JP2022130553A - 肺炎球菌多糖類-タンパク質コンジュゲートを含む組成物およびその使用方法 - Google Patents
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Abstract
Description
供する。各コンジュゲートは、担体タンパク質、好ましくはCRM197にコンジュゲー
トされた異なる血清型の肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae
)から調製された莢膜多糖類からなる。免疫原性組成物は、肺炎球菌疾患に対する広範な
適用範囲を提供する。
り、乳幼児の侵襲性細菌性疾患(肺炎、菌血症、髄膜炎および中耳炎など)の最も一般的
な原因である。肺炎球菌は、血清型特異性を付与する化学的に結合した多糖類でカプセル
化されている。肺炎球菌には90を超える血清型が知られており、莢膜は細菌の内面を補
体から保護するだけでなく、それ自体免疫原性が低いため、肺炎球菌の主要な病原性決定
基である。多糖類はT細胞非依存性抗原であり、ほとんどの場合、T細胞と相互作用する
ためにMHC分子で処理または提示することはできない。しかしながら、これらはB細胞
上の表面受容体の架橋を含む代替機構を通して免疫系を刺激することができる。
び高リスクの人々の肺炎球菌疾患を予防する際に有益であると証明されている。しかしな
がら、乳幼児は、非コンジュゲート肺炎球菌多糖類に十分に反応しない。当時乳幼児で侵
襲性肺炎球菌疾患を引き起こす7つの最も頻繁に分離された血清型(4、6B、9V、1
4、18C、19Fおよび23F)を含有する肺炎球菌コンジュゲートワクチンであるP
revnar(登録商標)が、2000年2月に米国で最初に認可された。米国でのPr
evnar(登録商標)の普遍的な使用後、Prevnar(登録商標)に存在する血清
型により、子供の侵襲性肺炎球菌疾患が大幅に減少した。Centers for Di
sease Control and Prevention,MMWR Morb M
ortal Wkly Rep 2005,54(36):893-7を参照されたい。
しかしながら、世界の一定の地域でのPrevnar(登録商標)による血清型の適用範
囲には制限があり、米国で一定の血清型が出現していることを示すいくつかの証拠がある
(例えば、19Aなど)。O’Brien et al.,2004,Am J Epi
demiol 159:634-44;Whitney et al.,2003,N
Engl J Med 348:1737-46;Kyaw et al.,2006,
N Engl J Med 354:1455-63;Hicks et al.,20
07,J Infect Dis 196:1346-54;Traore et al
.,2009,Clin Infect Dis 48:S181-S189を参照され
たい。
A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19Fおよび23Fを含む13価肺炎球
菌多糖類-タンパク質コンジュゲートワクチンを記載している。中国特許出願公開第10
1590224号明細書は、血清型1、2、4、5、6A、6B、7F、9N、9V、1
4、18C、19A、19Fおよび23Fを含む14価肺炎球菌多糖類-タンパク質コン
ジュゲートワクチンを記載している。
いる(米国特許出願公開第2011/0195086号明細書)が、一部の血清型での免
疫干渉(例えば、GSKのPCV-11の血清型3に対する防御が低い)およびPfiz
erのPCV-13(PREVNAR(登録商標)13)で血清型6Bに対する反応率が
低いことが観察されている。Prymula et al.,2006,Lancet
367:740-48およびKieninger et al.,Safety and
Immunologic Non-inferiority of 13-valen
t Pneumococcal Conjugate Vaccine Compare
d to 7-valent Pneumococcal Conjugate Vac
cine Given as a 4-Dose Series in Healthy
Infants and Toddlers,presented at the 4
8th Annual ICAAC/ISDA 46th Annual Meetin
g,Washington DC,October 25-28,2008を参照された
い。
発生率を低下させるのに有効であった。しかしながら、現在利用可能なワクチンに存在し
ない血清型を発現する肺炎球菌の有病率が増加してきている。したがって、肺炎球菌血清
型の異なるセットに対する防御を提供し、現在利用可能なワクチンには存在しない肺炎球
菌血清型に対する補完的防御を提供することができる追加の肺炎球菌ワクチン組成物が必
要とされている。
含む多価免疫原性組成物であって、ここで、コンジュゲートの各々は担体タンパク質にコ
ンジュゲートされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含み、ここ
で、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型は本明細書で定義される通りである
組成物を提供する。
a)15A、16F、23A、23B、24F、31および35B;
b)15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、10A、1
1A、12F、15C、17Fおよび20;および
c)3、7F、19A、22F、33F、15A、16F、23A、23B、24F、
31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20
からなる群から選択される血清型のセットを含む。
型は、
a)15A、16F、23A、23B、24F、31および35B;
b)15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、10A、1
1A、12F、15C、17Fおよび20A;および
c)3、7F、19A、22F、33F、15A、16F、23A、23B、24F、
31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20A
からなる群から選択される血清型のセットを含む。
型は、
a)15A、16F、23A、23B、24F、31および35B;
b)15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、10A、1
1A、12F、15C、17Fおよび20B;および
c)3、7F、19A、22F、33F、15A、16F、23A、23B、24F、
31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20B
からなる群から選択される血清型のセットを含む。
moniae)の血清型のセットは、血清型6C、血清型6A、または血清型6Aおよび
6Bをさらに含む。
ロトン性溶媒、例えば、ジメチルスルホキシド(DMSO)を含むコンジュゲーション反
応によって形成される。具体的な実施形態では、多糖類タンパク質コンジュゲートの各々
が、非プロトン性溶媒を含むコンジュゲーション反応によって形成される。本明細書に示
されるように、多糖類-タンパク質コンジュゲートの還元的アミノ化中の溶媒としてDM
SOを使用すると、水性条件下で調製された同じコンジュゲートと比較して、これらの血
清型の予想外に優れた安定性および免疫原性増強が得られる。
に投与するステップを含む方法も提供される。本発明の方法のいくつかの実施形態では、
患者が以前に多価肺炎球菌ワクチンで処置された。
の一部として使用され得る。したがって、本発明は、ヒト患者で防御免疫応答を誘導する
方法であって、任意の順序で、本発明の多価免疫原性組成物を患者に投与するステップを
含み、多価肺炎球菌ワクチンを患者に投与するステップをさらに含む方法を提供する。特
定の実施形態では、多価肺炎球菌ワクチンが、複数の肺炎球菌(S.pneumonia
e)多糖類タンパク質コンジュゲートよりなり、ここで、コンジュゲートの各々は、担体
タンパク質にコンジュゲートされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖
類を含む。他の実施形態では、多価肺炎球菌ワクチンが、非コンジュゲート莢膜多糖類よ
りなる。
eptococcus pneumoniae)多糖類-タンパク質コンジュゲートを調
製する方法であって、ここで、コンジュゲーション反応はシアノ水素化ホウ素を使用しな
い方法も提供される。
トを含む多価免疫原性組成物を提供し、ここで、コンジュゲートの各々は担体タンパク質
にコンジュゲートされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含み、
ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の選択血清型は他の選択血清型との交差
反応性を提供する。
って、ここで、コンジュゲートの各々は担体タンパク質にコンジュゲートされた肺炎球菌
(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含み、ここで、肺炎球菌(S.pneu
moniae)の血清型は本明細書で定義される通りである組成物を提供する。いくつか
の実施形態では、免疫原性組成物は、(a)15A、16F、23A、23B、24F、
31および35B;(b)15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8
、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20;および(c)3、7F、
19A、22F、33F、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8
、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20からなる群から選択される
肺炎球菌血清型のセットを含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、(a)1
5A、16F、23A、23B、24F、31および35B;(b)15A、16F、2
3A、23B、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、1
7Fおよび20B;および(c)3、7F、19A、22F、33F、15A、16F、
23A、23B、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、
17Fおよび20Bからなる群から選択される肺炎球菌血清型のセットを含む。他の実施
形態では、免疫原性組成物は、(a)15A、16F、23A、23B、24F、31お
よび35B;(b)15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N
、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20A;および(c)3、7F、19
A、22F、33F、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9
N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20Aからなる群から選択される肺
炎球菌血清型のセットを含む。さらなる実施形態では、免疫原性組成物は、(i)血清型
6A;(ii)血清型6Aおよび6B;または(iii)血清型6Cを含む。特定の実施
形態では、本発明は、複数の肺炎球菌の肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タ
ンパク質コンジュゲートを含み、ここで、コンジュゲートの各々は担体タンパク質にコン
ジュゲートされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含み、ここで
、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型は血清型3、6C、7F、8、9N、
10A、11A、12F、15A、15C、16F、17F、19A、20A、22F、
23A、23B、24F、31、33Fおよび35Bを含む。前記組成物は、ウサギにお
いて免疫原性であり、試験した全ての用量でワクチン型細菌株を殺傷する機能的抗体を産
生することが分かった(実施例43)。別の特定の実施形態では、本発明は、複数の肺炎
球菌の肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含み、
ここで、コンジュゲートの各々は担体タンパク質にコンジュゲートされた肺炎球菌(S.
pneumoniae)血清型の多糖類を含み、ここで、肺炎球菌(S.pneumon
iae)の血清型は、血清型3、7F、19A、22F、33F、8、9N、10A、1
1A、12F、15C、17F、20、6A、15A、15C、16F、23A、23B
、24F、31および35Bを含む。別の特定の実施形態では、本発明は、複数の肺炎球
菌の肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含み、こ
こで、コンジュゲートの各々は、担体タンパク質にコンジュゲートされた肺炎球菌(S.
pneumoniae)血清型の多糖類を含み、ここで、肺炎球菌(S.pneumon
iae)の血清型は、血清型3、7F、19A、22F、33F、8、9N、10A、1
1A、12F、15C、17F、20B、6A、15A、15C、16F、23A、23
B、24F、31および35Bを含む。別の特定の実施形態では、本発明は、複数の肺炎
球菌の肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含み、
ここで、コンジュゲートの各々は、担体タンパク質にコンジュゲートされた肺炎球菌(S
.pneumoniae)血清型の多糖類を含み、ここで、肺炎球菌(S.pneumo
niae)の血清型は、血清型3、7F、19A、22F、33F、8、9N、10A、
11A、12F、15C、17F、20A、6A、15A、15C、16F、23A、2
3B、24F、31および35Bを含む。
清型に対して患者を免疫するのに、および異なる補完的肺炎球菌ワクチン(類)を用いた
処置レジメンの一部として有用である。したがって、本発明は、ヒト患者で防御免疫応答
を誘導する方法であって、任意の順序で、本発明の多価免疫原性組成物を患者に投与する
ステップを含み、更に、多価肺炎球菌ワクチンを患者に投与するステップをさらに含む方
法を提供する。他の実施形態では、本発明の多価免疫原性組成物は、以前に異なる多価肺
炎球菌ワクチンで免疫された患者に投与される。
MSOのような非プロトン性溶媒中での還元的アミノ化を使用して調製される。さらなる
実施形態では、多価免疫原性組成物は、各々が非プロトン性溶媒中での還元的アミノ化を
使用して調製された肺炎球菌コンジュゲートを含む。各々が非プロトン性溶媒中での還元
的アミノ化を使用して調製された製剤原料を含むPCV1、PCV7、PCV14、PC
V16およびPCV21(以下で定義される)製剤は、炭水化物の解重合または化学分解
に対して安定であり、製剤中のタンパク質の凝集に対して安定であることが本明細書で示
されている(実施例40および実施例45参照)。DMSO溶媒を使用すると、担体タン
パク質の表面上のリジン残基の直接消費を通して、多糖類とタンパク質の共有結合性会合
が増強される。共有結合性会合の増加は、DMSO中でコンジュゲートされた多糖類抗原
を含む多価免疫原性組成物の多糖類タンパク質コンジュゲートの安定性を増加させること
に直接的な利益をもたらす。
本明細書および添付の特許請求の範囲を通して使用される場合、以下の略語が適用され
る:
APA リン酸アルミニウムアジュバント
APC 抗原提示細胞
CI 信頼区間
DMSO ジメチルスルホキシド
DS 多糖類-タンパク質製剤原料
GMC 幾何平均濃度
GMT 幾何平均抗体価
HPSEC 高速サイズ排除クロマトグラフィー
IM 筋肉内のまたは筋肉内に
LOS リポオリゴ糖
LPS リポ多糖
MALS 多角度光散乱
MBC 一価バルクコンジュゲート
MOPA 多重オプソニン食細胞アッセイ
MW 分子量
NMWCO 公称分子量カットオフ
NZWR ニュージーランドホワイト種ウサギ
OPA オプソニン食作用アッセイ
PCV 肺炎球菌コンジュゲートワクチン
PD1 投与1後
PD2 投与2後
PnPs 肺炎球菌多糖類
Ps 多糖類
PS-20 ポリソルベート-20
RI 屈折率
UV 紫外線
w/v 体積当たり重量。
に定義する。この文書の他で具体的に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技
術的および科学的用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解される意味
を有する。
n」および「the」は、文脈上別段の意味を有することが明らかな場合を除き、複数指
示対象を含む。
かまたは両方の可能性を示す。場合によっては、いずれかまたは両方の可能性を強調する
ために「および/または」を使用した。
ションで使用される場合、コンジュゲート反応のための溶媒としての水の使用を指す。水
は、有機溶媒が存在しないことを除いて緩衝剤および他の成分を含有してもよい。
的アミノ化のようなコンジュゲーションで使用される場合、コンジュゲーション反応のた
めの溶媒としての、非プロトン性溶媒、または非プロトン性溶媒の組み合わせ(または該
当する場合DMSO)の使用を指す。非プロトン性溶媒は、例えば最大1%、2%、5%
、10%または20%存在するいくらかの水を含んでもよい。
び賦形剤のような他の任意の成分の包含、または具体的に列挙されていない1以上の多糖
類-タンパク質コンジュゲートの添加を指す。「~からなる」という用語は、多価多糖類
-タンパク質コンジュゲート混合物で使用される場合、特定の肺炎球菌(S.pneum
oniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを有し、異なる血清型の他の肺炎球菌(S
.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを有さない混合物を指す。「
~から本質的になる(consists essentially of)」および「~
から本質的になる(consist essentially of)」または「~から
本質的になっている(consisting essentially of)」のよう
な変形は、列挙される要素または要素群の包含、および指定される投与レジメン、方法ま
たは組成物の基本的なまたは新規な特性を実質的に変化させない、列挙される要素と類似
のまたは異なる性質の他の要素の任意の包含を示す。
eumonia)の感染性(infectivitiy)の可能性または重症度を有意に
低下させる抗体を誘発するのに必要な用量を指す。
句は、ワクチンまたは免疫原性組成物が、米国食品医薬品局などの1以上の規制当局によ
って、限定されるものではないが、肺炎球菌疾患一般、肺炎球菌性肺炎、肺炎球菌性髄膜
炎、肺炎球菌性菌血症、肺炎球菌(S.pneumoniae)によって引き起こされる
侵襲性疾患、および肺炎球菌(S.pneumoniae)によって引き起こされる中耳
炎を含む、肺炎球菌(S.pneumoniae)のいずれかの血清型によって引き起こ
される1以上の疾患を予防するために承認されていることを意味する。
清型によって引き起こされる疾患または病的症状に対する能動免疫を提供する、2つ以上
の活性薬剤(例えば、肺炎球菌莢膜多糖類または肺炎球菌多糖類タンパク質コンジュゲー
ト)を含む医薬品である。
原糖要素(または抗原単位)を含むことを意味し、限定されるものではないが、「糖」、
「オリゴ糖」、「多糖」または「リポ多糖」、「リポオリゴ糖(LOS)」、「リポ多糖
(LPS)」、「グリコシレート」、「グリココンジュゲート(glycoconjug
ate)」などを含む。
肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の莢膜多糖類を含む、1つの肺炎球菌(S
.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む1価肺炎球菌コンジュ
ゲートワクチンであって、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型は3
である(実施例38および45に例示される)ワクチンを指す。特定の実施形態では、担
体タンパク質はCRM197である。
された肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の莢膜多糖類を含む、7つの肺炎球
菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む7価肺炎球菌コ
ンジュゲートワクチンであって、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清
型は3、8、9N、11A、19A、15Aおよび10Aである。具体的な実施形態では
、肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートの1以上の担
体タンパク質がCRM197である。さらなる実施形態では、肺炎球菌(S.pneum
oniae)多糖類タンパク質コンジュゲートの各々の担体タンパク質がCRM197で
ある。
された肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の莢膜多糖類を含む、8つの肺炎球
菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む8価肺炎球菌コ
ンジュゲートワクチンであって、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清
型は6C、15A、16F、23A、23B、24F、31および35Bである。具体的
な実施形態では、肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲー
トの1以上の担体タンパク質がCRM197である。さらなる実施形態では、肺炎球菌(
S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートの各々の担体タンパク質が
CRM197である。
トされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の莢膜多糖類を含む、14の肺炎
球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む14価肺炎球
菌コンジュゲートワクチンであって、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の
血清型は3、7F、8、9N、10A、11A、12F、15A、16F、17F、19
A、20、22Fおよび33Fである。具体的な実施形態では、肺炎球菌(S.pneu
moniae)多糖類タンパク質コンジュゲートの1以上の担体タンパク質がCRM19
7である。さらなる実施形態では、肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパ
ク質コンジュゲートの各々の担体タンパク質がCRM197である。
トされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の莢膜多糖類を含む、15の肺炎
球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む15価肺炎球
菌コンジュゲートワクチンであって、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の
血清型は1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、2
2F、23Fおよび33Fである。具体的な実施形態では、肺炎球菌(S.pneumo
niae)多糖類タンパク質コンジュゲートの1以上の担体タンパク質がCRM197で
ある。さらなる実施形態では、肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質
コンジュゲートの各々の担体タンパク質がCRM197である。
トされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の莢膜多糖類を含む、16の肺炎
球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む16価肺炎球
菌コンジュゲートワクチンであって、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の
血清型は6C、8、9N、10A、11A、12F、15A、16F、17F、20A、
23A、23B、24F、31および35Bならびに以下の血清群15の血清型:15B
、15Cまたは脱O-アセチル化15Bの少なくとも1つである。特定の実施形態では、
血清群15の血清型が、血清型15Cまたは脱O-アセチル化15Bである。本明細書に
示されるように(以下の実施例3参照)、脱O-アセチル化血清型15B肺炎球菌多糖類
は、血清型15C肺炎球菌多糖類と同等であり、同一のNMRスペクトルを有する。具体
的な実施形態では、肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲ
ートの1以上の担体タンパク質がCRM197である。さらなる実施形態では、肺炎球菌
(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートの各々の担体タンパク質
がCRM197である。
トされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の莢膜多糖類を含む、21の肺炎
球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む21価肺炎球
菌コンジュゲートワクチンであって、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の
血清型は3、6C、7F、8、9N、10A、11A、12F、15A、16F、17F
、19A、20A、22F、23A、23B、24F、31、33Fおよび35Bならび
に以下の血清群15の血清型:15B、15Cまたは脱O-アセチル化15Bの少なくと
も1つである。特定の実施形態では、血清群15の血清型が、血清型15Cまたは脱O-
アセチル化15Bである。具体的な実施形態では、肺炎球菌(S.pneumoniae
)多糖類タンパク質コンジュゲートの1以上の担体タンパク質がCRM197である。さ
らなる実施形態では、肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュ
ゲートの各々の担体タンパク質がCRM197である。
り2012年に血清群20内で同定された(Calix,J.J.et al.,J.B
iol.Chem.(2012)287(33):27885-27894)。Cali
x J.J.らによって議論されるように、従来の血清型分類法および市販の抗体は、こ
れら2つの血清型を以前は識別することができず、血清型20Aおよび20Bの血清型分
類の取り組みに関する情報は現在限られている。さらに、血清群20によって引き起こさ
れる特定された疾患内の20Aまたは20Bの疾患有病率は、十分には理解されていない
。したがって、当業者は、肺炎球菌(S.pneumoniae)ワクチン組成物にこれ
らの2つの血清型(20Aおよび/または20B)のいずれかまたは両方を含めることを
選択するかもしれない。一方の血清型20多糖類抗原を含む肺炎球菌(S.pneumo
niae)ワクチンが別の血清型に対して交差防御する可能性があることも考えられる(
例えば、肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型20Aの多糖類タンパク質コンジ
ュゲートを含み、血清型20Bの多糖類タンパク質コンジュゲートを含まないワクチンが
、肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型20Bによる感染に対して交差防御する
可能性がある)。したがって、本明細書で使用される「血清型20」は、血清型20Aお
よび/または血清型20Bの多糖類タンパク質コンジュゲートを含む組成物を指し得る。
クレオチド」および類似の用語は、非メチル化CpG部分を含む6~50ヌクレオチド長
のヌクレオチド分子を指す。例えば、Wang et al.,2003,Vaccin
e 21:4297を参照されたい。CpG含有オリゴヌクレオチドは、合成ヌクレオシ
ド間結合、修飾塩基および/または修飾糖を使用した修飾オリゴヌクレオチドを含む。
するのに役立つ物質である。免疫アジュバントは、単独で投与した場合に免疫原性が弱い
、例えば誘導する抗体価もしくは細胞媒介免疫応答がないもしくは弱い抗原に対する免疫
応答を増強する、抗原に対する抗体価を増加させる、および/または個体の免疫応答を達
成するのに有効な抗原の用量を低下させることができる。したがって、アジュバントは、
通常、免疫応答を増強するために与えられ、当業者に周知である。
oniae)に感染することができる哺乳動物を指す。好ましい実施形態では、患者がヒ
トである。患者を予防的または治療的に処置することができる。予防的処置は、肺炎球菌
感染症またはその効果、例えば肺炎球菌性肺炎の可能性または重症度を減少させるのに十
分な防御免疫を提供する。治療的処置は、肺炎球菌(S.pneumoniae)感染症
またはその臨床的効果の重症度を減少させるまたは再発を防止するために実施され得る。
本明細書に記載されるように、本発明の多価免疫原性組成物を使用して予防的処置を実施
することができる。本発明の組成物を、一般集団または肺炎球菌感染症のリスクが高い人
々、例えば高齢者、または高齢者と一緒に暮らしているもしくは高齢者を介護している人
々に投与することができる。
たは感染した人、以前に肺炎球菌(S.pneumoniae)に対してワクチン接種さ
れた人、ならびに感染する傾向がある人、または感染の可能性の減少が望ましい人、例え
ば免疫不全、高齢者、子供、成人または健康な個体が含まれる。
とも1ヶ月、2ヶ月、3ヶ月、6ヶ月、12ヶ月および/または24ヶ月間、有意な変化
が観察されない組成物である。さらに、「安定な」組成物は、25℃および37℃を含む
温度で、1ヶ月、3ヶ月、6ヶ月、12ヶ月および/または24ヶ月を含む期間にわたっ
て所望の特徴を示すものを含む。安定性の典型的な許容基準は次の通りである:以下の1
以上の変動が約5%、約10%、約15%または約20%以下である:(a)組成物中の
肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートの数平均分子量
(Mn)、(b)組成物中の肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コ
ンジュゲートの重量平均分子量(Mw)、(c)組成物中の総多糖類濃度、(d)特定の
励起波長、例えば280nmで固有のタンパク質蛍光分光法を使用して測定される組成物
の発光極大、および(e)特定の励起波長で固有のタンパク質蛍光分光法を使用して測定
される組成物の蛍光強度。「安定な」という用語はまた、多価免疫原性組成物内の特定の
肺炎球菌コンジュゲートを指すためにも使用され得る。このような使用において、この用
語は、特定の温度で経時的に所望の特性を示すコンジュゲートを指し、このような特性は
、言及される時間および温度にわたって約5%、約10%、約15%または約20%以下
しか変動しない。
本発明は、複数の肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲ
ートを含む多価免疫原性組成物であって、ここで、コンジュゲートの各々は担体タンパク
質にコンジュゲートされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含む
組成物を提供する。本発明の多価免疫原性組成物の異なる態様および実施形態を以下に記
載する。
された肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の莢膜多糖類を含む、複数の肺炎球
菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組
成物であって、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型は、
(1)15A、
(2)16F、
(3)(a)23Aおよび23B、(b)23Aおよび23F、(c)23Bおよび2
3F、(d)23A、(e)23B、および(f)23Fから選択される1以上の血清群
23の血清型、
(4)24F、
(5)31、および
(6)35B
を含む、からなる、またはから本質的になる組成物を提供する。
23Bである(すなわち、他の血清群23の血清型が存在しない)。実施形態E1のさら
なる下位実施形態では、1以上の血清群23の血清型が23Aおよび23Fである。実施
形態E1の別の下位実施形態では、1以上の血清群23の血清型が23Bおよび23Fで
ある。実施形態E1のさらに別の下位実施形態では、23Aが唯一の血清群23の血清型
である。実施形態E1のさらなる下位実施形態では、23Bが唯一の血清群23の血清型
である。実施形態E1のなおさらなる下位実施形態では、23Fが唯一の血清群23の血
清型である。
れた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の莢膜多糖類を含む、複数の肺炎球菌
(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成
物であって、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型が、実施形態E1
または実施形態E1のいずれかの下位実施形態に示される血清型を含み、血清型:(1)
6C、(2)6A、または(3)6Aおよび6Bをさらに含む組成物を提供する。
る下位実施形態では、組成物が血清型6Aおよび6Bを含み、そして、血清型6Cを含ま
ない。実施形態E2の別の下位実施形態では、組成物が血清型6Aを含む。
れた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の莢膜多糖類を含む、複数の肺炎球菌
(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成
物であって、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型が、実施形態E1
、または実施形態E1のいずれかの下位実施形態、または実施形態E2、または実施形態
E2のいずれかの下位実施形態に示される血清型を含み、そして、血清型:
(1)8、
(2)9N、
(3)11A
(4)12F、
(5)15Bまたは15C、
(6)17F、および
(7)20Aおよび/または20B
をさらに含む組成物を提供する。
れた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の莢膜多糖類を含む、複数の肺炎球菌
(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成
物であって、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型が、実施形態E1
~E3のまたはそのいずれかの下位実施形態のいずれかに示される血清型を含み、そして
、血清型:10Aまたは39をさらに含む組成物を提供する。
umoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であって、
ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型が、8、9N、10A、11A、
12F、15C、17F、20A、6C、15A、16F、23A、23B、24F、3
1および35Bを含む、からなる、またはから本質的になる組成物を提供する。
umoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であって、
ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型が、8、9N、39、11A、1
2F、15C、17F、20A、6C、15A、16F、23A、23B、24F、31
および35Bを含む、からなる、またはから本質的になる組成物を提供する。
umoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であって、
ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型が、8、9N、10A、11A、
12F、15B、17F、20A、6C、15A、16F、23A、23B、24F、3
1および35Bを含む、からなる、またはから本質的になる組成物を提供する。
umoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であって、
ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型が、8、9N、39、11A、1
2F、15B、17F、20A、6C、15A、16F、23A、23B、24F、31
および35Bを含む、からなる、またはから本質的になる組成物を提供する。
umoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であって、
ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型が、実施形態E1~E8(または
そのいずれかの下位実施形態)のいずれかに示される血清型を含み、そして、血清型:3
、7Fおよび19Aをさらに含む組成物を提供する。
neumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であっ
て、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型が、実施形態E1~E9(ま
たはそのいずれかの下位実施形態)のいずれかに示される血清型を含み、そして、血清型
22Fをさらに含む組成物を提供する。
neumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であっ
て、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型が、実施形態E1~E10(
またはそのいずれかの下位実施形態)のいずれかに示される血清型を含み、そして、血清
型33Fをさらに含む組成物を提供する。
neumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であっ
て、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型は、
(1)15A、16F、23A、23B、24F、31および35B、
(2)15A、16F、23F、23B、24F、31および35B、
(3)15A、16F、23A、23F、24F、31および35B、
(4)15A、16F、23A、24F、31および35B、
(5)15A、16F、23B、24F、31および35B、
(6)15A、16F、23F、24F、31および35B、
(7)6C、15A、16F、23A、23B、24F、31および35B、
(8)6C、15A、16F、23F、23B、24F、31および35B、
(9)6C、15A、16F、23A、23F、24F、31および35B、
(10)6C、15A、16F、23A、24F、31および35B、
(11)6C、15A、16F、23B、24F、31および35B、
(12)6C、15A、16F、23F、24F、31および35B、
(13)6A、15A、16F、23A、23B、24F、31および35B、
(14)6A、15A、16F、23F、23B、24F、31および35B、
(15)6A、15A、16F、23A、23F、24F、31および35B、
(16)6A、15A、16F、23A、24F、31および35B、
(17)6A、15A、16F、23B、24F、31および35B、
(18)6A、15A、16F、23F、24F、31および35B、
(19)6A、6B、15A、16F、23A、23B、24F、31および35B、
(20)6A、6B、15A、16F、23F、23B、24F、31および35B、
(21)6A、6B、15A、16F、23A、23F、24F、31および35B、
(22)6A、6B、15A、16F、23A、24F、31、および35B、
(23)6A、6B、15A、16F、23B、24F、31、および35B、および
(24)6A、6B、15A、16F、23F、24F、31、および35B
からなる群から選択される肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型のセットを含
む、からなる、またはから本質的になる組成物を提供する。
neumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であっ
て、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型は、
(1)8、9N、10A、11A、12F、15C、17F、20A、6C、15A、
16F、23A、23B、24F、31および35B、
(2)8、9N、39、11A、12F、15C、17F、20A、6C、15A、1
6F、23A、23B、24F、31および35B、
(3)8、9N、10A、11A、12F、15B、17F、20A、6C、15A、
16F、23A、23B、24F、31および35B、
(4)8、9N、39、11A、12F、15B、17F、20A、6C、15A、1
6F、23A、23B、24F、31および35B、
(5)8、9N、10A、11A、12F、15C、17F、20A、15A、16F
、23A、23B、24F、31および35B、
(6)8、9N、10A、11A、12F、15C、17F、20A、6A、6B、1
5A、16F、23A、23B、24F、31および35B、
(7)8、9N、10A、11A、12F、15C、17F、20A、6A、15A、
16F、23A、23B、24F、31および35B、
(8)8、9N、39、11A、12F、15C、17F、20A、15A、16F、
23A、23B、24F、31および35B、
(9)8、9N、39、11A、12F、15C、17F、20A、6A、6B、15
A、16F、23A、23B、24F、31および35B、
(10)8、9N、39、11A、12F、15C、17F、20A、6A、15A、
16F、23A、23B、24F、31および35B、
(11)8、9N、10A、11A、12F、15B、17F、20A、15A、16
F、23A、23B、24F、31および35B、
(12)8、9N、10A、11A、12F、15B、17F、20A、6A、6B、
15A、16F、23A、23B、24F、31および35B、
(13)8、9N、10A、11A、12F、15B、17F、20A、6A、15A
、16F、23A、23B、24F、31および35B、
(14)8、9N、39、11A、12F、15B、17F、20A、15A、16F
、23A、23B、24F、31および35B、
(15)8、9N、39、11A、12F、15B、17F、20A、6A、6B、1
5A、16F、23A、23B、24F、31および35B、
(16)8、9N、39、11A、12F、15B、17F、20A、6A、15A、
16F、23A、23B、24F、31および35B、
(17)8、9N、10A、11A、12F、15C、17F、20A、6C、15A
、16F、23F、24F、31および35B、
(18)8、9N、39、11A、12F、15C、17F、20A、6C、15A、
16F、23F、24F、31および35B、
(19)8、9N、10A、11A、12F、15B、17F、20A、6C、15A
、16F、23F、24F、31および35B、
