CN101939319A - 联噻唑衍生物、它们的制备方法以及它们作为药物的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(I)化合物及其盐、组合物和化合物在治疗通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶减轻的疾病中的用途。

Description

联噻唑衍生物、它们的制备方法以及它们作为药物的用途
本发明涉及作为新的磷脂酰肌醇(PI)3-激酶抑制剂化合物的联噻唑衍生物、它们的可药用盐、前药以及它们的制备方法。本发明还涉及这些化合物的组合物，这些化合物单独或者与至少一种其它治疗剂组合，并且任选与可药用载体组合。本发明进一步涉及应用这些化合物(单独或与至少一种其它治疗剂组合)预防或治疗多种疾病、特别是那些由一种或多种生长因子、受体酪氨酸激酶、蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶、G蛋白偶联受体和磷脂激酶及磷酸酶的异常活性介导的疾病的方法。
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)包括脂类激酶家族，它们能够催化磷酸酯向肌醇脂类的D-3’位转化，从而产生磷酸肌醇-3-磷酸酯(PIP)、磷酸肌醇-3，4-二磷酸酯(PIP2)和磷酸肌醇-3，4，5-三磷酸酯(PIP3)，然后它们通过含有血小板-白细胞C激酶底物同系、FYVE、Phox及其它磷脂-结合域的停靠蛋白在信号级联放大中用作第二信使，进入通常位于浆膜的各种信号传导复合体中(Vanhaesebroeck等人，Annu.Rev.Biochem 70：535(2001)；Katso等人，Annu.Rev.Cell Dev.Biol. 17：615(2001))。在两种1类PI3K中，1A类PI3K是由具有催化性的p110亚单位(α、β、δ同种型)组成的杂二聚体，所述亚单位在结构上与调节亚单位(可以是p85α、p55α，p50α，p85β或p55γ)有关。1B类亚类具有一个家族成员，它是由具有催化性的p110γ亚单位组成的杂二聚体，该亚单位与两种调节亚单位(p101或p84)之一有关(Fruman等人，Annu Rev.Biochem.67：481(1998)；Suire等人，Curr.Biol. 15：566(2005))。p85/55/50亚单位的调节域包括Src同源性(SH2)域，它与活化的受体和细胞质酪氨酸激酶上特殊序列背景中的磷酸酪氨酸残基结合，导致1A类PI3K的活化和定位。1B类PI3K通过G蛋白-偶联受体直接活化，它与肽和非肽配体的不同组成部分结合(Stephens等人，Cell 89：105(1997))；Katso等人，Annu.Rev.Cell Dev.Biol. 17：615-675(2001))。因此，得到的I类PI3K的磷脂产物与具有下游细胞活性的上游受体连接，所述活性包括增殖、存活、趋化性、细胞运输(cellular trafficking)、运动性、代谢、炎性和过敏反应、转录以及翻译(Cantley等人，Cell64：281(1991)；Escobedo和Williams，Nature 335：85(1988)；Fantl等人，Cell69：413(1992))。
在许多情况下，PIP2和PIP3募集Akt，它是病毒致癌基因v-Akt的人类同源物的产物，对于浆膜而言，它用作多种细胞内信号传导途径(对于生长和存活非常重要)的节点(Fantl等人，Cell69：413-423(1992)；Bader等人，Nature Rev.Cancer 5：921(2005)；Vivanco和Sawyer，Nature Rev.Cancer 2：489(2002))。PI3K的异常调节(通常通过Akt的活化而增加存活)是在人类癌症中最普遍的事件之一，并且已经在多种水平上显示其存在。肿瘤抑制因子基因PTEN在肌醇环的3’位上将磷酸肌醇脱磷酸化，并且籍此拮抗PI3K的活性，但在多种肿瘤中它被除去功能。在其它肿瘤中，p110α同种型的基因(PIK3CA)以及Akt的基因被扩增，并且它们的基因产物的蛋白表达的增加在数种人类癌症中已经得到证明。另外，用于上调p85-p110复合体的p85α的突变和易位在人类癌症中已有报道。最后，在PIK3CA中的活化下游信号传导途径的体细胞错义突变在多种不同的人类癌症中都有广泛的报道(Kang等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102：802(2005)；Samuels等人，Science 304：554(2004)；Samuels等人，Cancer Cell7：561-573(2005))。这些报道显示磷酸肌醇-3激酶以及该信号传导途径的上游和下游组分的失调是与人类癌症和增殖性疾病有关的最常见的失调之一(Parsons等人，Nature 436：792(2005)；Hennessey等人，Nature Rev.DrugDis.4：988-1004(2005))。
考虑到上述内容，PI3K抑制剂将在治疗增殖性疾病和其它障碍中特别有价值。
WO 2006/125805公开了某些作为PI3激酶抑制剂的噻唑衍生物以及它们作为药物的用途。
WO 2005/068444也公开了某些作为PI3激酶抑制剂的噻唑衍生物以及它们作为药物的用途。
现在发现下文给出的式I的联噻唑衍生物具有有利的药理学性质并且抑制例如PI3激酶(磷脂酰肌醇3-激酶)。特别的是，这些化合物在生物化学和细胞试验中显示出对PI3Kα具有高度选择性(与β、δ和γ亚型相比)。因此，式I化合物适合例如用于治疗依赖于PI3激酶(特别是PI3Kα)的疾病，特别是增殖性疾病，例如肿瘤疾病、白血病、真性红细胞增多症、原发性血小板增多和骨髓纤维化伴骨髓外化生。
一方面，本发明提供了式I化合物或其盐
Figure BPA00001195230600031
其中
n表示0或1；
m表示0、1、2、3或4；
R1表示氢或不同于氢的取代基；
R2表示卤素、氰基、硝基、羟基、苯基、低级烷基、低级烷氧基、低级烷基氨基、低级二烷基氨基、环烷基、环烷氧基，其中每个烷基或环烷基可以被卤素、氰基、硝基、羟基、苯基单或多取代，并且其中每个苯基可以被卤素、氰基、硝基、羟基、低级烷基单或多取代；
或者
两个R2取代基一起形成烷二基或烯二基以形成环状基团，每个任选被羟基或卤素取代；
或者
两个R2邻位取代基一起形成键以形成双键；
R3表示氢、CH3、CH2OH、CH2F。
通过参考以下描述、包括以下术语表和包括的实施例可以更完全地理解本发明。为了简洁，将本说明书中引用的出版物的公开内容并入本文作为参考。本文中所用的术语“包括”和“包含”以它们的开放、非限制性含义应用。
本文给出的任何化学式旨在表示具有结构式以及某些变通实施方案或形式中描述的结构的化合物。特别的是，本文给出的任何化学式的化合物可以具有不对称中心，并且因此以不同的对映异构体形式存在。如果式I化合物中存在至少一个不对称碳原子，该化合物可以以旋光活性形式或旋光异构体混合物形式、例如以外消旋混合物形式存在。所有的旋光异构体及其混合物、包括外消旋混合物是本发明的部分。因此，任何本文给出的化学式旨在表示外消旋体、一种或多种对映异构体形式、一种或多种非对映异构体形式、一种或多种阻转异构体形式以及它们的混合物。另外，某些结构可以作为几何异构体(即顺式和反式异构体)、作为互变异构体或作为阻转异构体存在。
本文给出的任何化学式旨在表示此类化合物的水合物、溶剂化物和多晶型物及其混合物。
本文给出的任何化学式也旨在表示化合物的未标记的形式以及同位素标记的形式。同位素标记的化合物具有本文给出的化学式描述的结构，除了一个或多个原子被具有选择的原子质量或原子质量数的原子所代替。可以引入本发明化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分别例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F、31p、32p、35S、36Cl、125I。多种同位素标记的本发明化合物、例如掺入放射性同位素例如3H、13C和14C的那些。此类同位素标记的化合物可以用于代谢研究(优选用14C)、反应动力学研究(用例如2H或3H)、检测或成像技术[例如正电子发射体层摄影术(PET)或单光子发射计算机体层摄影术(SPECT)包括药物或底物组织分布分析，或患者的放射性治疗。特别的是，18F或标记的化合物可以特别优选用于PET或SPECT研究。进一步的是，用较重的同位素例如氘(即2H)取代可以实现某些由较大的代谢稳定性引起的治疗益处，例如体内半衰期增加或剂量需求减少。本发明的同位素标记的化合物及其前药通常可以通过进行流程图或实施例和以下描述的制备中公开的方法制备，通过用已经获得的同位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂实现。
进一步的是，用较重的同位素、特别是氘(即2H或D)取代可以实现某些由较大的代谢稳定性引起的治疗益处，例如体内半衰期增加或剂量需求减少或治疗指数的改善。应当理解的是，在上下文中氘是式(I)化合物的取代基。此类较重的同位素、特别是氘的浓度可以通过同位素富集因子确定。本文所用的术语“同位素富集因子”指的是同位素丰度和特别的同位素的天然丰度之间的比值。如果本发明化合物中的取代基被指定为氘，那么此类化合物具有每个设计的氘原子的同位素富集因子为至少3500(在每个设计的氘原子处52.5％氘掺入)、至少4000(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少6600(99％氘掺入)或至少6633.3(99.5％氘掺入)。在本发明的化合物中，任何未特别设计为特别的同位素的原子旨在表示任何该原子的稳定的同位素。除非另外说明，否则当某个位置被特别设计为“H”或“氢”时，该位置被理解为具有其天然丰度同位素组合物的氢。因此，在本发明化合物中，任何被特别设计为氘(D)的原子旨在表示氘、例如在以上给出的范围内。
当涉及本文给出的任何化学式时，从特别变量的可能种类的列表中选择特别的基团不旨在定义其它地方出现的变量的基团。换言之，当变量出现一次以上时，从特别列表选择种类独立于在该化学式的其它地方选择相同变量的种类(其中实施方案中表征为上下文优选的一个或多个、至多所有更通用的表达可以被更具体的定义代替，因此分别产生本发明更优选的实施方案)。
当应用复数形式(例如多种化合物、盐)时，其包括单数(例如一种化合物、一种盐)。“化合物”不排除(例如在药物制剂中)多于一种式I化合物(或其盐)存在。
式I化合物的盐优选是可药用盐；此类盐是本领域已知的。
除非另外说明，否则以下通用定义将应用于本说明书：
卤素(或卤代)指的是氟、溴、氯或碘，特别是氟、氯。卤素取代的基团和部分，例如被卤素取代的烷基(卤代烷基)可以是单-、多-或全卤代的。
杂原子是除了碳和氢以外的原子，优选氮(N)、氧(O)或硫(S)，特别是氮。
含碳基团、部分或分子包含1至7个、优选1至6个、更优选1至4个、最优选1或2个碳原子。任何具有多于1个碳原子的非环含碳基团或部分是直链的或支链的。
前缀“低级”或“C1-C7”指的是具有至多并且包括最大值7个、特别是至多并且包括最大值4个碳原子的基团，所述基团是直链的或者具有一个或多个分支的支链的。
“烷基”指的是直链或支链烷基，优选表示直链或支链C1-12烷基，特别优选表示直链或支链C1-7烷基；例如甲基、乙基、正丙基或异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基、正十一烷基、正十二烷基，特别优选甲基、乙基、正丙基、异丙基以及正丁基和异丁基。烷基可以是未取代的或取代的。取代基的实例包括但不限于羟基、烷氧基、卤素和氨基。取代的烷基的实例是三氟甲基。环烷基也可以是烷基的取代基。此种情况的实例是基团(烷基)-环丙基或烷二基-环丙基，例如-CH2-环丙基。C1-C7-烷基优选具有从并且包括1至并且包括7、优选从并且包括1至并且包括4并且是直链的或支链的烷基；优选低级烷基是丁基例如正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、丙基例如正丙基或异丙基、乙基或者优选甲基。
其它基团如“烷氧基”、“烷氧基烷基”、“烷氧基羰基”、“烷氧基羰基烷基”、“烷基磺酰基”、“烷基次硫酰基(sulfoxyl)”、“烷基氨基”、“卤代烷基”的每个烷基部分应当具有与上述“烷基”定义中描述的相同含义。
“烷二基”指的是通过两个不同的碳原子与基团连接的直链或支链烷二基，其优选表示直链或支链C1-12烷二基，特别优选表示直链或支链C1-6烷二基；例如甲烷二基(-CH2-)、1，2-乙烷二基(-CH2-CH2-)、1，1-乙烷二基((-CH(CH3)-)、1，1-丙烷二基、1，2-丙烷二基、1，3-丙烷二基和1，1-丁烷二基、1，2-丁烷二基、1，3-丁烷二基、1，4-丁烷二基，特别优选甲烷二基、1，1-乙烷二基、1，2-乙烷二基、1，3-丙烷二基、1，4-丁烷二基。
“烯二基”指的是通过两个不同的碳原子与分子键合的直链或支链烯二基，其优选表示直链或支链C2-6烷二基；例如-CH＝CH-、-CH＝C(CH3)-、-CH＝CH-CH2-、-C(CH3)＝CH-CH2-、-CH＝C(CH3)-CH2-、-CH＝CH-C(CH3)H-、-CH＝CH-CH＝CH-、-C(CH3)＝CH-CH＝CH-、-CH＝C(CH3)-CH＝CH-，特别优选-CH＝CH-CH2-、-CH＝CH-CH＝CH-。烯二基可以是取代的或未取代的。
“环烷基”指的是饱和的或部分饱和的、单环、稠合的多环或螺多环碳环，每个碳环具有3至12个环原子。环烷基的说明性实例包括以下基团：环丙基、环丁基、环戊基和环己基。环烷基可以是未取代的或取代的；示例性取代基在烷基的定义中提供。
“芳基”指的是具有6个或更多个碳原子的芳族碳环环系；芳基优选是具有6至14个环碳原子、更优选具有6至10个环碳原子的芳族基团，例如苯基或萘基，优选苯基。芳基可以是未取代的或者被一个或多个、优选至多3个、更优选至多2个独立地选自下列的取代基取代：下述未取代的或取代的杂环基，特别是吡咯烷基，例如吡咯烷子基、氧代吡咯烷基例如氧代吡咯烷子基、C1-C7-烷基-吡咯烷基、2，5-二-(C1-C7烷基)吡咯烷基例如2，5-二-(C1-C7烷基)-吡咯烷子基、四氢呋喃基、噻吩基、C1-C7-烷基吡唑烷基、吡啶基、C1-C7-烷基哌啶基、哌啶子基、被氨基或者N-单-或N，N-二-[低级烷基、苯基、C1-C7-烷酰基和/或苯基-低级烷基)-氨基取代的哌啶子基、通过环碳原子键合的未取代的或者N-低级烷基取代的哌啶基；哌嗪子基、低级烷基哌嗪子基、吗啉代、硫代吗啉代、S-氧代-硫代吗啉代或S，S-二氧代硫代吗啉代；C1-C7-烷基、氨基-C1-C7-烷基、N-C1-C7-烷酰基氨基-C1-C7-烷基、N-C1-C7-烷磺酰基-氨基-C1-C7-烷基、氨基甲酰基-C1-C7-烷基、[N-单-或N，N-二-(C1-C7-烷基)-氨基甲酰基]-C1-C7-烷基、C1-C7-烷亚磺酰基-C1-C7-烷基、C1-C7-烷磺酰基-C1-C7-烷基、苯基、萘基、单-至三-[C1-C7-烷基、卤素和/或氰基]-苯基或单-至三-[C1-C7-烷基、卤素和/或氰基]-萘基；C3-C8-环烷基、单-至三-[C1-C7-烷基和/或羟基]-C3-C8-环烷基；卤素、羟基、低级烷氧基、低级-烷氧基-低级烷氧基、(低级-烷氧基)-低级烷氧基-低级烷氧基、卤素-C1-C7-烷氧基、苯氧基、萘氧基、苯基-或萘基-低级烷氧基；氨基-C1-C7-烷氧基、低级-烷酰基氧基、苯甲酰基氧基、萘甲酰基氧基、甲酰基(CHO)、氨基、N-单-或N，N-二-(C1-C7-烷基)-氨基、C1-C7-烷酰基氮基、C1-C7-烷磺酰基氨基、羧基、低级烷氧基羰基，例如苯基-或萘基-低级烷氧基羰基，例如苄基氧基羰基；C1-C7-烷酰基，例如乙酰基、苯甲酰基、萘甲酰基、氨基甲酰基、N-单-或N，N-二取代的氨基甲酰基，例如N-单-或N，N-二-取代的氨基甲酰基，其中取代基选自低级烷基、(低级-烷氧基)-低级烷基和羟基-低级烷基；脒基、胍基、脲基、巯基、低级烷基硫代、苯基-或萘基硫代、苯基-或萘基-低级烷基硫代、低级烷基-苯基硫代、低级烷基-萘基硫代、卤素-低级烷基巯基、磺基(-SO3H)、低级烷磺酰基、苯基-或萘基-磺酰基、苯基-或萘基-低级烷基磺酰基、烷基苯基磺酰基、卤素-低级烷基磺酰基，例如三氟甲磺酰基；亚磺酰氨基、苯并亚磺酰氨基、叠氮基、叠氮基-C1-C7-烷基特别是叠氮基甲基、C1-C7-烷磺酰基、氨磺酰基、N-单-或N，N-二-(C1-C7-烷基)-氨磺酰基、吗啉代磺酰基、硫代吗啉代磺酰基、氰基和硝基；其中每个上述作为取代的烷基(或也可以是本文提及的取代的芳基、杂环基等)的取代基或取代基的部分的苯基或萘基(也在苯氧基或萘氧基中)本身是未取代的或者被一个或多个、例如至多三个、优选1或2个独立地选自下列的取代基取代：卤素、卤素-低级烷基例如三氟甲基、羟基、低级烷氧基、叠氮基、氨基、N-单-或N，N-二-(低级烷基和/或C1-C7-烷酰基)-氨基、硝基、羧基、低级-烷氧基羰基、氨基甲酰基、氰基和/或氨磺酰基。
“杂环基”指的是不饱和的(＝环中带有最高可能数量的共轭双键)、饱和的或部分饱和的杂环基，并且优选单环或者在本发明最广的方面是二环、三环或螺环；并且具有3至24个、更优选4至16个、最优选5至10个并且最优选5或6个环原子；其中一个或多个、优选1至4个、特别是1个或2个碳环原子被杂原子代替，键合的环优选具有4至12个、特别是5至7个环原子。杂环基可以是未取代的或者被一个或多个、特别是1至3个独立地选自如上取代的烷基中定义的取代基和/或一个或多个以下取代基取代：氧代(＝O)、硫代羰基(＝S)、亚氨基(＝NH)、亚氨基-低级烷基。进一步的是，杂环基特别是选自下列的杂环基：环氧乙烷基、氮丙啶基(azirinyl)、吖丙啶基、1，2-氧杂硫杂环戊烷基、噻吩基(＝噻吩基)、呋喃基、四氢呋喃基、吡喃基、噻喃基、噻蒽基、异苯并呋喃基、苯并呋喃基、色烯基、2H-吡咯基、吡咯基、吡咯啉基、吡咯烷基、咪唑基、咪唑烷基、苯并咪唑基、吡唑基、吡嗪基、吡唑烷基、噻唑基、异噻唑基、二噻唑基、
Figure BPA00001195230600091
唑基、异
Figure BPA00001195230600092
唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哌啶基、哌嗪基、哒嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、(S-氧代或S，S-二氧代)-硫代吗啉基、中氮茚基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基特别是1，4-二氮杂环庚烷基、异吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、苯并咪唑基、香豆素基(cumaryl)、吲唑基、三唑基、四唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、异喹啉基、喹啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、八氢异喹啉基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、苯并噻吩基、二苯并噻吩基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、喹唑啉基、 噌啉基、蝶啶基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、
Figure BPA00001195230600093
啶基、菲咯啉基、呋咱基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩
Figure BPA00001195230600094
嗪基、色烯基、异色满基、色满基、苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基和2，3-二氢-苯并[1，4]二烯-6-基，这些基团中的每个是未取代的或者被一个或多个、优选至多三个选自以上取代的芳基中提及的取代基和/或一个或多个以下取代基取代：氧代(＝O)、硫代羰基(＝S)、亚氨基(＝NH)、亚氨基-低级烷基。
“芳基烷基”指的是通过烷基例如甲基或乙基与分子键合的芳基，优选苯乙基或苄基，特别是苄基。类似地，环烷基烷基和杂环基表示通过烷基与分子键合的环烷基或者通过烷基与分子键合的杂环基。在每种情况中，芳基、杂环基、环烷基和烷基可以如上定义的被取代。
“治疗”包括预防性(防止性)和治疗性治疗以及延迟疾病或障碍的进程。
“PI3激酶介导的疾病”(特别是PI3Kα介导的疾病)特别是例如以有益的方式(例如改善一种或多种症状、延迟疾病的发作、至多暂时或完全治愈疾病)对PI3激酶的抑制、特别是PI3Kα的抑制具有响应的障碍(其中待治疗的疾病特别可以提及增殖性疾病例如肿瘤疾病、白血病、真性红细胞增多症、原发性血小板增多和骨髓纤维化伴骨髓外化生)。
“盐”(“或其盐”)可以单独存在或者与游离的式I化合物混合存在，并且优选可药用盐。此类盐是例如优选与有机或无机酸形成的酸加成盐，由式I化合物与碱性氮原子形成，特别是可药用盐。适合的无机酸是例如氢卤酸例如盐酸、硫酸或磷酸。适合的有机酸是例如羧酸或磺酸，例如富马酸或甲磺酸。对于分离或纯化目的，也可以应用不可药用盐，例如苦味酸盐或高氯酸盐。对于治疗应用，仅可以应用可药用盐或游离化合物(可以以药物制剂的形式应用)，并且因此这些是优选的。由于游离形式的新化合物与它们的盐形式(包括可以用作中间体的那些盐)之间例如在纯化或鉴定新化合物中的密切关系，适合并且方便的时候，上下文中任何涉及游离化合物的地方应当被理解为也指相应的盐。
组合指的是在一个剂量单位形式中的固定组合，或者用于组合施用的部分的药盒，其中式I化合物和组合伴侣(例如下文解释的另外的药物，也称为“治疗剂”或“共同-活性剂”)可以在相同时间独立施用或者在一定时间间隔内分开施用，特别是这些时间间隔使组合伴侣显示出合作、例如协同作用。本文所用的术语“共同施用”或“组合施用”等指的是包括给需要的单一个体(例如患者)施用选择的组合伴侣，并且旨在包括治疗方案，其中不需要通过相同的施用途径或在相同时间施用活性剂。本文所用的术语“药物组合”指的是将多于一种活性成分混合或组合形成的产品，并且包括活性成分的固定组合和非固定组合。术语“固定组合”指的是将活性成分例如式I化合物和组合伴侣以单一实体或剂型的形式同时施用于患者。术语“非固定组合”指的是将活性成分例如式I化合物和组合伴侣作为分别的实体同时、共同或依次、没有特别的时间限制施用于患者，其中此类施用在患者体内提供了治疗有效水平的两种化合物。后者也应用于鸡尾酒疗法，例如施用三种或多种活性成分。
在优选的实施方案中，其是独立地优选的、共同优选的或以任何组合或亚组合优选的，本发明涉及游离碱形式或酸加成盐形式的式I化合物，其中取代基如本文定义的。
在进一步的实施方案中，本发明涉及式I化合物，其在含氮杂环的2位具有以下定义的立体化学，所述化合物由式I’表示：
Figure BPA00001195230600111
在另一个实施方案中，本发明涉及式I化合物，其中n是1，并且其由式IA表示：
Figure BPA00001195230600112
其中取代基如式I化合物中定义的并且m表示0、1或2。
在进一步的实施方案中，本发明涉及式I化合物，其中n是0，并且其由式IB表示：
