰｒｉｍｅｒＳｅｌｅｃｔ（ＤＮＡＳＴＡＲ Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ．）；及びＰｒｉｍｅｒ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ０．５．ＣＯＰＹＲＧＴ．，１９９１，Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ．）のＰＣＲプライマー分析ツールなどの、その目的のために意図されるコンピュータープログラムを用いて、既知の配列から得ることができる。さらに、当業者には公知のガイドラインを用いて、この配列を視覚的にスキャンした後、プライマーを手動で同定することができる。
本明細書で用いる「トランスジェニック」という用語は、その遺伝子型が、異種核酸の存在によって改変された、あらゆる細胞、細胞系、カルス、組織、植物部分、又は植物（最初にそのように改変されたこれらのトランスジェニック、及びこの最初のトランスジェニックからの有性交配又は無性増殖によって作出されたものを含む）を含むと理解すべきである。用語「トランスジェニック」は、本明細書で用いられる場合、従来の植物育種方法によるか、又は天然に存在するイベント（例えば、ランダムな交雑受精、非組み換えウイルス感染、非組み換え細菌形質転換、非組み換え転位、又は自然突然変異）による、ゲノムの改変（染色体の、又は染色体外の）改変を含まない。
「形質転換」とは、遺伝学的に安定した遺伝をもたらす、宿主生物のゲノムへの核酸フラグメントの移入を指す。形質転換された核酸フラグメントを含む宿主生物は、「トランスジェニック」生物と呼ばれる。植物の形質転換の方法の例としては、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）媒介の形質転換（Ｄｅ Ｂｌａｅｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１９８７，１４３：２７７）及び粒子加速又は「遺伝子銃」形質転換技術（Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８７，３２７：７０−７３；米国特許第４，９４５，０５０号明細書；これらの文献は、本明細書に参照として組み込まれる）が挙げられる。さらに別の形質転換方法は、以下に開示する。
このように、単離ポリヌクレオチドは、宿主細胞中に導入可能であり、かつ宿主細胞内で複製可能な、組換え構築物（典型的には、ＤＮＡ構築物）に組み込むことができる。このような構築物は、ポリペプチドのコード配列を所定の宿主細胞内で転写及び翻訳することが可能な複製系及び配列を含むベクターであってよい。植物細胞の安定なトランスフェクションに適した、又はトランスジェニック植物の構築に適したいくつかのベクターが、例えば、以下の文献に記載されている：Ｐｏｕｗｅｌｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，１９８５；Ｓｕｐｐ．１９８７；Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ ＆ Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９８９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；及びＦｌｅｖｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｍａｎｕａｌ，１９９０，Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ。典型的には、植物発現ベクターは、例えば、５’及び３’調節配列の転写制御下の１つ以上のクローン化植物遺伝子、並びに優性選択マーカーを含む。こうした植物発現ベクターはまた、プロモーター調節領域（例えば、誘導性若しくは構成的発現、環境的に、若しくは発生的に調節された発現、又は細胞若しくは組織特異的な発現を制御する調節領域）、転写開始部位、リボソーム結合部位、ＲＮＡプロセシングシグナル、転写終結部位、及び／又はポリアデニル化シグナルを含んでよい。
イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を同定するための様々な方法および組成物が提供される。このような方法は、あらゆる生物学的サンプル中のイベントＳＹＨＴ０Ｈ２を同定及び／又は検出する上で有用である。こうした方法として、例えば、種子の純度を確認する方法や、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２について種子ロット中の種子をスクリーニングする方法がある。本発明の一態様では、生物学的サンプル中のイベントＳＹＨＴ０Ｈ２を同定するための方法が提供され、この方法は、サンプルを第１及び第２プライマーと接触させるステップ；及びＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を含むポリヌクレオチドを増幅するステップを含む。
生物学的サンプルは、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を有するＤＮＡが存在するか否かの決定が所望される任意のサンプルを含みうる。例えば、生物学的サンプルは、あらゆる植物材料、又は植物材料を含む、若しくはこれに由来する材料、例えば、限定されないが、食品又は飼料製品を含みうる。本明細書で用いる場合、「植物材料」は、植物若しくは植物部分から得られるか、又はこれに由来する材料を指す。本発明の特定の態様では、生物学的サンプルは、ダイズ組織を含む。
本明細書に開示されるフランキングＤＮＡ及び挿入配列に基づくプライマー及びプローブは、従来の方法によって（例えば、このような配列をクローニングして、配列決定することによって）、開示された配列を確認するために（そして、必要であれば、補正するために）用いることができる。ポリヌクレオチドプローブ及びプライマーは、標的ＤＮＡ配列を特異的に検出する。サンプル中のトランスジェニックイベント由来のＤＮＡの存在を同定するために、任意の従来の核酸ハイブリダイゼーション又は増幅方法を用いることができる。「特異的に検出する」とは、ポリヌクレオチドをプライマーとして用いて、ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を増幅するか、又はストリンジェントな条件下で、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２又はＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を有するポリヌクレオチドにハイブリダイズするプローブとして、ポリヌクレオチドを用いうることを意味する。イベントＳＹＨＴ０Ｈ２又はイベントＳＹＨＴ０Ｈ２の特異的領域の特異的検出を可能にするハイブリダイゼーションのレベル又は程度は、ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を含むポリヌクレオチドを、この領域がないポリヌクレオチドから識別することによって、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を差別的に同定することを可能にするのに十分なものである。「ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的イベントの増幅を可能にするのに十分な配列同一性又は相補性を共有する」とは、配列が、ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を有するポリヌクレオチドのフラグメント又は完全長配列に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性又は相補性を共有することを意味する。
特定の増幅プライマー対を用いた標的ポリヌクレオチドの増幅（例えば、ＰＣＲによる）に関して、「ストリンジェントな条件」は、対応する野生型配列（又はその相補体）を有するプライマーが、ＤＮＡ熱増幅反応において、ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を有する同定可能な増幅産物（アンプリコン）を生成する、標的ポリヌクレオチドに、プライマーが、ハイブリダイズすることを可能にする条件である。ＰＣＲアプローチでは、ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を増幅するＰＣＲ反応に用いるためのオリゴヌクレオチドプライマーを設計することができる。ＰＣＲプライマーの設計及びＰＣＲクローニングの方法は、当分野では公知であり、以下の文献に開示されている：Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２nd ｅｄ．，１９８９，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；Ｉｎｎｉｓ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，１９９０，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｉｎｎｉｓ ＆ Ｇｅｌｆａｎｄ（ｅｄｓ．），ＰＣＲ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，１９９５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；及びＩｎｎｉｓ ＆ Ｇｅｌｆａｎｄ（ｅｄｓ．），ＰＣＲ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍａｎｕａｌ，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。増幅の方法については、米国特許第４，６８３，１９５号明細書及び同第４，６８３，２０２号明細書、並びにＣｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ，１９９４，９１：５６９５−５６９９にさらに詳しく記載されている。上記の方法及びＤＮＡ増幅の当分野で公知の他の方法を本発明の別の態様の実施に用いてもよい。特定のＰＣＲプロトコルにおけるいくつかのパラメーターが、具体的な実験室条件に合わせて調節を要する場合もあり、また、若干変更されうるが、それでも同様の結果の収集を可能にすることを理解されたい。これらの調節は、当業者には明らかであろう。
増幅されたポリヌクレオチド（アンプリコン）は、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２又はＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域の検出を可能にする、どんな長さであってもよい。例えば、アンプリコンは、約１０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、７００、１００、２０００、３０００、４０００、５０００ヌクレオチドの長さであってよい。
本発明の特定の態様では、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２の特異的領域を検出する。ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域の増幅及び／又は検出を可能にする、任意のプライマーを本発明で用いることができる。例えば、本発明の特定の態様では、第１プライマーは、配列番号１０のポリヌクレオチドのフラグメントを含み、ここで、第１又は第２プライマーは、ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を増幅するのに、ポリヌクレオチドに対して、十分な配列同一性又は相補性を共有する。このプライマー対は、配列番号１１のフラグメント及び配列番号１２のフラグメントを含んでもよい。本発明のさらに別の態様では、第１及び第２プライマーは、（ａ）配列番号１１〜１２、１４〜１５、及び１７〜２１に示される配列のいずれか１つ又は任意の組合せ；又は（ｂ）配列番号１０のフラグメント又はその相補体の配列を含んでよい。プライマーは、ＳＹＨＴ０Ｈ２領域を増幅するのに十分な任意の長さであってよく、例えば、少なくとも６、７、８、９、１０、１５、２０、１５、若しくは３０、又は約７〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜３５、３５〜４０、４０〜４５ヌクレオチド以上の長さが挙げられる。本発明のある態様では、第１及び第２プライマーは、それぞれ、配列番号１１及び配列番号１２；それぞれ、配列番号１４及び配列番号１５；それぞれ、配列番号１７及び配列番号１８；それぞれ、配列番号１７及び配列番号１９；それぞれ、配列番号１７及び配列番号２０；それぞれ、配列番号１７及び配列番号２１である。例えば、有用なプライマー対として、以下のものが挙げられる：（ａ）配列番号１１のポリヌクレオチド配列を含む第１プライマーと、配列番号１２のポリヌクレオチド配列を含む第２プライマー（これは、ダイズゲノムＤＮＡのＬＢ１（左ボーダー１）結合部と、アベナ（Ａｖｅｎａ）ＨＰＰＤ配列を含む挿入異種配列とをつなぐ配列を増幅するのに用いられうる）；（ｂ）配列番号１４のポリヌクレオチド配列を含む第１プライマーと、配列番号１５のポリヌクレオチド配列を含む第２プライマー（これは、ダイズゲノムＤＮＡのＬＢ２（左ボーダー２）結合部と、アベナ（Ａｖｅｎａ）ＨＰＰＤ配列を含む挿入異種配列とをつなぐ配列を増幅するのに用いられうる）；（ｃ）配列番号１７のポリヌクレオチド配列を含む第１プライマーと、配列番号１８又は配列番号１９のポリヌクレオチド配列を含む第２プライマー（これは、ダイズゲノムＤＮＡのＬＢ１結合部と、アベナ（Ａｖｅｎａ）ＨＰＰＤ配列を含む挿入異種配列とをつなぐ配列を増幅するのに用いられうる）；（ｄ）配列番号１７ポリヌクレオチド配列を含む第１プライマーと、配列番号２０又は配列番号２１のポリヌクレオチド配列を含む第２プライマー（これは、ダイズゲノムＤＮＡのＬＢ１結合部と、アベナ（Ａｖｅｎａ）ＨＰＰＤ配列を含む挿入異種配列とをつなぐ配列を増幅するのに用いられうる）。
本明細書の他所で述べるように、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２又は特異的領域をＰＣＲ増幅するための任意の方法を使用することができ、このような方法として、例えば、リアルタイムＰＣＲがある。例えば、Ｌｉｖａｋ ｅｔ ａｌ．，ＰＣＲ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，１９９５，４：３５７−３６２；米国特許第５，５３８，８４８号明細書及び同第５，７２３，５９１号明細書；Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｕｓｅｒ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ Ｎｏ．２，“Ｒｅｌａｔｉｖｅ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，” Ｐ／Ｎ ４３０３８５９；及びＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｕｓｅｒ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ Ｎｏ．５，“Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ＰＣＲ ｗｉｔｈ ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ＶＩＣ ｐｒｏｂｅｓ，”Ｐ／Ｎ ４３０６２３６を参照されたい。尚、上記の文献の各々は、参照として本明細書に組み込まれる。
従って、本発明の特定の態様では、生物学的サンプル中のダイズイベントＳＹＨＴ０Ｈ２又はその子孫の存在を検出する方法が提供される。この方法は、以下を含む：（ａ）生物学的サンプルからＤＮＡサンプルを抽出するステップ；（ｂ）一対のＤＮＡプライマー分子（例えば、配列番号１１〜１２、１４〜１５、及び１７〜２１及び／又は配列番号１０の有用なフラグメント若しくはその相補体の任意の組合せであり、この組合せは、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を増幅する）を提供するステップであって、上記組合せには、限定されないが、（ｉ）配列番号１１及び配列番号１２の配列を含むプライマー、（ｉｉ）配列番号１４及び配列番号１５の配列を含むプライマー、（ｉｉｉ）配列番号１７及び配列番号１８の配列を含むプライマー、（ｉｖ）配列番号１７及び配列番号１９の配列を含むプライマー、（ｖ）配列番号１７及び配列番号２０の配列を含むプライマー；並びに（ｖｉ）配列番号１７及び配列番号２１の配列を含むプライマーが含まれる、ステップ；（ｃ）ＤＮＡ増幅反応条件を提供するステップ；（ｄ）ＤＮＡ増幅反応を実施することにより、ＤＮＡアンプリコン分子を生成するステップ；（ｅ）ＤＮＡアンプリコン分子を検出するステップであって、ＤＮＡ増幅反応物中のＤＮＡアンプリコン分子が、ダイズイベントＳＹＨＴ０Ｈ２の存在を示す、ステップ。核酸分子がプライマー又はプローブとして機能するためには、用いられる特定の溶媒及び塩濃度下で、安定な二本鎖構造を形成することができるように、十分相補的な配列であることが必要とされるにすぎない。
ハイブリダイゼーション技術では、ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的イベントを有する標的ポリヌクレオチドに選択的にハイブリダイズするポリヌクレオチドの全部又は一部を使用する。「ストリンジェントな条件」又は「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」とは、ポリヌクレオチドプローブについて言うとき、プローブが、他の配列より検出可能に大きな度合い（例えば、背景の少なくとも２倍）まで、その標的配列にハイブリダイズする条件を意味する。特定の増幅プライマーを用いた標的ポリヌクレオチドの増幅（例えば、ＰＣＲによる）に関して、「ストリンジェントな条件」は、プライマーが、対応する野生型を有する標的ポリヌクレオチドに、プライマーがハイブリダイズすることを可能にする条件である。ストリンジェントな条件は、配列依存的であり、それぞれの状況に応じて異なる。ハイブリダイゼーション及び／又は洗浄条件のストリンジェンシーを制御することにより、プローブに対して１００％相補的な標的配列を同定することができる（相同的プロービング）。あるいは、より低い度合いの同一性が検出されるように、配列内にある程度のミスマッチを許容するように、ストリンジェンシー条件を調節することもできる（非相同的プロービング）。一般に、プローブは、長さ約１０００ヌクレオチド未満、又は長さ５００ヌクレオチド未満である。
本明細書で用いる場合、実質的に同一又は相補的配列は、高ストリンジェンシー条件下で比較される核酸分子の相補体に特異的にハイブリダイズするポリヌクレオチドである。ＤＮＡハイブリダイゼーションを促進する適切なストリンジェンシー条件（例えば、約４５℃で６Ｘ塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）の後、５０℃で２Ｘ ＳＳＣによる洗浄）は、当業者には公知であり、Ａｕｓｅｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９８９，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，６．３．１−６．３．６に見出すことができる。典型的には、ハイブリダイゼーション及び検出のためのストリンジェントな条件は、塩濃度が、約１．５Ｍ Ｎａ+イオン未満、典型的には、ｐＨ７．０〜８．３で約０．０１〜１．０Ｍ Ｎａ+イオン濃度未満（又は他の塩）であり、温度が、短いプローブ（例えば、１０〜５０ヌクレオチド）の場合、少なくとも約３０℃で、長いプローブ（例えば、５０ヌクレオチド超）の場合、少なくとも約６０℃であるような条件である。ストリンジェントな条件は、ホルムアミドのような不安定化剤の添加により達成してもよい。例としての低ストリンジェンシー条件は、３７℃の３０〜３５％ホルムアミド、１Ｍ ＮａＣｌ、１％ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）のバッファー溶液を用いたハイブリダイゼーションの後、５０〜５５℃のＩＸ〜２Ｘ ＳＳＣ（２０Ｘ ＳＳＣ＝３．０Ｍ ＮａＣｌ／０．３Ｍクエン酸三ナトリウム）中での洗浄を含む。例としての中ストリンジェンシー条件は、３７℃の４０〜４５％ホルムアミド、１．０Ｍ ＮａＣｌ、１％ＳＤＳ中でのハイブリダイゼーションの後、５５〜６０℃の０．５Ｘ〜ＩＸ ＳＳＣ中での洗浄を含む。例としての高ストリンジェンシー条件は、３７℃の５０％ホルムアミド、１Ｍ ＮａＣｌ、１％ＳＤＳ中でのハイブリダイゼーションの後、６０〜６５℃の０．１Ｘ ＳＳＣ中での洗浄を含む。任意で、洗浄バッファーは、約０．１％〜約１％ＳＤＳを含んでよい。ハイブリダイゼーションの継続時間は、一般に、約２４時間未満であり、通常、約４〜約１２時間である。洗浄の継続時間は、少なくとも平衡に達するのに十分な時間である。
ハイブリダイゼーション反応において、特異性は、典型的に、ハイブリダイゼーション後の洗浄の関数であり、決定的な因子は、最終洗浄溶液のイオン強度及び温度である。ＤＮＡ−ＤＮＡハイブリッドについては、Ｔｍは、以下のＭｅｉｎｋｏｔｈ及びＷａｈｌの式（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９８４，１３８：２６７−２８４）から概算することができる：Ｔｍ＝８１．５℃＋１６．６（ｌｏｇＭ）＋０．４１（％ＧＣ）−０．６１（％ｆｏｒｍ）−５００／Ｌ；式中、Ｍは、１価カチオンのモル濃度であり、％ＧＣは、ＤＮＡ中のグアノシンヌクレオチド及びシトシンヌクレオチドのパーセンテージであり、％ｆｏｒｍは、ハイブリダイゼーション溶液中のホルムアミドのパーセンテージであり、Ｌは、ハイブリッドの塩基対長さである。Ｔｍは、相補的標的配列の５０％が、完全にマッチするプローブにハイブリダイズする温度（規定されたイオン強度及びｐＨの下で）である。Ｔｍは、１％のミスマッチにつき、約１℃ずつ低下する；従って、Ｔｍ、ハイブリダイゼーション、及び／又は洗浄条件は、所望の同一性の配列にハイブリダイズするように調節することができる。例えば、９０％を超える同一性を有する配列が求められる場合には、Ｔｍを１０℃低下させることができる。一般に、ストリンジェントな条件は、既定されたイオン強度及びｐＨでの特定の配列及びその相補体についての熱融点（Ｔｍ）よりも約５℃低く選択される。しかし、厳しくストリンジェントな条件は、熱融点（Ｔｍ）よりも１、２、３、又は４℃低いハイブリダイゼーション及び／又は洗浄を使用することができ；中程度にストリンジェントな条件は、熱融点（Ｔｍ）よりも６、７、８、９、又は１０℃低いハイブリダイゼーション及び／又は洗浄を使用することができ；低ストリンジェンシー条件は、熱融点（Ｔｍ）よりも１１、１２、１３、１４、１５、又は２０℃低いハイブリダイゼーション及び／又は洗浄を使用することができる。上記の式、ハイブリダイゼーション及び洗浄組成物、並びに所望のＴｍを用いて、当業者は、ハイブリダイゼーション及び／又は洗浄溶液のストリンジェンシーの変化が固有に記載されることは理解されよう。所望のミスマッチの程度によって、４５℃（水溶液）又は３２℃（ホルムアミド溶液）よりも低いＴｍとなる場合、より高い温度を使用できるように、ＳＳＣ濃度を高めることが好ましい。核酸のハイブリダイゼーションについての広範な指針は、以下の文献に見出される：Ｔｉｊｓｓｅｎ，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９３，Ｐａｒｔ Ｉ，Ｃｈａｐｔｅｒ ２，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９５，Ｃｈａｐｔｅｒ ２，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，ＮＹ；Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２nd ｅｄ．，１９８９，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，ＮＹ）及びＨａｙｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ：Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，１９８５，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ。
ポリヌクレオチドが、別のポリヌクレオチドに対する相補性を呈示する場合、このポリヌクレオチドは、別のポリヌクレオチドの「相補体」であると言う。本明細書で用いる場合、分子は、ポリヌクレオチド分子の１つのすべてのヌクレオチドが、他の分子のヌクレオチドと相補的である場合、「完全な相補性」を示すと言う。２つの分子が、少なくとも従来の「低ストリンジェンシー」条件下で、互いにアニールした状態で保持されうるのに十分な安定性で互いにハイブリダイズすることができれば、「最低限に相補的である」と言う。同様に、これらの分子が、従来の「高ストリンジェンシー」条件下で、互いにアニールした状態で保持されうるのに十分な安定性で互いにハイブリダイズすることができれば、「相補的である」と言う。
サンプル中のイベントＳＹＨＴ０Ｈ２に対応するＤＮＡの存在を検出する方法がさらに提供される。本発明の一態様では、本方法は、（ａ）生物学的サンプルを、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でダイズイベントＳＹＨＴ０Ｈ２由来のＤＮＡとハイブリダイズすると共に、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を特異的に検出するポリヌクレオチドプローブと接触さるステップ；（ｂ）サンプル及びプローブをストリンジェントなハイブリダイゼーション条件に付すステップ；（ｃ）プローブとＤＮＡのハイブリダイゼーションを検出するステップを含み、ここで、ハイブリダイゼーションの検出が、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２の存在を示している。本発明の一態様では、ＤＮＡは、ハイブリダイゼーションイ事象の前に予め形成した適切な酵素で消化する。
ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域又はそのアンプリコンを検出するのに、様々な方法を用いることができ、このような方法として、Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｂｉｔ Ａｎａｌｙｓｉｓ （Ｎｉｋｉｆｏｒｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９４４，２２：４１６７−４１７５）が挙げられるが、これに限定されない。一方法では、隣接するフランキングＤＮＡ配列及び挿入ＤＮＡ配列の両方と重複する、ＤＮＡオリゴヌクレオチドが設計される。本発明の別の態様では、ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的アンプリコンを許容するようにＤＮＡオリゴが設計される。オリゴヌクレオチドは、マイクロウェルプレートのウェル中に固定化される。目的の領域のＰＣＲに続いて、一本鎖ＰＣＲ産物を、固定化オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせることができ、これは、ＤＮＡポリメラーゼと、予想される次の塩基に特異的な標識ｄｄＮＴＰとを用いた一塩基伸長反応のための鋳型として役立つ。読出しは、蛍光であっても、又はＥＬＩＳＡに基づくものであってもよい。シグナルは、好適な増幅、ハイブリダイゼーション、及び一塩基伸長による、挿入／フランキング配列の存在を示す。
別の検出方法は、Ｗｉｎｇｅ，Ｉｎｎｏｖ．Ｐｈａｒｍａ．Ｔｅｃｈ．，２０００，００：１８−２４）により記載されているようなパイロシーケンシング（Ｐｙｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）技術である。この方法では、隣接ＤＮＡ及び挿入ＤＮＡの結合部に重複するオリゴヌクレオチドを設計するか、又は、ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を増幅することができる一対のオリゴを使用する。オリゴヌクレオチドは、目的の領域に由来する一本鎖ＰＣＲ産物（挿入配列中に１つのプライマー及びフランキング配列中に１つのプライマー）にハイブリダイズさせた後、ＤＮＡポリメラーゼ、ＡＴＰ、スルフリラーゼ、ルシフェラーゼ、アピラーゼ、アデノシン５’ホスホ硫酸及びルシフェリンの存在下でインキュベートする。ｄＮＴＰを個別に添加した後、取込みによって光シグナルが生じるが、これを測定する。光シグナルは、好適な増幅、ハイブリダイゼーション、及び一又は多塩基伸長による、トランスジーン挿入／フランキング配列の存在を示す。
Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．，１９９９，９：４９２−４９８）により記載されているような蛍光偏向は、本発明のアンプリコンを検出するのに用いることができる方法である。この方法を用いて、フランキング及び挿入ＤＮＡの結合部に重複するオリゴヌクレオチドを設計するか、又は、ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を増幅することができる一対のオリゴを使用する。オリゴヌクレオチドは、目的の領域に由来する一本鎖ＰＣＲ産物（挿入ＤＮＡ中に１つのプライマー及びフランキングＤＮＡ中に１つのプライマー）にハイブリダイズさせた後、ＤＮＡポリメラーゼ、及び蛍光標識ｄｄＮＴＰの存在下でインキュベートする。一塩基伸長により、ｄｄＮＴＰの取込みが起こる。取込みは、蛍光計を用いて、偏光の変化として測定することができる。偏光の変化は、好適な増幅、ハイブリダイゼーション、及び一塩基伸長による、トランスジーン挿入／フランキング配列の存在を示す。
ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）（ＰＥ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）は、ＤＮＡ配列の存在を検出及び定量する方法として記載されており、製造者によって提供される説明書で十分に理解される。手短に言うと、フランキング及び挿入ＤＮＡの結合部に重複するＦＲＥＴオリゴヌクレオチドを設計するか、又は、ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を増幅することができる一対のオリゴを使用する。ＦＲＥＴプローブ及びＰＣＲプライマー（挿入ＤＮＡ配列中に１つのプライマー及びフランキングゲノム配列中に１つのプライマー）を、耐熱性ポリメラーゼ及びｄＮＴＰの存在下でサイクルさせる。ＦＲＥＴプローブのハイブリダイゼーションにより、ＦＲＥＴプローブのクエンチング部分から、蛍光部分の切断及び遊離が起こる。蛍光シグナルは、好適な増幅及びハイブリダイゼーションによる、フランキング／トランスジーン挿入配列の存在を示す。
分子ビーコンは、Ｔｙａｎｇｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１９９６，１４：３０３−３０８）に記載のような配列検出における使用のために記載されている。手短に言うと、フランキング及び挿入ＤＮＡの結合部に重複するＦＲＥＴオリゴヌクレオチドを設計するか、又は、ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を増幅することができる一対のオリゴを使用する。ＦＲＥＴプローブの特有の構造により、これは、蛍光部分及びクエンチング部分を近接した状態で保持する二次構造を含むものになる。ＦＲＥＴプローブ及びＰＣＲプライマー（挿入ＤＮＡ配列中に１つのプライマー及びフランキング配列中に１つのプライマー）を、耐熱性ポリメラーゼ及びｄＮＴＰの存在下でサイクルさせる。好適なＰＣＲ増幅の後、ＦＲＥＴプローブの標的配列へのハイブリダイゼーションにより、プローブの二次構造の除去及び蛍光部分とクエンチング部分の空間的分離が起こる。蛍光シグナルが生じる。蛍光シグナルは、好適な増幅及びハイブリダイゼーションによる、フランキング／トランスジーン挿入配列の存在を示す。
アンプリコン中に見出される配列に特異的なプローブを用いたハイブリダイゼーション反応は、ＰＣＲ反応によって生成されたアンプリコンを検出するために用いられる、さらに別の方法である。
本明細書において用いる場合、「キット」とは、本発明の方法の態様（より具体的には、生物学的サンプル中のイベントＳＹＨＴ０Ｈ２の同定及び／又は検出）を実施するための試薬一式を指す。品質管理（例えば、種子ロットの純度）の目的、植物材料、又は植物材料を含むか若しくはそれに由来する材料（例えば、限定されないが、食品又は飼料製品）中のイベントＳＹＨＴ０Ｈ２の検出の目的のために、上記キットを用いることができ、また、その構成要素を具体的に調節することができる。
本発明の特定の態様では、生物学的サンプル中のイベントＳＹＨＴ０Ｈ２を同定するためのキットが提供される。このキットは、第１及び第２プライマーを含み、第１及び第２プライマーは、ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を含むポリヌクレオチドを増幅する。本発明の別の態様では、キットは、ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域の検出のためのポリヌクレオチドを含む。キットは、例えば、配列番号１０のポリヌクレオチドのフラグメント又はその相補体を含む第１プライマーを含み、ここで、第１又は第２プライマーは、ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を増幅するのに、ポリヌクレオチドに対して十分な同一性又は相補性を共有する。例えば、プライマー対は、配列番号１１のフラグメント及び配列番号１２のフラグメントを含んでもよい。本発明のさらに別の態様では、第１及び第２プライマーは、配列番号１１〜１２、１４〜１５、及び１７〜２１に示される配列のいずれか１つ又は任意の組合せを含んでよい。プライマーは、ＳＹＨＴ０Ｈ２領域を増幅するのに十分な任意の長さであってよく、例えば、少なくとも６、７、８、９、１０、１５、２０、１５、若しくは３０、又は約７〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜３５、３５〜４０、４０〜４５ヌクレオチド以上の長さが挙げられる。本発明のある態様では、第１及び第２プライマーは、それぞれ、配列番号１１及び配列番号１２；それぞれ、配列番号１４及び配列番号１５；それぞれ、配列番号１７及び配列番号１８；又はそれぞれ、配列番号１７及び配列番号１９；又はそれぞれ、配列番号１７及び配列番号２０；又はそれぞれ、配列番号１７及び配列番号２１である。例えば、前述のプライマー対を用いて、以下のものを増幅することができる：（ａ）ダイズゲノムＤＮＡのＬＢ１（左ボーダー１）結合部と、アベナ（Ａｖｅｎａ）ＨＰＰＤ配列を含む異種挿入断片とをつなぐ配列（配列番号１１及び１２；配列番号１７及び１８；配列番号１７及び１９）；又は（ｂ）ダイズゲノムＤＮＡのＬＢ２（左ボーダー２）結合部と、アベナ（Ａｖｅｎａ）ＨＰＰＤ配列を含む異種挿入断片とをつなぐ配列（配列番号１４及び１５；配列番号１７及び２０；配列番号１７及び２１）。
さらに、ＳＹＨＴ０Ｈ２特異的領域を特異的に検出することができる少なくとも１つのポリヌクレオチドを含むＤＮＡ検出キットが提供され、このポリヌクレオチドは、配列番号１０に相同的又は相補的な、十分な長さの隣接したヌクレオチドからなる少なくとも１つのＤＮＡを含む。本発明の特定の態様では、ＤＮＡ検出キットは、配列番号１１〜１２のいずれか１つのポリヌクレオチド、若しくはそのフラグメント、又は配列番号１１〜１２のいずれか１つにハイブリダイズする配列、若しくはそのフラグメントを含む。
本方法及び組成物に使用されるポリヌクレオチド並びにそのフラグメント及び変異体のいずれも、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２のトランスジーン挿入の領域、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２の結合部配列、又はイベントＳＹＨＴ０Ｈ２のフランキング配列に対して配列同一性を共有しうる。様々な配列の関係を決定する方法は公知である。本明細書で用いられる場合、「参照配列」は、配列比較のための基準として用いられる規定の配列である。参照配列は、指定された配列のサブセット又は全部であってもよく；例えば、完全長ｃＤＮＡ若しくは遺伝子配列のセグメント、又は完全なｃＤＮＡ若しくは遺伝子配列などが挙げられる。本明細書で用いられる場合、「比較ウィンドウ」は、ポリヌクレオチド配列の隣接及び指定セグメントに関して用いられ、比較ウィンドウ中のポリヌクレオチドは、２つのポリヌクレオチドの最適なアラインメントのために参照配列（付加又は欠失を含まない）と比較して付加又は欠失（すなわちギャップ）を含みうる。一般に、比較ウィンドウは、長さが少なくとも２０の隣接ヌクレオチドであり、最適には、３０、４０、５０、１００、又はそれを超える長さであってよい。当業者であれば、ポリヌクレオチド配列中へのギャップの挿入による参照配列との高度の類似性を避けるために、ギャップペナルティーを導入して、マッチの数からこれを差し引くことは理解されよう。
比較のための配列のアラインメントの方法は、当分野において周知である。従って、任意の２つの配列同士の同一性（％）の決定は、数学アルゴリズムを用いて、達成することができる。このような数学アルゴリズムの非制限的例としては、以下のものがある：Ｍｙｅｒｓ ＆ Ｍｉｌｌｅｒ，ＣＡＢＩＯＳ，１９８８，４：１１−１７のアルゴリズム；Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．，１９８１，２：４８２のローカルアラインメントアルゴリズム；Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．，１９７０，４８：４４３−４５３のグローバルアラインメントアルゴリズム；Ｐｅａｒｓｏｎ ＆ Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９８８，８５：２４４４−２４４８のローカルアラインメント検索方法；Ｋａｒｌｉｎ ＆ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９０，８７：２２６４のアルゴリズム（Ｋａｒｌｉｎ ＆ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９３，９０：５８７３〜５８７７に記載のように改変）。
これらの数学アルゴリズムのコンピューター実行は、配列同一性を決定するための配列の比較に使用することができる。このような実行として、限定されないが、以下のものが挙げられる：ＰＣ／Ｇｅｎｅプログラム（Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡから入手可能）のＣＬＵＳＴＡＬ；ＡＬＩＧＮプログラム（Ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０）、並びにＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ １０（Ａｃｃｅｌｒｙｓ Ｉｎｃ．，９６８５ Ｓｃｒａｎｔｏｎ Ｒｏａｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから入手可能）のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ。これらのプログラムを用いるアラインメントは、デフォルトパラメーターを用いて実施することができる。ＣＬＵＳＴＡＬプログラムは、以下によって十分に記載されている：Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，１９８８，７３：２３７−２４４；Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃ４５／ＯＳ，１９８９，５：１５１−１５３；Ｃｏｒｐｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９８８，１６：１０８８１−９０；Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＣＡＢＩＯＳ，１９９２， ８：１５５−６５；及びＰｅａｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．，１９９４，２４：３０７−３３１。ＡＬＩＧＮプログラムは、Ｍｙｅｒｓ ＆ Ｍｉｌｌｅｒ，ＣＡＢＩＯＳ，１９８８，４：１１−１７のアルゴリズムに基づいている。アミノ酸配列を比較する場合には、ＡＬＩＧＮプログラムと共に、ＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップ長ペナルティー、及び４のギャップペナルティーを用いることができる。Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．，１９９０，２１５：４０３のＢＬＡＳＴプログラムは、Ｋａｒｌｉｎ ＆ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９３，９０：５８７３−５８７７に基づく。タンパク質をエンコードするヌクレオチド配列に相同的なヌクレオチド配列を取得するためには、ＢＬＡＳＴＮプログラム、スコア＝１００、語長＝１２を用いて、ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を実施することができる。タンパク質又はポリペプチドに相同的なアミノ酸配列を取得するためには、ＢＬＡＳＴＸプログラム、スコア＝５０、語長＝３を用いて、ＢＬＡＳＴタンパク質検索を実施することができる。比較の目的でギャップ付きアラインメントを取得するために、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９７，２５：３３８９に記載されているように、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ（ＢＬＡＳＴ ２．０）を使用することができる。あるいは、分子同士の距離関係を検出する反復検索を実施するために、ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ（ＢＬＡＳＴ ２．０）を用いることができる。Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９７，２５：３３８９を参照。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ、ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴを使用する場合、それぞれのプログラムのデフォルトパラメーター（例えば、ヌクレオチドについては、ＢＬＡＳＴＮ、タンパク質についてはＢＬＡＳＴＸ）を用いることができる。アラインメントは、検査により手動で実施してよい。
