JP4653587B2 - 容器詰コーヒー飲料 - Google Patents

Description

本発明は、加熱殺菌後のヒドロキシヒドロキノン及びヒドロキシヒドロキノン変化物の生成を抑えた血圧降下作用を有するコーヒー組成物及び容器詰コーヒー飲料に関する。

高血圧症の治療薬としては、神経因子による調節系に作用する各種神経遮断薬、液性因子に関わる調節系に作用するＡＣＥ阻害薬、ＡＴ受容体拮抗薬、血管内皮由来物質による調節系に関わるＣａ拮抗薬、腎臓での体液調節系に関わる降圧利尿薬などの医薬品が挙げられ、これらは主として医療機関において、重症の高血圧患者に使用される。しかし、現状において高血圧症対策の目的で使用される医薬品は、有効性に関しては満足できる反面少なからず存在する副作用のため患者にかかる負担は大きい。

また食餌療法、運動療法、飲酒・喫煙の制限などの生活改善による一般療法が、軽症を含む正常高値高血圧症者から重症な高血圧症者に広く適用されている。一般療法の重要性の認識の高まりに伴い、特に食生活の改善が重要であるといわれ続けている。血圧降下作用を有する食品は、数多く、従来から食品由来の降圧素材の探索がさかんに行われ、その有効成分の分離・同定が数多く行われている。

このうち、コーヒー等の食品に含まれているクロロゲン酸、カフェ酸、フェルラ酸等が優れた血圧降下作用を示すことが報告されている（特許文献１〜３）。しかしながら、クロロゲン酸類を多量に含むことが知られているコーヒー飲料では、明確な血圧降下作用が認められず、逆に血圧を上昇させるという報告もある（非特許文献１）。
特開２００２−３６３０７５号公報 特開２００２−２２０６２号公報 特開２００２−５３４６４号公報 Eur. J. Clin. Nutr., 53(11), 831(1999)

本発明の目的は、優れた高血圧改善作用を有し、通常摂取できる容器詰コーヒー飲料を提供することにある。

本発明者は、コーヒー飲料がクロロゲン酸を含んでいるにもかかわらず、十分な血圧降下作用を示さないことに着目し、血圧降下作用とコーヒー飲料成分との関係について種々検討した結果、コーヒー飲料に含まれているヒドロキシヒドロキノンがクロロゲン酸類の血圧降下作用を阻害していることを見出した。そして、クロロゲン酸類量を一定範囲に保持し、ヒドロキシヒドロキノン含量を通常含まれる量より十分少ない一定量以下に低下させれば、優れた血圧降下作用を有するコーヒー組成物が得られることを見出した。

加えて、ヒドロキシヒドロキノン変化物が存在することによって、血圧降下作用が阻害されることも見出した。

すなわち、本発明は、 下記条件（Ａ）〜（Ｃ）：
（Ａ）クロロゲン酸類 ０．０１〜１質量％、
（Ｂ）ヒドロキシヒドロキノン クロロゲン酸類量の０．１質量％未満
（Ｃ）ヒドロキシヒドロキノン変化物を実質的に含有しない
を満たすコーヒー組成物を提供するものである。
また、本発明は、 下記条件（Ａ）〜（Ｃ）：
（Ａ）クロロゲン酸類 ０．０１〜１質量％、
（Ｂ）ヒドロキシヒドロキノン クロロゲン酸類量の０．１質量％未満
（Ｃ）ヒドロキシヒドロキノン変化物を実質的に含有しない
を満たす容器詰コーヒー飲料を提供するものである。

本発明の容器詰コーヒー飲料は、優れた高血圧改善作用、すなわち血圧降下作用又は血圧上昇抑制作用を有し、かつ長期摂取可能である。従って、本発明の容器詰コーヒー飲料は、高血圧改善用の医薬として、更には血圧降下のために、又は、血圧上昇抑制のために用いられる旨、又は血圧が高めの方にと表示された飲料として有用である。
また、本発明のコーヒー組成物は、ヒドロキシヒドロキノン及びヒドロキシヒドロキノン変化物の生成が少ないため血圧降下作用に優れた容器詰コーヒー飲料の製造に有用である。

本発明の容器詰コーヒー飲料又はコーヒー組成物は、血圧降下作用、血圧上昇抑制作用、及び味の点で、（Ａ）クロロゲン酸類を０．０１〜１質量％含有するが、好ましくは０．０５〜０．８質量％、より好ましくは０．１〜０．６質量％、更に好ましくは０．１３〜０．５質量％、特に好ましくは０．１５〜０．４質量％含有する。（Ａ）当該クロロゲン酸類としては（Ａ¹）モノカフェオイルキナ酸、（Ａ²）フェルラキナ酸、（Ａ³）ジカフェオイルキナ酸の三種を含有する。ここで（Ａ¹）モノカフェオイルキナ酸としては３−カフェオイルキナ酸、４−カフェオイルキナ酸及び５−カフェオイルキナ酸から選ばれる１種以上が挙げられる。また（Ａ²）フェルラキナ酸としては、３−フェルラキナ酸、４−フェルラキナ酸及び５−フェルラキナ酸から選ばれる１種以上が挙げられる。（Ａ³）ジカフェオイルキナ酸としては３，４−ジカフェオイルキナ酸、３，５−ジカフェオイルキナ酸及び４，５−ジカフェオイルキナ酸から選ばれる１種以上が挙げられる。当該クロロゲン酸類の含有量は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により測定することができる。ＨＰＬＣにおける検出手段としては、ＵＶ検出が一般的であるが、ＣＬ（化学発光）検出、ＥＣ（電気化学）検出、ＬＣ−Ｍａｓｓ検出等により更に高感度で検出することもできる。

