JP3253638B2 - シリカ磁気粒子を使用する生物学的目標物質の分離法 - Google Patents

シリカ磁気粒子を使用する生物学的目標物質の分離法

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Description

【発明の詳細な説明】 関連出願の相互参照 「磁気基体上のシリカ吸着剤」と言う発明の名称の米
国特許出願が同時に行われており、ここにその全体を参
照として導入する。
発明の分野 本発明は、媒体中で、他の物質から生物学的目標物質
を分離又は単離し、更なる処理又は分析の為に十分な純
度の単離物質を製造する方法に関する。本発明は、特
に、その物質を可逆的に結合する事の出来る磁気的応答
性粒子を使用して、生物学的目標物質を分離又は単離す
る方法に関する。本発明は、尚詳細には、生物学的目標
物質を可逆的に結合するシリカ、又は、シリカゲルの様
なシリカ誘導体を含む、少なくと１つの磁気的応答性粒
子を使用して、生物学的目標物質を分離又は単離する方
法に関する。
発明の背景 多数の分子生物学的方法、例えば、逆転写、クローニ
ング、制限分析及び配列決定は、生物学的物質の処理又
は分析を含む。これらの方法は、一般に、その様な物質
には、その様な処理又は分析方法を妨害する混入物が実
質的に存在しない事を要求する。その様な混入物として
は、一般に、化学反応（例えば、分子生物学的方法で使
用される、核酸又はタンパク質ハイブリダイゼーショ
ン、酵素的に触媒される反応、及びその他の反応）を妨
害又は抑制する物質、対象の核酸又はその他の生物学的
物質の劣化又は解重合を触媒する物質、或いは、実際
に、核酸が試料中に存在しない場合に、対象の生物学的
目標物質の定量サンプル中で存在を示す「背景（バック
グランド）」を用意する物質が挙げられる。又、混入物
は、対象の核酸物質が単離されるin vivo又はin vitro
媒体からの高分子物質、酵素の様な高分子物質、他のタ
イプのタンパク質、多糖類、又はポリヌクレオチド、及
び脂質の様な低分子量物質、低分子量酵素抑制剤又はオ
リゴヌクレオチドを含む。また、混入物は、化学品、又
は、その他の物質からその物質を単離する為に使用する
その他の物質から、目標の生物学的物質中に導入されて
くる。この最後のタイプの通常の混入物は、痕跡の金
属、染料及び有機溶媒を含む。
分子生物学的用途の為に、混入物が殆ど無いDNA又はR
NAを得る事は、DNA又はRNAが一般に見出される複雑な系
の為に困難なものである。これらの系、例えば、組織か
らの細胞、血液、リンパ液、ミルク、尿、便、精液等の
体液からの細胞、培養中の細胞、アガロース又はポリア
クリルアミドゲル、又は、目標の核酸増幅が行われてい
る溶液は、対象のDNA又はRNAが、分子生物学的方法に使
用される前に単離されなければならない相当量の混入物
を含む。
細胞からDNA又はRNAを得る為の通常の手順は、文献に
記載されている。例えば、F.Ausubel et al.,eds.,Cure
nt Protocol in Molecular Biology,Wiley−Interscien
ce,New York（1993）の二章（DNA）及び四章（RNA）を
参照。通常のDNA単離手順は、一般に、溶液中への細胞
の懸濁、及び細胞を徐々に溶解して、細胞内に含まれる
DNAを、得られる溶解産物（lysate）中に放出させる為
の酵素及び／又は化学品の使用を伴う。RNA単離の為
に、通常の溶解及び可溶化方法は、リボヌクレアーゼ、
及びDNAを含むRNAから分離されるべき混入物の抑制の為
の測定を含む。
又、今日使用されている多くの通常の手順は、上述の
如くにして造られた通常の溶解産物からタンパク質及び
脂質の様な追加の細胞物質を抽出する為に、フェノール
又は、フェノールとクロロホルムとを含む有機溶媒混合
物の使用を伴う。フェノール／クロロホルム抽出工程
は、この後、一般に、抽出された水性相にエタノールを
添加して、抽出された水性相中に残留している核酸物質
を沈殿させる工程が続く。沈殿物は、一般に、遠心分離
によって溶液から除去され、得られた沈殿物のペレット
は、更なる処理又は分析の為に、水又は緩衝溶液に再懸
濁される前に乾燥される。
通常の核酸単離方法は、重大な欠点を有している。そ
れらの欠点の内には、抽出に必要な多段処理工程の為に
費やされる時間及びフェノール又はクロロホルムの使用
の危険性がある。フェノールは、接触によって危険な発
火の原因となる。クロロホルムは高揮発性で、毒性があ
り、可燃性である。これらの性質は、フェノールの取扱
い及びフェノール／クロロホルム抽出が、ヒュームフー
ド中で行われ事を要求する。
フェノール／クロロホルム抽出のその他の望ましくな
い性質は、フェノールの酸化生成物が核酸を損傷させる
事である。唯一、新鮮に再蒸留されたフェノールだけが
有効に使用出来、核酸はフェノールの存在でなくなる事
はない。又、一般に、多段工程方法は、フェノール／ク
ロロホルム抽出後にRNAを単離する事を必要とする。エ
タノール（又はイソプロパノール）沈殿は、DNAのフェ
ノール／クロロホルム抽出水溶液からDNAを沈殿させ、D
NAから残留フェノール及びクロロホルムを除去する為に
採用されなければならない。更に、エタノール（又はイ
ソプロパノール）沈殿は、DNAからヌクレオシドトリホ
スフェート及び短い（即ち、約30塩基又は塩基対未満）
一本鎖又は二本鎖オリゴヌクレオシド混入物を除去する
事が必要である。更に、最上の環境下において、その様
な方法は、単離された核酸物質及び／又は不純物で汚染
された単離核酸物質の収量が比較的低い。
分子生物学的方法を使用する操作の為に、十分にDNA
及び／又はRNAを単離する為の、従来のフェノール／ク
ロロホルム抽出／エタノール沈殿法よりも単純で安全
な、或いは一層効果的な方法に対して、当該技術分野に
おいて認識された必要性が存在する。
サイズによって細胞から回収されるDNAの画分化は、
多くの分子生物学的方法にとって必要なものである。そ
の様な画分化は、一般に、アガロース又はポリアクリル
アミドゲルの電気泳動によって達成される。画分化後に
分子生物学的方法による分析又は処理の為に、対象の画
分中のDNAは、その様な電気泳動で使用されるゲル中の
混入物、例えば、アガロース、その他の多糖類、ポリア
クリルアミド、アクリルアミド又はアクリル酸から分離
されなければならない。この様に、その様な分離を達成
する為の方法に対する要求が、又、当該技術分野には存
在する。
核酸又はそのセグメントの増幅の為の方法、例えば、
良く知られているポリメラーゼ連鎖反応（PCR）法（例
えば、米国特許第4,683,202号明細書参照）は、酵素、
ヌクレオシドトリホスフェート、オリゴヌクレオチド、
及びその他の核酸の複雑な混合物の溶液を生成する。一
般に、この方法は、一本鎖核酸セグメント（「目標セグ
メント」）を多量に得る為に実施される。この増幅法が
実施された後では、この溶液中のその他の成分からこの
目標セグメントを分離する事がしばしば必要である。こ
の様に、これらの分離を達成する為の簡単な方法に対す
る要望が、当該技術分野において、更に存在する。
ガラス粒子、例えば、ガラス粉、シリカ粒子、及びガ
ラス繊維フィルター紙を粉砕して造られるガラス微細繊
維、及び珪藻土を含めたシリカ物質は、カオトロピック
塩の水溶液と組合わせて、その他の物質からDNAを分離
して、分子生物学的方法での使用に適したDNAとするの
に使用されている。米国特許第5,075,430号明細書及び
そこに引用されている参照例、Marko et al.,Anal.Bioc
hem.121,382−387（1982）及びVogelstein et al.,Pro
c.Natl.Acad.Sci.（USA）76,615−619（1979）参照。
又、Boom et al.,J.Clin.Mocrobiol.28,495−503（199
0）参照。その他の物質からDNAを分離する為に、カオト
ロピック剤の水溶液との組合わせで使用された元のガラ
ス繊維フィルターに関しては、Chen and Thomas,Anal.B
iochem.101,339−341（1980）を参照。先のVogelstein
et al.は、シリカゲルが、DNA分離での使用には適さな
い事を示唆している。シリカ物質とカオトロピック剤を
使用するRNAの分離に関しては、Gillespie et al.の米
国特許第5,155,018号明細書を参照。
ガラス粒子、シリカ粒子、シリカゲル及び上記の混合
物は、カオトロピック剤の存在下で、核酸物質を含有す
る媒体と接触される場合、核酸物質を可逆的に結合する
事の出来るマトリックスを造る為に、様々の異なる形態
で構成されている。その様なマトリックスは、核酸物質
に結合したまま、一方で、マトリックスは、外部の力、
例えば、遠心分離又は真空濾過に曝されて、残留媒体成
分からマトリックス及びそれに結合した核酸物質を分離
する様に設計されている。核酸は、次いで、マトリック
スを溶出溶液、例えば、水又は溶出バッファーに曝す事
によってマトリックスから溶出される。遠心分離及び／
又は濾過単離系での使用の為に設計されたシリカ基体マ
トリックスは、多数が市販品として販売されている。例
えば、Promega Corp.（Madison,Wisconsin,U.S.A.）か
らの、製品のWizard DNA精製系ライン、或いは、Qiagen
Corp.（Chatsworth,California,U.S.A.）からのDNA単
離系のQiaPrepライン。
磁気応答性粒子（以後、「磁気粒子」と言う）は、タ
ンパク質又は抗体の様なポリペプチド分子の単離又は精
製の為に通常使用されている。然しながら、最近では、
磁気粒子及び磁気粒子を使用する方法が、核酸物質の単
離の為に開発されてきている。核酸単離での使用の為に
設計された幾つかの異なるタイプの磁気粒子が文献に記
載されており、それらのタイプの粒子の多くは、市販品
として利用可能である。その様な磁気粒子は、一般に、
２つの範疇のいずれか、即ち、核酸物質を、直接に、可
逆的に結合する様に設計されているものか、又は、少な
くとも１つの中間物質を通過する様に設計されているも
のの何れかに分けられる。中間物質は、ここでは、「ラ
ベル」と称する。
核酸を間接的に結合する様に設計されている磁気粒子
は、一般に、以下の基本的な単離方法によって、特定の
核酸物質、例えば、mRNAを単離する為に使用される。先
ず初めに、核酸物質を含有する媒体が、対象の核酸物質
に結合する事の出来るラベルと接触させられる。例え
ば、普通一般に使用されるラベルの１つであるビオチン
化オリゴヌクレオチドデオキシチミジン（オリゴ−dT）
は、媒体中で、mRNA分子のポリ−アデノシン末端で水素
結合を形成する。その様に使用される各ラベルは、適当
な結合条件下で磁気反応性粒子との接触下に置かれた場
合には、磁気反応性粒子と結合する様に設計される。例
えば、ビオチン化オリゴ−dT/mRNA複合体のビオチン末
端は、ストレプトアビジンを被覆した磁気反応性粒子の
表面上のストレプトアビジン部位に結合する事が出来
る。幾つかの異なる市販品は、ストレプトアビジン磁気
粒子及び、上述のビオチン化オリゴ−dTを使用するmRNA
単離で使用されるように設計された試薬に利用する事が
出来る。例えば、Promega Corp.からの、PolyATtract S
eries 9600 mRNA Isolation System;或いは、Bangs Lab
oratories（Carmel,Indiana,U.S.A.）からの、ストレプ
トアビジン被覆微粒子のProActive lineを参照。又、磁
性粒子及びラベル系として、核酸の他のタイプ、例え
ば、二本鎖及び一本鎖PCRテンプレートを間接的に結合
して単離する事の出来るものが開発されている。例え
ば、Advanced Magnetics,Inc.（Cambridge,Massachuset
ts,U.S.A,）からの、BioMag superparamagnetic partic
leを参照。
核酸単離又は分離の為の間接結合磁気分離系は、全
て、少なくとも３つの成分、即ち、磁気粒子、ラベル、
及び対象の核酸物質を含有する媒体を必要とする。ラベ
ル／核酸結合反応及びラベル／粒子結合反応は、互いに
異なる溶液及び／又は温度反応条件を必要とする。各追
加成分又は核酸単離方法で使用される溶液は、ヌクレア
ーゼ、金属、及びその他の有害物質によって、単離最終
生成物の汚染の危険性を増す。
又、二三のタイプの磁気粒子が、生物学的物質、特
に、核酸の直接的結合及び単離での使用の為に開発され
ている。その様な粒子タイプの１つに、磁気応答性ガラ
スビーズ、好ましくは孔径が調節されている磁気応答性
ガラスビーズがある。例えば、CPG Inc.（Lincoln Par
k,New Jersey,U.S.A.）からの、Magnetic Porous Glass
（MPG）particle;又は、米国特許第4,395,271号明細
書；第4,233,169号明細書；又は第4,297,337号明細書に
記載の多孔性磁気ガラス粒子を参照。然しながら、核酸
物質は、それに一度結合したら除去するのが困難となる
程ガラスに緊密に結合する傾向がある。従って、磁気ガ
ラス粒子からの溶出効率は、シリカの様に、核酸結合物
質を少ない量で含む粒子からの溶出効率と比較すると、
低くなる傾向にある。
生物学的物質、特に、核酸の直接的結合及び単離での
使用の為に設計された磁気応答性粒子の第２のタイプ
は、小さな強磁性粒子が埋め込まれた、ガラスで被覆さ
れたアガロースから成る粒子である。例えば、米国特許
第5,395,498号明細書参照。酵素、タンパク質、ホルモ
ン又は抗体を直接結合する事の出来る磁気応答性粒子の
第３のタイプは、磁気物質を、重合性シリコンジキサイ
ド化合物のマトリックス中に導入する事によって造られ
る。例えば、ドイツ特許第4307262A1号参照。後の２つ
のタイプの磁気粒子、即ち、アガロース粒子及び重合性
シリコンジオキサイドマトリックスは、生物学的物質を
それぞれのその様な粒子に直接結合するのに必要な条件
下で、鉄を媒体中に浸出させる傾向がある。又、それら
に結合した核酸物質の迅速且つ効率的な単離を高める為
に、十分に均一で且つ磁気容量の濃いその様な粒子を製
造する事は困難である。
必要とされるものは、生物学的存在物、特に、核酸
を、分子生物学的方法で使用する為に、十分に混入物の
無いその様な存在物を迅速に、且つ効率よく直接に単離
する事の出来る磁気応答性粒子を使用して単離する為の
方法である。
発明の要旨 要するに、１つの観点では、本発明は、媒体中で、他
の物質から生物学的目標物質を単離する方法であって、 生物学的目標物質を含む媒体を用意し、 シリカ磁気粒子を用意し、 シリカ磁気粒子と媒体とを組合せて、シリカ磁気粒子
と生物学的目標物質との複合体を形成し、 外部磁場を適用して、媒体から複合体を除去し、 生物学的目標物質を溶出させる事によって、複合体か
ら生物学的目標物質を分離して、単離された生物学的目
標物質を得る事を含む方法である。
更なる観点では、本発明は、シリカ磁気粒子の1mg当
たり、生物学的目標物質の少なくとも２μｇと可逆的に
結合する事の出来るシリカ磁気粒子を使用して、媒体中
で、その他の物質から対象の生物学的目標物質を単離
し、且つそれに結合した生物学的目標物質の少なくとも
60％を放出する為の方法である。本発明方法の好ましい
実施では、シリカ磁気粒子の1mg当たり、生物学的目標
物質の少なくとも約４μｇがそれらに結合し、且つシリ
カ磁気粒子に接着した生物学的目標物質の少なくとも約
75％が順次溶出した。本発明の方法により単離される生
物学的目標物質は、好ましくは核酸である。
本発明方法の好ましい実施は、次の工程から成る。第
１に、媒体とシリカ磁気粒子から成る混合物が形成され
る。第２に、生物学的目標物質が、混合物中で、シリカ
磁気粒子に接着される。第３に、シリカ磁気粒子が外部
力、最も好ましくは磁力を使用して混合物から除去され
る。第４に、シリカ磁気粒子に接着した生物学的目標物
質の少なくとも60％が、粒子と溶出溶液とを接触させる
事によって溶出される。
その他の観点では、本発明は、シリカ磁気粒子、即
ち、シリカ質酸化物被覆磁気粒子の好ましい形態を使用
して、媒体中でその他の物質からプラスミドDNAを単離
する方法であって、好ましい粒子は、粒子の1mg当たり
プラスミドDNA物質の少なくとも２μｇを結合する事が
出来、それに結合したプラスミドDNAの少なくとも60％
を放出する事が出来る。本発明のこの観点の方法の好ま
しい実施は、次の工程から成る。第１に、プラスミドDN
A、シリカ質酸化物被覆磁気粒子、及びカロトロピック
塩を含有する媒体から成る混合物が形成される。第２
に、このプラスミドDNAが混合物中でシリカ質酸化物被
覆磁気粒子に接着される。第３に、シリカ質酸化物被覆
磁気粒子が、外部力、最も好ましくは磁場を使用して混
合物から除去される。第４に、シリカ質酸化物被覆磁気
粒子に接着したプラスミドDNAの少なくとも60％が、粒
子と溶出溶液とを接触させる事によって溶出される。
更なる観点では、本発明は、生物学的目標物質を含有
する媒体から生物学的目標物質を単離する為のキットで
あり、このキットは、第１の容器の水溶液中に懸濁され
たシリカ質酸化物被覆磁気粒子のアリコットを含み、粒
子は、粒子の1mg当たり生物学的目標物質の少なくとも
