JP4197347B2

JP4197347B2 - コーヒー飲料組成物

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Publication number: JP4197347B2
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Inventors: 明彦藤井; 淳鈴木; 英雄大南; 龍史落合; 祐輔渋谷
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Description

本発明は、血圧降下作用を有するコーヒー飲料組成物に関する。

高血圧症の治療薬としては、神経因子による調節系に作用する各種神経遮断薬、液性因子に関わる調節系に作用するＡＣＥ阻害薬、ＡＴ受容体拮抗薬、血管内皮由来物質による調節系に関わるＣａ拮抗薬、腎臓での体液調節系に関わる降圧利尿薬などの医薬品が挙げられ、これらは主として医療機関において、重症の高血圧患者に使用される。しかし、現状において高血圧症対策の目的で使用される医薬品は、有効性に関しては満足できる反面少なからず存在する副作用のため患者にかかる負担は大きい。

また食餌療法、運動療法、飲酒・喫煙の制限などの生活改善による一般療法が、軽症を含む正常高値高血圧症者から重症な高血圧症者に広く適用されている。一般療法の重要性の認識の高まりに伴い、特に食生活の改善が重要であるといわれ続けている。血圧降下作用を有する食品は、数多く、従来から食品由来の降圧素材の探索がさかんに行われ、その有効成分の分離・同定が数多く行われている。

このうち、コーヒー等の食品に含まれているクロロゲン酸、カフェ酸、フェルラ酸等が優れた血圧降下作用を示すことが報告されている（特許文献１〜３）。しかしながら、クロロゲン酸類を多量に含むことが知られているコーヒー飲料では、明確な血圧降下作用が認められず、逆に血圧を上昇させるという報告もある（非特許文献１）。
特開２００２−３６３０７５号公報特開２００２−２２０６２号公報特開２００２−５３４６４号公報 Eur. J. Clin. Nutr., 53(11), 831(1999)

本発明の目的は、優れた高血圧改善作用を有し、通常摂取できる飲食品を提供することにある。

そこで本発明者は、コーヒー飲料がクロロゲン酸を含んでいるにもかかわらず、十分な血圧降下作用を示さないことに着目し、血圧降下作用とコーヒー飲料成分との関係について種々検討した結果、コーヒー飲料に含まれているヒドロキシヒドロキノンがクロロゲン酸類の血圧降下作用を阻害していることを見出した。そして、更に検討した結果、コーヒー飲料中のクロロゲン酸類量を一定範囲に保持し、ヒドロキシヒドロキノン含量を通常含まれる量より十分少ない一定量以下に低下させれば、優れた血圧降下作用を有するコーヒー飲料組成物が得られることを見出した。

次の成分（Ａ）及び（Ｂ）、
（Ａ）クロロゲン酸類０．０１〜１質量％、
（Ｂ）ヒドロキシヒドロキノンクロロゲン酸類量の０．１質量％未満
を含有するコーヒー飲料組成物であって、高血圧改善作用を有することを特徴とし、高血圧改善のために用いられる旨の表示が付されたコーヒー飲料組成物を提供するものである。

また、本発明は、次の成分（Ａ）及び（Ｂ）、
（Ａ）クロロゲン酸類０．１〜１０質量％、
（Ｂ）ヒドロキシヒドロキノンクロロゲン酸類量の０．１質量％未満
を含有するソリュブルコーヒー組成物であって、高血圧改善作用を有することを特徴とし、高血圧改善のために用いられる旨の表示が付されたコーヒー飲料組成物を提供するものである。

また、本発明は、次の成分（Ａ）及び（Ｂ）、
（Ａ）クロロゲン酸類０．０１〜１質量％、
（Ｂ）ヒドロキシヒドロキノンクロロゲン酸類量の０．１質量％未満
を含有するコーヒー飲料組成物を充填した容器詰飲料であって、高血圧改善作用を有することを特徴とし、高血圧改善のために用いられる旨の表示が付されたコーヒー飲料組成物提供するものである。

本発明のコーヒー飲料組成物は、優れた高血圧改善作用、すなわち血圧降下作用又は血圧上昇抑制作用を有し、かつ長期摂取可能である。従って、本発明のコーヒー飲料組成物は、高血圧改善用の医薬として、更には血圧降下のために、又は、血圧上昇抑制のために用いられる旨、又は血圧が高めの方にと表示された食品として有用である。

本発明のコーヒー飲料組成物は、血圧降下作用、血圧上昇抑制作用、及び味の点で、（Ａ）クロロゲン酸類を０．０１〜１質量％含有するが、好ましくは０．０５〜１質量％、更に好ましくは０．１〜１質量％含有する。また本発明のソリュブルコーヒー組成物にはクロロゲン酸類は０．１〜１０質量％含有するが、好ましくは０．５〜１０質量％、更に好ましくは１〜１０質量％含有する。（Ａ）当該クロロゲン酸類としては（Ａ¹）モノカ
フェオイルキナ酸、（Ａ²）フェルラキナ酸、（Ａ³）ジカフェオイルキナ酸の三種を含有する。ここで（Ａ¹）モノカフェオイルキナ酸としては３−カフェオイルキナ酸、４−カ
フェオイルキナ酸及び５−カフェオイルキナ酸から選ばれる１種以上が挙げられる。また（Ａ²）フェルラキナ酸としては、３−フェルラキナ酸、４−フェルラキナ酸及び５−フ
ェルラキナ酸から選ばれる１種以上が挙げられる。（Ａ³）ジカフェオイルキナ酸として
は３，４−ジカフェオイルキナ酸、３，５−ジカフェオイルキナ酸及び４，５−ジカフェオイルキナ酸から選ばれる１種以上が挙げられる。当該クロロゲン酸類の含有量は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により測定することができる。ＨＰＬＣにおける検出手段としては、ＵＶ検出が一般的であるが、ＣＬ（化学発光）検出、ＥＣ（電気化学）検出、ＬＣ−Ｍａｓｓ検出等により更に高感度で検出することもできる。

