EA032683B1 - Набор для идентификации события syht0h2 в биологическом образце (варианты) - Google Patents

Набор для идентификации события syht0h2 в биологическом образце (варианты) Download PDF

Info

Publication number
EA032683B1
EA032683B1 EA201600085A EA201600085A EA032683B1 EA 032683 B1 EA032683 B1 EA 032683B1 EA 201600085 A EA201600085 A EA 201600085A EA 201600085 A EA201600085 A EA 201600085A EA 032683 B1 EA032683 B1 EA 032683B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
seq
sequence
dna
syht0h2
snp
Prior art date
Application number
EA201600085A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201600085A1 (ru
Inventor
Джон Хипскинд
Кристина Бёрджин
Ракеш Джейн
Каролин Терпстра
Марина Сигарева
Анник Дефрамон
Бекки Брейтингер
Ванс Крамер
Вэйнин Гу
Original Assignee
Зингента Партисипейшнс Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=46245292&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA032683(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Зингента Партисипейшнс Аг filed Critical Зингента Партисипейшнс Аг
Publication of EA201600085A1 publication Critical patent/EA201600085A1/ru
Publication of EA032683B1 publication Critical patent/EA032683B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01C—PLANTING; SOWING; FERTILISING
    • A01C1/00—Apparatus, or methods of use thereof, for testing or treating seed, roots, or the like, prior to sowing or planting
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/36—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a singly bound oxygen or sulfur atom attached to the same carbon skeleton, this oxygen or sulfur atom not being a member of a carboxylic group or of a thio analogue, or of a derivative thereof, e.g. hydroxy-carboxylic acids
    • A01N37/38—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a singly bound oxygen or sulfur atom attached to the same carbon skeleton, this oxygen or sulfur atom not being a member of a carboxylic group or of a thio analogue, or of a derivative thereof, e.g. hydroxy-carboxylic acids having at least one oxygen or sulfur atom attached to an aromatic ring system
    • A01N37/40—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a singly bound oxygen or sulfur atom attached to the same carbon skeleton, this oxygen or sulfur atom not being a member of a carboxylic group or of a thio analogue, or of a derivative thereof, e.g. hydroxy-carboxylic acids having at least one oxygen or sulfur atom attached to an aromatic ring system having at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and one oxygen or sulfur atom attached to the same aromatic ring system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N39/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing aryloxy- or arylthio-aliphatic or cycloaliphatic compounds, containing the group or, e.g. phenoxyethylamine, phenylthio-acetonitrile, phenoxyacetone
    • A01N39/02—Aryloxy-carboxylic acids; Derivatives thereof
    • A01N39/04—Aryloxy-acetic acids; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N41/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a sulfur atom bound to a hetero atom
    • A01N41/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a sulfur atom bound to a hetero atom containing a sulfur-to-oxygen double bond
    • A01N41/10—Sulfones; Sulfoxides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/34—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • A01N43/40—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom six-membered rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/48—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • A01N43/56—1,2-Diazoles; Hydrogenated 1,2-diazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/72—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with nitrogen atoms and oxygen or sulfur atoms as ring hetero atoms
    • A01N43/80—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with nitrogen atoms and oxygen or sulfur atoms as ring hetero atoms five-membered rings with one nitrogen atom and either one oxygen atom or one sulfur atom in positions 1,2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N57/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds
    • A01N57/18—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds having phosphorus-to-carbon bonds
    • A01N57/20—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds having phosphorus-to-carbon bonds containing acyclic or cycloaliphatic radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
    • A23J1/14—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from leguminous or other vegetable seeds; from press-cake or oil-bearing seeds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B1/00—Production of fats or fatty oils from raw materials
    • C11B1/10—Production of fats or fatty oils from raw materials by extracting
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C12N15/8275—Glyphosate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8281—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for bacterial resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8282—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for fungal resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8283—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for virus resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8286—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for insect resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N2300/00—Combinations or mixtures of active ingredients covered by classes A01N27/00 - A01N65/48 with other active or formulation relevant ingredients, e.g. specific carrier materials or surfactants, covered by classes A01N25/00 - A01N65/48

Abstract

Изобретение относится к наборам для идентификации объекта SYHT0H2 в биологическом образце, которые содержат праймеры для амплификации указанного объекта или зонды для его обнаружения.

