JP2012502080A - 有機化合物 - Google Patents

Abstract

本発明は、式(Ｉ)

〔式中、置換基は明細書に定義した通りである。〕
の化合物またはその塩、組成物およびホスファチジルイノシトール３−キナーゼの阻害により軽減する疾患の処置における化合物の使用に関する。

Description

本発明は、新規、アルファ−選択的ホスファチジルイノシトール(ＰＩ)３−キナーゼ阻害剤化合物としての特異的２−カルボキサミドシクロアミノウレア誘導体、その薬学的に許容される塩、そのプロドラッグおよびその製造方法に関する。本発明はまた、これらの化合物の、単独または少なくとも１種の付加的治療剤と組み合わせた、そして場合により薬学的に許容される担体と組み合わせてもよい組成物に関する。本発明は、さらに、多数の疾患、特に、増殖因子、受容体チロシンキナーゼ類、タンパク質セリン／ヘロインキナーゼ類、Ｇタンパク質共役受容体およびリン脂質キナーゼ類およびホスファターゼ類の異常活性の１種以上が仲介する疾患の処置における、単独でまたは少なくとも１種のさらなる治療剤と組み合わせたこれらの化合物の使用方法にも関する。

ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ類(ＰＩ３Ｋｓ)は、イノシトール脂質のＤ−３'位置へのホスフェートの移動を触媒する脂質キナーゼ類のファミリーを含み、その結果ホスホイノシトール−３−ホスフェート(ＰＩＰ)、ホスホイノシトール−３,４−ジホスフェート(ＰＩＰ_２)およびホスホイノシトール−３,４,５−トリホスフェート(ＰＩＰ_３)が産生され、これらは、しばしば原形質膜でプレクストリン相同性、ＦＹＶＥ、Ｐｈｏｘおよび他のリン脂質結合ドメインを含むタンパク質を種々のシグナル伝達複合体に結合させることによりシグナル伝達カスケードにおける二次メッセンジャーとして作用する((Vanhaesebroeck et al., Annu. Rev. Biochem 70: 535 (2001); Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17: 615 (2001))。２種のクラス１ ＰＩ３Ｋｓの中で、クラス１Ａ ＰＩ３Ｋｓは、ｐ８５α、ｐ５５α、ｐ５０α、ｐ８５βまたはｐ５５γであり得る制御サブユニットと構成的に関連している触媒的ｐ１１０サブユニット(α、β、δアイソフォーム)から成るヘテロダイマーである。クラス１Ｂサブクラスは一ファミリーメンバーである、２個の調節サブユニット、ｐ１０１またはｐ８４の一方と関連した触媒的ｐ１１０γサブユニットから成るヘテロダイマーを有する(Fruman et al., Annu Rev. Biochem. 67: 481 (1998); Suire et al., Curr. Biol. 15:566 (2005))。ｐ８５／５５／５０サブユニットのモジュラードメインは、活性化受容体および細胞質チロシンキナーゼ類上の特異的配列構成でホスホチロシン残基と結合し、クラス１Ａ ＰＩ３Ｋｓの活性化および局在化をもたらすＳｒｃ相同(ＳＨ２)ドメインを含む。クラス１Ｂ ＰＩ３Ｋは、ペプチドおよび非ペプチドリガンドの雑多なレパートリーに結合するＧタンパク質共役受容体により直接活性化される(Stephens et al., Cell 89:105 (1997)); Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17: 615-675 (2001))。その結果、クラスＩ ＰＩ３Ｋの得られたリン脂質産物は、上流受容体と、増殖、生存、走化性、細胞輸送、運動性、代謝、炎症性およびアレルギー性応答、転写および翻訳を含む下流細胞活動を結びつける(Cantley et al., Cell 64: 281 (1991); Escobedo and Williams, Nature 335: 85 (1988); Fantl et al., Cell 69: 413 (1992))。

多くの場合、ＰＩＰ２およびＰＩＰ３は、ウイルス癌遺伝子ｖ−Ａｋｔのヒトホモログの産物であるＡｋｔを原形質膜に集め、そこで、それは、増殖および生存に重要な多くの細胞内シグナル伝達経路の接点として働く(Fantl et al., Cell 69: 413-423(1992); Bader et al., Nature Rev. Cancer 5: 921 (2005); Vivanco and Sawyer, Nature Rev. Cancer 2: 489 (2002))。しばしばＡｋｔ活性化を介して生存を高めるＰＩ３Ｋの異常制御は、ヒト癌で最も多い事象の一つであり、多様なレベルで起こることが示されている。ホスホイノシチド類をイノシトール環の３'位で脱リン酸化し、そうすることによりＰＩ３Ｋ活性に拮抗する腫瘍抑制遺伝子ＰＴＥＮは、種々の腫瘍で機能が欠失している。他の腫瘍において、ｐ１１０αアイソフォームであるＰＩＫ３ＣＡ、およびＡｋｔの遺伝子が増幅され、その遺伝子産物のタンパク質発現増加が数種のヒト癌で証明されている。さらに、ｐ８５−ｐ１１０複合体の上方制御に作用するｐ８５αの変異および転座がヒト癌に関して記載されている。最後に、下流シグナル伝達経路を活性化するＰＩＫ３ＣＡにおける体細胞ミスセンス突然変異が、広範なヒト癌で相当な頻度で記載されている(Kang at el., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 802 (2005); Samuels et al., Science 304: 554 (2004); Samuels et al., Cancer Cell 7: 561-573 (2005))。これらの観察は、ホスホイノシトール−３キナーゼおよびこのシグナル伝達経路の上流および下流成分の脱制御が、ヒト癌および増殖性疾患と関連する最も一般的な脱制御の一つであることを示す(Parsons et al., Nature 436: 792 (2005); Hennessey at el., Nature Rev. Drug Disc. 4: 988-1004 (2005))。

上記の点から、ＰＩ３Ｋアルファの阻害剤は、増殖性疾患および他の障害の処置に特に価値がある。

ＷＯ２００４／０９６７９７は、ＰＩ３Ｋガンマの阻害剤としてのある種のチアゾール誘導体と、特に炎症性およびアレルギー性状態の処置のための、医薬用途を開示する。

ＷＯ２００５／０２１５１９はまた、ＰＩ３Ｋガンマの阻害剤としてのある種のチアゾール誘導体と、特に炎症性およびアレルギー性状態の処置のための、医薬用途を開示する。

ＷＯ２００６／０５１２７０はまた、ＰＩ３Ｋアルファの阻害剤としてのある種のチアゾール誘導体と、特に抗腫瘍活性による、医薬用途を開示する。

ＷＯ２００７／１２９０４４はまた、ＰＩ３Ｋアルファの阻害剤としてのチアゾール誘導体と、特に抗腫瘍活性による、医薬用途を開示する。

先行文献の点から、増殖性疾患の処置に適するさらなる化合物を提供し、特に改善された選択性および／または高い／改善された活性を有する化合物を提供する必要がある。

本発明により、以下に記載する式(Ｉ)の２−カルボキサミドシクロアミノウレア誘導体が有利な薬理学的特性を有し、例えば、ＰＩ３Ｋ(ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ)を阻害することが判明した。特に、これらの化合物は、好ましくはベータおよび／または、デルタおよび／またはガンマサブタイプに対してＰＩ３Ｋアルファに対する選択性が改善されている。それ故に、式(Ｉ)の化合物は、例えば、ＰＩ３キナーゼ類(特にＰＩ３Ｋアルファ、例えば、ＰＩ３Ｋアルファの過発現または増幅、ＰＩＫ３ＣＡの体細胞突然変異、またはＰＴＥＮの生殖系列変異もしくは体細胞突然変異、またはｐ８５−ｐ１１０複合体の上方制御に作用するｐ８５αの変異および転座を示すもの)に依存する疾患、特に腫瘍疾患および白血病のような増殖性疾患の処置に使用するのに適する。

さらに、これらの化合物は、好ましくは代謝安定性が改善されており、それ故に、クリアランスが低下し、薬物動態プロファイルが改善されている。

第一の面において、本発明は、式(Ｉ)

〔式中、
Ａはヘテロアリールであり；
Ｒ^１は(１)場合により置換されていてよいアルキル；(２)場合により置換されていてよいシクロアルキル；(３)場合により置換されていてよいアリール；(４)場合により置換されていてよいアミン；(５)場合により置換されていてよいスルホニル；(６)ハロであり；
Ｒ^２は水素、重水素またはＲ^１について定義した置換基であり；
Ｒ^３は水素、ハロまたは場合により置換されていてよいアルキルである。〕
の化合物、またはその塩を提供する；(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(ｔｅｒｔ−ブチル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)を除く。

本発明は、以下の用語集および結びの実施例を含む以下の記載を参照して、より完全に認識されるであろう。簡潔にする目的で、本明細書に引用する刊行物の開示は、引用により本明細書に包含させる。ここで使用し、用語“含む”、“包含する”および“含有する”は、その開放された、非限定的意味で使用する。

ここに記載した全ての式は、該構造式により記載された構造を有する化合物ならびにある種の変形物または形態を示すことを意図する。特に、ここに記載する全ての式の化合物は不斉中心を有し得て、それ故種々の鏡像体形態で存在する。少なくとも１個の不斉炭素原子が式(Ｉ)の化合物に存在するならば、かかる化合物は光学活性形態または光学異性体混合物の形態、例えばラセミ混合物の形態で存在し得る。全ての光学異性体およびラセミ混合物を含むそれらの混合物は、本発明の一部である。それ故、ここに記載する全ての所与の式はラセミ体、１個以上の鏡像体形態、１個以上のジアステレオマー形態、１個以上のアトロプ異性体形態、およびそれらの混合物を意味することを意図する。さらに、ある種の構造は幾何異性体(すなわちｃｉｓおよびｔｒａｎｓ異性体)、互変異性体、またはアトロプ異性体として存在し得る。

ここに記載した全ての式は水和物、溶媒和物、およびかかる化合物の多形、およびそれらの混合物を意味することを意図する。

ここに記載した全ての式はまた本化合物の標識されていないならびに同位体標識された形態を示すことも意図する。同位体標識された化合物は、１個以上の原子が選択した原子質量または質量数を有する原子に置き換えられている以外、ここに記載する式により表される構造を有する。本発明の化合物に包含できる同位体の例は、水素の同位体、炭素の同位体、窒素の同位体、酸素の同位体、リンの同位体、フッ素の同位体、および塩素の同位体、例えば各々^２Ｈ、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^１８Ｆ、^３１Ｐ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^３６Ｃｌ、^１２５Ｉである。本発明は、種々の同位体標識されたここに定義する化合物、例えば放射性同位体、例えば^３Ｈ、^１３Ｃ、および^１４Ｃが存在する家具汚物を含む。かかる同位体標識された化合物は、代謝試験(好ましくは^１４Ｃを用いて)、反応速度論試験(例えば^２Ｈまたは^３Ｈを用いて)、薬物または基質組織分布アッセイを含む、検出または造影技術例えば陽電子放出断層撮影(ＰＥＴ)または単光子放出コンピュータ断層撮影(ＳＰＥＣＴ)、または患者の放射線処置に有用である。特に、^１８Ｆ標識化合物は、ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴ試験に特に好ましい。同位体標識された本発明の化合物およびそのプロドラッグは、一般に、以下に記載するスキームまたは実施例および製造に記載された方法を実施することにより、同位体標識されていない反応体を容易に入手可能な同位体標識された反応体に変えることにより製造できる。

さらに、重い同位体、特に重水素(すなわち、^２ＨまたはＤ)への置換は、大きな代謝安定性に起因するある種の治療的利点、例えばインビボ半減期延長または必要投与量減少、または治療指数改善を提供し得る。この文脈での重水素は、式(Ｉ)の化合物の置換基として見なされると解釈すべきである。かかる重い同位体、具体的に重水素の濃度は、同位体濃縮係数により定義され得る。ここで使用する用語“同位体濃縮係数”は、特定の同位体の同位体存在度対天然存在度の比率である。本発明の化合物における置換基が重水素であると記されているならば、かかる化合物は、各指定された重水素原子について少なくとも３５００(各指定された重水素原子で５２.５％重水素取り込み)、少なくとも４０００(６０％重水素取り込み)、少なくとも４５００(６７.５％重水素取り込み)、少なくとも５０００(７５％重水素取り込み)、少なくとも５５００(８２.５％重水素取り込み)、少なくとも６０００(９０％重水素取り込み)、少なくとも６３３３.３(９５％重水素取り込み)、少なくとも６４６６.７(９７％重水素取り込み)、少なくとも６６００(９９％重水素取り込み)、または少なくとも６６３３.３(９９.５％重水素取り込み)の同位体濃縮係数を有する。本発明の化合物において、特定の同位体として特に指定されていない原子は、その原子の任意の適当な同位体を表すことを意味する。特にことわらない限り、ある位置が特に“Ｈ”または“水素”として指定されているとき、その位置は、天然存在度同位体組成で水素を有すると理解される。従って、本発明の化合物において、重水素(Ｄ)として特に指定した任意の原子は、例えば上記の範囲の重水素を表すことを意味する。

ここに記載する何らかの式を言うとき、特定の可変基についての可能な基の一覧からの特定の部分の選択は、他の場所に記載するその置換基についての部分を規定するものと解釈してはならない。言い換えると、可変基が１回を超えて記載されているとき、特定の一覧からの基の選択は、式における他の場所の同じ可変基の基の選択とは無関係である(上記および下記で好ましいとして特徴付けられる１個以上乃至全ての一般的表現をより具体的な定義に置き換え、それぞれより好ましい本発明の態様を導き得る)。

複数表現(例えば化合物群、塩類)が使用されているとき、これは単数表現(例えば一つの化合物、一つの塩)を含む。“化合物”は、１個以上の式(Ｉ)の化合物(またはその塩)が存在する場合(例えば医薬製剤内に)を除外しない。

以下の一般的定義を、特にことわらない限り、本明細書において適用する：
ハロゲン(またはハロ)はフッ素、臭素、塩素またはヨウ素、特にフッ素、塩素を意味する。ハロゲン置換された基および部分、例えばハロゲンで置換されたアルキル(ハロアルキル)は、モノ−、ポリ−またはペル−ハロゲン化され得る。

ヘテロ原子は、炭素および水素以外の原子、好ましくは窒素(Ｎ)、酸素(Ｏ)または硫黄(Ｓ)、特に窒素である。

炭素含有基、部分または分子は、１〜７個、好ましくは１〜６個、より好ましくは１〜４個、最も好ましくは１個または２個の炭素原子を含む。１個を超える炭素原子を有する全ての非環状炭素含有基または部分は直鎖または分枝鎖である。

接頭辞“低級”または“Ｃ_１−Ｃ_７”は最大７個(７個を含む)、特に最大４個(４個を含む)の炭素原子を有する基を意味し、当該基は直鎖であるか、一個所または複数個所分枝で分枝している。

“アルキル”は、直鎖または分枝鎖アルキル基、好ましくは直鎖または分枝鎖Ｃ_１−１２アルキル、特に好ましくは直鎖または分枝鎖Ｃ_１−７アルキル；例えば、メチル、エチル、ｎ−またはイソ−プロピル、ｎ−、イソ−、ｓｅｃ−またはｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシル、ｎ−ウンデシル、ｎ−ドデシルを意味し、特に好ましいのはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピルおよびｎ−ブチルおよびイソ−ブチルである。アルキルは置換されていなくても置換されていてもよい。例示的置換基は、重水素、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロおよびアミノを含み、これらに限定されない。置換アルキルの例はトリフルオロメチルである。シクロアルキルもまたアルキルの置換基であり得る。かかる場合の例は部分(アルキル)−シクロプロピルまたはアルカンジイル−シクロプロピル(proyl)、例えば−ＣＨ_２−シクロプロピルである。Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルは、好ましくは１個(１個を含む)から最大７個(７個を含む)、好ましくは１個(１個を含む)から最大４個(４個を含む)のアルキルであり、直鎖または分枝鎖である；好ましくは、低級アルキルはブチル、例えばｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、プロピル、例えばｎ−プロピルまたはイソプロピル、エチルまたは好ましくはメチルである。

“アルコキシ”、“アルコキシアルキル”、“アルコキシカルボニル”、“アルコキシ−カルボニルアルキル”、“アルキルスルホニル”、“アルキルスルホキシル”、“アルキルアミノ”、“ハロアルキル”のような他の基のアルキル部分は、“アルキル”の上記で位置に記載したのと同じ意味を有するべきである。

“アルカンジイル”は、当該部分に２個の異なる炭素原子により結合する直鎖または分枝鎖アルカンジイル基を意味し、それは好ましくは直鎖または分枝鎖Ｃ_１−１２アルカンジイル、特に好ましくは直鎖または分枝鎖Ｃ_１−６アルカンジイル；例えば、メタンジイル(−ＣＨ_２−)、１,２−エタンジイル(−ＣＨ_２−ＣＨ_２−)、１,１−エタンジイル((−ＣＨ(ＣＨ_３)−)、１,１−、１,２−、１,３−プロパンジイルおよび１,１−、１,２−、１,３−、１,４−ブタンジイルを意味し、特に好ましいのはメタンジイル、１,１−エタンジイル、１,２−エタンジイル、１,３−プロパンジイル、１,４−ブタンジイルである。

“アルケンジイル”は、当該分子に２個の異なる炭素原子により結合する直鎖または分枝鎖アルケンジイル基を意味し、それは好ましくは直鎖または分枝鎖Ｃ_２−６アルカンジイル；例えば、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝Ｃ(ＣＨ_３)−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ_２−、−Ｃ(ＣＨ_３)＝ＣＨ−ＣＨ_２−、−ＣＨ＝Ｃ(ＣＨ_３)−ＣＨ_２−、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ(ＣＨ_３)Ｈ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ(ＣＨ_３)＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝Ｃ(ＣＨ_３)−ＣＨ＝ＣＨ−、特に好ましいのは−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ_２−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−を意味する。アルケンジイルは置換されていても、置換されていなくてもよい。

“シクロアルキル”は、炭素環あたり３〜１２個の環原子を有し、飽和または部分的に飽和された、単環式、縮合多環式、またはスピロ多環式、炭素環を意味する。シクロアルキル基の説明的例は以下の部分を含む：シクロプロピル、シクロブチル、シクロ(cycl)ペンチルおよびシクロ(cylclo)ヘキシル。シクロアルキルは置換されていなくても、置換されていてもよい；例示的置換基はアルキルの定義に記載したものであり、かつアルキル自体(例えばメチル)も含む。−(ＣＨ_３)シクロプロピルのような部分は置換シクロアルキルと見なす。

“アリール”は、６個以上の炭素原子を有する芳香族同素環状環系(すなわち環形成原子が炭素のみ)を意味する；アリールは、好ましくは６〜１４個の環炭素原子、より好ましくは６〜１０個の環炭素原子を有する芳香族部分、例えばフェニルまたはナフチル、好ましくはフェニルである。アリールは置換されていなくても、以下に記載する非置換または置換ヘテロシクリルからなる群から独立して選択される１個以上、好ましくは３個まで、より好ましくは２個までの置換基、特にピロリジニル、例えばピロリジノ、オキソピロリジニル、例えばオキソピロリジノ、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル−ピロリジニル、２,５−ジ−(Ｃ_１−Ｃ_７アルキル)ピロリジニル、例えば２,５−ジ−(Ｃ_１−Ｃ_７アルキル)−ピロリジノ、テトラヒドロフラニル、チオフェニル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルピラゾリジニル、ピリジニル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルピペリジニル、ピペリジノ、アミノまたはＮ−モノ−またはＮ,Ｎ−ジ−[低級アルキル、フェニル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルカノイルおよび／またはフェニル−低級アルキル)−アミノで置換されたピペリジノ、環炭素原子を介して結合する非置換またはＮ−低級アルキル置換ピペリジニル、ピペラジノ、低級アルキルピペラジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、Ｓ−オキソ−チオモルホリノまたはＳ,Ｓ−ジオキソチオモルホリノ；Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル、アミノ−Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｎ−Ｃ_１−Ｃ_７−アルカノイルアミノ−Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｎ−Ｃ_１−Ｃ_７−アルカンスルホニル−アミノ−Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル、カルバモイル−Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル、[Ｎ−モノ−またはＮ,Ｎ−ジ−(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)−カルバモイル]−Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルカンスルフィニル−Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルカンスルホニル−Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル、フェニル、ナフチル、モノ−乃至トリ−[Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル、ハロおよび／またはシアノ]−フェニルまたはモノ−乃至トリ−[Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル、ハロおよび／またはシアノ]−ナフチル；Ｃ_３−Ｃ_８−シクロアルキル、モノ−乃至トリ−[Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルおよび／またはヒドロキシ]−Ｃ_３−Ｃ_８−シクロアルキル；ハロ、ヒドロキシ、低級アルコキシ、低級アルコキシ−低級アルコキシ、(低級アルコキシ)−低級アルコキシ−低級アルコキシ、ハロ−Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシ、フェノキシ、ナフチルオキシ、フェニル−またはナフチル−低級アルコキシ；アミノ−Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシ、低級アルカノイルオキシ、ベンゾイルオキシ、ナフトイルオキシ、ホルミル(ＣＨＯ)、アミノ、Ｎ−モノ−またはＮ,Ｎ−ジ−(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)−アミノ、Ｃ_１−Ｃ_７−アルカノイルアミノ、Ｃ_１−Ｃ_７−アルカンスルホニルアミノ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、例えば；フェニル−またはナフチル−低級アルコキシカルボニル、例えばベンジルオキシカルボニル；Ｃ_１−Ｃ_７−アルカノイル、例えばアセチル、ベンゾイル、ナフトイル、カルバモイル、Ｎ−モノ−またはＮ,Ｎ−ジ−置換カルバモイル、例えば置換基が低級アルキル、(低級アルコキシ)−低級アルキルおよびヒドロキシ−低級アルキルから選択されるＮ−モノ−またはＮ,Ｎ−ジ−置換カルバモイル；アミジノ、グアニジノ、ウレイド、メルカプト、低級アルキルチオ、フェニル−またはナフチルチオ、フェニル−またはナフチル−低級アルキルチオ、低級アルキル−フェニルチオ、低級アルキル−ナフチルチオ、ハロ−低級アルキルメルカプト、スルホ(−ＳＯ_３Ｈ)、低級アルカンスルホニル、フェニル−またはナフチル−スルホニル、フェニル−またはナフチル−低級アルキルスルホニル、アルキルフェニルスルホニル、ハロ−低級アルキルスルホニル、例えばトリフルオロメタンスルホニル；スルホンアミド、ベンゾスルホンアミド、アジド、アジド−Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル、特にアジドメチル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルカンスルホニル、スルファモイル、Ｎ−モノ−またはＮ,Ｎ−ジ−(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)−スルファモイル、モルホリノスルホニル、チオモルホリノスルホニル、シアノおよびニトロで置換されていてもよく；ここで、置換基または置換アルキル(またはここに記載する置換アリール、ヘテロシクリルなど)の置換基の一部として上記するフェニルまたはナフチル(フェノキシまたはナフトキシも)は、それ自体、非置換であるか、またはハロ、ハロ−低級アルキル、例えばトリフルオロメチル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アジド、アミノ、Ｎ−モノ−またはＮ,Ｎ−ジ−(低級アルキルおよび／またはＣ_１−Ｃ_７−アルカノイル)−アミノ、ニトロ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、カルバモイル、シアノおよび／またはスルファモイルから独立して選択される１個以上、例えば３個まで、好ましくは１個または２個の置換基で置換されている。

“ヘテロシクリル”は、不飽和(＝環内に最大数の共役二重結合を担持する)、飽和または部分的に飽和であり、好ましくは単環式であるか、または本発明の広い面においては二環式、三環式またはスピロ環状環であり；そして３〜２４個、より好ましくは４〜１６個、最も好ましくは５〜１０個および最も好ましくは５個または６個の環原子を有し；ここで、１個以上、好ましくは１個〜４個、特に１個または２個の環原子がヘテロ原子(残りの環原子は、それ故炭素)である、ヘテロ環基を意味する。結合している環(すなわち本分枝に結合する環)は、好ましくは４〜１２個、特に５〜７個の環原子を有する。用語ヘテロシクリルはまたヘテロアリールも含む。ヘテロ環基(ヘテロシクリル)は置換されていなくても、上記で置換アルキルについて定義した置換基からなる群からおよび／または１個以上の以下の置換基：オキソ(＝Ｏ)、チオカルボニル(＝Ｓ)、イミノ(＝ＮＨ)、イミノ−低級アルキルから選択される１個以上、特に１〜３個の置換基で置換されていてもよい。さらに、ヘテロシクリルは、特にオキシラニル、アジリニル、アジリジニル、１,２−オキサチオラニル、チエニル(＝チオフェニル)、フラニル、テトラヒドロフリル、ピラニル、チオピラニル、チアントレニル、イソベンゾフラニル、ベンゾフラニル、クロメニル、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、イミダゾリル、イミダゾリジニル、ベンゾイミダゾリル、ピラゾリル、ピラジニル、ピラゾリジニル、チアゾリル、イソチアゾリル、ジチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリダジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、(Ｓ−オキソまたはＳ,Ｓ−ジオキソ)−チオモルホリニル、インドーリジニル、アゼパニル、ジアゼパニル、特に１,４−ジアゼパニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、クマリル、インダゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、イソキノリル、キノリル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリル、デカヒドロキノリル、オクタヒドロイソキノリル、ベンゾフラニル、ジベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、ジベンゾチオフェニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリル、キナゾリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、カルバゾリル、ベータ−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ペリミジニル、フェナントロリニル、フラザニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、クロメニル、イソクロマニル、クロマニル、ベンゾ[１,３]ジオキソｌ−５−イルおよび２,３−ジヒドロ−ベンゾ[１,４]ジオキシン−６−イルからなる群から選択されるヘテロシクリル基であり、これらの基の各々は、非置換であるか、または上記で置換アリールについて定義した置換基からなる群からおよび／または１個以上の以下の置換基：オキソ(＝Ｏ)、チオカルボニル(＝Ｓ)、イミノ(＝ＮＨ)、イミノ−低級アルキルから選択される１個以上、好ましくは３個までの置換基で置換されていてもよい。

“アリールアルキル”は、アルキル基、例えばメチルまたはエチル基を介して本分子に結合したアリール基、好ましくはフェネチルまたはベンジル、特にベンジルを意味する。同様に、シクロアルキル−アルキルおよびヘテロシクリル−アルキルは、アルキル基を介して本分子に結合したシクロアルキル基またはアルキル基を介して本分子に結合したヘテロシクリル基を意味する。各例で、アリール、ヘテロシクリル、シクロアルキルおよびアルキルは上に定義した通りに置換されていてよい。

“処置”は、予防的(防止的)および治療的処置ならびに疾患または障害の進行遅延を含む。

“ＰＩ３キナーゼ仲介疾患”(特にＰＩ３Ｋアルファ仲介疾患またはＰＩ３Ｋアルファの過発現または増幅、ＰＩＫ３ＣＡの体細胞突然変異、またはＰＴＥＮの生殖系列変異または体細胞突然変異、またはｐ８５−ｐ１１０複合体の上方制御に作用するｐ８５αの変異および転座により仲介される疾患)は、特にＰＩ３キナーゼの阻害、特にＰＩ３Ｋアルファまたはその変異形態の阻害に、有益な方法で(例えば１個以上の症状の改善、疾患発症の遅延から疾患の一時的または完全な治癒まで)応答するような障害である(処置する疾患の中で、腫瘍疾患および白血病のような増殖性疾患を特記し得る)。

“塩類”(これは、“またはその塩類”または“またはその塩”を意味する)は、単独でまたは遊離の式(Ｉ)の化合物との混合物で存在でき、好ましくは薬学的に許容される塩類である。かかる塩類は、例えば、好ましくは有機酸または無機酸との酸付加塩類として、塩基性窒素原子を有する式(Ｉ)の化合物から形成され、特に薬学的に許容される塩類である。適当な無機酸類は、例えば、ハロゲン酸類、例えば塩酸、硫酸、またはリン酸である。適当な有機酸類は、例えば、カルボン酸類またはスルホン酸類、例えばフマル酸またはメタンスルホン酸である。単離または精製目的で、薬学的に許容されない塩類、例えばピクリン酸塩または過塩素酸塩を使用することも可能である。治療用途には、薬学的に許容される塩類または遊離化合物のみが用いられ(適用可能であれば医薬製剤の形で)、それ故それらが好ましい。遊離形の新規化合物と、中間体として、例えば新規化合物の精製または同定に使用できる塩類を含む塩類の密接な関係の点から、前記および後記で何らかの遊離化合物を言うときは、適当であり、好都合であるならば対応する塩類も言うと理解されるべきである。式(Ｉ)の化合物の塩類は、好ましくは薬学的に許容される塩類である；適当なカウンターイオンを形成する薬学的に許容される塩類が当分野で既知である。

“組合せ剤”は、一投与量単位形態の固定された組合せ剤、または式(Ｉ)の化合物および組合せ相手(例えば、“治療剤”または“併用剤”とも呼び、以下に説明する他の薬剤)を独立して同じ時に、または別々に一定間隔で、特に複数の組合せ相手が協調的、例えば相乗効果を示す間隔で投与し得る複数パーツのキットのいずれかを意味する。ここで利用される用語“併用投与”または“組合せ投与”などは、処置を必要とする一対象(例えば患者)に選択した組合せパートナーを投与することを意味し、複数薬剤が必ずしも同じ投与経路でまたは同時に投与されるものではない処置レジメンを含むことを意図する。ここで使用する用語“医薬組合せ剤”は、１種を超える活性成分の混合または組合せに由来する製品を意味し、複数活性成分の固定されたおよび固定されていない組合せ剤の両方を包含する。用語“固定された組合せ剤”は、複数成分、例えば式(Ｉ)の化合物および組合せ相手が、両方とも一患者に同時に一つの物または投与量として投与されることを意味する。用語“固定されていない組合せ剤”は、複数活性成分、例えば式(Ｉ)の化合物および組合せ相手が、両方とも一患者に別々の物として同時に、一緒にまたは具体的時間制限なく連続的に投与されることを意味し、ここで、かかる投与が患者体内で２化合物の治療有効レベルを提供する。後者はカクテル療法、例えば３種以上の活性成分の投与にも適用される。

独立して、集合的にまたは任意の組合せまたは下位の組み合わせで好ましいものである好ましい態様において、本発明は、置換基がここに定義する通りである、遊離塩基形態または酸付加塩形態の式(Ｉ)の化合物に関する。

有利な態様において、本発明は、式ＩＡ

〔式中、置換基は式(Ｉ)の化合物において定義した通りである。〕
の化合物に関する。

さらに有利な態様において、本発明は、式ＩＢ

〔式中、置換基は式(Ｉ)の化合物において定義した通りである。〕
の化合物に関する。

それ故に、式(Ｉ)の化合物は、また式(ＩＡ)および(ＩＢ)の化合物にも関する。本発明の状況で、以下の定義も適用可能である。

Ａは、好ましくは、１個または２個の窒素原子と５〜１０個の環形成原子を有するヘテロアリールである。

Ａは、特に好ましくは：

からなる群から選択されるヘテロアリールである。

Ａは、極めて好ましくは：

からなる群から選択されるヘテロアリールである。

Ａは、最も好ましくは：

からなる群から選択されるヘテロアリールである。

Ｒ^１は、好ましくは以下の置換基の１個である：
(１) 非置換または置換、好ましくは置換Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルであって、該置換基は以下の部分から独立して選択される１個以上、好ましくは１〜９個である：重水素、ハロ、シアノ、Ｃ_３−Ｃ_１２−シクロアルキル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルアミノ、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノ、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルアミノカルボニル、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノカルボニル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシ、フェニル(これは非置換であるか、または１個以上、好ましくは１個のＣ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシ、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノ−Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシで置換されている)、フェノキシ、(これは非置換であるか、または１個以上、好ましくは１個のＣ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシ、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノ−Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシで置換されている)；
(２) 非置換または置換Ｃ_３−Ｃ_１２−シクロアルキルであって、該置換基は以下の部分から独立して選択される１個以上、好ましくは１〜４個である：重水素、ハロ、シアノ、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルアミノ、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノ、アミノカルボニル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルアミノカルボニル、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノカルボニル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシ、フェニル(これは非置換であるか、または１個以上、好ましくは１個のＣ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシ、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノ−Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシで置換されている)、フェノキシ、(これは非置換であるか、または１個以上、好ましくは１個のＣ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシ、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノ−Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシで置換されている)；
(３) 非置換または置換フェニルであって、該置換基は以下の部分から独立して選択される１個以上、好ましくは１〜２個である：重水素、ハロ、シアノ、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルアミノ、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノ、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルアミノカルボニル、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノカルボニル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシ；
(４) 非置換、モノ−またはジ−置換アミン；ここで、該置換基は独立して以下の部分から選択される：重水素、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル(これは非置換であるか、または重水素、フルオロ、クロロ、ヒドロキシからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されている)、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルカルボニル、フェニル(これは非置換であるか、または１個以上、好ましくは１個のＣ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシ、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノ−Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシで置換されている)、フェニルスルホニル(これは非置換であるか、または１個以上、好ましくは１個のＣ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシ、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノ−Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシで置換されている)、
(５) 置換スルホニル；ここで、該置換基は以下の部分から選択される：Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル(これは非置換であるか、または重水素、フルオロ、クロロ、ヒドロキシからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されている)、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルアミノ(ここで、本アルキル部分は非置換であるか、または重水素、フルオロ、クロロ、ヒドロキシルからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されている) ジ−Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルアミノ(ここで、本アルキル部分は非置換であるか、または重水素、フルオロ、クロロ、ヒドロキシルからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されている)；
(６) フルオロ、クロロ。

