EA018863B1 - Органические соединения - Google Patents

Органические соединения Download PDF

Info

Publication number
EA018863B1
EA018863B1 EA201100447A EA201100447A EA018863B1 EA 018863 B1 EA018863 B1 EA 018863B1 EA 201100447 A EA201100447 A EA 201100447A EA 201100447 A EA201100447 A EA 201100447A EA 018863 B1 EA018863 B1 EA 018863B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
amide
dicarboxylic acid
pyridin
thiazol
pyrrolidine
Prior art date
Application number
EA201100447A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201100447A1 (ru
Inventor
Джорджио Караватти
Робин Алек Фэрхёрст
Паскаль Фюре
Вито Гуаньано
Патрисиа Имбах
Original Assignee
Новартис Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=40350060&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA018863(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Новартис Аг filed Critical Новартис Аг
Publication of EA201100447A1 publication Critical patent/EA201100447A1/ru
Publication of EA018863B1 publication Critical patent/EA018863B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/427—Thiazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (IA) или их солям, где значения заместителей определены далее к композиции, содержащей эти соединения, и к их применению для лечения заболеваний, протекание которых облегчается путем ингибирования фосфатидилинозит-3-киназы.

Description

Настоящее изобретение относится к особым 2-карбоксамидциклоаминопроизводным мочевины в качестве новых ингибиторов фосфатидилинозит (ΡΙ) 3-киназы-а, их фармацевтически приемлемым солям, пролекарствам и способам их получения. Настоящее изобретение также относится к композициям этих соединений по отдельности или в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным терапевтическим средством и необязательно в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем. Настоящее изобретение также относится к способам применения этих соединений по отдельности или в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным терапевтическим средством для профилактики или лечения целого ряда заболеваний, предпочтительно опосредуемых аномальной активностью одного или большего количества следующих веществ: факторов роста, рецепторных тирозинкиназ, протеинсерин/треонинкиназ, связанных с белком С рецепторов и фосфолипидкиназ и фосфатаз.
Фосфатидилинозит-3-киназы (ΡΙ3Κ) представляют собой семейство липидных киназ, которые катализируют перенос фосфата в Ό-З'-положение инозитсодержащих липидов с образованием фосфоинозит3-фосфата (ΡΙΡ), фосфоинозит-3,4-дифосфата (ΡΙΡ2) и фосфоинозит-3,4,5-трифосфата (ΡΙΡ3), которые, в свою очередь, действуют в качестве вторичных мессенджеров в каскадах передачи сигналов путем вовлечения белков, которые содержат гомологичные плекстрину РУУЕ, Ρΐιοχ и другие связывающие фосфолипиды домены, в различные передающие сигналы комплексы, которые часто присутствуют на плазматической мембране ((УаиЬаекеЬгоеск е! а1., Аппи. Вех. Вюскет 70:535 (2001); 1<а!ко е! а1., Аппи. Вех. Се11 Эех. Вю1. 17:615 (2001)). Среди ΡΙ3Κ, принадлежащих двум классам, которые являются подклассами класса 1, ΡΙ3Κ класса 1А представляют собой гетеродимеры, состоящие из каталитической субъединицы р110 (изоформы α, β, δ), конститутивно ассоциированной с регуляторной субъединицей, которая может представлять собой р85а, р55а, р50а, р85в или р55у. Подкласс, представляющий собой класс 1В, состоит из одного представителя семейства, а именно гетеродимера, который включает каталитическую субъединицу ρ110γ, ассоциированную с двумя регуляторными субъединицами р101 или р84 (Ргитап е! а1., Аппи Вех. Вюскет. 67:481 (1998); Зике е! а1., Сигг. Вю1. 15:566 (2005)). Модулярные домены субъединиц р85/55/50 включают домены, гомологичные Згс (8Н2), которые связывают остатки фосфотирозина в контексте специфической последовательности на активированном рецепторе и цитоплазматических тирозинкиназах, что приводит к активации и локализации ΡΙ3Κ класса 1А. ΡΙ3Κ класса 1В активируются непосредственно сшитыми с протеином С рецепторами, с которыми связывается много разнообразных пептидных и непептидных лигандов (З1еркен8 е! а1., Се11 89:105 (1997)); 1<а!ко е! а1., Аппи. Вех. Се11 Эех. Вю1. 17:615-675 (2001)). В результате образовавшиеся фосфолипидные продукты ΡΙ3Κ класса Ι связывают рецепторы, расположенные выше в пути передачи сигнала, с расположенными ниже в пути передачи сигнала клеточными элементами, оказывающими воздействие на пролиферацию, выживание, хемотаксис, направленную миграцию клеток, подвижность, метаболизм, воспалительные и аллергические ответы, транскрипцию и трансляцию (Сап!1еу е! а1., Се11 64:281 (1991); ЕксоЬебо апб Айкатк, Ыа!иге 335:85 (1988); Рап!1 е! а1., Се11 69:413 (1992)).
Во многих случаях ΡΙΡ2 и ΡΙΡ3 приводят к рекрутменту Ак1. человеческого продукта, гомологичного вирусному онкогену ν-Ак!, на плазматической мембране, где он действует в качестве узловой точки для многих внутриклеточных путей передачи сигналов, важных для роста и выживания (РапЙ е! а1., Се11 69:413-423(1992); Вабег е! а1., На! Вех. Сапсег 5:921 (2005); Утуапсо апб Задует, Ыа!. Вех. Сапсег 2:489 (2002)). Аномальная регуляция ΡΙ3Κ, которая часто повышает выживание благодаря активации Ак!, является одним из наиболее превалирующих явлений при раке у человека и, как установлено, происходит на нескольких уровнях. У гена-супрессора опухолей ΡΤΕΝ, который дефосфорилирует фосфоинозитиды в 3'-положении инозитного кольца и поэтому обладает способностью антагонизировать активность ΡΙ3Κ, во многих типах опухолей отсутствует функциональная активность. В других типах опухолей происходит амплификация генов, кодирующих изоформу ρ110α, ΡIΚ3СА и Ак!, и повышенный уровень экспрессии белковых продуктов этих генов был продемонстрирован при некоторых видах рака человека. Кроме того, для некоторых видов рака человека описаны мутации и транслокации субъединицы р85а, которая служит для повышающей регуляции комплекса р85-р110. И, наконец, установлено, что соматические миссенс-мутации ΡIΚ3СА, которые активируют пути дальнейшей передачи сигнала, достаточно часто встречаются при многих видах рака человека (1<апд а! е1., Бгос. Ыа!1. Асаб. 8ск ИЗА 102:802 (2005); Затиек е! а1., Заепсе 304:554 (2004); Затиек е! а1., Сапсег Се11 7:561-573(2005)). Эти данные свидетельствуют о том, что нарушение регуляции фосфоинозит-3-киназы и компонентов, находящихся выше и ниже в этом пути передачи сигнала, является одним из наиболее распространенных видов нарушения регуляции, ассоциированных с раком и пролиферативными заболеваниями человека (Багкои® е! а1., Ыа!иге 436:792(2005); Неппеккеу а! е1., Ыа!иге Вех. Эгид Όίκ. 4:988-1004 (2005)).
Поэтому ингибиторы ΡΙ3Κ-α должны быть полезными для лечения пролиферативного заболевания и других нарушений.
В АО 2004/096797 раскрыты некоторые производные тиазола в качестве ингибиторов ΡΙ3Κ-γ и их применение в качестве лекарственных средств, в частности, для лечения воспалительных и аллергических патологических состояний.
В АО 2005/021519 также раскрыты некоторые производные тиазола в качестве ингибиторов ΡΙ3Κ-γ
- 1 018863 и их применение в качестве лекарственных средств, в частности, для лечения воспалительных и аллергических патологических состояний.
В νϋ 2006/051270 также раскрыты некоторые производные тиазола в качестве ингибиторов ΡΙ3Κ-α и их применение в качестве лекарственных средств, в частности, вследствие их противоопухолевой активности.
В νθ 2007/129044 также раскрыты некоторые производные тиазола в качестве ингибиторов ΡΙ3Κ-α и их применение в качестве лекарственных средств, в частности, вследствие их противоопухолевой активности.
С учетом предшествующего уровня техники необходимо получение дополнительных соединений, применимых для лечения пролиферативных заболеваний, в частности соединений, обладающих улучшенной селективностью и/или большей/улучшенной активностью.
Согласно изобретению было установлено, что 2-карбоксамидциклоаминопроизводные мочевины формулы (I), приведенные ниже, обладают благоприятными фармакологическими характеристиками и ингибируют, например, ΡΙ3Κ (фосфатидилинозит-3-киназа). В частности, по данным биохимических и/или проводимых с использованием клеток анализов эти соединения предпочтительно обладают высокой степенью селективности по отношению к ΡΙ3Κ-α по сравнению с селективностью по отношению к подтипам β, и/или δ, и/или γ. Поэтому соединения формулы I применимы, например, для лечения заболеваний, зависящих от киназ ΡΙ3 (предпочтительно ΡΙ3Κ-α, таких как при которых наблюдаются сверхэкспрессирование или амплификация ΡΙ3Κ-α, соматические мутации ΡΙΚ3ΟΆ или мутации зародышевого типа или соматические мутации ΡΤΕΝ или мутации и транслокации р85а, которые обеспечивают повышающую регуляцию комплекса р85-р110), в особенности пролиферативных заболеваний, таких как опухолевые заболевания и лейкозы.
Кроме того, эти соединения предпочтительно обладают улучшенной метаболический стабильностью и поэтому сниженным клиренсом, что приводит к улучшенным фармакокинетическим профилям.
Первым объектом настоящего изобретения являются соединения формулы (ΙΑ)
или их фармацевтически приемлемые соли, в которой
В1 обозначает один из следующих заместителей: (1) незамещенный или замещенный С1-С7-алкил, где указанные заместители независимо выбраны из 1-9 фрагментов дейтерия или фтора или 1-2 фрагментов С3-С5-циклоалкила; (2) необязательно замещенный С3-С5-циклоалкил, где указанные заместители независимо выбраны из 1-4 следующих заместителей: дейтерий, С1-С4-алкил, фтор, цианогруппа, аминокарбонил; (3) необязательно замещенный фенил, где указанные заместители независимо выбраны из 1-2 следующих фрагментов: дейтерий, галоген, цианогруппа, С1-С7-алкил, С1-С7алкиламиногруппа, ди(С1С7-алкил)аминогруппа, С1-С7-алкиламинокарбонил, ди(С1-С7-алкил)аминокарбонил, С1-С7алкоксигруппа; (4) необязательно моно- или дизамещенный амин; где указанные заместители независимо выбраны из следующих фрагментов: дейтерий, С1-С7-алкил (который является незамещенным или содержит один или более заместителей, выбранных из группы, включающей дейтерий, фтор, хлор, гидроксигруппу), фенилсульфонил (который является незамещенным или содержит один из следующих заместителей: С1-С7-алкил, С1-С7-алкоксигруппа, ди(С1-С7-алкил)амино-С1-С7-алкоксигруппа); (5) замещенный сульфонил; где указанный заместитель выбран из следующих фрагментов: С1-С7-алкил (который является незамещенным или содержит один или более заместителей, выбранных из группы, включающей дейтерий, фтор), пирролидиновую группу (которая является незамещенной или содержит один или более заместителей, выбранных из группы, включающей дейтерий, гидроксигруппу, оксогруппу); (6) фтор, хлор;
В3 обозначает (1) водород, (2) фтор, хлор, (3) необязательно замещенный метил, где указанные заместители независимо выбраны из 1-3 следующих фрагментов: дейтерий, фтор, хлор, диметиламиногруппа.
Настоящее изобретение можно лучше понять с помощью приведенного ниже описания, включая приведенный ниже словарь терминов и последующие примеры. Для краткости укажем, что раскрытия и публикации, цитированные в настоящем описании, включены в настоящее изобретение в качестве ссылки. При использовании в настоящем изобретении термины включая, содержащий и включающий применяются в широком, не ограничительном смысле.
Любая формула, приведенная в настоящем изобретении, предназначена для описания соединений, обладающих структурой, представленной структурной формулой, а также некоторых их вариантов и
- 2 018863 форм. В частности, соединения любой формулы, приведенной в настоящем изобретении, могут содержать асимметрические центры и поэтому существовать в разных энантиомерных формах. Если в соединении формулы (I) содержится по меньшей мере один асимметрический атом углерода, то такое соединение может существовать в оптически активной форме или в виде смеси оптических изомеров, например в виде рацемической смеси. Все оптические изомеры и их смеси, включая рацемические смеси, входят в объем настоящего изобретения. Таким образом, любая конкретная формула, приведенная в настоящем изобретении, означает рацемат, одну или большее количество энантиомерных форм, одну или большее количество диастереоизомерных форм, одну или большее количество атропоизомерных форм и их смесей. Кроме того, некоторые структуры могут существовать в виде геометрических изомеров (т.е. цис- и транс-изомеров), в виде таутомеров или в виде атропоизомеров.
Любая формула, приведенная в настоящем изобретении, характеризует гидраты, сольваты и полиморфные формы таких соединений и их смеси.
Любая формула, приведенная в настоящем изобретении, также характеризует немеченые формы, а также изотопно-меченые формы соединений.
Изотопно-меченые соединения обладают структурами, описывающимися формулами, приведенными в настоящем изобретении, за исключением того, что один или большее количество атомов заменены на атомы, обладающие указанными атомными массами или массовыми числами. Примеры изотопов, которые можно вводить в соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, включают изотопы водорода, углерода, азота, фтора, фосфора, серы, хлора и иода, такие как Н, Н, С, С, С, Ν, Ρ, Ρ, Р, 358 , 36С1, 1251 соответственно. В объем настоящего изобретения входят различные изотопно-меченые соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, например, в которые включены радиоактивные изотопы, такие как 3Н, 13С и 14С. Такие изотопно-меченые соединения применимы для изучения метаболизма (предпочтительно содержащие 14С), кинетики реакций (содержащие, например, 2Н или 3Н), в методологиях детектирования и визуализации, таких как позитронная эмиссионная томография (ПЭТ) или однофотонная эмиссионная компьютерная томография (ОФЭКТ), включая исследование распределения лекарственного средства или субстрата в тканях или лучевую терапию пациентов. В частности, содержащее 18Ρ или меченое им соединение может быть особенно предпочтительным для исследований с помощью ПЭТ или ОФЭКТ. Изотопно-меченые соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, и их пролекарства обычно можно получить по методикам, раскрытым в схемах или в примерах и синтезах, описанных ниже, путем замены не содержащего изотопа реагента на легкодоступный изотопно-меченый реагент.
Кроме того, замещение более тяжелыми изотопами, предпочтительно дейтерием (т.е. 2Н или Ό), может обеспечить некоторые терапевтические преимущества, обусловленные их более высокой метаболической стабильностью, например увеличенной длительностью полувыведения ίη νίνο или возможностью использования меньших доз, или улучшением терапевтического индекса. Следует понимать, что в этом контексте дейтерий рассматривается в качестве заместителя в соединении формулы (I). Концентрацию такого более тяжелого изотопа, в частности дейтерия, можно определить с помощью коэффициента изотопного обогащения. Термин коэффициент изотопного обогащения при использовании в настоящем изобретении означает отношение содержания изотопа к содержанию конкретного изотопа в природе. Если заместитель в соединении, предлагаемом в настоящем изобретении, означает дейтерий, то такое соединение характеризуется коэффициентом изотопного обогащения для каждого обозначенного атома дейтерия, равным не менее 3500 (содержание дейтерия для каждого обозначенного атома дейтерия равно 52,5%), не менее 4000 (содержание дейтерия равно 60%), не менее 4500 (содержание дейтерия равно 67,5%), не менее 5000 (содержание дейтерия равно 75%), не менее 5500 (содержание дейтерия равно 82,5%), не менее 6000 (содержание дейтерия равно 90%), не менее 6333,3 (содержание дейтерия равно 95%), не менее 6466,7 (содержание дейтерия равно 97%), не менее 6600 (содержание дейтерия равно 99%) или не менее 6633,3 (содержание дейтерия равно 99,5%). В соединениях, предлагаемых в настоящем изобретении, любой атом, специально не обозначенный, как конкретный изотоп означает любой стабильный изотоп этого атома. Если не указано иное, когда специально указано Н или водород, это означает водород, обладающий природным изотопным составом. Соответственно, в соединениях, предлагаемых в настоящем изобретении, любой атом, специально обозначенный, как дейтерий (Ό) означает атом с содержанием дейтерия, например, в указанных выше диапазонах.
Выбор значения конкретного фрагмента из перечня возможных значений при описании любой формулы, приведенной в настоящем изобретении, не означает задание значения этого фрагмента для остальной части настоящего описания. Другими словами, если переменная содержится более одного раза, то выбор ее значений из перечня значений не зависит от выбора значений этой переменной в формуле, находящейся в другой части настоящего описания (где в вариантах осуществления одно или большее количество и вплоть до всех более общих значений, охарактеризованных выше или ниже как предпочтительные, можно заменить на более предпочтительное определение и таким образом образовать соответствующий более предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения).
Если используется множественное число (например, соединения, соли), то она включает и единственное число (например, одно соединение, одну соль). Использование термина соединение не исклю
- 3 018863 чает того, что (например, в фармацевтическом препарате) содержится больше чем одно соединение формулы (Ι) (или его соль).
Если не указано иное, то в настоящем описании применимы указанные ниже общие определения.
Галоген означает фтор, бром, хлор или йод, предпочтительно фтор, хлор. Галогензамещенные группы и фрагменты, такие как алкил, замещенный галогеном (галогеналкил), могут быть моно-, полиили пергалогенированными.
Углеродсодержащие группы, фрагменты или молекулы содержат от 1 до 7, предпочтительно от 1 до 6, более предпочтительно от 1 до 4, наиболее предпочтительно 1 или 2 атома углерода. Любая нециклическая углеродсодержащая группа или фрагмент, содержащий более 1 атома углерода, обладает линейной или разветвленной цепью.
Приставка низш. или С1-С7 означает радикал, содержащий максимально до 7 включительно, предпочтительно максимально до 4 включительно атомов углерода, использующиеся радикалы являются линейными или разветвленными и содержат одно или несколько разветвлений.
Алкил означает обладающую линейной или разветвленной цепью алкильную группу, предпочтительно представляет собой обладающий линейной или разветвленной цепью С1-С12-алкил, особенно предпочтительно представляет собой обладающий линейной или разветвленной цепью С1-С7-алкил, например метил, этил, н- или изопропил, н-, изо-, втор- или трет-бутил, н-пентил, н-гексил, н-гептил, ноктил, н-нонил, н-децил, н-ундецил, н-додецил, особенно предпочтительными являются метил, этил, нпропил, изопропил и н-бутил и изобутил. Алкил может быть незамещенным или замещенным. Типичные заместители включают, но не ограничиваются только ими, гидроксигруппу, алкоксигруппу, галоген и аминогруппу. Примером замещенного алкила является трифторметил. Циклоалкил также может быть заместителем алкила. Примером такого случая является фрагмент (алкил)-циклопропил или алкандиилциклопропил, например -СН2-циклопропил. С1-С7-Алкил предпочтительно представляет собой алкил, содержащий от 1 включительно до 7 включительно, предпочтительно от 1 включительно до 4 включительно атомов углерода, и является линейным или разветвленным; низш. алкил предпочтительно представляет собой бутил, такой как н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, пропил, такой как н-пропил или изопропил, этил или предпочтительно метил.
Каждый алкильный фрагмент других групп, таких как алкоксигруппа, алкоксиалкил, алкоксикарбонил, алкоксикарбонилалкил, алкилсульфонил, алкилсульфоксил, алкиламиногруппа, галогеналкил, обладает таким же значением, как указано в приведенном выше определении алкила.
Циклоалкил означает насыщенный или частично насыщенный моноциклический, конденсированный полициклический или спиросочлененный полициклический карбоцикл, содержащий от 3 до 12 кольцевых атомов в одном карбоцикле. Иллюстративные примеры циклоалкильных групп включают следующие фрагменты: циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил. Циклоалкил может быть незамещенным или замещенным; типичные заместители указаны в определении алкила и также включают сам алкил (например, метил). Фрагмент типа -(СН3)циклопропил считается замещенным циклоалкилом.
Лечение включает профилактическое (предупредительное) и терапевтическое лечение, а также задержку прогрессирования заболевания или нарушения.
Опосредуемые ΡΙ3 киназой заболевания (предпочтительно опосредуемые ΡΙ3Κ-α заболевания и заболевания, опосредуемые сверхэкспрессированием или амплификацией ΡΙ3Κ- α, соматическими мутациями ΡΙΚ3ΟΑ или мутациями зародышевого типа или соматическими мутациями ΡΤΕΝ или мутациями и транслокациями р85а, которые обеспечивают повышающую регуляцию комплекса р85-р110) предпочтительно представляют собой нарушения, которые реагируют благоприятным образом (например, происходит ослабление одного или большего количества симптомов, задержка начала заболевания, вплоть до временного или полного излечивания заболевания) на ингибирование киназы ΡΙ3, предпочтительно на ингибирование ΡΙ3Κ-α или ее мутантной формы (где из числа подвергающихся лечению заболеваний в особенности можно отметить пролиферативные заболевания, такие как опухолевые заболевания и лейкозы).
Соли (то, что означает выражение или его соли или или его соль) могут содержаться по отдельности или в смеси со свободным соединением формулы (ΙΑ) и предпочтительно представляют собой фармацевтически приемлемые соли. Такие соли, например, образуются в виде солей присоединения с кислотами, предпочтительно с органическими или неорганическими кислотами, из соединений формулы (ΙΑ), содержащих основной атом азота, предпочтительно фармацевтически приемлемые соли. Подходящими неорганическими кислотами являются, например, галогенводородные кислоты, такие как хлористо-водородная кислота, серная кислота или фосфорная кислота. Подходящими органическими кислотами являются, например, карбоновые кислоты или сульфоновые кислоты, такие как фумаровая кислота или метансульфоновая кислота. Для выделения и очистки также можно использовать фармацевтически неприемлемые соли, например пикраты или перхлораты. Для терапевтического применения используют только фармацевтически приемлемые соли или свободные соединения (если они применимы в виде фармацевтических препаратов) и поэтому они являются предпочтительными. Вследствие близкого родства
- 4 018863 новых соединений в свободной форме и в форме их солей, включая соли, которые можно использовать в качестве промежуточных продуктов, например, при очистке или идентификации новых соединений, любое указание на свободное соединение выше и ниже в настоящем изобретении следует понимать также и как указание на соответствующие соли, если это является подходящим или целесообразным. Соли соединений формулы (ΙΑ) предпочтительно представляют собой фармацевтически приемлемые соли; подходящие противоионы, образующие фармацевтически приемлемые соли, известны в данной области техники.
Комбинация означает фиксированную комбинацию в одной разовой дозированной форме или набор компонентов для комбинированного введения, при котором соединение и компонент комбинации (например, другое лекарственное средство, как указано ниже, также называющееся как терапевтическое средство или совместно вводимое средство) можно независимо вводить одновременно или по отдельности через определенные промежутки времени, предпочтительно так, чтобы эти промежутки времени позволяли компонентам комбинации оказывать совместное, например, синергетическое воздействие. Термины совместное введение или комбинированное введение и т.п. при использовании в настоящем изобретении означают введение выбранного компонента комбинации одному нуждающемуся в нем субъекту (например, пациенту) и включают режимы лечения, при которых средства необязательно вводят одним и тем же путем или в одно и то же время. Термин фармацевтическая комбинация при использовании в настоящем изобретении означает препарат, полученный смешиванием или комбинированием более одного активного ингредиента, и включает фиксированные и нефиксированные комбинации активных ингредиентов. Термин фиксированная комбинация означает, что активные ингредиенты, например соединение и другой компонент комбинации, оба вводят пациенту одновременно в виде одного объекта или дозы. Термин нефиксированная комбинация означает, что активные ингредиенты, например соединение и другой компонент комбинации, оба вводят пациенту в виде отдельных объектов совместно, одновременно или последовательно без установленных временных ограничений и такое введение обеспечивает терапевтически эффективные содержания этих двух соединений в организме пациента. Последнее также относится к смешанному лечению, например, введению трех или большего количества активных ингредиентов.
Соединения формулы (ΙΑ) могут быть также представлены в виде фармацевтически приемлемых пролекарств или фармацевтически приемлемых метаболитов.
Соединения формулы (ΙΑ) могут быть получены с помощью подходящих известных методик превращения различных аминов в соответствующие производные мочевины с использованием соответст вующего исходного вещества.
Таким образом, соединение формулы (ΙΑ) можно получить реакцией соединения формулы (II) или с соединением формулы (ΙΙΙΑ)
в которой заместители К2 и К3 являются такими, как определено выше, а цикл А означает пиридин, в присутствии активирующего реагента (способ А), или с соединением формулы (ΙΙΙΒ)
(ΙΙ1Β) в которой заместители К2 и К3 являются такими, как определено выше, цикл А означает пиридин и КС обозначает реакционноспособную группу, такую как имидазолилкарбонил, которая может реагировать непосредственно или путем образования промежуточного изоцианата формулы (ΙΙΙΕ) (способ В),
- 5 018863
(ΠΙΕ) в которой заместители являются такими, как определено в (ΙΙΙΒ), в каждом случае необязательно в присутствии разбавителя и необязательно в присутствии средства, способствующего протеканию реакции, и извлечение полученного соединения формулы (ΙΑ) в свободной форме или в форме соли и, необязательно, превращение соединения формулы (ΙΑ), полученного способом А или способом В, в другое соединение формулы (ΙΑ), и/или превращение полученной соли соединения формулы (ΙΑ) в другую его соль, и/или превращение полученного свободного соединения формулы (ΙΑ) в его соль, и/или отделение полученного изомера соединения формулы (ΙΑ) от одного или большего количества различных полученных изомеров формулы Ι.
Условия проведения реакций
Способ можно осуществить по методикам, известным в данной области техники, или описанным ниже в примерах. Например, соединение формулы ΙΙ можно ввести в реакцию с соединением формулы ΙΙΙ в растворителе, например диметилформамиде, в присутствии основания, например органического амина, например триэтиламина.
Когда выше или ниже в настоящем изобретении указаны значения температуры, к ним следует добавить слово примерно, как указание на небольшие отклонения от приведенных числовых значений, например, допустимыми являются отклонения, составляющие ±10%.
Все реакции могут протекать в присутствии одного или большего количества разбавителей и/или растворителей. Исходные вещества можно использовать в эквимолярных количествах; альтернативно, соединение можно использовать в избытке, например, в качестве растворителя или для смещения равновесия, или для общего повышения скоростей реакций.
Средства, способствующие протеканию реакций, такие как кислоты, основания или катализаторы, можно добавить в подходящих количествах, как это известно в данной области техники, необходимых для протекания реакции и в соответствии с общеизвестными методиками.
Защитные группы
Если в исходном веществе, описанном в настоящем изобретении, или в любом предшественнике одну или большее количество других функциональных групп, например карбоксигруппу, гидроксигруппу, аминогруппу сульфгидрил и т.п., необходимо снабдить защитной группой, поскольку они не должны принимать участие в реакции или влиять на реакцию, то ими являются защитные группы, которые обычно используются при синтезе пептидных соединений, а также цефалоспоринов и пенициллинов, а также производных нуклеиновых кислот и сахаров. Защитные группы являются такими группами, которые после удаления не должны содержаться в конечных соединениях, а группы, которые остаются в качестве заместителей, в использованном в настоящем описании смысле не являются защитными группами, которые вводят в исходное вещество или на промежуточной стадии и удаляют для получения конечного соединения. Также и в случае превращений соединения формулы (ΙΑ) в другое соединение формулы (ΙΑ) защитные группы можно вводить и удалять, если это целесообразно или необходимо.
Защитные группы могут уже содержаться в предшественниках и должны защищать соответствующие функциональные группы от вступления в нежелательные вторичные реакции, такие как ацилирование, образование простого эфира, образование сложного эфира, окисление, сольволиз и аналогичные реакции. Особенностью защитных групп является то, что их можно легко, т.е. без нежелательных вторичных реакций, удалять, обычно с помощью ацетолиза, протолиза, сольволиза, восстановления, фотолиза, а также при воздействии ферментов, например, при условиях, аналогичных физиологическим условиям, и они не содержатся в конечных продуктах. Специалисту в данной области техники известно или он без труда может установить, какие защитные группы являются подходящими для проведения реакций, указанных выше и ниже в настоящем изобретении.
Защита таких функциональных групп с помощью таких защитных групп, сами защитные группы и реакции их удаления описаны, например, в стандартных справочниках, таких как ТЕЛУ. МеОш1е, Рго1сс11ус Огоирк ίη Отдаше С11ет1йгу. Р1епит Ргекк, Бопбоп аиб Ыете Уотк 1973, ίη Т. У. Отееие, РгсИееЦуе Огоирк ίη Отдаше ЗуиШейк, ТЫгб ебйюи У11еу, №\у Уотк 1999, ίη ТНе Рерйбек; Уо1ите 3 (ебйотк: Е. Огокк аиб 1. МсгспЬоГсг), Лсабепис Ргекк, Ьои6ои аиб Ыете Уотк 1981, ίη МеШобеи бег огдашксйеи СНет1е (МеШобк оГ отдаше еНет1к1гу), НоиЬеи Уеу1, 4111 ебйюи, Уо1ите 15/Ι, Оеогд ТЫете Уег1ад, 8ишдаг1 1974, ίη Н.-Ό. 1акиЬке аиб Н. бекеНе1(, Αт^ηоκаи^еη, Рер11бе, РгсИеше (Атто ае1бк, рерИбек, ргсИешк), Уег1ад Сйет1е, ХУетНет!, ОеегПе1б ВеасН, аиб Ваке1 1982 и в боейеи ^еНтаηη. СНепйе бег ΚоЫеηйуб^аΐе: МоиокасеНапбе ииб ОегЕше (Сйетгкйу оГ еагЬоНубШек: еагЬоНубШек аиб бепуаЦуек), Оеогд ТЫете Уег- 6 018863
1ад, 81ийдай 1974.
Необязательные реакции и превращения
Соединение формулы (ΙΑ) можно превратить в другое соединение формулы (ΙΑ).
Соединение формулы ДА), в которой К3 обозначает фтор, можно получить путем превращения соответствующего хлорпроизводного в соединение, содержащее фтор. Такие реакции известны и называются реакциями замещения. Это превращение может протекать на стадии, включающей исходное вещество формулы (ΙΙΙΑ или В), или путем превращения соответствующего соединения формулы (ΙΑ).