Description

Настоящее изобретение относится к идентификации события SYHT0H2, т.е. к предназначенным для этих целей наборам, где событие SYHT0H2 является трансгенным растением сои.
Предпосылки изобретения
Экспрессия гетерологичных генов в растениях, как известно, зависит от их расположения в геноме растения, возможно из-за структуры хроматина или близости транскрипционных регуляторных элементов, близких к сайту интеграции. В то же время наличие трансгена в различных местах в геноме поразному влияет на общий фенотип растения. По этой причине часто необходим скрининг большого количества событий для идентификации события, характеризуемого оптимальной экспрессией введенного целевого гена. Например, было замечено, что у растений и у других организмов могут быть значительные различия в уровнях экспрессии введенного гена между событиями. Могут иметь место различия в пространственных или временных паттернах экспрессии, например различия в относительной экспрессии трансгена в различных тканях растения, которые могут не соответствовать паттернам, ожидаемым от транскрипционных регуляторных элементов, присутствующих во введенной генной конструкции. Кроме того, было обнаружено, что трансгенная вставка может повлиять на эндогенную экспрессию генов. По этим причинам обычно получают от сотен до тысяч различных событий и подвергают скринингу данные события для обнаружения единичного события, которое обладает требуемыми для коммерческих целей уровнями и паттернами экспрессии трансгенов. Событие, которое обладает требуемыми уровнями или паттернами экспрессии трансгенов, используется для интрогрессирования трансгена в другие генетические окружения путем генеративного ауткроссинга с использованием традиционных способов селекции. Потомство от таких скрещиваний сохраняет характеристики экспрессии трансгена оригинального трансформанта. Эта стратегия используется для обеспечения надежной экспрессии генов в ряду сортов, которые хорошо приспособлены к местным условиям выращивания.
Было бы полезно иметь возможность обнаруживать присутствие специфического события для того, чтобы определить, содержит ли потомство, полученное в результате генеративного скрещивания, целевой трансген. Кроме того, обнаружение специфического события будет полезно для соблюдения правил процедуры предрыночного одобрения и маркировки пищевых продуктов, полученных из рекомбинантных сельскохозяйственных растений, для использования в экологическом мониторинге, контролирующем признаки культурных растений в поле, для контроля продукции, полученной из собранного урожая, и/или для обеспечения соблюдения сторонами нормативных или договорных условий. Наборы, которые обеспечивают быструю идентификацию событий в растениях, проявляющих толерантность к гербициду, могут быть использованы для защиты растений и борьбы с сорняками, например, с целью уменьшения количества применений гербицида, необходимых для борьбы с сорняками в поле, с целью уменьшения количества гербицида, необходимого для борьбы с сорняками в поле, с целью уменьшения объема обработки почвы, необходимого для получения урожая, и/или для разработки программ, которые отсрочат или предотвратят появление устойчивых к гербицидам сорняков. Существует постоянная потребность в защите растений и борьбы с сорняками, которые дают возможность целевого использования конкретных комбинаций гербицида и эффективного обнаружения такого события.
Чтобы удовлетворить эту потребность, настоящее изобретение предоставляет соевые растения, которые включают трансформационное событие SYHT0H2, которое придает устойчивость к гербицидуингибитору HPPD и к глюфосинату. Также предложены композиции и способы обнаружения трансформационного события SYHT0H2.
Краткое описание настоящего изобретения
Настоящее изобретение относится к наборам для идентификации события SYHT0H2 в биологическом образце. В одном аспекте настоящего изобретения набор включает в себя первый и второй праймеры, в котором первый и второй праймеры амплифицируют полинуклеотид, содержащий специфический участок SYHT0H2. В другом аспекте настоящего изобретения указанный набор содержит по меньшей мере один зонд нуклеиновой кислоты, который гибридизуется в жестких условиях со специфическим участком SYHT0H2.
Краткое описание графических материалов
Чертеж представляет собой изображение бинарного вектора 15954, содержащего соевый кодоноптимизированный Avena HPPD ген.
- 1 032683
Краткое описание последовательностей в перечне последовательностей
SEQ ГО NO. Описание
1 20 и. о. LB2 соединение (10 и. о. фланкирующая /10 и. о. вставка)
2 20 и. о. LB1 соединение (3 и. о. вставка/17 и. о. фланкирующая)
3 40 и. о. LB2 соединение (20 и. о. фланкирующая /20 и. о. вставка)
4 40 и. о. LB1 соединение (13 и. о. вставка/27 и. о. фланкирующая)
5 60 и. о. LB2 соединение (30 и. о. фланкирующая /30 и. о. вставка)
6 60 и. о. LB1 соединение (23 и. о. вставка/37 и. о. фланкирующая)
7 LB2 фланкирующая геномная последовательность (99 п. о.)
8 LB1 фланкирующая геномная последовательность (462 п. о.)
9 Полная вставка
10 Вставка плюс фланкирующая геномная последовательность
13, 16 Зонды, используемые для TAQMAN® теста
11-12, 14-15, Последовательности праймера, используемые в
17-21 амплификационных тестах
22-23 TAQMAN® тестовые продукты амплификации
24 Gm08: 9905210-9905426
25-28 Последовательности праймера, используемые для секвенирования
Таблица 1
Подробное описание настоящего изобретения
Соевое растение, содержащее событие SYHT0H2, включающее полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1-6, 9, 11 или 12, создали путем вставки мутантного гена HPPD, полученного из Avena, и гена фосфинотрицин ацетилтрансферазы из S. Viridochromogenes, как описано в примере 1.
В контексте данного документа аббревиатура HPPD означает гидроксифенил-пируватдиоксигеназу. HPPD полинуклеотиды кодируют полипептиды, обладающие ферментативной активностью фермента гидроксифенил-пируват-диоксигеназы.
Полинуклеотиды, наделяющие толерантностью к ингибитору HPPD, встраивают в определенное положение в геноме сои и тем самым получают соевое событие SYHT0H2. См. пример 3. Соевое растение, содержащее событие SYHT0H2, включает геномные/трансгенные соединения, имеющие, по меньшей мере, полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1 или 2. Идентификация геномного сайта встраивания события SYHT0H2 обеспечивает повышенную оплодотворяемость и дает возможность использования молекулярных маркеров для отслеживания трансгенной вставки в выведенных популяциях и их потомстве. См. пример 4. Различные способы и композиции для идентификации, обнаружения и использования соевого события SYHT0H2 приведены в данном документе. См., например, пример 2. В контексте данного документа описание определенное SYHT0H2, используемое для описания нуклеиновой кислоты или нуклеотидной последовательности, относится к особенности дифференциально идентифицированного события SYHT0H2 в растениях, растительных материалах или в продуктах, таких как, но, не ограничиваясь ими, пищевые или кормовые продукты (сырые и переработанные), содержащие растительный материал или полученные из растительного материала.
В контексте данного документа термин соя означает Glycine max и включает в себя все сорта растений, которые могут быть выведены из сои. В контексте данного документа термин растение включает растительные клетки, органы растений, растительные протопласты, клеточные тканевые культуры растения, из которых растения могут быть восстановлены, каллус и пр., а также растительные клетки, которые являются интактными в растениях или частях растений, таких как зародыши, пыльца, семяпочки, семена, листья, цветы, ветви, плоды, стебли, корни, корневые кончики, пыльники и тому подобное. Зерно означает зрелые семена, полученные фермерами-коммерсантами для отличных от выращивания или воспроизведения видов целей. Трансгенное событие получают путем трансформации растительных клеток конструкцией(ями) гетерологичной ДНК, включая экспрессионную кассету нуклеиновой кислоты, которая содержит целевой трансген, регенерацию популяции растений, полученную в результате введения трансгена в геном растения, а также выбор определенного растения, характеризующееся вставкой в определенное место генома. Событие характеризуется фенотипически экспрессией трансгена(ов). На генетическом уровне событие является частью генетического строения растения. Термин событие относится к потомству, полученному путем генеративного ауткроссинга между трансформантом и другим сортом, который включает гетерологичную ДНК. Даже после повторного обратного скрещивания с
- 2 032683 рекуррентным родителем вставленная ДНК и фланкирующая ДНК из трансформированного родителя присутствует в потомстве, полученном в результате скрещивания в том же хромосомном месторасположении. Термин событие относится к ДНК из первичного трансформанта, содержащего вставленную последовательность ДНК и фланкирующую последовательность ДНК, непосредственно примыкающие к встроенной ДНК, которая, как ожидается, будет передана потомству, которое получает встроенную ДНК, в том числе целевой трансген в результате генеративного скрещивания одной родительской клеточной линии, которая включает встроенную ДНК (например, первичный трансформант и потомство, полученное в результате самоопыления), и родительской клеточной линии, не содержащей вставленную ДНК.
Среднюю величину и распределение толерантности к гербициду или уровни устойчивости ряда основных трансформационных событий растения оценивают стандартным способом, основанным на повреждении растений, меристематических симптомах обесцвечивания и т.д. в диапазоне различных концентраций того или иного гербицида. Эти данные могут быть выражены в терминах, например, GR50 значений, полученных из кривых дозовой зависимости, имеющих дозу, нанесенную на ось х, и процент уничтожения, гербицидное действие, количество новых зеленых растений и т.д., нанесённые на ось Y, где повышенные GR50 значения соответствуют повышенным уровням наследственной толерантности к ингибитору (например, повышенное Ki/KmHpp значение) и/или уровню экспрессии экспрессируемого HPPD полипептида.
В контексте данного документа ДНК-вставка относится к гетерологичной ДНК в экспрессионных кассетах, используемой для трансформации растительного материала, в то время как фланкирующая ДНК может включать либо геномную ДНК, естественным образом присутствующую в организме, таком как растение, либо чужеродную (гетерологичную) ДНК, введенную способом трансформации, которая является чужеродной для исходной молекулы ДНК-вставки, например фрагменты, связанные с трансформационным событием. Фланкирующая область или фланкирующая последовательность в контексте данного документа относится к последовательности по меньшей мере с 20, 50, 100, 200, 300, 400, 1000, 1500, 2000, 2500 или 5000 или более парами оснований, которая расположена либо непосредственно перед исходной чужеродной молекулой ДНК-вставки и является смежной с ней, либо непосредственно ниже и является смежной с ней. Неограничивающие примеры фланкирующих областей события SYHT0H2 представлены в SEQ ID NO: 7 и 8, а также в их вариантах и фрагментах.
Методики трансформации, приводящие к случайной интеграции чужеродной ДНК, дадут в результате трансформанты, содержащие различные уникальные для каждого трансформанта характеристики фланкирующих областей. При введении рекомбинантной ДНК в растение путем традиционного скрещивания ее фланкирующие области в целом не будут изменены. Трансформанты будут содержать уникальные соединения между частью гетерологичной ДНК-вставки и геномной ДНК, или двумя частями геномной ДНК, или двумя частями гетерологичной ДНК. Соединение - это точка, где соединяются два специфических фрагмента ДНК. Например, соединение существует там, где ДНК-вставка соединяется с фланкирующей ДНК. Точка соединения существует в трансформированном организме, где два фрагмента ДНК объединяются способом, который является модификацией обнаруженного в природном организме фрагмента. В контексте данного документа соединение ДНК относится к ДНК, которая содержит точку соединения. Неограничивающие примеры соединения ДНК из набора событий SYHT0H2 представлены далее как SEQ ID NO: 1-6, а также их варианты и фрагменты.
Растение, содержащее событие SYHT0H2, может быть выведено с помощью первого генеративного скрещивания первого родительского соевого растения, выращенного из трансгенного соевого растения SYHT0H2, и второго родительского соевого растения, которому не хватает фенотипа толерантности к гербициду, получая вследствие этого некоторое количество первого потомства растений; а затем отбора первого потомства растения, которое проявляет требуемую толерантность к гербициду и самоопыления первого потомства растений, получая вследствие этого некоторое количество второго потомства растений, а затем отбора из второго потомства растения, которые проявляют требуемую толерантность к гербициду. Эти этапы могут дополнительно включать обратное скрещивание устойчивого к гербицидам потомства растения со вторым родительским соевым растением или третьим родительским соевым растением, тем самым получая соевое растение, которое проявляет требуемую толерантность к гербициду. Также признают, что анализ потомства на фенотип не требуется. Известно, что два различных трансгенных растения могут быть генеративно скрещенными с получением потомства, которое содержит два независимо сегрегирующих добавленных экзогенных гена. Путем самоопыления соответствующего потомства можно получить растения, которые являются гомозиготными для обоих добавленных экзогенных генов. Обратное скрещивание с родительским растением и ауткроссинг с нетрансгенным растением рассматриваются, как вегетативное размножение. Описание других способов селекции, которые обычно используются для различных признаков и культур, могут быть найдены в одной из нескольких ссылок, например Fehr, в Breeding Methods for Cultivar Development 1987, Wilcos, J. (ed.), Американское агрономическое общество, Мадисон, Висконсин.
Термин идиоплазма относится к индивидууму, группе индивидуумов или клону, представляющему генотип, сорт, вид или культуру, или к их генетическому материалу.
Линия или штамм является группой индивидуумов одинакового происхождения, которые
- 3 032683 обычно являются инбредными до некоторой степени и которые обычно являются изогенными или близкими к изогенным.
Инбредные линии сои, как правило, разрабатывают для использования в производстве соевых гибридов и для использования в качестве идиоплазмы в выведенных популяциях для создания новых и отличающихся инбредных линий сои. Инбредные линии сои часто используют в качестве целей для интрогрессии новых признаков посредством традиционных методик скрещивания и/или молекулярных методик интрогрессии. Для использования в качестве родителей коммерческих гибридов инбредные линии сои должны быть высокооднородными, гомозиготными и воспроизводимыми. Для определения гомозиготности и фенотипической стабильности инбредных линий доступно множество аналитических способов.
Выражение гибридные растения относится к растениям, полученным в результате скрещивания генетически разнородных индивидуумов.
Термин скрещенные или скрещивание в контексте настоящего изобретения в случае растений означает слияние гамет, например, посредством опыления с получением потомства (т.е. клеток, семян или растений). Термин охватывает как генеративное скрещивание (опыление одного растения другим), так и в случае растений самоопыление (гомоклинное опыление, т.е. если пыльца и семязачаток из одного растения).
Термин интрогрессия относится к передаче требуемого аллеля генетического локуса от одного генетического окружения другому. В одном из способов требуемые аллели могут быть интрогрессированы посредством генеративного скрещивания двух родителей, где по меньшей мере один из родителей имеет нужную аллель в своем геноме.
Событие SYHT0H2 может содержать один или несколько дополнительных целевых признаков с любой комбинацией целевых полинуклеотидных последовательностей для создания растений с требуемой комбинацией признаков. Признак в контексте данного документа относится к фенотипу, полученному из конкретной последовательности или группы последовательностей. Например, толерантные к гербициду полинуклеотиды могут быть состыкованы с любыми другими полинуклеотидами, кодирующими полипептиды, обладающие пестицидной и/или инсектицидной активностью, как, например, токсичные белки Bacillus thuringiensis (описанные в патентах США №№ 5366892; 5747450; 5737514; 5723756 и 5593881; Geiser et al., Gene, 1986 48:109; Lee et al., Appl. Environ. Microbiol, 2003, 69:4648-4657 (Vip3A); Galitzky et al., Acta Crystallogr. D. Biol. Crystallog, 2001, 57:1101-1109 (Cry3Bbl) и Herman et al., J. Agric. Food Chem., 2004, 52:2726-2734 (Cry1F)), лектины (Van Damme et al., Plant Mol. Biol., 1994, 24:825), пектины (описанные в патенте США № 5981722) и т.п. Полученные сочетания могут включать несколько копий любого из целевых полинуклеотидов. Данные комбинации можно также получить путем скрещивания наборов с существующими или новыми событиями, содержащими данные гены. Примеры событий, которые могут быть использованы в наборах для скрещивания, включают, но не ограничиваются ими, MON87701-устойчивость к чешуекрылым.
Событие SYHT0H2 можно состыковать с другими признаками толерантности к гербициду для создания трансгенного растения с дополнительно улучшенными свойствами. Например, полинуклеотиды, кодирующие мутантный полипептид HPPD или его вариант, который сохраняет HPPD ферментативную активность, можно состыковать с любыми другими полинуклеотидами, кодирующими полипептиды, которые придают требуемые признаки, в том числе, но не ограничиваясь ими, устойчивость к болезням, насекомым и гербицидам, устойчивость к теплу и засухе, сокращенное время вызревания сельскохозяйственной культуры, улучшенная промышленная обработка, как, например, осахаривание крахмала или биомассы до сбраживаемых сахаров, а также улучшенные агрономические качества, такие как высокое содержание масла и высокое содержание белка.
Примеры полинуклеотидов, которые можно состыковать с полинуклеотидами настоящего изобретения, кодирующими мутантный HPPD полипептид или его вариант, который сохраняет HPPD ферментативную активность, включают полинуклеотиды, кодирующие полипептиды, сообщающие устойчивость к вредителям/патогенам, таким как вирусы, нематоды, насекомые или грибки и т.п. Примеры полинуклеотидов, которые можно состыковать с полинуклеотидами настоящего изобретения, включают полинуклеотиды, кодирующие полипептиды, обладающие пестицидной и/или инсектицидной активностью, такие как токсичне белки Bacillus thuringiensis (описанные в патентах США №№ 5366892; 5747450; 5737514; 5723756 и 5593881и Geiser et al., Gene, 1986, 48:109), лектины (Van Damme et al., Plant Mol. Biol., 1994, 24:825, пентин (описанные в патенте США № 5981722) и т.п.; признаки, желательные для устойчивости к болезням или к гербицидам (например, гены нейтрализации фумонизина (патент США № 5792931); гены невирулентности и устойчивости к болезням (Jones et al., Science, 1994, 266:789; Martin et al., Science, 1993, 262:1432; Mindrinos et al., Cell, 1993, 78:1089); мутанты ацетолактатсинтазы (ALS), которые приводят к устойчивости к гербицидам, такие как S4 и/или Hra мутации ((устойчивость к гербицидам, включая сульфонилмочевины, имидазолиноны, триазолопиримидины, пиримидинил тиобензоаты); ген устойчивости к глифосату (например, ген 5-энол-пировил-шикимат-3-фосфат-синтазы (EPSPS), включая, но не ограничиваясь описанными в патентах США №№ 4940935, 5188642, 5633435, 6566587, 7674598, а также во всех связанных заявках, или ген глифосат N-ацетилтрансферазы (GAT), описанный в
- 4 032683
Castle et al., Science, 2004, 304:1151-1154, а также в опубликованных патентных заявках США №№ 20070004912, 20050246798 и 20050060767)); устойчивость к глюфосинату (например, BAR, см., например, патент США № 5561236); устойчивость к 2,4-D (например, арилоксиалканоат диоксигеназа или AAD-1, AAD-12 или AAD-13), устойчивость к HPPD (например, Pseudomonas HPPD) и устойчивость к РРО (например, фомезафен, ацифлуорфен-натрий, оксифлуорфен, лактофен, флутиацетметил, сафлуфенацил, флумиоксазин, флумиклорак-пентил, карфентразон-этил, сульфентразон); цитохром Р450 или его вариант, который придает устойчивость к гербицидам или устойчивость, в частности, к HPPDингибирующим гербицидам, РРО-ингибирующим гербицидам и ALS-ингибирующим гербицидам (опубликованная патентная заявка США № 20090011936; патенты США №№ 6380465; 6121512; 5349127; 6649814 и 6300544; а также международная публикация согласно PCT № WO 2007/000077); устойчивость к дикамбе (например, дикамба монооксигеназной) и признаки, желательные для обработки или переработки продуктов, таких как продукты с высоким содержанием масла (например, патент США № 6232529); модифицированные масла (например, гены десатуразы жирной кислоты (патент США № 5952544, международная публикация согласно PCT № WO 94/11516)), модифицированные крахмалы (например, ADPG-пирофосфорилазы (AGPase), крахмал-синтазы (SS), ветвящий фермент крахмала (SBE) и деветвящие ферменты крахмала (SDBE)), а также полимеры или биопластик (например, патент США № 5602321; β-кетотиолаза, полигидроксибутират синтазы и ацетоацетил-СоА-редуктаза (Schubert et al., J. Bacteriol, 1988, 170:5837-5847) облегчают экспрессию полиоксиалканоатов (PHAs)), раскрытие которых включено в данный документ посредством ссылки.
Другие толерантные к гербициду полинуклеотиды, которые могут быть использованы, включают полинуклеотиды, сообщающие толерантность к ингибиторам HPPD с помощью других генов или способов действия. Другие признаки, которые могут быть объединены с соевыми событиями SYHT0H2, включают признаки, полученные от полинуклеотидов, которые наделяют растение возможностью продуцировать более высокий уровень 5-энолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазы (EPSPS), например, как более детально описанные в патентах США №№ 6248876, 5627061, 5804425, 5633435, 5145783, 4971908, 5312910, 5188642, 4940835, 5866775, 6225114, 6130366, 5310667, 4535060, 4769061, 5633448, 5510471; RE 36449; RE 37287 и 5491288, в международной публикации согласно PCT № WO 97/04103, WO 00/66746, WO 01/66704 и WO 00/66747. Другие признаки, которые могут быть объединены с событием SYHT0H2, включают признаки, придающие устойчивость сульфонилмочевине, имидазолинон триазолпиримидинам и/или пиримидинил тиобензоатам, например, как более детально описанные в патентах США №№ 5605011, 5013659, 5141870, 5767361, 5731180, 5304732, 4761373, 5331107, 5928937 и 5378824, а также в международной публикации согласно PCT № WO 96/33270.
Событие SYHT0H2 можно состыковывать, например, с гидроксифенилпируватдиоксигеназами, которые являются ферментами, катализирующими реакцию, в которой парагидроксифенилпируват (НРР) преобразуется в гомогентизат. Молекулы, которые ингибируют этот фермент и которые связываются с ферментом для того, чтобы ингибировать трансформацию НРР в гомогентизат, используют в качестве гербицидов. Признаки, сообщающие толерантность к гербицидам в растениях, описаны в патентах США №№ 6245968; 6268549 и 6069115 и в международной публикации согласно PCT № WO 99/23886. Другие примеры подходящих признаков толерантности к гербициду, которые можно состыковать с событием SYHT0H2, включают полинуклеотиды арилоксиалканоат диоксигеназы (которые могут придавать толерантность к 2,4-Д и к другим феноксиауксин гербицидам, а также к арилоксифеноксипропионатным гербицидам, как описано, например, в международных публикациях PCT №№ WO 2005/107437, WO 2007/053482 и WO 2008/141154 и патенте США № 7820883, а также соответствующих заявках и патентах), а также полинуклеотиды, толерантные к гомогентизату соланесилтрансферазе (HST) (например, как описано в международной публикации согласно PCT № WO 10/029311, и дикамбе (монооксигеназе), как описано, например, в Herman et al., J. Biol. Chem., 2005, 280: 24759-24767 и в патенте США № 7812224, а также связанных с ними заявках и патентах.
Другие примеры признаков устойчивости к гербициду, которые могут быть объединены с событием SYHT0H2, включают признаки, сообщаемые полинуклеотидами, кодирующими экзогенную фосфинотрицинацетилтрансферазу, как описано в патентах США №№ 5969213; 5489520, 5550318, 5874265, 5919675, 5561236, 5648477, 5646024, 6177616 и 5879903. Растения, содержащие экзогенную фосфинотрицинацетилтрансферазу, могут демонстрировать повышенную толерантность к гербицидам с глюфосинатом, которые ингибируют фермент глутаминсинтетазу. Другие примеры признаков устойчивости к гербициду, которые могут быть объединены с событием SYHT0H2, включают признаки, придаваемые полинуклеотидами, сообщающими измененную активность протопорфириногеноксидазы (протоке), как описано в патентах США №№ 6288306; 6282837 и 5767373 и в международной публикации согласно PCT № WO 01/12825. Растения, содержащие такие полинуклеотиды, могут обладать повышенной толерантностью к любому из ряда гербицидов, которые направлены на фермент протокса (именуемые ингибиторами протокса).
Другие примеры признаков толерантности к гербициду, которые могут быть объединены с событием SYHT0H2, включают признаки, придающие толерантность по меньшей мере к одному гербициду в растении, таком как, например, соевое растение или мелколепестник канадский. Толерантные к гербици
- 5 032683 дам сорняки известны в данной области техники как растения, которые различаются в своей толерантности к определенным гербицидам. См., например, Green & Williams, Correlation of Corn (Zea mays) Inbred Response to Nicosulfuron and Mesotrione, представленный на ежегодном собрании WSSA в Канзас-Сити, Миссури, 9-12 февраля 2004 г.; Green (1998) Weed Technology 12: 474-477; Green & Ulrich, Weed Science 2003, 41:508-516. Признак(и), ответственные за эти толерантности, могут быть объединены с помощью скрещивания или с помощью других способов с событием SYHT0H2.
Описанные выше гены могут быть генетически сконструированы в событии SYHT0H2 или объединены с событием SYHT0H2 с помощью набора для скрещивания с новым или существующим событием, придавая толерантность одному из вышеупомянутых генов. Возможные события для использования в наборе для скрещивания включают, но не ограничиваются ими, MON89788 - толерантность к глифостату (патент США № 7632985 и связанные заявки и патенты), MON87708 - толерантность к дикамбе (опубликованная патентная заявка США № 2011/0067134 и связанные заявки и патенты), DP-356043-5 - толерантность к глифосату и ALS (опубликованная патентная заявка США № 2010/0184079 и связанные заявки и патенты), А2704-12 - толерантность к глюфосинату (опубликованная патентная заявка США № 2008/0320616 и связанные заявки и патенты), толерантность к DP-305423-1 - толерантность к ALS (опубликованная патентная заявка США № 2008/0312082 и связанные заявки и патенты), толерантность к А5547-127-глюфосинату (опубликованная патентная заявка США № 2008/0196127 и связанные заявки и патенты), толерантность к DAS-40278-9 - 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоте и арилоксифеноксипропионату (международная публикация согласно PCT № WO 2011/022469, WO 2011/022470, WO 2011/022471 и связанные заявки и патенты), толерантность к 127-ALS (международная публикация согласно PCT № WO 2010/080829 и связанные заявки и патенты), толерантность к GTS 40-3-2-глифосату, толерантность к DAS-68416-4 - 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоте и глюфосинату, толерантность к РО72-глифосату и изоксафлутолу, толерантность к BPS-CV127-9 - ALS и толерантность к GU262глюфосинату, толерантность к SYHT04R-HPPD.
Событие SYHT0H2 может быть объединено по меньшей мере с одним дополнительным признаком, таким как признаки, требуемые для кормления животных, такие как высокое содержание масла (например, патент США № 6232529); сбалансированное содержание аминокислот (например, гордотианинов (патенты США №№ 5990389; 5885801, 5885802 и 5703409, патент США № 5850016), высоколизиновый ячмень (Williamson и др., Eur J. Biochem, 1987, 165:99-106 и международная публикация согласно PCT № WO 98/20122) и белки с высоким содержанием метионина (Pedersen et al., J. Biol. Chem. 1986, 261:6279; Kirihara et al., Gene, 1988, 71:359; и Musumura et al., Plant Mol. Biol., 1989, 12:123)), повышенная усвояемость (например, модифицированные запасные белки (патент США № 6858778), а также тиоредоксины (патент США № 7009087)), раскрытие которых включено в данный документ посредством ссылки. Требуемые комбинации признаков включают LLNC (низкое содержание линоленовой кислоты; см., например, Dyer et al., Appl. Microbiol. Biotechnol, 2002, 59:224-230) и OLCH (высокое содержание олеиновой кислоты, см., например, Fernandez-Moya et al., J. Agric. Food Chem., 2005, 53: 5326-5330).
Событие SYHT0H2 можно объединять с другими желательными признаками, такими как, например, гены дезактивации фумонизина (патент США № 5792931), гены устойчивости к невирулентности и болезни (Jones et al., Science, 1994, 266:789; Martin et al., Science, 1993, 262:1432; Mindrinos et al., Cell, 1994, 78:1089), а также признаками, желательными для обработки или переработки продуктов, таких как модифицированные масла (например, жирные кислоты десатуразы (патент США № 5952544; международная публикация согласно PCT № WO 94/11516)), модифицированные крахмалы (например, ADPG пирофосфорилаза (AGPase), синтазы крахмала (SS), ветвящий фермент крахмала (SBE) и деветвящий фермент крахмала (SDBE)), а также полимеры или биопластик (например, патент США № 5602321; βкетотиолаза, полигидроксибутират синтазы и ацетоацетил-СоА-редуктазы (Schubert et al., J. Bacteriol., 1988, 170:5837-5847) облегчают экспрессию полиоксиалканоатов (PHAs)), раскрытие которых включено в данный документ посредством ссылки. Можно также объединять толерантные к гербицидам полинуклеотиды с полинуклеотидами, придающими агрономические признаки, такие как мужская стерильность (см., например, патент США № 5583210), прочность стебля, время цветения или признаки технологии трансформации, такие как регуляция клеточного цикла или направленное воздействие на гены (например, международные публикации согласно PCT №№ WO 99/61619, WO 00/17364 и WO 99/25821), раскрытие которой включено в данный документ посредством ссылки.
Событие SYHT0H2 может быть объединено с Rcgl последовательностью или биологически активным вариантом или его фрагментом. Rcgl последовательность является геном устойчивости к антракнозной гнили стебля в кукурузе. См., например, опубликованные патентные заявки США №№ 20060225151, 20060223102 и 20060225152, каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки.
Описанные выше состыкованные комбинации можно создавать любым способом, включая, но не ограничиваясь ими, разведение растений с помощью любой традиционной или TopCross методологии или генетической трансформации. В случае, если последовательности состыковываются посредством генетического трансформирования растений, целевые полинуклеотидные последовательности могут быть объединены в любое время и в любом порядке. Признаки могут быть введены одновременно в протокол котрансформации с целевыми полинуклеотидами, полученными посредством любого сочетания
- 6 032683 кассет для трансформации. Например, в случае введения двух кассет, две последовательности можно содержать в отдельных трансформационных кассетах (транс) или содержать в одной трансформационной кассете (цис). Экспрессия последовательностей может приводиться в действие одним и тем же промотором или различными промоторами. В некоторых случаях может быть желательным введение трансформационной кассеты, которая будет подавлять экспрессию целевого полинуклеотида. Возможно объединение с любой комбинацией других супрессионных кассет или сверхэкспрессионных кассет для создания требуемой комбинации признаков в растении. Также признают, что полинуклеотидные последовательности можно состыковывать в нужной геномной локализации с использованием системы сайтспецифической рекомбинации. См., например, международные публикации согласно PCT №№ WO 99/25821, WO 99/25854, WO 99/25840, WO 99/25855 и WO 99/25853, все из которых включены в данный документ посредством ссылки.
В контексте данного документа применение термина полинуклеотид охватывает полинуклеотиды, содержащие рибонуклеотиды и/или дезоксирибонуклеотиды, включая как молекулы природного происхождения, так и синтетические аналоги. Полинуклеотиды охватывают все виды последовательностей, включая, но не ограничиваясь ими, одноцепочечные формы, двухцепочечные формы, шпильки, структуры петля на стебле и тому подобные.
SYHT0H2 растение содержит экспрессионную кассету, имеющую мутантный ген HPPD и 5' и 3' регуляторные последовательности, функционально связанные с мутантным геном HPPD. Функционально связанный означает функциональную связь между двумя или более элементами. Например, функциональная связь между целевым полинуклеотидом и регуляторной последовательностью (т.е. промотором) является функциональной связью, которая создает возможность для экспрессии целевого полинуклеотида. Функционально связанные элементы могут быть смежными или несмежными. Обычно, когда ссылаются на соединение двух белок-кодирующих областей, под функционально связанным предполагают, что кодирующие участки находятся в одной рамке считывания. Кассета может дополнительно содержать по меньшей мере один дополнительный ген, который будет котрансформирован в организм. Кроме того, дополнительный ген(ы) может быть предусмотрен на нескольких экспрессионных кассетах. Такая экспрессионная кассета снабжена множеством сайтов рестрикции и/или сайтов рекомбинации для того, чтобы вставка полинуклеотида находилась под транскрипционным контролем регулирующих областей. Экспрессионная кассета может дополнительно содержать селективные маркерные гены.
Экспрессионная кассета будет включать в 5'-3' направлении транскрипции область инициации транскрипции и трансляции (т.е. промотор), кодирующую область и функциональную область терминации транскрипции и трансляции в растениях. Промотор относится к нуклеотидной последовательности, способной контролировать экспрессию кодирующей последовательности или функциональной РНК. Обычно кодирующая последовательность расположена 3 к промоторной последовательности. Промоторная последовательность может включать в себя проксимальный и дистальный вышерасположенные элементы, последние элементы часто называют энхансерами. Соответственно, энхансер представляет собой нуклеотидную последовательность, которая может стимулировать активность промотора и может быть природным элементом промотора или гетерологичным элементом, вставленным для повышения уровня или тканеспецифичности промотора. Промоторы могут быть получены полностью из природного гена или состоять из различных элементов, полученных из различных промоторов, существующих в природе, или даже содержать синтетические нуклеотидные сегменты. Специалистам в данной области техники ясно, что различные промоторы могут направлять экспрессию генов в различных тканях или типах клеток или на различных стадиях развития, или в ответ на различные условия окружающей среды. Промоторы, которые порождают фрагмент нуклеиновой кислоты, который будет экспрессироваться в большинстве типов клеток, в большинстве случаев традиционно именуются конститутивными промоторами. Постоянно раскрывают новые промоторы различных типов, используемые в растительных клетках, многочисленные примеры могут быть найдены в компиляции Okamuro & Goldberg, Biochemistry of Plants, 1989, 15:1-82. Кроме того, признано, что поскольку в большинстве случаев точные границы регуляторных последовательностей полностью не определены, фрагменты нуклеиновых кислот различной длины могут обладать идентичной промоторной активностью.
Экспрессионные кассеты могут содержать 5' лидерные последовательности. Такие лидерные последовательности могут служить для усиления трансляции. Регулирующие области (например, промоторы, регулирующие области транскрипции, области процессинга РНК или области устойчивости, интроны, сигналы полиаденилирования и области терминации трансляции) и/или кодирующая область могут быть нативными/аналогичными или гетерологичными по отношению к клетке-хозяину или друг к другу.
Трансляционная лидерная последовательность относится к нуклеотидной последовательности, расположенной между промоторной последовательностью гена и кодирующей последовательностью. Трансляционная лидерная последовательность присутствует в полностью обработанной мРНК выше последовательности инициации трансляции. Трансляционная лидерная последовательность может влиять на многочисленные параметры, включая процессинг первичных транскриптов в мРНК, стабильность мРНК и/или эффективность трансляции. Примеры трансляционных лидерных последовательностей были описаны (Turner & Foster, Mol. Biotechnol., 1995, 3:225-236). 3' некодирующие последовательности от
- 7 032683 носятся к нуклеотидным последовательностям, расположенным ниже кодирующей последовательности, и включают последовательности распознавания полиаденилирования и другие последовательности, кодирующие регуляторные сигналы, способные воздействовать на процессинг мРНК или экспрессию генов. Сигнал полиаденилирования обычно характеризуется влиянием на добавление участков полиадениловой кислоты к 3'-концу предшественника мРНК. Использование различных некодирующих 3'последовательностей иллюстрируется Ingelbrecht et al., Plant Cell, 1989, 1:671-680.
В контексте данного документа гетерологичный со ссылкой на последовательность означает последовательность, которая берет свое начало из чужеродного вида, или, если из того же вида, то в композиции и/или геномном локусе является существенно модифицированной по сравнению со своей природной формой в результате преднамеренного вмешательства человека. Например, промотор, функционально связанный с гетерологичным полинуклеотидом происходит от вида, отличного от вида, из которого полинуклеотид был получен, или, если из того же/аналогичного вида, то один из них или оба являются существенно модифицированными по сравнению с их первоначальной формой и/или геномным локусом, либо промотор не является природным промотором для функционально связанного полинуклеотида.
При получении экспрессионной кассеты можно манипулировать различными фрагментами ДНК так, чтобы обеспечить подходящие последовательности ДНК и при необходимости подходящую рамку считывания. С этой целью могут быть задействованы адаптеры или линкеры для присоединения фрагментов ДНК или другие манипуляции могут быть вовлечены для получения удобных сайтов рестрикции, удаления избыточной ДНК, удаления сайтов рестрикции или тому подобного. С этой целью in vitro мутагенез, репарация праймера, рестрикция, отжиг, подстановки, например переходы и транс-версии, могут быть вовлечены. Экспрессионная кассета может содержать селективный маркерный ген для отбора трансформированных клеток.
Селективные маркерные гены используются для отбора трансформированных клеток или тканей.
Предлагаются изолированные полинуклеотиды, которые могут быть использованы в различных способах обнаружения и/или определения соевого события SYHT0H2. Изолированный или очищенный полинуклеотид или его биологически активная часть является в значительной степени или практически свободной от компонентов, которые обычно сопровождают или взаимодействуют с полинуклеотидом в его природной среде. Таким образом, изолированный или очищенный полинуклеотид практически свободен от другого клеточного материала или среды для культивирования при продуцировании рекомбинантными способами или практически свободен от химических предшественников или других химических веществ, в случае, если он химически синтезирован. Оптимально изолированный полинуклеотид является свободным от последовательностей (оптимально кодирующих белок последовательностей), которые естественным образом фланкируют полинуклеотид (например, последовательностей, расположенных на 5'- и 3'-концах полинуклеотида) в геномной ДНК организма, из которой полинуклеотид происходит. Например, в различных аспектах изобретения выделенный полинуклеотид может содержать менее чем приблизительно 5 kb, 4 kb, 3 kb, 2 kb, 1 kb, 0,5 kb, или 0.1 kb нуклеотидной последовательности, которая естественным образом фланкирует полинуклеотид в геномной ДНК клетки, из которой происходит этот полинуклеотид. Во избежание неясности изолированная последовательность все еще может быть в окружении другой ДНК либо in vitro, либо in vivo и может, например, встречаться в трансгенной клетке или организме.
В определенных аспектах настоящего изобретения полинуклеотиды содержат соединение ДНК последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 1-6. Фрагменты и варианты соединения ДНК последовательностей являются подходящими для дифференциальной идентификации события SYHT0H2. Как обсуждалось в других местах данного документа, такие последовательности находят применение в качестве праймеров и/или зондов.
В других аспектах настоящего изобретения предлагаются полинуклеотиды, которые могут обнаружить событие SYHT0H2 или специфический участок SYHT0H2. Такие последовательности включают любой полинуклеотид, представленный в SEQ ID NO: 1-20, а также его варианты и фрагменты. В определенных аспектах настоящего изобретения полинуклеотид, используемый для обнаружения события SYHT0H2, включает последовательность, представленную в SEQ ID NO: 10 или фрагмент SEQ ID NO: 10, имеющий по меньшей мере 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170 или 180 нуклеотидов. Фрагменты и варианты полинуклеотидов, которые обнаруживают событие SYHT0H2 или специфический участок SYHT0H2 подходят для дифференциально идентифицированного события SYHT0H2. Как обсуждалось в других местах данного документа, такие последовательности находят применение в качестве праймеров и/или зондов. Кроме того, дополнительно предлагаются праймеры с изолированной нуклеотидной ДНК последовательностью, содержащие последовательность или состоящие из (а) последовательности, представленной в любой из SEQ ID NO: 11-12, 14-15 и 17-21, и (b) варианты и фрагменты SEQ ID NO: 10 или ее комплемент.
Варианты означает по сути аналогичные последовательности. В случае полинуклеотидов вариант содержит полинуклеотид, имеющий делеции (т.е. усечения) на 5'- и/или 3'-конце; делецию и/или добавление одного или нескольких нуклеотидов к одному или нескольким внутренним сайтам в природном полинуклеотиде; и/или замену одного или нескольких нуклеотидов в одном или нескольких сайтах в
- 8 032683 природном полинуклеотиде.
В контексте данного документа зонд представляет собой изолированный полинуклеотид, к которому прикреплена обычная детектируемая метка или репортерная группа, например радиоактивный изотоп, лиганда, хемилюминесцентный агент, фермент и т.д. Такой зонд является комплементарным к нити целевого полинуклеотида, в данном случае к нити изолированной ДНК из соевого события SYHT0H2 либо из соевого растения или из образца, который включает ДНК из события. Зонды включают не только дезоксирибонуклеиновые или рибонуклеиновые кислоты, но также полиамиды и другие материалы зонда, которые могут специфично обнаруживать присутствие целевой ДНК последовательности.
В контексте данного документа праймерами являются изолированные полинуклеотиды, которые соединяются с комплементарной нитью ДНК-мишени посредством гибридизации нуклеиновых кислот с образованием гибрида между праймером и нитью ДНК-мишени, затем распространяются вдоль нити ДНК-мишени с помощью полимеразы, например ДНК-полимеразы. Пары праймеров относятся к их применению для амплификации целевого полинуклеотида, например, с помощью полимеразной цепной реакции (PCR) или других обычных способов амплификации нуклеиновых кислот. PCR или полимеразная цепная реакция представляет собой способ, используемый для амплификации специфических участков ДНК (см. патенты США №№ 4683195 и 4800159, включенные в данный документ посредством ссылки). Любая комбинация праймеров, раскрытых в данном документе, может быть использована, вследствие чего пара позволяет обнаружить событие SYHT0H2 (например, праймеры, содержащие SEQ ID NO: 11-12, 14-15 и 17-21, а также их варианты или фрагменты SEQ ID NO: 10 или ее комплемент). Неограничивающие примеры пар праймеров, используемых в раскрытых способах, включают в себя: (а) первый праймер, содержащий полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 11, и второй праймер, содержащий полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 12, которая может быть использована для амплификации последовательности, охватывающей LB1 (левый край 1) соединение геномной ДНК сои и вставленную гетерологичную последовательность, содержащую Avena HPPD последовательность, (b) первый праймер, содержащий полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 14, и второй праймер, содержащий полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 15, который может быть использован для амплификации последовательности, охватывающей LB2 (левый край 2) соединение геномной ДНК сои и вставленной гетерологичной последовательности, содержащей Avena HPPD последовательность, (с) первый праймер, содержащий полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 17, и второй праймер, содержащий полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 18 или SEQ ID NO: 19, которая может быть использована для амплификации последовательности, охватывающей LB1 соединение геномной ДНК сои и вставленной гетерологичной последовательности, содержащей Avena HPPD последовательность, и (d) первый праймер, содержащий полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 17, и второй праймер, содержащий полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 20 или SEQ ID NO: 21, которая может быть использована для амплификации LB1 соединения геномной ДНК сои и вставленной гетерологичной последовательности, содержащей Avena HPPD последовательность. LB1, применяемое для описания вставки соединения или фланкирующей последовательности, относится к 3'-концу вставки и соседней фланкирующей последовательности. LB2, применяемое для описания вставки соединения или фланкирующей последовательности, относится к 5'-концу вставки и прилегающей фланкирующей последовательности.
Зонды и праймеры имеют достаточную для связывания с целевой ДНК последовательностью длину нуклеотидной цепи и главным образом обнаруживают и/или идентифицируют полинуклеотид, имеющий событие SYHT0H2. Следует признать, что условия гибридизации или условия реакции для достижения данного результата могут быть определены оператором. Данная длина может быть любой длиной, достаточной для использования в предпочтительном способе обнаружения. Как правило, используется 8, 11, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 40, 50, 75, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700 нуклеотидов или более или примерно 11-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-100, 100-200, 200-300, 300-400, 400-500, 500-600, 600-700, 700800 или более нуклеотидов в длину. Такие зонды и праймеры могут гибридизоваться главным образом с целевой последовательностью при условиях гибридизации высокой жесткости. Зонды и праймеры по настоящему изобретению могут иметь полное соответствие ДНК-последовательности смежных нуклеотидов с целевой последовательностью, хотя зонды отличаются от ДНК-мишени, а те, что сохраняют способность специфически обнаруживать и/или идентифицировать целевую ДНК-последовательность могут быть сконструированы традиционными способами. Соответственно, зонды и праймеры могут иметь около 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичности в последовательности или комплементарности к целевому полинуклеотиду (например, SEQ ID NO: 1-12) либо могут отличаться от целевой последовательности (например, SEQ ID NO: 1-12) на 1, 2, 3, 4, 5, 6 или более нуклеотидов. Зонды могут быть использованы в качестве праймеров, но, как правило, предназначены для связывания с ДНКили РНК-мишенью и не используются в процессе амплификации.
Специфические праймеры могут быть использованы для амплификации фрагмента интеграции с получением ампликона, который можно использовать в качестве специфического зонда, или могут самообнаруживаться для идентификации события SYHT0H2 в биологических пробах. В качестве альтернативы зонд может быть использован в ходе реакции PCR с целью создания возможности для обнаружения
- 9 032683 амплификационного события (т.е. TAQMAN® зонд или MGB™ зонд) (так называемая PCR в режиме реального времени). Когда зонд гибридизуют с полинуклеотидами биологического образца при условиях, которые создают возможность для связывания зонда с образцом, это связывание может быть обнаружено, и таким образом обеспечивают указание на наличие события SYHT0H2 в биологическом образце. Такая идентификация связанного зонда была описана в данной области. В одном аспекте настоящего изобретения специфический зонд представляет собой последовательность, которая при оптимальных условиях специфично гибридизируется с участком в 5'- или 3'-фланкирующей области события и содержит часть чужеродной ДНК смежной с ним. Специфический зонд может содержать последовательность по меньшей мере с 80, от 80 до 85, от 85 до 90, от 90 до 95 и от 95 до 100% идентичностью (или комплементарностью) со специфическим участком события SYHT0H2.
