JP6266343B2 - 抗体ライブラリー - Google Patents
抗体ライブラリー Download PDFInfo
- Publication number
- JP6266343B2 JP6266343B2 JP2013519836A JP2013519836A JP6266343B2 JP 6266343 B2 JP6266343 B2 JP 6266343B2 JP 2013519836 A JP2013519836 A JP 2013519836A JP 2013519836 A JP2013519836 A JP 2013519836A JP 6266343 B2 JP6266343 B2 JP 6266343B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- library
- sequences
- segments
- cdrh3
- sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 208
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 194
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 193
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 190
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 143
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 143
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 143
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 70
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 44
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 44
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 44
- 238000013519 translation Methods 0.000 claims description 38
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 20
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 claims description 13
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims description 12
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 claims description 11
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 7
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 164
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 164
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 160
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 115
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 85
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 58
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 57
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 46
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 42
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 41
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 40
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 39
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 36
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 35
- 102100036034 Thrombospondin-1 Human genes 0.000 description 33
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 33
- 101000659879 Homo sapiens Thrombospondin-1 Proteins 0.000 description 32
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 31
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 31
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical group COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 238000013461 design Methods 0.000 description 29
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 29
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 29
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 28
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 28
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 27
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 26
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 24
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 description 23
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 22
- 238000002898 library design Methods 0.000 description 21
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 20
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 19
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 19
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 18
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 17
- 239000000047 product Substances 0.000 description 17
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 16
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 16
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 16
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 16
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 16
- 230000008569 process Effects 0.000 description 16
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 16
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 14
- 230000009191 jumping Effects 0.000 description 13
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 13
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 13
- 238000002169 hydrotherapy Methods 0.000 description 12
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 12
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 11
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 11
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 10
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 10
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 10
- 230000006269 (delayed) early viral mRNA transcription Effects 0.000 description 9
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 101001055307 Homo sapiens Immunoglobulin heavy constant delta Proteins 0.000 description 9
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 9
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 8
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 8
- 230000037230 mobility Effects 0.000 description 8
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 8
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 7
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 7
- -1 Leu Chemical group 0.000 description 7
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 230000006303 immediate early viral mRNA transcription Effects 0.000 description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 7
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 7
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 7
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 7
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 7
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 6
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 6
- 238000002702 ribosome display Methods 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 5
- 102100026211 Immunoglobulin heavy constant delta Human genes 0.000 description 5
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 5
- 241000235343 Saccharomycetales Species 0.000 description 5
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 5
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 5
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 5
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 5
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 108050001049 Extracellular proteins Proteins 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 101000868422 Homo sapiens Sushi, nidogen and EGF-like domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 4
- 102100032853 Sushi, nidogen and EGF-like domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 210000001948 pro-b lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 4
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 238000012219 cassette mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 3
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 3
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 238000001499 laser induced fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 3
- 238000002818 protein evolution Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 108020005065 3' Flanking Region Proteins 0.000 description 2
- 108020005029 5' Flanking Region Proteins 0.000 description 2
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 2
- 108091033380 Coding strand Proteins 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 108010058643 Fungal Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 230000008303 genetic mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000004850 protein–protein interaction Effects 0.000 description 2
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 238000012772 sequence design Methods 0.000 description 2
- 238000007614 solvation Methods 0.000 description 2
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 2
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 238000010396 two-hybrid screening Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 101100295756 Acinetobacter baumannii (strain ATCC 19606 / DSM 30007 / JCM 6841 / CCUG 19606 / CIP 70.34 / NBRC 109757 / NCIMB 12457 / NCTC 12156 / 81) omp38 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000054930 Agouti-Related Human genes 0.000 description 1
- 101100133992 Amycolatopsis sp Aaar gene Proteins 0.000 description 1
- 102000008102 Ankyrins Human genes 0.000 description 1
- 108010049777 Ankyrins Proteins 0.000 description 1
- 241001156002 Anthonomus pomorum Species 0.000 description 1
- 101100456008 Arabidopsis thaliana MANP gene Proteins 0.000 description 1
- XNSKSTRGQIPTSE-ACZMJKKPSA-N Arg-Thr Chemical group C[C@@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O XNSKSTRGQIPTSE-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100136076 Aspergillus oryzae (strain ATCC 42149 / RIB 40) pel1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000623895 Bos taurus Mucin-15 Proteins 0.000 description 1
- 101000984722 Bos taurus Pancreatic trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 102100025287 Cytochrome b Human genes 0.000 description 1
- 108010075028 Cytochromes b Proteins 0.000 description 1
- 101150097493 D gene Proteins 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108700022150 Designed Ankyrin Repeat Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000609473 Ecballium elaterium Trypsin inhibitor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000925646 Enterobacteria phage T4 Endolysin Proteins 0.000 description 1
- 241001524679 Escherichia virus M13 Species 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 102100029074 Exostosin-2 Human genes 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102100032518 Gamma-crystallin B Human genes 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 101000690301 Homo sapiens Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 description 1
- 101000918275 Homo sapiens Exostosin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001079285 Homo sapiens Immunoglobulin heavy joining 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000998950 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-18 Proteins 0.000 description 1
- 101000998953 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000998949 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-24 Proteins 0.000 description 1
- 101000998948 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-45 Proteins 0.000 description 1
- 101000998947 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-46 Proteins 0.000 description 1
- 101001002931 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-58 Proteins 0.000 description 1
- 101001037147 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-69 Proteins 0.000 description 1
- 101000998951 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-8 Proteins 0.000 description 1
- 101001037138 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-11 Proteins 0.000 description 1
- 101001037136 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-15 Proteins 0.000 description 1
- 101001037142 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-20 Proteins 0.000 description 1
- 101001037141 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-21 Proteins 0.000 description 1
- 101001037140 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-23 Proteins 0.000 description 1
- 101001037139 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-30 Proteins 0.000 description 1
- 101001037143 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-33 Proteins 0.000 description 1
- 101000839665 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-43 Proteins 0.000 description 1
- 101000839662 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-48 Proteins 0.000 description 1
- 101000839663 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-49 Proteins 0.000 description 1
- 101000839660 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-53 Proteins 0.000 description 1
- 101000839661 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-64 Proteins 0.000 description 1
- 101000839658 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-66 Proteins 0.000 description 1
- 101001037153 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-7 Proteins 0.000 description 1
- 101000839659 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-72 Proteins 0.000 description 1
- 101000839687 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-74 Proteins 0.000 description 1
- 101001037144 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-9 Proteins 0.000 description 1
- 101000839683 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 4-28 Proteins 0.000 description 1
- 101000839684 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 4-31 Proteins 0.000 description 1
- 101000839682 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 4-34 Proteins 0.000 description 1
- 101001077587 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 4-38-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000839679 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 4-39 Proteins 0.000 description 1
- 101000839686 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 4-4 Proteins 0.000 description 1
- 101000839781 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 4-59 Proteins 0.000 description 1
- 101000989076 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 4-61 Proteins 0.000 description 1
- 101000989062 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 5-51 Proteins 0.000 description 1
- 101000989060 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 6-1 Proteins 0.000 description 1
- 101001138128 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1-12 Proteins 0.000 description 1
- 101001138127 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1-13 Proteins 0.000 description 1
- 101001138126 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1-16 Proteins 0.000 description 1
- 101001138125 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1-17 Proteins 0.000 description 1
- 101001138123 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1-27 Proteins 0.000 description 1
- 101001138121 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1-33 Proteins 0.000 description 1
- 101001138089 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1-39 Proteins 0.000 description 1
- 101001008333 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1D-16 Proteins 0.000 description 1
- 101001008335 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1D-17 Proteins 0.000 description 1
- 101001009877 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1D-43 Proteins 0.000 description 1
- 101001008255 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1D-8 Proteins 0.000 description 1
- 101001008321 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 2D-26 Proteins 0.000 description 1
- 101001008325 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 2D-29 Proteins 0.000 description 1
- 101001008327 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 2D-30 Proteins 0.000 description 1
- 101001047617 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3-11 Proteins 0.000 description 1
- 101001047618 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3-15 Proteins 0.000 description 1
- 101001047619 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3-20 Proteins 0.000 description 1
- 101001008257 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3D-11 Proteins 0.000 description 1
- 101001008315 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3D-20 Proteins 0.000 description 1
- 101000604674 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 4-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000605181 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 5-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001090250 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 6-21 Proteins 0.000 description 1
- 101001009875 Homo sapiens Probable non-functional immunoglobulin kappa variable 6D-41 Proteins 0.000 description 1
- 101001138120 Homo sapiens Probable non-functional immunoglobulinn kappa variable 1-37 Proteins 0.000 description 1
- 101001116548 Homo sapiens Protein CBFA2T1 Proteins 0.000 description 1
- 101150069296 IGHD gene Proteins 0.000 description 1
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102100028078 Immunoglobulin heavy joining 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100036884 Immunoglobulin heavy variable 1-18 Human genes 0.000 description 1
- 102100036887 Immunoglobulin heavy variable 1-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100036890 Immunoglobulin heavy variable 1-24 Human genes 0.000 description 1
- 102100036889 Immunoglobulin heavy variable 1-45 Human genes 0.000 description 1
- 102100036888 Immunoglobulin heavy variable 1-46 Human genes 0.000 description 1