Ｒ^１は、特に好ましくは以下の置換基の１個である：
(１) 非置換または置換、好ましくは置換Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルであって、該置換基は重水素、フルオロから独立して選択される１個以上、好ましくは１〜９個であるか、またはＣ_３−Ｃ_５−シクロアルキルである１個または２個である；
(２) 場合により置換されていてよいＣ_３−Ｃ_５−シクロアルキルであって、該置換基は以下の部分から独立して選択される１個以上、好ましくは１〜４個である：重水素、Ｃ_１−Ｃ_４−アルキル(好ましくはメチル)、フルオロ、シアノ、アミノカルボニル；
(３) 場合により置換されていてよいフェニルであって、該置換基は以下の部分から独立して選択される１個以上、好ましくは１〜２個である：重水素、ハロ、シアノ、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルアミノ、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノ、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルアミノカルボニル、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノカルボニル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシ；
(４) 場合によりモノ−またはジ−置換アミン；ここで、該置換基は独立して以下の部分から選択される：重水素、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル(これは非置換であるか、または重水素、フルオロ、クロロ、ヒドロキシからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されている)、フェニルスルホニル(これは非置換であるか、または１個以上、好ましくは１個のＣ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシ、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノ−Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシで置換されている)、
(５) 置換スルホニル；ここで、該置換基は以下の部分から選択される：Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル(これは非置換であるか、または重水素、フルオロからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されている)、ピロリジノ、(これは非置換であるか、または重水素、ヒドロキシ、オキソからなる群から選択される１個以上；特に１個のオキソで置換されている)、
(６) フルオロ、クロロ。

Ｒ^１は、極めて好ましくは：
(１) シクロプロピルメチルまたは場合により置換されていてよい、分枝Ｃ_３−Ｃ_７−アルキルであって、該置換基は以下の部分から独立して選択される１個以上、好ましくは１〜９個である：重水素、フルオロ；
(２) 場合により置換されていてよいシクロプロピルまたはシクロブチルであって、該置換基は以下の部分から独立して選択される１個以上、好ましくは１〜４個である：メチル、重水素、フルオロ、シアノ、アミノカルボニル；
(３) 場合により置換されていてよいフェニルであって、該置換基は以下の部分から独立して選択される１個以上、好ましくは１〜２個である：重水素、ハロ、シアノ、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルアミノ、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノ、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルアミノカルボニル、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノカルボニル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシ；
(４) 場合によりモノ−またはジ−置換アミン；ここで、該置換基は独立して以下の部分から選択される：重水素、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル(これは非置換であるか、または重水素、フルオロ、クロロ、ヒドロキシからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されている)、フェニルスルホニル(これは非置換であるか、または１個以上、好ましくは１個のＣ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシ、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノ−Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシで置換されている)、
(５) 置換スルホニル；ここで、該置換基は以下の部分から選択される：Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル(これは非置換であるか、または重水素、フルオロからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されている)、ピロリジノ、(これは非置換であるか、または重水素、ヒドロキシ、オキソからなる群から選択される１個以上；特に１個のオキソで置換されている)、
(６) フルオロ、クロロ。

Ｒ^１は；好ましくは(ＩＡ)および(ＩＢ)の状況で、極めて好ましくは、以下の置換基の１個である：−Ｃ(ＣＨ_３)_２ＣＦ_３、Ｃ(ＣＤ_３)_３、１−メチルシクロプロピル。

Ｒ^２は、好ましくはＲ^１について定義した置換基である。
Ｒ^２は、さらに好ましくは水素または重水素である。
Ｒ^２は、特に好ましくは水素である。
Ｒ^２は、他の態様においてメチルである。

Ｒ^３は、好ましくは(１)水素、(２)ハロ、(３)場合により置換されていてよいＣ_１−Ｃ_７−アルキルであって、ここで、該置換基は以下の部分から独立して選択される１個以上、好ましくは１〜３個である：重水素、ハロ、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルアミノ、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノ。

Ｒ^３は、特に好ましくは(１)水素、(２)フルオロ、クロロ、(３)場合により置換されていてよいメチルであって、ここで、該置換基は以下の部分から独立して選択される１個以上、好ましくは１〜３個である：重水素、フルオロ、クロロ、ジメチルアミノ。

Ｒ^３は、極めて好ましくは水素、メチル、ＣＤ_３、ＣＨ_２Ｃｌ、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨ_２Ｎ(ＣＨ_３)_３；好ましくはメチルである。

本発明は、さらに、Ｒ^１および／またはＲ^２がｔｅｒｔ−ブチルである化合物以外の、ここに定義する式(Ｉ)の化合物に関する。
本発明は、さらに、式(Ｉ)の化合物の薬学的に許容されるプロドラッグに関する。
本発明は、さらに、式(Ｉ)の化合物の薬学的に許容される代謝物に関する。

本発明は、特に実施例に記載する式(Ｉ)の化合物、ならびにここに記載する製造方法に関する。

本発明はまた式(Ｉ)の化合物の製造方法にも関する。原則として、２個の異なるアミンを対応するウレア誘導体に変換する全ての既知方法が適し、各出発物質を使用して適用し得る。

それ故に、本発明は、特に式(Ｉ)の化合物の製造方法に関し、
式(II)

の化合物と、式(IIIＡ)

〔式中、置換基はここで定義した通りであり、そしてＲ^３はさらにクロロであり得る。〕の化合物を、活性化剤の存在下で反応させるか(“方法Ａ”)、または

上記式(II)の化合物と式(IIIＢ)

〔式中、Ｒ^１およびＲ^２はここで定義した通りであり、Ｒ^３はここで定義した通りであり、そしてさらにクロロであってよく、ＲＧは直接または式(IIIＥ)

(式中、置換基は(IIIＢ)において定義した通りである)
のイソシアネート中間体を介して反応できる反応性基、例えばイミダゾリルカルボニルである。〕
の化合物と反応させ(“方法Ｂ”)、

これらの反応はいずれの場合も場合により希釈剤の存在下であってよく、そして場合により反応助剤の存在下であってよく、そして
得られた式(Ｉ)の化合物を遊離形または塩の形態で回収し、場合により方法Ａまたは方法Ｂに従い得られる式(Ｉ)の化合物を異なる式(Ｉ)の化合物に変換し、および／または得られる式(Ｉ)の化合物の塩をその異なる塩に変換し、および／または得られる遊離の式(Ｉ)の化合物をその塩に変換し、および／または得られる式(Ｉ)の化合物の異性体を、得られる１個以上の異なる式Ｉの異性体から単離することを含む。

反応条件
本方法は、当分野で既知の方法に従い、または以下の実施例に記載する通りに実施し得る。例えば式IIの化合物を、式IIIの化合物と溶媒、例えばジメチルホルムアミド中、塩基、例えば有機アミン、例えばトリエチルアミンの存在下で反応させ得る。

上または下に温度が記載されているとき、記載した数値からのわずかな逸脱、例えば±１０％の変化が許容されるため、“約”を付すべきである。

全ての反応は１種以上の希釈剤および／または溶媒の存在下で行い得る。出発物質は等モル量で使い得る；あるいは、化合物を過剰に使用し、例えば溶媒として機能させるか、または平衡をシフトさせるか、または一般に反応速度を加速し得る。

反応助剤、例えば酸類、塩基類または触媒を、当分野で既知の通り、反応に必要であり、一般的に既知の方法に一致して、適当な量添加してよい。

保護基
反応に参加すべきでないかまたは反応を妨害するために、出発物質でまたは何らかの他の前駆体で１個以上の他の官能基、例えばカルボキシ、ヒドロキシ、アミノ、スルフヒドリルなどがここに記載する必要があるならば、これらは、ペプチド化合物、およびまたセファロスポリンおよびペニシリン類、ならびに核酸誘導体および糖類の合成に使用されるような基である。保護基は、除去されたら最終化合物にはもはや存在しない基であり、一方置換基として残る基は、出発物質または中間体段階で付加され、最終化合物を得るために除去される基であるここで使用する意味では保護基ではない。式(Ｉ)の化合物の異なる式(Ｉ)の化合物への変換の場合に、有用であるか、必要であるならば、保護基を導入し、除去してよい。

保護基は既に前駆体に存在してよく、意図する官能基を望まない二次反応、例えばアシル化、エーテル化、エステル化、酸化、加溶媒分解、および類似反応から保護しなければならない。それら自体が容易に、すなわち望まない二次反応なしに、典型的にアセトリシス、プロトノリシス、加溶媒分解、還元、光分解または、例えば生理学的条件に類似する条件下での酵素活性により除去され、最終産物に存在しないのが保護基の特徴である。専門家はどの保護基が上および下に記載する反応に適当であるか知っているか、または容易に確立できる。

かかる官能基のかかる保護基による保護、保護基自体、およびその除去反応は、例えば標準的参考書、例えばJ. F. W. McOmie, “Protective Groups in Organic Chemistry”, Plenum Press, London and New York 1973, in T. W. Greene, “Protective Groups in Organic Synthesis”, Third edition, Wiley, New York 1999, in “The Peptides”; Volume 3 (editors: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981, in “Methoden der organischen Chemie” (Methods of organic chemistry), Houben Weyl, 4th edition, Volume 15/I, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, in H.-D. Jakubke and H. Jescheit, “Aminosaeuren, Peptide, Proteine” (Amino acids, peptides, proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, and Basel 1982, and in Jochen Lehmann, “Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate” (Chemistry of carbohydrates: monosaccharides and derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974に記載されている。

場合により行う反応および変換
式(Ｉ)の化合物を、異なる式Ｉの化合物に変換し得る。
Ｒ^３がフルオロである式(Ｉ)の化合物において；かかる化合物を対応する塩素誘導体からフルオロ化合物に変換することにより得られ得る。かかる反応は既知であり、置換反応と言う。この変換は式(IIIＡまたはＢ)の出発物質の段階で、または対応する式Ｉの化合物の変換により行い得る。

置換基がアミノまたはアミノ−Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル置換基を担持する式(Ｉ)の化合物において、本アミノを、対応するＣ_１−Ｃ_７−アルカノイルハロゲニドまたはＣ_１−Ｃ_７−アルカンスルホニルハロゲニド、例えば対応するクロライドと、四級窒素塩基、例えばトリエチルアミンまたはピリジンの存在下、適当な溶媒、例えば塩化メチレンの非存在下または存在下、例えば−２０〜５０℃の範囲の温度で、例えばおおよそ室温で反応させることにより、アシルアミノ、例えばＣ_１−Ｃ_７−アルカノイルアミノまたはＣ_１−Ｃ_７−アルカンスルホニルアミノに変換できる。

置換基がシアノ置換基を担持する式(Ｉ)の化合物において、本シアノを、例えば、適当な金属触媒、例えばラネイニッケルまたはラネイコバルトの存在下、適当な溶媒、例えば低級アルカノール、例えばメタノールおよび／またはエタノール中、例えば−２０〜５０℃の範囲の温度で、例えばおおよそ室温で水素化することによりアミノメチル基に変換できる。

塩形成基を有する式(Ｉ)の化合物の塩類はそれ自体既知の方法により製造できる。式(Ｉ)の化合物の酸付加塩類は、それ故に、酸で、または適当なアニオン交換試薬で処理することにより得られ得る。２個の酸分子(例えば式Ｉの化合物のジハロゲニド)を有する塩もまた、化合物あたり１個の酸分子の塩(例えばモノハロゲニド)にも変換し得る；これは、融解するまで加熱し、または例えば固体として高真空下、高温で、例えば１３０〜１７０℃で加熱し、式Ｉの化合物の分子あたり酸１分子を放出させることにより行い得る。塩類は、通常、例えば適当な塩基性化合物、例えばアルカリ金属炭酸塩類、アルカリ金属炭酸水素塩類、またはアルカリ金属水酸化物類、典型的に炭酸カリウムまたは水酸化ナトリウムで処理することにより、遊離化合物に変換できる。

立体異性混合物、例えばジアステレオマー混合物を、適当な分離方法を用いるそれ自体既知の方法により、その対応する異性体に分割できる。ジアステレオマー混合物は、例えば、分別結晶、クロマトグラフィー、溶媒分布、および類似法の手段により、その個々のジアステレオマーに分離できる。この分離は、出発化合物または式(Ｉ)の化合物自体のいずれの段階で行ってもよい。鏡像体は、ジアステレオマー塩形成により、例えば鏡像体純粋キラル酸と塩形成させることにより、またはキラルリガンドを含むクロマトグラフィー支持体を使用するクロマトグラフィー、例えばＨＰＬＣの手段により分割し得る。

この章に記載するのと類似の反応を、適当な中間体の段階で行い得ることは強調すべきである(そしてそれ故、対応する出発物質の製造に有用である)。

出発物質：
式IIおよびIIIの出発物質、ならびに本明細書に、例えば以下に記載する他の出発物質は、当分野で既知の方法に従いまたは準じて製造できる、当分野で既知であるおよび／または市販されている。出発物質が特に記載されていないならば、該化合物は既知であるか、または当分野で、例えばＷＯ０５／０２１５１９またはＷＯ０４／０９６７９７で既知の方法に準じて、または以下に記載するとおりに製造できる。新規出発物質、ならびにその製造方法は、同様に本発明の一態様である。好ましい態様において、好ましい化合物が得られるように、出発物質を使用し、反応を選択する。

適当であり、好都合であるならば、塩類として使用および／または得てもよい出発物質(中間体を含む)において、置換基は好ましくは式(Ｉ)の化合物について定義した通りである。

本発明はまた式(IIIＡ)

〔式中、置換基は式(Ｉ)の化合物において定義した通りである。〕
の化合物、またはその塩にも関する。

本発明は、さらに式(IIIＡ)の化合物の製造方法に関する。原則として、２個のアリール／ヘテロアリール成分(例えばヘック型反応)を対応するウレア誘導体へとカップリングさせる全ての既知方法が適し、各出発物質を使用して適用し得る。本発明は、それ故に、式(IIIＡ)の化合物の製造方法であって
(工程１) 式(IV)

〔式中、Ｒ^３はここで定義した通りであり、そしてさらにハロであってもよく、ＰＧは保護基、例えばアシル基である。〕
の化合物と、式(Ｖ)

〔式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ａはここで定義した通りであり、そしてＨａｌはハロ、例えばブロモである。〕
の化合物を、場合により希釈剤の存在下、そして場合により反応助剤の存在下ヘック条件下で反応させ；

(工程２) その後、例えば酸性条件下で、場合により希釈剤の存在下、そして場合により反応助剤の存在下、保護基を除去してよく；そして
得られた式(IIIＡ)の化合物を遊離形または塩の形態で回収し、
場合により得られる式(IIIＡ)の化合物を異なる式(IIIＡ)の化合物に変換し、および／または得られる式(IIIＡ)の化合物の塩をその異なる塩に変換し、および／または得られる遊離の式(IIIＡ)の化合物をその塩に変換し、および／または得られる式(IIIＡ)の化合物の異性体を、得られる１個以上の異なる式Ｉの異性体から単離することを含む。

本発明は、さらに式(IIIＢ)

〔式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ａ式(Ｉ)の化合物において定義した通りであり、ＲＧは直接または式(IIIＥ)のイソシアネート中間体を介して反応できる反応性基、特にイミダゾリルカルボニルであり、そしてＲ^３はここで定義した通りであり、そしてさらにハロであってもよい。〕
の化合物、またはその塩に関する。

本発明は、さらに、式(IIIＢ)の化合物の製造方法に関する。原則として、アミンまたはその塩を対応する活性化誘導体に変換させる全ての既知方法が適し、各出発物質を使用して適用し得る。本発明はそれ故に式(IIIＢ)の化合物の製造方法に関し、それは、式(IIIＡ)

〔式中、置換基はここで定義した通りである。〕
の化合物と、活性化剤、例えば１,１'−カルボニルジイミミダゾールを、場合により希釈剤の存在下、そして場合により反応助剤の存在下反応させ；そして
得られた式(IIIＢ)の化合物を遊離形または塩の形態で回収し、
場合により得られる式(IIIＢ)の化合物を異なる式(IIIＢ)の化合物に変換し、および／または得られる式(IIIＢ)の化合物の塩をその異なる塩に変換し、および／または得られる遊離の式(IIIＢ)の化合物をその塩に変換し、および／または得られる式(IIIＢ)の化合物の異性体を、得られる１個以上の異なる式Ｉの異性体から単離することを含む。

本発明はまた、式(IIIＣ)

〔式中、置換基は式(Ｉ)の化合物において定義した通りである。〕
の化合物、またはその塩に関する。

本発明は、さらに、式(IIIＣ)の化合物の製造方法に関する。原則として、全ての閉環反応が適し、各出発物質を使用して適用し得る。本発明はそれ故に式(IIIＣ)の化合物の製造方法に関し、それは式(VI)

〔式中、Ｒ^３はここで定義した通りであり、そしてさらにハロであってもよい。〕
の化合物と、式(VII)

〔式中、Ｒ^１はここで定義した通りである。〕
の化合物を、場合により希釈剤の存在下、そして場合により反応助剤の存在下反応させ；そして
得られた式(IIIＣ)の化合物を遊離形または塩の形態で回収し、
場合により得られる式(IIIＣ)の化合物を異なる式(IIIＣ)の化合物に変換し、および／または得られる式(IIIＣ)の化合物の塩をその異なる塩に変換し、および／または得られる遊離の式(IIIＣ)の化合物をその塩に変換し、および／または得られる式(IIIＣ)の化合物の異性体を、得られる１個以上の異なる式Ｉの異性体から単離することを含む。

本発明は、さらに式(IIIＤ)

〔式中、Ｒ^１はここで定義した通りであり、ＲＧは反応性基、特にイミダゾリルカルボニルであり、Ｒ^３はここで定義した通りであり、そしてさらにハロであってもよい。〕
の化合物、またはその塩に関する。

本発明は、さらに、式(IIIＤ)の化合物の製造方法に関する。原則として、アミンまたはその塩を対応する活性化誘導体に変換する全ての反応が適し、各出発物質を使用して適用し得る。本発明はそれ故に式(IIIＤ)の化合物の製造方法に関し、それは式(IIIＣ)

〔式中、置換基は上で定義した通りである。〕
の化合物と活性化剤、例えば１,１'−カルボニルジイミミダゾールを、場合により希釈剤の存在下、そして場合により反応助剤の存在下、反応させ；そして
得られた式(IIIＤ)の化合物を遊離形または塩の形態で回収し、
場合により得られる式(IIIＤ)の化合物を異なる式(IIIＤ)の化合物に変換し、および／または得られる式(IIIＤ)の化合物の塩をその異なる塩に変換し、および／または得られる遊離の式(IIIＤ)の化合物をその塩に変換し、および／または得られる式(IIIＤ)の化合物の異性体を、得られる１個以上の異なる式Ｉの異性体から単離することを含む。

本発明は、さらに式(VI)

〔式中、Ｒ^３はここで定義した通りであり、そしてさらにハロであってもよい。〕
の化合物、またはその塩に関する。

本発明は、さらに式(VI)の化合物の製造方法に関する。原則として、かかる変換に適する全ての反応が適し、各出発物質を使用して適用し得る。本発明はそれ故に式(IIIＤ)の化合物の製造方法に関し、それは式(IIX)

〔式中、Ｒ^３は式(Ｉ)において定義した通りであり、そしてさらにハロであってもよい。〕
の化合物と、ジメチルホルムアミドのアセタール、例えばＤＭＦ−ジメチルアセタールを反応させて式(VI)の化合物を得て；
得られた式(IIIＤ)の化合物を遊離形または塩の形態で回収し、
場合により得られる式(IIX)の化合物を異なる式(IIX)の化合物に変換し、および／または得られる式(IIX)の化合物の塩をその異なる塩に変換し、および／または得られる遊離の式(IIX)の化合物をその塩に変換し、および／または得られる式(IIX)の化合物の異性体を、得られる１個以上の異なる式Ｉの異性体から単離することを含む。

式(Ｉ)

〔式中、
Ａはヘテロアリールであり；
Ｒ^１は(１)場合により置換されていてよいアルキル；(２)場合により置換されていてよいシクロアルキル；(３)場合により置換されていてよいアリール；(４)場合により置換されていてよいアミン；(５)場合により置換されていてよいスルホニル；(６)ハロであり；
Ｒ^２は水素、重水素またはＲ^１について定義した置換基であり；
Ｒ^３は水素、ハロ、場合により置換されていてよいアルキルである。〕
の化合物は、下位式(ＩＡ)、(ＩＢ)、および薬学的に許容されるその塩類も含み、医薬として有用である。本発明は、それ故、一態様において、ＰＩ３Ｋ阻害が指示される、ヒトまたは獣医使用のための組成物に関する。この態様はまた化合物(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(ｔｅｒｔ−ブチル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミドを含み、あるいは、該化合物を除外する。

一態様において、本発明は、ＰＩ３Ｋが仲介する細胞増殖性疾患、例えば腫瘍および／または癌性細胞増殖の処置に関する。疾患は、ＰＩ３Ｋアルファの過発現または増幅、ＰＩＫ３ＣＡの体細胞突然変異またはＰＴＥＮの生殖系列変異または体細胞突然変異またはｐ８５−ｐ１１０複合体の上方制御に作用するｐ８５αの変異および転座を示すものを含み得る。特に、本化合物は、例えば、肉腫；肺；気管支；前立腺；乳房(散発性乳癌およびカウデン病罹患者を含む)；膵臓；消化器癌；結腸；直腸；結腸癌腫；結腸直腸腺腫；甲状腺；肝臓；肝内胆管；肝細胞；副腎；胃；神経膠腫；神経膠芽腫；子宮内膜；黒色腫；腎臓；腎盂；膀胱；子宮体；子宮頸；膣；卵巣；多発性骨髄腫；食道；白血病；急性骨髄性白血病；慢性骨髄性白血病；リンパ球性白血病；骨髄球性白血病；脳；脳の癌腫；口腔および咽頭；喉頭；小腸；非ホジキンリンパ腫；黒色腫；絨毛結腸腺腫；腫瘍；上皮特性の腫瘍；リンパ腫；乳癌腫；基底細胞癌腫；扁平細胞癌腫；光線性角化症；固形腫瘍を含む腫瘍疾患；頭頚部腫瘍；真性多血症；本態性血小板血症；骨髄化生を伴う骨髄線維症；およびワルデンストレーム病を含む、ヒトまたは動物(例えば、マウス)癌の処置に有用である。

他の態様において、状態または障害(例えばＰＩ３Ｋ仲介)は：真性多血症、本態性血小板血症、骨髄化生を伴う骨髄線維症、喘息、ＣＯＰＤ、ＡＲＤＳ、レフレル(Loffler's)症候群、好酸球性肺炎、寄生虫(特に後生動物)感染(熱帯性好酸球増多症を含む)、気管支肺アスペルギルス症、結節性多発性動脈炎(チャーグ・ストラウス症候群を含む)、好酸球性肉芽腫、薬剤反応により誘発される気道に影響する好酸球関連障害、乾癬、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、円形脱毛症、多形性紅斑、疱疹状皮膚炎、強皮症、白斑症、過敏性血管炎、蕁麻疹、類天疱瘡、エリテマトーデス、天疱瘡、後天性表皮水疱症、自己免疫性血液学的(haematogical)障害(例えば溶血性貧血、再生不良性貧血、赤芽球癆(pure red cell anaemia)および特発性血小板減少症)、全身性エリテマトーデス、多発性軟骨炎、強皮症、ウェゲナー肉芽腫症、皮膚筋炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、スティーブン−ジョンソン症候群、特発性スプルー、自己免疫性炎症性腸疾患(例えば潰瘍性大腸炎およびクローン病)、内分泌眼疾患(opthalmopathy)、グレーブス病、サルコイドーシス、肺胞炎、慢性過敏性肺炎、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎(前部および後部)、間質性肺線維症、乾癬性関節炎、糸球体腎炎、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、高血圧、深部静脈血栓症、卒中、心筋梗塞、不安定狭心症、血栓塞栓症、肺塞栓症、血栓溶解疾患、急性動脈虚血、末梢血栓性閉塞、および冠動脈疾患、再灌流傷害、網膜症、例えば糖尿病性網膜症または高圧酸素誘発網膜症、および眼内圧上昇または眼房水分泌により特徴付けられる状態、例えば緑内障からなる群から選択される。

上記使用のために、必要投与量は当然投与方式、処置する特定の状態および望む効果により変わる。一般に、満足いく結果が、約０.０３〜約１００.０mg／kg体重、例えば約０.０３〜約１０.０mg／kg体重の１非投与量で全身的に得られることが指示される。大型哺乳動物、例えばヒトで指示される１日投与量は、約０.５mg〜約３ｇ、例えば約５mg〜約１.５ｇの範囲であり、簡便には、例えば、１日４回までの分割投与量でまたは持続形態で投与する。経口投与のための適当な単位投与量形態は、約０.１〜約５００mg、例えば約１.０〜約５００mg活性成分を含む。

式(Ｉ)の化合物は任意の慣用の経路で、特に経腸的に、例えば経口的に、例えば錠剤またはカプセル剤の形で、または非経腸的に、例えば注射可能溶液または懸濁液の形で、局所的に、例えばローション剤、ゲル剤、軟膏剤またはクリーム剤の形で、吸入により、経鼻的に、または坐薬形態で投与し得る。

式(Ｉ)の化合物は、例えば上記の通り遊離形または薬学的に許容される塩形態で投与してよい。かかる塩類は慣用の方法で製造でき、遊離化合物と同程度の活性を示す。

その結果、本発明はまた：
・ 処置を必要とする対象における、例えば上記のような、ＰＩ３Ｋ(例えばＰＩ３キナーゼアルファ)酵素の活性化が仲介する状態、障害または疾患の処置方法であって、該対象に有効量の式(Ｉ)の化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、方法。
・ 例えば、ここに示す方法のいずれかのための、医薬としての遊離形または薬学的に許容される塩形態の式(Ｉ)の化合物。
・ ここに示す方法のいずれかのための、特に１個以上のホスファチジルイノシトール３−キナーゼ仲介疾患において使用するための、医薬として使用するための、遊離形または薬学的に許容される塩形態の式(Ｉ)の化合物。
・ ここに記載する方法のいずれかにおける、特に１個以上のホスファチジルイノシトール３−キナーゼ仲介疾患の処置のための遊離形または薬学的に許容される塩形態の式(Ｉ)の化合物の使用。
・ ここに示す方法のいずれかにおける、特に１個以上のホスファチジルイノシトール３−キナーゼ仲介疾患の処置用医薬の製造のための、遊離形または薬学的に許容される塩形態の式(Ｉ)の化合物の使用。
を提供する。

ＰＩ３Ｋは、平行シグナル伝達経路を統合する二次メッセンジャー結節として働き、ＰＩ３Ｋ阻害剤と他の経路の阻害剤の組合せがヒトにおける癌および増殖性疾患の処置に有用であるとの証拠が増えつつある。

ヒト乳癌の約２０−３０％がＨｅｒ−２／ｎｅｕ−ＥｒｂＢ２を発現し、医薬トラスツマブの標的である。トラスツマブは、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ−ＥｒｂＢ２を発現する幾分かの患者で永続的な応答が証明されているが、これらの患者の一部しか応答しない。最近の試験では、この限定された奏効率が、トラスツマブとＰＩ３ＫまたはＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路の阻害剤の組合せにより実質的に改善できることを示している(Chan et al., Breast Can. Res. Treat. 91:187 (2005), Woods Ignatoski et al., Brit. J. Cancer 82: 666 (2000), Nagata et al., Cancer Cell 6: 117 (2004))。

種々のヒト悪性腫瘍は、Ｈｅｒ１／ＥＧＦＲの活性化変異を示すか、またはそのレベルが増加し、タルセバ、ゲフィチニブおよびアービタックスを含むこの受容体チロシンキナーゼに対する多数の抗体および小分子阻害剤が開発されている。しかしながら、ＥＧＦＲ阻害剤は、一定のヒト腫瘍(例えば、ＮＳＣＬＣ)で抗腫瘍活性を示すが、ＥＧＦＲ発現腫瘍の全患者の全体的患者生存を高めることはできない。これは、種々の悪性腫瘍において高頻度で、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路を含むＨｅｒ１／ＥＧＦＲの多くの下流標的が変異しているかまたは脱制御されているとの事実から説明可能である。例えば、ゲフィチニブはインビトロアッセイで腺癌細胞株の増殖を阻害する。それにもかかわらず、ゲフィチニブに耐性であるこれらの細胞株のサブクローンが選択でき、ＰＩ３／Ａｋｔ経路の活性化増加を証明する。この経路の下方制御または阻害は、この耐性サブクローンをゲフィチニブ感受性にする(Kokubo et al., Brit. J. Cancer 92: 1711 (2005))。さらに、ＰＴＥＮ変異を担持し、ＥＧＦＲを過発現する細胞株の乳癌のインビトロモデルにおいて、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路およびＥＧＦＲの両方の阻害は相乗効果をもたらす(She et al., Cancer Cell 8: 287-297(2005))。これらの結果は、ゲフィチニブとＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路阻害剤の組合せが、癌の魅力的な治療戦略であることを示す。

ＡＥＥ７７８(Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ／ＥｒｂＢ２、ＶＥＧＦＲおよびＥＧＦＲの阻害剤)とＲＡＤ００１(Ａｋｔの下流標的であるｍＴＯＲの阻害剤)の組合せは、神経膠芽腫異種移植モデルにおいていずれかの薬剤単独より大きな併用効果を生じる(Goudar et al., Mol. Cancer. Ther. 4: 101-112 (2005))。

タモキシフェンのような抗エストロゲン剤は、細胞周期阻害剤ｐ２７Ｋｉｐの作用を必要とする細胞周期停止の誘発を介して乳癌増殖を阻止する。最近、Ｒａｓ−Ｒａｆ−ＭＡＰキナーゼ経路の活性化が、ｐ２７Ｋｉｐのリン酸化状態を変え、それによりその細胞周期停止における阻害活性が弱まり、それにより抗エストロゲン剤耐性が付与されることが示されている(Donovan, et al, J. Biol. Chem. 276: 40888, (2001))。Donovan et al.により報告されている通り、ＭＥＫ阻害剤での処置を介したＭＡＰＫシグナル伝達の阻害は、ホルモン難治性乳癌細胞株におけるｐ２７の異常リン酸化状態を逆転させ、それによりホルモン感受性が回復する。同様に、Ａｋｔによるｐ２７Ｋｉｐのリン酸化も、その細胞周期停止の役割を無くす(Viglietto et al., Nat Med. 8: 1145 (2002))。

従って、さらなる面において、式Ｉの化合物はホルモン依存性癌、例えば乳癌および前立腺癌の処置に使用される。この使用により、慣用の抗癌剤を用いてこれらの癌で一般的に見られるホルモン耐性を逆転することを目的とする。

血液学的癌、例えば慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)において、染色体転座が構成的活性化ＢＣＲ−Ａｂｌチロシンキナーゼの原因である。罹患患者は、Ａｂｌキナーゼ活性の阻害の結果、小分子チロシンキナーゼ阻害剤であるイマチニブに応答する。しかしながら、進行段階の多くの患者は、疾患の最初はイマチニブに応答するが、Ａｂｌキナーゼドメインにおける耐性付与変異のためにその後再発する。インビトロ試験では、ＢＣＲ−Ａｂ１がその作用を発揮するためにＲａｓ−Ｒａｆキナーゼ経路を使用することが証明されている。加えて、同経路中の１種以上のキナーゼの阻害は、耐性付与変異に対するさらなる保護を提供する。

従って、他の面において、式Ｉの化合物を、血液学的癌、例えば慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)の処置において、キナーゼ阻害剤からなる群から選択される少なくとも１種のさらなる薬剤、例えばGleevec(登録商標)と組み合わせて使用する。この使用により、該少なくとも１種のさらなる薬剤に対する耐性を逆転させるか防止することを目的とする。

ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路の活性化が細胞生存を駆動するため、放射線療法および化学療法を含む癌細胞にアポトーシスを起こす治療と組み合わせたこの経路の阻害は、応答を改善させる(Ghobrial et al., CA Cancer J. Clin 55:178-194 (2005))。例として、ＰＩ３キナーゼ阻害剤とカルボプラチンの組合せは、インビトロでの増殖およびアポトーシスアッセイならびにインビボでの卵巣癌異種移植モデルにおける腫瘍効果の両方で相乗効果が証明されている(Westfall and Skinner, Mol. Cancer Ther. 4: 1764-1771 (2005))。

