JP3974677B2

JP3974677B2 - オルト置換されたベンゾイルグアニジン、それらの製造方法、医薬または診断薬としてのそれらの使用およびそれらを含有する医薬

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Publication number: JP3974677B2
Application number: JP03724197A
Authority: JP
Inventors: ウードー・アルブス; ヨーアヒム・ブレンデル; ハインツ−ヴエルナー・クレーマン; ハンス・ヨーヘン・ラング; ヴオルフガング・シヨルツ; ヤン−ローベルト・シユヴアルク; アンドレーアス・ヴアイヒエルト
Original assignee: ヘキスト・ゲゼルシャフト・ミト・ベシュレンクテル・ハフツング
Priority date: 1996-02-22
Filing date: 1997-02-21
Publication date: 2007-09-12
Anticipated expiration: 2017-02-21
Also published as: NZ314268A; SI0791577T1; SK23797A3; ID16042A; DK0791577T3; MX9701323A; HRP970101B1; EP0791577B1; ES2140922T3; PL318417A1; CZ52897A3; SK281753B6; BR9701046A; DE59700640D1; IL120259A; HRP970101A2; TW404937B; KR100476796B1; HU9700502D0; RU2218329C2

Description

【０００１】
本発明は、式Ｉ：
【化３】

〔式中、Ｒ(２)およびＲ(３)は相互に独立して、水素、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、(Ｃ₁〜Ｃ₈)−アルキル、（Ｃ₃〜Ｃ₈)−シクロアルキルまたは−ＯＲ(５)であり；
Ｒ(５)は(Ｃ₁〜Ｃ₈)−アルキルまたは−Ｃ_dＨ_2d−(Ｃ₃〜Ｃ₈)−シクロアルキルであり；
ｄは０、１または２であり；
２つの置換基Ｒ(２)およびＲ(３)のうちの一方は常に水素であるが両方の置換基Ｒ(２)およびＲ(３)が同時に水素であることはない〕
のオルト置換されたベンゾイルグアニジンおよびその医薬的に許容しうる塩に関する。
【０００２】
好ましい式Ｉの化合物は、Ｒ(２)およびＲ(３)は相互に独立して、水素、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、(Ｃ₁〜Ｃ₈)−アルキル、（Ｃ₃〜Ｃ₈)−シクロアルキルまたは−ＯＲ(５)であり；Ｒ(５)は(Ｃ₁〜Ｃ₈)−アルキルであるような化合物およびその医薬的に許容しうる塩である。
【０００３】
特に好ましい化合物は、以下の化合物、即ち：２−クロロ−４−メトキシ−５−フルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−３−メトキシ−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−３−ヨード−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−３−メチル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−３−ｎ−プロピル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−３−イソプロピル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−３−ｔ−ブチル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−３−シクロペンチル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−４−メチル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−４−ｎ−プロピル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−４−イソプロピル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−４−ｔ−ブチル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩および２−クロロ−４−シクロペンチル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩である。
【０００４】
置換基Ｒ(２)またはＲ(３)のいずれか一方が１つ以上の不斉中心を有する場合は、これらはＳまたはＲ配置のいずれかであることができる。化合物は光学異性体、ジアステレオマー、ラセミ体またはこれらの混合物として存在してよい。
記載したアルキル基は直鎖または分枝鎖であることができる。
【０００５】
本発明は更に、式II：
【化４】