本発明のコーヒー飲料組成物又はソリュブルコーヒー組成物は、クロロゲン酸類量に対してヒドロキシヒドロキノン（Ｂ）を０．１質量％未満含有する。クロロゲン酸類量に対してヒドロキシヒドロキノン量が０．１質量％未満であれば、クロロゲン酸類の血圧降下作用が十分に発揮される。より好ましくは０．０３質量％以下、特に好ましくは０．０１質量％以下である。クロロゲン酸類量に対してヒドロキシヒドロキノン量が０．０１質量％以下であればクロロゲン酸の血圧降下作用はまったく抑制されない。ここで、本発明組成物中のヒドロキシヒドロキノン含量は０であってもよい。

当該ヒドロキシヒドロキノン含量は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により測定することができる。ＨＰＬＣにおける検出手段としては、ＵＶ検出が一般的であるが、ＣＬ（化学発光）検出、ＥＣ（電気化学）検出、ＬＣ−Ｍａｓｓ検出等により更に高感度で検出することもできる。なお、ＨＰＬＣによるヒドロキシヒドロキノン含量の測定にあたっては、コーヒー飲料を濃縮した後に測定することもできる。

更にヒドロキシヒドロキノン含量は、ＨＰＬＣで直接測定することもできるが、コーヒー飲料組成物又はソリュブルコーヒー飲料組成物から、各種クロマトグラフィーによりヒドロキシヒドロキノンを濃縮して、その濃縮画分の量を測定することによっても定量できる。なお、クロロゲン酸類量及びヒドロキシヒドロキノン量の測定にあたっては、容器詰飲料の場合には開封後直ちに、例えば０.１Ｎ(規定)となるように塩酸を加えて、又は、
０．１Ｎの塩酸／水酸化ナトリウムバッファー系で測定するのが好ましい。

本発明のコーヒー飲料組成物及びソリュブルコーヒー組成物は、ヒドロキシヒドロキノン含有量を低減させる以外は、通常のコーヒー成分をそのまま含有しているのが好ましい。

本発明コーヒー飲料組成物は、コーヒー飲料組成物１００ｇを基準とした場合に、カリウムを３０〜３００ｍｇ／１００ｇ、更に４０〜２５０ｍｇ／１００ｇ、特に５０〜２００ｍｇ／１００ｇ含むのが好ましい。また本発明のソリュブルコーヒー組成物には、ソリュブルコーヒー組成物１ｇを基準として、カリウムを２０〜２００ｍｇ／１ｇ、更に３０〜１８０ｍｇ／１ｇ、特に４０〜１５０ｍｇ／１ｇ含むのがコーヒー本来の風味の点で好ましい。カリウム量を上記範囲にするためには、コーヒー飲料組成物の製造過程で、カリウムを積極的に除去する等の操作を行わないのが好ましい。
また、本発明のコーヒー飲料組成物は、コーヒー飲料組成物１００ｇを基準とした場合に、灰分の量が２８０ｍｇ以下、更には２５０ｍｇ以下、より更には２２０ｍｇ以下、特に２００ｍｇ以下であることがコーヒー本来の風味の点で好ましい。灰分の測定は、四訂日本食品標準成分表（昭和５７年発行、科学技術庁資源調査委員会編集、２８頁）記載の方法に準拠し、５５０℃で加熱し残存炭素がなくなり恒量となるまで灰化する方法を用いて測定することができる。灰分の量を上記範囲にするためには、コーヒー飲料組成物の製造過程で、強アルカリで処理した後に酸を用いて中性領域に戻すなどの、灰分の量が多くなる操作を行わないのが好ましい。

また本発明のコーヒー飲料組成物は、Ｈ₂Ｏ₂（過酸化水素）の含有量が１ｐｐｍ以下、更に０．１ｐｐｍ以下、特に０．０１ｐｐｍ以下であるのがコーヒー本来の風味の点で好ましい。過酸化水素の測定は通常用いられる過酸化水素計を用いて行うことができ、例えば、セントラル科学社製の高感度過酸化水素計スーパーオリテクターモデル５（ＳＵＰＥＲＯＲＩＴＥＣＴＯＲＭＯＤＥＬ５）等を用いることができる。

本発明のコーヒー飲料組成物に用いるコーヒー豆の種類は、特に限定されないが、例えばブラジル、コロンビア、タンザニア、モカ等が挙げられる。コーヒー種としては、アラビカ種、ロブスタ種などがある。コーヒー豆は１種でもよいし、複数種をブレンドして用いてもよい。焙煎コーヒー豆の焙煎方法については特に制限はなく、焙煎温度、焙煎環境についても何ら制限はなく、通常の方法を採用できる。更にその豆からの抽出方法についても何ら制限はなく、例えば焙煎コーヒー豆又はその粉砕物から水〜熱水（０〜１００℃）を用いて１０秒〜３０分抽出する方法が挙げられる。抽出方法は、ボイリング式、エスプレッソ式、サイホン式、ドリップ式（ペーパー、ネル等）等が挙げられる。

本発明のコーヒー飲料組成物は、１００ｇあたりコーヒー豆を生豆換算で１ｇ以上使用したものをいう。好ましくはコーヒー豆を２．５ｇ以上使用しているものである。更に好ましくはコーヒー豆を５ｇ以上使用しているものである。本発明のコーヒー飲料組成物を容器詰飲料とする場合には、シングルストレングスであることが好ましい。ここでシングルストレングスとは、容器詰飲料を開封した後、常態として薄めずにそのまま飲めるものをいう。