Figure BPA00001195230600113
其中取代基如式I化合物中定义的并且m表示0或1。
式IA和IB优选的实施方案包括分别在吡咯烷和氮杂环丁烷环的2位具有与式I’中的吡咯烷环显示的相同的立体化学。
以下优选的特征应用于本文的任何式，特别是应用于式I、IA、IB、IC和/或(I’)。
R1优选表示低级烷基、低级环烷基、低级烷氧基、低级烷基氨基、低级环烷基氨基、低级二烷基氨基、低级二烷基氨基低级烷基、低级烷基羰基、低级烷氧基羰基、低级烷基硫化物、低级烷基砜、低级烷基亚砜、低级烷基氨磺酰基、低级烷基磺酰胺基(sulfoxamide)、芳基、芳基氧基、芳基氨基、二芳基氨基、芳基烷基氨基、芳基羰基、芳基氧基羰基、芳基硫化物、芳基砜、芳基亚砜、芳基氨磺酰基、芳基磺酰胺基、杂环基、杂环基氨基，其中每个烷基、环烷基、芳基或杂环基可以任选被一个或多个取代基取代。
R1特别优选表示C1-C7-烷基、C3-C6-环烷基、1-(C1-C7-烷基)-C3-C6-环烷基、C3-C6-环烷基C1-C7-烷基、C1-C7-烷氧基、C1-C7-烷基氨基、C3-C6-环烷基氨基、二-C1-C7-烷基氨基、二-C1-C7-烷基氨基C1-C7-烷基、C1-C7-烷基羰基、C1-C7-烷氧基羰基、C1-C7-烷基硫化物、C1-C7-烷基砜、C1-C7-烷基亚砜、C1-C7-烷基氨磺酰基、C1-C7-烷基磺酰胺基、3-氮杂-二环[3.2.2]壬-3-基、吡啶基、吡啶基氨基、噻唑基、苯基、苯基氧基、苯基氨基、二-苯基氨基、苯基-C1-C7-烷基氨基、苯甲酰基、苯氧基羰基、苯基硫化物、苯基亚砜、苯基砜、苯基氨磺酰基、苯基磺酰胺基，其中每个C1-C7-烷基、C1-C7-环烷基、吡啶基、噻唑基或苯基可以任选被取代；所述的取代基独立地选自一个或多个、优选1至4个以下基团：
卤素、羟基、氰基、硝基、氨基、C1-C7-烷基、氨基-C1-C7-烷基、卤素-C1-C7-烷基、N-C1-C7-烷酰基氨基-C1-C7-烷基、N-C1-C7-烷磺酰基-氨基-C1-C7-烷基、C1-C7-烷亚磺酰基-C1-C7-烷基、C1-C7-烷磺酰基-C1-C7-烷基、C1-C7-烷氧基、N-单-或N，N-二-(C1-C7-烷基)-氨基、N-单-或N，N-二-(C1-C7-烷基、卤素-C1-C7-烷基、苯基)-磺酰基-氨基、C1-C7-烷酰基氨基，
磺基、C1-C7-烷磺酰基、C1-C7-烷亚磺酰基、氨磺酰基、氨基-磺酰基、N-单-或N，N-二-(C1-C7-烷基)-磺酰基、N-单-或N，N-二-(C1-C7-烷基)氨基-磺酰基、脯氨酸-N-羰基氨基磺酰基。
R1非常特别优选表示C1-C4-烷基(特别是甲基、异丙基、1-乙基丙基、叔丁基)、C3-C6-环烷基(特别是环丙基或环丁基)、1-(C1-C4-烷基)-C3-C6-环烷基(特别是1-甲基-环丙基)、1-(卤素-C1-C4-烷基)-C3-C6-环烷基(特别是1-三氟甲基-环丙基)、C3-C6-环烷基C1-C4-烷基(特别是环丙基甲基)、卤素-C1-C4-烷基(特别是CF3)、C1-C7-烷氧基、C1-C4-烷基氨基、二-C1-C4-烷基氨基(特别是二甲基氨基)、二-C1-C7-烷基氨基C1-C7-烷基(特别是二甲基氨基甲基)、C3-C6-环烷基氨基(特别是环丙基氨基)、C1-C4-烷基砜(特别是H3CSO2-)、C1-C4-烷基磺酰氨基(sulfonamino)(特别是H3CSO2NH-)、3-氮杂-二环[3.2.2]壬-3-基、吡啶基(特别是3-吡啶基)、吡啶基氨基(特别是3-吡啶基氨基)、噻唑基(特别是噻唑-4-基)、取代的噻唑基(特别是甲基噻唑基，特别是2-甲基噻唑-4-基)、苯基、苯基氨基、二-苯基氨基、苯基氨磺酰基、苯基磺酰胺基，其中每个苯基可以被一个或多个、优选一个选自下列的取代基取代：卤素(特别是F或Cl，例如卤素苯基，例如氟苯基、氯苯基氨基，更特别是2-或3-卤素苯基，例如2-氟苯基、3-氯苯基氨基)、氨基磺酰基、磺酰氨基、C1-C4-烷基-磺酰氨基(特别是H3CSO2NH-或PhSO2NH2-)、氨磺酰基(NH2SO2-)、取代的氨磺酰基(例如(2-氨基甲酰基-吡咯烷-1-羰基)-氨磺酰基)。
R2优选表示卤素、氰基、硝基、羟基、C1-C7-烷基、C1-C7-烷基氧基、C3-C6-环烷基、C3-C6-环烷基氧基、C1-C7-烷基氨基、二-C1-C7-烷基氨基、苯基，其中每个烷基、环烷基或苯基可以被以下基团单或二取代：氟、氯、氰基、羟基、苯基。
R2优选与进一步的取代基R2一起表示基团-CH2-；-CH(CH3)-、-C(CH3)2-；-CH2-CH2-、-CH＝CH-，从而形成二环基团。
R2优选与进一步的取代基R2一起表示键，以形成不饱和的基团。
R2特别优选表示羟基、甲基、N，N-二甲基氨基、氟；更优选羟基、甲基、N，N-二甲基氨基。
R2优选与进一步的取代基R2一起表示基团-CH2-。
R2优选与进一步的取代基R2一起表示键，以形成双键。
R3优选表示氢或甲基。
R3特别优选表示甲基。
m优选表示0、1或2，可选择的是m表示0或1。
m进一步可选择的是表示0。
n优选表示1。
本发明的一个实施方案包括式IC化合物或其盐
Figure BPA00001195230600141
其中
n表示0或1；
m表示0、1、2、3或4；
R1表示氢或不同于氢的取代基；
R2表示卤素、氰基、硝基、羟基、苯基、低级烷基、低级烷氧基、低级烷基氨基、低级二烷基氨基、环烷基、环烷氧基，其中每个烷基或环烷基可以被以下基团单或多取代：卤素、氰基、硝基、羟基、苯基，并且其中每个苯基可以被以下基团单或多取代：卤素、氰基、硝基、羟基、低级烷基；
或者
两个取代基一起形成烷二基或烯二基，每个任选被羟基或卤素取代以形成二环基团；
或者
两个取代基一起形成键以形成不饱和的基团；
R3表示氢、CH3、CH2OH、CH2F。
本发明进一步的实施方案涉及式(I)化合物，但是除了其中m不是0(零)的式(I)化合物。
本发明进一步涉及式(I)化合物的可药用前药。
本发明进一步涉及式(I)化合物的可药用代谢物。
本发明特别涉及实施例中给出的式I化合物以及其中描述的制备方法。
本发明还涉及制备式I化合物的方法。通常，所有已知的将两种不同的胺转化为相应的脲衍生物的方法是适合的并且可以通过应用不同的原料来应用。
因此，本发明特别涉及第一种方法，该方法包括将式II化合物
Figure BPA00001195230600151
其中取代基如以上定义，或者在活化剂的存在下与式IIIA化合物反应
Figure BPA00001195230600152
其中取代基如以上定义并且R3还可以表示CH2Cl(“方法A”)，或者与式IIIB化合物反应
Figure BPA00001195230600153
其中R1如以上定义；RG表示反应基团(例如咪唑基羰基)并且R3如以上定义并且还可以表示CH2Cl(“方法B”)
在每种情况中，任选在稀释剂的存在下并且任选在反应助剂的存在下，并且
回收产生的游离形式或盐形式的式I化合物，并且
任选将根据方法A或方法B可获得的式I化合物转化为不同的式I化合物，和/或将可获得的式I化合物的盐转化为其不同的盐，和/或将可获得的游离的式I化合物转化为其盐，和/或从一种或多种不同的可获得的式I化合物的异构体中分离可获得的式I化合物的异构体。
可选择的是，本发明还涉及制备式I化合物的方法。通常，所有已知的将胺转化为相应的氨磺酰基衍生物的方法是适合的并且可以通过应用不同的原料来应用。
本发明进一步涉及第二种方法，该方法包括将式IV化合物
Figure BPA00001195230600161
其中取代基如以上定义并且R4表示任选取代的烷基或任选取代的苯基，与式V化合物反应
Figure BPA00001195230600162
在每种情况中，任选在稀释剂的存在下并且任选在反应助剂的存在下，并且
回收产生的游离形式或盐形式的式I化合物，并且
任选将根据方法A或方法B可获得的式I化合物转化为不同的式I化合物，和/或将可获得的式I化合物的盐转化为其不同的盐，和/或将可获得的游离的式I化合物转化为其盐，和/或从一种或多种不同的可获得的式I化合物的异构体中分离可获得的式I化合物的异构体。
反应条件
该方法可以根据本领域已知的方法进行，或者如以下实施例中公开的方法进行。例如，可以将式II化合物与式III化合物在溶剂例如二甲基甲酰胺中，在碱例如有机胺例如三乙胺的存在下反应。
其中温度在上下文中给出，“约”需要在给出数值上加上较小的数值，例如变量±10％是允许的。
所有的反应可以在一种或多种稀释剂和/或溶剂的存在下进行。原料可以以等摩尔量应用；可选择的是，化合物可以以过量应用，例如用作溶剂或移位平衡或通常加快反应速率。
反应助剂，例如酸、碱或催化剂可以以适合的量加入，如本领域所知的，这是反应的需要并且与通常已知的方法一致。
保护基
如果一个或多个其它官能团例如羧基、羟基、氨基、巯基等是或者需要在本文描述的原料或者任何其它前体中被保护，因为它们不应当参与反应或者干扰反应，这些是例如通常用于合成肽化合物以及头孢菌素和青霉素以及核酸衍生物和糖的基团。保护基是例如一旦除去就不存在于最终化合物中的基团，而留下作为取代基的基团在本文应用的范围内不是保护基，它们是在原料或中间体阶段加入并且除去以获得最终化合物的基团。在将式I化合物转化为不同的式I化合物的情况中，如果可用并且需要，可以引入并且除去保护基。
保护基可以已经存在于前体中并且应当保护有关官能团免于不希望的二级反应，例如酰基化、醚化、酯化、氧化、溶剂解和类似的反应。保护基的特征在于它们可以易于除去(即没有不需要的二级反应发生)，典型地通过乙酰解、质子分解、溶剂解、还原、光解或者通过酶活性例如在类似于生理学条件下除去，并且它们不存在于终产物中。技术人员已知或可以容易地确定哪些保护基适合上下文提及的反应。
通过此类保护基的官能团的保护、保护基本身以及它们的除去反应例如在标准参考文献中描述，例如J.F.W.McOmie，“Protective Groups inOrganic Chemistry(有机化学中的保护基)”，Plenum Press，London andNew York 1973；T.W.Greene“Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保护基)”，第三版，Wiley，New York 1999；“The Peptides(肽)”，第3卷(编者：E.Gross和J.Meienhofer)，Academic Press，Londonand New York 1981；“Methoden der organischen Chemie”(Methods ofOrganic Chemistry(有机化学方法))，Houben WeyL，第四版，15/I卷，Georg Thieme Verlag，Stuttgart 1974；H.-D.Jakubke和H.Jeschkeit， “
Figure BPA00001195230600171
，Peptides，Proteine”(Amino acids，peptides，proteins(氨基酸、肽、蛋白质))，Verlag Chemie，Weinheim，Deerfield Beach和Basel 1982；以及Jochen Lehmann，“Chemie der Kohlenhydrate：Monosaccharide undDerivate”(Chemistry of carbohydrate：monosaccharides and derivatives(碳水化合物：单糖及其衍生物))，Georg Thieme Verlag，Stuttgart 1974。
任选反应和转化
式I化合物可以转化为不同的式I化合物。
在式I化合物中，其中R3表示氟或羟基；该化合物可以通过将相应的氯衍生物转化为羟基或氟化合物而获得。该反应是已知的并且参考取代反应。该转化可以在式(IIIA或B)的原料步骤中进行或者通过转化相应的式I化合物进行。
在式I化合物中，其中取代基带有氨基或氨基-C1-C7-烷基取代基，氨基可以转化为酰基氨基，例如C1-C7-烷酰基氨基或C1-C7-烷磺酰基氨基，其通过与相应的C1-C7-烷酰基卤化物或C1-C7-烷磺酰基卤化合物例如相应的氯化物，在叔氮碱例如三乙胺或吡啶的存在下，没有或有相应的溶剂例如二氯甲烷的存在下，例如在温度范围为-20至50℃例如在约室温下反应而实现。
在式I化合物中，其中取代基带有氰基取代基，氰基可以转化为氨基甲基，例如通过在适合的金属催化剂例如Raney镍或Raney钴的存在下，在适合的溶剂例如低级链烷醇例如甲醇和/或乙醇中，例如在温度范围为-20至50℃，例如在约室温下氢化而实现。
在式I化合物中，其中取代基带有羧基(COOH)取代基，后者可以转化为酰胺基，例如N-C1-C7-烷基-氨基甲酰基，通过与相应的胺，例如在偶联剂的存在下反应，其原位形成优选的羧基的反应性衍生物，例如二环己基碳二亚胺/1-羟基苯并三唑(DCC/HOBT)；双(2-氧代-3-唑烷基)次膦酰氯(BOPCl)；O-(1，2-二氢-2-氧代-1-吡啶基)-N，N，N’，N’-四甲基脲
Figure BPA00001195230600182
四氟硼酸盐(TPTU)；O-苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲
Figure BPA00001195230600183
四氟硼酸盐(TBTU)；(苯并三唑-1-基氧基)-三吡咯烷子基磷
Figure BPA00001195230600184
-六氟磷酸盐(PyBOP)、O-(1H-6-氯苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲
Figure BPA00001195230600185
六氟磷酸盐、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐/羟基苯并三唑或/1-羟基-7-氮杂苯并三唑(EDC/HOBT或EDC/HOAt)或单独HOAt，或与(1-氯-2-甲基-丙烯基)-二甲基胺一起。对于综述某些其它可能的偶联剂，参见例如Klauser；Bodansky，Synthesis(合成)(1972)，453-463。反应混合物优选在温度为约-20至50℃之间、特别是0℃至30℃之间、例如室温下搅拌。
式I化合物与成盐基团的盐可以以本身已知的方法制备。因此，式I化合物的酸加成盐可以通过用酸或者用适合的阴离子交换剂处理而获得。与两个酸分子的盐(例如式I化合物的二卤化物)也可以转化为每个化合物具有一个酸分子的盐(例如一卤化物)；这可以通过加热至熔点，或者例如通过作为固体在高真空下、在升高的温度例如130至170℃下加热而实现，每分子的式I化合物除去一个分子的酸。通常盐可以转化为游离的化合物，例如通过用适合的碱性化合物、例如用碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐或碱金属氢氧化物、典型的是碳酸钾或氢氧化钠处理而实现。
立体异构体混合物例如非对映异构体混合物可以以本身已知的方式通过适合的分离方法分离为它们的相应的异构体。非对映异构体混合物例如可以通过级分结晶、色谱、溶剂分布以及类似的方法分离为它们的单一的非对映异构体。该分离可以在起始化合物水平或者在式I化合物本身进行。对映异构体可以通过形成非对映异构体盐分离，例如通过与对映异构纯的手性酸形成盐，或者通过色谱，例如通过HPLC，应用具有手性配体的色谱底物。
应当强调的是类似于该章中提及的转化的反应还可以在适合的中间体水平进行(并且因此用于制备相应的原料)。
原料：
式II、III、IV和V的原料以及本文例如下文提及的其它原料可以根据或类似于本领域已知的方法制备和/或是可商购获得的。原料的制备没有特别的描述，该化合物或者是已知的或者可以类似于本领域已知的方法制备，例如WO 05/021519或WO04/096797，或者根据在下文中公开的方法制备。新的原料及其制备方法是本发明的实施方案。在优选的实施方案中，应用此类原料并且选择反应以使优选的化合物能够获得。
在原料(包括中间体)中，适合并且方便的时候，其也可以作为盐应用和/或获得，取代基优选如式I化合物中定义的。
本文公开的式I化合物可用作药物。因此，在一个实施方案中，本发明涉及用于人或兽用的组合物，其中表明了PI3K的抑制。
在一个实施方案中，本发明涉及治疗细胞增殖性疾病例如肿瘤和/或PI3K介导的癌细胞生长。特别的是，该化合物可用于治疗人或动物(例如鼠)的癌，包括例如肺和支气管癌；前列腺癌；乳腺癌；胰腺癌；结肠和直肠癌；甲状腺癌；肝和肝内胆管癌；肝细胞癌；胃癌；神经胶质瘤/神经胶质母细胞瘤；子宫内膜癌；黑素瘤；肾和肾盂癌；膀胱癌；子宫癌；子宫颈癌；卵巢癌；多发性骨髓瘤；食道癌；急性粒细胞白血病；慢性粒细胞白血病；淋巴细胞白血病；髓性白血病；脑癌；口腔和咽癌；喉癌；小肠癌；非霍奇金淋巴瘤；黑素瘤；和绒毛结肠腺瘤。
在其它实施方案中，PI3K-介导的病症或障碍选自：哮喘、COPD、ARDS、吕弗勒综合征、嗜酸细胞性肺炎、寄生动物(特别是后生动物)感染(包括热带嗜酸粒细胞增多症)、支气管肺曲霉菌病、结节性多发性动脉炎(包括丘-斯综合征)、嗜酸性肉芽肿、由药物反应引起的影响气道嗜酸性粒细胞相关障碍、银屑病、接触性皮炎、特应性皮炎、斑秃、多形性红斑、疱疹样皮炎、硬皮病、白癫风、变应性脉管炎、荨麻疹、大疱性类天疱疮、红斑狼疮、天疱疮(pemphisus)、获得性大疱性表皮松解、自身免疫性溶血障碍(例如溶血性贫血、再生障碍性贫血、纯红细胞贫血和特发性血小板减少)、系统性红斑狼疮、多软骨炎、硬皮病、韦格纳肉芽肿、皮肌炎、慢性活动型肝炎、重症肌无力、斯-琼综合征、特发性口炎性腹泻、自身免疫性炎性肠病(例如溃疡性结肠炎和克隆病)、内分泌性眼病、格雷夫斯病、肉瘤样病、牙槽炎、慢性过敏性肺炎、多发性硬化、原发性胆汁性肝硬变、眼色素层炎(较前或较后)、间质性肺纤维化、银屑病关节炎、肾小球肾炎、心血管疾病、动脉粥样硬化、高血压、深部静脉血栓形成、中风、心肌梗塞、不稳定型心绞痛、血栓栓塞、肺栓塞、溶血栓疾病、急性动脉局部缺血、外周血栓形成闭塞和冠状动脉病、再灌注损伤、视网膜病变例如糖尿病视网膜病变或高压氧诱导的视网膜病变，以及以升高的眼内压或眼房水分泌为特征的病症，例如青光眼。
对于以上应用，需要的剂量将取决于施用方式、待治疗的特别的病症和预期的效果而不同。通常，以日剂量从约0.03至10.0mg/kg体重可以全身性获得满意的结果。在较大的哺乳动物例如人中，指定的日剂量范围为约0.5mg至约1g，通常例如以至多每天四次的分剂量或缓释形式施用。适合口服施用的单位剂量形式包含约0.1至500mg活性成分。
式I化合物可以通过任何常规途径施用，特别是肠道施用，例如口服，例如以片剂或胶囊剂的形式，或者非肠道施用，例如以可注射溶液剂或混悬剂的形式，局部施用，例如以洗剂、凝胶剂、软膏剂或乳膏剂的形式，通过吸入施用，鼻内施用，或者以栓剂形式施用。
式I化合物可以以游离形式或可药用盐形式施用，例如如上所述。此类盐可以以常规方法制备并且与游离化合物显示出相同的活性级别。
因此，本发明还提供了：
■在需要该治疗的个体中预防或治疗由PI3激酶α酶的活化介导的病症、障碍或疾病(例如上述)的方法，该方法包括给所述个体施用有效量的式I化合物或其可药用盐。
■例如在本文所述的任何方法中用作药物的游离形式或可药用盐形式的式I化合物。
■游离形式或可药用盐形式的式I化合物，其例如在本文所述的任何方法中用作药物，特别是用于一种或多种磷脂酰肌醇3-激酶介导的疾病。
■游离形式或可药用盐形式的式I化合物在本文所述的任何方法中的用途，特别是在治疗一种或多种磷脂酰肌醇3-激酶介导的疾病中的用途。
■游离形式或可药用盐形式的式I化合物在本文所述的任何方法中的用途，特别是在制备用于治疗一种或多种磷脂酰肌醇3-激酶介导的疾病的药物中的用途。
PI3K作为整合平行信号传导途径的第二信使节点，证据显示PI3K抑制剂与其它途径的抑制剂的组合可以用于治疗人类癌症和增殖性疾病。
约20-30％的人类乳腺癌过度表达Her-2/neu-ErbB2，它是药物曲妥珠单抗的靶标。尽管已经证实曲妥珠单抗在某些表达Her2/neu-ErbB2的患者中具有持久的响应，但这些患者中只是一部分有响应。最近的研究显示该有限的响应率可以通过曲妥珠单抗与PI3K抑制剂或PI3K/AKT途径抑制剂的组合而得以实质的改善(Chan等人，Breast Can.Res.Treat.91：187(2005)，Woods Ignatoski等人，Brit.J.Cancer 82：666(2000)，Nagata等人，Cancer Cell 6：117(2004))。
多种人类恶性疾病表现为Her1/EGFR活化突变或水平升高，并且据此开发了多种针对该受体酪氨酸激酶的抗体和小分子抑制剂，包括特罗凯(tarceva)、吉非替尼和爱必妥(erbitux)。但是，尽管EGFR抑制剂在某些人类肿瘤(例如NSCLC)中被证明具有抗肿瘤活性，但是它们不能在表达EGFR的所有肿瘤患者中提高总患者存活率。这可以通过下列理论解释：Her1/EGFR的许多下游靶标在多种恶性肿瘤中以较高的频率突变或失调，包括PI3K/Akt途径。例如，吉非替尼在体外分析中能够抑制腺癌细胞系的生长。但是，这些细胞系的亚克隆可以被选择，其对抗吉非替尼具有抗性，它证明PI3/Akt途径的活化被增强了。该通路的下调或抑制使得有抗性的亚克隆对吉非替尼敏感(Kokubo等人，Brit.J.Cancer 92：1711(2005))。另外，在具有PTEN突变和过度表达EGFR的细胞系的乳腺癌的体外模型中，PI3K/Akt途径和EGFR两者的抑制产生了协同作用(She等人，CancerCell 8：287-297(2005))。这些结果表明吉非替尼和PI3K/Akt途径抑制剂的组合将是有吸引力的癌症治疗策略。
AEE778(Her-2/neu/ErbB2、VEGFR和EGFR的抑制剂)和RAD001(mTOR(Akt的下游靶标)的抑制剂)的组合较单一药物在成胶质细胞瘤异种移植模型中产生了更强的组合效果(Goudar等人，Mol.Cancer.Ther.4：101-112(2005))。
抗雌激素药物例如他莫西芬通过诱导细胞循环中止(它需要细胞循环抑制剂p27Kip的作用)而抑制乳腺癌生长。最近已经显示Ras-Raf-MAP激酶途径的活化改变了p27Kip的磷酸化状态，从而使得其在中止细胞循环中的抑制活性减弱，因此有助于抗雌激素的抗性(Donovan等人，J.Biol.Chem.276：40888，(2001))。根据Donovan等人的报道，通过用MEK抑制剂对MAPK信号传导的抑制在激素不应(hormone refractory)的乳腺癌细胞系中逆转了p27的异常磷酸化状态，因此恢复了激素的敏感性。类似地，通过Akt对p27Kip的磷酸化也使其失去了中止细胞循环的作用(Viglietto等人，Nat Med.8：1145(2002))。
因此，在进一步的方面中，式I化合物用于治疗激素依赖性癌症，例如乳腺癌和前列腺癌。通过该应用，其旨在逆转采用常规抗癌药物时在这些癌症中常见的激素抗性。
在血液性癌症、例如慢性粒细胞白血病(CML)中，染色体易位负责构成性活化的BCR-Abl酪氨酸激酶。由于Ab1激酶活性被抑制，患病的患者对伊马替尼(一种小分子酪氨酸激酶抑制剂)有响应。但是，处于疾病后期阶段的许多患者起初对伊马替尼有响应，但是由于Ab1激酶域的抗性突变在后期却会复发。体外研究表明，BCR-Ab1应用Ras-Raf激酶途径以发挥其作用。另外，在相同的途径中抑制一种以上的激酶提供了对抗抗性突变的其它保护作用。
因此，在另一方面中，式I化合物与至少一种另外的选自激酶抑制剂的药物(例如
