BR112019014833A2 - composições imunogênicas para uso em vacinas pneumococais - Google Patents

Abstract

a presente invenção refere-se ao provimento de composições imunogênicas para proteção contra s. pneumoniae, em particular contra s. pneumoniae sorogrupo 18, enquanto limitando o número de conjugados. a presente invenção por isso refere-se a novas composições imunogênicas para uso em vacinas pneumococais e a vacinação de indivíduos humanos, em particular bebês e idosos, contra infecções pneumococais usando as ditas composições imunogênicas.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para COMPOSIÇÕES IMUNOGÊNICAS PARA USO EM VACINAS PNEUMOCOCAIS.

Campo da Invenção [001] A presente invenção refere-se a provimento de composições imunogênicas para proteção contra S. pneumoniae serogrupo 18. Composições imunogênicas da presente invenção tipicamente compreenderão antígenos sacarídeos capsulares conjugados (glicoconjugados), onde os sacarídeos são derivados de sorotipos de Streptococcus pneumoniae. A presente invenção se refere a novas composições imunogênicas para uso em vacinas pneumococais.

Antecedentes da Invenção [002] Infecções causadas por pneumococos são uma principal causa de morbidez e mortalidade em todo o mundo. Pneumonia, bacteremia febril e meningite são as manifestações mais comuns de doença pneumococal invasiva, enquanto disseminação bacteriana dentro do trato respiratório pode resultar em infecção de ouvido médio, sinusite ou bronquite recorrente. Comparadas com doença invasiva, as manifestações não invasivas são usualmente menos severas, porém consideravelmente mais comuns.

[003] O agente etiológico de doenças pneumococais, Streptococcus pneumoniae (pneumococcus), é um coccus encapsulado Grampositivo, circundado por uma cápsula de polissacarídeo. Diferenças na composição desta cápsula permitem diferenciação sorológica entre cerca de 91 tipos capsulares, alguns dos quais são frequentemente associados com doença pneumococal, outros raramente. Infecções pneumococais invasivas incluem pneumonia, meningite e bacteremia febril; entre as manifestações não invasivas comuns estão otite média, sinusite e bronquite. Vacinas de conjugados pneumococais (PCVs) são vacinas pneumococais usadas para proteger contra doença cau

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2/123 sada por S. pneumoniae (penumococcus). Existem atualmente três vacinas PCV disponíveis no mercado global: PREVNAR® (chamada Prevenar em alguns países (vacina heptavalente), SYNFLORIX® (uma vacina decavalente) e PREVNAR 13® (vacina tridecavalente).

[004] Os específicos sorotipos causando doença além de 13 em PREVNAR 13® variam por região, população, podem mudar com o tempo devido a aquisição de resistência a antibióticos, introdução de vacina pneumococal e tendências seculares de origem desconhecida. A adição de conjugados a uma composição imunogênica não é um processo direto quando a combinação de conjugados em uma única injeção multivalente pode resultar em competição entre os diferentes componentes e pode afetar adversamente a imunogenicidade de qualquer conjugado individual.

[005] Este fenômeno de interferência pode limitar o número de conjugados que podem ser incluídos em uma vacina multivalente. Por isso proteção contra um alto número de sorotipos, enquanto limitando o número de conjugados na composição, pode ser muito difícil de ser obtido à despeito do significante valor.

[006] Um objeto da presente invenção é prover composições imunogênicas para adequada proteção contra S. pneumoniae, em particular contra S. pneumoniae sorogrupo 18, enquanto limitado o número de conjugados.

[007] Streptococcus pneumoniae sorogrupo 18 consiste em quatro diferentes sorotipos, 18F, 18A, 18B, e 18C, cada um dos quais produz seu próprio polissacarídeo capsular específico de tipo. É um objeto da presente invenção prover composições imunogênicas para apropriada proteção contra S. pneumoniae sorotipos 18F, 18A, 18B, e 18C, com um número limitado de conjugados.

Sumário da Invenção [008] A presente invenção refere-se a uma composição imunoPetição 870190068127, de 18/07/2019, pág. 17/160

3/123 gênica compreendendo pelo menos um glicoconjugado de

S.pneumoniae sorotipo 18C para uso em um processo de imunização de um indivíduo contra infeção por S. penumoniae 18A, 18B e/ou 18F. Preferível mente a dita composição não compreende sacarídeo capsular de S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e 18F.

[009] Em um aspecto a presente invenção refere-se ao uso de uma composição imunogênica compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C para a fabricação de um medicamento para imunização de um indivíduo contra infecção por S. penumoniae sorotipo 18A, 18B e/ou 18F. Preferivelmente a dita composição não compreende sacarídeo capsular de S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F. Em um aspecto, as composições imunogênicas acima ainda compreendem pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipos 4, 6B, 9V, 14, 19F e/ou 23F. Em um aspecto, as composições imunogênicas acima ainda compreendem pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 1,5 e/ou 7F.

[0010] Em um aspecto as composições imunogênicas acima ainda compreendem pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 6A e/ou 19A.

[0011] Em um aspecto as composições imunogênicas acima ainda compreendem pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 3, 15B, 22F, 33F, 12F, 10A, 11A e/ou 8.

[0012] Ainda em um aspecto as composições imunogênicas acima ainda compreendem pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 2, 15C, 17F e/ou 20.

[0013] Em um aspecto as composições imunogênicas ainda compreendem pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 9N.

[0014] Ainda em um aspecto a composição imunogênica é uma composição de conjugado pneumococal 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15,

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16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24 ou 25-valente. Ainda em um aspecto os glicoconjugados das composições imunogênicas são conjugados individualmente a CRM197.

[0015] Em um aspecto, os glicoconjugados de S. penumoniae sorotipos 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 e/ou 23F das composições imunogênicas são conjugados individualmente a PD, e se presente, 0 glicoconjugado de S. penumoniae sorotipo 18C é conjugado a TT e 0 glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 19F é conjugado a DT.

[0016] Em um aspecto, os glicoconjugados são preparados usando química CDAP ou através de química de aminação redutiva.

[0017] A composição imunogênica ainda pode compreender antígenos de outros patógenos, e/ou pelo menos um adjuvante como fosfato de alumínio, sulfato de alumínio ou hidróxido de alumínio.

[0018] Em um aspecto as composições imunogênicas são capazes de elicitar anticorpos IgG em humanos os quais são capazes de ligação a S. pneumoniae sorotipos polissacarídeos 18A, 18B e/ou 18F em uma concentração de pelo menos 0,35 pg/mL como determinado por ensaio ELISA. Em um aspecto as composições imunogênicas são capazes de elicitação de um título de pelo menos 1:8 contra S. pneumoniae sorotipo 18A, 18B e/ou 18F em pelo menos 50% dos indivíduos como determinado por ensaio de morte opsonofagocítica in vitro (OPA).

[0019] Em um aspecto, as composições imunogênicas são capazes de aumentar significantemente a proporção de respondedores contra S. pneumoniae sorotipo 18A, 18B e/ou 18F como comparado à população pré-imunizada.

[0020] Em um aspecto as composições imunogênicas são capazes de aumentar significantemente os títulos OPA de indivíduos humanos contra S. pneumoniae sorotipo 18A, 18B e/ou 18F como comparado à população pré-imunizada.

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5/123 [0021] Em um aspecto as composições imunogênicas são para uso em um processo de imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipo 18A, 18B e/ou 18F.

[0022] Em um aspecto as composições imunogênicas são para uso em um processo para prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição causada por S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo, para uso para prevenir infecção de S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo ou para uso em um processo para proteger ou tratar um humano suscetível a infecção de S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F por meio de administração de ditas composições imunogênicas via uma rota sistêmica ou de mucosa.

[0023] Em um aspecto a presente invenção refere-se ao uso da composição imunogênica mostrada no presente documento para a fabricação de um medicamento para prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição causada por S.pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo, para uso para prevenir infecção com S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo ou para uso em um processo para proteger ou tratar um humano suscetível a infecção com S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F, por meio de administração de ditas composições imunogênicas via uma rota sistêmica ou de mucosa.

[0024] Em um aspecto a invenção refere-se a um processo de prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição associada com S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva da composição imunogênica da invenção.

[0025] Em um aspecto a invenção refere-se a um processo de prevenção de uma infecção por S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B

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6/123 e/ou 18F em um indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva da composição imunogênica da invenção.

[0026] A invenção ainda refere-se a um kit compreendendo uma composição imunogênica aqui mostrada e um folheto de i nformação , onde o dito folheto de informação menciona a habilidade da composição para elicitar anticorpos funcionais contra S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F e processo para produção de dito kit.

[0027] Foi surpreendentemente verificado que conjugado polissacarídeo de sorotipo 18C além de elicitar anticorpos reativos funcionais para sorogrupo 18C, pode adicionalmente elicitar anticorpos reativos cruzados, funcionais para os outros sorotipos dentro de sorogrupo 18: 18A, 18B e/ou 18F.

Figuras [0028] Figura 1. Respostas OPA Funcionais Cruzadas. Um subconjunto de 59 soros de adultos vacinados com uma vacina de conjugado pneumococal 13 valente (US Study 6115A1-004; Clinical Trials.gov Identifier: NCT00427895) foi avaliado em OPAS para a presença de anticorpos funcionais contra sorotipos 18C, 18F, 18A, 18B. A porcentagem de amostras com título positivo OPA (isto é, > 1:8) é indicada acima de cada grupo. Títulos de média geométrica (GMT) são listados no eixo x abaixo de cada grupo.

[0029] Figura 2. Respostas OPA funcionais - cruzadas de 66 soros pré/pós emparelhados. Um subconjunto de 66 painéis de soros pré- e pós-vacinados emparelhados de adultos vacinados com uma vaci na de conjugado pneumococal 13 valente (estudo 6115A1-3005; ClinicalTrials.gov Identifier: NCT00546572) foi avaliado em OPAs para a presença de anticorpos funcionais contra sorotipos 18C, 18F, 18A, e 18B. A porcentagem de amostras com título positivo OPA (isto é, > 1:8) é indicada acima de cada grupo. Títulos de média geométrica

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7/123 (GMT) são listados no eixo x abaixo de cada grupo.

[0030] Figura 3. Curvas de distribuição cumulativa reversa (RCDC) de pré- e pós- imunização - pneumococal sorotipo 18C. Curvas de distribuição cumulativa reversa de títulos OPA para sorotipo 18C de partir de um painel de soro pré- e pós-vacinação emparelhado (N=66) vacinado com uma vacina de conjugado pneumococal 13 valente (estudo 6115A1-3005; ClinicalTrials.gov Identifier: NCT00546572). Os gráficos representam a porcentagem de soros com título positivo OPA (isto é, > 1:8).

[0031] Figura 4. Curvas de distribuição cumulativa reversa (RCDC) de pré- e pós-imunização pneumococal sorotipo 18A. Urvas de distribuição cumulativa reversa de títulos OPA para sorotipo 18A de um painel de soro pré- e pós-vacinação emparelhado (N = 66) vacinado com uma vacina de conjugado pneumococal 13 valente (estudo 6115A1-3005; Clinicai Trials.gov ldentifier:NCT00546572). Os gráficos representam a porcentagem de soros com título positivo OPA (isto é, > 1:8).

[0032] Figura 5. Curvas de distribuição cumulativa reversa (RCDC) de pré- e pós-imunização pneumococal sorotipo 18B. Curvas de distribuição cumulativa reversa de títulos OPA para sorotipo 18B de um painel de soros pré- e pós-vacinação emparelhado (N = 66) vacinado com uma vacina de conjugado pneumococal 13 valente (estudo 6115A1-3005; ClinicalTrials.gov Identifier: NCT00546572). Os gráficos representam a porcentagem de soros com título positivo OPA (isto é, > 1:8).

[0033] Figura 6. Curvas de distribuição cumulativa reversa (RCDC) de pré- e pós-imunização pneumococal sorotipo 18F. Curvas de distribuição cumulativa reversa de títulos OPA para sorotipo 18F a partir de um painel de soros pré- e pós-vacinação emparelhado (N = 66) vacinado com uma vacina de conjugado pneumococal 13 valente (estudo

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6114A1-3005; ClinicalTrials.gov Identifier: NCT00546572). Os gráficos representam a porcentagem de soros com título positivo OPA (isto é, > 1:8).

Composições imunoqênicas da invenção [0034] Composições imunogênicas da presente invenção tipicamente compreenderão antígenos de sacarídeo capsular conjugados (também chamados glicoconjugados), onde os sacarídeos são derivados de sorotipos de S. pneumoniae.

[0035] Preferivelmente, o número de sacarídeos capsulares de

S.pneumoniae pode variar de 1 sorotipo (ou v, valências) a 25 sorotipos diferentes (25v). Em uma modalidade, há um sorotipo. Em uma modalidade, existem 2 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 3 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 4 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 5 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 6 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 7 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 8 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 9 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 10 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 11 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 12 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 13 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 14 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 15 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 16 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 17 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 18 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 19 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 20 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 21 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 22 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 23 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 24 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, existem 25 diferentes sorotipos. Os sacarídeos capsulares são

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9/123 conjugados a uma proteína carreadora para formação de glicoconjugados com o aqui descrito abaixo.

[0036] Se o proteína carreadora é o mesma para 2 ou mais sacarídeos na composição, os sacarídeos podem ser conjugados à mesma molécula do carreador proteína (moléculas carreadoras tendo 2 ou mais diferentes sacarídeos conjugados às mesmas) [ver, por exemplo, W02004/083251].

[0037] Em uma modalidade preferida, os sacarídeos são cada um conjugados individualmente a diferentes moléculas do carreador proteína (cada molécula de carreador proteína somente tendo um tipo de sacarídeo conjugado à mesma). Na dita modalidade, os sacarídeos capsulares são ditos serem individualmente conjugados à proteína carreadora.

[0038] Para os propósitos da invenção o termo glicoconjugado indica um sacarídeo capsular ligado covalentemente a uma proteína carreadora. Em uma modalidade, um sacarídeo capsular está ligado diretamente a uma proteína carreadora. Em uma segunda modalidade um sacarídeo bacteriano está ligado a uma proteína através de um espaçador / ligador.

1.1 Proteína carreadora da invenção [0039] Um componente do glicoconjugado da invenção é uma proteína carreadora à qual o sacarídeo é conjugado. Os termos carreador proteína ou proteína carreadora ou carreador podem ser aqui usados intercambiavelmente. Proteínas carreadoras devem ser suscetíveis a procedimentos padrões de conjugação.

[0040] Em uma modalidade preferida, a proteína carreadora dos glicoconjugados é selecionada no grupo consistindo em: DT (toxina de difteria), TT (toxoide de tétano) ou fragmento C de TT, CRM197 (uma variante de toxina de difteria não tóxica mas antigenicamente idêntica), a cadeia A de mutante de toxina de difteria CRM197

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10/123 (CN103495161), outros mutantes de DT (como CRM176, CRM228, CRM45 (Uchida et al. (1973) J. Biol. Chem. 218:3838-3844), CRM9, CRM102, CRM103 ou CRM107; e outras mutações descritas por Nicholls and Youle em Genetically Engineered Toxins, Ed: Frankel, Maecel Dekker Inc. (1992); supressão ou mutação de Glu-148 para Asp, Gin ou Ser e/ou Ala 158 para Gly e outras mutações mostradas em patentes U.S. N^os· 4 709 017 e 4 950 740; mutação de pelo menos um ou mais resíduos Lys 516, Lys 526, Phe 530 e/ou Lys 534 e outras mutações mostradas em patentes U.S.N^0S· 5 917 017, e 6 455 673; ou fragmento mostrado na patente U.S. N⁰· 5 843 711, pneumolisina pneumococal (ply) (Kuo et al. (1995) Infect Immun 63:2706-2713) incluindo detoxificada fio de alguma maneira, por exemplo dPLY-GMBS (W02004/081515 e WO 2006/032499) ou dPLY-formol, PhtX, incluindo PhtA, PhtB, PhtD, phtE (sequências de PhtA, PhtB, phtD ou PhtE são mostradas em WO 00/37105 e WOOO/39299) e fusões de proteínas Pht, por exemplo, fusões PhtDE, fusões PhtBE, Pht A-E (WO 01/98334, WO 03/054007, WO 2009/000826), OMPC (proteína de membrana externa meningococal - usualmente extraída de Neisseria meningitidis sorogrupo Β (EP0372501), PorB (de N. meningitidis'), PD (Aemophilus influenzae proteína D; ver, por exemplo, EP0594610 B), ou seus equivalentes imunologicamente funcionais, peptídeos sintéticos (EP0378881, EP0427347), proteínas de choque térmico (WO 93/17712, WO 94/03208), proteínas pertussis (WO 98/58668, EP0471177), citocinas, linfocinas, fatores de crescimento ou hormônios (WO 91/01146), proteínas artificiais compreendendo múltiplos epitopos de célula T CD4+ humana de vários antígenos derivados de patógenos (Falugi et al. (2001) Eur J Immunol 31:3816-3824) tal como proteína N19 (Baraldoi etal. (2004) Infect Immun 72:4884-4887) proteína de superfície penumococal PspA (WO 02/091998), proteínas de absorção de ferro (WO 01/72337), toxina A e B de Clostridium difficile

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11/123 (WO 00/61761), proteínas de ligação de transferrina, proteína de adesão pneumococal (PsaA), exotoxina A de Pseudomonas aeruginosa recombinante (em particular seus mutantes não tóxicos (tal como exotoxina A transportando uma substituição em ácido glutâmico 553 (Douglas et al. (1987) J. Bacteriol. 169(11):4967-4971)). Outras proteínas, como ovalbumina, hemocianina de limpeta buraco de fechadura (KLH), albumina de soro bovino (BSA) ou derivado de proteína purificado de tuberculina (PPD) também podem ser usadas como proteínas carreadoras. Outras proteínas carreadoras apropriadas incluem toxinas bacterianas inativadas como toxoide de cólera (por exemplo, como descrito em WO 2004/083251), Escherichia coli LT, E. coli ST, e exotoxina A de P. aeruginosa.

[0041] Em uma modalidade preferida, a proteína carreadora dos glicoconjugados é selecionada independentemente do grupo consistindo em TT, DT, mutantes de DT (como CRM197), proteína D de H. influenzae, PhtX, fusões PhtDE (particularmente aqueles descritos em WO 01/98334 e WO 03/054007), pneumolisina detoxificada, PorB, proteína N19, PspA, OMPC, toxina A ou B de C. difficile e PsaA.

[0042] Em uma modalidade, a proteína carreadora dos glicoconjugados da invenção é DT (toxoide de difteria). Em uma outra modalidade, a proteína carreadora dos glicoconjugados da invenção é TT (toxoide de tétano).

[0043] Em uma outra modalidade, a proteína carreadora dos glicoconjugados da invenção é PD (proteína D de H. influenzae; ver, por exemplo, EP0594610 B).

[0044] A proteína CRM197 é uma forma não tóxica de toxina de difteria, mas é imunologicamente indistinguível da toxina de difteria. CRM 197 é produzida por Corynebacterium diphtheriae infectado pelo fago não toxigênico β197^tox- criado por mutagênese de nitrosoguanidina do corinefago toxigênico beta (Uchida etal. (1971) Nature New Bio

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12/123 logy 233:8-11). A proteína CRM197 tem 0 mesmo peso molecular como a toxina de difteria mas difere da mesma através de uma única mudança de base (guanina para adenina) no gene estrutural. Esta única mudança de base causa uma substituição de aminoácido (ácido glutâmico por glicina) na proteína madura e elimina as propriedades tóxicas de toxina de difteria. A proteína CRM197 é um carreador dependente de célula-T seguro e efetivo para sacarídeos. Ainda detalhes sobre CRM197 e sua produção podem ser encontrados, por exemplo, em patente U.S. N⁰· 5 614 382. Em uma modalidade, os sacarídeos capsulares da invenção são conjugados a proteína CRM197 ou a cadeia A de CRM 197 (ver CN103495161). Em uma modalidade, os sacarídeos capsulares da invenção são conjugados a cadeia A de CRM197 obtida via expressão por E. coli geneticamente recombinante (ver CN103495161). Em uma modalidade, os sacarídeos capsulares da invenção são todos conjugados a CRM197. Em uma modalidade, os sacarídeos capsulares da invenção são todos conjugados à cadeia A de CRM197.

[0045] Da mesma maneira, em modalidades frequentes, os glicoconjugados da invenção compreendem CRM197 como a proteína carreadora, onde 0 polissacarídeo capsular está ligado covalentemente a CRM197.

1.2. Sacarídeo capsular da invenção [0046] O termo sacarídeo por todo este relatório descritivo pode indicar polissacarídeo ou oligossacarídeo, em particular um polissacarídeo capsular de S. pneumoniae.

[0047] Polissacarídeos capsulares são preparados através de técnicas padrões conhecidas por aqueles versados na técnica.

[0048] Na presente invenção, polissacarídeos capsulares podem ser preparados, por exemplo, a partir de sorotipos 1,2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 9N, 10A, 11 A, 12F, 14, 15B, 15C, 17F, 18C, 19A, 19F, 20,

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22F, 23F e 33F de S. pneumonia. Tipicamente polissacarideos capsulares são produzidos através de crescimento de cada sorotipo de S. pneumoniae em um meio (por exemplo, em um meio baseado em soja), os polissacarideos são então preparados a partir da cultura de bactérias. Linhagens bacterianas de S. pneumoniae usadas para fabricar os respectivos polissacarideos que são usados nos glicoconjugados da invenção podem ser obtidas de coleções de cultura estabelecidas ou espécimes clínicos.

[0049] A população do organismo (cada sorotipo de S. pneumoniae) é frequentemente propaganda a partir de um frasco semente para garrafas sementes e passada através de um ou mais fermentadores de semente de volume crescent até serem atingidos volumes de fermentação de escala de produção. No fim do ciclo de crescimento as células são lisadas e o caldo de lisado é então colhido para processamento à jusante (purificação) (ver, por exemplo, WO 2006/110381, WO 2008/118752, e U.S. Patent App. Pub. Nos. 2006/0228380, 2006/0228381,2008/0102498 e 2008/0286838).

[0050] Os polissacarideos individuais são tipicamente purificados através de centrifugação, precipitação, ultrafiltração, e/ou cromatografia de coluna (ver, por exemplo, WO 2006/110352 e WO 2008/118752).

[0051] Polissacarideos purificados podem ser ativados (por exemplo, ativados quimicamente) para torna-los capazes de reação (por exemplo, tanto diretamente para a proteína carreadora via um ligador tal como um espaçador eTEC) e então incorporados em glicoconjugados da invenção, como ainda aqui descrito.

[0052] Polissacarideos capsulares de S. pneumoniae compreendem unidades oligossacarídeos de repetição que podem conter até 8 resíduos de açúcar.

[0053] Em uma modalidade, sacarídeo capsular da invenção pode

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14/123 ser uma unidade oligossacarídeo, ou uma cadeia de sacarídeo mais curta que o comprimento nativo de unidades oligossacarídeos de repetição. Em uma modalidade, sacarídeo capsular da invenção é uma unidade de repetição oligossacarídeo do sorotipo relevante.

[0054] Em uma modalidade, sacarídeo capsular da invenção pode ser oligossacarídeo. Oligossacarídeos têm um baixo número de unidade de repetição (tipicamente 5-15 unidades de repetição) e tipicamente são derivados sinteticamente ou através de hidrólise de polissacarídeos.

[0055] Em uma modalidade, todos os sacarídeos capsulares da presente invenção e nas composições imunogênicas da presente invenção são polissacarídeos. Polissacarídeos capsulares de alto peso molecular são capazes de induzir certas respostas imunes para anticorpos devido aos epítopos presentes sobre a superfície antigênica. O isolamento e purificação de polissacarídeos capsulares de alto peso molecular é preferivelmente contemplado para uso nas composições conjugadas e processos da presente invenção.

[0056] Em algumas modalidades, os polissacarídeos purificados antes de conjugação têm um peso molecular de entre 5 kDa e 4000 kDa. Em outras tais modalidades, o polissacarídeo tem um pesdo molecu lar de entre 10 kDa e 4000 kDa; entre 50 kDa e 4000 kDa; entre 50 kDa e 3000 kDa; entre 50 kDa e 2000 kDa; em ter 50 kDa e 1500 kDa; entre 50 kDa e 1000 kDa; entre 50 kDa e 750 kDa; entre 50 kDa e 500 kDa; entre 100 kDa e 4000 kDa; entre 100 kDa e 3000 kDa; 100 kDa e 2000 kDa; entre 100 kDa e 1500 kDa; em ter 100 kDa e 1000 kDa; entre 100 kDa e 750 kDa; em ter 100 kDa e 500 kDa; entre 100 e 400 kDa; entre 200 kDa e 4000 kDa; entre 200 kDa e 3000 kDa; entre 200 kDa e 2000 kDa; entre 200 kDa e 1500 kDa; entre 200 kDa e 1000 kDa; ou entre 200 kDa e 500 kDa.

[0057] Ainda em modalidades, o polissacarídeo capsular tem um

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15/123 peso molecular de entre 70 kDa a 150 kDa; 80 kDa a 160 kDa; 90 kDa a 250 kDa; 100 kDa a 1,000; 100 kDa a 500 kDa; 100 kDa a 400 kDa; 100 kDa a 160 kDa; 150 kDa a 600 kDa; 200 kDa a 1,000 kDa; 200 kDa a 600 kDa; 200 kDa a 400 kDa; 300 kDa a 1,000 KDa; 300 kDa a 600 kDa; 300 kDa a 500 kDa ou 500 kDa a 600 kDa.

[0058] Ainda em modalidades, o polissacarideo capsular tern urn peso molecular de entre 5 kDa a 100 kDa; 7 kDa a 100 kDa; 10 kDa a 100 kDa; 20 kDa a 100 kDa; 30 kDa a 100 kDa; 40 kDa a 100 kDa; 50 kDa a 100 kDa; 60 kDa a 100 kDa; 70 kDa a 100 kDa; 80 kDa a 100 kDa; 90 kDa a 100 kDa; 5 kDa a 90 KDa; 5 kDa a 80 kDa; 5 kDa a 70 kDa; 5 kDa to 60 kDa; 5 kDa to 50 kDa; 5 kDa to 40 kDa; 5 kDa to 30 kDa; 5 kDa a 20 kDa ou 5 kDa a 10 kDa. Qualquer número inteiro dentro de qualquer uma das faixas acima é contemplados como uma modalidade da descrição.

[0059] Um polissacarideo pode tornar-se levemente reduzido em tamanho durante procedimentos normais de purificação. Adicionalmente, como aqui descrito, polissacarideo pode ser submetido a técnicas de colagem antes de conjugação. Colagem mecânica ou química pode ser empregada. Hidrólise química pode ser conduzida usando ácido acético. Por exemplo, sacarídeos de sorotipo 18C podem ser colados (e des-O-acetilados) através de tratamento com ácido acético (ver, por exemplo, WQ2006/110381, página 37, linhas 1-4). Colagem mecânica pode ser conduzida usando Cisalhamento de Homogeneizaç ão de Alta Pressão. As faixas de pesos moleculares mencionadas acima se referem a polissacarídeos purificados antes de conjugação (por exemplo, antes de ativação).

[0060] Em uma modalidade preferida os polissacarídeos purificados, são polissacarídeos capsulares de sorotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 9N, 10A, 11 A, 12F, 14, 15B, 15C, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F ou 33F de S. pneumonia, onde o polissacarideo capsular tem

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16/123 um peso molecular caindo dentro de uma das faixas de peso molecular como aqui descrito acima.