(20)8、9N、39、11A、12F、15B、17F、20A、6C、15A、
16F、23F、24F、31および35B、
(21)8、9N、10A、11A、12F、15C、17F、20A、15A、16
F、23F、24F、31および35B、
(22)8、9N、10A、11A、12F、15C、17F、20A、6A、6B、
15A、16F、23F、24F、31および35B、
(23)8、9N、10A、11A、12F、15C、17F、20A、6A、15A
、16F、23F、24F、31および35B、
(24)8、9N、39、11A、12F、15C、17F、20A、15A、16F
、23F、24F、31および35B、
(25)8、9N、39、11A、12F、15C、17F、20A、6A、6B、1
5A、16F、23F、24F、31および35B、
(26)8、9N、39、11A、12F、15C、17F、20A、6A、15A、
16F、23F、24F、31および35B、
(27)8、9N、10A、11A、12F、15B、17F、20A、15A、16
F、23F、24F、31および35B、
(28)8、9N、10A、11A、12F、15B、17F、20A、6A、6B、
15A、16F、23F、24F、31および35B、
(29)8、9N、10A、11A、12F、15B、17F、20A、6A、15A
、16F、23F、24F、31および35B、
(30)8、9N、39、11A、12F、15B、17F、20A、15A、16F
、23F、24F、31および35B、
(31)8、9N、39、11A、12F、15B、17F、20A、6A、6B、1
5A、16F、23F、24F、31および35B、および
(32)8、9N、39、11A、12F、15B、17F、20A、6A、15A、
16F、23F、24F、31および35B
からなる群から選択される肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型のセットを含
む、からなる、またはから本質的になる組成物を提供する。
型の行(1)~(32)のセットをさらに含み、ここで、各セットの血清型20Aは、血
清型20または血清型20Bのいずれかで置換される。
(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成
物であって、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型は、実施形態E13
の行(17)~(32)に示される血清型のセットのいずれかから選択される肺炎球菌(
S.pneumoniae)血清型のセットを含む、からなる、またはから本質的になり
、血清型23Aおよび/または23Bをさらに含む組成物を提供する。
neumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であっ
て、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型は、
(1)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、10A、11A、12F、15
C、17F、20A、6C、15A、16F、23A、23B、24F、31および35
B、
(2)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、39、11A、12F、15C
、17F、20A、6C、15A、16F、23A、23B、24F、31および35B
、
(3)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、10A、11A、12F、15
B、17F、20A、6C、15A、16F、23A、23B、24F、31および35
B、
(4)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、39、11A、12F、15B
、17F、20A、6C、15A、16F、23A、23B、24F、31および35B
、
(5)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、10A、11A、12F、15
C、17F、20A、15A、16F、23A、23B、24F、31および35B、
(6)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、10A、11A、12F、15
C、17F、20A、6A、6B、15A、16F、23A、23B、24F、31およ
び35B、
(7)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、10A、11A、12F、15
C、17F、20A、6A、15A、16F、23A、23B、24F、31および35
B、
(8)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、39、11A、12F、15C
、17F、20A15A、16F、23A、23B、24F、31および35B、
(9)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、39、11A、12F、15C
、17F、20A、6A、6B、15A、16F、23A、23B、24F、31および
35B、
(10)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、39、11A、12F、15
C、17F、20A、6A、15A、16F、23A、23B、24F、31および35
B、
(11)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、10A、11A、12F、1
5B、17F、20A、15A、16F、23A、23B、24F、31および35B、
(12)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、10A、11A、12F、1
5B、17F、20A、6A、6B、15A、16F、23A、23B、24F、31お
よび35B、
(13)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、10A、11A、12F、1
5B、17F、20A、6A、15A、16F、23A、23B、24F、31および3
5B、
(14)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、39、11A、12F、15
B、17F、20A、15A、16F、23A、23B、24F、31および35B、
(15)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、39、11A、12F、15
B、17F、20A、6A、6B、15A、16F、23A、23B、24F、31およ
び35B、
(16)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、39、11A、12F、15
B、17F、20A、6A、15A、16F、23A、23B、24F、31および35
B、
(17)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、10A、11A、12F、1
5C、17F、20A、6C、15A、16F、23F、24F、31および35B、
(18)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、39、11A、12F、15
C、17F、20A、6C、15A、16F、23F、24F、31および35B、
(19)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、10A、11A、12F、1
5B、17F、20A、6C、15A、16F、23F、24F、31および35B、
(20)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、39、11A、12F、15
B、17F、20A、6C、15A、16F、23F、24F、31および35B、
(21)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、10A、11A、12F、1
5C、17F、20A、15A、16F、23F、24F、31および35B、
(22)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、10A、11A、12F、1
5C、17F、20A、6A、6B、15A、16F、23F、24F、31および35
B、
(23)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、10A、11A、12F、1
5C、17F、20A、6A、15A、16F、23F、24F、31および35B、
(24)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、39、11A、12F、15
C、17F、20A、15A、16F、23F、24F、31および35B、
(25)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、39、11A、12F、15
C、17F、20A、6A、6B、15A、16F、23F、24F、31および35B
、
(26)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、39、11A、12F、15
C、17F、20A、6A、15A、16F、23F、24F、31および35B、
(27)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、10A、11A、12F、1
5B、17F、20A、15A、16F、23F、24F、31および35B、
(28)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、10A、11A、12F、1
5B、17F、20A、6A、6B、15A、16F、23F、24F、31および35
B、
(29)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、10A、11A、12F、1
5B、17F、20A、6A、15A、16F、23F、24F、31および35B、
(30)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、39、11A、12F、15
B、17F、20A、15A、16F、23F、24F、31および35B、
(31)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、39、11A、12F、15
B、17F、20A、6A、6B、15A、16F、23F、24F、31および35B
、
(32)3、7F、19A、22F、33F、8、9N、39、11A、12F、15
B、17F、20A、6A、15A、16F、23F、24F、31および35B、
(33)3、7F、19A、22F、33F、6C、15A、16F、23A、23B
、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび2
0B、
(34)3、7F、19A、22F、33F、6C、15A、16F、23A、23B
、24B、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび2
0A、
(35)3、7F、19A、22F、33F、6C、15A、16F、23A、23B
、24B、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび2
0B、
(36)3、7F、19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B
、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび2
0B、
(37)3、7F、19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B
、24B、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび2
0A、
(38)3、7F、19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B
、24B、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび2
0B、
(39)3、7F、19A、22F、33F、6C、15A、16F、23A、23B
、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび2
0
(40)3、7F、19A、22F、33F、6C、15A、16F、23A、23B
、24B、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび2
0
(41)3、7F、19A、22F、33F、6C、15A、16F、23A、23B
、24B、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび2
0
(42)3、7F、19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B
、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび2
0
(43)3、7F、19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B
、24B、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび2
0、および
(44)3、7F、19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B
、24B、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび2
0
からなる群から選択される肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型のセットを含
む、からなる、またはから本質的になる組成物を提供する。
(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成
物であって、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型は、実施形態E15
の行(17)~(32)に示される血清型のセットのいずれかから選択される肺炎球菌(
S.pneumoniae)血清型のセットを含む、からなる、またはから本質的になり
、血清型23Aおよび/または23Bをさらに含む組成物を提供する。
トされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の莢膜多糖類を含む、複数の肺炎
球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性
組成物であって、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型は、
i.6C、15A、16F、23A、23B、24F、31および35B、
ii.6C、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、1
0A、11A、12F、15C、17Fおよび20A、および
iii.3、7F、19A、22F、33F、6C、15A、16F、23A、23B
、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび2
0A
からなる群から選択される血清型のセットを含む組成物を提供する。
eumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含まない。
iae)血清型6C、15A、16F、23A、23B、24F、31および35Bの莢
膜多糖類を含む複数の肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュ
ゲートを含む多価免疫原性組成物を提供する。実施形態E18の下位実施形態では、免疫
原性組成物は、さらなる肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジ
ュゲートを含まない。
iae)血清型6C、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9
N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20Aの莢膜多糖類を含む複数の肺
炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原
性組成物を提供する。実施形態E19の下位実施形態では、免疫原性組成物は、さらなる
肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含まない。
iae)血清型3、7F、19A、22F、33F、6C、15A、16F、23A、2
3B、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよ
び20Aの莢膜多糖類を含む複数の肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパ
ク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物を提供する。実施形態E20の下位実施形
態では、免疫原性組成物は、さらなる肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タン
パク質コンジュゲートを含まない。
、19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B、24F、31、3
5B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20Aの莢膜多糖類を
含む複数の肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含
む多価免疫原性組成物を提供する。この実施形態の下位実施形態(すなわち、3、7F、
19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B、24F、31、35
B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20A)では、免疫原性
組成物は、さらなる肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲ
ートを含まない。
、19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B、24F、31、3
5B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20の莢膜多糖類を含
む複数の肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む
多価免疫原性組成物を提供する。この実施形態の下位実施形態(すなわち、3、7F、1
9A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B
、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20)では、免疫原性組成
物は、さらなる肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲート
を含まない。
、19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B、24F、31、3
5B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20Bの莢膜多糖類を
含む複数の肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含
む多価免疫原性組成物を提供する。この実施形態の下位実施形態(すなわち、3、7F、
19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B、24F、31、35
B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20B)では、免疫原性
組成物は、さらなる肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲ
ートを含まない。
炎球菌多糖類は、血清型15C肺炎球菌多糖類と同等であり、同一のNMRスペクトルを
有する。本明細書に記載および開示される脱O-アセチル化血清型15B肺炎球菌多糖類
は、血清型15C肺炎球菌多糖類と同等であり、両者とも0~5%の範囲、または0~4
%の範囲、または0~3%の範囲、または0~2%の範囲、または0~1%の範囲、また
は0~0.5%の範囲、または0~0.1%の範囲の反復単位当たりのO-アセチル含有
量を有し得る、またはO-アセチル含有量がない。Spencer B.L.らの報告で
は、15CがわずかにO-アセチル化されていてもよい(Spencer,B.L.et
al.,Clin.Vac.Immuno.(2017)24(8):1-13)。し
たがって、本明細書の多価免疫原性組成物の実施形態のいずれでも、血清型15Cの代わ
りに脱O-アセチル化血清型15Bを使用することができる。脱O-アセチル化の方法は
、例えば、Rajam et al.,Clinical and Vaccine I
mmunology,2007,14(9):1223-1227に記載されているよう
に当技術分野で知られている。
性組成物のいずれかの一定の実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体をさらに
含む。
一実施形態では、本発明は、肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質
コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であって、ここで、コンジュゲートの各々は、
担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型6Cを含む肺炎球菌(S.pneumon
iae)血清型の多糖類を含み、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清
型6Cは、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型6Aおよび6Bに対する交差
防御を提供する組成物を提供する。
neumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であっ
て、ここで、コンジュゲートの各々が担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型6C
を含む肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含み、ここで、肺炎球菌
(S.pneumoniae)の血清型6Cは、肺炎球菌(S.pneumoniae)
の血清型6Aおよび6Bに対する交差防御を提供する組成物を提供する。
コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であって、ここで、コンジュゲートの各々が担
体タンパク質にコンジュゲートされた血清型19Aを含む肺炎球菌(S.pneumon
iae)血清型の多糖類を含み、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清
型19Aは、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型19Fに対する交差防御を
提供する組成物を提供する。
neumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であっ
て、ここで、コンジュゲートの各々は担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型19
Aを含む肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含み、ここで、肺炎球
菌(S.pneumoniae)の血清型19Aは、肺炎球菌(S.pneumonia
e)の血清型19Fに対する交差防御を提供する組成物を提供する。
コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であって、ここで、コンジュゲートの各々は担
体タンパク質にコンジュゲートされた血清型23Aおよび/または23Bを含む肺炎球菌
(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含み、ここで、肺炎球菌(S.pneu
moniae)の血清型23Aおよび/または23Bは、肺炎球菌(S.pneumon
iae)の血清型23Fに対する交差防御を提供する組成物を提供する。
neumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であっ
て、ここで、コンジュゲートの各々は担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型23
Aおよび/または23Bを含む肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を
含み、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型23Aおよび/または2
3Bは、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型23Fに対する交差防御を提供
する組成物を提供する。
コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であって、ここで、コンジュゲートの各々は担
体タンパク質にコンジュゲートされた血清型6Aを含む肺炎球菌(S.pneumoni
ae)血清型の多糖類を含み、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型
6Aは、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型6Bおよび/または6Cに対す
る交差防御を提供する組成物を提供する。
neumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であっ
て、ここで、コンジュゲートの各々は担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型6A
を含む肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含み、ここで、肺炎球菌
(S.pneumoniae)の血清型6Aは、肺炎球菌(S.pneumoniae)
の血清型6Bおよび/または6Cに対する交差防御を提供する組成物を提供する。
コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であって、ここで、コンジュゲートの各々は担
体タンパク質にコンジュゲートされた血清型20Aを含む肺炎球菌(S.pneumon
iae)血清型の多糖類を含み、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清
型20Aは、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型20Bに対する交差防御を
提供する組成物を提供する。
neumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であっ
て、ここで、コンジュゲートの各々は担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型20
Aを含む肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含み、ここで、肺炎球
菌(S.pneumoniae)の血清型20Aは、肺炎球菌(S.pneumonia
e)の血清型20Bに対する交差防御を提供する組成物を提供する。
コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であって、ここで、コンジュゲートの各々は担
体タンパク質にコンジュゲートされた血清型20Bを含む肺炎球菌(S.pneumon
iae)血清型の多糖類を含み、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清
型20Bは、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型20Aに対する交差防御を
提供する組成物を提供する。
neumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であっ
て、ここで、コンジュゲートの各々は担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型20
Bを含む肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含み、ここで、肺炎球
菌(S.pneumoniae)の血清型20Bは、肺炎球菌(S.pneumonia
e)の血清型20Aに対する交差防御を提供する組成物を提供する。
コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であって、ここで、コンジュゲートの各々は担
体タンパク質にコンジュゲートされた血清型15Cを含む肺炎球菌(S.pneumon
iae)血清型の多糖類を含み、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清
型15Cは、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型15Bに対する交差防御を
提供する組成物を提供する。
neumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であっ
て、ここで、コンジュゲートの各々は担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型15
Cを含む肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含み、ここで、肺炎球
菌(S.pneumoniae)の血清型15Cは、肺炎球菌(S.pneumonia
e)の血清型15Bに対する交差防御を提供する組成物を提供する。
本発明の特定の実施形態では、CRM197が担体タンパク質として使用される。CR
M197は、以下のアミノ酸配列:
GADDVVDSSK SFVMENFSSY HGTKPGYVDS IQKGIQ
KPKS GTQGNYDDDW KEFYSTDNKY DAAGYSVDNE NP
LSGKAGGV VKVTYPGLTK VLALKVDNAE TIKKELGLS
L TEPLMEQVGT EEFIKRFGDG ASRVVLSLPF AEGSS
SVEYI NNWEQAKALS VELEINFETR GKRGQDAMYE Y
MAQACAGNR VRRSVGSSLS CINLDWDVIR DKTKTKIE
SL KEHGPIKNKM SESPNKTVSE EKAKQYLEEF HQTA
LEHPEL SELKTVTGTN PVFAGANYAA WAVNVAQVID
SETADNLEKT TAALSILPGI GSVMGIADGA VHHNTEE
IVA QSIALSSLMV AQAIPLVGEL VDIGFAAYNF VES
IINLFQV VHNSYNRPAY SPGHKTQPFL HDGYAVSWNT
VEDSIIRTGF QGESGHDIKI TAENTPLPIA GVLLPT
IPGK LDVNKSKTHI SVNGRKIRMR CRAIDGDVTF CR
PKSPVYVG NGVHANLHVA FHRSSSEKIH SNEISSDSI
G VLGYQKTVDH TKVNSKLSLF FEIKS(配列番号1)
を有するジフテリア毒素の非毒性変異体(すなわち、トキソイド)である。
フテリア菌(Corynebacterium diphtheria)株C7(β19
7)の培養物から単離される。別の実施形態では、CRM197は、米国特許第5,61
4,382号明細書に記載される方法に従って組換え的に調製される。典型的には、CR
M197は、限外濾過、硫酸アンモニウム沈殿およびイオン交換クロマトグラフィーの組
み合わせを通して精製される。いくつかの実施形態では、CRM197は、Pfenex
Expression Technology(商標)(Pfenex Inc.、カ
リフォルニア州サンディエゴ)を使用して、蛍光菌(Pseudomonas fluo
rescens)で調製される。
ントB(DTFB)、TT(破傷風トキソイド)またはTTのフラグメントC、百日咳ト
キソイド、コレラトキソイド(例えば、国際公開第2004/083251号に記載され
る)、大腸菌(E.coli)LT、大腸菌(E.coli)ST、および緑膿菌(Ps
eudomonas aeruginosa)の外毒素Aなどの追加の不活化細菌毒素が
含まれる。細菌外膜タンパク質、例えば外膜複合体c(OMPC)、ポーリン、トランス
フェリン結合タンパク質、肺炎球菌表面タンパク質A(PspA;国際公開第02/09
1998号参照)、肺炎球菌アドヘシンタンパク質(PsaA)、A群もしくはB群連鎖
球菌のC5aペプチダーゼ、またはインフルエンザ菌(Haemophilus inf
luenzae)プロテインD、肺炎球菌ニューモリシン(Kuo et al.,19
95,Infect Immun 63;2706-13)(ある様式で解毒されたpl
y、例えばdPLY-GMBS(国際公開第04/081515号参照)またはdPLY
-ホルモールを含む)、PhtX(PhtA、PhtB、PhtD、PhtEおよびPh
tタンパク質の融合体、例えばPhtDE融合体、PhtBE融合体(国際公開第01/
98334号および国際公開第03/54007号参照)を含む)も使用することができ
る。オボアルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン(KLH)、ウシ血清アルブミ
ン(BSA)またはツベルクリンの精製タンパク質誘導体(PPD)、PorB(髄膜炎
菌(N.meningitidis)由来)、PD(インフルエンザ菌(Haemoph
ilus influenzae)タンパク質D;例えば欧州特許第0594 610号
明細書参照)またはその免疫学的に機能的な等価物、合成ペプチド(欧州特許第0378
881号明細書および欧州特許第0427347号明細書参照)、熱ショックタンパク質
(国際公開第93/17712号および国際公開第94/03208号参照)、百日咳タ
ンパク質(国際公開第98/58668号および欧州特許第0471177号明細書参照
)、サイトカイン、リンホカイン、成長因子またはホルモン(国際公開第91/0114
6号参照)、種々の病原体由来抗原の複数のヒトCD4+T細胞エピトープを含む人工タ
ンパク質(Falugi et al.,2001,Eur J Immunol 31
:3816-3824参照)、例えばN19タンパク質(Baraldoi et al
.,2004,Infect Immun 72:4884-7参照)、鉄取り込みタン
パク質(国際公開第01/72337号参照)、クロストリジウム・ディフィシル(C.
difficile)の毒素AまたはB(国際公開第00/61761号参照)、および
フラジェリン(Ben-Yedidia et al.,1998,Immunol L
ett 64:9参照)などの他のタンパク質も担体タンパク質として使用することがで
きる。
J Biol Chem 218:3838-3844);CRM9、CRM45、CR
M102、CRM103およびCRM107ならびにNicholls and You
le in Genetically Engineered Toxins,Ed:F
rankel,Maecel Dekker Inc,1992によって記載される他の
突然変異;Glu-148からAsp、GlnまたはSerおよび/またはAla 15
8からGlyへの欠失または突然変異ならびに米国特許第4,709,017号明細書ま
たは米国特許第4,950,740号明細書に開示される他の突然変異;少なくとも1以
上の残基Lys 516、Lys 526、Phe 530および/またはLys 53
4の突然変異ならびに米国特許第5,917,017号明細書または米国特許第6,45
5,673号明細書に開示される他の突然変異;または米国特許第5,843,711号
明細書に開示される断片のような他のDT突然変異体を、担体タンパク質として使用する
ことができる。このようなDT突然変異体を使用して、エピトープ領域を含むBフラグメ
ントを含むDTFB変異体を作製することもできる。
トキソイド、ジフテリアトキソイド、プロテインDおよびCRM197からなる群から選
択される。
パク質コンジュゲートの1以上に使用することができる。第2の担体タンパク質は、好ま
しくは、非毒性で、非反応原性(non-reactogenic)で、十分な量および
純度で入手可能なタンパク質である。第2の担体タンパク質も、抗原の免疫原性を増強す
るために肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類とコンジュゲートまたは連結され
る。担体タンパク質は、標準的なコンジュゲーション手順に適しているべきである。一実
施形態では、第1の担体タンパク質にコンジュゲートされていない各莢膜多糖類が、同じ
第2の担体タンパク質にコンジュゲートされている(例えば、各莢膜多糖類分子が単一の
担体タンパク質にコンジュゲートされている)。別の実施形態では、第1の担体タンパク
質にコンジュゲートされていない莢膜多糖類が、2つ以上の担体タンパク質にコンジュゲ
ートされている(各莢膜多糖類分子が単一の担体タンパク質にコンジュゲートされている
)。このような実施形態では、同じ血清型の各莢膜多糖類が、典型的には、同じ担体タン
パク質にコンジュゲートされている。
施形態では、多糖類血清型の1以上(該当する場合、2、3、4、5、6、7、8、9、
10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21を含む)が
CRM197にコンジュゲートされている。実施形態E1~E20およびそのいずれかの
下位実施形態のいずれかを含む本発明のさらなる実施形態では、多糖類血清型の各々がC
RM197にコンジュゲートされている。
方法を使用して達成することができる。例えば、個々の肺炎球菌コンジュゲートは、組成
物を調製するため生理学的に許容されるビヒクルを用いて製剤化することができる。この
ようなビヒクルの例としては、限定されるものではないが、水、緩衝生理食塩水、ポリオ
ール(例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール)お
よびデキストロース溶液を含む。
剤中で製剤化される。
ゲートされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の莢膜多糖類を含む複数の肺
炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートと、アジュバント
とを含み、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型は本明細書に記載され
る通りである。組成物の有効性を増強するための適切なアジュバントには、限定されるも
のではないが、以下が含まれる:
(1)アルミニウム塩(ミョウバン)、例えば水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウ
ム、硫酸アルミニウム等;
(2)水中油型エマルジョン配合物(他の特定の免疫賦活剤、例えばムラミルペプチド
(以下に定義される)または細菌細胞壁成分を含むまたは含まない)、例えば(a)Mo
del 110Yマイクロフリューダイザ(Microfluidics、Newton
、MA)などのマイクロフリューダイザを使用してサブミクロン粒子に製剤化される、5
%スクアレン、0.5%Tween 80、および0.5%Span 85(種々の量の
MTP-PEを含んでもよい)を含むMF59(国際特許出願公開番号、国際公開第90
/14837号)、(b)サブミクロンエマルジョンに微小流動化されるまたはボルテッ
クスされてより大きな粒径のエマルジョンを生成する、10%スクアレン、0.4%Tw
een 80、5%プルロニックブロックポリマーL121およびthr-MDPを含む
SAF、(c)2%スクアレン、0.2%Tween 80、ならびに米国特許第4,9
12,094号明細書に記載される3-O-脱アシル化モノリン脂質A(MPL(商標)
)、トレハロースジミコレート(TDM)および細胞壁骨格(CWS)、好ましくはMP
L+CWS(Detox(商標)からなる群の1以上の細菌細胞壁成分を含むRibi(
商標)アジュバントシステム(RAS)(Corixa、Hamilton、MT);お
よび(d)Montanide ISA;
(3)サポニンアジュバント、例えばQuil AまたはSTIMULON(商標)Q
S-21(Antigenics、Framingham、MA)(米国特許第5,05
7,540号明細書参照)を使用してもよく、またはそこから作製された粒子、例えばI
SCOM(コレステロール、サポニン、リン脂質および両親媒性タンパク質の組み合わせ
によって形成される免疫賦活複合体)およびIscomatrix(登録商標)(ISC
OMと本質的に同じ構造を有するが、タンパク質を含まない);
(4)細菌のリポ多糖、合成脂質A類似体、例えばCorixaから入手可能であり、
米国特許第6,113,918号明細書に記載されているアミノアルキルグルコサミンホ
スフェート化合物(AGP)またはその誘導体もしくは類似体;1つのこのようなAGP
は、水性形態または安定なエマルジョンとして配合される、529(以前はRC529と
して知られていた)としても知られている2-[(R)-3-テトラデカノイルオキシテ
トラデカノイルアミノ]エチル2-デオキシ-4-O-ホスホノ-3-O-[(R)-3
-テトラデカノイルオキシテトラデカノイル]-2-[(R)-3-テトラデカノイルオ
キシテトラデカノイルアミノ]-b-D-グルコピラノシド、
(5)合成ポリヌクレオチド、例えば(1以上の)CpGモチーフを含むオリゴヌクレ
オチド(米国特許第6,207,646号明細書);および
(6)サイトカイン、例えばインターロイキン(例えば、IL-1、IL-2、IL-
4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12、IL-15、IL-18等)、インタ
ーフェロン(例えば、γインターフェロン)、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(
GM-CSF)、マクロファージコロニー刺激因子(M-CSF)、腫瘍壊死因子(TN
F)、共刺激分子B7-1およびB7-2等;および
(7)補体、例えば補体成分C3dの三量体。
合物、例えば、SBAS2(3-脱アシル化モノホスホリル脂質AおよびQS21も含む
水中油型エマルジョン)である。
レオニル-D-イソグルタミン(thr-MDP)、N-アセチル-ノルムラミル-L-
アラニン-2-(1’-2’ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ヒドロキシホスホリ
ルオキシ)-エチルアミン(MTP-PE)等が含まれる。
ントは、ミョウバン沈殿ワクチンまたはミョウバン吸着ワクチンであり得る。アルミニウ
ム塩アジュバントは、当技術分野で周知であり、例えば、Harlow,E.およびD.