癌および増殖性疾患に加えて、クラス１Ａおよび１Ｂ ＰＩ３キナーゼ類の阻害剤が、他の疾患領域で治療的に有用である証拠が蓄積されつつある。ＰＩＫ３ＣＢ遺伝子のＰＩ３Ｋアイソフォーム産物であるｐ１１０βの阻害は、剪断誘発血小板活性化に関与することが示されている(Jackson et al., Nature Medicine 11: 507-514 (2005))。それ故、ｐ１１０βを阻害するＰＩ３Ｋ阻害剤は、抗血栓性治療に単剤としてまたは組合せで有用である。ＰＩＫ３ＣＤ遺伝子の産物であるアイソフォームｐ１１０δは、Ｂ細胞機能および分化(Clayton et al., J. Exp. Med. 196: 753-763 (2002))、Ｔ細胞依存性および非依存性抗原応答(Jou et al., Mol. Cell. Biol. 22: 8580-8590 (2002))および肥満細胞分化(Ali et al., Nature 431:1007-1011 (2004))に重要である。それ故、ｐ１１０δ阻害剤は、Ｂ細胞が引き起こす自己免疫性疾患および喘息の処置に有用であることが期待される。最後に、ＰＩ３ＫＣＧ遺伝子のアイソフォーム産物であるｐ１１０γの阻害は、Ｔ細胞応答を減少させるが、Ｂ細胞応答は減少させず(Reif et al., J. Immunol. 173: 2236-2240 (2004))、その阻害は、自己免疫性疾患の動物モデルで効果が証明されている(Camps et al., Nature Medicine 11: 936-943 (2005), Barber et al., Nature Medicine 11: 933-935 (2005))。

本発明は、さらに、少なくとも１個の式(Ｉ)の化合物を、単独でまたは他の抗癌剤と共に、ヒトまたは動物対象に投与するために適当な薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を提供する。

本発明は、さらに、細胞増殖性疾患、例えば癌を有するヒトまたは動物対象の処置方法を提供する。本発明は、それ故に、処置を必要とするヒトまたは動物対象における処置方法であって、治療有効量の式(Ｉ)の化合物を単独でまたは１種以上の他の抗癌剤と組み合わせて投与することを含む、方法を提供する。特に、組成物は組合せ治療剤として一緒に製剤されるか、または別々に投与される。式(Ｉ)の化合物と共に使用するのに適当な抗癌剤は、以下に記載するキナーゼ阻害剤、抗エストロゲン剤、抗アンドロゲン剤、他の阻害剤、癌化学療法剤、アルキル化剤、キレート化剤、生物学的応答修飾剤、癌ワクチン、アンチセンス治療用薬剤からなる群から選択される１種以上の化合物を含み、これらに限定されない：

Ａ. キナーゼ阻害剤：式(Ｉ)の化合物と組み合わせて抗癌剤として使用するためのキナーゼ阻害剤は、上皮細胞増殖因子受容体(ＥＧＦＲ)キナーゼ類の阻害剤、例えば小分子キナゾリン類、例えばゲフィチニブ(ＵＳ５４５７１０５、ＵＳ５６１６５８２、およびＵＳ５７７０５９９)、ZD-6474(ＷＯ０１／３２６５１)、エルロチニブ(タルセバ(登録商標)、ＵＳ５,７４７,４９８およびＷＯ９６／３０３４７)、およびラパチニブ(ＵＳ６,７２７,２５６およびＷＯ０２／０２５５２)；SU-11248(ＷＯ０１／６０８１４)、SU-5416(ＵＳ５,８８３,１１３およびＷＯ９９／６１４２２)、SU-6668(ＵＳ５,８８３,１１３およびＷＯ９９／６１４２２)、CHIR-258(ＵＳ６,６０５,６１７およびＵＳ６,７７４,２３７)、バタラニブまたはPTK-787(ＵＳ６,２５８,８１２)、VEGF-Trap(ＷＯ０２／５７４２３)、Ｂ４３−ゲニステイン(ＷＯ−０９６０６１１６)、フェンレチニド(レチノイン酸ｐ−ヒドロキシフェニルアミン)(ＵＳ４,３２３,５８１)、IM-862(ＷＯ０２／６２８２６)、ベバシズマブまたはAvastin(登録商標)(ＷＯ９４／１０２０２)、KRN-951、３−[５−(メチルスルホニルピペラジンメチル)−インドリル]−キノロン、AG-13736およびAG-13925、ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン類、ZK-304709、Veglin(登録商標)、VMDA-3601、EG-004、CEP-701(ＵＳ５,６２１,１００)、Cand5(ＷＯ０４／０９７６９)を含む血管内皮細胞増殖因子受容体(ＶＥＧＦＲ)キナーゼ阻害剤；Ｅｒｂ２チロシンキナーゼ阻害剤、例えばペルツズマブ(ＷＯ０１／００２４５)、トラスツマブ、およびリツキシマブ；Ａｋｔタンパク質キナーゼ阻害剤、例えばRX-0201；タンパク質キナーゼＣ(ＰＫＣ)阻害剤、例えばＬＹ−３１７６１５(ＷＯ９５／１７１８２)、およびペリホシン(ＵＳ２００３１７１３０３)；ソラフェニブ(ＢＡＹ４３−９００６)、ARQ-350RP、LErafAON、BMS-354825 AMG-548、およびＷＯ０３／８２２７２に開示されている他のものを含む、Ｒａｆ／Ｍａｐ／ＭＥＫ／Ｒａｓキナーゼ阻害剤；線維芽細胞増殖因子受容体(ＦＧＦＲ)キナーゼ阻害剤；CYC-202またはロスコビチン(ＷＯ９７／２０８４２およびＷＯ９９／０２１６２)を含む細胞依存性キナーゼ(ＣＤＫ)阻害剤；血小板由来増殖因子受容体(ＰＤＧＦＲ)キナーゼ阻害剤、例えばCHIR-258、3G3 mAb、AG-13736、SU-11248およびSU6668；およびＢｃｒ−Ａｂｌキナーゼ阻害剤および融合タンパク質、例えばSTI-571またはGleevec(登録商標)(イマチニブ)を含む。

Ｂ. 抗エストロゲン剤：式(Ｉ)の化合物と組み合わせて抗癌治療に使用するためのエストロゲンターゲティング剤は、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェンを含む選択的エストロゲン受容体モジュレーター(ＳＥＲＭｓ)；Arimidex(登録商標)またはアナストロゾールを含むアロマターゼ阻害剤；Faslode(登録商標)またはフルベストラントを含むエストロゲン受容体下方制御剤(ＥＲＤｓ)を含む。

Ｃ. 抗アンドロゲン：式(Ｉ)の化合物と組み合わせて抗癌治療に使用するためのアンドロゲンターゲティング剤は、フルタミド、ビカルタミド、フィナステリド、アミノグルテサミド、ケトコナゾール、およびコルチコステロイドを含む。

Ｄ. 他の阻害剤：式(Ｉ)の化合物と組み合わせて抗癌剤として使用するための他の阻害剤は、ティピファルニブまたはR-115777(ＵＳ２００３１３４８４６およびＷＯ９７／２１７０１)、BMS-214662、AZD-3409、およびFTI-277を含むタンパク質ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤；メルバロンおよびジフロモテカン(diflomotecan)(BN-80915)を含むトポイソメラーゼ阻害剤；SB-743921およびMKI-833を含む有糸分裂カイネシンスピンドルタンパク質(ＫＳＰ)阻害剤；プロテアソームモジュレーター、例えばボルテゾミブまたはベルケイド(登録商標)(ＵＳ５,７８０,４５４)、XL-784；および非ステロイド性抗炎症剤Ｉ(ＮＳＡＩＤｓ)を含むシクロオキシゲナーゼ２(ＣＯＸ−２)阻害剤。

Ｅ. 癌化学療法剤：式(Ｉ)の化合物と組み合わせて抗癌剤として使用するための特定の癌化学療法剤は、アナストロゾール(Arimidex(登録商標))、ビカルタミド(Casodex(登録商標))、硫酸ブレオマイシン(Blenoxane(登録商標))、ブスルファン(Myleran(登録商標))、ブスルファン注(Busulfex(登録商標))、カペシタビン(Xeloda(登録商標))、Ｎ４−ペントキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン(Paraplatin(登録商標))、カルムスチン(BiCNU(登録商標))、クロラムブシル(Leukeran(登録商標))、シスプラチン(Platinol(登録商標))、クラドリビン(Leustatin(登録商標))、シクロホスファミド(Cytoxan(登録商標)またはNeosar(登録商標))、シタラビン、シトシンアラビノシド(Cytosar-U(登録商標))、シタラビンリポソーム注(DepoCyt(登録商標))、ダカルバジン(DTIC-Dome(登録商標))、ダクチノマイシン(Actinomycin D, Cosmegan)、塩酸ダウノルビシン(Cerubidine(登録商標))、クエン酸ダウノルビシンリポソーム注(DaunoXome(登録商標))、デキサメサゾン、ドセタキセル(タキソテール(登録商標))、塩酸ドキソルビシン(アドリアマイシン(登録商標)、Rubex(登録商標))、エトポシド(Vepesid(登録商標))、リン酸フルダラビン(Fludara(登録商標))、５−フルオロウラシル(Adrucil(登録商標)、Efudex(登録商標))、フルタミド(Eulexin(登録商標))、テザシチビン(tezacitibine)、ゲムシタビン(ジフルオロデオキシシチジン)、ヒドロキシウレア(Hydrea(登録商標))、イダルビシン(Idamycin(登録商標))、イホスファミド(IFEX(登録商標))、イリノテカン(Camptosar(登録商標))、Ｌ−アスパラギナーゼ(ELSPAR(登録商標))、ロイコボリンカルシウム、メルファラン(Alkeran(登録商標))、６−メルカプトプリン(Purinethol(登録商標))、メトトレキサート(Folex(登録商標))、ミトキサントロン(Novantrone(登録商標))、マイロターグ、パクリタキセル(タキソール(登録商標))、フェニックス(phoenix)(Yttrium90/MX-DTPA)、ペントスタチン、カルムスチンインプラントを組み合わせたpolifeprosan 20(グリアデル(登録商標))、クエン酸タモキシフェン(Nolvadex(登録商標))、テニポシド(Vumon(登録商標))、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン(Tirazone(登録商標))、注射用塩酸トポテカン(Hycamptin(登録商標))、ビンブラスチン(Velban(登録商標))、ビンクリスチン(Oncovin(登録商標))、およびビノレルビン(Navelbine(登録商標))を含む。

Ｆ. アルキル化剤：式(Ｉ)の化合物と組み合わせて使用するためのアルキル化剤は、VNP-40101Mまたはクロレタジン(cloretizine)、オキサリプラチン(ＵＳ４,１６９,８４６、ＷＯ０３／２４９７８およびＷＯ０３／０４５０５)、グルフォスファミド、マフォスファミド、エトポフォス(ＵＳ５,０４１,４２４)、プレドニムスチン；トレオスルファン；ブスルファン；イロフルベン(irofluven)(アシルフルベン)；ペンクロメジン；ピラゾロアクリジン(PD-115934)；Ｏ６−ベンジルグアニン；デシタビン(５−アザ−２−デオキシシチジン)；ブロスタリシン；マイトマイシンＣ(MitoExtra)；ＴＬＫ−２８６(Telcyta(登録商標))；テモゾロミド；トラベクテジン(ＵＳ５,４７８,９３２)；AP-5280(シスプラチンの白金酸製剤)；ポルフィロマイシン；およびクレアラジド(メクロレタミン)を含む。

Ｇ. キレート化剤：式(Ｉ)の化合物と組み合わせて使用するためのキレート化剤は、テトラチオモリブデート(ＷＯ０１／６０８１４)；ＲＰ−６９７；キメラＴ８４.６６(cT84.66)；ガドホスベセット(Vasovist(登録商標))；デフェロキサミン；および場合により電気穿孔(ＥＰＴ)と組み合わせたブレオマイシンを含む。

Ｈ. 生物学的応答修飾剤：式(Ｉ)の化合物と組み合わせて使用するための生物学的応答修飾剤、例えば免疫調節剤は、スタウロスポリン(staurosprine)および、UCN-01、CEP-701およびミドスタウリン(ＷＯ０２／３０９４１、ＷＯ９７／０７０８１、ＷＯ８９／０７１０５、ＵＳ５,６２１,１００、ＷＯ９３／０７１５３、ＷＯ０１／０４１２５、ＷＯ０２／３０９４１、ＷＯ９３／０８８０９、ＷＯ９４／０６７９９、ＷＯ００／２７４２２、ＷＯ９６／１３５０６およびＷＯ８８／０７０４５参照)を含むその大環状アナログ；スクアラミン(ＷＯ０１／７９２５５)；DA-9601(ＷＯ９８／０４５４１およびＵＳ６,０２５,３８７)；アレムツズマブ；インターフェロン類(例えばＩＦＮ−ａ、ＩＦＮ−ｂなど)；インターロイキン類、特にＩＬ−２またはアルデスロイキンならびにＩＬ−１、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、および、天然ヒト配列の７０％を超えるアミノ酸配列を有するその活性生物学的変異体；アルトレタミン(ヘキサレン(登録商標))；SU 101またはレフルノミド(ＷＯ０４／０６８３４およびＵＳ６,３３１,５５５)；イミダゾキノリン類、例えばレシキモドおよびイミキモド(ＵＳ４,６８９,３３８、５,３８９,６４０、５,２６８,３７６、４,９２９,６２４、５,２６６,５７５、５,３５２,７８４、５,４９４,９１６、５,４８２,９３６、５,３４６,９０５、５,３９５,９３７、５,２３８,９４４、および５,５２５,６１２)；およびベンズアゾール類、アントラキノン類、チオセミカルバゾン類、およびトリプタントリン類(ＷＯ０４／８７１５３、ＷＯ０４／６４７５９、およびＷＯ０４／６０３０８)を含むＳＭＩＰ類を含む。

Ｉ. 癌ワクチン：式(Ｉ)の化合物と組み合わせて使用するための抗癌ワクチンは、Avicine(登録商標)(Tetrahedron Lett. 26: 2269-70 (1974))；オレゴボマブ(OvaRex(登録商標))；Theratope(登録商標)(ＳＴｎ−ＫＬＨ)；黒色腫ワクチン；Ｒａｓタンパク質の５種の変異に対するＧＩ−４０００シリーズ(GI-4014、GI-4015、およびGI-4016)；GlioVax-1；MelaVax；Advexin(登録商標)またはINGN-201(ＷＯ９５／１２６６０)；HPV-16 E7をコードするSig/E7/LAMP-1；ＭＡＧＥ−３ワクチンまたはM3TK(ＷＯ９４／０５３０４)；HER-2VAX；腫瘍特異的Ｔ細胞を刺激するACTIVE；ＧＭ−ＣＳＦ癌ワクチン；およびリステリア菌ベースのワクチン。

Ｊ. アンチセンス治療：式(Ｉ)の化合物と組み合わせて使用するための抗癌剤はまたアンチセンス組成物、例えばAEG-35156(GEM-640)；AP-12009およびAP-11014(ＴＧＦ−ベータ２特異的アンチセンスオリゴヌクレオチド類)；AVI-4126；AVI-4557；AVI-4472；オブリメルセン(Genasense(登録商標))；ＪＦＳ２；アプリノカルセン(ＷＯ９７／２９７８０)；GTI-2040(Ｒ２リボヌクレオチドレダクターゼｍＲＮＡアンチセンスオリゴ)(ＷＯ９８／０５７６９)；GTI-2501(ＷＯ９８／０５７６９)；リポソーム封入ｃ−Ｒａｆアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド類(LErafAON)(ＷＯ９８／４３０９５)；およびSirna-027(ＶＥＧＦＲ−１ ｍＲＮＡを標的とするＲＮＡｉベースの治療)を含む。

式(Ｉ)の化合物はまた、気管支拡張性または抗ヒスタミン性医薬物質の医薬組成物と組合せることもできる。かかる気管支拡張性医薬は抗コリン剤または抗ムスカリン剤、特に臭化イプラトロピウム、臭化オキシトロピウム、および臭化チオトロピウム、およびβ−２−アドレナリン受容体アゴニスト、例えばサルブタモール、テルブタリン、サルメテロール、カルモテロール、ミルベテロール(milveterol)および、特に、フォルモテロールまたはインダカテロールを含む。併用抗ヒスタミン性医薬物質は、塩酸セチリジン、フマル酸クレマスチン、プロメタジン、ロラタジン、デスロラタジンジフェンヒドラミンおよび塩酸フェキソフェナジンを含む。

本発明は、さらなる面において式(Ｉ)の化合物と、血栓溶解疾患、心臓疾患、卒中などの処置に有用な１種以上の化合物を含む組合せを提供する。かかる化合物は、アスピリン、ストレプトキナーゼ、組織プラスミノーゲン活性化因子、ウロキナーゼ、抗凝血剤、抗血小板剤(例えば、PLAVIX；硫酸クロピドグレル)、スタチン(例えば、LIPITORまたはアトルバスタチンカルシウム)、ZOCOR(シンバスタチン)、CRESTOR(ロスバスタチン)など)、ベータブロッカー(例えば、アテノロール)、NORVASC(ベシル酸アムロジピン)、およびＡＣＥ阻害剤(例えば、リシノプリル)を含む。

本発明は、さらなる面において式(Ｉ)の化合物と、抗高血圧の処置に有用な１種以上の化合物を含む組合せを提供する。かかる化合物は、ＡＣＥ阻害剤、脂質低下剤、例えばスタチン、LIPITOR(アトルバスタチンカルシウム)、カルシウムチャネルブロッカー類、例えばNORVASC(ベシル酸アムロジピン)を含む。

本発明は、さらなる面において式(Ｉ)の化合物と、フィブラート、ベータブロッカー、ＮＥＰＩ阻害剤、アンギオテンシン−２受容体アンタゴニストおよび血小板凝集阻害剤からなる群から選択される１種以上の化合物を含む組合せを提供する。

本発明は、さらなる面において、式(Ｉ)の化合物と、リウマチ性関節炎を含む炎症性疾患の処置に適当な化合物を含む組合せを提供する。かかる化合物は、ＴＮＦ−α阻害剤、例えば抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体(例えばREMICADE、CDP-870)およびＤ２Ｅ７(HUMIRA)およびＴＮＦ受容体免疫グロブリン融合分子(例えばENBREL)、ＩＬ−１阻害剤、受容体アンタゴニストまたは可溶性ＩＬ−１Ｒα(例えばKINERETまたはＩＣＥ阻害剤)、非ステロイド性抗炎症剤(ＮＳＡＩＤＳ)、ピロキシカム、ジクロフェナク、ナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェンイブプロフェン、フェナメート、メフェナム酸、インドメタシン、スリンダク、アパゾン、ピラゾロン類、フェニルブタゾン、アスピリン、ＣＯＸ−２阻害剤(例えばCELEBREX(セレコキシブ)、PREXIGE(ルミラコキシブ))、メタロプロテアーゼ阻害剤(好ましくはＭＭＰ−１３選択的阻害剤)、ｐ２ｘ７阻害剤、α２α阻害剤、NEUROTIN、プレガバリン、低用量メトトレキサート、レフルノミド、ヒドロキシクロロキン、ｄ−ペニシラミン、オーラノフィンまたは非経腸または経口金からなる群から選択され得る。

本発明は、さらなる面において、式(Ｉ)の化合物と、骨関節症の処置に適当な化合物を含む組合せを提供する。かかる化合物は、標準非ステロイド性抗炎症剤(以後ＮＳＡＩＤ)、例えばピロキシカム、ジクロフェナク、プロピオン酸類、例えばナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェンおよびイブプロフェン、フェナメート例えばメフェナム酸、インドメタシン、スリンダク、アパゾン、ピラゾロン類、例えばフェニルブタゾン、サリチレート類、例えばアスピリン、ＣＯＸ−２阻害剤、例えばセレコキシブ、バルデコキシブ、ルミラコキシブおよびエトリコキシブ、鎮痛剤および関節内治療剤、例えばコルチコステロイドおよびヒアルロン酸類、例えばヒアルガン(hyalgan)およびシンビスク(synvisc)からなる群から選択され得る。

本発明は、さらなる面において、式(Ｉ)の化合物と、抗ウイルス剤および／または抗敗血症化合物を含む組合せを提供する。かかる抗ウイルス剤は、Viracept、ＡＺＴ、アシクロビルおよびファムシクロビルからなる群から選択され得る。かかる抗敗血症化合物は、Valantからなる群から選択され得る。

本発明は、さらなる面において式(Ｉ)の化合物と、ＣＮＳ剤、例えば抗鬱剤(セルトラリン)、抗パーキンソン病剤(例えばデプレニル、Ｌ−ｄｏｐａ、Requip、Mirapex；ＭＡＯＢ阻害剤(例えばセレギリン(selegine)およびラサギリン)；ｃｏｍＰ阻害剤(例えばタスマール)；Ａ−２阻害剤；ドーパミン再取り込み阻害剤；ＮＭＤＡアンタゴニスト；ニコチンアゴニスト；ドーパミンアゴニスト；および神経型一酸化窒素合成酵素阻害剤)から成る群から選択される１個以上の薬剤を含む組合せを提供する。

本発明は、さらなる面において、式(Ｉ)の化合物と、１個以上の抗アルツハイマー剤を含む組合せを提供する。かかる抗アルツハイマー剤は、ドネペジル、タクリン、α２δ阻害剤、ＮＥＵＲＯＴＩＮ、プレガバリン、ＣＯＸ−２阻害剤、プロペントフィリンまたはメトリホネート(metryfonate)からなる群から選択され得る。

本発明は、さらなる面において、式(Ｉ)の化合物と、骨粗鬆症剤および／または免疫抑制剤を含む組合せを提供する。かかる骨粗鬆症剤は、EVISTA(塩酸ラロキシフェン)、ドロロキシフェン、ラソフォキシフェンまたはフォサマックス(fosomax)からなる群から選択され得る。かかる免疫抑制剤は、FK-506およびラパマイシンからなる群から選択され得る。

好ましい態様の他の面において、１個以上の式(Ｉ)の化合物と、ここに記載する組合せ相手を含むキットを提供する。代表的キットは、ＰＩ３Ｋ阻害剤化合物(例えば、式(Ｉ)の化合物)および、ＰＩ３Ｋ阻害量の本化合物の投与により細胞増殖性疾患を処置する指示を含む、添付文書または他の標識を含む。

一般に、式(Ｉ)の化合物は、類似の有用性を有する多の薬剤で許容される任意の投与形態により、治療有効量で投与される。式(Ｉ)の化合物、すなわち、活性成分の実際の量は、多くの因子、例えば処置する疾患の重症度、対象の年齢および相対的健康、使用する化合物の効力、投与経路および形態、および他の因子による。医薬は１日１回以上、好ましくは１日１回または２回投与できる。全てのこれらの因子は担当医の技術の範囲内である。治療有効量の式Ｉの化合物は、１日あたり、受け手の体重キログラムあたり約０.０５〜約５０mg；好ましくは約０.１−２５mg／kg／日、より好ましくは約０.５〜１０mg／kg／日である。それ故、７０kgの人に投与するには、投与量範囲は最も好ましくは約３５−７０mg／日である。

一般に、式(Ｉ)の化合物は、以下の経路のいずれか一つにより医薬組成物として投与する：経口、全身(例えば、経皮、経鼻または坐薬)、または非経腸(例えば、筋肉内、静脈内または皮下)投与。好ましい投与方法は、苦痛の程度により調節できる好都合な毎日の投与量レジメンを使用する経口である。組成物は錠剤、丸薬、カプセル剤、半固体、散剤、持続性放出製剤、溶液、懸濁液、エリキシル剤、エアロゾル剤、または任意の他の適当な組成物の形を取り得る。式(Ｉ)の化合物を投与するための他の好ましい方法は吸入である。これは、治療剤を直接呼吸管に送達するために有効な方法である。

製剤の選択は、種々の因子、例えば医薬投与方式および医薬物質のバイオアベイラビリティによる。吸入を介して送達するために、本化合物を液体溶液、懸濁液、エアロゾル噴射剤または乾燥粉末として送達し、適当な投与用ディスペンサーに充填する。数種の医薬吸入器がある − ネブライザー型吸入器、定量吸入器(ＭＤＩ)および乾燥粉末吸入器(ＤＰＩ)。ネブライザーデバイスは、治療剤(これは液体形態に製剤されている)を患者の呼吸器に運搬される霧として噴霧させる高速気流を生じる。ＭＤＩは、典型的に圧縮ガスと共に包装された製剤である。駆動により、該デバイスは圧縮ガスにより定量治療剤を放出し、それにより固定量を投与するための信頼できる方法を提供する。ＤＰＩは、該デバイスにより呼吸中に患者の吸気性気流に分配され得る自由に浮遊する粉末の形態の治療剤を含む。自由に浮遊する粉末を達成するために、本治療剤は、ラクトースのような賦形剤と製剤する。定量の治療剤がカプセル形態に貯蔵され、各駆動により分配される。

本発明はまた、式(Ｉ)の化合物の粒子径が１０−１０００nm、好ましくは１０−４００nmである製剤にも関する。かかる医薬製剤は、特にバイオアベイラビリティが表面積の増加、すなわち粒子径の現象により増加できるとの原則にのっとり、バイオアベイラビリティが悪い医薬のために開発されている。例えば、Ｕ.Ｓ.４,１０７,２８８は、活性物質が架橋した高分子マトリックス上に指示されている１０〜１,０００nmの範囲の粒子径を有する医薬製剤を記載する。Ｕ.Ｓ.５,１４５,６８４は、表面修飾剤の存在下医薬物質をナノ粒子にまで粉砕し(平均粒子径４００nm)、液体媒体に分散して顕著に高いバイオアベイラビリティを示す医薬製剤を得る、医薬製剤の製造方法を記載する。両方を引用により本明細書に包含させる。

さらなる面において、本発明は、(治療有効量)の式(Ｉ)の化合物と、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。許容される賦形剤は、非毒性であり、投与を助け、式Ｉの化合物の治療的利点に不利に影響しない。かかる賦形剤は、一般に当業者に利用可能な任意の固体、液体、半固体、または、エアロゾル組成物の場合、ガス状賦形剤であり得る。

固体医薬賦形剤はデンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルクなどを含む。

液体および半固体賦形剤は、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールおよび、石油、動物、植物または合成起源の油、例えば、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などを含む種々の油から選択され得る。特に注射用溶液に好ましい液体担体は、水、食塩水、水性デキストロース、およびグリコール類を含む。

圧縮ガスをエアロゾル形態の式(Ｉ)の化合物を分配するために使用し得る。この目的に適当な不活性ガスは、窒素、二酸化炭素などである。他の適当な医薬賦形剤およびその製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences, edited by E. W. Martin (Mack Publishing Company, l8th ed., l990)に記載されている。

製剤中の本化合物の量は、当業者が用いる全範囲にわたり変えることができる。典型的に、本製剤は、重量パーセント(ｗｔ％)ベースで、全製剤に基づき約０.０１−９９.９９ｗｔ％の式(Ｉ)の化合物を含み、残りは１種以上の適当な医薬賦形剤である。好ましくは、本化合物は約１−８０ｗｔ％の濃度で存在する。

本発明は、さらに、少なくとも１個の式(Ｉ)の化合物と少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤を含む(すなわち含むまたはから成る)医薬組成物に関する。

遊離形または薬学的に許容される塩形態の式(Ｉ)の化合物を少なくとも１種の医薬許容される賦形剤(例えば担体および／または希釈剤)と共に含む医薬組成物は、これらの成分の混合による慣用の方法で製造し得る。

少なくとも１種の医薬許容される担体および／または希釈剤と共に遊離形または薬学的に許容される塩形態の式(Ｉ)の化合物を含み、さらに組合せ相手を(１個の投与量単位形態としてまたは複数パーツのキットとして)含む組合せ医薬組成物は、薬学的に許容される担体および／または希釈剤とこれら複数活性成分の混合による慣用の方法で製造し得る。

その結果、本発明は以下のさらなる一面を提供する：
・ 遊離形または薬学的に許容される塩形態の式(Ｉ)の化合物を薬学的に許容される希釈剤および／または担体と共に含む、例えば、ここに記載する方法のいずれか一つに使用するための組合せ医薬組成物。
・ 活性成分として遊離形または薬学的に許容される塩形態の式(Ｉ)の化合物；１個以上の薬学的に許容される担体物質および／または希釈剤および場合により１個以上のさらなる医薬物質を含む、組合せ医薬組成物。かかる組合せ医薬組成物は一投与量単位形態でも複数パーツのキットとしてでもよい。
・ 同時または連続投与のための治療有効量の遊離形または薬学的に許容される塩形態の式(Ｉ)の化合物および第二の活性物質を含む、組合せ医薬組成物。
・ 治療有効非毒性量の式(Ｉ)の化合物または薬学的に許容されるその塩と、少なくとも１個の、例えば上に示した第二の活性物質の、例えば同時のまたは連続的な併用投与を含む、上に定義した方法。
・ ａ)遊離形または薬学的に許容される塩形態のここに開示する式(Ｉ)の化合物である第一剤、およびｂ)少なくとも１個の、例えば上に示す併用剤を含む医薬組合せ剤、例えばキット；ここで、かかるキットはその投与のための指示書を含み得る。

式(Ｉ)の化合物の以下の実施例は、本発明を範囲を限定することなく説明する。かかる化合物の製造方法を後記する。

実施例１：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−ｔｅｒｔ−ブチル−ピリジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

Ｅｔ_３Ｎ(１.５４mL、１１.１mmol、３当量)をイミダゾール−１−カルボン酸[５−(２−ｔｅｒｔ−ブチル−ピリジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド(工程１.１)(１.２６ｇ、３.７mmol)およびＬ−プロリンアミド(０.５４８ｇ、４.８mmol、１.３当量)のＤＭＦ(２５mL)溶液に、アルゴン雰囲気下添加する。反応混合物を１４時間、ｒｔで撹拌し、ＮａＨＣＯ_３飽和溶液の添加によりクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機相をＮａＨＣＯ_３飽和溶液で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１：０→９４：６)で精製し、Ｅｔ_２Ｏで摩砕して、１.２２ｇの表題化合物灰白色固体として得る：ESI-MS: 388.1 [M+H]⁺; t_R = 2.35分(系1); TLC: R_f = 0.36 (DCM/MeOH, 9:1). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 1.32 (s, 9 H) 1.75-1.95 (m, 3 H) 1.97 - 2.13 (m, 1 H) 2.39 (s, 3 H) 3.38-3.50 (m, 1 H) 3.52-3.65 (m., 1 H) 4.10-4.40 (m, 1 H) 6.94 (br. s., 1 H) 7.22 (d, 1 H) 7.30 - 7.48 (m, 2 H) 8.49 (d, 1 H) 10.87 (br. s., 1 H)

工程１.１：イミダゾール−１−カルボン酸[５−(２−ｔｅｒｔ−ブチル−ピリジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド

５−(２−ｔｅｒｔ−ブチル−ピリジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イルアミン(工程１.２)(１ｇ、４.０５mmol)および１,１'−カルボニルジイミミダゾール(０.９８４ｇ、６.０７mmol、１.５当量)のＤＣＭ(５０mL)の混合物を４時間、還流で撹拌し、冷却する。得られた沈殿を濾過により回収して、１.２６ｇの表題化合物を白色固体として得る：ESI-MS: 340.2 [M-H]^-; t_R = 2.85分(系1)。

工程１.２：５−(２−ｔｅｒｔ−ブチル−ピリジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イルアミン

Ｎ−[５−(２−ｔｅｒｔ−ブチル−ピリジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アセトアミド(工程１.３)(２ｇ、７mmol)、６Ｎ ＨＣｌ水溶液(１０mL)およびＥｔＯＨ(５０mL)の混合物を、２時間、８５℃で撹拌し、冷却し、ＮａＨＣＯ_３飽和溶液の添加によりクエンチし、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ(９：１、ｖ／ｖ)で抽出する。有機相をＮａＨＣＯ_３飽和溶液で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１：０→９６：４)で精製して、１.２１ｇの表題化合物を黄色固体として得る：ESI-MS: 248.1 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.36 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程１.３：Ｎ−[５−(２−ｔｅｒｔ−ブチル−ピリジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アセトアミド

２−アセトアミド−４−メチルチアゾール(１.２ｇ、７.７mmol、１.１当量)、炭酸セシウム(４.５５ｇ、１４mmol、２当量)、トリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィニウムテトラフルオロボレート(０.４０６ｇ、１.４mmol、０.２当量)、酢酸パラジウム(II)(０.１５ｇ、０.７mmol、０.１当量)および４−ブロモ−２−ｔｅｒｔ−ブチル−ピリジン(工程１.４)(１.５ｇ、７mmol)のＤＭＦ(５０mL)の混合物を、１.５時間、９０℃でアルゴン雰囲気下に撹拌し、冷却し、ＮａＨＣＯ_３飽和溶液の添加によりクエンチし、セライトのパッドを通して濾過する。濾液をＥｔＯＡｃで抽出する。有機相をＮａＨＣＯ_３飽和溶液で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１：０→９７：３)で精製して、２.０２ｇの表題化合物を黄色固体として得る：ESI-MS: 290.1 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.35 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程１.４：４−ブロモ−２−ｔｅｒｔ−ブチル−ピリジン

２−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピリジン−４−オン(工程１.５)(４.２５ｇ、２８mmol)およびＰＯＢｒ_３(８.８８ｇ、３１mmol、１.１当量)の混合物を１２０℃に加熱し、１５分間撹拌し、冷却し、ＮａＨＣＯ_３飽和溶液の添加によりクエンチし、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ(９：１、ｖ／ｖ)で抽出する。有機相をＮａＨＣＯ_３飽和溶液で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、９５：５)で精製して、５.１８ｇの表題化合物を黄色油状物として得る：ESI-MS: 214.0/216.0 [M+H]⁺; t_R = 2.49分(系1); TLC: R_f = 0.35 (Hex/EtOAc, 1:1)。