В контексте данного документа амплифицированная ДНК или ампликон относится к продукту амплификации целевого полинуклеотида, который является частью матрицы нуклеиновой кислоты. Например, чтобы определить, содержит ли соевое растение, полученное в результате генеративного скрещивания, событие SYHT0H2, ДНК, выделенная из образца ткани соевого растения, может быть подвергнута способу амплификации полинуклеотида с использованием пары ДНК-праймеров, которая включает первый праймер, полученный из фланкирующей последовательности, смежной с сайтом встраивания вставленной гетерологичной ДНК, и второго праймера, полученного из вставленной гетерологичной ДНК для получения ампликона, который является диагностическим в отношении присутствия события SYHT0H2 ДНК. Под диагностическим в отношении события SYHT0H2 подразумевают использование любого способа или анализа, который распознает наличие или отсутствие события SYHT0H2 в биологическом образце. В качестве альтернативы второй праймер может быть получен из фланкирующей последовательности. В других аспектах изобретения пары праймеров могут быть получены из фланкирующей последовательности по обе стороны вставленной ДНК для получения ампликона, который включает в себя полинуклеотидную вставку экспрессирующей конструкции целиком, а также последовательность, фланкирующую трансгенную вставку. Ампликон имеет длину и имеет последовательность, которая является диагностической для события (т.е. содержит соединение ДНК из события SYHT0H2). Ампликон может варьировать по длине от суммарной длины пары праймеров плюс одной пары оснований нуклеотида до любой длины ампликона, предъявляемой протоколом амплификации ДНК. Член пары праймера, полученный из фланкирующей последовательности, может быть расположен на расстоянии от вставленной ДНК-последовательности, данное расстояние может варьировать от одной пары оснований нуклеотида до предельного значения реакции амплификации, или до около двадцати тысяч нуклеотидных пар оснований. Применение термина ампликон, как правило, исключает димеры праймера, которые могут быть сформированы в реакции термической амплификации ДНК.
Способы получения и использования зондов и праймеров, описаны, например, в Sambrook et al. (eds.), Molecular Cloning: A Laboratory Manual 2nd ed, vol. 1-3, 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausebel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, 1992, Greene Publishing and Wiley-Interscience, New York, NY; и в Innis et al., PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, 1990, Academic Press, San Diego, CA. Пары PCR-праймера могут быть получены из известной последовательности, например, с помощью компьютерной программы, предназначенной для этой цели, такой как способ анализа праймера для PCR в Vector NTI версия 6 (Informax Inc., Бетесда, Мэриленд); PrimerSelect (DNASTAR Inc., Мадисон, Висконсин.) и в Primer (версия 0.5.COPYRGT., 1991, институт медикобиологических исследований Уайтхед, Кембридж, Массачусетс). Кроме того, последовательность можно визуально сканировать и определять праймеры вручную с использованием инструкций, известных специалисту в данной области техники.
Следует понимать, что в контексте данного документа термин трансгенный включает любую клетку, клеточную линию, каллус, ткань, часть растения или растение, генотип которых был изменен благодаря наличию гетерологичной нуклеиновой кислоты, в том числе изначально трансгенные и таким образом измененные, а также те, которые созданы путем генеративного скрещивания или бесполого размножения из изначально трансгенных. Термин трансгенный в контексте данного документа не охватывает изменение генома (хромосомного или внехромосомного) с помощью обычных способов селекции растений или с помощью событий природного происхождения, таких как случайное перекрестное опыление, нерекомбинантная вирусная инфекция, нерекомбинантная бактериальная трансформация, нерекомбинантная транспозиция или спонтанная мутация.
Трансформация относится к переносу фрагмента нуклеиновой кислоты в геном организмахозяина, приводящему в результате к генетически стабильной наследственности. Организмы-хозяева, содержащие трансформированные фрагменты нуклеиновой кислоты, называют трансгенными организмами. Примеры способов трансформации растений включают трансформацию, опосредованную агробактериями (De Blaere et al., Meth. Enzymol., 1987, 143:277), а также технологии ускоренной частицами трансформации или генной пушки (Klein et al., Nature, 1987, 327:70-73; патент США № 4945050, включенный в данный документ посредством ссылки). Дополнительные способы преобразования представлены ниже.
Таким образом, изолированные полинуклеотиды могут быть включены в рекомбинантные конст
- 10 032683 рукции, обычно ДНК-конструкции, которые способны к интродукции и репликации в клетке-хозяине. Такая конструкция может быть вектором, который включает в себя систему репликации и последовательности, которые способны к транскрипции и трансляции последовательности, кодирующей полипептид в данной клетке-хозяине. Количество векторов, подходящих для стабильной трансфекции клеток растений или создания трансгенных растений, было описано в, например, Pouwels et al., Cloning Vectors: A Laboratory Manual, 1985; Supp. 1987; Weissbach & Weissbach, Methods for Plant Molecular Biology, 1989, Academic Press, New York, NY; и Flevin et al., Plant Molecular Biology Manual, 1990, Kluwer Academic Publishers. Обычно растительные экспрессионные векторы включают, например, один или несколько клонированных растительных генов под транскрипционным контролем 5'- и 3'-регуляторных последовательностей и доминантный селективный маркер. Такие растительные экспрессионные векторы могут содержать промоторный регулирующий участок (например, регулирующий участок, контролирующий индуцируемую или конститутивную, экологически регулируемую или регулируемую развитием либо клеточно- или ткане-специфическую экспрессию), начальный участок инициации транскрипции, сайт связывания рибосомы, сигнал обработки РНК, сайт терминации транскрипции и/или сигнал полиаденилирования.
Известны различные способы и композиции для идентификации события SYHT0H2. Такие способы находят применение в идентификации и/или обнаружении события SYHT0H2 в любом биологическом материале. Такие способы включают, например, способы подтверждения чистоты семян и способы скрининга семян в партии семян для события SYHT0H2. Биологический образец может включать любой образец, в котором требуется определить наличие ДНК, имеющей событие SYHT0H2. Например, биологический образец может содержать любой растительный материал или материал, содержащийся в растительном материале или полученный из растительного материала, такого как, но не ограничиваясь ими, пищевые или кормовые продукты. В контексте данного документа растительный материал означает материал, который добыт или получен из растения или части растения. В конкретных аспектах изобретения биологический образец содержит соевую ткань.
Праймеры и зонды, основанные на фланкирующей ДНК и вставленных последовательностях, раскрытых в данном документе, могут быть использованы для подтверждения (и, если необходимо, для корректировки) раскрытых последовательностей с помощью обычных способов, например, с помощью повторного клонирования и секвенирования таких последовательностей. Полинуклеотидные зонды и праймеры специфично определяют ДНК-мишень. Для идентификации наличия ДНК из трансгенного события в образце может быть использован любой обычный способ гибридизации или амплификации нуклеиновых кислот. Под специфично определять подразумевают, что полинуклеотид может быть использован либо в качестве праймера для амплификации специфического участка SYHT0H2, либо в качестве зонда, который гибридизуется в жестких условиях с полинуклеотидом, имеющим событие SYHT0H2 или специфический участок SYHT0H2. Уровень или степень гибридизации, которая создает возможность для конкретного обнаружения события SYHT0H2 или специфического участка события SYHT0H2, является достаточной для того, чтобы отличить полинуклеотид со специфическим участком SYHT0H2 от полинуклеотида, лишенного данного участка и тем самым создают возможность избирательной идентификации события SYHT0H2. Под иметь идентичность или комплементарность последовательности, достаточную для обеспечения амплификации специфического события SYHT0H2 подразумевают, что последовательность имеет по меньшей мере 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности или комплементарности к фрагменту полинуклеотида или ко всей длине полинуклеотида, имеющего специфический участок SYHT0H2.
Относительно амплификации целевого полинуклеотида (например, посредством PCR) с использованием конкретной пары праймеров амплификации жесткие условия представляют собой условия, которые позволяют паре праймеров гибридизоваться с целевым полинуклеотидом, к которому праймер, имеющий соответствующую последовательность дикого типа (или ее комплемент), будет создавать идентифицируемый продукт амплификации (ампликон), имеющий специфический участок SYHT0H2 в реакции термической амплификации ДНК. В случае PCR подхода олигонуклеотидные праймеры могут предназначаться для использования в реакциях PCR для амплификации специфического участка SYHT0H2. Способы конструирования праймера для PCR и PCR-клонирования, как правило, известны в данной области и описаны в Sambrook et al. (eds.), Molecular Cloning: A Laboratory Manual 2nd ed., 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, New York; Innis et al. (eds.), PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, 1990, Academic Press, New York; Innis & Gelfand (eds.), PCR Strategies, 1995, Academic Press, New York; и Innis & Gelfand (eds.), PCR Methods Manual, 1999, Academic Press, New York. Способы амплификации также описаны в патентах США №№ 4683195 и 4683202 и в Chen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1994, 91:5695-5699. Данные способы амплификации ДНК, а также другие способы амплификации ДНК, известные в данной области, могут быть использованы в практической реализации других аспектов изобретения. Понятно, что ряд параметров в специфическом протоколе PCR может требовать адаптации к конкретным условиям лаборатории и может быть незначительно модифицирован, при этом все же обеспечить получение аналогичных результатов. Данные корректировки будут очевидны для специалистов в данной области.
Амплифицированный полинуклеотид (ампликон) может быть любой длины, которая создает воз
- 11 032683 можности для обнаружения события SYHT0H2 или специфического участка SYHT0H2. Например, ампликон может быть приблизительно 10, 50, 100, 200, 300, 500, 700, 100, 2000, 3000, 4000, 5000 нуклеотидов в длину или длиннее.
В конкретных аспектах настоящего изобретения первый праймер содержит фрагмент полинуклеотида SEQ ID NO: 10, где первый или второй праймер имеет идентичность или комплементарность последовательности к полинуклеотиду достаточную для амплификации специфического участка SYHT0H2. Пара праймеров может содержать фрагмент SEQ ID NO: 11 и фрагмент SEQ ID NO: 12. В других аспектах изобретения первый и второй праймер могут содержать (а) любую из последовательностей или любую комбинацию последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 11-12, 14-15 и 17-21, или (b) последовательность фрагмента SEQ ID NO: 10 или ее комплемент. Праймеры могут иметь любую длину, достаточную для амплификации участка SYHT0H2, включая, например, по меньшей мере 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 15 или 30 или приблизительно 7-10, 10-15, 15-20, 20-25, 25-30, 30-35, 35-40, 40-45 нуклеотидов или длиннее. В некоторых аспектах настоящего изобретения первый и второй праймеры являются SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12 соответственно; SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 15 соответственно; SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 18 соответственно; SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 19 соответственно; SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 20 соответственно или SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 21 соответственно. Например, используемые пары праймеров включают: (а) первый праймер, содержащий полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 11, и второй праймер, содержащий полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 12, которые могут быть использованы для амплификации последовательности, охватывающей LB1 (левая граница 1) соединение геномной ДНК сои и вставленную гетерологичную последовательность, содержащую последовательность Avena HPPD, (b) первый праймер, содержащий полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 14, и второй праймер, содержащий полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 15, которые могут быть использованы для амплификации последовательности, охватывающей LB2 (левый край 2) соединение геномной ДНК сои и вставленную гетерологичную последовательность, содержащую последовательность Avena HPPD, (с) первый праймер, содержащий полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 17, и второй праймер, содержащий полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 18 или SEQ ID NO: 19, которые могут быть использованы для амплификации последовательности, охватывающей LB1 соединение геномной ДНК сои и вставленную гетерологичную последовательность, содержащую последовательность Avena HPPD, а также (d) первый праймер, содержащий полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 17, и второй праймер, содержащий полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 20 или SEQ ID NO: 21, которые могут быть использованы для амплификации LB1 соединения геномной ДНК сои и вставленную гетерологичную последовательность, содержащую последовательность Avena HPPD.
Как обсуждалось в другом месте данного документа, может быть использован любой способ PCRамплификации события SYHT0H2 или специфического участка, включая, например, PCR в режиме реального времени. См., например, Livak et al., PCR Methods and Applications, 1995, 4:357-362; патенты США №№ 5538848 и 5723591; пользовательский бюллетень прикладных биосистем (Applied Biosystems User Bulletin) № 2, Relative Quantitation of Gene Expression, P/N 4303859; а также пользовательский бюллетень прикладных биосистем (Applied Biosystems User Bulletin) № 5, Multiplex PCR with TAQMAN® VIC probes, P/N 4306236, каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки.
В методике гибридизации используется целый полинуклеотид или часть полинуклеотида, которые селективно гибридизуются с целевым полинуклеотидом, имеющим специфическое событие SYHT0H2. Под жесткими условиями или жесткими условиями гибридизации, когда речь идет об условиях полинуклеотидного зонда, подразумевают такие условия, при которых зонд гибридизуется со своей целевой последовательностью в заметно большей степени, чем другие последовательности (например, по меньшей мере в 2 раза больше окружения). Относительно амплификации целевого полинуклеотида (например, посредством PCR) с использованием определенной пары амплификационных праймеров, жесткие условия являются условиями, которые позволяют паре праймеров гибридизироваться с целевым полинуклеотидом, с которым праймер имеет аналогичный дикий тип. Строгие условия зависят от последовательности и будут различными в разных случаях. Путем регулирования жесткости гибридизации и/или условий отмывки могут быть идентифицированы (гомологичное зондирование) целевые последовательности, которые на 100% комплементарны зонду. Кроме того, жесткость условий можно регулировать для обеспечения некоторого несовпадения в последовательностях с тем, чтобы обнаружить более низкие степени идентичности (гетерологичное зондирование). Обычно зонд составляет меньше чем приблизительно 1000 нуклеотидов в длину или меньше чем 500 нуклеотидов в длину.
В контексте данного документа в значительной степени идентичная или комплементарная последовательность представляет собой полинуклеотид, который будет специфически гибридизоваться с комплементом молекулы нуклеиновой кислоты, с которой она сравняется в условиях высокой жесткости. Подходящие жесткие условия, которые способствуют ДНК-гибридизации, например 6Х хлорид натрия/цитрат натрия (SSC) при приблизительно 45°С с последующей отмывкой в 2XSSC при 50°С, известны специалистам в данной области техники или могут быть найдены в Ausebel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology. 1989, John Wiley & Sons, NY, 6.3.1-6.3.6. Как правило, жесткими условия
- 12 032683 ми гибридизации и обнаружения будут те, в которых концентрация солей составляет менее чем приблизительно 1,5М Na+ ион, обычно приблизительно от 0,01 до 1,0М Na+ концентрация ионов (или других солей) при pH от 7,0 до 8,3, а температура составляет по меньшей мере приблизительно 30°С для коротких зондов (например, от 10 до 50 нуклеотидов) и по меньшей мере приблизительно 60°С для длинных зондов (например, более чем 50 нуклеотидов). Жесткие условия могут быть достигнуты при добавлении дестабилизирующих агентов, таких как формамид. Типичные условия низкой жесткости включают гибридизацию с буферным раствором в 30-35% формамиде, 1М NaCl, 1% SDS (додецилсульфат натрия) при 37°С и отмывку в IX-2X SSC (20X SSC = 3,0М NaCl/0,3M тринатрийцитрат) при 50-55°С. Типичные условия средней жесткости включают гибридизацию в 40-45% формамиде, 1,0М NaCl, 1% SDS при 37°С и отмывку в 0,5 X-IX SSC при 55-60°С. Типичные условия высокой жесткости включают гибридизацию в 50% формамиде, 1М NaCl, 1% SDS при 37°С и отмывку в 0,1 X SSC при 60-65°С. Дополнительно отмывочные буферы могут содержать от приблизительно 0,1 до приблизительно 1% SDS. Продолжительность гибридизации обычно составляет менее приблизительно 24 ч, обычно от приблизительно 4 до приблизительно 12 ч.
Продолжительность отмывки будет равна, по меньшей мере, периоду времени, достаточному для достижения равновесия.
В реакциях гибридизации специфичность является, как правило, функцией послегибридизационных отмывок, причем критическими факторами являются ионная сила и температура конечного отмывочного раствора. Для ДНК-ДНК гибридов, Tm может быть приближена из уравнения Meinkoth & Wahl, Anal. Biochem., 1984, 138:267-284: Tm = 81,5°C + 16,6 (log M) + 0,41 (% GC) - 0,61 (% форм.) - 500/L, где М представляет собой молярность одновалентных катионов, % GC представляет собой процент нуклеотидов гуанозина и цитозина в ДНК, % форм, представляет собой процент формамида в растворе для гибридизации и L представляет собой длину гибрида в парах оснований. Tm представляет собой температуру (при определенной ионной силе и pH), при которой 50% комплементарной целевой последовательности гибридизируется с идеально подходящим зондом. Tm уменьшается приблизительно на 1°С на каждый 1% несоответствия, таким образом, Tm, гибридизацию и/или условия отмывки можно регулировать для гибридизации до последовательностей нужной идентичности. Например, если добиваются последовательностей с >90% идентичностью, Tm может быть уменьшена на 10°С. Обычно выбирают жесткие условия, которые примерно на 5°С ниже, чем температура точки плавления (Tm) для конкретной последовательности и ее комплемента при определенной ионной силе и pH. Тем не менее, в очень жестких условиях возможно использование гибридизации и/или отмывки при температуре на 1, 2, 3 или 4°С ниже, чем температура точки плавления (Tm), в умеренно жестких условиях возможно использование гибридизации и/или отмывки при температуре на 6, 7, 8, 9 или 10°С ниже, чем температура точки плавления (Tm); в условиях низкой жесткости возможно использование гибридизации и/или отмывки при температуре на 11, 12, 13, 14, 15 или 20°С ниже, чем температура точки плавления (Tm). Используя уравнение, композиции для гибридизации и отмывки и нужную Tm, специалисты поймут, что вариации жесткости растворов для гибридизации и/или для отмывки, по сути, описаны выше. Если требуемая степень несоответствия дает в результате Tm менее чем 45°С (водный раствор) или 32°С (раствор формамида), оптимальным является увеличение концентрации SSC с тем, чтобы более высокая температура могла быть применена. Подробное руководство к гибридизации нуклеиновых кислот можно найти в Tijssen, Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, 1993, Part I, Chapter 2, Elsevier, NY; Ausubel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, 1995, Chapter 2, Greene Publishing и Wiley-Interscience, NY; Sambrook et al. (eds.), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, NY), а также Haymes et al., In: Nucleic Acid Hybridization, a Practical Approach, 1985, IRL Press, Washington, DC.
Говорят, что полинуклеотид является комплементом другого полинуклеотида, если они проявляют взаимодополняемость. В контексте данного документа говорят, что молекулы обладают полной комплементарностью в случае, когда каждый нуклеотид одной из полинуклеотидных молекул является комплементарным к нуклеотиду другой. Говорят, что две молекулы являются минимально комплементарными, если они могут гибридизироваться друг с другом со стабильностью, достаточной для того, чтобы позволить им оставаться соединенными друг с другом при стандартных условиях низкой жесткости. Аналогично говорят, что молекулы являются комплементарными, если они могут гибридизироваться друг с другом со стабильностью, достаточной для того, чтобы позволить им оставаться соединенными друг с другом при стандартных условиях низкой жесткости.
Для обнаружения специфического участка SYHT0H2 или его ампликона могут быть использованы различные способы, включая, но не ограничиваясь ими, генетический анализ бита (Nikiforov et al., Nucleic Acid Res., 1994, 22: 4167-4175).
Другим способом обнаружения является методика пиросеквенирования, описанная в Winge, Innov. Pharma. Tech., 2000, 00:18-24. В этом способе используют олигонуклеотид, предназначенный перекрывать смежную ДНК и вставленное ДНК соединение или пару олигонуклеотидов, которые могут амплифицировать специфический участок SYHT0H2. Олигонуклеотид гибридизуют с одноцепочечным продуктом PCR целевого участка (один праймер во вставленной последовательности и один во фланкирую
- 13 032683 щей последовательности) и инкубируют в присутствии ДНК-полимеразы, АТР, сульфурилазы, люциферазы, апиразы, аденозина 5' фосфосульфата и люциферина. Отдельно добавляют dNTPs и инкорпорация дает в результате световой сигнал, который измеряют. Световой сигнал указывает на присутствие трансгена вставленной/фланкирующей последовательности, возникшей в результате успешной амплификации, гибридизации и удлинения цепи на одно или несколько оснований.
Поляризация флуоресценции, описанная Chen и др., Genome Res, 1999, 9: 492-498 представляет собой способ, который может быть использован для обнаружения ампликона настоящего изобретения. В случае этого способа используют олигонуклеотид, предназначенный перекрывать фланкирующее и вставленное ДНК-соединение или пару олигонуклеотидов, которые могут амплифицировать специфический участок SYHT0H2. Олигонуклеотид гибридизуют с одноцепочечным продуктом PCR из целевой области (один праймер во вставленной ДНК и один во фланкирующей ДНК последовательности) и инкубируют в присутствии ДНК-полимеразы и флуоресцентно-меченого ddNTP. Удлинение цепи на одно основание приводит к инкорпорации ddNTP. Инкорпорация может быть измерена с использованием флуориметра как изменение поляризации. Изменение поляризации указывает на присутствие трансгена вставленной/фланкирующей последовательности вследствие успешной амплификации, гибридизации и удлинения цепи на одно основание.
TAQMAN® (РЕ прикладные биосистемы, Фостер Сити, Калифорния) описан как способ обнаружения и количественного определения присутствия последовательности ДНК и полностью ясен из инструкции изготовителя. Коротко, создают FRET олигонуклеотидный зонд, который перекрывает фланкирующее и вставленное соединение ДНК или задействуют пару олигонуклеотидов, которые могут амплифицировать специфический участок SYHT0H2. FRET зонд и праймеры для PCR (один праймер во вставленной ДНК последовательности и один во фланкирующей геномной последовательности) циркулируют в присутствии термостабильной полимеразы и dNTPs. Гибридизация FRET зондов приводит к расщеплению и высвобождению флуоресцентной части из гасящей части на FRET зонде. Флуоресцентный сигнал указывает на наличие фланкирующей/трансгенной вставленной последовательности, возникшей в результате успешной амплификации и гибридизации.
Молекулярные маяки были описаны для использования в определении последовательности, как описано в Tyangi et al., Nature Biotech., 1996, 14: 303-308. Коротко, создают FRET олигонуклеотидный зонд, который перекрывает фланкирующее и вставленное ДНК соединение, или задействуют пару олигонуклеотидов, которые могут амплифицировать специфический участок SYHT0H2. Уникальная структура FRET зонда приводит в результате к тому, что он содержит вторичную структуру, которая удерживает флуоресцентную и гасящую части в непосредственной близости. FRET зонд и праймеры для PCR (один праймер в вставленной ДНК последовательности и один во фланкирующей последовательности) циркулируют в присутствии термостабильной полимеразы и dNTPs. Последующая успешная амплификация PCR, гибридизация зонда FRET с целевой последовательностью приводит к удалению вторичной структуры зонда и пространственному разделению флуоресцентной и гасящей части. В результате имеет место флуоресцентный сигнал. Флуоресцентный сигнал указывает на наличие фланкирующей/ трансгенной вставленной последовательности, возникшей в результате успешной амплификации и гибридизации.
Реакция гибридизации с использованием зонда, специфичного для последовательности, обнаруженной внутри ампликона, представляет собой еще один способ, применяемый для обнаружения ампликона, полученного в результате реакции PCR.
В контексте данного документа набор относится к набору реактивов для идентификации и/или определения события SYHT0H2 в биологических пробах. Набор может быть использован, а его компоненты могут быть специально адаптированы для целей контроля качества (например, чистоты партии семян), определения события SYHT0H2 в растительном материале или материале, содержащем растительный материал или полученном из растительного материала, таком как, но, не ограничиваясь ими, пищевые или кормовые продукты.
В определенных аспектах настоящего изобретения предлагается набор для идентификации события SYHT0H2 в биологическом образце. Набор включает в себя первый и второй праймер, где первый и второй праймеры амплифицируют полинуклеотид, содержащий специфический участок SYHT0H2. В других аспектах изобретения набор включает полинуклеотид для обнаружения специфического участка SYHT0H2. Набор может содержать, например, первый праймер, содержащий фрагмент полинуклеотида SEQ ID NO: 10 или его комплемент, причем первый или второй праймер имеют достаточную гомологию или комплементарность последовательности к полинуклеотиду для амплификации специфического участка SYHT0H2. Например, пара праймеров может содержать фрагмент SEQ ID NO: 11 и фрагмент SEQ ID NO: 12 или их комплемент. В других аспектах настоящего изобретения первый и второй праймеры может включать любую из последовательностей или любую комбинацию последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 11-12, 14-15 и 17-21. Праймеры могут иметь любую достаточную для амплификации участка SYHT0H2 длину, включая, например, по меньшей мере 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 15 или 30 или приблизительно 7-10, 10-15, 15-20, 20-25, 25-30, 30-35, 35-40, 40-45 нуклеотидов или длиннее. В некоторых аспектах настоящего изобретения первый и второй праймеры представляют собой SEQ ID NO:
- 14 032683 и SEQ ID NO: 12 соответственно, SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 15 соответственно, SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 18 соответственно или SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 19 соответственно, SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 20 соответственно или SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 21 соответственно. Например, указанные выше пары праймеров могут быть использованы для амплификации (а) последовательности, охватывающей LB1 соединение геномной ДНК сои и гетерологичную вставку, содержащую последовательность Avena HPPD (SEQ ID NO: 11 и 12, SEQ ID NO: 17 и 18; SEQ ID NO: 17 и 19), или (b) последовательности, охватывающей LB2 соединение геномной ДНК сои и гетерологичную вставку, содержащую последовательность Avena HPPD (SEQ ID NO: 14 и 15, SEQ ID NO: 17 и 20, SEQ ID NO: 17 и 21).
Также предлагаются наборы для обнаружения ДНК, содержащие по меньшей мере один полинуклеотид, который может специфически обнаруживать специфический участок SYHT0H2, где полинуклеотид содержит по меньшей мере одну молекулу ДНК с достаточной длиной смежных нуклеотидов, гомологичных или комплементарных SEQ ID NO: 10. В конкретных аспектах настоящего изобретения набор для обнаружения ДНК содержит любой полинуклеотид из SEQ ID NO: 11-12 или его фрагмент или последовательность, которая гибридизуется с любой из SEQ ID NO: 11-12 или ее фрагмент.
Любой из полинуклеотидов и его фрагменты и варианты, используемые в способах и композициях, могут иметь идентичность последовательности с участком трансгенной вставки события SYHT0H2, соединением последовательности события SYHT0H2 или фланкирующей последовательностью события SYHT0H2. Известны способы определения взаимосвязи различных последовательностей. В контексте данного документа эталонная последовательность является определенной последовательностью, используемой в качестве основы для сравнения последовательностей. Эталонная последовательность может быть разновидностью указанной последовательности или всей указанной последовательностью, например, в качестве сегмента полноразмерной кДНК или генной последовательности, или целой кДНК или генной последовательности. В контексте данного документа окно сравнения ссылается на смежный и определенный сегмент полинуклеотидной последовательности, причем полинуклеотидная последовательность в окне сравнения может содержать добавления или делеции (т.е. пробелы) по сравнению с эталонной последовательностью (которая не содержит добавлений или делеций) для оптимального выравнивания двух полинуклеотидов. Как правило, окно сравнения составляет по меньшей мере 20 смежных нуклеотидов в длину и, необязательно, может составлять 30, 40, 50, 100 или больше. Специалистам в данной области понятно, что во избежание высокого сходства с эталонной последовательностью за счет включения пробелов в полинуклеотидную последовательность обычно вводят штраф за пропуск в последовательности и вычитают из количества совпадений.
Способы выравнивания последовательностей для сравнения хорошо известны в данной области техники. Таким образом, определение процента идентичности последовательностей между двумя последовательностями может быть выполнено с использованием математического алгоритма. Неограничивающими примерами таких математических алгоритмов являются алгоритм Myers и Miller, CABIOS, 1988, 4:11-17; алгоритм локального выравнивания Smith et al., Adv. Appl. Math., 1981, 2:482; алгоритм глобального выравнивания Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol., 1970, 48:443-453; способ поиска локального выравнивания Pearson & Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1988, 85:2444-2448; алгоритм Karlin & Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1990, 87:2264, модифицированный как в Karlin & Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1993, 90:5873-5877.
Компьютерная реализация данных математических алгоритмов может применяться для сравнения последовательностей с целью определения идентичности последовательностей. Такие реализации включают, но не ограничиваются ими, CLUSTAL в PC/генная программа (доступна у Intelligenetics, Маунтин Вью, Калифорния); ALIGN программа (версия 2.0) и GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA и TFASTA в GCG Wisconsin Genetics Software Package, версия 10 (доступны у Accelrys Inc., 9685 Скрэнтон-Роуд, СанДиего, Калифорния). Выравниваниег с использованием этих программ могут быть выполнен с применением параметров по умолчанию. CLUSTAL программа хорошо описана Higgins et al., Gene, 1988, 73:237244; Higgins et al., C45/OS, 1989, 5:151-153; Corpet et al., Nucleic Acids Res., 1988, 16:10881-90; Huang et al., CABIOS, 1992, 8:155-65; и Pearson et al., Meth. Mol. Biol., 1994, 24:307-331. Программа ALIGN основана на алгоритме Myers & Miller, CABIOS, 1988, 4:11-17. Таблица веса остатков РАМ120, штраф за длину пропуска, равную 12, и штраф за пропуск, равный 4, можно использовать с программой ALIGN при сравнении аминокислотных последовательностей. Программа BLAST Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215:403 основана на алгоритме Karlin & Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1993, 90:5873-5877. Поиски нуклеотидов BLAST могут быть выполнены с программой BLASTN, показатель = 100, длина слова = 12, для получения нуклеотидных последовательностей, гомологичных нуклеотиднои последовательности, кодирующей белок. Поиски белка BLAST могут быть выполнены с помощью программы BLASTX, показатель = 50, длина слова = 3 для получения аминокислотных последовательностей, гомологичных белку или полипептиду. Для получения содержащих разрывы выравниваний в целях сравнения может быть использован содержащий разрывы BLAST (в BLAST 2.0), описанный в Altschul et al., Nucleic Acids Res., 1997, 25:3389. В качестве альтернативы PSI-BLAST (в BLAST 2.0) может быть использован для выполнения повторного поиска, который обнаруживает отдаленные взаимосвязи между молекулами. См. Altschul et al., Nucleic Acids Res., 1997, 25:3389. При использовании BLAST, содержащих разрывы
- 15 032683
BLAST, PSI-BLAST, могут быть использованы параметры по умолчанию соответствующих программ (например, BLASTN для нуклеотидных последовательностей, BLASTX для белков). Выравнивание можно осуществлять вручную посредством контроля.
Если не указано иное, значения идентичности/сходства последовательности, приведенных в данном документе, относятся к значению, полученному с использованием GAP версии 10 с применением следующих параметров: % идентичности и % сходства для нуклеотиднои последовательности, использующей вес GAP, равный 50, и меру длины, равную 3, а также матрицу замены nwsgapdna.cmp; % идентичности и % сходства для последовательности аминокислот, использующих вес GAP, равный 8, и меру длины, равную 2, а также оценочную матрицу BLOSUM62 или любой эквивалентной ей программы. Под эквивалентной программой подразумевают любую программу сравнения последовательностей, которая для любой из двух исследуемых последовательностей создает выравнивания, имеющие сходные совпадения нуклеотидных или аминокислотных остатков и сходные проценты идентичности последовательности по сравнению с соответствующим выравниванием, созданным с помощью GAP версии 10.
GAP использует алгоритм Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol., 1970, 48:443-453 для нахождения выравнивания двух полных последовательностей, которые максимизируют количество совпадений и минимизирует число пробелов. GAP учитывает все возможные выравнивания и позиции пробела и создает выравнивание с наибольшим количеством совпадающих оснований и наименьшим количеством пробелов. Это создает возможность для введение в действие штрафа за возникновение пробелов и штрафа за увеличение пробела в частях совпадающих оснований. GAP должен извлечь выгоду от штрафа за возникновение пробелов в ряду совпадений для каждого пробела, который он вставляет. Если выбирают штраф за расширение больше нуля, GAP должен, вдобавок, извлечь выгоду для каждого вставленного пробела в размере длины пробела, умноженной на штраф за увеличение пробела. Значения штрафа за создание пробелов по умолчанию и значения штрафа за увеличение пробела по умолчанию в версии 10 GCG Wisconsin Genetics Software Package для белковых последовательностей равны 8 и 2 соответственно. Для нуклеотидных последовательностей штраф за создание пробелов по умолчанию равен 50, в то время как штраф за увеличение пробела по умолчанию равен 3. Штрафы за создание пробелов и увеличение пробелов могут быть выражены как целое число, выбранное из группы, состоящей из целых чисел от 0 до 200. Так, например, штрафы за создание пробелов и увеличение пробелов могут быть 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 или больше.
GAP представляет одного из членов семейства лучших выравниваний. Членов данной семьи может быть много, но ни один другой из членов не имеет лучшего качества. GAP демонстрирует четыре показателя качества для выравниваний: качество, соотношение, идентичность и сходство. Качество является показателем, максимизированным для выравнивания последовательностей. Соотношение является качеством, разделенным на количество оснований в более коротком сегменте. Процент идентичности является процентом символов, которые фактически совпадают. Процент сходства является процентом символов, которые являются аналогичными. Символы, которые находятся в стороне от пробелов игнорируются. Сходство отмечают, когда значение матрицы замен для пары символов больше или равно 0,50, порога сходства. Матрица замен, используемая в версии 10 GCG Wisconsin Genetics Software Package, является, BLOSUM62 (см. Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1989, 89:10915).
В контексте данного документа идентичность последовательности или идентичность применительно к двум полинуклеотидным или полипептидным последовательностям, ссылается на остатки в двух последовательностях, которые являются аналогичными при выравнивании для максимального соответствия в заданном окне сравнения. Признают, что в случае, когда процент идентичности последовательностей применяют со ссылкой на белки, положения остатков, которые не являются идентичными, часто отличаются консервативными аминокислотными заменами, где аминокислотные остатки заменены на другие аминокислотные остатки со сходными химическими свойствами (например, зарядом или гидрофобностью) и, следовательно, не изменяют функциональные свойства молекулы. В случае, когда последовательности отличаются консервативными заменами, процент идентичности последовательности может быть отрегулирован в сторону повышения для коррекции консервативного характера замены. Говорят, что последовательности, которые отличаются такими консервативными заменами, обладают сходством последовательностей или сходством. Средства для осуществления такой корректировки хорошо известны специалистам в данной области техники. Как правило, они включают в себя количественную оценку консервативной замены скорее как частичного, а не полного неправильного спаривания, тем самым увеличивая процент идентичности последовательностей. Так, например, если идентичным аминокислотам дается оценка 1 и неконсервативное замещение имеет коэффициент, равный нулю, а консервативное замещение имеет коэффициент между нулем и 1. Количественную оценку консервативных замен рассчитывают, например, как реализовано в программе PC/GENE (Intelligenetics, Маунтин Вью, Калифорния).
В контексте данного документа процент идентичности последовательности означает значение, определенное путем сравнения двух оптимально выровненных последовательностей в окне сравнения, причем часть полинуклеотидной последовательности в окне сравнения может содержать добавления или делеции (т.е. пробелы) по сравнению с эталонной последовательностью (которая не содержит добавле
- 16 032683 ний или делеций) для оптимального выравнивания двух последовательностей. Процент рассчитывается путем определения числа позиций, в которых идентичное основание нуклеиновой кислоты или идентичный аминокислотный остаток встречается в обеих последовательностях для получения числа совпадающих позиций, деля некоторое количество совпадающих положений на общее число положений в окне сравнения и умножая результат на 100 для получения процента идентичности последовательностей.
Термин борьба и его производные, например борьба с сорняками, относится к одному или нескольким из ингибирующих рост, прорастание, воспроизведение и/или пролиферацию и/или уничтожение, удаление, инактивацию или иным образом уменьшение появления и/или активности сорняков.
В контексте данного документа обрабатываемые земли или месторасположение включает любой регион, в котором хотят вырастить растение. Такие обрабатываемые земли включают, но не ограничиваются ими, область, в которой растение выращивают (например, нива, перелог, лес, управляемый лес, поле для культивирования фруктов и овощей и т.д.), теплицу, камеру роста и т.д.
Соевые растения, содержащие событие SYHT0H2 могут дополнительно содержать один или несколько дополнительных участков полинуклеотидов, кодирующих полипептиды, которые придают устойчивость к одному или нескольким дополнительным гербицидам, насекомым, грибковым, бактериальным и/или вирусным инфекциям. Примеры полипептида(ов), который придает устойчивость к гербицидам, включают, например, толерантную к глифосату 5-енол-пирувилшикимат-3-фосфат-синтазу (EPSPS) (например, раскрытую в патентах США №№ 5804425 и 6566587), глифосат N-ацетилтрансферазу (GAT) (например, раскрытую в WO 02/036782), толерантную к гербицидам 4-гидроксипирувилдиоксигеназу (HPPD) (например, раскрытую в WO 02/46387), фосфинотрицин-ацетилтрансферазу (PAT) (например, раскрытую в патенте США 5273894), цитохром Р450 (например, раскрытую в международной публикации согласно PCT № WO 07/103567), глутатион S-трансферазу (GST) (например, раскрытую в международной публикации согласно PCT № WO 01/21770), толерантную к гербицидам ацетил-KoAкарбоксилазу (АССазу), устойчивую к гербицидам ацетолактатсинтазу (ALS) (например, раскрытую в патенте США № 5013659), толерантную к гербицидам протопорфириногеноксидазу (PPGO) (например, раскрытую в международной публикации согласно PCT № WO 95/34659) бромоксинилнитрилазу (например, раскрытую в международной публикации согласно PCT № WO 89/00193), толерантную к гербицидам фитоендесатуразу (например, раскрытую в опубликованной европейской заявке № 0393690), арилоксиалканоат диоксигеназу (например, раскрытую в международных публикациях согласно PCT № WO 2005/107437 и WO 2007/053482) и дикамба-разрушающие ферменты (например, раскрытые в международной публикации согласно PCT № WO 98/45424), в том числе известные мутировавшие или иначе модифицированные варианты этих полипептидов.
Соответственно, гербицидные композиции, применяемые к месторасположению, могут дополнительно содержать один или несколько дополнительных пестицидов, к которым соевое растение, содержащее событие SYTH0H2, является толерантным, например нематоцид, инсектицид, фунгицид и/или гербицид. Примеры подходящих пестицидов приведены в Tomlin, C.D.S. (ed.), The Pesticide Manual, 14th ed., 2006. Например, пестицид может быть одним или несколькими пестицидами, выбранными из следующих классов инсектицидно, акарицидно, нематоцидно или моллюскицидно активных ингредиентов: аланикарб, алдикарб, бендиокарб, бенфуракарб, бутокарбоксим, бутоксикарбоксим, карбарил, карбофуран, карбосульфан, этиофенкарб, фенобукарб, форметанат, фуратиокарб, изопрокарб, метиокарб, метомил, метолкарб, оксамил, пиримикарб, пропоксур, тиодикарб, тиофанокс, триазамат, триметакарб, ХМС, ксилилкарб; ацефат, азаметифос, азинфос-этил, азинфос-метил, кадусафос, хлорэтоксифос, хлорфенвинфос, хлормефос, хлорпирифос, хлорпирифос-метил, кумафос, цианофос, деметон^-метил, диазинон, дихлорвос/DDVP, дикротофос, диметоат, диметилвинфос, дисульфотон, EPN, этион, этопрофос, фамфур, фенамифос, фенитротион, фентион, фостиазат, гепетнофос, имисуафос, изофенфос, изопропил-О(митоксиаминотиофосфорил)салицилат, изоксатион, малатион, мекарбам, метамидофос, метидатион, мевинфос, монокротофос, налед, ометоат, оксидеметон-метил, паратион, паратион-метил, фентоат, форат, фозалон, фосмет, фосфамидон, фоксим, пиримифос-метил, профенофос, пропетамфос, протиофос, пираклофос, пиридафентион, квиналфос, сульфотеп, тебупиримфос, темефос, тербуфос, тетрахлорвинфос, тиометон, триазофос, триклорфон, вамидотион, циклодиен хлорорганических соединений, хлордан, эндосульфан; этипрол, фипронил, акринатрин, аллетрин, D-цис-транс-аллетрин, D-транс-аллетрин, бифентрин, биоаллетрин, биоаллетрин S-изомер циклопентенил, биоресметрин, циклопротрин, цифлутрин, бета-цифлутрин, цигалотрин, лямбда-цигалотрин, гамма-цигалотрин, циперметрин, альфа-циперметрин, бета-циперметрин, тета-циперметрин, зета-циперметрин, цифенотрин [(1И)-транс-изомеры], дельтаметрин, эмпентрин [(EZ)-(1R)-изомеры), эсфенвалерат, этофенпрокс, фенпропатрин, фенвалерат, флуцитринат, флуметрин, тауфлувалинат, халфенпрокс, имипротрин, кадетрин, перметрин, фенотрин [(Ш)-трансизомер), праллетрин, пиретрин (пиретрум), ресметрин, силафлуофен, тефлутрин, тетраметрин, тетраметрин [(Ш)-изомеры)], тралометрин, трансфлутрин; ДДТ; метоксихлор, ацетамиприд, клотианидин, динотефуран, имидаклоприд, нитенпирам, тиаклоприд, тиаметоксам; никотин, спинеторам, спиносад, абамектин, эмамектин бензоат, лепимектин, милбемектин, гидропрен, кинопрен, метопрен; феноксикарб; пирипроксифен, хлорпикрин; сульфурилфторид; бура; антимонил-тартрат калия, пиметрозин; флоникамид, клофентезин, гекситиазокс, дифловидазин, этоксазол. Бактерии Bacillus thuringiensis подвида israelensis,
- 17 032683 бактерии Bacillus sphaericus, бактерии Bacillus Thuringiensis подвида aizawai, бактерии Bacillus Thuringiensis подвида kurstaki, бактерии Bacillus Thuringiensis подвида tenebrionis, ВТ-белки сельскохозяйственных культур Cry1Ab, Cry1Ac, Cry1Fa, Cry2Ab, mCry3А, Cry3Ab, Cry3Bb, Cry34/35Ab1, диафентиурон, азоциклотин, цигексатин, фенбутатин оксид;, пропаргит, тетрадифон, хлорфенапир, ДНОК, сульфурамид, бенсультап, картап гидрохлорид, тиоциклам, тиосультап-натрий, бистрифлурон, хлорфлуазурон, дифлубензурон, флуциклоксурон, флуфеноксурон, гексафлумурон, луфенурон, новалурон, новифлумурон, тефлубензурон, трифлумурон, бупрофезин, циромазин, хромафенозид, галофенозид, метоксифенозид, тебуфенозид, амитраз, гидраметилнон; ацеквиноцил; флуакрипирим, феназаквин, фенпироксимат, пиримидифен, пиридабен, тебуфенпирад, толфенпирад, ротенон (Denis), индоксакарб; метафлумизон, спиродиклофен, спиромезифен, спиротетрамат, фосфида алюминий, кальция фосфид, фосфин, фосфид цинка, циенопирафен, хлорантранилипрол, флубендиамид, амидофлумет, азадирахтин, бенклотиаз, бензоксимат, бифеназат, бромопропилат, хинометионат, криолит, циантранилипрол (циазипир), цифлуметофен, дикофол, дифловидазин, флуенсульфон, флуфенерим, флуфипрол, флуопирам, фуфенозид, имидаклотиз, ипродион, меперфлутрин, пиридалил, пирифлуквиназон, тетраметилфлутрин, иодметан; продукты на основе Bacillus firmus (включая, но не ограничиваясь им, штамм CNCM 1-1582, такой как, например, VOTiVO™, BioNem); 3-бром-Ы-{2-бром-4-хлор-6-[(1-циклопропилэтил)карбамоил]фенил}-1-(3хлорпиридин-2-ил)-Ш-пиразол-5-карбоксамид (известный из WO 2005/077934), 4-{[(6-бромпиридин-3ил)метил](2-фторэтил)амино}фуран-2(5Н)-он (известное из WO 2007/115644), 4-{[(6-фтор-3ил)метил](2,2-дифторэтил)амино}фуран-2(5Н)-он (известный из WO 2007/115644), 4-{[(2-хлор-1,3тиазол-5-ил)метил](2-фторэтил)амино}фуран-2(5Н)-он (известный из WO 2007/115644), 4-{[(6хлорпиридин-3-ил)метил](2-фторэтил)амино}фуран-2(5Н)-он (известный из WO 2007/115644), флупирадифурон, 4-{[(6-хлор-5-фтор-3-ил)метил](метил)амино}фуран-2(5Н)-он (известный из WO 2007/115643), 4-{[(5,6-дихлорпиридин-3-ил)метил](2-фторэтил)амино}фуран-2(5Н)-он (известного из WO 2007/115646), 4-{[(6-хлор-5-фтор-3-ил)метил](циклопропил)амино}фуран-2(5Н)-он (известного из WO 2007/115643), 4-{[(6-хлорпиридин-3-ил)метил](циклопропил)амино}фуран-2(5Н)-он (известный из ЕР-А0539588), 4-{[(6-хлорпиридин-3-ил)метил](метил)амино}фуран-2(5Н)-он (известный из ЕР-А-0539588), {[1-(6-хлорпиридин-3-ил)этил](метил)оксидо-Х4-сульфанилиден}цианамид (известный из WO