本発明の容器詰コーヒー飲料又はコーヒー組成物は、ヒドロキシヒドロキノン（Ｂ）の含有量はクロロゲン酸類量に対して０．１質量％未満である。クロロゲン酸類量に対してヒドロキシヒドロキノン量が０．１質量％未満であれば、クロロゲン酸類の血圧降下作用が発揮される。好ましくは０．００１〜０．０７質量％、より好ましくは０．００２〜０．０５質量％、更に好ましくは０．００３〜０．０３質量％、特に好ましくは０．００４〜０．０２質量％である。クロロゲン酸類量に対してヒドロキシヒドロキノン量が０．０２質量％以下であればクロロゲン酸の血圧降下作用が顕著に現れる。ここで、本発明飲料等中のヒドロキシヒドロキノン含量は０であってもよい。

当該ヒドロキシヒドロキノン含量は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により測定することができる。ＨＰＬＣにおける検出手段としては、ＵＶ検出が一般的であるが、ＣＬ（化学発光）検出、ＥＣ（電気化学）検出、ＬＣ−Ｍａｓｓ検出等により更に高感度で検出でき、特にＥＣ（電気化学）検出が極微量のヒドロキシヒドロキノンを測定できる点で好ましい。なお、ＨＰＬＣによるヒドロキシヒドロキノン含量の測定にあたっては、容器詰コーヒー飲料等を濃縮した後に測定することもできる。

更にヒドロキシヒドロキノン含量は、ＨＰＬＣで直接測定することもできるが、容器詰コーヒー飲料又はコーヒー組成物から、各種クロマトグラフィーによりヒドロキシヒドロキノンを濃縮して、その濃縮画分の量を測定することによっても定量できる。なお、クロロゲン酸類量及びヒドロキシヒドロキノン量の測定にあたっては、容器詰コーヒー飲料を開封後直ちに、例えば０.１Ｎ(規定)となるように塩酸を加えて、又は、０．１Ｎの塩酸／水酸化ナトリウムバッファー系で測定するのが好ましい。

本発明において、ヒドロキシヒドロキノン変化物（Ｃ）は、高速液体クロマトグラフィーによる分析（後述するヒドロキシヒドロキノン変化物の分析条件）において、ガリックアシッドを標準物質とした場合のガリックアシッドに対する相対保持時間が０．２７〜０．３１の時間領域に存在し、本発明の容器詰コーヒー飲料又はコーヒー組成物は実質的にヒドロキシキノン変化物を含有しない。

ここでヒドロキシヒドロキノン変化物を実質的に含有しないとは、後述するヒドロキシヒドロキノン変化物の分析条件において実質的にピークを有しないことであり、Ｓ/Ｎ比にして３以下であることを意味する。

本発明の容器詰コーヒー飲料又はコーヒー組成物は、ヒドロキシヒドロキノン及びヒドロキシヒドロキノン変化物の含有量を低減させる以外は、通常のコーヒー成分をそのまま含有しているのが好ましい。

また本発明の容器詰コーヒー飲料又はコーヒー組成物は、Ｈ₂Ｏ₂（過酸化水素）の含有量が１ｐｐｍ以下、更に０．１ｐｐｍ以下、特に０．０１ｐｐｍ以下であるのがコーヒー本来の風味の点で好ましい。過酸化水素の測定は通常用いられる過酸化水素計を用いて行うことができ、例えば、セントラル科学社製の高感度過酸化水素計スーパーオリテクターモデル５（ＳＵＰＥＲ ＯＲＩＴＥＣＴＯＲ ＭＯＤＥＬ５）等を用いることができる。

本発明の容器詰コーヒー飲料又はコーヒー組成物に用いるコーヒー豆の種類は、特に限定されないが、例えばブラジル、コロンビア、タンザニア、モカ等が挙げられる。コーヒー種としては、アラビカ種、ロブスタ種などがある。コーヒー豆は１種でもよいし、複数種をブレンドして用いてもよい。焙煎コーヒー豆の焙煎方法については特に制限はなく、焙煎温度、焙煎環境についても何ら制限はなく、通常の方法を採用できる。更にその豆からの抽出方法についても何ら制限はなく、例えば焙煎コーヒー豆又はその粉砕物から水〜熱水（０〜１００℃）を用いて１０秒〜１２０分抽出する方法が挙げられる。抽出方法は、ボイリング式、エスプレッソ式、サイホン式、ドリップ式（ペーパー、ネル等）等が挙げられる。

また、本発明の容器詰コーヒー飲料又はコーヒー組成物には乳成分としては、生乳、牛乳、全粉乳、脱脂粉乳、生クリーム、濃縮乳、脱脂乳、部分脱脂乳、練乳、植物油等を適宜配合できる。

