JP7120767B2 - 肺炎球菌ワクチンにおいて用いるための免疫原性組成物 - Google Patents

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Description

本発明の目的は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清群１８から保護するための免疫原性組成物を提供することである。本発明の免疫原性組成物は、典型的にはコンジュゲートした莢膜糖類抗原（糖質コンジュゲート）を含み、糖類は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型に由来する。本発明は、肺炎球菌ワクチンにおいて用いるための新規な免疫原性組成物に関する。
肺炎球菌によって生じる感染は、世界中の罹患率および死亡率の主な原因である。肺炎、発熱性菌血症、および髄膜炎は、侵襲性の肺炎球菌疾患の最も一般的な兆候であり、一方、気道内での細菌の拡散は、中耳感染、副鼻腔炎、または再発性気管支炎を生じさせ得る。侵襲性の疾患と比較して、非侵襲性の兆候は通常それほど重度ではないが、よりいっそう一般的である。
肺炎球菌疾患の病原体である肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（肺炎球菌）は、多糖莢膜に囲まれているグラム陽性の莢膜形成球菌である。この莢膜の組成の違いによって、約９１種の莢膜型間の血清学的差別化が可能になり、これらの莢膜型の一部は肺炎球菌疾患に関連することが多く、他はほとんどない。侵襲性の肺炎球菌感染には、肺炎、髄膜炎、および発熱性菌血症が含まれ、一般的な非侵襲性の兆候としては、中耳炎、副鼻腔炎、および気管支炎がある。
肺炎球菌コンジュゲートワクチン（ＰＣＶ）は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（肺炎球菌）によって生じる疾患から保護するために用いられる肺炎球菌ワクチンである。現在、３つのＰＣＶワクチンが世界市場で利用可能であり、それは、ＰＲＥＶＮＡＲ（登録商標）（一部の国ではプレベナーと呼ばれる）（７価のワクチン）、ＳＹＮＦＬＯＲＩＸ（登録商標）（１０価のワクチン）、およびＰＲＥＶＮＡＲ １３（登録商標）（１３価のワクチン）である。
ＰＲＥＶＮＡＲ １３（登録商標）における１３種以外の疾患を生じさせる特異的血清型は、地域、集団によって変化し、さらに抗生物質耐性の獲得、肺炎球菌ワクチンの導入、および原因不明の長期的傾向に起因して経時的に変化する可能性がある。
免疫原性組成物へのコンジュゲートの添加は、単一の多価注射へのコンジュゲートの組み合わせが、異なる成分の間での競合を生じさせる可能性があり、さらにいずれか個々のコンジュゲートの免疫原性に不都合に作用する可能性があるため、確実なプロセスではない。
この干渉現象は、多価ワクチンに含めることができるコンジュゲートの数を制限する可能性がある。したがって、組成物内のコンジュゲートの数を制限しながら多くの血清型から保護することは、非常に有用ではあるが、非常に困難であり得る。
ＷＯ２００４／０８３２５１ ＣＮ１０３４９５１６１ 米国特許第４，７０９，０１７号 米国特許第４，９５０，７４０号 米国特許第５，９１７，０１７号 米国特許第６，４５５，６７３号 米国特許第５，８４３，７１１号 ＷＯ２００４／０８１５１５ ＷＯ２００６／０３２４９９ ＷＯ００／３７１０５ ＷＯ００／３９２９９ ＷＯ０１／９８３３４ ＷＯ０３／０５４００７ ＷＯ２００９／０００８２６ ＥＰ０３７２５０１ ＥＰ０５９４６１０Ｂ ＥＰ０３７８８８１ ＥＰ０４２７３４７ ＷＯ９３／１７７１２ ＷＯ９４／０３２０８ ＷＯ９８／５８６６８ ＥＰ０４７１１７７ ＷＯ９１／０１１４６ ＷＯ０２／０９１９９８ ＷＯ０１／７２３３７ ＷＯ００／６１７６１ 米国特許第５，６１４，３８２号 ＷＯ２００６／１１０３８１ ＷＯ２００８／１１８７５２ 米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号 米国特許出願公開第２００６／０２２８３８１号 米国特許出願公開第２００８／０１０２４９８号 米国特許出願公開第２００８／０２８６８３８号 ＷＯ２００６／１１０３５２ ＷＯ２００５／０３３１４８ ＷＯ００／５６３５７ ＷＯ９３／１５７６０ ＷＯ９５／０８３４８ ＷＯ９６／１２９０９４ ＷＯ９８／４２７２１ 米国特許出願公開第２００７／１８４０７２号 米国特許出願公開第２００７／０２３１３４０号 米国特許出願公開第２００７／０１８４０７１号 ＷＯ２００８／０７９６５３ ＷＯ２００８／１４３７０９ ＷＯ２０１４／０９７０９９ ＷＯ２０１４／０２７３０２ ＷＯ９０／０３１８４ ＷＯ９６／１１７１１ ＷＯ００／４８６３０ ＷＯ９８／３６７７２ ＷＯ００／４１７２０ ＷＯ２００６／１３４４２３ ＷＯ２００７／０２６１９０ ＷＯ００／０７６２１ ＷＯ９９／４４６３６ ＧＢ－２２２０２２１ ＥＰ０６８９４５４ ＷＯ００／５６３５８ ＥＰ０８３５３１８ ＥＰ０７３５８９８ ＥＰ０７６１２３１ ＷＯ９９／５２５４９ ＷＯ０１／２１２０７ ＷＯ０１／２１１５２ ＷＯ００／６２８００ ＷＯ００／２３１０５ ＷＯ９９／１１２４１ ＷＯ９８／５７６５９ 米国特許第６，１９４，３８８号 米国特許第６，２０７，６４６号 米国特許第６，２１４，８０６号 米国特許第６，２１８，３７１号 米国特許第６，２３９，１１６号 米国特許第６，３３９，０６８号 ＷＯ２０１０／１２５４８０ ＷＯ９６／０２５５５ ＷＯ９８／１８８１０ ＷＯ０３／０２４４８０
Ｕｃｈｉｄａら（１９７３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２１８：３８３８～３８４４ ＮｉｃｈｏｌｌｓおよびＹｏｕｌｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｔｏｘｉｎｓ、Ｆｒａｎｋｅｌ編、Ｍａｅｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ．（１９９２） Ｋｕｏら（１９９５）Ｉｎｆｅｃｔ ｌｍｍｕｎ ６３：２７０６～２７１３ Ｆａｌｕｇｉら（２００１）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３１：３８１６～３８２４ Ｂａｒａｌｄｏｉら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ ｌｍｍｕｎ ７２：４８８４～４８８７ Ｄｏｕｇｌａｓら（１９８７）Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６９（１１）：４９６７～４９７１ Ｕｃｈｉｄａら（１９７１）Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｗ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２３３：８～１１ Ｌｅｍｅｒｃｉｎｉｅｒら（１９９６）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２９６：８３～９６ Ｊｏｎｅｓら（２００２）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ３０：１２３３～１２４７ Ｈｅｓｔｒｉｎ（１９４９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１８０：２４９～２６１ Ｂｅｔｈｅｌｌら（１９７９）１．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｒｎ．２５４：２５７２～２５７４ Ｈｅａｒｎら（１９８１）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．２１８：５０９～５１８ Ｓｊｏｌａｎｄｅｒら（１９９８）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌ．６４：７１３ Ｕｈｌｍａｎｎら（１９９０）Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９０：５４３ Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＵＳＡ １９９３ Ｃｒｏｏｋｅら（１９９６）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３６：１０７～１２９ Ｈｕｎｚｉｋｅｒら（１９９５）Ｍｏｄ．Ｓｙｎｔｈ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ７：３３１～４１７ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｖａｃｃｉｎｅ．ｕａｂ．ｅｄｕ／ＥＬＩＳＡ％２０ｐｒｏｔｏｃｏｌ．ｐｄｆ ｈｔｔｐ：／／ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ＮＣＴ００５４６５７２ ｈｔｔｐ：／／ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｓｈｏｗ／ＮＣＴ００４２７８９５ Ｈｕら、（２００５）Ｃｌｉｎ Ｄｉａｇｎ Ｌａｂ Ｉｍｍｕｎｏｌ １２：２８７～２９５
本発明の目的は、コンジュゲートの数を制限しながら、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）から、特に肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清群１８から適切に保護するための免疫原性組成物を提供することである。
肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清群１８は、４種の異なる血清型、すなわち、１８Ｆ、１８Ａ、１８Ｂ、および１８Ｃからなり、このそれぞれは、それ自体、型特異的な莢膜多糖を生産する。
本発明の目的は、コンジュゲートの数が制限された、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆ、１８Ａ、１８Ｂ、および１８Ｃから適切に保護するための免疫原性組成物を提供することである。
本発明は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆによる感染に対して対象を免疫化する方法において用いるための、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートを含む免疫原性組成物に関する。好ましくは、前記組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および１８Ｆ由来の莢膜糖類を含まない。
１つの態様において、本発明は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆによる感染に対して対象を免疫化するための薬剤の製造のための、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートを含む免疫原性組成物の使用に関する。好ましくは、前記組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆ由来の莢膜糖類を含まない。
１つの態様において、上記の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１９Ｆ、および／または２３Ｆ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む。
１つの態様において、上記の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５、および／または７Ｆ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む。
１つの態様において、上記の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび／または１９Ａ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む。
１つの態様において、上記の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３、１５Ｂ、２２Ｆ、３３Ｆ、１２Ｆ、１０Ａ、１１Ａ、および／または８由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む。
さらなる態様において、上記の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、１５Ｃ、１７Ｆ、および／または２０由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む。
１つの態様において、上記の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｎ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む。
さらなる態様において、免疫原性組成物は、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
さらなる態様において、免疫原性組成物の糖質コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７に個々にコンジュゲートしている。
１つの態様において、免疫原性組成物の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、および／または２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＰＤに個々にコンジュゲートしており、存在する場合には、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートはＴＴにコンジュゲートしており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖質コンジュゲートはＤＴにコンジュゲートしている。
１つの態様において、糖質コンジュゲートは、ＣＤＡＰ化学を用いて、または還元性アミノ化化学によって調製される。
免疫原性組成物は、他の病原体由来の抗原、および／または、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、もしくは水酸化アルミニウムなどの少なくとも１つのアジュバントをさらに含み得る。
１つの態様において、免疫原性組成物は、ＥＬＩＳＡアッセイによって決定すると、少なくとも０．３５μｇ／ｍｌの濃度で、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆの多糖と結合し得るＩｇＧ抗体を引き起こすことが可能である。
１つの態様において、免疫原性組成物は、インビトロでのオプソニン貪食作用死滅アッセイ（ＯＰＡ）によって決定すると、対象の少なくとも５０％において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆに対して少なくとも１：８の力価を引き起こすことが可能である。
１つの態様において、免疫原性組成物は、免疫化前集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆに対する応答者の割合を有意に増大させ得る。
１つの態様において、免疫原性組成物は、免疫化前集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆに対するヒト対象のＯＰＡ力価を有意に増大させ得る。
１つの態様において、免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆによる感染に対して対象を免疫化する方法において用いるためのものである。
１つの態様において、免疫原性組成物は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆによって生じる感染、疾患、もしくは状態を予防、治療、もしくは改善するための方法において用いるための、対象における血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の感染の予防に用いるための、または、前記免疫原性組成物を全身経路もしくは粘膜経路を介して投与する手段によって、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆの感染に感受性のあるヒトを予防もしくは治療する方法において用いるためのものである。
１つの態様において、本発明は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆによって生じる感染、疾患、もしくは状態を予防、治療、もしくは改善するための薬剤の製造のための、対象における血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の感染の予防に用いるための、または、前記免疫原性組成物を全身経路もしくは粘膜経路を介して投与する手段によって、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆの感染に感受性のあるヒトを予防もしくは治療するための方法において用いるための、本文書において開示される免疫原性組成物の使用に関する。
１つの態様において、本発明は、免疫学的に効果的な量の本発明の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆに関連する感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善する方法に関する。
１つの態様において、本発明は、免疫学的に効果的な量の本発明の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆによる感染を予防する方法に関する。
本発明は、本明細書において開示される免疫原性組成物および情報リーフレットを含むキットであって、前記情報リーフレットが、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆに対する機能的抗体を引き起こす組成物の能力、ならびに前記キットを生産するためのプロセスに言及している、キットにさらに関する。
驚くべきことに、血清型１８Ｃの多糖コンジュゲートは、血清群１８Ｃに対する機能的反応性抗体を引き起こすこと以外にも、血清群１８の他の血清型、すなわち１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆに対する機能的な交差反応性抗体をさらに引き起こし得ることが分かった。
機能横断型のＯＰＡ応答を示す図である。１３価の肺炎球菌コンジュゲートワクチンを接種された成人の５９種の血清のサブセット（米国研究６１１５Ａ１－００４、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ００４２７８９５）を、血清型１８Ｃ、１８Ｆ、１８Ａ、１８Ｂに対する機能的抗体の存在についてＯＰＡで評価した。ＯＰＡ陽性の力価（すなわち、≧１：８）の試料のパーセントを各群の上に示す。幾何平均力価（ＧＭＴ）をｘ軸の各群の下に列挙する。 ６６種のマッチした前／後の血清の機能横断型のＯＰＡ応答を示す図である。１３価の肺炎球菌コンジュゲートワクチンを接種された成人の６６種のマッチしたワクチン接種前およびワクチン接種後の血清パネルのサブセット（研究６１１５Ａ１－３００５、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ００５４６５７２）を、血清型１８Ｃ、１８Ｆ、１８Ａ、および１８Ｂに対する機能的抗体の存在についてＯＰＡで評価した。ＯＰＡ陽性の力価（すなわち、≧１：８）の試料のパーセントを各群の上に示す。幾何平均力価（ＧＭＴ）をｘ軸の各群の下に列挙する。 免疫化前および免疫化後－肺炎球菌血清型１８Ｃの逆累積分布曲線（ＲＣＤＣ）を示す図である。１３価の肺炎球菌コンジュゲートワクチンを接種された、マッチしたワクチン接種前およびワクチン接種後の血清パネル（Ｎ＝６６）（研究６１１５Ａ１－３００５、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ００５４６５７２）の、血清型１８Ｃに対するＯＰＡ力価の逆累積分布曲線。プロットは、ＯＰＡ陽性の力価（すなわち、≧１：８）の血清のパーセントを表す。 免疫化前および免疫化後－肺炎球菌血清型１８Ａの逆累積分布曲線（ＲＣＤＣ）を示す図である。１３価の肺炎球菌コンジュゲートワクチンを接種された、マッチしたワクチン接種前およびワクチン接種後の血清パネル（Ｎ＝６６）（研究６１１５Ａ１－３００５、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ００５４６５７２）の、血清型１８Ａに対するＯＰＡ力価の逆累積分布曲線。プロットは、ＯＰＡ陽性の力価（すなわち、≧１：８）の血清のパーセントを表す。 免疫化前および免疫化後－肺炎球菌血清型１８Ｂの逆累積分布曲線（ＲＣＤＣ）を示す図である。１３価の肺炎球菌コンジュゲートワクチンを接種された、マッチしたワクチン接種前およびワクチン接種後の血清パネル（Ｎ＝６６）（研究６１１５Ａ１－３００５、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ００５４６５７２）の、血清型１８Ｂに対するＯＰＡ力価の逆累積分布曲線。プロットは、ＯＰＡ陽性の力価（すなわち、≧１：８）の血清のパーセントを表す。 免疫化前および免疫化後－肺炎球菌血清型１８Ｆの逆累積分布曲線（ＲＣＤＣ）を示す図である。１３価の肺炎球菌コンジュゲートワクチンを接種された、マッチしたワクチン接種前およびワクチン接種後の血清パネル（Ｎ＝６６）（研究６１１５Ａ１－３００５、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ００５４６５７２）の、血清型１８Ｆに対するＯＰＡ力価の逆累積分布曲線。プロットは、ＯＰＡ陽性の力価（すなわち、≧１：８）の血清のパーセントを表す。
１ 本発明の免疫原性組成物
本発明の免疫原性組成物は、糖類が肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型に由来する、コンジュゲートした莢膜糖類抗原（糖質コンジュゲートとも呼ばれる）を典型的に含む。
好ましくは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の莢膜糖類の数は、１種の血清型（または「ｖ」、価数）から２５種の異なる血清型（２５ｖ）の範囲であり得る。１つの実施形態において、１種の血清型が存在する。１つの実施形態において、２種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、３種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、４種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、５種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、６種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、７種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、８種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、９種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、１０種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、１１種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、１２種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、１３種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、１４種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、１５種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、１６種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、１７種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、１８種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、１９種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、２０種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、２１種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、２２種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、２３種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、２４種の異なる血清型が存在する。１つの実施形態において、２５の異なる血清型が存在する。莢膜糖類は、本明細書の以下に記載されるように、担体タンパク質にコンジュゲートして糖質コンジュゲートを形成している。
タンパク質担体が組成物内の２つ以上の糖類について同一である場合、糖類は、タンパク質担体（２つ以上の異なる糖類がコンジュゲートしている担体分子）の同一の分子にコンジュゲートし得る［例えば、ＷＯ２００４／０８３２５１を参照されたい］。
しかし、好ましい実施形態において、糖類は、タンパク質担体の異なる分子にそれぞれ個々にコンジュゲートしている（タンパク質担体の各分子にコンジュゲートした糖類の型がそれぞれ１種のみである、ということ）。前記実施形態において、莢膜糖類は、担体タンパク質に個々にコンジュゲートしていると言われる。
本発明の目的では、用語「糖質コンジュゲート」は、担体タンパク質に共有結合した莢膜糖類を指す。１つの実施形態において、莢膜糖類は、担体タンパク質に直接連結している。第２の実施形態において、細菌糖類は、スペーサー／リンカーを介してタンパク質に連結している。
１．１ 本発明の担体タンパク質
本発明の糖質コンジュゲートの成分は、糖類がコンジュゲートしている担体タンパク質である。用語「タンパク質担体」または「担体タンパク質」または「担体」は、本明細書において区別せずに用いられ得る。担体タンパク質は、標準的なコンジュゲーション手順を受けやすい。
好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートの担体タンパク質は、ＤＴ（ジフテリア毒素）、ＴＴ（破傷風毒素）もしくはＴＴの断片Ｃ、ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の無毒であるが抗原性が同一の変異体）、ジフテリア毒素突然変異体ＣＲＭ１９７のＡ鎖（ＣＮ１０３４９５１６１）、他のＤＴ突然変異体（例えば、ＣＲＭ１７６、ＣＲＭ２２８、ＣＲＭ４５（Ｕｃｈｉｄａら（１９７３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２１８：３８３８～３８４４）、ＣＲＭ９、ＣＲＭ１０２、ＣＲＭ１０３、またはＣＲＭ１０７、ならびにＧｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｔｏｘｉｎｓ、Ｆｒａｎｋｅｌ編、Ｍａｅｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ．（１９９２）においてＮｉｃｈｏｌｌｓおよびＹｏｕｌｅによって記載されている他の突然変異）、米国特許第４，７０９，０１７号および米国特許第４，９５０，７４０号において開示されているＧｌｕ－１４８の欠失またはＡｓｐ、Ｇｌｎ、もしくはＳｅｒへの突然変異および／またはＡｌａ１５８の欠失もしくはＧｌｙへの突然変異および他の突然変異、米国特許第５，９１７，０１７号および米国特許第６，４５５，６７３号において開示されている少なくとも１つまたは複数の残基Ｌｙｓ５１６、Ｌｙｓ５２６、Ｐｈｅ５３０、および／またはＬｙｓ５３４の突然変異、ならびに他の突然変異、あるいは米国特許第５，８４３，７１１号において開示されている断片、一部の様式で解毒されたｐｌｙを含む肺炎球菌ニューモリシン（ｐｌｙ）（Ｋｕｏら（１９９５）Ｉｎｆｅｃｔ ｌｍｍｕｎ ６３：２７０６～２７１３）、例えば、ｄＰＬＹ－ＧＭＢＳ（ＷＯ２００４／０８１５１５およびＷＯ２００６／０３２４９９）またはｄＰＬＹ－ｆｏｒｍｏｌ、ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＥを含むＰｈｔＸ（ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤ、またはＰｈｔＥの配列は、ＷＯ００／３７１０５およびＷＯ００／３９２９９において開示されている）、およびＰｈｔタンパク質の融合体、例えば、ＰｈｔＤＥ融合体、ＰｈｔＢＥ融合体、ＰｈｔＡ～Ｅ（ＷＯ０１／９８３３４、ＷＯ０３／０５４００７、ＷＯ２００９／０００８２６）、ＯＭＰＣ（髄膜炎菌外膜タンパク質、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂから通常抽出される（ＥＰ０３７２５０１））、ＰｏｒＢ（髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に由来する）、ＰＤ（インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、例えば、ＥＰ０５９４６１０Ｂを参照されたい）、またはその免疫学的機能的同等物、合成ペプチド（ＥＰ０３７８８８１、ＥＰ０４２７３４７）、熱ショックタンパク質（ＷＯ９３／１７７１２、ＷＯ９４／０３２０８）、百日咳タンパク質（ＷＯ９８／５８６６８、ＥＰ０４７１１７７）、サイトカイン、リンホカイン、成長因子または成長ホルモン（ＷＯ９１／０１１４６）、様々な病原体に由来する抗原の複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質（Ｆａｌｕｇｉら（２００１）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３１：３８１６～３８２４）、例えば、Ｎ１９タンパク質（Ｂａｒａｌｄｏｉら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ ｌｍｍｕｎ ７２：４８８４～４８８７）、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ（ＷＯ０２／０９１９９８）、鉄取り込みタンパク質（ＷＯ０１／７２３３７）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡまたはＢ（ＷＯ００／６１７６１）、トランスフェリン結合タンパク質、肺炎球菌接着タンパク質（ＰｓａＡ）、組換え緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素Ａ（特に、その無毒の突然変異体（例えば、グルタミン酸５５３での置換を有する外毒素Ａ（Ｄｏｕｇｌａｓら（１９８７）Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６９（１１）：４９６７～４９７１））からなる群から選択される。オボアルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、またはツベルクリン（ＰＰＤ）の精製タンパク質誘導体などの、他のタンパク質もまた、担体タンパク質として用いられ得る。他の適切な担体タンパク質には、不活化された細菌毒素、例えば、コレラトキソイド（例えばＷＯ２００４／０８３２５１において記載されているような）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＬＴ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ、および緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の外毒素Ａが含まれる。
好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートの担体タンパク質は、ＴＴ、ＤＴ、ＤＴ突然変異体（ＣＲＭ１９７など）、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、ＰｈｔＸ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＤＥ融合体（特に、ＷＯ０１／９８３３４およびＷＯ０３／０５４００７において記載されているもの）、解毒型ニューモリシン、ＰｏｒＢ、Ｎ１９タンパク質、ＰｓｐＡ、ＯＭＰＣ、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡまたはＢ、およびＰｓａＡからなる群から独立して選択される。
１つの実施形態において、本発明の糖質コンジュゲートの担体タンパク質は、ＤＴ（ジフテリアトキソイド）である。別の実施形態において、本発明の糖質コンジュゲートの担体タンパク質は、ＴＴ（破傷風トキソイド）である。
別の実施形態において、本発明の糖質コンジュゲートの担体タンパク質は、ＰＤ（インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、例えば、ＥＰ０５９４６１０Ｂを参照されたい）である。
ＣＲＭ１９７タンパク質は無毒の形態のジフテリア毒素であるが、ジフテリア毒素と免疫学的に区別不可能である。ＣＲＭ１９７は、毒素産生コリネファージベータのニトロソグアニジン突然変異生成によって生じた毒素非産生ファージβ１９７ｔｏｘ－に感染したジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）によって生産される（Ｕｃｈｉｄａら（１９７１）Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｗ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２３３：８～１１）。ＣＲＭ１９７タンパク質はジフテリア毒素と同じ分子量を有するが、一塩基変化（グアニンからアデニン）によって構造遺伝子がそれと異なる。この一塩基変化によって、成熟タンパク質においてアミノ酸置換（グリシンからグルタミン酸）が生じ、ジフテリア毒素の毒性が排除される。ＣＲＭ１９７タンパク質は、安全かつ効果的な、糖類のＴ細胞依存性担体である。ＣＲＭ１９７およびその生産についてのさらなる詳細は、例えば、米国特許第５，６１４，３８２号において見ることができる。１つの実施形態において、本発明の莢膜糖類は、ＣＲＭ１９７タンパク質またはＣＲＭ１９７のＡ鎖にコンジュゲートしている（ＣＮ１０３４９５１６１を参照されたい）。１つの実施形態において、本発明の莢膜糖類は、遺伝子組換え大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）による発現を介して得られる、コンジュゲートしたＣＲＭ１９７のＡ鎖である（ＣＮ１０３４９５１６１を参照されたい）。１つの実施形態において、本発明の莢膜糖類は、全てＣＲＭ１９７にコンジュゲートしている。１つの実施形態において、本発明の莢膜糖類は、全てＣＲＭ１９７のＡ鎖にコンジュゲートしている。
したがって、多くの実施形態において、本発明の糖質コンジュゲートはＣＲＭ１９７を担体タンパク質として含み、莢膜多糖はＣＲＭ１９７に共有結合している。
１．２ 本発明の莢膜糖類
本明細書の全体を通して、用語「糖類」は、多糖またはオリゴ糖を指し得、その両方を含む。多くの実施形態において、糖類は、多糖、特に肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜多糖である。
莢膜多糖は、当業者に知られている標準的な技術によって調製される。
本発明において、莢膜多糖は、例えば、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１５Ｃ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆから調製され得る。典型的には、莢膜多糖は、それぞれの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型を培地において（例えば、大豆ベースの培地において）成長させることによって生産され、多糖は次いで、細菌培養物から調製される。本発明の糖質コンジュゲートにおいて用いられるそれぞれの多糖を作製するために用いられる肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の細菌株は、確立された微生物株保存機関（ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ）または臨床標本から得ることができる。
生物（各肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型）の集団は、播種バイアルから播種ボトルにスケールアップされ、増大容積の１つまたは複数の播種発酵槽を介して、生産スケールの発酵容積に達するまで継代されることが多い。成長サイクルの最後に、細胞を溶解し、溶解物培養液を次いで下流（精製）処理のために採取する（例えば、ＷＯ２００６／１１０３８１、ＷＯ２００８／１１８７５２、ならびに米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８１号、米国特許出願公開第２００８／０１０２４９８号、および米国特許出願公開第２００８／０２８６８３８号を参照されたい）。
個々の多糖は、典型的には、遠心分離、沈殿、限外濾過、および／またはカラムクロマトグラフィーを介して精製される（例えば、ＷＯ２００６／１１０３５２およびＷＯ２００８／１１８７５２を参照されたい）。
精製された多糖は、本明細書においてさらに記載されるように、反応が可能となるように（例えば、担体タンパク質に直接、またはｅＴＥＣスペーサーなどのリンカーを介して）活性化され（例えば、化学的に活性化され）、次いで、本発明の糖質コンジュゲートに組み込まれ得る。
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜多糖は、最大８個の糖残基を含有し得る反復オリゴ糖単位を含む。
１つの実施形態において、本発明の莢膜糖類は、１オリゴ糖単位であり得るか、または反復オリゴ糖単位の固有の長さの糖類鎖よりも短くてよい。１つの実施形態において、本発明の莢膜糖類は、関連する血清型の１反復オリゴ糖単位である。
１つの実施形態において、本発明の莢膜糖類は、オリゴ糖であり得る。オリゴ糖は、少数の反復単位（典型的には５～１５個の反復単位）を有し、合成によって、または多糖の加水分解によって典型的には誘導される。
１つの実施形態において、本発明の莢膜糖類および本発明の免疫原性組成物中の莢膜糖類は全て、多糖である。高分子量莢膜多糖は、抗原性表面に存在するエピトープによって、特定の抗体免疫応答を誘発し得る。高分子量莢膜多糖の単離および精製が、本発明のコンジュゲート、組成物、および方法における使用について、好ましくは検討される。
いくつかの実施形態において、コンジュゲーション前の精製された多糖は、５ｋＤａと４０００ｋＤａとの間の分子量を有する。他のこのような実施形態において、多糖は、１０ｋＤａと４０００ｋＤａとの間、５０ｋＤａと４０００ｋＤａとの間、５０ｋＤａと３０００ｋＤａとの間、５０ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、５０ｋＤａと１５００ｋＤａとの間、５０ｋＤａと１０００ｋＤａとの間、５０ｋＤａと７５０ｋＤａとの間、５０ｋＤａと５００ｋＤａとの間、１００ｋＤａと４０００ｋＤａとの間、１００ｋＤａと３０００ｋＤａとの間、１００ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、１００ｋＤａと１５００ｋＤａとの間、１００ｋＤａと１０００ｋＤａとの間、１００ｋＤａと７５０ｋＤａとの間、１００ｋＤａと５００ｋＤａとの間、１００と４００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと４０００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと３０００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと１５００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと１０００ｋＤａとの間、または２００ｋＤａと５００ｋＤａとの間の分子量を有する。