В соединении формулы (ΙΑ), в которой заместитель содержит аминогруппу или амино-С1-С7-алкил в качестве заместителя, аминогруппу можно превратить в ациламиногруппу, например С1-С7алканоиламиногруппу или С1-С7-алкансульфониламиногруппу, по реакции с соответствующим С1-С7алканоилгалогенидом или С1-С7-алкансульфонилгалогенидом, например соответствующим хлоридом, в присутствии третичного азотистого основания, такого как триэтиламин или пиридин, при отсутствии или в присутствии подходящего растворителя, такого как метиленхлорид, например, при температурах в диапазоне от -20 до 50°С, например примерно при комнатной температуре.
В соединении формулы (ΙΑ), в которой заместитель содержит цианогруппу в качестве заместителя, цианогруппу можно превратить в аминометильную группу, например, путем гидрирования в присутствии подходящего катализатора на основе метала, такого как никель Ренея или кобальт Ренея, в подходящем растворителе, например низш. алканоле, таком как метанол и/или этанол, например, при температурах в диапазоне от -20 до 50°С, например примерно при комнатной температуре.
Соли соединения формулы (ΙΑ) с солеобразующей группой можно получить по известным методикам. Так, соли присоединения соединений формулы (ΙΑ) с кислотами можно получить обработкой кислотой или подходящим анионообменным реагентом. Соль с двумя молекулами кислоты (например, дигалогенид соединения формулы ΙΑ) также можно превратить в соль с одной молекулой кислоты на молекулу соединения (например, моногалогенид); это можно выполнить путем нагревания до плавления или например, путем нагревания в виде твердого вещества в высоком вакууме при повышенной температуре, например, равной от 130 до 170°С, в результате чего из одной молекулы соединения формулы (ΙΑ) удаляется одна молекула кислоты. Соли обычно можно превратить в свободные соединения, например, путем обработки подходящими основными соединениями, например, карбонатами щелочных металлов, гидрокарбонатами щелочных металлов или гидроксидами щелочных металлов, обычно карбонатом калия или гидроксидом натрия.
Смеси стереоизомеров, например смеси диастереоизомеров, можно разделить на соответствующие изомеры по известным методикам, с помощью подходящих методик разделения. Например, смеси диастереоизомеров можно разделить на индивидуальные диастереоизомеры с помощью фракционированной кристаллизации, хроматографии, распределения в растворителях и аналогичных методик. Это разделение можно проводить или для исходного соединения или для самого соединения формулы (ΙΑ). Энантиомеры можно разделить путем образования диастереоизомерных солей, например, путем образования соли с энантиомерно чистой хиральной кислотой или с помощью хроматографии, например ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография), с использованием хроматографических субстратов, содержащих хиральные лиганды.
Следует подчеркнуть, что реакции, аналогичные реакциям превращения, указанным в этом разделе, также можно проводить с подходящими промежуточными продуктами (и таким образом, они применимы для получения соответствующих исходных веществ).
Исходные вещества
Исходные вещества формул ΙΙ и ΙΙΙ, а также другие исходные вещества, указанные в настоящем изобретении, например, ниже, можно получить по методикам, которые известны в данной области техники, или по аналогичным методикам, или они имеются в продаже. Если получение исходных веществ специально не описано, то соединения являются известными или их можно получить по методикам, аналогичным известным в данной области техники, например, описанным в \νϋ 05/021519 или \νϋ 04/096797 или раскрытым ниже в настоящем изобретении. Новые исходные вещества, а также способы их получения также являются вариантами осуществления настоящего изобретения. В предпочтительных вариантах осуществления используют такие исходные вещества и реакцию выбирают так, чтобы можно было получить предпочтительные соединения.
В исходных веществах (включая промежуточные продукты), которые также можно использовать и/или получать в виде солей, если это является подходящим и целесообразным, заместители предпочтительно являются такими, как определено для соединения формулы (ΙΑ).
В соединениях формулы (ΙΙΙΑ) или их солях
- 7 018863
заместители являются такими, как определено для соединения формулы (ΙΑ).
Соединения формулы (ΙΙΙΑ) можно получить с помощью известных способов, которые приводят к сочетанию двух компонентов арил/гетероарил (такие как реакции типа реакции Хека) с образованием соответствующего производного мочевины, являются подходящими и могут быть использованы с применением соответствующего исходного вещества. Таким образом, получение соединений формулы (ΙΙΙΑ) включает (стадия 1) реакцию соединения формулы (Ιν)
в которой значения К3 являются такими, как определено выше, и РС обозначает защитную группу, такую как ацильная группа, с соединением формулы (V)
в которой значения К1 являются такими, как определено выше, цикл А обозначает пиридин и На1 обозначает галоген, такой как бром, по реакции Хека; необязательно в присутствии разбавителя и необязательно в присутствии средства, способствующего протеканию реакции; (стадия 2) с последующим удалением защитной группы, например, в кислой среде; необязательно в присутствии разбавителя и необязательно в присутствии средства, способствующего протеканию реакции; и извлечение полученного соединения формулы (ΙΙΙΑ) в свободной форме или в форме соли и, необязательно, превращение полученного соединения формулы (ΙΙΙΑ) в другое соединение формулы (ΙΙΙΑ), и/или превращение полученной соли соединения формулы (ΙΙΙΑ) в другую его соль, и/или превращение полученного свободного соединения формулы (ΙΙΙΑ) в его соль, и/или отделение полученного изомера соединения формулы (ΙΙΙΑ) от одного или большего количества различных полученных изомеров формулы (ΙΙΙΑ).
В соединениях формулы (ΙΙΙΒ) или их солях
заместители К1 и К3 являются такими, как определено для соединения формулы (ΙΑ), цикл А означает пиридин, а КС обозначает реакционноспособную группу, предпочтительно имидазолилкарбонил, которая может реагировать непосредственно или путем образования промежуточного изоцианата формулы (ΙΙΙΕ).
Соединения формулы (ΙΙΙΒ) можно получить известными способами, которые обеспечивают превращение амина или его соли в соответствующее активированное производное, являются подходящими и могут быть использованы с применением соответствующего исходного вещества. Таким образом, получение соединений формулы (ΙΙΙΒ) включает реакцию соединения формулы (ΙΙΙΑ)
в которой заместители являются такими, как определено выше, с активирующим реагентом, таким как
- 8 018863
1,1'-карбонилдиимидазол, необязательно, в присутствии разбавителя и, необязательно, в присутствии средства, способствующего протеканию реакции; и извлечение полученного соединения формулы (ШВ) в свободной форме или в форме соли, и, необязательно, превращение полученного соединения формулы (ΙΙΙΒ) в другое соединение формулы (ΙΙΙΒ), и/или превращение полученной соли соединения формулы (ΙΙΙΒ) в другую его соль, и/или превращение полученного свободного соединения формулы (ΙΙΙΒ) в его соль, и/или отделение полученного изомера соединения формулы (ΙΙΙΒ) от одного или большего количества различных полученных изомеров формулы (ΙΙΙΒ).
Соединения формулы (ΙΑ) применимы в качестве лекарственных средств. Поэтому в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к композициям, предназначенным для применения в медицине или ветеринарии, когда показано ингибирование ΡΙ3Κ.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к лечению клеточных пролиферативных заболеваний, таких как опухоли и/или рост раковых клеток, опосредуемых с помощью ΡΙ3Κ. Заболевания могут включать такие, при которых наблюдаются сверхэкспрессирование или амплификация ΡΙ3Κ-α, соматические мутации РГКЗСА или мутации зародышевого типа или соматические мутации ΡΤΕΝ или мутации и транслокации р85а, которые обеспечивают повышающую регуляцию комплекса р85-р110. В частности, эти соединения применимы для лечения раковых заболеваний человека или животного (например, мыши), включая, например, саркому, раковые заболевания легких, бронхов, предстательной железы, молочной железы (включая спорадические раковые заболевания молочной железы и страдающих болезнью Коудена), поджелудочной железы, желудочно-кишечный рак, толстой кишки, прямой кишки, карциному толстой кишки, колоректальную аденому, щитовидной железы, печени, внутрипеченочных желчных протоков, гепатоцеллюлярные, надпочечников, желудка, глиому, глиобластому, эндометрия, меланому, почек, почечных лоханок, мочевого пузыря, тела матки, шейки матки, влагалища, яичников, множественную миелому, пищевода, лейкоз, острый миелолейкоз, хронический миелолейкоз, лимфолейкоз, миелолейкоз, головного мозга, карциному головного мозга, полости рта и глотки, гортани, тонкого кишечника, неходжкинскую лимфому, меланому, ворсинчатую аденому толстой кишки, неоплазию, неоплазию эпителиального характера, лимфомы, карциному молочной железы, базально-клеточную карциному, плоскоклеточную карциному, старческий кератоз, опухолевые заболевания, включая солидные опухоли, опухоли головы и шеи, истинную полицитемию, эссенциальную тромбоцитемию, миелофиброз с миелоидной метаплазией и болезнь Вальденстрема.
В других вариантах осуществления патологическое состояние или нарушение (например, опосредуемое с помощью ΡΙ3Κ) выбрано из группы, включающей истинную полицитемию, эссенциальную тромбоцитемию, миелофиброз с миелоидной метаплазией, астму, ХОЗЛ (хроническое обструктивное заболевание легких), ОРДС (острый респираторный дистресс синдром), синдром Леффлера, эозинофильную пневмонию, заражение паразитами (в частности, многоклеточными) (включая тропическую эозинофилию), бронхолегочный аспергиллез, нодозный полиартериит (включая синдром Черджа-Строса), эозинофильную гранулему, связанные с эозинофилами нарушения, влияющие на дыхательные пути, вызванные реакцией на лекарственное средство, псориаз, контактный дерматит, атопический дерматит, гнездную алопецию, многоформную эритему, герпетриформный дерматит, склеродерму, витилиго, аллергический васкулит, уртикарию, буллезный пемфигоид, красную волчанку, пузырчатку, врожденный буллезный эпидермолиз, аутоиммунные заболевания крови (например, гемолитическую анемию, апластическую анемию, истинную эритроцитарную анемию и идиопатическую тромбоцитопению), системную красную волчанку, полихондрию, склеродерму, гранулематоз Вегенера, дерматомиозит, хронический активный гепатит, злокачественную миастению, синдром Стивенса-Джонсона, идиопатическое спру, аутоиммунное воспалительное заболевание кишечника (например, язвенный колит и болезнь Крона), эндокринную офтальмопатию, диффузный токсический зоб, саркоидоз, альвеолит, хронический гиперчувствительный пневмонит, рассеянный склероз, первичный биллиарный цирроз, увеит (передний и задний), интерстициальный фиброз легких, псориатический артрит, гломерулонефрит, сердечно-сосудистые заболевания, атеросклероз, гипертензию, тромбоз глубоких вен, удар, инфаркт миокарда, нестабильную стенокардию, тромбоэмболию, эмболию легких, тромболитические заболевания, острую артериальную ишемию, тромботические окклюзии периферийных сосудов и ишемическую болезнь сердца, реперфузионные поражения, ретинопатию, такую как диабетическая ретинопатия или вызванная кислородом гипербарическая ретинопатия, и патологические состояния, характеризующиеся повышенным внутриглазным давлением или секрецией внутриглазной жидкости, такие как глаукома.
Для указанных выше случаев применения необходимая доза, разумеется, будет меняться в зависимости от пути введения, конкретного патологического состояния, подвергающегося лечению, и необходимого эффекта. Обычно указывают, что удовлетворительные результаты систематически обеспечиваются при суточных дозах, равных от примерно 0,03 до примерно 100,0 мг/(кг массы тела), например от примерно 0,03 до примерно 10,0 мг/(кг массы тела). Показанная суточная доза для более крупного млекопитающего, например человека, находится в диапазоне от примерно 0,5 мг до примерно 3 г, например от примерно 5 мг до примерно 1,5 г, и ее обычно вводят, например, в виде разделенных доз до 4 раз в сутки или в форме пролонгированного действия. Разовые дозированные формы, подходящие для перо
- 9 018863 рального введения, содержат от примерно 0,1 до примерно 500 мг, например от примерно 1,0 до примерно 500 мг активного ингредиента.
Соединения формулы (ΙΑ) можно вводить любым подходящим путем, в частности энтерально, например перорально, например в виде таблеток или капсул, или парентерально, например в виде растворов или суспензий для инъекций, местно, например в виде лосьонов, гелей, мазей или кремов, путем ингаляции, назально или в форме суппозитория.
Соединения формулы (ΙΑ) можно вводить в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли, например, как указано выше. Такие соли можно получить обычным образом и они обладают активностью такого же порядка, как свободные соединения.
Таким образом, соединения формулы (ΙΑ) можно использовать для предупреждения или лечения патологических состояний, нарушений или заболеваний, опосредуемых активацией фермента ΡΙ3Κ (например, киназы ΡΙ3-α), например, таких как указано выше, у субъекта, нуждающегося в таком лечении, включающего введение указанному субъекту соединения формулы (ΙΑ) или его фармацевтически приемлемой соли в эффективном количестве;
применения соединения формулы (ΙΑ) в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли в качестве лекарственного средства, например, в любом из способов, указанных в настоящем изобретении;
применения соединения формулы (ΙΑ) в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли в любом из способов, указанных в настоящем изобретении, в частности, для лечения одного или большего количества заболеваний, опосредуемых фосфатидилинозит-3-киназой;
применения соединения формулы (ΙΑ) в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли в любом из способов, указанных в настоящем изобретении, в частности, для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения одного или большего количества заболеваний, опосредуемых фосфатидилинозит-3 -киназой.
ΡΙ3Κ выступают в качестве узла вторых мессенджеров, который объединяет параллельные пути передачи сигналов, и появляется все больше данных о том, что комбинация ингибитора ΡΙ3Κ с ингибиторами других путей будет применима для лечения рака и пролиферативных заболеваний у людей.
Примерно у 20-30% людей, страдающих раком молочной железы, сверхэкспрессируется Нег-2/пеиЕгЬВ2, мишень для лекарственного препарата трастузумаб. Хотя показано, что трастузумаб приводит к длительным ответам у некоторых пациентов, у которых экспрессируется Нег2/пеи-ЕгЬВ2, ответ наблюдается только у части этих пациентов. Последние исследования показали, что такой ограниченный ответ можно существенно улучшить с помощью комбинации трастузумаба с ингибиторами пути ΡΙ3Κ или ΡΙ3Κ/ΑΚΤ (Сйап е! а1., Втеав! Сап. Кее. Тгеа!. 91:187 (2005), νοοάβ ^аФвк! е! а1., Втй. 1. Сапсег 82:666 (2000), Ν;ιμ;ιΐ;ι е! а1., Сапсег Се11 6:117 (2004)).
При различных злокачественных заболеваниях людей происходят активирующие мутации или наблюдается повышенное содержание Нег1/ЕСЕК и для воздействия на эту рецепторную тирозинкиназу разработан целый ряд антител и небольших молекул-ингибиторов, в том числе тарцева, гефитиниб и эрбитукс. Однако, хотя ингибиторы ЕСЕК проявляют противоопухолевую активность по отношению к некоторым опухолям человека (например, Νδί'Έί.'). они не увеличивают общую выживаемость для всех пациентов, у которых имеются опухоли, экспрессирующие ЕСЕК. Это можно объяснить тем, что для многих мишеней Нег1/ЕСЕК, расположенных ниже в пути передачи сигнала, включая путь ΡΙ3Κ/ΑΌ, с высокой частотой происходят мутации или нарушения регуляции при различных злокачественных проявлениях. Например, по данным исследований ш νίίΓο гефитиниб подавляет рост линии клеток аденокарциномы. Однако можно выбрать субклоны этих линий клеток, которые резистентны к воздействию гефитиниба и у которых наблюдается усиленная активация пути ΡΙ3/Α&. Понижающая регуляция или ингибирование этого пути делает резистентные субклоны чувствительными к гефитинибу (ЕокиЬо е! а1., Втй. 1. Сапсег 92:1711 (2005)). Кроме того, в модели рака молочной железы ш νίΐτο с использованием линии клеток, у которых скрыта мутация ΡΤΕN и происходит сверэкспрессирование ЕСЕК, ингибирование и пути ΡΙ3 Κ/АкЕ и ЕСЕК приводит к синергетическому эффекту (8йе е! а1., Сапсег Се11 8:287-297(2005)). Эти результаты показывают, что комбинация гефитиниба и ингибиторов пути ΡΙ3Κ/Α1<1, вероятно, будет привлекательной методологией для лечения рака.
В модели ксенотрансплантата глиобластомы комбинация АЕЕ778 (ингибитор Нет-2/пеи/ЕтЬВ2, УЕСЕК и ЕСЕК) и КАЭ001 (ингибитор тТОК, расположенный в прямом направлении в пути передачи сигнала мишени Ак!) приводит к большей суммарной эффективности, чем при использовании этих средств по отдельности (Όοιιώπ е! а1., Μο1. Сапсег. Тйет. 4:101-112 (2005)).
Антиэстрогены, такие как тамоксифен, подавляют рост рака молочной железы, вызывая остановку клеточного цикла, для которой необходимо воздействие ингибитора ρ27Κίρ клеточного цикла. Недавно показано, что активация пути киназы Кав-КаЕ-МАГ меняет состояние фосфорилирования ρ27Κίρ, так что ослабляется его ингибирующее воздействие при остановке клеточного цикла, что способствует резистентности к антиэстрогенам (Οοπονηπ, е! а1., 1. Вю1. Сйет. 276:40888, 2001). Как показано в публикации □οπον-Ηΐ е! а1., ингибирование сигнального пути ΜΑΡΚ путем лечения ингибитором ΜΕΚ обращает аномальное состояние фосфорилирования р27 в случае резистентных к гормону линий клеток рака молоч
- 10 018863 ной железы и тем самым восстанавливает чувствительность к гормону. Аналогичным образом, фосфорилирование ρ27Κίρ посредством Ак! также устраняет его воздействие при остановке клеточного цикла (У1д11е!!о е! а1., Να!. Меб. 8:1145 (2002)).
В соответствии с этим соединения формулы (1А) применяются для лечения зависящих от гормонов типов рака, таких как рак молочной и предстательной железы. Их применение направлено на обращение резистентности к гормонам, обычно наблюдающейся для этих типов рака при использовании обычных противораковых средств.
При раковых заболеваниях крови, таких как хронический миелолейкоз (ХМЛ), транслокация хромосом ответственна за конститутивно активированную ВСЯ-АЬ1 тирозинкиназу. Страдающие этими заболеваниями пациенты реагируют на иматиниб, небольшую молекулу - ингибитор тирозинкиназы, вследствие ингибирования активности киназы АЫ. Однако на прогрессирующей стадии заболевания многие пациенты сначала реагируют на иматиниб, но затем происходит рецидив вследствие приводящих к резистентности мутаций в домене киназы АЫ. Исследования ίη νί!το показали, что для оказания воздействия ВСЯ-АЬ1 использует путь киназы Яак-ЯаТ. Кроме того, ингибирование на том же пути более одной киназы приводит к дополнительной защите от мутаций, приводящих к резистентности.
В соответствии с этим соединения формулы (1А) могут быть использованы в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным средством, выбранным из группы ингибиторов киназы, таким как глеевек®, для лечения раковых заболеваний крови, таких как хронический миелолейкоз (ХМЛ). Их применение направлено на обращение или предупреждение резистентности по отношению к указанному по меньшей мере одному дополнительному средству.
Поскольку активация пути Р13К/Ак! способствует выживанию клеток, ингибирование этого пути в сочетании со средствами, которые способствуют апоптозу раковых клеток, включая лучевую терапию и химиотерапию, приведет к улучшенному ответу (С1юЬпа1 е! а1., СА Сапсег 1. С1т 55:178-194 (2005)). Примером является комбинация ингибитора киназы ΡΙ3 с карбоплатином, которая обнаруживает синергетический эффект при исследованиях пролиферации и апоптоза ίη νίίτο, а также при исследованиях эффективности воздействия на опухоль ίη νίνο с использованием модели ксенотрансплантата рака яичников (АеЧГаП и Шхтпег. Μο1. Сапсег Тйег 4:1764-1771 (2005)).
Появляется все больше данных о том, что ингибиторы Р13-киназ классов 1А и 1В могут иметь терапевтическую ценность не только при раке и пролиферативных заболеваниях, но и при других типах заболеваний. Установлено, что ингибирование р110Ц, изоформы ΡΙ3Κ, являющейся продуктом гена Р1К3СВ, может участвовать в индуцируемой сдвигом активации тромбоцитов (баскюн е! а1., №11иге Мебюте 11:507-514 (2005)). Таким образом, ингибитор ΡΙ3Κ, который ингибирует ρ110β, можно применять в качестве единственного средства или в сочетании с антитромботической терапией. Изоформа ρ110δ, которая является продуктом гена ΡΙΚΒί'Ό, является важной для В-клеточной функции и дифференциации (СШуШп е! а1., 1. Εχρ. Меб. 196:753-763 (2002)), а также для зависящих и независящих от Тклеток иммунных ответов (Ιου е! а1., Μο1. Се11. Βίο1. 22:8580-8590 (2002)) и дифференциации мастоцитов (А11 е! а1., №11иге 431:1007-1011 (2004)). Таким образом, следует ожидать, что ингибиторы ρί 105 могут быть применимыми для лечения связанных с В-клетками аутоиммунных заболеваний и астмы. Наконец, ингибирование р110у, изоформы, являющейся продуктом гена ΡI3ΚСС, приводит к пониженному Тклеточному, но не В-клеточному ответу (Рей е! а1., 1. 1ттиго1. 173:2236-2240 (2004)) и эффективность ингибирования этой изоформы продемонстрирована на моделях аутоиммунных заболеваний на животных (Сатцх е! а1., №1Шге Мебюте 11:936-943 (2005), ВагЬег е! а1., №11иге Мебюте 11:933-935 (2005)). Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, включающим по меньшей мере одно соединение формулы (1А) совместно с фармацевтически приемлемым инертным наполнителем, пригодным для введения человеку или животному по отдельности или вместе с другими противораковыми средствами.
Соединения формулы (1А) могут быть также использованы для лечения людей или животных, страдающих от клеточного пролиферативного заболевания, такого как рак. Таким образом, соединения формулы (1А) могут быть использованы для лечения человека или животного, нуждающегося в таком лечении, которое включает введение субъекту соединения формулы (1А) по отдельности или в комбинации с другими противораковыми средствами в терапевтически эффективном количестве. В частности, композиции можно приготовить совместно в виде комбинированного лекарственного средства или вводить по отдельности. Противораковые средства, подходящие для применения совместно с соединением формулы (1А), включают, но не ограничиваются только ими, одно или большее количество соединений, выбранных из группы, включающей ингибиторы киназы, антиэстрогены, антиандрогены, другие ингибиторы, химиотерапевтические противораковые лекарственные средства, алкилирующие средства, хелатные средства, модификаторы биологического ответа, противораковые вакцины, средства антисмысловой терапии, приведенные ниже.
А. Ингибиторы киназы.
Ингибиторы киназы, предназначенные для применения в качестве противораковых средств совместно с соединением формулы (I), включают ингибиторы киназ рецептора эпидермального фактора роста
- 11 018863 (ЕСРВ), такие как небольшие молекулы хиналозинов, например гефитиниб (ИЗ 5457105, ИЗ 5616582 и ИЗ 5770599), ΖΌ-6474 (АО 01/32651), эрлотиниб (тарцева®, ИЗ 5747498 и АО 96/30347) и лапатиниб (ИЗ 6727256 и АО 02/02552), ингибиторы киназ рецептора сосудистого эндотелиального фактора роста (УЕСРВ), включая ЗИ-11248 (АО 01/60814), ЗИ 5416 (ИЗ 5883113 и АО 99/61422), ЗИ 6668 (ИЗ 5883113 и АО 99/61422), СШВ-258 (ИЗ 6605617 и ИЗ 6774237), ваталаниб или ΡΤΚ-787 (ИЗ 6258812), УЕСР-Тгар (АО 02/57423), В43-генистеин (АО-09606116), фенретинид (п-гидроксифениламиноретиноевая кислота) (ИЗ 4323581), ΙΜ-862 (АО 02/62826), бевацизумаб или авастин® (АО 94/10202), ΚΚΝ-951, 3-[5-(метилсульфонилпиперидинметил)индолил]хинолон, АС-13736 и АС-13925, пирроло[2,1£][1,2,4]триазины, ΖΚ-304709, веглин®, УМОА-3601, ЕС-004, СΕΡ-701 (ИЗ 5621100), Сапб5 (АО 04/09769), ингибиторы тирозинкиназы ЕгЬ2, такие как пертузумаб (АО 01/00245), трастузумаб и ритуксимаб, ингибиторы Ак! протеинкиназы, такие как ВХ-0201, ингибиторы протеинкиназы С (ΡΚС), такие как ЬУ-317615 (АО 95/17182) и перифосин (ИЗ 2003171303), ингибиторы киназы Ваί7Μаρ/ΜΕΚ/Ва8, включая сорафениб (ВАУ 43-9006), АВР-350ВГ, ЬЕтаГАОЫ, ВМЗ-354825 АМС-548 и другие, раскрытые в АО 03/82272, ингибиторы киназы рецептора фактора роста фибробластов (РСРВ), ингибиторы клеточно-зависимой киназы (ΟΌΚ), включая СУС-202 и росковитин (АО 97/20842 и АО 99/02162), ингибиторы киназ рецептора тромбоцитарного фактора роста (ЛОСРВ), такие как СН!В-258, 3С3 тАЬ, АС-13736, ЗИ-11248 и Зи-6668, и ингибиторы киназы Всг-АЬ1 и белков слияния, такие как ЗТР571 или глеевек® (иматиниб).
B. Антиэстрогены.
Воздействующие на эстрогены средства, предназначенные для применения в противораковой терапии совместно с соединением формулы (Ι), включают селективные модуляторы эстрогенного рецептора (ЗЕВМк), включая тамоксифен, торемифен, ралоксифен, ингибиторы ароматазы, включая аримидекс® или анастрозол, негативные регуляторы эстрогенного рецептора (ЕВЭк), включая фаслодекс® или фульвестрант.
C. Антиандрогены.
Воздействующие на андрогены средства, предназначенные для применения в противораковой терапии совместно с соединением формулы (Ι), включают флутамид, бикалутамид, финастерид, аминоглютетамид, кетоконазол и кортикостероиды.
Ό. Другие ингибиторы.
Другие ингибиторы, предназначенные для применения в качестве противораковых средств совместно с соединением формулы (Ι), включают ингибиторы протеинфарнезилтрансферазы, включая типифарниб или В-115777 (ИЗ 2003134846 и АО 97/21701), ВМЗ-214662, АΖ^-3409 и ΡΤΊ-277, ингибиторы топоизомеразы, включая мербарон и дифломотекан (ВЫ-80915), ингибиторы митотических кинезиновых белков веретена (ΚΈΡ), включая ЗВ-743921 и ΜΚΙ-833, модуляторы протеосомы, такие как бортезомиб или велкаде (ИЗ 5780454), ХЬ-784, и ингибиторы циклооксигеназы 2 (СОХ-2), включая нестероидные противовоспалительные лекарственные средства Ι (ЫЗАШк).
Е. Химиотерапевтические противораковые лекарственные средства.
Конкретные противораковые химиотерапевтические средства, предназначенные для применения в качестве противораковых средств совместно с соединением формулы (Ι), включают анастрозол (аримидекс®), бикалутамид (казодекс®), блеомицинсульфат (бленоксан®), бусульфан (милеран®), бусульфан для инъекций (бусульфекс®), капецитабин (кселода®), Ы4-пентоксикабонил-5-дезокси-5-фторцитидин, карбоплатин (параплатин®), кармустин (В1СЫи®), хлорамбуцил (лейкеран®), цисплатин (платинол®), кладрибин (лейстатин®), циклофосфамид (цитоксан® или неосар®), цитарабин, цитозинарабинозид (цитосар-и®), липосомный цитарабин для инъекций (ИероСу!®), дакарбазин (ИИС-Поте®), дактиномицин (актиномицин Ό, космеган), даунорубицингидрохлорид (церубидин®), липосомный даунорубицинцитрат для инъекций (ИаипоХоте®), дексаметазон, доцетаксел (таксотер®, ИЗ 2004073044), доксорубицингидрохлорид (адриамицин®, рубекс®), этопозид (вепезид®), флударабинфосфат (флудара®), 5фторурацил (адруцил®, эфудекс®), флутамид (эйлексин®), тезацитибин, гемцитабин (дифтордезоксицитидин), гидроксимочевина (гидреа®), идарубицин (идамицин®), ифосфамид (ГРЕХ®), иринотекан (камптосар®), Ь-аспарагиназа (ЭЛСПАР®), лейковорин-кальций, мелфалан (алкеран®), 6-меркаптопурин (пуринэтол®), метотрексат (фолекс®), митоксандрон (новантрон®), миотарг, паклитаксел (таксол®), феникс (иттрии-90/ΜX-^ΤΡА), пентостатин, полифепросан 20 с имплантатом кармустина (глиадел®), тамоксифенцитрат (нолвадекс®), тенипозид (вумон®), 6-тиогуанин, тиотепа, трирапазамин (тиразон®), топотекангидрохлорид для инъекции (гикамптин®), винбластин (велбан®), винкристин (онковин®) и винорелбин (навелбин®).
Р. Алкилирующие средства.
Алкилирующие средства, предназначенные для применения совместно с соединением формулы (Ι), включают νΝΡ-40101Μ или клоретизин, оксалиплатин (ИЗ 4169846, АО 03/24978 и АО 03/04505), глюфосфамид, мафосфамид, этопофос (ИЗ 5041424), преднимустин, треосульфан, бусульфан, ирофлувен (ацилфульвен), пенкломедин, пиразолоакридин (ΡΌ-115934), О6-бензилгуанин, децитабин (5-аза-2
- 12 018863 дезоксицитидин), бросталлицин, митомицин С (МйоЕхйа), ТБК-286 (телцита®), темозоломид, трабектедин (И8 5478932), АР-5280 (композиция цисплатина на основе платината), порфиромицин и клеаразид (меклоретамин).
С. Хелатные средства.
Хелатные средства, предназначенные для применения совместно с соединением формулы (Ι), включают тетратиомолибдат (\УО 01/60814), КР-697, химерик Т84.66 (сТ84.66), гадофосвесет (вазовист®), дефероксамин и блеомицин, необязательно, в сочетании с электропорацией (ЕРТ).