- 102100020774 Immunoglobulin heavy variable 1-58 Human genes 0.000 description 1
- 102100040232 Immunoglobulin heavy variable 1-69 Human genes 0.000 description 1
- 102100036885 Immunoglobulin heavy variable 1-8 Human genes 0.000 description 1
- 102100040222 Immunoglobulin heavy variable 3-11 Human genes 0.000 description 1
- 102100040224 Immunoglobulin heavy variable 3-15 Human genes 0.000 description 1
- 102100040218 Immunoglobulin heavy variable 3-20 Human genes 0.000 description 1
- 102100040217 Immunoglobulin heavy variable 3-21 Human genes 0.000 description 1
- 102100040220 Immunoglobulin heavy variable 3-23 Human genes 0.000 description 1
- 102100040219 Immunoglobulin heavy variable 3-30 Human genes 0.000 description 1
- 102100040236 Immunoglobulin heavy variable 3-33 Human genes 0.000 description 1
- 102100028315 Immunoglobulin heavy variable 3-43 Human genes 0.000 description 1
- 102100028320 Immunoglobulin heavy variable 3-48 Human genes 0.000 description 1
- 102100028319 Immunoglobulin heavy variable 3-49 Human genes 0.000 description 1
- 102100028317 Immunoglobulin heavy variable 3-53 Human genes 0.000 description 1
- 102100028321 Immunoglobulin heavy variable 3-64 Human genes 0.000 description 1
- 102100027821 Immunoglobulin heavy variable 3-66 Human genes 0.000 description 1
- 102100040231 Immunoglobulin heavy variable 3-7 Human genes 0.000 description 1
- 102100027820 Immunoglobulin heavy variable 3-72 Human genes 0.000 description 1
- 102100028305 Immunoglobulin heavy variable 3-74 Human genes 0.000 description 1
- 102100040234 Immunoglobulin heavy variable 3-9 Human genes 0.000 description 1
- 102100028311 Immunoglobulin heavy variable 4-28 Human genes 0.000 description 1
- 102100028310 Immunoglobulin heavy variable 4-31 Human genes 0.000 description 1
- 102100028306 Immunoglobulin heavy variable 4-34 Human genes 0.000 description 1
- 102100025114 Immunoglobulin heavy variable 4-38-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100028312 Immunoglobulin heavy variable 4-39 Human genes 0.000 description 1
- 102100028308 Immunoglobulin heavy variable 4-4 Human genes 0.000 description 1
- 102100028405 Immunoglobulin heavy variable 4-59 Human genes 0.000 description 1
- 102100029419 Immunoglobulin heavy variable 4-61 Human genes 0.000 description 1
- 102100029414 Immunoglobulin heavy variable 5-51 Human genes 0.000 description 1
- 102100029416 Immunoglobulin heavy variable 6-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100020773 Immunoglobulin kappa variable 1-12 Human genes 0.000 description 1
- 102100020772 Immunoglobulin kappa variable 1-13 Human genes 0.000 description 1
- 102100020946 Immunoglobulin kappa variable 1-16 Human genes 0.000 description 1
- 102100020945 Immunoglobulin kappa variable 1-17 Human genes 0.000 description 1
- 102100020902 Immunoglobulin kappa variable 1-27 Human genes 0.000 description 1
- 102100020901 Immunoglobulin kappa variable 1-33 Human genes 0.000 description 1
- 102100020910 Immunoglobulin kappa variable 1-39 Human genes 0.000 description 1
- 102100027462 Immunoglobulin kappa variable 1D-16 Human genes 0.000 description 1
- 102100027457 Immunoglobulin kappa variable 1D-17 Human genes 0.000 description 1
- 102100030883 Immunoglobulin kappa variable 1D-43 Human genes 0.000 description 1
- 102100027406 Immunoglobulin kappa variable 1D-8 Human genes 0.000 description 1
- 102100027460 Immunoglobulin kappa variable 2D-26 Human genes 0.000 description 1
- 102100027458 Immunoglobulin kappa variable 2D-29 Human genes 0.000 description 1
- 102100027465 Immunoglobulin kappa variable 2D-30 Human genes 0.000 description 1
- 102100022955 Immunoglobulin kappa variable 3-11 Human genes 0.000 description 1
- 102100022965 Immunoglobulin kappa variable 3-15 Human genes 0.000 description 1
- 102100022964 Immunoglobulin kappa variable 3-20 Human genes 0.000 description 1
- 102100027405 Immunoglobulin kappa variable 3D-11 Human genes 0.000 description 1
- 102100027403 Immunoglobulin kappa variable 3D-20 Human genes 0.000 description 1
- 102100038198 Immunoglobulin kappa variable 4-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100038241 Immunoglobulin kappa variable 5-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100034806 Immunoglobulin kappa variable 6-21 Human genes 0.000 description 1
- 101150008942 J gene Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000019298 Lipocalin Human genes 0.000 description 1
- 108050006654 Lipocalin Proteins 0.000 description 1
- 101000680845 Luffa aegyptiaca Ribosome-inactivating protein luffin P1 Proteins 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 102000007999 Nuclear Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010089610 Nuclear Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108010079855 Peptide Aptamers Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 102100030885 Probable non-functional immunoglobulin kappa variable 6D-41 Human genes 0.000 description 1
- 102100020904 Probable non-functional immunoglobulinn kappa variable 1-37 Human genes 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100084022 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) lapA gene Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 101100115711 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) CYT2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100281642 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) FRM2 gene Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102100024554 Tetranectin Human genes 0.000 description 1
- 102000002933 Thioredoxin Human genes 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- YBRHKUNWEYBZGT-WLTAIBSBSA-N Trp-Thr Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 YBRHKUNWEYBZGT-WLTAIBSBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 208000010115 WHIM syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000033355 WHIM syndrome 1 Diseases 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 101150042295 arfA gene Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000005441 aurora Substances 0.000 description 1
- 238000002819 bacterial display Methods 0.000 description 1
- 238000005452 bending Methods 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 101150014721 cdr gene Proteins 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000012938 design process Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 108010069898 fibrinogen fragment X Proteins 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 108010083914 gammaB crystallin Proteins 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008826 genomic mutation Effects 0.000 description 1
- 102000034238 globular proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005896 globular proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- UFFSXJKVKBQEHC-UHFFFAOYSA-N heptafluorobutyric anhydride Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(=O)OC(=O)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F UFFSXJKVKBQEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000054751 human RUNX1T1 Human genes 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002706 hydrostatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 101150087557 omcB gene Proteins 0.000 description 1
- 101150115693 ompA gene Proteins 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 101150040383 pel2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150050446 pelB gene Proteins 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150009573 phoA gene Proteins 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006916 protein interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- BAZAXWOYCMUHIX-UHFFFAOYSA-M sodium perchlorate Chemical compound [Na+].[O-]Cl(=O)(=O)=O BAZAXWOYCMUHIX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910001488 sodium perchlorate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 108010013645 tetranectin Proteins 0.000 description 1
- 108060008226 thioredoxin Proteins 0.000 description 1
- 229940094937 thioredoxin Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
- C12N15/1089—Design, preparation, screening or analysis of libraries using computer algorithms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
- G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
- G16B35/00—ICT specially adapted for in silico combinatorial libraries of nucleic acids, proteins or peptides
- G16B35/20—Screening of libraries
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/567—Framework region [FR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
- C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
- C40B40/00—Libraries per se, e.g. arrays, mixtures
- C40B40/04—Libraries containing only organic compounds
- C40B40/06—Libraries containing nucleotides or polynucleotides, or derivatives thereof
- C40B40/08—Libraries containing RNA or DNA which encodes proteins, e.g. gene libraries
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
- C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
- C40B50/00—Methods of creating libraries, e.g. combinatorial synthesis
- C40B50/06—Biochemical methods, e.g. using enzymes or whole viable microorganisms
-
- G—PHYSICS
- G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
- G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
- G16B35/00—ICT specially adapted for in silico combinatorial libraries of nucleic acids, proteins or peptides
-
- G—PHYSICS
- G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
- G16C—COMPUTATIONAL CHEMISTRY; CHEMOINFORMATICS; COMPUTATIONAL MATERIALS SCIENCE
- G16C20/00—Chemoinformatics, i.e. ICT specially adapted for the handling of physicochemical or structural data of chemical particles, elements, compounds or mixtures
- G16C20/60—In silico combinatorial chemistry
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Library & Information Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Evolutionary Biology (AREA)
- Theoretical Computer Science (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本出願は、2010年7月16日に提出された米国仮特許出願第61/365,194号に対する優先権を主張し、参照によってその全体が本明細書において組み込まれる。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される:
(項目1)
構造:[TN1]−[DH]−[N2]−[H3−JH]を有するCDRH3配列を含むポリペプチドをコードする少なくとも約10 4 のポリヌクレオチドを含む合成ポリヌクレオチドのライブラリーであって、
TN1は、表9〜10および18〜26のTN1ポリペプチドのいずれかに相当するポリペプチド、または表25〜26のTN1ポリヌクレオチドのいずれかの翻訳によって産生されるポリペプチドであり、
DHは、表9、11、17〜25、および28のDHポリペプチドのいずれかに相当するポリペプチド、または表16、25、および27のDHコードポリヌクレオチドのいずれかの翻訳によって産生されるポリペプチドであり、
N2は、表9、12、18〜25、および30のN2ポリペプチドのいずれかに相当するポリペプチド、または表25および29のN2コードポリヌクレオチドのいずれかの翻訳によって産生されるポリペプチドであり、及び
H3−JHは、表9、13、15、18〜25、および32のH3−JHポリペプチドのいずれかに相当するポリペプチドまたは表14、25、および31のH3−JHコードポリヌクレオチドのいずれかの翻訳によって産生されるポリペプチドである、ライブラリー。
(項目2)
前記ライブラリーにおける配列の少なくとも約1%、5%、または10%が、提供される構造を有する、項目1に記載のライブラリー。
(項目3)
前記ポリヌクレオチドが、表23〜25のいずれか1つにおいて提供されるTN1、DH、N2、およびH3−JHポリペプチドのセットによって産生されるCDRH3ポリペプチドをコードする、項目1に記載のライブラリー。
(項目4)
前記ポリヌクレオチドが、表26において提供されるTN1ポリペプチドのセット、表28において提供されるDHポリペプチドのセット、表30において提供されるN2ポリペプチドのセット、および表32において提供されるH3−JHポリペプチドのセットによって産生されるCDRH3ポリペプチドをコードする、項目1に記載のライブラリー。(項目5)
抗原に結合する抗体を単離するために項目1に記載のライブラリーを使用する方法であって、前記ライブラリーのポリペプチド発現産物を抗原と接触させるステップおよび前記
抗原に結合するポリペプチド発現産物を単離するステップを含む、方法。
(項目6)
N結合型グリコシル化部位、脱アミド化モチーフ、および/またはCys残基の数は、生物学的供給源由来のレパートリーの増幅によって産生されるライブラリーと比較して低下しているまたは削減されている、項目1に記載のライブラリー。
(項目7)
1つまたは複数の軽鎖可変ドメインポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、項目1に記載のライブラリー。
(項目8)
前記ポリペプチドは、完全長IgGとして発現される、項目7に記載のライブラリー。(項目9)
項目8に記載のライブラリーのポリペプチド発現産物。
(項目10)
項目9に記載のポリペプチド発現産物から単離される抗体。
(項目11)
項目1に記載のライブラリーを含有するベクター。
(項目12)
項目11に記載のベクターを含有する宿主細胞。
(項目13)
前記宿主細胞は、酵母細胞である、項目12に記載の宿主細胞。
(項目14)
前記酵母は、出芽酵母である、項目13に記載の酵母細胞。
(項目15)
項目1に記載のライブラリーを含有するキット。
(項目16)
コンピューター読み取り可能な形式の、項目1に記載のライブラリーの代理物。
(項目17)
構造:[TN1]−[DH]−[N2]−[H3−JH]を有するCDRH3配列を含むポリペプチドをコードする少なくとも約10 4 のポリヌクレオチドを含む合成ポリヌクレオチドのライブラリーであって、
TN1は、表9〜10および18〜26のTN1ポリペプチドのいずれかと少なくとも約80%、90%、もしくは95%同一であるポリペプチドまたは表25〜26のTN1ポリヌクレオチドのいずれかの翻訳によって産生されるポリペプチドと少なくとも約80%、90%、もしくは95%同一であるポリペプチドであり、
DHは、表9、11、17〜25、および28のDHポリペプチドのいずれかと少なくとも約80%、90%、もしくは95%同一であるポリペプチドまたは表16、25、および27のDHコードポリヌクレオチドのいずれかの翻訳によって産生されるポリペプチドと少なくとも約80%、90%、もしくは95%同一であるポリペプチドであり、
N2は、表9、12、18〜25、および30のN2ポリペプチドのいずれかと少なくとも約80%、90%、もしくは95%同一であるポリペプチドまたは表25および29のN2コードポリヌクレオチドのいずれかの翻訳によって産生されるポリペプチドと少なくとも約80%、90%、もしくは95%同一であるポリペプチドであり、及び
H3−JHは、表9、13、15、18〜25、および32のH3−JHポリペプチドのいずれかと少なくとも約80%、90%、もしくは95%同一であるポリペプチドまたは表14、25、および31のH3−JHコードポリヌクレオチドのいずれかの翻訳によって産生されるポリペプチドと少なくとも約80%、90%、もしくは95%同一であるポリペプチドである、ライブラリー。
(項目18)
軽鎖可変領域をコードする合成ポリヌクレオチドのライブラリーであって、
前記軽鎖可変領域は、
(a)1つもしくは複数の位置4、49、および46で異なるVK1−05配列;
(b)1つもしくは複数の位置4、49、46、および66で異なるVK1−12配列;(c)1つもしくは複数の位置4、49、および66で異なるVK1−33配列;
(d)1つもしくは複数の位置4、49、および46で異なるVK1−39配列;
(e)1つもしくは複数の位置2、4、46、および49で異なるVK2−28配列;
(f)1つもしくは複数の位置2、4、36、および49で異なるVK3−11配列;
(g)1つもしくは複数の位置2、4、48、および49で異なるVK3−15配列;
(h)1つもしくは複数の位置2、4、48、および49で異なるVK3−20配列;ならびに
(i)1つもしくは複数の位置4、46、49、および66で異なるVK4−1配列から成る群から選択される、ライブラリー。
(項目19)
前記ライブラリーは、表3において提供される2つ以上の軽鎖ポリペプチド配列と少なくとも約80%、90%、または95%同一であるポリペプチド配列を含む軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む、項目18に記載のライブラリー。
(項目20)
前記軽鎖可変領域は、表3において提供されるポリペプチド配列を含む、項目18に記載のライブラリー。
(項目21)
軽鎖可変領域をコードする合成ポリヌクレオチドのライブラリーであって、前記軽鎖可変領域のポリペプチド配列は、可変軽鎖ポリペプチド配列の位置89〜94の2つまたは3つの残基で異なる、ライブラリー。
(項目22)
前記ライブラリーは、表5〜7において提供される2つ以上のポリヌクレオチド配列の翻訳によって産生されるポリペプチドと少なくとも約80%、90%、または95%同一であるポリペプチド配列を含む軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む、項目21に記載のライブラリー。
(項目23)
前記軽鎖可変領域は、表5〜7において提供されるポリヌクレオチド配列の翻訳によって産生されるポリペプチドを含む、項目21に記載のライブラリー。
(項目24)
コンピューター読み取り可能な形式の、以下のいずれかの代理物:
表10、23〜25、および26のTN1ポリペプチド;
表11、23〜25、および28のDHポリペプチド;
表12、23〜25、および30のN2ポリペプチド;
表13、15、17、23〜25、および32のH3−JHポリペプチド;
表25〜26のTN1ポリヌクレオチド;
表25および27のDHポリヌクレオチド;
表25および29のN2ポリヌクレオチド;ならびに
表25および31のH3−JHポリヌクレオチド。
(項目25)
ヒト免疫前セットのポリヌクレオチド配列の代理物(付録A)またはコンピューター読み取り可能な形式の、そのポリペプチド発現産物。
(項目26)
CDRH3配列を含むポリペプチドをコードする合成ポリヌクレオチドのライブラリーを作製するための方法であって、
(a)TN1、DH、N2、およびH3−JHセグメントを含有する理論的セグメントプールを提供するステップ;
(b)CDRH3配列の参照セットを提供するステップ;
(c)(b)の参照セットにおけるそれぞれのCDRH3配列に最も近いマッチ(複数可
)を同定するために(a)の理論的セグメントプールを利用するステップ;
(d)合成ライブラリーにおける包含のために理論的セグメントプールからセグメントを選択するステップ;ならびに
(e)合成CDRH3ライブラリーを合成するステップを含む、方法。
(項目27)
項目26の方法に従って作製されるポリヌクレオチドのライブラリー。
(項目28)
前記合成ライブラリーにおける包含のために選択されるセグメントは、CDRH3配列の参照セットにおけるそれらのセグメント使用ウエイトに従って選択される、項目26に記載の方法。
(項目29)
前記合成ライブラリーにおける包含のために選択されるセグメントは、1つまたは複数の物理化学的特性に従って選択される、項目26に記載の方法。
(項目30)
前記CDRH3配列の参照セットは、免疫前CDRH3配列の参照セットである、請求項26に記載の方法。
(項目31)
理論的セグメントプールではなく、参照セットにおいて存在するさらなるTN1およびN2セグメントを選択するステップをさらに含む、項目26に記載の方法。
(項目32)
終止コドンは、前記ライブラリーから低下しているまたは削減されている、項目26に記載の方法。
(項目33)
対がないCys残基、N結合型グリコシル化モチーフ、および脱アミド化モチーフは、前記ライブラリーの翻訳産物において低下しているまたは削減されている、項目26に記載の方法。
(項目34)
前記DHセグメントおよびH3−JHセグメントは、前記参照セットにおけるCDRH3配列とのマッチング前に連続的に切断される、項目26に記載の方法。
(項目35)
DHおよびN2またはその組み合わせから成る群から選択されるセグメント中に1つまたは2つの縮退コドンを導入するステップをさらに含む、項目26に記載の方法。
(項目36)
H3−JHセグメント中に1つの縮退コドンを導入するステップをさらに含む、項目26に記載の方法。
(項目37)
項目26に記載のライブラリーのポリペプチド発現産物。
(項目38)
項目37に記載のポリペプチド発現産物から単離される抗体。
(項目39)
CDRL3ライブラリーをコードする合成ポリヌクレオチドを作製するための方法であって、
(i)軽鎖配列の参照セットを得るステップであって、参照セットは、同じIGVL生殖系列遺伝子および/またはその対立遺伝子変異体に由来するVLセグメントを有する軽鎖配列を含有するステップ;
(ii)IGVL遺伝子によってコードされる参照セットにおけるCDRL3位置のそれぞれでどのアミノ酸が存在するかを決定するステップ;
(iii)軽鎖可変ドメインコード配列を合成するステップであって、位置89〜94の2つまたは3つの位置は、参照セットにおける相当する位置に、2つ以上の、5つの最も頻繁に生じるアミノ酸残基をコードする縮退コドンを含有するステップ;および
(iv)前記CDRL3ライブラリーをコードするポリヌクレオチドを合成するステップを含む、方法。
(項目40)
項目39の方法に従って作製されるポリヌクレオチドのライブラリー。
(項目41)
ポリペプチドをコードする合成ポリヌクレオチドのライブラリーであって、
ヒトIGHV配列のKabat残基1〜94を含む1つまたは複数のVHシャーシ;
ヒトCDRH3配列の参照セットから選択される1つまたは複数のTN1セグメント;
ヒトCDRH3配列の参照セットにマッチした理論的セグメントプールから選択される1つまたは複数のDHセグメント;
ヒトCDRH3配列の参照セットから選択される1つまたは複数のN2セグメント;および
ヒトCDRH3配列の参照セットにマッチした理論的セグメントプールから選択される1つまたは複数のH3−JHセグメントを含む、ライブラリー。
その他に定義されない限り、本明細書において使用される技術用語および科学用語はすべて、当業者によって一般に理解される意味を有する。別段の定めがない限り、Kabatのナンバリング方式は、出願の全体にわたって使用される。下記の定義は、当技術分野における用語を補足するものであり、本出願において記載される実施形態に関するものである。
本発明によって提供された抗体ライブラリーは、ヒト免疫系によって生成される免疫前のレパートリーのある種の側面を反映するように設計されてもよい。本発明のある種のライブラリーは、ヒトV、D、およびJ遺伝子の集合によって特徴付けられる合理的な設計ならびにヒト重鎖および軽鎖配列(たとえば、それぞれ、その全体が参照によって組み込まれるJackson et al., J. Immunol Methods, 2007, 324: 26;Lee et al., Immunogenetics, 2006, 57: 917;Boyd et al., Science Translational Medicine, 2009, 1: 1−8から公的に知られている生殖系列配列および配列ならびに再配列されたVKおよびVλ配列から編成された配列(これもまたその全体が参照によって組み込まれる国際公開番号WO/2009/036379を参照されたい)の大きなデータベースに基づく。たとえば、さらなる情報は、それぞれ、その全体が参照によって組み込まれるScaviner et al., Exp. Clin. Immunogenet., 1999, 16: 234;Tomlinson et al., J. Mol. Biol., 1992, 227: 799;およびMatsuda et al., J. Exp. Med., 1998, 188: 2151において見つけられてもよい。
(a)1つまたは複数の選択されるヒト抗体重鎖シャーシ(つまり、Kabatの定義を使用すると、重鎖可変領域のアミノ酸1〜94);
(b)ヒトCDRH3配列の参照セットからのヒトIGHDおよびIGHJ生殖系列配列ならびにTN1およびN2配列の抽出に基づいて設計されるCDRH3レパートリー(下記により完全に記載される)であって、(i)TN1セグメント;(ii)DHセグメント;(iii)N2セグメント;(iv)H3−JHセグメントを含むCDRH3レパートリー、
(c)1つまたは複数の選択されるヒト抗体カッパおよび/またはラムダ軽鎖シャーシ、ならびに
(d)ヒトIGLVおよびIGLJ生殖系列配列に基づいて設計されるCDRL3レパートリーであって、「L」はカッパまたはラムダ軽鎖であってもよいCDRL3レパートリーを含む、レパートリーを提供する。
ある実施形態では、提供されるライブラリーは、天然に存在する可変ドメイン配列(たとえばIGHVおよびIGLV遺伝子)に基づく、選択されるシャーシ配列から構築される。そのようなシャーシ配列の選択は、任意にまたはある種のあらかじめ決定された基準の定義を通して行うことができる。たとえば、非重複再配列抗体配列を含有する電子データベースであるKabatデータベースは、最も頻繁に示される重鎖および軽鎖生殖系列配列について問い合わせることができる。BLASTなどのようなアルゴリズムまたはSoDAなどのようなより特殊化したツール(その全体が参照によって組み込まれるVolpe et al., Bioinformatics, 2006, 22: 438−44)は、機能的な抗体を生成するために最も頻繁に使用される生殖系列ファミリーを同定するために、生殖系列配列(たとえばV BASE2データベースを使用;たとえば、その全体が参照によって組み込まれるRetter et al., Nucleic Acids Res., 2005, 33: D671−D674を参照されたい)またはヒトV、D、およびJ遺伝子の類似する集合と再配列抗体配列を比較するために使用することができる。