工程１.５：２−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピリジン−４−オン

２−ｔｅｒｔ−ブチル−ピラン−４−オン(工程１.６)(５.７４ｇ、３７.７mmol)および水酸化アンモニウム３０％水溶液(１００mL)の混合物を、１時間、還流で撹拌し、冷却し、濃縮する。残留物をＭｅＯＨ(２００mL)で摩砕し、濾過する。濾液を濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ_３ ^ａｑ、９４：５：１→９２：７：１)で精製して、４.４６ｇの表題化合物を黄色固体として得る：ESI-MS: 152.0 [M+H]⁺; t_R = 1.45分(系1); TLC: R_f = 0.11 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程１.６：２−ｔｅｒｔ−ブチル−ピラン−４−オン

５−ヒドロキシ−１−メトキシ−６,６−ジメチル−ヘプタ−１,４−ジエン−３−オン(工程１.７)(６.８ｇ、３６.９mmol)およびＴＦＡ(５.６５mL、７４mmol、２当量)のベンゼン(２５０mL)中の混合物を１４時間、ｒｔで撹拌し、濃縮する。残留物のシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、１：０→７５：２５)による精製により、５.７４ｇの表題化合物を黄色油状物として得る：ESI-MS: 153.1 [M+H]⁺; t_R = 3.21分(系1); TLC: R_f = 0.22 (Hex/EtOAc, 1:1)。

工程１.７：５−ヒドロキシ−１−メトキシ−６,６−ジメチル−ヘプタ−１,４−ジエン−３−オン

ＬｉＨＭＤＳ(ＴＨＦ中１Ｍ、１００mL、２当量)を、４−メトキシ−３−ブテン−２−オン(１０mL、１００mmol、２当量)のＴＨＦ(４００mL)の冷(−７８℃)溶液に滴下する。３０分間、−７８℃で撹拌後、ピバロイルクロライド(６.１２mL、５０mmol)のＴＨＦ(１００mL)溶液を添加する。得られた混合物を２時間にわたりｒｔに温め、ＮＨ_４Ｃｌ飽和溶液の添加によりクエンチする。ＴＨＦを真空下で除去する。濃縮混合物をＥｔ_２Ｏで抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、１：０→８５：１５)で精製して、６.８３ｇの表題化合物を黄色油状物として得る：ESI-MS: 185.1 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.87 (Hex/EtOAc, 1:1)。

実施例２：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−シクロプロピル−ピリジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。工程１.１において、反応混合物を４時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を２時間、８５℃で撹拌する。工程１.３において、４−クロロ−２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリジン(工程２.１)を使用し、反応混合物を２時間、１５０℃で撹拌する。表題化合物：ESI-MS: 372.1 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.35 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程２.１：４−クロロ−２−シクロプロピル−ピリジン

表題化合物を文献に記載された方法の変法に従い製造する[Comins, D. L.; Mantlo, N. B., Journal of Organic Chemistry, (1985), 50, 4410-4411]。
シクロプロピルマグネシウムブロマイド(ＴＨＦ中０.５Ｍ、１００mL、５０mmol、２.２当量)を、４−クロロピリジンヒドロクロライド(３.４ｇ、２２mmol)のＴＨＦ(６８mL)の冷(−７８℃)懸濁液に一度に添加する。１０分間、−７８℃で撹拌後、フェニルクロロホルメート(２.７６mL、２２mmol)を滴下する。反応混合物を−７８℃で１５分間撹拌し、ｒｔに温め、２０％ＮＨ_４Ｃｌ水溶液の添加によりクエンチし、Ｅｔ_２Ｏ(２×１００mL)で抽出する。有機相をＮａＨＣＯ_３飽和溶液(５０mL)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。トルエン(１００mL)に溶解した残留物に、ｏ−クロラニル(６ｇ、２４.２mmol、１.１当量)の氷ＡｃＯＨ(５０mL)溶液を添加する。反応混合物を１４時間、ｒｔで撹拌し、０℃に冷却し、１０％ＮａＯＨ水溶液の添加により塩基性化し、セライトのパッドを通して濾過する。濾液からの有機層をＨ_２Ｏ(２０mL)で洗浄し、１０％ＨＣｌ水溶液(３×２５mL)で抽出する。合わせた酸性層を２０％ＮａＯＨ水溶液の添加により塩基性化し、ＤＣＭ(３×２５mL)で抽出する。有機相をＨ_２Ｏ(５０mL)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１：０→９９：１)で精製して、０.９５１ｇの表題化合物を無色油状物として得る：ESI-MS: 154.1 [M+H]⁺; t_R = 1.41分(系1); TLC: R_f = 0.85 (DCM/MeOH, 9:1)。

実施例３：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(２−フルオロ−フェニル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、工程１.３において４−クロロ−２−(２−フルオロ−フェニル)−ピリジン(工程３.１)を使用し、対応する混合物を２時間、１５０℃で撹拌して製造する：ESI-MS: 426.1 [M+H]⁺; t_R = 2.60分(系1); TLC: R_f = 0.40 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程３.１：４−クロロ−２−(２−フルオロ−フェニル)−ピリジン

２−フルオロフェニルボロン酸(１４１mg、１mmol、１.２当量)のＥｔＯＨ(１mL)中の混合物を、４−クロロ−２−ヨード−ピリジン[Choppin, S.; Gros, P.; Fort, Y., European Journal of Organic Chemistry (2001), (3), 603-606](２００mg、０.８４mmol)、ＰｄＣｌ_２(ｄｐｐｆ)(１８mg、０.０２５mmol、０.０３当量)およびＮａ_２ＣＯ_３(Ｈ_２Ｏ中２Ｍ溶液、１.６８mL、３.３６mmol、４当量)のトルエン(２mL)中の混合物に、１０５℃で、アルゴン雰囲気下添加する。反応混合物を１０５℃で１時間撹拌し、ｒｔに冷却し、ＮａＨＣＯ_３飽和溶液の添加によりクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機相をＮａＨＣＯ_３飽和溶液で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、１：０→９７：３)で精製して、１２７mgの表題化合物を白色固体として得る：ESI-MS: 208.1 [M+H]⁺; t_R = 4.66分(系1); TLC: R_f = 0.27 (Hex/EtOAc, 9:1)。

実施例４：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−シクロブチル−ピリジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を４時間、ｒｔで撹拌し、ＥｔＯＡｃおよびＨ_２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機相の乾燥および濃縮後、残留物をＤＣＭでの摩砕により精製する。工程１.３において、反応混合物を２時間、１２０℃で撹拌し、冷却し、ＥｔＯＡｃおよびＨ_２Ｏで希釈し、セライトのパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機相の乾燥および濃縮後、残留物をＥｔ_２Ｏでの摩砕により精製する。工程１.５において、反応混合物を１時間、８０℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.７において、４−メトキシ−３−ブテン−２−オンのＴＨＦ溶液を、ＬｉＨＭＤＳのＴＨＦ中の冷(−７８℃)溶液に添加する。３０分間の後、シクロブチルカルボニルクロライドのＴＨＦ溶液を添加し、反応混合物を１８時間にわたりｒｔにさせる。
表題化合物：ESI-MS: 386.1 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.11 (DCM/MeOH, 95:5)。

実施例５：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。工程１.１において、反応混合物を１４時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を１時間、８５℃で撹拌する。工程１.３において、反応混合物を３時間、１２０℃で撹拌する。工程１.５において、反応混合物を１時間、６５−７０℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.７において、１−メチル−シクロプロパンカルボニルクロライド(工程５.１)を使用する。
表題化合物: ESI-MS: 386.1 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.40 (DCM/MeOH, 9:1). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 0.71 - 0.87 (m, 2 H) 1.11 - 1.26 (m, 2 H) 1.47 (s, 3 H) 1.74 - 1.96 (m, 3 H) 2.00-2.15 (m, 1 H) 2.39 (s, 3 H) 3.35 - 3.52 (m, 1 H) 3.52 - 3.73 (m, 1 H) 4.10-4.40 (m, 1 H) 6.93 (br. s., 1 H) 7.15 (dd, 1 H) 7.27 (s, 1 H) 7.35 (s, 1 H) 8.40 (d, 1 H) 10.99 (br. s., 1 H)

工程５.１：１−メチル−シクロプロパンカルボニルクロライド

１−メチル−シクロプロパンカルボン酸(１０ｇ、１００mmol)および塩化オキサリル(１０.４９ml、１２０mmol、１.２当量のＣＨＣｌ_３(８０ml)中の混合物を、４時間、７０℃で撹拌する。反応混合物を濃縮して、１１.８ｇの表題化合物を黄色油状物として得て、それをさらに精製せずに使用する。

実施例６：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物をＥｔＯＡｃおよびＨ_２Ｏでの希釈によりクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.２において、反応混合物を２時間、１００℃で撹拌する。工程１.３において、反応混合物を３時間、１００℃で撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機相の乾燥および濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、１：４)で精製する。工程１.５において、反応混合物を２時間、８０℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.７において、４−メトキシ−３−ブテン−２−オン(５０mmol)のＴＨＦ(１００mL)溶液を、ＬｉＨＭＤＳ(ＴＨＦ中１Ｍ、１００mL)のＴＨＦ(２００mL)中の冷(−７８℃)溶液に添加する。３０分間の後、１−メチル−シクロブタンクロライド(工程６.１)を添加し、反応混合物を１８時間にわたりｒｔにさせる。
表題化合物：ESI-MS: 400.1 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.06 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 94:5:1)。

工程６.１：１−メチル−シクロブタンカルボニルクロライド

表題化合物を工程５.１に準じるが、１−メチル−シクロブタンカルボン酸[Cowling, S. J.; Goodby, J. W., Chemical Communications, (2006), (39), 4107-4109]を使用して製造する。

実施例７：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−ｔｅｒｔ−ブチル−ピリジン−４−イル)−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を実施例１に準じ、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を１６時間、ｒｔで撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.１において、反応混合物を２時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を１時間、１００℃で撹拌する。工程１.３において、Ｎ−チアゾール−２−イル−アセトアミドを使用する。反応混合物を２時間、１２０℃で撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏで希釈しＥｔＯＡｃで抽出する。有機相の乾燥および濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、１：１)、Ｅｔ_２Ｏでの摩砕により精製する。
表題化合物：ESI-MS: 374.1 [M+H]⁺; t_R = 2.16分(系1); TLC: R_f = 0.10 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 94:5:1)。

実施例８：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−イソプロピル−ピリジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を１６時間、ｒｔで撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.２において、反応混合物を２時間、１００℃で撹拌する。工程１.３において、４−クロロ−２−イソプロピル−ピリジン(工程８.１)を使用する。反応混合物を３時間、１５０℃撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機相の乾燥および濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、２５：７５)により精製する。
表題化合物：ESI-MS: 374.1 [M+H]⁺; t_R = 1.99分(系1); TLC: R_f = 0.10 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 94:5:1)。

工程８.１：４−クロロ−２−イソプロピル−ピリジン

表題化合物を工程２.１に準じるが、イソプロピルマグネシウムクロライド(ＴＨＦ中２Ｍ)を使用して製造する：ESI-MS: 156.0 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.32 (DCM)。

実施例９：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−シクロブチル−ピリジン−４−イル)−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を１６時間、ｒｔで撹拌し、ＤＣＭ／Ｈ_２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出する。工程１.２において、反応混合物を２時間、１００℃で撹拌し、粗生成物を精製しない。工程１.３において、Ｎ−チアゾール−２−イル−アセトアミドを使用する。反応混合物を３時間、１２０℃で撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機相の乾燥および濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、２：３)で精製する。工程１.５において、反応混合物を１時間、８０℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.７において、工程１.７において、４−メトキシ−３−ブテン−２−オン(５０mmol)のＴＨＦ(１００mL)溶液を、ＬｉＨＭＤＳ(ＴＨＦ中１Ｍ、１００mL)のＴＨＦ(２００mL)中の冷(−７８℃)溶液に添加する。３０分間の後、シクロブチルカルボニルクロライドを添加し、反応混合物を１８時間にわたりｒｔにさせる。
表題化合物：ESI-MS: 372.1 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.13 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 91.5:7.5:1)。

実施例１０：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。工程１.１において、反応混合物を１４時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を１時間、８５℃で撹拌する。工程１.３において、Ｎ−チアゾール−２−イル−アセトアミドを使用し、反応混合物を４時間、１２０℃で撹拌する。工程１.５において、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.７において、１−メチル−シクロプロパンカルボニルクロライド(工程５.１)を使用する。
表題化合物：ESI-MS: 372.1 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.43 (DCM/MeOH, 9:1)。

実施例１１：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(１−トリフルオロメチル−シクロプロピル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。工程１.１において、反応混合物を１４時間、還流で撹拌する。工程１.３において、Ｎ−チアゾール−２−イル−アセトアミドを使用する。反応混合物を２時間、１２０℃で撹拌する。工程１.４において、１,２−ジクロロエタン(２.５５mL／mmolのピリジン−４−オン)を溶媒として使用する。反応混合物を１時間、８３℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.５において、反応混合物を１時間、６５℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.７において、１−トリフルオロメチル−シクロプロパンカルボニルクロライド(工程１１.１)を使用する。
表題化合物：ESI-MS: 426.0 [M+H]⁺; t_R = 2.35分(系1); TLC: R_f = 0.25 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程１１.１：１−トリフルオロメチル−シクロプロパンカルボニルクロライド

表題化合物を工程５.１に準じるが、１−トリフルオロメチル−シクロプロパンカルボン酸を使用して製造する。

実施例１２：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を５時間、ｒｔで撹拌する。工程１.１において、反応混合物を１４時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を１時間、８５℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.３において、Ｎ−チアゾール−２−イル−アセトアミドを使用する。反応混合物を２.５時間、１２０℃で撹拌する。工程１.４において、反応混合物を１時間、８３℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.５において、反応混合物を１時間、６５℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.６において、粗生成物を精製しない。工程１.７において、３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオニルクロライド(工程１２.１)を使用する。
表題化合物：ESI-MS: 428.0 [M+H]⁺; t_R = 2.75分(系1); TLC: R_f = 0.21 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程１２.１：３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオニルクロライド

表題化合物を工程５.１に準じるが、３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオン酸を使用して製造する。

実施例１３：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(１−トリフルオロメチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を１８時間、ｒｔで撹拌し、ＤＣＭ／Ｈ_２Ｏの添加によりクエンチし、ＤＣＭで抽出する。工程１.１において、反応混合物を１時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を１時間、１００℃で撹拌し、クエンチして、ＤＣＭで抽出する。工程１.３において、Ｎ−チアゾール−２−イル−アセトアミドを使用する。反応混合物を５時間撹拌し、１２０℃、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチしＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.４において、１,２−ジクロロエタン(２.２６mL／mmolのピリジン−４−オン)を溶媒として使用する。反応混合物を１時間、還流で撹拌し、クエンチして、ＤＣＭで抽出する。工程１.５において、反応混合物を１時間、ｒｔで撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.６において、反応混合物を１８時間、ｒｔで撹拌する。工程１.７において、４−メトキシ−３−ブテン−２−オンのＴＨＦ溶液を、ＬｉＨＭＤＳのＴＨＦ中の冷(−７８℃)溶液に添加する。３０分間の後、１−トリフルオロメチル−シクロブタンカルボニルクロライド(工程１３.１)のＴＨＦを添加する。反応混合物を１８時間にわたりｒｔにし、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。
表題化合物：ESI-MS: 440.0 [M+H]⁺; t_R = 2.68分(系1); TLC: R_f = 0.08 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 91.5:7.5:1)。

工程１３.１：１−トリフルオロメチル−シクロブタンカルボニルクロライド

表題化合物を工程５.１に準じるが、１−トリフルオロメチル−シクロブタンカルボン酸、を使用し反応混合物を２時間還流で撹拌して製造する。

実施例１４：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１−トリフルオロメチル−シクロプロピル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。工程１.１において、反応混合物を１４時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を１時間、８５℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.３において、反応混合物を２時間、１２０℃で撹拌する。工程１.４において、１,２−ジクロロエタン(２.５５mL／mmolのピリジン−４−オン)を溶媒として使用する。反応混合物を１時間、８３℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.５において、反応混合物を１時間、６５℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.７において、１−トリフルオロメチル−シクロプロパンカルボニルクロライド(工程１１.１)を使用する。
表題化合物：ESI-MS: 440.0 [M+H]⁺; t_R = 2.65分(系1); TLC: R_f = 0.36 (DCM/MeOH, 9:1). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 1.41 (s, 4 H) 1.70-1.90 (m, 3 H) 2.00 - 2.10 (m, 1 H) 2.40 (s, 3 H) 3.36 - 3.52 (m, 1 H) 3.52-3.65( m, 1 H) 4.10-4.40 (m, 1 H) 6.95 (br. s., 1 H) 7.37 (d, 2 H) 7.47 (s, 1 H) 8.52 (d, 1 H) 10.94 (br. s., 1 H)

実施例１５：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。工程１.１において、反応混合物を１４時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を１時間、８５℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.３において、反応混合物を２.５時間、１２０℃で撹拌する。工程１.４において、反応混合物を１時間、８３℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.５において、反応混合物を１時間、６５℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.６において、粗生成物を精製しない。工程１.７において、３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオニルクロライド(工程１２.１)を使用する。
表題化合物：ESI-MS: 442.0 [M+H]⁺; t_R = 3.02分(系1); TLC: R_f = 0.35 (DCM/MeOH, 9:1). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 1.60 (s, 6 H) 1.70-1.95 (m, 3 H) 1.99 - 2.16 (m, 1 H) 2.40 (s, 3 H) 3.38 - 3.51 (m, 1 H) 3.51 - 3.69 (m, 1 H) 4.10-4.40 (m, 1 H) 6.95 (br. s., 1 H) 7.39 (d, 2 H) 7.53 (s, 1 H) 8.58 (d, 1 H) 10.93 (br. s., 1 H)

別の方法で、表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する：Ｎ,Ｎ−ジメチルアセトアミドをＤＭＦの代わりに使用し、混合物を６５℃で２時間撹拌する。工程１.１において、フェニルクロロホルメート(ゆっくり添加)を１,１'−カルボニルジイミミダゾールの代わりに使用し、反応を、ＴＨＦ中、Ｎ,Ｎ−ジエチル−イソプロピルアミンの存在下、室温(１.５時間)で行う。工程１.２において、反応混合物を５時間、(還流)下に加熱撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.３において、反応混合物を２時間、１００℃で撹拌する。工程１.４において、反応をトルエン中、１.１当量のＰＯＢｒ_３および１.１当量のトリプロピルアミンを使用して行い、混合物を、２時間、８０℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.５において、反応混合物を１時間、６５℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.６において、トルエンをベンゼンの代わりに使用し、粗生成物を精製しない。工程１.７において、３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオニルクロライド(工程１２.１)を使用する。

実施例１６：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１−トリフルオロメチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を７２時間、ｒｔで撹拌し、ＤＣＭ／Ｈ_２Ｏの添加によりクエンチし、ＤＣＭで抽出する。工程１.１において、反応混合物を１時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を２時間、１００℃で撹拌し、クエンチして、ＤＣＭで抽出する。工程１.３において、反応混合物を６時間、１２０℃で撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチし、セライトのパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.４において、１,２−ジクロロエタン(２.２６mL／mmolのピリジン−４−オン)を溶媒として使用する。反応混合物を１時間、還流で撹拌し、クエンチして、ＤＣＭで抽出する。工程１.５において、反応混合物を１時間、ｒｔで撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.６において、反応混合物を１８時間、ｒｔで撹拌する。工程１.７において、４−メトキシ−３−ブテン−２−オンのＴＨＦ溶液を、ＬｉＨＭＤＳのＴＨＦ中の冷(−７８℃)溶液に添加する。３０分間の後、１−トリフルオロメチル−シクロブタンカルボニルクロライド(工程１３.１)のＴＨＦを添加する。反応混合物を１８時間にわたりｒｔにし、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。
表題化合物：ESI-MS: 454.1 [M+H]⁺; t_R = 2.90分(系1); TLC: R_f = 0.22 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 91.5:7.5:1)。

実施例１７：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(１−メチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を２４時間、ｒｔで撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.２において、反応混合物を２時間、１００℃で撹拌し、クエンチして、ＤＣＭで抽出する。工程１.３において、Ｎ−チアゾール−２−イル−アセトアミドを使用する。反応混合物を３時間、１００℃で撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機相の乾燥および濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、２５：７５)により精製する。工程１.５において、反応混合物を２時間、８０℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.７において、４−メトキシ−３−ブテン−２−オンのＴＨＦ溶液を、ＬｉＨＭＤＳのＴＨＦ中の冷(−７８℃)溶液に添加する。３０分間の後、１−メチル−シクロブタンクロライド(工程６.１)のＴＨＦを添加し、反応混合物を１８時間にわたりｒｔにさせる。
表題化合物：ESI-MS: 386.1 [M+H]⁺; t_R = 2.32分(系1); TLC: R_f = 0.05 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 94:5:1)。

実施例１８：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(１−シアノ−シクロプロピル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を１６時間、ｒｔで撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.１において、１−[４−(２−アミノ−４−メチル−チアゾール−５−イル)−ピリジン−２−イル]−シクロプロパンカルボニトリル(工程１８.１)を使用し、反応混合物を２時間、還流で撹拌する。
表題化合物：ESI-MS: 397.0 [M+H]⁺; t_R = 2.90分(系1); TLC: R_f = 0.08 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 94:5:1). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 1.69 - 1.93 (m, 7 H) 2.00-2.20 (m, 1 H) 2.42 (s, 3 H) 3.38-3.50 (m, 1 H) 3.50-3.65 (m, 1 H) 4.10-4.40 (m, 1 H) 6.94 (br. s., 1 H) 7.34 (dd, 1 H) 7.37 (br. s., 1 H) 7.47 (s, 1 H) 8.47 (d, 1 H)

工程１８.１：１−[４−(２−アミノ−４−メチル−チアゾール−５−イル)−ピリジン−２−イル]−シクロプロパンカルボニトリル

{５−[２−(１−シアノ−シクロプロピル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(工程１８.２)(２９５mg)、ＤＣＭ(４mL)およびＴＦＡ(１mL)の混合物を、２時間、ｒｔで撹拌し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ_３ ^ａｑ、９４：５：１)で精製して、１８２mgの表題化合物を得る：ESI-MS: 257.1 [M+H]⁺; t_R = 2.54分(系1); TLC: R_f = 0.30 ((DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 94:5:1)。

工程１８.２：{５−[２−(１−シアノ−シクロプロピル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル

表題化合物を工程１.３に準じるが、１−(４−ブロモ−ピリジン−２−イル)−シクロプロパンカルボニトリル(工程１８.３)および(４−メチル−チアゾール−２−イル)−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(工程１８.４)を使用して製造する。反応混合物を２時間、１００℃で撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出する。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、１：１)で精製して、１２２mgの表題化合物を白色固体として得る：ESI-MS: 357.1 [M+H]⁺; t_R = 4.86分(系1); TLC: R_f = 0.29 (Hex/EtOAc, 1:1)。

工程１８.３：１−(４−ブロモ−ピリジン−２−イル)−シクロプロパンカルボニトリル

ＬｉＨＭＤＳ(トルエン中１Ｍ、１７.６mL、１７.６mmol、３.１当量)を４−ブロモ−２−フルオロ−ピリジン[Marsais, F. et al, Journal of Organic Chemistry, (1992), 57, 565-573](１ｇ、５.７mmol)、シクロプロパンカルボニトリル(１.２５mL、１７mmol、３当量)、４Åモレキュラー・シーブおよびトルエン(２０mL)の冷(−５℃)混合物に滴下する。反応混合物をｒｔに温め、１６時間撹拌し、Ｈ_２Ｏに注ぎ、濾過する。濾液をＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏで希釈しＥｔＯＡｃで抽出する。有機相をＨ_２Ｏおよび塩水で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、９：１)で精製して、６２０mgの表題化合物を白色固体として得る：ESI-MS: 223.1/225.1 [M+H]⁺; t_R = 4.22分(系1); TLC: R_f = 0.25 (Hex/EtOAc, 9:1)。

工程１８.４：(４−メチル−チアゾール−２−イル)−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル

ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート(２１ｇ、９６.５mmol、１.１当量)のｔ−ＢｕＯＨ(５０mL)溶液に、４−メチル−２−アミノチアゾール(１０ｇ、８７.７mmol)およびＤＭＡＰ(１.１ｇ、８.８mmol、０.１当量)のｔ−ＢｕＯＨ(５０mL)溶液を添加する。反応混合物を７２時間、ｒｔで撹拌し、濃縮する。残留物をＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏで希釈しＥｔＯＡｃで抽出する。有機相をＨ_２Ｏおよび塩水で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、９８：２)で精製して、１５.２ｇの表題化合物を白色固体として得る：ESI-MS: 215.1 [M+H]⁺; t_R = 3.43分(系1); TLC: R_f = 0.30 (DCM/MeOH, 98:2)。

実施例１９：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(１−シアノ−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を６時間、ｒｔで撹拌する。工程１.１において、１−[４−(２−アミノ−４−メチル−チアゾール−５−イル)−ピリジン−２−イル]−シクロブタンカルボニトリル(工程１９.１)を使用し、反応混合物を３時間、還流で撹拌する。
表題化合物: ESI-MS: 411.1 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.36 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程１９.１：１−[４−(２−アミノ−４−メチル−チアゾール−５−イル)−ピリジン−２−イル]−シクロブタンカルボニトリル

{５−[２−(１−シアノ−シクロブチルｌ)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(工程１９.２)(３００mg)、ＤＣＭ(５mL)およびＴＦＡ(１mL)の混合物を、４時間、ｒｔで撹拌し、ＮａＨＣＯ_３飽和溶液(５０mL)の添加によりクエンチし、ＤＣＭ(３×７５mL)で抽出する。有機相をＮａＨＣＯ_３飽和溶液(２×５０mL)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１：０→９６：４)で精製して、１８１mgの表題化合物を黄色固体として得る：ESI-MS: 271.1 [M+H]⁺; t_R = 2.48分(系1); TLC: R_f = 0.45 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程１９.２：{５−[２−(１−シアノ−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル

表題化合物を工程１.３に準じるが、１−(４−ブロモ−ピリジン−２−イル)−シクロブタンカルボニトリル(工程１９.３)および(４−メチル−チアゾール−２−イル)−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(工程１８.４)を使用して製造する。反応混合物を３時間、１００℃で撹拌する。表題化合物：ESI-MS: 371.1 [M+H]⁺; t_R = 4.86分(系1); TLC: R_f = 0.66 (Hex/EtOAc, 1:1)。

工程１９.３：１−(４−ブロモ−ピリジン−２−イル)−シクロブタンカルボニトリル

ＬｉＨＭＤＳ(トルエン中１Ｍ、１７.７mL、１７.７mmol、３.１当量)を、４−ブロモ−２−フルオロ−ピリジン[Marsais, F. et al, Journal of Organic Chemistry, (1992), 57, 565-573](１ｇ、５.７mmol)およびシクロブタンカルボニトリル(１.３９ｇ、１７.１mmol、３当量)のトルエン(２０mL)中の冷(−５℃)溶液に滴下する。反応混合物をｒｔに温め、５時間撹拌し、ＮａＨＣＯ_３飽和溶液(５０mL)の添加によりクエンチし、セライトのパッドを通して濾過する。濾液をＥｔＯＡｃ(３×７５mL)で抽出する。有機相をＮａＨＣＯ_３飽和溶液(２×５０mL)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、１：０→９５：５)で精製して、９３３mgの表題化合物を黄色油状物として得る：ESI-MS: 237.0/239.0 [M+H]⁺; t_R = 4.27分(系1); TLC: R_f = 0.30 (Hex/EtOAc, 9:1)。

実施例２０：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(１−カルバモイル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を３時間、ｒｔで撹拌する。工程１.１において、１−[４−(２−アミノ−４−メチル−チアゾール−５−イル)−ピリジン−２−イル]−シクロブタンカルボン酸アミド(工程２０.１)を使用し、反応混合物を１２時間、還流で撹拌する。
表題化合物：ESI-MS: 429.1 [M+H]⁺; t_R = 2.90分(系1); TLC: R_f = 0.11 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程２０.１：１−[４−(２−アミノ−４−メチル−チアゾール−５−イル)−ピリジン−２−イル]−シクロブタンカルボン酸アミド

{５−[２−(１−シアノ−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(工程１９.２)(６４０mg、１.７３mmol)および濃縮硫酸の混合物を、４０分間、０℃で撹拌し、ｒｔに温め、１時間撹拌し、ＮａＨＣＯ_３飽和溶液(５０mL)の添加によりクエンチしＤＣＭ(３×７５mL)で抽出する。有機相をＮａＨＣＯ_３飽和溶液(２×５０mL)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ_３ ^ａｑ、９９：０：１→９３：６：１)で精製して、３５mgの表題化合物を黄色固体として得る：ESI-MS: 289.1 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.32 (DCM/MeOH, 9:1)。

実施例２１：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(２−ジメチルアミノ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。工程１.１において、５−[２−(２−ジメチルアミノ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イルアミン(工程２１.１)を使用し、反応混合物を１４時間、還流で撹拌する。
表題化合物：ESI-MS: 431.1 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.12 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程２１.１：５−[２−(２−ジメチルアミノ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イルアミン

表題化合物を工程１９.１に準じるが、{５−[２−(２−ジメチルアミノ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(工程２１.２)を使用し、反応混合物を２時間、ｒｔで撹拌して製造する。表題化合物：ESI-MS: 291.1 [M+H]⁺; t_R = 2.48分(系1); TLC: R_f = 0.11 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程２１.２：{５−[２−(２−ジメチルアミノ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル

ホルムアルデヒド(Ｈ_２Ｏ中３６％、０.１４４mL、１.８７mmol、２当量)を、{５−[２−(２−アミノ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(工程２１.３)(０.３４ｇ、０.９４mmol)およびナトリウムアセトキシボロハイドライド(０.６ｇ、２.８２mmol、３当量)の１,２−ジクロロエタン(１０mL)中の混合物に添加する。反応混合物を１時間、ｒｔで撹拌し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ_３ ^ａｑ、９９：０：１→９７：２：１)で精製して、０.２２２ｇの表題化合物を白色固体として得る：ESI-MS: 391.2 [M+H]⁺; t_R = 4.27分(系1); TLC: R_f = 0.15 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程２１.３：{５−[２−(２−アミノ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル

ＬｉＡｌＨ_４(ＴＨＦ中１Ｍ、３.０６mL、３.０６mmol、１.５当量)を、{５−[２−(シアノ−ジメチル−メチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(工程２１.４)(０.７３ｇ、２.０４mmol)のＴＨＦ(１０mL)溶液に、アルゴン雰囲気下添加する。反応混合物を２時間、ｒｔで撹拌し、Ｈ_２Ｏ(２０mL)の添加によりクエンチし、ＥｔＯＡｃ(２×７５mL)で抽出する。有機相をＮａＨＣＯ_３飽和溶液(２×５０mL)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ_３ ^ａｑ、９９：０：１→９４：５：１)で精製して、３１８mgの表題化合物を褐色固体として得る：ESI-MS: 363.1 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.11 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程２１.４：{５−[２−(シアノ−ジメチル−メチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル

表題化合物を工程１.３に準じるが、２−(４−ヨード−ピリジン−２−イル)−２−メチル−プロピオニトリル(工程２１.５)および(４−メチル−チアゾール−２−イル)−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(工程１８.４)を使用して製造する。反応混合物を３時間、１００℃で撹拌する。表題化合物：ESI-MS: 359.1 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.47 (Hex/EtOAc, 1:1)。

工程２１.５：２−(４−ヨード−ピリジン−２−イル)−２−メチル−プロピオニトリル

表題化合物を工程１９.３に準じるが、２−フルオロ−４−ヨードピリジンを使用して製造する。表題化合物：ESI-MS: 273.0 [M+H]⁺; t_R = 4.22分(系1); TLC: R_f = 0.36 (Hex/EtOAc, 9:1)。

実施例２２：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−ジエチルアミノ−ピリジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を１８時間、ｒｔで撹拌し、ＤＣＭ／Ｈ_２Ｏの添加によりクエンチし、ＤＣＭで抽出する。工程１.１において、反応混合物を１時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を１時間、１００℃で撹拌し、クエンチして、ＤＣＭで抽出する。工程１.３において、ジエチル−(４−ヨード−ピリジン−２−イル)−アミン(工程２２.１)を使用する。反応混合物を１６時間撹拌し、１２０℃、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチし、セライトのパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃで抽出する。
表題化合物：ESI-MS: 403.2 [M+H]⁺; t_R = 2.38分(系1); TLC: R_f = 0.10 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 91.5:7.5:1)。

工程２２.１：ジエチル−(４−ヨード−ピリジン−２−イル)−アミン

２−フルオロ−４−ヨードピリジン(２ｇ、８.９７mmol)、ジエチルアミン(２.７７ml、２６.９mmol、３当量)およびＫ_２ＣＯ_３(２.４８ｇ、１７.９４mmol、２当量)のＤＭＦ(２０mL)の混合物を、１８時間、１００℃で撹拌し、ｒｔに冷却し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏで希釈しＥｔＯＡｃで抽出する。有機相をＨ_２Ｏおよび塩水で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／Ｅｔ_２Ｏ、９８：２)で精製して、２.３ｇの表題化合物を黄色油状物として得る：ESI-MS: 277.1 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.52 (Hex/Et₂O, 98:2)。