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)组合使用，用于治疗血液癌症，例如慢性粒细胞白血病(CML)。通过该应用，其旨在逆转或防止对所述至少一种另外的药物的抗性。
因为PI3K/Akt途径的活化使得细胞能够存活，在使得癌症细胞凋亡的组合治疗(包括放射治疗和化学治疗)中对该途径的抑制将改善响应(Ghobria1等人，CA Cancer J.Clin 55：178-194(2005))。例如，PI3激酶抑制剂与卡铂的组合在体外增殖和凋亡分析中以及在卵巢癌异种移植模型中的体内肿瘤疗效中显示协同作用(Westfall和Skinner，Mol.Cancer Ther4：1764-1771(2005))。
除了癌症和增殖性疾病外，有越来越多的证据显示1A类和1B类PI3激酶抑制剂在其它疾病中具有治疗用途。已经显示p110β(PIK3CB基因的PI3K同种型产物)的抑制与剪切诱导的血小板活化有关(Jackson等人，Nature Medicine 11：507-514(2005))。因此，抑制p110β的PI3K抑制剂可以作为单一药物或者组合用于抗血栓形成治疗。该同种型p110δ(PIK3CD基因的产物)在B细胞功能和分化(Clayton等人，J.Exp.Med.196：753-763(2002))、T-细胞依赖性和非依赖性抗原反应(Jou等人，Mol.Cell.Biol.22：8580-8590(2002))和肥大细胞分化(Ali等人，Nature 431：1007-1011(2004))中非常重要。因此，希望p110δ-抑制剂可以用于治疗B-细胞诱导的自身免疫性疾病和哮喘。最后，p110γ(PI3KCG基因的同种型产物)的抑制产生T细胞而非B细胞减少的响应(Reif等人，J.Immunol.173：2236-2240(2004))，并且其抑制在自身免疫性疾病动物模型中显示疗效(Camps等人，Nature Medicine 11：936-943(2005)，Barber等人，Nature Medicine11：933-935(2005))。
本发明进一步提供了药物组合物，该药物组合物包含至少一种式I化合物，以及适合施用于人或动物个体的可药用赋形剂，其单独或与其它抗癌剂一起。
本发明进一步提供了治疗患有细胞增殖性疾病例如癌症的人或动物个体的方法。因此，本发明提供了治疗需要该治疗的人或动物个体的方法，该方法包括给个体施用治疗有效量的式I化合物，其单独或者与一种或多种其它抗癌剂组合。特别的是，组合物将配制在一起作为组合治疗或者分别施用。适合与式I化合物一起应用的抗癌剂包括但不限于一种或多种选自下列的化合物：激酶抑制剂、抗雌激素药物、抗雄激素药物、其它抑制剂、癌症化学治疗药物、烷化剂、螯合剂、生物响应调节剂、癌症疫苗、反义治疗药物，如下所述：
激酶抑制剂：与式I化合物联合使用的作为抗癌剂的激酶抑制剂包括表皮生长因子受体(EGFR)激酶抑制剂，例如小分子喹唑啉类，例如吉非替尼(US 5457105、US 5616582和US 5770599)、ZD-6474(WO 01/32651)、厄洛替尼(
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US 5,747,498和WO 96/30347)和拉帕替尼(US6,727,256和WO 02/02552)；血管内皮生长因子受体(VEGFR)激酶抑制剂，包括SU-11248(WO 01/60814)、SU 5416(US 5,883,113和WO99/61422)、SU 6668(US 5,883,113和WO 99/61422)、CHIR-258(US6,605,617和US 6,774,237)、瓦他拉尼或PTK-787(US 6,258,812)、VEGF-Trap(WO 02/57423)、B43-染料木素(Genistein)(WO-09606116)、芬维A胺(fenretinide)(维A酸对-羟基苯基胺)(US 4,323,581)、IM-862(WO02/62826)、贝伐单抗或
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(WO 94/10202)、KRN-951、3-[5-(甲基磺酰基哌啶甲基)-吲哚基]-喹诺酮、AG-13736和AG-13925、吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪类、ZK-304709、
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VMDA-3601、EG-004、CEP-701(US 5,621,100)、Cand5(WO 04/09769)；Erb2酪氨酸激酶抑制剂，例如帕妥珠单抗(WO 01/00245)、曲妥珠单抗和利妥昔单抗；Akt蛋白激酶抑制剂，例如RX-0201；蛋白激酶C(PKC)抑制剂，例如LY-317615(WO95/17182)和哌立福新(US 2003171303)；Raf/Map/MEK/Ras激酶抑制剂，包括索拉非尼(BAY 43-9006)、ARQ-350RP、LErafAON、BMS-354825AMG-548和其它公开于WO 03/82272的抑制剂；成纤维细胞生长因子受体(FGFR)激酶抑制剂；细胞依赖性激酶(CDK)抑制剂，包括CYC-202或roscovitine(WO 97/20842和WO 99/02162)；血小板衍生生长因子受体(PDGFR)激酶抑制剂，例如CHIR-258、3G3mAb、AG-13736、SU-11248和SU6668；和Bcr-Abl激酶抑制剂和融合蛋白，例如STI-571或
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(伊马替尼)。
B.抗雌激素药物
在抗癌治疗中与式I化合物联合应用的雌激素靶向药物包括：选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括他莫西芬、托瑞米芬、雷洛西芬；芳香酶抑制剂，包括
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或阿那曲唑；雌激素受体下调剂(ERD)，包括
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或氟维司群。
C.抗雄激素药物
在抗癌治疗中与式I化合物联合应用的雄激素靶向药物包括：氟他胺、比卡鲁胺、非那甾胺、氨鲁米特、酮康唑和皮质激素类。
D.其它抑制剂
作为抗癌药物与式I化合物联合应用的其它抑制剂包括：蛋白法呢基转移酶抑制剂，包括tipifarnib或R-115777(US 2003134846和WO97/21701)、BMS-214662、AzD-3409和FTI-277；拓扑异构酶抑制剂，包括美巴龙(merbarone)和二氟替康(diflomotecan)(BN-80915)；有丝分裂驱动蛋白纺锤体蛋白(KSP)抑制剂，包括SB-743921和MKI-833；蛋白酶体调节剂，例如硼替佐米(bortezomib)或
Figure BPA00001195230600254
(US 5,780,454)、XL-784；和环氧酶2(COX-2)抑制剂，包括非甾体抗炎药I(NSAID)。
E.癌症化学治疗药物
与式I化合物联合应用的作为抗癌药物的特别的癌症化学治疗药物包括阿那曲唑
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必卡他胺
Figure BPA00001195230600262
硫酸争光霉素
Figure BPA00001195230600263
白消安
Figure BPA00001195230600264
白消安注射剂
Figure BPA00001195230600265
卡培他滨N4-戊氧基羰基-5-脱氧-5-氟胞苷、卡铂
Figure BPA00001195230600267
卡氮芥
Figure BPA00001195230600268
苯丁酸氮芥
Figure BPA00001195230600269
顺铂
Figure BPA000011952306002610
克拉屈滨环磷酰胺
Figure BPA000011952306002612
阿糖胞苷(cytarabine)、阿糖胞苷(cytosine arabinoside)
Figure BPA000011952306002613
阿糖胞苷脂质体注射液
Figure BPA000011952306002614
氮烯唑胺
Figure BPA000011952306002615
放线菌素D(Actinomycin D、Cosmegan)、柔红霉素盐酸盐
Figure BPA000011952306002616
柔红霉素柠檬酸盐脂质体注射液
Figure BPA000011952306002617
地塞米松、多烯紫杉醇(
Figure BPA000011952306002618
US 2004073044)、多柔比星盐酸盐
Figure BPA000011952306002619
依托泊苷
Figure BPA000011952306002620
氟达拉滨磷酸盐5-氟尿嘧啶
Figure BPA000011952306002622
氟他胺
Figure BPA000011952306002623
替扎他滨(tezacitibine)、吉西他滨(二氟去氧胞苷)、羟基脲
Figure BPA000011952306002624
依达比星
Figure BPA000011952306002625
异环磷酰胺
Figure BPA000011952306002626
依立替康
Figure BPA000011952306002627
L-天门冬酰胺酶
Figure BPA000011952306002628
甲酰四氢叶酸钙、美法仑6-巯基嘌呤
Figure BPA000011952306002630
甲氨蝶呤米托蒽醌吉妥单抗(mylotarg)、紫杉醇
Figure BPA000011952306002633
phoenix(Yttrium90/MX-DTPA)、喷司他丁、卡莫司汀植入膜剂20(polifeprosan 20)
Figure BPA000011952306002634
他莫西芬柠檬酸盐替尼泊甙
Figure BPA000011952306002636
6-硫鸟嘌呤、噻替派、替拉扎明
Figure BPA000011952306002637
注射用拓扑替康盐酸盐
Figure BPA000011952306002638
长春碱
Figure BPA000011952306002639
长春新碱
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和长春瑞宾
Figure BPA000011952306002641
F.烷化剂
与式I化合物联合应用的烷化剂包括VNP-40101M或cloretizine、奥沙利铂(US 4,169,846、WO 03/24978和WO 03/04505)、葡磷酰胺、马磷酰胺、依托泊苷(US 5,041,424)、泼尼莫司汀、曲奥舒凡、白消安、伊洛福芬(irofluven)(酰基富烯)、五氯甲定(penclomedine)、吡唑并吖啶(PD-115934)、O6-苄基鸟嘌呤、地西他滨(5-氮杂-2-去氧胞苷)、brostallicin、丝裂毒素C(MitoExtra)、TLK-286
Figure BPA000011952306002642
替莫唑胺、曲贝替定(US 5,478,932)、AP-5280(顺铂的铂酸盐制剂)、甲基丝裂霉素和clearazide(meciorethamine)。
G.螯合剂
与式I化合物联合应用的螯合剂包括四硫钼酸铵(WO 01/60814)、RP-697、Chimeric T84.66(cT84.66)、钆磷维塞(gadofosveset)
Figure BPA00001195230600271
去铁胺以及任选与electorporation(EPT)组合的博来霉素。
H.生物响应调节剂
与式I化合物联合应用的生物响应调节剂例如免疫调节剂包括星孢菌素(staurosprine)及其大环类似物，包括UCN-01、CEP-701和米哚妥林(参见WO 02/30941、WO 97/07081、WO 89/07105、US 5,621,100、WO93/07153、WO 01/04125、WO 02/30941、WO 93/08809、WO 94/06799、WO 00/27422、WO 96/13506和WO 88/07045)；角鲨胺(WO 01/79255)；DA-9601(WO 98/04541和US 6,025,387)；阿来组单抗；干扰素类(例如IFN-a、IFN-b等)；白细胞介素，特别是IL-2或阿地白介素以及IL-1、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12及其活性生物学变体(其氨基酸序列大于70％的天然人类序列)；六甲蜜胺
Figure BPA00001195230600272
SU 101或来氟米特(WO 04/06834和US 6,331,555)；咪唑并喹啉类，例如雷西莫特和咪喹莫特(US 4,689,338、5,389,640、5,268,376、4,929,624、5,266,575、5,352,784、5,494,916、5,482,936、5,346,905、5,395,937、5,238,944和5,525,612)；和SMIP，包括吲哚类、蒽醌类、缩氨基硫脲类和色胺酮类(WO 04/87153、WO 04/64759和WO 04/60308)。
I.癌症疫苗：
与式I化合物联合应用的癌症疫苗包括
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(Tetrahedron Letters26：2269-70(1974))、oregovomab
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Figure BPA00001195230600275
(STn-KLH)、黑素瘤疫苗、GI-4000系列(GI-4014、GI-4015和GI-4016)(它们在Ras蛋白中具有5种突变)、GlioVax-1、MelaVax、
Figure BPA00001195230600276
或INGN-201(WO95/12660)、Sig/E7/LAMP-1、编码HPV-16E7、MAGE-3疫苗或M3TK (WO94/05304)、HER-2VAX、ACTIVE(它刺激针对肿瘤特异的T-细胞)、GM-CSF癌症疫苗和基于单核细胞增生利斯特氏菌的疫苗。
J.反义治疗：
与式I化合物联合应用的抗癌药物也包括反义组合物，例如AEG-35156(GEM-640)、AP-12009和AP-11014(TGF-β2-特异性反义寡核苷酸)；AVI-4126、AVI-4557、AVI-4472、oblimersenJFS2、aprinocarsen(WO 97/29780)、GTI-2040(R2核糖核苷酸还原酶mRNA反义寡核苷酸)(WO 98/05769)；GTI-2501(WO 98/05769)、脂质体包囊的c-Raf反义寡脱氧核苷酸(LErafAON)(WO 98/43095)和Sirna-027(基于RNAi的治疗靶向VEGFR-1mRNA)。
式I化合物也可以与支气管扩张药或抗组胺药物在药物组合物中组合。此类支气管扩张药包括抗胆碱能药或抗毒蕈碱药，特别是格隆溴铵、异丙托溴铵、氧托溴铵和噻托溴铵、OrM3、aclidinium、CHF5407、GSK233705；以及β-2-肾上腺素受体激动剂，例如沙丁胺醇、特布他林、沙美特罗、卡莫特罗(carmoterol)、milveterol，并且特别是茚达特罗(indacaterol)和福莫特罗。共同治疗的抗组胺药物包括西替利嗪盐酸盐、富马酸氯马斯汀、异丙嗪、氯雷他定、地氯雷他定、苯海拉明和非索芬那定盐酸盐。
在进一步的方面中，本发明提供了包含式I化合物和一种或多种用于治疗溶血栓疾病、心脏病、中风等的化合物的组合。此类化合物包括阿司匹林、链激酶、组织纤溶酶原活化剂、尿激酶、抗凝血药物、抗血小板药物(例如PLAVIX；氯吡格雷硫酸氢盐)、他汀类(例如LIPITOR或阿伐他汀钙、ZOCOR(新伐他汀)、CRESTOR(罗伐他汀)等)、β-阻断剂(例如阿替洛尔)、NORVASC(苯磺酸氨氯地平)和ACE抑制剂(例如赖诺普利)。
在进一步的方面中，本发明提供了包含式I化合物和一种或多种用于治疗高血压的化合物的组合。此类化合物包括ACE抑制剂；降脂药，例如他汀类，LIPITOR(阿伐他汀钙)；钙通道阻断剂，例如NORVASC(苯磺酸氨氯地平)。
在进一步的方面中，本发明提供了包含式I化合物和一种或多种选自下列化合物的组合：贝特类、β-阻断剂、NEPI抑制剂、血管紧张素-2受体拮抗剂以及血小板聚集抑制剂。
在进一步的方面中，本发明提供了包含式I化合物和一种或多种适合用于治疗炎性疾病、包括类风湿性关节炎的化合物的组合。此类化合物可以选自TNF-α抑制剂，例如抗-TNF-α单克隆抗体(例如REMICADE、CDP-870)和D2E7(HUMIRA)以及TNF受体免疫球蛋白融合分子(例如ENBREL)；IL-1抑制剂、受体拮抗剂或可溶性IL-1Rα(例如KINERET或ICE抑制剂)；非甾体类抗炎药(NSAIDS)，吡罗昔康、双氯芬酸、萘普生、氟比洛芬、非诺洛芬、酮洛芬、布洛芬、芬那酸类、甲灭酸、消炎痛、舒林酸、阿扎丙宗、吡唑酮类、保泰松、阿司匹林；COX-2抑制剂(例如CELEBREX(塞来昔布)、PREXIGE(罗美昔布))；金属蛋白酶抑制剂(优选MMP-13选择性抑制剂)；p2x7抑制剂；α2α抑制剂；NEUROTIN；普瑞巴林；低剂量甲氨蝶呤；来氟米特；羟氯喹；d-青霉胺；金诺芬或非肠道的或口服的金。
在进一步的方面中，本发明提供了包含式I化合物和适合用于治疗骨关节炎的化合物的组合。此类化合物可以选自标准非甾体抗炎药(在下文中称为NSAID’s)，例如吡罗昔康、双氯芬酸、丙酸类例如萘普生、氟比洛芬、非诺洛芬、酮洛芬和布洛芬、芬那酸类例如甲灭酸、消炎痛、舒林酸、阿扎丙宗、吡唑酮类例如保泰松、水杨酸酯类例如阿司匹林；COX-2抑制剂，例如塞来昔布、戊地昔布、罗美昔布和依托考昔；镇痛药和关节腔内治疗，例如皮质激素类和透明质酸(例如海尔根(hyalgan)和欣维可(synvisc))。
在进一步的方面中，本发明提供了包含式I化合物和抗病毒药物和/或抗菌化合物的组合。此类抗病毒药物可以选自Viracept、AZT、阿昔洛韦和泛昔洛韦。此类抗菌化合物可以选自Valant。
在进一步的方面中，本发明提供了包含式I化合物和一种或多种药物的组合，所述的药物选自CNS药物例如抗抑郁药(舍曲林)；抗帕金森病药物(例如丙炔苯丙胺(deprenyl)、L-多巴、Requip、Mirapex)；MAOB抑制剂(例如selegine和雷沙吉兰)；comP抑制剂(例如Tasmar)；A-2抑制剂；多巴胺重摄取抑制剂；NMDA拮抗剂；烟碱激动剂；多巴胺激动剂和神经元一氧化氮合酶抑制剂。
在进一步的方面中，本发明提供了包含式I化合物和一种或多种抗阿尔茨海默病的药物的组合。此类抗阿尔茨海默病的药物可以选自多奈哌齐、他克林、α2δ抑制剂、NEUROTIN、普瑞巴林、COX-2抑制剂、丙戊茶碱或metryfonate。
在进一步的方面中，本发明提供了包含式I化合物和抗骨质疏松症药物和/或免疫抑制剂的组合。此类抗骨质疏松症药物可以选自EVISTA(雷洛昔芬盐酸盐)、屈洛昔芬、拉索昔芬或福善美。此类免疫抑制剂可以选自FK-506和雷帕霉素。
在另一方面的优选实施方案中，提供了包含一种或多种式I化合物(作为如本文公开的组合伴侣)的药盒。代表性的药盒包含PI3K抑制剂化合物(例如式I化合物)和药品说明书或其它标签，包括通过施用PI3K抑制量的化合物用于治疗细胞增殖性疾病的说明。
通常，式I化合物将以治疗有效量通过任何用于类似用途的药物的可接受的施用方式施用。式I化合物的实际量，即活性成分，将取决于多种因素，例如待治疗疾病的严重程度、个体的年龄和相对健康、所用化合物的效力、施用途径和形式以及其它因素。药物可以每天施用多于一次，优选每天一次或两次。所有这些因素在主治医师的能力范围内。
式I化合物的治疗有效量的范围可以是每天每千克体重受试者约0.05至约50mg；优选约0.1-25mg/kg/天，更优选约0.5至10mg/lg/天。因此，对于施用于70kg的人而言，剂量范围将最优选每天约35-70mg。
通常，式I化合物将作为药物组合物通过任何一种以下途径施用：口服、全身(例如透皮、鼻内或通过栓剂)，或非肠道(例如肌内、静脉内或皮下)施用。优选的施用方式是口服，应用常规的日剂量方案，其可以根据患病的程度调节。组合物可以采用片剂、丸剂、胶囊剂、半固体、散剂、缓释制剂、溶液剂、混悬剂、酏剂、气雾剂或任何其它适合的组合物的形式。另外优选的施用式I化合物的方式是吸入。这是用于将治疗剂直接递送至呼吸道的有效方法。
制剂的选择取决于多种因素，例如药物的施用模式和药物的生物利用度。对于通过吸入递送而言，可以将化合物配制为液体溶液剂、混悬剂、气雾剂抛射剂或干粉并且置于适合的分散器中用于施用。具有多种类型的药物吸入装置-喷雾吸入器、计量吸入器(MDI)和干粉吸入器(DPI)。喷雾吸入器产生高速气体流，其引起治疗剂(其以液体形式配制)作为雾喷出，进入患者的呼吸道。MDI典型地是用压缩气体包装的制剂。在刺激后，该装置通过压缩气体释放测量量的治疗剂，因此得到施用固定量药物的可信赖的方法。DPI使治疗剂以游离的流动的粉末形式分散，其可以在呼吸的过程中通过该装置分散入患者的呼吸气流。为了获得游离的流动粉末，将治疗剂用赋形剂例如乳糖配制。将测量量的治疗剂以胶囊形式贮存并且在每次刺激时分散。
本发明还涉及制剂，其中式I化合物的粒度为10-1000nm之间、优选10-400nm。此类药物制剂已经特别为了生物利用度差的药物而开发，其基于的原则是可以通过增加表面积、即减小粒度来增加生物利用度。例如，U.S.4,107,288描述了具有粒度范围为10至1,000nm的药物制剂，其中活性物质由交联的大分子基质支持。U.S.5,145,684描述了药物制剂产品，其中将药物在表面修饰剂的存在下粉末化为纳米粒(平均粒度为400nm)，然后分散在液体基质中以得到药物制剂，该药物制剂显示出显著高的生物利用度。将以上两篇文献并入本文作为参考。
在进一步的方面中，本发明提供了药物组合物，该药物组合物包含(治疗有效量的)式I化合物，以及至少一种可药用赋形剂。可药用赋形剂是无毒的、有助施用的并且对式I化合物的治疗益处没有负面影响。此类赋形剂可以是任何固体、液体、半固体，或者在气雾剂组合物的情况中，对于本领域技术人员而言气体赋形剂通常可以获得。
固体药物赋形剂包括淀粉、纤维素、滑石粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、水稻、面粉、天然碳酸钙、硅胶、硬脂酸镁、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、氯化钠、脱脂奶粉等。
液体和半固体赋形剂可以选自甘油、丙二醇、水、乙醇和多种油类，包括那些石油，动物、植物或合成来源的，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。优选的液体载体(特别对于可注射溶液剂)包括水、盐水、水性右旋糖和甘油。