本発明において使用することができる重鎖シャーシ配列の設計および選択は、米国特許出願公開第2009/0181855号および米国特許出願公開第2010/0056386号および国際公開番号WO/2009/036379において詳細に記載されており、それぞれ、その全体が参照によって組み込まれ、そのため、本明細書で簡潔に記載されるのみである。
本発明において使用することができる軽鎖シャーシ配列の設計および選択は、米国特許出願公開第2009/0181855号および米国特許出願公開第2010/0056386号および国際公開番号WO/2009/036379において詳細に記載されており、それぞれ、その全体が参照によって組み込まれ、そのため、本明細書で簡潔に記載されるのみである。本発明の軽鎖シャーシは、カッパおよび/またはラムダ軽鎖配列に基づくものであってもよい。
ヒト生殖系列レパートリーは、少なくとも6つのIGHJ遺伝子(IGHJ1、IGHJ2、IGHJ3、IGHJ4、IGHJ5、およびIGHJ6;表14に含まれる、主要な対立遺伝子は「01」と称され、選択される対立遺伝子変異体は、「02」または「03」と称される)ならびに少なくとも27のIGHD遺伝子(表16、対立遺伝子変異体を含む)を含有する。いくつかの実施形態では、本発明は、CDRH3ポリペプチド配列またはCDRH3配列をコードするポリヌクレオチド配列のライブラリーおよび本明細書において開示される理論的セグメントプールのいずれかのメンバーを含むライブラリーを含む。
(i)1つまたは複数のTN1、DH、N2、およびH3−JHセグメントを含有する理論的セグメントプールを提供するステップ;
(ii)CDRH3配列の参照セットを提供するステップ;
(iii)(ii)の参照セットにおけるそれぞれのCDRH3配列に最も近いマッチ(複数可)を同定するために(i)の理論的セグメントプールを利用するステップ;ならびに
(iv)合成ライブラリーにおける包含のために理論的セグメントプールからセグメントを選択するステップを含む、方法を提供する。
GEIM800106 ベータタンパク質についてのベータストランド指標(Geisow−Roberts, 1980);GEIM800107アルファ/ベータタンパク質についてのベータストランド指標、GEIM800108 非周期的指標(Geisow−Roberts, 1980);GEI M800109 アルファタンパク質についての非周期的指標(Geisow−Roberts, 1980);GEIM800110 ベータタンパク質についての非周期的指標(Geisow−Roberts, 1980);GEIM800111 アルファ/ベータタンパク質についての非周期的指標(Geisow−Roberts, 1980);GOLD730101 疎水性因子(Goldsack−Chalifoux, 1973);GOLD730102 残基体積(Goldsack−Chalifoux, 1973);GRAR740101 組成(Grantham, 1974);GRAR740102 極性(Grantham, 1974)、GRAR740103 体積(Grantham, 1974);GUYH850101 分配エネルギー(Guy, 1985);Charton−Charton(1982)によって引用されるHOPA770101 水和数(Hopfinger, 1971)、HOPT810101 親水性値(Hopp−Woods, 1981);HUTJ700101 熱容量(Hutchens, 1970);HUTJ700102 絶対エントロピー(Hutchens, 1970);HUTJ700103 生成エントロピー(Hutchens, 1970);ISOY800101 アルファヘリックスの相対的標準化頻度 (Isogai et al., 1980);ISOY800102 拡張構造の相対的標準化頻度(Isogai et al., 1980);ISOY800103 屈曲の相対的標準化頻度(Isogai et al., 1980);ISOY800104 屈曲Rの相対的標準化頻度(Isogai et al., 1980);ISOY800105 屈曲Sの相対的標準化頻度(Isogai et al., 1980);ISOY800106 ヘリックス末端の相対的標準化頻度(Isogai et al., 1980);ISOY800107 2重屈曲の相対的標準化頻度(Isogai et al., 1980);ISOY800108 コイルの相対的標準化頻度(Isogai et al., 1980);JANJ780101 平均最近接包絡面積(Janin et al., 1978);JANJ780102 埋込残基のパーセンテージ(Janin et al., 1978);JANJ780103 露出残基のパーセンテージ(Janin et al., 1978);JANJ790101 埋込および接触可能モル分率の比(Janin, 1979);JANJ790102 移動自由エネルギー(Janin, 1979);JOND750101 疎水性(Jones, 1975);JOND750102 pK (−COOH) (Jones, 1975);JOND920101 相対的出現頻度(Jones et al., 1992);JOND920102 相対的突然変異性(Jones et al., 1992)、JUKT750101 アミノ酸分布(Jukes et al., 1975);JUNJ780101 配列頻度(Jungck, 1978);KANM800101 ヘリックスの平均相対的可能性(Kanehisa−Tsong, 1980);KANM800102 ベータシートの平均相対的可能性(Kanehisa−Tsong, 1980);KANM800103 内部ヘリックスの平均相対的可能性(Kanehisa−Tsong, 1980);KANM800104 内部ベータシートの平均相対的可能性(Kanehisa−Tsong, 1980);KARP850101 強固な隣接物がないことについての可動性パラメーター(Karplus−Schulz, 1985);KARP850102 1つの強固な隣接物についての可動性パラメーター(Karplus−Schulz, 1985);KARP850103 2つの強固な隣接物についての可動性パラメーター(Karplus−Schulz, 1985);KHAG800101 カー定数インクリメント(Khanarian−Moore, 1980);KLEP840101 正味の電荷(Klein et al., 1984);KRIW710101 側鎖相互作用パラメーター(Krigbaum−Rubin, 1971);KRIW790101 側鎖相互作用パラメーター(Krigbaum−Komoriya, 1979);KRIW790102 水によって占められる部位の画分(Krigbaum−Komoriya, 1979);KRIW790103 側鎖体積(Krigbaum−Komoriya, 1979);KYTJ820101 ヒドロパシー指標(Kyte−Doolittle, 1982);LAWE840101 移動自由エネルギー、CHP/水(Lawson et al., 1984);LEVM760101 疎水性パラメーター(Levitt, 1976);LEVM760102 側鎖のC−アルファおよび重心の間の距離(Levitt, 1976);LEVM760103 側鎖角度シータ(AAR)(Levitt, 1976);LEVM760104 側鎖ねじれ角ファイ(AAAR)(Levitt, 1976);LEVM760105 側鎖の回転半径(Levitt, 1976);LEVM760106 ファンデルワールスパラメーターR0(Levitt, 1976)、LEVM760107 ファンデルワールスパラメーターイプシロン(Levitt, 1976);LEVM780101 重要性を有するアルファヘリックスの標準化頻度(Levitt, 1978);LEVM780102 重要性を有するベータシートの標準化頻度(Levitt, 1978);LEVM780103 重要性を有する逆ターンの標準化頻度(Levitt, 1978);LEVM780104 重要と考えられないアルファヘリックスの標準化頻度(Levitt, 1978);LEVM780105 重要と考えられないベータシートの標準化頻度(Levitt, 1978);LEVM780106 重要と考えられない逆ターンの標準化頻度(Levitt, 1978);LEWP710101 ベータ屈曲における存在の頻度(Lewis et al., 1971);LIFS790101 すべてのベータストランドについての立体構造選択(Lifson−Sander, 1979);LIFS790102 パラレルベータストランドについての立体構造選択(Lifson−Sander, 1979);LIFS790103 アンチパラレルベータストランドについての立体構造選択(Lifson−Sander, 1979);MANP780101 平均周囲疎水性(Manavalan−Ponnuswamy, 1978);MAXF760101 アルファヘリックスの標準化頻度(Maxfield−Scheraga, 1976);MAXF760102 拡張構造の標準化頻度(Maxfield−Scheraga, 1976);MAXF760103 ゼータRの標準化頻度(Maxfield−Scheraga, 1976);MAXF760104 左回りのアルファヘリックスの標準化頻度(Maxfield−Scheraga, 1976);MAXF760105 ゼータLの標準化頻度(Maxfield−Scheraga, 1976);MAXF760106 アルファ領域の標準化頻度(Maxfield−Scheraga, 1976);MCMT640101 Jones (1975)によって引用される屈折力(McMeekin et al., 1964);MEEJ800101 HPLC、pH7.4における保持係数(Meek, 1980);MEEJ800102 HPLC、pH2.1における保持係数(Meek, 1980);MEEJ810101 NaClO4における保持係数(Meek−Rossetti, 1981);MEEJ810102 NaH2PO4における保持係数(Meek−Rossetti, 1981);MEIH800101 C−アルファについての平均換算距離(Meirovitch et al., 1980);MEIH800102 側鎖についての平均換算距離(Meirovitch et al., 1980);MEIH800103 平均側鎖配向角(Meirovitch et al., 1980);MIYS850101 有効な分配エネルギー(Miyazawa−Jernigan, 1985);NAGK730101 アルファヘリックスの標準化頻度(Nagano, 1973);NAGK730102 ベータ構造の標準化頻度(Nagano, 1973)、NAGK730103 コイルの標準化頻度(Nagano, 1973);NAKH900101 総タンパク質のアミノ酸組成(Nakashima et al., 1990);NAKH900102 総タンパク質のアミノ酸組成のSD(Nakashima et al., 1990);NAKH900103 mt−タンパク質のアミノ酸組成(Nakashima et al., 1990);NAKH900104 mt−タンパク質の標準化組成(Nakashima et al., 1990);NAKH900105 動物由来のmt−タンパク質のアミノ酸組成(Nakashima et al., 1990);NAKH900106 動物由来の標準化組成(Nakashima et al., 1990);NAKH900107 菌類および植物由来のmt−タンパク質のアミノ酸組成(Nakashima et al., 1990);NAKH900108 菌類および植物由来の標準化組成(Nakashima et al., 1990);NAKH900109 膜タンパク質のアミノ酸組成(Nakashima et al., 1990);NAKH900110 膜タンパク質の標準化組成(Nakashima et al., 1990);NAKH900111 非mt−タンパク質の膜貫通領域(Nakashima et al., 1990);NAKH900112 mt−タンパク質の膜貫通領域(Nakashima et al., 1990);NAKH900113 平均および算出組成の比(Nakashima et al., 1990);NAKH920101 1回貫通タンパク質のCYTのアミノ酸組成(Nakashima−Nishikawa, 1992);NAKH920102 1回貫通タンパク質のCYT2のアミノ酸組成(Nakashima−Nishikawa, 1992);NAKH920103 1回貫通タンパク質のEXTのアミノ酸組成(Nakashima−Nishikawa, 1992);NAKH920104 1回貫通タンパク質のEXT2のアミノ酸組成(Nakashima−Nishikawa, 1992);NAKH920105 1回貫通タンパク質のMEMのアミノ酸組成(Nakashima−Nishikawa, 1992);NAKH920106 複数回貫通タンパク質のCYTのアミノ酸組成(Nakashima−Nishikawa, 1992);NAKH920107 複数回貫通タンパク質のEXTのアミノ酸組成(Nakashima−Nishikawa, 1992);NAKH920108 複数回貫通タンパク質のMEMのアミノ酸組成(Nakashima−Nishikawa, 1992);NISK800101 8 接触数(Nishikawa−Ooi, 1980);NISK860101 14 接触数(Nishikawa−Ooi, 1986);
NOZY710101 移動エネルギー、有機溶媒/水(Nozaki−Tanford, 1971);OOBM770101 原子当たりの平均非結合エネルギー(Oobatake−Ooi, 1977);OOBM770102 原子当たりの短および中距離非結合エネルギー(Oobatake−Ooi, 1977);OOBM770103 原子当たりの長距離非結合エネルギー(Oobatake−Ooi, 1977)、OOBM770104 残基当たりの平均非結合エネルギー(Oobatake−Ooi, 1977);OOBM770105 残基当たりの短および中距離非結合エネルギー(Oobatake−Ooi, 1977);OOBM850101 最適化ベータ構造コイル平衡定数(Oobatake et al., 1985);OOBM850102 逆ターンを形成する最適化傾向(Oobatake et al., 1985);OOBM850103 最適化移動エネルギーパラメーター(Oobatake et al., 1985);OOBM850104 原子当たりの最適化平均非結合エネルギー(Oobatake et al., 1985);OOBM850105 最適化側鎖相互作用パラメーター(Oobatake et al., 1985);PALJ810101 LG由来のアルファヘリックスの標準化頻度 (Palau et al., 1981);PALJ810102CF由来のアルファヘリックスの標準化頻度(Palau et al., 1981);PALJ810103LG由来のベータシートの標準化頻度(Palau et al., 1981);PALJ810104 CF由来のベータシートの標準化頻度(Palau et al., 1981);PALJ810105 LG由来のターンの標準化頻度(Palau et al., 1981);PALJ810106 CF由来のターンの標準化頻度(Palau et al., 1981);PALJ810107 全アルファクラスにおけるアルファヘリックスの標準化頻度(Palau et al., 1981);PALJ810108 アルファ+ベータクラスにおけるアルファヘリックスの標準化頻度(Palau et al., 1981);PALJ810109 アルファ/ベータクラスにおけるアルファヘリックスの標準化頻度(Palau et al., 1981);PALJ810110 全ベータクラスにおけるベータシートの標準化頻度(Palau et al., 1981);PALJ810111 アルファ+ベータクラスにおけるベータシートの標準化頻度(Palau et al., 1981);PALJ810112 アルファ/ベータクラスにおけるベータシートの標準化頻度(Palau et al., 1981);PALJ810113 全アルファクラスにおけるターンの標準化頻度(Palau et al., 1981);PALJ810114 全ベータクラスにおけるターンの標準化頻度(Palau et al., 1981);PALJ810115 アルファ+ベータクラスにおけるターンの標準化頻度(Palau et al., 1981);PALJ810116 アルファ/ベータクラスにおけるターンの標準化頻度(Palau et al., 1981);PARJ860101 HPLCパラメーター(Parker et al., 1986);PLIV810101 分配係数(Pliska et al., 1981);PONP800101 フォールド形態における周囲疎水性(Ponnuswamy et al., 1980);PONP800102 周囲疎水性におけるの平均増加(Ponnuswamy et al., 1980);PONP800103 周囲疎水性におけるの平均増加比(Ponnuswamy et al., 1980);PONP800104 アルファヘリックスにおける周囲疎水性(Ponnuswamy et al., 1980);PONP800105 ベータシートにおける周囲疎水性(Ponnuswamy et al., 1980);PONP800106 ターンにおける周囲疎水性(Ponnuswamy et al., 1980);PONP800107 到達性低下比(Ponnuswamy et al., 1980);PONP800108 周囲残基の平均数(Ponnuswamy et al., 1980);PRAM820101 回帰分析における切片(Prabhakaran−Ponnuswamy, 1982);PRAM820102 回帰分析x 1.0E1における傾斜(Prabhakaran−Ponnuswamy, 1982);PRAM820103 回帰分析における相関係数(Prabhakaran−Ponnuswamy, 1982);PRAM900101 疎水性(Prabhakaran, 1990);PRAM900102 アルファヘリックスにおけるの相対的頻度(Prabhakaran, 1990);PRAM900103 ベータシートにおける相対的頻度(Prabhakaran, 1990);PRAM900104 逆ターンにおける相対的頻度(Prabhakaran, 1990);PTIO830101 ヘリックスコイル平衡定数(Ptitsyn−Finkelstein, 1983);PTIO830102 ベータコイル平衡定数(Ptitsyn−Finkelstein, 1983);QIAN880101 −6のウィンドウ位置でのアルファヘリックスについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880102 −5のウィンドウ位置でのアルファヘリックスについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880103 −4のウィンドウ位置でのアルファヘリックスについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880104 −3のウィンドウ位置でのアルファヘリックスについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880105 −2のウィンドウ位置でのアルファヘリックスについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880106 −1のウィンドウ位置でのアルファヘリックスについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880107 0のウィンドウ位置でのアルファヘリックスについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880108 1のウィンドウ位置でのアルファヘリックスについてのウエイト (Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880109 2のウィンドウ位置でのアルファヘリックスについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880110 3のウィンドウ位置でのアルファヘリックスについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880111 4のウィンドウ位置でのアルファヘリックスについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880112 5のウィンドウ位置でのアルファヘリックスについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880113 6のウィンドウ位置でのアルファヘリックスについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880114 −6のウィンドウ位置でのベータシートについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880115 −5のウィンドウ位置でのベータシートについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880116 −4のウィンドウ位置でのベータシートについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880117 −3のウィンドウ位置でのベータシートについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880118 −2のウィンドウ位置でのベータシートについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880119 −1のウィンドウ位置でのベータシートについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880120 0のウィンドウ位置でのベータシートについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880121 1のウィンドウ位置でのベータシートについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880122 2のウィンドウ位置でのベータシートについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880123 3のウィンドウ位置でのベータシートについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880124 4のウィンドウ位置でのベータシートについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880125 5のウィンドウ位置でのベータシートについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880126 6のウィンドウ位置でのベータシートについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880127 −6のウィンドウ位置でのコイルについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880128 −5のウィンドウ位置でのコイルについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880129 −4のウィンドウ位置でのコイルについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880130 −3のウィンドウ位置でのコイルについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880131 −2のウィンドウ位置でのコイルについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880132 −1のウィンドウ位置でのコイルについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880133 0のウィンドウ位置でのコイルについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880134 1のウィンドウ位置でのコイルについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880135 2のウィンドウ位置でのコイルについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880136 3のウィンドウ位置でのコイルについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880137 4のウィンドウ位置でのコイルについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880138 5のウィンドウ位置でのコイルについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);QIAN880139 6のウィンドウ位置でのコイルについてのウエイト(Qian−Sejnowski, 1988);RACS770101 C−アルファについてのの平均換算距離(Rackovsky−Scheraga, 1977);RACS770102 側鎖についての平均換算距離(Rackovsky−Scheraga, 1977);RACS770103 側鎖の配向性の選択(Rackovsky−Scheraga, 1977);RACS820101 A0(i)におけるの平均の相対的な断片の存在(Rackovsky−Scheraga, 1982);RACS820102 AR(i)におけるの平均の相対的な断片の存在(Rackovsky−Scheraga, 1982);RACS820103 AL(i)におけるの平均の相対的な断片の存在(Rackovsky−Scheraga, 1982);RACS820104 EL(i)におけるの平均の相対的な断片の存在(Rackovsky−Scheraga, 1982);RACS820105 E0(i)におけるの平均の相対的な断片
の存在(Rackovsky−Scheraga, 1982);
RACS820106 ER(i)におけるの平均の相対的な断片の存在(Rackovsky−Scheraga, 1982);RACS820107 A0(i−1)におけるの平均の相対的な断片の存在(Rackovsky−Scheraga, 1982);RACS820108 AR(i−1)におけるの平均の相対的な断片の存在(Rackovsky−Scheraga, 1982);RACS820109 AL(i−1)におけるの平均の相対的な断片の存在(Rackovsky−Scheraga, 1982);RACS820110 EL(i−1)におけるの平均の相対的な断片の存在(Rackovsky−Scheraga, 1982);RACS820111 E0(i−1)におけるの平均の相対的な断片の存在(Rackovsky−Scheraga, 1982);RACS820112 ER(i−1)におけるの平均の相対的な断片の存在(Rackovsky−Scheraga, 1982);RACS820113 シータ(i)の値(Rackovsky−Scheraga, 1982);RACS820114 シータ(i−1)の値(Rackovsky−Scheraga, 1982);RADA880101 chx〜watの移動自由エネルギー(Radzicka−Wolfenden, 1988);RADA880102 oct〜watの移動自由エネルギー(Radzicka−Wolfenden, 1988);RADA880103 vap〜chxの移動自由エネルギー(Radzicka−Wolfenden, 1988);RADA880104 chx〜octの移動自由エネルギー(Radzicka−Wolfenden, 1988);RADA880105 vap〜octの移動自由エネルギー(Radzicka−Wolfenden, 1988);RADA880106 最近接包絡面積(Radzicka−Wolfenden, 1988);RADA880107 外から内へのエネルギー移動(95%埋込)(Radzicka−Wolfenden, 1988);RADA880108 平均極性(Radzicka−Wolfenden, 1988);RICJ880101 N”での相対的な選択値(Richardson−Richardson, 1988);RICJ880102 N’での相対的な選択値(Richardson−Richardson, 1988);RICJ880103 N−capでの相対的な選択値(Richardson−Richardson, 1988);RICJ880104 N1での相対的な選択値(Richardson−Richardson, 1988);RICJ880105 N2での相対的な選択値(Richardson−Richardson, 1988);RICJ880106 N3での相対的な選択値(Richardson−Richardson, 1988);RICJ880107 N4での相対的な選択値(Richardson−Richardson, 1988);RICJ880108 N5での相対的な選択値(Richardson−Richardson, 1988);RICJ880109 Midでの相対的な選択値(Richardson−Richardson, 1988);RICJ880110 C5での相対的な選択値(Richardson−Richardson, 1988);RICJ880111 C4での相対的な選択値(Richardson−Richardson, 1988);RICJ880112 C3での相対的な選択値(Richardson−Richardson, 1988);RICJ880113 C2での相対的な選択値(Richardson−Richardson, 1988);RICJ880114 C1での相対的な選択値(Richardson−Richardson, 1988);RICJ880115 C−capでの相対的な選択値(Richardson−Richardson, 1988);RICJ880116 C’での相対的な選択値(Richardson−Richardson, 1988);RICJ880117 C’’での相対的な選択値(Richardson−Richardson, 1988);ROBB760101 アルファヘリックスについての情報測定値(Robson−Suzuki, 1976);ROBB760102 N末端ヘリックスについての情報測定値(Robson−Suzuki, 1976);ROBB760103 中央のヘリックスについての情報測定値(Robson−Suzuki, 1976);ROBB760104 C末端ヘリックスについての情報測定値(Robson−Suzuki, 1976);ROBB760105 拡張についての情報測定値(Robson−Suzuki, 1976);ROBB760106 プリーツシートについての情報測定値(Robson−Suzuki, 1976);ROBB760107 H結合を伴わない拡張についての情報測定値(Robson−Suzuki, 1976);ROBB760108 ターンについての情報測定値(Robson−Suzuki, 1976);ROBB760109 N末端ターンについての情報測定値(Robson−Suzuki, 1976);ROBB760110 中央のターンについての情報測定値(Robson−Suzuki, 1976);ROBB760111 C末端ターンについての情報測定値(Robson−Suzuki, 1976);ROBB760112 コイルについての情報測定値(Robson−Suzuki, 1976);ROBB760113 ループについての情報測定値(Robson−Suzuki, 1976);ROBB790101 水和自由エネルギー(Robson−Osguthorpe, 1979);ROSG850101 移動によって埋込される平均占有面積(Rose et al., 1985);ROSG850102 平均断片エリア損失(Rose et al., 1985);ROSM880101 溶媒和について未修正の側鎖ヒドロパシー(Roseman, 1988);ROSM880102 溶媒和について修正された側鎖ヒドロパシー(Roseman, 1988);ROSM880103 ヘリックス形成による側鎖ヒドロパシーの損失(Roseman, 1988);SIMZ760101 Charton−Charton(1982)によって引用される移動自由エネルギー(Simon, 1976);SNEP660101 主成分I(Sneath, 1966);SNEP660102 主成分II(Sneath, 1966);SNEP660103 主成分III(Sneath, 1966);SNEP660104 主成分IV(Sneath, 1966);SUEM840101 20CでのZimm−Braggパラメーター(Sueki et al., 1984);SUEM840102 Zimm−Braggパラメーター シグマx 1.0E4(Sueki et al., 1984);SWER830101 最適マッチング疎水性(Sweet−Eisenberg, 1983);TANS770101 アルファヘリックスの標準化頻度(Tanaka−Scheraga, 1977);TANS770102 単離ヘリックスの標準化頻度(Tanaka−Scheraga, 1977);TANS770103 拡張構造の標準化頻度(Tanaka−Scheraga, 1977);TANS770104 鎖反転Rの標準化頻度(Tanaka−Scheraga, 1977);TANS770105 鎖反転Sの標準化頻度(Tanaka−Scheraga, 1977);TANS770106 鎖反転Dの標準化頻度(Tanaka−Scheraga, 1977);TANS770107 左回りのヘリックスの標準化頻度(Tanaka−Scheraga, 1977);TANS770108 ゼータRの標準化頻度(Tanaka−Scheraga, 1977);TANS770109 コイルの標準化頻度(Tanaka−Scheraga, 1977)、TANS770110 鎖反転の標準化頻度(Tanaka−Scheraga, 1977);VASM830101 立体構造状態Aの相対的な占有率(Vasquez et al., 1983);VASM830102 立体構造状態Cの相対的な占有率(Vasquez et al., 1983);VASM830103 立体構造状態Eの相対的な占有率(Vasquez et al., 1983);VELV850101 電子イオン相互作用ポテンシャル(Veljkovic et al., 1985);VENT840101 苦味(Venanzi, 1984);VHEG790101 親油性相への移動自由エネルギー(von Heijne−Blomberg, 1979);WARP780101 側鎖原子当たりの平均相互作用(Warme−Morgan, 1978);WEBA780101 高塩クロマトグラフィーにおけるRF値(Weber−Lacey, 1978);WERD780101 内部に埋込まれる傾向(Wertz−Scheraga, 1978);WERD780102 イプシロン(i)〜イプシロン(ex)の自由エネルギー変化(Wertz−Scheraga, 1978);WERD780103 アルファ(Ri)〜アルファ(Rh)の自由エネルギー変化(Wertz−Scheraga, 1978);WERD780104 イプシロン(i)〜アルファ(Rh)の自由エネルギー変化(Wertz−Scheraga, 1978);WOEC730101 極性要求 (Woese, 1973);WOLR810101 水和ポテンシャル(Wolfenden et al., 1981);WOLS870101 主要な属性値z1(Wold et al., 1987);WOLS870102 主要な属性値z2(Wold et al., 1987);WOLS870103 主要な属性値z3(Wold et al., 1987);YUTK870101 水、pH7.0における変性ギブズエネルギー(Yutani et al., 1987);YUTK870102 水、pH9.0における変性ギブズエネルギー(Yutani et al., 1987);YUTK870103 変性、pH7.0の活性化ギブズエネルギー(Yutani et al., 1987);YUTK870104 変性、pH9.0の活性化ギブズエネルギー(Yutani et al., 1987);ZASB820101 イオン強度への分配係数の依存(Zaslavsky et al., 1982);ZIMJ680101 疎水性(Zimmerman et al., 1968);ZIMJ680102 かさばり(Zimmerman et al., 1968);ZIMJ680103 極性(Zimmerman et al., 1968);ZIMJ680104 等電点(Zimmerman et al., 1968);ZIMJ680105 RFランク(Zimmerman et al., 1968);AURR980101 ヘリックス末端N4’での標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose, 1998);AURR980102 ヘリックス末端N”’での標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose, 1998);AURR980103 ヘリックス末端N”での標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose, 1998);AURR980104 ヘリックス末端N’での標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose, 1998);AURR980105 ヘリックス末端Ncでの標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose, 1998);AURR980106 ヘリックス末端N1での標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose,