本発明のコーヒー飲料組成物又はソリュブルコーヒー組成物は、焙煎コーヒー豆抽出物を吸着剤処理してヒドロキシヒドロキノン含量を低減させることにより得られる。吸着剤としては、活性炭、逆相担体などが挙げられる。より具体的には、焙煎コーヒー豆抽出液又は焙煎コーヒー豆抽出液の乾燥品の水溶液に、吸着剤を加え０〜１００℃で１０分〜５時間撹拌した後、吸着剤を除去すればよい。ここで、吸着剤は、焙煎コーヒー豆重量に対して活性炭の場合は０．０２〜１．０倍、逆相担体の場合は２〜１００倍用いるのが好ましい。活性炭としては、ミクロ孔領域における平均細孔半径が５オングストローム（Å）以下、更には、２〜５オングストロームの範囲であることが好ましく、特に３〜５オングストロームの範囲であることが好ましい。本発明におけるミクロ孔領域における平均細孔径は、文献（Colloid and Interface Sc., 26, 46(1968)）記載のＭＰ法（住化分析センター、東レリサーチセンターにて採用されている方法である）によって測定することができる。また、活性炭の種類としては、ヤシ殻活性炭が好ましく、更に水蒸気賦活化ヤシ殻活性炭が好ましい。活性炭の市販品としては、白鷺ＷＨ₂ｃ（日本エンバイロケミカルズ）、太閣ＣＷ（二村化学）、クラレコールＧＷ（クラレケミカル）等を用いることができる。逆相担体としては、ＹＭＣ・ＯＤＳ−Ａ（ＹＭＣ）、Ｃ１８（ＧＬサイエンス）等が挙げられる。
これらの吸着剤処理法のうち、活性炭を用いた吸着剤処理法はクロロゲン酸類量を低下させることなく選択的にヒドロキシヒドロキノン含量を低減させることができるだけでなく、工業的にも有利であり、更にカリウム含量を低下させない（質量比で１／５以上、特に１／２以上保持）点からも好ましい。

また、本発明のコーヒー飲料組成物又はソリュブルコーヒー組成物中のヒドロキシヒドロキノン量は、高速液体クロマトグラフィーによりガリックアシッドを標準物質とした場合のガリックアシッドに対する相対保持時間が０．５４〜０．６１の時間領域のピークとして検出することができる。従って、本発明のコーヒー飲料組成物は、クロロゲン酸類を０．０１〜１質量％含有するコーヒー飲料組成物であって、高速液体クロマトグラフィーによる分析において、ガリックアシッドを標準物質とした場合のガリックアシッドに対する相対保持時間が０．５４〜０．６１の時間領域に、実質的にピークを有しないことを特徴とするコーヒー飲料組成物と規定できる。また、本発明のソリュブルコーヒー組成物は、クロロゲン酸類を０．１〜１０質量％含有するソリュブルコーヒー組成物であって、高速液体クロマトグラフィーによる分析において、ガリックアシッドを標準物質とした場合のガリックアシッドに対する相対保持時間が０．５４〜０．６１の時間領域に、実質的にピークを有しないことを特徴とするソリュブルコーヒー組成物と規定できる。尚、この規定における高速液体クロマトグラフィーの分析条件は、後述の分析条件Ｂによるものである。

本発明におけるコーヒー組成物が、高速液体クロマトグラフィーによる分析における、ガリックアシッドを標準物質とした場合のガリックアシッドに対する相対保持時間が０．５４〜０．６１の時間領域に実質的にピークを有しないことを確認するには、一般的なＨＰＬＣを使用することができ、例えば溶離液として０．０５Ｍ酢酸水溶液と０．０５Ｍ酢酸１００％アセトニトリル溶液のグラジエントを用い、ＯＤＳカラムを用いて、紫外線吸光光度計等により検出することで確認することができる。

本発明においてガリックアシッドに対する相対保持時間が０．５４〜０．６１の時間領域に実質的にピークを有しないとは、ガリックアシッドの１ｐｐｍ溶液を分析時の面積値をＳ１とし、同条件でコーヒー飲料組成物を分析した時の前記特定の領域に溶出する成分に由来するピーク面積の総和をＳ２としたとき、Ｓ２／Ｓ１＜０．０１であることを意味する。

本発明のコーヒー飲料組成物には、所望により、ショ糖、グルコース、フルクトース、キシロース、果糖ブドウ糖液、糖アルコール等の糖分、乳成分、抗酸化剤、ｐＨ調整剤、乳化剤、香料等を添加することができる。乳成分としては、生乳、牛乳、全粉乳、脱脂粉乳、生クリーム、濃縮乳、脱脂乳、部分脱脂乳、れん乳等が挙げられる。本発明のコーヒー飲料組成物のｐＨとしては、３〜７．５、更に４〜７、特に５〜７が飲料の安定性の面で好ましい。

ソリュブルコーヒー組成物とは粉体状のインスタントコーヒー粉体等の粉体食品のことである。インスタントコーヒー粉体は、常法にしたがって製造することができる。例えばコーヒー抽出液をノズルからスプレーし、約２１０〜３１０℃の熱風中を落下させることにより、多孔質、水可溶性のコーヒー粉末にする噴霧乾燥（スプレードライ）；あるいはコーヒー抽出物を液体窒素や冷凍庫等で凍結し、粉砕し、篩別したのち真空で水分を昇華させて、水分を３％以下にする凍結乾燥（フリーズドライ）等により乾燥粉体を得ることができる。