在气雾剂形式中，压缩气体可以用于分散式I化合物。适合该目的的惰性气体是氮气、二氧化碳等。其它适合的药用赋形剂以及它们的制剂在Remington’s Pharmaceutical Sciences(雷明顿药物学)，E.W.Martin编辑(Mack Publishing Company，第18版，1990)中描述。
制剂中化合物的量可以在本领域技术人员应用的全部范围内不同。典型的是，制剂将包含基于重量百分比(wt％)占总制剂的约0.01-99.99wt％的式I化合物，用一种或多种适合的药用赋形剂平衡。优选的是，化合物以约1-80wt％的水平存在。
本发明进一步涉及药物组合物，该药物组合物包含(即包含或由......组成)至少一种式I化合物以及至少一种可药用赋形剂。
包含游离形式或可药用盐形式的式I化合物以及至少一种可药用赋形剂(例如载体和/或稀释剂)的药物组合物可以以常规方法通过将组分混合制备。
包含游离形式或可药用盐形式的式I化合物并且进一步包含组合伴侣(在一个剂量单位形式中或者作为部分的药盒)以及至少一种可药用载体和/或稀释剂的组合的药物组合物可以以常规方法通过将可药用载体和/和稀释剂与所述活性成分混合制备。
因此本发明在进一步的方面提供了
■组合的药物组合物，例如用于本文描述的任何方法，该药物组合物包含游离形式或可药用盐形式的式I化合物以及可药用稀释剂和/或载体。
■组合的药物组合物，该药物组合物包含作为活性成分的游离形式或可药用盐形式的式I化合物；一种或多种可药用载体物质和/或稀释剂，以及任选一种或多种进一步的药物。此类组合的药物组合物可以是一个剂量单位形式或者作为部分的药盒。
■组合的药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的游离形式或可药用盐形式的式I化合物，以及第二种药物，它们同时或依次施用。
■如上定义的方法，该方法包括共同施用(例如共同或依次)治疗有效的无毒量的式I化合物或其可药用盐，以及至少一种第二种药物，例如如上所述的。
■药物组合，例如药盒，其包含a)第一种药物，其是本文公开的游离形式或可药用盐形式的式I化合物，和b)至少一种共同药物，例如如上所述的；其中此类药盒可以包含用于其施用的说明书。
以下式(I)的实施例说明本发明，但不限制本发明的范围，并且如表1所示。制备此类化合物的方法如下文所述。
Figure BPA00001195230600331
表1
Figure BPA00001195230600332
Figure BPA00001195230600341
Figure BPA00001195230600351
Figure BPA00001195230600361
温度以摄氏度计算。除非另外说明，否则反应在室温下进行。以下HPLC/MS和MS方法在制备中间体和实施例中应用：
方法A (分析HPLC/MS)仪器：Hewlett Packard Agilent 1100系列，柱：XBridgeTM C182.5μm 3.0×30mm，温度：50℃，洗脱，2通道系统：通道A为在水中的5％乙腈，通道B为含0.2％甲酸的乙腈
时间(分钟)     ％通道B        流速(mL/分钟)
0              1              0.6
0.5            1              0.6
2.5            30             0.6
3.5            95             0.7
4.0            95             0.7
4.5            95             0.8
检测：Agilent 1100DAD 210-350nm和Waters Micromass ZQ 2000ESI+和ESI-。
方法B (制备HPLC/MS)仪器：Gilson制备HPLC系统，柱：SunfireTMPrep C18OBDTM 5μm 30×100mm，温度：25℃，洗脱：梯度历经20分钟为在0.05％三氟乙酸水溶液中的5-100％乙腈，流速：30mL/分钟，检测：UV 254nm。
方法C (分析HPLC/MS)仪器：Hewlett Packard Agilent 1100系列，柱：XBridgeTM C182.5μm 3.0×30mm，温度：50℃，洗脱：2通道系统：通道A为在水中的5％乙腈，通道B为含0.2％甲酸的乙腈
时间(分钟)     ％通道B        流速(mL/分钟)
0              1              0.6
3.5            95             0.7
4.0            95             0.7
4.5            95             0.8
检测：Agilent 1100DAD 210-350nm和Waters Micromass ZQ 2000ESI+和ESI-。
方法D (分析MS)仪器：Micromass Platform II，洗脱：在含0.2％的25％氢氧化铵溶液的水中的15％甲醇
方法E (分析HPLC/MS)仪器：Hewlett Packard Agilent 1100系列，柱：XBridgeTM C182.5μm 3.0×30mm，温度：50℃，洗脱：2通道系统：通道A为在水中的5％乙腈，通道B为含1.0％甲酸的乙腈
时间(分钟)       ％通道B         流速(mL/分钟)
0                5               1.4
3.7              95              1.6
4.4              95              2.4
4.45             95              2.4
检测：Agilent 1100DAD 210-350nm和Waters Micromass ZQ 2000ESI+和ESI-。
方法F (分析HPLC)仪器：Shimadzu LC-10AD系统；RF-10荧光分光光度计检测器；柱：Nucleosil OD-5-100C18(150×4.6mm)；在215nm处检测，流速2mL/分钟，在室温下；线性梯度2-100％CH3CN(0.1％TFA)和H2O(0.1％TFA)，4分钟+2分钟100％CH3CN(0.1％TFA)；返回至-100％CH3CN(0.1％TFA)，3分钟；
中间体A (S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]三氟乙酸酯
在室温下，将三氟乙酸(1mL)加入至{2’-[((S)-2-氨基甲酰基-吡咯烷-1-羰基)-氨基]-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2-基}-氨基甲酸叔丁酯(112mg)的CH2Cl2(2mL)悬浮液中。在室温下放置18小时后，将反应混合物蒸发并且将残留物通过反相色谱(方法A)纯化，蒸发8.4分钟的保留组分，得到标题化合物，为澄清绿色玻璃状物。HPLC/MS(方法B)RT 0.92分钟，M+H 353.1。
中间体A1{2’-[((S)-2-氨基甲酰基-吡咯烷-1-羰基)-氨基]-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2-基}-氨基甲酸叔丁酯
在室温下，将羰基二咪唑(91mg)加入至(2’-氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2-基)-氨基甲酸叔丁酯(140mg)在三乙胺(0.19mL)和DMF(3mL)中的溶液中。放置24小时后，将反应混合物蒸发并且将残留物在甲醇水溶液中重结晶，得到标题化合物，为米色固体。
中间体A2(2’-氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2-基)-氨基甲酸叔丁酯
在室温下，将N-叔丁氧基羰基硫脲(0.40g，如B.Schiava等人Synth.Commun.2002，32，1671-1674中描述的制备)加入至1-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-2-溴-乙酮氢溴酸盐(0.43g，如WO 06/125805中描述的制备)在三乙胺(0.57mL)和乙醇(5.4mL)中的悬浮液中。在室温下搅拌4小时后，加入三乙胺(0.57mL)和水(30mL)，然后用4×30mL EtOAc萃取，将有机层经Na2SO4干燥，并且蒸发。将分离的物质吸附在硅胶上并且通过快速柱色谱纯化，用乙酸乙酯洗脱，得到标题化合物，为类白色固体。
中间体B咪唑-1-甲酸(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺
在室温下，将羰基二咪唑(337mg)加入至2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基胺(480mg)在三乙胺(0.66mL)和CH2Cl2(19mL)中的溶液中。在室温下放置7小时后，将反应混合物过滤，得到标题化合物，为白色针状物。
中间体B12-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基胺
将1-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-2-溴-乙酮(7.0g，如WO 2006/125805中描述的制备)、2，2-二甲基丙烷硫代酰胺(2.25g，如Boys和Downs在Synthetic Communications 2006，36，295-298中描述的制备)、三乙胺(7.2mL)和乙醇(173mL)的混合物在回流下加热3.5小时。冷却至室温，将反应混合物过滤，将滤液蒸发，然后在NaHCO3水溶液和CH2Cl2之间分配，萃取3×CH2Cl2。将有机层干燥并且蒸发，然后用乙醚(50mL)研磨4×，将乙醚层合并并且用1M HCl(100mL)萃取。然后，将HCl层用3×乙醚洗涤，用NaOH水溶液碱化并且用4×乙醚和2×CH2Cl2萃取。将有机层经Na2SO4干燥并且蒸发，得到标题化合物，为红色固体。HPLC/MS(方法B)RT 1.95分钟，M+H 253.9。
中间体C (2S，4R)-4-羟基-吡咯烷-2-甲酸酰胺
将(2S，4R)-4-羟基-吡咯烷-2-甲酸苄基酯(1g)的880氨(5mL)溶液搅拌18小时，然后蒸发并且用乙醚研磨，得到标题化合物，为白色固体。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)9.15(s，br，1H)，8.04(s，1H)，7.63(s，1H)，5.56(s，1H)，4.40(s，1H)，4.27-4.16(m，1H)，3.27(d，J＝7Hz，1H)，3.02(d，J＝7Hz，1H)，2.33-2.19(m，1H)，1.89-1.76(m，1H)。
中间体D (2S，4S)-4-羟基-吡咯烷-2-甲酸酰胺
将(2S，4S)-4-羟基-吡咯烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(1g)在7M氨的甲醇溶液(10mL)中的溶液搅拌18小时，然后蒸发并且用乙醚研磨。将残留物溶于最小体积的热甲醇中并且在4℃下放置4小时。通过过滤分离标题化合物，为白色固体。
中间体E (2S，3S)-3-羟基-吡咯烷-2-甲酸酰胺
在室温下，将4M HCl的1，4-二
Figure BPA00001195230600401
烷溶液(3mL)加入至(2S，3S)-3-羟基吡咯烷-2-甲酸(1g)的乙醇(10mL)悬浮液中并且将混合物在回流下加热21小时。将反应混合物蒸发并且加入7M氨的甲醇溶液(10.5mL)。将反应混合物在室温下放置2天，然后蒸发，将残留物用乙醇(2mL)研磨并且过滤并且用冷却的9∶1乙醇/甲醇(2mL)混合物洗涤，得到标题化合物，为淡粉色固体。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)8.27(s，1H)，7.76(s，1H)，5.85(d，J＝4Hz，1H)，4.38-4.32(m，1H)，3.97(d，J＝2Hz，1H)，3.36-3.15(m，3H)，1.90-1.80(m，2H)。
中间体F (S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺
将(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸丁酯(2.3g)在7M氨的甲醇溶液(22.2mL)中的溶液在氧气瓶中在70℃下加热10天。将反应混合物蒸发并且用己烷(20 mL)研磨，得到标题化合物，为类白色固体。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)，7.40(s，1H)，6.89(s，1H)，2.95-2.84(m，1H)，2.72-2.60(m，1H)，2.06-1.95(m，1H)，1.66-1.44(m，2H)，1.42-1.30(m，1H)，1.22(s，3H)。
中间体F1(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸丁酯
将浓HCl(2mL)加入至(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸(2g)的丁-1-醇(50mL)悬浮液中，将其在60℃下加热18小时，然后在回流下加热4天。将反应混合物蒸发，在饱和的NaHCO3水溶液和CH2Cl2之间分配，萃取3×CH2Cl2，经Na2SO4干燥并且蒸发。然后将分离的油状物在10mbar下kugelrohr蒸馏，得到标题化合物，为澄清无色油状物，来自在炉温为100-120℃蒸馏的级分。
中间体G(2S，3S)-3-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺
在室温下，将4 M HCl的1，4-二
Figure BPA00001195230600411
烷溶液(1.5 mL)加入至(2S，3S)-3-甲基吡咯烷-2-甲酸(0.5g)的乙醇(5mL)悬浮液中并且将混合物在回流下加热20小时。将反应混合物蒸发并且加入7 M氨的甲醇溶液(5.6 mL)。将反应混合物在室温下放置6天，然后蒸发，将残留物用甲醇(0.5 mL)研磨并且过滤并且用冷甲醇(2mL)洗涤，得到标题化合物，为白色固体。1H NMR(d6-DMSO，400 MHz)8.06(s，1H)，7.67(s，1H)，3.60(d，J＝10 Hz，1H)，3.25-3.14(m，2H)，2.24-2.15(m，1H)，2.09-1.98(m，1H)，1.57-1.45(m，1H)，1.13(d，J＝8 Hz，3H)。
中间体H(2S，4R)-4-氟-吡咯烷-2-甲酸酰胺
在室温下，将1.25 M HCl的乙醇溶液(2.3 mL)加入至(2S，4R)-4-氟-吡咯烷-2-甲酸(0.25 g)的乙醇(2mL)悬浮液中并且将混合物在55℃下加热62小时。将反应混合物蒸发并且加入7 M氨的甲醇溶液(5.6mL)。将反应混合物在室温下放置36小时，然后蒸发，将残留物用甲醇(0.5mL)研磨并且过滤，得到标题化合物，为白色固体。1H NMR(d6-DMSO，400 MHz)7.68(s，1H)，7.37(s，1H)，5.30(d，J＝50 Hz，1H)，3.96(t，J＝8 Hz，1H)，3.40-3.12(m，2H)，2.48-2.31(m，1H)，2.02-1.81(m，1H)。
中间体I咪唑-1-甲酸[4’-甲基-2-(吡啶-3-基氨基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺
在室温下，将羰基二咪唑(506mg)加入至在DMF(10mL)中的4’-甲基-N＊2＊-吡啶-3-基-[4，5’]联噻唑-2，2’-二胺(740mg)中。在室温下放置18小时后，将反应混合物过滤并且将固体用CH2Cl2洗涤，得到标题化合物，为灰色粉末。
中间体I14’-甲基-N＊2＊-吡啶-3-基-[4，5’]联噻唑-2，2’-二胺
将N-[4’-甲基-2-(吡啶-3-基氨基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-乙酰胺(0.9g)在乙醇(30mL)和浓盐酸(3mL)的混合物中回流18小时，然后再加入盐酸(1.5mL)。在回流下进一步24小时后，将反应混合物冷却并且通过加入5％NaHCO3水溶液将pH调节至8-9。通过过滤收集标题化合物，用水洗涤并且干燥，得到淡棕色固体。
中间体I2N-[4’-甲基-2-(吡啶-3-基氨基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-乙酰胺
在-10℃下，将3-吡啶基硫脲(0.62g)加入至在乙醇(10mL)中的N-[5-(2-溴-乙酰基)-4-甲基-噻唑-2-基]-乙酰胺(1.1g，如WO 2005/068444中描述的制备)和三乙胺(1.68mL)中。在室温下搅拌30分钟后，加入水(50mL)并且通过过滤收集标题化合物，用水洗涤并且干燥，得到橙色固体。
中间体J咪唑-1-甲酸(2，4”-二甲基-[4，2’；4’，5”]三联噻唑-2”-基)-酰胺
标题化合物如中间体I中描述的制备，应用2-甲基-1，3-噻唑-4-羰基硫代酰胺代替3-吡啶基硫脲。标题化合物：HPLC(方法F)RT 5.86分钟；MS(方法D)M+H 389.0。
中间体K咪唑-1-甲酸[4’-甲基-2-(2-甲基-1H-咪唑-4-基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺
标题化合物如中间体I中描述的制备，应用2-甲基-1H-咪唑-4-羰基硫代酰胺代替3-吡啶基硫脲。标题化合物：HPLC(方法F)RT 3.55分钟；MS(方法D)M+H 372.1和M-H 370.1。
中间体L咪唑-1-甲酸(2-环丙基氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺
标题化合物如中间体I中描述的制备，应用环丙基-硫脲代替3-吡啶基硫脲。标题化合物：HPLC(方法F)RT 4.13分钟；MS(方法D)M+H 347.1。
中间体M咪唑-1-甲酸(2-二甲基氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺
标题化合物如中间体I中描述的制备，应用1，1-二甲基-硫脲代替3-吡啶基硫脲。标题化合物：HPLC(方法F)RT 4.20分钟；MS(方法D)在甲醇中制备的样品引起仅检测相应的尿烷(NH-CO-OCH3)：M+H 299.1。
中间体N咪唑-1-甲酸[2-(3-氮杂-二环[3.2.2]壬-3-基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺
标题化合物如中间体I中描述的制备，应用3-氮杂-二环[3.2.2]壬烷-3-硫代羟酸酰胺代替3-吡啶基硫脲。标题化合物：HPLC(方法F)RT 5.43分钟；MS(方法D)在甲醇中制备的样品引起仅检测相应的尿烷(NH-CO-OCH3)：M+H 379.1。
中间体O咪唑-1-甲酸(2-乙基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺
标题化合物如中间体I中描述的制备，应用N-(2-乙基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-乙酰胺代替N-[4’-甲基-2-(吡啶-3-基氨基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-乙酰胺。标题化合物：HPLC(方法F)RT 5.05分钟；MS(方法D)在甲醇中制备的样品引起仅检测相应的尿烷(NH-CO-OCH3)：M+H 283.8。
中间体O1N-(2-乙基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-乙酰胺
在室温下，将N-[5-(2-溴-乙酰基)-4-甲基-噻唑-2-基]-乙酰胺(71.6mg)(通过WO 2005/068444的方法制备)溶于CH3OH(5mL)中，然后加入硫代丙酰胺(21.4mg)和钼磷酸铵×H2O(37.5mg)。反应完全后，加入水(25mL)并且将沉淀过滤，得到标题化合物，为深绿色粉末。标题化合物：HPLC(方法F)RT 4.86分钟；MS(方法D)M+H 268.2和M-H 266.2。
中间体P咪唑-1-甲酸(4’-甲基-2-吡啶-3-基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺
标题化合物如中间体I中描述的制备，应用硫代烟酰胺代替3-吡啶基硫脲。标题化合物：HPLC(方法F)RT 4.13分钟；MS(方法D)在甲醇中制备的样品引起仅检测相应的尿烷(NH-CO-OCH3)：M+H 382.8。
中间体O咪唑-1-甲酸[4’-甲基-2-(1-甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺
标题化合物如中间体O中描述的制备，应用1-甲基-环丙烷硫代羟酸酰胺代替硫代丙酰胺。标题化合物：HPLC(方法F)RT 5.80分钟；MS(方法D)在甲醇中制备的样品引起仅检测相应的尿烷(NH-CO-OCH3)：M+H309.8。
中间体R(2S，4R)-4-二甲基氨基-吡咯烷-2-甲酸酰胺
在室温下，将(2S，4R)-4-二甲基氨基-吡咯烷-2-甲酸甲酯(225mg)和7M氨的甲醇(7mL)溶液在密封容器中放置18小时。蒸发并且用乙醚研磨，得到标题化合物，为白色固体。
中间体R1(2S，4R)-4-二甲基氨基-吡咯烷-2-甲酸甲酯
将(2S，4R)-4-二甲基氨基-吡咯烷-1，2-二甲酸1-苄基酯2-甲酯(420mg)、10％钯炭(80mg)和甲醇(10mL)的混合物在氢气气氛下搅拌16小时。过滤并且蒸发，得到标题化合物，将其用于下面的步骤而无需纯化。
中间体R2(2S，4R)-4-二甲基氨基-吡咯烷-1，2-二甲酸1-苄基酯2-甲酯
将氰基硼氢化钠(200mg)加入至(2S，4R)-4-氨基-吡咯烷-1，2-二甲酸1-苄基酯2-甲酯(400mg)、福尔马林(0.68mL)、乙酸(0.72mL)、三乙胺(0.2mL)和甲醇(2mL)的混合物中并且将混合物在室温下搅拌2小时。然后将反应混合物在二氯甲烷和碳酸氢钠水溶液之间分配，将二氯甲烷层蒸发并且通过正相色谱纯化，洗脱梯度为乙酸乙酯至在乙酸乙酯中的20％乙醇，得到显著的UV活性组分。将色谱物质溶于1M盐酸中，用乙醚洗涤2×，将水层用碳酸氢钠碱化，用乙醚萃取3×，经硫酸钠干燥并且蒸发，得到标题化合物，为淡黄色油状物。
中间体S(2S，4S)-4-二甲基氨基-吡咯烷-2-甲酸酰胺
在室温下，将(2S，4S)-4-二甲基氨基-吡咯烷-2-甲酸丁酯(326mg)和7M氨的甲醇(8mL)溶液在密封容器中放置18小时。过滤，蒸发并且用乙醚/甲醇研磨，得到标题化合物，为米色固体。
中间体S1(2S，4S)-4-二甲基氨基-吡咯烷-2-甲酸丁酯