実施例２３：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−ジエチルアミノ−ピリジン−４−イル)−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を１８時間、ｒｔで撹拌し、ＤＣＭ／Ｈ_２Ｏの添加によりクエンチし、ＤＣＭで抽出する。工程１.１において、反応混合物を１時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を１時間、１００℃で撹拌し、クエンチして、ＤＣＭで抽出する。工程１.３において、ジエチル−(４−ヨード−ピリジン−２−イル)−アミン(工程２２.１)およびＮ−チアゾール−２−イル−アセトアミドを使用する。反応混合物を５時間撹拌し、１２０℃、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチし、セライトのパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃで抽出する。
表題化合物：ESI-MS: 389.2[M+H]⁺; t_R=2.28分(系1); TLC: R_f = 0.34 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 91.5:7.5:1)。

実施例２４：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(３−ｔｅｒｔ−ブチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル)−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を５時間、ｒｔで撹拌する。工程１.１において、反応混合物を１４時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を１時間、８５℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.３において、６−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール(工程２４.１)およびＮ−チアゾール−２−イル−アセトアミドを使用する。反応混合物を７時間、１２０℃で撹拌する。
表題化合物：ESI-MS: 413.2 [M+H]⁺; t_R = 2.29分(系1); TLC: R_f = 0.45 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程２４.１：６−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール

４−ブロモ−Ｎ^＊２^＊−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンゼン−１,２−ジアミン(工程２４.２)(２.１４ｇ、８.８０mmol)およびトリエチルオルトホルメート(１４.７mL、８８mmol)の混合物を、１時間、１４８℃で撹拌し、冷却し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１：０→９９：１)で精製して、１.７４ｇの表題化合物を白色固体として得る：ESI-MS: 253.0/255.0 [M+H]⁺; t_R = 2.88分(系1); TLC: R_f = 0.54 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程２４.２：４−ブロモ−Ｎ ^＊ ２ ^＊ −ｔｅｒｔ−ブチル−ベンゼン−１,２−ジアミン

(５−ブロモ−２−ニトロ−フェニル)−ｔｅｒｔ−ブチル−アミン(工程２４.３)(６ｇ、２１.９７mmol)およびラネイニッケル(２ｇ)のＭｅＯＨ／ＴＨＦ(１：１ｖ／ｖ、６００mL)懸濁液を、９時間、ｒｔで、水素雰囲気下撹拌する。反応混合物をセライトのパッドを通して濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、９７：３→３：１)で精製して、４.４ｇの表題化合物を黒色油状物として得る：ESI-MS: 243.0/245.0 [M+H]⁺; t_R = 2.75分(系1); TLC: R_f = 0.89 (Hex/EtOAc, 1:1)。

工程２４.３：(５−ブロモ−２−ニトロ−フェニル)−ｔｅｒｔ−ブチル−アミン

４−ブロモ−２−フルオロ−ニトロベンゼン(４ｇ、１８.２mmol)およびｔｅｒｔ−ブチルアミン(４.７８mL、４５.５mmol、２.５当量)のＥｔＯＨ(８０mL)中の混合物を、１５時間、８５℃で撹拌し、冷却し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、１：０→９９：１)で精製して、４.８ｇの表題化合物をオレンジ色固体として得る：ESI-MS: 273.0/275.0 [M+H]⁺; t_R = 5.68分(系1); TLC: R_f = 0.49 (Hex/EtOAc, 9:1)。

実施例２５：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(３−ｔｅｒｔ−ブチル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル)−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。工程１.１において、反応混合物を１４時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を１時間、８５℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.３において、６−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール(工程２５.１)およびＮ−チアゾール−２−イル−アセトアミドを使用する。反応混合物を５時間撹拌し、１２０℃。
表題化合物：ESI-MS: 427.2 [M+H]⁺; t_R = 2.37分(系1); TLC: R_f = 0.38 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程２５.１：６−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール

６−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−２−エトキシメチル−２−メチル−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール(工程２５.２)(２.０４ｇ、６.５１mmol)およびＴＦＡ(１０ml)の混合物をｒｔで一夜撹拌し、ＮａＨＣＯ_３飽和溶液(１００mL)の添加によりクエンチし、ＥｔＯＡｃ(２×１５０mL)で抽出する。有機相をＮａＨＣＯ_３飽和溶液(２×５０mL)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１：０→９８：２)で精製して、１.０５ｇの表題化合物を白色固体として得る：ESI-MS: 267.0/269.0 [M+H]⁺; t_R = 2.99分(系1); TLC: R_f = 0.58 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程２５.２：６−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−２−エトキシメチル−２−メチル−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール

４−ブロモ−Ｎ^＊２^＊−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンゼン−１,２−ジアミン(工程２４.２)(２.１４ｇ、８.８０mmol)およびトリエチルオルトアセテート(１６.２mL、８８mmol、１０当量)の混合物を、１時間、１４２℃で撹拌し、冷却し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、１：０→９５：５)で精製して、２.０４ｇの表題化合物を紫色油状物として得る：ESI-MS: 313.0/315.0 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.67 (Hex/EtOAc, 9:1)。

実施例２６：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(３−エチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。工程１.１において、反応混合物を１５時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を３時間、８５℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.３において、６−ブロモ−１−エチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール(工程２６.１)およびＮ−チアゾール−２−イル−アセトアミドを使用する。反応混合物を１４時間、１２０℃で撹拌する。
表題化合物：ESI-MS: 399.1 [M+H]⁺; t_R = 1.73分(系1); TLC: R_f = 0.25 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程２６.１：６−ブロモ−１−エチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール

４−ブロモ−Ｎ^＊２^＊−エチル−ベンゼン−１,２−ジアミン(工程２６.２)(２ｇ、９.３mmol)およびトリエチルオルトホルメート(１５.５mL、９３mmol、１０当量)の混合物を、１時間、１４８℃で撹拌し、冷却し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１：０→９８：２)で精製して、２.０５ｇの表題化合物を白色固体として得る：ESI-MS: 225.1/227.1 [M+H]⁺; t_R = 2.31分(系1); TLC: R_f = 0.58 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程２６.２：４−ブロモ−Ｎ ^＊ ２ ^＊ −エチル−ベンゼン−１,２−ジアミン

(５−ブロモ−２−ニトロ−フェニル)−エチル−アミン(工程２６.３)(６ｇ、２４.４８mmol)およびラネイニッケル(２ｇ)のＭｅＯＨ／ＴＨＦ(１：１ｖ／ｖ、６００mL)懸濁液を、９時間、ｒｔで、水素雰囲気下撹拌する。反応混合物をセライトのパッドを通して濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、９５：５→８５：１５)で精製して、４.５１ｇの表題化合物を黒色油状物として得る：ESI-MS: 213.1/215.1 [M-H]^-; t_R = 2.53分(系1); TLC: R_f = 0.57 (Hex/EtOAc, 1:1)。

工程２６.３：(５−ブロモ−２−ニトロ−フェニル)−エチル−アミン

４−ブロモ−２−フルオロ−ニトロベンゼン(６ｇ、２７.３mmol)、メチルアミン(ＭｅＯＨ中２Ｍ、３４.１mL、６８.２mmol、２.５当量)およびＥｔＯＨ(８０mL)の混合物を、１５時間、８５℃で撹拌し、冷却し、濃縮する。残留物を摩砕により精製して、６ｇの表題化合物を黄色固体として得る：t_R = 5.13分(系1)。

実施例２７：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(５−{２−[１−(４−メトキシ−フェニル)−１−メチル−エチル]−ピリジン−４−イル}−４−メチル−チアゾール−２−イル)−アミド]

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を２４時間、ｒｔで撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチする。工程１.２において、反応混合物を２時間、１００℃で撹拌し、クエンチして、ＤＣＭで抽出する。工程１.３において、反応混合物を３時間、１００℃で撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチしＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.４において、１,２−ジクロロエタン(４.３mL／mmolのピリジン−４−オン)を溶媒として使用する。反応混合物を１時間、還流で撹拌し、ＮａＨＣＯ_３飽和溶液に注ぎ、ＤＣＭで抽出する。工程１.５において、反応混合物を２３時間、８０℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.６において、反応混合物を２１時間、ｒｔで撹拌する。工程１.７において、４−メトキシ−３−ブテン−２−オンのＴＨＦ溶液を、ＬｉＨＭＤＳのＴＨＦ中の冷(−７８℃)溶液に添加する。３０分間の後、２−(４−メトキシ−フェニル)−２−メチル−プロピオニルクロライド(工程２７.１)のＴＨＦを添加し、反応混合物を１６時間にわたりｒｔに到達させる。
表題化合物：ESI-MS: 480.0 [M+H]⁺; t_R = 3.05分(系1); TLC: R_f = 0.13 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 94:5:1)。

工程２７.１：２−(４−メトキシ−フェニル)−２−メチル−プロピオニルクロライド

表題化合物を工程５.１に準じるが、２−(４−メトキシ−フェニル)−２−メチル−プロピオン酸を使用し、反応混合物を３時間、還流で撹拌して製造する。

実施例２８：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(５−{２−[１−(４−メトキシ−フェニル)−１−メチル−エチル]−ピリジン−４−イル}−チアゾール−２−イル)−アミド]

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を１６時間、ｒｔで撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチする。工程１.２において、反応混合物を２時間、１００℃で撹拌し、クエンチして、ＤＣＭで抽出する。工程１.３において、Ｎ−チアゾール−２−イル−アセトアミドを使用する。反応混合物を５時間撹拌し、１００℃、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチしＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.４において、１,２−ジクロロエタン(４.３mL／mmolのピリジン−４−オン)を溶媒として使用する。反応混合物を１時間、還流で撹拌し、ＮａＨＣＯ_３飽和溶液に注ぎＤＣＭで抽出する。工程１.５において、反応混合物を２３時間、８０℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.６において、反応混合物を２１時間、ｒｔで撹拌する。工程１.７において、４−メトキシ−３−ブテン−２−オンのＴＨＦ溶液を、ＬｉＨＭＤＳのＴＨＦ中の冷(−７８℃)溶液に添加する。３０分間の後、２−(４−メトキシ−フェニル)−２−メチル−プロピオニルクロライド(工程２７.１)のＴＨＦを添加し、反応混合物を１６時間にわたりｒｔに到達させる。
表題化合物：ESI-MS: 466.1 [M+H]⁺; t_R = 2.91分(系1); TLC: R_f = 0.23 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 94:5:1)。

実施例２９：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(５−{２−[１−(４−メトキシ−フェニル)−シクロプロピル]−ピリジン−４−イル}−４−メチル−チアゾール−２−イル)−アミド]

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を２１時間、ｒｔで撹拌する、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチする。工程１.２において、反応混合物を３時間、１００℃で撹拌し、クエンチして、ＤＣＭで抽出する。工程１.３において、反応混合物を６時間、１００℃で撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチしＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.４において、１,２−ジクロロエタン(４.３mL／mmolのピリジン−４−オン)を溶媒として使用する。反応混合物を１時間、還流で撹拌し、ＮａＨＣＯ_３飽和溶液に注ぎＤＣＭで抽出する。工程１.５において、反応混合物を１８時間、８０℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.６において、反応混合物を１８時間、ｒｔで撹拌する。工程１.７において、４−メトキシ−３−ブテン−２−オンのＴＨＦ溶液を、ＬｉＨＭＤＳのＴＨＦ中の冷(−７８℃)溶液に添加する。３０分間の後、１−(４−メトキシ−フェニル)−シクロプロパンカルボニルクロライド(工程２９.１)のＴＨＦを添加し、反応混合物を１６時間にわたりｒｔに到達させる。
表題化合物：ESI-MS: 478.1 [M+H]⁺; t_R = 2.65分(系1); TLC: R_f = 0.09 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 94:5:1)。

工程２９.１：１−(４−メトキシ−フェニル)−シクロプロパンカルボニルクロライド

表題化合物を工程５.１に準じるが、１−(４−メトキシ−フェニル)−シクロプロピルカルボン酸を使用し、反応混合物を３時間、還流で撹拌して製造する。

実施例３０：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(５−{２−[１−(４−メトキシ−フェニル)−シクロプロピル]−ピリジン−４−イル}−チアゾール−２−イル)−アミド]

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を１６時間、ｒｔで撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチする。工程１.２において、反応混合物を３時間、１００℃で撹拌し、クエンチして、ＤＣＭで抽出する。工程１.３において、Ｎ−チアゾール−２−イル−アセトアミドを使用する。反応混合物を２８時間、１００℃で撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチしＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.４において、１,２−ジクロロエタン(４.３mL／mmolのピリジン−４−オン)を溶媒として使用する。反応混合物を１時間、還流で撹拌し、ＮａＨＣＯ_３飽和溶液に注ぎＤＣＭで抽出する。工程１.５において、反応混合物を１８時間、８０℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.６において、反応混合物を１８時間、ｒｔで撹拌する。工程１.７において、４−メトキシ−３−ブテン−２−オンのＴＨＦ溶液を、ＬｉＨＭＤＳのＴＨＦ中の冷(−７８℃)溶液に添加する。３０分間の後、１−(４−メトキシ−フェニル)−シクロプロパンカルボニルクロライド(工程２９.１)のＴＨＦを添加し、反応混合物を１６時間にわたりｒｔに到達させる。
表題化合物：ESI-MS: 464.1 [M+H]⁺; t_R = 2.90分(系1); TLC: R_f = 0.06 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 94:5:1)。

実施例３１：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−{１−[４−(３−ジメチルアミノ−プロポキシ)−フェニル]−１−メチル−エチル}−ピリジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を１８時間、ｒｔで撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチする。工程１.２において、反応混合物を７時間、１００℃で撹拌しクエンチして、ＤＣＭで抽出する。工程１.３において、(３−{４−[１−(４−ブロモ−ピリジン−２−イル)−１−メチル−エチル]−フェノキシ}−プロピル)−ジメチル−アミン(工程３１.１)を使用する。反応混合物を２時間、１２０℃で撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチしＥｔＯＡｃで抽出する。
表題化合物：ESI-MS: 551.1 [M+H]⁺; t_R = 2.38分(系1); TLC: R_f = 0.05 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 94:5:1)。

工程３１.１：(３−{４−[１−(４−ブロモ−ピリジン−２−イル)−１−メチル−エチル]−フェノキシ}−プロピル)−ジメチル−アミン

水酸化ナトリウム(ペレットを微粉砕、０.４８８ｇ、１２.２mmol、５当量)を、４−[１−(４−ブロモ−ピリジン−２−イル)−１−メチル−エチル]−フェノール(工程３１.２)(０.７１４ｇ、２.４４mmol)のＤＭＦ(５mL)溶液に添加する。混合物を、２０分間、ｒｔで撹拌する。３−ジメチルアミノ−１−プロピルクロライドヒドロクロライド(０.６１１ｇ、３.８７mmol、１.６当量)を添加する。反応混合物を９０℃に加熱し、１０時間撹拌し、冷却し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機相をＨ_２Ｏおよび塩水で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ_３ ^ａｑ、９４：５：１)で精製して、０.３９８ｇの表題化合物を不純褐色油状物として得て、それをさらに精製せずに使用する：ESI-MS: 377.1/379.0 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.22 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 94:5:1)。

工程３１.２：４−[１−(４−ブロモ−ピリジン−２−イル)−１−メチル−エチル]−フェノール

ＢＢｒ_３(１ＭのＤＣＭ、２３mmol、８当量)を４−ブロモ−２−[１−(４−メトキシ−フェニル)−１−メチル−エチル]−ピリジン(工程３１.３)(０.８７８ｇ、２.８７mmol)のＤＣＭ(４２mLの)冷(０℃)溶液に、アルゴン雰囲気下滴下する。反応混合物を１時間撹拌し、０℃、ｒｔに温め、１８時間撹拌し、０℃に冷却し、無水ＭｅＯＨの添加によりクエンチする。混合物を濃縮し、６Ｍ ＨＣｌ水溶液で希釈し、１時間撹拌し、ｐＨ７に中和し、ＤＣＭで抽出する。有機相を乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物を精製せずに使用する。

工程３１.３：４−ブロモ−２−[１−(４−メトキシ−フェニル)−１−メチル−エチル]−ピリジン

表題化合物を工程１.４〜１.７に準じるが、以下の改変をして製造する。工程１.４において、１,２−ジクロロエタン(４.３mL／mmolのピリジン−４−オン)を溶媒として使用する。反応混合物を１時間、還流で撹拌し、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液に注ぎ、ＤＣＭで抽出する。工程１.５において、反応混合物を２３時間、８０℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.６において、反応混合物を２１時間、ｒｔで撹拌する。工程１.７において、４−メトキシ−３−ブテン−２−オンのＴＨＦ溶液を、ＬｉＨＭＤＳのＴＨＦ中の冷(−７８℃)溶液に添加する。３０分間の後、２−(４−メトキシ−フェニル)−２−メチル−プロピオニルクロライド(工程２７.１)のＴＨＦを添加し、反応混合物を１６時間にわたりｒｔに到達させる。
表題化合物：ESI-MS: 306.0/308.0 [M+H]⁺; t_R = 3.94分(系1); TLC: R_f = 0.55 (Hex/EtOAc, 7: 3)。

実施例３２：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１−ｄ _３ −メチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を１８時間、ｒｔで撹拌し、ＤＣＭ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチし、ＤＣＭで抽出する。工程１.１において、反応混合物を１時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を１時間、１００℃で撹拌し、クエンチして、ＤＣＭで抽出する。工程１.３において、パラジウム触媒を、残りの反応材の加熱混合物に添加し、得られた混合物を、１時間、１２０℃で撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏで希釈しＥｔＯＡｃで抽出する。有機相の乾燥および濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、１：４)で精製する。工程１.５において、反応混合物を３時間、８０℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.７において、４−メトキシ−３−ブテン−２−オンのＴＨＦ溶液を、ＬｉＨＭＤＳのＴＨＦ中の冷(−７８℃)溶液に添加する。３０分間の後、１−ｄ_３−メチル−シクロブタンクロライド(工程３２.１)のＴＨＦを添加し、反応混合物を１６時間にわたりｒｔに到達させる。
表題化合物：ESI-MS: 403.2 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.22 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 91.5:7.5:1)。

工程３２.１：１−ｄ _３ −メチル−シクロブタンカルボニルクロライド

表題化合物を工程５.１に準じるが、記載の方法[Cowling, S. J.; Goodby, J. W., Chemical Communications, (2006), (39), 4107-4109]に準じるが、ｄ_３−メチル−アイオダイドを使用して製造した１−ｄ_３−メチル−シクロブタンカルボン酸を使用して製造する。

実施例３３：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(１−ｄ _３ −メチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を１８時間、ｒｔで撹拌し、ＤＣＭ／Ｈ_２Ｏの添加によりクエンチし、ＤＣＭで抽出する。工程１.１において、反応混合物を１時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を１時間、１００℃で撹拌し、クエンチして、ＤＣＭで抽出する。工程１.３において、Ｎ−チアゾール−２−イル−アセトアミドを使用する。パラジウム触媒を、残りの反応材の加熱混合物に添加する。得られた混合物を、７時間、１２０℃で撹拌し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏで希釈し、セライトのパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機相の乾燥および濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、１：４)で精製する。工程１.５において、反応混合物を３時間、８０℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.７において、４−メトキシ−３−ブテン−２−オンのＴＨＦ溶液を、ＬｉＨＭＤＳのＴＨＦ中の冷(−７８℃)溶液に添加する。３０分間の後、１−ｄ_３−メチル−シクロブタンクロライド(工程３２.１)のＴＨＦを添加し、反応混合物を１６時間にわたりｒｔに到達させる。
表題化合物：ESI-MS: 389.2 [M+H]⁺; t_R = 2.30分(系1); TLC: R_f = 0.11 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 91.5:7.5:1)。

実施例３４：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−ｄ _３ −メチル−５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。工程１.１において、反応混合物を８時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を１時間、８５℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.３において、２−アセトアミド−４−ｄ_３−メチル−チアゾール(工程３４.１)を使用する。反応混合物を２時間、１２０℃で撹拌する。工程１.５において、反応混合物を１時間、６５−７０℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.７において、１−メチル−シクロプロパンカルボニルクロライド(工程５.１)を使用する。
表題化合物：ESI-MS: 389.2 [M+H]⁺; t_R = 2.12分(系1); TLC: R_f = 0.35 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程３４.１：２−アセトアミド−４−ｄ _３ −メチル−チアゾール

１−ブロモ−プロパン−２−オン−ｄ_５[Challacombe, K. et al, Journal of Chemical Society Perkin Trans. I, (1988), 2213-2218](１.２５ｇ、８.８mmol)および１−アセチル−２−チオウレア(１ｇ、８.８mmol)のＥｔＯＨ(２０mL)中の混合物を、２時間、８５℃撹拌し、冷却し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、８５：１５→１：１)で精製して、１.０８ｇの表題化合物をオレンジ色固体として得る：ESI-MS: 160.0 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.25 (Hex/EtOAc, 1:1)。

実施例３５：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−ｄ _３ −メチル−５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。工程１.１において、反応混合物を８時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を１時間、８５℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.３において、２−アセトアミド−４−ｄ_３−メチル−チアゾール(工程３４.１)を使用する。反応混合物を２時間、１２０℃で撹拌する。工程１.４において、反応混合物を１時間、８３℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.５において、反応混合物を１時間、６５℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.６において、粗生成物を精製しない。工程１.７において、３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオニルクロライド(工程１２.１)を使用する。
表題化合物：API-ES-MS: 445.1 [M+H]⁺; t_R = 3.00分(系1); TLC: R_f = 0.51 (DCM/MeOH, 9:1)。

実施例３６：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−ジメチルアミノメチル−５−[２−(１−ｄ _３ −メチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を１８時間、ｒｔで撹拌し、ＤＣＭ／Ｈ_２Ｏの添加によりクエンチし、ＤＣＭで抽出する。工程１.１において、反応混合物を２時間、還流で撹拌する。工程１.２において、Ｎ−{４−ジメチルアミノメチル−５−[２−(１−ｄ_３−メチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アセトアミド(工程３６.１)を使用する。反応混合物を１時間、１００℃で撹拌し、クエンチして、ＤＣＭで抽出する。
表題化合物：ESI-MS: 446.1 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.40 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 89:10: 1)。

工程３６.１：Ｎ−{４−ジメチルアミノメチル−５−[２−(１−ｄ _３ −メチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アセトアミド

Ｎ−{４−ブロモメチル−５−[２−(１−ｄ_３−メチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アセトアミド(工程３６.２)(１５０mg、０.３９１mmol)、ジメチルアミンヒドロクロライド(３８.３mg、０.４７０mmol、１.２当量)および炭酸セシウム(２９３mg、０.９００mmol、２.３当量)のＤＭＦ(２mL)中の混合物を、撹拌する２時間、ｒｔ、ＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機相をＨ_２Ｏおよび塩水で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をＥｔ_２Ｏでの摩砕により精製して、８９mgの表題化合物を白色固体として得る：ESI-MS: 348.2 [M+H]⁺。

工程３６.２：Ｎ−{４−ブロモメチル−５−[２−(１−ｄ _３ −メチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アセトアミド

ＮＢＳ(５５４mg、３.０６mmol、１.１当量)を、Ｎ−{４−メチル−５−[２−(１−ｄ_３−メチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アセトアミド(工程３６.３)(８４６mg、２.７８mmol)のＣＣｌ_４(２０mL)およびＣＨＣｌ_３(１６mL)中の溶液に添加する。反応混合物を１時間撹拌し、ｒｔ、Ｈ_２Ｏおよび塩水で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、１：４)で精製して、５７２mgの表題化合物を薄黄色固体として得る：ESI-MS: 383.0/385.0 [M+H]⁺; t_R = 3.12分(系1); TLC: R_f = 0.45 (Hex/EtOAc, 1: 4)。

工程３６.３：Ｎ−{４−メチル−５−[２−(１−ｄ _３ −メチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アセトアミド

表題化合物を工程１.３〜１.７に準じるが、以下の改変をして製造する。工程１.３において、反応混合物を１時間撹拌し、１２０℃およびＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏでの希釈によりクエンチする。工程１.５において、反応混合物を３時間、８０℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.７において、４−メトキシ−３−ブテン−２−オンのＴＨＦ溶液を、ＬｉＨＭＤＳのＴＨＦ中の冷(−７８℃)溶液に添加する。３０分間の後、１−ｄ_３−メチル−シクロブタンクロライド(工程３２.１)のＴＨＦを添加し、反応混合物を１６時間にわたりｒｔに到達させる。
表題化合物：ESI-MS: 305.2 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.24 (Hex/EtOAc, 1: 4)。

実施例３７：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−クロロ−５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

４−クロロ−５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミン(工程３７.１)(１００mg、０.３１１mmol)およびホスゲン(０.１６４mL、０.３１１mmol)のピリジン(２mL)中の混合物を、１時間、１０５℃で撹拌する。Ｌ−プロリンアミド(１０６mg、０.９３２mmol、３当量)を添加する。得られた混合物を、３０分間、１０５℃で撹拌し、冷却し、ＮａＨＣＯ_３飽和溶液(１００mL)の添加によりクエンチし、ＥｔＯＡｃ(２×１００mL)で抽出する。有機相をＮａＨＣＯ_３飽和溶液で洗浄し(１００mL)、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、９９：１→９４：６)で精製して、４６mgの表題化合物を黄色固体として得る：ESI-MS: 461.9 [M+H]⁺; t_R = 3.60分(系1); TLC: R_f = 0.28 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程３７.１：４−クロロ−５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミン

表題化合物を工程１.２〜１.７に準じるが、以下の改変をして製造する。工程１.２において、反応混合物を３時間、８５℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.３において、Ｎ−(４−クロロ−チアゾール−２−イル)−アセトアミド(工程３７.２)を使用する。反応混合物を２時間、１２０℃で撹拌する。工程１.４において、反応混合物を１時間、８３℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.５において、反応混合物を１時間、６５℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.６において、粗生成物を精製しない。工程１.７において、３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオニルクロライド(工程１２.１)を使用する。
表題化合物：ESI-MS: 322.1 [M+H]⁺; t_R = 3.58分(系1); TLC: R_f = 0.45 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程３７.２：Ｎ−(４−クロロ−チアゾール−２−イル)−アセトアミド

Ｎ−(４−オキソ−４,５−ジヒドロ−チアゾール−２−イル)−アセトアミド(工程３７.３)(１４.８ｇ、９４mmol)およびＰＯＣｌ_３(１７５mL、２０当量)の混合物を１０５℃に加熱し、１５分間撹拌し、冷却し、濃縮する。残留物を氷Ｈ_２Ｏに注ぎ、ＥｔＯＡｃ(２×１００mL)で抽出する。有機相をＮａＨＣＯ_３飽和溶液で洗浄し(２×１００mL)、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、９９：１)で精製して、１３.９ｇの表題化合物を白色固体として得る：ESI-MS: 177.0 [M+H]⁺; t_R = 2.74分(系1); TLC: R_f = 0.66 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程３７.３：Ｎ−(４−オキソ−４,５−ジヒドロ−チアゾール−２−イル)−アセトアミド

シュードチオヒダントイン(１６ｇ、１３８mmol)および酢酸無水物(１６.９mL、１７９mmol、１.３当量)のピリジン(１５０mL)中の混合物を１１５℃に加熱し、１時間攪拌し、冷却する。得られた沈殿を濾過により回収して、１２.６４ｇの表題化合物を褐色固体として得る：ESI-MS: 159.0 [M+H]⁺。

実施例３８：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−フルオロメチル−５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を１８時間、ｒｔで撹拌し、ＤＣＭ／Ｈ_２Ｏの添加によりクエンチし、ＤＣＭで抽出する。工程１.１において、反応混合物を１時間、還流で撹拌し、濃縮し、得られた粗物質を精製せずに使用する。工程１.２において、Ｎ−{４−フルオロメチル−５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アセトアミド(工程３８.１)を使用する。反応混合物を１時間、１００℃で撹拌し、クエンチして、ＤＣＭで抽出する。粗物質を精製しない。
表題化合物：ESI-MS: 460.0 [M+H]⁺; TLC: R_f = 0.44 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 91.5:7.5:1]

工程３８.１：Ｎ−{４−フルオロメチル−５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アセトアミド

表題化合物を工程１.３〜１.７に準じるが、以下の改変をして製造する。工程１.３において、Ｎ−(４−フルオロメチル−チアゾール−２−イル)−アセトアミド(工程３８.２)を使用する。反応混合物を７時間、９０℃で、５時間、１００℃で撹拌し、ＥｔＯＡｃおよびＨ_２Ｏでの希釈によりクエンチする。工程１.５において、反応混合物を１時間、６５℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.６において、粗生成物を精製しない。工程１.７において、３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオニルクロライド(工程１２.１)を使用する。
表題化合物：ESI-MS: 362.1 [M+H]⁺; t_R = 4.18分(系1); TLC: R_f = 0.29 (Hex/EtOAc, 1:1)。

工程３８.２：Ｎ−(４−フルオロメチル−チアゾール−２−イル)−アセトアミド

１−クロロ−３−フルオロ−プロパン−２−オン(工程３８.３)(１.１４ｇ、１０.３mmol)およびＮ−アセチル−２−チオウレア(１.２２ｇ、１０.３mmol)のＥｔＯＨ(１０mL)中の混合物を、１.５時間、還流で撹拌し、冷却し、濃縮する。残留物をＤＣＭ／Ｈ_２Ｏに溶解し、ＤＣＭで抽出する。有機相を乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、１：１)で精製して、０.１４３ｇの表題化合物を得る：ESI-MS: 173.1 [M-H]^-; t_R = 1.98分(系1); TLC: R_f = 0.21 (Hex/EtOAc, 1:1)。

工程３８.３：１−クロロ−３−フルオロ−プロパン−２−オン

１−フルオロ−３−クロロイソプロパノール(２.７mL、３１.２mmol)を、３０mLのジョーンズ試薬(２３０mLの濃縮硫酸を、７００mLのＨ_２Ｏ中の２６７ｇの三酸化クロムに添加し、Ｈ_２Ｏで１Ｌに希釈することにより製造)を含むフラスコにゆっくり添加し、５℃に冷却する。反応混合物をｒｔに温め、１８時間撹拌し、ＮａＨＣＯ_３飽和溶液に注ぎ、Ｅｔ_２Ｏで抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ)で精製して、１.１４ｇの表題化合物を不純黄色油状物として得る。

実施例３９：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(５−ベンゼンスルホニルアミノ−６−クロロ−ピリジン−３−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を工程１.３に準じるが、以下の改変をして製造する。(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(４−メチル−チアゾール−２−イル)−アミド](工程３９.２)およびＮ−(５−ブロモ−２−クロロ−ピリジン−３−イル)−ベンゼンスルホンアミド(工程３９.１)を使用する。パラジウム触媒を、残りの反応材の加熱混合物に添加し、得られた混合物を、３時間、１３５℃で撹拌し、ＥｔＯＡｃおよびＨ_２Ｏで希釈し、セライトのパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機相の乾燥および濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーおよび逆相ＨＰＬＣで精製する。表題化合物：ESI-MS: 519.0/521.1 [M-H]^-; t_R = 3.33分(系1); TLC: R_f = 0.09 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 84: 15:1)。

工程３９.１：Ｎ−(５−ブロモ−２−クロロ−ピリジン−３−イル)−ベンゼンスルホンアミド

ベンゼンスルホニルクロライド(１.２３mL、９.６２mmol、２当量)のＤＣＭ(５０mL)溶液を１５分間にわたり、３−アミノ−５−ブロモ−２−クロロピリジン[Jouve, K.; Bergman, J., Journal of Heterocyclic Chemistry, (2003), 40(2), 261-268](１ｇ、４.８１mmol)およびピリジン(１.９４ml、２４mmol、５当量)のＤＣＭ(２０mL)溶液に、アルゴン雰囲気下滴下する。得られた混合物を、２０時間、ｒｔで撹拌し、濃縮し、Ｈ_２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ)で精製して、１６３mgの表題化合物を白色固体として得る：ESI-MS: 346.9 [M-H]^-; t_R = 4.33分(系1); TLC: R_f = 0.23 (DCM)。

工程３９.２：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(４−メチル−チアゾール−２−イル)−アミド]

表題化合物を実施例１に準じるが、イミダゾール−１−カルボン酸(４−メチル−チアゾール−２−イル)−アミド(工程３９.３)を使用して製造する。反応混合物を１８時間、ｒｔで撹拌し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ_３ ^ａｑ、９４：５：１)、Ｅｔ_２Ｏでの摩砕により精製する。表題化合物: ESI-MS: 253.2 [M-H]^-; TLC: R_f = 0.18 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 84: 15:1)。