H. Модификаторы биологического ответа.
Модификаторы биологического ответа, такие как иммунномодуляторы, предназначенные для применения совместно с соединением формулы (Ι), включают стауроспорин и его макроциклические аналоги, включая иСЫ-01, СЕР-701 и мидостаурин (см. νΟ 02/30941, νΟ 97/07081, νΟ 89/07105, И8 5621100, νθ 93/07153, νθ 01/04125, νθ 02/30941, νθ 93/08809, νθ 94/06799, νθ 00/27422, νθ 96/13506 и νθ 88/07045), скваламин (νΟ 01/79255), ΌΑ-9601 (νΟ 98/04541 и И8 6025387), алемтузумаб, интерфероны (например, ΙΕΝ-α, ΙΕΝ-β и т.п.), интерлейкины, предпочтительно ГБ-2 или алдеслейкин, а также ΙΕ-1, Ш-3, Ш-4, Ш-5, Ш-6, Ш-7, Ш-8, Ш-9, БШ-10, Ш-11, Ш-12 и их активные биологические варианты, содержащие аминокислотные последовательности, составляющие более 70% от нативной последовательности человека, алтретамин (гексален®), 8И 101 или лефлуномид (νθ 04/06834 и И8 6331555), имидазохинолины, такие как ресихимод и имихимод (И8 4689338, 5389640, 5268376, 4929624, 5266575, 5352784, 5494916, 5482936, 5346905, 5395937, 5238944 и 5525612), и δΜΙΡκ (небольшие молекулы, модулирующие иммунофармацевтические средства), включая бензазолы, антрахиноны, тиосемикарбазоны и триптантрины (νθ 04/87153, νθ 04/64759 и νθ 04/60308).
Ι. Противораковые вакцины.
Противораковые вакцины, предназначенные для применения совместно с соединением формулы (Ι), включают авицин® (ТейаНебгоп Бей. 26:2269-70 (1974)), ореговомаб (ОуаКех® ), тератоп® (8Ти-КБН), вакцины против мелатомы, серия СБ4000 (СБ4014, СБ4015 и СБ4016), нацеленные на 5 мутаций белка Как, &ίον;·ιχ-1, Μе1аVаx, адвексин® или ШС№201 (νθ 95/12660), 8|д/Е7/БЛМР-1, кодирующий ΗΡν16 Ε7, вакцину ΜΑСΕ-3 или М3ТК (νθ 94/05304), ΗΕК-2VЛX, ΑΟΓΙνΈ, который стимулирует Тклетки, специфические для опухолей, противораковую вакцину СМ-С8Е и вакцины на основе моноцитогенов БШепа.
I. Средства антисмысловой терапии.
Противораковые средства, предназначенные для применения совместно с соединением формулы (Ι), также включают антисмысловые композиции, такие как ΑΕ^35156 (СЕМ-640), АР-12009 и АР11014 (ТСР-в-2-специфические антисмысловые олигонуклеотиды), ΑνΙ-4126, ΑνΙ-4557, ΑνΙ-4472, облимерсен (генасенсе®), Ш82, апринокарсен (νθ 97/29780), СТБ2040 (антисмысловой олигонуклеотид, воздействующий на К2 рибонуклеотидредуктазы мРНК) (νθ 98/05769), СТБ2501 (νθ 98/05769), капсулированные в липосомах антисмысловые олигодезоксинуклеотиды с-КаГ (ΕΕταΓΑΟΝ) (νθ 98/43095) и 81гиа-027 (основанные на иммунной РНК лекарственные средства, воздействующие на VΕСΕК-1 мРНК).
Соединение формулы (ΙΑ) также можно объединить в фармацевтической композиции с бронхорасширяющими или антигистаминными лекарственными веществами. Такие бронхорасширяющие лекарственные средства включают антихолинергические или антимускариновые средства, в частности гликопирролат, ипратропийбромид, окситропийбромид и тиотропийбромид, ОгМ3, аклидиний, СНЕ5407, С8К233705 и агонисты β-2-адренорецептора, такие как салбутамол, тербуталин, салметерол, кармотерол, милветерол и предпочтительно индакатерол и формотерол. Совместно применяющиеся терапевтические антигистаминные лекарственные вещества включают цетиризингидрохлорид, клемастин фумарат, прометазин, лоратадин, дезлоратадин, дифенгидрамин и фексофенадингидрохлорид.
Соединения формулы (ΙΑ) могут быть также использованы в комбинации, включающей помимо соединения формулы (ΙΑ) одно или большее количество соединений, которые применимы для лечения тромболитического заболевания, заболевания сердца, удара и т.п. Такие соединения включают аспирин, стрептокиназу, активатор плазминогена ткани, урокиназу, антикоагулянт, лекарственные средства, препятствующие агрегации тромбоцитов (например, ПЛАВИКС; клопидогрелбисульфат), статин (например, ЛИПИТОР или кальциевая соль аторвастатина), ЗОКОР (симвастатин), КРЕСТОР (росувастатин и т.п.), β-блокатор (например, атенолол), НОРВАСК (амлодипинбезилат) и ингибитор АХЭ (ацтилхолинэстеразы) (например, лизиноприл).
Соединения формулы (ΙΑ) могут быть также использованы в комбинации, включающей помимо соединения формулы (ΙΑ) одно или большее количество соединений, которые применимы для лечения гипертензии. Такие соединения включают ингибиторы АХЭ, средства, снижающие содержание липидов, такие как статины, ЛИПИТОР (кальциевая соль аторвастатина), блокаторы кальциевых каналов, такие как НОРВАСК (амлодипинбезилат).
Соединения формулы (ΙΑ) могут быть также использованы в комбинации, включающей помимо соединения формулы (ΙΑ) одно или большее количество соединений, выбранных из группы, включающей фибраты, β-блокаторы, ингибиторы ΝΕΡΙ, антагонисты ангиотензинового рецептора 2 и средства, пре
- 13 018863 пятствующие агрегации тромбоцитов.
Соединения формулы (ΙΑ) могут быть также использованы в комбинации, включающей помимо соединения формулы ДА) и соединение, применимое для лечения воспалительных заболеваний, включая ревматоидный артрит. Такое соединение можно выбрать из группы, включающей ингибиторы ΤΝΕ-α, такие как анти-ΤΝΕ-α моноклональные антитела (такие как РЕМИКАДЕ, СЭР-870) и Ό2Ε7 (ГУМИРА) и молекулы иммуноглобулина слияния рецептора ΤΝΕ (такие как ЭМБРЕЛ), ингибиторы 1Ь-1, антагонисты рецептора растворимого 1Ь-1Ка (например, КИНЕРЕТ или ингибиторы 1СЕ), нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (НСПВЛС), пироксикам, диклофенак, напроксен, флурбипрофен, фенопрофен, кетопрофен, ибупрофен, фенаматы, мефенаминовую кислоту, индометацин, сулиндак, апазон, пиразолоны, фенилбутазон, аспирин, ингибиторы СОХ-2 (такие как ЦЕЛЕБРЕКС (целекоксиб), ПРЕКСИГ (лумиракоксиб)), ингибиторы металлопротеазы (предпочтительно селективные ингибиторы ММР-13), р2х7 ингибиторы, а2а-ингибиторы, НЕЙРОТИН, прегабалин, применяющийся в низкой дозе метотрексат, лефлуномид, гидроксихлорхин, й-пеницилламин, ауранофин или вводимые парентерально или перорально препараты золота.
Соединения формулы (ΙΑ) могут быть также использованы в комбинации, включающей помимо соединения формулы (ΙΑ) и соединение, применимое для лечения остеоартрита. Такое соединение можно выбрать из группы, включающей стандартные нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (далее НСПВЛС), такие как пироксикам, диклофенак, пропионовые кислоты, такие как напроксен, флурбипрофен, фенопрофен, кетопрофен и ибупрофен, фенаматы, такие как мефенаминовая кислота, индометацин, сулиндак, апазон, пиразолоны, такие как фенилбутазон, салицилаты, такие как аспирин, ингибиторы СОХ-2, такие как целекоксиб, валдекоксиб, лумиракоксиб и эторикоксиб, анальгетики и внутрисуставные лекарственные средства, такие как кортикостероиды, и гиалуроновые кислоты, такие как гиалган и синвиск.
Соединения формулы (ΙΑ) могут быть также использованы в комбинации, включающей помимо соединения формулы (ΙΑ) и противовирусное средство и/или антисептические соединение. Такое противовирусное средство можно выбрать из группы, включающей вирацепт, ΑΖΤ, ацикловир и фамцикловир. Такое антисептическое соединение можно выбрать из группы, включающей валант.
Соединения формулы (ΙΑ) могут быть также использованы в комбинации, включающей помимо соединения формулы (ΙΑ) и одно или большее количество средств, выбранных из группы, включающей средства, действующие на ЦНС (центральная нервная система), такие как антидепрессанты (сертралин), лекарственные средства для лечения болезни Паркинсона (такие как депренил, Ь-дофа, реквип, мирапекс, ингибиторы МАОВ, такие как селегин и расагилин, ингибиторы сотР, такие как тасмар, ингибиторы А-2, ингибиторы повторного всасывания допамина, антагонисты ΝΜΌΑ, агонисты никотина, агонисты допамина и ингибиторы нейронной синтазы оксида азота).
Соединения формулы (ΙΑ) могут быть также использованы в комбинации, включающей помимо соединения формулы (ΙΑ) и одно или большее количество лекарственных средств для лечения болезни Альцгеймера. Такое лекарственное средство для лечения болезни Альцгеймера можно выбрать из группы, включающей донепезил, такрин, а25-ингибиторы, НЕЙРОТИН, прегабалин, ингибиторы СОХ-2, пропентофиллин и метрифонат.
Соединения формулы (ΙΑ) могут быть также использованы в комбинации, включающей помимо соединения формулы (ΙΑ) и средства для лечения остеопороза и/или иммунодепрессивное средство. Такие средства для лечения остеопороза можно выбрать из группы, включающей ЭВИСТА (ралоксифенгидрохлорид), дролоксифен, лазофоксифен и фосамакс. Такие иммунодепрессивные средства можно выбрать из группы, включающей ЕК-506 и рапамицин.
Соединения формулы (ΙΑ) могут быть также использованы в виде набора, который включает одно или большее количество соединений формулы (ΙΑ) и необязательно другой компонент комбинации, раскрытый в настоящем изобретении. Типичные наборы включают ингибитор Р13К (например, соединение формулы ΙΑ) и листок-вкладыш или другую маркировку, содержащую указания для лечения клеточного пролиферативного заболевания путем введения ингибирующего Р13К количества соединения (соединений).
Обычно соединения формулы (ΙΑ) вводят в терапевтически эффективном количестве по любому из общепринятых путей введения средств, которые предназначены для аналогичных целей. Использующееся количество соединения формулы (ΙΑ), т.е. активного ингредиента, будет зависеть от множества факторов, таких как тяжесть заболевания, подвергающегося лечению, возраст и относительное состояние здоровья субъекта, активность использующегося соединения, путь и форма введения и других факторов. Лекарственное средство можно вводить более одного раза в сутки, предпочтительно один или два раза в сутки. Все эти факторы находятся в пределах компетенции лечащего врача. Терапевтически эффективные количества соединений формулы (ΙΑ) могут находиться в диапазоне от примерно 0,05 до примерно 50 мг/(кг массы тела) реципиента в сутки; предпочтительно примерно 0,1-25 мг/кг/сутки, более предпочтительно примерно от 0,5 до 10 мг/кг/сутки. Так, для введения пациенту массой 70 кг наиболее предпочтительный диапазон доз составляет примерно 35-70 мг в сутки.
- 14 018863
Обычно соединения формулы (ΙΑ) вводят в виде фармацевтических композиций по любому из следующих путей: перорально, системно (например, чрескожно, назально или с помощью суппозитория) или парентерально (например, внутримышечно, внутривенно или подкожно). Предпочтительным путем введения является пероральный с использованием обычного суточного режима, который можно изменить в соответствии со степенью поражения. Композиции могут находиться в форме таблеток, пилюль, капсул, полужидких веществ, порошков, препаратов пролонгированного действия, растворов, суспензий, эликсиров, аэрозолей или любых других подходящих композиций. Другим предпочтительным путем введения соединений формулы (ΙΑ) является ингаляция. Она является эффективной методикой доставки терапевтического средства непосредственно в дыхательные пути.
Выбор композиции зависит от различных факторов, таких как путь введения лекарственного средства и биологическая доступность лекарственного вещества. Для доставки путем ингаляции соединение можно приготовить в виде жидкого раствора, суспензий, аэрозольного препарата или сухого порошка и поместить в дозирующее устройство, подходящее для введения. Имеется несколько типов фармацевтических устройств для ингаляции - ингаляторы типа небулайзера, мерные дозирующие ингаляторы (МДИ) и ингаляторы для сухих порошков (ИСП). В устройствах типа небулайзера образуется поток воздуха высокой скорости, который распыляет терапевтическое средство (которое приготовлено в жидкой форме) в воздушную дисперсию, которая попадает в дыхательные пути пациента. МДИ обычно содержат композицию вместе со сжатым газом. После активации устройство выбрасывает отмеренное количество терапевтического средства с помощью сжатого газа и таким образом является надежным средством введения заданного количества средства. ИСП дозирует терапевтические средства в виде сыпучего порошка, который может диспергироваться во вдыхаемом пациентом потоке воздуха. Для получения сыпучего порошка терапевтическое средство готовят вместе с инертным наполнителем, таким как лактоза. Определенное количество терапевтического средства хранится в виде капсулы и подается при каждом срабатывании.
Соединения формулы (ΙΑ) могут быть также использованы в виде композиций, в которых размер частиц соединения формулы (ΙΑ) находится в диапазоне 10-1000 нм, предпочтительно 10-400 нм. Такие фармацевтические композиции, разработанные специально для лекарственных средств, обладающих низкой биологической доступностью, основаны на том, что биологическую доступность можно улучшить путем увеличения площади поверхности, т.е. уменьшения размера частиц. Например, в И.8. № 4107288 описана фармацевтическая композиция, обладающая частицами с размером в диапазоне примерно от 10 до 1000 нм, в которой активное вещество нанесено на матрицу из сшитых макромолекул. В И.8. № 5145684 описано приготовление фармацевтической композиции, в которой лекарственное вещество распыляют в наночастицы (средний размер частиц составляет 400 нм) в присутствии модификатора поверхности и затем диспергируют в жидкой среде и получают фармацевтическую композицию, обладающую довольно высокой биологической доступностью. Оба документа включены в настоящее изобретение в качестве ссылки.
Другим объектом настоящего изобретения являются фармацевтические композиции, содержащие (терапевтически эффективное количество) соединения формулы (ΙΑ) и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый инертный наполнитель. Приемлемые инертные наполнители являются нетоксичными, способствуют введению и не оказывают неблагоприятного воздействия на терапевтические характеристики соединения формулы (ΙΑ). Такой инертный наполнитель может являться любым твердым, жидким, полужидким или, в случае аэрозольной композиции, газообразным инертным наполнителем, которые обычно имеются в распоряжении специалиста в данной области техники.
Твердые фармацевтические инертные наполнители включают крахмал, целлюлозу, тальк, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат магния, стеарат натрия, глицеринмоностеарат, хлорид натрия, сухое обезжиренное молоко и т.п.
Жидкие и полужидкие инертные наполнители можно выбрать из группы, включающей глицерин, пропиленгликоль, воду, этанол и различные масла, включая полученные из нефти, животного, растительного или синтетического происхождения, например арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т.п. Предпочтительные жидкие носители, в особенности предназначенные для растворов для инъекций, включают воду, физиологический раствор, водный раствор декстрозы и гликоли.
Сжатые газы можно использовать для диспергирования соединения формулы Ι в аэрозольной форме. Инертными газами, подходящими для этой цели, являются азот, диоксид углерода и т.п. Другие подходящие фармацевтически приемлемые инертные наполнители и их композиции описаны в публикации К.еттдои'8 РЬагтасеибса1 8сюпсс5. ебйеб Ьу Е.^. Майш (Маск РиЬШЫпд Сотрапу, 18(П еб., 1990).
Количество соединения в композиции может меняться в широких пределах, использующихся специалистами в данной области техники. Обычно композиция содержит примерно 0,01-99,99 мас.% соединения формулы (ΙΑ) в пересчете на полную массу композиции, а остальное представляет собой один или большее количество подходящих фармацевтических инертных наполнителей. Предпочтительно, если соединение содержится в количестве, составляющем примерно 1-80 мас.%.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, включающей (т.е. содержащей или заключающей в себе) по меньшей мере одно соединение формулы (Ι) и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый инертный наполнитель.
- 15 018863
Фармацевтические композиции, включающие соединение формулы (ΙΑ) в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли вместе по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым инертным наполнителем (таким как носитель и/или разбавитель), можно приготовить обычным образом путем смешивания компонентов.
Объединенные фармацевтические композиции, включающие соединение формулы (ΙΑ) в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли и дополнительно включающие компонент комбинации (в одной дозированной разовой форме или в виде набора компонентов) вместе по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем и/или разбавителем, можно приготовить обычным образом путем смешивания указанных активных ингредиентов с фармацевтически приемлемым носителем и/или разбавителем.
Таким образом, соединения формулы (ΙΑ) могут быть также использованы в виде объединенной фармацевтической композиции, например, для применения в любом из способов, описанных в настоящем изобретении, которая включает соединение формулы (ΙΑ) в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли вместе с фармацевтически приемлемым разбавителем и/или носителем;
объединенной фармацевтической композиции, которая включает соединение формулы (ΙΑ) в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли в качестве активного ингредиента; один или большее количество фармацевтически приемлемых носителей и/или разбавителей и необязательно одно или большее количество дополнительных лекарственных веществ. Такая объединенная фармацевтическая композиция может находиться в виде одной разовой дозы или в виде набора компонентов;
объединенной фармацевтической композиции, включающей соединение формулы (ΙΑ) в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли в терапевтически эффективном количестве и вто рое лекарственное вещество, предназначенное для одновременного или последовательного введения; фармацевтической комбинации, например набора, включающего (а) первое средство, которое представляет собой соединение формулы (ΙΑ), раскрытое в настоящем изобретении, в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли, и (Ь) по меньшей мере одно совместно вводимое средство, указанное выше, и такой набор может содержать инструкции по его введению.
Соединения формулы (ΙΑ) могут быть также использованы для способа, определенного выше, включающего совместное введение, например одновременное или последовательное, соединения формулы (ΙΑ) или его фармацевтически приемлемой соли в терапевтически эффективном нетоксичном количестве и по меньшей мере второго лекарственного вещества, например указанного выше.
Приведенные ниже примеры соединений формулы (Ι) иллюстрируют настоящее изобретение, не ограничивая его объем. Способы получения таких соединений описаны ниже в настоящем изобретении.
Пример 1. 2-Амид,1-{[5-(2-трет-бутилпиридин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид} (§)-пирролидин-
1,2-дикарбоновой кислоты
Стадия 1 6 Стадия 1 5
Стадия 1 3 Стадия 1 2
Εΐ3Ν (1,54 мл, 11,1 ммоль, 3 экв.) добавляют к раствору [5-(2-трет-бутилпиридин-4-ил)-4метилтиазол-2-ил]амида имидазол-1-карбоновой кислоты (стадия 1.1) (1,26 г, 3,7 ммоль) и Ьпролинамида (0,548 г, 4,8 ммоль, 1,3 экв.) в ДМФ (25 мл) в атмосфере аргона. Реакционную смесь перемешивают в течение 14 ч при КТ, реакцию останавливают путем добавления насыщенного раствора №1НСО3 и экстрагируют с помощью ЕЮАс. Органическую фазу промывают насыщенным раствором
- 16 018863
ЫаНСО3, сушат (Ыа28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ/МеОН, 1:0^94:6), затем растирают с ЕьО и получают 1,22 г искомого соединения в виде почти белого твердого вещества. ИЭР-МС: 388,1 [М+Н]+; Ц = 2,35 мин (система 1); ТСХ: 1С = 0,36 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-66) δ (ч./млн): 1,32 (8, 9Н), 1,75-1,95 (т, 3Н), 1,97-2,13 (т, 1Н), 2,39 (8, 3Н), 3,38-3,50 (т, 1Н), 3,52-3,65 (т., 1Н), 4,10-4,40 (т, 1Н), 6,94 (Ьг. 8., 1Н), 7,22 (6, 1Н), 7,30-7,48 (т, 2Н), 8,49 (6, 1Н), 10,87 (Ьг. 8., 1Н).
Стадия 1.1. [5-(2-трет-Бутилпиридин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид имидазол-1-карбоновой кислоты
Смесь 5-(2-трет-бутилпиридин-4-ил)-4-метилтиазол-2-иламина (стадия 1.2) (1 г, 4,05 ммоль) и 1,1'карбонилдиимидазола (0,984 г, 6,07 ммоль, 1,5 экв.) в ДХМ (50 мл) перемешивают в течение 4 ч при кипячении с обратным холодильником и дают охладиться. Полученный осадок собирают фильтрованием и получают 1,26 г искомого соединения в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: 340,2 [М-Н]-; Ц = 2,85 мин (система 1).
Стадия 1.2. 5-(2-трет-Бутилпиридин-4-ил)-4-метилтиазол-2-иламин
Смесь Ы-[5-(2-трет-бутилпиридин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]ацетамида (стадия 1.3) (2 г, 7 ммоль), 6н. водного раствора НС1 (10 мл) и Е!ОН (50 мл) перемешивают в течение 2 ч при 85 °С, дают охладиться, реакцию останавливают путем добавления насыщенного раствора ЫаНСО3 и экстрагируют смесью ДХМ/МеОН (9:1, об./об.). Органическую фазу промывают насыщенным раствором ЫаНСО3. сушат (Ыа28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ/МеОН, 1:0 96:4) и получают 1,21 г искомого соединения в виде желтого твердого вещества. ИЭР-МС: 248,1 [М+Н]+; ТСХ: 1С = 0,36 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 1.3. Ы-[5-(2-трет-бутилпиридин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]ацетамид
Смесь 2-ацетамидо-4-метилтиазол (1,2 г, 7,7 ммоль, 1,1 экв.), карбонат цезия (4,55 г, 14 ммоль, 2 экв.), три-трет-бутилфосфинийтетрафторборат (0,406 г, 1,4 ммоль, 0,2 экв.), ацетат палладия(П) (0,15 г, 0,7 ммоль, 0,1 экв.) и 4-бром-2-трет-бутилпиридин (стадия 1.4) (1,5 г, 7 ммоль) в ДМФ (50 мл) перемешивают в течение 1,5 ч при 90 °С в атмосфере аргона, дают охладиться, реакцию останавливают путем добавления насыщенного раствора ЫаНСО3 и фильтруют через слой целита. Фильтрат экстрагируют с помощью ЕЮЛс. Органическую фазу промывают насыщенным раствором ЫаНСО3, сушат (Ыа28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ/МеОН, 1:0 97:3) и получают 2,02 г искомого соединения в виде желтого твердого вещества.
ИЭР-МС: 290,1 [М+Н]+; ТСХ: Яг = 0,35 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Смесь 2-трет-бутил-1Н-пиридин-4-она (стадия 1.5) (4,25 г, 28 ммоль) и РОВг3 (8,88 г, 31 ммоль, 1,1 экв.) нагревают при 120°С, перемешивают в течение 15 мин, дают охладиться, реакцию останавливают путем добавления насыщенного раствора ЫаНСО3 и экстрагируют смесью ДХМ/МеОН (9:1, об./об.). Ор
- 17 018863 ганическую фазу промывают насыщенным раствором ЫаНСОз, сушат (ЫагЗОд), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Нсх/ЕЮЛс. 95:5) и получают 5,18 г искомого соединения в виде желтого масла. ИЭР-МС: 214,0/216,0 [М+Н]+; Ц = 2,49 мин (система 1); ТСХ: Кг = 0,35 (Нех/ЕЮАс, 1:1).
Стадия 1.5. 2-трет-Бутил-1Н-пиридин-4-он
Смесь 2-трет-бутилпиран-4-она (стадия 1.6) (5,74 г, 37,7 ммоль) и 30% водного раствора гидроксида аммония (100 мл) перемешивают в течение 1 ч при кипячении с обратным холодильником, дают охладиться и концентрируют. Остаток растирают с МеОН (200 мл) и фильтруют. Фильтрат концентрируют и остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ/МеОН/ΝΗ/4, 94:5:1 92:7:1) и получают 4,46 г искомого соединения в виде желтого твердого вещества. ИЭР-МС: 152,0 [М+Н]+; 1к = 1,45 мин (система 1); ТСХ: Кг = 0,11 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 1.6. 2-трет-Бутилпиран-4-он
Смесь 5-гидрокси-1-метокси-6,6-диметилгепта-1,4-диен-3-она (стадия 1.7) (6,8 г, 36,9 ммоль) и ТФК (5,65 мл, 74 ммоль, 2 экв.) в бензоле (250 мл) перемешивают в течение 14 ч при КТ и концентрируют. Очистка остатка с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Нех/Е1ОАс, 1:0 75:25) дает
5,74 г искомого соединения в виде желтого масла. ИЭР-МС: 153,1 [М+Н]; Ц = 3,21 мин (система 1); ТСХ: Кг = 0,22 (Нех/ЕЮАс, 1:1).
Стадия 1.7. 5-Гидрокси-1-метокси-6,6-диметилгепта-1,4-диен-3-он
ОН О
ЫНМОЗ (1М в ТГФ, 100 мл, 2 экв.) по каплям добавляют к холодному (-78°С) раствору 4-метокси3-бутен-2-она (10 мл, 100 ммоль, 2 экв.) в ТГФ (400 мл). После 30 мин перемешивания при -78°С добавляют раствор пивалоилхлорид (6,12 мл, 50 ммоль) в ТГФ (100 мл). Полученной смеси дают нагреваться до КТ в течение 2 ч и реакцию останавливают путем добавления насыщенного раствора ΝΠ·|Ο. ТГФ удаляют в вакууме. Концентрированную смесь экстрагируют с помощью ЕьО. Органическую фазу промывают рассолом, сушат (№28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Нех/Е1ОАс, 1:0 85:15) и получают 6,83 г искомого соединения в виде желтого масла. ИЭР-МС: 185,1 [М+Н]+; ТСХ: Кг = 0,87 (Нех/ЕЮАс, 1:1).
Пример 2. 2-Амид,1-{[5-(2-циклопропилпиридин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид} (8)-пирролидин-
1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 4 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 85°С. На стадии 1.3 используют 4-хлор-2-(1-метилциклопропил)пиридин (стадия 2.1) и реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 150°С. Искомое соединение: ИЭР-МС: 372,1 [М+Н]+; ТСХ: К£ = 0,35 (ДХМ/МеОН, 9:1).
- 18 018863
Стадия 2.1. 4-Хлор-2-циклопропилпиридин
Искомое соединение получают по модифицированной методике, описанной в литературе [Сош1П8, И.Ь.; Мап11о, Ν.Β., 1оигпа1 οί Огдашс СйешИйу, (1985), 50, 4410-4411].
Циклопропилмагнийбромид (0,5М в ТГФ, 100 мл, 50 ммоль, 2,2 экв.) одной порцией добавляют к холодной (-78°С) суспензии 4-хлорпиридингидрохлорида (3,4 г, 22 ммоль) в ТГФ (68 мл). После 10 мин перемешивания при -78°С по каплям добавляют фенилхлорформиат (2,76 мл, 22 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при -78°С в течение 15 мин, дают нагреться до КТ, реакцию останавливают путем добавления 20% водного раствора ΝΗ4Ο и экстрагируют с помощью Е12О (2x100 мл). Органическую фазу промывают насыщенным раствором Ν;·ιΗίΌ3 (50 мл), сушат (Ν;·ι28Ο4). фильтруют и концентрируют. К остатку, растворенному в толуоле (100 мл), добавляют раствор о-хлоранила (6 г, 24,2 ммоль, 1,1 экв.) в ледяной АсОН (50 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 14 ч при КТ, охлаждают до 0°С, подщелачивают путем добавления 10% водного раствора ΝαΟΗ и фильтруют через слой целита. Органический слой фильтрата промывают с помощью Н2О (20 мл) и экстрагируют 10% водным раствором НС1 (3x25 мл). Объединенные кислые слои подщелачивают путем добавления 20% водного раствора ΝαΟΗ и экстрагируют с помощью ДХМ (3x25 мл). Органическую фазу промывают с помощью Н2О (50 мл), сушат (№28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ/МеОН, 1:0 99:1) и получают 0,951 г искомого соединения в виде бесцветного масла.
ИЭР-МС: 154,1 [М+Н]+; 1к = 1,41 мин (система 1); ТСХ: Кг = 0,85 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Пример 3. 2-Амид,1-({5-[2-(2-фторфенил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2-ил}амид) (8)-
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но с использованием 4-хлор-2-(2-фторфенил)пиридина (стадия 3.1) и перемешивания соответствующей смеси в течение 2 ч при 150°С на стадии 1.3. ИЭР-МС: 426,1 [М+Н]+; 1к = 2,60 мин (система 1); ТСХ: К£ = 0,40 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 3.1. 4-Хлор-2-(2-фторфенил)пиридин
Смесь 2-фторфенилбороновой кислоты (141 мг, 1 ммоль, 1,2 экв.) с ЕЮН (1 мл) при 105°С в атмосфере аргона добавляют к смеси 4-хлор-2-йодпиридина [Сйоррш, 8.; Огок, Р.; Εοή, Υ., Еигореап 1оигпа1 οί Огдашс Сйетюйу (2001), (3), 603-606] (200 мг, 0,84 ммоль), РбС12(брр1) (18 мг, 0,025 ммоль, 0,03 экв.) и №-ьСОз (2М раствор в Н2О, 1,68 мл, 3,36 ммоль, 4 экв.) в толуоле (2 мл). Реакционную смесь перемешивают при 105°С в течение 1 ч, дают охладиться до КТ, реакцию останавливают путем добавления насыщенного раствора NаНСΟ3 и экстрагируют с помощью ЕЮАс. Органическую фазу промывают насыщенным раствором NаНСΟ3, сушат (№28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Нех/ЕЮАс, 1:0 97:3) и получают 127 мг искомого соединения в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: 208,1 [М+Н]+; 1к = 4,66 мин (система 1); ТСХ: Κί = 0,27 (Нех/ЕЮАс, 9:1).
Пример 4. 2-Амид,1-{[5-(2-циклобутилпиридин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид} (8)-пирролидин-
1,2-дикарбоновой кислоты
- 19 018863
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 4 ч при КТ, разбавляют с помощью ЕЮАс и Н2О и экстрагируют с помощью ЕЮАс. После сушки и концентрирования органической фазы остаток очищают путем растирания с ДХМ. На стадии 1.3 реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 120°С, охлаждают, разбавляют с помощью ЕЮАс и Н2О, фильтруют через слой целита и экстрагируют с помощью ЕЮАс. После сушки и концентрирования органической фазы остаток очищают путем растирания с ЕьО. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 80°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.7 4-метокси-3-бутен-2-он в ТГФ добавляют к холодному (-78°С) раствору ЫНМОЗ в ТГФ. Через 30 мин добавляют циклобутилкарбонилхлорид в ТГФ и реакционной смеси дают нагреваться до КТ в течение 18 ч.