[0061] Como aqui usado, o termo peso molecular de polissacarídeo ou de conjugado de polissacarídeo - proteína carreadora referese a peso molecu lar calculado por cromatografia de exclusão de tamanho (SEC) combinada com detetor de dispersão de luz laser de múltiplos ângulos (MALLS).

[0062] Em algumas modalidades, os sacarídeos pneumococais de sorotipos 9V, 18C, 11 A, 15B, 22F, e/ou 33F da invenção são Oacetilados. Em algumas modalidades, os sacarídeos pneumococais de sorotipos 9V, 11 A, 15B, 22F e/ou 33F da invenção são O-acetilados. Em uma modalidade preferida, o sacarídeo pneumococal de sorotipo 18C da invenção está des-O-acetilado. Por exemplo, sacarídeos de sorotipo 18C podem ser des-O-acetilados através de tratamento ácido (ver, por exemplo, W02006/110381, página 37 linhas 1 -4).

[0063] O grau de O-acetilação do polissacarídeo pode ser determinado através de qualquer processo conhecido na técnica, por exemplo, através de RNM de próton (ver, por exemplo, Lemercinier et al. (1996) Carbohydrate Research 296:83-96, Jones et al. (2002) J. Pharmaceutical and Biomedical Analysis 30:1233-1247, WO 2005/033148 e WO 00/56357). Um outro processo comumente usado é descrito em Hestrin (1949) J. Biol. Chem. 180:249-261. Preferivelmente, a presença de grupos O-acetila é determinada por análise de HPLC-íon.

[0064] Os polissacarídeos purificados aqui descritos são ativados quimicamente para tornar os sacarídeos capazes de reagirem com a proteína carreadora. Estes conjugados pneumococais são preparados através de processos separados e formulados em uma formulação de dosagem simples como descrito abaixo.

·3· Glicoconiuqados da invenção

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17/123 [0065] Os sacarídeos purificados são ativados quimicamente para tornar os sacarídeos (isto é, sacarídeos ativados) capazes de reagirem com a proteína carreadora, tanto diretamente como via um ligador. Uma vez ativado, cada sacarídeo capsular é separadamente conjugado a uma proteína carreadora para formar um glicoconjugado. Em uma modalidade, cada sacarídeo capsular está conjugado à mesma proteína carreadora. A ativação química dos sacarídeos e subsequente conjugação à proteína carreadora pode ser obtida através de processos de ativação e conjugação aqui mostrados.

·3·1 Glicoconiuqados da invenção [0066] Polissacarídeos capsulares de sorotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 9N, 10A, 11 A, 12F, 14, 15B, 15C, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F e/ou 33F de S. pneumoniae são preparados como descrito acima.

[0067] Em uma modalidade, os polissacarídeos são ativados com tetra flúor borato de 1-ciano-4-dimetil amino piridinium (CDAP) para formar um cianeto éster. O polissacarídeo ativado é então acoplado diretamente ou via um grupo espaçador (ligador) a um grupo amino sobre a proteína carreadora (preferivelmente CRM197). Por exemplo, 0 espaçador pode ser cistamina ou cisteamina para render um polissacarídeo tiolado que pode ser acoplado ao carreador via uma ligação tio éter obtida após reação com uma proteína carreadora ativada - maleimida (por exemplo, usando éster de N-[y-maleimido butiloxi] succinimida (GMBS)) ou uma proteína carreadora halo acetilada (por exemplo, usando iodo acetimida, bromo acetato de N-succinimidila (SBA; SIB), (4-iodo acetil) amino benzoato de N-succinimidila (SIAB), (4-iodo acetil) amino benzoato de sulfo succinimidila (sulfo-SIAB), iodo acetato de N-succinimidila (SAI), ou 3-[bromo acetamido] propionato de succinimidila (SBAP)). Preferivelmente, 0 cianeto éster (opcional mente fabricado através de química CDAP) é acoplado com hexano diamina ou

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18/123 diidrazida de ácido adípico (ADH) e o sacarídeo derivado-amino é conjugado à proteína carreadora (por exemplo, CRM197) usando química carbodiimida (por exemplo, EDAC ou EDC) via um grupo carboxila sobre a proteína carreadora. Tais conjugados são descritos, por exemplo, em WO93/15760, WO 95/08348 e WO 96/129094.

[0068] Em uma modalidade, da presente invenção, os glicconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1,2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 9N, 10A, 11 A, 12F, 14, 15B, 15C, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F e/ou 33F são preparados usando química CDAP. Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, e 23F são preparados usando química CDAP. Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1,4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, e 23F são preparados usando química CDAP. Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, e 23F são preparados usando química CDAP. Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoconjugados de S. pneumoniae de sorotipos 1,4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, e 23F são preparados usando química CDAP. Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1,3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, e 23F são preparados usando química CDAP.

[0069] Outras técnicas apropriadas para conjugação usam carbodiimidas, hidrazidas, ésteres ativos, norborano, ácido p-nitro benzóico, N-hidróxi succinimida, S-NHS, EDC, TSTU. Muitos são descritos na publicação de pedido de patente internacional N⁰· WO 98/42721. Conjugação pode envolver um ligador carbonila que pode ser formado por reação de um grupo hidroxila livre do sacarídeo com GDI (ver Bethell et al. (1979) 1. Biol. Chern. 254:2572-2574; Hearn et al. (1981) J. Chromatogr. 218:509-518) seguida por reação com uma proteína para

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19/123 formar uma ligação carbamato. Isto pode envolver redução do terminus anomérico para um grupo hidroxila primária, reação do grupo hidroxila primária com GDI para formar um intermediário carbamato GDI e acoplamento de intermediário Carbamato GDI com um grupo amino sobre uma proteína.

[0070] Em uma modalidade preferida, pelo menos um de polissacarídeos capsulares de sorotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 9N, 10A, 11 A, 12F, 14, 15B, 15C, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F e 33F de S. pneumoniae é conjugado à proteína carreadora através de aminação redutiva (tal como descrito nas publicações de pedidos de patente U.S. N^os· 2006/0228380, 2007/184072, 2007/0231340 e 2007/0184071, WO 2006/110381, WO 2008/079653, e WO 2008/143709).

[0071] Em uma modalidade, da presente invenção, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C é preparado através de aminação redutiva. Em uma modalidade, da presente invenção, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 6A é preparado através de am inação redutiva. Em uma modalidade, da presente invenção, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 19A é preparado através de aminação redutiva. Em uma modalidade, da presente invenção, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 3 é preparado através de aminação redutiva. Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoco njugados de S. pneumoniae sorotipos 6A e 19A são preparados através de aminação redutiva. Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoco n jugados de S. pneumoniae sorotipos 3, 6A e 19A são preparados através de aminação redutiva.

[0072] Em uma modalidade preferida da presente invenção, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, e 23F são preparados através de aminação redutiva. Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoconjugados de S. pneumoniae

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20/123 sorotipos 1, 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F e 23F são preparados através de aminação redutiva. Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1,4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F e 23F são preparados por aminação redutiva. Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1,4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, e 23F são preparados através de aminação redutiva. Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F são preparados através de aminação redutiva. Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F são todos preparados através de aminação redutiva.

[0073] Em uma outra modalidade preferida, os glicoconjugados de

S. pneumoniae sorotipos 1,3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 22F e 23F são todos preparados através de aminação redutiva.

[0074] Em uma outra modalidade preferida, os glicoconjugados de

S.pneumoniae sorotipos 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F e 23F são todos preparados por aminação redutiva.

[0075] Em uma outra modalidade preferida, os glicoconjugados de

S. pneumoniae sorotipos 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11 A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F e 23F são todos preparados através de aminação redutiva.

[0076] Em uma outra modalidade preferida, os glicoconjugados de

S. pneumoniae sorotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F são todos preparados através de aminação redutiva.

[0077] Em uma outra modalidade preferida, os glicoconjugados de

S. pneumoniae sorotipos 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 12F, 14, 15C, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F e 33F são todos preparados através de aminação redutiva.

[0078] Em uma outra modalidade preferida, os glicoconjugados de

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S. pneumoniae sorotipos 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11 A, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F e 23F são todos preparados através de aminação redutiva.

[0079] Em uma outra modalidade preferida, os glicoconjugados de

S. pneumoniae sorotipos 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11 A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F e 23F são todos preparados através de aminação redutiva.

[0080] Em uma outra modalidade preferida, os glicoconjugados de

S. pneumoniae sorotipos 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11 A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F e 33F são todos preparados através de aminação redutiva.

[0081] Em uma outra modalidade preferida, os gliconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11 A, 12F, 14, 15B, 15C, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F e 33F são todos preparados através de aminação redutiva.

[0082] Em uma outra modalidade preferida, os glicoconjugados de

S. pneumoniae sorotipos 1,2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 9N, 10A, 11 A, 12F, 14, 15B, 15C, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F e 33F são todos preparados por aminação redutiva.

[0083] Aminação redutiva envolve duas etapas, (1) oxidação do polissacarídeo, (2) redução do polissacarídeo ativado e uma proteína carreadora para formar um conjugado. Antes de oxidação, o polissacarídeo é opcionalmente hidrolisado. Hidrólise mecânica ou química pode ser empregada. Hidrólise química pode ser conduzida usando ácido acético. A etapa de oxidação pode envolver reação com periodato. Para o propósito da presente invenção, o termo periodato inclui ambos periodato e ácido periódico; o termo também inclui ambos, metaperiodato (IO4) e ortoperiodato (ΙΟθ⁵ ) e inclui os vários sais de periodato (por exemplo, periodato de sódio e periodato de potássio). Em uma modalidade, 0 polissacarídeo capsular é oxidado na presença de me

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22/123 taperiodato, preferivelmente na presença de periodato de sódio (NalCXi). Em uma outra modalidade o polissacarídeo capsular é oxidado na presença de ortoperiodato, preferivelmente na presença de ácido periódico.

[0084] Em uma modalidade, o agente oxidante é um composto radical nitróxido ou nitroxila estável, tal como compostos piperidina-N-óxi ou pirrolidina-N-óxi, na presença de um oxidante para oxidar seletivamente hidroxilas primárias (como descrito em WO 2014/097099). Na dita reação, o oxidante real é o sal N-oxoamônio, em um ciclo catalítico. Em um aspecto, o dito composto radical nitróxido ou nitroxila estável é composto piperidina-N-óxi ou pirrolidina-N-óxi. Em um aspecto, o dito composto radical nitróxido ou nitroxila estável transporta uma metrade TEMPO (2,2,6,6-tetra metil-1 -piperidinilóxi) ou PROXYL (2,2,5,5tetra metil-1-pirrolidinilóxi). Em um aspecto, o dito composto radical nitroxila estável é TEMPO ou um seu derivado. Em um aspecto, o dito oxidante é uma molécula transportando uma metade N-halo. Em um aspecto, o dito oxidante é selecionado do grupo consistindo em Ncloro succinimida, N-bromo succinimida, N-iodo succinimida, ácido dicloro isocianúrico, 1,3,5-tricloro-1,3,5-triazinano-2,4,6-triona, ácido dibromo isocianúrico, 1,3,5-tribromo-1,3,5-triazinano-2,4,6-triona, ácido diiodo isocianúrico e 1,3,5-tri-iodo-1,3,5-triazinano-2,4,6-triona. Preferivelmente o dito oxidante é N-cloro succinimida.

[0085] Em uma modalidade preferida, polissacarídeos capsulares de sorotipos 12F de S. pneumoniae são conjugados à proteína carreadora através de aminação redutiva, onde o agente oxidante é radical livre 2,2,6,6-tetra metil-1-piperidinilóxi (TEMPO) e N-cloro succinimida (NCS) como o co-oxidante (como descrito em WO 2014/097099). Por isso em um aspecto, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 12F são obteníveis através de um processo compreendendo as etapas de: a) reação de um sacarídeo 12F com 2,2,6,6-tetra metil-1

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23/123 piperidinilóxi (TEMPO) e N-cloro succinimida (NCS) em um solvente aquoso para produzir um sacarídeo ativado; e b) reação de sacarídeo ativado com uma proteína carreadora compreendendo um ou mais grupos amina (o dito processo é designado daqui por diante como aminação redutiva -NCS/TEMPO).

[0086] Opcionalmente a reação de oxidação é rapidamente resfriada pela adição de um agente de resfriamento. O agente de resfriamento pode ser selecionado de dióis vicinais, 1,2-amino álcoois, aminoácidos, glutationa, sulfito, bissulfato, ditionito, metabissulfito, tiossulfato, fosfitos, hipofosfitos ou ácido fosforoso (tal como glicerol, etileno glicol, propano-1,2-diol, butan-1,2-diol ou butan-2,3-diol, ácido ascórbico).

[0087] Seguindo a etapa de oxidação do polissacarídeo, o polissacarídeo é dito estar ativado e é referido aqui abaixo como um polissacarídeo ativado. O polissacarídeo ativado e a proteína carreadora podem ser liofilizados (secados - congelados), tanto independentemente (liofilização discreta) como juntos (coliofilizados). Em uma modalidade, o polissacarídeo ativado e a proteína carreadora são coliofilizados. Em uma outra modalidade o polissacarídeo ativado e a proteína carreadora são liofilizados independentemente.

[0088] Em uma modalidade, a liofilização ocorre na presença de um açúcar não redutor, possíveis açúcares não rerdutores incluem sucrose, trealose, rafinose, estaquiose, melezitose, dextrano, manitol, lactitol e palatinite.

[0089] A segunda etapa do processo de conjugação é a redução do polissacarídeo ativado e uma proteína carreadora para formar um conjugado (assim chamada aminação redutiva), usando um agente redutor. Agentes redutores que são apropriados incluem os ciano boroidretos (como cian o boroidreto de sódio, triacetóxi boroidreto de sódio ou boroidreto de sódio ou zinco na presença de ácidos de Bronsted

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24/123 ou Lewis), amino boranos como piridino borano, 2-picolino borano, 2,6diborano metanol, dimetil amino borano, t-BuMe'PrN-BHa ou 5-etil-2metil piridino borano (PEMB) ou resina de troca de boroidreto. Em uma modalidade, o agente redutor é ciano boroidreto de sódio.

[0090] Em uma modalidade, a reação de redução é realizada em solvente aquoso (por exemplo, selecionado de PBS, MES, HEPES, Bis-tris, ADA, PIPES, MOPSO, BES, MOPS, DIPSO, MOBS, HEPPSO, POPSO, TEA, EPPS, Bicine ou HEPB, em u m pH entre 6,0 e 8,5, 7,0 e 8,0, ou 7,0 e 7,5), em uma outra modalidade a reação é realizada em solvente aprótico. Em uma modalidade, a reação de redução é realizada em solvente DMSO (sulfóxido de dimetila) ou em DMF (dimetil formamida). O solvente DMSO ou DMF pode ser usado para reconstituir o polissacarídeo ativado e a proteína carreadora que foram liofilizados.

[0091] No fim da reação de redução, podem restar grupos aldeído não reagidos nos conjugados, estes podem ser capeados usando apropriado agente de capeamento. Em uma modalidade, este agente de capeamento é boroidreto de sódio (NaBH4). Seguindo a conjugação (a reação de redução e opcionalmente o capeamento), os glicoconjugados podem ser purificados (enriquecidos com relação à quantidade de conjugado proteína - polissacarídeo) através de uma variedade de técnicas conhecidas por aqueles versados. Estas técnicas incluem diálise, operações de concentração / diafiltração, eluição / precipitação filtração de fluxo tangencial, cromatografia de coluna (DEAE ou cromatografia de interação hidrofóbica), e filtração profunda. Em uma modalidade, os glicoconjugados são purificados por diafiltração ou cromatografia de troca de íons ou cromatografia de exclusão de tamanho.

[0092] Em uma modalidade, os glicoconjugados são filtrados estéreis. Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, e 23F

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25/123 são preparados usando química CDAP e o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 6A é preparado por am inação redutiva.

[0093] Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1,4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, e 23F são preparados usando química CDAP e o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 19A é preparado através de aminação redutiva.

[0094] Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoconjugados de S. penumoniae sorotipos 1,4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, e 23F são preparados usando química CDAP e os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 6A e 19A são preparados por aminação redutiva. [0095] Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1,4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, e 23F são preparados usando química CDAP e os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 3, 6A, e 19A são preparados através de aminação redutiva.

[0096] Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1,4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, e 23F são preparados usando química CDAP e o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 6A é preparado através de aminação redutiva.

[0097] Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1,4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, e 23F são preparados usando química CDAP e o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 19A é preparado através de aminação redutiva.

[0098] Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, 22F e 23F são preparados usando química CDAP e os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 6A, e 19A são preparados através de aminação redutiva.

[0099] Em uma modalidade, da presente invenção, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1,4, 5, 6B, 7F, 8, 9V, 14, 18C, 19F,

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22F e 23F são preparados usando química CDAP e os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 3, 6A, e 19A são preparados através de aminação redutiva.

[00100] Em uma modalidade, os glicoconjugados da invenção são preparados usando a conjugação eTEC, tal como descrito em WO 2014/027302. Os ditos glicoconjugados compreendem um sacarídeo conjugado covalentemente a uma proteína carreadora através de um ou mais espaçadores eTEC, onde o sacarídeo é covalentemente conjugado ao espaçador eTEC através de uma ligação carbamato, e onde a proteína carreadora está covalentemente conjugada ao espaçador eTEC através de uma ligação amida. Os glicoconjugados ligados eTEC da invenção podem ser representados pela fórmula genérica (I):

[00101] onde os átomos que compreendem o espaçador eTEC estão contidos na caixa central.

[00102] O espaçador eTEC inclui sete átomos lineares (isto é, C(O)NH(CH2)2SCH2C(O)- ) e proporciona estáveis ligações tioéter e amida entre o sacarídeo e a proteína carreadora. Síntese do glicoconjugado ligado a eTEC envolve reação de um grupo hidroxila ativado do sacarídeo com o grupo amino de um reagente tioalquil amina, por exemplo, cistamina ou cisteinamina ou um seu sal, formando uma ligação carbamato para o sacarídeo para prover um sacarídeo tiolado. Geração de um ou mais grupos sulfidrila livres é realizada através de reação com um agente redutor para prover um sacarídeo tiolado ativado. Reação dos grupos sulfidrila do sacarídeo tiolado ativado com uma proteína carreadora ativada tendo um ou mais grupos α-halo acetamida sobre resíduos contendo amina gera uma ligação tioéter para formar o conjugado, onde a proteína carreadora está ligada ao espaçador

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27/123 eTEC através de uma ligação amida.

[00103] Nos ditos glicoconjugados da invenção, o sacarídeo pode ser um polissacarídeo ou um oligossacarídeo. A proteína carreadora pode ser selecionada de qualquer carreador apropriado como aqui descrito ou conhecido por aqueles versados na técnica. Em modalidades frequentes, o sacarídeo é um polissacarídeo. Em algumas tais modalidades, a proteína carreadora é CRM197. Em algumas tais modalidades 0 glicoconjugado ligado eTEC compreende polissacarídeo capsular de sorotipo 33F de S. pneumoniae.

[00104] Em modalidades particularmente preferidas, 0 glicoconjugado ligado eTEC compreende um polissacarídeo capsular de sorotipo 33F pneumococal (Pn33F), que está conjugado covalentemente a CRM197 através de um espaçador eTEC (glicoconjugados ligados eTEC sorotipo 33F).

[00105] Em algumas modalidades, 0 glicoconjugado de S. penumoniae sorotipos 1, 7F, 9V e/ou 18C da invenção são O-acetilados. Em algumas modalidades, 0 glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipos 1, 7F e 9V é O-accetilado e 0 glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C é des-O-acetilado.

[00106] Em algumas modalidades, 0 glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 1 compreende um sacarídeo que tem um grau de Oacetilação de entre 10 e 100%, entre 20 a 100%, entre 30 a 100%, entre 40 e 100%, entre 50 e 100%, entre 60 e 100%, entre 70 e 100%, entre 75 e 100%, 80 e 100%, 90 e 100%, 50 e 90%, 60 e 90%, 70 e 90% ou 80 e 90%. Em outras modalidades, 0 grau de O-acetilação é > 10%, > 20%, > 30%, > 40%, > 50%, > 60%, > 70%, > 80%, > 90%, ou cerca de 100%.

[00107] Em algumas modalidades, 0 glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 7F compreende um sacarídeo que tem um grau de Oacetilação de entre 10 e 100%, entre 20 e 100%, entre 30 e 100%, en

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28/123 ter 40 e 100%, entre 50 e 100%, entre 60 a 100%, entre 70 e 100%, entre 75 e 100%, 80 e 100%, 90 e 100%, 50 e 90%, 60 e 90%, 70 e 90%, ou 80 e 90%. Em outras modalidades o grau de O-acetilação é > 10%, > 20%, > 30%, > 40%, > 50%, > 60%, > 70%, > 80%, > 90%, ou cerca de 100%.

[00108] Em algumas modalidades, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 9V compreende um sacarídeo que tem um grau de Oacetilação de entre 10 e 100%, entre 20 e 100%, entre 30 e 100%, enter 40 e 100%, entre 50 e 100%, entre 60 e 100%, entre 70 e 100%, entre 75 e 100%, 80 e 100%, 90 e 100%, 50 e 90%, 60 e 90%, 70 e 90% ou 80 e 90%. Em outras modalidades, o grau de O-acetilação é > 10%, > 20%, > 30%, > 40%, > 50%, > 60%, > 70%, > 80%, > 90%, ou cerca de 100%.

[00109] Em algumas modalidades, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C compreende um sacarídeo que tem um grau de Oacetilação de entre 10 e 100%, entre 20 e 100%, entre 30 e 100%, entre 40 e 100%, entre 50 e 100%, entre 60 e 100%, entre 70 e 100%, entre 75 e 100%, 80 e 100%, 90 e 100%, 50 e 90%, 60 e 90%, 70 e 90% ou 80 e 90%. Em outras modalidades, o grau de O-acetilação é > 10%, > 20%, > 30%, > 40%, > 50%, > 60%, > 70%, > 80%, > 90%, ou cerca de 100%. Preferivelmente no entanto, o glicoconjugado de S. penumoniae sorotipo 18C está des-O-acetilado. Em algumas ditas modalidades, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C compreende um sacarídeo que tem um grau de O-acetilação de entre 0 e 50%, entre 0 e 40%, entre 0 e 30%, entre 0 e 20%, entre 0 e 10%, entre 0 e 5%, ou entre 0 e 2%. Em outras modalidades, o grau de Oacetilação é < 50%, < 40%, < 30%, < 20%, < 10%, < 5%, < 2%, ou < 1%.

[00110] Por % de O-acetilação é pretendida a porcentagem de um dado sacarídeo em relação a 100% (onde cada unidade de repetição

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29/123 está inteiramente acetilada em relação a sua estrutura acetilada).

[00111] Em algumas modalidades, os glicoconjugados da presente invenção compreendem um sacarídeo tendo u m peso molecular de entre 5 kDa e 2000 kDa. Em outras tais modalidades, o sacarídeo tem um peso molecular de entre 50 kDa e 1000 kDa. Em outras modalidades, o sacarídeo tem um peso molecular de entre 70 kDa e 900 kDa. Em tais outras modalidades, o sacarídeo tem um peso molecular de entre 100 kDa e 800 kDa. Em tais outras modalidades, o sacarídeo tem um peso molecular de entre 200 kDa e 600 kDa. Ainda em tais modalidades, o sacarídeo tem um peso molecular de entre 100 kDa a 1000 kDa; 100 kDa a 900 kDa; 100 kDa a 800 kDa; 100 kDa a 700 kDa; 100 kDa a 600 kDa; 100 kDa a 500 kDa; 100 kDa a 400 kDa; 100 kDa a 300 kDa; 150 kDa a 1000 kDa; 150 kDa a 900 kDa; 150 kDa a 800 kDa; 150 kDa a 700 kDa; 150 kDa a 600 kDa; 150 kDa a 500 kDa; 150 kDa a 400 kDa; 150 kDa a 300 kDa; 200 kDa a 1000 kDa; 200 kDa a 900 kDa; 200 kDa a 800 kDa; 200 kDa a 700 kDa; 200 kDa a 600 kDa; 200 kDa a 500 kDa; 200 kDa a 400 kDa; 200 kDa a 300; 250 kDa a 1,000 kDa; 250 kDa a 900 kDa; 250 kDa a 800 kDa; 250 kDa a 700 kDa; 250 kDa a 600 kDa; 250 kDa a 500 kDa; 250 kDa a 400 kDa; 250 kDa a 350 kDa; 300 kDa a 1,000 kDa; 300 kDa a 900 kDa; 300 kDa a 800 kDa; 300 kDa a 700 kDa; 300 kDa a 600 kDa; 300 kDa a 500 kDa; 300 kDa a 400 kDa; 400 kDa a 1,000 kDa; 400 kDa a 900 kDa; 400 kDa a 800 kDa; 400 kDa a 700 kDa; 400 kDa a 600 kDa; 500 kDa a 600 kDa. Ainda em modalidades, o sacarídeo tem um peso molecular entre 5 kDa a 100 kDa; 7 kDa a 100 kDa; 10 kDa a 100 kDa; 20 kDa a 100 kDa; 30 kDa a 100 kDa; 40 kDa a 100 kDa; 50 kDa a 100 kDa; 60 kDa a 100 kDa; 70 kDa a 100 kDa; 80 kDa a 100 kDa; 90 kDa a 100 kDa; 5 kDa a 90 KDa; 5 kDa a 80 kDa; 5 kDa a 70 kDa; 5 kDa a 60 kDa; 5 kDa a 50 kDa; 5 kDa a 40 kDa; 5 kDa a 30 kDa; 5 kDa a 20 kDa ou 5 kDa a 10 kDa. Qualquer número inteiro dentro de qualquer

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30/123 uma das faixas acima é contemplado como uma modalidade da descrição. Em algumas tais modalidades, o glicoconjugado é preparado usando aminação redutiva.

[00112] Em algumas modalidades, o glicoconjugado da invenção tem um peso molecular de entre 100 kDa e 15000 kDa; entre 500 kDa e 10.000 kDa; entre 2.000 kDa e 10.000 kDa; entre 3.000 kDa e 8.000 kDa; ou entre 3.000 kDa e 5.000 kDa. Em outras modalidades, o glico conjugado tem um peso molecular de entre 500 kDa e 10.000 kDa. Em outras modalidades, o glicoconjugado tem um peso molecular de entre 1.000 kDa e 8.000 kDa. Ainda em outras modalidades, o glicoconjugado tem um peso molecular de entre 2.000 kDa e 8.000 kDa ou entre 3.000 kDa e 7.00 kDa. Ainda em modalidades, o glicoconjugado da invenção tem um peso molecular de entre 200 kDa e 20.000 kDa; entre 200 kDa e 15.000 kDa; entre 200 kDa e 10.000 kDa; entre 200 kDa e 7500 kDa; entre 200 kDa e 5.000 kDa; entre 200 kDa e 3.000 kDa; entre 200 kDa e 1.000 kDa; entre 500 kDa e 20.000 kDa; entre 500 kDa e 15.000 kDa; entre 500 kDa e 12.500 kDa; entre 500 kDa e 10.000 kDa; entre 500 kDa e 7500 kDa; entre 500 kDa e 6.000 kDa; entre 500 kDa e 5.000 kDa; entre 500 kDa e 4.000 kDa; entre 500 kDa e 3.000 kDa; entre 500 kDa e 2.000 kDa; entre 500 kDa e 1500 kDa; entre 500 kDa e 1.000 kDa; entre 750 kDa e 20.000 kDa; entre 750 kDa e 15.000 kDa; entre 750 kDa e 12.500 kDa; entre 750 kDa e 10.000 kDa; entre 750 kDa e 7500 kDa; entre 750 kDa e 6.000 kDa; entre 750 kDa e 5.000 kDa; entre 750 kDa e 4.000 kDa; entre 750 kDa e 3.000 kDa; entre 750 e 2.000 kDa; entre 750 kDa e 1500 kDa; entre 1.000 kDa e 15.000 kDa; entre 1.000 kDa e 12500 kDa; entre 1.000 kDa e 10.000 kDa; entre 1.000 kDa e 7500 kDa; entre 1.000 kDa e 6.000 kDa; entre 1.000 kDa e 5.000 kDa; entre 1.000 kDa e 4.000 kDa; entre 1.000 kDa e 2500 kDa; entre 2.000 kDa e 15.000 kDa; entre 2.000 kDa e 12.500 kDa; entre 2.000 kDa e 10.000 kDa; entre 2.000

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31/123 kDa e 7500 kDa; entre 2.000 kDa e 6.000 kDa; entre 2.000 kDa e 5.000 kDa; entre 2.000 kDa e 4.000 kDa; ou entre 2.000 kDa e 3.000 kDa.