〔式中、Ｒ(２)およびＲ(３)は上記したとおりであり、Ｌは容易に求核的に置換される脱離基である〕の化合物をグアニジンと反応させることからなる式Ｉの化合物の製造方法に関する。
【０００６】
Ｌがアルコキシ基、好ましくはメトキシ基、フェノキシ基、フェニルチオ基、メチルチオ基または２−ピリジルチオ基、または窒素複素環、好ましくは１−イミダゾリルであるような式IIの活性化された酸の誘導体は、基礎となるカルボニルクロリド(式II、Ｌ＝Ｃｌ)からそれ自体知られた方法で好都合に得ることができこのカルボニルクロリドは基礎となるカルボン酸（式II、Ｌ＝ＯＨ）から例えばチオニルクロリドを用いて、それ自体知られた方法で製造することができる。
【０００７】
式II（Ｌ＝Ｃｌ）のカルボニルクロリドの他に、他の式IIの活性化酸誘導体もまたそれ自体知られた方法で、直接基礎となる安息香酸誘導体（式II、Ｌ＝ＯＨ）から、例えばＬ＝ＯＣＨ₃であるような式IIのメチルエステルをメタノール中塩化水素ガスで処理することにより、Ｌ＝１−イソダゾリルである式IIのイミダゾリドをカルボニルジイソダゾールで処理することにより〔Staab, Angew, Chem. Iny. Ed. Emhl. 1, 351〜367(1962)〕、混成無水物IIはジエチルアミンの存在下不活性溶媒中、Ｃｌ−ＣＯＯＣ₂Ｈ₅、またはトシルクロリドから製造することができ、また、安息香酸の活性化は、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を用いるか、またはＯ−〔（シアノ（エトキシカルボニル）メチレン）アミノ〕−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＯＴＵ）〔Weiss and Krommer, Chemiker Zeitung 98, 817(1974)〕を用いて行うこともできる。式IIの活性化カルボン酸誘導体を製造するための一連の適当な方法は、出所文献を引用してJ. MarchのAdvanced Organic Chemistry, 第３版(John Wiley & Sons, 1985), p350に記載されている。
【０００８】
式IIの活性化カルボン酸誘導体は、プロトン性または非プロトン性の極性の不活性有機溶媒中、それ自体知られた方法でグアニジンと反応させる。これに関して、メタノール、イソプロピロパノールまたはＴＨＦを２０℃から溶媒沸点までの温度で使用することが、メチルベンゾエート（II、Ｌ＝ＯＭｅ）とグアニジンを反応させる場合に有利であることが解っている。塩非含有グアニジンと化合物IIの反応の大部分はＴＨＦ、ジメトキシエタンまたはジオキサンのような非プロトン性の不活性溶媒中で好都合に行われる。しかしながら、塩基、例えば水酸化ナトリウムを使用する場合は、水もまたグアニジンと化合物IIを反応させる際の溶媒として用いることができる。
【０００９】
Ｌ＝Ｃｌである場合は、ハロゲン化水素酸を除去する目的のために例えば過剰量のグアニジンの形態で添加した酸捕獲剤の存在下工程を好都合に行う。
式IIの基礎となる安息香酸誘導体の一部は知られたものであり、文献に記載されている。式IIの未知化合物は文献既知の方法を用いることにより製造してよい。得られた安息香酸は上記した方法の変法の１つを用いることにより、新規化合物Ｉに変換する。
【００１０】
３位および４位への一部の置換基の導入はアリールハライドまたはアリールトリフレートと、例えば有機スタンナン、有機ボロン酸または有機ボランまたは有機銅化合物または有機亜鉛化合物とのパラジウム媒介交叉カップリングに関する文献既知の方法を用いて行う。
【００１１】
一般的にベンゾイルグアニジンＩは弱塩基であり、酸と結合して塩を形成できる。適当な酸付加塩は、全ての薬理学的に許容し得る酸の塩、例えばハロゲン化物、特に、塩酸塩、乳酸塩、硫酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、酢酸塩、リン酸塩、メチルスルホン酸塩およびｐ−トルエンスルホン酸塩である。
【００１２】
化合物Ｉは置換されたアシルグアニジンである。
多くの他のＲ(１)置換基の他に５位にＣＦ₃基を有し、多くの置換基の他に２位にＣｌ原子を有することができるような同様の構造の化合物は欧州公開明細書６４０５８８Ａ１に開示されている。しかしながら、トリフルオロメチル基および塩素原子を置換基として有するこれらの化合物が厳密に顕著な作用を示すかどうかは予測できなかった。
【００１３】
意外にも、極めて良好な抗不整脈特性に加えて、新規の化合物は望ましくない不都合な塩分排泄作用を示さないばかりでなく、同時に、既知物質は半減期が長いものが多く望ましくなかったのに対し、新規の化合物は特に好ましい比較的短い半減期を示す。更に新規な化合物は、in vivoの試験データにより明らかにされるとおり、良好な生物学的利用性を示すという特性を有する。
【００１４】
薬理学的特性の結果として本発明の化合物は、既知化合物と同様、梗塞の予防と治療のため、および、狭心症の治療のための心臓保護成分を有する抗不整脈剤として特に適しており、この関連において、これらはまた、虚血的に誘発された損傷の発生に関る、特に虚血的に誘発された心臓不整脈の引き金に関る、病理生理学的過程を、防止的態様で抑制または顕著に低減する。病理学的に低酸素で虚血の状況に対抗するその保護作用を利用して、式Ｉの新規化合物は、細胞Ｎａ⁺／Ｈ⁺−交換機構の抑制の結果として、虚血により誘導される全ての急性または慢性の損傷、または、それにより一次的または二次的に誘発される疾患の治療のための薬剤として使用できる。このことは、例えば臓器移植に伴う外科的介入のための薬剤としての使用に関わり、化合物は、ドナーの臓器の摘出前および摘出中の保護のため、摘出した臓器を例えば生理学的浴液中で処理したり、そこに保存する際、そしてまた、臓器を移植対象まで輸送する際の保護のために用いることも可能である。化合物はまた、例えば心臓や末梢血管で血管形成のための外科的介入を行う場合に使用できる、保護作用を有する価値ある薬剤である。虚血的に誘導された損傷に対抗する保護作用に基づいて、化合物はまた、神経系、特にＣＮＳの虚血を治療するための薬剤として使用するのに適しており、このような用途においては、例えば卒中または大脳浮腫の治療に適している。更に、式Ｉの新規化合物は、ショック状態、例えばアレルギー性ショック、心源性ショック、循環血液量減少性ショックおよび細菌性ショックを治療するために適している。
