KR20110038737A - 유기 화합물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염, 조성물, 및 포스파티딜이노시톨 3-키나제의 억제에 의해 개선되는 질환의 치료에서의 화합물의 용도에 관한 것이다.
<화학식 I>
Figure pct00392

상기 식에서, 치환기는 상세한 설명에 정의된 바와 같다.

Description

유기 화합물 {ORGANIC COMPOUNDS}
본 발명은 신규한 알파-선택적 포스파티딜이노시톨 (PI) 3-키나제 억제제 화합물로서의 특정 2-카르복스아미드 시클로아미노 우레아 유도체, 그의 제약상 허용되는 염, 그의 전구약물 및 그의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 단독의 또는 하나 이상의 추가의 치료제와 조합된 이들 화합물을 임의로 제약상 허용되는 담체와 조합하여 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 수많은 질환, 특히 성장 인자, 수용체 티로신 키나제, 단백질 세린/트레오닌 키나제, G 단백질 커플링된 수용체 및 인지질 키나제 및 포스파타제의 비정상적인 활성 중 하나 이상에 의해 매개되는 질환의 치료에서, 단독의 또는 하나 이상의 추가의 치료제와 조합된 이들 화합물의 사용 방법에 관한 것이다.
포스파티딜이노시톨 3-키나제 (PI3K)는, 포스페이트를 이노시톨 지질의 D-3' 위치로 전달하는 것을 촉매화하여 포스포이노시톨-3-포스페이트 (PIP), 포스포이노시톨-3,4-디포스페이트 (PIP2) 및 포스포이노시톨-3,4,5-트리포스페이트 (PIP3)를 생성하고, 이어서 플렉스트린-상동성 부위, FYVE, Phox 및 다른 인지질-결합 도메인을 함유하는 단백질을 대개 원형질 막에서의 다양한 신호전달 복합체에 결합시킴으로써 신호전달 캐스케이드에서 제2 메신저로 작용하는 지질 키나제의 패밀리를 구성한다 (문헌 [Vanhaesebroeck et al., Annu. Rev. Biochem 70:535 (2001)]; [Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17:615 (2001)]). 1 PI3K의 두 가지 클래스 중, 클래스 1A PI3K는 p85α, p55α, p50α, p85β 또는 p55γ일 수 있는 조절 서브유닛과 구성적으로 관련이 있는 p110 촉매 서브유닛 (α, β, δ 이소형)으로 이루어진 이종이량체이다. 클래스 1B 하위 클래스는 p101 또는 p84의 두 가지 조절 서브유닛 중 하나와 관련이 있는 촉매 p110γ 서브유닛으로 이루어진 이종이량체를 패밀리의 한 구성원으로 갖는다 (문헌 [Fruman et al., Annu Rev. Biochem. 67:481 (1998)]; [Suire et al., Curr. Biol. 15:566 (2005)]). p85/55/50 서브유닛의 모듈 도메인은 활성화된 수용체 및 세포질 티로신 키나제 상의 특정 서열 환경에서 포스포티로신 잔기에 결합하여 클래스 1A PI3K를 활성화 및 국소화시키는 Src 상동성 (SH2) 도메인을 포함한다. 클래스 1B PI3K는 펩티드 및 비-펩티드 리간드의 여러 가지 레퍼토리에 결합하는 G 단백질-커플링된 수용체에 의해 직접적으로 활성화된다 (문헌 [Stephens et al., Cell 89:105 (1997)]; [Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17:615-675 (2001)]). 결과적으로, 생성된 클래스 I PI3K의 인지질 생성물은 상류 수용체를, 증식, 생존, 주화성, 세포 소통, 운동성, 대사, 염증성 및 알레르기 반응, 전사 및 번역을 비롯한 하류 세포 활성과 연결시킨다 (문헌 [Cantley et al., Cell 64:281 (1991)]; [Escobedo and Williams, Nature 335:85 (1988)]; [Fantl et al., Cell 69:413 (1992)]).
여러 경우, PIP2 및 PIP3은 바이러스성 종양유전자 v-Akt의 인간 상동체의 생성물인 Akt를 원형질 막으로 동원하고, 여기서 이는 성장 및 생존에 중요한 여러 세포내 신호전달 경로를 위한 중심점으로서 작용한다 (문헌 [Fantl et al., Cell 69:413-423(1992)]; [Bader et al., Nature Rev. Cancer 5:921 (2005)]; [Vivanco and Sawyer, Nature Rev. Cancer 2:489 (2002)]). 대개 Akt 활성화를 통해 생존을 증가시키는 PI3K의 비정상적인 조절은 인간 암에서 가장 일반적인 사건 중 하나이며, 다양한 수준으로 일어나는 것으로 밝혀졌다. 이노시톨 고리의 3' 위치에서 포스포이노시티드를 탈인산화시켜 PI3K 활성을 길항시키는 종양 억제인자 유전자 PTEN은 다양한 종양에서 기능적으로 결실되어 있다. 다른 종양에서, p110α 이소형, PIK3CA 및 Akt에 대한 유전자가 증폭되며, 이의 유전자 생성물의 증가된 단백질 발현은 여러 인간 암에서 입증되었다. 게다가, p85-p110 복합체를 상향 조절하는 p85α의 돌연변이 및 전좌가 인간 암에서 보고되었다. 최종적으로, 하류 신호전달 경로를 활성화시키는 PIK3CA에서의 체세포 과오 돌연변이는 광범위한 인간 암에서 상당한 빈도로 보고되었다 (문헌 [Kang at el., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:802 (2005)]; [Samuels et al., Science 304:554 (2004)]; [Samuels et al., Cancer Cell 7:561-573 (2005)]). 이러한 관찰은, 포스포이노시톨-3 키나제의 탈조절 및 이 신호전달 경로의 상류 및 하류 성분이 인간 암 및 증식성 질환과 관련된 가장 흔한 탈조절 중 하나임을 나타낸다 (문헌 [Parsons et al., Nature 436:792 (2005)]; [Hennessey at el., Nature Rev. Drug Disc. 4:988-1004 (2005)]).
상기에 비추어 볼 때, PI3K 알파의 억제제가 증식성 질환 및 다른 장애의 치료에서 특히 가치가 있을 것이다.
WO 2004/096797에는 PI3K 감마의 억제제로서의 특정 티아졸 유도체, 및 특히 염증성 상태 및 알레르기 상태의 치료를 위한 그의 제약 용도가 개시되어 있다.
WO 2005/021519에는 또한 PI3K 감마의 억제제로서의 특정 티아졸 유도체, 및 특히 염증성 상태 및 알레르기 상태의 치료를 위한 그의 제약 용도가 개시되어 있다.
WO 2006/051270에는 또한 PI3K 알파의 억제제로서의 특정 티아졸 유도체, 및 특히 항-종양 활성으로 인한 그의 제약 용도가 개시되어 있다.
WO 2007/129044에는 또한 PI3K 알파의 억제제로서의 특정 티아졸 유도체, 및 특히 항-종양 활성으로 인한 그의 제약 용도가 개시되어 있다.
선행 기술에 비추어 볼 때, 증식성 질환의 치료에 적합한 추가의 화합물, 특히 개선된 선택성 및/또는 보다 높은/개선된 활성을 갖는 화합물의 제공에 대한 필요성이 존재한다.
본 발명에 이르러, 하기 주어진 화학식 I의 2-카르복스아미드 시클로아미노 우레아 유도체가 유리한 약리학적 특성을 가지며, 예를 들어 PI3K (포스파티딜이노시톨 3-키나제)를 억제한다는 것이 밝혀졌다. 특히, 이들 화합물은 바람직하게는 베타 및/또는, 델타 및/또는 감마 아형과 관련된 PI3K 알파에 대해 개선된 선택성을 나타낸다. 따라서, 화학식 I의 화합물은, 예를 들어 PI3 키나제에 의존성인 질환 (특히, PI3K 알파, 예컨대 PI3K 알파의 과다발현 또는 증폭, PIK3CA의 체세포 돌연변이, 또는 PTEN의 배선(germline) 돌연변이 또는 체세포 돌연변이, 또는 p85-p110 복합체를 상향 조절하는 역할을 하는 p85α의 돌연변이 및 전좌를 나타내는 것들), 특히 증식성 질환, 예컨대 종양 질환 및 백혈병의 치료에 사용하기에 적합하다.
또한, 이들 화합물은 바람직하게는 개선된 대사 안정성을 나타내고 따라서 감소된 청소율을 나타내어, 개선된 약동학 프로파일을 유도한다.
제1 측면에서, 본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염을 제공한다.
<화학식 I>
Figure pct00001
상기 식에서,
A는 헤테로아릴을 나타내고;
R1은 (1) 임의로 치환된 알킬; (2) 임의로 치환된 시클로알킬; (3) 임의로 치환된 아릴; (4) 임의로 치환된 아민; (5) 임의로 치환된 술포닐; (6) 할로를 나타내고;
R2는 수소, 중수소, 또는 R1에 대해 정의된 바와 같은 치환기를 나타내고;
R3은 수소, 할로, 임의로 치환된 알킬을 나타내고,
단, (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(tert-부틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드)는 제외한다.
하기 용어 설명 및 종결부의 실시예를 포함하는 하기 명세서에 입각하여 본 발명이 더욱 상세히 이해될 수 있다. 간결성을 위하여, 본 명세서에 인용된 공보의 개시내용이 본원에 참조로 포함된다. 본원에서 사용되는 용어 "포함되는", "함유하는" 및 "포함하는"은 본원에서 이들의 개방적, 비제한적 의미로 사용된다.
본원에 제시된 임의의 화학식은 화학식에 의해 도시된 구조를 갖는 화합물 뿐만 아니라 특정 변형 또는 형태들을 나타내는 것으로 의도된다. 특히, 본원에 제시된 임의의 화학식의 화합물은 비대칭 중심을 가질 수 있어서, 상이한 거울상이성질체 형태로 존재할 수 있다. 적어도 하나의 비대칭 탄소 원자가 화학식 I의 화합물 내에 존재하는 경우, 상기 화합물은 광학 활성 형태 또는 광학 이성질체의 혼합물의 형태, 예를 들어 라세미체 혼합물의 형태로 존재할 수 있다. 라세미체 혼합물을 비롯한 모든 광학 이성질체 및 그의 혼합물은 본 발명의 일부이다. 따라서, 본원에 제시된 임의의 제시 화학식은 라세미체, 하나 이상의 거울상이성질체 형태, 하나 이상의 부분입체이성질체 형태, 하나 이상의 회전장애이성질체 형태, 및 그의 혼합물을 나타내는 것으로 의도된다. 게다가, 특정 구조들은 기하이성질체 (즉 시스 및 트랜스 이성질체)로서, 호변이성질체로서, 또는 회전장애이성질체로서 존재할 수 있다.
본원에 제시된 임의의 화학식은 상기 화합물의 수화물, 용매화물 및 다형체 및 그의 혼합물을 나타내는 것으로 의도된다.
본원에 제시된 임의의 화학식은 또한 화합물의 표지되지 않은 형태 뿐만 아니라 동위원소-표지된 형태를 나타내는 것으로 의도된다. 동위원소-표지된 화합물은 하나 이상의 원자가 선택된 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자로 대체된 것을 제외하고는, 본원에 제시된 화학식으로 도시된 구조를 갖는다. 본 발명의 화합물에 혼입될 수 있는 동위 원소의 예로는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 불소 및 염소의 동위원소, 예컨대 각각 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl, 125I가 포함된다. 본 발명은 본원에 정의된 바와 같은 다양한 동위원소-표지된 화합물, 예를 들어 3H, 13C 및 14C와 같은 방사성 동위원소가 존재하는 것을 포함한다. 이러한 동위원소-표지된 화합물은 대사성 연구 (바람직하게는 14C 사용), 반응 역학 연구 (예를 들어, 2H 또는 3H 사용), 약물 또는 기질 조직 분포 검정을 비롯한 검출 또는 영상 기술, 예컨대, 양전자 방출 단층촬영 (PET) 또는 단일 광자 방출 전산화된 단층촬영 (SPECT)에서, 또는 환자의 방사성 치료에서 유용하다. 특히, 18F 또는 표지된 화합물이 PET 또는 SPECT 연구에서 특히 바람직할 수 있다. 동위원소 표지된 본 발명의 화합물 및 그의 전구약물은 일반적으로, 동위원소 표지되지 않은 시약을 손쉽게 입수가능한 동위 원소 표지된 시약으로 대체하여 이하 기재된 반응식, 또는 실시예 및 제조에 개시된 절차를 수행함으로써 제조할 수 있다.
추가로, 보다 무거운 동위원소, 예컨대 중수소 (즉, 2H 또는 D)로의 치환은 보다 큰 대사 안정성, 예를 들어 생체내 반감기 증가 또는 투여 요구량 감소 또는 치료 지수의 개선을 야기하여 특정한 치료 이점을 제공할 수 있다. 이러한 맥락에서 중수소는 화학식 I의 화합물의 치환기로서 간주된다고 이해된다. 상기 보다 무거운 동위원소, 상세하게는 중수소의 농도는 동위원소 농축 계수에 의해 정의될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "동위원소 농축 계수"는 동위원소 존재량 및 특정 동위원소의 자연 존재량 사이의 비율을 의미한다. 본 발명의 화합물 내 치환기가 표시된 중수소인 경우, 이러한 화합물은 각 지정된 중수소 원자에 대하여 적어도 3500 (각 지정된 중수소 원자에서 52.5％의 중수소 혼입), 적어도 4000 (60％의 중수소 혼입), 적어도 4500 (67.5％의 중수소 혼입), 적어도 5000 (75％의 중수소 혼입), 적어도 5500 (82.5％의 중수소 혼입), 적어도 6000 (90％의 중수소 혼입), 적어도 6333.3 (95％의 중수소 혼입), 적어도 6466.7 (97％의 중수소 혼입), 적어도 6600 (99％의 중수소 혼입), 또는 적어도 6633.3 (99.5％의 중수소 혼입)의 동위원소 농축 계수를 갖는다. 본 발명의 화합물에서, 특정 동위원소로서 구체적으로 지정되지 않은 임의의 원자는 상기 원자의 임의의 안정한 동위원소를 나타내는 것을 의미한다. 달리 언급하지 않는 한, 위치가 "H" 또는 "수소"로서 구체적으로 지정된 경우, 상기 위치는 그의 자연 존재량 동위원소 조성으로 수소를 갖는 것으로 이해한다. 따라서, 본 발명의 화합물에서 중수소 (D)로서 구체적으로 지정된 임의의 원자는, 예를 들어 앞서 제시된 범위의 중수소를 나타내는 것을 의미한다.
본원에 제시된 임의의 화학식이 참조되는 경우, 특정 변수에 대하여 가능한 종들의 목록에서 특정 잔기를 선택하는 것은, 다른 곳에 나타낸 그 변수에 대한 잔기를 한정하는 것으로 의도되지 않는다. 즉, 변수가 1회를 초과하여 나타나는 경우, 구체적인 목록으로부터의 종의 선택은 화학식 내 다른 곳에서의 동일 변수에 대한 종의 선택과 무관하다 (상기 또는 하기에 바람직한 것으로서 특징화된 실시양태에서의 하나 이상 내지 모든 보다 일반적인 표현이 보다 구체적인 정의로 대체되어, 각각 본 발명의 보다 바람직한 실시양태를 유도할 수 있음).
복수 형태 (예를 들어, 화합물들, 염들)가 사용되는 경우, 이에는 단수형 (예를 들어, 단일 화합물, 단일 염)이 포함된다. "화합물"은 (예를 들어, 제약 제제에서) 하나 초과의 화학식 I의 화합물 (또는 그의 염)이 존재하는 것을 배제하지 않는다.
달리 명시하지 않는 한, 하기 일반적 정의가 본 명세서에서 적용될 것이다.
할로겐 (또는 할로)은 불소, 브롬, 염소 또는 요오드, 특히 불소, 염소를 나타낸다. 할로겐-치환된 기 및 잔기, 예컨대 할로겐으로 치환된 알킬 (할로알킬)은 모노-, 폴리- 또는 퍼-할로겐화될 수 있다.
헤테로 원자는 탄소 및 수소 이외의 원자, 바람직하게는 질소 (N), 산소 (O) 또는 황 (S), 특히 질소이다.
탄소 함유 기, 잔기 또는 분자는 1 내지 7개, 바람직하게는 1 내지 6개, 보다 바람직하게는 1 내지 4개, 가장 바람직하게는 1 또는 2개의 탄소 원자를 함유한다. 1개 초과의 탄소 원자를 갖는 임의의 비-시클릭 탄소 함유 기 또는 잔기는 직쇄 또는 분지형이다.
접두사 "저급" 또는 "C1-C7"은 7개 이하, 특히 4개 이하의 탄소 원자를 갖는 라디칼을 나타내며, 당해 라디칼은 선형이거나, 또는 단일 또는 다중 분지를 갖는 분지형이다.
"알킬"은 직쇄 또는 분지쇄 알킬기를 지칭하고, 바람직하게는 직쇄 또는 분지쇄 C1 - 12알킬을 나타내고, 특히 바람직하게는 직쇄 또는 분지쇄 C1 - 7알킬; 예를 들어, 메틸, 에틸, n- 또는 이소-프로필, n-, 이소-, sec- 또는 tert-부틸, n-펜틸, n-헥실, n-헵틸, n-옥틸, n-노닐, n-데실, n-운데실, n-도데실을 나타내고, 특히 바람직하게는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필 및 n-부틸 및 이소-부틸이다. 알킬은 비치환 또는 치환될 수 있다. 예시적인 치환기로는 중수소, 히드록시, 알콕시, 할로 및 아미노가 포함되나, 이에 제한되지는 않는다. 치환된 알킬의 예는 트리플루오로메틸이다. 시클로알킬이 알킬에 대한 치환기일 수도 있다. 이러한 경우의 예는 잔기 (알킬)-시클로프로필 또는 알칸디일-시클로프로필, 예를 들어 -CH2-시클로프로필이다. C1-C7-알킬은 바람직하게는 1 이상 7 이하, 바람직하게는 1 이상 4 이하의 알킬이고, 선형 또는 분지형이고; 바람직하게는, 저급 알킬이 부틸, 예컨대 n-부틸, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸, 프로필, 예컨대 n-프로필 또는 이소프로필, 에틸 또는 바람직하게는 메틸이다.
"알콕시", "알콕시알킬", "알콕시카르보닐", "알콕시카르보닐알킬", "알킬술포닐", "알킬술폭실", "알킬아미노", "할로알킬"과 같은 기타 기에서의 각 알킬 부분은 상기 언급된 "알킬"의 정의에 기재된 바와 동일한 의미를 가질 것이다.
"알칸디일"은 2개의 상이한 탄소 원자에 의해 잔기에 결합되는 직쇄 또는 분지쇄 알칸디일 기를 지칭하며, 이는 바람직하게는 직쇄 또는 분지쇄 C1 -12 알칸디일을 나타내고, 특히 바람직하게는 직쇄 또는 분지쇄 C1 -6 알칸디일; 예를 들어, 메탄디일 (-CH2-), 1,2-에탄디일 (-CH2-CH2-), 1,1-에탄디일 ((-CH(CH3)-), 1,1-, 1,2-, 1,3-프로판디일 및 1,1-, 1,2-, 1,3-, 1,4-부탄디일을 나타내고, 특히 바람직하게는 메탄디일, 1,1-에탄디일, 1,2-에탄디일, 1,3-프로판디일, 1,4-부탄디일다.
"알켄디일"은 2개의 서로 다른 탄소 원자에 의해 분자에 결합되는 직쇄 또는 분지쇄 알켄디일 기를 지칭하며, 이는 바람직하게는 직쇄 또는 분지쇄 C2 -6 알칸디일; 예를 들어, -CH=CH-, -CH=C(CH3)-, -CH=CH-CH2-, -C(CH3)=CH-CH2-, -CH=C(CH3)-CH2-, -CH=CH-C(CH3)H-, -CH=CH-CH=CH-, -C(CH3)=CH-CH=CH-, -CH=C(CH3)-CH=CH-를 나타내고, 특히 바람직하게는 -CH=CH-CH2-, -CH=CH-CH=CH-이다. 알켄디일은 치환 또는 비치환될 수 있다.
"시클로알킬"은 카르보사이클 당 3 내지 12개의 고리 원자를 갖는, 포화 또는 부분 포화된 모노시클릭, 융합된 폴리시클릭 또는 스피로 폴리시클릭 카르보사이클을 지칭한다. 시클로알킬기의 예시적 예로는 하기 잔기가 포함된다: 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 및 시클로헥실. 시클로알킬은 비치환 또는 치환될 수 있고; 예시적인 치환기는 알킬에 대한 정의에 제공되어 있으며, 또한 알킬 자체 (예컨대, 메틸)를 포함한다. -(CH3)시클로프로필과 같은 잔기는 치환된 시클로알킬로 간주한다.
"아릴"은 6개 이상의 탄소 원자를 갖는 방향족 호모시클릭 고리계 (즉, 탄소 원자만이 고리 형성 원자임)를 지칭하며; 아릴은 바람직하게는 6 내지 14개의 고리 탄소 원자, 보다 바람직하게는 6 내지 10개의 고리 탄소 원자를 갖는 방향족 잔기, 예컨대 페닐 또는 나프틸, 바람직하게는 페닐이다. 아릴은 비치환되거나, 또는 하기 기재된 비치환 또는 치환 헤테로시클릴, 특히 피롤리디닐, 예컨대 피롤리디노, 옥소피롤리디닐, 예컨대 옥소피롤리디노, C1-C7-알킬-피롤리디닐, 2,5-디-(C1-C7알킬)피롤리디닐, 예컨대 2,5-디-(C1-C7알킬)-피롤리디노, 테트라히드로푸라닐, 티오페닐, C1-C7-알킬피라졸리디닐, 피리디닐, C1-C7-알킬피페리디닐, 피페리디노, 아미노 또는 N-모노- 또는 N,N-디-[저급 알킬, 페닐, C1-C7-알카노일 및/또는 페닐-저급 알킬)-아미노로 치환된 피페리디노, 고리 탄소 원자를 통해 결합된, 비치환 또는 N-저급 알킬 치환된 피페리디닐, 피페라지노, 저급 알킬피페라지노, 모르폴리노, 티오모르폴리노, S-옥소-티오모르폴리노 또는 S,S-디옥소티오모르폴리노; C1-C7-알킬, 아미노-C1-C7-알킬, N-C1-C7-알카노일아미노-C1-C7-알킬, N-C1-C7-알칸술포닐-아미노-C1-C7-알킬, 카르바모일-C1-C7-알킬, [N-모노- 또는 N,N-디-(C1-C7-알킬)-카르바모일]-C1-C7-알킬, C1-C7-알칸술피닐-C1-C7-알킬, C1-C7-알칸술포닐-C1-C7-알킬, 페닐, 나프틸, 모노- 내지 트리-[C1-C7-알킬, 할로 및/또는 시아노]-페닐 또는 모노- 내지 트리-[C1-C7-알킬, 할로 및/또는 시아노]-나프틸; C3-C8-시클로알킬, 모노- 내지 트리-[C1-C7-알킬 및/또는 히드록시]-C3-C8-시클로알킬; 할로, 히드록시, 저급 알콕시, 저급-알콕시-저급 알콕시, (저급-알콕시)-저급 알콕시-저급 알콕시, 할로-C1-C7-알콕시, 페녹시, 나프틸옥시, 페닐- 또는 나프틸-저급 알콕시; 아미노-C1-C7-알콕시, 저급-알카노일옥시, 벤조일옥시, 나프토일옥시, 포르밀 (CHO), 아미노, N-모노- 또는 N,N-디-(C1-C7-알킬)-아미노, C1-C7-알카노일아미노, C1-C7-알칸술포닐아미노, 카르복시, 저급 알콕시 카르보닐, 예를 들어; 페닐- 또는 나프틸-저급 알콕시카르보닐, 예컨대 벤질옥시카르보닐; C1-C7-알카노일, 예컨대 아세틸, 벤조일, 나프토일, 카르바모일, N-모노- 또는 N,N-이치환된 카르바모일, 예컨대 N-일치환 또는 N,N-이치환된 카르바모일 (여기서 치환기는 저급 알킬, (저급-알콕시)-저급 알킬 및 히드록시-저급 알킬로부터 선택됨); 아미디노, 구아니디노, 우레이도, 메르캅토, 저급 알킬티오, 페닐- 또는 나프틸티오, 페닐- 또는 나프틸-저급 알킬티오, 저급 알킬-페닐티오, 저급 알킬-나프틸티오, 할로-저급 알킬메르캅토, 술포 (-SO3H), 저급 알칸술포닐, 페닐- 또는 나프틸-술포닐, 페닐- 또는 나프틸-저급 알킬술포닐, 알킬페닐술포닐, 할로-저급 알킬술포닐, 예컨대 트리플루오로메탄술포닐; 술폰아미도, 벤조술폰아미도, 아지도, 아지도-C1-C7-알킬, 특히 아지도메틸, C1-C7-알칸술포닐, 술파모일, N-모노- 또는 N,N-디-(C1-C7-알킬)-술파모일, 모르폴리노술포닐, 티오모르폴리노술포닐, 시아노 및 니트로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 1개 이상, 바람직하게는 3개 이하, 보다 바람직하게는 2개 이하의 치환기로 치환될 수 있고; 여기서 치환된 알킬 (또는 또한 본원에 언급된 치환된 아릴, 헤테로시클릴 등)의 치환기의 일부로서 또는 치환기로서의 상기 각각의 페닐 또는 나프틸 (또한 페녹시 또는 나프톡시)은 그 자체가 비치환되거나, 또는 할로, 할로-저급 알킬, 예컨대 트리플루오로메틸, 히드록시, 저급 알콕시, 아지도, 아미노, N-모노- 또는 N,N-디-(저급 알킬 및/또는 C1-C7-알카노일)-아미노, 니트로, 카르복시, 저급-알콕시카르보닐, 카르바모일, 시아노 및/또는 술파모일로부터 독립적으로 선택되는 1개 이상, 예를 들어 3개 이하, 바람직하게는 1 또는 2개의 치환기로 치환된다.
"헤테로시클릴"은 불포화 (= 접합된 이중 결합을 고리(들)에 가능한 최대수로 함유함), 포화 또는 부분 포화 헤테로시클릭 라디칼을 지칭하고, 바람직하게는 모노시클릭이거나 또는, 본 발명의 보다 넓은 측면에서는, 비시클릭, 트리시클릭 또는 스피로시클릭 고리이고; 3 내지 24개, 보다 바람직하게는 4 내지 16개, 가장 바람직하게는 5 내지 10개, 가장 바람직하게는 5 또는 6개의 고리 원자를 가지며; 여기서 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 4개, 특히 1 또는 2개의 고리 원자가 헤테로원자이다 (따라서, 나머지 고리 원자는 탄소임). 결합 고리 (즉, 분자에 연결되는 고리)는 바람직하게는 4 내지 12개, 특히 5 내지 7개의 고리 원자를 갖는다. 용어 헤테로시클릴은 또한 헤테로아릴이다. 헤테로시클릭 라디칼 (헤테로시클릴)은 비치환되거나, 또는 치환된 알킬에 대해 상기 정의된 치환기로 이루어진 군 및/또는 하기 치환기 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되는 1개 이상, 특히 1 내지 3개의 치환기로 치환될 수 있다: 옥소 (=O), 티오카르보닐 (=S), 이미노(=NH), 이미노-저급 알킬. 또한, 헤테로시클릴은 특히 옥시라닐, 아지리닐, 아지리디닐, 1,2-옥사티올라닐, 티에닐 (=티오페닐), 푸라닐, 테트라히드로푸릴, 피라닐, 티오피라닐, 티안트레닐, 이소벤조푸라닐, 벤조푸라닐, 크로메닐, 2H-피롤릴, 피롤릴, 피롤리닐, 피롤리디닐, 이미다졸릴, 이미다졸리디닐, 벤즈이미다졸릴, 피라졸릴, 피라지닐, 피라졸리디닐, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 디티아졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 피리딜, 피라지닐, 피리미디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 피리다지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, (S-옥소 또는 S,S-디옥소)-티오모르폴리닐, 인돌리지닐, 아제파닐, 디아제파닐, 특히 1,4-디아제파닐, 이소인돌릴, 3H-인돌릴, 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 쿠마릴, 인다졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 퓨리닐, 4H-퀴놀리지닐, 이소퀴놀릴, 퀴놀릴, 테트라히드로퀴놀릴, 테트라히드로이소퀴놀릴, 데카히드로퀴놀릴, 옥타히드로이소퀴놀릴, 벤조푸라닐, 디벤조푸라닐, 벤조티오페닐, 디벤조티오페닐, 프탈라지닐, 나프티리디닐, 퀴녹살릴, 퀴나졸리닐, 퀴나졸리닐, 신놀리닐, 프테리디닐, 카르바졸릴, 베타-카르볼리닐, 페난트리디닐, 아크리디닐, 페리미디닐, 페난트롤리닐, 푸라자닐, 페나지닐, 페노티아지닐, 페녹사지닐, 크로메닐, 이소크로마닐, 크로마닐, 벤조[1,3]디옥솔-5-일 및 2,3-디히드로-벤조[1,4]디옥신-6-일로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로시클릴 라디칼이고, 이들 각각의 라디칼은 비치환되거나, 또는 치환된 아릴에 대해 상기 언급된 것들 및/또는 하기 치환기 중 하나 이상으로부터 선택되는 1개 이상의, 바람직하게는 3개 이하의 치환기로 치환된다: 옥소 (=O), 티오카르보닐 (=S), 이미노(=NH), 이미노-저급 알킬.
"아릴알킬"은 알킬기, 예컨대 메틸 또는 에틸기를 통해 분자에 결합된 아릴 기, 바람직하게는 페네틸 또는 벤질, 특히 벤질을 지칭한다. 유사하게, 시클로알킬-알킬 및 헤테로시클릴-알킬은 알킬기를 통해 분자에 결합된 시클로알킬기 또는 알킬기를 통해 분자에 결합된 헤테로시클릴 기를 나타낸다. 각 경우, 아릴, 헤테로시클릴, 시클로알킬 및 알킬은 상기 정의된 바와 같이 치환될 수 있다.
"치료"에는 질환 또는 장애의 예방적 (방지적) 및 치유적 치료 뿐만 아니라 진행의 지연이 포함된다.
"PI3 키나제 매개 질환" (특히, PI3K 알파 매개 질환, 또는 PI3K 알파의 과다발현 또는 증폭, PIK3CA의 체세포 돌연변이, 또는 PTEN의 배선 돌연변이 또는 체세포 돌연변이, 또는 p85-p110 복합체를 상향조절하는 역할을 하는 p85α의 돌연변이 및 전좌에 의해 매개되는 질환)은 특히 PI3 키나제의 억제, 특히 PI3K알파 또는 그의 돌연변이 형태의 억제에 대해 유익한 방식 (예를 들어, 하나 이상의 증상의 개선, 질환 발병의 지연, 질환으로부터의 최대 일시적이거나 또는 완전한 치유)으로 반응하는 장애이다 (여기서, 치료되는 질환 중에서 증식성 질환, 예컨대 종양 질환 및 백혈병을 특히 언급할 수 있음).
"염" ("또는 그의 염들" 또는 "또는 그의 염"의 의미)은 단독으로 또는 화학식 I의 유리 화합물과의 혼합물로 존재할 수 있으며, 바람직하게는 제약상 허용되는 염이다. 이러한 염은 염기성 질소 원자를 갖는 화학식 I의 화합물로부터, 바람직하게는 유기 또는 무기산과의, 예를 들어 산 부가염으로서 형성되며, 특히 제약상 허용되는 염이다. 적합한 무기산은, 예를 들어 할로겐산, 예컨대 염산, 황산 또는 인산이다. 적합한 유기산은, 예를 들어 카르복실산 또는 술폰산, 예컨대 푸마르산 또는 메탄술폰산이다. 단리 또는 정제 목적상, 제약상 허용되지 않는 염, 예를 들어 피크레이트 또는 퍼클로레이트를 사용하는 것도 가능하다. 치료 용도를 위해서는, 제약상 허용되는 염 또는 유리 화합물만을 사용하므로 (제약 제제의 형태로 적용가능한 경우), 이들이 바람직하다. 유리 형태의 화합물 및 그의 염 (예를 들어, 신규 화합물의 정제 또는 동정에서 중간체로서 사용될 수 있는 염 포함) 형태의 신규 화합물 사이의 밀접한 관계를 고려할 때, 상기 및 하기의 유리 화합물에 대한 임의의 언급은, 적절하게 편의상 상응하는 염도 지칭하는 것으로 이해해야 한다. 화학식 I의 화합물의 염은 바람직하게는 제약상 허용되는 염이며, 제약상 허용되는 염을 형성하는 적합한 반대-이온은 당업계에 공지되어 있다.
조합물은 하나의 투여 단위 형태인 고정 조합물을 지칭하거나, 또는 화학식 I의 화합물 및 조합 파트너 (예를 들어, 이하 설명되며, 또한 "치료제" 또는 "공동-작용제"로서 칭해지는 또 다른 약물)를 동일한 시간에 독립적으로 투여하거나, 또는 특히 조합 파트너가 협동 효과, 예를 들어 상승작용 효과를 나타내게 하는 시간 간격 이내에 별도로 투여할 수 있는 조합 투여용 부분품의 키트를 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "공동-투여" 또는 "조합 투여" 등은 이를 필요로 하는 단일 대상체 (예를 들어, 환자)로의 선택된 조합 파트너의 투여를 포함하는 것을 의미하며, 작용제가 반드시 동일한 투여 경로를 통해 또는 동일한 시간에 투여될 필요는 없는 치료 투약법을 포함하는 것으로 의도된다. 본원에 사용된 용어 "제약 조합물"은 하나 초과의 활성 성분을 혼합 또는 조합하여 얻은 생성물을 의미하며, 활성 성분들의 고정 및 비-고정 조합물을 모두 포함한다. 용어 "고정 조합물"은 활성 성분, 예를 들어 화학식 I의 화합물 및 조합 파트너가 모두 단일 개체 또는 투여 형태로 환자에게 동시에 투여되는 것을 의미하다. 용어 "비-고정 조합물"은 활성 성분, 예를 들어 화학식 I의 화합물 및 조합 파트너가 분리체 (separate entities)로서 동시에, 함께, 또는 구체적 시간 제한 없이 순차적으로 환자에게 투여되는 것을 의미한다 (여기서, 상기 투여는 환자 체내에서 두 화합물의 치료적 유효 수준을 제공함). 후자는 또한 칵테일(cocktail) 요법, 예를 들어 셋 이상의 활성 성분의 투여에 적용된다.