Искомое соединение: ИЭР-МС: 386,1 [М+Н]+; ТСХ: Кг = 0,11 (ДХМ/МеОН, 95:5).
Пример 5. 2-Амид,1-({4-метил-5-[2-(1-метилциклопропил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (8)пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 14 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 85°С. На стадии 1.3 реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при 120°С. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 65-70°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.7 используют 1-метилциклопропанкарбонилхлорид (стадия 5.1).
Искомое соединение: ИЭР-МС: 386,1 [М+Н]+; ТСХ: Кг = 0,40 (ДХМ/МеОН, 9:1).
'|| ЯМР (400 МГц, ДМСО-66) δ (ч./млн): 0,71-0,87 (т, 2Н), 1,11-1,26 (т, 2Н), 1,47 (8, 3Н), 1,74-1,96 (т, 3Н), 2,00-2,15 (т, 1Н), 2,39 (8, 3Н), 3,35-3,52 (т, 1Н), 3,52-3,73 (т, 1Н), 4,10-4,40 (т, 1Н), 6,93 (Ьг. 8., 1Н), 7,15 (66, 1Н), 7,27 (8, 1Н), 7,35 (8, 1Н), 8,40 (6, 1Н), 10,99 (Ьг. 8., 1Н).
Стадия 5.1. 1-Метилциклопропанкарбонилхлорид
Смесь 1-метилциклопропанкарбоновой кислоты (10 г, 100 ммоль) и оксалилхлорида (10,49 мл, 120 ммоль, 1,2 экв.) в СНС13 (80 мл) перемешивают в течение 4 ч при 70°С. Реакционную смесь концентрируют и получают 11,8 г искомого соединения в виде желтого масла, которое используют без дополнительной очистки.
Пример 6. 2-Амид,1-({4-метил-5-[2-(1-метилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (8)пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакцию останавливают путем разбавления смесью ЕЮАс и Н2О и экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 100°С. На
- 20 018863 стадии 1.3 реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при 100°С, разбавляют смесью ΕΐΘΑο/Η20 и экстрагируют с помощью ΕιΟΑο. После сушки и концентрирования органической фазы остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Ηοχ/ΕιΟΑο. 1:4). На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 80°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.7 4-метокси3-бутен-2-он (50 ммоль) в ТГФ (100 мл) добавляют к холодному (-78°С) раствору иНМБ8 (1М в ТГФ, 100 мл) в ТГФ (200 мл). Через 30 мин добавляют 1-метилциклобутанхлорид (стадия 6.1) и реакционной смеси дают нагреваться до КТ в течение 18 ч. Искомое соединение: ИЭР-МС: 400,1 [М+Н]+; ТСХ: К£ = 0,06 (ДХМ/МеОН/ИНзД 94:5:1).
Стадия 6.1. 1-Метилциклобутанкарбонилхлорид
СОС1
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 5.1, но с использованием 1-метилциклобутанкарбоновой кислоты [СоМтд, 8.Г; СообЬу, Γ\ν., СНет1са1 Соттип1са11ОП5, (2006), (39), 4107-4109].
Пример 7. 2-Амид,1-{[5-(2-трет-бутилпиридин-4-ил)тиазол-2-ил]амид} (8)-пирролидин-1,2дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают но аналогии с методикой, описанной в примере 1, со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч при КТ, реакцию останавливают путем разбавления смесью ΕΐΟΑс/Н2Ο и экстрагируют с помощью ΕΐΟΑ^ На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 100°С. На стадии 1.3 используют Ы-тиазол-2илацетамид. Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 120°С, разбавляют смесью ΕΐΟΑс/Н2Ο и экстрагируют с помощью ΕΐΟΑ^ После сушки и концентрирования органической фазы остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (^χ/ΕίΟΑ^ 1:1), затем растирают с Εΐ2Ο.
Искомое соединение: ИЭР-МС: 374,1 [М+Н]+; = 2,16 мин (система 1); ТСХ: К£ = 0,10 (ДХМ/МеОН/ЛНЛ 94:5:1).
Пример 8. 2-Амид,1-{[5-(2-изопропилпиридин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид} (8)-пирролидин-1,2дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч при КТ, реакцию останавливают путем разбавления смесью ΕΐΟΑс/Н2Ο и экстрагируют с помощью ΕΐΟΑ^ На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 100°С. На стадии 1.3 используют 4-хлор-2изопропилпиридин (стадия 8.1). Реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при 150°С, разбавляют смесью ΕΐΟΑс/Н2Ο и экстрагируют с помощью ΕΐΟΑ^ После сушки и концентрирования органической фазы остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (^χ/ΕίΟΑ^ 25:75).
Искомое соединение: ИЭР-МС: 374,1 [М+Н]+; = 1,99 мин (система 1); ТСХ: К£ = 0,10 (ДХМ/МеОН/МН3 ач, 94:5:1).
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 2.1, но с использова- 21 018863 нием изопропилмагнийхлорида (2М в ТГФ): ИЭР-МС: 156,0 [М+Н]+; ТСХ: В£ = 0,32 (ДХМ).
Пример 9. 2-Амид,1-{[5-(2-циклобутилпиридин-4-ил)тиазол-2-ил]амид} (3)-пирролидин-1,2дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч при КТ, разбавляют смесью ДХМ/Н2О и экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 100°С и неочищенный продукт не очищают. На стадии 1.3 используют №тиазол-2илацетамид. Реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при 120°С, реакцию останавливают путем разбавления смесью ЕЮАс/Н2О и экстрагируют с помощью ЕЮАс. После сушки и концентрирования органической фазы остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Нех/ЕЮАс, 2:3). На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 80°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.7 4-метокси-3-бутен-2-он (50 ммоль) в ТГФ (100 мл) добавляют к холодному (-78°С) раствору ΕίΗΜΌδ (1М в ТГФ, 100 мл) в ТГФ (200 мл). Через 30 мин добавляют циклобутилкарбонилхлорид и реакционной смеси дают нагреваться до КТ в течение 18 ч.
Искомое соединение: ИЭР-МС: 372,1 [М+Н]+; ТСХ: Вг = 0,13 (ДХ\1/\1еО11/\11; :. 91,5:7,5:1).
Пример 10. 2-Амид,1-({5-[2-(1-метилциклопропил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (§)-
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 14 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 85°С. На стадии 1.3 используют №тиазол-2-илацетамид и реакционную смесь перемешивают в течение 4 ч при 120°С. На стадии 1.5 растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.7 используют 1метилциклопропанкарбонилхлорид (стадия 5.1). Искомое соединение: ИЭР-МС: 372,1 [М+Н]+; ТСХ: В£ = 0,43 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Пример 11. 2-Амид,1-({5-[2-(1-трифторметилциклопропил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (§)-
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 14 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.3 используют №тиазол-2-илацетамид. Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 120°С. На стадии 1.4 в качестве растворителя используют 1,2-дихлорэтан (2,55 мл на 1 ммоль пиридин-4-она). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 83°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 65°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.7 используют 1-трифторметилциклопропанкарбонилхлорид (стадия 11.1).
Искомое соединение: ИЭР-МС: 426,0 [М+Н]+; 1В = 2,35 мин (система 1); ТСХ: В£ = 0,25 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 11.1. 1-Трифторметилциклопропанкарбонилхлорид
- 22 018863
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 5.1, но с использованием 1-трифторметилциклопропанкарбоновой кислоты.
Пример 12. 2-Амид,1-({5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (8)-
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 5 ч при КТ. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 14 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 85°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.3 используют №тиазол-2-илацетамид. Реакционную смесь перемешивают в течение 2,5 ч при 120°С. На стадии 1.4 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 83°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 65°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.6 неочищенный продукт не очищают. На стадии 1.7 используют 3,3,3-трифтор-2,2-диметилпропионилхлорид (стадия 12.1). Искомое соединение: ИЭР-МС: 428,0 [М+Н]+; !к = 2,75 мин (система 1); ТСХ: Кг = 0,21 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 12.1. 3,3,3-Трифтор-2,2-диметилпропионилхлорид
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 5.1, но с использованием 3,3,3-трифтор-2,2-диметилпропионовой кислоты.
Пример 13. 2-Амид,1-({5-[2-(1-трифторметилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (8)-
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при КТ, реакцию останавливают путем разбавления смесью ДХМ/Н2О и экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 100°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.7 №тиазол-2-илацетамид используют. Реакционную смесь перемешивают в течение 5 ч при 120 °С, реакцию останавливают путем разбавления смесью ЕЮАс/Н2О и экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.4 в качестве растворителя используют 1,2-дихлорэтан (2,26 мл на 1 ммоль пиридин-4-она). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при кипячении с обратным холодильником и после остановки реакции экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при КТ и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.6 реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при КТ. На стадии 1.7 4-метокси-3-бутен-2-он в ТГФ добавляют к холодному (-78°С) раствору Ь1НМИ8 в ТГФ. Через 30 мин добавляют 1-трифторметилциклобутанкарбонилхлорид (стадия 13.1) в ТГФ. Реакционной смеси дают нагреваться до КТ в течение 18 ч и после остановки реакции экстрагируют с помощью ЕЮАс.
Искомое соединение: ИЭР-МС: 440,0 [М+Н]+; !к = 2,68 мин (система 1); ТСХ: К£ = 0,08 (ДХМ/МеОН/ΝΗ/4, 91,5:7,5:1).
Стадия 13.1. 1-Трифторметилциклобутанкарбонилхлорид
- 23 018863
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 5.1, но с использованием 1-трифторметилциклобутанкарбоновой кислоты и перемешивания реакционной смеси в течение 2 ч при кипячении с обратным холодильником.
Пример 14. 2-Амид,1-({4-метил-5-[2-(1-трифторметилциклопропил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил} амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 14 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 85 °С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.3 реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 120 °С. На стадии 1.4 в качестве растворителя используют 1,2-дихлорэтан (2,55 мл на 1 ммоль пиридин-4-она). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 83°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 65°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.7 используют 1-трифторметилциклопропанкарбонилхлорид (стадия 11.1).
Искомое соединение: ИЭР-МС: 440,0 [М+Н]+; = 2,65 мин (система 1); ТСХ: В£ = 0,36 (ДХМ/МеОН, 9:1).
'|| ЯМР (400 МГц, ДМСО-й6) δ (ч./млн): 1,41 (8, 4Н), 1,70-1,90 (т, 3Н), 2,00-2,10 (т, 1Н), 2,40 (8, 3Н) 3,36-3,52 (т, 1Н), 3,52-3,65 ( т, 1Н), 4,10-4,40 (т, 1Н), 6,95 (Ьг. 8., 1Н), 7,37 (й, 2Н), 7,47 (8, 1Н), 8,52 (й, 1Н), 10,94 (Ьг. 8., 1Н).
Пример 15. 2-Амид,1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил} амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 14 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 85°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.3 реакционную смесь перемешивают в течение 2,5 ч при 120°С. На стадии 1.4 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 83°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 65°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.6 неочищенный продукт не очищают. На стадии 1.7 используют 3,3,3-трифтор-2,2-диметилпропионилхлорид (стадия 12.1).
Искомое соединение: ИЭР-МС: 442,0 [М+Н]+; Ц = 3,02 мин (система 1); ТСХ: К£ = 0,35 (ДХМ/МеОН, 9:1).
'|| ЯМР (400 МГц, ДМСО-й6) δ (ч./млн): 1,60 (8, 6Н), 1,70-1,95 (,т 3Н), 1,99-2,16 (т, 1Н), 2,40 (8, 3Н), 3,38-3,51 (т, 1Н), 3,51-3,69 (т, 1Н), 4,10-4,40 (т, 1Н), 6,95 (Ьг. 8., 1Н), 7,39 (й, 2Н), 7,53 (8, 1Н), 8,58 (й, 1Н), 10,93 (Ьг. 8., 1Н).
В альтернативной методике искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями: Ν,Ν-диметилацетамид используют вместо ДМФ и смесь перемешивают при 65°С в течение 2 ч. На стадии 1.1 фенилхлорформиат (медленно добавляют) используют вместо 1,1'-карбонилдиимидазола и реакцию проводят в ТГФ в присутствии Ν,Νдиэтилизопропиламина при комнатной температуре (1,5 ч). На стадии 1.2 реакционную смесь кипятят с обратным холодильником при перемешивании в течение 5 ч и после остановки реакции экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.3 реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 100°С. На стадии 1.4 реакцию проводят в толуоле с использованием 1,1 экв. РОВг3 и 1,1 экв. трипропиламина и смесь перемешивают в течение 2 ч при 80°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ЕЮАс. На ста
- 24 018863 дии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 65°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.6 толуол используют вместо бензола и неочищенный продукт не очищают. На стадии 1.7 используют 3,3,3-трифтор-2,2-диметилпропионилхлорид (стадия 12.1).
Пример 16. 2-Амид,1-({4-метил-5-[2-(1-трифторметилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 72 ч при КТ, реакцию останавливают путем разбавления смесью ДХМ/Н2О и экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 100°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.3 реакционную смесь перемешивают в течение 6 ч при 120°С, реакцию останавливают путем разбавления смесью ЕЮАС/Н2О, фильтруют через слой целита и экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.4 в качестве растворителя используют 1,2-дихлорэтан (2,26 мл на 1 ммоль пиридин-4-она). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при кипячении с обратным холодильником и после остановки реакции экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при КТ и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.6 реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при КТ. На стадии 1.7 4-метокси-3-бутен-2-он в ТГФ добавляют к холодному (-78°С) раствору Ь1НМП8 в ТГФ. Через 30 мин добавляют 1-трифторметилциклобутанкарбонилхлорид (стадия 13.1) в ТГФ. Реакционной смеси дают нагреваться до КТ в течение 18 ч и после остановки реакции экстрагируют с помощью ЕЮАс.
Искомое соединение: ИЭР-МС: 454,1 [М+Н]+; Ц = 2,90 мин (система 1); ТСХ: Я£ = 0,22 (ДХМ/МеОН/ЫН3 ач, 91,5:7,5:1).
Пример 17. 2-Амид,1-({5-[2-(1-метилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (8)-пирролидин1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 24 ч при КТ, реакцию останавливают путем разбавления смесью ЕЮАс/Н2О и экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 100°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.7 используют Ы-тиазол-2-илацетамид. Реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при 100°С, разбавляют смесью ЕЮАс/Н2О и экстрагируют с помощью ЕЮАс. После сушки и концентрирования органической фазы остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Нех/ЕЮАс, 25:75). На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 80°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.7 4-метокси-3-бутен-2-он в ТГФ добавляют к холодному (-78°С) раствору ЫНМОЗ в ТГФ. Через 30 мин добавляют 1-метилциклобутанхлорид (стадия 6.1) в ТГФ и реакционной смеси дают нагреваться до КТ в течение 18 ч.
Искомое соединение: ИЭР-МС: 386,1 [М+Н]+; Ц = 2,32 мин (система 1); ТСХ: Я£ = 0,05 (ДХМ/МеОН/МН3 ач, 94:5:1).
Пример 18. 2-Амид,1-({5-[2-(1-цианоциклопропил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2-ил}амид) (8)-
- 25 018863
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч при КТ, реакцию останавливают путем разбавления смесью Е1ОАс/Н2О и экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.1 используют 1-[4-(2-амино-4-метилтиазол-5-ил)пиридин-2-ил]циклопропанкарбонитрил (стадия 18.1) и реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при кипячении с обратным холодильником.
Искомое соединение: ИЭР-МС: 397,0 [М+Н]+; Ц = 2,90 мин (система 1); ТСХ: К.£ = 0,08 (ДХМ/МеОН/ИНз34, 94:5:1).
Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-Б6) δ (ч./млн): 1,69-1,93 (т. 7Н), 2,00-2,20 (т, 1Н), 2,42 (8, 3Н), 3,38-3,50 (т, 1Н), 3,50-3,65 (т, 1Н), 4,10-4,40 (т, 1Н), 6,94 (Ьг. 8., 1Н), 7,34 (άά, 1Н), 7,37 (Ьг. 8., 1Н), 7,47 (8, 1Н), 8,47 (ά, 1Н).
Стадия 18.1. 1-[4-(2-Амино-4-метилтиазол-5-ил)пиридин-2-ил]циклопропанкарбонитрил
Смесь трет-бутилового эфира {5-[2-(1-цианоциклопропил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2-ил}карбаминовой кислоты (стадия 18.2) (295 мг), ДХМ (4 мл) и ТФК (1 мл) перемешивают в течение 2 ч при КТ и затем концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ/МеОН/ИН3 ач, 94:5:1) и получают 182 мг искомого соединения. ИЭР-МС: 257,1 [М+Н]+; Ц = 2,54 мин (система 1); ТСХ: В£ = 0,30 ((ДХМ/МеОН/ΝΉ/4, 94:5:1).
Стадия 18.2. Трет-бутиловый эфир {5-[2-(1-цианоциклопропил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2ил}карбаминовой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 1.3, но с использованием 1-(4-бромпиридин-2-ил)циклопропанкарбонитрила (стадия 18.3) и трет-бутилового эфира (4метилтиазол-2-ил)карбаминовой кислоты (стадия 18.4). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 100°С, реакцию останавливают путем разбавления смесью ЕЮАс/Н2О и экстрагируют с помощью ЕЮАс. Неочищенный продукт очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Нех/ЕЮАс, 1:1) и получают 122 мг искомого соединения в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: 357,1 [М+Н]; 1К = 4,86 мин (система 1); ТСХ: В£ = 0,29 (Нех/ЕЮАс, 1:1).
Стадия 18.3. 1-(4-Бромпиридин-2-ил)циклопропанкарбонитрил
Вг
ЬШМОБ (1М в толуоле, 17,6 мл, 17,6 ммоль, 3,1 экв.) по каплям добавляют к холодной (-5°С) смеси 4-бром-2-фторпиридина [Маг8а18, Е. е1 а1., 1оигиа1 οί Отдашс Сйет18!ту, (1992), 57, 565-573] (1 г, 5,7 ммоль), циклопропанкарбонитрила (1,25 мл, 17 ммоль, 3 экв.), 4 А молекулярных сит и толуола (20 мл). Реакционной смеси дают нагреться до КТ, перемешивают в течение 16 ч, выливают в Н2О и фильтруют. Фильтрат разбавляют смесью ЕЮАс/Н2О и экстрагируют с помощью ЕЮАс. Органическую фазу промывают с помощью Н2О и рассолом, сушат (№28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Нех/ЕЮАс, 9:1) и получают 620 мг искомого соединения в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: 223,1/225,1 [М+Н]+; Ц = 4,22 мин (система 1); ТСХ: В£ = 0,25 (Нех/ЕЮАс, 9:1).
Стадия 18.4. трет-Бутиловый эфир (4-метилтиазол-2-ил)карбаминовой кислоты
Раствор ди-трет-бутилдикарбоната (21 г, 96,5 ммоль, 1,1 экв.) в ΐ-ВиОН (50 мл) добавляют к раствору 4-метил-2-аминотиазола (10 г, 87,7 ммоль) и ДМАП (1,1 г, 8,8 ммоль, 0,1 экв.) в 1-ВиОН (50 мл). Реак
- 26 018863 ционную смесь перемешивают в течение 72 ч при КТ и концентрируют. Остаток разбавляют смесью ЕЮАс/Н2О и экстрагируют с помощью ЕЮАс. Органическую фазу промывают с помощью Н2О и рассолом, сушат (Па28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ/МеОН, 98:2) и получают 15,2 г искомого соединения в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: 215,1 [М+Н]+; Ц = 3,43 мин (система 1); ТСХ: К£ = 0,30 (ДХМ/МеОН, 98:2).
Пример 19. 2-Амид,1-({5-[2-(1-цианоциклобутил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2-ил}амид) (8)-
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 6 ч при КТ. На стадии 1.1 используют 1-[4-(2-амино-4-метилтиазол-5-ил)пиридин-2-ил]циклобутанкарбонитрил (стадия 19.1) и реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при кипячении с обратным холодильником. Искомое соединение. ИЭР-МС: 411,1 [М+Н]+; ТСХ: К£ = 0,36 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 19.1. 1-[4-(2-Амино-4-метилтиазол-5-ил)пиридин-2-ил]циклобутанкарбонитрил
Смесь трет-бутилового эфира {5-[2-(1-цианоциклобутил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2ил}карбаминовой кислоты (стадия 19.2) (300 мг), ДХМ (5 мл) и ТФК (1 мл) перемешивают в течение 4 ч при КТ, реакцию останавливают путем добавления насыщенного раствора №1НСО3 (50 мл) и экстрагируют с помощью ДХМ (3x75 мл). Органическую фазу промывают насыщенным раствором ЫаНСО3 (2x50 мл), сушат (Ыа28О4) фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ/МеОН, 1:0 96:4) и получают 181 мг искомого соединения в виде желтого твердого вещества. ИЭР-МС: 271,1 [М+Н]+; Ц = 2,48 мин (система 1); ТСХ: К£ = 0,45 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 19.2. трет-Бутиловый эфир {5-[2-(1-цианоциклобутил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2ил}карбаминовой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 1.3, но с использованием 1-(4-бромпиридин-2-ил)циклобутанкарбонитрила (стадия 19.3) и трет-бутилового эфира (4метилтиазол-2-ил)карбаминовой кислоты (стадия 18.4). Реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при 100°С. Искомое соединение: ИЭР-МС: 371,1 [М+Н]+; Ц = 4,86 мин (система 1); ТСХ: К£ = 0,66 (Нех/ЕЮАс, 1:1).
Стадия 19.3. 1-(4-Бромпиридин-2-ил)циклобутанкарбонитрил
ЫНМО8 (1М в толуоле, 17,7 мл, 17,7 ммоль, 3,1 экв.) по каплям добавляют к холодному (-5°С) раствору 4-бром-2-фторпиридина [Маг8а18, Е. е1 а1., 1оигиа1 о£ Огдашс Сйет181гу, (1992), 57, 565-573] (1 г, 5,7 ммоль) и циклобутанкарбонитрила (1,39 г, 17,1 ммоль, 3 экв.) в толуоле (20 мл). Реакционной смеси дают нагреться до КТ, перемешивают в течение 5 ч, реакцию останавливают путем добавления насыщенного раствора ЫаНСО3 (50 мл) и фильтруют через слой целита. Фильтрат экстрагируют с помощью ЕЮАс (3x75 мл). Органическую фазу промывают насыщенным раствором №НСЮ3 (2x50 мл), сушат (Ыа28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле
- 27 018863 (Нех/ЕЮАс, 1:0 95:5) и получают 933 мг искомого соединения в виде желтого масла. ИЭР-МС:
237,0/239,0 [М+Н]+; = 4,27 мин (система 1); ТСХ: Κί = 0,30 (Нех/ЕЮАс, 9:1).
Пример 20. 2-Амид,1-({5-[2-(1-карбамоилциклобутил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2-ил}амид (8)пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты)
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. Β примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при КТ. На стадии 1.1 используют амид 1-[4-(2-амино-4-метилтиазол-5-ил)пиридин-2-ил]циклобутанкарбоновой кислоты (стадия 20.1) и реакционную смесь перемешивают в течение 12 ч при кипячении с обратным холодильником.
Искомое соединение: ИЭР-МС: 429,1 [М+Н]+; = 2,90 мин (система 1); ТСХ: Κί = 0,11 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 20.1. Амид 1-[4-(2-амино-4-метилтиазол-5-ил)пиридин-2-ил]циклобутанкарбоновой кислоты
Смесь трет-бутилового эфира {5-[2-(1-цианоциклобутил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2ил}карбаминовой кислоты (стадия 19.2) (640 мг, 1,73 ммоль) и концентрированной серной кислоты перемешивают в течение 40 мин при 0°С, дают нагреться до КТ, перемешивают в течение 1 ч, реакцию останавливают путем добавления насыщенного раствора NаНСΟ3 (50 мл) и экстрагируют с помощью ДХМ (3x75 мл). Органическую фазу промывают насыщенным раствором NаНСΟ3 (2x50 мл), сушат (№28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ/МеΟН/NН3 а^, 99:0:1 93:6:1) и получают 35 мг искомого соединения в виде желтого твердого вещества. ИЭР-МС: 289,1 [М+Н]+; ТСХ: Κί = 0,32 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Пример 21. 2-Амид, 1 -({5-[2-(2-диметиламино-1,1 -диметилэтил)пиридин-4-ил] -4-метилтиазол-2ил}амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. На стадии 1.1 используют 5-[2-(2-диметиламино-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]-4метилтиазол-2-иламин (стадия 21.1) и реакционную смесь перемешивают в течение 14 ч при кипячении с обратным холодильником. Искомое соединение: ИЭР-МС: 431,1 [М+Н]+; ТСХ: Κί = 0,12 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 21.1. 5-[2-(2-Диметиламино-1,1 -диметилэтил)пиридин-4-ил] -4-метилтиазол-2-иламин
ΝΗ2
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 19.1, но с использованием трет-бутилового эфира {5-[2-(2-диметиламино-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2ил}карбаминовой кислоты (стадия 21.2) и перемешивания реакционной смеси в течение 2 ч при КТ.
Искомое соединение: ИЭР-МС: 291,1 [М+Н]+; = 2,48 мин (система 1); ТСХ: Κί = 0,11 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 21.2. трет-Бутиловый эфир {5-[2-(2-диметиламино-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]-4метилтиазол-2-ил}карбаминовой кислоты
- 28 018863
Формальдегид (36% в Н2О, 0,144 мл, 1,87 ммоль, 2 экв.) добавляют к смеси трет-бутилового эфира {5-[2-(2-амино-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2-ил}карбаминовой кислоты (стадия 21.3) (0,34 г, 0,94 ммоль) и ацетоксиборогидрида натрия (0,6 г, 2,82 ммоль, 3 экв.) в 1,2-дихлорэтане (10 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при КТ и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ/МеОН/ΝΗ/4, 99:0:1 97:2:1) и получают 0,222 г искомого соединения в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: 391,2 [М+Н] ; = 4,27 мин (система 1);
ТСХ: Кг = 0,15 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 21.3. трет-Бутиловый эфир {5-[2-(2-амино-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2ил}карбаминовой кислоты
□ ΑΙΗ.-ι (1Μ в ТГФ, 3,06 мл, 3,06 ммоль, 1,5 экв.) добавляют к раствору трет-бутилового эфира {5[2-(цианодиметилметил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2-ил}карбаминовой кислоты (стадия 21.4) (0,73 г, 2,04 ммоль) в ТГФ (10 мл) в атмосфере аргона. Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при КТ, реакцию останавливают путем добавления Н2О (20 мл) и экстрагируют с помощью ΕΐОΑс (2x75 мл). Органическую фазу промывают насыщенным раствором NаНСО3 (2x50 мл), сушат (Ν;ι25Ο4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ/МеОН/ΝΗ/4, 99:0:1 94:5:1) и получают 318 мг искомого соединения в виде коричневого твердого вещества. ИЭР-МС: 363,1 [М+Н]; ТСХ: Кг = 0,11 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 21.4. трет-Бутиловый эфир {5-[2-(цианодиметилметил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2ил}карбаминовой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 1.3, но с использованием 2-(4-йодпиридин-2-ил)-2-метилпропионитрила (стадия 21.5) и трет-бутилового эфира (4метилтиазол-2-ил)карбаминовой кислоты (стадия 18.4). Реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при 100°С. Искомое соединение: ИЭР-МС: 359,1 [М+Н]+; ТСХ: Кг = 0,47 (^χ/ΕίΟΑ^ 1:1).
Стадия 21.5. 2-(4-Йодпиридин-2-ил)-2-метилпропионитрил
I
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 19.3, но с использованием 2-фтор-4-йодпиридина. Искомое соединение: ИЭР-МС: 273,0 [М+Н]+; = 4,22 мин (система 1); ТСХ: Кг = 0,36 (^χ/ΕίΟΑ^ 9:1).
Пример 22. 2-Амид,1-{[5-(2-диэтиламинопиридин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид} (8)-пирролидин1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при КТ, реакцию оста- 29 018863 навливают путем разбавления смесью ДХМ/Н2О и экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 100°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.7 используют диэтил-(4-йодпиридин-2-ил)амин (стадия 22.1). Реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч при 120°С, реакцию останавливают путем разбавления смесью ЕΐОΑс/Н2О, фильтруют через слой целита и экстрагируют с помощью ΕΐΟΑ^
Искомое соединение: ИЭР-МС: 403,2 [М+Н]+; = 2,38 мин (система 1); ТСХ: КГ = 0,10 (ДХМ/МеОН/ΝΗ/4, 91,5:7,5:1).
Стадия 22.1. Диэтил-(4-йодпиридин-2-ил)амин
I
Смесь 2-фтор-4-йодпиридина (2 г, 8,97 ммоль), диэтиламина (2,77 мл, 26,9 ммоль, 3 экв.) и К2СО3 (2,48 г, 17,94 ммоль, 2 экв.) в ДМФ (20 мл) перемешивают в течение 18 ч при 100°С, дают охладиться до КТ, разбавляют смесью ΕΐΟΑс/Н2О и экстрагируют с помощью ΕΏΑ^ Органическую фазу промывают с помощью Н2О и рассолом, сушат (№28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Нех/ЕьО, 98:2) и получают 2,3 г искомого соединения в виде желтого масла. ИЭР-МС: 277,1 [М+Н]+; ТСХ: КГ = 0,52 (Нех/Е12О, 98:2).
Пример 23. 2-Амид,1-{[5-(2-диэтиламинопиридин-4-ил)тиазол-2-ил]амид} (8)-пирролидин-1,2дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при КТ, реакцию останавливают путем разбавления смесью ДХМ/Н2О и экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 100°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.7 используют диэтил-(4-йодпиридин-2-ил)амин (стадия 22.1) и №тиазол-2илацетамид. Реакционную смесь перемешивают в течение 5 ч при 120°С, реакцию останавливают путем разбавления смесью ΕΐΟΑс/Η2Ο, фильтруют через слой целита и экстрагируют с помощью ΕΏΑ^ Искомое соединение: ИЭР-МС: 389,2 [М+Н]+; = 2,28 мин (система 1); ТСХ: КГ = 0,34 (ДХМ/МеОН^Л 91,5:7,5:1).
Сопоставительный пример 24. 2-Амид,1-{[5-(3-трет-бутил-3Н-бензимидазол-5-ил)тиазол-2ил]амид} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 5 ч при КТ. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 14 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 85°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ΕΏΑ^ На стадии 1.7 используют 6-бром-1-трет-бутил-1Н-бензимидазол (стадия 24.1) и Νтиазол-2-илацетамид. Реакционную смесь перемешивают в течение 7 ч при 120°С.