本発明のコーヒー飲料組成物又はソリュブルコーヒーはＰＥＴボトル、缶（アルミニウム、スチール）、紙、レトルトパウチ、瓶（ガラス）等の容器に詰めて容器詰飲料とすることができる。この場合、本発明のコーヒー飲料組成物はそのまま容器に詰めて５０〜２５００ｍＬの容器詰飲料とすることができる。容器詰飲料のｐＨとしては５〜７．５が好ましく、特に５．４〜７が好ましい。容器詰飲料中のモノカフェオイルキナ酸の構成比としては、４−カフェオイルキナ酸／３−カフェオイルキナ酸質量比が０．６〜１．２であり、５−カフェオイルキナ酸／３−カフェオイルキナ酸質量比が０．０１〜３であることがこのましい。容器としては、コーヒー中の成分の変化を防止する観点から、酸素非透過性の容器が好ましく、例えば、アルミニウムや、スチールなどの缶、ガラス製のビン等を用いるのが良い。缶やビンの場合、リキャップ可能な、リシール型のものも含まれる。ここで酸素非透過性とは、２０℃、相対湿度５０％の環境下で測定した酸素透過度（ｃｃ・ｍｍ／ｍ²・ｄａｙ・ａｔｍ）が５以下であることをいうが、更に３以下、特に１以下であればより好ましい。
また本発明のソリュブルコーヒーは１ｇあたり２５〜５００ｍＬの水又はお湯に溶解して飲むことができる。

容器詰飲料にする場合、通常殺菌処理が行われるが、当該殺菌処理は、金属缶のように容器に充填後、加熱殺菌できる場合にあっては食品衛生法に定められた殺菌条件で行われる。ＰＥＴボトル、紙容器のようにレトルト殺菌できないものについては、あらかじめ食品衛生法に定められた条件と同等の殺菌条件、例えばプレート式熱交換器で高温短時間殺菌後、一定の温度迄冷却して容器に充填する等の方法が採用される。また無菌下で加熱殺菌後、無菌下でｐＨを中性に戻すことや、中性下で加熱殺菌後、無菌下でｐＨを酸性に戻す等の操作も可能である。

本発明のコーヒー飲料組成物及びソリュブルコーヒー飲料組成物は、高血圧改善作用を有するクロロゲン酸類を有効量含有しており、かつクロロゲン酸類の高血圧改善作用を阻害しているヒドロキシヒドロキノン量が低減されていることから、血圧降下用、又は血圧上昇抑制医薬組成物、血圧降下用飲料、血圧上昇抑制飲料として有用である。また、血圧降下のために、又は、血圧上昇抑制のために用いられる旨の表示が付された飲料や血圧が高めの方にと表示された飲料としても有用である。

実施例１
（ａ）本発明のコーヒー飲料組成物は次のように製造した。インスタントコーヒー（ネスカフェ（登録商標、以下同じ）カフェインレス）２．５ｇをＯＤＳ充填剤（オクタデシルシリル化シリカゲル）（ＹＭＣＧＥＬＯＤＳ−Ａ細孔径６ｎｍ粒子径１５０μｍ）５００ｇを充填したカラムにアプライし、０．５％酢酸水６Ｌでヒドロキシヒドロキノンを含む画分を溶出し、クロロゲン酸類その他の成分を含む画分はメタノール６Ｌで溶出した。クロロゲン酸類その他の成分を含む画分Ａは凍結乾燥法によりメタノールを完全に除去した。インスタントコーヒー２．５ｇから画分Ａは０．９３３ｇ得られた。

（ｂ）コーヒー飲料組成物のクロロゲン酸類及びヒドロキシヒドロキノンの分析法は次の通りである。以下の分析条件を分析条件Ａとする。分析機器はＨＰＬＣ（島津製作所（株））を使用した。装置の構成ユニットの型番は次の通り。ディテクター：ＳＰＤ−Ｍ１０Ａ、オーブン：ＣＴＯ−１０ＡＣ、ポンプ：ＬＣ−１０ＡＤ、オートサンプラー：ＳＩＬ−１０ＡＤ、カラム：Inertsil ＯＤ
Ｓ−２内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ。
分析条件は次の通り。サンプル注入量：１０μＬ、流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ、紫外線吸光光度計検出波長：３２５ｎｍ（クロロゲン酸類）、２９０ｎｍ（ヒドロキシヒドロキノン）、溶離液Ａ：０．０５Ｍ酢酸３％アセトニトリル溶液、溶離液Ｂ：０．０５Ｍ酢酸１００％アセトニトリル溶液

濃度勾配条件
時間溶離液Ａ溶離液Ｂ
０分１００％０％
２０分８０％２０％
３５分８０％２０％
４５分０％１００％
６０分０％１００％
７０分１００％０％
１２０分１００％０％

クロロゲン酸類の保持時間（単位：分）（Ａ¹）モノカフェオイルキナ酸：１７．９、２０．４、２２．０の計３点（Ａ²）フェルラキナ酸：２２．８、２５．８、２７．０の計３点（Ａ³）ジカフェオイルキナ酸：３２．３、３３．０、３５．８の計３点ここで求めたエリアから５―カフェオイルキナ酸を標準物質とし、質量％を求めた。
ヒドロキシヒドロキノンの保持時間：５．５分、ここで求めたエリアからヒドロキシヒドロキノンを標準物質とし、質量％を求めた。

また、コーヒー組成物中のヒドロキシヒドロキノンは以下の分析法によっても測定できる。以下の分析条件を分析条件Ｂとする。分析機器はＨＰＬＣ（日立製作所（株））を使用した。装置の構成ユニットの型番は次の通り。ディテクター：Ｌ−７４５５、オーブン：Ｌ−７３００、ポンプ：Ｌ−７１００、オートサンプラー：Ｌ−７２００、カラム：Inertsil ＯＤＳ−２内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ。