바람직한 실시양태 (독립적으로, 총괄적으로 또는 임의의 조합 또는 하위-조합으로 바람직함)에서, 본 발명은 유리 염기 형태 또는 산 부가염 형태의 화학식 I의 화합물 (여기서, 치환기는 본원에서 정의된 바와 같음)에 관한 것이다.
유리한 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 IA의 화합물에 관한 것이다.
<화학식 IA>
Figure pct00002
상기 식에서, 치환기는 화학식 I의 화합물에 대해 정의된 바와 같다.
추가의 유리한 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 IB의 화합물에 관한 것이다.
<화학식 IB>
Figure pct00003
상기 식에서, 치환기는 화학식 I의 화합물에 대해 정의된 바와 같다.
따라서, 화학식 I의 화합물 또한 화학식 IA 및 IB의 화합물을 포함한다. 본 발명의 문맥에서, 하기 정의가 또한 적용가능하다.
바람직하게는, A는 1 또는 2개의 질소 원자, 및 5 내지 10개의 고리 형성 원자를 갖는 헤테로아릴을 나타낸다.
특히 바람직하게는, A는
Figure pct00004
로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로아릴을 나타낸다.
매우 특히 바람직하게는, A는
Figure pct00005
로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로아릴을 나타낸다.
가장 바람직하게는, A는
Figure pct00006
로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로아릴을 나타낸다.
바람직하게는, R1은 다음의 치환기:
(1) 비치환 또는 치환된, 바람직하게는 치환된 C1-C7-알킬 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: 중수소, 할로, 시아노, C3-C12-시클로알킬, C1-C7-알킬아미노, 디(C1-C7-알킬)아미노, C1-C7-알킬아미노카르보닐, 디(C1-C7-알킬)아미노카르보닐, C1-C7-알콕시, 페닐 (이는 1개 이상, 바람직하게는 1개의, C1-C7-알킬, C1-C7-알콕시, 디(C1-C7-알킬)아미노-C1-C7-알콕시로 치환 또는 비치환됨), 페녹시 (이는 1개 이상, 바람직하게는 1개의, C1-C7-알킬, C1-C7-알콕시, 디(C1-C7-알킬)아미노-C1-C7-알콕시로 치환 또는 비치환됨) 중 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 9개로부터 독립적으로 선택됨);
(2) 비치환 또는 치환된 C3-C12-시클로알킬 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: 중수소, 할로, 시아노, C1-C7-알킬, C1-C7-알킬아미노, 디(C1-C7-알킬)아미노, 아미노카르보닐, C1-C7-알킬아미노카르보닐, 디(C1-C7-알킬)아미노카르보닐, C1-C7-알콕시, 페닐 (이는 1개 이상, 바람직하게는 1개의, C1-C7-알킬, C1-C7-알콕시, 디(C1-C7-알킬)아미노-C1-C7-알콕시로 치환 또는 비치환됨), 페녹시 (이는 1개 이상, 바람직하게는 1개의, C1-C7-알킬, C1-C7-알콕시, 디(C1-C7-알킬)아미노-C1-C7-알콕시로 치환 또는 비치환됨) 중 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 4개로부터 독립적으로 선택됨);
(3) 비치환 또는 치환된 페닐 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: 중수소, 할로, 시아노, C1-C7-알킬, C1-C7-알킬아미노, 디(C1-C7-알킬)아미노, C1-C7-알킬아미노카르보닐, 디(C1-C7-알킬)아미노카르보닐, C1-C7-알콕시 중 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 2개로부터 독립적으로 선택됨);
(4) 비치환된, 일치환 또는 이치환된 아민 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: 중수소, C1-C7-알킬 (이는 중수소, 플루오로, 클로로, 히드록시의 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 치환 또는 비치환됨), C1-C7-알킬카르보닐, 페닐 (이는 1개 이상, 바람직하게는 1개의, C1-C7-알킬, C1-C7-알콕시, 디(C1-C7-알킬)아미노-C1-C7-알콕시로 치환 또는 비치환됨), 페닐술포닐 (이는 1개 이상, 바람직하게는 1개의, C1-C7-알킬, C1-C7-알콕시, 디(C1-C7-알킬)아미노-C1-C7-알콕시로 치환 또는 비치환됨)로부터 독립적으로 선택됨),
(5) 치환된 술포닐 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: C1-C7-알킬 (이는 중수소, 플루오로, 클로로, 히드록시의 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 치환 또는 비치환됨), C1-C7-알킬아미노 (여기서, 알킬 부분은 중수소, 플루오로, 클로로, 히드록실의 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 치환 또는 비치환됨), 디-C1-C7-알킬아미노 (여기서, 알킬 부분은 중수소, 플루오로, 클로로, 히드록실의 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 치환 또는 비치환됨)로부터 선택됨);
(6) 플루오로, 클로로
중 하나를 나타낸다.
특히 바람직하게는, R1은 다음의 치환기:
(1) 비치환 또는 치환된, 바람직하게는 치환된 C1-C7-알킬 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: 중수소, 플루오로 중 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 9개, 또는 다음의 잔기: C3-C5-시클로알킬 중 1 내지 2개로부터 독립적으로 선택됨);
(2) 임의로 치환된 C3-C5-시클로알킬 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: 중수소, C1-C4-알킬 (바람직하게는 메틸), 플루오로, 시아노, 아미노카르보닐 중 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 4개로부터 독립적으로 선택됨);
(3) 임의로 치환된 페닐 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: 중수소, 할로, 시아노, C1-C7-알킬, C1-C7-알킬아미노, 디(C1-C7-알킬)아미노, C1-C7-알킬아미노카르보닐, 디(C1-C7-알킬)아미노카르보닐, C1-C7-알콕시 중 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 2개로부터 독립적으로 선택됨);
(4) 임의로 일치환 또는 이치환된 아민 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: 중수소, C1-C7-알킬 (이는 중수소, 플루오로, 클로로, 히드록시의 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 치환 또는 비치환됨), 페닐술포닐 (이는 1개 이상, 바람직하게는 1개의, C1-C7-알킬, C1-C7-알콕시, 디(C1-C7-알킬)아미노-C1-C7-알콕시로 치환 또는 비치환됨)로부터 독립적으로 선택됨),
(5) 치환된 술포닐 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: C1-C7-알킬 (이는 중수소, 플루오로의 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 치환 또는 비치환됨), 피롤리디노 (이는 중수소, 히드록시, 옥소의 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기; 특히 1개의 옥소로 치환 또는 비치환됨)로부터 선택됨),
(6) 플루오로, 클로로
중 하나를 나타낸다.
매우 특히 바람직하게는, R1은
(1) 시클로프로필메틸 또는 임의로 치환된 분지형 C3-C7-알킬 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: 중수소, 플루오로 중 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 9개로부터 독립적으로 선택됨);
(2) 임의로 치환된 시클로프로필 또는 시클로부틸 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: 메틸, 중수소, 플루오로, 시아노, 아미노카르보닐 중 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 4개로부터 독립적으로 선택됨);
(3) 임의로 치환된 페닐 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: 중수소, 할로, 시아노, C1-C7-알킬, C1-C7-알킬아미노, 디(C1-C7-알킬)아미노, C1-C7-알킬아미노카르보닐, 디(C1-C7-알킬)아미노카르보닐, C1-C7-알콕시 중 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 2개로부터 독립적으로 선택됨);
(4) 임의로 일치환 또는 이치환된 아민 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: 중수소, C1-C7-알킬 (이는 중수소, 플루오로, 클로로, 히드록시의 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 치환 또는 비치환됨), 페닐술포닐 (이는 1개 이상, 바람직하게는 1개의, C1-C7-알킬, C1-C7-알콕시, 디(C1-C7-알킬)아미노-C1-C7-알콕시로 치환 또는 비치환됨)로부터 독립적으로 선택됨),
(5) 치환된 술포닐 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: C1-C7-알킬 (이는 중수소, 플루오로의 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 치환 또는 비치환됨), 피롤리디노 (이는 중수소, 히드록시, 옥소의 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기; 특히 1개의 옥소로 치환 또는 비치환됨)로부터 선택됨),
(6) 플루오로, 클로로
를 나타낸다.
매우 특히 바람직하게는, R1은, 바람직하게는 I-A 및 I-B의 맥락에서 다음의 치환기: -C(CH3)2CF3, C(CD3)3, 1-메틸시클로프로필 중 하나를 나타낸다.
바람직하게는, R2는 R1에 대해 정의된 바와 같은 치환기를 나타낸다.
보다 바람직하게는, R2는 수소 또는 중수소를 나타낸다.
특히 바람직하게는, R2는 수소를 나타낸다.
별법의 실시양태에서, R2는 메틸을 나타낸다.
바람직하게는, R3은 (1) 수소, (2) 할로, (3) 임의로 치환된 C1-C7-알킬 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: 중수소, 할로, C1-C7-알킬아미노, 디(C1-C7-알킬)아미노 중 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 3개로부터 독립적으로 선택됨)을 나타낸다.
특히 바람직하게는, R3은 (1) 수소, (2) 플루오로, 클로로, (3) 임의로 치환된 메틸 (여기서, 상기 치환기 다음의 잔기: 중수소, 플루오로, 클로로, 디메틸아미노 중 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 3개로부터 독립적으로 선택됨)을 나타낸다.
매우 특히 바람직하게는, R3은 수소, 메틸, CD3, CH2Cl, CH2F, CH2N(CH3)3; 바람직하게는 메틸을 나타낸다.
본 발명은 또한 R1 및/또는 R2가 tert-부틸을 나타내는 화합물을 제외한, 본원에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 화학식 I의 화합물의 제약상 허용되는 전구약물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 화학식 I의 화합물의 제약상 허용되는 대사물에 관한 것이다.
본 발명은 특히 실시예에 기재된 화학식 I의 화합물, 또한 그에 기재된 제조 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 화학식 I의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다. 원칙적으로 2개의 상이한 아민을 상응하는 우레아 유도체로 전환시키는 모든 공지된 방법이 적합하며 이는 각 출발 물질을 사용하여 적용할 수 있다.
따라서, 본 발명은 특히, 각 경우에 임의로 희석제의 존재하에, 그리고 임의로 반응 보조제의 존재하에, 하기 화학식 II의 화합물을 활성화제의 존재하에 하기 화학식 IIIA의 화합물과 반응시키거나 ("방법 A"), 또는 하기 화학식 IIIB의 화합물과 반응시키고 ("방법 B");
생성된 화학식 I의 화합물을 유리 형태 또는 염의 형태로 회수하고;
임의로, 방법 A 또는 방법 B에 따라 수득가능한 화학식 I의 화합물을 화학식 I의 다른 화합물로 전환시키고/거나, 화학식 I의 화합물의 수득가능한 염을 그의 다른 염으로 전환시키고/거나, 화학식 I의 수득가능한 유리 화합물을 그의 염으로 전환시키고/거나, 화학식 I의 화합물의 수득가능한 이성질체를 화학식 I의 하나 이상의 다른 수득가능한 이성질체로부터 분리하는 것
을 포함하는, 화학식 I의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.
<화학식 II>
Figure pct00007
<화학식 IIIA>
Figure pct00008
(상기 식에서, 치환기는 본원에 정의된 바와 같고, R3은 추가로 클로로를 나타낼 수 있음)
<화학식 IIIB>
Figure pct00009
(상기 식에서, R1 및 R2는 본원에 정의된 바와 같고, R3은 본원에 정의된 바와 같으며 추가로 클로로일 수 있고, RG는 직접적으로 또는 하기 화학식 IIIE의 이소시아네이트 중간체의 형성을 통해 반응할 수 있는 반응성 기 (예컨대, 이미다졸릴카르보닐)를 나타냄)
<화학식 IIIE>
Figure pct00010
(상기 식에서, 치환기는 IIIB에 정의된 바와 같음)
반응 조건
방법은 당업계에 공지된 방법에 따라 또는 하기 실시예에 개시된 바와 같이 수행할 수 있다. 예를 들어, 화학식 II의 화합물을 염기, 예를 들어 유기 아민, 예를 들어 트리에틸아민의 존재하에서 화학식 III의 화합물과 용매, 예를 들어 디메틸포름아미드 중에서 반응시킬 수 있다.
상기 또는 하기에 온도가 제시된 경우, 제시된 수치값으로부터의 소폭의 편차, 예를 들어 ±10％의 편차가 허용될 수 있으므로, "약"이 추가되어야 한다.
모든 반응은 하나 이상의 희석제 및/또는 용매의 존재하에서 수행될 수 있다. 출발 물질은 등몰량으로 사용될 수 있고; 별법으로, 화합물이 과량으로 사용되어, 예를 들어 용매로서 기능하거나, 평형을 이동시키거나, 또는 일반적으로 반응 속도를 가속화시킬 수 있다.
반응 보조제, 예컨대 산, 염기 또는 촉매는, 일반적으로 공지된 절차에서와 유사하며 반응에 의해 요구되는 적합한 양으로, 당 분야에 공지된 바와 같이, 첨가될 수 있다.
보호기
하나 이상의 다른 관능기, 예를 들어 카르복시, 히드록시, 아미노, 술피드릴 등이 본원에 기재된 바와 같이 출발 물질 또는 임의의 다른 전구체에서 보호되거나 보호될 필요가 있는 경우, 이들이 반응에 참여하거나 반응을 방해해서는 안되기 때문에, 이들은 펩티드 화합물, 및 또한 세팔로스포린 및 페니실린 뿐만 아니라 핵산 유도체 및 당의 합성에 통상적으로 사용되는 기들이다. 보호기는 일단 제거되면 최종 화합물에는 더 이상 존재하지 않는 기이며 (한편 치환기로서 잔존하는 기는 본원에 사용되는 의미에서 보호기가 아님), 이는 출발 물질에 또는 중간 단계에 첨가되었다가 최종 화합물의 수득을 위해 제거되는 기이다. 또한 화학식 I의 화합물을 화학식 I의 다른 화합물로 전환시키는 경우, 유용하거나 필요하면, 보호기를 도입 및 제거할 수 있다.
보호기는 전구체 내에 이미 존재할 수 있으며, 원치않는 2차 반응, 예컨대 아실화, 에테르화, 에스테르화, 산화, 가용매분해 및 유사한 반응에 대하여 관련 관능기를 보호해야 한다. 보호기는, 그들 스스로, 전형적으로는 가아세토산분해, 가양성자분해, 가용매분해, 환원, 광분해에 의해 또는 또한 예를 들어, 생리학적 조건과 유사한 조건하에서의 효소 활성에 의해 용이하게, 즉 바람직하지 않은 2차 반응없이 제거되며, 최종 생성물에 존재하지 않는 것을 특징으로 한다. 전문가들은 상기 및 하기 언급된 반응에 적합한 보호기를 인지하고 있거나 또는 용이하게 확립할 수 있다.
상기 보호기에 의한 상기 관능기의 보호, 보호기 그 자체, 및 그의 제거 반응은, 예를 들어 표준 참고 도서, 예컨대 [J. F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London and New York 1973], [T. W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", Third edition, Wiley, New York 1999], ["The Peptides"; Volume 3 (editors: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981], ["Methoden der organischen Chemie" (Methods of organic chemistry), Houben Weyl, 4th edition, Volume 15/I, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974], [H.-D. Jakubke and H. Jescheit, "Aminosauren, Peptide, Proteine" (Amino acids, peptides, proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, and Basel 1982] 및 [Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate" (Chemistry of carbohydrates: monosaccharides and derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974]에 기재되어 있다.
임의의 반응 및 전환
화학식 I의 화합물은 화학식 I의 다른 화합물로 전환될 수 있다.
R3이 플루오로를 나타내는 화학식 I의 화합물에서; 이러한 화합물은 상응하는 염소 유도체를 플루오로 화합물로 전환시킴으로써 수득될 수 있다. 이러한 반응은 공지되어 있고, 치환 반응으로 지칭된다. 이러한 전환은 화학식 IIIA 또는 B의 출발 물질의 단계에서 수행되거나, 또는 상응하는 화학식 I의 화합물을 전환시킴으로써 수행될 수 있다.
치환기가 아미노 또는 아미노-C1-C7-알킬 치환기를 함유하는 화학식 I의 화합물에서, 아미노는 3급 질소 염기, 예컨대 트리에틸아민 또는 피리딘의 존재하에 적절한 용매, 예컨대 메틸렌 클로라이드의 부재 또는 존재하에, 예를 들어 -20 내지 50℃의 온도에서, 예컨대 대략 실온에서 상응하는 C1-C7-알카노일할로게니드 또는 C1-C7-알칸술포닐할로게니드, 예를 들어 상응하는 클로라이드과의 반응에 의해 아실아미노, 예를 들어 C1-C7-알카노일아미노 또는 C1-C7-알칸술포닐아미노로 전환될 수 있다.
치환기가 시아노 치환기를 함유하는 화학식 I의 화합물에서, 시아노는 적절한 금속 촉매, 예컨대 라니 니켈 또는 라니 코발트의 존재하에, 적합한 용매 중에서, 예를 들어 저급 알칸올, 예컨대 메탄올 및/또는 에탄올 중에서, 예를 들어 -20 내지 50℃의 온도에서, 예컨대 대략 실온에서, 예를 들어 수소화에 의해 아미노메틸기로 전환될 수 있다.
염-형성 기를 갖는 화학식 I의 화합물의 염은 그 자체로 공지된 방식으로 제조될 수 있다. 따라서, 화학식 I의 화합물의 산 부가염은 산 또는 적합한 음이온 교환 시약으로의 처리에 의해 수득될 수 있다. 2개의 산 분자를 갖는 염 (예를 들어, 화학식 I의 화합물의 디할로게니드)은 또한 화합물 당 1개의 산 분자를 갖는 염 (예를 들어, 모노할로게니드)으로 전환될 수 있으며; 이는 융점으로 가열하거나, 또는 예를 들어 고진공하에 승온 (예를 들어, 130-170℃)에서 고체로서 가열하여 화학식 I의 화합물의 분자 당 1개의 산 분자를 방출시킴으로써 수행할 수 있다. 염은 통상적으로, 예를 들어 적합한 염기성 화합물, 예를 들어 알칼리 금속 카르보네이트, 알칼리 금속 히드로겐카르보네이트, 또는 알칼리 금속 히드록시드, 전형적으로는 탄산칼륨 또는 수산화나트륨을 이용한 처리에 의해 유리 화합물로 전환될 수 있다.
입체이성질체 혼합물, 예를 들어 부분입체이성질체의 혼합물은 그 자체로 공지된 방식으로 적합한 분리 방법에 의해 그의 상응하는 이성질체로 분리될 수 있다. 부분입체이성질체 혼합물은, 예를 들어 분별 결정화, 크로마토그래피, 용매 분포에 의해, 및 유사한 절차에 의해 그의 개별 부분입체이성질체로 분리될 수 있다. 이러한 분리는 출발 화합물의 수준에서 또는 화학식 I의 화합물 그 자체에서 수행될 수 있다. 거울상이성질체는, 예를 들어 거울상이성질체-순수 키랄 산과의 염 형성에 의한 부분입체이성질체 염의 형성을 통해, 또는 예를 들어 키랄 리간드를 갖는 크로마토그래피 기질을 사용하는 크로마토그래피, 예컨대 HPLC에 의해 분리될 수 있다.
본 챕터에서 언급된 전환과 유사한 반응이 적합한 중간체의 수준에서 일어날 수도 있음 (따라서 상응하는 출발 물질의 제조에 있어서 유용함)이 강조되어야 한다.
출발 물질:
화학식 II 및 III의 출발 물질 뿐만 아니라 본원, 예를 들어 하기에 언급된 다른 출발 물질은 당업계에 공지된 방법에 따라 제조되거나 또는 이와 유사하게 제조될 수 있으며, 이들은 당업계에 공지되어 있고/있거나 시중에서 입수가능하다. 출발 물질의 제조가 특별히 기재되어 있지 않은 한, 화합물은 공지된 것이거나 또는 당업계에 공지된 방법 (예를 들어, WO 05/021519 또는 WO 04/096797)과 유사하게, 또는 하기 개시된 바와 같이 제조할 수 있다. 신규한 출발 물질 뿐만 아니라 그의 제조 방법이 또한 본 발명의 실시양태이다. 바람직한 실시양태에서, 이러한 출발 물질이 사용되고, 선택된 반응은 바람직한 화합물이 수득될 수 있도록 선택된다.
출발 물질 (중간체 포함) (이는 또한 적절하고 편리한 경우 염으로서 사용되고/거나 수득될 수 있음)에서, 치환기는 바람직하게는 화학식 I의 화합물에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 또한 하기 화학식 IIIA의 화합물 또는 그의 염에 관한 것이다.
<화학식 IIIA>
Figure pct00011
상기 식에서, 치환기는 화학식 I의 화합물에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 또한 화학식 IIIA의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다. 원칙적으로, 2개의 아릴/헤테로아릴 성분을 상응하는 우레아 유도체로 커플링시키는 (예컨대, 헤크(Heck)-유형 반응) 모든 공지된 방법이 적합하고, 각각의 출발 물질을 사용하여 적용할 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한
(단계 1) 헤크 조건하에; 임의로 희석제의 존재하에, 그리고 임의로 반응 보조제의 존재하에 하기 화학식 IV의 화합물을 하기 화학식 V의 화합물과 반응시키고, 이어서
<화학식 IV>
Figure pct00012
(상기 식에서, R3은 본원에 정의된 바와 같으며 추가로 할로를 나타낼 수 있고, PG는 보호기, 예컨대 아실기를 나타냄)
<화학식 V>
Figure pct00013
(상기 식에서, R1, R2, A는 본원에 정의된 바와 같고, Hal은 할로, 예컨대 브로모를 나타냄)
(단계 2) 예를 들어, 산성 조건 하에서; 임의로 희석제의 존재하에, 그리고 임의로 반응 보조제의 존재하에 보호기를 제거하고;
생성된 화학식 IIIA의 화합물을 유리 형태 또는 염의 형태로 회수하고,
임의로, 수득된 화학식 IIIA의 화합물을 화학식 IIIA의 다른 화합물로 전환시키고/거나, 화학식 IIIA의 화합물의 수득가능한 염을 그의 다른 염으로 전환시키고/거나, 화학식 IIIA의 수득가능한 유리 화합물을 그의 염으로 전환시키고/거나, 화학식 IIIA의 화합물의 수득가능한 이성질체를 화학식 IIIA의 하나 이상의 다른 수득가능한 이성질체로부터 분리하는 것
을 포함하는, 화학식 IIIA의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 하기 화학식 IIIB의 화합물 또는 그의 염에 관한 것이다.
<화학식 IIIB>
Figure pct00014
상기 식에서, R1, R2, A는 화학식 I의 화합물에 대해 정의된 바와 같고, RG는 직접적으로 또는 화학식 IIIE의 이소시아네이트 중간체의 형성을 통해 반응할 수 있는 반응성 기, 특히 이미다졸릴카르보닐을 나타내고, R3은 본원에 정의된 바와 같으며 추가로 할로를 나타낼 수 있다.
본 발명은 또한 화학식 IIIB의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다. 원칙적으로, 아민 또는 그의 염을 상응하는 활성화된 유도체로 전환시키는 모든 공지된 방법이 적합하고, 각각의 출발 물질을 사용하여 적용할 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한
임의로 희석제의 존재하에, 그리고 임의로 반응 보조제의 존재하에 하기 화학식 IIIA의 화합물을 활성화 시약, 예컨대 1,1'-카르보닐디이미다졸과 반응시키고;
<화학식 IIIA>
Figure pct00015
(상기 식에서, 치환기는 본원에 정의된 바와 같음)
생성된 화학식 IIIB의 화합물을 유리 형태 또는 염의 형태로 회수하고,
임의로, 수득된 화학식 IIIB의 화합물을 화학식 IIIB의 다른 화합물로 전환시키고/거나, 화학식 IIIB의 화합물의 수득가능한 염을 그의 다른 염으로 전환시키고/거나, 화학식 IIIB의 수득가능한 유리 화합물을 그의 염으로 전환시키고/거나, 화학식 IIIB의 화합물의 수득가능한 이성질체를 화학식 IIIB의 하나 이상의 다른 수득가능한 이성질체로부터 분리하는 것
을 포함하는, 화학식 IIIB의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 하기 화학식 IIIC의 화합물 또는 그의 염에 관한 것이다.
<화학식 IIIC>
Figure pct00016
상기 식에서, 치환기는 화학식 I의 화합물에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 또한 화학식 IIIC의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다. 원칙적으로, 모든 고리 닫힘 반응이 적합하고, 각각의 출발 물질을 사용하여 적용할 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한
임의로 희석제의 존재하에, 그리고 임의로 반응 보조제의 존재하에 하기 화학식 VI의 화합물을 하기 화학식 VII의 화합물과 반응시키고;
<화학식 VI>
Figure pct00017
(상기 식에서, R3은 본원에 정의된 바와 같고, 추가로 할로를 나타낼 수 있음)
<화학식 VII>
Figure pct00018
(상기 식에서, R1은 본원에 정의된 바와 같음)
생성된 화학식 IIIC의 화합물을 유리 형태 또는 염의 형태로 회수하고,
임의로, 수득된 화학식 IIIC의 화합물을 화학식 IIIC의 다른 화합물로 전환시키고/거나, 화학식 IIIC의 화합물의 수득가능한 염을 그의 다른 염으로 전환시키고/거나, 화학식 IIIC의 수득가능한 유리 화합물을 그의 염으로 전환시키고/거나, 화학식 IIIC의 화합물의 수득가능한 이성질체를 화학식 IIIC의 하나 이상의 다른 수득가능한 이성질체로부터 분리하는 것
을 포함하는, 화학식 IIIC의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 하기 화학식 IIID의 화합물 또는 그의 염에 관한 것이다.
<화학식 IIID>
Figure pct00019
상기 식에서, R1은 본원에 정의된 바와 같고, RG는 반응성 기, 특히 이미다졸릴카르보닐을 나타내고, R3은 본원에 정의된 바와 같으며 추가로 할로를 나타낼 수 있다.
본 발명은 또한 화학식 IIID의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다. 원칙적으로, 아민 또는 그의 염을 상응하는 활성화된 유도체로 전환시키는 모든 공지된 방법이 적합하고, 각각의 출발 물질을 사용하여 적용할 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한
임의로 희석제의 존재하에, 그리고 임의로 반응 보조제의 존재하에 하기 화학식 IIIC의 화합물을 활성화 시약, 예컨대 1,1'-카르보닐디이미다졸과 반응시키고;
<화학식 IIIC>
Figure pct00020
(상기 식에서, 치환기는 상기 정의된 바와 같음)
생성된 화학식 IIID의 화합물을 유리 형태 또는 염의 형태로 회수하고,
임의로, 수득된 화학식 IIID의 화합물을 화학식 IIID의 다른 화합물로 전환시키고/거나, 화학식 IIID의 화합물의 수득가능한 염을 그의 다른 염으로 전환시키고/거나, 화학식 IIID의 수득가능한 유리 화합물을 그의 염으로 전환시키고/거나, 화학식 IIID의 화합물의 수득가능한 이성질체를 화학식 IIID의 하나 이상의 다른 수득가능한 이성질체로부터 분리하는 것
을 포함하는, 화학식 IIID의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 하기 화학식 VI의 화합물 또는 그의 염에 관한 것이다.
<화학식 VI>
Figure pct00021
상기 식에서, R3은 본원에 정의된 바와 같으며 추가로 할로를 나타낼 수 있다.
본 발명은 또한 화학식 VI의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다. 원칙적으로, 이러한 전환에 적합한 모든 공지된 방법이, 각각의 출발 물질을 사용하여 적용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한
하기 화학식 IIX의 화합물을 디메틸포름아미드의 아세탈, 예컨대 DMF-디메틸아세탈과 반응시켜 화학식 VI의 화합물을 수득하고;
<화학식 IIX>
Figure pct00022
(상기 식에서, R3은 화학식 I에 정의된 바와 같으며 추가로 할로를 나타낼 수 있음)
생성된 화학식 VI의 화합물을 유리 형태 또는 염의 형태로 회수하고,
임의로, 수득된 화학식 VI의 화합물을 화학식 VI의 다른 화합물로 전환시키고/거나, 화학식 VI의 화합물의 수득가능한 염을 그의 다른 염으로 전환시키고/거나, 화학식 VI의 수득가능한 유리 화합물을 그의 염으로 전환시키고/거나, 화학식 VI의 화합물의 수득가능한 이성질체를 화학식 VI의 하나 이상의 다른 수득가능한 이성질체로부터 분리하는 것
을 포함하는, 화학식 VI의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.
하기 화학식 I의 화합물 (또한 하위-화학식 IA, IB의 화합물 포함) 및 그의 제약상 허용되는 염은 제약으로서 유용하다. 그러므로, 본 발명은 한 실시양태에서 PI3K의 억제가 지시되는 인간 또는 수의학적 용도를 위한 조성물에 관한 것이다. 이러한 실시양태는 또한 화합물 (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(tert-부틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드를 포함하지만, 별법으로 상기 화합물을 제외한다.
<화학식 I>
Figure pct00023
상기 식에서,
A는 헤테로아릴을 나타내고;
R1은 (1) 임의로 치환된 알킬; (2) 임의로 치환된 시클로알킬; (3) 임의로 치환된 아릴; (4) 임의로 치환된 아민; (5) 임의로 치환된 술포닐; (6) 할로를 나타내고;
R2는 수소, 중수소, 또는 R1에 대해 정의된 바와 같은 치환기를 나타내고;
R3은 수소, 할로, 임의로 치환된 알킬을 나타낸다.
한 실시양태에서, 본 발명은 PI3K에 의해 매개되는 세포 증식성 질환, 예컨대 종양 및/또는 암성 세포 성장의 치료에 관한 것이다. 질환에는 PI3K 알파의 과다발현 또는 증폭, PIK3CA의 체세포 돌연변이, 또는 PTEN의 배선 돌연변이 또는 체세포 돌연변이, 또는 p85-p110 복합체를 상향조절하는 역할을 하는 p85α의 돌연변이 및 전좌를 나타내는 것들이 포함될 수 있다. 특히, 화합물은, 예를 들어 육종; 폐암; 기관지암; 전립선암; 유방암 (산발성 유방암 및 코우덴병의 환자 포함); 췌장암; 위장암; 결장암; 직장암; 결장 암종; 결장직장 선종; 갑상선암; 간암; 간내 담관암; 간세포암; 부신암; 위(stomach)암; 위(gastric)암; 신경교종; 교모세포종; 자궁내막암; 흑색종; 신장암; 신우암; 방광암; 자궁체부암; 자궁경부암; 질암; 난소암; 다발성 골수종; 식도암; 백혈병; 급성 골수성 백혈병; 만성 골수성 백혈병; 림프구성 백혈병; 골수양 백혈병; 뇌암; 뇌의 암종; 구강 및 인두암; 후두암; 소장암; 비-호지킨 림프종; 흑색종; 융모성 결장 선종; 신생물; 상피 특성의 신생물; 림프종; 유방 암종; 기저 세포 암종; 편평 세포 암종; 광선 각화증; 충실성 종양을 비롯한 종양 질환; 경부 또는 두부의 종양; 진성 적혈구증가증; 본태성 혈소판증가증; 골수양화생을 수반하는 골수섬유증; 및 발덴스트룀병을 비롯한, 인간 또는 동물 (예를 들어, 쥐과) 암의 치료에 유용하다.
다른 실시양태에서, (예를 들어, PI3K-매개) 상태 또는 장애는 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 골수양화생을 수반하는 골수섬유증, 천식, COPD, ARDS, 뢰플러 증후군, 호산구성 폐렴, 기생충 (특히 후생동물) 침습 (열대 호산구증가증 포함), 기관지폐 아스페르길루스증, 결절성 다발동맥염 (처크-스트라우스 증후군 포함), 호산구성 육아종, 약물-반응에 의해 발생하여 기도에 영향을 미치는 호산구-관련 장애, 건선, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 원형 탈모증, 다형 홍반, 포진성 피부염, 경피증, 백반증, 과민성 혈관염, 두드러기, 수포성 유천포창, 홍반성 루푸스, 천포창, 후천성 수포성 표피박리증, 자가면역성 혈액 장애 (예를 들어, 용혈성 빈혈, 재생불량 빈혈, 순수 적혈구 빈혈 및 특발성 혈소판감소증), 전신 홍반성 루푸스, 다발성연골염, 경피증, 베게너 육아종증, 피부근염, 만성 활성 간염, 중증 근무력증, 스티븐-존슨 증후군, 특발성 스프루, 자가면역성 염증성 장 질환 (예를 들어, 궤양성 대장염 및 크론병), 내분비 안병증, 그레이브병, 사르코이드증, 폐포염, 만성 과민성 폐렴, 다발성 경화증, 원발성 담즙성 간경변증, 포도막염 (전방 및 후방), 간질성 폐 섬유증, 건선성 관절염, 사구체신염, 심혈관 질환, 아테롬성동맥경화증, 고혈압, 심부 정맥 혈전증, 졸중, 심근경색증, 불안정형 협심증, 혈전색전증, 폐동맥 색전증, 혈전용해 질환, 급성 동맥 허혈, 말초 혈전성 폐쇄, 및 관상 동맥 질환, 재관류 손상, 망막병증, 예컨대 당뇨병성 망막병증 또는 고압 산소-유도 망막병증, 및 상승된 안내압 또는 안구 방수 분비를 특징으로 하는 상태, 예컨대 녹내장으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 용도에 있어서, 필요한 투여량은 물론 투여 방식, 치료하고자 하는 특정 상태 및 목적 효과에 따라 달라질 것이다. 일반적으로, 전신적으로 체중 1 kg 당 약 0.03 내지 약 100.0 mg, 예를 들어 체중 1 kg 당 약 0.03 내지 약 10.0 mg의 1일 투여량으로 만족스러운 결과가 얻어지도록 제시된다. 보다 큰 포유동물, 예컨대 인간에서 제시되는 1일 투여량은 약 0.5 mg 내지 약 3 g, 예를 들어 약 5 mg 내지 약 1.5 g 범위이며, 이는 예를 들어 1일 4회 이하의 분할 투여량으로 또는 지연 형태로 편리하게 투여된다. 경구 투여를 위한 적합한 단위 투여 형태는 약 0.1 내지 약 500 mg, 예를 들어 약 1.0 내지 약 500 mg의 활성 성분을 포함한다.