将浓盐酸(0.3mL)加入至(2S，4S)-4-二甲基氨基-吡咯烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(400mg)和1-丁醇(4mL)的混合物中并且在115℃下加热18小时。冷却后，将反应混合物蒸发，然后在二氯甲烷和碳酸氢钠水溶液之间分配，并且将二氯甲烷层干燥并且蒸发，得到标题化合物，为棕色油状物，将其应用而无需进一步纯化。
中间体T咪唑-1-甲酸[2-(2-氟-苯基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺
标题化合物如中间体O中描述的制备，应用2-氟硫代苯甲酰胺代替硫代丙酰胺。标题化合物：由于溶解度差无HPLC；MS(方法D)在甲醇中制备的样品引起仅检测相应的尿烷(NH-CO-OCH3)：M+H 350.1和M-H348.1。
中间体U咪唑-1-甲酸(2-环丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺
标题化合物如中间体O中描述的制备，应用环丁烷硫代羟酸酰胺代替硫代丙酰胺。标题化合物：HPLC(方法F)RT 5.58分钟；MS(方法D)在甲醇中制备的样品引起仅检测相应的尿烷(NH-CO-OCH3)：M+H 310.1和M-H 308.1。
中间体V咪唑-1-甲酸[4’-甲基-2-(1-三氟甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺
标题化合物如中间体O中描述的制备，应用1-三氟甲基-环丙烷硫代羟酸酰胺代替硫代丙酰胺。标题化合物：HPLC(方法F)RT 3.533分钟；MS(方法D)在甲醇中制备的样品引起仅检测相应的尿烷(NH-CO-OCH3)：M+H 364.0和M-H 362.1。
中间体W(1S，5R)-2-氮杂-二环[3.1.0]己烷-1-甲酸酰胺
在80℃下，将(1S，5R)-2-氮杂-二环[3.1.0]己烷-1-甲酸乙酯(2.5g，通过Hercouet Tetrahedron Assymmetry 1996，7，1267-1268的方法制备)和7M氨在甲醇(20mL)中的混合物在密封容器中加热5天。将冷却的反应混合物蒸发并且用己烷/二氯甲烷研磨，得到标题化合物，为米色固体。
中间体X咪唑-1-甲酸[2-(1-乙基-丙基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺
标题化合物如中间体O中描述的制备，应用2-乙基-硫代丁酰胺代替硫代丙酰胺。HPLC(方法F)RT 5.892分钟；MS(方法D)在甲醇中制备的样品引起仅检测相应的尿烷(NH-CO-OCH3)：M+H 326.1和M-H 324.2。
中间体Y咪唑-1-甲酸(2-二甲基氨基甲基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺
标题化合物如中间体O中描述的制备，应用2-乙基-硫代丁酰胺代替硫代丙酰胺。HPLC(方法F)RT 3.433分钟；MS(方法D)在甲醇中制备的样品引起仅检测相应的尿烷(NH-CO-OCH3)：M+H 313.1和M-H 311.2。
中间体Z咪唑-1-甲酸(2-环丙基甲基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺
标题化合物如中间体O中描述的制备，应用2-环丙烷乙烷硫代酰胺代替硫代丙酰胺.标题化合物：HPLC(方法F)RT 5.17分钟；MS(方法D)M+H 294.2和M-H 292.2。
中间体AA 2-异丙基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基胺
Figure BPA00001195230600461
将1M HCl的甲醇溶液加入至N-(2-异丙基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-乙酰胺中并且将混合物在50℃下加热17小时。将反应混合物蒸发并且在饱和的碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯之间分配，用乙酸乙酯萃取3×并且经硫酸钠干燥。蒸发后获得标题化合物并且将其用于下一步而无需进一步纯化。
中间体AA1N-(2-异丙基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-乙酰胺在室温下，将氩气鼓入2-乙酰氨基-4-甲基噻唑(300mg)、2-溴-4-异丙基噻唑(475mg)、碳酸铯(1.25g)、乙酸钯(43.1mg)、三叔丁基磷
Figure BPA00001195230600462
四氟硼酸盐(111mg)和DMF(2.5mL)的混合物中达2分钟。然后，将反应混合物在150℃下加热1小时，冷却，通过硅藻土过滤，用甲醇(2×10mL)洗涤。通过蒸发除去甲醇后，通过0.45μm PTFE膜滤器过滤，并且通过质量指定的制备HPLC纯化，得到标题化合物。
实施例1(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-甲磺酰基氨基-4’-甲基后蒸发2×，然后溶于吡啶(1mL)中并且在室温下加入甲磺酰氯(0.009mL)。在室温下放置18小时后，加入另外的甲磺酰氯(0.009mL)，并且在进一步的24小时后，将反应混合物蒸发并且通过反相色谱纯化(方法A)。将包含-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]三氟乙酰胺
将(S)-吡咯烷-1，2--二甲酸2-酰胺1-[(2-氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]三氟乙酸酯(39mg)溶于在1，4-二
Figure BPA00001195230600463
烷中的4M HCl(2mL)中，然3.1分钟保留组分的级分蒸发，得到标题化合物，为澄清棕色玻璃状物。HPLC/MS(方法B)RT 1.38分钟，M+H 431.1。
实施例2和3(S)-吡咯烷-1，2--二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(4-氨磺酰基-苯基氨基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}和(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-{4-[((S)-2-氨基甲酰基-吡咯烷-1-羰基)-氨磺酰基]-苯基氨基}-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
在室温下，将羰基二咪唑(25mg)加入至在三乙胺(0.04mL)和DMF(1mL)中的4-(2’-氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2-基氨基)-苯磺酰胺(52mg)中。在室温下放置24小时后，加入另外的羰基二咪唑(25mg)，并且在进一步的6小时后，加入L-脯氨酰胺(19mg)。在室温下放置进一步的24小时后，将反应混合物用水(0.4mL)稀释并且直接应用于反相纯化(方法A)。将包含9.7分钟保留组分的级分蒸发，得到(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-{4-[((S)-2-氨基甲酰基-吡咯烷-1-羰基)-氨磺酰基]-苯基氨基}-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]，为澄清棕色玻璃状物。HPLC/MS(方法B)RT1.70分钟，M+H 648.2。将包含10.2分钟保留组分的级分蒸发，得到(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(4-氨磺酰基-苯基氨基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}，为棕色固体。HPLC/MS(方法B)RT 1.75分钟，M+H 508.0和M-H 506.2。
实施例4(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-苯磺酰基氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
将(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]三氟乙酸酯(25mg)溶于在1，4-二
Figure BPA00001195230600471
烷中的4M HCl(2mL)中，然后蒸发2×，然后溶于吡啶(1mL)中并且在室温下加入苯磺酰氯(0.009mL)。在室温下放置18小时和36小时后，加入另外部分的苯磺酰氯(0.009mL)，并且在进一步的6小时后，将反应混合物蒸发并且通过反相色谱纯化(方法A)。将包含10.9分钟保留组分的级分蒸发，得到标题化合物，为澄清棕色玻璃状物。HPLC/MS(方法B)RT 1.87分钟，M+H 493.0和M-H 491.1。
实施例5(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[-(3-氯-苯基氨基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}
在室温下，将羰基二咪唑(29mg)加入至在三乙胺(0.05mL)和DMF(1mL)中的N＊2＊-(3-氯-苯基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2，2’-二胺(52mg)中。在室温下放置24小时后，加入另外的羰基二咪唑(29mg)，并且在进一步的6小时后，加入L-脯氨酰胺(22mg)。在室温下放置进一步的24小时后，将反应混合物用水(0.4mL)稀释并且直接应用于反相纯化(方法A)。将包含13.7分钟保留组分的级分蒸发，得到标题化合物，为米色固体。HPLC/MS(方法B)RT 2.39分钟，M+H 463.0/465.0。
实施例6(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
将咪唑-1-甲酸(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺(40mg)、L-脯氨酰胺(20mg)和三乙胺(0.02mL)在DMF(1mL)中的混合物在室温下放置18小时。将反应混合物蒸发后，通过从甲醇水溶液中结晶，得到标题化合物，为白色固体。HPLC/MS(方法B)RT 2.40分钟，M+H 394.1和M-H392.3。
实施例7(2S，4R)-4-羟基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
将咪唑-1-甲酸(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺(139mg)、(2S，4R)-4-羟基-吡咯烷-2-甲酸酰胺(73mg)和三乙胺(0.14mL)在DMF(2mL)中的混合物在室温下放置18小时。将反应混合物蒸发并且将残留物通过反相色谱纯化(方法A)。将包含12.3分钟保留组分的级分蒸发，加入NaHCO3水溶液，并且将形成的固体通过过滤收集，用CH2Cl2和水洗涤。从乙醇水溶液中结晶，得到标题化合物，为类白色固体。HPLC/MS (方法C)RT 1.59分钟，M+H 409.8和M-H 408.0。
实施例8(2S，4S)-4-羟基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[{-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
将咪唑-1-甲酸(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺(139mg)、(2S，4S)-4-羟基-吡咯烷-2-甲酸酰胺(73mg)和三乙胺(0.14mL)在DMF(2mL)中的混合物在室温下放置18小时。将反应混合物蒸发并且将残留物通过反相色谱纯化(方法A)。将包含12.9分钟保留组分的级分蒸发，在NaHCO3水溶液和CH2Cl2之间分配，萃取4×CH2Cl2，将合并的有机层蒸发并且从乙醇水溶液中结晶，得到标题化合物，为白色固体。HPLC/MS(方法C)RT 1.65分钟，M+H 409.8和M-H 408.0。
实施例9(2S，3S)-3-羟基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]三氟乙酸酯
将咪唑-1-甲酸(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺(37mg)、(2S，3S)-3-羟基-吡咯烷-2-甲酸酰胺(15mg)和三乙胺(0.037mL)在DMF(1mL)中的混合物在室温下放置18小时。将反应混合物过滤并且蒸发后，通过从甲醇水溶液中结晶进行纯化，得到标题化合物，为米色固体。HPLC/MS(方法B)RT 2.21分钟，M+H 409.9和M-H 408.1。
实施例10(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
将咪唑-1-甲酸(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺(70mg)、(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺(28mg)和三乙胺(0.07mL)在DMF(1mL)中的混合物在室温下放置18小时。将反应混合物蒸发并且将残留物通过从甲醇水溶液中结晶进行纯化，得到标题化合物，为白色固体。HPLC/MS (方法B)RT 2.57分钟，M+H 407.9和M-H 406.0。
实施例11(2S，3S)-3-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
将咪唑-1-甲酸(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺(60mg)、(2S，3S)-3-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺(24mg)和三乙胺(0.06mL)在DMF(1mL)中的混合物在室温下放置18小时。将反应混合物过滤并且蒸发并且将残留物通过反相色谱纯化(方法A)。将包含15.3分钟保留组分的级分蒸发，在NaHCO3水溶液和CH2Cl2之间分配，萃取4×CH2Cl2，将合并的有机层蒸发并且从甲醇水溶液中结晶，得到标题化合物，为白色固体。HPLC/MS(方法B)RT 2.48分钟，M+H 407.9和M-H 406.0。
实施例12(2S，4R)-4-氟-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
将咪唑-1-甲酸(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺(60mg)、(2S，4R)-4-氟-吡咯烷-2-甲酸酰胺(25mg)和三乙胺(0.06mL)在DMF(1mL)中的混合物在室温下放置18小时。将反应混合物过滤并且蒸发并且将残留物通过反相色谱纯化(方法A)。将包含15.2分钟保留组分的级分蒸发，在NaHCO3水溶液和CH2Cl2之间分配，萃取3×CH2Cl2，将合并的有机层蒸发并且从热过滤的甲醇水溶液中结晶，得到标题化合物，为白色固体。HPLC/MS(方法B)RT 2.42分钟，M+H 411.8和M-H 410.0。
实施例13氮杂环丁烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
将咪唑-1-甲酸(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺(30mg)、氮杂环丁烷-2-甲酸酰胺(10mg)和三乙胺(0.03mL)在DMF(0.5mL)中的混合物在室温下放置36小时。将反应混合物蒸发并且将残留物通过从甲醇水溶液中结晶进行纯化，得到标题化合物，为白色固体。HPLC/MS(方法B)RT2.40分钟，M+H 379.8和M-H 378.0。
实施例14(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(吡啶-3-基氨基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}
将咪唑-1-甲酸[4’-甲基-2-(吡啶-3-基氨基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺(115mg)、(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺(42mg)和三乙胺(0.10mL)在DMF(1.5mL)中的混合物在室温下搅拌3.5小时。然后将反应混合物蒸发并且将标题化合物从甲醇和水中沉淀，得到灰色粉末。MS(方法D)M+H 444.1和M-H 442.2。
实施例15(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(吡啶-3-基氨基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}
将咪唑-1-甲酸[4’-甲基-2-(吡啶-3-基氨基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺(115mg)、L-脯氨酰胺(38mg)和三乙胺(0.10mL)在DMF(1.5mL)中的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物直接通过中等压力反相色谱纯化(C18柱，梯度在含0.1％三氟乙酸的水中的0-32％CH3CN)，将级分蒸发以除去CH3CN并且用NaHCO3将pH调节至8-9。然后通过过滤收集标题化合物，为棕色固体。MS(方法D)M+H 430.1和M-H 428.1。
实施例16(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(，4”-二甲基[4，2’；4’，5”]三联噻唑-2”-基)-酰胺]
Figure BPA00001195230600511
将咪唑-1-甲酸(2，4”-二甲基-[4，2’；4’，5”]三联噻唑-2”-基)-酰胺(25mg)悬浮于DMF(1mL)中，然后在室温下加入(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺(9.1mg)和三乙胺(0.022mL)。将反应混合物搅拌直至反应完全(30分钟)。加入EtOAc(50mL)并且将混合物用水(2×)洗涤。将该层在减压下从溶剂中分离出来并且将残留物溶于二
Figure BPA00001195230600512
烷中并且冻干。获得标题化合物，为白色粉末；HPLC(方法F)RT 4.65分钟；MS(方法D)M+H 449.0和M-H 447.1。
实施例17(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(2-甲基-1H-咪唑-4-基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}
标题化合物如实施例16中描述的制备，应用咪唑-1-甲酸[4’-甲基-2-(2-甲基-1H-咪唑-4-基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺和(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替咪唑-1-甲酸(2，4”-二甲基-[4，2’；4’，5”]三联噻唑-2”-基)-酰胺和(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC(方法F)RT 3.61分钟；MS (方法D)M+H 418.1和M-H 416.2。
实施例18(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(2-甲基-1H-咪唑-4-基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}
Figure BPA00001195230600521
标题化合物如实施例16中描述的制备，应用咪唑-1-甲酸[4’-甲基-2-(2-甲基-1H-咪唑-4-基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺代替咪唑-1-甲酸(2，4”-二甲基-[4，2’；4’，5”]三联噻唑-2”-基)-酰胺和(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC(方法F)RT 3.73分钟；MS(方法D)M+H 432.1和M-H 430.2。
实施例19(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-环丙基氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
Figure BPA00001195230600522
标题化合物如实施例16中描述的制备，应用咪唑-1-甲酸(2-环丙基氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺和(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替咪唑-1-甲酸(2，4”-二甲基-[4，2’；4’，5”]三联噻唑-2”-基)-酰胺和(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 3.79分钟；MS(方法D)M+H393.1和M-H 391.2。
实施例20(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-环丙基氧基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
Figure BPA00001195230600531
标题化合物如实施例19中描述的制备，应用(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC(方法F)RT 3.90分钟；MS(方法D)M+H 407.1和M-H 405.2。
实施例21(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-二甲基氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
Figure BPA00001195230600532
标题化合物如实施例16中描述的制备，应用咪唑-1-甲酸(2-二甲基氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺和(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替咪唑-1-甲酸(2，4”-二甲基-[4，2’；4’，5”]三联噻唑-2”-基)-酰胺和(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC(方法F)RT 3.17分钟；MS(方法D)M+H381.1和M-H 379.2。