[00113] Ainda em modalidades, o glicoconjugado da invenção tem um peso molecular de entre 3.000 kDa e 20.000 kDa; entre 3.000 kDa e 15.000 kDa; entre 3.000 kDa e 10.000 kDa; entre 3.000 kDa e 7500 kDa; entre 3.000 kDa e 5.000 kDa; entre 4.000 kDa e 20.000 kDa; enter 4.000 kDa e 15.000 kDa; entre 4.000 kDa e 12.500 kDa; entre 4.000 kDa e 10.000 kDa; entre 4.000 kDa e 7500 kDa; entre 4.000 kDa e 6.000 kDa; ou entre 4.000 kDa e 5.000 kDa.

[00114] Ainda em modalidades, o glicoconjugado da invenção tem um peso molecular de entre 5.000 kDa e 20.000 kDa; entre 5.000 kDa e 15.000 kDa; entre 5.000 kDa e 10.000 kDa; entre 5.000 kDa e 7500 kD; entre 6.000 kDa e 20.000 kDa; entre 6.000 kDa e 15.000 kDa; enter 6.000 kDa e 12.500 kDa; entre 6.000 kDa e 10.000 kDa ou entre 6.000 kDa e 7500 kDa.

[00115] Ainda em modalidades, o glicoconjugado da invenção tem um peso molecular de entre 100 kDa e 250 kDa; entre 100 kDa e 500 kDa; entre 100 kDa e 750 kDa; entre 100 kDa e 1.000 kDa; entre 100 kDa e 1500 kDa; entre 100 kDa e 2.000 kDa; entre 100 kDa e 2500 kDa; entre 100 kDa e 3.000 kDa; entre 250 kDa e 500 kDa; entre 250 kDa e 1.000 kDa; entre 250 kDa e 1500 kDa; entre 250 kDa e 2000 kDa ou entre 250 kDa e 2500 kDa.

[00116] O peso molecular do glicoconjugado é medido por SECMALLS. Qualquer número inteiro dentro de qualquer uma das faixas acima é contemplado como uma modalidade da descrição.

[00117] Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado de sorotipo 22F da invenção compreende pelo menos 0,1,0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6 ou 0,7 ou cerca de 0,8 mM acetato por mM de polissacarídeo de sorotipo 22F. Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado compreende pe

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Io menos 0,5, 0,6 ou 0,7 mM acetato por mM de polissacarídeo de sorotipo 22F. Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado compreende pelo menos 0,6 mM acetato por mM de polissacarídeo de sorotipo 22F. Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado compreende pelo menos 0,7 mM acetato por mM de polissacarídeo de sorotipo 22F.

[00118] Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado de sorotipo 33F da invenção compreende pelo menos 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7 ou 0,8 mM acetato por mM de polissacarídeo capsular de sorotipo 33F. Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado compreende pelo menos 0,5, 0,6 ou 0,7 mM acetato por mM de polissacarídeo capsular de sorotipo 33F. Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado compreende pelo menos 0,6 mM acetato por mM de polissacarídeo capsular de sorotipo 33F. Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado compreende pelo menos 0,7 mM acetato por mM de polissacarídeo capsular de sorotipo 33F. Em uma modalidade preferida, a presença de grupos O-acetila é determinada por análise de HPLC-íon.

[00119] Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado de sorotipo 15B da invenção compreende pelo menos 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7 ou 0,8 mM acetato por mM de polissacarídeo capsular de sorotipo 15B. Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado compreende pelo menos 0,5, 0,6 ou 0,7 mM acetato por mM de polissacarídeo capsular de sorotipo 15B. Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado compreende pelo menos 0,6 mM acetato por mM de polissacarídeo capsular de sorotipo 15B. Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado compreende pelo menos 0,7 mM acetato por mM de polissacarídeo capsular de sorotipo 15B. Em uma modalidade preferida, a presença de grupos O-acetila é determinada por análise HPLC-íon.

[00120] Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado de sorotipo 15B da invenção compreende pelo menos 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6,

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0,7 ou 0,8 mM glicerol por mM de polissacarídeo capsular de sorotipo 15B. Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado de sorotipo 15B da invenção compreende pelo menos 0,5, 0,6 ou 0,7 mM de glicerol por mM de polissacarídeo capsular de sorotipo 15B. Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado de sorotipo 15B da invenção compreende pelo menos 0,6 mM glicerol por mM de polissacarídeo capsular de sorotipo 15B. Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado de sorotipo 15B da invenção compreende pelo menos 0,7 mM de glicerol por mM de polissacarídeo capsular de sorotipo 15B.

[00121] Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado de sorotipo 11A da invenção compreende pelo menos 0,3, 0,5, 0,6, 1,0, 1,4, 1,8,

2,2, 2,6, 3,0, 3,4, 3,8, 4,2, 4,6 ou cerca de 5,0 mM acetato por mM de polissacarídeo de sorotipo 11 A. Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado de sorotipo 11A compreende pelo menos 1,8, 2,2 ou 2,6 mM acetate por mM de polissacarídeo sorotipo 11 A. Em uma modalidade, o glicoconjugado compreende pelo menos 0,6 mM acetate por mM de polissacarídeo de sorotipo 11 A. Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado de sorotipo 11A da invenção compreende pelo menos 0,6, 1,0, 1,4, 1,8, 2,2, 2,6, 3,0, 3,4, 3,8, 4,2 ou cerca de 4,6 mM acetato por mM de polissacarídeo de sorotipo 11A e menos que cerca de 5,0 mM acetato por mM de polissacarídeo de sorotipo 11 A. Em uma modalidade, o glicoconjugado de sorotipo 11A da invenção compreende pelo menos 0,6, 1,0, 1,4, 1,8, 2,2, 2,6, ou cerca de 3,0 mM acetato por mM de polissacarídeo de sorotipo 11A e menos que cerca de 3,4 mM acetato por mM de polissacarídeo de sorotipo 11 A. Em uma modalidade, o glicoconjugado de sorotipo 11A da invenção compreende pelo menos 0,6, 1,0, 1,4, 1,8, 2,2, 2,6, ou cerca de 3,0 mM acetato por mM de polissacarídeo de sorotipo 11A e menos que cerca de 3,3 mM acetato por mM de polissacarídeo de sorotipo 11 A. Qualquer um dos numerous acima é contemplado como uma modalidade

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34/123 da descrição.

[00122] Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado de sorotipo 11A da invenção compreende pelo menos 0,1 , 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 ou cerca de 1,0 mM de glicerol por mM de polissacarideo de sorotipo 11 A. Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado de sorotipo 11A compreende pelo menos 0,2, 0,3 ou 0,4 mM glicerol por mM de polissacarideo de sorotipo 11 A. Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado de sorotipo 11A da invenção compreende pelo menos 0,1,0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8 ou cerca de 0,9 mM glicerol por mM de polissacarideo de sorotipo 11A e menos que cerca de 1,0 mM glicerol por mM de polissacarideo de sorotipo 11 A. Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado de sorotipo 11A da invenção compreende pelo menos 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, ou cerca de 0,7 mM de glicerol por mM de polissacarideo de sorotipo 11A e menos que cerca de 0,8 mM glicerol por mM de polissacarideo de sorotipo 11 A. Qualquer um dos números acima é contemplado como uma modalidade da descrição.

[00123] Uma outra maneira para caracterizar os glicoconjugados da invenção é através do número de resíduos lisina na proteína carreadora (por exemplo, CRM197) que se torna conjugada ao sacarídeo que podem ser caracterizados como uma faixa de lisinas conjugadas (grau de conjugação). A evidência para modificação lisina da proteína carreadora, devido a ligações covalentes para os polissacarídeos, pode ser obtida através de análise de aminoácido usando processos de rotina conhecidos por aqueles versados na técnica. Conjugação resulta em uma redução no número de resíduos lisina recuperados comparado ao material de partida proteína carreadora usado para gerar os materiais conjugados. Em uma modalidade preferida, 0 grau de conjugação do glicoconjugado da invenção está entre 2 e 15, entre 2 e 13, entre 2 e 10, entre 2 e 8, entre 2 e 6, entre 2 e 5, entre 2 e 4, entre 3 e 15, entre 3 e 13, entre 3 e 10, entre 3 e 8, entre 3 e 6, entre 3 e 5, entre 3 e 4,

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35/123 entre 5 e 15, entre 5 e 10, entre 8 e 15, entre 8 e 12, entre 10 e 15 ou entre 10 e 12. Em uma modalidade, o grau de conjugação do glicoconjugado da invenção é cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7, cerca de cerca de 9, cerca de 10, cerca de 11, cerca de 12, cerca de 13, cerca de 14 ou cerca de 15. Em uma modalidade preferida, o grau de conjugação do glicoconjugado da invenção está entre 4 e 7. Em algumas tais modalidades, a proteína carreadora é CRM197.

[00124] Os glicoconjugados da invenção também podem ser caracterizados pela razão (peso / peso) de sacarídeo para proteína carreadora. Em algumas modalidades, a razão de polissacarídeo para proteína carreadora no glicoconjugado (peso / peso) está entre 0,5 e 3 (por exemplo, cerca de 0,5, cerca de 0,6, cerca de 0,7, cerca de 0,8, cerca de 0,9, cerca de 1,0, cerca de 1,1, cerca de 1,2, cerca de 1,3, cerca de

1.4, cerca de

1,9, cerca de

2.4, cerca de

1.5, cerca de

2,0, cerca de

2.5, cerca de

1.6, cerca de

2,1, cerca de

2.6, cerca de

1.7, cerca de

2,2, cerca de

2.7, cerca de

1.8, cerca de

2,3, cerca de

2.8, cerca de

2,9, ou cerca de 3,0). Em outras modalidades, a razão de sacarídeo para proteína carreadora (peso / peso) está entre 0,5 e 2,0, entre 0,5 e

1,5, entre 0,8 e 1,2, entre 0,5 a 1,0, entre 1,0 e 1,5 ou entre 1,0 e 2,0.

Ainda em modalidades, a razão de sacarídeo para proteína carreadora (peso / peso) está entre 0,8 e 1,2. Em uma modalidade preferida, a razão de polissacarídeo capsular parra proteína carreadora no conjugado está entre 0,9 e 1,1. Em algumas tais modalidades, a proteína carreadora é CRM197.

[00125] Os glicoconjugados e composições imunogênicas da invenção podem conter sacarídeo livre que não está conjugado covalentemente à proteína carreadora, mas não obstante está presente na composição de glicoconjugado. O sacarídeo livre pode estar associado não covalentemente (isto é, ligado não covalentemente a, adsorvido a,

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36/123 ou arrastado com) o glicococonjugado.

[00126] Em uma modalidade preferida, o glicoconjugado compreende menos que cerca de 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20% ou 15% de polissacarídeo livre comparado à quantidade total de polissacarídeo. Em uma modalidade preferida o glicoconjugado compreende menos que cerca de 25%do polissacarídeo livre comparado à quantidade total de polissacarídeo. Em uma modalidade preferida o glicoconjugado compreende menos que cerca de 20% do polissacarídeo livre comparado à quantidade total de polissacarídeo. Em uma modalidade preferida o glicoconjugado compreende menos que cerca de 15% de polissacarídeo livre comparado à quantidade total de polissacarídeo.

[00127] Os glicoconjugados também podem ser caracterizados por sua distribuição de tamanho molecular (Kd). Meios de cromatografia de exclusão de tamanho (CL-4B) podem ser usados para determinar a distribuição de tamanho molecular relativa do conjugado. Cromatografia de Exclusão de Tamanho (SEC) é usada em colunas de alimentação por gravidade para obter perfil de distribuição de tamanho molecular de conjugados. Moléculas grandes excluídas dos poros nos meios eluem mais rapidamente que moléculas pequenas. Coletores de frações são usados para coleta de eluato de coluna. As frações são testadas colorimetricamente através de ensaio de sacarídeo. Para a determinação de Kd, colunas são calibradas para estabelecimento de fração na qual molécu Ias são inteiramente excluídas (Vo), (Kd = 0), e a fração representando a retenção máxima (Vi), (Kd = 1). A fração na qual um atributo de amostra especificado é atingido (V_e), está relacionado a Kd através da expressão Kd = (V_e - Vo) / (Vi-Vo).

[00128] Em uma modalidade preferida, pelo menos 30% do glicoconjugado tem um Kd abaixo ou igual a 0,3 em uma coluna CL-4B. Em uma modalidade preferida, pel o men os 40% do glicoconjugado tem um Kd abixo ou igual a 0,3 em uma coluna CL-4B. Em uma modalidade

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37/123 preferida, pelo menos 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, ou 85% do glicoconjugado têm um Kd abaixo ou igual a 0,3 em uma coluna CL-4B. Em uma modalidade preferida, pelo menos 60% do glicoconjugado têm um Kd abixo ou igual a 0,3 em uma coluna CL-4B. Em uma modalidade preferida, entre 50% e 80% do glicoconjugado têm um Kd abaixo ou igual a 0,3 em uma coluna CL-4B. Em uma modalidade preferida, entre 65% e 80% do glicoconjugado têm um Kd abaixo ou igual a 0,3 em uma coluna CL-4B. A frequência de ligação da cadeia de sacarídeo a uma lisina sobre a proteína carreadora é um outro parâmetro para caracterização de glicoconjugados da invenção. Por exemplo, em algumas modalidades, pelo menos uma ligação covalente entre a proteína carreadora e o polissacarídeo ocorre para cada 4 unidade de repetição sacarídeo do polissacarídeo. Em uma outra modalidade, a ligação covalente entre a proteína carreadora e o polissacarídeo ocorre pelo menos uma vez a cada 10 unidades de repetição sacarídeo do polissacarídeo. Em uma outra modalidade, a ligação covalente entre a proteína carreadora e o polissacarídeo ocorre pelo menos uma vez a cada 15 unidades de repetição sacarídeo do polissacarídeo. Ainda em uma modalidade, a ligação covalente entre a proteína carreadora e o polissacarídeo ocorre pelo menos uma vez a cada 25 unidades de repetição sacarídeo do polissacarídeo.

[00129] Em frequentes modalidades, a proteína carreadora é CRM 197 e a ligaçao covalente via um espaçador eTEC entre a CRM197 e 0 polissacarídeo ocorre pelo menos uma vez a cada 4, 10, 15 ou 25 unidades de repetição sacarídeo do polissacarídeo.

[00130] Em outras modalidades, 0 conjugado compreende pelo menos uma ligação covalente entre a proteína carreadora e sacarídeo para cada 5 a 10 unidades de repetição sacarídeo; cada 2 a 7 unidades de repetição sacarídeo; cada 3 a 8 unidades de repetição sacarídeo; cada 4 a 9 unidades de repetição sacarídeo; cada 6 a 11 unida

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38/123 des de repetição sacarídeo; cada 7 a 12 unidades de repetição sacarídeo; cada 8 a 13 unidades de repetição sacarídeo; cada 9 a 14 unidades de repetição sacarídeo; cada 10 a 15 unidades de repetição sacarídeo; cada 2 a 6 unidades de repetição sacarídeo, cada 3 a 7 unidades de repetição sacarídeo; cada 4 a 8 unidades de repetição sacarídeo; cada 6 a 10 unidades de repetição sacarídeo; cada 7 a 11 unidades de repetição sacarídeo; cada 8 a 12 unidades de repetição sacarídeo; cada 9 a 13 unidades de repetição sacarídeo; cada 10 a 14 unidades de repetição sacarídeo; cada 10 a 20 unidades de repetição sacarídeo; cada 4 a 25 unidades de repetição sacarídeo ou cada 2 a 25 unidades de repetição sacarídeo. Em frequentes modalidades, a proteína carreadora é CRM197.

[00131] Em uma outra modalidade, pelo menos uma ligação entre a proteína carreadora e sacarídeo ocorre para cada 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24 ou 25 unidades de repetição sacarídeo do polissacarídeo. Em uma modalidade, a proteína carreadora é CRM197. Qualquer número inteiro dentro de qualquer uma das faixas acima é contemplado como uma modalidade da descrição.

1·3·2· Glicoconjugados de sorotipo 18C da invenção [00132] Em uma modalidade, os glicoconjugados de 18C da invenção são como definidos na presente seção.

[00133] Polissacarídeos capsulares de sorotipo 18C de S. pneumoniae são preparados como mostrado acima.

[00134] Em uma modalidade, os polissacarídeos são ativados com tetra flúor borato de 1-ciano-4-dimetil amino piridinium (CDAP) para formar um cianeto éster. O polissacarídeo ativado é então acoplado diretamente ou via um grupo espaçador (ligador) a um grupo amino sobre a proteína carreadora (preferivelmente CRM197). Por exemplo, 0 espaçador pode ser cistamina ou cisteamina para render um polissa

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39/123 carídeo tiolado que pode ser acoplado ao carreador via uma ligação tio éter obtida após reação com uma proteína carreadora ativada com maleimida (por exemplo, usando N-[y-maleimido butirloxi] succinimido éster (GMBS)) ou uma proteína carreadora halo acetilada (por exemplo, usando iodo acetimida, bromo acetato de N-succinimidila (SNA; SIB), (4-iodo acetil) amino benzoato de N-succinimidila (SIAB), (4-iodo acetil) amino benzoato de sulfo succinimidila (sulfo-SIAB), iodo accetato de N-succinimidila (SAI), ou 3-[bromo acetamido] propionato de succinimidila (SBAP)). Preferivelmente, o cianeto éster (opcional mente fabricado através de química CDAP) é acoplado co m hexano diamina ou diidrazida de ácido adípico (ADH) e o sacarídeo derivatizadoamino é conjugado à proteína carreadora (por exemplo, CRM197) usando química carbodiimida (por exemplo, EDAC ou EDC) via um grupo carboxila sobre 0 carreador proteína. Tais conjugados são descritos por exemplo em WO 93/15760, WO 95/08348 e WO 96/129094.

[00135] Em uma modalidade, da presente invenção, 0 glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C é preparado usando química CDAP.

[00136] Outras técnicas apropriadas para conjugação usam carbodiimidas, hidrazidas, ésteres ativos, norborano, ácido p-nitrobenzóico, N-hidróxi succinimida, S—NHS, EDC, TSTU. Muitos são descritos em publicação de pedido de patente internacional N⁰· WO 98/42721. Conjugação pode envolver um ligador carbonila que pode ser formado através de reação de um grupo hidroxila livre do sacarídeo com GDI (ver Bethell et al. (1979) 1. Biol. Chem. 254:2572-2574; Hearn et al. (1981) J. Chromatogr. 218:509-518) seguido por reação com uma proteína para formar uma ligação carbamato. Isto pode envolver redução do terminus anomérico para um grupo hidroxila primária, opcional proteção / desproteção do grupo hidroxila primária, reação do grupo hidroxila primária com GDI para formar um intermediário carbamato de

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GDI e acoplamento de intermediário carbamato de GDI com um grupo amino sobre uma proteína.

[00137] Em uma modalidade preferida, polissacarídeo capsular de sorotipo 18C de S. pneumoniae é conjugado à proteína carreadora através de aminação redutiva (tal como descrito em publicações de pedidos de patente U.S. N^os· 2006/0228380, 2007/184072, 2007/0231340 and 2007/0184071, WO 2006/110381, WO 2008/079653, e WO 2008/143709). Aminação redutiva envolve duas etapas como mostrado acima.

[00138] Em algumas modalidades, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C da invenção é O-acetilado. Em algumas modalidades, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C é des-Oacetilado.

[00139] Em algumas modalidades, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C compreende um sacarídeo que tem um grau de Oacetilação de entre 10 e 100%, entre 20 e 100%, entre 30 e 100%, em ter 40 e 100%, entre 50 e 100%, entre 60 e 100%, entre 70 e 100%, entre 75 e 100%, 80 e 100%, 90 e 100%, 50 e 90%, 60 e 90%, 70 e 90% ou 80 e 90%. Em outras modalidades, o grau de O-acetilação é > 10%, > 20%, > 30%, > 40%, > 50%, > 60%, > 70%, > 80%, > 90%, ou cerca de 100%. Preferivelmente, no entanto, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C está des-O-acetilado. Em algumas modalidades, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C compreende um sacarídeo que tem um grau de O-acetilação de entre 0 e 50%, entre 0 e 40%, entre 0 e 30%, entre 0 e 20%, entre 0 e 10%, entre 0 e 5%, ou entre 0 e 2%. Em outras modalidades, o grau de O-acetilação é < 50%, < 40%, < 30%, < 20%, < 10%, < 5%, < 2%, ou < 1%.

[00140] Por % de O-acetilação é pretendida a porcentagem de um dado sacarídeo em relação a 100% (onde cada unidade de repetição está inteiramente acetilada em relação a sua estrutura acetilada).

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41/123 [00141] Em algumas modalidades, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C da presente invenção compreende um sacarídeo tendo um peso molecular de entre 5 kDa e 2000 kDa. Em outras tais modalidades, o sacarídeo tem um peso molecular de entre 10 kDa e 1000 kDa. Em outras tais modalidades, o sacarídeo tem um peso molecular de entre 15 kDa e 900 kDa. Em outras tais modalidades, o sacarídeo tem um peso molecular de entre 20 kDa e 800 kDa. Ainda em tais modalidades, o sacarídeo tem um peso molecular de entre 100 kDa a 1000 kDa; 100 kDa a 900 kDa; 100 kDa a 800 kDa; 100 kDa a 700 kDa; 100 kDa a 600 kDa; 100 kDa a 500 kDa; 100 kDa a 400 kDa; 100 kDa a 300 kDa; 150 kDa a 1,000 kDa; 150 kDa a 900 kDa; 150 kDa a 800 kDa; 150 kDa a 700 kDa; 150 kDa a 600 kDa; 150 kDa a

500 kDa; 150 kDa a 400 kDa; 150 kDa a 300 kDa; 200 kDa a 1,000 kDa; 200 kDa a 900 kDa; 200 kDa a 800 kDa; 200 kDa a 700 kDa; 200 kDa a 600 kDa; 200 kDa a 500 kDa; 200 kDa a 400 kDa; 200 kDa a

300; 250 kDa a 1,000 kDa; 250 kDa a 900 kDa; 250 kDa a 800 kDa;

250 kDa a 700 kDa; 250 kDa a 600 kDa; 250 kDa a 500 kDa; 250 kDa a 400 kDa; 250 kDa a 350 kDa; 300 kDa a 1,000 kDa; 300 kDa a 900 kDa; 300 kDa a 800 kDa; 300 kDa a 700 kDa; 300 kDa a 600 kDa; 300 kDa a 500 kDa; 300 kDa a 400 kDa; 400 kDa a 1,000 kDa; 400 kDa a 900 kDa; 400 kDa a 800 kDa; 400 kDa a 700 kDa; 400 kDa a 600 kDa; 500 kDa a 600 kDa. Ainda em modalidades preferidas, o sacarídeo tem um peso molecular de entre 5 kDa a 100 kDa; 7 kDa a 100 kDa; 10 kDa a 100 kDa; 20 kDa a 100 kDa; 30 kDa a 100 kDa; 40 kDa a 100 kDa; 50 kDa a 100 kDa; 60 kDa a 100 kDa; 70 kDa a 100 kDa; 80 kDa a 100 kDa ou 90 kDa a 100 kDa. Ainda em modalidades preferidas, o sacarídeo tem um peso molecular de entre 5 kDa a 90 KDa; 5 kDa a 80 kDa; 5 kDa a 70 kDa; 5 kDa a 60 kDa; 5 kDa a 50 kDa; 5 kDa a 40 kDa; 5 kDa a 30 kDa; 5 kDa a 20 kDa, 5 kDa a 10 kDa, 10 kDa a 90 KDa; 10 kDa a 80 kDa; 10 kDa a 70 kDa; 10 kDa a 60 kDa; 10 kDa

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42/123 a 50 kDa; 10 kDa a 40 kDa; 10 kDa a 30 kDa; 10 kDa a 20 kDa, 20 kDa a 90 KDa; 20 kDa a 80 kDa; 20 kDa a 70 kDa; 20 kDa a 60 kDa; 20 kDa a 50 kDa; 20 kDa a 40 kDa ou 20 kDa a 30 kDa. Ainda em modalidades preferidas, o sacarídeo tem um peso molecular de entre 30 kDa a 90 KDa; 30 kDa a 80 kDa; 30 kDa a 70 kDa; 30 kDa a 60 kDa; 30 kDa a 50 kDa; 30 kDa a 40 kDa; 40 kDa a 90 KDa; 40 kDa a 80 kDa; 40 kDa a 70 kDa; 40 kDa a 60 kDa; 40 kDa a 50 kDa; 50 kDa a 90 KDa; 50 kDa a 80 kDa; 50 kDa a 70 kDa ou 50 kDa a 60 kDa. Qualquer número inteiro dentro de qualquer uma das faixas acima é contemplado como uma modalidade da descrição. Em algumas tais modalidades, o glicoconjugado é preparado usando aminação redutiva.