화학식 I의 화합물은 임의의 통상의 경로에 의해, 특히 경장으로, 예를 들어 경구로, 예를 들어 정제 또는 캡슐의 형태로, 또는 비경구로, 예를 들어 주사가능한 용액 또는 현탁액의 형태로, 국소적으로, 예를 들어 로션, 겔, 연고 또는 크림의 형태로, 흡입에 의해, 비내로, 또는 좌제 형태로 투여될 수 있다.
화학식 I의 화합물은, 예를 들어 상기 나타낸 바와 같이, 유리 형태로 또는 제약상 허용되는 염 형태로 투여될 수 있다. 이러한 염은 통상적 방식으로 제조될 수 있고, 유리 화합물과 동일한 정도의 활성을 나타낼 수 있다.
결론적으로, 본 발명은 또한 하기를 제공한다:
· 예를 들어, 상기 나타낸 것과 같은, PI3K (예컨대, PI3 키나제 알파) 효소의 활성화에 의해 매개되는 상태, 장애 또는 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 상기 상태, 장애 또는 질환을 예방 또는 치료하는 방법.
· 예를 들어, 본원에 나타낸 임의의 방법에서 약제로서의, 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I의 화합물.
· 예를 들어, 본원에 나타낸 임의의 방법에서, 특히 하나 이상의 포스파티딜이노시톨 3-키나제 매개 질환에 사용하기 위한 방법에서 약제로서 사용하기 위한, 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I의 화합물.
· 본원에 나타낸 임의의 방법에서, 특히 하나 이상의 포스파티딜이노시톨 3-키나제 매개 질환의 치료를 위한 방법에서의, 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I의 화합물의 용도.
· 본원에 나타낸 임의의 방법에서, 특히 하나 이상의 포스파티딜이노시톨 3-키나제 매개 질환의 치료용 의약의 제조를 위한 방법에서의, 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I의 화합물의 용도.
PI3K는 대등한 신호전달 경로를 통합시키는 제2 메신저 중심으로 기능하며, PI3K 억제제와 다른 경로 억제제의 조합물이 인간에서 암 및 증식성 질환을 치료하는데 유용할 것이라는 증거가 드러나고 있다.
인간 유방암의 대략 20 내지 30％에서는 Her-2/neu-ErbB2가 과다발현되며, 이는 약물 트라스투주맙에 대한 표적이다. 트라스투주맙은 Her2/neu-ErbB2를 발현하는 일부 환자에서의 내성 반응이 입증되었으나, 이들 환자 중 하위세트에서만 반응한다. 최근의 작업을 통해, 이러한 제한된 반응률이 트라스투주맙과 PI3K 또는 PI3K/AKT 경로의 억제제의 조합물에 의해 실질적으로 개선될 수 있음이 확인되었다 (문헌 [Chan et al., Breast Can. Res. Treat. 91:187 (2005)], [Woods Ignatoski et al., Brit. J. Cancer 82:666 (2000)], [Nagata et al., Cancer Cell 6:117 (2004)]).
다양한 인간 악성 종양은 돌연변이 활성화 또는 Her1/EGFR 수준의 증가를 나타내며, 수많은 항체 및 소분자 억제제가 상기 수용체 티로신 키나제에 대항하도록 개발되었다 (예컨대, 타르세바, 게피티닙 및 에르비툭스). 그러나, EGFR 억제제는 특정 인간 종양 (예를 들어, NSCLC)에서 항-종양 활성이 입증된 반면, 이들은 EGFR-발현 종양을 가진 모든 환자에서 전반적인 환자 생존을 증가시키는데는 실패하였다. 이는 PI3K/Akt 경로를 비롯한 Her1/EGFR의 여러 하류 표적이 다양한 악성 종양에서 높은 빈도로 돌연변이되거나 탈조절된다는 사실에 의해 설명될 수 있다. 예를 들어, 게피티닙은 시험관내 검정에서 선암종 세포주의 성장을 억제한다. 그럼에도, 이들 세포주의 서브클론은 PI3/Akt 경로의 활성화를 증가시키는 것으로 입증된 게피티닙에 대해 내성인 것으로 선별될 수 있다. 이 경로의 하향-조절 또는 억제는 상기 내성 서브클론이 게피티닙에 대해 민감하도록 만든다 (문헌 [Kokubo et al., Brit. J. Cancer 92:1711 (2005)]). 게다가, PTEN 돌연변이를 가지며 EGFR을 과다발현하는 세포주를 이용한 유방암의 시험관내 모델에서, PI3K/Akt 경로 및 EGFR을 둘 다 억제시킨 결과 상승작용 효과가 나타났다 (문헌 [She et al., Cancer Cell 8:287-297(2005)]). 이들 결과는, 게피티닙 및 PI3K/Akt 경로 억제제의 조합이 암의 치료학적 방침에 유용함을 나타낸다.
AEE778 (Her-2/neu/ErbB2, VEGFR 및 EGFR의 억제제) 및 RAD001 (Akt의 하류 표적, mTOR의 억제제)의 조합은 교아세포종 이종이식 모델에서 단독의 상기 작용제보다 더 큰 조합 효능을 생성한다 (Goudar et al., Mol. Cancer. Ther. 4:101-112 (2005)).
항-에스트로겐, 예컨대 타목시펜은 세포 주기 억제제 p27Kip의 작용을 요하는 세포 주기 정지의 유도를 통해 유방암 성장을 억제한다. 최근, Ras-Raf-MAP 키나제 경로의 활성화가 p27Kip의 인산화 상태를 변경시켜, 세포 주기 정지에 있어 이의 억제 활성을 감쇠시키고, 이로써 항-에스트로겐 내성에 기여한다는 것이 밝혀졌다 (문헌 [Donovan, et al., J. Biol. Chem. 276:40888, (2001)]). 도노반(Donovan) 등에 의해 보고된 바와 같이, MEK 억제제로 처리하여 MAPK 신호전달을 억제하자, 호르몬 불응성 유방암 세포주에서 p27의 비정상적인 인산화 상태가 역행되었고 그에 따라 호르몬 민감성이 복구되었다. 유사하게, Akt에 의한 p27Kip의 인산화는 또한 세포 주기를 정지시키는 이의 역할을 폐기시켰다 (문헌 [Viglietto et al., Nat Med. 8:1145 (2002)]).
따라서, 추가의 측면에서, 화학식 I의 화합물은 호르몬 의존성 암, 예컨대 유방암 및 전립선암의 치료에 사용된다. 이러한 사용에 의해, 통상의 항암제 사용시 상기 암에서 흔히 보여지는 호르몬 내성을 역행시키는 것을 목적으로 한다.
혈액암, 예컨대 만성 골수성 백혈병 (CML)에서, 염색체 전좌는 구성적으로 활성화된 BCR-Abl 티로신 키나제를 유도한다. 발병 환자는 Abl 키나제 활성 억제의 결과로서 소분자 티로신 키나제 억제제인 이마티닙에 대해 반응성이다. 그러나, 진행된 단계의 질환을 가진 여러 환자가 초기에는 이마티닙에 대해 반응하지만, 이후에는 Abl 키나제 도메인에서의 내성-부여 돌연변이로 인해 재발하게 된다. 시험관내 연구는, BCR-Ab1이 Ras-Raf 키나제 경로를 이용하여 이의 효과를 이끌어 낸다는 것을 입증하였다. 또한, 동일한 경로에서 한 가지가 넘는 키나제의 억제는 내성-부여 돌연변이에 대해 추가의 보호를 제공한다.
따라서, 또 다른 측면으로서, 혈액암, 예컨대 만성 골수성 백혈병 (CML)의 치료에서 화학식 I의 화합물을 키나제 억제제의 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추가의 작용제, 예컨대 글리벡 (Gleevec, 등록상표)과 조합하여 사용한다. 이러한 사용에 의해, 상기 하나 이상의 추가의 작용제에 대한 내성을 역행시키거나 예방하는 것을 목적으로 한다.
PI3K/Akt 경로의 활성화가 세포 생존을 유도하기 때문에, 암 세포에서 아폽토시스를 유도하는 요법, 예컨대 방사선요법 및 화학요법과 조합하여 상기 경로를 억제하면 개선된 반응이 나타날 것이다 (문헌 [Ghobrial et al., CA Cancer J. Clin 55:178-194 (2005)]). 예를 들어, PI3 키나제 억제제와 카르보플라틴의 조합은 시험관내 증식 및 아폽토시스 검정의 둘 다에서 뿐만 아니라 난소암의 이종이식 모델의 생체내 종양 효능에서 상승작용 효과가 입증되었다 (문헌 [Westfall and Skinner, Mol. Cancer Ther. 4:1764-1771 (2005)]).
클래스 1A 및 1B PI3 키나제의 억제제가 암 및 증식성 질환 이외에도 다른 질환 분야에 치료적으로 유용할 것이라는 여러 증거가 있다. PIK3CB 유전자의 PI3K 이소형 생성물인 p110β의 억제가 전단-유도된 혈소판 활성화와 관련이 있는 것으로 밝혀졌다 (문헌 [Jackson et al., Nature Medicine 11:507-514 (2005)]). 따라서, p110β를 억제하는 PI3K 억제제는 단일 제제로서 또는 항혈전 요법과 조합되어 유용할 것이다. PIK3CD 유전자의 생성물인 이소형 p110δ는 B 세포 기능 및 분화 (문헌 [Clayton et al., J. Exp. Med. 196:753-763 (2002)]), T-세포 의존성 및 독립성 항원 반응 (문헌 [Jou et al., Mol. Cell. Biol. 22:8580-8590 (2002)]) 및 비만 세포 분화 (문헌 [Ali et al., Nature 431:1007-1011 (2004)])에서 중요하다. 따라서, p110δ-억제제는 B-세포 유도된 자가면역성 질환 및 천식의 치료에서 유용할 것이 예상된다. 최종적으로, PI3KCG 유전자의 이소형 생성물인 p110γ의 억제는 T 세포 반응은 감소시키나 B 세포 반응은 감소시키지 않고 (문헌 [Reif et al., J. Immunol. 173:2236-2240 (2004)]), 이의 억제는 자가면역성 질환의 동물 모델에서 효능이 입증되었다 (문헌 [Camps et al., Nature Medicine 11:936-943 (2005)], [Barber et al., Nature Medicine 11:933-935 (2005)]).
본 발명은 또한 하나 이상의 화학식 I의 화합물을 인간 또는 동물 대상체에 투여하기에 적합한 제약상 허용되는 부형제와 함께, 단독으로 또는 다른 항암제와 함께 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 세포 증식성 질환, 예컨대 암을 앓는 인간 또는 동물 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 따라서 본 발명은 상기 치료가 필요한 인간 또는 동물 대상체에게 치료 유효량의 화학식 I의 화합물을 단독으로 또는 하나 이상의 다른 항암제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체의 치료 방법을 제공한다. 특히, 조성물은 조합 치료제로서 또는 별도 투여되도록 함께 제제화될 것이다. 화학식 I의 화합물과 사용하기에 적합한 항암제에는 하기에 제시된 키나제 억제제, 항에스트로겐, 항항드로겐, 다른 억제제, 암 화학요법 약물, 알킬화제, 킬레이트화제, 생물학적 반응 조절제, 암 백신, 안티센스 요법용 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 화합물이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다.
A. 키나제 억제제: 화학식 I의 화합물과 함께 항암제로 사용하기 위한 키나제 억제제로는 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 키나제의 억제제, 예컨대 소분자 퀴나졸린, 예를 들어 게피티닙 (US 5457105, US 5616582 및 US 5770599), ZD-6474 (WO 01/32651), 에를로티닙 (타르세바(Tarceva, 등록상표), US 5,747,498 및 WO 96/30347) 및 라파티닙 (US 6,727,256 및 WO 02/02552); 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFR) 키나제 억제제, 예컨대 SU-11248 (WO 01/60814), SU 5416 (US 5,883,113 및 WO 99/61422), SU 6668 (US 5,883,113 및 WO 99/61422), CHIR-258 (US 6,605,617 및 US 6,774,237), 바탈라닙 또는 PTK-787 (US 6,258,812), VEGF-트랩 (WO 02/57423), B43-게니스테인 (WO-09606116), 펜레티니드 (레티노산 p-히드록시페닐아민) (US 4,323,581), IM-862 (WO 02/62826), 베바시주맙 또는 아바스틴(Avastin, 등록상표) (WO94/10202), KRN-951, 3-[5-(메틸술포닐피페라딘 메틸)-인돌릴]-퀴놀론, AG-13736 및 AG-13925, 피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진, ZK-304709, 베글린(Veglin, 등록상표), VMDA-3601, EG-004, CEP-701 (US 5,621,100), Cand5 (WO 04/09769); Erb2 티로신 키나제 억제제, 예컨대 페르투주맙 (WO 01/00245), 트라스투주맙 및 리툭시맙; Akt 단백질 키나제 억제제, 예컨대 RX-0201; 단백질 키나제 C (PKC) 억제제, 예컨대 LY-317615 (WO 95/17182) 및 페리포신 (US 2003171303); Raf/Map/MEK/Ras 키나제 억제제, 예컨대 소라페닙 (BAY 43-9006), ARQ-350RP, LErafAON, BMS-354825 AMG-548, 및 그외 WO 03/82272에 기재된 것; 섬유모세포 성장 인자 수용체 (FGFR) 키나제 억제제; 세포 의존성 키나제 (CDK) 억제제, 예컨대 CYC-202 또는 로스코비틴 (WO 97/20842 및 WO 99/02162); 혈전-유도된 성장 인자 수용체 (PDGFR) 키나제 억제제, 예컨대 CHIR-258, 3G3 mAb, AG-13736, SU-11248 및 SU6668; 및 Bcr-Abl 키나제 억제제 및 융합 단백질, 예컨대 STI-571 또는 글리벡(등록상표)(이마티닙)이 포함된다.
B. 항-에스트로겐: 화학식 I의 화합물과 함께 항암 요법에 사용하기 위한 에스트로겐-표적 작용제로는 선택적 에스트로겐 수용체 조절제 (SERM), 예컨대 타목시펜, 토레미펜, 랄록시펜; 아로마타제 억제제, 예컨대 아리미덱스(Arimidex, 등록상표) 또는 아나스트로졸; 및 에스트로겐 수용체 하향 조절제 (ERD), 예컨대 파슬로덱스(Faslodex, 등록상표) 또는 풀베스트란트가 포함된다.
C. 항-안드로겐: 화학식 I의 화합물과 함께 항암 요법에 사용하기 위한 안드로겐-표적 작용제로는 플루타미드, 비칼루타미드, 피나스테리드, 아미노글루테타미드, 케토코나졸 및 코르티코스테로이드가 포함된다.
D. 다른 억제제: 화학식 I의 화합물과 함께 항암제로 사용하기 위한 다른 억제제로는 단백질 파르네실 트랜스페라제 억제제, 예컨대 티피파르닙 또는 R-115777 (US 2003134846 및 WO 97/21701), BMS-214662, AZD-3409 및 FTI-277; 토포아이소머라제 억제제, 예컨대 메르바론 및 디플로모테칸 (BN-80915); 유사분열 키네신 방추 단백질 (KSP) 억제제, 예컨대 SB-743921 및 MKI-833; 프로테아좀 조절제, 예컨대 보르테조밉 또는 벨카데(Velcade, 등록상표) (US 5,780,454), XL-784; 및 시클로옥시게나제-2 (COX-2) 억제제, 예컨대 비-스테로이드성 항염증성 약물 I (NSAID)이 포함된다.
E. 암 화학요법 약물: 화학식 I의 화합물과 함께 항암제로 사용하기 위한 특정 암 화학요법제로는 아나스트로졸 (아리미덱스, 등록상표), 비칼루타미드 (카소덱스(Casodex, 등록상표)), 블레오마이신 술페이트 (블레녹산(Blenoxane, 등록상표)), 부술판 (미엘란(Myleran, 등록상표)), 부술판 주사제 (부술펙스(Busulfex, 등록상표)), 카페시타빈 (크셀로다(Xeloda, 등록상표)), N4-펜톡시카르보닐-5-데옥시-5-플루오로시티딘, 카르보플라틴 (파라플라틴(Paraplatin, 등록상표)), 카르무스틴 (BiCNU, 등록상표), 클로람부실 (류케란(Leukeran, 등록상표)), 시스플라틴 (플라틴올(Platinol, 등록상표)), 클라드리빈 (류스타틴(Leustatin, 등록상표)), 시클로포스파미드(시톡산(Cytoxan, 등록상표) 또는 네오사르(Neosar, 등록상표)), 시타라빈, 시토신 아라비노시드 (시토스타-유(Cytosar-U, 등록상표)), 시타라빈 리포좀 주사제 (데포시트(DepoCyt, 등록상표)), 다카르바진 (DTIC-Dome, 등록상표), 닥티노마이신 (안티노마이신 D, 코스메간(Cosmegan)), 다우노루비신 히드로클로라이드 (세루비딘(Cerubidine, 등록상표)), 다우노루비신 시트레이트 리포좀 주사제 (다우노좀(DaunoXome, 등록상표)), 덱사메타손, 도세탁셀 (탁소테레(Taxotere, 등록상표)), 독소루비신 히드로클로라이드 (아드리아마이신(Adriamycin, 등록상표), 루벡스(Rubex, 등록상표)), 에토포시드 (베페시드(Vepesid, 등록상표)), 플루다라빈 포스페이트 (플루다라(Fludara, 등록상표)), 5-플루오로우라실 (아드루실(Adrucil, 등록상표), 에푸덱스(Efudex, 등록상표)), 플루타미드 (율렉신(Eulexin, 등록상표)), 테자시티빈, 겜시타빈 (디플루오로데옥시시티딘), 히드록시우레아 (히드레아(Hydrea, 등록상표)),이다루비신 (이다마이신(Idamycin, 등록상표)), 이포스파미드 (이펙스(IFEX, 등록상표)), 이리노테칸 (캄프토사르(Camptosar, 등록상표)), L-아스파라기나제 (엘스파(ELSPAR, 등록상표)), 류코보린 칼슘, 멜팔란 (알케란(Alkeran, 등록상표)), 6-머캅토퓨린 (퓨린톨(Purinethol, 등록상표)), 메토트렉세이트 (폴렉스(Folex, 등록상표)), 미톡산트론 (노반트론(Novantrone, 등록상표)), 밀로타르그, 파클리탁셀 (탁솔(Taxol, 등록상표)), 페닉스 (이트륨(Yttrium)90/MX-DTPA), 펜토스타틴, 폴리페프로산 20과 카르무스틴 임플란트 (글리아델(Gliadel, 등록상표)), 타목시펜 시트레이트 (놀바덱스(Nolvadex, 등록상표)), 테니포시드 (부몬(Vumon, 등록상표)), 6-티오구아닌, 티오테파, 티라파자민 (티라존(Tirazone, 등록상표)), 주사용 토포테칸 히드로클로라이드 (히캄프틴(Hycamptin, 등록상표)), 빈블라스틴 (벨반(Velban, 등록상표)), 빈크리스틴 (온코빈(Oncovin, 등록상표)) 및 비노렐빈 (나벨빈(Navelbine, 등록상표))이 포함된다.
F. 알킬화제 : 화학식 I의 화합물과 함께 사용하기 위한 알킬화제로는 VNP-40101M 또는 클로레티진, 옥살리플라틴 (US 4,169,846, WO 03/24978 및 WO 03/04505), 글루포스파미드, 마포스파미드, 에토포포스 (US 5,041,424), 프레드니무스틴; 트레오술판; 부술판; 이로플루벤 (아실플루벤); 펜클로메딘; 피라졸로아크리딘 (PD-115934); O6-벤질구아닌; 데시타빈 (5-아자-2-데옥시시티딘); 브로스탈리신; 미토마이신 C (미토엑스트라(MitoExtra)); TLK-286 (텔시타(Telcyta, 등록상표)); 테모졸로미드; 트라베크테딘 (US 5,478,932); AP-5280 (시스플라틴의 플라티네이트 제형); 포르피로마이신 및 클레아라지드 (메클로레타민)이 포함된다.
G. 킬레이트화제: 화학식 I의 화합물과 함께 사용하기 위한 킬레이트화제로는 테트라티오몰리브데이트 (WO 01/60814); RP-697; 키메릭 T84.66 (cT84.66); 가도포스베세트 (바소비스트(Vasovist, 등록상표)); 데페록사민; 및 블레오마이신 (임의로 전기천공 (EPT)과 조합)이 포함된다.
H. 생물학적 반응 조절제 : 화학식 I의 화합물과 함께 사용하기 위한 생물학적 반응 조절제, 예컨대 면역 조절제로는 스타우로스피린 및 그의 마크로시클릭 유사체, 예컨대 UCN-01, CEP-701 및 미도스타우린 (WO 02/30941, WO 97/07081, WO 89/07105, US 5,621,100, WO 93/07153, WO 01/04125, WO 02/30941, WO 93/08809, WO 94/06799, WO 00/27422, WO 96/13506 및 WO 88/07045 참조); 스쿠알라민 (WO 01/79255); DA-9601 (WO 98/04541 및 US 6,025,387); 알렘투주맙; 인터페론 (예를 들어 IFN-a, IFN-b 등); 인터류킨, 구체적으로 IL-2 또는 알데스류킨 및 IL-1, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, 및 천연 인간 서열의 70％보다 더 많은 아미노산 서열을 갖는 그의 활성 생물학적 변이체; 알트레타민 (헥살렌(Hexalen, 등록상표)); SU 101 또는 레플루노미드 (WO 04/06834 및 US 6,331,555); 이미다조퀴놀린, 예컨대 레시퀴모드 및 이미퀴모드 (US 4,689,338, 5,389,640, 5,268,376, 4,929,624, 5,266,575, 5,352,784, 5,494,916, 5,482,936, 5,346,905, 5,395,937, 5,238,944 및 5,525,612); 및 SMIP, 예컨대 벤즈아졸, 안트라퀴논, 티오세미카르바존 및 트립탄트린 (WO 04/87153, WO 04/64759 및 WO 04/60308)이 포함된다.
I. 암 백신: 화학식 I의 화합물과 함께 사용하기 위한 항암 백신으로는 아비신(Avicine, 등록상표) (문헌 [Tetrahedron Lett. 26:2269-70 (1974)]); 오레고보맙 (오바렉스(OvaRex, 등록상표)); 테라토프(Theratope, 등록상표) (STn-KLH); 흑색종 백신; GI-4000 시리즈 (GI-4014, GI-4015 및 GI-4016; 이들은 Ras 단백질에서의 5가지 돌연변이에 관한 것임); 글리오박스-1; 멜라박스; 아드벡신(Advexin, 등록상표) 또는 INGN-201 (WO 95/12660); Sig/E7/LAMP-1, 코딩 HPV-16 E7; MAGE-3 백신 또는 M3TK (WO 94/05304); HER-2VAX; 종양에 대해 특이적인 T-세포를 자극하는 액티브(ACTIVE); GM-CSF 암 백신; 및 리스테리아 모노사이토진-기재 백신이 포함된다.
J. 안티센스 요법제: 화학식 I의 화합물과 함께 사용하기 위한 항암제로는 또한 안티센스 조성물, 예컨대 AEG-35156 (GEM-640); AP-12009 및 AP-11014 (TGF-베타2-특이적 안티센스 올리고뉴클레오티드); AVI-4126; AVI-4557; AVI-4472; 오블리메르센 (게나센스(Genasense, 등록상표)); JFS2; 아프리노카르센 (WO 97/29780); GTI-2040 (R2 리보뉴클레오티드 환원효소 mRNA 안티센스 올리고) (WO 98/05769); GTI-2501 (WO 98/05769); 리포좀-캡슐화 c-Raf 안티센스 올리고데옥시뉴클레오티드 (LErafAON) (WO 98/43095); 및 시르나(Sirna)-027 (RNAi-기재 치료 표적 VEGFR-1 mRNA)가 포함된다.
화학식 I의 화합물은 또한 기관지확장제 또는 항히스타민 약물 물질과 함께 제약 조성물로 조합될 수 있다. 이러한 기관지확장제 약물로는 항콜린작용제 또는 항무스카린제, 특히 이프라트로퓸 브로마이드, 옥시트로퓸 브로마이드 및 티오트로퓸 브로마이드, 및 β-2-아드레날린수용체 효능제, 예컨대 살부타몰, 테르부탈린, 살메테롤, 카르모테롤, 밀베테롤, 및 특히 포르모테롤 또는 인다카테롤이 포함된다. 공동-치유적 항히스타민 약물 물질로는 세티리진 히드로클로라이드, 클레마스틴 푸마레이트, 프로메타진, 로라타딘, 데슬로라타딘 디펜히드라민 및 펙소페나딘 히드로클로라이드가 포함된다.
본 발명은 추가의 측면에서 또한 화학식 I의 화합물, 및 혈전용해 질환, 심장 질환, 졸중 등의 치료에 유용한 하나 이상의 화합물을 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 화합물로는 아스피린, 스트렙토키나제, 조직 플라스미노겐 활성화제, 우로키나제, 항응집제, 항혈소판 약물 (예를 들어, 플라빅스(PLAVIX); 클로피도그렐 비술페이트), 스타틴 (예를 들어, 리피토르(LIPITOR) 또는 아토르바스타틴 칼슘), 조코르(ZOCOR) (심바스타틴(Simvastatin)), 그레스토르(CRESTOR) (로수바스타틴(Rosuvastatin)) 등), 베타 차단제 (예를 들어, 아테놀롤), 노바스크(NORVASC) (암로디핀 베실레이트) 및 ACE 억제제 (예를 들어, 리시노프릴)가 포함된다.
본 발명은 추가의 측면에서 화학식 I의 화합물, 및 항고혈압의 치료에 유용한 하나 이상의 화합물을 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 화합물로는 ACE 억제제, 지질 강하제, 예컨대 스타틴, 리피토르 (아토르바스타틴 칼슘), 칼슘 채널 차단제, 예컨대 노바스크 (암로디핀 베실레이트)가 포함된다.
본 발명은 추가의 측면에서 화학식 I의 화합물, 및 피브레이트, 베타-차단제, NEPI 억제제, 안지오텐신-2 수용체 길항제 및 혈소판 응집 억제제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 화합물을 포함하는 조합물을 제공한다.
본 발명은 추가의 측면에서 화학식 I의 화합물, 및 염증성 질환, 예컨대 류마티스양 관절염의 치료에 적합한 화합물을 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 화합물은 TNF-α 억제제, 예컨대 항-TNF-α 모노클로날 항체 (예컨대, 레미케이드(REMICADE), CDP-870) 및 D2E7 (휴미라(HUMIRA)) 및 TNF 수용체 이뮤노글로불린 융합 분자 (예컨대, 엔브렐(ENBREL)), IL-1 억제제, 수용체 길항제 또는 가용성 IL-1Rα (예를 들어, 키네레트(KINERET) 또는 ICE 억제제), 비스테로이드성 항염증제 (NSAID), 피록시캄, 디클로페낙, 나프록센, 플루비프로펜, 페노프로펜, 케토프로펜, 이부프로펜, 페나메이트, 메페남산, 인도메타신, 술린닥, 아파존, 피라졸론, 페닐부타존, 아스피린, COX-2 억제제 (예컨대, 셀레브렉스(CELEBREX) (셀레콕시브), 프렉시지(PREXIGE) (루미라콕시브)), 메탈로프로테아제 억제제 (바람직하게는 MMP-13 선택적 억제제), p2x7 억제제, α2α억제제, 뉴로틴(NEUROTIN), 프레가발린, 저용량 메토트렉세이트, 레플루노미드, 히드록식스클로로퀸, d-페니실라민, 아우라노핀 또는 비경구 또는 경구용 금으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명은 추가의 측면에서 화학식 I의 화합물, 및 골관절염의 치료에 적합한 화합물을 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 화합물은 표준 비-스테로이드성 항염증제 (이후 NSAID), 예컨대 피록시캄, 디클로페낙, 프로피온산, 예컨대 나프록센, 플루비프로펜, 페노프로펜, 케토프로펜 및 이부프로펜, 페나메이트, 예컨대 메페남산, 인도메타신, 술린닥, 아파존, 피라졸론, 예컨대 페닐부타존, 살리실레이트, 예컨대 아스피린, COX-2 억제제, 예컨대 셀레콕시브, 발데콕시브, 루미콕시브 및 에토리콕시브, 진통제 및 관절내 요법제, 예컨대 코르티코스테로이드 및 히알루론산, 예컨대 히알간 및 신비스크로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명은 추가의 측면에서 화학식 I의 화합물, 및 항바이러스제 및/또는 항패혈증 화합물을 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 항바이러스제는 비라셉트, AZT, 아시클로비르 및 팜시클로비르로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 이러한 항패혈증 화합물은 발란트(Valant)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명은 추가의 측면에서 화학식 I의 화합물, 및 CNS 작용제, 예컨대 항우울제 (세르트랄린), 항-파킨슨 약물 (예컨대, 데프레닐, L-도파, 레큅, 미라펙스; MAOB 억제제 (예컨대 셀레긴 및 라사길린); comP 억제제 (예컨대 타스마르); A-2 억제제; 도파민 재흡수 억제제; NMDA 길항제, 니코틴 효능제, 도파민 효능제; 및 뉴런 산화질소 신타제의 억제제)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 작용제를 포함하는 조합물을 제공한다.
본 발명은 추가의 측면에서 화학식 I의 화합물, 및 하나 이상의 항알츠하이머 약물을 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 항-알츠하이머 약물은 도네페질, 타크린, α2δ억제제, 뉴로틴, 프레가발린, COX-2 억제제, 프로펜토필린 또는 메트리포네이트로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명은 추가의 측면에서 화학식 I의 화합물, 및 골다공증 작용제 및/또는 면역억제제를 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 골다공증 작용제는 에비스타(EVISTA) (랄록시펜 히드로클로라이드), 드롤록시펜, 라소폭시펜 또는 포소막스로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 상기 면역억제제는 FK-506 및 라파마이신으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
바람직한 실시양태의 또 다른 측면에서, 하나 이상의 화학식 I의 화합물을 본원에 개시된 조합 파트너와 함께 포함하는 키트가 제공된다. 대표적인 키트에는 PI3K 억제제 화합물 (예를 들어, 화학식 I의 화합물), 및 포장 삽입물 또는 다른 라벨, 예컨대 PI3K 억제량의 화합물(들)을 투여하여 세포 증식성 질환을 치료하는 것에 대한 지시서가 포함된다.
일반적으로, 화학식 I의 화합물은 유사한 용도로 작용하는 작용제에 대해 허용되는 임의의 투여 방식에 의해 치료 유효량으로 투여될 것이다. 화학식 I의 화합물, 즉 활성 성분의 실제 양은 수많은 요인, 예컨대 치료하고자 하는 질환의 중증도, 대상체의 연령 및 상대적인 건강, 사용된 화합물의 효능, 투여 경로 및 형태, 및 다른 요인에 따라 달라질 것이다. 약물은 1일 1회 넘게, 바람직하게는 1일 1 또는 2회 투여될 수 있다. 이들 모든 요인은 임상의의 기술 내에 있다. 화학식 I의 화합물의 치료 유효량은 수용자의 체중 1 kg 당 1일 약 0.05 내지 약 50 mg 범위; 바람직하게는 약 0.1 내지 25 mg/kg/일, 보다 바람직하게는 약 0.5 내지 10 mg/kg/일일 수 있다. 따라서, 70 kg의 사람에 대한 투여에 있어서, 가장 바람직한 투여량 범위는 약 35 내지 70 g/일일 수 있다.
일반적으로, 화학식 I의 화합물은 하기 경로 중 어느 하나에 의해 제약 조성물로 투여될 것이다: 경구, 전신 (예를 들어, 경피, 비내 또는 좌제로서), 또는 비경구 (예를 들어, 근육내, 정맥내 또는 피하) 투여. 바람직한 투여 방식은 편리한 1일 투약법 (이는 발병 정도에 따라 조정될 수 있음)을 이용하여 경구 투여하는 것이다. 조성물은 정제, 환제, 캡슐, 반고체, 분말, 지속 방출 제제, 용액, 현탄액, 엘릭시르, 에어로졸, 또는 임의의 다른 적절한 조성물의 형태를 가질 수 있다. 화학식 I의 화합물의 또 다른 바람직한 투여 방식은 흡입이다. 이는 치료제를 기도로 직접 전달하는데 효과적인 방법이다.
제제의 선택은 다양한 요인, 예컨대 약물 투여 방식 및 약물 물질의 생체이용률에 따라 달라진다. 흡입에 의한 전달을 위하여, 화합물을 액체 용액, 현탁액, 에어로졸 추진제 또는 건조 분말로 제제화하여, 적합한 투여 분배기에 로딩할 수 있다. 여러 유형의 제약 흡입 장치-네불라이져 흡입기, 계량 투여 흡입기 (MDI) 및 건조 분말 흡입기 (DPI)가 있다. 네불라이져 장치는 치료제 (액체 형태로 제제화됨)를, 환자의 기도로 전달되는 미스트로서 분무하는 고속 공기 스트림을 생성한다. MDI는 전형적으로 압축 기체를 이용하여 포장한 제제이다. 작동시, 장치는 압축 기체에 의해 측정된 양의 치료제를 방출하여, 설정된 양의 작용제를 투여하는 신뢰할만한 방법을 제공한다. DPI는 환자가 장치를 통해 호흡하는 동안 흡기 스트림으로 분산될 수 있는 자유 유동 분말 형태로 치료제를 분배한다. 자유 유동 분말을 얻기 위해서는, 치료제를 락토스와 같은 부형제와 함께 제제화한다. 측정된 양의 치료제는 캡슐 형태로 저장되어 매 사용시에 분배된다.