2007/149134) и его диастереомеры {[(1И)-1-(6-хлорпиридин-3-ил)этил](метил)оксидо-Х4сульфанилиден}цианамид (А) и {[(Ш)-1-(6-хлорпиридин-3-ил)этил](метил)оксидо-Х4-сульфанилиден} цианамид (В) (также известный из WO 2007/149134), а также сульфоксафлор и его диастереомеры [(R)метил-(оксидо){(Ш)-1-[6-(трифторметил)пиридин-3-ил]этил}-Х4-сульфанилиден]цианамид (А1) и [(S)метил-(оксидо){( 1 S)-1-[6-(трифторметил)пиридин-3 -ил]этил} -Х4-сульфанилиден]цианамид (А2), называют группой диастереомеров А (известный из WO 2010/074747, WO 2010/074751), [Щ)-метил(оксидо){(Ш)-1-[6-(трифторметил)пиридин-3-ил]этил}-Х4-сульфанилиден]цианамид (В1) и |(Ь)-метил(оксидо){(Ш)-1-[6-(трифторметил)пиридин-3-ил]этил}-Х4-сульфанилиден]цианамид (В2), именуемый группой диастереомеров В (также известный из WO 2010/074747, WO 2010/074751) и 11-(4-хлор-2,6диметилфенил)-12-гидрокси-1,4-диокса-9-азадиспиро[4.2.4.2]тетрадец-11-ен-10-он (известный из WO 2006/089633), 3-(4-фтор-2,4-диметилбифенил-3-ил)-4-гидрокси-8-оксо-1-азаспиро[4.5]дец-3-ен-2-он (известный из WO 2008/067911), 1-{2-фтор-4-метил-5-[(2,2,2-трифлуоретил)сульфинил]фенил}-3(трифторметил)-Ш-1,2,4-триазол-5-амин (известный из WO 2006/043635), [(3S,4aR,12R,12aS,12bS)-3[(циклопропилкарбонил)окси]-6,12-дигидрокси-4,12b-диметил-11-оксо-9-(пиридин-3-ил)-1,3,4,4а,5,6,6а, 12,12а,12b-декагидро-2Н,11H-бензо-[f]-пирано[4,3-b]хромен-4-ил]метилциклопропан-карбоксилат (известный из WO 2008/066153), 2-циано-3-(дифторметокси)-Ы,№диметилбензол-сульфонамид (известный из WO 2006/056433), 2-циано-3-(дифторметокси)-Ы-метилбензол-сульфонамид (известный из WO 2006/100288), 2-циано-3-(дифторметокси)-Ы-этилбензол-сульфонамид (известный из WO 2005/035486), 4-(дифторметокси)-Ы-этил-Н-метил-1,2-бензотиазол-3-амин-1,1-диоксид (известный из WO 2007/057407), №[1-(2,3-диметилфенил)-2-(3,5-диметилфенил)этил]-4,5-дигидро-1,3-тиазол-2-амин (известный из WO 2008/104503), {1'-[(2Е)-3-(4-хлорфенил)проп-2-ен-1-ил]-5-фторспиро[индол-3,4'пиперидин]-1(2Н)-ил}(2-хлорпиридин-4-ил)метанон (известный из WO 2003/106457), 3-(2,5диметилфенил)-4-гидрокси-8-метокси-1,8-диазаспиро[4.5]дец-3-ен-2-он (известный из WO 2009/049851), 3-(2,5-диметилфенил)-8-метокси-2-оксо-1,8-диаза-спиро[4.5]дец-3-ен-4-ил этилкарбонат (известный из WO 2009/049851), 4-(бут-2-ин-1-илокси)-6-(3,5-диметилпиперидин-1-ил)-5-фторпиримидин (известный из WO 2004/099160), (2,2,3,3,4,4,5,5-октафторпентил)(3,3,3-трифторпропил)малононитрил (известный из WO 2005/063094), (2,2,3,3,4,4,5,5-октафторпентил)(3,3,4,4,4-пентафторбутил)малононитрил (известный из WO 2005/063094), 8-[2-(циклопропилметокси)-4-(трифторметил)феноксил]-3-[6-(трифторметил)пиридазин-3-ил]-3-азабицикло[3.2.1]октан (известный из WO 2007/040280), флометоквин, PF1364 (CASрег. № 1204776-60-2) (известный из JP 2010/018586), 5-[5-(3,5-дихлорфенил)-5-(трифторметил)-4,5дигидро-1,2-оксазол-3-ил]-2-(1Н-1,2,4-триазол-1-ил)бензонитрил (известный из WO 2007/075459), 5-[5(2-хлорпиридин-4-ил)-5-(трифторметил)-4,5-дигидро-1,2-оксазол-3 -ил]-2-(1Н-1,2,4-триазол-1-ил)бензонитрил (известный из WO 2007/075459), 4-[5-(3,5-дихлорпропенил)-5-(трифторметил)-4,5-дигидро-1,2оксазол-3-ил]-2-метил-И-{2-оксо-2-[(2,2,2-1рифторэтил)амино]этил}бензамид (известный из WO
- 18 032683
2005/085216), 4-{ [(6-хлорпиридин-3-ил)метил](циклопропил)амино}-1,3-оксазол-2(5Н)-он, 4-{ [(6хлорпиридин-3 -ил)метил] -(2,2-дифторэтил)амино}-1,3-оксазол-2(5Н)-он, 4-{ [(6-хлорпиридин-3 ил)метил] (этил)амино}-1,3-оксазол-2(5Н)-он, 4-{ [(6-хлорпиридин-3 -ил)метил] (метил)амино }-1,3оксазол-2(5Н)-он (все известны из WO 2010/005692), NNI-0711 (известный из WO 2002/096882), 1ацетил-И-[4-( 1,1,1,3,3,3-гексафтор-2-метоксипропан-2-ил)-3 -изобутилфенил] -Ы-изобутирил-3,5-диметил1Н-пиразол-4-карбоксамид (известный из WO 2002/096882), метил-2-[2-({[3-бром-1-(3-хлорпиридин-2ил)-1Н-пиразол-5-ил]карбонил}амино)-5-хлор-3-метилбензоил]-2-метилгидразин-карбоксилат (известный из WO 2005/085216), метил-2-[2-({[3-бром-1-(3-хлорпиридин-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил]карбонил} амино)-5-циано-3-метилбензоил]-2-этилгидразинкарбоксилат (известный из WO 2005/085216), метил 2[2-({[3-бром-1-(3-хлорпиридин-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил]карбонил}амино)-5-циано-3 -метилбензоил]-2метилгидразинкарбоксилат (известный из WO 2005/085216), метил-2-[3,5-дибром-2-({[3-бром-1-(3хлорпиридин-2-ил-1Н-пиразол-5-ил]карбонил}амино)бензоил]-1,2-диетилгидразинкарбоксилат (известный из WO 2005/085216), метил-2-[3,5-дибром-2-({[3-бром-1-(3-хлорпиридин-2-ил-1Н-пиразол-5ил]карбонил}амино)бензоил]-2-этилгидразинкарбоксилат (известный из WO 2005/085216), (5RS,7RS;5RS,7RS)-l-(6-хлор-3-пиридиметил)-1,2,3,5,6,7-гексагидро-7-метил-8-ниΊро-5-пропоксиимидазо[1,2-а]пиридин (известный из WO 2007/101369), №[2-(5-амино-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-4-хлор-6метилфенил]-3-бром-1-(3-хлорпиридин-2-ил)-Ш-пиразол-5-карбоксамид (известный из CN 102057925) и метил-2-[3,5-дибром-2-({ [3 -бром-1-(3 -хлорпиридин-2-ил)-Ш-пиразол-5 -ил] карбонил}амино)бензоил] -2этил-1-метилгидразин карбоксилат (известный из WO 2011/049233).
В качестве дополнительного примера фунгицид включает, но не ограничивается ими, один или несколько фунгицидов, выбранных из следующих: алдиморф, азаконазол, битертанол, бромуконазол, ципроконазол, диклобутразол, дифеноконазол, диниконазол, диниконазол-М, додеморф, додеморф ацетат, эпоксиконазол, этаконазол, фенаримол, фенбуконазол, фенгексамид, фенпропидин, фенпропиморф, флуквинконазол, флурпримидол, флусилазол, флутриафол, фурконазол, фурконазол -цис, гексаконазол, имазалил, имазалил сульфат, имибенконазол, ипконазол, метконазол, миклобутанил, нафтифин, нуаримол, окспоконазол, паклобутразол, пефуразоат, пенконазол, пипералин, прохлораз, пропиконазол, протиоконазол, пирибутикарб, пирифенокс, квинконазол, симеконазола, спироксамин, тебуконазол, тербинафин, тетраконазол триадимефон, триадименол, тридеморф, трифлумизол, трифорин, тритиконазол, униконазол, униконазол-р, виниконазол, вориконазол, 1-(4-хлорфенил)-2-(Ш-1,2,4-триазол-1-ил)циклогептанол, метил-1-(2,2-диметил-2,3-дигидро-Ш-инден-1-ил)-Ш-имидазол-5-карбоксилат, №-{5-(дифторметил)-2метил-4-[3-(триметилсилил)пропокси]фенил}-Н-этил-Н-метилимидоформамид, №этил-Н-метил-И'-{2метил-5 -(трифторметил)-4-[3 -(триметилсилил)пропокси] фенил}имидоформамид, О-[1 -(4метоксифенокси)-3,3-диметилбутан-2-ил]-Ш-имидазол-1-карботиоат, биксафен, боскалид, карбоксин, дифлуметорим, фенфурам, флуопирам, флутоланил, флуксапироксад, фураметпир, фурмециклокс, изопиразам (смесь син-эпимерного рацемата 1RS,4SR,9RS и антиэпимерного рацемата 1RS,4SR,9SR), изопиразам (антиэпимерный рацемат 1RS,4SR,9SR), изопиразам (антиэпимерный энантиомер 1R,4S,9S), изопиразам (антиэпимерный энантиомер 1S,4R,9R), изопиразам (син-эпимерный рацемат 1RS,4SR,9RS), изопиразам (син-эпимерный энантиомер 1R,4S,9R), изопиразам (син-эпимерный энантиомер 1S,4R,9S), мепронил, оксикарбоксин, пенфлуфен, пентиопирад, седаксан, тифлузамид, 1-метил-И-[2-(1,1,2,2тетрафтортокси)фенил] -3 -(трифторметил)-Ш-пиразол-4-карбоксамид, 3 -(дифторметил)-1 -метил-И-[2(1,1,2,2-тетрафтортокси)фенил]-Ш-пиразол-4-карбоксамид, 3 -(дифторметил)-И-[4-фтор-2-( 1,1,2,3,3,3гексафторпропокси)фенил] -1 -метил-Ш-пиразол-4-карбоксамид, N-[1 -(2,4-дихлорфенил)-1 -метоксипропан-2-ил]-3-(дифторметил)-1-метил-Ш-пиразол-4-карбоксамид, 5,8-дифтор-Н-[2-(2-фтор-4-{[4-(трифторметил)пиридин-2-ил]окси}фенил)этил]квиназолин-4-амин, №[9-(дихлорметилен)-1,2,3,4-тетрагидро-1,4-метанонафтален-5 -ил] -3 -(дифторметил)-1 -метил-Ш-пиразол-4-карбоксамид, N-[(1 S,4R)-9(дифторметилен)-1,2,3,4-тетрагидро-1,4-метанонафтален-5 -ил] -3 -(дифторметил)-1 -метил-Ш-пиразол-4карбоксамид, №[(Ш^)-9-(дихлорметилен)-1,2,3,4-тетрагидро-1,4-метанонафтален-5-ил]-3-(дифторметил)-1-метил-Ш-пиразол-4-карбоксамид, аметоктрадин, амисульбром, азоксистробин, циазофамид, куметоксистробин, кумоксистробин, димоксистробин, энестробурин, фамоксадон, фенамидон, феноксистробин, флуоксастробин, крезоксим-метил, метоминостробин, орисастробин, пикоксистробин, пираклостробин, пираметостробин, пираоксистробин, пирибенкарб, триклопирикарб, трифлоксистробин, (2Е)-2(2-{[6-(3-хлор-2-метилфенокси)-5-фторпиримидин-4-ил]окси}фенил)-2-(метоксиимино)-Н-метилэтанамид, (2Е)-2-(метоксиимино)-Н-метил-2-(2-{[({(1Е)-1-[3-(трифторметил)фенил]этилиден}амино)окси] метил}фенил)этанамид, (2Е)-2-(метоксиимино)-Н-метил-2-{2-[(Е)-({1-[3-(трифторметил)фенил]этокси} имино)метил]фенил}этанамид, (2Е)-2-{2-[({ [(1Е)-1-(3-{ [(Е)-1-фтор-2-фенилэтенил]окси}фенил)этилиден]амино}окси)метил]фенил}-2-(метоксиимино)-Ы-метилэтанамид, (2Е)-2-{2-[({[(2Е,3Е)-4-(2,6дихлорфенил)бут-3-ен-2-илиден]амино}окси)метил]фенил}-2-(метоксиимино)-Н-метилэтанамид, 2-хлор№(1,1,3-триметил-2,3-дигидро-Ш-инден-4-ил)пиридин-3-карбоксамид, 5-метокси-2-метил-4-(2-{[({(1Е)-
1- [3-(трифторметил)фенил]этилиден}амино)окси]метил}фенил)-2,4-дигидро-3Н-1,2,4-триазол-3-он, метил-(2Е)-2-{2-[({циклопропил[(4-метоксифенил)имино]метил}сульфанил)метил]фенил}-3-метоксипроп-
2- еноат, №(3-этил-3,5,5-триметилциклогексил)-3-(формиламино)-2-гидроксибензамид, 2-{2-[(2,5диметилфенокси)метил]фенил}-2-метокси-Ы-метилацетамид, (2R)-2-{2-[(2,5-диметилфенокси)метил]
- 19 032683 фенил}-2-метокси-Ы-метилацетамид, беномил, карбендазим, хлорфеназол, диэтофенкарб, этабоксам, флуопиколид, фуберидазол, пенцикурон, тиабендазол, тиофанат-метил, тиофанат, зоксамид, 5-хлор-7-(4метилпиперидин-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)[1,2,4]триазоло[1,5-а]пиримидин, 3-хлор-5-(6-хлорпиридин-3-ил)-6-метил-4-(2,4,6-трифторфенил)пиридазин, бордосская жидкость, каптафол, каптан, хлороталонил, гидроксид меди, нафтенат меди, оксид меди, оксихлорид меди, сульфат меди (2+), дихлофлуанид, дитианон, додин, свободное основание додина, фербам, фторфолпет, фолпет, гуазатин, гуазатин ацетат, иминоктадин, иминоктадин албесилат, иминоктадин триацетат, манкоппер, манкозеб, манеб, метирам, метирам цинк, оксин меди, пропамидин, пропинеб, сера, соединения серы, включая полисульфид кальция, тирам, толилфлуанид, цинеб, зирам, ацибензолар^-метил, изотианил, пробеназол, тиадинил, андоприм, бластицидин-S, ципродинил, касугамицин, касугамицин гидрохлорид гидрат, мепанипирим, пириметанил, 3-(5-фтор-3,3,4,4-тетраметил-3,4-дигидроизохинолин-1-ил)хинолин, фентин ацетат, хлорид фентин, фентин гидроксид, силтиофам, бентиаваликарб, диметоморф, флуморф, ипроваликарб, мандипропамид, полиоксины, полиоксорим, валидамицин А, валифеналат, бифенил, хлоронеб, диклоран, эдифенфос, этридиазол, иодокарб, ипробенфос, изопротиолан, пропамокарб, пропамокарб гидрохлорид, протиокарб, пиразофос, квинтозен, текназен толклофос-метил, карпропамид, диклоцимет, феноксанил, фталид, пироквилон, трициклазол, 2,2,2-трифторэтил{3-метил-1-[(4-метилбензоил)амино]бутан-2ил}карбамат, беналаксил, беналаксил-М (киралаксил), бупиримат, клозилакон, диметиримол, этиримол, фуралаксил, гимексазол, металаксил, металаксил-М (мефеноксам), офурас, оксадиксил, оксолиновая кислота, хлозолинат, фенпиклонил, флудиоксонил, ипродион, процимидон, квиноксифен, винклозолил, бинапакрил, динокап, феримзон, флуазинам, мептилдинокап, бентиазол, бетоксазин, капсимицин, карвон, хинометионат, пириофенон (хлазафенон), куфранеб, цифлуфенамид, цимоксанил, ципросульфамид, дазомет, дебакарб, дихлорофен, дикломезин, дифензокват, дифензокват метилсульфат, дифениламин, экомат, фенпиразамин, флуметовер, фторимид, флусульфамид, флутианил, фосетил-алюминий, фосетилкальций, фосетил-натрий, гексахлорбензол, иримамицин, метасульфокарб, метил изотиоцианата, метрафенон, милдиомицин, натамицин, никель диметилдитиокарбамат, нитротал -изопропил, октилинон, оксамокарб, оксифентиин, пентахлорфенол и соли, фенотрин, фосфористая кислота и ее соли, пропамокарб-фосетилат, пропанозин-натрий, проквиназид, пириморф, (2Е)-3-(4-трет-бутилфенил)-3-(2хлорпиридин-4-ил)-1-(морфолин-4-ил)проп-2-ен-1-он, (22)-3-(4-трет-бутилфенил)-3-(2-хлорпиридин-4ил)-1-(морфолин-4-ил)проп-2-ен-1-он, пирролнитрин, тебуфлоквин, теклофталам, толнифанид, триазоксид, трихламид, зариламид, (3S,6S,7R,8R)-8-бензил-3-[({3-[(изобутирилокси)метокси]-4-метоксипиридин-2-ил}карбонил)амино]-6-метил-4,9-диоксо-1,5-диоксонан-7-ил-2-метилпропаноат, 1-(4-{4-[(5R)5-(2,6-дифторфенил)-4,5-дигидро-1,2-оксазол-3-ил]-1,3-тиазол-2-ил}пиперидин-1-ил)-2-[5-метил-3(трифторметил)-1И-пиразол-1-ил]этанон, 1-(4-{4-[^)-5-(2,6-дифторфенил)-4,5-дигидро-1,2-оксазол-3ил]-1,3-тиазол-2-ил} пиперидин-1-ил)-2-[5-метил-3-(трифторметил)-1Ы-пиразол-1-ил]этанон, 1-(4-{4-[5(2,6-дифторфенил)-4,5-дигидро-1,2-оксазол-3 -ил]-1,3-тиазол-2-ил}пиперидин-1-ил)-2-[5-метил-3-(трифторметил)-1Н-пиразол-1-ил]этанон, 1-(4-метоксифенокси)-3,3-диметилбутан-2-ил-1Ы-имидазол-1карбоксилат, 2,3,5,6-тетрахлор-4-(метилсульфонил)пиридин, 2,3-дибутил-6-хлортиено[2,3^]пиримидин4(3И)-он, 2,6-диметил-1Н,5Н-[1,4]дитиино[2,3-с:5,6-с']дипиррол-1,3,5,7(2Н,6Н)-тетрон, 2-[5-метил-3(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]-1-(4-{4-[(5R)-5-фенил-4,5-дигидро-1,2-оксазол-3-ил]-1,3-тиазол-2ил}пиперидин-1-ил)этанон, 2-[5-метил-3-(трифторметил)-1И-пиразол-1-ил]-1-(4-{4-[^)-5-фенил-4,5дигидро-1,2-оксазол-3 -ил]-1,3-тиазол-2-ил}пиперидин-1 -ил)этанон, 2-[5-метил-3 -(трифторметил)-1Ипиразол-1-ил]-1-{4-[4-(5-фенил-4,5-дигидро-1,2-оксазол-3-ил)-1,3-тиазол-2-ил]пиперидин-1-ил}этанон, 2-бутокси-6-иод-3-пропил-4Н-хромен-4-он, 2-хлор-5-[2-хлор-1-(2,6-дифтор-4-метоксифенил)-4-метил1И-имидазол-5-ил]пиридин, 2-фенилфенол и соли, 3-(4,4,5-трифтор-3,3-диметил-3,4-дигидроизохинолин1-ил)хинолин, 3,4,5-трихлорпиридин-2,6-дикарбонитрил, 3-[5-(4-хлорфенил)-2,3-диметил-1,2-оксазолидин-3-ил]пиридин, 3-хлор-5-(4-хлорфенил)-4-(2,6-дифторфенил)-6-метилпиридазин, 4-(4-хлорфенил)-5(2,6-дифторфенил)-3,6-диметилпиридазин, 5-амино-1,3,4-тиадиазол-2-тиол, 5-хлор-№-фенил-№-(проп-2ин-1-ил)тиофен-2-сульфоногидразид, 5-фтор-2-[(4-фторбензил)окси]пиримидин-4-амин, 5-фтор-2-[(4метилбензил)окси]пиримидин-4-амин, 5-метил-6-октил[1,2,4]триазоло[1,5-а]пиримидин-7-амин, этил(22)-3-амино-2-циано-3-фенилпроп-2-еноат, №-(4-{[3-(4-хлорбензил)-1,2,4-тиадиазол-5-ил]окси}2,5-диметилфенил)-Н-этил-Ы-метилимидоформамид, №(4-хлорбензил)-3-[3-метокси-4-(проп-2-ин-1илокси)фенил]пропанамид, №[(4-хлорфенил)(циано)метил]-3-[3-метокси-4-(проп-2-ин-1-илокси)фенил] пропанамид, №[(5-бром-3-хлорпиридин-2-ил)метил]-2,4-дихлорпиридин-3-карбоксамид, №[1-(5-бром-3хлорпиридин-2-ил)этил]-2,4-дихлорпиридин-3-карбоксамид, №[1-(5-бром-3-хлорпиридин-2-ил)этил]-2фтор-4-иодопиридин-3-карбоксамид, №{(Е)-[(циклопропилметокси)имино][6-(дифторметокси)-2,3дифторфенил] метил}-2-фенилацетамид, №{(2)-[(циклопропилметокси)имино][6-(дифторметокси)-2,3дифторфенил]метил}-2-фенилацетамид, №-{4-[(3-трет-бутил-4-циано-1,2-тиазол-5-ил)окси]-2-хлор-5метилфенил}-Н-этил-И-метилимидоформамид, №метил-2-(1-{[5-метил-3-(трифторметил)-1И-пиразол-1ил] ацетил} пиперидин-4 -ил) -N-(1,2,3,4 -тетрагидронафтален-1 -ил) -1,3 -тиазол-4 -карбо ксамид, N -метил-2 (1-{[5-метил-3 -(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]ацетил}пиперидин-4-ил)-N-[(1R)-1,2,3,4-тетрагидронафтален-1 -ил] -1,3 -тиазол-4 -карбоксамид, N -метил-2-( 1-{[5 -метил-3 -(трифторметил) -Ш-пиразол-1 ил]ацетил}пиперидин-4-ил)-Ы-[(Ш)-1,2,3,4-тетрагидронафтален-1-ил]-1,3-тиазол-4-карбоксамид, пен
- 20 032683 тил{6-[({[(1-метил-1Н-тетразол-5-ил)(фенил)метилиден]амино}окси)метил]пиридин-2-ил}карбамат, феназин-1-карбоновая кислота, хинолин-8-ол, хинолин-8-ол сульфат (2:1), трет-бутил{6-[({[(1-метил-Штетразол-5-ил)(фенил)метилен]амино}окси)метил]пиридин-2-ил}карбамат, 1-метил-3-(трифторметил)-И[2'-(трифторметил)бифенил-2-ил]-Ш-пиразол-4-карбоксамид, №(4'-хлорбифенил-2-ил)-3-(дифторметил)-
1- метил-Ш-пиразол-4-карбоксамид, №(2',4'-дихлорбифенил-2-ил)-3-(дифторметил)-1-метил-1Н-пиразол-
4- карбоксамид, 3-(дифторметил)-1-метил-И-[4'-(трифторметил)бифенил-2-ил]-1Н-пиразол-4-карбокс- амид, №(2',5'-дифторбифенил-2-ил)-1-метил-3-(трифторметил)-Ш-пиразол-4-карбоксамид, 3-(дифторметил)-1-метил-Н-[4'-(проп-1-ин-1-ил)бифенил-2-ил]-Ш-пиразол-4-карбоксамид, 5-фтор-1,3-диметил-И[4'-(проп-1 -ин-1-ил)бифенил-2-ил]-Ш-пиразол-4-карбоксамид, 2-хлор-И-[4'-(проп-1 -ин-1 -ил)бифенил-2ил]пиридин-3 -карбоксамид, 3 -(дифторметил)-И-[4'-(3,3-диметилбут-1-ин-1-ил)бифенил-2-ил] -1 -метилШ-пиразол-4-карбоксамид, №[4'-(3,3-диметилбут-1 -ин-1 -ил)бифенил-2-ил] -5 -фтор-1,3-диметил-Шпиразол-4-карбоксамид, 3-(дифторметил)-Н-(4'-этинилбифенил-2-ил)-1-метил-Ш-пиразол-4-карбоксамид, №(4'-этинилбифенил-2-ил)-5-фтор-1,3-диметил-Ш-пиразол-4-карбоксамид, 2-хлор-И-(4'-этинилбифенил-2-ил)пиридин-3-карбоксамид, 2-хлор-И-[4'-(3,3-диметилбут-1-ин-1-ил)бифенил-2-ил]пиридин-
3-карбоксамид, 4-(дифторметил)-2-метил-И-[4'-(трифторметил)бифенил-2-ил]-1,3-тиазол-5 -карбоксамид,
5- фтор-Н-[4'-(3-гидрокси-3-метилбут-1-ин-1-ил)бифенил-2-ил]-1,3-диметил-Ш-пиразол-4-карбоксамид,
2- хлор-И-[4'-(3 -гидрокси-3 -метилбут-1 -ин-1 -ил)бифенил-2-ил]пиридин-3 -карбоксамид, 3 -(дифторметил)№[4'-(3-метокси-3-метилбут-1-ин-1-ил)бифенил-2-ил]-1-метил-Ш-пиразол-4-карбоксамид, 5-фтор-И-[4'(3 -метокси-3 -метилбут-1 -ин-1 -ил)бифенил-2-ил] - 1,3-диметил-Ш-пиразол-4-карбоксамид, 2-хлор-И-[4'(3 -метокси-3 -метилбут-1 -ин-1 -ил)бифенил-2-ил]пиридин-3 -карбоксамид, (5-бром-2-метокси-4-метилпиридин-3-ил)(2,3,4-триметокси-6-метилфенил)метанон, №[2-(4-{[3-(4-хлорфенил)проп-2-ин-1-ил]окси}-3-метоксифенил)этил]-Ы2-(метилсульфонил)валинамид, 4-оксо-4-[(2-фенилэтил)амино]бутановая кислота, бут-3-ин-1-ил{6-[({[(2)-(1-метил-1Н-тетразол-5-ил)(фенил) метилен]амино}окси)метил]пиридин-2-ил}карбамат.
Также примером добавочного пестицида может быть один или несколько гербицидов, выбранных из группы, состоящей из ацетохлора, ацифлуорфена, ацифлуорфен-натрия, аклонифена, алахлора, аллидохлора, аллоксидима, аллоксидим натрия, аметрина, амикарбазона, амидохлора, амидосульфурона, аминоциклопирахлора, аминоциклопирахлор-калия, аминоциклопирахлор-метила, аминопиралида, амитрола, аммониумсульфамата, анилофоса, азулама, атразина, азафенидина, азимсульфурона, бефлубутамида, беназолина, беназолин-этила, бенфлуралина, бенфуресата, бенсульфурона, бенсульфуронметила, бензулида, бентазона, бензобициклона, бензофенапа, бициклопирона, бифенокса, биланафоса, биланафос-натрия, биспирибака, биспирибак-натрия, бромацила, бромобутида, бромфеноксима, бромоксинила, бромоксинил-бутирата, -калия-, -гептаноата и -октаноата, бузоксинона, бутахлора, бутафенацила, бутамифоса, бутенахлора, бутралина, бутроксидима, бутилата, кафенстрола, карбетамида, карфентразона, карфентразон-этила, хлорамбена, хлорбромурона, хлорфенака, хлорфенак-натрия, хлорфенпропа, хлорфлуренола, хлорфлуренол-метила, хлоридазона, хлоримурона, хлоримурон-этила, хлорфталима, хлоротолурона, хлортал-диметила, хлорсульфурона, цинидона, цинидон-этила, цинметилина, циносульфурона, клетодима, клодинафопа, клодинафоп-пропаргила, кломазона, кломепропа, клопиралида, клорансулама, клорансулам-метила, кумилурона, цианамида, цианазина, циклоата, циклосульфамурона, циклоксидима, цигалофопа, цигалофоп-бутила, ципразина, 2,4-D, 2,4-Э-бутотила, -бутила, -диметиламмония, -диоламина, -этила, 2-этилгексила, дазомета,-изобутила, -изооктила,-изопропиламмония, калий-,-триисопропаноламмония и -троламина, 2,4-DB, 2,4-DB-бутил,-диметиламмония, изооктила, -калий и натрий-, даимурона (димрона), далапона, N-деканола, десмедифама, детосил-пиразолата (DTP), дикамбы, дихлобенила, дихлорпропа, дихлорпроп-Р, диклофопа, диклофоп-метила, диклофоп-Р-метила, диклосулама, дифензоквата, дифлуфеникана, дифлуфензопира, дифлуфензопир-натрия, димефурона, димепиперата, диметахлора, диметаметрина, диметенамида, диметенамида-Р, диметрасульфурона, динитрамина, динотерба, дифенамида, диквата, дикват-дибромида, дитиопира, диурона, DNOC, эндотала, ЕРТС, эспрокарба, эталфлуралина, этаметсульфурона, этаметсульфурон-метила, этиозина, этофумесата, этоксифена, этоксифен-этила, этоксисульфурона, этобензанида, F-5231, т.е. №{2-хлор-4-фтор-5-[4-(3фторпропил)-5-оксо-4,5-дигидро-Ш-тетразол-1-ил]фенил}этансульфонамида, F-7967, т.е. 3-[7-хлор-5фтор-2-(трифторметил)-Ш-бензимидазол-4-ил]-1-метил-6-(трифторметил)пиримидин-2,4(1Н,3Н)-диона, феноксапропа, феноксапропа-Р, феноксапроп-этила, феноксапроп-Р-этила, феноксасульфона, фентразамида, флампропа, флампроп-М-изопропила, флампроп-М-метила, флазасульфурона, флорасулама, флуазифопа, флуазифопа-Р, флуазифоп-бутила, флуазифоп-Р-бутила, флукарбазона, флукарбазон-натрия, флуцетосульфурона, флухлоралина, флуфенацета (тиафлуамида), флуфенпура, флуфенпур-этила, флуметсулама, флумиклорака, флумиклорак-пентила, флумиоксазина, флуометурона, флуренола, флуренолбутила, -диметиламмоний и -метила, флуорогликофена, флуорогликофен-этила, флупропаната, флупирсульфурона, флупирсульфурон-метил-натрия, флуридона, флурохлоридона, флуроксипира, флуроксипир-мептила, флуртамон флутиацета, флутиацет-метила, флутиамида, фомезафена, фомезафен-натрия, форамсульфурона, фозамина, глуфосината, глуфосинат аммония, глуфосинат-Р-натрия, глюфосинат-Раммония, глюфосинат-Р-натрия, глифосата, глифосата аммония, -изопропиламмония, -диаммония-, -диметиламмония,-калия, -натрий- и -тримесиума, Н-9201, т.е. О-(2,4-диметил-6-нитрофенил)-О-этил
- 21 032683 изопропилфосфорамидотиоата, галозафена, галосульфурона, галосульфурон-метила, галоксифопа, галоксифопа-Р, галоксифоп-этоксиэтила, галоксифоп-Р-этоксиэтила, галоксифоп-метила, галоксифоп-Рметила, гексазинона, HW-02, т.е. 1-(диметоксифосфорил)этил-(2,4-дихлорфенокси)ацетата, имазаметабенза, имазаметабенз-метила, имазамокса, имазамокс-аммония, имазапика, имазапик-аммония, имазапира, имазапир-изопропиламмония, имазахина, имазахина-аммоний, имазетапира, имазетапир-иммония, имазосульфурона, инданофана, индазифлама, иодосульфурона, иодосульфурон-метил-натрия, иоксинила, иоксинил-октаноата, -калия и -натрия, ипфенкарбазона, изопротурона, изоурона, изоксабена, изоксафлутола, карбутилата, KUH-043, т.е. 3-({[5-(дифторметил)-1-метил-3-(Ίрифторметил)-1H-пиразол-4ил]метил}сульфонил)-5,5-диметил-4,5-дигидро-1,2-оксазола, кетоспирадокса, лактофена, кенацила, кинурона, МСРА, МСРА-бутотила, -диметиламмония, -2-этилгексила, -изопропиламмония, -калия и -натрия, МСРВ, МСРВ-метила, -этила и -натрия, мекопропа, мекопроп-натрия и -бутотила, мекопроп-Р, мекопроп-Р-бутотила, диметиламмония, -2-этилгексила и -калия, мефенацета, мефлуидида, мезосульфурона, мезосульфурон-метила, мезотриона, метабензтиазурона, метама, метамифопа, метамитрона, метазахлора, метазосульфурона, метабензтиазурона, метиопирсульфурона, метиозолина, метил изотиоцианата, метобромурона, метолахлора, S-метолахлора, метосулама, метоксурона, метрибузина, метсульфурона, метсульфурон -метила, молината, монолинурона, моносульфурона, моносульфурон-эфира, МТ-128, т.е. 6-хлор-Ы-[(2Е)-3-хлорпроп-2-ен-1-ил]-5-метил-Ы-фенилпиридазин-3-амина, МТ-5950, т.е. Ы-(3-хлор-
4-изопропилфенил)-2-метилпентан амида, NGGC-011, напропамида, NC-310, т.е. [5-(бензилокси)-1метил-Ш-пиразол-4-ил](2,4-дихлорфенил)метанона, небурона, никосульфурона, нонановой кислоты (пеларгоновой кислоты), норфлуразона, олеиновой кислоты (жирной кислоты), орбенкарба, ортосульфамурон, оризалина, оксадиаргила, оксадиазона, оксафульфурона, оксацикломефона, оксифлуорфена, параквата, дихлорида параквата, пебулата, пендиметалина, пеноксулама, пентахлорфенола, пентоксазона, петоксамида, нефтяных масел, фенмедифама, пиклорама, пиколинафена, пиноксадена, пиперофоса, претилахлора, примисульфурона, примисульфурон-метила, продиамина, прифлуралина, профоксидима, прометон прометрина, пропахлора, пропанила, пропаквизафопа, пропазина, профама, прописохлора, пропоксикарбазона, пропоксикарбазон-натрия, пропирисульфурона, пропизамида, просульфокарба, просульфурона, пираклонила, пирафлуфена, пирафлуфен-этила, пирасульфотола, пиразолината (пиразолата), пиразосульфурона, пиразосульфурон-этила, пиразоксифена, пирибамбенза, пирибамбенз изопропила, пропил-пирибамбенза, пирибензоксима, пирибутикарба, пиридафола, пиридата, пирифталида, пириминобака, пириминобак-метила, пиримисульфана, пиритиобака, пиритиобак-натрия, пироксасульфона, пироксулама, квинклорака, квинмерака, квинокламина, хизалофопа, квизалофоп-этила, квизалофопа-Р, квизалофоп-Р-этила, квизалофоп-Р-тефурила, римсульфурона, сафлуфенацила, сетоксидима, сидурона, симазина, симетрина, сулькотриона, сульфентразона, сульфометурона, сульфометурон-метила, сульфосульфурона, SW-065, SYN-523, SYP-249, т.е. 1-этокси-3-метил-1-оксобут-3-ин-2-ил-5-[2-хлор-4- (трифторметил)фенокси]-2-нитробензоата, SYP-300, т.е. 1-[7-фтор-3-оксо-4-(проп-2-ин-1-ил)-3,4дигидро-2Н-1,4-бензоксазин-6-ил]-3-пропил-2-тиоксоимидазолидин-4,5-диона, 2,3,6-ТВА, ТСА (трихлоруксусной кислоты), ТСА-натрия, тебутиурона, тефурилтриона, темботриона, тепралоксидима, тербацила, тербукарба, тербуметона, тербутилазина, тербутрина, тенилхлора, тиазопира, тиенкарбазона, тиенкарбазон-метила, тифенсульфурона, тифенсульфурон-метила, тиобенкарба, топрамезона, тралкоксидима, триафамона, триаллата, триасульфурона, триазифлама, трибенурона, трибенурон-метила, триклопира, триетазина, трифлоксисульфурона, трифлоксисульфурон-натрия, трифлуралина, трифлусульфурона, трифлусульфурон-метил тритосульфурона, сульфат мочевины, вернолата, ZJ-0862, т.е. 3,4-дихлор-Ы-{2[(4,6-диметоксипиримидин-2-ил)окси]бензил}анилина или регуляторов роста растений, выбранных из группы, содержащей ацибензолар, ацибензолар^-метил, 5-аминолевулиновую кислоту, анцимидол, 6бензиламинопурин, брассинолид, катехин, хлормекват хлорид, клопроп, цикланилид, 3-(циклопроп-1енил)пропионовую кислоту, даминозид, дазомет, n-деканол, дикегулак, дикегулак-натрий, эндотал, эндотал-дикалий, -динатрий-и моно-АА-диметилалкиламмоний), этефон, флуметралин, флуренол, флуренол-бутил, флурпримидол, форхлорфенурон, гибберелловую кислоту, инабенфид, индол-3-уксусную кислоту (IAA), 4-индол-3-ил-масляную кислоту, изопротиолан, пробеназол, жасминовую кислоту, гидразид малеиновой кислоты, мепикватхлорид, 1-метилциклопропен, метилжасмонат, 2-(1-нафтил)ацетамид, 1-нафтилуксусную кислоту, 2-нафтилуксусную кислоту, смесь нитрофенолата, паклобутразол, N-(2фенилэтил)-бета-аланин, N-полуамид фенилфталевой кислоты, прогексадион, прогексадион-кальций, прогидрожасмон, салициловую кислоту, стриголактон, текназен, тидиазурон, триаконтанол, тринексапак, тринексапак-этил, цитодеф, униконазол, униконазол-Р, или предпочтительных в области агрохимии солей или других форм.
В зависимости от характера гербицидов в гербицидной композиции она может быть применена к месторасположению до посадки, до всходов и/или после всходов. Под до посадки подразумевают, что гербицидную композицию применяют до посадки сельскохозяйственной культуры в месторасположении, под до всходов подразумевают, что гербицидную композицию наносят до того, как прорастающие семена сельскохозяйственной культуры выступят над поверхностью месторасположения, и после всходов означает, что гербицидную композицию применяют, как только сельскохозяйственная культура покажется над поверхностью месторасположения. Эти индивидуальные схемы применения могут быть
- 22 032683 применены к месторасположению отдельно или в любой комбинации. Например, схема применения может содержать применение до посадки с последующим применением после всходов.
Со многими видами сорняков можно бороться (т.е. уничтожать или повреждать) с помощью гербицидной композиции(ий). Соответственно, ее применяют в борьбе с данными видами растений, где они нежелательны (т.е. если они являются сорняками). Эти виды растений включают культурные растения, а также виды, обычно причисляемые к сорнякам, в том числе, но не ограничиваясь, такими видами, как лисохвост полевой (Alopecurus myosuroides), лисохвост (Setaria faberi), ползучий сорняк (Digitaria sanguinalis), суринам трава (Brachiaria decumbens), овсюг (Avenafatua), дурнишник обыкновенный (Xanthium pensylvanicum), марь белая (Chenopodium album), вьюнок пурпурный (Ipomoea spp. и многие другие виды ипомеи, включая hederacea, grandifolia), амарант (Amaranthus spp), канатник Теофраста (Abutilion theophrasti), ежовник обыкновенный (Echinochloa crus-galli), бермудская трава (Cynodon dactylon), костер кровельный (Bromus tectorum), элевзина индийская (Eleusine indica), щетинник зеленый (Setaria Viridis), итальянский райграс (Lolium multiflorum), джонсонова трава (Sorghum halepense), малый канареечник канарский (Phalaris minor), метлица (Apera spica-venti), шерстняк мохнатый (Erichloa villosa), чуфа (Cyperus esculentus), звездчатка полевая (Stellaria media), амброзия трехраздельная, амброзия высокая (Ambrosia trifida) (Ambrosia artemisiifolia), Kochia scoparia, мелколепестник канадский (Conyza canadensis), плевел жесткий (Lolium rigidum), элевзина индийская (Eleucine indica), мелколепестник волосистый (Conyza bonariensis), подорожник (Plantago lanceolata), тропический паучник (Commelina benghalensis), полевой вьюнок (Convolvulus arvensis), циперус пурпурный (Cyperus rotundus), бруннихия (Brunnichia ovata), сесбания конопляная (Sesbania exaltata), резуха канадская (Senna obtusifolia), техасский синяк обыкновенный (Helianthus ciliaris), просо раздвоенноцветковое (Panicum dichotomiflorum), техасское просо (Panicum texanum), широколистная брахиария (Brachiaria) и лютик полевой (Proboscidea louisianica). В других аспектах настоящего изобретения сорняки содержат устойчивый к гербицидам райграс, например устойчивый к глифосату райграс, устойчивый к параквату райграс, устойчивый к АССазы-ингибитору райграс и устойчивый к неселективному гербициду райграс.
Различные химикаты, такие как гербициды, имеют разное последействие, т.е. разное количество времени, в течение которого обработка химикатами или гербицидами продолжает оказывать влияние на растения, произрастающие в обработанной области. Такой эффект может быть желательным или нежелательным в зависимости от желаемой будущей цели обработанной области (например, поля или обрабатываемых земель). Таким образом, схема чередования культур может быть выбрана на основе последействий от обработок, которые будет использоваться для каждой культуры и их влияния на культуру, которая будет впоследствии выращиваться в том же районе. Специалист в данной области техники знаком со способами, которые могут быть использованы для оценки последействия гербицидов, например, как правило, глифосат обладает очень незначительным последействием или совсем его не имеет на почве, в то время как гербициды, которые выполняют функцию ингибирования HPPD, различаются в своих уровнях последействия. Как известно, последействия для различных гербицидов, которые известны в данной области техники, зависят от различных факторов внешней среды, таких как, например, уровень влажности почвы, температура, pH и состав почвы (текстура и органическая примесь). Соевые растения SYHT0H2 находят особое применение в способах выращивания сельскохозяйственных культур, где повышенная устойчивость к последействию гербицидов является выгодной.
Термин антидот относится к веществу, которое при добавлении к гербицидным составам, примененным к семенам посева или внесенным в почву, устраняет или снижает фитотоксическое действие гербицида у определенных культур. Специалисту в данной области должно быть понятно, что выбор антидота зависит, в частности, от целевой сельскохозяйственной культуры, а также от конкретного гербицида или сочетания гербицидов, включенных в синергическую гербицидную композицию. Примеры антидотов, подходящих для использования с раскрытыми в настоящий момент композициями гербицидов включают, но не ограничиваются ими, описанные в патентах США №№ 4808208; 5502025; 6124240 и опубликованных патентных заявках США №№ 2006/0148647; 2006/0030485; 2005/0233904;
2005/0049145; 2004/0224849; 2004/0224848; 2004/0224844; 2004/0157737; 2004/0018940; 2003/0171220; 2003/0130120; 2003/0078167, раскрытия которых включены в данный документ посредством ссылки во всей их полноте. Эти способы могут включать использование гербицидов в сочетании с антидотами гербицидов, такими как беноксакор, BCS (1-бром-4-[(хлорметил)сульфонилбензин), клоквинтосет-мексил, циометринил, дихлормид, 2-(дихлорметил)-2-метил,3-диоксолана (MG 191), фенхлоразол-этил, фенклорим, флуразол, флуксофеним, фурилазол, изоксадифенэтил, мефенпир-диэтил, метоксифенон ((4метокси-3-метилфенил)-(3-метилфенил)метанон), нафтойный ангидрид (1,8-нафтойный ангидрид), ципросульфамид, Ы-(2-метоксибензоил)-4-[(метиламинокарбонил)амино]бензолсульфонамид и оксабетринил для повышения безопасности посева. Эффективные в качестве противоядия количества антидотов гербицида можно применять при этом в виде соединений или применять для обработки семян или почвы. Таким образом, один из аспектов настоящего изобретения относится к применению смеси, содержащей гербицид-ингибитор HPPD, по меньшей мере еще один гербицид и эффективное в качестве противоядия количество антидота гербицида.
Обработка семян антидотами гербицида, в частности, применяют для селективной борьбы с сорня
- 23 032683 ками, так как она физически ограничивает действие антидота на культурные растения. Избирательная борьба с сорняками в поле включает обработку семян, из которых выращивают сельскохозяйственные культуры эффективным в качестве противоядия количеством антидота и обработку поля эффективным количеством гербицида с целью борьбы с сорняками. Эффективные в качестве противоядия количества антидота могут быть легко определены специалистом в данной области с помощью простых экспериментов. Эффективное в качестве противоядия количество антидота присутствует там, где желаемое растение обрабатывают антидотом с тем, чтобы уменьшить действие гербицида на растение по сравнению с действием гербицида на растение, которое не обрабатывали антидотом; как правило, эффективное в качестве противоядия количество антидота предупреждает повреждение или значительное повреждение растения, обработанного антидотом. Специалист в данной области техники способен определить, является ли применение антидота целесообразным и способен определить дозу, в которой антидот следует вводить сельскохозяйственным культурам.
Гербицид или смесь гербицидов, примененные к SYHT0H2 растению, иногда действуют как антидот. Например, первый гербицид или смесь гербицидов применяют в эффективном в качестве противоядия количестве к растению. Например, способ может содержать засадку посевной площади семенами сельскохозяйственных культур или растениями, которые содержат первый полинуклеотид, кодирующий полипептид, который может придать толерантность к ингибитору гербицида HPPD, функционально связанный с промотором, активным в растении, и второй полинуклеотид, кодирующий полипептид, который придает толерантность к гербициду, функционально связанный с промотором, активным в растении. Соединение гербицидов, содержащее по меньшей мере эффективное количество первого и второго гербицидов, применяют к сельскохозяйственной культуре, частям сельскохозяйственной культуры, сорнякам или области их возделывания. Эффективное количество соединения гербицидов борется с сорняками, причем эффективное количество первого гербицида не переносится сельскохозяйственной культурой при применении отдельно по сравнению с контрольной сельскохозяйственной культурой, которую не подвергли воздействию первого гербицида, при этом эффективное количество второго гербицида является достаточным для получения эффекта противоядия, где эффект противоядия обеспечивает повышение толерантности сельскохозяйственной культуры при применении первого и второго гербицида по сравнению с толерантностью культуры, когда первый гербицид применяется отдельно.
Соя является ведущим в мире источником растительного масла и шрота. Масло, полученное из соевых бобов, используют в качестве кулинарного жира, маргарина и заправки для салатов. Соевое масло состоит из насыщенных, мононенасыщенных и полиненасыщенных жирных кислот. Оно имеет в составе типичную смесь 11% пальмитиновой, 4% стеариновой, 25% олеиновой, 50% линолевой и 9% линоленовой жирных кислот (Economic Implications of Modified Soybean Traits Summary Report, Iowa Soybean Promotion Board and American Soybean Association Special Report 92S, May 1990). Изменения в составе жирных кислот для повышения устойчивости к окислению и питательной ценности пользуется постоянным спросом. Промышленное использование соевого масла, которое подвергают дальнейшей переработке, включает ингредиенты для красок, пластмасс, волокон, моющих средств, косметических средств, смазочных материалов и биодизельного топлива. Соевое масло может быть расщепленным, интерэтерифицированным, сульфированным, эпоксидированным, полимеризованным, этоксилированным или расщепляемым. Разработка и получение производных соевого масла с улучшенной функциональностью и улучшенным химическим составом является быстро развивающейся областью. Типичная смесь триглицеридов, как правило, является расщепленной и разделенной на чистые жирные кислоты, которые затем смешивают со спиртами, полученными из нефти или кислотами, азотом, сульфонатами, хлорином или с жирными спиртами, полученными из жиров и масел.
Соя также используется в качестве источника пищи для людей и животных. Соя широко используется в качестве источника белка для животных кормов для домашней птицы, свиней и крупного рогатого скота. Во время обработки цельных соевых бобов удаляют волокнистый корпус и извлекают масло. Оставшийся соевый шрот представляет собой соединение углеводов и приблизительно 50% белка.
Для употребления в пищу соевый шрот превращают в соевую муку, которую перерабатывают в белковые концентраты, используемые для наполнителей мяса или специализированных кормов для домашних животных. Производство пищевых белковых ингредиентов из сои предлагает более полезную для здоровья, менее дорогую замену животного белка в мясных продуктах, а также в продуктах молочного типа.
Процесс производства данной продукции может протекать, например, следующим образом:
(i) нагревание бобов до 82°С до содержания в них всего лишь 9% влаги;
(ii) размещение в бочках в течение от 24 до 72 ч;
(iii) дробление бобов с целью удаления оболочки так, что остатки составляют от 1/4 до 1/8 исходных бобов;
(iv) удаление оболочки посредством всасывания воздуха;
(v) нагревание остатков при 71°С в течение от 20 до 30 мин;
(vi) прессование остатков в мелкие хлопья толщиной от 1,2 до 1,6 мм;
(vii) , обработка с созданием сухариков с помощью механического давления и пара;
- 24 032683 (viii), отмывание гексаном с целью разбавления жиров;
(ix) нагревание при 100°С в течение 20 мин для испарения жиров (восстановленные жиры создают соевое масло);
(x) дополнительный нагрев для удаления гексана;
(xi) прессование сухариков частями от 2 до 4 мм с получением соевой муки или прессование в соевый кормовой жмых.
Аспекты настоящего изобретения дополнительно описаны в следующих примерах. Следует понимать, что данные примеры даны только с целью иллюстрации. Из приведенного выше обсуждения и данных примеров специалист в данной области может установить существенные признаки и без отхода от сущности и объема изобретения может внести различные изменения и модификации аспектов настоящего изобретения с целью его адаптации к различным практическим применениям и условиям. Таким образом, различные модификации аспектов настоящего изобретения в дополнение к показанным и описанным в данном документе будут очевидными специалистам в данной области техники из предшествующего описания. Такие модификации подпадают под объем прилагаемой формулы изобретения.
Примеры
Пример 1. Получение и определение соевого события SYHT0H2.
Двоичные векторы преобразования сои создавали (сконструировали) с промотором, таким как промотор, содержащий синтетический CaMV 35S и FMV транскрипционный энхансер и синтетический ТАТА-бокс, запускающий экспрессию кодирующей последовательности HPPD, за которой следует 3'терминатор гена NOS. Мутантный ген HPPD, полученный из Avena HPPD, кодон-оптимизировали для экспрессии сои на основе прогнозированной аминокислотной последовательности кодирующей участок гена HPPD. Мутантный фермент HPPD включает делецию изолированного остатка аланина в позициях 109-111 природного фермента Avena sativa HPPD. См. опубликованную патентную заявку США № 20100197503. Бинарный вектор 15954 конструировали для включения экспрессионных кассет для экспрессии мутантного гена HPPD вместе с селективным маркерным геном (см. чертеж). Данный вектор конструировали с использованием комбинации способов, хорошо известных специалистам в данной области техники, таких как перекрестная PCR, синтез ДНК, субклонирование рестрикционного фрагмента и лигирование.
Аббревиатуры, используемые на чертеже (вектор 15954), определяют следующим образом: cAvHPPD-03.
Начало: 1036, конец: 2355.
Соевый кодон-оптимизированный HPPD ген овса, кодирующий SEQ ID NO: 14. сРАТ-03-01.
Начало: 3178, конец: 3729.
PAT Hoescht AO2774 синтетические S. виридохромогены, кодоны растения, идентичные Q57146 фосфотрицину.
Белок ацетилтрансферазы.
сРАТ-03-02.
Начало: 4761, конец: 5312.
PAT Q57146 S. белок фосфинотрицинацетилтрансферазы виридохромогенов, сРАТ-03-01 ДНК, но мутирует BamH1, Bgl2 сайты.
cSpec-03.
Начало: 6045, конец: 6833.
Стрептомицин аденилилтрансфераза; из Tn7 (aadA). cVirG-01.
Начало: 7133, конец: 7858.
G ген вирулентности из Agrobacterium tumefaciens (virGN54D, содержащей TTG кодон начала) virGN54D, полученный из pAD1289, описанного в Hansen et al., 1994, PROC. NATL. ACAD. SCI. USA 91:7603-7607.
cRepA-01.
Начало: 788, конец: 8961.
RepA, pVS1 белок репликации от А до G при nt735.
eTMV-02.
Начало: 965, конец: 1032 (комплементарный).
Вирус табачной мозаики (TMV_Omega 5'UTR лидер последовательности, предназначенный для усиления экспрессии.
EMBL: TOTMV6.
e35S-05.
Начало: 608, конец: 900 (комплементарный).
Вирус мозаики цветной капусты 35S участок энхансера с от С до Т&С в т.н.п. изменениями. eFMV-03.
Начало: 408, конец: 601 (комплементарный).
- 25 032683
Энхансер вируса мозаики норичника.
bNRB-05.
Начало: 4, конец: 259 (комплементарный).
Правая граничная область Т-ДНК Agrobacterium tumefaciens нопалин ти-плазмиды. bNRB-01-01.
Начало: 101, конец: 125 (комплементарный).
Повтор правой границы Т-ДНК Agrobacterium tumefaciens нопалин ти-плазмиды. bNLB-03.
Начало: 5636, конец: 5765 (комплементарный).
Левая граничная область Т-ДНК Agrobacterium tumefaciens нопалин ти-плазмиды. (Zambryski et al., 1980, Science, 209:1385-1391) EMBL no: J01825.
bNLB-01-01.
Начало: 5671, конец: 5695 (комплементарный).
т.п.н. левой граничной области Т-ДНК нопалин ти-плазмиды опухолеобразующей агробактерии. pr35S-04-01.
Начало: 2633, конец: 3153.
35S промотор; изначально определенный на карте длиной 64 т.п.н., точного соответствия в литературе не найдено (LF июль 2004 г.).
prCMP-06.
Начало: 4024, конец: 4677.
Промотор вируса скручивания желтого листа Cestrum с лидерной последовательностью. Промотор транскрипта не полной длины. 528 пар оснований изменили с G на С для удаления внутреннего сайта RsrII.
oVS1-02.
Начало: 9004, конец: 9408.
Исходная точка репликации и разбиения участка из плазмиды pVS1 Pseudomonas (Itoh et al., 1984, Plasmid 11: 206-220); аналогичной номеру доступа GenBank U10487; служит в качестве источника репликации в хозяине опухолеобразующей агробактерии.
oCOLE-06.
Начало: 10086, конец: 10892 (комплементарный).
ColE1 исходная точка функциональной репликации в Е. coli. tNOS-05-01.
Начало: 2372, конец: 2624 (комплементарный). NOS терминатор: 3'UTR гена нопалин синтетазы. tNOS-05-01.
Начало: 3763, конец: 4015.
NOS терминатор: 3'UTR гена нопалин синтетазы.
tNOS-05-01.
Начало: 5341, конец: 5593.
NOS терминатор: 3'UTR гена нопалин синтетазы.
Материал соевого растения можно соответствующим образом трансформировать, а плодоносящие растения регенерировать множеством способов, хорошо известных специалистам в данной области техники. Например, плодоносящие морфологически нормальные трансгенные соевые растения могут быть получены путем 1) производства соматической эмбриогенетической ткани, например, из незрелой семядоли, гипокотиля или другой подходящей ткани; 2) трансформации путем бомбардировки частицами или инфицирования агробактериями и 3) регенерации растений. В одном примере, описанном в патенте США № 5024944, ткань семядоли вырезали из незрелых зародышей сои, необязательно с удаленной зародышевой осью и культивировали на гормонсодержащей среде с образованием соматического эмбриогенного растительного материала. Данный материал трансформируют в плодоносящие трансгенные соевые растения с использованием, например, прямых способов ДНК, баллистической трансфекции покрытой ДНК или инфицирования агробактериями, культивированными на подходящей селективной среде и регенерированные, необязательно, также в постоянном присутствии селективного агента. Селективными агентами могут быть антибиотики, такие как канамицин, гигромицин или гербициды, такие как ингибитор HPPD, фосфинотрицин или глифосат, или в качестве альтернативы селекция может быть основана на экспрессии визуализируемого маркерного гена, такого как GUS. Целевые ткани для преобразования включают меристему, сомаклональную эмбриогенетическую ткань и цветочную или создающую цветок ткань. Другие примеры трансформации сои включают физические способы доставки ДНК, такие как бомбардировка частицами (см., например, Finer & McMullen, In Vitro Cell Dev. Biol., 1991, 27P:175-182; McCabe et al., Bio/technology, 1998, 6:923-926), усов (Khalafalla et al., African J. of Biotechnology, 2006, 5:1594-1599), аэрозольное введение бобам (патент США № 7001754) или опосредованные агробактериями способы доставки (Hinchee et al., BioTechnology, 1988, 6:915-922, патент США № 7002058; опубликованные патентные заявки США №№ 20040034889 и 20080229447, Paz et al., Plant Cell Report, 2006,
- 26 032683
25:206-213).
Соевые трансгенные растения могут быть получены с использованием описанного выше бинарного вектора 15954, содержащего мутантный ген HPPD, используя любой доступный способ трансформации. Необязательно, HPPD ген может обеспечить средство отбора и идентификации трансгенной ткани. Например, вектор использовали для трансформации незрелых целевых семян, согласно описанию, для создания трансгенных HPPD соевых растений, ограничиваясь использованием ингибиторов HPPD, таких как мезотрион, в качестве селективного агента (см. опубликованную патентную заявку США № 20080229447). Необязательно, HPPD ген может присутствовать в полинуклеотиде наряду с другими последовательностями, которые обеспечивают дополнительными средствами селекции/идентификации трансформированных тканей, включая, например, известные гены, которые придают устойчивость к канамицину, гигромицину, фосфинотрицину, бутафенацилу или глифосату. Например, в данной области техники известны различные бинарные векторы, содержащие PAT или EPSPS селективные маркерные гены (см., например, опубликованную патентную заявку США № 20080229447). В качестве альтернативы селективные маркерные последовательности могут присутствовать в отдельных полинуклеотидах, при этом используют, например, способ котрансформации и вспомогательной селекции. Подлежащие оценке маркерные гены, такие как GU.S. также могут быть использованы для идентификации трансформированной ткани.
Растения Т0, взятые из культуры тканей, помещали в теплицу, где их пересаживали в водонасыщенную почву (REDI-EARTH® Plug and Seedling Mix, Sun Gro Horticulture, Bellevue, WA, or Fafard Germinating Mix), смешанную с 1% гранулированного MARATHON® (Olympic Horticultural Products, Co., Mainland, PA) в дозировке 5-10 г/галлон почвы в 2-квадратные горшки. Растения покрывали влажным колпаком и помещали в камеру Conviron (Пембина, Северная Дакота) при следующих условиях: 24°С днем; 20°С ночью, 16-23-часовой световой период - 1-8-часовой темный период, 80% относительной влажности.
После того как растения укоренились в почве и появился подрост (~1-2 недели), отбирали образцы растений и проверяли на наличие требуемого трансгена с помощью TAQMAN® анализа с использованием соответствующих зондов для HPPD генов или промоторов (например, prCMP). Позитивные растения пересаживали в 4-квадратные горшки, содержащие почву Fafard #3. Удобрение с медленным высвобождением Sierra 17-6-12 вводили в почву в рекомендованной дозе. Затем растения перемещали в стандартную теплицу для акклиматизации (~1 неделя). Условиями окружающей среды были 27°С днем; 21°С ночью; 14-часовой световой период (с дополнительным светом); влажность окружающей среды. После акклиматизации (~1 неделя) отбирали образцы растений и проверяли на наличие и количество копий вставленных трансгенов. Трансгенные соевые растения выращивали до зрелости с получением семян Т1. Растения Т1 выращивали, а после TAQMAN® анализа гомозиготные растения выращивали для получения семян. Трансгенные семена и потомство растений использовали для дальнейшей оценки показателей их устойчивости к гербициду и молекулярных свойств. Из популяции в приблизительно 90 трансформантов событие SYHT0H2 показало высокий уровень толерантности к мезотриону.
Вставку события SYHT0H2 и фланкирующие последовательности получали сочетанием двух способов; создания библиотеки лямбда и GENOMEWALKER™ (Clontech). Секвенирование события SYHT0H2 проводили, используя способ Сэнгера секвенирования ДНК. Анализ последовательности проводили с использованием программы анализа последовательности SEQUENCHER® (Gene Codes Corporation). Геномную ДНК из соевого события SYHT0H2 изолировали для получения библиотеки лямбда путем изолирования геномной ДНК и ограничения расщепления рестрикционными ферментами BamHI и EcoRI и KpnI до завершения, описанного поставщиком рестриктазы (NEB). Неполное расщепление геномной ДНК завершали, применяя BfuCI при 0.15 U/мкг ДНК при 37°С. Образцы отбирали через 2, 4, 6, 8 и 10 мин после добавления фермента. Образцы объединяли для загрузки в гель. Расщепленные образцы загружали в 1% агарозный гель ТАЕ и запускали в течение ночи при 20 V. Фракции изолировали для каждого расщепления BfuCI; 2-4 т.п.н., BamHI; 0,7-3,5 т.п.н. и EcoRI-KpnI, 3-6 т.п.н. ДНК выделяли из геля, используя QIAQUICK® Gel Extraction Kit согласно описанию поставщика (Qiagen). Изолированные фракции сшивали с лямбда Zap экспресс вектором (Lambda Zap Express vector) (Stratagene), разрезанным либо BamHI, либо EcoRI-KpnI. Организовали лигирования, применяя соотношение 1000 нг вектора на 100 нг вставки в 10 мкл объема с 200 U лигазы в течение ночи при 6°С.
Библиотеки компоновали с использованием Maxplaq согласно описанию поставщика (Epicentre). Библиотеки титровали с использованием XL-1MRA (Stratagene) клеток. Клетки выращивали в течение 6 ч при 37°С в бульоне NZY с добавлением 0,2% мальтозы. Клетки центрифугировали при 4 К и ресуспендировали в SM буфере (Stratagene). Фаг разводили 1/100 в буфере SM и 10 мкл смешивали с 100 мкл клеток, инкубированных при 37°С в течение 15 мин, добавляли 3,5 мл NZY линейной агарозы (50°С), смешанной путем инверсии и распределенной по всем планшетам с L-агаром, которые затем инкубировали в течение ночи при 37°С.