さらなる実施形態において、莢膜多糖は、７０ｋＤａから１５０ｋＤａの間、８０ｋＤａから１６０ｋＤａの間、９０ｋＤａから２５０ｋＤａの間、１００ｋＤａから１０００の間、１００ｋＤａから５００ｋＤａの間、１００ｋＤａから４００ｋＤａの間、１００ｋＤａから１６０ｋＤａの間、１５０ｋＤａから６００ｋＤａの間、２００ｋＤａから１０００ｋＤａの間、２００ｋＤａから６００ｋＤａの間、２００ｋＤａから４００ｋＤａの間、３００ｋＤａから１０００ＫＤａの間、３００ｋＤａから６００ｋＤａの間、３００ｋＤａから５００ｋＤａの間、または５００ｋＤａから６００ｋＤａの間の分子量を有する。
さらなる実施形態において、莢膜多糖は、５ｋＤａと１００ｋＤａとの間、７ｋＤａと１００ｋＤａとの間、１０ｋＤａと１００ｋＤａとの間、２０ｋＤａと１００ｋＤａとの間、３０ｋＤａと１００ｋＤａとの間、４０ｋＤａと１００ｋＤａとの間、５０ｋＤａと１００ｋＤａとの間、６０ｋＤａと１００ｋＤａとの間、７０ｋＤａと１００ｋＤａとの間、８０ｋＤａと１００ｋＤａとの間、９０ｋＤａと１００ｋＤａとの間、５ｋＤａと９０ＫＤａとの間、５ｋＤａと８０ｋＤａとの間、５ｋＤａと７０ｋＤａとの間、５ｋＤａと６０ｋＤａとの間、５ｋＤａと５０ｋＤａとの間、５ｋＤａと４０ｋＤａとの間、５ｋＤａと３０ｋＤａとの間、５ｋＤａと２０ｋＤａとの間、または５ｋＤａと１０ｋＤａとの間の分子量を有する。上記の範囲のいずれかに入るあらゆる整数は、本開示の実施形態として検討される。
多糖は、通常の精製手順の間にサイズがわずかに低減し得る。さらに、本明細書において記載されるように、多糖は、コンジュゲーション前にサイジング技術にかけられ得る。機械的または化学的サイジングが採用され得る。化学的加水分解は、酢酸を用いて行われ得る。例えば、血清型１８Ｃの糖類は、酢酸処理によってサイジング（および脱Ｏ－アセチル化）され得る（例えば、ＷＯ２００６／１１０３８１、第３７頁、第１～４行を参照されたい）。機械的サイジングは、高圧ホモジナイズ化せん断を用いて行われ得る。上記の分子量範囲は、コンジュゲーション前（例えば、活性化前）の精製された多糖を指す。
好ましい実施形態において、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１５Ｃ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、または３３Ｆ由来の莢膜多糖であり、莢膜多糖は、本明細書の上記に記載された分子量範囲の１つに入る分子量を有する。
本明細書において用いられる場合、多糖のまたは担体タンパク質－多糖コンジュゲートの「分子量」という用語は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）と多角レーザー光散乱検出器（ＭＡＬＬＳ）との組み合わせによって計算された分子量を指す。
いくつかの実施形態において、本発明の血清型９Ｖ、１８Ｃ、１１Ａ、１５Ｂ、２２Ｆ、および／または３３Ｆ由来の肺炎球菌糖類は、Ｏ－アセチル化されている。いくつかの実施形態において、本発明の血清型９Ｖ、１１Ａ、１５Ｂ、２２Ｆ、および／または３３Ｆ由来の肺炎球菌糖類は、Ｏ－アセチル化されている。好ましい実施形態において、本発明の血清型１８Ｃ由来の肺炎球菌糖類は、脱Ｏ－アセチル化されている。例えば、血清型１８Ｃの糖類は、酸処理によって脱Ｏ－アセチル化され得る（例えば、ＷＯ２００６／１１０３８１、第３７頁、第１～４行を参照されたい）。
多糖のＯ－アセチル化の程度は、当技術分野において知られているあらゆる方法によって、例えばプロトンＮＭＲ（例えば、Ｌｅｍｅｒｃｉｎｉｅｒら（１９９６）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２９６：８３～９６、Ｊｏｎｅｓら（２００２）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ３０：１２３３～１２４７、ＷＯ２００５／０３３１４８、およびＷＯ００／５６３５７を参照されたい）によって決定され得る。別の一般的に用いられる方法は、Ｈｅｓｔｒｉｎ（１９４９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１８０：２４９～２６１において記載されている。好ましくは、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。
本明細書において記載される精製された多糖は、化学的に活性化されて、担体タンパク質と反応し得る糖類をもたらす。これらの肺炎球菌コンジュゲートは、分離したプロセスによって調製され、以下に記載するように、単回投与量製剤に製剤される。
１．３ 本発明の糖質コンジュゲート
精製された糖類は、化学的に活性化されて、直接またはリンカーを介して担体タンパク質と反応し得る糖類（すなわち、活性化型糖類）をもたらす。一度活性化されると、各莢膜糖類は担体タンパク質に個別にコンジュゲートして、糖質コンジュゲートを形成する。１つの実施形態において、各莢膜糖類は、同一の担体タンパク質にコンジュゲートしている。糖類の化学的活性化およびその後の担体タンパク質へのコンジュゲーションは、本明細書において開示される活性化方法およびコンジュゲーション方法によって行うことができる。
１．３．１ 本発明の糖質コンジュゲート
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１５Ｃ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および／または３３Ｆ由来の莢膜多糖は、上記に開示されるように調製される。
１つの実施形態において、多糖は、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）で活性化されて、シアン酸エステルを形成する。活性化型多糖は、次いで、直接またはスペーサー（リンカー）基を介して担体タンパク質（好ましくは、ＣＲＭ１９７）上のアミノ基に結合する。例えば、スペーサーは、チオール化型多糖をもたらすためのシスタミンまたはシステアミンであり得、チオール化型多糖は、マレイミドで活性化された担体タンパク質（例えば、Ｎ－［γ－マレイミドブチロキシ］スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）を用いる）、またはハロアセチル化型担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、Ｎ－スクシンイミジルブロモ酢酸（ＳＢＡ、ＳＩＢ）、Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、スルホスクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノベンゾエート（スルホ－ＳＩＡＢ）、Ｎ－スクシンイミジルヨード酢酸（ＳＩＡ）、またはスクシンイミジル３－［ブロモアセトアミド］プロピオネート（ＳＢＡＰ）を用いる）との反応後に得られるチオエーテル連結を介して担体に結合し得る。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製されてもよい）は、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）と結合させられ、アミノ誘導体化糖類は、タンパク質担体上のカルボキシル基を介して、カルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を用いて担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）にコンジュゲートさせられる。このようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８、およびＷＯ９６／１２９０９４において記載されている。
本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１５Ｃ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および／または３３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＤＡＰ化学を用いて調製される。本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＤＡＰ化学を用いて調製される。本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＤＡＰ化学を用いて調製される。本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＤＡＰ化学を用いて調製される。本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＤＡＰ化学を用いて調製される。本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＤＡＰ化学を用いて調製される。
コンジュゲーションのための他の適切な技術は、カルボジイミド、ヒドラジド、活性エステル、ノルボラン、ｐ－ニトロ安息香酸、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、Ｓ－ＮＨＳ、ＥＤＣ、ＴＳＴＵを用いる。多くは、国際特許出願公開ＷＯ９８／４２７２１において記載されている。コンジュゲーションは、糖類の遊離ヒドロキシル基とＣＤＩとの反応（Ｂｅｔｈｅｌｌら（１９７９）１．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｒｎ．２５４：２５７２～２５７４、Ｈｅａｒｎら（１９８１）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．２１８：５０９～５１８を参照されたい）と、その後の、カルバメート連結を形成するためのタンパク質との反応とによって形成され得る、カルボニルリンカーを伴い得る。これは、アノマー末端の、第１級ヒドロキシル基への還元、第１級ヒドロキシル基の任意の保護／脱保護、ＣＤＩカルバメート中間体を形成するための第１級ヒドロキシル基とＣＤＩとの反応、およびＣＤＩカルバメート中間体とタンパク質上のアミノ基との結合を伴い得る。
好ましい実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１５Ｃ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆ由来の莢膜多糖の少なくとも１つは、還元性アミノ化（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、米国特許出願公開第２００７／１８４０７２号、米国特許出願公開第２００７／０２３１３４０号、および米国特許出願公開第２００７／０１８４０７１号、ＷＯ２００６／１１０３８１、ＷＯ２００８／０７９６５３、およびＷＯ２００８／１４３７０９において記載されている）によって担体タンパク質にコンジュゲートしている。
本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａ由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ａ由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａ由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３、６Ａ、および１９Ａ由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。
本発明の好ましい実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、全て、還元性アミノ化によって調製される。
別の好ましい実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、全て、還元性アミノ化によって調製される。
別の好ましい実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、全て、還元性アミノ化によって調製される。
別の好ましい実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、全て、還元性アミノ化によって調製される。
別の好ましい実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、全て、還元性アミノ化によって調製される。
別の好ましい実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１２Ｆ、１４、１５Ｃ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、全て、還元性アミノ化によって調製される。
別の好ましい実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、全て、還元性アミノ化によって調製される。
別の好ましい実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、全て、還元性アミノ化によって調製される。
別の好ましい実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、全て、還元性アミノ化によって調製される。
別の好ましい実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１５Ｃ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、全て、還元性アミノ化によって調製される。
別の好ましい実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１５Ｃ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、全て、還元性アミノ化によって調製される。
還元性アミノ化は、（１）多糖の酸化、（２）コンジュゲートを形成するための活性化型多糖および担体タンパク質の還元、という２つステップを伴う。酸化の前に、多糖は、加水分解されてもよい。機械的または化学的加水分解が採用され得る。化学的加水分解は、酢酸を用いて行われ得る。
酸化ステップは、過ヨウ素酸塩との反応を伴い得る。本発明の目的では、用語「過ヨウ素酸塩」には、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸との両方が含まれ、この用語にはまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ４ －）とオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ６ ５－）との両方が含まれ、過ヨウ素酸塩の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）が含まれる。１つの実施形態において、莢膜多糖は、メタ過ヨウ素酸塩の存在下で、好ましくは過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）の存在下で酸化される。別の実施形態において、莢膜多糖は、オルト過ヨウ素酸塩の存在下で、好ましくは過ヨウ素酸の存在下で酸化される。
１つの実施形態において、酸化剤は、第１級ヒドロキシルを選択的に酸化するためのオキシダントの存在下の、安定なニトロキシルラジカル化合物またはニトロキシドラジカル化合物、例えば、ピペリジン－Ｎ－オキシ化合物またはピロリジン－Ｎ－オキシ化合物である（ＷＯ２０１４／０９７０９９において記載されているように）。前記反応において、実際のオキシダントは、触媒サイクルにおける、Ｎ－オキソアンモニウム塩である。１つの態様において、前記安定なニトロキシルラジカル化合物またはニトロキシドラジカル化合物は、ピペリジン－Ｎ－オキシ化合物またはピロリジン－Ｎ－オキシ化合物である。１つの態様において、前記安定なニトロキシルラジカル化合物またはニトロキシドラジカル化合物は、ＴＥＭＰＯ（２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシ）またはＰＲＯＸＹＬ（２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ）部分を有する。１つの態様において、前記安定なニトロキシルラジカル化合物は、ＴＥＭＰＯまたはその誘導体である。１つの態様において、前記オキシダントは、Ｎ－ハロ部分を有する分子である。１つの態様において、前記オキシダントは、Ｎ－クロロスクシンイミド、Ｎ－ブロモスクシンイミド、Ｎ－ヨードスクシンイミド、ジクロロイソシアヌル酸、１，３，５－トリクロロ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジブロモイソシアヌル酸、１，３，５－トリブロモ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジヨードイソシアヌル酸、および１，３，５－トリヨード－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオンからなる群から選択される。好ましくは、前記オキシダントは、Ｎ－クロロスクシンイミドである。
好ましい実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型１２Ｆ由来の莢膜多糖は、還元性アミノ化によって担体タンパク質にコンジュゲートされ、ここで、酸化剤は、共酸化剤としての、２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシ（ＴＥＭＰＯ）フリーラジカルおよびＮ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）である（ＷＯ２０１４／０９７０９９において記載されているように）。したがって、１つの態様において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ａ）水性溶媒において１２Ｆの糖類と２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシ（ＴＥＭＰＯ）およびＮ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）とを反応させて活性化型糖類を生産するステップ、ならびにｂ）活性化型糖類と１つまたは複数のアミン基を含む担体タンパク質とを反応させるステップを含む方法によって得られる（前記方法を、以降、「ＴＥＭＰＯ／ＮＣＳ還元性アミノ化」と呼ぶ）。
酸化反応は、クエンチ剤の添加によってクエンチされてもよい。クエンチ剤は、隣接ジオール、１，２－アミノアルコール、アミノ酸、グルタチオン、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオスルフェート、亜リン酸塩、次亜リン酸塩、または亜リン酸（グリセロール、エチレングリコール、プロパン－１，２－ジオール、ブタン－１，２－ジオールまたはブタン－２，３－ジオール、アスコルビン酸など）から選択され得る。
多糖の酸化ステップの後、多糖は活性化されたと言われ、本明細書において、以下、「活性化型多糖」と呼ばれる。活性化型多糖および担体タンパク質は、独立して（個別の凍結乾燥）または共に（共凍結乾燥）、凍結乾燥（フリーズドライ）され得る。１つの実施形態において、活性化型多糖および担体タンパク質は、共凍結乾燥される。別の実施形態において、活性化型多糖および担体タンパク質は、独立して凍結乾燥される。
１つの実施形態において、凍結乾燥は非還元性糖の存在下で行われ、考えられる非還元性糖には、ショ糖、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトール、およびパラチニットが含まれる。
コンジュゲーションプロセスの第２のステップは、還元剤を用いる、コンジュゲートを形成するための活性化型多糖および担体タンパク質の還元（いわゆる還元性アミノ化）である。適切な還元剤には、シアノ水素化ホウ素（ブレンステッドまたはルイス酸の存在下の、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、または水素化ホウ素ナトリウムもしくは水素化ホウ素亜鉛など）、アミンボラン、例えば、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３、もしくは５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）、または水素化ホウ素交換樹脂が含まれる。１つの実施形態において、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。
１つの実施形態において、還元反応は、水性溶媒（例えば、６．０と８．５との間、７．０と８．０との間、または７．０と７．５との間のｐＨの、ＰＢＳ、ＭＥＳ、ＨＥＰＥＳ、Ｂｉｓ－ｔｒｉｓ、ＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、ＭＯＰＳＯ、ＢＥＳ、ＭＯＰＳ、ＤＩＰＳＯ、ＭＯＢＳ、ＨＥＰＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＴＥＡ、ＥＰＰＳ、Ｂｉｃｉｎｅ、またはＨＥＰＢから選択される）内で行われる。別の実施形態において、反応は、非プロトン性溶媒内で行われる。１つの実施形態において、還元反応は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）溶媒内またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒内で行われる。ＤＭＳＯまたはＤＭＦ溶媒は、凍結乾燥された活性化型多糖および担体タンパク質を再構成するために用いられ得る。
還元反応の終わりに、未反応のアルデヒド基がコンジュゲート内に残っている場合があり、これらは、適切なキャップ剤を用いてキャップされ得る。１つの実施形態において、このキャップ剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）である。コンジュゲーション（還元反応、およびキャップであってもよい）の後、糖質コンジュゲートは、当業者に知られている様々な技術によって精製され得る（多糖－タンパク質コンジュゲートの量が増える）。これらの技術には、透析、濃縮／ダイアフィルトレーション操作、タンジェンシャルフロー濾過沈殿／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が含まれる。１つの実施形態において、糖質コンジュゲートは、ダイアフィルトレーションまたはイオン交換クロマトグラフィーまたはサイズ排除クロマトグラフィーによって精製される。
１つの実施形態において、糖質コンジュゲートは、滅菌濾過される。
本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＤＡＰ化学を用いて調製され、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａ由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。
本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＤＡＰ化学を用いて調製され、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ａ由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。
本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＤＡＰ化学を用いて調製され、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａ由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。
本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＤＡＰ化学を用いて調製され、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３、６Ａ、および１９Ａ由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。
本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２２Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＤＡＰ化学を用いて調製され、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａ由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。
本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２２Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＤＡＰ化学を用いて調製され、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ａ由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。
本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２２Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＤＡＰ化学を用いて調製され、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａ由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。
本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２２Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＤＡＰ化学を用いて調製され、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３、６Ａ、および１９Ａ由来の糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化によって調製される。
１つの実施形態において、本発明の糖質コンジュゲートは、ＷＯ２０１４／０２７３０２において記載されているようなｅＴＥＣコンジュゲーションを用いて調製される。前記糖質コンジュゲートは、１つまたは複数のｅＴＥＣスペーサーを介して担体タンパク質に共有結合的にコンジュゲートした糖類を含み、ここで、糖類は、カルバメート連結を介してｅＴＥＣスペーサーに共有結合的にコンジュゲートしており、担体タンパク質は、アミド連結を介してｅＴＥＣスペーサーに共有結合的にコンジュゲートしている。本発明の、ｅＴＥＣが連結した糖質コンジュゲートは、一般式（Ｉ）：
Figure 0007120767000001
 によって表され得、式中、ｅＴＥＣスペーサーを含む原子は、中央の四角の中に含まれる。
ｅＴＥＣスペーサーは７つの直鎖状の原子（すなわち、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）２ＳＣＨ２Ｃ（Ｏ）－）を含み、安定なチオエーテルおよび糖類と担体タンパク質との間のアミド結合を提供する。ｅＴＥＣが連結した糖質コンジュゲートの合成は、糖類へのカルバメート連結を形成してチオール化型糖類をもたらす、糖類の活性化型ヒドロキシル基と、チオアルキルアミン試薬、例えばシスタミンまたはシステインアミンまたはその塩のアミノ基との反応を伴う。１つまたは複数の遊離スルフヒドリル基の生成は、活性化型チオール化型糖類をもたらすための還元剤との反応によって行われる。活性化型チオール化型糖類の遊離スルフヒドリル基と、アミン含有残基上に１つまたは複数のα－ハロアセトアミド基を有する活性化型担体タンパク質との反応は、コンジュゲートを形成するためのチオエーテル結合を生成し、ここで、担体タンパク質は、アミド結合を介してｅＴＥＣスペーサーに付着している。
本発明の前記糖質コンジュゲートにおいて、糖類は、多糖またはオリゴ糖であり得る。担体タンパク質は、本明細書において記載される、または当業者に知られている、あらゆる適切な担体から選択され得る。多くの実施形態において、糖類は多糖である。いくつかのこのような実施形態において、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。いくつかのこのような実施形態において、ｅＴＥＣが連結した糖質コンジュゲートは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆの莢膜多糖を含む。
特に好ましい実施形態において、ｅＴＥＣが連結した糖質コンジュゲートは、肺炎球菌血清型３３Ｆ（Ｐｎ３３Ｆ）の莢膜多糖を含み、これは、ｅＴＥＣスペーサーを介してＣＲＭ１９７に共有結合的にコンジュゲートしている（血清型３３ＦのｅＴＥＣが連結した糖質コンジュゲート）。
いくつかの実施形態において、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、７Ｆ、９Ｖ、および／または１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、Ｏ－アセチル化されている。いくつかの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、７Ｆ、および９Ｖ由来の糖質コンジュゲートは、Ｏ－アセチル化されており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、脱Ｏ－アセチル化されている。
いくつかの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１由来の糖質コンジュゲートは、１０と１００％との間、２０と１００％との間、３０と１００％との間、４０と１００％との間、５０と１００％との間、６０と１００％との間、７０と１００％との間、７５と１００％との間、８０と１００％との間、９０と１００％との間、５０と９０％との間、６０と９０％との間、７０と９０％との間、または８０と９０％との間のＯ－アセチル化の程度を有する糖類を含む。他の実施形態において、Ｏ－アセチル化の程度は、≧１０％、≧２０％、≧３０％、≧４０％、≧５０％、≧６０％、≧７０％、≧８０％、≧９０％、または約１００％である。
いくつかの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型７Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、１０と１００％との間、２０と１００％との間、３０と１００％との間、４０と１００％との間、５０と１００％との間、６０と１００％との間、７０と１００％との間、７５と１００％との間、８０と１００％との間、９０と１００％との間、５０と９０％との間、６０と９０％との間、７０と９０％との間、または８０と９０％との間のＯ－アセチル化の程度を有する糖類を含む。他の実施形態において、Ｏ－アセチル化の程度は、≧１０％、≧２０％、≧３０％、≧４０％、≧５０％、≧６０％、≧７０％、≧８０％、≧９０％、または約１００％である。
いくつかの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｖ由来の糖質コンジュゲートは、１０と１００％との間、２０と１００％との間、３０と１００％との間、４０と１００％との間、５０と１００％との間、６０と１００％との間、７０と１００％との間、７５と１００％との間、８０と１００％との間、９０と１００％との間、５０と９０％との間、６０と９０％との間、７０と９０％との間、または８０と９０％との間のＯ－アセチル化の程度を有する糖類を含む。他の実施形態において、Ｏ－アセチル化の程度は、≧１０％、≧２０％、≧３０％、≧４０％、≧５０％、≧６０％、≧７０％、≧８０％、≧９０％、または約１００％である。
いくつかの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、１０と１００％との間、２０と１００％との間、３０と１００％との間、４０と１００％との間、５０と１００％との間、６０と１００％との間、７０と１００％との間、７５と１００％との間、８０と１００％との間、９０と１００％との間、５０と９０％との間、６０と９０％との間、７０と９０％との間、または８０と９０％との間のＯ－アセチル化の程度を有する糖類を含む。他の実施形態において、Ｏ－アセチル化の程度は、≧１０％、≧２０％、≧３０％、≧４０％、≧５０％、≧６０％、≧７０％、≧８０％、≧９０％、または約１００％である。しかし、好ましくは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、脱Ｏ－アセチル化されている。いくつかの前記実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、０と５０％との間、０と４０％との間、０と３０％との間、０と２０％との間、０と１０％との間、０と５％との間、または０と２％との間のＯ－アセチル化の程度を有する糖類を含む。他の実施形態において、Ｏ－アセチル化の程度は、≦５０％、≦４０％、≦３０％、≦２０％、≦１０％、≦５％、≦２％、または≦１％である。
Ｏ－アセチル化の％は、１００％に対する（各反復単位が完全にアセチル化されている場合は、そのアセチル化型構造に対する）、所与の糖類のパーセンテージを意味する。
いくつかの実施形態において、本発明の糖質コンジュゲートは、５ｋＤａと２０００ｋＤａとの間の分子量を有する糖類を含む。他のこのような実施形態において、糖類は、５０ｋＤａと１０００ｋＤａとの間の分子量を有する。他のこのような実施形態において、糖類は、７０ｋＤａと９００ｋＤａとの間の分子量を有する。他のこのような実施形態において、糖類は、１００ｋＤａと８００ｋＤａとの間の分子量を有する。他のこのような実施形態において、糖類は、２００ｋＤａと６００ｋＤａとの間の分子量を有する。さらなるこのような実施形態において、糖類は、１００ｋＤａから１０００ｋＤａの間、１００ｋＤａから９００ｋＤａの間、１００ｋＤａから８００ｋＤａの間、１００ｋＤａから７００ｋＤａの間、１００ｋＤａから６００ｋＤａの間、１００ｋＤａから５００ｋＤａの間、１００ｋＤａから４００ｋＤａの間、１００ｋＤａから３００ｋＤａの間、１５０ｋＤａから１０００ｋＤａの間、１５０ｋＤａから９００ｋＤａの間、１５０ｋＤａから８００ｋＤａの間、１５０ｋＤａから７００ｋＤａの間、１５０ｋＤａから６００ｋＤａの間、１５０ｋＤａから５００ｋＤａの間、１５０ｋＤａから４００ｋＤａの間、１５０ｋＤａから３００ｋＤａの間、２００ｋＤａから１０００ｋＤａの間、２００ｋＤａから９００ｋＤａの間、２００ｋＤａから８００ｋＤａの間、２００ｋＤａから７００ｋＤａの間、２００ｋＤａから６００ｋＤａの間、２００ｋＤａから５００ｋＤａの間、２００ｋＤａから４００ｋＤａの間、２００ｋＤａから３００の間、２５０ｋＤａから１０００ｋＤａの間、２５０ｋＤａから９００ｋＤａの間、２５０ｋＤａから８００ｋＤａの間、２５０ｋＤａから７００ｋＤａの間、２５０ｋＤａから６００ｋＤａの間、２５０ｋＤａから５００ｋＤａの間、２５０ｋＤａから４００ｋＤａの間、２５０ｋＤａから３５０ｋＤａの間、３００ｋＤａから１０００ｋＤａの間、３００ｋＤａから９００ｋＤａの間、３００ｋＤａから８００ｋＤａの間、３００ｋＤａから７００ｋＤａの間、３００ｋＤａから６００ｋＤａの間、３００ｋＤａから５００ｋＤａの間、３００ｋＤａから４００ｋＤａの間、４００ｋＤａから１０００ｋＤａの間、４００ｋＤａから９００ｋＤａの間、４００ｋＤａから８００ｋＤａの間、４００ｋＤａから７００ｋＤａの間、４００ｋＤａから６００ｋＤａの間、５００ｋＤａから６００ｋＤａの間の分子量を有する。さらなる実施形態において、糖類は、５ｋＤａから１００ｋＤａの間、７ｋＤａから１００ｋＤａの間、１０ｋＤａから１００ｋＤａの間、２０ｋＤａから１００ｋＤａの間、３０ｋＤａから１００ｋＤａの間、４０ｋＤａから１００ｋＤａの間、５０ｋＤａから１００ｋＤａの間、６０ｋＤａから１００ｋＤａの間、７０ｋＤａから１００ｋＤａの間、８０ｋＤａから１００ｋＤａの間、９０ｋＤａから１００ｋＤａの間、５ｋＤａから９０ｋＤａの間、５ｋＤａから８０ｋＤａの間、５ｋＤａから７０ｋＤａの間、５ｋＤａから６０ｋＤａの間、５ｋＤａから５０ｋＤａの間、５ｋＤａから４０ｋＤａの間、５ｋＤａから３０ｋＤａの間、５ｋＤａから２０ｋＤａの間、または５ｋＤａから１０ｋＤａの間の分子量を有する。上記の範囲のいずれかに入るあらゆる整数は、本開示の実施形態として検討される。いくつかのこのような実施形態において、糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化を用いて調製される。
いくつかの実施形態において、本発明の糖質コンジュゲートは、１００ｋＤａと１５０００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと１００００ｋＤａとの間、２０００ｋＤａと１００００ｋＤａとの間、３０００ｋＤａと８０００ｋＤａとの間、または３０００ｋＤａと５０００ｋＤａとの間の分子量を有する。他の実施形態において、糖質コンジュゲートは、５００ｋＤａと１００００ｋＤａとの間の分子量を有する。他の実施形態において、糖質コンジュゲートは、１０００ｋＤａと８０００ｋＤａとの間の分子量を有する。さらに他の実施形態において、糖質コンジュゲートは、２０００ｋＤａと８０００ｋＤａとの間、または３０００ｋＤａと７０００ｋＤａとの間の分子量を有する。さらなる実施形態において、本発明の糖質コンジュゲートは、２００ｋＤａと２００００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと１５０００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと１００００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと７５００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと５０００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと３０００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと１０００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと２００００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと１５０００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと１２５００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと１００００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと７５００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと６０００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと５０００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと４０００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと３０００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと１５００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと１０００ｋＤａとの間、７５０ｋＤａと２００００ｋＤａとの間、７５０ｋＤａと１５０００ｋＤａとの間、７５０ｋＤａと１２５００ｋＤａとの間、７５０ｋＤａと１００００ｋＤａとの間、７５０ｋＤａと７５００ｋＤａとの間、７５０ｋＤａと６０００ｋＤａとの間、７５０ｋＤａと５０００ｋＤａとの間、７５０ｋＤａと４０００ｋＤａとの間、７５０ｋＤａと３０００ｋＤａとの間、７５０ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、７５０ｋＤａと１５００ｋＤａとの間、１０００ｋＤａと１５０００ｋＤａとの間、１０００ｋＤａと１２５００ｋＤａとの間、１０００ｋＤａと１００００ｋＤａとの間、１０００ｋＤａと７５００ｋＤａとの間、１０００ｋＤａと６０００ｋＤａとの間、１０００ｋＤａと５０００ｋＤａとの間、１０００ｋＤａと４０００ｋＤａとの間、１０００ｋＤａと２５００ｋＤａとの間、２０００ｋＤａと１５０００ｋＤａとの間、２０００ｋＤａと１２５００ｋＤａとの間、２０００ｋＤａと１００００ｋＤａとの間、２０００ｋＤａと７５００ｋＤａとの間、２０００ｋＤａと６０００ｋＤａとの間、２０００ｋＤａと５０００ｋＤａとの間、２０００ｋＤａと４０００ｋＤａとの間、または２０００ｋＤａと３０００ｋＤａとの間の分子量を有する。