본 발명은 또한 화학식 I의 화합물의 입자 크기가 10 내지 1000 nm, 바람직하게는 10 내지 400 nm인 제제에 관한 것이다. 이러한 제약 제제는 생체이용률이 표면적 증가, 즉 입자 크기 감소에 의해 증가될 수 있다는 원리에 기초하여 특히 불량한 셍체이용률을 나타내는 약물에 대해 개발되었다. 예를 들어, U.S. 4,107,288에는 거대 분자의 가교결합된 매트릭스에 활성 물질이 지지되어 있는, 입자 크기가 10 내지 1,000 nm인 입자를 갖는 제약 제제가 기재되어 있다. U.S. 5,145,684에는 표면 변형제의 존재하에 약물 물질을 나노입자 (평균 입자 크기 400 nm)로 분쇄한 다음 액체 매질에 분산시켜 생체이용률의 현저한 증가를 나타내는 제약 제제를 제공하는, 제약 제제의 제조가 기재되어 있다. 두 문헌이 참조로 포함된다.
추가의 측면에서, 본 발명은 (치료 유효량)의 화학식 I의 화합물, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 허용되는 부형제는 무독성이며, 투여를 보조하고, 화학식 I의 화합물의 치료적 이점에 불리한 영향을 미치지 않는다. 이러한 부형제는 임의의 고체, 액체, 반고체이거나, 또는, 에어로졸 조성물의 경우, 당업자가 일반적으로 입수할 수 있는 기체형 부형제일 수 있다.
고체 제약 부형제로는 전분, 셀룰로스, 활석, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 벼, 밀가루, 백악, 실리카겔, 스테아르산마그네슘, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 염화나트륨, 건조 탈지유 등이 포함된다.
액체 및 반고체 부형제는 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 물, 에탄올 및 다양한 오일, 예컨대 석유, 동물성유, 식물성유 또는 합성 기원 오일, 예를 들어 땅콩유, 대두유, 광유, 참깨유 등으로부터 선택될 수 있다. 특히 주사가능한 용액을 위한 바람직한 액체 담체로는 물, 염수, 수성 덱스트로스 및 글리콜이 포함된다.
압축 기체를 사용하여 화학식 I의 화합물을 에어로졸 형태로 분산시킬 수 있다. 이러한 목적에 적합한 불활성 기체는 질소, 이산화탄소 등이다. 다른 적합한 제약 부형제 및 그의 제제는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, edited by E. W. Martin (Mack Publishing Company, 18th ed., 1990)]에 기재되어 있다.
제제 내 화합물의 양은 당업자에게 이용되는 전체 범위 내에서 가변적일 수 있다. 전형적으로, 제제는 중량％ (wt％)로 (전체 제제 기준) 약 0.01 내지 99.99중량％의 화학식 I의 화합물을 함유하고, 나머지는 하나 이상의 적합한 제약 부형제가 차지할 것이다. 바람직하게는, 화합물은 약 1 내지 80중량％의 수준으로 존재한다.
본 발명은 또한 하나 이상의 화학식 I의 화합물 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 (즉 함유하거나 또는 그로 이루어지는) 제약 조성물에 관한 것이다.
유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I의 화합물을 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제 (예컨대 담체 및/또는 희석제)와 함께 포함하는 제약 조성물은 통상의 방식으로 성분을 혼합하여 제조할 수 있다.
유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I의 화합물, 및 추가로 조합 파트너 (하나의 투여 단위 형태로 또는 부분품의 키트로서)를 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제와 함께 포함하는 조합 제약 조성물은 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제와 상기 활성 성분을 통상의 방식으로 혼합하여 제조할 수 있다.
결론적으로, 본 발명은 추가의 측면에서 하기를 제공한다.
· 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I의 화합물을 제약상 허용되는 희석제 및/또는 담체와 함께 포함하는, 예를 들어 본원에 기재된 임의의 방법에 사용하기 위한, 조합 제약 조성물.
· 활성 성분으로서의 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I의 화합물; 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 물질(들) 및/또는 희석제, 및 임의로 하나 이상의 추가의 약물 물질을 포함하는 조합 제약 조성물. 이러한 조합 제약 조성물은 하나의 투여 단위 형태의 형태로 또는 부분품의 키트로서 존재할 수 있다.
· 동시 또는 순차 투여를 위한, 치료 유효량의 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I의 화합물 및 제2 약물 물질을 포함하는 조합 제약 조성물.
· 무독성의 치료 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 적어도, 예를 들어 상기 나타낸 바와 같은 제2의 약물 물질의 공동-투여, 예를 들어 함께 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함하는 상기 정의된 바와 같은 방법.
· a) 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의, 본원에 개시된 화학식 I의 화합물인 제1 작용제, 및 b) 하나 이상의, 예를 들어 상기 나타낸 바와 같은 공동-작용제를 포함하는 제약 조합물, 예를 들어 키트; 여기서, 상기 키트는 그의 투여를 위한 설명서를 포함할 수 있다.
화학식 I의 화합물의 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것으로서, 그의 범주를 제한하지는 않는다. 상기 화합물의 제조 방법이 하기 기재된다.
실시예 1: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-tert-부틸-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00024
Et3N (1.54 mL, 11.1 mmol, 3 당량)을 아르곤 분위기하에 DMF (25 mL) 중 이미다졸-1-카르복실산 [5-(2-tert-부틸-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드 (단계 1.1) (1.26 g, 3.7 mmol) 및 L-프롤린아미드 (0.548 g, 4.8 mmol, 1.3 당량)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 14시간 동안 교반하고, NaHCO3의 포화 용액을 첨가하여 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 NaHCO3의 포화 용액으로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH, 1:0 → 94:6)로 정제한 후, Et2O 중에서 연화처리하여, 표제 화합물 1.22 g을 회백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00025
단계 1.1: 이미다졸-1-카르복실산 [5-(2-tert-부틸-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드
Figure pct00026
DCM (50 mL) 중 5-(2-tert-부틸-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일아민 (단계 1.2) (1 g, 4.05 mmol) 및 1,1'-카르보닐디이미다졸 (0.984 g, 6.07 mmol, 1.5 당량)의 혼합물을 환류 온도에서 4시간 동안 교반하고, 냉각시켰다. 생성된 침전물을 여과에 의해 수집하여, 표제 화합물 1.26 g을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00027
단계 1.2: 5-(2-tert-부틸-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일아민
Figure pct00028
N-[5-(2-tert-부틸-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아세트아미드 (단계 1.3) (2 g, 7 mmol), HCl의 6 N 수용액 (10 mL) 및 EtOH (50 mL)의 혼합물을 85℃에서 2시간 동안 교반하고, 냉각시키고, NaHCO3의 포화 용액을 첨가하여 켄칭하고, DCM/MeOH (9:1, v/v)으로 추출하였다. 유기 상을 NaHCO3의 포화 용액으로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH, 1:0 → 96:4)로 정제하여, 표제 화합물 1.21 g을 황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00029
단계 1.3: N-[5-(2-tert-부틸-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아세트아미드
Figure pct00030
DMF (50 mL) 중 2-아세트아미도-4-메틸티아졸 (1.2 g, 7.7 mmol, 1.1 당량), 탄산세슘 (4.55 g, 14 mmol, 2 당량), 트리-tert-부틸포스피늄 테트라플루오로보레이트 (0.406 g, 1.4 mmol, 0.2 당량), 팔라듐 (II) 아세테이트 (0.15 g, 0.7 mmol, 0.1 당량) 및 4-브로모-2-tert-부틸-피리딘 (단계 1.4) (1.5 g, 7 mmol)의 혼합물을 90℃에서 아르곤 분위기하에 1.5시간 동안 교반하고, 냉각시키고, NaHCO3의 포화 용액을 첨가하여 켄칭하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여과액을 EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 NaHCO3의 포화 용액으로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH, 1:0 → 97:3)로 정제하여, 표제 화합물 2.02 g을 황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00031
단계 1.4: 4-브로모-2-tert-부틸-피리딘
Figure pct00032
2-tert-부틸-1H-피리딘-4-온 (단계 1.5) (4.25 g, 28 mmol) 및 POBr3 (8.88 g, 31 mmol, 1.1 당량)의 혼합물을 120℃로 가열하고, 15분 동안 교반하고, 냉각시키고, NaHCO3의 포화 용액을 첨가하여 켄칭하고, DCM/MeOH (9:1, v/v)로 추출하였다. 유기 상을 NaHCO3의 포화 용액으로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 95:5)로 정제하여, 표제 화합물 5.18 g을 황색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00033
단계 1.5: 2-tert-부틸-1H-피리딘-4-온
Figure pct00034
2-tert-부틸-피란-4-온 (단계 1.6) (5.74 g, 37.7 mmol) 및 수산화암모늄의 30％ 수용액 (100 mL)의 혼합물을 1시간 동안 환류 온도에서 교반하고, 냉각시키고, 농축시켰다. 잔류물을 MeOH (200 mL)로 연화처리하고, 여과하였다. 여과액을 농축시키고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH/NH3 수성, 94:5:1 → 92:7:1)로 정제하여, 표제 화합물 4.46 g을 황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00035
단계 1.6: 2-tert-부틸-피란-4-온
Figure pct00036
벤젠 (250 mL) 중 5-히드록시-1-메톡시-6,6-디메틸-헵타-1,4-디엔-3-온 (단계 1.7) (6.8 g, 36.9 mmol) 및 TFA (5.65 mL, 74 mmol, 2 당량)의 혼합물을 실온에서 14시간 동안 교반하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 1:0 → 75:25)로 정제하여, 표제 화합물 5.74 g을 황색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00037
단계 1.7: 5-히드록시-1-메톡시-6,6-디메틸-헵타-1,4-디엔-3-온
Figure pct00038
LiHMDS (THF 중 1 M, 100 mL, 2 당량)를 THF (400 mL) 중 4-메톡시-3-부텐-2-온 (10 mL, 100 mmol, 2 당량)의 차가운 (-78℃) 용액에 적가하였다. -78℃에서 30분 동안 교반한 후, THF (100 mL) 중 피발로일 클로라이드 (6.12 mL, 50 mmol)의 용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간에 걸쳐 실온으로 가온하고, NH4Cl의 포화 용액을 첨가하여 켄칭하였다. THF를 진공하에 제거하였다. 농축 혼합물을 Et2O로 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 1:0 → 85:15)로 정제하여, 표제 화합물 6.83 g을 황색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00039
실시예 2: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-시클로프로필-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00040
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 4시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 85℃에서 2시간 동안 교반하였다. 단계 1.3에서, 4-클로로-2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘 (단계 2.1)을 사용하고, 반응 혼합물을 150℃에서 2시간 동안 교반하였다.
표제 화합물:
Figure pct00041
단계 2.1: 4-클로로-2-시클로프로필-피리딘
Figure pct00042
표제 화합물을 문헌 [Comins, D. L.; Mantlo, N. B., Journal of Organic Chemistry, (1985), 50, 4410-4411]에 기재된 절차의 변형에 따라 제조하였다.
시클로프로필마그네슘 브로마이드 (THF 중 0.5 M, 100 mL, 50 mmol, 2.2 당량)를 THF (68 mL) 중 4-클로로피리딘 히드로클로라이드 (3.4 g, 22 mmol)의 차가운 (-78℃) 현탁액에 한 번에 첨가하였다. -78℃에서 10분 동안 교반한 후, 페닐 클로로포르메이트 (2.76 mL, 22 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 15분 동안 교반하고, 실온으로 가온하고, NH4Cl의 20％ 수용액을 첨가하여 켄칭하고, Et2O (2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기 상을 NaHCO3의 포화 용액 (50 mL)으로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 톨루엔 (100 mL)에 용해된 잔류물에 빙초산 (50 mL) 중 o-클로라닐 (6 g, 24.2 mmol, 1.1 당량)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 14시간 동안 교반하고, 0℃로 냉각시키고, NaOH의 10％ 수용액을 첨가하여 염기성화시키고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여과액으로부터의 유기 층을 H2O (20 mL)로 세척하고, HCl의 10％ 수용액 (3 x 25 mL)으로 추출하였다. NaOH의 20％ 수용액을 첨가하여 합한 산성 층을 염기성화시키고, DCM (3 x 25 mL)으로 추출하였다. 유기 상을 H2O (50 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH, 1:0 → 99:1)로 정제하여, 표제 화합물 0.951 g을 무색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00043
실시예 3: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(2-플루오로-페닐)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00044
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (4-클로로-2-(2-플루오로-페닐)-피리딘 (단계 3.1)을 사용하고, 단계 1.3에서 상응하는 혼합물을 150℃에서 2시간 동안 교반한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00045
단계 3.1: 4-클로로-2-(2-플루오로-페닐)-피리딘
Figure pct00046
EtOH (1 mL) 중 2-플루오로페닐보론산 (141 mg, 1 mmol, 1.2 당량)의 혼합물을 105℃에서 아르곤 분위기하에 톨루엔 (2 mL) 중 4-클로로-2-요오도-피리딘 (문헌 [Choppin, S.; Gros, P.; Fort, Y., European Journal of Organic Chemistry (2001), (3), 603-606]) (200 mg, 0.84 mmol), PdCl2(dppf) (18 mg, 0.025 mmol, 0.03 당량) 및 Na2CO3 (H2O 중 2 M 용액, 1.68 mL, 3.36 mmol, 4 당량)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 105℃에서 1시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, NaHCO3의 포화 용액을 첨가하여 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 NaHCO3의 포화 용액으로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 1:0 → 97:3)로 정제하여, 표제 화합물 127 mg을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00047
실시예 4: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-시클로부틸-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00048
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, EtOAc과 H2O로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 건조시키고, 유기 상을 농축시킨 후, 잔류물을 DCM 중에서 연화처리하여 정제하였다. 단계 1.3에서, 반응 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하고, 냉각시키고, EtOAc 및 H2O로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, EtOAc로 추출하였다. 건조시키고, 유기 상을 농축시킨 후, 잔류물을 Et2O 중에서 연화처리하여 정제하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리는 수행하지 않았다. 단계 1.7에서, THF 중 4-메톡시-3-부텐-2-온을 THF 중 LiHMDS의 차가운 (-78℃) 용액에 첨가하였다. 30분 후, THF 중 시클로부틸카르보닐 클로라이드를 첨가하고, 반응 혼합물을 18시간에 걸쳐 실온에 이르도록 하였다.
표제 화합물:
Figure pct00049
실시예 5: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00050
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 14시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 85℃에서 1시간 동안 교반하였다. 단계 1.3에서, 반응 혼합물을 120℃에서 3시간 동안 교반하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 65 내지 70℃에서 1시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.7에서, 1-메틸-시클로프로판카르보닐 클로라이드 (단계 5.1)를 사용하였다.
표제 화합물:
Figure pct00051
단계 5.1: 1-메틸-시클로프로판카르보닐 클로라이드
Figure pct00052
CHCl3 (80 ml) 중 1-메틸-시클로프로판카르복실산 (10 g, 100 mmol) 및 옥살릴 클로라이드 (10.49 ml, 120 mmol, 1.2 당량)의 혼합물을 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜, 표제 화합물 11.8 g을 황색 오일로서 수득하였고, 이를 추가 정제없이 사용하였다.
실시예 6: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00053
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, EtOAc 및 H2O로 희석하여 반응 혼합물을 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 단계 1.3에서, 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 건조시키고, 유기 상을 농축시킨 후, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 1:4)로 정제하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.7에서, THF (100 mL) 중 4-메톡시-3-부텐-2-온 (50 mmol)을 THF (200 mL) 중 LiHMDS (THF 중 1 M, 100 mL)의 차가운 (-78℃) 용액을 첨가하였다. 30분 후, 1-메틸-시클로부탄 클로라이드 (단계 6.1)를 첨가하고, 반응 혼합물을 18시간에 걸쳐 실온에 이르도록 하였다.
표제 화합물:
Figure pct00054
단계 6.1: 1-메틸-시클로부탄카르보닐 클로라이드
Figure pct00055
표제 화합물을 단계 5.1에 기재된 절차와 유사하게 [1-메틸-시클로부탄카르복실산 (문헌 [Cowling, S. J.; Goodby, J. W., Chemical Communications, (2006), (39), 4107-4109])을 사용한 것 제외] 제조하였다.
실시예 7: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-tert-부틸-피리딘-4-일)-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00056
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 2시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 단계 1.3에서, N-티아졸-2-일-아세트아미드를 사용하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 건조시키고, 유기 상을 농축시킨 후, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 1:1)로 정제하고, 이어서 Et2O 중에서 연화처리하였다.
표제 화합물:
Figure pct00057
실시예 8: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-이소프로필-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00058
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 단계 1.3에서, 4-클로로-2-이소프로필-피리딘 (단계 8.1)을 사용하였다. 반응 혼합물을 150℃에서 3시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 건조시키고, 유기 상을 농축시킨 후, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 25:75)로 정제하였다.
표제 화합물:
Figure pct00059
단계 8.1: 4-클로로-2-이소프로필-피리딘
Figure pct00060
표제 화합물을 단계 2.1에 기재된 절차와 유사하게 [이소프로필마그네슘 클로라이드 (THF 중 2 M)를 사용한 것 제외] 제조하였다.
Figure pct00061
실시예 9: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-시클로부틸-피리딘-4-일)-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00062
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, DCM/H2O로 희석하고, DCM으로 추출하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하고, 조 생성물을 정제하지 않았다. 단계 1.3에서, N-티아졸-2-일-아세트아미드를 사용하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 3시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 건조시키고, 유기 상을 농축시킨 후, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 2:3)로 정제하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.7에서, THF (100 mL) 중 4-메톡시-3-부텐-2-온 (50 mmol)을 THF (200 mL) 중 LiHMDS (THF 중 1 M, 100 mL)의 차가운 (-78℃) 용액에 첨가하였다. 30분 후, 시클로부틸카르보닐 클로라이드를 첨가하고, 반응 혼합물을 18시간에 걸쳐 실온에 이르도록 하였다.
표제 화합물:
Figure pct00063
실시예 10: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00064
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 14시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 85℃에서 1시간 동안 교반하였다. 단계 1.3에서, N-티아졸-2-일-아세트아미드를 사용하고, 반응 혼합물을 120℃에서 4시간 동안 교반하였다. 단계 1.5에서, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.7에서, 1-메틸-시클로프로판카르보닐 클로라이드 (단계 5.1)를 사용하였다.
표제 화합물:
Figure pct00065
실시예 11: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00066
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 14시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.3에서, N-티아졸-2-일-아세트아미드를 사용하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. 단계 1.4에서, 1,2-디클로로에탄 (피리딘-4-온 1 mmol 당 2.55 mL)을 용매로서 사용하였다. 반응 혼합물을 83℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 65℃에서 1시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.7에서, 1-트리플루오로메틸-시클로프로판카르보닐 클로라이드 (단계 11.1)를 사용하였다.
표제 화합물:
Figure pct00067
단계 11.1: 1-트리플루오로메틸-시클로프로판카르보닐 클로라이드
Figure pct00068
표제 화합물을 단계 5.1에 기재된 절차와 유사하게 (1-트리플루오로메틸-시클로프로판카르복실산을 사용한 것 제외) 제조하였다.
실시예 12: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00069
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 14시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 85℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.3에서, N-티아졸-2-일-아세트아미드를 사용하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. 단계 1.4에서, 반응 혼합물을 83℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 65℃에서 1시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.6에서, 조 생성물을 정제하지 않았다. 단계 1.7에서, 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피오닐 클로라이드 (단계 12.1)를 사용하였다.
표제 화합물:
Figure pct00070
단계 12.1: 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피오닐 클로라이드
Figure pct00071
표제 화합물을 단계 5.1에 기재된 절차와 유사하게 (3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피온산을 사용한 것 제외) 제조하였다.
실시예 13: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(1-트리플루오로메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00072
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, DCM/H2O로 희석하여 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 1시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, DCM으로 추출하였다. 단계 1.3에서, N-티아졸-2-일-아세트아미드를 사용하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 5시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.4에서, 1,2-디클로로에탄 (피리딘-4-온 1 mmol 당 2.26 mL)을 용매로서 사용하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 환류 온도에서 교반하고, 켄칭한 후, DCM으로 추출하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.6에서, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 단계 1.7에서, THF 중 4-메톡시-3-부텐-2-온을 THF 중 LiHMDS의 차가운 (-78℃) 용액에 첨가하였다. 30분 후, THF 중 1-트리플루오로메틸-시클로부탄카르보닐 클로라이드 (단계 13.1)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 18시간에 걸쳐 실온에 이르도록 하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다.
표제 화합물:
Figure pct00073
단계 13.1: 1-트리플루오로메틸-시클로부탄카르보닐 클로라이드
Figure pct00074
표제 화합물을 단계 5.1에 기재된 절차와 유사하게 (1-트리플루오로메틸-시클로부탄카르복실산을 사용하고, 반응 혼합물을 환류 온도에서 2시간 동안 교반한 것 제외) 제조하였다.
실시예 14: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00075
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 14시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 85℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.3에서, 반응 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. 단계 1.4에서, 1,2-디클로로에탄 (피리딘-4-온 1 mmol 당 2.55 mL)을 용매로서 사용하였다. 반응 혼합물을 83℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 65℃에서 1시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.7에서, 1-트리플루오로메틸-시클로프로판카르보닐 클로라이드 (단계 11.1)를 사용하였다.
표제 화합물:
Figure pct00076
실시예 15: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00077
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 14시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 85℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.3에서, 반응 혼합물을 120℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. 단계 1.4에서, 반응 혼합물을 83℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 65℃에서 1시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.6에서, 조 생성물을 정제하지 않았다. 단계 1.7에서, 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피오닐 클로라이드 (단계 12.1)를 사용하였다.
표제 화합물:
Figure pct00078
별법의 절차에서, 표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다: DMF 대신에 N,N-디메틸아세트아미드를 사용하고, 혼합물을 65℃에서 2시간 동안 교반하였다. 단계 1.1에서, 1,1'-카르보닐디이미다졸 대신에 페닐 클로로포르메이트를 사용하고 (서서히 첨가함), 반응을 THF 중에서 N,N-디에틸-이소프로필아민의 존재하에 실온에서 (1.5시간) 수행하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 환류하에 5시간 동안 교반하면서 가열하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.3에서, 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 단계 1.4에서, 반응을 1.1 당량의 POBr3 및 1.1 당량의 트리프로필아민을 사용하여 톨루엔 중에서 수행하고, 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 65℃에서 1시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.6에서, 벤젠 대신에 톨루엔을 사용하고, 조 생성물을 정제하지 않았다. 단계 1.7에서, 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피오닐 클로라이드 (단계 12.1)를 사용하였다.
실시예 16: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-트리플루오로메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00079
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 72시간 동안 교반하고, DCM/H2O로 희석하여 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 1시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, DCM으로 추출하였다. 단계 1.3에서, 반응 혼합물을 120℃에서 6시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.4에서, 1,2-디클로로에탄 (피리딘-4-온 1 mmol 당 2.26 mL)을 용매로서 사용하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 환류 온도에서 교반하고, 켄칭한 후, DCM으로 추출하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.6에서, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 단계 1.7에서, THF 중 4-메톡시-3-부텐-2-온을 THF 중 LiHMDS의 차가운 (-78℃) 용액에 첨가하였다. 30분 후, THF 중 1-트리플루오로메틸-시클로부탄카르보닐 클로라이드 (단계 13.1)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 18시간에 걸쳐 실온에 이르도록 하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다.
표제 화합물:
Figure pct00080
실시예 17: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(1-메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00081
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, DCM으로 추출하였다. 단계 1.3에서, N-티아졸-2-일-아세트아미드를 사용하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 건조시키고, 유기 상을 농축시킨 후, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 25:75)로 정제하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.7에서, THF 중 4-메톡시-3-부텐-2-온을 THF 중 LiHMDS의 차가운 (-78℃) 용액에 첨가하였다. 30분 후, THF 중 1-메틸-시클로부탄 클로라이드 (단계 6.1)를 첨가하고, 반응 혼합물을 18시간에 걸쳐 실온에 이르도록 하였다.
표제 화합물:
Figure pct00082
실시예 18: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(1-시아노-시클로프로필)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00083
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.1에서, 1-[4-(2-아미노-4-메틸-티아졸-5-일)-피리딘-2-일]-시클로프로판카르보니트릴 (단계 18.1)을 사용하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 환류 온도에서 교반하였다.
표제 화합물:
Figure pct00084
단계 18.1: 1-[4-(2-아미노-4-메틸-티아졸-5-일)-피리딘-2-일]-시클로프로판카르보니트릴
Figure pct00085
{5-[2-(1-시아노-시클로프로필)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르 (단계 18.2) (295 mg), DCM (4 mL) 및 TFA (1 mL)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH/NH3 수성, 94:5:1)로 정제하여, 표제 화합물 182 mg을 수득하였다.
Figure pct00086
단계 18.2: {5-[2-(1-시아노-시클로프로필)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르
Figure pct00087
표제 화합물을 단계 1.3에 기재된 절차와 유사하게 [1-(4-브로모-피리딘-2-일)-시클로프로판카르보니트릴 (단계 18.3) 및 (4-메틸-티아졸-2-일)-카밤산 tert-부틸 에스테르 (단계 18.4)를 사용한 것 제외] 제조하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 조 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 1:1)로 정제하여, 표제 화합물 122 mg을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00088
단계 18.3: 1-(4-브로모-피리딘-2-일)-시클로프로판카르보니트릴
Figure pct00089
LiHMDS (톨루엔 중 1 M, 17.6 mL, 17.6 mmol, 3.1 당량)를 4-브로모-2-플루오로-피리딘 (문헌 [Marsais, F. et al., Journal of Organic Chemistry, (1992), 57, 565-573]) (1 g, 5.7 mmol), 시클로프로판카르보니트릴 (1.25 mL, 17 mmol, 3 당량), 4 Å 분자체 및 톨루엔 (20 mL)의 차가운 (-5℃) 혼합물에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 16시간 동안 교반하고, H2O에 붓고, 여과하였다. 여과액을 EtOAc/H2O로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 H2O 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 9:1)로 정제하여, 표제 화합물 620 mg을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00090
단계 18.4: (4-메틸-티아졸-2-일)-카밤산 tert-부틸 에스테르
Figure pct00091
t-BuOH (50 mL) 중 디-tert-부틸-디카르보네이트 (21 g, 96.5 mmol, 1.1 당량)의 용액을 t-BuOH (50 mL) 중 4-메틸-2-아미노티아졸 (10 g, 87.7 mmol) 및 DMAP (1.1 g, 8.8 mmol, 0.1 당량)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 72시간 동안 교반하고, 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/H2O로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 H2O 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH, 98:2)로 정제하여, 표제 화합물 15.2 g을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00092
실시예 19: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(1-시아노-시클로부틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00093
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 단계 1.1에서, 1-[4-(2-아미노-4-메틸-티아졸-5-일)-피리딘-2-일]-시클로부탄카르보니트릴 (단계 19.1)을 사용하고, 반응 혼합물을 3시간 동안 환류 온도에서 교반하였다.
표제 화합물:
Figure pct00094
단계 19.1: 1-[4-(2-아미노-4-메틸-티아졸-5-일)-피리딘-2-일]-시클로부탄카르보니트릴
Figure pct00095
{5-[2-(1-시아노-시클로부틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르 (단계 19.2) (300 mg), DCM (5 mL) 및 TFA (1 mL)의 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, NaHCO3의 포화 용액 (50 mL)을 첨가하여 켄칭하고, DCM (3 x 75 mL)으로 추출하였다. 유기 상을 NaHCO3의 포화 용액 (2 x 50 mL)으로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH, 1:0 → 96:4)로 정제하여, 표제 화합물 181 mg을 황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00096
단계 19.2: {5-[2-(1-시아노-시클로부틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르
Figure pct00097
표제 화합물을 단계 1.3에 기재된 절차와 유사하게 (1-(4-브로모-피리딘-2-일)-시클로부탄카르보니트릴 (단계 19.3) 및 (4-메틸-티아졸-2-일)-카밤산 tert-부틸 에스테르 (단계 18.4)를 사용한 것 제외) 제조하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다.
표제 화합물:
Figure pct00098
단계 19.3: 1-(4-브로모-피리딘-2-일)-시클로부탄카르보니트릴
Figure pct00099
LiHMDS (톨루엔 중 1 M, 17.7 mL, 17.7 mmol, 3.1 당량)를 톨루엔 (20 mL) 중 4-브로모-2-플루오로-피리딘 (문헌 [Marsais, F. et al., Journal of Organic Chemistry, (1992), 57, 565-573]) (1 g, 5.7 mmol) 및 시클로부탄카르보니트릴 (1.39 g, 17.1 mmol, 3 당량)의 차가운 (-5℃) 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 5시간 동안 교반하고, NaHCO3의 포화 용액 (50 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여과액을 EtOAc (3 x 75 mL)로 추출하였다. 유기 상을 NaHCO3의 포화 용액 (2 x 50 mL)으로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 1:0 → 95:5)로 정제하여, 표제 화합물 933 mg을 황색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00100
실시예 20: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(1-카르바모일-시클로부틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00101
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 단계 1.1에서, 1-[4-(2-아미노-4-메틸-티아졸-5-일)-피리딘-2-일]-시클로부탄카르복실산 아미드 (단계 20.1)를 사용하고, 반응 혼합물을 12시간 동안 환류 온도에서 교반하였다.
표제 화합물:
Figure pct00102
단계 20.1: 1-[4-(2-아미노-4-메틸-티아졸-5-일)-피리딘-2-일]-시클로부탄카르복실산 아미드
Figure pct00103
{5-[2-(1-시아노-시클로부틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르 (단계 19.2) (640 mg, 1.73 mmol) 및 진한 황산의 혼합물을 0℃에서 40분 동안 교반하고, 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하고, NaHCO3의 포화 용액 (50 mL)을 첨가하여 켄칭하고, DCM (3 x 75 mL)으로 추출하였다. 유기 상을 NaHCO3의 포화 용액 (2 x 50 mL)으로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH/NH3 수성, 99:0:1 → 93:6:1)로 정제하여, 표제 화합물 35 mg을 황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00104
실시예 21: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(2-디메틸아미노-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00105
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 단계 1.1에서, 5-[2-(2-디메틸아미노-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일아민 (단계 21.1)를 사용하고, 반응 혼합물을 14시간 동안 환류 온도에서 교반하였다.
표제 화합물:
Figure pct00106
단계 21.1: 5-[2-(2-디메틸아미노-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일아민
Figure pct00107
표제 화합물을 단계 19.1에 기재된 절차와 유사하게 ({5-[2-(2-디메틸아미노-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르 (단계 21.2)를 사용하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 것 제외) 제조하였다.
표제 화합물:
Figure pct00108
단계 21.2: {5-[2-(2-디메틸아미노-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르
Figure pct00109
포름알데히드 (H2O 중 36％, 0.144 mL, 1.87 mmol, 2 당량)를 1,2-디클로로에탄 (10 mL) 중 {5-[2-(2-아미노-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르 (단계 21.3) (0.34 g, 0.94 mmol) 및 나트륨 아세톡시보로하이드라이드 (0.6 g, 2.82 mmol, 3 당량)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH/NH3 수성, 99:0:1 → 97:2:1)로 정제하여, 표제 화합물 0.222 g을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00110
단계 21.3: {5-[2-(2-아미노-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르
Figure pct00111
LiAlH4 (THF 중 1 M, 3.06 mL, 3.06 mmol, 1.5 당량)를 아르곤 분위기하에 THF (10 mL) 중 {5-[2-(시아노-디메틸-메틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르 (단계 21.4) (0.73 g, 2.04 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, H2O (20 mL)를 첨가하여 켄칭하고, EtOAc (2 x 75 mL)로 추출하였다. 유기 상을 NaHCO3의 포화 용액 (2 x 50 mL)으로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH/NH3 수성, 99:0:1 → 94:5:1)로 정제하여, 표제 화합물 318 mg을 갈색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00112
단계 21.4: {5-[2-(시아노-디메틸-메틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르
Figure pct00113
표제 화합물을 단계 1.3에 기재된 절차와 유사하게 [2-(4-요오도-피리딘-2-일)-2-메틸-프로피오니트릴 (단계 21.5) 및 (4-메틸-티아졸-2-일)-카밤산 tert-부틸 에스테르 (단계 18.4)를 사용한 것 제외] 제조하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다.
표제 화합물:
Figure pct00114
단계 21.5: 2-(4-요오도-피리딘-2-일)-2-메틸-프로피오니트릴
Figure pct00115
표제 화합물을 단계 19.3에 기재된 절차와 유사하게 (2-플루오로-4-요오도피리딘을 사용한 것 제외) 제조하였다.
표제 화합물:
Figure pct00116
실시예 22: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-디에틸아미노-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00117
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, DCM/H2O로 희석하여 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 1시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, DCM으로 추출하였다. 단계 1.3에서, 디에틸-(4-요오도-피리딘-2-일)-아민 (단계 22.1)을 사용하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 16시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, EtOAc로 추출하였다.
표제 화합물:
Figure pct00118
단계 22.1: 디에틸-(4-요오도-피리딘-2-일)-아민
Figure pct00119
DMF (20 mL) 중 2-플루오로-4-요오도피리딘 (2 g, 8.97 mmol), 디에틸 아민 (2.77 ml, 26.9 mmol, 3 당량) 및 K2CO3 (2.48 g, 17.94 mmol, 2 당량)의 혼합물을 100℃에서 18시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, EtOAc/H2O로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 H2O 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/Et2O, 98:2)로 정제하여, 표제 화합물 2.3 g을 황색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00120
실시예 23: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-디에틸아미노-피리딘-4-일)-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00121
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, DCM/H2O로 희석하여 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 1시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, DCM으로 추출하였다. 단계 1.3에서, 디에틸-(4-요오도-피리딘-2-일)-아민 (단계 22.1) 및 N-티아졸-2-일-아세트아미드를 사용하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 5시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, EtOAc로 추출하였다.
표제 화합물:
Figure pct00122
실시예 24: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(3-tert-부틸-3H-벤조이미다졸-5-일)-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00123
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 14시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 85℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.3에서, 6-브로모-1-tert-부틸-1H-벤조이미다졸 (단계 24.1) 및 N-티아졸-2-일-아세트아미드를 사용하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 7시간 동안 교반하였다.