1998);AURR980107 ヘリックス末端N2での標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose, 1998);
AURR980108 ヘリックス末端N3での標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose, 1998);AURR980109 ヘリックス末端N4での標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose, 1998);AURR980110 ヘリックス末端N5での標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose, 1998);AURR980111 ヘリックス末端C5での標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose, 1998);AURR980112 ヘリックス末端C4での標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose, 1998);AURR980113 ヘリックス末端C3での標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose, 1998);AURR980114 ヘリックス末端C2での標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose, 1998);AURR980115 ヘリックス末端C1での標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose, 1998);AURR980116 ヘリックス末端Ccでの標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose, 1998);AURR980117 ヘリックス末端C’での標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose, 1998);AURR980118 ヘリックス末端C”での標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose, 1998);AURR980119 ヘリックス末端C”’での標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose, 1998);AURR980120 ヘリックス末端C4’での標準化位置的残基頻度(Aurora−Rose, 1998);ONEK900101 0M尿素に合わせた推定されるペプチドについてのデルタG値(O’Neil−DeGrado, 1990);ONEK900102 ヘリックス形成パラメーター(デルタ デルタG)(O’Neil−DeGrado, 1990);VINM940101 標準化可動性パラメーター(B−値)、平均(Vihinen et al., 1994);VINM940102 強固な隣接物によって囲まれないそれぞれの残基についての標準化可動性パラメーター(B−値)(Vihinen et al., 1994);VINM940103 1つの強固な隣接物によって囲まれるそれぞれの残基についての標準化可動性パラメーター(B−値)(Vihinen et al., 1994);VINM940104 2つの強固な隣接物によって囲まれるそれぞれの残基についての標準化可動性パラメーター(B−値)(Vihinen et al., 1994);MUNV940101 アルファヘリックス立体構造における自由エネルギー(Munoz−Serrano, 1994);MUNV940102 アルファヘリックス領域における自由エネルギー(Munoz−Serrano, 1994);MUNV940103 ベータストランド立体構造における自由エネルギー(Munoz−Serrano, 1994);MUNV940104 ベータストランド領域における自由エネルギー(Munoz−Serrano, 1994);MUNV940105 ベータストランド領域における自由エネルギー(Munoz−Serrano, 1994)、WIMW960101 二重層界面から水へのAcWl−X−LLペプチドの移動の自由エネルギー(Wimley−White, 1996);KIMC930101 熱力学ベータシート傾向(Kim−Berg, 1993);MONM990101 膜貫通ヘリックスについてのターン傾向スケール(Monne et al., 1999);BLAM930101 T4リゾチームにおける位置44のアルファヘリックス傾向(Blaber et al., 1993);PARS000101 B値の分布に基づく中温性のタンパク質のp値(Parthasarathy−Murthy, 2000);PARS000102 B値の分布に基づく好熱性のタンパク質のp値(Parthasarathy−Murthy, 2000);KUMS000101 好熱性のタンパク質の18の非重複ファミリーにおけるアミノ酸残基の分布(Kumar et al., 2000);KUMS000102 中温性のタンパク質の18の非重複ファミリーにおけるアミノ酸残基の分布(Kumar et al., 2000);KUMS000103 好熱性のタンパク質におけるアルファヘリックスにおけるアミノ酸残基の分布(Kumar et al., 2000);KUMS000104 中温性のタンパク質におけるアルファヘリックスにおけるアミノ酸残基の分布(Kumar et al., 2000);TAKK010101 タンパク質安定性への側鎖寄与(kJ/mol)(Takano−Yutani, 2001);FODM020101 piヘリックス内のアミノ酸の傾向(Fodje−Al−Karadaghi, 2002);NADH010101 二状態モデルにおける自己情報価値に基づくヒドロパシースケール(5%到達性)(Naderi−Manesh et al., 2001);NADH010102 二状態モデルにおける自己情報価値に基づくヒドロパシースケール(9%到達性)(Naderi−Manesh et al., 2001);NADH010103 二状態モデルにおける自己情報価値に基づくヒドロパシースケール(16%到達性)(Naderi−Manesh et al., 2001);NADH010104 二状態モデルにおける自己情報価値に基づくヒドロパシースケール(20%到達性)(Naderi−Manesh et al., 2001);NADH010105 二状態モデルにおける自己情報価値に基づくヒドロパシースケール(25%到達性)(Naderi−Manesh et al., 2001);NADH010106 二状態モデルにおける自己情報価値に基づくヒドロパシースケール(36%到達性)(Naderi−Manesh et al., 2001);NADH010107 二状態モデルにおける自己情報価値に基づくヒドロパシースケール(50%到達性)(Naderi−Manesh et al., 2001);MONM990201 膜貫通ヘリックスにおける平均ターン傾向(Monne et al., 1999);KOEP990101 設計された配列に由来するアルファヘリックス傾向;KOEP990102 設計された配列に由来するベータシート傾向;CEDJ970101 細胞外タンパク質におけるアミノ酸の組成(パーセント)(Cedano et al., 1997);CEDJ970102 固定されたタンパク質におけるアミノ酸の組成(パーセント)(Cedano et al., 1997);CEDJ970103 膜タンパク質におけるアミノ酸の組成(パーセント)(Cedano et al., 1997);CEDJ970104 細胞内タンパク質におけるアミノ酸の組成(パーセント)(Cedano et al., 1997);CEDJ970105 核タンパク質におけるアミノ酸の組成(パーセント)(Cedano et al., 1997);FUKS010101 好熱菌の細胞内タンパク質におけるアミノ酸の表面組成(パーセント)(Fukuchi−Nishikawa, 2001);FUKS010102 中温菌の細胞内タンパク質におけるアミノ酸の表面組成(パーセント)(Fukuchi−Nishikawa, 2001);FUKS010103 中温菌の細胞外タンパク質におけるアミノ酸の表面組成(パーセント)(Fukuchi−Nishikawa, 2001);FUKS010104 核タンパク質におけるアミノ酸の表面組成(パーセント)(Fukuchi−Nishikawa, 2001);FUKS010105 好熱菌の細胞内タンパク質におけるアミノ酸の内部組成(パーセント)(Fukuchi−Nishikawa, 2001);FUKS010106 中温菌の細胞内タンパク質におけるアミノ酸の内部組成(パーセント)(Fukuchi−Nishikawa, 2001);FUKS0101072 中温菌の細胞外タンパク質におけるアミノ酸の内部組成(パーセント)(Fukuchi−Nishikawa, 2001);FUKS010108 核タンパク質におけるアミノ酸の内部組成(パーセント)(Fukuchi−Nishikawa, 2001);FUKS010109 好熱菌の細胞内タンパク質におけるアミノ酸の全鎖組成(パーセント)(Fukuchi−Nishikawa, 2001);FUKS010110 中温菌の細胞内タンパク質におけるアミノ酸の全鎖組成(パーセント)(Fukuchi−Nishikawa, 2001);FUKS010111 中温菌の細胞外タンパク質におけるアミノ酸の全鎖組成(パーセント)(Fukuchi−Nishikawa, 2001);FUKS010112 核タンパク質におけるアミノ酸の全鎖組成(パーセント)(Fukuchi−Nishikawa, 2001);AVBF000101 スクリーニング係数ガンマ、局所的(Avbelj, 2000);AVBF000102 スクリーニング係数ガンマ、非局所的(Avbelj, 2000);AVBF000103 斜面トリペプチド、FDPB VFF 中性(Avbelj, 2000);AVBF000104 斜面トリペプチド、LD VFF 中性(Avbelj, 2000);AVBF000105 斜面トリペプチド、FDPB VFF ノーサイド(Avbelj, 2000);AVBF000106 斜面トリペプチド FDPB VFF すべて(Avbelj, 2000);AVBF000107 斜面トリペプチド FDPB PARSE 中性(Avbelj, 2000);AVBF000108 斜面デカペプチド FDPB VFF 中性(Avbelj, 2000);AVBF000109 斜面タンパク質、FDPB VFF 中性(Avbelj, 2000);YANJ020101 gaussian進化的手法による側鎖立体構造(Yang et al., 2002);MITS020101 両親媒性指標(Mitaku et al., 2002);TSAJ990101 ProtOrを使用する、結晶水を含む体積(Tsai et al., 1999);TSAJ990102 ProtOrを使用する、結晶水を含まない体積;COSI940101 電子イオン相互作用ポテンシャル値(Cosic, 1994);PONP930101 疎水性スケール(Ponnuswamy, 1993);WILM950101 0.1%TFA/MeCN/H2Oを用いるRP−HPLC、C18における疎水性係数(Wilce et al. 1995);WILM950102 0.1%TFA/MeCN/H2Oを用いるRP−HPLC、C8における疎水性係数(Wilce et al. 1995);WILM950103 0.1%TFA/MeCN/H2Oを用いるRP−HPLC、C4における疎水性係数(Wilce et al. 1995);WILM950104 0.1%TFA/2−PrOH/MeCN/H2Oを用いるRP−HPLC、C18における疎水性係数(Wilce et al. 1995);KUHL950101 親水性スケール(Kuhn et al., 1995);GUOD860101 pH2での保持係数(Guo et al., 1986);JURD980101 修飾Kyte−Doolittle疎水性スケール(Juretic et al., 1998);
BASU050101 接触マトリックスから得られる相互作用スケール(Bastolla et al., 2005);BASU050102 単一ドメイン球状タンパク質に対する相関係数の平均を最大限にすることによって得られる相互作用スケール(Bastolla et al., 2005);BASU050103 TIMバレルフォールドを共有する配列のペアに対する相関係数の平均を最大限にすることによって得られる相互作用スケール(Bastolla et al., 2005);SUYM030101 リンカー傾向指標(Suyama−Ohara, 2003);PUNT030101 MPtopoデータベースにおける1d_Helix由来の情報ベースの膜傾向スケール(Punta−Maritan, 2003);PUNT030102 MPtopoデータベースにおける3D_Helix由来の情報ベースの膜傾向スケール(Punta−Maritan, 2003);GEOR030101 すべてのデータセットからのリンカー傾向(George−Heringa, 2003);GEOR030102 1−リンカーデータセットからのリンカー傾向(George−Heringa, 2003);GEOR030103 2−リンカーデータセットからのリンカー傾向(George−Heringa, 2003);GEOR030104 3−リンカーデータセットからの(George−Heringa, 2003);GEOR030105 小さなデータセット(リンカー長は6残基未満)からのリンカー傾向(George−Heringa, 2003);GEOR030106 中程度のデータセット(リンカー長は6〜14残基)からのリンカー傾向(George−Heringa, 2003);GEOR030107 長いデータセット(リンカー長は14残基を超える)からのリンカー傾向(George−Heringa, 2003);GEOR030108 ヘリックス(DSSPによって注釈)データセットからのリンカー傾向(George−Heringa, 2003);GEOR030109 非ヘリックス(DSSPによって注釈)データセットからのリンカー傾向(George−Heringa, 2003);ZHOH040101 情報ベースの原子−原子ポテンシャルの安定性スケール(Zhou−Zhou, 2004);ZHOH040102 突然変異実験から抽出される相対的な安定性スケール(Zhou−Zhou, 2004);ZHOH040103 埋没性(buriability)(Zhou−Zhou, 2004);BAEK050101 リンカー指標(Bae et al., 2005);HARY940101 タンパク質内部に埋込まれる残基の平均体積(Harpaz et al., 1994);PONJ960101 残基の平均体積(Pontius et al., 1996);DIGM050101 静水圧非対称指標、PAI(Di Giulio, 2005);WOLR790101 疎水性指標(Wolfenden et al., 1979);OLSK800101 平均内部選択(Olsen, 1980);KIDA850101 疎水性関連指標(Kidera et al., 1985);GUYH850102 Wertz−Scheraga指標から計算される見かけ上の分配エネルギー(Guy, 1985);GUYH850103 Robson−Osguthorpe指標から計算される見かけ上の分配エネルギー(Guy, 1985);GUYH850104 Janin指標から計算される見かけ上の分配エネルギー(Guy, 1985);GUYH850105 Chothia指標から計算される見かけ上の分配エネルギー(Guy, 1985);ROSM880104 アミノ酸側鎖、中性形態のヒドロパシー(Roseman, 1988);ROSM880105 アミノ酸側鎖のヒドロパシー、pH7.0におけるpi値(Roseman, 1988);JACR890101 IFHスケールからのウエイト(Jacobs−White, 1989);COWR900101 疎水性指標、3.0pH(Cowan−Whittaker, 1990)、BLAS910101 側鎖疎水性値(Black−Mould, 1991);CASG920101 天然のタンパク質構造からの疎水性スケール(Casari−Sippl, 1992);CORJ870101 NNEIG指標(Cornette et al., 1987);CORJ870102 SWEIG指標(Cornette et al., 1987);CORJ870103 PRIFT指標(Cornette et al., 1987);CORJ870104 PRILS指標(Cornette et al., 1987);CORJ870105 ALTFT指標(Cornette et al., 1987)、CORJ870106 ALTLS指標(Cornette et al., 1987);CORJ870107 TOTFT指標(Cornette et al., 1987);CORJ870108 TOTLS指標(Cornette et al., 1987);MIYS990101 Bethe近似によって誘導される相対的分配エネルギー(Miyazawa−Jernigan, 1999);MIYS990102 最適化相対的分配エネルギー−方法A(Miyazawa−Jernigan, 1999);MIYS990103 最適化相対的分配エネルギー−方法B(Miyazawa−Jernigan, 1999);MIYS990104 最適化相対的分配エネルギー−方法C(Miyazawa−Jernigan, 1999);MIYS990105 最適化相対的分配エネルギー−方法D(Miyazawa−Jernigan, 1999);ENGD860101 疎水性指標(Engelman et al., 1986);ならびにFASG890101 疎水性指標(Fasman, 1989)を含むことができる。
本発明のCDRH3ライブラリーは、TN1、DH、N2、およびH3−JHセグメントを含む。したがって、本発明のある実施形態では、CDRH3ライブラリーの全体的な設計は、以下の式によって示すことができる:
[TN1]−[DH]−[N2]−[H3−JH]。
CA[R/K/T]-[TN1]-[DH]-[N2]-[H3-JH]-[WG(Q/R/K)G]。
CA[R/K]-[TN1]-[DH]-[N2]-[H3-JH]-[WG(Q/R/K)G]。
セグメントの長さもまた、たとえば、CDRH3長の特定の分布を有するライブラリーを産生するために多様化されてもよい。本発明の一実施形態では、H3−JHセグメントは、約0〜約10アミノ酸長であり、DHセグメントは、約0〜約12アミノ酸長であり、TN1セグメントは、約0〜約4アミノ酸長であり、N2セグメントは、約0〜約4アミノ酸長である。ある実施形態では、H3−JHセグメントは、少なくとも約0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、および/または10アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、DHセグメントは、少なくとも約0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、および/または12アミノ酸長である。ある実施形態では、TN1セグメントは、少なくとも約0、1、2、3、または4アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、N2アミノ酸は、少なくとも約0、1、2、3、または4アミノ酸長である。本発明のある実施形態では、CDRH3は、約2〜約35、約2〜約28、または約5〜約26アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、CDRH3は、少なくとも約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、および/または35アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、本発明のセグメントまたはCDRH3のいずれかの長さは、アミノ酸の特定の数未満であってもよく、アミノ酸の数は、それぞれのセグメントまたはCDRH3について上記に提供される整数のいずれか1つを使用して定められる。本発明のある実施形態では、特定の数の範囲は、包含的なまたは排他的な範囲の下限および上限として、上記に提供される整数のいずれか2つを使用して定められる。上限および下限を定める、提供される整数の組み合わせはすべて、企図される。
CDRL3ライブラリーの設計および軽鎖配列は、米国特許出願公開第2009/0181855号および第2010/0056386号ならびに国際公開番号WO/2009/036379において詳細に記載されており、それぞれ、その全体が参照によって組み込まれ、そのため、本明細書で簡潔に記載されるのみである。本明細書において記載されるライブラリーは、同様の原理に従って設計されるが、3つの重要な差異を伴う、すなわち、本発明のライブラリーは、(1)CDRL1およびCDRL2における多様性、(2)フレームワーク領域における多様性、ならびに/または(3)上記に定義されるように、ヒト生殖系列様CDRL3配列に厳密に類似するCDRL3を有する軽鎖ライブラリーを産生するように設計されるCDRL3における多様性(表1)を含有する。
いくつかの実施形態では、本発明は、軽鎖可変ドメインが、1つまたは複数のフレームワーク位置2、4、36、46、48、49、および66で異なる、軽鎖可変ドメインのライブラリーを提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、アミノ酸配列が1つまたは複数の位置2、4、36、46、48、49、および66での置換を除いて互いに同一である、少なくとも複数の軽鎖可変ドメインを含む、軽鎖可変ドメインのライブラリーを提供する。ある実施形態では、本発明は、アミノ酸配列が、本明細書において開示される軽鎖可変ドメイン配列のいずれかの少なくとも約70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、および/または99.5%であり、1つまたは複数の位置2、4、36、46、48、49、および66に置換をさらに有する、少なくとも複数の軽鎖可変ドメインを含む軽鎖可変ドメインのライブラリーを提供する。いくつかの実施形態では、これらの位置における包含のために選択されるアミノ酸は、軽鎖可変ドメインの参照セットにおける相当する位置で約2、3、4、5、6、7、8、9、および/または10の最も頻繁に存在するアミノ酸の中から選択される。
(i)軽鎖配列の参照セットを得るステップであって、参照セットは、単一のIGVL生殖系列遺伝子において見つけられるもしくはそれによってコードされる配列および/または単一のIGVL生殖系列遺伝子の対立遺伝子変異体において見つけられるもしくはそれによってコードされる配列から成る群から選択されるVLセグメントを有する軽鎖配列を含有する、ステップ、
(ii)参照セット内のどのフレームワーク位置が、参照セットにおける配列の1つまたは複数のCDR位置に存在する多様性の程度に類似する多様性の程度を有するかを決定するステップ(たとえば、フレームワーク位置における多様性は、参照セットにおける配列のCDR位置に見つけられる多様性の少なくとも約70%、80%、90%、もしくは95%、100%、またはそれ以上である)、
(iii)(ii)において同定されるフレームワーク位置のそれぞれについてのアミノ酸残基の出現頻度を決定するステップ、
(iv)軽鎖可変ドメインコード配列を合成するステップであって、(ii)において同定されるフレームワーク位置は、相当する位置に、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20の最も頻繁に存在するアミノ酸残基((iii)において同定される)を含むように多様化される、系および方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、軽鎖可変ドメインが、1つまたは複数のCDRL1位置28、29、30、30A、30B、30E、31、および32で異なる、軽鎖可変ドメインのライブラリーを提供する(Chothia−Leskナンバリング手法; Chothia and Lesk, J. Mol. Biol., 1987, 196: 901)。いくつかの実施形態では、本発明は、軽鎖可変ドメインが、1つまたは複数のCDRL2位置50、51、53、および55で異なる、軽鎖可変ドメインのライブラリーを提供する。いくつかの実施形態では、これらのCDRL1および/またはCDRL2位置における包含のために選択されるアミノ酸は、軽鎖可変ドメインの参照セットにおける相当する位置で約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、および/または20の最も頻繁に存在するアミノ酸の中から選択される。いくつかの実施形態では、本発明は、軽鎖可変ドメインにおいて多様化されることとなるCDRL1および/またはCDRL2位置を選択するための系および方法であって、
(i)軽鎖配列の参照セットを得るステップであって、参照セットは、単一のIGVL生殖系列遺伝子において見つけられるもしくはそれによってコードされる配列および単一のIGVL生殖系列遺伝子の対立遺伝子変異体において見つけられるもしくはそれによってコードされる配列から成る群から選択されるVLセグメントを有する軽鎖配列を含有する、ステップ、
(ii)どのCDRL1および/またはCDRL2位置が参照セット内で多様であるかを決定するステップ、
(iii)軽鎖可変ドメインコード配列を合成するステップであって、(ii)において同定されるCDRL1および/またはCDRL2位置は、相当する位置に、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20の最も頻繁に存在するアミノ酸残基を含むように多様化される、系および方法を提供する。当業者は、本開示を理解し、本発明が、重鎖配列のCDRH2および/またはCDRH2変異体を開発するための類似の方法を提供することを十分に理解するであろう。
いくつかの実施形態では、本発明は、1つまたは複数の、本明細書において提供される軽鎖配列、たとえば表3および/もしくは表4のポリペプチド配列ならびに/または表5、表6、および/もしくは表7のポリヌクレオチド配列のいずれかを含む軽鎖ライブラリーを提供する。当業者は、本明細書において提供されるすべての軽鎖配列が、本発明の機能的な軽鎖ライブラリーを産生するのに必要であるとは限らないことを認識するであろう。そのため、ある実施形態では、本発明の軽鎖ライブラリーは、上記に記載される配列のサブセットを含有するであろう。たとえば、本発明のある実施形態では、本明細書において提供される軽鎖ポリヌクレオチドおよび/またはポリペプチド配列の少なくとも約10、100、200、300、400、500、600、700、800、900、103、104、および/または105は、ライブラリーに含まれる。いくつかの実施形態では、本発明のライブラリーは、特定の数未満のポリヌクレオチドまたはポリペプチドセグメントを含有してもよく、セグメントの数は、それぞれのセグメントについて上記に提供される整数のいずれか1つを使用して定められる。本発明のある実施形態では、特定の数の範囲は、包含的なまたは排他的な範囲の下限および上限として、上記に提供される整数のいずれか2つを使用して定められる。上限および下限を定める、提供される整数の組み合わせはすべて、企図される。
(ii)IGVL遺伝子によってコードされる参照セットにおけるCDRL3位置のそれぞれでどのアミノ酸が存在するかを決定するステップ(つまり、位置89〜94、包含的);
(iii)軽鎖可変ドメインコード配列を合成するステップであって、配列をコードするそれぞれの軽鎖可変ドメインにおける2つの位置は、参照セットにおける相当する位置に、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20の最も頻繁に存在するアミノ酸残基をコードする縮退コドンを含有する、ステップを含む、系および方法を提供する。
いくつかの実施形態では、もう1つの方法としてまたは本明細書において記載される他の特徴に加えて、本発明は、CDRL3の長さが異なっていてもよいライブラリーを提供する。そのため、本発明は、とりわけ、特定の分布のCDRL3長を有するライブラリーを提供する。長さが8、9、および10のCDRL3ライブラリーが例示されるが、当業者は、本明細書において記載される方法を、これもまた本発明の範囲内にある、異なる長さ(たとえば約5、6、7、11、12、13、14、15、および/または16)のCDRL3を有する軽鎖を産生するために適用することができることを容易に認識するであろう。いくつかの実施形態では、本発明のCDRL3のいずれかの長さは、アミノ酸の特定の数未満であってもよく、アミノ酸の数は、上記に提供される整数のいずれか1つを使用して定義される。本発明のいくつかの実施形態では、特定の数の範囲は、包含的なまたは排他的な範囲の下限および上限として、上記に提供される整数のいずれか2つを使用して定められる。上限および下限を定める、提供される整数の組み合わせはすべて、企図される。
本発明のいくつかの実施形態では、提供されるライブラリーは、1つまたは複数の合成ポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、提供されるライブラリーは、(a)重鎖シャーシポリヌクレオチド;(b)軽鎖シャーシポリヌクレオチド;(c)CDR3ポリヌクレオチド;(d)定常ドメインポリヌクレオチド;および(e)その組み合わせから選択される合成ポリヌクレオチドを含んでいてもよい。当業者らは、そのような合成ポリヌクレオチドが、提供されるライブラリーにおける他の合成または非合成ポリヌクレオチドに連結されてもよいことを十分に理解するであろう。本明細書において提供される合成ポリヌクレオチドは、任意の入手可能な方法によって調製されてもよい。
ある実施形態では、本発明は、酵母細胞が相同組換えを高効率で促進する本質的な能力を利用する。酵母における相同組換えのメカニズムおよびその出願は、下記に簡潔に記載される(たとえば、それぞれ、その全体が参照によって組み込まれる米国特許第6,406,863号;第6,410,246号;第6,410,271号;第6,610,472号;および第7,700,302号もまた参照されたい)。
(a)酵母細胞の中に、
(i)重鎖シャーシまたは軽鎖シャーシ、FRM4の一部分、および定常領域をコードする、直線化されたベクターであって、直線化の部位が、シャーシのFRM3の末端および定常領域の最初の間にある、直線化されたベクターならびに
(ii)直線状で二本鎖のCDR3挿入ヌクレオチド配列のライブラリーであって、CDR3挿入配列のそれぞれが、CDR3をコードするヌクレオチド配列ならびに相同組換えがベクターおよびCDR3挿入配列のライブラリーの間で行われるのを可能にするのに、直線化の部位の(i)のベクターの末端に十分に相同である5’および3’フランキング配列を含む、CDR3挿入ヌクレオチド配列のライブラリー、を形質転換するステップならびに
(b)完全長重鎖または軽鎖をコードするベクターを産生するために、CDR3挿入配列がベクターの中に組み込まれるように、形質転換酵母細胞において、ベクターおよびCDR3挿入配列の間で相同組換えが行われるのを可能にするステップを含む。
本明細書において記載された技術のいずれかまたは他の適した技術によって生成されるポリヌクレオチドのライブラリーは、所望の構造および/または活性を有する抗体を同定するために発現させ、スクリーニングすることができる。抗体の発現は、たとえば、無細胞抽出物(およびたとえばリボソームディスプレイ)、ファージディスプレイ、原核細胞(たとえば細菌ディスプレイ)、または真核細胞(たとえば酵母ディスプレイ)を使用して実行することができる。本発明のある実施形態では、抗体ライブラリーは、酵母において発現される。
上記に記載されるように、抗体リードは、1つもしくは複数の抗原への結合についてまたは生物学的活性について本発明のライブラリーの抗体をスクリーニングすることを含む選択プロセスを通して同定することができる。これらの抗体リードのコード配列は、最初の抗体リードとの関連において導入される多様性を有する二次ライブラリーを生成するためにin vitroにおいてまたはin vivoにおいてさらに突然変異誘発されてもよい。そのような突然変異誘発された抗体リードは、次いで、一次ライブラリーからの最初の抗体リードの選択のために使用される手順に類似する手順に従って、in vitroにおいてまたはin vivoにおいて標的抗原への結合または生物学的活性についてさらにスクリーニングすることができる。一次抗体リードのそのような突然変異誘発および選択は、抗原に対する親和性における段階的な増加を有する抗体を産生する哺乳動物において天然に存在する親和性成熟プロセスを有効に模倣する。
ある実施形態では、本発明は、本明細書において教示されるポリヌクレオチドとハイブリダイズするまたは本明細書において教示されるポリヌクレオチドの相補体とハイブリダイズするポリヌクレオチドを提供する。たとえば、本明細書において教示されるポリヌクレオチドに、低、中、または高ストリンジェンシー条件下でのハイブリダイゼーションおよび洗浄後にハイブリダイズしたままの単離ポリヌクレオチドまたは本明細書において教示されるポリヌクレオチドの相補体は、本発明によって包含される。
本発明のサブライブラリーおよびライブラリーまたはサブライブラリーを含むより大きなライブラリー
当業者に明らかであるように、本発明によって提供されるCDRH3および/またはCDRL3ポリペプチドはまた、代替の足場上にディスプレイされてもよい。いくつかのそのような足場は、抗体に匹敵する特異性および親和性を有する分子をもたらすことが示されてきた。例示的な代替の足場は、フィブロネクチン(たとえばAdNectin)、β−サンドイッチ(たとえばiMab)、リポカリン(たとえばAnticalin)、EETI−II/AGRP、BPTI/LACI−D1/ITI−D2(たとえばKunitzドメイン)、チオレドキシン(たとえばペプチドアプタマー)、プロテインA(たとえばAffibody)、アンキリンリピート(たとえばDARPin)、γBクリスタリン/ユビキチン(たとえばAffilin)、CTLD3(たとえばテトラネクチン)、および(LDLR−Aモジュール)3(たとえばAvimer)に由来するものを含む。たとえば、代替の足場についてのさらなる情報は、たとえば、それぞれ、その全体が参照によって組み込まれるBinz et al., Nat. Biotechnol., 2005 23: 1257およびSkerra, Current Opin. in Biotech., 2007 18: 295−304において提供される。
ライブラリーサイズ
本発明のいくつかの実施形態では、ライブラリーは、約101〜約1020の異なるポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列を含む(たとえば抗体、重鎖、CDRH3、軽鎖、および/またはCDRL3をコードするまたはそれを含む)。いくつかの実施形態では、本発明のライブラリーは、少なくとも約101、102、103、104、105、106、107、108、109、1010、1011、1012、1013、1014、1015、1016、1017、1018、1019、もしくは1020またはそれ以上の異なる抗体、重鎖、CDRH3、軽鎖、および/またはCDRL3ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列を含むように設計される。いくつかの実施形態では、本発明のライブラリーは、特定の数未満のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列を含有してもよく、配列の数は、上記に提供される整数のいずれか1つを使用して定義される。本発明のある実施形態では、特定の数の範囲は、包含的なまたは排他的な範囲の下限および上限として、上記に提供される整数のいずれか2つを使用して定められる。上限および下限を定める、提供される整数の組み合わせはすべて、企図される。