２μｇと可逆的に結合する能力を有する。任意に、キッ
トは、本発明方法により、生物学的目標物質を含有する
媒体から、生物学的目標物質を単離するのに必要とされ
るその他の成分を含んでも良い。
ここで使用される「磁気粒子」とは、磁場を持たない
が、磁場に曝された時に磁気双極性を形成する物質、即
ち、磁場の存在で磁気化される事の出来る物質である
が、その様な磁場が存在しなければそれ自身磁気のない
物質を意味する。この文脈で使用される「磁気」と言う
言葉は、常磁性又は超常磁性物質である物質を含む。
又、ここで使用される「磁気」と言う言葉は、例えば、
キューリー温度で強磁性又はフェリ磁性物質の様な一時
的磁性物質を包含し、その様な一時的磁性物質は、その
様な物質を含有するシリカ磁気粒子が、生物学的物質を
単離する為に本発明方法で使用される温度範囲で常磁性
を示す。
「シリカ磁気粒子」とは、シリカゲル、シリカ質酸化
物、ガラス又は珪藻土の様な固体シリカ、又は前述の２
つ以上の混合物形態のシリカから成る磁気粒子を意味す
る。ここで使用される「シリカゲル」とは、普通に多く
の販売元から市販されている物質である、クロマトグラ
フィー用シリカゲルを意味する。シリカゲルは、珪酸
塩、例えば、ナトリウムシリケートを含有する溶液を、
10又は11より低いpHまで酸性化し、次いで、酸性化溶液
をゲル化させる事によって極一般的に製造される。例え
ば、Kurt−Othmer Encyclopedia of Chemical Technolo
gy,Vol.6,4th ed.,Mary Howe−Grant,ed.,John Wiley
＆ Sons,pub.,1993,pp.773−775のシリカ調製の項参
照。ここで使用される「シリカ磁気粒子」は、シリカ磁
気粒子の1mg当たり生物学的目標物質の少なくとも２μ
ｇを結合する能力を有し、且つ、独立的に、本発明方法
の溶出工程において、それらに結合した生物学的目標物
質の少なくとも60％を放出する能力を有する、上述の性
質を持った粒子を、好ましくは意味する。本発明で使用
されるシリカ磁気粒子は、シリカゲルマトリックス中に
導入された強磁性物質から成るのが更に好ましい。本発
明の単離方法の溶出工程は、金属、金属化合物（例え
ば、鉄又は鉄化合物）又は、シリカ磁気粒子に起因する
その他の異物質による核酸物質の実質的な汚染無しに遂
行されるのが好ましい。
ここで使用される「ガラス粒子」とは、結晶シリカは
非晶質ではないから、正しくは「ガラス」ではないが、
結晶シリカ（例えば、α−石英、石英ガラス）又は主に
シリカから造られたガラス粒子を意味する。
「シリカ質酸化物被覆磁気粒子」又は「SOCM粒子」と
は、本発明の方法及びキットで使用されるシリカ磁気粒
子の最も好ましい形態を意味する為にここでは使用され
る。SOCM粒子は、超常磁性又は常磁性物質の少なくとも
１つの粒子の芯を被覆しているシリカ質酸化物から成
る。本発明の方法及びキットで使用されるSOCM粒子は、
又、含水シリカ質酸化物の吸着性表面、即ち、その上に
シラノール基を有する事を特徴とする表面を有する。DN
A又はRNAの様な目標核酸物質は、粒子の吸着性表面に接
着する一方、その他の物質、特に、エキソヌクレアーゼ
の様な有害物質は、接着しないか、又は、核酸物質と一
緒に粒子から共溶出する。SOCM粒子の物性及びその様な
粒子の製造方法は、同時出願の、発明の名称が「磁気基
体上のシリカ吸着剤」の米国特許出願第
号明細書に開示されており、ここに参照として導入され
る。
本発明は、様々な異なる媒体から、対象の生物学的目
標物質を単離する為の簡便且つ効率的手段を提供するも
のである。媒体から粒子を除去するのに磁力が使用され
る、上で簡単に述べた本発明方法の好ましい観点は、生
物学的目標物質が他のシリカ物質に可逆的に結合する従
来の単離方法よりも顕著な利点を提供する。特に、本発
明方法の磁気除去工程は、従来のシリカ結合及び溶出単
離方法で必要とされる真空濾過又は遠心分離工程に代わ
るものである。従って、特に自動化され易い。小さな実
験室又は個々の研究者は、例えば、真空濾過の為の真空
マニホールド及び真空、或いは遠心分離法の為のマイク
ロ遠心分離機といった方法を実施する為の特殊な、且つ
高価な装置を購入しなければならない。反対に、本発明
の磁気分離は、強力且つ簡単に利用できる磁石から発生
される様な集中磁場だけを必要とするに過ぎない。又、
分子生物学研究関係での使用に特に適合した安価な装
置、例えば、MagneSphere Technology Magnetic Separa
tion Strand又は、PolyATract Series 9600 Multi−Mag
net（共に、Promega Corporation,Madison,Wisconsin,U
SAから市販）が市販されている。
本発明の単離方法を使用して単離された生物学的目標
物質は、標準分子生物学的方法を使用する更なる処理又
は分析用として十分に汚染物質の無いものである。様々
な異なる媒体から様々な異なる生物学的目標物質を単離
する為の本発明方法の適用は、以下の本発明の詳細な説
明から明らかになるであろう。
図面の簡単な説明 図１は、磁性の、孔径調整ガラス（CPG）粒子又はシ
リカ磁気粒子に添加されたプラスミドDNAのμｇ当たり
に結合したプラスミドDNAのμｇ数のプロットである。
図２は、磁気CPG又はシリカ磁気粒子から溶出したプ
ラスミドDNAのμｇ数対溶出前に粒子に添加されたプラ
スミドDNAのμｇ数のプロットである。
図３は、図１に示された結合データ及び磁気CPG及び
シリカ磁気粒子から得られた図２に示した溶出データの
プロットである。
図４は、ゲル電気泳動を使用して、ゲル上のDNAフラ
グメントを画分化した後、蛍光染料で染色したアガロー
スゲルの蛍光像である。DNAフラグメントは、λDNAをHi
nd IIIで消化し、結合し、フラグメントをシリカ磁気粒
子から溶出する事によって製造された。
図５は、ゲル電気泳動を使用して、ゲル上のDNAフラ
グメントを画分化した後、蛍光染料で染色したアガロー
スゲルの蛍光像である。DNAフラグメントは、ΦX174DNA
をHae IIIで消化し、結合し、フラグメントをシリカ磁
気粒子から溶出する事によって製造された。
図６は、シリカ磁気粒子に適用され、結合され、そし
てそれから放出された、32P−ラベル化RNAの100万当た
りのカウント（CPM）のヒストグラムプロットである。
発明の詳細な説明 本発明方法を使用して単離される生物学的目標物質
は、核酸又はタンパク質が好ましく、より好ましくはRN
A、DNA又はRNA/DNAハイブリッドの様な核酸物質であ
る。本発明方法を使用して単離される生物学的目標物質
が核酸である場合は、プラスミドDNA、制限酵素消化か
ら造られるDNAフラグメント、ポリメラーゼ連鎖反応（P
CR）の様な増幅反応によって造られる増幅DNA、一本鎖D
NA、mRNA又はトータルRNAを含み、これらに限定されな
いDNA又はRNAが好ましい。本発明方法によって単離され
る核酸物質は、プラスミドDNA又はトータルDNAが尚一層
好ましい。
核酸は、本発明方法を使用して単離される最も好まし
い生物学的目標物質であるから、以下の本発明の詳細な
説明の大部分は、本発明のこの好ましい観点に就いて述
べる。然しながら、本発明のこの特定の観点についての
詳細な説明は、本発明の範囲を限定する為のものではな
い。ここに開示の説明は、当業者に、核酸物質、例え
ば、タンパク質又は抗体以外の生物学的目標物質を単離
する為の本発明方法を使用できる様にする為の十分な方
向付けを提供するものである。
生物学的目標物質を単離する為の本発明方法は、任意
のシリカ磁気粒子を使用して実施する事が出来るが、SO
CM形態のシリカ磁気粒子を使用して実施するのが好まし
い。又、本発明方法は、以下の物性を持つシリカ磁気粒
子を使用して実施する事が好ましい。
本発明方法で使用されるシリカ磁気粒子は、多数の異
なるサイズのものであっても良い。小さなシリカ磁気粒
子は、吸着に対しては広い表面積（重量単位基準当た
り）を用意するが、小さな粒子は、大きな粒子に比べ
て、その様な粒子中に導入する事の出来る磁性物質の量
が制限される。本発明で使用されるシリカ磁気粒子の平
均粒径は、約１〜15μｍが好ましく、より好ましくは約
３〜10μｍ、最も好ましくは約４〜７μｍである。又、
粒径分布は、変化しても良い。然しながら、比較的狭い
単一粒径分布（monodal particle size distribution）
が好ましい。単一粒径分布は、粒径の約80重量％が、平
均粒径で10μｍの範囲以内、より好ましくは８μｍの範
囲以内、最も好ましくは６μｍの範囲以内であるのが好
ましい。
本発明で使用される好ましいシリカ磁気粒子は、粒子
の外部から近づく事の出来る孔を有する。この孔は、生
物学的目標物質、例えば、核酸を粒子の内部へ収容で
き、大部分のその様な孔の内側表面上のシリカゲル物質
に結合させるのに十分大きく調整されているサイズ範囲
である事が好ましい。シリカ磁気粒子の最も好ましい形
態の孔は、生物学的目標物質、特に、核酸物質を結合す
る事の出来る大きな表面積のシリカゲル物質となる様に
設計される。シリカ磁気粒子の全細孔容積は、窒素BET
法で測定して、粒子質量の少なくとも約0.2ml/gが好ま
しい。窒素BET法で測定した全細孔容積の、少なくと約5
0％の細孔容積が、600Å以上の直径を有する孔に含まれ
る事が好ましい。
シリカ磁気粒子は、その様な物質で実質的に汚染され
た単離された生物学的目標物質の単一性に逆に影響を及
ぼす、例えば、遷移金属或いは揮発性有機物の様な物質
を含むかも知れない。特に、その様な混入物は、下流の
処理、分析及び／又はその様な物質の使用、例えば、酵
素活性の抑制又は目標物質それ自身のニッキング又は分
解の為の使用に影響を及ぼし得る。本発明で使用される
シリカ磁気粒子中に存在するその様な物質は、粒子の外
に及び本発明方法により製造された単離生物学的目標物
質中に簡単に浸出しない形態で存在する。鉄は、特に、
生物学的目標物質が核酸である場合に、望ましくない混
入物の１つである。鉄は、マグネタイトの形態で、本発
明のシリカ磁気粒子の特に好ましい形態、即ち、SOCM粒
子の芯に存在する。鉄は、260と270nmの間に広い吸収ピ
ークを持つ。核酸は、約260nmにピーク吸収を有するの
で、核酸試料中の鉄混入は、その様な試料の定量分光光
度分析の結果の精度に、逆に影響を及ぼす。本発明を使
用して、核酸を単離する為に使用されるシリカ磁気粒子
中に含まれる鉄は、260nm付近での物質の分光光度分析
を邪魔する、その鉄に対して鉄で十分に汚染された単離
核酸物質を製造しない。
本発明方法で使用される最も好ましいシリカ磁気粒
子、即ち、SOCM粒子は、次の様な分析を行った場合に、
50ppmより多く、より好ましくは10ppmより多く、最も好
ましくは5ppmより多くの遷移金属を浸出しない。特に、
0.33gの粒子（110℃でオーブン乾燥した）を、20mlの1N
HCl水溶液（脱イオン水を使用）に混合し、次いで、こ
の混合物を、粒子を分散する為だけの目的で撹拌し、全
接触時間で約15分後に、次いで、混合物の液体部分の金
属含有量が分析される。得られる液体中の遷移金属の量
を定量する為には、通常の元素分析方法を使用しても良
いが、誘導結合プラズマ分光分析（ICP）が好ましい。
同時出願の特許出願番号 、発明の名
称「磁気基体上のシリカ吸着剤」（ここに参照として導
入される）は、本発明方法及びキットで使用するのに適
したSOCM粒子の製造方法を開示する。本発明での使用の
為のSOCM粒子を製造する為の最も好ましい方法は、次の
工程を含む：（１）FeCl2及びFeCl3の混合物の水性沈殿
によって磁気コア粒子を調整する工程、（２）粒子のス
ラリーを、SiO2及びNa2Oの混合物に、少なくとも45分
間、少なくとも60℃の温度で暴露する事に依って磁気コ
ア粒子上にシリカ質酸化物被膜を沈着させ、次いで、酸
溶液を混合物に添加して、pHを９未満のpHまで下げる工
程、（３）得られたスラリーを、少なくとも約15分間、
好ましくはスラリーの撹拌を続けながら熟成する工程、
及び（４）粒子を洗浄する工程。上述の好ましい粒子製
造方法の沈着及び熟成工程は、磁気コア上に多層のシリ
カ質酸化物被膜を造る為に繰返し行う事が出来、これに
よって、周囲の環境へのコアからの浸出に対して追加的
保証を用意する事が出来る。上述の方法で製造されたSO
CM粒子は、コアからの更なる浸出を抑制する為に、穏や
かな酸化工程に掛ける事によって処理されるのが最も好
ましい。
本発明方法を使用して単離される生物学的目標物質
は、培養中の真核細胞又は原核細胞から、或いは、組
織、動物及び植物を含む多細胞有機体から得られる細
胞；血液、リンパ液、尿、便又は精液の様な体液；胚嚢
又は胎児；食品；化粧品；或いは、その他の細胞源から
得る事が出来る。或種のDNA又はRNAの様な生物学的目標
物質は、オルガネラ、ウイルス、ファージ、プラスミ
ド、細胞感染ウイロイド等のDNA又はRNAから、本発明方
法によって単離される。細胞は、溶解され、溶解産物
は、当業者にとって周知の様々な方法で普通に処理さ
れ、DNA又はRNAの水溶液を得、これに本発明の分離又は
単離方法が適用される。その様な溶液中のDNA又はRNA
は、一般には、その他の成分、例えば、タンパク質、
（DNA分離の場合には）RNA、（RNA分離の場合には）DNA
又はその他のタイプの成分と共に存在する。
その様な物質源の性質に拘わりなく、本発明方法で単
離される生物学的目標物質は、生物学的目標物質及びそ
の他の種類から成る媒体で提供される。生物学的目標物
質は、本発明方法の第１工程で、シリカ磁気粒子に接着
する事の出来る形態で媒体中に存在しなければならな
い。核酸物質が、細胞内部に含まれる時は、細胞壁又は
細胞膜は、その物質を粒子に接着出来ない様にする。そ
の様な細胞が溶解されたとしても、或いは、そこに含ま
れる核酸物質を周りの溶液中に放出する為に十分に分裂
されたとしても、溶液中の細胞片は、シリカ磁気粒子へ
の核酸物質の接着を妨害する。従って、本発明方法を使
用して単離される核酸物質が、細胞内に含まれる場合
は、細胞は、先ず初めに、溶解産物を造る為に細胞を溶
解又は分裂処理する事が好ましく、更に、本発明方法の
媒体として用意される場合に、核酸物質のシリカ磁気粒
子への接着を多分妨害するであろう細胞片の溶解産物を
清浄処理する（例えば、遠心分離又は真空濾過によっ
て）事が、より好ましい。
そこに含まれる核酸物質を放出する為に、溶解又は分
裂させる為の多くの異なる公知の方法はどれでも、本発
明での使用の為に細胞からの媒体の製造に使用するのに
適する。細胞から核酸物質を放出するのに選ばれる方法
は、その物質を含有する細胞の性質に依存する。例え
ば、比較的硬い細胞壁を有する細胞、例えば、真菌細胞
又は植物細胞からそこに含まれる核酸物質を放出させる
為には、強力なプロテアーゼ及び、ホモジナイザーでの
機械的剪断或いは超音波処理器を使用する音波での分裂
の様な厳しい処理を必要とするかも知れない。対照的
に、核酸物質は、水溶液中に細胞を懸濁して、その溶液
に界面活性剤を添加するだけで、E.coliバクテリアの様
な脂質２層膜を持つ細胞又は動物の血液細胞から簡単に
放出する事が出来る。
上述の様に、核酸物質が溶解又は分裂細胞から放出さ
れると、シリカ磁気粒子への核酸の接着を妨害する細胞
片は、多くの異なる公知の方法又は方法の組合わせを使
用して除去する事が出来る。溶解又は分裂された細胞の
溶液は、遠心分離にかけて粒状細胞片を除去する事が好
ましい。次いで、上澄液は、追加のその他の物質の沈殿
物を形成させる為にその上澄液に第二溶液を添加し、次
いで、得られる溶液から沈殿物を遠心分離によって除去
する為に更に処理される事が好ましい。
本発明の特に好ましい観点では、本発明方法によって
単離される対象の核酸物質は、E.coliバクテリア細胞中
に最初に含まれるプラスミドDNAである。この核酸物質
は、溶解産物を形成する為にアルカリ溶液、例えば、水
酸化ナトリウム溶液の添加によって、バクテリアから放
出されるのが最も好ましい。この溶解産物は、次いで、
細胞片を除去する為に、遠心分離で更に処理される事が
好ましい。中和溶液、例えば、酸性緩衝液を、追加の強
力な妨害物質の沈殿物を形成する為に、得られる上澄液
に添加する事が好ましい。この様にして形成された沈殿
物は、遠心分離によって除去されるのが好ましい。清澄
な溶解産物の残留上澄液は、本発明方法のこの特に好ま
しい観点の第１工程で用意される媒体である。
本発明方法の第１工程で用意される媒体は、細胞から
直接放出される核酸物質を含む必要が無い。核酸物質
は、ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）を使用して製造され
る増幅DNAの様な増幅反応の生成物である事が出来る。
又、核酸物質は、制限酵素でDNAを消化する事によって
産生されるDNAのフラグメントの形態である事も出来
る。又、媒体は、溶融又は酵素的に消化された電気泳動
ゲルと核酸物質との混合物の形態である事も出来る。
本発明方法の第２工程で用意されるシリカ磁気粒子
は、粒子1mg当たり、核酸物質の少なくとも２μｇを可
逆的に結合する事によって、媒体中で核酸物質と複合体
を形成する能力を有する事が好ましい。本発明での使用
の為に用意される粒子は、粒子1mg当たり、核酸物質を
少なくとも４μｇ、より好ましくは少なくとも８μｇを