표제 화합물:
Figure pct00124
단계 24.1: 6-브로모-1-tert-부틸-1H-벤조이미다졸
Figure pct00125
4-브로모-N*2*-tert-부틸-벤젠-1,2-디아민 (단계 24.2) (2.14 g, 8.80 mmol) 및 트리에틸오르토포르메이트 (14.7 mL, 88 mmol)의 혼합물을 148℃에서 1시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH, 1:0 → 99:1)로 정제하여, 표제 화합물 1.74 g을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00126
단계 24.2: 4-브로모-N*2*-tert-부틸-벤젠-1,2-디아민
Figure pct00127
MeOH/THF (1:1 v/v, 600 mL) 중 (5-브로모-2-니트로-페닐)-tert-부틸-아민 (단계 24.3) (6 g, 21.97 mmol) 및 라니 니켈 (2 g)의 현탁액을 실온에서 수소 분위기하에 9시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 97:3 → 3:1)로 정제하여, 표제 화합물 4.4 g을 흑색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00128
단계 24.3: (5-브로모-2-니트로-페닐)-tert-부틸-아민
Figure pct00129
EtOH (80 mL) 중 4-브로모-2-플루오로-니트로벤젠 (4 g, 18.2 mmol) 및 tert-부틸아민 (4.78 mL, 45.5 mmol, 2.5 당량)의 혼합물을 85℃에서 15시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 1:0 → 99:1)로 정제하여, 표제 화합물 4.8 g을 오렌지색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00130
실시예 25: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(3-tert-부틸-2-메틸-3H-벤조이미다졸-5-일)-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00131
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 14시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 85℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.3에서, 6-브로모-1-tert-부틸-2-메틸-1H-벤조이미다졸 (단계 25.1) 및 N-티아졸-2-일-아세트아미드를 사용하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 5시간 동안 교반하였다.
표제 화합물:
Figure pct00132
단계 25.1: 6-브로모-1-tert-부틸-2-메틸-1H-벤조이미다졸
Figure pct00133
6-브로모-1-tert-부틸-2-에톡시메틸-2-메틸-2,3-디히드로-1H-벤조이미다졸 (단계 25.2) (2.04 g, 6.51 mmol) 및 TFA (10 ml)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, NaHCO3의 포화 용액 (100 mL)을 첨가하여 켄칭하고, EtOAc (2 x 150 mL)로 추출하였다. 유기 상을 NaHCO3의 포화 용액 (2 x 50 mL)으로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH, 1:0 → 98:2)로 정제하여, 표제 화합물 1.05 g을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00134
단계 25.2: 6-브로모-1-tert-부틸-2-에톡시메틸-2-메틸-2,3-디히드로-1H-벤조이미다졸
Figure pct00135
4-브로모-N*2*-tert-부틸-벤젠-1,2-디아민 (단계 24.2) (2.14 g, 8.80 mmol) 및 트리에틸오르토아세테이트 (16.2 mL, 88 mmol, 10 당량)의 혼합물을 142℃에서 1시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 1:0 → 95:5)로 정제하여, 표제 화합물 2.04 g을 자색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00136
실시예 26: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(3-에틸-3H-벤조이미다졸-5-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00137
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 15시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 85℃에서 3시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.3에서, 6-브로모-1-에틸-1H-벤조이미다졸 (단계 26.1) 및 N-티아졸-2-일-아세트아미드를 사용하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 14시간 동안 교반하였다.
표제 화합물:
Figure pct00138
단계 26.1: 6-브로모-1-에틸-1H-벤조이미다졸
Figure pct00139
4-브로모-N*2*-에틸-벤젠-1,2-디아민 (단계 26.2) (2 g, 9.3 mmol) 및 트리에틸오르토포르메이트 (15.5 mL, 93 mmol, 10 당량)의 혼합물을 148℃에서 1시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH, 1:0 → 98:2)로 정제하여, 표제 화합물 2.05 g을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00140
단계 26.2: 4-브로모-N*2*-에틸-벤젠-1,2-디아민
Figure pct00141
MeOH/THF (1:1 v/v, 600 mL) 중 (5-브로모-2-니트로-페닐)-에틸-아민 (단계 26.3) (6 g, 24.48 mmol) 및 라니 니켈 (2 g)의 현탁액을 실온에서 수소 분위기하에 9시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 95:5 → 85:15)로 정제하여, 표제 화합물 4.51 g을 흑색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00142
단계 26.3: (5-브로모-2-니트로-페닐)-에틸-아민
Figure pct00143
4-브로모-2-플루오로-니트로벤젠 (6 g, 27.3 mmol), 메틸아민 (MeOH 중 2 M, 34.1 mL, 68.2 mmol, 2.5 당량) 및 EtOH (80 mL)의 혼합물을 85℃에서 15시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 농축시켰다. 잔류물을 연화처리에 의해 정제하여, 표제 화합물 6 g을 황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00144
실시예 27: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(5-{2-[1-(4-메톡시-페닐)-1-메틸-에틸]-피리딘-4-일}-4-메틸-티아졸-2-일)-아미드]
Figure pct00145
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, DCM으로 추출하였다. 단계 1.3에서, 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.4에서, 1,2-디클로로에탄 (피리딘-4-온 1 mmol 당 4.3 mL)을 용매로서 사용하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 환류 온도에서 교반하고, NaHCO3의 포화 용액에 붓고, DCM으로 추출하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 80℃에서 23시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.6에서, 반응 혼합물을 실온에서 21시간 동안 교반하였다. 단계 1.7에서, THF 중 4-메톡시-3-부텐-2-온을 THF 중 LiHMDS의 차가운 (-78℃) 용액에 첨가하였다. 30분 후, THF 중 2-(4-메톡시-페닐)-2-메틸-프로피오닐 클로라이드 (단계 27.1)를 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간에 걸쳐 실온에 이르도록 하였다.
표제 화합물:
Figure pct00146
단계 27.1: 2-(4-메톡시-페닐)-2-메틸-프로피오닐 클로라이드
Figure pct00147
표제 화합물을 단계 5.1에 기재된 절차와 유사하게 [2-(4-메톡시-페닐)-2-메틸-프로피온산을 사용하고, 반응 혼합물을 환류 온도에서 3시간 동안 교반한 것 제외] 제조하였다.
실시예 28: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(5-{2-[1-(4-메톡시-페닐)-1-메틸-에틸]-피리딘-4-일}-티아졸-2-일)-아미드]
Figure pct00148
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, DCM으로 추출하였다. 단계 1.3에서, N-티아졸-2-일-아세트아미드를 사용하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 5시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.4에서, 1,2-디클로로에탄 (피리딘-4-온 1 mmol 당 4.3 mL)을 용매로서 사용하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 환류 온도에서 교반하고, NaHCO3의 포화 용액에 붓고, DCM으로 추출하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 80℃에서 23시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.6에서, 반응 혼합물을 실온에서 21시간 동안 교반하였다. 단계 1.7에서, THF 중 4-메톡시-3-부텐-2-온을 THF 중 LiHMDS의 차가운 (-78℃) 용액에 첨가하였다. 30분 후, THF 중 2-(4-메톡시-페닐)-2-메틸-프로피오닐 클로라이드 (단계 27.1)를 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간에 걸쳐 실온에 이르도록 하였다.
표제 화합물:
Figure pct00149
실시예 29: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(5-{2-[1-(4-메톡시-페닐)-시클로프로필]-피리딘-4-일}-4-메틸-티아졸-2-일)-아미드]
Figure pct00150
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 21시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, DCM으로 추출하였다. 단계 1.3에서, 반응 혼합물을 100℃에서 6시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.4에서, 1,2-디클로로에탄 (피리딘-4-온 1 mmol 당 4.3 mL)을 용매로서 사용하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 환류 온도에서 교반하고, NaHCO3의 포화 용액에 붓고, DCM으로 추출하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 80℃에서 18시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.6에서, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 단계 1.7에서, THF 중 4-메톡시-3-부텐-2-온을 THF 중 LiHMDS의 차가운 (-78℃) 용액에 첨가하였다. 30분 후, THF 중 1-(4-메톡시-페닐)-시클로프로판카르보닐 클로라이드 (단계 29.1)를 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간에 걸쳐 실온에 이르도록 하였다.
표제 화합물:
Figure pct00151
단계 29.1: 1-(4-메톡시-페닐)-시클로프로판카르보닐 클로라이드
Figure pct00152
표제 화합물을 단계 5.1에 기재된 절차와 유사하게 [1-(4-메톡시-페닐)-시클로프로필카르복실산을 사용하고, 반응 혼합물을 환류 온도에서 3시간 동안 교반한 것 제외] 제조하였다.
실시예 30: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(5-{2-[1-(4-메톡시-페닐)-시클로프로필]-피리딘-4-일}-티아졸-2-일)-아미드]
Figure pct00153
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, DCM으로 추출하였다. 단계 1.3에서, N-티아졸-2-일-아세트아미드를 사용하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 28시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.4에서, 1,2-디클로로에탄 (피리딘-4-온 1 mmol 당 4.3 mL)을 용매로서 사용하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 환류 온도에서 교반하고, NaHCO3의 포화 용액에 붓고, DCM으로 추출하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 80℃에서 18시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.6에서, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 단계 1.7에서, THF 중 4-메톡시-3-부텐-2-온을 THF 중 LiHMDS의 차가운 (-78℃) 용액에 첨가하였다. 30분 후, THF 중 1-(4-메톡시-페닐)-시클로프로판카르보닐 클로라이드 (단계 29.1)를 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간에 걸쳐 실온에 이르도록 하였다.
표제 화합물:
Figure pct00154
실시예 31: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-{1-[4-(3-디메틸아미노-프로폭시)-페닐]-1-메틸-에틸}-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00155
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 100℃에서 7시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, DCM으로 추출하였다. 단계 1.3에서, (3-{4-[1-(4-브로모-피리딘-2-일)-1-메틸-에틸]-페녹시}-프로필)-디메틸-아민 (단계 31.1)을 사용하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다.
표제 화합물:
Figure pct00156
단계 31.1: (3-{4-[1-(4-브로모-피리딘-2-일)-1-메틸-에틸]-페녹시}-프로필)-디메틸-아민
Figure pct00157
수산화나트륨 (펠릿은 미세하게 분쇄됨, 0.488 g, 12.2 mmol, 5 당량)을 DMF (5 mL) 중 4-[1-(4-브로모-피리딘-2-일)-1-메틸-에틸]-페놀 (단계 31.2) (0.714 g, 2.44 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. 3-디메틸아미노-1-프로필클로라이드 히드로클로라이드 (0.611 g, 3.87 mmol, 1.6 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃로 가열하고, 10시간 동안 교반하고, 냉각시키고, EtOAc/H2O로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 H2O 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH/NH3 수성, 94:5:1)로 정제하여, 표제 화합물 0.398 g을 불순한 갈색 오일로서 수득하였고, 이를 추가 정제없이 사용하였다.
Figure pct00158
단계 31.2: 4-[1-(4-브로모-피리딘-2-일)-1-메틸-에틸]-페놀
Figure pct00159
BBr3 (DCM 중 1 M, 23 mmol, 8 당량)을 아르곤 분위기하에 DCM (42 mL) 중 4-브로모-2-[1-(4-메톡시-페닐)-1-메틸-에틸]-피리딘 (단계 31.3) (0.878 g, 2.87 mmol)의 차가운 (0℃) 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 실온으로 가온하고, 18시간 동안 교반하고, 0℃로 냉각시키고, 무수 MeOH를 첨가하여 켄칭하였다. 혼합물을 농축시키고, HCl의 6 M 수용액으로 희석하고, 1시간 동안 교반하고, pH 7로 중화시키고, DCM으로 추출하였다. 유기 상을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제없이 사용하였다.
단계 31.3: 4-브로모-2-[1-(4-메톡시-페닐)-1-메틸-에틸]-피리딘
Figure pct00160
표제 화합물을 단계 1.4 내지 1.7에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 단계 1.4에서, 1,2-디클로로에탄 (피리딘-4-온 1 mmol 당 4.3 mL)을 용매로서 사용하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 환류 온도에서 교반하고, NaHCO3의 포화 수용액에 붓고, DCM으로 추출하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 80℃에서 23시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.6에서, 반응 혼합물을 실온에서 21시간 동안 교반하였다. 단계 1.7에서, THF 중 4-메톡시-3-부텐-2-온을 THF 중 LiHMDS의 차가운 (-78℃) 용액에 첨가하였다. 30분 후, THF 중 2-(4-메톡시-페닐)-2-메틸-프로피오닐 클로라이드 (단계 27.1)를 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간에 걸쳐 실온에 이르도록 하였다.
표제 화합물:
Figure pct00161
실시예 32: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-d3-메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00162
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, DCM/H2O로 희석하여 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 1시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, DCM으로 추출하였다. 단계 1.3에서, 팔라듐 촉매를 남아있는 시약의 가열 혼합물에 첨가하고, 생성된 혼합물을 120℃에서 1시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 건조시키고, 유기 상을 농축시킨 후, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 1:4)로 정제하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.7에서, THF 중 4-메톡시-3-부텐-2-온을 THF 중 LiHMDS의 차가운 (-78℃) 용액에 첨가하였다. 30분 후, THF 중 1-d3-메틸-시클로부탄 클로라이드 (단계 32.1)를 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간에 걸쳐 실온에 이르도록 하였다.
표제 화합물:
Figure pct00163
단계 32.1: 1- d3-메틸-시클로부탄카르보닐 클로라이드
Figure pct00164
표제 화합물을 단계 5.1에 기재된 절차와 유사하게 (d3-메틸-요오다이드를 사용한 것을 제외하고는 문헌 [Cowling, S. J.; Goodby, J. W., Chemical Communications, (2006), (39), 4107-4109]에 기재된 절차에 따라 제조한, 1-d3-메틸-시클로부탄카르복실산을 사용한 것 제외) 제조하였다.
실시예 33: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(1-d3-메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00165
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, DCM/H2O로 희석하여 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 1시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, DCM으로 추출하였다. 단계 1.3에서, N-티아졸-2-일-아세트아미드를 사용하였다. 팔라듐 촉매를 남아있는 시약의 가열 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃에서 7시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, EtOAc로 추출하였다. 건조시키고, 유기 상을 농축시킨 후, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 1:4)로 정제하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.7에서, THF 중 4-메톡시-3-부텐-2-온을 THF 중 LiHMDS의 차가운 (-78℃) 용액에 첨가하였다. 30분 후, THF 중 1-d3-메틸-시클로부탄 클로라이드 (단계 32.1)를 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간에 걸쳐 실온에 이르도록 하였다.
표제 화합물:
Figure pct00166
실시예 34: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-d3-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00167
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 8시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 85℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.3에서, 2-아세트아미도-4-d3-메틸-티아졸 (단계 34.1)을 사용하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 65 내지 70℃에서 1시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.7에서, 1-메틸-시클로프로판카르보닐 클로라이드 (단계 5.1)를 사용하였다.
표제 화합물:
Figure pct00168
단계 34.1: 2-아세트아미도-4-d3-메틸-티아졸
Figure pct00169
EtOH (20 mL) 중 1-브로모-프로판-2-온-d5 (문헌 [Challacombe, K. et al., Journal of the Chemical Society Perkin Trans. I, (1988), 2213-2218]) (1.25 g, 8.8 mmol) 및 1-아세틸-2-티오우레아 (1 g, 8.8 mmol)의 혼합물을 85℃에서 2시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 85:15 → 1:1)로 정제하여, 표제 화합물 1.08 g을 오렌지색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00170
실시예 35: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-d3-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00171
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 8시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 85℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.3에서, 2-아세트아미도-4-d3-메틸-티아졸 (단계 34.1)을 사용하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. 단계 1.4에서, 반응 혼합물을 83℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 65℃에서 1시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.6에서, 조 생성물을 정제하지 않았다. 단계 1.7에서, 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피오닐 클로라이드 (단계 12.1)를 사용하였다.
표제 화합물:
Figure pct00172
실시예 36: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-디메틸아미노메틸-5-[2-(1-d3-메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00173
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, DCM/H2O로 희석하여 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 2시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, N-{4-디메틸아미노메틸-5-[2-(1-d3-메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아세트아미드 (단계 36.1)를 사용하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, DCM으로 추출하였다.
표제 화합물:
Figure pct00174
단계 36.1: N-{4-디메틸아미노메틸-5-[2-(1-d3-메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아세트아미드
Figure pct00175
DMF (2 mL) 중 N-{4-브로모메틸-5-[2-(1-d3-메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아세트아미드 (단계 36.2) (150 mg, 0.391 mmol), 디메틸아민 히드로클로라이드 (38.3 mg, 0.470 mmol, 1.2 당량) 및 탄산세슘 (293 mg, 0.900 mmol, 2.3 당량)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 H2O 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 Et2O 중에서 연화처리하여 정제함으로써, 표제 화합물 89 mg을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00176
단계 36.2: N-{4-브로모메틸-5-[2-(1-d3-메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아세트아미드
Figure pct00177
NBS (554 mg, 3.06 mmol, 1.1 당량)를 CCl4 (20 mL) 및 CHCl3 (16 mL) 중 N-{4-메틸-5-[2-(1-d3-메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아세트아미드 (단계 36.3) (846 mg, 2.78 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, H2O 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 1:4)로 정제하여, 표제 화합물 572 mg을 연황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00178
단계 36.3: N-{4-메틸-5-[2-(1-d3-메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아세트아미드
Figure pct00179
표제 화합물을 단계 1.3 내지 1.7에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 단계 1.3에서, 반응 혼합물을 120℃에서 1시간 동안 교반하고, EtOAc/H2O로 희석하여 켄칭하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.7에서, THF 중 4-메톡시-3-부텐-2-온을 THF 중 LiHMDS의 차가운 (-78℃) 용액에 첨가하였다. 30분 후, THF 중 1-d3-메틸-시클로부탄 클로라이드 (단계 32.1)를 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간에 걸쳐 실온에 이르도록 하였다.
표제 화합물:
Figure pct00180
실시예 37: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-클로로-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00181
피리딘 (2 mL) 중 4-클로로-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일아민 (단계 37.1) (100 mg, 0.311 mmol) 및 포스겐 (0.164 mL, 0.311 mmol)의 혼합물을 105℃에서 1시간 동안 교반하였다. L-프롤린아미드 (106 mg, 0.932 mmol, 3 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 105℃에서 30분 동안 교반하고, 냉각시키고, NaHCO3의 포화 용액 (100 mL)을 첨가하여 켄칭하고, EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기 상을 NaHCO3의 포화 용액 (100 mL)으로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH, 99:1 → 94:6)로 정제하여, 표제 화합물 46 mg을 황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00182
단계 37.1: 4-클로로-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일아민
Figure pct00183
표제 화합물을 단계 1.2 내지 1.7에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 85℃에서 3시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.3에서, N-(4-클로로-티아졸-2-일)-아세트아미드 (단계 37.2)를 사용하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. 단계 1.4에서, 반응 혼합물을 83℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 65℃에서 1시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.6에서, 조 생성물을 정제하지 않았다. 단계 1.7에서, 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피오닐 클로라이드 (단계 12.1)를 사용하였다.
표제 화합물:
Figure pct00184
단계 37.2: N-(4-클로로-티아졸-2-일)-아세트아미드
Figure pct00185
N-(4-옥소-4,5-디히드로-티아졸-2-일)-아세트아미드 (단계 37.3) (14.8 g, 94 mmol) 및 POCl3 (175 mL, 20 당량)의 혼합물을 105℃로 가열하고, 15분 동안 교반하고, 냉각시키고, 농축시켰다. 잔류물을 빙-H2O에 붓고, EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기 상을 NaHCO3의 포화 용액 (2 x 100 mL)으로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH, 99:1)로 정제하여, 표제 화합물 13.9 g을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00186
단계 37.3: N-(4-옥소-4,5-디히드로-티아졸-2-일)-아세트아미드
Figure pct00187
피리딘 (150 mL) 중 슈도티오히단토인 (16 g, 138 mmol) 및 아세트산 무수물 (16.9 mL, 179 mmol, 1.3 당량)의 혼합물을 115℃로 가열하고, 1시간 동안 교반하고, 냉각시켰다. 생성된 침전물을 여과에 의해 수집하여, 표제 화합물 12.64 g을 갈색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00188
실시예 38: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-플루오로메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00189
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, DCM/H2O로 희석하여 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 1시간 동안 환류 온도에서 교반하고, 농축시키고, 생성된 조 물질을 정제없이 사용하였다. 단계 1.2에서, N-{4-플루오로메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아세트아미드 (단계 38.1)를 사용하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, DCM으로 추출하였다. 조 물질을 정제하지 않았다.
표제 화합물:
Figure pct00190
단계 38.1: N-{4-플루오로메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아세트아미드
Figure pct00191
표제 화합물을 단계 1.3 내지 1.7에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 단계 1.3에서, N-(4-플루오로메틸-티아졸-2-일)-아세트아미드 (단계 38.2)를 사용하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 7시간 동안, 100℃에서 5시간 동안 교반하고, EtOAc 및 H2O로 희석하여 켄칭하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 65℃에서 1시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.6에서, 조 생성물을 정제하지 않았다. 단계 1.7에서, 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피오닐 클로라이드 (단계 12.1)를 사용하였다.
표제 화합물:
Figure pct00192
단계 38.2: N-(4-플루오로메틸-티아졸-2-일)-아세트아미드
Figure pct00193
EtOH (10 mL) 중 1-클로로-3-플루오로-프로판-2-온 (단계 38.3) (1.14 g, 10.3 mmol) 및 N-아세틸-2-티오우레아 (1.22 g, 10.3 mmol)의 혼합물을 1.5시간 동안 환류 온도에서 교반하고, 냉각시키고, 농축시켰다. 잔류물을 DCM/H2O에 용해시키고, DCM으로 추출하였다. 유기 상을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 1:1)로 정제하여, 표제 화합물 0.143 g을 수득하였다.
Figure pct00194
단계 38.3: 1-클로로-3-플루오로-프로판-2-온
Figure pct00195
1-플루오로-3-클로로이소프로판올 (2.7 mL, 31.2 mmol)을 존스 시약(Jones' reagent) (진한 황산 230 mL를 H2O 700 mL 중 삼산화크롬 267 g에 첨가하고, H2O를 사용하여 1 L로 희석함으로써 제조함) 30 mL를 함유하는 플라스크에 서서히 첨가하고, 5℃로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 18시간 동안 교반하고, NaHCO3의 포화 용액에 붓고, Et2O로 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM)로 정제하여, 표제 화합물 1.14 g을 불순한 황색 오일로서 수득하였다.
실시예 39: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(5-벤젠술포닐아미노-6-클로로-피리딘-3-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00196
표제 화합물을 단계 1.3에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(4-메틸-티아졸-2-일)-아미드] (단계 39.2) 및 N-(5-브로모-2-클로로-피리딘-3-일)-벤젠술폰아미드 (단계 39.1)를 사용하였다. 팔라듐 촉매를 남아있는 시약의 가열 혼합물에 첨가하고, 생성된 혼합물을 135℃에서 3시간 동안 교반하고, EtOAc 및 H2O로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, EtOAc로 추출하였다. 건조시키고, 유기 상을 농축시킨 후, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 및 역상 HPLC로 정제하였다.
표제 화합물:
Figure pct00197
단계 39.1: N-(5-브로모-2-클로로-피리딘-3-일)-벤젠술폰아미드
Figure pct00198
DCM (50 mL) 중 벤젠술포닐 클로라이드 (1.23 mL, 9.62 mmol, 2 당량)의 용액을 아르곤 분위기하에 15분에 걸쳐 DCM (20 mL) 중 3-아미노-5-브로모-2-클로로피리딘 (문헌 [Jouve, K.; Bergman, J., Journal of Heterocyclic Chemistry, (2003), 40(2), 261-268]) (1 g, 4.81 mmol) 및 피리딘 (1.94 ml, 24 mmol, 5 당량)의 용액에 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하고, 농축시키고, H2O로 희석하고, DCM으로 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM)로 정제하여, 표제 화합물 163 mg을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00199
단계 39.2: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(4-메틸-티아졸-2-일)-아미드]
Figure pct00200
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 [이미다졸-1-카르복실산 (4-메틸-티아졸-2-일)-아미드 (단계 39.3)를 사용한 것 제외] 제조하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH/NH3 수성, 94:5:1)로 정제한 후, Et2O 중에서 연화처리하였다.
표제 화합물:
Figure pct00201
단계 39.3: 이미다졸-1-카르복실산 (4-메틸-티아졸-2-일)-아미드
Figure pct00202
표제 화합물을 단계 1.1에 기재된 절차와 유사하게 (2-아세트아미도-4-메틸티아졸을 사용하고, 반응 혼합물을 환류 온도에서 5.5시간 동안 교반한 것 제외) 제조하였다.
실시예 40: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(5-벤젠술포닐아미노-6-클로로-피리딘-3-일)-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00203
표제 화합물을 단계 1.3에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-티아졸-2-일아미드 (단계 40.1) 및 N-(5-브로모-2-클로로-피리딘-3-일)-벤젠술폰아미드 (단계 39.1)를 사용하였다. 팔라듐 촉매를 남아있는 시약의 가열 혼합물에 첨가하고, 생성된 혼합물을 120℃에서 6시간 동안 교반하고, 농축시키고, DCM/MeOH로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여과액을 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 및 역상 HPLC로 정제하였다.
표제 화합물:
Figure pct00204
단계 40.1: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-티아졸-2-일아미드
Figure pct00205
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (이미다졸-1-카르복실산 티아졸-2-일아미드 (단계 40.2)를 사용한 것 제외) 제조하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH/NH3 수성, 94:5:1)로 정제한 후, EtOAc 중에서 연화처리하였다.
표제 화합물:
Figure pct00206
단계 40.2: 이미다졸-1-카르복실산 티아졸-2-일아미드
Figure pct00207
표제 화합물을 단계 1.1에 기재된 절차와 유사하게 (N-티아졸-2-일-아세트아미드를 사용하고, 반응 혼합물을 환류 온도에서 5시간 동안 가열한 것 제외) 제조하였다.
실시예 41: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(6-아미노-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00208
표제 화합물을 단계 1.3에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(4-메틸-티아졸-2-일)-아미드] (단계 39.2) 및 5-브로모-3-트리플루오로메틸-피리딘-2-일아민 (WO 2007095588)을 사용하였다. 팔라듐 촉매를 남아있는 시약의 가열 혼합물에 첨가하고, 생성된 혼합물을 120℃에서 3시간 동안 교반하고, DCM/H2O로 희석하고, DCM으로 추출하였다. 건조시키고, 유기 상을 농축시킨 후, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 및 역상 HPLC로 정제하였다.
표제 화합물:
Figure pct00209
실시예 42: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00210
이미다졸-1-카르복실산 {4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드 (4.0 g)을 실온에서 DMF (46 ml) 중 L-프롤린 아미드 (1.48 g) 및 트리에틸아민 (4.1 ml)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 22시간 동안 방치하고, 증발시키고, 메탄올 (60 ml) 및 물 (20 ml)로 결정화시킨 후, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00211
단계 42.1: 이미다졸-1-카르복실산 {4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드
Figure pct00212
카르보닐 디이미다졸 (4.56 g)을 실온에서 DMF (26 ml) 중 4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 (10.5 g) 및 트리에틸아민 (4.28 ml)의 용액에 첨가한 후, 80℃에서 2시간 동안 가열하였다. 냉각시킨 후, 표제 화합물을 여과에 의해 단리하였다.
단계 42.2: 4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민
Figure pct00213
분말 수산화나트륨 (5.86 g)을 2-메톡시에탄올 (98 ml) 중 N'-[5-(3-디메틸아미노-아크릴로일)-4-메틸-티아졸-2-일]-N,N-디메틸-포름아미딘 (13 g, 문헌 [S. Wang et al. J. Med. Chem. 2004, 47, 1662-1675.]에 기재된 바와 같이 제조) 및 1-메틸-시클로프로판카르복스아미딘 히드로클로라이드 (7.2 g, EP0227415에 기재된 바와 같이 제조)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 125℃에서 1시간 동안 교반하면서 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 물을 첨가하고, 표제 화합물을 여과에 의해 단리하였다.
Figure pct00214
실시예 43: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-이소프로필-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00215
이미다졸-1-카르복실산 [5-(2-이소프로필-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드 (50 mg)를 실온에서 DMF (152 ㎕) 중 L-프롤린 아미드 (19 mg) 및 트리에틸아민 (26 ㎕)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 교반한 후, 정제용 역상 크로마토그래피로 정제하였다. 표제 화합물을 함유하는 분획을 300 mg 본드일루트(BondElut) SPE, SCX 카트리지를 이용하여 포획한 후, 메탄올 중 7 M 암모니아 용액 (1 ml)을 사용하여 유리시켰다. 증발시켜 표제 화합물을 수득하였다.
Figure pct00216
단계 43.1: 이미다졸-1-카르복실산 {4-메틸-5-[2-이소프로필-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드
Figure pct00217
표제 화합물을 실시예 42에 기재된 절차와 유사하게 (4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 4-메틸-5-[2-이소프로필-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하였다.
실시예 44: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-벤질-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00218
표제 화합물을 실시예 43에 기재된 절차와 유사하게 (4-메틸-5-[2-이소프로필-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 4-메틸-5-[2-벤질-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00219
실시예 45: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-에틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00220
표제 화합물을 실시예 43에 기재된 절차와 유사하게 (4-메틸-5-[2-이소프로필-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 4-메틸-5-[2-에틸-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00221
실시예 46: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-메톡시메틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00222
표제 화합물을 실시예 43에 기재된 절차와 유사하게 (4-메틸-5-[2-이소프로필-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 4-메틸-5-[2-메톡시메틸-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00223
실시예 47: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(2,6-디클로로-벤질)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00224
표제 화합물을 실시예 43에 기재된 절차와 유사하게 (4-메틸-5-[2-이소프로필-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 4-메틸-5-[2-(2,6-디클로로-벤질)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00225
실시예 48: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-이소부틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00226
표제 화합물을 실시예 43에 기재된 절차와 유사하게 (4-메틸-5-[2-이소프로필-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 4-메틸-5-[2-이소부틸-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00227
실시예 49: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(4-메톡시-페녹시메틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00228
표제 화합물을 실시예 43에 기재된 절차와 유사하게 (4-메틸-5-[2-이소프로필-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 4-메틸-5-[2-(4-메톡시-페녹시메틸)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00229
실시예 50: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(3-메톡시-페녹시메틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00230
표제 화합물을 실시예 43에 기재된 절차와 유사하게 (4-메틸-5-[2-이소프로필-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 4-메틸-5-[2-(3-메톡시-페녹시메틸)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00231
실시예 51: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(2-플루오로-페닐)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00232
이미다졸-1-카르복실산 {5-[2-(2-플루오로-페닐)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드 (415 mg)를 실온에서 DMF (1.1 ml) 중 L-프롤린 아미드 (137 mg) 및 트리에틸아민 (182 ㎕)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 18시간 동안 교반하고, 증발시키고, 메탄올 (8 ml) 및 물 (2 ml)로부터 결정화시켜, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00233
단계 51.1: 이미다졸-1-카르복실산 {5-[2-(2-플루오로-페닐)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드
Figure pct00234
표제 화합물을 실시예 43에 기재된 절차와 유사하게 (4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 4-메틸-5-[2-(2-플루오로-페닐)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하였다.
실시예 52: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-트리플루오로메틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00235
L-프롤린 아미드 (9 mg)를 실온에서 DMF (71 ㎕) 중 이미다졸-1-카르복실산 [5-(2-트리플루오로메틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드 (25 mg) 및 트리에틸아민 (12 ㎕)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 18시간 동안 교반하고, 정제용 역상 크로마토그래피로 정제하였다. 표제 화합물을 함유하는 분획을 300 mg 본드일루트 SPE, SCX 카트리지를 이용하여 포획한 후, 메탄올 중 7 M 암모니아의 용액 (1 ml)을 사용하여 유리시켰다. 증발시켜 표제 화합물을 수득하였다.
Figure pct00236
단계 52.1: 이미다졸-1-카르복실산 {4-메틸-5-[2-트리플루오로메틸-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드
Figure pct00237
표제 화합물을 실시예 43에 기재된 절차와 유사하게 (4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 4-메틸-5-[2-트리플루오로메틸-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하였다.
실시예 53: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1,1,2-트리메틸-프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00238
표제 화합물을 실시예 51에 기재된 절차와 유사하게 (4-메틸-5-[2-(2-플루오로-페닐)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 4-메틸-5-[2-(1,1,2-트리메틸-프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00239
실시예 54: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(5-{2-[1-(4-메톡시-페닐)-1-메틸-에틸]-피리미딘-4-일}-4-메틸-티아졸-2-일)-아미드]
Figure pct00240
표제 화합물을 실시예 51에 기재된 절차와 유사하게 (4-메틸-5-[2-(2-플루오로-페닐)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 5-{2-[1-(4-메톡시-페닐)-1-메틸-에틸]-피리미딘-4-일}-4-메틸-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00241
실시예 55: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00242
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 15시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.3에서, 반응 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. 단계 1.4에서, 반응 혼합물을 85℃에서 30분 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 65℃에서 1시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.6에서, 조 생성물을 정제하지 않았다. 단계 1.7에서, 3-플루오로-2-플루오로메틸-2-메틸-프로피오닐 클로라이드 (단계 55.1)를 사용하였다.
표제 화합물:
Figure pct00243
단계 55.1: 3-플루오로-2-플루오로메틸-2-메틸-프로피오닐 클로라이드
Figure pct00244
표제 화합물을 단계 5.1에 기재된 절차와 유사하게 (3-플루오로-2-플루오로메틸-2-메틸-프로피온산 (단계 55.2)을 사용한 것 제외) 제조하였다.
단계 55.2: 3-플루오로-2-플루오로메틸-2-메틸-프로피온산
Figure pct00245
표제 화합물을 단계 73.2에 기재된 절차와 유사하게 (3-플루오로-2-플루오로메틸-2-메틸-프로피온산 메틸 에스테르 (제조 WO 2007/053394)를 사용한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00246
실시예 56: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1,1-디메틸-프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00247
표제 화합물을 실시예 43에 기재된 절차와 유사하게 (4-메틸-5-[2-이소프로필-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 4-메틸-5-[2-(1,1-디메틸-프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00248
실시예 57: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-메틸-1-p-톨릴-에틸)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00249
표제 화합물을 실시예 43에 기재된 절차와 유사하게 (4-메틸-5-[2-이소프로필-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 4-메틸-5-[2-(1-메틸-1-p-톨릴-에틸)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00250
실시예 58: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-페닐-시클로펜틸)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00251
표제 화합물을 실시예 43에 기재된 절차와 유사하게 (4-메틸-5-[2-이소프로필-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 4-메틸-5-[2-(1-페닐-시클로펜틸)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00252
실시예 59: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-시클로프로필-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00253
표제 화합물을 실시예 43에 기재된 절차와 유사하게 (4-메틸-5-[2-이소프로필-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 4-메틸-5-[2-시클로프로필-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00254
실시예 60: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-시클로부틸-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00255
표제 화합물을 실시예 52에 기재된 절차와 유사하게 (4-메틸-5-[2-트리플루오로메틸-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 4-메틸-5-[2-시클로부틸-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00256
실시예 61: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-d9-tert-부틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00257
이미다졸-1-카르복실산 [5-(2-d9-tert-부틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드 (0.82 g)를 실온에서 DMF (5 ml) 중 L-프롤린 아미드 (0.29 g) 및 트리에틸아민 (0.81 ml)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 22시간 동안 방치한 후, 증발시키고, 2:1 메탄올:물을 사용하여 2회 결정화시킨 후, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00258
단계 61.1: 이미다졸-1-카르복실산 [5-(2-d9-tert-부틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드
Figure pct00259
카르보닐 디이미다졸 (0.77 g)을 실온에서 DMF (4.3 ml) 중 5-(2-d9-tert-부틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일아민 (1.11 g)의 교반 용액에 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 25℃에서 18시간 동안 방치한 후, 표제 화합물을 여과에 의해 단리하였다.