实施例22(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-二甲基氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
Figure BPA00001195230600533
标题化合物如实施例21中描述的制备，应用(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 3.87分钟；MS(方法D)M+H 395.1和M-H 393.2。
实施例23(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[2-(3-氮杂-二环[3.2.2]壬-3-基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}
Figure BPA00001195230600541
标题化合物如实施例16中描述的制备，应用咪唑-1-甲酸[2-(3-氮杂-二环[3.2.2]壬-3-基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺和(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替咪唑-1-甲酸(2，4”-二甲基-[4，2’；4’，5”]三联噻唑-2”-基)-酰胺和(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 4.54分钟；MS(方法D)M+H 460.9。
实施例24(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[2-(3-氮杂-二环[3.2.2]壬-3-基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}
Figure BPA00001195230600542
标题化合物如实施例23中描述的制备，应用(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 4.78分钟；MS(方法D)M+H 474.9。
实施例25(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-乙基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
标题化合物如实施例16中描述的制备，应用咪唑-1-甲酸(2-乙基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺代替咪唑-1-甲酸(2，4”-二甲基-[4，2’；4’，5”]三联噻唑-2”-基)-酰胺和(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC(方法F)RT 4.27分钟；MS(方法D)M+H 379.8。
实施例26(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(4’-甲基-2-吡啶-3-基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
Figure BPA00001195230600552
标题化合物如实施例16中描述的制备，应用咪唑-1-甲酸(4’-甲基-2-吡啶-3-基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺和(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替咪唑-1-甲酸(2，4”-二甲基-[4，2’；4’，5”]三联噻唑-2”-基)-酰胺和(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 3.66分钟；MS(方法D)M+H414.8。
实施例27(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(4’-甲基-2-吡啶-3-基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
标题化合物如实施例26中描述的制备，应用(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 3.78分钟；MS(方法D)M+H 428.8。
实施例28(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(1-甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}
Figure BPA00001195230600562
标题化合物如实施例16中描述的制备，应用咪唑-1-甲酸[4’-甲基-2-(1-甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺代替咪唑-1-甲酸(2，4”-二甲基-[4，2’；4’，5”]三联噻唑-2”-基)-酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 4.83分钟；MS(方法D)M+H 405.8。
实施例29(2S，4R)-4-羟基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(1-甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}
Figure BPA00001195230600563
标题化合物如实施例28中描述的制备，应用(2S，4R)-4-羟基-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC(方法F)RT 4.21分钟；MS(方法D)M+H 407.8。
实施例30（2S，4S)-4-羟基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(1-甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}
标题化合物如实施例28中描述的制备，应用(2S，4S)-4-羟基-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 4.35分钟；MS(方法D)M+H 407.8。
实施例31(2S，4R)-4-二甲基氨基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
Figure BPA00001195230600572
标题化合物如实施例11中描述的制备，应用(2S，4R)-4-二甲基氨基-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替(2S，3S)-3-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。通过色谱经硅胶纯化，用CH2Cl2/CH3OH(82/18％)洗脱。标题化合物：HPLC(方法F)RT4.20分钟；MS(方法D)M+H 437.1和M-H 435.2。
实施例32(2S，4R)-4-二甲基氨基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(1-甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}
Figure BPA00001195230600581
标题化合物如实施例28中描述的制备，应用(2S，4R)-4-二甲基氨基-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 4.13分钟；MS(方法D)M+H 435.1和M-H 433.1。
实施例33(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(1-甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}
Figure BPA00001195230600582
标题化合物如实施例32中描述的制备，应用(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替(2S，4R)-4-二甲基氨基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 4.63分钟；MS(方法D)M+H 392.1和M-H 390.1。
实施例34(2S，4S)-4-二甲基氨基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
Figure BPA00001195230600583
标题化合物如实施例11中描述的制备，应用(2S，4S)-4-二甲基氨基-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替(2S，3S)-3-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 4.23分钟；MS(方法D)M+H 437.2和M-H 435.2。
实施例35(2S，4S)-4-二甲基氨基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(1-甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}
Figure BPA00001195230600591
标题化合物如实施例28中描述的制备，应用(2S，4S)-4-二甲基氨基-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 4.17分钟；MS(方法D)M+H 435.2和M-H 433.2。
实施例36(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-1-2-(2-氟-苯基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}
Figure BPA00001195230600592
标题化合物如实施例16中描述的制备，应用咪唑-1-甲酸[2-(2-氟-苯基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺和(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替咪唑-1-甲酸(2，4”-二甲基-[4，2’；4’，5”]三联噻唑-2”-基)-酰胺和(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 4.98分钟；MS(方法D)M+H432.0和M-H 430.1。
实施例37(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-环丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
Figure BPA00001195230600601
标题化合物如实施例16中描述的制备，应用咪唑-1-甲酸(2-环丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺和(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替咪唑-1-甲酸(2，4”-二甲基-[4，2’；4’，5”]三联噻唑-2”-基)-酰胺和(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 4.53分钟；MS(方法D)M+H 392.1和M-H 390.1。
实施例38(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-环丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
Figure BPA00001195230600602
标题化合物如实施例37中描述的制备，应用(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 4.71分钟；MS(方法D)M+H 406.1和M-H 404.2。
实施例39(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(1-三氟甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}
Figure BPA00001195230600603
标题化合物如实施例16中描述的制备，应用咪唑-1-甲酸[4’-甲基-2-(1-三氟甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺代替咪唑-1-甲酸(2，4”-二甲基-[4，2’；4’，5”]三联噻唑-2”-基)-酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 4.88分钟；MS(方法D)M+H 460.0和M-H 458.0。
实施例40(1S，5R)-2-氮杂-二环[3.1.0]己烷-1，2-二甲酸1-酰胺2-[(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
标题化合物如实施例11中描述的制备，应用(1S，5R)-2-氮杂-二环[3.1.0]己烷-1-甲酸酰胺代替(2S，3S)-3-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 4.90分钟；MS(方法D)M+H 406.1和M-H 404.1。
实施例41(1S，5R)-2-氮杂-二环[3.1.0]己烷-1，2-二甲酸1-酰胺2-[(2-环丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
Figure BPA00001195230600612
标题化合物如实施例16中描述的制备，应用咪唑-1-甲酸(2-环丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺和(1S，5R)-2-氮杂-二环[3.1.0]己烷-1-甲酸酰胺代替咪唑-1-甲酸(2，4”-二甲基-[4，2’；4’，5”]三联噻唑-2”-基)-酰胺和(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 4.68分钟；MS(方法D)M+H 404.1和M-H 402.1。
实施例42(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[2-(1-乙基-丙基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}
Figure BPA00001195230600621
标题化合物如实施例16中描述的制备，应用咪唑-1-甲酸[2-(1-乙基-丙基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺和(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替咪唑-1-甲酸(2，4”-二甲基-[4，2’；4’，5”]三联噻唑-2”-基)-酰胺和(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 4.86分钟；MS(方法D)M+H408.1和M-H 406.2。
实施例43(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[2-(1-乙基-丙基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}
标题化合物如实施例42中描述的制备，应用(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 5.05分钟；MS(方法D)M+H 422.1和M-H 420.2。
实施例44(1S，5R)-2-氮杂-二环[3.1.0]己烷-1，2-二甲酸1-酰胺2-{[2-(1-乙基-丙基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}
Figure BPA00001195230600623
标题化合物如实施例42中描述的制备，应用(1S，5R)-2-氮杂-二环[3.1.0]己烷-1-甲酸酰胺代替(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 5.00分钟；MS(方法D)M+H 420.1和M-H 418.1。
实施例45(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(1-三氟甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}
Figure BPA00001195230600631
标题化合物如实施例39中描述的制备，应用(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 4.78分钟；MS(方法D)M+H 446.0和M-H 444.1。
实施例46(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-二甲基氨基甲基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
Figure BPA00001195230600632
标题化合物如实施例16中描述的制备，应用咪唑-1-甲酸(2-二甲基氨基甲基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺和(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替咪唑-1-甲酸(2，4”-二甲基-[4，2’；4’，5”]三联噻唑-2”-基)-酰胺和(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 3.42分钟；MS(方法D)M+H395.1和M-H 393.2。
实施例47(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-二甲基氨基甲基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
Figure BPA00001195230600641
标题化合物如实施例46中描述的制备，应用(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 3.54分钟；MS(方法D)M+H 409.1和M-H 407.2。
实施例48(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-环丙基甲基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
Figure BPA00001195230600642
标题化合物如实施例16中描述的制备，应用咪唑-1-甲酸(2-环丙基甲基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺和(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替咪唑-1-甲酸(2，4”-二甲基-[4，2’；4’，5”]三联噻唑-2”-基)-酰胺和(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 4.46分钟；MS(方法D)M+H392.1和M-H 390.0。
实施例49(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-环丙基甲基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
Figure BPA00001195230600643
标题化合物如实施例48中描述的制备，应用(S)-2-甲基-吡咯烷-2-甲酸酰胺代替(S)-吡咯烷-2-甲酸酰胺。标题化合物：HPLC：(方法F)RT 4.59分钟；MS(方法D)M+H 406.1和M-H 404.2。
实施例50(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-异丙基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]
Figure BPA00001195230600651
在室温下，将三乙胺(3当量)加入至2-异丙基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基胺(1.0当量)和羰基二咪唑(1.1当量)在DMF(足以得到0.1M溶液)中的混合物中并且将混合物在50℃下加热17小时。加入(S)-脯氨酰胺(1.1当量)并且将混合物在50℃下进一步加热17小时。然后将反应混合物通过0.45μm PTFE膜滤器过滤并且通过质量指定的制备HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC/MS RT 1.02分钟，M+H 380.0。
实施例A：作为PI3激酶抑制剂的有效性
PI3K KinaseGlo试验：将50nL化合物稀释液分散至黑色384-孔低体积非结合苯乙烯(NBS)板(Costar Cat.No.NBS#3676)中。将L-a-磷脂酰肌醇(PI)(以10mg/mL甲醇溶液提供)转移至玻璃试管中并且在氮气流下干燥。然后通过涡旋将其悬浮于3％辛基葡糖苷(OG)中并且在4℃下贮存。KinaseGlo发光激酶试验(Promega，Madison/WI，USA)是通过定量激酶反应后保留在溶液中的ATP的量测定激酶活性的均相HTS方法。
加入含PI3K亚型的5μL PI/OG混合物(表1)。通过加入5μLATP-混合物开始激酶反应，所述的混合物在终体积10μL中包含10mMTRIS-HCl pH 7.5、3mM MgCl2、50mM NaCl、0.05％CHAPS、1mM DTT和1μM ATP，并且存在于室温下。将反应用10-KinaseGlo停止并且将板在Synergy2读板器中读10分钟，每孔应用积分时间为0.1秒。将2.5μMpan-class 1PI3激酶抑制剂(标准)加入至试验板中以产生激酶反应的100％抑制，并且通过溶剂介质(在水中的90％DMSO)给出0％抑制。将标准用作参考化合物并且以16个稀释点(一式两份)的形式包括在所有的试验板中。