分析条件は次の通り。サンプル注入量：１０μＬ、流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ、紫外線吸光光度計検出波長：２５８又は２８８ｎｍ、溶離液Ａ：０．０５Ｍ酢酸水溶液、溶離液Ｂ：０．０５Ｍ酢酸１００％アセトニトリル溶液

濃度勾配条件
時間溶離液Ａ溶離液Ｂ
０分１００％０％
１５分１００％０％
１５．１分０％１００％
２５分０％１００％
２５．１分１００％０％
３０分１００％０％

ヒドロキシヒドロキノンの保持時間：６．８分。ここで求めたエリアからヒドロキシヒドロキノンを標準物質とし、質量％を求めた。同様に測定したガリックアシッドの保持時間は１１．５分であった。

インスタントコーヒーと上記実施例１（ａ）で製造した画分Ａの総クロロゲン酸量及びヒドロキシヒドロキノン量は表１に示すものであった。

尚、本発明のコーヒー飲料組成物中の過酸化水素量を高感度過酸化水素計を用いて測定したところ、過酸化水素量は検出限界以下であり検出されなかった。過酸化水素の分析法は次の通りである。測定は、高感度過酸化水素計ＳＵＰＥＲＯＲＩＴＥＣＴＯＲＭＯＤＥＬ５（セントラル科学（株））にて行った。試料２ｍＬをホールピペットにて精秤し、装置本体の反応セルに注入した。反応セルを密栓した後、測定レンジを選択し、測定用スイッチを押して測定を開始した。測定準備が整ったことを知らせる発信音を確認後、速やかにオリテクター用カタラーゼ２０μＬをマイクロシリンジにて注入し、出力値を読み取った。

装置の校正は、０．１、１、及び５ｍｇ／Ｌの過酸化水素標準液にて行った。
過酸化水素標準液の調製は、過酸化水素（３０％水溶液、特級、和光純薬工業（株））を、イオン交換水にて１，０００ｍｇ／Ｌに希釈したものを原液として使用した。原液を抽出用溶液にて希釈し、過酸化水素標準液５ｍｇ／Ｌを調製した。更に、過酸化水素標準液５ｍｇ／Ｌ溶液を抽出用溶液にて希釈し、１ｍｇ／Ｌ及び０．１ｍｇ／Ｌを調製した。

抽出用溶液（０．５％臭素酸カリウム含有０．２Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７．０）は、リン酸ニ水素カリウム（特級）１１．０ｇ、リン酸水素ニナトリウム１２水和物（特級）４４．８ｇ、及び臭素酸カリウム（特級）５．０ｇをイオン交換水に溶解した後、１Ｌに定容して調製した。使用時は、あらかじめ氷冷下で１時間以上窒素ガスを通気した。

実施例２
血圧降下評価
ｉ）実験材料及び方法
（ａ）１２週齢の雄性自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）を予備的に５日間連続で市販のラット用非観血式血圧測定装置（ソフトロン社製）を用いて血圧測定することにより、ラットを血圧操作に十分慣れさせた後、評価試験を測定した。ラットはすべて温度２５±１℃、相対湿度５５±１０％、照明時間１２時間（午前７時〜午後７時）の条件下（ラット区域内飼育室）で飼育した。

（ｂ）投与方法及び投与量；試験群ではインスタントコーヒからヒドロキシヒドロキノンを除去した画分Ａを投与材料とした。対照群はインスタントコーヒーを使用した。画分Ａインスタントコーヒーをそれぞれ生理食塩水に溶解し、総クロロゲン酸量として２００ｍｇ／ｋｇの投与量となるように作製した。投与方法は経口用ゾンデを用いて、経口投与を行った。投与量は５ｍＬ／匹とした。

（ｃ）試験方法；ＳＨＲを１群３−６匹使用した。経口投与前と１２時間後の尾静脈の収縮期血圧を測定し、投与前血圧から１２時間後の血圧変化率を算出した。

（ｄ）統計学処理方法；得られた測定結果は、平均値及び標準誤差を表してStudent's t-testを行い、有意水準は５％とした。

ii）結果
表２から明らかなように、本発明のコーヒー飲料組成物を摂取することにより、通常のインスタントコーヒーを摂取した場合に比較して、著明な血圧降下を認めた。

実施例３
血圧降下評価
ｉ）実験材料及び方法
（ａ）１２週齢の雄性自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）を実施例２と同様に予備飼育した。

（ｂ）投与方法及び投与量；対照群では生理食塩水を経口投与した。比較群ではクロロゲン酸が主成分である生コーヒー豆抽出物（フレーバーホルダーＦＨ１０４１：長谷川香料（株）製）を使用した。投与量は総クロロゲン酸量として３００ｍｇ／ｋｇの投与量となるように作製した。試験群１ではＦＨ１０４１を総クロロゲン酸量として３００ｍｇ／ｋｇ、ヒドロキシヒドロキノンを０．０３ｍｇ／ｋｇ（総クロロゲン酸量に対して０．０１％）の投与量となるように作製した。以下試験群２では、ＦＨ１０４１を総クロロゲン酸量として３００ｍｇ／ｋｇ、ヒドロキシヒドロキノンを０．３ｍｇ／ｋｇ（総クロロゲン酸量に対して０．１％）、試験群３では、ＦＨ１０４１を総クロロゲン酸量として３００ｍｇ／ｋｇ、ヒドロキシヒドロキノンを３ｍｇ／ｋｇ（総クロロゲン酸量に対して１％）の投与量となるように作製した。投与方法は経口用ゾンデを用いて、経口投与を行った。投与量は５ｍＬ／匹とした。