【００１５】
更にまた、式Ｉの新規化合物は、細胞の増殖、例えば腺維芽細胞の増殖および血管平滑筋の増殖に対する強力な抑制作用を示すという特徴を有する。この理由のために、式Ｉの化合物は細胞の増殖が一次的または二次的な原因を構成するような疾患で用いるための価値ある治療薬として適しており、従って、抗アテローム性動脈硬化症剤、および糖尿病の後期合併症、癌性疾患、腺維性疾患、例えば肺腺維症、肝腺維症または腎腺維症、および臓器肥大および過形成、特に前立腺の過形成また肥大に伴う疾患に対抗するための薬剤として使用できる。
【００１６】
新規化合物は、多くの疾患（本態性高血圧、アテローム性動脈硬化症、糖尿病など）において赤血球、血小板または白血球のような容易に測定できる血球内で高値となる細胞ナトリウム／プロトン交互輸送機構（Ｎａ⁺／Ｈ⁺交換体）の効果的な抑制剤である。従って新規化合物は、例えば、特定の形態の高血圧症そしてまたアテローム性動脈硬化症、糖尿病、増殖性疾患を発見して判別するための診断薬としての使用において、簡単で極めて良好な科学的道具として用いるのに適している。更に、式Ｉの化合物は高血圧、例えば本態性高血圧の発症を防止するための防止的治療における使用に適している。
【００１７】
これに関連して、化合物Ｉを含有する薬剤は、経口、非経腸、静脈内または直腸内、または、吸入により、疾患の特定の臨床像に応じた好ましい投与方法で、投与してよい。化合物Ｉは単独かまたは医薬補助剤とともに使用でき、そして、家畜用薬剤および人間に投与する薬剤の両方で使用できる。
【００１８】
当業者はその専門的知識に基づいて、所望の医薬処方に適する補助物質に精通している。例えば、抗酸化剤、分散剤、乳化剤、消泡剤、矯味剤、保存料、可溶化剤または染料を、溶剤、ゲル化剤、坐薬基剤、錠剤補助物質および他の活性化合物賦形剤に加えて使用できる。
【００１９】
経口用剤形のためには、活性化合物を、担体、安定化剤または希釈剤のような目的に応じた添加物と混合し、定法により投与に適する形態例えば錠剤、コーティング錠剤、ハードゼラチンカプセルおよび水性、アルコール性または油性の溶液とする。アラビアゴム、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム、リン酸カリウム、乳糖、グルコースまたは澱粉、特にコーンスターチを不活性賦形剤として使用できる。これに関連して、製剤は乾燥顆粒としてまたは湿潤顆粒として形成することができる。適当な油性の担体または溶媒の例は、植物性油または動物性油、例えばヒマワリ油またはタラ肝油である。
【００２０】
皮下または静脈内投与のためには、活性化合物は所望によりこの目的のためには慣用的な物質、例えば、可溶化剤、乳化剤または他の補助物質と共に、溶液、懸濁液または乳液とする。適当な溶剤の例は水、生理食塩水またはアルコール類例えば、エタノール、プロパノールおよびグリセロール、並びに糖溶液、グルコース溶液またはマンニトール溶液、または上述の種々の溶剤の混合物である。
【００２１】
特にエタノールまたは水、またはこれらの溶媒の混合物のような医薬的に無害な溶媒中の式Ｉの活性化合物の溶液、懸濁液または乳液は、例えば、エアロゾルまたはスプレーの形態における投与のための医薬処方として使用するのに適している。
【００２２】
所望により、処方はまた界面活性剤、乳化剤および安定化剤並びに高圧ガスのような他の医薬補助物質も含有できる。このような製剤は慣用的に、活性化合物を、約０.１〜１０重量％、特に約０.３〜３重量％の濃度で含有する。
【００２３】
投与すべき式Ｉの活性化合物の用量、および投与頻度は使用する化合物の作用の強度および作用持続時間により異なり、また治療すべき疾患の性質と重症度、治療すべき哺乳類対象の性別、年齢、体重および個体別応答によっても異なる。
【００２４】
平均で、式Ｉの化合物の一日当たりの用量は、体重約７５kgの患者の場合、少なくとも０.００１mg／kg体重、好ましくは０.０１mg／kg体重〜最大１０mg／kg体重、好ましくは１mg／kg体重である。疾患の急性の発生の場合、例えば心筋梗塞直後は、より高用量そして特により高頻度、例えば一日当たり４回分までの用量が必要である場合もある。静脈内投与の場合、例えば、集中治療中の梗塞患者の場合は、特に一日当たり２００mgまでの用量が必要となる場合もある。
【００２５】
略記方法：
ＭｅＯＨメタノール
ＮＭＰＮ−メチル−２−ピロリジノン
ＲＴ室温
ＥＡ酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）
m.p. 融点
ＴＨＦテトラヒドロフラン
【００２６】
アルキルベンゾエート（II、Ｌ＝Ｏ−アルキル）からベンゾイルグアニジン(Ｉ)を製造するための一般的方法
式IIのアルキルベンゾエート１.０当量およびグアニジン（遊離塩基）５.０当量をイソプロパノールに溶解するか、ＴＨＦ中に懸濁し、反応が終了（薄層クロマトグラフィーでモニタリング）するまで煮沸加熱する（典型的な反応時間は２〜５時間）。溶媒を減圧下（ロータリーエバポレーター中）留去し、残存物をＥＡ中に溶解し、この溶液を重炭酸ナトリウム溶液で３回洗浄する。ＥＡ溶液を硫酸ナトリウム上に乾燥し、溶媒を真空下に留去し、残存物を適当な溶離剤、例えばＥＡ／ＭｅＯＨ５：１を用いてシリカゲル上のクロマトグラフィーに付す。
【００２７】
実施例１
２−クロロ−４−メトキシ−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩
【化５】