別途記載のない限り、本明細書に記載する配列同一性／類似性の値は、以下のパラメーターを用いたＧＡＰ Ｖｅｒｓｉｏｎ１０を使用して得られる値を指す：５０のＧＡＰ Ｗｅｉｇｈｔ及び３のＬｅｎｇｔｈ Ｗｅｉｇｈｔ、並びにｎｗｓｇａｐｄｎａ．ｃｍｐスコア付けマトリクスを用いた、ヌクレオチド配列についての同一性（％）及び類似性（％）；８のＧＡＰ Ｗｅｉｇｈｔ及び２のＬｅｎｇｔｈ Ｗｅｉｇｈｔ、並びにＢＬＯＳＵＭ６２スコア付けマトリクスを用いた、アミノ酸配列についての同一性（％）及び類似性（％）；又はこれらの任意の同等のプログラム。「同等のプログラム」とは、問題とする任意の２つの配列について、ＧＡＰ Ｖｅｒｓｉｏｎ１０により生成される対応アラインメントと比較して、同じヌクレオチド又はアミノ酸残基マッチ及び同じ配列同一性（％）を有するアラインメントを生成するあらゆる配列比較プログラムを意味する。
マッチの数を最大にすると共に、ギャップの数を最小にする２つの完全な配列のアラインメントを見出すために、ＧＡＰは、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．，１９７０，４８：４４３−４５３のアルゴリズムを用いる。ＧＡＰは、あらゆる可能なアラインメント及びギャップ位置を考慮して、最大数の対合塩基及び最少のギャップを有するアラインメントを生成する。これにより、対合塩基の単位でギャップ生成ペナルティー及びギャップ伸長ペナルティーを提供することが可能になる。ＧＡＰは、それが挿入するギャップ毎にマッチのギャップ生成ペナルティーを利用しなければならない。０より大きいギャップ伸長ペナルティーが選択された場合、ＧＡＰは、挿入されるギャップ毎に、ギャップの長さとギャップ伸長ペナルティーとの積を利用しなければならない。タンパク質配列のためのＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ＰａｃｋａｇｅのＶｅｒｓｉｏｎ １０におけるデフォルトギャップ生成ペナルティー値及びギャップ伸長ペナルティー値は、それぞれ８及び２である。ヌクレオチド配列については、デフォルトギャップ生成ペナルティーは５０であり、デフォルトギャップ伸長ペナルティーは３である。ギャップ生成びギャップ伸長ペナルティーは、０〜２００からなる整数の群から選択される整数として表すことができる。従って、例えば、ギャップ生成及びギャップ伸長ペナルティーは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、６５、又はこれを超える数であってよい。
ＧＡＰは、最良のアラインメントのファミリーの１メンバーを提示する。このファミリーの多数のメンバーが存在しうるが、より優れた品質を有するメンバーは他にない。ＧＡＰは、アラインメントの４つの性能指数：品質、比、同一性、及び類似性を呈示する。品質は、配列をアラインメントするために最大化される測定基準である。比は、品質を短いセグメント内の塩基の数で割った商である。同一性（％）は、実際にマッチする記号（ｓｙｍｂｏｌ）のパーセントである。類似性（％）は、類似する記号（ｓｙｍｂｏｌ）のパーセントである。ギャップを隔てた記号は無視する。一対の記号についてのスコア付けマトリクス値が、類似性閾値である０．５０以上であれば、類似性をスコア付けする。ＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ＰａｃｋａｇｅのＶｅｒｓｉｏｎ １０で用いられるスコア付けマトリクスは、ＢＬＯＳＵＭ６２である（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ＆ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９８９，８９：１０９１５を参照）。
本明細書において用いられる場合、２つのポリヌクレオチド又はポリペプチド配列に関連して、「配列同一性」又は「同一性」は、指定の比較ウィンドウにわたって最大限に一致するようにアラインメントされたとき、同一である２つの配列中の残基に関して述べるものである。配列同一性（％）がタンパク質に関して用いられる場合には、同一ではない残基位置は、往々にして保存的アミノ酸置換により異なることが認識されている。こうしたアミノ酸置換では、アミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷又は疎水性）を有する他のアミノ酸残基で置換されるため、分子の機能的特性を変化させない。配列が、保存的置換において異なる場合、配列同一性（％）は、置換の保存的性質について補正するように上方に調節してもよい。このような保存的置換によって異なる配列は、「配列類似性」又は「類似性」を有すると言う。この調節を行うための手段は、当業者には周知である。典型的には、これは、完全なミスマッチではなく、部分的なものとして保存的置換をスコア付けすることを含み、これによって、配列同一性（％）を増加する。従って、例えば、同一のアミノ酸が、１のスコアを与えられ、非保存的置換が０のスコアを与えられる場合、保存的置換には、０〜１のスコアが与えられる。保存的置換のスコア付けは、例えば、プログラムＰＣ／ＧＥＮＥ（Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）で実行されるように計算される。
本明細書で用いられる「配列同一性のパーセンテージ」とは、比較ウィンドウにわたって最適にアラインメントされた２つの配列を比較することによって決定される値を意味し、ここで、比較ウィンドウ内のポリヌクレオチドの部分は、２つの配列の最適なアラインメントのために、参照配列（これは付加又は欠失を含まない）と比較して、付加又は欠失（すなわち、ギャップ）を含みうる。パーセンテージは、両配列に同一の核酸塩基又はアミノ酸残基が存在する位置の数を決定して、マッチ位置の数を取得し、このマッチ位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数で割り、その結果に１００をかけて配列同一性のパーセンテージを得ることによって、計算される。
本発明はまた、作物及び雑草を含む場所（すなわち、栽培地）での雑草を選択的に抑制する方法も提供し、ここで、作物は、ＳＹＨＴ０Ｈ２を含み、本方法は、上記の場所に、１種以上のＨＰＰＤ阻害除草剤を含む、雑草抑制量の除草剤組成物を適用することを含む。
用語「抑制（する）」、及びその派生形、例えば、「雑草を抑制する」とは、雑草の成長、発芽、再生、及び／又は繁殖を阻害する；及び／又は雑草を死滅させる、除去する、破壊する、あるいは、その発生及び／又は活性を低減させることの１つ以上を指す。
本明細書で用いられる場合、「栽培地」又は「場所」は、植物を生育することが所望されるあらゆる区域を含む。このような栽培地としては、植物が栽培される圃場（例えば、作物畑、芝生地、植林地、管理された森林、果実及び野菜栽培のための畑など）、温室、生育箱などが挙げられるが、これらに限定されない。
本方法は、ダイズＳＹＨＴ０Ｈ２種子又は植物を栽培地に作付けすることを含み、本発明の特定の態様では、作物、種子、雑草又はその栽培地に、雑草抑制量の目的の除草剤を適用することを含む。除草剤は、作物を栽培地に作付けする前又は後のいずれに適用してもよいことは認識されている。このような除草剤の適用は、ＨＰＰＤ阻害剤の適用を含みうるが、これは、単独、又は作物によって許容されるその他の除草剤との組合せのいずれで行ってもよい。当業者であれば、雑草抑制量は、例えば、除草剤の種類及び適用の時期に応じて変動しうるが、作物に対する損傷はあったとしてもほとんど引き起こさずに、望ましいレベルの雑草抑制を達成する量に等しいことは理解されよう。ＨＰＰＤ阻害除草剤の場合には、その量は、典型的に、１５〜５００ｇａｉ／ｈａである。
本発明の別の態様では、除草剤組成物は、少なくとも２種のＨＰＰＤ阻害剤を含む。ＨＰＰＤ阻害剤は、雑草を選択的に抑制し、しかも作物を有意に損傷しない任意の有効比率で適用することができる。
本発明の特定の態様では、ＨＰＰＤ阻害剤は、以下からなる群から選択される：ベンゾビシクロン、ビシクロピロン、メソトリオン、スルコトリオン、テフリルトリオン、テンボトリオン、ケトスピラドックス若しくはその遊離酸、ベンゾフェナプ、ピラスルホトール、ピラゾリネート、ピラゾキシフェン、トプラメゾン、［２−クロロ−３−（２−メトキシエトキシ）−４−（メチルスルホニル）フェニル］（１−エチル−５−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メタノン、（２，３−ジヒドロ−３，３，４−トリメチル−１，１−ジオキシドベンゾ［ｂ］チエン−５−イル）（５−ヒドロキシ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−メタノン、イソキサクロルトール、イソキサフルトール、α−（シクロプロピルカルボニル）−２−（メチルスルホニル）−β−オキソ−４−クロロ−ベンゼンプロパンニトリル、及びα−（シクロプロピルカルボニル）−２−（メチルスルホニル）−β−オキソ−４−（トリフルオロメチル）−ベンゼンプロパンニトリル、又はこれらの農業的に許容される塩。特に好ましい実施形態では、ＨＰＰＤ阻害剤は、メソトリオンである。特に好ましい実施形態では、ＨＰＰＤ阻害剤は、テンボトリオンである。特に好ましい実施形態では、ＨＰＰＤ阻害剤は、ビシクロピロンである。特に好ましい実施形態では、ＨＰＰＤ阻害剤は、イソキサフルトールである。特に好ましい実施形態では、ＨＰＰＤ阻害剤は、ピラスルファトールである。特に好ましい実施形態では、ＨＰＰＤ阻害剤は、トプラメゾンである。
イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を含むダイズ植物は、さらに、１種以上の別の除草剤、昆虫、真菌、細菌及び／又はウイルス感染に対する耐性を賦与するポリペプチドをエンコードする１つ以上の別のポリヌクレオチド領域を含んでもよい。除草剤に対する耐性を賦与するポリペプチドの例として、例えば、以下のものが挙げられ：グリホサート耐性５−エノール−ピルビルシキミ酸−３−リン酸シンターゼ（ＥＰＳＰＳ）（例えば、米国特許第５，８０４，４２５号明細書及び同第６，５６６，５８７号明細書に開示の通り）、グリホサートＮ−アセチルトランスフェラーゼ（ＧＡＴ）（例えば、国際公開第０２／０３６７８２号パンフレットに開示の通り）、除草剤耐性４−ヒドロキシピルビルジオキシゲナーゼ（ＨＰＰＤ）（例えば、国際公開第０２／４６３８７号パンフレットに開示の通り）、ホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ（ＰＡＴ）（例えば、米国特許第５，２７３、８９４号明細書に開示の通り）、シトクロムＰ４５０（例えば、国際公開第０７／１０３５６７号パンフレットに開示の通り）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）（例えば、国際公開第０１／２１７７０号パンフレットに開示の通り）、除草剤耐性アセチル−ＣＯＡ−カルボキシラーゼ（ＡＣＣａｓｅ）、除草剤耐性アセト乳酸シンターゼ（ＡＬＳ）（例えば、米国特許第５，０１３、６５９号明細書に開示の通り）、除草剤耐性プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ（ＰＰＧＯ）（例えば、国際公開第９５／３４６５９号パンフレットに開示の通り）、ブロモキシニルニトリラーゼ（例えば、国際公開第８９／００１９３号パンフレットに開示の通り）、除草剤耐性フィトエンデサチュラーゼ（例えば、欧州特許出願公開第０３９３６９０号明細書に開示の通り）、アリールオキシアルカノエートジオキシゲナーゼ（例えば、国際公開第２００５／１０７４３７号パンフレット及び同第２００７／０５３４８２号パンフレットに開示の通り）並びにジカンバ分解酵素（例えば、国際公開第９８／４５４２４号パンフレットに開示の通り）；これらのペプチドの既知の突然変異誘発又は改変された変異体も含まれる。
従って、前述の場所に適用される除草剤組成物は、イベントＳＹＴＨ０Ｈ２を含むダイズ植物が耐性である１種以上の別の農薬、例えば、殺センチュウ剤、殺虫剤、殺菌剤及び／又は除草剤をさらに含んでもよい。好適な農薬の例は、その一覧が、Ｔｏｍｌｉｎ，Ｃ．Ｄ．Ｓ．（ｅｄ．），Ｔｈｅ Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ Ｍａｎｕａｌ，１４th ｅｄ．，２００６に記載されている。
例えば、農薬は、以下のクラスの殺虫剤、殺センチュウ剤、又は軟体動物駆除剤として活性の成分から選択される１種以上の農薬であってよい：
アラニカルブ、アルジカルブ、ベンジオカルブ、ベンフラカルブ、ブトカルボキシム、ブトキシカルボキシム、カルバリル、カルボフラン、カルボスルファン、エチオフェンカルブ、フェノブカルブ、ホルメタネート、フラチオカルブ、イソプロカルブ、メチオカルブ、メトミル、メトールカルブ、オキサミル、ピリミカルブ、プロポキスル、チオジカルブ、チオファノクス、トリアザマート、トリメタカルブ、ＸＭＣ、キシリルカルブ；アセフェート、アザメチホス、アジンホス−エチル、アジンホス−メチル、カズサホス、クロレトキシホス、クロルフェビンホス、クロルメホス、クロルピリホス、クロルピリホス−メチル、クマホス、シアノホス、デメトン−Ｓ−メチル、ジアジノン、ジクロルボス／ＤＤＶＰ、ジクロトホス、ジメトエート、ジメチルビンホス、ジスルホトン、ＥＰＮ、エチオン、エトプロホス、ファムフール、ファナミホス、フェニトロチオン、フェンチオン、ホスチアゼート、ヘプテノホス、イミシアホス、イソフェンホス、イソプロピルＯ−（メトキシアミノチオ−ホスホリル）サリチル酸塩、イソキサチオン、マラチオン、メカルバム、メタミドホス、メチダチオン、メビンホス、モノクロトホス、ナレド、オメトエート、オキシデメントン−メチル、パラチオン、パラチオン−メチル、フェントエート、ホレート、ホサロン、ホスメト、ホスファミドン、ホキシム、ピリミホス−メチル、プロフェノホス、プロペタンホス、プロチオホス、ピラクロホス、ピリダフェンチオン、キナルホス、スルホテプ、テブピリンホス、テメホス、テルブホス、テトラクロルビンホス、チオメトン、トリアゾホス、トリクロルホン、バミドチオン、シクロジエンオルガノクロリン、クロルダン、エンドスルファン；エチプロール、フィプロニル、アクリナトリン、アレトリン、ｄ−シス−トランスアレトリン、ｄ−トランスアレトリン、ビフェントリン、ビオアレトリン、ビオアレトリンＳ−シクロペンテニル異性体、ビオレスメトリン、シクロプロトリン、シフルトリン、β−シフルトリン、シハロトリン、λ−シハロトリン、γ−シハロトリン、シペルメトリン、α−シペルメトリン、β−シペルメトリン、θ−シペルメトリン、ζ−シペルメトリン、シフェノトリン［（１Ｒ）−トランス異性体］、デルタメトリン、エンペントリン［（ＥＺ）−（１Ｒ）異性体）、エスフェンバレレート、エトフェンプロクス、フェンプロパトリン、フェンバレレート、フルシトリネート、フルメトリン、τ−フルバリネート、ハルフェンプロクス、イミプロトリン、カデトリン、ペルメトリン、フェノトリン［（１Ｒ）−トランス異性体）、プラレトリン、ピレトリン（ジョチュウギク（ｐｙｒｅｔｈｒｕｍ））、レスメトリン、シラフルオフェン、テフルトリン、テトラメトリン、テトラメトリン［（１Ｒ）異性体）］、トラロメトリン、トランスフルトリン；ＤＤＴ；メトキシクロル、アセタミプリド、クロチアニジン、ジノテフラン、イミダクロピド、ニテンピラム、チアクロプリド、チアメトキサム；ニコチン、スピネトラム、スピノサド、アバメクチン、エマメクチン安息香酸塩、レピメクチン、ミルベメクチン、ヒドロプレン、キノプレン、メトプレン；フェノキシカルブ；ピリプロキシフェン、クロロピクリン；フッ化スルフリル；ホウ砂；吐酒石、ピメトロジン；フロニカミド、クロフェンテジン、ヘキリチアゾクス、ジフロビダジン、エトキサゾール。バチルス・チューリンゲンシス亜種イスラエレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｉｓｒａｅｌｅｎｓｉｓ）、バチルス・スファエリクス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）、バチルス・チューリンゲンシス亜種アイザワイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ａｉｚａｗａｉ）、バチルス・チューリンゲンシス亜種クルスタキ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｋｕｒｓｔａｋｉ）、バチルス・チューリンゲンシス亜種テネブリオニス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｔｅｎｅｂｒｉｏｎｉｓ）、ＢＴ穀類タンパク質：Ｃｒｙ１Ａｂ、Ｃｒｙ１Ａｃ、Ｃｒｙ１Ｆａ、Ｃｒｙ２Ａｂ、ｍＣｒｙ３Ａ、Ｃｒｙ３Ａｂ、Ｃｒｙ３Ｂｂ、Ｃｒｙ３４／３５Ａｂ１、ジアフェンチウロン、アゾシクロチン、シヘキサチン、酸化フェンブタスズ；プロパルギット、テトラジホン、クロルフェナピル、ＤＮＯＣ、スルフルラミド、ベンスルタプ、カルタップ塩酸塩、チオシクラム、チオスルタップ−ナトリウム、ビストリフルロン、クロルフルアズロン、ジフルベンズロン、フルシクロクスロン、フルフェノクスロン、ヘキサフルムロン、ルフェヌロン、ノバルロン、ノビフルムロン、テフルベズロン、トリフルムロン、ブプロフェジン、シロマジン、クロマフェノジド、ハロフェノジド、メトキシフェノジド、テブフェノジド、アミトラズ、ヒドラメチルノン；アセキノシル；フルアクリピリム、フェナザキン、フェンピロキシメート、ピリミジフェン、ピリダベン、テブフェンピラド、トルフェンピラド、ロテノン（デリス）、インドキサカルブ；メタフルミゾン、スピロジクロフェン、スピロメシフェン、スピロテトラマト、リン化アルミニウム、リン化カルシウム、ホスフィン、リン化亜鉛、シエノピラフェン、クロラントラニリプロール、フルベンジアミド、アミドフルメト、アザジラクチン、ベンクロチアズ、ベンゾキシメート、ビフェナゼート、ブロモプロピレート、キノメチオナート、氷晶石、シアントリニプロール（Ｃｙａｚｙｐｙｒ）、シフルメトフェン、ジコフォール、ジフロビダジン、フルエンスルホン、フルフェネリム、フルフィプロール、フルオピラム、フフェノジド、イミダクロチズ、イプロジオン、メペルフルトリン、ピリダリル、ピリフルキナゾン、テトラメチルフルトリン、ヨードメタン；バチルス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ）をベースとする製品（限定されないが、株ＣＮＣＭ Ｉ−１５８２、例えば、ＶＯＴｉＶＯ（商標）、ＢｉｏＮｅｍなど）；３−ブロモ−Ｎ−｛２−ブロモ−４−クロロ−６−［（１−シクロプロピルエチル）カルバモイル］フェニル｝−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボキサミド（国際公開第２００５／０７７９３４号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−ブロモピリジン−３−イル）メチル］（２−フルオロエチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４４号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−フルオロピリジン−３−イル）メチル］（２，２−ジフルオロエチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４４号パンフレットから公知である）、４−｛［（２−クロロ−１，３−チアゾール−５−イル）メチル］（２−フルオロエチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４４号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−クロルピリジン−３−イル）メチル］（２−フルオロエチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４４号パンフレットから公知である）、フルピラジフロン、４−｛［（６−クロル−５−フルオロピリジン−３−イル）メチル］（メチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４３号パンフレットから公知である）、４−｛［（５，６−ジクロロピリジン−３−イル）メチル］（２−フルオロ-エチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４６号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−クロロ−５−フルオロピリジン−３−イル）メチル］−（シクロプロピル）−アミノ｝−フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４３号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］−（シクロプロピル）−アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（欧州特許出願公開第Ａ−０ ５３９ ５８８号明細書から公知である）、４−｛［（６−クロルピリジン−３−イル）−メチル］（メチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（欧州特許出願公開第Ａ−０ ５３９ ５８８号明細書から公知である）、｛［１−（６−クロロピリジン−３−イル）エチル］（メチル）オキシド−λ4−スルファニリデン｝シアンアミド（国際公開第２００７／１４９１３４号パンフレットから公知である）並びにそのジアステレオマー｛［（１Ｒ）−１−（６−クロロピリジン−３−イル）エチル］（メチル）オキシド−λ4−スルファニリデン｝シアンアミド（Ａ）及び｛［（１Ｓ）−１−（６−クロロピリジン−３−イル）エチル］（メチル）オキシド−λ4−スルファニリデン｝シアンアミド（Ｂ）（これも、国際公開第２００７／１４９１３４号パンフレットから公知である）、さらには、スルホキサフロール及びそのジアステレオマー［（Ｒ）−メチル（オキシド）｛（１Ｒ）−１−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］エチル｝−λ4−スルファニリデン］シアンアミド（Ａ１）及び［（Ｓ）−メチル（オキシド）｛（１Ｓ）−１−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］エチル｝−λ4−スルファニリデン］-シアンアミド（Ａ２）（ジアステレオマーＡ群と呼ばれる）（国際公開第２０１０／０７４７４７号パンフレット、国際公開第２０１０／０７４７５１号パンフレットから公知である）、［（Ｒ）−メチル（オキシド）｛（１Ｓ）−１−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］エチル｝−λ4−スルファニリデン］シアンアミド（Ｂ１）及び［（Ｓ）−メチル（オキシド）｛（１Ｒ）−１−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］エチル｝−λ4−スルファニリデン］シアンアミド（Ｂ２）（ジアステレオマーＢ群と呼ばれる）（これもまた、国際公開第２０１０／０７４７４７号パンフレット、国際公開第２０１０／０７４７５１号パンフレットから公知である）、並びに１１−（４−クロロ−２，６−ジメチルフェニル）−１２−ヒドロキシ−１，４−ジオキサ−９−アザジスピロ［４．２．４．２］テトラデク−１１−エン−１０−オン（国際公開第２００６／０８９６３３号パンフレットから公知である）、３−（４’−フルオロ−２，４−ジメチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デク−３−エン−２−オン（国際公開第２００８／０６７９１１号パンフレットから公知である）、１−｛２−フルオロ−４−メチル−５−［（２，２，２−トリフルオルエチル）スルフィニル］フェニル｝−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−アミン（国際公開第２００６／０４３６３５号パンフレットから公知である）、［（３Ｓ，４ａＲ，１２Ｒ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−３−［（シクロプロピルカルボニル）オキシ］−６，１２−ジヒドロキシ−４，１２ｂ−ジメチル−１１−オキソ−９−（ピリジン−３−イル）−１，３，４，４ａ，５，６，６ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−デカヒドロ−２Ｈ，１１Ｈ−ベンゾ［ｆ］−ピラノ［４，３−ｂ］クロメン−４−イル］メチルシクロプロパンカルボキシレート（国際公開第２００８／０６６１５３号パンフレットから公知である）、２−シアノ−３−（ジフルオロメトキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルベンゼン-スルホンアミド（国際公開第２００６／０５６４３３号パンフレットから公知である）、２−シアノ−３−（ジフルオロメトキシ）−Ｎ−メチルベンゼン-スルホンアミド（国際公開第２００６／１００２８８号パンフレットから公知である）、２−シアノ−３−（ジフルオロメトキシ）−Ｎ−エチルベンゼンスルホンアミド（国際公開第２００５／０３５４８６号パンフレットから公知である）、４−（ジフルオロメトキシ）−Ｎ−エチル−Ｎ−メチル−１，２−ベンゾチアゾール−３−アミン１，１−ジオキシド（国際公開第２００７／０５７４０７号パンフレットから公知である）、Ｎ−［１−（２，３−ジメチルフェニル）−２−（３，５−ジメチルフェニル）エチル］−４，５−ジヒドロ−１，３−チアゾール−
２−アミン（国際公開第２００８／１０４５０３号パンフレットから公知である）、｛１’−［（２Ｅ）−３−（４−クロロフェニル）プロプ−２−エン−１−イル］−５−フルオロスピロ［インドール−３，４’−ピペリジン］−１（２Ｈ）−イル｝（２−クロロ-ピリジン−４−イル）-メタノン（国際公開第２００３／１０６４５７号パンフレットから公知である）、３−（２，５−ジメチルフェニル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−１，８−ジアザスピロ［４．５］デク−３−エン−２−オン（国際公開第２００９／０４９８５１号パンフレットから公知である）、３−（２，５−ジメチルフェニル）−８−メトキシ−２−オキソ−１，８−ジアザスピロ［４．５］デク−３−エン−４−イルエチル炭酸塩（国際公開第２００９／０４９８５１号パンフレットから公知である）、４−（ブト−２−イン−１−イルオキシ）−６−（３，５−ジメチルピペリジン−１−イル）−５−フルオロピリミジン（国際公開第２００４／０９９１６０号パンフレットから公知である）、（２，２，３，３，４，４，５，５−オクタフルオロペンチル）（３，３，３−トリフルオロプロピル）マロノニトリル（国際公開第２００５／０６３０９４号パンフレットから公知である）、（２，２，３，３，４，４，５，５−オクタフルオロペンチル）（３，３，４，４，４−ペンタフルオロ-ブチル）マロノニトリル（国際公開第２００５／０６３０９４号パンフレットから公知である）、８−［２−（シクロプロピルメトキシ）−４−（トリフルオロ-メチル）フェノキシ］−３−［６−（トリフルオロメチル）−ピリダジン−３−イル］−３−アザビシクロ［３．２．１］オクタン（国際公開第２００７／０４０２８０号パンフレットから公知である）、フロメトキン、ＰＦ１３６４（ＣＡＳ−Ｒｅｇ．Ｎｏ．１２０４７７６−６０−２）（特開２０１０−０１８５８６号公報から公知である）、５−［５−（３，５−ジクロロフェニル）−５−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ベンゾニトリル（国際公開第２００７／０７５４５９号明細書から公知である）、５−［５−（２−クロロピリジン−４−イル）−５−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ベンゾニトリル（国際公開第２００７／０７５４５９号パンフレットから公知である）、４−［５−（３，５−ジクロロフェニル）−５−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−２−メチル−Ｎ−｛２−オキソ−２−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−エチル｝ベンズアミド（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］−（シクロプロピル）アミノ｝−１，３−オキサゾール−２（５Ｈ）−オン、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］（２，２−ジフルオロエチル）−アミノ｝−１，３−オキサゾール−２（５Ｈ）−オン、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］（エチル）アミノ｝−１，３−オキサゾール−２（５Ｈ）−オン、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］（メチル）アミノ｝−１，３−オキサゾール−２（５Ｈ）−オン（すべて、国際公開第２０１０／００５６９２号パンフレットから公知である）、ＮＮＩ−０７１１（国際公開第２００２／０９６８８２号パンフレットから公知である）、１−アセチル−Ｎ−［４−（１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−メトキシプロパン−２−イル）−３−イソブチルフェニル］−Ｎ−イソブチリル−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド（国際公開第２００２／０９６８８２号パンフレットから公知である）、メチル２−［２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝アミノ）−５−クロロ−３−メチルベンゾイル］−２−メチルヒドラジンカルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、メチル２−［２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝アミノ）−５−シアノ−３−メチルベンゾイル］−２−エチルヒドラジンカルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、メチル２−［２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝−アミノ）−ベンゾイル］−２−メチルヒドラジンカルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、メチル２−［３，５−ジブロモ−２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝アミノ）−５−シアノ−３−メチルベンゾイル］−１，２−ジエチルヒドラジンカルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、メチル２−［３，５−ジブロモ−２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝アミノ）ベンゾイル］−２−エチルヒドラジン−カルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、（５ＲＳ，７ＲＳ；５ＲＳ，７ＳＲ）−１−（６−クロロ−３−ピリジルメチル）−１，２，３，５，６，７−ヘキサヒドロ−７−メチル−８−ニトロ−５−プロポキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン（国際公開第２００７／１０１３６９号パンフレットから公知である）、Ｎ−［２−（５−アミノ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−４−クロロ−６−メチルフェニル］−３−ブロモ−１−（３−クロロ−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボキサミド（ＣＮ１０２０５７９２５から公知である）、並びにメチル２−［３，５−ジブロモ−２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝-アミノ）-ベンゾイル］−２−エチル−１−メチルヒドラジンカルボキシレート（国際公開第２０１１／０４９２３３号パンフレットから公知である）。
さらに、殺菌剤の例としては、限定されないが、以下から選択される１種以上の殺菌剤が挙げられる：アルジモルフ、アザコナゾール、ビテルタノール、ブロムコナゾール、シプロコナゾール、ジクロブトラゾール、ジフェノコナゾール、ジニコナゾール、ジニコナゾール−Ｍ、ドデモルフ、酢酸ドデモルフ、エポキシコナゾール、エタコナゾール、フェナリモール、フェンブコナゾール、フェンヘキサミド、フェンプロピジン、フェンプロピモルフ、フルキノコナゾール、フルルプリミドール、フルシラゾール、フルトリアフォール、フルコナゾール、フルコナゾール−シス、ヘキサコナゾール、イマザリル、硫酸イマザリル、イミベンコナゾール、イプコナゾール、メトコナゾール、ミクロブタニル、ナフチフィン、ヌアリモール、オキスポコナゾール、パクロブトラゾール、ペフラゾエート、ペンコナゾール、ピペラリン、プロクロラズ、プロピコナゾール、プロチオコナゾール、ピリブチカルブ、ピリフェノクス、キンコナゾール、シメコナゾール、スピロキサミン、テブコナゾール、テルビナフィン、テトラコナゾール、トリアジメホン、トリアジメノール、トリデモルフ、トリフルミゾール、トリホリン、トリチコナゾール、ウニコナゾール、ウニコナゾール−ｐ、ビニコナゾール、ボリコナゾール、１−（４−クロロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）シクロへプタノール、メチル１−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボキシレート、Ｎ’−｛５−（ジフルオロメチル）−２−メチル−４−［３−（トリメチルシリル）プロポキシ］フェニル｝−Ｎ−エチル−Ｎ−メチルイミドホルムアミド、Ｎ−エチル−Ｎ−メチル−Ｎ’−｛２−メチル−５−（トリフルオロメチル）−４−［３−（トリメチルシリル）プロポキシ］フェニル｝イミドホルムアミド、Ｏ−［１−（４−メトキシフェノキシ）−３，３−ジメチルブタン−２−イル］１Ｈ−イミダゾール−１−カルボチオエート、ビキサフェン、ボスカリド、カルボキシン、ジフルメトリム、フェンフラム、フルピラム、フルトラニル、フルキサピロキサド、フラメトピル、フルメシクロクス、イソピラザム（ｓｙｎ−エピマーラセミ体１ＲＳ、４ＳＲ、９ＲＳ及び抗エピマーラセミ体１ＲＳ、４ＳＲ、９ＳＲの混合物）、イソピラザム（抗エピマーラセミ体１ＲＳ、４ＳＲ、９ＳＲの混合物）、イソピラザム（抗エピマー鏡像体１Ｒ、４Ｓ、９Ｓの混合物）、イソピラザム（抗エピマー鏡像体１Ｓ、４Ｒ、９Ｒの混合物）、イソピラザム（ｓｙｎエピマーラセミ体１ＲＳ、４ＳＲ、９ＲＳ）、イソピラザム（ｓｙｎ−エピマー鏡像体１Ｒ、４Ｓ，９Ｒ）、イソピラザム（ｓｙｎ−エピマー鏡像体１Ｓ、４Ｒ、９Ｓ）、メプトニル、オキシカルボキシン、ペンフルフェン、ペンチオピラド、セダキサン、チフルザミド、１−メチル−Ｎ−［２−（１，１，２，２−テトラフルオロエトキシ）フェニル］−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−Ｎ−［２−（１，１，２，２−テトラフルオロエトキシ）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−Ｎ−［４−フルオロ−２−（１，１，２，３，３，３−ヘキサフルオロプロポキシ）フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−［１−（２，４−ジクロロフェニル）−１−メトキシプロパン−２−イル］−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、５，８−ジフルオロ−Ｎ−［２−（２−フルオロ−４−｛［４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝フェニル）エチル］キナゾリン−４−アミン、Ｎ−［９−（ジクロロメチレン）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，４−メタノナフタレン−５−イル］−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−［（１Ｓ，４Ｒ）−９−（ジクロロメチレン）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，４−メタノナフタレン−５−イル］−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−［（１Ｒ，４Ｓ）−９−（ジクロロメチレン）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，４−メタノナフタレン−５−イル］−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、アメトクラジン、アミスルボム、アゾキシストロビン、シアゾファミド、クメトキシストロビン、クモキシストロビン、ジモキシストロビン、エネストロブリン、ファモキサドン、フェナミドン、フェノキシストロビン、フルオキサストロビン、クレソキシム−メチル、メトミノストロビン、オリサストロビン、ピコキシストロビン、ピラクロストロビン、ピラメトストロビン、ピラオキシストロビン、ピリベンカルブ、トリクロピリカルブ、トリフロキシストロビン、（２Ｅ）−２−（２−｛［６−（３−クロロ−２−メチルフェノキシ）−５−フルオロピリミジン−４−イル］オキシ｝フェニル）−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチルエタンアミド、（２Ｅ）−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチル−２−（２−｛［（｛（１Ｅ）−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチリデン｝アミノ）オキシ］メチル｝フェニル）エタンアミド、（２Ｅ）−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチル−２−｛２−［（Ｅ）−（｛１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ｝イミノ）メチル］フェニル｝エタンアミド、（２Ｅ）−２−｛２−［（｛［（１Ｅ）−１−（３−｛［（Ｅ）−１−フルオロ−２−フェニルエテニル］オキシ｝フェニル）エチリデン］アミノ｝オキシ）メチル］フェニル｝−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチルエタンアミド、（２Ｅ）−２−｛２−［（｛［（２Ｅ，３Ｅ）−４−（２，６−ジクロロフェニル）ブト−３−エン−２−イリデン］アミノ｝オキシ）メチル］フェニル｝−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチルエタンアミド、２−クロロ−Ｎ−（１，１，３−トリメチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−４−イル）ピリジン−３−カルボキサミド、５−メトキシ−２−メチル−４−（２−｛［（｛（１Ｅ）−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチリデン｝アミノ）オキシ］メチル｝フェニル）−２，４−ジヒドロ−３Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−オン、メチル（２Ｅ）−２−｛２−［（｛シクロプロピル［（４−メトキシフェニル）イミノ］メチル｝スルファニル）メチル］フェニル｝−３−メトキシプロプ−２−エノエート、Ｎ−（３−エチル−３，５，５−トリメチルシクロヘキシル）−３−（ホルミルアミノ）−２−ヒドロキシベンズアミド、２−｛２−［（２，５−ジメチルフェノキシ）メチル］フェニル｝−２−メトキシ−Ｎ−メチルアセトアミド、（２Ｒ）−２−｛２−［（２，５−ジメチルフェノキシ）メチル］フェニル｝−２−メトキシ−Ｎ−メチルアセトアミド、ベノミル、カルベンダジム、クロルフェナゾール、ジエトフェンカルブ、エタボキサム、フルオピコリド、フベリダゾール、ペンシクロン、チアベンダゾール、チオファネートメチル、チオファネート、ゾキサミド、５−クロロ−７−（４−メチルピペリジン−１−イル）−６−（２，４，６−トリフルオロフェニル）［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン、３−クロロ−５−（６−クロロピリジン−３−イル）−６−メチル−４−（２，４，６−トリフルオロフェニル）ピリダジン、ボルドー液、キャプタホール、キャプタン、クロロタロニル、水酸化銅、ナフテン酸銅、酸化第一銅、塩基性塩化銅、硫酸銅（ＩＩ）、ジクロフルアニド、ジチアノン、ドジン、ドジンフリーベース、フェルバム、フルオフォルペット、フォルペット、グアザチン、酢酸グアザチン、イミノクタジン、イミノクタジンアルベシル酸塩、イミノクタジン三酢酸塩、マンカッパー、マンコゼブ、マネブ、メチラム、メチラム亜鉛、オキシン銅、プロパミジン、プロピネブ、イオウ、多硫化カルシウムなどのイオウ製剤、チラム、トリルフルアニド、ジネブ、ジラム、アシベンゾラルＳメチル、イソチアニル、プロベナゾール、チアジニル、アンドプリム、ブラスチシジン−Ｓ、シプロジニル、カスガマイシン、カスガマイシン塩酸塩、メパニピリム、ピリメタニル、３−（５−フルオロ−３，３，４，４−テトラメチル−３，４−ジヒドロイソキノリン−１−イル）キノリン、酢酸フェンチン、塩化フェンチン、水酸化フェンチン、シルチオファム、ベンチアバリカルブ、ジメトモルフ、フルモルフ、イプロバリカルブ、マンジプロパミド、ポリオキシン、ポリオキソリム、バリダマイシンＡ、バリフェナレート、ビフェニル、クロロネブ、ジクロラン、エジフェンホス、エトリジアゾール、ヨードカルブ、イプロベンホス、イソプロチオラン、プロパモカルブ、プロパモカルブ塩酸塩、プロチオカルブ、ピラゾホス、キントゼン、テクナゼントルクロホス−メチル、カルプロパミド、ジクロシメト、フェノキサニル、フタリド、ピロキロン、トリシクラゾール、２，２，２−トリフルオロエチル｛３−メチル−１−［（４−メチルベンゾイル）アミノ］ブタン−２−イル｝カルバメート、ベナラキシル、ベナラキシル−Ｍ（キララキシル）、ブピリメート、クロジラコン、ジメチリモール、エチリモール、フララキシル、ヒメキサゾール、メタラキシル、メタラキシル−Ｍ（メフェノキサム）、オフラセ、オキサジキシル、オキソリン酸、クロゾリネート、フェンピクロニル、フルジオキソニル、イプロジオン、プロシミドン、キノキシフェン、ビンクロゾリル、ビナパクリル、ジノカップ、フェリムゾン、フルアジナム、メプチルジノカップ、ベンチアゾール、ベトキサジン、カプシマイシン、カルボン、チノメチオナト、ピリオフェノン（クラザフェノン）、クフラネブ、シフルフェナミド、シモキサニル、シプロスルファミド、ダゾメト、デバカルブ、ジクロロフェン、ジクロメジン、ジフェンゾコート、メチル硫酸ジフェンゾコート、ジフェニルアミン、エコメート、フェンピラザミン、フルメトベル、フルオロイミド、フルスルファミド、フルチアニル、ホセチル−アルミニウム、ホセチル−カルシウム、ホセチル−ナトリウム、ヘキサクロロベンゼン、イルママイシン、メタスルホカルブ、メチルイソチオシアネート、メトラフェノン、ミルジオマイシン、ナタマイシン、ニッケルジメチルジチオカルバメート、ニトロタール−イソプロピル、オクチリノン、オキサノカルブ、オキシフェンチン、ペンタクロロフェノール及びその塩、フェノトリン、リン酸及びその塩、プロパモカルブ−ホセチレート、プロパノシン−ナトリウム、プロキナジド、ピリモルフ、（２Ｅ）−３−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−３−（２−クロロピリジン−４−イル）−１−（モルホリン−４−イル）プロプ−２−エン−１−オン、（２Ｚ）−３−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−３−（２−クロロピリジン−４−イル）−１−（モルホリン−４−イル）プロプ−２−エン−１−オン、ピロールニトリン、テブフロキン、テクトフタラム、トルニファニド、トリアゾキシド、トリクラミド、ザリラミド、（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−ベンジル−３−［（｛３−［（イソブチリルオキシ）メトキシ］−４−メトキシピリジン−２−イル｝カルボニル）アミノ］−６−メチル−４，９−ジオキソ−１，５−ジオキソナン−７−イル２−メチルプロパノエート、１−（４−｛４−［（５Ｒ）−５−（２，６−ジフルオロフェニル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピペリジン−１−イル）−２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］エタノン、１−（４−｛４−［（５Ｓ）−５−（２，６−ジフルオロフェニル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピペリジン−１−イル）−２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］エタノン、１−（４−｛４−［５−（２，６−ジフルオロフェニル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピ
ペリジン−１−イル）−２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］エタノン、１−（４−メトキシフェノキシ）−３，３−ジメチルブタン−２−イル１Ｈ−イミダゾール−１−カルボキシレート、２，３，５，６−テトラクロロ−４−（メチルスルホニル）ピリジン、２，３−ジブチル−６−クロロチエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、２，６−ジメチル−１Ｈ，５Ｈ−［１，４］ジチイノ［２，３−ｃ：５，６−ｃ’］ジピロール−１，３，５，７（２Ｈ，６Ｈ）−テトロン、２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−１−（４−｛４−［（５Ｒ）−５−フェニル−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピペリジン−１−イル）エタノン、２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−１−（４−｛４−［（５Ｓ）−５−フェニル−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピペリジン−１−イル）エタノン、２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−１−｛４−［４−（５−フェニル−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル）−１，３−チアゾール−２−イル］ピペリジン−１−イル｝エタノン、２−ブトキシ−６−ヨード−３−プロピル−４Ｈ−クロメン−４−オン、２−クロロ−５−［２−クロロ−１−（２，６−ジフルオロ−４−メトキシフェニル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］ピリジン、２−フェニルフェノール及びその塩、３−（４，４，５−トリフルオロ−３，３−ジメチル−３，４−ジヒドロイソキノリン−１−イル）キノリン、３，４，５−トリクロロピリジン−２，６−ジカルボニトリル、３−［５−（４−クロロフェニル）−２，３−ジメチル−１，２−オキサゾリジン−３−イル］ピリジン、３−クロロ−５−（４−クロロフェニル）−４−（２，６−ジフルオロフェニル）−６−メチルピリダジン、４−（４−クロロフェニル）−５−（２，６−ジフルオロフェニル）−３，６−ジメチルピリダジン、５−アミノ−１，３，４−チアジアゾール−２−チオール、５−クロロ−Ｎ’−フェニル−Ｎ’−（プロプ−２−イン−１−イル）チオフェン−２−スルホノヒドラジド、５−フルオロ−２−［（４−フルオロベンジル）オキシ］ピリミジン−４−アミン、５−フルオロ−２−［（４−メチルベンジル）オキシ］ピリミジン−４−アミン、５−メチル−６−オクチ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミン、エチル（２Ｚ）−３−アミノ−２−シアノ−３−フェニルプロプ−２−エノエート、Ｎ’−（４−｛［３−（４−クロロベンジル）−１，２，４−チアジアゾール−５−イル］オキシ｝−２，５−ジメチルフェニル）−Ｎ−エチル−Ｎ−メチルイミドホルムアミド、Ｎ−（４−クロロベンジル）−３−［３−メトキシ−４−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）フェニル］プロパンアミド、Ｎ−［（４−クロロフェニル）（シアノ）メチル］−３−［３−メトキシ−４−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）フェニル］プロパンアミド、Ｎ−［（５−ブロモ−３−クロロピリジン−２−イル）メチル］−２，４−ジクロロピリジン−３−カルボキサミド、Ｎ−［１−（５−ブロモ−３−クロロピリジン−２−イル）エチル］−２，４−ジクロロ-ピリジン−３−カルボキサミド、Ｎ−［１−（５−ブロモ−３−クロロピリジン−２−イル）エチル］−２−フルオロ−４−ヨードピリジン−３−カルボキサミド、Ｎ−｛（Ｅ）−［（シクロプロピルメトキシ）イミノ］［６−（ジフルオロメトキシ）−２，３−ジフルオロフェニル］メチル｝−２−フェニルアセトアミド、Ｎ−｛（Ｚ）−［（シクロプロピルメトキシ）イミノ］［６−（ジフルオロメトキシ）−２，３−ジフルオロフェニル］メチル｝−２−フェニルアセトアミド、Ｎ’−｛４−［（３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−シアノ−１，２−チアゾール−５−イル）オキシ］−２−クロロ−５−メチルフェニル｝−Ｎ−エチル−Ｎ−メチルイミドホルムアミド、Ｎ−メチル−２−（１−｛［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アセチル｝ピペリジン−４−イル）−Ｎ−（１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）−１，３−チアゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−メチル−２−（１−｛［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アセチル｝ピペリジン−４−イル）−Ｎ−［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル］−１，３−チアゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−メチル−２−（１−｛［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アセチル｝ピペリジン−４−イル）−Ｎ−［（１Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル］−１，３−チアゾール−４−カルボキサミド、ペンチル｛６−［（｛［（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）（フェニル）メチリデン］アミノ｝オキシ）メチル］ピリジン−２−イル｝カルバメート、フェナジン−１−カルボン酸、キノリン−８−オル、キノリン−８−オル硫酸塩（２：１）、ｔｅｒｔ−ブチル｛６−［（｛［（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）（フェニル）メチレン］アミノ｝オキシ）メチル］ピリジン−２−イル｝カルバメート、１−メチル−３−（トリフルオロメチル）−Ｎ−［２’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（４’−クロロビフェニル−２−イル）−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（２’，４’−ジクロロビフェニル−２−イル）−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−Ｎ−［４’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（２’，５’−ジフルオロビフェニル−２−イル）−１−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−Ｎ−［４’−（プロプ−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、５−フルオロ−１，３−ジメチル−Ｎ−［４’−（プロプ−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−［４’−（プロプ−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］ピリジン−３−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−Ｎ−［４’−（３，３−ジメチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−［４’−（３，３−ジメチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−５−フルオロ−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−Ｎ−（４’−エチニルビフェニル−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（４’−エチニルビフェニル−２−イル）−５−フルオロ−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−（４’−エチニルビフェニル−２−イル）ピリジン−３−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−［４’−（３，３−ジメチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］ピリジン−３−カルボキサミド、４−（ジフルオロメチル）−２−メチル−Ｎ−［４’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−２−イル］−１，３−トリアゾール−５−カルボキサミド、５−フルオロ−Ｎ−［４’−（３−ヒドロキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−［４’−（３−ヒドロキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］ピリジン−３−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−Ｎ−［４’−（３−メトキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、５−フルオロ−Ｎ−［４’−（３−メトキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−［４’−（３−メトキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］ピリジン−３−カルボキサミド、（５−ブロモ−２−メトキシ−４−メチルピリジン−３−イル）（２，３，４−トリメトキシ−６−メチルフェニル）メタノン、Ｎ−［２−（４−｛［３−（４−クロロフェニル）プロプ−２−イン−１−イル］オキシ｝−３−メトキシフェニル）エチル］−Ｎ２−（メチルスルホニル）バリンアミド、４−オキソ−４−［（２−フェニルエチル）アミノ］ブタン酸、ブト−３−イン−１−イル｛６−［（｛［（Ｚ）−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）（フェニル）メチレン］アミノ｝オキシ）メチル］ピリジン−２−イル｝カルバメート。
さらなる例として、別の農薬は、以下からなる群から選択される１種以上の除草剤であってよい：アセトクロル、アシフルオルフェン、アシフルオルフェン−ナトリウム、アクロニフェン、アラクロル、アリドクロル、アロキシジム、アロキシジム−ナトリウム、アメトリン、アミカルバゾン、アミドクロル、アミドスルフロン、アミノシクロピラクロル、アミノシクロピラクロル−カリウム、アミノシクロピラクロル−メチル、アミノピラリド、アミトロール、スルファミド酸アンモニウム、アニロホス、アスラム、アトラジン、アザフェニジン、アジンスルフロン、ベフルブタミド、ベナゾリン、ベナゾリン−エチル、ベンフルラリン、ベンフレセート、ベンスルフロン、ベンスルフロン−メチル、ベンスリド、ベンタゾン、ベンゾビシクロン、ベンゾフェナプ、ビシクロピロン、ビフェノクス、ビラナホス、ビラナホス−ナトリウム、ビスピリバク、ビスピリバク−ナトリウム、ブロマシル、ブロモブチド、ブロモフェノキシム、ブロモキシニル、ブロモキシニル−酪酸塩、−カリウム、−ヘプタン酸塩及び−オクタン酸塩、ブソキシノン、ブタクロル、ブタフェナシル、ブタミホス、ブテナクロル、ブトラリン、ブトロキシジム、ブチレート、カフェンストロール、カルベタミド、カルフェントラゾン、カルフェントラゾン−エチル、クロランベン、クロルブロムロン、クロルフェナク、クロルフェナク−ナトリウム、クロルフェンプロプ、クロルフルレノール、クロルフルレノール−メチル、クロリダゾン、クロリムロン、クロリムロン−エチル、クロロフタリム、クロロトルロン、クロルタール−ジメチル、クロルスルフロン、シニドン、シニドン−エチル、シンメチリン、シノスルフロン、クレトジム、クロジナホプ、クロジナホプ−プロパルギル、クロマゾン、クロメプロプ、クロピラリド、クロランスラム、クロランスラム−メチル、クミルロン、シアンアミド、シアナジン、シクロエート、シクロスルファムロン、シクロキシジム、シハロホプ、シハロホプ−ブチル、シプラジン、２，４−Ｄ、２，４−Ｄ−ブトチル、−ブチル、−ジメチルアンモニウム、−ジオールアミン、−エチル、２−エチルヘキシル、ダゾメト、−イソブチル、−イソオクチル、−イソプロピルアンモニウム、−カリウム、−トリイソプロパノールアンモニウム及び−トロールアミン、２，４−ＤＢ、２，４−ＤＢ−ブチル−ジメチルアンモニウム、イソオクチル、−カリウム及び−ナトリウム、ダイムロン（ｄｙｍｒｏｎ）、ダラポン、ｎ−デカノール、デスメジファム、デトシル−ピラゾレート（ＤＴＰ）、ジカンバ、ジクロベニル、ジクロルプロプ、ジクロルプロプ−Ｐ、ジクロホプ、ジクロホプ−メチル、ジクロホプ−Ｐ−メチル、ジクロスラム、ジフェンゾコート、ジフルフェニカン、ジフルフェンゾピル、ジフルフェンゾピル−ナトリウム、ジメフロン、ジメピペラート、ジメタクロル、ジメタメトリン、ジメテナミド、ジメテナミド−Ｐ、ジメトラスルフロン、ジニトラミン、ジノテルブ、ジフェナミド、ジコート、ジコート−ジブロミド、ジチオピル、ジウロン、ＤＮＯＣ、エドタール、ＥＰＴＣ、エスプロカルブ、エタルフルラリン、エタメトスルフロン、エタメトスルフロン−メチル、エチオジン、エトフメセート、エトキシフェン、エトキシフェン−エチル、エトキシスルフロン、エトベンザニド、Ｆ−５２３１、すなわち、Ｎ−｛２−クロロ−４−フルオロ−５−［４−（３−フルオロプロピル）−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−テトラゾール−１−イル］フェニル｝エタンスルホンアミド、Ｆ−７９６７、すなわち、３−［７−クロロ−５−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−４−イル］−１−メチル−６−（トリフルオロメチル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン、フェノキサプロプ、フェノキサプロプ−Ｐ、フェノキサプロプ−エチル、フェノキサプロプ−Ｐ−エチル、フェノキサスルホン、フェントラザミド、フランプロプ、フランプロプ−Ｍ−イソプロピル、フランプロプ−Ｍ−メチル、フラザスルフロン、フロラスラム、フルアジホプ、フルアジホプ−Ｐ、フルアジホプ−ブチル、フルアジホプ−Ｐ−ブチル、フルカルバゾン、フルカルバゾン−ナトリウム、フルセトスルフロン、フルクロラリン、フルフェナセト（チアフルアミド）、フルフェンピル、フルフェンピル−エチル、フルメトスラム、フルミクロラク、フルミクロラク−ペンチル、フルミオキサジン、フルメツロン、フルレノール、フルレノール−ブチル、−ジメチルアンモニウム及び−メチル、フルオログリコフェン、フルオログリコフェン−エチル、フルプロパネート、フルピルスルフロン、フルピルスルフロン−メチル−ナトリウム、フルリドン、フルロクロリドン、フルロキシピル、フルロキシピル−メプチル、フルルタモン、フルチアセト、フルチアセト−メチル、フルチアミド、ホメサフェン、ホメサフェン−ナトリウム、ホラムスルフロン、ホサミン、グルホシネート、グルホシネート−アンモニウム、グルホシネート−Ｐ−ナトリウム、グルホシネート−Ｐ−アンモニウム、グルホシネート−Ｐ−ナトリウム、グリホサート、グリホサート−アンモニウム、−イソプロピルアンモニウム、−ジアンモニウム、−ジメチルアンモニウム、−カリウム、−ナトリウム、及び−トリメシウム、Ｈ−９２０１、すなわち、Ｏ−（２，４−ジメチル−６−ニトロフェニル）Ｏ−エチル−イソプロピルホスホルアミドチオエート、ハロサフェン、ハロスルフロン、ハロスルフロン−メチル、ハロキシホプ、ハロキシホプ−Ｐ、ハロキシホプ−エトキシエチル、ハロキシホプ−Ｐ−エトキシエチル、ハロキシホプ−メチル、ハロキシホプ−Ｐ−メチル、ヘキサジノン、ＨＷ−０２、すなわち、１−（ジメトキシホスホリル）−エチル−（２，４−ジクロロフェノキシ）酢酸塩、イマザメタベンズ、イマザメタベンズ−メチル、イマザモクス、イマザモクス−アンモニウム、イマザピク、イマザピク−アンモニウム、イマザピル、イマザピル−イソプロピルアンモニウム、イマザキン、イマザキン−アンモニウム、イマゼタピル、イマゼタピル−インモニウム、イマゾスルフロン、インダノファン、インダジフラム、ヨードスルフロン、ヨードスルフロン−メチル−ナトリウム、イオキシニル、イオキシニル−オクタン酸塩、−カリウム、及び−ナトリウム、イプフェンカルバゾン、イソプロツロン、イソウロン、イソキサベン、イソキサフルトール、カルブチレート、ＫＵＨ−０４３、すなわち、３−（｛［５−（ジフルオロメチル）−１−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］メチル｝スルホニル）−５，５−ジメチル−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール、ケトスピラドクス、ラクトフェン、ケナシル、キヌロン、ＭＣＰＡ、ＭＣＰＡ−ブトチル、−ジメチルアンモニウム、−２−エチルヘキシル、−イソプロピルアンモニウム、−カリウム、及び−ナトリウム、ＭＣＰＢ、ＭＣＰＢ−メチル、−エチル及び−ナトリウム、メコプロプ、メコプロプ−ナトリウム、及び−ブトチル、メコプロプ−Ｐ、メコプロプ−Ｐ−ブトチル、ジメチルアンモニウム、−２−エチルヘキシル及び−カリウム、メフェナセト、メフルイジド、メソスルフロン、メソスルフロン−メチル、メソトリオン、メタベンズチアズロン、メタム、メタミホプ、メタミトロン、メタザクロル、メタゾスルフロン、メタベンズチアズロン、メチオピルスルフロン、メチオゾリン、メチルイソチオシアネート、メトブロムロン、メトラクロル、Ｓ−メトラクロル、メトスラム、メトクスロン、メトリブジン、メトスルフロン、メトスルフロン−メチル、モリナト、モノリヌロン、モノスルフロン、モノスルフロン−エステル、ＭＴ−１２８、すなわち、６−クロロ−Ｎ−［（２Ｅ）−３−クロロプロプ−２−エン−１−イル］−５−メチル−Ｎ−フェニルピリダシン−３−アミン、ＭＴ−５９５０、すなわち、Ｎ−（３−クロロ−４−イソプロピルフェニル）−２−メチルペンタンアミド、ＮＧＧＣ−０１１、ナプロパミド、ＮＣ−３１０、すなわち、［５−（ベンズイルオキシ）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］（２，４−ジクロロフェニル）メタノン、ネブロン、ニコスルフロン、ノナン酸（ペラルグ酸）、ノルフルラゾン、オレイン酸（脂肪酸）、オルベンカルブ、オルトスルファムロン、オリザリン、オキサジアルギル、オキサジアゾン、オキサスルフロン、オキサジクロメホン、オキシフルオルフェン、パラコート、パラコートジクロリド、ペブレート、ペンジメタリン、ペノクススラム、ペンタクロルフェノール、ペントキサゾン、ペトキサミド、石油、フェンメジファム、ピクロラム、ピコリナフェン、ピノキサデン、ピペロホス、プレチラクロル、プリミスルフロン、プリミスルフロン−メチル、プロジアミン、プリフルラリン、プロポホキシジム、プロメトン、プロメトリン、プロパクロル、プロパニル、プロパキザホプ、プロパジン、プロファム、プロピソクロル、プロポキシカルバゾン、プロポキシカルバゾン−ナトリウム、プロピリスルフロン、プロピザミド、プロスルホカルブ、プロスルフロン、ピラクロニル、ピラフルフェン、ピラフルフェン−エチル、ピラスルホトール、ピラゾリナート（ピラゾレート）、ピラゾスルフロン、ピラゾスルフロン−エチル、ピラゾキシフェン、ピリバムベンズ−イソプロピル、ピリバムベンズ−プロピル、ピリベンゾキシム、ピリブチカルブ、ピリダフォル、ピリデート、ピリフタリド、ピリミノバク、ピリミノバク−メチル、ピリミスルファン、ピリチオバク、ピリチオバク−ナトリウム、ピロキサスルホン、ピロクススラム、キンクロラク、キンメラク、キノクラミン、キザロホプ、キザロホプ−エチル、キザロホプ−Ｐ、キザロホプ−Ｐ−エチル、キザロホプ−Ｐ−テフリル、リムスルフロン、サフルフェナシル、セトキシジム、シズロン、シマジン、シメトリン、スルコトリオン、スルフェントラゾン、スルホメツロン、スルホメツロン−メチル、スルホスルフロン、ＳＷ−０６５、ＳＹＮ−５２３、ＳＹＰ−２４９、すなわち、１−エトキシ−３−メチル−１−オキソブト−３−エン−２−イル５−［２−クロロ−４−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−２−ニトロベンゾエート、ＳＹＰ−３００、すなわち、１−［７−フルオロ−３−オキソ−４−（プロプ−２−イン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−ベンゾキサジン−６−イル］−３−プロピル−２−チオキソイミダゾリジン−４，５−ジオン、２，３，６−ＴＢＡ、ＴＣＡ（トリクロロ酢酸）、ＴＣＡ−ナトリウム、テブチウロン、テフリルトリオン、テンボトリオン、テプラロキシジム、テルバシル、テルブカルブ、テルブメトン、テルブチラジン、テルブトリン、テニルクロル、チアゾピル、チエンカルバゾン、チエンカルバゾン−メチル、チフェンスルフロン、チフェンスルフロン−メチル、チオベンカルブ、トプラメゾン、トラルコキシジム、トリアフォモン、トリ−アレート、トリアスルフロン、トリアジフラム、トリベヌロン、トリベヌロン−メチル、トリクロピル、トリエタジン、トリフロキシスルフロン、トリフロキシスルフロン−ナトリウム、トリフラリン、トリフルスルフロン、トリフルスルフロン−メチル、トリトスルフロン、尿素硫酸塩、ベルノレート、ＺＪ−０８６２、すなわち、３，４−ジクロロ−Ｎ−｛２−［（４，６−ジメトキシピリミジン−２−イル）オキシ］ベンジル｝アニリン；又は以下からなる群から選択される植物成長調節剤：アシベンゾラル、アシベンゾラル−Ｓ−メチル、５−アミノレブリン酸、アンシミドール、６−ベンジルアミノプリン、ブラシノリド、カテキン、クロルメコートクロリド、クロプロプ、シクラニリド、３−（シクロプロプ−１−エニル）プロピオン酸、ダミノジド、ダゾメト、ｎ−デカノール、ジケグラク、ジケグラク−ナトリウム、エンドタール、エンドタール−ジカリウム、−ジナトリウム、及びモノ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアルキルアンモニウム）、エテホン、フルメトラリン、フルレノール、フルレノール−ブチル、フルルプリミドール、ホルクロルフェヌロン、ジベレリン酸、イナベンフィド、インドール−３−酢酸（ＩＡＡ）、４−インドール−３イル酪酸
、イソプロチオラン、プロベナゾール、ジャスモン酸、マレイン酸ヒドラジド、メピコートクロリド、１−メチルシクロプロペン、ジャスモン酸メチル、２−（１−ナフチル）アセトアミド、１−ナフチル酢酸、２−ナフチルオキシ酢酸、ニトロフェノレート−混合物、パクロブトラゾール、Ｎ−（２−フェニルエチル）−β−アラニン、Ｎ−フェニルフタルアミド酸、プロヘキサジオン、プロヘキサジオン−カルシウム、プロヒドロジャスモン、サリチル酸、ストリゴラクトン、テクナゼン、チジアズロン、トリネキサパク、トリネキサパク−エチル、チトデフ、ウニコナゾール、ウニコナゾール−Ｐ；又はこれらの農学的に好ましい塩若しくはその他の形態。
本発明の好ましい実施形態では、前記の場所に適用される除草剤組成物は、グリホサート及び／又はグルホシネートをさらに含む。
従って、除草剤組成物中の除草剤の性質に応じて、この組成物は、作付け前、出芽前及び／又は出芽後に前記場所に適用することができる。「作付け前」とは、作物を前記場所に作付けする前に、除草剤組成物を適用することを意味し、「出芽前」とは、発芽した作物の種子が前記場所の表面から出現する前に、除草剤組成物を適用することを意味し、また「出芽後」とは、作物が前記場所上に見えるようになった後に、除草剤組成物を適用することを意味する。これらの個別の使用パターンは、単独又は任意の組合せで前記場所に適用することができる。例えば、使用パターンは、作付け前の適用に続いて、出芽後の適用を含んでもよい。
本明細書に記載する除草剤組成物によって様々な雑草種を抑制する（すなわち、死滅又は損傷させる）ことができる。従って、本発明は、これらの植物種が不要である（すなわち、雑草である）場合に、これらを抑制する上で有用である。これらの植物種には、作物並びに一般に考慮される雑草が含まれ、限定されないが、以下の種が挙げられる：スズメノテッポウ（Ａｌｏｐｅｃｕｒｕｓ ｍｙｏｓｕｒｏｉｄｅｓ）、エノコログサ（アキノエノコログサ（Ｓｅｔａｒｉａ ｆａｂｅｒｉ））、オニメヒシバ （Ｄｉｇｉｔａｒｉａ ｓａｎｇｕｉｎａｌｉｓ）、スリナムグラス（Ｂｒａｃｈｉａｒｉａ ｄｅｃｕｍｂｅｎｓ）、カラスムギ（Ａｖｅｎａｆａｔｕａ）、オナモミ（Ｘａｎｔｈｉｕｍ ｐｅｎｓｙｌｖａｎｉｃｕｍ）、シロザ（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍ ａｌｂｕｍ）、アサガオ（アサガオ類（Ｉｐｏｍｏｅａ ｓｐｐ．）及び多数の他のイポモエア種、例えば、ヘデラケア（ｈｅｄｅｒａｃｅａ）、グランジフォリア（ｇｒａｎｇｉｆｏｌｉａ）など）、アカザ（アマランサス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ ｓｐｐ．））、ビロード葉（イチビ（Ａｂｕｔｉｌｉｏｎ ｔｈｅｏｐｈｒａｓｔｉ））、イヌビエ（Ｅｃｈｉｎｏｃｈｌｏａ ｃｒｕｓ−ｇａｌｌｉ）、バミューダグラス（ギョウシバ（Ｃｙｎｏｄｏｎ ｄａｃｔｙｌｏｎ））、ヒゲナガチャヒキ（ウマノチャヒキ（Ｂｒｏｍｕｓ ｔｅｃｔｏｒｕｍ））、オヒシバ（Ｅｌｅｕｓｉｎｅ ｉｎｄｉｃａ））、ネコジャラシ（エノコログサ （Ｓｅｔａｒｉａ ｖｉｒｉｄｉｓ））、イタリアンライグラス（ネズミムギ（Ｌｏｌｉｕｍ ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ））、ジョンソングラス（セイバンモロコシ（Ｓｏｒｇｈｕｍ ｈａｌｅｐｅｎｓｅ））、小形種のカナリーグラス（ヒメカナリーグラス（Ｐｈａｌａｒｉｓ ｍｉｎｏｒ）、セイヨウヌカボ（Ａｐｅｒａ ｓｐｉｃａ−ｖｅｎｔｉ）、ウーリーカップグラス（ナルコビエ（Ｅｒｉｃｈｌｏａ ｖｉｌｌｏｓａ））、ショクヨウガヤツリ（Ｃｙｐｅｒｕｓ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｓ）、ハコベ（Ｓｔｅｌｌａｒｉａ ｍｅｄｉａ）、一般的ブタクサ、オオブタクサ（Ａｍｂｒｏｓｉａ ｔｒｉｆｉｄａ）（ブタクサ（Ａｍｂｒｏｓｉａ ａｒｔｅｍｉｓｉｉｆｏｌｉａ））、ホウキギ（Ｋｏｃｈｉａ ｓｃｏｐａｒｉａ）、ヒメムカシヨモギ（Ｃｏｎｙｚａ ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ）、ボウムギ（Ｌｏｌｉｕｍ ｒｉｇｉｄｕｍ）、オヒシバ（Ｅｌｅｕｓｉｎｅ ｉｎｄｉｃａ）、アレチノギク（Ｃｏｎｙｚａ ｂｏｎａｒｉｅｎｓｉｓ）、ヘラオオバコ（Ｐｌａｎｔａｇｏ ｌａｎｃｅｏｌａｔａ）、マルバツユクサ（Ｃｏｍｍｅｌｉｎａ ｂｅｎｇｈａｌｅｎｓｉｓ）、セイヨウヒルガオ（Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌｕｓ ａｒｖｅｎｓｉｓ）、ハマスゲ（Ｃｙｐｅｒｕｓ ｒｏｔｕｎｄｕｓ）、レッドバイン（Ｂｒｕｎｎｉｃｈｉａ ｏｖａｔａ）、アメリカツノクサネム（Ｓｅｓｂａｎｉａ ｅｘａｌｔａｔａ）、エビスグサ（Ｓｅｎｎａ ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ）、テキサスブリーウィード（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ ｃｉｌｉａｒｉｓ）、オオクサキビ（Ｐａｎｉｃｕｍ ｄｉｃｈｏｔｏｍｉｆｌｏｒｕｍ）、テキサスキビ（Ｐａｎｉｃｕｍ ｔｅｘａｎｕｍ）、メリケンニクキビ（（ビロードキビ）Ｂｒａｃｈｉａｒｉａ）、及びデビルズクロウ（ツノゴマ（Ｐｒｏｂｏｓｃｉｄｅａ ｌｏｕｉｓｉａｎｉｃａ））。本発明の別の態様では、雑草は、除草剤抵抗性ライグラス、例えば、グリホサート抵抗性ライグラス、パラコート抵抗性ライグラス、ＡＣＣａｓｅ阻害剤抵抗性ライグラス、及び非選択的除草剤抵抗性ライグラスを含む。
本発明の別の態様では、前記場所でボランティアＳＹＨＴ０Ｈ２作物を抑制する方法が提供され、この方法は、ダイズに有効で、しかも、ＨＰＰＤの阻害以外の作用機序を有する１種以上の除草剤を前記場所に適用するステップを含む。
本発明の別の態様では、ＳＹＨＴ０Ｈ２作物を含む場所で、ボランティアトランスジェニックイベントを抑制する方法が提供され、このボランティアイベントは、１種以上の除草剤に対する抵抗性を含むが、ＨＰＰＤ除草剤に対する抵抗性は含んでおらず、本方法は、１種以上のＨＰＰＤ除草剤を含む、抑制量の除草剤組成物を前記場所に適用するステップを含む。
本発明の別の態様では、ある場所に、除草剤混合物を適用する方法が提供され、除草剤混合物は、ＨＰＰＤ阻害剤と、有害生物（雑草、病害、昆虫、センチュウ）防除の目的で、ＳＹＨＴ０Ｈ２が耐性を持たない可能性がある少なくとも１種の別の化学物質を含むが、ここで、ＳＹＨＴ０Ｈ２イベントが存在するため、残留ＨＰＰＤ活性から保護することにより、作付け前又は出芽前のいずれかに上記混合物の適用が可能になる。例えば、一態様では、パラコートのような典型的なバーンダウン型除草剤をＨＰＰＤ阻害剤と組み合わせて、出芽前又は作付け前バーンダウン式適用で、上記の場所に適用する。
本発明の一態様では、収量を改善するためにＳＹＨＴ０Ｈ２植物を用いる。例えば、ダイズイベントＳＹＨＴ０Ｈ２は、、非噴霧の場合と比較して、出芽前又は早期の栄養成長期に、メソトリオンを噴霧すると、収量増加を示す。例えば、出芽前又は栄養成長期に、メソトリオンの２Ｘ噴霧を受けるダイズイベントＳＹＨＴ０Ｈ２は、非噴霧の場合より高い収率を示しうる。従って、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を含むダイズに、成長促進量のＨＰＰＤ阻害剤を適用して、雑草圧力から独立した収量を改善することにより、植物収量を改善する方法が提供される。ＨＰＰＤ阻害剤は、メソトリオン又はその他のＨＰＰＤ阻害剤であってよい。本明細書で用いる場合、成長促進量とは、ＨＰＰＤ阻害剤除草剤を噴霧されていないＳＹＨＴ０Ｈ２植物と比較して、少なくとも約２倍、例えば、少なくとも約５倍、少なくとも約１０、少なくとも約２０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍以上、植物収量を増加するのに十分なＨＰＰＤ阻害剤除草剤の量を意味する。成長促進量はまた、ＨＰＰＤ阻害剤除草剤を噴霧されていないＳＹＨＴ０Ｈ２植物と比較して、少なくとも約５％、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％以上、植物収量を増加するのに十分なＨＰＰＤ阻害剤除草剤の量も意味する。
本発明のある態様では、本方法は、本発明の植物及び／又は目的の区域（例えば、圃場又は栽培地）及び／又は雑草を１種だけの除草剤若しくは他の化学物質、例えば、ＨＰＰＤ阻害剤で処理することを含む。
上記の方法はまた、複数のクラスの除草剤の同時及び／又は逐次的適用からなる使用も含む。特に、アベナ（Ａｖｅｎａ）ＨＰＰＤ配列を含む異種挿入断片は、ホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ（ＰＡＴ）配列も含み、これは、グルホシネート（ホスフィノトリシンとも呼ばれる）のようなグルタミンシンテターゼ阻害剤に対する抵抗性を賦与する。ホスフィノトリシン（ＰＴＣ、２−アミノ−４−メチルホスフィノ酪酸）は、ストレプトマイセス・ビリドクロモゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｒｉｄｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ）Ｔｕ ４９４（ＤＳＭ ４０７３６、ＤＳＭ ４１１２）株によって生産される抗生物質ホスフィノトリシルアラニル−アラニンの構造単位である。この抗生物質は、グラム陽性及びグラム陰性菌、並びに真菌ボトリシス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）に対して活性である。ＰＴＣはまた、有効な除草剤としても作用する。従って、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２は、グルホシネートのようなグルタミンシンテターゼ阻害剤と組み合わせて用いてもよい。代表的なグルホシネート除草剤は、ＢＡＳＴＡ（登録商標）、ＬＩＢＥＲＴＹ（登録商標）、ＲＥＬＹ（登録商標）、ＣＨＡＬＬＥＮＧＥ（登録商標）、ＩＧＮＩＴＥ（登録商標）、及びＦＩＮＡＬＥ（登録商標）として市販されている。
除草剤のような様々な化学物質は、異なる「残留」効果、すなわち、化学物質又は除草剤による処理が、処理区域で生育する植物に対する効果を持続する異なる時間量を有する。このような効果は、処理区域（例えば、圃場又は栽培地）の所望する将来の目的に応じて、望ましいものもあれば、望ましくないものもある。従って、各作物に用いようとする処理からの残留効果、及び同じ区域で後に栽培しようとする作物に対するその影響に基づいて、輪作計画を選択することができる。当業者であれば、除草剤の残留効果を評価するのに用いることができる技術に精通している；例えば、一般に、グリホサートは、土壌残留活性が極めて少ないか全くないが、ＨＰＰＤを阻害する作用を有する除草剤は、その残留活性レベルはまちまちである。各種除草剤の残留活性は、当分野では公知であり、様々な環境因子、例えば、土壌水分レベル、温度、ｐＨ、及び土壌組成（組織及び有機物質）によって変動することがわかっている。ＳＹＨＴ０Ｈ２ダイズ植物は、除草剤の残留活性に対する耐性の改善が有益である作物を栽培する方法において特に有用である。
例えば、本発明の一態様では、前の作物に用いたＨＰＰＤ除草剤の残留効果からの薬害の危険性を低減するために、例えば、前の作付けで、ビシクロピロン及びトプラメゾンをトウモロコシ作物に用いた場合、ＳＹＨＴ０Ｈ２ダイズ植物を作付けする。
例えば、本発明の一態様では、ＳＹＨＴ０Ｈ２ダイズ植物は、個別に適用されると、ＨＰＰＤ阻害剤化学に対する改善された耐性を有するため、除草剤の組合せに対する改善された耐性をさらに提供する。さらには、本明細書に開示されるトランスジェニック植物は、除草剤処理と一緒に、作物に一般に用いられる化学物質、例えば、薬害軽減剤、補助剤、例えば、非イオン界面活性剤、イオン界面活性剤、硫酸アンモニウム及び作物油濃縮物などを含む処理に対する、改善された耐性を提供する。
用語「薬害軽減剤」とは、除草剤組成物に添加されて、作物種子又は土壌に適用されると、特定の作物に対する除草剤の植物毒素作用を除去又は軽減する物質を指す。当業者であれば、薬害軽減剤の選択が、部分的に、目的の作物、及び相乗作用的除草剤の組成物に含まれる具体的除草剤又は除草剤の組合せによって変わることは理解されよう。本明細書に開示される除草剤組成物と一緒に用いるのに好適な薬害軽減剤の例としては、限定されないが、以下の文献に開示されているものが挙げられる：米国特許第４，８０８，２０８号明細書；同第５，５０２，０２５号明細書；同第６，１２４，２４０号明細書及び米国特許出願第２００６／０１４８６４７号明細書；同第２００６／００３０４８５号明細書；同第２００５／０２３３９０４号明細書；同第２００５／００４９１４５号明細書；同第２００４／０２２４８４９号明細書；同第２００４／０２２４８４８号明細書；同第２００４／０２２４８４４号明細書；同第２００４／０１５７７３７号明細書；同第２００４／００１８９４０号明細書；同第２００３／０１７１２２０号明細書；同第２００３／０１３０１２０号明細書；同第２００３／００７８１６７号明細書。尚、これらの文献の開示内容は、その全文を参照として本明細書に組み込むものとする、本方法は、作物の安全性を高めるために、以下の除草剤薬害軽減剤と組み合わせた除草剤の使用を含んでよい：例えば、ベノキサコル、ＢＣＳ（１−ブロモ−４−［（クロロメチル）スルホニルｊベンゼン）、クロキントセト−メキシル、シトメトリニル、ジクロルミド、２−（ジクロロメチル）−２−メチル−１，３−ジオキソラン（ＭＧ １９１）、フェンクロラゾール−エチル、フェンクロリム、フルラゾール、フルキソフェニム、フリラゾール、イソキサジフェン−エチル、メフェンピル−ジエチル、メトキシフェノン（（４−メトキシ−３−メチルフェニル）（３−メチルフェニル）−メタノン）、ナフタル酸無水物（１，８−ナフタール酸無水物）、シプロスルファミド、Ｎ−（２−メトキシベンゾイル）−４−［（メチルアミノカルボニル）アミノ］ベンゼンスルファミド、及びオキサベトリニル。解毒剤として有効な量の除草剤薬害軽減剤を化合物と同時に適用するか、又は種子処理剤として、若しくは土壌に適用することができる。従って、本発明の一態様は、ＨＰＰＤ阻害剤除草剤、少なくとも一種の他の除草剤、及び解毒剤として有効な量の除草剤薬害軽減剤を含む混合物の使用に関する。
除草剤薬害軽減剤による種子の処理は、作物に対する解毒剤作用を物理的に制限することから、選択的雑草抑制のために特に有用である。従って、本発明の別の有用な態様は、圃場における雑草の成長を選択的に抑制する方法であり、この方法は、作物の種子を、雑草を抑制するのに有効な量の除草剤で処理するステップを含む。解毒剤として有効な量の薬害軽減剤は、当業者によって簡単な実験から決定することができる。解毒剤として有効な量の薬害軽減剤は、薬害軽減剤で処理しなかった植物に対する除草剤の効果と比較して、植物に対する除草剤の効果が低下するように、所望の植物を薬害軽減剤で処理する場合に存在し；一般に、解毒剤として有効な量の薬害軽減剤は、薬害軽減剤で処理した植物に対する薬害若しくは深刻な薬害を防止する。当業者は、薬害軽減剤の使用が適切であるか否かを決定して、作物に薬害軽減剤を投与すべき用量を決定することができる。
一実施形態では、ＳＹＨＴ０Ｈ２イベントを含む種子を処理する。考えられる種子処理剤の例として、以下の化学物質が挙げられるが、これらに限定されない：アラニカルブ、アルジカルブ、ベンジオカルブ、ベンフラカルブ、ブトカルボキシム、ブトキシカルボキシム、カルバリル、カルボフラン、カルボスルファン、エチオフェンカルブ、フェノブカルブ、ホルメタネート、フラチオカルブ、イソプロカルブ、メチオカルブ、メトミル、メトールカルブ、オキサミル、ピリミカルブ、プロポキスル、チオジカルブ、チオファノクス、トリアザマート、トリメタカルブ、ＸＭＣ、キシリルカルブ；アセフェート、アザメチホス、アジンホス−エチル、アジンホス−メチル、カズサホス、クロレトキシホス、クロルフェビンホス、クロルメホス、クロルピリホス、クロルピリホス−メチル、クマホス、シアノホス、デメトン−Ｓ−メチル、ジアジノン、ジクロルボス／ＤＤＶＰ、ジクロトホス、ジメトエート、ジメチルビンホス、ジスルホトン、ＥＰＮ、エチオン、エトプロホス、ファムフール、ファナミホス、フェニトロチオン、フェンチオン、ホスチアゼート、ヘプテノホス、イミシアホス、イソフェンホス、イソプロピルＯ−（メトキシアミノチオ−ホスホリル）サリチル酸塩、イソキサチオン、マラチオン、メカルバム、メタミドホス、メチダチオン、メビンホス、モノクロトホス、ナレド、オメトエート、オキシデメントン−メチル、パラチオン、パラチオン−メチル、フェントエート、ホレート、ホサロン、ホスメト、ホスファミドン、ホキシム、ピリミホス−メチル、プロフェノホス、プロペタンホス、プロチオホス、ピラクロホス、ピリダフェンチオン、キナルホス、スルホテプ、テブピリンホス、テメホス、テルブホス、テトラクロルビンホス、チオメトン、トリアゾホス、トリクロルホン、バミドチオン、シクロジエンオルガノクロリン、クロルダン、エンドスルファン；エチプロール、フィプロニル、アクリナトリン、アレトリン、ｄ−シス−トランスアレトリン、ｄ−トランスアレトリン、ビフェントリン、ビオアレトリン、ビオアレトリンＳ−シクロペンテニル異性体、ビオレスメトリン、シクロプロトリン、シフルトリン、β−シフルトリン、シハロトリン、λ−シハロトリン、γ−シハロトリン、シペルメトリン、α−シペルメトリン、β−シペルメトリン、θ−シペルメトリン、ζ−シペルメトリン、シフェノトリン［（１Ｒ）−トランス異性体］、デルタメトリン、エンペントリン［（ＥＺ）−（１Ｒ）異性体）、エスフェンバレレート、エトフェンプロクス、フェンプロパトリン、フェンバレレート、フルシトリネート、フルメトリン、τ−フルバリネート、ハルフェンプロクス、イミプロトリン、カデトリン、ペルメトリン、フェノトリン［（１Ｒ）−トランス異性体）、プラレトリン、ピレトリン（ジョチュウギク（ｐｙｒｅｔｈｒｕｍ））、レスメトリン、シラフルオフェン、テフルトリン、テトラメトリン、テトラメトリン［（１Ｒ）異性体）］、トラロメトリン、トランスフルトリン；ＤＤＴ；メトキシクロル、アセタミプリド、クロチアニジン、ジノテフラン、イミダクロピド、ニテンピラム、チアクロプリド、チアメトキサム；ニコチン、スピネトラム、スピノサド、アバメクチン、エマメクチン安息香酸塩、レピメクチン、ミルベメクチン、ヒドロプレン、キノプレン、メトプレン；フェノキシカルブ；ピリプロキシフェン、クロロピクリン；フッ化スルフリル；ホウ砂；吐酒石、ピメトロジン；フロニカミド、クロフェンテジン、ヘキリチアゾクス、ジフロビダジン、エトキサゾール、バチルス・チューリンゲンシス亜種イスラエレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｉｓｒａｅｌｅｎｓｉｓ）、バチルス・スファエリクス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）、バチルス・チューリンゲンシス亜種アイザワイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ａｉｚａｗａｉ）、バチルス・チューリンゲンシス亜種クルスタキ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｋｕｒｓｔａｋｉ）、バチルス・チューリンゲンシス亜種テネブリオニス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｔｅｎｅｂｒｉｏｎｉｓ）、ＢＴ穀類タンパク質：Ｃｒｙ１Ａｂ、Ｃｒｙ１Ａｃ、Ｃｒｙ１Ｆａ、Ｃｒｙ２Ａｂ、ｍＣｒｙ３Ａ、Ｃｒｙ３Ａｂ、Ｃｒｙ３Ｂｂ、Ｃｒｙ３４／３５Ａｂ１、ジアフェンチウロン、アゾシクロチン、シヘキサチン、酸化フェンブタスズ；プロパルギット、テトラジホン、クロルフェナピル、ＤＮＯＣ、スルフルラミド、ベンスルタプ、カルタップ塩酸塩、チオシクラム、チオスルタップ−ナトリウム、ビストリフルロン、クロルフルアズロン、ジフルベンズロン、フルシクロクスロン、フルフェノクスロン、ヘキサフルムロン、ルフェヌロン、ノバルロン、ノビフルムロン、テフルベズロン、トリフルムロン、ブプロフェジン、シロマジン、クロマフェノジド、ハロフェノジド、メトキシフェノジド、テブフェノジド、アミトラズ、ヒドラメチルノン；アセキノシル；フルアクリピリム、フェナザキン、フェンピロキシメート、ピリミジフェン、ピリダベン、テブフェンピラド、トルフェンピラド、ロテノン（デリス）、インドキサカルブ；メタフルミゾン、スピロジクロフェン、スピロメシフェン、スピロテトラマト、リン化アルミニウム、リン化カルシウム、ホスフィン、リン化亜鉛、シエノピラフェン、クロラントラニリプロール、フルベンジアミド、アミドフルメト、アザジラクチン、ベンクロチアズ、ベンゾキシメート、ビフェナゼート、ブロモプロピレート、キノメチオナート、氷晶石、シアントリニプロール（Ｃｙａｚｙｐｙｒ）、シフルメトフェン、ジコフォール、ジフロビダジン、フルエンスルホン、フルフェネリム、フルフィプロール、フルオピラム、フフェノジド、イミダクロチズ、イプロジオン、メペルフルトリン、ピリダリル、ピリフルキナゾン、テトラメチルフルトリン、ヨードメタン；バチルス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ）をベースとする製品（限定されないが、株ＣＮＣＭ Ｉ−１５８２、例えば、ＶＯＴｉＶＯ（商標）、ＢｉｏＮｅｍなど）；３−ブロモ−Ｎ−｛２−ブロモ−４−クロロ−６−［（１−シクロプロピルエチル）カルバモイル］フェニル｝−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボキサミド（国際公開第２００５／０７７９３４号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−ブロモピリジン−３−イル）メチル］（２−フルオロエチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第ＷＯ２００７／１１５６４４号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−フルオロピリジン−３−イル）メチル］（２，２−ジフルオロエチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４４から公知である）、４−｛［（２−クロロ−１，３−チアゾール−５−イル）メチル］（２−フルオロエチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４４号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−クロルピリジン−３−イル）メチル］（２−フルオロエチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４４号パンフレットから公知である）、フルピラジフロン、４−｛［（６−クロル−５−フルオロピリジン−３−イル）メチル］（メチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４３号パンフレットから公知である）、４−｛［（５，６−ジクロロピリジン−３−イル）メチル］（２−フルオロ-エチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４６号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−クロロ−５−フルオロピリジン−３−イル）メチル］−（シクロプロピル）−アミノ｝−フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４３号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］−（シクロプロピル）−アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（欧州特許出願公開第Ａ−０ ５３９ ５８８号明細書から公知である）、４−｛［（６−クロルピリジン−３−イル）−メチル］（メチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（欧州特許出願公開第Ａ−０ ５３９ ５８８号明細書から公知である）、｛［１−（６−クロロピリジン−３−イル）エチル］（メチル）オキシド−λ4−スルファニリデン｝シアンアミド（国際公開第２００７／１４９１３４号パンフレットから公知である）並びにそのジアステレオマー｛［（１Ｒ）−１−（６−クロロピリジン−３−イル）エチル］（メチル）オキシド−λ4−スルファニリデン｝シアンアミド（Ａ）及び｛［（１Ｓ）−１−（６−クロロピリジン−３−イル）エチル］（メチル）オキシド−λ4−スルファニリデン｝シアンアミド（Ｂ）（これも、国際公開第２００７／１４９１３４号パンフレットから公知である）、さらには、スルホキサフロール及びそのジアステレオマー［（Ｒ）−メチル（オキシド）｛（１Ｒ）−１−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］エチル｝−λ4−スルファニリデン］シアンアミド（Ａ１）及び［（Ｓ）−メチル（オキシド）｛（１Ｓ）−１−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］エチル｝−λ4−スルファニリデン］シアンアミド（Ａ２）（ジアステレオマーＡ群と呼ばれる）（国際公開第２０１０／０７４７４７号パンフレット、国際公開第２０１０／０７４７５１号パンフレットから公知である）、［（Ｒ）−メチル（オキシド）｛（１Ｓ）−１−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］エチル｝−λ4−スルファニリデン］シアンアミド（Ｂ１）及び［（Ｓ）−メチル（オキシド）｛（１Ｓ）−１−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］エチル｝−λ4−スルファニリデン］シアンアミド（Ｂ２）（ジアステレオマーＢ群と呼ばれる）（これもまた、国際公開第２０１０／０７４７４７号パンフレット、国際公開第２０１０／０７４７５１号パンフレットから公知である）、並びに１１−（４−クロロ−２，６−ジメチルフェニル）−１２−ヒドロキシ−１，４−ジオキサ−９−アザジスピロ［４．２．４．２］テトラデク−１１−エン−１０−オン（国際公開第２００６／０８９６３３号パンフレットから公知である）、３−（４’−フルオロ−２，４−ジメチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デク−３−エン−２−オン（国際公開第２００８／０６７９１１号パンフレットから公知である）、１−｛２−フルオロ−４−メチル−５−［（２，２，２−トリフルオルエチル）スルフィニル］フェニル｝−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−アミン（国際公開第２００６／０４３６３５号パンフレットから公知である）、［（３Ｓ，４ａＲ，１２Ｒ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−３−［（シクロプロピルカルボニル）オキシ］−６，１２−ジヒドロキシ−４，１２ｂ−ジメチル−１１−オキソ−９−（ピリジン−３−イル）−１，３，４，４ａ，５，６，６ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−デカヒドロ−２Ｈ，１１Ｈ−ベンゾ［ｆ］−ピラノ［４，３−ｂ］クロメン−４−イル］メチルシクロプロパンカルボキシレート（国際公開第２００８／０６６１５３号パンフレットから公知である）、２−シアノ−３−（ジフルオロメトキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルベンゼン-スルホンアミド（国際公開第２００６／０５６４３３号パンフレットから公知である）、２−シアノ−３−（ジフルオロメトキシ）−Ｎ−メチルベンゼン-スルホンアミド（国際公開第２００６／１００２８８号パンフレットから公知である）、２−シアノ−３−（ジフルオロメトキシ）−Ｎ−エチルベンゼン-スルホンアミド（国際公開第２００５／０３５４８６号パンフレットから公知である）、４−（ジフルオロメトキシ）−Ｎ−エチル−Ｎ−メチル−１，２−ベンゾチアゾール−３−アミン１，１−ジオキシド（国際公開第２００７／０５７４０７号パンフレットか
ら公知である）、Ｎ−［１−（２，３−ジメチルフェニル）−２−（３，５−ジメチルフェニル）エチル］−４，５−ジヒドロ−１，３−チアゾール−２−アミン（国際公開第２００８／１０４５０３号パンフレットから公知である）、｛１’−［（２Ｅ）−３−（４−クロロフェニル）プロプ−２−エン−１−イル］−５−フルオロスピロ［インドール−３，４’−ピペリジン］−１（２Ｈ）−イル｝（２−クロロ-ピリジン−４−イル）-メタノン（国際公開第２００３／１０６４５７号パンフレットから公知である）、３−（２，５−ジメチルフェニル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−１，８−ジアザスピロ［４．５］デク−３−エン−２−オン（国際公開第２００９／０４９８５１号パンフレットから公知である）、３−（２，５−ジメチルフェニル）−８−メトキシ−２−オキソ−１，８−ジアザスピロ［４．５］デク−３−エン−４−イルエチル炭酸塩（国際公開第２００９／０４９８５１号パンフレットから公知である）、４−（ブト−２−イン−１−イルオキシ）−６−（３，５−ジメチルピペリジン−１−イル）−５−フルオロピリミジン（国際公開第２００４／０９９１６０号パンフレットから公知である）、（２，２，３，３，４，４，５，５−オクタフルオロペンチル）（３，３，３−トリフルオロプロピル）マロノニトリル（国際公開第２００５／０６３０９４号パンフレットから公知である）、（２，２，３，３，４，４，５，５−オクタフルオロペンチル）（３，３，４，４，４−ペンタフルオロ-ブチル）マロノニトリル（国際公開第２００５／０６３０９４号パンフレットから公知である）、８−［２−（シクロプロピルメトキシ）−４−（トリフルオロ-メチル）フェノキシ］−３−［６−（トリフルオロメチル）−ピリダジン−３−イル］−３−アザビシクロ［３．２．１］オクタン（国際公開第２００７／０４０２８０号パンフレットから公知である）、フロメトキン、ＰＥ１３６４（ＣＡＳ−Ｒｅｇ．Ｎｏ．１２０４７７６−６０−２）（特開２０１０−０１８５８６号公報から公知である）、５−［５−（３，５−ジクロロフェニル）−５−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ベンゾニトリル（国際公開第２００７／０７５４５９号パンフレットから公知である）、５−［５−（２−クロロピリジン−４−イル）−５−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ベンゾニトリル（国際公開第２００７／０７５４５９号パンフレットから公知である）、４−［５−（３，５−ジクロロフェニル）−５−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−２−メチル−Ｎ−｛２−オキソ−２−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−エチル｝ベンズアミド（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］−（シクロプロピル）アミノ｝−１，３−オキサゾール−２（５Ｈ）−オン、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］（２，２−ジフルオロエチル）−アミノ｝−１，３−オキサゾール−２（５Ｈ）−オン、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］（エチル）-アミノ｝−１，３−オキサゾール−２（５Ｈ）−オン、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］（メチル）アミノ｝−１，３−オキサゾール−２（５Ｈ）−オン（すべて、国際公開第２０１０／００５６９２号パンフレットから公知である）、ＮＮＩ−０７１１（国際公開第２００２／０９６８８２号パンフレットから公知である）、１−アセチル−Ｎ−［４−（１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−メトキシプロパン−２−イル）−３−イソブチルフェニル］−Ｎ−イソブチリル−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド（国際公開第２００２／０９６８８２号パンフレットから公知である）、メチル２−［２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝アミノ）−５−クロロ−３−メチルベンゾイル］−２−メチル-ヒドラジン-カルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、メチル２−［２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝アミノ）−５−シアノ−３−メチルベンゾイル］−２−エチルヒドラジンカルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、メチル２−［２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝−アミノ）−５−シアノ−３−メチルベンゾイル］−２−メチルヒドラジンカルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、メチル２−［３，５−ジブロモ−２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝アミノ）−ベンゾイル］−１，２−ジエチルヒドラジンカルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、メチル２−［３，５−ジブロモ−２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝アミノ）ベンゾイル］−２−エチルヒドラジン−カルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、（５ＲＳ，７ＲＳ；５ＲＳ，７ＳＲ）−１−（６−クロロ−３−ピリジルメチル）−１，２，３，５，６，７−ヘキサヒドロ−７−メチル−８−ニトロ−５−プロポキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン（国際公開第２００７／１０１３６９号パンフレットから公知である）、Ｎ−［２−（５−アミノ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−４−クロロ−６−メチルフェニル］−３−ブロモ−１−（３−クロロ−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボキサミド（ＣＮ１０２０５７９２５から公知である）、並びにメチル２−［３，５−ジブロモ−２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝アミノ）ベンゾイル］−２−エチル−１−メチルヒドラジンカルボキシレート（国際公開第２０１１／０４９２３３号パンフレットから公知である）、アルジモルフ、アザコナゾール、ビテルタノール、ブロムコナゾール、シプロコナゾール、ジクロブトラゾール、ジフェノコナゾール、ジニコナゾール、ジニコナゾール−Ｍ、ドデモルフ、酢酸ドデモルフ、エポキシコナゾール、エタコナゾール、フェナリモール、フェンブコナゾール、フェンヘキサミド、フェンプロピジン、フェンプロピモルフ、フルキノコナゾール、フルルプリミドール、フルシラゾール、フルトリアフォール、フルコナゾール、フルコナゾール−シス、ヘキサコナゾール、イマザリル、硫酸イマザリル、イミベンコナゾール、イプコナゾール、メトコナゾール、ミクロブタニル、ナフチフィン、ヌアリモール、オキスポコナゾール、パクロブトラゾール、ペフラゾエート、ペンコナゾール、ピペラリン、プロクロラズ、プロピコナゾール、プロチオコナゾール、ピリブチカルブ、ピリフェノクス、キンコナゾール、シメコナゾール、スピロキサミン、テブコナゾール、テルビナフィン、テトラコナゾール、トリアジメホン、トリアジメノール、トリデモルフ、トリフルミゾール、トリホリン、トリチコナゾール、ウニコナゾール、ウニコナゾール−ｐ、ビニコナゾール、ボリコナゾール、１−（４−クロロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）シクロへプタノール、メチル１−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボキシレート、Ｎ’−｛５−（ジフルオロメチル）−２−メチル−４−［３−（トリメチルシリル）プロポキシ］フェニル｝−Ｎ−エチル−Ｎ−メチルイミドホルムアミド、Ｎ−エチル−Ｎ−メチル−Ｎ’−｛２−メチル−５−（トリフルオロ-メチル）−４−［３−（トリメチルシリル）プロポキシ］フェニル｝イミドホルムアミド、Ｏ−［１−（４−メトキシフェノキシ）−３，３−ジメチルブタン−２−イル］１Ｈ−イミダゾール−１−カルボチオエート、ビキサフェン、ボスカリド、カルボキシン、ジフルメトリム、フェンフラム、フルピラム、フルトラニル、フルキサピロキサド、フラメトピル、フルメシクロクス、イソピラザム（ｓｙｎ−エピマーラセミ体１ＲＳ、４ＳＲ、９ＲＳ及び抗エピマーラセミ体１ＲＳ、４ＳＲ、９ＳＲの混合物）、イソピラザム（抗エピマーラセミ体１ＲＳ、４ＳＲ、９ＳＲの混合物）、イソピラザム（抗エピマー鏡像体１Ｒ、４Ｓ、９Ｓの混合物）、イソピラザム（抗エピマー鏡像体１Ｓ、４Ｒ、９Ｒの混合物）、イソピラザム（ｓｙｎエピマーラセミ体１ＲＳ、４ＳＲ、９ＲＳ）、イソピラザム（ｓｙｎ−エピマー鏡像体１Ｒ、４Ｓ，９Ｒ）、イソピラザム（ｓｙｎ−エピマー鏡像体１Ｓ、４Ｒ、９Ｓ）、メプトニル、オキシカルボキシン、ペンフルフェン、ペンチオピラド、セダキサン、チフルザミド、１−メチル−Ｎ−［２−（１，１，２，２−テトラフルオロエトキシ）フェニル］−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−Ｎ−［２−（１，１，２，２−テトラフルオロエトキシ）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−Ｎ−［４−フルオロ−２−（１，１，２，３，３，３−ヘキサフルオロプロポキシ）フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−［１−（２，４−ジクロロフェニル）−１−メトキシプロパン−２−イル］−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、５，８−ジフルオロ−Ｎ−［２−（２−フルオロ−４−｛［４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝フェニル）エチル］キナゾリン−４−アミン、Ｎ−［９−（ジクロロメチレン）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，４−メタノナフタレン−５−イル］−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−［（１Ｓ，４Ｒ）−９−（ジクロロメチレン）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，４−メタノナフタレン−５−イル］−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−［（１Ｒ，４Ｓ）−９−（ジクロロメチレン）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，４−メタノナフタレン−５−イル］−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、アメトクラジン、アミスルボム、アゾキシストロビン、シアゾファミド、クメトキシストロビン、クモキシストロビン、ジモキシストロビン、エネストロブリン、ファモキサドン、フェナミドン、フェノキシストロビン、フルオキサストロビン、クレソキシム−メチル、メトミノストロビン、オリサストロビン、ピコキシストロビン、ピラクロストロビン、ピラメトストロビン、ピラオキシストロビン、ピリベンカルブ、トリクロピリカルブ、トリフロキシストロビン、（２Ｅ）−２−（２−｛［６−（３−クロロ−２−メチルフェノキシ）−５−フルオロピリミジン−４−イル］オキシ｝フェニル）−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチルエタンアミド、（２Ｅ）−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチル−２−（２−｛［（｛（１Ｅ）−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチリデン｝アミノ）オキシ］メチル｝フェニル）エタンアミド、（２Ｅ）−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチル−２−｛２−［（Ｅ）−（｛１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ｝イミノ）メチル］フェニル｝エタンアミド、（２Ｅ）−２−｛２−［（｛［（１Ｅ）−１−（３−｛［（Ｅ）−１−フルオロ−２−フェニルエテニル］オキシ｝フェニル）エチリデン］アミノ｝オキシ）メチル］フェニル｝−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチルエタンアミド、（２Ｅ）−
２−｛２−［（｛［（２Ｅ，３Ｅ）−４−（２，６−ジクロロフェニル）ブト−３−エン−２−イリデン］アミノ｝オキシ）メチル］フェニル｝−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチルエタンアミド、２−クロロ−Ｎ−（１，１，３−トリメチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−４−イル）ピリジン−３−カルボキサミド、５−メトキシ−２−メチル−４−（２−｛［（｛（１Ｅ）−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチリデン｝アミノ）オキシ］メチル｝フェニル）−２，４−ジヒドロ−３Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−オン、メチル（２Ｅ）−２−｛２−［（｛シクロプロピル［（４−メトキシフェニル）イミノ］メチル｝スルファニル）メチル］フェニル｝−３−メトキシプロプ−２−エノエート、Ｎ−（３−エチル−３，５，５−トリメチルシクロヘキシル）−３−（ホルミルアミノ）−２−ヒドロキシベンズアミド、２−｛２−［（２，５−ジメチルフェノキシ）メチル］フェニル｝−２−メトキシ−Ｎ−メチルアセトアミド、（２Ｒ）−２−｛２−［（２，５−ジメチルフェノキシ）メチル］フェニル｝−２−メトキシ−Ｎ−メチルアセトアミド、ベノミル、カルベンダジム、クロルフェナゾール、ジエトフェンカルブ、エタボキサム、フルオピコリド、フベリダゾール、ペンシクロン、チアベンダゾール、チオファネートメチル、チオファネート、ゾキサミド、５−クロロ−７−（４−メチルピペリジン−１−イル）−６−（２，４，６−トリフルオロフェニル）［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン、３−クロロ−５−（６−クロロピリジン−３−イル）−６−メチル−４−（２，４，６−トリフルオロフェニル）ピリダジン、ボルドー液、キャプタホール、キャプタン、クロロタロニル、水酸化銅、ナフテン酸銅、酸化第一銅、塩基性塩化銅、硫酸銅（ＩＩ）、ジクロフルアニド、ジチアノン、ドジン、ドジンフリーベース、フェルバム、フルオフォルペット、フォルペット、グアザチン、酢酸グアザチン、イミノクタジン、イミノクタジンアルベシル酸塩、イミノクタジン三酢酸塩、マンカッパー、マンコゼブ、マネブ、メチラム、メチラム亜鉛、オキシン銅、プロパミジン、プロピネブ、イオウ、多硫化カルシウムなどのイオウ製剤、チラム、トリルフルアニド、ジネブ、ジラム、アシベンゾラルＳメチル、イソチアニル、プロベナゾール、チアジニル、アンドプリム、ブラスチシジン−Ｓ、シプロジニル、カスガマイシン、カスガマイシン塩酸塩、メパニピリム、ピリメタニル、３−（５−フルオロ−３，３，４，４−テトラメチル−３，４−ジヒドロイソキノリン−１−イル）キノリン、酢酸フェンチン、塩化フェンチン、水酸化フェンチン、シルチオファム、ベンチアバリカルブ、ジメトモルフ、フルモルフ、イプロバリカルブ、マンジプロパミド、ポリオキシン、ポリオキソリム、バリダマイシンＡ、バリフェナレート、ビフェニル、クロロネブ、ジクロラン、エジフェンホス、エトリジアゾール、ヨードカルブ、イプロベンホス、イソプロチオラン、プロパモカルブ、プロパモカルブ塩酸塩、プロチオカルブ、ピラゾホス、キントゼン、テクナゼントルクロホス−メチル、カルプロパミド、ジクロシメト、フェノキサニル、フタリド、ピロキロン、トリシクラゾール、２，２，２−トリフルオロエチル｛３−メチル−１−［（４−メチルベンゾイル）アミノ］ブタン−２−イル｝カルバメート、ベナラキシル、ベナラキシル−Ｍ（キララキシル）、ブピリメート、クロジラコン、ジメチリモール、エチリモール、フララキシル、ヒメキサゾール、メタラキシル、メタラキシル−Ｍ（メフェノキサム）、オフラセ、オキサジキシル、オキソリン酸、クロゾリネート、フェンピクロニル、フルジオキソニル、イプロジオン、プロシミドン、キノキシフェン、ビンクロゾリル、ビナパクリル、ジノカップ、フェリムゾン、フルアジナム、メプチルジノカップ、ベンチアゾール、ベトキサジン、カプシマイシン、カルボン、チノメチオナト、ピリオフェノン（クラザフェノン）、クフラネブ、シフルフェナミド、シモキサニル、シプロスルファミド、ダゾメト、デバカルブ、ジクロロフェン、ジクロメジン、ジフェンゾコート、メチル硫酸ジフェンゾコート、ジフェニルアミン、エコメート、フェンピラザミン、フルメトベル、フルオロイミド、フルスルファミド、フルチアニル、ホセチル−アルミニウム、ホセチル−カルシウム、ホセチル−ナトリウム、ヘキサクロロベンゼン、イルママイシン、メタスルホカルブ、メチルイソチオシアネート、メトラフェノン、ミルジオマイシン、ナタマイシン、ニッケルジメチルジチオカルバメート、ニトロタール−イソプロピル、オクチリノン、オキサノカルブ、オキシフェンチン、ペンタクロロフェノール及びその塩、フェノトリン、リン酸及びその塩、プロパモカルブ−ホセチレート、プロパノシン−ナトリウム、プロキナジド、ピリモルフ、（２Ｅ）−３−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−３−（２−クロロピリジン−４−イル）−１−（モルホリン−４−イル）プロプ−２−エン−１−オン、（２Ｚ）−３−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−３−（２−クロロピリジン−４−イル）−１−（モルホリン−４−イル）プロプ−２−エン−１−オン、ピロールニトリン、テブフロキン、テクトフタラム、トルニファニド、トリアゾキシド、トリクラミド、ザリラミド、（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−ベンジル−３−［（｛３−［（イソブチリルオキシ）メトキシ］−４−メトキシピリジン−２−イル｝カルボニル）アミノ］−６−メチル−４，９−ジオキソ−１，５−ジオキソナン−７−イル２−メチルプロパノエート、１−（４−｛４−［（５Ｒ）−５−（２，６−ジフルオロフェニル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピペリジン−１−イル）−２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］エタノン、１−（４−｛４−［（５Ｓ）−５−（２，６−ジフルオロフェニル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピペリジン−１−イル）−２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］エタノン、１−（４−｛４−［５−（２，６−ジフルオロフェニル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピペリジン−１−イル）−２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］エタノン、１−（４−メトキシフェノキシ）−３，３−ジメチルブタン−２−イル１Ｈ−イミダゾール−１−カルボキシレート、２，３，５，６−テトラクロロ−４−（メチルスルホニル）ピリジン、２，３−ジブチル−６−クロロチエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、２，６−ジメチル−１Ｈ，５Ｈ−［１，４］ジチイノ［２，３−ｃ：５，６−ｃ’］ジピロール−１，３，５，７（２Ｈ，６Ｈ）−テトロン、２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−１−（４−｛４−［（５Ｒ）−５−フェニル−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピペリジン−１−イル）エタノン、２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−１−（４−｛４−［（５Ｓ）−５−フェニル−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピペリジン−１−イル）エタノン、２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−１−｛４−［４−（５−フェニル−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル）−１，３−チアゾール−２−イル］ピペリジン−１−イル｝エタノン、２−ブトキシ−６−ヨード−３−プロピル−４Ｈ−クロメン−４−オン、２−クロロ−５−［２−クロロ−１−（２，６−ジフルオロ−４−メトキシフェニル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］ピリジン、２−フェニルフェノール及びその塩、３−（４，４，５−トリフルオロ−３，３−ジメチル−３，４−ジヒドロイソキノリン−１−イル）キノリン、３，４，５−トリクロロピリジン−２，６−ジカルボニトリル、３−［５−（４−クロロフェニル）−２，３−ジメチル−１，２−オキサゾリジン−３−イル］ピリジン、３−クロロ−５−（４−クロロフェニル）−４−（２，６−ジフルオロフェニル）−６−メチルピリダジン、４−（４−クロロフェニル）−５−（２，６−ジフルオロ-フェニル）−３，６−ジメチルピリダジン、５−アミノ−１，３，４−チアジアゾール−２−チオール、５−クロロ−Ｎ’−フェニル−Ｎ’−（プロプ−２−イン−１−イル）チオフェン−２−スルホノヒドラジド、５−フルオロ−２−［（４−フルオロベンジル）オキシ］ピリミジン−４−アミン、５−フルオロ−２−［（４−メチルベンジル）オキシ］ピリミジン−４−アミン、５−メチル−６−オクチ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミン、エチル（２Ｚ）−３−アミノ−２−シアノ−３−フェニルプロプ−２−エノエート、Ｎ’−（４−｛［３−（４−クロロベンジル）−１，２，４−チアジアゾール−５−イル］オキシ｝−２，５−ジメチルフェニル）−Ｎ−エチル−Ｎ−メチルイミドホルムアミド、Ｎ−（４−クロロベンジル）−３−［３−メトキシ−４−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）フェニル］プロパンアミド、Ｎ−［（４−クロロフェニル）（シアノ）メチル］−３−［３−メトキシ−４−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）フェニル］プロパンアミド、Ｎ−［（５−ブロモ−３−クロロピリジン−２−イル）メチル］−２，４−ジクロロピリジン−３−カルボキサミド、Ｎ−［１−（５−ブロモ−３−クロロピリジン−２−イル）エチル］−２，４−ジクロロ-ピリジン−３−カルボキサミド、Ｎ−［１−（５−ブロモ−３−クロロピリジン−２−イル）エチル］−２−フルオロ−４−ヨードピリジン−３−カルボキサミド、Ｎ−｛（Ｅ）−［（シクロプロピルメトキシ）イミノ］［６−（ジフルオロメトキシ）−２，３−ジフルオロフェニル］メチル｝−２−フェニルアセトアミド、Ｎ−｛（Ｚ）−［（シクロプロピルメトキシ）イミノ］［６−（ジフルオロメトキシ）−２，３−ジフルオロフェニル］メチル｝−２−フェニルアセトアミド、Ｎ’−｛４−［（３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−シアノ−１，２−チアゾール−５−イル）オキシ］−２−クロロ−５−メチルフェニル｝−Ｎ−エチル−Ｎ−メチルイミドホルムアミド、Ｎ−メチル−２−（１−｛［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アセチル｝ピペリジン−４−イル）−Ｎ−（１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）−１，３−チアゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−メチル−２−（１−｛［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アセチル｝ピペリジン−４−イル）−Ｎ−［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル］−１，３−チアゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−メチル−２−（１−｛［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アセチル｝ピペリジン−４−イル）−Ｎ−［（１Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル］−１，３−チアゾール−４−カルボキサミド、ペンチル｛６−［（｛［（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）（フェニル）-メチリデン］-アミノ｝オキシ）メチル］ピリジン−２−イル｝カルバメート、フェナジン−１−カルボン酸、キノリン−８−オル、キノリン−８−オル硫酸塩（２：１）、ｔｅｒｔ−ブチル｛６−［（｛［（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）（フェニル）メチレン］アミノ｝オキシ）メチル］ピリジン−２−イル｝カルバメート、１−メチル−３−（トリフルオロメチル）−Ｎ−［２’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（４’−クロロビフェニル−２−イル）−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（２’，４’−ジクロ
ロビフェニル−２−イル）−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−Ｎ−［４’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（２’，５’−ジフルオロビフェニル−２−イル）−１−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−Ｎ−［４’−（プロプ−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、５−フルオロ−１，３−ジメチル−Ｎ−［４’−（プロプ−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−［４’−（プロプ−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］ピリジン−３−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−Ｎ−［４’−（３，３−ジメチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−［４’−（３，３−ジメチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−５−フルオロ−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−Ｎ−（４’−エチニルビフェニル−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（４’−エチニルビフェニル−２−イル）−５−フルオロ−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−（４’−エチニルビフェニル−２−イル）ピリジン−３−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−［４’−（３，３−ジメチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］ピリジン−３−カルボキサミド、４−（ジフルオロメチル）−２−メチル−Ｎ−［４’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−２−イル］−１，３−トリアゾール−５−カルボキサミド、５−フルオロ−Ｎ−［４’−（３−ヒドロキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−［４’−（３−ヒドロキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］ピリジン−３−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−Ｎ−［４’−（３−メトキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、５−フルオロ−Ｎ−［４’−（３−メトキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−［４’−（３−メトキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］ピリジン−３−カルボキサミド、（５−ブロモ−２−メトキシ−４−メチルピリジン−３−イル）（２，３，４−トリメトキシ−６−メチルフェニル）メタノン、Ｎ−［２−（４−｛［３−（４−クロロフェニル）プロプ−２−イン−１−イル］オキシ｝−３−メトキシフェニル）エチル］−Ｎ２−（メチルスルホニル）バリンアミド、４−オキソ−４−［（２−フェニルエチル）アミノ］ブタン酸、ブト−３−イン−１−イル｛６−［（｛［（Ｚ）−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）（フェニル）メチレン］アミノ｝オキシ）メチル］ピリジン−２−イル｝カルバメート。
本発明の別の態様では、ＳＹＨＴ０Ｈ２植物に適用される除草剤又は除草剤の組合せは、薬害軽減剤として作用する。例えば、第１除草剤又は除草剤混合物は、解毒剤として有効な量で、植物に適用する。例えば、本方法は、植物において活性のプロモーターに機能的に連結した、ＨＰＰＤ阻害剤除草剤に対する耐性を賦与しうるポリペプチドをエンコードする第１ポリヌクレオチドと；植物において活性のプロモーターに機能的に連結した、除草剤耐性を賦与するポリペプチドをエンコードする第２ポリヌクレオチドとを含む作物種子又は植物を栽培地に作付けするステップを含むことができる。少なくとも有効量の第１及び第２除草剤を含む除草剤の組合せを、作物、作物部分、雑草、又は栽培地に適用する。有効量の除草剤組合せが、雑草を抑制するが；有効量の第１除草剤は、第１除草剤に暴露されていない対照作物と比較して、単独で適用されると、この除草剤に対し作物は耐性ではなく；有効量の第２除草剤は、薬害軽減効果を生み出すのに十分なものあり、その薬害軽減効果により、第１除草剤が単独で適用された場合の作物耐性と比較して、第１及び第２除草剤を適用すると、作物耐性が増大する。
本発明の特定の態様では、薬害軽減除草剤の組合せは、第１ＨＰＰＤ阻害剤及び第２ＨＰＰＤ阻害剤を含む。本発明の別の態様では、薬害軽減効果は、有効量のＨＰＰＤ阻害剤及び少なくとも１種の別の除草剤の組合せを適用することによって達成される。このような混合物は、作物耐性の増大（すなわち、除草剤による損傷の低減）をもたらす。この方法によって、処理後又は処理前の化学作用の適用速度の増加が可能になる。
本発明の別の態様では、エンバク（Ａｖｅｎａ ｓａｖｉｔａ）ＨＰＰＤ以外の異種核酸の標的挿入のための部位（ＳＹＨＴ０Ｈ２と同じ部位である）が提供される。実施例５及び６を参照されたい。
本発明のさらに別の態様では、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２を含むダイズ植物の種子及びそのダイズ植物の様々な部分をヒト用の食品、家畜用飼料、並びに工業用原材料に使用することができる。ダイズ種子を粉砕して、又はダイズ種子の成分を抽出して、食品又は飼料製品に含有させることもできる。
ダイズは、世界の主要な植物油及びタンパク質ミール供給源である。ダイズから抽出された油は、料理油、マーガリン、及びサラダドレッシングに用いられる。ダイズ油は、飽和、モノ不飽和及び高不飽和脂肪酸から構成される。これは、含有率１１％パルミチン脂肪酸、４％ステアリン脂肪酸、２５％オレイン脂肪酸、５０％リノール脂肪酸及び９％リノレン脂肪酸の典型的組成を有する（“Ｅｃｏｎｏｍｉｃ Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｓｏｙｂｅａｎ Ｔｒａｉｔｓ Ｓｕｍｍａｒｙ Ｒｅｐｏｒｔ”，Ｉｏｗａ Ｓｏｙｂｅａｎ Ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ Ｂｏａｒｄ ａｎｄ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｙｂｅａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｓｐｅｃｉａｌ Ｒｅｐｏｒｔ ９２Ｓ，Ｍａｙ １９９０）。酸化安定性及び栄養の改善のために、脂肪酸組成の改変が絶えず求められている。さらなる加工に付されるダイズ油の工業用途としては、塗料、プラスチック、繊維、洗剤、化粧品、潤滑剤及びバイオディーゼル燃料の成分がある。ダイズ油は、分解、エステル交換、イオウ処理、エポキシ化、重合、エトキシル化、又は開裂されうる。改善された機能性及び油脂化学を有するダイズ油誘導体の設計及び生産は急速に成長している分野である。トリグリセリドの典型的混合物は、通常、分解して、純粋な脂肪酸に分離した後、石油由来のアルコール若しくは酸、窒素、スルホン酸塩、塩素、又は脂肪及び油由来の脂肪アルコールと組み合わせる。
ダイズはまた、動物及びヒトの両方の食料源としても用いられている。ダイズは、家禽、ブタ及び畜牛のタンパク源として広く用いられている。全ダイズの加工時に、繊維質の外皮が除去され、油が抽出される。残ったダイズミールは、炭水化物と約５０％のタンパク質の組合せである。
ヒトの消費のために、ダイズミールは、ダイズ粉に製造された後、食肉増量剤又は専用ペットフードに用いられるタンパク質濃縮物に加工される。ダイズからの食用タンパク質材料の生産により、食肉及び乳製品中の動物タンパク質に対する、より健康的で、より安価な代替品が提供される。
上記の製品の生産工程は、例えば、以下のように実施される：（ｉ）ダイズが含有する水分がわずか９％になるまで、ダイズを８２℃まで加熱し；（ｉｉ）バレル中に２４〜７２時間静置し；（ｉｉｉ）ダイズを粉砕して、鞘部を除去することにより、残留物が、もとのダイズの１／４〜１／８になるようにし；（ｉｖ）吸気により鞘部を除去し；（ｖ）残留物を７１℃で２０〜３０分加熱し；（ｖｉ）残留物をプレスして、厚さが１．２〜１．６ミリメートルの小さなフレークにし；（ｖｉｉ）機械圧力及び蒸気を用いて処理することにより「コレット」を形成し；（ｖｉｉｉ）ヘキサンで洗浄することにより、脂肪を希釈し；（ｉｘ）１００℃で２０分加熱することにより、脂肪を蒸発させ（回収した脂肪から、ダイズ油を生産する）；（ｘ）さらに加熱して、ヘキサンを除去し；（ｘｉ）コレットを２〜４ミリメートルに分けてプレスすることにより、ダイズミールを生産するか、又は飼料用ダイズ粕にプレスする。
本発明の態様を以下の実施例においてさらに説明する。これらの実施例が、あくまで例示として与えられることは理解すべきである。前述の記載及びこれらの実施例から、当業者であれば、本発明の本質的な特徴を確認し、また、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、本発明の態様の様々な変更及び改変を行って、様々な用法及び条件に本発明を適合させることができるであろう。従って、本明細書に説明し、記載したものに加えて、本発明の態様の様々な改変が、前述の記載から当業者には明らかであろう。このような改変も添付の特許請求の範囲に含まれるものとする。
組合せ及び適用
以下の表は、以下を含むＳＹＨＴ０Ｈ２と交配させることが考えられる育種積層の例（ｉ）既知のトランスジェニックイベント（表２参照）、（ｉｉ）ＳＹＨＴ０Ｈ２に遺伝子的に組み込むことができる特徴の可能な組合せ又は（ｉｉｉ）新規のトランスジェニックイベントに遺伝子的に組み込んだ後、ＳＹＨＴ０Ｈ２と交配させたもの（表３参照）、並びにこのような積層への使用が考えられる除草剤の組合せを示す。（表２および３を参照）
この組合せのいずれについても、以下のことが常に可能である：（ｉ）ＨＰＰＤ阻害剤のみ（例えば、２５〜５００ｇ／ｈａのスルコトリオン、２５〜２５０ｇ／ｈａのメソトリオン、２５〜２５０ｇ／ｈａのビシクロピロン、２５〜２５０ｇ／ｈａのイソキサフルトール、２５〜２５０ｇ／ｈａのテンボトリオン、５〜２５０ｇ／ｈａのトプラメゾン）、５〜２５０ｇ／ｈａのピラスルファトールを使用すること、（ｉｉ）タンク混合の形態の組合せを用いること、及び／又は（ｉｉｉ）後の適用の形態で適用を実施すること。この意味で、以下の表に示す「＋」は、植物の同じ圃場に対する表示除草剤の任意の適用を意味する。これには、混合物及び後の適用の両方が含まれるが、適用の時間及び順序は変わりうる。
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表は、例として記載するに過ぎない。ＳＹＨＴ０Ｈ２と一緒に、又はＳＹＨＴ０Ｈ２に遺伝子的に組み込んだ育種積層に含ませることが考えられる特徴としては、限定されないが、以下をエンコードする特徴が挙げられ：グリホサート耐性（例えば、抵抗性植物又は細菌ＥＰＳＰＳ、ＧＯＸ、ＧＡＴ）、グルホシネート抵抗性（例えば、ＰＡＴ、ＢＡＲ）、アセトラクテートシンターゼ（ＡＬＳ）阻害除草剤抵抗性（例えば、イミダゾリノン［イマゼタピルなど］、スルホニル尿素、トリアゾロピリミジンスルホナニリド、ピリルミジニルチオベンゾエート、及びその他の化学物質）、ブロモキシニル抵抗性（例えば、Ｂｘｎ）、ＨＰＰＤ（例えば、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、エンバク（Ａｖｅｎａ ｓａｔｉｖａ）由来の４−ヒドロキシルフェニル−ピルビン酸−ジオキシゲナーゼ）酵素の阻害剤に対する抵抗性、フィトエンデサチュラーゼの阻害剤に対する抵抗性（ＰＤＳ）、光学系ＩＩ阻害除草剤（例えば、ｐｓｂＡ）に対する抵抗性、光学系Ｉ阻害除草剤に対する抵抗性、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼＩＸ（ＰＰＯ）阻害除草剤（例えば、ホメサフェン、アシルフルオフェン−ナトリウム、オキシフルオルフェン、ラクトフェン、フルチアセト−メチル、サフルフェナシル、フルミオキサジン、フルミクロラク−ペンチル、カルフェントラゾン−エチル、スルフェントラゾン）に対する抵抗性、フェニル尿素除草剤（例えば、ＣＹＰ７６Ｂ１）に対する抵抗性、２，４−Ｄ抵抗性（例えば、アリールオキシアルカノエートジオキシゲナーゼ又はｔｆｄＡ、ＡＡＤ−１、ＡＡＤ−１２、又はＡＡＤ−１３）、ホモゲンチジン酸ソランシルトランスフェラーゼ（例えば、ＨＳＴ）ジカンバ分解酵素（例えば、ＤＭＯ）、またさらに、上記以外のものを単独で、又は複数の組合せで、積層することにより、雑草シフトを有効に抑制又は予防する能力及び／又は前述したクラスのあらゆる除草剤に対する抵抗性を賦与することができる。
上に個別に挙げた除草剤組成物は、以下からなる群から選択される１種以上のダイズ選択的除草剤をさらに含んでもよい：アセトクロル、アシフルオルフェン、アシフルオルフェン−ナトリウム、アクロニフェン、アラクロル、アリドクロル、アロキシジム、アロキシジム−ナトリウム、アメトリン、アミカルバゾン、アミドクロル、アミドスルフロン、アミノシクロピラクロル、アミノシクロピラクロル−カリウム、アミノシクロピラクロル−メチル、アミノピラリド、アミトロール、スルファミド酸アンモニウム、アニロホス、アスラム、アトラジン、アザフェニジン、アジンスルフロン、ベフルブタミド、ベナゾリン、ベナゾリン−エチル、ベンフルラリン、ベンフレセート、ベンスルフロン、ベンスルフロン−メチル、ベンスリド、ベンタゾン、ベンゾビシクロン、ベンゾフェナプ、ビシクロピロン、ビフェノクス、ビラナホス、ビラナホス−ナトリウム、ビスピリバク、ビスピリバク−ナトリウム、ブロマシル、ブロモブチド、ブロモフェノキシム、ブロモキシニル、ブロモキシニル−酪酸塩、−カリウム、−ヘプタン酸塩及び−オクタン酸塩、ブソキシノン、ブタクロル、ブタフェナシル、ブタミホス、ブテナクロル、ブトラリン、ブトロキシジム、ブチレート、カフェンストロール、カルベタミド、カルフェントラゾン、カルフェントラゾン−エチル、クロランベン、クロルブロムロン、クロルフェナク、クロルフェナク−ナトリウム、クロルフェンプロプ、クロルフルレノール、クロルフルレノール−メチル、クロリダゾン、クロリムロン、クロリムロン−エチル、クロロフタリム、クロロトルロン、クロルタール−ジメチル、クロルスルフロン、シニドン、シニドン−エチル、シンメチリン、シノスルフロン、クレトジム、クロジナホプ、クロジナホプ−プロパルギル、クロマゾン、クロメプロプ、クロピラリド、クロランスラム、クロランスラム−メチル、クミルロン、シアンアミド、シアナジン、シクロエート、シクロスルファムロン、シクロキシジム、シハロホプ、シハロホプ−ブチル、シプラジン、２，４−Ｄ、２，４−Ｄ−ブトチル、−ブチル、−ジメチルアンモニウム、−ジオールアミン、−エチル、２−エチルヘキシル、ダゾメト、−イソブチル、−イソオクチル、−イソプロピルアンモニウム、−カリウム、−トリイソプロパノールアンモニウム及び−トロールアミン、２，４−ＤＢ、２，４−ＤＢ−ブチル−ジメチルアンモニウム、イソオクチル、−カリウム及び−ナトリウム、ダイムロン（ｄｙｍｒｏｎ）、ダラポン、ｎ−デカノール、デスメジファム、デトシル−ピラゾレート（ＤＴＰ）、ジカンバ、ジクロベニル、ジクロルプロプ、ジクロルプロプ−Ｐ、ジクロホプ、ジクロホプ−メチル、ジクロホプ−Ｐ−メチル、ジクロスラム、ジフェンゾコート、ジフルフェニカン、ジフルフェンゾピル、ジフルフェンゾピル−ナトリウム、ジメフロン、ジメピペラート、ジメタクロル、ジメタメトリン、ジメテナミド、ジメテナミド−Ｐ、ジメトラスルフロン、ジニトラミン、ジノテルブ、ジフェナミド、ジコート、ジコート−ジブロミド、ジチオピル、ジウロン、ＤＮＯＣ、エドタール、ＥＰＴＣ、エスプロカルブ、エタルフルラリン、エタメトスルフロン、エタメトスルフロン−メチル、エチオジン、エトフメセート、エトキシフェン、エトキシフェン−エチル、エトキシスルフロン、エトベンザニド、Ｆ−５２３１、すなわち、Ｎ−｛２−クロロ−４−フルオロ−５−［４−（３−フルオロプロピル）−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−テトラゾール−１−イル］フェニル｝エタンスルホンアミド、Ｆ−７９６７、すなわち、３−［７−クロロ−５−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−４−イル］−１−メチル−６−（トリフルオロメチル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン、フェノキサプロプ、フェノキサプロプ−Ｐ、フェノキサプロプ−エチル、フェノキサプロプ−Ｐ−エチル、フェノキサスルホン、フェントラザミド、フランプロプ、フランプロプ−Ｍ−イソプロピル、フランプロプ−Ｍ−メチル、フラザスルフロン、フロラスラム、フルアジホプ、フルアジホプ−Ｐ、フルアジホプ−ブチル、フルアジホプ−Ｐ−ブチル、フルカルバゾン、フルカルバゾン−ナトリウム、フルセトスルフロン、フルクロラリン、フルフェナセト（チアフルアミド）、フルフェンピル、フルフェンピル−エチル、フルメトスラム、フルミクロラク、フルミクロラク−ペンチル、フルミオキサジン、フルメツロン、フルレノール、フルレノール−ブチル、−ジメチルアンモニウム及び−メチル、フルオログリコフェン、フルオログリコフェン−エチル、フルプロパネート、フルピルスルフロン、フルピルスルフロン−メチル−ナトリウム、フルリドン、フルロクロリドン、フルロキシピル、フルロキシピル−メプチル、フルルタモン、フルチアセト、フルチアセト−メチル、フルチアミド、ホメサフェン、ホメサフェン−ナトリウム、ホラムスルフロン、ホサミン、グルホシネート、グルホシネート−アンモニウム、グルホシネート−Ｐ−ナトリウム、グルホシネート−Ｐ−アンモニウム、グルホシネート−Ｐ−ナトリウム、グリホサート、グリホサート−アンモニウム、−イソプロピルアンモニウム、−ジアンモニウム、−ジメチルアンモニウム、−カリウム、−ナトリウム、及び−トリメシウム、Ｈ−９２０１、すなわち、Ｏ−（２，４−ジメチル−６−ニトロフェニル）Ｏ−エチル−イソプロピルホスホルアミドチオエート、ハロサフェン、ハロスルフロン、ハロスルフロン−メチル、ハロキシホプ、ハロキシホプ−Ｐ、ハロキシホプ−エトキシエチル、ハロキシホプ−Ｐ−エトキシエチル、ハロキシホプ−メチル、ハロキシホプ−Ｐ−メチル、ヘキサジノン、ＨＷ−０２、すなわち、１−（ジメトキシホスホリル）−エチル−（２，４−ジクロロフェノキシ）酢酸塩、イマザメタベンズ、イマザメタベンズ−メチル、イマザモクス、イマザモクス−アンモニウム、イマザピク、イマザピク−アンモニウム、イマザピル、イマザピル−イソプロピルアンモニウム、イマザキン、イマザキン−アンモニウム、イマゼタピル、イマゼタピル−インモニウム、イマゾスルフロン、インダノファン、インダジフラム、ヨードスルフロン、ヨードスルフロン−メチル−ナトリウム、イオキシニル、イオキシニル−オクタン酸塩、−カリウム、及び−ナトリウム、イプフェンカルバゾン、イソプロツロン、イソウロン、イソキサベン、イソキサフルトール、カルブチレート、ＫＵＨ−０４３、すなわち、３−（｛［５−（ジフルオロメチル）−１−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］メチル｝スルホニル）−５，５−ジメチル−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール、ケトスピラドクス、ラクトフェン、ケナシル、キヌロン、ＭＣＰＡ、ＭＣＰＡ−ブトチル、−ジメチルアンモニウム、−２−エチルヘキシル、−イソプロピルアンモニウム、−カリウム、及び−ナトリウム、ＭＣＰＢ、ＭＣＰＢ−メチル、−エチル及び−ナトリウム、メコプロプ、メコプロプ−ナトリウム、及び−ブトチル、メコプロプ−Ｐ、メコプロプ−Ｐ−ブトチル、ジメチルアンモニウム、−２−エチルヘキシル及び−カリウム、メフェナセト、メフルイジド、メソスルフロン、メソスルフロン−メチル、メソトリオン、メタベンズチアズロン、メタム、メタミホプ、メタミトロン、メタザクロル、メタゾスルフロン、メタベンズチアズロン、メチオピルスルフロン、メチオゾリン、メチルイソチオシアネート、メトブロムロン、メトラクロル、Ｓ−メトラクロル、メトスラム、メトクスロン、メトリブジン、メトスルフロン、メトスルフロン−メチル、モリナト、モノリヌロン、モノスルフロン、モノスルフロン−エステル、ＭＴ−１２８、すなわち、６−クロロ−Ｎ−［（２Ｅ）−３−クロロプロプ−２−エン−１−イル］−５−メチル−Ｎ−フェニルピリダシン−３−アミン、ＭＴ−５９５０、すなわち、Ｎ−（３−クロロ−４−イソプロピルフェニル）−２−メチルペンタンアミド、ＮＧＧＣ−０１１、ナプロパミド、ＮＣ−３１０、すなわち、［５−（ベンズイルオキシ）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］（２，４−ジクロロフェニル）メタノン、ネブロン、ニコスルフロン、ノナン酸（ペラルグ酸）、ノルフルラゾン、オレイン酸（脂肪酸）、オルベンカルブ、オルトスルファムロン、オリザリン、オキサジアルギル、オキサジアゾン、オキサスルフロン、オキサジクロメホン、オキシフルオルフェン、パラコート、パラコートジクロリド、ペブレート、ペンジメタリン、ペノクススラム、ペンタクロルフェノール、ペントキサゾン、ペトキサミド、石油、フェンメジファム、ピクロラム、ピコリナフェン、ピノキサデン、ピペロホス、プレチラクロル、プリミスルフロン、プリミスルフロン−メチル、プロジアミン、プリフルラリン、プロポホキシジム、プロメトン、プロメトリン、プロパクロル、プロパニル、プロパキザホプ、プロパジン、プロファム、プロピソクロル、プロポキシカルバゾン、プロポキシカルバゾン−ナトリウム、プロピリスルフロン、プロピザミド、プロスルホカルブ、プロスルフロン、ピラクロニル、ピラフルフェン、ピラフルフェン−エチル、ピラスルホトール、ピラゾリナート（ピラゾレート）、ピラゾスルフロン、ピラゾスルフロン−エチル、ピラゾキシフェン、ピリバムベンズ−イソプロピル、ピリバムベンズ−プロピル、ピリベンゾキシム、ピリブチカルブ、ピリダフォル、ピリデート、ピリフタリド、ピリミノバク、ピリミノバク−メチル、ピリミスルファン、ピリチオバク、ピリチオバク−ナトリウム、ピロキサスルホン、ピロクススラム、キンクロラク、キンメラク、キノクラミン、キザロホプ、キザロホプ−エチル、キザロホプ−Ｐ、キザロホプ−Ｐ−エチル、キザロホプ−Ｐ−テフリル、リムスルフロン、サフルフェナシル、セトキシジム、シズロン、シマジン、シメトリン、スルコトリオン、スルフェントラゾン、スルホメツロン、スルホメツロン−メチル、スルホスルフロン、ＳＷ−０６５、ＳＹＮ−５２３、ＳＹＰ−２４９、すなわち、１−エトキシ−３−メチル−１−オキソブト−３−エン−２−イル５−［２−クロロ−４−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−２−ニトロベンゾエート、ＳＹＰ−３００、すなわち、１−［７−フルオロ−３−オキソ−４−（プロプ−２−イン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−ベンゾキサジン−６−イル］−３−プロピル−２−チオキソイミダゾリジン−４，５−ジオン、２，３，６−ＴＢＡ、ＴＣＡ（トリクロロ酢酸）、ＴＣＡ−ナトリウム、テブチウロン、テフリルトリオン、テンボトリオン、テプラロキシジム、テルバシル、テルブカルブ、テルブメトン、テルブチラジン、テルブトリン、テニルクロル、チアゾピル、チエンカルバゾン、チエンカルバゾン−メチル、チフェンスルフロン、チフェンスルフロン−メチル、チオベンカルブ、トプラメゾン、トラルコキシジム、トリアフォモン、トリ−アレート、トリアスルフロン、トリアジフラム、トリベヌロン、トリベヌロン−メチル、トリクロピル、トリエタジン、トリフロキシスルフロン、トリフロキシスルフロン−ナトリウム、トリフラリン、トリフルスルフロン、トリフルスルフロン−メチル、トリトスルフロン、尿素硫酸塩、ベルノレート、ＺＪ−０８６２、すなわち、３，４−ジクロロ−Ｎ−｛２−［（４，６−ジメトキシピリミジン−２−イル）オキシ］ベンジル｝アニリン；又は以下からなる群から選択される植物成長調節剤：アシベンゾラル、アシベンゾラル−Ｓ−メチル、５−アミノレブリン酸、アンシミドール、６−ベンジルアミノプリン、ブラシノリド、カテキン、クロルメコートクロリド、クロプロプ、シクラニリド、３−（シクロプロプ−１−エニル）プロピオン酸、ダミノジド、ダゾメト、ｎ−デカノール、ジケグラク、ジケグラク−ナトリウム、エンドタール、エンドタール−ジカリウム、−ジナトリウム、及びモノ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアルキルアンモニウム）、エテホン、フルメトラリン、フルレノール、フルレノール−ブチル、フルルプリミドール、ホルクロルフェヌロン、ジベレリン酸、イナベンフィド、インドール−３−酢酸（ＩＡＡ）、４−
インドール−３イル酪酸、イソプロチオラン、プロベナゾール、ジャスモン酸、マレイン酸ヒドラジド、メピコートクロリド、１−メチルシクロプロペン、ジャスモン酸メチル、２−（１−ナフチル）アセトアミド、１−ナフチル酢酸、２−ナフチルオキシ酢酸、ニトロフェノレート−混合物、パクロブトラゾール、Ｎ−（２−フェニルエチル）−β−アラニン、Ｎ−フェニルフタルアミド酸、プロヘキサジオン、プロヘキサジオン−カルシウム、プロヒドロジャスモン、サリチル酸、ストリゴラクトン、テクナゼン、チジアズロン、トリネキサパク、トリネキサパク−エチル、チトデフ、ウニコナゾール、ウニコナゾール−Ｐ；又はこれらの農学的に好ましい塩若しくはその他の形態。例えば、ＳＹＨＴ０Ｈ２の他に、グリホサート抵抗性、例えば、ＥＰＳＰＳ（例：ＧＴＳ４０−３−２、ＭＯＮ８９７８８、ＦＧ７２、ＤＰ−３５６０４３−５）を含有する育種積層を含むダイズ植物に、グリホサート、メソトリオン及びＳ−メトラクロルの組合せを適用してもよい。
上に個別に挙げた除草剤組成物はまた、２、３、４、５、６又は７種以下のＨＰＰＤ阻害剤除草剤を含む別のＨＰＰＤ除草剤をさらに含んでもよい。ＨＰＰＤ阻害剤除草剤の２種組合せの例を以下に挙げる：メソトリオン＋スルコトリオン、メソトリオン＋テンボトリオン、メソトリオン＋ビシクロピロン、メソトリオン＋トプラメゾン、メソトリオン＋イソキサフルトール、メソトリオン＋ピラスルファトール、スルコトリオン＋テンボトリオン、スルコトリオン＋ビシクロピロン、スルコトリオン＋トプラメゾン、スルコトリオン＋イソキサフルトール、スルコトリオン＋ピラスルファトール、テンボトリオン＋ビシクロピロン、テンボトリオン＋トプラメゾン、テンボトリオン＋イソキサフルトール、テンボトリオン＋ピラスルファトール、ビシクロピロン＋トプラメゾン、ビシクロピロン＋イソキサフルトール、ビシクロピロン＋ピラスルファトール、トプラメゾン＋イソキサフルトール、トプラメゾン＋ピラスルファトール、イソキサフルトール＋ピラスルファトール。ＨＰＰＤ阻害剤除草剤の３種組合せの例を以下に挙げる：メソトリオン＋スルコトリオン＋テンボトリオン、メソトリオン＋スルコトリオン＋トプラメゾン、メソトリオン＋スルコトリオン＋ビシクロピロン、メソトリオン＋スルコトリオン＋イソキサフルトール、メソトリオン＋スルコトリオン＋ピラスルファトール、メソトリオン＋テンボトリオン＋トプラメゾン、メソトリオン＋テンボトリオン＋ビシクロピロン、メソトリオン＋テンボトリオン＋イソキサフルトール、メソトリオン＋テンボトリオン＋ピラスルファトール、メソトリオン＋ビシクロピロン＋トプラメゾン、メソトリオン＋ビシクロピロン＋イソキサフルトール、メソトリオン＋ビシクロピロン＋ピラスルファトール、メソトリオン＋トプラメゾン＋イソキサフルトール、メソトリオン＋トプラメゾン＋ピラスルファトール、メソトリオン＋イソキサフルトール＋ピラスルファトール、スルコトリオン＋テンボトリオン＋ビシクロピロン、スルコトリオン＋テンボトリオン＋トプラメゾン、スルコトリオン＋テンボトリオン＋イソキサフルトール、スルコトリオン＋テンボトリオン＋ピラスルファトール、スルコトリオン＋トプラメゾン＋ビシクロピロン、スルコトリオン＋トプラメゾン＋イソキサフルトール、スルコトリオン＋トプラメゾン＋ピラスルファトール、スルコトリオン＋ビシクロピロン＋イソキサフルトール、スルコトリオン＋ビシクロピロン＋ピラスルファトール、スルコトリオン＋イソキサフルトール＋ピラスルファトール、テンボトリオン＋ビシクロピロン＋トプラメゾン、テンボトリオン＋ビシクロピロン＋イソキサフルトール、テンボトリオン＋ビシクロピロン＋ピラスルファトール、テンボトリオン＋トプラメゾン＋イソキサフルトール、テンボトリオン＋トプラメゾン＋ピラスルファトール、ビシクロピロン＋トプラメゾン＋イソキサフルトール、ビシクロピロン＋トプラメゾン＋ピラスルファトール、トプラメゾン＋イソキサフルトール＋ピラスルファトール。
実施例１．ダイズイベントＳＹＨＴ０Ｈ２の作製及び特性決定
ダイズ形質転換のためのバイナリーベクターを、プロモーター、例えば、ＣａＭＶ ３５Ｓ及びＦＭＶ転写エンハンサーを含む合成プロモーターと、ＮＯＳ遺伝子３’ターミネーターが続くＨＰＰＤコード配列の発現を駆動する合成ＴＡＴＡボックスを用いて構築した。ＨＰＰＤ遺伝子コード領域の推定アミノ酸配列に基づくダイズ発現のために、アベナ（Ａｖｅｎａ）ＨＰＰＤ由来の突然変異体ＨＰＰＤ遺伝子をコドン最適化した。突然変異体ＨＰＰＤ酵素は、天然のエンバク（Ａｖｅｎａ ｓａｔｉｖａ）ＨＰＰＤ酵素の位置１０９〜１１１内に単一アラン残基の欠失を含む。米国特許出願第２０１００１９７５０３号明細書を参照されたい。バイナリーベクター１５９５４は、選択マーカー遺伝子と一緒に突然変異体ＨＰＰＤ遺伝子を発現するための発現カセットを含むように構築した。図１を参照方。このベクターは、当分野では公知の方法（例えば、オーバーラップＰＣＲ、ＤＮＡ合成、制限フラグメントサブクローニング及び連結など）の組合せを用いて構築した。
図１（ベクター１５９５４）で用いる略語は、以下のように定義される：
ｃＡｖＨＰＰＤ−０３
開始点：１０３６、終点：２３５５
配列番号１４をエンコードするダイズコドン最適化Ｏａｔ ＨＰＰＤ遺伝子
ｃＰＡＴ−０３−０１
開始点：３１７８、終点：３７２９
ＰＡＴ Ｈｏｅｓｃｈｔ ＡＯ２７７４合成ストレプトミセス・ビリドクロモゲネス（Ｓ．ｖｉｒｉｄｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ）、植物コドン：Ｑ５７１４６ホスフィノトリシンと同一
アセチルトランスフェラーゼタンパク質。
ｃＰＡＴ−０３−０２
開始点：４７６１、終点：５３１２
ＰＡＴ Ｑ５７１４６ストレプトミセス・ビリドクロモゲネス（Ｓ．ｖｉｒｉｄｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ）ホスフィノトリシン アセチルトランスフェラーゼタンパク質、
ｃＰＡＴ−０３−０１ＤＮＡだが、ＢａｍＨ１、Ｂｇｌ２部位を突然変異させる。
ｃＳｐｅｃ−０３
開始点：６０５４、終点：６８３３
ストレプトマイシンアデニルトランスフェラーゼ；Ｔｎ７（ａａｄＡ）由来
ｃＶｉｒＧ−０１
開始点：７１３３、終点：７８５８
アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）由来の病原性Ｇ遺伝子（ＴＴＧコドンを含むｖｉｒＧＮ５４Ｄ）。ｖｉｒＧＮ５４Ｄは、Ｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．１９９４，ＰＲＯＣ．ＮＡＴＬ．ＡＣＡＤ．ＳＣＩ．Ｕ．Ｓ．Ａ ９１：７６０３−７６０７に記載のｐＡＤ１２８９由来のものである。
ｃＲｅｐＡ−０１
開始点：７８８、終点：８９６１
ＲｅｐＡ、ｎｔ７３５でＡからＧへの変更を含むｐＶＳ１複製
ｅＴＭＶ−０２
開始点：９６５、終点：１０３２（相補性）
タバコモザイクウイルス（Ｔｏｂａｃｃｏ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ）（発現を増強すると考えられるＴＭＶ＿Ｏｍｅｇａ ５’ＵＴＲリーダー配列。
ＥＭＢＬ：ＴＯＴＭＶ６
ｅ３５Ｓ−０５
開始点：６０８、終点：９００（相補性）
ＣからＴ及びＣからＡへのｂｐ変更を有する、カリフラワーモザイクウイルス（Ｃａｕｌｉｆｌｏｗｅｒ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ）３５Ｓエンハンサー領域
ｅＦＭＶ−０３
開始点：４０８、終点：６０１（相補性）
フィグウォルトモザイクウイルスエンハンサー
ｂＮＲＢ−０５
開始点：４、終点：２５９（相補性）
アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）ノパリンＴｉプラスミドのＴ−ＤＮＡの右境界領域
ｂＮＲＢ−０１−０１
開始点：１０１、終点：１２５（相補性）
アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）ノパリンＴｉプラスミドのＴ−ＤＮＡの右境界反復配列
ｂＮＬＢ−０３
開始点：５６３６、終点：５７６５（相補性）
アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）ノパリンＴｉプラスミドのＴ−ＤＮＡの左境界領域
（Ｚａｍｂｒｙｓｋｉ ｅｔ ａｌ．１９８０，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０９：１３８５−１３９１）ＥＭＢＬ 番号：Ｊ０１８２５。
ｂＮＬＢ−０１−０１
開始点：５６７１、終点：５６９５（相補性）
アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）ノパリンＴｉプラスミドのＴ−ＤＮＡの２５ｂｐ左境界領域
ｐｒ３５Ｓ−０４−０１
開始点：２６３３、終点：３１５３
３５Ｓプロモーター；地図上で本来長さ６４１ｂｐとして規定されたプロモーター；厳密なマッチは文献に見出されていない（ＬＦ ２００４年７月）。
ｐｒＣＭＰ−０６
開始点：４０２４、終点：４６７７
ケストルム・イェローリーフカーリングウイルス（Ｃｅｓｔｒｕｍ Ｙｅｌｌｏｗ ｌｅａｆ ｃｕｒｌ ｖｉｒｕｓ）プロモーター及びリーダー配列。完全長転写物プロモーターではない。塩基対５２８をＧからＣに変更することにより、中部ＲｓｒＩＩ部位を除去した。
ｏＶＳ１−０２
開始点：９００４、終点：９４０８
シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）のプラスミドｐＶＳ１由来の複製起点及び分配領域（Ｉｔｏｈ ｅｔ ａｌ．１９８４，Ｐｌａｓｍｉｄ １１：２０６−２２０）；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｕ１０４８７に類似；アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）宿主における複製起点として機能する。
ｏＣＯＬＥ−０６
開始点：１００８６、終点：１０８９２（相補性）
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）において機能性のＣｏｌＥ１複製起点
ｔＮＯＳ−０５−０１
開始点：２３７２、終点：２６２４（相補性）
ＮＯＳターミネーター：ノパリンシンターゼ遺伝子の３’ＵＴＲ
ｔＮＯＳ−０５−０１
開始点：３７６３、終点：４０１５
ＮＯＳターミネーター：ノパリンシンターゼ遺伝子の３’ＵＴＲ
ｔＮＯＳ−０５−０１
開始点：５３４１、終点：５５９３
ＮＯＳターミネーター：ノパリンシンターゼ遺伝子の３’ＵＴＲ
当業者には公知の多くの方法によって、ダイズ植物材料を好適に形質転換し、稔性植物を再生させることができる。例えば、稔性の、形態学的に正常なトランスジェニックダイズ植物が、以下によって得られる：１）例えば、未熟な子葉、胚軸若しくは他の好適な組織からの体細胞胚形成組織の生成；２）微粒子銃又はアグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）への感染；及び３）植物の再生。一例では、米国特許第５，０２４，９４４号明細書に記載されているように、任意で胚軸を除去したダイズの未熟胚から、子葉組織を切除して、ホルモン含有培地で培養することにより、体細胞胚形成植物材料を形成する。この材料は、例えば、直接ＤＮＡ方法、ＤＮＡコーティング微粒子銃又はアグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）への感染を用いて、形質転換し、好適な選択培地で培養した後、任意で、選択因子の継続的存在下で、稔性トランスジェニックダイズ植物に再生させる。選択因子は、カナマイシン、ヒグロマイシンのような抗生物質、又はＨＰＰＤ阻害剤、ホスフィノトリシン、若しくはグリホサートのような除草剤であってもよいし、あるいは、選択は、ＧＵＳのような視覚化可能なマーカー遺伝子の発現に基づくものでもよい。形質転換の標的組織には、分裂組織、体細胞繁殖系組織、及び花又は花形成組織などがある。ダイズ形質転換の他の例としては、物理的ＤＮＡ送達方法、例えば、微粒子銃（例えば、Ｆｉｎｅｒ ＆ ＭｃＭｕｌｌｅｎ，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌ Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．，１９９１，２７Ｐ：１７５−１８２；ＭｃＣａｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９８，６：９２３−９２６を参照）、ウィスカー（Ｋｈａｌａｆａｌｌａ ｅｔ ａｌ．，Ａｆｒｉｃａｎ Ｊ．ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００６，５：１５９４−１５９９）、エアロゾルビームインジェクション（米国特許第７，００１，７５４号明細書）、又はアグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）媒介送達方法（Ｈｉｎｃｈｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９８８，６：９１５−９２２；米国特許第７，００２，０５８号明細書；米国特許出願第２００４００３４８８９号明細書及び同第２００８０２２９４４７号明細書；Ｐａｚ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔ，２００６，２５：２０６−２１３）が挙げられる。
ダイズトランスジェニック植物は、任意の利用可能な形質転換方法を用いて、突然変異体ＨＰＰＤ遺伝子を含む前述のバイナリーベクターで作製することができる。任意で、ＨＰＰＤ遺伝子は、トランスジェニック組織の選択及び同定の手段を提供することができる。例えば、ベクターを用いて、前述したように未熟種子標的を形質転換することにより、選択因子としてメソトリオンのようなＨＰＰＤ遺伝子を直接用いて、トランスジェニックＨＰＰＤダイズ植物を作製した（米国特許出願第２００８０２２９４４７号明細書を参照）。任意で、ＨＰＰＤ遺伝子は、形質転換された組織の選択／同定の別の手段を提供する他の配列、例えば、カナマイシン、ヒグロマイシン、ホスフィノトリシン、ブタフェナシル、若しくはグリホサートに対する抵抗性を提供する既知の遺伝子と一緒に、ポリヌクレオチド内に存在してもよい。例えば、ＰＡＴ又はＥＰＳＰＳ選択マーカー遺伝子を含有する細胞バイナリーベクターが当分野では公知である（例えば、米国特許出願第２００８０２２９４４７号明細書を参照）。あるいは、選択マーカー配列は、個別のポリヌクレオチドに存在してもよく、その際、例えば、共形質転換及び共選択の方法を使用する。ＧＵ．Ｓのようなスコア付け可能なマーカー遺伝子を用いて、形質転換された組織を同定することも可能である。
Ｔ０植物を組織培養物から取り出して温室に移し、そこで、２インチ平方の鉢内の５〜１０ｇ／ｇａｌの１％顆粒状ＭＡＲＡＴＨＯＮ（登録商標）（Ｏｌｙｍｐｉｃ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｃｏ．，Ｍａｉｎｌａｎｄ，ＰＡ）と混合した水飽和土壌（ＲＥＤＩ−ＥＡＲＴＨ（登録商標）Ｐｌｕｇ ａｎｄ Ｓｅｅｄｌｉｎｇ Ｍｉｘ，Ｓｕｎ Ｇｒｏ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｂｅｌｌｅｖｕｅ，ＷＡ、又はＦａｆａｒｄ Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ Ｍｉｘ）に移植した。植物を欲しくカバーで覆い、以下の環境条件でＣｏｎｖｉｒｏｎチャンバー（Ｐｅｍｂｉｎａ，ＮＤ）内に配置した：日中２４℃；夜間２０℃；１６〜２３時間照明−１〜８時間暗闇の光周期；８０％相対湿度。
植物が、土壌に根付き、新芽が出現した（約１〜２週）後、植物をサンプリングし、ＨＰＰＤ遺伝子に適したプローブ、又はプロモーター（例えば、ｐｒＣＭＰ）について適切なプローブを用いたＴＡＱＭＡＮ（登録商標）分析により所望のトランスジーンの存在について試験した。陽性植物を、Ｆａｆａｒｄ＃３土壌を含む４インチ平方の鉢に移植した。Ｓｉｅｒｒａ１７−６−１２徐放性肥料を推奨される比率で土壌に混ぜた。次に、植物を標準的温室に移して、順化させた（約１週間）。環境条件は、以下の通りであった：日中２７℃；夜間２１℃；１４時間光周期（補助照明を用いて）；周囲湿度。順化（約１週間）の後、植物をサンプリングし、挿入したトランスジーンの存在及びコピー数について詳しく試験した。トランスジェニックダイズ植物をＴ１種子生産のために成熟まで生育させた。Ｔ１植物が生育して、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）分析の後、同型接合植物を種子生産のために生育させた。トランスジェニック種子及び子孫植物を用いて、それらの除草剤耐性性能及び分子特徴をさらに評価した。約９０の形質転換体の集団について、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２は、高レベルのメソトリオン耐性を示した。
イベントＳＹＨＴ０Ｈ２挿入配列及びフランキング配列を以下の２つの方法の組合せによって取得した：λライブラリー作製及びＧＥＮＯＭＥＷＡＬＫＥＲ（商標）（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）。ＤＮＡ配列決定のＳａｎｇｅｒ方法を用いて、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２の配列決定を実施した。配列分析は、配列分析プログラムＳＥＱＵＥＮＣＨＥＲ（登録商標）（Ｇｅｎｅ Ｃｏｄｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いて、実施した。λライブラリーを作製する目的で、ゲノムＤＮＡを単離した後、制限酵素供給者（ＮＥＢ）により記載されているように、制限酵素ＢａｍＨＩ又はＥｃｏＲＩ及びＫｐｎＩで、完了まで制限消化することにより、ダイズイベントＳＹＨＴ０Ｈ２からゲノムＤＮＡを単離した。ゲノムＤＮＡの部分的消化物は、３７℃、０．１５Ｕ／μｇＤＮＡのＢｆｕＣＩを用いて完了した。酵素の添加から２、４、６、８、及び１０分後、サンプルを取り出した。サンプルをゲルローディングのためにプールした。消化サンプルを１％アガロースＴＡＥゲル中にロードし、２０Ｖで一晩泳動させた。各消化物について、画分を分離した：ＢｆｕＣＩ；２〜４ｋｂ、ＢａｍＨＩ；０．７〜３．５ｋｂ及びＥｃｏＲＩ−ＫｐｎＩ；３〜６ｋｂ。供給者（Ｑｉａｇｅｎ）により記載されているように、ＱＩＡＱＵＩＣＫ（登録商標）Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎキットを用いて、ＤＮＡをゲルから回収した。単離した画分を、ＢａｍＨＩ又はＥｃｏＲＩ−ＫｐｎＩのいずれかで切断したＬａｍｂｄａ Ｚａｐ Ｅｘｐｒｅｓｓベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）に連結させた。連結は、６℃で一晩インキュベートした、２００Ｕリガーゼを含む１０μｌの容量中、ベクター１０００ｎｇ：挿入配列１００ｎｇの比を用いて、セットアップした。
供給者（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ）に記載されているようにＭａｘｐｌａｑを用いて、ライブラリーをパッケージングした。ＸＬ−１ＭＲＡ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）細胞を用いて、ライブラリーを滴定した。０．２％マルトースを添加したＮＺＹブロスにおいて細胞を３７℃で６時間増殖させた。細胞を４Ｋで遠心分離した後、ＳＭバッファー（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）中に再懸濁させた。ファージをＳＭバッファーで１／１００に希釈し、１０μｌを１００μｌの細胞と混合して、３５℃で１５分インキュベートし、３．５ｍｌのＮＺＹ Ｔｏｐアガロース（５０℃）を添加し、反転により混合してから、Ｌ−寒天プレートに塗布した後、３７℃で一晩インキュベートした。
異種挿入配列を含む個々のクローンについて、ライブラリーをスクリーニングした。ライブラリーを平板培養するのに用いた細菌細胞は、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから購入したＸＬ−１ＭＲＡであった。ＸＬ−１ＭＲＡ細胞は、使用前に、０．２％マルトースを添加したＮＺＹブロス中で６時間増殖させた。使用前に３７℃に予熱しておいた２５×１５０ｍｍプレートにＬ−寒天を流し込むことにより調製したＬ−寒天プレート上で、感染した細菌細胞を平板培養した。細菌細胞を４Ｋでの遠心分離により回収して、ＳＭバッファー（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）中に再懸濁させた。３００μｌの細菌細胞と５０，０００ファージを１５ｍｌ試験管（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で混ぜ合わせ、３７℃で１５分インキュベートした。９ｍｌのＮＺＹ Ｔｏｐアガロースを添加し、反転によって混合した後、得られた混合物を大きなプレートの表面全体に塗布することにより、滑らかな表面を維持した。ライブラリー別にスクリーニングした合計５００，０００ファージについて、ライブラリー当たり１０プレートを構築した。接種したプレートを３７℃で一晩インキュベートした。翌日、プレートを取り出して、４℃で少なくとも１時間静置した。
Ｈｙｂｏｎｄ ＮＸ（ＧＥ Ａｍｅｒｓｈａｍ）膜をプレートの表面に配置することにより、接種プレートに形成されたプラークをこの膜に移した。膜が均一に湿潤状態になった後、２分インキュベートさせた。針とＩｎｄｉｃａインクを用いて、３つの異なるスポットで、膜及び寒天にインク付きの針を刺すことにより、プレートの配向をマーキングした。マーキングした膜をプレートから取り出し、０．５Ｍ ＮａＯＨに浸漬したＷｈａｔｍａｎ紙に、ファージ側を上にして５分載せた（Ｂｉｏ−Ｒａｄ方法）後、２Ｘ ＳＳＣに浸したＷｈａｔｍａｎ紙に移し、空気乾燥させてから、１６０ｍＬのＳｔｒａｔａｌｉｎｋｅｒ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を用いて、ＤＮＡと膜を架橋させた。
異種挿入ＤＮＡを含むλファージクローンを同定するために、上で得たフィルターを以下のようにプロービングした：７％ＳＤＳ、２５０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．０、１％ＢＳＡ中で６２℃にて４時間、フィルターをプレハイブリダイズさせた。プレハイブリダイゼーション溶液を新鮮なハイブリダイゼーション溶液と交換した後、放射性プローブを添加した。
プローブは、鋳型としてｐＳＹＮ１５７６４を使用するプライマーＭＴ＿ＳＯＹ＿Ｆ２及びＭＴ＿ＳＯＹ＿Ｒ３を用いたＰＣＲによって作製した：
Ｐ＿ＭＴＳＯＹ＿Ｆ２
ＴＴＴＴＧＴＧＧＴＣＧＴＣＡＣＴＧＣＧＴＴ（配列番号２５）
Ｐ＿ＭＴＳＯＹ＿Ｒ３
ＣＡＧＧＡＴＡＴＡＴＴＧＴＧＧＴＧＴＡＡＡＣＡＡＡＴＴＧＡＣＧＣＴＴＡＧＡＣＡＡ（配列番号２６）
反応条件は以下の通りである：５０μｌの反応容量中、１Ｘ Ｅｘｐａｎｄバッファー、２００μＭ ｄＮＴＰ、５０ｎｇ鋳型、１０ｐＭプライマー、１．５Ｕ Ｅｘｐａｎｄ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｒｏｃｈｅ）。
サイクル条件は、［９４℃、３０秒；５５℃、３０秒、７２℃、２分］で３５サイクルであった。
増幅したフラグメントを１％アガロース−ＴＡＥゲル上で単離した。ＱＩＡＱＵＩＣＫ Ｇｅｌ抽出キット（ＱＩＡＧＥＮ）を用いて、ＤＮＡをアガロースから精製した。放射性ｄＣＴ32Ｐを含むＲＥＤＩＰＲＩＭＥ（商標）ＩＩキット（ＧＥ Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いて、プローブをランダムプライムにより標識した。ＧＥ Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｇ−５０スピンカラムを用いて、非取込み標識から、プローブを分離した。プローブを９５℃で５分加熱した後、ハイブリダイゼーションバッファーに添加した。ハイブリダイゼーションは、６２℃で一晩進行させた。まず、６２℃で２Ｘ ＳＳＣ、０．５％ ＳＤＳにより３０分、次に、６２℃で０．２Ｘ ＳＳＣ、０．２％ ＳＤＳにより３０分、フィルターを洗浄した。フィルターをプラスチック製ラップで包んだ後、増感スクリーンを用いて、Ｋｏｄａｋ Ｂｉｏｍａｘ ＸＡＲフィルムに−８０℃で１６〜２４時間暴露した。
陽性スポットを直径８ｍｍのプラグで詰め、２５μｌのクロロホルムを含む５００μｌのＳＭバッファー中に導入し、６℃で一晩溶離させた。第２ラウンドスクリーニングのために、ファージをＳＭバッファーで１／７５００に希釈した。合計１０００ｐｆｕ（プラーク形成単位）を第２ラウンドでスクリーニングした。第２ラウンドスクリーンでは、一次スクリーンについて用いた工程を繰り返した。これは、一次スクリーンにおいて同定された各陽性クローンについて行う。この工程は、単一の陽性プラークが単離されるまで繰り返すことができる。
Ｚａｐ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｖｅｃｔｏｒ Ｋｉｔマニュアル（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）に記載されているプロトコルを用いて、ファージをプラスミドに変換した。単離したプラスミドを配列決定した後、プログラムＳＥＱＵＥＮＣＨＥＲ（登録商標）（Ｇｅｎｅ Ｃｏｄｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いて、配列をアセンブリングした。
前述した配列決定方法の他に、ＢＤ ＧＥＮＯＭＥＷＡＬＫＥＲ（商標）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｋｉｔを用いて、ダイズイベントＳＹＨＴ０Ｈ２の異種挿入ポリヌクレオチド配列の挿入部位も配列決定した。ＧＥＮＯＭＥＷＡＬＫＥＲ（商標）キットを用いて、ＳＹＨＴ０Ｈ２イベントについての左境界１（ＬＢ１）フランキング配列を回収した。キット説明書に概説されているように、ダイズイベントＳＹＨＴ０Ｈ２からゲノムＤＮＡを単離して、滅菌マイクロ遠心チューブ中で、８μｌＤＮＡ（約１０ｎｇ／μｌ）、１μｌ １０Ｘ ＥｃｏＲＶバッファー、及び１μｌ ＥｃｏＲＶを混合することにより、上記ＤＮＡを完全に消化した後、３７℃で一晩インキュベートした。
ＥｃｏＲＶ消化ＤＮＡを、ＢＤ ＧＥＮＯＭＥＷＡＬＫＥＲ（商標）Ａｄａｐｔｏｒに、製造者の指示書の記載に従って連結させた。ダイズイベントＳＹＨＴ０Ｈ２の異種挿入ポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡを増幅するために、１５９５４形質転換ベクター配列の左境界領域の配列に基づいて、２つの遺伝子特異的プライマー（ＧＳＰ１及びＧＳＰ２）を消化した。ＧＳＰ２は、ＧＰＳ１の増幅により生成されるＰＣＲ産物中でネスト化され、ＢＤ ＧＥＮＯＭＥＷＡＬＫＥＲ（商標）Ａｄａｐｔｏｒの配列に基づき設計されたプライマーである。
Figure 0006278446
製造者の指示に従い、一次ＰＣＲ及び二次（ネステッド）ＰＣＲからなる２つのステップで、ＰＣＲアンプリコンを生成した。二次ＰＣＲのＰＣＲ産物を配列決定した。
λライブラリー配列及びＧＥＮＯＭＥＷＡＬＫＥＲ（商標）配列決定の両方から得られる配列情報を総合して、ダイズイベントＳＹＨＴ０Ｈ２の挿入部位配列を作製した。完全な挿入断片のヌクレオチド配列は配列番号９として示され、ゲノムＤＮＡがフランキングする挿入断片のヌクレオチド配列は、配列番号１０として示される。挿入断片と、フランキングゲノムＤＮＡのＬＢ２及びＬＢ１結合部を表す別のヌクレオチド配列は、配列番号１〜６として示される（表１、第３頁を参照）。
実施例２．イベント特異的ＰＣＲ分析
表５に示すプライマー対及び表６に示すサイクル条件を用いるＴＡＱＭＡＮ（登録商標）アッセイでのＰＣＲ分析の鋳型として、ダイズ（Ｇｌｙｉｎｅ ｍａｘ）形質転換体由来のゲノムＤＮＡを用いた。典型的反応混合物は、総量１０μｌ中に、１Ｘ ＪＵＭＰＳＴＡＲＴ（商標）ＲＥＡＤＹＭＩＸ（商標）、３００ｎｍのプライマー１，３００ｎｍのプライマー２，１００ｎｍのプローブ、及び約３０ｎｇの鋳型ＤＮＡを含む。アッセイＡ１７２０の場合、プライマーＰ１０３２５は、挿入配列中に存在し、Ｔ−ＤＮＡ挿入配列のＬＢ１を増幅するために用いられるのに対し、プライマーＰ１２７２１は、ゲノム中の挿入部位に存在する。アッセイＡ１７２０により、長さ６６ｂｐのＰＣＲ産物が生成される：
ＣＧＧＧＣＧＧＣＣＡＧＣＡＴＧＧＣＣＧＴＡＴＣＣＧＣＡＡＴＧＴＧＴＴＡＴＴＡＡＧＴＴＧＴＣＴＡＡＡＣＣＣＴＡＡＡＣＣＡＡＴＧＧＣＡＣ（配列番号２４）
アッセイＡ１７２１については、プライマーＰ１００４３が、挿入配列中に存在して、Ｔ−ＤＮＡ挿入配列のＬＢ２を検出するために用いられるのに対し、プライマーＰ１２７２３は、ゲノム中の挿入部位に存在する）。アッセイＡ１７２１により、長さ７０ｂｐのＰＣＲ産物が生成される：
ＧＧＡＴＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＧＡＧＡＡＣＣＡＴＣＡＣＡＧＡＡＴＴＧＡＣＧＣＴＴＡＧＡＣＡＡＣＴＴＡＡＴＡＡＣＡＣＡＴＴＧＣＧＧＡＴＡＣＧＧＣ（配列番号２５）
Figure 0006278446
Figure 0006278446
あるいは、表７に示すプライマー対及び表８に示すサイクル条件を用いるゲルベースのアッセイの鋳型として、ダイズ（Ｇｌｙｉｎｅ ｍａｘ）形質転換体由来のゲノムＤＮＡを用いた。典型的反応混合物は、総量２０μｌ中に、１Ｘ ＪＵＭＰＳＴＡＲＴ（商標）ＲＥＡＤＹＭＩＸ（商標）、１０μＭのプライマー１、１０μＭのプライマー２、１μＬの１０ｎｇ／μＬゲノム鋳型ＤＮＡを含んだ。
Figure 0006278446
Figure 0006278446
実施例３．イベントＳＹＨＴ０Ｈ２の実地での効果
米国の５か所で、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２ダイズ植物をメソトリオンに対する効果について試験した。非トランスジェニックダイズ系Ｊａｃｋを対照として用いた。ダイズ植物は、ＳＹＨＴ０Ｈ２及びＪａｃｋのいずれも、Ｖ２／Ｖ３期に、２１０ｇ ａｉ／ｈａのメソトリオンで処理し、次に、処理から４〜７日後（ＤＡＴ）、１３〜１７ＤＡＴ、及び２５〜３３ＤＡＴに、損傷を示す葉のパーセンテージについて評価した。表９に示す結果から、対照系と比較して、メソトリオンに対する０Ｈ２の効果が明らかである。
Figure 0006278446
米国の８か所で、ＳＹＨＴ０Ｈ２ダイズ植物をグルホシネートに対する効果について試験した。非トランスジェニックダイズ系Ｊａｃｋを対照として用いた。ダイズ植物は、ＳＹＨＴ０Ｈ２及びＪａｃｋのいずれも、Ｖ２／Ｖ３期、次にＶ５〜６期に、９００ｇ ａｉ／ｈａのグルホシネートで処理した。次いで、これらを処理から４〜８日後（ＤＡＴ）、１３〜２０ＤＡＴ、及び２６〜３５ＤＡＴに、損傷を示す葉のパーセンテージについて評価した。表１０に示す結果から、対照系と比較して、グルホシネートに対するＳＹＨＴ０Ｈ２の効果が明らかである。
Figure 0006278446
実施例４．マッピング及び育種選択のためのマーカー
挿入ＳＹＨＴ０Ｈ２のＬＢ２からのフランキング配列（配列番号７）又はＬＢ１のフランキング配列（配列番号８）は、８Ｘ Ｓｏｙｂｅａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｄａｔａｂａｓｅ（すなわち、ワールドワイドウェブで入手可能な、Ｊｏｉｎｔ Ｇｅｎｏｍｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ａｎｄ ｔｈｅ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ Ｇｅｎｏｍｉｃｓにより運営される“Ｐｈｙｔｏｚｏｍｅ”；また、Ｓｃｈｍｕｔｚ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｎａｔｕｒｅ ４６３：１７８−１８３も参照されたい）に対して、Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ；Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９０，２１５：４０３−４１０；Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９７，２５：３３８９−３４０２）（これもインターネットで入手可能である）を用いて、アラインメントした。ＬＢ２は、ヌクレオチド９，９０５，２１２から９，９０５，３１０までの第８染色体（連鎖群Ａ２）とアラインメントした。ＬＢ１は、ヌクレオチド９，９０５，３２６から９，９０５，７８８までの第８染色体（連鎖群Ａ２）とアラインメントした。次に、物理的位置を、Ｓｏｙｂｅａｎ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｍａｐ ４．０（Ｈｙｔｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｃｒｏｐ Ｓｃｉ．，２０１０，５０：９６０−９６８）に一覧が記載されているマーカーの位置と比較した。最も近いマーカーのセンチモルガン（ｃｅｎｔｉＭｏｒｇａｎ）位置を見出し、１０センチモルガン以内の全マーカーの一覧を表９に記載する。このデータから、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２への異種ポリヌクレオチド配列の挿入が、ダイズの第８染色体において、塩基対９，９０５，３１０〜９，９０５，３２６の位置（配列番号２４のヌクレオチド９９〜１１６の配列に相当する）で起こったことがわかる。ＨＰＰＤ配列を含む異種配列を挿入すると、ゲノム配列の１６塩基対が欠失するが、これは、配列番号２４のヌクレオチド１００〜１１５に相当する。
表１１に同定した一般に入手可能なマーカーの１つ以上を用いて、従来の育種技術により、ダイズ植物にイベントＳＹＨＴ０Ｈ２を導入する。イベントＳＹＨＴ０Ｈ２は、分子マーカーＢＡＲＣ−６５５７１−１９５７３に最も近く、分子マーカーＢＡＲＣ−６５５７１−１９５７３とＢＡＲＣ−４３１１９−０８５３５の間に位置する。育種アプローチ及び技術は、当分野では公知である。例えば、以下の文献を参照されたい：Ｆｅｈｒ，ｉｎ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｃｕｌｔｉｖａｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，１９８７，Ｗｉｌｃｏｓ，Ｊ．（ｅｄ．），Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｇｒｏｎｏｍｙ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ；Ｗｅｌｓｈ Ｊ．Ｒ．，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９８１）；Ｗｏｏｄ Ｄ．Ｒ．（Ｅｄ．），Ｃｒｏｐ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｇｒｏｎｏｍｙ Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．（１９８３）；Ｍａｙｏ Ｏ．，Ｔｈｅ Ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｌａｒｅｎｄｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ（１９８７）；Ｓｉｎｇｈ，Ｄ．Ｐ．，Ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｆｏｒ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ Ｉｎｓｅｃｔ Ｐｅｓｔｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ（１９８６）；及びＷｒｉｃｋｅ ａｎｄ Ｗｅｂｅｒ，Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ Ｐｌａｎｔ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，Ｗａｌｔｅｒ ｄｅ Ｇｒｕｙｔｅｒ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｂｅｒｌｉｎ（１９８６）。
Figure 0006278446
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実施例５．ダイズへの標的組込みのためのイベントＳＹＨＴ０Ｈ２挿入部位の使用
配列番号７及び配列番号８に開示されるイベントＳＹＨＴ０Ｈ２フランキング配列を用いて、ダイズゲノムデーターベースを検索する。両側のフランキング配列との同一マッチをＢＡＣクローンに見出し、その位置での分子マーカーを同定する。別のマーカーを作製して、挿入部位の精密なマッピングに用いる。
実地条件下で、数世代にわたってイベントＳＹＨＴ０Ｈ２のトランスジーンの農学的性能は一貫しており、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２の組込み部位は、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２の突然変異体ＨＰＰＤ酵素以外の目的のトランスジーンの組込みに有用なゲノム遺伝子座をもたらす。このような標的型組込みにより、いわゆる「位置効果」、及び宿主へのトランスジーンの組込み時に、ゲノム内に突然変異を発生する危険性に伴う問題が解消される。このような標的型組込みのさらなる利点として、限定されないが、宿主ゲノムにおける重要な遺伝子座へのトランスジーンの不注意な組込みによって起こる異常を示すことなく、多数の形質転換イベントを減少することが挙げられるが、これらの形質転換イベントは、所望のレベルのトランスジーン発現を呈示するトランスジェニック植物を取得する前に、スクリーニングし、試験しなければならない。さらには、このような標的型組込みによって、両遺伝子を含む選択植物系の育種をより効率的にするトランスジーンの積層が可能になる。
上に開示した教示内容を用いて、当業者は、当分野で公知の方法により、ＳＹＨＴ０Ｈ２中のものと同じ挿入部位に、又はＳＹＨＴ０Ｈ２中の挿入部位に近接する部位にトランスジーンをターゲティングすることができる。このような方法の１つが、米国特許出願第２００６０２５３９１８号明細書（その全文を本明細書に参照として組み込む）に開示されている。手短に言いば、挿入部位に５’側でフランキングする２０Ｋｂ以下のゲノム配列（例えば、配列番号７、配列番号７を含むゲノム配列、及び配列番号７に相同的なゲノム配列）と、挿入部位に３’側でフランキングする２０Ｋｂ以下のゲノム配列（例えば、配列番号８、配列番号８を含むゲノム配列、及び配列番号８に相同的なゲノム配列）とを用いて、目的の遺伝子（１つ又は複数）にフランキングさせるが、この目的の遺伝子は、相同的組換えによって挿入することが意図され、その組込み部位は、イベントＳＹＨＴ０Ｈ２の部位又はその付近である。これらの配列は、さらに、Ｔ−ＤＮＡ境界反復配列、例えば、左境界（ＬＢ）及び右境界（ＲＢ）反復配列、又はＴ−ＤＮＡ送達効率を増大するための他のブースター配列によってフランキングさせることもできる。目的の遺伝子は、ＳＹＨＴ０Ｈ２組込み部位と厳密に同じ位置に配置してもよいし、植物に有害な作用を及ぼすことなく、一定レベルのトランスジーン発現を賦与するように、ＳＹＨＴ０Ｈ２組込み部位周囲２０Ｋｂ領域以内のどこに配置してもよい。目的の遺伝子及びフランキング配列を含むＤＮＡベクターは、当業者には公知の複数の方法（限定されないが、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）媒介形質転換など）の１つによって、植物細胞に送達することができる。ＳＹＨＴ０Ｈ２標的部位へのＤＮＡベクターの挿入は、複数の方法の１つによりさらに増強することができ、こうした方法としては、限定されないが、遺伝子を増強する共発現若しくは組換えの上方制御、又は内在性組換え抑制遺伝子の下方制御が挙げられる。さらに、ゲノム中の特定の配列の切断を用いて、相同的組換え頻度、従って、ＳＹＨＴ０Ｈ２挿入部位への挿入を増加することができ、また、これらの配列を切断するための天然又は設計された配列特異的エンドヌクレアーゼの発現により、そのフランキング配列を増強できることは公知である。
実施例７．遺伝子発現の安定化のためのイベントＳＹＨＴ０Ｈ２挿入部位及びフランキング配列の使用
また、ＳＹＨＴ０Ｈ２挿入部位にフランキングするゲノム配列を用いて、目的とする別の遺伝子が、ダイズ並びにその他の作物において、ＳＹＨＴ０Ｈ２の組込み部位以外のゲノム位置に、トランスジーンとして挿入された場合、その発現を安定化することもできる。具体的には、挿入部位に５’側でフランキングする２０Ｋｂ以下のゲノム配列（例えば、配列番号７、配列番号７を含むゲノム配列、及び配列番号７に相同的なゲノム配列）と、挿入部位に３’側でフランキングする２０Ｋｂ以下のゲノム配列（例えば、配列番号８、配列番号８を含むゲノム配列、及び配列番号８に相同的なゲノム配列）とを用いて、植物のゲノムに挿入しようとする目的の遺伝子（１つ又は複数）とフランキングさせる。これらの配列は、さらに、Ｔ−ＤＮＡ境界反復配列、例えば、左境界（ＬＢ）及び右境界（ＲＢ）反復配列、並びにＴ−ＤＮＡ送達効率を高めるための他のブースター配列によってフランキングさせることもできる。目的の遺伝子は、ＳＹＨＴ０Ｈ２組込み部位と厳密に同じ位置に配置してもよいし、一定レベルのトランスジーン発現を賦与するように、ＳＹＨＴ０Ｈ２挿入部位のいずれかの側で、２０Ｋｂ領域以内のどこに配置してもよい。目的の遺伝子及びＳＹＨＴ０Ｈ２挿入部位フランキング配列を含むＤＮＡベクターは、当業者には公知の複数の方法（限定されないが、プロトプラスト形質転換、微粒子銃照射及びアグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）媒介形質転換など）の１つによって、植物細胞に送達することができる。送達されたＤＮＡは、植物ゲノムにランダムに組み込んでもよいし、又は独立に分離する遺伝子単位、例えば、人工染色体若しくはミニ染色体の一部として存在させることもできる。目的の遺伝子及びＳＹＨＴ０Ｈ２挿入部位フランキング配列を含むＤＮＡベクターは、植物細胞に送達することができる。従って、目的の遺伝子の周囲を、ＳＹＨＴ０Ｈ２挿入部位とフランキングするゲノム配列で取り囲むことにより、このような遺伝子の発現が、トランスジェニック宿主植物（単子葉及び双子葉植物の両方を含む）において安定化される。

Claims (19)

  1. 配列番号１０のポリヌクレオチド配列からなる単離されたポリヌクレオチド分子。
  2. 植物又は植物部分が、請求項１のポリヌクレオチド分子を含む、トランスジェニックダイズ植物又はその部分。
  3. 種子、細胞、花粉、胚珠、花、新芽、根、又は葉である、請求項２に記載のトランスジェニックダイズ植物部分。
  4. 種子である、請求項２又は３に記載のトランスジェニックダイズ植物部分。
  5. グリホサート、グルホシネート、ジカンバ、２，４−Ｄ、フェノキシオーキシン除草剤、ＰＰＯ除草剤、アリールオキシフェノキシプロピン酸除草剤、イミダゾリン、スルホニル尿素、アメトリン、トリアジン除草剤及びメトリブジンからなる群から選択される１種以上の除草剤に対する抵抗性又は耐性を植物に賦与することができるポリペプチドをエンコードする１つ以上の付加領域をさらに含む、請求項４に記載のトランスジェニックダイズ植物の種子。
  6. 前記１つ以上の付加領域が、１種以上の除草剤に対する抵抗性又は耐性を植物に賦与することができるポリペプチドをエンコードし、前記ポリペプチドが、以下：グリホサート耐性５−エノール−ピルビルシキミ酸−３−リン酸シンターゼ（ＥＰＳＰＳ）、グリホサートＮ−アセチルトランスフェラーゼ（ＧＡＴ）、除草剤耐性４−ヒドロキシピルビルジオキシゲナーゼ（ＨＰＰＤ）、ホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ（ＰＡＴ）、シトクロムＰ４５０、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、除草剤耐性アセチル−ＣＯＡ−カルボキシラーゼ（ＡＣＣａｓｅ）、除草剤耐性アセト乳酸シンターゼ（ＡＬＳ）、除草剤耐性プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ（ＰＰＧＯ）、ブロモキシニルニトリラーゼ、除草剤耐性フィトエンデサチュラーゼ、アリールオキシアルカノエートジオキシゲナーゼ、ホモゲンチジン酸ソラネシル転移酵素（ＨＳＴ）及びジカンバ分解酵素からなる群から選択される、請求項５に記載のトランスジェニックダイズ植物の種子。
  7. 前記トランスジェニックダイズ植物が、以下：
    ａ．ＨＰＰＤ阻害剤とグルホシネート、
    ｂ．ＨＰＰＤ阻害剤とグリホサート、
    ｃ．ＨＰＰＤ阻害剤とジカンバ、
    ｄ．ＨＰＰＤ阻害剤と２，４−Ｄ、
    ｅ．ＨＰＰＤ阻害剤とＡＬＳ阻害剤、
    ｆ．ＨＰＰＤ阻害剤、グリホサート、及びグルホシネート、
    ｇ．ＨＰＰＤ阻害剤、グリホサート、及びジカンバ、
    ｈ．ＨＰＰＤ阻害剤、グリホサート、及び２，４−Ｄ、
    ｉ．ＨＰＰＤ阻害剤、グリホサート、及びＡＬＳ阻害剤、
    ｊ．ＨＰＰＤ阻害剤、グルホシネート、及び２，４−Ｄ、
    ｋ．ＨＰＰＤ阻害剤、グルホシネート、及びジカンバ、
    ｌ．ＨＰＰＤ阻害剤、グルホシネート、及びＡＬＳ阻害剤、
    ｍ．ＨＰＰＤ阻害剤、グリホサート、グルホシネート、及びジカンバ、
    ｎ．ＨＰＰＤ阻害剤、グリホサート、グルホシネート、及び２，４−Ｄ、
    ｏ．ＨＰＰＤ阻害剤、グリホサート、グルホシネート、２，４−Ｄ、及びＡＬＳ阻害剤、
    ｐ．ＨＰＰＤ阻害剤、グリホサート、グルホシネート、ジカンバ、及びＡＬＳ阻害剤、
    ｑ．ＨＰＰＤ阻害剤、グリホサート、グルホシネート、ジカンバ、２，４−Ｄ、
    ｒ．ＨＰＰＤ阻害剤、グリホサート、グルホシネート、ジカンバ、２，４−Ｄ、及びＡＬＳ阻害剤
    からなる群から選択される除草剤の組合せに対する抵抗性を含み、前記ＨＰＰＤ阻害剤が、以下：イソキサフルトール、ビシクロピロン、メソトリオン、スルコトリオン、テンボトリオン、トプラメゾン、ピラスルファトールを含む群から選択される少なくとも１つのメンバーを含み、前記ＡＬＳ阻害剤が、プロスルフロン、プリミスルフロン、トリアスルフロン、ベンスルフロン、ニコスルフロン、リムスルフロン、プリミスルフロン、チフェンスルフロン、フォラムスルフロン、クロルスルフロン、ハロスルフロン、イマザキン、イマザピク、イマザピル、イマゼタピル、イマザモクス、ヨードスルフロン、メトスルフロン、メソスルフロン、スルホスルフロン、トリフロキシスルフロン、トリベヌロンメチル、チアゾピル、ジクロスラム、クロランスラム−メチル、フルカルバゾン、フルメトスラム、チエンカルバゾン、クロリムロン−エチルを含む群から選択される少なくとも１つのメンバーを含む、請求項６に記載のトランスジェニックダイズ植物の種子。
  8. 前記１つ以上の付加領域が、１種以上の除草剤に対する抵抗性又は耐性を前記植物に賦与することができるポリペプチドをエンコードし、前記ポリペプチドが、グリホサート耐性、ジカンバ耐性、ＡＬＳ耐性、グルホシネート耐性、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸に対する耐性、アリールオキシフェノキシプロピオン酸に対する耐性、イソキサフルトール耐性、及びＨＰＰＤ耐性から選択される少なくとも１つの除草剤耐性を賦与するポリペプチドからなる群から選択される、請求項５に記載のトランスジェニックダイズ植物の種子。
  9. 前記種子が、以下：
    アラニカルブ、アルジカルブ、ベンジオカルブ、ベンフラカルブ、ブトカルボキシム、ブトキシカルボキシム、カルバリル、カルボフラン、カルボスルファン、エチオフェンカルブ、フェノブカルブ、ホルメタネート、フラチオカルブ、イソプロカルブ、メチオカルブ、メトミル、メトールカルブ、オキサミル、ピリミカルブ、プロポキスル、チオジカルブ、チオファノクス、トリアザマート、トリメタカルブ、ＸＭＣ、キシリルカルブ；アセフェート、アザメチホス、アジンホス−エチル、アジンホス−メチル、カズサホス、クロレトキシホス、クロルフェビンホス、クロルメホス、クロルピリホス、クロルピリホス−メチル、クマホス、シアノホス、デメトン−Ｓ−メチル、ジアジノン、ジクロルボス／ＤＤＶＰ、ジクロトホス、ジメトエート、ジメチルビンホス、ジスルホトン、ＥＰＮ、エチオン、エトプロホス、ファムフール、ファナミホス、フェニトロチオン、フェンチオン、ホスチアゼート、ヘプテノホス、イミシアホス、イソフェンホス、イソプロピルＯ−（メトキシアミノチオ−ホスホリル）サリチル酸塩、イソキサチオン、マラチオン、メカルバム、メタミドホス、メチダチオン、メビンホス、モノクロトホス、ナレド、オメトエート、オキシデメントン−メチル、パラチオン、パラチオン−メチル、フェントエート、ホレート、ホサロン、ホスメト、ホスファミドン、ホキシム、ピリミホス−メチル、プロフェノホス、プロペタンホス、プロチオホス、ピラクロホス、ピリダフェンチオン、キナルホス、スルホテプ、テブピリンホス、テメホス、テルブホス、テトラクロルビンホス、チオメトン、トリアゾホス、トリクロルホン、バミドチオン、シクロジエンオルガノクロリン、クロルダン、エンドスルファン；エチプロール、フィプロニル、アクリナトリン、アレトリン、ｄ−シス−トランスアレトリン、ｄ−トランスアレトリン、ビフェントリン、ビオアレトリン、ビオアレトリンＳ−シクロペンテニル異性体、ビオレスメトリン、シクロプロトリン、シフルトリン、β−シフルトリン、シハロトリン、λ−シハロトリン、γ−シハロトリン、シペルメトリン、α−シペルメトリン、β−シペルメトリン、θ−シペルメトリン、ζ−シペルメトリン、シフェノトリン［（１Ｒ）−トランス異性体］、デルタメトリン、エンペントリン［（ＥＺ）−（１Ｒ）異性体）、エスフェンバレレート、エトフェンプロクス、フェンプロパトリン、フェンバレレート、フルシトリネート、フルメトリン、τ−フルバリネート、ハルフェンプロクス、イミプロトリン、カデトリン、ペルメトリン、フェノトリン［（１Ｒ）−トランス異性体）、プラレトリン、ピレトリン（ジョチュウギク（ｐｙｒｅｔｈｒｕｍ））、レスメトリン、シラフルオフェン、テフルトリン、テトラメトリン、テトラメトリン［（１Ｒ）異性体）］、トラロメトリン、トランスフルトリン；ＤＤＴ；メトキシクロル、アセタミプリド、クロチアニジン、ジノテフラン、イミダクロピド、ニテンピラム、チアクロプリド、チアメトキサム；ニコチン、スピネトラム、スピノサド、アバメクチン、エマメクチン安息香酸塩、レピメクチン、ミルベメクチン、ヒドロプレン、キノプレン、メトプレン；フェノキシカルブ；ピリプロキシフェン、クロロピクリン；フッ化スルフリル；ホウ砂；吐酒石、ピメトロジン；フロニカミド、クロフェンテジン、ヘキリチアゾクス、ジフロビダジン、エトキサゾール、バチルス・チューリンゲンシス亜種イスラエレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｉｓｒａｅｌｅｎｓｉｓ）、バチルス・スファエリクス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）、バチルス・チューリンゲンシス亜種アイザワイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ａｉｚａｗａｉ）、バチルス・チューリンゲンシス亜種クルスタキ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｋｕｒｓｔａｋｉ）、バチルス・チューリンゲンシス亜種テネブリオニス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｔｅｎｅｂｒｉｏｎｉｓ）、ＢＴ穀物タンパク質：Ｃｒｙ１Ａｂ、Ｃｒｙ１Ａｃ、Ｃｒｙ１Ｆａ、Ｃｒｙ２Ａｂ、ｍＣｒｙ３Ａ、Ｃｒｙ３Ａｂ、Ｃｒｙ３Ｂｂ、Ｃｒｙ３４／３５Ａｂ１、ジアフェンチウロン、アゾシクロチン、シヘキサチン、酸化フェンブタスズ；プロパルギット、テトラジホン、クロルフェナピル、ＤＮＯＣ、スルフルラミド、ベンスルタプ、カルタップ塩酸塩、チオシクラム、チオスルタップ−ナトリウム、ビストリフルロン、クロルフルアズロン、ジフルベンズロン、フルシクロクスロン、フルフェノクスロン、ヘキサフルムロン、ルフェヌロン、ノバルロン、ノビフルムロン、テフルベズロン、トリフルムロン、ブプロフェジン、シロマジン、クロマフェノジド、ハロフェノジド、メトキシフェノジド、テブフェノジド、アミトラズ、ヒドラメチルノン；アセキノシル；フルアクリピリム、フェナザキン、フェンピロキシメート、ピリミジフェン、ピリダベン、テブフェンピラド、トルフェンピラド、ロテノン（デリス）、インドキサカルブ；メタフルミゾン、スピロジクロフェン、スピロメシフェン、スピロテトラマト、リン化アルミニウム、リン化カルシウム、ホスフィン、リン化亜鉛、シエノピラフェン、クロラントラニリプロール、フルベンジアミド、アミドフルメト、アザジラクチン、ベンクロチアズ、ベンゾキシメート、ビフェナゼート、ブロモプロピレート、キノメチオナート、氷晶石、シアントリニプロール（Ｃｙａｚｙｐｙｒ）、シフルメトフェン、ジコフォール、ジフロビダジン、フルエンスルホン、フルフェネリム、フルフィプロール、フルオピラム、フフェノジド、イミダクロチズ、イプロジオン、メペルフルトリン、ピリダリル、ピリフルキナゾン、テトラメチルフルトリン、ヨードメタン；バチルス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ）をベースとする製品（限定されないが、株ＣＮＣＭ Ｉ−１５８２、例えば、ＶＯＴｉＶＯ（商標）、ＢｉｏＮｅｍなど）；３−ブロモ−Ｎ−｛２−ブロモ−４−クロロ−６−［（１−シクロプロピルエチル）カルバモイル］フェニル｝−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボキサミド（国際公開第２００５／０７７９３４号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−ブロモピリジン−３−イル）メチル］（２−フルオロエチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第ＷＯ２００７／１１５６４４号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−フルオロピリジン−３−イル）メチル］（２，２−ジフルオロエチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４４から公知である）、４−｛［（２−クロロ−１，３−チアゾール−５−イル）メチル］（２−フルオロエチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４４号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−クロルピリジン−３−イル）メチル］（２−フルオロエチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４４号パンフレットから公知である）、フルピラジフロン、４−｛［（６−クロル−５−フルオロピリジン−３−イル）メチル］（メチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４３号パンフレットから公知である）、４−｛［（５，６−ジクロロピリジン−３−イル）メチル］（２−フルオロエチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４６号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−クロロ−５−フルオロピリジン−３−イル）メチル］−（シクロプロピル）−アミノ｝−フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４３号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］−（シクロプロピル）−アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（欧州特許出願公開第Ａ−０ ５３９ ５８８号明細書から公知である）、４−｛［（６−クロルピリジン−３−イル）−メチル］（メチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（欧州特許出願公開第Ａ−０ ５３９ ５８８号明細書から公知である）、｛［１−（６−クロロピリジン−３−イル）エチル］（メチル）オキシド−λ4−スルファニリデン｝シアンアミド（国際公開第２００７／１４９１３４号パンフレットから公知である）並びにそのジアステレオマー｛［（１Ｒ）−１−（６−クロロピリジン−３−イル）エチル］（メチル）オキシド−λ4−スルファニリデン｝シアンアミド（Ａ）及び｛［（１Ｓ）−１−（６−クロロピリジン−３−イル）エチル］（メチル）オキシド−λ4−スルファニリデン｝シアンアミド（Ｂ）（これも、国際公開第２００７／１４９１３４号パンフレットから公知である）、さらには、スルホキサフロール及びそのジアステレオマー［（Ｒ）−メチル（オキシド）｛（１Ｒ）−１−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］エチル｝−λ4−スルファニリデン］シアンアミド（Ａ１）及び［（Ｓ）−メチル（オキシド）｛（１Ｓ）−１−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］エチル｝−λ4−スルファニリデン］シアンアミド（Ａ２）（ジアステレオマーＡ群と呼ばれる）（国際公開第２０１０／０７４７４７号パンフレット、国際公開第２０１０／０７４７５１号パンフレットから公知である）、［（Ｒ）−メチル（オキシド）｛（１Ｓ）−１−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］エチル｝−λ4−スルファニリデン］シアンアミド（Ｂ１）及び［（Ｓ）−メチル（オキシド）｛（１Ｒ）−１−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］エチル｝−λ4−スルファニリデン］シアンアミド（Ｂ２）（ジアステレオマーＢ群と呼ばれる）（これもまた、国際公開第２０１０／０７４７４７号パンフレット、国際公開第２０１０／０７４７５１号パンフレットから公知である）、並びに１１−（４−クロロ−２，６−ジメチルフェニル）−１２−ヒドロキシ−１，４−ジオキサ−９−アザジスピロ［４．２．４．２］テトラデク−１１−エン−１０−オン（国際公開第２００６／０８９６３３号パンフレットから公知である）、３−（４’−フルオロ−２，４−ジメチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デク−３−エン−２−オン（国際公開第２００８／０６７９１１号パンフレットから公知である）、１−｛２−フルオロ−４−メチル−５−［（２，２，２−トリフルオルエチル）スルフィニル］フェニル｝−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−アミン（国際公開第２００６／０４３６３５号パンフレットから公知である）、［（３Ｓ，４ａＲ，１２Ｒ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−３−［（シクロプロピルカルボニル）オキシ］−６，１２−ジヒドロキシ−４，１２ｂ−ジメチル−１１−オキソ−９−（ピリジン−３−イル）−１，３，４，４ａ，５，６，６ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−デカヒドロ−２Ｈ，１１Ｈ−ベンゾ［ｆ］−ピラノ［４，３−ｂ］クロメン−４−イル］メチルシクロプロパンカルボキシレート（国際公開第２００８／０６６１５３号パンフレットから公知である）、２−シアノ−３−（ジフルオロメトキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルベンゼンスルホンアミド（国際公開第２００６／０５６４３３号パンフレットから公知である）、２−シアノ−３−（ジフルオロメトキシ）−Ｎ−メチルベンゼンスルホンアミド（国際公開第２００６／１００２８８号パンフレットから公知である）、２−シアノ−３−（ジフルオロメトキシ）−Ｎ−エチルベンゼン-スルホンアミド（国際公開第２００５／０３５４８６号パンフレットから公知である）、４−（ジフルオロメトキシ）−Ｎ−エチル−Ｎ−メチル−１，２−ベンゾチアゾール−３−アミン１，１−ジオキシド（国際公開第２００７／０５７４０７号パンフレットから公知である）、Ｎ−［１−（２，３−ジメチルフェニル）−２−（３，５−ジメチルフェニル）エチル］−４，５−ジヒドロ−１，３−チアゾール−２−アミン（
    国際公開第２００８／１０４５０３号パンフレットから公知である）、｛１’−［（２Ｅ）−３−（４−クロロフェニル）プロプ−２−エン−１−イル］−５−フルオロスピロ［インドール−３，４’−ピペリジン］−１（２Ｈ）−イル｝（２−クロロピリジン−４−イル）メタノン（国際公開第２００３／１０６４５７号パンフレットから公知である）、３−（２，５−ジメチルフェニル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−１，８−ジアザスピロ［４．５］デク−３−エン−２−オン（国際公開第２００９／０４９８５１号パンフレットから公知である）、３−（２，５−ジメチルフェニル）−８−メトキシ−２−オキソ−１，８−ジアザスピロ［４．５］デク−３−エン−４−イルエチル炭酸塩（国際公開第２００９／０４９８５１号パンフレットから公知である）、４−（ブト−２−イン−１−イルオキシ）−６−（３，５−ジメチルピペリジン−１−イル）−５−フルオロピリミジン（国際公開第２００４／０９９１６０号パンフレットから公知である）、（２，２，３，３，４，４，５，５−オクタフルオロペンチル）（３，３，３−トリフルオロプロピル）マロノニトリル（国際公開第２００５／０６３０９４号パンフレットから公知である）、（２，２，３，３，４，４，５，５−オクタフルオロペンチル）（３，３，４，４，４−ペンタフルオロ-ブチル）マロノニトリル（国際公開第２００５／０６３０９４号パンフレットから公知である）、８−［２−（シクロプロピルメトキシ）−４−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−３−［６−（トリフルオロメチル）−ピリダジン−３−イル］−３−アザビシクロ［３．２．１］オクタン（国際公開第２００７／０４０２８０号パンフレットから公知である）、フロメトキン、ＰＥ１３６４（ＣＡＳ−Ｒｅｇ．Ｎｏ．１２０４７７６−６０−２）（特開２０１０−０１８５８６号公報から公知である）、５−［５−（３，５−ジクロロフェニル）−５−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ベンゾニトリル（国際公開第２００７／０７５４５９号パンフレットから公知である）、５−［５−（２−クロロピリジン−４−イル）−５−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ベンゾニトリル（国際公開第２００７／０７５４５９号パンフレットから公知である）、４−［５−（３，５−ジクロロフェニル）−５−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−２−メチル−Ｎ−｛２−オキソ−２−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−エチル｝ベンズアミド（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］−（シクロプロピル）アミノ｝−１，３−オキサゾール−２（５Ｈ）−オン、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］（２，２−ジフルオロエチル）−アミノ｝−１，３−オキサゾール−２（５Ｈ）−オン、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］（エチル）アミノ｝−１，３−オキサゾール−２（５Ｈ）−オン、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］（メチル）アミノ｝−１，３−オキサゾール−２（５Ｈ）−オン（すべて、国際公開第２０１０／００５６９２号パンフレットから公知である）、ＮＮＩ−０７１１（国際公開第２００２／０９６８８２号パンフレットから公知である）、１−アセチル−Ｎ−［４−（１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−メトキシプロパン−２−イル）−３−イソブチルフェニル］−Ｎ−イソブチリル−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド（国際公開第２００２／０９６８８２号パンフレットから公知である）、メチル２−［２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝アミノ）−５−クロロ−３−メチルベンゾイル］−２−メチルヒドラジンカルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、メチル２−［２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝アミノ）−５−シアノ−３−メチルベンゾイル］−２−エチルヒドラジンカルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、メチル２−［２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝−アミノ）−５−シアノ−３−メチルベンゾイル］−２−メチルヒドラジンカルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、メチル２−［３，５−ジブロモ−２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝アミノ）−５−シアノ−３−メチルベンゾイル］−１，２−ジエチルヒドラジンカルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、メチル２−［３，５−ジブロモ−２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝アミノ）ベンゾイル］−２−エチルヒドラジン−カルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、（５ＲＳ，７ＲＳ；５ＲＳ，７ＳＲ）−１−（６−クロロ−３−ピリジルメチル）−１，２，３，５，６，７−ヘキサヒドロ−７−メチル−８−ニトロ−５−プロポキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン（国際公開第２００７／１０１３６９号パンフレットから公知である）、Ｎ−［２−（５−アミノ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−４−クロロ−６−メチルフェニル］−３−ブロモ−１−（３−クロロ−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボキサミド（中国特許第１０２０５７９２５号明細書から公知である）、並びにメチル２−［３，５−ジブロモ−２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝アミノ）ベンゾイル］−２−エチル−１−メチルヒドラジンカルボキシレート（国際公開第２０１１／０４９２３３号パンフレットから公知である）、アルジモルフ、アザコナゾール、ビテルタノール、ブロムコナゾール、シプロコナゾール、ジクロブトラゾール、ジフェノコナゾール、ジニコナゾール、ジニコナゾール−Ｍ、ドデモルフ、酢酸ドデモルフ、エポキシコナゾール、エタコナゾール、フェナリモール、フェンブコナゾール、フェンヘキサミド、フェンプロピジン、フェンプロピモルフ、フルキノコナゾール、フルルプリミドール、フルシラゾール、フルトリアフォール、フルコナゾール、フルコナゾール−シス、ヘキサコナゾール、イマザリル、硫酸イマザリル、イミベンコナゾール、イプコナゾール、メトコナゾール、ミクロブタニル、ナフチフィン、ヌアリモール、オキスポコナゾール、パクロブトラゾール、ペフラゾエート、ペンコナゾール、ピペラリン、プロクロラズ、プロピコナゾール、プロチオコナゾール、ピリブチカルブ、ピリフェノクス、キンコナゾール、シメコナゾール、スピロキサミン、テブコナゾール、テルビナフィン、テトラコナゾール、トリアジメホン、トリアジメノール、トリデモルフ、トリフルミゾール、トリホリン、トリチコナゾール、ウニコナゾール、ウニコナゾール−ｐ、ビニコナゾール、ボリコナゾール、１−（４−クロロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）シクロへプタノール、メチル１−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボキシレート、Ｎ’−｛５−（ジフルオロメチル）−２−メチル−４−［３−（トリメチルシリル）プロポキシ］フェニル｝−Ｎ−エチル−Ｎ−メチルイミドホルムアミド、Ｎ−エチル−Ｎ−メチル−Ｎ’−｛２−メチル−５−（トリフルオロメチル）−４−［３−（トリメチルシリル）プロポキシ］フェニル｝イミドホルムアミド、Ｏ−［１−（４−メトキシフェノキシ）−３，３−ジメチルブタン−２−イル］１Ｈ−イミダゾール−１−カルボチオエート、ビキサフェン、ボスカリド、カルボキシン、ジフルメトリム、フェンフラム、フルピラム、フルトラニル、フルキサピロキサド、フラメトピル、フルメシクロクス、イソピラザム（ｓｙｎ−エピマーラセミ体１ＲＳ、４ＳＲ、９ＲＳ及び抗エピマーラセミ体１ＲＳ、４ＳＲ、９ＳＲの混合物）、イソピラザム（抗エピマーラセミ体１ＲＳ、４ＳＲ、９ＳＲの混合物）、イソピラザム（抗エピマー鏡像体１Ｒ、４Ｓ、９Ｓの混合物）、イソピラザム（抗エピマー鏡像体１Ｓ、４Ｒ、９Ｒの混合物）、イソピラザム（ｓｙｎエピマーラセミ体１ＲＳ、４ＳＲ、９ＲＳ）、イソピラザム（ｓｙｎ−エピマー鏡像体１Ｒ、４Ｓ，９Ｒ）、イソピラザム（ｓｙｎ−エピマー鏡像体１Ｓ、４Ｒ、９Ｓ）、メプトニル、オキシカルボキシン、ペンフルフェン、ペンチオピラド、セダキサン、チフルザミド、１−メチル−Ｎ−［２−（１，１，２，２−テトラフルオロエトキシ）フェニル］−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−Ｎ−［２−（１，１，２，２−テトラフルオロエトキシ）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−Ｎ−［４−フルオロ−２−（１，１，２，３，３，３−ヘキサフルオロプロポキシ）フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−［１−（２，４−ジクロロフェニル）−１−メトキシプロパン−２−イル］−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、５，８−ジフルオロ−Ｎ−［２−（２−フルオロ−４−｛［４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝フェニル）エチル］キナゾリン−４−アミン、Ｎ−［９−（ジクロロメチレン）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，４−メタノナフタレン−５−イル］−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−［（１Ｓ，４Ｒ）−９−（ジクロロメチレン）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，４−メタノナフタレン−５−イル］−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−［（１Ｒ，４Ｓ）−９−（ジクロロメチレン）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，４−メタノナフタレン−５−イル］−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、アメトクラジン、アミスルボム、アゾキシストロビン、シアゾファミド、クメトキシストロビン、クモキシストロビン、ジモキシストロビン、エネストロブリン、ファモキサドン、フェナミドン、フェノキシストロビン、フルオキサストロビン、クレソキシム−メチル、メトミノストロビン、オリサストロビン、ピコキシストロビン、ピラクロストロビン、ピラメトストロビン、ピラオキシストロビン、ピリベンカルブ、トリクロピリカルブ、トリフロキシストロビン、（２Ｅ）−２−（２−｛［６−（３−クロロ−２−メチルフェノキシ）−５−フルオロピリミジン−４−イル］オキシ｝フェニル）−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチルエタンアミド、（２Ｅ）−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチル−２−（２−｛［（｛（１Ｅ）−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチリデン｝アミノ）オキシ］メチル｝フェニル）エタンアミド、（２Ｅ）−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチル−２−｛２−［（Ｅ）−（｛１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ｝イミノ）メチル］フェニル｝エタンアミド、（２Ｅ）−２−｛２−［（｛［（１Ｅ）−１−（３−｛［（Ｅ）−１−フルオロ−２−フェニルエテニル］オキシ｝フェニル）エチリデン］アミノ｝オキシ）メチル］フェニル｝−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチルエタンアミド、（２Ｅ）−２−｛２−［（｛［（２Ｅ，３Ｅ）−４−（２，６−ジクロロフェニル）ブト−３−エン−２−イリデン］アミノ｝オキシ）メチル
    ］フェニル｝−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチルエタンアミド、２−クロロ−Ｎ−（１，１，３−トリメチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−４−イル）ピリジン−３−カルボキサミド、５−メトキシ−２−メチル−４−（２−｛［（｛（１Ｅ）−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチリデン｝アミノ）オキシ］メチル｝フェニル）−２，４−ジヒドロ−３Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−オン、メチル（２Ｅ）−２−｛２−［（｛シクロプロピル［（４−メトキシフェニル）イミノ］メチル｝スルファニル）メチル］フェニル｝−３−メトキシプロプ−２−エノエート、Ｎ−（３−エチル−３，５，５−トリメチルシクロヘキシル）−３−（ホルミルアミノ）−２−ヒドロキシベンズアミド、２−｛２−［（２，５−ジメチルフェノキシ）メチル］フェニル｝−２−メトキシ−Ｎ−メチルアセトアミド、（２Ｒ）−２−｛２−［（２，５−ジメチルフェノキシ）メチル］フェニル｝−２−メトキシ−Ｎ−メチルアセトアミド、ベノミル、カルベンダジム、クロルフェナゾール、ジエトフェンカルブ、エタボキサム、フルオピコリド、フベリダゾール、ペンシクロン、チアベンダゾール、チオファネートメチル、チオファネート、ゾキサミド、５−クロロ−７−（４−メチルピペリジン−１−イル）−６−（２，４，６−トリフルオロフェニル）［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン、３−クロロ−５−（６−クロロピリジン−３−イル）−６−メチル−４−（２，４，６−トリフルオロフェニル）ピリダジン、ボルドー液、キャプタホール、キャプタン、クロロタロニル、水酸化銅、ナフテン酸銅、酸化第一銅、塩基性塩化銅、硫酸銅（ＩＩ）、ジクロフルアニド、ジチアノン、ドジン、ドジンフリーベース、フェルバム、フルオフォルペット、フォルペット、グアザチン、酢酸グアザチン、イミノクタジン、イミノクタジンアルベシル酸塩、イミノクタジン三酢酸塩、マンカッパー、マンコゼブ、マネブ、メチラム、メチラム亜鉛、オキシン銅、プロパミジン、プロピネブ、イオウ、多硫化カルシウムなどのイオウ製剤、チラム、トリルフルアニド、ジネブ、ジラム、アシベンゾラルＳメチル、イソチアニル、プロベナゾール、チアジニル、アンドプリム、ブラスチシジン−Ｓ、シプロジニル、カスガマイシン、カスガマイシン塩酸塩、メパニピリム、ピリメタニル、３−（５−フルオロ−３，３，４，４−テトラメチル−３，４−ジヒドロイソキノリン−１−イル）キノリン、酢酸フェンチン、塩化フェンチン、水酸化フェンチン、シルチオファム、ベンチアバリカルブ、ジメトモルフ、フルモルフ、イプロバリカルブ、マンジプロパミド、ポリオキシン、ポリオキソリム、バリダマイシンＡ、バリフェナレート、ビフェニル、クロロネブ、ジクロラン、エジフェンホス、エトリジアゾール、ヨードカルブ、イプロベンホス、イソプロチオラン、プロパモカルブ、プロパモカルブ塩酸塩、プロチオカルブ、ピラゾホス、キントゼン、テクナゼントルクロホス−メチル、カルプロパミド、ジクロシメト、フェノキサニル、フタリド、ピロキロン、トリシクラゾール、２，２，２−トリフルオロエチル｛３−メチル−１−［（４−メチルベンゾイル）アミノ］ブタン−２−イル｝カルバメート、ベナラキシル、ベナラキシル−Ｍ（キララキシル）、ブピリメート、クロジラコン、ジメチリモール、エチリモール、フララキシル、ヒメキサゾール、メタラキシル、メタラキシル−Ｍ（メフェノキサム）、オフラセ、オキサジキシル、オキソリン酸、クロゾリネート、フェンピクロニル、フルジオキソニル、イプロジオン、プロシミドン、キノキシフェン、ビンクロゾリル、ビナパクリル、ジノカップ、フェリムゾン、フルアジナム、メプチルジノカップ、ベンチアゾール、ベトキサジン、カプシマイシン、カルボン、チノメチオナト、ピリオフェノン（クラザフェノン）、クフラネブ、シフルフェナミド、シモキサニル、シプロスルファミド、ダゾメト、デバカルブ、ジクロロフェン、ジクロメジン、ジフェンゾコート、メチル硫酸ジフェンゾコート、ジフェニルアミン、エコメート、フェンピラザミン、フルメトベル、フルオロイミド、フルスルファミド、フルチアニル、ホセチル−アルミニウム、ホセチル−カルシウム、ホセチル−ナトリウム、ヘキサクロロベンゼン、イルママイシン、メタスルホカルブ、メチルイソチオシアネート、メトラフェノン、ミルジオマイシン、ナタマイシン、ニッケルジメチルジチオカルバメート、ニトロタール−イソプロピル、オクチリノン、オキサノカルブ、オキシフェンチン、ペンタクロロフェノール及びその塩、フェノトリン、リン酸及びその塩、プロパモカルブ−ホセチレート、プロパノシン−ナトリウム、プロキナジド、ピリモルフ、（２Ｅ）−３−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−３−（２−クロロピリジン−４−イル）−１−（モルホリン−４−イル）プロプ−２−エン−１−オン、（２Ｚ）−３−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−３−（２−クロロピリジン−４−イル）−１−（モルホリン−４−イル）プロプ−２−エン−１−オン、ピロールニトリン、テブフロキン、テクトフタラム、トルニファニド、トリアゾキシド、トリクラミド、ザリラミド、（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−ベンジル−３−［（｛３−［（イソブチリルオキシ）メトキシ］−４−メトキシピリジン−２−イル｝カルボニル）アミノ］−６−メチル−４，９−ジオキソ−１，５−ジオキソナン−７−イル２−メチルプロパノエート、１−（４−｛４−［（５Ｒ）−５−（２，６−ジフルオロフェニル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピペリジン−１−イル）−２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］エタノン、１−（４−｛４−［（５Ｓ）−５−（２，６−ジフルオロフェニル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピペリジン−１−イル）−２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］エタノン、１−（４−｛４−［５−（２，６−ジフルオロフェニル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピペリジン−１−イル）−２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］エタノン、１−（４−メトキシフェノキシ）−３，３−ジメチルブタン−２−イル１Ｈ−イミダゾール−１−カルボキシレート、２，３，５，６−テトラクロロ−４−（メチルスルホニル）ピリジン、２，３−ジブチル−６−クロロチエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、２，６−ジメチル−１Ｈ，５Ｈ−［１，４］ジチイノ［２，３−ｃ：５，６−ｃ’］ジピロール−１，３，５，７（２Ｈ，６Ｈ）−テトロン、２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−１−（４−｛４−［（５Ｒ）−５−フェニル−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピペリジン−１−イル）エタノン、２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−１−（４−｛４−［（５Ｓ）−５−フェニル−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピペリジン−１−イル）エタノン、２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−１−｛４−［４−（５−フェニル−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル）−１，３−チアゾール−２−イル］ピペリジン−１−イル｝エタノン、２−ブトキシ−６−ヨード−３−プロピル−４Ｈ−クロメン−４−オン、２−クロロ−５−［２−クロロ−１−（２，６−ジフルオロ−４−メトキシフェニル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］ピリジン、２−フェニルフェノール及びその塩、３−（４，４，５−トリフルオロ−３，３−ジメチル−３，４−ジヒドロイソキノリン−１−イル）キノリン、３，４，５−トリクロロピリジン−２，６−ジカルボニトリル、３−［５−（４−クロロフェニル）−２，３−ジメチル−１，２−オキサゾリジン−３−イル］ピリジン、３−クロロ−５−（４−クロロフェニル）−４−（２，６−ジフルオロフェニル）−６−メチルピリダジン、４−（４−クロロフェニル）−５−（２，６−ジフルオロフェニル）−３，６−ジメチルピリダジン、５−アミノ−１，３，４−チアジアゾール−２−チオール、５−クロロ−Ｎ’−フェニル−Ｎ’−（プロプ−２−イン−１−イル）チオフェン−２−スルホノヒドラジド、５−フルオロ−２−［（４−フルオロベンジル）オキシ］ピリミジン−４−アミン、５−フルオロ−２−［（４−メチルベンジル）オキシ］ピリミジン−４−アミン、５−メチル−６−オクチ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミン、エチル（２Ｚ）−３−アミノ−２−シアノ−３−フェニルプロプ−２−エノエート、Ｎ’−（４−｛［３−（４−クロロベンジル）−１，２，４−チアジアゾール−５−イル］オキシ｝−２，５−ジメチルフェニル）−Ｎ−エチル−Ｎ−メチルイミドホルムアミド、Ｎ−（４−クロロベンジル）−３−［３−メトキシ−４−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）フェニル］プロパンアミド、Ｎ−［（４−クロロフェニル）（シアノ）メチル］−３−［３−メトキシ−４−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）フェニル］プロパンアミド、Ｎ−［（５−ブロモ−３−クロロピリジン−２−イル）メチル］−２，４−ジクロロピリジン−３−カルボキサミド、Ｎ−［１−（５−ブロモ−３−クロロピリジン−２−イル）エチル］−２，４−ジクロロピリジン−３−カルボキサミド、Ｎ−［１−（５−ブロモ−３−クロロピリジン−２−イル）エチル］−２−フルオロ−４−ヨードピリジン−３−カルボキサミド、Ｎ−｛（Ｅ）−［（シクロプロピルメトキシ）イミノ］［６−（ジフルオロメトキシ）−２，３−ジフルオロフェニル］メチル｝−２−フェニルアセトアミド、Ｎ−｛（Ｚ）−［（シクロプロピルメトキシ）イミノ］［６−（ジフルオロメトキシ）−２，３−ジフルオロフェニル］メチル｝−２−フェニルアセトアミド、Ｎ’−｛４−［（３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−シアノ−１，２−チアゾール−５−イル）オキシ］−２−クロロ−５−メチルフェニル｝−Ｎ−エチル−Ｎ−メチルイミドホルムアミド、Ｎ−メチル−２−（１−｛［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アセチル｝ピペリジン−４−イル）−Ｎ−（１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）−１，３−チアゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−メチル−２−（１−｛［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アセチル｝ピペリジン−４−イル）−Ｎ−［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル］−１，３−チアゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−メチル−２−（１−｛［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アセチル｝ピペリジン−４−イル）−Ｎ−［（１Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル］−１，３−チアゾール−４−カルボキサミド、ペンチル｛６−［（｛［（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）（フェニル）メチリデン］アミノ｝オキシ）メチル］ピリジン−２−イル｝カルバメート、フェナジン−１−カルボン酸、キノリン−８−オル、キノリン−８−オル硫酸塩（２：１）、ｔｅｒｔ−ブチル｛６−［（｛［（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）（フェニル）メチレン］アミノ｝オキシ）メチル］ピリジン−２−イル｝カルバメート、１−メチル−３−（トリフルオロメチル）−Ｎ−［２’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（４’−クロロビフェニル−２−イル）−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（２’，４’−ジクロロビフェニル−２−イル）−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチ
    ル）−１−メチル−Ｎ−［４’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（２’，５’−ジフルオロビフェニル−２−イル）−１−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−Ｎ−［４’−（プロプ−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、５−フルオロ−１，３−ジメチル−Ｎ−［４’−（プロプ−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−［４’−（プロプ−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］ピリジン−３−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−Ｎ−［４’−（３，３−ジメチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−［４’−（３，３−ジメチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−５−フルオロ−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−Ｎ−（４’−エチニルビフェニル−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（４’−エチニルビフェニル−２−イル）−５−フルオロ−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−（４’−エチニルビフェニル−２−イル）ピリジン−３−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−［４’−（３，３−ジメチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］ピリジン−３−カルボキサミド、４−（ジフルオロメチル）−２−メチル−Ｎ−［４’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−２−イル］−１，３−トリアゾール−５−カルボキサミド、５−フルオロ−Ｎ−［４’−（３−ヒドロキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−［４’−（３−ヒドロキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］ピリジン−３−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−Ｎ−［４’−（３−メトキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、５−フルオロ−Ｎ−［４’−（３−メトキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−［４’−（３−メトキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］ピリジン−３−カルボキサミド、（５−ブロモ−２−メトキシ−４−メチルピリジン−３−イル）（２，３，４−トリメトキシ−６−メチルフェニル）メタノン、Ｎ−［２−（４−｛［３−（４−クロロフェニル）プロプ−２−イン−１−イル］オキシ｝−３−メトキシフェニル）エチル］−Ｎ２−（メチルスルホニル）バリンアミド、４−オキソ−４−［（２−フェニルエチル）アミノ］ブタン酸、ブト−３−イン−１−イル｛６−［（｛［（Ｚ）−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）（フェニル）メチレン］アミノ｝オキシ）メチル］ピリジン−２−イル｝カルバメート
    を含む一覧から選択される化学物質で処理される、請求項４〜８のいずれか一項に記載のトランスジェニックダイズ植物の種子。
  10. 請求項４〜８のいずれか一項に記載の種子から栽培するダイズの圃場での雑草抑制を目的とする、請求項９に記載の化学物質のいずれかの使用。
  11. 請求項５〜８のいずれか一項に記載の種子から栽培するダイズの圃場に、２種以上の除草剤に対する抵抗性又は耐性を前記植物に賦与することができるポリペプチドをエンコードする前記領域に対応する少なくとも２種の除草剤の組合せを適用することを含む、雑草抑制の方法であって、前記除草剤の組合せが、以下：
    ａ．メソトリオン、グルホシネート、
    ｂ．メソトリオン、グリホサート、
    ｃ．メソトリオン、グリホサート、グルホシネート、
    ｄ．メソトリオン、グリホサート、ジカンバ、
    ｅ．メソトリオン、グリホサート、２，４−Ｄ、
    ｆ．メソトリオン、グルホシネート、グルホシネート、
    ｇ．メソトリオン、グルホシネート、ジカンバ、
    ｈ．メソトリオン、グルホシネート、２，４−Ｄ、
    ｉ．メソトリオン、グリホサート、グルホシネート、ジカンバ、
    ｊ．メソトリオン、グリホサート、グルホシネート、２，４−Ｄ、
    ｋ．メソトリオン、グリホサート、グルホシネート、ジカンバ、２，４−Ｄ、
    ｌ．スルコトリオン、グルホシネート、
    ｍ．スルコトリオン、グリホサート、
    ｎ．スルコトリオン、グリホサート、グルホシネート、
    ｏ．スルコトリオン、グリホサート、ジカンバ、
    ｐ．スルコトリオン、グリホサート、２，４−Ｄ、
    ｑ．スルコトリオン、グルホシネート、グルホシネート、
    ｒ．スルコトリオン、グルホシネート、ジカンバ、
    ｓ．スルコトリオン、グルホシネート、２，４−Ｄ、
    ｔ．スルコトリオン、グリホサート、グルホシネート、ジカンバ、
    ｕ．スルコトリオン、グリホサート、グルホシネート、２，４−Ｄ、
    ｖ．スルコトリオン、グリホサート、グルホシネート、ジカンバ、２，４−Ｄ、
    ｗ．ビシクロピロン、グルホシネート、
    ｘ．ビシクロピロン、グリホサート、
    ｙ．ビシクロピロン、グリホサート、グルホシネート、
    ｚ．ビシクロピロン、グリホサート、ジカンバ、
    ａａ．ビシクロピロン、グリホサート、２，４−Ｄ、
    ｂｂ．ビシクロピロン、グルホシネート、グルホシネート、
    ｃｃ．ビシクロピロン、グルホシネート、ジカンバ、
    ｄｄ．ビシクロピロン、グルホシネート、２，４−Ｄ、
    ｅｅ．ビシクロピロン、グリホサート、グルホシネート、ジカンバ、
    ｆｆ．ビシクロピロン、グリホサート、グルホシネート、２，４−Ｄ、
    ｇｇ．ビシクロピロン、グリホサート、グルホシネート、ジカンバ、２，４−Ｄ、
    ｈｈ．イソキサフルトール、グルホシネート、
    ｉｉ．イソキサフルトール、グリホサート、
    ｊｊ．イソキサフルトール、グリホサート、グルホシネート、
    ｋｋ．イソキサフルトール、グリホサート、ジカンバ、
    ｌｌ．イソキサフルトール、グリホサート、２，４−Ｄ、
    ｍｍ．イソキサフルトール、グルホシネート、グルホシネート、
    ｎｎ．イソキサフルトール、グルホシネート、ジカンバ、
    ｏｏ．イソキサフルトール、グルホシネート、２，４−Ｄ、
    ｐｐ．イソキサフルトール、グリホサート、グルホシネート、ジカンバ、
    ｑｑ．イソキサフルトール、グリホサート、グルホシネート、２，４−Ｄ、
    ｒｒ．イソキサフルトール、グリホサート、グルホシネート、ジカンバ、２，４−Ｄ、
    ｓｓ．テンボトリオン、グルホシネート、
    ｔｔ．テンボリオン、グリホサート、
    ｕｕ．テンボトリオン、グリホサート、グルホシネート、
    ｖｖ．テンボリオン、グリホサート、ジカンバ、
    ｗｗ．テンボリオン、グリホサート、２，４−Ｄ、
    ｘｘ．テンボリオン、グルホシネート、グルホシネート、
    ｙｙ．テンボリオン、グルホシネート、ジカンバ、
    ｚｚ．テンボリオン、グルホシネート、２，４−Ｄ、
    ａａａ．テンボリオン、グリホサート、グルホシネート、ジカンバ、
    ｂｂｂ．テンボリオン、グリホサート、グルホシネート、２，４−Ｄ、
    ｃｃｃ．テンボリオン、グリホサート、グルホシネート、ジカンバ、２，４−Ｄ、
    ｄｄｄ．トプラメゾン、グルホシネート、
    ｅｅｅ．トプラメゾン、グリホサート、
    ｆｆｆ．トプラメゾン、グリホサート、グルホシネート、
    ｇｇｇ．トプラメゾン、グリホサート、ジカンバ、
    ｈｈｈ．トプラメゾン、グリホサート、２，４−Ｄ、
    ｉｉｉ．トプラメゾン、グルホシネート、グルホシネート、
    ｊｊｊ．トプラメゾン、グルホシネート、ジカンバ、
    ｋｋｋ．トプラメゾン、グルホシネート、２，４−Ｄ、
    ｌｌｌ．トプラメゾン、グリホサート、グルホシネート、ジカンバ、
    ｍｍｍ．トプラメゾン、グリホサート、グルホシネート、２，４−Ｄ、
    ｎｎｎ．トプラメゾン、グリホサート、グルホシネート、ジカンバ、２，４−Ｄ、
    ｏｏｏ．ピラスルファトール、グルホシネート、
    ｐｐｐ．ピラスルファトール、グリホサート、
    ｑｑｑ．ピラスルファトール、グリホサート、グルホシネート、
    ｒｒｒ．ピラスルファトール、グリホサート、ジカンバ、
    ｓｓｓ．ピラスルファトール、グリホサート、２，４−Ｄ、
    ｔｔｔ．ピラスルファトール、グルホシネート、グルホシネート、
    ｕｕｕ．ピラスルファトール、グルホシネート、ジカンバ、
    ｖｖｖ．ピラスルファトール、グルホシネート、２，４−Ｄ、
    ｗｗｗ．ピラスルファトール、グリホサート、グルホシネート、ジカンバ、
    ｘｘｘ．ピラスルファトール、グリホサート、グルホシネート、２，４−Ｄ、
    ｙｙｙ．ピラスルファトール、グリホサート、グルホシネート、ジカンバ、２，４−Ｄ
    の組み合わせからなる群から選択される、方法。
  12. 前記適用が、（ｉ）タンク混合適用、（ｉｉ）後の噴霧、（ｉｉｉ）混合前適用からなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
  13. 以下のステップを含む、ダイズ植物の栽培方法：
    ｉ）請求項４〜８のいずれか一項に記載の種子を蒔くステップ；
    ｉｉ）以下のクラスの殺虫剤、殺ダニ剤、殺センチュウ剤、又は軟体動物駆除剤として活性の成分：
    アラニカルブ、アルジカルブ、ベンジオカルブ、ベンフラカルブ、ブトカルボキシム、ブトキシカルボキシム、カルバリル、カルボフラン、カルボスルファン、エチオフェンカルブ、フェノブカルブ、ホルメタネート、フラチオカルブ、イソプロカルブ、メチオカルブ、メトミル、メトールカルブ、オキサミル、ピリミカルブ、プロポキスル、チオジカルブ、チオファノクス、トリアザマート、トリメタカルブ、ＸＭＣ、キシリルカルブ；アセフェート、アザメチホス、アジンホス−エチル、アジンホス−メチル、カズサホス、クロレトキシホス、クロルフェビンホス、クロルメホス、クロルピリホス、クロルピリホス−メチル、クマホス、シアノホス、デメトン−Ｓ−メチル、ジアジノン、ジクロルボス／ＤＤＶＰ、ジクロトホス、ジメトエート、ジメチルビンホス、ジスルホトン、ＥＰＮ、エチオン、エトプロホス、ファムフール、ファナミホス、フェニトロチオン、フェンチオン、ホスチアゼート、ヘプテノホス、イミシアホス、イソフェンホス、イソプロピルＯ−（メトキシアミノチオ−ホスホリル）サリチル酸塩、イソキサチオン、マラチオン、メカルバム、メタミドホス、メチダチオン、メビンホス、モノクロトホス、ナレド、オメトエート、オキシデメントン−メチル、パラチオン、パラチオン−メチル、フェントエート、ホレート、ホサロン、ホスメト、ホスファミドン、ホキシム、ピリミホス−メチル、プロフェノホス、プロペタンホス、プロチオホス、ピラクロホス、ピリダフェンチオン、キナルホス、スルホテプ、テブピリンホス、テメホス、テルブホス、テトラクロルビンホス、チオメトン、トリアゾホス、トリクロルホン、バミドチオン、シクロジエンオルガノクロリン、クロルダン、エンドスルファン；エチプロール、フィプロニル、アクリナトリン、アレトリン、ｄ−シス−トランスアレトリン、ｄ−トランスアレトリン、ビフェントリン、ビオアレトリン、ビオアレトリンＳ−シクロペンテニル異性体、ビオレスメトリン、シクロプロトリン、シフルトリン、β−シフルトリン、シハロトリン、λ−シハロトリン、γ−シハロトリン、シペルメトリン、α−シペルメトリン、β−シペルメトリン、θ−シペルメトリン、ζ−シペルメトリン、シフェノトリン［（１Ｒ）−トランス異性体］、デルタメトリン、エンペントリン［（ＥＺ）−（１Ｒ）異性体）、エスフェンバレレート、エトフェンプロクス、フェンプロパトリン、フェンバレレート、フルシトリネート、フルメトリン、τ−フルバリネート、ハルフェンプロクス、イミプロトリン、カデトリン、ペルメトリン、フェノトリン［（１Ｒ）−トランス異性体）、プラレトリン、ピレトリン（ジョチュウギク（ｐｙｒｅｔｈｒｕｍ））、レスメトリン、シラフルオフェン、テフルトリン、テトラメトリン、テトラメトリン［（１Ｒ）異性体）］、トラロメトリン、トランスフルトリン；ＤＤＴ；メトキシクロル、アセタミプリド、クロチアニジン、ジノテフラン、イミダクロピド、ニテンピラム、チアクロプリド、チアメトキサム；ニコチン、スピネトラム、スピノサド、アバメクチン、エマメクチン安息香酸塩、レピメクチン、ミルベメクチン、ヒドロプレン、キノプレン、メトプレン；フェノキシカルブ；ピリプロキシフェン、クロロピクリン；フッ化スルフリル；ホウ砂；吐酒石、ピメトロジン；フロニカミド、クロフェンテジン、ヘキリチアゾクス、ジフロビダジン、エトキサゾール、バチルス・チューリンゲンシス亜種イスラエレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｉｓｒａｅｌｅｎｓｉｓ）、バチルス・スファエリクス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）、バチルス・チューリンゲンシス亜種アイザワイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ａｉｚａｗａｉ）、バチルス・チューリンゲンシス亜種クルスタキ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｋｕｒｓｔａｋｉ）、バチルス・チューリンゲンシス亜種テネブリオニス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｔｅｎｅｂｒｉｏｎｉｓ）、ＢＴ穀物タンパク質：Ｃｒｙ１Ａｂ、Ｃｒｙ１Ａｃ、Ｃｒｙ１Ｆａ、Ｃｒｙ２Ａｂ、ｍＣｒｙ３Ａ、Ｃｒｙ３Ａｂ、Ｃｒｙ３Ｂｂ、Ｃｒｙ３４／３５Ａｂ１、ジアフェンチウロン、アゾシクロチン、シヘキサチン、酸化フェンブタスズ；プロパルギット、テトラジホン、クロルフェナピル、ＤＮＯＣ、スルフルラミド、ベンスルタプ、カルタップ塩酸塩、チオシクラム、チオスルタップ−ナトリウム、ビストリフルロン、クロルフルアズロン、ジフルベンズロン、フルシクロクスロン、フルフェノクスロン、ヘキサフルムロン、ルフェヌロン、ノバルロン、ノビフルムロン、テフルベズロン、トリフルムロン、ブプロフェジン、シロマジン、クロマフェノジド、ハロフェノジド、メトキシフェノジド、テブフェノジド、アミトラズ、ヒドラメチルノン；アセキノシル；フルアクリピリム、フェナザキン、フェンピロキシメート、ピリミジフェン、ピリダベン、テブフェンピラド、トルフェンピラド、ロテノン（デリス）、インドキサカルブ；メタフルミゾン、スピロジクロフェン、スピロメシフェン、スピロテトラマト、リン化アルミニウム、リン化カルシウム、ホスフィン、リン化亜鉛、シエノピラフェン、クロラントラニリプロール、フルベンジアミド、アミドフルメト、アザジラクチン、ベンクロチアズ、ベンゾキシメート、ビフェナゼート、ブロモプロピレート、キノメチオナート、氷晶石、シアントリニプロール（Ｃｙａｚｙｐｙｒ）、シフルメトフェン、ジコフォール、ジフロビダジン、フルエンスルホン、フルフェネリム、フルフィプロール、フルオピラム、フフェノジド、イミダクロチズ、イプロジオン、メペルフルトリン、ピリダリル、ピリフルキナゾン、テトラメチルフルトリン、ヨードメタン；バチルス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ）をベースとする製品（限定されないが、株ＣＮＣＭ Ｉ−１５８２、例えば、ＶＯＴｉＶＯ（商標）、ＢｉｏＮｅｍなど）；３−ブロモ−Ｎ−｛２−ブロモ−４−クロロ−６−［（１−シクロプロピルエチル）カルバモイル］フェニル｝−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボキサミド（国際公開第２００５／０７７９３４号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−ブロモピリジン−３−イル）メチル］（２−フルオロエチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４４号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−フルオロピリジン−３−イル）メチル］（２，２−ジフルオロエチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４４から公知である）、４−｛［（２−クロロ−１，３−チアゾール−５−イル）メチル］（２−フルオロエチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４４号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−クロルピリジン−３−イル）メチル］（２−フルオロエチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４４号パンフレットから公知である）、フルピラジフロン、４−｛［（６−クロル−５−フルオロピリジン−３−イル）メチル］（メチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４３号パンフレットから公知である）、４−｛［（５，６−ジクロロピリジン−３−イル）メチル］（２−フルオロエチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４６号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−クロロ−５−フルオロピリジン−３−イル）メチル］−（シクロプロピル）−アミノ｝−フラン−２（５Ｈ）−オン（国際公開第２００７／１１５６４３号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］−（シクロプロピル）−アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（欧州特許出願公開第Ａ−０ ５３９ ５８８号明細書から公知である）、４−｛［（６−クロルピリジン−３−イル）−メチル］（メチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（欧州特許出願公開第Ａ−０ ５３９ ５８８号明細書から公知である）、｛［１−（６−クロロピリジン−３−イル）エチル］（メチル）オキシド−λ4−スルファニリデン｝シアンアミド（国際公開第２００７／１４９１３４号パンフレットから公知である）並びにそのジアステレオマー｛［（１Ｒ）−１−（６−クロロピリジン−３−イル）エチル］（メチル）オキシド−λ4−スルファニリデン｝シアンアミド（Ａ）及び｛［（１Ｓ）−１−（６−クロロピリジン−３−イル）エチル］（メチル）オキシド−λ4−スルファニリデン｝シアンアミド（Ｂ）（これも、国際公開第２００７／１４９１３４号パンフレットから公知である）、さらには、スルホキサフロール及びそのジアステレオマー［（Ｒ）−メチル（オキシド）｛（１Ｒ）−１−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］エチル｝−λ4−スルファニリデン］シアンアミド（Ａ１）及び［（Ｓ）−メチル（オキシド）｛（１Ｓ）−１−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］エチル｝−λ4−スルファニリデン］シアンアミド（Ａ２）（ジアステレオマーＡ群と呼ばれる）（国際公開第２０１０／０７４７４７号パンフレット、国際公開第２０１０／０７４７５１号パンフレットから公知である）、［（Ｒ）−メチル（オキシド）｛（１Ｓ）−１−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］エチル｝−λ4−スルファニリデン］シアンアミド（Ｂ１）及び［（Ｓ）−メチル（オキシド）｛（１Ｓ）−１−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］エチル｝−λ4−スルファニリデン］シアンアミド（Ｂ２）（ジアステレオマーＢ群と呼ばれる）（これもまた、国際公開第２０１０／０７４７４７号パンフレット、国際公開第２０１０／０７４７５１号パンフレットから公知である）、並びに１１−（４−クロロ−２，６−ジメチルフェニル）−１２−ヒドロキシ−１，４−ジオキサ−９−アザジスピロ［４．２．４．２］テトラデク−１１−エン−１０−オン（国際公開第２００６／０８９６３３号パンフレットから公知である）、３−（４’−フルオロ−２，４−ジメチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デク−３−エン−２−オン（国際公開第２００８／０６７９１１号パンフレットから公知である）、１−｛２−フルオロ−４−メチル−５−［（２，２，２−トリフルオルエチル）スルフィニル］フェニル｝−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−アミン（国際公開第２００６／０４３６３５号パンフレットから公知である）、［（３Ｓ，４ａＲ，１２Ｒ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−３−［（シクロプロピルカルボニル）オキシ］−６，１２−ジヒドロキシ−４，１２ｂ−ジメチル−１１−オキソ−９−（ピリジン−３−イル）−１，３，４，４ａ，５，６，６ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−デカヒドロ−２Ｈ，１１Ｈ−ベンゾ［ｆ］−ピラノ［４，３−ｂ］クロメン−４−イル］メチルシクロプロパンカルボキシレート（国際公開第２００８／０６６１５３号パンフレットから公知である）、２−シアノ−３−（ジフルオロメトキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルベンゼンスルホンアミド（国際公開第２００６／０５６４３３号パンフレットから公知である）、２−シアノ−３−（ジフルオロメトキシ）−Ｎ−メチルベンゼンスルホンアミド（国際公開第２００６／１００２８８号パンフレットから公知である）、２−シアノ−３−（ジフルオロメトキシ）−Ｎ−エチルベンゼンスルホンアミド（国際公開第２００５／０３５４８６号パンフレットから公知である）、４−（ジフルオロメトキシ）−Ｎ−エチル−Ｎ−メチル−１，２−ベンゾチアゾール−３−アミン１，１−ジオキシド（国際公開第２００７／０５７４０７号パンフレットから公知である）、Ｎ−［１−（２，３−ジメチルフェニル）−２−（３，５−ジメチルフェニル）エチル］−４，５−ジヒドロ−１，３−チアゾール−２−アミン（国際公
    開第２００８／１０４５０３号パンフレットから公知である）、｛１’−［（２Ｅ）−３−（４−クロロフェニル）プロプ−２−エン−１−イル］−５−フルオロスピロ［インドール−３，４’−ピペリジン］−１（２Ｈ）−イル｝（２−クロロピリジン−４−イル）メタノン（国際公開第２００３／１０６４５７号パンフレットから公知である）、３−（２，５−ジメチルフェニル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−１，８−ジアザスピロ［４．５］デク−３−エン−２−オン（国際公開第２００９／０４９８５１号パンフレットから公知である）、３−（２，５−ジメチルフェニル）−８−メトキシ−２−オキソ−１，８−ジアザスピロ［４．５］デク−３−エン−４−イルエチル炭酸塩（国際公開第２００９／０４９８５１号パンフレットから公知である）、４−（ブト−２−イン−１−イルオキシ）−６−（３，５−ジメチルピペリジン−１−イル）−５−フルオロピリミジン（国際公開第２００４／０９９１６０号パンフレットから公知である）、（２，２，３，３，４，４，５，５−オクタフルオロペンチル）（３，３，３−トリフルオロプロピル）マロノニトリル（国際公開第２００５／０６３０９４号パンフレットから公知である）、（２，２，３，３，４，４，５，５−オクタフルオロペンチル）（３，３，４，４，４−ペンタフルオロ-ブチル）マロノニトリル（国際公開第２００５／０６３０９４号パンフレットから公知である）、８−［２−（シクロプロピルメトキシ）−４−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−３−［６−（トリフルオロメチル）−ピリダジン−３−イル］−３−アザビシクロ［３．２．１］オクタン（国際公開第２００７／０４０２８０号パンフレットから公知である）、フロメトキン、ＰＥ１３６４（ＣＡＳ−Ｒｅｇ．Ｎｏ．１２０４７７６−６０−２）（特開２０１０−０１８５８６号公報から公知である）、５−［５−（３，５−ジクロロフェニル）−５−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ベンゾニトリル（国際公開第２００７／０７５４５９号パンフレットから公知である）、５−［５−（２−クロロピリジン−４−イル）−５−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ベンゾニトリル（国際公開第２００７／０７５４５９号パンフレットから公知である）、４−［５−（３，５−ジクロロフェニル）−５−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−２−メチル−Ｎ−｛２−オキソ−２−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−エチル｝ベンズアミド（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］−（シクロプロピル）アミノ｝−１，３−オキサゾール−２（５Ｈ）−オン、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］（２，２−ジフルオロエチル）−アミノ｝−１，３−オキサゾール−２（５Ｈ）−オン、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］（エチル）アミノ｝−１，３−オキサゾール−２（５Ｈ）−オン、４−｛［（６−クロロピリジン−３−イル）メチル］（メチル）アミノ｝−１，３−オキサゾール−２（５Ｈ）−オン（すべて、国際公開第２０１０／００５６９２号パンフレットから公知である）、ＮＮＩ−０７１１（国際公開第２００２／０９６８８２号パンフレットから公知である）、１−アセチル−Ｎ−［４−（１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−メトキシプロパン−２−イル）−３−イソブチルフェニル］−Ｎ−イソブチリル−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド（国際公開第２００２／０９６８８２号パンフレットから公知である）、メチル２−［２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝アミノ）−５−クロロ−３−メチルベンゾイル］−２−メチルヒドラジンカルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、メチル２−［２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝アミノ）−５−シアノ−３−メチルベンゾイル］−２−エチルヒドラジンカルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、メチル２−［２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝−アミノ）−５−シアノ−３−メチルベンゾイル］−２−メチルヒドラジンカルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、メチル２−［３，５−ジブロモ−２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝アミノ）−５−シアノ−３−メチルベンゾイル］−１，２−ジエチルヒドラジンカルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、メチル２−［３，５−ジブロモ−２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝アミノ）ベンゾイル］−２−エチルヒドラジン−カルボキシレート（国際公開第２００５／０８５２１６号パンフレットから公知である）、（５ＲＳ，７ＲＳ；５ＲＳ，７ＳＲ）−１−（６−クロロ−３−ピリジルメチル）−１，２，３，５，６，７−ヘキサヒドロ−７−メチル−８−ニトロ−５−プロポキシイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン（国際公開第２００７／１０１３６９号パンフレットから公知である）、Ｎ−［２−（５−アミノ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）−４−クロロ−６−メチルフェニル］−３−ブロモ−１−（３−クロロ−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボキサミド（中国特許第１０２０５７９２５号明細書から公知である）、並びにメチル２−［３，５−ジブロモ−２−（｛［３−ブロモ−１−（３−クロロピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］カルボニル｝アミノ）ベンゾイル］−２−エチル−１−メチルヒドラジンカルボキシレート（国際公開第２０１１／０４９２３３号パンフレットから公知である）
    から選択される農薬を適用するステップ；並びに
    ｉｉｉ）以下：
    アルジモルフ、アザコナゾール、ビテルタノール、ブロムコナゾール、シプロコナゾール、ジクロブトラゾール、ジフェノコナゾール、ジニコナゾール、ジニコナゾール−Ｍ、ドデモルフ、酢酸ドデモルフ、エポキシコナゾール、エタコナゾール、フェナリモール、フェンブコナゾール、フェンヘキサミド、フェンプロピジン、フェンプロピモルフ、フルキノコナゾール、フルルプリミドール、フルシラゾール、フルトリアフォール、フルコナゾール、フルコナゾール−シス、ヘキサコナゾール、イマザリル、硫酸イマザリル、イミベンコナゾール、イプコナゾール、メトコナゾール、ミクロブタニル、ナフチフィン、ヌアリモール、オキスポコナゾール、パクロブトラゾール、ペフラゾエート、ペンコナゾール、ピペラリン、プロクロラズ、プロピコナゾール、プロチオコナゾール、ピリブチカルブ、ピリフェノクス、キンコナゾール、シメコナゾール、スピロキサミン、テブコナゾール、テルビナフィン、テトラコナゾール、トリアジメホン、トリアジメノール、トリデモルフ、トリフルミゾール、トリホリン、トリチコナゾール、ウニコナゾール、ウニコナゾール−ｐ、ビニコナゾール、ボリコナゾール、１−（４−クロロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）シクロへプタノール、メチル１−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボキシレート、Ｎ’−｛５−（ジフルオロメチル）−２−メチル−４−［３−（トリメチルシリル）プロポキシ］フェニル｝−Ｎ−エチル−Ｎ−メチルイミドホルムアミド、Ｎ−エチル−Ｎ−メチル−Ｎ’−｛２−メチル−５−（トリフルオロメチル）−４−［３−（トリメチルシリル）プロポキシ］フェニル｝イミドホルムアミド、Ｏ−［１−（４−メトキシフェノキシ）−３，３−ジメチルブタン−２−イル］１Ｈ−イミダゾール−１−カルボチオエート、ビキサフェン、ボスカリド、カルボキシン、ジフルメトリム、フェンフラム、フルピラム、フルトラニル、フルキサピロキサド、フラメトピル、フルメシクロクス、イソピラザム（ｓｙｎ−エピマーラセミ体１ＲＳ、４ＳＲ、９ＲＳ及び抗エピマーラセミ体１ＲＳ、４ＳＲ、９ＳＲの混合物）、イソピラザム（抗エピマーラセミ体１ＲＳ、４ＳＲ、９ＳＲの混合物）、イソピラザム（抗エピマー鏡像体１Ｒ、４Ｓ、９Ｓの混合物）、イソピラザム（抗エピマー鏡像体１Ｓ、４Ｒ、９Ｒの混合物）、イソピラザム（ｓｙｎエピマーラセミ体１ＲＳ、４ＳＲ、９ＲＳ）、イソピラザム（ｓｙｎ−エピマー鏡像体１Ｒ、４Ｓ，９Ｒ）、イソピラザム（ｓｙｎ−エピマー鏡像体１Ｓ、４Ｒ、９Ｓ）、メプトニル、オキシカルボキシン、ペンフルフェン、ペンチオピラド、セダキサン、チフルザミド、１−メチル−Ｎ−［２−（１，１，２，２−テトラフルオロエトキシ）フェニル］−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−Ｎ−［２−（１，１，２，２−テトラフルオロエトキシ）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−Ｎ−［４−フルオロ−２−（１，１，２，３，３，３−ヘキサフルオロプロポキシ）フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−［１−（２，４−ジクロロフェニル）−１−メトキシプロパン−２−イル］−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、５，８−ジフルオロ−Ｎ−［２−（２−フルオロ−４−｛［４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝フェニル）エチル］キナゾリン−４−アミン、Ｎ−［９−（ジクロロメチレン）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，４−メタノナフタレン−５−イル］−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−［（１Ｓ，４Ｒ）−９−（ジクロロメチレン）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，４−メタノナフタレン−５−イル］−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−［（１Ｒ，４Ｓ）−９−（ジクロロメチレン）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，４−メタノナフタレン−５−イル］−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、アメトクラジン、アミスルボム、アゾキシストロビン、シアゾファミド、クメトキシストロビン、クモキシストロビン、ジモキシストロビン、エネストロブリン、ファモキサドン、フェナミドン、フェノキシストロビン、フルオキサストロビン、クレソキシム−メチル、メトミノストロビン、オリサストロビン、ピコキシストロビン、ピラクロストロビン、ピラメトストロビン、ピラオキシストロビン、ピリベンカルブ、トリクロピリカルブ、トリフロキシストロビン、（２Ｅ）−２−（２−｛［６−（３−クロロ−２−メチルフェノキシ）−５−フルオロピリミジン−４−イル］オキシ｝フェニル）−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチルエタンアミド、（２Ｅ）−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチル−２−（２−｛［（｛（１Ｅ）−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチリデン｝アミノ）オキシ］メチル｝フェニル）エタンアミド、（２Ｅ）−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチル−２−｛２−［（Ｅ）−（｛１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ｝イミノ）メチル］フェニル｝エタンアミド、（２Ｅ）−２−｛２−［（｛［（１Ｅ）−１−（３−｛［（Ｅ）−１−フルオロ−２−フェニルエテニル］オキシ｝フェニル）エチリデン］アミノ｝オキシ）メチル］フェニル｝−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチルエタンアミド、（２Ｅ）−２−｛２−［（｛［（２Ｅ，３Ｅ）−４−（２，６−ジクロロフェニル）ブト−３−エン−２−イリデン］アミノ｝オキシ）メチル］フェニル｝−２−（メトキシイミノ）−Ｎ−メチルエタンアミド、２−クロロ−Ｎ−（１，１，３−トリメチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−４−イル）ピリジン−３−カルボキサミド、５−メトキシ−２−メチル−４−（２−｛［（｛（１Ｅ）−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチリデン｝アミノ）オキシ］メチル｝フェニル）−２，４−ジヒドロ−３Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−オン、メチル（２Ｅ）−２−｛２−［（｛シクロプロピル［（４−メトキシフェニル）イミノ］メチル｝スルファニル）メチル］フェニル｝−３−メトキシプロプ−２−エノエート、Ｎ−（３−エチル−３，５，５−トリメチルシクロヘキシル）−３−（ホルミルアミノ）−２−ヒドロキシベンズアミド、２−｛２−［（２，５−ジメチルフェノキシ）メチル］フェニル｝−２−メトキシ−Ｎ−メチルアセトアミド、（２Ｒ）−２−｛２−［（２，５−ジメチルフェノキシ）メチル］フェニル｝−２−メトキシ−Ｎ−メチルアセトアミド、ベノミル、カルベンダジム、クロルフェナゾール、ジエトフェンカルブ、エタボキサム、フルオピコリド、フベリダゾール、ペンシクロン、チアベンダゾール、チオファネートメチル、チオファネート、ゾキサミド、５−クロロ−７−（４−メチルピペリジン−１−イル）−６−（２，４，６−トリフルオロフェニル）［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン、３−クロロ−５−（６−クロロピリジン−３−イル）−６−メチル−４−（２，４，６−トリフルオロフェニル）ピリダジン、ボルドー液、キャプタホール、キャプタン、クロロタロニル、水酸化銅、ナフテン酸銅、酸化第一銅、塩基性塩化銅、硫酸銅（ＩＩ）、ジクロフルアニド、ジチアノン、ドジン、ドジンフリーベース、フェルバム、フルオフォルペット、フォルペット、グアザチン、酢酸グアザチン、イミノクタジン、イミノクタジンアルベシル酸塩、イミノクタジン三酢酸塩、マンカッパー、マンコゼブ、マネブ、メチラム、メチラム亜鉛、オキシン銅、プロパミジン、プロピネブ、イオウ、多硫化カルシウムなどのイオウ製剤、チラム、トリルフルアニド、ジネブ、ジラム、アシベンゾラルＳメチル、イソチアニル、プロベナゾール、チアジニル、アンドプリム、ブラスチシジン−Ｓ、シプロジニル、カスガマイシン、カスガマイシン塩酸塩、メパニピリム、ピリメタニル、３−（５−フルオロ−３，３，４，４−テトラメチル−３，４−ジヒドロイソキノリン−１−イル）キノリン、酢酸フェンチン、塩化フェンチン、水酸化フェンチン、シルチオファム、ベンチアバリカルブ、ジメトモルフ、フルモルフ、イプロバリカルブ、マンジプロパミド、ポリオキシン、ポリオキソリム、バリダマイシンＡ、バリフェナレート、ビフェニル、クロロネブ、ジクロラン、エジフェンホス、エトリジアゾール、ヨードカルブ、イプロベンホス、イソプロチオラン、プロパモカルブ、プロパモカルブ塩酸塩、プロチオカルブ、ピラゾホス、キントゼン、テクナゼントルクロホス−メチル、カルプロパミド、ジクロシメト、フェノキサニル、フタリド、ピロキロン、トリシクラゾール、２，２，２−トリフルオロエチル｛３−メチル−１−［（４−メチルベンゾイル）アミノ］ブタン−２−イル｝カルバメート、ベナラキシル、ベナラキシル−Ｍ（キララキシル）、ブピリメート、クロジラコン、ジメチリモール、エチリモール、フララキシル、ヒメキサゾール、メタラキシル、メタラキシル−Ｍ（メフェノキサム）、オフラセ、オキサジキシル、オキソリン酸、クロゾリネート、フェンピクロニル、フルジオキソニル、イプロジオン、プロシミドン、キノキシフェン、ビンクロゾリル、ビナパクリル、ジノカップ、フェリムゾン、フルアジナム、メプチルジノカップ、ベンチアゾール、ベトキサジン、カプシマイシン、カルボン、チノメチオナト、ピリオフェノン（クラザフェノン）、クフラネブ、シフルフェナミド、シモキサニル、シプロスルファミド、ダゾメト、デバカルブ、ジクロロフェン、ジクロメジン、ジフェンゾコート、メチル硫酸ジフェンゾコート、ジフェニルアミン、エコメート、フェンピラザミン、フルメトベル、フルオロイミド、フルスルファミド、フルチアニル、ホセチル−アルミニウム、ホセチル−カルシウム、ホセチル−ナトリウム、ヘキサクロロベンゼン、イルママイシン、メタスルホカルブ、メチルイソチオシアネート、メトラフェノン、ミルジオマイシン、ナタマイシン、ニッケルジメチルジチオカルバメート、ニトロタール−イソプロピル、オクチリノン、オキサノカルブ、オキシフェンチン、ペンタクロロフェノール及びその塩、フェノトリン、リン酸及びその塩、プロパモカルブ−ホセチレート、プロパノシン−ナトリウム、プロキナジド、ピリモルフ、（２Ｅ）−３−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−３−（２−クロロピリジン−４−イル）−１−（モルホリン−４−イル）プロプ−２−エン−１−オン、（２Ｚ）−３−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−３−（２−クロロピリジン−４−イル）−１−（モルホリン−４−イル）プロプ−２−エン−１−オン、ピロールニトリン、テブフロキン、テクトフタラム、トルニファニド、トリアゾキシド、トリクラミド、ザリラミド、（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−ベンジル−３−［（｛３−［（イソブチリルオキシ）メトキシ］−４−メトキシピリジン−２−イル｝カルボニル）アミノ］−６−メチル−４，９−ジオキソ−１，５−ジオキソナン−７−イル２−メチルプロパノエート、１−（４−｛４−［（５Ｒ）−５−（２，６−ジフルオロフェニル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピペリジン−１−イル）−２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］エタノン、１−（４−｛４−［（５Ｓ）−５−（２，６−ジフルオロフェニル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピペリジン−１−イル）−２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］エタノン、１−（４−｛４−［５−（２，６−ジフルオロフェニル）−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピペリジン−１−イル）−２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル
    ］エタノン、１−（４−メトキシフェノキシ）−３，３−ジメチルブタン−２−イル１Ｈ−イミダゾール−１−カルボキシレート、２，３，５，６−テトラクロロ−４−（メチルスルホニル）ピリジン、２，３−ジブチル−６−クロロチエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、２，６−ジメチル−１Ｈ，５Ｈ−［１，４］ジチイノ［２，３−ｃ：５，６−ｃ’］ジピロール−１，３，５，７（２Ｈ，６Ｈ）−テトロン、２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−１−（４−｛４−［（５Ｒ）−５−フェニル−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピペリジン−１−イル）エタノン、２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−１−（４−｛４−［（５Ｓ）−５−フェニル−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ピペリジン−１−イル）エタノン、２−［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−１−｛４−［４−（５−フェニル−４，５−ジヒドロ−１，２−オキサゾール−３−イル）−１，３−チアゾール−２−イル］ピペリジン−１−イル｝エタノン、２−ブトキシ−６−ヨード−３−プロピル−４Ｈ−クロメン−４−オン、２−クロロ−５−［２−クロロ−１−（２，６−ジフルオロ−４−メトキシフェニル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］ピリジン、２−フェニルフェノール及びその塩、３−（４，４，５−トリフルオロ−３，３−ジメチル−３，４−ジヒドロイソキノリン−１−イル）キノリン、３，４，５−トリクロロピリジン−２，６−ジカルボニトリル、３−［５−（４−クロロフェニル）−２，３−ジメチル−１，２−オキサゾリジン−３−イル］ピリジン、３−クロロ−５−（４−クロロフェニル）−４−（２，６−ジフルオロフェニル）−６−メチルピリダジン、４−（４−クロロフェニル）−５−（２，６−ジフルオロフェニル）−３，６−ジメチルピリダジン、５−アミノ−１，３，４−チアジアゾール−２−チオール、５−クロロ−Ｎ’−フェニル−Ｎ’−（プロプ−２−イン−１−イル）チオフェン−２−スルホノヒドラジド、５−フルオロ−２−［（４−フルオロベンジル）オキシ］ピリミジン−４−アミン、５−フルオロ−２−［（４−メチルベンジル）オキシ］ピリミジン−４−アミン、５−メチル−６−オクチ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミン、エチル（２Ｚ）−３−アミノ−２−シアノ−３−フェニルプロプ−２−エノエート、Ｎ’−（４−｛［３−（４−クロロベンジル）−１，２，４−チアジアゾール−５−イル］オキシ｝−２，５−ジメチルフェニル）−Ｎ−エチル−Ｎ−メチルイミドホルムアミド、Ｎ−（４−クロロベンジル）−３−［３−メトキシ−４−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）フェニル］プロパンアミド、Ｎ−［（４−クロロフェニル）（シアノ）メチル］−３−［３−メトキシ−４−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）フェニル］プロパンアミド、Ｎ−［（５−ブロモ−３−クロロピリジン−２−イル）メチル］−２，４−ジクロロピリジン−３−カルボキサミド、Ｎ−［１−（５−ブロモ−３−クロロピリジン−２−イル）エチル］−２，４−ジクロロ-ピリジン−３−カルボキサミド、Ｎ−［１−（５−ブロモ−３−クロロピリジン−２−イル）エチル］−２−フルオロ−４−ヨードピリジン−３−カルボキサミド、Ｎ−｛（Ｅ）−［（シクロプロピルメトキシ）イミノ］［６−（ジフルオロメトキシ）−２，３−ジフルオロフェニル］メチル｝−２−フェニルアセトアミド、Ｎ−｛（Ｚ）−［（シクロプロピルメトキシ）イミノ］［６−（ジフルオロメトキシ）−２，３−ジフルオロ-フェニル］メチル｝−２−フェニルアセトアミド、Ｎ’−｛４−［（３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−シアノ−１，２−チアゾール−５−イル）オキシ］−２−クロロ−５−メチルフェニル｝−Ｎ−エチル−Ｎ−メチルイミドホルムアミド、Ｎ−メチル−２−（１−｛［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アセチル｝ピペリジン−４−イル）−Ｎ−（１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）−１，３−チアゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−メチル−２−（１−｛［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アセチル｝ピペリジン−４−イル）−Ｎ−［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル］−１，３−チアゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−メチル−２−（１−｛［５−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アセチル｝ピペリジン−４−イル）−Ｎ−［（１Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル］−１，３−チアゾール−４−カルボキサミド、ペンチル｛６−［（｛［（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）（フェニル）メチリデン］アミノ｝オキシ）メチル］ピリジン−２−イル｝カルバメート、フェナジン−１−カルボン酸、キノリン−８−オル、キノリン−８−オル硫酸塩（２：１）、ｔｅｒｔ−ブチル｛６−［（｛［（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）（フェニル）メチレン］アミノ｝オキシ）メチル］ピリジン−２−イル｝カルバメート、１−メチル−３−（トリフルオロメチル）−Ｎ−［２’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（４’−クロロビフェニル−２−イル）−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（２’，４’−ジクロロビフェニル−２−イル）−３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−Ｎ−［４’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（２’，５’−ジフルオロビフェニル−２−イル）−１−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−Ｎ−［４’−（プロプ−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、５−フルオロ−１，３−ジメチル−Ｎ−［４’−（プロプ−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−［４’−（プロプ−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］ピリジン−３−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−Ｎ−［４’−（３，３−ジメチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−［４’−（３，３−ジメチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−５−フルオロ−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−Ｎ−（４’−エチニルビフェニル−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（４’−エチニルビフェニル−２−イル）−５−フルオロ−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−（４’−エチニルビフェニル−２−イル）ピリジン−３−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−［４’−（３，３−ジメチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］ピリジン−３−カルボキサミド、４−（ジフルオロメチル）−２−メチル−Ｎ−［４’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−２−イル］−１，３−トリアゾール−５−カルボキサミド、５−フルオロ−Ｎ−［４’−（３−ヒドロキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−［４’−（３−ヒドロキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］ピリジン−３−カルボキサミド、３−（ジフルオロメチル）−Ｎ−［４’−（３−メトキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、５−フルオロ−Ｎ−［４’−（３−メトキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、２−クロロ−Ｎ−［４’−（３−メトキシ−３−メチルブト−１−イン−１−イル）ビフェニル−２−イル］ピリジン−３−カルボキサミド、（５−ブロモ−２−メトキシ−４−メチルピリジン−３−イル）（２，３，４−トリメトキシ−６−メチルフェニル）メタノン、Ｎ−［２−（４−｛［３−（４−クロロフェニル）プロプ−２−イン−１−イル］オキシ｝−３−メトキシフェニル）エチル］−Ｎ２−（メチルスルホニル）バリンアミド、４−オキソ−４−［（２−フェニルエチル）アミノ］ブタン酸、ブト−３−イン−１−イル｛６−［（｛［（Ｚ）−（１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）（フェニル）メチレン］アミノ｝オキシ）メチル］ピリジン−２−イル｝カルバメート
    から選択される殺菌剤を適用するステップ。
  14. ダイズ製品の生産における請求項４〜８のいずれか一項に記載の種子の使用。
  15. 前記ダイズ製品が、ミール、粉、フレーク、又は油である、請求項１４に記載の使用。
  16. 前記ダイズ製品が、ミールである、請求項１４又は１５に記載の使用。
  17. 以下：
    ａ）請求項４〜８のいずれか一項に記載の種子からダイズ植物を栽培するステップであり、この栽培ステップは、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の方法を用いた雑草管理を含み；
    ｂ）前記ダイズ植物からダイズを回収するステップ；及び
    ｃ）ダイズ油を抽出することにより、ダイズ油及びダイズミールを取得するステップ
    を含む、ダイズミール及びダイズ油の製造方法。
  18. ダイズ油を抽出する前に、以下：
    （ｉ）前記回収したダイズを加熱して、その水分を減少させるステップ；
    （ｉｉ）前記回収したダイズを粉砕して、その鞘部を除去するステップ；及び
    （ｉｉｉ）ダイズを小さなフレークにプレスするステップ
    の少なくとも１つを実施する、請求項１７に記載の方法。
  19. 前記ダイズ油を抽出するステップが、溶媒を使用して実施される、請求項１７又は１８に記載の方法。
JP2013544621A 2010-12-15 2011-12-09 ダイズイベントｓｙｈｔ０ｈ２及びその組成物並びにその検出方法 Active JP6278446B2 (ja)

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