Искомое соединение: ИЭР-МС: 413,2 [М+Н]+; = 2,29 мин (система 1); ТСХ: КГ = 0,45 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 24.1. 6-Бром-1-трет-бутил-1Н-бензимидазол
- 30 018863
Смесь 4-бром-Ы*2*-трет-бутилбензол-1,2-диамина (стадия 24.2) (2,14 г, 8,80 ммоль) и триэтилортоформиата (14,7 мл, 88 ммоль) перемешивают в течение 1 ч при 148°С, дают охладиться и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ/МеОН, 1:0 99:1) и получают 1,74 г искомого соединения в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: 253,0/255,0 [М+Н]+; 1К = 2,88 мин (система 1); ТСХ: К£ = 0,54 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 24.2. 4-Бром-Ы*2*-трет-бутилбензол-1,2-диамин
Суспензию (5-бром-2-нитрофенил)-трет-бутиламина (стадия 24.3) (6 г, 21,97 ммоль) и никеля Ренея (2 г) в смеси МеОН/ТГФ (1:1 об./об., 600 мл) перемешивают в течение 9 ч при КТ в атмосфере водорода. Реакционную смесь фильтруют через слой целита и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Нех/ЕЮАс, 97:3 3:1) и получают 4,4 г искомого соединения в виде черного масла. ИЭР-МС: 243,0/245,0 [М+Н]+; Ц = 2,75 мин (система 1); ТСХ: К£ = 0,89 (Нех/ЕЮАс, 1:1).
Стадия 24.3. (5-Бром-2-нитрофенил)-трет-бутиламин
Смесь 4-бром-2-фторнитробензола (4 г, 18,2 ммоль) и трет-бутиламина (4,78 мл, 45,5 ммоль, 2,5 экв.) в ЕЮН (80 мл) перемешивают в течение 15 ч при 85°С, дают охладиться и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Нех/ЕЮАс, 1:0 99:1) и получают 4,8 г искомого соединения в виде оранжевого твердого вещества. ИЭР-МС: 273,0/275,0 [М+Н]+; Ц = 5,68 мин (система 1); ТСХ: К£ = 0,49 (Нех/ЕЮАс, 9:1).
Сопоставительный пример 25. 2-Амид,1-{[5-(3-трет-бутил-2-метил-3Н-бензимидазол-5-ил)тиазол-2ил]амид} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 14 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 85°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.7 используют 6-бром-1-трет-бутил-2метил-1Н-бензимидазол (стадия 25.1) и Ы-тиазол-2-илацетамид. Реакционную смесь перемешивают в течение 5 ч при 120°С. Искомое соединение: ИЭР-МС: 427,2 [М+Н]+; Ц = 2,37 мин (система 1); ТСХ: К£ = 0,38 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 25.1. 6-Бром-1-трет-бутил-2-метил-1Н-бензимидазол
Смесь 6-бром-1-трет-бутил-2-этоксиметил-2-метил-2,3-дигидро-1Н-бензимидазола (стадия 25.2)
- 31 018863 (2,04 г, 6,51 ммоль) и ТФК (10 мл) перемешивают при КТ в течение ночи, реакцию останавливают путем добавления насыщенного раствора №1НСО3 (100 мл) и экстрагируют с помощью ЕЮАс (2x150 мл). Органическую фазу промывают насыщенным раствором №1НСО3 (2x50 мл), сушат (№28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ/МеОН, 1:0 98:2) и получают 1,05 г искомого соединения в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС:
267,0/269,0 [М+Н]+; 1В = 2,99 мин (система 1); ТСХ: В£ = 0,58 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 25.2. 6-Бром-1-трет-бутил-2-этоксиметил-2-метил-2,3-дигидро-1Н-бензимидазол
Вг
ОЕ(
Смесь 4-бром-№2*-трет-бутилбензол-1,2-диамина (стадия 24.2) (2,14 г, 8,80 ммоль) и триэтилортоацетата (16,2 мл, 88 ммоль, 10 экв.) перемешивают в течение 1 ч при 142°С, дают охладиться и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Нех/ЕЮАс, 1:0 95:5) и получают 2,04 г искомого соединения в виде пурпурного масла. ИЭР-МС: 313,0/315,0 [М+Н]+; ТСХ: В£ = 0,67 (Нех/ЕЮАс, 9:1).
Сопоставительный пример 26. 2-Амид,1-{[5-(3-этил-3Н-бензимидазол-5-ил)-4-метилтиазол-2ил]амид} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 15 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при 85°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.7 используют 6-бром-1-этил-1Нбензимидазол (стадия 26.1) и №тиазол-2-илацетамид. Реакционную смесь перемешивают в течение 14 ч при 120°С. Искомое соединение: ИЭР-МС: 399,1 [М+Н]+; 1В = 1,73 мин (система 1); ТСХ: В£ = 0,25 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 26.1. 6-Бром-1-этил-1Н-бензимидазол
Вг
Смесь 4-бром-№2*-этилбензол-1,2-диамина (стадия 26.2) (2 г, 9,3 ммоль) и триэтилорто формиата (15,5 мл, 93 ммоль, 10 экв.) перемешивают в течение 1 ч при 148°С, дают охладиться и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ/МеОН, 1:0 98:2) и получают 2,05 г искомого соединения в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: 225,1/227,1 [М+Н]+; 1В = 2,31 мин (система 1); ТСХ: В£ = 0,58 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 26.2. 4-Бром-№2*-этилбензол-1,2-диамин
Вг
Суспензию (5-бром-2-нитрофенил)этиламина (стадия 26.3) (6 г, 24,48 ммоль) и никеля Ренея (2 г) в МеОН/ТГФ (1:1 об./об., 600 мл) перемешивают в течение 9 ч при КТ в атмосфере водорода. Реакционную смесь фильтруют через слой целита и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Нех/ЕЮАс, 95:5 85:15) и получают 4,51 г искомого соединения в виде черного масла. ИЭР-МС: 213,1/215,1 [М-Н]-; 1В = 2,53 мин (система 1); ТСХ: В£ = 0,57 (Нех/ЕЮАс, 1:1).
Стадия 26.3. (5-Бром-2-нитрофенил)этиламин
- 32 018863
Вг
Смесь 4-бром-2-фторнитробензола (6 г, 27,3 ммоль), метиламина (2М в МеОН, 34,1 мл, 68,2 ммоль, 2,5 экв.) и Е!ОН (80 мл) перемешивают в течение 15 ч при 85°С, дают охладиться и концентрируют. Остаток очищают путем растирания и получают 6 г искомого соединения в виде желтого твердого вещества: !К = 5,13 мин (система 1).
Пример 27. 2-Амид,1-[(5-{2-[1-(4-метоксифенил)-1-метилэтил]пиридин-4-ил}-4-метилтиазол-2ил)амид] (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 24 ч при КТ, реакцию останавливают путем разбавления смесью Е!ОАс/Н2О. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 100°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.3 реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при 100°С, реакцию останавливают путем разбавления смесью Е!ОАс/Н2О и экстрагируют с помощью Е!ОАс. На стадии 1.4 в качестве растворителя используют 1,2дихлорэтан (4,3 мл на 1 ммоль пиридин-4-она). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при кипячении с обратным холодильником, выливают в насыщенный раствор NаНСОз и экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 23 ч при 80°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.6 реакционную смесь перемешивают в течение 21 ч при КТ. На стадии 1.7 4-метокси-3-бутен-2-он в ТГФ добавляют к холодному (-78°С) раствору ЫНМИЗ в ТГФ. Через 30 мин добавляют 2-(4-метоксифенил)-2-метилпропионилхлорид (стадия 27.1) в ТГФ и реакционной смеси дают нагреваться до КТ в течение 16 ч. Искомое соединение: ИЭР-МС: 480,0 [М+Н]+; !К = 3,05 мин (система 1); ТСХ: КЕ = 0,13 (ДХ\1/\1еО11/ΝΙ 1/, 94:5:1).
Стадия 27.1. 2-(4-Метоксифенил)-2-метилпропионилхлорид
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 5.1, но с использованием 2-(4-метоксифенил)-2-метилпропионовой кислоты и перемешивания реакционной смеси в течение 3 ч при кипячении с обратным холодильником.
Пример 28. 2-Амид,1-[(5-{2-[1-(4-метоксифенил)-1-метилэтил]пиридин-4-ил}тиазол-2-ил)амид] (8)-
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч при КТ, реакцию останавливают путем разбавления смесью Е!ОАс/Н2О. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 100°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.7 используют №тиазол-2-илацетамид. Реакционную смесь перемешивают в течение 5 ч при 100°С, реакцию останавливают путем разбавления смесью Е!ОАс/Н2О и экстрагируют с помощью Е!ОАс. На стадии 1.4 в качестве растворителя используют 1,2-дихлорэтан (4,3 мл на 1 ммоль пиридин-4-она). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при кипячении с обратным холодильником, выливают в насыщенный раствор NаНСОз и экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 23 ч при 80°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.6 реакционную смесь перемешивают в течение 21 ч при КТ. На стадии 1.7 4-метокси-3-бутен-2-он в ТГФ добавляют к холодному (-78°С)
- 33 018863 раствору Ь1НМ08 в ТГФ. Через 30 мин добавляют 2-(4-метоксифенил)-2-метилпропионилхлорид (стадия 27.1) в ТГФ и реакционной смеси дают нагреваться до КТ в течение 16 ч.
Искомое соединение: ИЭР-МС: 466,1 [М+Н]+; !к = 2,91 мин (система 1); ТСХ: К£ = 0,23 (ДХМ/МеОН/ΝΗ/4, 94:5:1).
Пример 29. 2-Амид,1-[(5-{2-[1-(4-метоксифенил)циклопропил]пиридин-4-ил}-4-метилтиазол-2ил)амид] (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 21 ч при КТ, реакцию останавливают путем разбавления смесью ЕЮАс/Н2О. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при 100°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.3 реакционную смесь перемешивают в течение 6 ч при 100°С, реакцию останавливают путем разбавления смесью ЕЮАс/Н2О и экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.4 в качестве растворителя используют 1,2дихлорэтан (4,3 мл на 1 ммоль пиридин-4-она). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при кипячении с обратным холодильником, выливают в насыщенный раствор NаΗСО3 и экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при 80°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.6 реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при КТ. На стадии 1.7 4-метокси-3-бутен-2-он в ТГФ добавляют к холодному (-78°С) раствору ЫНМИ8 в ТГФ. Через 30 мин добавляют 1-(4-метоксифенил)циклопропанкарбонилхлорид (стадия 29.1) в ТГФ и реакционной смеси дают нагреваться до КТ в течение 16 ч. Искомое соединение: ИЭР-МС: 478,1 [М+Н]+; !к = 2,65 мин (система 1); ТСХ: К£ = 0,09 (ДХМ/МеОН^Л 94:5:1).
Стадия 29.1. 1-(4-Метоксифенил)циклопропанкарбонилхлорид
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 5.1, но с использованием 1-(4-метоксифенил)циклопропилкарбоновой кислоты и перемешивания реакционной смеси в течение 3 ч при кипячении с обратным холодильником.
Пример 30. 2-Амид,1-[(5-{2-[1-(4-метоксифенил)циклопропил]пиридин-4-ил}тиазол-2-ил)-амид] (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч при КТ, реакцию останавливают путем разбавления смесью ЕЮАс/Н2О. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при 100°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.7 используют №тиазол-2-илацетамид. Реакционную смесь перемешивают в течение 28 ч при 100°С, реакцию останавливают путем разбавления смесью ЕЮАс/Н2О и экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.4 в качестве растворителя используют 1,2-дихлорэтан (4,3 мл на 1 ммоль пиридин-4-она). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при кипячении с обратным холодильником, выливают в насыщенный раствор NаΗСО3 и экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при 80°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.6 реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при КТ. На стадии 1.7 4-метокси-3-бутен-2-он в ТГФ добавляют к холодному (-78 °С) раствору ЫНМЭ8 в ТГФ. Через 30 мин добавляют 1-(4-метоксифенил)циклопропанкарбонилхлорид (стадия 29.1) в ТГФ и реакционной смеси дают нагреваться до КТ в течение 16 ч. Искомое соединение: ИЭР-МС: 464,1 [М+Н]+; !к = 2,90 мин (система 1); ТСХ: К£ = 0,06 (ДХМ/МеОН/ЯНЛ 94:5:1).
Пример 31. 2-Амид, 1 -{[5 -(2-{ 1-[4-(3 -диметиламинопропокси)фенил]-1-метилэтил}пиридин-4-ил)-4метилтиазол-2-ил]амид} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
- 34 018863
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при КТ, реакцию останавливают путем разбавления смесью Е!ОАс/Н2О. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 7 ч при 100°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.7 используют (3-{4-[1-(4-бромпиридин-2-ил)-1-метилэтил]фенокси}пропил)диметиламин (стадия 31.1). Реакци онную смесь перемешивают в течение 2 ч при 120°С, реакцию останавливают путем разбавления смесью Е!ОАс/Н2О и экстрагируют с помощью Е!ОАс. Искомое соединение: ИЭР-МС: 551,1 [М+Н]-; !Я = 2,38 мин (система 1); ТСХ: Яй = 0,05 (ДХМ/МеОН^Л 94:5:1).
Стадия 31.1. (3-{4-[1-(4-Бромпиридин-2-ил)-1-метилэтил]фенокси}пропил)диметиламин
Гидроксид натрия (гранулы тонко измельчают, 0,488 г, 12,2 ммоль, 5 экв.) добавляют к раствору 4[1-(4-бромпиридин-2-ил)-1-метилэтил]фенола (стадия 31.2) (0,714 г, 2,44 ммоль) в ДМФ (5 мл). Смесь перемешивают в течение 20 мин при КТ. Добавляют 3-диметиламино-1-пропилхлоридгидрохлорид (0,611 г, 3,87 ммоль, 1,6 экв.). Реакционную смесь нагревают до 90°С, перемешивают в течение 10 ч, дают охладиться, разбавляют смесью Е!ОАс/Н2О и экстрагируют с помощью Е!ОАс. Органическую фазу промывают с помощью Н2О и рассолом, сушат Ща28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ/МеОН/МН3 ач, 94:5:1) и получают 0,398 г искомого соединения в виде неочищенного коричневого масла, которое используют без дополнительной очистки: ИЭР-МС: 377,1/379,0 [М+Н]+; ТСХ: Яй = 0,22 (ДХМ/МеОН^Л 94:5:1).
Стадия 31.2. 4-[1-(4-Бромпиридин-2-ил)-1-метилэтил]фенол
Вг
ВВг3 (1М В ДХМ, 23 ммоль, 8 экв.) по каплям добавляют к холодному (0°С) раствору 4-бром-2-[1(4-метоксифенил)-1-метилэтил]пиридина (стадия 31.3) (0,878 г, 2,87 ммоль) в ДХМ (42 мл) в атмосфере аргона. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 0°С, дают нагреваться до КТ, перемешивают в течение 18 ч, охлаждают до 0°С и реакцию останавливают путем добавления безводного МеОН. Смесь концентрируют, разбавляют 6М водным раствором НС1, перемешивают в течение 1 ч, нейтрализуют до рН 7 и экстрагируют с помощью ДХМ. Органическую фазу сушат Ща28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток используют без очистки.
Стадия 31.3. 4-Бром-2-[1-(4-метоксифенил)-1-метилэтил]пиридин
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадиях 1.4-1.7, но со следующими изменениями. На стадии в качестве растворителя используют 1.4 1,2-дихлорэтан (4,3 мл на 1 ммоль пиридин-4-она). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при кипячении с обратным холодильником, выливают в насыщенный водный раствор NаНСО3 и экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 23 ч при 80°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.6 реакционную смесь перемешивают в течение 21 ч при КТ. На стадии 1.7 4-метокси-3бутен-2-он в ТГФ добавляют к холодному (-78°С) раствору ЫНМО8 в ТГФ. Через 30 мин добавляют 2(4-метоксифенил)-2-метилпропионилхлорид (стадия 27.1) в ТГФ и реакционной смеси дают нагреваться до КТ в течение 16 ч.
Искомое соединение: ИЭР-МС: 306,0/308,0 [М+Н]+; !Я = 3,94 мин (система 1); ТСХ: Яй = 0,55 (Нех/Е!ОАс, 7:3).
- 35 018863
Пример 32. 2-Амид,1-({4-метил-5-[2-(1-63-метилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (8)-
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при КТ, реакцию останавливают путем разбавления смесью ДХМ/Н2О и экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 100°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.7 к нагретой смеси оставшихся реагентов добавляют палладиевый катализатор и полученную смесь перемешивают в течение 1 ч при 120°С, разбавляют смесью ΕΐΟΑс/Н2Ο и экстрагируют с помощью ΕΐΟΑ^ После сушки и концентрирования органической фазы остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (^χ/ΕίΟΑ^ 1:4). На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при 80°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.7 4-метокси-3бутен-2-он в ТГФ добавляют к холодному (-78°С) раствору Ь1НМБ8 в ТГФ. Через 30 мин добавляют 163-метилциклобутанхлорид (стадия 32.1) в ТГФ и реакционной смеси дают нагреваться до КТ в течение 16 ч. Искомое соединение: ИЭР-МС: 403,2 [М+Н]+; ТСХ: К£ = 0,22 (ДХМ/МеΟН/NН3 а^, 91,5:7,5:1).
Стадия 32.1. 1-63-Метилциклобутанкарбонилхлорид
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 5.1, но с использованием 1-63-метилциклобутанкарбоновой кислоты, которую получают по опубликованной методике |Со\\'1ίπ§, 84.; СообЬу, IV., С11еппса1 Соттишсайопк, (2006), (39), 4107-4109], но с использованием 63метилйодида.
Пример 33. 2-Амид,1-({5-[2-(1-63-метилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (8)-
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при КТ, реакцию останавливают путем разбавления смесью ДХМ/Н2О и экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 100°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.7 используют Ы-тиазол-2-илацетамид. К нагретой смеси оставшихся реагентов добавляют палладиевый катализатор. Полученную смесь перемешивают в течение 7 ч при 120°С, разбавляют смесью ΕΐΟΑс/Н2Ο, фильтруют через слой целита и экстрагируют с помощью ΕΐΟΑ^ После сушки и концентрирования органической фазы остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (^χ/ΕΐΟΑ^ 1:4). На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при 80°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.7 4-метокси-3-бутен-2-он в ТГФ добавляют к холодному (-78°С) раствору Ь1НМБ8 в ТГФ. Через 30 мин добавляют 1-63-метилциклобутанхлорид (стадия 32.1) в ТГФ и реакционной смеси дают нагреваться до КТ в течение 16 ч. Искомое соединение: ИЭР-МС: 389,2 [М+Н]+; ΐκ = 2,30 мин (система 1); ТСХ: К£ = 0,11 (ДХМ/МеΟН/NН3 а^, 91,5:7,5:1).
Пример 34. 2-Амид,1-({4-63-метил-5-[2-(1-метилциклопропил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (8)пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
- 36 018863
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 8 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 85°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью Е!ОАс. На стадии 1.7 используют 2-ацетамидо-4-б3метилтиазол (стадия 34.1). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 120°С. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 65-70°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.7 используют 1-метилциклопропанкарбонилхлорид (стадия 5.1). Искомое соединение: ИЭР-МС: 389,2 [М+Н]+; !В = 2,12 мин (система 1); ТСХ: 1В = 0,35 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 34.1. 2-Ацетамидо-4-б3-метилтиазол
Смесь 1-бромпропан-2-она-б5 [Ска11асотЬе, Κ. е! а1., 1оигпа1 о£ !ке Скетюа1 Зос1е1у Ρе^к^п Тгапк. Ι, (1988), 2213-2218] (1,25 г, 8,8 ммоль) и 1-ацетил-2-тиомочевины (1 г, 8,8 ммоль) в Е!ОН (20 мл) перемешивают в течение 2 ч при 85°С, дают охладиться и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Нех/Е!ОАс, 85:15 1:1) и получают 1,08 г искомого соединения в виде оранжевого твердого вещества. ИЭР-МС: 160,0 [М+Н]+; ТСХ: В£ = 0,25 (Нех/Е!ОАс, 1:1).
Пример 35. 2-Амид,1-({4-б3-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]тиазол-2ил}-амид) (З)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 8 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 85°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью Е!ОАс. На стадии 1.7 используют 2-ацетамидо-4-б3метилтиазол (стадия 34.1). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 120°С. На стадии 1.4 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 83°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью Е!ОАс. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 65°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.6 неочищенный продукт не очищают. На стадии 1.7 используют 3,3,3трифтор-2,2-диметилпропионилхлорид (стадия 12.1).
Искомое соединение: ΆΡΙ-ЕЗ-МС: 445,1 [М+Н]+; !В = 3,00 мин (система 1); ТСХ: В£ = 0,51 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Пример 36. 2-Амид,1-({4-диметиламинометил-5-[2-(1-б3-метилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2ил}амид) (З)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при КТ, реакцию останавливают путем разбавления смесью ДХМ/Н2О и экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2
- 37 018863 используют №{4-диметиламинометил-5-[2-(1-б3-метилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}ацетамид (стадия 36.1). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 100°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ДХМ.
Искомое соединение: ИЭР-МС: 446,1 [М+Н]+; ТСХ: КГ = 0,40 (ДХМ/МеО^ГХНзЦ 89:10:1).
Стадия 36.1. №{4-Диметиламинометил-5-[2-(1-б3-метилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2ил}ацетамид
Смесь №{4-бромметил-5-[2-(1-б3-метилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}ацетамида (стадия 36.2) (150 мг, 0,391 ммоль), диметиламингидрохлорида (38,3 мг, 0,470 ммоль, 1,2 экв.) и карбоната цезия (293 мг, 0,900 ммоль, 2,3 экв.) в ДМФ (2 мл) перемешивают в течение 2 ч при КТ, разбавляют смесью ΕΐΟΑс/Η2Ο и экстрагируют с помощью ΕΏΑο. Органическую фазу промывают с помощью Н2О и рассолом, сушат (№28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают путем растирания с Εΐ^ и получают 89 мг искомого соединения в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: 348,2 [М+Н]+.
Стадия 36.2. №{4-Бромметил-5-[2-(1-б3-метилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}ацетамид
ΝΒ8 (554 мг, 3,06 ммоль, 1,1 экв.) добавляют к раствору №{4-метил-5-[2-(1-б3метилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}ацетамида (стадия 36.3) (846 мг, 2,78 ммоль) в СС14 (20 мл) и СНС13 (16 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при КТ, промывают с помощью Н2О и рассолом, сушат (№28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Ηеx/ΕΐΟΑс, 1:4) и получают 572 мг искомого соединения в виде бледножелтого твердого вещества. ИЭР-МС: 383,0/385,0 [М+Н]+; = 3,12 мин (система 1); ТСХ: КГ = 0,45 (^χ/ΕωΑο, 1:4).
Стадия 36.3. №{4-Метил-5-[2-(1-б3-метилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}ацетамид
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадиях 1.3-1.7, но со следующими изменениями. На стадии 1.3 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 120°С и реакцию останавливают путем разбавления смесью ΕΐΟΑс/Η2Ο. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при 80°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.7 4-метокси-3-бутен-2-он в ТГФ добавляют к холодному (-78°С) раствору ЫНМОЗ в ТГФ. Через 30 мин добавляют 1-б3метилциклобутанхлорид (стадия 32.1) в ТГФ и реакционной смеси дают нагреваться до КТ в течение 16 ч. Искомое соединение: ИЭР-МС: 305,2 [М+Н]+; ТСХ: КГ = 0,24 (^χ/ΕωΑο, 1:4).
Пример 37. 2-Амид,1-({4-хлор-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]тиазол-2ил}амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
- 38 018863
Смесь 4-хлор-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]тиазол-2-иламина (стадия 37.1) (100 мг, 0,311 ммоль) и фосгена (0,164 мл, 0,311 ммоль) в пиридин (2 мл) перемешивают в течение 1 ч при 105°С. Добавляют Ь-пролинамид (106 мг, 0,932 ммоль, 3 экв.). Полученную смесь перемешивают в течение 30 мин при 105°С, дают охладиться, реакцию останавливают путем добавления насыщенного раствора №1НСО3 (100 мл) и экстрагируют с помощью ЕЮАс (2x100 мл). Органическую фазу промывают насыщенным раствором NаНСО3 (100 мл), сушат (№28О4) фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ/МеОН, 99:1 94:6) и получают мг искомого соединения в виде желтого твердого вещества. ИЭР-МС: 461,9 [М+Н]+; Ц = 3,60 мин (система 1); ТСХ: К£ = 0,28 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 37.1. 4-Хлор-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]тиазол-2-иламин
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадиях 1.2-1.7, но со следующими изменениями. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при 85°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.7 используют №(4-хлортиазол-2ил)ацетамид (стадия 37.2). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 120°С. На стадии 1.4 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 83°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 65°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.6 неочищенный продукт не очищают. На стадии 1.7 используют 3,3,3трифтор-2,2-диметилпропионилхлорид (стадия 12.1). Искомое соединение: ИЭР-МС: 322,1 [М+Н]+; Ц = 3,58 мин (система 1); ТСХ: К£ = 0,45 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 37.2. №(4-Хлортиазол-2-ил)ацетамид
Смесь №(4-оксо-4,5-дигидротиазол-2-ил)ацетамида (стадия 37.3) (14,8 г, 94 ммоль) и РОС13 (175 мл, 20 экв.) нагревают при 105°С, перемешивают в течение 15 мин, дают охладиться и концентрируют. Остаток выливают в смесь лед-Н2О и экстрагируют с помощью ЕЮАс (2x100 мл). Органическую фазу промывают насыщенным раствором NаНСО3 (2x100 мл), сушат (Ца28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ/МеОН, 99:1) и получают 13,9 г искомого соединения в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: 177,0 [М+Н]+; = 2,74 мин (система 1); ТСХ: К£ = 0,66 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 37.3. №(4-Оксо-4,5-дигидротиазол-2-ил)ацетамид
Смесь псевдотиогидантоина (16 г, 138 ммоль) и уксусного ангидрида (16,9 мл, 179 ммоль, 1,3 экв.) в пиридине (150 мл) нагревают при 115°С, перемешивают в течение 1 ч и дают охладиться. Полученный осадок собирают фильтрованием и получают 12,64 г искомого соединения в виде коричневого твердого вещества: ИЭР-МС: 159,0 [М+Н]+.
Пример 38. 2-Амид,1-({4-фторметил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]тиазол-2ил}амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
- 39 018863
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. Β примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при КТ, реакцию останавливают путем разбавления смесью ДХМ/Н2О и экстрагируют с помощью ДХМ. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при кипячении с обратным холодильником, концентрируют и полученное неочищенное вещество используют без очистки. На стадии 1.2 используют Ν-{4фторметил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}ацетамид (стадия 38.1). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 100°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ДХМ. Неочищенное вещество не очищают.
Искомое соединение: ИЭР-МС: 460,0 [М+Н]+; ТСХ: Κί = 0,44 (ДХМ/МеОН/ΝΉΑ 91,5:7,5:1).
Стадия 38.1. N-{4 -Фторметил-5 -[2-(2,2,2 -трифтор-1,1 -диметилэтил)пиридин-4 -ил] тиазо л-2 ил}ацетамид
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадиях 1.3-1.7, но со следующими изменениями. На стадии 1.3 используют №(4-фторметилтиазол-2-ил)ацетамид (стадия 38.2). Реакционную смесь перемешивают в течение 7 ч при 90°С, в течение 5 ч при 100°С и реакцию останавливают путем разбавления смесью ЕЮАс и Н2О. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 65°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.6 неочищенный продукт не очищают. На стадии 1.7 используют 3,3,3-трифтор-2,2-диметилпропионилхлорид (стадия 12.1). Искомое соединение: ИЭР-МС: 362,1 [М+Н]+; = 4,18 мин (система 1); ТСХ: Κί = 0,29 (Нех/ЕЮАс, 1:1).
Стадия 38.2. №(4-Фторметилтиазол-2-ил)ацетамид
Смесь 1-хлор-3-фторпропан-2-она (стадия 38.3) (1,14 г, 10,3 ммоль) и №ацетил-2-тиомочевины (1,22 г, 10,3 ммоль) в ЕЮН (10 мл) перемешивают в течение 1,5 ч при кипячении с обратным холодильником, дают охладиться и концентрируют. Остаток растворяют в смеси ДХМ/Н2О и экстрагируют с помощью ДХМ. Органическую фазу сушат (№28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Нех/ЕЮАс, 1:1) и получают 0,143 г искомого соединения: ИЭР-МС: 173,1 [М-Н]-; = 1,98 мин (система 1); ТСХ: Κί = 0,21 (Нех/ЕЮАс, 1:1).
Стадия 38.3. 1-Хлор-3-фторпропан-2-он
О
1-Фтор-3-хлоризопропанол (2,7 мл, 31,2 ммоль) медленно добавляют в колбу, содержащую 30 мл реагента Джонса (получен путем добавления 230 мл концентрированной серной кислоты к 267 г триоксида хрома в 700 мл Н2О разбавления с помощью Н2О до 1 л), охлажденного до 5°С. Реакционной смеси дают нагреться до КТ, перемешивают в течение 18 ч, выливают в насыщенный раствор NаНСΟ3 и экстрагируют с помощью ЕьО. Органическую фазу промывают рассолом, сушат (№28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ) и получают 1,14 г искомого соединения в виде неочищенного желтого масла.
Сопоставительный пример 39. 2-Амид,1-{[5-(5-бензолсульфониламино-6-хлорпиридин-3-ил)-4метилтиазол-2-ил]амид} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
- 40 018863
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 1.3, но со следующими изменениями. Используют 2-амид,1-[(4-метилтиазол-2-ил)амид] (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (стадия 39.2) и Ы-(5-бром-2-хлорпиридин-3-ил)бензолсульфонамид (стадия 39.1). К нагретой смеси оставшихся реагентов добавляют палладиевый катализатор и полученную смесь перемешивают в течение 3 ч при 135°С, разбавляют с помощью ЕЮАс и Н2О, фильтруют через слой целита и экстрагируют с помощью ЕЮАс. После сушки и концентрирования органической фазы остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле и с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой. Искомое соединение: ИЭР-МС: 519,0/521,1 [М-Н]-; !к = 3,33 мин (система 1); ТСХ: 11 = 0,09 (ДХМ/МеОН/ЫН3 ач, 84:15:1).