いくつかの実施形態では、本発明は、HPS内に含有される3,571の管理されたヒト免疫前抗体配列のセット、それらの相当するCDRH3配列(付録A)、ならびに/またはコンピューター読み取り可能な形式のこれらのCDRH3配列(ならびに/またはそのTN1、DH、N2、および/またはH3−JHセグメント)の代理物を含む。ある実施形態では、本発明は、CDRH3ライブラリーを産生するための方法であって、理論的セグメントプール由来の候補セグメント(つまりTN1、DH、N2、およびH3−JH)を、HPSにおけるCDRH3配列および/またはCDRH3配列の任意の他のレパートリーとマッチさせるステップを含む、方法を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書において開示される理論的セグメントプール由来の候補セグメントおよび/または物理的ライブラリーへの包含のために選択されるセグメントを含む。
本明細書において記載される方法は、限られた数の対立遺伝子変異体を使用する、H3−JHおよびDHのセグメントの理論的セグメントプールの産生を示すが、当業者は、本明細書において教示される方法が、任意の他の対立遺伝子変異体ならびにすべての非ヒトIGHJおよびIGHD遺伝子を含む任意のIGHJおよびIGHD遺伝子に適用されてもよいことを認識するであろう。その代わりにまたはさらに、本明細書において記載される方法は、たとえば、さらなるTN1および/またはN2セグメントを抽出するために、CDRH3配列の任意の参照セットに適用されてもよい。その代わりにまたはさらに、当業者は、本発明の記載される実施形態のそれぞれが、ベクター、ウイルス、または微生物(たとえば酵母もしくは細菌)内でポリヌクレオチドまたはポリペプチドの形態をしていてもよいことを認識するであろう。さらに、本発明が、完全に列挙される合成ライブラリーを含むので、本発明のある実施形態は、コンピューター読み取り可能な形式の、上記に記載される実施形態のいずれかおよびその使用に関する。
本発明は、限定として解釈されるべきでない以下の実施例によってさらに例証される。本出願の全体にわたって引用されるすべての参考文献、特許、および公開特許出願の内容は、参照によってこれによって組み込まれる。
実施例1.フレームワークおよび/またはCDRL1および/またはCDRL2多様性を有する軽鎖ライブラリー
抗体配列における多様性は、CDRに集中するが、フレームワーク領域におけるある種の残基もまた、抗原認識に影響を及ぼし得るおよび/または親和性を変え得る(それぞれ、その全体が参照によって組み込まれるQueen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86: 10029; Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992, 89: 4285)。これらの残基は、分類されており、たとえば抗体ヒト化のプロセスの間に抗体親和性を改善するフレームワーク置換を行うために使用されてきた(たとえば、参照によってその全体が組み込まれるFoote and Winter, J. Mol. Biol., 1992, 224: 487中の”Vernier” residuesを参照されたい)。重鎖では、バーニア残基は、Kabatナンバリング残基2、27〜30、47〜49、67、69、71、73、78、93〜94、および103を含む。軽鎖では、バーニア残基は、Kabat残基2、4、35〜36、46〜49、64、66、68〜69、71、および98を含む。バーニア残基数は、カッパおよびラムダ軽鎖の配列について同じである(その全体が参照によって組み込まれるChothia et al., J. Mol. Biol., 1985, 186: 651における表4を参照されたい)。さらに、VL−VH界面のフレームワーク位置もまた、親和性に影響を及ぼし得る。重鎖では、界面残基は、Kabat残基35、37、39、45、47、91、93、95、100、および103を含む(その全体が参照によって組み込まれるChothia et al., J. Mol. Biol., 1985, 186: 651)。軽鎖では、界面残基は、Kabat残基34、36、38 44、46、87、89、91、96、および98を含む。
b.バーニアおよび界面位置のそれぞれでの変異のパターンは、以下のように検査した:
i.式1(その全体が参照によって組み込まれるMakowski & Soares, Bioinformatics, 2003, 19: 483からの)は、バーニア位置、界面位置、CDRL1、およびCDRL2についての多様性指標を計算するために使用した。
ここで、dは、多様性指標であり、Nは、20、アミノ酸タイプの総数であり、piは、対象位置でのタイプ「i」のアミノ酸の割合である。総計は、20のアミノ酸タイプに対して実行する。パラメーターdは、単一のアミノ酸タイプが所与の位置で観察される場合、0.05または1/20のその最小値に至るであろう:piは、1つのタイプについては1となり、残りすべてについてはゼロとなる。反対に、アミノ酸タイプがすべて同等に可能性が高い(たとえば、piがすべてのiについて0.05である)場合、dは、1.0のその最大値に至るであろう。
ii.バーニア位置および界面位置のそれぞれについての多様性指標は、CDRL1およびCDRL2における位置についての多様性指標と比較した。
iii.界面位置は、比較的不変であり、d値は最小の0.05に非常に近いことが分かり、したがって、改変しなかった。CDR位置と同等のまたはそれよりも大きな多様性指標を有するバーニア残基(つまり、図1において提供される特定の実施例について0.07のまたはそれを上回る)は、変異のための候補として選択した(図1を参照されたい)。これらの位置に含まれるアミノ酸残基は、それぞれの特定のVK生殖系列についてのヒトVK軽鎖の集合における配列におけるその位置において最も頻繁に存在する2〜3のアミノ酸の中から選択した。
iv.表2は、それぞれの9つの例示される軽鎖生殖系列における変異のために選択された位置を示す。代替のフレームワーク位置は、一次フレームワーク位置未満の多様性指標を有するが、抗原結合に影響を及ぼすように多様性がなお組み込まれてもよい位置を示す。
v.変異のために選択されるフレームワーク位置におけるアミノ酸残基は、以下のように多様化される(表3は、これらの変異体のポリペプチド配列を提供する)。
1.位置2:生殖系列Iは、任意選択でVに変化させた。
2.位置4:生殖系列MまたはLは、任意選択でLまたはMに変化させた。いくつかの実施形態では、その逆ではなくMからLへの変化は、Mが産生、処理、または保存の間に酸化を受け、可能性として抗体の特性を改変し得るので、好ましいくてもよい。
3.位置36:生殖系列Yは、任意選択でFおよびHに変化させた。
4.位置46:生殖系列Lは、任意選択でVに変化させた。
5.位置48:生殖系列Iは、任意選択でLに変化させた。
6.位置49:生殖系列Yは、任意選択でS、F、およびHに変化させた。
7.位置66:生殖系列Gは、任意選択でRおよびEに変化させた。
1.位置28:生殖系列SまたはGは、任意選択でG、A、またはDに変化させた。
2.位置29:生殖系列Vは、任意選択でIに変化させた。
3.位置30:生殖系列Sは、任意選択でN、D、G、T、A、またはRに変化させた。
4.位置30A:生殖系列Hは、任意選択でYに変化させた。
5.位置30B:生殖系列Sは、任意選択でRまたはTに変化させた。
6.位置30E:生殖系列Yは、任意選択でNに変化させた。
7.位置31:生殖系列Sは、任意選択でD、R、I、N、またはTに変化させた。
8.位置32:
生殖系列YまたはNは、任意選択でF、S、またはDに変化させた。
9.位置50:
生殖系列A、D、またはGは、任意選択でG、S、E、K、またはDに変化させた。
10.位置51:
生殖系列GまたはAは、任意選択でA、S、またはTに変化させた。
11.位置53:
生殖系列SまたはNは、任意選択でN、H、S、K、またはRに変化させた。
12.位置55:
生殖系列Eは、任意選択でAまたはQに変化させた。
軽鎖ライブラリーを産生するための様々な方法は、当技術分野において知られている(たとえば米国特許出願公開第2009/0181855号、第2010/0056386号、および国際公開番号WO/2009/036379を参照されたい)。臨床的に検証した抗体配列の分析は、これらの配列が体細胞突然変異前の生殖系列様VL−JL(ここで「L」はカッパまたはラムダ生殖系列配列とすることができる)再配列からのずれをほとんど有していないことを示した(図2)。ここで、生殖系列様再配列は、V部分もJ部分もそれぞれの生殖系列遺伝子と異ならない再配列、特定の例の目的のために、CDRL3の長さが8、9、または10アミノ酸に制限される再配列である(米国特許出願公開第2009/0181855号、第2010/0056386号、および国際公開番号WO/2009/036379を参照されたい)。しかしながら、IGHJK1遺伝子については、WT(Trp−Thr)およびRT(Arg−Thr)配列(最初の2つのN末端残基)の両方は、「生殖系列様」であると考えられ、したがって、そのような配列を含有する全L3再配列が「生殖系列様」であると考えられ。そのため、新しい軽鎖ライブラリーは、同時に、(1)上記に定義されるように、生殖系列様配列からのずれを最小限にし、(2)最大の多様性を生成する目的で設計し、構築した。特に、重要な目的は、臨床的に検証された抗体配列によって最も好都合であることが示される多様性のタイプを最大限にすることであった。特に、設計されたライブラリーは、長さがマッチした生殖系列配列と2つ以下のアミノ酸が異なるCDRL3配列の多様性を最大限にするよう努めた。
以下の実施例は、当技術分野において知られているライブラリーと比較して改善されたCDRH3配列を有する抗体ライブラリーの設計および合成に有用な方法および組成物を記載する。本発明のCDRH3配列は、当技術分野において知られているライブラリーと比較して多様性が増強しているが、ヒト配列の特徴を保持する、合成CDRH3セグメントのコンビナトリアル効率を改善する、ならびに/または合成CDRH3配列および1つもしくは複数の参照セットにおけるヒトCDRH3配列の間のマッチングを改善する。
およそ84,000のヒトおよびマウス重鎖DNA配列を含有するファイルは、BLASTの公的なリソースからダウンロードした(ftp.ncbi.nih.gov/blast/db/FASTA/;ファイル名:igSeqNt.gz;ダウンロード日:2008年8月29日)。これらのおよそ84,000の配列のうち、およそ34,000の配列は、配列ヘッダーアノテーション(sequence header annotation)の分析に基づいてヒト重鎖配列として同定された。次いで、これらの配列は、以下のようにフィルターにかけた:第1に、配列はすべて、それらの相当する(最も近いマッチの)VH生殖系列に従ってそれらのVH領域によって分類した。不正確なもしくは不十分な長さであったまたは広範囲な突然変異によりマッチすることができなかった配列は切り捨てた。第2に、それらの相当する生殖系列VH配列と比較した場合にDNAレベルで5つを超える突然変異を含有するあらゆる配列もまた、切り捨てた。Rada and Milstein, EMBO J., 2001, 20: 4570と一致して、可変領域のN末端部分における突然変異(またはその欠如)が、可変領域のC末端部分における、特にCDRH3における突然変異(またはその欠如)についての保守的な代用物(conservative surrogate)として使用されてもよいことを想定した。CDRH3に対してN末端のVHにおいて5以下のヌクレオチド突然変異を有する配列のみの選択はまた、少し突然変異しているまたは全く突然変異していない(つまり免疫前の特徴を有する)CDRH3配列を選択する可能性も高い。
本実施例は、HPSにおけるCDRH3のTN1、DH、N2、およびH3−JHセグメントを同定するために使用される方法を記載する。ヒトCDRH3配列の設計および合成に対する現在例示されるアプローチは、ヒト免疫系が免疫前CDRH3レパートリーを生成するセグメントV−D−J遺伝子組換えプロセスを模倣する。本明細書で記載されるマッチング方法は、CDRH3の参照セット(たとえばHPS)にわたって、特定のCDRH3を産生するために、どのTN1、DH、N2、およびH3−JHセグメントが使用されているかを決定する。次いで、この情報は、理論的セグメントプール由来のどのTN1、DH、N2、およびH3−JHセグメント(またはTN1およびN2の場合には参照セットにおけるCDRH3配列から抽出されたセグメント)が合成CDRH3ライブラリーに含まれるべきかを決定するために、任意選択で、下記に記載される他の情報(たとえば物理化学的特性)と共に使用される。
合成CDRH3ライブラリーにおける包含を考慮してH3−JHセグメントの理論的セグメントプールを産生するために、以下方法は、表14の12の生殖系列IGHJ配列のうちの7つ(IGHJ1−01、IGHJ2−01、IGHJ3−02、IGHJ4−02、IGHJ5−02、IGHJ6−02、およびIGHJ6−03)の突然変異体を生成するために適用した。これらの7つの対立遺伝子は、それらがヒト配列において最も一般的に存在する対立遺伝子の中にあったので選んだ。H3−JHおよび/またはJH(つまりH3−JHおよびFRM4)を生成するために、表14のすべての配列(いくつかはFRM4においてのみ異なる)を使用するライブラリーもまた、本発明の範囲内にある。方法は、in vivoにおけるV−D−J組換えプロセスの間の接合部の多様性の生成をシミュレートするように意図され、これは、生殖系列遺伝子セグメントに対するヌクレオチドの酵素媒介性の追加および欠失によって行われる。方法は、以下のように進行し、H3−JHセグメントの完全に列挙される理論的セグメントプールをもたらす。
1.前処理は、よく知られているJHフレームワーク領域を産生するJHセグメントの翻訳をコードする第1のヌクレオチドの前に、それらの5’末端に2つのヌクレオチド塩基から成る部分的なコドンを含有するIGHJ遺伝子(IGHJ3−02、IGHJ4−02、IGHJ5−02、IGHJ6−02、およびIGHJ6−03)に適用した。たとえば、IGHJ3−02遺伝子は、JHフレームワーク領域を産生するJHセグメントの翻訳をコードする第1のヌクレオチドの前にATジヌクレオチド配列を含有する(図4、上)。2つのヌクレオチド塩基から成る部分的なコドンはすべて、それらの2つの最も5’の位置にすべての可能なヌクレオチドダブレット(つまりNN)を使用して完成させた(図4、上、IGHJ3−02については2列目)。より具体的には、生殖系列配列におけるほとんどの5’ヌクレオチドは、Nに突然変異させ、さらなるNを、そのヌクレオチドに対して5’に追加した。
2.IGHJ遺伝子IGHJ1−01(図4、中央)およびIGHJ2−01(図4、下)は、JHフレームワーク領域を産生するJHセグメントの翻訳をコードする第1のヌクレオチドの前に、それらの5’末端にゼロおよび1つのヌクレオチド塩基を含有する。これらの遺伝子については、ステップ1において記載する前処理は実行しなかった。代わりに、5’ダブレットは、NNに突然変異させた(図4、中央および下、それぞれの2列目)。そのため、このステップを実行した後、上記に列挙される7つのIGHJ遺伝子のそれぞれは、その最初の2つの5’位置としてNNダブレットを有する変異体に変換された。
3.次いで、ステップ1および2によって産生された配列の5’コドンは、欠失させ、結果として生じるDNA配列の最初の2つの塩基は、続いてNNダブレットに突然変異させた(図4、すべてについて列3〜4)。
4.次いで、ステップ3において産生された配列の5’コドンは、欠失させ、結果として生じるDNA配列の最初の2つの塩基は、続いてNNダブレットに突然変異させた(図4、すべてについて列5〜6)。
5.次いで、ステップ(1)〜(4)によって生成されたポリヌクレオチド配列のそれぞれは、JHフレームワーク領域を産生したそれぞれの配列についてのリーディングフレームから248の親H3−JHポリペプチドセグメント(表15)から成る理論的セグメントプールを得るために翻訳した。
6.親H3−JHポリペプチドセグメントは、FW4を含むJHセグメントの一部分のみが残るまで(つまりゼロアミノ酸長を有するH3−JHセグメント)、一度に1つのアミノ酸を除去することによって、それらのN−末端で切断した。上記に記載される方法は、285のH3−JHセグメントの理論的セグメントプールの産生をもたらした(表13)。
DHセグメントの理論的な2つのプールは、「翻訳方法0」(TM0)または「翻訳方法1」(「TM1」)と称される2つの翻訳方法の1つまたは複数を使用して生成し、それぞれ、27のヒト生殖系列IGHD DNA配列またはそれに由来するセグメントの3つフォワードリーディングフレームにおいて実行した(表16)。
TM1は、「1K DH理論的セグメントプール」(「1K DH」;表11の1,111のDHセグメントを参照されたい)を生成するために使用した。TM1では、3つのフォワードリーディングフレームのいずれかにおいて翻訳の後にも2つの非翻訳塩基を含有する部分的なコドンを有するIGHD配列は、2つの塩基が完成に際してただ一つのアミノ酸のみをコードすることができる場合のみ、完全なコドンを産生するように完成させた。たとえば、TTA−GCT−CGなどのようなDNA配列は、LAに翻訳される2つの完全なコドンおよびCGA、CGC、CGG、またはCGTのいずれもRをコードするので、Rのみをコードすることができる残りの部分的なコドン(CG)を有する。したがって、この配列にTM1を適用することにより、LARがもたらされるであろう。1つを超えるアミノ酸をコードすることができる部分的なコドン(たとえばGAまたはAG)を有する配列については、部分的なコドンは、無視した。表16の27のIGHD配列にTM1を適用することにより、表17の73のDH親セグメントを含有する理論的セグメントプールを生成した(いくつかは終止コドン(「Z」)および対がないCys残基を含有する)。次いで、これらの配列は、2つのアミノ酸のみが残るまで、それらのNおよびC末端でアミノ酸レベルで連続的に欠失させた。切断したセグメントは、それらが終止コドン、対がないCys残基、N結合型グリコシル化モチーフ、または脱アミド化モチーフを含有した場合、切り捨てた。このプロセスにより、表11の1,111のDHセグメントがもたらされた。
表16の27のIGHD遺伝子および対立遺伝子は、4つの塩基が残るまで、それらの5’および3’末端のどちらかまたはその両方で連続的に欠失させ、4つ以上のヌクレオチドの5,076のユニークなポリヌクレオチド配列がもたらされた。これらの5,076の配列は、それらの5’および/または3’末端の0、1、および/または2Nヌクレオチドの系統的な追加にかけた。結果として生じる配列は、TM0を使用して翻訳した。TM0では、完全なコドンのみが翻訳され、部分的なコドン(つまり1または2塩基)は無視される。この方法は、終止コドン、対がないCys残基、N結合型グリコシル化モチーフに至り得る最後のまたは最後の位置の隣のAsn、および脱アミド化モチーフを有するセグメントの排除の後に68,374のユニークなDHポリペプチドセグメントをもたらした(「68K DH理論的セグメントプール」)。PYTHONに対する入力として表16のIGHD遺伝子を使用すると、下記に提供されるコンピューターコードは、68,374のDHセグメントの厳密な理論的セグメントプールを再現するであろう。このプログラムにおいて2つの自由なパラメーターがある:(1)段階的な欠失後の残りのDNA配列の最小長(本実施例において4塩基)および(2)理論的セグメントプールにおける包含のために許容できるペプチド配列の最小長(本実施例において2アミノ酸)。これらのパラメーターは、プログラムの出力を改変するために変更することができる。たとえば、1塩基への第1のパラメーターの変更および1アミノ酸への第2のパラメーターの変更は、18の単一アミノ酸のセグメントを含む、68,396のユニークな配列を有するより大きな理論的セグメントプールに至るであろう。異なる長さに連続的に切断されたDHセグメント、たとえば、1、2、3、もしくは4またはそれ以上のアミノ酸または翻訳前に1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、またはそれ以上のヌクレオチドに切断されたものもまた、本発明の範囲内にある。
本実施例のライブラリーは、いくつかの実例において、当技術分野において知られている他のライブラリーと比較して、それらのTN1およびN2セグメントにおいてより大きな多様性を有するように設計される。TN1およびN2セグメントの多様性は、HPSにおけるCDRH3配列をそれらの構成成分セグメント(つまりTN1、DH、N2、およびH3−JH)にデコンボリューションし、その後に、下記に記載される方法において「新規な」TN1およびN2セグメントを抽出するために、実施例4において記載されるマッチング方法を使用することによって増加させた。本発明の目的のために、「新規な」TN1およびN2セグメントは、CDRH3配列の参照セットにマッチする理論的セグメントプールにおいて現れないTN1およびN2セグメントである。以下は、HPSから新規なTN1およびN2セグメントを抽出するために使用される方法の例である。この方法は、TN1、DH、N2、および/またはH3−JHセグメントを含有する任意の理論的セグメントプールを使用して、CDRH3配列の任意の参照セットから新規なTN1およびN2セグメントを抽出するために一般化することができる。
セグメント使用ウエイトは、理論的セグメントプール(たとえばTSP1ならびにTSP1および実施例7において記載されるように同定された新規なTN1およびN2セグメント)由来のどのセグメントを合成ライブラリーに含むべきかを決定する際にそれらの有用性について計算した。セグメント使用ウエイトは、上記に記載されるマッチング方法および式2の利用によって得た:
ここで、
・w(i):セグメントiについてのウエイト。0≦w(i)≦1。
・Sm:参照CDRH3配列の特定された領域において多くともmのアミノ酸ミスマッチで、1つまたは複数の最良のマッチを含有する配列の数(参照CDRH3セットにおける合計Sのうちの)。ここで、ミスマッチは、Kabat−CDRH3領域に対して算出されるが、CDRH3配列の他の断片もまた、考慮されてもよい。m=3の一定値がここで使用されたが、他の値が使用されてもよいまたは値は、参照CDRH3配列の長さに依存してもよい。
・g(j):参照CDRH3配列jに対する最良のマッチをもたらす縮退セグメントの組み合わせの総数。
・fi(k):参照CDRH3配列jにおける相当する配列断片と比べた、縮退マッチkにおける、TN1、DH、N2、またはH3−JHセグメントの断片のアミノ酸同一性。セグメントがマッチkにおいて現れない場合、断片のアミノ酸同一性はゼロと等しい。アミノ酸類似性(たとえば、疎水性などのようなアミノ酸の物理化学的特性に基づく)などのようなfの他の定義もまた、同一性の代わりに使用されてもよい。
表9におけるテストケース1を参照されたい。CDRH3配列RTAHHFDY(配列番号3660)は、ユニークなセグメントの組み合わせ(g=1)によってTSP1(f=1、簡潔さのために添字は省略する)において同様に位置する。表18は、テストケース1のCDRH3についてのTSP1由来の最良のマッチに相当するセグメントについての使用ウエイトを提供する。
表9におけるテストケース2.1および2.2を参照されたい。CDRH3配列VGIVGAASY(配列番号3661)は、2つの別個のセグメントの組み合わせ(g=2)によってTSP1(f=1)において同様に位置し得る。表19は、テストケース2.1および2.2のCDRH3についてのTSP1由来の最良のマッチに相当するセグメントについての使用ウエイトを提供する。
表9におけるテストケース3.1を参照されたい。CDRH3配列DRYSGHDLGY(配列番号3662)は、ただ一つのアミノ酸差異で、ユニークなセグメントの組み合わせ(g=1)によってTSP1において同様に位置し得る。下記に提供されるように、TN1、N2、およびH3−JHセグメントは、相当する参照配列断片に同様にマッチするが、5つのDHアミノ酸のうちの4つが、同様にマッチする。
HPS由来の配列:DR−YSGHD−LG−Y(配列番号3662)
TSP1において最も近い隣接物:DR−YSGYD−LG−Y(配列番号8719)
したがって、ここで、
f=DHセグメントについて4/5および=TN1、N2、およびH3−JHセグメントについて1となる(表20)。
表9におけるテストケース4.1および4.2を参照されたい。CDRH3配列GIAAADSNWLDP(配列番号3663)は、それぞれただ一つのアミノ酸差異で、2つの別個のセグメントの組み合わせ(g=2)によってTSP1において位置し得る。下記に提供されるように、TN1、DH、およびN2セグメントは、相当する参照配列断片と同様にマッチするが、6つのH3−JHアミノ酸のうちの5つが同様にマッチする。
HPS由来の配列:(−)−GIAAA−D−SNWLDP(配列番号3663)
TSP1において最も近い隣接物:(−)−GIAAA−D−SNWFDP(配列番号8720)
HPS由来の配列:G−IAAA−D−SNWLDP(配列番号3663)
TSP1において最も近い隣接物:G−IAAA−D−SNWFDP(配列番号8720)
ここで、(−)は、「空の」TN1セグメントを示す。
式2の適用により、表21において提供されるセグメント使用ウエイトがもたらされる。
表9のテストケース1〜4.2をすべて同時に含むように上記に記載される個々の計算を拡張することにより、表22のセグメント使用ウエイトがもたらされる。
CDRH3配列ERTINWGWGVYAFDI(配列番号8760)ならびに実施例7においてCDRH3
配列から抽出した新規なTN1およびN2セグメントを参照されたい。この場合、新規なTN1およびN2セグメント(それぞれERTI(配列番号8718)およびWGV)ならびにTSP1由来のDHおよびH3−JHセグメント(それぞれNWGおよびYAFDI(配列番号4540))はそれぞれ、単一の使用ウエイトが割り当てられる。
図5は、合成CDRH3ライブラリーの設計のために使用した一般的な方法を提供する。方法は、入力として、(1)TN1、DH、N2、およびH3−JHセグメントを含有する理論的セグメントプール(たとえばTSPおよび新規なTN1およびN2セグメント)ならびに(2)参照CDRH3配列の集合(たとえばHPS)を使用する。これらの入力から、理論的セグメントプール由来のセグメントの特定のサブセットが、物理的CDRH3ライブラリーへの包含のために選択される。
ELD−1は、入力として、HPSおよびTSP1 1由来のセグメント(9.5×109メンバー)を使用し、HPSにおけるそれらの使用ウエイトによって順番に並べられた、TSP1から、それぞれ、100のTN1、200のDH、141のN2、および100のH3−JHセグメントの出力をもたらし、2.82×108の理論的な複雑性を有するライブラリーを産生する。ELD−1に相当するセグメントは、表23に提供される。ここで、セグメントのすべての組み合わせ(つまりTN1、DH、N2、およびH3−JH)ならびにセグメントの個々のセット(つまりTN1のみ、DHのみ、N2のみ、およびH3−JHのみ)はそれぞれ、理論的セグメントプールを構成することに注意されたい。
この設計のための入力は、HPSならびにTSP1由来のセグメントおよびHPSから抽出された新規なTN1およびN2セグメント(実施例7)である。出力は、(1)TSP1由来のそれぞれ200のDHおよび100のH3−JHセグメントならびに(2)もともとTSP1のTN1およびN2セグメントを含む100のTN1および200のN2セグメントならびにHPSにおける配列から抽出されたものである。新規なTN1およびN2セグメント(つまりTSP1に含まれていない)を抽出するための実施例7において記載される方法の適用は、1,710の新規なTN1セグメントおよび1,024の新規なN2セグメントの同定をもたらした。ELD−2に相当するセグメントは、表24に提供される。ここで、セグメントのすべての組み合わせ(つまりTN1、DH、N2、およびH3−JH)ならびにセグメントの個々のセット(つまりTN1のみ、DHのみ、N2のみ、およびH3−JHのみ)はそれぞれ、理論的セグメントプールを構成することに注意されたい。ELD−1におけるように、ELD−2におけるセグメントはすべて、もっぱらHPSにおけるそれらの使用ウエイトに基づいて包含のために選択した。
この設計についての入力は、ELD−2と同一である。ELD−2におけるように、出力は、(1)TSP1由来のそれぞれ200のDHおよび100のH3−JHセグメントのセットそして(2)もともとTSP1のTN1およびN2セグメントを含む100のTN1および200のN2セグメントのセットならびにHPSにおける配列から抽出されたものである(実施例7)。しかしながら、ELD−3についてのセグメントの選択のために使用したアプローチは、2点において異なる。セグメントの第1の選択された物理化学的特性(疎水性、等電点、およびアルファヘリックス傾向)は、物理的ライブラリーにおける包含のためにセグメントに優先順位をつけるためにセグメント使用ウエイトに加えて使用した。疎水性は、酵母ベースから単離される、発現が不十分な抗体において実験的に不釣合いに多い疎水性DHセグメントを優先順位から外す(de−prioritize)ために使用した。等電点およびアルファヘリックス形成に対する傾向は、当技術分野において知られているCDRH3ライブラリーにおいて比較的未調査であった物理化学的特性空間の領域に位置するセグメントを同定するために利用した(たとえば米国特許出願公開第2009/0181855号および第2010/0056386号ならびに国際公開番号WO/2009/036379)。第2に、セグメント使用ウエイトは、HPSデータセットのブートストラップ分析によって計算した。これらの方法は、より完全に下記に記載される。ELD−3に相当するセグメントは、表25に提供される。ここで、セグメントのすべての組み合わせ(つまりTN1、DH、N2、およびH3−JH)ならびにセグメントの個々のセット(つまりTN1のみ、DHのみ、N2のみ、およびH3−JHのみ)はそれぞれ、理論的セグメントプールを構成することに注意されたい。
ブートストラップ分析(Efron & Tibshirani, An Introduction to the Bootstrap, 1994 Chapman Hill, New York)は、所与のサンプルの統計値の多様性を推定するための広く使用される統計的処理である。この推定は、もとのサンプルにサイズが等しく、復元サンプリングによってそれに由来するいくつかのサブサンプルについて計算された統計値の値に基づく。もとのサンプルのメンバーは、サブサンプルを形成するようにランダムに選び、典型的に、それぞれのサブサンプルにおいて複数回、含まれる(よって「復元サンプリング」)。
www.genome.jp/aaindex/でオンラインで入手可能なAAindexデータベースは、アミノ酸およびペアのアミノ酸の様々な物理化学的および生化学的特性を示す500を超える数的な指数を提供する。これらの特性は、所与の特性に対して多くの場合、有効ないくつかの指数と共に、疎水性、静電気的挙動、二次構造の傾向、および他の特徴を含む。以下の3つの指数は、十分に理解されているKyte−Doolittleヒドロパシー指標(KYJT820101)から始めて、それと、また、互いに最も数的に非相関の(de−correlated)指数を追加することによって選んだ。それらは、したがって、可能性として、アミノ酸特性空間の非重複領域を説明し、ELD−3についてのDHおよびH3−JHセグメントの分析および選択のために使用した。
1.KYTJ820101(ヒドロパシー指標)
2.LEVM780101(アルファヘリックスの標準化頻度)
3.ZIMJ680104(等電点)
出芽酵母において発現されるおよそ1200の抗体のタンパク質発現レベルに基づいて、抗体は、「好適な」または「不十分な」発現体(expressor)として分類した。それぞれの部類におけるそれぞれの抗体のCDRH3配列は、発現レベルと相関する配列特徴を同定するために検査した。1つのそのような配列特徴は、KYTJ820101指標を使用して計算されるDHセグメントの疎水性である。図6は、DHセグメント疎水性(右に向かって増加)に応じた、「好適な」および「不十分な」発現体の度数を提供する。これらの抗体を単離するために使用される合成ライブラリーから期待される分布もまた、参照(「設計」)として提供する。最も高度な疎水性値(プロットの右端)を有するDHセグメントは、「不十分な」発現体の間で不釣合いに多く(設計に基づく期待に比べて)、「好適な」発現体の間で不釣合いに少なかった。同様に、親水性DHセグメント(左端)は、「好適な」発現体の間で不釣合いに多く、「不十分な」発現体の間で不釣合いに少なかった。このデータから、ライブラリーの抗体の全体的な発現能力は、疎水性DHセグメントがより少ないCDRH3配列を合成することによって改善され得ることが推測された。
TSP1由来の71のDHセグメントのセットは、ELD−3における自動的な包含のための「コア」DHセグメントとして称された。これらのセグメントは、以下の望ましい特性を有した:
1.71のうちの53は、ブートストラップ分析由来のセグメント使用ウエイトによって順番を付けられたDHセグメントの上位7%内に存在した。
2.71のうちの18は、出芽酵母において発現されたライブラリーから単離された抗体に由来する使用ウエイトによって順番を付けられたDHセグメントの上位7%内に存在した。
1.65のセグメントは、それらが、(a)N2アミノ酸との組み合わせを介してN結合型グリコシル化モチーフを形成する可能性を有する最後のもしくは最後の位置の隣のAsn残基または(b)脱アミド化に関係するアミノ酸配列NGを含有するので、削減した。
2.KYTJ820101ヒドロパシー指標についての中央値(中央値=1K DHについて2.9)よりも高度なセグメントは、さらなる考察から削減した。抗原認識のためのTyrの知られている重要性を考慮して(それぞれ、その全体が参照によって組み込まれFellouse et al., PNAS, 2004, 101: 12467;およびHofstadter et al., J. Mol. Biol., 1999, 285: 805)、少なくとも1つのTyrの残基を含有するセグメントは、最も高度な疎水性四分位値(9.4よりも高度なKYTJ820101値)に位置しない限り、保持された。これにより443のセグメントを削減した。
3.129のセグメントの最終のセットは、以下の変数:(1)最も近い隣接物に対するアミノ酸ミスマッチおよび(2)3つの物理化学的特性指数の値によって定義される多次元空間における「コア」および残りの443の「非コア」セグメントの間のユークリッドの距離を最大限にすることを目標とした目的関数を使用することによって得た。
100のH3−JHセグメントは、以下の方法においてELD−3における包含のために選んだ。
1.28のH3−JHセグメントは、これらのH3−JHセグメントのみを含有する他のライブラリーにおいて実験的に検証した後に選択した(米国特許出願公開第2009/0181855号および第2010/0056386号ならびに国際公開番号WO/2009/036379を参照されたい)。
2.57のセグメントは、上記に記載されるブートストラップ分析由来の使用ウエイトによって順番を付けられたH3−JHセグメントの上位25%内のそれらの存在に基づいて選択した。(1)これらの57のH3−JHセグメントおよび28のH3−JHセグメント(つまり合計85のセグメント)は、「コア」H3−JHセグメントとして称され、これらは、コアDHセグメントのように、ELD−3に自動的に含まれた。
4.15のさらなるセグメントは、以下の変数:(1)最も近い隣接物に対するアミノ酸ミスマッチおよび(2)3つの物理化学的特性指数の値によって定義される多次元空間における「コア」および残りの200の「非コア」セグメントの間のユークリッドの距離を最大限にすることを目標とした目的関数を使用することによって選んだ。
TN1およびN2セグメントは、ブートストラップ手順のそれぞれのサブサンプルにおける配列から抽出し、最も高度な平均セグメント使用ウエイトを有する100のTN1および200のN2セグメントは、望ましくないモチーフ、すなわちCysおよびAsn残基を有する配列の排除の後にライブラリーへの包含のために選んだ。
ライブラリーにおける包含のために選ばれたポリペプチドセグメントのそれぞれは、相当するオリゴヌクレオチド配列に翻訳し戻さなければならない(ポリペプチドからDNAに)。多くのオリゴヌクレオチドが、遺伝子コードの縮退により、それぞれのポリペプチドセグメントをおそらくコードすることができるが、より望ましいオリゴヌクレオチドを選択するためにある種の制約を課した。第1に、ELD−3が酵母(出芽酵母)において発現されたので、酵母においてめったに使用されないコドンは回避した。たとえば、Argについての6つの可能なコドンのうちで、3つのCGA、CGC、およびCGGは、10%未満の割合で酵母タンパク質をコードするために使用され(たとえばNakamura et al., Nucleic Acids Res., 2000, 28:292を参照されたい)、そのため、それらの3つのコドンは、可能な程度まで回避した。第2に、多くの抗体がチャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞において産生されるので(たとえば酵母における発見の後に)、CCGコドン(Proをコードする)もまた、それがハムスターによってめったに使用されないので(Nakamura et al.)、回避した。