（ｃ）試験方法；ＳＨＲを１群３匹使用した。経口投与前と１２時間後の尾静脈の収縮期血圧を測定し、投与前血圧から１２時間後の血圧変化率を算出した。

（ｄ）統計学処理方法；得られた測定結果は、平均値及び標準誤差を表して多群検定（Ｓｃｈｅｆｆｅ）を行い、有意水準は５％とした。
ii）結果
表３から明らかなように、クロロゲン酸にヒドロキシヒドロキノンを添加することにより、クロロゲン酸の血圧降下が阻害された。

実施例４
（実施例１で得た画分Ａを用いた缶コーヒーの製造）
画分Ａ０．７５ｇを１４０ｍＬの水に溶解し、缶に充填、巻締めを行った後、レトルト殺菌（１２１℃で１０分間）を施し、缶コーヒーを得た。

実施例５
（実施例１で得た画分Ａを用いた粉末コーヒーの製造）
画分Ａを粉砕することにより粉末コーヒーを得た。

実施例６
本発明品のコーヒー飲料組成物は次の方法でも製造した。
活性炭処理コーヒーの製造
市販インスタントコーヒー（ネスカフェゴールドブレンド赤ラベル）２０ｇを、蒸留水１４００ｍＬに溶解したのち（このコーヒーをコーヒーＰという）、活性炭白鷺ＷＨ₂ｃ
２８／４２（平均細孔径４．２オングストローム、日本エンバイロケミカルズ）を３０ｇ加え、１時間攪拌したのち、メンブレンフィルター（０．４５μｍ）を用いてろ過し、ろ液を得た（このコーヒーをコーヒーＱという）。得られたろ液を、凍結乾燥し、褐色粉末１５．８ｇを得た。この褐色粉末を蒸留水に溶解し、実施例１と同様にしてＨＰＬＣ分析により、クロロゲン酸及びＨＨＱの定量を行なったところ、クロロゲン酸は４．１２質量％含まれ、ＨＨＱは検出限界以下（分析条件Ｂによる）であった。また、ＩＣＰ発光分光分析法でカリウム含量を測定したところ、原料インスタントコーヒー及び活性炭処理コーヒーのいずれも約４．２質量％であった。コーヒーＰ、コーヒーＱ及びガリックアシッドをＨＰＬＣを用いて分析すると、図１及び図２に示すチャートが得られた。コーヒーＱにおいては保持時間６．８分付近のピークが消失し、実質的にピークを有していない。図１におけるａはコーヒーＰのチャートを、ｂはコーヒーＱのチャートを、ｃはガリックアシッドのチャートを示す。図２におけるｂはコーヒーＰのチャートを、ｃはコーヒーＱのチャートを、ａはガリックアシッドのチャートを示す。
また、本発明のコーヒー飲料組成物中のヒドロキシヒドロキノン（ＨＨＱ）量の測定は以下の方法でも行った。

ヒドロキシヒドロキノンの測定
コーヒー飲料組成物のヒドロキシヒドロキノンの分析法は次の通りである。分析機器はＨＰＬＣ−電気化学検出器（クーロメトリック型）であるクーロアレイシステム（モデル５６００Ａ、開発・製造：米国ＥＳＡ社、輸入・販売：エム・シー・メディカル（株））を使用した。装置の構成ユニットの名称・型番は次の通りである。
アナリティカルセル：モデル５０１０、クーロアレイオーガナイザー、クーロアレイエレクトロニクスモジュール・ソフトウエア：モデル５６００Ａ、溶媒送液モジュール：モデル５８２、グラジエントミキサー、オートサンプラー：モデル５４２、パルスダンパー、デガッサー：ＤｅｇａｓｙｓＵｌｔｉｍａｔｅＤＵ３００３、カラムオーブン：５０５。カラム：ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫＣ１８ＡＱ内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ粒子径５μｍ（（株）資生堂）。
分析条件は次の通りである。
サンプル注入量：１０μＬ、流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ、電気化学検出器の印加電圧：０ｍＶ、カラムオーブン設定温度：４０℃、溶離液Ａ：０．１（Ｗ／Ｖ）％リン酸、０．１ｍＭ１−ヒドロキシエタン−１，１−ジホスホン酸、５（Ｖ／Ｖ）％メタノール溶液、溶離液Ｂ：０．１（Ｗ／Ｖ）％リン酸、０．１ｍＭ１−ヒドロキシエタン−１，１−ジホスホン酸、５０（Ｖ／Ｖ）％メタノール溶液。

溶離液Ａ及びＢの調製には、高速液体クロマトグラフィー用蒸留水（関東化学（株））、高速液体クロマトグラフィー用メタノール（関東化学（株））、リン酸（特級、和光純薬工業（株））、１−ヒドロキシエタン−１，１−ジホスホン酸（６０％水溶液、東京化成工業（株））を用いた。

濃度勾配条件
時間溶離液Ａ溶離液Ｂ
０．０分１００％０％
１０．０分１００％０％
１０．１分０％１００％
２０．０分０％１００％
２０．１分１００％０％
５０．０分１００％０％

分析試料の調製は、試料２ｇを精秤後、溶離液Ａにて１０ｍＬにメスアップし、メンブレンフィルター（ＨＬＣ−ＤＩＳＫ２５溶媒系、孔径０．４５μｍ、高速液体クロマトグラフィー用、関東化学（株））にて濾過した。得られた濾液約２．５ｍＬについて、ボンドエルートＳＣＸ（固相充填量：５００ｍｇ、リザーバ容量：３ｍＬ、ジーエルサイエンス（株））に通液し、初通過液約０．５ｍＬを除いた通過液を、速やかに分析に供した。