Стадия 39.1. Ы-(5-Бром-2-хлорпиридин-3-ил)бензолсульфонамид
Раствор бензолсульфонилхлорид (1,23 мл, 9,62 ммоль, 2 экв.) в ДХМ (50 мл) в течение 15 мин в атмосфере аргона по каплям добавляют к раствору 3-амино-5-бром-2-хлорпиридина Цоиуе, К.; Вегдтап, 1., 1оита1 о£ Не!егосус1ю Сйет18!гу, (2003), 40(2), 261-268] (1 г, 4,81 ммоль) и пиридина (1,94 мл, 24 ммоль, 5 экв.) в ДХМ (20 мл). Полученную смесь перемешивают в течение 20 ч при КТ, концентрируют, разбавляют с помощью Н2О и экстрагируют с помощью ДХМ. Органическую фазу промывают рассолом, сушат (Ыа28О4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ) и получают 163 мг искомого соединения в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: 346,9 [М-Н]-; !к = 4,33 мин (система 1); ТСХ: 11 = 0,23 (ДХМ).
Стадия 39.2. 2-Амид,1-[(4-метилтиазол-2-ил)амид] (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но с использованием (4-метилтиазол-2-ил)амида имидазол-1-карбоновой кислоты (стадия 39.3). Реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при КТ и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ/МеОН/ЫН3 ач, 94:5:1), затем растирают с ЕьО. Искомое соединение: ИЭРМС: 253,2 [М-Н]-; ТСХ: 11 = 0,18 (ДХМ/МеОН/ЫН3 ач, 84:15:1).
Стадия 39.3. (4-Метилтиазол-2-ил)амид имидазол-1-карбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 1.1, но с использованием 2-ацетамидо-4-метилтиазола и перемешивания реакционной смеси в течение 5,5 ч при кипячении с обратным холодильником.
Сопоставительный пример 40. 2-Амид,1-{[5-(5-бензолсульфониламино-6-хлорпиридин-3-ил)тиазол2-ил]амид} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
οι
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 1.3, но со следующими изменениями. Используют 2-амид,1-тиазол-2-иламид (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (стадия 40.1) и Ы-(5-бром-2-хлорпиридин-3-ил)-бензолсульфонамид (стадия 39.1). К нагретой смеси оставшихся реагентов добавляют палладиевый катализатор и полученную смесь перемешивают в течение 6 ч при 120°С, концентрируют, разбавляют смесью ДХМ/МеОН, фильтруют через слой целита и фильтрат концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле и с помощью
- 41 018863
ВЭЖХ с обращенной фазой. Искомое соединение: ИЭР-МС: 506,9 [М+Н]+; ΐκ= 3,21 мин (система 1). Стадия 40.1. 2-Амид,1-тиазол-2-иламид (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но с использованием тиазол-2-иламида имидазол-1-карбоновой кислоты (стадия 40.2). Реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при КТ и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ДХМ/МеОН^Н3 ач, 94:5:1), затем растирают с ΕΐΟΑ^ Искомое соединение: ИЭР-МС: 239,2 [М-Н]-; ТСХ: Кг = 0,11 (ДХМ/МеО^'ХН/4, 84:15:1).
Стадия 40.2. Тиазол-2-иламид имидазол-1-карбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 1.1, но с использованием №тиазол-2-илацетамида и перемешивания реакционной смеси в течение 5 ч при кипячении с обратным холодильником.
Сопоставительный пример 41. 2-Амид,1-{[5-(6-амино-5-трифторметилпиридин-3-ил)-4метилтиазол-2-ил]амид} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Η2Ν
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 1.3, но со следующими изменениями. Используют 2-амид,1-[(4-метилтиазол-2-ил)амид] (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (стадия 39.2) и 5-бром-3-трифторметилпиридин-2-иламин (АО 2007095588). К нагретой смеси оставшихся реагентов добавляют палладиевый катализатор и полученную смесь перемешивают в течение 3 ч при 120°С, разбавляют смесью ДХМ/Н2О и экстрагируют с помощью ДХМ. После сушки и концентрирования органической фазы остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле и с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой. Искомое соединение: ИЭР-МС: 413,1 [М-Н]-; ТСХ: К£ = 0,27 (ДХМ/МеОН/ХН3 а<1, 89:10:1).
Сопоставительный пример 42. 2-Амид,1-({4-метил-5-[2-(1-метилциклопропил)пиримидин-4ил]тиазол-2-ил}амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
(ди мети л ацеталь ДМФ)
кипячение с обратным холодильником (ЮО’С) в течение ночи
Пример 42. {4-Метил-5-[2-(1-метилциклопропил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-ил}амид имидазол-1карбоновой кислоты (4,0 г) при комнатной температуре при перемешивании добавляют к раствору Ьпролинамида (1,48 г) и триэтиламина (4,1 мл) в ДМФ (46 мл). Реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 22 ч, выпаривают и искомое соединение получают в виде белого твер
- 42 018863 дого вещества после кристаллизации из метанола (60 мл) и воды (20 мл). ВЭЖХ/МС: время удерживания 1,24 мин, М+Н 387,1 и М-Н 385,2.
Стадия 42.1. {4-Метил-5-[2-(1-метилциклопропил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-ил}амид имидазол-1карбоновой кислоты
Карбонилдиимидазол (4,56 г) добавляют к раствору 4-метил-5-[2-(1-метилциклопропил)пиримидин-4ил]тиазол-2-иламина (10,5 г) и триэтиламина (4,28 мл) в ДМФ (26 мл) при комнатной температуре и затем нагревают в течение 2 ч при 80°С. После охлаждения искомое соединение выделяют фильтрованием.
Стадия 42.2. 4-Метил-5-[2-(1-метилциклопропил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламин
Порошкообразный гидроксид натрия (5,86 г) добавляют к раствору Ы'-[5-(3-диметиламиноакрилоил)-4-метилтиазол-2-ил]-Ы,Х-диметилформамидина (13 г, получают, как это описано в публикации 8. Ааид е1 а1., 1. Ме6. СНет. 2004, 47, 1662-1675) и 1-метилциклопропанкарбоксамидингидрохлорида (7,2 г, получают, как это описано в ЕР 0227415) в 2-метоксиэтаноле (98 мл) и смесь при перемешивании нагревают при 125°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждают, добавляют воду и искомое соединение выделяют фильтрованием. ИЭР-МС: М+Н 247 и М-Н 245.
Сопоставительный пример 43. 2-Амид,1-{[5-(2-изопропилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2ил]амид} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
νη2 [5-(2-Изопропилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид (50 мг) имидазол-1-карбоновой кислоты добавляют к раствору Ь-пролинамида (19 мг) и триэтиламина (26 мкл) в ДМФ (152 мкл) при комнатной температуре. Смесь перемешивают в течение 2 ч при 40°С и затем очищают с помощью препаративной хроматографии с обращенной фазой. Фракции, содержащие искомое соединение, поглощают с помощью содержащего 300 мг Вои6Е1и1 8РЕ картриджа 8СХ и затем выделяют 7М раствором аммиака в метаноле (1 мл). Искомое соединение получают путем выпаривания. ИЭР-МС: М+Н 275 и М-Н 273.
Стадия 43.1. Имидазол-1-карбоновой кислоты {4-метил-5-[2-изопропилпиримидин-4-ил]тиазол-2ил}амид
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 42, но с использованием 4-метил-5-[2-изопропилпиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина вместо 4-метил-5-[2-(1-метилцикло- 43 018863 пропил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина.
Сопоставительный пример 44. 2-Амид,1-{[5-(2-бензилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 43, но с использованием 4-метил-5-[2-бензилпиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина вместо 4-метил-5-[2-изопропилпиримидин4-ил]тиазол-2-иламина. ИЭР-МС: М+Н 423 и М-Н 421.
Сопоставительный пример 45. 2-Амид,1-{[5-(2-этилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 43, но с использованием 4-метил-5-[2-этилпиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина вместо 4-метил-5-[2-изопропилпиримидин-4ил]тиазол-2-иламина. ИЭР-МС: М+Н 361 и М-Н 359.
Сопоставительный пример 46. 2-Амид,1-{[5-(2-метоксиметилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2ил]амид} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 43, но с использованием 4-метил-5-[2-метоксиметилпиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина вместо 4-метил-5-[2-изопропилпиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина. ИЭР-МС: М+Н 377 и М-Н 375.
Сопоставительный пример 47. 2-Амид,1-({5-[2-(2,6-дихлорбензил)пиримидин-4-ил]-4-метилтиазол2-ил}амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 43, но с использованием 4-метил-5-[2-(2,6-дихлорбензил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина вместо 4-метил-5-[2изопропилпиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина. ИЭР-МС: М+Н 491, 493 и М-Н 489, 491.
Сопоставительный пример 48. 2-Амид,1-{[5-(2-изобутилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2ил]амид} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
- 44 018863
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 43, но с использованием 4-метил-5-[2-изобутилпиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина вместо 4-метил-5-[2-изопропилпиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина. ИЭР-МС: М+Н 389 и М-Н 387.
Сопоставительный пример 49. 2-Амид,1-({5-[2-(4-метоксифеноксиметил)пиримидин-4-ил]-4метилтиазол-2-ил}амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 43, но с использованием 4-метил-5-[2-(4-метоксифеноксиметил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина вместо 4-метил-5-[2изопропилпиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина. ИЭР-МС: М+Н 469 и М-Н 467.
Сопоставительный пример 50. 2-Амид,1-({5-[2-(3-метоксифеноксиметил)пиримидин-4-ил]-4метилтиазол-2-ил}амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 43, но с использованием 4-метил-5-[2-(3-метоксифеноксиметил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина вместо 4-метил-5-[2изопропилпиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина. ИЭР-МС М-Н 467.
Сопоставительный пример 51. 2-Амид,1-({5-[2-(2-фторфенил)пиримидин-4-ил]-4-метилтиазол-2ил}амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
{5-[2-(2-Фторфенил)пиримидин-4-ил]-4-метилтиазол-2-ил}амид имидазол-1-карбоновой кислоты (415 мг) при комнатной температуре добавляют к раствору Ь-пролинамида (137 мг) и триэтиламина (182 мкл) в ДМФ (1,1 мл). Смесь перемешивают в течение 18 ч при 40 °С, выпаривают и кристаллизуют из метанола (8 мл) и воды (2 мл) и получают искомое соединение в виде белого твердого вещества. ИЭРМС: М+Н 427 и М-Н 425.
Стадия 51.1. {5-[2-(2-Фторфенил)пиримидин-4-ил]-4-метилтиазол-2-ил}амид имидазол-1карбоновой кислоты
- 45 018863
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 43, но с использованием 4-метил-5-[2-(2-фторфенил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина вместо 4-метил-5-[2-(1метилциклопропил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина.
Сопоставительный пример 52. 2-Амид,1-{[5-(2-трифторметилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2ил]амид} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Ь-Пролинамид (9 мг) при температуре добавляют к раствору [5-(2комнатной трифторметилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амида имидазол-1-карбоновой кислоты (25 мг) и триэтиламина (12 мкл) в ДМФ (71 мкл). Смесь перемешивают в течение 18 ч при 25°С и очищают с помощью препаративной хроматографии с обращенной фазой. Фракции, содержащие искомое соединение, поглощают с помощью содержащего 300 мг ВопбЕ1и1 ББЕ картриджа 8СХ и затем выделяют 7М раствором аммиака в метаноле (1 мл). Искомое соединение получают путем выпаривания. ИЭР-МС: М+Н 401 и М-Н 399.
Стадия 52.1. {4-Метил-5-[2-трифторметилпиримидин-4-ил]тиазол-2-ил}амид имидазол-1карбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 43, но с использованием 4-метил-5-[2-трифторметилпиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина вместо 4-метил-5-[2-(1-метилциклопропил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламин.
Сопоставительный пример 53. 2-Амид,1-({4-метил-5-[2-(1,1,2-триметилпропил)пиримидин-4ил]тиазол-2-ил}амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 51, но с использованием 4-метил-5-[2-(1,1,2-триметилпропил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина вместо 4-метил-5-[2-(2фторфенил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина. ИЭР-МС: М+Н 417 и М-Н 415.
Сопоставительный пример 54. 2-Амид,1-[(5-{2-[1-(4-метоксифенил)-1-метилэтил]пиримидин-4-ил}4-метилтиазол-2-ил)амид] (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
- 46 018863
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 51, но с использованием 5-{2-[1-(4-метоксифенил)-1-метилэтил]пиримидин-4-ил}-4-метилтиазол-2-иламина вместо 4-метил5-[2-(2-фторфенил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина. ИЭР-МС: М+Н 495 и М-Н 493.
Пример 55. 2 - Амид, 1-({5-[2 -(2-фтор-1 -фторметил-1 -метилэтил)пиридин-4 -ил]-4 -метилтиазо л-2 ил}амид (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 6 ч при КТ. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 15 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 100°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.3 реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 120°С. На стадии 1.4 реакционную смесь перемешивают в течение 30 мин при 85°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью ЕЮАс. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 65°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.6 неочищенный продукт не очищают. На стадии 1.7 используют 3-фтор-2-фторметил-2-метилпропионилхлорид (стадия 55.1).
Искомое соединение: ИЭР-МС: 424,1 [М+Н]+; Ц = 2,40 мин (система 1); ТСХ: В£ = 0,35 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 55.1. 3-Фтор-2-фторметил-2-метилпропионилхлорид
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 5.1, но с использованием 3-фтор-2-фторметил-2-метилпропионовой кислоты (стадия 55.2).
Стадия 55.2. 3-Фтор-2-фторметил-2-метилпропионовая кислота
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 73.2, но с использованием метилового эфира 3-фтор-2-фторметил-2-метилпропионовой кислоты (получение описано в \УО 2007/053394). ИЭР-МС: 137,0 [М-Н]-.
Сопоставительный пример 56. 2-Амид,1-({4-метил-5-[2-(1,1-диметилпропил)пиримидин-4ил]тиазол-2-ил}амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 43, но с использованием 4-метил-5-[2-(1,1-диметилпропил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина вместо 4-метил-5-[2
- 47 018863 изопропилпиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина. ИЭР-МС: М+Н 403 и М-Н 401.
Сопоставительный пример 57. 2-Амид,1-({4-метил-5-[2-(1-метил-1-п-толилэтил)пиримидин-4ил]тиазол-2-ил}амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 43, но с использованием 4-метил-5-[2-(1-метил-1-п-толилэтил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина вместо 4-метил-5-[2изопропилпиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина. ИЭР-МС: М+Н 479 и М-Н 477.
Сопоставительный пример 58. 2-Амид,1-({4-метил-5-[2-(1-фенилциклопентил)пиримидин-4ил]тиазол-2-ил}амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 43, но с использованием 4-метил-5-[2-(1-фенилциклопентил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина вместо 4-метил-5-[2изопропилпиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина. ИЭР-МС: М+Н 477 и М-Н 475.
Сопоставительный пример 59. 2-Амид,1-({4-метил-5-[2-циклопропилпиримидин-4-ил]тиазол-2ил}амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 43, но с использованием 4-метил-5-[2-циклопропилпиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина вместо 4-метил-5-[2-изопропилпиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина. ИЭР-МС: М+Н 373 и М-Н 371.
Сопоставительный пример 60. 2-Амид,1-({4-метил-5-[2-циклобутилпиримидин-4-ил]тиазол-2ил}амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 52, но с использованием 4-метил-5-[2-циклобутилпиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина вместо 4-метил-5-[2-трифторметилпиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина. ИЭР-МС: М+Н 387 и М-Н 385.
Сопоставительный пример 61. 2-Амид,1-{[5-(2-б9-трет-бутилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2ил]амид} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
- 48 018863
[5-(2-б9-трет-Бутилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид имидазол-1-карбоновой кислоты (0,82 г) при комнатной температуре при перемешивании добавляют к раствору Ь-пролинамида (0,29 г) и триэтиламина (0,81 мл) в ДМФ (5 мл). Реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 22 ч, затем выпаривают и после двукратной кристаллизации смесью 2:1 метанол:вода получают искомое соединение в виде белого твердого вещества. ВЭЖХ/МС: время удерживания 1,27 мин, М+Н 398,3 и М-Н 396,3.
Стадия 61.1. [5-(2-б9-трет-Бутилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид имидазол-1-карбоновой кислоты
Карбонилдиимидазол (0,77 г) при комнатной температуре при перемешивании добавляют к раствору 5-(2-б9-трет-бутилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2-иламина (1,11 г) в ДМФ (4,3 мл). Затем реакционную смесь выдерживают в течение 18 ч при 25°С и затем искомое соединение выделяют фильтрованием.
Стадия 61.2. 5-(2-б9-трет-Бутилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2-иламин
Порошкообразный гидроксид натрия (3,71 г) добавляют к раствору Ы'-[5-(3-диметиламиноакрилоил)-4-метилтиазол-2-ил]-Ы,Ы-диметилформамидина (5,51 г) и б9-2,2-диметилпропионамидингидрохлорида (4,50 г) в 2-метоксиэтаноле (41 мл) и смесь при перемешивании нагревают при 125°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждают, добавляют воду и неочищенный продукт выделяют фильтрованием. Неочищенный продукт очищают с помощью препаративной ВЭЖХ и фракции, содержащие искомое соединение, подвергают распределению между дихлорметаном и водным раствором бикарбоната натрия. После выпаривания высушенных дихлорметановых слоев получают искомое соединение в виде желтого твердого вещества. ВЭЖХ/МС: время удерживания 1,12 мин, М+Н 258,4.
Стадия 61.3. б9-2,2-Диметилпропионамидингидрохлорид
2М раствор триметилалюминия в толуоле (61 мл) по каплям добавляют к суспензии хлорида аммония (6,53 г) в толуоле (46 мл) при охлаждении в бане со льдом. Реакционную смесь перемешивают в те
- 49 018863 чение 4 дней при комнатной температуре и добавляют бутиловый эфир бд-2,2-диметилпропионовой кислоты (6,3 г). После нагревания при 80°С в течение 4 дней реакционную смесь охлаждают до 0°С и по каплям добавляют метанол (200 мл). После перемешивания обработки ультразвуком в течение 1 ч при комнатной температуре реакционную смесь фильтруют через Ну®, промывают метанолом и фильтрат выпаривают и получают искомое соединение в виде почти белого твердого вещества.
Стадия 61.4. Бутиловый эфир б9-2,2-диметилпропионовой кислоты
бд-трет-Бутилхлорид (5,0 г) в течение 1 ч порциями добавляют к суспензии магния (1,50 г) в тетрагидрофуране (20 мл), активированной каталитическим количеством йода, при нагревании, необходимом для постоянного кипения. Затем реакционную смесь нагревают в течение еще 1 ч для обеспечения полного образования реагента Гриньяра. Затем полученный раствор реагента Гриньяра по каплям добавляют к раствору бутилового эфира имидазол-1-карбоновой кислоты (7,5 г, получают, как это описано в публикации Т. Аегпег апб А.С.М. Вагге!! I. Огд. С1ет. 2006, 71, 4302-4304) в тетрагидрофуране (40 мл) при охлаждении в бане со льдом. Реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при комнатной температуре, добавляют воду (200 мл), смесь фильтруют через Ну®, фильтрат экстрагируют диэтиловым эфиром и слои, содержащие диэтиловый эфир, сушат над сульфатом натрия и выпаривают и получают искомое соединение.
Сопоставительный пример 62. 2-Амид,1-({4-метил-5-[2-(2-метилциклопропил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
{4-Метил-5-[2-(2-метилциклопропил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-ил}амид имидазол-1-карбоновой кислоты (50 мг) при комнатной температуре при перемешивании добавляют к раствору Ь-пролинамида (18 мг) и триэтиламина (25 мкл) в ДМФ (147 мкл). Реакционную смесь перемешивают при 40°С в течение 2 ч и очищают с помощью препаративной хроматографии с обращенной фазой. Фракции, содержащие искомое соединение, поглощают с помощью содержащего 300 мг ВοηбΕ1и! 8ΡΕ картриджа 8СХ и затем выделяют 7М раствором аммиака в метаноле (1 мл). Искомое соединение получают путем выпаривания. ИЭР-МС: М+Н 387 и М-Н 385.
Стадия 62.1. {4-Метил-5-[2-(2-метилциклопропил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-ил}амид имидазол-1карбоновой кислоты
Карбонилдиимидазол (487 мг) при комнатной температуре добавляют к раствору 4-метил-5-[2-(2метилциклопропил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина (370 мг) и триэтиламина (251 мкл) в ДМФ (1,5 мл) и затем нагревают в течение 2 ч при 40°С. Реакционную смесь выпаривают и растирают с хлороформом. Искомое соединение выделяют фильтрованием.
Стадия 62.2. 4-Метил-5-[2-(2-метилциклопропил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламин
- 50 018863
Порошкообразный гидроксид натрия (300 мг) добавляют к раствору Ν'-[5-(3диметиламиноакрилоил)-4-метилтиазол-2-ил]-Ы,М-диметилформамидина (1 г, получают, как это описано в публикации 8. \Уапд е! а1., I. Меб. СЬет. 2004, 47, 1662-1675) и цис/транс 2метилциклопропанкарбоксамидингидрохлорида (0,61 г, получают, как это описано в νΟ 03/087064) в 2 метоксиэтаноле (3,8 мл) и смесь при перемешивании нагревают при 125°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждают, фильтруют, промывают водой и получают искомое соединение. МС: М+Н 247 и М-Н 245.
Сопоставительный пример 63. 2-Амид,1-{[5-(2-диэтиламинопиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2ил]амид}(8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
[5-(2-Диэтиламинопиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид имидазол-1-карбоновой кислоты (40 мг) при комнатной температуре при перемешивании добавляют к раствору Ь-пролинамида (14 мг) и три этиламина (19 мкл) в ДМФ (147 мкл). Реакционную смесь перемешивают при 40°С в течение 2 ч и очищают с помощью препаративной хроматографии с обращенной фазой. Фракции, содержащие искомое соединение, поглощают с помощью содержащего 300 мг ВопбЕ1и! 8РЕ картриджа 8СХ и затем выделяют 7М раствором аммиака в метаноле (1 мл). Искомое соединение получают путем выпаривания. ИЭР-МС: М+Н 404 и М-Н 402.
Стадия 63.1. [5-(2-Диэтиламинопиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид имидазол-1-карбоновой кислоты
Карбонилдиимидазол (437 мг) при комнатной температуре добавляют к раствору [4-(2-амино-4метилтиазол-5-ил)пиримидин-2-ил]диэтиламина (355 мг) и триэтиламина (207 мкл) в ДМФ (1,4 мл) и затем нагревают в течение 18 ч при 80°С. Реакционную смесь выпаривают и растирают с хлороформом. Искомое соединение выделяют фильтрованием.
Стадия 63.2. [4-(2 - Амино -4 -метилтиазол-5 -ил)пиримидин-2 -ил] диэтиламин
Порошкообразный гидроксид натрия (150 мг) добавляют к раствору Ν'-[5-(3диметиламиноакрилоил)-4-метилтиазол-2-ил]-^№диметилформамидина (0,5 г, получают, как это описано в публикации 8. νηηβ е! а1., I. Меб. СЬет. 2004, 47, 1662-1675) и 1,1-диэтилгуанидина (259 мг) в 2метоксиэтаноле (1,9 мл) и смесь при перемешивании нагревают при 125°С в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и очищают с помощью хроматографии с нормальной фазой, элюент;
- 51 018863
ДХМ/ΕΐΟΑс и получают искомое соединение. ИЭР-МС: М+Н 264 и М-Н 262.
Сопоставительный пример 64. 2-Амид,1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Р {4-Метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-ил}амид имидазол-1карбоновой кислоты (69 мг) при комнатной температуре при перемешивании добавляют к раствору Ьпролинамида (22 мг) и триэтиламина (53 мг) в ДМФ (1 мл). Реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 22 ч, затем выпаривают и после кристаллизации из метанола (2 мл) и воды (1 мл) получают искомое соединение в виде белого твердого вещества. ВЭЖХ/МС: время удерживания 1,80 мин, М+Н 443,1 и М-Н 441,2.
Стадия 64.1. {4-Метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-ил}амид имидазол-1-карбоновой кислоты
Карбонилдиимидазол (38 мг) при комнатной температуре добавляют к раствору 4-метил-5-[2-(2,2,2трифтор-1,1-диметилэтил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина (65 мг) в ДХМ (1 мл) и ДМФ (0,2 мл) и затем выдерживают в течение 18 ч при 25°С. После охлаждения искомое соединение выделяют фильтрова нием.
Стадия 64.2. 4-Метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламин
Порошкообразный гидроксид натрия (0,42 г) добавляют к раствору Ν'-[5-((Ε)-3диметиламиноакрилоил)-4-метилтиазол-2-ил]-^№диметилформамидина (0,93 г, получают, как это описано в публикации 8. Уаид е! а1., I. Меб. СНет. 2004, 47, 1662-1675) и 3,3,3-трифтор-2,2диметилпропионамидингидрохлорида (0,54 г) в 2-метоксиэтаноле (7 мл) и смесь при перемешивании нагревают при 125°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждают, добавляют воду и водный слой 4 раза экстрагируют 10% метанолом в дихлорметане. Объединенные органические слои очищают с помощью хроматографии с обращенной фазой и к фракциям, содержащим искомое соединение, добавляют бикарбонат натрия и получают белый осадок, который собирают фильтрованием. ВЭЖХ/МС: время удерживания 1,47 мин, М+Н 303,1.
Стадия 64.3. 3,3,3-Трифтор-2,2-диметилпропионамидингидрохлорид
Искомое соединение синтезируют по методике, описанной на стадии 61.3, со следующими изменениями. Бутиловый эфир 3,3,3-трифтор-2,2-диметилпропионовой кислоты используют вместо бутилового эфира б9-2,2-диметилпропионовой кислоты и смесь перемешивают в течение 3 дней при 80°С. Неочи
- 52 018863 щенный продукт переносят в ДХМ, обрабатывают небольшим количеством НС1 в Е!ОН и выпаривают. Остаток растирают с ДХМ, фильтруют и сушат и получают искомое соединение в виде почти белого твердого вещества.
Стадия 64.4. Бутиловый эфир 3,3,3-трифтор-2,2-диметилпропионовой кислоты
3,3,3-Трифтор-2,2-диметилпропионовую кислоту (3,0 г, 19,2 ммоль) и каплю ДМФ растворяют в 30 мл ДХМ при КТ, по каплям обрабатывают оксалилхлоридом (1,85 мл, 21,1 ммоль). Через 2 ч прекращается выделение газа и смесь медленно обрабатывают триэтиламином (5,36 мл, 38,4 ммоль), затем нбутанолом (2,1 мл, 23 ммоль). Смесь перемешивают в течение ночи, растворитель выпаривают и остаток перемешивают с гексанами. Твердое вещество отфильтровывают и фильтрат выпаривают и получают коричнево-красное масло. Перегонка в аппарате Кугельрора (10 мбар, температура печи 60-80°С) дает искомое соединение в виде бесцветной жидкости.
Сопоставительный пример 65. 2-Амид,1-({5-[2-(этилметиламино)пиримидин-4-ил]-4-метилтиазол2-ил}амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
кислоты
Смесь (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой
2-амид,1-{ [5-(2-метансульфинилпиримидин-4 ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид} (60 мг) и Ν-этилметиламин (45 мг) нагревают в течение 18 ч при 80°С в герметизированной пробирке. Затем неочищенный продукт очищают с помощью препаративной хроматографии с обращенной фазой. Фракции, содержащие искомое соединение, поглощают с помощью содержащего 300 мг ΒοηάΕ1иΐ 8ΡΕ картриджа 8СХ и затем выделяют 7М раствором аммиака в метаноле (1 мл). Искомое соединение получают путем выпаривания. ИЭР-МС: М+Н 390.
Стадия 65.1. 2-Амид,1-{[5-(2-метансульфинилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид} (8)пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Метахлорпероксибензойную кислоту (0,50 г) при 0°С добавляют к раствору 2-амида,1-{[4-метил-5(2-метилсульфанилпиримидин-4-ил)тиазол-2-ил]амида} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (1,7 г) в дихлорметане (8,5 мл). Через 1 ч реакционную смесь выпаривают и очищают с помощью хроматографии с нормальной фазой при элюировании смесью дихлорметан/метанол в градиентном режиме и получают искомое соединение в виде желтого твердого вещества. ИЭР-МС: М+Н 395 и М-Н 393.
Стадия 65.2. 2-Амид,1-{[4-метил-5-(2-метилсульфанилпиримидин-4-ил)тиазол-2-ил]амид} (8)пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
- 53 018863 [4-Метил-5-(2-метилсульфанилпиримидин-4-ил)тиазол-2-ил]амид имидазол-1-карбоновой кислоты (1,0 г) при комнатной температуре при перемешивании добавляют к раствору Ь-пролинамида (379 мг) и триэтиламина (0,51 мл) в ДМФ (3 мл). Реакционную смесь перемешивают при 40°С в течение 2 ч, затем выпаривают и после осаждения дихлорметаном и водой получают искомое соединение в виде оранжевого твердого вещества. ИЭР-МС: М+Н 379 и М-Н 377.
Стадия 65.3. [4 -Метил-5 -(2 -метилсульфанилпиримидин-4 -ил)тиазо л-2 -ил] амид карбоновой кислоты имидазол-1-
4-метил-5-(2Карбонилдиимидазол (1,77 г) при комнатной температуре добавляют к раствору метилсульфанилпиримидин-4-ил)тиазол-2-иламина (1,3 г) в триэтиламине (0,84 мл) и ДМФ (5,5 мл) и перемешивают в течение 2 ч при 80°С. После охлаждения искомое соединение выделяют фильтрованием.
Стадия 65.4. 4-Метил-5-(2-метилсульфанилпиримидин-4-ил)тиазол-2-иламин
(1,09 г) добавляют к раствору Ν'-[5-(3Порошкообразный гидроксид натрия диметиламиноакрилоил)-4-метилтиазол-2-ил]-Л,№диметилформамидина (2,0 г, получают, как это описано в публикации 8. \Уап§ е1 а1., 1. Меб. СЬет. 2004, 47, 1662-1675) и тиомочевины (0,57 г) в этаноле (25 мл) и смесь при перемешивании кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и добавляют воду, затем метилйодид (0,47 мл). Через 1 ч при комнатной температуре этанол удаляют путем выпаривания и добавляют воду и значение рН доводят до 7 2 н. водным раствором хлористо-водородной кислоты. Затем искомое соединение выделяют фильтрованием. ИЭР-МС: М+Н 239 и М-Н 237.
Сопоставительный пример 66. 2-Амид,1-{[5-(6-циклопропилпиразин-2-ил)-4-метилтиазол-2ил]амид} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
[5-(6-Циклопропилпиразин-2-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид имидазол-1-карбоновой кислоты (78 мг) при комнатной температуре при перемешивании добавляют к раствору Ь-пролинамида (30 мг) и триэтиламина (83 мкл) в ДМФ (1 мл). Реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 18 ч, выпаривают и после кристаллизации из метанола (1 мл) и воды (0,5 мл) получают искомое соединение в виде желтовато-белогого твердого вещества. ВЭЖХ/МС: время удерживания 1,40 мин, М+Н 373,1 и М-Н 371,3.