Lane(1988;Antibodies:A Laboratory Manual
Cold Spring Harbor Laboratory)およびNickla
s,W.(1992;Aluminum salts.Research in Imm
unology 143:489-493)に記載されている。アルミニウム塩には、限
定されるものではないが、水和アルミナ、アルミナ水和物、アルミナ三水和物(ATH)
、アルミニウム水和物、アルミニウム三水和物、alhydrogel、Superfo
s、Amphogel、水酸化アルミニウム(III)、ヒドロキシリン酸硫酸アルミニ
ウム(aluminum hydroxyphosphate sulfate)、リン
酸アルミニウムアジュバント(APA)、非晶質アルミナ、三水和アルミナ、またはトリ
ヒドロキシアルミニウムが含まれる。
ニウムとリン酸ナトリウムを1:1の体積比でブレンドして、ヒドロキシリン酸アルミニ
ウムを沈殿させることによって製造される。混合工程後、材料を高剪断ミキサーでサイズ
縮小して、単分散粒径分布を達成する。次いで、生成物を生理食塩水に対して透析濾過し
、蒸気滅菌する。
te Chemical and Scientific Co.、Westbury、
NYのAlhydrogelまたはSuperfos)を使用して、50~200μgタ
ンパク質/水酸化アルミニウムmgの比でタンパク質を吸着する。別の実施形態では、タ
ンパク質の吸着は、タンパク質のpI(等電点pH)および培地のpHに依存する。pI
が低いタンパク質は、pIが高いタンパク質よりも強く、正に帯電したアルミニウムイオ
ンに吸着する。アルミニウム塩は、2~3週間にわたってゆっくり放出される抗原のデポ
ーを確立し、マクロファージの非特異的活性化および補体活性化に関与し、および/また
は自然免疫機構を刺激し得る(おそらく尿酸の刺激による)。例えば、Lambrech
t et al.,2009,Curr Opin Immunol 21:23を参照
されたい。
希釈する6Bを除いて全ての血清型について標的4μg/mLに希釈する。いったん希釈
したら、バッチを濾過滅菌し、等体積のリン酸アルミニウムアジュバントを、250μg
/mLの最終アルミニウム濃度を目標として無菌的に添加する。アジュバント製剤化バッ
チを単回使用0.5mL/用量バイアルに充填する。
含有オリゴヌクレオチド、特に、CpG含有オリゴデオキシヌクレオチド(CpG OD
N)である。別の実施形態では、アジュバントがODN 1826であり、これはCol
ey Pharmaceutical Groupから入手することができる。
et al.,1999,J Immunol.162:6284-93;Verth
elyi,2006,Methods Mol Med.127:139-58;and
Yasuda et al.,2006,Crit Rev Ther Drug C
arrier Syst.23:89-110に記載されている。
はそのいずれかの下位実施形態のいずれかに記載される複数の肺炎球菌(S.pneum
oniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含み、そして、アジュバントを含まない
。
本発明の組成物は、単回投与バイアル、複数回投与バイアル、またはプレフィルドガラ
スもしくはプラスチックシリンジとして製剤化され得る。
態で、すなわち、固体または液体調製物として製剤化される。固体経口製剤には、錠剤、
カプセル剤、丸剤、顆粒剤、ペレットなどが含まれる。液体経口製剤には、液剤、懸濁剤
、分散剤、エマルジョン、油などが含まれる。
ルジョンまたは油である。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリ
コールおよび注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体には、
水、アルコール/水溶液、エマルジョンまたは懸濁液が含まれ、生理食塩水および緩衝媒
体が含まれる。油の例は、動物、植物または合成起源のもの、例えば、落花生油、大豆油
、オリーブ油、ヒマワリ油、魚肝油、別の海産油、または乳もしくは卵の脂質である。
医薬組成物は、投与される場合、本質的に等張であることが通常好ましい。よって、貯蔵
のために、医薬組成物は、好ましくは等張または高張であり得る。医薬組成物が貯蔵のた
めに高張である場合、これを投与前に希釈して等張液にすることができる。
得る。イオン性等張剤の例としては、限定されるものではないが、NaCl、1l2、K
ClおよびMgCl2を含む。非イオン性等張剤の例としては、限定されるものではない
が、マンニトール、ソルビトールおよびグリセロールを含む。
の目的のために、例えば、医薬組成物が注入または注射を目的とする場合、組成物が、溶
液を4~10、例えば5~9、例えば6~8の範囲のpHに緩衝することができる緩衝剤
を含むことが通常望ましい。
酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、炭酸塩、グリシン酸塩、ヒスチジン、グリシン、コハク酸
塩およびトリエタノールアミン緩衝剤からなる群から選択され得る。
SP適合性緩衝剤から選択され得る。例えば、緩衝剤は、酢酸、安息香酸、グルコン酸、
グリセリン酸および乳酸のような一塩基酸;アコニット酸、アジピン酸、アスコルビン酸
、炭酸、グルタミン酸、リンゴ酸、コハク酸および酒石酸などの二塩基酸、クエン酸およ
びリン酸のような多塩基酸;アンモニア、ジエタノールアミン、グリシン、トリエタノー
ルアミンおよびTRISのような塩基からなる群から選択され得る。
液、リンガーデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸加リンガー液
および不揮発性油が含まれる。静脈内ビヒクルには、流体および栄養補充液、電解質補充
液、例えばリンガーデキストロースに基づくものなどが含まれる。例には、界面活性剤お
よび他の薬学的に許容されるアジュバントの添加を伴うまたは伴わない水および油のよう
な無菌液体がある。一般に、水、生理食塩水、デキストロース水溶液および関連する糖溶
液、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールのようなグリコール、ポリソル
ベート80(PS-80)、ポリソルベート20(PS-20)、およびポロキサマー1
88(P188)が、特に注射可能な溶液にとって好ましい液体担体である。油の例は、
動物、植物または合成起源のもの、例えば、落花生油、大豆油、オリーブ油、ヒマワリ油
、魚肝油、別の海産油、または乳もしくは卵の脂質である。
のではないが、ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤(一般的にTween
sと呼ばれる)、特にPS-20およびPS-80;DOWFAX(商標)の商品名で販
売されているエチレンオキシド(EO)、プロピレンオキシド(PO)および/またはブ
チレンオキシド(BO)のコポリマー、例えば線状EO/POブロックコポリマー;反復
エトキシ(オキシ-1,2-エタンジイル)基の数が変化し得るオクトキシノール(オク
トキシノール-9(Triton X-100、またはt-オクチルフェノキシポリエト
キシエタノール)が特に重要である);(オクチルフェノキシ)ポリエトキシエタノール
(IGEPAL CA-630/NP-40);リン脂質、例えばホスファチジルコリン
(レシチン);ノニルフェノールエトキシレート、例えばTergitol(商標)NP
シリーズ;ラウリル、セチル、ステアリルおよびオレイルアルコールから誘導されたポリ
オキシエチレン脂肪エーテル(Brij界面活性剤として知られている)、例えばトリエ
チレングリコールモノラウリルエーテル(Brij 30);ならびにソルビタンエステ
ル(一般的にSPANとして知られている)、例えばソルビタントリオレエート(Spa
n 85)およびソルビタンモノラウレートが含まれる。エマルジョンに含めるのに好ま
しい界面活性剤は、PS-80である。
る。ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート(PS-80)のようなポリオキシエ
チレンソルビタンエステルとt-オクチルフェノキシポリエトキシエタノール(Trit
on X-100)のようなオクトキシノールの組み合わせも適している。別の有用な組
み合わせは、ラウレス9とポリオキシエチレンソルビタンエステルおよび/またはオクト
キシノールを含む。
-80など)0.01~1%、特に約0.1%;オクチル-またはノニルフェノキシポリ
オキシエタノール(Triton X-100、またはTritonシリーズの他の界面
活性剤など)0.001~0.1%、特に0.005~0.02%;ポリオキシエチレン
エーテル(ラウレス9など)0.1~20%、好ましくは0.1~10%、特に0.1~
1%または約0.5%である。
ュバント)を含み、pH5.8で、ヒスチジン(20mM)、生理食塩水(150mM)
、および0.2%PS-20または0.04%PS-80から本質的になる。PS-20
は0.005%~0.3%(w/v)の範囲であり得、シミュレーション製造中の凝集を
制御する製剤化および一次包装を使用した出荷では、PS-20またはPS-80が存在
する。別の実施形態では、PS-20が0.025%~0.8%(w/v)の範囲であり
得る。別の実施形態では、PS-20が0.05%~0.8%(w/v)の範囲であり得
る。別の実施形態では、PS-20が0.05%~0.2%(w/v)の範囲であり得る
。方法は、ヒスチジン、生理食塩水、およびPS-20またはPS-80中で最大24の
血清型のブレンドを組み合わせ、次いで、このブレンドした材料を、抗微生物保存剤の有
無にかかわらずAPAおよび生理食塩水と組み合わせることからなる。
多糖類タンパク質コンジュゲートを含み、ここで、コンジュゲートの各々が担体タンパク
質にコンジュゲートされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含み
、ここで、多糖類タンパク質コンジュゲート中の肺炎球菌(S.pneumoniae)
の血清型が本明細書に示される血清型のセットのいずれかを含み、そして、20~80m
MのヒスチジンpH5.8および150mMのNaClをさらに含む。いくつかの実施形
態では、多価免疫原性組成物が、0.2%~0.8%w/vのポリソルベート20をさら
に含む。
上の血清型を有する多価ワクチンの場合、PS-20およびP188が好ましい。コンジ
ュゲートを作製するために使用される化学の選択も、製剤の安定化で重要な役割を果たし
得る。特に、異なる多糖類タンパク質コンジュゲートを多価組成物に調製するために使用
されるコンジュゲーション反応が水性溶媒とDMSO溶媒の両方を含む場合、特定の界面
活性剤系が安定性に有意な差をもたらす。多糖類タンパク質コンジュゲートの安定性改善
は、ポリソルベート20単独またはポリオールと組み合わせたポロキサマー188で見ら
れた。
理解されておらず、先験的に予測することができない。考えられる安定化機構には、優先
的水和、優先的排除、バイオ医薬品と表面との間の空気/液体界面競合、表面張力、およ
び/または凝集の種として機能する疎水性パッチをマスクする界面活性剤とバイオ医薬品
の直接的会合が含まれる。
ン(ポリ(エチレンオキシド))の2つの親水性鎖が隣接する、ポリオキシプロピレン(
ポリ(プロピレンオキシド))の中央疎水性鎖で構成される非イオン性トリブロックコポ
リマーである。ポロキサマーは、Pluronic(登録商標)という商品名でも知られ
ている。ポリマーブロックの長さはカスタマイズすることができるため、わずかに異なる
特性を有する多くの異なるポロキサマーが存在する。総称「ポロキサマー」の場合、これ
らのコポリマーは一般に文字「P」(ポロキサマーについて)、引き続いて3桁の数字で
命名され、最初の2桁の数字×100はポリオキシプロピレンコアのおよその分子質量を
示し、最後の桁×10はポリオキシエチレン含有率を示す(例えば、P407=4,00
0g/molのポリオキシプロピレン分子質量および70%ポリオキシエチレン含有量の
ポロキサマー)。Pluronic(登録商標)の商品名では、これらのコポリマーの記
号化が、室温での物理的形態を定義する文字(L=液体、P=ペースト、F=フレーク(
固体))で始まり、2つまたは3つの数字が続く。数値表示の最初の数字(3桁の数字の
2桁)に300を掛けたものが、疎水性物質のおおよその分子量を示し;最後の桁×10
がポリオキシエチレン含有率を示す(例えば、L61=1,800g/molのポリオキ
シプロピレン分子質量および10%のポリオキシエチレン含有量のPluronic(登
録商標))。米国特許第3740421号明細書を参照されたい。
5,000Da、または7,500~10,000Daの範囲の分子量を有する。ポロキ
サマーは、ポロキサマー188またはポロキサマー407から選択することができる。製
剤中のポロキサマーの最終濃度は、0.001%~5%重量/体積、または0.025%
~1%重量/体積である。一定の態様では、ポリオールがプロピレングリコールであり、
最終濃度で1%~20%重量/体積である。一定の態様では、ポリオールがポリエチレン
グリコール400であり、最終濃度で1%~20%重量/体積である。
ないが、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコール、ポリエチレングリコール
モノメチルエーテルを含むポリエーテルジオールである。プロピレングリコールは、モノ
マーの分子量が約425~約2700の範囲で利用可能である。ポリエチレングリコール
およびポリエチレングリコールモノメチルエーテルはまた、約200~約35000に及
ぶ分子量の範囲で利用可能であり、限定されるものではないが、PEG200、PEG3
00、PEG400、PEG1000、PEG MME 550、PEG MME 60
0、PEG MME 2000、PEG MME 3350およびPEG MME 40
00を含む。好ましいポリエチレングリコールは、ポリエチレングリコール400である
。本発明の製剤中のポリオールの最終濃度は、1%~20%重量/体積または6%~20
%重量/体積であり得る。
タミン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、炭酸塩、グリシ
ン酸塩、ヒスチジン、グリシン、コハク酸塩、HEPES(4-(2-ヒドロキシエチル
)-1-ピペラジンエタンスルホン酸)、MOPS(3-(N-モルホリノ)プロパンス
ルホン酸)、MES(2-(N-モルホリノ)エタンスルホン酸)およびトリエタノール
アミン緩衝剤からなる群から選択され得る。緩衝剤は、溶液を4~10、5.2~7.5
または5.8~7.0の範囲のpHに緩衝することができる。本発明の一定の態様では、
緩衝剤が、リン酸塩、コハク酸塩、ヒスチジン、MES、MOPS、HEPES、酢酸塩
またはクエン酸塩からなる群から選択される。緩衝剤は、さらに、例えば、特に医薬製剤
が非経口使用のためのものである場合、非経口使用のためのUSP適合性緩衝剤から選択
され得る。緩衝剤の濃度は1mM~100mMの範囲である。緩衝剤の濃度は10mM~
80mMの範囲である。緩衝剤の濃度は1mM~50mMまたは5mM~50mMの範囲
である。一定の態様では、緩衝剤が、5mM~50mMの最終濃度のヒスチジン、または
1mM~10mMの最終濃度のコハク酸塩である。一定の態様では、ヒスチジンが20m
M±2mMの最終濃度である。
には、限定されるものではないが、CaCl2、KClおよびMgCl2ならびにこれら
の組み合わせが含まれる。限定されるものではないが、スクロース、トレハロース、マン
ニトール、ソルビトールおよびグリセロールを含む非イオン性等張剤が、塩の代わりに使
用され得る。適切な塩の範囲には、限定されるものではないが、25mM~500mMま
たは40mM~170mMが含まれる。一態様では、生理食塩水がNaClであり、20
mM~170mMの濃度で存在してもよい。
脈内注入、経皮パッチ、リポソームまたは他の投与様式を使用して投与することができる
。別の実施形態では、ポリマー材料が、例えば、ミクロスフェアまたはインプラントで使
用される。
する量として選択される。このような量は、肺炎球菌の血清型に応じて変化し得る。一般
に、多糖類系コンジュゲートの場合、各用量は0.08~100μgの各多糖類を含む。
本発明のいくつかの実施形態では、各多糖類コンジュゲートの用量は、0.08~10μ
gである。さらなる実施形態では、用量は、1~5μg、0.4~4μg、0.4~3μ
g、0.4~2μgまたは0.4~1μgである。いくつかの実施形態では、1以上の多
糖類コンジュゲートの用量は、100、150、200、250、300、400、50
0もしくは750ngまたは0.4、0.5、0.6、0.7、0.75、0.8、0.
9、1、1.5、2、3、4、5、6、7、7.5、8、9、10、11、12、13、
14、15、16、18、20、22、25、30、40、50、60、70、80、9
0もしくは100μgである。
同じ量で存在する。さらなる実施形態では、多糖類コンジュゲートが、組成物中に異なる
量で存在する(すなわち、少なくとも1つの多糖類コンジュゲートが、組成物の他の多糖
類コンジュゲートの1以上とは異なる量で存在する)。
試験によって確認することができる。例えば、別の実施形態では、ヒトワクチン接種につ
いての投与量が、動物試験からヒトデータへの外挿によって決定される。別の実施形態で
は、投与量が経験的に決定される。
0、100、125、150、200、300、500もしくは700μg、または1、
1.2、1.5、2、3、5mgまたはそれ以上である。さらに別の実施形態では、上記
のミョウバン塩の用量が、組換えタンパク質1μg当たりである。
を含み得る。含めるのに適した肺炎球菌(S.pneumoniae)タンパク質の例と
しては、国際特許出願公開番号、国際公開第02/083855号および国際公開第02
/053761号で同定されたものが挙げられる。
によって、例えば、非経口、経粘膜、経皮、筋肉内、静脈内、皮内、鼻腔内、皮下、腹腔
内投与され、それに応じて製剤化される。一実施形態では、本発明の組成物は、液体調製
物の表皮注射、筋肉内注射、静脈内、動脈内、皮下注射、または呼吸器内粘膜注射を介し
て投与される。注射用の液体製剤には、溶液などが含まれる。
肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae)の莢膜多糖類は、当
業者に知られている標準的な技術によって調製することができる。例えば、多糖類は細菌
から単離することができ、既知の方法によって(例えば、欧州特許第497524号明細
書および欧州特許第497525号明細書参照)、好ましくはホモジナイザーを使用して
達成される微小流動化(microfluidisation)または化学的加水分解に
よってある程度の大きさにすることができる。一実施形態では、各肺炎球菌多糖類血清型
は、大豆系培地で増殖される。次いで、遠心分離、沈殿および限外濾過を含む標準的なス
テップを通して、個々の多糖類が精製される。例えば、米国特許出願公開第2008/0
286838号明細書および米国特許第5,847,112号明細書を参照されたい。多
糖類試料の粘度を低下させるため、および/または機械的もしくは化学的サイジングのよ
うな技術を使用してコンジュゲートされた生成物の濾過性を改善するために、多糖類をサ
イジングすることができる。化学的加水分解は、酢酸を使用して実施され得る。機械的サ
イジングは、高圧均質化剪断を使用して実施され得る。
ることができる。精製された多糖類を、リンカーに接続することができる。いったん活性
化またはリンカーに接続されると、各莢膜多糖類は担体タンパク質に個別にコンジュゲー
トされてグリココンジュゲートを形成する。多糖類コンジュゲートは、既知のカップリン
グ技術によって調製され得る。
類-リンカー中間体を形成することができる。したがって、リンカーは、少なくとも1つ
の末端がエステル基であるリンカーとなる。他方の末端は、多糖類と反応して多糖類-リ
ンカー中間体を形成することができるように選択される。
る。この場合、リンカーは、典型的には両末端にエステル基を有する。これにより、エス
テル基の1つを、求核アシル置換により多糖類中の一級アミン基と反応させることによっ
て、カップリングを行うことができる。反応は、多糖類がアミド結合を介してリンカーに
カップリングしている多糖類-リンカー中間体をもたらす。
担体分子の一級アミン基と反応するための第2のエステル基を提供する二官能性リンカー
である。典型的なリンカーは、アジピン酸N-ヒドロキシスクシンイミドジエステル(S
IDEA)である。
導体化するために使用される追加のリンカーを用いて行うこともできる。
する。このカップリングは2つのステップ:(a1)カルボニル基を追加のリンカーと反
応させるステップ;および(a2)追加リンカーの遊離末端をリンカーと反応させるステ
ップを含む。これらの実施形態では、追加のリンカーが、典型的には両末端に一級アミン
基を有し、それにより、還元的アミノ化によって一級アミン基の1つを多糖類のカルボニ
ル基と反応させることによりステップ(a1)を行うことができる。多糖類のカルボニル
基と反応性の一級アミン基が使用される。ヒドラジドまたはヒドロキシルアミノ基が適し
ている。典型的には追加のリンカーの両末端に同じ一級アミン基が存在する。反応は、多
糖類がC-N結合を介して追加のリンカーにカップリングしている多糖類-追加のリンカ
ー中間体をもたらす。
プリングすることができる。このカップリングは2つのステップ:(a1)基を追加のリ
ンカーと反応させるステップ;および(a2)追加リンカーの遊離末端をリンカーと反応
させるステップを含む。この場合、追加のリンカーが、典型的には両末端に一級アミン基
を有し、それにより、EDAC活性化によって一級アミン基の1つを多糖類のカルボキシ
ル基と反応させることによりステップ(a1)を行うことができる。多糖類のEDAC活
性化カルボキシル基と反応性の一級アミン基が使用される。ヒドラジド基が適している。
典型的には追加のリンカーの両末端に同じ一級アミン基が存在する。反応は、多糖類がア
ミド結合を介して追加のリンカーにカップリングしている多糖類-追加のリンカー中間体
をもたらす。
パク質とのコンジュゲーションが、米国特許第4,365,170号明細書、同第4,6
73,574号明細書および同第4,902,506号明細書、米国特許出願公開第20
06/0228380号明細書、同第2007/184072号明細書、同第2007/
0231340号明細書および同第2007/0184071号明細書、ならびに国際公
開第2006/110381号、国際公開第2008/079653号および国際公開第
2008/143709号に記載される手段によって達成され得る。化学は、過ヨウ素酸
塩(過ヨウ素酸ナトリウム、過ヨウ素酸カリウムまたは過ヨウ素酸を含む)のような、末
端ヒドロキシル基をアルデヒドに酸化する任意の酸化剤との反応による肺炎球菌多糖類の
活性化を含み得る。この反応により、炭水化物の隣接ヒドロキシル基がランダムに酸化的
開裂し、反応性アルデヒド基が形成される。
た還元的アミノ化による。例えば、コンジュゲーションは、活性化多糖類と担体タンパク
質の混合物を、ニッケルの存在下でシアノ水素化ホウ素ナトリウムのような還元剤と反応
させることによって行うことができる。コンジュゲーション反応は、水溶液下またはDM
SOの存在下で行うことができる。例えば、米国特許出願公開第2015/023127
0号明細書、米国特許出願公開第2011/0195086号明細書および欧州特許第0
471 177号明細書を参照されたい。次いで、水素化ホウ素ナトリウムなどの強力な
還元剤を添加して、未反応アルデヒドをキャッピングする。
多糖類と担体タンパク質との間に形成されたイミン(シッフ塩基)の還元による安定なア
ミンコンジュゲート結合の形成という2つのステップを含む。酸化の前に、多糖類のサイ
ズを減少させてもよい。機械的方法(例えば、均質化)または化学的加水分解を使用する
ことができる。化学的加水分解は、酢酸を使用して実施され得る。酸化ステップは、過ヨ
ウ素酸塩との反応を含み得る。本発明の目的のために、「過ヨウ素酸塩」という用語は、
過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む;この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩(IO4)
とオルト過ヨウ素酸塩(IO6)の両方を含み、種々の過ヨウ素酸塩(例えば、過ヨウ素
酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム)を含む。一実施形態では、莢膜多糖類が、メタ
過ヨウ素酸塩の存在下で、好ましくは過ヨウ素酸ナトリウム(NaIO4)の存在下で酸
化される。別の実施形態では、莢膜多糖類が、オルト過ヨウ素酸塩の存在下で、好ましく
は過ヨウ素酸の存在下で酸化される。
ピペリジン-N-オキシまたはピロリジン-N-オキシ化合物のような安定なニトロキシ
ルまたはニトロキシドラジカル化合物である(国際公開第2014/097099号に記
載される)。前記反応では、実際の酸化剤は、触媒サイクルにおけるN-オキソアンモニ
ウム塩である。一態様では、前記安定なニトロキシルまたはニトロキシドラジカル化合物
は、ピペリジン-N-オキシまたはピロリジン-N-オキシ化合物である。一態様では、
前記安定なニトロキシルまたはニトロキシドラジカル化合物は、TEMPO(2,2,6
,6-テトラメチル-1-ピペリジニルオキシ)またはPROXYL(2,2,5,5-
テトラメチル-1-ピロリジニルオキシ)部分を有する。一態様では、前記安定なニトロ
キシルラジカル化合物は、TEMPOまたはその誘導体である。一態様では、前記酸化剤
は、N-ハロ部分を有する分子である。一態様では、前記酸化剤は、N-クロロスクシン
イミド、N-ブロモスクシンイミド、N-ヨードスクシンイミド、ジクロロイソシアヌル
酸、1,3,5-トリクロロ-1,3,5-トリアジナン-2,4,6-トリオン、ジブ
ロモイソシアヌル酸、1,3,5-トリブロモ-1,3,5-トリアジナン-2,4,6
-トリオン、ジヨードイソシアヌル酸および1,3,5-トリヨード-1,3,5-トリ
アジナン-2,4,6-トリオンからなる群から選択される。好ましくは、前記酸化剤は
N-クロロスクシンイミドである。
(TEMPO)フリーラジカルおよび共酸化剤としてのN-クロロスクシンイミド(NC
S)である(国際公開第2014/097099号に記載される)。したがって、一態様
では、肺炎球菌(S.pneumoniae)のグリココンジュゲートは、a)水性溶媒
中で、糖を2,2,6,6-テトラメチル-1-ピペリジニルオキシ(TEMPO)およ
びN-クロロスクシンイミド(NCS)と反応させて、活性化糖を得るステップと;b)
活性化糖を、1以上のアミン基を含む担体タンパク質と反応させるステップとを含む方法
によって得られる(前記方法は、その後「TEMPO/NCS還元的アミノ化」と呼ばれ
る)。
、1-、2-アミノアルコール、アミノ酸、グルタチオン、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチ
オン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸(グ
リセロール、エチレングリコール、プロパン-1,2-ジオール、ブタン-1,2-ジオ
ールまたはブタン-2,3-ジオール、アスコルビン酸など)から選択され得る。
用する血清型8肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae)多糖類
-タンパク質コンジュゲートを調製する方法であって、ここで、コンジュゲーション反応
がシアノ水素化ホウ素を使用しない方法を提供する。さらなる実施形態では、コンジュゲ
ーション反応は、シッフ塩基還元または還元的アミノ化である。さらなる実施形態では、
タンパク質が破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイドまたはCRM197である。さら
に別の実施形態では、タンパク質がCRM197である。さらなる実施形態では、コンジ
ュゲーション反応は、還元的アミノ化である。さらなる実施形態では、還元的アミノ化は
、ジメチルスルホキシド(DMSO)中で実施される。
00kDaの分子量を有する。分子量は、サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)と多
角度光散乱検出器(MALS)および屈折率検出器(RI)を組み合わせて計算すること
ができる。一部の実施形態では、多糖類は、50kDa~300kDaの分子量を有する
。いくつかの実施形態では、多糖類は、50kDa~1,000kDaの分子量を有する
。追加の実施形態では、多糖類は、70kDa~900kDaの分子量を有する。他の実
施形態では、多糖類は、100kDa~800kDaの分子量を有する。他の実施形態で
は、多糖類は、200kDa~600kDaの分子量を有する。さらなる実施形態では、
多糖類は、100kDa~1,000kDa;100kDa~900kDa;100kD
a~800kDa;100kDa~700kDa;100kDa~600kDa;100
kDa~500kDa;100kDa~400kDa;100kDa~300kDa;1
50kDa~1,000kDa;150kDa~900kDa;150kDa~800k
Da;150kDa~700kDa;150kDa~600kDa;150kDa~50
0kDa;150kDa~400kDa;150kDa~300kDa;200kDa~
1,000kDa;200kDa~900kDa;200kDa~800kDa;200
kDa~700kDa;200kDa~600kDa;200kDa~500kDa;2
00kDa~400kDa;200kDa~300;250kDa~1,000kDa;
250kDa~900kDa;250kDa~800kDa;250kDa~700kD
a;250kDa~600kDa;250kDa~500kDa;250kDa~400
kDa;250kDa~350kDa;300kDa~1,000kDa;300kDa
~900kDa;300kDa~800kDa;300kDa~700kDa;300k
Da~600kDa;300kDa~500kDa;300kDa~400kDa;40
0kDa~1,000kDa;400kDa~900kDa;400kDa~800kD
a;400kDa~700kDa;400kDa~600kDa;500kDa~600
kDaの分子量を有する。
タンパク質との間のイミン(シッフ塩基)結合を還元して、安定なコンジュゲート結合を
形成すること(いわゆる還元的アミノ化)である。適切な還元剤には、シアノ水素化ホウ
素(シアノ水素化ホウ素ナトリウムまたは水素化ホウ素ナトリウムなど)が含まれる。一
実施形態では、還元剤がシアノ水素化ホウ素ナトリウムである。
溶媒の混合物)中で行われる。一実施形態では、還元反応が、DMSOまたはDMF(ジ
メチルホルムアミド)溶媒中で行われる。凍結乾燥されている場合、DMSOまたはDM
F溶媒を使用して、活性化多糖類および担体タンパク質を再構成してもよい。一実施形態
では、非プロトン性溶媒はDMSOである。
、これを適切なキャッピング剤を使用してキャッピングすることができる。一実施形態で
は、このキャッピング剤が、水素化ホウ素ナトリウム(NaBH4)である。適切な代替
物には、ブレンステッド酸またはルイス酸の存在下でのナトリウムトリアセトキシボロヒ
ドリドまたは水素化ホウ素ナトリウムもしくは亜鉛、アミンボラン、例えばピリジンボラ
ン、2-ピコリンボラン、2,6-ジボラン-メタノール、ジメチルアミン-ボラン、t
-BuMe’PrN-BH3、ベンジルアミン-BH3または5-エチル-2-メチルピ
リジンボラン(PEMB)または水素化ホウ素交換樹脂が含まれる。コンジュゲーション
(還元反応および場合によりキャッピング)後、グリココンジュゲートを、当業者に知ら
れている種々の技術によって精製(多糖類-タンパク質コンジュゲートの量に関して濃縮
)してもよい。これらの技術には、透析、濃縮/ダイアフィルトレーション操作、タンジ
ェント流濾過、沈殿/溶出、カラムクロマトグラフィー(イオン交換クロマトグラフィー
、マルチモーダルイオン交換クロマトグラフィー、DEAEまたは疎水性相互作用クロマ
トグラフィー)、およびデプス濾過が含まれる。一実施形態では、グリココンジュゲート
を、ダイアフィルトレーションまたはイオン交換クロマトグラフィーまたはサイズ排除ク
ロマトグラフィーによって精製する。
一般的に多価肺炎球菌コンジュゲートワクチンに使用される。よって、全ての血清型が非
プロトン性溶媒中で調製されるわけではない多価組成物の一定の実施形態では、残りの血
清型の還元反応が、水性溶媒(例えば、PBS(リン酸緩衝生理食塩水)、MES(2-
(N-モルホリノ)エタンスルホン酸)、HEPES(4-(2-ヒドロキシエチル)-
1-ピペラジンエタンスルホン酸)、ビス-トリス、ADA(N-(2-アセトアミド)
イミノ二酢酸)、PIPES(ピペラジン-N,N’-ビス(2-エタンスルホン酸))
、MOPSO(3-モルホリノ-2-ヒドロキシプロパンスルホン酸)、BES(N,N
-ビス(2-ヒドロキシエチル)-2-アミノエタンスルホン酸)、MOPS(3-(N
-モルホリノ)プロパンスルホン酸)、DIPSO(3-ビス(2-ヒドロキシエチル)
アミノ-2-ヒドロキシプロパン-1-スルホン酸)、MOBS(4-(N-モルホリノ
)ブタンスルホン酸)、HEPPSO(N-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-N-
(2-ヒドロキシプロパンスルホン酸))、POPSO(ピペラジン-1,4-ビス(2
-ヒドロキシ-3-プロパンスルホン酸))、TEA(トリエタノールアミン)、EPP
S(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-プロパンスルホン酸)、pH6.0
~8.5、7.0~8.0または7.0~7.5のBicineから選択される)中で行
われる。
.pneumonia)莢膜多糖類-タンパク質コンジュゲートには、限定されるもので
はないが、血清型:3、6A、6B、6C、7F、8、9N、10A、11A、12F、
15A、15B、15C、16F、17F、19A、20A、22F、23A、23B、
23F、24F、31、33F、35Bおよび39が含まれる。非プロトン性溶媒中での
還元的アミノ化を使用して調製することができる肺炎球菌(S.pneumonia)莢
膜多糖類-タンパク質コンジュゲートには、限定されるものではないが、血清型:3、6
A、6B、6C、7F、8、9N、10A、11A、12F、15A、15B、15C、
16F、17F、19A、20、22F、23A、23B、23F、24F、31、33
F、35Bおよび39が含まれる。非プロトン性溶媒中での還元的アミノ化を使用して調
製することができる肺炎球菌(S.pneumonia)莢膜多糖類-タンパク質コンジ
ュゲートには、限定されるものではないが、血清型:3、6A、6B、6C、7F、8、
9N、10A、11A、12F、15A、15B、15C、16F、17F、19A、2
0B、22F、23A、23B、23F、24F、31、33F、35Bおよび39が含
まれる。多糖類は、オリゴ糖の形態で使用することができる。これらは、(例えば、加水
分解による)精製多糖類の断片化によって都合よく形成され、通常、引き続いて所望のサ
イズの断片が精製される。
、12F、15A、15B、15C、16F、17F、19A、20A、22F、23A
、23B、23F、24F、31、33F、35Bおよび39の1以上の肺炎球菌多糖類
-タンパク質コンジュゲートは、非プロトン性溶媒中での還元的アミノ化を使用して調製
される。一定の実施形態では、血清型3、6A、6B、6C、7F、8、9N、10A、
11A、12F、15A、15B、15C、16F、17F、19A、20、22F、2
3A、23B、23F、24F、31、33F、35Bおよび39の1以上の肺炎球菌多
糖類-タンパク質コンジュゲートは、非プロトン性溶媒中での還元的アミノ化を使用して
調製される。一定の実施形態では、血清型3、6A、6B、6C、7F、8、9N、10
A、11A、12F、15A、15B、15C、16F、17F、19A、20B、22
F、23A、23B、23F、24F、31、33F、35Bおよび39の1以上の肺炎
球菌多糖類-タンパク質コンジュゲートは、非プロトン性溶媒中での還元的アミノ化を使
用して調製される。一定の実施形態では、多価免疫原性組成物中の血清型の各々は、非プ
ロトン性溶媒中での還元的アミノ化を使用して調製される。一定の実施形態では、多価組
成物中の1以上の血清型の多糖類は、非プロトン性溶媒中での還元的アミノ化を使用して
コンジュゲートされ、そして、1以上の血清型の多糖類は、水性溶媒中での還元的アミノ
化を使用してコンジュゲートされる。一定の実施形態では、多価組成物中の2つ以上の血
清型の多糖類は、非プロトン性溶媒中での還元的アミノ化を使用してコンジュゲートされ
る。他の実施形態では、多価組成物中の3以上、4以上、5以上、6以上、7以上、8以
上、9以上、10以上、11以上、12以上、13以上、14以上、15以上、16以上
、17以上、18以上、19以上、20以上、または21以上の血清型の多糖類は、非プ
ロトン性溶媒中での還元的アミノ化を使用してコンジュゲートされる。一定の実施形態で
は、多価組成物中の1以上の血清型の多糖類は、非プロトン性溶媒中または水性溶媒中に
あり得る他の化学物質を使用してコンジュゲートされる。
eumoniae)血清型の莢膜多糖類を含む、複数の肺炎球菌(S.pneumoni
ae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であって、ここで、肺
炎球菌(S.pneumoniae)の血清型は本明細書(すなわち、第II節、「多価
免疫原性組成物」)に記載される通りであり、ここで、多糖類タンパク質コンジュゲート
の1以上の多糖類はそれによって担体タンパク質にコンジュゲートされるコンジュゲーシ
ョン反応が非プロトン性溶媒中にある。一定の実施形態では、多価組成物中の血清型の少
なくとも30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、
90、95または100%が非プロトン性溶媒中で調製される。血清型の残りは、代替化
学を使用して、および/または水性溶媒中で調製される。
用すると、水性条件下で調製された同じコンジュゲートと比較して、これらの血清型の予
想外に優れた安定性および免疫原性増強が得られることが決定された(米国出願番号第6
2/463,216号明細書および同第62/555,444号明細書参照)。本明細書
に示されるように(実施例40参照)、非プロトン性溶媒(例えば、DMSO)中での還
元的アミノ化を使用して調製された本発明の肺炎球菌コンジュゲートを含む製剤は、コン
ジュゲーション方法で還元的アミノ化中にプロトン性(すなわち、水性)溶媒を使用して
調製された製剤原料を利用したワクチンと比較して、優れた物理的および化学的安定性を
もたらした。よって、いくつかの実施形態では、多価組成物中の肺炎球菌多糖類コンジュ
ゲートの全てが非プロトン性溶媒中で調製される。
mg/mLである。本発明の一定の実施形態では、組成物中の総多糖類濃度は、約0.0
3~約0.175mg/mLである。本発明の一定の実施形態では、組成物中の総多糖類
濃度が、約0.04~約0.175mg/mLである。他の実施形態では、組成物中の総
多糖類濃度は、約0.065~約0.085mg/mL、約0.070~約0.080m
g/mL、約0.065~約0.080mg/mL、約0.070~約0.085mg/
mL、約0.110~約0.128mg/mL、約0.110~約0.175mg/mL
、約0.10~約0.175mg/mL、約0.110~約0.170mg/mL、約0
.115~約0.15mg/mL、約0.110~約0.15mg/mL、約0.110
~約0.125mg/mL、約0.150~約0.170mg/mL、約0.150~約
0.165mg/mL、約0.140~約0.170mg/mL、約0.130~約0.