可逆的に結合する能力を有する事が更に好ましい。シリ
カ磁気粒子は、好ましくは、それらに接着した核酸物質
の少なくとも60％を放出する能力を有さなければならな
い。粒子は、それらに接着した核酸物質の少なくとも70
％、最も好ましくは、少なくとも90％を放出する能力を
有する事が更に好ましい。本発明方法の第１工程で用意
されるシリカ磁気粒子は、SOCM粒子が最も好ましい。
シリカ磁気粒子と生物学的目標物質との複合体は、第
３工程で、好ましくは、粒子を、複合体の形成を促進す
る様に設計された条件下で、目標物質を含有する媒体に
暴露する事によって形成される。複合体は、シリカ磁気
粒子と媒体とカオトロピック塩の混合物で形成されるの
が更に好ましい。
カオトロピック塩は、カオトロピックイオンの塩であ
る。その様な塩は、水溶液に良く溶ける。その様な塩で
用意されたカオトロピックイオンは、タンパク質又は核
酸の水溶液中で十分に高濃度であれば、タンパク質を展
開し、核酸の第２構造を失わせ、或いは、二本鎖核酸の
場合には、溶融（即ち、鎖−分離）させる。カオトロピ
ックイオンは、それらが、液体の水に存在する水素結合
ネットワークを分裂させて、それらの、正確に組合され
又は構造化された対応物よりも熱力学的により安定な変
性タンパク質及び核酸とするので、その様な効果を有す
るものと考えられる。カオトロピックイオンとしては、
グアニジニウム、ヨウ化物、過塩素酸化物及びトリクロ
ロアセテートが挙げられ、本発明では、グアニジニウム
イオンが好ましい。カオトロピック塩としては、塩酸グ
アニジン、チオシアン酸グアニジン（これは、時に、イ
ソチオシアン酸グアニジンとも称される）、ヨウ化ナト
リウム、過塩素酸ナトリウム、及びナトリウムトリクロ
ロアセテートが挙げられ、グアニジニウム塩が好まし
く、特に、塩酸グアニジンが好ましい。
本発明方法のこの実施で形成される混合物中のカオト
ロピックイオンの濃度は、約0.1M〜7Mの間が好ましい
が、約0.5M〜5Mの間がなお好ましい。混合物中のカオト
ロピックイオンの濃度は、混合物中で生物学的目標物質
をシリカ磁気粒子に接着させる程度に十分高くなければ
ならないが、劣化する程に実質的に変性させたり、或い
は、目標物質を混合物の外に沈殿させる程に高くする必
要はない。タンパク質及び、染色体DNAの様な二本鎖DNA
の大きな分子は、約0.5〜２モルの間のカオトロピック
塩濃度では安定であるが、約２モル以上のカオトロピッ
ク塩濃度では溶液の外に沈殿する事が知られている。例
えば、米国特許第5,346,994号明細書の第２欄、56〜63
行参照。逆に、RNA及び、プラスミドDNA、染色体DNAの
制限又はPCRフラグメント、又は一本鎖DNAは、２〜５モ
ルの間のカオトロピック塩濃度で、劣化せずに溶液で残
る。
本発明で使用されるカオトロピック塩は、塩の濃度
を、本発明を実施するに当って、塩が使用される溶液の
いずれの溶液に於いても、本発明を実施するに当って、
溶液が置かれる全ての条件下で、溶液中の塩の溶解度以
下に止める事が望ましい。
本発明方法の実施においては、上述の様に形成される
混合物は、核酸物質の少なくとも幾つかがシリカ磁気粒
子に接着して複合体を形成するまで培養される。この培
養工程は、少なくとも０℃、好ましくは少なくとも４
℃、尚好ましくは少なくとも20℃で行われ、培養温度は
67℃未満である。培養工程は、シリカ磁気粒子が、核酸
物質へ可逆的に結合するその能力を失い始める温度以下
の温度で行われなければならない。培養工程は、約室温
（即ち、約25℃で）で行うのが最も好ましい。
複合体は、磁場を使用して、混合物から除去される。
又、磁場に加えて、その他の形態の外部力も、初期除去
工程後に、本発明方法により生物学的目標物質を単離す
る為に使用する事が出来る。外部力の適当な追加形態と
しては、重力濾過、真空濾過及び遠心分離が挙げられる
がこれらに限定されるものではない。
媒体から複合体を除去する為に使用される外部磁場
は、多数の異なる公知の方法を使用して、媒体中で適宜
発生させる事が出来る。例えば、粒子を含有する溶液の
容器の外側面に磁石を置き、溶液を介して粒子を移動さ
せ、磁石に隣接する容器の内側面に集める事が出来る。
次いで、磁石を、容器の外側面の位置に保持して、粒子
を、磁石によって発生した磁場によって容器中に保持し
ながら、溶液は、容器の外にデカントして、棄てる事も
出来る。次いで、第二溶液を容器に加え、磁石を除去し
て、粒子を第二溶液中に移動させる事も出来る。或いは
又、磁化性プルーブを溶液中に挿入してプルーブを磁化
して、粒子を、溶液に浸漬したプルーブの末端に沈着さ
せる事も出来る。次いで、磁化したままで、プルーブを
溶液から除去し、第二溶液に浸漬し、粒子を第二溶液に
移動させる為に磁場を中断させる事も出来る。上記の一
般的用語で述べられた磁気除去並びに移動技術の２つの
タイプで使用される様に設計された磁石は、市販品とし
て存在する。例えば、MagneSphere Technology Magneti
c Separation Stand or the PolyATract Series 9600 M
ulti−Magnet,共にPromega Corp.から市販されている;M
agnetight Separation Stand（Novagen,Madison,WI）;o
r Dynal Magnetic Particle Concentrator（Dynal,Osl
o,Norway）参照。
本発明方法の好ましい観点では、第３工程で媒体から
除去される複合体は、洗浄溶液でリンスされる事によっ
て、少なくとも一度は洗浄される。この方法の好ましい
追加工程で使用される洗浄溶液は、好ましくは、シリカ
磁気粒子からの混入物を除去する事の出来る溶液から成
る。洗浄溶液は、好ましくは、塩及び溶媒、好ましくは
アルコールから成る。洗浄溶液のこの最後の好ましい形
態でのアルコールの濃度は、少なくとも30容量％、より
好ましくは少なくとも40容量％、最も好ましくは少なく
とも50容量％である。その様に使用されるアルコール
は、エタノール又はイソプロパノールが好ましく、より
好ましくはエタノールである。塩は、緩衝液の形態であ
るのが好ましく、アセテートバッファーの形態が最も好
ましい。洗浄溶液中の塩の濃度は、核酸物質が、洗浄工
程中にシリカ磁気粒子から溶出しない程度に十分に高い
ものである。
複合体は、洗浄溶液中に複合体を再懸濁して媒体から
除去された後に洗浄するのが好ましい。複合体は、最初
の洗浄後に洗浄溶液から除去されるのが好ましく、各洗
浄工程毎に新鮮な洗浄溶液を使用して、少なくとも一回
以上、最も好ましくは三回以上洗浄される。
第４に、そして最後に、核酸物質は、溶出溶液に複合
体を暴露する事によってシリカ磁気粒子から溶出され
る。溶出溶液は、低イオン強度の水溶液が好ましく、よ
り好ましくは、水又は、核酸物質が安定で且つ実質的に
損なわれないpH付近の低イオン強度バッファーである。
TEバッファー（即ち、10mMTris−HCl,1mMエチレンジア
ミン四酢酸（EDTA）、pH8.0）以下のイオン強度の水溶
液であれば、本発明方法の溶出工程での使用に適する
が、溶出溶液は、約6.5〜8.5のpHまで、より好ましく
は、約7.0〜8.0のpHまで緩衝されるのが好ましい。TEバ
ッファー及び蒸留された或いは脱イオン化された水は、
本発明での使用の為の溶出溶液として特に好ましい。上
記の溶出溶液の好ましい形態の低イオン強度は、核酸物
質が粒子から放出されるのを確実にする。本発明方法で
の使用に適するその他の溶出溶液は、当業者にとって
は、容易に明らかである。
本発明方法の溶出工程で複合体から溶出した核酸物質
は、例えば、遠心分離又は磁場の様な外部力によって、
より好ましくは遠心分離を使用して、溶出混合物中に残
存するシリカ磁気粒子及び複合体から分離されるのが好
ましい。遠心分離は、小さ過ぎるか、或いは、磁場を使
用して除去される為に十分に磁気的に応答性のない粒子
又は粒子セグメントを除去する事が出来るので好まし
い。
本発明方法を使用して溶出される核酸物質は、更に単
離する事無しに、分子生物学的方法による分析又は更な
る処理に適するものである。溶出された核酸は、例え
ば、配列、制限分析、又は核酸プルーブハイブリダイゼ
ーションによって分析出来る。この様に、本発明方法
は、DNAまたはRNAの分析を基礎とした、例えば、病気診
断；病原体の同定；食品、化粧品、血液又は血液製品、
又は病原体による汚染に対するその他の製品検査；父性
検査；及び胎児又は胚嚢の性鑑別方法の一部として適用
出来る。
本発明方法によって用意される溶出DNA又はRNAは、DN
A又はRNAそれぞれとの反応を触媒する様々なエキソヌク
レアーゼ及びエンドヌクレアーゼで処理する事が出来、
DNAの場合には、DNA中に存在する制限部位を切断する制
限酵素で消化する事が出来る。溶出DNA由来の制限フラ
グメントは、ベクター中に結合する事が出来、クローニ
ング又は発現の為の適当な宿主中に形質転換する事が出
来る。溶出DNA又はRNAのセグメントは、目標の核酸セグ
メントを増幅する為に、当該技術分野において公知の様
々な方法で増幅する事が出来る。溶出DNAが、プラスミ
ド又は、他のタイプの自己複製DNAであれば、形質転換
された宿主中で発現する事の出来るDNA上の遺伝子のク
ローニング又は発現の為に適当な宿主中に形質転換する
事が出来る。本発明方法で単離されたプラスミドDNA
は、この出願の本発明方法のシリカゲルに代えて、珪藻
土が使用される従来法によって単離されたものよりも、
真核細胞中により効率的に形質転換される事が分かっ
た。
以下の非限定的実施例は、本発明の種々の実施態様を
教示するものである。実施例及び明細書及びクレームに
おいて、容量及び濃度は、特段の指示なき場合は、室温
におけるものである。最も好ましい形態のシリカ磁気粒
子、即ち、SOCM粒子のみが、以下のそれぞれの実施例で
の使用で使用された。然しながら、当業者は、本発明の
教示の方法を、その使用が、以下の実施例で証明される
本発明方法の観点で例示されるSOCM粒子以外のシリカ磁
気粒子の形態の選択及び使用の為に使用する事が出来る
ものと考える。
以下の実施例１及び６で示される分析結果を造り出す
為に、同じバッチのSOCM粒子が使用され、一方で、SOCM
粒子の第二バッチが、実施例２〜４及び７で示される結
果を出す為に使用された。然しながら、SOCM粒子の両バ
ッチ共、以下に開示のテストを行った場合には、受入れ
可能な結果を出す事が分かった。SOCM粒子の第一のバッ
チ、即ち、実施例１及び６で使用された粒子は、次の物
性を有する事が分った：表面積が55m2/g、＜600Åの粒
径の細孔容積が0.181ml/g、＞600Åの粒径の細孔容積が
0.163ml/g、平均粒径サイズが5.3μｍ、及び、上記のIC
Pの使用で開示された様に分析された場合の鉄浸出が2.8
ppm。以下の実施例で使用されたSOCMのその他のバッチ
は、次の物性を有する事が分った：表面積が49m2/g（＜
600Åの粒径）の細孔容積が0.160ml/g（＞600Åの粒
径）の細孔容積が0.163ml/g、平均粒径サイズが5.5μ
ｍ、及び鉄浸出が2.0ppm。
実施例１−プラスミドDNAに対するシリカ磁気粒子の結
合能力及び溶出効率の分析 シリカ磁気粒子及び磁気調整細孔ガラス（CPG）粒子
のSOCM形態の結合能力は、最終600μｌ容量の4.16M塩酸
グアニジン（GHCl）中で、粒子の一定量に対するプラス
ミドの増加量を滴定する事によって決定した。使用した
磁気CPG粒子は、500Åの平均細孔径を持つ５μＭ磁気ガ
ラス粒子であり、CPG Inc.,Lincoln Park,N.J.,U.S.A.,
Part Number MCPG0510から入手した。
この実施例では、140mgの磁気シリカを10mlの脱イオ
ン水（DIH2O）に懸濁し、次いで、同じ溶液で最終濃度1
4mg/mlで懸濁する前に、10mlの5MGHClで３回洗浄した。
DNAの５μｇ、10μｇ、20μｇ、40μｇ、60μｇ及び80
μｇに相当する、DIH2O中のPromega Corp.のpGEM3zf
（＋）プラスミドDNA（カタログ番号P2271）の増加量
を、μｌ当たり1.0μｇの濃度で、500μｌの粒子に添加
して結合混合物を形成し、DIH2Oを添加して最終容量を6
00μｌとした。次いで、このプラスミド／粒子結合混合
物を、２〜３分間、室温で培養した。
磁気シリカに結合したプラスミドの量は、各サンプル
で、粒子に添加された全プラスミドの量から、溶液中に
残ったプラスミドDNAの量を差し引いて、次の様にして
決定した。分析混合物の液体画分は、20秒間の14,000xg
の遠心分離によって、磁気シリカから分離された。上澄
液中に残ったプラスミドDNAの量は、260nmでの溶液の吸
光度を観察する事によって決定した。260nmでの１吸光
度単位は、50μg/mlのプラスミドDNA濃度に等しい。
結合混合物中に残ったシリカ磁気粒子は、次いで、混
合物から分離されて、次の様にして洗浄した。混合物中
のシリカ磁気粒子を、磁石に最も近い容器の側に沈着さ
せる為に、結合混合物を入れた容器の外側の、容器の一
側面に近い位置に磁石を置いた。次いで、磁石を、容器
のその側面上のその位置に維持しながら、容器中の実質
的に全てのシリカ磁気粒子を残して、混合物を容器の外
にデカントした。次いで、各洗浄工程中に容器の側面か
ら磁石を取除いて、各洗浄工程に引き続いて洗浄溶液を
デカントしながら、粒子が容器中に残るのを確実にする
為に、磁石を、再度、容器の側面に置き直して、残留シ
リカ磁気粒子を、80mMKOAc及び55％のエタノールを含む
10μMEDTAの洗浄溶液の1mlで４回洗浄した。次いで、最
後の洗浄工程後に容器に残った粒子を、３〜５分間、空
気乾燥した。
最後に、プラスミドDNAを、室温で、DI水の1mlを添加
してシリカ磁気粒子から溶出した。粒子は、得られた単
離プラスミドDNA溶液から遠心分離によって除去され
た。次いで、溶出したプラスミドDNAの量を、260nmでの
溶液の吸光度を測定して決定した。
プラスミド単離方法の全体効率は、粒子と一緒に培養
されたDNAの量に対する最終溶出液中に回収されたDNAの
割合で決定した。結合能力は、全体効率が、90％に低下
した時点で決定した。
上述の結合分析の結果は、図１で、図３の溶出結果と
一緒に示される。磁気シリカ（△）及び磁気CPG（＋）
粒子で得られたDNA結合能力の結果は、図１で、別々に
示される。この結果は、シリカ磁気粒子に添加されたプ
ラスミドDNAの量が増加するにつれて、粒子は、DNAの増
加量を結合し続けて、添加されたプラスミドの130μｇ
当たり90μｇを結合する事を示している。反対に、磁気
CPG粒子は、130μｇのプラスミドDNAが添加された場合
でも、プラスミドDNAの40μｇより多くを結合する事は
ない。シリカ磁気粒子の全結合能力は、粒子1mg当たり
プラスミド８μｇであった。これは、磁気CPG粒子の結
合能力よりも著しく高く、Promega Corp.のWizard Plus
Plasmid DNA Purification Systemで使用される10μＭ
シリカビーズの結合能力の少なくとも４倍高い。
上述の溶出分析の結果は、図２で、図３の溶出結果と
一緒に示される。この結果は、この実施例のシリカ磁気
粒子に結合したプラスミドDNAの90％より多くが、粒子
から溶出され、一方、CPG粒子に結合したプラスミドDNA
の60％未満が、それらから溶出された事を示す。
図１〜３で示される結果は、ここで分析されたシリカ
磁気粒子は、優れた結合並びに溶出特性を示す事を明確
に証明した。
実施例２−DNAフラグメントに対するシリカ磁気粒子の
結合能力及び溶出効率の分析 Promega Corp.からの精製した自然のλDNAを、自然の
λDNAを、23,000bp〜125bpの範囲の８つのセグメントに
切断する酵素である、Hind III制限酵素で消化した。こ
のHind IIIで消化されたλDNAは、以後、「λHind III
消化物」と称する。
磁気シリカは、前述の様にして調製され、14mg/mlの
濃度で、5MGHCl中に懸濁された。1mlの懸濁粒子溶液
を、室温で、２〜３分間、80μｌの「λHind III消化
物」で培養した。磁気シリカに結合したDNAの量は、20
秒間の14,000xgの遠心分離で液体及び固体相を分離した
後に粒子に添加された全DNA量から、溶液中に残るDNAを
差し引いて決定した。DNA濃度は、260nmでの吸光度測定
で決定した。260nmでの１吸光度単位は、50μg/mlのDNA
濃度に等しい。
結合混合物中に残ったシリカ磁気粒子は、次いで、混
合物から分離して、次の様にして洗浄した。混合物中の
シリカ磁気粒子を、磁石に最も近い容器の側に沈着させ
る為に、結合混合物を入れた容器の外側の、容器の一側
面に近い位置に磁石を置いた。次いで、磁石を、容器の
その側面上のその位置に維持しながら、容器中に実質的
に全てのシリカ磁気粒子を残して、混合物を容器の外に
デカントした。次いで、各洗浄工程中に容器の側面から
磁石を取除いて、各洗浄工程に引き続いて洗浄溶液をデ
カントしながら、粒子が容器中に残るのを確実にする為
に、磁石を、再度、容器の側面に置き直して、残留シリ
カ磁気粒子を、80mMKOAc及び55％のエタノールを含む10
μMEDTAの洗浄溶液の1mlで４回洗浄した。次いで、最後
の洗浄工程後に容器に残った粒子を、３〜５分間、空気