表1PI3K KinaseGlo：试验条件和试剂方案
Figure BPA00001195230600661
PI3K的克隆
PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kδ构建体是p85αiSH2结构域和不同的p110同种型的融合。p85α片段和p110同种型基因是通过PCR产生的，第一链cDNA由RT-PCR从商购胎盘、睾丸和脑的RNA产生，如下所述。PI3Kγ构建体从Roger Williams实验室，MRC Laboratory of Molecular Biology，Cambridge，UK(2003年11月)获得并且被描述(Pacold，Michael E.；Suire，Sabine；Perisic，Olga；Lara-Gonzalez，Samuel；Davis，Colin T.；Walker，Edward H.；Hawkins，Phillip T.；Stephens，Len；Eccleston，John F.；Williams，Roger L.Crystal structure and functional analysis of Rasbinding to its effector phosphoinositide 3-kinase gamma(结合其效应器磷脂酰肌醇3-激酶γ的Ras的晶体结构和功能分析).Cell(2000)，103(6)，931-943)。
PI3Kα构建体和蛋白质
  PI3Kαwt   BV1075   p85iSH2(461-568)-GGGGGGGGGGGG-p110α(21-1068)-His
BV1075：杆状病毒BV-1075构建体是通过三部分连接产生的，所述的连接包括p85片段和p110α片段(克隆至载体pBlueBac4.5)。p85片段衍生自用Nhe/Spe消化的质粒p1661-2。p110α衍生自通过测序证明的克隆并且用于LR410作为SpeI/HindIII片段。对于杆状病毒表达载体LR410的产生，应用Gateway LR反应将插入片段转移至Gateway适合的pBlueBac4.5(Invitrogen)载体中。将克隆载体pBlueBac4.5(InVitrogen)用Nhe/HindIII消化。这产生了构建体PED 153.8。p85组分(iSH2)是通过PCR产生的，应用ORF 318(上述)作为模板以及一个正向引物KAC1028(5’-GCTAGCATGCGAGAATATGATAGAT-TATATGAAG-AATATACC)和两个反向引物KAC1029(5’-GCCTCCACCAC-CTCCGCCTG-GTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC)和KAC1039(5’-TACTAGTC-CGCCTCCAC-CACCTCCGCCTCCACCACCTCCGCC)。两个反向引物重叠并且将12×Gly连接体和p110α基因的N-端序列掺入至SpeI位点。在BV1052构建体中12×Gly连接体代替了单一的Gly连接体。将PCR片段克隆至pCR2.1TOPO(Invitrogen)中。在产生的克隆中，通过测序确定p1661-2是正确的。将该质粒用Nhe和SpeI消化并且将产生的片段进行凝胶分离并且纯化用于亚克隆。
p110α克隆片段通过将克隆LR410(参见上述)用Spe I和HindIII酶消化产生。SpeI位点在p110α基因的编码区域。将产生的片段进行凝胶分离并且纯化用于亚克隆。克隆载体pBlueBac4.5(Invitrogen)是通过用Nhe和HindIII酶消化制备的。将切割载体用Qiagen柱纯化，然后用小牛肠碱性磷酸酶(CIP)(BioLabs)脱磷酸化。CIP反应完成后，将切割载体再次柱纯化以产生最终的载体。应用Roche快速连接酶和销售说明书进行三部分连接。通过测序证明最终质粒。
激酶结构域。
BV 1075的蛋白序列：
1    MREYDRLYEE YTRTSQEIQM KRTAIEAFNE TIKIFEEQCQ TQERYSKEYI EKFKREGNEK
61   EIQRIMHNYD KLKSRISEII DSRRRLEEDL KKQAAEYREI DKRMNSIKPG GGGGGGGGGG
121  GLVECLLPNG MIVTLECLRE ATLITIKHEL FKEARKYPLH QLLQDESSYI FVSVTQEAER
181  EEFFDETRRL CDLRLFQPFL KVIEPVGNRE EKILNREIGF AIGMPVCEFD MVKDPEVQDF
241  RRNILNVCKE AVDLRDLNSP HSRAMYVYPP NVESSPELPK HIYNKLDKGQ IIVVIWVIVS
301  PNNDKQKYTL KINHDCVPEQ VIAEAIRKKT RSMLLSSEQL KLCVLEYQGK YILKVCGCDE
361  YFLEKYPLSQ YKYIRSCIML GRMPNLMLMA KESLYSQLPM DCFTMPSYSR RISTATPYMN
421  GETSTKSLWV INSALRIKIL CATYVNVNIR DIDKIYVRTG IYHGGEPLCD NVNTQRVPCS
481  NPRWNEWLNY DIYIPDLPRA ARLCLSICSV KGRKGAKEEH CPLAWGNINL FDYTDTLVSG
541  KMALNLWPVP HGLEDLLNPI GVTGSNPNKE TPCLELEFDW FSSVVKFPDM SVIEEHANWS
601  VSREAGFSYS HAGLSNRLAR DNELRENDKE QLKAISTRDP LSEITEQEKD FLWSHRHYCV
661  TIPEILPKLL LSVKWNSRDE VAQMYCLVKD WPPIKPEQAM ELLDCNYPDP MVRGFAVRCL
721  EKYLTDDKLS QYLIQLVQVL KYEQYLDNLL VRFLLKKALT NQRIGHFFFW HLKSEMHNKT
781  VSQRFGLLLE SYCRACGMYL KHLNRQVEAM EKLINLTDIL KQEKKDETQK VQMKFLVEQM
841  RRPDFMDALQ GFLSPLNPAH QLGNLRLEEC RIMSSAKRPL WLNWENPDIM SELLFQNNEI
901  IFKNGDDLRQ DMLTLQIIRI MENIWQNQGL DLRMLPYGCL SIGDCVGLIE VVRNSHTIMQ
961  IQCKGGLKGA LQFNSHTLHQ WLKDKNKGEI YDAAIDLFTR SCAGYCVATF ILGIGDRHNS
1021 NIMVKDDGQL FHIDFGHFLD HKKKKFGYKR ERVPFVLTQD FLIVISKGAQ ECTKTREFER
1081 FQEMCYKAYL AIRQHANLFI NLFSMMLGSG MPELQSFDDI AYIRKTLALD KTEQEALEYF
1141 MKQMNDAHHG GWTTKMDWIF HTIKQHALNE  LGGAHHHHHH
PI3Kβ构建体和蛋白质
PI3Kβ   BV949   P85iSH2(461-N58K-568)-GGGGGG-p110β(2-1070)-His
BV949：p85PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kδ亚单位以及全长p110β亚单位的干扰SH2结构域(iSH2)的PCR产物通过重叠PCR产生并且融合。iSH2PCR产物是从第一链cDNA获得的，所述的第一链cDNA由RT-PCR从商购胎盘、睾丸和脑的人RNA(Clontech)产生，最初应用引物gwG130-p01(5’-CGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3’)和gwG130-p02(5’-TGGTTT-AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3’)。然后，在二级PCR反应中分别在p85iSH2片段的5’端和3’端加入Gateway重组AttB1位点和连接序列，应用引物gwG130-p03(5’-GGGACAAGTT-TGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATATACATATGCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3’)和gwG130-p05(5’-ACTGAAGCATCCTCCTC-CTCCTCCT-CCTGGTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC-3’)。p110β片段是通过PCR获得的，应用模板p110克隆(来源未知，测序证明)，应用引物gwG130-p04(5’-ATTAAACCAGGAGGAGGAGGAGGAGGATGCTT-CAGTTTCATAATGCCTCCTGCT-3’)，其包含连接序列和p110β的5’端，以及gwG130-p06(5’-AGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCCAGATC-TGTAGTCTTTCCGAA-CTGTGTG-3’)，其包含融合至组氨酸标签的p110-β的3’端序列。p85-iSH2/p110β融合蛋白通过重叠PCR装配，其是在iSH2片段的3’端和p110β片段的5’端的连接反应，应用上述gwG130-p03引物和包含重叠组氨酸标签和AttB2重组序列的引物(5’-GGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTTAAGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCC-3’)。将终产物在Gateway(Invitrogen)OR反应中重组至供体载体pDONR201(InVitrogen)中以产生ORF253进入克隆。该克隆通过测序证明并且用于Gateway LR反应(Invitrogen)以将插入片段转移至Gateway适合的pBlueBaac4.5(Invitrogen)载体中用于产生杆状病毒表达载体LR280。该LR280在p85序列中具有氨基酸突变。
激酶结构域。
BV949的蛋白序列：
1   MREYDRLYEE YTRTSQEIQM KRTAIEAFNE TIKIFEEQCQ TQERYSKEYI EKFKREGKEK
61  EIQRIMHNYD KLKSRISEII DSRRRLEEDL KKQAAEYREI DKRMNSIKPG GGGGGCFSFI
121 MPPAMADILD IWAVDSQIAS DGSIPVDFLL PTGIYIQLEV PREATISYIK QMLWKQVHNY
181 PMFNLLMDID SYMFACVNQT AVYEELEDET RRLCDVRPFL PVLKLVTRSC DPGEKLDSKI
241 GVLIGKGLHE FDSLKDPEVN EFRRKMRKFS EEKILSLVGL SWMDWLKQTY PPEHEPSIPE
301 NLEDKLYGGK LIVAVHFENC QDVFSFQVSP NMNPIKVNEL AIQKRLTIHG KEDEVSPYDY
361 VLQVSGRVEY VFGDHPLIQF QYIRNCVMNR ALPHFILVEC CKIKKMYEQE MIAIEAAINR
421 NSSNLPLPLP PKKTRIISHV WENNNPFQIV LVKGNKLNTE ETVKVHVRAG LFHGTELLCK
481 TIVSSEVSGK NDHIWNEPLE FDINICDLPR MARLCFAVYA VLDKVKTKKS TKTINPSKYQ
541 TIRKAGKVHY PVAWVNTMVF DFKGQLRTGD IILHSWSSFP DELEEMLNPM GTVQTNPYTE
601 NATALHVKFP ENKKQPYYYP PFDKIIEKAA EIASSDSANV SSRGGKKFLP VLKEILDRDP
661 LSQLCENEMD LIWTLRQDCR EIFPQSLPKL LLSIKWNKLE DVAQLQALLQ IWPKLPPREA
721  LELLDFNYPD QYVREYAVGC LRQMSDEELS QYLLQLVQVL KYEPFLDCAL SRFLLERALG
781  NRRIGQFLFW HLRSEVHIPA VSVQFGVILE AYCRGSVGHM KVLSKQVEAL NKLKTLNSLI
841  KLNAVKLNRA KGKEAMHTCL KQSAYREALS DLQSPLNPCV ILSELYVEKC KYMDSKMKPL
901  WLVYNNKVFG EDSVGVIFKN GDDLRQDMLT LQMLRLMDLL WKEAGLDLRM LPYGCLATGD
961  RSGLIEVVST SETIADIQLN SSNVAAAAAF NKDALLNWLK EYNSGDDLDR AIEEFTLSCA
1021 GYCVASYVLG IGDRHSDNIM VKKTGQLFHI DFGHILGNFK SKFGIKRERV PFILTYDFIH
1081 VIQQGKTGNT EKFGRFRQCC EDAYLILRRH GNLFITLFAL MLTAGLPELT SVKDIQYLKD
1141 SLALGKSEEE ALKQFKQKFD EALRESWTTK VNWMAHTVRK DYRSGAHHHH HHGA
激酶结构域。
PI3Kγ构建体和蛋白质
  PI3KY   BV950   p110Y(Δ143-[Met144-1102])-His
从Roger Williams实验室，MRC Laboratory of Molecular Biology，Cambridge，UK(2003年11月)获得构建体。该构建体的描述(Pacold，Michael E.；Suire，Sabine；Perisic，Olga；Lara-Gonzalez，Samuel；Davis，Colin  T.；Walker，Edward  H.；Hawkins，Phillip  T.；Stephens，Len；Eccleston，John F.；Williams，Roger L.Crystal structure and functionalanalysis of Ras binding to its effector phosphoinositide 3-linase gamma(结合其效应器磷脂酰肌醇3-激酶γ的Ras的晶体结构和功能分析).Cell(2000)，103(6)，931-943)。该构建体缺少N端144aa。
BV950的蛋白序列：
1   MSEESQAFQR QLTALIGYDV TDVSNVHDDE LEFTRRGLVT PRMAEVASRD PKLYAMHPWV
61  TSKPLPEYLW KKIANNCIFI VIHRSTTSQT IKVSPDDTPG AILQSFFTKM AKKKSLMDIP
121 ESQSEQDFVL RVCGRDEYLV GETPIKNFQW VRHCLKNGEE IHVVLDTPPD PALDEVRKEE
181 WPLVDDCTGV TGYHEQLTIH GKDHESVFTV SLWDCDRKFR VKIRGIDIPV LPRNTDLTVF
241 VEANIQHGQQ VLCQRRTSPK PFTEEVLWNV WLEFSIKIKD LPKGALLNLQ IYCGKAPALS
301 SKASAESPSS ESKGKVRLLY YVNLLLIDHR FLLRRGEYVL HMWQISGKGE DQGSFNADKL
361 TSATNPDKEN SMSISILLDN YCHPIALPKH QPTPDPEGDR VRAEMPNQLR KQLEAIIATD
421 PLNPLTAEDK ELLWHFRYES LKHPKAYPKL FSSVKWGQQE IVAKTYQLLA RREVWDQSAL
481 DVGLTMQLLD CNFSDENVRA IAVQKLESLE DDDVLHYLLQ LVQAVKFEPY HDSALARFLL
541 KRGLRNKRIG HFLFWFLRSE IAQSRHYQQR FAVILEAYLR GCGTAMLHDF TQQVQVIEML
601 QKVTLDIKSL SAEKYDVSSQ VISQLKQKLE NLQNSQLPES FRVPYDPGLK AGALAIEKCK
661 VMASKKKPLW LEFKCADPTA LSNETIGIIF KHGDDLRQDM LILQILRIME SIWETESLDL
721 CLLPYGCIST GDKIGMIEIV KDATTIAKIQ QSTVGNTGAF KDEVLNHWLK EKSPTEEKFQ
781 AAVERFVYSC AGYCVATFVL GIGDRHNDNI MITETGNLFH IDFGHILGNY KSFLGINKER
841 VPFVLTPDFL FVMGTSGKKT SPHFQKFQDI CVKAYLALRH HTNLLIILFS MMLMTGMPQL
901 TSKEDIEYIR DALTVGKNEE DAKKYFLDQI EVCRDKGWTV QFNWFLHLVL GIKQGEKHSA
961 HHHHHH
PI3Kδ构建体和蛋白质
PI3Kδ   BV1060   p85iSH2(461-568)-GGGGGG-p110δ(2-1044)-His
BV1060：p85亚单位的干扰SH2结构域(iSH2)和全长p110δ亚单位的PCR产物通过重叠PCR产生并且融合。iSH2PCR产物通过应用模板ORF318(参见上述)以及引物gwG130-p03(5’-GGGACAAG-TTTGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATATACATATGC-GAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3’)和gwG154-p04(5’-TCCTCCTCCT-CCTCCTCCTGGTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC-3’)产生。p110δ片段是从第一链cDNA获得的，所述的第一链cDNA由RT-PCR从商购胎盘、睾丸和脑的人RNA(Clontech)产生，最初应用引物gwG154-p01(5’-ATGCCCCCTGGGGTGGACTGCCCCAT-3’)和gwG154-p02(5’-CTACTGCCTGT-TGTCTTTGGACACGT-3’)。然后，分别在p110δ片段的5’端和3’端加入PCR反应连接序列和组氨酸标签，应用引物gw154-p03(5’-ATTAAACCAGGAGGAGGAGGAGGAGGACCCCCTGGGGTGGAC-TGCCCCATGGA-3’)和gwG154-p06(5’-AGCTCCGTGATGGTGATGGTGAT-GTGCT-CCCTGCCTGTTGTCTTTGGACACGTTGT-3’)。p85-iSH2/p110δ融合蛋白在第三PCR反应中装配，通过在iSH2片段的3’端和p110δ片段的5’端的重叠连接实现，应用上述gwG130-p03引物和包含重叠组氨酸标签和Gateway(Invitrogen)AttB2重组序列的引物(5’-GGG-ACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTTAA-GCTCCGTGATGGTGATGGTGAGTGCTCC-3’)。将终产物在Gateway OR反应中重组至供体载体pDONR201(Invitrogen)中以产生ORF319进入克隆。该克隆通过测序证明并且用于Gateway LR反应(Invitrogen)以将插入片段转移至Gateway适合的pBlueBac4.5(Invitrogen)载体中用于产生杆状病毒表达载体LR415。
BV1060的蛋白序列：
1    MREYDRLYEE YTRTSQEIQM KRTAIEAFNE TIKIFEEQCQ TQERYSKEYI EKFKREGNEK
61   EIQRIMHNYD KLKSRISEII DSRRRLEEDL KKQAAEYREI DKRMNSIKPG GGGGPPGVD
121  CPMEFWTKEE NQSVVVDFLL PTGVYLNFPV SRNANLSTIK QLLWHRAQYE PLFHMLSGPE
181  AYVFTCINQT AEQQELEDEQ RRLCDVQPFL PVLRLVAREG DRVKKLINSQ ISLLIGKGLH
241  EFDSLCDPEV NDFRAKMCQF CEEAAARRQQ LGWEAWLQYS FPLQLEPSAQ TWGPGTLRLP
301  NRALLVNVKF EGSEESFTFQ VSTKDVPLAL MACALRKKAT VFRQPLVEQP EDYTLQVNGR
361  HEYLYGSYPL CQFQYICSCL HSGLTPHLTM VHSSSILAMR DEQSNPAPQV QKPRAKPPPI
421  PAKKPSSVSL WSLEQPFRIE LIQGSKVNAD ERMKLVVQAG LFHGNEMLCK TVSSSEVSVC
481  SEPVWKQRLE FDINICDLPR MARLCFALYA VIEKAKKARS TKKKSKKADC PIAWANLMLF
541  DYKDQLKTGE RCLYMWPSVP DEKGELLNPT GTVRSNPNTD SAAALLICLP EVAPHPVYYP
601  ALEKILELGR HSECVHVTEE EQLQLREILE RRGSGELYEH EKDLVWKLRH EVQEHFPEAL
661  ARLLLVTKWN KHEDVAQMLY LLCSWPELPV LSALELLDFS FPDCHVGSFA IKSLRKLTDD
721  ELFQYLLQLV QVLKYESYLD CELTKFLLDR ALANRKIGHF LFWHLRSEMH VPSVALRFGL
781  ILEAYCRGST HHMKVLMKQG EALSKLKALN DFVKLSSQKT PKPQTKELMH LCMRQEAYLE
841  ALSHLQSPLD PSTLLAEVCV EQCTFMDSKM KPLWIMYSNE EAGSGGSVGI IFKNGDDLRQ
901  DMLTLQMIQL MDVLWKQEGL DLRMTPYGCL PTGDRTGLIE VVLRSDTIAN IQLNKSNMAA
961  TAAFNKDALL NWLKSKNPGE ALDRAIEEFT LSCAGYCVAT YVLGIGDRHS DNIMIRESGQ
1021 LFHIDFGHFL GNFKTKFGIN RERVPFILTY DFVHVIQQGK TNNSEKFERF RGYCERAYTI
1081 LRRHGLLFLH LFALMRAAGL PELSCSKDIQ YLKDSLALGK TEEEALKHFR VKFNEALRES
1141 WKTKVNWLAH NVSKDNRQEL GGAHHHHHH
PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kγ构建体的纯化
PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kγ在两个色谱步骤中纯化：固定金属亲和色谱(IMAC)，在Ni sepharose树脂(GE Healthcare)上，以及凝胶过滤，应用Superdex 20026/60柱(GE Healthcare)。将所有的缓冲液冷却至4℃并且裂解在冰上冷却进行。柱级分在室温下进行。所有用于纯化PI3Kβ的缓冲液除了下述外还包含0.05％Triton X100。
将典型的从10L Tn5细胞培养基中冻干的细胞悬浮于“裂解缓冲液”20mM Tris-Cl，pH 7.5、500mM NaCl、5％甘油、5mM咪唑、1mM NaF、0.1μg/mL冈田酸(OAA)、5mM BME、1×完全蛋白酶抑制剂混合物-无EDTA(20片/1L缓冲液，Roche Applied Sciences)、benzonase(25U/mL缓冲液，EMD Biosciences)中，比例为1∶6v/v的沉淀：裂解缓冲液并且通过douncing 20strokes应用紧密研杵进行机械裂解。将裂解物在45,000g下离心30分钟，并且将上清液置于预平衡的IMAC柱上(3mL树脂/100mL裂解物)。将柱用3-5柱体积的裂解缓冲液洗涤，然后用3-5柱体积的20mMTris-Cl，pH 7.5、500mM NaCl、5％甘油、45mM咪唑、1mM NaF、0.1μg/mL OAA、5mM BME、1×完全蛋白酶抑制剂混合物-无EDTA二次洗涤。将蛋白质用20mM Tris-Cl，pH 7.5、0.5M NaCl、5％甘油、250mM咪唑、1mM NaF、0.1μg/mL OAA、5mM BME、1×完全蛋白酶抑制剂混合物-无EDTA洗脱。将有关级分通过SDS-PAGE分析并且相应收集。将蛋白质进一步通过凝胶过滤在Superdex 20026/60柱上纯化，该柱用20mM Tris-Cl，pH 7.5、0.5M NaCl、5％甘油、1mM NaF、5mM DTT、1×完全蛋白酶抑制剂混合物-无EDTA平衡。将有关级分通过SDS-PAGE分析并且相应收集。将等体积的裂解缓冲液(20mM Tris-Cl，pH 7.5、500mMNaCl、50％甘油、5mM NaF、5mM DTT)加入至收集物中，然后用从裂解缓冲液中透析出来，进行两次(每次过夜)。将蛋白质贮存在-20℃下。
PI3Kδ的纯化
PI3Kδ在三个色谱步骤中纯化：固定金属亲和色谱(IMAC)，在Nisepharose树脂(GE Healthcare)上，以及凝胶过滤，应用Superdex 20026/60柱(GE Healthcare)，以及最后是离子交换步骤，在Q-HP柱(GE Healthcare)上。将所有的缓冲液冷却至4℃并且裂解在冰上冷却进行。柱级分在室温下进行。
将典型的从10L Tn5细胞培养基中冻干的细胞悬浮于“裂解缓冲液”20mM Tris-Cl，pH 7.5、500mM NaCl、5％甘油、5mM咪唑、1mM NaF、0.1μg/mL冈田酸(OAA)、5mM BME、1×完全蛋白酶抑制剂混合物-无EDTA(20片/1L缓冲液，Roche Applied Sciences)、benzonase(25U/mL缓冲液，EMD Biosciences)中，比例为1∶10v/v的沉淀：裂解缓冲液并且通过douncing 20strokes应用紧密研杵进行机械裂解。将裂解物在45,000g下离心30分钟，并且将上清液置于预平衡的IMAC柱上(5mL树脂/100mL裂解物)。将柱用3-5柱体积的裂解缓冲液洗涤，然后用3-5柱体积的20mMTris-Cl，pH 7.5、500mM NaCl、5％甘油、40mM咪唑、1mM NaF、0.1μg/mL OAA、5mM BME、1×完全蛋白酶抑制剂混合物-无EDTA二次洗涤。将蛋白质用20mM Tris-Cl，pH 7.5、500mM NaCl、5％甘油、250mM咪唑、1mM NaF、0.1μg/mL OAA、5mM BME、1×完全蛋白酶抑制剂混合物-无EDTA洗脱。将有关级分通过SDS-PAGE分析并且相应收集。将蛋白质进一步通过凝胶过滤在Superdex 200上纯化，该柱用20mM Tris-Cl，pH 7.5、500mM NaCl、5％甘油、1mM NaF、0.1μg/mL OAA、5mM DTT、1×完全蛋白酶抑制剂混合物-无EDTA平衡。将有关级分通过SDS-PAGE分析并且相应收集。将这些级分用“缓冲液A”20mM Tris-Cl，pH 8.2、5％甘油、1mM NaF、0.1μg/mL OAA、5mM DTT稀释1∶10v/v收集物体积：缓冲液，并且上样至制备Q-HP柱上。上样完成后，用缓冲液A和5％“缓冲液B”20mM Tris-Cl，pH 8.2、1M NaCl、5％甘油、1mM NaF、0.1μg/mL OAA、5mM DTT洗涤3-5倍柱体积。应用5％-30％梯度的缓冲液B洗脱蛋白质。典型的是，蛋白质在～200mM NaCl洗脱。将有关级分通过SDS-PAGE分析并且相应收集。将等体积的裂解缓冲液(20mMTris-Cl，pH 7.5、500mM NaCl、50％甘油、1mM NaF、0.1μg/mL OAA、5mM DTT)加入至收集物中，然后用从裂解缓冲液中透析出来，进行两次(每次过夜)。将蛋白质贮存在-20℃下。
应用上述试验获得以下结果。
Figure BPA00001195230600751
Figure IPA00001195230100011
Figure IPA00001195230100021
Figure IPA00001195230100031
Figure IPA00001195230100041
Figure IPA00001195230100051
Figure IPA00001195230100061
Figure IPA00001195230100071
Figure IPA00001195230100081
Figure IPA00001195230100091
Figure IPA00001195230100101
Figure IPA00001195230100111
Figure IPA00001195230100121
Figure IPA00001195230100131
Figure IPA00001195230100151
Figure IPA00001195230100161
Figure IPA00001195230100171
Figure IPA00001195230100181
Figure IPA00001195230100191
Figure IPA00001195230100201
Figure IPA00001195230100211
Figure IPA00001195230100221
Figure IPA00001195230100231
Figure IPA00001195230100241
Figure IPA00001195230100251
Figure IPA00001195230100261
Figure IPA00001195230100271

Claims (16)

1.式I化合物或其盐
Figure FPA00001195230500011
其中
n表示0或1；
m表示0、1、2、3或4；
R1表示氢或不同于氢的取代基；
R2表示卤素、氰基、硝基、羟基、苯基、低级烷基、低级烷氧基、低级烷基氨基、低级二烷基氨基、环烷基、环烷氧基，其中每个烷基或环烷基可以被卤素、氰基、硝基、羟基、苯基单或多取代，并且其中每个苯基可以被卤素、氰基、硝基、羟基、低级烷基单或多取代；
或者
两个R2取代基一起形成烷二基或烯二基以形成环状基团，每个任选被羟基或卤素取代；
或者
两个R2邻位取代基一起形成键以形成双键；
R3表示氢、CH3、CH2OH、CH2F。
2.权利要求1的化合物，其中
R1表示C1-C7-烷基、C3-C6-环烷基、1-(C1-C7-烷基)-C3-C6-环烷基、C3-C6-环烷基C1-C7-烷基、C1-C7-烷氧基、C1-C7-烷基氨基、C3-C6-环烷基氨基、二-C1-C7-烷基氨基、二-C1-C7-烷基氨基C1-C7-烷基、C1-C7-烷基羰基、C1-C7-烷氧基羰基、C1-C7-烷基硫化物、C1-C7-烷基砜、C1-C7-烷基亚砜、C1-C7-烷基氨磺酰基、C1-C7-烷基磺酰胺基、3-氮杂-二环[3.2.2]壬-3-基、吡啶基、吡啶基氨基、噻唑基、苯基、苯基氧基、苯基氨基、二-苯基氨基、苯基-C1-C7-烷基氨基、苯甲酰基、苯氧基羰基、苯基硫化物、苯基亚砜、苯基砜、苯基氨磺酰基、苯基磺酰胺基，其中每个C1-C7-烷基、C1-C7-环烷基、吡啶基、噻唑基或苯基可以任选被取代；所述的取代基独立地选自一个或多个、优选1至4个以下基团：
卤素、羟基、氰基、硝基、氨基、C1-C7-烷基、氨基-C1-C7-烷基、卤素-C1-C7-烷基、N-C1-C7-烷酰基氨基-C1-C7-烷基、N-C1-C7-烷磺酰基-氨基-C1-C7-烷基、C1-C7-烷亚磺酰基-C1-C7-烷基、C1-C7-烷磺酰基-C1-C7-烷基、C1-C7-烷氧基、N-单-或N，N-二-(C1-C7-烷基)-氨基、N-单-或N，N-二-(C1-C7-烷基、卤素-C1-C7-烷基、苯基)-磺酰基-氨基、C1-C7-烷酰基氨基、
磺基、C1-C7-烷磺酰基、C1-C7-烷亚磺酰基、氨磺酰基、氨基磺酰基、N-单-或N，N-二-(C1-C7-烷基)-磺酰基、N-单-或N，N-二-(C1-C7-烷基)氨基-磺酰基、脯氨酸-N-羰基氨基磺酰基；
R2表示卤素、氰基、硝基、羟基、C1-C7-烷基、C1-C7-烷基氧基、C3-C6-环烷基、C3-C6-环烷基氧基、C1-C7-烷基氨基、二-C1-C7-烷基氨基、苯基，其中每个烷基、环烷基或苯基可以被以下基团单或二取代：氟、氯、氰基、羟基、苯基；
或者
与进一步的取代基R2一起表示基团-CH2-；-CH(CH3)-、-C(CH3)2-；-CH2-CH2-、-CH＝CH-，从而形成二环基团；
或者
与进一步的取代基R2一起表示键，以形成不饱和的基团；
R3表示氢或甲基；
m表示0、1或2。
3.前述权利要求中任意一项的化合物，其中
R1表示C1-C4-烷基(特别是甲基、异丙基、1-乙基丙基、叔丁基)、C3-C6-环烷基(特别是环丙基或环丁基)、1-(C1-C4-烷基)-C3-C6-环烷基(特别是1-甲基-环丙基)、1-(卤素-C1-C4-烷基)-C3-C6-环烷基(特别是1-三氟甲基-环丙基)、C3-C6-环烷基C1-C4-烷基(特别是环丙基甲基)、卤素-C1-C4-烷基(特别是CF3)、C1-C7-烷氧基、C1-C4-烷基氨基、二-C1-C4-烷基氨基(特别是二甲基氨基)、二-C1-C7-烷基氨基C1-C7-烷基(特别是二甲基氨基甲基)、C3-C6-环烷基氨基(特别是环丙基氨基)、C1-C4-烷基砜(特别是H3CSO2-)、C1-C4-烷基磺酰氨基(特别是H3CSO2NH-)、3-氮杂-二环[3.2.2]壬-3-基、吡啶基(特别是3-吡啶基)、吡啶基氨基(特别是3-吡啶基氨基)、噻唑基(特别是噻唑-4-基)、取代的噻唑基(特别是甲基噻唑基，特别是2-甲基噻唑-4-基)、苯基、苯基氨基、二-苯基氨基、苯基氨磺酰基、苯基磺酰胺基，其中每个苯基可以被一个或多个、优选一个选自下列的取代基取代：卤素(特别是F或Cl，例如卤素苯基，例如氟苯基、氯苯基氨基，更特别是2-或3-卤素苯基，例如2-氟苯基、3-氯苯基氨基)、氨基磺酰基、磺酰氨基、C1-C4-烷基-磺酰氨基(特别是H3CSO2NH-或PhSO2NH2-)、氨磺酰基(NH2SO2-)、取代的氨磺酰基(例如(2-氨基甲酰基-吡咯烷-1-羰基)-氨磺酰基)；
R2表示羟基、甲基、N，N-二甲基氨基、氟。
4.前述权利要求中任意一项的化合物，其中R3表示甲基。
5.前述权利要求中任意一项的化合物，其中n表示1。
6.前述权利要求中任意一项的化合物，其中m表示0。
7.选自下列的化合物：
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-甲磺酰基氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]三氟乙酰胺；
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(4-氨磺酰基苯基氨基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-{4-[((S)-2-氨基甲酰基-吡咯烷-1-羰基)-氨磺酰基]-苯基氨基}-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-苯磺酰基氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[2-(3-氯-苯基氨基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(2S，4R)-4-羟基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(2S，4S)-4-羟基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(2S，3S)-3-羟基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]三氟乙酸酯；
(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(2S，3S)-3-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(2S，4R)-4-氟-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
氮杂环丁烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(吡啶-3-基氨基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(吡啶-3-基氨基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2，4”-二甲基[4，2’；4’，5”]三联噻唑-2”-基)-酰胺]；
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(2-甲基-1H-咪唑-4-基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(2-甲基-1H-咪唑-4-基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-环丙基氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-环丙基氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-二甲基氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-二甲基氨基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-([2-(3-氮杂-二环[3.2.2]壬-3-基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[2-(3-氮杂-二环[3.2.2]壬-3-基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-乙基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(4’-甲基-2-吡啶-3-基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(4’-甲基-2-吡啶-3-基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(1-甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(2S，4R)-4-羟基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(1-甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(2S，4S)-4-羟基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(1-甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(2S，4R)-4-二甲基氨基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(2S，4R)-4-二甲基氨基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(1-甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(1-甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(2S，4S)-4-二甲基氨基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-叔丁基4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(2S，4S)-4-二甲基氨基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(1-甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[2-(2-氟-苯基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-环丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-环丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(1-三氟甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(1S，5R)-2-氮杂-二环[3.1.0]己烷-1，2-二甲酸1-酰胺2-[(2-叔丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(1S，5R)-2-氮杂-二环[3.1.0]己烷-1，2-二甲酸1-酰胺2-[(2-环丁基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[2-(1-乙基-丙基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[2-(1-乙基-丙基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(1S，5R)-2-氮杂-二环[3.1.0]己烷-1，2-二甲酸1-酰胺2-{[2-(1-乙基-丙基)-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-{[4’-甲基-2-(1-三氟甲基-环丙基)-[4，5’]联噻唑-2’-基]-酰胺}；
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-二甲基氨基甲基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-二甲基氨基甲基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-环丙基甲基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；
(S)-2-甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-环丙基甲基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]；和
(S)-吡咯烷-1，2-二甲酸2-酰胺1-[(2-异丙基-4’-甲基-[4，5’]联噻唑-2’-基)-酰胺]。
8.游离形式或可药用盐形式的权利要求1至7中任意一项的式I化合物，其用作药物。
9.游离形式或可药用盐形式的权利要求1至7中任意一项的式I化合物，其用作药物，特别用于一种或多种磷脂酰肌醇3-激酶介导的疾病。
10.游离形式或可药用盐形式的权利要求1至7中任意一项的式I化合物在治疗一种或多种磷脂酰肌醇3-激酶介导的疾病中的用途。
11.游离形式或可药用盐形式的权利要求1至7中任意一项的式I化合物在制备用于治疗一种或多种磷脂酰肌醇3-激酶介导的疾病的药物中的用途。
12.治疗磷脂酰肌醇3-激酶介导的疾病的方法，该方法包括给需要的个体施用治疗有效量的游离形式或可药用盐形式的权利要求1至7中任意一项的式I化合物的步骤。
13.药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的游离形式或可药用盐形式的权利要求1至7中任意一项的式I化合物作为活性成分；一种或多种可药用载体物质和/或稀释剂。
14.组合的药物组合物，其适合同时或依次施用，其包含治疗有效量的游离形式或可药用盐形式的权利要求1至7中任意一项的式I化合物；治疗有效量的一种或多种组合伴侣；一种或多种可药用载体物质和/或稀释剂。
15.权利要求13的药物组合物或权利要求14的组合的药物组合物，其用于治疗蛋白酪氨酸激酶介导的疾病，特别是磷脂酰肌醇3-激酶介导的疾病。
16.制备权利要求1至6中任意一项的式I化合物的方法，该方法包括以下步骤：将式II化合物
其中取代基如权利要求1-6中定义，或者在活化剂的存在下与式IIIA化合物反应
Figure FPA00001195230500081
其中取代基如权利要求1-6中定义并且R3还可以表示CH2Cl(“方法A”)，或者与式IIIB化合物反应
Figure FPA00001195230500082
其中R1如权利要求1-6中定义；RG表示反应基团(例如咪唑基羰基)并且R3如权利要求1-6中定义并且还可以表示CH2Cl(“方法B”)
或者
该方法包括以下步骤：将式IV化合物
Figure FPA00001195230500083
其中取代基如权利要求1-6中定义并且R4表示任选取代的烷基或任选取代的苯基，与式V化合物反应
Figure FPA00001195230500084
其中取代基如权利要求1-6中定义，
在每种情况中，任选在稀释剂的存在下并且任选在反应助剂的存在下，并且
任选回收产生的游离形式或盐形式的式I化合物，并且
任选将根据方法A或方法B可获得的式I化合物转化为不同的式I化合物，和/或将可获得的式I化合物的盐转化为其不同的盐，和/或将可获得的游离的式I化合物转化为其盐，和/或从一种或多种不同的可获得的式I化合物的异构体中分离可获得的式I化合物的异构体。
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