工程３９.３：イミダゾール−１−カルボン酸(４−メチル−チアゾール−２−イル)−アミド

表題化合物を工程１.１に準じるが、２−アセトアミド−４−メチルチアゾールを使用し、反応混合物を５.５時間、還流で撹拌して製造する。

実施例４０：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(５−ベンゼンスルホニルアミノ−６−クロロ−ピリジン−３−イル)−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を工程１.３に準じるが、以下の改変をして製造する。(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−チアゾール−２−イルアミド(工程４０.１)およびＮ−(５−ブロモ−２−クロロ−ピリジン−３−イル)−ベンゼンスルホンアミド(工程３９.１)を使用する。パラジウム触媒を、残りの反応材の加熱混合物に添加し、得られた混合物を、６時間、１２０℃で撹拌し、濃縮し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨで希釈し、セライトのパッドを通して濾過し、濾液を濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーおよび逆相ＨＰＬＣで精製する。表題化合物：ESI-MS: 506.9 [M+H]⁺; t_R = 3.21分(系1)。

工程４０.１：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−チアゾール−２−イルアミド

表題化合物を実施例１に準じるが、イミダゾール−１−カルボン酸チアゾール−２−イルアミド(工程４０.２)を使用して製造する。反応混合物を１８時間、ｒｔで撹拌し、濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ_３ ^ａｑ、９４：５：１)、ＥｔＯＡｃでの摩砕により精製する。表題化合物：ESI-MS: 239.2 [M-H]^-; TLC: R_f = 0.11 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 84: 15:1)。

工程４０.２：イミダゾール−１−カルボン酸チアゾール−２−イルアミド

表題化合物を工程１.１に準じるが、Ｎ−チアゾール−２−イル−アセトアミドを使用し、反応混合物を５時間、還流で撹拌して製造する。

実施例４１：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(６−アミノ−５−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を工程１.３に準じるが、以下の改変をして製造する。(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(４−メチル−チアゾール−２−イル)−アミド](工程３９.２)および５−ブロモ−３−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミン(ＷＯ２００７０９５５８８)を使用する。パラジウム触媒を、残りの反応材の加熱混合物に添加し、得られた混合物を、３時間、１２０℃で撹拌し、ＤＣＭ／Ｈ_２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出する。有機相の乾燥および濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーおよび逆相ＨＰＬＣで精製する。表題化合物：ESI-MS: 413.1 [M-H]^-; TLC: R_f = 0.27 (DCM/MeOH/NH₃ ^aq, 89:10: 1)。

実施例４２：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

イミダゾール−１−カルボン酸{４−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド(４.０ｇ)を、撹拌しているＬ−プロリンアミド(１.４８ｇ)およびトリエチルアミン(４.１ml)のＤＭＦ(４６ml)溶液に室温で添加する。反応混合物を室温で２２時間静置し、蒸発させ、表題化合物をメタノール(６０ml)および水(２０ml)から結晶化後、白色固体として得る。HPLC/MS: 保持時間1.24分, M+H 387.1およびM-H 385.2。

工程４２.１：イミダゾール−１−カルボン酸{４−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド

カルボニルジイミミダゾール(４.５６ｇ)を、４−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミン(１０.５ｇ)およびトリエチルアミン(４.２８ml)のＤＭＦ(２６ml)溶液に室温で添加し、２時間、８０℃で加熱する。冷却後表題化合物を濾過により単離する。

工程４２.２：４−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミン

粉末化水酸化ナトリウム(５.８６ｇ)を、Ｎ'−[５−(３−ジメチルアミノ−アクリロイル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−Ｎ,Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン(１３ｇ、S. Wang et al J. Med. Chem. 2004, 47, 1662-1675.に記載の通り製造)および１−メチル−シクロプロパンカルボキシアミジンヒドロクロライド(７.２ｇ、ＥＰ０２２７４１５に記載の通り製造)の２−メトキシエタノール(９８ml)予液に添加し、混合物を１２５℃で１時間、撹拌しながら加熱する。反応混合物を冷却し、水を添加し、表題化合物を濾過により単離する。ESI-MS: M+H 247およびM-H 245。

実施例４３：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−イソプロピル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

イミダゾール−１−カルボン酸[５−(２−イソプロピル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド(５０mg)を、Ｌ−プロリンアミド(１９mg)およびトリエチルアミン(２６μl)のＤＭＦ(１５２μl)溶液に室温で添加する。混合物を、２時間、４０℃で撹拌し、分取逆相クロマトグラフィーで精製する。表題化合物含有フラクションを３００mg BondElut SPE、ＳＣＸカートリッジで捕捉し、７Ｍアンモニアのメタノール溶液(１ml)で遊離する。表題化合物を蒸発により得る。ESI-MS: M+H 275およびM-H 273。

工程４３.１：イミダゾール−１−カルボン酸{４−メチル−５−[２−イソプロピル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド

表題化合物を実施例４２に準じるが、４−メチル−５−[２−イソプロピル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用して製造する。

実施例４４：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−ベンジル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を実施例４３に準じるが、４−メチル−５−[２−ベンジル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−イソプロピル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用して製造する。ESI-MS: M+H 423およびM-H 421。

実施例４５：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−エチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を実施例４３に準じるが、４−メチル−５−[２−エチル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−イソプロピル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用して製造する。ESI-MS: M+H 361およびM-H 359。

実施例４６：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−メトキシメチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を実施例４３に準じるが、４−メチル−５−[２−メトキシメチル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−イソプロピル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用して製造する。ESI-MS: M+H 377およびM-H 375。

実施例４７：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(２,６−ジクロロ−ベンジル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例４３に準じるが、４−メチル−５−[２−(２,６−ジクロロ−ベンジル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−イソプロピル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用して製造する。ESI-MS: M+H 491, 493およびM-H 489, 491。

実施例４８：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−イソブチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を実施例４３に準じるが、４−メチル−５−[２−イソブチル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−イソプロピル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用して製造する。ESI-MS: M+H 389およびM-H 387。

実施例４９：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(４−メトキシ−フェノキシメチル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例４３に準じるが、４−メチル−５−[２−(４−メトキシ−フェノキシメチル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−イソプロピル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用して製造する。ESI-MS: M+H 469およびM-H 467。

実施例５０：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(３−メトキシ−フェノキシメチル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例４３に準じるが、４−メチル−５−[２−(３−メトキシ−フェノキシメチル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−イソプロピル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用して製造する。ESI-MS M-H 467。

実施例５１：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(２−フルオロ−フェニル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)

イミダゾール−１−カルボン酸{５−[２−(２−フルオロ−フェニル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド(４１５mg)を、Ｌ−プロリンアミド(１３７mg)およびトリエチルアミン(１８２μl)のＤＭＦ(１.１ml)溶液に室温で添加する。混合物を、１８時間、４０℃で撹拌し、蒸発させ、メタノール(８ml)および水(２ml)から結晶化させて、表題化合物を白色固体として得る。ESI-MS: M+H 427およびM-H 425。

工程５１.１：イミダゾール−１−カルボン酸{５−[２−(２−フルオロ−フェニル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド

表題化合物を実施例４３に準じるが、４−メチル−５−[２−(２−フルオロ−フェニル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用して製造する。

実施例５２：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−トリフルオロメチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

Ｌ−プロリンアミド(９mg)を、イミダゾール−１−カルボン酸[５−(２−トリフルオロメチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド(２５mg)およびトリエチルアミン(１２μl)のＤＭＦ(７１μl)溶液に室温で添加する。混合物を、１８時間、２５℃で撹拌し、分取逆相クロマトグラフィーで精製する。表題化合物含有フラクションを３００mg BondElut SPE、ＳＣＸカートリッジで捕捉し、７Ｍアンモニアのメタノール溶液(１ml)で遊離する。表題化合物を蒸発により得る。ESI-MS: M+H 401およびM-H 399。

工程５２.１：イミダゾール−１−カルボン酸{４−メチル−５−[２−トリフルオロメチル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド

表題化合物を実施例４３に準じるが、４−メチル−５−[２−トリフルオロメチル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用して製造する。

実施例５３：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１,１,２−トリメチル−プロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例５１に準じるが、４−メチル−５−[２−(１,１,２−トリメチル−プロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−(２−フルオロ−フェニル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用して製造する。ESI-MS: M+H 417およびM-H 415。

実施例５４：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(５−{２−[１−(４−メトキシ−フェニル)−１−メチル−エチル]−ピリミジン−４−イル}−４−メチル−チアゾール−２−イル)−アミド]

表題化合物を実施例５１に準じるが、５−{２−[１−(４−メトキシ−フェニル)−１−メチル−エチル]−ピリミジン−４−イル}−４−メチル−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−(２−フルオロ−フェニル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用して製造する。ESI-MS: M+H 495およびM-H 493。

実施例５５：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を６時間、ｒｔで撹拌する。工程１.１において、反応混合物を１５時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を１時間、１００℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.３において、反応混合物を２時間、１２０℃で撹拌する。工程１.４において、反応混合物を３０分間、８５℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.５において、反応混合物を１時間、６５℃で撹拌し、ＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.６において、粗生成物を精製しない。工程１.７において、３−フルオロ−２−フルオロメチル−２−メチル−プロピオニルクロライド(工程５５.１)を使用する。
表題化合物：ESI-MS: 424.1 [M+H]⁺; t_R = 2.40分(系1); TLC: R_f = 0.35 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程５５.１：３−フルオロ−２−フルオロメチル−２−メチル−プロピオニルクロライド

表題化合物を工程５.１に準じるが、３−フルオロ−２−フルオロメチル−２−メチル−プロピオン酸を使用して製造する(工程５５.２)。

工程５５.２：３−フルオロ−２−フルオロメチル−２−メチル−プロピオン酸

表題化合物を工程７３.２に準じるが、３−フルオロ−２−フルオロメチル−２−メチル−プロピオン酸メチルエステル(製造ＷＯ２００７／０５３３９４)を使用して製造する。ESI-MS: 137.0[M-H]^-。

実施例５６：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１,１−ジメチル−プロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例４３に準じるが、４−メチル−５−[２−(１,１−ジメチル−プロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−イソプロピル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用して製造する。ESI-MS: M+H 403およびM-H 401。

実施例５７：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１−メチル−１−ｐ−トリル−エチル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例４３に準じるが、４−メチル−５−[２−(１−メチル−１−ｐ−トリル−エチル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−イソプロピル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用して製造する。ESI-MS: M+H 479およびM-H 477。

実施例５８：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１−フェニル−シクロペンチル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例４３に準じるが、４−メチル−５−[２−(１−フェニル−シクロペンチル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−イソプロピル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用して製造する。ESI-MS: M+H 477およびM-H 475。

実施例５９：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−シクロプロピル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例４３に準じるが、４−メチル−５−[２−シクロプロピル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−イソプロピル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用して製造する。ESI-MS: M+H 373およびM-H 371。

実施例６０：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−シクロブチル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例５２に準じるが、４−メチル−５−[２−シクロブチル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−トリフルオロメチル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用して製造する。ESI-MS: M+H 387およびM-H 385。

実施例６１：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−ｄ _９ −ｔｅｒｔ−ブチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

イミダゾール−１−カルボン酸[５−(２−ｄ_９−ｔｅｒｔ−ブチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド(０.８２ｇ)を、撹拌しているＬ−プロリンアミド(０.２９ｇ)およびトリエチルアミン(０.８１ml)のＤＭＦ(５ml)溶液に室温で添加する。反応混合物を室温で２２時間静置し、蒸発させ、表題化合物を２回２：１ メタノール：水で結晶化後に白色固体として得る。HPLC/MS: 保持時間1.27分, M+H 398.3およびM-H 396.3。

工程６１.１：イミダゾール−１−カルボン酸[５−(２−ｄ _９ −ｔｅｒｔ−ブチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド

カルボニルジイミミダゾール(０.７７ｇ)を、撹拌している５−(２−ｄ_９−ｔｅｒｔ−ブチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イルアミン(１.１１ｇ)のＤＭＦ(４.３ml)溶液に室温で添加する。反応混合物を１８時間、２５℃で静置し、その後表題化合物を濾過により単離する。

工程６１.２：５−(２−ｄ _９ −ｔｅｒｔ−ブチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イルアミン

粉末化水酸化ナトリウム(３.７１ｇ)を、Ｎ'−[５−(３−ジメチルアミノ−アクリロイル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−Ｎ,Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン(５.５１ｇ)およびｄ_９−２,２−ジメチル−プロピオンアミジンヒドロクロライド(４.５０ｇ)の２−メトキシエタノール(４１ml)溶液に添加し、混合物を１２５℃で１時間、撹拌しながら加熱する。反応混合物を冷却し、水を添加し、粗生成物を濾過により単離する。粗生成物を分取ＨＰＬＣで精製し、表題化合物含有フラクションをジクロロメタンおよび水性重炭酸ナトリウムに分配する。表題化合物を乾燥させたジクロロメタン層の蒸発後に黄色固体として得る。HPLC/MS: 保持時間1.12分, M+H 258.4。

工程６１.３：ｄ _９ −２,２−ジメチル−プロピオンアミジンヒドロクロライド

トルエン中２Ｍ溶液のトリメチルアルミニウム(６１ml)を塩化アンモニウム(６.５３ｇ)のトルエン(４６ml)懸濁液に滴下し、氷浴で冷却する。反応混合物を４時間、室温で撹拌し、ｄ_９−２,２−ジメチル−プロピオン酸ブチルエステル(６.３ｇ)を添加する。８０℃で４日間加熱後、反応混合物を０℃に冷却し、メタノール(２００ml)を滴下する。１時間撹拌および超音波処理後、室温反応混合物をHyfloを通して濾過し、メタノールで洗浄し、濾液を蒸発させて、表題化合物灰白色固体として得る。

工程６１.４：ｄ _９ −２,２−ジメチル−プロピオン酸ブチルエステル

ｄ_９−ｔｅｒｔ−ブチルクロライド(５.０ｇ)を、マグネシウム(１.５０ｇ)のテトラヒドロフラン(２０ml)懸濁液に少しずつ添加し、触媒量のヨウ素で、必要に応じて一定の乾留を維持しながら１時間にわたり加熱して活性化する。反応混合物をさらに１時間加熱して、グリニャール形成の完了を確実にする。上記グリニャール溶液をイミダゾール−１−カルボン酸ブチルエステル(７.５ｇ、T. WernerおよびA.G.M. Barrett J. Org. Chem. 2006, 71, 4302-4304.に記載の通りにｓ映像)のテトラヒドロフラン(４０ml)溶液に滴下し、氷浴で冷却する。反応混合物を１８時間撹拌し、室温、水(２００ml)を添加し、混合物をHyfloを通して濾過し、濾液をジエチルエーテルで抽出し、ジエチルエーテル層を硫酸ナトリウムで乾燥させて、蒸発させて、表題化合物を得る。

実施例６２：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(２−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

イミダゾール−１−カルボン酸{４−メチル−５−[２−(２−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド(５０mg)を、撹拌しているＬ−プロリンアミド(１８mg)およびトリエチルアミン(２５μl)のＤＭＦ(１４７μl)溶液に室温で添加する。反応混合物を４０℃で２時間撹拌し、分取逆相クロマトグラフィーで精製する。表題化合物含有フラクションを３００mg BondElut SPE、ＳＣＸカートリッジで捕捉し、７Ｍアンモニアのメタノール溶液(１ml)で遊離する。表題化合物を蒸発により得る。ESI-MS: M+H 387およびM-H 385。

工程６２.１：イミダゾール−１−カルボン酸{４−メチル−５−[２−(２−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド

カルボニルジイミミダゾール(４８７mg)を、４−メチル−５−[２−(２−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミン(３７０mg)およびトリエチルアミン(２５１μl)のＤＭＦ(１.５ml)溶液に室温で添加し、２時間、４０℃で加熱する。反応混合物を蒸発させ、クロロホルムで摩砕する。表題化合物を濾過により単離する。

工程６２.２：４−メチル−５−[２−(２−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミン

粉末化水酸化ナトリウム(３００mg)を、Ｎ'−[５−(３−ジメチルアミノ−アクリロイル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−Ｎ,Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン(１ｇ、S. Wang et al J. Med. Chem. 2004, 47, 1662-1675.に記載の通り製造)およびｃｉｓ／ｔｒａｎｓ２−メチル−シクロプロパンカルボキシアミジンヒドロクロライド(０.６１ｇ、ＷＯ０３／０８７０６４に記載の通り製造)の２−メトキシエタノール(３.８ml)溶液に添加し、混合物を１２５℃で１時間、撹拌しながら加熱する。反応混合物を冷却し、濾過し、水で洗浄して、表題化合物を得る。MS: M+H 247およびM-H 245。

実施例６３：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−ジエチルアミノ−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

イミダゾール−１−カルボン酸[５−(２−ジエチルアミノ−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド(４０mg)を、撹拌しているＬ−プロリンアミド(１４mg)およびトリエチルアミン(１９μl)のＤＭＦ(１４７μl)溶液に室温で添加する。反応混合物を４０℃で２時間撹拌し、分取逆相クロマトグラフィーで精製する。表題化合物含有フラクションを３００mg BondElut SPE、ＳＣＸカートリッジで捕捉し、７Ｍアンモニアのメタノール溶液(１ml)で遊離する。表題化合物を蒸発により得る。ESI-MS: M+H 404およびM-H 402。

工程６３.１：イミダゾール−１−カルボン酸[５−(２−ジエチルアミノ−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド

カルボニルジイミミダゾール(４３７mg)を、[４−(２−アミノ−４−メチル−チアゾール−５−イル)−ピリミジン−２−イル]−ジエチル−アミン(３５５mg)およびトリエチルアミン(２０７μl)のＤＭＦ(１.４ml)溶液に室温で添加し、１８時間、８０℃で加熱する。反応混合物を蒸発させ、クロロホルムで摩砕する。表題化合物を濾過により単離する。

工程６３.２：[４−(２−アミノ−４−メチル−チアゾール−５−イル)−ピリミジン−２−イル]−ジエチル−アミン

粉末化水酸化ナトリウム(１５０mg)を、Ｎ'−[５−(３−ジメチルアミノ−アクリロイル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−Ｎ,Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン(０.５ｇ、S. Wang et al J. Med. Chem. 2004, 47, 1662-1675.に記載の通り製造)および１,１−ジエチルグアニジン(２５９mg)の２−メトキシエタノール(１.９ml)溶液に添加し、混合物を１２５℃で１時間、撹拌しながら加熱する。反応混合物を真空下で濃縮し、順相クロマトグラフィー、溶離剤；ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃで精製して、表題化合物を得る。ESI-MS: M+H 264およびM-H 262。

実施例６４：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)

イミダゾール−１−カルボン酸{４−メチル−５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド(６９mg)を、撹拌しているＬ−プロリンアミド(２２mg)およびトリエチルアミン(５３mg)のＤＭＦ(１ml)溶液に室温で添加する。反応混合物を室温で２２時間静置し、蒸発させ、表題化合物をメタノール(２ml)および水(１ml)での結晶化後に白色固体として得る。HPLC/MS: 保持時間1.80分, M+H 443.1およびM-H 441.2。

工程６４.１：イミダゾール−１−カルボン酸{４−メチル−５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド

カルボニルジイミミダゾール(３８mg)を、４−メチル−５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミン(６５mg)のＤＣＭ(１ml)およびＤＭＦ(０.２ml)溶液に室温で添加し、１８時間、２５℃で静置する。冷却後表題化合物を濾過により単離する。

工程６４.２：４−メチル−５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミン

粉末化水酸化ナトリウム(０.４２ｇ)を、Ｎ'−[５−((Ｅ)−３−ジメチルアミノ−アクリロイル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−Ｎ,Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン(０.９３ｇ、S. Wang et al J. Med. Chem. 2004, 47, 1662-1675.に記載の通り製造)および３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオンアミジンヒドロクロライド(０.５４ｇ)の２−メトキシエタノール(７ml)溶液に添加し、混合物を１２５℃で１時間、撹拌しながら加熱する。反応混合物を冷却し、水を添加し、水性層を、４回１０％メタノールのジクロロメタン溶液で抽出する。合わせた有機層を逆相クロマトグラフィーで精製し、重炭酸ナトリウムを表題化合物含有フラクションに添加して白色沈殿を得て、それを濾過により回収する。HPLC/MS: 保持時間1.47分, M+H 303.1。

工程６４.３：３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオンアミジンヒドロクロライド

表題化合物を、工程６１.３に記載された方法に準じ、以下の改変をして製造する。３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオン酸ブチルエステルをｄ_９−２,２−ジメチル−プロピオン酸ブチルエステルの代わりに使用し、混合物を３日間、８０℃で撹拌する。粗生成物をＤＣＭに取り込み、小量のＨＣｌのＥｔＯＨ溶液で処理し、蒸発させる。残留物をＤＣＭで摩砕し、濾過し、乾燥させて、表題化合物灰白色固体として得る。

工程６４.４：３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオン酸ブチルエステル

３,３,３−トリフルオロ−２,２−ジメチル−プロピオン酸(３.０ｇ、１９.２mmol)および１滴のＤＭＦを３０mLのＤＣＭに溶解し、ＲＴで塩化オキサリル(１.８５mL、２１.１mmol)の滴下により処理する。２時間後ガス発生が止み、混合物をゆっくりトリエチルアミン(５.３６mL、３８.４mmol)、ｎ−ブタノール(２.１mL、２３mmol)で処理する。混合物を一夜撹拌し、溶媒を蒸発させ、残留物をヘキサンと撹拌する。固体を濾取し、濾液を蒸発させて、褐色−赤色油状物を得る。クーゲルロール蒸留(１０mbar、６０−８０℃オーブン温度)により、表題化合物を無色液体として得る。

実施例６５：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(エチル−メチル−アミノ)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)

(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−メタンスルフィニル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}(６０mg)およびＮ−エチルメチルアミン(４５mg)の混合物を、１８時間、８０℃で密閉チューブ中加熱する。粗生成物を分取逆相クロマトグラフィーで精製する。表題化合物含有フラクションを３００mg BondElut SPE、ＳＣＸカートリッジで捕捉し、７Ｍアンモニアのメタノール溶液(１ml)で遊離する。表題化合物を蒸発により得る。ESI-MS: M+H 390。

工程６５.１：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−メタンスルフィニル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

メタ−クロロペルオキシ安息香酸(０.５０ｇ)に、(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[４−メチル−５−(２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル)−チアゾール−２−イル]−アミド}(１.７ｇ)のジクロロメタン(８.５ml)溶液を０℃で添加した。１時間後反応混合物を蒸発させ、ジクロロメタン／メタノール勾配で溶出する順相クロマトグラフィーで精製して、表題化合物を黄色固体として得る。ESI-MS: M+H 395およびM-H 393。

工程６５.２：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[４−メチル−５−(２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル)−チアゾール−２−イル]−アミド}

イミダゾール−１−カルボン酸[４−メチル−５−(２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル)−チアゾール−２−イル]−アミド(１.０ｇ)を、撹拌しているＬ−プロリンアミド(３７９mg)およびトリエチルアミン(０.５１ml)のＤＭＦ(３ml)溶液に室温で添加する。反応混合物を４０℃で２時間撹拌し、蒸発させ、表題化合物をジクロロメタンおよび水で沈降後にオレンジ色固体として得る。ESI-MS: M+H 379およびM-H 377。

工程６５.３：イミダゾール−１−カルボン酸[４−メチル−５−(２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル)−チアゾール−２−イル]−アミド

カルボニルジイミミダゾール(１.７７ｇ)を、４−メチル−５−(２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル)−チアゾール−２−イルアミン(１.３ｇ)のトリエチルアミン(０.８４ml)およびＤＭＦ(５.５ml)溶液に室温で添加し、２時間、８０℃で撹拌する。冷却後表題化合物を濾過により単離する。

工程６５.４：４−メチル−５−(２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル)−チアゾール−２−イルアミン

粉末化水酸化ナトリウム(１.０９ｇ)を、Ｎ'−[５−(３−ジメチルアミノ−アクリロイル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−Ｎ,Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン(２.０ｇ、S. Wang et al J. Med. Chem. 2004, 47, 1662-1675.に記載の通り製造)およびチオウレア(０.５７ｇ)のエタノール(２５ml)溶液に添加し、混合物を３時間、撹拌しながら加熱還流する。反応混合物を室温に冷却し、水、メチルアイオダイド(０.４７ml)を添加する。１時間、室温の後、エタノールを蒸発により除去し、水を添加し、２Ｎ 水性塩酸でｐＨを７に調節する。表題化合物を濾過により得る。ESI-MS: M+H 239およびM-H 237。

実施例６６：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(６−シクロプロピル−ピラジン−２−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

イミダゾール−１−カルボン酸[５−(６−シクロプロピル−ピラジン−２−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド(７８mg)を撹拌しているＬ−プロリンアミド(３０mg)およびトリエチルアミン(８３μl)のＤＭＦ(１ml)溶液に室温で添加する。反応混合物を室温で１８時間静置し、蒸発させ、表題化合物を、メタノール(１ml)および水(０.５ml)で結晶化後に黄色／白色固体として得る。HPLC/MS: 保持時間1.40分, M+H 373.1およびM-H 371.3。

工程６６.１：イミダゾール−１−カルボン酸[５−(６−シクロプロピル−ピラジン−２−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド

カルボニルジイミミダゾール(７４mg)を、５−(６−シクロプロピル−ピラジン−２−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イルアミン(９６mg)のＤＭＦ(２ml)溶液に室温で添加し、１８時間、室温で静置する。反応混合物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄して、表題化合物を得る。

工程６６.２：５−(６−シクロプロピル−ピラジン−２−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イルアミン

濃塩酸(０.４ml)を、Ｎ−[５−(６−シクロプロピル−ピラジン−２−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アセトアミド(１２０mg)のエタノール(９ml)溶液に室温で添加し、混合物を１８時間加熱還流する。冷却し、反応混合物を蒸発させ水性炭酸水素ナトリウムで中和し、１０％メタノールのＤＣＭ溶液で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、表題化合物を得る。HPLC/MS: 保持時間0.93分, M+H 233.3。

工程６６.３：Ｎ−[５−(６−シクロプロピル−ピラジン−２−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アセトアミド

アルゴンを、２−シクロプロピル−６−クロロピラジン(１５４mg、A. Fuerstner et al J. Am. Chem. Soc. 2002, 214, 13856-13863.の方法により製造)、２−アセトアミド−４−メチルチアゾール(２００mg)、酢酸パラジウム(２４mg)、トリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスホニウムテトラフルオロ(fuoro)ボレート(６１mg)および炭酸セシウム(６７８mg)のＤＭＦ(３ml)中の混合物に、室温で５分間バブリングする。反応混合物を密閉バイアル中、アルゴン雰囲気下で４５分間、１５０℃で、Biotage Initiator^ＴＭマイクロ波装置中、加熱する。反応混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣで精製する。表題化合物含有フラクションを合わせ、蒸発させてアセトニトリルを除去し、表題化合物を濾過によりベージュ色固体として得る。HPLC/MS: 保持時間1.65分, M+H 275.3。

実施例６７：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[４−メチル−５−(５−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル)−チアゾール−２−イル]−アミド}

カルボニルジイミミダゾール(２９mg)を、４−メチル−５−(５−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル)−チアゾール−２−イルアミン(４２mg)およびトリエチルアミン(５０μl)のＤＭＦ(１ml)溶液に室温で添加し、混合物を１８時間、室温で静置する。Ｌ−プロリンアミド(２０mg)を添加し、反応混合物をさらに８時間、室温に静置し、蒸発させ、表題化合物を、メタノール(３ml)および水(１.５ml)後白色固体として得る。ESI-MS: M+H 400。

工程６７.１：４−メチル−５−(５−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル)−チアゾール−２−イルアミン

トリメチルシリルクロライド(０.３ml)を、Ｎ−[４−メチル−５−(５−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル)−チアゾール−２−イル]−アセトアミド(４４mg)のエタノール(２ml)溶液に室温で添加し、混合物を室温で４.５時間撹拌する。反応を５０℃で１８時間加熱し、冷却し、蒸発させ、表題化合物をジエチルエーテルで摩砕後、濾過により得る。

工程６７.２：Ｎ−[４−メチル−５−(５−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル)−チアゾール−２−イル]−アセトアミド

アルゴンを、５−(トリフルオロ(fuoro)メチル)−３−ピリジニルボロン酸ヒドロクロライド(２６３mg、ＷＯ２００７／１３４８２８に記載の通り製造)、２−アセチルアミノ−５−ヨード−４−メチルチアゾール(２６０mg、ＷＯ２００６／１２５８０７に記載の通り製造)、１,１'−ビス−(ジフェニルホスフィノ)−フェロセンジクロロパラジウム(II)(３８mg)、炭酸ナトリウム(４８８mg)のＤＭＥ(２.３ml)および水(２.３ml)中の混合物に、室温で５分間バブリングする。反応混合物を密閉バイアル中、アルゴン雰囲気下、３０分間、８０℃、続いて６０分間、８０℃で、Biotage Initiator^ＴＭマイクロ波装置中加熱する。冷却後反応混合物をＤＣＭで抽出し、合わせた有機層をシリカゲルを用いて蒸発させ、順相クロマトグラフィー(溶離剤；勾配ＤＣＭから１：１ ＤＣＭ：酢酸エチル)で精製する。生成物含有フラクションをメタノール(５ml)、ＤＭＦ(０.３ml)および水(１.３ml)で摩砕し、濾過して、表題化合物をベージュ色固体として得る。

実施例６８：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(６−ｄ _１０ −ジエチルアミノ−ピラジン−２−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

イミダゾール−１−カルボン酸[５−(６−ｄ_１０−ジエチルアミノ−ピラジン−２−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド(８２mg)を、撹拌しているＬ−プロリンアミド(２８mg)およびトリエチルアミン(７８μl)のＤＭＦ(１ml)溶液に室温で添加する。反応混合物を室温で１４時間静置し、蒸発させ、表題化合物を、メタノール(１ml)および水(０.５ml)で結晶化後に黄色／白色固体として得る。HPLC/MS: 保持時間1.41分, M+H 414.2およびM-H 412.3。

工程６８.１：イミダゾール−１−カルボン酸[５−(６−ｄ _１０ −ジエチルアミノ−ピラジン−２−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド

カルボニルジイミミダゾール(７８mg)を５−(６−ｄ_１０−ジエチルアミノ−ピラジン−２−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イルアミン(１２１mg)のＤＭＦ(２ml)溶液に室温で添加し、３.５時間、室温で静置する。反応混合物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄して、表題化合物を得る。

工程６８.２：５−(６−ｄ _１０ −ジエチルアミノ−ピラジン−２−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イルアミン

濃塩酸(０.４ml)を、Ｎ−[５−(６−ｄ_１０−ジエチルアミノ−ピラジン−２−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アセトアミド(１４０mg)のエタノール(９ml)溶液に室温で添加し、混合物を４０時間加熱還流する。冷却し、反応混合物を蒸発させ、水性炭酸水素ナトリウムで中和し、１０％メタノールのＤＣＭ溶液で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、表題化合物を得る。HPLC/MS: 保持時間1.17分, M+H 274.4。

工程６８.３：Ｎ−[５−(６−ｄ _１０ −ジエチルアミノ−ピラジン−２−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アセトアミド

アルゴンを、２−ｄ_１０−ジエチルアミノ−６−クロロピラジン(２９３mg)、２−アセトアミド−４−メチルチアゾール(３００mg)、酢酸パラジウム(２４mg)、トリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスホニウムテトラフルオロ(fuoro)ボレート(６１mg)および炭酸セシウム(１.０２ｇ)のＤＭＦ(３ml)中の混合物に、室温で５分間バブリングする。反応混合物を密閉バイアル中、アルゴン雰囲気下、４５分間、１５０℃で、Biotage Initiator^ＴＭマイクロ波装置中、加熱する、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製する。表題化合物含有フラクションを合わせ、蒸発させてアセトニトリルを除去し、表題化合物を濾過によりベージュ色固体として得る。HPLC/MS: 保持時間1.68分, M+H 316.3。

工程６８.４：２−ｄ _１０ −ジエチルアミノ−６−クロロピラジン

ｄ_１０−ジエチルアミン(０.５ｇ)を、撹拌している２,６−ジクロロピラジン(０.９３ｇ)および炭酸カリウム(１.４１ｇ)のアセトニトリル(４ml)中の混合物に室温で添加する。反応混合物を５５℃で６０時間加熱し、冷却し、水を添加し、ジクロロメタンで抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させ、順相クロマトグラフィー、溶離剤ＤＣＭで精製して、表題化合物を得る。HPLC/MS: 保持時間2.10分, M+H 196.4および198.4。

実施例６９：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(６−ジエチルアミノ−ピラジン−２−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を実施例６８に準じるが、ジエチルアミンをｄ_１０−ジエチルアミンの代わりに使用して製造する。HPLC/MS: 保持時間1.43分, M+H 404.2および402.3。

実施例７０：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−シクロプロピルメチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を実施例４２に準じるが、イミダゾール−１−カルボン酸[５−(２−シクロプロピルメチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミドをイミダゾール−１−カルボン酸{４−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミドの代わりに使用して製造する。M.p. 220-222℃, ESI-MS [M+H]⁺ 387.1, TLC: R_f = 0.2 (DCM/EtOH 95:5)

工程７０.１：イミダゾール−１−カルボン酸[５−(２−シクロプロピルメチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド

表題化合物を工程４２.１に準じるが、５−(２−シクロプロピルメチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用し、反応混合物を、１５時間撹拌して製造する。M.p. 240-243℃, ESI-MS [M+H]⁺ 305.1, TLC: R_f = 0.35 (DCM/EtOH 95:5)。