乾燥した。
最後に、「λHind III消化物」を、室温で、DI水の20
0μｌを添加して溶出した。粒子は、得られた単離「λH
ind III消化物」溶液から遠心分離によって除去され
た。次いで、溶出した「λHind III消化物」の量を、26
0nmでの溶液の吸光度を測定して決定した。
同様のシリカ磁気粒子結合並びに溶出分析を、1353bp
〜72bpサイズの範囲の10のDNAセグメントを産生する消
化反応である、Hae III制限酵素で消化されるΦX174DNA
を使用して行った。これらの実験のデータは、以下の表
１に纏められる。
実施例３−シリカ磁気粒子から溶出後のDNAフラグメン
トの電気泳動 シリカ磁気粒子が、異なる量で、異なる分子量のDNA
フラグメントを結合又は放出するのかを決定する為に、
実施例２において、シリカ磁気粒子に結合し、それから
放出されたDNAフラグメントを、次の様に、電気泳動を
使用して分析した。シリカ磁気粒子の２つの異なるサン
プルから溶出されたλHind III消化物のサンプルを使用
して、未処理DNA消化物の対照サンプルと一緒にアガロ
ースゲル上に分画した。又、結合し溶出されたΦX174Ha
e III消化物のサンプルを、未処理DNA消化物の対照サン
プルと一緒にアガロースゲル上に分画した。次いで、画
分化DNAの得られたゲルを、DNAを染色する事の出来る蛍
光染料で染色し、この染色ゲルを、分子動力学的蛍光画
像機（Molecular Dynamics Fluoroimager）を使用して
分析した。制限酵素ダイゲストのそれぞれからの溶出DN
Aフラグメントの蛍光強度は、磁気シリカ上で捕獲、及
び溶出する前の対照消化物に匹敵するものである。
図４及び５は、上述の様に造られた、画分化され、捕
獲、及び溶出されたDNAフラグメントの蛍光染色アガロ
ースゲルからの、蛍光光度計で発生した可視像を示す。
図４は、１％アガロースゲル上で電気泳動された２μｇ
のλHind III消化物を示す。図５は、３％アガロースゲ
ル上で電気泳動された５μｇのΦX174Hae III消化物を
示す。両パネル上で、サンプル１は、未処理DNA消化物
の対照であり、一方、サンプル２及び３は、２つの異な
るシリカ磁気粒子のサンプルに結合し、それから溶出し
たDNA消化物のサンプルを示す。
対照及び、ここで分析された消化物サンプルのいずれ
かのセットからのサンプルの間には、相対バンド強度又
はバックグランドにおいて実質的な相違は認められず、
ここで分析されたシリカ磁気粒子は、分子量によりDNA
フラグメントを選択的に結合又は放出しない事を示して
いる。
実施例４−シリカ磁気粒子及び磁力を使用して、バクテ
リア培養からプラスミドDNAの単離 プラスミドDNAのいずれかの形態で形質転換された、D
H5αE.coliバクテリアの培養からのpGEM−3zf（＋）プ
ラスミドDNAを単離する為に、実施例１で調製された再
懸濁シリカ磁気粒子を使用した。次の溶液を単離方法に
おいて使用した。
1.細胞再懸濁溶液： 50mMTris−HCl,pH7.5 10mMEDTA 100μg/mlDNアーゼ−フリーリボヌクレアーゼ（RNア
ーゼＡ） 2.カラム洗浄溶液： 200mMNaCl、20mMTris−HCl、5mMEDTA、pH7.5、又は、
190mMKAc、20mMTris−HCl、0.1mMEDTA、pH7.5から成る
水性緩衝液を造り、この緩衝液を、95％エタノールで1:
1.4に希釈して調製した。
3.TEバッファー： 10mMTris−HCl、pH7.5 1mMEDTA 4.中和溶液： 1.32MKOAc（酢酸カリウム）、pH4.8 5.細胞溶解溶液： 0.2MNaOH １％SDS（ドデシル硫酸ナトリウム） 以下に簡単に述べられる工程に従って、清澄な溶解産
物を造る為に、バクテリア培養を処理した。
1.培養を、マイクロ遠心分離機でトップスピードで１〜
２分間、遠心分離に掛けて、１〜3mlのバクテリア培養
から細胞を収集した。収集した細胞を200mlの細胞再懸
濁溶液に再懸濁し、マイクロ遠心分離管に移した。得ら
れた再懸濁細胞溶液は濁っていた。
2.次いで、200mlの細胞溶解溶液を、再懸濁細胞溶液に
添加し、溶液が、比較的清澄になって、再懸濁細胞が溶
解された事を示すまで、反転混合した。
3.200mlの中和溶液をこの可溶化溶液に添加し、反転混
合した。この溶解産物は、中和溶液が添加された後に混
濁した。
4.次いで、溶解産物を清澄にする為に、溶液を５分間、
トップスピードでマイクロ遠心分離機で回転させた。
5.得られた清澄な溶解産物の上澄液を、新たなマイクロ
遠心分離管に移した。
次いで、実施例１で調製した塩酸グアニジンの溶液に
再懸濁したシリカ磁気粒子を使用して、清澄な溶解産物
からプラスミドDNAを単離した。実施例２で開示したプ
ラスミド結合分析で使用されたものと本質的に同じ方法
を、粒子及び磁力を使用して、プラスミドDNAの単離に
使用した。然しながら、この単離方法は、500μｌの懸
濁粒子を、精製プラスミドDNAの５〜80μｇに添加する
方法から始めるのではなしに、1mlの懸濁シリカ磁気粒
子を、直前の工程５から造られた清澄な溶解産物に添加
する事によって開始された。後に続くこの単離方法の各
後工程でのシリカ磁気粒子に添加される各溶液の容量
は、大量のスタート容量を考慮して、それに釣り合う様
に調整した。
得られた単離プラスミドDNAを、ゲル電気泳動を使用
し、且つ分光光度計を使用して、定量的に分析した。ゲ
ル分析結果は、元の多重螺旋プラスミドDNAの高い割合
を示した。光学濃度測定は、DNAの期待範囲での吸光度
比（例えば、260/250nm及び260/280nm）で証明される様
に、DNA生成を示した。
実施例５−シリカ磁気粒子及び真空濾過を使用して、バ
クテリア培養からプラスミドDNAの単離 実施例４で使用した、清澄な溶解産物製造方法と同じ
方法を、プラスミドDNAで形質転換したE.coliバクテリ
アの培養の清澄な溶解産物を造るのに使用した。次い
で、プラスミドを、実施例１のシリカ磁気粒子の懸濁液
を使用して、一度プラスミドDNAが粒子に結合した結合
混合物から粒子を分離する為に、磁力ではなくて真空濾
過を使用して、得られた清澄な溶解産物からプラスミド
を単離した。又、真空濾過は、単離方法の洗浄工程で、
粒子から洗浄溶液を除去するのにも使用される。
実施例６−RNAの結合の例示 4Mチオシアン酸グアニジン中の14mg/mlの磁気シリカ
を使用して、実施例１と同様にして調製された再懸濁シ
リカ磁気粒子の700μｌを、容器中で、32Pでラベル化さ
れた、Promega RNA Markers,カタログ番号1550の30μｌ
と、1mg/ml溶液のコールド（即ち、未ラベル化）Promeg
a RNA Markers part ＃G3191の５μｌに添加した。
得られた混合物を、５分間、室温で培養した。その後
で、上澄液を第二容器にデカントしながら、粒子を容器
の一側面に引付ける為の磁力を使用して、粒子を捕獲し
た。
第二容器に集められた上澄液は貯えられ、数えられ
た。
次いで、第一容器の捕獲粒子を、カラム洗浄溶液で３
回洗浄し、実施例４に開示の様に調製した。粒子は、各
洗浄工程後に捕獲され、洗浄後はデカントされた。各デ
カント洗浄液は貯蔵されて、数えられた。上澄液のカウ
ントの合計及び洗浄のくぼみカウントは、全ての未結合
CPMを決定するのに使用された。
第三洗浄工程後に、37℃に加熱したナノ純水（Nanopu
re water）の250ml中に粒子を再懸濁し、次いで、溶出
液をデカントして、収集しながら、粒子を容器の側面上
に保つ為に磁力を使用して、RNAが、捕獲され、洗浄さ
れた粒子から溶出された。次いで、100μｌの溶出液を
カウントした。
残留粒子を500μｌのナノ純水に再懸濁し、次いで、
残留している未溶出CPMの量を決める為にカウントし
た。
上記分析を二度にわたって行った。図６に示される結
果は、二度の各セットに対する平均カウント及び各実験
で集められたカウントを示す。図６は、この分析のシリ
カ磁気粒子に暴露されたRNAの200,000CPMの内、平均12
5,000CPMが粒子に結合した事になり、粒子に結合したCP
Mの約100,000が放出されて、最終溶出工程で粒子から溶
出した事を示す。
これらのRNA結合並びに溶出分析結果は、実施例２に
開示のDNA結合並びに溶出結果に匹敵し得るものであ
る。この分析は、RNAを単離する為の、本発明方法によ
るシリカ磁気粒子の可能な適用を示す。
実施例７−シリカ磁気粒子からの鉄浸出の分析 上記実施例で使用された様なシリカ磁気粒子を、核酸
物質の定量分析を妨害すると思われる鉄又はその他の物
質を浸出させるそれらの傾向について、粒子に暴露され
た溶液が分光光度計で分析される場合に、260nm付近で
ピークを作り出す事によってスクリーンした。
シリカ磁気粒子は、次の様にして分析された。140mg
のシリカ磁気粒子を、10mlのDI水に再懸濁し、簡単に掻
き混ぜた。粒子／水混合物を保つ容器の外側に対して磁
石を置き、粒子を磁場に１分間暴露した。混合物中の粒
子は、磁石表面に最も近い容器の側に集められ、上澄液
を容器の外にデカントしながら、磁石によって容器の側
に保たれた。次いで、磁石を取除き、容器に残っている
粒子を、別の10mlのDI水に再懸濁した。この収集、デカ
ント及び再懸濁工程を、三度繰返した。
第三のその様な工程の後に、再懸濁粒子を、それぞ
れ、10mlの7M塩酸グアニジン、pH5.9で二度、10mlのDI
水で二度、そして10mlの50mMEDTA（pH8.0）で二度洗浄
した。それらの洗浄のそれぞれからの上澄液を、それぞ
れの対照溶液をブランクとして、Hewlett Packard Diod
e配列分光光度計を使用して、230nm〜300nmを走査し
た。
上記実施例で使用したシリカ磁気粒子を分析して得ら
れた洗浄溶液のいすれにおいても、260nmでのバックグ
ランド以上の吸光度は観察されなかった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平９−19292（ＪＰ，Ａ) 特開 平９−327290（ＪＰ，Ａ) 特開 平９−327291（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−289596（ＪＰ，Ａ) 特開 平７−235407（ＪＰ，Ａ) 西独国特許出願公開19520398（ＤＥ, Ａ１) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 15/09 C07K 1/14 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) ＥＰＡＴ（ＱＵＥＳＴＥＬ)

Claims (29)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】媒体中で他の物質から生物学的目標物質を
    単離する方法であって、 a.生物学的目標物質を含有する媒体を用意し、 b.粒子1mg当たり、生物学的目標物質の少なくとも２μ
    ｇと可逆的に結合出来るシリカ磁気粒子を用意し、 c.シリカ磁気粒子と媒体とを組合せて、シリカ磁気粒子
    と生物学的目標物質との複合体を形成し、 d.外部磁場を適用して媒体から複合体を除去し、及び、 e.生物学的目標物質を溶出させる事によって、複合体か
    ら生物学的目標物質を分離して、単離された生物学的目
    標物質を得る、 事を特徴とする方法。
  2. 【請求項２】該方法によって単離される生物学的目標物
    質が、核酸から成る、請求項１に記載の生物学的目標物
    質を単離する方法。
  3. 【請求項３】工程（ｂ）で用意されるシリカ磁気粒子
    が、シリカ質酸化物被覆磁気粒子である、請求項１に記
    載の生物学的目標物質を単離する方法。
  4. 【請求項４】複合体中の生物学的目標物質の少なくとも
    60％が、工程（ｅ）で粒子から溶出される、請求項１に
    記載の生物学的目標物質を単離する方法。
  5. 【請求項５】工程（ｅ）において、複合体から溶出され
    る生物学目標物質が、50ppm以下の遷移金属混入物を含
    む、請求項１に記載の生物学的目標物質を単離する方
    法。
  6. 【請求項６】媒体中で他の物質から生物学的目標物質を
    単離する方法であって、 ａ）生物学的目標物質を含有する媒体を用意する工程、 ｂ）粒子1mg当たり、生物学的目標物質の少なくとも２
    μｇと可逆的に結合する能力を持つシリカ磁気粒子を用
    意する工程、 ｃ）媒体とシリカ磁気粒子とから成る混合物を形成する
    工程、 ｄ）混合物中で、生物学的目標物質をシリカ磁気粒子に
    接着させる工程、 ｅ）外部磁場を適用して、混合物から、シリカ磁気粒子
    と共に、粒子に接着した生物学的目標物質を除去する工
    程、及び、 ｆ）溶出溶液に粒子を暴露する事によって、シリカ磁気
    粒子から、少なくとも60％の生物学的目標物質を溶出さ
    せる工程、 を含む事を特徴とする方法。
  7. 【請求項７】該方法により単離される生物学的目標物質
    が、核酸物質から成る、請求項６に記載の生物学的目標
    物質を単離する方法。
  8. 【請求項８】該方法により単離される核酸生物学的目標
    物質が、プラスミドDNA物質から成る、請求項７に記載
    の生物学的目標物質を単離する方法。
  9. 【請求項９】単離される核酸生物学的目標物質が、DNA
    フラグメント物質から成る、請求項７に記載の生物学的
    目標物質を単離する方法。
  10. 【請求項１０】該方法の工程（ｂ）で用意されるシリカ
    磁気粒子が、シリカ質酸化物被覆磁気粒子である、請求
    項６に記載の生物学的目標物質を単離する方法。
  11. 【請求項１１】工程（ｃ）で形成される混合物が、媒
    体、シリカ磁気粒子及びカオトロピック塩を含み、カオ
    トロピック塩濃度が、工程（ｄ）において、生物学的目
    標物質をシリカ磁気粒子に接着させるのに十分に高い、
    請求項６に記載の生物学的目標物質を単離する方法。
  12. 【請求項１２】工程（ｃ）で形成される混合物中のカオ
    トロピック塩が、塩酸グアニジン又はチオシアン酸グア
    ニジンから成る、グアニジニウムカオトロピック塩から
    成る、請求項11に記載の生物学的目標物質を単離する方
    法。
  13. 【請求項１３】工程（ｃ）で形成される混合物中のカオ
    トロピック塩の濃度が、少なくとも２モルである、請求
    項11に記載の生物学的目標物質を単離する方法。
  14. 【請求項１４】生物学的目標物質が、混合物をインキュ
    ベートする事によって、工程（ｄ）においてシリカ磁気
    粒子に接着する、請求項６に記載の生物学的目標物質を
    単離する方法。
  15. 【請求項１５】生物学的目標物質が、混合物を室温で少
    なくとも30秒間インキュベートする事によって、工程
    （ｄ）においてシリカ磁気粒子に接着する、請求項14に
    記載の生物学的目標物質を単離する方法。
  16. 【請求項１６】シリカ磁気粒子を媒体から除去した後で
    あって、該粒子から生物学的目標物質を溶出する前に、
    シリカ磁気粒子を洗浄する工程を更に含む、請求項６に
    記載の生物学的目標物質を単離する方法。
  17. 【請求項１７】洗浄工程が、アルコールと塩とから成る
    洗浄溶液を使用して行われる、請求項16に記載の生物学
    的目標物質を単離する方法。
  18. 【請求項１８】洗浄工程が、少なくとも30容量％のアル
    コールと緩衝液とから成る洗浄溶液を使用して行われ
    る、請求項17に記載の生物学的目標物質を単離する方
    法。
  19. 【請求項１９】生物学的目標物質が、水又は低イオン強
    度の溶出溶液を使用して、工程（ｆ）で、シリカ磁気粒
    子から溶出される、請求項６に記載の生物学的目標物質
    を単離する方法。
  20. 【請求項２０】工程（ｆ）で、シリカ磁気粒子から溶出
    される生物学的目標物質が、高分子又は金属混入物を実
    質的に含まない、請求項６に記載の生物学的目標物質を
    単離する方法。
  21. 【請求項２１】媒体中で、他の物質からプラスミドDNA
    物質を単離する方法であって、 ａ）プラスミドDNAを含有する媒体を用意する工程、 ｂ）粒子1mg当たり、生物学的目標物質の少なくとも２
    μｇと可逆的に結合する能力を持つシリカ質酸化物被覆
    磁気粒子を用意する工程、 ｃ）媒体、シリカ質酸化物被覆磁気粒子及びカオトロピ
    ック塩を含む混合物を形成する工程であって、混合物中
    のカオトロピック塩濃度が、プラスミドDNAを粒子に接
    着させるのに十分に高い工程、 ｄ）少なくとも或程度の生物学的目標物質が、シリカ質
    酸化物被覆磁気粒子に接着するまで、混合物をおよそ室
    温でインキュベートする工程、 ｅ）外部磁場を使用して、混合物からシリカ質酸化物被
    覆磁気粒子を除去する工程、及び、 ｆ）粒子を溶出溶液に暴露する事によって、シリカ質酸
    化物被覆磁気粒子に接着したプラスミドDNAの少なくと
    も60％を溶出させる工程、 を含む事を特徴とする方法。
  22. 【請求項２２】工程（ｃ）で形成された混合物中のカオ
    トロピック塩が、塩酸グアニジン又はチオシアン酸グア
    ニジンから成るグアニジニウムカオトロピック塩であ
    る、請求項21に記載のプラスミドDNA物質を単離する方
    法。
  23. 【請求項２３】工程（ｃ）で形成された混合物中のカオ
    トロピック塩の濃度が、約0.1M〜7Mである、請求項21に
    記載のプラスミドDNA物質を単離する方法。
  24. 【請求項２４】シリカ質酸化物被覆磁気粒子を媒体から
    除去した後であって、該粒子からプラスミドDNA物質を
    溶出する前に、シリカ質酸化物被覆磁気粒子を洗浄する
    工程を更に含む、請求項21に記載のプラスミドDNA物質
    を単離する方法。
  25. 【請求項２５】洗浄工程が、アルコールと塩とを含む洗
    浄溶液を使用して行われる、請求項24に記載のプラスミ
    ドDNA物質を単離する方法。
  26. 【請求項２６】洗浄工程が、少なくとも30容量％のアル
    コールと緩衝液とを含む洗浄溶液を使用して行われる、
    請求項24に記載のプラスミドDNA物質を単離する方法。
  27. 【請求項２７】工程（ｆ）でシリカ質酸化物被覆磁気粒
    子から溶出されるプラスミドDNAが、更なる処理又は分
    析を妨害する様な高分子又は金属混入物を実質的に含ま
    ない、請求項21に記載のプラスミドDNA物質を単離する
    方法。
  28. 【請求項２８】媒体から生物学的目標物質を単離する為
    のキットであって、第一容器の水溶液に懸濁されたシリ
    カ質酸化物被覆磁気粒子のアリコットを含む、粒子が、
    粒子1mg当たり、生物学的目標物質の少なくとも２μｇ
    と可逆的に結合する能力を有するキット。
  29. 【請求項２９】第二容器にカオトロピック塩を、及び第
    三容器に洗浄溶液を更に含む、請求項28に記載のキッ
    ト。
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DK (1) DK1367137T3 (ja)
WO (1) WO1998031840A1 (ja)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8697020B2 (en) 2008-02-14 2014-04-15 Bioneer Corporation Silica magnetic particles having a spherical form and a process for preparing the same
EP3107107A2 (en) 2015-05-28 2016-12-21 Bioneer Corporation Highly active silica magnetic nanoparticles for purifying biomaterial and preparation method thereof
WO2018004309A1 (ko) 2016-06-30 2018-01-04 김성천 이중가닥 핵산 신호 프로브 및 이를 이용한 표적분자의 검출방법

Families Citing this family (261)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9425138D0 (en) * 1994-12-12 1995-02-08 Dynal As Isolation of nucleic acid
KR100463475B1 (ko) 1995-06-08 2005-06-22 로셰 디아그노스틱스 게엠베하 자기성피그먼트
DE19520398B4 (de) * 1995-06-08 2009-04-16 Roche Diagnostics Gmbh Magnetisches Pigment
JP2965131B2 (ja) * 1995-07-07 1999-10-18 東洋紡績株式会社 核酸結合用磁性担体およびそれを用いる核酸単離方法
ATE366418T1 (de) 1996-04-25 2007-07-15 Bioarray Solutions Ltd Licht-regulierte, elektrokinetische zusammensetzung von partikeln an oberflächen
ATE229371T1 (de) 1997-01-21 2002-12-15 Grace W R & Co Siliciumdioxidadsorbent auf magnetischem träger
US6027945A (en) * 1997-01-21 2000-02-22 Promega Corporation Methods of isolating biological target materials using silica magnetic particles
US20050287583A1 (en) * 1997-01-21 2005-12-29 Promega Corporation Methods and kits for isolating biological target materials using silica magnetic particles
WO1998050567A1 (en) * 1997-05-02 1998-11-12 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting diseases of the prostate
DE19743518A1 (de) * 1997-10-01 1999-04-15 Roche Diagnostics Gmbh Automatisierbare universell anwendbare Probenvorbereitungsmethode
US20080064108A1 (en) * 1997-12-10 2008-03-13 Tony Baker Urine Preservation System
US7569342B2 (en) * 1997-12-10 2009-08-04 Sierra Molecular Corp. Removal of molecular assay interferences
DE69815282T2 (de) * 1997-12-25 2004-05-06 Tosoh Corp., Shinnanyo Magnetischer Träger, seine Herstellung, und Verfahren zum Extrahieren von Nukleinsäuren
US7078224B1 (en) * 1999-05-14 2006-07-18 Promega Corporation Cell concentration and lysate clearance using paramagnetic particles
WO1999058664A1 (en) 1998-05-14 1999-11-18 Whitehead Institute For Biomedical Research Solid phase technique for selectively isolating nucleic acids
EP0969090A1 (en) * 1998-05-27 2000-01-05 QIAGEN GmbH Rapid and simple process for isolation of circular nucleic acids
US6368866B1 (en) 1998-08-03 2002-04-09 Reference Diagnostics, Inc. Rapid separation assay for total iron binding capacity
US6703228B1 (en) * 1998-09-25 2004-03-09 Massachusetts Institute Of Technology Methods and products related to genotyping and DNA analysis
AU2144000A (en) * 1998-10-27 2000-05-15 Affymetrix, Inc. Complexity management and analysis of genomic dna
US5973138A (en) 1998-10-30 1999-10-26 Becton Dickinson And Company Method for purification and manipulation of nucleic acids using paramagnetic particles
ATE248911T1 (de) * 1998-11-30 2003-09-15 Roche Diagnostics Gmbh Magnetische partikel zur reinigung von nukleinsäuren
US6723237B1 (en) * 1999-01-18 2004-04-20 Precision Systems Science Co., Ltd. Concentration device using magnetic particles and method therefor
FI990082A0 (fi) * 1999-01-18 1999-01-18 Labsystems Oy Puhdistusprosessi magneettipartikkeleita käyttäen
WO2000043199A1 (en) * 1999-01-20 2000-07-27 Reference Diagnostics, Inc. Magnetically responsive gel particle
US6310199B1 (en) 1999-05-14 2001-10-30 Promega Corporation pH dependent ion exchange matrix and method of use in the isolation of nucleic acids
EP1621618B1 (en) 1999-05-14 2011-10-26 Promega Corporation Cell concentration and lysate clearance using paramagnetic particles
US6270970B1 (en) 1999-05-14 2001-08-07 Promega Corporation Mixed-bed solid phase and its use in the isolation of nucleic acids
AU778486B2 (en) * 1999-05-14 2004-12-09 Promega Corporation Cell concentration and lysate clearance using paramagnetic particles
DK1069131T3 (da) * 1999-07-15 2006-06-26 Qiagen Gmbh Fremgangsmåde til at skille partikelformige substrater fra en oplösning med et minimalt tab af partikler
DE19937607A1 (de) * 1999-08-09 2001-02-15 Bilatec Ges Zur Entwicklung Bi Reagenzienkit zur Isolierung von Nukleinsäuren
WO2001014590A2 (en) * 1999-08-20 2001-03-01 Promega Corporation Simultaneous isolation and quantitation of dna
EP1510578A3 (en) * 1999-08-20 2005-03-16 Promega Corporation Simultaneous isolation and quantitation of dna
US6841393B2 (en) 1999-10-19 2005-01-11 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Selective removal of contaminants from a surface using colored particles and articles having magnets
US6503761B1 (en) * 1999-10-19 2003-01-07 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Selective removal of contaminants from a surface using articles having magnets
US6958225B2 (en) 1999-10-27 2005-10-25 Affymetrix, Inc. Complexity management of genomic DNA
DE60025529T2 (de) * 1999-11-17 2006-08-24 Roche Diagnostics Gmbh Magnetische glasteilchen, herstellungsverfahren und benutzung
US6936414B2 (en) 1999-12-22 2005-08-30 Abbott Laboratories Nucleic acid isolation method and kit
US7183002B2 (en) * 2000-03-24 2007-02-27 Qiagen, Gmbh Porous ferro- or ferrimagnetic glass particles for isolating molecules
US6672458B2 (en) * 2000-05-19 2004-01-06 Becton, Dickinson And Company System and method for manipulating magnetically responsive particles fluid samples to collect DNA or RNA from a sample
JP4792192B2 (ja) * 2000-05-19 2011-10-12 ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー 液体サンプル内の磁気応答性粒子を操作し、サンプルからｄｎａ又はｒｎａを収集するシステム及び方法
GB0013658D0 (en) * 2000-06-05 2000-07-26 Dynal Asa Nucleic acid isolation
US7892854B2 (en) * 2000-06-21 2011-02-22 Bioarray Solutions, Ltd. Multianalyte molecular analysis using application-specific random particle arrays
US9709559B2 (en) 2000-06-21 2017-07-18 Bioarray Solutions, Ltd. Multianalyte molecular analysis using application-specific random particle arrays
AU2001276830A1 (en) * 2000-06-23 2002-01-08 Irm, Llc Method and apparatus for performing an assay
US20030087286A1 (en) * 2000-09-06 2003-05-08 Hodge Timothy A. Isolation of eukaryotic genomic DNA using magnetically responsive solid functionalized particles
US20050266494A1 (en) * 2000-09-06 2005-12-01 Hodge Timothy A System and method for computer network ordering of biological testing
US20050272085A1 (en) * 2000-09-06 2005-12-08 Hodge Timothy A Methods for forensic and congenic screening
KR20020065509A (ko) * 2000-09-06 2002-08-13 티모시 에이. 호지 유전자이식 및 표적 돌연변이유발 스크리닝을 위한시스템, 방법 및 장치
US7494817B2 (en) * 2000-09-06 2009-02-24 Transnet Yx, Inc. Methods for genotype screening using magnetic particles
AU2001288689A1 (en) * 2000-09-06 2002-03-22 Timothy A. Hodge System, method and apparatus for transgenic and targeted mutagenesis screening
US20050239125A1 (en) * 2000-09-06 2005-10-27 Hodge Timothy A Methods for genotype screening
US7011943B2 (en) * 2000-09-06 2006-03-14 Transnetyx, Inc. Method for detecting a designated genetic sequence in murine genomic DNA
US20030082605A1 (en) * 2000-09-06 2003-05-01 Hodge Timothy A. Genomic DNA detection method and system thereof
US20030207289A1 (en) * 2001-09-04 2003-11-06 Hodge Timothy A. Detection of genetic sequences using a bipartite probe
CA2428532C (en) * 2000-11-13 2009-05-19 Promega Corporation Lysate clearance and nucleic acid isolation using silanized silica matrices
US6607667B2 (en) * 2000-11-28 2003-08-19 W. R. Grace & Co.-Conn. Method for adsorbing substances using silica adsorbent on magnetic substrate
EP1339876A2 (en) * 2000-11-28 2003-09-03 Promega Corporation Purification of dna sequencing reactions using silica magnetic particles
US6794141B2 (en) * 2000-12-22 2004-09-21 Arcturus Bioscience, Inc. Nucleic acid amplification
JP4065405B2 (ja) * 2001-01-19 2008-03-26 デー エル エム ドクトル ミュラー アクチェンゲゼルシャフト プラスミドｄｎａを含有する細胞溶解物を製造するためのバイオマスの処理法
AU2001296762B2 (en) 2001-02-16 2007-03-15 Promega Corporation Magnetic isolation and purification of nucleic acids
US6855499B1 (en) 2001-02-16 2005-02-15 Cortex Biochem, Inc. Magnetic isolation and purification of nucleic acids
US20030022203A1 (en) * 2001-04-23 2003-01-30 Rajan Kumar Cellular Arrays
US6656587B2 (en) 2001-05-02 2003-12-02 Phillips Plastics Corporation Composite particles
US6849186B2 (en) * 2001-05-02 2005-02-01 Phillips Plastic Corporation Composite particles
US7262063B2 (en) 2001-06-21 2007-08-28 Bio Array Solutions, Ltd. Directed assembly of functional heterostructures
US7217513B2 (en) * 2001-07-10 2007-05-15 Massachusetts Institute Of Technology Apparatus and method for isolating a nucleic acid from a sample
US7285412B2 (en) * 2001-07-27 2007-10-23 Surface Logix Inc. Device for magnetic immobilization of cells
US7169577B2 (en) * 2001-07-27 2007-01-30 Surface Logix, Inc. Cell isolation and screening device and method of using same
US7169578B2 (en) * 2001-07-27 2007-01-30 Surface Logix, Inc. Cell isolation and screening device and method of using same
US20030040129A1 (en) * 2001-08-20 2003-02-27 Shah Haresh P. Binding assays using magnetically immobilized arrays
US20060014186A1 (en) * 2001-09-04 2006-01-19 Hodge Timothy A Methods for genotype screening of a strain disposed on an adsorbent carrier
US20040137449A1 (en) * 2001-10-05 2004-07-15 Nargessi R D Magnetic isolation and purification of nucleic acids
CA2497740C (en) 2001-10-15 2011-06-21 Bioarray Solutions, Ltd. Multiplexed analysis of polymorphic loci by probe elongation-mediated detection
DE60238648D1 (de) 2001-11-06 2011-01-27 Promega Corp Isolierung und Reinigung von Nucleinsäuren
JP2005538929A (ja) 2002-01-16 2005-12-22 ダイナル バイオテック エイエスエイ 単一サンプルからの核酸及びタンパク質の単離方法
US20060258856A1 (en) * 2002-02-13 2006-11-16 Medimolecular Pty. Ltd. Method of isolating nucleic acids from stool samples
AU2003220249A1 (en) * 2002-03-15 2003-09-29 Arcturus Bioscience, Inc. Improved nucleic acid amplification
US7214427B2 (en) * 2002-03-21 2007-05-08 Aviva Biosciences Corporation Composite beads comprising magnetizable substance and electro-conductive substance
GB0207975D0 (en) * 2002-04-05 2002-05-15 Genovision As Isolating nucleic acid
GB0210766D0 (en) * 2002-05-10 2002-06-19 Genovision As Isolating nucleic acid
EP1376129B1 (en) * 2002-06-27 2007-10-10 Toyo Boseki Kabushiki Kaisha Magnetic carrier for biological substance, production method thereof and isolation method of biological substance using the same
GB0215185D0 (en) 2002-07-01 2002-08-07 Genovision As Binding a target substance
JP2005532072A (ja) * 2002-07-10 2005-10-27 マサチューセッツ・インスティテュート・オブ・テクノロジー サンプルから核酸を単離するための装置および方法
EP1527345A2 (en) * 2002-07-29 2005-05-04 Axxima Pharmaceuticals AG Method for isolating atp binding proteins by means of immobilized protein inhibitors
US7183104B1 (en) 2002-08-23 2007-02-27 Duane Morris Llp Separator and particle detection system
US7176036B2 (en) * 2002-09-20 2007-02-13 Arrowhead Center, Inc. Electroactive microspheres and methods
AU2003298655A1 (en) 2002-11-15 2004-06-15 Bioarray Solutions, Ltd. Analysis, secure access to, and transmission of array images
GB0229287D0 (en) * 2002-12-16 2003-01-22 Dna Res Innovations Ltd Polyfunctional reagents
US20040157219A1 (en) * 2003-02-06 2004-08-12 Jianrong Lou Chemical treatment of biological samples for nucleic acid extraction and kits therefor
US7601491B2 (en) * 2003-02-06 2009-10-13 Becton, Dickinson And Company Pretreatment method for extraction of nucleic acid from biological samples and kits therefor
JP2004000922A (ja) * 2003-03-26 2004-01-08 Toyobo Co Ltd 核酸またはタンパク質抽出用シリカ粒子組成物
JP4836795B2 (ja) * 2003-05-19 2011-12-14 ブランデイズ ユニバーシティー 核酸プロセシング方法、キット、及び装置
JP4612789B2 (ja) * 2003-05-29 2011-01-12 キヤノン株式会社 Ｄｎａハイブリッド及びｄｎａハイブリッドを用いた環境浄化システム
WO2004108925A1 (en) * 2003-06-04 2004-12-16 Qiagen As Method for sequentially isolating dna and rna from the same nucleic acid-containing sample
US20050042660A1 (en) * 2003-07-31 2005-02-24 Hall Gerald Edward Devices and methods for isolating RNA
GB0319671D0 (en) * 2003-08-21 2003-09-24 Secr Defence Apparatus for processing a fluid sample
EP1510577A1 (en) 2003-08-29 2005-03-02 Qiagen GmbH Method for magnetic bead isolation of nucleic acids
WO2005029705A2 (en) * 2003-09-18 2005-03-31 Bioarray Solutions, Ltd. Number coding for identification of subtypes of coded types of solid phase carriers
ATE532066T1 (de) * 2003-09-22 2011-11-15 Bioarray Solutions Ltd Oberflächenimmobilisierter polyelektrolyt mit mehreren, zur kovalenten bindung an biomoleküle fähigen funktionellen gruppen
NZ547492A (en) * 2003-10-28 2009-12-24 Bioarray Solutions Ltd Optimization of gene expression analysis using immobilized capture probes of different lengths and densities
US20050089916A1 (en) * 2003-10-28 2005-04-28 Xiongwu Xia Allele assignment and probe selection in multiplexed assays of polymorphic targets
JP2007509629A (ja) 2003-10-29 2007-04-19 バイオアレイ ソリューションズ リミテッド 二本鎖ｄｎａの切断による複合核酸分析
US20050106589A1 (en) * 2003-11-17 2005-05-19 Hashem Akhavan-Tafti Compositions and methods for releasing nucleic acids from solid phase binding materials
US20050136477A1 (en) * 2003-11-17 2005-06-23 Hashem Akhavan-Tafti Methods for isolating nucleic acids from biological and cellular materials
US20050106602A1 (en) * 2003-11-17 2005-05-19 Hashem Akhavan-Tafti Simplified methods for isolating nucleic acids from cellular materials
US20050106577A1 (en) * 2003-11-17 2005-05-19 Hashem Akhavan-Tafti Cleavable solid phases for isolating nucleic acids
US20050106576A1 (en) * 2003-11-17 2005-05-19 Hashem Akhavan-Tafti Methods of using cleavable solid phases for isolating nucleic acids
DE10358137A1 (de) * 2003-12-12 2005-07-07 Merck Patent Gmbh Verfahren und Kit zur Isolierung von RNA
EP1709197A4 (en) * 2003-12-30 2007-07-04 Sigma Aldrich Co RAPID PREPARATION OF NUCLEIC ACIDS BY ENZYMATIC DEPENDENCE
EP1715953A1 (en) * 2004-02-18 2006-11-02 Applera Corporation Polyelectrolyte-coated size-exclusion ion-exchange particles
US8426126B2 (en) * 2004-03-18 2013-04-23 Applied Biosystems, Llc Modified surfaces as solid supports for nucleic acid purification
US20050239091A1 (en) * 2004-04-23 2005-10-27 Collis Matthew P Extraction of nucleic acids using small diameter magnetically-responsive particles
US20050236299A1 (en) * 2004-04-27 2005-10-27 Mark Weber Folded material containment packages and related methods of packaging folded material products
NL1026271C2 (nl) * 2004-05-26 2005-11-30 Keygene Nv Werkwijze en inrichting voor het isoleren van nucleïnezuur uit nucleïnezuur bevattend materiaal.
WO2006004611A2 (en) * 2004-06-25 2006-01-12 Invitrogen Corporation Separation of nucleic acid
JP4476050B2 (ja) * 2004-06-30 2010-06-09 株式会社ニデック 視野計
US7363170B2 (en) * 2004-07-09 2008-04-22 Bio Array Solutions Ltd. Transfusion registry network providing real-time interaction between users and providers of genetically characterized blood products
JP4798971B2 (ja) * 2004-07-30 2011-10-19 キヤノン株式会社 磁性粒子集合体およびそれを用いた標的核酸の抽出装置および抽出方法
JP2008510456A (ja) 2004-07-30 2008-04-10 アジェンコート バイオサイエンス コーポレーション 多官能基コート化固相担体を用いる核酸の単離方法
US7848889B2 (en) 2004-08-02 2010-12-07 Bioarray Solutions, Ltd. Automated analysis of multiplexed probe-target interaction patterns: pattern matching and allele identification
WO2006017427A1 (en) * 2004-08-03 2006-02-16 Becton, Dickinson And Company Use of magnetic material to fractionate samples
AU2005271688B2 (en) * 2004-08-03 2011-10-06 Becton, Dickinson And Company Use of magnetic material to direct isolation of compounds and fractionation of multipart samples
EP1774041B9 (en) 2004-08-03 2013-04-17 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Method for obtaining nucleic acids by lysis of microbial samples
EP1623996A1 (en) * 2004-08-06 2006-02-08 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Improved method of selecting a desired protein from a library
US20060099605A1 (en) * 2004-11-11 2006-05-11 Hall Gerald E Jr Devices and methods for isolating RNA
US7320891B2 (en) * 2004-09-10 2008-01-22 Promega Corporation Methods and kits for isolating sperm cells
US7166680B2 (en) * 2004-10-06 2007-01-23 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Blends of poly(ester amide) polymers
EP1650297B1 (en) * 2004-10-19 2011-04-13 Samsung Electronics Co., Ltd. Method and apparatus for the rapid disruption of cells or viruses using micro magnetic beads and laser
DE102005002343A1 (de) 2005-01-18 2006-07-27 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Verfahren zur spezifischen oder unspezifischen Separation von Zellen und/oder Viren aus flüssigen Medien und dessen Verwendung
US7964380B2 (en) * 2005-01-21 2011-06-21 Argylia Technologies Nanoparticles for manipulation of biopolymers and methods of thereof
US20060166223A1 (en) * 2005-01-26 2006-07-27 Reed Michael W DNA purification and analysis on nanoengineered surfaces
EP1690938A1 (de) 2005-02-11 2006-08-16 Qiagen GmbH Verfahren zur Isolierung von Nukleinsäuren, wobei die Nukleinsäuren bei erhöhter Temperatur an einer Matrix immobilisiert werden
ITRM20050068A1 (it) * 2005-02-17 2006-08-18 Istituto Naz Per Le Malattie I Metodo per la rivelazione di acidi nucleici di agenti patogeni batterici o di parassiti nelle urine.
US7914982B2 (en) * 2005-02-17 2011-03-29 Trovagene, Inc. Methods for detecting pathogen specific nucleic acids in urine
ITRM20050067A1 (it) 2005-02-17 2006-08-18 Istituto Naz Per Le Malattie I Metodo per la rivelazione di acidi nucleici virali o di origine virale nelle urine.
US20060223071A1 (en) * 2005-04-01 2006-10-05 Wisniewski Michele E Methods, compositions, and kits for detecting nucleic acids in a single vessel
US8628918B2 (en) * 2005-05-09 2014-01-14 Affymetrix, Inc. Multiplex capture of nucleic acids
US8632970B2 (en) * 2005-05-09 2014-01-21 Affymetrix, Inc. Multiplex capture of nucleic acids
EP1880025B1 (en) 2005-05-12 2011-03-16 Affymetrix, Inc. Multiplex branched-chain dna assays
US20060270843A1 (en) * 2005-05-26 2006-11-30 Hall Gerald E Jr Methods for isolation of nucleic acids
US20060269929A1 (en) * 2005-05-26 2006-11-30 Hall Gerald E Jr Methods and kits for DNA purification on polymeric membranes at low ionic strength
US8486629B2 (en) 2005-06-01 2013-07-16 Bioarray Solutions, Ltd. Creation of functionalized microparticle libraries by oligonucleotide ligation or elongation
CN104673905B (zh) * 2005-06-20 2016-09-07 领先细胞医疗诊断有限公司 检测单个细胞中的核酸和鉴定异质大细胞群中罕见细胞的方法
JP2009500019A (ja) * 2005-07-01 2009-01-08 プロメガ・コーポレーション 生体分子の精製のための浮遊性粒子のネットワーク、及び生体分子の精製のための浮遊性粒子又は浮遊性粒子のネットワークの使用
US20070072195A1 (en) * 2005-09-29 2007-03-29 Constantine Haralambopoulos Bio-commemorative article incorporating amplified genetic material
US7927798B2 (en) * 2005-10-05 2011-04-19 Panomics, Inc. Detection of nucleic acids from whole blood
US7727473B2 (en) 2005-10-19 2010-06-01 Progentech Limited Cassette for sample preparation
US7754148B2 (en) 2006-12-27 2010-07-13 Progentech Limited Instrument for cassette for sample preparation
US20070092403A1 (en) * 2005-10-21 2007-04-26 Alan Wirbisky Compact apparatus, compositions and methods for purifying nucleic acids
US8030034B2 (en) * 2005-12-09 2011-10-04 Promega Corporation Nucleic acid purification with a binding matrix
US20100035331A1 (en) * 2006-02-15 2010-02-11 Tosoh Corporation Method for extracting of nucleic acid from biological material
US20070254284A1 (en) * 2006-05-01 2007-11-01 Biwei Zhao A nucleic acid detection method
US7608399B2 (en) * 2006-06-26 2009-10-27 Blood Cell Storage, Inc. Device and method for extraction and analysis of nucleic acids from biological samples
JP2010505425A (ja) * 2006-10-06 2010-02-25 プロメガ コーポレイション 細胞を単離する方法およびキット
EP1911844A1 (en) * 2006-10-10 2008-04-16 Qiagen GmbH Methods and kit for isolating nucleic acids
US8895267B2 (en) 2006-11-03 2014-11-25 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Random access system and method for polymerase chain reaction testing
EP2126074B1 (en) * 2006-12-13 2010-12-01 Roche Diagnostics GmbH Use of acetals for the isolation of nucleic acids
ES2394815T3 (es) * 2006-12-13 2013-02-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Utilización de TDE para el aislamiento de ácidos nucleicos
JP2011503244A (ja) * 2006-12-21 2011-01-27 インヴィトロジェン ダイナル エーエス 核酸の単離方法またはリン酸化タンパク質の単離方法における粒子およびその使用
US8993292B2 (en) * 2007-01-16 2015-03-31 Applied Biosystems Llc Methods and systems for differential extraction
US7960180B2 (en) * 2007-02-20 2011-06-14 University Of Notre Dame Du Lac Methods and apparatus to capture and release microbe particles using amino-functionalized silica
US20100129878A1 (en) * 2007-04-25 2010-05-27 Parthasarathy Ranjani V Methods for nucleic acid amplification
DK2171098T3 (en) * 2007-06-29 2018-05-22 Becton Dickinson Co PROCEDURES FOR EXTRACTION AND CLEANING COMPONENTS IN BIOLOGICAL SAMPLES
US7868145B2 (en) * 2007-07-11 2011-01-11 Industrial Technology Research Institute Magnetic particles containing a copolymer core, magnetic layer and silicon layer
EP2171058A1 (en) 2007-07-23 2010-04-07 Applied Biosystems Inc. Method for recovering sperm nucleic acid from a forensic sample
EP2195450B2 (en) * 2007-08-22 2016-07-20 TrovaGene, Inc. Methods of using mirna for detection of in vivo cell death
CN101363045B (zh) * 2007-09-10 2012-10-17 厦门致善生物科技有限公司 一种用超微磁颗粒分离纯化生物靶物质的方法
US9388457B2 (en) 2007-09-14 2016-07-12 Affymetrix, Inc. Locus specific amplification using array probes
US8357296B2 (en) 2007-09-24 2013-01-22 Emd Millipore Corporation Centrifugal filter
WO2009068585A1 (en) * 2007-11-26 2009-06-04 Atonomics A/S Integrated separation and detection cartridge using magnetic particles with bimodal size distribution
WO2009117167A1 (en) * 2008-01-02 2009-09-24 Blood Cell Storage, Inc. Devices and processes for nucleic acid extraction
WO2009088987A2 (en) 2008-01-03 2009-07-16 The Johns Hopkins University Compositions and methods for polynucleotide extraction and methylation detection
US9074244B2 (en) 2008-03-11 2015-07-07 Affymetrix, Inc. Array-based translocation and rearrangement assays
EP2265942B1 (en) 2008-03-12 2017-10-18 University Of Virginia Patent Foundation Detection of polymeric analytes
US20120149587A1 (en) * 2008-03-12 2012-06-14 University Of Virginia Patent Foundation Method for detecting nucleated cells
DE102008029356A1 (de) * 2008-06-20 2009-12-24 Siemens Healthcare Diagnostics Gmbh Verfahren zur Aufreinigung von Nukleinsäuren, insbesondere aus fixiertem Gewebe
EP2147981A1 (en) * 2008-07-25 2010-01-27 Biotype AG Kit and method for evaluating detection properties in amplification reactions
US20100062518A1 (en) * 2008-09-09 2010-03-11 Sukanta Banerjee Concentrating White Blood Cells for DNA Extraction from a Leukodepleted Blood Sample
US8632671B2 (en) * 2008-10-03 2014-01-21 Board Of Regents, University Of Texas System Method for measuring carbon nanotubes taken-up by a plurality of living cells
CN102264899A (zh) * 2008-11-04 2011-11-30 血细胞保存公司 弯曲的玻璃表面上的核酸提取
US8846878B1 (en) 2009-01-23 2014-09-30 Cubrc Corporation Method and device for isolating a protein sample
WO2010088517A1 (en) * 2009-01-30 2010-08-05 The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods and systems for purifying transferring and/or manipulating nucleic acids
DE102009001864A1 (de) * 2009-03-25 2010-09-30 Qiagen Gmbh Überschichtung zur Partikelabtrennung
DE102009022512A1 (de) * 2009-05-25 2010-12-02 Qiagen Gmbh Verfahren zur Reaktivierung von Silikaoberflächen zur Isolierung von Nukleinsäuren
US8222397B2 (en) 2009-08-28 2012-07-17 Promega Corporation Methods of optimal purification of nucleic acids and kit for use in performing such methods
US8039613B2 (en) 2009-08-28 2011-10-18 Promega Corporation Methods of purifying a nucleic acid and formulation and kit for use in performing such methods
TW201113523A (en) * 2009-08-31 2011-04-16 Mbio Diagnostics Inc Integrated sample preparation and analyte detection
US11096345B2 (en) 2009-09-01 2021-08-24 Basf Se Method for treating post-emergent rice
TW201113376A (en) 2009-09-01 2011-04-16 Basf Agrochemical Products Bv Herbicide-tolerant plants
TWI407994B (zh) 2009-10-22 2013-09-11 Ind Tech Res Inst 分離核酸的方法、試劑及套組
JP2013515956A (ja) * 2009-12-23 2013-05-09 コーニンクレッカ フィリップス エレクトロニクス エヌ ヴィ 検体測定装置及び方法
EP2345719A1 (en) 2010-01-18 2011-07-20 Qiagen GmbH Method for isolating small RNA
KR20160088958A (ko) 2010-02-23 2016-07-26 루미넥스 코포레이션 일체화된 샘플 제조, 반응 및 검출을 위한 장치 및 방법
US20110223588A1 (en) * 2010-03-09 2011-09-15 Biosample Llc Solid Phase Nucleic Acid Extraction From Small Sample Volumes, and Release of Controlled Quantities
EP2407540A1 (en) 2010-07-15 2012-01-18 Qiagen GmbH Method for purifying a target nucleic acid
DE102010036111B4 (de) 2010-09-01 2013-08-29 Bundesrepublik Deutschland (Bundesamt für Ausrüstung, Informationstechnik und Nutzung der Bundeswehr) Vorbehandlungsverfahren zur Isolierung und Aufkonzentrierung von Nukleinsäuren aus einer Umweltprobe
CN107365847A (zh) 2010-10-21 2017-11-21 领先细胞医疗诊断有限公司 用于原位检测核酸的超灵敏方法
WO2012075133A1 (en) 2010-11-30 2012-06-07 Life Technologies Corporation Alkylene glycols and polymers and copolymers thereof for direct isolation of nucleic acid from embedded samples
KR102085133B1 (ko) 2010-12-16 2020-03-05 바스프 아그로 비.브이. 제초제에 대한 내성이 증가된 식물
EP2465934A1 (de) 2010-12-20 2012-06-20 Steffen Mergemeier Extraktion von Nukleinsäuren
US9051563B2 (en) 2011-01-14 2015-06-09 Zymo Research Corporation Nucleic acid purification
EP2705130B1 (en) 2011-05-04 2016-07-06 Luminex Corporation Apparatus and methods for integrated sample preparation, reaction and detection
WO2012159063A2 (en) 2011-05-19 2012-11-22 Blood Cell Strorage, Inc. Gravity flow fluidic device for nucleic acid extraction
US9304070B2 (en) 2011-07-13 2016-04-05 Emd Millipore Corporation All-in-one sample preparation device and method
DE102011054474B4 (de) 2011-07-20 2014-02-13 Stratec Biomedical Ag System zur Stabilisierung, Aufbewahrung und Lagerung einer Nukleinsäure
DK2742152T3 (en) 2011-08-12 2017-07-31 Qiagen Gmbh PROCEDURE FOR ISOLATING NUCLEIC ACIDS
AU2013215159B2 (en) 2012-01-30 2018-07-12 Exact Sciences Corporation Modification of DNA on magnetic beads
EP2634254A1 (en) 2012-02-29 2013-09-04 QIAGEN GmbH Method for isolating nucleic acids from a food sample
US10041087B2 (en) 2012-06-19 2018-08-07 BASF Agro B.V. Plants having increased tolerance to herbicides
AR091489A1 (es) 2012-06-19 2015-02-11 Basf Se Plantas que tienen una mayor tolerancia a herbicidas inhibidores de la protoporfirinogeno oxidasa (ppo)
JP6382188B2 (ja) 2012-06-25 2018-08-29 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション 高勾配磁場を使用する粒子選別法
US9206469B2 (en) * 2012-07-18 2015-12-08 Zymo Research Corporation Nucleic acid purification
FR2994184B1 (fr) 2012-08-02 2017-12-08 Biomerieux Sa Procedes de fonctionalisation et reactifs utilises dans de tels procedes utilisant un anhydride aza-isatoique ou un de ses derives, molecules biologiques ainsi traitees et kits
WO2014029792A1 (en) 2012-08-21 2014-02-27 Qiagen Gmbh Virus particle stabilisation and method for isolating viral nucleic acids
WO2014029791A1 (en) 2012-08-21 2014-02-27 Qiagen Gmbh Method for isolating nucleic acids from a formaldehyde releaser stabilized sample
WO2014033326A1 (en) 2012-09-03 2014-03-06 Qiagen Gmbh Method for isolating rna including small rna with high yield
AU2013330344B2 (en) 2012-09-17 2018-07-05 W. R. Grace & Co.-Conn. Chromatography media and devices
GB201217405D0 (en) * 2012-09-28 2012-11-14 Fermentas Uab Protein removal agent
US10745686B2 (en) 2013-02-08 2020-08-18 Qiagen Gmbh Method for separating DNA by size
JP2016510872A (ja) 2013-03-01 2016-04-11 スピノミックス エス．ア．Ｓｐｉｎｏｍｉｘ Ｓ．Ａ． 磁気粒子をベースとする分離および分析方法
WO2014160233A1 (en) * 2013-03-13 2014-10-02 Abbott Molecular Inc. Systems and methods for isolating nucleic acids
US9670479B2 (en) 2013-03-15 2017-06-06 F Cubed, LLC Sample preparation device and methods of use
JP5802237B2 (ja) * 2013-04-18 2015-10-28 三洋化成工業株式会社 磁性粒子及びその製造方法
EP3033426A4 (en) 2013-08-12 2017-08-02 BASF Agro B.V. Plants having increased tolerance to herbicides
US10968462B2 (en) 2013-08-12 2021-04-06 BASF Agro B.V. Plants having increased tolerance to herbicides
DE202014002379U1 (de) 2014-03-15 2014-08-19 Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg DNA Stabilisierungssystem
WO2015150465A2 (en) 2014-04-03 2015-10-08 Basf Se Plants having increased tolerance to herbicides
JP6914189B2 (ja) 2014-05-02 2021-08-04 ダブリュー・アール・グレース・アンド・カンパニー−コーンＷ Ｒ Ｇｒａｃｅ ＆ Ｃｏ−Ｃｏｎｎ 官能化担体材料並びに官能化担体材料を作製及び使用する方法
WO2015199423A1 (ko) * 2014-06-24 2015-12-30 (주)바이오니아 자성 입자를 이용한 핵산 분리 방법
US10000750B2 (en) 2014-10-09 2018-06-19 Promega Corporation Method of isolating nucleic acid
US10319502B2 (en) 2014-10-23 2019-06-11 Corning Incorporated Polymer-encapsulated magnetic nanoparticles
JP6773402B2 (ja) * 2014-11-04 2020-10-21 三洋化成工業株式会社 磁性シリカ粒子を用いた対象物質の分離方法
EP3059312A1 (en) 2015-02-20 2016-08-24 QIAGEN GmbH Nucleic acid extraction method
US9422596B1 (en) 2015-04-27 2016-08-23 Norgen Biotek Corp. Methods and columns for nucleic acid purification
EP3303582A1 (en) 2015-06-01 2018-04-11 Qiagen GmbH Electrophoresis assisted method and device for purifying a charged target molecule from a sample
US10711265B2 (en) 2015-06-01 2020-07-14 Qiagen Gmbh Electrophoresis assisted method for purifying a target nucleic acid using a delayed elution approach
EP3302784B1 (en) 2015-06-05 2021-10-06 W.R. Grace & Co.-Conn. Adsorbent bioprocessing clarification agents and methods of making and using the same
US20180291365A1 (en) 2015-06-05 2018-10-11 Qiagen Gmbh Method for separating dna by size
EP3347490A1 (en) * 2015-09-11 2018-07-18 Corning Incorporated Compositions and methods for nucleic acid purification from blood samples
EP3913068B1 (en) 2015-10-12 2023-08-02 Advanced Cell Diagnostics, Inc. In situ detection of nucleotide variants in high noise samples, and compositions and methods related thereto
CA3001979A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Basf Se Plants having increased tolerance to herbicides
EP3868880A1 (en) 2016-04-29 2021-08-25 Basf Plant Science Company GmbH Improved methods for modification of target nucleic acids
TR201606310A2 (tr) 2016-05-12 2017-11-21 Akdeniz Ueniversitesi Genomik dna izolasyon yöntemi ve kiti.
CA3024770A1 (en) 2016-05-20 2017-11-23 BASF Agro B.V. Dual transit peptides for targeting polypeptides
BR112019001483A2 (pt) 2016-07-27 2019-09-10 Basf Agro Bv método para controlar a vegetação indesejada em um local de cultivo de plantas
US10077465B2 (en) * 2016-09-13 2018-09-18 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Navy Sorbents for extraction and stabilization of nucleic acids
US11185863B2 (en) 2016-09-30 2021-11-30 Koninklijke Philips N.V. System for applying a reagent to a sample
US10415080B2 (en) 2016-11-21 2019-09-17 Nanostring Technologies, Inc. Chemical compositions and methods of using same
UA128688C2 (uk) 2016-12-20 2024-10-02 Басф Агро Б.В. Рослина з підвищеною толерантністю до гербіцидів
EP3630971A1 (en) * 2017-05-22 2020-04-08 QIAGEN Healthcare Biotechnologies Systems Limited Improvements in the recovery of nucleic acids from solid supports
EP3688154A1 (en) 2017-09-27 2020-08-05 QIAGEN GmbH Method for isolating rna with high yield
SG11202011274YA (en) 2018-05-14 2020-12-30 Nanostring Technologies Inc Chemical compositions and methods of using same
JP7428657B2 (ja) * 2018-10-26 2024-02-06 テルモ株式会社 標的物質の分離方法および定量方法
EP3968029A4 (en) * 2019-05-08 2023-01-18 Hitachi High-Tech Corporation PRETREATMENT PROCEDURE OF AN AUTOMATIC ANALYZER
US11807909B1 (en) 2019-09-12 2023-11-07 Zymo Research Corporation Methods for species-level resolution of microorganisms
US20220396826A1 (en) * 2019-11-20 2022-12-15 Toray Industries, Inc. Nucleic acid separation method, detection method, nucleic acid purification column and method of producing same
WO2021246820A1 (ko) 2020-06-05 2021-12-09 주식회사 씨젠 호흡기 병원체 검출을 위한 검체수송 키트 및 이를 이용한 호흡기 병원체 검출방법
KR20220075978A (ko) 2020-11-30 2022-06-08 (주)바이오니아 중저 비유전율을 가진 화합물을 포함한 핵산 결합 완충액을 이용한 핵산 분리방법
EP4424242A1 (en) 2021-10-29 2024-09-04 Seegene, Inc. Sample collecting swab tool and method for detection of respiratory pathogen
WO2024126113A1 (en) 2022-12-12 2024-06-20 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Plants having increased tolerance to herbicides
WO2024124348A1 (en) * 2022-12-15 2024-06-20 Stemcell Technologies Canada Inc. Methods for nucleic acid extraction

Family Cites Families (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4233169A (en) * 1979-04-13 1980-11-11 Corning Glass Works Porous magnetic glass structure
US4297337A (en) * 1979-04-13 1981-10-27 Corning Glass Works Solid-phase immunoassays using magnetic glass
US4395271A (en) * 1979-04-13 1983-07-26 Corning Glass Works Method for making porous magnetic glass and crystal-containing structures
DE3211309A1 (de) 1982-03-26 1983-09-29 Metin Dipl.-Ing. 6100 Darmstadt Colpan Chromatographisches verfahren zur isolierung von makromolekuelen
US5482834A (en) 1982-05-17 1996-01-09 Hahnemann University Evaluation of nucleic acids in a biological sample hybridization in a solution of chaotrophic salt solubilized cells
US4695393A (en) * 1983-05-12 1987-09-22 Advanced Magnetics Inc. Magnetic particles for use in separations
US4672040A (en) 1983-05-12 1987-06-09 Advanced Magnetics, Inc. Magnetic particles for use in separations
US4554088A (en) * 1983-05-12 1985-11-19 Advanced Magnetics Inc. Magnetic particles for use in separations
US4683202A (en) * 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US5076950A (en) * 1985-12-20 1991-12-31 Syntex (U.S.A.) Inc. Magnetic composition for particle separation
US6027750A (en) * 1986-09-04 2000-02-22 Gautsch; James Systems and methods for the rapid isolation of nucleic acids
DE3639949A1 (de) 1986-11-22 1988-06-09 Diagen Inst Molekularbio Verfahren zur trennung von langkettigen nukleinsaeuren
US4767670A (en) 1987-01-21 1988-08-30 E. I. Du Pont De Nemours And Company Chromatographic supports for separation of oligonucleotides
ES2066851T3 (es) * 1988-05-24 1995-03-16 Anagen Uk Ltd Particulas atraibles magneticamente y metodo de preparacion.
US5512439A (en) * 1988-11-21 1996-04-30 Dynal As Oligonucleotide-linked magnetic particles and uses thereof
US5075430A (en) * 1988-12-12 1991-12-24 Bio-Rad Laboratories, Inc. Process for the purification of DNA on diatomaceous earth
US5234809A (en) 1989-03-23 1993-08-10 Akzo N.V. Process for isolating nucleic acid
US5523231A (en) 1990-02-13 1996-06-04 Amersham International Plc Method to isolate macromolecules using magnetically attractable beads which do not specifically bind the macromolecules
US5243037A (en) * 1990-09-21 1993-09-07 E. I. Du Pont De Nemours And Company Poly(fluoroalkyl) sugar reagents for surface modification of supports
WO1992011933A1 (en) 1991-01-04 1992-07-23 Perseptive Biosystems, Inc. Sulfonamide bonded hydrophilic coatings
US5155018A (en) * 1991-07-10 1992-10-13 Hahnemann University Process and kit for isolating and purifying RNA from biological sources
US5395498A (en) * 1991-11-06 1995-03-07 Gombinsky; Moshe Method for separating biological macromolecules and means therfor
US5610274A (en) * 1991-11-20 1997-03-11 Cpg, Inc. Production and use of magnetic porous inorganic materials
US5734020A (en) 1991-11-20 1998-03-31 Cpg, Inc. Production and use of magnetic porous inorganic materials
US5346994A (en) * 1992-01-28 1994-09-13 Piotr Chomczynski Shelf-stable product and process for isolating RNA, DNA and proteins
DE69324716T2 (de) 1992-02-13 1999-09-09 Becton Dickinson And Co. Celithydrat und Reinigung von DNS
JP3494646B2 (ja) * 1992-06-08 2004-02-09 ジェン−プローブ・インコーポレイテッド 単核細胞からの核酸の調製
US5316680A (en) 1992-10-21 1994-05-31 Cornell Research Foundation, Inc. Multimodal chromatographic separation media and process for using same
JP3615545B2 (ja) 1993-02-01 2005-02-02 キアゲン・エヌ・ブイ 第四級アンモニウム塩界面活性剤及びそのｒｎａの単離剤
DE4307262A1 (de) * 1993-03-02 1994-09-08 Christian Bergemann Magnetisches polymeres Siliciumdioxid
JP3696238B2 (ja) * 1993-08-30 2005-09-14 プロメガ・コーポレイシヨン 核酸精製用組成物及び方法
US5990301A (en) 1994-02-07 1999-11-23 Qiagen Gmbh Process for the separation and purification of nucleic acids from biological sources
US5747663A (en) 1994-02-07 1998-05-05 Qiagen Gmbh Process for the depletion or removal of endotoxins
DE4420732A1 (de) * 1994-06-15 1995-12-21 Boehringer Mannheim Gmbh Vorrichtung zur Behandlung von Nukleinsäuren aus einer Probe
JP3436760B2 (ja) * 1994-07-27 2003-08-18 ハーバート ピルグリム 超常磁性粒子
US5582988A (en) 1994-09-15 1996-12-10 Johnson & Johnson Clinical Diagnostics, Inc. Methods for capture and selective release of nucleic acids using weakly basic polymer and amplification of same
US5652348A (en) 1994-09-23 1997-07-29 Massey University Chromatographic resins and methods for using same
US5660984A (en) * 1994-12-09 1997-08-26 Davis; Thomas E. DNA isolating apparatus comprising a non-porous DNA binding, anion exchange resin and methods of use thereof
DE19520398B4 (de) * 1995-06-08 2009-04-16 Roche Diagnostics Gmbh Magnetisches Pigment
JP2965131B2 (ja) * 1995-07-07 1999-10-18 東洋紡績株式会社 核酸結合用磁性担体およびそれを用いる核酸単離方法
US5783686A (en) * 1995-09-15 1998-07-21 Beckman Instruments, Inc. Method for purifying nucleic acids from heterogenous mixtures
SE9600590D0 (sv) 1996-02-19 1996-02-19 Pharmacia Biotech Ab Sätt för kromatografisk separation av peptider och nukleinsyra samt ny högaffin jonbytesmatris
US5904848A (en) 1996-02-21 1999-05-18 Cpg, Inc. Controlled pore glass-synthetic resin membrane
CA2248981C (en) * 1996-03-15 2009-11-24 The Penn State Research Foundation Detection of extracellular tumor-associated nucleic acid in blood plasma or serum using nucleic acid amplification assays
JP3940935B2 (ja) * 1996-06-11 2007-07-04 東洋紡績株式会社 プラスミドｄｎａの抽出精製方法
JPH09327291A (ja) * 1996-06-11 1997-12-22 Toyobo Co Ltd Ｒｎａの抽出精製方法
ATE229371T1 (de) 1997-01-21 2002-12-15 Grace W R & Co Siliciumdioxidadsorbent auf magnetischem träger
US6027945A (en) 1997-01-21 2000-02-22 Promega Corporation Methods of isolating biological target materials using silica magnetic particles
JP4196227B2 (ja) 1997-05-20 2008-12-17 東洋紡績株式会社 核酸またはタンパク質抽出用シリカ粒子組成物
AU3377500A (en) * 1999-02-26 2000-09-14 Myriad Genetics, Inc. Method for extracting dna from dried specimens

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8697020B2 (en) 2008-02-14 2014-04-15 Bioneer Corporation Silica magnetic particles having a spherical form and a process for preparing the same
EP3107107A2 (en) 2015-05-28 2016-12-21 Bioneer Corporation Highly active silica magnetic nanoparticles for purifying biomaterial and preparation method thereof
JP2016221498A (ja) * 2015-05-28 2016-12-28 バイオニア コーポレイション 生体物質精製用高活性シリカ磁性ナノ粒子及びこれの製造方法
US10465184B2 (en) 2015-05-28 2019-11-05 Bioneer Corporation Highly active silica magnetic nanoparticles for purifying biomaterial and preparation method thereof
US10724031B2 (en) 2015-05-28 2020-07-28 Bioneer Corporation Highly active silica magnetic nanoparticles for purifying biomaterial and preparation method thereof
WO2018004309A1 (ko) 2016-06-30 2018-01-04 김성천 이중가닥 핵산 신호 프로브 및 이를 이용한 표적분자의 검출방법

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