170mg/mL、約0.150~約0.175mg/mL、約0.070~約0.17
0mg/mL、約0.065~約0.175mg/mLまたは約0.065~約0.18
0mg/mLである。
ロトン性溶媒中で調製される本発明の実施形態では、組成物中の総多糖類濃度は、37℃
で4週間以上、25℃で4週間以上および4℃で12週間以上安定である。
ロトン性溶媒中で調製される本発明の一定の実施形態では、組成物中の肺炎球菌(S.p
neumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートの全ての重量平均分子量(Mw)
(組成物中の全てのコンジュゲートの平均)は、約3,500~約4,700kDa、約
3,500~約4,600kDa、約3,500~約4,500kDa、約3,500~
約4,400kDa、約3,500~約4,300kDa、約3,500~約4,200
kDa、約3,600~約4,700kDa、約3,600~約4,600kDa、約3
,600~約4,500kDa、約3,600~約4,400kDa、約3,600~約
4,300kDa、約3,600~約4,200kDa、約3,700~約4,700k
Da、約3,700~約4,600kDa、約3,700~約4,500kDa、約3,
700~約4,400kDa、約3,700~約4,300kDa、約3,700~約4
,200kDa、約3,800~約4,700kDa、約3,800~約4,600kD
a、約3,800~約4,500kDa、約3,800~約4,400kDa、約3,8
00~約4,300kDa、約3,800~約4,200kDa、約3,900~約4,
700kDa、約3,900~約4,600kDa、約3,900~約4,500kDa
、約3,900~約4,400kDa、約3,900~約4,300kDaまたは約3,
900~約4,200kDaである。
製される本発明の一定の実施形態では、組成物中の肺炎球菌(S.pneumoniae
)多糖類タンパク質コンジュゲートの各々のMw(単一血清型について)は、約1,00
0~約10,000kDa、約1,500~約5,500kDa、約1,500~約5,
600kDa、約1,500~約5,700kDa、約1,500~約5,800kDa
、約1,500~約5,900kDa、約1,500~約6,000kDa、約1,00
0~約5,500kDa、約1,000~約5,000kDa、約1,000~約4,0
00kDa、約1,000~約4,500kDa、約1,000~約4,000kDaま
たは約1,000~約3,500kDaである。他の実施形態では、組成物中の単一の血
清型のコンジュゲートのMwは、約1,000kDa、約1,100kDa、約1,20
0kDa、約1,300kDa、約1,400kDa、約1,500kDa、約1,60
0kDa、約1,700kDa、約1,800kDa、約1,900kDa、約2,00
0kDa、約2,100kDa、約2,200kDa、約2,300kDa、約2,40
0kDa、約2,500kDa、約2,600kDa、約2,700kDa、約2,80
0kDa、約2,900kDa、約3,000kDa、約3,100kDa、約3,20
0kDa、約3,300kDa、約3,400kDa、約3,500kDa、約3,60
0kDa、約3,700kDa、約3,800kDa、約3,900kDa、約4,00
0kDa、約4,100kDa、約4,200kDa、約4,300kDa、約4,40
0kDa、約4,500kDa、約4,600kDa、約4,700kDa、約4,80
0kDa、約4,900kDa、約5,000kDa、約5,100kDa、約5,20
0kDa、約5,300kDa、約5,400kDaまたは約5,500kDaである。
ートは、非プロトン性溶媒中で調製される。(プロトン性溶媒中で調製されるのと反対に
)非プロトン性溶媒中で担体タンパク質にコンジュゲートされた肺炎球菌(S.pneu
moniae)多糖類の割合が高い組成物が好ましい場合がある。一定の実施形態では、
非プロトン性溶媒中で調製された肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型特異的コ
ンジュゲートの割合(非プロトン性溶媒中で調製された多糖類血清型の数を多糖類血清型
の総数で割ることによって計算され、総数は非プロトン性溶媒またはプロトン性溶媒中で
調製されたものを含む)は、50%超、または60%超、または70%超、または80%
超、または90%超であり得る、または100%である。
は、非プロトン性溶媒中で調製され、前記コンジュゲートのMwは、約1,000~約5
,000kDa、または約1,000~約4,000kDa、または約1,000~約3
,000kDa、または約1,000~約2,500kDa、または約1,000~約2
,000kDaである。
ロトン性溶媒中で調製される本発明の一定の実施形態では、組成物中の肺炎球菌(S.p
neumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートの数平均分子量(Mn)(組成物
中の全てのコンジュゲートの平均)は、約900~約3000kDa、約1000~約3
000kDa、約1000~約2500kDa、約1500~約2500kDa、約18
00~約2500kDa、約1900~約2500kDaまたは約2000~約2500
kDaである。
ロトン性溶媒中で調製される本発明の一定の実施形態では、組成物中の肺炎球菌(S.p
neumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートの各々のMn(単一血清型につい
て)は、約700~約7000kDa、約1000~約6000kDa、約1000~約
5000kDa、約1000~約4000kDa、約1000~約3000kDa、約9
00~約5500kDa、約900~約5000kDa、約900~約4500kDa、
約900~約4000kDa、約900~約3500kDaまたは約900~約3000
kDaである。
パク質コンジュゲートのMwおよび/またはMnは、37℃で4週間以上、25℃で4週
間以上および/または4℃で12週間以上安定である。
MALS/RIを使用して決定される。
ロトン性溶媒中で調製される本発明のいくつかの実施形態では、280ナノメートル(n
m)の励起波長で固有のタンパク質蛍光分光法を使用して測定される組成物の発光極大は
、約335nm~約342nmである。いくつかの実施形態では、発光極大は、約335
nm~約342nmを維持し、蛍光強度が37℃で少なくとも1週間安定である。いくつ
かの実施形態では、発光極大は約335nm~約342nmを維持し、蛍光強度が37℃
で1週間安定である。
MSO中での還元的アミノ化を使用して調製される。一定の下位実施形態では、全てがD
MSOを使用して調製された多糖類コンジュゲートを含む多価組成物は、アジュバントを
含まない。
トで観察される免疫原性増強の1つの考えられる機構には、タンパク質と多糖類との間の
追加の結合点をもたらして安定性を付与し、ペプチドの炭水化物結合の化学的解重合また
は分解に対抗する、炭水化物(莢膜多糖類)と担体タンパク質の表面上のリジン残基との
間の結合の数の増加が含まれる。例えば、Hsieh,Characterizatio
n of Saccharide-CRM197 Conjugate Vaccine
s in Brown F,Corbel M,Griffiths E(eds):P
hysico-Chemical Procedures for the Chara
cterization of Vaccines.Dev.Biol.Basel,K
arger,2000,vol 103,pp.93-104を参照されたい。DMSO
溶媒中でのコンジュゲーション中に作成される多糖類-タンパク質結合の増加の追加の利
点は、T細胞へのペプチド-炭水化物の提示を成功させるための追加の機会であり得るだ
ろう。炭水化物抗原にコンジュゲートされた特定のペプチド配列による負荷またはこれら
との会合の異なる能力および感受性をもたらすヒト集団の遺伝的多様性により、担体タン
パク質上の追加の結合点により、抗原提示細胞(APC)の表面での抗原提示の成功の機
会増加が可能となり、他のT細胞非依存性抗原に対するT細胞依存性応答が可能になるこ
とが理解され得る。DMSO溶媒中でのコンジュゲーションによって観察される免疫原性
増強の別の考えられる機構は、多糖類結合のための追加のリジンを露出して、異なるペプ
チドエピトープに対するT細胞依存性応答のためのAPCの表面での糖ペプチド提示の機
会の増加をもたらす有機溶媒中でのCRM 197の変性によるものであり得る。Avc
i et al.,2011,Nature Medicine 17:1602-16
10を参照されたい。
さらに別の利点は、天然CRM 197エピトープに対する減少された抗体の免疫学的干
渉であり得る。DMSO溶媒中でのコンジュゲーション中に作成される多糖類-タンパク
質結合の増加のさらなる利点は、免疫原性の向上をもたらす、より大きなサイズの多糖類
タンパク質コンジュゲートの形成であり得る。本発明の組成物は、ヒト応答を誘発するこ
とにおいて重要な利点を提供すると考えられている。
コンジュゲーション反応効率を高めるためにおよび遊離シアン化物の除去を助けるために
、ニッケルが使用される。遷移金属はシアン化物と安定な錯体を形成することが知られて
おり、シアノ水素化ホウ素ナトリウムによるタンパク質アミノ基とホルムアルデヒドの還
元的メチル化を改善することが知られている(S Gidley et al.,Bio
chem J.1982,203:331-334;Jentoft et al.An
al Biochem.1980,106:186-190)。残留阻害性シアン化物を
錯化することによって、ニッケルの添加は、コンジュゲーション中のタンパク質の消費を
増加し、より大きく潜在的に免疫原性の高いコンジュゲートの形成を導く。
のないコンジュゲーション性能をもたらし、コンジュゲートサイズおよびコンジュゲート
のPs対CRM197比のような製品属性が変動する。ニッケルの添加により、シアン化
物を錯化することでコンジュゲーション不整合が減少し、シアノ水素化ホウ素ナトリウム
ロットの差が排除された。
レート(CDAP)により糖を活性化してシアン酸エステルを形成することが含まれる。
よって、活性化された糖を、直接的にまたはスペーサー(リンカー)基を介して担体タン
パク質上のアミノ基にカップリングすることができる。例えば、スペーサーは、チオール
化多糖類を与えるシスタミンまたはシステアミンであり得、チオール化多糖類をマレイミ
ド活性化担体タンパク質(例えば、GMBSを使用)またはハロアセチル化担体タンパク
質(例えば、ヨードアセトイミド[例えば、エチルヨードアセトイミドHCl]またはN
-スクシンイミジルブロモアセテートまたはSIAB、またはSIA、またはSBAPを
使用)との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることがで
きるだろう。好ましくは、シアン酸エステル(CDAP化学によって生成されてもよい)
を、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド(ADH)とカップリングし、アミ
ノ誘導体化糖を、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド(例えば、
EDACまたはEDC)化学を使用して担体タンパク質にコンジュゲートする。このよう
なコンジュゲートは、国際特許出願公開番号、国際公開第93/15760号、国際公開
第95/08348号および国際公開第96/29094号;ならびにChu et a
l.,1983,Infect.Immunity 40:245-256に記載されて
いる。
トロ安息香酸、N-ヒドロキシスクシンイミド、S-NHS、EDC、TSTUを使用す
る。多くは国際特許出願公開番号、国際公開第98/42721号に記載されている。コ
ンジュゲーションは、糖の遊離ヒドロキシル基とCDIの反応によって形成され得るカル
ボニルリンカー(Bethell et al.,1979,J.Biol.Chem.
254:2572-4;Hearn et al.,1981,J.Chromatog
r.218:509-18参照)を含み、引き続いてタンパク質との反応によってカルバ
メート結合を形成する。これは、アノマー末端の一級ヒドロキシル基への還元、一級ヒド
ロキシル基の任意の保護/脱保護、一級ヒドロキシル基とCDIとの反応によるCDIカ
ルバメート中間体の形成、およびCDIカルバメート中間体とタンパク質上のアミノ基の
カップリングを含み得る。
ゲートを、種々の技術の1以上によって精製する(多糖類-タンパク質コンジュゲートの
量に関して濃縮する)。これらの技術の例は当業者に周知であり、濃縮/ダイアフィルト
レーション操作、限外濾過、沈殿/溶出、カラムクロマトグラフィーおよびデプス濾過を
含む。例えば、米国特許第6,146,902号明細書を参照されたい。
物を製剤化する。これらの肺炎球菌コンジュゲートは、別々の方法で調製され、単一投与
製剤にバルク製剤化される。
の範囲(コンジュゲーションの程度)として特徴付けることができる糖にコンジュゲート
された担体タンパク質(例えば、CRM197)中のリジン残基の数によるものである。
多糖類との共有結合による担体タンパク質のリジン修飾の証拠は、当業者に知られている
日常的な方法を使用したアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションに
より、コンジュゲート物質を生成するために使用される担体タンパク質出発材料と比較し
て、回収されるリジン残基の数が減少する。好ましい実施形態では、本発明のグリココン
ジュゲートのコンジュゲーションの程度は、2~15、2~13、2~10、2~8、2
~6、2~5、2~4、3~15、3~13、3~10、3~8、3~6、3~5、3~
4、5~15、5~10、8~15、8~12、10~15または10~12である。一
実施形態では、本発明のグリココンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、約2、約
3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14ま
たは約15である。好ましい実施形態では、本発明のグリココンジュゲートのコンジュゲ
ーションの程度は4~7である。いくつかのこのような実施形態では、担体タンパク質が
CRM197である。
)(Ps:Pr)によって特徴付けられ得る。いくつかの実施形態では、組成物中のグリ
ココンジュゲートの多糖類と担体タンパク質の比(w/w)は、0.5~3.0(例えば
、約0.5、約0.6、約0.7、約0.8、約0.9、約1.0、約1.1、約1.2
、約1.3、約1.4、約1.5、約1.6、約1.7、約1.8、約1.9、約2.0
、約2.1、約2.2、約2.3、約2.4、約2.5、約2.6、約2.7、約2.8
、約2.9または約3.0)である。他の実施形態では、糖と担体タンパク質の比(w/
w)は、0.5~2.5、0.5~1.5、0.8~2.5、0.5~1.0、1.0~
1.5、1.0~2.0、0.8~2.4、0.8~2.3、0.8~2.2、0.8~
2.1、0.8~2.0、0.8~1.9、0.8~1.8、0.8~1.7、0.8~
1.6、0.8~1.5、0.8~1.4、0.8~1.3、0.9~2.4、0.9~
2.3、0.9~2.2、0.9~2.1、0.9~2.0、0.9~1.9、0.9~
1.8、0.9~1.7、0.9~1.6、0.9~1.5、0.9~1.4、0.9~
1.3、0.9~1.2、1.0~2.4、1.0~2.3、1.0~2.2、1.0~
2.1、1.0~2.0、1.0~1.9、1.0~1.8、1.0~1.7、1.0~
1.6、1.0~1.5、1.0~1.4、1.0~1.3または1.0~1.2である
。さらなる実施形態では、糖と担体タンパク質の比(w/w)は0.8~1.2である。
いくつかのこのような実施形態では、担体タンパク質がCRM197である。本発明のグ
リココンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有結合的にコンジュゲ
ートされているわけではないが、それにもかかわらずグリココンジュゲート組成物中に存
在する遊離糖を含んでもよい。遊離糖は、グリココンジュゲートに非共有結合的に会合し
ていてもよい(すなわち、非共有結合、吸着、または捕捉されている)。
比(w/w)は、約1.0~約2.0、約1.25~約1.75または約1.3~約1.
7である。他の実施形態では、血清型15Aについての糖と担体タンパク質の比(w/w
)は、約1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7または1.8である
。
比(w/w)は、約1.0~約2.0、約1.25~約1.75または約1.3~約1.
7である。他の実施形態では、血清型15Cについての糖と担体タンパク質の比(w/w
)は、約1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7または1.8である
。
比(w/w)は、約1.0~約2.0、約1.25~約1.75または約1.3~約1.
7である。他の実施形態では、血清型33Fについての糖と担体タンパク質の比(w/w
)は、約1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7または1.8である
。
比(w/w)は、約1.25~約2.25、約1.25~約2.0または約1.3~約1
.8である。他の実施形態では、血清型33Bについての糖と担体タンパク質の比(w/
w)は、約1.2、1.3、1.3、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9または2
.0である。
比(w/w)は、約0.5~約1.5、約0.75~約1.25または約0.8~約1.
0である。他の実施形態では、血清型24Fについての糖と担体タンパク質の比(w/w
)は、約0.5、0.6、0.7、0.8、0.9または1.0である。
45%、40%、35%、30%、25%、20%または15%未満の遊離多糖類を含む
。好ましい実施形態では、グリココンジュゲートは、多糖類の総量と比較して約25%未
満の遊離多糖類を含む。好ましい実施形態では、グリココンジュゲートは、多糖類の総量
と比較して約20%未満の遊離多糖類を含む。好ましい実施形態では、グリココンジュゲ
ートは、多糖類の総量と比較して約15%未満の遊離多糖類を含む。
本発明の実施形態はまた、(a)治療(例えば、ヒトの体の);(b)医薬;(c)肺
炎球菌(Streptococcus pneumoniae)による感染の阻害;(d
)肺炎球菌(S.pneumoniae)に対する免疫応答または防御免疫応答の誘導;
(e)肺炎球菌(S.pneumoniae)による感染の予防;(f)肺炎球菌(S.
pneumoniae)感染の再発の予防;(g)脳損傷、難聴および発作などの関連す
る合併症の予防を含む肺炎球菌(S.pneumoniae)感染に関連する病理学的症
状の進行、発症または重症度の減少;(h)肺炎球菌(S.pneumoniae)感染
の可能性の減少;または(i)限定されるものではないが、肺炎球菌性肺炎、肺炎球菌性
菌血症、肺炎球菌性髄膜炎、中耳炎および副鼻腔炎を含む、(1以上の)肺炎球菌疾患の
発症、重症度または進行の処置、予防または遅延の;(i)使用するため、(ii)医薬
または組成物として使用するため、または(iii)医薬品の調製に使用するため、の本
明細書に記載される多価免疫原性組成物の1以上も含む。これらの使用では、本発明の多
価肺炎球菌多糖類-コンジュゲート組成物は、1以上のアジュバントと組み合わせて、ま
たはアジュバントなしで使用してもよい。
ート組成物の1以上を、処置を必要とする患者に投与するステップを含む、肺炎球菌(S
.pneumoniae)感染症または肺炎球菌疾患の予防的処置(すなわち、防御)の
ための方法を提供する。
を投与することによって、感染症、例えば肺炎球菌感染症にかかりやすいヒトを防御また
は処置することができる。
を誘導する方法であって、免疫学的有効量の本発明の多価免疫原性組成物を患者に投与す
るステップを含む方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、肺炎球菌感染症に対し
てヒトをワクチン接種する方法であって、免疫学的有効量の本発明の多価免疫原性組成物
をヒトに投与するステップを含む方法を提供する。
者で防御免疫応答を誘導する、(3)肺炎球菌(S.pneumoniae)による感染
に対してヒト患者にワクチン接種する、または(4)ヒト患者の肺炎球菌(S.pneu
moniae)感染の可能性を減少させる方法であって、本発明の多価免疫原性組成物(
すなわち、本明細書に記載されるいずれかの多価免疫原性組成物、例えば、上記の「多価
免疫原性組成物」と題された第II節に記載される多価免疫原性組成物)を、患者に投与
するステップを含む方法を提供する。
患を予防する方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、24種の肺炎球菌(Str
eptococcus pneumoniae)菌株(3、6A、6C、7F、8、9N
、10A、11A、12F、15A、15B、15C、16F、17F、19A、20A
、20B、22F、23A、23B、24F、31、33Fおよび35B)によって引き
起こされる肺炎球菌性肺炎および侵襲性疾患を予防する方法を提供する。
多糖類タンパク質コンジュゲートを含み、ここで、コンジュゲートの各々は担体タンパク
質にコンジュゲートされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含み
、ここで、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型は、血清型:3、7F、19
A、22F、33F、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9
N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20Aのセットを含む。上記方法の
一実施形態では、組成物は、複数の肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパ
ク質コンジュゲートを含み、ここで、コンジュゲートの各々は担体タンパク質にコンジュ
ゲートされた肺炎球菌(S.pneumonia)血清型の多糖類を含み、ここで、肺炎
球菌(S.pneumoniae)の血清型は、血清型:3、7F、19A、22F、3
3F、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、10A、1
1A、12F、15C、17Fおよび20のセットを含む。上記方法の一実施形態では、
組成物は、複数の肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲー
トを含み、ここで、コンジュゲートの各々は担体タンパク質にコンジュゲートされた肺炎
球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含み、ここで、肺炎球菌(S.pn
eumoniae)の血清型は、血清型:3、7F、19A、22F、33F、15A、
16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、
15C、17Fおよび20Bのセットを含む。上記方法の別の実施形態では、組成物は、
血清型6Aまたは6Cの肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジ
ュゲートをさらに含む。
差防御を提供し得ることが示されている(Cooper et al.,Vaccine
29(2011)7207-7211)。したがって、上記方法のいくつかの実施形態
では、本発明はまた、血清型6Cを含まず、代わりに血清型6Aまたは血清型6Aおよび
6Bを含む多価免疫原性組成物の使用を提供する。他の実施形態では、免疫原性組成物は
、血清型6A、6Bおよび6Cの肺炎球菌コンジュゲートを含む。上記方法の特定の実施
形態では、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型は、
I-a)3、7F、19A、22F、33F、15A、16F、23A、23B、24
F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20A;
I-b)3、7F、19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B
、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび2
0A;
I-c)3、7F、19A、22F、33F、6A、6B、15A、16F、23A、
23B、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fお
よび20A;および
I-d)3、7F、19A、22F、33F、6C、15A、16F、23A、23B
、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび2
0A
からなる群から選択される血清型のセットを含む。
Bが、血清型20Aに置換し得る。
、
II-a)15A、16F、23A、23B、24F、31および35B;
II-b)6A、15A、16F、23A、23B、24F、31および35B;
II-c)6A、6B、15A、16F、23A、23B、24F、31および35B
;
II-d)6C、15A、16F、23A、23B、24F、31および35B;
II-e)15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、10
A、11A、12F、15C、17Fおよび20A;
II-f)6A、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N
、10A、11A、12F、15C、17F、および20A;
II-g)6A、6B、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8
、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20A;および
II-h)6C、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N
、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20A
からなる群から選択される血清型のセットを含む。
0Bは、血清型20Aに置換し得る。
、実施形態I-a)、II-a)またはII-e)のいずれかに示される血清型のセット
を含み、血清型6A、6Bおよび6Cをさらに含む。
交差防御を提供し得ることも示されている(国際公開第2017/085586号参照)
。したがって、上記方法のいくつかの実施形態では、本発明はまた、血清型10Aを含ま
ず、代わりに血清型39を含む多価免疫原性組成物の使用を提供する。他の実施形態では
、免疫原性組成物は、血清型10Aおよび39の肺炎球菌コンジュゲートを含む。上記方
法の特定の実施形態では、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型は、
III-a)3、7F、19A、22F、33F、15A、16F、23A、23B、
24F、31、35B、8、9N、39、11A、12F、15C、17Fおよび20A
;
III-b)3、7F、19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、2
3B、24F、31、35B、8、9N、39、11A、12F、15C、17Fおよび
20A;
III-c)3、7F、19A、22F、33F、6A、6B、15A、16F、23
A、23B、24F、31、35B、8、9N、39、11A、12F、15C、17F
および20A;
III-d)3、7F、19A、22F、33F、6C、15A、16F、23A、2
3B、24F、31、35B、8、9N、39、11A、12F、15C、17Fおよび
20A;
III-e)15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、3
9、11A、12F、15C、17Fおよび20A;
III-f)6A、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9
N、39、11A、12F、15C、17Fおよび20A;
III-g)6A、6B、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、
8、9N、39、11A、12F、15C、17Fおよび20A;および
III-h)6C、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9
N、39、11A、12F、15C、17Fおよび20A
からなる群から選択される血清型のセットを含む。
は20Bは、血清型20Aに置換し得る。
、実施形態III-a)~III-h)のいずれかに示される血清型のセットを含み、そ
して、血清型10Aをさらに含む。
15B莢膜多糖類を含む免疫原性コンジュゲートが、血清型15Cおよび/または血清型
15Aに対するいくらかの交差防御を提供し得ることも示されている(国際公開第201
5/110942号参照)。したがって、上記方法のいくつかの実施形態では、本発明は
また、血清型15C(または脱O-アセチル化15B)を含まず、代わりに血清型15B
(すなわち、血清型15B多糖類は脱O-アセチル化されていない)を含む多価免疫原性
組成物の使用を提供する。他の実施形態では、免疫原性組成物は、血清型15Bおよび1
5C(または脱O-アセチル化15B)の肺炎球菌コンジュゲートを含む。上記方法の特
定の実施形態では、肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型は、
IV-a)3、7F、19A、22F、33F、15A、16F、23A、23B、2
4F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15B、17Fおよび20A
;
IV-b)3、7F、19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23
B、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15B、17Fおよび
20A;
IV-c)3、7F、19A、22F、33F、6A、6B、15A、16F、23A
、23B、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15B、17F
および20A;
IV-d)3、7F、19A、22F、33F、6C、15A、16F、23A、23
B、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15B、17Fおよび
20A;
IV-e)15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、10
A、11A、12F、15B、17Fおよび20A;
IV-f)6A、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N
、10A、11A、12F、15B、17Fおよび20A;
IV-g)6A、6B、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8
、9N、10A、11A、12F、15B、17Fおよび20A;および
IV-h)6C、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N
、10A、11A、12F、15B、17Fおよび20A
からなる群から選択される血清型のセットを含む。
Bは、血清型20Aに置換し得る。
、実施形態IV-a)~IV-h)のいずれかに示される血清型のセットを含み、そして
、血清型15C(および/または脱O-アセチル化15B)をさらに含む。
pneumoniae)に対する補完的防御を提供する方法に有用である。この使用では
、本発明の組成物が、患者が以前にワクチン接種されなかった特定の肺炎球菌(S.pn
eumoniae)血清型に対する防御を提供することができ、患者が以前にワクチン接
種された肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型に対する追加の防御を提供するこ
とができ、または患者が以前にワクチン接種されなかった肺炎球菌(S.pneumon
iae)血清型と患者が以前にワクチン接種された肺炎球菌(S.pneumoniae
)血清型の両方に対する防御を提供することができる。
誘導する、ワクチン接種する、または防御免疫応答を誘導する方法であって、多価免疫原
性組成物を患者に投与するステップを含み、ここで、組成物は複数の肺炎球菌(S.pn
eumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含み、ここで、多糖類タンパク質
コンジュゲートは担体タンパク質にコンジュゲートされた肺炎球菌(S.pneumon
iae)血清型の莢膜多糖類を含み、ここで、患者は、以前に肺炎球菌(S.pneum
oniae)に対してワクチン接種された方法を提供する。本発明のこの態様の実施形態
では、多価免疫原性組成物は、本明細書に記載されるいずれかの多価免疫原性組成物であ
り得る。本発明の方法の特定の実施形態では、多価免疫原性組成物は、以前に多価肺炎球
菌ワクチンで処置された患者に投与される。多価免疫原性ワクチンは、肺炎球菌(S.p
neumoniae)の2つ以上の血清型によって引き起こされる肺炎球菌疾患を予防す
るために必要とされる任意のワクチンであり得る。
a)4、6B、9V、14、18C、19Fおよび23F;
b)4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、6A、7Fおよび
19A;
c)1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19Fおよび23F;
d)4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、6A、7F、19
A、22Fおよび33F;
e)4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、7F、19A、2
2F、33F、2、8、9N、10A、11A、12F、15B、17Fおよび20;お
よび
f)4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、6A、7F、19
A、22F、33F、8、10A、11A、12Fおよび15B
からなる群から選択される肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型によって引き
起こされる肺炎球菌疾患を予防するために必要とされる多価肺炎球菌ワクチンで処置され
た。
moniae)血清型4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、7
F、19A、22F、33F、2、8、9N、10A、11A、12F、15B、17F
および20Aの莢膜多糖類を含む。上記方法の具体的な実施形態では、多価肺炎球菌ワク
チンは、肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型4、6B、9V、14、18C、
19F、23F、1、3、5、7F、19A、22F、33F、2、8、9N、10A、
11A、12F、15B、17Fおよび20の莢膜多糖類を含む。上記方法の具体的な実
施形態では、多価肺炎球菌ワクチンは、肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型4
、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、7F、19A、22F、3
3F、2、8、9N、10A、11A、12F、15B、17Fおよび20Bの莢膜多糖
類を含む。
ンジュゲートを含み、ここで、多糖類タンパク質コンジュゲートは、担体タンパク質にコ
ンジュゲートされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含む。他の
実施形態では、多価肺炎球菌ワクチンは、担体タンパク質にコンジュゲートされていない
複数の肺炎球菌(S.pneumoniae)莢膜多糖類を含む。
炎球菌13価コンジュゲートワクチン[ジフテリアCRM197タンパク質]、Pfiz
er,Inc.、フィラデルフィア、PA、米国)で処置された。
3(肺炎球菌ワクチン多価、Merck&Co.,Inc.、ケニルワース、NJ、米国
)で処置された。
肺炎球菌多糖類コンジュゲートワクチン(吸着)、GlaxoSmithKline B
iologicals s.a.、リクサンサール、ベルギー)で処置された。
よって提供される処置レジメンに従って、患者が多価肺炎球菌ワクチンを受けた後の任意
の時点で患者に投与される。特定の実施形態では、本発明の多価免疫原性組成物は、患者
が多価肺炎球菌ワクチンを受けた1ヶ月~5年後、あるいは患者が多価肺炎球菌ワクチン
を受けた1ヶ月~1年後、1ヶ月~2年後、1ヶ月~3年後、1ヶ月~4年後、1ヶ月~
6ヶ月後、2ヶ月~6ヶ月後、2ヶ月~1年後、1年~5年後、6ヶ月~5年後、6ヶ月
~4年後、6ヶ月~3年後、6ヶ月~2年後、6ヶ月~1年後、1年~4年後、1年~3
年後または1年~2年後に患者に投与される。さらなる実施形態では、多価免疫原性組成
物は、患者が多価肺炎球菌ワクチンを受けた約1ヶ月後、約2ヶ月後、約3ヶ月後、約4
ヶ月後、約5ヶ月後、約6ヶ月後、約7ヶ月後、約8ヶ月後、約9ヶ月後、約10ヶ月後
、約11ヶ月後、約1年後、約1.25年後、約1.5年後、約1.75年後、約2年後
、約2.25年後、約2.5年後、約2.75年後、約3年後、約3.25年後、約3.
5年後、約3.75年後、約4年後、約4.25年後、約4.5年後、約4.75年後ま
たは約5年後に患者に投与される。
患者で防御免疫応答を誘導する、(3)肺炎球菌(S.pneumoniae)による感
染に対してヒト患者にワクチン接種する、または(4)ヒト患者の肺炎球菌(S.pne
umoniae)感染の可能性を減少させる方法であって、任意の順序で本発明の多価免
疫原性組成物を患者に投与するステップと多価肺炎球菌ワクチンを患者に投与するステッ
プと含む方法を提供する。多価肺炎球菌ワクチンは、肺炎球菌(S.pneumonia
e)の2つ以上の血清型によって引き起こされる肺炎球菌疾患を予防するために必要とさ
れる任意のワクチンであり得る。
a)4、6B、9V、14、18C、19Fおよび23F;
b)4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、6A、7Fおよび
19A;
c)1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19Fおよび23F;
d)4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、6A、7F、19
A、22Fおよび33F;
e)4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、7F、19A、2
2F、33F、2、8、9N、10A、11A、12F、15B、17Fおよび20;お
よび
f)4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、6A、7F、19
A、22F、33F、8、10A、11A、12Fおよび15B
からなる群から選択される肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型によって引き
起こされる肺炎球菌疾患を予防するために必要とされる本発明の多価免疫原性組成物およ
び多価肺炎球菌ワクチンで処置される。
moniae)血清型4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、7
F、19A、22F、33F、2、8、9N、10A、11A、12F、15B、17F
および20Aの莢膜多糖類を含む。
ンジュゲートを含み、ここで、多糖類タンパク質コンジュゲートは、担体タンパク質にコ
ンジュゲートされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含む。他の
実施形態では、多価肺炎球菌ワクチンは、担体タンパク質にコンジュゲートされていない
複数の肺炎球菌(S.pneumoniae)莢膜多糖類を含む。
で処置され、PREVNAR(登録商標)13(肺炎球菌13価コンジュゲートワクチン
[ジフテリアCRM197タンパク質]、Pfizer,Inc.、フィラデルフィア、
PA、米国)で処置される。一実施形態では、患者は最初にPREVNAR(登録商標)
13を投与され、患者は第2に本発明の多価免疫原性組成物を投与される。代替実施形態
では、患者は最初に本発明の多価免疫原性組成物を投与され、第2にPREVNAR(登
録商標)13を投与される。
物で処置され、PNEUMOVAX(登録商標)23(肺炎球菌ワクチン多価、Merc
k&Co.,Inc.、ケニルワース、NJ、米国)で処置される。一実施形態では、患
者は最初にPNEUMOVAX(登録商標)23を投与され、患者は第2に本発明の多価
免疫原性組成物を投与される。代替実施形態では、患者は最初に本発明の多価免疫原性組
成物を投与され、第2にPNEUMOVAX(登録商標)23を投与される。
組成物で処置され、SYNFLORIX(商標)(肺炎球菌多糖類コンジュゲートワクチ
ン(吸着)、GlaxoSmithKline Biologicals s.a.、リ
クサンサール、ベルギー)で処置される。一実施形態では、患者は最初にSYNFLOR
IX(商標)を投与され、患者は第2に本発明の多価免疫原性組成物を投与される。代替
実施形態では、患者は最初に本発明の多価免疫原性組成物を投与され、第2にSYNFL
ORIX(商標)を投与される。
が同時に投与される。本明細書で使用される場合、「同時投与」は、2つの組成物を同時
に投与することに限定されず、任意の順序で次々に投与することを含む。いくつかの実施
形態では、多価免疫原性組成物および多価肺炎球菌ワクチンは、筋肉内または皮下投与を
介して、別々の解剖学的部位、例えば2つの異なる腕に投与される。
チンの投与の間の時間量が、約4週間~約1年である。代替実施形態では、時間量は、約
1ヶ月~約5年である。
免疫原性組成物を投与される。代替実施形態では、患者は最初に本発明の多価免疫原性組
成物を投与され、第2に多価肺炎球菌ワクチンを投与される。
クチン接種する、または防御免疫応答を誘導する方法であって、
(1)多価免疫原性組成物を患者に投与し、該組成物は複数の肺炎球菌(S.pneu
moniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含み、ここで、多糖類タンパク質コン
ジュゲートの各々は、担体タンパク質にコンジュゲートされた肺炎球菌(S.pneum
oniae)血清型の莢膜多糖類を含むステップと、
(2)所定の量の時間が経過するのを待つステップと、
(3)多価肺炎球菌ワクチンを患者に投与するステップと
を含む方法も提供される。
oniae)多糖類タンパク質コンジュゲートの任意の組み合わせを含むことができ、そ
して、多価肺炎球菌ワクチンは、肺炎球菌(S.pneumoniae)の2つ以上の血
清型によって引き起こされる疾患を予防するために必要とされる任意のワクチンであり得
る。
クチン接種する、または防御免疫応答を誘導する方法であって、
(1)多価肺炎球菌ワクチンを患者に投与するステップと、
(2)所定の量の時間が経過するのを待つステップと、
(3)多価免疫原性組成物を患者に投与し、組成物は複数の肺炎球菌(S.pneum
oniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含み、多糖類タンパク質コンジュゲート
の各々は担体タンパク質にコンジュゲートされた肺炎球菌(S.pneumoniae)
血清型の莢膜多糖類を含むステップと、
を含む方法も本発明によって提供される。
oniae)多糖類タンパク質コンジュゲートの任意の組み合わせを含むことができ、そ
して、多価肺炎球菌ワクチンは、肺炎球菌(S.pneumoniae)の2つ以上の血
清型によって引き起こされる疾患を予防するために必要とされる任意のワクチンであり得
る。
neumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含み、ここで、多糖類タンパク
質コンジュゲートは、担体タンパク質にコンジュゲートされた肺炎球菌(S.pneum
oniae)血清型の莢膜多糖類を含む。代替実施形態では、多価肺炎球菌ワクチンは、
担体タンパク質にコンジュゲートされていない肺炎球菌(S.pneumoniae)莢
膜多糖類を含む。
は、該方法は、本発明の多価免疫原性組成物の1以上の追加の用量を患者に投与するステ
ップをさらに含み得る。このような方法では、患者が、上記の本発明の多価免疫原性組成
物の最初の投与を受ける前に多価肺炎球菌ワクチンを既に受けていてもよい、または本発
明の多価免疫原性組成物を受ける前に肺炎球菌(S.pneumoniae)に対してワ
クチン接種されていなくてもよい。よって、一実施形態では、肺炎球菌(S.pneum
oniae)によって引き起こされる肺炎球菌疾患を予防するために必要とされる多価肺
炎球菌ワクチンを受けた患者は、2回用量以上の本発明の多価免疫原性組成物を投与され
る。代替実施形態では、以前に肺炎球菌疾患を予防するために必要とされるいずれかのワ
クチンで処置されていない患者は、2回用量以上の本発明の多価免疫原性組成物を投与さ
れる。
。代替実施形態では、2回以上の用量が、異なる本発明の多価免疫原性組成物である。
の本発明の多価免疫原性組成物を投与される。特定の実施形態では、患者は(例えば、幹
細胞移植後の免疫抑制レジメンで)免疫不全であり、投与回数が3回である。
約4週間~約1年である。代替実施形態では、本発明の多価免疫原性組成物の各用量の投
与間の時間量は、約1ヶ月~約5年である。
者はヒトである。一定の実施形態では、ヒト患者は、幼児(およそ12ヶ月~24ヶ月)
、または小児(およそ2~5歳)である。本発明の組成物はまた、より年長の子供、青年
および成人(例えば、18~45歳、18~50歳、18~55歳、18~60歳または
18~65歳)での使用にも適している。本発明の方法のいずれかの他の実施形態では、
患者は、約2~約18歳である。本発明の方法のいずれかのさらなる実施形態では、患者
は、18歳以上である。
れかのいくつかの実施形態では、患者は50歳以上である。本発明の方法のいずれかのい
くつかの実施形態では、患者は55歳以上である。本発明の方法のいずれかのいくつかの
実施形態では、患者は60歳以上である。本発明の方法のいずれかのなおさらなる実施形
態では、患者は65歳以上である。本発明の方法のいずれかの追加の実施形態では、患者
は70歳以上である。
れる患者は免疫不全である。
エンザに対するワクチンと同時に投与される。一定の実施形態では、インフルエンザワク
チンは、「シニアインフルエンザワクチン」、高齢者、例えば65歳以上の人に必要とさ
れる高用量インフルエンザワクチンである。
学的有効量の本明細書に記載される多価免疫原性肺炎球菌多糖類-タンパク質コンジュゲ
ート組成物のいずれかを患者に投与するステップを含む方法を提供する。特定のワクチン
の成分(すなわち、多価免疫原性組成物)の最適量は、対象における適切な免疫応答の観
察を含む標準的な試験によって確認することができる。例えば、別の実施形態では、ヒト
ワクチン接種についての投与量は、動物試験からヒトデータへの外挿によって決定される
。別の実施形態では、投与量が経験的に決定される。
中耳炎および副鼻腔炎)の両方を含む微生物、例えば肺炎球菌(S.pneumonia
)によって引き起こされる一次臨床症候群の予防および/または減少に使用することがで
きる。
は、口腔/食事性、呼吸器もしくは尿生殖器管への粘膜投与の1以上を含むことができる
。一実施形態では、鼻腔内投与は、肺炎または中耳炎の処置に使用される(肺炎球菌の鼻
咽頭運搬をより有効に防ぎ、よってその初期段階で感染症を弱毒化することができるため
)。具体的な実施形態では、本発明の組成物は、筋肉内または皮下投与を介して患者に投
与される。
料を記載および開示する目的で参照により組み込まれる。
これらの正確な実施形態に限定されず、添付の特許請求の範囲で定義される本発明の範囲
または精神から逸脱することなく、種々の変更および修正が当業者によってその中で行わ
れ得ることを理解されたい。
肺炎球菌(S.Pneumoniae)莢膜多糖類の調製
肺炎球菌を培養する方法は、当技術分野で周知である。例えば、Chase,1967
,Methods of Immunology and Immunochemist
ry 1:52を参照されたい。肺炎球菌莢膜多糖類を調製する方法も当該分野で周知で
ある。例えば、欧州特許第0 497 524号明細書を参照されたい。以下に記載され
る方法は、一般に、欧州特許第0 497 524号明細書に記載される方法に従い、一
般に、全ての肺炎球菌血清型に適用可能である。
センター(Atlanta、GA)から入手した。血清型3、8、10A、11A、12
F、15B、22Fおよび33Fについての菌株は、ペンシルベニア大学(Robert
Austrian博士)から入手した。血清型17Fおよび19Aについての菌株は、
FDA生物医薬品局(John Robbins博士)から入手した。血清型7Fは、ニ
ューヨーク州立大学、ダウンステート・メディカル・センター(Gerald Schi
ffman博士)から入手した。上に列挙されていない肺炎球菌血清型の分離株は、アメ
リカ培養細胞系統保存機関(マナサス、VA)から入手した。必要に応じて、サブタイプ
を、特定の抗血清を使用したクェルング反応に基づいて区別した。例えば、米国特許第5
,847,112号明細書を参照されたい。得られた分離株を、ヘミン無しで、大豆ペプ
トン、酵母エキスおよびグルコースを含む動物成分を含まない培地からなる寒天プレート
上に2段階で連続的に播種することによってさらにクローン分離した。血清型7Fの場合
、使用した寒天プレートがヘミンも含んでいた。各血清型についてのクローン分離株を、
大豆ペプトン、酵母エキス、HEPES、塩化ナトリウム、重炭酸ナトリウム、リン酸カ
リウム、グルコースおよびグリセロールを含む動物成分を含まない培地を使用した液体培
養でさらに拡大して、プレマスター細胞バンクを調製した。
精製前の化学的不活性化からなっていた。大豆ペプトンまたは大豆ペプトン限外濾過液、
酵母エキスまたは酵母エキス限外濾過液、HEPES、塩化ナトリウム、重炭酸ナトリウ
ム、リン酸カリウムおよびグルコースを含む滅菌済みの動物成分を含まない増殖培地を含
む振盪フラスコまたは培養ボトルを使用して、各血清型の解凍細胞バンクバイアルを拡大
した。細胞拡大培養物を密封振盪フラスコまたはボトル内で増殖させて、温度および攪拌
制御によりガス交換を最小化した。血清型3、7F、8、9N、10A、11A、12F
、15B、17F、19A、20、22Fおよび33Fの場合、同じ培地を含む発酵槽を
使用して、解凍した細胞バンクバイアルを拡大した。これらの血清型の細胞拡大中に、温
度、pH、圧力および攪拌を制御した。スパージングを使用しなかったため、通気オーバ
ーレイも制御した。600nmでの光学濃度によって測定される特定の培養密度に達した
後、細胞拡大培養物の一部を、大豆ペプトンまたは大豆ペプトン限外濾過液、酵母エキス
または酵母エキス限外濾過液、塩化ナトリウム、リン酸カリウムおよびグルコースを含む
滅菌済みの動物成分を含まない増殖培地を含む生産発酵槽に移した。温度、pH、圧力お
よび攪拌を制御した。スパージングを使用しなかったため、通気オーバーレイも制御した
。
酵を終了した。純粋なフェノールを最終濃度0.8~1.2%まで添加して、細胞を不活
性化し、細胞壁から莢膜多糖類を遊離させた。一次不活性化が発酵槽内で指定された時間
起こり、そこでは温度および攪拌が制御され続ける。一次不活化後、バッチを別の容器に
移し、これを制御された温度でさらなる指定時間保持し、完全に不活化するために攪拌し
た。これを、微生物プレーティング技術またはフェノール濃度および指定時間の検証によ
って確認した。次いで、不活化ブロスを精製した。
肺炎球菌多糖類の精製
肺炎球菌多糖類の精製方法は、いくつかの遠心分離、デプス濾過、濃縮/ダイアフィル
トレーション操作および沈殿ステップからなっていた。特に指定のない限り、全ての手順
を室温で実施した。
性ポリマー(BPA-1000、TRETOLITE(登録商標)(Baker Hug
hes Inc.、ヒューストン、TX)、Spectrum 8160、ポリ(エチレ
ンイミン)およびMillipore pDADMACなど)で凝集させた。カチオン性
ポリマーは、不純物タンパク質、核酸および細胞片に結合した。凝集ステップおよび熟成
期間後、凝集した固体を、遠心分離および複数回のデプス濾過ステップを介して除去した
。清澄化ブロスを濃縮し、100kDa~500kDaのMWCO(分子量カットオフ)
フィルタを使用してダイアフィルトレーションした。トリス、MgCl2緩衝液およびリ
ン酸ナトリウム緩衝液を使用してダイアフィルトレーションを達成した。ダイアフィルト
レーションにより、残留核酸およびタンパク質を除去した。
ール中の多糖類の再沈殿によってさらなる不純物の除去を達成した。フェノール沈殿ステ
ップ中、リン酸ナトリウム生理食塩水緩衝液中の酢酸ナトリウムとフェノール(液化フェ
ノールまたは固体フェノール)をダイアフィルトレーション保持液に装入した。次いで、
多糖類のアルコール分画を2段階で実施した。第一段階では、低濃度のアルコールを調製
物に添加して、細胞片およびその他の不要な不純物を沈殿させたが、粗多糖類は溶液中に
残った。遠心分離、引き続いてデプス濾過ステップを介して不純物を除去した。次いで、
追加のイソプロパノールまたは変性アルコールをバッチに添加することによって、溶液か
ら多糖類を回収した。沈殿した多糖類ペレットを遠心分離によって回収し、研和し、粉末
として乾燥させ、-70℃で凍結保存した。
NMR試験による一定の肺炎球菌血清型の構造同一性分析
0.01%ジメチルスルホキシド(DMSO)および0.01%2,2-ジメチル-2
-シラペンタン-5-スルホネート-d6ナトリウム塩(DSS-d6)を含む重水(D
2O)に、5mg粉末/mL溶液で多糖類粉末を溶解することによって、NMR分析用の
試料を調製した。DMSOは定量分析に使用した内部標準であり、DSS-d6は化学シ
フトスケールを0ppmに設定するために使用した。一次元プロトンNMRデータセット
を50℃で取得し、次いで、アノマー共鳴を含むスペクトルの一部を、Microsof
t Excelワークブックを使用して分析するために、ASCIIファイルにx、y座
標として選択的に書き込んだ。次いで、Y座標(すなわち、スペクトルプロファイル)を
、参照データベース内の莢膜細菌多糖類のスペクトルプロファイルと比較した。参照プロ
ファイルは、その後、参照ロットとして指定される各血清型の選択された調製物について
同様に作成した。試料スペクトルと参照スペクトルからのy値を対比較して、スペクトル
間の類似性の尺度として相関係数(ρxy)を作成した。参照スペクトルのいずれかで0
.95以上のρ値を、多糖類構造の正の同定と見なした。
脱O-アセチル化15Bおよび35Bの莢膜多糖類の600MHz一次元1H NMRス
ペクトルを提供する。肺炎球菌(S.pneumonia)血清型6C、15A、脱O-
アセチル化15Bおよび35Bの血清型同定に使用される1H NMR同定領域は、それ
ぞれ図5~図8に提供される。
膜多糖類の構造
ニュージーランドホワイト種ウサギでPCV21を使用して免疫原性試験を行った(下
記の実施例43参照)。これらの試験では、血清型15Cの代わりに脱O-アセチル化多
糖類血清型15Bを多価組成物に使用した。NMR試験を行って、脱O-アセチル化15
B多糖類が血清型15C多糖類と同等であることを確認した。
アノマー領域(およそ4.4ppm~6.0ppm)は、多糖類の反復単位の全ての構造
的特徴に感受性である。立体化学、単糖組成、O-アセチル化およびグリコシド結合の差
が、各血清型に固有のスペクトルのこの領域を残して、アノマーシグナルの化学シフトに
影響を及ぼす。脱O-アセチル化血清型15B多糖類の場合、完全な1H NMRスペク
トルは血清型15C多糖類の1H NMRスペクトルと同一であり、両多糖類の反復単位
が同じ単糖置換基およびグリコシド結合部位からなることを示している(図9B~図9C
および図10B~図10C参照)。脱O-アセチル化ステップによって15B多糖類に存
在するO-アセテート基が除去されたこと、および観察されるO-アセテート基が本質的
に残っていないことも明確に示されている(図10A~図10F参照)。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型3コンジュゲートの調製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM 197を個別に凍結乾燥
し、ジメチルスルホキシド(DMSO)に再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液お
よびCRM197溶液を合わせ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュ
ゲートを、最後の0.2ミクロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃
度および時間のような各ステップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の
属性を有するコンジュゲートを得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、380bar/5通過に制御した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性
化の標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.25モルのメタ過ヨ
ウ素酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応
は22℃で12時間進行した。
レーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して
水に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
燥用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mL
で凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液およびCRM
197溶液をブレンドして、多糖類濃度1.0g Ps/Lおよび多糖類とCRM197
の質量比1.3を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197
の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル
当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で1時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1.6時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およ
そ0.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈し
た。次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30k
Da NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、2
5mMリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
ト20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7.0中で追加の10mMヒスチジンで希
釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用したコンジュゲート多価試験用の血清型6Cの調製
多糖類を溶解し、化学的に活性化し、限外濾過によって緩衝液交換した。活性化された
多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し、DMSOに再溶解した。次い
で、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わせ、下記のようにコンジュゲー
トさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミクロン濾過の前に限外濾過によっ
て精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステップ内のいくつかのプロセスパ
ラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲートを得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。濾過し溶
解した多糖類を濃縮し、10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性
化の標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.10モルのメタ過ヨ
ウ素酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応
は22℃で2時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液およびCRM
197溶液をブレンドして、多糖類濃度2.2g Ps/Lおよび多糖類とCRM197
の質量比1.4を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197
の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル
当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で15時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で3時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kDa
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25m
Mリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
ト20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7.0中で追加の10mMヒスチジンで希
釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型6Cコンジュゲートの調製
多糖類を溶解し、化学的に活性化し、限外濾過によって緩衝液交換した。活性化された
多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し、DMSOに再溶解した。次い
で、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わせ、下記のようにコンジュゲー
トさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミクロン濾過の前に限外濾過によっ
て精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステップ内のいくつかのプロセスパ
ラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲートを得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。濾過し溶
解した多糖類を濃縮し、10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性
化の標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.10モルのメタ過ヨ
ウ素酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応
は22℃で2時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液およびCRM
197溶液をブレンドして、多糖類濃度1.9g Ps/Lおよび多糖類とCRM197
の質量比1.4を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197
の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル
当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で15時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で3時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kDa
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25m
Mリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
ト20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7.0中で追加の10mMヒスチジンで希
釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
多糖類を溶解し、化学的に活性化し、限外濾過によって緩衝液交換した。活性化された
多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し、DMSOに再溶解した。次い
で、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わせ、下記のようにコンジュゲー
トさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミクロン濾過の前に限外濾過によっ
て精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステップ内のいくつかのプロセスパ
ラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲートを得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、200bar/5通過に制御した。サイズが減少した多糖類を濃縮し、
10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水に対してダイアフィルト
レーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性
化の標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.10モルのメタ過ヨ
ウ素酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応
は22℃で2時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液およびCRM
197溶液をブレンドして、多糖類濃度1.5g Ps/Lおよび多糖類とCRM197
の質量比1.4を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197
の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル
当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で15時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で3時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kDa
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25m
Mリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
ト20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7.0中で追加の10mMヒスチジンで希
釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型7Fコンジュゲートの調製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、150bar/7通過に制御した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性
化の標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.24モルのメタ過ヨ
ウ素酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応
は4℃で4時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液およびCRM
197溶液をブレンドして、多糖類濃度2.6g Ps/Lおよび多糖類とCRM197
の質量比1.5を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197
の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル
当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で4時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で3時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kDa
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25m
Mリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
ト20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7.0中で追加の10mMヒスチジンで希
釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型8コンジュゲートの調製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、600bar/5通過に制御した。
使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性
化の標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.18モルのメタ過ヨ
ウ素酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応
は22℃で4時間進行した。
ーションし、引き続いて5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水に
対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液およびCRM
197溶液をブレンドして、多糖類濃度4.0g Ps/Lおよび多糖類とCRM197
の質量比1.5を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197
の比を制御するように選択した。ブレンド後、コンジュゲーション反応は22℃で2時間
進行した。シアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加すると、血清型8のコンジュゲーション
反応中に不可逆的沈殿が生じる可能性があることが観察されたため、シアノ水素化ホウ素
ナトリウムをコンジュゲーション反応に添加しなかった。反応からシアノ水素化ホウ素ナ
トリウムを省略すると、コンジュゲートの属性に有意に影響を及ぼすことなく沈殿が回避
された。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kDa
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25m
Mリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7
.0中で追加の10mMヒスチジンで希釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結
した。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型9Nコンジュゲートの調製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、250bar/5通過に制御した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性
化の標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.16モルのメタ過ヨ
ウ素酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応
は22℃で4時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液およびCRM
197溶液をブレンドして、多糖類濃度3.25g Ps/Lおよび多糖類とCRM19
7の質量比1.5を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM19
7の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モ
ル当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で1時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kDa
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25m
Mリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
ト20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7.0中で追加の10mMヒスチジンで希
釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用した一価試験用の血清型10Aコンジュゲートの調
製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、200bar/5通過、引き続いて600bar/5通過に制御して、
標的分子質量を達成した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性
化の標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.15モルのメタ過ヨ
ウ素酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応
は22℃で2時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液およびCRM
197溶液をブレンドして、多糖類濃度5.0g Ps/Lおよび多糖類とCRM197
の質量比2.0を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197
の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル
当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で4時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kDa
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25m
Mリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7
.0中で追加の10mMヒスチジンで希釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結
した。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型10Aコンジュゲートの調
製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、600bar/5通過に制御した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性
化の標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.16モルのメタ過ヨ
ウ素酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応
は22℃で2時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液およびCRM
197溶液をブレンドして、多糖類濃度4.0g Ps/Lおよび多糖類とCRM197
の質量比1.75を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM19
7の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モ
ル当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で4時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kDa
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25m
Mリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7
.0中で追加の10mMヒスチジンで希釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結
した。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型11Aコンジュゲートの調
製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を、酢酸を200mMに添加して酸加水分解によってサイズを減少させ、92℃で
75分間インキュベートし、次いで、冷リン酸カリウムpH7緩衝液を400mMに添加
して中和した。
使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性
化の標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.13モルのメタ過ヨ
ウ素酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応
は22℃で2時間進行した。
ーションし、引き続いて5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水に
対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、25mM塩化ナトリウムを含む等体積のDMSOに個別に再溶解
した。多糖類溶液およびCRM197溶液をブレンドして、多糖類濃度3.5g Ps/
Lおよび多糖類とCRM197の質量比1.5を達成した。質量比は、得られるコンジュ
ゲートの多糖類とCRM197の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナト
リウム(多糖類反復単位1モル当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で
4時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kDa
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25m
Mリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7
.0中で追加の10mMヒスチジンで希釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結
した。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型12Fコンジュゲートの調
製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を、酢酸を200mMに添加して酸加水分解によってサイズを減少させ、90℃で
45分間インキュベートし、次いで、冷リン酸カリウムpH7緩衝液を400mMに添加
して中和した。
使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性
化の標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.26モルのメタ過ヨ
ウ素酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応
は22℃で2時間進行した。
ーションし、引き続いて5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水に
対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、25mM塩化ナトリウムを含む等体積のDMSOに個別に再溶解
した。多糖類溶液およびCRM197溶液をブレンドして、多糖類濃度3.0g Ps/
Lおよび多糖類とCRM197の質量比1.5を達成した。質量比は、得られるコンジュ
ゲートの多糖類とCRM197の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナト
リウム(多糖類反復単位1モル当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で
4時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で3時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kDa
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25m
Mリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
ト20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7.0中で追加の10mMヒスチジンで希
釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用した一価試験用の血清型15Aコンジュゲートの調
製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、200bar/5通過に制御した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性
化の標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり1.75モルのメタ過ヨ
ウ素酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応
は22℃で20時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、25mM塩化ナトリウムを含む等体積のDMSOに個別に再溶解
した。多糖類溶液およびCRM197溶液をブレンドして、多糖類濃度6.0g Ps/
Lおよび多糖類とCRM197の質量比2.0を達成した。質量比は、得られるコンジュ
ゲートの多糖類とCRM197の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナト
リウム(多糖類反復単位1モル当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で
2.5時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kDa
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25m
Mリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7
.0中で追加の10mMヒスチジンで希釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結
した。
水性コンジュゲーションを使用した15A/B/C交差防御試験用の血清型15Aコン
ジュゲートの調製
多糖類を溶解し、サイズを減少させ、化学的に活性化し、限外濾過によって緩衝液交換
した。次いで、精製したCRM197を、水性反応混合物中の塩化ニッケルを利用して活
性化多糖類にコンジュゲートさせ、得られたコンジュゲートを最終0.2ミクロン濾過の
前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステップ内のい
くつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲートを得た。
精製された肺炎球菌莢膜多糖類粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解し
た多糖類を均質化して、分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを通過
する回数を、200bar/5通過に制御して、標的分子質量を達成した。次いで、サイ
ズが減少した多糖類を濃縮し、10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類反復
単位1モル当たり0.45モルのメタ過ヨウ素酸ナトリウムとした。酸化反応は22℃で
20時間進行した。活性化された生成物を、10kDa NMWCOタンジェント流限外
濾過膜を使用して、10mMリン酸カリウム、pH6.4に対してダイアフィルトレーシ
ョンした。限外濾過は2~8℃で行った。限外濾過生成物を22℃およびpH5に調整す
ることによって、さらなる活性化を達成した。多糖類活性化の標的レベルを達成するため
に、多糖類反復単位1モル当たり2.0モルのメタ過ヨウ素酸ナトリウム(多糖類反復単
位1モル当たりのアルデヒドのモル)を装入して、100mMメタ過ヨウ素酸ナトリウム
溶液を添加して活性化を行った。酸化反応は22℃で20時間進行した。第2の活性化さ
れた生成物を、10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、10mM
リン酸カリウム、pH6.4に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8
℃で行った。
酸化多糖類溶液を水および1.5Mリン酸カリウムpH6.0と混合した。選択した緩
衝液pHは、コンジュゲーション反応中の活性化多糖類の安定性を向上させるためのもの
であった。以前記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(P
seudomonas fluorescens)での発現を通して得られた精製CRM
197を、0.2ミクロン濾過し、多糖類とCRM197の質量比0.6で、緩衝多糖類
溶液と合わせた。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197の比を制御
するように選択した。多糖類濃度およびリン酸塩濃度は、それぞれ9.75g/Lおよび
100mMであった。多糖類濃度は、得られるコンジュゲートのサイズを制御するように
選択した。100mM塩化ニッケル溶液を使用して、塩化ニッケルをおよそ2mMまで添
加した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)を添加し
た。多糖類およびタンパク質の消費を最大化するために10℃で148時間コンジュゲー
ションを進めた。
コンジュゲーション反応後、バッチをおよそ3.0g/Lの多糖類濃度に希釈し、2~
8℃に冷却し、1.2ミクロン濾過した。バッチを、100kDa NMWCOタンジェ
ント流限外濾過膜を使用して、2~8℃で、100mMリン酸カリウム、pH7.0に対
してダイアフィルトレーションした。次いで、保持液に回収されたバッチをおよそ2.0
g多糖類/Lに希釈し、1.2M重炭酸ナトリウム、pH9.4を添加してpHを調整し
た。水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり1モル)を添加した。1.5
Mリン酸カリウム、pH6.0を後で添加した。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、150mM塩化ナトリウム、pH7.0中10mM L-ヒスチジンに対
してダイアフィルトレーションした。ポリソルベート20を保持液バッチに0.05%(
w/v)の濃度まで添加し、次いで、バッチを0.2ミクロン濾過した(0.5ミクロン
プレフィルタを使用)。
、pH7.0緩衝液中追加の10mM L-ヒスチジンで、1.0g/Lの多糖類濃度に
調整した。バッチをアリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型15Aコンジュゲートの調
製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、200bar/5通過に制御した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性
化の標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり1.75モルのメタ過ヨ
ウ素酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応
は22℃で20時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、34℃に予熱した等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類
溶液に塩化ナトリウムを50mMの濃度まで添加した。多糖類溶液およびCRM197溶
液をブレンドして、多糖類濃度5.0g Ps/Lおよび多糖類とCRM197の質量比
2.0を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197の比を制
御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり1
モル)を添加し、コンジュゲーションを34℃で2時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kDa
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25m
Mリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
ト20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7.0中で追加の10mMヒスチジンで希
釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用した15A/B/C交差防御試験用の血清型15B
コンジュゲートの調製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、300bar/5通過に制御した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性
化の標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.20モルのメタ過ヨ
ウ素酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応
は22℃で4時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液およびCRM
197溶液をブレンドして、多糖類濃度3.0g Ps/Lおよび多糖類とCRM197
の質量比2.0を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197
の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル
当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で5時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kDa
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25m
Mリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7
.0中で追加の10mMヒスチジンで希釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結
した。
DMSOコンジュゲーションを使用した一価試験および15A/B/C交差防御試験用
の血清型15Cコンジュゲートの調製
肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae)血清型15Bに由来
する多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、温和な塩基加水分解に供してO-ア
セチル基を放出し、化学的に活性化し、限外濾過によって緩衝液交換した。活性化された
多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し、DMSOに再溶解した。次い
で、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わせ、下記のようにコンジュゲー
トさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミクロン濾過の前に限外濾過によっ
て精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステップ内のいくつかのプロセスパ
ラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲートを得た。
精製された血清型15B肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過し
た。溶解した多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモ
ジナイザーを通過する回数を、300bar/5通過に制御した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
添加した。バッチを60℃で13時間混合しながらインキュベートして、O-アセチル基
を放出した。リン酸カリウムpH6緩衝液を最終濃度136mMまで添加してpHを中和
し、溶液を周囲温度に冷却した。次いで、溶液を濃縮し、10kDa NMWCOタンジ
ェント流限外濾過膜を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナトリウム
溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性化の標的
レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.20モルのメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応は22℃
で2時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液およびCRM
197溶液をブレンドして、多糖類濃度3.0g Ps/Lおよび多糖類とCRM197
の質量比2.0を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197
の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル
当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で4時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kDa
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25m
Mリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7
.0中で追加の10mMヒスチジンで希釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結
した。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型15Cコンジュゲートの調
製
肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae)血清型15Bに由来
する多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、温和な塩基加水分解に供してO-ア
セチル基を放出し、化学的に活性化し、限外濾過によって緩衝液交換した。活性化された
多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し、DMSOに再溶解した。次い
で、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わせ、下記のようにコンジュゲー
トさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミクロン濾過の前に限外濾過によっ
て精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステップ内のいくつかのプロセスパ
ラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲートを得た。
精製された血清型15B肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過し
た。溶解した多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモ
ジナイザーを通過する回数を、300bar/5通過に制御した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
添加した。バッチを60℃で13時間混合しながらインキュベートして、O-アセチル基
を放出した。リン酸カリウムpH6緩衝液を最終濃度136mMまで添加してpHを中和
し、溶液を周囲温度に冷却した。
水に対してダイアフィルトレーションした。
糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナトリウム
溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性化の標的
レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.20モルのメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応は22℃
で2時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液およびCRM
197溶液をブレンドして、多糖類濃度3.0g Ps/Lおよび多糖類とCRM197
の質量比1.75を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM19
7の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モ
ル当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で8時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kDa
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25m
Mリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7
.0中で追加の10mMヒスチジンで希釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結
した。
水性コンジュゲーションを使用した一価試験用の血清型16Fコンジュゲートの調製
多糖類を溶解し、サイズを減少させ、化学的に活性化し、限外濾過によって緩衝液交換
した。次いで、精製したCRM197を、水性反応混合物中の塩化ニッケルを利用して活
性化多糖類にコンジュゲートさせ、得られたコンジュゲートを最終0.2ミクロン濾過の
前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステップ内のい
くつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲートを得た。
精製された肺炎球菌莢膜多糖類粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解し
た多糖類を均質化して、分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを通過
する回数を、200bar/5通過、引き続いて500bar/5通過に制御して、標的
分子質量を達成した。次いで、サイズが減少した多糖類を濃縮し、10kDa NMWC
Oタンジェント流限外濾過膜を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性
化の標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.15モルのメタ過ヨ
ウ素酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応
は22℃で2時間進行した。
、10mMリン酸カリウム、pH6.4に対してダイアフィルトレーションした。限外濾
過は2~8℃で行った。
酸化多糖類溶液を水および1.5Mリン酸カリウムpH7.0と混合した。選択した緩
衝液pHは、コンジュゲーション反応中の活性化多糖類の安定性を向上させるためのもの
であった。以前記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(P
seudomonas fluorescens)での発現を通して得られた精製CRM
197を、0.2ミクロン濾過し、多糖類とCRM197の質量比0.7で、緩衝多糖類
溶液と合わせた。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197の比を制御
するように選択した。多糖類濃度およびリン酸塩濃度は、それぞれ7.5g/Lおよび1
00mMであった。多糖類濃度は、得られるコンジュゲートのサイズを制御するように選
択した。次いで、溶液を0.2ミクロン濾過した。100mM塩化ニッケル溶液を使用し
て、塩化ニッケルをおよそ2mMまで添加した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類
反復単位1モル当たり2モル)を添加した。多糖類およびタンパク質の消費を最大化する
ために22℃で122時間コンジュゲーションを進めた。
コンジュゲーション反応後、バッチをおよそ3.0g/Lの多糖類濃度に希釈し、2~
8℃に冷却し、1.2ミクロン濾過した。バッチを、100kDa NMWCOタンジェ
ント流限外濾過膜を使用して、2~8℃で、100mMリン酸カリウム、pH7.0に対
してダイアフィルトレーションした。次いで、保持液に回収されたバッチをおよそ2.0
g多糖類/Lに希釈し、1.2M重炭酸ナトリウム、pH9.4を添加してpHを調整し
た。水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり1モル)を添加した。1.5
Mリン酸カリウム、pH6.0を後で添加した。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、150mM塩化ナトリウム、pH7.0中10mM L-ヒスチジンに対
してダイアフィルトレーションした。ポリソルベート20を保持液バッチに0.05%(
w/v)の濃度まで添加し、次いで、バッチを0.2ミクロン濾過した(0.5ミクロン
プレフィルタを使用)。
、pH7.0緩衝液中追加の10mM L-ヒスチジンで、1.0g/Lの多糖類濃度に
調整した。バッチをアリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型16Fコンジュゲートの調
製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、1000bar/5通過に制御した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性
化の標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.15モルのメタ過ヨ
ウ素酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応
は22℃で2時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液に塩化ナトリ
ウムを50mMの濃度まで添加した。多糖類溶液およびCRM197溶液をブレンドして
、多糖類濃度2.0g Ps/Lおよび多糖類とCRM197の質量比1.5を達成した
。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197の比を制御するように選択
した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり1モル)を添加し、
コンジュゲーションを22℃で2時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kD
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25mM
リン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
ト20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7.0中で追加の10mMヒスチジンで希
釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用した一価試験用の血清型17Fコンジュゲートの調
製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、200bar/5通過に制御した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性
化の標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.11モルのメタ過ヨ
ウ素酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応
は22℃で2時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液に塩化ナトリ
ウムを50mMの濃度まで添加した。多糖類溶液およびCRM197溶液をブレンドして
、多糖類濃度2.0g Ps/Lおよび多糖類とCRM197の質量比1.5を達成した
。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197の比を制御するように選択
した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり1モル)を添加し、
コンジュゲーションを22℃で2時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kDa
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25m
Mリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
ト20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7.0中で追加の10mMヒスチジンで希
釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型17Fコンジュゲートの調
製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、200bar/5通過に制御した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性
化の標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.11モルのメタ過ヨ
ウ素酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応
は22℃で2時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液に塩化ナトリ
ウムを20mMの濃度まで添加した。多糖類溶液およびCRM197溶液をブレンドして
、多糖類濃度2.1g Ps/Lおよび多糖類とCRM197の質量比1.5を達成した
。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197の比を制御するように選択
した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり1モル)を添加し、
コンジュゲーションを22℃で2時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kDa
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25m
Mリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7
.0中で追加の10mMヒスチジンで希釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結
した。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型19Aコンジュゲートの調
製
多糖類を溶解し、化学的に活性化し、限外濾過によって緩衝液交換した。活性化された
多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し、DMSOに再溶解した。次い
で、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わせ、下記のようにコンジュゲー
トさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミクロン濾過の前に限外濾過によっ
て精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステップ内のいくつかのプロセスパ
ラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲートを得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。多糖類を
濃縮し、10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水に対してダイア
フィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムの量は、多糖類活性
化の標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.26モルのメタ過ヨ
ウ素酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応
は22℃で20時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液およびCRM
197溶液をブレンドして、多糖類濃度3.8g Ps/Lおよび多糖類とCRM197
の質量比1.33を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM19
7の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モ
ル当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で1.5時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で3時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kDa
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25m
Mリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
ト20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7.0中で追加の10mMヒスチジンで希
釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用した一価試験用の血清型20Aコンジュゲートの調
製
以前に血清型20Aであると決定された多糖類(Calix et al.,Bioc
hemical,Genetic,and Serological Characte
rization of Two Capsule Subtypes among S
treptococcus pneumoniae Serotype 20 Stra
ins,J.Biol.Chem.287(33):27885-27894,(201
2))を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって緩
衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し、
DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わせ
、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミクロ
ン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステッ
プ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲートを
得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、200bar/5通過に制御した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。メタ過ヨウ素酸ナトリウムを、多糖類活性化の標的レベ
ルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.11モルのメタ過ヨウ素酸ナトリ
ウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)で添加した。酸化反応は22℃
で2時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液およびCRM
197溶液をブレンドして、多糖類濃度2.0g Ps/Lおよび多糖類とCRM197
の質量比1.5を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197
の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル
当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で6時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kD
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25mM
リン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7
.0中で追加の10mMヒスチジンで希釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結
した。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型20Aコンジュゲートの調
製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、220bar/5通過に制御した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。メタ過ヨウ素酸ナトリウムを、多糖類活性化の標的レベ
ルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.16モルのメタ過ヨウ素酸ナトリ
ウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)で添加した。酸化反応は22℃
で2時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液に塩化ナトリ
ウムを20mMの濃度まで添加した。多糖類溶液およびCRM197溶液をブレンドして
、多糖類濃度1.4g Ps/Lおよび多糖類とCRM197の質量比1.5を達成した
。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197の比を制御するように選択
した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり1モル)を添加し、
コンジュゲーションを22℃で4時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kD
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25mM
リン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7
.0中で追加の10mMヒスチジンで希釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結
した。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型22Fコンジュゲートの調
製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、400bar/5通過に制御した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。メタ過ヨウ素酸ナトリウムを、多糖類活性化の標的レベ
ルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.12モルのメタ過ヨウ素酸ナトリ
ウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)で添加した。酸化反応は22℃
で2時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液およびCRM
197溶液をブレンドして、多糖類濃度1.8g Ps/Lおよび多糖類とCRM197
の質量比1.5を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197
の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル
当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で1時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kD
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25mM
リン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
ト20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7.0中で追加の10mMヒスチジンで希
釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用した一価試験用の血清型23Aコンジュゲートの調
製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を、酢酸を200mMに添加して酸加水分解によってサイズを減少させ、90℃で
1.5時間インキュベートし、次いで、冷リン酸カリウムpH7緩衝液を400mMに添
加して中和した。
使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムは、多糖類活性化の
標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.20モルのメタ過ヨウ素
酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応は2
2℃で2時間進行した。
ーションし、引き続いて5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水に
対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液に塩化ナトリ
ウムを50mMの濃度まで添加した。多糖類溶液およびCRM197溶液をブレンドして
、多糖類濃度3.0g Ps/Lおよび多糖類とCRM197の質量比1.5を達成した
。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197の比を制御するように選択
した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり1モル)を添加し、
コンジュゲーションを22℃で2時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で3時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kD
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25mM
リン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
ト20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7.0中で追加の10mMヒスチジンで希
釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型23Aコンジュゲートの調
製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を、酢酸を200mMに添加して酸加水分解によってサイズを減少させ、90℃で
1.5時間インキュベートし、次いで、冷リン酸カリウムpH7緩衝液を400mMに添
加して中和した。
使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムは、多糖類活性化の
標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.20モルのメタ過ヨウ素
酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応は2
2℃で2時間進行した。
ーションし、引き続いて5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水に
対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液およびCRM
197溶液をブレンドして、多糖類濃度3.5g Ps/Lおよび多糖類とCRM197
の質量比1.5を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197
の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル
当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で2時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kD
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25mM
リン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
ト20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7.0中で追加の10mMヒスチジンで希
釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用した一価試験用の血清型23Bコンジュゲートの調
製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、400bar/5通過に制御した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。メタ過ヨウ素酸ナトリウムを、多糖類活性化の標的レベ
ルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.10モルのメタ過ヨウ素酸ナトリ
ウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)で添加した。酸化反応は22℃
で2時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液に塩化ナトリ
ウムを50mMの最終濃度まで添加した。多糖類溶液およびCRM197溶液をブレンド
して、多糖類濃度5.0g Ps/Lおよび多糖類とCRM197の質量比1.5を達成
した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197の比を制御するように
選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり1モル)を添加
し、コンジュゲーションを22℃で2時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kD
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25mM
リン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
ト20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7.0中で追加の10mMヒスチジンで希
釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型23Bコンジュゲートの調
製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、400bar/5通過に制御した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。メタ過ヨウ素酸ナトリウムを、多糖類活性化の標的レベ
ルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.13モルのメタ過ヨウ素酸ナトリ
ウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)で添加した。酸化反応は22℃
で2時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液およびCRM
197溶液をブレンドして、多糖類濃度5.0g Ps/Lおよび多糖類とCRM197
の質量比1.5を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197
の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル
当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で4時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kD
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25mM
リン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
ト20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7.0中で追加の10mMヒスチジンで希
釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用した一価および多価試験用の血清型24Fコンジュ
ゲートの調製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を、酢酸を200mMに添加して酸加水分解によってサイズを減少させ、92℃で
50分間インキュベートし、次いで、冷リン酸カリウムpH7緩衝液を400mMに添加
して中和した。
使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムは、多糖類活性化の
標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.18モルのメタ過ヨウ素
酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応は2
2℃で2時間進行した。
ーションし、引き続いて5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水に
対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
燥用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mL
で凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液に塩化ナトリ
ウムを50mMの最終濃度まで添加した。多糖類溶液およびCRM197溶液をブレンド
して、多糖類濃度1.5g Ps/Lおよび多糖類とCRM197の質量比1.5を達成
した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197の比を制御するように
選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり1モル)を添加
し、コンジュゲーションを22℃で2時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kD
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25mM
リン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
ト20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7.0中で追加の10mMヒスチジンで希
釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用した一価試験用の血清型31コンジュゲートの調製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を、酢酸を200mMに添加して酸加水分解によってサイズを減少させ、90℃で
30分間インキュベートし、次いで、冷リン酸カリウムpH7緩衝液を400mMに添加
して中和した。
使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムは、多糖類活性化の
標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.16モルのメタ過ヨウ素
酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応は2
2℃で2時間進行した。
ーションし、引き続いて5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水に
対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液およびCRM
197溶液をブレンドして、多糖類濃度4.0g Ps/Lおよび多糖類とCRM197
の質量比1.5を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197
の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル
当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で1時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kD
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25mM
リン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
ト20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7.0中で追加の10mMヒスチジンで希
釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型31コンジュゲートの調製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、400bar/5通過に制御した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。メタ過ヨウ素酸ナトリウムを、多糖類活性化の標的レベ
ルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.12モルのメタ過ヨウ素酸ナトリ
ウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)で添加した。酸化反応は22℃
で2時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液に塩化ナトリ
ウムを50mMの最終濃度まで添加した。多糖類溶液およびCRM197溶液をブレンド
して、多糖類濃度3.5g Ps/Lおよび多糖類とCRM197の質量比1.5を達成
した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197の比を制御するように
選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり1モル)を添加
し、コンジュゲーションを22℃で1時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kD
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25mM
リン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
ト20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7.0中で追加の10mMヒスチジンで希
釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結した。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型33Fコンジュゲートの調
製
多糖類を溶解し、標的分子質量にサイジングし、化学的に活性化し、限外濾過によって
緩衝液交換した。活性化された多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し
、DMSOに再溶解した。次いで、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わ
せ、下記のようにコンジュゲートさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミク
ロン濾過の前に限外濾過によって精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステ
ップ内のいくつかのプロセスパラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲート
を得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を均質化して、Psの分子質量を減少させた。均質化圧力およびホモジナイザーを
通過する回数を、350bar/4通過に制御した。
を使用して水に対してダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。メタ過ヨウ素酸ナトリウムを、多糖類活性化の標的レベ
ルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.12モルのメタ過ヨウ素酸ナトリ
ウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)で添加した。酸化反応は22℃
で2時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197材料を、等体積のDMSOに個別に再溶解した。多糖類溶液およびCRM
197溶液をブレンドして、多糖類濃度1.8g Ps/Lおよび多糖類とCRM197
の質量比1.75を達成した。質量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM19
7の比を制御するように選択した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モ
ル当たり1モル)を添加し、コンジュゲーションを22℃で4時間進めた。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kD
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25mM
リン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7
.0中で追加の10mMヒスチジンで希釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結
した。
DMSOコンジュゲーションを使用した一価試験用の血清型35Bコンジュゲートの調
製
多糖類を溶解し、化学的に活性化し、限外濾過によって緩衝液交換した。活性化された
多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し、DMSOに再溶解した。次い
で、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わせ、下記のようにコンジュゲー
トさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミクロン濾過の前に限外濾過によっ
て精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステップ内のいくつかのプロセスパ
ラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲートを得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を濃縮し、10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水に対し
てダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムは、多糖類活性化の
標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.05モルのメタ過ヨウ素
酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応は2
2℃で2時間進行した。
ーションし、引き続いて10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水
に対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
びCRM197を、25mM塩化ナトリウムを含む等体積のDMSOに個別に再溶解した
。多糖類溶液およびCRM197溶液をブレンドして、多糖類濃度10g Ps/Lおよ
び多糖類とCRM197の質量比4.0を達成した。質量比は、得られるコンジュゲート
の多糖類とCRM197の比を制御するように選択した。コンジュゲーションは22℃で
2.5時間進行した。水素化ホウ素ナトリウム(多糖反復単位1モル当たり0.025モ
ル)を、コンジュゲーションインキュベーション中に2回の添加にわたって添加した。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、22℃で1.5時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およ
そ0.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈し
た。次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30k
D NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25
mMリン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7
.0中で追加の10mMヒスチジンで希釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結
した。
DMSOコンジュゲーションを使用した多価試験用の血清型35Bコンジュゲートの調
製
多糖類を溶解し、化学的に活性化し、限外濾過によって緩衝液交換した。活性化された
多糖類および精製されたCRM197を個別に凍結乾燥し、DMSOに再溶解した。次い
で、再溶解した多糖類溶液およびCRM197溶液を合わせ、下記のようにコンジュゲー
トさせた。得られたコンジュゲートを、最後の0.2ミクロン濾過の前に限外濾過によっ
て精製した。pH、温度、濃度および時間のような各ステップ内のいくつかのプロセスパ
ラメータを制御して、所望の属性を有するコンジュゲートを得た。
精製された肺炎球菌莢膜Ps粉末を水に溶解し、0.45ミクロン濾過した。溶解した
多糖類を濃縮し、10kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水に対し
てダイアフィルトレーションした。
による多糖類のサイズ減少を最小化した。多糖類活性化を、100mMメタ過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液の添加で開始した。添加したメタ過ヨウ素酸ナトリウムは、多糖類活性化の
標的レベルを達成するために、多糖類反復単位1モル当たり0.05モルのメタ過ヨウ素
酸ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たりのアルデヒドのモル)とした。酸化反応は2
2℃で2時間進行した。
ーションし、引き続いて5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して水に
対してダイアフィルトレーションした。限外濾過は2~8℃で行った。
以前に記載されたように(国際公開第2012/173876号)、蛍光菌(Pseu
domonas fluorescens)での発現を通じて得られた精製CRM197
を、5kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して2mMリン酸塩、pH7
.2緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、0.2ミクロン濾過した。
用に製剤化した。CRM197を、1%w/vのスクロース濃度で6mg Pr/mLで
凍結乾燥用に製剤化した。
50mM塩化ナトリウムを含むDMSOに再溶解した。凍結乾燥したCRM197を等体
積のDMSOに再溶解した。多糖類溶液およびCRM197溶液をブレンドして、多糖類
濃度5.25g Ps/Lおよび多糖類とCRM 197の質量比3.5を達成した。質
量比は、得られるコンジュゲートの多糖類とCRM197の比を制御するように選択した
。コンジュゲーションは34℃で3時間進行した。水素化ホウ素ナトリウム(多糖反復単
位1モル当たり0.0375モル)を、コンジュゲーションインキュベーション中に3回
の添加にわたって添加した。
水素化ホウ素ナトリウム(多糖類反復単位1モル当たり2モル)をコンジュゲーション
反応後に添加し、34℃で1時間インキュベートした。バッチをおよそ4℃で、およそ0
.025%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウムに希釈した。
次いで、リン酸カリウム緩衝液を添加してpHを中和した。バッチを濃縮し、30kD
NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用して、150mM塩化ナトリウム、25mM
リン酸カリウムpH7に対しておよそ4℃でダイアフィルトレーションした。
次いで、バッチを濃縮し、300kDa NMWCOタンジェント流限外濾過膜を使用
して、4℃で、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリ
ウム、pH7.0中10mMヒスチジンに対してダイアフィルトレーションした。
、0.015%(w/v)ポリソルベート20を含む150mM塩化ナトリウム、pH7
.0中で追加の10mMヒスチジンで希釈し、アリコートに分注し、-60℃以下で凍結
した。
記載しなかった。本明細書に記載されていないこれらの水性コンジュゲーション方法につ
いては、類似の方法を国際公開第2018/156491号に見出すことができる。
肺炎球菌コンジュゲートワクチンの製剤化
上記の実施例に記載される異なる化学を利用して調製された個々の肺炎球菌多糖類-タ
ンパク質コンジュゲートを、それぞれPCV1、PCV7、PCV8、PCV14、PC
V15、PCV16、PCV21およびPCV31と呼ばれる1価、7価、8価、14価
、15価、16価、21価および31価肺炎球菌コンジュゲートワクチンの製剤化に使用
した。
媒中での還元的アミノ化を使用してコンジュゲートされ、20mM L-ヒスチジンpH
5.8、150mM NaClおよび0.1%(w/v)PS-20に、ワクチン中84
μg/mL(w/v)の肺炎球菌多糖類(PnPs)の標的最終濃度で製剤化された血清
型3を含んでいた。
SO)中での還元的アミノ化を使用してコンジュゲートされ、20mM L-ヒスチジン
pH5.8、150mM NaClおよび0.1%(w/v)PS-20に製剤化された
血清型3、8、9N、10A、11A、15Aおよび19Aを含んでいた。PCV7の各
多糖類-タンパク質コンジュゲートを、ワクチン中84μg/mL PnPsの標的最終
濃度で12μg/mL(w/v)肺炎球菌多糖類(PnPs)で製剤化した。
化を使用してコンジュゲートされ、20mM L-ヒスチジンpH5.8、150mM
NaClおよび0.2%(w/v)PS-20に製剤化された血清型6C、15A、16
F、23A、23B、24F、31および35Bを含んでいた。PCV8の各多糖類-タ
ンパク質コンジュゲートを、ワクチン中32μg/mL PnPsの標的最終濃度で4μ
g/mL(w/v)肺炎球菌多糖類(PnPs)で製剤化した。
MSO)中での還元的アミノ化を使用してコンジュゲートされ、20mM L-ヒスチジ
ンpH5.8、150mM NaClおよび0.1%(w/v)PS-20に製剤化され
た血清型3、7F、8、9N、10A、11A、12F、15A、16F、17F、19
A、20A、22Fおよび33Fを含んでいた。PCV14の各多糖類-タンパク質コン
ジュゲートを、ワクチン中84μg/mL PnPsの標的最終濃度で6μg/mL(w
/v)肺炎球菌多糖類(PnPs)で製剤化した。
M L-ヒスチジンpH5.8、150mM NaClおよび0.2%(w/v)PS-
20に製剤化された血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、1
9A、19F、22F、23Fおよび33Fを含んでいた。各多糖類-タンパク質コンジ
ュゲートを、ワクチン中64μg/mL PnPsの標的最終濃度で、8μg/mLで製
剤化した6Bを除いて、4μg/mL(w/v)肺炎球菌多糖類(PnPs)で製剤化し
た。
ノ化を使用してコンジュゲートされ、20mM L-ヒスチジンpH5.8、150mM
NaClおよび0.2%(w/v)PS-20に製剤化された血清型6C、8、9N、
10A、11A、12F、15A、15C、16F、17F、20A、23A、23B、
24F、31および35Bを含んでいた。各多糖類-タンパク質コンジュゲートを、ワク
チン中64μg/mLまたは128μg/mL PnPsの標的最終濃度で4μg/mL
(w/v)または8μg/mL(w/v)肺炎球菌多糖類(PnPs)で製剤化した。
ノ化を使用してコンジュゲートされ、20mM L-ヒスチジンpH5.8、150mM
NaClおよび各実施例で定義される種々の濃度のPS-20に製剤化された血清型3
、6C、7F、8、9N、10A、11A、12F、15A、15C、16F、17F、
19A、20A、22F、23A、23B、24F、31、33Fおよび35Bを含んで
いた。各多糖類-タンパク質コンジュゲートを、ワクチン中84μg/mLまたは168
μg/mL PnPsの標的最終濃度で4μg/mL(w/v)または8μg/mL(w
/v)肺炎球菌多糖類(PnPs)で製剤化した。いくつかの実施例では、PCV21を
リン酸アルミニウムの形態で250μg[Al]/mLで製剤化した。
、DMSO)中での還元的アミノ化を使用してコンジュゲートされ、20mM L-ヒス
チジンpH5.8、150mM NaClおよび0.2%PS-20に製剤化された血清
型1、3、4、5、6A、6B、6C、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F
、14、15A、15C、16F、17F、18C、19A、19F、20A、22F、
23A、23B、23F、24F、31、33Fおよび35Bを含んでいた。各多糖類-
タンパク質コンジュゲートを、ワクチン中128μg/mL PnPsの標的最終濃度で
、8μg/mL PnPsで製剤化した6Bを除いて、4μg/mL(w/v)肺炎球菌
多糖類(PnPs)で製剤化した。いくつかの実施例では、PCV31をリン酸アルミニ
ウムの形態で250μg[Al]/mLで製剤化した。
、15B、15C、16F、17F、20A、23A、23B、24F、31または35
Bを利用して、追加の一価PCV製剤を調製した。追加の詳細は、これらの製剤について
の具体的な実施例に記載する。
Psとも呼ばれる)を得るために必要なバルクコンジュゲートの必要体積を、バッチ体積
およびバルク多糖類濃度に基づいて計算した。
よび150mM塩化ナトリウム、pH5.8中1倍~4倍の最終濃度のPnPsブレンド
でのコンジュゲートバルクブレンド調製からなっていた。
溶液を調製し、製剤容器に添加した。凍結貯蔵された個々の肺炎球菌多糖類-タンパク質
コンジュゲートを2~8℃で解凍し、次いで、製剤容器に添加した。多糖類-タンパク質
コンジュゲートを製剤緩衝液(コンジュゲートブレンド)に添加する間、容器を混合して
、磁気攪拌棒または磁気インペラーを使用して均質性を確保した。全ての添加を行い、溶
液を攪拌した後、コンジュゲートブレンドを滅菌フィルタに通過させ、リン酸アルミニウ
ムアジュバントの有無にかかわらず容器に回収した。場合によっては、滅菌フィルタを1
50mM塩化ナトリウムで追跡して、バッチを目標濃度に調整した。
肺炎球菌コンジュゲートワクチンの安定性評価
PCV16(128μg/mL PnP)または2つのPCV21肺炎球菌コンジュゲ
ートワクチン製剤(84μg/mLまたは168μg/mL PnP)をシリンジまたは
バイアルに充填した。多糖類タンパク質コンジュゲートを、非プロトン性溶媒(例えば、
DMSO)中での還元的アミノ化によって作製し、20mM L-ヒスチジン、pH5.
8、150mM NaClおよび0.2%(w/v)PS-20に製剤化した。これらの
製剤を、25℃または37℃で最大4週間および4℃で最大12週間置いた。場合によっ
ては、シリンジを水平回転プラットフォームに置き、4℃、25℃または37℃で1週間
貯蔵した後、最大18時間振盪した。製剤製造および流通に伴う可能性のある輸送および
取り扱いのストレスをシミュレートするためにこれを行った。PCV16またはPCV2
1製剤の安定性を評価するために、HPSEC UV/MALS/RIを使用した。2つ
のShodexカラム(803および806)を使用した高速サイズ排除クロマトグラフ
ィー(HPSEC)を紫外線(UV)多角度光散乱(MALS)および屈折率(RI)検
出と直列に組み合わせて、貯蔵中のPCV製剤の濃度およびモル質量を測定した。濃度を
、ピーク全体にわたって各時間間隔で計算し、次いで、全ての間隔で積分して最終的な濃
度値を達成する。光散乱は、分析物の分子質量と濃度の積に比例する。各間隔での分子質
量または分子量を、検出器シグナルから計算する。加重平均(Mw)または数平均(Mn
)分子質量を、ピークの全ての間隔にわたって計算し、平均分子量として報告する。
生じ得る。多糖類の反復単位にホスホジエステル主鎖結合または他の不安定性を有する炭
水化物抗原は、拡大された時間および温度での貯蔵で加水分解を通した解重合を受けやす
くなり得る。さらに、コンジュゲートワクチンに使用される担体タンパク質または炭水化
物は、貯蔵および物理的ストレスで凝集しやすくなり得る。
、25℃および37℃で4週間ならびに4℃で最大12週間安定であった。さらに、熱的
ストレス後の水平攪拌で、PCV16およびPCV21製剤は安定していることが示され
た。これらの熱的ストレスおよび物理的ストレス下では、容器(container)ま
たは容器(vessel)の側面への非特異的吸着による抗原量の損失は観察されなかっ
た。さらに、ワクチンの総用量を推定する際に、カラムでの性能に影響を与える可能性の
ある製剤の凝集(例えば、カラムへの不可逆的な結合または分離カラムへの出入りができ
ない)は観察されなかった(図12)。
分子量を測定した。製剤中の多糖類-タンパク質コンジュゲートが分解または解重合して
いる場合、分子量の減少が自明であり、製剤の凝集が起こっている場合、分子量の増加が
生じるだろう。この測定は、ワクチン製剤または中間体の品質に関する追加の特性評価を
提供する。図13に示されるように、各々が非プロトン性溶媒(例えば、DMSO)中で
の還元的アミノ化を使用して調製された製剤原料を含むPCV16およびPCV21製剤
は、炭水化物の解重合または化学分解に対して安定であり、製剤中のタンパク質の凝集に
対して安定であった。これは、DMSOなどの非プロトン性溶媒中での還元的アミノ化を
使用して調製された多糖類タンパク質コンジュゲートを使用するPCV16およびPCV
21製剤が、高温および物理的ストレスを通して安定であることを示している。製剤は量
と質の両方に関して優れた安定性を実証する。製剤は、容器の側面または他の表面への非
特異的吸着により総用量を失うことはなく、製剤は、ワクチン製剤の安定な分子量(重量
平均分子量(Mw))および数平均分子量(Mn))によって示されるように、分解も凝
集もしない。
肺炎球菌コンジュゲートワクチンの安定性に対するコンジュゲーション化学の影響
上記の実施例に記載されるように異なる化学を利用して調製された個々の肺炎球菌多糖
類-タンパク質複合体を、64μg/mLのPCV15およびPCV16と呼ばれる15
価および16価肺炎球菌コンジュゲートワクチンの製剤化に使用した。PCV15ワクチ
ン製剤は、プロトン性溶媒(全て水性)中での還元的アミノ化を使用してコンジュゲート
され、20mM L-ヒスチジンpH5.8、150mM NaClおよび0.2%w/
v PS-20に製剤化された血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、
18C、19A、19F、22F、23Fおよび33Fを含んでいた(実施例38参照)
。PCV16製剤は、非プロトン性溶媒(例えば、全てDMSO)中での還元的アミノ化
を使用してコンジュゲートされ、20mM L-ヒスチジンpH5.8、150mM N
aClおよび0.2%(w/v)PS-20に製剤化された血清型6C、8、9N、10
A、11A、12F、15A、15C、16F、17F、20A、23A、23B、24
F、31および35Bを含んでいた(実施例38参照)。各多糖類-タンパク質コンジュ
ゲートを、各ワクチン中64μg/mL PnPsの最終濃度で、8μg/mLで製剤化
したPCV15の6Bを除いて、4μg/mL(w/v)肺炎球菌多糖類(PnPs)で
製剤化した。
光分光法(IPFS)を使用して、PCV15またはPCV16組成物中の肺炎球菌多糖
類コンジュゲート担体タンパク質、CRM197の安定性を、4℃および37℃で最大1
週間貯蔵して評価した。非希釈試料の蛍光発光スペクトル(Em290~400nm)を
、Jasco FP-6500分光蛍光光度計を使用して、周囲室温で経路長1cmの石
英キュベットで収集した。励起波長280nmを走査速度100nm/分ならびに励起お
よび発光バンドパス3nmと共に使用した。
ミノ化を使用して調製された製剤原料を含む製剤は、コンジュゲーション方法(全て水性
コンジュゲーション)で還元的アミノ化中にプロトン性溶媒を使用して調製された製剤原
料を利用したワクチンと比較して、優れた物理的および化学的安定性をもたらした。37
℃でわずか16時間で、コンジュゲーション方法でプロトン性溶媒(全て水性)での還元
的アミノ化を使用して調製された、64μg/mL PnPsのPCV15製剤の蛍光強
度が減少し、ワクチンの発光極大は332nmから338nmにシフトした。非プロトン
性溶媒(例えば、全てDMSO)中での還元的アミノ化化学により調製された製剤原料を
利用した、64μg/mL PnPsのPCV16ワクチン製剤は、蛍光強度も発光極大
338nmも変化を示さなかった。IPFS測定から得られた結果のシグナル強度および
発光極大は、多価複合製剤中の個々の製剤原料の集団的安定性によるものであることを理
解すべきである。本発明者らは、非プロトン性溶媒中で調製された全ての製剤原料を利用
したワクチン製剤は安定であるが、プロトン性溶媒中で調製された全ての製剤原料を利用
したワクチン製剤は安定ではないことを示した。
ルディングおよび変性をもたらすDMSO中でのコンジュゲーションによるものであり得
るだろう。変性した担体タンパク質へのコンジュゲーションは、コンジュゲーション後の
変性状態でコンフォメーションを固定するだろう。もしそうなら、この試験はまた、ここ
で評価されたストレス試験の下で最終的なコンフォメーションが安定であることも示唆し
ている。したがって、一貫して安定なワクチン製剤を提供するために、主に非プロトン性
溶媒で調製されたコンジュゲートを含むワクチンを使用することが好ましい。
水性またはDMSO)を利用した製剤原料、グリココンジュゲートまたは多糖類タンパク
質コンジュゲートの混合物を含む場合、製剤から測定される平均発光極大または強度は、
332nmでの各水性多糖類タンパク質コンジュゲート発光と338nmでの各非水性多
糖類タンパク質コンジュゲート発光の寄与により重みづけされるだろう。多価製剤におい
て、非プロトン性溶媒中での還元的アミノ化を使用して調製された全ての多糖類タンパク
質コンジュゲートを使用しているわけではない混合物については、高温で強度または発光
極大のいずれかで変化が生じると予想されるだろう。したがって、一貫して安定なワクチ
ン製剤を提供するために、主に非プロトン性溶媒で調製されたコンジュゲートを含むワク
チンを使用することが好ましい。
選択された血清型に関する収集された一価ウサギ免疫原性試験
成体ニュージーランドホワイト種ウサギ(NZWR、n=3/群)を、0日目と14日
目(交互の側)に、0.25mlまたは0.5mL(15Cのみ)のそれぞれの一価コン
ジュゲートワクチンで筋肉内(IM)免疫した。20mM L-ヒスチジン、pH5.8
、150mM NaClおよび0.2%(w/v)PS-20ならびに実施例38に記載
される製剤化方法で製剤化された一価肺炎球菌ワクチンを、以下のように投与した:(1
)1免疫当たり62.5μgのリン酸アルミニウムアジュバント(APA)を含む、1μ
g PnPs(6C、10A、15A、16F、17F、20A、23A、23B、24
F、31または35B、各々がCRM197にコンジュゲート)、または(2)2μg
PnPs(15C-CRM197、1免疫あたり125μgのAPAを含む)。血清を、
試験開始前(免疫前)および14日目(投与1後、PD1)および28日目(投与2後、
PD2)に回収した。病気または苦痛の徴候について、訓練を受けた動物管理スタッフが
少なくとも毎日、NZWRを観察した。NZWRにおけるワクチン製剤は、ワクチン関連
の有害事象が認められなかったため、安全で忍容性が高いと見なされた。全ての動物実験
は、国立衛生研究所の実験動物の管理と使用に関するガイドの推奨事項に厳密に従って実
施した。NZWR実験プロトコルは、Merck&Co.,Inc.(ケニルワース、N
J)とCovance(デンバー、PA)の両方の施設内動物管理および使用委員会によ
って承認された。
sコーティング濃度を使用してIgG免疫原性を評価した。Opsotiter(登録商
標)3ソフトウェア(UAB Research Foundation、Caro-A
guilar et al.Immunogenicity differences
of a 15-valent pneumococcal polysacchari
de conjugate vaccine(PCV15)based on vacc
ine dose,route of immunization and mouse
strain.Vaccine 35(6):865-72(2017);Burto
n et al.Development and validation of a
fourfold multiplexed opsonization assay(
MOPA4)for pneumococcal antibodies.Clin V
accine Immunol 13(9):1004-9(2006))を使用して、
アラバマ大学バーミンガム校の細菌呼吸器病原体参考検査室でオンラインで入手可能な以
前に記載されたプロトコルに基づいてオプソニン食作用アッセイ(OPA)を通して機能
的抗体を決定した。
5)、それぞれの細菌株を殺傷する機能的抗体を生成する(図16)ことが分かった。
血清型15A、15B、15Cの交差防御の評価
ウサギを15A-CRM197/APA、15B-CRM197/APAまたは15C
-CRM197/APAで免疫して、各血清型間の交差反応性を評価した。
目(交互の側)に、0.5mLのそれぞれの一価コンジュゲートワクチンで筋肉内(IM
)免疫した。20mM L-ヒスチジン、pH5.8、150mM NaClおよび0.
2%(w/v)PS-20ならびに実施例38に記載される製剤化方法で製剤化された一
価肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、1免疫当たり125μgのAPAを含む、2μg
PnPs(各々がCRM197にコンジュゲートされた15A、15Bまたは15C)
で投与した。血清を、試験開始前(免疫前)および14日目(投与1後、PD1)および
28日目(投与2後、PD2)に回収した。病気または苦痛の徴候について、訓練を受け
た動物管理スタッフが少なくとも毎日、NZWRを観察した。NZWRにおけるワクチン
製剤は、ワクチン関連の有害事象が認められなかったため、安全で忍容性が高いと見なさ
れた。全ての動物実験は、国立衛生研究所の実験動物の管理と使用に関するガイドの推奨
事項に厳密に従って実施した。NZWR実験プロトコルは、Merck&Co.,Inc
とCovance(デンバー、PA)の両方の施設内動物管理および使用委員会によって
承認された。
sコーティング濃度を使用してIgG免疫原性を評価した。Opsotiter(登録商
標)3ソフトウェア(UAB Research Foundation(Caro-A
guilar et al.,2017;Burton et al.,2006)を使
用して、アラバマ大学バーミンガム校の細菌呼吸器病原体参考検査室でオンラインで入手
可能な以前に記載されたプロトコルに基づいてOPAを通して機能的抗体を決定した。
原性であり(図17)、それぞれの細菌株を殺傷する機能的抗体を生成する(図18)こ
とが分かった。さらに、血清群15の一価肺炎球菌コンジュゲートワクチンで免疫したウ
サギは、それぞれ同種および異種の多糖類および細菌株と同等のPD2 IgGおよびO
PA価を有していた。15A-CRM197/APA、15B-CRM197/APAま
たは15C-CRM197/APAで免疫したウサギは全て、各肺炎球菌多糖類(15A
、15B、15C)に対する交差反応性を有していた(図17)。Tukeyの多重比較
検定(P値=0.354)を使用した一元配置ANOVAによって分析された投与2後(
PD2)の対数変換IgGデータを使用すると、血清群15全体でIgG価に有意差はな
かった。さらに、15A-CRM197/APA、15B-CRM197/APAまたは
15C-CRM197/APAで免疫したウサギ全てが、全てのウサギ高免疫血清が評価
された各菌株に対する機能的抗体を有し、細菌を殺傷したので、それぞれの肺炎球菌(S
.pneumoniae)菌株(15A、15B、15C)に対して交差反応性を有した
(図18)。同様に、Tukeyの多重比較検定(P値=0.054)を使用した一元配
置ANOVAによって分析された投与2後(PD2)の対数変換OPAデータを使用する
と、血清群15全体でOPA価に有意差はなかった。
ニュージーランドホワイト種ウサギにおけるPCV21の免疫原性
成体ニュージーランドホワイト種ウサギ(NZWR、n=5/群)を、0日目と14日
目(交互の側)に、0.1~0.5mLの肺炎球菌コンジュゲートワクチンで筋肉内(I
M)免疫した。20mM L-ヒスチジン、pH5.8、150mM NaClおよび0
.2%(w/v)PS-20ならびに実施例38に記載される製剤化方法で製剤化された
PCV21肺炎球菌ワクチンを、1免疫当たり4、2、1、0.4、0.08または0.
016μg PnPs(各々CRM197にコンジュゲートされた3、6C、7F、8、
9N、10A、11A、12F、15A、15C、16F、17F、19A、20A、2
2F、23A、23B、24F、31、33Fまたは35B)で投与した。血清を、試験
開始前(免疫前)および14日目(投与1後、PD1)および28日目(投与2後、PD
2)に回収した。病気または苦痛の徴候について、訓練を受けた動物管理スタッフが少な
くとも毎日、NZWRを観察した。NZWRにおけるワクチン製剤は、ワクチン関連の有
害事象が認められなかったため、安全で忍容性が高いと見なされた。全ての動物実験は、
国立衛生研究所の実験動物の管理と使用に関するガイドの推奨事項に厳密に従って実施し
た。NZWR実験プロトコルは、Merck&Co.,IncとCovance(デンバ
ー、PA)の両方の施設内動物管理および使用委員会によって承認された。
いて評価した。このアッセイは、電気化学刺激で発光するSULFO-TAG(商標)標
識を利用するMesoScale Discovery(MesoScale Diag
nostics,LLC、Gaithersburg、MDの事業部)によって開発され
た技術を使用して、Marcheseら(Optimization and vali
dation of a multiplex,electrochemilumine
scence-based detection assay for the qua
ntitation of immunoglobulin G serotype-s
pecific antipneumococcal antibodies in h
uman serum.Clin Vaccine Immunol.16(3):38
7-96(2009))によって記載されるヒトアッセイに基づいてウサギ血清で使用す
るために開発された。SULFO-TAG(商標)標識抗ウサギIgGを、NZWR血清
試料を試験するための二次抗体として使用した。Opsotiter(登録商標)3ソフ
トウェア(UAB Research Foundation、Caro-Aguila
r et al.,2017、上記、Burton et al.,2006、上記)を
使用して、アラバマ大学バーミンガム校の細菌呼吸器病原体参考検査室でオンラインで入
手可能な以前に記載されたプロトコルに基づいて多重オプソニン食細胞アッセイ(MOP
A)を通して機能的抗体を決定した。
原性であり(図19A、図19B、図20Aおよび図20B)、ワクチン型細菌株を殺傷
する機能的抗体を生成する(図21Aおよび図21B)ことが分かった。
びに2μg用量と比較して0.4μg用量でより高い免疫原性を有した15A、15Bお
よび15Cを除いて、4、2、1および0.4μg/PnPsで投与したPCV21につ
いて同等のPD1免疫原性が観察された(図19Aおよび図19B)。したがって、より
高いPnPs用量(0.4~4μg/PnPs)で、ワクチン用量反応はあまりなかった
。多くの血清型が2μgワクチン用量と比較した場合に有意に低かったため、0.08お
よび0.016μg PnPsワクチン用量でより低い免疫原性が観察された。
免疫原性が観察された(図20Aおよび図20B)。
のPD2 MOPA価が観察され、MOPA価は0.08および0.016μg PnP
sワクチン用量で低い傾向があったが、多くは統計学的有意性に達していない(データは
示さず)。2μg/PnPsで投与されたPCV21を、MOPAの代表的なデータセッ
トとして選択した。具体的には、2μg用量のPCV21で免疫したウサギが、血清型3
を除いて、免疫前ウサギ血清と比較して、全ての血清型でPD1 MOPA価が有意に高
かった(図21A)。この試験のウサギ免疫前血清は、血清型16F、31および35B
に対してより高いバックグラウンド価を有していたことに留意すべきである。2μg用量
のPCV21で免疫したウサギは、免疫前ウサギの血清と比較して、全ての血清型で有意
に高いPD2 MOPA価を有していた(図21B)。対数変換データを、ダネット検定
を使用した一元配置ANOVAによって分析して有意性を決定した。
材料および方法
遊離多糖類試験
コンジュゲート試料中の遊離多糖類(CRM197とコンジュゲートしていない多糖類
)を、最初に遊離タンパク質およびコンジュゲートをデオキシコール酸(DOC)および
塩酸で沈殿させることによって測定する。次いで、沈殿を濾別し、濾液をHPSEC/U
V/MALS/RIによって遊離多糖類濃度について分析する。遊離多糖類を、HPSE
C/UV/MALS/RIによって測定される総多糖類の割合として計算する。
コンジュゲート試料中の遊離多糖類、多糖類-CRM197コンジュゲートおよび遊離
CRM197を、ミセル動電クロマトグラフィー(micellar electrok
inetic chromatography)(MEKC)モードのキャピラリー電気
泳動によって分離する。手短に言えば、試料を、25mMホウ酸塩、100mM SDS
を含むMEKC泳動緩衝液、pH9.3と混合し、事前調整された裸の溶融シリカキャピ
ラリーで分離する。分離を200nmで監視し、遊離CRM197をCRM197標準曲
線で定量化する。遊離タンパク質の結果を、HPSEC/UV/MALS/RI手順によ
って決定される総タンパク質含有量の割合として報告する。
濃度分析
コンジュゲート試料を注入し、高速サイズ排除クロマトグラフィー(HPSEC)によ
って分離した。直列の紫外線(UV)、多角度光散乱(MALS)および屈折率(RI)
検出器で検出を達成した。タンパク質濃度を、吸光係数を使用してUV280から計算し
た。mL/gで報告される溶質濃度の変化を伴う溶液の屈折率の変化であるdn/dc係
数を使用して、多糖類濃度をRIシグナル(タンパク質と多糖類の両方が寄与する)から
デコンボリューションした。試料の平均分子量を、試料ピーク全体にわたる測定された濃
度および光散乱情報を使用して、Astraソフトウェア(Wyatt Technol
ogy Corporation、サンタバーバラ、CA)によって計算した。多分散分
子の分子量の平均値には複数の形式がある。例えば、数平均分子量Mn、重量平均分子量
Mwおよびz平均分子量Mzがある(Molecules,2015,20,10313
-10341)。特に明記しない限り、分子量は重量平均分子量である。
質中のリジン消費の決定
Waters AccQ-Tagアミノ酸分析(AAA)を使用して、コンジュゲート
試料中のコンジュゲーションの程度を測定した。Eldexワークステーションで気相酸
加水分解を使用して試料を加水分解して、担体タンパク質を構成アミノ酸に分解した。遊
離アミノ酸を、6-アミノキノリル-N-ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート(A
QC)を使用して誘導体化した。次いで、誘導体化された試料を、C18カラムでUV検
出を備えたUPLCを使用して分析した。リジン以外の代表的なアミノ酸を使用して平均
タンパク質濃度を得た。コンジュゲーション中のリジン消費(すなわち、リジン損失)を
、コンジュゲート中のリジンの測定された平均量と、開始タンパク質中のリジンの予想量
との間の差によって決定した。
肺炎球菌コンジュゲートワクチンの安定性に対するコンジュゲーション方法の影響
上記の実施例に記載される異なる還元的アミノ化溶媒(水性またはDMSO)を利用し
て調製された個々の肺炎球菌多糖類-タンパク質コンジュゲートを、84μg/mLで、
PCV1、PCV7、PCV14およびPCV21と呼ばれる1価、7価、14価および
21価肺炎球菌コンジュゲートワクチン製剤の製剤化に使用した。
質蛍光分光法(IPFS)を使用して、PCV1、PCV7、PCV14またはPCV2
1組成物中の肺炎球菌多糖類コンジュゲート担体タンパク質、CRM197の安定性を、
最大4℃および37℃で貯蔵して評価した。非希釈試料の蛍光発光スペクトル(Em29
0~400nm)を、Jasco FP-6500分光蛍光光度計を使用して、周囲室温
で経路長1cmの石英キュベットで収集した。励起波長280nmを走査速度100nm
/分ならびに励起および発光バンドパス3nmと共に使用した。
還元的アミノ化を使用して調製された全ての多糖類-タンパク質コンジュゲートを含む製
剤は、コンジュゲーション方法(プロトン性)で還元的アミノ化中に水性溶媒を使用して
調製された全ての多糖類-タンパク質コンジュゲートを利用したワクチンと比較して、優
れた物理的および化学的安定性をもたらした。37℃でわずか16時間で、84μg/m
L PnPsの水性溶媒中での還元的アミノ化を使用して調製された全ての多糖類-タン
パク質コンジュゲートを使用して調製されたPCV1、PCV7およびPCV14製剤の
蛍光強度が減少し、ワクチンの発光極大は332nmから338nmにシフトした。非プ
ロトン性溶媒(例えば、DMSO)中での還元的アミノ化化学により調製された製剤原料
を利用した、84μg/mL PnPsのPCV1、PCV7およびPCV14ワクチン
製剤は、蛍光強度も338nmの発光極大も変化を示さなかった。さらに、PCV21製
剤も試験した。これを、非プロトン性溶媒(例えば、DMSO)中での還元的アミノ化を
使用して調製された多糖類-タンパク質複合体を含む、実施例38に記載されるように2
0mM L-ヒスチジン、pH5.8、150mM NaClおよび0.1%(w/v)
PS-20に製剤化した。この試験は、37℃での貯蔵後に優れた物理的および化学的安
定性を示した。PCV21は、蛍光強度も発光極大338nmも変化を示さなかった(図
22D)。
複合製剤中の個々の多糖類-タンパク質コンジュゲートの集団的安定性によるものである
ことを理解すべきである。本発明者らは、非プロトン性溶媒中で調製された全ての多糖類
-タンパク質コンジュゲートを利用したワクチン製剤は安定であるが、プロトン性溶媒中
で調製された全ての製剤原料を利用したワクチン製剤はストレス条件下で安定ではないこ
とを示した。ワクチン製剤組成物が、プロトン性コンジュゲーション方法と非プロトン性
コンジュゲーション方法の両方を使用した多糖類-タンパク質コンジュゲートの混合物を
含む場合、製剤から測定される平均発光極大または強度は、332nmでの各プロトン性
多糖類タンパク質コンジュゲート発光と338nmでの各非プロトン性多糖類タンパク質
コンジュゲート発光の寄与により重みづけされるだろう。プロトン性コンジュゲーション
方法を使用して調製された多糖類タンパク質コンジュゲートの存在により、このような混
合物については、高温で強度または発光極大のいずれかで加重変化が生じると予想される
。
剤の安定性を評価するために、ナノ粒子追跡分析(NTA)を利用した。この技術は、ブ
ラウン運動で移動するナノ粒子集団を直接追跡したビデオを収集して、粒径および濃度を
外挿する。クラス1、635nmレーザーは、80ミクロンの赤色レーザービームを液体
試料に集中させ、光の急速な拡散点として粒子を照射する。CCDカメラは、毎秒30フ
レームのビデオを記録して、経時的な個々の照射粒子の動きを追跡する。システムソフト
ウェアは、ビデオから個々の粒子の中心を識別し、独立に移動した距離を追跡して、平均
二乗変位を決定する。この追跡を、ビデオ全体から収集された生データが分析されるまで
、各フレームの試料集団内の全ての粒子に対して同時に実施する。追跡された全ての個々
の粒子の平均二乗変位を同時に測定することによって、その拡散係数(Dt)および等価
球面度数流体力学半径(rh)を、ストークス-アインシュタイン方程式を適用すること
によって決定する。次いで、ソフトウェアはこの累積データを粒径および濃度分布として
表す。粒径および濃度だけでなく、個々の粒子の強度または輝度に関する生データ情報も
収集する。まとめると、データを、粒径に対する粒子強度、および粒径に対する粒子濃度
として個別に当てはめ、プロットし、次いで、全ての粒子集団の粒径、濃度および強度を
比較する3次元等高線図にプロットする。
は別々に10~1000nmの粒径範囲内で凝集しやすく、それによってNTAが凝集現
象を評価および定量化するための適切な安定性を示す技術になる。製剤を4℃および37
℃に1週間曝露すると、0.025%w/v、0.05%w/v、0.1%w/v、0.
15%w/vおよび0.2%w/v PS20の濃度でPS-20を含む製剤では、NT
Aによって製剤の有意な凝集は観察されなかった(図23に示される)。しかしながら、
製剤を4℃で6時間攪拌に供した後、ポリソルベート20を欠く製剤は、NTAによって
提供されるD90粒径の増加、粒径分布の拡大および粒子強度の増加によって証明される
ように、製剤の攪拌誘導凝集の軽減に有効でなかった。そのため、ポリソルベート20を
0.025~0.2%またはそれ以上のレベル(w/v)に維持して、日常的な製造、貯
蔵、輸送および取り扱いの間、製剤を安定させることが好ましい。
mM L-ヒスチジン、pH5.8、150mM NaClおよび0~0.2%(w/v
)PS-20ならびに実施例38に記載される製剤化方法で製剤化された21価(PCV
21)多糖類-タンパク質コンジュゲート製剤の分子量を測定した。製剤を4℃または3
7℃で最大1週間置いた。場合によっては、シリンジを水平回転プラットフォームに置き
、4℃または37℃で1週間貯蔵した後、最大6時間振盪した。製剤製造および流通に伴
う可能性のある輸送および取り扱いのストレスをシミュレートするためにこれを行った。
製剤中の多糖類-タンパク質コンジュゲートが分解または解重合している場合、分子量の
減少が自明であり、製剤の凝集が起こっている場合、分子量の増加が生じるだろう。この
測定は、PS-20濃度の関数としてワクチン製剤または多糖類-タンパク質コンジュゲ
ートの品質に関する追加の特性評価を提供する。図24に示されるように、各々が非プロ
トン性溶媒(例えば、DMSO)中での還元的アミノ化を使用して調製された全ての製剤
原料を含むPCV21製剤は、炭水化物の解重合または化学分解に対して安定であり、0
.05%~0.15%のPS-20で熱処理による製剤中のタンパク質の凝集に対して安
定であった。まとめると、これは、PCV21製剤が、0.025%および0.2%以上
のレベルのPS-20を使用して製剤化した場合、高温および物理的ストレスを通して安
定であることを示している。
マウスでの曝露からのPCV21防御
若い雌のSwiss Websterマウス(6~8週齢、n=10/群)を、0日目
、14日目および28日目に0.1~0.5mLの21価肺炎球菌コンジュゲートワクチ
ン(PCV21)で腹腔内(IP)免疫した。PCV21肺炎球菌ワクチンを、1免疫当
たり4、2、0.4、0.08または0.016μgのPnPs(各々がCRM197に
コンジュゲートされた3、6C、7F、8、9N、10A、11A、12F、15A、1
5C、16F、17F、19A、20A、22F、23A、23B、24F、31、33
Fおよび35B)で投与した。病気または苦痛の徴候について、訓練を受けた動物管理ス
タッフが少なくとも毎日、マウスを観察した。マウスにおけるワクチン製剤は、ワクチン
関連の有害事象が認められなかったため、安全で忍容性が高いと見なされた。52日目に
、マウスに肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae)血清型24
Fを気管内曝露した。肺炎球菌(S.pneumoniae)の対数期培養物を遠心分離
し、洗浄し、滅菌PBSに懸濁した。曝露前にイソフルランでマウスを麻酔した。0.1
mLのPBS中105cfuの肺炎球菌(S.pneumoniae)を、切歯によって
直立につるされたマウスの喉に入れた。舌を外側にそっと引き、鼻孔を覆うことによって
細菌の吸引を誘導した。マウスの体重を毎日測定し、体重減少が開始時体重の20%を超
えたら安楽死させた。血液を24時間、48時間および72時間で採取して菌血症を評価
した。病気または苦痛の徴候について、訓練を受けた動物管理スタッフが少なくとも毎日
2回、マウスを観察した。全ての動物実験は、国立衛生研究所の実験動物の管理と使用に
関するガイドの推奨事項に厳密に従って実施した。マウス実験プロトコルは、Merck
&Co.,Inc.の施設内動物管理および使用委員会によって承認された。
て評価した。このアッセイは、電気化学刺激で発光するSULFO-TAG(商標)標識
を利用するMesoScale Discovery(MesoScale Diagn
ostics,LLC、Gaithersburg、MDの事業部)によって開発された
技術を使用して、Marchese et al.,Clin Vaccine Imm
unol.(2009)16(3):387-96によって記載されるヒトアッセイに基
づいてマウス血清で使用するために開発された。SULFO-TAG(商標)標識抗マウ
スIgGを、マウス血清試料を試験するための二次抗体として使用した。www.vac
cine.uab.eduで以前に記載されたプロトコルならびにアラバマ大学(UAB
)研究財団によって所有およびライセンス供与されるOpsotiter(登録商標)3
ソフトウェア(Caro-Aguilar I.et al.,Vaccine(201
7)35(6):865-72 and Burton R.L.and Nahm M
.H.Clin.Vaccine Immunol.(2006)13(9):1004
-9参照)に基づいて多重オプソニン食細胞アッセイ(MOPA)を通して機能的抗体を
決定した。
ウスで抗体価を生成した(データは示さず)。PCV21は、Balb/cおよびCD1
マウスでも免疫原性であった(データは示さず)。PCV21免疫Swiss Webs
terマウスはまた、肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型24Fによる曝露か
らも防御された(図25)。Mantel Coxログ・ランク検定は、全てのPCV2
1免疫群が、ナイーブ群と比較すると、曝露から有意に防御されたことを示している(P
<0.05)。同様に、PCV21免疫マウス群はほとんど~全く菌血症がなく、ナイー
ブ群と比較すると、有意に少なかった(データは示さず)。
ウサギにおけるPCV免疫原性および機能的抗体
成体ニュージーランドホワイト種ウサギ(NZWR、n=5/群)を、0日目と14日
目(交互の側)に、0.1mLのPCVで筋肉内(IM)免疫した。PCVを、リン酸ア
ルミニウムアジュバント(APA)の形態で25μg[Al]を含む1免疫当たり1血清
型当たり0.4μg PnPsで投与した。PCV31の場合、血清型6Bの投与濃度を
、1免疫当たり0.8μg PnPsに倍増した。PCV21(実施例38に記載される
)は、各々がCRM197にコンジュゲートされた血清型3、6C、7F、8、9N、1
0A、11A、12F、15A、15C、16F、17F、19A、20A、22F、2
3A、23B、24F、31、33Fおよび35Bの精製多糖類を含んでいた。各多糖類
-タンパク質コンジュゲートを、非アジュバント化またはリン酸アルミニウムもしくはA
PAの形態で250μg[Al]/mLで製剤化して、アジュバントの効果を評価した(
PCV21/APA)。低価PCVも(実施例38に記載されるように)、8つの新規S
T(PCV8:各々がCRM197にコンジュゲートされた6C、15A、16F、23
A、23B、24F、31および35B、非アジュバント化)を含むように製剤化し、1
6STをいずれのライセンス化PCV(PCV16:各々がCRM197にコンジュゲー
トされた6C、8、9N、10A、11A、12F、15A、15C、16F、17F、
20、23A、23B、24F、31および35B、非アジュバント化)にもPCV31
(各々がCRM197にコンジュゲートされた1、3、4、5、6A、6B、6C、7F
、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15A、15C、16F、17F、
18C、19A、19F、20A、22F、23A、23B、23F、24F、33Fお
よび35B、リン酸アルミニウムの形態の250μg[Al]/mLを用いて製剤化)に
も含めず、ワクチン価の増加に伴う担体抑制を評価した(PCV31/APA)。各ワク
チンは、PCV31またはPCV31/APAで8μg/mL(w/v)肺炎球菌多糖類
(PnPs)で製剤化された6Bを除いて、4μg/mL(w/v)肺炎球菌多糖類(P
nPs)で製剤化された多糖類タンパク質コンジュゲートを使用した。各ワクチン中の肺
炎球菌多糖類(PnPs)の最終濃度は、PCV31で128μg/mL PnPs、P
CV21で84μg/mL PnPs、PCV16で64μg/mLおよびPCV8で3
2μg/mLであった。
回収した。病気または苦痛の徴候について、訓練を受けた動物管理スタッフが少なくとも
毎日、NZWRを観察した。NZWRにおけるワクチン製剤は、ワクチン関連の有害事象
が認められなかったため、安全で忍容性が高いと見なされた。全ての動物実験は、国立衛
生研究所の実験動物の管理と使用に関するガイドの推奨事項に厳密に従って実施した。N
ZWR実験プロトコルは、Merck&Co.,IncとCovance(デンバー、P
A)の両方の施設内動物管理および使用委員会によって承認された。
て評価した。このアッセイは、電気化学刺激で発光するSULFO-TAG(商標)標識
を利用するMesoScale Discovery(MesoScale Diagn
ostics,LLC、Gaithersburg、MDの事業部)によって開発された
技術を使用して、Marchese et al.,Clin Vaccine Imm
unol.(2009)16(3):387-96によって記載されるヒトアッセイに基
づいてウサギ血清で使用するために開発された。SULFO-TAG(商標)標識抗ウサ
ギIgGを、NZWR血清試料を試験するための二次抗体として使用した。www.va
ccine.uab.eduで以前に記載されたプロトコルならびにアラバマ大学(UA
B)研究財団によって所有およびライセンス供与されるOpsotiter(登録商標)
3ソフトウェア(Caro-Aguilar I.et al.,Vaccine(20
17)35(6):865-72 and Burton R.L.and Nahm
M.H.Clin.Vaccine Immunol.(2006)13(9):100
4-9参照)に基づいて多重オプソニン食細胞アッセイ(MOPA)を通して機能的抗体
を決定した。
て、PD2については個別に試験して、抗体価を決定した。PCVは、ワクチンによる免
疫後、ウサギにおいて全ての血清型について抗体価を生成した(データは示さず)。PC
V16、PCV21またはPCV31には血清型15B多糖類は含まれていなかったが、
PCV16、PCV21およびPCV31の両方での免疫後、血清型15Bに対する抗体
価が観察された。
よび図28)と比較して、同等または有意に高い免疫原性(血清型3、7F、10A、1
9A、23Aおよび23B)を有し、APAをワクチンに含めたウサギで追加の免疫原性
の利点がないことを示唆している。
された抗原(莢膜多糖類など)に対する抗体応答の干渉を指す。干渉は、限られた数の担
体特異的プライミングTヘルパー細胞の競合から生じると考えられている。結果として、
莢膜多糖類への応答が低下し得る。Pfizerは、ワクチン価が7価から13価に増加
するにつれて、共有血清型のワクチン免疫原性の低下を観察した[Prevnar(7価
)対Prevnar13のIgG抗体GMCの比較]。(PCV13モノグラフの表9、
29頁)]。したがって、本発明者らは、PCV21と比較して、より低い価のPCVの
免疫原性を調査しようとした(図27A~図27C)。PCV8(8つの新規血清型)は
、8つの共有血清型について、PCV21と比較して同等の免疫原性を有していた(図2
9)。PCV16(PCV21-PCV15の5つの重複する血清型)は、16の共有血
清型のうち15について、PCV21と比較して同等の免疫原性を有していた(図29)
血清型31は、PCV16でより高い免疫原性を有していた(図29)。全体として、N
ZWRにおいてPCV21による担体抑制の主要な傾向はなかった。PCV31/APA
は、21の共有血清型のうち12について、PCV21/APAと比較して同等の免疫原
性を有していた。10の血清型(6C、7F、9N、12F、15A、15B(PCV2
1にはない)、15C、17F、19Aおよび23A)が、PCV31においてより高い
免疫原性を有し、2.9倍から11倍の範囲であった(図30)。全体として、NZWR
におけるPCV31による担体抑制の主要な傾向はなかった。
生成することが分かった。ウサギ血清を、多重オプソニン食細胞アッセイ(MOPA)で
テストして、機能的抗体価を決定した。PCV21は、PCV21/APA、PCV8お
よびPCV16と比較した場合、同等またはより高いPD2 OPA価を有していた(図
31)。対数変換データを、ダネット検定を使用した一元配置ANOVAによって分析し
て有意性を決定した。PCV21は、PCV8と比較して血清型16Fについて、ならび
にPCV21/APAと比較して血清型12F、23Aおよび19Aについて有意に高い
OPA価を有していた。PCV31は、PCV21と比較して、血清型23Aについて、
有意に高いOPA価を有していた。
成体アカゲザルにおけるPCV21免疫原性
PCV21を、成体アカゲザル免疫原性モデルでも評価した。アカゲザルを、0日目、
28日目および56日目にPCV21で筋肉内免疫した。PCV21を、1免疫当たり0
.25mL体積中1μgのPnPs(各々がCRM197にコンジュゲートされた3、6
C、7F、8、9N、10A、11A、12F、15A、15C、16F、17F、19
A、20A、22F、23A、23B、24F、31、33Fおよび35B)で投与した
。血清を、試験開始前(免疫前、0日目)および14日目(PD1)、28日目、42日
目(PD2)、56日目、70日目(PD3)および84日目に回収した。
ついて評価した。このアッセイは、電気化学刺激で発光するSULFO-TAG(商標)
標識を利用するMesoScale Discovery(MesoScale Dia
gnostics,LLC、Gaithersburg、MDの事業部)によって開発さ
れた技術を使用して、MarcheseらおよびSkinnerら(Marchese
R.D.et al.,Clin.Vaccine Immunol.(2009)16
(3):387-96およびSkinner,J.M.et al.,Vaccine(
2011)29(48):8870-8876)によって記載されるヒトアッセイに基づ
いてアカゲザル血清で使用するために開発された。SULFO-TAG(商標)標識抗ヒ
トIgGを、アカゲザル血清試料を試験するための二次抗体として使用した。www.v
accine.uab.eduで以前に記載されたプロトコルならびにアラバマ大学(U
AB)研究財団によって所有およびライセンス供与されるOpsotiter(登録商標
)3ソフトウェア(Caro-Aguilar I.et al.,Vaccine(2
017)35(6):865-72 and Burton R.L.and Nahm
M.H.Clin.Vaccine Immunol.(2006)13(9):10
04-9参照)に基づいて多重オプソニン食細胞アッセイ(MOPA)を通して機能的抗
体を決定した。
細菌株を殺傷する機能的抗体を生成することが分かった(図32および図33)。ECL
で証明されているように、多糖類コンジュゲート15A-CRM197および15C-C
RM197を含むPCV21も15Bとの交差反応性を提供することも注目に値する。P
CV21はサルにおいて1回用量のワクチンで免疫原性であった(図32)。追加の免疫
の恩恵を受けたST 6C、12Fおよび24Fを除いて、ほとんどの血清型がPD1で
最大価に達した。成体アカゲザルは、乳児アカゲザルでの以前のPCV試験と比較して、
高い既存の抗体価を有していた。MOPAで血清試料を試験した場合、既存の抗体価が最
も明らかであり、オプソニン食細胞価の決定を困難にした。全ての試験時点を、プールさ
れた試料または個別の試料としてMOPAで試験したが、PD1とPD3との間でOPA
価に大きな差がなかったので、見やすくするために、免疫前、PD1およびPD3のみを
示している(図33)。
対する交差防御について評価した(図34)。PCV21免疫アカゲザル血清は、血清型
6A、6Bおよび23Fとの交差防御を有していたが、19Fはなかった。6Aおよび6
Bに対する交差防御は、多価PCV21の一部としての多糖類コンジュゲート6C-CR
M197による免疫によるものと思われる。同様に、多価PCVの一部としての多糖類コ
ンジュゲート23A-CRM197および23B-CRM197による免疫は、血清型2
3Fに対する交差防御をもたらした。多糖類コンジュゲート19A-CRM197を含む
PCV21による免疫は、19Fに対する交差防御を提供しなかった。
成体アカゲザルにおけるPCV21免疫原性-アジュバントおよび担体抑制の評価
別のサルの試験は、APAを用いたおよび用いないPCV21の評価、ならびに担体抑
制を評価するための共有血清型免疫原性の比較を含んでいた。試験の0日目に、成体アカ
ゲザル(n=5/群)を、ヒトの半分の用量のワクチンで筋肉内免疫した。PCV21を
、1免疫当たり0.25mL体積中1μgのPnPs(各々がCRM197にコンジュゲ
ートされた3、6C、7F、8、9N、10A、11A、12F、15A、15C、16
F、17F、19A、20、22F、23A、23B、24F、31、33Fおよび35
B)で投与した。ある群は、リン酸アルミニウムの形態で62.5μg[Al]をアジュ
バント化されたPCV21を含んでいた。別の群は、1免疫当たり0.25mL体積中1
μgのPnPs(各々がCRM197にコンジュゲートされた1、3、4、5、6A、7
F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23Fおよび33F、6Bを2μg
で投与)で投与され、リン酸アルミニウムの形態で62.5μg[Al]でアジュバント
化されたPCV15を含んでいた。別の群は、1免疫当たり0.25mL体積中1.1μ
gのPnPs(各々がCRM197にコンジュゲートされた1、3、4、5、6A、7F
、9V、14、18C、19A、19Fおよび23F、6Bを2.2μgで投与)で投与
されるPrevnar13(登録商標)(PCV13)を含んでいた。血清を、試験開始
前(免疫前、0日目)および28日目に回収した。
抗体を生成することが分かった。アジュバントを含まないPCV21は、APAを含むP
CV21と比較した場合、同等のまたは有意に高い免疫原性(血清型15Aおよび15B
)を有していた(図35)。PCV21は血清型15Bを含まなかった。
た。PCV21およびPCV15は5つの共有血清型(3、7F、19A、22F、33
F)を有し;PCV21またはPCV15で免疫したサル間で、これら5つの血清型の免
疫原性に差はなかった(図36)。PCV21およびPrevnar13は3つの共有血
清型(3、7F、19A)を有し;血清型7Fおよび19Aについては免疫原性に差はな
かった。Prevnar13免疫サルは、PCV21と比較して血清型3について低い抗
体価を有していた(図36)。この発見は、血清型3がMerckのPCV15ワクチン
でより免疫原性であることを示しているPCV15ヒト臨床データと一致している。まと
めると、これらの結果は、Prevnar13またはPCV15と比較した場合、PCV
21で免疫した成体アカゲザルでは担体抑制が観察されなかったことを示唆している。
血清型6A、6Bおよび6Cの交差反応性-一価試験
一価製剤を、肺炎球菌多糖類6A-CRM197コンジュゲートまたは肺炎球菌多糖類
6B-CRM197コンジュゲートを使用して調製し、4.0μg/mLのいずれかの血
清型の標的総多糖類濃度で、20mMヒスチジンpH5.8および150mM塩化ナトリ
ウムおよび0.1%w/vポリソルベート-20(PS-20)に製剤化した。CRM1
97タンパク質を肺炎球菌多糖類(PnPs)型(-6Aまたは-6Bのいずれか)に個
別にコンジュゲートさせることによってコンジュゲートを調製した。個々の血清型の標的
濃度を得るために必要なバルクコンジュゲートの必要体積を、個々のバルク多糖類濃度の
バッチ体積および濃度に基づいて計算した。個々のコンジュゲートを、ヒスチジン、塩化
ナトリウム、PS-20の溶液に添加して、2Xコンジュゲートブレンドを作成した。2
Xコンジュゲートブレンドを含む製剤容器を、磁気攪拌棒を使用して混合し、別の容器に
滅菌濾過した。次いで、滅菌濾過した2Xブレンドを生理食塩水で希釈して、所望の標的
総多糖類および賦形剤濃度を達成した。次いで、製剤をバイアルに充填し、2~8℃で貯
蔵した。
反応性を評価した。成体ニュージーランドホワイト種ウサギ(NZWR、n=3/群)を
、0日目と14日目(交互の側)に、0.25mLのそれぞれの一価コンジュゲートワク
チンで筋肉内(IM)免疫した。実施例38に記載される製剤化方法で20mM L-ヒ
スチジン、pH5.8、150mM NaClおよび0.1%(w/v)PS-20に製
剤化された一価肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、1μg PnPs(各々がCRM1
97にコンジュゲートされた6Aまたは6B)で投与した。血清を、試験開始前(免疫前
)および14日目(投与1後、PD1)および28日目(投与2後、PD2)に回収した
。病気または苦痛の徴候について、訓練を受けた動物管理スタッフが少なくとも毎日、N
ZWRを観察した。NZWRにおけるワクチン製剤は、ワクチン関連の有害事象が認めら
れなかったため、安全で忍容性が高いと見なされた。全ての動物実験は、国立衛生研究所
の実験動物の管理と使用に関するガイドの推奨事項に厳密に従って実施した。NZWR実
験プロトコルは、Merck&Co.,IncとCovance(デンバー、PA)の両
方の施設内動物管理および使用委員会によって承認された。
ーティング濃度を使用してIgG免疫原性を評価した。www.vaccine.uab
.eduで以前に記載されたプロトコルならびにUAB研究財団によって所有およびライ
センス供与されるOpsotiter(登録商標)3ソフトウェア(Caro-Agui
lar I.et al.,Vaccine(2017)35(6):865-72 a
nd Burton R.L.and Nahm M.H.Clin.Vaccine
Immunol.(2006)13(9):1004-9参照)に基づいてオプソニン食
細胞アッセイ(OPA)を通して機能的抗体を決定した。
37)、それぞれの細菌株を殺傷する機能的抗体を生成することが分かった(図38)。
さらに、血清群6の一価肺炎球菌コンジュゲートワクチンで免疫したウサギは、それぞれ
同種および異種の多糖類および細菌株と同等のPD2 IgGおよびOPA価を有してい
た。6A-CRM197または6B-CRM197で免疫したウサギは全て、各肺炎球菌
多糖類(PnPs 6A、PnPs 6BおよびPnPs 6C)に対する交差反応性を
有していた(図37)。一元配置ANOVAによって分析された投与2後(PD2)の対
数変換IgGデータを使用すると、血清群6全体でIgG価に有意差はなかった。さらに
、6A-CRM197または6B-CRM197で免疫したウサギ全てが、全てのウサギ
高免疫血清が評価された各菌株に対する機能的抗体を有し、細菌を殺傷したので、それぞ
れの肺炎球菌(S.pneumoniae)菌株(6A、6Bおよび6C)に対して交差
反応性を有した(図38)。
データを使用すると、血清群6にわたってOPA価に有意差はなかった。
血清型20Aおよび20Bの交差反応性-一価試験
一価製剤を、肺炎球菌多糖類20A-CRM197コンジュゲートを使用して調製し、
4.0μg/mLで、20mMヒスチジンpH5.8および150mM塩化ナトリウムお
よび0.2%w/vポリソルベート-20(PS-20)に製剤化した。アジュバントと
してリン酸アルミニウムの形態で250.0μg[Al]/mLで製剤を調製した(20
A-CRM197/APA)。CRM197タンパク質を肺炎球菌多糖類(PnPs)型
20に個別にコンジュゲートさせることによってコンジュゲートを調製した。個々の血清
型の標的濃度を得るために必要なバルクコンジュゲートの必要体積を、個々のバルク多糖
類濃度のバッチ体積および濃度に基づいて計算した。単一コンジュゲートを、16.0μ
g/mLで、ヒスチジン、塩化ナトリウムおよびPS-20の溶液に添加して、4Xコン
ジュゲートブレンドを生成した。コンジュゲートブレンドを含む製剤容器を、磁気攪拌棒
を使用して混合し、別の容器に滅菌濾過した。次いで、滅菌濾過した4Xブレンドを、リ
ン酸アルミニウムアジュバントを含む別の容器に添加して、所望の標的総多糖類、賦形剤
およびアジュバント濃度を達成した。次いで、製剤をガラスバイアルに充填し、2~8℃
で貯蔵した。
交差反応性を評価した。成体ニュージーランドホワイト種ウサギ(NZWR、n=3/群
)を、0日目と14日目(交互の側)に、肺炎球菌コンジュゲートワクチンで筋肉内(I
M)免疫した。上記のように製剤化された一価肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、0.
25ml中1μgのPnPs(CRM197にコンジュゲートされたST20A、リン酸
アルミニウムの形態の62.5μg[Al]をアジュバントとして使用した)で投与し、
実施例38に記載される製剤化方法で20mM L-ヒスチジンpH5.8、150mM
NaClおよび0.2%(w/v)PS-20に製剤化されたPCV21多価肺炎球菌
コンジュゲートワクチン(84μg/mL PnPs)を、0.1ml中0.4μgのP
nPs(各々がCRM197にコンジュゲートされた血清型3、6C、7F、8、9N、
10A、11A、12F、15A、15C、16F、17F、19A、20、22F、2
3A、23B、24F、31、33Fおよび35B)で投与した。血清を、試験開始前(
免疫前)および14日目(投与1後、PD1)および28日目(投与2後、PD2)に回
収した。病気または苦痛の徴候について、訓練を受けた動物管理スタッフが少なくとも毎
日、NZWRを観察した。NZWRにおけるワクチン製剤は、ワクチン関連の有害事象が
認められなかったため、安全で忍容性が高いと見なされた。全ての動物実験は、国立衛生
研究所の実験動物の管理と使用に関するガイドの推奨事項に厳密に従って実施した。NZ
WR実験プロトコルは、Merck&Co.,IncとCovance(デンバー、PA
)の両方の施設内動物管理および使用委員会によって承認された。
B研究財団によって所有およびライセンス供与されるOpsotiter(登録商標)3
ソフトウェア(Caro-Aguilar I.et al.,Vaccine(201
7)35(6):865-72 and Burton R.L.and Nahm M
.H.Clin.Vaccine Immunol.(2006)13(9):1004
-9参照)に基づいて機能的抗体を評価するためにNZWR血清をオプソニン食細胞アッ
セイ(OPA)で試験した。
は、肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型20Aと20Bの両方を殺傷する機能
的抗体を生成した(図39)。これは、血清型20Aおよび20Bが構造的類似性を共有
し、血清群内で交差反応性をもたらすことを示唆している。
Claims (93)
- 肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免
疫原性組成物であって、ここで、前記コンジュゲートの各々は、担体タンパク質にコンジ
ュゲートされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含み、ここで、
前記多糖類タンパク質コンジュゲートの肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型
は、
a)15A、16F、23A、23B、24F、31および35B;
b)15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、10A、1
1A、12F、15C、17Fおよび20;および
c)3、7F、19A、22F、33F、15A、16F、23A、23B、24F、
31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20
からなる群から選択される血清型のセットを含む多価免疫原性組成物。 - a)、b)またはc)に列挙される肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型の
前記セットが、
(i)血清型6C、
(ii)血清型6A、または
(iii)血清型6Aおよび6B
をさらに含む、請求項1に記載の多価免疫原性組成物。 - 肺炎球菌(S.pneumoniae)の前記血清型が、
a)6C、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、10
A、11A、12F、15C、17Fおよび20;
b)6A、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、10
A、11A、12F、15C、17Fおよび20;および
c)6A、6B、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N
、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20
からなる群から選択される血清型のセットを含み、
ここで、セットa)~c)の血清型20が、血清型20Aまたは血清型20Bのいずれ
かで置換されていてもよい、請求項1に記載の多価免疫原性組成物。 - 肺炎球菌(S.pneumoniae)の前記血清型が、
a)3、7F、19A、22F、33F、6C、15A、16F、23A、23B、2
4F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20A
;
b)3、7F、19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B、2
4F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20A
;および
c)3、7F、19A、22F、33F、6A、6B、15A、16F、23A、23
B、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび
20A
からなる群から選択される血清型のセットを含む、請求項1に記載の多価免疫原性組成
物。 - 肺炎球菌(S.pneumoniae)の前記血清型が、3、7F、19A、22F、
33F、6C、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、1
0A、11A、12F、15C、17Fおよび20Aからなる群から選択される血清型を
含む、請求項1に記載の多価免疫原性組成物。 - 肺炎球菌(S.pneumoniae)の前記血清型が、3、7F、19A、22F、
33F、6A、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、1
0A、11A、12F、15C、17Fおよび20Aからなる群から選択される血清型を
含む、請求項1に記載の多価免疫原性組成物。 - 前記免疫原性組成物が、さらなる肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパ
ク質コンジュゲートを含まない、請求項1から6のいずれか一項に記載の多価免疫原性組
成物。 - 前記多糖類タンパク質コンジュゲートの少なくとも1つが、非プロトン性溶媒を含むコ
ンジュゲーション反応によって形成される、請求項1から7のいずれか一項に記載の多価
免疫原性組成物。 - 前記多糖類タンパク質コンジュゲートの各々が、非プロトン性溶媒を含むコンジュゲー
ション反応によって形成される、請求項1から8のいずれか一項に記載の多価免疫原性組
成物。 - 組成物中の総多糖類濃度が約0.02~約0.175mg/mLである、請求項1から
9のいずれか一項に記載の多価免疫原性組成物。 - 組成物中の前記肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲー
トの重量平均分子量(Mw)が約1,000~約6,000kDaである、請求項1から
10のいずれか一項に記載の多価免疫原性組成物。 - 組成物中の前記肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲー
トの数平均分子量(Mn)が約500~約4,000kDaである、請求項1から11の
いずれか一項に記載の多価免疫原性組成物。 - 37℃で最大4週間以上安定である、請求項1から12のいずれか一項に記載の多価免
疫原性組成物。 - 4℃で最大12週間以上安定である、請求項1から12のいずれか一項に記載の多価免
疫原性組成物。 - 安定性がHPSEC UV/MALS/RIを使用して決定される、請求項13または
14に記載の多価免疫原性組成物。 - 280ナノメートル(nm)の励起波長で固有のタンパク質蛍光分光法を使用して測定
される組成物の発光極大が約335nm~約342nmである、請求項1から15のいず
れか一項に記載の多価免疫原性組成物。 - 前記発光極大が約335nm~約342nmを維持し、そして、蛍光強度が37℃で少
なくとも1週間安定である、請求項16に記載の多価免疫原性組成物。 - 前記非プロトン性溶媒がジメチルスルホキシド(DMSO)である、請求項8から17
のいずれか一項に記載の多価免疫原性組成物。 - 前記コンジュゲーション反応が還元的アミノ化である、請求項8または9に記載の多価
免疫原性組成物。 - 前記担体タンパク質が、外膜タンパク質複合体(OMPC)、破傷風トキソイド、ジフ
テリアトキソイド、プロテインDおよびCRM197からなる群から選択される、請求項
1から19のいずれか一項に記載の多価免疫原性組成物。 - 前記担体タンパク質がCRM197である、請求項1から20のいずれか一項に記載の
多価免疫原性組成物。 - アジュバントをさらに含む、請求項1から21のいずれか一項に記載の多価免疫原性組
成物。 - アジュバントを含まない、請求項1から21のいずれか一項に記載の多価免疫原性組成
物。 - 10~80mMのヒスチジンpH5.8および150mMのNaClをさらに含む、請
求項1から23のいずれか一項に記載の多価免疫原性組成物。 - 0.025%~0.8%w/vのポリソルベート20をさらに含む、請求項24に記載
の多価免疫原性組成物。 - 肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免
疫原性組成物であって、ここで、前記コンジュゲートの各々は、CRM197にコンジュ
ゲートされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含み、ここで、前
記多糖類タンパク質コンジュゲートの肺炎球菌(S.pneumoniae)の血清型は
、
a)15A、16F、23A、23B、24F、31および35B;
b)6A、6B、15A、16F、23A、23B、24F、31および35B;
c)6A、15A、16F、23A、23B、24F、31および35B;
d)6C、15A、16F、23A、23B、24F、31および35B;
e)15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、10A、1
1A、12F、15C、17Fおよび20A;
f)6A、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、10
A、11A、12F、15C、17Fおよび20A;
g)6A、6B、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N
、10A、11A、12F、15C、17F、および20A;
h)6C、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、10
A、11A、12F、15C、17Fおよび20A;
i)3、7F、19A、22F、33F、15A、16F、23A、23B、24F、
31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20A;
j)3、7F、19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B、2
4F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20A
;
k)3、7F、19A、22F、33F、6A、6B、15A、16F、23A、23
B、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび
20A;および
l)3、7F、19A、22F、33F、6C、15A、16F、23A、23B、2
4F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20A
からなる群から選択される血清型のセットからなり;
ここで、セットe)~l)の血清型20Aは、血清型20または血清型20Bのいずれ
かで置換されていてもよく;ここで、前記多糖類タンパク質コンジュゲートの各々は、非
プロトン性溶媒を含むコンジュゲーション反応によって形成され、そしてここで、組成物
はアジュバントを含まない、多価免疫原性組成物。 - 肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む請求項
26に記載の組成物であって、ここで、前記コンジュゲートの各々は、CRM197にコ
ンジュゲートされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含み、ここ
で、前記多糖類タンパク質コンジュゲートの肺炎球菌(S.pneumoniae)の血
清型は、3、7F、19A、22F、33F、6C、15A、16F、23A、23B、
24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20
Aから選択される血清型からなり;ここで、血清型20Aは、血清型20または血清型2
0Bのいずれかで置換されていてもよく;ここで、前記多糖類タンパク質コンジュゲート
の各々は、非プロトン性溶媒を含むコンジュゲーション反応によって形成され、そしてこ
こで、組成物は、アジュバントを含まない、多価免疫原性組成物。 - 肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む請求項
26に記載の組成物であって、ここで、前記コンジュゲートの各々は、CRM197にコ
ンジュゲートされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含み、ここ
で、前記多糖類タンパク質コンジュゲートの肺炎球菌(S.pneumoniae)の血
清型は、3、7F、19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B、
24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20
Aから選択される血清型からなり;ここで、血清型20Aは、血清型20または血清型2
0Bのいずれかで置換されていてもよく;ここで、前記多糖類タンパク質コンジュゲート
の各々は、非プロトン性溶媒を含むコンジュゲーション反応によって形成され、そしてこ
こで、組成物は、アジュバントを含まない、多価免疫原性組成物。 - ヒト患者において防御免疫応答を誘導する方法であって、請求項1から28のいずれか
一項に記載の多価免疫原性組成物を前記患者に投与するステップを含む方法。 - 肺炎球菌(S.pneumoniae)の前記血清型が、
a)3、7F、19A、22F、33F、15A、16F、23A、23B、24F、
31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20A;
b)3、7F、19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B、2
4F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20A
;
c)3、7F、19A、22F、33F、6A、6B、15A、16F、23A、23
B、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび
20A;および
d)3、7F、19A、22F、33F、6C、15A、16F、23A、23B、2
4F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20A
からなる群から選択される血清型のセットを含み;
ここで、セットa)~d)の血清型20Aは、血清型20または血清型20Bのいずれ
かで置換されていてもよい、請求項29に記載の方法。 - 肺炎球菌(S.pneumoniae)の前記血清型が、
a)15A、16F、23A、23B、24F、31および35B;
b)6A、15A、16F、23A、23B、24F、31および35B 6A、6B
、15A、16F、23A、23B、24F、31および35B;
c)6C、15A、16F、23A、23B、24F、31および35B;
d)15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、10A、1
1A、12F、15C、17Fおよび20A;
e)6A、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、10
A、11A、12F、15C、17F、および20A;
f)6A、6B、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N
、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20A;および
g)6C、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、10
A、11A、12F、15C、17Fおよび20A
からなる群から選択される血清型のセットを含み;
ここで、セットd)~g)の血清型20Aは、血清型20または血清型20Bのいずれ
かで置換されていてもよい、請求項29に記載の方法。 - 肺炎球菌(S.pneumoniae)の前記血清型が、3、7F、19A、22F、
33F、6C、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、1
0A、11A、12F、15C、17Fおよび20Aから選択される血清型を含む、請求
項30に記載の方法。 - 肺炎球菌(S.pneumoniae)の前記血清型が、3、7F、19A、22F、
33F、6A、15A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、1
0A、11A、12F、15C、17Fおよび20Aから選択される血清型を含む、請求
項30に記載の方法。 - 前記患者は、以前に多価肺炎球菌ワクチンで処置された、請求項29から33のいずれ
か一項に記載の方法。 - 前記多価肺炎球菌ワクチンが、
a)4、6B、9V、14、18C、19Fおよび23F;
b)4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、6A、7Fおよび
19A;
c)1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19Fおよび23F;
d)4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、6A、7F、19
A、22Fおよび33F;
e)4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、7F、19A、2
2F、33F、2、8、9N、10A、11A、12F、15B、17Fおよび20;
f)4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、6A、7F、19
A、22F、33F、8、10A、11A、12Fおよび15B;および
g)4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、6A、6C、7F
、19A、22F、33F、8、10A、11A、12Fおよび15B
からなる群から選択される血清型によって引き起こされる肺炎球菌疾患を予防するため
に必要とされる、請求項34に記載の方法。 - 前記多価肺炎球菌ワクチンが複数の多糖類タンパク質コンジュゲートを含み、ここで、
前記多糖類タンパク質コンジュゲートが担体タンパク質にコンジュゲートされた肺炎球菌
(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含む、請求項34または35に記載の方
法。 - 前記多価免疫原性組成物の1以上の追加の用量を前記患者に投与するステップをさらに
含む、請求項31から36のいずれか一項に記載の方法。 - 用量間の時間量が約4週間~約1年である、請求項37に記載の方法。
- 2回の追加の用量が前記患者に投与され、そして、前記患者が免疫不全である、請求項
37または請求項38に記載の方法。 - 任意の順序で多価肺炎球菌ワクチンを前記患者に投与するステップをさらに含み、ここ
で、前記多価免疫原性組成物および前記多価肺炎球菌ワクチンは同じではない、請求項3
1から33のいずれか一項に記載の方法。 - 前記多価肺炎球菌ワクチンが、
a)4、6B、9V、14、18C、19Fおよび23F;
b)4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、6A、7Fおよび
19A;
c)1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19Fおよび23F;
d)4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、6A、7F、19
A、22Fおよび33F;
e)4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、7F、19A、2
2F、33F、2、8、9N、10A、11A、12F、15B、17Fおよび20;
f)4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、6A、7F、19
A、22F、33F、8、10A、11A、12Fおよび15B;および
g)4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、3、5、6A、6C、7F
、19A、22F、33F、8、10A、11A、12Fおよび15B
からなる群から選択される肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型によって引き
起こされる肺炎球菌疾患を予防するために必要とされる、請求項40に記載の方法。 - 前記多価肺炎球菌ワクチンが、複数の肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タ
ンパク質コンジュゲートからなり、ここで、前記コンジュゲートの各々は、担体タンパク
質にコンジュゲートされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含む
、請求項41に記載の方法。 - 前記多価免疫原性組成物および前記多価肺炎球菌ワクチンが同時に投与される、請求項
40から42のいずれか一項に記載の方法。 - 前記多価免疫原性組成物と前記多価肺炎球菌ワクチンの投与の間の時間量が、約4週間
~約1年である、請求項40から42のいずれか一項に記載の方法。 - 前記多価免疫原性組成物が前記多価肺炎球菌ワクチンの前に投与される、請求項40か
ら42または44のいずれか一項に記載の方法。 - 前記多価肺炎球菌ワクチンが前記多価免疫原性組成物の前に投与される、請求項40か
ら42または44のいずれか一項に記載の方法。 - 前記患者が50歳以上である、請求項31から46のいずれか一項に記載の方法。
- 前記患者が2~18歳である、請求項31から46のいずれか一項に記載の方法。
- 前記患者が18歳以上である、請求項31から46のいずれか一項に記載の方法。
- 前記患者が65歳以上である、請求項31から46のいずれか一項に記載の方法。
- 前記患者が免疫不全である、請求項31から50のいずれか一項に記載の方法。
- 前記免疫原性組成物が皮下または筋肉内注射によって投与される、請求項31から51
のいずれか一項に記載の方法。 - 前記免疫原性組成物が、インフルエンザに対するワクチンと同時に投与される、請求項
31から52のいずれか一項に記載の方法。 - 非プロトン性溶媒中でのコンジュゲーション反応を利用する血清型8肺炎球菌(Str
eptococcus pneumoniae)多糖類-タンパク質コンジュゲートを調
製する方法であって、ここで、前記コンジュゲーション反応はシアノ水素化ホウ素を使用
しない、方法。 - 前記コンジュゲーション反応がシッフ塩基還元または還元的アミノ化である、請求項5
4に記載の方法。 - 前記タンパク質が破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイドまたはCRM197である
、請求項54および55に記載の方法。 - 前記タンパク質がCRM197である、請求項56に記載の方法。
- 前記コンジュゲーション反応が還元的アミノ化である、請求項54から57のいずれか
一項に記載の方法。 - 前記還元的アミノ化が、ジメチルスルホキシド(DMSO)中で実施される、請求項5
4から48のいずれか一項に記載の方法。 - ヒト患者において防御免疫応答を誘導する方法であって、請求項1から28に記載の多
価免疫原性組成物を前記ヒト患者に投与するステップを含み、ここで、各血清型の前記多
糖類用量は、約0.4~約4μgである、方法。 - 肺炎球菌(S.pneumoniae)多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免
疫原性組成物であって、ここで、前記コンジュゲートの各々は、担体タンパク質にコンジ
ュゲートされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含み、そしてこ
こで、前記多糖類タンパク質コンジュゲートは、
I)3、7F、19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B、2
4F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20;
II)3、7F、19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B、
24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20
A;
III)3、7F、19A、22F、33F、6A、15A、16F、23A、23B
、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび2
0B;
IV)3、7F、19A、22F、33F、6C、15A、16F、23A、23B、
24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20
;
V)3、7F、19A、22F、33F、6C、15A、16F、23A、23B、2
4F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20A
;および
VI)3、7F、19A、22F、33F、6C、15A、16F、23A、23B、
24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12F、15C、17Fおよび20
B
からなる群から選択される肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含
む、多価免疫原性組成物。 - 前記免疫原性組成物が、さらなる肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖
類を有する多糖類タンパク質コンジュゲートを含まない、請求項61に記載の多価免疫原
性組成物。 - 前記多糖類タンパク質コンジュゲートの少なくとも1つが、非プロトン性溶媒を含むコ
ンジュゲーション反応によって形成される、請求項61または62に記載の多価免疫原性
組成物。 - 前記多糖類タンパク質コンジュゲートの各々が、非プロトン性溶媒を含むコンジュゲー
ション反応によって形成される、請求項61から63のいずれか一項に記載の多価免疫原
性組成物。 - 前記非プロトン性溶媒がジメチルスルホキシド(DMSO)である、請求項63から6
4のいずれか一項に記載の多価免疫原性組成物。 - 前記担体タンパク質が、外膜タンパク質複合体(OMPC)、破傷風トキソイド、ジフ
テリアトキソイド、プロテインDおよびCRM197からなる群から選択される、請求項
61から65のいずれか一項に記載の多価免疫原性組成物。 - 前記担体タンパク質がCRM197である、請求項61から66のいずれか一項に記載
の多価免疫原性組成物。 - 組成物がアジュバントをさらに含む、請求項61から67のいずれか一項に記載の多価
免疫原性組成物。 - 組成物がアジュバントを含まない、請求項61から67のいずれか一項に記載の多価免
疫原性組成物。 - ヒト患者において防御免疫応答を誘導する方法であって、請求項61から69のいずれ
か一項に記載の多価免疫原性組成物を患者に投与するステップを含む方法。 - 前記患者が以前に多価肺炎球菌ワクチンで処置された、請求項70に記載の方法。
- 前記多価免疫原性組成物の1以上の追加の用量を前記患者に投与するステップをさらに
含む、請求項70から71のいずれか一項に記載の方法。 - 用量間の時間量が約4週間~約1年である、請求項70から72のいずれか一項に記載
の方法。 - 2回の追加の用量が前記患者に投与され、前記患者が免疫不全である、請求項70から
73のいずれか一項に記載の方法。 - 任意の順序で多価肺炎球菌ワクチンを前記患者に投与するステップをさらに含み、ここ
で、前記多価免疫原性組成物および前記多価肺炎球菌ワクチンは同じではない、請求項7
0から74のいずれか一項に記載の方法。 - 前記多価肺炎球菌ワクチンが、複数の肺炎球菌(S.pneumonia)多糖類タン
パク質コンジュゲートよりなり、ここで、前記コンジュゲートの各々が担体タンパク質に
コンジュゲートされた肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型の多糖類を含む、請
求項75に記載の方法。 - 前記多価免疫原性組成物および前記多価肺炎球菌ワクチンが同時に投与される、請求項
75から76のいずれか一項に記載の方法。 - 前記多価免疫原性組成物と前記多価肺炎球菌ワクチンの投与の間の時間量が、約4週間
~約1年である、請求項75から77のいずれか一項に記載の方法。 - 前記多価免疫原性組成物が前記多価肺炎球菌ワクチンの前に投与される、請求項75か
ら78のいずれか一項に記載の方法。 - 前記多価肺炎球菌ワクチンが前記多価免疫原性組成物の前に投与される、請求項75か
ら78のいずれか一項に記載の方法。 - 前記患者が50歳以上である、請求項70から80のいずれか一項に記載の方法。
- 前記患者が2~18歳である、請求項70から81のいずれか一項に記載の方法。
- 前記患者が18歳以上である、請求項70から82のいずれか一項に記載の方法。
- 前記患者が65歳以上である、請求項70から83のいずれか一項に記載の方法。
- 前記患者が免疫不全である、請求項70から84のいずれか一項に記載の方法。
- 前記免疫原性組成物が皮下または筋肉内注射によって投与される、請求項70から85
のいずれか一項に記載の方法。 - 前記免疫原性組成物が、インフルエンザに対するワクチンと同時に投与される、請求項
70から86のいずれか一項に記載の方法。 - 18歳以上の成人における肺炎球菌性肺炎および侵襲性疾患を予防する方法であって、
請求項62に記載の多価免疫原性組成物を患者に投与するステップを含む方法。 - 24種の肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae)菌株(3、
6A、6C、7F、8、9N、10A、11A、12F、15A、15B、15C、16
F、17F、19A、20A、20B、22F、23A、23B、24F、31、33F
および35B)によって引き起こされる肺炎球菌性肺炎および侵襲性疾患を予防する方法
であって、請求項62に記載の多価免疫原性組成物を患者に投与するステップを含む方法
。 - 21種の別個の多糖類タンパク質コンジュゲートを含む多価免疫原性組成物であって、
ここで、前記コンジュゲートの各々は担体タンパク質にコンジュゲートされた肺炎球菌(
S.pneumoniae)血清型の莢膜多糖類を含み、ここで、前記多糖類は、肺炎球
菌(S.pneumoniae)血清型3、7F、19A、22F、33F、6A、15
A、16F、23A、23B、24F、31、35B、8、9N、10A、11A、12
F、15C、17Fおよび20Aから調製され、そしてここで、前記担体タンパク質はC
RM197である多価免疫原性組成物。 - 免疫原性組成物が、他の肺炎球菌(S.pneumoniae)血清型から調製された
多糖類タンパク質コンジュゲートを含まない、請求項90に記載の多価免疫原性組成物。 - 前記多糖類タンパク質コンジュゲートの各々が、非プロトン性溶媒を含むコンジュゲー
ション反応によって形成され、ここで、前記非プロトン性溶媒がジメチルスルホキシド(
DMSO)である、請求項90に記載の多価免疫原性組成物。 - 組成物がアジュバントを含まない、請求項90に記載の多価免疫原性組成物。
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