JP2020518264A5

JP2020518264A5 -

Info

Publication number: JP2020518264A5
Application number: JP2019560352A
Authority: JP
Filing date: 2018-05-02
Publication date: 2021-07-26
Anticipated expiration: 2038-05-02

Claims

構造：

を有する化合物１の産生方法であって、
モグロシドＩＩＩ_Ｅを、モグロシドＩＩＩ_Ｅからの化合物１の産生を触媒することが可能な第１の酵素と接触させることを含み；
ここで、前記第１の酵素が、ＵＤＰグリコシルトランスフェラーゼ、シクロマルトデキストリングルカノトランスフェラーゼ（ＣＧＴアーゼ）、グリコトランスフェラーゼ、デキストランスクラーゼ、セルラーゼ、β−グルコシダーゼ、アミラーゼ、トランスグルコシダーゼ、ペクチナーゼおよびデキストラナーゼのうちの１種以上であり；
前記ＣＧＴアーゼは、配列番号１、３、７８〜８８、９０〜１０１、１４８および１５４のいずれか１つの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
前記デキストランスクラーゼは、配列番号２、１０３、１０６〜１１０、１５６および８９６に記載された配列のいずれか１つと少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、あるいは
デキストランスクラーゼ活性を有する酵素は、配列番号１０４、１５７および８９５に記載された配列のいずれか１つと少なくとも９０％の配列同一性を有する遺伝子によってコードされる、方法。
モグロシドＩＩＩ_Ｅを前記第１の酵素と接触させることが、モグロシドＩＩＩ_Ｅを、前記第１の酵素をコードする第１の遺伝子を含む組換え宿主細胞と接触させることを含む、請求項１記載の方法。
前記第１の遺伝子が、前記組換え宿主細胞に対して異種である、請求項２記載の方法。
前記第１の酵素が、配列番号３、７８〜８８、９０〜１０１、１４８および１５４のいずれか１つの配列を有するアミノ酸配列を含むＣＧＴアーゼである、請求項１から３までのいずれか１項記載の方法。
前記第１の酵素が、配列番号２、１０３、１０６〜１１０、１５６および８９６に記載された配列のいずれか１つのアミノ酸配列を含むデキストランスクラーゼである、請求項１から３までのいずれか１項記載の方法。
前記第１の酵素が、配列番号１０４、１５７および８９５のいずれか１つの核酸配列によってコードされるデキストランスクラーゼである、請求項１から３までのいずれか１項記載の方法。
モグロシドＩＩ_Ａを、モグロシドＩＩ_ＡからのモグロシドＩＩＩ_Ｅの産生を触媒することが可能な第２の酵素と接触させることを含む、請求項１から６までのいずれか１項記載の方法。
モグロールを、モグロールからのモグロシドＩＩＩ_Ｅの産生を触媒することが可能な１種以上の酵素と接触させることを含む、請求項１から７までのいずれか１項記載の方法。
モグロシド化合物を、モグロシド化合物からのモグロシドＩＩＩ_Ｅの産生を触媒することが可能な１種以上の酵素と接触させてモグロシドＩＩＩ_Ｅを産生することを含み、ここで、前記モグロシド化合物が、モグロシドＩ_Ａ１、モグロシドＩ_Ｅ１、モグロシドＩＩ_Ａ１、モグロシドＩＩ_Ｅ、モグロシドＩＩ_Ａ、モグロシドＩＩＩ_Ａ１、モグロシドＩＩＩ_Ａ２、モグロシドＩＩＩ、モグロシドＩＶ、モグロシドＩＶ_Ａ、モグロシドＶおよびシアメノシドのうちの１種以上である、請求項１から８までのいずれか１項記載の方法。
前記モグロシド化合物からのモグロシドＩＩＩ_Ｅの産生を触媒することが可能な前記１種以上の酵素が、ＵＤＰグリコシルトランスフェラーゼ、ＣＧＴアーゼ、グリコトランスフェラーゼ、デキストランスクラーゼ、セルラーゼ、β−グルコシダーゼ、アミラーゼ、トランスグルコシダーゼ、ペクチナーゼおよびデキストラナーゼのうちの１種以上を含む、請求項９記載の方法。
前記モグロシド化合物が、モグロシドＩＩ_ＡまたはモグロシドＩＩ_Ｅであり、ここで、１種以上の酵素と接触させることにより、モグロシドＩＩＩ_Ａ、モグロシドＩＶ_ＥおよびモグロシドＶのうちの１種以上を産生する、請求項９または１０記載の方法。
１１−ヒドロキシ−２４，２５−エポキシククルビタジエノールを、前記組換え宿主細胞と接触させることを含み、ここで、前記組換え宿主細胞が、エポキシドヒドロラーゼをコードする遺伝子を含み、
前記１１−ヒドロキシ−２４，２５−エポキシククルビタジエノールが、前記組換え宿主細胞に存在し、かつ／または前記組換え宿主細胞によって産生される、請求項２から１１までのいずれか１項記載の方法。
前記接触により前記組換え宿主細胞内でモグロールが産生される、請求項１２記載の方法。
ククルビタジエノールを前記組換え宿主細胞と接触させることを含み、ここで、前記組換え宿主細胞が、シトクロムＰ４５０をコードする遺伝子を含み、前記接触により１１−ヒドロキシククルビタジエノールが産生される、請求項２から１３までのいずれか１項記載の方法。
２，３−オキシドスクアレン、ジオキシドスクアレンおよびジエポキシスクアレンのうちの１種以上を、前記組換え宿主細胞と接触させることを含み、ここで、前記組換え宿主細胞が、ククルビタジエノールシンターゼ活性を有するポリペプチドをコードする遺伝子を含み、前記接触によりククルビタジエノールおよび／または２４，２５−エポキシククルビタジエノールが産生される、請求項２から１４までのいずれか１項記載の方法。
２，３−オキシドスクアレン、ジオキシドスクアレンおよびジエポキシスクアレンのうちの１種以上が、前記組換え宿主細胞によって産生され、かつ／または前記組換え宿主細胞に存在する、請求項１５記載の方法。
ファルネシルピロリン酸を、前記組換え宿主細胞と接触させることを含み、ここで、前記組換え宿主細胞は、スクアレンシンターゼをコードする遺伝子を含み、前記接触によりスクアレンが産生される、請求項２から１６までのいずれか１項記載の方法。