本発明の容器詰コーヒー飲料又はコーヒー組成物は、１００ｇあたりコーヒー豆を生豆換算で１ｇ以上使用したものをいう。好ましくはコーヒー豆を２．５ｇ以上使用しているものである。更に好ましくはコーヒー豆を５ｇ以上使用しているものである。また、容器詰コーヒー飲料は、シングルストレングスであることが好ましい。ここでシングルストレングスとは、容器詰飲料を開封した後、常態として薄めずにそのまま飲めるものをいう。

本発明の容器詰コーヒー飲料に用いるコーヒー組成物は、焙煎コーヒー豆抽出物を吸着剤処理してヒドロキシヒドロキノン含量及びヒドロキシヒドロキノン変化物を低減させることにより得られる。吸着剤としては、活性炭、逆相担体などが挙げられる。より具体的には、焙煎コーヒー豆抽出液又は焙煎コーヒー豆抽出液の乾燥品の水溶液に、吸着剤を加え０〜１００℃で１０分〜５時間撹拌した後、吸着剤を除去すればよい。ここで、吸着剤は、焙煎コーヒー豆重量に対して活性炭の場合は０．０２〜１．０倍、逆相担体の場合は２〜１００倍用いるのが好ましい。活性炭としては、ミクロ孔領域における平均細孔半径が５オングストローム（Å）以下、更には、２〜５オングストロームの範囲であることが好ましく、特に３〜５オングストロームの範囲であることが好ましい。
本発明におけるミクロ孔領域とは、１０オングストローム以下を示し、平均細孔半径は、ＭＰ法により測定して得た細孔分布曲線のピークトップを示す細孔半径の値とした。ＭＰ法とは、文献（Colloid and Interface Science, 26, 46(1968)）に記載の細孔測定法であり、株式会社住化分析センター、株式会社東レリサーチセンターにて採用されている方法である。

また、活性炭の種類としては、ヤシ殻活性炭が好ましく、更に水蒸気賦活化ヤシ殻活性炭が好ましい。活性炭の市販品としては、白鷺ＷＨ２Ｃ（日本エンバイロケミカルズ）、太閣ＣＷ（二村化学）、クラレコールＧＷ（クラレケミカル）等を用いることができる。逆相担体としては、ＹＭＣ・ＯＤＳ−Ａ（ＹＭＣ）、Ｃ１８（ＧＬサイエンス）等が挙げられる。
これらの吸着剤処理法のうち、特定の活性炭を用いた吸着剤処理法はクロロゲン酸類量を低下させることなく選択的にヒドロキシヒドロキノン及びヒドロキシヒドロキノン変化物の含量を低減させることができるだけでなく、工業的にも有利であり、更にカリウム含量を低下させない（質量比で１／５以上、特に１／２以上保持）点からも好ましい。

本発明における容器詰コーヒー飲料においてヒドロキシヒドロキノンについては、高速液体クロマトグラフィーによる分析における、ガリックアシッドを標準物質とした場合のガリックアシッドに対する相対保持時間が０．５４〜０．６１の時間領域に実質的にピークを有しないことが好ましい。当該時間領域に実質的にピークを有しないことを確認するには、一般的なＨＰＬＣを使用することができ、例えば溶離液として０．０５Ｍ酢酸水溶液と０．０５Ｍ酢酸１００％アセトニトリル溶液のグラジエントを用い、ＯＤＳカラムを用いて、紫外線吸光光度計等により検出することで確認することができる。

本発明においてガリックアシッドに対するヒドロキシヒドロキノンの相対保持時間が０．５４〜０．６１の時間領域に実質的にピークを有しないとは、ガリックアシッドの１ ｐｐｍ溶液を分析時の面積値をＳ１とし、同条件でコーヒー組成物又は容器詰コーヒー飲料を分析した時の前記特定の領域に溶出する成分に由来するピーク面積の総和をＳ２としたとき、Ｓ２／Ｓ１＜０．０１であることを意味する。

本発明の容器詰コーヒー飲料又はコーヒー組成物には、所望により、ショ糖、グルコース、フルクトース、キシロース、果糖ブドウ糖液、糖アルコール等の糖分、抗酸化剤、ｐＨ調整剤、乳化剤、香料等を添加することができる。

本発明の容器詰コーヒー飲料は、ＰＥＴボトル、缶（アルミニウム、スチール）、紙、レトルトパウチ、瓶（ガラス）等の容器を用いることができる。この場合、容器は５０〜２５００ｍＬとすることができる。容器詰コーヒー飲料のｐＨとしては５〜７が好ましく、より好ましくは特に５．４〜６．５、特に好ましくは５．６〜６．３である。容器としては、コーヒー中の成分の変化を防止する観点から、酸素透過度の低い容器が好ましく、例えば、アルミニウムや、スチールなどの缶、ガラス製のビン等を用いるのが良い。缶やビンの場合、リキャップ可能な、リシール型のものも含まれる。ここで酸素透過度とは、２０℃、相対湿度５０％の環境下で測定した酸素透過度（ｃｃ・ｍｍ／ｍ²・ｄａｙ・ａｔｍ）がであり、５以下、更に３以下、特に１以下であればより好ましい。

容器詰コーヒー飲料にする場合、通常殺菌処理が行われるが、当該殺菌処理は、金属缶のように容器に充填後、加熱殺菌できる場合にあっては食品衛生法に定められた殺菌条件で行われる。ＰＥＴボトル、紙容器のようにレトルト殺菌できないものについては、あらかじめ食品衛生法に定められた条件と同等の殺菌条件、例えばプレート式熱交換器で高温短時間殺菌後、一定の温度迄冷却して容器に充填する等の方法が採用される。また無菌下で加熱殺菌後、無菌下でｐＨを中性に戻すことや、中性下で加熱殺菌後、無菌下でｐＨを酸性に戻す等の操作も可能である。

本発明の容器詰コーヒー飲料は、高血圧改善作用を有するクロロゲン酸類を有効量含有しており、かつ加熱殺菌処理後もクロロゲン酸類の高血圧改善作用を阻害しているヒドロキシヒドロキノン及びヒドロキシヒドロキノン変化物が低減されていることから、血圧降下用、又は血圧上昇抑制医薬組成物、血圧降下用飲料、血圧上昇抑制飲料として有用である。

クロロゲン酸類およびヒドロキシヒドロキノン、ヒドロキシヒドロキノン変化物の分析法は次の通りである。
クロロゲン酸類の分析方法：分析条件Ａ
分析機器はＨＰＬＣ（島津製作所（株））を使用した。装置の構成ユニットの型番は次の通り。ディテクター：ＳＰＤ-Ｍ１０Ａ、オーブン：ＣＴＯ-１０ＡＣ、ポンプ：ＬＣ-１０ＡＤ、オートサンプラー：ＳＩＬ-１０ＡＤ、カラム：Inertsil ＯＤＳ-２ 内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ。
分析条件は次の通り。サンプル注入量：１０μＬ、流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ、紫外線
吸光光度計検出波長：３２５ｎｍ（クロロゲン酸類）、２９０ｎｍ（ヒドロキシヒドロキ
ノン）、溶離液Ａ：０．０５Ｍ酢酸３％アセトニトリル溶液、溶離液Ｂ：０．０５Ｍ酢酸
１００％アセトニトリル溶液

濃度勾配条件
時間 溶離液Ａ 溶離液Ｂ
０分 １００％ ０％
２０分 ８０％ ２０％
３５分 ８０％ ２０％
４５分 ０％ １００％
６０分 ０％ １００％
７０分 １００％ ０％
１２０分 １００％ ０％

クロロゲン酸類の保持時間（単位：分）（Ａ1）モノカフェオイルキナ酸：１７．９、
２０．４、２２．０の計３点（Ａ2）フェルラキナ酸：２２．８、２５．８、２７．０の
計３点（Ａ3）ジカフェオイルキナ酸：３２．３、３３．０、３５．８の計３点ここで求
めたエリアから５―カフェオイルキナ酸を標準物質とし、質量％を求めた。

クロロゲン酸類の分析方法：分析条件Ｋ
容器詰コーヒー飲料又はコーヒー組成物のクロロゲン酸類の分析法は次の通りである。分析機器はＨＰＬＣを使用した。装置の構成ユニットの型番は次の通り。ＵＶ−ＶＩＳ検出器：Ｌ−２４２０（（株）日立ハイテクノロジーズ）、カラムオーブン：Ｌ−２３００（（株）日立ハイテクノロジーズ）、ポンプ：Ｌ−２１３０（（株）日立ハイテクノロジーズ）、オートサンプラー：Ｌ−２２００（（株）日立ハイテクノロジーズ）、カラム：Ｃａｄｅｎｚａ ＣＤ−Ｃ１８ 内径４．６ｍｍ×長さ１５０ｍｍ、粒子径３μｍ（インタクト（株））。
分析条件は次の通り。サンプル注入量：１０μＬ、流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ、ＵＶ−ＶＩＳ検出器設定波長：３２５ｎｍ、カラムオーブン設定温度：３５℃、溶離液Ａ：０．０５Ｍ 酢酸、０．１ｍＭ １−ヒドロキシエタン−１，１−ジホスホン酸、１０ｍＭ 酢酸ナトリウム、５（Ｖ／Ｖ）％アセトニトリル溶液、溶離液Ｂ：アセトニトリル。

濃度勾配条件
時間 溶離液Ａ 溶離液Ｂ
０．０分 １００％ ０％
１０．０分 １００％ ０％
１５．０分 ９５％ ５％
２０．０分 ９５％ ５％
２２．０分 ９２％ ８％
５０．０分 ９２％ ８％
５２．０分 １０％ ９０％
６０．０分 １０％ ９０％
６０．１分 １００％ ０％
７０．０分 １００％ ０％

ＨＰＬＣでは、試料１ｇを精秤後、溶離液Ａにて１０ｍＬにメスアップし、メンブレンフィルター（ＧＬクロマトディスク２５Ａ，孔径０．４５μｍ，ジーエルサイエンス（株））にて濾過後、分析に供した。
クロロゲン酸類の保持時間（単位：分）
（Ａ¹）モノカフェオイルキナ酸：５．３、８．８、１１．６の計３点（Ａ²）フェルラキナ酸：１３．０、１９．９、２１．０の計３点（Ａ³）ジカフェオイルキナ酸：３６．６、３７．４、４４．２の計３点。ここで求めた９種のクロロゲン酸類の面積値から５−カフェオイルキナ酸を標準物質とし、質量％を求めた。

ヒドロキシヒドロキノンのＨＰＬＣ分析：分析条件Ｂ
ヒドロキシヒドロキノンは以下の分析法によっても測定できる。以下の分析条件を分析条件Ｂとする。分析機器はＨＰＬＣ（日立製作所（株））を使用した。装置の構成ユニットの型番は次の通り。
ディテクター：Ｌ−７４５５、オーブン：Ｌ−７３００、ポンプ：Ｌ−７１００、オートサンプラー：Ｌ−７２００、カラム：Inertsil ＯＤＳ−２ 内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ。

分析条件は次の通り。
サンプル注入量：１０μＬ、流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ、紫外線吸光光度計検出波長：２５８又は２８８ｎｍ、溶離液Ａ：０．０５Ｍ酢酸水溶液、溶離液Ｂ：０．０５Ｍ酢酸１００％アセトニトリル溶液

濃度勾配条件
時間 溶離液Ａ 溶離液Ｂ
０分 １００％ ０％
１５分 １００％ ０％
１５．１分 ０％ １００％
２５分 ０％ １００％
２５．１分 １００％ ０％
３０分 １００％ ０％

ヒドロキシヒドロキノンの保持時間：６．８分。ここで求めたエリアからヒドロキシヒドロキノンを標準物質とし、質量％を求めた。同様に測定したガリックアシッドの保持時間は１１．５分であった。

ＨＰＬＣ−電気化学検出器によるヒドロキシヒドロキノンの分析方法
容器詰コーヒー飲料又はコーヒー組成物のヒドロキシヒドロキノンの分析法は次の通りである。分析機器はＨＰＬＣ−電気化学検出器（クーロメトリック型）であるクーロアレイシステム（モデル５６００Ａ、開発・製造：米国ＥＳＡ社、輸入・販売：エム・シー・メディカル（株））を使用した。装置の構成ユニットの名称・型番は次の通りである。
アナリティカルセル：モデル５０１０、クーロアレイオーガナイザー、クーロアレイエレクトロニクスモジュール・ソフトウエア：モデル５６００Ａ、溶媒送液モジュール：モデル５８２、グラジエントミキサー、オートサンプラー：モデル５４２、パルスダンパー、デガッサー：Ｄｅｇａｓｙｓ Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＤＵ３００３、カラムオーブン：５０５。カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ１８ ＡＱ 内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ 粒子径５μｍ（（株）資生堂）。

分析条件は次の通りである。
サンプル注入量：１０μＬ、流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ、電気化学検出器の印加電圧：０ｍＶ、カラムオーブン設定温度：４０℃、溶離液Ａ：０．１（Ｗ／Ｖ）％リン酸、０．１ｍＭ １−ヒドロキシエタン−１，１−ジホスホン酸、５（Ｖ／Ｖ）％メタノール溶液、溶離液Ｂ：０．１（Ｗ／Ｖ）％リン酸、０．１ｍＭ １−ヒドロキシエタン−１，１−ジホスホン酸、５０（Ｖ／Ｖ）％メタノール溶液。

溶離液Ａ及びＢの調製には、高速液体クロマトグラフィー用蒸留水（関東化学（株））、高速液体クロマトグラフィー用メタノール（関東化学（株））、リン酸（特級、和光純薬工業（株））、１−ヒドロキシエタン−１，１−ジホスホン酸（６０％水溶液、東京化成工業（株））を用いた。

濃度勾配条件
時間 溶離液Ａ 溶離液Ｂ
０．０分 １００％ ０％
１０．０分 １００％ ０％
１０．１分 ０％ １００％
２０．０分 ０％ １００％
２０．１分 １００％ ０％
５０．０分 １００％ ０％

分析試料の調製は、試料５ｇを精秤後、０．５（Ｗ／Ｖ）％リン酸、０．５ｍＭ １−ヒドロキシエタン−１，１−ジホスホン酸、５（Ｖ／Ｖ）％メタノール溶液にて１０ｍＬにメスアップし、この溶液について遠心分離を行い上清を得た。この上清について、ボンドエルートＳＣＸ（固相充填量：５００ｍｇ、リザーバ容量：３ｍＬ、ジーエルサイエンス（株））に通液し、初通過液約０．５ｍＬを除いて通過液を得た。この通過液について、メンブレンフィルター（ＧＬクロマトディスク２５Ａ，孔径０．４５μｍ，ジーエルサイエンス（株））にて濾過し、速やかに分析に供した。

ＨＰＬＣ−電気化学検出器の上記の条件における分析において、ヒドロキシヒドロキノンの保持時間は、６．３８分であった。得られたピークの面積値から、ヒドロキシヒドロキノン（和光純薬工業（株））を標準物質とし、質量％を求めた。

ヒドロキシヒドロキノン変化物の分析条件
コーヒー組成物又は容器詰コーヒー飲料中の分析法は次の通りである。分析機器であるＨＰＬＣ装置はアジレントＨＰ１１００を使用した。
分析条件は次の通り。カラム：Inertsil ＯＤＳ−３（５μｍ） 内径２．１mm×長さ１５０mm。サンプル注入量：５μＬ、流量：０．２mL/min、紫外線吸光光度計検出波長：２５８nm、２８８nm、溶離液Ａ：０．００５M酢酸５％メタノール溶液、溶離液Ｂ：０．００５M酢酸９０％メタノール溶液、カラム温度３５℃。

濃度勾配条件
時間 溶離液Ａ 溶離液Ｂ
０分 １００％ ０％
１０分 １００％ ０％
３５分 ０％ １００％
４５分 ０％ １００％
４５．１分 １００％ ０％
６０分 ０％ １００％

ヒドロキシヒドロキノン変化物の保持時間２．７０分。同様にして求めたガリックアシドの保持時間は９．１３分であった。

参考例１ 血圧降下評価
ｉ）実験材料及び方法
（ａ）１２週齢の雄性自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）を予備的に５日間連続で市販のラット用非観血式血圧測定装置（ソフトロン社製）を用いて血圧測定することにより、ラットを血圧操作に十分慣れさせた後、評価試験を測定した。ラットはすべて温度２５±１℃、相対湿度５５±１０％、照明時間１２時間（午前７時〜午後７時）の条件下（ラット区域内飼育室）で飼育した。

（ｂ）投与方法及び投与量；対照群では生理食塩水を経口投与した。比較群ではクロロゲン酸が主成分である生コーヒー豆抽出物（フレーバーホルダーＦＨ１０４１：長谷川香料（株）製）を使用した。投与量は総クロロゲン酸量として３００ｍｇ／ｋｇの投与量となるように作製した。試験群１ではＦＨ１０４１を総クロロゲン酸量として３００ｍｇ／ｋｇ、ヒドロキシヒドロキノンを０．０３ｍｇ／ｋｇ（総クロロゲン酸量に対して０．０１％）の投与量となるように作製した。以下試験群２では、ＦＨ１０４１を総クロロゲン酸量として３００ｍｇ／ｋｇ、ヒドロキシヒドロキノンを０．３ｍｇ／ｋｇ（総クロロゲン酸量に対して０．１％）、試験群３では、ＦＨ１０４１を総クロロゲン酸量として３００ｍｇ／ｋｇ、ヒドロキシヒドロキノンを３ｍｇ／ｋｇ（総クロロゲン酸量に対して１％）の投与量となるように作製した。投与方法は経口用ゾンデを用いて、経口投与を行った。投与量は５ｍＬ／匹とした。

(ｃ）試験方法；ＳＨＲを１群３匹使用した。経口投与前と１２時間後の尾静脈の収縮期血圧を測定し、投与前血圧から１２時間後の血圧変化率を算出した。

（ｄ）統計学処理方法；得られた測定結果は、平均値及び標準誤差を表して多群検定（Ｓｃｈｅｆｆｅ）を行い、有意水準は５％とした。
ii）結果
表１から明らかなように、クロロゲン酸にヒドロキシヒドロキノンを添加することにより、クロロゲン酸の血圧降下が阻害された。

参考例２
コーヒー飲料Ｑを次の方法で製造した。
活性炭処理コーヒーの製造
市販インスタントコーヒー（ネスカフェゴールドブレンド赤ラベル（商標名））２０ｇを、蒸留水１４００ｍＬに溶解したのち（このコーヒーをコーヒー組成物Ｐという）、活性炭白鷺ＷＨ２Ｃ ２８／４２（日本エンバイロケミカルズ）を３０ｇ加え、１時間攪拌したのち、メンブレンフィルター（０．４５μｍ）を用いてろ過し、ろ液を得た（このコーヒーをコーヒー組成物Ｑという）。得られたろ液を、凍結乾燥し、褐色粉末１５．８ｇを得た。この褐色粉末を蒸留水に溶解し、ＨＰＬＣ分析により、クロロゲン酸類及びＨＨＱの定量を行なったところ、クロロゲン酸類は４．１２質量％含まれ（分析条件Ａによる）、ＨＨＱは検出限界以下（分析条件Ｂによる）であった。また、ＩＣＰ発光分光分析法でカリウム含量を測定したところ、原料インスタントコーヒー及び活性炭処理コーヒーのいずれも約４．２質量％であった。コーヒー組成物Ｐ、コーヒー組成物Ｑ及びガリックアシッドをＨＰＬＣを用いて分析すると、図１及び図２に示すチャートが得られた。コーヒー組成物Ｑにおいては保持時間６．８分付近のピークが消失し、実質的にピークを有していない。図１におけるａはコーヒー組成物Ｐのチャートを、ｂはコーヒー組成物Ｑのチャートを、ｃはガリックアシッドのチャートを示す。図２におけるｂはコーヒー組成物Ｐのチャートを、ｃはコーヒー組成物Ｑのチャートを、ａはガリックアシッドのチャートを示す。
また、コーヒー組成物Ｑ中のヒドロキシヒドロキノン（ＨＨＱ）量の測定はＨＰＬＣ−電気化学検出器による方法でも行った。

参考例３
市販インスタントコーヒー（ネスカフェゴールドブレンド赤ラベル（商標名））２０ｇを、蒸留水１４００ｍＬに溶解したのち（このコーヒーをコーヒー組成物Ｐという）、活性炭クラレコールＧＷ−Ｈ ４８／１００を１０ｇ加え、１時間攪拌したのち、メンブレンフィルター（０．４５μｍ）を用いてろ過し、ろ液を得た（このコーヒーをコーヒー組成物Ｒという）。得られたろ液を、凍結乾燥し、褐色粉末１６．５ｇを得た。この褐色粉末を蒸留水に溶解し、ＨＰＬＣ分析により、クロロゲン酸及びＨＨＱの定量を行なったところ、クロロゲン酸は４．３１質量％含まれ（分析条件Ａによる）、ＨＨＱは検出限界以下（分析条件Ｂによる）であった。また、ＩＣＰ発光分光分析法でカリウム含量を測定したところ、原料インスタントコーヒー及び活性炭処理コーヒーのいずれも約４．２質量％であった。

参考例４
参考例２で作製したコーヒー組成物Ｑの血圧降下評価
実験材料及び方法
（ａ）１３−１４週齢の雄性自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）を予備的に５日間連続で市販のラット用非観血式血圧測定装置（ソフトロン社製）を用いて血圧測定することにより、ラットを血圧操作に十分慣れさせた後、評価試験を測定した。ラットはすべて温度２５±１℃、相対湿度５５±１０％、照明時間１２時間（午前７時〜午後７時）の条件下（ラット区域内飼育室）で飼育した。
（ｂ）投与方法及び投与量；試験群では参考例２で作製したコーヒー組成物Ｑ（活性炭処理コーヒー）を用いた。対照群は市販のインスタントコーヒーを使用した。活性炭処理コーヒーとインスタントコーヒーをそれぞれ生理食塩水に溶解し、総クロロゲン酸量として２００ｍｇ／ｋｇの投与量となるように作製した。投与方法は経口用ゾンデを用いて、経口投与を行った。投与量は５ｍＬ／ｋｇとした。
（ｃ）試験方法；ＳＨＲを１群４−６匹使用した。経口投与前と１２時間後の尾静脈の収縮期血圧を測定し、投与前血圧から１２時間後の血圧変化率を算出した。
（ｄ）統計学処理方法；得られた測定結果は、平均値及び標準誤差を表してStudent's t-testを行い、有意水準は５％とした。
結果；表２から明らかなように、コーヒー組成物Ｑを摂取することにより、通常のインスタントコーヒーを摂取した場合に比較して、著明な血圧降下を認めた。

参考例２で作製したコーヒー組成物Ｑの血圧降下評価
（ラットにおける血圧上昇抑制評価）
実験材料及び方法
（ａ）使用動物；６週齢の雄性自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）を、予備的に７日間連続で市販のラット用非観式血圧測定装置（ソフトロン社製）を用いて血圧測定することにより、ラットを血圧測定操作に十分慣れさせたのち、評価試験を開始した。ラットはすべて温度２５±１℃、湿度５５±１０％、照明時間１２時間（午前７時〜午後７時）の条件下（ラット区域内飼育室）で飼育した。
（ｂ）投与方法及び投与量；試験区１〜２と対照区を用意した。投与方法は経口投与とし、金属製胃ゾンデを用いて強制的に投与した。投与量は１０ｍＬ／ｋｇ／ｄａｙとし、週５日で７週間投与した。
（ｃ）試験方法；７週齢ＳＨＲを１群６−９匹使用し、試験開始前と開始後７週間における尾動脈の収縮期血圧を毎週測定した。
（ｄ）統計学的処理方法；得られた試験成績は平均値及び標準誤差で表してStudent's t-testを行い、有意水準は５％以下とした。
結果；グラフに、試験開始前及び開始後７週間における収縮期血圧（ＳＢＰ）を示した。図３から明らかなように、対照区（生食）に及び試験区１（ＨＨＱ（＋）Ｃ）と比較してＨＨＱ除去コーヒーである試験区２（ＨＨＱ（−）Ｃ）は有意に血圧上昇を抑制した。

実施例１
中焙煎度のコーヒー豆粉砕物１２５ｇに対して８倍量のイオン交換水（９５℃）で抽 出し、コーヒー抽出液１Ｋｇを得た。次に本コーヒー抽出液中のＢｒｉｘを測定し、Ｂ ｒｉｘに対して５０質量％の量の活性炭（白鷺ＷＨ２Ｃ）を充填したカラム（内径４５ ｍｍ、長さ１５０ｍｍ）を準備した。その後、活性炭２０ｇを充填したカラムに温度２ ５℃、流量０．３７Ｌ/Ｈｒの条件下でコーヒー抽出液を通液し、活性炭処理してヒド ロキシヒドロキノン及びヒドロキシヒドロキノン変化物を除去したコーヒー組成物を得 た。こうして得られたヒドロキシヒドロキノン及びヒドロキシヒドロキノン変化物を除 去したコーヒー組成物中のクロロゲン酸類量を測定し、イオン交換水で希釈し、重曹に てｐＨ調整（ｐＨ５．４）を行った。次にこうして得られたコーヒー組成物を１９０ｇ 金属缶に充填後、密封し、レトルト殺菌（１２３℃、７分）を施した。殺菌後のクロロ ゲン酸類濃度は０．１７質量％、ヒドロキシヒドロキノン及びヒドロキシヒドロキノン 変化物はいずれも検出限界以下であった。

比較例１
中焙煎度のコーヒー豆に対して８倍量のイオン交換水（９５℃）で抽出し、コーヒー抽出液を得た。殺菌前は０．００４５質量％のヒドロキシヒドロキノンであり、ヒドロキシヒドロキノン変化物は実質的にピークを有しなかった。また活性炭処理を実施しない以外は実施例１と同様の操作で製造した。また殺菌後のクロロゲン酸類濃度は０．１７質量％、ヒドロキシヒドロキノン０．０００８質量％、ヒドロキシヒドロキノン変化物は実質的にピークは存在しなかった。

比較例２
活性炭未処理コーヒー（空気暴露処理品）
比較例１で得られた容器詰コーヒー飲料を開封し、２５℃、６時間の間、空気暴露処理した。その結果、ヒドロキシヒドロキノンは実質的にピークを有しなかった。一方、ヒドロキシヒドロキノン変化物は実質的にピークを有するものが得られた（相対保持時間０．２７〜０．３１はＳ／Ｎ比は３を超えていた）。比較例１の容器詰コーヒーの開封直後のヒドロキシヒドロキノン変化物の分析結果を図４の上図に、空気暴露６時間後の分析結果を図４の下図に示す。

実施例２ 血圧降下評価方法
（ａ）１７週齢の雄性自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）を予備的に５日間連続で市販のラット用非観血式血圧測定装置（ソフトロン社製）を用いて血圧測定することにより、ラットを血圧操作に十分慣れさせた後、評価試験を測定した。ラットはすべて温度２５±１℃、相対湿度５５±１０％、照明時間１２時間（午前７時〜午後７時）の条件下（ラット区域内飼育室）で飼育した。
（ｂ）投与方法及び投与量；試験には実施例１で作製したコーヒー組成物（活性炭処理コーヒー）、比較例１及び比較例２で得られたコーヒー組成物を用いた。各コーヒー組成物は凍結乾燥により粉末化して使用した。コーヒー組成物をそれぞれ生理食塩水に溶解し、総クロロゲン酸量として２００ｍｇ／ｋｇの投与量となるように作製した。投与方法は経口用ゾンデを用いて、経口投与を行った。投与量は１０ｍＬ／ｋｇとした。
（ｃ）試験方法；ＳＨＲを１群４−６匹使用した。経口投与前と１２時間後の尾静脈の収縮期血圧を測定し、投与前血圧から１２時間後の血圧変化率を算出した。
（ｄ）統計学処理方法；得られた測定結果は、平均値及び標準誤差を表してStudent's t-testを行い、有意水準は５％とした。
結果；表３から明らかなように、空気暴露処理したコーヒー組成物は活性炭処理したコーヒーに比較して血圧低下作用が有意に減弱していた。

比較例３
ヒドロキシヒドロキノン１００ｐｐｍの水溶液を調製し、２５℃、空気暴露条件下にて経時変化させたものを高速液体クロマトグラフィーにより分析した。その結果、ヒドロキシヒドロキノンは経時的に減少するものの、ヒドロキシヒドロキノン変化物として定義されているガッリクアシッド相対保持時間０．２７〜０．３１の位置にピークは認められなかった。比較例３のヒドロキシヒドロキノン水溶液中のヒドロキシヒドロキノン変化物の分析結果を図５上図に、空気暴露６時間後の分析結果を図５下図に示す。

比較例４
実施例１の容器詰コーヒー飲料から内容物を取り出し、これを２５℃、空気暴露条件下にて経時変化させたものを高速液体クロマトグラフィーにより分析した。その結果、ヒドロキシヒドロキノン及びヒドロキシヒドロキノン変化物のピークはいずれも検出されなかった（相対保持時間０．２７〜０．３１はいずれもＳ／Ｎ比は３以下であった）。実施例１の容器詰コーヒーの開封直後のヒドロキシヒドロキノン変化物の分析結果を図６上図に、空気暴露６時間後の分析結果を図６下図に示す。
よって、比較例２〜４から相対保持時間０．２７〜０．３１はヒドロキシヒドロキノンの変化物であると推定された。

コーヒー組成物Ｐ及びＱのＨＰＬＣチャート（検出波長２５８ｎｍ）を示す図である。 コーヒー組成物Ｐ及びＱのＨＰＬＣチャート（検出波長２８８ｎｍ）を示す図である。 ＳＨＲに対する連続投与による、クロロゲン酸類除去コーヒー飲料（ＨＨＱ（−）Ｃ）の血圧降下作用を示す図である。ＨＨＱ（＋）Ｃは、クロロゲン酸類非除去コーヒー飲料投与群である。 比較例１の容器詰コーヒー飲料のＨＰＬＣチャート（検出波長２５８ｎｍ）を示す図である（ヒドロキシヒドロキノン変化物の分析結果）。 比較例３のヒドロキシヒドロキノン水溶液のＨＰＬＣチャート（検出波長２５８ｎｍ）を示す図である（ヒドロキシヒドロキノン変化物の分析結果）。 実施例１の容器詰コーヒー飲料のＨＰＬＣチャート（検出波長２５８ｎｍ）を示す図である（ヒドロキシヒドロキノン変化物の分析結果）。

Claims (1)

1. 焙煎コーヒー豆抽出物を、平均細孔半径が２〜５オングストロームの活性炭を充填したカラムに通液し、得られたコーヒー組成物を殺菌処理する、
   下記条件（Ａ）〜（Ｃ）：
   （Ａ）クロロゲン酸類 ０．０１〜１質量％、
   （Ｂ）ヒドロキシヒドロキノン クロロゲン酸類量の０．１質量％未満
   （Ｃ）高速液体クロマトグラフィーによる分析において、ガリックアシッドを標準物質とした場合のガリックアシッドに対する相対保持時間が０．２７〜０．３１の時間領域に、Ｓ／Ｎ比が３以上のピークを実質的に有しない
   を満たす容器詰コーヒー飲料の製造方法。