工程７０.２：５−(２−シクロプロピルメチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イルアミン

表題化合物を工程４２.２に準じるが、２−シクロプロピル−アセトアミジンヒドロクロライドを１−メチル−シクロプロパンカルボキシアミジンヒドロクロライドの代わりに使用して製造する。M.p. 198-200℃, ESI-MS [M+H]⁺ 247.1, TLC: R_f = 0.25 (DCM/EtOH 95:5)。

実施例７１：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(２−フルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例４２に準じるが、イミダゾール−１−カルボン酸{５−[２−(２−フルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミドをイミダゾール−１−カルボン酸{４−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミドの代わりに使用して製造する。M.p. 187-190℃, ESI-MS [M+H]⁺ 407.1, TLC: R_f = 0.3 (DCM/EtOH 95:5)

工程７１.１：イミダゾール−１−カルボン酸{５−[２−(２−フルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド

表題化合物を工程４２.１に準じるが、５−[２−(２−フルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用し、反応混合物を、１６時間、８０℃で撹拌して製造する。

工程７１.２：５−[２−(２−フルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イルアミン

表題化合物を工程４２.２に準じるが、３−フルオロ−２,２−ジメチル−プロピオンアミジンヒドロクロライドを１−メチル−シクロプロパンカルボキシアミジンヒドロクロライドの代わりに使用して製造する。ESI-MS [M+H]⁺ 267.1, TLC: R_f = 0.4 (DCM/EtOH 95:5)。

実施例７２：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−ｔｅｒｔ−ブチル−６−メチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}

表題化合物を実施例４２に準じるが、イミダゾール−１−カルボン酸[５−(２−ｔｅｒｔ−ブチル−６−メチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミドをイミダゾール−１−カルボン酸{４−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミドの代わりに使用して製造する。M.p. 197-199℃, ESI-MS [M+H]⁺ 403.1, TLC: R_f = 0.3 (DCM/EtOH 95:5)

工程７２.１：イミダゾール−１−カルボン酸[５−(２−ｔｅｒｔ−ブチル−６−メチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド

表題化合物を工程４２.１に準じるが、５−(２−ｔｅｒｔ−ブチル−６−メチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イルアミンを４−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イルアミンの代わりに使用し、反応混合物を、１６時間撹拌して製造する。ESI-MS [M-H]^- 355.2。

工程７２.２：５−(２−ｔｅｒｔ−ブチル−６−メチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イルアミン

表題化合物を工程１.２に準じるが、Ｎ−[５−(２−ｔｅｒｔ−ブチル−６−メチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アセトアミドをＮ−[５−(２−ｔｅｒｔ−ブチル−ピリジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アセトアミドの代わりに使用し、２Ｎ ＨＣｌを使用して製造する。反応混合物を１６時間、ＲＴで、３時間、９０℃で撹拌する。ESI-MS [M+H]⁺ 263.1。

工程７２.３：Ｎ−[５−(２−ｔｅｒｔ−ブチル−６−メチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アセトアミド

表題化合物を工程１.３に準じるが、４−ブロモ−２−ｔｅｒｔ−ブチル−６−メチル−ピリミジンを４−ブロモ−２−ｔｅｒｔ−ブチル−ピリジンの代わりに使用して製造する。ESI-MS [M+H]⁺ 305.2。

工程７２.４：４−ブロモ−２−ｔｅｒｔ−ブチル−６−メチル−ピリミジン

表題化合物を工程１.４に準じるが、２−ｔｅｒｔ−ブチル−６−メチル−３Ｈ−ピリミジン−４−オンを２−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピリジン−４−オンの代わりに使用して製造する。ESI-MS [M+H]⁺ 229/231.0. TLC: R_f = 0.58 (ヘキサン/DCM 7: 3)

実施例７３：(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(２−フルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)

表題化合物を実施例１に準じるが、以下の改変をして製造する。実施例１において、反応混合物を６時間、ｒｔで撹拌する。工程１.１において、反応混合物を１５時間、還流で撹拌する。工程１.２において、反応混合物を１時間、１００℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.３において、反応混合物を４時間、１２０℃で撹拌する。工程１.４において、反応混合物を３０分間、８５℃で撹拌し、クエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出する。工程１.５において、反応混合物を１時間撹拌し、７０℃およびＭｅＯＨでの摩砕を行わない。工程１.６において、粗生成物を精製しない。工程１.７において、３−フルオロ−２,２−ジメチル−プロピオニルクロライド(工程７６.１)を使用する。
表題化合物：ESI-MS: 406.1 [M+H]⁺; t_R = 2.20分(系1); TLC: R_f = 0.47 (DCM/MeOH, 9:1)。

工程７３.１：３−フルオロ−２,２−ジメチル−プロピオニルクロライド

表題化合物を工程５.１に準じるが、３−フルオロ−２,２−ジメチル−プロピオン酸(工程７３.２)を使用して製造する。

工程７３.２：３−フルオロ−２,２−ジメチル−プロピオン酸

６.９ｇ(３８.６mmol)の３−フルオロ−２,２−ジメチル−プロピオン酸メチルエステルの３０mLのメタノール溶液を３８.６mL(７７mmol)の２Ｎ ＮａＯＨで処理し、混合物を３時間加熱還流する。混合物をＲＴに冷却し、溶媒を蒸発させる。残留物を水およびＤＣＭに分配する。水性相を５０mLの２Ｎ ＨＣｌの添加により酸性化し、酢酸エチルで抽出する。有機相を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させる。無色残留物をヘキサンと撹拌し、不溶性物質を濾過により除去し、濾液を蒸発させて、表題化合物を無色固体として得る。ESI-MS: 119.0 [M-H]^-。

工程７３.３：３−フルオロ−２,２−ジメチル−プロピオン酸メチルエステル

２７mLのＴＨＦ中１Ｍ溶液のテトラブチルアンモニウムフルオライドを、ゆっくり、氷冷下、７.２５ｇ(２７.４mmol)の２,２−ジメチル−３−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−プロピオン酸メチルエステルの１５０mLのＴＨＦ溶液に添加する。得られた溶液を６時間、０℃で、１０時間、ＲＴで撹拌する。溶媒を注意深く蒸発させ、残留物をＤＣＭおよび塩水に分配する。有機相を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、注意深く蒸発させる。褐色油状物をクーゲルロール・オーブン(オーブン温度１２０〜１５０℃)で蒸留して、表題化合物を無色液体として得る。

工程７３.４：２,２−ジメチル−３−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−プロピオン酸メチルエステル
３.６４ｇ(２７.５mmol)の３−ヒドロキシ−２,２−ジメチル−プロピオン酸メチルエステルおよび４.８２mL(４１.３mmol)の２,６−ルチジンの５０mL乾燥ＤＣＭ溶液に、トリフルオロ−メタンスルホン酸無水物(５.１２mL、３０.３mmol)を−７０℃で窒素下にゆっくり添加する。黄色溶液を５分間、−７０℃で撹拌し、冷却浴を除き、混合物を３時間、ＲＴで撹拌する。色が黄色からオレンジ色乃至褐色に変わる。ＤＣＭ(５０mL)を添加し、溶液を２回２Ｎ ＨＣｌで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固する。褐色残留物を真空下に乾燥させ、表題化合物をさらに精製せずに使用する。TLC: R_f = 0.72 (EtOAc/ヘキサン 1:2)。

分析的ＨＰＬＣ条件：
直線勾配２０−１００％溶媒Ａを５分間＋１.５分間１００％溶媒Ａ；２１５nmで検出、流速１mL／分、３０℃。カラム：Nucleosil 100-3 C18 (70×4.0mm)。溶媒Ａ＝ＣＨ_３ＣＮ＋０.１％ＴＦＡ；溶媒Ｂ＝Ｈ_２Ｏ＋０.１％ＴＦＡ。

ＭＳ条件：
装置：Micromass Platform II、溶離剤：１５％メタノールの水溶液、０.２％の２５％水酸化アンモニウム溶液含有

^１ Ｈ−ＮＭＲスペクトルを、Varian Mercury 400分光計で示した溶媒で検出した。略語：ｂｒ：幅広；ｓ：一重項；ｄ：二重項；ｔ：三重項；ｑ：四重項；ppm：１００万分の１

ＨＰＬＣ／ＭＳ条件：
装置：Hewlett Packard Agilent 1100シリーズ、カラム：XBridge^TM C18 ２.５ミクロン(microm) ３.０×３０mm、温度：５０℃、溶離剤：２チャネルシステム：チャネルＡ ５％アセトニトリルの水溶液、チャネルＢ １.０％ギ酸含有アセトニトリル

検出：Agilent 1100 DAD 210-350nmおよびWaters Micromass ZQ 2000 ESI+およびESI-。

分取ＨＰＬＣ：
装置：Gilson分取ＨＰＬＣ系、カラム：Sunfire^TM Prep C18 OBD^TM ５ミクロン(microm)３０×１００mm、温度：２５℃、溶離剤：勾配２０分間にわたり０.０５％水性トリフルオロ酢酸中５から１００％アセトニトリル、流速：３０ml／分、検出：ＵＶ ２５４nm。

実施例Ａ：ＰＩ３キナーゼ阻害剤の有効性
ＰＩ３Ｋ KinaseGloアッセイ：５０nLの化合物希釈液を黒色３８４ウェル低容積Non Binding Styrene(ＮＢＳ)プレート(Costar Cat. No. NBS#3676)に分配した。メタノール中１０mg／ml溶液として提供されたＬ−ａ−ホスファチジルイノシトール(ＰＩ)をガラスチューブに移し、窒素ビーム下に乾燥させた。それを３％オクチルグルコシド(ＯＧ)にボルテックス処理により溶解し、４℃で貯蔵した。KinaseGlo発光キナーゼアッセイ(Promega, Madison/WI, USA)は、キナーゼ反応後に溶液に残ったＡＴＰ量を定量することによるキナーゼ活性を測定する均質ＨＴＳ方法である。

５μLのＰＩ／ＯＧとＰＩ３Ｋサブタイプの混合物を添加した(表１)。キナーゼ反応を、最終容積１０μLの１０mM ＴＲＩＳ−ＨＣｌ ｐＨ７.５、３mM ＭｇＣｌ_２、５０mM ＮａＣｌ、０.０５％ＣＨＡＰＳ、１mM ＤＴＴおよび１μM ＡＴＰを含む５μlのＡＴＰ混合物の添加により開始させ、室温で進行させた。反応を１０μlのKinaseGloの添加により停止させ、プレートを１０分後Synergy2リーダーでウェルあたり０.１秒の積分時間を使用して読んだ。２.５μMのパン−クラス１ ＰＩ３キナーゼ阻害剤(標準)をアッセイプレートに添加して１００％阻害を起こさせ、０％阻害を溶媒媒体(９０％ＤＭＳＯの水溶液)で得た。標準を参照化合物として使用し、１６希釈点の形態の全アッセイプレートにデュプリケートで包含させた。

ＰＩ３Ｋ類のクローニング
ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３ＫβおよびＰＩ３Ｋδ構築物は、ｐ８５α ｉＳＨ２ドメインおよび各ｐ１１０アイソフォームの融合体である。ｐ８５αフラグメントおよびｐ１１０アイソフォーム遺伝子を、以下に記載する通り、胎盤、精巣および脳由来の市販ＲＮＡからのＲＴ−ＰＣＲにより産生した第一鎖ｃＤＮＡからＰＣＲにより産生した。ＰＩ３Ｋγ構築物はRoger Williams lab, MRC Laboratory of Molecular Biology, Cambridge, UK(November, 2003)から得て、記載されている(Pacold, Michael E.; Suire, Sabine; Perisic, Olga; Lara-Gonzalez, Samuel; Davis, Colin T.; Walker, Edward H.; Hawkins, Phillip T.; Stephens, Len; Eccleston, John F.; Williams, Roger L. Crystal structure and functional analysis of Ras binding to its effector phosphoinositide 3-kinase gamma. Cell (2000), 103(6), 931-943)。

ＢＶ１０７５：バキュロウイルスＢＶ−１０７５の構築物は、ｐ８５フラグメントおよびベクターpBlueBac4.5にクローン化したｐ１１０αフラグメントを含む、３パート・ライゲーションにより産生した。ｐ８５フラグメントは、Ｎｈｅ／Ｓｐｅで消化させたプラスミドｐ１６６１−２由来であった。このクローン由来のｐ１１０αフラグメントを配列決定により確認し、ＬＲ４１０にＳｐｅＩ／ＨｉｎｄIIIフラグメントとして使用した。バキュロウイルス発現ベクターLR410の産生のために、インサートをゲートウェイ適応pBlueBac4.5(Invitrogen)ベクターに移すためのゲートウェイＬＲ反応を使用した。クローニングベクターpBlueBac4.5(Invitrogen)をＮｈｅ／ＨｉｎｄIIIで消化させた。これにより構築物PED 153.8を得る。ｐ８５要素(ｉＳＨ２)を、ORF 318(上記定義)を鋳型として使い、一つの順方向プライマーKAC1028(5'-GCTAGCATGCGAGAATATGATAGAT-TATATGAAG-AATATACC)(配列番号１)および２個の逆方向プライマーKAC1029(5'-GCCTCCACCAC-CTCCGCCTG-GTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC)(配列番号２)およびKAC1039(5'-TACTAGTC-CGCCTCCAC-CACCTCCGCCTCCACCACCTCCGCC)(配列番号３)を使用する。２個の逆方向プライマーは、１２×ＧｌｙリンカーおよびＳｐｅＩ部位へのｐ１１０α遺伝子のＮ末端配列に重複し、取り込む。１２×Ｇｌｙリンカーは、ＢＶ１０５２構築物で一Ｇｌｙリンカーに置き換わる。ＰＣＲフラグメントをpCR2.1 TOPO(Invitrogen)にクローン化した。得られたクローンで、p1661-2が配列決定により正しいと決定された。このプラスミドをＮｈｅおよびＳｐｅＩにより消化し、得られたフラグメントをサブクローニングのためにゲル単離し、精製した。

ｐ１１０αクローニングフラグメントを、クローンＬＲ４１０(上記参照)のＳｐｅＩおよびＨｉｎｄIIIでの消化により産生した。ＳｐｅＩ部位はｐ１１０α遺伝子のコーディング領域である。得られたフラグメントをサブクローニングのためにゲル単離し、精製した。クローニングベクター、pBlueBac4.5(Invitrogen)をＮｈｅおよびＨｉｎｄIIIでの酵素消化により製造した。切断ベクターをQiagenカラムで精製し、ウシ腸アルカリホスファターゼ(ＣＩＰ)(BioLabs)で脱リン酸化した。ＣＩＰ反応完了後、切断ベクターを再びカラム精製して、最終ベクターを産生した。３パート・ライゲーションを、販売社の明細に従いRoche Rapidリガーゼを使用して行った。最終プラスミドを配列決定により確認した。

キナーゼドメイン。
ＢＶ １０７５のタンパク質配列：
1 MREYDRLYEE YTRTSQEIQM KRTAIEAFNE TIKIFEEQCQ TQERYSKEYI EKFKREGNEK
61 EIQRIMHNYD KLKSRISEII DSRRRLEEDL KKQAAEYREI DKRMNSIKPG GGGGGGGGGG
121 GLVECLLPNG MIVTLECLRE ATLITIKHEL FKEARKYPLH QLLQDESSYI FVSVTQEAER
181 EEFFDETRRL CDLRLFQPFL KVIEPVGNRE EKILNREIGF AIGMPVCEFD MVKDPEVQDF
241 RRNILNVCKE AVDLRDLNSP HSRAMYVYPP NVESSPELPK HIYNKLDKGQ IIVVIWVIVS
301 PNNDKQKYTL KINHDCVPEQ VIAEAIRKKT RSMLLSSEQL KLCVLEYQGK YILKVCGCDE
361 YFLEKYPLSQ YKYIRSCIML GRMPNLMLMA KESLYSQLPM DCFTMPSYSR RISTATPYMN
421 GETSTKSLWV INSALRIKIL CATYVNVNIR DIDKIYVRTG IYHGGEPLCD NVNTQRVPCS
481 NPRWNEWLNY DIYIPDLPRA ARLCLSICSV KGRKGAKEEH CPLAWGNINL FDYTDTLVSG
541 KMALNLWPVP HGLEDLLNPI GVTGSNPNKE TPCLELEFDW FSSVVKFPDM SVIEEHANWS
601 VSREAGFSYS HAGLSNRLAR DNELRENDKE QLKAISTRDP LSEITEQEKD FLWSHRHYCV
661 TIPEILPKLL LSVKWNSRDE VAQMYCLVKD WPPIKPEQAM ELLDCNYPDP MVRGFAVRCL
721 EKYLTDDKLS QYLIQLVQVL KYEQYLDNLL VRFLLKKALT NQRIGHFFFW HLKSEMHNKT
781 VSQRFGLLLE SYCRACGMYL KHLNRQVEAM EKLINLTDIL KQEKKDETQK VQMKFLVEQM
841 RRPDFMDALQ GFLSPLNPAH QLGNLRLEEC RIMSSAKRPL WLNWENPDIM SELLFQNNEI
901 IFKNGDDLRQ DMLTLQIIRI MENIWQNQGL DLRMLPYGCL SIGDCVGLIE VVRNSHTIMQ
961 IQCKGGLKGA LQFNSHTLHQ WLKDKNKGEI YDAAIDLFTR SCAGYCVATF ILGIGDRHNS
1021 NIMVKDDGQL FHIDFGHFLD HKKKKFGYKR ERVPFVLTQD FLIVISKGAQ ECTKTREFER
1081 FQEMCYKAYL AIRQHANLFI NLFSMMLGSG MPELQSFDDI AYIRKTLALD KTEQEALEYF
1141 MKQMNDAHHG GWTTKMDWIF HTIKQHALNE LGGAHHHHHH(配列番号４)

ＢＶ９４９：ｐ８５ ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３ＫβおよびＰＩ３Ｋδサブユニットおよび完全長ｐ１１０βサブユニットの内部(inter)ＳＨ２ドメイン(ｉＳＨ２)のためのＰＣＲ生成物を産生し、オーバーラッピングＰＣＲにより融合させた。ｉＳＨ２ ＰＣＲ生成物を、胎盤、精巣および脳由来の市販ヒトＲＮＡ(Clontech)からの、最初にプライマーgwG130-p01(5'-CGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3')(配列番号５)およびgwG130-p02(5'-TGGTTT-AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3')(配列番号６)を使用したＲＴ−ＰＣＲにより産生した第一鎖ｃＤＮＡから得た。続いて、二次的ＰＣＲ反応ゲートウェイ組み換えにおいて、ＡｔｔＢ１部位およびリンカー配列を、プライマーgwG130-p03(5'-GGGACAAGTT-TGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATATACATATGCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3')(配列番号７)およびgwG130-p05(5'-ACTGAAGCATCCTCCTC-CTCCTCCT-CCTGGTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC-3')(配列番号８)を使用して各々ｐ８５ ｉＳＨ２フラグメントの５'末端および３'末端に付加した。ｐ１１０βフラグメントを、ｐ１１０βクローン(配列確認された未知供給源由来)を鋳型として使用し、リンカー配列およびｐ１１０βの５'末端を含むプライマーgwG130-p04(5'-ATTAAACCAGGAGGAGGAGGAGGAGGATGCTT-CAGTTTCATAATGCCTCCTGCT-3')(配列番号９)およびヒスチジンタグに融合したｐ１１０−βの３'末端の配列を含むgwG130-p06(5'-AGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCCAGATC-TGTAGTCTTTCCGAA-CTGTGTG-3')(配列番号１０)を使用したＰＣＲにより得た。ｐ８５−ｉＳＨ２／ｐ１１０β融合タンパク質をオーバーラッピングＰＣＲにより集合させ、ｉＳＨ２フラグメントの３'末端およびｐ１１０βフラグメントの５'末端を、上記gwG130-p03プライマーおよび重複ヒスチジンタグおよびＡｔｔＢ２組み換え配列(5'-GGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTTAAGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCC-3')(配列番号１１)を含むリンカーの反応である。この最終生成物を、ゲートウェイ(Invitrogen)OR反応でドナーベクターpDONR201(Invitrogen)に再結合させ、ORF253エントリークローンを産生した。このクローンを配列決定により確認し、ゲートウェイＬＲ反応(Invitrogen)に使用して、バキュロウイルス発現ベクターLR280の産生のために、ゲートウェイ適応pBlueBac4.5(Invitrogen)ベクターにインサートを移した。このLR280はｐ８５配列にアミノ酸変異を有する。

キナーゼドメイン。
ＢＶ９４９のタンパク質配列：
1 MREYDRLYEE YTRTSQEIQM KRTAIEAFNE TIKIFEEQCQ TQERYSKEYI EKFKREGKEK
61 EIQRIMHNYD KLKSRISEII DSRRRLEEDL KKQAAEYREI DKRMNSIKPG GGGGGCFSFI
121 MPPAMADILD IWAVDSQIAS DGSIPVDFLL PTGIYIQLEV PREATISYIK QMLWKQVHNY
181 PMFNLLMDID SYMFACVNQT AVYEELEDET RRLCDVRPFL PVLKLVTRSC DPGEKLDSKI
241 GVLIGKGLHE FDSLKDPEVN EFRRKMRKFS EEKILSLVGL SWMDWLKQTY PPEHEPSIPE
301 NLEDKLYGGK LIVAVHFENC QDVFSFQVSP NMNPIKVNEL AIQKRLTIHG KEDEVSPYDY
361 VLQVSGRVEY VFGDHPLIQF QYIRNCVMNR ALPHFILVEC CKIKKMYEQE MIAIEAAINR
421 NSSNLPLPLP PKKTRIISHV WENNNPFQIV LVKGNKLNTE ETVKVHVRAG LFHGTELLCK
481 TIVSSEVSGK NDHIWNEPLE FDINICDLPR MARLCFAVYA VLDKVKTKKS TKTINPSKYQ
541 TIRKAGKVHY PVAWVNTMVF DFKGQLRTGD IILHSWSSFP DELEEMLNPM GTVQTNPYTE
601 NATALHVKFP ENKKQPYYYP PFDKIIEKAA EIASSDSANV SSRGGKKFLP VLKEILDRDP
661 LSQLCENEMD LIWTLRQDCR EIFPQSLPKL LLSIKWNKLE DVAQLQALLQ IWPKLPPREA
721 LELLDFNYPD QYVREYAVGC LRQMSDEELS QYLLQLVQVL KYEPFLDCAL SRFLLERALG
781 NRRIGQFLFW HLRSEVHIPA VSVQFGVILE AYCRGSVGHM KVLSKQVEAL NKLKTLNSLI
841 KLNAVKLNRA KGKEAMHTCL KQSAYREALS DLQSPLNPCV ILSELYVEKC KYMDSKMKPL
901 WLVYNNKVFG EDSVGVIFKN GDDLRQDMLT LQMLRLMDLL WKEAGLDLRM LPYGCLATGD
961 RSGLIEVVST SETIADIQLN SSNVAAAAAF NKDALLNWLK EYNSGDDLDR AIEEFTLSCA
1021 GYCVASYVLG IGDRHSDNIM VKKTGQLFHI DFGHILGNFK SKFGIKRERV PFILTYDFIH
1081 VIQQGKTGNT EKFGRFRQCC EDAYLILRRH GNLFITLFAL MLTAGLPELT SVKDIQYLKD
1141 SLALGKSEEE ALKQFKQKFD EALRESWTTK VNWMAHTVRK DYRSGAHHHH HHGA(配列番号１２)

キナーゼドメイン。

構築物をRoger Williams lab, MRC Laboratory of Molecular Biology, Cambridge, UK(November, 2003)から得た。構築物の記載は(Pacold, Michael E.; Suire, Sabine; Perisic, Olga; Lara-Gonzalez, Samuel; Davis, Colin T.; Walker, Edward H.; Hawkins, Phillip T.; Stephens, Len; Eccleston, John F.; Williams, Roger L. Crystal structure and functional analysis of Ras binding to its effector phosphoinositide 3-kinase gamma. Cell (2000), 103(6), 931-943)。構築物はＮ末端１４４ａａを欠く。

ＢＶ９５０のタンパク質配列：
1 MSEESQAFQR QLTALIGYDV TDVSNVHDDE LEFTRRGLVT PRMAEVASRD PKLYAMHPWV
61 TSKPLPEYLW KKIANNCIFI VIHRSTTSQT IKVSPDDTPG AILQSFFTKM AKKKSLMDIP
121 ESQSEQDFVL RVCGRDEYLV GETPIKNFQW VRHCLKNGEE IHVVLDTPPD PALDEVRKEE
181 WPLVDDCTGV TGYHEQLTIH GKDHESVFTV SLWDCDRKFR VKIRGIDIPV LPRNTDLTVF
241 VEANIQHGQQ VLCQRRTSPK PFTEEVLWNV WLEFSIKIKD LPKGALLNLQ IYCGKAPALS
301 SKASAESPSS ESKGKVRLLY YVNLLLIDHR FLLRRGEYVL HMWQISGKGE DQGSFNADKL
361 TSATNPDKEN SMSISILLDN YCHPIALPKH QPTPDPEGDR VRAEMPNQLR KQLEAIIATD
421 PLNPLTAEDK ELLWHFRYES LKHPKAYPKL FSSVKWGQQE IVAKTYQLLA RREVWDQSAL
481 DVGLTMQLLD CNFSDENVRA IAVQKLESLE DDDVLHYLLQ LVQAVKFEPY HDSALARFLL
541 KRGLRNKRIG HFLFWFLRSE IAQSRHYQQR FAVILEAYLR GCGTAMLHDF TQQVQVIEML
601 QKVTLDIKSL SAEKYDVSSQ VISQLKQKLE NLQNSQLPES FRVPYDPGLK AGALAIEKCK
661 VMASKKKPLW LEFKCADPTA LSNETIGIIF KHGDDLRQDM LILQILRIME SIWETESLDL
721 CLLPYGCIST GDKIGMIEIV KDATTIAKIQ QSTVGNTGAF KDEVLNHWLK EKSPTEEKFQ
781 AAVERFVYSC AGYCVATFVL GIGDRHNDNI MITETGNLFH IDFGHILGNY KSFLGINKER
841 VPFVLTPDFL FVMGTSGKKT SPHFQKFQDI CVKAYLALRH HTNLLIILFS MMLMTGMPQL
901 TSKEDIEYIR DALTVGKNEE DAKKYFLDQI EVCRDKGWTV QFNWFLHLVL GIKQGEKHSA
961 HHHHHH(配列番号１３)

ＢＶ１０６０：ｐ８５サブユニットおよび完全長ｐ１１０δサブユニットの内部(inter)ＳＨ２ドメイン(ｉＳＨ２)のためのＰＣＲ生成物を産生し、オーバーラッピングＰＣＲにより融合させた。ｉＳＨ２ ＰＣＲ生成物をORF318(上記参照)を鋳型として使用し、プライマーgwG130-p03(5'-GGGACAAG-TTTGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATATACATATGC-GAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3')(配列番号７)およびgwG154-p04(5'-TCCTCCTCCT-CCTCCTCCTGGTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC-3')(配列番号１４)を使用して、産生した。ｐ１１０δフラグメントを、胎盤、精巣および脳からの市販ヒトＲＮＡ(Clontech)から、最初にプライマーgwG154-p01(5'-ATGCCCCCTGGGGTGGACTGCCCCAT-3')(配列番号１５)およびgwG154-p02(5'-CTACTGCCTGT-TGTCTTTGGACACGT-3')(配列番号１６)を使用してＲＴ−ＰＣＲにより産生した第一鎖ｃＤＮＡから得た。続くＰＣＲ反応において、リンカー配列およびヒスチジンタグをプライマーgw154-p03(5'-ATTAAACCAGGAGGAGGAGGAGGAGGACCCCCTGGGGTGGAC-TGCCCCATGGA-3')(配列番号１７)およびgwG154-p06(5'-AGCTCCGTGATGGTGATGGTGAT-GTGCT-CCCTGCCTGTTGTCTTTGGACACGTTGT-3')(配列番号１８)を使用して、それぞれｐ１１０δフラグメントの５'末端および３'末端に付加した。ｐ８５−ｉＳＨ２／ｐ１１０δ融合タンパク質を、第三のＰＣＲ反応で、上記gwG130-p03プライマーおよび重複ヒスチジンタグおよびGateway(Invitrogen)AttB2組み換え配列(5'-GGG-ACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTTAA-GCTCCGTGATGGTGATGGTGAGTGCTCC-3')(配列番号１９)を含むプライマーを使用して、リンカーをｉＳＨ２フラグメントの３'末端およびｐ１１０δフラグメントの５'末端で重複させることにより集合させた。この最終生成物をGateway OR反応でドナーベクターpDONR201(Invitrogen)に再結合させ、ＯＲＦ３１９エントリークローンを産生した。このクローンを配列決定により確認し、ゲートウェイＬＲ反応(Invitrogen)に使用して、バキュロウイルス発現ベクターLR415を産生するためにインサートをゲートウェイ適応pBlueBac4.5(Invitrogen)ベクターに移した。

ＢＶ１０６０のタンパク質配列：
1 MREYDRLYEE YTRTSQEIQM KRTAIEAFNE TIKIFEEQCQ TQERYSKEYI EKFKREGNEK
61 EIQRIMHNYD KLKSRISEII DSRRRLEEDL KKQAAEYREI DKRMNSIKPG GGGGGPPGVD
121 CPMEFWTKEE NQSVVVDFLL PTGVYLNFPV SRNANLSTIK QLLWHRAQYE PLFHMLSGPE
181 AYVFTCINQT AEQQELEDEQ RRLCDVQPFL PVLRLVAREG DRVKKLINSQ ISLLIGKGLH
241 EFDSLCDPEV NDFRAKMCQF CEEAAARRQQ LGWEAWLQYS FPLQLEPSAQ TWGPGTLRLP
301 NRALLVNVKF EGSEESFTFQ VSTKDVPLAL MACALRKKAT VFRQPLVEQP EDYTLQVNGR
361 HEYLYGSYPL CQFQYICSCL HSGLTPHLTM VHSSSILAMR DEQSNPAPQV QKPRAKPPPI
421 PAKKPSSVSL WSLEQPFRIE LIQGSKVNAD ERMKLVVQAG LFHGNEMLCK TVSSSEVSVC
481 SEPVWKQRLE FDINICDLPR MARLCFALYA VIEKAKKARS TKKKSKKADC PIAWANLMLF
541 DYKDQLKTGE RCLYMWPSVP DEKGELLNPT GTVRSNPNTD SAAALLICLP EVAPHPVYYP
601 ALEKILELGR HSECVHVTEE EQLQLREILE RRGSGELYEH EKDLVWKLRH EVQEHFPEAL
661 ARLLLVTKWN KHEDVAQMLY LLCSWPELPV LSALELLDFS FPDCHVGSFA IKSLRKLTDD
721 ELFQYLLQLV QVLKYESYLD CELTKFLLDR ALANRKIGHF LFWHLRSEMH VPSVALRFGL
781 ILEAYCRGST HHMKVLMKQG EALSKLKALN DFVKLSSQKT PKPQTKELMH LCMRQEAYLE
841 ALSHLQSPLD PSTLLAEVCV EQCTFMDSKM KPLWIMYSNE EAGSGGSVGI IFKNGDDLRQ
901 DMLTLQMIQL MDVLWKQEGL DLRMTPYGCL PTGDRTGLIE VVLRSDTIAN IQLNKSNMAA
961 TAAFNKDALL NWLKSKNPGE ALDRAIEEFT LSCAGYCVAT YVLGIGDRHS DNIMIRESGQ
1021 LFHIDFGHFL GNFKTKFGIN RERVPFILTY DFVHVIQQGK TNNSEKFERF RGYCERAYTI
1081 LRRHGLLFLH LFALMRAAGL PELSCSKDIQ YLKDSLALGK TEEEALKHFR VKFNEALRES
1141 WKTKVNWLAH NVSKDNRQEL GGAHHHHHH(配列番号２０)

ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３ＫβおよびＰＩ３Ｋγ構築物の精製
ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３ＫβおよびＰＩ３Ｋγを、２クロマトグラフィー工程で精製した：Ｎｉセファロース樹脂(GE Healthcare)上の固定化金属親和性クロマトグラフィー(ＩＭＡＣ)およびSuperdex 200 26/60カラム(GE Healthcare)を使用するゲル濾過。全緩衝液を４℃に冷却し、溶解を氷上で冷却しながら行った。カラム分別は室温で行った。ＰＩ３Ｋβの精製に使用した全緩衝液は、以下に記載するものに加えて０.０５％Triton X100を含んだ。