Стадия 66.1. [5-(6-Циклопропилпиразин-2-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид имидазол-1-карбоновой кислоты
- 54 018863
Карбонилдиимидазол (74 мг) при комнатной температуре добавляют к раствору 5-(6циклопропилпиразин-2-ил)-4-метилтиазол-2-иламина (96 мг) в ДМФ (2 мл) и выдерживают в течение 18 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтруют, промывают дихлорметаном и получают искомое соединение.
Стадия 66.2. 5-(6-Циклопропилпиразин-2-ил)-4-метилтиазол-2-иламин
Концентрированную хлористо-водородную кислоту (0,4 мл) при комнатной температуре добавляют к Ы-[5-(6-циклопропилпиразин-2-ил)-4-метилтиазол-2-ил]ацетамиду (120 мг) в этаноле (9 мл) и смесь кипятят с обратным холодильником в течение 18 ч. Охлажденную реакционную смесь выпаривают, нейтрализуют водным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют 10% метанолом в ДХМ. Объединенные органические экстракты сушат над сульфатом натрия и выпаривают и получают искомое соединение. ВЭЖХ/МС: время удерживания 0,93 мин, М+Н 233,3.
Стадия 66.3. Ы-[5-(6-Циклопропилпиразин-2-ил)-4-метилтиазол-2-ил]ацетамид
Аргон при комнатной температуре в течение 5 мин пропускают через смесь 2-циклопропил-6хлорпиразина (154 мг, получают по методике, описанной в публикации А. ЕиШиег е1 а1., 1. Ат. СНет. 8ос. 2002, 214, 13856-13863), 2-ацетамидо-4-метилтиазола (200 мг), ацетата палладия (24 мг), три-третбутилфосфонийтетрафторбората (61 мг) и карбоната цезия (678 мг) в ДМФ (3 мл). Реакционную смесь нагревают в герметизированном сосуде в атмосфере аргона в течение 45 мин при 150°С в микроволновом аппарате Вю1аде 1шйа1ог™. Реакционную смесь фильтруют и очищают с помощью препаративной ВЭЖХ. Фракции, содержащие искомое соединение, объединяют и выпаривают для удаления ацетонитрила и искомое соединение выделяют фильтрованием в виде бежевого твердого вещества. ВЭЖХ/МС: время удерживания 1,65 мин, М+Н 275,3.
Сопоставительный пример 67. 2-Амид,1-{[4-метил-5-(5-трифторметилпиридин-3-ил)тиазол-2ил]амид} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Карбонилдиимидазол (29 мг) при комнатной температуре при перемешивании добавляют к раствору 4-метил-5-(5-трифторметилпиридин-3-ил)тиазол-2-иламина (42 мг) и триэтиламина (50 мкл) в ДМФ (1 мл) и смесь выдерживают в течение 18 ч при комнатной температуре. Добавляют Ь-пролинамид (20 мг) и
- 55 018863 реакционную смесь выдерживают в течение еще 8 ч при комнатной температуре, выпаривают и после кристаллизации из метанола (3 мл) и воды (1,5 мл) получают искомое соединение в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: М+Н 400.
Стадия 67.1. 4-Метил-5-(5-трифторметилпиридин-3-ил)тиазол-2-иламин
р
Триметилсилилхлорид (0,3 мл) при комнатной температуре добавляют к №[4-метил-5-(5трифторметилпиридин-3-ил)тиазол-2-ил]ацетамиду (44 мг) в этаноле (2 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4,5 ч. Затем реакционную смесь нагревают при 50°С в течение 18 ч, охлаждают, выпаривают и после растирания с диэтиловым эфиром искомое соединение выделяют фильтрованием.
Стадия 67.2. А|4-Метил-5 -(5 -трифторметилпиридин-3 -ил)тиазол-2-ил] ацетамид о
р
Аргон при комнатной температуре в течение 5 мин пропускают через смесь гидрохлорида 5(трифторметил)-3-пиридинбороновой кислоты (263 мг, получают, как это описано в УО 2007/134828), 2ацетиламино-5-йод-4-метилтиазола (260 мг, получают, как это описано в УО 2006/125807), 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцендихлорпалладия(П) (38 мг), карбоната натрия (488 мг) в ДМЭ (2,3 мл) и воды (2,3 мл). Реакционную смесь нагревают в герметизированном сосуде в атмосфере аргона в течение 30 мин при 80°С и затем в течение 60 мин при 80°С в микроволновом аппарате Вю1аде 1шйа1ог™. После охлаждения реакционную смесь экстрагируют с помощью ДХМ, объединенные органические слои выпаривают с силикагелем и очищают с помощью хроматографии с нормальной фазой (элюент; градиентный режим от ДХМ до 1:1 ДХМ:этилацетат). Затем фракции, содержащие продукт, растирают с метанолом (5 мл), ДМФ (0,3 мл) и водой (1,3 мл) и фильтруют и получают искомое соединение в виде бежевого твердого вещества.
Сопоставительный пример 68. 2-Амид,1-{[5-(6-б10-диэтиламинопиразин-2-ил)-4-метилтиазол-2ил]амид} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
[5-(6-б10-Диэтиламинопиразин-2-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид (82 мг) имидазол-1-карбоновой кислоты при комнатной температуре при перемешивании добавляют к раствору Ь-пролинамида (28 мг) и триэтиламина (78 мкл) в ДМФ (1 мл). Реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 14 ч, выпаривают и после кристаллизации из метанола (1 мл) и воды (0,5 мл) получают искомое соединение в виде желтовато-белогого твердого вещества. ВЭЖХ/МС: время удерживания 1,41 мин, М+Н 414,2 и М-Н 412,3.
Стадия 68.1. [5-(6-йю-Диэтиламинопиразин-2-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид имидазол-1-карбоновой кислоты
- 56 018863
Карбонилдиимидазол (78 мг) при комнатной температуре добавляют к раствору 5-(6-й10диэтиламинопиразин-2-ил)-4-метилтиазол-2-иламина (121 мг) в ДМФ (2 мл) и выдерживают в течение 3,5 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтруют, промывают дихлорметаном и полу чают искомое соединение.
Стадия 68.2. 5-(6-й| 0-Диэтиламинопиразин-2 -ил) -4 -метилтиазол-2 -иламин
Концентрированную хлористо-водородную кислоту (0,4 мл) при комнатной температуре добавляют к №[5-(6-й10-диэтиламинопиразин-2-ил)-4-метилтиазол-2-ил]ацетамиду (140 мг) в этаноле (9 мл) и смесь кипятят с обратным холодильником в течение 40 ч. Охлажденную реакционную смесь выпаривают, нейтрализуют водным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют 10% метанолом в ДХМ. Объединенные органические экстракты сушат над сульфатом натрия и выпаривают и получают искомое соединение. ВЭЖХ/МС: время удерживания 1,17 мин, М+Н 274,4.
Стадия 68.3. №[5-(6-й10-Диэтиламинопиразин-2-ил)-4-метилтиазол-2-ил]ацетамид
Аргон при комнатной температуре в течение 5 мин пропускают через смесь 2-й10-диэтиламино-6хлорпиразина (293 мг), 2-ацетамидо-4-метилтиазола (300 мг), ацетата палладия (24 мг), три-третбутилфосфонийтетрафторбората (61 мг) и карбоната цезия (1,02 г) в ДМФ (3 мл). Реакционную смесь нагревают в герметизированном сосуде в атмосфере аргона в течение 45 мин при 150°С в микроволновом аппарате Вю1аде 1шйа1ог™, фильтруют и очищают с помощью препаративной ВЭЖХ. Фракции, содержащие искомое соединение, объединяют и выпаривают для удаления ацетонитрила и искомое соединение выделяют фильтрованием в виде бежевого твердого вещества. ВЭЖХ/МС: время удерживания 1,68 мин, М+Н 316,3.
Стадия 68.4. 2-йю-Диэтиламино-6-хлорпиразин
й10-Диэтиламин (0,5 г) при комнатной температуре при перемешивании добавляют к смеси 2,6дихлорпиразина (0,93 г) и карбоната калия (1,41 г) в ацетонитриле (4 мл). Затем реакционную смесь нагревают при 55°С в течение 60 ч, охлаждают, добавляют воду и затем экстрагируют дихлорметаном.
- 57 018863
Объединенные органические экстракты сушат над сульфатом натрия, выпаривают и очищают с помощью хроматографии с нормальной фазой, элюент ДХМ и получают искомое соединение. ВЭЖХ/МС: время удерживания 2,10 мин, М+Н 196,4 и 198,4.
Сопоставительный пример 69. 2-Амид,1-{[5-(6-диэтиламинопиразин-2-ил)-4-метилтиазол-2ил]амид} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 68, но с использованием диэтиламина вместо ά10-диэтиламина. ВЭЖХ/МС: время удерживания 1,43 мин, М+Н 404,2 и 402,3.
Сопоставительный пример 70. 2-Амид,1-{[5-(2-циклопропилметилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол2-ил]амид}(8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 42, но с использованием [5-(2-циклопропилметилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амида имидазол-1-карбоновой кислоты вместо {4-метил-5-[2-(1-метилциклопропил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-ил}амида имидазол-1карбоновой кислоты. Т. пл. 220-222°С, ИЭР-МС [М+Н]+ 387,1, ТСХ: Вг = 0,2 (ДХМ/ЕЮН 95:5).
Стадия 70.1. [5-(2-Циклопропилметилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид имидазол-1карбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 42.1, но с использованием 5-(2-циклопропилметилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2-иламина вместо 4-метил-5-[2-(1метилциклопропил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина и реакционную смесь перемешивают в течение 15 ч. Т. пл. 240-243°С, ИЭР-МС [М+Н]+ 305,1, ТСХ: Вг = 0,35 (ДХМ/ЕЮН 95:5).
Стадия 70.2. 5-(2 -Циклопро пилметилпиримидин-4 -ил) -4 -метилтиазол-2 -иламин
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 42.2, но с использованием 2-циклопропилацетамидингидрохлорида вместо 1-метилциклопропанкарбоксамидингидрохлорида. Т. пл. 198-200°С, ИЭР-МС [М+Н]+ 247,1, ТСХ: Вг = 0,25 (ДХМ/ЕЮН 95:5).
Сопоставительный пример 71. 2-Амид,1-({5-[2-(2-фтор-1,1-диметилэтил)пиримидин-4-ил]-4метилтиазол-2-ил}амид) (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
- 58 018863
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 42, но с использованием {5-[2-(2-фтор-1,1-диметилэтил)пиримидин-4-ил]-4-метилтиазол-2-ил}амида имидазол-1-карбоновой кислоты вместо {4-метил-5-[2-(1-метилциклопропил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-ил}амида имидазол1-карбоновой кислоты. Т. пл. 187-190°С, ИЭР-МС [М+Н]+ 407,1, ТСХ: К£ = 0,3 (ДХМ/ЕЮН 95:5)
Стадия 71.1. {5-[2-(2-Фтор-1,1-диметилэтил)пиримидин-4-ил]-4-метилтиазол-2-ил}амид имидазол1-карбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 42.1, но с использованием 5-[2-(2-фтор-1,1-диметилэтил)пиримидин-4-ил]-4-метилтиазол-2-иламина вместо 4-метил-5-[2-(1метилциклопропил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина и реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч при 80°С.
Стадия 71.2. 5-[2-(2-Фтор-1,1-диметилэтил)пиримидин-4-ил]-4-метилтиазол-2-иламин
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 42.2, но с использованием 3-фтор-2,2-диметилпропионамидингидрохлорида вместо 1-метилциклопропанкарбоксамидингидрохлорида. ИЭР-МС [М+Н] 267,1, ТСХ: К£ = 0,4 (ДХМ/ЕЮН 95:5).
Сопоставительный пример 72. 2-Амид,1-{[5-(2-трет-бутил-6-метилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол2-ил]амид} (8)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 42, но с использованием [5-(2-трет-бутил-6-метилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амида имидазол-1-карбоновой кислоты вместо {4-метил-5-[2-(1-метилциклопропил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-ил}амида имидазол-1карбоновой кислоты. Т. пл. 197-199°С, ИЭР-МС [М+Н]+ 403,1, ТСХ: К£ = 0,3 (ДХМ/ЕЮН 95:5).
Стадия 72.1. [5-(2-трет-Бутил-6-метилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид имидазол-1карбоновой кислоты
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 42.1, но с использованием 5-(2-трет-бутил-6-метилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2-иламина вместо 4-метил-5-[2-(1- 59 018863 метилциклопропил)пиримидин-4-ил]тиазол-2-иламина и реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч. ИЭР-МС [М-Н]- 355,2.
Стадия 72.2. 5-(2 -трет-Бутил-6 -метилпиримидин-4 -ил) -4 -метилтиазол-2 -иламин
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 1.2, но с использованием №[5-(2-трет-бутил-6-метилпиримидин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]ацетамида вместо №[5-(2-третбутилпиридин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]ацетамида и с использованием 2н. НС1. Реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч при КТ и затем в течение 3 ч при 90°С. ИЭР-МС [М+Н]+ 263,1.
Стадия 72.3. Ν-[5-(2 -трет-Бутил-6 -метилпиримидин-4 -ил) -4 -метилтиазол-2 -ил] ацетамид
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 1.3, но с использованием 4-бром-2-трет-бутил-6-метилпиримидина вместо 4-бром-2-трет-бутилпиридина. ИЭР-МС [М+Н]+ 305,2.
Стадия 72.4. 4-Бром-2-трет-бутил-6-метилпиримидин
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 1.4, но с использованием 2-трет-бутил-6-метил-3Н-пиримидин-4-она вместо 2-трет-бутил-1Н-пиридин-4-она. ИЭР-МС [М+Н]+ 229/231,0. ТСХ: КЕ = 0,58 (гексаны/ДХМ 7:3).
Пример 73. 2-Амид,1-({5-[2-(2-фтор-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2-ил}амид) (8)-
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, но со следующими изменениями. В примере 1 реакционную смесь перемешивают в течение 6 ч при КТ. На стадии 1.1 реакционную смесь перемешивают в течение 15 ч при кипячении с обратным холодильником. На стадии 1.2 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 100°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью Е!ОАс. На стадии 1.3 реакционную смесь перемешивают в течение 4 ч при 120°С. На стадии 1.4 реакционную смесь перемешивают в течение 30 мин при 85°С и после остановки реакции экстрагируют с помощью Е!ОАс. На стадии 1.5 реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 70°С и растирание с МеОН не проводят. На стадии 1.6 неочищенный продукт не очищают. На стадии 1.7 используют 3-фтор-2,2-диметилпропионилхлорид (стадия 76.1).
Искомое соединение: ИЭР-МС: 406,1 [М+Н]+; !К = 2,20 мин (система 1); ТСХ: КЕ = 0,47 (ДХМ/МеОН, 9:1).
Стадия 73.1. 3-Фтор-2,2-диметилпропионилхлорид
Искомое соединение получают по аналогии с методикой, описанной на стадии 5.1, но с использованием 3-фтор-2,2-диметилпропионовой кислоты (стадия 73.2).
Стадия 73.2. 3-Фтор-2,2-диметилпропионовая кислота
- 60 018863 соон
Раствор 6,9 г (38,6 ммоль) метилового эфира 3-фтор-2,2-диметилпропионовой кислоты в 30 мл метанола обрабатывают с помощью 38,6 мл (77 ммоль) 2н. ЫаОН и смесь кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч. Смесь охлаждают до КТ и растворитель выпаривают. Остаток подвергают распределению между водой и ДХМ. Водную фазу подкисляют путем добавления 50 мл 2н. НС1 и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают рассолом, сушат над сульфатом натрия и выпаривают. Бесцветный остаток перемешивают с гексанами, нерастворимое вещество удаляют фильтрованием и фильтрат выпаривают и получают искомое соединение в виде бесцветного твердого вещества. ИЭР-МС: 119,0 [М-Н]-.
Стадия 73.3. Метиловый эфир 3-фтор-2,2-диметилпропионовой кислоты
I
А р
мл 1М раствора тетрабутиламмонийфторида в ТГФ медленно и при охлаждении льдом добавляют к раствору 7,25 г (27,4 ммоль) метилового эфира 2,2-диметил-3-трифторметансульфонилоксипропионовой кислоты в 150 мл ТГФ. Полученный раствор перемешивают в течение 6 ч при 0°С и затем в течение 10 ч при КТ. Растворитель осторожно выпаривают и остаток подвергают распределению между ДХМ и рассолом. Органическую фазу промывают рассолом, сушат над сульфатом натрия и осторожно выпаривают. Коричневое масло перегоняют в аппарате Кугельрора (температура печи от 120 до 150°С) и получают искомое соединение в виде бесцветной жидкости.
Стадия 73.4. Метиловый эфир 2,2-диметил-3-трифторметансульфонилоксипропионовой кислоты
ΟΤί
К раствору 3,64 г (27,5 ммоль) метилового эфира 3-гидрокси-2,2-диметилпропионовой кислоты и 4,82 мл ( 41,3 ммоль) 2,6-лутидина в 50 мл сухого ДХМ при -70°С и в атмосфере азота медленно добавляют ангидрид трифторметансульфоновой кислоты (5,12 мл, 30,3 ммоль). Желтый раствор перемешивают в течение 5 мин при -70°С, затем охлаждающую баню удаляют и смесь перемешивают в течение 3 ч при КТ. Окраска переходит из желтой в оранжевую, затем в коричневую. Добавляют ДХМ (50 мл) и раствор дважды промывают с помощью 2н. НС1, сушат над сульфатом натрия и выпаривают досуха. Коричневый остаток сушат в вакууме и искомое соединение используют без дополнительной очистки. ТСХ: В(=0,72 (Е!ОАс/гексаны 1:2).
Условия проведения аналитической ВЭЖХ.
Линейный градиентный режим 20-100% растворитель А в течение 5 мин + 1,5 мин 100% растворитель А; детектирование при 215 нм, скорость потока 1 мл/мин при 30°С. Колонка: Ыис1еок11 100-3 С18 (70x4,0 мм). Растворитель А = СН3СЫ + 0,1% ТФК; Растворитель В = Н2О + 0,1% ТФК.
Условия проведения МС.
Прибор: Мкготакк ΡΓιΙίοπη ΙΙ, элюент: 15% метанола в воде, содержащего 0,2% 25% раствора гидроксида аммония.
Спектры 1Н-ЯМР снимали на спектрометре Уапап Мегсигу 400 в указанных растворителях. Аббревиатуры: Ьг: широкий; к: синглет; б: дублет; !: триплет; с.|: квартет; част./млн: частей на миллион.
Условия проведения ВЭЖХ/МС.
Прибор: Не\\ГеЦ Гаскагб Адйен! 1100 кепек, колонка: ХВпбде™ С18 2,5 мкм 3,0x30 мм, температура: 50°С, элюент: 2-канальная система: канал А - 5% ацетонитрила в воде, канал В - ацетонитрил, содержащий 1,0% муравьиной кислоты
Время(мин) Канал В, % Скорость потока (мл/мин)
0 5 1,4
3,7 95 1,4
4,4 95 2,4
4,45 95 2,4
детектирование: Адйеп! 1100 ОАЭ 210-350 нм и Аа!егк Мкготакк ΖΡ 2000 ИЭР+ и ИЭР-. Препаративная ВЭЖХ.
Прибор: препаративная система СПкоп НГГС, колонка: Зипйге™ Ггер С18 ОВЭ 5 мкм 30 х 100 мм,
- 61 018863 температура: 25°С, элюент: градиентный режим 5-100% ацетонитрила в 0,05% водном растворе трифторуксусной кислоты за 20 мин, скорость потока: 30 мл/мин, детектирование: УФ 254 нм.
Аббревиатуры и сокращения:
ВВгз - трибромид бора, ‘ВиР.НВР4 - три-трет-бутилфосфинийтетрафторборат,
ДХМ - дихлорметан,
ДИЭА - диизопропилэтиламин,
ДМАП - 4-(диметиламино)пиридин,
ДМЭ - 1,2-диметоксиэтан,
ДМФ - диметилформамид,
ДМП - 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2-(1Н)-пиримидинон,
ДМСО - диметилсульфоксид,
Нех - гексан, л - литр(ы),
Ь1НМ08 - бис(триметилсилил)амид лития,
т. пл. - температура плавления,
ЖХСД - жидкостная хроматография среднего давления,
ΝΡ8 - Ν-бромсукцинимид,
ЯМР - 1-метил-2-пирролидон,
РйС12(йрр£) - [1,1 '-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11),
Рй(РР113)4 - тетракис(трифенилфосфин)палладий(0),
Рг - соотношение фронтов (ТСХ),
КТ - комнатная температура,
ТФК - трифторуксусная кислота,
ТГФ - тетрагидрофуран,
ТСХ - тонкослойная хроматография,
- время удерживания.
Пример А. Эффективность в качестве ингибиторов киназы Р13.
Исследование Р13К Кта§еС1о: 50 нл разведений соединения дозировали в черные обладающие небольшим объемом несвязывающие изготовленные из полистирола (ΝΡ^) 384-луночные планшеты (Со81аг Са1. Νο. ЫВ8#3676). Ь-а-фосфатидилинозит (Р1), поставляющийся в виде раствора в метаноле концентрации 10 мг/мл, помещали в стеклянную пробирку и сушили в токе азота. Затем его путем взбалтывания повторно суспендировали в 3% растворе октилглюкозида (ОГ) и хранили при 4°С. Люминесцентный анализ киназы Кта§е61о (Рготеда, Май18ои/А1, υδΑ) представляет собой гомогенную методику ΗΤ8 определения активности киназы путем количественного определения количества АТФ (аденозинтрифосфат), оставшегося в растворе после реакции киназы.
Добавляли 5 мкл смеси Р1/ОГ, содержащей подтип Р13К (табл. 1).
Реакции киназы инициировали путем добавления 5 мкл смеси АТФ, содержащей в конечном объеме 10 мкл 10 мМ Τη^ΉΟ |Τπ5 - трис(гидроксиметиламинометан)] рН 7,5, 3 мМ МдС12, 50 мМ №1СТ 0,05% ХЛАПС (3-((3-холамидопропил)диметиламмоний)-1-пропансульфоновая кислота), 1 мМ ДТТ (дитиотреитол) и 1 мкМ АТФ, и проводили при комнатной температуре. Реакции останавливали с помощью 10 мкл К1иа8еС1о и через 10 мин планшеты считывали с помощью устройства для считывания 8упегду2 при времени интегрирования, равном 0,1 с/лунка. Для 100% ингибирования реакции киназы в планшеты для исследований добавляли 2,5 мкМ ингибитора рап-класса 1 Р13 киназы (стандарт), а равное 0% ингибирование обеспечивали путем использования растворителя с разбавителем (90% ДМСО в воде). Стандарт использовали в качестве контрольного соединения и по 2 раза помещали во все планшеты для исследования в виде 16 разведений.
Таблица 1 Исследование Р13К§ с помощью К1па8еС1о: условия проведения исследования и реагенты
Объем (Ю мкл) Содержание фермента (нМ) АТФ (мкМ) ΡΙ/ΟΓ (мкМ/ мкг/мл) ΝβϋΙ (мМ) - Мё + (мМ ) ХЛАП С (%) ДТТ (мМ) Время (мин)
Р13Ка 10 1 11/10 50 3 0,05 1 30
ΡΙ3Κβ 25 1 11/10 50 3 0,05 1 30
ΡΙ3Κγ 150 1 22/20 50 3 0,05 1 90
ΡΪ3Κά 10 1 11/10 50 3 0,05 1 30
Клонирование Р13К.
Конструкции Р13Ка, Р13Кв и Р13К5 представляют собой слияния домена р85а 18Н2 и соответствующих изоформ р110. Фрагмент р85а и гены изоформ р110 генерировали с помощью ПЦР (полимераз
- 62 018863 ная цепная реакция) из первой спирали кДНК, генерированной при КТ с помощью ПЦР из имеющейся в продаже РНК, выделенной из плаценты, семенника и головного мозга, как это описано ниже. Конструкцию ΡΙ3Ι<γ получали из Кодег \νί11ί;·ιιη8 1аЬ., МКС ЬаЬотаЧоту оГ Мо1еси1аг Βίοίοβν, СатЬпбде, ИК (ΝοуетЬет, 2003) и она описана в публикации (Расо1б, Мюйае1 Ε.; 8шге, 8аЬте; Рег1К1с, О1да; Бата-Соп/Це/, 8атие1; Οηνίκ, Со1т Т.; Vа1ке^, Ε6\\ήγ6 Н.; На\\ктк, РЫШр Т.; 8Черйепк, Ьеи; Ε^^κίΌη, Чо1т р.; V^11^атκ, Кодег Б. СгукЧа1 к1гнс1нге апб Чипсйопа1 апа1ук1к оГ Как Ьтбтд Ю йк еГГесЮг рйокрйошокШбе 3-к1паке датта. Се11 (2000), 103(6), 931-943).
Конструкции РККа и белки.
ΡΙ3Κα ννΐ ВУ107 5 р8518Н2(461-568)-ООСОССОООООО’р110α(21-1068)-ΗΪ3
Βν1075. Конструкцию для бакуловируса Βν-1075 генерировали путем лигирования трех фрагментов, включающего фрагмент р85 и фрагмент р110а, клонированные в вектор рΒ1иеΒас4.5. Фрагмент р85 получали из плазмиды р1661-2, ферментированной с помощью №е/8ре. Фрагмент р110а, полученный из клона, проверяли путем секвенирования и использовали в БК410 в качестве фрагмента ЗреБНтбПБ Для генерации вектора экспрессии БК410 бакуловируса использовали реакцию Са1е\\ау БК для переноса вставки в Са1е\\ау адаптированный рΒ1иеΒас4.5 (ЧпуЦгодеп). Вектор для клонирования, рΒ1иеΒас4.5 (Чпуйтодеп) ферментировали с помощью Ше/НтбШ. Это давало конструкцию ΡΕ^ 153.8. Компонент р85 (18Н2) генерировали с помощью ПЦР с использованием ОКР 318 (описано выше) в качестве матрицы и одного прямого праймера ^01028 (5'-ССТΑССΑТСССΑСΑΑТΑТСΑТΑСΑТТΑТΑТСΑΑСААТАТАСС) и двух обратных праймеров, ^0029 (5'-СССТССΑССΑССТСССССТССТТТΑΑТССТСТТСΑТΑССТТТСТС) и ^0039 (5'-ТΑСТΑСТСССССТССΑССΑССТСССССТССΑССΑССТССССС). Эти два обратных праймера перекрываются и вводят 12х линкер С1у и Ν-концевую последовательность гена р110а в сайт 8рек Линкер 12х С1у заменяет единичный линкер С1у в конструкции Βν1052. Фрагмент ПЦР клонировали в рСК2.1 ТОРО (Iηνй^οдеη). С помощью секвенирования установлено, что из полученных клонов корректным являлся р1661-2. Эту плазмиду ферментировали с помощью Ν^ и 8реI и полученный фрагмент выделяли с помощью геля и очищали для субклонирования.
Фрагмент для клонирования р110а генерировали с помощью ферментации клона БК410 (см. выше) с помощью 8реI и НшбШ. Сайт 8реI находится в кодирующей области гена р110а. Полученный фрагмент выделяли с помощью геля и очищали для субклонирования. Вектор для клонирования, рΒ1иеΒас4.5 (Тпуйгодеп) получали путем ферментирования с помощью Νίκ и НтбПБ Разрезанный вектор очищали на колонке Ц1адеп и затем дефосфорилировали с помощью щелочной фосфатазы кишечника теленка (СЧР) (БюБаЬк). После завершения реакции с С'ЧР разрезанный вектор повторно очищали на колонке и получали конечный вектор. Лигирование трех фрагментов проводили с использованием лигазы Коске Кар1б в соответствии со спецификациями поставщика. Конечную плазмиду проверяли с помощью секвенирования.
- 63 018863
Домен киназы.
Последовательность белков для ВУ 1075:
ΜΚΕΥΟΚίΥΕΕ ΥΤΚΤ80ΕΙ9Μ ΚΚ.ΤΑΙΕΑΕΝΕ Т1К1ЕЕЕОСО ΤΟΕΚΥ8ΚΕΥΙ ΕΚΕΚΚΕΟΝΕΚ
ΕΙΡΚΙΜΗΝΥΟ ΚΕΚ.8Κ.Ι8ΕΙΙ О8ККИЕЕЕОЕ ΚΚςΑΑΕΥΚΕΙ ϋΚΚΜΝΒΙΚΡΟ
666ССС0600
121 аЬУЕСЬЬРМО М1УТЕЕСБКЕ АТЫТ1КНЕЬ ΡΚΕΑΒΧΥΡΕΗ (^11(^88ΥΙ ΕνδνΤί^ΕΑΕΚ.