上記の条件における分析において、ヒドロキシヒドロキノンの保持時間は、６．３８分であった。得られたピークの面積値から、ヒドロキシヒドロキノン（和光純薬工業（株））を標準物質とし、質量％を求めた。
尚、本発明の発明のコーヒー飲料組成物中の過酸化水素量を高感度過酸化水素計を用いて測定したところ、過酸化水素量は検出限界以下であり検出されなかった。また、コーヒーＰの灰分量は、前述の測定法により測定したところ、コーヒー飲料１００ｇあたりの量で表すと、１８６ｍｇ／１００ｇであり、コーヒーＱの灰分量は１７６ｍｇ／１００ｇであった。

実施例７
市販インスタントコーヒー（ネスカフェゴールドブレンド赤ラベル）２０ｇを、蒸留水１４００ｍＬに溶解したのち（このコーヒーをコーヒーＰという）、活性炭クラレコールＧＷ−Ｈ４８／１００（平均細孔径３．９オングストローム）を１０ｇ加え、１時間攪拌したのち、メンブレンフィルター（０．４５μｍ）を用いてろ過し、ろ液を得た（このコーヒーをコーヒーＱという）。得られたろ液を、凍結乾燥し、褐色粉末１６．５ｇを得た。この褐色粉末を蒸留水に溶解し、実施例１と同様にしてＨＰＬＣ分析により、クロロゲン酸及びＨＨＱの定量を行なったところ、クロロゲン酸は４．３１質量％含まれ、ＨＨＱは検出限界以下（分析条件Ｂによる）であった。また、ＩＣＰ発光分光分析法でカリウム含量を測定したところ、原料インスタントコーヒー及び活性炭処理コーヒーのいずれも約４．２質量％であった。

実施例８
実施例６で作製したコーヒー飲料組成物の血圧降下評価
実験材料及び方法
（ａ）１３−１４週齢の雄性自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）を予備的に５日間連続で市販のラット用非観血式血圧測定装置（ソフトロン社製）を用いて血圧測定することにより、ラットを血圧操作に十分慣れさせた後、評価試験を測定した。ラットはすべて温度２５±１℃、相対湿度５５±１０％、照明時間１２時間（午前７時〜午後７時）の条件下（ラット区域内飼育室）で飼育した。
（ｂ）投与方法及び投与量；試験群では実施例６で作製したコーヒー飲料組成物（活性炭処理コーヒー）を用いた。対照群は市販のインスタントコーヒーを使用した。活性炭処理コーヒーとインスタントコーヒーをそれぞれ生理食塩水に溶解し、総クロロゲン酸量として２００ｍｇ／ｋｇの投与量となるように作製した。投与方法は経口用ゾンデを用いて、経口投与を行った。投与量は５ｍＬ／ｋｇとした。
（ｃ）試験方法；ＳＨＲを１群４−６匹使用した。経口投与前と１２時間後の尾静脈の収縮期血圧を測定し、投与前血圧から１２時間後の血圧変化率を算出した。
（ｄ）統計学処理方法；得られた測定結果は、平均値及び標準誤差を表してStudent's t-testを行い、有意水準は５％とした。
結果；表４から明らかなように、本発明のコーヒー飲料組成物を摂取することにより、通常のインスタントコーヒーを摂取した場合に比較して、著明な血圧降下を認めた。

実施例６で作製したコーヒー飲料組成物の血圧降下評価
（ラットにおける血圧上昇抑制評価）
実験材料及び方法
（ａ）使用動物；６週齢の雄性自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）を、予備的に７日間連続で市販のラット用非観式血圧測定装置（ソフトロン社製）を用いて血圧測定することにより、ラットを血圧測定操作に十分慣れさせたのち、評価試験を開始した。ラットはすべて温度２５±１℃、湿度５５±１０％、照明時間１２時間（午前７時〜午後７時）の条件下（ラット区域内飼育室）で飼育した。
（ｂ）投与方法及び投与量；試験区１〜２と対照区を用意した。投与方法は経口投与とし、金属製胃ゾンデを用いて強制的に投与した。投与量は１０ｍＬ／ｋｇ／ｄａｙとし、週５日で４週間投与した。
（ｃ）試験方法；７週齢ＳＨＲを１群６−９匹使用し、試験開始前と開始後７週間における尾動脈の収縮期血圧を毎週測定した。
（ｄ）統計学的処理方法；得られた試験成績は平均値及び標準誤差で表してStudent's t-testを行い、有意水準は５％以下とした。
結果；グラフに、試験開始前及び開始後７週間における収縮期血圧（ＳＢＰ）を示した。図３から明らかなように、対照区に及び試験区１と比較してＨＨＱ除去コーヒーである試験区２は有意に血圧上昇を抑制した。