さらなる実施形態において、本発明の糖質コンジュゲートは、３０００ｋＤａと２００００ｋＤａとの間、３０００ｋＤａと１５０００ｋＤａとの間、３０００ｋＤａと１００００ｋＤａとの間、３０００ｋＤａと７５００ｋＤａとの間、３０００ｋＤａと５０００ｋＤａとの間、４０００ｋＤａと２００００ｋＤａとの間、４０００ｋＤａと１５０００ｋＤａとの間、４０００ｋＤａと１２５００ｋＤａとの間、４０００ｋＤａと１００００ｋＤａとの間、４０００ｋＤａと７５００ｋＤａとの間、４０００ｋＤａと６０００ｋＤａとの間、または４０００ｋＤａと５０００ｋＤａとの間の分子量を有する。
さらなる実施形態において、本発明の糖質コンジュゲートは、５０００ｋＤａと２００００ｋＤａとの間、５０００ｋＤａと１５０００ｋＤａとの間、５０００ｋＤａと１００００ｋＤａとの間、５０００ｋＤａと７５００ｋＤａとの間、６０００ｋＤａと２００００ｋＤａとの間、６０００ｋＤａと１５０００ｋＤａとの間、６０００ｋＤａと１２５００ｋＤａとの間、６０００ｋＤａと１００００ｋＤａとの間、または６０００ｋＤａと７５００ｋＤａとの間の分子量を有する。
さらなる実施形態において、本発明の糖質コンジュゲートは、１００ｋＤａと２５０ｋＤａとの間、１００ｋＤａと５００ｋＤａとの間、１００ｋＤａと７５０ｋＤａとの間、１００ｋＤａと１０００ｋＤａとの間、１００ｋＤａと１５００ｋＤａとの間、１００ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、１００ｋＤａと２５００ｋＤａとの間、１００ｋＤａと３０００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと５００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと１０００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと１５００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、または２５０ｋＤａと２５００ｋＤａとの間の分子量を有する。
糖質コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかに入るあらゆる整数は、本開示の実施形態として検討される。
好ましい実施形態において、本発明の血清型２２Ｆの糖質コンジュゲートは、血清型２２Ｆの多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、または０．７、または約０．８ｍＭの酢酸塩を含む。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートは、血清型２２Ｆの多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．５、０．６、または０．７ｍＭの酢酸塩を含む。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートは、血清型２２Ｆの多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．６ｍＭの酢酸塩を含む。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートは、血清型２２Ｆの多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．７ｍＭの酢酸塩を含む。
好ましい実施形態において、本発明の血清型３３Ｆの糖質コンジュゲートは、血清型３３Ｆの莢膜多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、または０．８ｍＭの酢酸塩を含む。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートは、血清型３３Ｆの莢膜多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．５、０．６、または０．７ｍＭの酢酸塩を含む。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートは、血清型３３Ｆの莢膜多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．６ｍＭの酢酸塩を含む。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートは、血清型３３Ｆの莢膜多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．７ｍＭの酢酸塩を含む。好ましい実施形態において、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。
好ましい実施形態において、本発明の血清型１５Ｂの糖質コンジュゲートは、血清型１５Ｂの莢膜多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、または０．８ｍＭの酢酸塩を含む。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートは、血清型１５Ｂの莢膜多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．５、０．６、または０．７ｍＭの酢酸塩を含む。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートは、血清型１５Ｂの莢膜多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．６ｍＭの酢酸塩を含む。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートは、血清型１５Ｂの莢膜多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．７ｍＭの酢酸塩を含む。好ましい実施形態において、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。
好ましい実施形態において、本発明の血清型１５Ｂの糖質コンジュゲートは、血清型１５Ｂの莢膜多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、または０．８ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態において、本発明の血清型１５Ｂの糖質コンジュゲートは、血清型１５Ｂの莢膜多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．５、０．６、または０．７ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態において、本発明の血清型１５Ｂの糖質コンジュゲートは、血清型１５Ｂの莢膜多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態において、本発明の血清型１５Ｂの糖質コンジュゲートは、血清型１５Ｂの莢膜多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．７ｍＭのグリセロールを含む。
好ましい実施形態において、本発明の血清型１１Ａの糖質コンジュゲートは、血清型１１Ａの多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．３、０．５、０．６、１．０、１．４、１．８、２．２、２．６、３．０、３．４、３．８、４．２、４．６、または約５．０ｍＭの酢酸塩を含む。好ましい実施形態において、血清型１１Ａの糖質コンジュゲートは、血清型１１Ａの多糖１ｍＭ当たり、少なくとも１．８、２．２、または２．６ｍＭの酢酸塩を含む。１つの実施形態において、糖質コンジュゲートは、血清型１１Ａの多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．６ｍＭの酢酸塩を含む。好ましい実施形態において、本発明の血清型１１Ａの糖質コンジュゲートは、血清型１１Ａの多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．６、１．０、１．４、１．８、２．２、２．６、３．０、３．４、３．８、４．２、または約４．６ｍＭの酢酸塩、かつ血清型１１Ａの多糖１ｍＭ当たり、約５．０ｍＭ未満の酢酸塩を含む。１つの実施形態において、本発明の血清型１１Ａの糖質コンジュゲートは、血清型１１Ａの多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．６、１．０、１．４、１．８、２．２、２．６、または約３．０ｍＭの酢酸塩、かつ血清型１１Ａの多糖１ｍＭ当たり、約３．４ｍＭ未満の酢酸塩を含む。１つの実施形態において、本発明の血清型１１Ａの糖質コンジュゲートは、血清型１１Ａの多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．６、１．０、１．４、１．８、２．２、２．６、または約３．０ｍＭの酢酸塩、かつ血清型１１Ａの多糖１ｍＭ当たり、約３．３ｍＭ未満の酢酸塩を含む。上記の数値のいずれも、本開示の実施形態として検討される。
好ましい実施形態において、本発明の血清型１１Ａの糖質コンジュゲートは、血清型１１Ａの多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、または約１．０ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態において、血清型１１Ａの糖質コンジュゲートは、血清型１１Ａの多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．２、０．３、または０．４ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態において、本発明の血清型１１Ａの糖質コンジュゲートは、血清型１１Ａの多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、または約０．９ｍＭのグリセロールを含み、かつ血清型１１Ａの多糖１ｍＭ当たり、約１．０ｍＭ未満のグリセロールを含む。好ましい実施形態において、本発明の血清型１１Ａの糖質コンジュゲートは、血清型１１Ａの多糖１ｍＭ当たり、少なくとも０．３、０．４、０．５、０．６、または約０．７ｍＭのグリセロールを含み、かつ血清型１１Ａの多糖１ｍＭ当たり、約０．８ｍＭ未満のグリセロールを含む。上記の数値のいずれも、本開示の実施形態として検討される。
本発明の糖質コンジュゲートを特徴付けするための別の方法は、さまざまなコンジュゲート型リジンとして特徴付けされ得る、担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）における、糖類にコンジュゲートしたリジン残基の数（コンジュゲーションの程度）による。多糖への共有結合に起因する担体タンパク質のリジン修飾の証拠は、当業者に知られている通常の方法を用いるアミノ酸分析によって得られ得る。コンジュゲーションの結果、コンジュゲート材料を生成するために用いられる担体タンパク質出発材料と比較して、回収されるリジン残基の数が低減する。好ましい実施形態において、本発明の糖質コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、２と１５との間、２と１３との間、２と１０との間、２と８との間、２と６との間、２と５との間、２と４との間、３と１５との間、３と１３との間、３と１０との間、３と８との間、３と６との間、３と５との間、３と４との間、５と１５との間、５と１０との間、８と１５との間、８と１２との間、１０と１５との間、または１０と１２との間である。１つの実施形態において、本発明の糖質コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、または約１５である。好ましい実施形態において、本発明の糖質コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、４と７との間である。いくつかのこのような実施形態において、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。
本発明の糖質コンジュゲートはまた、担体タンパク質に対する糖類の比率（重量／重量）によって特徴付けされ得る。いくつかの実施形態において、糖質コンジュゲートにおける担体タンパク質に対する糖類の比率（ｗ／ｗ）は、０．５と３との間（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態において、担体タンパク質に対する糖類の比率（ｗ／ｗ）は、０．５と２．０との間、０．５と１．５との間、０．８と１．２との間、０．５と１．０との間、１．０と１．５との間、または１．０と２．０との間である。さらなる実施形態において、担体タンパク質に対する糖類の比率（ｗ／ｗ）は、０．８と１．２との間である。好ましい実施形態において、コンジュゲートにおける担体タンパク質に対する莢膜多糖の比率は、０．９と１．１との間である。いくつかのこのような実施形態において、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。
本発明の糖質コンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有結合的にコンジュゲートしていないがそれでも糖質コンジュゲート組成物内に存在する、遊離糖類を含有し得る。遊離糖類は、糖質コンジュゲートと非共有結合的に会合し得る（すなわち、糖質コンジュゲートに非共有結合的に結合し得る、糖質コンジュゲートに吸着し得る、または、糖質コンジュゲートの中にもしくは糖質コンジュゲートと共に捕捉され得る）。
好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートは、多糖の全量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、または１５％未満の遊離多糖を含む。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートは、多糖の全量と比較して、約２５％未満の遊離多糖を含む。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートは、多糖の全量と比較して、約２０％未満の遊離多糖を含む。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートは、多糖の全量と比較して、約１５％未満の遊離多糖を含む。
糖質コンジュゲートはまた、それらの分子サイズ分布（Ｋｄ）によって特徴付けされ得る。サイズ排除クロマトグラフィー培地（ＣＬ－４Ｂ）が、コンジュゲートの相対的分子サイズ分布を決定するために用いられ得る。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイルするために、重力送りのカラムにおいて用いられる。培地内の孔から排出された高分子は、低分子よりも速く溶出する。画分回収器を用いて、カラム溶出物を回収する。画分を、糖類アッセイによって比色分析試験する。Ｋｄの決定のために、カラムを較正して、分子が完全に排出される画分（Ｖ０）、（Ｋｄ=０）、および最大保持に相当する画分（Ｖｉ）、（Ｋｄ=１）を確立する。特定の試料の特質が達成された画分（Ｖｅ）を、式Ｋｄ=（Ｖｅ－Ｖ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）によってＫｄに関連付ける。
好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートの少なくとも３０％は、ＣＬ－４Ｂカラムにおいて０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートの少なくとも４０％は、ＣＬ－４Ｂカラムにおいて０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％は、ＣＬ－４Ｂカラムにおいて０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートの少なくとも６０％は、ＣＬ－４Ｂカラムにおいて０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートの５０％と８０％との間は、ＣＬ－４Ｂカラムにおいて０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートの６５％と８０％との間は、ＣＬ－４Ｂカラムにおいて０．３以下のＫｄを有する。
担体タンパク質上のリジンへの糖類鎖の付着の頻度は、本発明の糖質コンジュゲートを特徴付けするための別のパラメータである。例えば、いくつかの実施形態において、担体タンパク質と多糖との間の少なくとも１つの共有結合は、多糖の４つの糖類反復単位ごとに生じる。別の実施形態において、担体タンパク質と多糖との間の共有結合は、多糖の１０個の糖類反復単位ごとに少なくとも１回生じる。別の実施形態において、担体タンパク質と多糖との間の共有結合は、多糖の１５個の糖類反復単位ごとに少なくとも１回生じる。さらなる実施形態において、担体タンパク質と多糖との間の共有結合は、多糖の２５個の糖類反復単位ごとに少なくとも１回生じる。
多くの実施形態において、担体タンパク質はＣＲＭ１９７であり、ＣＲＭ１９７と多糖との間のｅＴＥＣスペーサーを介する共有結合は、多糖の４、１０、１５、または２５個の糖類反復単位ごとに少なくとも１回生じる。
他の実施形態において、コンジュゲートは、５から１０個の糖類反復単位ごとに、２から７個の糖類反復単位ごとに、３から８個の糖類反復単位ごとに、４から９個の糖類反復単位ごとに、６から１１個の糖類反復単位ごとに、７から１２個の糖類反復単位ごとに、８から１３個の糖類反復単位ごとに、９から１４個の糖類反復単位ごとに、１０から１５個の糖類反復単位ごとに、２から６個の糖類反復単位ごとに、３から７個の糖類反復単位ごとに、４から８個の糖類反復単位ごとに、６から１０個の糖類反復単位ごとに、７から１１個の糖類反復単位ごとに、８から１２個の糖類反復単位ごとに、９から１３個の糖類反復単位ごとに、１０から１４個の糖類反復単位ごとに、１０から２０個の糖類反復単位ごとに、４から２５個の糖類反復単位ごとに、または２から２５個の糖類反復単位ごとに、担体タンパク質と糖類との間の少なくとも１つの共有結合を含む。多くの実施形態において、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。
別の実施形態において、担体タンパク質と糖類との間の少なくとも１つの連結は、多糖の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５個の糖類反復単位ごとに生じる。１つの実施形態において、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。上記の範囲のいずれかに入るあらゆる整数は、本開示の実施形態として検討される。
１．３．２ 本発明の血清型１８Ｃ糖質コンジュゲート
１つの実施形態において、本発明の１８Ｃ糖質コンジュゲートは、本節において定義される通りである。
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型１８Ｃ由来の莢膜多糖は、上記に開示されるように調製される。
１つの実施形態において、多糖は、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）で活性化されて、シアン酸エステルを形成する。活性化型多糖は、次いで、直接またはスペーサー（リンカー）基を介して担体タンパク質（好ましくは、ＣＲＭ１９７）上のアミノ基に結合する。例えば、スペーサーは、チオール化型多糖をもたらすためのシスタミンまたはシステアミンであり得、チオール化型多糖は、マレイミドで活性化された担体タンパク質（例えば、Ｎ－［γ－マレイミドブチロキシ］スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）を用いる）、またはハロアセチル化型担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、Ｎ－スクシンイミジルブロモ酢酸（ＳＢＡ、ＳＩＢ）、Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、スルホスクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノベンゾエート（スルホ－ＳＩＡＢ）、Ｎ－スクシンイミジルヨード酢酸（ＳＩＡ）、またはスクシンイミジル３－［ブロモアセトアミド］プロピオネート（ＳＢＡＰ）を用いる）との反応後に得られるチオエーテル連結を介して担体に結合し得る。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製されてもよい）は、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）と結合させられ、アミノ誘導体化糖類は、タンパク質担体上のカルボキシル基を介して、カルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を用いて担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）にコンジュゲートさせられる。このようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８、およびＷＯ９６／１２９０９４において記載されている。
本発明の１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＤＡＰ化学を用いて調製される。
コンジュゲーションのための他の適切な技術は、カルボジイミド、ヒドラジド、活性エステル、ノルボラン、ｐ－ニトロ安息香酸、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、Ｓ－ＮＨＳ、ＥＤＣ、ＴＳＴＵを用いる。多くは、国際特許出願公開ＷＯ９８／４２７２１において記載されている。コンジュゲーションは、糖類の遊離ヒドロキシル基とＣＤＩとの反応（Ｂｅｔｈｅｌｌら（１９７９）１．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｒｎ．２５４：２５７２～２５７４；Ｈｅａｒｎら（１９８１）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．２１８：５０９～５１８を参照されたい）と、その後の、カルバメート連結を形成するためのタンパク質との反応とによって形成され得る、カルボニルリンカーを伴い得る。これは、アノマー末端の、第１級ヒドロキシル基への還元、第１級ヒドロキシル基の任意の保護／脱保護、ＣＤＩカルバメート中間体を形成するための第１級ヒドロキシル基とＣＤＩとの反応、およびＣＤＩカルバメート中間体とタンパク質上のアミノ基との結合を伴い得る。
好ましい実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の莢膜多糖は、還元性アミノ化（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、米国特許出願公開第２００７／１８４０７２号、米国特許出願公開第２００７／０２３１３４０号、および米国特許出願公開第２００７／０１８４０７１号、ＷＯ２００６／１１０３８１、ＷＯ２００８／０７９６５３、およびＷＯ２００８／１４３７０９において記載されている）によって担体タンパク質にコンジュゲートしている。
還元性アミノ化は、上記に開示された２つのステップを伴う。
いくつかの実施形態において、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、Ｏ－アセチル化されている。いくつかの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、脱Ｏ－アセチル化されている。
いくつかの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、１０と１００％との間、２０と１００％との間、３０と１００％との間、４０と１００％との間、５０と１００％との間、６０と１００％との間、７０と１００％との間、７５と１００％との間、８０と１００％との間、９０と１００％との間、５０と９０％との間、６０と９０％との間、７０と９０％との間、または８０と９０％との間のＯ－アセチル化の程度を有する糖類を含む。他の実施形態において、Ｏ－アセチル化の程度は、≧１０％、≧２０％、≧３０％、≧４０％、≧５０％、≧６０％、≧７０％、≧８０％、≧９０％、または約１００％である。しかし、好ましくは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、脱Ｏ－アセチル化されている。いくつかの前記実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、０と５０％との間、０と４０％との間、０と３０％との間、０と２０％との間、０と１０％との間、０と５％との間、または０と２％との間のＯ－アセチル化の程度を有する糖類を含む。他の実施形態において、Ｏ－アセチル化の程度は、≦５０％、≦４０％、≦３０％、≦２０％、≦１０％、≦５％、≦２％、または≦１％である。
Ｏ－アセチル化の％は、１００％に対する（各反復単位が完全にアセチル化されている場合は、そのアセチル化型構造に対する）、所与の糖類のパーセンテージを意味する。
いくつかの実施形態において、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、５ｋＤａと２０００ｋＤａとの間の分子量を有する糖類を含む。他のこのような実施形態において、糖類は、１０ｋＤａと１０００ｋＤａとの間の分子量を有する。他のこのような実施形態において、糖類は、１５ｋＤａと９００ｋＤａとの間の分子量を有する。他のこのような実施形態において、糖類は、２０ｋＤａと８００ｋＤａとの間の分子量を有する。さらなるこのような実施形態において、糖類は、１００ｋＤａと１０００ｋＤａとの間、１００ｋＤａと９００ｋＤａとの間、１００ｋＤａと８００ｋＤａとの間、１００ｋＤａと７００ｋＤａとの間、１００ｋＤａと６００ｋＤａとの間、１００ｋＤａと５００ｋＤａとの間、１００ｋＤａと４００ｋＤａとの間、１００ｋＤａと３００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと１０００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと９００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと８００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと７００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと６００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと５００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと４００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと３００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと１０００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと９００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと８００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと７００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと６００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと５００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと４００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと３００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと１０００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと９００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと８００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと７００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと６００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと５００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと４００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと３５０ｋＤａとの間、３００ｋＤａと１０００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと９００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと８００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと７００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと６００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと５００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと４００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと１０００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと９００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと８００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと７００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと６００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと６００ｋＤａとの間の分子量を有する。さらに好ましい実施形態において、糖類は、５ｋＤａと１００ｋＤａとの間、７ｋＤａと１００ｋＤａとの間、１０ｋＤａと１００ｋＤａとの間、２０ｋＤａと１００ｋＤａとの間、３０ｋＤａと１００ｋＤａとの間、４０ｋＤａと１００ｋＤａとの間、５０ｋＤａと１００ｋＤａとの間、６０ｋＤａと１００ｋＤａとの間、７０ｋＤａと１００ｋＤａとの間、８０ｋＤａと１００ｋＤａとの間、または９０ｋＤａと１００ｋＤａとの間の分子量を有する。さらに好ましい実施形態において、糖類は、５ｋＤａと９０ＫＤａとの間、５ｋＤａと８０ｋＤａとの間、５ｋＤａと７０ｋＤａとの間、５ｋＤａと６０ｋＤａとの間、５ｋＤａと５０ｋＤａとの間、５ｋＤａと４０ｋＤａとの間、５ｋＤａと３０ｋＤａとの間、５ｋＤａと２０ｋＤａとの間、５ｋＤａと１０ｋＤａとの間、１０ｋＤａと９０ＫＤａとの間、１０ｋＤａと８０ｋＤａとの間、１０ｋＤａと７０ｋＤａとの間、１０ｋＤａと６０ｋＤａとの間、１０ｋＤａと５０ｋＤａとの間、１０ｋＤａと４０ｋＤａとの間、１０ｋＤａと３０ｋＤａとの間、１０ｋＤａと２０ｋＤａとの間、２０ｋＤａと９０ＫＤａとの間、２０ｋＤａと８０ｋＤａとの間、２０ｋＤａと７０ｋＤａとの間、２０ｋＤａと６０ｋＤａとの間、２０ｋＤａと５０ｋＤａとの間、２０ｋＤａと４０ｋＤａとの間、または２０ｋＤａと３０ｋＤａとの間の分子量を有する。さらに好ましい実施形態において、糖類は、３０ｋＤａと９０ＫＤａとの間、３０ｋＤａと８０ｋＤａとの間、３０ｋＤａと７０ｋＤａとの間、３０ｋＤａと６０ｋＤａとの間、３０ｋＤａと５０ｋＤａとの間、３０ｋＤａと４０ｋＤａとの間、４０ｋＤａと９０ＫＤａとの間、４０ｋＤａと８０ｋＤａとの間、４０ｋＤａと７０ｋＤａとの間、４０ｋＤａと６０ｋＤａとの間、４０ｋＤａと５０ｋＤａとの間、５０ｋＤａと９０ＫＤａとの間、５０ｋＤａと８０ｋＤａとの間、５０ｋＤａと７０ｋＤａとの間、または５０ｋＤａと６０ｋＤａとの間の分子量を有する。上記の範囲のいずれかに入るあらゆる整数は、本開示の実施形態として検討される。いくつかのこのような実施形態において、糖質コンジュゲートは、還元性アミノ化を用いて調製される。