典型的に１０ＬのＴｎ５細胞培養からの凍結細胞を“溶解緩衝液”２０mM Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、５００mM ＮａＣｌ、５％グリセロール、５mM イミダゾール、１mM ＮａＦ、０.１μg／mL オカダ酸(ＯＡＡ)、５mM ＢＭＥ、１×Completeプロテアーゼ阻害剤カクテル − 無ＥＤＴＡ(２０錠／１Ｌ緩衝液、Roche Applied Sciences)、ベンゾナーゼ(２５Ｕ／mL緩衝液、EMD Biosciences)に、１：６ｖ／ｖペレット対溶解緩衝液比で再懸濁し、窮屈なきねを使用した２０ストロークのダウンシングにより機械的に溶解させた。溶解物を４５,０００ｇで３０分間遠心し、上清を、予め平衡化したＩＭＡＣカラム(３mL樹脂／１００mL溶解物)に負荷した。カラムを３−５カラム容積の溶解緩衝液で洗浄し、続いて３−５カラム容積の２０mM Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、５００mM ＮａＣｌ、５％グリセロール、４５mM イミダゾール、１mM ＮａＦ、０.１μg／mL ＯＡＡ、５mM ＢＭＥ、１×Completeプロテアーゼ阻害剤カクテル − 無ＥＤＴＡで２回目の洗浄をした。タンパク質を２０mM Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、０.５Ｍ ＮａＣｌ、５％グリセロール、２５０mM イミダゾール、１mM ＮａＦ、０.１μg／mL ＯＡＡ、５mM ＢＭＥ、１×Completeプロテアーゼ阻害剤カクテル − 無ＥＤＴＡを使用して溶出した。適切なフラクションをＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析し、それに応じてプールした。タンパク質を、２０mM Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、０.５Ｍ ＮａＣｌ、５％グリセロール、１mM ＮａＦ、５mM ＤＴＴ、１×Completeプロテアーゼ阻害剤カクテル − 無ＥＤＴＡで平衡化したSuperdex 200 26/60カラムでのゲル濾過によりさらに精製した。適切なフラクションをＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析し、それに応じてプールした。等容積の透析緩衝液(２０mM Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、５００mM ＮａＣｌ、５０％グリセロール、５mM ＮａＦ、５mM ＤＴＴ)をプールに添加し、透析緩衝液を２回変えて透析した(一夜で１回変える)。タンパク質を−２０℃で貯蔵した。

ＰＩ３Ｋδの精製
ＰＩ３Ｋδを３クロマトグラフィー工程で精製した：Ｎｉセファロース樹脂(GE Healthcare)上での固定化金属親和性クロマトグラフィー、Superdex 200 26/60カラム(GE Healthcare)を使用するゲル濾過、および最後にＱ−ＨＰカラム(GE Healthcare)でのイオン交換工程。全緩衝液を４℃に冷却し、溶解を氷上で冷却しながら行った。カラム分別は室温で行った。

典型的に１０ＬのＴｎ５細胞培養からの凍結細胞を、“溶解緩衝液”２０mM Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、５００mM ＮａＣｌ、５％グリセロール、５mM イミダゾール、１mM ＮａＦ、０.１μg／mL オカダ酸(ＯＡＡ)、５mM ＢＭＥ、１×Completeプロテアーゼ阻害剤カクテル − 無ＥＤＴＡ(２０錠／１Ｌ緩衝液、Roche Applied Sciences)、ベンゾナーゼ(２５Ｕ／mL 溶解緩衝液、EMD Biosciences)に１：１０ｖ／ｖペレット対溶解緩衝液比で再懸濁し、窮屈なきねを使用した２０ストロークのダウンシングにより機械的に溶解させた。溶解物を４５,０００ｇで３０分間遠心し、上清を予め平衡化したＩＭＡＣカラム(５mL樹脂／１００mL溶解物)に載せた。カラムを３−５カラム容積の溶解緩衝液で洗浄し、３−５カラム容積の２０mM Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、５００mM ＮａＣｌ、５％グリセロール、４０mM イミダゾール、１mM ＮａＦ、０.１μg／mL ＯＡＡ、５mM ＢＭＥ、１×Completeプロテアーゼ阻害剤カクテル − 無ＥＤＴＡで２回目の洗浄をした。タンパク質を２０mM Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、５００mM ＮａＣｌ、５％グリセロール、２５０mM イミダゾール、１mM ＮａＦ、０.１μg／mL ＯＡＡ、５mM ＢＭＥ、１×Completeプロテアーゼ阻害剤カクテル − 無ＥＤＴＡで溶出した。適切なフラクションをＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析し、それに応じてプールした。タンパク質を２０mM Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、５００mM ＮａＣｌ、５％グリセロール、１mM ＮａＦ、０.１μg／mL ＯＡＡ、５mM ＤＴＴ、１×Completeプロテアーゼ阻害剤カクテル − 無ＥＤＴで平衡化したSuperdex 200でのゲル濾過によりさらに精製した。適切なフラクションをＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析し、それに応じてプールした。これらのフラクションを“緩衝液Ａ”２０mM Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ８.２、５％グリセロール、１mM ＮａＦ、０.１μg／mL ＯＡＡ、５mM ＤＴＴで、１：１０ｖ／ｖプール体積対緩衝液比に希釈し、調製済みＱ−ＨＰカラムに載せた。サンプル充填完了後、我々は、緩衝液Ａおよび５％“緩衝液Ｂ”２０mM Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ８.２、１Ｍ ＮａＣｌ、５％グリセロール、１mM ＮａＦ、０.１μg／mL ＯＡＡ、５mM ＤＴＴで３−５カラム容積洗浄する。我々は、タンパク質を緩衝液Ｂの５％−３０％勾配を使用して溶出する。典型的にタンパク質は、〜２００mM ＮａＣｌで溶出する。適切なフラクションをＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析し、それに応じてプールした。等容積の透析緩衝液(２０mM Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７.５、５００mM ＮａＣｌ、５０％グリセロール、１mM ＮａＦ、０.１μg／mL ＯＡＡ、５mM ＤＴＴ)をプールに添加し、２回変えた透析緩衝液で透析した(一夜で１回変える)。タンパク質を−２０℃で貯蔵した。

上記アッセイで以下の結果を得た。

本発明の化合物、特に、好ましい本発明の化合物は、例えば生化学的アッセイで測定して、ベータおよび／またはデルタおよび／またはガンマサブタイプと比較してＰＩ３Ｋアルファに対する選択性が改善される。これらの化合物はまた、好ましくは細胞アッセイで測定して、ベータおよび／またはデルタおよび／またはガンマサブタイプと比較してＰＩ３Ｋアルファに選択性を示す。

実施例Ｂ：インビトロ代謝クリアランスの決定

最終試験品およびタンパク質濃度、ならびにインキュベーション時間は以下に示す(表１)。低試験品濃度を、反応速度論がＫｍ未満(またはおおよそ同等)の濃度で評価されるとの仮定に合わせて選択した。
ＤＭＳＯはＣＹＰ活性に対する阻害効果を有することが知られている。それ故、インキュベーション媒体中のＤＭＳＯ濃度は、代謝過程への影響を最小化するために０.０１％(ｖ／ｖ)に限定した。

^ａ ＵＧＴ(ウリジン５'ジホスフェートグルクロノシルトランスフェラーゼ)活性の再構成にのみ必要な任意成分。

典型的実験を、９６ウェル形式で３７℃で振盪インキュベーションしながら行う。インビトロ代謝クリアランス速度は、補因子(ＮＡＤＰＨおよび／またはＵＤＰＧＡ)を含む反応中４つの時点(例えば０分、５分、１５分および３０分)から集めたデータに由来する。３０分間のネガティブコントロールインキュベーション(補因子を欠く)もまた行い、ＣＹＰ非関連安定性問題(例えば、化学安定性、ＣＹＰ非依存性代謝)を評価する。

一般に、１０mM ＤＭＳＯ中のＴＡを、ＤｉＨ２Ｏ中０.６％ＡＣＮ(ｖ／ｖ)で１：１０００希釈し、１０μMにする。実験開始直前、１.２５mg／mLのミクロソームタンパク質を５０mM ＫＰｉに懸濁させる。ＵＧＴ仲介代謝の評価のために、懸濁液を、最初にalamethicin(２５μg／mgのミクロソームタンパク質)と共に氷上で５分間インキュベーションする。ＴＡ(３５μL)を、１４０μLのミクロソーム懸濁液に添加し、１７５μL 酵素−基質混合物とする。この酵素・基質混合物を、１５分間、３７℃でプレインキュベーションする。３０分間ネガティブコントロールインキュベーションを、２５μLの酵素・基質混合物と等容積の４mM ＭｇＣｌ_２含有５０mM ＫＰｉを合わせることにより進行させる。３０分間、３７℃でインキュベーション後、混合物をＭＳ内部標準(２μMアルプレノロール)を含む５０μLのＡＣＮの添加によりクエンチする。Ｔ＝０分間時点を、２５μLの酵素・基質混合物を直接ＭＳ内部標準(２μMアルプレノロール)を含む５０μLのＡＣＮに添加することにより処理する。２５μLの補因子溶液(５０mM ＫＰｉ中２mM ＮＡＤＰＨ＋４mM ＭｇＣｌ_２；場合によりＣＹＰ＋ＵＧＴアッセイのために２mM ＵＤＰＧＡを含んでよい)を添加して、完全にクエンチした反応混合物を摸倣する。

残りの時点についてのバルク反応を、１２５μLの補因子溶液(５０mM ＫＰｉ中２mM ＮＡＤＰＨ＋４mM ＭｇＣｌ_２)を残りの１２５μLの酵素・基質混合物に添加することにより開始する。ＵＧＴ代謝について、２mM ＵＤＰＧＡを同様に補因子溶液に含む。特定の反応時点(例えば５分、１５分、３０分)で、一定量の反応(５０μL)を採り、反応を質量分析内部標準(２μMアルプレノロール)含有アセトニトリル(５０μL)に添加することにより停止させる。全サンプルを〜３４００×ｇで４℃で１０分間遠心分離し、上清をＬＣ−ＭＳ／ＭＳで分析して、残ったＴＡを定量する。０分に対する残留ＴＡパーセントをインビトロ排出速度定数(ｋｍｉｃ)の概算に使用し、それをインビトロ代謝クリアランス速度の計算に使用できる。

サンプルの分析を、Waters Quattro Premiere質量分光計、ＥＳＩイオン源、ＣＴＣ−ＨＴＳ Ｐａｌオートサンプラー、およびAgilent LCポンプから成る、高速液体クロマトグラフィータンデム質量分光分析(ＬＣ／ＭＳ)システムで行う。サンプルをAtlantic C18カラム、２.１×３０mm、３.５ミクロンで、表２に略記する速い移動相勾配を使用して分離する。移動相Ａは、１０mMギ酸アンモニウム含有精製水から成る。移動相Ｂは、０.０１％ギ酸含有アセトニトリルから成る。流速は１mL／分である。注入容積は１０μLである。溶出の最初の３０秒間は、サンプル浄化のために迂回させ、廃棄する。化合物をソフトウェアMassLynx/QuanLynxを使用して検出し、これは試験化合物の分子量に対する全フラグメントについての強度データを集める。生データを集めた後、必要に応じて、３個までのクオリティ・フラグメントをソフトウェアによりプロファイルしてよい。一般に、最強強度のフラグメントピークを積分する。

各ミクロソーム排出速度であるｋｍｉｃは、シングレットで試験した４点排出曲線に基づく。反応プレートのＬＣ−ＭＳ／ＭＳ生データを、ＴＡおよびＩＳのために統合された検体ピーク面積として帰す。これらの値を、標準データ比較のために検体：ＩＳピーク面積比に変換してよい。

反応時点(例えば０分、５分、２０分または３０分)を、０分に対する残存ＴＡパーセントの自然対数に対してプロットする(相対的ピーク面積比に基づく)。このクリアランスプロットであるｋｍｉｃの傾斜を、Ｅｑ.(１)に示すインビトロ半減期、ｔ１／２の計算に使用する。直線状反応速度論に絞るため、可能ならいつでも、＜１０％ＴＡ残存を示すデータ点を、一般にクリアランスプロット傾斜の定義から外す。反応ｔ１／２はＣＬｉｎｔ(Ｅｑ.２)の計算に使用する核となる実験値である。
Ｅｑ.(１)：ｔ1/2＝０.６９３／−ｋ_ｍｉｃ
Ｅｑ.(２)：Ｃｌｉｎｔ＝０.６９３／−ｋ_ｍｉｃ・Ｖ／Ｍ

以下の結果が上記方法を使用して得られた：

実施例Ｃ：ルシフェラーゼ発光アッセイで決定するＰＩ３Ｋアルファ変異体Ｅ５４５ＫおよびH1047Rの阻害
発光はＡＴＰ濃度測定のために充分に確立されている読み出しであり、それ故に、基質に関係なく多くのキナーゼ類の活性の追跡に使用できる。KinaseGlo発光キナーゼアッセイ(Promega, Madison/WI, USA)は、キナーゼ反応後に溶液に残ったＡＴＰ量を定量することによるキナーゼ活性を測定する均質ＨＴＳ方法である。

ホスホイノシチド３−キナーゼを、室温で、１μM ＡＴＰ、５mM ＭｇＣｌ_２、５０mM ＮａＣｌ、５μg／ml 大豆ホスファチジルイノシトール(Avanti Polar lipids, Cat. Nr 840044C)、０.０１５％オクトグルコシド(Sigma, Cat. Nr O9882)、０.０１％ＣＨＡＰＳ、１mM ＤＴＴ、２.５％ＤＭＳＯ、および１０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７.５を含む５０μl媒体中でインキュベートした。キナーゼ反応をＡＴＰ(阻害剤を用いた酵素の１５分間プレインキュベーション)により開始し、１時間後に５０μl KinaseGlo(登録商標)(Promega, cat. Nr V6714)で停止させ、発光をVictor IIリーダー(０.１秒積分)で測定した。曲線を、ロジスティック方程式(XLfit(登録商標)のモデル２０５、ID Business Solutions, Guildford, UK)を使用して非直線状回帰によりフィットさせた。

発光アッセイ(KinaseGlo)のアッセイ原理：

上記アッセイ系を使用し、以下の表に示す構築物から得られるＰＩ３Ｋタンパク質を使用して、野生型および変異ＰＩ３Ｋアルファに対する阻害活性を評価した。

結果を以下の表に示す。

野生型および変異ＰＩ３Ｋアルファの阻害：

ＢＶ１１４７：多くの癌で見られる活性化変異Ｅ５４５Ｋを、QuickChange XL部位特異的変異導入キット(Stratagene)を用いた部位特異的変異導入によりORF318に導入した。製造者により推奨される方法および変異原性プライマーgwG152-p15(5'-CTCTCTGAAATCACTAAGCAGGAGAAAGATTTT-3')(配列番号２１)およびgwG152-p16(5'-AAAATCTTTCT-CCTGCTTAGTGATTTCAGAGAG-3')(配列番号２２)を使用して、ORF544を産生した。このクローンを配列決定により確認し、バキュロウイルス発現ベクターLR561の産生のために、インサートをゲートウェイ適応pBlueBac4.5(Invitrogen)ベクターに移すためのゲートウェイＬＲ反応(Invitrogen)反応に使用した。

キナーゼドメイン。
ＢＶ １１４７のタンパク質配列：
1 MREYDRLYEE YTRTSQEIQM KRTAIEAFNE TIKIFEEQCQ TQERYSKEYI EKFKREGNEK
61 EIQRIMHNYD KLKSRISEII DSRRRLEEDL KKQAAEYREI DKRMNSIKPG GISGGGGGIM
121 VLVECLLPNG MIVTLECLRE ATLITIKHEL FKEARKYPLH QLLQDESSYI FVSVTQEAER
181 EEFFDETRRL CDLRLFQPFL KVIEPVGNRE EKILNREIGF AIGMPVCEFD MVKDPEVQDF
241 RRNILNVCKE AVDLRDLNSP HSRAMYVYPP NVESSPELPK HIYNKLDKGQ IIVVIWVIVS
301 PNNDKQKYTL KINHDCVPEQ VIAEAIRKKT RSMLLSSEQL KLCVLEYQGK YILKVCGCDE
361 YFLEKYPLSQ YKYIRSCIML GRMPNLMLMA KESLYSQLPM DCFTMPSYSR RISTATPYMN
421 GETSTKSLWV INSALRIKIL CATYVNVNIR DIDKIYVRTG IYHGGEPLCD NVNTQRVPCS
481 NPRWNEWLNY DIYIPDLPRA ARLCLSICSV KGRKGAKEEH CPLAWGNINL FDYTDTLVSG
541 KMALNLWPVP HGLEDLLNPI GVTGSNPNKE TPCLELEFDW FSSVVKFPDM SVIEEHANWS
601 VSREAGFSYS HAGLSNRLAR DNELRENDKE QLKAISTRDP LSEITKQEKD FLWSHRHYCV
661 TIPEILPKLL LSVKWNSRDE VAQMYCLVKD WPPIKPEQAM ELLDCNYPDP MVRGFAVRCL
721 EKYLTDDKLS QYLIQLVQVL KYEQYLDNLL VRFLLKKALT NQRIGHFFFW HLKSEMHNKT
781 VSQRFGLLLE SYCRACGMYL KHLNRQVEAM EKLINLTDIL KQEKKDETQK VQMKFLVEQM
841 RRPDFMDALQ GFLSPLNPAH QLGNLRLEEC RIMSSAKRPL WLNWENPDIM SELLFQNNEI
901 IFKNGDDLRQ DMLTLQIIRI MENIWQNQGL DLRMLPYGCL SIGDCVGLIE VVRNSHTIMQ
961 IQCKGGLKGA LQFNSHTLHQ WLKDKNKGEI YDAAIDLFTR SCAGYCVATF ILGIGDRHNS
1021 NIMVKDDGQL FHIDFGHFLD HKKKKFGYKR ERVPFVLTQD FLIVISKGAQ ECTKTREFER
1081 FQEMCYKAYL AIRQHANLFI NLFSMMLGSG MPELQSFDDI AYIRKTLALD KTEQEALEYF
1141 MKQMNDAHHG GWTTKMDWIF HTIKQHALNE LGGAHHHHHH(配列番号２３)。

ＢＶ１０９７：多くの癌で見られる活性化変異H1047Rを、QuickChange XL部位特異的変異導入キット(Stratagene)を用いた部位特異的変異導入によりORF318に導入した。製造者により推奨される方法および変異原性プライマーgwG152-p07(5'-CAAATGAATGATGCACGTCATGGTGGCTGGACA-3')(配列番号２４)およびgwG152-p11(5'-TGTCCAGCCA-CCATGACGTGCATCATTCATTTG-3')(配列番号25)を使用して、ORF396を産生した。このクローンを配列決定により確認し、バキュロウイルス発現ベクターLR480の産生のために、インサートをゲートウェイ適応pBlueBac4.5ベクター(Invitrogen)に移すためのゲートウェイＬＲ反応(Invitrogen)に使用した。

キナーゼドメイン。
ＢＶ １０９７のタンパク質配列：
1 MREYDRLYEE YTRTSQEIQM KRTAIEAFNE TIKIFEEQCQ TQERYSKEYI EKFKREGNEK
61 EIQRIMHNYD KLKSRISEII DSRRRLEEDL KKQAAEYREI DKRMNSIKPG GISGGGGGIM
121 VLVECLLPNG MIVTLECLRE ATLITIKHEL FKEARKYPLH QLLQDESSYI FVSVTQEAER
181 EEFFDETRRL CDLRLFQPFL KVIEPVGNRE EKILNREIGF AIGMPVCEFD MVKDPEVQDF
241 RRNILNVCKE AVDLRDLNSP HSRAMYVYPP NVESSPELPK HIYNKLDKGQ IIVVIWVIVS
301 PNNDKQKYTL KINHDCVPEQ VIAEAIRKKT RSMLLSSEQL KLCVLEYQGK YILKVCGCDE
361 YFLEKYPLSQ YKYIRSCIML GRMPNLMLMA KESLYSQLPM DCFTMPSYSR RISTATPYMN
421 GETSTKSLWV INSALRIKIL CATYVNVNIR DIDKIYVRTG IYHGGEPLCD NVNTQRVPCS
481 NPRWNEWLNY DIYIPDLPRA ARLCLSICSV KGRKGAKEEH CPLAWGNINL FDYTDTLVSG
541 KMALNLWPVP HGLEDLLNPI GVTGSNPNKE TPCLELEFDW FSSVVKFPDM SVIEEHANWS
601 VSREAGFSYS HAGLSNRLAR DNELRENDKE QLKAISTRDP LSEITEQEKD FLWSHRHYCV
661 TIPEILPKLL LSVKWNSRDE VAQMYCLVKD WPPIKPEQAM ELLDCNYPDP MVRGFAVRCL
721 EKYLTDDKLS QYLIQLVQVL KYEQYLDNLL VRFLLKKALT NQRIGHFFFW HLKSEMHNKT
781 VSQRFGLLLE SYCRACGMYL KHLNRQVEAM EKLINLTDIL KQEKKDETQK VQMKFLVEQM
841 RRPDFMDALQ GFLSPLNPAH QLGNLRLEEC RIMSSAKRPL WLNWENPDIM SELLFQNNEI
901 IFKNGDDLRQ DMLTLQIIRI MENIWQNQGL DLRMLPYGCL SIGDCVGLIE VVRNSHTIMQ
961 IQCKGGLKGA LQFNSHTLHQ WLKDKNKGEI YDAAIDLFTR SCAGYCVATF ILGIGDRHNS
1021 NIMVKDDGQL FHIDFGHFLD HKKKKFGYKR ERVPFVLTQD FLIVISKGAQ ECTKTREFER
1081 FQEMCYKAYL AIRQHANLFI NLFSMMLGSG MPELQSFDDI AYIRKTLALD KTEQEALEYF
1141 MKQMNDARHG GWTTKMDWIF HTIKQHALNE LGGAHHHHHH(配列番号２６)。

Claims (17)

1. 式(Ｉ)
   

   

   〔式中、
   Ａは：
   

   

   からなる群から選択されるヘテロアリールであり；
   Ｒ^１は以下の置換基の１個であり：(１)非置換または置換、好ましくは置換Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルであって、該置換基は重水素、フルオロから独立して選択される１個以上、好ましくは１〜９個であるか、または部分Ｃ_３−Ｃ_５−シクロアルキルの１個または２個である；(２)場合により置換されていてよいＣ_３−Ｃ_５−シクロアルキルであって、該置換基は以下の部分から独立して選択される１個以上、好ましくは１〜４個である：重水素、Ｃ_１−Ｃ_４−アルキル(好ましくはメチル)、フルオロ、シアノ、アミノカルボニル；(３)場合により置換されていてよいフェニルであって、該置換基は以下の部分から独立して選択される１個以上、好ましくは１〜２個である：重水素、ハロ、シアノ、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルアミノ、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノ、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルアミノカルボニル、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノカルボニル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシ；(４)場合によりモノ−またはジ−置換アミン；ここで、該置換基は独立して以下の部分から選択される：重水素、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル(これは非置換であるか、または重水素、フルオロ、クロロ、ヒドロキシからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されている)、フェニルスルホニル(これは非置換であるか、または１個以上、好ましくは１個のＣ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシ、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノ−Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシで置換されている)；(５)置換スルホニル；ここで、該置換基は以下の部分から選択される：Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル(これは非置換であるか、または重水素、フルオロからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されている)、ピロリジノ、(これは非置換であるか、または重水素、ヒドロキシ、オキソからなる群から選択される１個以上；特に１個のオキソで置換されている)；(６)フルオロ、クロロ；
   Ｒ^２は水素であり；
   Ｒ^３は(１)水素、(２)フルオロ、クロロ、(３)場合により置換されていてよいメチルであって、ここで、該置換基は以下の部分から独立して選択される１個以上、好ましくは１〜３個である：重水素、フルオロ、クロロ、ジメチルアミノ。〕
   の化合物またはその塩；(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(ｔｅｒｔ−ブチル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)を除く。
2. Ａが：
   

   

   からなる群から選択されるヘテロアリールであり；
   Ｒ^１が：(１)シクロプロピルメチルまたは場合により置換されていてよい、分枝Ｃ_３−Ｃ_７−アルキルであって、該置換基は以下の部分から独立して選択される１個以上、好ましくは１〜９個である：重水素、フルオロ；(２)場合により置換されていてよいシクロプロピルまたはシクロブチルであって、該置換基は以下の部分から独立して選択される１個以上、好ましくは１〜４個である：メチル、重水素、フルオロ、シアノ、アミノカルボニル；(３)場合により置換されていてよいフェニルであって、該置換基は以下の部分から独立して選択される１個以上、好ましくは１〜２個である：重水素、ハロ、シアノ、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルアミノ、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノ、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキルアミノカルボニル、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノカルボニル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシ；(４)場合によりモノ−またはジ−置換アミン；ここで、該置換基は独立して以下の部分から選択される：重水素、Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル(これは非置換であるか、または重水素、フルオロ、クロロ、ヒドロキシからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されている)、フェニルスルホニル(これは非置換であるか、または１個以上、好ましくは１個のＣ_１−Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシ、ジ(Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル)アミノ−Ｃ_１−Ｃ_７−アルコキシで置換されている)；(５)置換スルホニル；ここで、該置換基は以下の部分から選択される：Ｃ_１−Ｃ_７−アルキル(これは非置換であるか、または重水素、フルオロからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されている)、ピロリジノ、(これは非置換であるか、または重水素、ヒドロキシ、オキソからなる群から選択される１個以上；特に１個のオキソで置換されている)；(６)フルオロ、クロロであり；
   Ｒ^２が水素であり；
   Ｒ^３が水素、メチル、ＣＤ_３、ＣＨ_２Ｃｌ、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨ_２Ｎ(ＣＨ_３)_３である；
   請求項１に記載の化合物；(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(ｔｅｒｔ−ブチル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)を除く。
3. Ａが：
   

   

   からなる群から選択されるヘテロアリールである、請求項１または２に記載の化合物。
4. 式(Ｉ)の化合物が式(ＩＢ)
   

   

   の化合物である、請求項１または２に記載の化合物；(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(ｔｅｒｔ−ブチル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)を除く。
5. 式(Ｉ)の化合物が式(ＩＡ)
   

   

   の化合物である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
6. 次のものから選択される、遊離形または薬学的に許容される塩形態の化合物：
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−ｔｅｒｔ−ブチル−ピリジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−シクロプロピル−ピリジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(２−フルオロ−フェニル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−シクロブチル−ピリジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−ｔｅｒｔ−ブチル−ピリジン−４−イル)−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−イソプロピル−ピリジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−シクロブチル−ピリジン−４−イル)−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(１−トリフルオロメチル−シクロプロピル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(１−トリフルオロメチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１−トリフルオロメチル−シクロプロピル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１−トリフルオロメチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(１−メチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(１−シアノ−シクロプロピル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(１−シアノ−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(１−カルバモイル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(２−ジメチルアミノ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−ジエチルアミノ−ピリジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−ジエチルアミノ−ピリジン−４−イル)−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(３−ｔｅｒｔ−ブチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル)−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(３−ｔｅｒｔ−ブチル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル)−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(３−エチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(５−{２−[１−(４−メトキシ−フェニル)−１−メチル−エチル]−ピリジン−４−イル}−４−メチル−チアゾール−２−イル)−アミド]；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(５−{２−[１−(４−メトキシ−フェニル)−１−メチル−エチル]−ピリジン−４−イル}−チアゾール−２−イル)−アミド]；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(５−{２−[１−(４−メトキシ−フェニル)−シクロプロピル]−ピリジン−４−イル}−４−メチル−チアゾール−２−イル)−アミド]；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(５−{２−[１−(４−メトキシ−フェニル)−シクロプロピル]−ピリジン−４−イル}−チアゾール−２−イル)−アミド]；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−{１−[４−(３−ジメチルアミノ−プロポキシ)−フェニル]−１−メチル−エチル}−ピリジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１−ｄ_３−メチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(１−ｄ_３−メチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−ｄ_３−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−ｄ_３−メチル−５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−ジメチルアミノメチル−５−[２−(１−ｄ_３−メチル−シクロブチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−クロロ−５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−フルオロメチル−５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(５−ベンゼンスルホニルアミノ−６−クロロ−ピリジン−３−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(５−ベンゼンスルホニルアミノ−６−クロロ−ピリジン−３−イル)−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(６−アミノ−５−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−イソプロピル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−ベンジル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−エチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−メトキシメチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(２,６−ジクロロ−ベンジル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−イソブチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(４−メトキシ−フェノキシメチル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(３−メトキシ−フェノキシメチル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(２−フルオロ−フェニル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−トリフルオロメチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１,１,２−トリメチル−プロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(５−{２−[１−(４−メトキシ−フェニル)−１−メチル−エチル]−ピリミジン−４−イル}−４−メチル−チアゾール−２−イル)−アミド]；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１,１−ジメチル−プロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１−メチル−１−ｐ−トリル−エチル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(１−フェニル−シクロペンチル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−シクロプロピル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−シクロブチル−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−ｄ_９−ｔｅｒｔ−ブチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(２−メチル−シクロプロピル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−ジエチルアミノ−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({４−メチル−５−[２−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリミジン−４−イル]−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(エチル−メチル−アミノ)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(６−シクロプロピル−ピラジン−２−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[４−メチル−５−(５−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル)−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(６−ｄ_１０−ジエチルアミノ−ピラジン−２−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(６−ジエチルアミノ−ピラジン−２−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−シクロプロピルメチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(２−フルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリミジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[５−(２−ｔｅｒｔ−ブチル−６−メチル−ピリミジン−４−イル)−４−メチル−チアゾール−２−イル]−アミド}；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(２−フルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド)；
   (Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−({５−[２−(２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル)−ピリジン−４−イル]−４−メチル−チアゾール−２−イル}−アミド。
7. 医薬として使用するための、遊離形または薬学的に許容される塩形態の、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
8. １種以上のホスファチジルイノシトール３−キナーゼ(ＰＩ３Ｋ)仲介疾患の処置に使用するための、遊離形または薬学的に許容される塩形態の、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
9. １種以上のホスファチジルイノシトール３−キナーゼ(ＰＩ３Ｋ)仲介疾患の処置用医薬の製造のための、遊離形または薬学的に許容される塩形態の、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物の使用。
10. ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ(ＰＩ３Ｋ)仲介疾患の処置方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の遊離形または薬学的に許容される塩形態の、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物を投与することを含む、方法。
11. 治療有効量の遊離形または薬学的に許容される塩形態の、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物および１個以上の薬学的許容物を含む、医薬組成物。
12. 治療有効量の遊離形または薬学的に許容される塩形態の、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物および治療有効量の１個以上の組合せ相手；および１個以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、同時または連続投与に適した組合せ医薬組成物。
13. ａタンパク質チロシンキナーゼ仲介疾患、特にホスファチジルイノシトール３−キナーゼ(ＰＩ３Ｋ)仲介疾患の処置に使用するための、請求項１１に記載の医薬組成物または請求項１２に記載の組合せ医薬組成物。
14. 該ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ(ＰＩ３Ｋ)仲介疾患がＰＩ３Ｋアルファ仲介疾患である、請求項８記載の使用のための化合物、請求項９に記載の化合物の使用、または請求項１０に記載の処置方法。
15. 該ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ(ＰＩ３Ｋ)仲介疾患がＰＩ３Ｋアルファの過発現または増幅、ＰＩＫ３ＣＡの体細胞突然変異またはＰＴＥＮの生殖系列変異または体細胞突然変異またはｐ８５−ｐ１１０複合体の上方制御に作用するｐ８５αの変異および転座に依存性である、請求項８記載の使用のための化合物、請求項９に記載の化合物の使用、または請求項１０に記載の処置方法。
16. 増殖性疾患；良性または悪性腫瘍；肉腫から選択される癌；肺；気管支；前立腺；乳房(散発性乳癌およびカウデン病罹患者を含む)；膵臓；消化器癌；結腸；直腸；結腸癌腫；結腸直腸腺腫；甲状腺；肝臓；肝内胆管；肝細胞；副腎；胃；胃；神経膠腫；神経膠芽腫；子宮内膜；黒色腫；腎臓；腎盂；膀胱；子宮体；子宮頸；膣；卵巣；多発性骨髄腫；食道；白血病；急性骨髄性白血病；慢性骨髄性白血病；リンパ球性白血病；骨髄球性白血病；脳；脳の癌腫；口腔および咽頭；喉頭；小腸；非ホジキンリンパ腫；黒色腫；絨毛結腸腺腫；腫瘍；上皮特性の腫瘍；リンパ腫；乳癌腫；基底細胞癌腫；扁平細胞癌腫；光線性角化症；固形腫瘍を含む腫瘍疾患；頭頚部腫瘍；真性多血症；本態性血小板血症；骨髄化生を伴う骨髄線維症；およびワルデンストレーム病の処置に使用するための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
17. 請求項１〜６のいずれか１項に記載のの式(Ｉ)の化合物の製造方法であって、
    式II
    

    

    の化合物と、式(IIIＡ)
    

    

    〔式中、置換基は請求項１〜６のいずれか１項に定義した通りである。〕
    化合物を、活性化剤の存在下で反応させるか(“方法Ａ”)、または
    式(IIIＢ)
    

    

    〔式中、置換基は請求項１〜６のいずれか１項に定義した通りであり；ＲＧは反応性基(例えばイミダゾリルカルボニル)である。〕
    の化合物と反応させ(“方法Ｂ”)；
    いずれの場合も場合により希釈剤の存在下であってよく、そして場合により反応助剤の存在下であってよく；
    ａそして
    得られた式(Ｉ)の化合物を遊離形または塩の形態で回収し、場合により方法Ａまたは方法Ｂに従い得られる式(Ｉ)の化合物を異なる式(Ｉ)の化合物に変換し、および／または得られる式(Ｉ)の化合物の塩をその異なる塩に変換し、および／または得られる遊離の式(Ｉ)の化合物をその塩に変換し、および／または得られる式(Ｉ)の化合物の異性体を、得られる１個以上の異なる式Ｉの異性体から単離することを含む、方法。