本発明の目的の中には、in vivoにおけるヒトCDRH3レパートリーの生成の根底にあるV−D−J組換えプロセスを模倣し、それによって、CDRH3のヒトの特徴を維持しながら、当技術分野において知られている他のライブラリーと比較してCDRH3ライブラリーの多様性を増加させることがある。成功についての1つの測定値は、ヒト参照CDRH3配列の集合が、本発明の任意のライブラリーにおいて同様にまたは近いマッチ(たとえば約5、4、3、または2未満のアミノ酸差異)によって示される程度である。発明者らは、両方とも互いに非重複である2つのヒトCDRH3配列参照データセットならびにHPS:(1)666のヒトCDRH3配列の集合(Lee et al., Immunogenetics, 2006, 57: 917; ”Lee−666”);および(2)Boyd et al., Science Translational Medicine, 2009, 1: 1−8 (”Boyd−3000”)において開示される200,000以上の配列からランダムに選ばれた3,000のヒトCDRH3配列の集合を使用して、この測定基準を評価した。Boyd et al.由来の3,000のヒトCDRH3配列のランダムサンプルの結果は、Boyd et al. のセットのすべてのメンバー(>200,000 CDRH3配列)に適用された同じ分析の結果の代表であった。
ELD−3は、LUA−141と同様に、73のTN1、92のDH、119のN2、および28のH3−JHを有する。したがって、ELD−3(4.0×108メンバー)における配列の94.5%は、LUA−141ライブラリー(2.3×108メンバー)とは異なる。図9は、ELD−3におけるセグメントのコンビナトリアル効率がLUA−141におけるセグメントを超えることを示す。特に、ELD−3セグメントは、LUA−141ライブラリーセグメントよりも、ユニークなCDRH3を得る可能性が高い。それが、より少ないセグメントを使用してCDRH3多様性が増加したライブラリーを合成するのを可能にするので、これは好都合である。
実施例12.縮退オリゴヌクレオチドを利用することによるCDRH3多様性のさらなる増加
本実施例において記載される方法は、上記に記載されるライブラリーよりも多くのメンバーを有するCDRH3ライブラリーを産生するために、上記に教示される方法を拡張する。特に、1つまたは2つの縮退コドンは、DHおよび/またはN2ポリヌクレオチドセグメントの中に導入し、(一般に)縮退コドンはH3−JHセグメントの中に導入しなかったまたは1つの縮退コドンを導入した。異なる数の縮退コドンを有するセグメント、たとえば0、1、2、3、4、5、6、7、8、またはそれ以上の縮退コドンを有するDHセグメントおよび0、1、2、3、4、5、またはそれ以上の縮退コドンを有するH3−JHセグメントもまた、企図される。これは、とりわけヒトCDRH3配列の参照セットの長さおよび組成などのような特性を厳密に反映する約1011(約2×1011)を超える別個のCDRH3アミノ酸配列を含有するCDRH3ライブラリーをもたらす。下記に記載されるように、DHセグメントにおける縮退位置は、相当するオリゴヌクレオチド配列を考慮すると、それぞれ、常にではないが、通常、きわめてNおよび/もしくはC末端の位置または5’および3’末端コドン(つまり必ずしもではないが最初もしくは最後の塩基のみ)である。縮退コドンは、N2セグメントを合成するために同様に使用した。TN1セグメントのうちの200は、ELD−3において記載されるとおりであったが、縮退TN1セグメントを有するまたはTN1セグメント配列の代替の選択肢を有するライブラリーは、本発明の範囲内にある。さらなる100のTN1セグメントは、このライブラリーについての300のTN1セグメントのセットを完成する。アミノ酸配列およびヌクレオチド配列は、表26において列挙される。縮退オリゴヌクレオチドの代わりにまたはそれに加えて、トリヌクレオチドの混合物を使用することもまた、「ベース」または「シード」セグメント配列(下記に定義される)内の1つまたは複数の選択される位置でのアミノ酸タイプの変異を可能にするために、可能である。
セグメント使用ウエイトは、Boyd et al.において含有される配列に対する比較によって68K DH理論的セグメントプールについて計算した。3つ以上のアミノ酸長を有するDHセグメントは、それらのセグメント使用ウエイト(上記に記載されるように)に従ってランク付けし、上位201は「シード」配列として称された。これらのシード配列は、次いで、縮退コドンを組み込むためにある位置を選択することによって多様化した。変異、それらが多様化されるアミノ酸タイプのために選択される位置は、68K DH理論的セグメントプールのサブセットである9,171のDHセグメントの参照セットとシード配列を比較することによって決定した。これらの9,171のDHセグメントは、Boyd et al.におけるそれらのセグメント使用ウエイトが有意であり、累積的なセグメント使用ウエイト(実施例8)が少なくとも1.0であることを意味したので、選択した。
異なる方法は、DH二量体配列をコードする縮退オリゴヌクレオチドのセットを設計するために用いた。方法は、Asn(N)残基および過度に疎水性の二量体(つまりF、I、L、M、および/またはV残基のみを含む任意の二量体の組み合わせ)を含有するセグメントを引いた、ELD−3における45の二量体配列のすべておよび他の400の理論上可能な二量体配列(つまり、それぞれの2つの位置において可能な20の残基=20*20)を含むことを目標とした。この設計プロセスは、213のユニークなペプチド二量体配列をコードする35の縮退オリゴヌクレオチド配列を最終的にもたらした。本発明の他のセグメントのすべてについて使用される選択プロセスと同様に、当業者は、DH二量体セグメントを選択するために他の基準を使用することができ、これらのセグメントを含むライブラリーもまた、本発明の範囲内にあることを容易に認識するであろう。
上記に記載されるように、ELD−3は、200のN2セグメントを含有する。現在例示されるライブラリーでは、空のN2セグメント(つまり、N2はなく、その結果、DHセグメントは、H3−JHセグメントに直接連結される)および単量体N2セグメントは、ELD−3と同じであった。しかしながら、縮退オリゴヌクレオチドは、ELD−3における相当する配列のすべてを再現するだけではなく、さらなる多様性をももたらす2、3、および4塩基長のセットを生成するために使用した。DHセグメントと同様に、これらの縮退オリゴヌクレオチドは、Asn(不適当な位置における)およびCys残基および終止コドンを削減するように設計した。より具体的には、Asn残基は、続くアミノ酸がGlyではなく、次のアミノ酸がSerまたはThrではない場合は常に、三量体の1番目の位置および四量体の1番目または2番目の位置にし、したがって、候補N2セグメント内の脱アミド化またはN結合型グリコシル化モチーフを回避した。現在例示されるライブラリーについてのN2理論的セグメントプールは、合計で、1つのゼロ量体(zero−mer)(つまり、N2セグメントはない)、18の単量体、279の二量体、339の三量体、および90の四量体のN2アミノ酸配列または727のセグメントを含有する。これらのアミノ酸配列は、合計146のオリゴヌクレオチドについて、1、18、81、36、および10オリゴヌクレオチドによってそれぞれコードされる。最初の19のオリゴヌクレオチド以外、ゼロおよび1量体をコードするものは縮退である。表29は、146のオリゴヌクレオチド配列を列挙するが、表30は、結果として生じる727のユニークなポリペプチド配列を列挙する。
FRM4に相当するDNA配列のみが残る(つまり、H3−JHは残らない)点までの、ヒトIGHJポリヌクレオチドセグメントの5’末端に対するヌクレオチドレベルの段階的な欠失、その後に続く、同じ5’末端に対する系統的な1または2bpによる完成の適用は、翻訳の後に643のユニークなH3−JHペプチドセグメントをもたらした(「643のH3−JH セット」)。DHセグメントのように、Boyd et al.由来のおよそ237,000のヒト配列に対する比較の後に得られたそれらの使用ウエイトによって643のセグメントのそれぞれに順番を付けることが可能であり、上記に記載される望まれないモチーフがないものからの上位200の個々の配列は、現在例示されるライブラリーのためのH3−JHセグメントのセットを提供するために選んだ。
上記に選択された、表26〜32において提供されるTN1、DH、H3−JH、およびN2セグメントは、約2×1011(300のTN1×3,779のDH×727のN2×246のH3−JH)の理論的多様性を有するExtended Diversity Library Design(EDLD)を生成するために組み合わせた。選択されたセグメントをコードするオリゴヌクレオチドは、実施例9.3.7の原理に従って選んだ。
当業者らは、ルーチン的な実験作業のみを使用して、本明細書において記載される、本発明の特定の実施形態および方法の多くの等価物を認識するであろうまたは確認することができるであろう。そのような等価物は、以下の請求項の範囲によって包含されるように意図される。
健康な免疫前セット(HPS)における3,571の配列のGI番号
Claims (17)
- 構造:[TN1]−[DH]−[N2]−[H3−JH]を有する免疫前CDRH3配列を含む少なくとも104の異なるポリペプチドをコードする少なくとも104のポリヌクレオチドを含む合成ポリヌクレオチドのライブラリーであって、
TN1は、表9〜10および18〜26のTN1ポリペプチドのいずれかに相当するポリペプチド、または表25〜26のTN1コードポリヌクレオチドのいずれかの翻訳によって産生されるポリペプチドであり、
DHは、表9、11、17〜25、および28のDHポリペプチドのいずれかに相当するポリペプチド、または表16、25、および27のDHコードポリヌクレオチドのいずれかの翻訳によって産生されるポリペプチドであり、
N2は、表9、12、18〜25、および30のN2ポリペプチドのいずれかに相当するポリペプチド、または表25および29のN2コードポリヌクレオチドのいずれかの翻訳によって産生されるポリペプチドであり、及び
H3−JHは、表9、13、15、18〜25、および32のH3−JHポリペプチドのいずれかに相当するポリペプチドまたは表14、25、および31のH3−JHコードポリヌクレオチドのいずれかの翻訳によって産生されるポリペプチドである、ライブラリー。 - 前記ポリヌクレオチドが、表23〜25のいずれか1つにおいて提供されるTN1、DH、N2、およびH3−JHポリペプチドのセットによって産生されるCDRH3ポリペプチドをコードする、請求項1に記載のライブラリー。
- 前記ポリヌクレオチドが、表26において提供されるTN1ポリペプチドのセット、表28において提供されるDHポリペプチドのセット、表30において提供されるN2ポリペプチドのセット、および表32において提供されるH3−JHポリペプチドのセットによって産生されるCDRH3ポリペプチドをコードする、請求項1に記載のライブラリー。
- 抗原に結合する抗体を単離するために請求項1に記載のライブラリーを使用する方法であって、前記ライブラリーのポリペプチド発現産物を抗原と接触させるステップおよび前記抗原に結合するポリペプチド発現産物を単離するステップを含む、方法。
- N結合型グリコシル化部位、脱アミド化モチーフ、および/またはCys残基の数は、生物学的供給源由来のレパートリーの増幅によって産生されるライブラリーと比較して低下しているまたは削減されている、請求項1に記載のライブラリー。
- 1つまたは複数の軽鎖可変ドメインポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項1に記載のライブラリー。
- 前記ポリペプチドは、完全長IgGとして発現される、請求項6に記載のライブラリー。
- 請求項1に記載のライブラリーを含有するキット。
- CDRH3配列を含むポリペプチドをコードする合成ポリヌクレオチドのライブラリーを作製するための方法であって、
(a)TN1、DH、N2、およびH3−JHセグメントを含有する理論的セグメントプールを提供するステップ;
(b)ネガティブセレクションおよび/または超変異を受ける前の天然に存在する抗体配列に類似する配列の多様性および長さの多様性を有する免疫前CDRH3配列の参照セットを提供するステップ;
(c)(b)の参照セットにおけるそれぞれのCDRH3配列に最も近いマッチ(複数可)を同定するために(a)の理論的セグメントプールに含まれるTN1、DH、N2、およびH3−JHセグメントの組み合わせを利用するステップ;
(d)合成ライブラリーにおける包含のために、(c)において同定された最も近いマッチからセグメントを選択するステップ;ならびに
(e)合成CDRH3ライブラリーを合成するステップを含む、方法。 - 前記合成ライブラリーにおける包含のために選択されるセグメントは、CDRH3配列の参照セットにおけるそれらのセグメント使用ウエイトに従って選択される、請求項9に記載の方法。
- 前記合成ライブラリーにおける包含のために選択されるセグメントは、1つまたは複数の物理化学的特性に従って選択される、請求項9に記載の方法。
- 理論的セグメントプールではなく、参照セットにおいて存在するさらなるTN1およびN2セグメントを選択するステップをさらに含む、請求項9に記載の方法。
- 終止コドンは、前記ライブラリーから低下しているまたは削減されている、請求項9に記載の方法。
- 対がないCys残基、N結合型グリコシル化モチーフ、および脱アミド化モチーフは、前記ライブラリーの翻訳産物において低下しているまたは削減されている、請求項9に記載の方法。
- 前記DHセグメントおよびH3−JHセグメントは、前記参照セットにおけるCDRH3配列とのマッチング前に連続的に切断される、請求項9に記載の方法。
- DHおよびN2またはその組み合わせから成る群から選択されるセグメント中に1つまたは2つの縮退コドンを導入するステップをさらに含む、請求項9に記載の方法。
- H3−JHセグメント中に1つの縮退コドンを導入するステップをさらに含む、請求項9に記載の方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017000349A JP6898103B2 (ja) | 2010-07-16 | 2017-01-05 | 抗体ライブラリー |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US36519410P | 2010-07-16 | 2010-07-16 | |
US61/365,194 | 2010-07-16 | ||
PCT/US2011/044063 WO2012009568A2 (en) | 2010-07-16 | 2011-07-14 | Antibody libraries |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017000349A Division JP6898103B2 (ja) | 2010-07-16 | 2017-01-05 | 抗体ライブラリー |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013534130A JP2013534130A (ja) | 2013-09-02 |
JP2013534130A5 JP2013534130A5 (ja) | 2014-08-07 |
JP6266343B2 true JP6266343B2 (ja) | 2018-01-24 |
Family
ID=45470085
Family Applications (6)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013519836A Active JP6266343B2 (ja) | 2010-07-16 | 2011-07-14 | 抗体ライブラリー |
JP2017000349A Active JP6898103B2 (ja) | 2010-07-16 | 2017-01-05 | 抗体ライブラリー |
JP2018220295A Withdrawn JP2019023247A (ja) | 2010-07-16 | 2018-11-26 | 抗体ライブラリー |
JP2020193227A Pending JP2021027838A (ja) | 2010-07-16 | 2020-11-20 | 抗体ライブラリー |
JP2021163963A Withdrawn JP2022000054A (ja) | 2010-07-16 | 2021-10-05 | 抗体ライブラリー |
JP2023170057A Pending JP2023169425A (ja) | 2010-07-16 | 2023-09-29 | 抗体ライブラリー |
Family Applications After (5)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017000349A Active JP6898103B2 (ja) | 2010-07-16 | 2017-01-05 | 抗体ライブラリー |
JP2018220295A Withdrawn JP2019023247A (ja) | 2010-07-16 | 2018-11-26 | 抗体ライブラリー |
JP2020193227A Pending JP2021027838A (ja) | 2010-07-16 | 2020-11-20 | 抗体ライブラリー |
JP2021163963A Withdrawn JP2022000054A (ja) | 2010-07-16 | 2021-10-05 | 抗体ライブラリー |
JP2023170057A Pending JP2023169425A (ja) | 2010-07-16 | 2023-09-29 | 抗体ライブラリー |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US9354228B2 (ja) |
EP (4) | EP3741883B1 (ja) |
JP (6) | JP6266343B2 (ja) |
KR (5) | KR102159272B1 (ja) |
CN (2) | CN103282560B (ja) |
AU (4) | AU2011279073B2 (ja) |
BR (1) | BR112013001175A2 (ja) |
CA (3) | CA2805875C (ja) |
DK (3) | DK3741883T3 (ja) |
HK (1) | HK1256463A1 (ja) |
MX (1) | MX360336B (ja) |
WO (1) | WO2012009568A2 (ja) |
Families Citing this family (134)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TWI614267B (zh) | 2009-05-13 | 2018-02-11 | 建新公司 | 抗人類cd52免疫球蛋白 |
AU2011279073B2 (en) | 2010-07-16 | 2016-06-09 | Adimab, Llc | Antibody libraries |
NZ700578A (en) | 2012-04-17 | 2017-03-31 | Arsanis Biosciences Gmbh | Cross-reactive staphylococcus aureus antibody |
PL2945651T3 (pl) | 2013-01-17 | 2018-08-31 | Arsanis Biosciences Gmbh | Przeciwciało swoiste wobec E.coli MDR |
AR095199A1 (es) * | 2013-03-15 | 2015-09-30 | Genzyme Corp | Anticuerpos anti-cd52 |
US20160053023A1 (en) | 2013-04-09 | 2016-02-25 | Annexon, Inc. | Methods of treatment for neuromyelitis optica |
RU2015154792A (ru) | 2013-05-21 | 2017-06-22 | Арзанис Байэусайнсис ГмбХ | Выделенный антиген лейкоцидина Staphylococcus aureus, антитело, специфически связывающееся с субъединицей LukGH и способ определения связывания или токсичности двухкомпонентного цитолизина LukGH Staphylococcus aureus |
EP4252769A3 (en) | 2013-07-09 | 2023-11-29 | Annexon, Inc. | Anti-complement factor c1q antibodies and uses thereof |
EP3051942B1 (en) * | 2013-10-01 | 2020-09-02 | Kymab Limited | Animal models and therapeutic molecules |
CA2925071A1 (en) | 2013-10-17 | 2015-04-23 | Arsanis Biosciences Gmbh | Cross-reactive staphylococcus aureus antibody sequences |
WO2015084262A2 (en) | 2013-12-03 | 2015-06-11 | Agency For Science, Technology And Research | Cytotoxic antibody |
US20170022291A1 (en) | 2014-04-01 | 2017-01-26 | Adimab, Llc | Multispecific antibody analogs comprising a common light chain, and methods of their preparation and use |
TWI695011B (zh) | 2014-06-18 | 2020-06-01 | 美商梅爾莎納醫療公司 | 抗her2表位之單株抗體及其使用之方法 |
SG11201700901SA (en) | 2014-08-08 | 2017-03-30 | Alector Llc | Anti-trem2 antibodies and methods of use thereof |
WO2016081640A1 (en) | 2014-11-19 | 2016-05-26 | Genentech, Inc. | Anti-transferrin receptor / anti-bace1 multispecific antibodies and methods of use |
JP6859259B2 (ja) | 2014-11-19 | 2021-04-14 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | BACElに対する抗体及び神経疾患免疫療法のためのその使用 |
KR101694832B1 (ko) * | 2014-12-31 | 2017-01-12 | 앱클론(주) | 항체 라이브러리 및 그의 제작방법 |
RU2021131224A (ru) | 2015-02-17 | 2021-11-03 | Х4 Фармасьютикалз (Австрия) ГмбХ | Антитела, нацеленные на о-антиген на основе галактана из k. pneumoniae |
CA2981851A1 (en) | 2015-04-07 | 2016-10-13 | Alector Llc | Anti-sortilin antibodies and methods of use thereof |
JP6962819B2 (ja) | 2015-04-10 | 2021-11-05 | アディマブ, エルエルシー | 親ホモ二量体抗体種からのヘテロ二量体多重特異性抗体の精製方法 |
MX2017012775A (es) | 2015-04-17 | 2019-04-29 | Arsanis Biosciences Gmbh | Preparacion combinatoria de anticuerpos anti-staphylococcus aureus. |
EP3307779A2 (en) | 2015-06-12 | 2018-04-18 | Alector LLC | Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof |
CN107922480B (zh) | 2015-06-12 | 2022-09-23 | 艾利妥 | 抗cd33抗体及其使用方法 |
CN104894652A (zh) * | 2015-06-25 | 2015-09-09 | 黄薇 | 一种cTnI人源化单链抗体库的构建及应用 |
KR20180054639A (ko) | 2015-08-28 | 2018-05-24 | 알렉터 엘엘씨 | 항-siglec-7 항체 및 이의 사용 방법 |
AR109625A1 (es) | 2015-10-01 | 2019-01-09 | Potenza Therapeutics Inc | Proteínas de unión a antígenos (abp) que se unen selectivamente a tigit y métodos para el uso de las mismas |
US10654919B2 (en) * | 2015-10-05 | 2020-05-19 | The Feinstein Institutes For Medical Research | Inhibition of autism spectrum disorder using decoy antigens to maternal brain-reactive antibodies |
CA2997960A1 (en) | 2015-10-06 | 2017-04-13 | Alector Llc | Anti-trem2 antibodies and methods of use thereof |
CA3000901A1 (en) | 2015-10-16 | 2017-04-20 | Arsanis Biosciences Gmbh | Bactericidal monoclonal antibody targeting klebsiella pneumoniae |
SG11201803567XA (en) | 2015-10-29 | 2018-05-30 | Alector Llc | Anti-siglec-9 antibodies and methods of use thereof |
JP6959260B2 (ja) * | 2016-01-19 | 2021-11-02 | ズムトール バイオロジクス、インコーポレイテッド | 合成抗体ライブラリーを作製する方法、前記ライブラリー、及びその適用 |
KR20180104036A (ko) | 2016-01-22 | 2018-09-19 | 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 | 항-응고 인자 xi 항체 |
US11472877B2 (en) | 2016-03-04 | 2022-10-18 | Alector Llc | Anti-TREM1 antibodies and methods of use thereof |
KR102457751B1 (ko) | 2016-03-10 | 2022-10-21 | 악셀레론 파마 인코포레이티드 | 액티빈 타입 2 수용체 결합 단백질 및 이의 용도 |
JP7137474B2 (ja) | 2016-03-15 | 2022-09-14 | メルサナ セラピューティクス,インコーポレイティド | NaPi2b標的化抗体-薬物コンジュゲート及びその使用方法 |
US11623958B2 (en) | 2016-05-20 | 2023-04-11 | Harpoon Therapeutics, Inc. | Single chain variable fragment CD3 binding proteins |
EA201892691A1 (ru) | 2016-05-20 | 2019-04-30 | Харпун Терапьютикс, Инк. | Однодоменный белок, связывающий сывороточный альбумин |
SG10202103120UA (en) | 2016-06-14 | 2021-05-28 | Merck Sharp & Dohme | Anti-coagulation factor xi antibodies |
EP3497125A1 (en) | 2016-08-12 | 2019-06-19 | ARSANIS Biosciences GmbH | Anti-galactan ii monoclonal antibodies targeting klebsiella pneumoniae |
US10759848B2 (en) | 2016-08-12 | 2020-09-01 | Arsanis Biosciences Gmbh | Klebsiella pneumoniae O3 specific antibodies |
AR109621A1 (es) | 2016-10-24 | 2018-12-26 | Janssen Pharmaceuticals Inc | Formulaciones de vacunas contra glucoconjugados de expec |
SI3535298T1 (sl) | 2016-11-02 | 2022-01-31 | Jounce Therapeutics, Inc. | Protitelesa proti pd-1 in njihove uporabe |
JOP20190100A1 (ar) | 2016-11-19 | 2019-05-01 | Potenza Therapeutics Inc | بروتينات ربط مولد ضد مضاد لـ gitr وطرق استخدامها |
MX2019005772A (es) | 2016-11-23 | 2019-10-02 | Bioverativ Therapeutics Inc | Anticuerpos mono y biespecíficos que se unen al factor de coagulación ix y al factor de coagulación x. |
EP3559037A1 (en) | 2016-12-22 | 2019-10-30 | Wake Forest University Health Sciences | Sirp-gamma targeted agents for use in the treatment of cancer |
JOP20190134A1 (ar) | 2016-12-23 | 2019-06-02 | Potenza Therapeutics Inc | بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لنيوروبيلين وطرق استخدامها |
CN108239150A (zh) | 2016-12-24 | 2018-07-03 | 信达生物制药(苏州)有限公司 | 抗pcsk9抗体及其用途 |
WO2018160754A2 (en) | 2017-02-28 | 2018-09-07 | Harpoon Therapeutics, Inc. | Inducible monovalent antigen binding protein |
CN108623686A (zh) | 2017-03-25 | 2018-10-09 | 信达生物制药(苏州)有限公司 | 抗ox40抗体及其用途 |
JOP20190203A1 (ar) | 2017-03-30 | 2019-09-03 | Potenza Therapeutics Inc | بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لـ tigit وطرق استخدامها |
KR102376863B1 (ko) | 2017-05-12 | 2022-03-21 | 하푼 테라퓨틱스, 인크. | 메소텔린 결합 단백질 |
WO2018213316A1 (en) | 2017-05-16 | 2018-11-22 | Alector Llc | Anti-siglec-5 antibodies and methods of use thereof |
CA3066547A1 (en) | 2017-06-08 | 2018-12-13 | Black Belt Therapeutics Limited | Cd38 modulating antibody |
WO2018224683A1 (en) | 2017-06-08 | 2018-12-13 | Tusk Therapeutics Ltd | Cd38 modulating antibody |
CA3066774A1 (en) | 2017-06-22 | 2018-12-27 | Novartis Ag | Antibody molecules to cd73 and uses thereof |
SG10201913147WA (en) | 2017-07-11 | 2020-02-27 | Compass Therapeutics Llc | Agonist antibodies that bind human cd137 and uses thereof |
WO2019023504A1 (en) | 2017-07-27 | 2019-01-31 | Iteos Therapeutics Sa | ANTI-TIGIT ANTIBODIES |
AU2018306463A1 (en) | 2017-07-27 | 2020-03-05 | iTeos Belgium SA | Anti-TIGIT antibodies |
MA47691A (fr) | 2017-08-03 | 2020-01-08 | Alector Llc | Anticorps anti-cd33 et leurs procédés d'utilisation |
BR112019022752A2 (pt) | 2017-08-03 | 2020-05-19 | Alector Llc | anticorpos anti-trem2 e métodos de uso dos mesmos |
EP3668896A1 (en) | 2017-08-16 | 2020-06-24 | Black Belt Therapeutics Limited | Cd38 modulating antibody |
CN111032086B (zh) | 2017-08-16 | 2023-09-26 | 黑带医疗有限公司 | Cd38抗体 |
WO2019036842A1 (en) * | 2017-08-21 | 2019-02-28 | Adagene Inc. | DYNAMIC LIBRARIES OF HUMAN HEAVY CHAIN ANTIBODIES |
JP7324744B2 (ja) | 2017-08-21 | 2023-08-10 | アダジーン インコーポレイテッド | ダイナミックヒト抗体軽鎖ライブラリー |
SG11202000387YA (en) | 2017-08-25 | 2020-03-30 | Five Prime Therapeutics Inc | B7-h4 antibodies and methods of use thereof |
CN109422811A (zh) | 2017-08-29 | 2019-03-05 | 信达生物制药(苏州)有限公司 | 抗cd47抗体及其用途 |
EP3681906A4 (en) * | 2017-09-11 | 2021-06-09 | Twist Bioscience Corporation | GPCR-BINDING PROTEINS AND THEIR SYNTHESIS |
WO2019075097A1 (en) | 2017-10-11 | 2019-04-18 | Board Of Regents, The University Of Texas System | PD-L1 HUMAN ANTIBODIES AND METHODS OF USE |
CN111465612A (zh) | 2017-10-13 | 2020-07-28 | 哈普恩治疗公司 | B细胞成熟抗原结合蛋白 |
WO2019089753A2 (en) | 2017-10-31 | 2019-05-09 | Compass Therapeutics Llc | Cd137 antibodies and pd-1 antagonists and uses thereof |
US11851497B2 (en) | 2017-11-20 | 2023-12-26 | Compass Therapeutics Llc | CD137 antibodies and tumor antigen-targeting antibodies and uses thereof |
CN111727075B (zh) | 2017-11-27 | 2024-04-05 | 普渡制药公司 | 靶向人组织因子的人源化抗体 |
EP3728705A4 (en) * | 2017-12-18 | 2022-01-19 | Charles River Laboratories, Inc. | RADICALLY DIVERSE HUMAN ANTIBODY BANK |
CN109970856B (zh) | 2017-12-27 | 2022-08-23 | 信达生物制药(苏州)有限公司 | 抗lag-3抗体及其用途 |
WO2019129137A1 (zh) | 2017-12-27 | 2019-07-04 | 信达生物制药(苏州)有限公司 | 抗lag-3抗体及其用途 |