いくつかの実施形態において、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、１００ｋＤａと２００００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと１００００ｋＤａとの間、または３００ｋＤａと５０００ｋＤａとの間の分子量を有する。さらなる実施形態において、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、１００ｋＤａと５０００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと４０００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと３０００ｋＤａとの間、または２５０ｋＤａと２０００ｋＤａとの間の分子量を有する。さらなる実施形態において、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、１００ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、３５０ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、４５０ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、５５０ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、６００ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、７００ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、８００ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、９００ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、１０００ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、１２５０ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、１５００ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、または１７５０ｋＤａと２０００ｋＤａとの間の分子量を有する。さらなる実施形態において、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、１５０ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと１９００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと１８００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと１７００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと１６００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと１５００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと１４００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと１３００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと１２００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと１１００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと１０００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと９００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと８００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと７００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと６００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと５００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと４００ｋＤａとの間、１５０ｋＤａと３００ｋＤａとの間、または１５０ｋＤａと２００ｋＤａとの間の分子量を有する。さらなる実施形態において、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、２００ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと１９００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと１８００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと１７００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと１６００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと１５００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと１４００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと１３００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと１２００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと１１００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと１０００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと９００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと８００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと７００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと６００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと５００ｋＤａとの間、２００ｋＤａと４００ｋＤａとの間、または２００ｋＤａと３００ｋＤａとの間の分子量を有する。さらなる実施形態において、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、２５０ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと１９００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと１８００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと１７００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと１６００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと１５００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと１４００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと１３００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと１２００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと１１００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと１０００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと９００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと８００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと７００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと６００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと５００ｋＤａとの間、２５０ｋＤａと４００ｋＤａとの間、または２５０ｋＤａと３００ｋＤａとの間の分子量を有する。さらなる実施形態において、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、３００ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと１９００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと１８００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと１７００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと１６００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと１５００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと１４００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと１３００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと１２００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと１１００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと１０００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと９００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと８００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと７００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと６００ｋＤａとの間、３００ｋＤａと５００ｋＤａとの間、または３００ｋＤａと４００ｋＤａとの間の分子量を有する。さらなる実施形態において、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、４００ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと１９００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと１８００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと１７００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと１６００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと１５００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと１４００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと１３００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと１２００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと１１００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと１０００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと９００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと８００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと７００ｋＤａとの間、４００ｋＤａと６００ｋＤａとの間、または４００ｋＤａと５００ｋＤａとの間の分子量を有する。さらなる実施形態において、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、５００ｋＤａと２０００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと１９００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと１８００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと１７００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと１６００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと１５００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと１４００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと１３００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと１２００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと１１００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと１０００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと９００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと８００ｋＤａとの間、５００ｋＤａと７００ｋＤａとの間、または５００ｋＤａと６００ｋＤａとの間の分子量を有する。
糖質コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかに入るあらゆる整数は、本開示の実施形態として検討される。
本発明の糖質コンジュゲートを特徴付けするための別の方法は、さまざまなコンジュゲート型リジンとして特徴付けされ得る、担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）における、糖類にコンジュゲートしたリジン残基の数（コンジュゲーションの程度）による。多糖への共有結合に起因する担体タンパク質のリジン修飾の証拠は、当業者に知られている通常の方法を用いるアミノ酸分析によって得られ得る。コンジュゲーションの結果、コンジュゲート材料を生成するために用いられる担体タンパク質出発材料と比較して、回収されるリジン残基の数が低減する。好ましい実施形態において、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、２と１５との間、２と１３との間、２と１０との間、２と８との間、２と６との間、２と５との間、２と４との間、３と１５との間、３と１３との間、３と１０との間、３と８との間、３と６との間、３と５との間、３と４との間、５と１５との間、５と１０との間、８と１５との間、８と１２との間、１０と１５との間、または１０と１２との間である。１つの実施形態において、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、または約１５である。好ましい実施形態において、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、４と７との間である。いくつかのこのような実施形態において、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。
本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートはまた、担体タンパク質に対する糖類の比率（重量／重量）によって特徴付けされ得る。いくつかの実施形態において、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートにおける担体タンパク質に対する糖類の比率（ｗ／ｗ）は、０．５と３との間（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態において、担体タンパク質に対する糖類の比率（ｗ／ｗ）は、０．５と２．０との間、０．５と１．５との間、０．８と１．２との間、０．５と１．０との間、１．０と１．５との間、または１．０と２．０との間である。さらなる実施形態において、担体タンパク質に対する糖類の比率（ｗ／ｗ）は、０．８と１．２との間である。好ましい実施形態において、コンジュゲートにおける担体タンパク質に対する莢膜多糖の比率は、０．９と１．１との間である。いくつかのこのような実施形態において、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。
好ましい実施形態において、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、多糖の全量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、または１５％未満の遊離多糖を含む。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートは、多糖の全量と比較して、約２５％未満の遊離多糖を含む。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートは、多糖の全量と比較して、約２０％未満の遊離多糖を含む。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートは、多糖の全量と比較して、約１５％未満の遊離多糖を含む。
糖質コンジュゲートはまた、それらの分子サイズ分布（Ｋｄ）によって特徴付けされ得る。サイズ排除クロマトグラフィー培地（ＣＬ－４Ｂ）が、コンジュゲートの相対的分子サイズ分布を決定するために用いられ得る。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイルするために、重力送りのカラムにおいて用いられる。培地内の孔から排出された高分子は、低分子よりも速く溶出する。画分回収器を用いて、カラム溶出物を回収する。画分を、糖類アッセイによって比色分析試験する。Ｋｄの決定のために、カラムを較正して、分子が完全に排出される画分（Ｖ０）、（Ｋｄ＝０）、および最大保持に相当する画分（Ｖｉ）、（Ｋｄ＝１）を確立する。特定の試料の特質が達成された画分（Ｖｅ）を、式Ｋｄ＝（Ｖｅ－Ｖ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）によってＫｄに関連付ける。
好ましい実施形態において、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートの少なくとも３０％は、ＣＬ－４Ｂカラムにおいて０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートの少なくとも４０％は、ＣＬ－４Ｂカラムにおいて０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％は、ＣＬ－４Ｂカラムにおいて０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートの少なくとも６０％は、ＣＬ－４Ｂカラムにおいて０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートの５０％と８０％との間は、ＣＬ－４Ｂカラムにおいて０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態において、糖質コンジュゲートの６５％と８０％との間は、ＣＬ－４Ｂカラムにおいて０．３以下のＫｄを有する。
担体タンパク質上のリジンへの糖類鎖の付着の頻度は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートを特徴付けするための別のパラメータである。例えば、いくつかの実施形態において、担体タンパク質と多糖との間の少なくとも１つの共有結合は、多糖の４つの糖類反復単位ごとに生じる。別の実施形態において、担体タンパク質と多糖との間の共有結合は、多糖の１０個の糖類反復単位ごとに少なくとも１回生じる。別の実施形態において、担体タンパク質と多糖との間の共有結合は、多糖の１５個の糖類反復単位ごとに少なくとも１回生じる。さらなる実施形態において、担体タンパク質と多糖との間の共有結合は、多糖の２５個の糖類反復単位ごとに少なくとも１回生じる。
他の実施形態において、コンジュゲートは、５から１０個の糖類反復単位ごとに、２から７個の糖類反復単位ごとに、３から８個の糖類反復単位ごとに、４から９個の糖類反復単位ごとに、６から１１個の糖類反復単位ごとに、７から１２個の糖類反復単位ごとに、８から１３個の糖類反復単位ごとに、９から１４個の糖類反復単位ごとに、１０から１５個の糖類反復単位ごとに、２から６個の糖類反復単位ごとに、３から７個の糖類反復単位ごとに、４から８個の糖類反復単位ごとに、６から１０個の糖類反復単位ごとに、７から１１個の糖類反復単位ごとに、８から１２個の糖類反復単位ごとに、９から１３個の糖類反復単位ごとに、１０から１４個の糖類反復単位ごとに、１０から２０個の糖類反復単位ごとに、４から２５個の糖類反復単位ごとに、または２から２５個の糖類反復単位ごとに、担体タンパク質と糖類との間の少なくとも１つの共有結合を含む。多くの実施形態において、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。
別の実施形態において、担体タンパク質と糖類との間の少なくとも１つの連結は、多糖の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５個の糖類反復単位ごとに生じる。１つの実施形態において、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。上記の範囲のいずれかに入るあらゆる整数は、本開示の実施形態として検討される。
１．４ 本発明の糖質コンジュゲートの組み合わせ
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、本明細書において開示される糖質コンジュゲートのいずれかを含む。
１．４．１ 糖質コンジュゲートの組み合わせ
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートを含む。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、２つの以下の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型、すなわち、１８Ｃおよび４、１８Ｃおよび６Ｂ、１８Ｃおよび１４、１８Ｃおよび９Ｖ、１８Ｃおよび１９Ｆ、または１８Ｃおよび２３Ｆのそれぞれの、少なくとも１つの糖質コンジュゲートを含む。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、７つの以下の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型、すなわち、１８Ｃ、４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１９Ｆ、および２３Ｆのそれぞれの、少なくとも１つの糖質コンジュゲートを含む。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、８つの以下の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型、すなわち、１、４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ；４、５、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ；４、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆのそれぞれの、少なくとも１つの糖質コンジュゲートを含む。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、１０個の以下の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型、すなわち、１、５、４、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆのそれぞれの、少なくとも１つの糖質コンジュゲートを含む。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、１１個の以下の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型、すなわち、１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ；１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、および２３Ｆのそれぞれの、少なくとも１つの糖質コンジュゲートを含む。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、１２個の以下の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型、すなわち、１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、および２３Ｆのそれぞれの、少なくとも１つの糖質コンジュゲートを含む。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、１３個の以下の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型、すなわち、１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、および２３Ｆのそれぞれの、少なくとも１つの糖質コンジュゲートを含む。
１．４．２ 糖質コンジュゲートのさらなる組み合わせ
１つの実施形態において、上記の１．４．１で定義される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂの少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む。
１つの実施形態において、上記の１．４．１で定義される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆの少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む。
１つの実施形態において、上記の１．４．１で定義される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆの少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む。
１つの実施形態において、上記の１．４．１で定義される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む。
１つの実施形態において、上記の１．４．１で定義される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａの少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む。
１つの実施形態において、上記の１．４．１で定義される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａの少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む。
１つの実施形態において、上記の１．４．１で定義される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆの少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む。
１つの実施形態において、上記の１．４．１で定義される免疫原性組成物のいずれかは、２つの以下の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型のそれぞれの少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む：
１５Ｂおよび２２Ｆ、
１５Ｂおよび３３Ｆ、
１５Ｂおよび１２Ｆ、
１５Ｂおよび１０Ａ、
１５Ｂおよび１１Ａ、
１５Ｂおよび８、
２２Ｆおよび３３Ｆ、
２２Ｆおよび１２Ｆ、
２２Ｆおよび１０Ａ、
２２Ｆおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび８、
３３Ｆおよび１２Ｆ、
３３Ｆおよび１０Ａ、
３３Ｆおよび１１Ａ、
３３Ｆおよび８、
１２Ｆおよび１０Ａ、
１２Ｆおよび１１Ａ、
１２Ｆおよび８、
１０Ａおよび１１Ａ、
１０Ａおよび８、または
１１Ａおよび８。
１つの実施形態において、上記の１．４．１で定義される免疫原性組成物のいずれかは、３つの以下の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型のそれぞれの少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む：
１５Ｂおよび２２Ｆおよび３３Ｆ、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび１２Ｆ、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび１０Ａ、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび１１Ａ、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび８、
１５Ｂおよび３３Ｆおよび１２Ｆ、
１５Ｂおよび３３Ｆおよび１０Ａ、
１５Ｂおよび３３Ｆおよび１１Ａ、
１５Ｂおよび３３Ｆおよび８、
１５Ｂおよび１２Ｆおよび１０Ａ、
１５Ｂおよび１２Ｆおよび１１Ａ、
１５Ｂおよび１２Ｆおよび８、
１５Ｂおよび１０Ａおよび１１Ａ、
１５Ｂおよび１０Ａおよび８、
１５Ｂおよび１１Ａおよび８、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆ、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１０Ａ、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび８、
２２Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａ、
２２Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび１２Ｆおよび８、
２２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび１０Ａおよび８、
２２Ｆおよび１１Ａおよび８、
３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａ、
３３Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａ、
３３Ｆおよび１２Ｆおよび８、
３３Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
３３Ｆおよび１０Ａおよび８、
３３Ｆおよび１１Ａおよび８、
１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
１２Ｆおよび１０Ａおよび８、
１２Ｆおよび１１Ａおよび８、または
１０Ａおよび１１Ａおよび８。
１つの実施形態において、上記の１．４．１で定義される免疫原性組成物のいずれかは、４つの以下の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型のそれぞれの少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む：
１５Ｂおよび２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆ、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび３３Ｆおよび１０Ａ、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび３３Ｆおよび１１Ａ、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび３３Ｆおよび８、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａ、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａ、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび１２Ｆおよび８、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび１０Ａおよび８、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび１１Ａおよび８、
１５Ｂおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａ、
１５Ｂおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａ、
１５Ｂおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび８、
１５Ｂおよび３３Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
１５Ｂおよび３３Ｆおよび１０Ａおよび８、
１５Ｂおよび３３Ｆおよび１１Ａおよび８、
１５Ｂおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
１５Ｂおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび８、
１５Ｂおよび１２Ｆおよび１１Ａおよび８、
１５Ｂおよび１０Ａおよび１１Ａおよび８、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａ、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび８、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１０Ａおよび８、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１１Ａおよび８、
２２Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび８、
２２Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａおよび８、
２２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａおよび８、
３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび８、
３３Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａおよび８、
３３Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａおよび８、または
１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａおよび８。
１つの実施形態において、上記の１．４．１で定義される免疫原性組成物のいずれかは、５つの以下の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型のそれぞれの少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む：
１５Ｂおよび２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａ、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａ、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび８、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび３３Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび３３Ｆおよび１０Ａおよび８、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび３３Ｆおよび１１Ａおよび８、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび８、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａおよび８、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａおよび８、
１５Ｂおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
１５Ｂおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび８、
１５Ｂおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａおよび８、
１５Ｂおよび３３Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａおよび８、
１５Ｂおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａおよび８、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび８、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａおよび８、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａおよび８、
２２Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａおよび８、または
３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａおよび８。
１つの実施形態において、上記の１．４．１で定義される免疫原性組成物のいずれかは、６つの以下の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型のそれぞれの少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む：
１５Ｂおよび２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび８、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａおよび８、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび３３Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａおよび８、
１５Ｂおよび２２Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａおよび８、
１５Ｂおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａおよび８、または
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａおよび８。
１つの実施形態において、上記の１．４．１で定義される免疫原性組成物のいずれかは、７つの以下の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型、すなわち、１５Ｂおよび２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａおよび８のそれぞれの、少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む。
１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２由来の糖質コンジュゲートをさらに含む。
１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１７Ｆ由来の糖質コンジュゲートをさらに含む。
１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０由来の糖質コンジュゲートをさらに含む。
１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｃ由来の糖質コンジュゲートをさらに含む。
好ましくは、上記の免疫原性組成物の全ての糖質コンジュゲートは、担体タンパク質に個々にコンジュゲートしている。
上記の免疫原性組成物のいずれかの１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートしている。上記の免疫原性組成物のいずれかの１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートしている。上記の免疫原性組成物のいずれかの１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートしている。上記の免疫原性組成物のいずれかの１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートしている。上記の免疫原性組成物のいずれかの１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートしている。上記の免疫原性組成物のいずれかの１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートしている。上記の免疫原性組成物のいずれかの１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートしている。上記の免疫原性組成物のいずれかの１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８由来の糖質コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートしている。上記の免疫原性組成物のいずれかの１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートしている。上記の免疫原性組成物のいずれかの１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５、および７Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートしている。上記の免疫原性組成物のいずれかの１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートしている。上記の免疫原性組成物のいずれかの１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３由来の糖質コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートしている。上記の免疫原性組成物のいずれかの１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２由来の糖質コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートしている。上記の免疫原性組成物のいずれかの１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１７Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートしている。上記の免疫原性組成物のいずれかの１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０由来の糖質コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートしている。上記の免疫原性組成物のいずれかの１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートしている。
１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物の糖質コンジュゲートは、全て、ＣＲＭ１９７に個々にコンジュゲートしている。
１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物のいずれかの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、ＴＴに個々にコンジュゲートしている。
１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物のいずれかの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、および／または２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＰＤに個々にコンジュゲートしている。
１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物のいずれかの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＤＴにコンジュゲートしているＤＴ。
１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物のいずれかの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、および／または２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＰＤに個々にコンジュゲートしており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートは、ＴＴにコンジュゲートしており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖質コンジュゲートは、ＤＴにコンジュゲートしている。
１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の７から２５の異なる血清型を含む。１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物は、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５の異なる血清型由来の糖質コンジュゲートを含む。
１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の７から２０の異なる血清型を含む。１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物は、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０の異なる血清型由来の糖質コンジュゲートを含む。１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物は、１６から２０の異なる血清型由来の糖質コンジュゲートを含む。
１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物は、１４、１５、１６、１７、１８、または１９価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物は、１６価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物は、１９価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物は、２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆ由来の糖質コンジュゲートを含む。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆ由来の糖質コンジュゲートを含む。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆのコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆのコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物の糖質コンジュゲートは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆ由来の糖質コンジュゲートからなる。１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物の糖質コンジュゲートは、血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆ由来の糖質コンジュゲートからなる。１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物の糖質コンジュゲートは、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆ由来の糖質コンジュゲートからなる。１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物の糖質コンジュゲートは、１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆ由来の糖質コンジュゲートからなる。
好ましくは、本発明の免疫原性組成物の全ての糖質コンジュゲートは、担体タンパク質に個々にコンジュゲートしている。１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物の糖質コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７に個々にコンジュゲートしている。
１．４．３ 糖質コンジュゲートのさらなる組み合わせ
１つの実施形態において、上記の１．４．１または１．４．２で定義される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆ由来の莢膜糖類を含まない。
１つの実施形態において、上記の１．４．１または１．４．２で定義される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ由来の莢膜糖類を含まない。
１つの実施形態において、上記の１．４．１または１．４．２で定義される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ由来の莢膜糖類を含まない。
１つの実施形態において、上記の１．４．１または１．４．２で定義される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆおよび１８Ａ由来の莢膜糖類を含まない。
１つの実施形態において、上記の１．４．１または１．４．２で定義される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆおよび１８Ｂ由来の莢膜糖類を含まない。
１つの実施形態において、上記の１．４．１または１．４．２で定義される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａおよび１８Ｂ由来の莢膜糖類を含まない。
１つの実施形態において、上記の１．４．１または１．４．２で定義される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆ、１８Ａ、および１８Ｂ由来の莢膜糖類を含まない。
２ 免疫原性組成物の投与量
２．１ 多糖の量
各用量における糖質コンジュゲートの量は、典型的なワクチン接種済みの患者において顕著な不都合な副作用を伴うことなく免疫保護応答を誘発する量として選択される。このような量は、採用される特異的免疫原およびその提示のされ方に応じて変化する。
免疫原性組成物における特定の糖質コンジュゲートの量は、総多糖に基づいて、そのコンジュゲート（コンジュゲート型および非コンジュゲート型）について計算され得る。例えば、２０％の遊離多糖を有する糖質コンジュゲートは、１００μｇの多糖用量において、約８０μｇのコンジュゲート型多糖および約２０μｇの非コンジュゲート型多糖を有する。糖質コンジュゲートの量は、連鎖球菌の血清型に応じて変化し得る。糖類の濃度は、ウロン酸アッセイによって決定され得る。
免疫原性組成物における異なる多糖成分の「免疫原性量」は異なり得、それぞれ、約１．０μｇ、約２．０μｇ、約３．０μｇ、約４．０μｇ、約５．０μｇ、約６．０μｇ、約７．０μｇ、約８．０μｇ、約９．０μｇ、約１０．０μｇ、約１５．０μｇ、約２０．０μｇ、約３０．０μｇ、約４０．０μｇ、約５０．０μｇ、約６０．０μｇ、約７０．０μｇ、約８０．０μｇ、約９０．０μｇ、または約１００．０μｇのあらゆる特定の多糖抗原を含み得る。
通常、各用量は、所与の血清型について０．１μｇから１００μｇ、特に０．５μｇから２０μｇ、より特に１μｇから１０μｇ、さらにより特に２μｇから５μｇの多糖を含む。上記の範囲のいずれかに入るあらゆる整数は、本開示の実施形態として検討される。
１つの実施形態において、各用量は、所与の血清型について１μｇ、２μｇ、３μｇ、４μｇ、５μｇ、６μｇ、７μｇ、８μｇ、９μｇ、１０μｇ、１５μｇ、または２０μｇの多糖を含む。
２．２ 担体の量
通常、各用量は、５μｇから１５０μｇの担体タンパク質、特に１０μｇから１００μｇの担体タンパク質、より特に１５μｇから１００μｇの担体タンパク質、より特に２５から７５μｇの担体タンパク質、より特に３０μｇから７０μｇの担体タンパク質、より特に３０から６０μｇの担体タンパク質、より特に３０μｇから５０μｇの担体タンパク質、さらにより特に４０から６０μｇの担体タンパク質を含む。１つの実施形態において、前記担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。
１つの実施形態において、各用量は、約２５μｇ、約２６μｇ、約２７μｇ、約２８μｇ、約２９μｇ、約３０μｇ、約３１μｇ、約３２μｇ、約３３μｇ、約３４μｇ、約３５μｇ、約３６μｇ、約３７μｇ、約３８μｇ、約３９μｇ、約４０μｇ、約４１μｇ、約４２μｇ、約４３μｇ、約４４μｇ、約４５μｇ、約４６μｇ、約４７μｇ、約４８μｇ、約４９μｇ、約５０μｇ、約５１μｇ、約５２μｇ、約５３μｇ、約５４μｇ、約５５μｇ、約５６μｇ、約５７μｇ、約５８μｇ、約５９μｇ、約６０μｇ、約６１μｇ、約６２μｇ、約６３μｇ、約６４μｇ、約６５μｇ、約６６μｇ、約６７μｇ、６８μｇ、約６９μｇ、約７０μｇ、約７１μｇ、約７２μｇ、約７３μｇ、約７４μｇ、または約７５μｇの担体タンパク質を含む。１つの実施形態において、前記担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。
３ さらなる抗原
本発明の免疫原性組成物は、コンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類抗原（糖質コンジュゲート）を含む。これらはまた、他の病原体由来の、特に細菌および／またはウイルス由来の抗原をさらに含み得る。好ましいさらなる抗原は、ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、典型的には無細胞性の（Ｐａ）百日咳抗原（Ｐ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）抗原、コンジュゲートしたインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型莢膜糖類（Ｈｉｂ）、不活化型ポリオウイルスワクチン（ＩＰＶ）から選択される。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、Ｄ－Ｔ－Ｐａを含む。１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、Ｄ－Ｔ－Ｐａ－Ｈｉｂ、Ｄ－Ｔ－Ｐａ－ＩＰＶ、またはＤ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇを含む。１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、Ｄ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇ－ＩＰＶまたはＤ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇ－Ｈｉｂを含む。１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、Ｄ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇ－ＩＰＶ－Ｈｉｂを含む。
百日咳抗原：百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）は、百日咳の原因である。ワクチン内の百日咳抗原は、細胞性（不活化型百日咳菌（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）細胞の形態の全細胞）または無細胞性である。細胞性百日咳抗原の調製は、文献に良く記載されている（例えば、これは、百日咳菌（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）のＩ相培養物の熱不活化によって得ることができる）。しかし、好ましくは、本発明は、無細胞性抗原を用いる。無細胞性抗原を用いる場合、（１）解毒された百日咳毒素（百日咳トキソイド、またはＰＴ）、（２）線維状血球凝集素（ＦＨＡ）、（３）パータクチン（６９キロダルトンの外膜タンパク質としても知られている）という抗原の１つ、２つ、または（好ましくは）３つを用いることが好ましい。ＦＨＡおよびパータクチンは、本発明に従う使用の前にホルムアルデヒドで処理され得る。ＰＴは、好ましくは、ホルムアルデヒドおよび／またはグルタルアルデヒドでの処理によって解毒される。無細胞性百日咳抗原は、好ましくは、１つまたは複数のアルミニウム塩アジュバントに吸着される。あるいは、これらは、未吸着状態で添加され得る。パータクチンが添加される場合、パータクチンは、好ましくは、水酸化アルミニウムアジュバントに既に吸着されている。ＰＴおよびＦＨＡは、水酸化アルミニウムアジュバントまたはリン酸アルミニウムに吸着され得る。水酸化アルミニウムへのＰＴ、ＦＨＡ、およびパータクチンの全ての吸着が最も好ましい。
不活化型ポリオウイルスワクチン：ポリオウイルスは、灰白髄炎の原因である。口腔ポリオウイルスワクチンを用いるよりもむしろ、本発明の好ましい実施形態はＩＰＶを用いる。患者への投与の前に、ポリオウイルスは不活化されなくてはならず、これは、ホルムアルデヒドでの処理によって行われ得る。灰白髄炎は、３つの型のポリオウイルスの１つによって生じ得る。３つの型は類似しており、同一の症候を生じさせるが、これらは抗原的に異なり、１つの型による感染は、他の型による感染に対して保護しない。したがって、ポリオウイルス１型（例えば、Ｍａｈｏｎｅｙ株）、ポリオウイルス２型（例えば、ＭＥＦ－１株）、およびポリオウイルス３型（例えば、Ｓａｕｋｅｔｔ株）という３つのポリオウイルス抗原を本発明において用いることが好ましい。ウイルスは、好ましくは、成長させられ、精製され、個々に不活化され、次いで、本発明と共に用いるためのバルク３価混合物を得るために組み合わされる。
ジフテリアトキソイド：ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）は、ジフテリアの原因である。ジフテリア毒素は、注射後に特異的抗毒素抗体を誘発する能力を保持しながら毒性を除去するように（例えば、ホルマリンまたはホルムアルデヒドを用いて）処理され得る。これらのジフテリアトキソイドは、ジフテリアワクチンにおいて用いられる。好ましいジフテリアトキソイドは、ホルムアルデヒド処理によって調製されたものである。ジフテリアトキソイドは、成長培地においてジフテリア菌（Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）を成長させ、その後、ホルムアルデヒド処理、限外濾過、および沈殿を行うことによって得られ得る。トキソイド化された材料は、次いで、滅菌濾過および／または透析を含むプロセスによって処理され得る。ジフテリアトキソイドは、好ましくは、水酸化アルミニウムアジュバントに吸着される。
破傷風トキソイド：破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）は、破傷風の原因である。破傷風毒素は、保護性トキソイドを得るように処理され得る。トキソイドは、破傷風ワクチンにおいて用いられる。好ましい破傷風トキソイドは、ホルムアルデヒド処理によって調製されたものである。破傷風トキソイドは、成長培地において破傷風菌（Ｃ．ｔｅｔａｎｉ）を成長させ、その後、ホルムアルデヒド処理、限外濾過、および沈殿を行うことによって得られ得る。材料は、次いで、滅菌濾過および／または透析を含むプロセスによって処理され得る。
Ａ型肝炎ウイルス抗原：Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）は、ウイルス性肝炎の原因である既知の作用物質の１つである。好ましいＨＡＶ成分は不活化型ウイルスに基づき、不活化は、ホルマリン処理によって行われ得る。
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は、ウイルス性肝炎の原因である既知の作用物質の１つである。カプシドの主要成分は、ＨＢＶ表面抗原として、またはより一般的には、典型的には分子量が約２４ｋＤａの２２６アミノ酸のポリペプチドであるＨＢｓＡｇとして知られているタンパク質である。全ての既存のＢ型肝炎ワクチンは、ＨＢｓＡｇを含有し、この抗原が、正常なワクチン接種済みの患者に投与されると、これは、ＨＢＶ感染から保護する抗ＨＢｓＡｇ抗体の生産を刺激する。
ワクチンの製造のために、ＨＢｓＡｇは、慢性Ｂ型肝炎キャリアの血漿からの微粒子形態の抗原の精製、または組換えＤＮＡ法によるタンパク質の発現（例えば、酵母細胞における組換え発現）という、２つの方法で作製されている。非変性ＨＢｓＡｇと異なり（すなわち、血漿精製産物におけるように）、酵母発現したＨＢｓＡｇは、通常、グリコシル化されておらず、これは、本発明と共に用いるためのＨＢｓＡｇの最も好ましい形態である。
コンジュゲートしたインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型抗原：インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型（Ｈｉｂ）は、細菌性髄膜炎の原因である。Ｈｉｂワクチンは、典型的には、莢膜糖類抗原に基づき、その調製は文献に良く記載されている。Ｈｉｂ糖類は、特に小児においてその免疫原性を増強させるために、担体タンパク質にコンジュゲートされ得る。典型的な担体タンパク質は、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、ＣＲＭ１９７、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、および血清群Ｂ髄膜炎菌由来の外膜タンパク質複合体である。コンジュゲートの糖類部分は、Ｈｉｂ細菌から調製された完全長ポリリボシルリビトールリン酸（ＰＲＰ）、および／または完全長ＰＲＰの断片を含み得る。Ｈｉｂコンジュゲートは、アルミニウム塩アジュバントに吸着されていてもされていなくてもよい。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、コンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖類（ＭｅｎＹ）、および／またはコンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖類（ＭｅｎＣ）をさらに含む。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、コンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ莢膜糖類（ＭｅｎＡ）、コンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５莢膜糖類（ＭｅｎＷ１３５）、コンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖類（ＭｅｎＹ）、および／またはコンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖類（ＭｅｎＣ）をさらに含む。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、コンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５莢膜糖類（ＭｅｎＷ１３５）、コンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖類（ＭｅｎＹ）、および／またはコンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖類（ＭｅｎＣ）をさらに含む。
４ アジュバント
いくつかの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物は、少なくとも１つのアジュバント（例えば、１つ、２つ、または３つのアジュバント）をさらに含み得る。用語「アジュバント」は、抗原に対する免疫応答を増強させる化合物または混合物を指す。抗原は、主に送達系として作用し得るか、主に免疫調節物質として作用し得るか、またはその両方の強力な特徴を有し得る。適切なアジュバントには、ヒトを含む哺乳動物における使用に適したアジュバントが含まれる。
ヒトにおいて用いられ得る既知の適切な送達系型アジュバントの例には、限定はしないが、ミョウバン（例えば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、または水酸化アルミニウム）、リン酸カルシウム、リポソーム、水中油型エマルジョン、例えばＭＦ５９（４．３％ｗ／ｖのスクアレン、０．５％ｗ／ｖのポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）、０．５％ｗ／ｖのソルビタントリオレエート（Ｓｐａｎ ８５））、油中水型エマルジョン、例えばモンタナイド、およびポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧ）微粒子またはナノ粒子が含まれる。
１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物は、アルミニウム塩（ミョウバン）をアジュバントとして含む（例えば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、または水酸化アルミニウム）。好ましい実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物は、リン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムをアジュバントとして含む。１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物は、０．１ｍｇ／ｍＬから１ｍｇ／ｍＬ、または０．２ｍｇ／ｍＬから０．３ｍｇ／ｍｌの元素アルミニウムをリン酸アルミニウムの形態で含む。１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物は、約０．２５ｍｇ／ｍＬの元素アルミニウムをリン酸アルミニウムの形態で含む。
ヒトにおいて用いられ得る既知の適切な免疫調節型アジュバントの例には、限定はしないが、アキラ（Ａｑｕｉｌｌａ）の木の樹皮から得られるサポニン抽出物（ＱＳ２１、Ｑｕｉｌ Ａ）、ＴＬＲ４アゴニスト、例えばＭＰＬ（モノホスホリルリピドＡ）、３ＤＭＰＬ（３－Ｏ－脱アシル化型ＭＰＬ）もしくはＧＬＡ－ＡＱ、ＬＴ／ＣＴ突然変異体、サイトカイン、例えば様々なインターロイキン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－１２）、またはＧＭ－ＣＳＦなどが含まれる。
ヒトにおいて用いられ得る、送達性の特徴と免疫調節性の特徴との両方を有する既知の適切な免疫調節型アジュバントの例には、限定はしないが、ＩＳＣＯＭＳ（例えば、Ｓｊｏｌａｎｄｅｒら（１９９８）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌ．６４：７１３、ＷＯ９０／０３１８４、ＷＯ９６／１１７１１、ＷＯ００／４８６３０、ＷＯ９８／３６７７２、ＷＯ００／４１７２０、ＷＯ２００６／１３４４２３、およびＷＯ２００７／０２６１９０を参照されたい）、またはＴＬＲ４アゴニストと水中油型エマルジョンとの組み合わせであるＧＬＡ－ＥＭが含まれる。
限定はしないが動物実験を含む獣医学的適用では、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、Ｅｍｕｌｓｉｇｅｎ、Ｎ－アセチル－ムラミル－Ｌ－スレオニル－Ｄ－イソグルタミン（ｔｈｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチル－ノル－ムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン（ノル－ＭＤＰと呼ばれるＣＧＰ１１６３７）、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミニル－Ｌ－アラニン－２－（１’－２’－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ヒドロキシホスホリルオキシ）－エチルアミン（ＭＴＰ－ＰＥと呼ばれるＣＧＰ１９８３５Ａ）、および、２％スクアレン／Ｔｗｅｅｎ ８０エマルジョン内に、細菌から抽出された３つの成分であるモノホスホリルリピドＡ、トレハロースジミコール酸、および細胞壁骨格（ＭＰＬ＋ＴＤＭ＋ＣＷＳ）を含有するＲＩＢＩが用いられ得る。
本明細書において開示される肺炎球菌ワクチンの有効性を増強させるためのさらなる例示的なアジュバントには、限定はしないが、（１）水中油型エマルジョン製剤（ムラミルペプチド（以下を参照されたい）または細菌細胞壁成分などの他の特異的な免疫刺激物質を有するまたは有さない）、例えば（ａ）サブミクロンエマルジョン内にマイクロフルイダイズされているかまたはより大きな粒子サイズのエマルジョンを生成するようにボルテックスされた、１０％のスクアラン、０．４％のＴｗｅｅｎ ８０、５％のプルロニックブロック型ポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ－ＭＤＰを含有するＳＡＦ、ならびに（ｂ）２％のスクアレン、０．２％のＴｗｅｅｎ ８０、および１つまたは複数の細菌細胞壁成分、例えばモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコール酸（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤＥＴＯＸ（商標））を含有するＲＩＢＩ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、ＭＴ）、（２）サポニンアジュバント、例えば、ＱＳ２１、ＳＴＩＭＵＬＯＮ（商標）（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ、ＭＡ）、Ａｂｉｓｃｏ（登録商標）（Ｉｓｃｏｎｏｖａ、Ｓｗｅｄｅｎ）、またはＩｓｃｏｍａｔｒｉｘ（登録商標）（Ｃｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ Ｓｅｒｕｍ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）もしくはそれから生じる粒子、例えばＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）（このＩＳＣＯＭＳは、追加の洗剤を含まない場合がある（例えば、ＷＯ００／０７６２１））、（３）完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、（４）サイトカイン、例えばインターロイキン（例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１２（ＷＯ９９／４４６３６））、インターフェロン（例えば、ガンマインターフェロン）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）など、（５）肺炎球菌糖類と共に用いる場合にはミョウバンが実質的に不存在であってもよい（例えば、ＷＯ００／５６３５８を参照されたい）、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）または３－Ｏ－脱アシル化型ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）（例えば、ＧＢ－２２２０２２１、ＥＰ０６８９４５４を参照されたい）、（６）３ｄＭＰＬと、例えばＱＳ２１および／または水中油型エマルジョンとの組み合わせ（例えば、ＥＰ０８３５３１８、ＥＰ０７３５８９８、ＥＰ０７６１２３１を参照されたい）、（７）ポリオキシエチレンエーテルまたはポリオキシエチレンエステル（例えば、ＷＯ９９／５２５４９を参照されたい）、（８）オクトキシノールと組み合わされたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（ＷＯ０１／２１２０７）、または少なくとも１つのさらなる非イオン性界面活性剤、例えばオクトキシノールと組み合わされたポリオキシエチレンアルキルエーテルもしくはエステル界面活性剤（ＷＯ０１／２１１５２）、（９）サポニンおよび免疫刺激性オリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）（ＷＯ００／６２８００）、（１０）免疫刺激剤および金属塩粒子（例えば、ＷＯ００／２３１０５を参照されたい）、（１１）サポニンおよび水中油型エマルジョン、例えばＷＯ９９／１１２４１、（１２）サポニン（例えばＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＭ２（＋ステロールであってもよい）、例えばＷＯ９８／５７６５９、（１３）組成物の有効性を増強させるための免疫刺激物質として作用する他の物質が含まれる。ムラミルペプチドには、Ｎ－アセチル－ムラミル－Ｌ－スレオニル－Ｄ－イソグルタミン（ｔｈｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－２５アセチル－ノルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン（ノル－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミニル－Ｌ－アラニン－２－（１’－２’－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ヒドロキシホスホリルオキシ）－エチルアミン、ＭＴＰ－ＰＥ）などが含まれる。
本発明の１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物は、ＣｐＧオリゴヌクレオチドをアジュバントとして含む。本明細書において用いられるＣｐＧオリゴヌクレオチドは、免疫刺激性ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ ＯＤＮ）を指し、したがって、これらの用語は、別段の指示がない限り、区別せずに用いられる。免疫刺激性ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドは、場合によって特定の好ましい塩基性背景内で、非メチル化型シトシン－グアニジンジヌクレオチドである１つまたは複数の免疫刺激性ＣｐＧモチーフを含有する。ＣｐＧ免疫刺激性モチーフのメチル化状態は、通常、ジヌクレオチド内のシトシン残基についてのものである。少なくとも１つの非メチル化型ＣｐＧジヌクレオチドを含有する免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、３’グアニジンへのリン酸結合によって連結されている５’非メチル化型シトシンを含有し、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ－９）への結合を介して免疫系を活性化させる、オリゴヌクレオチドである。別の実施形態において、免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数のメチル化型ＣｐＧジヌクレオチドを含有していてもよく、ここでメチル化型ＣｐＧジヌクレオチドはＴＬＲ９を介して免疫系を活性化させるがＣｐＧモチーフが非メチル化型されている場合ほどには強力ではない。ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数のパリンドロームを含んでいてもよく、このパリンドロームは順に、ＣｐＧジヌクレオチドを包含していてもよい。ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、米国特許第６，１９４，３８８号、米国特許第６，２０７，６４６号、米国特許第６，２１４，８０６号、米国特許第６，２１８，３７１号、米国特許第６，２３９，１１６号、および米国特許第６，３３９，０６８号を含む、多くの特許、公開された特許出願、および他の刊行物において記載されている。
本発明の１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物は、ＷＯ２０１０／１２５４８０の第３頁、第２２行から、第１２頁、第３６行に記載されているＣｐＧオリゴヌクレオチドのいずれかを含む。
異なるクラスのＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドが同定されている。これらは、Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＰクラスと呼ばれ、ＷＯ２０１０／１２５４８０の第３頁、第２２行から、第１２頁、第３６行に、より詳細に記載されている。本発明の方法は、これらの異なるクラスのＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの使用を包含する。
本発明の１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物は、ＡクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。本発明の１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物は、ＢクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。
本発明のＢクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドの配列は、概ね上述され、かつ、公開されたＷＯ９６／０２５５５、ＷＯ９８／１８８１０において、ならびに米国特許第６，１９４，３８８号、米国特許第６，２０７，６４６号、米国特許第６，２１４，８０６号、米国特許第６，２１８，３７１号、米国特許第６，２３９，１１６号、および米国特許第６，３３９，０６８号において開示されているものである。例示的な配列には、限定はしないが、これらの後者の出願および特許において開示されているものが含まれる。
１つの実施形態において、本発明の「Ｂクラス」のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、以下の核酸配列を有する。
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＴＣＧＧＴＧＣＴＴＴＴ ３’（配列番号１）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＴＣＧＧＴＣＧＴＴＴＴ ３’（配列番号２）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ ３’（配列番号３）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ ３’（配列番号４）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＴＴＴＣＧＡ ３’（配列番号５）。
これらの配列のいずれかにおいて、連結の全ては、ホスホロチオエート結合であり得る。別の実施形態において、これらの配列のいずれかにおいて、連結の１つまたは複数は、好ましくはセミソフトＣｐＧオリゴヌクレオチドを作るＣｐＧモチーフの「Ｃ」と「Ｇ」との間の、ホスホジエステルであり得る。これらの配列のいずれかにおいて、エチル－ウリジンまたはハロゲンが５’Ｔを置換し得、ハロゲン置換の例には、限定はしないが、ブロモ－ウリジン置換またはヨードウリジン置換が含まれる。
Ｂ－クラスのオリゴヌクレオチドのいくつかの非限定的な例には、
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ ３’（配列番号６）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ ３’（配列番号７）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ ３’（配列番号８）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ ３’（配列番号９）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ ３’（配列番号１０）
が含まれ、式中、「*」は、ホスホロチオエート結合を指す。
本発明の１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物は、ＣクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。
本発明の１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物は、ＰクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。
１つの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエート連結を含む。別の実施形態において、オリゴヌクレオチドの全てのヌクレオチド間連結は、ホスホロチオエート連結である。別の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホジエステル様連結を含む。別の実施形態において、ホスホジエステル様連結は、ホスホジエステル連結である。別の実施形態において、脂溶性基が、オリゴヌクレオチドにコンジュゲートしている。１つの実施形態において、脂溶性基はコレステロールである。
１つの実施形態において、本明細書において開示されるＣｐＧオリゴヌクレオチドの全てのヌクレオチド間連結は、ホスホジエステル結合である（ＷＯ２００７／０２６１９０において記載されている「ソフト」オリゴヌクレオチド）。別の実施形態において、本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、分解に対する耐性が付与されている（例えば、安定化されている）。「安定化型オリゴヌクレオチド」は、インビボでの分解（例えば、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼを介する）に対して比較的耐性であるオリゴヌクレオチドを指す。核酸の安定化は、骨格の修飾を介して行われ得る。ホスホロチオエート連結を有するオリゴヌクレオチドは、最大の活性をもたらし、オリゴヌクレオチドを細胞内のエキソヌクレアーゼおよびエンドヌクレアーゼによる分解から保護する。
免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、ホスホジエステル連結とホスホロチオエート連結との組み合わせを有するキメラ骨格を有し得る。本発明の目的では、キメラ骨格は、少なくとも１つのヌクレオチド間連結がホスホジエステルまたはホスホジエステル様であり、少なくとも１つの他のヌクレオチド間連結が安定化型ヌクレオチド間連結であり、少なくとも１つのホスホジエステル連結またはホスホジエステル様連結と少なくとも１つの安定化型連結とが異なる、部分的に安定化された骨格を指す。ホスホジエステル連結がＣｐＧモチーフ内に優先的に位置する場合、このような分子は、ＷＯ２００７／０２６１９０において記載されているように「セミソフト」と呼ばれる。
他の修飾されたオリゴヌクレオチドには、ホスホジエステル連結、ホスホロチオエート連結、メチルホスホネート連結、メチルホスホロチオエート連結、ホスホロジチオエート連結、および／またはｐ－エトキシ連結の組み合わせが含まれる。
混合型の骨格が修飾されたＯＤＮは、ＷＯ２００７／０２６１９０において記載されているように合成され得る。
ＣｐＧオリゴヌクレオチドのサイズ（すなわち、オリゴヌクレオチドの長さ全体のヌクレオチド残基の数）もまた、オリゴヌクレオチドの刺激活性に関与し得る。細胞内への取り込みを容易にするために、本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、好ましくは、６ヌクレオチド残基という最小の長さを有する。６ヌクレオチドを超えるあらゆるサイズ（さらに多くのｋｂ長）のオリゴヌクレオチドは、十分な免疫刺激性モチーフが存在するならば免疫応答を誘発し得、それは、より長いオリゴヌクレオチドが細胞内で分解されるためである。一部の実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、６から１００ヌクレオチド長、優先的には８から３０ヌクレオチド長である。重要な実施形態において、本発明の核酸およびオリゴヌクレオチドは、プラスミドまたは発現ベクターではない。
１つの実施形態において、本明細書において開示されるＣｐＧオリゴヌクレオチドは、ＷＯ２００７／０２６１９０の第１３４段落から第１４７段落で記載されているような塩基および／または糖におけるような置換または修飾を含む。
１つの実施形態において、本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、化学修飾されている。化学修飾の例は、当業者に知られており、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎら（１９９０）Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９０：５４３；Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＵＳＡ １９９３；Ｃｒｏｏｋｅら（１９９６）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３６：１０７～１２９；およびＨｕｎｚｉｋｅｒら（１９９５）Ｍｏｄ．Ｓｙｎｔｈ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ７：３３１～４１７において記載されている。本発明に従ったオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾を有し得、各修飾は、天然のＤＮＡまたはＲＮＡからなる同一の配列のオリゴヌクレオチドと比較して、特定のホスホジエステルヌクレオシド間架橋に、および／または特定のβ－Ｄ－リボース単位に、および／または特定の天然ヌクレオシド塩基位置に位置する。
本発明のいくつかの実施形態において、ＣｐＧ含有核酸は、当業者に知られている方法に従って、免疫原性担体と単純に混合され得る（例えば、ＷＯ０３／０２４４８０を参照されたい）。
本発明の特定の実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物のいずれかは、２μｇから１００ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは、０．１ｍｇから５０ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは、０．２ｍｇから１０ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは、０．３ｍｇから５ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは、０．３ｍｇから５ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、さらに好ましくは、０．５ｍｇから２ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、さらに好ましくは、０．７５ｍｇから１．５ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。好ましい実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物のいずれかは、約１ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。
５ 製剤
本発明の免疫原性組成物は、液体形態（すなわち、溶液または懸濁液）に、または凍結乾燥形態に製剤され得る。液体製剤は、有利には、それらのパッケージされた形態から直接投与され得、したがって、さもなければ凍結乾燥された本発明の組成物に必要な水性媒質における再構成の必要性を伴うことなく、注射に理想的である。
本発明の免疫原性組成物の製剤は、当技術分野において認識されている方法を用いて行われ得る。例えば、個々の肺炎球菌コンジュゲートを生理学的に許容できる媒体と共に製剤して、組成物を調製することができる。このような媒体の例には、限定はしないが、水、緩衝生理食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール）、およびデキストロース溶液が含まれる。
本開示は、本明細書において開示される糖質コンジュゲートと、薬学的に許容できる賦形剤、担体、または希釈剤との組み合わせのいずれかを含む、免疫原性組成物を提供する。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、液体形態、好ましくは水性液体形態である。
本開示の免疫原性組成物は、緩衝液、塩、二価陽イオン、非イオン性洗剤、糖などの凍結保護物質、およびフリーラジカルスカベンジャーもしくはキレート剤などの抗酸化剤、またはあらゆる複数のその組み合わせの、１つまたは複数を含み得る。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、緩衝液を含む。１つの実施形態において、前記緩衝液は、約３．５から約７．５のｐＫａを有する。いくつかの実施形態において、緩衝液は、ホスフェート、スクシネート、ヒスチジン、またはシトレートである。一部の実施形態において、緩衝液は、１ｍＭから１０ｍＭの最終濃度のスクシネートである。１つの特定の実施形態において、スクシネート緩衝液の最終濃度は約５ｍＭである。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、塩を含む。いくつかの実施形態において、塩は、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、およびその組み合わせからなる群から選択される。１つの特定の実施形態において、塩は、塩化ナトリウムである。１つの特定の実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、界面活性剤を含む。１つの実施形態において、界面活性剤は、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（商標）２０）、ポリソルベート４０（ＴＷＥＥＮ（商標）４０）、ポリソルベート６０（ＴＷＥＥＮ（商標）６０）、ポリソルベート６５（ＴＷＥＥＮ（商標）６５）、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（商標）８０）、ポリソルベート８５（ＴＷＥＥＮ（商標）８５）、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｎ－１ ０１、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００、オクトキシノール４０、ノノキシノール－９、トリエタノールアミン、トリエタノールアミンポリペプチドオレエート、ポリオキシエチレン－６６０ヒドロキシステアレート（ＰＥＧ－１５、Ｓｏｌｕｔｏｌ Ｈ １５）、ポリオキシエチレン－３５－リシンオレエート（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）ＥＬ）、大豆レシチン、およびポロキサマーからなる群から選択される。１つの特定の実施形態において、界面活性剤は、ポリソルベート８０である。いくつかの前記実施形態において、製剤におけるポリソルベート８０の最終濃度は、重量比（ｗ／ｗ）で少なくとも０．０００１％から１０％のポリソルベート８０である。いくつかの前記実施形態において、製剤におけるポリソルベート８０の最終濃度は、重量比（ｗ／ｗ）で少なくとも０．００１％から１％のポリソルベート８０である。いくつかの前記実施形態において、製剤におけるポリソルベート８０の最終濃度は、重量比（ｗ／ｗ）で少なくとも０．０１％から１％のポリソルベート８０である。他の実施形態において、製剤におけるポリソルベート８０の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、または０．１％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態において、製剤におけるポリソルベート８０の最終濃度は、１％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。
一部の実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、５．５から７．５のｐＨ、より好ましくは、５．６から７．０のｐＨ、さらにより好ましくは、５．８から６．０のｐＨを有する。
１つの実施形態において、本発明は、本明細書において開示される免疫原性組成物のいずれかで充填された容器を提供する。１つの実施形態において、容器は、バイアル、シリンジ、フラスコ、発酵槽、バイオリアクター、袋、瓶、アンプル、カートリッジ、および使い捨てのペンからなる群から選択される。一部の実施形態において、容器は、シリコーン処理されている。
１つの実施形態において、本発明の容器は、ガラス、金属（例えば、鋼鉄、ステンレス鋼、アルミニウムなど）、および／またはポリマー（例えば、熱可塑性物質、エラストマー、熱可塑性エラストマー）製である。１つの実施形態において、本発明の容器は、ガラス製である。
１つの実施形態において、本発明は、本明細書において開示される免疫原性組成物のいずれかで充填されたシリンジを提供する。一部の実施形態において、シリンジは、シリコーン処理されている、および／またはガラス製である。
注射のための本発明の免疫原性組成物の典型的な用量は、０．１ｍＬから２ｍＬの容積、より好ましくは０．２ｍＬから１ｍＬ、さらにより好ましくは、約０．５ｍＬの容積を有する。
したがって、上記に定義される容器またはシリンジは、０．１ｍＬから２ｍＬの容積、より好ましくは、０．２ｍＬから１ｍＬ、さらにより好ましくは、約０．５ｍＬの容積の、本明細書において定義される免疫原性組成物のいずれかで充填されている。
６ 交差反応性の抗体を引き起こす、本発明の免疫原性組成物の能力
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、ＥＬＩＳＡアッセイによって決定すると、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆの多糖と結合し得るＩｇＧ抗体を引き起こすことが可能である。
ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）方法において、ワクチン接種された対象の血清から得られた抗体を、固体支持体に吸着されている多糖とインキュベートする。結合した抗体を、酵素にコンジュゲートした二次検出抗体を用いて検出する。
１つの実施形態において、前記ＥＬＩＳＡアッセイは、ＷＨＯによって「Ｔｒａｉｎｉｎｇ Ｍａｎｕａｌ Ｆｏｒ Ｅｎｚｙｍｅ Ｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ Ｆｏｒ Ｔｈｅ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ Ｏｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ｓｅｒｏｔｙｐｅ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＩｇＧ（Ｐｎ ＰＳ ＥＬＩＳＡ）」（２０１４年３月３１日にアクセスした、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｖａｃｃｉｎｅ．ｕａｂ．ｅｄｕ／ＥＬＩＳＡ％２０ｐｒｏｔｏｃｏｌ．ｐｄｆで入手可能である）において定義されている、標準化されたＥＬＩＳＡアッセイである。
ＥＬＩＳＡは、ヒト血清内に存在する、型特異的なＩｇＧ抗肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜多糖（ＰＳ）抗体を測定する。ヒト血清の希釈物を、型特異的な莢膜ＰＳで被覆されたマイクロタイタープレートに添加すると、その莢膜ＰＳに特異的な抗体が、マイクロタイタープレートに結合する。プレートに結合した抗体は、ヤギ抗ヒトＩｇＧアルカリホスファターゼ標識抗体を用いて検出され、その後、ｐ－ニトロフェニルリン酸基質で検出される。着色された最終産物の光学密度は、血清内に存在する抗莢膜ＰＳ抗体の量に比例する。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、ＥＬＩＳＡアッセイによって決定すると、少なくとも０．０５μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．２μｇ／ｍｌ、０．３μｇ／ｍｌ、０．３５μｇ／ｍｌ、０．４μｇ／ｍｌ、または０．５μｇ／ｍｌの濃度で、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａの多糖と結合し得るＩｇＧ抗体を引き起こすことが可能である。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、ＥＬＩＳＡアッセイによって決定すると、少なくとも０．０５μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．２μｇ／ｍｌ、０．３μｇ／ｍｌ、０．３５μｇ／ｍｌ、０．４μｇ／ｍｌ、または０．５μｇ／ｍｌの濃度で、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂの多糖と結合し得るＩｇＧ抗体を引き起こすことが可能である。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、ＥＬＩＳＡアッセイによって決定すると、少なくとも０．０５μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．２μｇ／ｍｌ、０．３μｇ／ｍｌ、０．３５μｇ／ｍｌ、０．４μｇ／ｍｌ、または０．５μｇ／ｍｌの濃度で、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆの多糖と結合し得るＩｇＧ抗体を引き起こすことが可能である。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、インビトロでのオプソニン貪食作用アッセイ（ＯＰＡ）（実施例１を参照されたい）によって決定すると、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆを死滅させ得る機能的抗体を引き起こすことが可能である。１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、インビトロでのオプソニン貪食作用アッセイ（ＯＰＡ）によって決定すると、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａを死滅させ得る機能的抗体を引き起こすことが可能である。１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、インビトロでのオプソニン貪食作用アッセイ（ＯＰＡ）によって決定すると、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂを死滅させ得る機能的抗体を引き起こすことが可能である。１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、インビトロでのオプソニン貪食作用アッセイ（ＯＰＡ）によって決定すると、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆを死滅させ得る機能的抗体を引き起こすことが可能である。１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、インビトロでのオプソニン貪食作用アッセイ（ＯＰＡ）によって決定すると、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａおよび１８Ｂを死滅させ得る機能的抗体を引き起こすことが可能である。１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、インビトロでのオプソニン貪食作用アッセイ（ＯＰＡ）によって決定すると、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａおよび１８Ｆを死滅させ得る機能的抗体を引き起こすことが可能である。１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、インビトロでのオプソニン貪食作用アッセイ（ＯＰＡ）によって決定すると、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂおよび１８Ｆを死滅させ得る機能的抗体を引き起こすことが可能である。
機能的抗体および補体の存在下での貪食エフェクター細胞による肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）細胞の死滅を測定する、肺炎球菌のオプソニン貪食作用アッセイ（ＯＰＡ）は、肺炎球菌ワクチンの有効性を評価するための重要な代替手段であると考えられる。
インビトロでのオプソニン貪食作用アッセイ（ＯＰＡ）は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）細胞、試験対象の熱不活化されたヒト血清、分化したＨＬ－６０細胞（食細胞）、および外因性補体源（例えば、ベビーウサギ補体）の混合物を共にインキュベートすることによって行われ得る。オプソニン貪食作用はインキュベーションの間に進行し、抗体および補体で被覆された細菌細胞は、オプソニン貪食作用で死滅する。オプソニン貪食作用から逃れた生存細菌のコロニー形成単位（ｃｆｕ）を、アッセイ混合物を播種することによって決定する。ＯＰＡ力価を、試験血清を有さない対照ウェルに対する、細菌数を５０％低減させる希釈の逆数と定義する。ＯＰＡ力価を、この５０％死滅カットオフを包含する２つの希釈から内挿する。
１：８以上のエンドポイント力価を、これらの死滅型ＯＰＡにおける陽性の結果と考える。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、インビトロでのオプソニン貪食作用死滅アッセイ（ＯＰＡ）によって決定すると、対象の少なくとも５０％において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対して少なくとも１：８の力価を引き起こすことが可能である。１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、インビトロでのオプソニン貪食作用死滅アッセイ（ＯＰＡ）によって決定すると、対象の少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または少なくとも９９％において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対して少なくとも１：８の力価を引き起こすことが可能である。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、インビトロでのオプソニン貪食作用死滅アッセイ（ＯＰＡ）によって決定すると、対象の少なくとも５０％において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂに対して少なくとも１：８の力価を引き起こすことが可能である。１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、インビトロでのオプソニン貪食作用死滅アッセイ（ＯＰＡ）によって決定すると、対象の少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または少なくとも９９％において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂに対して少なくとも１：８の力価を引き起こすことが可能である。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、インビトロでのオプソニン貪食作用死滅アッセイ（ＯＰＡ）によって決定すると、対象の少なくとも５０％において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆに対して少なくとも１：８の力価を引き起こすことが可能である。１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、インビトロでのオプソニン貪食作用死滅アッセイ（ＯＰＡ）によって決定すると、対象の少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または少なくとも９９％において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆに対して少なくとも１：８の力価を引き起こすことが可能である。
いくつかの実施形態において、対象は、肺炎球菌ワクチン接種の前に、例えば肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する天然の暴露に起因して、（例えば、成人対象のケースにおいて）血清型特異的なＯＰＡ力価を有し得る。
したがって、本発明の免疫原性組成物での免疫化前および免疫化後の血清のＯＰＡ活性の比較を行うことができ、血清型１８Ａ、１８Ｂ、および１８Ｆに対するそれらの応答を比較して、応答者の潜在的な増大を評価することができる（実施例１を参照されたい）。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、免疫化前の集団と比較して、応答者（すなわち、インビトロでのＯＰＡによって決定すると、少なくとも１：８の力価を有する血清を有する個体）の割合を有意に増大させる。
したがって、１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、免疫化前の集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対する応答者（すなわち、インビトロでのＯＰＡによって決定すると、少なくとも１：８の力価を有する血清を有する個体）の割合を有意に増大させ得る。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、免疫化前の集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂに対する応答者（すなわち、インビトロでのＯＰＡによって決定すると、少なくとも１：８の力価を有する血清を有する個体）の割合を有意に増大させ得る。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、免疫化前の集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆに対する応答者（すなわち、インビトロでのＯＰＡによって決定すると、少なくとも１：８の力価を有する血清を有する個体）の割合を有意に増大させ得る。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、免疫化前の集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａおよび１８Ｂに対する応答者（すなわち、インビトロでのＯＰＡによって決定すると、少なくとも１：８の力価を有する血清を有する個体）の割合を有意に増大させ得る。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、免疫化前の集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａおよび１８Ｆに対する応答者（すなわち、インビトロでのＯＰＡによって決定すると、少なくとも１：８の力価を有する血清を有する個体）の割合を有意に増大させ得る。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、免疫化前の集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂおよび１８Ｆに対する応答者（すなわち、インビトロでのＯＰＡによって決定すると、少なくとも１：８の力価を有する血清を有する個体）の割合を有意に増大させ得る。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、免疫化前の集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および１８Ｆに対する応答者（すなわち、インビトロでのＯＰＡによって決定すると、少なくとも１：８の力価を有する血清を有する個体）の割合を有意に増大させ得る。
本発明の免疫原性組成物での免疫化前および免疫化後の血清のＯＰＡ活性の比較はまた、ＯＰＡ力価における潜在的な増大の比較によっても行われ得る。
したがって、本発明の免疫原性組成物での免疫化前および免疫化後の血清のＯＰＡ活性の比較を行うことができ、血清型１８Ａ、１８Ｂ、および１８Ｆに対するそれらの応答を比較して、ＯＰＡ力価の増大の可能性を評価することができる（実施例１を参照されたい）。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、免疫化前の集団と比較して、ヒト対象のＯＰＡ力価を有意に増大させ得る。
したがって、１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、免疫化前の集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対するヒト対象のＯＰＡ力価を有意に増大させ得る。１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも１．５、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、７．５、８．０、または８．４倍である。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、免疫化前の集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂに対するヒト対象のＯＰＡ力価を有意に増大させ得る。１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０、１１．０、１２．０、１３．０、１４．０、１５．０、１５．５、または１６．０倍である。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、免疫化前の集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆに対するヒト対象のＯＰＡ力価を有意に増大させ得る。１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも２．０、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、５．７、または５．９倍である。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、免疫化前の集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａおよび１８Ｂに対するヒト対象のＯＰＡ力価を有意に増大させ得る。１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも１．５、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、７．５、８．０、または８．４倍であり、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０、１１．０、１２．０、１３．０、１４．０、１５．０、１５．５、または１６．０倍である。１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも８．４であり、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも１６．０である。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、免疫化前の集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａおよび１８Ｆに対するヒト対象のＯＰＡ力価を有意に増大させ得る。１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも１．５、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、７．５、８．０、または８．４倍であり、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも２．０、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、５．７、または５．９倍である。１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも８．４であり、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも５．９である。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、免疫化前の集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂおよび１８Ｆに対するヒト対象のＯＰＡ力価を有意に増大させ得る。１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０、１１．０、１２．０、１３．０、１４．０、１５．０、１５．５、または１６．０倍であり、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも２．０、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、５．７、または５．９倍である。１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも１６．０であり、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも５．９である。
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、免疫化前の集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および１８Ｆに対するヒト対象のＯＰＡ力価を有意に増大させ得る。１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも１．５、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、７．５、８．０、または８．４倍であり、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０、１１．０、１２．０、１３．０、１４．０、１５．０、１５．５、または１６．０倍であり、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも２．０、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、５．７、または５．９倍である。１つの実施形態において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも８．４であり、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも１６．０であり、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆに対するＯＰＡ力価の上昇倍率は、少なくとも５．９である。
７ 本発明の免疫原性組成物の使用
１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物は、薬剤として用いるためのものである。
本明細書において記載される免疫原性組成物は、対象における細菌の感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善するための様々な治療方法または予防方法において用いられ得る。特に、本明細書において記載される免疫原性組成物は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善するために用いられ得る。
したがって、１つの態様において、本発明は、免疫学的に効果的な量の本発明の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に関連する感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善する方法を提供する。
１つの態様において、本発明は、免疫学的に効果的な量の本発明の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および１８Ｆに関連する感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善する方法を提供する。
１つの態様において、本発明は、免疫学的に効果的な量の本発明の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに関連する感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善する方法を提供する。
１つの態様において、本発明は、免疫学的に効果的な量の本発明の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂに関連する感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善する方法を提供する。
１つの態様において、本発明は、免疫学的に効果的な量の本発明の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆに関連する感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善する方法を提供する。
１つの態様において、本発明は、免疫学的に効果的な量の本発明の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａおよび１８Ｂに関連する感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善する方法を提供する。
１つの態様において、本発明は、免疫学的に効果的な量の本発明の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａおよび１８Ｆに関連する感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善する方法を提供する。
１つの態様において、本発明は、免疫学的に効果的な量の本発明の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂおよび１８Ｆに関連する感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善する方法を提供する。
１つの態様において、本発明は、免疫学的に効果的な量の本発明の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆに対する免疫応答を誘発する方法を提供する。
１つの態様において、本発明は、免疫学的に効果的な量の本発明の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対する免疫応答を誘発する方法を提供する。
１つの態様において、本発明は、免疫学的に効果的な量の本発明の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂに対する免疫応答を誘発する方法を提供する。
１つの態様において、本発明は、免疫学的に効果的な量の本発明の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆに対する免疫応答を誘発する方法を提供する。
１つの態様において、本発明の免疫原性組成物は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆによって生じる感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善するための方法において用いるためのものである。
１つの態様において、本発明の免疫原性組成物は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａによって生じる感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善するための方法において用いるためのものである。１つの態様において、本発明の免疫原性組成物は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂによって生じる感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善するための方法において用いるためのものである。１つの態様において、本発明の免疫原性組成物は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆによって生じる感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善するための方法において用いるためのものである。
１つの態様において、本発明の免疫原性組成物は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａおよび１８Ｂによって生じる感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善するための方法において用いるためのものである。１つの態様において、本発明の免疫原性組成物は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａおよび１８Ｆによって生じる感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善するための方法において用いるためのものである。１つの態様において、本発明の免疫原性組成物は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂおよび１８Ｆによって生じる感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善するための方法において用いるためのものである。
１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆによる感染に対して対象を免疫化する方法において用いるためのものである。
１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａによる感染に対して対象を免疫化する方法において用いるためのものである。１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂによる感染に対して対象を免疫化する方法において用いるためのものである。１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆによる感染に対して対象を免疫化する方法において用いるためのものである。
１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａおよび１８Ｂによる感染に対して対象を免疫化する方法において用いるためのものである。１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａおよび１８Ｆによる感染に対して対象を免疫化する方法において用いるためのものである。１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂおよび１８Ｆによる感染に対して対象を免疫化する方法において用いるためのものである。
１つの態様において、本発明は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆによって生じる感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善するための薬剤の製造のための、本明細書において開示される免疫原性組成物の使用を目的としている。
１つの態様において、本発明は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａおよび１８Ｂによって生じる感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善するための薬剤の製造のための、本明細書において開示される免疫原性組成物の使用を目的としている。１つの態様において、本発明は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａおよび１８Ｆによって生じる感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善するための薬剤の製造のための、本明細書において開示される免疫原性組成物の使用を目的としている。１つの態様において、本発明は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂおよび１８Ｆによって生じる感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善するための薬剤の製造のための、本明細書において開示される免疫原性組成物の使用を目的としている。
１つの実施形態において、本発明は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆによる感染に対して対象を免疫化するための薬剤の製造のための、本明細書において開示される免疫原性組成物の使用を目的としている。
１つの実施形態において、本発明は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａによる感染に対して対象を免疫化するための薬剤の製造のための、本明細書において開示される免疫原性組成物の使用を目的としている。１つの実施形態において、本発明は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂによる感染に対して対象を免疫化するための薬剤の製造のための、本明細書において開示される免疫原性組成物の使用を目的としている。１つの実施形態において、本発明は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆによる感染に対して対象を免疫化するための薬剤の製造のための、本明細書において開示される免疫原性組成物の使用を目的としている。
１つの実施形態において、本発明は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａおよび１８Ｂによる感染に対して対象を免疫化するための薬剤の製造のための、本明細書において開示される免疫原性組成物の使用を目的としている。１つの実施形態において、本発明は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａおよび１８Ｆによる感染に対して対象を免疫化するための薬剤の製造のための、本明細書において開示される免疫原性組成物の使用を目的としている。１つの実施形態において、本発明は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂおよび１８Ｆによる感染に対して対象を免疫化するための薬剤の製造のための、本明細書において開示される免疫原性組成物の使用を目的としている。
１つの態様において、本発明は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆに対する免疫応答を誘発するための方法を提供する。１つの態様において、本発明は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対する免疫応答を誘発するための方法を提供する。１つの態様において、本発明は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂに対する免疫応答を誘発するための方法を提供する。１つの態様において、本発明は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆに対する免疫応答を誘発するための方法を提供する。１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物は、ワクチンとして用いるためのものである。より具体的には、本明細書において記載される免疫原性組成物は、対象における血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染を予防するために用いられ得る。したがって、１つの態様において、本発明は、免疫学的に効果的な量の本発明の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象における血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染を予防する方法を提供する。いくつかのこのような実施形態において、感染は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、膿胸、結膜炎、髄膜炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂巣炎、軟組織感染、および脳膿瘍からなる群から選択される。１つの態様において、ワクチン接種される対象は、哺乳動物、例えば、ヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシ、またはイヌである。
１つの態様において、本明細書において開示される免疫原性組成物は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆに関連する感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善するための方法において用いるためのものである。いくつかのこのような実施形態において、感染、疾患、または状態は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、膿胸、結膜炎、髄膜炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂巣炎、軟組織感染、および脳膿瘍からなる群から選択される。
１つの態様において、本明細書において開示される免疫原性組成物は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆによる感染を予防する方法において用いるためのものである。いくつかのこのような実施形態において、感染は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、膿胸、結膜炎、髄膜炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂巣炎、軟組織感染、および脳膿瘍からなる群から選択される。１つの態様において、ワクチン接種される対象は、哺乳動物、例えば、ヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシ、またはイヌである。
１つの態様において、本発明は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆに関連する感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善するための薬剤の製造のための、本明細書において開示される免疫原性組成物の使用を目的としている。いくつかのこのような実施形態において、感染、疾患、または状態は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、膿胸、結膜炎、髄膜炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂巣炎、軟組織感染、および脳膿瘍からなる群から選択される。
１つの態様において、本発明は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆによる感染を予防するための薬剤の製造のための、本明細書において開示される免疫原性組成物の使用を目的としている。いくつかのこのような実施形態において、感染は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、膿胸、結膜炎、髄膜炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂巣炎、軟組織感染、および脳膿瘍からなる群から選択される。１つの態様において、ワクチン接種される対象は、哺乳動物、例えば、ヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシ、またはイヌである。
本発明の免疫原性組成物は、全身経路または粘膜経路を介して免疫原性組成物を投与することによって、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆの感染に感受性のあるヒトを予防または治療するために用いられ得る。１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物は、筋肉内経路、腹腔内経路、皮内経路、または皮下経路によって投与される。１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物は、筋肉内注射、腹腔内注射、皮内注射、または皮下注射によって投与される。１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物は、筋肉内注射または皮下注射によって投与される。
１つの実施形態において、本開示の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）９Ｖ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲート（上記の第１．３項の糖質コンジュゲートなど）を含む。
８ 本発明の免疫原性組成物で治療される対象
本明細書において開示されるように、本明細書において記載される免疫原性組成物は、対象における細菌の感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善するための様々な治療方法または予防方法において用いられ得る。
好ましい実施形態において、前記対象はヒトである。最も好ましい実施形態において、前記対象は、新生児（すなわち、３カ月齢未満）、乳児（すなわち、３カ月齢から１歳）、または幼児（すなわち、１歳から４歳）である。
１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫原性組成物は、ワクチンとして用いるためのものである。
このような実施形態において、ワクチン接種される対象は、１歳未満であり得る。例えば、ワクチン接種される対象は、約１カ月齢、約２カ月齢、約３カ月齢、約４カ月齢、約５カ月齢、約６カ月齢、約７カ月齢、約８カ月齢、約９カ月齢、約１０カ月齢、約１１カ月齢、または約１２カ月齢であり得る。１つの実施形態において、ワクチン接種される対象は、約２カ月齢、４カ月齢、または６カ月齢である。別の実施形態において、ワクチン接種される対象は、２歳未満である。例えば、ワクチン接種される対象は、約１２カ月齢から約１５カ月齢であり得る。いくつかのケースにおいて、本発明に従った免疫原性組成物のわずか１用量が必要であるが、一部の状況下では、第２の、第３の、または第４の用量が投与され得る（以下の第９節を参照されたい）。
本発明の１つの実施形態において、ワクチン接種される対象は、５０歳以上の成人であり、より好ましくは、５５歳以上の成人である。１つの実施形態において、ワクチン接種される対象は、６５歳以上、７０歳以上、７５歳以上、または８０歳以上の成人である。
１つの実施形態において、ワクチン接種される対象は、免疫不全の個体、特にヒトである。免疫不全の個体は通常、感染性物質による攻撃に対する正常な液性または細胞性防御を開始する能力が弱まっているかまたは低減している人として定義される。
本発明の１つの実施形態において、ワクチン接種される免疫不全の対象は、免疫系を弱め、かつ肺炎球菌疾患からの保護または治療には不十分な抗体応答をもたらす、疾患または状態に罹患している。
１つの実施形態において、前記疾患は、原発性の免疫不全障害である。好ましくは、前記原発性の免疫不全障害は、Ｔ細胞およびＢ細胞免疫不全の組み合わせ、抗体の不全、明確に定義された症候群、免疫異常調節疾患、食細胞障害、自然免疫の不全、自己炎症性障害、および補体の不全からなる群から選択される。１つの実施形態において、前記原発性の免疫不全障害は、ＷＯ２０１０／１２５４８０の第２４頁、第１１行から、第２５頁、第１９行に開示されているものから選択される。
本発明の特定の実施形態において、ワクチン接種される免疫不全の対象は、ＨＩＶ感染、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、癌、慢性心臓または肺障害、鬱血性心不全、糖尿病、慢性肝臓疾患、アルコール依存症、肝硬変、髄液漏、心筋症、慢性気管支炎、気腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、脾臓機能障害（鎌状赤血球疾患など）、脾臓機能の欠如（無脾症）、血液悪性腫瘍、白血病、多発性骨髄腫、ホジキン病、リンパ腫、腎不全、ネフローゼ症候群、および喘息からなる群から選択される疾患に罹患している。
本発明の１つの実施形態において、ワクチン接種される免疫不全の対象は、栄養不良に罹患している。
本発明の特定の実施形態において、ワクチン接種される免疫不全の対象は、感染に対する身体の耐性を低下させる薬品または治療を受けている。１つの実施形態において、前記薬品は、ＷＯ２０１０／１２５４８０の第２６頁、第３３行から、第２６頁、第４行に開示されているものから選択される。
本発明の特定の実施形態において、ワクチン接種される免疫不全の対象は、喫煙者である。
本発明の特定の実施形態において、ワクチン接種される免疫不全の対象は、１リットル当たり５×１０９細胞未満、または１リットル当たり４×１０９細胞未満、または１リットル当たり３×１０９細胞未満、または１リットル当たり２×１０９細胞未満、または１リットル当たり１×１０９細胞未満、または１リットル当たり０．５×１０９細胞未満、または１リットル当たり０．３×１０９細胞未満、または１リットル当たり０．１×１０９細胞未満の白血球数（リンパ球数）を有する。
白血球数（リンパ球数）：血液内の白血球（ＷＢＣ）の数。ＷＢＣは、通常、ＣＢＣ（全血球計算値）の一部として測定される。白血球は、血液内の、感染に対して攻撃する細胞であり、赤血球として知られている赤色（酸素運搬）血球と区別される。好中球（多形核リンパ球、ＰＭＮ）、桿状球（わずかに未熟の好中球）、Ｔ型リンパ球（Ｔ細胞）、Ｂ型リンパ球（Ｂ細胞）、単球、好酸球、および好塩基球を含む、異なる型の白血球が存在する。全ての型の白血球が、白血球数に反映される。白血球数の正常範囲は、通常、血液１立方ミリメートル当たり４３００細胞と１０８００細胞との間である。これはまた、リンパ球数にも言えることであり、国際単位で１リットル当たり４．３～１０．８×１０９細胞と表され得る。
本発明の特定の実施形態において、ワクチン接種される免疫不全の対象は、好中球減少症に罹患している。本発明の特定の実施形態において、ワクチン接種される免疫不全の対象は、１リットル当たり２×１０９細胞未満、または１リットル当たり１×１０９細胞未満、または１リットル当たり０．５×１０９細胞未満、または１リットル当たり０．１×１０９細胞未満、または１リットル当たり０．０５×１０９細胞未満の好中球数を有する。
少ない白血球数または「好中球減少症」は、循環血液における好中球のレベルが異常に低いことによって特徴付けされる状態である。好中球は、感染に対する予防および攻撃を助ける、特異的な種類の白血球である。癌患者が好中球減少症になる最も一般的な理由は、化学療法の副作用である。化学療法によって誘発された好中球減少症は、患者の感染のリスクを増大させ、癌治療を妨害する。
本発明の特定の実施形態において、ワクチン接種される免疫不全の対象は、５００個／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、または３００個／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、または２００個／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、１００個／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、７５個／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、または５０個／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数を有する。
ＣＤ４細胞試験は、１ｍｍ３内の細胞の数として通常報告される。正常なＣＤ４数は、５００個と１６００個との間であり、ＣＤ８数は、３７５個と１１００個との間である。ＣＤ４数は、ＨＩＶを有する人では劇的に低下する。
本発明の１つの実施形態において、本明細書において開示される免疫不全の対象のいずれかは、ヒト男性またはヒト女性である。
９ レジメン
いくつかのケースにおいて、本発明に従った免疫原性組成物のわずか１用量が必要であるが、より大きな免疫不全の状態などの一部の状況下では、第２の、第３の、または第４の用量が投与され得る。初回ワクチン接種の後、対象は、適切に間隔の開いた１回または複数回の追加免疫化を受け得る。
１つの実施形態において、本発明に従った免疫原性組成物のワクチン接種のスケジュールは、単回投与である。特定の実施形態において、前記単回投与スケジュールは、少なくとも２歳の健康な人のためのものである。
１つの実施形態において、本発明に従った免疫原性組成物のワクチン接種のスケジュールは、複数回投与スケジュールである。特定の実施形態において、前記複数回投与スケジュールは、約１カ月から約２カ月の間隔で分離された一連の２用量からなる。特定の実施形態において、前記複数回投与スケジュールは、約１カ月の間隔によって分離された一連の２用量、または約２カ月の間隔によって分離された一連の２用量からなる。
別の実施形態において、前記複数回投与スケジュールは、約１カ月から約２カ月の間隔によって分離された一連の３用量からなる。別の実施形態において、前記複数回投与スケジュールは、約１カ月の間隔によって分離された一連の３用量、または約２カ月の間隔によって分離された一連の３用量からなる。
別の実施形態において、前記複数回投与スケジュールは、約１カ月から約２カ月の間隔によって分離された一連の３用量と、その後の、初回投与の約１０カ月から約１３カ月後の第４の用量とからなる。別の実施形態において、前記複数回投与スケジュールは、約１カ月の間隔によって分離された一連の３用量と、その後の、初回投与の約１０カ月から約１３カ月後の第４の用量とから、または、約２カ月の間隔によって分離された一連の３用量と、その後の、初回投与の約１０カ月から約１３カ月後の第４の用量とからなる。
１つの実施形態において、複数回投与スケジュールは、１歳での少なくとも１つの用量（例えば、１、２、または３用量）と、その後の、少なくとも１つの幼児用量とからなる。
１つの実施形態において、複数回投与スケジュールは、２カ月齢で開始される、約１カ月から約２カ月の間隔によって分離された（例えば、用量の間が２８～５６日）一連の２または３用量と、その後の、１２～１８カ月齢での幼児用量とからなる。１つの実施形態において、前記複数回投与スケジュールは、２カ月齢で開始される、約１から２カ月の間隔によって分離された一連の３用量（例えば、用量の間が２８～５６日）と、その後の、１２～１５カ月齢での幼児用量とからなる。別の実施形態において、前記複数回投与スケジュールは、２カ月齢で開始される、約２カ月の間隔によって分離された一連の２用量と、その後の、１２～１８カ月齢での幼児用量とからなる。
１つの実施形態において、複数回投与スケジュールは、２、４、６、および１２～１５カ月齢での、４用量連続のワクチンからなる。
１つの実施形態において、初回用量は０日目で投与され、１回または複数回の追加投与は、約２から約２４週間にわたる間隔で、好ましくは４～８週間の投与間隔で投与される。
１つの実施形態において、初回用量は０日目で投与され、追加投与は約３カ月後に投与される。
１０ キットおよびプロセス
１つの実施形態において、本発明は、本明細書において開示される免疫原性組成物および情報リーフレットを含むキットを目的としている。
１つの実施形態において、前記情報リーフレットは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ、１８Ｆ、および／または１８Ａに対する機能的抗体を引き起こす組成物の能力について言及している。
１つの実施形態において、前記情報リーフレットは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対する機能的抗体を引き起こす組成物の能力について言及している。
１つの実施形態において、前記情報リーフレットは、ヒト集団において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ、１８Ｆ、および／または１８Ａに対する抗莢膜抗体を≧０．３５μｇ／ｍＬの濃度で引き起こす組成物の能力について言及している。
１つの実施形態において、前記情報リーフレットは、ヒト集団において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対する抗莢膜抗体を≧０．３５μｇ／ｍＬの濃度で引き起こす組成物の能力について言及している。
１つの実施形態において、前記情報リーフレットは、ヒト集団において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ、１８Ｆ、および／または１８Ａに対するＯＰＡ力価を引き起こす組成物の能力について言及している。
１つの実施形態において、前記情報リーフレットは、ヒト集団において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対するＯＰＡ力価を引き起こす組成物の能力について言及している。
１つの実施形態において、本発明は、免疫原性組成物および情報リーフレットを含むキットを生産するためのプロセスであって、
－ 本開示の免疫原性組成物を生産するステップ、および
－ 同一のキットにおいて、前記免疫原性組成物および情報リーフレットを組み合わせるステップであって、前記情報リーフレットが、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ、１８Ｆ、および／または１８Ａに対する機能的抗体を引き起こす前記組成物の能力について言及しているステップ
を含む、プロセスを目的としている。
１つの実施形態において、本発明は、免疫原性組成物および情報リーフレットを含むキットを生産するためのプロセスであって、
－ 本開示の免疫原性組成物を生産するステップ、および
－ 同一のキットにおいて、前記免疫原性組成物および情報リーフレットを組み合わせるステップであって、前記情報リーフレットが、ヒト集団において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ、１８Ｆ、および／または１８Ａに対する抗莢膜抗体を≧０．３５μｇ／ｍＬの濃度で引き起こす組成物の能力について言及しているステップ
を含む、プロセスを目的としている。
１つの実施形態において、本発明は、免疫原性組成物および情報リーフレットを含むキットを生産するためのプロセスであって、
－ 本開示の免疫原性組成物を生産するステップ、および
－ 同一のキットにおいて、前記免疫原性組成物および情報リーフレットを組み合わせるステップであって、前記情報リーフレットが、ヒト集団において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ、１８Ｆ、および／または１８Ａに対するＯＰＡ力価を引き起こす組成物の能力について言及しているステップ
を含む、プロセスを目的としている。
１つの実施形態において、本発明は、免疫原性組成物および情報リーフレットを含むキットを生産するためのプロセスであって、
－ 本開示の免疫原性組成物を生産するステップ、
－ 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ、１８Ｆ、および／または１８Ａに対する機能的抗体を引き起こす前記組成物の能力について言及している情報リーフレットを印刷するステップ、
－ 同一のキットにおいて、前記免疫原性組成物および前記情報リーフレットを組み合わせるステップ
を含む、プロセスを目的としている。
１つの実施形態において、本発明は、免疫原性組成物および情報リーフレットを含むキットを生産するためのプロセスであって、
－ 本開示の免疫原性組成物を生産するステップ、
－ ヒト集団において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ、１８Ｆ、および／または１８Ａに対する抗莢膜抗体を≧０．３５μｇ／ｍＬの濃度で引き起こす組成物の能力について言及している情報リーフレットを印刷するステップ、
－ 同一のキットにおいて、前記免疫原性組成物および前記情報リーフレットを組み合わせるステップ
を含む、プロセスを目的としている。
１つの実施形態において、本発明は、免疫原性組成物および情報リーフレットを含むキットを生産するためのプロセスであって、
－ 本開示の免疫原性組成物を生産するステップ、
－ ヒト集団において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ、１８Ｆ、および／または１８Ａに対するＯＰＡ力価を引き起こす組成物の能力について言及している情報リーフレットを印刷するステップ、
－ 同一のキットにおいて、前記免疫原性組成物および前記情報リーフレットを組み合わせるステップ
を含む、プロセスを目的としている。
１１ 方法
１つの実施形態において、本発明は、
－ 対象に、免疫学的に効果的な量の、本発明の文書において定義されている免疫原性組成物のいずれかを注射するステップ、
－ 前記対象から血清試料を回収するステップ、
－ 前記血清試料を、インビトロでのオプソニン貪食作用死滅アッセイ（ＯＰＡ）によって、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対するオプソニン貪食作用死滅活性について試験するステップ
を含む方法を目的としている。
１つの実施形態において、本発明は、
－ 対象に、免疫学的に効果的な量の、本文書において定義されている免疫原性組成物のいずれかを注射するステップ、
－ 前記対象から血清試料を回収するステップ、
－ 前記血清試料を、インビトロでのオプソニン貪食作用死滅アッセイ（ＯＰＡ）によって、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂに対するオプソニン貪食作用死滅活性について試験するステップ
を含む方法を目的としている。
１つの実施形態において、本発明は、
－ 対象に、免疫学的に効果的な量の、本文書において定義されている免疫原性組成物のいずれかを注射するステップ、
－ 前記対象から血清試料を回収するステップ、
－ 前記血清試料を、インビトロでのオプソニン貪食作用死滅アッセイ（ＯＰＡ）によって、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆに対するオプソニン貪食作用死滅活性について試験するステップ
を含む方法を目的としている。
１つの実施形態において、本発明は、
－ 対象に、免疫学的に効果的な量の、本文書において定義されている免疫原性組成物のいずれかを注射するステップ、
－ 前記対象から血清試料を回収するステップ、
－ 前記血清試料を、インビトロでのオプソニン貪食作用死滅アッセイ（ＯＰＡ）によって、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆに対するオプソニン貪食作用死滅活性について試験するステップ
を含む方法を目的としている。
１２ 本発明はまた、以下の番号付けされた項１から１０３において定義されるような以下の実施形態を提供する
１． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆによる感染に対して対象を免疫化する方法において用いるための、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
２． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ由来の莢膜糖類を含まない、項１に記載の免疫原性組成物。
３． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ由来の莢膜糖類を含まない、項１または２に記載の免疫原性組成物。
４． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆ由来の莢膜糖類を含まない、項１～３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
５． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および１８Ｆ由来の莢膜糖類を含まない、項１に記載の免疫原性組成物。
６． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
７． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
８． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｖ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～７のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
９． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１４由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
１０． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
１１． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｆ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～１０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
１２． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
１３． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～１２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
１４． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型５由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～１３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
１５． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型７Ｆ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～１４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
１６． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５、および７Ｆ由来の糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～１５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
１７． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～１６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
１８． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ａ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～１７のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
１９． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａ由来の糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～１５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
２０． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～１９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
２１． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～２０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
２２． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～２１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
２３． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～２２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
２４． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
２５． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～２４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
２６． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～２５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
２７． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～２６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
２８． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆおよび３３Ｆ由来の糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～２０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
２９． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ、２２Ｆ、および３３Ｆ由来の糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～２０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
３０． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ、１０Ａ、１１Ａ、および８由来の糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
３１． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～３０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
３２． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１７Ｆ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～３１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
３３． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～３２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
３４． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、１７Ｆ、および２０由来の糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～３０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
３５． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｃ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～３４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
３６． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｎ由来の少なくとも１つの糖質コンジュゲートをさらに含む、項１～３５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
３７． ７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、項１～３６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
３８． １４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、項１～３６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
３９． １６価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、項１～３６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
４０． ２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、項１～３６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
４１． 前記糖質コンジュゲートがＣＲＭ１９７に個々にコンジュゲートしている、項１～４０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
４２． 全ての糖質コンジュゲートがＣＲＭ１９７に個々にコンジュゲートしている、項１～４０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
４３． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、および／または２３Ｆ由来の糖質コンジュゲートがＰＤに個々にコンジュゲートしている、項１～４０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
４４． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートがＴＴにコンジュゲートしている、項１～４０および４３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
４５． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖質コンジュゲートがＤＴにコンジュゲートしている、項１０～４０、４３、および４４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
４６． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖質コンジュゲートがＣＲＭ１９７にコンジュゲートしている、項１～４０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
４７． 前記糖質コンジュゲートが、ＣＤＡＰ化学を用いて調製される、項１～４６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
４８． 前記糖質コンジュゲートが、還元性アミノ化によって調製される、項１～４６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
４９． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の前記糖質コンジュゲートが、還元性アミノ化によって調製される、項１～４８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
５０． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の前記糖質コンジュゲートが、≦１０％のＯ－アセチル化の程度を有する糖類を含む、項１～４９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
５１． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の前記糖質コンジュゲートが、１５０ｋＤａと２０００ｋＤａとの間の分子量を有する、項１～５０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
５２． 他の病原体の抗原をさらに含む、項１～５１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
５３． ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、典型的には無細胞の（Ｐａ）百日咳抗原（Ｐ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）抗原、コンジュゲートしたインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型莢膜糖類（Ｈｉｂ）、不活化型ポリオウイルスワクチン（ＩＰＶ）から選択される抗原をさらに含む、項１～５１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
５４． 少なくとも１つのアジュバント、最も好ましくは、本明細書において開示されるアジュバントのいずれかをさらに含む、項１～５３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
５５． リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、および水酸化アルミニウムからなる群から選択される少なくとも１つのアジュバントをさらに含む、項１～５３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
５６． ０．１ｍｇ／ｍＬから１ｍｇ／ｍＬの元素アルミニウムをリン酸アルミニウムの形でアジュバントとして含む、項１～５３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
５７． ＥＬＩＳＡアッセイによって決定すると、少なくとも０．３５μｇ／ｍｌの濃度で、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａの多糖と結合し得るＩｇＧ抗体を引き起こすことが可能である、項１～５６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
５８． ＥＬＩＳＡアッセイによって決定すると、少なくとも０．３５μｇ／ｍｌの濃度で、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂの多糖と結合し得るＩｇＧ抗体を引き起こすことが可能である、項１～５７のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
５９． ＥＬＩＳＡアッセイによって決定すると、少なくとも０．３５μｇ／ｍｌの濃度で、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆの多糖と結合し得るＩｇＧ抗体を引き起こすことが可能である、項１～５８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
６０． インビトロでのオプソニン貪食作用アッセイ（ＯＰＡ）によって決定すると、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆを死滅させ得る機能的抗体を引き起こすことが可能である、項１～５９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
６１． インビトロでのオプソニン貪食作用死滅アッセイ（ＯＰＡ）によって決定すると、対象の少なくとも５０％において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対して少なくとも１：８の力価を引き起こすことが可能である、項１～６０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
６２． インビトロでのオプソニン貪食作用死滅アッセイ（ＯＰＡ）によって決定すると、対象の少なくとも５０％において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂに対して少なくとも１：８の力価を引き起こすことが可能である、項１～６１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
６３． インビトロでのオプソニン貪食作用死滅アッセイ（ＯＰＡ）によって決定すると、対象の少なくとも５０％において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆに対して少なくとも１：８の力価を引き起こすことが可能である、項１～６２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
６４． 免疫化前集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対する応答者の割合を有意に増大させ得る、項１～６３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
６５． 免疫化前集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂに対する応答者の割合を有意に増大させ得る、項１～６４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
６６． 免疫化前集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆに対する応答者の割合を有意に増大させ得る、項１～６５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
６７． 免疫化前集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対するヒト対象のＯＰＡ力価を有意に増大させ得る、項１～６６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
６８． 免疫化前集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂに対するヒト対象のＯＰＡ力価を有意に増大させ得る、項１～６７のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
６９． 免疫化前集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆに対するヒト対象のＯＰＡ力価を有意に増大させ得る、項１～６８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
７０． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａによる感染に対して対象を免疫化する方法において用いるための、項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
７１． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂによる感染に対して対象を免疫化する方法において用いるための、項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
７２． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆによる感染に対して対象を免疫化する方法において用いるための、項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
７３． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａおよび１８Ｂによる感染に対して対象を免疫化する方法において用いるための、項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
７４． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａおよび１８Ｆによる感染に対して対象を免疫化する方法において用いるための、項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
７５． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂおよび１８Ｆによる感染に対して対象を免疫化する方法において用いるための、項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
７６． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および１８Ｆによる感染に対して対象を免疫化する方法において用いるための、項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
７７． 対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆによって生じる感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善するための方法において用いるための、項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
７８． 対象における血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染の予防に用いるための、項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
７９． 前記免疫原性組成物を全身経路または粘膜経路を介して投与する手段によって、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆの感染に感受性のあるヒトを予防または治療する方法において用いるための、項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
８０． 免疫学的に効果的な量の項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆに関連する感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善する方法。
８１． 免疫学的に効果的な量の項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆによる感染を予防する方法。
８２． 前記対象が１歳未満のヒトである、項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
８３． 前記対象が２歳未満のヒトである、項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
８４． 前記対象が５０歳以上の成人である、項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
８５． 複数回投与ワクチン接種スケジュールにおいて用いるための、項１～８４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
８６． 本明細書において開示される免疫原性組成物および情報リーフレットを含むキット。
８７． 項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物および情報リーフレットを含むキット。
８８． 前記情報リーフレットが、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ、１８Ｆ、および／または１８Ａに対する機能的抗体を引き起こす組成物の能力について言及している、項８６または８７に記載のキット。
８９． 前記情報リーフレットが、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対する機能的抗体を引き起こす組成物の能力について言及している、項８６または８７に記載のキット。
９０． 前記情報リーフレットが、ヒト集団において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ、１８Ｆ、および／または１８Ａに対する抗莢膜抗体を≧０．３５μｇ／ｍＬの濃度で引き起こす組成物の能力について言及している、項８６または８７に記載のキット。
９１． 前記情報リーフレットが、ヒト集団において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対する抗莢膜抗体を≧０．３５μｇ／ｍＬの濃度で引き起こす組成物の能力について言及している、項８６または８７に記載のキット。
９２． 前記情報リーフレットが、ヒト集団において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ、１８Ｆ、および／または１８Ａに対するＯＰＡ力価を引き起こす組成物の能力について言及している、項８６～９１のいずれか一項に記載のキット。
９３． 免疫原性組成物および情報リーフレットを含むキットを生産するためのプロセスであって、
－ 項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を生産するステップ、および
－ 同一のキットにおいて、前記免疫原性組成物および情報リーフレットを組み合わせるステップであって、前記情報リーフレットが、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ、１８Ｆ、および／または１８Ａに対する機能的抗体を引き起こす前記組成物の能力について言及しているステップ
を含む、プロセス。
９４． 免疫原性組成物および情報リーフレットを含むキットを生産するためのプロセスであって、
－ 項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を生産するステップ、および
－ 同一のキットにおいて、前記免疫原性組成物および情報リーフレットを組み合わせるステップであって、前記情報リーフレットが、ヒト集団において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ、１８Ｆ、および／または１８Ａに対する抗莢膜抗体を≧０．３５μｇ／ｍＬの濃度で引き起こす組成物の能力について言及しているステップ
を含む、プロセス。
９５． 免疫原性組成物および情報リーフレットを含むキットを生産するためのプロセスであって、
－ 項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を生産するステップ、および
－ 同一のキットにおいて、前記免疫原性組成物および情報リーフレットを組み合わせるステップであって、前記情報リーフレットが、ヒト集団において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ、１８Ｆ、および／または１８Ａに対するＯＰＡ力価を引き起こす組成物の能力について言及しているステップ
を含む、プロセス。
９６． 免疫原性組成物および情報リーフレットを含むキットを生産するためのプロセスであって、
－ 項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を生産するステップ、
－ 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ、１８Ｆ、および／または１８Ａに対する機能的抗体を引き起こす前記組成物の能力について言及している情報リーフレットを印刷するステップ、
－ 同一のキットにおいて、前記免疫原性組成物および前記情報リーフレットを組み合わせるステップ
を含む、プロセス。
９７． 免疫原性組成物および情報リーフレットを含むキットを生産するためのプロセスであって、
－ 項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を生産するステップ、
－ ヒト集団において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ、１８Ｆ、および／または１８Ａに対する抗莢膜抗体を≧０．３５μｇ／ｍＬの濃度で引き起こす組成物の能力について言及している情報リーフレットを印刷するステップ、
－ 同一のキットにおいて、前記免疫原性組成物および前記情報リーフレットを組み合わせるステップ
を含む、プロセス。
９８． 免疫原性組成物および情報リーフレットを含むキットを生産するためのプロセスであって、
－ 項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を生産するステップ、
－ ヒト集団において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂ、１８Ｆ、および／または１８Ａに対するＯＰＡ力価を引き起こす組成物の能力について言及している情報リーフレットを印刷するステップ、
－ 同一のキットにおいて、前記免疫原性組成物および前記情報リーフレットを組み合わせるステップ
を含む、プロセス。
９９． － 対象に、免疫学的に効果的な量の、項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を注射するステップ、
－ 前記対象から血清試料を回収するステップ、
－ 前記血清試料を、インビトロでのオプソニン貪食作用死滅アッセイ（ＯＰＡ）によって、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆに対するオプソニン貪食作用死滅活性について試験するステップ
を含む方法。
１００． 免疫学的に効果的な量の項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆに対する免疫応答を誘発する方法。
１０１． 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆによる感染に対して対象を免疫化するための薬剤の製造のための、項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物の使用。
１０２． 対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆによって生じる感染、疾患、または状態を予防、治療、または改善するための薬剤の製造における、項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物の使用。
１０３． 対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｆによる感染を予防するための薬剤の製造における、項１～６９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物の使用。
本明細書において用いられる場合、用語「約」は、言及された濃度範囲、時間枠、分子量、温度、またはｐＨなどの値の統計上有意な範囲に入ることを意味する。このような範囲は、所与の値または範囲の１桁内、典型的には２０％内、より典型的には１０％内、さらにより典型的には５％内、または１％内であり得る。時として、このような範囲は、所与の値または範囲の測定および／または決定に用いられる標準的な方法の典型的な実験誤差内であり得る。用語「約」によって包含される許容可能な変化量は、研究下にある特定の系に応じ、当業者によって容易に理解され得る。範囲が本出願内で示される場合は常に、その範囲内の全ての整数もまた、本開示の実施形態として検討される。
本明細書における用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、本発明者らによって、全ての場合において、用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ）」、および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ）」とそれぞれ置換可能であり得ることが意図されている。
この特許明細書内で引用される全ての参考文献または特許出願は、参照することによって本明細書に組み込まれる。
本発明を、付随する実施例において説明する。以下の実施例は、別段のことが詳細に記載されている場合を除き、当業者に周知であり通常のものである標準的な技術を用いて行われる。実施例は例示的なものであるが、本発明を限定するものではない。
（実施例１）
肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清群１８内の交差反応性オプソニン貪食作用免疫応答の評価
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する宿主保護は、抗莢膜抗体依存性のオプソニン貪食作用によって主に仲介される。機能的抗体および補体の存在下での貪食エフェクター細胞による肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）細胞の死滅を測定する、肺炎球菌のオプソニン貪食作用アッセイ（ＯＰＡ）は、肺炎球菌ワクチンの有効性を評価するための重要な代替手段であると考えられる。
材料および方法
血清
１３価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン（１３ｖＰｎＣ）をワクチン接種された成人の免疫血清からなる２つのランダムに選択されたサブセットを、血清型１８Ｆ、１８Ａ、１８Ｂ、および１８ＣについてＯＰＡアッセイにおいて試験した。血清は、米国臨床試験６１１５Ａ１－００４（Ｎ＝５９、ワクチン接種後）および６１１５Ａ１－３００５（Ｎ＝６６、マッチしたワクチン接種前およびワクチン接種後）からそれぞれ回収した。
研究６１１５Ａ１－３００５（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ００５４６５７２）は、１用量の２３ｖＰＳを研究に登録する少なくとも５年前に投与された、歩行可能な７０歳以上の高齢者の個体における、２３価の肺炎球菌多糖ワクチン（２３ｖＰＳ）と比較したＰＲＥＶＮＡＲ １３（登録商標）の安全性、耐容性、および免疫原性を評価する、第３相無作為化実薬－対照の改変型二重盲検試験であった（２０１６年１０月４日にアクセスした、ｈｔｔｐ：／／ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ＮＣＴ００５４６５７２を参照されたい）。
研究６１１５Ａ１－００４（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ００４２７８９５）は、２３ｖＰＳを投与されていない６０から６４歳の成人における、２３価の肺炎球菌多糖ワクチン（２３ｖＰＳ）と比較した１３価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン（１３ｖＰｎＣ）の安全性、耐容性、および免疫原性、ならびに、２３ｖＰＳを投与されていない１８歳から５９歳の成人における、１３ｖＰｎＣの安全性、耐容性、および免疫原性を評価する、第３相無作為化実薬－対照改変型二重盲検試験であった（２０１６年１０月４日にアクセスした、ｈｔｔｐ：／／ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｓｈｏｗ／ＮＣＴ００４２７８９５を参照されたい）。
これらの研究において試験された１３価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン（１３ｖＰｎＣ）は、ジフテリアと交差反応する材料１９７（ＣＲＭ１９７）担体タンパク質（Ｐｒｅｖｅｎａｒ １３（登録商標））に個々にコンジュゲートしている肺炎球菌血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来のコンジュゲートを含有していた。
マイクロコロニーオプソニン貪食作用アッセイ（ｍｃＯＰＡ）手順
オプソニン貪食作用アッセイ（ＯＰＡ）は、ヒト血清における、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆ、１８Ａ、１８Ｂ、および／または１８Ｃに対する機能的抗体を測定するために用いられる。試験血清を、莢膜多糖特異的な免疫グロブリンの、細菌をオプソニン化し、補体沈着を引き起こし、それによって食細胞による食作用および細胞の死滅を容易にする能力を測定するアッセイ反応において設ける。ＯＰＡ力価を、試験血清を有さない対照ウェルに対する、細菌数を５０％低減させる希釈の逆数と定義する。ＯＰＡ力価を、この５０％死滅カットオフを包含する２つの希釈から内挿する。
ＯＰＡ手順は、Ｈｕら、（２００５）Ｃｌｉｎ Ｄｉａｇｎ Ｌａｂ Ｉｍｍｕｎｏｌ １２：２８７～２９５において記載されている方法に基づくものであった。
マイクロコロニーオプソニン貪食作用アッセイは、試験血清を含有するマイクロコロニーＯＰＡ（ｍｃＯＰＡ）反応における細菌の生存を測定することによって、機能的抗肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）抗体を定量的に評価する。加熱不活化された血清の連続希釈物（２．５倍）をアッセイプレート内の標的細菌に添加し、振とうしながら３０分インキュベートした。ベビーウサギ補体（３～４週齢、１２．５％の最終濃度）および分化したＨＬ－６０細胞を次いで２００：１の概算のエフェクターと標的との比率で各ウェルに添加し、振とうしながら３７℃でインキュベートした。反応を終わらせるために、８０μＬの０．９％ＮａＣｌを全ウェルに添加し、反応溶液を混合し、１０μＬのアリコートを、２００μＬの水を含有するＭｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎＨＴＳ ＨＶフィルタープレートのウェルに移した。液体を真空下でプレートを介して濾過し、１５０μＬのＨｙＳｏｙ培地を各ウェルに添加し、濾過した。
濾過後、フィルタープレートを３７℃で、５％ＣＯ２インキュベーター内で一晩インキュベートし、次いで、Ｄｅｓｔａｉｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）で固定した。プレートを次いでクマシーブルーで染色し、１回脱色した。コロニーを画像化し、Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｉｍｉｔｅｄ（ＣＴＬ）ＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔ Ａｎａｌｙｚｅｒ（登録商標）で数えた。ＯＰＡ抗体力価を、血清を含有しない細菌－エフェクター細胞－補体対照ウェルと比較した場合に細菌コロニーの数を５０％減少させた最低血清希釈の逆数として決定した。
結果－１８Ｆ、１８Ａ、１８Ｂ、および１８ＣにおけるＯＰＡ応答
血清型１８Ｆ、１８Ａ、および１８Ｂに対する、１３ｖＰｎＣで免疫化された成人の免疫血清の機能横断型の応答を、血清型１８Ｃに対する同種の機能的応答と共に、それぞれのマイクロコロニーオプソニン貪食作用アッセイ（ｍｃＯＰＡ）において評価した。１３ｖＰｎＣをワクチン接種された成人の免疫血清からなる２つのランダムに選択されたサブセットを試験した。血清は、米国臨床試験６１１５Ａ１－００４（Ｎ＝５９、ワクチン接種後）および６１１５Ａ１－３００５（Ｎ＝６６、マッチしたワクチン接種前およびワクチン接種後）からそれぞれ回収した（上記を参照されたい）。
研究６１１５Ａ１－００４における対象は、事前に、いかなる肺炎球菌ワクチン接種も受けておらず、研究プロトコルの一部として１３ｖＰｎＣを単回投与された。図１において示されるように、研究６１１５Ａ１－００４（５９／５９）の免疫血清は全て、ワクチン内の抗原である血清型１８Ｃに対してだけではなく、血清型１８Ｆ、１８Ａ、および１８Ｂに対しての正の力価も示し、このことは、ＯＰＡによって測定される交差保護を示唆する。応答者の１００％が全ての血清群（１８Ｃ、１８Ｆ、１８Ａ、および１８Ｂ）で見られ（図１）、このことは、６１１５Ａ１－３００５の結果を裏付ける（図２）。
研究６１１５Ａ１－３００５における対象は、事前に、研究に登録する少なくとも５年前に１用量の２３ｖＰＳを投与されており、研究プロトコルの一部として１３ｖＰｎＣを単回投与された。１３ｖＰｎＣで免疫化された成人のマッチしたワクチン接種前およびワクチン接種後の血清パネル（Ｎ＝６６）（研究６１１５Ａ１－３００５）を、血清型１８Ｃに対する同種の応答について、ならびに血清型１８Ｆ、１８Ａ、および１８Ｂに対する抗１８Ｃ抗体の交差反応性について、ＯＰＡで評価した。図２において示されるように、１８Ｃ（７７％）、１８Ａ（７３％）、１８Ｂ（７４％）、および１８Ｆ（７７％）に対する比較的高い免疫性（応答者のパーセンテージ）が、ＯＰＡアッセイにおいて検出され、これは、血清型１８Ｃ由来のコンジュゲートしていない多糖を含む２３ｖＰＳでの事前の免疫化に起因している可能性が高い。しかし、応答者のパーセンテージは、血清群１８由来の血清型１８Ｃコンジュゲートのみを含有する１３ｖＰｎＣでのワクチン接種の後、４つの血清型全てで９２％以上まで増大した。力価値の上昇倍率は、表１に示されており、血清型の間で類似しており、このこともまた、交差反応性を示唆する。
Figure 0007120767000002
ＯＰＡ力価の分布のより包括的な分析を、図３～６の逆累積分布曲線（ＲＣＤＣ）に示す。ＲＣＤＣは、ワクチン接種後の血清型１８Ｃ、１８Ｆ、１８Ａ、および１８Ｂについての血清型特異的な免疫応答の増大を示す。
結論
血清群１８株（１８Ｆ、１８Ａ、１８Ｂ、および１８Ｃ）の交差血清型の機能的死滅が、ｍｃＯＰＡにおいて観察された。これらのデータに基づいて、１３ｖＰｎＣワクチンは、１８Ｃからの予想された保護に加えて血清型１８Ｆ、１８Ａ、および１８Ｂからのさらなる保護も提供することによって、事前に予想されたものよりも広い血清型を網羅する可能性が高い。
本明細書において言及される全ての刊行物および特許出願は、本発明が属する技術分野の当業者のレベルの指標である。全ての刊行物および特許出願は、それぞれの個々の刊行物または特許出願が参照することによって組み込まれることが具体的かつ個々に指示されるのと同程度に、参照することによって本明細書に組み込まれる。
理解を明確にする目的で上述した発明を説明および例によってある程度詳細に記載したが、ある種の変更および修正が添付の特許請求の範囲の範囲内で行われる場合がある。

Claims (12)

  1. 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および１８Ｆによる感染に対してヒト対象を免疫化する方法において用いるための、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の少なくとも１つの莢膜糖類コンジュゲートを含み、さらに肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の莢膜糖類コンジュゲートを含む免疫原性組成物であって、免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および１８Ｆ由来の莢膜糖類コンジュゲートを含まず、免疫原性組成物が、免疫化前集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および１８Ｆに対するヒト対象のオプソニン貪食作用アッセイ（ＯＰＡ）力価を有意に増大させることができ、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａに対するＯＰＡ力価における上昇倍率が少なくとも８．４であり、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｂに対するＯＰＡ力価における上昇倍率が少なくとも１６．０であり、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｆに対するＯＰＡ力価における上昇倍率が少なくとも５．９であり、前記莢膜糖類コンジュゲートがＣＲＭ １９７ に個別にコンジュゲートしている、免疫原性組成物。
  2. 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆおよび３３Ｆ由来の莢膜糖類コンジュゲートをさらに含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
  3. 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ、２２Ｆ、および３３Ｆ由来の莢膜糖類コンジュゲートをさらに含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
  4. 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ、１０Ａ、１１Ａ、および８由来の莢膜糖類コンジュゲートをさらに含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
  5. １３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、請求項１～４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
  6. 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の前記莢膜糖類コンジュゲートが還元性アミノ化によって調製される、請求項１～５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
  7. 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の前記莢膜糖類コンジュゲートが、≦１０％のＯ－アセチル化の程度を有する莢膜糖類を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
  8. 少なくとも１つのアジュバントをさらに含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
  9. ＥＬＩＳＡアッセイによって決定すると、少なくとも０．３５μｇ／ｍｌの濃度で、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および１８Ｆの莢膜糖類と結合し得るＩｇＧ抗体を引き起こすことが可能である、請求項１～８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
  10. インビトロでのオプソニン貪食作用アッセイ（ＯＰＡ）によって決定すると、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および１８Ｆを死滅させ得る機能的抗体を引き起こすことが可能である、請求項１～９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
  11. インビトロでのオプソニン貪食作用死滅アッセイ（ＯＰＡ）によって決定すると、対象の少なくとも５０％において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および１８Ｆに対して少なくとも１：８の力価を引き起こすことが可能である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
  12. 免疫化前集団と比較して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ａ、１８Ｂ、および１８Ｆに対する応答者の割合を有意に増大させ得る、請求項１～１１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
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