단계 61.2: 5-(2-d9-tert-부틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일아민
Figure pct00260
분말 수산화나트륨 (3.71 g)을 2-메톡시에탄올 (41 ml) 중 N'-[5-(3-디메틸아미노-아크릴로일)-4-메틸-티아졸-2-일]-N,N-디메틸-포름아미딘 (5.51 g) 및 d9-2,2-디메틸-프로피온아미딘 히드로클로라이드 (4.50 g)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 125℃에서 1시간 동안 교반하면서 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 물을 첨가하고, 조 생성물을 여과에 의해 단리하였다. 조 생성물을 정제용 HPLC로 정제하고, 표제 화합물을 함유하는 분획을 디클로로메탄 및 수성 중탄산나트륨 사이에 분배하였다. 건조된 디클로로메탄 층을 증발시킨 후, 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00261
단계 61.3: d9-2,2-디메틸-프로피온아미딘 히드로클로라이드
Figure pct00262
톨루엔 중 트리메틸알루미늄의 2 M 용액 (61 ml)을, 빙조를 이용하여 냉각시킨 톨루엔 (46 ml) 중 염화암모늄 (6.53 g)의 현탁액에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, d9-2,2-디메틸-프로피온산 부틸 에스테르 (6.3 g)를 첨가하였다. 80℃에서 4일 동안 가열한 후, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 메탄올 (200 ml)을 적가하였다. 교반하고, 실온에서 1시간 동안 초음파 처리한 후, 반응 혼합물을 메탄올로 세척하면서 하이플로(Hyflo)를 통해 여과하고, 여과액을 증발시켜, 표제 화합물을 회백색 고체로서 수득하였다.
단계 61.4: d9-2,2-디메틸-프로피온산 부틸 에스테르
Figure pct00263
일정한 환류를 유지하기 위해 필요한 만큼 가열하면서, d9-tert-부틸클로라이드 (5.0 g)를 촉매량의 요오드로 활성화된 테트라히드로푸란 (20 ml) 중 마그네슘 (1.50 g)의 현탁액에 1시간에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 추가로 1시간 동안 가열하여, 완전한 그리냐르(Grignard) 형성을 확실하게 하였다. 이어서, 상기 그리냐르 용액을, 빙조를 이용하여 냉각시킨 테트라히드로푸란 (40 ml) 중 이미다졸-1-카르복실산 부틸 에스테르 (7.5 g, 문헌 [T. Werner and A.G.M. Barrett J. Org. Chem. 2006, 71, 4302-4304.]에 기재된 바와 같이 제조)의 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, 물 (200 ml)을 첨가하고, 혼합물을 하이플로를 통해 여과하고, 여과액을 디에틸 에테르로 추출하고, 디에틸 에테르 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜, 표제 화합물을 수득하였다.
실시예 62: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00264
이미다졸-1-카르복실산 {4-메틸-5-[2-(2-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드 (50 mg)을 실온에서 DMF (147 ㎕) 중 L-프롤린 아미드 (18 mg) 및 트리에틸아민 (25 ㎕)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 교반하고, 정제용 역상 크로마토그래피로 정제하였다. 표제 화합물을 함유하는 분획을 300 mg 본드일루트 SPE, SCX 카트리지를 이용하여 포획한 후, 메탄올 중 7 M 암모니아의 용액 (1 ml)을 사용하여 유리시켰다. 증발시켜 표제 화합물을 수득하였다.
Figure pct00265
단계 62.1: 이미다졸-1-카르복실산 {4-메틸-5-[2-(2-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드
Figure pct00266
카르보닐 디이미다졸 (487 mg)을 실온에서 DMF (1.5 ml) 중 4-메틸-5-[2-(2-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 (370 mg) 및 트리에틸아민 (251 ㎕)의 용액에 첨가한 후, 40℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 클로로포름으로 연화처리하였다. 표제 화합물을 여과에 의해 단리하였다.
단계 62.2: 4-메틸-5-[2-(2-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민
Figure pct00267
분말 수산화나트륨 (300 mg)을 2-메톡시에탄올 (3.8 ml) 중 N'-[5-(3-디메틸아미노-아크릴로일)-4-메틸-티아졸-2-일]-N,N-디메틸-포름아미딘 (1 g, 문헌 [S. Wang et al. J. Med. Chem. 2004, 47, 1662-1675.]에 기재된 바와 같이 제조) 및 시스/트랜스 2-메틸-시클로프로판카르복스아미딘 히드로클로라이드 (0.61 g, WO 03/087064에 기재된 바와 같이 제조)의 용액에 첨가하고, 혼합물 125℃에서 1시간 동안 교반하면서 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 여과하고, 물로 세척하여, 표제 화합물을 수득하였다.
Figure pct00268
실시예 63 (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-디에틸아미노-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00269
이미다졸-1-카르복실산 [5-(2-디에틸아미노-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드 (40 mg)를 실온에서 DMF (147 ㎕) 중 L-프롤린 아미드 (14 mg) 및 트리에틸아민 (19 ㎕)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 교반하고, 정제용 역상 크로마토그래피로 정제하였다. 표제 화합물을 함유하는 분획을 300 mg 본드일루트 SPE, SCX 카트리지를 이용하여 포획한 후, 메탄올 중 7 M 암모니아의 용액 (1 ml)을 사용하여 유리시켰다. 증발시켜 표제 화합물을 수득하였다.
Figure pct00270
단계 63.1: 이미다졸-1-카르복실산 [5-(2-디에틸아미노-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드
Figure pct00271
카르보닐 디이미다졸 (437 mg)을 실온에서 DMF (1.4 ml) 중 [4-(2-아미노-4-메틸-티아졸-5-일)-피리미딘-2-일]-디에틸-아민 (355 mg) 및 트리에틸아민 (207 ㎕)의 용액에 첨가한 후, 80℃에서 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 클로로포름으로 연화처리하였다. 표제 화합물을 여과에 의해 단리하였다.
단계 63.2: [4-(2-아미노-4-메틸-티아졸-5-일)-피리미딘-2-일]-디에틸-아민
Figure pct00272
분말 수산화나트륨 (150 mg)을 2-메톡시에탄올 (1.9 ml) 중 N'-[5-(3-디메틸아미노-아크릴로일)-4-메틸-티아졸-2-일]-N,N-디메틸-포름아미딘 (0.5 g, 문헌 [S. Wang et al. J. Med. Chem. 2004, 47, 1662-1675.]에 기재된 바와 같이 제조) 및 1,1-디에틸구아니딘 (259 mg)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 125℃에서 1시간 동안 교반하면서 가열하였다. 반응 혼합물을 진공하에 농축시키고, 순상 크로마토그래피 (용리액; DCM/EtOAc)로 정제하여, 표제 화합물을 수득하였다.
Figure pct00273
실시예 64: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00274
이미다졸-1-카르복실산 {4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드 (69 mg)을 실온에서 DMF (1 ml) 중 L-프롤린 아미드 (22 mg) 및 트리에틸아민 (53 mg)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 22시간 동안 방치한 후, 증발시키고, 메탄올 (2 ml) 및 물 (1 ml)로 결정화시킨 후, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00275
단계 64.1: 이미다졸-1-카르복실산 {4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드
Figure pct00276
카르보닐 디이미다졸 (38 mg)을 실온에서 DCM (1 ml) 및 DMF (0.2 ml) 중 4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 (65 mg)의 용액에 첨가한 후, 25℃에서 18시간 동안 방치하였다. 냉각시킨 후, 표제 화합물을 여과에 의해 단리하였다.
단계 64.2: 4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민
Figure pct00277
분말 수산화나트륨 (0.42 g)을 2-메톡시에탄올 (7 ml) 중 N'-[5-((E)-3-디메틸아미노-아크릴로일)-4-메틸-티아졸-2-일]-N,N-디메틸-포름아미딘 (0.93 g, 문헌 [S. Wang et al. J. Med. Chem. 2004, 47, 1662-1675.]에 기재된 바와 같이 제조) 및 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피온아미딘 히드로클로라이드 (0.54 g)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 125℃에서 1시간 동안 교반하면서 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 물을 첨가하고, 수성층을 디클로로메탄 중 10％ 메탄올로 4회 추출하였다. 합한 유기 층을 역상 크로마토그래피로 정제하고, 표제 화합물을 함유하는 분획에 중탄산나트륨을 첨가하자 백색 침전물이 생성되었고, 이를 여과에 의해 수집하였다.
Figure pct00278
단계 64.3: 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피온아미딘 히드로클로라이드
Figure pct00279
표제 화합물을 단계 61.3에 기재된 절차에 따라 (하기 변형을 가짐) 합성하였다. d9-2,2-디메틸-프로피온산 부틸 에스테르 대신에 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피온산 부틸 에스테르를 사용하고, 혼합물을 80℃에서 3일 동안 교반하였다. 조 생성물을, EtOH 중 소량의 HCl로 처리된 DCM에 녹이고, 증발시켰다. 잔류물을 DCM으로 연화처리하고, 여과하고, 건조시켜, 표제 화합물을 회백색 고체로서 수득하였다.
단계 64.4: 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피온산 부틸 에스테르
Figure pct00280
3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피온산 (3.0 g, 19.2 mmol) 및 DMF 1방울을 DCM 30 mL에 용해시키고, 실온에서 옥살릴 클로라이드 (1.85 mL, 21.1 mmol)로 적가 처리하였다. 2시간 후, 기체 발생이 중지되었고, 혼합물을 트리에틸 아민 (5.36 mL, 38.4 mmol)에 이어서 n-부탄올 (2.1 mL, 23 mmol)로 서서히 처리하였다. 혼합물을 밤새 교반하고, 용매를 증발시키고, 잔류물을 헥산과 함께 교반하였다. 고체를 여과하고, 여과액을 갈색빛-적색 오일로 증발시켰다. 쿠겔로어(Kugelrohr) 증류시켜 (10 mbar, 60-80℃ 오븐 온도), 표제 화합물을 무색 액체로서 수득하였다.
실시예 65 (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(에틸-메틸-아미노)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00281
(S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-메탄술피닐-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드} (60 mg) 및 N-에틸메틸아민 (45 mg)의 혼합물을 80℃에서 18시간 동안 밀봉된 튜브에서 가열하였다. 이어서, 조 생성물을 정제용 역상 크로마토그래피로 정제하였다. 표제 화합물을 함유하는 분획을 300 mg 본드일루트 SPE, SCX 카트리지를 이용하여 포획한 후, 메탄올 중 7 M 암모니아의 용액 (1 ml)을 사용하여 유리시켰다. 증발시켜 표제 화합물을 수득하였다.
Figure pct00282
단계 65.1: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-메탄술피닐-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00283
메타-클로로퍼옥시벤조산 (0.50 g)을 0℃에서 디클로로메탄 (8.5 ml) 중 (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[4-메틸-5-(2-메틸술파닐-피리미딘-4-일)-티아졸-2-일]-아미드} (1.7 g)의 용액에 첨가하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 증발시키고, 순상 크로마토그래피 (디클로로메탄/메탄올 구배로 용출)로 정제하여, 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00284
단계 65.2: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[4-메틸-5-(2-메틸술파닐-피리미딘-4-일)-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00285
이미다졸-1-카르복실산 [4-메틸-5-(2-메틸술파닐-피리미딘-4-일)-티아졸-2-일]-아미드 (1.0 g)를 실온에서 DMF (3 ml) 중 L-프롤린 아미드 (379 mg) 및 트리에틸아민 (0.51 ml)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 교반한 후, 증발시키고, 디클로로메탄 및 물을 사용하여 침전시킨 후, 표제 화합물을 오렌지색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00286
단계 65.3: 이미다졸-1-카르복실산 [4-메틸-5-(2-메틸술파닐-피리미딘-4-일)-티아졸-2-일]-아미드
Figure pct00287
카르보닐 디이미다졸 (1.77 g)을 실온에서 트리에틸아민 (0.84 ml) 및 DMF (5.5 ml) 중 4-메틸-5-(2-메틸술파닐-피리미딘-4-일)-티아졸-2-일아민 (1.3 g)의 용액에 첨가하고, 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 냉각시킨 후, 표제 화합물을 여과에 의해 단리하였다.
단계 65.4: 4-메틸-5-(2-메틸술파닐-피리미딘-4-일)-티아졸-2-일아민
Figure pct00288
분말 수산화나트륨 (1.09 g)을 에탄올 (25 ml) 중 N'-[5-(3-디메틸아미노-아크릴로일)-4-메틸-티아졸-2-일]-N,N-디메틸-포름아미딘 (2.0 g, 문헌 [S. Wang et al. J. Med. Chem. 2004, 47, 1662-1675.]에 기재된 바와 같이 제조) 및 티오우레아 (0.57 g)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 교반하면서 환류 온도에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물에 이어서 메틸요오다이드 (0.47 ml)를 첨가하였다. 실온에서 1시간 후, 증발에 의해 에탄올을 제거하고, 물을 첨가하고, 2 N 염산 수용액을 사용하여 pH를 7로 조정하였다. 이어서, 표제 화합물을 여과에 의해 수득하였다.
Figure pct00289
실시예 66 (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(6-시클로프로필-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00290
이미다졸-1-카르복실산 [5-(6-시클로프로필-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드 (78 mg)를 실온에서 DMF (1 ml) 중 L-프롤린 아미드 (30 mg) 및 트리에틸아민 (83 ㎕)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 방치하고, 증발시키고, 메탄올 (1 ml) 및 물 (0.5 ml)을 사용하여 결정화시킨 후, 표제 화합물을 황색/백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00291
단계 66.1: 이미다졸-1-카르복실산 [5-(6-시클로프로필-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드
Figure pct00292
카르보닐 디이미다졸 (74 mg)을 실온에서 DMF (2 ml) 중 5-(6-시클로프로필-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일아민 (96 mg)의 용액에 첨가하고, 실온에서 18시간 동안 방치하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 세척하면서 여과하여, 표제 화합물을 수득하였다.
단계 66.2: 5-(6-시클로프로필-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일아민
Figure pct00293
진한 염산 (0.4 ml)을 실온에서 에탄올 (9 ml) 중 N-[5-(6-시클로프로필-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아세트아미드 (120 mg)에 첨가하고, 혼합물을 환류 온도에서 18시간 동안 가열하였다. 냉각시킨 반응 혼합물을 증발시키고, 수성 탄산수소나트륨을 사용하여 중화시키고, DCM 중 10％ 메탄올로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜, 표제 화합물을 수득하였다.
Figure pct00294
단계 66.3: N-[5-(6-시클로프로필-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아세트아미드
Figure pct00295
아르곤을 DMF (3 ml) 중 2-시클로프로필-6-클로로피라진 (154 mg, 문헌 [A. Fuerstner et al. J. Am. Chem. Soc. 2002, 214, 13856-13863.]의 방법에 의해 제조), 2-아세트아미도-4-메틸티아졸 (200 mg), 팔라듐 아세테이트 (24 mg), 트리-tert-부틸포스포늄 테트라플루오로보레이트 (61 mg) 및 탄산세슘 (678 mg)의 혼합물을 통해 실온에서 5분 동안 버블링시켰다. 반응 혼합물을 밀봉된 바이알 내에서 아르곤 분위기하에 150℃에서 45분 동안 바이오티지(Biotage) 이니시에이터(Initiator, 상표명) 마이크로파 장치에서 가열하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 정제용 HPLC로 정제하였다. 표제 화합물을 함유하는 분획을 합하고, 증발시켜 아세토니트릴을 제거하고, 표제 화합물을 여과에 의해 베이지색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00296
실시예 67 (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[4-메틸-5-(5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00297
카르보닐 디이미다졸 (29 mg)을 실온에서 DMF (1 ml) 중 4-메틸-5-(5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-티아졸-2-일아민 (42 mg) 및 트리에틸아민 (50 ㎕)의 교반 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 18시간 동안 방치하였다. L-프롤린 아미드 (20 mg)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 추가로 8시간 동안 방치하고, 증발시키고, 메탄올 (3 ml) 및 물 (1.5 ml)로 결정화시킨 후, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00298
단계 67.1: 4-메틸-5-(5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-티아졸-2-일아민
Figure pct00299
트리메틸실릴 클로라이드 (0.3 ml)를 실온에서 에탄올 (2 ml) 중 N-[4-메틸-5-(5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-티아졸-2-일]-아세트아미드 (44 mg)에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 4.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 50℃에서 18시간 동안 가열하고, 냉각시키고, 증발시키고, 디에틸 에테르로 분쇄한 후, 여과하여 표제 화합물을 수득하였다.
단계 67.2: N-[4-메틸-5-(5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-티아졸-2-일]-아세트아미드
Figure pct00300
아르곤을 실온에서 5분 동안 DME (2.3 ml) 및 물 (2.3 ml) 중 5-(트리플루오로메틸)-3-피리디닐보론산 히드로클로라이드 (263 mg, WO 2007/134828에 기재된 바와 같이 제조), 2-아세틸아미노-5-요오도-4-메틸티아졸 (260 mg, WO 2006/125807에 기재된 바와 같이 제조), 1,1'-비스-(디페닐포스피노)-페로센디클로로 팔라듐 (II) (38 mg), 탄산나트륨 (488 mg)의 혼합물을 통해 버블링시켰다. 반응 혼합물을 밀봉된 바이알에서 아르곤 분위기하에 80℃에서 30분 동안, 이어서 80℃에서 60분 동안 바이오티지 이니시에이터(상표명) 마이크로파 장치에서 가열하였다. 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 DCM으로 추출하고, 합한 유기 층을 실리카겔과 함께 증발시키고, 순상 크로마토그래피 (용리액; DCM → 1:1 DCM:에틸 아세테이트 구배)로 정제하였다. 이어서, 생성물을 함유하는 분획을 메탄올 (5 ml), DMF (0.3 ml) 및 물 (1.3 ml)로 연화처리하고, 여과하여, 표제 화합물을 베이지색 고체로서 수득하였다.
실시예 68 (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(6-d10-디에틸아미노-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00301
이미다졸-1-카르복실산 [5-(6-d10-디에틸아미노-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드 (82 mg)를 실온에서 DMF (1 ml) 중 L-프롤린 아미드 (28 mg) 및 트리에틸아민 (78 ㎕)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 14시간 동안 방치하고, 증발시키고, 메탄올 (1 ml) 및 물 (0.5 ml)로 결정화시킨 후, 표제 화합물을 황색/백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00302
단계 68.1: 이미다졸-1-카르복실산 [5-(6-d10-디에틸아미노-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드
Figure pct00303
카르보닐 디이미다졸 (78 mg)을 실온에서 DMF (2 ml) 중 5-(6-d10-디에틸아미노-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일아민 (121 mg)의 용액에 첨가하고, 실온에서 3.5시간 동안 방치하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 세척하면서 여과하여, 표제 화합물을 수득하였다.
단계 68.2: 5-(6-d10-디에틸아미노-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일아민
Figure pct00304
진한 염산 (0.4 ml)을 실온에서 에탄올 (9 ml) 중 N-[5-(6-d10-디에틸아미노-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아세트아미드 (140 mg)에 첨가하고, 혼합물을 환류 온도에서 40시간 동안 가열하였다. 냉각시킨 반응 혼합물을 증발시키고, 수성 탄산수소나트륨을 사용하여 중화시키고, DCM 중 10％ 메탄올로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜, 표제 화합물을 수득하였다.
Figure pct00305
단계 68.3: N-[5-(6-d10-디에틸아미노-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아세트아미드
Figure pct00306
아르곤을 실온에서 5분 동안 DMF (3 ml) 중 2-d10-디에틸아미노-6-클로로피라진 (293 mg), 2-아세트아미도-4-메틸티아졸 (300 mg), 팔라듐 아세테이트 (24 mg), 트리-tert-부틸포스포늄 테트라플루오로보레이트 (61 mg) 및 탄산세슘 (1.02 g)의 혼합물을 통해 버블링시켰다. 반응 혼합물을 밀봉된 바이알에서 아르곤 분위기하에 150℃에서 45분 동안 바이오티지 이니시에이터(상표명) 마이크로파 장치에서 가열하고, 여과하고, 정제용 HPLC로 정제하였다. 표제 화합물을 함유하는 분획을 합하고, 증발시켜 아세토니트릴을 제거하고, 표제 화합물을 여과에 의해 베이지색 고체로서 수득하였다.
단계 68.4: 2-d10-디에틸아미노-6-클로로피라진
Figure pct00308
d10-디에틸아민 (0.5 g)을 실온에서 아세토니트릴 (4 ml) 중 2,6-디클로로피라진 (0.93 g) 및 탄산칼륨 (1.41 g)의 교반 혼합물에 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 55℃에서 60시간 동안 가열하고, 냉각시키고, 물을 첨가한 후, 디클로로메탄으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시키고, 순상 크로마토그래피 (용리액 DCM)로 정제하여, 표제 화합물을 수득하였다.
Figure pct00309
실시예 69 (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(6-디에틸아미노-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00310
표제 화합물을 실시예 68에 기재된 절차와 유사하게 (d10-디에틸아민 대신에 디에틸아민을 사용한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00311
실시예 70: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-시클로프로필메틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00312
표제 화합물을 실시예 42에 기재된 절차와 유사하게 (이미다졸-1-카르복실산 {4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드 대신에 이미다졸-1-카르복실산 [5-(2-시클로프로필메틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드를 사용한 것 제외) 제조하였다 (M.p. 220-222℃).
Figure pct00313
단계 70.1: 이미다졸-1-카르복실산 [5-(2-시클로프로필메틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드
Figure pct00314
표제 화합물을 단계 42.1에 기재된 것과 유사하게 (4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 5-(2-시클로프로필메틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하고, 반응물을 15시간 동안 교반하였다 (M.p. 240-243℃).
Figure pct00315
단계 70.2: 5-(2-시클로프로필메틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일아민
Figure pct00316
표제 화합물을 단계 42.2에 기재된 절차와 유사하게 (1-메틸-시클로프로판카르복스아미딘 히드로클로라이드 대신에 2-시클로프로필-아세트아미딘 히드로클로라이드를 사용한 것 제외) 제조하였다 (M.p. 198-200℃).
Figure pct00317
실시예 71: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00318
표제 화합물을 실시예 42에 기재된 절차와 유사하게 (이미다졸-1-카르복실산 {4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드 대신에 이미다졸-1-카르복실산 {5-[2-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드를 사용한 것 제외) 제조하였다 (M.p. 187-190℃).
Figure pct00319
단계 71.1: 이미다졸-1-카르복실산 {5-[2-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드
Figure pct00320
표제 화합물을 단계 42.1에 기재된 것과 유사하게 (4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 5-[2-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하고, 반응물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다.
단계 71.2: 5-[2-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일아민
Figure pct00321
표제 화합물을 단계 42.2에 기재된 절차와 유사하게 (1-메틸-시클로프로판-카르복스아미딘 히드로클로라이드 대신에 3-플루오로-2,2-디메틸-프로피온아미딘 히드로클로라이드를 사용한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00322
실시예 72: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-tert-부틸-6-메틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
Figure pct00323
표제 화합물을 실시예 42에 기재된 절차와 유사하게 (이미다졸-1-카르복실산 {4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드 대신에 이미다졸-1-카르복실산 [5-(2-tert-부틸-6-메틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드를 사용한 것 제외) 제조하였다 (M.p. 197-199℃)
Figure pct00324
단계 72.1: 이미다졸-1-카르복실산 [5-(2-tert-부틸-6-메틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드
Figure pct00325
표제 화합물을 단계 42.1에 기재된 것과 유사하게 (4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일아민 대신에 5-(2-tert-부틸-6-메틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일아민을 사용한 것 제외) 제조하고, 반응물을 16시간 동안 교반하였다.
Figure pct00326
단계 72.2: 5-(2-tert-부틸-6-메틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일아민
Figure pct00327
표제 화합물을 단계 1.2에 기재된 절차와 유사하게 (N-[5-(2-tert-부틸-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아세트아미드 대신에 N-[5-(2-tert-부틸-6-메틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아세트아미드를 사용하고, 2 N HCl을 사용한 것 제외) 제조하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안, 이어서 90℃에서 3시간 동안 교반하였다.
Figure pct00328
단계 72.3: N-[5-(2-tert-부틸-6-메틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아세트아미드
Figure pct00329
표제 화합물을 단계 1.3에 기재된 절차와 유사하게 (4-브로모-2-tert-부틸-피리딘 대신에 4-브로모-2-tert-부틸-6-메틸-피리미딘을 사용한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00330
단계 72.4: 4-브로모-2-tert-부틸-6-메틸-피리미딘
Figure pct00331
표제 화합물을 단계 1.4에 기재된 절차와 유사하게 (2-tert-부틸-1H-피리딘-4-온 대신에 2-tert-부틸-6-메틸-3H-피리미딘-4-온을 사용한 것 제외) 제조하였다.
Figure pct00332
실시예 73: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드)
Figure pct00333
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 (하기 변형을 가짐) 제조하였다. 실시예 1에서, 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 단계 1.1에서, 반응 혼합물을 15시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 단계 1.2에서, 반응 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.3에서, 반응 혼합물을 120℃에서 4시간 동안 교반하였다. 단계 1.4에서, 반응 혼합물을 85℃에서 30분 동안 교반하고, 켄칭한 후, EtOAc로 추출하였다. 단계 1.5에서, 반응 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 교반하고, MeOH 중에서의 연화처리를 수행하지 않았다. 단계 1.6에서, 조 생성물을 정제하지 않았다. 단계 1.7에서, 3-플루오로-2,2-디메틸-프로피오닐 클로라이드 (단계 76.1)을 사용하였다.
표제 화합물:
Figure pct00334
단계 73.1: 3-플루오로-2,2-디메틸-프로피오닐 클로라이드
Figure pct00335
표제 화합물을 단계 5.1에 기재된 절차와 유사하게 (3-플루오로-2,2-디메틸-프로피온산 (단계 73.2)을 사용한 것 제외) 제조하였다.
단계 73.2: 3-플루오로-2,2-디메틸-프로피온산
Figure pct00336
메탄올 30 mL 중 3-플루오로-2,2-디메틸-프로피온산 메틸 에스테르 6.9 g (38.6 mmol)의 용액을 2 N NaOH 38.6 mL (77 mmol)로 처리하고, 혼합물을 환류 온도로 3시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 물 및 DCM 사이에 분배하였다. 2 N HCl 50 mL를 첨가하여 수성상을 산성화시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 증발시켰다. 무색 잔류물을 헥산과 함께 교반하고, 불용성 물질을 여과에 의해 제거하고, 여과액을 증발시켜, 표제 화합물을 무색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00337
단계 73.3: 3-플루오로-2,2-디메틸-프로피온산 메틸 에스테르
Figure pct00338
THF 중 테트라부틸암모늄 플루오라이드의 1 M 용액 27 mL를 THF 150 mL 중 2,2-디메틸-3-트리플루오로메탄술포닐옥시-프로피온산 메틸 에스테르 7.25 g (27.4 mmol)의 용액에 빙냉하에 서서히 첨가하였다. 생성된 용액을 0℃에서 6시간 동안, 이어서 실온에서 10시간 동안 교반하였다. 용매를 조심스럽게 증발시키고, 잔류물을 DCM 및 염수 사이에 분배하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 조심스럽게 증발시켰다. 갈색 오일을 쿠겔로어-오븐 (오븐 온도 120 내지 150℃)에서 증류시켜, 표제 화합물을 무색 액체로서 수득하였다.
단계 73.4: 2,2-디메틸-3-트리플루오로메탄술포닐옥시-프로피온산 메틸 에스테르
Figure pct00339
-70℃에서 질소하에, 건조 DCM 50 mL 중 3-히드록시-2,2-디메틸-프로피온산 메틸 에스테르 3.64 g (27.5 mmol) 및 2,6-루티딘 4.82 mL (41.3 mmol)의 용액에 트리플루오로-메탄술폰산 무수물 (5.12 mL, 30.3 mmol)을 서서히 첨가하였다. 황색 용액을 -70℃에서 5분 동안 교반한 후, 냉각조를 제거하고, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 색상이 황색 → 오렌지색 → 갈색으로 변화하였다. DCM (50 mL)을 첨가하고, 용액을 2 N HCl로 2회 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 증발 건조시켰다. 갈색 잔류물을 진공하에 건조시키고, 표제 화합물을 추가 정제없이 사용하였다.
Figure pct00340
분석용 HPLC 조건:
선형 구배 20→100％ 용매 A (5분 이내) + 100％ 용매 A (1.5분); 215 nm에서 검출, 유속 1 ml/분 (30℃). 칼럼: 뉴클레오실(Nucleosil) 100-3 C18 (70 x 4.0 mm). 용매 A = CH3CN + 0.1％ TFA; 용매 B = H2O + 0.1％ TFA.
MS 조건:
기기: 마이크로매스(Micromass) 플랫폼(Platform) II, 용리액: 0.2％의 25％ 수산화암모늄 용액을 함유하는 물 중 15％ 메탄올
1H-NMR 스펙트럼을 배리안(Varian) 머큐리(Mercury) 400 분광계 상에서 지시 용매 중에서 측정하였다. 약어: br: 광폭선; s: 단일선; d: 이중선; t: 삼중선; q: 사중선; ppm: 백만분율.
HPLC/MS 조건:
기기: 휴렛 패커드(Hewlett Packard) 애질런트(Agilent) 1100 시리즈, 칼럼: 엑스브릿지(XBridge, 상표명) C18 2.5 ㎛ 3.0 X 30 mm, 온도: 50℃, 용리액: 2 채널 시스템: 채널 A 물 중 5％ 아세토니트릴, 채널 B 1.0％ 포름산을 함유하는 아세토니트릴
Figure pct00341
검출: 애질런트 1100 DAD 210-350 nm, 및 워터스(Waters) 마이크로매스 ZQ 2000 ESI+ 및 ESI-.
정제용 HPLC:
기기: 길슨(Gilson) 정제용 HPLC 시스템, 칼럼: 선파이어(Sunfire, 상표명) 정제용 C18 OBD (상표명) 5 ㎛ 30 X 100 mm, 온도: 25℃, 용리액: 구배 0.05％ 수성 트리플루오로아세트산 중 5 → 100％ 아세토니트릴 (20분에 걸쳐), 유속: 30 ml/분, 검출: UV 254 nm.
약어 및 두문자어:
BBr3 삼브롬화붕소
tBuP·HBF4 트리-tert-부틸포스피늄 테트라플루오로보레이트
DCM 디클로로메탄
DIEA 디이소프로필에틸아민
DMAP 4-(디메틸아미노)피리딘
DME 1,2-디메톡시에탄
DMF 디메틸 포름아미드
DMP 1,3-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-2-(1H)-피리미디논
DMSO 디메틸술폭사이드
Hex 헥산
L 리터
LiHMDS 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드
m.p. 융점
MPLC 중압 액체 크로마토그래피
NBS N-브로모숙신이미드
NMP 1-메틸-2-피롤리돈
PdCl2(dppf) [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)
Pd(PPh3)4 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)
Rf 전개율 (TLC)
rt 실온
TFA 트리플루오로아세트산
THF 테트라히드로푸란
TLC 박층 크로마토그래피
tR 체류 시간
v 부피
wt. 중량
실시예 A: PI3 키나제 억제제로서의 효능
PI3K 키나제글로(KinaseGlo) 검정: 화합물 희석액 50 nL를 흑색 384-웰 저용적 비결합 스티렌 (NBS) 플레이트 (코스타(Costar) 카탈로그 번호 NBS#3676)에 분산시켰다. 메탄올 중 10 mg/ml 용액으로서 제공된 L-a-포스파티딜이노시톨 (PI)을 유리 튜브로 옮기고, 질소 빔하에 건조시켰다. 이어서, 이를 볼텍싱함으로써 3％ 옥틸글루코시드 (OG)에 재현탁시키고, 4℃에서 보관하였다. 키나제글로 발광 키나제 검정 (프로메가(Promega), 미국 위스콘신주 메디슨)은 키나제 반응 후 용액에 잔류하는 ATP의 양을 정량함으로써 키나제 활성을 측정하는 균일 HTS 방법이다.
PI/OG와 PI3K 아형의 혼합물 5 ㎕를 첨가하였다 (표 1). 10 mM TRIS-HCl (pH 7.5), 3 mM MgCl2, 50 mM NaCl, 0.05％ CHAPS, 1 mM DTT 및 1 μM ATP를 최종 부피 10 ㎕로 함유하는 ATP 혼합물 5 ㎕를 첨가하여 키나제 반응을 개시하였고, 실온에서 반응이 일어났다. 키나제글로 10 ㎕를 사용하여 반응을 중단시키고, 10분 후에 플레이트를 시너지2(Synergy2) 판독기에서 웰 당 0.1 초의 통합 시간을 사용하여 판독하였다. 2.5 μM의 팬(pan)-클래스 1 PI3 키나제 억제제 (표준물)를 검정 플레이트에 첨가하여 키나제 반응의 100％ 억제를 생성하였고, 0％ 억제는 용매 비히클 (물 중 90％ DMSO)에 의해 제공되었다. 표준물을 기준 화합물로서 사용하였고, 16 희석점의 형태로 이벌식으로 모든 검정 플레이트에 포함되었다.