SG11202006400UA (en) | 2018-01-04 | 2020-08-28 | Iconic Therapeutics Inc | Anti-tissue factor antibodies, antibody-drug conjugates, and related methods |
CN116041516A (zh) | 2018-02-01 | 2023-05-02 | 信达生物制药(苏州)有限公司 | 全人源的抗b细胞成熟抗原(bcma)单链抗体及其应用 |
KR20200144094A (ko) | 2018-03-02 | 2020-12-28 | 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. | B7-h4 항체 및 이의 사용 방법 |
NZ782442A (en) | 2018-03-14 | 2022-01-28 | Surface Oncology Inc | Antibodies that bind cd39 and uses thereof |
MX2020009879A (es) | 2018-03-22 | 2021-01-08 | Surface Oncology Inc | Anticuerpos anti-il-27 y sus usos. |
EP3768726A4 (en) | 2018-03-23 | 2021-12-22 | Board of Regents, The University of Texas System | DOUBLE SPECIFICITY ANTIBODIES FOR PD-L1 AND PD-L2 AND METHOD OF USING THEREOF |
CN110464842B (zh) | 2018-05-11 | 2022-10-14 | 信达生物制药(苏州)有限公司 | 包含抗pcsk9抗体的制剂及其用途 |
BR112020023844A2 (pt) | 2018-05-25 | 2021-04-13 | Alector Llc | Anticorpos, métodos de tratamento do câncer e de produção de um anticorpo, ácido nucleico, vetor, células hospedeiras e composição farmacêutica |
WO2019232244A2 (en) | 2018-05-31 | 2019-12-05 | Novartis Ag | Antibody molecules to cd73 and uses thereof |
US12006357B2 (en) | 2018-06-26 | 2024-06-11 | Mor Research Applications Ltd. | Transthyretin antibodies and uses thereof |
US20210277113A1 (en) | 2018-06-29 | 2021-09-09 | Alector Llc | Anti-SIRP-Beta1 Antibodies and Methods of Use Thereof |
AU2019246837B2 (en) | 2018-07-13 | 2024-03-21 | Alector Llc | Anti-Sortilin antibodies and methods of use thereof |
AU2019306628A1 (en) | 2018-07-20 | 2021-02-11 | Surface Oncology, Inc. | Anti-CD112R compositions and methods |
WO2020020281A1 (zh) | 2018-07-25 | 2020-01-30 | 信达生物制药(苏州)有限公司 | 抗tigit抗体及其用途 |
JP2021531027A (ja) | 2018-07-27 | 2021-11-18 | アレクトル エルエルシー | 抗Siglec−5抗体及びその使用方法 |
WO2020033923A1 (en) | 2018-08-09 | 2020-02-13 | Compass Therapeutics Llc | Antigen binding agents that bind cd277 and uses thereof |
US20210309746A1 (en) | 2018-08-09 | 2021-10-07 | Compass Therapeutics Llc | Antibodies that bind cd277 and uses thereof |
WO2020033925A2 (en) | 2018-08-09 | 2020-02-13 | Compass Therapeutics Llc | Antibodies that bind cd277 and uses thereof |
JP2021534196A (ja) | 2018-08-23 | 2021-12-09 | シージェン インコーポレイテッド | 抗tigit抗体 |
US10815311B2 (en) | 2018-09-25 | 2020-10-27 | Harpoon Therapeutics, Inc. | DLL3 binding proteins and methods of use |
JP2022502052A (ja) | 2018-09-27 | 2022-01-11 | ティゾナ セラピューティクス | 抗hla−g抗体、抗hla−g抗体を含む組成物、および抗hla−g抗体を使用する方法 |
US20210403579A1 (en) * | 2018-10-31 | 2021-12-30 | Delinia, Inc. | Multivalent regulatory t cell modulators |
US11046769B2 (en) | 2018-11-13 | 2021-06-29 | Compass Therapeutics Llc | Multispecific binding constructs against checkpoint molecules and uses thereof |
WO2020144178A1 (en) | 2019-01-07 | 2020-07-16 | Iteos Therapeutics Sa | Anti-tigit antibodies |
US20220111047A1 (en) | 2019-01-16 | 2022-04-14 | Compass Therapeutics Llc | Formulations of antibodies that bind human cd137 and uses thereof |
AU2020240072A1 (en) | 2019-03-18 | 2021-10-28 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Bioconjugates of E. coli O-antigen polysaccharides, methods of production thereof, and methods of use thereof |
TW202124444A (zh) | 2019-09-16 | 2021-07-01 | 美商表面腫瘤學公司 | 抗cd39抗體組合物及方法 |
JP2022549854A (ja) | 2019-09-25 | 2022-11-29 | サーフィス オンコロジー インコーポレイテッド | 抗il-27抗体及びその使用 |
AU2020397888A1 (en) | 2019-12-05 | 2022-06-09 | Alector Llc | Methods of use of anti-TREM2 antibodies |
CA3161206A1 (en) | 2019-12-12 | 2021-06-17 | Alector Llc | Methods of use of anti-cd33 antibodies |
EP4089114A1 (en) | 2020-01-09 | 2022-11-16 | Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. | Application of combination of anti-cd47 antibody and anti-cd20 antibody in preparation of drugs for preventing or treating tumors |
KR20220143048A (ko) | 2020-02-18 | 2022-10-24 | 알렉터 엘엘씨 | Pilra 항체 및 이의 사용 방법 |
MX2022010175A (es) * | 2020-02-21 | 2022-09-12 | Harpoon Therapeutics Inc | Proteinas de union a flt3 y metodos de uso. |
EP4110814A1 (en) | 2020-02-24 | 2023-01-04 | Alector LLC | Methods of use of anti-trem2 antibodies |
IL296992A (en) | 2020-04-03 | 2022-12-01 | Alector Llc | Methods for using anti-trem2 antibodies |
KR20230005268A (ko) | 2020-04-24 | 2023-01-09 | 밀레니엄 파머슈티컬스 인코퍼레이티드 | 항-cd19 항체 및 이의 용도 |
AU2021275361A1 (en) | 2020-05-17 | 2023-01-19 | Astrazeneca Uk Limited | SARS-CoV-2 antibodies and methods of selecting and using the same |
EP4169948A1 (en) | 2020-06-22 | 2023-04-26 | Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. | Anti-cd73 antibody and use thereof |
JP2023531678A (ja) | 2020-06-22 | 2023-07-25 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー | 加齢筋肉、萎縮性筋肉、または異栄養性筋肉の処置のためのtsp-1阻害物質 |
WO2022018040A2 (en) | 2020-07-20 | 2022-01-27 | Astrazeneca Uk Limited | Sars-cov-2 proteins, anti-sars-cov-2 antibodies, and methods of using the same |
KR20230048439A (ko) | 2020-08-18 | 2023-04-11 | 세파론 엘엘씨 | 항-par-2 항체 및 이의 사용 방법 |
KR102507515B1 (ko) * | 2020-08-26 | 2023-03-08 | 이화여자대학교 산학협력단 | 신규 항체 라이브러리 제조방법 및 이로부터 제조된 라이브러리 |
AU2021376218A1 (en) | 2020-11-08 | 2023-06-15 | Seagen Inc. | Combination Therapy |
EP4259203A1 (en) | 2020-12-11 | 2023-10-18 | The University of North Carolina at Chapel Hill | Compositions and methods comprising sfrp2 antagonists |
EP4284510A1 (en) | 2021-01-29 | 2023-12-06 | Novartis AG | Dosage regimes for anti-cd73 and anti-entpd2 antibodies and uses thereof |
KR20230165911A (ko) | 2021-04-09 | 2023-12-05 | 씨젠 인크. | 항-tigit 항체를 사용한 암의 치료 방법 |
CN117794952A (zh) | 2021-08-09 | 2024-03-29 | 普米斯生物技术(珠海)有限公司 | 抗tigit抗体及其用途 |
EP4384545A1 (en) | 2021-08-10 | 2024-06-19 | BYOMass Inc. | Anti-gdf15 antibodies, compositions and uses thereof |
WO2023028501A1 (en) | 2021-08-23 | 2023-03-02 | Immunitas Therapeutics, Inc. | Anti-cd161 antibodies and uses thereof |
CA3235627A1 (en) | 2021-10-18 | 2023-04-27 | Byomass Inc. | Anti-activin a antibodies, compositions and uses thereof |
WO2023081898A1 (en) | 2021-11-08 | 2023-05-11 | Alector Llc | Soluble cd33 as a biomarker for anti-cd33 efficacy |
WO2023122213A1 (en) | 2021-12-22 | 2023-06-29 | Byomass Inc. | Targeting gdf15-gfral pathway cross-reference to related applications |
WO2023147107A1 (en) | 2022-01-31 | 2023-08-03 | Byomass Inc. | Myeloproliferative conditions |
WO2023164516A1 (en) | 2022-02-23 | 2023-08-31 | Alector Llc | Methods of use of anti-trem2 antibodies |
WO2023178192A1 (en) | 2022-03-15 | 2023-09-21 | Compugen Ltd. | Il-18bp antagonist antibodies and their use in monotherapy and combination therapy in the treatment of cancer |
TW202405011A (zh) | 2022-04-01 | 2024-02-01 | 美國德州系統大學評議委員會 | 針對人類pd-l1及pd-l2之雙重特異性抗體及其使用方法 |
WO2023209177A1 (en) | 2022-04-29 | 2023-11-02 | Astrazeneca Uk Limited | Sars-cov-2 antibodies and methods of using the same |
WO2024102948A1 (en) | 2022-11-11 | 2024-05-16 | Celgene Corporation | Fc receptor-homolog 5 (fcrh5) specific binding molecules and bispecific t-cell engaging antibodies including same and related methods |
WO2024114525A1 (zh) * | 2022-11-29 | 2024-06-06 | 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 | B7-h3结合蛋白及其用途 |
Family Cites Families (167)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US631391A (en) | 1898-12-27 | 1899-08-22 | James S Ahrens | Acetylene-gas generator. |
US5118605A (en) | 1984-10-16 | 1992-06-02 | Chiron Corporation | Polynucleotide determination with selectable cleavage sites |
GB2183661B (en) | 1985-03-30 | 1989-06-28 | Marc Ballivet | Method for obtaining dna, rna, peptides, polypeptides or proteins by means of a dna recombinant technique |
US6492107B1 (en) | 1986-11-20 | 2002-12-10 | Stuart Kauffman | Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique |
US5618920A (en) | 1985-11-01 | 1997-04-08 | Xoma Corporation | Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use |
EP0281604B1 (en) | 1986-09-02 | 1993-03-31 | Enzon Labs Inc. | Single polypeptide chain binding molecules |
US4946778A (en) | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
DE3852304T3 (de) | 1987-03-02 | 1999-07-01 | Enzon Lab Inc | Organismus als Träger für "Single Chain Antibody Domain (SCAD)". |
US5223409A (en) | 1988-09-02 | 1993-06-29 | Protein Engineering Corp. | Directed evolution of novel binding proteins |
US5688666A (en) | 1988-10-28 | 1997-11-18 | Genentech, Inc. | Growth hormone variants with altered binding properties |
US5750373A (en) | 1990-12-03 | 1998-05-12 | Genentech, Inc. | Enrichment method for variant proteins having altered binding properties, M13 phagemids, and growth hormone variants |
AU634186B2 (en) | 1988-11-11 | 1993-02-18 | Medical Research Council | Single domain ligands, receptors comprising said ligands, methods for their production, and use of said ligands and receptors |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
US6969586B1 (en) | 1989-05-16 | 2005-11-29 | Scripps Research Institute | Method for tapping the immunological repertoire |
US6291158B1 (en) | 1989-05-16 | 2001-09-18 | Scripps Research Institute | Method for tapping the immunological repertoire |
US6680192B1 (en) | 1989-05-16 | 2004-01-20 | Scripps Research Institute | Method for producing polymers having a preselected activity |
US6291160B1 (en) | 1989-05-16 | 2001-09-18 | Scripps Research Institute | Method for producing polymers having a preselected activity |
US6291159B1 (en) | 1989-05-16 | 2001-09-18 | Scripps Research Institute | Method for producing polymers having a preselected activity |
US6291161B1 (en) | 1989-05-16 | 2001-09-18 | Scripps Research Institute | Method for tapping the immunological repertiore |
US5283173A (en) | 1990-01-24 | 1994-02-01 | The Research Foundation Of State University Of New York | System to detect protein-protein interactions |
DE4002897A1 (de) | 1990-02-01 | 1991-08-08 | Behringwerke Ag | Herstellung und verwendung von genbanken synthetischer menschlicher antikoerper ("synthetische human-antikoerper-bibliotheken") |
ES2336444T3 (es) | 1990-02-01 | 2010-04-13 | Siemens Healthcare Diagnostics Products Gmbh | Obtencion y empleo de ginotecas de anticuerpos humanos ("bancos de anticuerpos humanos"). |
JP4251406B2 (ja) | 1990-04-05 | 2009-04-08 | クレア,ロベルト | ウォーク―スルー突然変異誘発 |
EP0453048B1 (en) | 1990-04-18 | 1998-06-17 | Gist-Brocades N.V. | Mutated beta-lactam acylase genes |
US6172197B1 (en) | 1991-07-10 | 2001-01-09 | Medical Research Council | Methods for producing members of specific binding pairs |
GB9206318D0 (en) | 1992-03-24 | 1992-05-06 | Cambridge Antibody Tech | Binding substances |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
US7063943B1 (en) | 1990-07-10 | 2006-06-20 | Cambridge Antibody Technology | Methods for producing members of specific binding pairs |
US6916605B1 (en) | 1990-07-10 | 2005-07-12 | Medical Research Council | Methods for producing members of specific binding pairs |
JPH0568599A (ja) | 1990-07-31 | 1993-03-23 | Wistar Inst | 遺伝子工学的に作られた抗体 |
US5780279A (en) | 1990-12-03 | 1998-07-14 | Genentech, Inc. | Method of selection of proteolytic cleavage sites by directed evolution and phagemid display |
AU662148B2 (en) | 1991-04-10 | 1995-08-24 | Scripps Research Institute, The | Heterodimeric receptor libraries using phagemids |
US5858657A (en) | 1992-05-15 | 1999-01-12 | Medical Research Council | Methods for producing members of specific binding pairs |
US5871907A (en) | 1991-05-15 | 1999-02-16 | Medical Research Council | Methods for producing members of specific binding pairs |
US6492160B1 (en) | 1991-05-15 | 2002-12-10 | Cambridge Antibody Technology Limited | Methods for producing members of specific binding pairs |
US6225447B1 (en) | 1991-05-15 | 2001-05-01 | Cambridge Antibody Technology Ltd. | Methods for producing members of specific binding pairs |
US5962255A (en) | 1992-03-24 | 1999-10-05 | Cambridge Antibody Technology Limited | Methods for producing recombinant vectors |
EP0597960B1 (en) | 1991-08-10 | 1999-01-20 | Medical Research Council | Treatment of cell populations |
ES2136092T3 (es) | 1991-09-23 | 1999-11-16 | Medical Res Council | Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados. |
US5492817A (en) | 1993-11-09 | 1996-02-20 | Promega Corporation | Coupled transcription and translation in eukaryotic cell-free extract |
US5665563A (en) | 1991-10-11 | 1997-09-09 | Promega Corporation | Coupled transcription and translation in eukaryotic cell-free extract |
ES2097363T3 (es) | 1991-10-11 | 1997-04-01 | Promega Corp | Transcripcion y traduccion acopladas en un extracto exento de celulas eucariotas. |
US20030036092A1 (en) | 1991-11-15 | 2003-02-20 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Directed evolution of enzymes and antibodies |
US5866344A (en) | 1991-11-15 | 1999-02-02 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Antibody selection methods using cell surface expressed libraries |
ES2227512T3 (es) | 1991-12-02 | 2005-04-01 | Medical Research Council | Produccion de anticuerpos contra auto-antigenos a partir de repertorios de segmentos de anticuerpos fijados en un fago. |
US5872215A (en) | 1991-12-02 | 1999-02-16 | Medical Research Council | Specific binding members, materials and methods |
US5733743A (en) | 1992-03-24 | 1998-03-31 | Cambridge Antibody Technology Limited | Methods for producing members of specific binding pairs |
AU685057B2 (en) | 1992-07-08 | 1998-01-15 | Unilever Plc | Process for immobilizing enzymes to the cell wall of a microbial cell by producing a fusion protein |
WO1994002610A1 (en) | 1992-07-17 | 1994-02-03 | Dana-Farber Cancer Institute | Method of intracellular binding of target molecules |
ATE233814T1 (de) | 1992-09-30 | 2003-03-15 | Scripps Research Inst | Humaner neutralisierender monoklonaler antikörper gegen den die immunschwäche beim menschen hervorringenden virus |
US7166423B1 (en) | 1992-10-21 | 2007-01-23 | Miltenyi Biotec Gmbh | Direct selection of cells by secretion product |
GB9225453D0 (en) | 1992-12-04 | 1993-01-27 | Medical Res Council | Binding proteins |
JP3720353B2 (ja) | 1992-12-04 | 2005-11-24 | メディカル リサーチ カウンシル | 多価および多重特異性の結合タンパク質、それらの製造および使用 |
JP3695467B2 (ja) | 1993-02-04 | 2005-09-14 | ボレアン ファーマ エー/エス | タンパクを再生するための改良された方法 |
JP3691055B2 (ja) | 1993-02-10 | 2005-08-31 | ユニリーバー・ナームローゼ・ベンノートシャープ | 特異的結合力をもつ固定化タンパク質並びに各種プロセス・物品におけるそれらの使用 |
GB9313509D0 (en) | 1993-06-30 | 1993-08-11 | Medical Res Council | Chemisynthetic libraries |
CA2169620A1 (en) | 1993-09-22 | 1995-03-30 | Gregory Paul Winter | Retargeting antibodies |
US5922545A (en) | 1993-10-29 | 1999-07-13 | Affymax Technologies N.V. | In vitro peptide and antibody display libraries |
US5605793A (en) | 1994-02-17 | 1997-02-25 | Affymax Technologies N.V. | Methods for in vitro recombination |
US5525490A (en) | 1994-03-29 | 1996-06-11 | Onyx Pharmaceuticals, Inc. | Reverse two-hybrid method |
US5695941A (en) | 1994-06-22 | 1997-12-09 | The General Hospital Corporation | Interaction trap systems for analysis of protein networks |
US5888773A (en) | 1994-08-17 | 1999-03-30 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Method of producing single-chain Fv molecules |
US5763733A (en) | 1994-10-13 | 1998-06-09 | Enzon, Inc. | Antigen-binding fusion proteins |
GB9504344D0 (en) | 1995-03-03 | 1995-04-19 | Unilever Plc | Antibody fragment production |
WO1996032503A1 (en) | 1995-04-11 | 1996-10-17 | The General Hospital Corporation | Reverse two-hybrid systems |
US6828422B1 (en) | 1995-08-18 | 2004-12-07 | Morphosys Ag | Protein/(poly)peptide libraries |
DE69621940T2 (de) | 1995-08-18 | 2003-01-16 | Morphosys Ag | Protein-/(poly)peptidbibliotheken |
DE69611102T2 (de) | 1995-09-22 | 2001-06-21 | Amersham Pharm Biotech Uk Ltd | Verstärkung der mutagenese von nukleinsäuren |
FR2741892B1 (fr) | 1995-12-04 | 1998-02-13 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Procede de preparation d'une banque multicombinatoire de vecteurs d'expression de genes d'anticorps, banque et systemes d'expression d'anticorps "coliclonaux" obtenus |
US20010041333A1 (en) | 1997-06-16 | 2001-11-15 | Short Jay M. | High throughput screening for a bioactivity or biomolecule |
EP0907750B1 (en) | 1996-04-26 | 2002-09-18 | Massachusetts Institute Of Technology | Three-hybrid screening assay |
US6699658B1 (en) | 1996-05-31 | 2004-03-02 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Yeast cell surface display of proteins and uses thereof |
US6696251B1 (en) | 1996-05-31 | 2004-02-24 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Yeast cell surface display of proteins and uses thereof |
US6300065B1 (en) | 1996-05-31 | 2001-10-09 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Yeast cell surface display of proteins and uses thereof |
US6083693A (en) | 1996-06-14 | 2000-07-04 | Curagen Corporation | Identification and comparison of protein-protein interactions that occur in populations |
DE19624562A1 (de) | 1996-06-20 | 1998-01-02 | Thomas Dr Koehler | Verfahren zur Bestimmung von Konzentrationsverhältnissen zweier sich um mindestens ein Nucleotid unterscheidender Nucleinsäuren und Testkit zur Durchführung des Verfahrens |