Библиотеку подвергали проверке на отдельные клоны, которые содержали вставленные гетерологичные последовательности. Бактериальные клетки, используемые для посева библиотеки XL-1MRA,
- 27 032683 приобретали у Stratagene. XL-1MRA клетки выращивали в бульоне NZY с добавлением 0,2% мальтозы в течение 6 ч перед использованием. Зараженные бактериальные клетки сеяли на планшетах с L-агаром, подготовленных путем заливки L-агара на 25x150 мм планшеты, нагретые при 37°С перед использованием. Бактериальные клетки собирали с помощью центрифугирования при 4 К и ресуспендирования клеток в SM буфере (Stratagene). 300 мкл бактериальных клеток и 50000 фага смешивали в 15 мл пробирке (Fisher Scientific) и инкубировали при 37°С в течение 15 мин. 9 мл NZY линейной агарозы добавляли и смешивали посредством инверсии, а полученную смесь распределяли по всей поверхности больших планшетов для сохранения гладкой поверхности. Изготавливали 10 планшетов на библиотеку для в общей сложности проверенных 500000 фагов на библиотеку. Инокулированные планшеты инкубировали в течение ночи при 37°С. На следующий день растения удаляли и оставляли при 4°С по меньшей мере на 1 ч.
Бляшки, образованные в инокулированных планшетах, перемещали на Hybond NX (GE Amersham) мембраны путем размещения мембраны на поверхности планшета. После того как мембрана стала равномерно влажной, ей дали возможность инкубироваться в течение 2 мин. Ориентацию планшета помечали иглой и индийскими чернилами путем проделывания отверстий иглой с чернилами на ней в мембране и агаре в трех разных местах. Меченую мембрану снимали с планшета и помещали мембрану фага сверху на ватман, пропитанный 0,5М NaOH на 5 мин (Bio-Rad способ) с последующим перемещением на ватман, пропитанный 2Х SSC, затем сушили на воздухе, при этом ДНК и мембрану перекрестно сшивали с использованием ДНК-кросслинкера фирмы Stratalinker (Stratagene) при 160 мДж.
С целью определения клонов фага лямбда, которые содержали гетерологичную вставленную ДНК, вышеуказанные фильтры исследовали следующим образом: фильтры предварительно гибридизировали в 7% SDS, 250 мМ фосфата натрия, pH 7,0, 1% BSA при 62°С в течение 4 ч. Прегибридизационный раствор заменяли свежим гибридизационным раствором перед добавлением радиоактивного зонда.
Зонды получали посредством PCR с праймерами MT_SOY_F2 и MT_SOY_R3, используя pSYN15764 в качестве матрицы
PMTSOYF2
TTTTGTGGTCGTCACTGCGTT (SEQIDNO: 25)
PMTSOYR3
CAGGATATATTGTGGTGTAAACAAATTGACGCTTAGACAA (SEQIDNO: 26)
Условия реакции были следующими: 1X буфера Expand, 200 мкМ dNTP, 50 нг матрицы, 10 пм праймеров, 1,5 U ДНК-полимеразы Expand (Roche) в 50 мкл реакционного объема.
Условия циклования представляли собой 35 циклов при [94°С, 30 с, 55°С, 30 с, 72°С, 2 мин].
Амплифицированный фрагмент изолировали в 1% агарозном ТАЕ геле. ДНК очищали от агарозы, используя набор для удаления геля QIAQUICK (Qiagen). Зонд помечали случайными штрихами, используя REDIPRIME™ II набор (GE Amersham) с радиоактивным dCT32P. Зонд отделяли от единичной метки с помощью спин-колонки GE Amersham G-50. Зонд нагревали в течение 5 мин при 95°С перед добавлением к буферу для гибридизации. Гибридизация происходила в течение ночи при 62°С. Фильтры отмывали сначала 2Х SSC, 0,5% SDS в течение 30 мин при 62°С, а затем с 0,2X SSC, 0,2% SDS в течение 30 мин при 62°С. Фильтры оборачивали в полимерную пленку и подвергали воздействию пленки Kodak Biomax XAR в течение 16-24 ч при -80°С. Позитивные капли закупоривали пробкой диаметром 8 мм и помещали в 500 мкл буфера SM с 25 мкл хлороформа и позволяли элюировать в течение ночи при 6°С. Фаги разбавляли 1/7500 SM в буфере для 2-го этапа скрининга. В общей сложности 1000 pfu (бляшкообразующих единиц) проверили во 2-м этапе. В тестах 2-го этапа повторяют процесс, используемый для тестов 1-го этапа. Это делали для каждого положительного клона, выявленного в тестах 1-го этапа. Данный процесс можно повторять до изолирования отдельной бляшки.
Фаг преобразовывали в плазмиду, используя протокол, описанный в ручном наборе Zap вектора экспрессии (Stratagene). Изолированные плазмиды секвенировали, при этом последовательность собирали с помощью программы SEQUENCHER® (Gene Codes Corporation).
В дополнение к описанному выше способу секвенирования сайт встраивания гетерологичной вставленной полинуклеотидной последовательностью соевого события SYHT0H2 также секвенировали, используя универсальный комплект BD GENOMEWALKER™. Границу 1 (LB1), фланкирующую последовательности для события SYHT0H2, восстанавливали, используя комплект BD GENOMEWALKER™. Как указано в инструкции к набору, геномную ДНК из соевого события SYHT0H2 изолировали и полностью расщепляли путем соединения 8 мкл ДНК (~10 нг/мкл), 1 мкл 10Х буфера EcoRV и 1 мкл EcoRV в стерильной микроцентрифужной пробирке и инкубирования при 37°С в EcoRV расщепленную ДНК лигировали к адаптеру BD GENOMEWALKER™ согласно описанию в инструкции производителя. Для амплификации ДНК, которая содержит гетерологичную вставленную полинуклеотидную последовательность соевого события SYHT0H2, два ген-специфичных праймера (GSP1 и GSP2) создавали на основе
- 28 032683 последовательности левой граничной области 15954 трансформационной векторной последовательности. GSP2 вкладывают в продукт PCR, созданный с помощью амплификации GSP1 и праймера, созданного на основе последовательности адаптера BD GENOMEWALKER™.
________________________________________________________________ Таблица 4
Наименование праймера Последовательность праймера
GSPl/FlkSeq 0027 GAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGCGATAGAA SEQ ГО NO: 27
GSP2/FlkSeq 0005 GGCCAGCATGGCCGTATCCGCAATGTGTT SEQ ГО NO: 28
PCR ампликоны получали в две стадии, состоящие из первичной PCR и вторичной (вложенной) PCR, в соответствии с инструкциями производителя. PCR продукты вторичной PCR секвенировали.
Параметры последовательности, созданной с помощью и последовательности библиотеки лямбда, и секвенирования GENOMEWALKER, объединяли для создания последовательности сайта встраивания соевого события SYTH0H2. Нуклеотидную последовательность завершенной вставки определяют как SEQ ID NO: 9, а нуклеотидную последовательность вставки, окруженной геномной ДНК, определяют как SEQ ID NO: 10. Дополнительные нуклеотидные последовательности, которые описывают LB2 и LB1 соединения вставленной и фланкирующей геномной ДНК, определяют как SEQ ID NO: 1-6 (см. табл. 1).
Пример 2. PCR анализ трансформационного события.
Геномную ДНК из трансформантов Glycine max использовали в качестве матрицы для PCR анализа в TAQMAN® анализе с использованием пары праймеров, показанных в табл. 5, и условий циклования, показанных в табл. 6. Стандартная реакционная смесь включала 1X JUMPSTART™ READYMIX™, 300 нм праймера 1, 300 нм праймера 2, 100 нм зонда и приблизительно 30 нг ДНК-матрицы в общем объеме 10 мкл. В случае анализа А1720 праймер Р10325 находится во вставке и используется для амплификации LB1 Т-ДНК-вставки, в то время как праймер Р12721 находится в геноме на сайте встраивания. Анализ А1720 генерирует PCR продукт, длина которого составляет 66 пар оснований
CGGGCGGCCAGCATGGCCGTATCCGCAATGTGTTATTAAGTTGTCT
AAACCCTAAACCAATGGCAC (SEQ ГО NO: 24).
В случае анализа А1721 праймер Р10043 находится во вставке и используется для обнаружения LB2 Т-ДНК-вставки, в то время как праймер Р12723 находится в геноме на сайте встраивания. Анализ А1721 генерирует PCR продукт, длина которого составляет 70 пар оснований
GGATGAAGAGATGAGAGAACCATCACAGAATTGACGCTTAGACAA
Таблица 5
CTTAATAACACATTGCGGATACGGC (SEQ ГО NO: 25)
ID анализа ID праймера/зонд а Последовательность (с 5'- по- 3')
А1720 Р10325 (праймер) CGGGCGGCCAGCAT (SEQ ID NO: 11)
Р12721 (праймер) GTGCCATTGGTTTAGGGTTTAGAC (SEQ ID NO: 12)
Р12722 (зонд) FAM-ATCCGCAATGTGTTATTAA-MGB* (SEQ ID NO: 13)
ID анализа ID праймера/зонд а Последовательность (c 5'- no- 3')
А1721 Р10043 (праймер) GCCGTATCCGCAATGTGTTA (SEQ ID NO: 14)
Р12723 (праймер) GGATGAAGAGATGAGAGAACCATCA (SEQ ID NO: 15)
Р12724 (зонд) FAM-TAAGTTGTCTAAGCGTCAATT-MGB* (SEQIDNO: 16)
FAM - 6 карбоксифлуоресцин, *MGB - дигидроциклопиролоиндола трипептид, связывающийся с малой бороздой, *BGB-меченый зонд также может быть использован.
- 29 032683
Таблица 6
Цикл Этап Температура (°C) Время Повторяющиеся циклы
A 1 95 10 минут —
В 1 95 15 секунд 40
В 2 60 1 минута 40
В качестве альтернативы геномную ДНК из трансформантов Glycine max использовали в качестве матрицы для анализов на основе геля с использованием пары праймеров, показанных в табл. 7, и условиях циклования, приведенных в табл. 8. Стандартная реакционная смесь включала 1X JUMPSTART™ READYMIX™, 10 мкм праймера 1, 10 мкм праймера 2, 1 мкл 10 нг/мкл геномной ДНК в общем объеме 20 мкл.
Таблица 7
Цель Праймер 1 (Т-ДНК) Праймер 2 (геном)
SYHT0H2 LBFS 1 FE0845 (SEQIDNO: 17) FE3427 (SEQ ID NO: 18)
SYHT0H2 LBFS 1 FE0845 FE3443
(SEQIDNO: 17) (SEQ ID NO: 19)
SYHT0H2 LBFS 2 FE0845 (SEQIDNO: 17) FE3429 (SEQ ID NO: 20)
SYHT0H2 LBFS 2 FE0845 (SEQ ID NO: 17) FE3442 (SEQ ID NO: 21)
Цикл Этап Температура (°C) Время Повторяю щиеся циклы
A 1 94 3 минуты —
В 1 94 30 секунд 35
В 2 58 30 секунд 35
В о J 68 1 минут 35
с 1 68 7 минут -
D 1 4 10 минут -
Таблица 8
Пример 3. Эффективность события SYHT0H2 в полевых условиях.
Событие SYHT0H2 соевых растений протестировали на эффективность действия в отношении мезотриона в 5 местах на территории Соединенных Штатов. Нетрансгенную линию сои Jack использовали в качестве контроля. Соевые растения как SYHT0H2, так и Jack, обрабатывали 210 г а.и./га мезотриона на V2/V3 этапе, а затем оценивали на процентную долю листьев с повреждениями на 4-7 дней после обработки (DAT), 13-17 DAT и 25-33 DAT. Результаты в табл. 9 показывают эффективность 0Н2 в отношении мезотриона по сравнению с контрольной линией.
Таблица 9
Г енотип % Повреждение
4-7 DAT 13-17 DAT 25-33 DAT
Jack 46,5 81 62,4
SYHT0H2 13,2 4,7 0
SYHT0H2 соевых растений протестировали на эффективность действия в отношении глюфосината в 8 местах на территории Соединенных Штатов. Нетрансгенную линию сои Jack использовали в качестве контроля. Соевые растения как SYHT0H2, так и Jack, обрабатывали 900 г а.и./га глюфосинатом на V2/V3 этапе, а затем повторно обрабатывали на V5-V6 этапе. Затем их оценивали на процентную долю листьев с повреждениями на 4-8 день после обработки (DAT), 13-20 DAT, 26-35 DAT. Результаты в табл. 10 демонстрируют эффективность SYHT0H2 в отношении глюфосината по сравнению с контрольной линией.
Таблица 10
Генотип % Повреждения
4-8 DAT 13-20 DAT 26-35 DAT
Jack 100 100 100
SYHT0H2 9 5 0
Пример 4. Маркеры для картирования и селекции скрещиванием.
Фланкирующую последовательность из LB2 (SEQ ID NO: 7) или фланкирующую последовательность LB1 (SEQ ID NO: 8) вставки SYHT0H2 привели в соответствие с 8Х базой данных генома сои (т.е. базой данных Phytozome в ведении объединенного института генома (Joint Genome Institute) и центра интегративной геномики (Center for Integrative Genomics), доступной во всемирной сети Интернет, см. также Schmutz et al. (2010) Nature 463:178-183) с помощью средства поиска основного локального выравнивания (BLAST; Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215:403-410; Altschul et al., Nucleic Acids Res., 1997,
- 30 032683
25:3389-3402), также доступного в сети Интернет. LB2 привели в соответствие с хромосомой номер 8 (группа сцепления А2) из нуклеотида 9905212-9905310. LB1 привели в соответствие с хромосомой 8 (группа сцепления А2) из нуклеотида 9905326-9905788. Физические позиции затем сравнивали с физическими позициями маркеров, перечисленных в консенсусной карте сои 4.0 (Hyten et al., Crop Sci., 2010, 50:960-968). Идентифицировали позицию сантиморганиды ближайшего маркера, все маркеры в пределах 10 сантиморганид приведены в табл. 9. Эти данные показывают, что вставка гетерологичной полинуклеотидной последовательности в событии SYT0H2 происходила на соевой хромосоме 8 в месте между парами оснований 9905310 и 9905326, которые соответствуют последовательности SEQ ID NO: 24 между нуклеотидами 99 и 116. После вставки гетерологичной последовательности, содержащей последовательность HPPD, удаляют 16 пар оснований геномной последовательности, которые соответствуют нуклеотидам 100-115 SEQ ID NO: 24.
Событие SYHT0H2 вводят в соевое растение, используя один или несколько доступных маркеров, указанных в табл. 11, и традиционные способы селекции. Событие SYHT0H2 находится ближе всего к молекулярным маркерам BARC-65571-19573 и находится между молекулярными маркерами BARC65571-19573 и BARC-43119-08535. Подходы и способы скрещивания хорошо известны в данной области техники. См., например, Fehr, в Breeding Methods for Cultivar Development 1987, Wilcos, J. (ed.), American Society of Agronomy, Madison, WI; Welsh J. R., Fundamentals of Plant Genetics and Breeding. John Wiley & Sons, NY (1981); Wood D.R. (Ed.), Crop Breeding. American Society of Agronomy Madison, Wis. (1983); Mayo O., The Theory of Plant Breeding. Second Edition, Clarendon Press, Oxford (1987); Singh, D.P., Breeding for Resistance to Diseases and Insect Pests. Springer-Verlag, NY (1986); и Wricke and Weber, Quantitative Genetics and Selection Plant Breeding. Walter de Gruyter and Co., Berlin (1986).
__________________________________________ Таблица 11
Общепринятое название маркера LG cM Тип
Sat 400 A2 43,8 SSR
BARC-032503-08989 A2 44,5 SNP
BARC-045047-08867 A2 45,6 SNP
BARC-028361-05839 A2 45,7 SNP
BARC-028361-05840 A2 45,7 SNP
BARC-028361-05841 A2 45,7 SNP
BARC-028361-05842 A2 45,7 SNP
BARC-028361-05843 A2 45,7 SNP
BARC-028361-05844 A2 45,7 SNP
BARC-028361-05845 A2 45,7 SNP
BARC-028361-05846 A2 45,7 SNP
- 31 032683
BARC-028361-05847 A2 45,7 SNP
BARC-028361-05848 A2 45,7 SNP
BARC-028361-05849 A2 45,7 SNP
BARC-028361-05850 A2 45,7 SNP
BARC-028361-05851 A2 45,7 SNP
В ARC-018419-02910 A2 46,0 SNP
В ARC-018419-02911 A2 46,0 SNP
В ARC-018419-02912 A2 46,0 SNP
BARC-016861-02355 A2 46,1 SNP
Satt632 A2 46,3 SSR
Sat 157 A2 46,4 SSR
В ARC-021329-0403 8 A2 46,4 SNP
BARC-021329-04039 A2 46,4 SNP
BARC-016685-03321 A2 46,4 SNP
Sat 162 A2 46,6 SSR
В ARC-018023 -02498 A2 46,7 SNP
В ARC-018023 -02499 A2 46,7 SNP
BARC-028309-05824 A2 46,8 SNP
BARC-028309-05825 A2 46,8 SNP
BARC-028309-05826 A2 46,8 SNP
В ARC-0403 39-07714 A2 47,0 SNP
В ARC-0403 39-07715 A2 47,0 SNP
BARC-030485-06876 A2 47,2 SNP
BARC-050171-09440 A2 47,3 SNP
В ARC-012193-01743 A2 47,6 SNP
В ARC-010097-00518 A2 47,6 SNP
Sat 215 A2 47,9 SSR
BARC-059853-16139 A2 48,0 SNP
В ARC-015419-01822 A2 48,2 SNP
BARC-027690-06633 A2 49,0 SNP
В ARC-021831-04219 A2 49,0 SNP
В ARC-021831-04220 A2 49,0 SNP
BARC-027726-06646 A2 49,3 SNP
BARC-057257-14650 A2 49,3 SNP
Satti 87 A2 49,9 SSR
В ARC-027618-06620 A2 50,0 SNP
В ARC-027618-06621 A2 50,0 SNP
В ARC-027618-06622 A2 50,0 SNP
В ARC-027618-06623 A2 50,0 SNP
В ARC-027618-06624 A2 50,0 SNP
BARC-026091-05255 A2 50,4 SNP
Sat 212 A2 50,7 SSR
BARC-065571-19573 A2 51,3 SNP
- 32 032683
В ARC-040029-0763 8 A2 52,2 SNP
В ARC-040029-0763 9 A2 52,2 SNP
BARC-040029-07640 A2 52,2 SNP
В ARC-043119-0853 5 A2 52,3 SNP
В ARC-03 8631-07266 A2 52,4 SNP
BARC-053809-12037 A2 52,4 SNP
В ARC-018083-02511 A2 52,5 SNP
BARC-018083-02512 A2 52,5 SNP
BARC-013857-01257 A2 52,6 SNP
BARC-013857-01258 A2 52,6 SNP
В ARC-017983 -02492 A2 53,0 SNP
BARC-039145-07456 A2 53,1 SNP
BARC-039145-07457 A2 53,1 SNP
BARC-029007-06050 A2 53,4 SNP
Satt424 A2 53,6 SSR
BARC-020307-04547 A2 55,1 SNP
BARC-020307-04548 A2 55,1 SNP
BARC-020307-04549 A2 55,1 SNP
BARC-020307-04550 A2 55,1 SNP
В ARC-0203 07-045 51 A2 55,1 SNP
В ARC-045081-08872 A2 55,1 SNP
В ARC-019749-04349 A2 56,4 SNP
В ARC-019749-043 50 A2 56,4 SNP
В ARC-019749-043 51 A2 56,4 SNP
В ARC-019749-043 52 A2 56,4 SNP
В ARC-019749-043 53 A2 56,4 SNP
В ARC-019749-043 54 A2 56,4 SNP
В ARC-019749-043 5 5 A2 56,4 SNP
В ARC-019749-043 56 A2 56,4 SNP
В ARC-019749-043 57 A2 56,4 SNP
В ARC-019749-043 5 8 A2 56,4 SNP
В ARC-019749-043 59 A2 56,4 SNP
В ARC-019749-043 60 A2 56,4 SNP
В ARC-019749-043 61 A2 56,4 SNP
В ARC-013 587-01167 A2 56,6 SNP
В ARC-013 587-01169 A2 56,6 SNP
В ARC-013 587-01170 A2 56,6 SNP
В ARC-029671-063 01 A2 56,7 SNP
В ARC-029671-063 02 A2 56,7 SNP
В ARC-029671-063 03 A2 56,7 SNP
В ARC-029671-063 04 A2 56,7 SNP
В ARC-029671-063 05 A2 56,7 SNP
В ARC-029671-063 06 A2 56,7 SNP
- 33 032683
BARC-029671-063 07 A2 56,7 SNP
BARC-029671-063 08 A2 56,7 SNP
BARC-029671-063 09 A2 56,7 SNP
BARC-029671-06310 A2 56,7 SNP
BARC-029671-063 И A2 56,7 SNP
В ARC-03 93 93-07313 A2 56,7 SNP
В ARC-027614-06615 A2 56,9 SNP
В ARC-027614-06616 A2 56,9 SNP
В ARC-027614-06617 A2 56,9 SNP
В ARC-027614-06618 A2 56,9 SNP
В ARC-027614-06619 A2 56,9 SNP
В ARC-016661-02162 A2 57,2 SNP
В ARC-016661-02163 A2 57,2 SNP
BARC-044327-08668 A2 58,2 SNP
BARC-044869-08827 A2 58,9 SNP
BARC-044869-08828 A2 58,9 SNP
В ARC-018941-03 041 A2 59,3 SNP
В ARC-018941-03 042 A2 59,3 SNP
BARC-030759-06940 A2 60,1 SNP
BARC-030759-06941 A2 60,1 SNP
BARC-030759-06942 A2 60,1 SNP
В ARC-014665-01611 A2 61,1 SNP
BARC-014665-01612 A2 61,1 SNP
BARC-014665-01613 A2 61,1 SNP
BARC-014665-01614 A2 61,1 SNP
BARC-014665-01615 A2 61,1 SNP
BARC-014665-01616 A2 61,1 SNP
BARC-014665-01617 A2 61,1 SNP
BARC-014665-01618 A2 61,1 SNP
BARC-029865-06449 A2 61,5 SNP
В ARC-044217-08646 A2 61,9 SNP
В ARC-013 567-01162 A2 62,2 SNP
В ARC-013 567-01163 A2 62,2 SNP
Пример 5. Использование события SYHT0H2 сайт встраивания для направленной интеграции в сое.
Фланкирующие последовательности события SYHT0H2, раскрытые в SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, используют для поиска в базах данных генома сои. Идентичные совпадения с обеими фланкирующими последовательностями идентифицируют на ВАС-клоне и идентифицируют молекулярные маркеры по месту нахождения. Дополнительные маркеры разрабатывают и используют для тонкого картирования сайта встраивания.
Однородные агрономические свойства трансгена события SYHT0H2 в нескольких поколениях в полевых условиях, сайт интеграции события SYHT0H2 обеспечивают используемый геномный локус для интеграции целевых трансгенов, кроме мутантного фермента HPPD события SYHT0H2. Такая целевая интеграция преодолевает проблемы с так называемыми эффектами положения и риском возникновения мутации в геноме в случае интеграции трансгена в хозяина. Дополнительные преимущества такой направленной интеграции включают, но не ограничиваются ими, сокращение ряда трансформационных событий, которые должны быть проверены и испытаны до получения трансгенного растения, которое проявляет желаемый уровень экспрессии трансгена, не обнаруживая в то же время нарушений в результате случайной вставки трансгена в важный локус в геноме хозяина. Кроме того, такая направленная интеграция делает возможным разведение элитных линий растения с обоими генами более эффективным.
С помощью описанной выше идеи специалист может использовать способы, известные в области техники, для направления трансгенов к тому же сайту встраивания, что и в SYHT0H2 или к сайту в непосредственной близости от сайта встраивания в SYHT0H2. Один такой способ описан в опубликованной патентной заявке США № 20060253918, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Коротко, до 20 т.п.н. геномной последовательности, фланкирующей 5' к сайту встраивания (например, SEQ ID NO: 7, геномные последовательности, содержащие SEQ ID NO: 7, и геномные последовательности, гомологичные SEQ ID NO: 7), и до 20 т.п.н. геномной последовательности, фланкирующей 3' к сайту встраивания (например, SEQ ID NO: 8, геномные последовательности, содержащие SEQ ID NO: 8, и геномные последовательности, гомологичные SEQ ID NO: 8), используют для фланкирования целевого гена или генов, которые предназначают для вставки путем гомологичной рекомбинации, сайт интеграции которых находится у сайта события SYHT0H2 или вблизи него. Данные последовательности можно дополнительно фланкировать путем повторов границы Т-ДНК, как, например, повторов последовательностей левой границы (LB) и правой границы (RB) и других усиливающих последовательностей для повышения эффективности доставки Т-ДНК. Целевой ген или гены могут быть размещены именно так, как в сайте встраивания SYHT0H2, или могут быть размещены в любом месте в пределах
- 34 032683
т.п.н. участков вблизи сайтов встраивания SYHT0H2, чтобы обеспечить постоянный уровень экспрессии трансгенов без вредного воздействия на растения. ДНК-векторы, содержащие целевой ген или гены, и фланкирующие последовательности могут быть доставлены в клетки растений с помощью одного из нескольких способов, известных специалистам в данной области техники, включая, но не ограничиваясь ею, опосредованную агробактериями трансформацию. Вставку ДНК вектора в целевой сайт SYHT0H2 можно дополнительно усилить одним из нескольких способов, включая, но не ограничиваясь ими, коэкспрессию или повышение экспрессии усиливающих рекомбинацию генов или снижение экспрессии эндогенных генов подавления рекомбинации. Более того, в данной области техники известно, что расщепление специфических последовательностей в геноме можно использовать для увеличения частоты гомологичной рекомбинации, поэтому вставка в сайт встраивания SYHT0H2 и ее фланкирующие участки могут быть усилены путем экспрессии природных или искусственно созданных распознающих последовательность эндонуклеаз для расщепления этих последовательностей.
Пример 7. Использование сайта встраивания события SYHT0H2 и фланкирующей последовательности для стабилизации экспрессии генов.
Геномные последовательности, фланкирующие сайт встраивания SYHT0H2, также могут быть использованы для стабилизации экспрессии другого целевого гена(ов) в случае вставки в качестве трансгена в геномные локализации в сое, за исключением сайта интеграции в SYHT0H2, а также в другие сельскохозяйственные культуры. В частности, до 20 т.п.н. геномной последовательности, фланкирующей 5' к сайту встраивания (например, SEQ ID NO: 7, геномные последовательности, содержащие SEQ ID NO: 7, а также геномные последовательности, гомологичные SEQ ID NO: 7), и до 20 т.п.н. геномной последовательности, фланкирующей 3' к сайту встраивания (например, SEQ ID NO: 8, геномные последовательности, содержащие SEQ ID NO: 8, и геномные последовательности, гомологичные SEQ ID NO: 8), используют для фланкирования целевого гена или генов, что которые предназначают для вставки в геном растений. Данные последовательности можно дополнительно фланкировать путем повторов границы ТДНК, как, например, повторов последовательностей левой границы (LB) и правой границы (RB) и других усиливающих последовательностей для повышения эффективности доставки Т-ДНК.
Целевой ген или гены могут быть размещены именно так, как в сайте встраивания SYHT0H2, или могут быть размещены в любом месте в пределах 20 т.п.н. участков вблизи сайтов встраивания SYHT0H2, чтобы обеспечить постоянный уровень экспрессии трансгенов без вредного воздействия на растения. ДНК-векторы, содержащие целевой ген или гены и фланкирующую последовательность сайта встраивания SYHT0H2, могут быть доставлены в клетки растений с помощью одного из нескольких способов, известных специалистам в данной области техники, включая, но не ограничиваясь ими, трансформацию протопластов, баллистическую бомбардировку и опосредованную агробактериями трансформацию. Доставленная ДНК может быть интегрирована случайно в геном растения или может также присутствовать как часть независимо расщепленных генетических единиц, таких как искусственные хромосомы или мини-хромосомы. ДНК-векторы, содержащие целевой ген(ы) с геномной последовательностью, фланкирующей сайт встраивания SYHT0H2, могут быть доставлены в клетки растений. Таким образом, окружая целевой ген или гены геномной последовательностью, фланкирующей сайт встраивания SYHT0H2, экспрессию таких генов стабилизируют в трансгенном растении-хозяине, включая как однодольные, так и двудольные растения.
- 35 032683
Перечень последовательностей <110> Зингента Партисипейшнс АГ <120> НАБОР ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ СОБЫТИЯ SYHT0H2 В БИОЛОГИЧЕСКОМ ОБРАЗЦЕ (ВАРИАНТЫ) <130> 72722WOPCT <150> US61/423131 <150> US61/467621 <160> 28 <170> Patentin версия 3.5 <210> 1 <211> 20 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Получена из Glycine max и Avena sativa <400> 1 accatcacag aattgacgct 20 <210> 2 <211> 20 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Получена из Glycine max и Avena sativa <400>2 taaaccctaa accaatggca20 <210>3 <211>40 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Получена из Glycine max и Avena sativa <400>3 agatgagaga accatcacag aattgacgct tagacaactt40 <210>4 <211>40 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Получена из Glycine max и Avena sativa <400>4 ttaagttgtc taaaccctaa accaatggca cacaaaaatt40 <210>5 <211> 60 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Получена из Glycine max и Avena sativa <400> 5 taggatgaag agatgagaga accatcacag aattgacgct tagacaactt aataacacat 60 <210> 6 <211> 60 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Получена из Glycine max и Avena sativa <400>6 caatgtgtta ttaagttgtc taaaccctaa accaatggca cacaaaaatt cccatcctag60 <210>7 <211>99 <212> ДНК <213> Glycine max
- 36 032683 <400> 7
acatatacta cataagaagg aggtggagaa agtgtatgta accgacaaca aaaaactaat 60
aggaatatat aggatgaaga gatgagagaa ccatcacag 99
<210> 8 <211> 462 <212> ДНК <213> Glycine max
<400> 8 accaatggca cacaaaaatt cccatcctag tttttggagt aattaatgaa ctagcaatta 60
tataataagc tctgtatctg ttatattctg cattaatttt gttgaataaa aaacactgta 120
aattaattgg tcatgtgtta tattttgcac actaattttt tttttaaaaa aggtgggaga 180
gcgtgatatt tttagttgtc cagaaaataa agattgaaaa atttgaatgt atttggcacg 240
tgggatactt taaaaattag aaggcacctt attgtttact tcgatcggag aaaaataata 300
aaatccttta tatgttaatt tatttcaatt tgtatgtctg tagtaggaat attaaagtag 360
acatttatca ttaatctcat tattagtctt tccttttgta gaatctcgtt aattttatta 420
actaactttt aaataactct ctagaggaat gaacaaaata at 4 62
<210> 9 <211> 7914 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность Avena sativa, оптимизированная для экспрессии в
Glycine max <400> 9
aattgacgct tagacaactt aataacacat tgcggatacg gccatgctgg ccgcccgggc 60
atggtaccca attcccgatc tagtaacata gatgacaccg cgcgcgataa tttatcctag 120
tttgcgcgct atattttgtt ttctatcgcg tattaaatgt ataattgcgg gactctaatc 180
ataaaaaccc atctcataaa taacgtcatg cattacatgt taattattac atgcttaacg 240
taattcaaca gaaattatat gataatcatc gcaagaccgg caacaggatt caatcttaag 300
aaactttatt gccaaatgtt tgaacgatcg gggaaattcg gggatctaga gctcgactca 360
tatctgggta actggcctaa ctggccttgg aggagctggc aactcaaaat ccctttgcca 420
aaaaccaaca tcatgccatc caccatgctt gtatccagct gcgcgcaatg taccccgggc 480
tgtgtatccc aaagcctcat gcaacctaac agatggatcg tttggaaggc ctataacagc 540
aaccacagac ttaaaacctt gcgcctccat agacttaagc aaatgtgtgt acaatgtaga 600
tcctaggccc aacctttgat gcctatgtga cacgtaaaca gtactctcaa ctgtccaatc 660
gtaagcgttc ctagccttcc agggcccagc gtaagcaata ccagccacaa caccctcaac 720
ctcagcaacc aaccaagggt atctatcttg caacctctct agatcatcaa tccactcttg 780
tggtgtttgt ggctctgtcc taaagttcac tgtagacgtc tcaatgtaat ggttaacgat 840
atcacaaacc gcggccatat cagctgctgt agctggccta atctcaactg gtctcctctc 900
cggagacatg gtgggatcct gtaattgtaa atagtaattg taatgttgtt tgttgtttgt 960
tgttgttggt aattgttgta aaaatactcg agggtttatg tttttacaaa cgactccaac 1020
aaagtatcaa gttttattca aacagaatga tacagattta aatatcgggt tttatacaaa 1080
ccatatgata tttatcaatt cagtgatcct atacggacgg tggagacaaa aatcatcaag 1140
aatcatcttt gagatgagaa agcttagctc ttacctgttt tcgtcgtctt ggcttttctt 1200
cttcctggcc acctgcctga atacttcgcc gccttgacta cttctaggct acttgctctc 1260
tttctctctc taggactatc tctctgagat tttgctccct taacaatgag ggaggggcta 1320
agtatttata gactgacggg tgagtggaca tttcccaaac tacccttact tatttcgtaa 1380
gcccttacgt cattgctcca ttattggagt ctgaagatgc cttcacatgg tggaccccca 1440
cctgtcggcc acgaatctta tttgttcgtc agaaaaagcc aaaccgactg cacagttttt 1500
ccatcgtggt agggaccact ttggtattga ttaaaggcag ccgacctaac ctttgtcaga 1560
cgcattattt cacgcgtttt cttttacaga ttccatcttc atttgtggga cagtatgtct 1620
gccactttgt ctgccagtaa ttaaacgcgg tccggatcta gtaacataga tgacaccgcg 1680
- 37 032683
cgcgataatt tatcctagtt tgcgcgctat attttgtttt ctatcgcgta ttaaatgtat 1740
aattgcggga ctctaatcat aaaaacccat ctcataaata acgtcatgca ttacatgtta 1800
attattacat gcttaacgta attcaacaga aattatatga taatcatcgc aagaccggca 1860
acaggattca atcttaagaa actttattgc caaatgtttg aacgatctgc aggtcgaccc 1920
atggcgccga tatcactagt tcagatctgg gtaactggcc taactggcct tggaggagct 1980
ggcaactcaa aatccctttg ccaaaaacca acatcatgcc atccaccatg cttgtatcca 2040
gctgcgcgca atgtaccccg ggctgtgtat cccaaagcct catgcaacct aacagatgga 2100
tcgtttggaa ggcctataac agcaaccaca gacttaaaac cttgcgcctc catagactta 2160
agcaaatgtg tgtacaatgt ggatcctagg cccaaccttt gatgcctatg tgacacgtaa 2220
acagtactct caactgtcca atcgtaagcg ttcctagcct tccagggccc agcgtaagca 2280
ataccagcca caacaccctc aacctcagca accaaccaag ggtatctatc ttgcaacctc 2340
tctagatcat caatccactc ttgtggtgtt tgtggctctg tcctaaagtt cactgtagac 2400
gtctcaatgt aatggttaac gatatcacaa accgcggcca tatcagctgc tgtagctggc 2460
ctaatctcaa ctggtctcct ctccggagac atggtggact agtgatttca gcgtgtcctc 2520
tccaaatgaa atgaacttcc ttatatagag gaagggtctt gcgaaggata gtgggattgt 2580
gcgtcatccc ttacgtcagt ggagatatca catcaatcca cttgctttga agacgtggtt 2640
ggaacgtctt ctttttccac gatgctcctc gtgggtgggg gtccatcttt gggaccactg 2700
tcggcagagg catcttcaac gatggccttt cctttatcgc aatgatggca tttgtaggag 2760
ccaccttcct tttccactat cttcacaata aagtgacaga tagctgggca atggaacctt 2820
tgctgctgca catggacttg ctgtcagatc tgttggagct taatatccgg aaacctcctc 2880
ggattccatt gcccagctat ctgtcacttt attgtgaaga tagtggaaaa ggaaggtggc 2940
tcctacaaat gccatcattg cgataaagga aaggctatcg ttgaagatgc ctctgccgac 3000
agtggtccca aagatggacc cccacccacg aggagcatcg tggaaaaaga agacgttcca 3060
accacgtctt caaagcaagt ggattgatgt gatatctcca ctgacgtaag ggatgacgaa 3120
caatcccact atccttctgc aggtcgactc tagaggatcc tataaatagg aagttcattt 3180
catttggaga ggaaacctcg agtattttta caacaattac caacaacaac aaacaacaaa 3240
caacattaca attactattt acaattacac atatgcctcc aacaccagct actgctactg 3300
gagctgctgc tgctgccgtt acaccagaac atgctgcaag gtcattccct agagttgttc 3360
gcgttaaccc taggtctgac agattccctg ttctgtcctt ccatcatgtg gagctttggt 3420
gtgctgatgc agctagtgct gctggtcgtt tcagctttgc acttggagca ccacttgctg 3480
caagatctga tctgtctaca gggaactcag cacatgcttc tctcctactt cgatctggag 3540
cattagcctt cctttttacc gctccttatg ctccacctcc acaagaagct gcaactgctg 3600
caactgcttc cattccctcc ttttcagcag atgctgcaag aacctttgct gctgcacatg 3660
gacttgctgt cagatctgtt ggagttaggg ttgctgatgc agctgaagca tttcgcgtta 3720
gtgttgctgg aggagcaaga cctgcttttg ctccagcaga tcttggtcac ggatttggac 3780
ttgctgaagt ggagctgtat ggagatgtgg ttctgagatt cgtgagctat cctgacgaaa 3840
ctgacctacc atttctccca ggattcgaga gggtttcaag tccaggtgca gttgactacg 3900
gtttgactcg ctttgaccac gttgttggaa acgttccaga aatggctcct gtcatcgact 3960
acatgaaggg attccttggt ttccacgagt tcgctgaatt cacagcagag gatgttggaa 4020
ccacagaatc tggactgaac agtgtggttc tagccaacaa cagtgaagct gttcttctgc 4080
cattgaacga gcctgttcat ggaaccaaga gacgatctca gatccaaacc tacctcgaat 4140
accatggtgg accaggagtt caacacatcg cattggcttc taacgatgtg cttcgaactc 4200
tcagggaaat gagagccaga actccaatgg gagggttcga atttatggct cctccacaag 4260
ccaagtacta tgaaggagtc cgtagaatcg ctggagatgt cttgtcagag gaacagatca 4320
aggagtgtca agaactgggt gttctcgttg atcgagacga tcaaggtgtg ctactccaga 4380
tcttcaccaa accagttggt gatcgtccca cttttttcct cgaaatgatt cagcgaatag 4440
gatgcatgga gaaggatgaa gttgggcaag agtaccagaa aggtggatgt ggtgggtttg 4500
- 38 032683
gaaaggggaa cttttccgag ttgttcaagt ccatagagga ctacgagaag tcactggaag 4560
tcaagcagtc tgtcgttgct cagaagagct aagagctctt catatgacga tcgttcaaac 4620
atttggcaat aaagtttctt aagattgaat cctgttgccg gtcttgcgat gattatcata 4680
taatttctgt tgaattacgt taagcatgta ataattaaca tgtaatgcat gacgttattt 4740
atgagatggg tttttatgat tagagtcccg caattataca tttaatacgc gatagaaaac 4800
aaaatatagc gcgcaaacta ggataaatta tcgcgcgcgg tgtcatctat gttactagat 4860
cgcggaccca gtcaaagatt caaatagagg acctaacaga actcgccgta aagactggcg 4920
aacagttcat acagagtctc ttacgactca atgacaagaa gaaaatcttc gtcaacatgg 4980
tggagcacga cacgcttgtc tactccaaaa atatcaaaga tacagtctca gaagaccaaa 5040
gggcaattga gacttttcaa caaagatgac ttttcaacaa agggtaatat ccggaaacct 5100
cctcggattc cattgcccag ctatctgtca ctttattgtg aagatagtgg aaaaggaagg 5160
tggctcctac aaatgccatc attgcgataa aggaaaggcc atcgttgaag atgcctctgc 5220
cgacagtggt cccaaagatg gacccccacc cacgaggagc atcgtggaaa aagaagacgt 5280
tccaaccacg tcttcaaagc aagtggattg atgtgatatc tccactgacg taagggatga 5340
cgcacaatcc cactatcctt cgcaagaccc ttcctctata taaggaagtt catttcattt 5400
ggagaggaca cgctgaaatc actagtccac catgtctccg gagaggagac cagttgagat 5460
taggccagct acagcagctg atatggccgc ggtttgtgat atcgttaacc attacattga 5520
gacgtctaca gtgaacttta ggacagagcc acaaacacca caagagtgga ttgatgatct 5580
agagaggttg caagatagat acccttggtt ggttgctgag gttgagggtg ttgtggctgg 5640
tattgcttac gctgggccct ggaaggctag gaacgcttac gattggacag ttgagagtac 5700
tgtttacgtg tcacataggc atcaaaggtt gggcctagga tccacattgt acacacattt 5760
gcttaagtct atggaggcgc aaggttttaa gtctgtggtt gctgttatag gccttccaaa 5820
cgatccatct gttaggttgc atgaggcttt gggatacaca gcccggggta cattgcgcgc 5880
agctggatac aagcatggtg gatggcatga tgttggtttt tggcaaaggg attttgagtt 5940
gccagctcct ccaaggccag ttaggccagt tacccagatc tgaactagtg atatcggcgc 6000
catgggtcga cctgcagatc gttcaaacat ttggcaataa agtttcttaa gattgaatcc 6060
tgttgccggt cttgcgatga ttatcatata atttctgttg aattacgtta agcatgtaat 6120
aattaacatg taatgcatga cgttatttat gagatgggtt tttatgatta gagtcccgca 6180
attatacatt taatacgcga tagaaaacaa aatatagcgc gcaaactagg ataaattatc 6240
gcgcgcggtg tcatctatgt tactagatcc ggaccgcgtt taattactgg cagacaaagt 6300
ggcagacata ctgtcccaca aatgaagatg gaatctgtaa aagaaaacgc gtgaaataat 6360
gcgtctgaca aaggttaggt cggctgcctt taatcaatac caaagtggtc cctaccacga 6420
tggaaaaact gtgcagtcgg tttggctttt tctgacgaac aaataagatt cgtggccgac 6480
aggtgggggt ccaccatgtg aaggcatctt cagactccaa taatggagca atgacgtaag 6540
ggcttacgaa ataagtaagg gtagtttggg aaatgtccac tcacccgtca gtctataaat 6600
acttagcccc tccctcattg ttaagggagc aaaatctcag agagatagtc ctagagagag 6660
aaagagagca agtagcctag aagtagtcaa ggcggcgaag tattcaggca ggtggccagg 6720
aagaagaaaa gccaagacga cgaaaacagg taagagctaa gctttctcat ctcaaagatg 6780
attcttgatg atttttgtct ccaccgtccg tataggatca ctgaattgat aaatatcata 6840
tggtttgtat aaaacccgat atttaaatct gtatcattct gtttgaataa aacttgatac 6900
tttgttggag tcgtttgtaa aaacataaac cctcgagtat ttttacaaca attaccaaca 6960
acaacaaaca acaaacaaca ttacaattac tatttacaat tacaggatcc caccatgtct 7020
ccggagagga gaccagttga gattaggcca gctacagcag ctgatatggc cgcggtttgt 7080
gatatcgtta accattacat tgagacgtct acagtgaact ttaggacaga gccacaaaca 7140
ccacaagagt ggattgatga tctagagagg ttgcaagata gatacccttg gttggttgct 7200
gaggttgagg gtgttgtggc tggtattgct tacgctgggc cctggaaggc taggaacgct 7260
tacgattgga cagttgagag tactgtttac gtgtcacata ggcatcaaag gttgggccta 7320
- 39 032683
ggatctacat tgtacacaca tttgcttaag tctatggagg cgcaaggttt taagtctgtg 7380
gttgctgtta taggccttcc aaacgatcca tctgttaggt tgcatgaggc tttgggatac 7440
acagcccggg gtacattgcg cgcagctgga tacaagcatg gtggatggca tgatgttggt 7500
ttttggcaaa gggattttga gttgccagct cctccaaggc cagttaggcc agttacccag 7560
atatgagtcg agctctagat ccccgaattt ccccgatcgt tcaaacattt ggcaataaag 7620
tttcttaaga ttgaatcctg ttgccggtct tgcgatgatt atcatataat ttctgttgaa 7680
ttacgttaag catgtaataa ttaacatgta atgcatgacg ttatttatga gatgggtttt 7740
tatgattaga gtcccgcaat tatacattta atacgcgata gaaaacaaaa tatagcgcgc 7800
aaactaggat aaattatcgc gcgcggtgtc atctatgtta ctagatcggg aattgggtac 7860
catgcccggg cggccagcat ggccgtatcc gcaatgtgtt attaagttgt ctaa 7914
<210> 10
<211> 9206
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Получена из Glycine max и Avena sativa
<220>
<221> иной признак
<222> (1) ..(821)
<223> геномный участок, называемый LB2
<220>
<221> иной признак <222> (822)..(8735)
<223> гетерологичная вставленная ДНК
<220>
<221> иной признак
<222> (8736)..(9206)
<223> геномная фланкирующая последовательность, называемая LB1
<400> 10
tgatcttaaa aattcaaagt ccacctaatt tgacaaggaa agcaccaggt agcgtttcat 60
ctaatgtttt ctccatatag ttgactattt acccaagttc atgacgatgt caacaatgca 120
agttgtacga ctaaacttct tccttgtgca ataaaatgcc atctattact gtcacaaagg 180
aagtgtttta ctgtcttata agttagtttg attacataag ttttatttag taaacgagct 240
tattaattta ttgcatatta ttaggtggtc caaaatagaa tagaggatcc agagttatct 300
aataatttct tatatgaatg ggtctagatt taacaaaaat gaatcaaaat catttatgta 360
tgattattct actttatata tatgaggaaa cttaaaaggt tattttttta ttattatgat 420
attgatatag aatatttatc aatttttttg aaaattattt tttgatataa aatctgattg 480
accattttta ataaattttt tccttacaat gacgtttttt tatatacaag atgaatttaa 540
aattttaatt atggggatcg aatttaaata tcgattaatg acttaatgat actctaagct 600
aatttagttt tacataattg agaatgaggc accaacattc ttgtggtaat attaaatttt 660
ctgttgactt ttttttacgt aaatgatact tgattagaag atgactaata aatgaaggct 720
ttacatatac tacataagaa ggaggtggag aaagtgtatg taaccgacaa caaaaaacta 780
ataggaatat ataggatgaa gagatgagag aaccatcaca gaattgacgc ttagacaact 840
taataacaca ttgcggatac ggccatgctg gccgcccggg catggtaccc aattcccgat 900
ctagtaacat agatgacacc gcgcgcgata atttatccta gtttgcgcgc tatattttgt 960
tttctatcgc gtattaaatg tataattgcg ggactctaat cataaaaacc catctcataa 1020
ataacgtcat gcattacatg ttaattatta catgcttaac gtaattcaac agaaattata 1080
tgataatcat cgcaagaccg gcaacaggat tcaatcttaa gaaactttat tgccaaatgt 1140
ttgaacgatc ggggaaattc ggggatctag agctcgactc atatctgggt aactggccta 1200
actggccttg gaggagctgg caactcaaaa tccctttgcc aaaaaccaac atcatgccat 1260
ccaccatgct tgtatccagc tgcgcgcaat gtaccccggg ctgtgtatcc caaagcctca 1320
tgcaacctaa cagatggatc gtttggaagg cctataacag caaccacaga cttaaaacct 1380
tgcgcctcca tagacttaag caaatgtgtg tacaatgtag atcctaggcc caacctttga 1440
- 40 032683
tgcctatgtg acacgtaaac agtactctca actgtccaat cgtaagcgtt cctagccttc 1500
cagggcccag cgtaagcaat accagccaca acaccctcaa cctcagcaac caaccaaggg 1560
tatctatctt gcaacctctc tagatcatca atccactctt gtggtgtttg tggctctgtc 1620
ctaaagttca ctgtagacgt ctcaatgtaa tggttaacga tatcacaaac cgcggccata 1680
tcagctgctg tagctggcct aatctcaact ggtctcctct ccggagacat ggtgggatcc 1740
tgtaattgta aatagtaatt gtaatgttgt ttgttgtttg ttgttgttgg taattgttgt 1800
aaaaatactc gagggtttat gtttttacaa acgactccaa caaagtatca agttttattc 1860
aaacagaatg atacagattt aaatatcggg ttttatacaa accatatgat atttatcaat 1920
tcagtgatcc tatacggacg gtggagacaa aaatcatcaa gaatcatctt tgagatgaga 1980
aagcttagct cttacctgtt ttcgtcgtct tggcttttct tcttcctggc cacctgcctg 2040
aatacttcgc cgccttgact acttctaggc tacttgctct ctttctctct ctaggactat 2100
ctctctgaga ttttgctccc ttaacaatga gggaggggct aagtatttat agactgacgg 2160
gtgagtggac atttcccaaa ctacccttac ttatttcgta agcccttacg tcattgctcc 2220
attattggag tctgaagatg ccttcacatg gtggaccccc acctgtcggc cacgaatctt 2280
atttgttcgt cagaaaaagc caaaccgact gcacagtttt tccatcgtgg tagggaccac 2340
tttggtattg attaaaggca gccgacctaa cctttgtcag acgcattatt tcacgcgttt 2400
tcttttacag attccatctt catttgtggg acagtatgtc tgccactttg tctgccagta 2460
attaaacgcg gtccggatct agtaacatag atgacaccgc gcgcgataat ttatcctagt 2520
ttgcgcgcta tattttgttt tctatcgcgt attaaatgta taattgcggg actctaatca 2580
taaaaaccca tctcataaat aacgtcatgc attacatgtt aattattaca tgcttaacgt 2640
aattcaacag aaattatatg ataatcatcg caagaccggc aacaggattc aatcttaaga 2700
aactttattg ccaaatgttt gaacgatctg caggtcgacc catggcgccg atatcactag 2760
ttcagatctg ggtaactggc ctaactggcc ttggaggagc tggcaactca aaatcccttt 2820
gccaaaaacc aacatcatgc catccaccat gcttgtatcc agctgcgcgc aatgtacccc 2880
gggctgtgta tcccaaagcc tcatgcaacc taacagatgg atcgtttgga aggcctataa 2940
cagcaaccac agacttaaaa ccttgcgcct ccatagactt aagcaaatgt gtgtacaatg 3000
tggatcctag gcccaacctt tgatgcctat gtgacacgta aacagtactc tcaactgtcc 3060
aatcgtaagc gttcctagcc ttccagggcc cagcgtaagc aataccagcc acaacaccct 3120
caacctcagc aaccaaccaa gggtatctat cttgcaacct ctctagatca tcaatccact 3180
cttgtggtgt ttgtggctct gtcctaaagt tcactgtaga cgtctcaatg taatggttaa 3240
cgatatcaca aaccgcggcc atatcagctg ctgtagctgg cctaatctca actggtctcc 3300
tctccggaga catggtggac tagtgatttc agcgtgtcct ctccaaatga aatgaacttc 3360
cttatataga ggaagggtct tgcgaaggat agtgggattg tgcgtcatcc cttacgtcag 3420
tggagatatc acatcaatcc acttgctttg aagacgtggt tggaacgtct tctttttcca 3480
cgatgctcct cgtgggtggg ggtccatctt tgggaccact gtcggcagag gcatcttcaa 3540
cgatggcctt tcctttatcg caatgatggc atttgtagga gccaccttcc ttttccacta 3600
tcttcacaat aaagtgacag atagctgggc aatggaacct ttgctgctgc acatggactt 3660
gctgtcagat ctgttggagc ttaatatccg gaaacctcct cggattccat tgcccagcta 3720
tctgtcactt tattgtgaag atagtggaaa aggaaggtgg ctcctacaaa tgccatcatt 3780
gcgataaagg aaaggctatc gttgaagatg cctctgccga cagtggtccc aaagatggac 3840
ccccacccac gaggagcatc gtggaaaaag aagacgttcc aaccacgtct tcaaagcaag 3900
tggattgatg tgatatctcc actgacgtaa gggatgacga acaatcccac tatccttctg 3960
caggtcgact ctagaggatc ctataaatag gaagttcatt tcatttggag aggaaacctc 4020
gagtattttt acaacaatta ccaacaacaa caaacaacaa acaacattac aattactatt 4080
tacaattaca catatgcctc caacaccagc tactgctact ggagctgctg ctgctgccgt 4140
tacaccagaa catgctgcaa ggtcattccc tagagttgtt cgcgttaacc ctaggtctga 4200
cagattccct gttctgtcct tccatcatgt ggagctttgg tgtgctgatg cagctagtgc 4260
tgctggtcgt ttcagctttg cacttggagc accacttgct gcaagatctg atctgtctac 4320
agggaactca gcacatgctt ctctcctact tcgatctgga gcattagcct tcctttttac 4380
cgctccttat gctccacctc cacaagaagc tgcaactgct gcaactgctt ccattccctc 4440
cttttcagca gatgctgcaa gaacctttgc tgctgcacat ggacttgctg tcagatctgt 4500
tggagttagg gttgctgatg cagctgaagc atttcgcgtt agtgttgctg gaggagcaag 4560
acctgctttt gctccagcag atcttggtca cggatttgga cttgctgaag tggagctgta 4620
tggagatgtg gttctgagat tcgtgagcta tcctgacgaa actgacctac catttctccc 4680
aggattcgag agggtttcaa gtccaggtgc agttgactac ggtttgactc gctttgacca 4740
cgttgttgga aacgttccag aaatggctcc tgtcatcgac tacatgaagg gattccttgg 4800
tttccacgag ttcgctgaat tcacagcaga ggatgttgga accacagaat ctggactgaa 4860
cagtgtggtt ctagccaaca acagtgaagc tgttcttctg ccattgaacg agcctgttca 4920
tggaaccaag agacgatctc agatccaaac ctacctcgaa taccatggtg gaccaggagt 4980
tcaacacatc gcattggctt ctaacgatgt gcttcgaact ctcagggaaa tgagagccag 5040
aactccaatg ggagggttcg aatttatggc tcctccacaa gccaagtact atgaaggagt 5100
ccgtagaatc gctggagatg tcttgtcaga ggaacagatc aaggagtgtc aagaactggg 5160
tgttctcgtt gatcgagacg atcaaggtgt gctactccag atcttcacca aaccagttgg 5220
tgatcgtccc acttttttcc tcgaaatgat tcagcgaata ggatgcatgg agaaggatga 5280
agttgggcaa gagtaccaga aaggtggatg tggtgggttt ggaaagggga acttttccga 5340
gttgttcaag tccatagagg actacgagaa gtcactggaa gtcaagcagt ctgtcgttgc 5400
tcagaagagc taagagctct tcatatgacg atcgttcaaa catttggcaa taaagtttct 5460
taagattgaa tcctgttgcc ggtcttgcga tgattatcat ataatttctg ttgaattacg 5520
ttaagcatgt aataattaac atgtaatgca tgacgttatt tatgagatgg gtttttatga 5580
ttagagtccc gcaattatac atttaatacg cgatagaaaa caaaatatag cgcgcaaact 5640
aggataaatt atcgcgcgcg gtgtcatcta tgttactaga tcgcggaccc agtcaaagat 5700
tcaaatagag gacctaacag aactcgccgt aaagactggc gaacagttca tacagagtct 5760
cttacgactc aatgacaaga agaaaatctt cgtcaacatg gtggagcacg acacgcttgt 5820
ctactccaaa aatatcaaag atacagtctc agaagaccaa agggcaattg agacttttca 5880
acaaagatga cttttcaaca aagggtaata tccggaaacc tcctcggatt ccattgccca 5940
gctatctgtc actttattgt gaagatagtg gaaaaggaag gtggctccta caaatgccat 6000
cattgcgata aaggaaaggc catcgttgaa gatgcctctg ccgacagtgg tcccaaagat 6060
ggacccccac ccacgaggag catcgtggaa aaagaagacg ttccaaccac gtcttcaaag 6120
caagtggatt gatgtgatat ctccactgac gtaagggatg acgcacaatc ccactatcct 6180
tcgcaagacc cttcctctat ataaggaagt tcatttcatt tggagaggac acgctgaaat 6240
cactagtcca ccatgtctcc ggagaggaga ccagttgaga ttaggccagc tacagcagct 6300
gatatggccg cggtttgtga tatcgttaac cattacattg agacgtctac agtgaacttt 6360
aggacagagc cacaaacacc acaagagtgg attgatgatc tagagaggtt gcaagataga 6420
tacccttggt tggttgctga ggttgagggt gttgtggctg gtattgctta cgctgggccc 6480
tggaaggcta ggaacgctta cgattggaca gttgagagta ctgtttacgt gtcacatagg 6540
catcaaaggt tgggcctagg atccacattg tacacacatt tgcttaagtc tatggaggcg 6600
caaggtttta agtctgtggt tgctgttata ggccttccaa acgatccatc tgttaggttg 6660
catgaggctt tgggatacac agcccggggt acattgcgcg cagctggata caagcatggt 6720
ggatggcatg atgttggttt ttggcaaagg gattttgagt tgccagctcc tccaaggcca 6780
gttaggccag ttacccagat ctgaactagt gatatcggcg ccatgggtcg acctgcagat 6840
cgttcaaaca tttggcaata aagtttctta agattgaatc ctgttgccgg tcttgcgatg 6900
attatcatat aatttctgtt gaattacgtt aagcatgtaa taattaacat gtaatgcatg 6960
acgttattta tgagatgggt ttttatgatt agagtcccgc aattatacat ttaatacgcg 7020
atagaaaaca aaatatagcg cgcaaactag gataaattat cgcgcgcggt gtcatctatg 7080
- 42 032683
ttactagatc cggaccgcgt ttaattactg gcagacaaag tggcagacat actgtcccac 7140
aaatgaagat ggaatctgta aaagaaaacg cgtgaaataa tgcgtctgac aaaggttagg 7200
tcggctgcct ttaatcaata ccaaagtggt ccctaccacg atggaaaaac tgtgcagtcg 7260
gtttggcttt ttctgacgaa caaataagat tcgtggccga caggtggggg tccaccatgt 7320
gaaggcatct tcagactcca ataatggagc aatgacgtaa gggcttacga aataagtaag 7380
ggtagtttgg gaaatgtcca ctcacccgtc agtctataaa tacttagccc ctccctcatt 7440
gttaagggag caaaatctca gagagatagt cctagagaga gaaagagagc aagtagccta 7500
gaagtagtca aggcggcgaa gtattcaggc aggtggccag gaagaagaaa agccaagacg 7560
acgaaaacag gtaagagcta agctttctca tctcaaagat gattcttgat gatttttgtc 7620
tccaccgtcc gtataggatc actgaattga taaatatcat atggtttgta taaaacccga 7680
tatttaaatc tgtatcattc tgtttgaata aaacttgata ctttgttgga gtcgtttgta 7740
aaaacataaa ccctcgagta tttttacaac aattaccaac aacaacaaac aacaaacaac 7800
attacaatta ctatttacaa ttacaggatc ccaccatgtc tccggagagg agaccagttg 7860
agattaggcc agctacagca gctgatatgg ccgcggtttg tgatatcgtt aaccattaca 7920
ttgagacgtc tacagtgaac tttaggacag agccacaaac accacaagag tggattgatg 7980
atctagagag gttgcaagat agataccctt ggttggttgc tgaggttgag ggtgttgtgg 8040
ctggtattgc ttacgctggg ccctggaagg ctaggaacgc ttacgattgg acagttgaga 8100
gtactgttta cgtgtcacat aggcatcaaa ggttgggcct aggatctaca ttgtacacac 8160
atttgcttaa gtctatggag gcgcaaggtt ttaagtctgt ggttgctgtt ataggccttc 8220
caaacgatcc atctgttagg ttgcatgagg ctttgggata cacagcccgg ggtacattgc 8280
gcgcagctgg atacaagcat ggtggatggc atgatgttgg tttttggcaa agggattttg 8340
agttgccagc tcctccaagg ccagttaggc cagttaccca gatatgagtc gagctctaga 8400
tccccgaatt tccccgatcg ttcaaacatt tggcaataaa gtttcttaag attgaatcct 8460
gttgccggtc ttgcgatgat tatcatataa tttctgttga attacgttaa gcatgtaata 8520
attaacatgt aatgcatgac gttatttatg agatgggttt ttatgattag agtcccgcaa 8580
ttatacattt aatacgcgat agaaaacaaa atatagcgcg caaactagga taaattatcg 8640
cgcgcggtgt catctatgtt actagatcgg gaattgggta ccatgcccgg gcggccagca 8700
tggccgtatc cgcaatgtgt tattaagttg tctaaaccct aaaccaatgg cacacaaaaa 8760
ttcccatcct agtttttgga gtaattaatg aactagcaat tatataataa gctctgtatc 8820
tgttatattc tgcattaatt ttgttgaata aaaaacactg taaattaatt ggtcatgtgt 8880
tatattttgc acactaattt tttttttaaa aaaggtggga gagcgtgata tttttagttg 8940
tccagaaaat aaagattgaa aaatttgaat gtatttggca cgtgggatac tttaaaaatt 9000
agaaggcacc ttattgttta cttcgatcgg agaaaaataa taaaatcctt tatatgttaa 9060
tttatttcaa tttgtatgtc tgtagtagga atattaaagt agacatttat cattaatctc 9120
attattagtc tttccttttg tagaatctcg ttaattttat taactaactt ttaaataact 9180
ctctagagga atggaacaaa ataata 9206 <210> 11 <211> 14 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> PCR-праймер <400>11 cgggcggcca gcat14 <210> 12 <211>24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> PCR-праймер <400> 12 gtgccattgg tttagggttt agac <210>
<211>
<212>
ДНК <213>
Искусственная последовательность <220>
<223>
Зонд для анализа TAQMAN <400:
<210>
<211>
<212>
ДНК <213>
Искусственная последовательность <220>
<223>
PCR-праймер :400>
<210>
<211>
<212>
ДНК <213>
Искусственная последовательность <220>
<223>
PCR-праймер <400>
ggatgaagag atgagagaac catca <210>
<211>
<212>
ДНК <213>
Искусственная последовательность <220>
<223>
<400>
Зонд для анализа TAQMAN
<210>
<211:
<212>
ДНК <213>
Искусственная последовательность <220>
<223>
PCR-праймер <400>
caa
<210>
<211>
<212>
ДНК <213>
Искусственная последовательность <220>
<223>
PCR-праймер <400>
<210>
<211>
<212>
ДНК <213>
Искусственная последовательность <220>
<223>
PCR-праймер <400>
aaatatcacg ctctccca <210> 20 <211> 26 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
- 44 032683 <223> PCR-праймер <400>20 actacataag aaggaggtgg agaaag26 <210> 21 <211>29 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> PCR-праймер <400> 21 gaggtggaga aagtgtatgt aaccgacaa 29 <210> 22 <211> 66 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> PCR-продукт, полученный из Glycine max и Avena sativa <400>22 cgggcggcca gcatggccgt atccgcaatg tgttattaag ttgtctaaac cctaaaccaa60 tggcac66 <210>23 <211>70 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> PCR-продукт, полученный из Glycine max и Avena sativa <400> 23
ggatgaagag atgagagaac catcacagaa ttgacgctta gacaacttaa taacacattg 60
cggatacggc 70
<210> 24 <211> 217 <212> ДНК <213> Glycine max
<400> 24 ttacatatac tacataagaa ggaggtggag aaagtgtatg taaccgacaa caaaaaacta 60
ataggaatat ataggatgaa gagatgagag aaccatcaca gattggacgg tgggggacca 120
atggcacaca aaaattccca tcctagtttt tggagtaatt aatgaactag caattatata 180
ataagctctg tatctgttat attctgcatt aattttg 217
<210> 25 <211> 21 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> PCR-праймер <400>25 ttttgtggtc gtcactgcgt t21 <210> 26 <211>40 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> PCR-праймер <400>26 caggatatat tgtggtgtaa acaaattgac gcttagacaa40 <210>27 <211>35 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> PCR-праймер <400> 27 gagtcccgca attatacatt taatacgcga tagaa <210> 28 <211> 29 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> PCR-праймер <400>
ggccagcatg gccgtatccg caatgtgtt

Claims (4)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Набор для идентификации области нуклеиновой кислоты, которая указывает на устойчивое к гербицидам трансгенное растение сои, содержащее последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, в биологическом образце, включающий первый и второй праймеры, которые при использовании вместе образуют ампликон, содержащий SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2 или комплементарные им последовательности.
  2. 2. Набор по п.1, который дополнительно включает зонд для обнаружения амплифицированного специфического участка SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2 или комплементарных им последовательностей.
  3. 3. Набор по п.1 или 2, где (a) первый праймер содержит полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 11, и второй праймер содержит полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 12;
    (b) первый праймер содержит полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 14, и второй праймер содержит полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 15;
    (c) первый праймер содержит полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 17, и второй праймер содержит полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 18;
    (d) первый праймер содержит полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 17, и второй праймер содержит полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 19;
    (e) первый праймер содержит полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 17, и второй праймер содержит полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 20; или (f) первый праймер содержит полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 17, и второй праймер содержит полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 21.
  4. 4. Набор для идентификации области нуклеиновой кислоты, которая указывает на устойчивое к гербицидам трансгенное растение сои, содержащее последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, в биологическом образце, включающий по меньшей мере один зонд для нуклеиновой кислоты, который гибридизуется в жестких условиях с SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2 или комплементарными им последовательностями.
EA201600085A 2010-12-15 2011-12-09 Набор для идентификации события syht0h2 в биологическом образце (варианты) EA032683B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US42313110P 2010-12-15 2010-12-15
US201161467621P 2011-03-25 2011-03-25

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201600085A1 EA201600085A1 (ru) 2016-05-31
EA032683B1 true EA032683B1 (ru) 2019-07-31

Family

ID=46245292

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201600085A EA032683B1 (ru) 2010-12-15 2011-12-09 Набор для идентификации события syht0h2 в биологическом образце (варианты)
EA201600078A EA031633B1 (ru) 2010-12-15 2011-12-09 Хромосомный целевой сайт растения сои, растение сои или его часть, способ получения трансгенного растения сои
EA201300707A EA031999B1 (ru) 2010-12-15 2011-12-09 Соевое событие syht0h2, а также композиции и способы его обнаружения

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201600078A EA031633B1 (ru) 2010-12-15 2011-12-09 Хромосомный целевой сайт растения сои, растение сои или его часть, способ получения трансгенного растения сои
EA201300707A EA031999B1 (ru) 2010-12-15 2011-12-09 Соевое событие syht0h2, а также композиции и способы его обнаружения

Country Status (20)

Country Link
US (2) US10184134B2 (ru)
EP (1) EP2651209B1 (ru)
JP (3) JP6278446B2 (ru)
KR (1) KR101981250B1 (ru)
CN (3) CN104745693B (ru)
AR (1) AR084284A1 (ru)
AU (1) AU2011344222B9 (ru)
BR (1) BR112013014395A2 (ru)
CA (2) CA2821101C (ru)
CL (1) CL2013001717A1 (ru)
CO (1) CO6731109A2 (ru)
EA (3) EA032683B1 (ru)
EC (1) ECSP13012758A (ru)
ES (1) ES2668656T3 (ru)
MX (3) MX349466B (ru)
TW (1) TWI667347B (ru)
UA (1) UA116972C2 (ru)
UY (2) UY33795A (ru)
WO (1) WO2012082548A2 (ru)
ZA (1) ZA201304337B (ru)

Families Citing this family (297)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112014004275A2 (pt) 2011-08-25 2017-03-21 Syngenta Participations Ag derivados de isoxazolina como compostos inseticidas
JP6061934B2 (ja) 2011-08-25 2017-01-18 シンジェンタ パーティシペーションズ アーゲー 殺虫化合物としてのイソオキサゾリン誘導体
WO2013026929A1 (en) 2011-08-25 2013-02-28 Syngenta Participations Ag Dihydropyrrole derivatives as insecticidal compounds
EP3190110B1 (en) 2011-09-13 2020-01-08 Syngenta Participations AG Isothiazoline derivatives as insecticidal compounds
EP2763970A1 (en) 2011-10-03 2014-08-13 Syngenta Participations AG Isoxazoline derivatives as insecticidal compounds
WO2013050317A1 (en) 2011-10-03 2013-04-11 Syngenta Limited Polymorphs of an isoxazoline derivative
EP2782920B1 (en) 2011-11-21 2016-12-21 Bayer Intellectual Property GmbH Fungicide n-[(trisubstitutedsilyl)methyl]-carboxamide derivatives
RU2014126063A (ru) 2011-11-30 2016-01-27 Байер Интеллекчуал Проперти Гмбх ФУНГИЦИДНЫЕ N-БИЦИКЛОАЛКИЛ и N-ТРИЦИКЛОАЛКИЛ(ТИО)КАРБОКСАМИДНЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ
JP5976837B2 (ja) 2011-12-29 2016-08-24 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ 殺菌性３−［（１，３−チアゾール−４−イルメトキシイミノ）（フェニル）メチル］−２−置換−１，２，４−オキサジアゾール−５（２ｈ）−オン誘導体
WO2013098147A1 (en) 2011-12-29 2013-07-04 Bayer Intellectual Property Gmbh Fungicidal 3-[(pyridin-2-ylmethoxyimino)(phenyl)methyl]-2-substituted-1,2,4-oxadiazol-5(2h)-one derivatives
US20150011389A1 (en) 2012-01-25 2015-01-08 Bayer Intellectual Property Gmbh Active Compound Combinations Containing Fluopyram and Biological Control Agent
WO2013135674A1 (en) 2012-03-12 2013-09-19 Syngenta Participations Ag Insecticidal 2-aryl-acetamide compounds
WO2014019957A2 (en) 2012-08-03 2014-02-06 Syngenta Participations Ag Methods of pest control in soybean
MX364818B (es) 2012-08-24 2019-05-08 Syngenta Participations Ag Métodos para control de plagas del suelo.
WO2014029709A1 (en) 2012-08-24 2014-02-27 Syngenta Participations Ag Methods of controlling insects
EP2887809B1 (en) 2012-08-24 2018-11-21 Syngenta Participations AG Methods of controlling insects
WO2014036231A2 (en) * 2012-08-30 2014-03-06 Monsanto Technology Llc Molecular markers and phenotypic screening for metribuzin tolerance
CN104736699B (zh) 2012-09-14 2020-04-14 拜尔作物科学有限合伙公司 Hppd变体及使用方法
EP2906043A1 (en) 2012-10-10 2015-08-19 Syngenta Participations AG Pesticidal mixtures
PL2908640T3 (pl) 2012-10-19 2020-06-29 Bayer Cropscience Ag Sposób stymulowania wzrostu roślin przy pomocy pochodnych karboksamidu
BR112015008798B1 (pt) 2012-10-19 2020-03-17 Bayer Cropscience Ag Método para o tratamento de plantas contra fungos fitopatogênicos resistentes a um fungicida SDHI
WO2014060502A1 (en) 2012-10-19 2014-04-24 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations comprising carboxamide derivatives
EA025862B1 (ru) 2012-10-19 2017-02-28 Байер Кропсайенс Аг Способ повышения устойчивости к абиотическому стрессу в растениях с использованием производных карбоксамида или тиокарбоксамида
UA117816C2 (uk) * 2012-11-06 2018-10-10 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт Гербіцидна комбінація для толерантних соєвих культур
WO2014079935A1 (en) 2012-11-21 2014-05-30 Syngenta Participations Ag Insecticidal compounds based on arylthioacetamide derivatives
WO2014090765A1 (en) 2012-12-12 2014-06-19 Bayer Cropscience Ag Use of 1-[2-fluoro-4-methyl-5-(2,2,2-trifluoroethylsulfinyl)phenyl]-5-amino-3-trifluoromethyl)-1 h-1,2,4 tfia zole for controlling nematodes in nematode-resistant crops
WO2014131837A1 (en) 2013-02-28 2014-09-04 Syngenta Participations Ag Isoxaline derivatives for use in cotton plants
MX369500B (es) 2013-03-07 2019-11-11 Athenix Corp Genes de toxinas y métodos para su uso.
CA2909725A1 (en) 2013-04-19 2014-10-23 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
BR112015024506A2 (pt) * 2013-04-30 2017-10-24 Basf Se métodos para controlar vegetação, para identificar uma heteroarila, para identificar uma sequência de nucleotídeos, para produzir uma célula vegetal e para produzir uma planta, ácido nucleico, célula vegetal, plantas e semente
WO2014177514A1 (en) 2013-04-30 2014-11-06 Bayer Cropscience Ag Nematicidal n-substituted phenethylcarboxamides
TW201507722A (zh) 2013-04-30 2015-03-01 Bayer Cropscience Ag 做為殺線蟲劑及殺體內寄生蟲劑的ｎ－（２－鹵素－２－苯乙基）－羧醯胺類
EP2992103A4 (en) * 2013-04-30 2017-01-11 Basf Se Plants having increased tolerance to herbicides
RU2662191C1 (ru) * 2013-12-20 2018-07-24 ДАУ АГРОСАЙЕНСИЗ ЭлЭлСи Синергический гербицидный контроль сорной растительности
EP3117003B1 (en) 2014-03-11 2019-10-30 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Hppd variants and methods of use
US9635854B2 (en) * 2014-03-31 2017-05-02 Fmc Corporation Controlling red rice with mesotrione
CN104388579B (zh) * 2014-12-16 2018-11-09 上海速芯生物科技有限公司 一种转基因大豆及其衍生品种的Arm-PCR检测方法
EP3097782A1 (en) 2015-05-29 2016-11-30 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Methods for controlling phytopathogenic nematodes by combination of fluopyram and biological control agents
CN105002291B (zh) * 2015-08-10 2018-01-12 吉林省农业科学院 转基因大豆mon87708的lamp检测引物组、试剂盒及检测方法
WO2017044310A1 (en) * 2015-09-09 2017-03-16 Syngenta Participations Ag Compositions and methods for protein detection
ES2933673T3 (es) 2015-09-11 2023-02-13 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Variantes de HPPD y métodos de uso
RU2758667C2 (ru) 2015-12-14 2021-11-01 Фмк Корпорейшн Замещенные по гетероциклу бициклические азол пестициды
CN105724139B (zh) * 2016-03-22 2018-10-30 北京大北农科技集团股份有限公司 除草剂耐受性蛋白质的用途
CN106086010B (zh) * 2016-06-18 2019-10-18 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性大豆植物dbn9008的核酸序列及其检测方法
CN106086011B (zh) * 2016-06-18 2019-10-18 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性大豆植物dbn9004的核酸序列及其检测方法
CN106119245B (zh) * 2016-06-18 2019-10-18 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性大豆植物dbn9001的核酸序列及其检测方法
GB201618266D0 (en) 2016-10-28 2016-12-14 Syngenta Participations Ag Improvements in or relating to organic compounds
AU2017365169B2 (en) 2016-11-23 2022-07-21 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Axmi669 and Axmi991 toxin genes and methods for their use
BR112019011293A2 (pt) 2016-12-19 2019-10-08 Basf Se compostos de fórmula i, intermediários, composição agroquímica, uso e método para combater fungos nocivos fitopatogênicos
AU2017382305A1 (en) 2016-12-22 2019-07-18 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Use of CRY14 for the control of nematode pests
AU2017382330A1 (en) 2016-12-22 2019-06-20 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Elite event EE-GM4 and methods and kits for identifying such event in biological samples
MX2019007593A (es) 2016-12-22 2019-12-02 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Evento de elíte ee-gm5 y métodos y kits para identificar dicho evento en muestras biológicas.
GB201622007D0 (en) 2016-12-22 2017-02-08 And See Cambridge Display Tech Ltd Syngenta Participations Ag Polymorphs
UA124167C2 (uk) 2016-12-22 2021-07-28 Сінгента Партісіпейшнс Аг Поліморфи
EP3571303A1 (en) 2017-01-18 2019-11-27 Basf Agricultural Solutions Seed Us Llc Bp005 toxin gene and methods for its use
WO2018136611A1 (en) 2017-01-18 2018-07-26 Bayer Cropscience Lp Use of bp005 for the control of plant pathogens
BR112019015338B1 (pt) 2017-02-21 2023-03-14 Basf Se Compostos de fórmula i, composição agroquímica, semente revestida, uso dos compostos e método para combater fungos nocivos fitopatogênicos
UY37623A (es) 2017-03-03 2018-09-28 Syngenta Participations Ag Derivados de oxadiazol tiofeno fungicidas
BR112019018056A2 (pt) 2017-03-07 2020-08-11 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC molécula de ácido nucleico recombinante, cassete de expressão, célula hospedeira, plantas, sementes transgênicas, polipeptídeo recombinante, métodos para conferir tolerância e para controlar ervas daninhas, produto de utilidade e uso da sequência de nucleotídeos
JP7146797B2 (ja) 2017-03-31 2022-10-04 シンジェンタ パーティシペーションズ アーゲー 殺菌性組成物
WO2018177880A1 (en) 2017-03-31 2018-10-04 Syngenta Participations Ag Fungicidal compositions
CN110506040A (zh) 2017-04-03 2019-11-26 先正达参股股份有限公司 杀微生物的噁二唑衍生物
BR112019021019B1 (pt) 2017-04-05 2023-12-05 Syngenta Participations Ag Compostos derivados de oxadiazol microbiocidas, composição agrícola, método para controlar ou prevenir a infestação de plantas úteis por microrganismos fitopatogênicos e uso de um composto derivado de oxadiazol
BR112019020819B1 (pt) 2017-04-05 2023-12-05 Syngenta Participations Ag Composto de fórmula (i), composição agroquímica, método para controlar ou prevenir a infestação de plantas úteis por micro-organismos fitopatogênicos e uso de um composto de fórmula (i)
BR112019020735B1 (pt) 2017-04-05 2023-12-05 Syngenta Participations Ag Compostos derivados de oxadiazol microbiocidas e seu uso, composição agroquímica e método para controlar ou prevenir a infestação de plantas úteis por microrganismos fitopatogênicos
WO2018184986A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 Syngenta Participations Ag Microbiocidal oxadiazole derivatives
WO2018184985A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 Syngenta Participations Ag Microbiocidal oxadiazole derivatives
BR112019020756B1 (pt) 2017-04-05 2023-11-28 Syngenta Participations Ag Compostos derivados de oxadiazol microbicidas, composição agroquímica compreendendo os mesmos, método para controlar ou prevenir a infestação de plantas úteis por microrganismos fitopatogênicos e uso desses compostos
WO2018185211A1 (en) 2017-04-06 2018-10-11 Syngenta Participations Ag Microbiocidal oxadiazole derivatives
EP3606912A1 (en) 2017-04-07 2020-02-12 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018188962A1 (en) 2017-04-11 2018-10-18 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018195256A1 (en) 2017-04-21 2018-10-25 Bayer Cropscience Lp Method of improving crop safety
CN110621669A (zh) 2017-05-04 2019-12-27 巴斯夫欧洲公司 防除植物病原性真菌的取代5-卤代烷基-5-羟基异噁唑类
WO2018202491A1 (en) 2017-05-04 2018-11-08 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018219797A1 (en) 2017-06-02 2018-12-06 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
BR112019024993A2 (pt) 2017-06-02 2020-06-16 Syngenta Participations Ag Composições fungicidas
WO2018219825A1 (en) 2017-06-02 2018-12-06 Syngenta Participations Ag Microbiocidal oxadiazole derivatives
US11154058B2 (en) 2017-06-14 2021-10-26 Syngenta Participations Ag Fungicidal compositions
WO2018234139A1 (en) 2017-06-19 2018-12-27 Basf Se 2 - [[5- (TRIFLUOROMETHYL) -1,2,4-OXADIAZOL-3-YL] ARYLOXY] (THIO) ACETAMIDES FOR THE CONTROL OF PHYTOPATHOGENIC FUNGI
KR20200022452A (ko) 2017-06-28 2020-03-03 신젠타 파티서페이션즈 아게 살진균 조성물
WO2019011923A1 (en) 2017-07-11 2019-01-17 Syngenta Participations Ag MICROBIOCIDE OXADIAZOLE DERIVATIVES
WO2019011926A1 (en) 2017-07-11 2019-01-17 Syngenta Participations Ag MICROBIOCIDE OXADIAZOLE DERIVATIVES
BR112020000456A2 (pt) 2017-07-11 2020-07-21 Syngenta Participations Ag derivados oxadiazol microbiocidas
BR112020000470A2 (pt) 2017-07-11 2020-07-21 Syngenta Participations Ag derivados oxadiazol microbiocidas
BR112020000414A2 (pt) 2017-07-12 2020-07-21 Syngenta Participations Ag derivados de oxadiazol microbicidas
WO2019012011A1 (en) 2017-07-12 2019-01-17 Syngenta Participations Ag MICROBIOCIDE OXADIAZOLE DERIVATIVES
WO2019012003A1 (en) 2017-07-13 2019-01-17 Syngenta Participations Ag MICROBIOCIDE OXADIAZOLE DERIVATIVES
WO2019025250A1 (en) 2017-08-04 2019-02-07 Basf Se SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR COMBATING PHYTOPATHOGENIC FUNGI
BR122023021519A2 (pt) 2017-08-09 2024-01-09 Basf Se Mistura de herbicidas, composição pesticida e método de controle de vegetação
WO2019038042A1 (en) 2017-08-21 2019-02-28 Basf Se SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR THE CONTROL OF PHYTOPATHOGENIC FUNGI
BR112020004441B1 (pt) 2017-09-18 2024-01-16 Basf Se Compostos da fórmula i, composição agroquímica, semente revestida, uso de compostos e método não-terapêutico de combate de fungos
UY37913A (es) 2017-10-05 2019-05-31 Syngenta Participations Ag Derivados de picolinamida fungicidas que portan un grupo terminal cuaternario
UY37912A (es) 2017-10-05 2019-05-31 Syngenta Participations Ag Derivados de picolinamida fungicidas que portan grupos terminales heteroarilo o heteroariloxi
BR112020008096A2 (pt) 2017-10-24 2020-11-03 Basf Se método para conferir tolerância a um herbicida e planta de soja transgênica
US11279944B2 (en) 2017-10-24 2022-03-22 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Of herbicide tolerance to 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase (HPPD) inhibitors by down-regulation of HPPD expression in soybean
US11291205B2 (en) 2017-11-15 2022-04-05 Syngenta Participations Ag Microbiocidal picolinamide derivatives
EP3713936B1 (en) 2017-11-23 2021-10-20 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2019121143A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Basf Se Substituted cyclopropyl derivatives
WO2019137995A1 (en) 2018-01-11 2019-07-18 Basf Se Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests
BR112020013680A2 (pt) 2018-01-29 2020-12-01 BASF Agro B.V. formulações agroquímicas, uso de formulações e método para controlar insetos
BR112020014817A2 (pt) 2018-02-07 2020-12-08 Basf Se Uso dos compostos de fórmula i, compostos de fórmula i, composição, uso de um composto de fórmula i, método para o combate de fungos fitopatogênicos e semente
WO2019154665A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 Basf Se New pyridine carboxamides
BR112020016805A2 (pt) 2018-03-01 2020-12-15 BASF Agro B.V. Composições fungicidas, métodos para controlar fungos nocivos fitopatogênicos, para melhorar a saúde de plantas e para a proteção de material de propagação vegetal, material de propagação vegetal e uso
WO2019207062A1 (en) 2018-04-26 2019-10-31 Syngenta Participations Ag Microbiocidal oxadiazole derivatives
WO2019219464A1 (en) 2018-05-15 2019-11-21 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2019224092A1 (en) 2018-05-22 2019-11-28 Basf Se Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides
JP2021525774A (ja) 2018-06-04 2021-09-27 バイエル アクチェンゲゼルシャフトＢａｙｅｒ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 除草活性二環式ベンゾイルピラゾール
GB201810047D0 (en) 2018-06-19 2018-08-01 Syngenta Participations Ag Improvements in or relating to organic compounds
US20210269426A1 (en) 2018-06-29 2021-09-02 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal oxadiazole derivatives
EP3818058A1 (en) 2018-07-02 2021-05-12 Syngenta Crop Protection AG 3-(2-thienyl)-5-(trifluoromethyl)-1,2,4-oxadiazole derivatives as agrochemical fungicides
BR112021000615A2 (pt) 2018-07-16 2021-04-13 Syngenta Crop Protection Ag Derivados oxadiazol microbiocidas
EP3613736A1 (en) 2018-08-22 2020-02-26 Basf Se Substituted glutarimide derivatives
EP3628158A1 (en) 2018-09-28 2020-04-01 Basf Se Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide
BR112021007156A2 (pt) 2018-10-17 2021-07-20 Syngenta Crop Protection Ag derivados de oxadiazol microbiocidas
GB201816931D0 (en) 2018-10-17 2018-11-28 Syngenta Participations Ag Improvements in or relating to organic compounds
AR116628A1 (es) 2018-10-18 2021-05-26 Syngenta Crop Protection Ag Compuestos microbiocidas
US20210347777A1 (en) 2018-10-23 2021-11-11 Basf Se Tricyclic pesticidal compounds
EP3643705A1 (en) 2018-10-24 2020-04-29 Basf Se Pesticidal compounds
EP3670501A1 (en) 2018-12-17 2020-06-24 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides
US20220024898A1 (en) 2019-01-11 2022-01-27 Basf Se Crystalline forms of 1-(1,2-dimethylpropyl)-n-ethyl-5-methyl-n-pyridazin-4-yl-pyrazole-4-carboxamide
EP3696177A1 (en) 2019-02-12 2020-08-19 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
WO2020165403A1 (en) 2019-02-15 2020-08-20 Syngenta Crop Protection Ag Phenyl substituted thiazole derivatives as microbiocidal compounds
TW202045010A (zh) 2019-02-20 2020-12-16 瑞士商先正達農作物保護公司 特特拉姆酸衍生物之用途
GB201903942D0 (en) 2019-03-22 2019-05-08 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal compounds
EP3953442A1 (de) * 2019-04-09 2022-02-16 Waldemar NEUMÜLLER Verfahren und vorrichtung zur industriellen gewinnung von rapskernöl und rapsproteinkonzentrat aus rapssaat
WO2020208095A1 (en) 2019-04-10 2020-10-15 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal picolinamide derivatives
CA3132321A1 (en) 2019-04-10 2020-10-15 Clemens Lamberth Fungicidal compositions
CN113923987A (zh) 2019-05-29 2022-01-11 巴斯夫欧洲公司 用于防除动物害虫的介离子咪唑鎓化合物和衍生物
EP3769623A1 (en) 2019-07-22 2021-01-27 Basf Se Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests
WO2020244969A1 (en) 2019-06-06 2020-12-10 Basf Se Pyridine derivatives and their use as fungicides
WO2020244970A1 (en) 2019-06-06 2020-12-10 Basf Se New carbocyclic pyridine carboxamides
JP2022536081A (ja) 2019-06-06 2022-08-12 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 殺菌ｎ－（ピリド－３－イル）カルボキサミド
WO2021004968A1 (en) 2019-07-05 2021-01-14 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal picolinamide derivatives
GB201910037D0 (en) 2019-07-12 2019-08-28 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal compounds
EP3766879A1 (en) 2019-07-19 2021-01-20 Basf Se Pesticidal pyrazole derivatives
MX2022000950A (es) 2019-07-22 2022-02-14 Bayer Ag 5-amino pirazoles y triazoles como plaguicidas.
WO2021013719A1 (en) 2019-07-23 2021-01-28 Bayer Aktiengesellschaft Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides
EP4003974A1 (en) 2019-07-23 2022-06-01 Bayer Aktiengesellschaft Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides
GB201910641D0 (en) 2019-07-25 2019-09-11 Syngenta Crop Protection Ag Improvments in or relating to organic compounds
WO2021022069A1 (en) 2019-08-01 2021-02-04 Bayer Cropscience Lp Method of improving cold stress tolerance and crop safety
EP3701796A1 (en) 2019-08-08 2020-09-02 Bayer AG Active compound combinations
WO2021058659A1 (en) 2019-09-26 2021-04-01 Bayer Aktiengesellschaft Rnai-mediated pest control
WO2021063735A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Basf Se New bicyclic pyridine derivatives
WO2021064075A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations comprising fatty acids
WO2021063736A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Basf Se Bicyclic pyridine derivatives
EP4041721B1 (en) 2019-10-09 2024-03-06 Bayer Aktiengesellschaft Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides
CN117567338A (zh) 2019-10-09 2024-02-20 拜耳公司 作为农药的新的杂芳基三唑化合物
EP4055010A1 (de) 2019-11-07 2022-09-14 Bayer Aktiengesellschaft Substituierte sulfonylamide zur bekämpfung tierischer schädlinge
WO2021097162A1 (en) 2019-11-13 2021-05-20 Bayer Cropscience Lp Beneficial combinations with paenibacillus
AR120445A1 (es) 2019-11-15 2022-02-16 Syngenta Crop Protection Ag N-tetrazolil o n-1,3,4-oxadiazolil benzamidas como herbicidas
US20220408727A1 (en) 2019-11-18 2022-12-29 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations comprising fatty acids
TW202134226A (zh) 2019-11-18 2021-09-16 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物
TW202136248A (zh) 2019-11-25 2021-10-01 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物
MX2022009333A (es) 2020-01-31 2022-10-07 Pairwise Plants Services Inc Supresion de la respuesta de evasion de la sombra en las plantas.
CN115551839A (zh) 2020-02-18 2022-12-30 拜耳公司 作为农药的杂芳基-三唑化合物
EP3708565A1 (en) 2020-03-04 2020-09-16 Bayer AG Pyrimidinyloxyphenylamidines and the use thereof as fungicides
UY39115A (es) 2020-03-05 2021-10-29 Syngenta Crop Protection Ag Mezclas fungicidas de derivados de arilo metoxiacrilato
CN115209736A (zh) 2020-03-05 2022-10-18 先正达农作物保护股份公司 杀真菌组合物
EP4135512A1 (en) 2020-04-16 2023-02-22 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for controlling meristem size for crop improvement
WO2021209490A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Bayer Aktiengesellschaft Cyclaminephenylaminoquinolines as fungicides
AU2021255800A1 (en) 2020-04-17 2022-11-03 Syngenta Crop Protection Ag Herbicidal compounds
US20230212163A1 (en) 2020-04-21 2023-07-06 Bayer Aktiengesellschaft 2-(het)aryl-substituted condensed heterocyclic derivatives as pest control agents
EP3903583A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iii
EP3903582A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ii
EP3903584A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iv
EP3903581A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors i
WO2021219513A1 (en) 2020-04-28 2021-11-04 Basf Se Pesticidal compounds
GB202006386D0 (en) 2020-04-30 2020-06-17 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal Compounds
GB202006399D0 (en) 2020-04-30 2020-06-17 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal compounds
GB202006480D0 (en) 2020-05-01 2020-06-17 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal compounds
GB202006606D0 (en) 2020-05-05 2020-06-17 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal compounds
EP4146628A1 (en) 2020-05-06 2023-03-15 Bayer Aktiengesellschaft Pyridine (thio)amides as fungicidal compounds
TW202208347A (zh) 2020-05-06 2022-03-01 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基三唑化合物
BR112022023012A2 (pt) 2020-05-12 2022-12-20 Bayer Ag (tio)amidas de triazina e pirimidina como compostos fungicidas
EP3909950A1 (en) 2020-05-13 2021-11-17 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
US20230192617A1 (en) 2020-05-19 2023-06-22 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Azabicyclic(thio)amides as fungicidal compounds
CN116096230A (zh) 2020-06-02 2023-05-09 成对植物服务股份有限公司 控制分生组织大小以改良作物的方法
EP4161906A1 (en) 2020-06-04 2023-04-12 Bayer Aktiengesellschaft Heterocyclyl pyrimidines and triazines as novel fungicides
EP3945089A1 (en) 2020-07-31 2022-02-02 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v
WO2021249800A1 (en) 2020-06-10 2021-12-16 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides
JP2023529475A (ja) 2020-06-10 2023-07-10 バイエル、アクチエンゲゼルシャフト 新規殺菌剤としてのアザビシクリル置換複素環
BR112022025598A2 (pt) 2020-06-17 2023-01-03 Pairwise Plants Services Inc Métodos para controlar o tamanho do meristema para melhoria da safra
CN116157017A (zh) 2020-06-18 2023-05-23 拜耳公司 作为杀菌剂用于作物保护的3-(哒嗪-4-基)-5,6-二氢-4h-1,2,4-噁二嗪衍生物
WO2021255118A1 (en) 2020-06-18 2021-12-23 Bayer Aktiengesellschaft Composition for use in agriculture
UY39276A (es) 2020-06-19 2022-01-31 Bayer Ag Uso de compuestos de 1,3,4–oxadiazol–2–ilpirimidina para controlar microorganismos fitopatógenos, métodos de uso y composiciones.
WO2021255091A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Bayer Aktiengesellschaft 1,3,4-oxadiazoles and their derivatives as fungicides
UY39275A (es) 2020-06-19 2022-01-31 Bayer Ag 1,3,4-oxadiazol pirimidinas como fungicidas, procesos e intermediarios para su preparación, métodos de uso y usos de los mismos
BR112022025710A2 (pt) 2020-06-19 2023-03-07 Bayer Ag 1,3,4-oxadiazol pirimidinas e 1,3,4-oxadiazol piridinas como fungicidas
EP3929189A1 (en) 2020-06-25 2021-12-29 Bayer Animal Health GmbH Novel heteroaryl-substituted pyrazine derivatives as pesticides
BR112022026904A2 (pt) 2020-07-02 2023-01-24 Bayer Ag Derivados de heterocicleno como agentes de controle de pragas
EP3939961A1 (en) 2020-07-16 2022-01-19 Basf Se Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi
WO2022017836A1 (en) 2020-07-20 2022-01-27 BASF Agro B.V. Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol
EP3970494A1 (en) 2020-09-21 2022-03-23 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii
WO2022033991A1 (de) 2020-08-13 2022-02-17 Bayer Aktiengesellschaft 5-amino substituierte triazole als schädlingsbekämpfungsmittel
UY39397A (es) 2020-08-31 2022-02-25 Basf Se Mejora del rendimiento
WO2022053453A1 (de) 2020-09-09 2022-03-17 Bayer Aktiengesellschaft Azolcarboxamide als schädlingsbekämpfungsmittel
WO2022058327A1 (en) 2020-09-15 2022-03-24 Bayer Aktiengesellschaft Substituted ureas and derivatives as new antifungal agents
GB202014840D0 (en) 2020-09-21 2020-11-04 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal compounds
EP3974414A1 (de) 2020-09-25 2022-03-30 Bayer AG 5-amino substituierte pyrazole und triazole als schädlingsbekämpfungsmittel
EP4236691A1 (en) 2020-10-27 2023-09-06 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
WO2022090071A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Basf Se Use of mefenpyr-diethyl for controlling phytopathogenic fungi
WO2022090069A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Basf Se Compositions comprising mefenpyr-diethyl
WO2022106304A1 (en) 2020-11-23 2022-05-27 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
AR124281A1 (es) 2020-11-27 2023-03-15 Syngenta Crop Protection Ag Composiciones plaguicidas
UY39544A (es) 2020-12-02 2022-06-30 Syngenta Crop Protection Ag Composiciones fungicidas que comprenden una mezcla de componentes (a) y (b) como principios activos
WO2022117650A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Syngenta Crop Protection Ag Fungicidal compositions
CA3201212A1 (en) 2020-12-14 2022-06-23 Rizwan Shabbir SHAIKH Sulfoximine pesticides
EP3915971A1 (en) 2020-12-16 2021-12-01 Bayer Aktiengesellschaft Phenyl-s(o)n-phenylamidines and the use thereof as fungicides
AR124335A1 (es) 2020-12-18 2023-03-15 Syngenta Crop Protection Ag Compuestos herbicidas
WO2022129196A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft Heterobicycle substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides
WO2022129188A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft 1,2,4-oxadiazol-3-yl pyrimidines as fungicides
WO2022129190A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft (hetero)aryl substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides
CA3205419A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft Use of dhodh inhibitor for controlling resistant phytopathogenic fungi in crops
EP4036083A1 (de) 2021-02-02 2022-08-03 Bayer Aktiengesellschaft 5-oxy substituierte hetereozyklen, als schädlingsbekämpfungsmittel
EP4043444A1 (en) 2021-02-11 2022-08-17 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
CN117441015A (zh) 2021-02-11 2024-01-23 成对植物服务股份有限公司 用于修饰植物中细胞分裂素氧化酶水平的方法和组合物
CN117203227A (zh) 2021-02-25 2023-12-08 成对植物服务股份有限公司 用于修饰植物中根结构的方法和组合物
AR125089A1 (es) 2021-03-19 2023-06-07 Syngenta Crop Protection Ag Composiciones plaguicidas
BR112023019788A2 (pt) 2021-03-30 2023-11-07 Bayer Ag 3-(hetero)aril-5-clorodifluorometil-1,2,4-oxadiazol como fungicida
WO2022207494A1 (en) 2021-03-30 2022-10-06 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2022233758A1 (en) 2021-05-03 2022-11-10 Basf Se Additives for enhancing the pesticidal effectiveness of pesticidal microorganisms
EP4333618A1 (en) 2021-05-04 2024-03-13 Syngenta Crop Protection AG Use of clethodim for insect control
KR20240005019A (ko) 2021-05-06 2024-01-11 바이엘 악티엔게젤샤프트 알킬아미드 치환된, 환형 이미다졸 및 살충제로서의 이의 용도
WO2022233727A1 (en) 2021-05-07 2022-11-10 Syngenta Crop Protection Ag Herbicidal compounds
CN117222633A (zh) 2021-05-10 2023-12-12 先正达农作物保护股份公司 取代的苯甲酰胺作为除草剂
WO2022238391A1 (de) 2021-05-12 2022-11-17 Bayer Aktiengesellschaft 2-(het)aryl-substituierte kondensierte heterocyclen-derivate als schädlingsbekämpfungsmittel
GB202106945D0 (en) 2021-05-14 2021-06-30 Syngenta Crop Protection Ag Improvements in or relating to organic compounds
EP4091451A1 (en) 2021-05-17 2022-11-23 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
WO2022243107A1 (en) 2021-05-18 2022-11-24 Basf Se New substituted pyridines as fungicides
WO2022243111A1 (en) 2021-05-18 2022-11-24 Basf Se New substituted pyridines as fungicides
BR112023023989A2 (pt) 2021-05-18 2024-01-30 Basf Se Compostos, composição, método para combater fungos fitopatogênicos e semente
BR112023026264A2 (pt) 2021-06-14 2024-03-05 Basf Se Métodos para melhorar o rendimento produzido por uma planta, para produzir uma planta híbrida e para melhorar o rendimento sinérgico, método de cultivo para melhorar o rendimento produzido por uma planta e uso de uma combinação
CN117897050A (zh) 2021-06-17 2024-04-16 成对植物服务股份有限公司 大豆中生长调节因子家族转录因子的修饰
UY39827A (es) 2021-06-24 2023-01-31 Pairwise Plants Services Inc Modificación de genes de ubiquitina ligasa e3 hect para mejorar los rasgos de rendimiento
CA3224982A1 (en) 2021-07-01 2023-01-05 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for enhancing root system development
AU2022301674A1 (en) 2021-07-02 2023-12-21 Syngenta Crop Protection Ag Use of fluazifop-p-butyl for insect control
WO2023280701A1 (en) 2021-07-09 2023-01-12 Syngenta Crop Protection Ag Herbicidal compositions
AU2022308318A1 (en) 2021-07-09 2023-12-07 Syngenta Crop Protection Ag Herbicidal compositions
WO2023280703A1 (en) 2021-07-09 2023-01-12 Syngenta Crop Protection Ag Herbicidal compositions
AU2022306931A1 (en) 2021-07-09 2023-12-07 Syngenta Crop Protection Ag Herbicidal compositions
EP4119547A1 (en) 2021-07-12 2023-01-18 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
AU2022323668A1 (en) 2021-08-02 2024-02-15 Basf Se (3-quinolyl)-quinazoline
CN117794907A (zh) 2021-08-02 2024-03-29 巴斯夫欧洲公司 (3-吡啶基)-喹唑啉
WO2023019188A1 (en) 2021-08-12 2023-02-16 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits
AU2022326207A1 (en) 2021-08-13 2024-02-15 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations and fungicide compositions comprising those
US20230063927A1 (en) 2021-08-17 2023-03-02 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying cytokinin receptor histidine kinase genes in plants
EP4140986A1 (en) 2021-08-23 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
AU2022335669A1 (en) 2021-08-25 2024-02-01 Bayer Aktiengesellschaft Novel pyrazinyl-triazole compounds as pesticides
EP4140995A1 (en) 2021-08-27 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
US20230074699A1 (en) 2021-08-30 2023-03-09 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of ubiquitin binding peptidase genes in plants for yield trait improvement
EP4144739A1 (de) 2021-09-02 2023-03-08 Bayer Aktiengesellschaft Anellierte pyrazole als schädlingsbekämpfungsmittel
AR126938A1 (es) 2021-09-02 2023-11-29 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para mejorar la arquitectura de las plantas y los rasgos de rendimiento
EP4151631A1 (en) 2021-09-20 2023-03-22 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
WO2023049720A1 (en) 2021-09-21 2023-03-30 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for reducing pod shatter in canola
WO2023060028A1 (en) 2021-10-04 2023-04-13 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for improving floret fertility and seed yield
AR127300A1 (es) 2021-10-07 2024-01-10 Pairwise Plants Services Inc Métodos para mejorar la fertilidad de la flor y el rendimiento de semillas
GB202115018D0 (en) 2021-10-20 2021-12-01 Syngenta Crop Protection Ag Improvements in or relating to organic compounds
WO2023072670A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x
WO2023072671A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix
WO2023078915A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Bayer Aktiengesellschaft Bis(hetero)aryl thioether (thio)amides as fungicidal compounds
WO2023099445A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Bayer Aktiengesellschaft Bis(hetero)aryl thioether oxadiazines as fungicidal compounds
EP4194453A1 (en) 2021-12-08 2023-06-14 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
AR127904A1 (es) 2021-12-09 2024-03-06 Pairwise Plants Services Inc Métodos para mejorar la fertilidad de floretes y el rendimiento de semillas
EP4198033A1 (en) 2021-12-14 2023-06-21 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP4198023A1 (en) 2021-12-16 2023-06-21 Basf Se Pesticidally active thiosemicarbazone compounds
WO2023147526A1 (en) 2022-01-31 2023-08-03 Pairwise Plants Services, Inc. Suppression of shade avoidance response in plants
WO2023148028A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests
WO2023148036A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests in soybean
WO2023156402A1 (en) 2022-02-17 2023-08-24 Basf Se Pesticidally active thiosemicarbazone compounds
WO2023156270A1 (en) 2022-02-18 2023-08-24 Basf Se Coumarin synthesis and uses thereof
WO2023168217A1 (en) 2022-03-02 2023-09-07 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits
EP4238971A1 (en) 2022-03-02 2023-09-06 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
WO2023192838A1 (en) 2022-03-31 2023-10-05 Pairwise Plants Services, Inc. Early flowering rosaceae plants with improved characteristics
WO2023196886A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving resistance to fusarium head blight
US20230383305A1 (en) 2022-04-21 2023-11-30 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield traits
WO2023215704A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for enhancing yield and disease resistance
WO2023213670A1 (en) 2022-05-03 2023-11-09 Bayer Aktiengesellschaft Crystalline forms of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine
WO2023213626A1 (en) 2022-05-03 2023-11-09 Bayer Aktiengesellschaft Use of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine for controlling unwanted microorganisms
WO2023215809A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying root architecture and/or improving plant yield traits
US20230416771A1 (en) 2022-06-27 2023-12-28 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants
US20240002873A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement
US20240000031A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement
WO2024017762A1 (en) 2022-07-19 2024-01-25 Syngenta Crop Protection Ag Herbicidal compounds
WO2024018016A1 (en) 2022-07-21 2024-01-25 Syngenta Crop Protection Ag Crystalline forms of 1,2,4-oxadiazole fungicides
WO2024028243A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Basf Se Pyrazolo pesticidal compounds
US20240043857A1 (en) 2022-08-04 2024-02-08 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield traits
WO2024033374A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 Syngenta Crop Protection Ag Novel arylcarboxamide or arylthioamide compounds
US20240060081A1 (en) 2022-08-11 2024-02-22 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement
WO2024054880A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield characteristics in plants
EP4342885A1 (en) 2022-09-20 2024-03-27 Basf Se N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides
EP4295688A1 (en) 2022-09-28 2023-12-27 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combination
GB202214202D0 (en) 2022-09-28 2022-11-09 Syngenta Crop Protection Ag Agricultural methods
WO2024068519A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068517A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068518A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-heteroaryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
GB202214203D0 (en) 2022-09-28 2022-11-09 Syngenta Crop Protection Ag Fungicidal compositions
WO2024068520A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030176284A1 (en) * 2002-03-05 2003-09-18 Bayer Cropscience Gmbh Herbicide combination with acylated aminophenylsulfonylureas
WO2008150473A2 (en) * 2007-05-30 2008-12-11 Syngenta Participations Ag Cytochrome p450 genes conferring herbicide resistance
US20100099859A1 (en) * 2005-05-27 2010-04-22 Marianne Malven Soybean event mon89788 and methods for detection thereof