Figure pct00342
PI3K의 클로닝
PI3Kα, PI3Kβ 및 PI3Kδ 구조체는 p85α iSH2 도메인 및 각 p110 이소형의 융합물이다. p85α 단편 및 p110 이소형 유전자는, 하기 기재된 바와 같이 태반, 고환 및 뇌로부터의 시판되는 RNA로부터 RT-PCR에 의해 생성된 제1 가닥 cDNA로부터 PCR에 의해 생성되었다. PI3Kγ 구조체는 영국 캠브리지 소재의 엠알씨 래버러토리즈 오브 몰레큘라 바이올로지(MRC Laboratory of Molecular Biology)의 로저 윌리엄스 랩(Roger Williams lab) (2003년 11월)으로부터 입수하였고, 문헌 [Pacold, Michael E.; Suire, Sabine; Perisic, Olga; Lara-Gonzalez, Samuel; Davis, Colin T.; Walker, Edward H.; Hawkins, Phillip T.; Stephens, Len; Eccleston, John F.; Williams, Roger L. Crystal structure and functional analysis of Ras binding to its effector phosphoinositide 3-kinase gamma. Cell (2000), 103(6), 931-943)]에 기재되어 있다.
PI3Kα 구조체 및 단백질
Figure pct00343
BV1075: 바쿨로바이러스 BV-1075에 대한 구조체는 벡터 pBlueBac4.5에 클로닝된 p85 단편 및 p110α 단편으로 이루어진 3-부분 라이게이션에 의해 생성되었다. p85 단편은 Nhe/Spe에 의해 절단된 플라스미드 p1661-2로부터 유래되었다. 클론으로부터 유래된 p110α 단편은 서열분석에 의해 확인되었고, SpeI/HindIII 단편으로서 LR410에 사용되었다. 바쿨로바이러스 발현 벡터 LR410의 생성을 위해, 삽입체를 게이트웨이(Gateway)에 적합화된 pBlueBac4.5 (인비트로젠(Invitrogen)) 벡터로 전달하는 게이트웨이 LR 반응을 이용하였다. 클로닝 벡터 pBlueBac4.5 (인비트로젠)를 Nhe/HindIII에 의해 절단하였다. 이와 같이 하여, 구조체 PED 153.8이 생성되었다. p85 성분 (iSH2)은 주형으로서의 ORF 318 (상기 기재됨), 및
1개의 전방향 프라이머 KAC1028
Figure pct00344
및
2개의 역방향 프라이머 KAC1029
Figure pct00345
및 KAC1039
Figure pct00346
를 사용하여 PCR에 의해 생성되었다. 상기 두 역방향 프라이머는 중첩되어, 12x Gly 링커, 및 SpeI 부위에 대한 p110α 유전자의 N-말단 서열을 통합시켰다. 12x Gly 링커는 BV1052 구조체에서 단일 Gly 링커를 대체하였다. PCR 단편을 pCR2.1 TOPO (인비트로젠)에 클로닝하였다. 생성된 클론 중에서 p1661-2를 서열분석에 의해 측정하여 보정하였다. 이 플라스미드를 Nhe 및 SpeI에 의해 절단시키고, 생성된 단편을 서브-클로닝을 위해 겔-단리 및 정제하였다.
p110α 클로닝 단편은 Spe I 및 HindIII에 의한 클론 LR410 (상기 참조)의 효소적 절단에 의해 생성되었다. SpeI 부위는 p110α 유전자의 코딩 영역에 있다. 생성된 단편을 서브-클로닝을 위해 겔-단리 및 정제하였다. 클로닝 벡터 pBlueBac4.5 (인비트로젠)는 Nhe 및 HindIII에 의한 효소적 절단에 의해 제조되었다. 절단 벡터를 퀴아젠(Qiagen) 칼럼으로 정제한 후, 송아지 창자 알칼리 포스파타제 (CIP) (바이오랩스(BioLabs))로 탈포스포릴화시켰다. CIP 반응을 완료한 후, 절단 벡터를 다시 칼럼 정제하여, 최종 벡터를 생성하였다. 3-부분 라이게이션을 로슈 래피드(Roche Rapid) 리가제 및 제조업체의 설명서를 사용하여 수행하였다. 최종 플라스미드를 서열분석에 의해 확인하였다.
키나제 도메인.
BV 1075의 단백질 서열:
Figure pct00347
PI3Kβ 구조체 및 단백질
Figure pct00348
BV949: p85 PI3Kα, PI3Kβ 및 PI3Kδ 서브유닛의 내부 SH2 도메인 (iSH2)을 위한 PCR 생성물 및 전장 p110β 서브유닛을 위한 PCR 생성물을 생성하여, 중첩 PCR에 의해 융합시켰다. iSH2 PCR 생성물은 태반, 고환 및 뇌로부터의 시판되는 인간 RNA (클론테크(Clontech))로부터
먼저 프라이머 gwG130-p01
Figure pct00349
및
gwG130-p02
Figure pct00350
를 사용하여 RT-PCR에 의해 생성된 제1 가닥 cDNA로부터 수득하였다. 후속적으로, 2차 PCR 반응에서, 게이트웨이 재조합 AttB1 부위 및 링커 서열을 각각
프라이머 gwG130-p03
Figure pct00351
및 gwG130-p05
Figure pct00352
를 사용하여 p85 iSH2 단편의 5' 말단 및 3' 말단에 부가하였다. p110β 단편은 주형으로서 p110β 클론 (서열이 확인된 미지의 공급원으로부터)을 사용하고, 링커 서열 및 p110β의 5' 말단을 함유하는 프라이머 gwG130-p04
Figure pct00353
및 히스티딘 태크에 융합된 p110-β의 3' 말단 서열을 함유하는 프라이머 gwG130-p06
Figure pct00354
을 사용하여 PCR에 의해 수득하였다. p85-iSH2/p110β 융합 단백질은 상기 언급한 gwG130-p03 프라이머, 및 중첩 히스티딘 태그 및 AttB2 재조합 서열을 함유하는 프라이머
Figure pct00355
를 사용하여 iSH2 단편의 3' 말단 및 p110β 단편의 5' 말단에서 링커의 반응을 중첩 PCR에 의해 어셈블리하였다. 이 최종 생성물을 게이트웨이 (인비트로젠) OR 반응으로 공여자 벡터 pDONR201 (인비트로젠)에 재조합하여, ORF253 엔트리 클론을 생성하였다. 이 클론을 서열분석으로 확인하고, 바쿨로바이러스 발현 벡터 LR280의 생성을 위해 게이트웨이 LR 반응 (인비트로젠)에 사용하여 삽입체를 게이트웨이에 적합화된 pBlueBac4.5 (인비트로젠) 벡터로 전달하였다. 이 LR280은 p85 서열에서 아미노산 돌연변이를 가졌다.
키나제 도메인.
BV949의 단백질 서열:
Figure pct00356
키나제 도메인.
PI3Kγ 구조체 및 단백질
Figure pct00357
구조체는 영국 캠브리지 소재의 엠알씨 래버러토리즈 오브 몰레큘라 바이올로지의 로저 윌리엄스 랩 (2003년 11월)으로부터 입수하였다. 상기 구조체는 문헌 [Pacold, Michael E.; Suire, Sabine; Perisic, Olga; Lara-Gonzalez, Samuel; Davis, Colin T.; Walker, Edward H.; Hawkins, Phillip T.; Stephens, Len; Eccleston, John F.; Williams, Roger L. Crystal structure and functional analysis of Ras binding to its effector phosphoinositide 3-kinase gamma. Cell (2000), 103(6), 931-943)]에 기재되어 있다. 구조체에는 N-말단 144 aa가 결여되어 있다.
BV950의 단백질 서열:
Figure pct00358
PI3Kδ 구조체 및 단백질
Figure pct00359
BV1060: p85 서브유닛의 내부 SH2 도메인 (iSH2)에 대한 PCR 생성물 및 전장 p110δ 서브유닛에 대한 PCR 생성물을 생성하여, 중첩 PCR에 의해 융합시켰다. iSH2 PCR 생성물은 주형으로서의 ORF318 (상기 참조), 및 프라이머 gwG130-p03
Figure pct00360
및 gwG154-p04
Figure pct00361
를 사용하여 생성하였다. p110δ 단편은 태반, 고환 및 뇌로부터의 시판되는 인간 RNA (클론테크)로부터
먼저 프라이머 gwG154-p01
및 gwG154-p02
Figure pct00363
를 사용하여 RT-PCR에 의해 생성된 제1 가닥 cDNA로부터 수득하였다. 후속적인 PCR 반응에서, 링커 서열 및 히스티딘 태그를 각각 프라이머 gw154-p03
Figure pct00364
및 gwG154-p06
Figure pct00365
을 사용하여 p110δ 단편의 5' 말단 및 3' 말단에 부가하였다. p85-iSH2/p110δ 융합 단백질은 상기 언급된 gwG130-p03 프라이머, 및 중첩 히스티딘 태그 및 게이트웨이 (인비트로젠) AttB2 재조합 서열을 함유하는 프라이머
Figure pct00366
를 사용하여 iSH2 단편의 3' 말단 및 p110δ 단편의 5' 말단에서 중첩 링커에 의해 제3 PCR 반응으로 어셈블리하였다. 이 최종 생성물을 게이트웨이 OR 반응으로 공여자 벡터 pDONR201 (인비트로젠)에 재조합하여, ORF319 엔트리 클론을 생성하였다. 이 클론을 서열분석으로 확인하고, 바쿨로바이러스 발현 벡터 LR415의 생성을 위해 게이트웨이 LR 반응 (인비트로젠)에 사용하여 삽입체를 게이트웨이에 적합화된 pBlueBac4.5 (인비트로젠) 벡터로 전달하였다.
BV1060의 단백질 서열:
Figure pct00367
PI3Kα, PI3Kβ 및 PI3Kγ 구조체의 정제
PI3Kα, PI3Kβ 및 PI3Kγ를 두 크로마토그래피 단계로 정제하였다: Ni 세파로스 수지 (GE 헬쓰케어(GE Healthcare)) 상에서의 고정화 금속 친화성 크로마토그래피 (IMAC), 및 수퍼덱스(Superdex) 200 26/60 칼럼 (GE 헬쓰케어)을 이용한 겔 여과. 모든 완충액을 4℃로 냉각시키고, 얼음 상의 냉각하에 용해를 수행하였다. 칼럼 분획화를 실온에서 수행하였다. PI3Kβ를 정제하기 위해 사용된 모든 완충액은 하기 기재된 것 이외에도 0.05％ 트리톤 X100을 함유하였다.
Tn5 세포 배양물 10 L로부터의 전형적 동결 세포를 "용해 완충액" 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 5％ 글리세롤, 5 mM 이미다졸, 1 mM NaF, 0.1 ug/mL 오카다산 (OAA), 5 mM BME, 1 x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 - EDTA-무함유 (20개 정제/1 L 완충액, 로슈 어플라이드 사이언시즈(Roche Applied Sciences)), 벤조나제 (25U/mL 완충액, 이엠디 바이오사이언시즈(EMD Biosciences))에 1:6 v/v 펠릿 대 용해 완충액의 비율로 재현탁시키고, 꼭 맞는 막자를 이용하여 20회 타격을 다운싱(douncing)하여 기계적으로 용해시켰다. 용해물을 45,000 g에서 30분 동안 원심분리하고, 상층액을 예비-평형화된 IMAC 칼럼에 로딩하였다 (3 mL 수지/100 mL 용해물). 상기 칼럼을 3 내지 5 칼럼 부피의 용해 완충액으로 세척한 후, 3 내지 5 칼럼 부피의 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 5％ 글리세롤, 45 mM 이미다졸, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/mL OAA, 5 mM BME, 1x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유)로 2차 세척하였다. 단백질을 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 0.5 M NaCl, 5％ 글리세롤, 250 mM 이미다졸, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/mL OAA, 5 mM BME, 1x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유)로 용출시켰다. 적절한 분획을 SDS-PAGE에 의해 분석한 후 수집하였다. 단백질을 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 0.5 M NaCl, 5％ 글리세롤, 1 mM NaF, 5 mM DTT, 1x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유)로 평형화된 수퍼덱스 200 26/60 칼럼 상에서 겔 여과에 의해 추가로 정제하였다. 적절한 분획을 SDS-PAGE에 의해 분석한 후 수집하였다. 동일한 부피의 투석 완충액 (20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 50％ 글리세롤, 5 mM NaF, 5 mM DTT)을 수집물에 첨가한 후, 투석 완충액 2회 변화에 대해 투석하였다 (밤새 1회 변화). 단백질을 -20℃에서 보관하였다.
PI3Kδ의 정제
PI3Kδ를 세 크로마토그래피 단계로 정제하였다: Ni 세파로스 수지 (GE 헬쓰케어) 상에서의 고정화 금속 친화성 크로마토그래피, 수퍼덱스 200 26/60 칼럼 (GE 헬쓰케어)을 이용한 겔 여과, 및 최종적으로 Q-HP 칼럼 (GE 헬쓰케어) 상에서의 이온 교환 단계. 모든 완충액을 4℃로 냉각시키고, 얼음 상의 냉각하에 용해를 수행하였다. 칼럼 분획화를 실온에서 수행하였다.
Tn5 세포 배양물 10 L로부터의 전형적 동결 세포를 "용해 완충액" 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 5％ 글리세롤, 5 mM 이미다졸, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/mL 오카다산 (OAA), 5 mM BME, 1 x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 - EDTA-무함유 (20개 정제/1 L 완충액, 로슈 어플라이드 사이언시즈), 벤조나제 (25U/mL 용해 완충액, 이엠디 바이오사이언시즈)에 1:10 v/v 펠릿 대 용해 완충액의 비율로 재현탁시키고, 꼭 맞는 막자를 이용하여 20회 타격을 다운싱하여 기계적으로 용해시켰다. 용해물을 45,000 g에서 30분 동안 원심분리하고, 상층액을 예비-평형화된 IMAC 칼럼에 로딩하였다 (5 mL 수지/100 mL 용해물). 상기 칼럼을 3 내지 5 칼럼 부피의 용해 완충액으로 세척한 후, 3 내지 5 칼럼 부피의 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 5％ 글리세롤, 40 mM 이미다졸, 1 mM NaF, 0.1 ug/mL OAA, 5 mM BME, 1x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유)로 2차 세척하였다. 단백질을 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 5％ 글리세롤, 250 mM 이미다졸, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/mL OAA, 5 mM BME, 1x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유)로 용리시켰다. 적절한 분획을 SDS-PAGE에 의해 분석한 후 수집하였다. 단백질을 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 5％ 글리세롤, 1 mM NaF, 0.1 ug/mL OAA, 5 mM DTT, 1x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유)로 평형화된 수퍼덱스 200 칼럼 상에서 겔 여과에 의해 추가로 정제하였다. 적절한 분획을 SDS-PAGE에 의해 분석한 후 수집하였다. 이들 분획을 "완충액 A" 20 mM Tris-Cl, pH 8.2, 5％ 글리세롤, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/mL OAA, 5 mM DTT를 사용하여 1:10 v/v 수집물 부피 대 완충액의 비율로 희석하고, 제조된 Q-HP 칼럼 상에 로딩하였다. 샘플 로딩을 완료한 후, 완충액 A 및 5％ "완충액 B" 20 mM Tris-Cl, pH 8.2, 1 M NaCl, 5％ 글리세롤, 1 mM NaF, 0.1 ug/mL OAA, 5 mM DTT로 3 내지 5 칼럼 부피로 세척하였다. 단백질을 완충액 B의 5％→30％ 구배로 용출시켰다. 전형적으로, 단백질은 대략 200 mM NaCl에서 용출되었다. 적절한 분획을 SDS-PAGE에 의해 분석한 후 수집하였다. 동일한 부피의 투석 완충액 (20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 50％ 글리세롤, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/mL OAA, 5 mM DTT)을 수집물에 첨가한 후, 투석 완충액 2회 변화에 대해 투석하였다 (밤새 1회 변화). 단백질을 -20℃에서 보관하였다.
상기 기재된 검정을 이용하여 하기 결과를 수득하였다.
Figure pct00368
본 발명의 화합물, 특히, 본 발명의 바람직한 화합물은, 예를 들어 생화학적 검정에서 측정시 베타 및/또는 델타 및/또는 감마 아형과 관련하여 PI3K 알파에 대한 개선된 선택성을 나타냈다. 또한, 이들 화합물은 바람직하게는, 세포 검정에서 측정시 베타 및/또는 델타 및/또는 감마 아형과 관련하여 PI3K 알파에 대한 선택성을 나타냈다.
실시예 B: 시험관내 대사 청소율의 측정
약어
ACN 아세토니트릴
ADME 흡수, 분포, 대사 및 배출
ALP 자동화 랩웨어 포지셔너
％B HPLC 용매 B의 비율(％)
BT 생체내변환 (또는 대사 안정성 또는 미세소체 안정성)
[C]t=0 TA의 시험관내 개시 (시간: 0) 농도
CLh 간 청소율 (ml/분/kg)
CLint 고유 청소율 (㎕ 반응 부피/분/mg 미세소체 단백질)
CLint,s 간 질량에 대해 스케일링된 고유 청소율 (mL 반응 부피/분/g 간)
Cyno 사이노몰구스(Cynomolgous)
CYP(들) 시토크롬 P450(들)
DiH2O 탈이온수
ERh 간 추출 비율
ESI 전기분무 이온화
fub 혈액 또는 혈장에서의 약물의 유리 분획
fum 미세소체에서의 약물의 유리 분획
IS 내부 표준물
kmic 미세소체에서의 제거율
KPi 0.05 M 인산칼륨 완충액 (pH 7.4)
LC-MS/MS 직렬 질량 분석법과 연결된 액체 크로마토그래피
LOD 검출 한계
M 인큐베이션 중의 미세소체 단백질 함량 (mg/mL)
NADPH β-니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 포스페이트 (감소된 형태)
NCE 신규한 화학적 개체
NSB 비-특이적 결합
Qh 문맥 혈류 (ml/분/kg)
RPM 분 당 회전수
SD 표준 편차
S-D 스프라그-돌리(Sprague-Dawley)
SF1 스케일링 인자: 간 (g) 당 미세소체 단백질 (mg)
SF2 스케일링 인자: 동물 체중 (kg) 당 간 (g)
t1/2 시험관내 청소율 반감기 (분)
TA 시험 품목
UDPGA 우리딘 5'디포스포글루쿠론산
UGT 우리딘 5'디포스페이트 글루쿠로노실트랜스퍼라제
V 반응 인큐베이션 부피 (㎕)
최종 시험 품목 및 단백질 농도, 뿐만 아니라 인큐베이션 지속시간을 하기 나타냈다 (표 1). 반응 역학을 Km 미만의 (또는 대략 동일한) 농도에서 평가한다는 가정에 따라 낮은 시험 품목 농도를 선택하였다. DMSO는 CYP 활성에 대해 억제 효과를 갖는 것으로 알려져 있다. 따라서, 대사 과정에 대한 간섭이 최소화되도록 인큐베이션 매질 중 DMSO의 농도를 0.01％ (v/v)로 제한하였다.
<표 1>
Figure pct00369
전형적 실험을, 37℃에서 진탕 인큐베이션을 이용하여 96-웰 포맷으로 수행하였다. 시험관내 대사 청소율을, 보조인자(들) (NADPH 및/또는 UDPGA)를 포함하는 반응에서의 4개의 시점 (예컨대, 0, 5, 15 및 30분)에서 수집한 데이터로부터 유도하였다. 또한, 30분간 음성 대조군 인큐베이션 (보조인자 없이)을 수행하여, CYP-비조절된 안정성 문제 (예컨대, 화학적 불안정성, CYP-비의존성 대사)를 평가하였다.
일반적으로, DiH2O 중 0.6％ ACN (v/v)으로 10 mM DMSO 중 TA를 10 μM로 1:1000희석하였다. 실험을 시작하기 직전에, 1.25 mg/mL의 미세소체 단백질을 50 mM KPi에 현탁시켰다. UGT-매개 대사를 평가하기 위해, 먼저 현탁액을 알라메티신 (25 ㎍/mg 미세소체 단백질)을 함유하는 얼음 상에서 5분간 인큐베이션함으로써 전처리할 수 있었다. TA (35 ㎕)를 미세소체 현탁액 140 ㎕에 첨가하여 효소-기질 혼합물 175 ㎕를 얻었다. 상기 효소·기질 혼합물을 37℃에서 15분 동안 예비인큐베이션하였다. 효소·기질 혼합물 25 ㎕를 동일 부피의 50 mM KPi (4 mM MgCl2 함유)와 합하여 30분간 음성 대조군 인큐베이션 처리하였다. 37℃에서 30분간 인큐베이션한 후, MS 내부 표준물 (2 μM 알프레놀롤)을 함유하는 ACN 50 ㎕를 첨가하여 혼합물을 켄칭하였다. T=0분의 시점에 효소·기질 혼합물 25 ㎕를, MS 내부 표준물 (2 μM 알프레놀롤)을 함유하는 ACN 50 ㎕와 직접 합하여 처리하였다. 보조인자 용액 25 ㎕ (4 mM MgCl2 + 50 mM KPi 중 2 mM NADPH; 임의로 CYP+UGT 검정을 위해 2 mM UDPGA 포함)를 첨가하여 완전히 켄칭된 반응 혼합물을 시뮬레이션하였다.
남아있는 효소·기질 혼합물 125 ㎕에 보조인자 용액 (4 mM MgCl2 + 50 mM KPi 중 2 mM NADPH) 125 ㎕를 첨가하여, 남아있는 시점에 대한 벌크 반응을 개시하였다. UGT 대사를 위해, 마찬가지로 2 mM UDPGA를 보조인자 용액에 포함시켰다. 특정 반응 시점 (예컨대, 5 , 15, 30분)에서, 반응 분취량 (50 ㎕)을 제거하고, 질량 분광측정법 내부 표준물 (2 μM 알프레놀롤)을 함유하는 아세토니트릴 (50 ㎕)을 첨가하여 반응을 종결시켰다. 모든 샘플을 4℃에서 10분 동안 약 3400 x g로 원심분리하고, 남아있는 TA의 정량화를 위해 상층액을 LC-MS/MS로 분석하였다. 0분에 대한, 남아 있는 TA의 비율(％)을 사용하여 시험관내 제거율 상수 (kmic)를 추정하였고, 이를 사용하여 시험관내 대사 청소율을 계산할 수 있었다.
샘플의 분석을 워터스 콰트로 프리미어(Waters Quattro Premiere) 질량 분석계, ESI 이온 공급원, CTC-HTS Pal 오토샘플러 및 애질런트(Agilent) LC 펌프로 구성된 고성능 액체 크로마토그래피-직렬 질량분광측정법 (LC/MS) 시스템 상에서 수행하였다. 샘플을, 표 2에 요약된 빠른 이동상 구배를 사용하여 아틀란틱(Atlantic) C18 칼럼 (2.1 x 30 mm, 3.5 ㎛) 상에서 분리하였다. 이동상 A는 10 mM 암모늄 포르메이트를 함유하는 정제수로 구성하였다. 이동상 B는 0.01％ 포름산을 함유하는 아세토니트릴로 구성하였다. 유속은 1 ml/분이었다. 주입 부피는 10 ㎕였다. 샘플 정화를 위해 용출의 처음 30초를 소모용으로 전환하였다. 시험 화합물의 분자량과 관련된 모든 단편에 대한 강도 데이터를 수집하는 소프트웨어 매스링스(MassLynx)/쿠안링스(QuanLynx)를 이용하여 화합물을 검출하였다. 기초 자료를 수집한 후, 필요한 경우 소프트웨어로 3개 까지의 특질 단편의 프로파일을 합할 수 있었다. 일반적으로, 가장 강한 강도의 단편 피크를 적분하였다.
<표 2>
Figure pct00370
각각의 미세소체 제거율 (kmic)은 단일선의 시험한 4-포인트 제거 곡선을 기초로 하였다. 반응 플레이트에 대한 LC-MS/MS 기초 자료를 TA 및 IS에 대한 적분된 분석물 피크 면적으로서 복구시켰다. 3개의 값을 분석물:IS 피크 면적 비율로 전환하여, 데이터 비교를 표준화할 수 있었다.
반응 시점 (예컨대, 0, 5, 20 또는 30분)을 0분과 비교한 남아있는 TA 비율(％)의 자연 로그에 대해 플롯팅하였다. 이러한 청소율 플롯의 기울기 (kmic)는 하기 방정식 1에 나타낸 바와 같이 시험관내 반감기 (t1/2)를 계산하는데 사용하였다. 선형 반응 역학에 초점을 맞추기 위해, 가능한 경우, 일반적으로 남아있는 TA가 <10％임을 나타내는 데이터 지점을 청소율 플롯 기울기의 정의로부터 제외하였다. 반응 t1/2은 CLint를 계산하기 위해 (방정식 2) 사용되는 핵심 실험적 값이다.
방정식 1:
Figure pct00371
방정식 2:
Figure pct00372
상기 기재된 절차를 이용하여 하기 결과를 얻었다.
Figure pct00373
실시예 C: 루시퍼라제 발광 검정에서 측정한 PI3K 알파 돌연변이체 E545K 및 H1047R의 억제
발광은 ATP 농도를 측정하기 위한 잘 확립된 판독체이고, 따라서 이를 사용하여, 수많은 키나제의 활성을 그의 기질에 관계없이 추적할 수 있다. 키나제글로 발광 키나제 검정 (프로메가(Promega), 미국 위스콘신주 메디슨)은 키나제 반응 후 용액에 잔류하는 ATP의 양을 정량함으로써 키나제 활성을 측정하는 균일 HTS 방법이다.
포스포이노시티드 3-키나제를 1 μM ATP, 5 mM MgCl2, 50 mM NaCl, 5 ㎍/ml 대두 포스파티딜이노시톨 (아반티 폴라 리피즈(Avanti Polar lipids), 카탈로그 번호 840044C), 0.015％ 옥토글루코시드 (시그마, 카탈로그 번호 O9882), 0.01 ％ CHAPS, 1 mM DTT, 2.5 ％ DMSO 및 10 mM 트리스-HCl (pH 7.5)을 함유하는 매질 50-㎕ 중 실온에서 인큐베이션하였다. ATP를 첨가하여 키나제 반응을 개시하고 (효소와 억제제의 15분 예비인큐베이션), 1시간 후에 키나제글로 (등록상표) (프로메가, 카탈로그 번호 V6714) 50 ㎕를 사용하여 중지시키고, 빅터(Victor) II 판독기 (0.1 초 통합)로 발광을 측정하였다. 로지스틱 방정식 (엑스엘피트(XLfit, 등록상표)의 모델 205, 아이디 비지니스 솔루션즈(ID Business Solutions), 영국 길드포드)을 이용하여 비-선형 회귀로 곡선을 적합화시켰다.
발광 검정의 검정 원칙 (키나제글로):
Figure pct00374
상기 검정 시스템 및 하기 표에 나타낸 구조체로부터 얻은 PI3K 단백질 사용.
Figure pct00375
야생형 및 돌연변이체 PI3K알파에 대한 억제 활성을 평가하였다. 결과를 하기 표에 나타냈다.
야생형 및 돌연변이체 PI3K알파의 억제:
Figure pct00376
BV1147: 퀵체인지(QuickChange) XL 돌연변이유발 키트 (스트라타진(Stratagene))를 이용하여 부위 지정 돌연변이유발에 의해 수많은 암에서 발견되는 활성화 돌연변이 E545K를 ORF318에 도입시켰다. 제조업체에 의해 권장되는 방법을 이용하여, 돌연변이 프라이머 gwG152-p15
Figure pct00377
및 gwG152-p16
Figure pct00378
ORF544를 생성하였다. 이 클론을 서열분석으로 확인하고, 바쿨로바이러스 발현 벡터 LR561의 생성을 위해 게이트웨이 LR 반응 (인비트로겐)에 사용하여 삽입체를 게이트웨이에 적합화된 pBlueBac4.5 (인비트로겐) 벡터로 전달하였다.
키나제 도메인.
BV 1147의 단백질 서열:
Figure pct00379
BV1097: 퀵체인지 XL 돌연변이유발 키트 (스트라타진)를 이용하여 부위 지정 돌연변이유발에 의해 수많은 암에서 발견되는 활성화 돌연변이 H1047R을 ORF318에 도입시켰다.
제조업체에 의해 권장되는 방법을 이용하여, 돌연변이 프라이머
gwG152-p07
Figure pct00380
및
gwG152-p11
Figure pct00381
ORF396을 생성하였다. 이 클론을 서열분석에 의해 확인하고, 바쿨로바이러스 발현 벡터 LR480의 생성을 위해 게이트웨이 LR 반응 (인비트로겐)에 사용하여 삽입체를 게이트웨이에 적합화된 pBlueBac4.5 벡터 (인비트로겐)로 전달하였다.
키나제 도메인.