血圧降下評価用サンプルを以下のようにして製造し、血圧降下試験に供した。
プラセボ（Ｐ）：一般的抽出機に中煎り(L=22)・粉砕(中挽き)デカフェコロンビア豆を４００ｇ投入後、９５℃の湯を加え３２００ｇの抽出液を得る。その抽出液にイオン交換水及び重曹をｐＨ６．３になる様に加え調合液を得、その調合液を１９０ｇ容金属缶に充填・密封後、１１８．１℃にて１０分のレトルト殺菌を行い、プラセボ用試験飲料を得た。殺菌後のｐＨは５．８であった。
サンプル（Ｓ）：一般的抽出機に中煎り（Ｌ＝２２）・粉砕（中挽き）デカフェコロンビア豆を４００ｇ投入後、９５℃の湯を加え３２００ｇの抽出液を得る。その抽出液の固形量に対し、５０％（ｗ／ｗ）の活性炭ＷＨ₂ｃ（日本エンバイロケミカル社製）を添加し、３０分間攪拌後、遠心ろ過を行い活性炭除去し、脱ＨＨＱコーヒー抽出液を得る。その脱ＨＨＱコーヒー抽出液にイオン交換水及び重曹をｐＨ６．３になる様に加え調合液を得る。その調合液を１９０ｇ容金属缶に充填・密封後、１１８．１℃にて１０分のレトルト殺菌を行い、サンプル用試験飲料を得た。殺菌後のｐＨは５．８であった。
（健常人の血圧降下試験）
試験飲料（一缶１９０ｍＬ）
（Ｐ）Placebo クロロゲン酸４３３ｍｇ／缶カフェイン１９４ｍｇ／缶ＨＨＱ３．０ｐｐｍ
（Ｓ）Sample クロロゲン酸４４８ｍｇ／缶カフェイン１４２ｍｇ／缶ＨＨＱ０．１ｐｐｍ以下
試験方法
３０−４０才代男性９名によるＨＨＱ除去コーヒー飲料を用いた血圧降下性能の評価を４週間毎の交叉試験により実施した。
１）活性炭処理によりＨＨＱを除去した缶コーヒー飲料（Ｓ）と通常缶コーヒー（Ｐ）２種類のコーヒー飲料を調製し、香味的に同等であることを確認した。内容物についてのブラインドを保ち、毎日１本（１９０ｍＬ）、好きな時に飲用する条件にて、（Ｐ）を４週間、（Ｓ）を４週間、計８週間の飲用期間にて継続して飲用した。
２）血圧測定血圧測定には、オムロン社血圧計を用いた。飲用開始前及び飲用後４週間、毎週定時時間帯に、血圧測定前に１０分間の安静を保たせた後に血圧測定を行った。なお、試験前の平均血圧値は、１３８ｍｍＨｇ（収縮期）であった。尚、試験期間中は他のコーヒー飲料の摂取を禁止した。
飲用後の収縮期血圧降下値を図４に、抗張期血圧降下値を図５に示すが、本発明のＨＨＱ除去コーヒー飲料に血圧降下作用が認められた。

実施例９
実施例６で得られた活性炭処理コーヒー２ｇを１４０ｍＬの水に溶解し、缶に充填、巻き締めを行った後、レトルト殺菌（１２１℃で１０分間）を施し、缶コーヒーを得た。

実施例１０
実施例６で得られた凍結乾燥品をそのまま粉末コーヒーとした。
実施例１１〜１３
コーヒー抽出物の製造及び容器詰飲料の製造と飲用評価
多段式抽出機において、焙煎（中煎り、Ｌ＝２２）・粉砕されたガテマラコーヒー豆に１２０℃・熱水を加え冷却後コーヒー抽出液（エキス）を得た。仕込み豆量に対し３０％の固形を回収した。得られた抽出液の固形量に対し５０％（ｗ／ｗ）の活性炭ＷＨ₂ｃ（日本エンバイロケミカル社製）を添加し、３０分間攪拌後、遠心ろ過を行い活性炭を除去し、脱ＨＨＱコーヒー抽出液を得た。次いで、抽出液にイオン交換水及び重曹をｐＨ６．３になる様に加え調合液を得、調合液を８５℃に加温後、１９０ｇ容量の金属缶に充填し、ヘッドスペースをＮ２ガスにて置換後、巻き締め密封し、得られた密封容器を１１８．１℃にて１０分間のレトルト殺菌し、容器詰飲料を得た。殺菌後のｐＨは５．８であった。得られた容器詰飲料の分析値及び評価を表５に示した。

コーヒーＱのＨＰＬＣチャート（検出波長２５８ｎｍ）を示す図である。コーヒーＱのＨＰＬＣチャート（検出波長２８８ｎｍ）を示す図である。ＳＨＲに対する連続投与による、クロロゲン酸類除去コーヒー飲料組成物（ＨＨＱ（−）Ｃ）の血圧降下作用を示す図である。ＨＨＱ（＋）Ｃは、クロロゲン酸類非除去コーヒー投与群である。ヒトに対するクロロゲン酸類除去コーヒー飲料組成物（Ｓａｍｐｌｅ）の血圧降下作用（収縮期血圧）を示す図である。ヒトに対するクロロゲン酸類除去コーヒー飲料組成物（Ｓａｍｐｌｅ）の血圧降下作用（拡張期血圧）を示す図である。

Claims

次の成分（Ａ）及び（Ｂ）、
（Ａ）クロロゲン酸類０．０１〜１質量％、
（Ｂ）ヒドロキシヒドロキノンクロロゲン酸類量の０．１質量％未満
を含有するコーヒー飲料組成物からなる高血圧改善剤。
高速液体クロマトグラフィーによる分析において、ガリックアシッドを標準物質とした場合のガリックアシッドに対する相対保持時間が０．５４〜０．６１の時間領域に、実質的にピークを有しないものである請求項１記載の高血圧改善剤。
容器詰飲料形態である請求項１又は２記載の高血圧改善剤。
シングルストレングスである請求項３記載の高血圧改善剤。
容器が酸素非透過性である請求項３又は４記載の高血圧改善剤。
次の成分（Ａ）及び（Ｂ）、
（Ａ）クロロゲン酸類０．１〜１０質量％、
（Ｂ）ヒドロキシヒドロキノンクロロゲン酸類量の０．１質量％未満
を含有するソリュブルコーヒー組成物からなる高血圧改善剤。
高速液体クロマトグラフィーによる分析において、ガリックアシッドを標準物質とした場合のガリックアシッドに対する相対保持時間が０．５４〜０．６１の時間領域に、実質的にピークを有しないものである請求項６記載の高血圧改善剤。