Family Cites Families (158)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4535060A (en) 1983-01-05 1985-08-13 Calgene, Inc. Inhibition resistant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthetase, production and use
US4761373A (en) 1984-03-06 1988-08-02 Molecular Genetics, Inc. Herbicide resistance in plants
US5331107A (en) 1984-03-06 1994-07-19 Mgi Pharma, Inc. Herbicide resistance in plants
US5304732A (en) 1984-03-06 1994-04-19 Mgi Pharma, Inc. Herbicide resistance in plants
US4945050A (en) 1984-11-13 1990-07-31 Cornell Research Foundation, Inc. Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor
DE3587548T2 (de) 1984-12-28 1993-12-23 Plant Genetic Systems Nv Rekombinante DNA, die in pflanzliche Zellen eingebracht werden kann.
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4940835A (en) 1985-10-29 1990-07-10 Monsanto Company Glyphosate-resistant plants
DK175922B1 (da) 1985-08-07 2005-07-04 Monsanto Technology Llc Glyphosat-resistente planter
US4810648A (en) 1986-01-08 1989-03-07 Rhone Poulenc Agrochimie Haloarylnitrile degrading gene, its use, and cells containing the gene
US4800159A (en) 1986-02-07 1989-01-24 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences
DE3765449D1 (de) 1986-03-11 1990-11-15 Plant Genetic Systems Nv Durch gentechnologie erhaltene und gegen glutaminsynthetase-inhibitoren resistente pflanzenzellen.
US4808208A (en) 1986-08-04 1989-02-28 Canadian Patents & Development Ltd. Phenolic safeners for glyphosate herbicides
US5024944A (en) 1986-08-04 1991-06-18 Lubrizol Genetics, Inc. Transformation, somatic embryogenesis and whole plant regeneration method for Glycine species
US5273894A (en) 1986-08-23 1993-12-28 Hoechst Aktiengesellschaft Phosphinothricin-resistance gene, and its use
US5605011A (en) 1986-08-26 1997-02-25 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
US5013659A (en) 1987-07-27 1991-05-07 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
US5378824A (en) 1986-08-26 1995-01-03 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
US4971908A (en) 1987-05-26 1990-11-20 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US5312910A (en) 1987-05-26 1994-05-17 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US5145783A (en) 1987-05-26 1992-09-08 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-endolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US5502025A (en) 1987-08-13 1996-03-26 Monsanto Company Safening herbicidal pyrazolylsulfonylureas
DE69018117T2 (de) 1989-04-21 1995-10-26 Kirin Brewery Zur Synthese von Karotinoiden verwendbare DNA-Sequenzen.
US5310667A (en) 1989-07-17 1994-05-10 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthases
US5550318A (en) 1990-04-17 1996-08-27 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US4940935A (en) 1989-08-28 1990-07-10 Ried Ashman Manufacturing Automatic SMD tester
US5212296A (en) 1989-09-11 1993-05-18 E. I. Du Pont De Nemours And Company Expression of herbicide metabolizing cytochromes
ATE212667T1 (de) 1990-04-26 2002-02-15 Aventis Cropscience Nv Neuer bacillusthuringsiensis stamm und sein für insektentoxin kodierendes gen
WO1992000964A1 (en) 1990-07-05 1992-01-23 Nippon Soda Co., Ltd. Amine derivative
US5633435A (en) 1990-08-31 1997-05-27 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases
US5866775A (en) 1990-09-28 1999-02-02 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthases
US5277905A (en) 1991-01-16 1994-01-11 Mycogen Corporation Coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate
FR2673642B1 (fr) 1991-03-05 1994-08-12 Rhone Poulenc Agrochimie Gene chimere comprenant un promoteur capable de conferer a une plante une tolerance accrue au glyphosate.
FR2673643B1 (fr) 1991-03-05 1993-05-21 Rhone Poulenc Agrochimie Peptide de transit pour l'insertion d'un gene etranger dans un gene vegetal et plantes transformees en utilisant ce peptide.
USRE36449E (en) 1991-03-05 1999-12-14 Rhone-Poulenc Agro Chimeric gene for the transformation of plants
US5731180A (en) 1991-07-31 1998-03-24 American Cyanamid Company Imidazolinone resistant AHAS mutants
ATE174626T1 (de) 1991-08-02 1999-01-15 Mycogen Corp Neuer mikroorganismus und insektizid
EP0616644B1 (en) 1991-12-04 2003-07-02 E.I. Du Pont De Nemours And Company Fatty acid desaturase genes from plants
DK0668919T3 (da) 1992-11-17 2003-09-15 Du Pont Gener for mikorsomale delta-12-fedtsyredesaturaser og beslægtede enzymer fra planter
EP0625006A4 (en) 1992-11-20 1996-04-24 Agracetus Transgenic cotton plants producing heterologous bioplastic.
CA2161881C (en) 1993-01-13 2001-03-27 A. Gururaj Rao High lysine derivatives of alpha-hordothionin
US5583210A (en) 1993-03-18 1996-12-10 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions for controlling plant development
US5538848A (en) 1994-11-16 1996-07-23 Applied Biosystems Division, Perkin-Elmer Corp. Method for detecting nucleic acid amplification using self-quenching fluorescence probe
JPH07177130A (ja) 1993-12-21 1995-07-14 Fujitsu Ltd エラーカウント回路
US5593881A (en) 1994-05-06 1997-01-14 Mycogen Corporation Bacillus thuringiensis delta-endotoxin
US5767373A (en) 1994-06-16 1998-06-16 Novartis Finance Corporation Manipulation of protoporphyrinogen oxidase enzyme activity in eukaryotic organisms
US5792931A (en) 1994-08-12 1998-08-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Fumonisin detoxification compositions and methods
DE4440354A1 (de) 1994-11-11 1996-05-15 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Kombinationen aus Phenylsulfonylharnstoff-Herbiziden und Safenern
US6576455B1 (en) 1995-04-20 2003-06-10 Basf Corporation Structure-based designed herbicide resistant products
US5853973A (en) 1995-04-20 1998-12-29 American Cyanamid Company Structure based designed herbicide resistant products
FR2734842B1 (fr) 1995-06-02 1998-02-27 Rhone Poulenc Agrochimie Sequence adn d'un gene de l'hydroxy-phenyl pyruvate dioxygenase et obtention de plantes contenant un gene de l'hydroxy-phenyl pyruvate dioxygenase, tolerantes a certains herbicides
AR004938A1 (es) 1995-06-02 1999-04-07 Pioneer Hi Bred Internacional Inc Proteina derivada de alfa-hordotionina de alto contenido en metionina, secuencias de nucleotidos, arn y adn, cassete de expresion, vector detransformacion bacteriana, celulas bacterianas y vegetales transformadas, celula o cultivo de tejidos de maiz y metodo para potenciar el contenido de
AR003683A1 (es) 1995-06-02 1998-09-09 Pioneer Hi Bred Int Proteinas derivadas de alfa-hordiotonina con alto contenido de treonina
FR2736926B1 (fr) 1995-07-19 1997-08-22 Rhone Poulenc Agrochimie 5-enol pyruvylshikimate-3-phosphate synthase mutee, gene codant pour cette proteine et plantes transformees contenant ce gene
US5981722A (en) 1995-11-20 1999-11-09 Board Of Regents For The University Of Oklahoma Trypsin inhibitors with insecticidal properties obtained from PENTACLETHRA MACROLOBA
US5737514A (en) 1995-11-29 1998-04-07 Texas Micro, Inc. Remote checkpoint memory system and protocol for fault-tolerant computer system
US5850016A (en) 1996-03-20 1998-12-15 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Alteration of amino acid compositions in seeds
DE19638233A1 (de) 1996-09-19 1998-03-26 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Kombinationen aus Sulfonylharnstoff-Herbiziden und Safenern
JP3441899B2 (ja) 1996-11-01 2003-09-02 理化学研究所 完全長ｃＤＮＡライブラリーの作成方法
US6232529B1 (en) 1996-11-20 2001-05-15 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods of producing high-oil seed by modification of starch levels
DE19652284A1 (de) 1996-12-16 1998-06-18 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Neue Gene codierend für Aminosäure-Deacetylasen mit Spezifität für N-Acetyl-L-Phosphinothricin, ihre Isolierung und Verwendung
EP0970191A2 (en) 1997-03-07 2000-01-12 Novartis AG Cytochrome p450 monooxygenases
HUP0002926A3 (en) 1997-03-07 2005-11-28 Syngenta Participations Ag Cytochrome p450 monooxygenases
WO1998045424A1 (en) 1997-04-04 1998-10-15 Weeks Donald P Methods and materials for making and using transgenic dicamba-degrading organisms
US7105724B2 (en) 1997-04-04 2006-09-12 Board Of Regents Of University Of Nebraska Methods and materials for making and using transgenic dicamba-degrading organisms
US6121512A (en) 1997-10-10 2000-09-19 North Carolina State University Cytochrome P-450 constructs and method of producing herbicide-resistant transgenic plants
US6245968B1 (en) 1997-11-07 2001-06-12 Aventis Cropscience S.A. Mutated hydroxyphenylpyruvate dioxygenase, DNA sequence and isolation of plants which contain such a gene and which are tolerant to herbicides
US6069115A (en) 1997-11-12 2000-05-30 Rhone-Poulenc Agrochimie Method of controlling weeds in transgenic crops
AU1526199A (en) 1997-11-18 1999-06-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Targeted manipulation of herbicide-resistance genes in plants
DE69841438D1 (de) 1997-11-18 2010-02-25 Pioneer Hi Bred Int Mobilisierung eines viralen genoms aus t-dna durch ortsspezifische rekombinationssysteme
ATE317440T1 (de) 1997-11-18 2006-02-15 Pioneer Hi Bred Int Neuartige methode zur integration von fremd-dna ins eukaryotische genom
NZ503859A (en) 1997-11-18 2003-02-28 Pioneer Hi Bred Int Non-identical minimal recombination sites (FRT) which are non-identical for targeted integration of nucleotide sequences into transformed plants
WO1999061619A2 (en) 1998-05-22 1999-12-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Cell cycle genes, proteins and uses thereof
DE19827855A1 (de) 1998-06-23 1999-12-30 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Kombinationen aus Herbiziden und Safenern
US6380465B1 (en) 1998-07-12 2002-04-30 University Of Kentucky Research Foundation Cytochrome P450 enzymes and related compounds and methods
WO2000009727A2 (en) 1998-08-12 2000-02-24 Maxygen, Inc. Dna shuffling to produce herbicide selective crops
US6518487B1 (en) 1998-09-23 2003-02-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Cyclin D polynucleotides, polypeptides and uses thereof
DE19853827A1 (de) 1998-11-21 2000-05-25 Aventis Cropscience Gmbh Kombinationen aus Herbiziden und Safenern
AU2848800A (en) 1999-01-14 2000-08-01 Monsanto Technology Llc Soybean transformation method
CA2365590A1 (en) 1999-04-29 2000-11-09 Zeneca Limited Herbicide resistant plants
CZ20013856A3 (cs) 1999-04-29 2002-04-17 Syngenta Ltd. Herbicidně rezistentní rostliny
CA2381927A1 (en) 1999-08-13 2001-02-22 Syngenta Participations Ag Herbicide-tolerant protoporphyrinogen oxidase
GB9922346D0 (en) 1999-09-21 1999-11-24 Zeneca Ltd Improvements in or relating to organic compounds
EP1250447B1 (en) 1999-11-29 2011-12-21 Midwest Oilseeds, Inc. Methods, media and apparatus for the introduction of molecules into plant cells and bacteria using aerosol beams
FR2805971B1 (fr) * 2000-03-08 2004-01-30 Aventis Cropscience Sa Procedes de traitement et/ou de protection des cultures contre les arthropodes et compositions utiles pour de tels procedes
DE60111613T2 (de) 2000-03-09 2006-05-18 Monsanto Technology Llc. Verfahren zum herstellen von glyphosat-toleranten pflanzen
IL151886A (en) * 2000-03-27 2010-11-30 Syngenta Participations Ag Promoters of a virus that causes curling of a yellow leaf of a cyst
CN101684458A (zh) 2000-10-30 2010-03-31 弗迪亚股份有限公司 新的草甘膦n-乙酰转移酶(gat)基因
US7462481B2 (en) 2000-10-30 2008-12-09 Verdia, Inc. Glyphosate N-acetyltransferase (GAT) genes
US6858778B1 (en) 2000-11-07 2005-02-22 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plants transformed with a DNA construct comprising a nucleic acid molecule encoding an 18 kD α-globulin
US7009087B1 (en) 2000-12-01 2006-03-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods for altering the disulfide status of proteins
JP2004528821A (ja) * 2000-12-07 2004-09-24 シンジェンタ リミテッド 除草剤抵抗性植物
DE10119721A1 (de) 2001-04-21 2002-10-31 Bayer Cropscience Gmbh Herbizide Mittel enthaltend Benzoylcyclohexandione und Safener
AU2002304109B2 (en) 2001-05-31 2005-07-21 Nihon Nohyaku Co., Ltd. Substituted anilide derivatives, intermediates thereof, agricultural and horticultural chemicals, and their usage
DE10145019A1 (de) 2001-09-13 2003-04-03 Bayer Cropscience Gmbh Kombinationen aus Herbiziden und Safenern
GB0213715D0 (en) 2002-06-14 2002-07-24 Syngenta Ltd Chemical compounds
CA2490154A1 (en) 2002-06-22 2003-12-31 Syngenta Participations Ag Method of transforming soybean
JP2004027091A (ja) * 2002-06-27 2004-01-29 Nisshin Oillio Ltd 圧搾大豆油及びその製造方法
EP1382247A1 (en) 2002-07-18 2004-01-21 Bayer CropScience GmbH Combinations of cyclohexanedione oxime herbicides and safeners
US6953756B2 (en) 2002-10-25 2005-10-11 Kyocera Corporation Glass ceramic sintered body and wiring board using the sintered body
CA2520228A1 (en) 2003-03-26 2004-10-07 Bayer Cropscience Gmbh Use of aromatic compounds as safeners
TWI312272B (en) 2003-05-12 2009-07-21 Sumitomo Chemical Co Pyrimidine compound and pests controlling composition containing the same
DE10335725A1 (de) 2003-08-05 2005-03-03 Bayer Cropscience Gmbh Safener auf Basis aromatisch-aliphatischer Carbonsäuredarivate
UA79404C2 (en) 2003-10-02 2007-06-11 Basf Ag 2-cyanobenzenesulfonamide for controlling pests
US7935862B2 (en) 2003-12-02 2011-05-03 Syngenta Participations Ag Targeted integration and stacking of DNA through homologous recombination
GB0329744D0 (en) 2003-12-23 2004-01-28 Koninkl Philips Electronics Nv A beverage maker incorporating multiple beverage collection chambers
DE602005025601D1 (de) 2004-02-18 2011-02-10 Ishihara Sangyo Kaisha Anthranilamide, verfahren zu deren herstellung und diese enthaltende schädlingsbekämpfungsmittel
KR101197482B1 (ko) 2004-03-05 2012-11-09 닛산 가가쿠 고교 가부시키 가이샤 이속사졸린 치환 벤즈아미드 화합물 및 유해생물 방제제
ATE442044T1 (de) 2004-03-27 2009-09-15 Bayer Cropscience Ag Herbizid-safener-kombination
US7405074B2 (en) 2004-04-29 2008-07-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Glyphosate-N-acetyltransferase (GAT) genes
ES2407857T5 (es) 2004-04-30 2017-07-31 Dow Agrosciences Llc Nuevo gen de resistencia a los herbicidas
US7674598B2 (en) 2004-05-21 2010-03-09 Beckman Coulter, Inc. Method for a fully automated monoclonal antibody-based extended differential
NZ553200A (en) 2004-10-20 2009-09-25 Kumiai Chemical Industry Co 3-triazolylphenyl sulfide derivative and insecticide/acaricide/nematicide containing the same as active ingredient
ATE469124T1 (de) 2004-11-26 2010-06-15 Basf Se Neue 2-cyano-3- (halogen)alkoxybenzolsulfonamidverbindungen zur bekämpfung tierischer schädlinge
DE102005008021A1 (de) 2005-02-22 2006-08-24 Bayer Cropscience Ag Spiroketal-substituierte cyclische Ketoenole
ATE494780T1 (de) 2005-03-24 2011-01-15 Basf Se 2-cyanobenzolsulfonamidverbindungen zur behandlung von samen
US20060223102A1 (en) 2005-04-04 2006-10-05 E.I. Du Pont De Nemours And Company Polynucleotides and methods for making plants resistant to fungal pathogens
CN103103262B (zh) 2005-04-08 2017-07-04 拜尔作物科学公司 原种事件a2704‑12以及用于鉴定生物样品中此事件的方法和试剂盒
CN101155933B (zh) 2005-04-11 2015-09-16 拜尔作物科学公司 原种事件a5547-127以及在生物样品中鉴定此类事件的方法和试剂盒
EP1900817B1 (en) 2005-06-28 2012-12-05 Zhejiang University A bentazon and sulfonylurea herbicide-resistant gene cyp81a6 of rice
WO2007040280A1 (ja) 2005-10-06 2007-04-12 Nippon Soda Co., Ltd. 環状アミン化合物および有害生物防除剤
DK2484202T3 (en) 2005-10-28 2017-09-11 Dow Agrosciences Llc NEW HERBICID RESISTANCE GENES
EP1954138A2 (en) 2005-11-21 2008-08-13 Basf Se Insecticidal methods using 3-amino-1,2-benzisothiazole derivatives
US7491813B2 (en) * 2005-12-07 2009-02-17 Monsanto Technology Llc Promoter polynucleotides identified from Zea mays for use in plants
TW200803740A (en) 2005-12-16 2008-01-16 Du Pont 5-aryl isoxazolines for controlling invertebrate pests
JP5164862B2 (ja) * 2006-02-10 2013-03-21 マハラシュートラ ハイブリッド シーズ カンパニー リミテッド（マヒコ） Ｅｅ−１イベントを含むトランスジェニックナス（ｓｏｌａｎｕｍｍｅｌｏｎｇｅｎａ）
US20070214515A1 (en) 2006-03-09 2007-09-13 E.I.Du Pont De Nemours And Company Polynucleotide encoding a maize herbicide resistance gene and methods for use
EP1997820A4 (en) 2006-03-09 2009-03-04 Univ East China Science & Tech METHOD OF PREPARATION AND USE OF COMPOUNDS HAVING BIOCIDAL ACTION
US7820883B2 (en) 2006-03-15 2010-10-26 Dow Agrosciences Llc Resistance to auxinic herbicides
DE102006015468A1 (de) 2006-03-31 2007-10-04 Bayer Cropscience Ag Substituierte Enaminocarbonylverbindungen
DE102006015467A1 (de) 2006-03-31 2007-10-04 Bayer Cropscience Ag Substituierte Enaminocarbonylverbindungen
DE102006015470A1 (de) 2006-03-31 2007-10-04 Bayer Cropscience Ag Substituierte Enaminocarbonylverbindungen
CA2653338C (en) * 2006-05-26 2018-04-24 Monsanto Technology, Llc Corn plant and seed corresponding to transgenic event mon89034 and methods for detection and use thereof
TWI381811B (zh) 2006-06-23 2013-01-11 Dow Agrosciences Llc 用以防治可抵抗一般殺蟲劑之昆蟲的方法
US7951995B2 (en) * 2006-06-28 2011-05-31 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Soybean event 3560.4.3.5 and compositions and methods for the identification and detection thereof
EP2078089B1 (en) 2006-10-31 2016-05-04 E. I. du Pont de Nemours and Company Soybean event dp-305423-1 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof
JP5269609B2 (ja) 2006-11-30 2013-08-21 Ｍｅｉｊｉ Ｓｅｉｋａファルマ株式会社 害虫防除剤
DE102006057036A1 (de) 2006-12-04 2008-06-05 Bayer Cropscience Ag Biphenylsubstituierte spirocyclische Ketoenole
EA200901143A1 (ru) 2007-03-01 2010-04-30 Басф Се Пестицидные активные смеси, включающие аминотиазолиновые соединения
US20080229447A1 (en) 2007-03-12 2008-09-18 Syngenta Participations Ag Transformation of immature soybean seeds through organogenesis
MX2009012120A (es) 2007-05-09 2010-02-12 Dow Agrosciences Llc Genes novedosos con resistencia a herbicidas.
BRPI0812177B1 (pt) * 2007-06-01 2018-06-05 Syngenta Participations Ag Método para produção de safra
GB0720126D0 (en) 2007-10-15 2007-11-28 Syngenta Participations Ag Chemical compounds
WO2010005692A2 (en) 2008-06-16 2010-01-14 E. I. Du Pont De Nemours And Company Insecticidal cyclic carbonyl amidines
JP5268461B2 (ja) 2008-07-14 2013-08-21 Ｍｅｉｊｉ Ｓｅｉｋａファルマ株式会社 Ｐｆ１３６４物質、その製造方法、生産菌株、及び、それを有効成分とする農園芸用殺虫剤
GB0816880D0 (en) 2008-09-15 2008-10-22 Syngenta Ltd Improvements in or relating to organic compounds
ES2757880T3 (es) 2008-12-26 2020-04-30 Dow Agrosciences Llc Composiciones estables de insecticida de tipo sulfoximina
KR101736078B1 (ko) 2008-12-26 2017-05-16 다우 아그로사이언시즈 엘엘씨 안정한 살충제 조성물 및 이의 제조방법
US9024114B2 (en) 2009-01-07 2015-05-05 Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuaria—EMBRAPA Soybean event 127 and methods related thereto
BRPI1007175A2 (pt) * 2009-01-22 2015-08-18 Syngenta Participations Ag Polipeptídeos hidroxifenilpriruvato dioxigenase mutantes e métodos de uso
US8748700B2 (en) 2009-08-19 2014-06-10 Dow Agrosciences, Llc. Control of AAD-1 monocot volunteers in fields of dicot crops
IN2012DN01800A (ru) 2009-08-19 2015-06-05 Dow Agrosciences Llc
WO2011022469A2 (en) 2009-08-19 2011-02-24 Dow Agrosciences Llc Aad-1 event das-40278-9, related transgenic corn lines, and event-specific identification thereof
RU2624025C2 (ru) 2009-09-17 2017-06-30 МОНСАНТО ТЕКНОЛОДЖИ ЭлЭлСи Трансгенный объект сои mon 87708 и способы его применения
US8697695B2 (en) 2009-10-23 2014-04-15 Sumitomo Chemical Company, Limited Pest control composition
WO2011063413A2 (en) * 2009-11-23 2011-05-26 Bayer Bioscience N.V. Herbicide tolerant soybean plants and methods for identifying same
CN102057925B (zh) 2011-01-21 2013-04-10 陕西上格之路生物科学有限公司 一种含噻虫酰胺和生物源类杀虫剂的杀虫组合物

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030176284A1 (en) * 2002-03-05 2003-09-18 Bayer Cropscience Gmbh Herbicide combination with acylated aminophenylsulfonylureas
US20100099859A1 (en) * 2005-05-27 2010-04-22 Marianne Malven Soybean event mon89788 and methods for detection thereof
WO2008150473A2 (en) * 2007-05-30 2008-12-11 Syngenta Participations Ag Cytochrome p450 genes conferring herbicide resistance

Also Published As

Publication number Publication date
BR112013014395A2 (pt) 2016-09-27
EP2651209A4 (en) 2014-09-17
CA3141423A1 (en) 2012-06-21
CN103597077A (zh) 2014-02-19
EA031633B1 (ru) 2019-01-31
EA201600078A2 (ru) 2016-05-31
CN104745693B (zh) 2017-09-26
EA201300707A1 (ru) 2014-08-29
MX352542B (es) 2017-11-29
WO2012082548A3 (en) 2013-09-19
EA201600085A1 (ru) 2016-05-31
US10184134B2 (en) 2019-01-22
AU2011344222A1 (en) 2013-06-06
MX2013006477A (es) 2013-10-03
CN108004235A (zh) 2018-05-08
TWI667347B (zh) 2019-08-01
CN104745693A (zh) 2015-07-01
CA2821101A1 (en) 2012-06-21
EA201600078A3 (ru) 2016-09-30
CO6731109A2 (es) 2013-08-15
EA031999B1 (ru) 2019-03-29
WO2012082548A2 (en) 2012-06-21
JP2018007674A (ja) 2018-01-18
MX349466B (es) 2017-07-31
AR084284A1 (es) 2013-05-08
JP7096225B2 (ja) 2022-07-05
CL2013001717A1 (es) 2014-04-11
CN103597077B (zh) 2017-11-07
US20190078115A1 (en) 2019-03-14
EP2651209B1 (en) 2018-03-14
AU2011344222B2 (en) 2017-03-02
JP2014502494A (ja) 2014-02-03
JP6278446B2 (ja) 2018-02-14
KR20130126646A (ko) 2013-11-20
JP2020054343A (ja) 2020-04-09
ZA201304337B (en) 2018-12-19
JP6660351B2 (ja) 2020-03-11
ES2668656T3 (es) 2018-05-21
AU2011344222B9 (en) 2017-04-06
CA2821101C (en) 2022-03-01
EP2651209A2 (en) 2013-10-23
ECSP13012758A (es) 2013-09-30
UY38977A (es) 2021-01-29
TW201307552A (zh) 2013-02-16
MX344121B (es) 2016-12-06
UA116972C2 (uk) 2018-06-11
CN108004235B (zh) 2022-02-08
US11053514B2 (en) 2021-07-06
KR101981250B1 (ko) 2019-05-22
US20140201860A1 (en) 2014-07-17
UY33795A (es) 2012-07-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7096225B2 (ja) ダイズイベントｓｙｈｔ０ｈ２及びその組成物並びにその検出方法
US10006044B2 (en) Soybean event SYHT04R and compositions and methods for detection thereof
JP5988585B2 (ja) 大豆イベント１２７及びそれに関する方法
AU2010324752B2 (en) AAD-12 event 416, related transgenic soybean lines, and event-specific identification thereof
TW200825180A (en) Maize event DP-098140-6 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof
UA120741C2 (uk) Рослина з мутованою протопорфіриногеноксидазою
CN105874062B (zh) 草甘膦-n-乙酰转移酶(glyat)序列以及使用方法
KR102060513B1 (ko) 시토크롬 p450을 코딩하는 유전자 및 그의 이용
RU2574777C2 (ru) Событие 127 в геноме сои и связанные с ним способы

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM