CN100566583C - 咖啡饮料组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种具有优异降血压作用的咖啡饮料。是含有以下成分(A)和(B)的咖啡饮料组合物，(A)绿原酸类 0.01～1质量%，(B)羟基氢醌 不到绿原酸类量的0.1质量%。

Description

咖啡饮料组合物

技术领域

本发明涉及具有降血压作用的咖啡饮料组合物。

背景技术

作为高血压病的治疗药物，可以举出作用于依赖神经因子的调节系统的各种神经安定药，作用于与体液因素有关的调节系统的ACE阻碍药，AT受体拮抗药，与依赖于来自血管内皮的物质的调节系统有关的Ca拮抗药，与肾脏中的体液调节系统有关的降压利尿药等的医药品，在医疗机构中它们主要被用于重症的高血压患者。但是，现状中以应对高血压病为目的而使用的医药品，由于有效性可以满足但相反也存在不少的副作用而给患者增加了很大的负担。

另外，通过食物疗法、运动疗法、饮酒·吸烟的限制等的改善生活的一般疗法，广泛适用于从包括轻症的正常高值高血压症者至重症的高血压症者。人们一直在说，随着对一般疗法的重要性的认识的提高，特别是改善饮食生活很重要。具有降血压作用的食品，大量而盛行地进行对现有的来自食品的降压素材的探索，并大量进行其有效成分的分离·鉴定。

其中，有报道，咖啡等的食品中所含的绿原酸、咖啡酸、阿魏酸等显示优异的降血压作用(专利文献1～3)。但是，也有报道，不但不承认周知的含大量绿原酸类的咖啡饮料的明确的降血压作用，反而认为会使血压上升(非专利文献1)。

专利文献1：日本特开2002-363075号公报

专利文献2：日本特开2002-22062号公报

专利文献3：日本特开2002-53464号公报

非专利文献1：Eur.J.Clin.Nutr.，53(11)，831(1999)

发明内容

本发明提供一种咖啡饮料组合物及其制造方法，含有下述成分(A)和(B)，

(A)绿原酸类    0.01～1质量％，

(B)羟基氢醌    不到绿原酸类量的0.1质量％。

此外，本发明还提供一种可溶性咖啡组合物及其制造方法，含有下述成分(A)和(B)，

(A)绿原酸类    0.01～10质量％，

(B)羟基氢醌    不到绿原酸类量的0.1质量％。

此外，本发明还提供一种填充了咖啡饮料组合物的容器装饮料，含有下述成分(A)和(B)，

(A)绿原酸类    0.01～1质量％，

(B)羟基氢醌    不到绿原酸类量的0.1质量％。

此外，本发明提供的咖啡饮料组合物、其制造方法以及填充其的容器装饮料，其特征在于，是含有0.01～1质量％的绿原酸类的咖啡饮料组合物，在由高效液相色谱进行的分析中，在以五倍子酸(没食子酸)作为标准物时的对五倍子酸的相对保留时间为0.54～0.61的时间区域上实质上没有峰。

另外，本发明提供的可溶性咖啡组合物及其制造方法，其特征在于，是含有0.01～10质量％的绿原酸类的可溶性咖啡组合物，在由高效液相色谱进行的分析中，在以五倍子酸作为标准物时的对五倍子酸的相对保留时间为0.54～0.61的时间区域上实质上没有峰。

附图说明

图1是表示咖啡Q的HPLC图(检测波长258nm)的图。

图2是表示咖啡Q的HPLC图(检测波长288nm)的图。

图3是表示通过对SHR的连续给药，除去HHQ的咖啡饮料组合物(HHQ(-)C)的降血压作用的图。HHQ(+)C是不除去HHQ的咖啡的给药群。

图4是表示除去HHQ的咖啡饮料组合物(Sample)对人的降血压作用(收缩期血压)的图。

图5是表示除去HHQ的咖啡饮料组合物(Sample)对人的降血压作用(扩张期血压)的图；

具体实施方式

本发明提供一种具有优异的改善高血压作用且可平时摄取的饮食品。

本发明人着眼于尽管咖啡饮料含有绿原酸，却不显示充分的降血压作用，对降血压作用与咖啡饮料成分的关系进行了种种研究，结果发现咖啡饮料中所含的羟基氢醌阻碍绿原酸类的降血压作用。于是进一步研究的结果发现，如果将咖啡饮料中的绿原酸类量保持在一定范围，并且使羟基氢醌的含量降低到比通常所含的量充分少的一定量以下，就可以得到具有优异的降血压作用的咖啡饮料组合物。

本发明的咖啡饮料组合物具有优异的高血压改善作用，即具有降低血压作用或抑制血压上升的作用，并且可长期摄取。因此，本发明的咖啡饮料组合物，作为高血压改善用的医药，进一步作为被表示为用于降血压或者抑制血压上升的意思、或表示为面向血压高的人群的食品，是有用的。

本发明的咖啡饮料组合物，从降血压作用、抑制血压上升作用和风味方面考虑，含有0.01～1质量％的(A)绿原酸类，但优选含有0.05～1质量％，更优选含有0.1～1质量％。另外，在本发明的可溶性咖啡组合物中含有0.01～10质量％的绿原酸类，但优选含有0.5～10质量％，更优选含有1～10质量％。作为(A)该绿原酸类含有(A¹)单咖啡酰奎宁酸、(A²)阿魏酰奎宁酸(feruloylquinic acid)、(A³)二咖啡酰奎宁酸三种。这里，作为(A¹)单咖啡酰奎宁酸，可以举出选自3-咖啡酰奎宁酸、4-咖啡酰奎宁酸和5-咖啡酰奎宁酸的1种以上。另外作为(A²)阿魏酰奎宁酸，可以举出选自3-阿魏酰奎宁酸、4-阿魏酰奎宁酸和5-阿魏酰奎宁酸的1种以上。作为(A³)二咖啡酰奎宁酸，可以举出选自3，4-二咖啡酰奎宁酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸和4，5-二咖啡酰奎宁酸的1种以上。该绿原酸类的含量，可以通过高效液相色谱(HPLC)测定。作为HPLC中的检测方法，一般为UV检测，但是也可以用CL(化学发光)检测、EC(电化学)检测、LC-Mass检测等灵敏度更高地进行检测。

本发明的咖啡饮料组合物或可溶性咖啡组合物，相对绿原酸类量含有不到0.1质量％羟基氢醌(B)。若相对绿原酸类的量羟基氢醌量为不到0.1质量％，则可以充分发挥绿原酸类的降血压作用。更优选的是0.03质量％以下，特别优选的是0.01质量％以下。若相对绿原酸类的量羟基氢醌的量为0.01质量％以下，则绿原酸的降血压作用完全不被抑制。这里，本发明组合物中的羟基氢醌含量也可以为0。

该羟基氢醌的含量，可通过高效液相色谱(HPLC)测定。作为HPLC中的检测手段，一般为UV检测，但是也可以用CL(化学发光)检测、EC(电化学)检测、LC-Mass检测等以更高灵敏度进行检测。而且，在由HPLC的羟基氢醌含量的测定中，也可以在浓缩咖啡饮料后进行测定。

并且，羟基氢醌含量，虽然也可以用HPLC直接测定，但也可以通过由咖啡饮料组合物或可溶性咖啡饮料组合物，通过各种色谱浓缩羟基氢醌，并测定其浓缩组分的量而定量。另外，优选在绿原酸类量和羟基氢醌量的测定中，在容器装饮料的情况中开封后立即进行，例如加入0.1N(规定)的盐酸，调整为pH3以下的酸性溶液，进行测定。

优选本发明的咖啡饮料组合物和可溶性咖啡组合物，除了减少羟基氢醌含量外，仍原样地含有通常的咖啡成分。

本发明的咖啡饮料组合物，在以100g咖啡饮料组合物作为基准时，优选含有钾30～300mg/100g，更优选含有40～250mg/100g，特别优选含有50～200mg/100g。此外，从咖啡本来的风味的观点出发，优选在本发明的可溶性咖啡组合物中，以1g可溶性咖啡组合物作为基准，优选含有钾20～200mg/1g，更优选含有30～180mg/1g，特别优选含有40～150mg/1g。为了使钾的量处于上述范围内，优选在咖啡饮料组合物的制造过程中，不进行积极地除去钾等的操作。

此外，从咖啡本来的风味的观点出发，本发明的咖啡饮料组合物，以100g咖啡饮料组合物作为基准时，灰分的量优选为280mg以下，更优选250mg以下，进一步优选220mg以下，特别优选200mg以下。灰分的测定，可以按照日本食品标准成分表第四次修订(昭和57年发行，科学技术厅资源调查委员会编集，28页)记载的方法，用在550℃下加热直到没有残余的碳而成为恒量为止进行灰化的方法测定。为了使灰分的量处于上述范围内，优选在咖啡饮料组合物的制造过程中，不进行用强碱处理后用酸回到中性范围等的使灰分的量变多的操作。

此外，从咖啡本来的风味的观点出发，本发明的咖啡饮料组合物优选H₂O₂(过氧化氢)的含量为1ppm以下，更优选为0.1ppm以下，特别优选为0.01ppm以下。过氧化氢的测定可以用通常所用的过氧化氢计进行，例如，可以用Central Kagaku公司制的高灵敏度过氧化氢计SUPER ORITECTOR MODEL 5。

在本发明的咖啡饮料组合物中使用的咖啡豆的种类没有特别的限定，可以举出例如，巴西咖啡豆、哥伦比亚咖啡豆、坦桑尼亚咖啡豆、摩卡咖啡豆等。作为咖啡种，有阿拉伯咖啡(arabica)种、罗布斯塔(robusta)种。咖啡豆可以为1种，也可以将多种混合使用。对于焙煎咖啡豆的焙煎方法没有特别限制，对于焙煎温度、焙煎环境也没有任何限制，可以采用通常的方法。并且，对从其豆的提取方法也没有任何限制，例如可以举出从焙煎咖啡豆或其粉碎物使用冷水～热水(0～100℃)提取10秒～30分钟的方法。提取方法可以举出沸腾式、蒸汽加压式、虹吸式、滴式(纸、绒布等)等。

本发明的咖啡饮料组合物是指，每100g用生豆换算使用了1g以上咖啡豆的咖啡饮料组合物。优选为使用2.5g以上咖啡豆的。更优选为使用5g以上咖啡豆的。在本发明的咖啡饮料组合物作为容器装饮料时，优选为一倍浓度(single strength)。此处一倍浓度是指将容器装饮料开封后，作为常态无需稀释而可直接饮用的。

本发明的咖啡饮料组合物或可溶性咖啡组合物，可以通过用吸附剂处理焙煎咖啡豆提取物，使羟基氢醌含量降低而得到。作为吸附剂，可以举出活性炭、反相载体等。更具体地说，也可以在焙煎咖啡豆提取液或焙煎咖啡豆提取液的干燥品的水溶液中，加入吸附剂并在0～100℃搅拌10分钟～5小时后，除去吸附剂。此处，优选吸附剂，当为活性碳时使用相对于焙煎咖啡豆重量的0.02～1.0倍，当为反相载体时使用相对于焙煎咖啡豆重量的2～100倍。作为活性碳，优选在微孔区域中的平均细孔径为5埃

以下，更优选为2～5埃的范围，特别优选为3～5埃的范围。本发明中的微孔区域的平均细孔径，可以根据文献(Colloid and Interface Sc.，26，46(1968))记载的MP法(住化分析中心，Toray Research Center采用的方法)测定。另外，作为活性炭的种类，优选椰子壳活性碳、更优选水蒸气活化的椰子壳活性碳。作为活性碳的市售品，可以使用白鹭WH₂c(Japan EnviroChemicals)、太阁CW(二村化学)、クラレコ一ルGW(Kuraray Chemical)。作为反相载体，可以举出YMC·ODS-A(YMC)、C18(GL Science)等。

在这些吸附剂处理法中，由于使用活性炭的吸附剂处理法，不仅可以不使绿原酸类量下降而选择性地使羟基氢醌含量减少，而且在工业上也是有利的，而且不会使钾含量下降(保持质量比1/5以上，特别是1/2以上)，从该点出发是优选的。

在使用通过水蒸气活化法活化的活性炭时，不使绿原酸类含量下降而选择性地使羟基氢醌含量下降的效果特别优异。即，作为原料，在使用含有绿原酸类0.01～1质量％，并且含有该绿原酸类量的5质量％以上的羟基氢醌的焙煎咖啡豆提取物时，可有效地得到上述羟基氢醌含量下降了的咖啡饮料组合物。特别可以得到，相对原料绿原酸类含量，处理后的绿原酸类含量为80％以上，更优选为90％，并且羟基氢醌含量降低了的咖啡饮料组合物。

此外，本发明的咖啡饮料组合物或可溶性咖啡组合物中的羟基氢醌的量，可以通过高效液相色谱，作为在以五倍子酸作为标准物质时的相对五倍子酸的相对保留时间为0.54～0.61的时间区域的峰而检测。因此，本发明的咖啡饮料组合物，可以规定为，其特征在于，为含有绿原酸类0.01～1质量％的咖啡饮料组合物，在根据高效液相色谱的分析中，在以五倍子酸作为标准物质时的相对五倍子酸的相对保留时间为0.54～0.61的时间范围内，实质上没有峰。另外，本发明的可溶性咖啡组合物，可以规定为，其特征在于，为含有绿原酸类0.1～10质量％的可溶性咖啡组合物，在根据高效液相色谱的分析中，在以五倍子酸作为标准物质时的相对五倍子酸的相对保留时间为0.54～0.61的时间范围内，实质上没有峰。并且，该规定的高效液相色谱的分析条件为根据后述的分析条件B的分析条件。

本发明中的咖啡组合物，为了确认在根据高效液相色谱的分析中的、在以五倍子酸作为标准物质时的相对五倍子酸的相对保留时间为0.54～0.61的时间范围内实质上没有峰，可以使用一般的HPLC，通过例如作为洗脱液使用0.05M醋酸溶液和0.05M醋酸100％乙腈溶液的梯度洗脱液，使用ODS柱，通过紫外线吸光光度计等检测而确认。

在本发明中在相对五倍子酸的相对保留时间为0.54～0.61的时间范围内实质上没有峰的意思是，将分析五倍子酸的1ppm溶液时的面积值作为S1，将来自在相同条件下分析咖啡饮料组合物时在前述特定范围内溶出的成分的峰面积的总和作为S2时，S2/S1＜0.01。

本发明的咖啡饮料组合物中，根据需要，可以添加蔗糖、葡萄糖、果糖、木糖、果糖葡萄糖液、糖醇等糖分，乳成分，抗氧化剂，pH调节剂，乳化剂，香料等。作为乳成分，可以举出鲜奶、牛奶、全脂奶粉、脱脂奶粉、鲜奶油、浓缩奶、脱脂奶、部分脱脂奶、炼乳等。作为本发明的咖啡饮料组合物的pH，从饮料的稳定性方面考虑，优选为3～7.5，更优选为4～7，特别优选为5～7。

所谓可溶性咖啡组合物是粉体状的速溶咖啡粉体等的粉体食品。速溶咖啡粉体可以按照常规方法制造。例如可以通过从喷雾器的喷嘴将咖啡提取液喷出，使其在大约210～310℃的热风中落下，而形成多孔、水溶性的咖啡粉末的喷雾干燥(食品加热干燥法，spray-dry)，或者通过在液氮或冰箱等中冷冻咖啡提取物、粉碎、筛分之后在真空中使水分升华，使水分在3％以下的冷冻干燥(冻干，freeze-dry)等而得到干燥粉体。

本发明的咖啡饮料组合物或可溶性咖啡可以装入PET瓶、罐(铝、钢)、纸、杀菌袋(retort pouch)、瓶(玻璃)等容器中而作为容器装饮料。该情况下，本发明的咖啡饮料组合物可以直接装入容器内作为50～2500mL的容器装饮料。此外，本发明的可溶性咖啡，每1g可溶解在25～500mL的冷水或开水中饮用。作为容器装饮料的pH值优选为5～7.5，特别优选为5.4～7。作为容器装饮料中的单咖啡酰奎宁酸的构成比，优选4-咖啡酰奎宁酸/3-咖啡酰奎宁酸的质量比为0.6～1.2，5-咖啡酰奎宁酸/3-咖啡酰奎宁酸的质量比为0.01～3。从防止咖啡中的成分的变化的观点出发，作为容器优选为氧不透过性的容器，例如可以使用铝或钢等的罐、玻璃制的瓶等。罐或瓶的情况包括可重新加盖的再密封型的罐或瓶。此处氧不透过性是指氧穿透性(cc·mm/m²·day·atm)为5以下，但更优选为3以下，特别优选在1以下。

在制成容器装饮料时，可以进行通常的杀菌处理，但是该杀菌处理，可以在填充到金属罐之类的容器中后，在可以加热杀菌的情况中在根据食品卫生法中规定的杀菌条件下进行。对于PET瓶、纸容器一类不能进行高压蒸汽灭菌的容器，采用预先在与食品卫生法规定的条件同等的杀菌条件下，例如用平板式热交换器高温短时间杀菌后，冷却至一定的温度并填充到容器中等的方法。此外，也可以进行在无菌条件下加热杀菌后，在无菌条件下使pH回复到中性，或在中性下加热杀菌后，在无菌条件下使pH回复到酸性等的操作。

本发明的咖啡饮料组合物和速溶咖啡饮料组合物，由于含有有效量的具有改善高血压作用的绿原酸类，并且可以减少阻碍绿原酸类的高血压改善作用的羟基氢醌的量，所以作为降血压用、或抑制血压上升的医药组合物、降血压用饮料、抑制血压上升饮料是有用的。另外，作为附有表示该咖啡饮料组合物是用于改善高血压的标记的饮料，或被表示为面向血压高的人群的饮料也是有用的。

实施例

实施例1

(a)本发明的咖啡饮料组合物如下制造。将速溶咖啡(无咖啡因雀巢咖啡)2.5g置于填充有500g ODS填充剂(十八烷基甲硅烷基化二氧化硅凝胶)(YMC GEL ODS-A细孔径6nm粒径150μm)的柱中、用0.5％的醋酸水6L溶出含有羟基氢醌的组分、用6L甲醇溶出含有绿原酸类其他成分的组分。通过冷冻干燥法完全除去将含有绿原酸类其他成分的组分A中的甲醇。从2.5g速溶咖啡得到0.933g组分A。

(b)咖啡饮料组合物的绿原酸类和羟基氢醌的分析法如下。将以下的分析条件作为分析条件A。分析仪器使用HPLC(岛津制作所(株))。装置的结构单元的型号如下。检测器：SPD-M10A，恒温箱：CTO-10AC，泵：LC-10AD，自动进样器：SIL-10AD，柱：Inertsil ODS-2内径4.6mm×长度250mm。

分析条件如下。样品注入量：10μL，流量：1.0mL/min，紫外线吸光光度计检测波长：325nm(绿原酸类)、290nm(羟基氢醌)，洗脱液A：0.05M醋酸3％乙腈溶液，洗脱液B：0.05M醋酸100％乙腈溶液。

浓度梯度条件

时间    洗脱液A  洗脱液B

0分     100％    0％

20分    80％     20％

35分    80％     20％

45分    0％      100％

60分    0％      100％

70分    100％    0％

120分   100％    0％

绿原酸类的保留时间(单位：分)(A¹)单咖啡酰奎宁酸：17.9、20.4、22.0共3点(A²)阿魏酰奎宁酸：22.8、25.8、27.0共3点(A³)二咖啡酰奎宁酸：32.3、33.0、35.8共3点。此处从求得的面积以5-咖啡酰奎宁酸为标准物质求出质量％。

羟基氢醌的保留时间：5.5分，此处从求得的面积以羟基氢醌为标准物质求出质量％。

此外，咖啡组合物中的羟基氢醌还可以根据以下的分析法测定。将以下的分析条件作为分析条件B。分析仪器使用HPLC(日立制作所(株))。装置的结构单元的型号如下。检测器：L-7455，恒温箱：L-7300，泵：L-7100，自动进样器：L-7200，柱：Inertsil ODS-2内径4.6mm×长度250mm。

分析条件如下。样品注入量：10μL，流量：1.0mL/min，紫外线吸光光度计检测波长：258或288nm，洗脱液A：0.05M醋酸水溶液，洗脱液B：0.05M醋酸100％乙腈溶液

浓度梯度条件

时间    洗脱液A  洗脱液B

0分     100％    0％

15分    100％    0％

15.1分  0％      100％

25分    0％      100％

25.1分  100％    0％

30分    100％    0％

羟基氢醌的保留时间：6.8分。此处从求得的面积以羟基氢醌作为标准物质求得质量％。同样测定的五倍子酸的保留时间为11.5分。

速溶咖啡与上述实施例1(a)制造的组分A的总绿原酸的量和羟基氢醌的量在表1中表示。

表1

	总绿原酸量(mg/g)	羟基氢醌量(mg/g)
			速溶咖啡	54	0.7
组分A	145	不能检测出

另外，用高灵敏度过氧化氢计测定本发明的咖啡饮料组合物中的过氧化氢量时，过氧化氢量在检测限以下而不能检测出。过氧化氢的分析法如下。用高灵敏度过氧化氢计SUPER ORITECTOR MODEL5(Central Kagaku)进行测定。用全程移液管精确量取试料2mL，注入装置本体的反应池中。塞严反应池后，选择测定范围，按下测定开关开始测定。在确认了提示测定准备完整了的信号音后，迅速用微量注射器注入ORITECTOR用过氧化氢酶20μL，读取输出值。

装置的校正用0.1、1和5mg/L的过氧化氢标准液进行。

过氧化氢标准液的调制是将用离子交换水稀释过氧化氢(30％水溶液，特级，和光纯药工业(株))到1000mg/L的溶液作为原液使用。用提取用溶液稀释原液，调制成5mg/L的过氧化氢标准液。并且，用提取用溶液稀释5mg/L的过氧化氢标准液，调制成1mg/L和0.1mg/L。

提取用溶液(含有0.5％溴酸钾的0.2M磷酸缓冲液，pH7.0)为通过在离子交换水中溶解磷酸二氢钾(特级)11.0g、磷酸氢钠12水合物(特级)44.8g和溴酸钾(特级)5.0g后，定容成1L而调制。使用时，预先在冰冷下通氮气1小时以上。

实施例2

降血压的评价

i)实验材料及方法

(a)通过对12周龄的雄性自然发症高血压的大鼠(SHR)预备地连续5天使用市售的大鼠用非观血式血压测定装置(ソフトロン社制)测定血压，在使大鼠对血压操作充分习惯后，测定评价试验。大鼠全部在温度25±1℃，相对湿度55±10％，照明时间12小时(上午7点～下午7点)的条件下(大鼠区域内饲养室)进行饲养。

(b)给药方法和给药量：在试验组中以从速溶咖啡除去羟基氢醌后的组分A为给药材料。对照组使用速溶咖啡。将组分A速溶咖啡分别溶解于生理食盐水，制作成作为总绿原酸量为200mg/kg的给药量。给药方法为使用经口用探针，进行经口给药。给药量为5ml/只。

(c)试验方法：使用1组3～6只SHR。测定经口给药前与12小时后的尾静脉的收缩期血压，从给药前血压算出12小时后的血压变化率。

(d)统计学处理方法：得到的测定结果，表示平均值和标准误差进行学生t检定(Student′s t-test)，显著性水平为5％。

ii)结果

从表2可知，通过摄取本发明的咖啡饮料组合物，与摄取普通的速溶咖啡相比较，可以看到明显的血压下降。

表2

	给药物	例数	给药12小时后的血压下降率(％)	标准误差
					对照组	速溶咖啡	3	-5.8	1.1
试验组	组分A	6	-14.4<sup>*</sup>	1.4

^*：相对于对照组在显著性水平5％以下有显著性差异。

实施例3

降血压的评价

i)实验材料及方法

(a)与实施例2同样地预备饲养了12周龄的雄性自然发症高血压的大鼠(SHR)。

(b)给药方法和给药量：在对照组中将生理食盐水经口给药。对比较组使用绿原酸为主要成分的生咖啡豆提取物(フレ一バ一ホルダ一FH1041：长谷川香料(株)制)。给药量制作成作为总绿原酸量为300mg/kg的给药量。在试验组1中将FH1041制作成作为总绿原酸量300mg/kg，将羟基氢醌制作成0.03mg/kg(相对总绿原酸量0.01％)的给药量。在以下试验组2中，制作成使FH1041作为总绿原酸量300mg/kg，使羟基氢醌为0.3mg/kg(相对总绿原酸量0.1％)，在试验组3中，使FH1041作为总绿原酸量为300mg/kg，使羟基氢醌为3mg/kg(相对总绿原酸量1％)的给药量。给药方法为使用经口用探针，进行经口给药。给药量为5ml/只。

(c)试验方法：使用1组3只SHR。测定经口给药前与12小时后的尾静脉的收缩期血压，从给药前血压算出12小时后的血压变化率。

(d)统计学处理方法：得到的测定结果，表示平均值和标准误差进行多组鉴定(Scheffe)，显著性水平为5％。

ii)结果

从表3可知，通过在绿原酸中添加羟基氢醌，绿原酸的降血压被阻碍。

表3

	给药物	例数	给药12小时后的血压下降率(％)	标准误差
					对照组	生理食盐水	3	-2.1	1.1
比较组	FH1041	3	-13.8	1.5
					试验组1	FH1041HHQ(0.03mg/kg)	3	-14.3	2.4
试验组2	FH1041HHQ(0.3mg/kg)	3	-8.8<sup>*</sup>	1.4
					试验组3	FH1041HHQ(3mg/kg)	3	-6.7<sup>*</sup>	1.0

HHQ：羟基氢醌

^*：相对于比较组在显著性水平5％以下有显著性差异。

实施例4

(使用实施例1中所得到组分A的罐咖啡的制造)

将0.75g的组分A溶解在140mL的水中，填充到罐中，进行卷边接缝后，实施高压蒸汽灭菌(121℃10分钟)，得到罐咖啡。

实施例5

(使用实施例1中所得到组分A的粉末咖啡的制造)

通过粉碎组分A得到粉末咖啡。

实施例6

本发明的咖啡饮料组合物还可按以下方法制造。

活性炭处理咖啡的制造

市售速溶咖啡(Nescafe Gold Blend Red Label)20g溶解在1400mL蒸馏水中后(将该咖啡称作咖啡P)，加入活性炭白鹭WH₂c 28/42(平均细孔径4.2埃，Japan EnviroChemicals)30g，搅拌1小时后，用膜过滤器(0.45μm)过滤，得到滤液(将该咖啡称作咖啡Q)。将所得滤液冷冻干燥得到15.8g褐色粉末。将该褐色粉末溶解于蒸馏水中，通过与实施例1同样地进行HPLC分析，进行绿原酸和HHQ的定量时，含有绿原酸4.12质量％，HHQ在检测限以下(根据分析条件B)。此外，根据ICP发光分光分析法测定钾含量时，原料速溶咖啡和活性炭处理咖啡的任意一种都为约4.2质量％。用HPLC分析咖啡P、咖啡Q和五倍子酸时，得到图1和图2所示的图。在咖啡Q中，在保留时间6.8分钟附近的峰消失，实质上没有峰。图1中的a表示咖啡P的图，b表示咖啡Q的图，c表示五倍子酸的图。图2中的b表示咖啡P的图，c表示咖啡Q的图，a表示五倍子酸的图。

此外，本发明的咖啡饮料组合物中的羟基氢醌(HHQ)的量的测定也可以通过以下方法进行。

羟基氢醌的测定

咖啡饮料组合物的羟基氢醌的分析法如下。分析仪器使用HPLC-电化学检测器(库仑型)的库仑阵列系统(CoulArray system)(5600A型，开发·制造：美国ESA公司，进口·销售：MC Medical，Inc.)。装置的结构单元的名称·型号如下。

分析池：5010型；库仑阵列管理器(CoulArray organizer)；库仑阵列电子组件·软件(CoulArray Electronics Module·Software)：5600A型；溶剂送液组件：582型；梯度混合器；自动进样器：542型；脉冲阻尼器；脱气装置：Degasys Ultimate DU3003；柱箱：505。柱：CAPCELLPAK C18 AQ内径4.6mm×长度250mm粒径5μm((株)资生堂)。

分析条件如下。

样品注入量：10μL，流量：1.0mL/min，电化学检测器的外加电压：0mV，柱箱设定温度：40℃，洗脱液A：0.1(W/V)％磷酸、0.1mM 1-羟基乙烷-1，1-二膦酸、5(V/V)％甲醇溶液，洗脱液B：0.1(W/V)％磷酸、0.1mM 1-羟基乙烷-1，1-二膦酸、50(V/V)％甲醇溶液。

洗脱液A和B的调制，使用高效液相色谱用蒸馏水(关东化学(株))、高效液相色谱用甲醇(关东化学(株))、磷酸(特级，和光纯药工业(株))、1-羟基乙烷-1，1-二膦酸(60％水溶液，东京化成工业(株))。

浓度梯度条件

时间      洗脱液A  洗脱液B

0.0分     100％    0％

10.0分    100％    0％

10.1分    0％      100％

20.0分    0％      100％

20.1分    100％    0％

50.0分    100％    0％

分析试样的调制为：精确称取试样2g后，在洗脱液A中混合成10mL，通过膜过滤器(HLC-DISK25溶剂体系，孔径0.45μm，高效液相色谱用，关东化学(株))过滤。将所得滤液约2.5mL在Bond EluteSCX(固相填充量：500mg，储藏容量：3mL，Gl Sciences(株))中通液，将除去初通过液约0.5mL的通过液立即供给分析。

在上述条件中的分析中，羟基氢醌的保留时间为6.38分。从所得的峰的面积值，以羟基氢醌(和光纯药工业(株))作为标准物质，求得质量％。

而且，用高灵敏度过氧化氢计测定本发明的发明的咖啡饮料组合物中的过氧化氢量时，过氧化氢量在检测限以下而不能检测出。此外，咖啡P的灰分量，通过前述测定法测定时，用每100g咖啡饮料的量表示时，为186mg/100g，咖啡Q的灰分量为176mg/100g。

实施例7

将市售速溶咖啡(Nescafe Gold Blend Red Label)20g溶解在1400mL蒸馏水中后(将该咖啡称作咖啡P)，加入活性炭クラレコ一ルGW-H 48/100(平均细孔径3.9埃)10g，搅拌1小时后，用膜过滤器(0.45μm)过滤，得到滤液(将该咖啡称作咖啡Q)。将所得的滤液冷冻干燥得到16.5g褐色粉末。将该褐色粉末溶解于蒸馏水中，通过与实施例1同样地进行HPLC分析，进行绿原酸和HHQ的定量时，含有绿原酸4.31质量％，HHQ在检测限以下(根据分析条件B)。此外，根据ICP发光分光分析法测定钾含量时，原料速溶咖啡和活性炭处理咖啡都为约4.2质量％。

实施例8

对实施例6所制作的咖啡饮料组合物的血压下降进行评价。

实验材料及其方法

(a)通过对13～14周龄的雄性自然发症高血压的大鼠(SHR)预备连续5天使用市售的大鼠用非观血式血压测定装置(ソフトロン公司制)测定血压，在使大鼠充分习惯血压操作后，测定评价试验。大鼠都是在温度25±1℃、相对湿度55±10％、照明时间12小时(上午7点～下午7点)的条件下(大鼠区域内饲养室)进行饲养。

(b)给药方法和给药量：对试验组使用在实施例6中制作的咖啡饮料组合物(活性炭处理咖啡)。对照组使用市售的速溶咖啡。将活性炭处理咖啡和速溶咖啡分别溶解于生理食盐水中，制作成作为总绿原酸量为200mg/kg的给药量。给药方法为使用经口用探针，进行经口给药。给药量为5mL/kg。

(c)试验方法：使用1组4～6只SHR。测定经口给药前与12小时后的尾静脉的收缩期血压，由给药前血压算出12小时后的血压变化率。

(d)统计学处理方法：得到的测定结果，表示平均值和标准误差进行学生t检定(Student′s t-test)，显著性水平为5％。

结果：从表4可知，通过摄取本发明的咖啡饮料组合物，与摄取普通的速溶咖啡时相比较，看到明显的血压下降。

表4

	给药物	例数	给药12小时后的血压下降率(％)	标准误差
					对照组	速溶咖啡	4	-5.1	1.0
试验组	活性炭处理咖啡	6	-10.0<sup>*</sup>	0.6

^*：相对于对照组在显著性水平5％以下有显著性差异。

对实施例6所制作的咖啡饮料组合物的降血压评价。

(大鼠中的抑制血压上升的评价)

实验材料及方法

(a)使用动物：通过对6周龄的雄性自然发症高血压的大鼠(SHR)预备连续7天使用市售的大鼠用非观血式血压测定装置测定血压，在使大鼠充分习惯血压操作后，开始评价试验。大鼠都是在温度25±1℃、相对湿度55±10％、照明时间12小时(上午7点～下午7点)的条件下(大鼠区域内饲养室)进行饲养。

(b)给药方法和给药量：准备试验区1～2和对照区。给药方法为经口给药，使用金属制的胃探针强制给药。给药量为10mL/kg/day，每周5天给药4周。

(c)试验方法：使用1组6～9只7周龄SHR，每周测定试验开始前和开始后7周中的尾静脉的收缩期血压。

(d)统计学处理方法：得到的试验成绩以平均值和标准误差表示进行学生t检定(Student′s t-test)，显著性水平为5％。

结果：图中表示试验开始前和开始后7周中的收缩期血压(SBP)。从图3可知，与对照区和试验区1比较除去HHQ的咖啡的试验区2明显抑制血压上升。

如下制造血压下降评价用样品，供血压下降试验。

安慰剂(P)：在一般的提取机中投入400g中等焙煎(L＝22)·粉碎(中等研磨)的去咖啡因的哥伦比亚咖啡豆后，加入95℃的热水得到3200g提取液。在该提取液中加入离子交换水和碳酸氢钠使其成为pH6.3而得到调合液，往金属罐中填充·密封190g该混合液后，在118.1℃进行10分钟的高压蒸汽灭菌，得到安慰剂用试验饮料。杀菌后的pH为5.8。

样品(S)：在一般的提取机中投入400g中等焙煎(L＝22)·粉碎(中等研磨)的去咖啡因的哥伦比亚咖啡豆后，加入95℃的热水得到3200g提取液。相对其提取液的固体量，添加50％(w/w)的活性炭WH2C(Japan EnviroChemicals制)，搅拌30分钟后，进行离心过滤除去活性炭，得到脱HHQ的咖啡提取液。在该脱HHQ的咖啡提取液中加入离子交换水和碳酸氢钠使得pH6.3而得到调合液。往金属罐中填充·密封190g该混合液后，在118.1℃进行10分钟的高压蒸汽灭菌，得到样品用试验饮料。杀菌后的pH为5.8。

(健康正常人的血压下降试验)

试验饮料(一罐190mL)

(P)安慰剂(Placebo)绿原酸433mg/罐咖啡因194mg/罐HHQ3.0ppm

(S)样品(Sample)绿原酸448mg/罐咖啡因142mg/罐HHQ0.1ppm以下

试验方法

每4周的交叉试验实施根据9名30～40年龄段的男性的、使用去除HHQ咖啡饮料的血压下降性能的评价。

1)调制通过活性炭处理去除了HHQ的罐咖啡饮料(S)和普通罐咖啡(P)2种咖啡饮料，确认香味同等。对内容物保密，每天1罐(190mL)，在想喝时饮用的条件下，在(P)4周、(S)4周、共8周的引用期间内连续饮用。