BV 1097의 단백질 서열:
Figure pct00382
SEQUENCE LISTING <110> Novartis AG <120> Organic Compounds <130> PAT052777A <160> 26 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR Primer <400> 1 gctagcatgc gagaatatga tagattatat gaagaatata cc 42 <210> 2 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 2 gcctccacca cctccgcctg gtttaatgct gttcatacgt ttgtc 45 <210> 3 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 3 tactagtccg cctccaccac ctccgcctcc accacctccg cc 42 <210> 4 <211> 1180 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> PI3K kinase construct <400> 4 Met Arg Glu Tyr Asp Arg Leu Tyr Glu Glu Tyr Thr Arg Thr Ser Gln 1 5 10 15 Glu Ile Gln Met Lys Arg Thr Ala Ile Glu Ala Phe Asn Glu Thr Ile 20 25 30 Lys Ile Phe Glu Glu Gln Cys Gln Thr Gln Glu Arg Tyr Ser Lys Glu 35 40 45 Tyr Ile Glu Lys Phe Lys Arg Glu Gly Asn Glu Lys Glu Ile Gln Arg 50 55 60 Ile Met His Asn Tyr Asp Lys Leu Lys Ser Arg Ile Ser Glu Ile Ile 65 70 75 80 Asp Ser Arg Arg Arg Leu Glu Glu Asp Leu Lys Lys Gln Ala Ala Glu 85 90 95 Tyr Arg Glu Ile Asp Lys Arg Met Asn Ser Ile Lys Pro Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Leu Val Glu Cys Leu Leu Pro 115 120 125 Asn Gly Met Ile Val Thr Leu Glu Cys Leu Arg Glu Ala Thr Leu Ile 130 135 140 Thr Ile Lys His Glu Leu Phe Lys Glu Ala Arg Lys Tyr Pro Leu His 145 150 155 160 Gln Leu Leu Gln Asp Glu Ser Ser Tyr Ile Phe Val Ser Val Thr Gln 165 170 175 Glu Ala Glu Arg Glu Glu Phe Phe Asp Glu Thr Arg Arg Leu Cys Asp 180 185 190 Leu Arg Leu Phe Gln Pro Phe Leu Lys Val Ile Glu Pro Val Gly Asn 195 200 205 Arg Glu Glu Lys Ile Leu Asn Arg Glu Ile Gly Phe Ala Ile Gly Met 210 215 220 Pro Val Cys Glu Phe Asp Met Val Lys Asp Pro Glu Val Gln Asp Phe 225 230 235 240 Arg Arg Asn Ile Leu Asn Val Cys Lys Glu Ala Val Asp Leu Arg Asp 245 250 255 Leu Asn Ser Pro His Ser Arg Ala Met Tyr Val Tyr Pro Pro Asn Val 260 265 270 Glu Ser Ser Pro Glu Leu Pro Lys His Ile Tyr Asn Lys Leu Asp Lys 275 280 285 Gly Gln Ile Ile Val Val Ile Trp Val Ile Val Ser Pro Asn Asn Asp 290 295 300 Lys Gln Lys Tyr Thr Leu Lys Ile Asn His Asp Cys Val Pro Glu Gln 305 310 315 320 Val Ile Ala Glu Ala Ile Arg Lys Lys Thr Arg Ser Met Leu Leu Ser 325 330 335 Ser Glu Gln Leu Lys Leu Cys Val Leu Glu Tyr Gln Gly Lys Tyr Ile 340 345 350 Leu Lys Val Cys Gly Cys Asp Glu Tyr Phe Leu Glu Lys Tyr Pro Leu 355 360 365 Ser Gln Tyr Lys Tyr Ile Arg Ser Cys Ile Met Leu Gly Arg Met Pro 370 375 380 Asn Leu Met Leu Met Ala Lys Glu Ser Leu Tyr Ser Gln Leu Pro Met 385 390 395 400 Asp Cys Phe Thr Met Pro Ser Tyr Ser Arg Arg Ile Ser Thr Ala Thr 405 410 415 Pro Tyr Met Asn Gly Glu Thr Ser Thr Lys Ser Leu Trp Val Ile Asn 420 425 430 Ser Ala Leu Arg Ile Lys Ile Leu Cys Ala Thr Tyr Val Asn Val Asn 435 440 445 Ile Arg Asp Ile Asp Lys Ile Tyr Val Arg Thr Gly Ile Tyr His Gly 450 455 460 Gly Glu Pro Leu Cys Asp Asn Val Asn Thr Gln Arg Val Pro Cys Ser 465 470 475 480 Asn Pro Arg Trp Asn Glu Trp Leu Asn Tyr Asp Ile Tyr Ile Pro Asp 485 490 495 Leu Pro Arg Ala Ala Arg Leu Cys Leu Ser Ile Cys Ser Val Lys Gly 500 505 510 Arg Lys Gly Ala Lys Glu Glu His Cys Pro Leu Ala Trp Gly Asn Ile 515 520 525 Asn Leu Phe Asp Tyr Thr Asp Thr Leu Val Ser Gly Lys Met Ala Leu 530 535 540 Asn Leu Trp Pro Val Pro His Gly Leu Glu Asp Leu Leu Asn Pro Ile 545 550 555 560 Gly Val Thr Gly Ser Asn Pro Asn Lys Glu Thr Pro Cys Leu Glu Leu 565 570 575 Glu Phe Asp Trp Phe Ser Ser Val Val Lys Phe Pro Asp Met Ser Val 580 585 590 Ile Glu Glu His Ala Asn Trp Ser Val Ser Arg Glu Ala Gly Phe Ser 595 600 605 Tyr Ser His Ala Gly Leu Ser Asn Arg Leu Ala Arg Asp Asn Glu Leu 610 615 620 Arg Glu Asn Asp Lys Glu Gln Leu Lys Ala Ile Ser Thr Arg Asp Pro 625 630 635 640 Leu Ser Glu Ile Thr Glu Gln Glu Lys Asp Phe Leu Trp Ser His Arg 645 650 655 His Tyr Cys Val Thr Ile Pro Glu Ile Leu Pro Lys Leu Leu Leu Ser 660 665 670 Val Lys Trp Asn Ser Arg Asp Glu Val Ala Gln Met Tyr Cys Leu Val 675 680 685 Lys Asp Trp Pro Pro Ile Lys Pro Glu Gln Ala Met Glu Leu Leu Asp 690 695 700 Cys Asn Tyr Pro Asp Pro Met Val Arg Gly Phe Ala Val Arg Cys Leu 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Lys Gln Glu Gly Leu Asp Leu Arg Met Thr Pro Tyr Gly 915 920 925 Cys Leu Pro Thr Gly Asp Arg Thr Gly Leu Ile Glu Val Val Leu Arg 930 935 940 Ser Asp Thr Ile Ala Asn Ile Gln Leu Asn Lys Ser Asn Met Ala Ala 945 950 955 960 Thr Ala Ala Phe Asn Lys Asp Ala Leu Leu Asn Trp Leu Lys Ser Lys 965 970 975 Asn Pro Gly Glu Ala Leu Asp Arg Ala Ile Glu Glu Phe Thr Leu Ser 980 985 990 Cys Ala Gly Tyr Cys Val Ala Thr Tyr Val Leu Gly Ile Gly Asp Arg 995 1000 1005 His Ser Asp Asn Ile Met Ile Arg Glu Ser Gly Gln Leu Phe His 1010 1015 1020 Ile Asp Phe Gly His Phe Leu Gly Asn Phe Lys Thr Lys Phe Gly 1025 1030 1035 Ile Asn Arg Glu Arg Val Pro Phe Ile Leu Thr Tyr Asp Phe Val 1040 1045 1050 His Val Ile Gln Gln Gly Lys Thr Asn Asn Ser Glu Lys Phe Glu 1055 1060 1065 Arg Phe Arg Gly Tyr Cys Glu Arg Ala Tyr Thr Ile Leu Arg Arg 1070 1075 1080 His Gly Leu Leu Phe Leu His Leu Phe Ala Leu Met Arg Ala Ala 1085 1090 1095 Gly Leu Pro Glu Leu Ser Cys Ser Lys Asp Ile Gln Tyr Leu Lys 1100 1105 1110 Asp Ser Leu Ala Leu Gly Lys Thr Glu Glu Glu Ala Leu Lys His 1115 1120 1125 Phe Arg Val Lys Phe Asn Glu Ala Leu Arg Glu Ser Trp Lys Thr 1130 1135 1140 Lys Val Asn Trp Leu Ala His Asn Val Ser Lys Asp Asn Arg Gln 1145 1150 1155 Glu Leu Gly Gly Ala His His His His His His 1160 1165 <210> 21 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 21 ctctctgaaa tcactaagca ggagaaagat ttt 33 <210> 22 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 22 aaaatctttc tcctgcttag tgatttcaga gag 33 <210> 23 <211> 1180 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> PI3K kinase construct <400> 23 Met Arg Glu Tyr Asp Arg Leu Tyr Glu Glu Tyr Thr Arg Thr Ser Gln 1 5 10 15 Glu Ile Gln Met Lys Arg Thr Ala Ile Glu Ala Phe Asn Glu Thr Ile 20 25 30 Lys Ile Phe Glu Glu Gln Cys Gln Thr Gln Glu Arg Tyr Ser Lys Glu 35 40 45 Tyr Ile Glu Lys Phe Lys Arg Glu Gly Asn Glu Lys Glu Ile Gln Arg 50 55 60 Ile Met His Asn Tyr Asp Lys Leu Lys Ser Arg Ile Ser Glu Ile Ile 65 70 75 80 Asp Ser Arg Arg Arg Leu Glu Glu Asp Leu Lys Lys Gln Ala Ala Glu 85 90 95 Tyr Arg Glu Ile Asp Lys Arg Met Asn Ser Ile Lys Pro Gly Gly Ile 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ile Met Val Leu Val Glu Cys Leu Leu Pro 115 120 125 Asn Gly Met Ile Val Thr Leu Glu Cys Leu Arg Glu Ala Thr Leu Ile 130 135 140 Thr Ile Lys His Glu Leu Phe Lys Glu Ala Arg Lys Tyr Pro Leu His 145 150 155 160 Gln Leu Leu Gln Asp Glu Ser Ser Tyr Ile Phe Val Ser Val Thr Gln 165 170 175 Glu Ala Glu Arg Glu Glu Phe Phe Asp Glu Thr Arg Arg Leu Cys Asp 180 185 190 Leu Arg Leu Phe Gln Pro Phe Leu Lys Val Ile Glu Pro Val Gly Asn 195 200 205 Arg Glu Glu Lys Ile Leu Asn Arg Glu Ile Gly Phe Ala Ile Gly Met 210 215 220 Pro Val Cys Glu Phe Asp Met Val Lys Asp Pro Glu Val Gln Asp Phe 225 230 235 240 Arg Arg Asn Ile Leu Asn Val Cys Lys Glu Ala Val Asp Leu Arg Asp 245 250 255 Leu Asn Ser Pro His Ser Arg Ala Met Tyr Val Tyr Pro Pro Asn Val 260 265 270 Glu Ser Ser Pro Glu Leu Pro Lys His Ile Tyr Asn Lys Leu Asp Lys 275 280 285 Gly Gln Ile Ile Val Val Ile Trp Val Ile Val Ser Pro Asn Asn Asp 290 295 300 Lys Gln Lys Tyr Thr Leu Lys Ile Asn His Asp Cys Val Pro Glu Gln 305 310 315 320 Val Ile Ala Glu Ala Ile Arg Lys Lys Thr Arg Ser Met Leu Leu Ser 325 330 335 Ser Glu Gln Leu Lys Leu Cys Val Leu Glu Tyr Gln Gly Lys Tyr Ile 340 345 350 Leu Lys Val Cys Gly Cys Asp Glu Tyr Phe Leu Glu Lys Tyr Pro Leu 355 360 365 Ser Gln Tyr Lys Tyr Ile Arg Ser Cys Ile Met Leu Gly Arg Met Pro 370 375 380 Asn Leu Met Leu Met Ala Lys Glu Ser Leu Tyr Ser Gln Leu Pro Met 385 390 395 400 Asp Cys Phe Thr Met Pro Ser Tyr Ser Arg Arg Ile Ser Thr Ala Thr 405 410 415 Pro Tyr Met Asn Gly Glu Thr Ser Thr Lys Ser Leu Trp Val Ile Asn 420 425 430 Ser Ala Leu Arg Ile Lys Ile Leu Cys Ala Thr Tyr Val Asn Val Asn 435 440 445 Ile Arg Asp Ile Asp Lys Ile Tyr Val Arg Thr Gly Ile Tyr His Gly 450 455 460 Gly Glu Pro Leu Cys Asp Asn Val Asn Thr Gln Arg Val Pro Cys Ser 465 470 475 480 Asn Pro Arg Trp Asn Glu Trp Leu Asn Tyr Asp Ile Tyr Ile Pro Asp 485 490 495 Leu Pro Arg Ala Ala Arg Leu Cys Leu Ser Ile Cys Ser Val Lys Gly 500 505 510 Arg Lys Gly Ala Lys Glu Glu His Cys Pro Leu Ala Trp Gly Asn Ile 515 520 525 Asn Leu Phe Asp Tyr Thr Asp Thr Leu Val Ser Gly Lys Met Ala Leu 530 535 540 Asn Leu Trp Pro Val Pro His Gly Leu Glu Asp Leu Leu Asn Pro Ile 545 550 555 560 Gly Val Thr Gly Ser Asn Pro Asn Lys Glu Thr Pro Cys Leu Glu Leu 565 570 575 Glu Phe Asp Trp Phe Ser Ser Val Val Lys Phe Pro Asp Met Ser Val 580 585 590 Ile Glu Glu His Ala Asn Trp Ser Val Ser Arg Glu Ala Gly Phe Ser 595 600 605 Tyr Ser His Ala Gly Leu Ser Asn Arg Leu Ala Arg Asp Asn Glu Leu 610 615 620 Arg Glu Asn Asp Lys Glu Gln Leu Lys Ala Ile Ser Thr Arg Asp Pro 625 630 635 640 Leu Ser Glu Ile Thr Lys Gln Glu Lys Asp Phe Leu Trp Ser His Arg 645 650 655 His Tyr Cys Val Thr Ile Pro Glu Ile Leu Pro Lys Leu Leu Leu Ser 660 665 670 Val Lys Trp Asn Ser Arg Asp Glu Val Ala Gln Met Tyr Cys Leu Val 675 680 685 Lys Asp Trp Pro Pro Ile Lys Pro Glu Gln Ala Met Glu Leu Leu Asp 690 695 700 Cys Asn Tyr Pro Asp Pro Met Val Arg Gly Phe Ala Val Arg Cys Leu 705 710 715 720 Glu Lys Tyr Leu Thr Asp Asp Lys Leu Ser Gln Tyr Leu Ile Gln Leu 725 730 735 Val Gln Val Leu Lys Tyr Glu Gln Tyr Leu Asp Asn Leu Leu Val Arg 740 745 750 Phe Leu Leu Lys Lys Ala Leu Thr Asn Gln Arg Ile Gly His Phe Phe 755 760 765 Phe Trp His Leu Lys Ser Glu Met His Asn Lys Thr Val Ser Gln Arg 770 775 780 Phe Gly Leu Leu Leu Glu Ser Tyr Cys Arg Ala Cys Gly Met Tyr Leu 785 790 795 800 Lys His Leu Asn Arg Gln Val Glu Ala Met Glu Lys Leu Ile Asn Leu 805 810 815 Thr Asp Ile Leu Lys Gln Glu Lys Lys Asp Glu Thr Gln Lys Val Gln 820 825 830 Met Lys Phe Leu Val Glu Gln Met Arg Arg Pro Asp Phe Met Asp Ala 835 840 845 Leu Gln Gly Phe Leu Ser Pro Leu Asn Pro Ala His Gln Leu Gly Asn 850 855 860 Leu Arg Leu Glu Glu Cys Arg Ile Met Ser Ser Ala Lys Arg Pro Leu 865 870 875 880 Trp Leu Asn Trp Glu Asn Pro Asp Ile Met Ser Glu Leu Leu Phe Gln 885 890 895 Asn Asn Glu Ile Ile Phe Lys Asn Gly Asp Asp Leu Arg Gln Asp Met 900 905 910 Leu Thr Leu Gln Ile Ile Arg Ile Met Glu Asn Ile Trp Gln Asn Gln 915 920 925 Gly Leu Asp Leu Arg Met Leu Pro Tyr Gly Cys Leu Ser Ile Gly Asp 930 935 940 Cys Val Gly Leu Ile Glu Val Val Arg Asn Ser His Thr Ile Met Gln 945 950 955 960 Ile Gln Cys Lys Gly Gly Leu Lys Gly Ala Leu Gln Phe Asn Ser His 965 970 975 Thr Leu His Gln Trp Leu Lys Asp Lys Asn Lys Gly Glu Ile Tyr Asp 980 985 990 Ala Ala Ile Asp Leu Phe Thr Arg Ser Cys Ala Gly Tyr Cys Val Ala 995 1000 1005 Thr Phe Ile Leu Gly Ile Gly Asp Arg His Asn Ser Asn Ile Met 1010 1015 1020 Val Lys Asp Asp Gly Gln Leu Phe His Ile Asp Phe Gly His Phe 1025 1030 1035 Leu Asp His Lys Lys Lys Lys Phe Gly Tyr Lys Arg Glu Arg Val 1040 1045 1050 Pro Phe Val Leu Thr Gln Asp Phe Leu Ile Val Ile Ser Lys Gly 1055 1060 1065 Ala Gln Glu Cys Thr Lys Thr Arg Glu Phe Glu Arg Phe Gln Glu 1070 1075 1080 Met Cys Tyr Lys Ala Tyr Leu Ala Ile Arg Gln His Ala Asn Leu 1085 1090 1095 Phe Ile Asn Leu Phe Ser Met Met Leu Gly Ser Gly Met Pro Glu 1100 1105 1110 Leu Gln Ser Phe Asp Asp Ile Ala Tyr Ile Arg Lys Thr Leu Ala 1115 1120 1125 Leu Asp Lys Thr Glu Gln Glu Ala Leu Glu Tyr Phe Met Lys Gln 1130 1135 1140 Met Asn Asp Ala His His Gly Gly Trp Thr Thr Lys Met Asp Trp 1145 1150 1155 Ile Phe His Thr Ile Lys Gln His Ala Leu Asn Glu Leu Gly Gly 1160 1165 1170 Ala His His His His His His 1175 1180 <210> 24 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 24 caaatgaatg atgcacgtca tggtggctgg aca 33 <210> 25 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 25 tgtccagcca ccatgacgtg catcattcat ttg 33 <210> 26 <211> 1180 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> PI3K kinase construct <400> 26 Met Arg Glu Tyr Asp Arg Leu Tyr Glu Glu Tyr Thr Arg Thr Ser Gln 1 5 10 15 Glu Ile Gln Met Lys Arg Thr Ala Ile Glu Ala Phe Asn Glu Thr Ile 20 25 30 Lys Ile Phe Glu Glu Gln Cys Gln Thr Gln Glu Arg Tyr Ser Lys Glu 35 40 45 Tyr Ile Glu Lys Phe Lys Arg Glu Gly Asn Glu Lys Glu Ile Gln Arg 50 55 60 Ile Met His Asn Tyr Asp Lys Leu Lys Ser Arg Ile Ser Glu Ile Ile 65 70 75 80 Asp Ser Arg Arg Arg Leu Glu Glu Asp Leu Lys Lys Gln Ala Ala Glu 85 90 95 Tyr Arg Glu Ile Asp Lys Arg Met Asn Ser Ile Lys Pro Gly Gly Ile 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ile Met Val Leu Val Glu Cys Leu Leu Pro 115 120 125 Asn Gly Met Ile Val Thr Leu Glu Cys Leu Arg Glu Ala Thr Leu Ile 130 135 140 Thr Ile Lys His Glu Leu Phe Lys Glu Ala Arg Lys Tyr Pro Leu His 145 150 155 160 Gln Leu Leu Gln Asp Glu Ser Ser Tyr Ile Phe Val Ser Val Thr Gln 165 170 175 Glu Ala Glu Arg Glu Glu Phe Phe Asp Glu Thr Arg Arg Leu Cys Asp 180 185 190 Leu Arg Leu Phe Gln Pro Phe Leu Lys Val Ile Glu Pro Val Gly Asn 195 200 205 Arg Glu Glu Lys Ile Leu Asn Arg Glu Ile Gly Phe Ala Ile Gly Met 210 215 220 Pro Val Cys Glu Phe Asp Met Val Lys Asp Pro Glu Val Gln Asp Phe 225 230 235 240 Arg Arg Asn Ile Leu Asn Val Cys Lys Glu Ala Val Asp Leu Arg Asp 245 250 255 Leu Asn Ser Pro His Ser Arg Ala Met Tyr Val Tyr Pro Pro Asn Val 260 265 270 Glu Ser Ser Pro Glu Leu Pro Lys His Ile Tyr Asn Lys Leu Asp Lys 275 280 285 Gly Gln Ile Ile Val Val Ile Trp Val Ile Val Ser Pro Asn Asn Asp 290 295 300 Lys Gln Lys Tyr Thr Leu Lys Ile Asn His Asp Cys Val Pro Glu Gln 305 310 315 320 Val Ile Ala Glu Ala Ile Arg Lys Lys Thr Arg Ser Met Leu Leu Ser 325 330 335 Ser Glu Gln Leu Lys Leu Cys Val Leu Glu Tyr Gln Gly Lys Tyr Ile 340 345 350 Leu Lys Val Cys Gly Cys Asp Glu Tyr Phe Leu Glu Lys Tyr Pro Leu 355 360 365 Ser Gln Tyr Lys Tyr Ile Arg Ser Cys Ile Met Leu Gly Arg Met Pro 370 375 380 Asn Leu Met Leu Met Ala Lys Glu Ser Leu Tyr Ser Gln Leu Pro Met 385 390 395 400 Asp Cys Phe Thr Met Pro Ser Tyr Ser Arg Arg Ile Ser Thr Ala Thr 405 410 415 Pro Tyr Met Asn Gly Glu Thr Ser Thr Lys Ser Leu Trp Val Ile Asn 420 425 430 Ser Ala Leu Arg Ile Lys Ile Leu Cys Ala Thr Tyr Val Asn Val Asn 435 440 445 Ile Arg Asp Ile Asp Lys Ile Tyr Val Arg Thr Gly Ile Tyr His Gly 450 455 460 Gly Glu Pro Leu Cys Asp Asn Val Asn Thr Gln Arg Val Pro Cys Ser 465 470 475 480 Asn Pro Arg Trp Asn Glu Trp Leu Asn Tyr Asp Ile Tyr Ile Pro Asp 485 490 495 Leu Pro Arg Ala Ala Arg Leu Cys Leu Ser Ile Cys Ser Val Lys Gly 500 505 510 Arg Lys Gly Ala Lys Glu Glu His Cys Pro Leu Ala Trp Gly Asn Ile 515 520 525 Asn Leu Phe Asp Tyr Thr Asp Thr Leu Val Ser Gly Lys Met Ala Leu 530 535 540 Asn Leu Trp Pro Val Pro His Gly Leu Glu Asp Leu Leu Asn Pro Ile 545 550 555 560 Gly Val Thr Gly Ser Asn Pro Asn Lys Glu Thr Pro Cys Leu Glu Leu 565 570 575 Glu Phe Asp Trp Phe Ser Ser Val Val Lys Phe Pro Asp Met Ser Val 580 585 590 Ile Glu Glu His Ala Asn Trp Ser Val Ser Arg Glu Ala Gly Phe Ser 595 600 605 Tyr Ser His Ala Gly Leu Ser Asn Arg Leu Ala Arg Asp Asn Glu Leu 610 615 620 Arg Glu Asn Asp Lys Glu Gln Leu Lys Ala Ile Ser Thr Arg Asp Pro 625 630 635 640 Leu Ser Glu Ile Thr Glu Gln Glu Lys Asp Phe Leu Trp Ser His Arg 645 650 655 His Tyr Cys Val Thr Ile Pro Glu Ile Leu Pro Lys Leu Leu Leu Ser 660 665 670 Val Lys Trp Asn Ser Arg Asp Glu Val Ala Gln Met Tyr Cys Leu Val 675 680 685 Lys Asp Trp Pro Pro Ile Lys Pro Glu Gln Ala Met Glu Leu Leu Asp 690 695 700 Cys Asn Tyr Pro Asp Pro Met Val Arg Gly Phe Ala Val Arg Cys Leu 705 710 715 720 Glu Lys Tyr Leu Thr Asp Asp Lys Leu Ser Gln Tyr Leu Ile Gln Leu 725 730 735 Val Gln Val Leu Lys Tyr Glu Gln Tyr Leu Asp Asn Leu Leu Val Arg 740 745 750 Phe Leu Leu Lys Lys Ala Leu Thr Asn Gln Arg Ile Gly His Phe Phe 755 760 765 Phe Trp His Leu Lys Ser Glu Met His Asn Lys Thr Val Ser Gln Arg 770 775 780 Phe Gly Leu Leu Leu Glu Ser Tyr Cys Arg Ala Cys Gly Met Tyr Leu 785 790 795 800 Lys His Leu Asn Arg Gln Val Glu Ala Met Glu Lys Leu Ile Asn Leu 805 810 815 Thr Asp Ile Leu Lys Gln Glu Lys Lys Asp Glu Thr Gln Lys Val Gln 820 825 830 Met Lys Phe Leu Val Glu Gln Met Arg Arg Pro Asp Phe Met Asp Ala 835 840 845 Leu Gln Gly Phe Leu Ser Pro Leu Asn Pro Ala His Gln Leu Gly Asn 850 855 860 Leu Arg Leu Glu Glu Cys Arg Ile Met Ser Ser Ala Lys Arg Pro Leu 865 870 875 880 Trp Leu Asn Trp Glu Asn Pro Asp Ile Met Ser Glu Leu Leu Phe Gln 885 890 895 Asn Asn Glu Ile Ile Phe Lys Asn Gly Asp Asp Leu Arg Gln Asp Met 900 905 910 Leu Thr Leu Gln Ile Ile Arg Ile Met Glu Asn Ile Trp Gln Asn Gln 915 920 925 Gly Leu Asp Leu Arg Met Leu Pro Tyr Gly Cys Leu Ser Ile Gly Asp 930 935 940 Cys Val Gly Leu Ile Glu Val Val Arg Asn Ser His Thr Ile Met Gln 945 950 955 960 Ile Gln Cys Lys Gly Gly Leu Lys Gly Ala Leu Gln Phe Asn Ser His 965 970 975 Thr Leu His Gln Trp Leu Lys Asp Lys Asn Lys Gly Glu Ile Tyr Asp 980 985 990 Ala Ala Ile Asp Leu Phe Thr Arg Ser Cys Ala Gly Tyr Cys Val Ala 995 1000 1005 Thr Phe Ile Leu Gly Ile Gly Asp Arg His Asn Ser Asn Ile Met 1010 1015 1020 Val Lys Asp Asp Gly Gln Leu Phe His Ile Asp Phe Gly His Phe 1025 1030 1035 Leu Asp His Lys Lys Lys Lys Phe Gly Tyr Lys Arg Glu Arg Val 1040 1045 1050 Pro Phe Val Leu Thr Gln Asp Phe Leu Ile Val Ile Ser Lys Gly 1055 1060 1065 Ala Gln Glu Cys Thr Lys Thr Arg Glu Phe Glu Arg Phe Gln Glu 1070 1075 1080 Met Cys Tyr Lys Ala Tyr Leu Ala Ile Arg Gln His Ala Asn Leu 1085 1090 1095 Phe Ile Asn Leu Phe Ser Met Met Leu Gly Ser Gly Met Pro Glu 1100 1105 1110 Leu Gln Ser Phe Asp Asp Ile Ala Tyr Ile Arg Lys Thr Leu Ala 1115 1120 1125 Leu Asp Lys Thr Glu Gln Glu Ala Leu Glu Tyr Phe Met Lys Gln 1130 1135 1140 Met Asn Asp Ala Arg His Gly Gly Trp Thr Thr Lys Met Asp Trp 1145 1150 1155 Ile Phe His Thr Ile Lys Gln His Ala Leu Asn Glu Leu Gly Gly 1160 1165 1170 Ala His His His His His His 1175 1180

Claims (17)

  1. 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염.
    <화학식 I>
    Figure pct00383

    상기 식에서,
    A는
    Figure pct00384
    로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로아릴을 나타내고;
    R1은 다음의 치환기: (1) 비치환 또는 치환된, 바람직하게는 치환된 C1-C7-알킬 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: 중수소, 플루오로 중 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 9개, 또는 다음의 잔기: C3-C5-시클로알킬 중 1 내지 2개로부터 독립적으로 선택됨); (2) 임의로 치환된 C3-C5-시클로알킬 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: 중수소, C1-C4-알킬 (바람직하게는 메틸), 플루오로, 시아노, 아미노카르보닐 중 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 4개로부터 독립적으로 선택됨); (3) 임의로 치환된 페닐 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: 중수소, 할로, 시아노, C1-C7-알킬, C1-C7-알킬아미노, 디(C1-C7-알킬)아미노, C1-C7-알킬아미노카르보닐, 디(C1-C7-알킬)아미노카르보닐, C1-C7-알콕시 중 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 2개로부터 독립적으로 선택됨); (4) 임의로 일치환 또는 이치환된 아민 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: 중수소, C1-C7-알킬 (이는 중수소, 플루오로, 클로로, 히드록시의 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 치환 또는 비치환됨), 페닐술포닐 (이는 1개 이상, 바람직하게는 1개의, C1-C7-알킬, C1-C7-알콕시, 디(C1-C7-알킬)아미노-C1-C7-알콕시로 치환 또는 비치환됨)로부터 독립적으로 선택됨); (5) 치환된 술포닐 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: C1-C7-알킬 (이는 중수소, 플루오로의 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 치환 또는 비치환됨), 피롤리디노 (이는 중수소, 히드록시, 옥소의 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기; 특히 1개의 옥소로 치환 또는 비치환됨)로부터 선택됨); (6) 플루오로, 클로로 중 하나를 나타내고;
    R2는 수소를 나타내고;
    R3은 (1) 수소, (2) 플루오로, 클로로, (3) 임의로 치환된 메틸 (여기서, 상기 치환기는 다음의 잔기: 중수소, 플루오로, 클로로, 디메틸아미노 중 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 3개로부터 독립적으로 선택됨)을 나타내고,
    단, (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(tert-부틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드)는 제외한다.
  2. 제1항에 있어서,
    A가
    Figure pct00385
    로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로아릴을 나타내고;
    R1이 (1) 시클로프로필메틸 또는 임의로 치환된 분지형 C3-C7-알킬 (여기서, 상기 치환기가 다음의 잔기: 중수소, 플루오로 중 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 9개로부터 독립적으로 선택됨); (2) 임의로 치환된 시클로프로필 또는 시클로부틸 (여기서, 상기 치환기가 다음의 잔기: 메틸, 중수소, 플루오로, 시아노, 아미노카르보닐 중 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 4개로부터 독립적으로 선택됨); (3) 임의로 치환된 페닐 (여기서, 상기 치환기가 다음의 잔기: 중수소, 할로, 시아노, C1-C7-알킬, C1-C7-알킬아미노, 디(C1-C7-알킬)아미노, C1-C7-알킬아미노카르보닐, 디(C1-C7-알킬)아미노카르보닐, C1-C7-알콕시 중 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 2개로부터 독립적으로 선택됨); (4) 임의로 일치환 또는 이치환된 아민 (여기서, 상기 치환기가 다음의 잔기: 중수소, C1-C7-알킬 (이는 중수소, 플루오로, 클로로, 히드록시의 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 치환 또는 비치환됨), 페닐술포닐 (이는 1개 이상, 바람직하게는 1개의, C1-C7-알킬, C1-C7-알콕시, 디(C1-C7-알킬)아미노-C1-C7-알콕시로 치환 또는 비치환됨)로부터 독립적으로 선택됨); (5) 치환된 술포닐 (여기서, 상기 치환기가 다음의 잔기: C1-C7-알킬 (이는 중수소, 플루오로의 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 치환 또는 비치환됨), 피롤리디노 (이는 중수소, 히드록시, 옥소의 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기; 특히 1개의 옥소로 치환 또는 비치환됨)로부터 선택됨); (6) 플루오로, 클로로를 나타내고;
    R2가 수소를 나타내고;
    R3이 수소, 메틸, CD3, CH2Cl, CH2F, CH2N(CH3)3을 나타내는 것인,
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(tert-부틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드)를 제외한 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, A가
    Figure pct00386
    로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로아릴을 나타내는 것인 화합물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 화학식 I의 화합물이 하기 화학식 IB의 화합물인, (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(tert-부틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드)를 제외한 화합물.
    <화학식 IB>
    Figure pct00387
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물이 하기 화학식 IA의 화합물인 화합물.
    <화학식 IA>
    Figure pct00388
  6. (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-tert-부틸-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-시클로프로필-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(2-플루오로-페닐)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-시클로부틸-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-tert-부틸-피리딘-4-일)-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-이소프로필-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-시클로부틸-피리딘-4-일)-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(1-트리플루오로메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-트리플루오로메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(1-메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(1-시아노-시클로프로필)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(1-시아노-시클로부틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(1-카르바모일-시클로부틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(2-디메틸아미노-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-디에틸아미노-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-디에틸아미노-피리딘-4-일)-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(3-tert-부틸-3H-벤조이미다졸-5-일)-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(3-tert-부틸-2-메틸-3H-벤조이미다졸-5-일)-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(3-에틸-3H-벤조이미다졸-5-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(5-{2-[1-(4-메톡시-페닐)-1-메틸-에틸]-피리딘-4-일}-4-메틸-티아졸-2-일)-아미드];
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(5-{2-[1-(4-메톡시-페닐)-1-메틸-에틸]-피리딘-4-일}-티아졸-2-일)-아미드];
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(5-{2-[1-(4-메톡시-페닐)-시클로프로필]-피리딘-4-일}-4-메틸-티아졸-2-일)-아미드];
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(5-{2-[1-(4-메톡시-페닐)-시클로프로필]-피리딘-4-일}-티아졸-2-일)-아미드];
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-{1-[4-(3-디메틸아미노-프로폭시)-페닐]-1-메틸-에틸}-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-d3-메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(1-d3-메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-d3-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-d3-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-디메틸아미노메틸-5-[2-(1-d3-메틸-시클로부틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-클로로-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-플루오로메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(5-벤젠술포닐아미노-6-클로로-피리딘-3-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(5-벤젠술포닐아미노-6-클로로-피리딘-3-일)-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(6-아미노-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-이소프로필-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-벤질-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-에틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-메톡시메틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(2,6-디클로로-벤질)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-이소부틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(4-메톡시-페녹시메틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(3-메톡시-페녹시메틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(2-플루오로-페닐)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-트리플루오로메틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1,1,2-트리메틸-프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(5-{2-[1-(4-메톡시-페닐)-1-메틸-에틸]-피리미딘-4-일}-4-메틸-티아졸-2-일)-아미드];
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1,1-디메틸-프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-메틸-1-p-톨릴-에틸)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-페닐-시클로펜틸)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-시클로프로필-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-시클로부틸-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-d9-tert-부틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2-메틸-시클로프로필)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-디에틸아미노-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리미딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(에틸-메틸-아미노)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(6-시클로프로필-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[4-메틸-5-(5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(6-d10-디에틸아미노-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(6-디에틸아미노-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-시클로프로필메틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-tert-부틸-6-메틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드);
    (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-피리딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드
    로부터 선택된, 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화합물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 약제로서 사용하기 위한 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I의 화합물.
  8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 포스파티딜이노시톨 3-키나제 (PI3K) 매개 질환의 치료에 사용하기 위한 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I의 화합물.
  9. 하나 이상의 포스파티딜이노시톨 3-키나제 (PI3K) 매개 질환의 치료용 의약의 제조를 위한, 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 화학식 I의 화합물의 용도.
  10. 포스파티딜이노시톨 3-키나제 (PI3K) 매개 질환의 치료가 필요한 대상체에게 치료 유효량의 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 화학식 I의 화합물을 투여하는 단계를 포함하는, 포스파티딜이노시톨 3-키나제 (PI3K) 매개 질환의 치료 방법.
  11. 치료 유효량의 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 화학식 I의 화합물, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
  12. 치료 유효량의 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 화학식 I의 화합물, 및 치료 유효량의 하나 이상의 조합 파트너; 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는, 동시 또는 순차 투여에 적합한 조합 제약 조성물.
  13. 제11항 또는 제12항에 있어서, 단백질 티로신 키나제 매개 질환, 특히 포스파티딜이노시톨 3-키나제 (PI3K) 매개 질환의 치료에 사용하기 위한, 제약 조성물 또는 조합 제약 조성물.
  14. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포스파티딜이노시톨 3-키나제 (PI3K) 매개 질환이 PI3K 알파 매개 질환인, 화합물, 용도 또는 치료 방법.
  15. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포스파티딜이노시톨 3-키나제 (PI3K) 매개 질환이 PI3K 알파의 과다발현 또는 증폭, PIK3CA의 체세포 돌연변이, 또는 PTEN의 배선(germline) 돌연변이 또는 체세포 돌연변이, 또는 p85-p110 복합체를 상향조절하는 역할을 하는 p85α의 돌연변이 및 전좌에 의존성인, 화합물, 용도 또는 치료 방법.
  16. 육종; 폐암; 기관지암; 전립선암; 유방암 (산발성 유방암 및 코우덴병의 환자 포함); 췌장암; 위장암; 결장암; 직장암; 결장 암종; 결장직장 선종; 갑상선암; 간암; 간내 담관암; 간세포암; 부신암; 위(stomach)암; 위(gastric)암; 신경교종; 교모세포종; 자궁내막암; 흑색종; 신장암; 신우암; 방광암; 자궁체부암; 자궁경부암; 질암; 난소암; 다발성 골수종; 식도암; 백혈병; 급성 골수성 백혈병; 만성 골수성 백혈병; 림프구성 백혈병; 골수양 백혈병; 뇌암; 뇌의 암종; 구강 및 인두암; 후두암; 소장암; 비-호지킨 림프종; 흑색종; 융모성 결장 선종; 신생물; 상피 특성의 신생물; 림프종; 유방 암종; 기저 세포 암종; 편평 세포 암종; 광선 각화증; 충실성 종양을 비롯한 종양 질환; 경부 또는 두부의 종양; 진성 적혈구증가증; 본태성 혈소판증가증; 골수양화생을 수반하는 골수섬유증; 및 발덴스트룀병으로부터 선택된, 증식성 질환; 양성 또는 악성 종양; 암의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  17. 각 경우에 임의로 희석제의 존재하에, 그리고 임의로 반응 보조제의 존재하에, 하기 화학식 II의 화합물을 활성화제의 존재하에 하기 화학식 IIIA의 화합물과 반응시키거나 ("방법 A"), 또는 하기 화학식 IIIB의 화합물과 반응시키고 ("방법 B");
    임의로, 생성된 화학식 I의 화합물을 유리 형태 또는 염의 형태로 회수하고;
    임의로, 방법 A 또는 방법 B에 따라 수득가능한 화학식 I의 화합물을 화학식 I의 다른 화합물로 전환시키고/거나, 화학식 I의 화합물의 수득가능한 염을 그의 다른 염으로 전환시키고/거나, 화학식 I의 수득가능한 유리 화합물을 그의 염으로 전환시키고/거나, 화학식 I의 화합물의 수득가능한 이성질체를 화학식 I의 하나 이상의 다른 수득가능한 이성질체로부터 분리하는 것
    을 포함하는, 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 화학식 I의 화합물의 제조 방법.
    <화학식 II>
    Figure pct00389

    <화학식 IIIA>
    Figure pct00390

    (상기 식에서, 치환기는 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같음)
    <화학식 IIIB>
    Figure pct00391

    (상기 식에서, 치환기는 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같고, RG는 반응성 기 (예컨대, 이미다졸릴카르보닐)를 나타냄)
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