[00142] Em algumas modalidades, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C da presente invenção tem um peso molecular de entre 100 kDa e 20.000 kDa; entre 200 kDa e 10.000 kDa ou entre 300 kDa e 5.000 kDa. Ainda em modalidades, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C da invenção tem um peso molecular de entre 100 kDa e 5.000 kDa; entre 150 kDa e 4.000 kDa; entre 200 kDa e 3.000 kDa; ou entre 250 kDa e 2.000 kDa. Ainda em modalidades, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C da invenção tem um peso molecular de entre 100 kDa e 2000 kDa; entre 150 kDa e 2.000 kDa; entre 200 kDa e 2.000 kDa; entre 250 kDa e 2.000 kDa; entre 300 kDa e 2.000 kDa; entre 350 kDa e 2000 kDa; entre 400 kDa e 2000 kDa; entre 450 kDa e 2.000 kDa; entre 500 kDa e 2.000 kDa; entre 550 kDa e 2.000 kDa; entre 600 kDa e 2.000 kDa; entre 700 kDa e 2.000 kDa; entre 800 kDa e 2.000 kDa; entre 900 kDa e 2.000 kDa; entre 1.000 kDa e 2.000 kDa; entre 1250 kDa e 2.000 kDa; entre 1500 kDa e 2.000 kDa ou entre 1750 kDa e 2.000 kDa. Ainda em modalidades, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C da invenção tem um peso molecular de entre 150 kDa e 2,000 kDa; entre 150 kDa e 1,900

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43/123 kDa; entre 150 kDa e 1,800 kDa; entre 150 kDa e 1,700 kDa; entre 150 kDa e 1,600 kDa; entre 150 kDa e 1,500 kDa; entre 150 kDa e 1,400 kDa; entre 150 kDa e 1,300 kDa; entre 150 kDa e 1,200 kDa; entre 150 kDa e 1,100 kDa; entre 150 kDa e 1,000 kDa; entre 150 kDa e 900 kDa; entre 150 kDa e 800 kDa; entre 150 kDa e 700 kDa; entre 150 kDa e 600 kDa; entre 150 kDa e 500 kDa; entre 150 kDa e 400 kDa; entre 150 kDa e 300 kDa ou entre 150 kDa e 200 kDa. Ainda em modalidades, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C da invenção tern urn peso molecular de entre 200 kDa e 2.000 kDa; entre 200 kDa e 1900 kDa; entre 200 kDa e 1800 kDa; entre 200 kDa e 1700 kDa; entre 200 kDa e 1.600 kDa; entre 200 kDa e 1.500 kDa; entre 200 kDa e 1.400 kDa; entre 200 kDa e 1.300 kDa; entre 200 kDa e 1.200 kDa; entre 200 kDa e 1.100 kDa; entre 200 kDa e 1.000 kDa; entre 200 kDa e 900 kDa; entre 200 kDa e 800 kDa; entre 200 kDa e 700 kDa; entre 200 kDa e 600 kDa; entre 200 kDa e 500 kDa; entre 200 kDa e 400 kDa ou entre 200 kDa e 300 kDa. Ainda em modalidades, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C da invenção tern urn peso molecular de entre 250 kDa e 2.000 kDa; entre 250 kDa e 1.900 kDa; en tre 250 kDa e 1.800 kDa; entre 250 kDa e 1.700 kDa; entre 250 kDa e 1.600 kDa; entre 250 kDa e 1.500 kDa; entre 250 kDa e 1.400 kDa; entre 250 kDa e 1.300 kDa; entre 250 kDa e 1200 kDa; entre 250 kDa e 1.100 kDa; entre 250 kDa e 1.000 kDa; entre 250 kDa e 900 kDa; entre 250 kDa e 800 kDa; entre 250 kDa e 700 kDa; entre 250 kDa e 600 kDa; entre 250 kDa e 500 kDa; entre 250 kDa e 400 kDa ou entre 250 kDa e 300 kDa. Ainda em modalidades, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C da invenção tern urn peso molecular de entre 300 kDa e 2,000 kDa; entre 300 kDa e 1,900 kDa; entre 300 kDa e 1,800 kDa; entre 300 kDa e 1,700 kDa; entre 300 kDa e 1,600 kDa; entre 300 kDa e 1,500 kDa; entre 300 kDa e 1,400 kDa; entre 300 kDa e 1,300 kDa; entre 300 kDa e 1,200 kDa; entre 300 kDa e 1,100 kDa;

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44/123 entre 300 kDa e 1,000 kDa; entre 300 kDa e 900 kDa; entre 300 kDa e 800 kDa; entre 300 kDa e 700 kDa; entre 300 kDa e 600 kDa; entre 300 kDa e 500 kDa ou entre 300 kDa e 400 kDa. Ainda em modalidades, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C da invenção tem um peso molecular de entre 400 kDa e 2,000 kDa; entre 400 kDa e 1,900 kDa; entre 400 kDa e 1,800 kDa; entre 400 kDa e 1,700 kDa; entre 400 kDa e 1,600 kDa; entre 400 kDa e 1,500 kDa; entre 400 kDa e 1,400 kDa; entre 400 kDa e 1,300 kDa; entre 400 kDa e 1,200 kDa; entre 400 kDa e 1,100 kDa; entre 400 kDa e 1,000 kDa; entre 400 kDa e 900 kDa; entre 400 kDa e 800 kDa; entre 400 kDa e 700 kDa; entre 400 kDa e 600 kDa ou entre 400 kDa e 500 kDa. Ainda em modalidades, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C da invenção tem um peso molecular de entre 500 kDa e 2,000 kDa; entre 500 kDa e 1,900 kDa; entre 500 kDa e 1,800 kDa; entre 500 kDa e 1,700 kDa; entre 500 kDa e 1,600 kDa; entre 500 kDa e 1,500 kDa, entre 500 kDa e 1,400 kDa; entre 500 kDa e 1,300 kDa; entre 500 kDa e 1,200 kDa; entre 500 kDa e 1,100 kDa; entre 500 kDa e 1,000 kDa; entre 500 kDa e 900 kDa; entre 500 kDa e 800 kDa; entre 500 kDa e 700 kDa ou entre 500 kDa e 600 kDa.

[00143] O peso molecular do glicoconjugado é medido por SECMALLS. Qualquer número inteiro dentro de qualquer uma das faixas acima é contemplado como uma modalidade da descrição.

[00144] Uma outra maneira para caracterizar os glicoconjugados da invenção é através do número de resíduos lisina na proteína carreadora (por exemplo, CRM197) que se tornam conjugados ao sacarídeo que podem ser caracterizados como uma faixa de lisinas conjugadas (grau de conjugação). A evidência para modificação de lisina da proteína carreadora, devida a ligações covalentes para os polissacarídeos, pode ser obtida através de análise de aminoácidos usando processos rotineiros conhecidos por aqueles versados na técnica. Conjugação

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45/123 resulta em uma redução no número de resíduos lisina recuperados, comparado ao material de partida proteína carreadora usado para gerar os materiais conjugados. Em uma modalidade preferida, o grau de conjugação do glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C da invenção está entre 2 e 15, entre 2 e 13, entre 2 e 10, entre 2 e 8, entre 2 e 6, entre 2 e 5, entre 2 e 4, entre 3 e 15, entre 3 e 13, entre 3 e 10, entre 3 e 8, entre 3 e 6, entre 3 e 5, entre 3 e 4, entre 5 e 15, entre 5 e

10, entre 8 e 15, entre 8 e 12, entre 10 e 15, ou entre 10 e 12. Em uma modalidade, o grau de conjugação do glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C da invenção é cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7, cerca de8, cerca de 9, cerca de 10, cerca de 11, cerca de 12, cerca de 13, cerca de 14 ou cerca de 15. Em uma modalidade preferida, o grau de conjugação do glicoconjugado de

S. pneumoniae sorotipo 18C da invenção está entre 4 e 7. Em algumas tais modalidades, a proteína carreadora é CRM197.

[00145] O glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C da invenção também pode ser caracterizado pela razão (peso / peso) de sacarídeo para proteína carreadora. Em algumas modalidades, a razão de polissacarídeo para proteína carreadora no glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C da invenção (peso / peso) está entre 0,5 e 3 (por exemplo, cerca de 0,5, cerca de 0,6, cerca de 0,7, cerca de 0,8, cerca de 0,9, cerca de 1,0, cerca de 1,1, cerca de 1,2, cerca de1,3, cerca de 1,4, cerca de 1,5, cerca de 1,6, cerca de 1,7, cerca de1,8, cerca de 1,9, cerca de 2,0, cerca de 2,1, cerca de 2,2, cerca de2,3, cerca de 2,4, cerca de 2,5, cerca de 2,6, cerca de 2,7, cerca de2,8, cerca de 2,9, ou cerca de 3,0). Em outras modalidades, a razão de sacarídeo para proteína carreadora (peso / peso) está entre 0,5 e 2,0, entre 0,5 e 1,5, entre 0,8 e 1,2, entre 0,5 e 1,0, entre 1,0 e 1,5 ou entre 1,0 e 2,0. Ainda em modalidades, a razão de sacarídeo para proteína carreadora (peso / peso) está entre 0,8 e 1,2. Em uma modalidade

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46/123 preferida, a razão de polissacarídeo capsular para proteína carreadora no conjugado está entre 0,9 e 1,1. Em algumas tais modalidades, a protéina carreadora é CRM197.

[00146] Em uma modalidade preferida, 0 glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C da invenção compreende menos que cerca de 50%, 45%, 40%, 355, 30%, 25%, 20%, ou 15% do polissacarídeo livre comparado à quantidade total de polissacarídeo. Em uma modalidade preferida 0 glicoconjugado compreende menos que cerca de 25% de polissacarídeo livre comparado à quantidade total de polissacarídeo. Em uma modalidade preferida 0 glicoconjugado compreende menos que cerca de 20% de polissacarídeo livre comparado à quantidade total de polissacarídeo. Em uma modalidade preferida 0 glicoconjugado compreende menos que cerca de 15% de polissacarídeo livre comparado à quantidade total de polissacarídeo.

[00147] Os glicoconjugados também podem ser caracterizados por sua distribuição de tamanho molecular (Kd). Meios de cromatografia de exclusão de tamanho (CL-4B) podem ser usados para determiner a distribuição de tamanho molecular relative do conjugado. Cromatografia de exclusão de tamanho (SEC) é usada em colunas alimentadas por gravidade para obtenção de perfil de distribuição de tamanho molecular de conjugados. Moléculas grandes excluídas dos poros nos meios eluem mais rapidamente do que moléculas pequenas. Coletores de frações são usados para coleta de eluatos de colunas. As frações são testadas colorimetricamente através de ensaio de sacarídeo. Para a determinação de Kd, colunas são calibradas para estabelecimento de fração na qual moléculas são inteiramente excluídas (Vo), (Kd = 0), e a frração representando a retenção maxima (Vi), (Kd = 1). A fração na qual um especificado atributo de amostra é atingido (V_e), está rrelacionada a Kd pela expressão, Kd = (V_e - Vo) / (Vi - Vo).

[00148] Em uma modalidade preferida, pelo menos 30% dos glico

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47/123 conjugados de S. pneumoniae sorotipo 18C da invenção tem um Kd abaixo ou igual a 0,3 em uma coluna CL-4B. Em uma modalidade preferida, pelo menos 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, ou 85% do glicoconjugado têm um Kd abaixo ou igual a 0,3 em uma coluna CL-4B. Em uma modalidade preferida, pelo menos 60% do glicoconjugado têm um Kd abaixo ou igual a 0,3 em uma coluna CL-4B. Em uma modalidade preferida, entre 50% e 80% do glicoconjugado têm um Kd abaixo ou igual a 0,3 em uma coluna CL-4B. Em uma modalidade preferida, entre 65% e 80% do glicoconjugado têm um Kd abaixo ou igual a 0,3 em uma coluna CL-4B.

[00149] A frequência de ligação da cadeia de sacarídeo a uma,lisina sobre a proteína carreadora é um outro parâmetro para caracterização de glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C da invenção. Por exemplo, em algumas modalidades, pelo menos uma ligação covalente entre a proteína carreadora e o polissacarídeo ocorre para cada 4 unidades de repetição sacarídeo do polissacarídeo. Em uma outra modalidade, a ligação covalente entre a proteína carreadora e o polissacarídeo ocorrre pelo menos uma vez em cada 10 unidades de repetição sacarídeo. Em uma outra modalidade, a ligação covalente entre a proteína carreadora e o polissacarídeo ocorre pelo menos uma vez a cada 15 unidades de repetição sacarídeo do polissacarídeo. Ainda em uma modalidade, a ligação covalente entre a proteína carreadora e o polissacarídeo ocorre pelo menos uma vez cada 25 unidades de repetição sacarídeo do polissacarídeo.

[00150] Em outras modalidades, o conjugado compreende pelo menos uma ligação covalente entre a proteína carreadora e sacarídeo para cada 5 a 10 unidades de repetição sacarídeo; cada 2 a 7 unidades de repetição sacarídeo; cada 3 a 8 unidades de repetição sacarídeo; cada 4 a 9 unidades de repetição de sacarídeo; cada 6 a 11 unidades de repetição sacarídeo; cada 7 a 12 unidades de repetição sa

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48/123 carídeo; cada 8 a 13 unidades de repetição sacarídeo; cada 9 a 14 unidades de repetição sacarídeo; cada 10 a 15 unidades de repetição sacarídeo; cada 2 a 6 unidades de repetição sacarídeo; cada 3 a 7 unidades de repetição sacarídeo; cada 4 a 8 unidades de repetição sacarídeo; cada 6 a 10 unidades de repetição sacarídeo; cada 7 a 11 unidades de repetição sacarídeo; cada 8 a 12 unidades de repetição sacarídeo; cada 9 a 13 unidades de repetição sacarídeo; cada 10 a 14 unidades de repetição sacarídeo; cada 10 a 20 unidades de repetição sacarídeo; cada 4 a 25 unidades de repetição sacarídeo ou cada 2 a 25 unidades de repetição sacarídeo. Em modalidades frequentes, a proteína carreadora é CRM197.

[00151] Em uma outra modalidade, pelo menos uma ligação em ter proteína carreadora e sacarídeo ocorre para cada 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24 ou 25 unidades de repetição sacarídeo do polissacarídeo. Em uma modalidade, a proteína carreadora é CRM197. Qualquer número inteiro dentro de qualquer uma das faixas acima é contemplado como uma modalidade da descrição.

1.4. Combinação de qlicoconiuqados da invenção [00152] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção compreende qualquer um dos glicoconjugados aqui mostrados.

·4·1 Combinações de qlicoconiuqados [00153] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção compreende pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C.

[00154] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção compreende pelo menos um glicoconjugado de cada um dos seguintes sorotipos de S. pneumoniae·. 18C e 4, 18C e 6B, 18C e 14, 18C e 9V, 18C e 19F ou 18C e 23F.

[00155] Em uma modalidade, a composição imunogênica da inven

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49/123 ção compreende pelo menos um glicoconjugado de cada um dos sete seguintes sorotipos de S. pneumoniae·. 18C, 4, 6B, 9V, 14, 19F e 23F.

[00156] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção compreende pelo menos um glicoconjugado de cada um dos seguintes oito sorotipos de S. pneumoniae·. 1,4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, e 23F; 4, 5, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, e 23F; 4, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, e 23F.

[00157] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção compreende pelo menos um glicoconjugado de cada um dos seguintes dez sorotipos de S. pneumoniae·. 1, 5, 4, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19Fe23F.

[00158] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção compreende pelo menos um glicoconjugado de cada dos onze seguintes sorotipos de S. pneumoniae·. 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, e 23F; 1,4,5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, e 23F.

[00159] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção compreende pelo menos um glicoconjugado de cada dos seguintes doze sorotipos de S. pneumoniae: 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, e 23F.

[00160] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção compreende pelo menos um glicoconjugado de cada dos seguintes treze sorotipos de S. pneumoniae: 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, e 23F.

·4·2· Adicionais combinações de qlicoconiuqados [00161] Em uma modalidade, de qualquer uma composição imunogênica definida em 1.4.1 acima compreende em adição pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 15B.

[00162] Em uma modalidade, qualquer uma composição imunogênica definida em 1.4.1 acima compreende em adição pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 22F.

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50/123 [00163] Em uma modalidade, qualquer uma composição imunogênica definida em 1.4.1 acima compreende em adição pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 33F.

[00164] Em uma modalidade, qualquer uma composição imunogênica definida em 1.4.1 acima compreende em adição pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 8.

[00165] Em uma modalidade, qualquer uma composição imunogênica definida em 1.4.1 acima compreende em adição pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 10A.

[00166] Em uma modalidade, qualquer uma composição imunogênica definida em 1.4.1 acima compreende em adição pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 11 A.

[00167] Em uma modalidade, qualquer uma composição imunogênica definida em 1.4.1 acima compreende em adição pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 12F.

[00168] Em uma modalidade, qualquer composição imunogênica definida em 1.4.1 acima compreende em adição pelo menos um glicoconjugado de cada um dos dois seguintes sorotipos de S. pneumoniae:

[00169]	15Be22F
[00170]	15Be33F,
[00171]	15Be 12F,
[00172]	15Be 10A,
[00173]	15Be 11A,
[00174]	15Be8,
[00175]	22F e 33F,
[00176]	22F e 12F,
[00177]	22F e 10A,
[00178]	22F e 11 A,
[00179]	22F e 8,

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51/123 [00180] 33Fe12F, [00181] 33Fe10A, [00182] 33Fe11A, [00183] 33F e 8, [00184] 12Fe10A, [00185] 12Fe11A, [00186] 12Fe8, [00187] 10Ae11A, [00188] 10Ae8, ou [00189] 11Ae8.

[00190] Em uma modalidade, qualquer uma composição imunogênica definida em 1.4.1 acima compreende em adição pelo menos um glicoconjugado de cada um dos três seguintes sorotipos de S. pneumoniae:

[00191] 15Be22Fe33F, [00192] 15Be22Fe12F, [00193] 15Be22Fe10A, [00194] 15Be22Fe11A, [00195] 15Be22Fe8, [00196] 15Be33Fe12F, [00197] 15Be33Fe10A, [00198] 15Be33Fe11A, [00199] 15Be33Fe8, [00200] 15Be12Fe10A, [00201] 15Be12Fe11A, [00202] 15Be12Fe8, [00203] 15Be10Ae11A, [00204] 15Be10Ae8, [00205] 15Be11Ae8, [00206] 22Fe33Fe12F,

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52/123

[00207]	22F e 33F e 10A,
[00208]	22F e 33F e 11 A,
[00209]	22F e 33F e 8,
[00210]	22F e 12Fe 10A,
[00211]	22F e 12Fe 11 A,
[00212]	22F e 12Fe8,
[00213]	22F e 10Ae 11 A,
[00214]	22F e 10Ae8,
[00215]	22F e 11Ae8,
[00216]	33F e 12Fe 10A,
[00217]	33F e 12Fe 11 A,
[00218]	33F e 12Fe8,
[00219]	33F e 10Ae 11 A,
[00220]	33F e 10Ae8,
[00221]	33F e 11Ae8,
[00222]	12Fe 10Ae 11 A,
[00223]	12Fe 10Ae8,
[00224]	12Fe 11Ae8, ou
[00225]	10Ae 11Ae8.
[00226]	Em uma modalidade, qualquer uma composição imunogê-

nica definida em 1.4.1 acima compreende em adição pelo menos um glicoconjugado de cada um dos quarto seguintes sorotipos de S. pneumoniae·.

[00227]	15B e 22F e 33F e 12F,
[00228]	15B e 22F e 33F e 10A,
[00229]	15B e 22F e 33F e 11 A,
[00230]	15B e 22F e 33F e 8,
[00231]	15B e 22F e 12F e 10A,
[00232]	15B e 22F e 12F e 11 A,
[00233]	15B e 22F e 12F e 8,

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53/123 [00234] 15B e 22F e 10A e 11 A, [00235] 15B e 22F e 10A e 8, [00236] 15B e 22F e 11A e 8, [00237] 15B e 33F e 12F e 10A, [00238] 15B e 33F e 12F e 11 A, [00239] 15B e 33F e 12F e 8, [00240] 15B e 33F e 10A e 11 A, [00241] 15B e 33F e 10A e 8, [00242] 15B e 33F e 11A e 8, [00243] 15B e 12F e 10A e 11 A, [00244] 15B e 12F e 10A e 8, [00245] 15B e 12F e 11A e 8, [00246] 15B e 10A e 11A e 8, [00247] 22F e 33F e 12F e 1OA, [00248] 22F e 33F e 12F e 11 A, [00249] 22F e 33F e 12F e 8, [00250] 22F e 33F e 10A e 11 A, [00251] 22F e 33F e 10A e 8, [00252] 22F e 33F e 11A e 8, [00253] 22F e 12F e 10A e 11 A, [00254] 22F e 12F e 10A e 8, [00255] 22F e 12F e 11A e 8, [00256] 22F e 10A e 11A e 8, [00257] 33F e 12F e 10A e 11 A, [00258] 33F e 12F e 10A e 8, [00259] 33F e 12F e 11A e 8, [00260] 33F e 10A e 11A e 8 ou [00261] 12F e 10A e 11A e 8.

[00262] Em uma modalidade, qualquer uma composição imunogênica definida em 1.4.1 acima compreende em adição pelo menos um

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54/123 glicoconjugado de cada um dos seguintes cinco sorotipos de S. pneumoniae·.

[00263]	15B e 22F e 33F e 12F e 10A,
[00264]	15B e 22F e 33F e 12F e 11 A,
[00265]	15B e 22F e 33F e 12F e 8,
[00266]	15B e 22F e 33F e 10A e 11 A,
[00267]	15B e 22F e 33F e 10A e 8,
[00268]	15B e 22F e 33F e 11A e 8,
[00269]	15B e 22F e 12F e 10A e 11 A,
[00270]	15B e 22F e 12F e 10A e 8,
[00271]	15B e 22F e 12F e 11A e 8,
[00272]	15B e 22F e 10A e 11A e 8,
[00273]	15B e 33F e 12F e 10A e 11 A,
[00274]	15B e 33F e 12F e 10A e 8,
[00275]	15B e 33F e 12F e 11A e 8,
[00276]	15B e 33F e 10A e 11A e 8,
[00277]	15B e 12F e 10A e 11A e 8,
[00278]	22F e 33F e 12F e 10A e 11 A,
[00279]	22F e 33F e 12F e 10A e 8,
[00280]	22F e 33F e 12F e 11A e 8,
[00281]	22F e 33F e 10A e 11A e 8,
[00282]	22F e 12F e 10A e 11A e 8 ou
[00283]	33F e 12F e 10A e 11A e 8.
[00284]	Em uma modalidade, qualquer uma composição imunogê-

nica definida em 1.4.1 acima compreende em adição pelo menos um glicoconjugado de cada um dos seguintes seis sorotipos de S. pneumoniae·.

[00285]	15B e 22F e 33F e 12F e 10A e 11 A,
[00286]	15B e 22F e 33F e 12F e 10A e 8,
[00287]	15B e 22F e 33F e 12F e 11A e 8,

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55/123 [00288] 15B e 22F e 33F e 10A e 11A e 8, [00289] 15B e 22F e 12F e 10A e 11A e 8, [00290] 15B e 33F e 12F e 10A e 11A e 8 ou [00291] 22F e 33F e 12F e 10A e 11A e 8.

[00292] Em uma modalidade, qualquer uma composição imunogênica definida em 1.4.1 acima compreende em adição pelo menos um glicoconjugado de cada um dos seguintes sete sorotipos de S. pneumoniae: 15B e 22F e 33F e 12F e 10A e 11A e 8.

[00293] Em uma modalidade, qualquer uma composição imunogênica acima compreende em adição glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 2.

[00294] Em uma modalidade, qualquer uma composição imunogênica acima compreende em adição glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 17F.

[00295] Em uma modalidade, qualquer uma composição imunogênica acima compreende em adição glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 20.

[00296] Em uma modalidade, qualquer uma composição imunogênica acima compreende em adição glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 15C.

[00297] Preferivelmente, todos os glicoconjugados da composição imunogênica acima são individualmente conjugados à proteína carreadora.

[00298] Em uma modalidade, de qualquer uma composição imunogênica acima, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 18C está conjugada a CRM197. Em uma modalidade, de qualquer uma das composições imunogênicas acima, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 22F estão conjugados a CRM197. Em uma modalidade, de qualquer uma composição imunogênica acima, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 33F são conjugados a CRM197. Em uma mo

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56/123 dalidade, de qualquer composição imunogênica acima, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 15B são conjugados aCRMw?. Em uma modalidade, de qualquer uma composição imunogênica acima, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 12F está conjugado a CRM197. Em uma modalidade, de qualquer composição imunoigênica aci ma, os gliconjugados de S. pneumoniae sorotipo 10A estão conjugados a CRM197. Em uma modalidade, de qualquer composição imunogênica acima, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 11A estão conjugados a CRM197. Em uma modalidade, de qualquer composição imunogênica acima, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 8 estão conjugados a CRM197. Em uma modalidade, de qualquer composição imunogênica acima, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 4, 6B, 9V, 14, 19F, e 23F estão conjugados a CRM197. Em uma modalidade, de qualquer composição imunogênica acima, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1,5 e 7F estão conjugados a CRM197. Em uma modalidade, de qualquer composição imunogênica acima, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 6A e 19A estão conjugados a CRM197. Em uma modalidade, de qualquer composição imunogênica acima, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 3 estão conjugados a CRM197. Em uma modalidade, de qualquer composição imunogênica acima, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 2 estão conjugados a CRM197. Em uma modalidade, de qualquer composição imunogênica acima, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 17F estão conjugados a CRM197. Em uma modalidade, de qualquer composição imunogênica acima, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 20 estão conjugados a CRM197. Em uma modalidade, de qualquer composição imunogênica acima, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 15C estão conjugados a CRM197.

[00299] Em uma modalidade, os glicoconjugados das composições

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57/123 imunogênicas acima são todos individualmente conjugados a CRM197. [00300] Em uma modalidade, 0 glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C de qualquer das composições imunogênicas acima é individualmente conjugado a TT.

[00301] Em uma modalidade, , os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 e/ou 23F de qualquer uma das composições imunogênicas acima são individualmente conjugados a PD.

[00302] Em uma modalidade, 0 glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 19F de qualquer uma das composições imunogênicas acima está conjugado a DT.

[00303] Em uma modalidade, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 e/ou 23F de qualquer uma das composições imunogênicas acima são individual mente conjugados a PD, 0 gliconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C está conjugado a TT e 0 glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 19F está conjugado a DT. Em uma modalidade, a composição imunogênica acima compreende de 7 a 25 diferentes sorotipos de S. pneumoniae. Em uma modalidade, a composição imunogênica acima compreende glicoconjugados de 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 ou 25 diferentes sorotipos.

[00304] Em uma modalidade, a composição imunogênica acima compreende de 7 a 20 diferentes sorotipos de S. pneumoniae. Em uma realizaçãoa composição imunogênica acima compreende glicoconjugados de 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 diferentes sorotipos. Em uma modalidade, a composição imunogênica acima compreende glicoconjugados de 16 e 20 diferentes sorotipos.

[00305] Em uma modalidade, a composição imunogênica acima é uma composição de conjugado pneumococal 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20-valente. Em uma modalidade, a composição

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58/123 imunogênica acima é uma composição de conjugado pneumococal 14, 15, 16, 17, 18 ou 19 valente. Em uma modalidade, a composição imunogênica acima é uma composição de conjugado pneumococal 16valente. Em uma modalidade, a composição imunogênica acima é uma composição de conjugado pneumococal 19-valente. Em uma modalidade, a composição imunogênica acima é uma composição de conjugado pneumococal 20-valente.

[00306] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção compreende glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 15|B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F e 33F.

[00307] Em uma rrealização, a composição imunogênica da invenção compreende glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F, e 33F.

[00308] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção compreende sacarídeos conjugados de S. pneumoniae sorotipos 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11 A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F e 33F.

[00309] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção compreende sacarídeos conjugados de S. pneumoniae de sorotipos 1,4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11 A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F e 33F.

[00310] Em uma modalidade, os glicoconjugados da composição imunogênica da invenção consistem em glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F e 33F.

[00311] Em uma modalidade, os glicoconjugados da composição imunogênica da invenção consistem em glicoconjugados de sorotipos 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F e 33F. Em uma modalidade, os glicoconjugados da composição imunogênica da invenção consistem em glicoconjugados de sorotipos 1, 3, 4, 5, 6A,

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6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F e 33F. Em uma modalidade, os glicoconjugados da composição imunogênica da invenção consistem em glicoconjugados de sorotipos 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11 A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F e 33F. [00312] Preferivelmente, todos os glicoconjugados da composição imunogênica da invenção são individualmente conjugados à proteína carreadora. Em uma modalidade, os glicoconjugados da composição imunogênica acima são individualmente conjugados a CRM197.

·4·3· Ainda combinações de glicoconjugados [00313] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imunogênicas definidas em 1.4.1 ou 1.4.2 acima não compreende sacarídeo capsular de S. pneumoniae sorotipo 18F.

[00314] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imunogênicas definidas em 1.4.1 ou 1.4.2 acima não compreende sacarídeo capsular de S. pneumoniae sorotipo 18A.

[00315] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imunogênicas definidas em 1.4.1 ou 1.4.2 acima não compreende sacarídeo capsular de S. pneumoniae sorotipo 18B.

[00316] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imunogênicas definidas em 1.4.1 ou 1.4.2 acima não compreende sacarídeo capsular de S. pneumoniae sorotipos 18F e 18A.

[00317] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imunogênicas definidas em 1.4.1 ou 1.4.2 acima não compreende sacarídeo capsular de S. pneumoniae sorotipos 18F e 18B.

[00318] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imunogênicas definidas em 1.4.1 ou 1.4.2 acima não compreende sacarídeo capsular de S. pneumoniae sorotipos 18A e 18B.

[00319] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imunogênicas definidas em 1.4.1 ou 1.4.2 acima não compreende sacarídeo capsular de S. pneumoniae sorotipos 18F, 18A e 18B.

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2· Dosagem das composições imunogênicas

2.1 Quantidade de polissacarídeo [00320] A quantidade de glicoconjugado(s) em cada dose é selecionada como uma quantidade que induz uma resposta protetora sem significantes efeitos colaterais adversos em vacinas típicas. Tal quantidade variará dependendo de qual específico imunógeno é empregado e como ele é apresentado.

[00321] A quantidade de um particular glicoconjugado em uma composição imunogênica pode ser calculada baseada no polissacarídeo total para aquele conjugado (conjugado e não conjugado). Por exemplo, um glicoconjugado com 20% de polissacarídeo livre terá cerca de 80 pg de polissacarídeo conjugado e cerca de 20 pg de polissacarpideo não conjugado em uma dose de 100 pg de polissacarídeo. A quantidade de glicoconjugado pode variar dependendo do sorotipo sttreptococal. A concentração de sacarídeo pode ser determinada através de ensaio de ácido urônico.

[00322] A quantidade imunogênica dos diferentes componentes polissacarídeos na composição imunogênica, pode divergir e cada uma pode compreender cerca de 1,0 pg, cerca de 2,0 pg, cerca de 3,0 pg, cerca de 4.0 pg, cerca de 5.0 pg, cerca de 6.0 pg, cerca de 7.0 pg, cerca de 8.0 pg, cerca de 9.0 pg, cerca de 10.0 pg, cerca de 15.0 pg, cerca de 20.0 pg, cerca de 30.0 pg, cerca de 40.0 pg, cerca de 50.0 pg, cerca de 60.0 pg, cerca de 70.0 pg, cerca de 80.0 pg, cerca de 90.0 pg, ou cerca de 100.0 pg de qualquer particular antigen polissacarídeo.

[00323] Genericamente, cada dose compreenderá 0,1 pg a 100 pg de polissacarídeo para um dado sorotipo, particularmente 0,5 pg a 20 pg, mais particularmente 1 pg a 10 pg, e mesmo mais particularmente 2 pg a 5 pg.Qualquer número inteiro dentro de qualquer uma das faixas acima é contemplado como uma modalidade da descrição.

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61/123 [00324] Em uma modalidade, cada dose compreenderá 1 pg, 2 pg, 3 pg, 4 pg, 5 pg, 6 pg, 7 pg, 8 pg, 9 pg, 10 pg, 15 pg ou 20 pg de polissacarídeo para um dado sorotipo.

2.2. Quantidade de carreador [00325] Genericamente, cada dose compreenderá 5 pg a 150 pg de proteína carreadora, particularmente 10 pg a 100 pg de proteína carreadora, mais particularmente 15 pg a 100 pg de proteína carreadora, mais particularmente 25 a 75 microgramas de proteína carreadora, mais particularmente 30 microgramas a 70 microgramas de proteína carreadora, mais particularmente 30 a 60 microgramas de proteína carreadora, mais particularmente 30 microgramas a 50 microgramas de proteína carreadora e mesmo mais particularmente 40 a 60 microgramas de proteína carreadora. Em uma modalidade, a dita proteína carreadora é CRM197.

[00326] Em uma modalidade, cada dose compreenderá cerca de 25 microgramas, cerca de 26 microgramas, cerca de 27 microgramas, cerca de 28 microgramas, cerca de 29 microgramas, cerca de 30 microgramas, cerca de 31 microgramas, cerca de 32 microgramas, cerca de 33 microgramas, cerca de 34 microgramas, cerca de 35 microgramas, cerca de 36 microgramas, cerca de 37 microgramas, cerca de 38 microgramas, cerca de 39 microgramas, cerca de 40 microgramas, cerca de 41 microgramas, cerca de 42 microgramas, cerca de 43 microgramas, cerca de 44 microgramas, cerca de 45 m icrogramas, cerca de 46 mirogramas, cerca de 47 microgramas, cerca de 48 microgramas, cerca de 49 microgramas, cerca de 50 microgramas, cerca de 51 microgramas, cerca de 52 microgramas, cerca de 53 microgramas, cerca de 54 microgramas, cerca de 55 microgramas, cerca de 56 microgramas, cerca de 57 microgramas, cerca de 58 microgramas, cerca de 59 microgramas, cerca de 60 microgramas, cerca de 61 microgramas, cerca de 62 microgramas, cerca de 63 microgramas, cerca de 64

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62/123 microgramas, cerca de 65 microgramas, cerca de 66 microgramas, cerca de 67 microgramas, cerca de 68 microgramas, cerca de 69 microgramas, cerca de 70 microgramas, cerca de 71 microgramas, cerca de 72 microgramas, cerca de 73 microgramas, cerca de 74 microgramas, ou cerca de 75 microgramas de proteína carreadora. Em uma modalidade, a dita proteína carreadora é CRM197.

3· Ainda antíqenos [00327] Composições imunogênicas da invenção compreendem antígenos de sacarídeo de S. pneumoniae conjugados (glicoconjugados). Elas ainda podem também incluir antígenos de outros patógenos, particularmente de bactérias e/ou virus. Antígenos ain da preferidos são selecionados de: um toxoide de difteria (D), um toxoide de tétano (T), um antígeno pertussis (P), que é tipicamente acelular (Pa), um antígeno de superfície de virus de hepatite B (HBV) (HBsAg), um antígeno de virus de hepatite A (HAV), um sacarídeo capsular tipo b de Haemophilus influenzae conjugado (Hib), vacina de virus de polio inativado (IPV).

[00328] Em uma modalidade, as composições imunogênicas da invenção compreendem D-T-Pa. Em uma modalidade, as composições imunogênicas da invenção compreendem D-T-Pa-Hib, D-T-Pa-IPV ou D-T-Pa-HBSAg. Em uma modalidade, as composições imunogênicas da invenção compreendem D-T-Pa-HbsAg-IPV ou D-T-Pa-HbsAg-Hib. Em uma modalidade, as composições imunogênicas da invenção compreendem D-T-Paa-HbsAg-IPV-Hib.

[00329] Antígenos pertussis: Bordetella pertussis causa tosse estridente. Antígenos pertussis em vacinas são tanto celulares (célula inteira, na forma de células B. pertussis inativadas) ou acelulares. Preparação de antígenos pertussis celulares é bem documentada (por exemplo, podem ser obtidos através de inativação térmica de cultura de fase I de B. pertussis). Preferivelmente, entretanto, a invenção usa

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63/123 antígenos acelulares. Onde antígenos acelulares são usados, é preferido usar um, dois ou (preferivelmente) três dos seguintes antígenos: (1) toxina pertussis detoxificada (toxoide pertussis, ou PT); (2) hemaglutinina filamentosa (FHA); (3) pertactina (também conhecida como a proteína de membrana externa de 69 kiloDalton). FHA e pertactina podem ser tratados com formaldeído antes de uso de acordo com a invenção. PT é preferivelmente detoxifiçado através de tratamento com formaldeído e/ou glutaraldeído. Antígenos pertussis acelulares são preferivelmente adsorvidos sobre um ou mais adjuvantes sais de alumínio. Como uma alternativa, eles podem ser adicionados em um estado não adsorvido. Onde pertactina é adicionada então ela está preferivelmente já adsorvida sobre um adjuvante hidróxido de alumínio. PT e FHA podem ser adsorvidos sobre um adjuvante hidróxido de alumínio ou um fosfatoi de alumínio. Adsorção de todo PT, FHA e pertactina para hidróxido de alumínio é mais preferida.

[00330] Vacina de vírus de pólio inativado: vírus pólio causam poliomielite. Antes que usando vacina de vírus pólio oral, rrealizações preferidas da invenção usando IPV. Antes de administração a pacientes, vírus pólio têm de ser inativados, e isto pode ser obtido através de tratamento com formaldeído. Poliomielite pode ser causada por um de três tipos de vírus pólio. Os três tipos são similares e causam sintomas idênticos, mas eles são antigenicamente diferentes e infecção por um tipo não protege contra infecção por outros. Por isso é preferido usar três antígenos de vírus pólio na invenção: vírus pólio Tipo 1 (por exemplo, linhagem Mahoney), vírus pólio Tipo 2 (por exemplo, linhagem MEF-1), e vírus pólio Tipo 3 (por exemplo, linhagem Saukett). Os vírus são preferivelmente crescidos, purificados e inativados individualmente, e são então combinados para renderem uma mistura trivalente de volume para uso com a invenção.

[00331] Toxoide de difteria: Corynebacterium diphtheriae causa dif

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64/123 teria. Toxina de difteria pode ser tratada (por exemplo, usando formalina ou formaldeído) para remoção de toxidez enquanto retendo a habilidade para induzir específicos anticorpos anti-toxina após injeção. Estes toxoides de difteria são usados em vacinas de difteria. Toxoides de difteria preferidos são aqueles preparados através de tratamento com formaldeído. O toxoide de difteria pode ser obtido através de crescimento de C. diphtheriae em meio de crescimento, seguido por tratamento com formaldeído, ultrafiltração e precipitação. O material com toxoide então pode ser tratado através de um processo compreendendo filtração estéril e/ou diálise. O toxoide de difteria é preferivelmente adsorvido sobre um adjuvante hidróxido de alumínio.

[00332] Toxoide de tétano: Clostridium teia/?/causa tétano. Toxina de tétano pode ser tratada para render um toxoide protetor. Os toxoides são usados em vacinas de tétano. Toxoides de tétano preferidos são aqueles preparados através de tratamento com formaldeído. O toxoide de tétano pode ser obtido através de crescimento de C. tetani em meio de crescimento, seguido por tratamento com formaldeído, ultrafiltração e precipitação. O material então pode ser tratado através de um processo compreendendo filtração estéril e/ou diálise.

[00333] Antígenos de vírus de hepatite A: Vírus de hepatite A (HAV) é um dos agentes conhecidos que causam hepatite viral. Um componente HAV preferido é baseado em vírus inativado, e inativação pode ser obtida através de tratamento com formalina.

[00334] Vírus de hepatite B (HBV) é um dos agentes conhecidos que causam hepatite viral. O principal componente do capsídeo é uma proteína conhecida como antígeno de superfície HBV ou, mais comumente, HbsAg, que é tipicamente um polipeptídeo de 226 aminoácidos com um peso molecular de ~24 kDa. Todas as vacinas de hepatite B existentes contêm HbsAg, e quando este antígeno é administrado a uma vacina normal ele estimula a produção de anticorpos anti-HbsAg

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65/123 que protegem contra infecção de HBV.

[00335] Para fabricação de vacina, HbsAg tem sido fabricado em duas maneiras: purificação do antígeno em forma de partículas a partir do plasma de carreadores de hepatite B crônica ou expressão da proteína através de processos e DNA recombinante (por exemplo, espressão recombinante em células de levedura). Diferente de HbsAg nativo (isto é, como no produto purificado de plasma), HbsAg expresso em levedura é genericamnente não glicosado, e esta é a forma mais preferida de HbsAg para uso com a invenção.

[00336] Antígenos tipo b de Haemophilus influenzae conjugados: Haemophilus influenzae tipo b (Hib) causa meningite bacteriana. Vacinas Hib são tipicamente baseadas no antígeno sacarídeo capsu lar, a preparação do qual é bem documentada. O scarídeo Hib pode ser conjugado a uma proteína carreadora de modo a aperfeiçoar sua imunogeneicidade, especialmente em crianças. Proteínas carreadoras típicas são toxoide de tétano, toxoide de difteria, CRM197, proteína D de H. influenzae, e um complexo de proteína de membrana externa de meningococcus sorogrupo Β. A metade sacarídeo do conjugado pode compreender poli ribosil ribitol fosfato (PRP) de inteiro comprimento como preparado a partir de bactérias Hib, e/ou fragmentos de PRP de inteiro comprimento. Conjugados de Hib podem ou não ser adsorvidos a um adjuvante sal de alumínio.

[00337] Em uma modalidade, as composições imunogênicas da invenção ainda incluem um sacarídeo capsular de sorogrupo Y de N. meningitidis conjugado (MenY), e/ou um sacarídeo capsular sorogrupo C de N. meningitidis conjugado (MenC).

[00338] Em uma modalidade, as composições imunogênicas da invenção ainda incluem um sacarídeo capsular sorogrupo A de N. meningitidis conjugado (MenA), um sacarídeo capsular sorogrupo W135 de N. meningitidis conjugado (MenW135), um sacarídeo capsular so

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66/123 rogrupo Y de Λ/, meningitidis conjugado (MenY), e/ou um sacarídeo capsular sorogrupo C de N. meningitidis conjugado (MenC).

[00339] Em uma modalidade, as composições imunogênicas da invenção ai nda incluem um sacarídeo capsular de sorogrupo W135 de N. meningitidis conjugado (MenW135), um sacarídeo capsular de sorogrupo Y de N. meningitidis conjugado (MenY), e/ou um sacarídeo capsular sorogrupo C de N. meningitidis conjugado (MenC).

4. Adiuvante(s) [00340] Em algumas modalidades, as composições imunogênicas aqui mostradas ainda podem compreender pelo menos um adjuvante (por exemplo, um, dois ou três adjuvantes). O termo adjuvante refere-se a um composto ou mistura que aperfeiçoa a resposta imune para um antígeno. Antígenos podem atuar primariamente como um sistema de liberação, primariamente como um modulador imune ou ter fortes características de ambos. Apropriados adjuvantes incluem aqueles apropriados para uso em mamíferos, incluindo humanos.

[00341] Exemplos de conhecidos adjuvantes do tipo sistema de liberação que podem ser usados em humanos incl uem, mas não são limitados a, alúmen (por exemplo, fosfato de alumínio, sulfato de alumínio ou hidróxido de alumínio), fosfato de cálcio, lipossomas, emulsões óleo-em-água como MF59 (4,3% peso / volume squaleno, 0,5% peso / volume polissorbato 80 (Tween™ 80), 0,5% peso / volume trioleato de sorbitano (Span 85)), emulsões água-em-óleo como Montanide, e micropartículas ou nanopartículas de poli(D,L-lactídeo-coglicolídeo) (PLG).

[00342] Em uma modalidade, as composições imunogênicas aqui mostradas com preendem sais de alumínio (alúmen) como adjuvante (por exemplo, fosfato de alumínio, sulfato de alumínio ou hidróxido de alumínio). Em uma modalidade preferida, as composições imunogênicas aqui mostradas compreendem fosfato de alumínio ou hidróxido de

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67/123 alumínio como adjuvante. Em uma modalidade, as composições imunogênicas aqu i m ostradas compreendem de 0,1 mg/mL a 1 mg/ml ou de 0,2 mg/mL a 0,3 mg/mL de alumínio elementar na forma de fosfato de alumínio. Em uma modalidade, as composições imunogênicas aqui mostradas compreendem cerca de 0,25 mg/mL de alumínio elementar na forma de fosfato de alumínio. Exemplos de adjuvantes tipo modulador imune apropriados conhecidos que podem ser usados em humanos incluem, mas não são limitados a, extratos saponina da casca da árvore Aquilla (QS21, Quil A), agonistas de TLR4 como MPL (mono fosforil lipídeo A), 3DMPL (3-O-desacilado MPL) ou GLA-AQ, mutantes LT/CT, citocinas tais como as várias interlecuinas (por exemplo, IL-2, IL-12) ou GM-CSF, e semelhantes.

[00343] Exemplos de conhecidos adjuvantes tipo moduladores imunes apropriados com ambas características de imuno modulação e liberação que podem ser usados em humanos incluem, mas não são limitados a, ISCOMS (ver, por exemplo, Sjõlander et al. (1998) J. Leukocyte Biol. 64:713; WO 90/03184, WO 96/11711, WO 00/48630, WO 98/36772, WO 00/41720, WO 2006/134423 e WO 2007/026190) ou GLA-EM que é uma combinação de um agonista de TLR4 e uma emulsão óleo-em-água.

[00344] Para aplicações veterinárias incluindo mas não limitado a experimentação animal, pode-se usar adjuvante de Freud completo (CFA), adjuvante incompleto de Freund (IFA), Emulsigen, N-acetilmuramil-L-treonil-D-isoglutamina (thr-MDP), N-acetil-nor-muramil-Lalanil-D-isoglutamina (CGP 11637, referido como nor-MDP), N-acetil muramil-L-alan il-D-isoglutaminil-L-alanina-2-(1'-2'-dipalmitoil-snglicero-3-hidróxi fosforilóxi)-etil amina (CGP 19835A, referido como MTP-PE), e RIBI, que contém três componentes extraídos de bactérias, monofosforil lipídeo A, dimicolato de trealose e esqueleto de parede de célula (MPL + TDM + CWS) em uma emulsão 2% squaleno /

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Tween™ 80.

[00345] Ainda adjuvantes exemplares para aperfeiçoar eficácia das vacinas pneumococais como aqui mostradas incl uem, mas não são I imitados a: (1) formulações de emulsões de óleo-em-água (com ou sem outros específicos agentes imunoestimuladores tais como peptídeois muramila (ver abaixo) ou componentes de parede de célula bacteriana), tais como, por exemplo, (a) SAF, contendo 10% Squaleno, 0,4% Tween™ 80, 5% polímero bloqueado - pluronic L121, e thr-MDP tanto microfluidizado em uma emulsão submicron ou feito vórtice para gerar uma emulsão de maior tamanho de partícula, e (b) sistema adjuvante RIBI (RAS), (Ribi Immunochem, Hamilton, MT) contendo 2% Squaleno, 0,2% Tween™ 80, e um ou mais componentes de parede de célula bacteriana como mono fosforil lipídeo A (MPL), dimicolato de trealose (TDM), e esqueleto de parede de célula (CWS), preferivelmente MPL + CWS (DETOX); (2) adjuvantes saponina, como QS21, STIMULON (Cambridge Bioscience, Worcester, MA), Abisco (Isconova, Sweden), ou Iscomatrix (Commonwealth Serum Laboratories, Austrália), podem ser usados ou partículas geradas dos mesmos como ISCOMs (complexos imunoestimulantes), cujos ISCOMS podem ser destituídos de adicional detergente (por exemplo, WO 00/07621); (3) Adjuvante de Freund Completo (CFA) e Adjuvante de Freund Incompleto (IFA); (4) citocinas, tais como interleucinas (por exemplo, IL-1, IL2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12 (WO 99/44636)), interferons (por exemplo, interferon gama), fator de estimulação de colônia de macrófagos (M-CSF), fator de necrose de tumor (TNF), etc.; (5) mono fosforil lipídeo A (MPL) ou MPL 3-O-desacetilado (3dMPL) (ver, por exemplo, GB-2220221, EP0689454), opcionalmente na substancial ausência de alúmen quando usado com sacarídeos pneumococais (ver, por exemplo, WO 00/56358); (6) combinações de 3dMPL com, por exemplo, QS21 e/ou emulsões de óleo-em-água (ver, por exemplo, EP0835318,

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EP0735898, EP0761231); (7) um polioxietileno éter ou um polioxietileno éster (ver, por exemplo, WO99/52549); (8) um tensoativo polioxietileno sorbitano éster em combinação com um octoxinol (WO 01/21207) ou um tensoativo polioxietileno alquil éter ou éster em combinação com pelo menos um tensoativo não iônico adicional tal como octoxinol (WO 01/21152); (9) uma saponina e um oligonucleotídeo imunoestimulador (por exemplo, um oligonucleotídeo CpG) (WO 00/62800); (10) um imunoestimulante e uma partícula de sal de metal (ver, por exemplo, WO 00/23105); (11) uma saponina e uma emulsão de óleo-emágua, por exemplo, WO 99/11241; (12) uma saponina (por exemplo, QS21) + 3dMPL + IM2 (opcionalmente + um esterol), por exemplo, WO 98/57659; (13) outras substâncias que atuam como agentes estimulantes para aperfeiçoar a eficácia da composição. Peptídeos muramila incluem N-acetil muramil-L-treonil-D-isoglutamina (thr-MDP), N-25 accetilnormuramil-L-alanil-D-isoglutamina (nor-MDP), N-acetil muramil-Lalanil-D-isoglutarni nil-L-alanina-2-(1 '-2'-dipalmitoil-sn-glicero-3-hidróxi fosforilóxi) etil amina MTP-PE), etc.

[00346] Em uma modalidade, da presente invenção, as composições imunogênicas como aqui m ostradas compreendem um oligonucleotídeo CpG como adjuvante. Um oligonucleotídeo CpG como aqui usado refere-se a um oligodesoxinucleotídeo CpG imunoestimulador (CpG ODN), e da mesma maneira estes termos são usados intercambiavelmente a menos que indicado de outro modo. Oligodesoxinucleotídeos CpG imunoestimuladores contêm um o u mais motivos CpG imunoestimuladores que são dinucleotídeos citosina - guanina não metilados, opcionalmente dentro de certos contextos bases preferidos. O status de metilação do motivo imunoestimulador CpG genericamente refere-se ao resíduo citosina no dinucleotídeo. Um oligonucleotídeo imunoestimulador contendo pelo menos um dinucleotídeo CpG não metilado é um oligonucleotídeo que contém uma citosina não metilada

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5' ligada por uma ligação fosfato a uma guanina 3', e que ativa o sistema imune através de ligação a receptor 9 semelhante - Toll (TLR9). Em uma outra modalidade o oligonucleotídeo imunoestimulador pode conter um ou mais dinucleotídeos CpG metilados, que ativarão o sistema imune através de TLR9 mas não tão fortemente como se o motivo(s) CpG fosse/estivesse não metilado. Oligonucleotídeos imunoestimuladores CpG podem com preender um ou mais palíndromos que por sua vez podem abranger o dinucleotídeo CpG. Oligonucleotídeos CpG foram descritos em um número de patentes expedidas, pedidos de patente pulbicados, e outras publicações, incluindo patentes U.S. N^os 6,194,388; 6,207,646; 6,214,806; 6,218,371; 6,239,116; e 6,339,068.

[00347] Em uma modalidade, da presente invenção, as composições imunogênicas como aqui mostradas compreendem qualquer dos oligonucleotídeos CpG descritos nas páginas 3, linha 22, até página12, linha 36, de WO 2010/125480.

[00348] Diferentes classes de oligonucleotídeos imunoestimuladores CpG foram identificadas. Estas são referidas como classe A, B, C e P, e são descritas em maiores detalhes em páginas 3, linha 22, a página 12, linha 36, de WO 2010/125480. Processos da invenção abrangem o uso destas diferentes classes de oligonucleotídeos imunoestimuladores CpG. Em uma modalidade, da presente invenção, as composições imunogênicas como aqui mostradas compreendem um oligonucleotídeo CpG classe A. Em uma modalidade, da presente invenção, as composições imunogênicas como aqui mostradas compreendem um oligonucleotídeo CpG classe B.

[00349] As sequências de oligonucleotídeo CpG classe B da invenção são aquelas amplamente descritas acima assim como mostradas em WO 96/02555, WO 98/18810 publicados, e em patentes U.S. N^os· 6,194,388; 6,207,646; 6,214,806; 6,218,371; 6,239,116; e 6,339,068.

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Sequências exemplares incluem, mas não são limitadas àquelas mostradas neste últimos pedidos e patentes.

[00350] Em uma modalidade, o oligonucleotídeo CpG classe B da invenção tem a seguinte sequência de ácidos nucléicos:

5' TCGTCGTTTTTCGGTGCTTTT 3' (SEQ ID NO: 1), ou

5' TCGTCGTTTTTCGGTCGTTTT 3' (SEQ ID NO: 2), ou

5' TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT 3' (SEQ ID NO: 3), ou

5' TCGTCGTTTCGTCGTTTTGTCGTT 3' (SEQ ID NO: 4), ou

5' TCGTCGTTTTGTCGTTTTTTTCGA 3' (SEQ ID NO: 5).

[00351] Em qualquer uma destas sequências, todas as ligações podem ser ligações fósforotioato. Em uma outra modalidade, em qualquer destas sequências, uma ou mais das ligações podem ser fosfodiéster, preferivelmente entre a C e a G do motive CpG fazendo um oligonucleotídeo CpG semimacio. Em qualquer uma destas sequências, um etil-uridina ou um halogênio pode substituir 5'T; exemplos de substituições de halogênio incluem, mas não são limitados a substituições bromo - uridina ou iodo - uridina.

[00352] Alguns exemplos não limitantes de oligonucleotídeo classeB incluem:

5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*T*C*G*G*T*G*C*T*T*T*T 3' (SEQ ID NO: 6), ou

5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*T*C*G*G*T*C*G*T*T*T*T 3' (SEQ ID NO: 7), ou

5'

T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T 3 (SEQ

ID

NO: 8), ou

5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T 3' (SEQ

ID

NO: 9), ou

T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T*T*T*T*T*T*C*G*A 3 (SEQ

ID

NO: 10), onde refere-se a uma ligação fósforotioato.

[00353] Em uma modalidade, da presente invenção, as composi

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72/123 ções imunogênicas como aqui mostradas compreendem um oligonucleotídeo CpG classe C.

[00354] Em uma modalidade, da presente invenção, as composições imunogênicas como aqui m ostradas compreendem um oligonucleotídeo CpG classe P.

[00355] Em uma modalidade, o oligonucleotídeo inclui pelo menos uma ligação fósforotioato. Em uma outra modalidade todas as ligações internucleotídeo do oligonucleotídeo são ligações fósforotioato. Em uma outra modalidade o oligonucleotídeo inclui pelo menos uma ligação semelhante a fosfodiéster. Em uma outra modalidade a ligação semelhante a fosfodiéster é uma ligação fosfodiéster. Em uma outra modalidade um grupo lipofílico é conjugado ao oligonucleotídeo. Em uma modalidade, o grupo lipofílico é colesterol.

[00356] Em uma modalidade, todas as ligações internucleotídeo dos oligonucleotídeos CpG aqui mostrados são ligações fosfodiéster (oligonucleotídeos macios, como descritos em WO 2007/026190). Em uma outra modalidade, oligonucleotídeos CpG da invenção são tornados resistentes a degradação (por exemplo, são estabilizados). Um oligonucleotídeo estabilizado refere-se a um oligonucleotídeo que é relativamente resistente a degradação in vivo (por exemplo, via uma exo- ou endo-nuclease). Estabilização de ácido nucléico pode ser realizada via modificações na cadeia principal. Oligonucleotídeos tendo ligações fósforotioato proporcionam atividade máxima e protegem o oligonucleotídeo de degradação por exo- e endo-nucleases intracelulares.

[00357] Os oligonucleotídeos imunoestimuladores podem ter uma cadeia principal quimérica, que tem combinações de ligações fosfodiéster e fósforotioato. Para propósitos da presente invenção, uma cadeia principal quimérica refere-se a uma cadeia principal parcialmente estabilizada, onde pelo menos uma ligação internucleotídeo é fosfodiés

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73/123 ter ou semelhante a fosfodiéster, e onde pelo menos uma outra ligação internucleotídeo é uma ligação internucleotídeo estabilizada, onde a pelo menos uma ligação fosfodiéster ou semelhante a fosfodiéster e a pelo menos uma ligação estabilizada são diferentes. Quando a ligação fosfodiéster está preferivelmente localizada dentro de motivo CpG tais moléculas são chamadas semimacias como descrito em WO 2007/026190.

[00358] Outros oligonucleotídeos modificados incluem combinações de ligações fosfodiéster, fósforotioato, metil fosfonato, metil fósforotioato, fósforoditioato, e/ou p-etóxi.

[00359] ODN modificado de cadeia principal mista pode ser sintetizado como descrito em WO 2007/026190. O tamanho do oligonucleotídeo CpG (isto é, o número de resíduos nucleotídeos ao longo de comprimento do oligonucleotídeo) taambém pode contribuir para a atividade estimuladora do oligonucleotídeo. Para facilitar absorção em células, oligonucleotídeo CpG da invenção preferivelmente tem um comprimento mínimo de 6 resíduos nucleotídeos. Oligonucleotídeos de qualquer tamanho maior que 6 nucleotídeos (mesmo muitos kb de comprimento) são capazes de induzir uma resposta immune se suficientes motivos imunoestimuladores estão presentes, porque maiores oligonucleotídeos são degradados dentro de células. Em certas modalidades, os oligonucleotídeos CpG são de 6 a 100 nucleotídeos de comprimento, preferivelmente 8 a 30 nucleotídeos de comprimento. Em modalidades importantes, ácidos nucléicos e oligonucleotídeos da invenção não são plasmídeos ou vetores de expressão.

[00360] Em uma modalidade, o oligonucleotídeo CpG aqui mostrado compreende substituições ou modificações, tais como nas bases e/ou açúcares como descrito em parágrafos 134 a 147 de WO 2007/026190.

[00361] Em uma modalidade, o oligonucleotídeo CpG da presente

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74/123 invenção é quimicamente modificado. Exemplos de modificações químicas são conhecidos por aqueles versados na técnica e são descritas, por exemplo, em Uhlmann et al. (1990) Chem. Rev. 90:543; S. Agrawal, Ed., Humana Press, Totowa, USA 1993; Crooke. et al. (1996) Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 36:107-129; e Hunziker et al., (1995) Mod. Synth. Methods 7:331-417. Um oligonucleotídeo de acordo com a invenção pode ter uma ou mais modificações, onde cada modificação está localizada em uma particular ponte internucleosídeo fosfodiéster e/ou e uma particular unidade β-D-ribose e/ou em uma particular posição de base nucleosídeo natural em comparação a um oligonucleotídeo da mesma sequência que é composto por DNA ou RNA natural. [00362] Em algumas modalidades da invenção, ácidos nucléicos contendo CpG podem ser simplesmente misturados com carreadores imunogênicos de acordo com processos conhecidos por aqueles versados na técnica (ver, por exxemplo, WO 03/024480).

[00363] Em uma modalidade particular da presente invenção, qualquer uma composição imunogênica aqui mostrada compreende de 2 pg a 100 mg de oligonucleotídeo CpG, preferivelmente de 0,1 mg a 50 mg de oligonucleotídeo CpG, preferivelmente de 0,2 mg a 10 mg de oligonucleotídeo CpG, preferivelmente de 0,3 mg a 5 mg de oligonucleotídeo CpG, preferivelmente de 0,3 mg a 5 mg de oligonucleotídeo CpG, mesmo preferivelmente de 0,5 mg a 2 mg de de oligonucleotídeo CpG, mesmo preferivelmente de 0,75 mg a 1,5 mg de oligonucleotídeo CpG. Em uma modalidade preferida, qualquer uma composição imunogênica aqui mostrada compreende cerca de 1 mg de oligonucleotídeo CpG.

5· Formulação [00364] As composições imunogênicas da invenção podem ser formuladas em forma líquida (isto é, soluções ou suspensões) ou em uma forma liofilizada. Formulações líquidas vantajosamente podem ser

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75/123 administradas diretamente de sua forma embalada e são assim ideais para injeção sem a necessidade de reconstituição em meio aquoso como de outro modo requerido para composições liofilizadas da invenção.

[00365] Formulação da composição imunogênica da presente invenção pode ser realizada usando processos conhecidos na técnica. Por exemplo, os conjugados pneumococais individuais podem ser formulados com um veículo fisiologicamente aceitável para preparar a composição. Exemplos de tais veículos incluem, mas não são limitados a, água, solução salina tamponada, polióis (por exemplo, glicerol, propileno glicol, polietileno glicol liquido) e soluções de dextrose.

[00366] A presente descrição prove uma composição imunogênica compreendendo qualquer combinação de glicoconjugados aqu I mostrrados e um excipiente, carreador ou diluente farmaceuticamente aceitável.

[00367] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção está em forma líquida, preferivelmente em forma líquida aquosa.

[00368] Composições imunogênicas da descrição podem compreender um ou mais de um tampão, um sal, um cátion divalente, um detergente não iônico, um crioprotetor tal como um açúcar, e um antioxidante tal como um eliminador de radical livre ou agente quelante, ou quaisquer suas múltiplas combinações.

[00369] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção compreende um tampão. Em uma modalidade, o dito tampão tem um pKa de cerca de 3,5 a cerca de 7,5. Em algumas modalidades, o tampão é fosfato, succinate, histidina ou citrate. Em certas modalidades, o tampão é succinate em uma concentração final de 1 mM a 10 mM. Em uma modalidade particular, a concentração final do tampão succinato é cerca de 5 mM.

[00370] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenPetição 870190068127, de 18/07/2019, pág. 90/160

76/123 ção compreende um sal. Em algumas modalidades, o sal é selecionado dos grupos consistindo em cloreto de magnésio, cloreto de potássio, cloreto de sódio, e uma combinação dos mesmos. Em uma modalidade particular, o sal é cloreto de sódio. Em uma modalidade, particular, a composição imunogênica da invenção compreende cloreto de sódio em 150 mM. Em uma modalidade, as composições imunogênicas da invenção compreendem um tensoativo. Em uma modalidade, o tensoativo é selecionado do grupo consistindo em polissorbato 20 (Tween™ 20), polissorbato 40 (Tween™ 40), polissorbato 60 (Tween™ 60), polissorbato 65 (Tween™ 65), polissorbato 80 (Tween™ 80), polissorbato 85 (Tween™ 85), Triton N-1 01, Triton X100, oxtoxinol 40, nonoxinol-9, trietanolamina, oleato polipeptídeo trietanolamina, hidróxi estearato de polioxietileno-660 (PEG-15, Solutol H 15), polioxietileno-35-ricinoleato (CREMOPHOR EL), lecitina de soja e um poloxâmero. Em uma modalidade particular, o tensoativo é polissorbato 80. Em algumas ditas modalidades, a concentração final de polissorbato 80 na formulação é de pelo menos 0,0001% a 10% de polissorbato 80 peso por peso (peso/peso). Em algumas ditas modalidades, a concentração final de polissorbato 80 na formulação é pelo menos 0,001% a 1% de polissorbato 80 peso por peso (peso / peso). Em algumas das ditas modalidades, a concentração final de polissorbato 80 na formulação é pelo menos 0,01% a 1% de polissorbato 80 peso por peso (peso / peso). Em outras modalidades, a concentração final de polissorbato 80 na formulação é de 0,01%, 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08%, 0,09% ou 0,1% de polissorbato 80 (peso / peso). Em uma outra modalidade, a concentração final do polissorbato 80 na formulação é de 1% de polissorbato 80 (peso / peso).

[00371] Em certas modalidades, a composição imunogênica da invenção tem um pH de 5,5 a 7,5, mais preferivelmente um ph de 5,6 a

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7,0, mesmo mais preferivelmente um pH de 5,8 a 6,0. Em uma modalidade, a presente invent ção prove um recipient enchido com qualquer uma das composições imunogênicas aqui mostradas. Em uma modalidade, o recipiente é selecionado do grupo consistindo em um frasco, uma seringa, um frasco, um fermentador, um biorreator, uma bolsa, um jarro, uma ampola, um cartucho, e uma caneta descartável. Em certas modalidades, o recipiente é siliconizado.

[00372] Em uma modalidade, o recipiente da presente invenção é feito de vidro, metais (por exemplo, aço, aço inoxidável, alumínio, etc.) e/ou polímeros (por exemplo, ttermoplásticos, elastômeros, termoplástico - elastômeros). Em uma modalidade, o recipiente da presente invenção é feito de vidro.

[00373] Em uma modalidade, a presente invenção provê uma seringa enchida com qualquer uma das composições imunogênicas aqui mostradas. Em certas modalidades, a seringa é siliconizada e/ou é feita de vidro.

[00374] Uma dose típica da composição imunogênica da invenção para injeção tem um volume de 0,1 ml_ a 2 ml_, mais preferivelmente 0,2 ml_ a 1 ml_, mesmo mais preferivelmente um volume de cerca de 0,5 ml_.

[00375] Por isso o recipiente ou seringa como definida acima é enchida com um volume de 0,1 ml a 2 ml_, mais preferivelmente 0,2 ml_ a 1 ml_, mesmo mais preferivelmente um volume de cerca de 0,5 ml_ de qualquer composição imunogênica aqui definida.

6· Habilidade das composições imunogênicas da invenção para elicitar anticorpos reativos cruzados [00376] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de elicitar anticorpos IgG em humanos os quais são capazes de ligar polissacarídeo S. pneumoniae sorotipos 18A„ 18B, e/ou 18F como determinado por ensaio ELISA.

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78/123 [00377] No processo ELISA (ensaio imuno sorvente ligado a enzima), anticorpos dos soros de indivíduos vacinados são incubados com polissacarídeos que foram adsorvidos a um suporte sólido. Os anticorpos ligados são detectados usando anticorpos de detecção secundária conjugados com enzima.

[00378] Em uma modalidade, o dito ensaio ELISA é o ensaio ELISA padronizado como definido pelo WHO no Training Manual For Enzyme Linked Immunosorbent Assay For The Quantitation od Streptococcus Pneumoniae Serotype Specific IgG (Pn OS ELISA), (disponível em httD://www.vaccine.uab.edu/ELISA%20orotocol.Ddf, acessado em 31 de março de 2014).

[00379] O ELISA mede anticorpos polissacarídeos capsulares (PS) anti-S. pneumoniae IgG tipo específico presentes em soro humano. Quando diluições de soros humanos são adicionadas a placas de microtitulação revestidas com PS capsular específico - tipo, anticorpos específicos para este PS capsular se ligam às placas de microtitulação. Os anticorpos ligados às placas são detectados usando um anticorpo marcado com fosfatase alcalina IgG anti-humana cabra seguido por um substrato fosfato de p-nitro fenila. A densidade ótica do produto final colorido é proporcional à quantidade de anticorpo PS anticapsular presente no soro.

[00380] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de elicitar anticorpos IgG em humanos que são capazes de ligar polissacarídeo sorotipo 18A de S. pneumoniae em uma concentração de pelo menos 0,05 pg/mL, 0,1 pg/mL, 0,2 pg/mL, 0,3 pg/mL, 0,35 pg/mL, 0,4 pg/mL ou 0,5 pg/mL como determinado por ensaio ELISA.

[00381] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de elicitar anticorpos IgG em humano que são capazes de ligar polissacarídeo de sorotipo 18B de S. pneumoniae em uma con

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79/123 centração de pelo menos 0,05 pg/mL, 0,1 pg/mL, 0,2 μ/mL, 0,3 pg/mL, 0,35 pg/mL, 0,4 pg/mL ou 0,5 pg/mL como determinado por ensaio ELISA.

[00382] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de elicitar anticorpos IgG em humanos que são capazes de ligar polissacarídeo sorotipos 18F de S. pneumoniae em uma concentração de pelo menos 0,05 pg/mL, 0,1 pg/mL, 0,2 pg/mL, 0,3 pg/mL, 0,35 pg/mL, 0,4 pg/mL ou 0,5 pg/mL como determinado por ensaio ELISA.

[00383] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de elicitar anticorpos funcionais em humanos que são capazes de eliminar S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F como determinado por ensaio opsonofagocítico (OPA) in vitro (ver Exemplo 1). Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de elicitar anticorpos funcionais em humanos que são capazes de eliminar S. pneumoniae sorotipo 18A como determinado por ensaio opsonofagocítico (OPA) in vitro. Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de elicitar anticorpos funcionais em humanos que são capazes de eliminar S. pneumoniae sorotipo 18B como determinado por ensaio opsonofagocítico (OPA) in vitro. Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de elicitar anticorpos funcionais em humano os quais são capazes de eliminar S. pneumoniae sorotipo 18F como determinado por ensaio opsonofagocítico (OPA) in vitro. Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de elicitar anticorpos funcionais em humanos os quais são capazes de eliminar S. pneumoniae sorotipo 18A e 18B como determinado por ensaio opsonofagocítico (OPA) in vitro. Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de elicitar anticorpos funcionais em humanos os quais são capazes de matar S. pneumoniae sorotipos 18A e 18F como determina

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80/123 do por ensaio opsonofagocítico (OPA) in vitro. Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de elicitar anticorpos funcionais em human os quais são capazes de matar S. pneumoniae sorotipos 18B e 18F como determinado por ensaio opsonofagocítico (OPA) in vitro.

[00384] O ensaio opsonofagocítico (OPA) pneumococal, que mede morte de células de S. pneumoniae por células efetoras fagocíticas na presença de anticorpo funcional e complemento, é considerado ser um importante substituto para avaliação de eficácia de vacinas pneumococais.

[00385] Ensaio opsonofagocítico (OPA) in vitro pode ser conduzido por incubação junto com uma mistura de células de Streptococcus pneumoniae, um soro humano termo inativado a ser testado, células HL-60 diferenciadas (fagócitos) e uma fonte de complemento exógeno (por exemplo, complemento coelho bebê). Opsonofagocitose procede durante incubação e células bacterianas que são revestidas com anticorpo e complemento são mortas com opsonofagocitose. Unidades de formação de colônia (cfu) de bactérias sobreviventes que escapam de opsonofagocitose são determinadas através de revestimento de mistura de ensaio. O título OPA é definido como a diluição recíproca que resulta em uma redução de 50% em contagem bacteriana sobre cavidades controles sem soro teste. O título OPA e interpelado a partir de duas diluições que abrangem este corte de morte de 50%.

[00386] Um título de ponto final de 1:8 ou maior é considerado um resultado positivo nestes OPAs tipo morte.

[00387] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de elicitar um título de pelo menos 1:8 contra S. pneumoniae sorotipo 18A em pelo menos 50% dos indivíduos como determinado por ensaio de morte opsonofagocítica (OPA) in vitro. Em uma modalidade, , a composição imunogênica da invenção é capaz de elici

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81/123 tar um título de pelo menos 1:8 contra S. pneumoniae sorotipo 18A em pelo menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% ou pelo menos 99% dos indivíduos como determinado por ensaio de morte opsonofagocítica (OPA) in vitro.

[00388] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de elicitar um título de pelo menos 1:8 contra S. pneumoniae sorotipo 18B em pelo menos 50% dos indivíduos como determinado por ensaio de morte opsonofagocítica (OPA) in vitro. Em u ma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de elicitar um título de 1:8 contra S. pneumoniae sorotipo 18B em pelo menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% ou pelo menos 99%dos indivíduos como determinado por ensaio de morte opsonofagocítica (OPA) in vitro.

[00389] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de elicitar um título de pelo menos 1:8 contra S. pneumoniae sorotipo 18F em pelo menos 50% dos indivíduos como determinado por um ensaio de morte opsonofagocítica (OPA) in vitro. Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de elicitar um título de pelo menos 1:8 contra S. pneumoniae sorotipo 18F em pelo menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% ou pelo menos 99%, dos indivíduos como determinado por ensaio opsofagocítico (OPA) in vitro. Em algumas modalidades, os indivíduos podem ter títulos OPA específicos de sorotipo antes de vacinação pneumococal devido, por exemplo, a exposições naturais a S. pneumoniae (por exemplo, em caso de indivíduos adultos).

[00390] Por isso, comparação de atividade OPA de soro pré- e pósimunização com a composição imunogênica da invenção pode ser conduzida e comparada para sua resposta para sorotipos 18A, 18B, e 18F para avaliar o potencial aumento de respondedores (ver Exemplo 1).

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82/123 [00391] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção aumenta significantemente a proporção de respondedores (isto é, indivíduos com um soro tendo um título de pelo menos 1:8 como determinado por OPA in vitro) como comparada à população préimunizada.

[00392] Por isso em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de aumentar significantemente a proporção de respondedores contra S. pneumoniae sorotipo 18A (isto é, indivíduo com um soro tendo um título de pelo menos 1:8 como determinado por OPA in vitro) como comparada à população pré-imunizada.

[00393] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de aumentar significantemente a proporção de respondedores contra S. pneumoniae sorotipo 18B (isto é, indivíduo com um soro tendo um título de pelo menos 1:8 como determinado por OPA in vitro) como comparado à população pré-imunizada.

[00394] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de aumentar significantemente a proporção de respondedores contra S. pneumoniae sorotipo 18F (isto é, indivíduo com um soro tendo um título de pelo menos 1:8 como determinado por OPA in vitro) como comparado à população pré-imunizada.

[00395] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de aumentar significantemente a proporção de respondedores contra S. pneumoniae sorotipos 18A e 18B (isto é, indivíduos com um soro tendo um título de pelo menos 1:8 como determinado por OPA in vitro) como comparado à população pré-imunizada.

[00396] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de aumentar significantemente a proporção de respondedores contra S. pneumoniae sorotipos 18A e 18F (isto é, indivíduos com um soro tendo um título de pelo menos 1:8 como determinado por OPA in vitro) como comparado à população pré-imunizada.

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83/123 [00397] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de aumentar significantemente a proporção de respondedores contra S. pneumoniae sorotipos 18B e 18F (isto é, indivíduos com um soro tendo um título de pelo menos 1:8 como determinado por OPA in vitro) como comparado à população pré-imunizada.

[00398] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de aumentar significantemente a proporção de respondedores contra S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e 18F (isto é, indivíduos com um soro tendo um título de pelo menos 1:8 como determinado por OPA in vitro) como comparado à população pré-imunizada.

[00399] Comparação de atividade OPA de soro pré- e pósimunização com a composição imunogênica da invenção também pode ser feita através de comparação de poncial aumento em títulos OPA.

[00400] Por isso, comparação de atividade OPA de soro pré- e pósimunização com a composição imunogênica da invenção pode ser conduzida e comparada para sua resposta a sorotipos 18A, 18B,e 18F para avaliar o potencial para aumento em títulos OPA (ver Exemplo 1). [00401] Em uma modalidade, as composições imunogênicas da invenção são capazes de aumentar significantemente o título OPA de indivíduos humanos como comparado à população pré-imunizada.

[00402] Por isso em uma modalidade, a composição imunogânica da invenção é capaz de aumentar significantemente os títulos OPA de indivíduos humanos contra S. pneumoniae sorotipo 18A como comparado à população pré-imunizada. Em uma modalidade, o número de vezes de elevação em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18A é de pelo menos 1,5, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 7,5, 8,0 ou 8,4.

[00403] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de aumentar significantemente os títulos OPA de indivíduos humanos contra S. pneumoniae sorotipo 18B como comparado à

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84/123 população pré-imunizada. Em uma modalidade, o número de vezes de elevação em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18B é pelo menos 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0, 10,0, 11,0, 12,0, 13,0, 14,0, 15,0, 15,5 ou 16,0.

[00404] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de aumentar significantemente os títulos OPA de indivíduos humanos contra S. pneumoniae sorotipo 18F como comparado à população pré-imunizada. Em uma modalidade, o número de vezes de elevação em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18F é de pelo menos 2,0, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 5,7 ou 5,9.

[00405] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de aumentar significantemente os títulos OPA de indivíduos humanos contra S. pneumoniae sorotipo 18A 1 18B como comparado à população pré-imunizada. Em uma modalidade, o número de vezes de elevação em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18A é de pelo menos 1,5, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 7,5, 8,0 ou 8,4 e o número de vezes de elevação em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18B é pelo menos de 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0, 9.0, 10.0, 11.0, 12.0, 13.0, 14.0, 15.0, 15.5 ou 16.0.

[00406] Em uma modalidade, o número de vezes de aumento em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18A é pelo menos 8,4 e o número de vezes de aumento em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18B é de pelo menos 16,0.

[00407] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de aumentar significantemente os títulos OPA de indivíduos humanos contra S. pneumoniae sorotipos 18A e 18F como comparado à população pré-imunizada. Em uma modalidade, o número de vezes de elevação em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18A é pelo menos 1,5, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 7,5, 8,0 ou 8,4 e o número de vezes de elevação em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo

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18F é pelo menos 2,0, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 5,7 ou 5,9. Em uma modalidade, o número de vezes de elevação em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18A é pelo menos 8,4 e o número de vezes de elevação em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18F é pelo menos 5,9.

[00408] Em uma modalidade, a com posição imunogênica da invenção é capaz de aumentar significantemente os títulos OPA de indivíduos humanos contra S. pneumoniae sorotipos 18B e 18F como comparado à população pré-imunizada. Em u ma modalidade, o número de vezes de elevação em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18B é de pelo menos 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0, 10,0, 11,0, 12,0, 13,0, 14,0, 15,0, 15,5 ou 16,0 e o número de vezes de elevação em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18F é de pelo menos 2,0, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 5,7 ou 5,9. Em uma modalidade, o número de vezes de elevação em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18B é pelo menos 16,0 e o número de vezes de elevação em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18F é de pelo menos 5,9.

[00409] Em uma modalidade, a composição imunogênica da invenção é capaz de aumentar significantemente os títulos OPA de indivíduos humanos contra S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e 18F como comparado à população pré-imunizada. Em uma modalidade, o numero de vezes de au mento em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18A é de pelo menos 1,5, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 7,5, 8,0 ou 8,4, o número de vezes de aumento em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18B é de pelo menos 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0, 10,0, 11,0, 12,0, 13,0, 14,0, 15,0, 15,5 ou 16,0 e o número de vezes de aumento em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18F é de pelo menos 2,0, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 5,7 ou 5,9. Em uma modalidade, o número de vezes de aumento em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18A é de pelo menos 8,4, o número de vezes de aumento em

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86/123 título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18B é de pelo menos 16,0, e o número de vezes de aumento em título OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18F é de pelo menos 5,9.

7. Usos das composições imunogênicas da invenção [00410] Em uma modalidade, as composições imunogênicas aqui mostradas são para uso com o um medicamento.

[00411] As composições imunogênicas aqui descritas podem ser usadas em vários processos terapêuticos ou profiláticos para prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição bacteriana em um indivíduo. Em particular, composições imunogênicas aqui descritas podem ser usadas para prevenção, tratamento ou melhora de um infecção, doença ou condição de S. pneumoniae em um indivíduo.

[00412] Assim em um aspecto, a invenção provê um processo de prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição associada com S. pneumoniae em um indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva de uma composição imunogênica da invenção.

[00413] Em um aspecto, a invenção provê um processo de prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição associada com S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e 18F em um indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva de uma composição imunogênica da invenção.

[00414] Em um aspecto, a invenção provê um processo de prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição associada com S. pneumoniae sorotipo 18A em um indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva de uma composição imunogênica da invenção.

[00415] Em um aspecto, a invenção provê um processo de preven

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87/123 ção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição associada com S. pneumoniae sorotipo 18B em um indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva de uma composição imunogênica da invenção.

[00416] Em um aspecto, a invenção provê um processo de prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição associada com S. pneumoniae sorotipo 18F em um indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva de uma composição imunogênica da invenção.

[00417] Em um aspecto, a invenção provê um processo de prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição associada com S. pneumoniae sorotipo 18A e 18B em um indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva de uma composição imunogênica da invenção.

[00418] Em um aspecto, a invenção provê um processo de prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição associada com S. pneumoniae sorotipo 18A e 18F em um indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva de uma composição imunogênica da invenção.

[00419] Em um aspecto, a invenção provê um processo de prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição associada com S. pneumoniae sorotipo 18B e 18F em um indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva de uma composição imunogênica da invenção.

[00420] Em um aspecto, a invenção provê um processo de indução de uma resposta imune para S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva de uma composição imunogênica da invenção.

[00421] Em um aspecto, a invenção provê um processo de indução

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88/123 de uma resposta imune para S. pneumoniae sorotipos 18A em um indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva de uma composição imunogênica da invenção.

[00422] Em um aspecto, a invenção provê um processo de indução de uma resposta imune para S. pneumoniae sorotipo 18B em um indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva de uma composição imunogênica da invenção.

[00423] Em um aspecto, a invenção provê um processo de indução de uma resposta imune para S. pneumoniae sorotipo 18F em um indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva de uma composição imunogênica da invenção.

[00424] Em um aspecto, as composições imunogênicas da presente invenção são para uso em um processo de prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição causada por S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo.

[00425] Em um aspecto, as composições imunogênicas da presente invenção são para uso em um processo de prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição causada por S. pneumoniae sorotipos 18A em um indivíduo. Em um aspecto, as composições imunogênicas da presente invenção são para uso em um processo de prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição causada por S. pneumoniae sorotipo 18B em um indivíduo. Em um aspecto, as composições imunogênicas da presente invenção são para uso em um processo de prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição causada por S. pneumoniae sorotipo 18F em um indivíduo.

[00426] Em um aspecto, as composições imunogênicas da presente

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89/123 invenção são para uso em um processo de prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição causada por S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B em um indivíduo. Em um aspecto, as composições imunogênicas da presente invenção são para uso em um processo de prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição causada por S. pneumoniae sorotipos 18A e 18F em um indivíduo. Em um aspecto, as composições imunogênicas da presente invenção são para uso em um processo de prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição causada por S. pneumoniae sorotipos 18B e 18F em um indivíduo.

[00427] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imunogênicas aqui mostradas é para uso em um processo de imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F.

[00428] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imunogênicas aqui mostradas é para uso em um processo de imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipo 18A. Em uma modalidade, qualquer uma das composições imunogênicas aqui mostradas é para uso em um processo de imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipo 18B. Em uma modalidade, qualquer uma das composições imunogênicas aqui mostradas é para uso em um processo de imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipo 18F. Em uma modalidade, qualquer uma das composições imunogênicas aqui mostradas é para uso em um processo de imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipos 18A e 18B. Em uma modalidade, qualquer uma das composições imunogênicas aqui mostradas é para uso em um processo de imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipos 18A e 18F. Em uma modalidade, qualquer uma das composições imunogênicas aqui mostradas é para uso em um processo de

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90/123 imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipos 18B e 18F.

[00429] Em um aspecto, a prersente invenção é direcionada para o uso da composição imunogênica aqui mostrada para a fabricação de um medicamento para prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição causada por S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo.

[00430] Em um aspecto, a prersente invenção é direcionada para o uso da composição imunogênica aqui mostrada para a fabricação de um medicamento para prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição causada por S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B em um indivíduo. Em um aspecto, a prersente invenção é direcionada para o uso da composição imunogênica aqui mostrada para a fabricação de um medicamento para prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição causada por S. pneumoniae sorotipos 18A e 18F em um indivíduo. Em um aspecto, a prersente invenção é direcionada para o uso da composição imunogênica aqui mostrada para a fabricação de um medicamento para prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição causada por S. pneumoniae sorotipos 18B e 18F em um indivíduo.

[00431] Em uma modalidade, a presente invenção é direcionada ao uso da comoposição imunogênica aqui mostrada para a fabricação de um medicamento para imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F.

[00432] Em uma modalidade, a presente invenção é direcionada ao uso da comoposição imunogênica aqui mostrada para a fabricação de um medicamento para imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipo 18A. Em uma modalidade, a presente invenção é direcionada ao uso da comoposição imunogênica aqui mostrada para a fabricação de um medicamento para imunização de um indiví

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91/123 duo contra infecção por S. pneumoniae sorotipo 18B. Em uma modalidade, a presente invenção é direcionada ao uso da comoposição imunogênica aqui mostrada para a fabricação de um medicamento para imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipo 18F.

[00433] Em uma modalidade, a presente invenção é direcionada ao uso da comoposição imunogênica aqui mostrada para a fabricação de um medicamento para imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipos 18A e 18B. Em uma modalidade, a presente invenção é direcionada ao uso da comoposição imunogênica aqui mostrada para a fabricação de um medicamento para imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipos 18A, e 18F. Em uma modalidade, a presente invenção é direcionada ao uso da comoposição imunogênica aqui mostrada para a fabricação de um medicamento para imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipos 18B e 18F.

[00434] Em um aspecto, a presente invenção provê um processo para indução de uma resposta imune para S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo. Em um aspecto, a presente invenção provê um processo para indução de uma resposta imune para S. pneumoniae sorotipo 18A em um indivíduo. Em um aspecto, a presente invenção provê um processo para indução de uma resposta imune para S. pneumoniae sorotipo 18B em um indivíduo. Em um aspecto, a presente invenção provê um processo para indução de uma resposta imune para S. pneumoniae sorotipo 18F em um indivíduo. Em u ma modalidade, as composições imunogênicas aqui mostradas são para uso como uma vacina. Mais particularmente, as composições imunogênicas aqui descritas podem ser usadas para prevenir infecções de sorotipos 18A, 18B e/ou 18F de S. pneumoniae em um indivíduo. Assim em um aspecto, a invenção provê um processo de preven

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92/123 ção de uma infecção por sorotipos 18A, 18B e/ou 18F de S. pneumoniae em um indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva de uma composição imunogênica da invenção. Em algumas tais rrealizações, a infecção é selecionada do grupo consistindo em pneumonia, snusite, otite media, otite media aguda, meningite, bacteremia, sepse, empiema pleural, conjuntivite, osteomielite, artrite séptica, endocardite, peritonite, pericardite, mastoidite, celulite, infecção de tecido conjuntivo e abscesso de cérebro. Em um aspecto, o indivíduo a ser vacinado é um mamífero, tal como um humano, gato, cabra, porco, cavalo, bovino ou cão.

[00435] Em um aspecto, as composições imunogênicas aqui mostradas são para uso em um processo de prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição associada com S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo. Em algumas tais modalidades, a infecção, doença ou condição é selecionada do grupo consistindo em pneumonia, sinusite, otite média, otite média aguda, meningite, bacteremia, sepse, empiema pleural, conjuntivite, osteomielite, artrite séptica, endocardite, peritonite, pericardite, mastoidite, celulite, infecção de tecido conjuntivo e abscesso de cérebro.

[00436] Em um aspecto, a composição imunogênica aqui mostrada é para uso em um processo de prevenção de uma infecção por sorotipos 18A, 18B e/ou 18F de S. penumoniae em um indivíduo. Em algumas tais modalidades, a infecção é selecionada do grupo consistindo em pneumonia, sinusite, otite média, otite média aguda, meningite, bacteremia, sepse, empiema pleural, conjuntivite, osteomielite, artrite séptica, endocardite, peritonite, pericardite, mastoidite, celulite, infecção de tecido conjuntivo e abscesso de cérebro. Em um aspecto, o indivíduo a ser vacinado é um mamífero, tal como um humano, gato, ovelha, porco, cavalo, bovino ou cão.

[00437] Em um aspecto, a presente invenção é direcionada para o

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93/123 uso da composição imunogênica aqui mostrada para a fabricação de um medicamento para prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição associada com S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo. Em algumas tais modalidades, a infecção, doença ou condição é selecionada do grupo co nsistindo em pneumonia, sinusite, otite média, otite média aguda, meningite, bacteremia, sepse, empiema pleural, conjuntivite, osteomielite, artrite séptica, endocardite, peritonite, pericardite, mastoidite, celulite, infecção de tecido conjuntivo e abscesso de cérebro.

[00438] Em um aspecto, a presente invenção é direcionada ao uso da composição imunogênica aqui mostrada para a fabricação de um medicamento para prevenção de uma infecção por sorotipos 18A, 18B e/ou 18F de S. pneumoniae em um indivíduo. Em algumas tais modalidades, a infecção é selecionada do grupo consistindo em pneumonia, sinusite, otite média, otite média aguda, meningite, bacteremia, sepse, empiema pleural, conjuntivite, osteomielite, artrite séptica, endocardite, peritonite, pericardite, mastoidite, celulite, infecção de tecido conjuntivo e abscesso de cérebro. Em um aspecto, o indivíduo a ser vacinado é um mamífero, tal como um humano, gato, ovelha, porco, cavalo, bovino ou cão.

[00439] As composições imunogênicas da presente invenção podem ser usadas parar proteger ou tratar um humano suscetível a infecção por S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F, por meio de administração de composições imunogênicas via uma rota sistêmica ou de mucosa. Em u ma modalidade, as composições imunogênicas aqui m ostradas são administradas através de rotas intramuscular, intraperitoneal, intradérmica ou subcutânea. Em uma modalidade, as composições imunogênicas aqui mostradas são administradas através de injeção intramuscular, intraperitoneal, intradérmica ou subcutânea. Em uma modalidade, as composições imunogênicas aqui mostradas

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94/123 são administradas através de injeção intramuscular ou subcutânea.Em uma modalidade, as composições imunogênicas da presente descrição compreendem pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae 9V (tais como os glicoconjugados de parágrafo 1.3 acima).

8· Indivíduo a ser tratado com as composições imunoqânicas da invenção [00440] Como aqui mostrado, as composições farmacêuticas aqui descritas podem ser usadas em vários processos terapêuticos ou profiláticos para prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição bacteriana em um indivíduo.

[00441] Em uma modalidade preferida, o dito indivíduo é um humano. Em uma modalidade, mais preferida, o dito indivíduo é um recém nascido (isto é, abaixo de três meses de idade), um bebê (isto é, de 3 meses a um ano de idade) ou uma criança que começa a andar (isto é, de um ano a quatro anos de idade). Em uma modalidade, as composições imunogênicas aqui mostradas são para uso como uma vacina.

[00442] Em tal modalidade, o indivíduo a ser vacinado pode ser de menos que 1 ano de idade. Por exemplo, o indivíduo a ser vacinado pode ser de cerca de 1, cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7, cerca de 8, cerca de 9, cerca de 10, cerca de ou cerca de 12 meses de idade. Em uma modalidade, o indivíduo a ser vacinado é de cerca de 2, 4 ou 6 meses de idade. Em uma outra modalidade, o indivíduo a ser vacinado é de menos que 2 anos de idade. Por exemplo, o indivíduo a ser vacinado pode ser de cerca de a cerca de 15 meses de idade. Em alguns casos, tão pouco como uma dose da composição imunogênica de acordo com a invenção é necessária, mas sob algumas circunstâncias, uma segunda, terceira ou quarta dose podem ser dadas (ver seção 9 abaixo).

[00443] Em uma modalidade, da presente invenção, o indivíduo a

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95/123 ser vacinado é um adulto humano de 50 anos de idade ou mais velho, mais preferivelmente um adulto humano de 55 anos de idade ou mais velho. Em u ma modalidade, o indivíduo a ser vacinado é um adulto hu mano de 65 anos de idade ou mais velho, 70 anos de idade ou mais velho, 75 anos de idade ou mais velho, ou 80 anos de idade ou mais velho. Em uma modalidade, o indivíduo a ser vacinado é um indivíduo imunocomprometido, em particular um humano. Um indivíduo imunocomprometido é genericamente definido como uma pessoa que exibe uma habilidade atenuada ou reduzida para montar uma defesa celular ou humoral normal para desafio por agentes infecciosos.

[00444] Em uma modalidade, da presente invenção, o indivíduo imunocomprometido a ser vacinado sofre de uma doença ou condição que prejudica o sistema imune e resulta em uma resposta de anticorpos que é insuficiente para proteger contra ou tratar doença pneumococal.

[00445] Em uma modalidade, a dita doença é um distúrbio de imunodeficiência primário. Preferivelmente, o dito distúrbio de imunodeficiência primária é selecionado do grupo consistindo em: imunodeficiências de célula B e T combinadas, deficiências de anticorpos, síndromes bem definidas, doenças de desregulação imune, distúrbios de fagócito, deficiências de imunidade inatas, distúrbios autoinflamatórios, e deficiências de complemento. Em uma modalidade, o dito distúrbio de imunodeficiência primária é selecionado de um mostrado na página 24, linha 11, até página 25, linha 19 de WO 2010/125480.

[00446] Em uma modalidade particular da invenção, o indivíduo imunocomprometido a ser vacinado sofre de uma doença selecionada do grupo consistindo em: infecção de HIV, síndrome de imunodeficiência adquirida (AIDS), câncer, distúrbios crônicos de coração ou pulmão, insuficiência cardíaca congestiva, diabetes melitus, doença crônica de fígado, alcoolismo, cirrose, vazamentos de fluido espinhal,

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96/123 cardiomiopatia, bronquite crônica, enfisema, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), disfunção de baço (tal como doença de célula foicinha), falta de função de baço (asplenia), doença de sangue, leucemia, mieloma múltiplo, doença de Hodgkin, linfoma, insuficiência de rim, síndrome nefrótica e asma.

[00447] Em uma modalidade, da presente invenção, o indivíduo imunocomprometido a ser vacinado sofre de má nutrição.

[00448] Em uma modalidade particular da presente invenção, o indivíduo imunocomprometido a ser vacinado está tomando uma droga ou tratamento que diminui a resistência do corpo para infecção. Em uma modalidade, a dita droga é selecionada de uma mostrada na página 26, linha 33, até página 26, linha 4, de WO 2010/125480.

[00449] Em uma modalidade particular da presente invenção, o indivíduo imunocomprometido a ser vacinado é um fumante.

[00450] Em uma modalidade particular da presente invenção, o indivíduo imunocomprometido a ser vacinado tem uma contagem de célula branca de sangue (contagem de leucócitos) abaixo de 5x10⁹ células por litro, ou abaixo de 4x10⁹ células por litro, ou abaixo de 3x10⁹ células por litro, ou abaixo de 2x10⁹ células por litro, ou abaixo de 1x10⁹ células por litro, ou abaixo de 0,5x10⁹ células por litro, ou abaixo de 0,3x10⁹ células por litro, ou abaixo de 0,1x10⁹ células por litro.

[00451] Contagem de células brancas de sangue (contagem de leucócito): O número de células brancas de sangue (WBC) no sangue. O WBC é usualmente medido como parte da CBC (contagem completa de sangue). Células brancas de sangue são células de combate de infecção no sangue e são distintas ddas células vermelhas de sangue (transportando oxigênio) conhecidas como eritrócitos. Existem diferentes tipos de células brancas de sangue, incluindo neutrófilos (leucócitos polimorfonucleares; PMN), células banda (neutrófilos levemente imaturos), linfócitos tipo-T (células T), linfócitos tipo B (células B), mo

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97/123 nócitos, eosinófilos, e basófilos. Todos os tipos de células brancas do sangue são refletidos na contagem de células brancas de sangue. A faixa normal para a contagem de células brancas de sangue está usualmente entre 4.300 a 10.800 células por milímetro cúbico de sangue. Isto também pode ser referido como a contagem de leucócitos e pode ser expressa em unidades internacionais como 4,3-10,8 x 10⁹ células por litro.

[00452] Em uma modalidade particular da presente invenção, o indivíduo imunocomprometido a ser vacinado sofre de neutropenia. Em uma modalidade particular da presente invenção, o indivíduo imunocomprometido a ser vacinado tem uma contagem de neutrófilos abaixo de 2x10⁸ células por litro, ou abaixo de 1x10⁹ células por litro, ou abaixo de 0,5x10⁹ células por litro, ou abaixo de 0,1x10⁹ células por litro, ou abaixo de 0,05x10⁹ células por litro.

[00453] Uma baixa contagem de células brancas de sangue ou neutropenia é uma condição caracterizada por níveis anormalmente baixos de neutrófilos no sangue circulante. Neutrófilos são um tipo específico de célula branca do sangue que auxiliam a prevenir e combater infecções. A razão mais comum pela qual pacientes de câncer experimentam neutropenia é um efeito colateral de quimioterapia. Neutropenia induzida por quimioterapia aumenta um risco de paciente para infecção e interrompe tratamento de câncer.

[00454] Em uma modalidade particular da presente invenção , o indivíduo imunocomprometido a ser vacinado tem uma contagem de células CD4+ abaixo de 500/mm³, contagem de células CD4+ abaixo de 300/mm3, ou contagem de células CD4+ abaixo de 200/mm³, contagem de células CD4+ abaixo de 100/mm³, contagem de células CD4+ abaixo de 75/mm³ ou contagem de células CD4+ abaixo de 50/mm³.

[00455] Testes de células CD4+ são normalmente reportados como o número de células em mm³. Contagens normais de CD4+ estão en

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98/123 tre 500 e 1600, e contagens de CD8 estão entre 375 e 1100. Contagens de CD4 caem dramaticamente em pessoas com HIV.

[00456] Em uma modalidade da invenção, qualquer um dos indivíduos imunocomprometidos aqui m ostrados é um macho humano ou uma fêmea humana.

9· Regime [00457] Em alguns casos, tão pouco como uma dose da composição imunogênica de acordo com a invenção é necessário, mas sob algumas circunstâncias, tais como condições de maior deficiência imune, uma segunda, terceira ou quarta dose podem ser dadas. Seguindo uma vacinação inicial, indivíduos podem receber uma ou várias imunizações de reforço adequadamente espaçadas.

[00458] Em uma modalidade, o esquema de vacinação da composição imunogênica de acordo com a invenção é uma dose simples. Em uma modalidade particular, o dito esquema de dose simples é para pessoas saudáveis sendo de pelo menos 2 anos de idade.

[00459] Em uma modalidade, o esquema de vacinação da composição imunogênica de acordo com a invenção é um esquema de múltiplas doses. Em uma modalidade particular, o dito esquema de múltiplas doses consiste em uma série de 2 doses separadas por um intervalo de cerca de 1 mês a cerca de 2 meses. Em uma modalidade particular, o dito esquema de múltiplas doses consiste em uma série de 2 doses separadas por um intervalo de cerca de 1 mês, ou uma série de 2 doses separadas por um intervalo de cerca de 2 meses.

[00460] Em uma outra modalidade, o dito esquema de doses múltiplas consiste em uma série de 3 doses separadas por um intervalo de cerca de 1 mês a cerca de 2 meses. Em uma outra modalidade, o dito esquema de múltiplas doses consiste em uma série de 3 doses separadas por um intervalo de cerca de 1 mês, ou uma série de 3 doses separadas por um intervalor de cerca de 2 meses. Em uma outra moPetição 870190068127, de 18/07/2019, pág. 113/160

99/123 dalidade, o dito esquema de múltiplas doses consiste em uma série de 3 doses separadas por um intervalo de cerca de 1 mês a cerca de 2 meses seguida por uma quarta dose cerca de 10 meses a cerca de 13 meses após a primeira dose. Em uma outra modalidade, o dito esquema de múltiplas doses consiste em uma série de 3 doses separadas por um intervalo de cerca de 1 mês seguida por uma quarta dose cerca de 10 meses a cerca de 13 meses após a primeira dose, ou uma série de 3 doses separadas por um intervalo de cerca de 2 meses seguida por uma quarta dose cerca de 10 meses a cerca de 13 meses após a primeira dose.

[00461] Em uma modalidade, o esquema de múltiplas doses consiste em pelo menos uma dose (por exemplo, 1,2 ou 3 doses) no primeiro ano de idade seguida por pelo menos um dose quando a criança começa a andar.

[00462] Em uma modalidade, o esquema de múltiplas doses consiste em uma série de 2 ou 3 doses separadas por um intervalo de cerca de 1 mês a cerca de 2 meses (por exemplo, 28-56 dias entre doses), iniciando em 2 meses de idade, e seguida por uma dose quando a criança começa a andar em 12-18 meses de idade. Em uma modalidade, o dito esquema de múltiplas doses consiste em uma série de 3 doses separadas por um intervalo de cerca de 1 a 2 meses (por exemplo, 2856 dias entre doses), iniciando em 2 meses de idade, e seguida por uma dose quando a criança começa a andar em 12-15 meses de idade. Em uma outra modalidade, o dito esquema de múltiplas doses consiste em uma série de 2 doses separadas por um intervalo de cerca de 2 meses, iniciando em 2 meses de idade, e seguida por uma dose quando a criança começa a andar em 12-18 meses de idade.

[00463] Em uma modalidade, o esquema de múltiplas doses consiste em uma série de 4 doses de vacina em 2, 4, 6, e 12-15 meses de idade.

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100/123 [00464] Em uma modalidade, a primeira dose é dada em dia 0 e um ou mais reforços são dados em intervalos que variam de cerca de 2 a cerca de 24 semanas, preferivelmente com um intervalo de dosagem de 4-8 semanas.

[00465] Em uma modalidade, uma primeira dose é dada em dia 0 e um reforço é dado cerca de 3 meses depois.

10· Kit e processo [00466] Em uma modalidade, a invenção é direcionada para um kit compreendendo uma composição imunogênica aqui mostrada e um folheto de informação.

[00467] Em uma modalidade, o dito folheto de informação menciona a habilidade da composição para elicitar anticorpos funcionais contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A.

[00468] Em uma modalidade, o dito folheto de informação mencionada a habilidade da composição para elicitar anticorpos funcionais contra S. pneumoniae sorotipo 18A.

[00469] Em uma modalidade, o dito folheto de informação menciona a habilidade da composição para elicitar anticorpos anticapsulares contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A em uma concentração > 0,35 pg/mL em uma população humana.

[00470] Em uma modalidade, o dito folheto de informação menciona a habilidade da composição para elicitar anticorpos anticapsulares contra S. pneumoniae sorotipo 18A em uma concentração > 0,35 pg/mL em uma população humana.

[00471] Em uma modalidade, o dito folheto de informações menciona a habilidade da composição para elicitar títulos OPA contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A em uma população humana.

[00472] Em uma modalidade, o dito folheto de informações menciona a habilidade da composição para elicitar títulos OPA contra S. pneumoniae sorotipo 18A em uma população humana.

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101/123 [00473] Em uma modalidade, a invenção é direcionada a um processo para produção de um kit compreendendo uma composição imunogênica e um folheto de informações, o dito processo compreendendo as etapas de:

[00474] - produção de uma composição imunogênica da presente descrição e [00475] - combinação no mesmo kit de dita composição imunogênica e folheto de informação, onde o dito folheto de informação menciona a habilidade da dita composição para elicitar anticorpos funcionais contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A.

[00476] Em uma modalidade, a invenção é direcionada a um processo para produção de um kit compreendendo uma composição imunogênica e um folheto de informações, o dito processo compreendendo as etapas de:

[00477] - produção de uma composição imunogênica da presente descrição e [00478] - combinação no mesmo kit de dita composição imunogênica e folheto de informação, onde o dito folheto de informação menciona a habilidade da dita composição para elicitar anticorpos anticapsulares contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A em uma concentração de >0,35 pg/mL em uma população humana.

[00479] Em uma modalidade, a invenção é direcionada a um processo para produção de um kit compreendendo uma composição imunogênica e um folheto de informações, o dito processo compreendendo as etapas de:

[00480] - produção de uma composição imunogênica da presente descrição e [00481] - combinação no mesmo kit de dita composição imunogênica e folheto de informação, onde o dito folheto de informação menciona a habilidade da dita composição para elicitar títulos OPA contra S.

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102/123 pneumoniae sorotipos 1 SB, 18F e/ou 18A em uma população humana. [00482] Em uma modalidade, a invenção é direcionada a um processo para produção de um kit compreendendo uma composição imunogênica e um folheto de informações, o dito processo compreendendo as etapas de:

[00483] - produção de uma composição imunogênica da presente descrição;

[00484] - impressão de um folheto de informação onde o dito folheto de informação menciona a habilidade da dita composição para elicitar anticorpos funcionais contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A.

[00485] - combinação no mesmo kit de dita composição imunológica e dito folheto de informação.

[00486] Em uma modalidade, a invenção é direcionada a um processo para produção de um kit compreendendo uma composição imunogênica e um folheto de informações, o dito processo compreendendo as etapas de:

[00487] - produção de uma composição imunogênica da presente descrição;

[00488] - impressão de um folheto de informação onde o dito folheto de informação menciona a habilidade da dita composição para elicitar anticorpos anticapsulares contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A em uma concentração de > 0,35 pg/mL em uma população humana;

[00489] - combinação no mesmo kit de dita composição imunológica e dito folheto de informação.

[00490] Em uma modalidade, a invenção é direcionada a um processo para produção de um kit compreendendo uma composição imunogênica e um folheto de informações, o dito processo compreendendo as etapas de:

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103/123 [00491] - produção de uma composição imunogênica da presente descrição;

[00492] - impressão de um folheto de informação onde o dito folheto de informação menciona a habilidade da dita composição para elicitar títulos OPA contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A em uma população humana;

[00493] - combinação no mesmo kit de dita composição imunológica e dito folheto de informação.

Métodos [00494] Em uma modalidade, a invenção é direcionada a um método compreendendo as etapas de:

[00495] - injeção em um indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva de qualquer uma das composições imunogênicas definidas no presente documento;

[00496] - coleta de uma amostra de soro do dito indivíduo;

[00497] - teste de dita amostra de soro para atividade de morte opsonofagocítica contra S. pneumoniae sorotipo 18A através de um ensaio de morte opsonofagocítica (OPA) in vitro.

[00498] Em uma modalidade, a invenção é direcionadaa um método compreendendo as etapas de:

[00499] - injeção em um indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva de qualquer uma das composições imunogênicas definidas no presente documento;

[00500] - coleta de uma amostra de soro do dito indivíduo;

[00501] - teste de dita amostra de soro para atividade de morte opsonofagocítica contra S. pneumoniae sorotipo 18B através de um ensaio de morte opsonofagocítica (OPA) in vitro.

[00502] Em uma modalidade, a invenção é direcionadaa um método compreendendo as etapas de:

[00503] - injeção em um indivíduo de uma quantidade imunologica

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104/123 mente efetiva de qualquer uma das composições imunogênicas definidas no presente documento;

[00504] - coleta de uma amostra de soro do dito indivíduo;

[00505] - teste de dita amostra de soro para atividade de morte opsonofagocítica contra S. pneumoniae sorotipo 18F através de um ensaio de morte opsonofagocítica (OPA) in vitro.

[00506] Em uma modalidade, a invenção é direcionadaa um método compreendendo as etapas de:

[00507] - injeção em um indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva de qualquer uma das composições imunogênicas definidas no presente documento;

[00508] - coleta de uma amostra de soro do dito indivíduo;

[00509] - teste de dita amostra de soro para atividade de morte opsonofagocítica contra S. pneumoniae sorotipo 18A, 18B e/ou 18F através de um ensaio de morte opsonofagocítica (OPA) in vitro.

[00510] 12· A invenção também provê as seguintes modalidades como definidas nos seguintes parágrafos numerados de 1 a 103· [00511] 1. Uma composição imunogênica compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C para uso em um método de imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipo 18A, 18B e/ou 18F.

[00512] 2. A composição imunogênica de parágrafo 1, onde a dita composição não compreende sacarídeo capsular de S. pneumoniae sorotipo 18A.

[00513] 3. A composição imunogênica de qualquer um de parágrafos 1-2, onde a dita composição não compreende sacarídeo capsular de S. pneumoniae sorotipo 18B.

[00514] 4. A composição imunogênica de qualquer um de parágrafos 1-3, onde a dita composição não compreende sacarídeo capsular de S. pneumoniae sorotipo 18F.

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105/123 [00515] 5. Composição imunogênica de parágrafo 1, onde a dita composição não compreende sacarídeo capsular de S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e 18F.

[00516] 6. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-5, ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 4.

[00517] 7. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-6, ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 6B.

[00518] 8. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-7, ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 9V.

[00519] 9. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-8, ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 14.

[00520] 10. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-9, ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 19F.

[00521] 11. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-10, ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 23F.

[00522] 12. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-5 ainda compreendendo glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 4, 6B, 9V, 14, 19F e 23F.

[00523] 13. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-12 ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 1.

[00524] 14. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-13 ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 5.

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106/123 [00525] 15. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-14 ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 7F.

[00526] 16. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-15 ainda compreendendo glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1,5 e 7F.

[00527] 17. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-16 ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 6A.

[00528] 18. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-17 ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 19A.

[00529] 19. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-15 ainda compreendendo glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 6A e 19A.

[00530] 20. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-19 ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 3.

[00531] 21. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-20 ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 15B.

[00532] 22. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-21 ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 22F.

[00533] 23. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-22 ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 33F.

[00534] 24. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-23 ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 12F.

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107/123 [00535] 25. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-24 ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 10A.

[00536] 26. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-25 ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 11 A.

[00537] 27. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-26 ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 8.

[00538] 28. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-20 ainda compreendendo glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 22F e 33F.

[00539] 29. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-20 ainda compreendendo glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 15B, 22F e 33F.

[00540] 30. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-23 ainda compreendendo glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 12F, 10A, 11A e 8.

[00541] 31. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-30 ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 2.

[00542] 32. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-31 ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 17F.

[00543] 33. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-32 ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 20.

[00544] 34. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-30 ainda compreendendo glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 2, 17F e 20.

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108/123 [00545] 35. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-34 ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 15C.

[00546] 36. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-35 ainda compreendendo pelo menos um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 9N.

[00547] 37. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-36 que é uma composição conjugada pneumococal 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24 ou 25-valente.

[00548] 38. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-36 que é uma composição conjugada pneumococal 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20-valente.

[00549] 39. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-36 que é uma composição conjugada pneumococal 16valente.

[00550] 40. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-36 que é uma composição conjugada pneumococal 20valente.

[00551] 41. A composição imunogênica de qualquer um de parágrafos 1-40 onde os ditos glicoconjugados são individual mente conjugados a CRM197.

[00552] 42. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-40 onde todos os glicoconjugados são individualmente conjugados a CRM197.

[00553] 43. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-40 onde os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1,4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 e/ou 23F são individualmente conjugados a PD.

[00554] 44. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-40 ou 43 onde o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C é conjugado a TT.

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109/123 [00555] 45. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 10-40 ou 43-44 onde o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 19F é conjugado a DT.

[00556] 46. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos onde o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C é conjugado a CRM197.

[00557] 47. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-46 onde os ditos glicoconjugados são preparados usando química CDAP.

[00558] 48. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-46 onde os ditos glicoconjugados são preparados por aminação redutiva.

[00559] 49. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-48 onde o dito glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C é preparado por aminação redutiva.

[00560] 50. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-49 onde o dito glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C compreende um sacarídeo que tem um grau de O-acetilação < 10%.

[00561] 51. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-50 onde o dito glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C tem um peso molecular entre 150 kDa e 2.000 kDa.

[00562] 52. A composição imunogênica de qualquer dos parágrafos

1-51 onde a dita composição imunogênica ainda compreende antígenos de outros patógenos.

[00563] 53. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-51 onde a dita composição imunogênica ainda compreende antígenos selecionados de: um toxoide de difteria (D), um toxoide de tétano (T), um antígeno pertussis (P), que é tipicamente acelular (Pa), um antígeno de superfície de vírus de hepatite B (HBV) (HbsAg), um antígeno de vírus de hepatite A (HAV), um sacarídeo capsular tipo b

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110/123 de Haemophilus influenzae conjugado (Hib), vacina de vírus pólio inativado (IPV).

[00564] 54. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-53 onde a dita composição imunogênica ainda compreende pelo menos um adjuvante, mais preferivelmente qualquer um dos adjuvantes aqui mostrados.

[00565] 55. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-53 onde a dita composição imunogênica ainda compreende pelo menos um adjuvante selecionado do grupo consistindo em fosfato de alumínio, sulfato de alumínio e hidróxido de alumínio.

[00566] 56. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-53 onde a dita composição imunogênica compreende de 0,1 mg/ml_ a 1 mg/ml de alumínio elementar na forma de fosfato de alumínio como adjuvante.

[00567] 57. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-56 que é capaz de elicitar anticorpos IgG em humano os quais são capazes de ligação a polissacarídeo de S. pneumoniae sorotipo 18A em uma concentração de pelo menos 0,35 pg/mL como determinado por ensaio ELISA.

[00568] 58. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-57 que é capaz de elicitar anticorpos IgG em humano os quais são capazes de ligação a polissacarídeo de S. pneumoniae sorotipo 18B em uma concentração de pelo menos 0,35 pg/mL como determinado por ensaio ELISA.

[00569] 59. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-58 que é capaz de elicitar anticorpos IgG em humano os quais são capazes de ligação a polissacarídeo de S. pneumoniae sorotipo 18F em uma concentração de pelo menos 0,35 pg/mL como determinado por ensaio ELISA.

[00570] 60. A composição imunogênica de qualquer um dos pará

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111/123 grafos 1-59 que é capaz de elicitar anticorpos funcionais em humano os quais são capazes de matar S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F como determinado por ensaio opsonofagocítico (OPA) in vitro.

[00571] 61. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-60 que é capaz de elicitar um título de pelo menos 1:8 contra S. pneumoniae sorotipo 18A em pelo menos 50% dos indivíduos como determinado por ensaio de morte opsonofagocítica (OPA) in vitro.

[00572] 62. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-61 que é capaz de elicitar um título de pelo menos 1:8 contra S. pneumoniae sorotipo 18B em pelo menos 50% dos indivíduos como determinado por ensaio de morte opsonofagocítica (OPA) in vitro.

[00573] 63. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-62 que é capaz de elicitar um título de pelo menos 1:8 contra S. pneumoniae sorotipo 18F em pelo menos 50% dos indivíduos como determinado por ensaio de morte opsonofagocítica (OPA) in vitro.

[00574] 64. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-63 que é capaz de aumentar significantemente a proporção de respondedores contra S. pneumoniae sorotipo 18A como comparado à população pré-imunizada.

[00575] 65. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-64 que é capaz de aumentar significantemente a proporção de respondedores contra S. pneumoniae sorotipo 18B como comparado à população pré-imunizada.

[00576] 66. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-65 que é capaz de aumentar significantemente a proporção de respondedores contra S. pneumoniae sorotipo 18F como comparado à população pré-imunizada.

[00577] 67. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-66 que é capaz de aumentar significantemente os títulos OPA

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112/123 de indivíduos humanos contra S. pneumoniae sorotipo 18A como comparado à população pré-imunizada.

[00578] 68. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-67 que é capaz de aumentar significantemente os títulos OPA de indivíduos humanos contra S. pneumoniae sorotipo 18B como comparado à população pré-imunizada.

[00579] 69. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-68 que é capaz de aumentar significantemente os títulos OPA de indivíduos humanos contra S. pneumoniae sorotipo 18F como comparado à população pré-imunizada.

[00580] 70. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69, para uso em um método de imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipo 18A.

[00581] 71. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69, para uso em um método de imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipo 18B.

[00582] 72. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69, para uso em um método de imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipo 18F.

[00583] 73. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69, para uso em um método de imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipos 18A e18B.

[00584] 74. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69, para uso em um método de imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipo 18A e 18F.

[00585] 75. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69, para uso em um método de imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipo 18B e 18F.

[00586] 76. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69, para uso em um método de imunização de um indivíduo

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113/123 contra infecção por S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e 18F.

[00587] 77. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69, para uso em um método para prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição causada por S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo.

[00588] 78. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69, para uso para prevenir, infecção com S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo.

[00589] 79. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69, para uso em um método para proteger ou tratar um humano suscetível a infecção de S. pneumoniae sorotipos 18A,18B e/ou 18F, por meio de administração das ditas composições imunogênicas via uma rota sistêmica ou de mucosa.

[00590] 80. Um método de prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição associada com S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva de uma composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69.

[00591] 81. Um método de prevenção de uma infecção por S.

pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva de uma composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69.

[00592] 82. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69, onde o dito indivíduo é um humano tendo menos que 1 ano de idade.

[00593] 83. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69, onde o dito indivíduo é um humano tendo menos que 2 anos de idade.

[00594] 84. A composição imunogênica de qualquer um dos pará

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114/123 grafos 1-69, onde o dito indivíduo é um adulto humano de 50 anos de idade ou mais velho.

[00595] 85. A composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-84 para uso em um esquema de vacinação de múltiplas doses.

[00596] 86. Um kit compreendendo uma composição imunogênica aqui mostrada e um folheto de informação.

[00597] 87. Um kit compreendendo uma composição imunogênica de qualquer um de parágrafos 1-69 e um folheto de informação.

[00598] 88. O kit de parágrafo 86 ou 87 onde o dito folheto de informação menciona a habilidade da composição para elicitar anticorpos funcionais contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A.

[00599] 89. O kit de parágrafo 86 ou 87 onde o dito folheto de informação menciona a habilidade da composição para elicitar anticorpos funcionais contra S. pneumoniae sorotipo 18A.

[00600] 90. O kit de parágrafo 86 ou 87 onde o dito folheto de informação menciona a habilidade da composição para elicitar anticorpos anticapsulares contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A em uma concentração > 0,35 pg/mL em uma população humana.

[00601] 91. O kit de parágrafo 86 ou 87 onde o dito folheto de informação menciona a habilidade da composição para elicitar anticorpos anticapsulares contra S. pneumoniae sorotipo 18A em uma concentração > 0,35 pg/mL em uma população humana.

[00602] 92. O kit de parágrafo 86-91 onde o dito folheto de informação menciona a habilidade da composição para elicitar títulos OPA contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A em uma população humana.

[00603] 93. Um método para produção de um kit compreendendo uma composição imunogênica e um folheto de informação, o dito método compreendendo a etapa de:

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115/123 [00604] - produção de uma composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69 e [00605] - combinação no mesmo kit de dita composição imunológica e folheto de informação, onde o dito folheto de informação menciona a habilidade da dita composição para elicitar anticorpos funcionais contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A.

[00606] 94. Um método para produção de um kit compreendendo uma composição imunogênica e um folheto de informação, o dito método compreendendo a etapa de:

[00607] - produção de uma composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69 e [00608] - combinação no mesmo kit de dita composição imunológica e folheto de informação, onde o dito folheto de informação menciona a habilidade da dita composição para elicitar anticorpos anticapsulares contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A em uma concentração > 0,35 pg/mL em uma população humana.

[00609] 95. Um método para produção de um kit compreendendo uma composição imunogênica e um folheto de informação, o dito método compreendendo a etapa de:

[00610] - produção de uma composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69 e [00611] - combinação no mesmo kit de dita composição imunológica e folheto de informação, onde o dito folheto de informação menciona a habilidade da dita composição para elicitar títulos OPA contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A em uma população humana. [00612] 96. Um método para produção de um kit compreendendo uma composição imunogênica e um folheto de informação, o dito método compreendendo a etapa de:

[00613] - produção de uma composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69,

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116/123 [00614] - impressão de um folheto de informação onde o dito folheto de informação menciona a habilidade da dita composição para elicitar anticorpos funcionais contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A;

[00615] - combinação no mesmo kit de dita composição imunológica e folheto de informação.

[00616] 97. Um método para produção de um kit compreendendo uma composição imunogênica e um folheto de informação, o dito método compreendendo a etapa de:

[00617] - produção de uma composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69, [00618] - impressão de um folheto de informação onde o dito folheto de informação menciona a habilidade da dita composição para elicitar anticorpos anticapsulares contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A em uma concentração > 0,35 pg/mL em uma população humana;

[00619] - combinação no mesmo kit de dita composição imunológica e folheto de informação.

[00620] 98. Um método para produção de um kit compreendendo uma composição imunogênica e um folheto de informação, o dito método compreendendo a etapa de:

[00621] - produção de uma composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69, [00622] - impressão de um folheto de informação onde o dito folheto de informação menciona a habilidade da dita composição para elicitar títulos OPA contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A em uma população humana;

[00623] - combinação no mesmo kit de dita composição imunológica e folheto de informação.

[00624] 99. Método compreendendo a etapa de:

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117/123 [00625] - injeção em um indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva da composição imunogênica definida em qualquer um dos parágrafos 1-69;

[00626] - coleta de uma amostrra de soro do dito indivíduo;

[00627] - teste de dita amostra de soro para atividade de morte opsonofagocítica contra S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F através de ensaio de morte opsonofagocítica (OPA) in vitro.

[00628] 100. Um método de indução de uma resposta imune para

S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo de uma quantidade imunologicamente efetiva de uma composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69.

[00629] 101. Uso de uma composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69 para a fabricação de um medicamento para imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F.

[00630] 102. Uso de uma composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69 para a fabricação de um medicamento para prevenção, tratamento ou melhora de uma infecção, doença ou condição causada por S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo.

[00631] 103. Uso de uma composição imunogênica de qualquer um dos parágrafos 1-69 para a fabricação de um medicamento para prevenção de uma infecção causada por S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo.

[00632] Como aqui usado, o termo cerca significa dentro de uma faixa estatisticamente significante de um valor, tal como uma faixa de concentração estabelecida, estrutura de tempo, peso molecular, temperatura ou pH. Uma tal faixa pode estar dentro de uma ordem de magnitude, tipicamente dentro de 20%, mais tipicamente dentro de

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10%, e mesmo mais tipicamente dentro de 5% ou dentro de 1% de um dado valor ou faixa. Algumas vezes, uma tal faixa pode estar dentro de erro experimental típico de métodos padrões usados para a medição e/ou determinação de um dado valor ou faixa. A variação permissível abrangida pelo termo cerca dependerá do particular sistema sob estudo, e pode ser facilmente apreciado por aqueles versados na técnica. Quando quer que uma faixa seja recitada dentro deste pedido de patente, todo número inteiro dentro de faixa também é contemplado como uma modalidade da descrição.

[00633] Os termos compreendendo, compreende aqui são pretendidos pelos inventores serem opcionalmente substituíveis com os termos consistindo em, consiste em, respectivamente, em todo exemplo.

[00634] Todas as referências ou pedidos de patente citadas neste relatório descritivo de patente são aqui incorporados por referência.

[00635] A invenção é ilustrada nos exemplos acompanhantes. Os exemplos abaixo são realizados usando técnicas padrões, que são bem conhecidas e de rotina para aqueles versados na técnica, exceto onde de outro modo descrito em detalhes. Os exemplos são ilustrrativos, mas não limitam a invenção.

Exemplo

Exemplo 1· Avaliação de respostas imunes opsonofaqocíticas reativas cruzadas dentro de soroqrupo 18 de Streptococcus pneumoniae [00636] Proteção de hospedeiro contra S. pneumoniae é primariamente mediada através de opsonofagocitose dependente de anticorpo anticapsular. O ensaio opsonofagocítico (OPA) pneumococal, que mede morte de células de S. pneumoniae por células efetoras fagocíticas na presença de anticorpo funcional e complemento, é considerado ser um importante substituto para avaliação de eficácia de vacinas pneumococais.

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Materiais e Métodos

Soros [00637] Dois subconjuntos selecionados randomicamente de soros imunes de adultos vacinados com uma vacina de conjugado pneumococal 13-valente (13vPnC) foram testados em ensaios OPA para os sorotipos 18F, 18A, 18B e 18C. Os soros foram coletados de experimentos clínicos U.S. 6115A1-004 (N = 59, pós vacinados) e 6115A13005 (N = 66, pré- e pós-vacinação emparelhados), respectivamente.

[00638] Estudo 6115A13005 (ClinicalTrials.gov Identifier: NCT00546572) foi um experimento cego duplo modificado, controlado ativo, randomizado, fase 3 avaliando a segurança, tolerabilidade, e imunogeneicidade de PREVNAR 13® comparada com uma vacina de polissacarídeo pneumococal 23-valente (23vPS) em,indivíduos idosos de ambulatório com idade de 70 anos e mais velhos que receberam 1 dose de 23vPS pelo menos 5 anos antes de sere arrolados em estudo (ver httD://clinicaltrials.qov/ct2/show/NCT00546572, acessado em 4 de outubro de 2016).

[00639] Estudo 6115A1-004 (ClinicalTrials.gov Identifier: NCT00427895) foi um experimento cego duplo modificado, controlado ativo, randomizado, fase 3, avaliando a segurança, tolerabilidade, e imunogeneicidade de uma vacina conjugada pneumococcal 13-valente (13vPnC) comparada a uma vacina de polissacarídeo pneumococal 23-valente (23vPS) em adultos de 60 a 64 anos de idade que são puros para 23vPS e a segurança, tolerabilidade, e imunogeneicidade de 13vPnC em adultos de 18 a 59 anos de idade que são puros para 23vPS (ver: httD://clinicaltrials.qov/show/NCT00427895, acessado em 4 de outubro de 2016).

[00640] A vacina de conjugado pneumococal 13-valente (13vPnC) testada nestes estudos conteve conjugados de sorotipos pneumococais 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, e 23F, individual

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120/123 mente conjugados a proteína carreadora 197 de material de reação cruzada (CRM197) (Prevenar 13).

Procedimento de ensaio opsonofagocítico de microcolônia (mcOPA) [00641] Ensaios opsonofagocíticos (OPAs) são usados para medir anticorpos funcionais em soros humanos contra S. pneumoniae sorotipos 18F, 18A, 18B e/ou 18C. Soro teste é montado em reações de ensaio que medem a habilidade de imunoglobulina específica de polissacarídeo capsular para opsonizar bactérias, disparar deposição de complemento, pelo que facilitando fagocitose e morte de bactérias por fagócitos. O título OPA é definido como a diluição recíproca que resulta em uma redução de 50% em contagem de bactérias sobre cavidades controles sem soro teste. O título OPA é interpelado a partir de duas diluições que abrangem este corte de morte de 50%.

[00642] Procedimentos OPA foram baseados em métodos descritos em Hu etal., (2005) Clin Diagn Lab Immunol 12:287-295.

[00643] Ensaio opsonofagocítico de microcolônia avalia quantitativamente anticorpos anti-S.pneumoniae funcionais através de medição de sobrevivência bacteriana em reações Opa de microcolônia (mcOPA) contendo 0 soro teste. Diluições seriais (2,5 vezes) de soro termo inativado foram adicionadas às bactérias alvos em placas de ensaio e incubadas por 30 minutos com agitação. Complemento coelho bebê (3-4 semanas de idade, 12,5% de concentração final) e células HL-6diferenciadas, foram então adicionados a cada cavidade em uma razão de efetor para alvo aproximada de 200:1 e incubados a 37°C com agitação. Para terminar a reação, 80 microlitros de NaCI 0,9% foram adicionados a todas as cavidades, a solução de reação foi misturada, e uma alíquota de 10 microlitros foi transferida para as cavidades de placas de filtro Millipore MultiScreenHTS HV contendo 200 microlitros de água. Líquido foi filtrado através de placas sob vácuo, e 150 microlitros de meio HySoy foram adicionados a cada cavidade e filtrados

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121/123 através.

[00644] Seguindo filtração, as placas de filtro foram incubadas por toda noite em uma incubadora com 5% de CO2 a 37°C e foram então fixadas com Destain Solution (Bio-Rad). As placas foram então manchadas com azul Coomassie e mancha retirada uma vez. Colônias foram feitas imagem e enumeradas em um Cellular Technology Limited (CTL) ImmunoSpot Analyzer. O título de anticorpo OPA foi determinado como a recíproca da diluição de soro mais baixa resultando em redução de 50% no número de colônias de bactérias quando comparada às cavidades de controle de complemento de célula efetora-bactérias que não contêm soro.

Resultados - Respostas OPA em 18F, 18A, 18B e 18C [00645] A resposta funcional cruzada de soros imunes de adultos imunizados com 13vPnC contra sorotipos 18F, 18A 18B, foi avaliada nos rrespectivos ensaios opsonofagocíticos de microcolônia (mcOPAs), junto com a rresposta funcional homóloga para sorotipo 18C. Dois subconjuntos selecionados randomicamente de soros imunes de adultos vacinados com 13vPnC foram testados. Os soros foram coletados de experimentos clínicos U.S. 6115A1-004 (N = 59, pós vacinados) e 6115A13005 (N = 66, pré- e pós vacinação emparelhados), respectivamente (ver acima).

[00646] Indivíduos em estudo 6115A1-004 foram previamente puros para qualquer vacinação pneumococal e receberam uma única dose de 13vPnC como parte do protocolo de estudo. Como mostrado na Figura 1, os soros imunes de estudo 6115A1-004 (59/59) mostraram todos títulos positivos não somente para sorotipo 18C, que é 0 antígeno na vaci na, mas também para sorotipos 18F, 18A e 18B, sugerindo proteção cruzada como medida por OPA. 100% dos responderores foram verificados para todos os sorogrupos (18C, 18F, 18A e 18B) (Figura 1), suportando os resultados de 6115A1-3005 (Figura 2).

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122/123 [00647] Indivíduos em estudo 6115A1-3005 receberam previamente 1 dose de 23vPS pelo menos 5 anos antes de serem arrolados em estudo e receberam uma dose simples de 13vPnC como parte do protocolo de studo. Painel de soro de pré- e pós vacinação emparelhado (N = 66) de adultos imunizados com 13vPnC (estudo 6115A1-3005) foi avaliado sobre OPA para a resposta homóloga para sorotipo 18C e para reatividade cruizada de anticorpos anti-18C para sorotipos 18F, 18A e 18B. Como mostrado na Figura 2, uma imunidade relativamente alta (porcentagem de respondedores) para 18C (77%), 18A (73%), 18B (74%) e 18F (77%) foi detectada no ensaio OPA provavelmente devido a sua prévia imunização com 23vPS, que inclui polissacarídeo não conjugado de sorotipo 18C. Entretanto, a porcentagem de respondedores aumentou para 92% ou mais para todos os quatro sorotipos após vacinação com 13vPnC, que contém somente conjugado sorotipo 18C de sorogrupo 18. O número de vezes de elevação de valores de título é mostrado na Tabela 1 e é similar entre os sorotipos também sugerindo reatividade cruzada.

Tabela 1. Número de vezes de elevação de título OPA de pré- pós vacinação emparelhada, 13vPnC

GMT Número de vezes de elevação	OPA Titers
18C	18A	18B	18F
Pré	Pós	Pré	Pós	Pré	Pós	Pré	Pós
134	797	35	295	41	658	108	646
5,9	8,4	16,0	6,0

[00648] Uma análise mais compreensiva da distribuição de título OPA é mostrada nas curvas de distribuição cumulativa reversa (RCDC) em Figuras 3-6. As RCDCs mostram um aumento em resposta imune específica de sorotipo pós vacinação para sorotipos 18C, 18F, 18Ae 18B.

Conclusão

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123/123 [00649] Morte funcional de sorotipo cruzado de linhagens de sorogrupo 18 (18F, 18-, 18B, e 18C) foi observada em mcOPAs. Baseado nestes dados, a vacina 13vPnC é provável de prover cobertura de sorotipo mais ampla do que previamente antecipado através de provimento de adicional proteção contra sorotipos 18F, 18A, e 18B em adição à esperada proteção contra 18C.

[00650] Todas as publicações e pedidos de patente mencionados no relatório descritivo são indicativas do nível daqueles versados na técnica à qual esta invenção pertence. Todas as publicações e pedidos de patente são aqui incorporados por referência na mesma extensão como se cada publicação ou pedido de patente individual fosse especificamente e individualmente indicado para ser incorporado por referência.

[00651] Embora a invenção anterior tenha sido descrita em alguns detalhes por meio de ilustração e exemplo para propósito de clareza de entendimento, certas mudanças e modificações podem ser praticadas dentro do escopo das reivindicações apostas.

Claims (27)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Composição imunogênica, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos um glicoconjugado de S.pneumoniae sorotipo 18C para uso em um método de imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae 18A, 18B e/ou 18F, onde a dita composição não compreende sacarídeo capsular de S. pneumoniae sorotipo 18A, 18Be 18F.
2. 2. Composição imunogênica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende ainda glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 4, 6B, 9V, 14, 19F, e 23F.
3. 3. Composição imunogênica, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que compreende ainda glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1,5 e 7F.
4. 4. Composição imunogênica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que compreende ainda glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 6A e 19A.
5. 5. Composição imunogênica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que compreende ainda pelo menos um glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 3.
6. 6. Composição imunogênica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que compreende ainda glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 22F e 33F.
7. 7. Composição imunogênica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que compreende ainda glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 15B, 22F e 33F.
8. 8. Composição imunogênica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que compreende ainda glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 12F, 10A, 11A e 8.
9. 9. Composição imunogênica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que é uma compo

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   2/5 sição de conjugado pneumococal 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18,19, 20, 21,22, 23, 24 ou 25 valente.
10. 10. Composição imunogênica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo fato de que os ditos glicoconjugados são conjugados individualmente a CRM197.
11. 11. Composição imunogênica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada pelo fato de que 0 dito glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C é preparado por aminação redutiva.
12. 12. Composição imunogênica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizada pelo fato de que 0 dito glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C compreende um sacarídeo que apresenta um grau de O-acetilação < 10%.
13. 13. Composição imunogênica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pelo fato de que a dita composição imunogênica compreende ainda pelo menos um adjuvante.
14. 14. Composição imunogênica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizada pelo fato de que é capaz de selecionar anticorpos IgG em humano que são capazes de ligação de polissacarídeo de sorotipos 18A, 18B e/ou 18F de S. pneumoniae em uma concentração de pelo menos 0,35 pg/mL como determinado por ensaio ELISA.
15. 15. Composição imunogênica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizada pelo fato de que é capaz de extrair anticorpos funcionais em humano que são capazes de eliminar S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F como determinado por ensaio opsonofagocítico in vitro (OPA).
16. 16. Composição imunogênica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizada pelo fato de que é capaz

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    3/5 de extrair um título de pelo menos 1:8 contra S. pneumoniae sorotipo 18A, 18B e/ou 18F em pelo menos 50% dos sujeitos como determinado por ensaio de morte opsonofagocítica in vitro (OPA).
17. 17. Composição imunogênica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizada pelo fato de que é capaz de aumentar significantemente a proporção de respondedores contra S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F como comparado à população pré-imunizada.
18. 18. Composição imunogênica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizada pelo fato de que é capaz de aumentar significantemente os títulos OPA de indivíduos humanos contra S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F como comparado à população pré-imunizada.
19. 19. Composição imunogênica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, caracterizada pelo fato de que é usada em um método para prevenção, tratamento, ou melhora de uma infecção, doença ou condição causada por S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo.
20. 20. Composição imunogênica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, caracterizada pelo fato de que é usada para prevenção de infecção de S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo.
21. 21. Kit, caracterizado pelo fato de que compreende uma composição imunogênica, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 18, e um folheto de informação.
22. 22. Kit, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que o dito folheto de informação mencionar a habilidade da composição para selecionar anticorpos anticapsulares contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A em uma concentração > 0,35 pg/mL em uma população humana.

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    4/5
23. 23. Kit, de acordo com a reivindicação 21 ou 22, caracterizado pelo fato de que dito folheto de informação mencionar a habilidade da composição para selecionar títulos OPA contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A em uma população humana.
24. 24. Método para produção de um kit que compreende uma composição imunogênica e um folheto de informação, o dito método caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de:

    - produção de uma composição imunogênica, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 18, e

    - combinação no mesmo kit de dita composição imunogênica e folheto de informação, em que o dito folheto de informação menciona:

    - a habilidade da composição para selecionar anticorpos anticapsulares contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A em uma concentração > 0,35 pg/mL em uma população humana, e/ou

    - a habilidade da composição para selecionar títulos OPA contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A em uma população humana.
25. 25. Método para produção de um kit que compreende uma composição imunogênica e um folheto de informação, o dito método caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de:

    - produzir uma composição imunogênica, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 20;

    - imprimir um folheto de informação onde o dito folheto de informação menciona:

    - a habilidade da dita composição para selecionar anticorpos funcionais contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A e/ou;

    - a habilidade da composição para selecionar anticorpos anticapsulares contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A em

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    5/5 uma concentração > 35 pg/mL em uma população humana e/ou;

    - a habilidade da composição para selecionar títulos OPA contra S. pneumoniae sorotipos 18B, 18F e/ou 18A em uma população humana;

    - combinar no mesmo kit da dita composição imunogênica e dito folheto de informação.
26. 26. Método, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de:

    - injetar em um indivíduo uma quantidade imunologicamente efetiva da composição imunogênica como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 18;

    - coleta de uma amostra de soro do dito indivíduo;

    - teste de dita amostra de soro para atividade de morte opsonofagocítica contra S. pneumoniae sorotipo 18A, 18B e/ou 18F através de ensaio de morte opsonofagocítica (OPA) in vitro.
27. 27. Uso de pelo menos um glicoconjugado de S.pneumoniae sorotipo 18C, caracterizado pelo fato de que é na preparação de uma composição imunogênica, vacina, medicamento e/ou kit na imunização de um indivíduo contra infecção por S. pneumoniae 18A, 18B e/ou 18F, e/ou na prevenção, tratamento, ou melhora de uma infecção, doença ou condição causada por S. pneumoniae sorotipos 18A, 18B e/ou 18F em um indivíduo, e/ou no teste da atividade de morte opsonofagocítica contra S. pneumoniae sorotipo 18A, 18B e/ou 18F.