BR9709958A (pt) | 1996-06-24 | 1999-08-10 | Rotkreuzstiftung Zentrallab | Polipeptídeos capaz de formar estruturas de ligaçãode antígeno com especificidade para os antígenos de rhesus d o dna que os codifica e o processo para sua preparação e uso |
US5994515A (en) | 1996-06-25 | 1999-11-30 | Trustees Of The University Of Pennsylvania | Antibodies directed against cellular coreceptors for human immunodeficiency virus and methods of using the same |
GB9712818D0 (en) | 1996-07-08 | 1997-08-20 | Cambridge Antibody Tech | Labelling and selection of specific binding molecules |
US5948620A (en) | 1996-08-05 | 1999-09-07 | Amersham International Plc | Reverse two-hybrid system employing post-translation signal modulation |
US5955275A (en) | 1997-02-14 | 1999-09-21 | Arcaris, Inc. | Methods for identifying nucleic acid sequences encoding agents that affect cellular phenotypes |
US5925523A (en) | 1996-08-23 | 1999-07-20 | President & Fellows Of Harvard College | Intraction trap assay, reagents and uses thereof |
DE69731960T2 (de) | 1996-09-24 | 2005-12-15 | Cadus Pharmaceutical Corp. | Verfahren und zusammensetzungen für die identifizierung von receptor effectoren |
US5858671A (en) | 1996-11-01 | 1999-01-12 | The University Of Iowa Research Foundation | Iterative and regenerative DNA sequencing method |
US5869250A (en) | 1996-12-02 | 1999-02-09 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Method for the identification of peptides that recognize specific DNA sequences |
DK1712623T3 (da) | 1997-01-21 | 2012-02-06 | Gen Hospital Corp | Udvælgelse af proteiner ved anvendelse af RNA-proteinfusioner |
US6261804B1 (en) | 1997-01-21 | 2001-07-17 | The General Hospital Corporation | Selection of proteins using RNA-protein fusions |
US6057098A (en) | 1997-04-04 | 2000-05-02 | Biosite Diagnostics, Inc. | Polyvalent display libraries |
EP0985033A4 (en) | 1997-04-04 | 2005-07-13 | Biosite Inc | POLYVALENT AND POLYCLONAL LIBRARIES |
ATE321849T1 (de) | 1997-04-23 | 2006-04-15 | Univ Zuerich | Verfahren zur erkennung von nucleinsäuremolekülen codierend für (poly)peptide, welche mit zielmolekülen interagieren |
WO1998049198A1 (en) | 1997-04-30 | 1998-11-05 | Enzon, Inc. | Single-chain antigen-binding proteins capable of glycosylation, production and uses thereof |
AU8691398A (en) | 1997-08-04 | 1999-02-22 | Ixsys, Incorporated | Methods for identifying ligand specific binding molecules |
US6391311B1 (en) | 1998-03-17 | 2002-05-21 | Genentech, Inc. | Polypeptides having homology to vascular endothelial cell growth factor and bone morphogenetic protein 1 |
GB9722131D0 (en) | 1997-10-20 | 1997-12-17 | Medical Res Council | Method |
DE69822510T2 (de) | 1997-11-27 | 2005-03-24 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Identifizierung und charakterisierung von interagierenden molekülen |
AU3587599A (en) | 1997-11-28 | 1999-06-16 | Invitrogen Corporation | Single chain monoclonal antibody fusion reagents that regulate transcript ion in vivo |
US6759243B2 (en) | 1998-01-20 | 2004-07-06 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | High affinity TCR proteins and methods |
US6187535B1 (en) | 1998-02-18 | 2001-02-13 | Institut Pasteur | Fast and exhaustive method for selecting a prey polypeptide interacting with a bait polypeptide of interest: application to the construction of maps of interactors polypeptides |
AU766675B2 (en) | 1998-03-30 | 2003-10-23 | Northwest Biotherapeutics, Inc. | Therapeutic and diagnostic applications based on the role of the CXCR-4 gene in tumorigenesis |
US20020029391A1 (en) | 1998-04-15 | 2002-03-07 | Claude Geoffrey Davis | Epitope-driven human antibody production and gene expression profiling |
US7244826B1 (en) | 1998-04-24 | 2007-07-17 | The Regents Of The University Of California | Internalizing ERB2 antibodies |
WO2000018905A1 (en) | 1998-09-25 | 2000-04-06 | G.D. Searle & Co. | Method of producing permuteins by scanning permutagenesis |
GB2344886B (en) | 1999-03-10 | 2000-11-01 | Medical Res Council | Selection of intracellular immunoglobulins |
US20020102613A1 (en) | 1999-05-18 | 2002-08-01 | Hoogenboom Hendricus Renerus Jacobus Mattheus | Novel Fab fragment libraries and methods for their use |
US6531580B1 (en) | 1999-06-24 | 2003-03-11 | Ixsys, Inc. | Anti-αvβ3 recombinant human antibodies and nucleic acids encoding same |
ES2327382T3 (es) | 1999-07-20 | 2009-10-29 | Morphosys Ag | Metodos para presentar (poli)peptidos/proteinas en particulas de bacteriofagos a traves de enlaces disulfuro. |
US6171795B1 (en) | 1999-07-29 | 2001-01-09 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid ligands to CD40ligand |
US6794132B2 (en) | 1999-10-02 | 2004-09-21 | Biosite, Inc. | Human antibodies |
US20070111259A1 (en) * | 1999-10-02 | 2007-05-17 | Medarex, Inc. | Human antibodies |
US6867348B1 (en) | 1999-12-16 | 2005-03-15 | Xenogen Corporation | Methods and compositions for screening for angiogenesis modulating compounds |
AU2001253521A1 (en) | 2000-04-13 | 2001-10-30 | Genaissance Pharmaceuticals, Inc. | Haplotypes of the cxcr4 gene |
US8288322B2 (en) | 2000-04-17 | 2012-10-16 | Dyax Corp. | Methods of constructing libraries comprising displayed and/or expressed members of a diverse family of peptides, polypeptides or proteins and the novel libraries |
AU5358901A (en) | 2000-04-17 | 2001-10-30 | Dyax Corp | Novel methods of constructing libraries of genetic packages that collectively display the members of a diverse family of peptides, polypeptides or proteins |
US6686196B2 (en) | 2000-05-03 | 2004-02-03 | University Of Washington | Recombinant, modified adenoviral vectors for tumor specific gene expression and uses thereof |
US6358733B1 (en) | 2000-05-19 | 2002-03-19 | Apolife, Inc. | Expression of heterologous multi-domain proteins in yeast |
US20050158838A1 (en) | 2000-06-19 | 2005-07-21 | Dyax Corp., A Delaware Corporation | Novel enterokinase cleavage sequences |
US6410246B1 (en) | 2000-06-23 | 2002-06-25 | Genetastix Corporation | Highly diverse library of yeast expression vectors |
US6406863B1 (en) | 2000-06-23 | 2002-06-18 | Genetastix Corporation | High throughput generation and screening of fully human antibody repertoire in yeast |
US6410271B1 (en) | 2000-06-23 | 2002-06-25 | Genetastix Corporation | Generation of highly diverse library of expression vectors via homologous recombination in yeast |
US20020026653A1 (en) | 2000-07-10 | 2002-02-28 | Allen Keith D. | Transgenic mice containing serine protease gene disruptions |
US7094571B2 (en) | 2000-10-27 | 2006-08-22 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Combinatorial protein library screening by periplasmic expression |
US7083945B1 (en) | 2000-10-27 | 2006-08-01 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Isolation of binding proteins with high affinity to ligands |
US20030165988A1 (en) | 2002-02-08 | 2003-09-04 | Shaobing Hua | High throughput generation of human monoclonal antibody against peptide fragments derived from membrane proteins |
US7005503B2 (en) | 2002-02-08 | 2006-02-28 | Genetastix Corporation | Human monoclonal antibody against coreceptors for human immunodeficiency virus |
US7138496B2 (en) | 2002-02-08 | 2006-11-21 | Genetastix Corporation | Human monoclonal antibodies against human CXCR4 |
US6610472B1 (en) | 2000-10-31 | 2003-08-26 | Genetastix Corporation | Assembly and screening of highly complex and fully human antibody repertoire in yeast |
PT1360288E (pt) | 2000-12-18 | 2011-03-07 | Dyax Corp | Bibliotecas orientadas de pacotes genéticos |
US20020197691A1 (en) | 2001-04-30 | 2002-12-26 | Myriad Genetics, Incorporated | FLT4-interacting proteins and use thereof |
US6919183B2 (en) | 2001-01-16 | 2005-07-19 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Isolating cells expressing secreted proteins |
ATE343591T1 (de) | 2001-04-06 | 2006-11-15 | Univ Jefferson | Antagonist für die multimerisierung von hiv-1 vif-protein |
US7117096B2 (en) | 2001-04-17 | 2006-10-03 | Abmaxis, Inc. | Structure-based selection and affinity maturation of antibody library |
US7667004B2 (en) * | 2001-04-17 | 2010-02-23 | Abmaxis, Inc. | Humanized antibodies against vascular endothelial growth factor |
US20030022240A1 (en) * | 2001-04-17 | 2003-01-30 | Peizhi Luo | Generation and affinity maturation of antibody library in silico |
GB0118337D0 (en) | 2001-07-27 | 2001-09-19 | Lonza Biologics Plc | Method for selecting antibody expressing cells |
US6833441B2 (en) | 2001-08-01 | 2004-12-21 | Abmaxis, Inc. | Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers |
US7414111B2 (en) * | 2001-09-19 | 2008-08-19 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Engineered templates and their use in single primer amplification |
ATE434040T1 (de) | 2001-10-01 | 2009-07-15 | Dyax Corp | Mehrkettige eukaryontische display-vektoren und deren verwendungen |
DE10230997A1 (de) | 2001-10-26 | 2003-07-17 | Ribopharma Ag | Medikament zur Erhöhung der Wirksamkeit eines Rezeptor-vermittelt Apoptose in Tumorzellen auslösenden Arzneimittels |
AU2003217912A1 (en) * | 2002-03-01 | 2003-09-16 | Xencor | Antibody optimization |
US7371383B2 (en) * | 2002-04-12 | 2008-05-13 | Medimmune, Inc. | Recombinant anti-interleukin-9 antibodies |
US20030228302A1 (en) | 2002-04-17 | 2003-12-11 | Roberto Crea | Universal libraries for immunoglobulins |
AU2003240005B2 (en) | 2002-06-14 | 2010-08-12 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Recombination of nucleic acid library members |
US8337841B2 (en) | 2003-01-21 | 2012-12-25 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods of screening for antibody light chains |
WO2005007121A2 (en) | 2003-07-18 | 2005-01-27 | Massachusetts Institute Of Technology | Mutant interleukin-2(il-2) polypeptides |
WO2005042743A2 (en) * | 2003-08-18 | 2005-05-12 | Medimmune, Inc. | Humanization of antibodies |
EP1664343B1 (en) | 2003-09-09 | 2014-05-07 | Integrigen, Inc. | Methods and compositions for generation of germline human antibody genes |
US8551920B2 (en) | 2005-02-01 | 2013-10-08 | Morpho Sys AG | Libraries and methods for isolating antibodies |
JP2008546392A (ja) | 2005-06-17 | 2008-12-25 | バイオレクシス ファーマシューティカル コーポレーション | 固定されたトランスフェリン融合タンパク質ライブラリー |
ES2577292T3 (es) | 2005-11-07 | 2016-07-14 | Genentech, Inc. | Polipéptidos de unión con secuencias hipervariables de VH/VL diversificadas y consenso |
WO2007054816A2 (en) * | 2005-11-14 | 2007-05-18 | Bioren, Inc. | Antibody ultrahumanization by predicted mature cdr blasting and cohort library generation and screening |
JP5405831B2 (ja) | 2005-12-20 | 2014-02-05 | モルフォシス アーゲー | H−cdr3領域の新規集合体およびその使用 |
EP2975057A1 (en) * | 2006-07-10 | 2016-01-20 | Fujita Health University | Novel anti-cd73 antibody |
US20080171059A1 (en) | 2006-08-07 | 2008-07-17 | Shanshan Wu Howland | Methods and compositions for increased priming of t-cells through cross-presentation of exogenous antigens |
AU2007303572A1 (en) | 2006-10-02 | 2008-04-10 | Sea Lane Biotechnologies, Llc | Design and construction of diverse synthetic peptide and polypeptide libraries |
CA2671264C (en) | 2006-11-30 | 2015-11-24 | Research Development Foundation | Improved immunoglobulin libraries |
ES2532725T3 (es) * | 2007-06-25 | 2015-03-31 | Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc | Modificación por ingeniería genética basada en secuencia y optimización de anticuerpos de cadena sencilla |
US8877688B2 (en) | 2007-09-14 | 2014-11-04 | Adimab, Llc | Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor |
EP3124497B1 (en) | 2007-09-14 | 2020-04-15 | Adimab, LLC | Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor |
US7939450B2 (en) | 2007-09-21 | 2011-05-10 | Tokyo Electron Limited | Method and apparatus for spacer-optimization (S-O) |
WO2009114815A1 (en) | 2008-03-13 | 2009-09-17 | Dyax Corp | Libraries of genetic packages comprising novel hc cdr3 designs |
EP2280997A2 (en) * | 2008-04-18 | 2011-02-09 | Xencor, Inc. | Human equivalent monoclonal antibodies engineered from nonhuman variable regions |
EP2281078B1 (en) | 2008-04-24 | 2014-10-22 | Dyax Corporation | Libraries of genetic packages comprising novel hc cdr1, cdr2, and cdr3 and novel lc cdr1, cdr2, and cdr3 designs |
US8067339B2 (en) | 2008-07-09 | 2011-11-29 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Surface display of whole antibodies in eukaryotes |
JP2012508017A (ja) | 2008-11-07 | 2012-04-05 | ファブラス エルエルシー | 抗dll4抗体及びその使用 |
US20110082054A1 (en) | 2009-09-14 | 2011-04-07 | Dyax Corp. | Libraries of genetic packages comprising novel hc cdr3 designs |
EP2362070A1 (de) | 2010-02-19 | 2011-08-31 | Siemens Aktiengesellschaft | Antriebsvorrichtung zum Schwenken von verstellbaren Schaufeln einer Turbomaschine |
AU2011279073B2 (en) | 2010-07-16 | 2016-06-09 | Adimab, Llc | Antibody libraries |
-
2011
- 2011-07-14 AU AU2011279073A patent/AU2011279073B2/en active Active
- 2011-07-14 CN CN201180044711.3A patent/CN103282560B/zh active Active
- 2011-07-14 DK DK20152442.8T patent/DK3741883T3/da active
- 2011-07-14 CA CA2805875A patent/CA2805875C/en active Active
- 2011-07-14 WO PCT/US2011/044063 patent/WO2012009568A2/en active Application Filing
- 2011-07-14 KR KR1020197027292A patent/KR102159272B1/ko active IP Right Grant
- 2011-07-14 EP EP20152442.8A patent/EP3741883B1/en active Active
- 2011-07-14 BR BR112013001175A patent/BR112013001175A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2011-07-14 JP JP2013519836A patent/JP6266343B2/ja active Active
- 2011-07-14 CA CA3086837A patent/CA3086837C/en active Active
- 2011-07-14 DK DK17192812.0T patent/DK3336225T3/da active
- 2011-07-14 EP EP22213061.9A patent/EP4219805A1/en active Pending
- 2011-07-14 CN CN201511001417.0A patent/CN105734678B/zh active Active
- 2011-07-14 US US13/810,570 patent/US9354228B2/en active Active
- 2011-07-14 EP EP17192812.0A patent/EP3336225B1/en active Active
- 2011-07-14 MX MX2013000519A patent/MX360336B/es active IP Right Grant
- 2011-07-14 DK DK11807533.2T patent/DK2593594T3/en active
- 2011-07-14 KR KR1020207026778A patent/KR102318383B1/ko active IP Right Grant
- 2011-07-14 KR KR1020217034006A patent/KR20210129278A/ko not_active Application Discontinuation
- 2011-07-14 EP EP11807533.2A patent/EP2593594B1/en active Active
- 2011-07-14 CA CA3117920A patent/CA3117920A1/en active Pending
- 2011-07-14 KR KR1020137003809A patent/KR101963709B1/ko active IP Right Grant
- 2011-07-14 KR KR1020177033563A patent/KR102024922B1/ko active IP Right Grant
-
2016
- 2016-05-11 US US15/151,626 patent/US10138478B2/en active Active
- 2016-09-09 AU AU2016225862A patent/AU2016225862B2/en active Active
-
2017
- 2017-01-05 JP JP2017000349A patent/JP6898103B2/ja active Active
-
2018
- 2018-09-10 US US16/126,987 patent/US10889811B2/en active Active
- 2018-11-26 JP JP2018220295A patent/JP2019023247A/ja not_active Withdrawn
- 2018-12-03 HK HK18115409.3A patent/HK1256463A1/zh unknown
-
2019
- 2019-01-21 AU AU2019200298A patent/AU2019200298B2/en active Active
-
2020
- 2020-11-02 US US17/087,350 patent/US12018403B2/en active Active
- 2020-11-20 JP JP2020193227A patent/JP2021027838A/ja active Pending
-
2021
- 2021-10-05 JP JP2021163963A patent/JP2022000054A/ja not_active Withdrawn
- 2021-10-15 AU AU2021250973A patent/AU2021250973A1/en active Pending
-
2023
- 2023-09-29 JP JP2023170057A patent/JP2023169425A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6898103B2 (ja) | 抗体ライブラリー | |
JP6997246B2 (ja) | 合理的に設計された、合成抗体ライブラリおよびその使用 | |
EP3080158A2 (en) | Polyclonal mixtures of antibodies, and methods of making and using them |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140618 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20140618 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150819 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20151117 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20151214 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160219 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160705 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20161004 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20161202 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170105 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20170105 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20170602 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170919 |
|
C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20170919 |
|
C11 | Written invitation by the commissioner to file amendments |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C11 Effective date: 20170928 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20171020 |
|
C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20171023 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20171211 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20171220 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6266343 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |