JP2018506563A - セリンプロテアーゼ阻害剤としての置換ピラゾール化合物 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、米国特許法第119条(e)項の下で、本出願と現在同時係属中であり、かつすべての目的のために全体が参照により組み込まれる、2015年2月27日出願の米国仮出願第62/126,424号、SUBSTITUTED PYRAZOLE COMPOUNDS AS SERINE PROTEASE INHIBITORSに対する優先権の利益を主張するものである。
またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、もしくはプロドラッグを包含し、
式中、
L1、L2、及びL4が独立して、結合、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、−C(O)−、−S−、−SO−、−SO2−、−O−、−NHSO2−、−NHC(O)−、または−NR5−であり、
R1、R2、及びR4が独立して、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換ヘテロアルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換縮合環アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
R5が、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換ヘテロアルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換縮合環アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
Vが、水素または置換もしくは非置換アルキルであり、
Wが、不在、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換ヘテロアルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、−C(O)R6、−C(O)OR6、−C(O)NR6R7、−SR6、−SOR6、−SO2R6、−SO2NR6R7、−OR6、−NHSO2R6、または−NR6R7であり、式中、R6及びR7が独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換ヘテロアルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、R6及びR7の両方が存在する場合、それらが組み合わせられて、置換もしくは非置換アルキレン、または置換もしくは非置換ヘテロアルキレンを形成してもよく、
Xが、結合、置換もしくは非置換アルキレン、−O−、または−NR8−であり、
Yが、結合、置換もしくは非置換アルキレン、−O−、または−N−であるが、但し、Yが−O−である場合、Wが不在であることを条件とし、
Zが、結合、−C(O)−、置換もしくは非置換アルキレン、−O−、または−NR9−であり、
式中、R8及びR9が独立して、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換ヘテロアルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、−C(O)R6、−C(O)OR6、−C(O)NR6R7、−SR6、−SOR6、−SO2R6、−SO2NR6R7、−OR6、−NHSO2R6、または−NR6R7であり、式中、R6及びR7が、上で定義された通りであるが、
但し、Xが−O−もしくは−NR8−であること、Yが−O−もしくは−N−であること、またはZが−O−もしくは−NR9−であることのうちの少なくともいずれか1つであることを条件とする。
本明細書で使用される略語は、化学及び生物学分野におけるそれらの従来の意味を有する。本明細書に記載の化学構造及び式は、化学分野で既知の化学的価数の標準規則に従って構築される。
(A)−OH、−NH2、−SH、−CN、−CF3、−NO2、オキソ、ハロゲン、−COOH、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、ならびに
(B)アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールであって、以下から選択される少なくとも1つの置換基で置換されたもの:
(i)オキソ、−OH、−NH2、−SH、−CN、−CF3、−NO2、ハロゲン、−COOH、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、ならびに
(ii)アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールであって、以下から選択される少なくとも1つの置換基で置換されたもの:
(a)オキソ、−OH、−NH2、−SH、−CN、−CF3、−NO2、ハロゲン、−COOH、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、ならびに
(b)アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであって、オキソ、−OH、−NH2、−SH、−CN、−CF3、−NO2、ハロゲン、−COOH、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、及び非置換ヘテロアリールから選択される少なくとも1つの置換基で置換されたもの。
一態様では、式(Ia)の構造を有する化合物、
またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、もしくはプロドラッグが提供される。環Aは、置換もしくは非置換ピラゾリルである。L1、L2、及びL4は独立して、結合、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、−S−、−SO−、−SO2−、−O−、−NHSO2−、または−NR5−である。L3は、結合、置換もしくは非置換アルキレン、または置換もしくは非置換ヘテロアルキレンである。R1、R2、及びR4は独立して、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または置換もしくは非置換縮合環アリールである。R3は、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、または置換もしくは非置換ヘテロシクロアルケニルである。R5は、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換縮合環アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
式中、
L1、L2、及びL4が独立して、結合、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、−C(O)−、−S−、−SO−、−SO2−、−O−、−NHSO2−、−NHC(O)−、または−NR5−であり、R1、R2、及びR4が独立して、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換ヘテロアルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換縮合環アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、R5が、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換ヘテロアルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換縮合環アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、Vが、水素または置換もしくは非置換アルキルであり、Wが、不在、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換ヘテロアルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、−C(O)R6、−C(O)OR6、−C(O)NR6R7、−SR6、−SOR6、−SO2R6、−SO2NR6R7、−OR6、−NHSO2R6、または−NR6R7であり、式中、R6及びR7が独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換ヘテロアルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、R6及びR7の両方が存在する場合、それらが組み合わせられて、置換もしくは非置換アルキレン、または置換もしくは非置換ヘテロアルキレンを形成してもよく、Xが、結合、置換もしくは非置換アルキレン、−O−、または−NR8−であり、Yが、結合、置換もしくは非置換アルキレン、−O−、または−N−であるが、但し、Yが−O−である場合、Wが不在であることを条件とし、Zが、結合、−C(O)−、置換もしくは非置換アルキレン、−O−、または−NR9−であり、式中、R8及びR9が独立して、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換ヘテロアルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、−C(O)R6、−C(O)OR6、−C(O)NR6R7、−SR6、−SOR6、−SO2R6、−SO2NR6R7、−OR6、−NHSO2R6、または−NR6R7であり、式中、R6及びR7が、上で定義された通りであるが、但し、Xが−O−もしくは−NR8−であること、Yが−O−もしくは−N−であること、またはZが−O−もしくは−NR9−であることのうちの少なくともいずれか1つであることを条件とする。いくつかの実施形態では、本化合物は、式(IV)の化合物の薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、またはプロドラッグである。いくつかの実施形態では、本化合物は、エステルでも、溶媒和物でも、プロドラッグでもない。
いくつかの実施形態では、本化合物は、式(V)の化合物の薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、またはプロドラッグである。いくつかの実施形態では、本化合物は、エステルでも、溶媒和物でも、プロドラッグでもない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物は、1μM以上、例えば、約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100μM、またはさらにそれ以上の活性で、トロンビンに対する阻害活性を呈する。いくつかの実施形態では、本化合物は、0.1μM〜1μM、例えば、約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、または1.0μMの活性で、トロンビンに対する阻害活性を呈する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物は、0.1μM未満、例えば、約1、2、5、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、または100nMの活性で、トロンビンに対する阻害活性を呈する。上限及び/または下限として本明細書に列挙される値のうちのいずれかの組み合わせを使用する値の範囲も企図され、例えば、1〜10nM、10〜100nM、0.1〜1μM、1〜10μM、10〜100μM、100〜200μM、200〜500μM、またはさらには500〜1000μMであるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、阻害活性は、約1〜10nM、10〜100nM、0.1〜1μM、1〜10μM、10〜100μM、100〜200μM、200〜500μM、またはさらには500〜1000μMの範囲内である。定量目的のために、「活性」、「阻害活性」、「生物学的活性」、「トロンビン活性等の用語が、本明細書に開示される阻害化合物の文脈で、当該技術分野で既知の様々な方法で定量され得ることが理解される。別途指示されない限り、本明細書で使用されるとき、かかる用語は、通常の意味で、IC50(すなわち、半最大阻害を達成するための濃度)を指す。
トロンビン関連疾患及び状態(例えば、血栓症)。血栓性疾患は、凝固カスケード内でのトロンビンの位置、次いで、血液凝固過程の進行における凝固カスケードの重要性ため、トロンビン阻害の一次適応症である。しかしながら、いずれの理論にも拘束されることを望むものではないが、一般に凝固カスケード、具体的にはトロンビンが、様々な他の疾患状態において重要であると考えられる。
本明細書に記載の化合物は、当該技術分野で既知であり、かつ本明細書に記載の様々な方法によって、様々なタンパク質、例えば、トロンビン及びKLKB1の生物学的活性、例えば、プロテアーゼ活性の阻害についてアッセイされ得る。
別の態様では、本明細書に開示される化合物及び薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物が提供される。本化合物は、本明細書に開示される式(Ia)、(Ib)、(II)、(III)、(IV)、もしくは(V)のうちのいずれかの化合物、本明細書の表A、表B、表C、もしくは表Dに記載される化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、もしくはプロドラッグである。いくつかの実施形態では、本化合物は、本明細書の表A、表B、表C、または表Dに記載されている。
本明細書に開示される化合物は、多種多様な眼科、経口、非経口、及び局所剤形で調製及び投与され得る。本明細書に記載の化合物は、点眼薬によって投与され得る。また、本明細書に記載の化合物は、注入(例えば、静脈内、筋肉内、硝子体内、皮内、皮下、十二指腸内、または腹腔内)によって投与され得る。したがって、本明細書に記載の化合物は、硝子体内注入によっても投与され得る。また、本明細書に記載の化合物は、吸入によって、例えば、鼻腔内投与され得る。加えて、本明細書に開示される化合物は、経皮投与され得る。複数の投与経路(例えば、筋肉内、経口、眼)を使用して、本明細書に開示される化合物を投与することができることも想定される。
本明細書に提供される薬学的組成物は、活性成分が治療有効量で、すなわち、その意図された目的を達成するのに有効な量で含まれている組成物を含む。特定の適用に有効な実際の量は、とりわけ、治療される状態に依存する。
特定の化合物の毒性と治療効果との間の比率は、その治療指数であり、LD50(集団の50%において致命的な化合物の量)とED50(集団の50%において有効な化合物の量)との間の比率として表され得る。高治療指数を呈する化合物が好ましい。インビトロアッセイ、細胞培養アッセイ、及び/または動物研究から得られる治療指数データは、ヒトでの使用のための投薬量の範囲を考案する際に使用され得る。かかる化合物の投薬量は、好ましくは、毒性がほとんどまたは全くないED50を含む血漿濃度の範囲内にある。投薬量は、用いられる剤形及び利用される投与経路に応じてこの範囲内で異なり得る。例えば、Fingl et al.,The Pharmacological Basis of Therapeutics,Ch.1,p.l,1975を参照されたい。正確な製剤、投与経路、及び投薬量は、患者の状態及び化合物が使用される特定の方法を考慮して個々の実践者によって選択され得る。インビトロ製剤の場合、正確な製剤及び投薬量は、患者の状態及び化合物が使用される特定の方法を考慮して実践者によって選択され得る。
以下の実施例は、本発明のある特定の実施形態を例証するよう意図されており、本発明の範囲を限定するようには意図されていない。本明細書で使用される略語は、別途指示されない限り、当該技術分野におけるそれらの従来の意味を有する。具体的な略語としては、以下のものが挙げられる:Å=オングストローム、Ac2O=無水酢酸、AcOH=酢酸、aq=水性、Bt=ベンゾトリアゾール、BOC=N−tert−ブトキシカルボニル、br=ブロード、t−BuOH=tert−ブタノール、℃=摂氏温度、d=二重線、DABCO=1,4−ジアザビシクロ[2.2.2]オクタン、DCE=1,2−ジクロロエタン、DCM=ジクロロメタン、dd=二重線の二重線、DIEA=ジエチルイソプロピルアミン、DMAP=4−ジメチルアミノピリジン、DMF=N,N−ジメチルホルムアミド、DMSO=ジメチルスルホキシド、δ=化学シフト(別途指示されない限り、ppmで示される)、EDCI=1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド、eq=当量、Et2O=ジエチルエーテル、Et3N=トリエチルアミン、EtOAc=酢酸エチル、EtOH=エタノール、g=グラム、h(またはhr)=時間、HOBt=ヒドロキシベンゾトリアゾール、HPLC=高速液体クロマトグラフィー、Hz=ヘルツ、IC50=50%阻害での阻害濃度、J=結合定数(別途指示されない限り、Hzで示される)、LC=液体クロマトグラフィー、LHMDS=リチウムヘキサメチルジシラジド、m=多重線、M=モル、[M+H]+=親質量スペクトルピーク+H+、MS=質量スペクトル、ms=分子篩、MP=融点、Me2NH=ジメチルアミン、MeOH=メタノール、mg=ミリグラム、mL=ミリリットル、mM=ミリモル、mmol=ミリモル、min=分間、μL=マイクロリットル、μM=マイクロモル、ng=ナノグラム、nM=ナノモル、NMR=核磁気共鳴、ppm=100万分の1、q=四重線、Rf=保持因子、RT=室温、s=一重線、t=三重線、TFA=トリフルオロ酢酸、THF=テトラヒドロフラン、TLC=薄層クロマトグラフィー。
一般手順の一覧表
実施例1:中間体1の調製
中間体1の合成は、以下の一般手順1に従った。
冷THF(−78℃、80mL)中ジイソプロピルアミン(6.55g、64.7mmol、2.1当量)の溶液に、n−ブチルリチウム(4.04g、63.1mmol、2.05当量)を添加し、その後、0℃で1時間撹拌した。その後、反応混合物を−780Cに冷却し、次いで、これに1−(tert−ブチル)−3−メチルピペリジン−1,3−ジカルボキシレート(7.5g、30.8mmol、1当量)を添加した。混合物を1時間撹拌し、これにヨウ化メチル(13.12g、97.4mmol、3.0当量)を添加した。反応混合物を室温に一晩加温した。これをTLC及びLC−MSにより監視した。完了後、反応混合物を塩化アンモニウムで反応停止処理し、酢酸エチル(2×150mL)で抽出した。合わせた有機相を水及びブラインで洗浄し、その後、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル(60〜120のメッシュサイズ)を使用し、n−ヘキサン中5〜10%酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、生成物(中間体1、4.8g、収率60.5%)を得た。m/z 202[M−56]+1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.87(d,J=13.3Hz,1H),3.70(s,3H),3.46(s,1H),3.27(d,J=5.9Hz,1H),3.15(d,J=13.3Hz,1H),2.04(dd,J=12.7,6.2Hz,1H),1.58(s,1H),1.49(m,11H),1.18(s,3H)ppm。
中間体2の合成は、以下の一般手順2の手順に従った。
テトラヒドロフラン(70mL)中アセトニトリル(1.67g、40.8mmol、1.5当量)の冷溶液(−78℃)に、n−BuLi(ヘキサン中23%、2.61g、40.8mmol、1.5当量)を不活性窒素雰囲気下で20分間にわたって添加した。添加完了後、反応物をさらに60分間撹拌した。その後、冷(−78℃)混合物に、中間体1(7.0g、27.2mmol、1.0当量)を少量ずつに分けて添加し、反応混合物を3時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム溶液で反応停止処理し、生成物を酢酸エチルで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル(60〜120のメッシュサイズ)を使用し、n−ヘキサン中10〜40%酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、生成物tert−ブチル3−(2−シアノアセチル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(中間体2、4.775g、収率65.9%)を得た。m/z 211.0[M−56]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ4.26(q,J=20.1Hz,2H),3.74(d,J=12.6Hz,1H),3.38−3.32(m,1H),3.21−3.06(m,2H),1.94−1.77(m,1H),1.56−1.31(m,12H),1.06(s,3H)ppm。
化合物1の合成は、以下の一般手順3の手順に従った。
酢酸(0.2mL)及びイソプロパノール(80mL)中tert−ブチル3−(2−シアノアセチル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(中間体2、9.5g、35mmol、1.0当量)の溶液に、ヒドラジン一水和物(2.67g、53mmol、1.5当量)を滴加した。反応混合物を60℃で3時間撹拌した。反応混合物をLC−MSにより監視し、完了時、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル(60〜120メッシュ)を使用し、ジクロロメタン中5〜10%メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、tert−ブチル3−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物1、9.005g、収率90.0%)を得た。m/z 225.05[M−56]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.26(s,1H),4.62(s,2H),3.38(d,J=22.7Hz,2H),3.32(d,J=12.2Hz,1H),3.16(d,J=12.5Hz,1H),1.58−1.43(m,2H),1.38(d,J=9.7Hz,11H),1.09(d,J=8.6Hz,3H)ppm。
化合物2の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
メタノール(100mL)中tert−ブチル3−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物1、9.0g、32.1mmol、1.0当量)及び5−クロロチオフェン−2−カルバルデヒド(5.64g、38.5mmol、1.2当量)の冷溶液(0℃)に、酢酸(1.92g、32.1mmol、1.0当量)を添加した。3時間撹拌した後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(4.03g、64.2mmol、2.0当量)を添加した。反応混合物を室温に一晩加温し、TLCにより監視した。反応混合物を水(200mL)中に注ぎ、酢酸エチル(2×150mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル(60〜120のメッシュサイズ)を使用し、n−ヘキサン中10〜40%酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物2、7.0g、収率53.0%)を得た。m/z 411.40[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ6.92(d,J=3.7Hz,1H),6.84(s,1H),5.67(s,1H),5.35(s,1H),4.28(d,J=5.5Hz,2H),3.44−3.34(m,2H),3.29−3.26(m,2H),1.90(s,1H),1.54−1.43(m,3H),1.39(s,9H),1.12(s,3H)ppm。
化合物3の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
窒素雰囲気下の冷(0℃)THF(15mL)中ピバル酸(0.373g、3.65mmol、1.5当量)の溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、0.701g、3.65mmol、1.5当量)及びトリエチルアミン(0.74g、7.31mmol、3.0当量)を添加した。反応混合物を30分間撹拌し、これにヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、0.065g、0.48mmol、0.2当量)、続いて、tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物2、1.0g、3.43mmol、1.0当量)を添加した。混合物を室温で一晩撹拌した。反応物をLC−MSにより監視し、完了後、水(20mL)中に注ぎ、酢酸エチル(2×20mL)で抽出し、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、シリカゲル(60〜120のメッシュサイズ)を使用し、n−ヘキサン中0〜20%酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物3、0.500g、収率41.4%)を得た。m/z 494.88[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.63(d,J=5.6Hz,1H),6.97(s,2H),5.47(s,1H),4.41(s,2H),3.44(d,J=45.8Hz,2H),3.24(s,2H),1.94(s,1H),1.50(d,J=47.4Hz,3H),1.40(s,9H),1.34(s,9H),1.12(s,3H)ppm。
化合物4の合成は、以下の一般手順5bの手順に従った。
THF(25mL)中3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパン酸(0.576g、4.85mmol、2.0当量)の冷溶液(0℃)に、窒素下で、1−プロパンホスホン酸無水物(T3P、1.551g、4.85mmol、2.0当量)、続いて、ジイソプロピルエチルアミン(DIPEA、0.986g、9.75mmol、4.0当量)を添加した。反応混合物を1時間撹拌し、これにtert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物2、1.0g、3.43mmol、1.0当量)を添加した。反応物を48時間撹拌し、TLCにより監視した。反応完了後、混合物を水(50mL)中に注ぎ、酢酸エチル(2×20mL)で抽出し、水、その後、ブラインで洗浄し、次いで、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、シリカゲル(60〜120のメッシュサイズ)を使用し、n−ヘキサン中10〜20%酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパノイル)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物4、0.410g、収率32.9%)を得た。m/z 511.8[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.63(s,1H),6.92(d,J=37.7Hz,2H),5.46(s,1H),4.83(t,J=5.3Hz,1H),4.41(s,2H),3.87(s,2H),3.42(s,2H),3.19(d,J=5.2Hz,2H),1.91(s,1H),1.55(s,2H),1.36(s,3H),1.30(s,6H),1.12(s,3H)ppm。
化合物5の合成は、以下の一般手順6aの手順に従った。
酢酸エチル(600mL)中tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパノイル)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物4、0.4g、0.78mmol、1.0当量)の冷(0℃)溶液に、ヨードトリメチルシラン(0.5mL)を滴加した。反応混合物を室温にさせ、30時間撹拌した。反応物をLC−MS及びTLCにより監視した。完了後、反応混合物を重炭酸ナトリウム溶液(20%、150mL)、水(150mL)、続いて、ブライン(150mL)で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を、移動相としてアンモニア−水を使用した分取HPLCにより精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(3−メチルピペリジン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物5、0.030g、収率9.3%)を得た。m/z 410.90[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.71(s,1H),7.00(s,2H),5.57(s,1H),4.89−4.75(m,1H),4.44(s,2H),3.85(s,2H),2.89(s,4H),2.02−1.99(m,1H),1.62(s,3H),1.32(s,6H),1.19(s,3H)ppm。
化合物6の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(15mL)中3−メトキシ−2,2−ジメチルプロパン酸(0.483g、3.65mmol、1.5当量)の冷溶液(0℃)に、窒素下で、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、(0.701g、3.65mmol、1.5当量)、その後、トリエチルアミン(TEA、0.74g、7.31mmol、3.0当量)を添加した。30分間撹拌した後、混合物に、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、0.065g、0.48mmol、0.2当量)、続いて、tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物2、1.0g、3.43mmol、1.0当量)を添加した。反応混合物をLC−MSにより監視し、室温で72時間撹拌した。完了後、反応混合物を水(20mL)中に注ぎ、酢酸エチル(2×20mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、その後、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、シリカゲル(60〜120のメッシュサイズ)を使用し、n−ヘキサン中0〜20%酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(3−メトキシ−2,2−ジメチルプロパノイル)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物6、0.625g、収率48.9%)を得た。m/z 524.93[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.60(t,J=5.6Hz,1H),6.97(s,2H),5.47(s,1H),4.41(s,2H),3.84(s,2H),3.52(d,J=13.0Hz,1H),3.24(s,3H),3.13(s,3H),1.95(s,1H),1.57(s,3H),1.35(d,J=4.6Hz,6H),1.33(s,9H),1.13(s,3H)ppm。
化合物7の合成は、以下の一般手順6bの手順に従った。
ジクロロメタン(300mL)中tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(3−メトキシ−2,2−ジメチルプロパノイル)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物6、0.4g(0.76mmol、1.0当量)の冷溶液(0℃)に、ジクロロメタン(6mL)中トリフルオロ酢酸(TFA、2.5mL)の溶液を添加した。反応物をLC−MS及びTLCにより監視し、完了後(12時間)、反応混合物を20%重炭酸ナトリウム(200mL)、水(200mL)、及びブライン(200mL)で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を、移動相としてアンモニア−水を使用した分取HPLCにより精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(3−メチルピペリジン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−メトキシ−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物7、0.22g、収率83.4%)を得た。m/z 425.36[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.27(s,1H),7.63(d,J=6.2Hz,1H),6.98(q,J=3.8Hz,2H),5.52(s,1H),4.42(d,J=6.3Hz,2H),3.82(dd,J=20.7,8.4Hz,4H),3.14(s,4H),2.86−2.61(m,3H),1.98(s,2H),1.41(t,J=44.2Hz,6H),1.16(s,3H)ppm。
化合物8の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(12mL)中2−メトキシ安息香酸(0.278g、1.82mmol、1.5当量)の冷却溶液(0℃)に、窒素下で、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、0.351g、1.82mmol、1.5当量)、その後、トリエチルアミン(TEA、0.369g、3.65mmol、3.0当量)を添加した。30分間撹拌した後、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、0.032g、0.24mmol、0.2当量)、その後、tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物2、0.5g、1.21mmol、1.0当量)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、一晩撹拌した後、反応混合物を水(20mL)中に注ぎ、酢酸エチル(2×20mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、シリカゲル(60〜120のメッシュサイズ)を使用し、n−ヘキサン中0〜20%酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2−メトキシベンゾイル)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物8、0.25g、収率46%)を得た。m/z 545.49[M+1]1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.60(t,J=6.2 Hz,1H),7.47(dt,J=35.7,14.2Hz,1H),7.38(dd,J=7.5,1.6Hz,1H),7.13(d,J=8.4Hz,1H),7.05−6.98(m,3H),6.50−6.50(m,1H),5.55(s,2H),4.43(d,J=38.0Hz,2H),3.73(s,3H),3.48−3.11(m,4H),1.73(s,1H),1.60−1.06(m,13H),1.03(s,3H)ppm。
化合物9の合成は、以下の一般手順6bの手順に従った。
ジクロロメタン(250mL)中tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2−メトキシベンゾイル)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物8、0.4g、0.73mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、DCM(10mL)中TFA(2.5mL)の溶液を滴加した。反応物をLC−MS及びTLCにより監視し、0℃で12時間撹拌した後、混合物を20%重炭酸ナトリウム(200mL)、水(200mL)、その後、ブライン(200mL)で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアンモニア−水で溶出する分取HPLCにより精製して、生成物(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(3−メチルピペリジン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(2−メトキシフェニル)メタノン(化合物9、0.08g、収率24%)を得た。m/z 444.81[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.71(t,J=6.4Hz,1H),7.50(dd,J=11.4、4.4Hz,1H),7.44(dd,J=7.5,1.6Hz,1H),7.14(d,J=8.2Hz,1H),7.02(dd,J=12.5,4.5Hz,3H),5.64(s,1H),4.49(d,J=6.3Hz,2H),3.07(d,J=13.1Hz,1H),2.81(s,1H),2.69(d,J=12.1Hz,2H),1.85(s,1H),1.49(d,J=11.6Hz,3H),1.09(s,3H)ppm。
化合物10の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(20mL)中チオフェン−3−カルボン酸(0.374g、2.9mmol、1.5当量)の冷却溶液(0℃)に、窒素下で、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、0.561g、2.9mmol、1.5当量)及びトリエチルアミン(0.591g、5.8mmol、3.0当量)を添加した。反応混合物を30分間撹拌し、これにヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、0.052g、0.39mmol、0.2当量)、続いて、tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物2、0.8g、1.9mmol、1.0当量)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で一晩撹拌した後、反応混合物を水(20mL)中に注ぎ、酢酸エチル(2×20mL)で抽出した。合わせた有機相を水、その後、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、シリカゲル(60〜120のメッシュサイズ)を使用し、n−ヘキサン中0〜20%酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、生成物tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(チオフェン−3−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物10、0.4g、収率49%)を得た。m/z 521.77[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.95(d,J=58.3Hz,1H),7.78(dd,J=12.2,5.9Hz,2H),7.66(d,J=3.0Hz,1H),6.99(dd,J=11.6,3.7Hz,2H),5.61(s,1H),4.49(s,2H),3.70−3.53(m,1H),3.29−3.15(m,3H),1.98(s,1H),1.59(d,J=14.8Hz,3H),1.33(s,9H),1.16(s,3H)ppm。
化合物11の合成は、以下の一般手順6bの手順に従った。
ジクロロメタン(250mL)中tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(チオフェン−3−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物10、0.4g、0.76mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、DCM(10mL)中TFA(2.5mL)の溶液を滴加した。反応物をLC−MS及びTLCにより監視し、0℃で12時間撹拌した後、溶液を重炭酸ナトリウム(20%、200mL)、水(200mL)、及びブライン(200mL)で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を濃縮し、移動相としてアンモニア−水で溶出する分取HPLCにより精製して、所望の生成物(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(3−メチルピペリジン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(チオフェン−3−イル)メタノン(化合物11、0.075g、収率23%)を得た。m/z 420.80[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.90(d,J=1.8Hz,1H),8.31(s,1H),7.85−7.77(m,2H),7.66(dd,J=5.1,3.0Hz,1H),7.01(t,J=7.5Hz,1H),6.98(d,J=3.7Hz,1H),5.68(s,1H),4.50(d,J=6.2Hz,2H),3.34(d,J=12.3Hz,1H),2.81(d,J=12.0Hz,3H),2.00(s,1H),1.60(d,J=8.9Hz,2H),1.48(s,1H),1.19(d,J=12.7Hz,3H)ppm。
化合物12の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(20mL)中4−メチルテトラヒドロ−2H−ピラン−4−カルボン酸(0.527g、3.6mmol、1.5当量)の冷却溶液(0℃)に、窒素下で、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、0.701g、3.6mmol、1.5当量)及びトリエチルアミン(0.74g、7.3mmol、3.0当量)を添加した。0℃で30分間撹拌した後、反応混合物にヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、0.065g、4.8mmol、0.2当量)、続いて、tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物2、1.0g、2.4mmol、1.0当量)を添加した。反応混合物を室温で48時間撹拌し、LC−MSにより監視した。溶液を水(20mL)中に注ぎ、酢酸エチル(2×20mL)で抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し水、その後、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、シリカゲル(60〜120のメッシュサイズ)を使用し、n−ヘキサン中0〜20%酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(4−メチルテトラヒドロ−2H−ピラン−4−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物12、0.610g、収率47%)を得た。m/z 536.89[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.67(s,1H),6.97(s,2H),5.48(s,1H),4.42(s,2H),3.67(s,2H),3.47(s,3H),3.22(s,1H),2.34(s,2H),1.91(s,1H),1.71(s,2H),1.51(s,5H),1.33(s,9H),1.11(s,3H)ppm。
化合物13の合成は、以下の一般手順6bの手順に従った。
ジクロロメタン(300mL)中tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(4−メチルテトラヒドロ−2H−ピラン−4−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−1−カルボキシレート(化合物12、0.4g、0.74mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、ジクロロメタン(6mL)中TFA(2.5mL)の溶液を滴加した。反応物をLC−MS及びTLCにより監視し、0℃で12時間撹拌した後、反応混合物を重炭酸ナトリウム(20%、200mL)、水(200mL)、及びブライン(200mL)で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアンモニア−水を使用した分取HPLCにより精製して、(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(3−メチルピペリジン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(4−メチルテトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル)メタノン(化合物13、0.09g、収率28%)を得た。m/z 436.81[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.29(s,1H),7.67(s,1H),6.99(d,J=5.4Hz,2H),5.53(s,1H),4.44(d,J=6.2Hz,2H),3.69(s,2H),3.48(s,2H),3.10(s,1H),2.72(s,2H),2.34(s,2H),1.94(s,1H),1.70(s,2H),1.52(s,5H),1.14(s,3H)ppm。
中間体3の合成は、以下の一般手順2の手順に従った。
テトラヒドロフラン(150mL)中アセトニトリル(3.86mL、69.8mmol、1.7当量)の冷却溶液(−78℃)に、n−BuLi(ヘキサン中2.5M、27.9mL、69.8mmol、1.7当量)を30分間にわたって滴加し、続いて、−78℃でさらに30分間撹拌した。その後、これに1−(tert−ブチル)4−メチルピペリジン−1,4−ジカルボキシレート(10.0g、41.1mmol、1.0当量)を少量ずつに分けて添加し、混合物を−78℃でさらに3時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止処理し、その後、酢酸エチルで抽出した。有機相を乾燥させ(硫酸ナトリウム)、濾過し、蒸発させて油にし、これをさらに精製することなく使用した(中間体3、9.28g、収率89%)。m/z 252.15。
化合物14の合成は、以下の一般手順3の手順に従った。
イソプロパノール(210mL)中tert−ブチル4−(2−シアノアセチル)ピペリジン−1−カルボキシレート)(中間体3、7.0g、27.6mmol、1.0当量)の溶液に、ヒドラジン一水和物(1.65mL、33.2mmol、1.2当量)を滴加し、続いて、酢酸(1.65mL、27.6mmol、1.0当量)を添加した。反応混合物を85℃で4〜5時間撹拌した。完了後、反応混合物を減圧下で蒸発させた。残渣を、シリカゲル(60〜120メッシュ)を使用し、ジクロロメタン中10〜15%メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、tert−ブチル4−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物14、6.2g、収率84%)を得た。m/z 266.17。1H NMR(DMSO−d6,400MHz)δ5.182(1H,s),3.935−3.965(2H,d),3.172(2H,s),2.791(1H,m),1.747−1.802(2H,d),1.424(9H,s),1.361−1.402(2H,d),1.341−1.351(1H,d)ppm。
化合物15の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
メタノール(30mL)中tert−ブチル4−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物14、3.0g、11.3mmol、1.0当量)の溶液に、酢酸(0.67mL、11.3mmol、1.0当量)、続いて、5−クロロチオフェン−2−カルバルデヒド(1.81g、12.4mmol、1.1当量)を少量ずつに分けて添加した。反応物を室温で2時間撹拌した。その後、反応混合物に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(1.42g、22.6mmol、1.5当量)を少量ずつに分けて45分間にわたって添加した。反応混合物をさらに3時間撹拌した。反応完了後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を撹拌氷冷水中に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、中性シリカゲルを使用し、ジクロロメタン中5〜10%メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物15、3.0g、収率68%)を得た。m/z[M+H]+396.14 1H NMR(DMSO−d6,400MHz)δ11.34(1H,s),6.87−6.94(1H,q),6.834−6.843(1H,q),5.68(1H,s),4.275−4.288(1H,s),3.945−3.975(2H,d),2.786−2.796(2H,d),2.623−2.681(1H,d),1.725−1.995(2H,d),1.402−1.559(12H,m)ppm。
化合物16の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(10mL)中ピバル酸(0.19g、1.9mmol、1.5当量)の冷却溶液(0℃)に、ジイソプロピルエチルアミン(DIPEA、0.24mL、1.4mmol、1.5当量)、その後、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、0.365g、1.9mmol、1.5当量)を添加した。さらに20分間撹拌した後、反応混合物にtert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物15、0.5g、1.3mmol、1.0当量)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、0.035g、0.25mmol、0.2当量)を添加した。反応物を室温で16時間撹拌した。完了後、反応混合物を撹拌氷冷水で希釈し、生成物を酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、シリカゲル(60〜120メッシュ、トリエチルアミンで事前すすぎ)を使用し、ヘキサン中20〜40%酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物16、0.5g、収率83%)を得た。m/z[M+H]+480.20 1H NMR(DMSO−d6,400MHz)δ7.691−7.66(1H,t),6.957−6.984(2H,t),5.415(1H,s),4.4−4.416(2H,d),3.916−3.948(2H,d),2.867(2H,s),2.624−2.681(2H,m),1.818−1.852(2H,d),1.402−1.484(16H,s)ppm。
化合物17の合成は、以下の一般手順6aの手順に従った。
酢酸エチル中tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物16、0.5g、1.0mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、酢酸エチル中に希釈したヨードトリメチルシラン(0.148g、1.0mmol、1.0当量)を滴加した。反応物を10℃未満の温度で15分間撹拌した。反応完了後、混合物を撹拌しながら重炭酸ナトリウム溶液で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取HPLC法により精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)エタン−1−オン(化合物17、0.042g、収率10%)を得た。m/z[M+H]+380.14 1H NMR(DMSO−d6,400MHz)δ8.473(1H,s),8.189(1H,s),7.733−7.764(1H,t),6.945−6.971(2H,s),5.39(1H,d),4.421−4.436(2H,d),3.289−3.344(2H,d),2.985−3.035(2H,d),2.896−2.736(1H,m),2.029−2.057(2H,d),1.715−1.782(2H,d),1.366−1.413(9H,s)1.247−1.127(1H,m)ppm。
中間体4の合成は、以下の一般手順7の手順に従った。
ジクロロメタン(300mL)中エチルピペリジン−4−カルボキシレート(10.0g、64.1mmol、1.0当量)及びトリエチルアミン(6.4g、64.1mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、クロロギ酸アリル(7.7g、64.1mmol、1.0当量)を滴加した。反応物を室温で16時間撹拌した。完了後、混合物を撹拌しながら氷冷水で希釈し、ジクロロメタン(3×100mL)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル(60〜120メッシュ)を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製して、1−アリル−4−エチルピペリジン−1,4−ジカルボキシレート(10.0g、収率89%)を得た。m/z 241.13 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.96−5.81(m,1H),5.32−5.10(m,2H),4.53(dt,J=5.5,1.4Hz,2H),4.16−4.05(m,2H),4.06−3.93(m,2H),2.88(s,2H),2.42(tt,J=10.9、3.9Hz,1H),1.82(dd,J=24.3,8.9Hz,2H),1.60(dtd,J=13.6,11.2,4.3Hz,2H),1.21(t,J=7.1Hz,3H)ppm。
中間体5の合成は、以下の一般手順2の手順に従った。
テトラヒドロフラン(150mL)中アセトニトリル(3.9mL、70.5mmol、1.7当量)の冷却溶液(−78℃)に、n−BuLi(ヘキサン中2.5M、28.2mL、70.5mmol、1.7当量)を30分間にわたって滴加し、続いて、さらに30分間撹拌した。この混合物に1−アリル−4−エチルピペリジン−1,4−ジカルボキシレート(中間体4、10.0g、41.5mmol、1.0当量)を少量ずつに分けて添加し、反応混合物を−78℃で3時間維持した。反応物を飽和塩化アンモニウム水溶液の添加により反応停止処理し、生成物を酢酸エチルで抽出した。乾燥させた(硫酸ナトリウム)後、生成物を酢酸エチル/ヘキサン混合物中で撹拌し、その後、真空中で乾燥させて、アリル4−(2−シアノアセチル)ピペリジン−1−カルボキシレート(中間体5、9.8g、収率99%)を得た。m/z 236.12 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.95(ddd,J=22.7,10.8,5.6Hz,1H),5.27(ddd,J=13.8,11.7,1.4Hz,2H),4.60(d,J=5.5Hz,2H),4.22(s,2H),3.56(s,2H),2.92(s,2H),2.77(tt,J=11.3,3.7Hz,1H),1.92(d,J=11.4Hz,2H),1.68−1.54(m,2H)ppm。
化合物18の合成は、以下の一般手順3の手順に従った。
イソプロパノール(285mL)中アリル4−(2−シアノアセチル)ピペリジン−1−カルボキシレート(中間体5、9.5g、40.1mmol、1.0当量)の溶液に、ヒドラジン一水和物(2.0mL、40.1mmol、1.0当量)を滴加し、続いて、酢酸(2.88mL、48.1mmol、1.2当量)を添加した。反応物を室温で3〜4時間撹拌した。完了後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を、シリカゲル(60〜120メッシュ)を使用し、ジクロロメタン中10〜15%メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、アリル4−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物18、7.0g、収率70%)を得た。m/z 250.14。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.84−10.78(m,1H),5.94(ddd,J=22.4,10.5,5.2Hz,1H),5.28(d,J=17.3Hz,1H),5.19(d,J=6.0Hz,2H),4.53(d,J=5.1Hz,2H),4.01(d,J=13.1Hz,2H),3.17(s,2H),2.89(s,2H),2.62(dd,J=34.1,22.6Hz,1H),1.82(d,J=12.7Hz,2H),1.52−1.21(m,2H)ppm。
化合物19の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
MeOH(140mL)中アリル4−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物18、7.0g、28mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、酢酸(2.52mL、42mmol、1.5当量)、続いて、5−クロロチオフェン−2−カルバルデヒド(4.9g、33.6mmol、1.2当量)を少量ずつに分けて添加した。反応物を室温で4〜5時間撹拌した。その後、これにシアノ水素化ホウ素ナトリウム(3.5g、56mmol、2.0当量)を少量ずつに分けて45分間にわたって添加し、反応混合物をさらに4〜5時間撹拌した。反応完了後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣塊を撹拌しながら氷冷水中に注いだ。その後、生成物を酢酸エチルで抽出し、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、中性シリカゲルを使用し、ジクロロメタン中2〜4%メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、純粋なアリル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物19、4.5g、収率45%)を得た。m/z[M+H]+380.11 1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.41(s,1H),6.88(dd,J=30.0,3.7Hz,2H),5.94(ddd,J=22.4,10.5,5.2Hz,1H),5.68(d,J=6.2Hz,1H),5.28(dd,J=16.4,2.5Hz,2H),5.19(dd,J=10.5,1.5Hz,1H),4.60−4.46(m,2H),4.28(d,J=6.1Hz,2H),4.12(d,J=4.8Hz,1H),4.02(d,J=13.2Hz,2H),3.17(d,J=4.0Hz,2H),2.90(s,2H),2.69(t,J=11.6Hz,1H)ppm。
化合物20の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(10mL)中ピバル酸(0.644g、6.3mmol、1.2当量)の冷却溶液(0℃)に、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA、1.38mL、7.9mmol、1.5当量)、その後、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、1.52g、7.9mmol、1.5当量)を添加した。20分間撹拌した後、アリル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物19、2.0g、5.3mmol、1.0当量)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、0.142g、1.05mmol、0.2当量)を添加した。反応物を室温で16時間撹拌した。完了後、反応混合物を撹拌氷冷水で希釈し、その後、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、トリエチルアミンで事前洗浄したシリカゲル(60〜120メッシュ)を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、生成物をヘキサン中2〜5%酢酸エチルで溶出して、アリル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物20、1.5g、収率61%)を得た。m/z[M+H]+464.16 1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.69(t,J=6.2Hz,1H),6.97(dd,J=8.1,3.7Hz,2H),5.94(ddd,J=22.4,10.4,5.2Hz,1H),5.42(s,1H),5.28(dd,J=17.2,1.5Hz,1H),5.19(d,J=10.5Hz,1H),4.53(d,J=5.1Hz,2H),4.41(d,J=6.1Hz,2H),3.99(d,J=13.2Hz,2H),2.96(s,2H),2.69(t,J=11.0Hz,1H),1.86(d,J=11.1Hz,2H),1.56−1.44(m,2H),1.40(s,9H)ppm。
化合物21の合成は、以下の一般手順8aの手順に従った。
ジクロロメタン(10mL)中アリル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物20、0.1g、0.22mmol、1.0当量)及び塩化亜鉛(0.003g、21.6mmol、0.1当量)の溶液を、窒素流で15分間脱気した。その後、混合物にトリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(Pd2(dba)3、0.0098g、0.011mmol、0.05当量)を添加し、その後、溶液を窒素流で15分間再脱気した。その後、ポリ(メチルヒドロシロキサン)(PMHS、0.818g、0.43mmol、2.0当量)を室温で滴加し、反応混合物を室温で3〜4時間撹拌した。完了後、反応混合物を、Celite(登録商標)を通して濾過し、その後、溶媒を減圧下で蒸発させた。残渣にヘキサン、その後、アセトニトリルを添加し、次いで、混合物を10分間撹拌した。黒色の粒子を濾過し、アセトニトリル層とヘキサン層を分離した。アセトニトリル層をヘキサンで3回洗浄し、溶媒を蒸発させた。残渣を分取HPLCにより精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物21、0.0375g、収率32%)を得た。m/z[M+H]+380.14 1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.36(s,1H),7.72(t,J=6.2Hz,1H),6.97(s,2H),5.38(s,1H),4.42(d,J=6.1Hz,2H),3.21(d,J=12.6Hz,2H),2.88(dd,J=12.2,9.6Hz,2H),2.75(dd,J=12.9,9.4Hz,1H),1.98(d,J=11.2Hz,2H),1.76−1.61(m,2H),1.41(s,9H)ppm。
中間体6の合成は、以下の一般手順9の手順に従った。
THF(200mL)中ジイソプロピルアミン(8.74g、86.4mmol、1.6当量)の冷却溶液(−78℃)にn−BuLi(34.5mL、86.4mmol、1.6当量)を添加し、混合物を0℃で1時間撹拌した。混合物を−78℃に冷却し、これにtert−ブチル2−オキソピペリジン−1−カルボキシレート(10.0g、54.0mmol、1.0当量)を添加した。混合物を1時間撹拌し、クロロギ酸メチル(6.12g、64.8mmol、1.2当量)を添加した。反応混合物を室温に一晩加温させ、TLC及びLC−MSにより監視した。完了後、反応混合物を塩化アンモニウムで反応停止処理し、減圧下で蒸発させた。残渣を酢酸エチル(2×150mL)で抽出し、合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、シリカゲル(60〜120メッシュ)を使用し、n−ヘキサン中40%酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、1−(tert−ブチル)−3−メチル−2−オキソピペリジン−1,3−ジカルボキシレート(中間体6、9.2g、収率70%)を得た。m/z 202.13[M−56]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ3.70(s,1H),3.62−3.50(m,3H),2.10−1.89(m,2H),1.88−1.72(m,2H),1.42(s,9H)ppm。
中間体7の合成は、以下の一般手順1の手順に従った。
DMF(100mL)中1−(tert−ブチル)−3−メチル−2−オキソピペリジン−1,3−ジカルボキシレート(中間体6、10.0g、38.9mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、炭酸カリウム(27.0g、194mmol、5.0当量)を添加し、反応混合物を1時間撹拌した。混合物にヨウ化メチル(6.62g、46.7mmol、1.2当量)を添加した。反応混合物を室温にさせ、一晩撹拌した。完了後、反応混合物を氷冷水中に注ぎ、濾過して、生成物1−(tert−ブチル)−3−メチル−3−メチル−2−オキソピペリジン−1,3−ジカルボキシレート(中間体7、7.91g、収率75%)を得た。m/z 272.2[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ3.72−3.61(m,4H),3.56−3.45(m,1H),2.17(d,J=8.0Hz,1H),1.78(dd,J=17.4,12.4Hz,3H),1.45(s,9H),1.36(s,3H)ppm。
中間体8の合成は、以下の一般手順6bの手順に従った。
ジクロロメタン(50mL)中1−(tert−ブチル)−3−メチル−3−メチル−2−オキソピペリジン−1,3−ジカルボキシレート(中間体7、5.0g、18.4mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、トリフルオロ酢酸(2.5mL)を添加し、反応混合物を0℃で1時間撹拌した。反応混合物を室温に一晩加温させた。反応完了後、反応混合物を飽和NaHCO3で処理し、ジクロロメタン(2×50mL)で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で蒸発させて、メチル3−メチル−2−オキソピペリジン−3−カルボキシレート(中間体8、2.8g、収率89%)を得た。m/z 173.16[M+2]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.94(s,1H),3.63(s,3H),3.32−3.14(m,2H),2.58−2.37(m,2H),2.04−1.99(m,2H),1.26(s,3H)ppm。
中間体9の合成は、以下の一般手順2の手順に従った。
テトラヒドロフラン(30mL)中アセトニトリル(1.0g、24.3mmol、1.6当量)の冷却(−78℃)溶液に、n−BuLi(ヘキサン中2.5M、9.73mL、24.3mmol、1.6当量)を20分間にわたって滴加した。反応物を−78℃でさらに60分間撹拌した。混合物にメチル3−メチル−2−オキソピペリジン−3−カルボキシレート(中間体8、2.6g、15.2mmol、1.0当量)を少量ずつに分けて添加し、溶液を−78℃で3時間撹拌した。混合物を飽和塩化アンモニウム溶液で反応停止処理し、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル(60〜120のメッシュサイズ)を使用し、n−ヘキサン中70%酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、3−(3−メチル−2−オキソピペリジン−3−イル)−3−オキソプロパンニトリル(中間体9、2.41g、収率88%)を得た。m/z 181.11[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.89(s,1H),4.39−4.05(m,2H),3.27−3.06(m,2H),2.14(ddd,J=19.7,10.0,5.2Hz,1H),1.80−1.60(m,2H),1.60−1.43(m,1H),1.32(s,3H)ppm。
化合物22の合成は、以下の一般手順3の手順に従った。
イソプロパノール(10mL)及び酢酸(2.0mL)中3−(3−メチル−2−オキソピペリジン−3−イル)−3−オキソプロパンニトリル(中間体9、2.0g、11.0mmol、1.0当量)の溶液に、ヒドラジン一水和物(0.825g、16.5mmol、1.5当量)を滴加し、その後、反応物を60℃で3時間撹拌した。反応混合物をTLC及びLC−MSにより監視し、完了後、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル(60〜120メッシュ)を使用し、ジクロロメタン中0〜5%メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、3−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−2−オン(化合物22、1.16g、収率54%)を得た。m/z 195.19[M+1]+。
化合物23の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
メタノール(20mL)中3−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−2−オン(化合物22、1.0g、5.15mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、酢酸(0.3g、5.15mmol、1.0当量)を滴加した。混合物に5−クロロチオフェン−2−カルバルデヒド(0.91g、6.18mmol、1.2当量)を滴加し、混合物を45分間にわたって室温に加温した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(0.644g、10.3mmol、2.0当量)を少量ずつに分けて15分間にわたって添加し、反応混合物を室温で12時間撹拌した。反応完了後、混合物を減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル(60〜100メッシュ)を使用し、ジクロロメタン中0〜5%メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−2−オン(化合物23、0.686g、収率41%)を得た。m/z 325.25;1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.26(s,1H),7.50(s,1H),6.88(dd,J=31.3,3.6Hz,2H),5.66(s,1H),5.30(s,1H),4.29(d,J=6.2Hz,2H),3.14(s,2H),2.10(s,1H),1.65(s,3H),1.37(s,3H)ppm。
化合物24の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
窒素下のTHF(15mL)中ピバル酸(0.188g、1.84mmol、1.5当量)の冷却溶液(0℃)に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、0.352g、1.84mmol、1.5当量)、続いて、トリエチルアミン(TEA、0.373g、3.69mmol、3.0当量)を添加した。反応混合物を30分間撹拌し、その後、混合物にヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、0.033g、0.24mmol、0.2当量)、続いて、3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−2−オン(化合物23、0.4g、1.23mmol、1.0当量)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、完了後、反応混合物を水(50mL)中に注ぎ、酢酸エチル(3×25mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアセトニトリル−水を使用した分取HPLCにより精製して、生成物3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−2−オン(化合物24、0.21g、収率42%)を得た。m/z 408.95[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.62(t,J=6.2Hz,1H),7.53(s,1H),6.96(dd,J=12.1,3.7Hz,2H),5.42(s,1H),4.41(d,J=6.1Hz,2H),3.25−3.06(m,2H),2.29−2.17(m,1H),1.73(ddd,J=21.5,11.1,7.2Hz,3H),1.41(s,9H),1.37(s,3H)ppm。
化合物25の合成は、以下の一般手順5cの手順に従った。
窒素下のTHF(10mL)中3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパン酸(0.130g、1.1mmol、1.2当量)の冷却溶液(0℃)に、テトラフルオロホウ酸N,N,N’,N’−テトラメチル−O−(ベンゾトリアゾール−1−イル)ウロニウム(TBTU、0.320g、1.0mmol、1.1当量)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.280g、2.9mmol、3.0当量)を添加した。反応混合物を30分間撹拌し、これに3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−2−オン(化合物23、0.3g、0.9mmol、1.0当量)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、完了後、混合物を水(40mL)中に注ぎ、酢酸エチル(3×25mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアセトニトリル−水を使用した分取HPLCにより精製して、所望の生成物3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパノイル)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−2−オン(化合物25、0.0129g、収率3%)を得た。m/z 425.30[M+1]+;1H NMR(400MHz,CD3CN)δ7.48(s,1H),6.88(q,J=3.8Hz,2H),6.10(s,1H),5.44(s,1H),4.45(d,J=6.2Hz,2H),3.89(d,J=6.2Hz,2H),3.43(t,J=6.2Hz,1H),3.27(d,J=6.6Hz,2H),2.34−2.23(m,1H),1.91−1.70(m,3H),1.49−1.34(m,3H),1.30(s,6H)ppm。
化合物26の合成は、以下の一般手順5cの手順に従った。
窒素下のTHF(12mL)中3−メトキシ−2,2−ジメチルプロパン酸(0.134g、1.0mmol、1.1当量)の冷却溶液(0℃)に、テトラフルオロホウ酸N,N,N’,N’−テトラメチル−O−(ベンゾトリアゾール−1−イル)ウロニウム(TBTU、0.326g、1.0mmol、1.1当量)及びジイソプロピルエチルアミン(DIPEA、0.280g、2.8mmol、3.0当量)を添加した。反応混合物を30分間撹拌し、これに3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−2−オン(化合物23、0.3g、0.92mmol、1.0当量)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、完了後、混合物を水(30mL)中に注ぎ、酢酸エチル(3×25mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアセトニトリル−水を使用した分取HPLCにより精製して、3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(3−メトキシ−2,2−ジメチルプロパノイル)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−2−オン(化合物26、0.061g、収率15%)を得た。m/z 439.21[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.59(s,1H),7.54(s,1H),6.96(t,J=6.9Hz,2H),5.42(s,1H),4.41(d,J=6.0Hz,2H),3.83(d,J=5.1Hz,2H),3.13(s,3H),2.22(s,1H),1.70(s,3H),1.40−1.29(m,6H)ppm。
化合物27の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
窒素下のTHF(15mL)中2−メトキシ安息香酸(0.351g、2.3mmol、1.5当量)の冷却溶液(0℃)に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、0.441g、2.3mmol、1.5当量)、その後、トリエチルアミン(TEA、0.467g、4.6mmol、3.0当量)を添加した。反応混合物を30分間撹拌し、これにヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、0.041g、0.3mmol、0.2当量)、続いて、3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−yl)−3−メチルピペリジン−2−オン(化合物23、0.5g、1.53mmol、1.0当量)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、完了後、反応混合物を水(5mL)中に注ぎ、酢酸エチル(3×25mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアンモニア−水を使用した分取HPLCにより精製して、所望の生成物3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2−メトキシベンゾイル)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−2−オン(化合物27、0.23g、収率−32%)を得た。m/z 458.91[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.59(t,J=6.0Hz,1H),7.55−7.34(m,3H),7.12(d,J=8.3Hz,1H),7.01(dd,J=13.4,5.8Hz,2H),5.48(s,1H),4.48(d,J=6.0Hz,2H),3.73(s,3H),3.07(s,2H),2.15−1.94(m,2H),1.73−1.45(m,3H),1.25(s,3H)ppm。
化合物28の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
窒素下のTHF(15mL)中3−チオフェンカルボン酸(0.177g、1.38mmol、1.5当量)の冷却溶液(0℃)に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、0.264g、1.38mmol、1.5当量)、その後、トリエチルアミン(TEA、0.28g、2.77mmol、3.0当量)を添加した。反応混合物を30分間撹拌し、これにヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、0.024g、0.18mmol、0.2当量)、続いて、3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−2−オン(化合物23、0.3g、0.92mmol、1.0当量)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、完了後、反応混合物を水(30mL)中に注ぎ、酢酸エチル(3×25mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアンモニア−水を使用した分取HPLCにより精製して、所望の生成物3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(チオフェン−3−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−2−オン(化合物28、0.12g、収率30%)を得た。m/z 436.06[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.90(d,J=2.4Hz,1H),7.90−7.49(m,4H),6.98(s,2H),5.55(s,1H),4.49(d,J=6.2Hz,2H),3.18(s,2H),2.23(d,J=10.4Hz,1H),1.75(d,J=10.8Hz,3H),1.42(s,3H)ppm。
化合物29の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
窒素下のTHF(15mL)中4−メチルテトラヒドロ−2H−ピラン−4−カルボン酸(0.2g、1.4mmol、1.5当量)の冷却溶液(0℃)に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、0.265g、1.4mmol、1.5当量)、その後、トリエチルアミン(TEA、0.283g、2.8mmol、3.0当量)を添加した。反応混合物を30分間撹拌し、これにヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、0.025g、0.19mmol、0.2当量)及び3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−2−オン(化合物23、0.3g、0.92mmol、1.0当量)を添加した。反応物を2日間撹拌し、LC−MSにより監視した。完了後、反応混合物を水(40mL)中に注ぎ、酢酸エチル(3×25mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアセトニトリル−水を使用した分取HPLCにより精製して、所望の生成物3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(1−メチルシクロヘキサン−1−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピペリジン−2−オン(化合物29、0.052g、収率13%)を得た。m/z 450.96[M+2]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.65(t,J=6.3Hz,1H),7.53(s,1H),6.96(dd,J=11.0,3.7Hz,2H),5.43(s,1H),4.42(d,J=6.1Hz,2H),3.81−3.60(m,2H),3.45(dd,J=11.8,8.8Hz,2H),3.14(s,2H),2.34(s,2H),2.18(d,J=9.3Hz,1H),1.70(d,J=8.5Hz,5H),1.51(s,3H),1.36(s,3H)ppm。
中間体10の合成は、以下の一般手順9の手順に従った。
無水THF(200mL)中ジイソプロピルアミン(8.74g、86.4mmol、1.6当量)の冷却溶液(−78℃)に、n−BuLi(34.5mL、86.4mmol、1.6当量)を添加し、続いて、0℃で1時間撹拌した。混合物を−78℃に再冷却し、これにtert−ブチル2−オキソピロリジン−1−カルボキシレート(10.0g、54mmol、1.0当量)を少量ずつに分けて添加し、1時間撹拌し、これにクロロギ酸メチル(6.12g、64.8mmol、1.2当量)を添加した。反応混合物を室温にさせ、一晩撹拌した。これをTLC及びLC−MSにより監視した。完了後、反応混合物を塩化アンモニウムで反応停止処理し、蒸発させて残渣にし、これを酢酸エチル(2×150mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、シリカゲル(60〜120メッシュ)を使用し、n−ヘキサン中40%酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、1−(tert−ブチル)−3−メチル−2−オキソピロリジン−1,3−ジカルボキシレート(中間体10、9.46g、収率45%)を得た。m/z 188.17[M−56]+;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.90(ddd,J=10.8,8.5,5.4Hz,1H),3.81(s,3H),3.73(ddd,J=10.8,8.1,6.6Hz,1H),3.62−3.52(m,1H),2.50−2.34(m,1H),2.25(dddd,J=13.3,9.1,8.1,5.4Hz,1H),1.55(s,9H)ppm。
中間体11の合成は、以下の一般手順1の手順に従った。
DMF(100mL)中1−(tert−ブチル)−3−メチル−2−オキソピロリジン−1,3−ジカルボキシレート(中間体10、10.0g、41.1mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、炭酸カリウム(28.4g、205.5mmol、5.0当量)を添加した。0℃で1時間撹拌した後、ヨウ化メチル(7.02g、49.3mmol、1.2当量)を添加した。反応混合物を室温にさせ、一晩撹拌した。これをTLC及びLC−MSにより監視した。完了後、反応混合物を氷冷却水中に注ぎ、濾過して、1−(tert−ブチル)−3−メチル−3−メチル−2−オキソピロリジン−1,3−ジカルボキシレート(中間体11、7.3g、収率69%)を得た。m/z 202.13[M−56]+ 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.78(d,J=6.0Hz,5H),2.54(ddd,J=13.0,7.4,4.3Hz,1H),1.91(dt,J=13.1,8.2Hz,1H),1.54(d,J=11.7Hz,9H),1.49(d,J=11.6Hz,3H)ppm。
中間体12の合成は、以下の一般手順6bの手順に従った。
ジクロロメタン(50mL)中1−(tert−ブチル)−3−メチル−3−メチル−2−オキソピペリジン−1,3−ジカルボキシレート(中間体11、5.0g、19.4mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、トリフルオロ酢酸(2.5mL)を添加した。1時間撹拌した後、混合物を一晩かけて室温にさせた。これをTLC及びLC−MSにより監視した。完了後、反応混合物を飽和NaHCO3溶液で処理し、ジクロロメタン(2×50mL)で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、メチル3−メチル−2−オキソピロリジン−3−カルボキシレート(中間体12、2.26g、収率74%)を得た。m/z 158.04[M+1]+ 1H NMR(400MHz,DMSO)δ1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.94(s,1H),3.63(s,3H),3.32−3.14(m,2H),2.58−2.37(m,1H),2.04−1.86(m,1H),1.26(s,3H)ppm。
中間体13の合成は、以下の一般手順2の手順に従った。
無水テトラヒドロフラン(30mL)中アセトニトリル(1.2g、26.5mmol、1.6当量)の冷却溶液(−78℃)に、n−BuLi(ヘキサン中2.5M、10.6mL、26.5mmol、1.6当量)を20分間にわたって滴加した。1時間撹拌した後、メチル3−メチル−2−オキソピロリジン−3−カルボキシレート(中間体12、2.6g、16.5mmol、1.0当量)を少量ずつに分けて添加し、反応混合物を−78℃で3時間撹拌した。反応物を飽和塩化アンモニウム溶液で反応停止処理し、生成物を酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル(60〜120のメッシュサイズ)を使用し、n−ヘキサン中70%酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物3−(3−メチル−2−オキソピロリジン−3−イル)−3−オキソプロパンニトリル(中間体13、2.17g、収率79%)を得た。m/z 167.1[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.09(s,1H),4.27(q,J=20.3Hz,2H),3.35(s,3H),3.20(dd,J=13.0,5.6Hz,2H),1.81(ddd,J=13.1,7.7,5.6Hz,1H),1.35−1.20(m,1H)ppm。
化合物30の合成は、以下の一般手順3の手順に従った。
イソプロパノール(10mL)及び酢酸(2.0mL)中3−(3−メチル−2−オキソピロリジン−3−イル)−3−オキソプロパンニトリル(中間体13、0.5g、3.0mmol、1.0当量)の溶液に、ヒドラジン一水和物(0.25g、4.5mmol、1.5当量)を滴加した。反応物を60℃で3時間撹拌し、TLC及びLC−MSにより監視した。完了後、反応混合物を減圧下で濃縮して残渣を得て、これを、シリカゲル(60〜120メッシュ)を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製した。生成物をジクロロメタン中0〜5%メタノールで溶出して、3−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピロリジン−2−オン(化合物30、0.435g、収率80%)を得た。m/z 181.19[M+1]+。
化合物31の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
メタノール(20mL)中3−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピロリジン−2−オン(化合物30、1.0g、5.5mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、酢酸(0.3g、5.5mmol、1.0当量)を滴加し、続いて、5−クロロチオフェン−2−カルバルデヒド(0.92g、6.6mmol、1.2当量)を添加した。反応物を室温で30〜45分間撹拌した。その後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(0.65g、11.0mmol、2.0当量)を少量ずつに分けて15分間にわたって添加した。反応物を室温で12時間撹拌した。反応完了後、反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル(60〜100メッシュを使用し、ジクロロメタン中0〜5%メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピロリジン−2−オン(化合物31、0.21g、収率12%)を得た。m/z 311.3[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.43(s,1H),7.70(s,1H),6.89(dd,J=29.1,3.5Hz,2H),5.77(s,1H),5.35(s,1H),4.29(s,2H),3.20(t,J=6.5Hz,2H),2.33(s,1H),2.01(d,J=11.9Hz,1H),1.32(s,3H)ppm。
化合物32の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(15mL)中ピバル酸(0.147g、1.45mmol、1.5当量)の冷却溶液(0℃)に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、0.276g、1.45mmol、1.5当量)、続いて、トリエチルアミン(TEA、0.4mL、2.89mmol、3.0当量)を添加した。30分間撹拌した後、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、0.026g、0.2mmol、0.2当量)及び3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピロリジン−2−オン(化合物31、0.3g、0.96mmol、1.0当量)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、完了後、反応混合物を水(50mL)中に注ぎ、酢酸エチル(3×25mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアセトニトリル−水を使用した分取HPLCにより精製して、3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピロリジン−2−オン(化合物32、0.05g、収率13%)を得た。m/z 395.7[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.74(s,1H),7.66(t,J=6.2Hz,1H),6.97(s,2H),5.43(s,1H),4.43(d,J=6.2Hz,2H),3.30−3.18(m,2H),2.54(s,1H),2.00(dt,J=12.6、7.7Hz,1H),1.41(s,9H),1.34(s,3H)ppm。
化合物33の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(15mL)中2−メトキシ安息香酸(0.219g、1.45mmol、1.5当量)の冷却溶液(0℃)に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、0.276g、1.45mmol、1.5当量)、続いて、トリエチルアミン(TEA、0.4mL、2.89mmol、3.0当量)を添加した。30分間撹拌した後、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、0.026g、0.19mmol、0.2当量)及び3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピロリジン−2−オン(化合物31、0.3g、0.96mmol、1.0当量)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、完了後、混合物を水(40mL)中に注ぎ、酢酸エチル(3×25mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアセトニトリル−水を使用した分取HPLCにより精製して、3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2−メトキシベンゾイル)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピロリジン−2−オン(化合物33、0.05g、収率12%)を得た。m/z 447.18;1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.70−7.58(m,2H),7.55−7.44(m,1H),7.38(dd,J=7.5,1.7Hz,1H),7.13(d,J=8.2Hz,1H),7.09−6.95(m,3H),5.51(s,1H),4.49(d,J=6.2Hz,2H),3.74(s,3H),3.18−3.00(m,2H),2.35(ddd,J=12.0,7.1,4.7Hz,1H),1.84(dt,J=12.5,7.5Hz,1H),1.27−1.18(m,3H)ppm。
化合物34の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(12mL)中チオフェン−3−カルボン酸(0.123g、0.96mmol、1.5当量)の冷溶液(0℃)に、窒素下で、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、0.187g、0.96mmol、1.5当量)、その後、トリエチルアミン(TEA、0.26mL、1.93mmol、3.0当量)を添加した。30分間撹拌した後、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、0.0173g、0.138mmol、0.2当量)、その後、3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピロリジン−2−オン(化合物31、0.2g、0.643mmol、1.0当量)を添加した。反応物を2日間撹拌し、LC−MSにより監視した。完了後、反応混合物を水(40mL)中に注ぎ、酢酸エチル(3×25mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアセトニトリル−水を使用した分取HPLCにより精製して、3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(チオフェン−3−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピロリジン−2−オン(化合物34、0.05g、収率19%)を得た。m/z 421.01[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.90(dd,J=3.0,1.1Hz,1H),7.86−7.73(m,3H),7.66(dd,J=5.1,3.0Hz,1H),6.98(q,J=3.8Hz,2H),5.57(s,1H),4.50(d,J=6.2Hz,2H),3.32−3.17(m,2H),2.54−2.60(m,1H),2.12−1.96(m,2H),1.38(s,3H)ppm。
化合物35の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(15mL)中4−メチルテトラヒドロ−2H−ピラン−4−カルボン酸(0.184g、1.45mmol、1.5当量)の冷溶液(0℃)に、窒素下で、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、0.276g、1.45mmol、1.5当量)、続いて、トリエチルアミン(TEA、0.3g、2.9mmol、3.0当量)を添加した。30分間撹拌した後、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、0.026g、0.19mmol、0.2当量)、続いて、3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピロリジン−2−オン(化合物31、0.3g、0.96mmol、1.0当量)を添加した。反応物を2日間撹拌し、LC−MSにより監視し、完了後、反応混合物を水(40mL)中に注ぎ、酢酸エチル(3×25mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアセトニトリル−水を使用した分取HPLCにより精製して、3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(4−メチルテトラヒドロ−2H−ピラン−4−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)−3−メチルピロリジン−2−オン(化合物35、0.05g、収率12%)を得た。m/z 437.39[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.71(dd,J=15.0,8.8Hz,2H),6.96(d,J=4.3Hz,2H),5.44(s,1H),4.44(d,J=6.2Hz,2H),3.69(d,J=11.6Hz,2H),3.48(t,J=8.6Hz,2H),3.24(dd,J=9.2,5.0Hz,2H),2.35(d,J=6.8Hz,3H),1.99(dt,J=12.5,7.5Hz,1H),1.69(s,2H),1.52(s,3H),1.33(s,3H)ppm。
中間体14の合成は、以下の一般手順10の手順に従った。
室温の水(200mL)中(+/−)−ピペラジン−2−カルボン酸二塩酸塩(25g、123.2mmol)の撹拌溶液に、水酸化ナトリウム水溶液(2.5M、200mL)、続いて、硫酸銅五水和物(CuSO4.5H2O溶液、15.88g、100mLのH2O中61.5mmol)を滴加した。混合物を0℃に冷却し、これに固体重炭酸ナトリウム(12.5g、148.8mmol)を添加した。0℃で15分間撹拌した後、1,4−ジオキサン中CBZ−Clの溶液を添加した。反応混合物を室温で16時間撹拌した(注記:pHを、反応を通して7超で維持した)。揮発物を減圧下で蒸発させて、青色の銅錯体固体として4−(ベンジルオキシカルボニル)ピペラジン−2−カルボン酸(中間体14、45g、粗物)を得た。これを精製することなく次のステップに考慮した。TLC:ジクロロメタン中5%MeOH、Rf:0.4。
中間体15の合成は、以下の一般手順11の手順に従った。
水(200mL)中4−(ベンジルオキシカルボニル)ピペラジン−2−カルボン酸−銅錯体(中間体15、40g、122.6mmol)の撹拌溶液に、エチレンジアミン四酢酸(EDTA、20g、200mLの水中61.4mmol)を添加し、混合物を100℃に16時間加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮して、青色の固体として粗物4−(ベンジルオキシカルボニル)ピペラジン−2−カルボン酸(中間体15、30g)を得て、これをさらに精製することなく次のステップに進めた。TLC系:ジクロロメタン中5%MeOH、Rf:0.2。
中間体16の合成は、以下の一般手順12の手順に従った。
水(10体積、480mL)中4−(ベンジルオキシカルボニル)ピペラジン−2−カルボン酸(中間体15、48g、181.8mmol)の冷却溶液(0℃)に、固体NaHCO3(45.8g、545.4mmol)、続いて、二炭酸ジ−tert−ブチル((Boc)2O、109mL、490.9mmol)を添加した。反応混合物を室温で17時間撹拌した。室温に冷却した後、これをEtOAc(4×100mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、50%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、灰色がかった白色の固体として4−(ベンジルオキシカルボニル)−1−(tert−ブトキシカルボニル)ピペラジン−2−カルボン酸(中間体16、25g、収率55%)を得た。TLC:5%メタノール−ジクロロメタン、Rf:0.3。
中間体17の合成は、以下の一般手順13の手順に従った。
乾燥DMF(200mL)中4−(ベンジルオキシカルボニル)−1−(tert−ブトキシカルボニル)ピペラジン−2−カルボン酸(中間体16、20g、54.9mmol)の冷却溶液(0℃)に、炭酸セシウム(Cs2CO3、35.8g、109.9mmol)、続いて、ヨウ化メチル(10.26mL、164.83mmol)を添加した。反応混合物を室温で4時間撹拌した。0℃に冷却した後、混合物を氷冷水(90mL)で反応停止処理し、EtOAc(2×100mL)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、20%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、灰色がかった白色の固体として4−ベンジル−1−tert−ブチル−2−メチルピペラジン−1,2,4−トリカルボキシレート(中間体17、25g、収率55%)を得た。TLC:ヘキサン中30%酢酸エチル。Rf:0.5。
中間体18の合成は、以下の一般手順14の手順に従った。
鋼容器内のMeOH(100mL)中4−ベンジル−1−tert−ブチル−2−メチルピペラジン−1,2,4−トリカルボキシレート(中間体17、10g、26.5mmol)の撹拌溶液に、10%Pd/C(30w/w%、3.0g)を添加し、混合物を50psiの水素圧力下で、室温で5時間撹拌した。反応混合物を、Celiteパッドを通して濾過し、揮発物を減圧下で濃縮して、薄黄色の液体として1−tert−ブチル2−メチルピペラジン−1,2−ジカルボキシレート(中間体18、5.6g、収率88%)を得た。TLC:5%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.3。
中間体19の合成は、以下の一般手順15の手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(70mL)中1−tert−ブチル2−メチルピペラジン−1,2−ジカルボキシレート(中間体18、3.5g、14.3mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、5mL、35.9mmol)、続いて、モルホリン−4−塩化カルボニル(3.35mL、28.7mmol)を添加した。反応混合物を室温で3時間撹拌した。混合物に氷冷水(20mL)を添加し、その後、これをEtOAc(2×50mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗残渣を、30%EtOAc/n−ヘキサンを使用したフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、灰色がかった白色の固体として1−tert−ブチル2−メチル−4−(モルホリン−4−カルボニル)ピペラジン−1,2−ジカルボキシレート(中間体19、3.6g、収率72%)を得た。TLC:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.5。
中間体20の合成は、以下の一般手順6cの手順に従った。
1,4−ジオキサン(10mL)中1−tert−ブチル2−メチル−4−(モルホリン−4−カルボニル)ピペラジン−1,2−ジカルボキシレート(中間体19、1.0g、2.8mmol)の冷却溶液(0℃)に、HCl(ジオキサン中4M、10mL)を添加し、その後、混合物を室温で5時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、ジエチルエーテルで粉砕して、灰色がかった白色の固体としてメチル4−(モルホリン−4−カルボニル)ピペラジン−2−カルボキシレート塩酸塩(中間体20、800mg、収率86%)を得た。TLC:5%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.3。
中間体21の合成は、以下の一般手順7の手順に従った。
0℃のH2O(300mL)中メチル4−(モルホリン−4−カルボニル)ピペラジン−2−カルボキシレート(中間体20、8.2g、28.0mmol)の冷却(0℃)撹拌溶液に、固体NaHCO3(7.05g、83.2mmol)、続いて、THF(50mL)中クロロギ酸アリル(8mL、30.8mmol)を添加した。室温で16時間撹拌した後、氷冷水(100mL)を反応混合物に添加し、EtOAc(2×100mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、40〜50%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、淡黄色の液体として1−アリル−2−メチル4−(モルホリン−4−カルボニル)ピペラジン−1,2−ジカルボキシレート(中間体21、7.2g、収率84%)を得た。TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン、Rf:0.6。
中間体22の合成は、以下の一般手順2の手順に従った。
乾燥THF(120mL)中アセトニトリル(4.04mL、77mmol)の冷却溶液(−78℃)に、n−BuLi(ヘキサン中2.5M、26mL、65mmol)を添加した。−78℃で30分間撹拌した後、混合物に、乾燥THF(30mL)中1−アリル−2−メチル4−(モルホリン−4−カルボニル)ピペラジン−1,2−ジカルボキシレート(中間体21、7.5g、22mmol)の溶液を添加した。混合物を−78℃でさらに30分間撹拌した。反応混合物を飽和NH4Cl溶液(80mL)で反応停止処理し、EtOAc(2×120mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、50%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色の液体としてアリル2−(2−シアノアセチル)−4−(モルホリン−4−カルボニル)ピペラジン−1−カルボキシレート(中間体22、6.5g、収率85%)を得た。TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン、Rf:0.5。
化合物36の合成は、以下の一般手順3の手順に従った。
エタノール(65mL)中アリル2−(2−シアノアセチル)−4−(モルホリン−4−カルボニル)ピペラジン−1−カルボキシレート(中間体22、6.5g、18.6mmol)の溶液に、N2H4(1.1mL、22.3mmol)を添加し、反応混合物を80℃に5時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、揮発物を蒸発させ、結果として生じた残渣を、3%メタノール−ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、淡黄色の半固体としてアリル2−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)−4−(モルホリン−4−カルボニル)ピペラジン−1−カルボキシレート(化合物36、4.5g、収率67%)を得た。TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン、Rf:0.3、m/z 365.28[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.2(s,1H),5.9(m,1H),5.0−5.3(m,4H),4.8(br s,2H),4.6(br s,2H),3.85(m,2H),3.4−3.6(m,4H),3.0−3.2(m,6H),2.8(m,1H)ppm。
化合物37の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
乾燥MeOH(70mL)中アリル2−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)−4−(モルホリン−4−カルボニル)ピペラジン−1−カルボキシレート(化合物36、3.5g、9.6mmol)の冷却溶液(0℃)に、5−クロロチオフェン−2−カルバルデヒド(2.1mL、19.2mmol)、AcOH(0.2mL)、及び4Å粉末分子篩を添加した。反応混合物を室温で1時間撹拌した(イミンの形成がTLCにより極性のより低いスポットとして観察された)。反応混合物に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(NaCNBH30.73g、11.5mmol)を少量ずつに分けて添加し、混合物を室温で1時間撹拌した。その後、混合物に氷冷水(50mL)を添加し、次いで、Celiteパッドを通して濾過し、濾液をEtOAc(4×100mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、3%MeOH−DCMで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色の液体として所望の生成物(1.95g、収率41%)を得て、これを次のステップで使用した。試料(120mg)を分取HPLCによりさらに精製して、ガム状液体としてアリル2−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−4−(モルホリン−4−カルボニル)ピペラジン−1−カルボキシレート(化合物37、55mg)を得た。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ=11.55−11.41(br s,1H),6.96−6.77(m,2H),6.15−5.71(m,2H),5.41−4.97(m,4H),4.56(br s,2H),4.27(br s,2H),3.83(br t,J=12.5Hz,2H),3.67−3.32(m,5H),3.25−2.85(m,6H),2.81−2.64(m,1H)、TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン、Rf:0.5。
化合物38の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(20mL)中アリル2−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−4−(モルホリン−4−カルボニル)ピペラジン−1−カルボキシレート(化合物37、1.0g、2.0mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.4mL、3.0mmol)、続いて、塩化トリメチルアセチル(0.23mL、1.8mmol)を添加した。混合物を室温で4時間撹拌し、その後、水(25mL)で反応停止処理した。これをジクロロメタン(3×40mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、20%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、淡黄色の固体としてアリル2−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)−4−(モルホリン−4−カルボニル)ピペラジン−1−カルボキシレート(化合物38、600mg、収率69%)を得た。1H NMR(400MHz,DMSO−d6 )δ=7.71(t,J=6.1Hz,1H),6.97−6.91(m,2H),5.87(br s,1H),5.37(s,1H),5.14(br s,1H),5.05(br d,J=2.0Hz,1H),4.53(br s,2H),4.40(d,J=6.4Hz,2H),3.94−3.79(m,2H),3.60−3.36(m,6H),3.22−3.15(m,1H),3.19(br dd,J=4.4,13.2Hz,2H),2.93−2.78(m,3H),1.35(s,9H)ppm、TLC系:ヘキサン中30%酢酸エチル、Rf:0.5。
化合物39の合成は、以下の一般手順8bの手順に従った。
ジクロロメタン(10mL)中アリル2−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)−4−(モルホリン−4−カルボニル)ピペラジン−1−カルボキシレート(化合物38、500mg、0.86mmol)の撹拌溶液を、アルゴン流で15分間脱気し、その後、この溶液に、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(Pd(PPh3)4、100mg、0.087mmol)、続いて、フェニルシラン(PhSiH3、0.64mL、5.2mmol)を添加した。反応混合物を室温で45分間撹拌し、その後、Celiteパッドのパッドを通して濾過し、蒸発させた。粗残渣を、4%MeOH−ジクロロメタンで溶出するCombiFlash(登録商標)クロマトグラフィーにより精製して、灰色がかった白色の固体として1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(4−(モルホリン−4−カルボニル)ピペラジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物39、130mg、収率31%)を得た。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ=7.72(t,J=6.4Hz,1H),6.98−6.94(m,2H),5.47(s,1H),4.42(d,J=6.4Hz,2H),3.67(br d,J=12.7Hz,1H),3.61−3.53(m,5H),3.43(br d,J=11.7Hz,1H),3.11(dd,J=3.7,5.1Hz,4H),2.92−2.63(m,5H),1.41(s,9H)ppm、TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン、Rf:0.5。
化合物40の合成は、以下の一般手順6cの手順に従った。
1,4−ジオキサン(10mL)中1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(4−(モルホリン−4−カルボニル)ピペラジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物39、100mg、0.2mmol)の冷却(0℃)溶液に、HCl(ジオキサン中10mL)を添加し、その後、反応物を室温で5時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、ジエチルエーテルで粉砕して、100mgの半純粋な試料を得た。これを分取HPLCにより精製して、灰色がかった白色の固体として(3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペラジン−1−イル)(モルホリノ)メタノン塩酸塩(化合物40、28mg、収率34%)を得た。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ=12.02(br s,1H),11.61(br s,1H),9.06(s,2H),6.92(br d,J=13.7Hz,2H),6.39(br s,1H),5.81(br s,1H),5.53(br s,1H),4.32(br d,J=5.9Hz,2H),4.17(br s,1H),3.95−3.40(m,6H),3.27−2.57(m,8H)ppm、TLC系:10%メタノール−ジクロロメタン、Rf:0.5。
化合物41の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(20mL)中アリル2−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−4−(モルホリン−4−カルボニル)ピペラジン−1−カルボキシレート(化合物40、2.0g、4mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、1.1mL、8.1mmol)、続いて、1,3−チアゾール−4−塩化カルボニル(896mg、1.8mmol)を添加した。室温で4時間撹拌した後、反応混合物を水(25mL)と合わせ、ジクロロメタン(3×40mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、20%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色の液体としてアリル2−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−(チアゾール−4−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)−4−(モルホリン−4−カルボニル)ピペラジン−1−カルボキシレート(化合物41、600mg、収率69%)を得た。この試料の300mgを分取HPLCによりさらに精製して、薄黄色の固体として純粋な化合物を得た。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ=9.22(d,J=2.0Hz,1H),8.98(d,J=2.0Hz,1H),7.87(br t,J=6.1Hz,1H),6.96(s,2H),5.88(br s,1H),5.48(s,1H),5.12(br d,J=2.4Hz,3H),4.59−4.48(m,4H),4.02(br d,J=13.7Hz,1H),3.84(br d,J=12.7Hz,1H),3.56(br d,J=13.2Hz,1H),3.39(br d,J=2.9Hz,2H),3.33(br s,2H),3.23−3.18(m,2H),3.06−2.99(m,2H),2.90−2.81(m,3H)ppm、TLC系:10%メタノール−ジクロロメタン、Rf:0.5。
中間体23の合成は、以下の一般手順16の手順に従った。
ジエチルエーテル(Et2O、250mL)中ベンジル4−オキソピペリジン−1−カルボキシレート(20g、8.6mmol)の冷溶液(−78℃)に、ジアゾ酢酸エチル(11.6mL、11.1mmol)、続いて、三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート(BF3OEt2、10.7mL、8.6mmol)を添加した。反応混合物を−78℃で1時間撹拌させ、その後、室温で1時間撹拌し、その後、飽和K2CO3で反応停止処理した。溶液を窒素発生が停止するまで撹拌し、その後、EtOAc(300mL)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、黄色の液体として1−ベンジル−4−エチル5−オキソアゼパン−1,4−ジカルボキシレート(中間体23、26g)を得た。粗化合物をさらに精製することなく次のステップに進めた。MS(ESI):m/z 320.1[M+H]+、TLC系:ヘキサン中20%酢酸エチル。Rf:0.3。
中間体24の合成は、以下の一般手順17の手順に従った。
EtOH(250mL)中1−ベンジル−4−エチル5−オキソアゼパン−l,4−ジカルボキシレート(中間体23、26g、81.5mmol)の冷溶液(0℃)に、水素化ホウ素ナトリウム(NaBH4、3g、81.5mmol)を少量ずつに分けて添加した。10分後、反応物を室温に上昇させ、さらに30分間撹拌した。反応物を濃縮し、EtOAc(350mL)で希釈し、水(2×150mL)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、ヘキサン中20%EtOAcで溶出するシリカゲル(100〜200メッシュ)により精製して、無色の油として1−ベンジル−4−エチル5−ヒドロキシアゼパン−1,4−ジカルボキシレート(中間体24、12g、46%)を得た。MS(ESI):m/z 321.96([M+H]+)、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.3。
中間体25の合成は、以下の一般手順18の手順に従った。
一般手順18
THF(270mL)中1−ベンジル−4−エチル5−ヒドロキシアゼパン−l,4−ジカルボキシレート(中間体24、12g、37.3mmol)の撹拌溶液に、塩化メタンスルホニル(MsCl、7.1mL、93.4mmol)及びトリエチルアミン(TEA、15.5mL、112.1mmol)を2回に分けて添加し、混合物を12時間撹拌した。その後、混合物を減圧下で濃縮し、EtOAc(300mL)で希釈し、飽和NaHCO3水溶液(2×100mL)で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をTHF(270mL)中に溶解し、これに1,8−ジアザビシクロウンデス−7−エン(DBU、8.4mL、56.3mmol)を添加し、結果として生じた混合物を80℃で1時間加熱した。その後、反応物を濃縮し、EtOAc(300mL)で希釈し、飽和NaHCO3水溶液(3×80mL)及び水(200mL)で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、ヘキサン中20%EtOAcで溶出するシリカゲルクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、無色の油として1−ベンジル−4−エチル2,3−ジヒドロ−1H−アゼピン−1,4(6H,7H)−ジカルボキシレート(中間体25、10.5g、92%)を得た。MS(ESI):m/z 304([M+H]+)、TLC系:ヘキサン中20%酢酸エチル。Rf:0.9。
中間体26の合成は、以下の一般手順19の手順に従った。
エタノール及び酢酸エチル(1:1、200mL)中1−ベンジル−4−エチル2,3−ジヒドロ−1H−アゼピン−1,4(6H,7H)−ジカルボキシレート(中間体25、10.5g、34.6mmol)及び20%Pd/C(2.1g)の懸濁液を、80psiの水素雰囲気下で12時間撹拌した。その後、混合物をCeliteパッドで濾過し、Celiteベッドをメタノール(2×50mL)で洗浄した。合わせた有機層を濃縮して、黄色の油として粗エチルアゼパン−4−カルボキシレート(中間体26、5.6g、94%)を得た。TLC系:ジクロロメタン中10%MeOH。Rf:0.1。
中間体27の合成は、以下の一般手順7の手順に従った。
ジクロロメタン(100mL)中エチルアゼパン−4−カルボキシレート(中間体26、5.6g、32.9mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、13.7mL、98.8mmol)、続いて、クロロギ酸アリル(7mL、65.8mmol)を添加し、その後、混合物を室温で12時間撹拌した。反応混合物を水(100mL)で反応停止処理し、ジクロロメタン(2×200mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、20%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、無色の液体として1−アリル−4−エチルアゼパン−1,4−ジカルボキシレート(中間体27、6.5g、77%)を得た。MS(ESI):m/z 256.59[M+H]+、TLC系:ヘキサン中20%酢酸エチル。Rf:0.7。
中間体28の合成は、以下の一般手順2の手順に従った。
乾燥THF(30mL)中アセトニトリル(1.2mL、23.5mmol)の冷却溶液(−78℃)に、THF中n−BuLi(2.5M、9.4mL、23.5mmol)を添加した。30分間撹拌した後、乾燥THF(10mL)中1−アリル−4−エチルアゼパン−1,4−ジカルボキシレート(中間体27、5g、19.6mmol)の溶液を添加した。反応混合物を−78℃で1時間撹拌し、その後、飽和NH4Cl溶液(10mL)で反応停止処理し、EtOAc(2×120mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、50%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色の液体としてアリル4−(2−シアノアセチル)アゼパン−1−カルボキシレート(中間体28、3.1g、63%)を得た。MS(ESI):m/z 251.55[M+H]+、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.5。
化合物42の合成は、以下の一般手順3の手順に従った。
エタノール(30mL)中アリル4−(2−シアノアセチル)アゼパン−1−カルボキシレート(中間体28、3.1g、12.4mmol)の撹拌溶液に、ヒドラジン水和物(N2H4.H2O、0.74mL、14.8mmol)を添加し、その後、反応混合物を80℃に5時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、揮発物を蒸発させた。残渣を、5%MeOH−ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、橙色の液体としてアリル4−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)アゼパン−1−カルボキシレート(化合物42、2.8g、87%)を得た。MS(ESI):m/z 265.13[M+H]+、TLC系:10%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.3。
化合物43の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
乾燥MeOH(28mL)中アリル4−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)アゼパン−1−カルボキシレート(化合物42、2.8g、10.6mmol)の冷溶液(0℃)に、5−クロロチオフェン−2−カルバルデヒド(1.2mL、12.6mmol)、AcOH(0.6mL)、その後、4Å粉末分子篩(1.6g)を添加した。反応混合物を室温で1時間撹拌した(イミンの形成がTLCにより極性のより低いスポットとして観察された)。その後、これにシアノ水素化ホウ素ナトリウム(NaCNBH3、0.8g、12.6mmol)を0℃で少量ずつに分けて添加し、撹拌を室温で2時間続けた。反応混合物を氷冷水(50mL)で反応停止処理し、Celiteパッドを通して濾過し、濾液をEtOAc(4×100mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、60%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色の液体として所望の生成物(2.5g、60%)を得た。半純粋な試料の一部(200mg)を分取HPLCによりさらに精製して、ガムとしてアリル4−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼパン−1−カルボキシレート(化合物43、110mg)を得た。MS(ESI):m/z 395.05[M+H]+。1H NMR(300MHz,DMSO−d6):δ11.23(s,1H),6.89−6.91(d,J=6.0Hz,1H),6.83(d,J=3.0Hz,1H),5.89−5.91(m,1H),5.62(brs,1H),5.16−5.29(m,3H),4.54(d,J=6.0Hz,2H),4.27(d,J=6.1Hz,2H),3.23−3.61(m,4H),2.63(t,J=9.0Hz,1H),1.83−1.97(m,4H),1.70−1.97(m,2H)ppm、TLC系:酢酸エチル。Rf:0.5。
化合物44の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(100mL)中アリル4−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼパン−1−カルボキシレート(化合物43、2.5g、6.3mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、1.3mL、9.5mmol)、続いて、塩化トリメチルアセチル(0.7mL、5.7mmol)を添加した。室温で4時間撹拌した後、反応混合物を水(25mL)で希釈し、ジクロロメタン(3×40mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、10%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、無色の液体として所望の生成物アリル4−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)アゼパン−1−カルボキシレート(化合物44、1.8g、60%)を得た。MS(ESI):m/z 479.26[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6):δ7.63(t,J= 6.0Hz,1H),6.95(s,2H),5.88−5.96(m,1H),5.37(d,J=3.2Hz,1H),5.14−5.28(m,2H),4.53(d,J=5.2Hz,2H),4.40(d,J=6.0Hz,2H),3.28−3.61(m,4H),2.64−2.61(m,1H),1.84−1.88(m,4H),1.54−1.72(m,2H),1.39(s,9H)。
TLC系:ヘキサン中20%酢酸エチル。Rf:0.5。
化合物45の合成は、以下の一般手順8bの手順に従った。
ジクロロメタン(30mL)中アリル4−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)アゼパン−1−カルボキシレート(化合物44、400mg、0.8mmol)の撹拌溶液をアルゴン流で15分間脱気し、その後、これにフェニルシラン(PhSiH3、0.6mL、4.8mmol)、続いて、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(Pd(PPh3)4、93mg、0.08mmol)を添加した。反応混合物を室温で45分間撹拌し、その後、混合物を、Celiteパッドを通して濾過し、次いで蒸発させた。粗残渣を、30%MeOH−DCMを使用したフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、半純粋な1−(3−(アゼパン−4−イル)−5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物45、200mg、LCMSにより94%)を得た。MS(ESI)m/z 395.19[M+H]+、1H NMR(300MHz,DMSO−d6)δ7.62(t,J=6.0Hz,1H),6.96(s,2H),5.34(s,1H),4.40(d,J=5.7Hz,2H),3.18−2.68(m,6H),2.05−1.62(m,6H),1.38(s,9H)ppm、TLC系:20%MeOH−ジクロロメタン、Rf:0.2。
化合物46の合成は、以下の一般手順15の手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(50mL)中1−(3−(アゼパン−4−イル)−5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物45、317mg、0.8mmol)の冷溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.28mL、2mmol)、続いて、塩化モルホリンカルバミル(0.14mL、1.2mmol)を添加した。混合物を室温で3時間撹拌した。反応混合物を水(20mL)で希釈し、ジクロロメタン(2×20mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、30%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するCombiFlashにより精製して、灰色がかった白色の半固体として1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(モルホリン−4−カルボニル)アゼパン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物46、140mg、34%)を得た。MS(ESI):m/z 508.28[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6):δ7.63(t,J=6.4Hz,1H),6.95(s,2H),5.36(s,1H),4.40(d,J=6.0Hz,2H),3.57−3.55(m,4H),3.51−3.41(m,2H),3.31−3.21(m,2H),3.06−2.98(m,4H),2.64−2.62(m,1H),2.00−1.83(m,5H),1.81−1.51(m,1H),1.39(s,9H)ppm、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.5。
化合物47の合成は、以下の一般手順6dの手順に従った。
メタノール(5mL)中1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(モルホリン−4−カルボニル)アゼパン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物46、200mg、0.39mmol)の撹拌溶液に、重炭酸ナトリウム(NaHCO3、100mg、1.1mmol)を添加した。反応混合物を50℃で3時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、揮発物を蒸発させ、結果として生じた残渣をEtOAc(20mL)で希釈し、水(2×10mL)で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。結果として生じた固体をジエチルエーテル及びペンタンで粉砕し、高真空下で1時間乾燥させて、灰色がかった白色の固体として(4−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼパン−1−イル)(モルホリノ)メタノン(化合物47、150mg、90%)を得た。LCMS:m/z 424.24[M+H]+;1H−NMR(400MHz,DMSO−d6)δ11.21(s,1H),6.90−6.82(dd,J=10.0、3.2Hz,2H),5.58(brs,1H),5.25(s,1H),4.27(d,J=5.6Hz,2H),3.57−3.53(m,4H),3.50−3.42(m,2H),3.27−3.17(m,2H),3.08−2.98(m,4H),2.66−2.62(m,1H),1.69−1.92(m,5H),1.46−1.49(m,1H)ppm、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.2。
化合物48の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(10mL)中(4−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼパン−1−イル)(モルホリノ)メタノン(化合物47、187mg、0.44mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、1.84mL、1.32mmol)、続いて、チアゾール−4−塩化カルボニル(78mg、0.53mmol)を添加した。混合物を室温で3時間撹拌した。反応混合物を水(15mL)で希釈し、ジクロロメタン(3×40mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、60%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するCombiFlashにより精製して、黄色の固体として(4−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−(チアゾール−4−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼパン−1−イル)(モルホリノ)メタノン(化合物48、60mg、25%)を得た。MS(ESI):m/z 535.21[M+H]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ9.19(d,J=1.2Hz,1H),9.03(d,J=1.2Hz,1H),7.77(t,J=6.4Hz,1H),6.98(dd,J=9.2,3.2Hz,2H),5.52(s,1H),4.50(d,J=6.4Hz,2H),3.56−3.42(m,6H),3.31−3.21(m,2H),3.06−2.96(m,4H),2.68−2.64(m,1H),2.04−1.85(m,4H),1.72−1.67(m,1H),1.60−1.59(m,1H)ppm、TLC系:ヘキサン中80%酢酸エチル。Rf:0.7。
中間体29の合成は、以下の一般手順20の手順に従った。
エタノール(30mL)中アリル4−(3−アミノ−シアノアセチル)ピペリジン−1−カルボキシレート(中間体5、2.5g、10.6mmol)の撹拌溶液に、トリクロロアセトニトリル(2.1mL、21.2mmol)及びトリエチルアミン(TEA、0.2mL)を添加した。反応混合物を室温で2時間撹拌した。揮発物を蒸発させ、結果として生じた残渣を、50%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、茶色の液体として所望の生成物(Z)−アリル4−(3−アミノ−4,4,4−トリクロロ−2−シアノブト−2−エノイル)ピペリジン−1−カルボキシレート(中間体29、3.2g、80%)を得た。MS(ESI):m/z 380.13[M+H]+、TLC系:ヘキサン中30%酢酸エチル、Rf:0.5。
化合物49の合成は、以下の一般手順21の手順に従った。
トルエン(30mL)中(Z)−アリル4−(3−アミノ−4,4,4−トリクロロ−2−シアノブト−2−エノイル)ピペリジン−1−カルボキシレート(中間体29、3.2g、8.4mmol)の撹拌溶液に、N2H4(THF中1M)(16.8mL、16.8mmol)を添加し、反応混合物を100℃に15時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、揮発物を蒸発させ、結果として生じた残渣を、5%MeOH−ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、灰色がかった白色の固体として所望の生成物アリル4−(5−アミノ−4−シアノ−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物49、1.4g、61%)を得た。MS(ESI):m/z 275.13[M+H]+。TLC系:10%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.3。
化合物50の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
化合物51の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(100mL)中化合物50(2.1g、5.2mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(2.2mL、15.5mmol)、続いて、塩化ピバロイル(0.66mL、6.2mmol)を添加し、混合物を室温で4時間撹拌した。反応混合物を水(25mL)で希釈し、ジクロロメタン(3×40mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、10%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、無色の液体として所望の生成物(1.8g、72%)を得た。試料の一部(200mg)を分取HPLCによりさらに精製して、ガム状液体としてアリル4−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−4−シアノ−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物51、104mg/99%)を得た。MS(ESI):m/z 479.26[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.44(t,J=5.6Hz,1H),6.90(d,J=4.0Hz,1H),6.80(d,J=4.0Hz,1H),6.00−5.91(m,1H),5.33−5.20(m,2H),4.85(d,J=4.0Hz,2H),4.61(d,J=4.0Hz,2H),4.30−4.14(m,2H),3.04−2.90(m,2H),2.89−2.81(m,1H),2.01(d,J=10.8Hz,2H),1.73(d,J=10.8Hz,2H),1.42(s,9H)、TLC系:ヘキサン中20%酢酸エチル。Rf:0.5。
化合物52の合成は、以下の一般手順8bの手順に従った。
ジクロロメタン(10mL)中化合物51(250mg、0.51mmol)の撹拌溶液をアルゴン流で15分間脱気し、その後、これにフェニルシラン(PhSiH3、0.19mL、1.53mmol)、続いて、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(Pd(PPh3)4、58mg、0.05mmol)を添加した。反応混合物を室温で45分間撹拌し、その後、Celiteパッドを通して濾過し、濾液を蒸発させた。残渣を、30%MeOH−ジクロロメタンを使用したフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、半純粋な所望の生成物1−(3−(ピペルジン−4−イル)−5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−4−シアノ−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物52、280mg/74% by LCMS)を得て、さらに精製することなく次の反応に直接使用した。TLC系:20%MeOH−ジクロロメタン、Rf:0.2。
化合物53の合成は、以下の一般手順15の手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(50mL)中1−(3−(ピペルジン−4−イル)−5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−4−シアノ−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物52、280mg、0.69mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.28mL、2.1mmol)、続いて、塩化モルホリンカルバミル(0.12mg、0.83mmol)を添加した。混合物を室温で3時間撹拌した。反応混合物を水(20mL)で希釈し、ジクロロメタン(2×20mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、30%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するCombiFlash、続いて、分取HPLCにより精製して、灰色がかった白色の半固体として所望の生成物1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(モルホリン−4−カルボニル)ピペルジン−4−イル)−4−シアノ−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物53、140mg、34%)を得た。MS(ESI):m/z 508.28[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(t,J=6.0Hz,1H),6.90(d,J=4.0Hz,1H),6.80(d,J=4.0Hz,1H),4.85(d,J=6.0Hz,2H),3.80(d,J=13.2Hz,2H),3.71−3.68(m,4H),3.28−3.25(m,4H),2.97−2.90(m,2H),2.87−2.81(m,1H),2.04−2.00(m,2H),1.80−1.71(m,2H),1.42(s,9H)ppm、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.5。
中間体31の合成は、以下の一般手順2の手順に従った。
乾燥THF(120mL)中プロピオニトリル(5.8mL、74.7mmol)の冷却溶液(−40℃)に、リチウムヘキサメチルシラジド(LHMDS、THF中1M、99mL、99.6mmol)を添加した。−40℃で15分間撹拌した後、乾燥THF(30mL)中1−アリル−4−エチルピペリジン−1,4−ジカルボキシレート(中間体5、12g、49.8mmol)の溶液を添加し、反応混合物を同じ温度で30分間撹拌した。反応混合物を飽和NH4Cl溶液(80mL)で反応停止処理し、EtOAc(2×120mL)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、50%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色の液体としてアリル4−(2−シアノプロパノイル)ピペリジン−1−カルボキシレート(中間体31、9g、収率72%)を得た。m/z 250.87[M+H]+、TLC系:ヘキサン中30%酢酸エチル、Rf:0.5。
化合物54の合成は、以下の一般手順3の手順に従った。
エタノール(90mL)中アリル4−(2−シアノプロパノイル)ピペリジン−1−カルボキシレート(中間体31、9g、36mmol)の撹拌溶液に、N2H4(1.6mL、32.4mmol)を添加し、反応混合物を70℃に5時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、揮発物を蒸発させ、結果として生じた残渣を、3%MeOH−ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、無色の液体としてアリル4−(5−アミノ−4−メチル−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物54、8g、収率84%)を得た。m/z 265.13[M+H]+、TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.5。
化合物55の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
乾燥MeOH(50mL)中アリル4−(5−アミノ−4−メチル−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物54、5g、18.9mmol)の冷却溶液(0℃)に、5−クロロチオフェン−2−カルバルデヒド(4.2mL、37.8mmol)、AcOH(0.2mL)、その後、粉末4Å分子篩を添加した。反応混合物を室温で1時間撹拌した。イミンの形成がTLCにより極性のより低いスポットとして観察された。その後、反応混合物にシアノ水素化ホウ素ナトリウム(NaCNBH3、1.4g、22.7mmol)を少量ずつに分けて添加し、混合物を室温で2時間撹拌した。混合物に氷冷水(50mL)を添加し、その後、Celiteパッドを通して濾過し、濾液をEtOAc(4×100mL)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、50%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色の液体として所望の生成物(3.5g、収率46%)を得た。半純粋な試料の一部(300mg)を分取HPLCによりさらに精製して、ガム状液体としてアリル4−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−4−メチル−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物55、110mg)を得た。m/z 395.16[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.08(br s,1H),6.89(d,J=3.9Hz,1H),6.82(d,J=3.4Hz,1H),5.94(tdd,J=5.2,10.5,17.2Hz,1H),5.38−5.26(m,2H),5.19(dd,J=1.5,10.3Hz,1H),4.56−4.50(m,2H),4.33(d,J=6.4Hz,2H),4.08(br d,J=13.2Hz,2H),2.86(br s,2H),2.73(tt,J=3.5,12.2Hz,1H),1.79−1.71(m,3H),1.70−1.63(m,2H),1.59−1.48(m,2H)ppm、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.5。
化合物56の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(20mL)中アリル4−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−4−メチル−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物55、1.9g、4.8mmol)の冷却溶液(0℃)に、塩化トリメチルアセチル(0.57mL、4.3mmol)、続いて、トリエチルアミン(TEA、1mL、7.2mmol)を添加し、混合物を室温で4時間撹拌した。反応混合物を水(25mL)と合わせ、ジクロロメタン(3×40mL)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、20%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色の液体として所望の生成物(1.3g、収率69%)を得た。半純粋な試料の一部(300mg)を分取HPLCによりさらに精製して、薄黄色の液体としてアリル4−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−4−メチル−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物56、70mg)を得た。m/z 479.23[M+H]+1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=7.26(s,1H),6.74(d,J=3.9Hz,1H),6.69(d,J=3.4Hz,1H),6.02−5.91(m,1H),5.32(dd,J=1.5,17.1Hz,1H),5.22(dd,J=1.2,10.5Hz,1H),4.61(br d,J=5.4Hz,2H),4.51(br d,J=5.4Hz,2H),4.20(br d,J=10.8Hz,2H),2.98(br t,J=10.8Hz,2H),2.68(tt,J=3.7,10.8Hz,1H),2.01−1.97(m,3H),1.86(br d,J=11.2Hz,2H),1.78−1.69(m,2H),1.43(s,9H)ppm、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.5。
化合物57の合成は、以下の一般手順8bの手順に従った。
ジクロロメタン(10mL)中アリル4−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−4−メチル−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物56、1g、2.1mmol)の撹拌溶液をアルゴン流で15分間脱気し、その後、溶液にテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(Pd(PPh3)4、240mg、0.21mmol)、続いて、フェニルシラン(PhSiH3、1.6mL、12.5mmol)を添加した。反応混合物を室温で45分間撹拌し、その後、Celiteパッドを通して濾過し、濾液を蒸発させた。粗残渣を、4%MeOH−ジクロロメタンで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、半純粋な所望の生成物(600mg(LCMSにより91%)、収率72%)を得た。半純粋な試料の一部(130mg)を分取HPLCにより精製して、灰色がかった白色の固体として1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−4−メチル−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物57、40mg)を得た。m/z 395.19[M+H]+、1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ=8.37(br s,1H),7.26(br t,J=7.1Hz,1H),6.96(d,J=3.9Hz,1H),6.82(d,J=3.9Hz,1H),4.55(d,J=6.8Hz,2H),3.16(br d,J=12.2Hz,2H),2.86−2.72(m,3H),1.92(s,3H),1.83(br d,J=12.7Hz,2H),1.67(q,J=10.9Hz,2H),1.38(s,9H)ppm、TLC系:10%MeOH−ジクロロメタン、Rf:0.5。
化合物58の合成は、以下の一般手順6dの手順に従った。
メタノール(15mL)中1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(モルホリン−4−カルボニル)ピペルジン−4−イル)−4−シアノ−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物53、350mg、0.67mmol)の溶液に、重炭酸ナトリウム(NaHCO3、113mg、1.3mmol)を添加した。反応混合物を50℃で3時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、揮発物を蒸発させ、結果として生じた残渣をEtOAc(20mL)で希釈し、水(2×10mL)で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。得られた固体をジエチルエーテル及びペンタンで粉砕し、高真空下で1時間乾燥させて、灰色がかった白色の固体として5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(モルホリン−4−カルボニル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−4−カルボニトリル(化合物58、250mg、90%)を得た。m/z 424.24[M+H]+; 1H−NMR(400MHz,DMSO−d6,回転異性体混合物)δ12.30(s,0.7H),12.12(s,0.3H),7.45(br s,0.3H),7.00−6.80(m,2H),6.60(t,J=5.2Hz,0.7H),4.48−4.32(m,2H),3.74−3.62(m,2H),3.56(br s,4H),3.11(br s,4H),2.93−2.66(3H),1.86−1.78(m,2H),1.70−1.52(m,2H)ppm、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.2。
中間体32の合成は、以下の一般手順6cの手順に従った。
1,4−ジオキサン(30mL)中dl−1−tert−ブチル3−メチルピロリジン−1,3−ジカルボキシレート(12g、52.4mmol)の冷却溶液(0℃)に、ジオキサン(24mL)中4MのHClを添加した。溶液を室温に4時間加温させた。反応混合物を減圧下で濃縮して、dl−メチルピロリジン−3−カルボキシレート塩酸塩(8.6g、収率100%)を得た。これをさらに精製することなく次のステップで「そのまま」使用した。
中間体33の合成は、以下の一般手順7の手順に従った。
THF(150mL)中dl−メチルピロリジン−3−カルボキシレート塩酸塩(中間体32、14.4g、87.3mmol)の冷却溶液(0℃)に、ピリジン(28.1mL、349.3mmol)及び4−(ジメチルアミノ)ピリジン(DMAP、1.07g、8.7mmol)、続いて、クロロギ酸アリル(18.5mL、174.7mmol)を添加した。室温に16時間加温した後、反応混合物に水(100mL)を添加し、その後、ジクロロメタン(2×100mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、20〜25%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、無色の液体としてdl−1−アリル3−メチルピロリジン−1,3−ジカルボキシレート(中間体33、15g、収率80%)を得た。m/z 214.07[M+H]+、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.5。
中間体34の合成は、以下の一般手順2の手順に従った。
化合物59の合成は、以下の一般手順3の手順に従った。
エタノール(150mL)中dl−アリル−3−(2−シアノアセチル)ピロリジン−1−カルボキシレート(中間体34、15g、67.6mmol)の撹拌溶液に、ヒドラジン一水和物(2.9mL、60.8mmol)を添加し、その後、反応混合物を70℃に5時間加熱した。混合物を室温に冷却し、揮発物を蒸発させ、結果として生じた残渣を、3%メタノール−ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、無色の液体としてdl−アリル−3−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物59、12g、収率75%)を得た。m/z 237.54[M+H]+、TLC系:ジクロロメタン中5%メタノール、Rf:0.3。
化合物60の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
乾燥MeOH(30mL)中dl−アリル−3−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物59、3g、12.7mmol)の冷却溶液(0℃)に、5−クロロチオフェン−2−カルバルデヒド(2.7mL、25.4mmol)、AcOH(0.1mL)、及び粉末4Å分子篩を添加した。反応混合物を室温で1時間撹拌した(イミンの形成がTLCにより極性のより低いスポットとして観察された)。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(NaCNBH3、1.18g、19.1mmol)を少量ずつに分けて添加した。反応混合物を室温で2時間撹拌した後、氷冷水(30mL)を添加し、混合物を、Celiteパッドを通して濾過し、濾液をEtOAc(3×50mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、水性ギ酸(0.1%)中35%〜40%アセトニトリルを使用したRevelerisのC−18逆相カラムにより精製して、灰色がかった白色の固体としてdl−アリル−3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物60、1.6g、収率34%)を得た。m/z 367.10[M+H]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ11.43(br s,1H),6.91(d,J=3.9Hz,1H),6.84(br s,1H),5.98−5.88(m,1H),5.67(br s,1H,交換可能),5.37−5.24(m,2H),5.18(br d,J=10.3Hz,1H),4.52(td,J=1.5,3.3Hz,2H),4.28(d,J=6.4Hz,2H),3.67(br s,1H),3.49−3.35(m,2H),3.30−3.21(m,2H),2.16(br s,1H),1.99−1.85(m,1H)ppm、TLC系:ジクロロメタン中10%メタノール、Rf:0.4。
化合物61の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(10mL)中dl−アリル−3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物60、900mg、2.45mmol)の冷却溶液(0℃)に、塩化トリメチルアセチル(0.27mL、2.2mmol)、続いて、トリエチルアミン(TEA、0.51mL、3.7mmol)を添加した。室温で3時間撹拌した後、反応混合物を水(25mL)で希釈し、ジクロロメタン(3×40mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、10%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、無色のガム状液体としてdl−アリル−3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物61、450mg、収率40%)を得た。m/z 451.47[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ7.69(t,J=6.4Hz,1H),6.98−6.94(m,2H),5.97−5.86(m,1H),5.44(s,1H),5.27(dd,J=1.5,17.1Hz,1H),5.17(dd,J=1.7,10.5Hz,1H),4.51(br d,J=5.4Hz,2H),4.41(d,J=6.4Hz,2H),3.65−3.55(m,1H),3.53−3.37(m,3H),3.36−3.33(m,1H),2.24−2.12(m,1H),2.03−1.94(m,1H),1.39(s,9H)ppm、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.7。
化合物62の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(10mL)中dl−アリル−3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物60、300mg、0.8mmol)の氷冷溶液に、1,3−チアゾール−4−塩化カルボニル(158mg、1.1mmol)、続いて、トリエチルアミン(TEA、0.28mL、2.0mmol)を添加した。0℃で2時間撹拌した後、氷冷水(15mL)を添加し、ジクロロメタン(3×20mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、2〜4%MeOH−ジクロロメタンを使用して溶出するフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、半純粋な生成物(270mg、収率69%)を得た。これを分取HPLCによりさらに精製して、淡黄色の固体としてdl−アリル−3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−(チアゾール−4−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物62、62mg)を得た。m/z 478.17[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.12(d,J=8.8Hz,1H),8.88(s,1H),7.70(t,J=5.6Hz,1H),6.82−6.76(m,2H),6.00−5.90(m,1H),5.35−5.26(m,2H),5.21(dd,J=1.2,10.5Hz,1H),4.62(d,J=5.4Hz,2H),4.47(d,J=5.9Hz,2H),3.86−3.76(m,1H),3.68−3.50(m,3H),3.36(td,J=7.0,13.5Hz,1H),2.28(br s,1H),2.10(dt,J=4.2,8.2Hz,1H)ppm、TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.6。
化合物63の合成は、以下の一般手順8bの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(30mL)中アリル−3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物61、1.5g、3.3mmol)の撹拌溶液をアルゴン流で15分間脱気し、その後、これにテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(Pd(PPh3)4、385mg、0.33mmol)、続いて、フェニルシラン(PhSiH3、1.2mL、10mmol)を添加した。反応混合物を室温で45分間撹拌した。反応混合物を、Celiteパッドを通して濾過し、濾液を蒸発させた。粗残渣を、4%MeOH−ジクロロメタンを使用したCombi−Flashシリカクロマトグラフィーにより精製して、灰色がかった白色の固体として1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(ピロリジン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物63、1.1g、収率91%)を得た。m/z 367.26[M+H]+、1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ=9.11(br s,2H,交換可能),7.78(br t,J=6.1Hz,1H,交換可能),7.02−6.95(m,2H),5.50(s,1H),4.42(br d,J=5.9Hz,2H),3.57−3.34(m,2H),3.32−3.16(m,3H),2.34−2.20(m,1H),2.05−1.90(m,1H),1.41(s,9H)ppm、TLC系:ジクロロメタン中10%メタノール、Rf:0.1。
化合物64の合成は、以下の一般手順15の手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(10mL)中dl−1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(ピロリジン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物63、450mg、1.2mmol)の冷却溶液(0℃)に、モルホリン−4−塩化カルボニル(366mg、2.45mmol)、続いて、トリエチルアミン(0.31mL、3.0mmol)を添加した。混合物を室温で2時間撹拌した後、混合物に氷冷水(10mL)を添加した。混合物をジクロロメタン(2×15mL)に抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、50%EtOAc−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色の半固体として所望の生成物(370mg、収率62%)を得た。半純粋な材料(LCMSにより85%)の一部(160mg)を分取HPLCによりさらに精製して、灰色がかった白色の固体としてdl−1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(モルホリン−4−カルボニル)ピロリジン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物64、60mg)を得た。m/z 480.16[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ7.70(t,J=6.1Hz,1H,交換可能),6.96(s,2H),5.42(s,1H),4.41(d,J=6.4Hz,2H),3.58−3.47(m,6H),3.36(d,J=3.9Hz,2H),3.24−3.19(m,1H),3.15−3.10(m,4H),2.11(dd,J=6.1、12.5Hz,1H),1.97−1.89(m,1H),1.39(s,9H)ppm、TLC系:n−ヘキサン中70%酢酸エチル、Rf:0.6。
化合物65の合成は、以下の一般手順6dの手順に従った。
メタノール(10mL)中dl−1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(モルホリン−4−カルボニル)ピロリジン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物64、500mg、1.0mmol)の溶液に、重炭酸ナトリウム(438mg、5.2mmol)を室温で添加した。その後、混合物を50℃で4時間撹拌した。反応混合物を冷却して室温に戻し、水(20mL)を添加し、その後、ジクロロメタン(3×20mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、ジクロロメタン中5〜7%メタノールで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により部分精製して、薄黄色の半固体として所望の生成物(300mg、収率72%)を得た。半純粋な材料の一部(150mg、LCMSにより72%)を分取HPLC精製によりさらに精製して、灰色がかった白色の固体としてdl−(3−(5−((5−クロロチオフェン−2−yl)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−イル)(モルホリノ)メタノン(化合物65、62mg)を得た。m/z 396.21[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ11.42(br s,1H,交換可能),6.91(d,J=3.4Hz,1H),6.83(br s,1H),5.67(br s,1H,交換可能),5.35(br s,1H),4.28(d,J=5.9Hz,2H),3.56(td,J=3.8,5.6Hz,5H),3.37(td,J=3.7,7.7Hz,2H),3.21−3.07(m,6H),2.12(br s,1H),1.84(dd,J=8.6,12.0Hz,1H)ppm、TLC系:ジクロロメタン中10%メタノール、Rf:0.3。
化合物66の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
化合物67の合成は、以下の一般手順22の手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(20mL)中dl−1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(ピロリジン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物63、650mg、1.77mmol)の冷溶液(0℃)に、塩化メタンスルホニル(304.4mg、2.65mmol)、続いて、トリエチルアミン(TEA、0.62mL、4.42mmol)を添加した。混合物を室温で2時間撹拌した。反応混合物をNaHCO3溶液(10mL)で反応停止処理し、ジクロロメタン(3×20mL)に抽出した。残渣を、n−ヘキサン中20〜25%酢酸エチルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、所望の生成物(550mg、収率69%)を得た。試料の一部(170mg)を分取HPLCによりさらに精製して、淡黄色の液体としてdl−1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(メチルスルホニル)ピロリジン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物67、60mg)を得た。m/z 445.20[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.50(t,J=5.4Hz,1H,交換可能),6.89−6.62(m,2H),5.16(s,1H),4.36(d,J=5.9Hz,2H),3.73(dd,J=7.3,9.8Hz,1H),3.61−3.42(m,3H),3.40−3.28(m,1H),2.80(s,3H),2.39−2.10(m,2H),1.45(s,9H)ppm、TLC系:n−ヘキサン中30%酢酸エチル、Rf:0.6。
化合物68の合成は、以下の一般手順6dの手順に従った。
乾燥メタノール(10mL)中dl−1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(メチルスルホニル)ピロリジン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物67、380mg、0.86mmol)の冷却溶液(0℃)に、重炭酸ナトリウム(431.2mg、5.13mmol)を添加し、混合物を70℃で4時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、その後、水(20mL)を添加し、ジクロロメタン(3×20mL)に抽出した。残渣を、ジクロロメタン中5〜7%メタノールで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色の半固体として所望の化合物(300mg、収率72%)を得た。この材料の一部(130mg、LCMS純度89%)の分取HPLC精製により、白色の固体としてdl−N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(メチルスルホニル)ピロリジン−3−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物68、30mg)を得た。m/z 360.8[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ11.44(br s,1H,交換可能),6.94−6.82(m,2H),5.69(br s,1H,交換可能),5.41(br s,1H),4.29(d,J=6.4Hz,2H),3.59(br d,J=4.4Hz,1H),3.36(br d,J=6.8Hz,2H),3.28(br s,1H),3.15(br s,1H),2.88(br s,3H),2.20(br s,1H),2.01−1.89(m,1H)ppm、TLC系:ジクロロメタン中5%メタノール、Rf:0.3。
化合物69の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(10mL)中dl−N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(メチルスルホニル)ピロリジン−3−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物68、170mg、0.47mmol)の冷却溶液(0℃)に、1,3−チアゾール−4−塩化カルボニル(83.4mg、0.56mmol)、続いて、トリエチルアミン(TEA、0.13mL、0.94mmol)を添加した。混合物を室温で2時間撹拌した後、反応混合物をNaHCO3溶液(10mL)で反応停止処理し、ジクロロメタン(3×20mL)に抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、薄黄色の半固体として粗生成物(200mg、収率89%)を得た。材料の一部(200mg、LCMS純度87%)の分取HPLC精製により、淡黄色の固体としてdl−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(メチルスルホニル)ピロリジン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(チアゾール−4−イル)メタノン(化合物69、65mg)を得た。m/z 472.10[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ9.20(d,J=1.5Hz,1H),9.04(d,J=1.5Hz,1H),7.85(t,J=6.4Hz,1H,交換可能),7.03−7.00(d,1H),6.97(d,J=3.9Hz,1H),5.64(s,1H),4.51(d,J=5.9Hz,2H),3.66−3.59(m,1H),3.42−3.33(m,4H),2.87(s,3H),2.29−2.20(m,1H),2.12−2.02(m,1H)ppm、TLC系:ジクロロメタン中5%メタノール、Rf:0.6。
化合物70の合成は、以下の一般手順6dの手順に従った。
メタノール(5mL)中1−(3−(アゼパン−4−イル)−5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物45、100mg、0.25mmol)の溶液に、NaHCO3(63mg、0.76mmol)を添加した。反応混合物を50℃で3時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、揮発物を減圧下で蒸発させ、結果として生じた残渣を30%iPrOH−CHCl3(20mL)で希釈し、水(2×10mL)で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。結果として生じた残渣(70mg)を分取HPLCにより精製して、茶色の固体として3−(アゼパン−4−イル)−N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物70、15mg、収率19%)を得た。MS:m/z 311.15[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6):δ11.24(s,1H),6.90(d,J=3.6Hz,1H),6.83(d,J=4.0Hz,1H),5.60−5.57(m,1H),5.24(s,1H),4.27(d,J=6.0Hz,2H),3.97−3.18(m,2H),2.86−2.64(m,4H),1.90−1.80(m,2H),1.71−1.47(m,4H)ppm、TLC系:ヘキサン中10%酢酸エチル。Rf:0.1。
化合物71の合成は、以下の一般手順22の手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(10mL)中1−(3−(アゼパン−4−イル)−5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物45、280mg、0.71mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.25mL、1.77mmol)、続いて、塩化メタンスルホニル(MsCl、0.082mL、1.06mmol)を添加した。反応物を室温で2時間撹拌した後、混合物を水(10mL)で希釈し、ジクロロメタン(2×20mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、10%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するCombiFlashにより精製して、灰色がかった白色の固体として所望の生成物1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(メチルスルホニル)アゼパン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物71、100mg、収率40%)を得た。MS(ESI):m/z 473.08[M+H]+。1H NMR(300MHz,DMSO−d6)δ7.65(t,J=6.3Hz,1H),6.96(s,2H),5.39(s,1H),4.41(d,J=6.0Hz,2H),3.49−3.34(m,2H),3.32−3.17(m,2H),2.97(s,3H),2.72−2.50(m,1H),2.07−1.60(m,6H),1.40(s,9H)ppm、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.7。
化合物72の合成は、以下の一般手順6dの手順に従った。
メタノール(5mL)中1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(メチルスルホニル)アゼパン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物71、80mg、0.17mmol)の撹拌溶液に、NaHCO3(37mg、0.51mmol)を添加した。反応混合物を50℃で3時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、揮発物を蒸発させ、結果として生じた残渣をEtOAc(20mL)で希釈し、水(2×10mL)で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。結果として生じた固体をジエチルエーテル及びペンタンで粉砕し、減圧下で1時間乾燥させて、灰色がかった白色の固体としてN−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(メチルスルホニル)アゼパン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物72、55mg、収率84%)を得た。MS(ESI):m/z 389.15[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ11.24(s,1H),6.90−6.83(m,2H),5.60(br s,1H),5.28(s,1H),4.28(s,2H),3.42−3.31(m,2H),3.26−3.14(m,2H),2.87(s,3H),2.80−2.70(m,1H),2.04−1.60(m,3H),1.72−1.62(m,3H)ppm、TLC系:ヘキサン中70%酢酸エチル。Rf:0.2。
化合物73の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(10mL)中N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(メチルスルホニル)アゼパン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物72、110mg、0.28mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.12mL、0.85mmol)、続いて、チアゾール−4−塩化カルボニル(54mg、0.36mmol)を添加した。混合物を室温で3時間撹拌した後、反応混合物を水(10mL)で希釈し、ジクロロメタン(3×10mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、50%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するCombiFlashにより精製して、灰色がかった白色の固体として(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(メチルスルホニル)アゼパン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(チアゾール−4−イル)メタノン(化合物73、60mg、収率41%)を得た。MS(ESI):m/z 500.13[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ9.18(s,1H),9.03(s,1H),7.78(br s,1H),6.98(d,J=12.8Hz,2H),5.55(s,1H),4.50(d,J=5.2Hz,2H),3.47−3.39(m,2H),3.24−3.22(m,2H),2.88(s,3H),2.75(br s,1H),2.07−1.67(m,6H)ppm、TLC系:ヘキサン中80%酢酸エチル。Rf:0.7。
化合物74の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(10mL)中アリル4−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼパン−1−カルボキシレート(化合物43、250mg、0.634mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.26mL、1.9mmol)、続いて、チアゾール−4−塩化カルボニル(112mg、0.76mmol)を添加した。混合物を室温で3時間撹拌した後、反応混合物を水(10mL)で希釈し、ジクロロメタン(3×10mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、30%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するCombiFlashにより精製し、その後、ジエチルエーテル及びペンタンで粉砕して、黄色の固体としてアリル4−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−(チアゾール−4−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼパン−1−カルボキシレート(化合物74、180mg、収率61%)を得た。m/z 506.13[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6):δ9.18(d,J=1.6Hz,1H),9.02−9.01(m,1H),7.77(t,J=6.0Hz,1H),7.00(d,J=4.0Hz,1H),6.97(d,J=3.6Hz,1H),5.93−5.92(m,1H),5.53(d,J=2.8Hz,1H),5.28−5.23(m,1H),5.18−5.15(m,1H),4.53−4.48(m,4H),3.64−3.58(m,1H),3.48−3.31(m,3H),2.68−2.64(m,1H),2.04−1.86(m,3H),1.76−1.54(m,3H)ppm、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.8。
中間体35の合成は、以下の一般手順23の手順に従った。
乾燥THF(300mL)中tert−ブチル3−オキソ−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−8−カルボキシレート(30g、133.3mmol)の冷却溶液(−78℃)に、LiHMDS(リチウムヘキサメチルジシラジド、THF中1M、146mL、146.7mmol)を添加した。30分間撹拌した後、乾燥THF(30mL)中N−フェニル−ビス(トリフルオロメタンスルホンイミド)(PhNTf2、52g、146.7mmol)の溶液を添加し、混合物を室温で5時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム溶液(80mL)で反応停止処理し、EtOAc(2×300mL)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、3〜5%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、淡黄色の液体としてtert−ブチル3−(トリフルオロメチルスルホニルオキシ)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクト−3−エン−8−カルボキシレート(中間体35、40g、収率84%)を得た。TLC系:ヘキサン中20%酢酸エチル。Rf:0.5。
中間体36の合成は、以下の一般手順24の手順に従った。
密封管内の1,4−ジオキサン:水(5:1、125mL)中tert−ブチル3−(トリフルオロメチルスルホニルオキシ)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクト−3−エン−8−カルボキシレート(中間体35、21g、58.8mmol)の撹拌溶液に、モリブデンヘキサカルボニル(Mo(CO)6、7.7g、29.4mmol)、4−ジメチルアミノピリジン(DMAP、14.3g、117.6mmol)、及びN,N−ジイソプロピルエチルアミン(DIEA、25mL、141.2mmol)を添加した。アルゴン流で15分間脱気した後、酢酸パラジウム(Pd(OAc)2、1.3g、5.9mmol)、続いて、1,1’−ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(dppf、3.3g、5.9mmol)を添加した。反応混合物を120℃で5時間撹拌した。反応混合物を、Celiteパッドを通して濾過し、重炭酸ナトリウム水溶液(60mL)中に注ぎ、EtOAc(200mL)で抽出した。水層をHCl(2N、pH=2まで)で酸性化し、EtOAc(2×200mL)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、薄茶色の液体として8−(tert−ブトキシカルボニル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクト−3−エン−3−カルボン酸(中間体36、14g、収率94%)を得た。TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.2。
中間体37の合成は、以下の一般手順13の手順に従った。
アセトニトリル(105mL)中8−(tert−ブトキシカルボニル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクト−3−エン−3−カルボン酸(中間体36、14g、55.3mmol)の冷却溶液(0℃)に、炭酸セシウム(36g、110.7mmol)を添加した。15分間撹拌した後、ヨードメタン(MeI、14mL、221.3mmol)を添加し、その後、室温で16時間撹拌した。0℃に冷却した後、これを氷冷水(50mL)で反応停止処理し、EtOAc(2×150mL)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、5〜10%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、灰色がかった白色の固体として8−tert−ブチル−3−メチル−8−アザビシクロ[3.2.1]オクト−3−エン−3,8−ジカルボキシレート(中間体37、11.8g、収率80%)を得た。TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.6。
中間体38の合成は、以下の一般手順19の手順に従った。
鋼容器内のMeOH(120mL)中8−tert−ブチル−3−メチル−8−アザビシクロ[3.2.1]オクト−3−エン−3,8−ジカルボキシレート(中間体37、11.8g、44.2mmol)の溶液に、10%Pd/C(2.7g)を添加し、80psiの水素圧力下で、室温で16時間撹拌した。反応混合物を、Celiteパッドを通して濾過し、揮発物を減圧下で濃縮して、白色の固体として8−tert−ブチル−3−メチル−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−3,8−ジカルボキシレート(中間体38、11g、収率92%)を得た。TLC系:ヘキサン中10%酢酸エチル。Rf:0.5。
中間体39の合成は、以下の一般手順6cの手順に従った。
1,4−ジオキサン(33mL)中8−tert−ブチル−3−メチル−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−3,8−ジカルボキシレート(中間体38、11g、40.9mmol)の冷却溶液(0℃)に、HCl(1,4−ジオキサン中4M、66mL)を0℃で添加し、その後、室温に3時間加温した。反応混合物を濃縮し、ジエチルエーテルで粉砕して、白色の固体としてメチル8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−3−カルボキシレート塩酸塩(中間体39、8g、収率95%)を得た。TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.1。
中間体40の合成は、以下の一般手順7の手順に従った。
水(130mL)中メチル8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−3−カルボキシレート塩酸塩
(中間体39、10g、48.8mmol)の冷却(0℃)溶液に、重炭酸ナトリウム(12.3g、146.3mmol)、続いて、THF(60mL)中クロロギ酸アリル(5.7mL、53.7mmol)の溶液を添加した。室温で16時間撹拌した後、氷冷水(100mL)を添加し、その後、EtOAc(2×150mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、15%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、無色の液体として8−アリル−3−メチル−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−3,8−ジカルボキシレート(中間体40、8g、収率64%)を得た。TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.5。
中間体41の合成は、以下の一般手順2の手順に従った。
乾燥THF(50mL)中アセトニトリル(4.1mL、79.1mmol)の冷却溶液(−78℃)に、n−BuLi(ヘキサン中2.5M、28mL、69.2mmol)を添加した。1時間撹拌した後、乾燥THF(10mL)中8−アリル−3−メチル−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−3,8−ジカルボキシレート(中間体40、5g、19.8mmol)の溶液を添加し、その後、−78℃で2時間撹拌した。反応混合物を飽和NH4Cl溶液(80mL)で反応停止処理し、EtOAc(2×100mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、25%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色の液体としてアリル−3−(2−シアノアセチル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−8−カルボキシレート(中間体41、2.7g、収率52%)を得た。TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.3。
化合物74の合成は、以下の一般手順3の手順に従った。
エタノール(60mL)中アリル−3−(2−シアノアセチル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−8−カルボキシレート(中間体41、6g、22.9mmol)の撹拌溶液に、ヒドラジン(1mL、20.6mmol)を添加し、反応混合物を75℃に3時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、揮発物を蒸発させ、結果として生じた残渣を、2〜3%MeOH−ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、淡黄色の半固体としてアリル−3−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−8−カルボキシレート(化合物74、4g、収率63%)を得た。TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン、Rf:0.2。
化合物75の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
乾燥MeOH(35mL)中アリル−3−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−8−カルボキシレート(化合物74、3.2g、11.6mmol)の冷却溶液(0℃)に、5−クロロチオフェン−2−カルバルデヒド(2.6mL、23.18mmol)、続いて、AcOH(0.2mL)、その後、粉末4Å分子篩を添加した。反応混合物を室温で1時間撹拌した(イミンの形成がTLCにより極性のより低いスポットとして観察された)。これにシアノ水素化ホウ素ナトリウム(NaCNBH3、575mg、9.3mmol)を少量ずつに分けて添加し、混合物を室温で2時間撹拌した。混合物に氷冷水(50mL)を添加し、その後、Celiteパッドを通して濾過し、濾液をEtOAc(4×100mL)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、2〜5%MeOH−ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色の固体として所望の生成物(2.1g、収率44%)を得た。半純粋な試料の一部(170mg)を分取HPLCによりさらに精製して、灰色がかった白色の固体としてアリル3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−8−カルボキシレート(化合物75、50mg)を得た。m/z 407.27[M+H]+。1H NMR(300MHz,DMSO−d6)δ=11.28(s,1H,交換可能),6.90(d,J=4.0Hz,1H),6.82(d,J=3.7Hz,1H),5.93(tdd,J=5.3、10.4、17.2Hz,1H),5.61(br s,1H,交換可能),5.33−5.14(m,3H),4.54(br d,J=4.4Hz,2H),4.31−4.15(m,4H),3.11(br s,1H),1.92(br s,2H),1.82−1.57(m,6H)ppm、TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン、Rf:0.4。
化合物76の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(15mL)中アリル3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−8−カルボキシレート(化合物75、1g、2.5mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.52mL、3.7mmol)、続いて、塩化トリメチルアセチル(0.27mL、2.2mmol)を添加した。室温で2時間撹拌した後、反応混合物を水(25mL)に添加し、ジクロロメタン(2×40mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、1〜2%MeOH−ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色の液体として所望の生成物(900mg、収率75%)を得た。半純粋な材料の一部(250mg)を分取HPLCによりさらに精製して、白色の固体としてアリル3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−8−カルボキシレート(化合物76、60mg)を得た。m/z 491.21[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ=7.65(t,J=6.4Hz,1H,交換可能),6.97−6.93(m,2H),5.97−5.86(m,1H),5.33(s,1H),5.26(dd,J=1.5、17.1Hz,1H),5.16(dd,J=1.5,10.3Hz,1H),4.61−4.47(m,2H),4.40(d,J=5.9Hz,2H),4.21(br s,2H),3.11−3.01(m,1H),1.93(br s,2H),1.83−1.65(m,6H),1.39(s,9H)ppm、TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン、Rf:0.7。
化合物77の合成は、以下の一般手順8bの手順に従った。
化合物78の合成は、以下の一般手順8bの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(10mL)中アリル−3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−8−カルボキシレート(化合物75、250mg、0.6mmol)の溶液をアルゴン流で15分間脱気し、その後、溶液にテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(Pd(PPh3)4、42mg、0.03mmol)、続いて、フェニルシラン(PhSiH3、0.3mL、2.5mmol)を添加した。室温で45分間撹拌した後、反応混合物を、Celiteパッドを通して濾過し、濾液を蒸発させた。粗残渣を、10%MeOH−ジクロロメタンを使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、薄茶色の固体として所望の生成物(150mg、収率75%)を得た。これを分取HPLCによりさらに精製して、薄黄色の固体のギ酸塩として3−(8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−3−イル)−N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−1H−ピラゾール−5−アミン(25mg)を得た。m/z 323.23[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ=12.89−8.82(m,3H,交換可能),8.40(br s,1H),6.91(d,J=3.9Hz,1H),6.83(d,J=3.4Hz,1H),5.71(br s,1H),5.25(s,1H),4.28(br s,2H),3.79(br s,2H),2.97(ddd,J=5.9,10.9,17.0Hz,1H),1.95−1.74(m,8H)ppm、TLC系:10%メタノール−ジクロロメタン、Rf:0.1。
化合物79の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(15mL)中アリル−3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−8−カルボキシレート(化合物75、300mg、0.73mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.26mL、1.84mmol)、その後、1,3−チアゾール−4−塩化カルボニル(218mg、1.47mmol)を添加した。室温で2時間撹拌した後、これを氷冷水(10mL)に添加し、ジクロロメタン(2×20mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、1〜2%MeOH−ジクロロメタンを使用したフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、薄茶色の液体として所望の生成物(300mg、収率78%)を得た。一部を分取HPLCによりさらに精製して、淡黄色の固体としてアリル−3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−(チアゾール−4−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−8−カルボキシレート(化合物79、75mg)を得た。m/z 518.18[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ=9.19(d,J=2.0Hz,1H),9.02(d,J=2.0Hz,1H),7.79(t,J=6.4Hz,1H),7.00−6.95(m,2H),5.93(tdd,J=5.3,10.4,17.2Hz,1H),5.50(s,1H),5.27(dd,J=1.5,17.1Hz,1H),5.16(dd,J=1.5,10.3Hz,1H),4.57−4.47(m,4H),4.23(br s,2H),3.16−3.08(m,1H),1.96−1.66(m,8H)ppm、TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.7。
化合物80の合成は、以下の一般手順15の手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(10mL)中1−(3−(8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−3−イル)−5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物77、350mg、0.86mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.3mL、2.15mmol)、その後、モルホリン−4−塩化カルボニル(0.2mL、1.72mmol)を添加した。室温で2時間撹拌した後、氷冷水(5mL)を添加し、ジクロロメタン(2×20mL)で洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、1〜2%MeOH−ジクロロメタンを使用したフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、薄茶色の液体として所望の半純粋な生成物(320mg、収率71%)を得た。一部(120mg)を分取HPLCによりさらに精製して、灰色がかった白色の固体として1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(8−(モルホリン−4−カルボニル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物80、60mg)を得た。m/z 520.25[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ=7.65(t,J=6.1Hz,1H,交換可能),6.97−6.93(m,2H),5.35(s,1H),4.40(d,J=6.4Hz,2H),4.03(br s,2H),3.58−3.52(m,4H),3.25−3.18(m,4H),2.93(tt,J=5.7,11.7Hz,1H),1.85−1.66(m,8H),1.39(s,9H)ppm、TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.6。
化合物81の合成は、以下の一般手順6dの手順に従った。
室温のメタノール(5mL)中1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(8−(モルホリン−4−カルボニル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物80、140mg、0.26mmol)の溶液に、重炭酸ナトリウム(113mg、1.34mmol)を添加した。50℃で4時間撹拌した後、反応混合物を濃縮し、ジクロロメタン(2×15mL)で洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取HPLCにより精製して、灰色がかった白色の固体として(3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−8−イル)(モルホリノ)メタノン(化合物81、30mg)を得た。m/z 436.22[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ=11.25(s,1H),6.90(d,J=3.4Hz,1H),6.82(br d,J=2.9Hz,1H),5.59(br s,1H,交換可能),5.26(br s,1H),4.27(d,J=6.4Hz,2H),4.01(br s,2H),3.59−3.52(m,4H),3.27−3.19(m,4H),2.99(br s,1H),1.84−1.64(m,8H)ppm、TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.2。
化合物82の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(10mL)中(3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−8−イル)(モルホリノ)メタノン(化合物81、175mg、0.4mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.14mL、1mmol)、続いて、1,3−チアゾール−4−塩化カルボニル(119mg、0.8mmol)を添加した。室温で2時間撹拌した後、氷冷水(5mL)を添加し、その後、ジクロロメタン(2×15mL)で洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、1〜2%MeOH−ジクロロメタンで溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、薄茶色の液体として所望の生成物(165mg、収率75%)を得た。これを分取HPLCによりさらに精製して、灰色がかった白色の固体として(3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−(チアゾール−4−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−8−イル)(モルホリノ)メタノン(化合物82、55mg)を得た。m/z 547.23[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ=9.19(d,J=2.0Hz,1H),9.04(d,J=2.0Hz,1H),7.78(br t,J=6.4Hz,1H,交換可能),6.98(q,J=3.9Hz,2H),5.52(s,1H),4.50(br d,J=5.9Hz,2H),4.04(br s,2H),3.58−3.53(m,4H),3.25−3.21(m,4H),2.98(br dd,J=5.9,11.7Hz,1H),1.86−1.69(m,8H)ppm、TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.5。
化合物83の合成は、以下の一般手順22の手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(10mL)中1−(3−(8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−3−イル)−5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物77、350mg、0.86mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.3mL、2.15mmol)、続いて、塩化メタンスルホニル(0.1mL、1.3mmol)を添加した。室温で2時間撹拌した後、氷冷水(5mL)を添加し、ジクロロメタン(2×20mL)で洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、1%MeOH−ジクロロメタンを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、灰色がかった白色の固体として1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(8−(メチルスルホニル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物83、310mg、収率74%)を得た。m/z 485.15[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ=7.67(br t,J=6.1Hz,1H,交換可能),6.96(s,2H),5.36(s,1H),4.41(d,J=5.9Hz,2H),4.18(br s,2H),3.00−2.90(m,4H),2.05−1.96(m,2H),1.89−1.69(m,6H),1.40(s,9H)ppm、TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.6。
化合物84の合成は、以下の一般手順6dの手順に従った。
室温のメタノール(5mL)中1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(8−(メチルスルホニル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物83、145mg、0.3mmol)の撹拌溶液に、重炭酸ナトリウム(126mg、1.5mmol)を添加した。50℃で4時間撹拌した後、反応混合物を濃縮し、ジクロロメタン(2×15mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取HPLCにより精製して、灰色がかった白色の固体としてN−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(8−(メチルスルホニル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−3−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物84、25mg)を得た。m/z 401.20[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ=11.28(s,1H),6.90(d,J=3.9Hz,1H),6.83(br d,J=3.4Hz,1H),5.62(br s,1H,交換可能),5.27(br s,1H),4.27(d,J=6.4Hz,2H),4.16(br s,2H),2.94(s,4H),2.05−1.97(m,2H),1.86−1.74(m,4H),1.73−1.64(m,2H)ppm、TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.2。
化合物85の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(10mL)中N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(8−(メチルスルホニル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−3−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物84、170mg、0.42mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.15mL、1.06mmol)、その後、1,3−チアゾール−4−塩化カルボニル(125mg、0.85mmol)を添加した。室温で2時間撹拌した後、氷冷水(5mL)を添加し、その後、ジクロロメタン(2×15mL)で洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、1〜2%MeOH−ジクロロメタンで溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、薄茶色の液体として所望の生成物(170mg、収率78%)を得た。これを分取HPLCによりさらに精製して、淡黄色の固体として50mgの純粋な(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(8−(メチルスルホニル)−8−アザビシクロ[3.2.1]オクタン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(チアゾール−4−イル)メタノン(化合物85、50mg)を得た。m/z 512.14[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ=9.19(s,1H),9.04(s,1H),7.80(br s,1H),7.19(br s,1H),7.05−6.93(m,2H),5.54(s,1H),4.50(br d,J=5.4Hz,2H),4.19(br s,2H),3.07−2.90(m,4H),2.01(br s,2H),1.92−1.73(m,6H)ppm、TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.5。
中間体42の合成は、以下の一般手順7の手順に従った。
THF/H2O(3:6、100mL)中メチルアゼチジン−3−カルボキシレート塩酸塩(10g、66mmol)の冷却溶液(0℃)に、重炭酸ナトリウム(16.6g、198mmol)を少量ずつに分けて添加し、続いて、クロロギ酸アリル(7.73mL、72.6mmol)を添加した。室温で5時間撹拌した後、混合物をEtOAc(3×100mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、2%MeOH/ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、無色のシロップとして1−アリル−3−メチルアゼチジン−1,3−ジカルボキシレート(中間体42、11g、収率83%)を得た。m/z 200.03[M+H]+、TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン、Rf:0.7。
中間体43の合成は、以下の一般手順2の手順に従った。
乾燥THF(60mL)中アセトニトリル(3.1mL、60.3mmol)の冷却溶液(−78℃ )に、n−BuLi(THF中2.5M、24.1mL、60.3mmol)を添加し、その後、1時間撹拌し、次いで、これに乾燥THF(20mL)中1−アリル−3−メチルアゼチジン−1,3−ジカルボキシレート(中間体42、10g、50.3mmol)の溶液を添加した。−78℃で1時間撹拌した後、混合物を飽和NH4Cl溶液(20mL)で反応停止処理し、EtOAc(2×120mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、50%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色の液体として所望のアリル3−(2−シアノアセチル)アゼチジン−1−カルボキシレート(中間体43、5.1g、49%)を得た。TLC系:ヘキサン中60%酢酸エチル。Rf:0.3。
化合物86の合成は、以下の一般手順3の手順に従った。
エタノール(30mL)中アリル3−(2−シアノアセチル)アゼチジン−1−カルボキシレート(中間体43、5g、24mmol)の溶液に、ヒドラジン水和物(N2H4.H2O、1.2mL、24mmol)を添加し、その後、反応混合物を80℃に5時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、揮発物を蒸発させた。残渣を、4%MeOH−ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、橙色の液体としてアリル3−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物86、3.6g、68%)を得た。m/z 223.11[M+H]+、TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.3。
化合物87の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
乾燥EtOH(40mL)中アリル3−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物86、3.5g、15.8mmol)の冷却溶液(0℃)に、5−クロロチオフェン−2−カルバルデヒド(1.9mL、18.9mmol)、酢酸(0.5mL)、その後、粉末4Å分子篩(1g)を添加した。反応混合物を室温で1時間撹拌した(イミンの形成がTLCにより極性のより低いスポットとして観察された)。その後、混合物にシアノ水素化ホウ素ナトリウム(1.19g、18.9mmol)を少量ずつに分けて添加し、撹拌を室温で2時間続けた。反応混合物を氷冷水(50mL)で反応停止処理し、Celiteパッドを通して濾過し、濾液をEtOAc(3×100mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、5%MeOH/ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色のガム状液体としてアリル3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物87、3.2g、58%)を得た。m/z 353.17[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ11.54(br s,1H),6.97−6.79(m,2H),5.98−5.84(m,1H),5.73(br s,1H),5.47(br s,1H),5.28(dd,J=1.5、17.1Hz,1H),5.19(dd,J=1.2,10.5Hz,1H),4.50(d,J=5.4Hz,2H),4.36−4.10(m,4H),3.97−3.64(m,3H)ppm、TLC系:ジクロロメタン中5%メタノール、Rf:0.4。
化合物88の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(45mL)中アリル3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物87、3g、8.5mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、1.84mL、12.8mmol)、続いて、塩化トリメチルアセチル(1.0mL、8.5mmol)を添加した。室温で2時間撹拌した後、反応混合物を水(50mL)で希釈し、ジクロロメタン(3×50mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、15%EtOAc/ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、無色の液体としてアリル3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物88、1.9g、51%)を得た。MS(ESI):m/z 437.44[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ7.75(t,J=6.1Hz,1H),6.96(q,J=3.4Hz,2H),5.90(tdd,J=5.3,10.4,17.1Hz,1H),5.52(s,1H),5.31−5.23(m,1H),5.18(dd,J=1.5,10.8Hz,1H),4.53−4.47(m,2H),4.43(d,J=5.9Hz,2H),4.24(br s,2H),3.96(br s,2H),3.70(tt,J=5.9,8.8Hz,1H),1.41(s,9H)ppm、TLC系:ヘキサン中30%酢酸エチル。Rf:0.6。
化合物89の合成は、以下の一般手順8b及び15の手順に従った。
ジクロロメタン(30mL)中アリル3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物88、600mg、1.4mmol)の冷却溶液(0℃)をアルゴン流で15分間脱気し、その後、これにフェニルシラン(PhSiH3、0.5mL、4.1mmol)、続いて、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(Pd(PPh3)4、79.4mg、0.068mmol)を添加した。反応混合物を室温で3時間撹拌した。出発材料が完全に消費された後(TLCにより監視)、混合物を0℃に再冷却し、これにトリエチルアミン(TEA、0.39mL、2.75mmol)、続いて、モルホリン−4−塩化カルバミル(0.16mL、1.4mmol)を添加し、混合物を室温で3時間撹拌した。反応混合物を水(20mL)で希釈し、ジクロロメタン(2×20mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、2%MeOH/ジクロロメタンで溶出するCombi−Flashカラムクロマトグラフィーにより精製して、灰色がかった白色の固体として1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(モルホリン−4−カルボニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物89、200mg、2ステップにわたって31%)を得た。MS(ESI)m/z 466.49[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ7.75(t,J=6.1Hz,1H),6.96(s,2H),5.47(s,1H),4.43(d,J=5.9Hz,2H),4.20(t,J=8.3Hz,2H),3.94(dd,J=6.1、7.6Hz,2H),3.64(ddd,J=6.4、8.7、14.8Hz,1H),3.57−3.45(m,4H),3.25−3.14(m,4H),1.40(s,9H)ppm、TLC系:ジクロロメタン中5%メタノール、Rf:0.6。
化合物90の合成は、以下の一般手順6dの手順に従った。
メタノール(5mL)中1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(モルホリン−4−カルボニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物89、200mg、0.43mmol)の溶液に、重炭酸ナトリウム(NaHCO3、108mg、1.3mmol)を添加した。反応混合物を50℃で4時間撹拌した後、反応混合物を室温に冷却し、揮発物を蒸発させ、結果として生じた残渣をEtOAc(20mL)で希釈し、水(2×10mL)で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。結果として生じた固体をジエチルエーテル及びn−ペンタンで粉砕し、高真空下で1時間乾燥させて、淡黄色のガム状固体として(3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−イル)(モルホリノ)メタノン(化合物90、150mg、92%)を得た。TLC系:ジクロロメタン中5%メタノール、Rf:0.3。
化合物91の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(5mL)中(3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−イル)(モルホリノ)メタノン(化合物90、120mg、0.31mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.09mL、0.63mmol)、続いて、チアゾール−4−塩化カルボニル(51mg、0.35mmol)を添加した。室温で3時間撹拌した後、反応混合物を水(10mL)で希釈し、ジクロロメタン(3×20mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、20%アセトン/ジクロロメタンで溶出するCombi−Flashカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色の固体として(3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−(チアゾール−4−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−イル)(モルホリノ)メタノン(化合物91、50mg、32%)を得た。m/z 493.16[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ9.20(d,J=1.5Hz,1H),9.04(s,1H),7.87(t,J=6.1Hz,1H),6.99(dd,J=3.4,13.2Hz,2H),5.65(s,1H),4.53(d,J=6.4Hz,2H),4.22(t,J=8.6Hz,2H),3.98(t,J=6.8Hz,2H),3.75−3.64(m,1H),3.59−3.49(m,4H),3.26−3.17(m,4H)ppm、TLC系:ジクロロメタン中30%アセトン、Rf:0.6。
化合物92の合成は、以下の一般手順8bの手順に従った。
ジクロロメタン(10mL)中アリル3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物88、100mg、0.23mmol)の冷却溶液(0℃)をアルゴン流で15分間脱気し、その後、これにフェニルシラン(PhSiH3、0.075mL、0.69mmol)、続いて、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(Pd(PPh3)4、13mg、0.01mmol)を添加した。反応混合物を室温で3時間撹拌し、その後、Celiteパッドを通して濾過し、濾液を蒸発させた。残渣を、4%MeOH−ジクロロメタンで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色のガム状液体として1−(3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物92、30mg、37%)を得た。MS(ESI)m/z 353.27[M+H]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ11.54(s,1H),7.01−6.70(m,2H),5.71(br s,1H),5.48(s,1H),4.65(s,1H),4.40−3.97(m,4H),3.71(s,2H),1.30−0.83(s,9H)ppm、TLC系:ジクロロメタン中5%MeOH、Rf:0.4。
化合物93の合成は、以下の一般手順8b及び5dの手順に従った。
ジクロロメタン(15mL)中アリル3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物88、200mg、0.46mmol)の冷却溶液(0℃)をアルゴン流で15分間脱気し、その後、これにフェニルシラン(PhSiH3、0.16mL、1.38mmol)、続いて、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(Pd(PPh3)4、26mg、0.02mmol)を添加した。反応混合物を室温で3時間撹拌した。出発材料が完全に消費された後(TLCにより監視)、混合物を0℃に冷却し、これにトリエチルアミン(TEA、0.16mL、1.1mmol)、続いて、塩化ピバロイル(0.06mL、0.46mmol)を添加した。室温で2時間撹拌した後、反応混合物を水(10mL)で希釈し、ジクロロメタン(3×15mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、20%EtOAc/ヘキサンで溶出するCombi−Flashカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色のガム状材料として1−(3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物93、40mg、2ステップにわたって20%)を得た。m/z:437.21[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ7.72(t,J=6.4Hz,1H),6.94−6.90(m,2H),5.44(s,1H),4.63(s,1H),4.43−4.28(m,3H),4.10(s,1H),3.79(s,1H),3.63−3.58(m,1H),1.37(s,9H),1.07(s,9H)ppm、TLC系:ヘキサン中30%酢酸エチル、Rf:0.4。
化合物94の合成は、以下の一般手順8b及び22の手順に従った。
ジクロロメタン(25mL)中アリル3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物88、550mg、1.3mmol)の冷却溶液(0℃)をアルゴン流で15分間脱気し、その後、これにフェニルシラン(PhSiH3、0.46mL、3.8mmol)、続いて、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(Pd(PPh3)4、72mg、0.06mmol)を添加した。反応混合物を室温で3時間撹拌した。出発材料が完全に消費された後(TLCにより監視)、混合物を0℃に冷却し、これにトリエチルアミン(TEA、0.35mL、2.52mmol)、続いて、塩化メタンスルホニル(MsCl、0.1mL、1.3mmol)を添加した。混合物を室温で2時間撹拌した。反応混合物を水(20mL)で希釈し、ジクロロメタン(3×20mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、70%ジクロロメタン/ヘキサンで溶出するCombi−Flashカラムクロマトグラフィーにより精製して、灰色がかった白色の固体として1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(メチルスルホニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物94、160mg、2ステップにわたって29%)を得た。m/z 431.17[M+H]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ7.78(t,J=6.1Hz,1H),7.01−6.93(m,2H),5.51(s,1H),4.44(d,J=6.4Hz,2H),4.18−4.08(m,2H),3.96(t,J=7.6Hz,2H),3.78−3.65(m,1H),3.02(s,3H),1.42(s,9H)ppm、TLC系:ジクロロメタン、Rf:0.4。
化合物95の合成は、以下の一般手順6dの手順6に従った。
メタノール(5mL)中1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(メチルスルホニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物94、140mg、0.33mmol)の溶液に、重炭酸ナトリウム(NaHCO3、82mg、0.98mmol)を添加し、反応混合物を室温で4時間撹拌した。揮発物を蒸発させ、結果として生じた残渣をEtOAc(20mL)で希釈し、水(2×10mL)で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をジエチルエーテル及びn−ペンタンで粉砕し、高真空下で乾燥させて、淡黄色の固体としてN−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(メチルスルホニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物95、90mg、80%)を得た。m/z 347.19[M+H]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ11.54(br s,1H),6.96−6.78(m,2H),5.85−5.44(m,2H),4.30(d,J=6.4Hz,2H),4.10(t,J=7.8Hz,2H),3.87(t,J=7.3Hz,2H),3.73(br s,1H),3.03(s,3H)ppm、TLC系:ジクロロメタン中5%メタノール、Rf:0.4。
化合物96の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(4mL)中N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(メチルスルホニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物95、70mg、0.202mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.07mL、0.51mmol)、続いて、チアゾール−4−塩化カルボニル(32.7mg、0.22mmol)を添加した。その後、混合物を室温で3時間撹拌した。反応混合物を水(10mL)で希釈し、ジクロロメタン(3×15mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。結果として生じた残渣を、5%アセトン/ジクロロメタンで溶出するCombi−Flashカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色の固体として(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(メチルスルホニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(チアゾール−4−イル)メタノン(化合物96、50mg、54%)を得た。m/z 458.14[M+H]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ9.20(d,J=2.0Hz,1H),9.08(d,J=2.0Hz,1H),7.91(t,J=6.1Hz,1H),7.07−6.85(m,2H),5.66(s,1H),4.53(d,J=5.9Hz,2H),4.21−4.11(m,2H),4.02(t,J=7.3Hz,2H),3.83−3.72(m,1H),3.03(s,3H)ppm、TLC系:ジクロロメタン中10%アセトン、Rf:0.5。
化合物97の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(5mL)中アリル3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物87、100mg、0.28mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.1mL、0.71mmol)、続いて、チアゾール−4−塩化カルボニル(41.8mg、0.28mmol)を添加した。混合物を室温で3時間撹拌した。反応混合物を水(10mL)で希釈し、ジクロロメタン(3×15mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、2%MeOH/ジクロロメタンで溶出するCombi−Flashカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色の固体としてアリル3−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−(チアゾール−4−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物97、60mg、45%)を得た。m/z 464.15[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ9.20(d,J=1.5Hz,1H),9.03(d,J=2.0Hz,1H),7.88(t,J=6.4Hz,1H),7.02(d,J=3.4Hz,1H),6.97(d,J=3.9Hz,1H),5.98−5.84(m,1H),5.70(s,1H),5.27(dd,J=1.7,17.4Hz,1H),5.18(dd,J=1.5、10.3Hz,1H),4.51(dd,J=5.9,10.3Hz,4H),4.25(br s,2H),4.00(br s,2H),3.76(tt,J=6.2,8.7Hz,1H)ppm、TLC系:ジクロロメタン中5%MeOH、Rf:0.6。
中間体44の合成は、以下の一般手順13の手順に従った。
乾燥ジメチルホルムアミド(DMF、100mL)中1−(tert−ブトキシカルボニル)ピロリジン−2−カルボン酸(20g、92.9mmol)の冷却溶液(0℃)に、炭酸セシウム(Cs2CO3、103g、316mmol)、続いて、ヨードメタン(MeI、12mL、186mmol)を添加した。室温で16時間撹拌した後、水(100mL)を添加し、EtOAc(2×100mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、10〜15%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、淡黄色の液体として1−tert−ブチル−2−メチルピロリジン−1,2−ジカルボキシレート(中間体44、19g、収率90%)を得た。TLC系:ヘキサン中20%酢酸エチル、Rf:0.5。
中間体45の合成は、以下の一般手順6cの手順に従った。
1,4−ジオキサン(120mL)中1−tert−ブチル−2−メチルピロリジン−1,2−ジカルボキシレート(中間体44、19g、83mmol)の冷却溶液(0℃)に、HCl(1,4−ジオキサン中4M、95mL)を添加し、その後、反応物を室温で5時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、ジエチルエーテルで粉砕して、白色の固体としてメチルピロリジン−2−カルボキシレート塩酸塩(中間体45、12g、収率 88%)を得た。
中間体46の合成は、以下の一般手順7の手順に従った。
THF(150mL)中メチルピロリジン−2−カルボキシレート塩酸塩(中間体45、12g、72.7mmol)の冷却溶液(0℃)に、ピリジン(23.5mL、290.9mmol)、その後、4−(ジメチルアミノ)ピリジン(DMAP、889mg、7.3mmol)、続いて、クロロギ酸アリル(15.5mL、145.4mmol)を添加した。反応混合物を室温で16時間撹拌し、その後、水(100mL)を添加し、ジクロロメタン(2×100mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、10〜15%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、無色の液体として1−アリル−2−メチルピロリジン−1,2−ジカルボキシレート(中間体46、13g、収率80%)を得た。m/z 236.00[M+Na]+、TLC系:ヘキサン中20%酢酸エチル、Rf:0.5。
中間体47の合成は、以下の一般手順2の手順に従った。
乾燥THF(50mL)中アセトニトリル(1.8mL、35.2mmol)の冷溶液(−78℃)に、n−ブチルリチウム(n−ヘキサン中2.5M、14mL、35.2mmol)を添加した。−78℃で45分間撹拌した後、乾燥THF(10mL)中1−アリル−2−メチルピロリジン−1,2−ジカルボキシレート(中間体46、5g、23.5mmol)の溶液を添加し、反応物を−78℃で1時間撹拌した。反応混合物を飽和NH4Cl溶液(20mL)で反応停止処理し、EtOAc(2×50mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、20〜25%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、茶色の液体としてアリル−2−(2−シアノアセチル)ピロリジン−1−カルボキシレート(中間体47、4.3g、収率82%)を得た。TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.2。
化合物98の合成は、以下の一般手順3の手順に従った。
エタノール(40mL)中アリル−2−(2−シアノアセチル)ピロリジン−1−カルボキシレート(中間体47、4.3g、19.4mmol)の撹拌溶液に、ヒドラジン一水和物(0.85mL、17.4mmol)を添加した。その後、反応混合物を70℃に5時間加熱した。その後、反応混合物を室温に冷却し、揮発物を蒸発させた。結果として生じた残渣を、3%MeOH−ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、無色の液体としてアリル−2−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物98、4g、収率87%)を得た。m/z 237.14[M+H]+、TLC系:ジクロロメタン中5%メタノール、Rf:0.3。
化合物99の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
乾燥MeOH(70mL)中アリル−2−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物98、4g、16.9mmol)の冷却溶液(0℃)に、5−クロロチオフェン−2−カルバルデヒド(3.9mL、33.9mmol)及び酢酸(0.1mL)、続いて、粉末4Å分子篩を添加した。反応混合物を室温で1時間撹拌した(イミンの形成がTLCにより極性のより低いスポットとして観察された)。反応混合物を冷却して0℃に戻した後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(NaCNBH3、1.52g、8.5mmol)を少量ずつに分けて添加した。その後、混合物を室温で2時間撹拌した。反応混合物を氷冷水(30mL)で反応停止処理し、Celiteパッドを通して濾過し、濾液をEtOAc(3×50mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、水性ギ酸(0.1%)中35〜40%アセトニトリルで溶出するRevelerisのC−18逆相カラムを使用した分取HPLCにより精製して、所要の化合物(3g、収率45%)を得た。この一部(100mg)を分取HPLC精製によりさらに精製して、淡黄色のガム状液体としてアリル−2−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物99、50mg)を得た。m/z 367.07[M+H]+。1H NMR(300MHz,DMSO−d6)δ11.39(br s,1H,交換可能),7.02−6.92(m,1H),6.83(br d,J=3.7Hz,1H,交換可能),6.09−5.47(m,2H),5.38−4.97(m,3H),4.81(br s,1H),4.47(br d,J=15.0Hz,2H),4.28(d,J=6.2Hz,2H),3.48(br s,2H),2.08(br d,J=6.2Hz,1H),1.95−1.58(m,3H)ppm、TLC系:ジクロロメタン中5%メタノール、Rf:0.4。
化合物100の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(50mL)中アリル−2−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物99、3.5g、9.6mmol)の冷却溶液(0℃)に、塩化トリメチルアセチル(1.1mL、8.6mmol)、続いて、トリエチルアミン(TEA、1.9mL、14.3mmol)を添加した。室温で2時間撹拌した後、水(25mL)を添加し、混合物をジクロロメタン(3×40mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、10%EtOAc/n−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、淡黄色のガム状液体として所望の化合物(3g、収率69%)を得た。一部(120mg)を分取HPLC精製によりさらに精製して、淡黄色のガム状液体としてアリル−2−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物100、50mg)を得た。m/z 451.17[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.49−7.31(m,1H),6.83−6.66(m,2H),6.07−5.74(m,1H),5.38−5.26(m,1H),5.24−5.06(m,2H),4.98−4.77(m,1H),4.64−4.46(m,2H),4.34(d,J=5.9Hz,2H),3.67−3.41(m,2H),2.27−1.80(m,4H),1.44(s,9H)ppm、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.7。
化合物101の合成は、以下の一般手順8bの手順に従った。
ジクロロメタン(30mL)中アリル−2−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物100、1.5g、3.3mmol)の撹拌溶液をアルゴン流で15分間脱気し、その後、混合物にテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(Pd(PPh3)4、193mg、0.16mmol)、続いて、フェニルシラン(PhSiH3、1.2mL、10mmol)を添加した。反応混合物を室温で45分間撹拌し、その後、Celiteパッドを通して濾過し、濾液を蒸発させた。粗残渣を、4%MeOH−ジクロロメタンで溶出するCombi−Flashシリカクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色のガム状液体として1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(ピロリジン−3−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物101、1g、収率81%)を得た。m/z 367.26[M+H]+、1H NMR(300MHz,DMSO−d6)δ7.72(br t,J=6.1Hz,1H,交換可能),6.96(s,2H),5.44(s,1H),4.42(br d,J=6.2Hz,2H),4.05(br t,J=6.6Hz,1H),3.11−2.82(m,2H),2.13−1.95(m,1H),1.87−1.65(m,3H),1.41(s,9H)ppm、TLC系:ジクロロメタン中10%メタノール、Rf:0.3。
化合物102の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(10mL)中1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物101、200mg、1.2mmol)の冷却溶液(0℃)に、4−モルホリン塩化酢酸(94mg、0.66mmol)、続いて、トリエチルアミン(TEA、0.22mL、1.6mmol)を添加した。室温で2時間撹拌した後、氷冷水(10mL)を添加し、その後、ジクロロメタン(2×15mL)で洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、50%EtOAc−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色の半固体として所望の生成物(120mg、収率81%)を得た。この材料(LCMSにより85%)の一部(160mg)を分取HPLCにより精製して、灰色がかった白色のガム状半固体として1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(2−モルホリノアセチル)ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物102、60mg)を得た。m/z 494.22[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ7.49(br s,1H),6.90(s,2H),5.34(br s,1H),5.10(br s,2H),4.42(br s,2H),3.49(br s,8H),2.98(s,2H),2.48(br s,3H),1.94(br s,2H),1.39(s,9H)ppm、TLC系:n−ヘキサン中70%酢酸エチル、Rf:0.6。
化合物103の合成は、以下の一般手順6dの手順に従った。
化合物104の合成は、以下の一般手順22の手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(20mL)中1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物101、700mg、1.9mmol)の冷溶液(0℃)に、塩化メタンスルホニル(MsCl、0.22mL、2.8mmol)、続いて、トリエチルアミン(TEA、0.6mL、4.4mmol)を添加した。混合物を室温で1時間撹拌した後、氷冷水(20mL)を添加し、ジクロロメタン(3×20mL)に抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、n−ヘキサン中20〜25%酢酸エチルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、所望の生成物(550mg、収率64%)を得た。一部(170mg)を分取HPLCクロマトグラフィーによりさらに精製して、淡黄色のガム状液体として1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(メチルスルホニル)ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物104、50mg)を得た。m/z 445.17[M+H]+;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.52−7.35(m,1H,交換可能),6.91−6.61(m,2H),5.37(s,1H),4.83(dd,J=2.7、7.1Hz,1H),4.37(d,J=5.9Hz,2H),3.63−3.36(m,2H),2.75(s,3H),2.33−1.89(m,4H),1.45(s,9H)ppm、TLC系:ジクロロメタン中5%メタノール、Rf:0.6。
化合物105の合成は、以下の一般手順6dの手順に従った。
乾燥メタノール(10mL)中1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(メチルスルホニル)ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物104、200mg、0.45mmol)の冷却溶液(0℃)に、重炭酸ナトリウム(189mg、2.25mmol)を添加した。混合物を50℃で4時間加温した後、反応混合物を室温に冷却し、水(15mL)を添加し、ジクロロメタン(3×20mL)に抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、ジクロロメタン中5〜7%メタノールで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、灰色がかった白色の固体として所要の半純粋な化合物(145mg、収率89%)を得た。一部(130mg、LCMS純度89%)を分取HPLCによりさらに精製して、白色の固体としてN−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(メチルスルホニル)ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物105、50mg)を得た。m/z 361.16[M+H]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ11.52−11.30(m,1H,交換可能),6.99−6.80(m,2H),5.68(br s,1H,交換可能),5.41(br s,1H),4.74(br s,1H),4.29(d,J=6.4Hz,2H),3.46−3.24(m,2H),2.84(br s,3H),2.21−2.06(m,1H),1.89(br d,J=5.4Hz,3H)ppm、TLC系:ジクロロメタン中5%メタノール、Rf:0.3。
化合物106の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(10mL)中N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(メチルスルホニル)ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物105、200mg、0.56mmol)の冷却溶液(0℃)に、1,3−チアゾール−4−塩化カルボニル(148mg、1.11mmol)、続いて、トリエチルアミン(TEA、0.18mL、1.4mmol)を添加した。室温で2時間撹拌した後、反応混合物をNaHCO3溶液(10mL)で反応停止処理し、ジクロロメタン(3×20mL)に抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色の半固体として所望の化合物(150mg、収率57%)を得た。一部(100mg、LCMS純度87%)を分取HPLCクロマトグラフィーによりさらに精製して、灰色がかった白色の固体として(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(メチルスルホニル)ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(チアゾール−4−イル)メタノン(化合物106、40mg)を得た。m/z 472.10[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.13(d,J=2.0Hz,1H),8.88(d,J=2.0Hz,1H),7.65(br t,J=5.6Hz,1H,交換可能),6.89−6.69(m,2H),5.44(s,1H),4.88(dd,J=3.2,8.1Hz,1H),4.49(d,J=5.9Hz,2H),3.66−3.39(m,2H),2.78(s,3H),2.37−2.16(m,2H),2.14−1.95(m,2H)ppm、TLC系:ジクロロメタン中5%メタノール、Rf:0.5。
化合物107の合成は、以下の一般手順15の手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(10mL)中1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物101、320mg、0.87mmol)の冷却溶液(0℃)に、モルホリン−4−塩化カルボニル(0.2mL、1.7mmol)、続いて、トリエチルアミン(TEA、0.29mL、2.1mmol)を添加した。室温で1時間撹拌した後、氷冷水(10mL)を添加し、その後、ジクロロメタン(2×15mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、50%EtOAc−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色の半固体として所望の生成物(170mg、収率40%)を得た。一部(160mg、LCMSにより85%)を分取HPLCにより精製して、淡黄色のガム状液体として1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(モルホリン−4−カルボニル)ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物107、45mg)を得た。m/z 480.25[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.40(br t,J=5.6Hz,1H,交換可能),6.79−6.71(m,2H),5.17(s,1H),5.04(t,J=6.8Hz,1H),4.34(d,J=5.4Hz,2H),3.71−3.58(m,4H),3.57−3.41(m,2H),3.36(ddd,J=3.4、6.4、13.2Hz,2H),3.20(ddd,J=2.9,6.4,13.2Hz,2H),2.32−2.19(m,1H),2.06−1.79(m,3H),1.45(s,9H)ppm、TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.5。
化合物108の合成は、以下の一般手順6dの手順に従った。
メタノール(10mL)中1−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−3−(1−(モルホリン−4−カルボニル)ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物107、200mg、0.42mmol)の室温溶液に、重炭酸ナトリウム(176mg、2.1mmol)を添加し、続いて、混合物を50℃に4時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、水(20mL)を添加し、ジクロロメタン(3×20mL)に抽出した。残渣を、ジクロロメタン中5〜7%メタノールで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色の半固体として所望の生成物(100mg、収率65%)を得た。材料の一部(150mg、LCMSにより70%)を分取HPLCクロマトグラフィーによりさらに精製して、灰色がかった白色の固体として(2−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−イル)(モルホリノ)メタノン(化合物108、30mg)を得た。m/z 396.21[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)10.04(br s,1H,交換可能),6.83−6.56(m,2H),5.47(s,1H),5.05(dd,J=6.8、9.3Hz,1H),4.42(br d,J=4.9Hz,2H),3.95(br s,1H,交換可能),3.76−3.51(m,4H),3.50−3.31(m,4H),3.20(ddd,J=2.9,6.4,13.2Hz,2H),2.51−2.15(m,1H),2.10−1.95(m,2H),1.93−1.73(m,1H)ppm、TLC系:ジクロロメタン中5%メタノール、Rf:0.3。
化合物109の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(15mL)中(2−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−イル)(モルホリノ)メタノン(化合物108、260mg、0.66mmol)の冷却(0℃)溶液に、1,3−チアゾール−4−塩化カルボニル(194mg、1.3mmol)、続いて、トリエチルアミン(TEA、0.22mL、0.94mmol)を添加し、混合物を0℃でさらに2時間撹拌した。その後、これに氷冷水(15mL)を添加し、混合物をジクロロメタン(2×15mL)で洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、5〜10%THF−EtOAcで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色の固体として((2−(5−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチルアミノ)−1−(チアゾール−4−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−イル)(モルホリノ)メタノン(化合物109、75mg)を得た。m/z:507.22[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=9.18(d,J=2.0Hz,1H),8.87(d,J=2.0Hz,1H),7.64(t,J=6Hz,1H,交換可能),6.95−6.65(m,2H),5.27(s,1H),5.07(t,J=7.2Hz,1H),4.46(d,J=5.9Hz,2H),3.73−3.46(m,6H),3.38(ddd,J=2.9,6.4,13.2Hz,2H),3.20(ddd,J=2.9,6.4,13.2Hz,2H),2.43−2.25(m,1H),2.10−1.79(m,3H)ppm、TLC系:10%THF−EtOAc。Rf:0.5。
中間体48の合成は、以下の一般手順25の手順に従った。
エチルピペリジン−4−カルボキシレート(1.0g、6.4mmol、1.0当量)を無水アセトニトリル(25.0mL)中に溶解し、続いて、炭酸セシウム(4.15g、12.7mmol、2.0当量)を添加し、反応混合物を室温で30分間撹拌した。その後、反応物を0℃に冷却し、4−(2−クロロエチル)モルホリン塩酸塩(1.42g、7.6mmol、1.2当量)を添加した。混合物を緩徐に周囲温度に上昇させ、80℃で12時間撹拌した。反応完了後(TLC及びLC−MSにより監視)、反応混合物を冷水(10mL)で希釈し、酢酸エチル(3×20mL)で抽出した。有機層を水で洗浄し、減圧下で濃縮して、黄色の残渣を得て、これを、ヘキサン中45%酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィー(シリカ、100〜200メッシュ)により精製して、エチル−1−(2−モルホリノエチル)ピペリジン−4−カルボキシレート(中間体48、1.07g、収率62%)を得た。
中間体49の合成は、以下の一般手順2の手順に従った。
窒素ガス流での不活性雰囲気下で、アセトニトリル(1.14g、27.8mmol、1.5当量)をテトラヒドロフラン(30.0mL)中に添加し、−78℃に冷却した。これにn−BuLi(n−ヘキサン中2.5M、1.77mL、27.8mmol、1.5当量)を1時間にわたって滴加し、反応物をさらに60分間撹拌した。エチル−1−(2−モルホリノエチル)ピペリジン−4−カルボキシレート(中間体48、5.0g、18.5mmol、1.0当量)を反応混合物に少量ずつに分けて添加し、−78℃で3時間撹拌した。反応物を飽和塩化アンモニウム溶液で反応停止処理し、生成物を酢酸エチル(3×20mL)で抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮して残渣を得て、これを酢酸エチルで洗浄し、次のステップで「そのまま」使用した((3−(1−(2−モルホリノエチル)ピペリジン−4−イル)−3−オキソプロパンニトリル、中間体49、4.5g、収率92%)。m/z 266.03。
化合物110の合成は、以下の一般手順3の手順に従った。
イソプロパノール(50mL)及び酢酸(1.02g)中3−(1−(2−モルホリノエチル)ピペリジン−4−イル)−3−オキソプロパンニトリル(中間体49、4.5g、17.1mmol、1.0当量)の溶液に、ヒドラジン一水和物(0.9g、18.2mmol、1.1当量)を滴加し、反応物を80℃で5時間撹拌した。反応混合物をTLC及びLC−MSにより監視し、完了後、反応混合物を減圧下で濃縮して残渣を得て、これを、シリカゲル(100〜200メッシュ)を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製した。生成物をジクロロメタン中10%メタノールで溶出して、3−(1−(2−モルホリノエチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物110、4.0g、収率83%)を得た。m/z 280.13[M+1]+。
化合物111の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
MeOH(40.0mL)及び氷酢酸(0.431g)中3−(1−(2−モルホリノエチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物110、2.0g、7.2mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、5−クロロチオフェン−2−カルバルデヒド(1.265g、8.6mmol、1.2当量)を滴加した。反応混合物を緩徐に周囲温度に上昇させ、その後、1日撹拌した。完了後(TLC及びLC−MSにより監視)、混合物を冷却して0℃に戻し、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(0.68g、10.7mmol、1.5当量)を添加した。混合物を室温で4時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して黄色の残渣を得て、これを冷水(20mL)で希釈し、酢酸エチル(3×20mL)で抽出し、移動相としてジクロロメタン中6%MeOHで溶出するカラムクロマトグラフィー(60〜120メッシュ)により精製して、N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(2−モルホリノエチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物111、0.60g、収率20%)を得た。m/z 412.00[M+2]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.33(s,1H),6.91(d,J=2.9Hz,1H),6.84(s,1H),5.67(s,1H),5.28(s,1H),4.28(d,J=5.4Hz,2H),3.56(s,5H),2.98(s,2H),2.42(d,J=24.9Hz,7H),2.10(s,2H),1.81(s,2H),1.58(s,2H)ppm。
化合物112の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(10.0mL)中ピバル酸(49.0mg、0.49mmol、1.0当量)の溶液に、DIEA(130mg、1.0mmol、2.0当量)、HOBt(66.0mg、0.49mmol、1.0当量)、及びEDCI−HCl(143mg、0.75mmol、1.5当量)を添加し、反応混合物を室温で30分間撹拌した。その後、N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(2−モルホリノエチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物111、200mg、0.49mmol、1.0当量)を反応混合物に添加し、室温でさらに12時間撹拌させた。完了後、反応混合物を濃縮し、氷冷水中に注ぎ、酢酸エチル(3×50mL)で抽出した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して残渣を得て、これを、100%MeCN及び水中0.1%ギ酸を使用した分取HPLCにより精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(1−(2−モルホリノエチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物112、60.0mg、収率25%)を得た。m/z 495.53[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.20(s,1H),7.67(t,J=6.2Hz,1H),7.07−6.86(m,2H),5.39(s,1H),4.41(d,J=6.0Hz,2H),3.62−3.51(m,4H),2.93(d,J=11.7Hz,2H),2.50−2.31(m,9H),2.10(dd,J=13.3,7.1Hz,2H),1.83(d,J=12.3Hz,2H),1.66−1.53(m,2H),1.40(s,9H),1.35(s,1H)ppm。
化合物113の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(10mL)中ヒドロキシピバル酸(60.0mg、0.49mmol、1.0当量)の溶液に、DIPEA(130.0mg、0.98mmol、2.0当量)、HOBt(66.0mg、0.49mmol、1.0当量)、その後、EDCI−HCl(143.0mg、0.75mmol、1.5当量)を添加した。混合物を室温で30分間撹拌した。これにN−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(2−モルホリノエチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物111、200.0mg、0.49mmol、1.0当量)を添加し、混合物を室温でさらに12時間撹拌させた。完了後、反応混合物を濃縮し、氷冷水中に注ぎ、酢酸エチル(3×50mL)で抽出した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して残渣を得て、これを、100%MeCN及び水中0.1%ギ酸を使用した分取HPLCにより精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(1−(2−モルホリノエチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物113、55.0mg、収率22%)を得た。m/z 510.78[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.21(s,1H),7.67(t,J=6.2Hz,1H),6.97(q,J=3.8Hz,2H),5.38(s,1H),4.40(d,J=6.2Hz,2H),3.86(s,2H),3.59−3.53(m,4H),2.95(d,J=11.2Hz,2H),2.43(d,J=6.7Hz,3H),2.38(s,4H),2.12(t,J=11.1Hz,2H),1.83(d,J=11.8Hz,2H),1.67−1.51(m,2H),1.30(s,6H),1.03(s,1H)ppm。
中間体50の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
ジクロロメタン(2.0mL)中エチルピペリジン−4−カルボキシレート(0.2g、1.3mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.34mL、2.6mmol、2.0当量)、続いて、塩化クロロアセチル(0.13mL、1.5mmol、1.2当量)を滴加した。その後、これを室温で6時間撹拌した。反応物をTLC及びLCMSにより監視し、完了後、反応混合物を冷水(10mL)で希釈し、生成物を、ジクロロメタン(2×10mL)を使用して抽出した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で蒸発させて残渣を得て、これをジクロロメタン中3%メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、エチル−1−(2−クロロアセチル)ピペリジン−4−カルボキシレート(中間体50、210mg、収率70%)を得た。m/z 234.21[M+H]+1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.39−4.32(m,1H),4.17(q,J=7.1Hz,2H),4.09(d,J=1.4Hz,2H),3.85(d,J=13.6Hz,1H),3.22(tt,J=16.0,7.9Hz,1H),2.99−2.86(m,1H),2.58(tt,J=10.5,4.0Hz,1H),2.05−1.94(m,1H),1.87−1.76(m,1H),1.69(dt,J=11.0,5.3Hz,2H),1.28(t,J=7.1Hz,3H)ppm。
中間体51の合成は、以下の一般手順25の手順に従った。
アセトニトリル(2.0mL)中モルホリン(0.08mL、1.0mmol、1.2当量)の溶液に、炭酸カリウム(0.355g、2.4mmol、3.0当量)を添加し、室温で10〜15分間撹拌した。混合物にアセトニトリル(2.0mL)中エチル−1−(2−クロロアセチル)ピペリジン−4−カルボキシレート(中間体50、0.2g、0.8mmol、1.0当量)の溶液を添加し、その後、室温で14時間撹拌した。反応完了後(TLC及びLCMSにより監視)、反応混合物を酢酸エチル(20mL)で希釈し、水(50mL)で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で蒸発させて、粗生成物を得た。これを、ジクロロメタン中4%メタノールで溶出するシリカ(60〜120メッシュ)を通すカラムクロマトグラフィーにより精製して、エチル−1−(2−モルホリノアセチル)ピペリジン−4−カルボキシレート(中間体51、0.141g、収率69%)を得た。m/z 285.42[M+H]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ4.19(d,J=13.1Hz,1H),4.11−4.02(m,2H),3.97(d,J=13.7Hz,1H),3.60−3.50(m,4H),3.21(d,J=13.3Hz,1H),3.07(dd,J=21.2,12.3Hz,2H),2.76−2.65(m,1H),2.59(tt,J=11.0,3.9Hz,1H),2.41−2.33(m,4H),1.83(t,J=12.5Hz,2H),1.54(ddd,J=24.5,11.5,4.0Hz,1H),1.35(dt,J=11.3,7.5Hz,1H),1.22−1.15(m,3H)ppm。
中間体52の合成は、以下の一般手順2の手順に従った。
窒素ガス流での不活性雰囲気下で、アセトニトリル(0.12mL、2.9mmol、1.7当量)をTHF(7.5mL)に添加し、−78℃に冷却した。n−BuLi(n−ヘキサン中2.5M、1.2mL、2.9mmol、1.7当量)を20分間にわたって滴加し、反応物をさらに60分間撹拌した。エチル−1−(2−モルホリノアセチル)ピペリジン−4−カルボキシレート(中間体51、0.5g、1.7mmol、1.0当量)を反応混合物に一度に添加し、温度を−78℃で1時間維持し、その後、室温で14時間撹拌した。反応物を飽和塩化アンモニウム溶液で反応停止処理し、生成物を酢酸エチル(3×20mL)で抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これを酢酸エチルで洗浄し、次のステップで使用した。3−(1−(2−モルホリノアセチル)ピペリジン−4−イル)−3−オキソプロパンニトリル(中間体52、0.294g、収率60%)。m/z 280.44[M+H]+ 1H NMR(400MHz,DMSO)δ4.39−4.25(m,1H),4.07−3.97(m,2H),3.60−3.52(m,4H),3.20−3.12(m,1H),3.02(d,J=13.4Hz,2H),2.91−2.83(m,1H),2.37(s,4H),1.99(s,2H),1.51(d,J=15.6Hz,1H),1.45−1.36(m,1H),1.17(t,J=7.1Hz,2H)ppm。
化合物114の合成は、以下の一般手順3の手順に従った。
イソプロパノール(9.0mL)及び酢酸(0.6mL)中3−(1−(2−モルホリノアセチル)ピペリジン−4−イル)−3−オキソプロパンニトリル(中間体52、0.29g、1mmol、1.0当量)の溶液に、ヒドラジン一水和物(0.5mL、1.0mmol、1.0当量)を滴加し、反応物を80℃で12時間撹拌した。反応混合物をTLC及びLC−MSにより監視し、完了後、混合物を減圧下で濃縮して、粗残渣を得た。これを、ジクロロメタン中8%メタノールで溶出するシリカゲル(100〜200メッシュ)を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製して、1−(4−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−イル)−2−モルホリノエタン−1−オン(化合物114、0.164g、収率54%)を得た。m/z 294.03[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ5.17(s,1H),4.34(d,J=13.1Hz,1H),4.10−4.01(m,1H),3.56(s,4H),3.30−3.22(m,1H),3.05(t,J=14.3Hz,2H),2.73−2.54(m,2H),2.51(s,2H),2.36(d,J=19.7Hz,3H),1.89(d,J=15.2Hz,2H),1.84(t,J=13.0Hz,2H),1.50(dd,J=22.8,10.4Hz,1H),1.37−1.19(m,1H)ppm。
化合物115の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
メタノール(30mL)中1−(4−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−イル)−2−モルホリノエタン−1−オン(化合物114、1.5g、5.0mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、氷酢酸(0.33mL)、その後、5−クロロチオフェン−2−カルバルデヒド(0.75g、5.0mmol、1.0当量)を滴加した。反応混合物を室温で16時間撹拌した。完了後(TLC及びLC−MSにより監視)、混合物を冷却して0℃に戻し、その後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(0.63g、10.0mmol、2.0当量)を添加し、室温で14時間撹拌した。反応混合物を減圧下で緩徐に濃縮して黄色の残渣を得て、その後、酢酸エチル(100mL)で希釈し、次いで、水(25mL)で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した後、有機相を減圧下で濃縮して残渣を得て、これを、ジクロロメタン中5%メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィー(60〜120メッシュ)により精製して、1−(4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−イル)−2−モルホリノエタン−1−オン(化合物115、0.75g、収率60%)を得た。m/z 424.67[M+1]+ 1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.41(s,1H),6.88(dd,J=29.5、3.7Hz,2H),5.69(t,J=6.1Hz,1H),5.28(s,1H),4.32(dd,J=27.0、9.8Hz,2H),4.09(dd,J=21.6,9.2Hz,1H),3.65−3.52(m,4H),3.28−3.10(m,1H),3.04(d,J=13.2Hz,2H),2.76(d,J=11.6Hz,1H),2.62(dd,J=25.3,12.3Hz,2H),2.36(d,J=22.6Hz,4H),1.87(dd,J=23.9,12.8Hz,2H),1.51(dd,J=21.4,12.1Hz,1H),1.40−1.24(m,1H)ppm。
化合物116の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(2.5mL)中ピバル酸(0.10g、1.0mmol、1.1当量)の溶液に、DIEA(0.21mL、1.2mmol、1.5当量)、HOBt(0.021g、0.16mmol、0.2当量)、その後、EDCI.HCl(0.23g、1.2mmol、1.5当量)を添加し、混合物を室温で30分間撹拌した。その後、1−(4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−イル)−2−モルホリノエタン−1−オン(化合物115、0.35g、0.8mmol、1.0当量)を混合物に添加し、室温で14時間撹拌させた。完了後、反応混合物を濃縮し、氷冷水(5.0mL)中に注ぎ、酢酸エチル(3×10mL)で抽出した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して残渣を得て、これを、ヘキサン中50%酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(1−(2−モルホリノアセチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物116、46mg、収率11%)を得た。m/z 509.03[M+H]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.69(t,J=6.2Hz,1H),6.96(t,J=3.6Hz,2H),5.39(s,1H),4.41(d,J=6.4Hz,2H),4.29(d,J=14.3Hz,1H),4.03(d,J=12.2Hz,1H),3.56(s,4H),3.25(d,J=13.2Hz,1H),3.10(d,J=11.6Hz,1H),3.04(d,J=13.3Hz,1H),2.70(d,J=22.7Hz,3H),2.39(s,3H),1.88(s,2H),1.61(s,2H),1.40(s,9H)ppm。
化合物117の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(6.0mL)中ヒドロキシピバル酸(0.1g、0.9mmol、1.0当量)の溶液に、DIEA(0.18mL、1.0mmol、1.5当量)、HOBt(0.018g、0.14mmol、0.2当量)、その後、EDCI.HCl(0.13g、1.0mmol、1.5当量)を添加し、混合物を室温で30分間撹拌した。その後、混合物に1−(4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−イル)−2−モルホリノエタン−1−オン(化合物115、0.30g、0.7mmol、1.0当量)を添加し、反応混合物を室温で16時間撹拌した。完了後、反応混合物を濃縮し、氷冷水(5.0mL)中に注ぎ、酢酸エチル(3×10mL)で抽出した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して残渣を得て、これを、移動相として100%MeCN及び水を使用した分取HPLCにより精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(1−(2−モルホリノアセチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物117、38.0mg、収率10%)を得た。m/z 524.83[M+H]+;1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.69(t,J=6.0Hz,1H),6.96(q,J=3.7Hz,2H),5.39(s,1H),4.83(t,J=5.4Hz,1H),4.41(d,J=6.1Hz,2H),4.28(d,J=12.3Hz,1H),4.03(d,J=13.0Hz,1H),3.86(d,J=5.5Hz,2H),3.56(s,4H),3.24(d,J=13.3Hz,1H),3.18−3.01(m,2H),2.73(dd,J=23.5、12.4Hz,2H),2.36(d,J=22.9Hz,4H),1.87(s,2H),1.60(d,J=12.5Hz,1H),1.37(d,J=11.6Hz,1H),1.31(s,6H)ppm。
化合物118の合成は、以下の一般手順15の手順に従った。
ジクロロメタン(10mL)中N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(0.5g、1.7mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.26g、2.6mmol、1.5当量)を添加し、10〜15分間撹拌した。その後、モルホリン−4−塩化カルボニル(0.25g、1.7mmol、1.0当量)を添加し、室温で2時間撹拌した。反応物をTLC及びLC−MSにより監視した。完了後、溶媒を蒸発させて残渣を得て、これを、ジクロロメタン中5%メタノールで溶出するシリカゲル(60〜120メッシュ)を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製して、(4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−イル)(モルホリノ)メタノン(化合物118、0.24g、収率34%)を得た。m/z 410.37[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.34(s,1H),6.91(d,J=3.7Hz,1H),6.84(d,J=3.3Hz,1H),5.66(s,1H),5.29(s,1H),4.28(d,J=6.1Hz,2H),3.62(d,J=13.1Hz,2H),3.57(dd,J=13.4,9.1Hz,4H),3.18−3.01(m,4H),2.80(t,J=11.7Hz,2H),2.66(s,1H),1.81(d,J=11.0Hz,2H),1.53−1.32(m,2H)ppm。
化合物119の合成は、以下の一般手順5cの手順に従った。
THF(5.0mL)中4−ヒドロキシ−1−メチルシクロヘキサン−1−カルボン酸(0.15g、0.95mmol、1.3当量)の冷却溶液(0℃)に、窒素下で、TBTU(0.35g、1.1mmol、1.5当量)及びDIEA(0.38mL、2.2mmol、3.0当量)を添加した。反応混合物を30分間撹拌し、これに(4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(4−ヒドロキシ−1−メチルシクロヘキサン−1−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−イル)(モルホリノ)メタノン(化合物118、0.298g、0.73mmol、1.0当量)を添加し、その後、混合物を室温で14時間撹拌した。反応物をLC−MSにより監視し、完了後、混合物を濃縮して残渣を得て、これを、移動相として水−アセトニトリル中0.1%ギ酸を使用した分取HPLCにより精製して、(4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(4−ヒドロキシ−1−メチルシクロヘキサン−1−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−イル)(モルホリノ)メタノン(化合物119、0.053g、収率10%)を得た。m/z 550.68[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.68(s,1H),6.95(s,2H),5.39(s,1H),4.40(t,1H),4.40(d,2H),3.52(d,J=29.7Hz,6H),3.11(m,4H),2.84(m,2H),2.58(m,1H),2.53(m,3H),1.98(d,J=36.1Hz,2H),1.84(m,3H),1.54(d,J=30.8Hz,2H),1.42(m,6H)ppm。
化合物120の合成は、以下の一般手順25の手順に従った。
アセトニトリル(10mL)中N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(0.1g、2.4mmol、1当量)の冷却溶液(0℃)に、2−クロロ−1−モルホリノエタン−1−オン(1.23mL、2.4mmol、1.0当量)、その後、炭酸カリウム(0.102g、7.2mmol、3.0当量)を添加した。反応混合物を室温で12時間撹拌した。反応進行をTLCにより監視した。反応混合物を水(10mL)で希釈し、ジクロロメタン(2×10mL)で抽出し、合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮して、粗生成物を得た。この残渣を、ジクロロメタン中6%メタノールで溶出するCombi−Flashクロマトグラフィーにより精製して、2−(4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−イル)−1−モルホリノエタン−1−オン(化合物120、0.60g、収率57%)を得た。m/z 424.42[M+1]+、1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.29(s,1H),6.91(d,J=3.7Hz,1H),6.84(d,J=3.6Hz,1H),5.62(s,1H),5.28(s,1H),4.29(d,J=6.2Hz,2H),3.50−3.56(m,4H),3.40−3.43(m,4H),3.14(s,2H),2.84(d,J=11.3Hz,2H),2.44(s,1H),2.07(t,J=10.7Hz,2H),1.81(d,J=11.3Hz,2H),1.53(dd,J=21.3,11.9Hz,2H)ppm。
化合物121の合成は、以下の一般手順5dの手順に従った。
ジクロロメタン(10mL)中2−(4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−イル)−1−モルホリノエタン−1−オン(化合物120、0.15g、3.5mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.11g、11mmol、3当量)、続いて、塩化ピバロイル(0.042g、3.5mmol、1当量)を添加した。反応混合物を室温で14時間撹拌した。完了後、混合物を減圧下で濃縮して、粗残渣を得た。これを、ヘキサン中60%酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(1−(2−モルホリノ−2−オキソエチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物121、0.15g、収率83%)を得た。m/z 508.48[M+1]+、1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.68(d,J=6.3Hz,1H),6.96(d,J=3.8Hz,2H),5.39(s,1H),4.41(d,J=5.9Hz,2H),3.50−3.55(m,5H),3.41(d,J=11.7Hz,2H),3.13(s,2H),2.83(d,J=10.6Hz,2H),2.38(d,J=34.4Hz,1H),2.09(t,J=10.9Hz,2H),1.84(d,J=11.3Hz,2H),1.56(d,J=9.2Hz,2H),1.40(s,9H),1.11(s,1H)ppm。
化合物122の合成は、以下の一般手順5cの手順に従った。
アセトニトリル(10mL)中ヒドロキシピバル酸(92mg、0.78mmol、1.0当量)の溶液に、DIEA(301mg、2.3mmol、3.0当量)、その後、TBTU(375mg、0.78mmol、1.0当量)を添加し、次いで、混合物を室温で30分間撹拌した。これに2−(4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−イル)−1−モルホリノエタン−1−オン(化合物120、0.33g、0.78mmol、1.0当量)を添加し、反応物を室温で12時間撹拌した。完了後、混合物を減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これを、100%MeCN及び水中0.1%ギ酸を使用した分取HPLCにより精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(1−(2−モルホリノ−2−オキソエチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−yl)−3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物122、50mg、収率12%)を得た。m/z 524.63[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.74(d,J=6.1Hz,1H),6.97(s,2H),5.39(s,1H),4.85(t,J=5.4Hz,1H),4.42(d,J=6.2Hz,2H),4.30−4.06(m,1H),3.87(d,J=5.4Hz,2H),3.66−3.54(m,4H),3.50(s,2H),3.38(d,J=17.7Hz,2H),3.03(s,2H),2.68(s,2H),2.38−1.74(m,6H),1.32(s,6H)ppm。
化合物123の合成は、以下の一般手順22の手順に従った。
ジクロロメタン(4mL)中N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(0.1g、0.24mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.1g、0.98mmol、4.0当量)を添加した。15分間撹拌した後、塩化メタンスルホニル(MsCl、0.025g、0.22mmol、0.9当量)を添加した。反応混合物を室温で4時間撹拌し、TLC及びLC−MSにより監視した。反応完了後、反応混合物を水(10mL)中に注ぎ、酢酸エチル(2×10mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させて残渣を得て、これを、移動相として水−アセトニトリルを使用した分取HPLCにより精製して、N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(メチルスルホニル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物123、0.05g、収率40%)を得た。m/z 375.31[M+1]+1347 1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.39(s,1H),6.97−6.81(m,2H),5.73(d,J=32.5Hz,1H),5.32(s,1H),4.29(d,J=6.0Hz,2H),3.57(d,J=12.6Hz,2H),2.87(s,3H),2.78(t,J=11.0Hz,2H),2.61(s,1H),1.93(d,J=13.0Hz,2H),1.66−1.52(m,2H)ppm。
化合物124の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(8mL)中ピバル酸(0.098g、0.96mmol、1.5当量)の冷却溶液(0℃)に、EDCI.HCl(0.18g、0.96mmol、1.5当量)、その後、トリエチルアミン(TEA、0.194g、1.92mmol、3.0当量)であった。反応混合物を30分間撹拌し、その後、これにHOBt(0.017g、0.13mmol、0.2当量)及びN−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(メチルスルホニル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物123、0.24g、0.64mmol、1当量)を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。完了後(LC−MSにより監視)、反応混合物を水(15mL)中に注ぎ、酢酸エチル(2×15mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、粗化合物を得た。これを、移動相として水−アセトニトリルを使用した分取HPLCにより精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(1−(メチルスルホニル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物124、0.035g、収率11%)を得た。m/z 459.43[M+]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.70(t,J=6.2Hz,1H),7.04−6.92(m,2H),5.46(d,J=13.5Hz,1H),4.42(d,J=6.1Hz,2H),3.57(d,J=11.8Hz,2H),2.99−2.73(m,5H),2.60(dd,J=24.9,13.6Hz,1H),1.98(d,J=10.9Hz,2H),1.62(td,J=15.1,3.7Hz,2H),1.51−1.35(m,9H)ppm。
化合物125の合成は、以下の一般手順5bの手順に従った。
THF(8mL)中ヒドロキシピバル酸(0.119g、1.1mmol、1.5当量)の溶液に、プロピルホスホン酸無水物(酢酸エチル中50%溶液中T3P、0.318g、1.0mmol、1.5当量)、DIEA(0.20g、2mmol、3eq)、その後、N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(メチルスルホニル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物123、0.25g、0.66mmol、1当量)を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応完了後(LC−MSにより監視)、混合物を水(20mL)中に注ぎ、酢酸エチル(2×30mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させて残渣を得て、これを、移動相として水−アセトニトリルを使用した分取HPLCにより精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(1−(メチルスルホニル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物125、0.051g、収率16%)を得た。m/z 475.43[M+]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.70(d,J=6.0Hz,1H),6.97(t,J=4.0Hz,2H),5.43(s,1H),4.83(s,1H),4.41(d,J=6.4Hz,2H),3.87(d,J=5.1Hz,2H),3.56(d,J=11.2Hz,2H),3.12−2.74(m,5H),2.64(d,J=27.0Hz,2H),1.97(d,J=12.0Hz,2H),1.62(d,J=9.3Hz,2H),1.27(d,J=28.3Hz,6H)ppm。
化合物126の合成は、以下の一般手順22の手順に従った。
ジクロロメタン(4mL)中N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(0.1g、0.24mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.1g、1.0mmol、4.0当量)を添加した。15分間撹拌した後、塩化ベンゼンスルホニル(0.039g、0.22mmol、0.9当量)を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応物をTLC及びLC−MSにより監視した。反応完了後、反応混合物を水(10mL)中に注ぎ、酢酸エチル(2×10mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、粗化合物を得た。これを、移動相として水−アセトニトリルを使用した分取HPLCにより精製して、N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(フェニルスルホニル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物126、0.045g、収率31%)を得た。m/z 437.2[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.33(s,1H),8.30−7.26(m,5H),7.08−6.63(m,2H),5.68(s,1H),5.24(s,1H),4.26(d,J=6.2Hz,2H),3.65(d,J=11.1Hz,2H),2.32(t,J=11.2Hz,2H),1.89(d,J=11.4Hz,2H),1.72−1.38(m,2H)ppm。
化合物127の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(8mL)中ピバル酸(0.080g、0.78mmol、1.5当量)の冷却溶液(0℃)に、EDCI.HCl(0.15g、0.78mmol、1.5当量)及びトリエチルアミン(TEA、0.16g、1.6mmol、3.0当量)を添加した。反応混合物を30分間撹拌し、その後、HOBt(0.014g、0.1mmol、0.2当量)及びN−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(フェニルスルホニル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物126、0.23g、0.5mmol、1当量)を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。完了後(LC−MSにより監視)、反応混合物を水(15mL)中に注ぎ、酢酸エチル(2×20mL)で抽出し、その後、合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて、残渣を得た。これを、移動相として水−アセトニトリルを使用した分取HPLCにより精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(1−(フェニルスルホニル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物127、0.056g、収率20%)を得た。m/z 521.48[M+]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.83−7.51(m,6H),6.95(s,2H),5.34(s,1H),4.38(d,J=6.2Hz,2H),3.55(d,J=12.0Hz,2H),1.91(d,J=10.6Hz,2H),1.58(dt,J=34.4,17.4Hz,2H),1.34(s,9H)ppm。
化合物128の合成は、以下の一般手順5bの手順に従った。
THF(6mL)中ヒドロキシピバル酸(0.102g、0.85mmol、1.5当量)の溶液に、プロピルホスホン酸無水物(酢酸エチル中50%溶液中T3P、0.273g、0.85mmol、1.5当量)、DIEA(0.173g、1.7mmol、3当量)、続いて、N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(フェニルスルホニル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物126、0.27g、0.57mmol、1当量)を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。完了後(LC−MSにより監視)、混合物を水(20mL)中に注ぎ、酢酸エチル(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、その後、濾過し、減圧下で蒸発させて、残渣を得た。これを、移動相として水−アセトニトリルを使用した分取HPLCにより精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(1−(フェニルスルホニル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物128、0.054g、収率16%)を得た。m/z 537.54[M+]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.70(ddd,J=29.6,11.6,7.1Hz,5H),6.95(s,2H),5.33(s,1H),4.79(t,J=5.3Hz,1H),4.38(d,J=6.2Hz,2H),3.81(d,J=5.2Hz,2H),3.59(d,J=11.7Hz,2H),1.91(d,J=10.8Hz,2H),1.59(dd,J=21.2,10.6Hz,2H),1.25(s,6H)ppm。
化合物129の合成は、以下の一般手順15の手順に従った。
ジクロロメタン(10mL)中N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(0.8g、2.7mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、1.36g、13.5mmol、5.0当量)を添加した。10〜15分間撹拌した後、混合物にN,N−ジメチルカルバモイル塩化物(0.22g、2.7mmol、1.0当量)を添加し、混合物を室温で2時間撹拌した。反応物をTLC及びLC−MSにより監視した。完了後、溶媒を蒸発させて残渣を得て、これを、シリカゲル(100〜200メッシュ)を使用し、移動相としてジクロロメタン中5%メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−N,N−ジメチルピペリジン−1−カルボキサミド(化合物129、0.3g、収率30%)を得た。m/z 368.31[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.37(s,1H),6.92(d,J=3.7Hz,1H),6.84(d,J=3.6Hz,1H),5.70(s,1H),5.29(s,1H),4.28(s,2H),3.56(d,J=13.1Hz,2H),3.35(s,2H),3.15−3.02(m,1H),2.80−2.67(m,8H),2.62(d,J=11.8Hz,1H),1.81(d,J=11.6Hz,2H),1.48(dt,J=12.1,8.9Hz,2H),1.18(t,J=7.3Hz,1H)ppm。
化合物130の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(10mL)中ピバル酸(50mg、0.49mmol、1.0当量)の溶液に、DIEA(100mg、0.6mmol、1.5当量)、HOBt(11mg、0.08mmol、0.2当量)、最後にEDCI.HCl(118mg、0.6mmol、1.5当量)を添加した。溶液を室温で30分間撹拌した。その後、4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−N,N−ジメチルピペリジン−1−カルボキサミド(化合物129、150mg、0.41mmol、1.0当量)を添加し、溶液を室温でさらに12時間撹拌した。完了後、反応混合物を濃縮し、氷冷水中に注ぎ、酢酸エチル(3×50mL)で抽出した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して、残渣を得た。これを、100%アセトニトリル及び水中0.1%ギ酸を使用した分取HPLCにより精製して、4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)−N,N−ジメチルピペリジン−1−カルボキサミド(化合物130、52mg、収率28%)を得た。m/z 454.38[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.68(t,J=6.3Hz,1H),6.96(t,J=3.0Hz,2H),5.41(s,1H),4.41(d,J=6.1Hz,2H),3.54(d,J=13.2Hz,2H),2.79(t,J=11.4Hz,2H),2.73(s,6H),2.62(d,J=11.3Hz,1H),1.85(d,J=11.0Hz,2H),1.52(dd,J=21.3,11.6Hz,2H),1.41(s,9H)ppm。
化合物131の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(10mL)中ヒドロキシピバル酸(154mg、1.3mmol、1.0当量)の溶液に、DIEA(280mg、1.6mmol、1.5当量)、HOBt(29mg、0.22mmol、0.2当量)、最後にEDCI.HCl(315mg、1.6mmol、1.5当量)を添加した。室温で30分間撹拌した後、4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−N,N−ジメチルピペリジン−1−カルボキサミド(化合物129、400mg、1.1mmol、1.0当量)を添加し、反応混合物を室温でさらに12時間撹拌した。完了後、反応混合物を減圧下で濃縮し、氷冷水中に注ぎ、酢酸エチル(3×50mL)で抽出した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して残渣を得て、これを、100%アセトニトリル及び水中0.1%ギ酸を使用した分取HPLCにより精製して、4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパノイル)−1H−ピラゾール−3−イル)−N,N−ジメチルピペリジン−1−カルボキサミド(化合物131、56mg、収率11%)を得た。m/z 468.63[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.68(t,J=6.2Hz,1H),6.97(q,J=3.8Hz,2H),5.40(s,1H),4.83(t,J=5.3Hz,1H),4.41(d,J=6.1Hz,2H),3.87(d,J=5.2Hz,2H),3.55(d,J=13.0Hz,2H),2.80(t,J=11.4Hz,2H),2.73(s,6H),2.63(t,J=11.3Hz,1H),1.85(d,J=11.3Hz,2H),1.51(dt,J=15.0,7.7Hz,2H),1.31(s,6H)ppm。
化合物132の合成は、以下の一般手順15の手順に従った。
ジクロロメタン(10mL)中N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(100mg、2.7mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、200mg、1.6mmol、6.0当量)を添加した。10〜15分後、N,N−ジメチルカルバミン酸塩化物(87mg、0.82mmol、3.0当量)を添加し、混合物を室温で16時間撹拌した。反応物をTLC及びLC−MSにより監視した。完了後、溶媒を蒸発させて残渣を得て、これを、シリカゲル(60〜120メッシュ)を使用し、ジクロロメタン中5%メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(ジメチルカルバモイル)−1H−ピラゾール−3−イル)−N,N−ジメチルピペリジン−1−カルボキサミド(化合物132、0.65g、収率41%)を得た。m/z 439.57[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.00−6.91(m,2H),6.75(t,J=6.0Hz,1H),5.40(s,1H),4.36(d,J=6.0Hz,2H),3.54(d,J=13.2Hz,2H),2.98(d,J=66.8Hz,6H),2.78(d,J=12.1Hz,2H),2.72(s,6H),2.64−2.53(m,1H),1.80(d,J=10.9Hz,2H),1.59−1.40(m,2H)ppm。
中間体53の合成は、以下の一般手順26の手順に従った。
1,2−ジクロロエタン(50mL)中エチルピペリジン−4−カルボキシレート(0.93g、5.9mmol、3.0当量)の冷却溶液(0℃)に、酢酸(0.12g、2mmol、1.0当量)及びテトラヒドロ−4H−ピラン−4−オン(0.2g、2mmol、1当量)を添加した。室温で1時間撹拌した後、トリアセトキシホウ化水素ナトリウム(NaBH(OAc)3、0.63g、3mmol、1.5当量)を添加し、混合物を室温でさらに12時間撹拌した。反応進行をTLCにより監視した。反応混合物を水(20mL)に添加し、ジクロロメタン(3×30mL)で抽出し、合わせた有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させ た。粗生成物を、ジクロロメタン中3%メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、エチル1−(テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル)ピペリジン−4−カルボキシレート(中間体53、0.13g、収率42%)を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.15(q,J=7.1Hz,2H),4.05(dd,J=11.3,4.3Hz,2H),3.45−3.32(m,2H),3.08−2.96(m,2H),2.68(s,1H),2.41(dd,J=12.2,7.1Hz,3H),2.06(d,J=11.2Hz,2H),1.95−1.80(m,4H),1.67(ddd,J=24.4,12.2,4.4Hz,2H),1.26(t,J=7.1Hz,3H)ppm。
中間体54の合成は、以下の一般手順2の手順に従った。
THF(50mL)中アセトニトリル(0.97g、24mmol、1.5当量)の冷却溶液(−78℃)に、n−BuLi(n−ヘキサン中2.5M、9.5mL、2.4mmol、1.5当量)を20分間にわたって滴加した。−78℃で60分間撹拌した後、エチル1−(テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル)ピペリジン−4−カルボキシレート(中間体53、3.8g、15.7mmol、1.0当量)を一度に添加した。その後、混合物を室温に3時間にわたって加温した。反応物を飽和塩化アンモニウム溶液で反応停止処理し、生成物を酢酸エチル(3×20mL)で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。これを酢酸エチルで洗浄して、3−オキソ−3−(1−(テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル)ピペリジン−4−イル)プロパンニトリル(中間体54、1.5g、収率40%)を得て、次のステップで「そのまま」使用した。m/z 237.04[M+H]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ4.16(s,2H),3.88(d,J=11.0Hz,2H),3.25(t,J=11.0Hz,2H),2.91(d,J=11.4Hz,2H),2.45(s,1H),2.14(d,J=10.7Hz,2H),1.81(d,J=11.9Hz,3H),1.65(d,J=12.0Hz,2H),1.49−1.33(m,4H)ppm。
化合物132の合成は、以下の一般手順3の手順に従った。
イソプロパノール(15mL)及び酢酸(0.34g、5.7mmol、1.0当量)中3−オキソ−3−(1−(テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル)ピペリジン−4−イル)プロパンニトリル(中間体54、1.3g、5.7mmol、1.0当量)の溶液に、ヒドラジン一水和物(0.31g、6.2mmol、1.1当量)を滴加した。反応混合物を80℃で12時間撹拌した。反応混合物をTLC及びLC−MSにより監視し、完了後、反応混合物を濃縮して、粗生成物を得た。これを、シリカゲル(60〜120メッシュ)を使用し、ジクロロメタン中10%メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、3−(1−(テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物132、1.3g、収率95%)を得た。m/z 251.14[M+1]+ 1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.95(s,1H),5.18(s,1H),3.88(dd,J=10.8,3.6Hz,2H),3.26(t,J=11.1Hz,2H),3.17(s,2H),2.90(d,J=11.4Hz,2H),2.40(dd,J=21.3,11.5Hz,2H),2.15(t,J=10.6Hz,2H),1.80(d,J=12.4Hz,2H),1.71−1.60(m,2H),1.57−1.33(m,4H)ppm。
化合物133の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
無水メタノール(30mL)中3−(1−(テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物132、1.7g、6.8mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、氷酢酸(0.41g、6.8mmol、1.0当量)、その後、5−クロロチオフェン−2−カルバルデヒド(1.19g、8.2mmol、1.2当量)を滴加した。反応混合物を緩徐に室温に上昇させ、その後、1時間撹拌した。完了後(TLC及びLC−MSにより監視)、混合物を冷却して0℃に戻し、これにシアノ水素化ホウ素ナトリウム(2.16g、10mmol、1.5当量)を添加した。混合物を室温で4時間撹拌した。反応物をTLCにより監視した。反応混合物を減圧下で緩徐に濃縮して黄色の残渣を得て、これを酢酸エチル(100mL)で希釈し、水(3×25mL)で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して残渣を得て、これを、ジクロロメタン中5%メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、60〜120メッシュ)により精製して、N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物133、0.5g、収率19%)を得た。m/z 381.36[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.33(s,1H),6.99−6.90(m,1H),6.84(d,J=3.5Hz,1H),5.66(s,1H),5.28(s,1H),4.28(d,J=6.2Hz,2H),3.90(d,J=7.4Hz,2H),3.33−3.22(m,4H),2.98(s,2H),2.31−2.08(m,2H),2.02−1.64(m,4H),1.49(s,4H)ppm。
化合物134の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(3mL)中ピバル酸(44.7mg、0.44mmol、1.2当量)の溶液に、DIEA(0.09mL、0.55mmol、1.5当量)、HOBt(9.8mg、0.07mmol、0.2当量)、その後、EDCI.HCl(106mg、0.55mmol、1.5当量)を添加した。30分間撹拌した後、(4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−イル)(モルホリノ)メタノン(化合物118、150mg、0.37mmol、1.0当量)を添加し、反応混合物を室温でさらに16時間撹拌させた。完了後、混合物を濃縮し、氷冷水中に注ぎ、ジクロロメタン(3×50mL)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥させ、減圧下で蒸発させた。残渣を、100%アセトニトリル及び水中0.1%ギ酸を使用した分取HPLCにより精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(1−(モルホリン−4−カルボニル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物134、53.3mg、収率29%)を得た。m/z 494.48[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.69(d,J=6.1Hz,1H),6.97(s,2H),5.41(s,1H),4.41(d,J=6.1Hz,2H),3.61(d,J=13.2Hz,2H),3.60−3.53(m,4H),3.12(d,J=4.6Hz,4H),2.86(t,J=11.7Hz,2H),2.66(d,J=11.7Hz,1H),1.85(d,J=10.9Hz,2H),1.57−1.44(m,2H),1.40(s,9H)ppm。
化合物135の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(8mL)中ヒドロキシピバル酸(138mg、1.2mmol、1.2当量)の溶液に、DIEA(0.25mL、1.46mmol、1.5当量)、HOBt(26mg、0.2mmol、0.2当量)、その後、EDCI.HCl(282mg、1.5mmol、1.5当量)を添加した。さらに30分間撹拌した後、(4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−イル)(モルホリノ)メタノン(化合物118、400mg、0.98mmol、1.0当量)を添加し、混合物を室温で16時間撹拌させた。完了後、反応混合物を濃縮し、氷冷水中に注ぎ、酢酸エチル(3×50mL)で抽出した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して残渣を得て、これを、100%アセトニトリル及び100%水を使用した分取HPLCにより精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(1−(モルホリン−4−カルボニル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物135、58mg、収率12%)を得た。m/z 510.53[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.68(t,J=6.2Hz,1H),6.96(d,J=3.8Hz,2H),5.40(s,1H),4.83(t,J=5.4Hz,1H),4.41(d,J=6.1Hz,2H),3.87(d,J=5.3Hz,2H),3.61(d,J=13.5Hz,2H),3.59−3.53(m,4H),3.15−3.08(m,4H),2.86(t,J=11.6Hz,2H),2.66(d,J=11.5Hz,1H),1.85(d,J=10.6Hz,2H),1.50(dd,J=21.0,11.8Hz,2H),1.31(s,6H)ppm。
化合物136の合成は、以下の一般手順15の手順に従った。
ジクロロメタン(2mL)中N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(0.1g、0.24mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.2mL、1.46mmol、6.0当量)を添加した。15分間撹拌した後、モルホリン−4−塩化カルボニル(0.1g、0.73mmol、3.0当量)を添加し、反応物を室温で16時間撹拌した。反応物をTLC及びLC−MSにより監視した。完了後、溶媒を蒸発させて残渣を得て、これを、100%アセトニトリル及び100%水を使用した分取HPLCにより精製して、(4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(モルホリン−4−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−イル)(モルホリノ)メタノン(化合物136、15mg、収率2%)を得た。m/z 523.63[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ6.99−6.93(m,2H),6.85(t,J=6.2Hz,1H),5.42(s,1H),4.37(d,J=6.1Hz,2H),3.74−3.54(m,14H),3.15−3.07(m,4H),2.82(t,J=11.5Hz,2H),2.60(t,J=11.5Hz,1H),1.80(d,J=10.9Hz,2H),1.48(dd,J=21.0,11.9Hz,2H)ppm。
化合物137の合成は、以下の一般手順15の手順に従った。
ジクロロメタン(10mL)中N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(0.7g、2.4mmol、1.0当量)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、1.2g、12mmol、5当量)、続いて、塩化ジメチルスルファモイル(0.34g、2.3mmol、1.0当量)を添加した。混合物を室温で3時間撹拌した。反応進行をTLCにより監視した。反応混合物を冷水(10mL)に添加し、ジクロロメタン(3×25mL)で抽出し、合わせた有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗生成物を得た。これを、n−ヘキサン中45%酢酸エチルを用いたシリカゲル(60〜120のメッシュサイズ)上でのカラムクロマトグラフィーにより精製して、4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−N,N−ジメチルピペリジン−1−スルホンアミド(化合物137、0.62g、収率65%)を得た。m/z 404.30[M+H]+1H NMR(DMSO−d6,400MHz,12092)δ:11.36(s,1H),7.03−6.76(m,2H),5.65(s,1H),5.31(s,1H),4.29(d,J=6.3Hz,2H),3.58(d,J=12.5Hz,2H),2.90(td,J=12.3,2.3Hz,2H),2.76(d,J=5.7Hz,6H),2.64(s,1H),1.89(d,J=11.2Hz,2H),1.54(qd,J=12.6,4.0Hz,2H)ppm。
化合物138の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
アセトニトリル(12mL)中ピバル酸(0.085g、0.85mmol、1.5当量)の冷却溶液(0℃)に、EDCI.HCl(0.16g、0.85mmol、1.5当量)、HOBt(0.022g、0.17mmol、0.3当量)、及びDIEA(0.23mL、1.7mmol、3.0当量)を添加した。30分間撹拌した後、4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)−N,N−ジメチルピペリジン−1−スルホンアミド(化合物137、0.27g、0.56mmol、1.0当量)を添加し、混合物を室温で16時間撹拌した。反応物をLC−MSにより監視し、反応完了後、反応混合物を水(10mL)に添加し、酢酸エチル(3×20mL)で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗生成物を得た。残渣を、n−ヘキサン中30%酢酸エチルで溶出するCombi−Flashクロマトグラフィーにより精製して、4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)−N,N−ジメチルピペリジン−1−スルホンアミド(化合物138、0.09g、収率28%)を得た。m/z 488.53[M+H]+1H NMR(DMSO−d6,400MHz,12445)δ:7.69(t,J=6.2Hz,1H),6.97(q,J=3.7Hz,2H),5.42(s,1H),4.42(d,J=6.1Hz,2H),3.57(d,J=12.3Hz,2H),2.95(t,J=10.9Hz,2H),2.75(s,6H),2.69−2.59(m,1H),2.01−1.89(m,2H),1.58(td,J=15.2,3.7Hz,2H),1.41(s,9H)ppm。
化合物139の合成は、以下の一般手順5cの手順に従った。
アセトニトリル(12mL)中3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパン酸(化合物137、0.15g、1.3mmol、1.5当量)の冷却溶液(0℃)に、テトラフルオロホウ酸N,N,N’,N’−テトラメチル−O−(ベンゾトリアゾール−1−イル)ウロニウム(TBTU、0.42g、1.3mmol、1.5当量)、その後、(ジイソプロピル)エチルアミン(DIEA、0.24mL、2.6mmol、3.0当量)を添加した。30分間撹拌した後、混合物に4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパノイル)−1H−ピラゾール−3−イル)−N,N−ジメチルピペリジン−1−スルホンアミド(化合物137、0.35g、0.9mmol、1.0当量)を添加し、混合物を室温で12時間撹拌した。反応進行をTLCにより監視した。完了後、混合物を水(10mL)中に注ぎ、酢酸エチル(3×20mL)で抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、蒸発させて残渣にした。粗化合物を、Sunfire C18、5ミクロンカラム上での移動相として水及びアセトニトリルで溶出する分取HPLCにより精製した。精製された画分を凍結乾燥させて、4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパノイル)−1H−ピラゾール−3−イル)−N,N−ジメチルピペリジン−1−スルホンアミド(化合物139、0.05g、収率11%)を得た。m/z 504.48[M+H]+1H NMR(DMSO−d6,400MHz,13050)δ:7.69(t,J=6.1Hz,1H),6.97(d,J=2.3Hz,2H),5.41(s,1H),4.84(t,J=5.3Hz,1H),4.41(d,J=6.0Hz,2H),3.87(d,J=5.3Hz,2H),3.57(d,J=12.1Hz,2H),2.95(t,J=10.9Hz,2H),2.75(s,6H),2.62(dd,J=22.7,11.4Hz,1H),1.92(d,J=11.5Hz,2H),1.57(dd,J=21.0,11.1Hz,2H),1.31(s,6H)ppm。
化合物140の合成は、以下の一般手順25の手順に従った。
アセトニトリル(15mL)中N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(1.0g、2.5mmol、1.0当量)の溶液に、炭酸カリウム(2.0g、14.7mmol、6.0当量)を添加した。反応混合物を室温で30分間撹拌した後、トリフルオロメタンスルホン酸2−シクロプロポキシエチル(0.576g、2.5mmol、1当量)を添加し、反応混合物を室温で16時間撹拌させた。完了後(LC−MSにより監視)、反応混合物を濃縮して粗生成物を得て、これを、移動相として水−アセトニトリルを使用した分取HPLCにより精製して、N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(2−シクロプロポキシエチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物140、0.61g、収率65%)を得た。m/z 381.56[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.65(s,1H),6.97−6.81(m,2H),5.80(s,1H),5.35(d,J=39.2Hz,1H),4.29(d,J=6.0Hz,2H),3.74(s,2H),3.41−3.31(m,5H),3.23(s,2H),2.98(s,1H),2.08−2.01(m,2H),1.78(s,2H),0.60−0.42(m,4H)ppm。
化合物141の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(6mL)中ピバル酸(0.2g、0.64mmol、1.2当量)の冷却溶液(0℃)に、EDCI.HCl(0.15g、0.78mmol、1.5当量)及びトリエチルアミン(TEA、0.16g、1.6mmol、3.0当量)を添加した。30分間撹拌した後、HOBt(0.014g、0.1mmol、0.2当量)及びN−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(2−シクロプロポキシエチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物140、0.2g、0.52mmol、1当量)を添加した。反応混合物を室温で16時間撹拌した。完了後(LC−MSにより監視)、反応混合物を水(15mL)中に注ぎ、酢酸エチル(2×15mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残渣を、移動相として水−アセトニトリルを使用した分取HPLCにより精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(1−(2−シクロプロポキシエチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物141、0.06g、収率25%)を得た。m/z 465.02[M+H]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.64(t,J=6.1Hz,1H),6.96(q,J=3.8Hz,2H),5.37(s,1H),4.40(d,J=6.2Hz,2H),3.52(t,J=6.0Hz,2H),3.26(ddd,J=9.1,5.9、3.2Hz,1H),2.85(d,J=11.6Hz,2H),2.45−2.31(m,3H),2.13−1.95(m,3H),1.79(d,J=10.6Hz,2H),1.56(dd,J=21.1,11.8Hz,2H),1.39(s,9H),0.46−0.33(m,4H)ppm。
化合物142の合成は、以下の一般手順5bの手順に従った。
THF(6mL)中ヒドロキシピバル酸(0.093g、0.78mmol、1.5当量)の溶液に、プロピルホスホン酸無水物(酢酸エチル中50%溶液中T3P、0.25g、0.8mmol、1.5当量)、DIEA(0.2g、1.6mmol、3当量)、続いて、N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(2−シクロプロポキシエチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物140、0.2g、0.5mmol、1.0当量)を添加した。反応混合物を室温で16時間撹拌した。完了後(LC−MSにより監視)、反応混合物を水(10mL)中に注ぎ、酢酸エチル(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相として水−アセトニトリルを使用した分取HPLCにより精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(1−(2−シクロプロポキシエチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物142、0.032g、収率12%)を得た。m/z 481.1[M+H]+1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.65(d,J=6.2Hz,1H),6.96(t,J=3.4Hz,2H),5.38(s,1H),4.82(t,J=5.2Hz,1H),4.40(d,J=6.2Hz,2H),3.86(d,J=5.3Hz,2H),3.52(t,J=5.9Hz,2H),3.26(d,J=3.2Hz,1H),2.87(d,J=11.1Hz,2H),2.40(dd,J=28.5,14.2Hz,3H),2.04(dd,J=22.2,11.0Hz,3H),1.78(s,2H),1.56(d,J=9.6Hz,2H),1.30(s,6H),0.51−0.28(m,4H)ppm。
化合物143の合成は、以下の一般手順25の手順に従った。
アセトニトリル(15mL)中N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(1.0g、3.4mmol、1.0当量)の溶液に、炭酸カリウム(K2CO3、3.26g、23.7mmol、7当量)、続いて、トリフルオロメタンスルホン酸2,2−ジフルオロ−2−(ピリジン−2−イル)エチル(1.1g、3.7mmol、1.1当量)を添加した。混合物を80℃で12時間撹拌した。反応進行をLC−MSにより監視した。反応混合物を水(50mL)で希釈し、ジクロロメタン(3×80mL)で抽出し、合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗生成物を得た。これを、ジクロロメタン中2%メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(2,2−ジフルオロ−2−(ピリジン−2−イル)エチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物143、0.4g、27%)を得た。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.26(s,1H),8.68(d,J=3.9Hz,1H),7.98(t,J=7.7Hz,1H),7.70(d,J=7.7Hz,1H),7.59−7.49(m,1H),6.90(d,J=3.7Hz,1H),6.82(d,J=3.6Hz,1H),5.62(s,1H),5.23(s,1H),4.26(d,J=6.1Hz,2H),3.21(t,J=14.8Hz,2H),2.81(d,J=11.7Hz,2H),2.32(dd,J=29.7,18.6Hz,3H),1.78−1.62(m,2H),1.39(dd,J=21.2,12.6Hz,2H)ppm。
化合物144の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(10mL)中ピバル酸(77mg、0.76mmol、1.1当量)の冷却溶液(0℃)に、DIPEA(221mg、1.7mmol、2.5当量)、HOBt(46mg、0.34mmol、0.5当量)、その後、EDCI.HCl(197mg、1.0mmol、1.5当量)を添加した。0℃で30分間撹拌した後、混合物にN−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(2,2−ジフルオロ−2−(ピリジン−2−イル)エチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物143、300mg、0.7mmol、1.0当量)を添加し、混合物を室温で12時間撹拌させた。完了後、反応混合物を濃縮し、氷冷水中に注ぎ、酢酸エチル(3×50mL)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、アセトニトリル/水を使用した分取HPLCにより精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(1−(2,2−ジフルオロ−2−(ピリジン−2−イル)エチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物144、74.5mg、収率17%)を得た。m/z 522.10[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.68(d,J=4.8Hz,1H),7.98(t,J=7.8Hz,1H),7.70(d,J=7.8Hz,1H),7.64(t,J=6.4Hz,1H),7.56−7.49(m,1H),6.95(d,J=3.8Hz,2H),5.36(s,1H),4.39(d,J=6.2Hz,2H),3.21(t,J=14.8Hz,2H),2.81(d,J=11.5Hz,2H),2.33(t,J=11.5Hz,4H),1.72(d,J=12.2Hz,2H),1.51−1.40(m,2H),1.38(s,9H)ppm。
化合物145の合成は、以下の一般手順5aの手順に従った。
THF(10mL)中ヒドロキシピバル酸(89mg、0.76mmol、1.1当量)の冷却溶液(0℃)に、DIPEA(221mg、1.7mmol、2.5当量)、HOBt(46mg、0.34mmol、0.5当量)、その後、EDCI.HCl(197mg、1.0mmol、1.5当量)を添加した。0℃で30分間撹拌した後、混合物にN−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(1−(2,2−ジフルオロ−2−(ピリジン−2−イル)エチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物143、300mg、0.68mmol、1.0当量)を添加し、混合物を室温でさらに12時間撹拌した。完了後、反応混合物を濃縮し、氷冷水中に注ぎ、酢酸エチル(3×50mL)で抽出した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。残渣を、100%アセトニトリル及び100%水を使用した分取HPLCにより精製して、1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(1−(2,2−ジフルオロ−2−(ピリジン−2−イル)エチル)ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物145、76mg、収率21%)を得た。m/z 540.63[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.68(d,J=4.4Hz,1H),7.97(td,J=7.8,1.7Hz,1H),7.71(s,1H),7.63(d,J=6.3Hz,1H),7.54(dd,J=7.4,4.8Hz,1H),7.03−6.89(m,2H),5.35(s,1H),4.81(t,J=5.4Hz,1H),4.39(d,J=6.2Hz,2H),3.84(d,J=5.4Hz,2H),3.21(t,J=14.8Hz,2H),2.82(d,J=11.5Hz,2H),2.34(dd,J=23.2,11.6Hz,4H),1.72(d,J=11.4Hz,2H),1.50−1.35(m,2H),1.29(s,6H)ppm。
化合物146の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下のジクロロメタン(10mL)中シクロヘキサンカルボン酸(181mg、1.51mmol)の冷却(0℃)溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、361mg、1.89mmol)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、511mg、3.78mmol)を添加した。反応混合物を10分間撹拌し、その後、混合物にジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.64mL、3.78mmol)、続いて、tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物15、500mg、1.26mmol)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で16時間後、反応混合物を水(50mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、30%酢酸エチル/石油エーテルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、生成物tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(シクロヘキサンカルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物146、487mg、収率60%)を得た。m/z 508.16[M+1]+、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.7。
化合物147の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
ジエチルエーテル(2mL)中tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(シクロヘキサンカルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(200mg、0.39mmol)の冷却(0℃)溶液に、ジエチルエーテル(2mL)中塩化水素(1M)の溶液を添加した。反応混合物を2時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させ、ジエチルエーテル及びアセトンで粉砕して、灰色がかった白色の固体として生成物(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(シクロヘキシル)メタノン塩酸塩(化合物147、100mg、収率64%)を得た。m/z 407.27[(M−HCl)+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ8.70(br s,1H),8.35(br s,1H),7.65−7.63(m,1H),6.95(s,2H),5.39(s,1H),4.43−4.41(m,2H),3.40−3.26(m,3H),2.98−2.77(m,3H),2.01−1.67(m,8H),1.41−1.24(m,4H)、TLC系:ジクロロメタン中10%メタノール。Rf:0.15。
化合物148の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下のジクロロメタン(10mL)中シクロペンタンカルボン酸(172mg、1.51mmol)の冷却(0℃)溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、361mg、1.89mmol)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、511mg、3.78mmol)を添加した。反応混合物を10分間撹拌し、その後、混合物にジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.64mL、3.78mmol)、続いて、tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物15、500mg、1.26mmol)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で16時間後、反応混合物を水(50mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、30%酢酸エチル/石油エーテルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、生成物tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(シクロペンタンカルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物148、323mg、収率52%)を得た。m/z 494.16[M+1]+、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.7。
化合物149の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
ジエチルエーテル(2mL)中tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(シクロペンタンカルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(200mg、0.40mmol)の冷却(0℃)溶液に、ジエチルエーテル(2mL)中塩化水素(1M)の溶液を添加した。反応混合物を2時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させ、ジエチルエーテル及びアセトンで粉砕して、灰色がかった白色の固体として生成物(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(シクロペンチル)メタノン(化合物149、60mg、収率38%)を得た。m/z 393.25[(M−HCl)+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ8.70(br s,1H),8.35(br s,1H),7.65−7.63(m,1H),6.95(s,2H),5.39(s,1H),4.43−4.41(m,2H),3.40−3.26(m,3H),2.98−2.77(m,3H),2.01−1.67(m,8H),1.41−1.24(m,4H)、TLC系:ジクロロメタン中10%メタノール。Rf:0.15。
化合物150の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下のジクロロメタン(10mL)中安息香酸(184mg、1.51mmol)の冷却(0℃)溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、361mg、1.89mmol)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、511mg、3.78mmol)を添加した。反応混合物を10分間撹拌し、その後、混合物にジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.64mL、3.78mmol)、続いて、tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物15、500mg、1.26mmol)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で16時間後、反応混合物を水(50mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、30%酢酸エチル/石油エーテルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、生成物tert−ブチル4−(1−ベンゾイル−5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物150、487mg、収率60%)を得た。m/z 502.16[M+1]+、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.6。
化合物151の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
酢酸エチル(3mL)中tert−ブチル4−(1−ベンゾイル−5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(200mg、0.40mmol)の冷却(0℃)溶液に、酢酸エチル(3mL)中塩化水素(1M)の溶液を添加した。反応混合物を6時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させ、ジエチルエーテル及びアセトンで粉砕した。残渣をイソプロピルアルコール中で再結晶させて、灰色がかった白色の固体として生成物(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(フェニル)メタノン塩酸塩(化合物151、40mg、収率25%)を得た。m/z 401.26[(M−HCl)+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ8.79(br s,1H),8.48(br s,1H),7.97−7.94(m,2H),7.81−7.79(m,1H),7.64−6.97(s,3H),5.51(s,1H),4.51−4.49(m,2H),3.31−3.23(m,2H),2.99−2.77(m,3H),2.02−1.96(m,2H),1.78−1.66(m,2H)、TLC系:ジクロロメタン中10%メタノール。Rf:0.15。
化合物152の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下のジクロロメタン(10mL)中2,3−ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシン−5−カルボン酸(273mg、1.51mmol)の冷却(0℃)溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、361mg、1.89mmol)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、511mg、3.78mmol)を添加した。反応混合物を10分間撹拌し、その後、混合物にジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.64mL、3.78mmol)、続いて、tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物15、500mg、1.26mmol)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で16時間後、反応混合物を水(50mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、30%酢酸エチル/石油エーテルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、生成物tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2,3−ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシン−5−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物152、318mg、収率45%)を得た。m/z 560.16[M+1]+、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.6。
化合物153の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
酢酸エチル(3mL)中tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2,3−ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシン−5−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(250mg、0.45mmol)の冷却(0℃)溶液に、酢酸エチル(3mL)中塩化水素(1M)の溶液を添加した。反応混合物を7時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させ、ジエチルエーテル及びアセトンで粉砕した。残渣をイソプロピルアルコール中で再結晶させて、灰色がかった白色の固体として生成物(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(2,3−ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシン−5−イル)メタノン塩酸塩(化合物153、150mg、収率67%)を得た。m/z 401.26[(M−HCl)+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ8.79(br s,1H),8.48(br s,1H),7.97−7.94(m,2H),7.81−7.79(m,1H),7.04−6.97(m,5H),5.51(s,1H),4.51−4.49(m,2H),3.31−3.23(m,2H),2.99−2.77(m,3H),2.02−1.96(m,2H),1.78−1.66(m,2H)、TLC系:ジクロロメタン中5%メタノール。Rf:0.1。
化合物154の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下のジクロロメタン(10mL)中フラン−3−カルボン酸(169mg、1.51mmol)の冷却(0℃)溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、361mg、1.89mmol)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、511mg、3.78mmol)を添加した。反応混合物を10分間撹拌し、その後、混合物にジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.64mL、3.78mmol)、続いて、tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物15、500mg、1.26mmol)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で16時間後、反応混合物を水(50mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、30%酢酸エチル/石油エーテルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、生成物tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(フラン−3−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物154、235mg、収率38%)を得た。m/z 492.16[M+1]+、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.6。
化合物155の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
酢酸エチル(3mL)中tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(フラン−3−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(100mg、0.20mmol)の冷却(0℃)溶液に、酢酸エチル(4mL)中塩化水素(1M)の溶液を添加した。反応混合物を6時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させ、ジエチルエーテル及びアセトンで粉砕した。残渣をイソプロピルアルコール中で再結晶させて、灰色がかった白色の固体として生成物(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(フラン−3−イル)メタノン塩酸塩(化合物155、30mg、収率34%)を得た。m/z 391.28[(M−HCl)+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ8.82(br s,1H),8.75(s,1H),8.52(br s,1H),7.86−7.84(m,1H),7.82−7.77(m,1H),7.04−6.95(m,3H),5.50(s,1H),4.50−4.48(m,2H),3.33−3.27(m,2H),2.99−2.85(m,3H),2.11−2.07(m,2H),1.81−1.77(m,2H)、TLC系:ジクロロメタン中5%メタノール。Rf:0.1。
化合物156の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下のジクロロメタン(10mL)中2,4−ジメトキシ安息香酸(274mg、1.51mmol)の冷却(0℃)溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、361mg、1.89mmol)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、511mg、3.78mmol)を添加した。反応混合物を10分間撹拌し、その後、混合物にジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.64mL、3.78mmol)、続いて、tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物15、500mg、1.26mmol)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で16時間後、反応混合物を水(50mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、30%酢酸エチル/石油エーテルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、生成物tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2,4−ジメトキシベンゾイル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物156、324mg、収率45%)を得た。m/z 562.16[M+1]+、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.6。
化合物157の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
ジエチルエーテル(3mL)中tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2,4−ジメトキシベンゾイル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(250mg、0.45mmol)の冷却(−78℃)溶液に、ジエチルエーテル(3mL)中塩化水素(1M)の溶液を添加した。反応混合物を1時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させ、ジエチルエーテル及びアセトンで粉砕した。残渣をイソプロピルアルコール中で再結晶させて、灰色がかった白色の固体として生成物(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(2,4−ジメトキシフェニル)メタノン塩酸塩(化合物157、10mg、収率4%)を得た。m/z 461.26[(M−HCl)+1]+;1H NMR(400 MHzCDCl3)δ7.45−7.43(m,2H),6.81−6.76(m,2H),6.53−6.50(m,2H),5.23(s,1H),4.42−4.41(m,2H),3.85(s,3H),3.80(s,3H),3.37−3.33(m,2H),2.99−2.75(m,3H),2.07−2.05(m,2H),1.95−1.92(m,2H)、TLC系:ジクロロメタン中5%メタノール。Rf:0.1。
化合物158の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下のジクロロメタン(10mL)中2,6−ジメチルシクロヘキサン−1−カルボン酸(235mg、1.51mmol)の冷却(0℃)溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、361mg、1.89mmol)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、511mg、3.78mmol)を添加した。反応混合物を10分間撹拌し、その後、混合物にジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.64mL、3.78mmol)、続いて、tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物15、500mg、1.26mmol)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で16時間後、反応混合物を水(50mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、30%酢酸エチル/石油エーテルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、生成物tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2,6−ジメチルシクロヘキサン−1−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物158、371mg、収率55%)を得た。m/z 536.16[M+1]+、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.8。
化合物159の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
ジエチルエーテル(3mL)中tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2,6−ジメチルシクロヘキサン−1−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(15mg、0.03mmol)の冷却(−60℃)溶液に、ジエチルエーテル(0.5mL)中塩化水素(1M)の溶液を添加した。反応混合物を1時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させ、ジエチルエーテル及びアセトンで粉砕して、灰色がかった白色の固体として生成物(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(2,6−ジメチルシクロヘキシル)メタノン塩酸塩(化合物159、10mg、収率71%)を得た。m/z 435.34[(M−HCl)+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ8.66(br s,1H),8.38(br s,1H),7.72−7.69(m,1H),6.96−6.94(m,2H),5.40(s,1H),4.44−4.43(m,2H),3.40−3.26(m,3H),3.00−2.77(m,3H),2.32−2.28(m,1H),2.01−1.87(m,3H),1.75−1.65(m,3H),1.61−1.42(m,4H),0.82(s,3H),0.81(s,3H)、TLC系:ジクロロメタン中10%メタノール。Rf:0.15。
化合物160の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
ジエチルエーテル(20mL)中tert−ブチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(3g、7.5mmol)の冷却(0℃)溶液に、ジエチルエーテル(20mL)中塩化水素(1M)の溶液を添加した。反応混合物を2時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させ、ジエチルエーテル及びアセトンで粉砕して、灰色がかった白色の固体として生成物N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン塩酸塩(化合物160、2.8g、収率91%)を得た。m/z 297.21((M−HCl)+1]+、TLC系:クロロホルム中10%メタノール。Rf:0.1。
化合物161の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
ジオキサン(70mL)中N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン塩酸塩(2.8g、3.01mmol)の冷却(0℃)溶液に、水(42mL)中炭酸ナトリウム(0.63g、6.02mmol)、続いて、Fmocスクシンイミド(0.81g、2.4mmol)の溶液を添加した。反応混合物を2時間撹拌して室温に上昇させ、その後、水(100mL)中に注ぎ、酢酸エチル(2×50mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、酢酸エチルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、灰色がかった白色のふわふわした固体として生成物(9H−フルオレン−9−イル)メチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物161、1.2g、収率76%)を得た。m/z 505.3[M+1]+、TLC系:ジクロロメタン中10%メタノール。Rf:0.5。
化合物162の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下、室温でのクロロホルム(5mL)中(9H−フルオレン−9−イル)メチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物161、300mg、0.48mmol)及び3−メトキシ−2,2−ジメチルプロパン酸(76mg、0.58mmol)の溶液に、テトラフルオロホウ酸O−(ベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウム(TBTU、171mg、0.53mmol)、続いて、トリエチルアミン(TEA、0.1mL、0.72mmol)を添加した。反応混合物を室温で4時間撹拌し、水(50mL)で希釈し、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、20%酢酸エチル/石油エーテルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、(9H−フルオレン−9−イル)メチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(3−メトキシ−2,2−ジメチルプロパノイル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物162、300mg、収率82%)を得た。m/z 605.19[M+1]+、TLC系:ジクロロメタン中10%メタノール。Rf:0.9。
化合物163の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
テトラヒドロフラン(2mL)中(9H−フルオレン−9−イル)メチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(3−メトキシ−2,2−ジメチルプロパノイル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(200mg、0.31mmol)の溶液に、ピペリジン(0.8mL)を添加した。反応混合物を30分間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させた。残渣を、10%メタノール/ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、灰色がかった白色の固体として生成物1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−メトキシ−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物163、40mg、収率31%)を得た。m/z 411.22[(M+1]+;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.80(br s,1H),8.38(br s,1H),7.49(s,1H),6.75(s,2H),5.14(s,1H),4.35−4.34(m,2H),3.50−3.47(m,2H),3.27(s,3H),3.10−3.07(m,2H),2.86(br s,1H),2.21−2.00(m,4H),1.41(s,6H)、TLC系:ジクロロメタン中10%メタノール。Rf:0.15。
化合物164の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下、室温でのクロロホルム(5mL)中(9H−フルオレン−9−イル)メチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物161、300mg、0.48mmol)及び3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパン酸(59mg、0.58mmol)の溶液に、テトラフルオロホウ酸O−(ベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウム(TBTU、171mg、0.53mmol)、続いて、トリエチルアミン(TEA、0.1mL、0.72mmol)を添加した。反応混合物を室温で4時間撹拌し、水(50mL)で希釈し、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、20%酢酸エチル/石油エーテルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、(9H−フルオレン−9−イル)メチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパノイル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(化合物164、250mg、収率71%)を得た。m/z 620.19[M+1]+、TLC系:ジクロロメタン中10%メタノール。Rf:0.85。
化合物165の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
テトラヒドロフラン(10mL)中(9H−フルオレン−9−イル)メチル4−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパノイル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(250mg、0.31mmol)の溶液に、ピペリジン(1mL)を添加した。反応混合物を30分間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させた。残渣を、10%メタノール/ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、灰色がかった白色の固体として生成物1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピペリジン−4−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物165、60mg、収率48%)を得た。m/z 397.31[(M+1]+;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.82(br s,1H),7.49−7.47(m,1H),6.77−6.76(m,2H),5.21(s,1H),4.38−4.36(m,2H),4.00(br s,1H),3.78(s,2H),3.51−3.48(m,2H),3.07−3.02(m,2H),2.87−2.82(m,1H),2.23−2.12(m,4H),1.43(s,6H)、TLC系:ジクロロメタン中10%メタノール。Rf:0.15。
化合物166の合成は、一般手順5の手順に従った。
m/z 531.30[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.4(m,3H),7.0(m,2H),6.8(m,2H),5.2(s,1H),4.4(m,2H),4.1(m,2H),3.8(s,3H),2.8(m,2H),2.6(m,2H),1.8(m,2H),1.4(s,9H)。
化合物167の合成は、一般手順6cの手順に従った。
m/z 431.25[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ8.2−8.8(br m,3H),7.7(m,1H),7.5(m,1H),7.4(m,1H),7.1(m,1H),7.0(m,3H),5.4(s,1H),4.5(m,2H),3.7(s,3H),3.2(m,2H),2.9(m,2H),2.7(m,2H),1.9(m,2H),1.6(m,2H)。
化合物168の合成は、一般手順7の手順に従った。
m/z 473.27[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.4(m,3H),7.0(m,2H),6.8(m,2H),5.2(s,1H),4.5(m,1H),4.4(m,2H),3.8(s,3H),3.8(m,1H),3.1(m,1H),2.7(m,2H),2.1(s,3H),1.8(m,2H),1.5(m,1H)。
化合物169の合成は、一般手順7の手順に従った。
m/z 515.24[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.5(m,3H),7.0(m,2H),6.8(m,2H),5.2(s,1H),4.4(m,1H),4.3(m,2H),3.8(s,3H),2.9(m,2H),2.7(m,1H),1.9(m,2H),1.6(m,1H),1.5(m,1H),1.3(s,9H)。
化合物170の合成は、一般手順5の手順に従った。
m/z 507.24[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.9(s,1H),7.9(m,1H),7.6(m,1H),7.3(m,1H),6.8(m,2H),5.3(s,1H),4.4(m,2H),4.2(br s,2H),2.9(m,2H),2.7(m,1H),1.9(m,2H),1.6(m,2H),1.4(s,9H)。
化合物171の合成は、一般手順6cの手順に従った。
m/z 407.14[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ8.9(s,1H),8.6(br s,1H),8.3(br s,1H),7.9(m,1H),7.8(m,1H),7.6(m,1H),7.0(m,2H),5.5(s,1H),4.5(m,2H),3.2(m,2H),3.0(m,2H),2.8(m,1H),2.1(m,2H),1.8(m,2H)。
化合物172の合成は、一般手順7の手順に従った。
m/z 449.16[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.9(s,1H),7.9(m,1H),7.6(m,1H),7.3(m,1H),6.8(m,2H),5.2(s,1H),4.6(m,1H),4.4(m,2H),3.9(m,1H),3.2(m,1H),2.7−2.9(m,2H),2.1(s,3H),2.0(m,2H),1.7(m,3H)。
化合物173の合成は、一般手順7の手順に従った。
m/z 491.18[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.9(s,1H),7.9(m,1H),7.6(m,1H),7.3(m,1H),6.8(m,2H),5.2(s,1H),4.4−4.5(m,4H),3.0(m,2H),2.8(m,1H),2.0(m,2H),1.7(m,2H),1.3(s,9H)。
化合物174の合成は、一般手順5の手順に従った。
m/z 481.33[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ7.7(m,1H),7.0(m,2H),5.4(s,1H),4.4(m,2H),3.9(m,2H),2.8−2.9(br s,2H),2.7(m,1H),1.8(m,2H),1.4(m,18H)。
化合物175の合成は、一般手順6c及び7の手順に従った。
m/z 423.26[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.5(m,1H),6.8(m,2H),5.1(s,1H),4.5(m,1H),4.4(m,2H),3.8(m,1H),3.2(m,1H),2.7−2.9(m,2H),2.1(s,3H),2.0(m,2H),1.6(m,2H),1.4(s,9H)。
化合物176の合成は、一般手順6c及び7の手順に従った。
m/z 465.34[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.5(m,1H),6.8(m,2H),5.1(s,1H),4.3−4.4(m,4H),3.0(m,2H),2.8(m,1H),2.0(m,2H),1.6(m,2H),1.5(s,9H),1.3(s,9H)。
中間体55の合成は、以下の一般手順7の手順に従った。
エタノール(40mL)中テトラヒドロフラン−2−カルボン酸(5.8g、43mmol)の冷却溶液(0℃)に、塩化チオニル(9.6mL、129mmol)を添加した。この温度で2時間撹拌した後、混合物を減圧下で濃縮した。混合物を水(20mL)で希釈し、ジエチルエーテル(3×100mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、油性残渣としてエチルテトラヒドロフラン−2−カルボキシレート(中間体55、6g、収率96%)を得て、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。m/z 145.03[M+H]+、TLC系:10%メタノール−ジクロロメタン、Rf:0.6。
中間体56の合成は、以下の一般手順2の手順に従った。
THF(100mL)中エチルテトラヒドロフラン−2−カルボキシレート(中間体55、6g、41.66mmolの冷却(0℃)溶液に、乾燥アセトニトリル(3.4mL、83.33mmol)を添加した。10分後、LHDMS(THF中1M、13.9g、83.3mmol)を添加した。0℃で2時間撹拌した後、pHが5になるまで混合物を飽和クエン酸溶液で反応停止処理し、酢酸エチル(3×200mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、油性残渣として3−オキソ−3−(テトラヒドロフラン−2−イル)プロパンニトリル(中間体56、7.5g、収率99%)を得て、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。m/z 140.02[M+H]+、TLC系:10%メタノール−ジクロロメタン、Rf:0.4。
化合物177の合成は、以下の一般手順3の手順に従った。
エタノール(90mL)中3−オキソ−3−(テトラヒドロフラン−2−イル)プロパンニトリル(中間体56、7.5g、53.95mmol)の溶液に、ヒドラジン水和物(N2H4.H2O、4.04mL、24mmol)を添加し、その後、反応混合物を90℃に5時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、揮発物を蒸発させた。残渣を、2%MeOH−ジクロロメタンで溶出する中性アルミナカラムクロマトグラフィー(100〜300メッシュ)により精製して、橙色の液体として3−(テトラヒドロフラン−2−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物177、2g、24%)を得た。m/z 154.13[M+H]+、TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.5。
化合物178の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
乾燥DMF(20mL)中3−(テトラヒドロフラン−2−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物177、2g、13.1mmol)の冷却溶液(0℃)に、5−クロロチオフェン−2−カルバルデヒド(1.97mL、19.6mmol)及び酢酸(2mL)を添加した。反応混合物を室温で2時間撹拌した(イミンの形成がTLCにより極性のより低いスポットとして観察された)。反応混合物を冷却(0℃)し、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(1.64g、26.1mmol)を少量ずつに分けて添加し、触媒量の酢酸を添加した。2時間後、反応混合物を氷冷水(50mL)で反応停止処理し、酢酸エチル(3×100mL)に抽出した。合わせた有機層を飽和NaHCO3(2×50mL)、水(2×50mL)、及びブライン(2×50mL)で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、10%ジエチルエーテル/ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色のガム状液体としてN−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(テトラヒドロフラン−2−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物178、650mg、6.2%)を得た。m/z 284.13[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ11.50(br s,1H),6.91−6.84(m,2H),5.74(br s,1H),5.37(s,1H),4.70(s,2H),4.29(br s,2H),3.84−3.79(m,1H),3.71−3.66(m,1H),2.13−2.11(m,1H),1.91−1.79(m,3H)ppm、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.5。
化合物179の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(8mL)中N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(テトラヒドロフラン−2−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物178、200mg、0.70mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.10mL、0.7mmol)、続いて、塩化トリメチルアセチル(0.06mL、0.56mmol)を添加した。室温で2時間撹拌した後、反応混合物を水(50mL)で希釈し、ジクロロメタン(2×25mL)に抽出した。合わせた有機層を飽和NaHCO3(2×10mL)及び水(2×10mL)で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、15%酢酸エチル/ヘキサンで溶出する分取シリカゲルTLC(100〜200メッシュ)により精製して、無色の液体として1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(テトラヒドロフラン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物179、35mg、14%)を得た。MS(ESI):m/z 368.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ7.71(s,1H),6.96(s,2H),5.41(s,1H),4.66(s,1H),4.43(s,3H),3.82−3.80(m,1H),3.73−3.71(m,1H),2.12−2.11(m,1H),1.94−1.89(m,3H)ppm、TLC系:ヘキサン中30%酢酸エチル。Rf:0.6。
化合物180の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下のジクロロメタン(10mL)中チオフェン−3−カルボン酸(95mg、0.84mmol)の冷却(0℃)溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、201mg、1.05mmol)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、283mg、2.1mmol)を添加した。反応混合物を10分間撹拌し、その後、混合物にジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.48mL、2.8mmol)、続いて、N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(テトラヒドロフラン−2−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物178、200mg、0.7mmol)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で16時間後、反応混合物を水(50mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアセトニトリル−水を使用した分取HPLCにより精製して、生成物(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(テトラヒドロフラン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(チオフェン−3−イル)メタノン(化合物180、38mg、収率15%)を得た。m/z 394.16[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.87(s,1H),7.84−7.83(m,1H),7.81−7.77(m,1H),7.66−7.64(m,1H),7.00−6.96(m,2H),5.54(s,1H),4.73−4.70(m,1H),4.51(s,2H),3.88−3.83(m,1H),3.77−3.72(m,1H),2.21−2.14(m,1H),1.99−1.87(m,3H)ppm、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.6。
化合物181の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下のジクロロメタン(10mL)中2−メトキシ安息香酸(127mg、0.84mmol)の冷却(0℃)溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、201mg、1.05mmol)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、283mg、2.1mmol)を添加した。反応混合物を10分間撹拌し、その後、混合物にジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.48mL、2.8mmol)、続いて、N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(テトラヒドロフラン−2−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物178、200mg、0.7mmol)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で16時間後、反応混合物を水(50mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアセトニトリル−水を使用した分取HPLCにより精製して、生成物(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(テトラヒドロフラン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(2−メトキシフェニル)メタノン(化合物181、32mg、収率11%)を得た。m/z 394.16[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.71−7.68(m,1H),7.49−7.45(m,1H),7.36−7.34(m,1H),7.14−7.12(m,2H),7.03−6.98(m,3H),5.49(s,1H),4.50−4.46(m,3H),3.83−3.77(m,1H),3.73(s,3H),3.69−3.64(m,1H),2.06−2.02(m,1H),1.88−1.68(m,3H)、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.6。
中間体57の合成は、以下の一般手順7の手順に従った。
エタノール(100mL)中テトラヒドロ−2H−ピラン−4−カルボン酸(10g、76mmol)の冷却溶液(0℃)に、塩化チオニル(17.1mL、230mmol)を添加した。この温度で3時間撹拌した後、混合物を減圧下で濃縮した。混合物を飽和NaHCO3(20mL)で希釈し、ジエチルエーテル(3×100mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、油性残渣としてエチルテトラヒドロ−2H−ピラン−4−カルボキシレート(中間体57、11g、収率91%)を得て、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。m/z 145.03[M+H]+、TLC系:ヘキサン中30%酢酸エチル、Rf:0.7。
中間体58の合成は、以下の一般手順2の手順に従った。
THF(50mL)中エチルテトラヒドロ−2H−ピラン−4−カルボキシレート(中間体57、3g、18.98mmol)の冷却(0℃)溶液に、乾燥アセトニトリル(1.5mL、37.97mmol)を添加した。10分後、LHDMS(THF中1M、63.4g、37.9mmol)を添加した。0℃で2時間撹拌した後、pHが5になるまで混合物を飽和クエン酸溶液で反応停止処理し、酢酸エチル(3×100mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、油性残渣として3−オキソ−3−(テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル)プロパンニトリル(中間体58、3.3g、収率99%)を得て、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。m/z 153.12[M+H]+、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル、Rf:0.2。
化合物182の合成は、以下の一般手順3の手順に従った。
エタノール(90mL)中3−オキソ−3−(テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル)プロパンニトリル(中間体58、3.3g、21.5mmol)の溶液に、ヒドラジン水和物(N2H4.H2O、1.56mL、32.3mmol)を添加し、その後、反応混合物を90℃に5時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、揮発物を蒸発させた。残渣を、2%MeOH−ジクロロメタンで溶出する中性アルミナカラムクロマトグラフィー(100〜300メッシュ)により精製して、橙色の液体として3−(テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物182、1.7g、47%)を得た。m/z 168.15[M+H]+、TLC系:10%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.3。
化合物183の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
乾燥DMF(20mL)中3−(テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物182、2.1g、12.5mmol)の冷却溶液(0℃)に、5−クロロチオフェン−2−カルバルデヒド(1.96mL、18.8mmol)及び酢酸(2mL)を添加した。反応混合物を室温で2時間撹拌した(イミンの形成がTLCにより極性のより低いスポットとして観察された)。反応混合物を冷却(0℃)し、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(2.58g、25.1mmol)を少量ずつに分けて添加し、触媒量の酢酸を添加した。2時間後、反応混合物を氷冷水(25mL)で反応停止処理し、酢酸エチル(3×50mL)に抽出した。合わせた有機層を飽和NaHCO3(2×50mL)、水(2×50mL)、及びブライン(2×50mL)で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、10%ジエチルエーテル/ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、薄黄色のガム状液体としてN−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物183、600mg、16%)を得た。m/z 298.19[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ11.50(br s,1H),6.90(s,1H),6.83(s,1H),5.69(br s,1H),5.29(s,1H),4.28(s,2H),3.88−3.84(m,2H),3.39−3.34(m,3H),2.76−2.68(m,1H),1.76−1.72(m,2H),1.60−1.50(m,2H)ppm、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.5。
化合物184の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
乾燥ジクロロメタン(8mL)中N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物183、100mg、0.33mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(TEA、0.06mL、0.7mmol)、続いて、塩化トリメチルアセチル(0.03mL、0.26mmol)を添加した。室温で3時間撹拌した後、反応混合物を水(50mL)で希釈し、ジクロロメタン(2×25mL)に抽出した。合わせた有機層を飽和NaHCO3(2×10mL)及び水(2×10mL)で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、15%酢酸エチル/ヘキサンで溶出する分取シリカゲルTLC(100〜200メッシュ)により精製して、無色の液体として1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(テトラヒドロフラン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物184、15mg、11%)を得た。MS(ESI):m/z 382.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ7.69−7.66(m,1H),6.96(s,2H),5.40(s,1H),4.41(s,1H),4.43(s,3H),3.88−3.85(m,2H),3.43−3.34(m,2H),2.74−2.67(m,1H),1.79−1.76(m,2H),1.64−1.54(m,2H),1.40(s,9H)ppm、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.7。
化合物185の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下のジクロロメタン(10mL)中チオフェン−3−カルボン酸(103mg、0.80mmol)の冷却(0℃)溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、192mg、1.00mmol)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、271mg、2.01mmol)を添加した。反応混合物を10分間撹拌し、その後、混合物にジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.46mL、2.68mmol)、続いて、N−((5−クロロチオフェン−2−yl)メチル)−3−(テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物183、200mg、0.67mmol)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で16時間後、反応混合物を水(50mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアセトニトリル−水を使用した分取HPLCにより精製して、生成物(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(テトラヒドロフラン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(チオフェン−3−イル)メタノン(化合物185、30mg、収率11%)を得た。m/z 408.23[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.90(s,1H),7.81−7.78(m,2H),7.65−7.63(m,1H),7.01−6.96(m,2H),5.54(s,1H),4.49−4.47(m,2H),3.91−3.88(m,2H),3.44−3.41(m,2H),2.80−2.67(m,1H),1.83−1.79(m,2H),1.68−1.58(m,2H)ppm、TLC系:ヘキサン中50%酢酸エチル。Rf:0.5。
化合物186の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下のジクロロメタン(10mL)中2−メトキシ安息香酸(91mg、0.60mmol)の冷却(0℃)溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、144mg、0.75mmol)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、202mg、1.5mmol)を添加した。反応混合物を10分間撹拌し、その後、混合物にジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.34mL、1.5mmol)、続いて、N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物183、150mg、0.50mmol)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で16時間後、反応混合物を水(50mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアセトニトリル−水を使用した分取HPLCにより精製して、生成物(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(テトラヒドロフラン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(2−メトキシフェニル)メタノン(化合物186、25mg、収率12%)を得た。m/z 432.27[M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.67−7.64(m,1H),7.49−7.44(m,1H),7.36−7.33(m,1H),7.13−7.11(m,2H),7.03−6.98(m,3H),5.50(s,1H),4.48−4.47(m,2H),3.82−3.74(m,2H),3.73(s,3H),3.34−3.28(m,1H),2.55−2.49(m,1H),1.61−1.44(m,4H)、TLC系:ヘキサン中30%酢酸エチル。Rf:0.5。
中間体59の合成は、以下の一般手順2の手順に従った。
THF(150mL)中1−(tert−ブチル)2−エチルピロリジン−1,2−ジカルボキシレート(15g、61.7mmol)の冷却(−20℃)溶液に、乾燥アセトニトリル(2.5mL、61.7mmol)を添加した。10分後、LHDMS(THF中1M、15g、92.5mmol)を添加した。0℃で2時間撹拌した後、pHが5になるまで混合物を飽和クエン酸溶液で反応停止処理し、酢酸エチル(3×100mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、油性残渣としてtert−ブチル2−(2−シアノアセチル)ピロリジン−1−カルボキシレート(中間体59、15g、収率99%)を得て、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。m/z 238.12[M+H]+、TLC系:石油エーテル中50%酢酸エチル、Rf:0.3。
化合物187の合成は、以下の一般手順3の手順に従った。
エタノール(300mL)中tert−ブチル2−(2−シアノアセチル)ピロリジン−1−カルボキシレート(中間体59、15g、61.7mmol)の溶液に、ヒドラジン水和物(N2H4.H2O、4.68mL、32.3mmol)を添加し、その後、反応混合物を80℃に16時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、揮発物を蒸発させた。残渣を、3%MeOH−ジクロロメタンで溶出する中性アルミナカラムクロマトグラフィー(100〜300メッシュ)により精製して、薄茶色の固体としてtert−ブチル2−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物187、5g、32%)を得た。m/z 252.15[M+H]+、TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.2。
化合物188の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
乾燥DMF(10mL)中tert−ブチル2−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物187、5g、19.8mmol)の冷却溶液(0℃)に、5−クロロチオフェン−2−カルバルデヒド(2.75mL、25.8mmol)及び酢酸(1mL)を添加した。反応混合物を室温で2時間撹拌した(イミンの形成がTLCにより極性のより低いスポットとして観察された)。反応混合物を冷却(0℃)し、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(2.58g、25.1mmol)を少量ずつに分けて添加し、触媒量の酢酸を添加した。2時間後、反応混合物を氷冷水(25mL)で反応停止処理し、酢酸エチル(3×50mL)に抽出した。合わせた有機層をブライン(2×50mL)で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、1%ジクロロメタン/MeOHで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、赤みを帯びた茶色の固体としてtert−ブチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物188、2.2g、27%)を得た。m/z 383.29[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ11.34(br s,1H),6.89(s,1H),6.82(s,1H),5.63(br s,1H),5.24(s,1H),4.29−4.27(m,2H),3.38−3.24(m,2H),2.1(br s,1H),1.84(br s,3H),1.38−1.22(br m,9H)ppm、TLC系:5%メタノール−ジクロロメタン、Rf:0.5。
化合物189の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下のジクロロメタン(20mL)中2−メトキシ安息香酸(1g、6.59mmol)の冷却(0℃)溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、2.1g、10.99mmol)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、742mg、5.49mmol)を添加した。反応混合物を10分間撹拌し、冷却(0℃)し、その後、混合物にジイソプロピルエチルアミン(DIEA、2.8mL、16.49mmol)、続いて、tert−ブチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物188、2.1g、5.49mmol)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で16時間後、反応混合物を水(50mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、30%酢酸エチル/石油エーテルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、灰色がかった白色の固体としてtert−ブチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2−メトキシベンゾイル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物189、1.5g、収率53%)を得た。m/z 417.37[M+1]+;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.47−7.40(m,3H),7.02−6.96(m,2H),6.82−6.77(m,2H),5.34(s,1H),4.45−4.43(m,2H),4.03−3.99(m,1H),3.81(s,3H),3.06−3.02(m,1H),2.93−2.87(m,1H),2.08−2.03(m,1H),1.87−1.72(m,3H)、TLC系:石油エーテル中70%酢酸エチル。Rf:0.8。
化合物190の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
酢酸エチル(10mL)中tert−ブチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2−メトキシベンゾイル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(500mg、0.96mmol)の冷却(−10℃)溶液に、酢酸エチル(2mL)中塩化水素(1M)の溶液を添加した。反応混合物を1時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させて、灰色がかった白色の固体として生成物(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(2−メトキシフェニル)メタノン塩酸塩(化合物190、350mg、収率74%)を得た。m/z 417.37[(M−HCl)+1]+;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.47−7.40(m,3H),7.02−6.96(m,2H),6.82−6.77(m,2H),5.34(s,1H),4.45−4.43(m,2H),4.03−3.99(m,1H),3.81(s,3H),3.06−3.02(m,1H),2.93−2.87(m,1H),2.08−2.03(m,1H),1.87−1.72(m,3H)、TLC系:石油エーテル中70%酢酸エチル。Rf:0.8。
化合物191の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
ジクロロメタン(10mL)中(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(2−メトキシフェニル)メタノン塩酸塩(170mg、0.39mmol)の冷却(0℃)溶液に、トリエチルアミン(0.1mL、0.74mmol)、続いて、塩化ピバロイル(36mg、0.29mmol)を添加した。反応混合物を室温で4時間撹拌し、その後、水(50mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相をブライン(2×25mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、50%酢酸エチル/石油エーテルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、灰色がかった白色の固体として生成物1−(2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2−メトキシベンゾイル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物191、80mg、収率43%)を得た。m/z 501.29[M+1]+;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.41−7.32(m,3H),6.99−6.93(m,2H),6.80−6.76(m,2H),5.18(s,1H),5.17−5.13(m,1H),4.42−4.40(m,2H),3.80(s,3H),3.62(s,2H),1.96−1.87(m,4H),1.56(s,9H)、TLC系:クロロホルム中5%メタノール。Rf:0.6。
化合物192の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
ジクロロメタン(15mL)中(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(2−メトキシフェニル)メタノン塩酸塩(150mg、0.33mmol)の冷却(0℃)溶液に、トリエチルアミン(0.09mL、0.66mmol)、続いて、塩化イソブチリル(35mg、0.33mmol)を添加した。反応混合物を室温で4時間撹拌し、その後、水(50mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相をブライン(2×25mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、60%酢酸エチル/石油エーテルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、灰色がかった白色の固体として生成物1−(2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2−メトキシベンゾイル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−イル)−2−メチルプロパン−1−オン(化合物192、90mg、収率56%)を得た。m/z 487.35[M+1]+;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ回転異性体7.49−7.32(m,3H),7.04−6.91(m,2H),6.79−6.75(m,2H),5.16(s,1H),4.80−4.78(m,1H),4.42−4.39(m,2H),3.80(s,3H),3.62−3.48(m,2H),2.63−2.53(m,1H),2.02−1.86(m,4H),1.09−0.86(m,6H)、TLC系:クロロホルム中5%メタノール。Rf:0.5。
化合物193の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
ジクロロメタン(15mL)中(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(2−メトキシフェニル)メタノン塩酸塩(130mg、0.28mmol)の冷却(0℃)溶液に、トリエチルアミン(0.08mL、0.57mmol)、続いて、塩化アセチル(22mg、0.28mmol)を添加した。反応混合物を室温で4時間撹拌し、その後、水(50mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相をブライン(2×25mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、1%メタノール/ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、無色のガム状液体として生成物1−(2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2−メトキシベンゾイル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−イル)エタン−1−オン(化合物193、15mg、収率12%)を得た。m/z 459.27[M+1]+;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ回転異性体7.52−7.28(m,3H),7.04−6.94(m,2H),6.82−6.77(m,2H),5.31−5.06(m,2H),4.79−4.76(m,1H),4.48−4.38(m,2H),3.81(s,3H),3.62−3.48(m,2H),2.29−2.01(m,1H),1.99−1.86(m,6H)、TLC系:クロロホルム中5%メタノール。Rf:0.2。
化合物194の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下のジクロロメタン(15mL)中2,3−ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシン−5−カルボン酸(282mg、1.57mmol)の冷却(0℃)溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、191mg、3.91mmol)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、135mg、1.3mmol)を添加した。反応混合物を10分間撹拌し、その後、混合物にジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.69mL、3.91mmol)、続いて、tert−ブチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物188、500mg、1.30mmol)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で16時間後、反応混合物を水(50mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、25%酢酸エチル/石油エーテルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、生成物tert−ブチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2,3−ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシン−5−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物194、200mg、収率32%)を得た。m/z 545.16[M+1]+、TLC系:石油エーテル中70%酢酸エチル。Rf:0.7。
化合物195の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
ジエチルエーテル(2mL)中tert−ブチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2,3−ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシン−5−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(200mg、0.96mmol)の冷却(0℃)溶液に、ジエチルエーテル(2mL)中塩化水素(1M)の溶液を添加した。反応混合物を2時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させ、ジエチルエーテル及びアセトンで粉砕して、灰色がかった白色の固体として生成物(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(2,3−ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシン−5−イル)メタノン塩酸塩(化合物195、50mg、収率15%)を得た。m/z 445.19[(M−HCl)+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ9.85(br s,1H),8.95(br s,1H),7.86(s,1H),7.03−6.88(m,5H),5.78−5.74(m,1H),4.51−4.49(m,1H),4.41(s,1H),4.27−4.21(m,4H),3.17(s,1H),2.24−2.18(m,1H),1.98−1.88(m,3H)、TLC系:ジクロロメタン中10%メタノール。Rf:0.25。
化合物196の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下のジクロロメタン(15mL)中フラン−3−カルボン酸(175mg、1.57mmol)の冷却(0℃)溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、191mg、3.91mmol)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、135mg、1.3mmol)を添加した。反応混合物を10分間撹拌し、その後、混合物にジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.69mL、3.91mmol)、続いて、tert−ブチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物188、500mg、1.30mmol)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で室温で16時間後、反応混合物を水(50mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、15%酢酸エチル/石油エーテルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、生成物tert−ブチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(フラン−3−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物196、280mg、収率45%)を得た。m/z 477.16[M+1]+、TLC系:石油エーテル中70%酢酸エチル。Rf:0.75。
化合物197の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
ジオキサン(3mL)中tert−ブチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(フラン−3−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(100mg、0.20mmol)の冷却(−30℃)溶液に、ジエチルエーテル(2mL)中塩化水素(1M)の溶液を添加した。反応混合物を2時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させた。混合物をn−ペンタン、ジエチルエーテル、及びn−ペンタンで洗浄して、灰色がかった白色の固体として生成物(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(フラン−3−イル)メタノン塩酸塩(化合物197、30mg、収率38%)を得た。m/z 377.21[(M−HCl)+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ9.64(br s,1H),8.95(br s,1H),9.01(s,1H),8.99(s,1H),8.00−7.98(m,1H),7.88(s,1H),7.06(s,1H),6.99−6.97(m,2H),5.69(s,1H),4.69−4.51(m,3H),3.32−3.29(m,2H),2.39−2.33(m,1H),1.96−1.92(m,3H)、TLC系:クロロホルム中10%メタノール。Rf:0.1。
化合物198の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
ジオキサン(5mL)中tert−ブチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(200mg、0.52mmol)の冷却(0℃)溶液に、ジオキサン(5mL)中塩化水素(1M)の溶液を添加した。反応混合物を室温で8時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させた。混合物を飽和NaHCO3(20mL)で希釈し、酢酸エチル(3×50mL)に抽出した。合わせた有機層をブライン(50mL)で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。 残渣を、5%メタノール/ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、灰色がかった白色の固体として生成物N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン(化合物198、130mg、収率91%)を得た。m/z 283.21(M+1]+、TLC系:クロロホルム中10%メタノール。Rf:0.2。
化合物199の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
ジクロロメタン(20mL)中N−((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)−3−(ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−5−アミン塩酸塩(3.5g、11.0mmol)の冷却(0℃)溶液に、トリエチルアミン(0.72mL、16.5mmol)、続いて、塩化Fmoc(3.13g、12.1mmol)を添加した。反応混合物を2時間撹拌し、その後、水(50mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、5%メタノール/ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、灰色がかった白色のふわふわした固体として生成物(9H−フルオレン−9−イル)メチル−2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物199、3.5g、収率63%)を得た。m/z 505.3[M+1]+、TLC系:クロロホルム中10%メタノール。Rf:0.4。
化合物200の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下、室温でのジクロロメタン(5mL)中tert−ブチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物199、500mg、0.99mmol)及び3−メトキシ−2,2−ジメチルプロパン酸(180mg、1.18mmol)の溶液に、1−[ビス(ジメチルアミノ)メチレン]−1H−1,2,3−トリアゾロ[4,5−b]ピリジニウム3−オキシドヘキサフルオロリン酸塩(HATU、564mg、1.48mmol)、続いて、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.32mL、1.48mmol)を添加した。反応混合物を室温で16時間撹拌し、水(50mL)で希釈し、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアセトニトリル−水を使用した分取HPLCにより精製して、生成物(9H−フルオレン−9−イル)メチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2,4−ジメトキシベンゾイル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物200、140mg、収率21%)を得た。m/z 669.19[M+1]+、TLC系:ジクロロメタン中10%アセトン。Rf:0.85。
化合物201の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
ジメチルホルムアミド(2mL)中(9H−フルオレン−9−イル)メチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2,4−ジメトキシベンゾイル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(140mg、0.20mmol)の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA、142mg、1.70mmol)を添加した。反応混合物を2時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させた。混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。 残渣を、5%メタノール/ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、ガム状液体として生成物(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(2,4−ジメトキシフェニル)メタノン(化合物201、45mg、収率48%)を得た。m/z 447.24[(M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ9.64(br s,1H),8.95(br s,1H),9.11(s,1H),7.84−7.81(m,1H),7.39−7.37(m,1H),7.02−6.98(m,2H),6.67(s,1H),6.60−6.57(m,1H),5.72(s,1H),4.50−4.37(m,3H),3.83(s,3H),3.74(m,3H),3.19−3.14(m,2H),2.22−2.17(m,1H),1.96−1.88(m,3H)、TLC系:クロロホルム中10%メタノール。Rf:0.3。
化合物202の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下、室温でのジクロロメタン(5mL)中tert−ブチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物199、500mg、0.99mmol)及びピバル酸(121mg、1.18mmol)の溶液に、1−[ビス(ジメチルアミノ)メチレン]−1H−1,2,3−トリアゾロ[4,5−b]ピリジニウム3−オキシドヘキサフルオロリン酸塩(HATU、564mg、1.48mmol)、続いて、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.32mL、1.48mmol)を添加した。反応混合物を室温で16時間撹拌し、水(50mL)で希釈し、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアセトニトリル−水を使用した分取HPLCにより精製して、生成物(9H−フルオレン−9−イル)メチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物202、200mg、収率35%)を得た。m/z 590.19[M+1]+、TLC系:ジクロロメタン中10%アセトン。Rf:0.8。
化合物203の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
メタノール(2mL)中(9H−フルオレン−9−イル)メチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−ピバロイル−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(100mg、0.17mmol)の溶液に、重炭酸ナトリウム(142mg、1.70mmol)を添加した。反応混合物を16時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させた。混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、8%メタノール/ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、ガム状液体として生成物1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物203、35mg、収率56%)を得た。m/z 367.23[(M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ7.72−7.62(m,1H),6.99(s,1H),5.4(s,1H),4.45−4.38(m,2H),3.93−3.82(m,1H),2.85−2.97(m,2H),1.98−1.88(m,1H),1.78−1.62(m,3H),1.42(s,9H)、TLC系:クロロホルム中10%メタノール。Rf:0.35。
化合物204の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下、室温でのクロロホルム(25mL)中(9H−フルオレン−9−イル)メチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物199、500mg、0.99mmol)及び3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパン酸(146mg、1.2mmol)の溶液に、テトラフルオロホウ酸O−(ベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウム(TBTU、365mg、1.1mmol)、続いて、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.3mL、7.4mmol)を添加した。反応混合物を室温で4時間撹拌し、水(50mL)で希釈し、クロロホルム(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアセトニトリル−水を使用した分取HPLCにより精製して、生成物(9H−フルオレン−9−イル)メチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパノイル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物204、250mg、収率42%)を得た。m/z 605.19[M+1]+、TLC系:ジクロロメタン中10%メタノール。Rf:0.9。
化合物205の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
メタノール(2mL)中(9H−フルオレン−9−イル)メチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパノイル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(100mg、0.16mmol)の溶液に、重炭酸ナトリウム(139mg、1.65mmol)を添加した。反応混合物を16時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させた。混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、5%メタノール/ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、半固体として生成物1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−ヒドロキシ−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物205、15mg、収率24%)を得た。m/z 383.23[(M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ7.72−7.62(m,1H),6.99(s,1H),5.4(s,1H),4.84−4.83(m,1H),4.45−4.38(m,2H),3.93−3.82(m,1H),2.85−2.97(m,2H),2.78−2.81(m,1H),1.98−1.88(m,1H),1.78−1.62(m,3H),1.42(s,6H)、TLC系:クロロホルム中5%メタノール。Rf:0.3。
化合物206の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下、室温でのジクロロメタン(5mL)中(9H−フルオレン−9−イル)メチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物199、500mg、0.99mmol)及び4−メチルテトラヒドロ−2H−ピラン−4−カルボン酸(143mg、0.99mmol)の溶液に、1−[ビス(ジメチルアミノ)メチレン]−1H−1,2,3−トリアゾロ[4,5−b]ピリジニウム3−オキシドヘキサフルオロリン酸塩(HATU、564mg、1.48mmol)、続いて、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.32mL、1.48mmol)を添加した。反応混合物を室温で16時間撹拌し、水(50mL)で希釈し、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、移動相としてアセトニトリル−水を使用した分取HPLCにより精製して、生成物(9H−フルオレン−9−イル)メチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(4−メチルテトラヒドロ−2H−ピラン−4−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物206、110mg、収率18%)を得た。m/z 632.19[M+1]+、TLC系:ジクロロメタン中10%アセトン。Rf:0.9。
化合物207の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
メタノール(2mL)中(9H−フルオレン−9−イル)メチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(4−メチルテトラヒドロ−2H−ピラン−4−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(100mg、0.16mmol)の溶液に、重炭酸ナトリウム(139mg、1.65mmol)を添加した。反応混合物を16時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させた。混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、5%メタノール/ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、半固体として生成物(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)(4−メチルテトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル)メタノン(化合物207、15mg、収率24%)を得た。m/z 410.31[(M+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ8.81(br s,1H),7.85(br s,1H),6.96(s,2H),5.60(s,1H),4.54−4.43(m,2H),3.78(br s,2H),3.45(br s,2H),3.22(br s,2H),2.43−2.21(br s,3H),1.98−1.89(m,3H),1.75(br s,2H),1.54−1.50(m,3H)、TLC系:クロロホルム中10%メタノール。Rf:0.35。
化合物208の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下のジクロロメタン(15mL)中3−メトキシ−2,2−ジメチルプロパン酸(200mg、1.57mmol)の冷却(0℃)溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、191mg、3.91mmol)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、135mg、1.3mmol)を添加した。反応混合物を10分間撹拌し、その後、混合物にジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.69mL、3.91mmol)、続いて、(9H−フルオレン−9−イル)メチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物199、500mg、1.30mmol)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で16時間後、反応混合物を水(50mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×25mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、20%酢酸エチル/石油エーテルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、生成物(9H−フルオレン−9−イル)メチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(3−メトキシ−2,2−ジメチルプロパノイル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(化合物208、200mg、収率31%)を得た。m/z 497.26[M+1]+、TLC系:石油エーテル中70%酢酸エチル。Rf:0.7。
化合物209の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
メタノール(2mL)中(9H−フルオレン−9−イル)メチル2−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(3−メトキシ−2,2−ジメチルプロパノイル)−1H−ピラゾール−3−イル)ピロリジン−1−カルボキシレート(180mg、0.29mmol)の溶液に、重炭酸ナトリウム(200mg、2.91mmol)を添加した。反応混合物を16時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させた。混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、8%メタノール/ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、半固体として生成物1−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−3−(ピロリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−メトキシ−2,2−ジメチルプロパン−1−オン(化合物209、15mg、収率24%)を得た。m/z 397.25[(M+1]+;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.51−7.50(m,1H),6.80−6.79(m,1H),6.76−6.75(m,1H),5.42(s,1H),4.64−4.61(m,1H),4.36−4.35(m,2H),3.79(s,2H),3.41−3.40(m,1H),3.27(s,3H),2.37−2.32(m,1H),2.17−1.97(m,4H),1.42(s,6H)、TLC系:クロロホルム中10%メタノール。Rf:0.2。
中間体60の合成は、以下の一般手順7の手順に従った。
中間体61の合成は、以下の一般手順7の手順に従った。
ジクロロメタン(700mL)中エチルアゼチジン−3−カルボキシレート塩酸塩(70g、424mmol)の冷却溶液(0℃)に、トリエチルアミン(119mL、848mmol)を30分間にわたって滴加し、続いて、二炭酸ジ−tert−ブチル(111g、509mmol)を滴加した。この温度で3時間撹拌した後、混合物を減圧下で濃縮した。混合物を水(20mL)で希釈し、ジクロロメタン(3×100mL)に抽出した。合わせた有機層をブライン(2×10mL)で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、油性残渣として1−(tert−ブチル)3−エチルアゼチジン−1,3−ジカルボキシレート(中間体61、40g、収率42%)を得て、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。m/z 230.23[M+H]+、TLC系:10%メタノール−ジクロロメタン、Rf:0.7。
中間体62の合成は、以下の一般手順2の手順に従った。
THF(50mL)中1−(tert−ブチル)3−エチルアゼチジン−1,3−ジカルボキシレート(中間体61、1g、4.36mmolの冷却(0℃)溶液に、乾燥アセトニトリル(0.32mL、8.7mmol)を添加した。10分後、LHDMS(THF中1M、8.7mL、8.7mmol)を添加した。0℃で2時間撹拌した後、pHが5になるまで混合物を飽和クエン酸溶液で反応停止処理し、酢酸エチル(3×50mL)に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、油性残渣としてtert−ブチル3−(2−シアノアセチル)アゼチジン−1−カルボキシレート(中間体62、1.2g、収率99%)を得て、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。m/z 225.02[M+H]+、TLC系:10%メタノール−ジクロロメタン、Rf:0.5。
化合物210の合成は、以下の一般手順3の手順に従った。
エタノール(12mL)中tert−ブチル3−(2−シアノアセチル)アゼチジン−1−カルボキシレート(中間体62、1.2g、5.35mmol)の溶液に、ヒドラジン水和物(N2H4.H2O、1.34mL、8.0mmol)を添加し、その後、反応混合物を90℃に5時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、揮発物を蒸発させた。残渣を、2%MeOH−ジクロロメタンで溶出する中性アルミナカラムクロマトグラフィー(100〜300メッシュ)により精製して、灰色がかった白色の固体としてtert−ブチル3−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物210、600mg、47%)を得た。m/z 239.13[M+H]+、TLC系:10%メタノール−ジクロロメタン。Rf:0.4。
化合物211の合成は、以下の一般手順4の手順に従った。
乾燥DMF(40mL)中tert−ブチル3−(5−アミノ−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物210、11g、46.2mmol)の冷却溶液(0℃)に、5−クロロチオフェン−2−カルバルデヒド(7.12mL、69.3mmol)及び酢酸(12mL)を添加した。反応混合物を室温で2時間撹拌した(イミンの形成がTLCにより極性のより低いスポットとして観察された)。反応混合物を冷却(0℃)し、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(6.18g、92.4mmol)を少量ずつに分けて添加し、触媒量の酢酸を添加した。2時間後、反応混合物を氷冷水(50mL)で反応停止処理し、酢酸エチル(3×100mL)に抽出した。合わせた有機層を飽和NaHCO3(2×50mL)、水(2×50mL)、及びブライン(2×50mL)で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、2%メタノール/ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物211、7g、41%)を得た。m/z 368.13[M+H]+、TLC系:ジクロロメタン中10%メタノール、Rf:0.5。
化合物212の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下のジクロロメタン(10mL)中フラン−3−カルボン酸(182mg、1.63mmol)の冷却(0℃)溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、388mg、2.0mmol)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、135mg、4mmol)を添加した。反応混合物を10分間撹拌し、冷却(0℃)し、その後、混合物にジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.9mL、5.4mmol)、続いて、tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物211、500mg、1.35mmol)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で16時間後、反応混合物を水(25mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×10mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、10%酢酸エチル/ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、灰色がかった白色の固体としてtert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(フラン−3−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物212、230mg、収率35%)を得た。m/z 463.37[M+1]+、TLC系:ヘキサン中30%酢酸エチル。Rf:0.5。
化合物213の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
酢酸エチル(5mL)中tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(フラン−3−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(230mg、0.49mmol)の冷却(−10℃)溶液に、酢酸エチル(8mL)中塩化水素(1M)の溶液を添加した。反応混合物を2時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させ、ジエチルエーテル及びアセトンで粉砕し、残渣を、移動相としてアセトニトリル−水−TFAを使用した分取HPLCにより精製して、灰色がかった白色の固体として生成物(3−(アゼチジン−3−イル)−5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−1−イル)(フラン−3−イル)メタノン2,2,2−トリフルオロ酢酸塩(化合物213、10mg、収率8%)を得た。m/z 363.14[(M−TFA)+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ8.94(s,1H),8.74(br s,1H),7.96−7.92(m,1H),7.89−7.88(m,1H),7.07(s,1H),6.98−6.96(m,2H),5.58(s,1H),4.50−4.49(m,2H),4.26−4.22(m,2H),4.13−3.95(m,3H)、TLC系:石油エーテル中10%酢酸エチル。Rf:0.1。
化合物214の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下のジクロロメタン(10mL)中チオフェン−3−カルボン酸(208mg、1.63mmol)の冷却(0℃)溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、388mg、2.0mmol)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、135mg、4mmol)を添加した。反応混合物を10分間撹拌し、冷却(0℃)し、その後、混合物にジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.9mL、5.4mmol)、続いて、tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物211、500mg、1.35mmol)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で16時間後、反応混合物を水(25mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×10mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、10%酢酸エチル/ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、灰色がかった白色の固体としてtert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(チオフェン−3−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物214、230mg、収率36%)を得た。m/z 479.37[M+1]+、TLC系:ヘキサン中30%酢酸エチル。Rf:0.5。
化合物215の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
酢酸エチル(5mL)中tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(チオフェン−3−カルボニル)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(230mg、0.48mmol)の冷却(−10℃)溶液に、酢酸エチル(8mL)中塩化水素(1M)の溶液を添加した。反応混合物を2時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させ、ジエチルエーテル及びアセトンで粉砕し、残渣を、移動相としてアセトニトリル−水−TFAを使用した分取HPLCにより精製して、灰色がかった白色の固体として生成物(3−(アゼチジン−3−イル)−5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−1−イル)(チオフェン−3−イル)メタノン2,2,2−トリフルオロ酢酸塩(化合物215、10mg、収率7%)を得た。m/z 379.13[(M−TFA)+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ9.01(s,1H),9.00(br s,1H),7.98−7.94(m,1H),7.81−7.79(m,1H),7.68−7.67(m,1H),7.09−6.97(m,2H),5.63(s,1H),4.51−4.49(m,2H),4.26−4.21(m,2H),4.12−3.93(m,3H)、TLC系:石油エーテル中10%酢酸エチル。Rf:0.1。
化合物216の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下のジクロロメタン(10mL)中2−メトキシ安息香酸(247mg、1.63mmol)の冷却(0℃)溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、388mg、2.0mmol)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、135mg、4mmol)を添加した。反応混合物を10分間撹拌し、冷却(0℃)し、その後、混合物にジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.9mL、5.4mmol)、続いて、tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物211、500mg、1.35mmol)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で16時間後、反応混合物を水(25mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×10mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、10%酢酸エチル/ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、灰色がかった白色の固体としてtert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2−メトキシベンゾイル)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物216、150mg、収率25%)を得た。m/z 503.37[M+1]+、TLC系:ヘキサン中30%酢酸エチル。Rf:0.5。
化合物217の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
酢酸エチル(5mL)中tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2−メトキシベンゾイル)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(150mg、0.29mmol)の冷却(−10℃)溶液に、酢酸エチル(8mL)中塩化水素(1M)の溶液を添加した。反応混合物を2時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させ、ジエチルエーテル及びアセトンで粉砕し、残渣を、移動相としてアセトニトリル−水を使用した分取HPLCにより精製して、灰色がかった白色の固体として生成物(3−(アゼチジン−3−イル)−5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−1−イル)(2−メトキシフェニル)メタノン塩酸塩(化合物217、8mg、収率5%)を得た。m/z 403.24[(M−HCl)+1]+;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.51−7.38(m,3H),7.06−6.94(m,2H),6.86(s,1H),6.78(s,1H),5.51(s,1H),4.46−4.43(m,2H),4.25−4.16(m,4H),3.82(s,3H),3.81−3.76(m,1H)、TLC系:石油エーテル中50%酢酸エチル。Rf:0.1。
化合物218の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
窒素下のジクロロメタン(10mL)中2−メトキシ安息香酸(293mg、1.63mmol)の冷却(0℃)溶液に、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI.HCl、388mg、2.0mmol)、続いて、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt、135mg、4mmol)を添加した。反応混合物を10分間撹拌し、冷却(0℃)し、その後、混合物にジイソプロピルエチルアミン(DIEA、0.9mL、5.4mmol)、続いて、tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物211、500mg、1.35mmol)を添加した。反応物をLC−MSにより監視し、室温で16時間後、反応混合物を水(25mL)中に注ぎ、ジクロロメタン(2×10mL)で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を、10%酢酸エチル/ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100〜200メッシュ)により精製して、灰色がかった白色の固体としてtert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2−メトキシベンゾイル)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(化合物218、100mg、収率18%)を得た。m/z 531.37[M+1]+、TLC系:ヘキサン中30%酢酸エチル。Rf:0.5。
化合物219の合成は、以下の一般手順5の手順に従った。
酢酸エチル(5mL)中tert−ブチル3−(5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1−(2−メトキシベンゾイル)−1H−ピラゾール−3−イル)アゼチジン−1−カルボキシレート(100mg、0.19mmol)の冷却(−10℃)溶液に、酢酸エチル(8mL)中塩化水素(1M)の溶液を添加した。反応混合物を2時間撹拌し、その後、減圧下で蒸発させ、ジエチルエーテル及びアセトンで粉砕し、残渣を、移動相としてアセトニトリル−水−TFAを使用した分取HPLCにより精製して、油性液体として生成物(3−(アゼチジン−3−イル)−5−(((5−クロロチオフェン−2−イル)メチル)アミノ)−1H−ピラゾール−1−イル)(2−メトキシフェニル)メタノン2,2,2−トリフルオロ酢酸塩(化合物219、2mg、収率2%)を得た。m/z 431.2[(M−TFA)+1]+;1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ7.84−7.81(m,1H),7.02−6.87(m,5H),5.63(s,1H),4.50−4.49(m,4H),4.14−4.09(m,2H),3.94−3.85(m,2H)、TLC系:石油エーテル中50%酢酸エチル。Rf:0.1。
Claims (77)
- 以下の構造を有する化合物であって、
式中、
L1、L2、及びL4が独立して、結合、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、−C(O)−、−S−、−SO−、−SO2−、−O−、−NHSO2−、−NHC(O)−、または−NR5−であり、
R1、R2、及びR4が独立して、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換ヘテロアルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換縮合環アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
R5が、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換ヘテロアルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換縮合環アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
Vが、水素または置換もしくは非置換アルキルであり、
Wが、不在、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換ヘテロアルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、−C(O)R6、−C(O)OR6、−C(O)NR6R7、−SR6、−SOR6、−SO2R6、−SO2NR6R7、−OR6、−NHSO2R6、または−NR6R7であり、式中、R6及びR7が独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換ヘテロアルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、R6及びR7の両方が存在する場合、それらが組み合わせられて、置換もしくは非置換アルキレン、または置換もしくは非置換ヘテロアルキレンを形成してもよく、
Xが、結合、置換もしくは非置換アルキレン、−O−、または−NR8−であり、
Yが、結合、置換もしくは非置換アルキレン、−O−、または−N−であるが、但し、Yが−O−である場合、Wが不在であることを条件とし、
Zが、結合、−C(O)−、置換もしくは非置換アルキレン、−O−、または−NR9−であり、
式中、R8及びR9が独立して、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換ヘテロアルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、−C(O)R6、−C(O)OR6、−C(O)NR6R7、−SR6、−SOR6、−SO2R6、−SO2NR6R7、−OR6、−NHSO2R6、または−NR6R7であり、式中、R6及びR7が、上で定義された通りであるが、
但し、Xが−O−もしくは−NR8−であること、Yが−O−もしくは−N−であること、またはZが−O−もしくは−NR9−であることのうちの少なくともいずれか1つであることを条件とする、前記化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、もしくはプロドラッグ。 - Xが、結合または置換もしくは非置換アルキレンである、請求項1に記載の化合物。
- Zが、結合または置換もしくは非置換アルキレンである、請求項2に記載の化合物。
- Yが、−N−であり、Wが、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換アリール、−C(O)R6、−C(O)OR6、−C(O)NR6R7、−SO2R6、またはSO2NR6R7であり、式中、R6及びR7が独立して、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、または置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルであるか、またはR6及びR7の両方が存在する場合、それらが組み合わせられて、置換もしくは非置換アルキレン、または置換もしくは非置換ヘテロアルキレンを形成してもよい、請求項3に記載の化合物。
- Xが、置換もしくは非置換メチレン、置換もしくは非置換エチレン、置換もしくは非置換プロピレン、置換もしくは非置換ブチレン、及び置換もしくは非置換ペンチレンからなる群から選択され、Zが、結合である、請求項4に記載の化合物。
- Xが、結合であり、Zが、置換もしくは非置換メチレン、置換もしくは非置換エチレン、置換もしくは非置換プロピレン、置換もしくは非置換ブチレン、及び置換もしくは非置換ペンチレンからなる群から選択される、請求項4に記載の化合物。
- Xが、置換もしくは非置換メチレン、置換もしくは非置換エチレン、置換もしくは非置換プロピレン、置換もしくは非置換ブチレン、及び置換もしくは非置換ペンチレンからなる群から選択され、Zが、置換もしくは非置換メチレン、置換もしくは非置換エチレン、置換もしくは非置換プロピレン、置換もしくは非置換ブチレン、及び置換もしくは非置換ペンチレンからなる群から選択される、請求項4に記載の化合物。
- X及びZの両方が分岐アルキレンであり、X及びZが共有結合している、請求項7に記載の化合物。
- Zが、−OH、−NH2、−SH、−CN、−CF3、−NO2、オキソ、ハロゲン、−COOH、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールからなる群から選択される1つ以上の置換基を有する、置換メチレン、置換エチレン、置換プロピレン、置換ブチレン、及び置換ペンチレンからなる群から選択される、請求項6〜8のいずれかに記載の化合物。
- Xが、置換もしくは非置換メチレン、置換もしくは非置換エチレン、置換もしくは非置換プロピレン、置換もしくは非置換ブチレン、及び置換もしくは非置換ペンチレンからなる群から選択され、Zが、−C(O)−である、請求項4に記載の化合物。
- Wが、水素である、請求項4〜10のいずれかに記載の化合物。
- Wが、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換ヘテロアルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、−C(O)R6、−C(O)OR6、−C(O)NR6R7、−SR6、−SOR6、−SO2R6、及び−SO2NR6からなる群から選択される、請求項4〜10のいずれかに記載の化合物。
- Wが、−OH、−NH2、−SH、−CN、−CF3、−NO2、オキソ、ハロゲン、−COOH、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールからなる群から選択される1つ以上の置換基を有する、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換アルケニル、置換ヘテロアルケニル、置換シクロアルキル、または置換ヘテロシクロアルキルである、請求項12に記載の化合物。
- Wが、−COR6、−C(O)OR6、−C(O)NR6R7、−SO2R6、または−SO2NR6R7であり、式中、R6及びR7が、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換アリール、及び置換もしくは非置換ヘテロアリールからなる群から選択されるか、またはR6及びR7が組み合わさって、置換もしくは非置換アルキレンを形成する、請求項12に記載の化合物。
- Wが、不在であり、Xが、−NR8−であり、Yが、結合または置換もしくは非置換アルキレンであり、Zが、−NR9−である、請求項1に記載の化合物。
- Yが、置換もしくは非置換メチレン、置換もしくは非置換エチレン、置換もしくは非置換プロピレン、置換もしくは非置換ブチレン、及び置換もしくは非置換ペンチレンからなる群から選択される、請求項15に記載の化合物。
- R8が、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換ヘテロアルケニル、−COR6、−C(O)OR6、−C(O)NR6R7、−SR6、−SOR6、−SO2R6、及び−SO2NR6R7からなる群から選択され、R9が、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換ヘテロアルケニル、−COR6、−C(O)OR6、−C(O)NR6R7、−SR6、−SOR6、−SO2R6、及び−SO2NR6R7からなる群から選択される、請求項16に記載の化合物。
- Yが、−O−であり、Wが、不在である、請求項3に記載の化合物。
- Xが、置換もしくは非置換メチレン、置換もしくは非置換エチレン、置換もしくは非置換プロピレン、置換もしくは非置換ブチレン、及び置換もしくは非置換ペンチレンからなる群から選択され、Zが、結合である、請求項18に記載の化合物。
- Xが、結合であり、Zが、置換もしくは非置換メチレン、置換もしくは非置換エチレン、置換もしくは非置換プロピレン、置換もしくは非置換ブチレン、及び置換もしくは非置換ペンチレンからなる群から選択される、請求項18に記載の化合物。
- Xが、置換もしくは非置換メチレン、置換もしくは非置換エチレン、置換もしくは非置換プロピレン、置換もしくは非置換ブチレン、及び置換もしくは非置換ペンチレンからなる群から選択され、Zが、置換もしくは非置換メチレン、置換もしくは非置換エチレン、置換もしくは非置換プロピレン、置換もしくは非置換ブチレン、及び置換もしくは非置換ペンチレンからなる群から選択される、請求項18に記載の化合物。
- Vが、水素または置換もしくは非置換メチルである、請求項1〜21のいずれかに記載の化合物。
- L1が、−S−、−O−、−NR5−、置換もしくは非置換アルキレン、または置換もしくは非置換ヘテロアルキレンであり、R1が、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換縮合環アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルであり、R5が、水素、置換もしくは非置換アルキル、または置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルである、請求項1〜22のいずれかに記載の化合物。
- L1が、−NR5−または置換もしくは非置換ヘテロアルキルであり、R1が、置換もしくは非置換アルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである、請求項23に記載の化合物。
- L1が、−NR5−であり、R1が、置換もしくは非置換ヘテロアリール及び置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルからなる群から選択される1つ以上の置換基を有する置換アルキルである、請求項24に記載の化合物。
- R1が、クロロ置換チオフェニルによって置換された置換アルキルである、請求項25に記載の化合物。
- L1が、置換もしくは非置換ヘテロアルキルであり、R1が、置換もしくは非置換ヘテロアリールである、請求項24に記載の化合物。
- L2が、結合、置換もしくは非置換アルキレン、−C(O)−、または−SO2−であり、R2が、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換縮合環アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルである、請求項1〜27のいずれかに記載の化合物。
- L2が、結合であり、R2が、水素である、請求項28に記載の化合物。
- L2が、−C(O)−であり、R2が、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換縮合環アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルである、請求項28に記載の化合物。
- L4が、結合であり、R4が、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである、請求項1〜30のいずれかに記載の化合物。
- 表A、表B、表C、または表Dに記載される、請求項1〜31のいずれかに記載の化合物。
- 請求項1〜31のいずれかに記載の化合物、または表A、表B、表C、もしくは表Dに記載される化合物と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
- 対象における疾患または障害を治療及び/または予防するための方法であって、請求項1〜32のいずれかに記載の化合物または請求項33に記載の薬学的組成物を、それを必要とする対象に、前記疾患または障害を治療または予防するのに有効な量で投与することを含む、前記方法。
- 前記疾患または障害が、血栓性疾患または障害であり、かつ/または血餅血栓もしくは血餅血栓の形成可能性を伴う、請求項34に記載の方法。
- 前記血栓性疾患または障害が、急性冠症候群、血栓塞栓症、及び/または血栓症を含む、請求項35に記載の方法。
- 前記血栓塞栓症が、静脈血栓塞栓症、動脈血栓塞栓症、及び/または心原性血栓塞栓症を含む、請求項36に記載の方法。
- 前記静脈血栓塞栓症が、深部静脈血栓症及び/または肺塞栓症を含む、請求項37に記載の方法。
- 前記深部静脈血栓症及び/または肺塞栓症が、医療処置後に発症する、請求項38に記載の方法。
- 前記血栓性疾患または障害が、凝固機能不全または播種性血管内凝固を伴う、請求項35に記載の方法。
- 前記対象が、経皮冠動脈インターベンション(PCI)を受けている、請求項40に記載の方法。
- 前記血栓性疾患または障害が、血餅血栓または血餅血栓の形成可能性を伴い、脳卒中及び/または1回以上の一過性脳虚血発作(TIA)をさらに伴う、請求項35に記載の方法。
- 血餅血栓または血餅血栓の形成可能性を伴う前記血栓性疾患または障害が、脳卒中をさらに伴い、前記対象が、非弁膜症性心房細動を有する、請求項42に記載の方法。
- 前記血栓性疾患または障害が、血餅血栓または血餅血栓の形成可能性を伴い、肺高血圧症をさらに伴う、請求項35に記載の方法。
- 前記肺高血圧症が、1つ以上の左心障害及び/または慢性血栓塞栓性疾患によって引き起こされる、請求項44に記載の方法。
- 前記肺高血圧症が、特発性もしくは別の肺線維症を含む1つ以上の肺疾患及び/または低酸素症に関連する、請求項44に記載の方法。
- 前記疾患または障害が、線維症、アルツハイマー病、多発性硬化症、疼痛、癌、炎症、及び/またはI型糖尿病を含む、請求項34に記載の方法。
- 前記疾患または障害が、心筋梗塞後に再発性心イベントを伴う、請求項34に記載の方法。
- 前記静脈血栓塞栓症が、1つ以上の後天性もしくは遺伝性危険因子及び/または血栓剥離によって引き起こされる末梢静脈塞栓症に関連する静脈内での血栓の形成に関連する、請求項37に記載の方法。
- 前記1つ以上の危険因子が、静脈血栓塞栓症既往を含む、請求項49に記載の方法。
- 前記心原性血栓塞栓症が、心不整脈、心臓弁欠損、人工心臓弁もしくは心臓疾患、及び/または血栓剥離によって引き起こされる末梢動脈塞栓症に関連する心臓内での血栓の形成に起因する、請求項37に記載の方法。
- 前記血栓剥離が、脳内(虚血性脳卒中)である、請求項51に記載の方法。
- 前記血栓剥離が、一過性脳虚血発作(TIA)を引き起こす、請求項52に記載の方法。
- 前記心原性血栓塞栓症が、非弁膜症性心房細動に起因する、請求項51に記載の方法。
- 前記血栓症が、動脈血栓症である、請求項36に記載の方法。
- 前記動脈血栓症が、動脈内での1つ以上の基礎をなすアテローム硬化過程に起因する、請求項55に記載の方法。
- 動脈内での前記1つ以上の基礎をなすアテローム硬化過程が、動脈を閉塞または閉鎖し、心筋虚血を引き起こし(狭心症、急性冠症候群)、心筋梗塞を引き起こし、末梢動脈を閉塞または閉鎖し(虚血末梢動脈疾患)、かつ/または血管処置後に動脈を閉塞または閉鎖する(経管的冠動脈血管形成術後の再閉鎖または再狭窄、末梢動脈の経皮経管的血管形成術後の再閉鎖または再狭窄)、請求項56に記載の方法。
- 前記治療または予防が、補助療法を含む、請求項34に記載の方法。
- 前記対象が、心筋梗塞を有し、前記補助療法が、血栓溶解療法との並行である、請求項58に記載の方法。
- 前記対象が、不安定狭心症、血栓症、及び/またはヘパリン起因性血小板減少症を有し、前記補助療法が、抗血小板療法との併用である、請求項58に記載の方法。
- 前記対象が、非弁膜症性心房細動を有し、前記補助療法が、1つ以上の他の療法との並行である、請求項58に記載の方法。
- 前記疾患または障害が、カリクレイン関連疾患である、請求項34に記載の方法。
- 前記カリクレイン関連疾患が、血栓性疾患、線維素溶解性疾患、線維性疾患、ある種の癌、炎症状態、または皮膚科学的状態である、請求項62に記載の方法。
- 前記カリクレイン関連疾患が、眼科疾患である、請求項62に記載の方法。
- 前記化合物または前記薬学的組成物が、眼に局所適用される眼科組成物の形態で投与される、請求項64に記載の方法。
- 前記眼科組成物が、点眼薬の形態である、請求項65に記載の方法。
- 前記化合物または前記薬学的組成物が、硝子体内注入により眼科組成物の形態で投与される、請求項64に記載の方法。
- 前記眼科疾患が、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、加齢性黄斑変性症、または糖尿病性網膜症である、請求項64に記載の方法。
- 前記ある種の癌が、子宮頸癌、精巣癌、または非小細胞肺腺癌、限局性小細胞肺癌、神経膠腫、悪性乳癌、微小転移(例えば、血液または肝微小転移)、肺転移、及び前立腺癌からなる群から選択される、請求項63に記載の方法。
- 前記炎症状態が、敗血症、炎症性腸疾患、炎症性関節炎、全身性炎症反応症候群、またはリウマチ性関節炎である、請求項63に記載の方法。
- 前記皮膚科学的状態が、アトピー性皮膚炎、乾癬、またはネザートン症候群である、請求項63に記載の方法。
- 前記化合物が、トロンビン及び/またはカリクレインを阻害することによって作用する、請求項34〜71のいずれかに記載の方法。
- 前記化合物が、組織カリクレイン及び/または血漿カリクレインを阻害することによって作用する、請求項72に記載の方法。
- 投与される化合物の量が、1〜10nM、10〜100nM、0.1〜1μM、1〜10μM、10〜100μM、100〜200μM、200〜500μM、もしくは500〜1000μM、またはそれ以上の範囲内の、血漿中の前記化合物またはその活性代謝物(複数可)の初期濃度を達成するのに十分な治療有効用量である、請求項34に記載の方法。
- 前記初期化合物濃度の50%超が、静脈内注入後1時間、3時間、またはそれ以上の時間、前記血漿中に存続する、請求項74に記載の方法。
- 請求項34〜75のいずれかに記載の方法で使用するための請求項1〜32のいずれかに記載の化合物または請求項33に記載の薬学的組成物。
- 前記化合物が、1〜10nM、10〜100nM、0.1〜1μM、1〜10μM、10〜100μM、100〜200μM、200〜500μM、もしくは500〜1000μM、またはそれ以上の範囲内の、トロンビン及び/または血漿カリクレインに対する阻害活性を有する、請求項1〜32のいずれかに記載の化合物。
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