2)使用Omron公司的血压计进行血压测定。饮用开始前和饮用后4周，在每周定时的时间带中，在血压测定前保持10分钟的安定后进行血压测定。另外，试验前的平均血压值为138mmHg(收缩期)。另外，试验期间禁止摄取其他的咖啡饮料。

在图4中表示饮用后的收缩期血压下降值，在图5中表示扩张期血压下降值。在本发明的去除HHQ咖啡饮料中看到降血压作用。

实施例9

将在实施例6中得到的活性炭处理咖啡2g溶解在140mL水中，填充在罐中、进行拧紧密封后，实施高压蒸汽灭菌(121℃10分钟)，得到罐咖啡。

实施例10

将在实施例6中所得的冷冻干燥品直接做成粉末咖啡。

实施例11～13

咖啡提取物的制造以及容器装饮料的制造和饮用评价

在多段式提取机中，在焙煎(中等焙煎，L＝22)·粉碎的去咖啡因的哥伦比亚咖啡豆中加入120℃·热水冷却后得到咖啡提取液(萃取物)。相对装入豆量回收30％的固体。相对得到提取液的固体量添加50％(w/w)的活性炭WH2C(Japan EnviroChemicals制)，搅拌30分钟后，进行离心过滤除去活性炭，得到脱HHQ咖啡提取液。接着，向提取液中加入离子交换水和碳酸氢钠使其成为pH6.3得到调合液，将调合液加温至85℃后，填入190g容量的金属罐中，用N2气置换液面上空间气体(head space)后，拧紧密封，将得到的密封容器在118.1℃进行10分钟的高压蒸汽灭菌，得到容器装饮料。杀菌后的pH为5.8。在表5中表示得到的容器装饮料的分析值和评价。

表5

		实施例11	实施例12	实施例13
					<调合>		CQA100mg/罐	CQA300mg/罐	CQA800mg/罐
咖啡萃取物(GUA)使用量	质量％	0.6	1.7	4.5
					碳酸氢钠	质量％	0.03	0.10	0.21
离子交换水	质量％	平衡量	平衡量	平衡量
					合计	质量％	100	100	100
<制造条件>
					加热杀菌条件		高压蒸汽	高压蒸汽	高压蒸汽
容器(190mL容量)		金属罐	金属罐	金属罐
					<杀菌后的分析结果>
绿原酸类	mg/100g	55.7	158.1	418.4
					绿原酸类	质量％	0.05	0.15	0.41
羟基氢醌	mg/100g	0.0067	0.019	0.05
					羟基氢醌相对于绿原酸类的比率	质量％	0.012	0.012	0.012
在根据高效色谱的分析中，在以五倍子酸为标准物质时的相对于五倍子酸的相对保留时间为0.54～0.61的时间区域中的峰的存在		无	无	无
					4-咖啡酰奎宁酸/3-咖啡酰奎宁酸	质量比	0.94	0.94	0.94
5-咖啡酰奎宁酸/3-咖啡酰奎宁酸	质量比	1.01	1.01	1.01
					羟基氢醌(HHQ)/绿原酸类总量		1.2/10000	1.2/10000	1.2/10000
K量	mg/100g	38.8	110.0	291.1
					H2O2量(刚开封后的咖啡液中的过氧化氢)	mg/L	ND	ND	ND
pH		5.8	5.8	5.8

Claims (9)

1.一种咖啡饮料组合物，其特征在于，

含有以下成分(A)和(B)，

(A)绿原酸类  0.01～1质量％，

(B)羟基氢醌  不到绿原酸类量的0.1质量％。

2.如权利要求1所述的咖啡饮料组合物，其特征在于，

是高血压改善用组合物。

3.一种可溶性咖啡组合物，其特征在于，

含有以下成分(A)和(B)，

(A)绿原酸类  0.1～10质量％，

(B)羟基氢醌  不到绿原酸类量的0.1质量％。

4.如权利要求3所述的可溶性咖啡组合物，其特征在于，

是高血压改善用组合物。

5.一种容器装饮料，其特征在于，

填充有权利要求1所述的咖啡饮料组合物。

6.如权利要求5所述的容器装饮料，其特征在于，

是高血压改善用组合物。

7.如权利要求5所述的容器装饮料，其特征在于，

容器是氧不透过性的。

8.如权利要求1所述的咖啡饮料组合物的制造方法，其特征在于，用微孔区域中的平均细孔半径为5埃

以下的活性炭至少处理10分钟焙煎咖啡豆提取物。

9.如权利要求3所述的可溶性咖啡组合物的制造方法，其特征在于，

通过用微孔区域中的平均细孔半径为5埃

以下的活性炭至少处理10分钟焙煎咖啡豆提取物，得到含有0.01～1质量％绿原酸类并且含有不到该绿原酸类量的0.1质量％的羟基氢醌的咖啡饮料组合物，接着喷雾干燥或冷冻干燥该咖啡饮料组合物。

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