無色結晶、m.p. ２３２℃
合成経路：
ａ）メチル２−クロロ−５−ヨード−４−メトキシベンゾエートはメチル２−クロロ−４−メトキシベンゾエートから酢酸中ヨウ化カリウム２当量の存在下Ｎ−クロロスクシンイミド１.１当量と１時間室温で反応させることにより、製造した。黄色味を帯びた結晶、m.p. １２０℃
ｂ）メチル２−クロロ−４−メトキシ−５−トリフルオロメチルベンゾエートはａ）の物質から、ヨウ化銅(Ｉ)の存在下ＮＭＰ中トリフルオロ酢酸カリウムとともに９０℃に加熱することにより製造した。無色結晶、m.p. １１２℃
ｃ）２−クロロ−４−メトキシ−５−トリフルオロベンゾイルグアニジン塩酸塩を一般的方法に従って、ｂ）の化合物から製造した。
【００２８】
実施例２
２−クロロ−３−ヨード−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩：無色結晶、m.p. ２６８℃
合成経路：
ａ）メチル２−クロロ−３−ヨード−５−トリフルオロメチルベンゾエートはメチル２−クロロ−５−トリフルオロメチルベンゾエートから、トリフルオロメタンスルホン酸５当量中のＮ−ヨードスクシンイミド１当量と２４時間室温で反応させることにより、製造した。無色油状物（Ｍ＋Ｈ)⁺＝３６５
ｂ）２−クロロ−３−ヨード−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩はａ）の化合物から一般的方法により製造した。
【００２９】
実施例３
２−クロロ−３−メチル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩：無色結晶、m.p. ２３６℃
合成経路：
ａ）メチル２−クロロ−３−メチル−５−トリフルオロメチルベンゾエートは２ａ）の化合物から、触媒パラジウム(II)〔１,１′−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン〕クロリドおよびヨウ化銅(Ｉ)の存在下室温で撹拌することによる塩化メチル亜鉛（ＴＨＦ中の塩化亜鉛(II)エーテレートを用いた金属変換反応により塩化メチルマグネシウムから調製）１.５当量との交叉カップリング、水後処理、酢酸エチル抽出、および、その後の酢酸エチル／ｎ−ヘプタン（３：７）を用いたシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーにより製造した。無色油状物（Ｍ＋Ｈ)⁺＝２５３
ｂ）２−クロロ−３−メチル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩はａ）の化合物から一般的方法により製造した。
【００３０】
実施例４
２−クロロ−３−ｎ−プロピル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩：無色結晶、m.p. ２０８℃
合成経路：
ａ）メチル２−クロロ−３−ｎ−プロピル−５−トリフルオロメチルベンゾエートは２ａ）の化合物から３ａ）で記載したとおり塩化ｎ−プロピル亜鉛１.５当量との交叉カップリングにより製造した。無色油状物（Ｍ＋Ｈ)⁺＝２８１
ｂ）２−クロロ−３−ｎ−メチル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩はａ）の化合物から一般的方法により製造した。
【００３１】
実施例５
２−クロロ−３−イソプロピル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩：無色結晶、m.p. １８３℃
合成経路：
ａ）メチル２−クロロ−３−イソプロピル−５−トリフルオロメチルベンゾエートは２ａ）の化合物から、３ａ）で記載したとおり塩化イソプロピル亜鉛１.５当量と交叉カップリングさせることにより製造した。無色油状物（Ｍ＋Ｈ)⁺＝２８１
ｂ）２−クロロ−３−イソプロピル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩は、ａ）の化合物から一般的方法により製造した。
【００３２】
実施例６
２−クロロ−３−シクロペンチル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩：無色結晶、m.p. １６０℃
合成経路：
ａ）メチル２−クロロ−３−シクロペンチル−５−トリフルオロメチルベンゾエートは２ａ）の化合物から、３ａ）で記載したとおり塩化シクロペンチル亜鉛１.５当量と交叉カップリングさせることにより製造した。無色油状物（Ｍ＋Ｈ)⁺＝３０７
ｂ）２−クロロ−３−シクロペンチル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩は、ａ）の化合物から一般的方法により製造した。
【００３３】
実施例７
２−クロロ−４−シクロペンチル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩：無色結晶、m.p. ２４５℃
合成経路：
ａ）メチル２−クロロ−４−シクロペンチルベンゾエートはメチル２−クロロ−４−ブロモベンゾエートから、３ａ）で記載したとおり塩化シクロペンチル亜鉛１.５当量と交叉カップリングさせることにより製造した。無色油状物（Ｍ＋Ｈ)⁺＝２３８
ｂ）メチル２−クロロ−４−シクロペンチル−５−ヨードベンゾエートは７ａ）の化合物から、トリフルオロメタンスルホン酸５当量中のＮ−ヨードスクシンイミド１当量と２４時間で反応させることにより製造した。無色油状物（Ｍ＋Ｈ)⁺＝３６４
ｃ）メチル２−クロロ−４−シクロペンチル−５−トリフルオロメチルベンゾエートは７ｂ）の化合物から、１ｂ）と同様にしてヨウ化銅(Ｉ)の存在下ＮＭＰ中のトリフルオロ酢酸カリウムとともに９０℃で加熱することにより製造した。無色油状物（Ｍ＋Ｈ)⁺＝３０６
ｄ）２−クロロ−４−シクロペンチル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩は７ｃ）の化合物から、一般的方法により製造した。
【００３４】
実施例８
２−クロロ−４−ｎ−プロピル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩：無色結晶、m.p. ２１３℃
合成経路：
ａ）メチル２−クロロ−４−ｎ−プロピルベンゾエートはメチル２−クロロ−４−ブロモベンゾエートから、３ａ）で記載したとおり塩化ｎ−プロピル亜鉛１.５当量と交叉カップリングさせることにより製造した。無色油状物（Ｍ＋Ｈ)⁺＝２１２
ｂ）メチル２−クロロ−４−ｎ−プロピル−５−ヨードベンゾエートは８ａ）の化合物から、トリフルオロメタンスルホン酸５当量中のＮ−ヨードスクシンイミド１当量と２４時間室温で反応させることにより製造した。無色油状物（Ｍ＋Ｈ)⁺＝３３８
ｃ）メチル２−クロロ−４−ｎ−プロピル−５−トリフルオロメチルベンゾエートは８ｂ）の化合物から、１ｂ）と同様にしてヨウ化銅(Ｉ)の存在下ＮＭＰ中のトリフルオロ酢酸カリウムとともに９０℃で加熱することにより製造した。無色油状物（Ｍ＋Ｈ)⁺＝２８０
ｄ）２−クロロ−４−ｎ−プロピル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩は８ｃ）の化合物から、一般的方法により製造した。
【００３５】
薬理学的データ
ウサギ赤血球Ｎａ⁺／Ｈ⁺ 交換体の抑制
ニュージーランド白ウサギ(Ivanovas)に６週間２％コレステロール含有標準飼料を与えＮａ⁺／Ｈ⁺ 交換を促進し、これによりＮａ⁺／Ｈ⁺ 交換による赤血球へのＮａ⁺ の流入をフレーム測光法により測定できるようにした。血液は耳介動脈から採血し、２５ＩＵのヘパリンカリウムを添加して非凝血性にした。各試料の一部を用いて遠心分離により２連でヘマトクリットを測定した。各々１００μｌずつのアリコートを用いて赤血球中のＮａ⁺ の当初含有量を測定した。
アミロリド感受性ナトリウム流入を測定するために、各血液試料１００μｌを各々３７℃ pH７.４で高浸透圧塩／スクロース培地（mmol／リットル：１４０ＮａＣｌ、４ＫＣＬ、１５０スクロース、０.１ウアバイン、２０トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）５ml中でインキュベートした。赤血球を氷冷塩化マグネシウム／ウアバイン溶液（mmol／リットル：１１２塩化マグネシウム、０.１ウアバイン）で３回洗浄し、蒸留水２.０mlで溶血させた。ナトリウムの細胞内含有量をフレーム測光法で測定した。
正味のＮａ⁺ 流入は当初ナトリウム値とインキュベーション後の赤血球のナトリウム含有量との間の差から計算した。アミロリド抑制性ナトリウム流入は３×１０^-4mol／リットルのアミロリドの存在下および非存在下のインキュベーション後の赤血球のナトリウム含有量の差から求めた。この方法は新しい化合物の場合にも使用した。
【００３６】

【００３７】

Claims

式Ｉ：

のオルト置換されたベンゾイルグアニジン（Ｎ−ジアミノメチレン−２，４−ジクロロ−５−トリフルオロメチルベンズアミドは除く）またはその医薬的に許容し得る塩。
式中、Ｒ(２)およびＲ(３)は相互に独立して、水素、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、(Ｃ₁〜Ｃ₈)−アルキル、（Ｃ₃〜Ｃ₈)−シクロアルキルまたは−ＯＲ(５)であり；
Ｒ(５)は(Ｃ₁〜Ｃ₈)−アルキルまたは−Ｃ_dＨ_2d−(Ｃ₃〜Ｃ₈)−シクロアルキルであり；
ｄは０、１または２であり；
２つの置換基Ｒ(２)およびＲ(３)のうちの一方は常に水素であるが両方の置換基Ｒ(２)およびＲ(３)が同時に水素であることはない。
Ｒ(２)およびＲ(３)は相互に独立して、水素、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、(Ｃ₁〜Ｃ₈)−アルキル、(Ｃ₃〜Ｃ₈)−シクロアルキルまたは−ＯＲ(５)であり；Ｒ(５)は(Ｃ₁〜Ｃ₈)−アルキルであるような請求項１記載の式Ｉの化合物またはその医薬的に許容し得る塩。
２−クロロ−４−メトキシ−５−フルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−３−メトキシ−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−３−ヨード−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−３−メチル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−３−ｎ−プロピル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−３−イソプロピル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−３−ｔ−ブチル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−３−シクロペンチル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−４−メチル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−４−ｎ−プロピル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−４−イソプロピル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩、２−クロロ−４−ｔ−ブチル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩および２−クロロ−４−シクロペンチル−５−トリフルオロメチルベンゾイルグアニジン塩酸塩よりなる群から選択される請求項１記載の式Ｉの化合物。
式II：

〔式中、Ｒ(２)およびＲ(３)は上記したとおりであり、Ｌは容易に求核的に置換される脱離基である〕の化合物をグアニジンと反応させることからなる請求項１記載の式Ｉの化合物の製造方法。
請求項１〜３のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物の有効量を含有する細胞ナトリウム／プロトン交互輸送機構の抑制剤。