181 ЕЕРГОЕТККЬ СОЬКЬРфРРЬ ΚνίΕΡΥΰΝΚΕ ΕΚΙΕΝΚΕΙΰΡ АЮМРУСЕЕВ МУКОРЕУрПР
241 ΚΡΝΙΕΝνΟΚΕ АУОЬКОЬЯЗР Η8ΕΑΜΥνΥΡΡ ΝνΕ88ΡΕίΡΚ
ΗΙΥΝΚΕϋΚΌζ) ΙίννίΨνίνδ
301 ΡΝΝΟΚΡΚΥΊΈ ΚΙΝΗϋΟνΡΕί} νΐΑΕΑΙΚΚΚΤ КбМЕЬЗЙЕОЬ КЬСУЬЕУ(2СК У1ЕКУСССВЕ
361 УГЬЕКУРЬ8(^ ΥΚΥΙΚ8ΟΙΜΕ <лК.МРМЬМЬМА КЕ8БУ8(2ЕРМ ϋεΓΤΜΡδΥδκ. κι^τατρυμν
421 ОЕТЗТКЗЬАУУ ΙΝ8ΑΕΚ.ΙΚΙΕ ΟΑΤΥνΝνΝΙΚ ΌΙϋΚΙΥνΚΤΟ ΙΥΗΟΟΕΡΕΟϋ ИУЫТОКУРСЗ
481 ΝΡΡν/ΝΕ\ν’ΕΝΥ βΙΥΙΡΟίΡΚΑ АК.ЕСЕ81С8У КСК.КСАКЕЕН
ΟΡΕΑΨΟΝΙΝΕ ΡΟΥΤϋΊΈνδα
541 ΚΜΑΕΝΙΛνΡνΡ НОЕЕОШМР! ΟνΤΟΞΝΡΝΚΕ ТРСЕЕЕЕРЭХУ
Р88УУКЕРОМ 8νΐΕΕΗΑΝΨ8
601 ν8ΚΕΑσΡ8Υ8 ΗΑΟΕ8ΝΡΕΑΚ ϋΝΕΕΚΕΝϋΚΕ рЬКА18ТКТ)Р Е8Е1ТЕрЕКИ ΡΕΨδΗΚ,ΗΥεν
661 Т1РЕ1ЬРКЬЕ Ε5νΚ\νΝ8ΕϋΕ УАрМУСЬУКО У/РР1КРЕрАМ ΕΕΕΟΟΝΥΡϋΡ
МУКСРАУКСЕ
721 ЕКУЬТООКЬЙ рУЬ^ЕУрУЬ ΚΥΕςΥΕϋΝΕΕ УКРЬЬККАЬТ
ΝΟΚΙΟΗΡΡΡλν ΗΕΚ8ΕΜΗΝΚΤ
781 νδςΚΡΟΕΕΕΕ ЗУСКАССМУЬ ΚΗΕΝΚΟνΕΑΜ ΕΚΕΙΝίΤΟΙί Κ(}ΕΚΚΟΕΤζ)Κ У9МКРЬУЕ<ЗМ
841 ККРВЕМОАЬр 6ΓΕ8ΡΕΝΡΑΗ рЕСМЕЕЪЕЕС ΚΙΜ88ΑΚΕΡΕ ν/ΕΝν/ΕΝΡϋΙΜ 8ΕΕΕΡΡΝΝΕΙ
901 ΙΡΚΝΟϋΟΕΚρ ϋΜΕΤΕΟΙΙΚΙ ΜΕΝΙΨςΝΟΟΕ 0ЕКМЕРУ6СЕ ЗЮОСУОЫЕ ννκΝδΗτίΜς
961 10СКООЕКОА ΕΡΡΝ8ΗΤΕΗΟ ΧνΕΚΌΚΝΚΌΕΙ УОААГОЬРТК
8САСУСУАТЕ ΙΕΟίαΟΕΗΝδ
1021 ЕПМУКТЮСрЕ РНЮРОИРЬО ΗΚΚΚΚΡΟΥΚΚ ΕΚνΡΡνΕΤΟϋ
РЕ1У18КСАР ЕСТКТКЕРЕК
1081 РОЕМСУКАУЕ АПАНАЖЕ! ΝΕΡ8ΜΜΕΟ8Ο ΜΡΕΕ08ΡΒΟΙ ΑΥΙΚΚΤΕΑΕϋ ΚΤΕΟΕΑΕΕΥΡ
1141 ΜΚ()ΜΝΟΑΗΗ(ϊ ΟλνΤΤΚΜϋΧνίΡ ΗΤΙΚΡΗΑΕΝΕ ЬООАНННННН (8Ε(2 ΙΟ ΝΟ: 4)
Конструкции ΡΙ3Κβ и белки.
I ΡΙ3Κβ | ВУ949 | ρ85ί8Η2(461-Ν58Κ-568)-0000<30-ρ110β(2-1070)-Ηί5
ВУ949. Продукты ПЦР для внутреннего домена 8Н2 (18Н2) субъединиц р85 ΡΙ3Κα, ΡΙ3Κβ и ΡΙ3Κδ и для полноразмерной субъединицы ρ110β генерировали и подвергали слиянию с помощью перекрывающейся ПЦР. Продукт 18Н2 ПЦР получали из первой спирали кДНК, генерированной при КТ с помощью ПЦР из имеющейся в продаже РНК человека, выделенной из плаценты, семенника и головного мозга (С1оп(ес11), сначала с использованием праймеров βνΟ130-ρ01 (5'-С6А6ААТАТ6АТА6АТТАТАТ 6АА6ААТ-3') и §ν6130-ρ02 (5'-Т66ТТТААТ6СТ6ТТСАТАС6ТТТ6ТСААТ-3'). Затем при вторичной реакции ПЦР полученные с помощью Са1е\\ау рекомбинацию сайтов А11В1 и линкерные последовательности добавляли соответственно на 5'-конец и 3'-конец фрагмента р85 18Н2 с использованием праймеров §ν6130-ρ03 (5'-666АСАА6ТТ-Т6ТАСАААААА6СА66СТАС6АА66А6АТАТАСАТАТ6С6А6 ААТАТ6АТА6АТТАТАТ6АА6ААТ-3') и §™6130-ρ05 (5'-АСТ6АА6САТССТССТССТССТССТССТ66ТТТААТ6СТ6ТТСАТАС6ТТТ6ТС-3'). Фрагмент ρ110β получали с помощью ПЦР с использованием в качестве матрицы клона р110[3 (из неизвестного источника, последовательность проверена) с использованием праймеров β\ν6130-ρ04 (5'-АТТАААССА66А66А66А66А66А66АТ6СТТСА6ТТТСАТААТбССТССТ6СТ-3'), который содержит линкерные последовательности и 5'-конец р110в, и §ν6130-ρ06 (5'-А6СТСС6Т6АТ66Т6АТ66Т6АТ6Т6СТССА6АТСТ6ТА6ТСТТТСС6ААСТСТСТС-3'), который содержит последовательности 3'-конца р110в, подвергнутого слиянию с гистидиновой меткой. Сборку белка слияния р85-|8Н2/]э110в проводили с помощью перекрывающейся ПЦР
- 64 018863 реакции линкеров на 3'-конце фрагмента 18Н2 и 5'-конце фрагмента ρ110β с использованием указанного выше праймера д\\'С130-р03 и праймера, содержащего перекрывающуюся гистидиновую метку и ΑйΒ2 рекомбинационную последовательность (5'-СССАССАСТТТСТАСААСАААССТСССТТТААССТСС СТСАТССТСАТССТСАТСТССТСС-3'). Этот конечный продукт в реакции Са1е\\ау (Шуйгодеп) ОК повторно объединяли в донорный вектор рПОИК201 (Шуйгодеп) для получения внутреннего клона ОКР253. Этот клон проверяли путем секвенирования и использовали в реакции Са1е\\ау ЬК (Шуйгодеп) для переноса вставки в адаптированный с помощью Са1е\\ау вектор ρΒ1иеΒас4.5 (Шуйгодеп) для генерации вектора экспрессии ЙК280 бакуловируса. Этот ЙК280 содержал мутацию аминокислоты в последовательности р85.
Домен киназы.
Последовательность белков для Βν949:
МКЕУОКЬУЕЕ ΥΤΚΤ8()ΕΙζ>Μ ΚΚΤΑΙΕΑΡΝΕ Т1К1РЕЕ()Ср Τ<)ΕΒ.ΥδΚΕΥΙ
ЕКРККЕОК.ЕК
ΕΙζΗΟΜΗΝΥΟ КЬКЗШЗЕП О8КККЬЕЕОЕ ΚΚζΙΑΑΕΥΚΕΙ βΚΚΜΝΚΙΚΡΟ ОСОООСР8Р1
121 ΜΡΡΑΜΑϋΙΕϋ 1№АУО8<)1А8 О681РУОРЬЬ РТС1УЩЬЕУ ΡΚΕΑΤΙ8ΥΙΚ
ΟΜΙΛΥΚΟνΗΝΥ
181 РМРЫЬЬМОГО ΒΥΜΓΑΟνΝΟΤ ΑνΥΕΕίΕΟΕΤ ККЬСОУЕРРЬ
РУЬКЬУТКЗС ΟΡΟΕΚίϋδΚΙ
241 ОУЫОКОЕНЕ РОЗЬКОРЕУИ ЕРКККМККР8 ЕЕКЩЗЬУОЕ
8УУМОУ/ЬК()ТУ ΡΡΕΗΕΡ8ΙΡΕ
301 ΝίΕϋΚΕΥαΟΚ ЫУАУНРЕЫС ()ОУР8Р()У8Р ΝΜΝΡΙΚνΝΕΣ АЮККЬТШО
ΚΕϋΕνδΡΥϋΥ
361 νίΟνδΟΚνΕΥ УРСГОНРШ)Р ΟΥΙΚΝανΜΝΚ АЬРНРГОУЕС СК1ККМУЕ0Е
ΜΙΑΙΕΑΑΙΝΚ
421 ΝδδΝίΡΕΡίΡ РККТКПЗНУ ΨΕΝΝΝΡΡ<)ΐν ΕΥΚΟΝΚΙ-ΝΤΈ ЕТУКУНУКАС
ЬРНОТЕЕЬСК
481 Т1У88ЕУ8СК ΝϋΗΙΨΝΕΡΕΕ ГЫЕЦСОЬРК МАКЬСРАУУА УЫЖУКТККЗ
ΤΚΤΙΝΡ8ΚΥζ>
541 ΤΙΚ,ΚΑΟΚνΗΥ ΡΥΛΎνΝΐΜΥΕ ΟΡΚΟρίΚΤΟΟ Ι1ΕΗ8Ψ88ΡΡ ϋΕΕΕΕΜίΝΡΜ ΟΤνρΤΝΡΥΤΕ
601 ΝΑΤΑΕΗνΚΡΡ ΕΝΚΚςΡΥΥΥΡ ΡΡΡΚΠΕΚΑΑ ΕΙΑ88ϋ8ΑΝν 88кООККРЬР
УЬКЕП.ОРГОР
661 Ι^ΙΧΈΝΕΜΟ ЫАУТЕЮЗОСК Е1РР<28ЬРКЕ Π-δΙΚν/ΝΕΡΕ ОУА<2Ь<2АЫ,0
ΙλνΡΚίΡΡΚΕΑ
721 ЬЕПГОРКУРО ()ΥνΚ.ΕΥΑνθε Ьк0М8ОЕЕЕ8 (^ΥΕΕΟΕνρνί
КУЕРРЬОСАЬ 8КРЬЕЕКАЬО
781 ΝΚΚΙΟςΡΕΡΨ НЬК8ЕУН1РА У8У<ЭР6У1ЬЕ АУСКОЗУСНМ
КУЕ8КрУЕА1. ΝΚΙΧΤίΝδΙΛ
841 ΚΕΝΑνΚίΝΚΑ КОКЕАМНТСЬ Κ08ΑΥΒ.ΕΑΕ8 ΏΙ^δΡΕΝΡΟν 1Ь8ЕЬУУЕКС КУМОЗКМКРЬ
901 ΨίνΥΝΝΚνΡΟ ΕΟ8νονΐΡΚΝ ΟϋΟΕΚΡϋΜΕΤ ЬОМЕКЕМОРЬ ХУК.ЕАС1ГО1Л.М ЬРУОСЬАТОО
961 К.8ОЫЕУУ8Т δΕΤΙΑΟΚ^ίΝ 88ΝνΑΑΑΑΑΡ ΝΚΟΑΠ,Ν\νΐ_Κ ΕΥΝδΟΟΟΕΟΚ. ΑΙΕΕΡΊΈ8ΟΑ
1021 СУСУАЗУУЬб ΙΟΟΚΗδϋΝΙΜ νΚΚΤΟρίΡΗΙ ϋΡΟΗΙΕΟΝΡΚ.
8КРС1КК.ЕКУ ΡΡΙίΤΥΟΡΙΗ
1081 νΐ()()αΚΤ<3ΝΤ ЕКРСКРКОСС ЕОАУЫШКН С™ЬР1ТЕРАЬ МЬТАОЬРЕЬТ
8νΚϋΙ()ΥΕΚϋ
1141 ЗЬАЬОКЗЕЕЕ АЬК(}РК<2КРО ΕΑΕΚ.Ε8ΨΤΤΚ УКУ'МЛНТУРК.
ΟΥΕΒΟΑΗΗΗΗ ННОА (8Е<2 ГО ΝΟ; 12)
Домен киназы. Конструкция ΡΙ3Κγ и белок.
| ΡΙ3Κγ I ВУ950 | р! 10у(А143-[Ме!144-1102])-Н1£ |
Конструкцию получали из Кодег ^ййатз 1аЬ, МКС ЬаЬога!огу о£ Мо1еси1аг Βίο1ο§\·. СатЬпбде, υΚ (№уетЬег, 2003). Описание конструкции приведено в публикации ^асоИ, Мюйае1 Е.; 8шге, 8аЬте; Ρе^
- 65 018863
181с, О1да; Επη-Οοη/πΗζ, 8атие1; Оау15, ί’οΚη Т.; Аа1кег, Еб^агб Н.; На\\кй15, Ρ1ιί11ίρ Т.; 8^ρ1κη8, Ьеи; ЕссШбЛп Ίο1ιη Ρ.; Аййатз, Яοде^ Ь. Сгуз!а1 з!гис!иге амб Гипс!юпя1 атак^к οί Яаз Ьтбтд !ο Й8 еГГесЮг ρйο8ρйο^ηο8Й^бе 3-кта8е датта. Се11 (2000), 103(6), 931-943). В конструкции отсутствовал Ν-концевой 144 аа.
Последовательность белков для ВУ950:
МЗЕЕЗРАРРК ςΕΤΑΠΟΥΟν ΤϋνδΝνΗΟΟΕ ΤΕΡΤΗΡΟΙΛ'Τ ΡΚΜΑΕνΑΚΚϋ ΡΚίΥΑΜΗΡίνν
ΤδΚΡΕΡΕΥίνΖ ΚΚΙΑΝΝΟΡΙ У1НК8ТТ8<ЗТ ΙΚνδΡϋϋΤΡΟ АШРЗРРТКМ
ΑΚΚΚδίΜϋΙΡ
121 Е5р8Е<5ОРУЕ ΚνΟΟΚ-ΟΕΥίν ΟΕΤΡΙΚΝΡςψ νΚΗΟίΚΝΟΕΕ ШУУШТРРЦ РАЬОЕУККЕЕ
181 \νΡίΛΓ)ΙΧ'Τθν ТОУНЕОЬТШ ΟΚϋΗΕ5νΡΤν δΙΧΊΧ'ΟΚΚΓΚ νΚΙΚΟΙϋΙΡν ΪΡΚ’ΝΙΌΕΤνΐ'
241 νΕΑΝΙΟΗΟΟΟ УЬС<ЗККТ8РК ΡΕΤΕΕνΕλΥΝν \УЬЕГ81К!К1) Ι.ΡΚΟΑΙ.Ι.ΝίΟ 1УСОКАРАЬ8
301 8ΚΑ8ΑΕ8Ρ88 ЕЗКаКУКЬЬУ ΥνΝΕίΠΟΗΚ РЕЕЕКСЕУУЬ ΗΜΨ0Ι8ΟΚΟΕ ΟΟΟδΡΝΑϋΚΕ
361 Τ8ΑΤΝΡϋΚΕΝ 8М8181ШЦЧ УСНР1АЬРКН ρΡΤΡϋΡΕΟϋΒ. νΚΑΕΜΡΝζ>Ι_Ι< КОЬЕАПАТО
421 ΡΕΝΡίΤΛΕΟΚ ЕЕЬАУНРКУЕЗ ЬКИРКАУРКЬ Г88УК\УО0(}Е 1УАКТУОЬЬА ΚΡΕνν'ΟΟδΛΙ.
481 ОУОЬТМСгЫ-О ΟΝΕδϋΕΝνΚΑ 1АУ(}КХЕ81.Е ΟΟΟνίΒΥΕίς ЕУ(}АУКЕЕРУ НОЗАЕАКРЬЕ
541 ΚΡ6Ι.ΡΝΚ11Κ1 ΗΕΕΡνΡΕΚδΕ ΙΑςΚΡΗΥΟςΚ. РАУ1ЬЕАУЬК ОСОТАМШОЕ Τ(?(2ν<2νΐΕΜΕ
601 ОКУТЬИКЗЬ 8ΑΕΚΥϋν88Ο νίδΟίΚΟΚΕΕ ΝίΟΝδζΙΕΡΕδ РКУРУЦРСЬК
АОАЬА1ЕКСК
661 νΜΑδΚΚΚΡίψ ίΕΡΚΟΑϋΡΤΑ Ε8ΝΕΤΙΟΙΙΡ ΚΗ6ΟΟΙ ΚΟΟΜ иЦДЬШМЕ
8ΙΨΕΤΕ8ΙΛ0Ε
721 С1.1.РУ(тС18Т ΟΟΚΙΟΜΙΕίν ΚΟΑΤΤΙΑΚΙί) <28Τν6ΝΊΌΑΡ ΚΟΙΆΊ.ΝΙ ΙΑΊ.Κ ΕΚ8ΡΤΕΕΚΡ0
781 ААУЕКГУУЗС АСУСУАТРУЬ ΟΙΟϋΠΗΝΟΝΙ ΜΙΤΕΤΟΝίΓΗ ΙϋΡΟΗΙΕΟΝΥ
ΚδΡίΟΙΝΚΕΚ
841 УРРУЬТРОРЬ РУМОТЗОККТ 8ΡΗΡςΚΡρϋΙ СУКАУЬАЬКН ΠΤΝΙΧΠΙ.Γ8 ммьмтомррь
901 ΤδΚΕϋΙΕΥΙΚ ΟΑίΤνΟΚΝΕΕ ΟΑΚΚΥΕΕϋςΐ ЕУСКЛКОХУТУ 0ГМУ/П.П!Л'Е ΟΙΚΡΟΕΚΗ8Α
961 ΗΗΗΗΗΗ (8Ε<3 Ю ΝΟ: 13)
Конструкция ΡΙ3Κδ и белок.
| ΡΙ3Κ6 | ВУ1060 | ρ85ί8Η2(461-568)-ΰσθ<3ΟΟ-ρ110δ(2-1044)-ΗΪ5 |
ВУ1060. Продукты ПЦР для внутреннего домена 8Н2 (18Н2) субъединицы р85 и для полноразмерной субъединицы р1105 генерировали и подвергали слиянию с помощью перекрывающейся ПЦР. Продукт 18Н2 ПЦР генерировали с использованием матрицы ОЯР318 (см. выше) и праймеров дхС130-ц03 (5'-СССАСААСТТТСТАСААААААССАСССТАССААССАСАТАТАСАТАТСССАСААТАТСАТАСАТТАТАТСААСААТ-3') и ^6154-ρ04 (5’-ТССТССТССТССТССТССТСС
ТТТААТССТСТТСАТАССТТТСТС-3’). Фрагмент ρ110δ получали из первой спирали кДНК, генерированной при КТ с помощью ПЦР из имеющейся в продаже РНК человека, выделенной из плаценты, семенника и головного мозга (СШШесЬ), сначала с использованием праймеров дхС154-ц01 (5'АТССССССТССССТССАСТСССССАТ-3') и ^6154-ρ02 (5'-СТАСТСССТСТТСТСТТТССАСАССТ3'). В последующей реакции ПЦР линкерные последовательности и гистидиновую метку добавляли соответственно на 5'-конец и 3'-конец фрагмента ρ110δ с использованием праймеров §\ν154-ρ03 (5'АТТАААССАССАССАССАССАССАССАСССССТССССТССАС-ТСССССАТССА-3') и ^6154-ρ06 (5'-АССТСССТСАТССТСАТССТСАТСТССТСССТСССТСТТСТСТТТССАСАССТТСТ-3'). Сборку белка слияния ρ85-^8Н2/ρ110δ проводили с помощью третьей реакции ПЦР с использованием перекрывающихся линкеров на 3'-конце фрагмента 18Н2 и 5'-конце фрагмента р110δ с использованием указанного выше праймера дхС130-ц03 и праймера, содержащего перекрывающуюся гистидиновую метку и
- 66 018863
Са1е\\ау Циуйгодеи) ΑΐίΒ2 рекомбинационные последовательности (5'-ОООΑССΑСТТТОТΑСΑΑО ΑΑΑОСТОООТТТΑΑОСТССОТОΑТООТОΑТООТОΑОТОСТСС-3'). Этот конечный продукт в реакции Са1е\\ау Циуйгодеи) ОК повторно объединяли в донорный вектор рООХК201 Циуйгодеи) для получения внутреннего клона ОКЕ319. Этот клон проверяли путем секвенирования и использовали в реакции Оа!е\уау ЬК Циуйгодеи) для переноса вставки в адаптированный с помощью Са1ехау вектор рВ1иеВае4.5 (Ιηуйгодеи) для генерации вектора экспрессии ЬК415 бакуловируса.
Последовательность белков для ВУ1060:
ΜΚΕΥϋΚίΥΕΕ ΥΤΚΤ8ζ>ΕΙΟΜ ΚΡ.ΤΑΙΕΑΓΝΕ Т1К1ГЕЕС)С() ΤΟΕΚ.Υ8ΚΕΥΙ
ΕΚΡΚΚΕΟΝΕΚ
ΕίρΚΙΜΗΝΥϋ ΚίΚ8ΚΙ8ΕΠ ОЗКККЬЕЕОЕ ΚΚΟΑΑΕΥΚΕΙ ϋΚΚΜΝΒΙΚΡΟ
ΟΟΟΟΟΡΡΟνϋ
121 ΟΡΜΕΡΨΤΚΕΕ ΝζΙδνννΟΓΕί ΡΤΟνΥΕΝΓΡν 8Κ.ΝΑΝΕ8ΤΙΚ
01.1Л¥НКА(,ЛТ РЬГНМЬЗСРЕ
181 АУУРТСШСП АЕООЕЬЕОЕО ККЬСОУОРРЕ РУШЕУАКЕО ΟΚνΚΚίΙΝδΟ ^ьиск-бьн
241 ЕЕОЗЬСОРЕУ ΝϋΡΚΑΚΜΟΟΡ СЕЕАААК.КЦЦ ЬОТУЕА^ТОУЗ
ЕРЦ/ЬЕРЗАС} ТХУОРСТЬКЬР
301 ΝΚΑίΕνΝνΚΓ ΕΟ8ΕΕ8ΓΤΓ0 УЗТКОУРЕАЬ МАСАЬКККАТ
УЕКХЗРЬУЕОР ΕϋΥΤΙ,ΟνΝΟΚ
361 ΗΕΥΕΥΟ8ΥΡΕ СО1;р¥1С8С1. НКСЬТРНЕТМ УН8881ЬАМК ϋΕ(38ΝΡΑΡ(2ν
ΟΚΡΚΑΚΡΡΡΙ
421 РАККР88У8Ь У/ХЕрРЕК ΙΕ υ<)Ο8ΚνΝΑΟ ЕКМКЬУУЦАС
ΕΡΗΟΝΕΜΙΧΚ ТУ888ЕУЗУС
481 ЗЕРУУ'КОКЬЕ ΡΟΙΝΙΟΟΙ-ΡΚ МАЕШСРАЕУА У1ЕКАККАВ.8
ТККК8ККАБС Р1ААУАМЬМЬР
541 БУКООЬКТОЕ КСЬУМЗУРЗУР ϋΕΚΟΕΕίΝΡΤ ΟΤνΚ8ΝΡΝΤΟ 8АААЬЕ1СЬР ΕνΑΡΗΡνΥΥΡ
601 ΛΙ.ΕΚΠ.ΕΕΟΚ Н8ЕСУНУТЕЕ ΕζΙΕςΕΚΕΙίΕ К.К.О8СЕЬУЕН ΕΚϋΕνΨΚίΚΗ
ЕУ<2ЕНРРЕАЕ
661 АКЕЬЬУТКЗУМ КНЕЦУАГЗМЬУ I.Г.СКХУРГХРV ЬКАЕЕЬЕОРЗ
РРЕ>СНУО8РА ΙΚ8ΕΚΚΕΤΟΟ
721 ЕЬРОУЫХгЬУ ρνίΚΥΕδΥΕΩ СЕЕТКЕЬЕОК. ΑΕΛΝΚΚΚΪΗΕ
ЬРЗУН1.К.8ЕМН УРЗУАЕКРСЬ
781 1ЬЕАУСК.О8Т ННМКУЬМКрО ΕΑίδΚίΚΑΕΝ ОГУКЬ88<ЭКТ
РКРРТКЕЬМН ЬСМКСЕАУЬЕ
841 АЬЗНЬЧЗРЬО РЗТЬЬАЕУСУ ЕС1СТРМО8КМ ΚΡΙΛΥΙΜΥ8ΝΕ
ЕАС8СС8УС1 ΙΡΚΝΟϋΟΕΚς
901 ОМЕТЕ<?МКЗЕ МОУЬХУКрГ.СЕ ОЬКМТРУССЕ ΡΤΟΟΚΤΟίΙΕ
УУЬК.8ОТ1АЫ ΙΟΕΝΚ.8ΝΜΑΑ
961 ΤΑΑΡΝΚΟΑΕΕ Ν\νίΚ8ΚΝΡΟΕ АЬОКАШЕРТ ЬЗСАСУСУАТ
УУЬОЮОКНЗ ΟΝΙΜ[ΚΈ8Ο<2
1021 ЬРНЮРСНРЬ ΟΝΡΚΤΚΡΟΓΝ КЕКУРПЬТУ ОРУНУ ЮСОК ΤΝΝ8ΕΚΡΕΚ.Ρ
К.СУСЕК.АУТ1
1081 ШКНСЬЕРЕН ЬРАЬМКААОЕ РЕ1.8С8КО1О УЦКОЗЕАНЭК
ТЕЕЕЛЬКИРК ΥΚΕΝΕΛΕΚΕΚ
1141 λνΚ,ΤΚνΝΨΕΑΗ ΝνδΚΟΝΚ^Εί ООАНННННН (8Е<2 Ю ΝΟ: 20)
Очистка конструкций РВКа, Р!3К β и РВКу.
РВКа, РВКЗ и РВКу очищали с использованием двух стадий хроматографирования: афинной хроматографии с иммобилизацией ионами металла (^ΑΟ) на Νί-сефарозной смоле (ОЕ НеаИйеаге) и гель-фильтрации с использованием колонки 8ирегбех 200 26/60 (ОЕ НеаПйеаге). Все буферы охлаждали до 4°С и лизис проводили при охлаждении льдом. Фракционирование на колонках проводили при комнатной температуре. Все буферы, использованные для очистки РВКЗ, в дополнение к описанному ниже содержали 0,05% Тгйои Х100.
Обычно замороженные клетки, взятые из 10 л клеточной культуры Ти5, повторно суспендировали в литическом буфере, содержащем 20 мМ Тпк-С1, рН 7,5, 500 мМ №С1, 5% глицерина, 5 мМ имидазола,
- 67 018863 мМ ΝαΒ, 0,1 мкг/мл окадаевой кислоты (ОКК), 5 мМ ВМЕ, 1х полная смесь ингибиторов протеазы, не содержащая ЭДТК (этилендиаминтетрауксусная кислота) (20 таблеток/1 л буфера, ВосЬе АррЬеб 8с1епсез), бензоназу (25 Ед/(мл буфера), ЕМО Вюзаепсез) при отношении количества таблеток к количеству литического буфера, составляющем 1:6 об./об., и подвергали механическому лизису с помощью 20 циклов обработки плотно пригнанным пестиком. Лизат центрифугировали при 45000 д в течение 30 мин и надосадочную жидкость загружали в предварительно приведенную в равновесие колонку ГМАС (3 мл смолы/100 мл лизата). Колонку промывали с помощью равного 3-5 об. колонки количества литического буфера, затем второй раз промывали с помощью равного 3-5 об. колонки количества смеси 20 мМ Тп8С1, рН 7,5, 500 мМ №С1, 5% глицерина, 45 мМ имидазола, 1 мМ ΝαΒ, 0,1 мкг/мл ОКК, 5 мМ ВМЕ, 1 х полная смесь ингибиторов протеазы, не содержащая ЭДТК. Белок элюировали смесью 20 мМ Ти8-С1, рН 7,5, 0,5М ЛаС1, 5% глицерина, 250 мМ имидазола, 1 мМ ΝαΒ, 0,1 мкг/мл ОКК, 5 мМ ВМЕ, 1 х полная смесь ингибиторов протеазы, не содержащая ЭДТК. Соответствующие фракции анализировали с помощью 808-ВАСЕ (электрофорез на полиамидном геле с использованием додецилсульфата натрия) и соответственно объединяли. Белок дополнительно очищали с помощью гель-фильтрации на колонке 8ирегбех 200 26/60, приведенной в равновесие со смесью 20 мМ Тп5-С1, рН 7,5, 0,5М ЛаС1, 5% глицерин, 1 мМ ΝαΒ, 5 мМ ДТТ, 1 х полная смесь ингибиторов протеазы, не содержащая ЭДТК. Соответствующие фракции анализировали с помощью 808-ВАСЕ и соответственно объединяли. К объединенным фракциям добавляли такой же объем буфера для диализа (20 мМ ТП8-С1, рН 7,5, 500 мМ №С1, 50% глицерина, 5 мМ ΝαΒ, 5 мМ ДТТ) и затем проводили диализ против буфера для диализа с двумя заменами (одна замена в течение ночи). Белок хранили при -20°С.
Очистка ΡΙ3Κδ.
ΡΙ3Κδ очищали с использованием трех стадий хроматографирования: афинной хроматографии с иммобилизацией ионами металла на Νί-сефарозной смоле (СЕ НеяВНсте), гель-фильтрации с использованием колонки 8ирегбех 200 26/60 (СЕ Нег-ШЬсте) и в заключение с помощью ионного обмена на колонке О-НР (СЕ Нег-ШНс/пе). Все буферы охлаждали до 4°С и лизис проводили при охлаждении льдом. Фракционирование на колонках проводили при комнатной температуре.
Обычно замороженные клетки, взятые из 10 л клеточной культуры Тп5, повторно суспендировали в литическом буфере, содержащем 20 мМ ТП8-С1, рН 7,5, 500 мМ №С1, 5% глицерина, 5 мМ имидазола, 1 мМ ΝαΒ, 0,1 мкг/мл окадаевой кислоты (ОКК), 5 мМ ВМЕ, 1 х полная смесь ингибиторов протеазы, не содержащая ЭДТК (20 таблеток/1 л буфера, ВосЬе АррЬеб 8с1епсез), бензоназу (25 Ед/(мл буфера), ЕМЭ В1О8с1епсе8) при отношении количества таблеток к количеству литического буфера, составляющем 1:10 об./об., и подвергали механическому лизису с помощью 20 циклов обработки плотно пригнанным пестиком. Лизат центрифугировали при 45000 д в течение 30 мин и надосадочную жидкость загружали в предварительно приведенную в равновесие колонку ЕМАС (5 мл смолы/100 мл лизата). Колонку промывали с помощью равного 3-5 об. колонки количества литического буфера, затем второй раз промывали с помощью равного 3-5 об. колонки количества смеси 20 мМ Тп5-С1, рН 7,5, 500 мМ №С1, 5% глицерина, 40 мМ имидазола, 1 мМ ΝαΒ, 0,1 мкг/мл ОКК, 5 мМ ВМЕ, 1 х полная смесь ингибиторов протеазы, не содержащая ЭДТК. Белок элюировали смесью 20 мМ Тп5-С1, рН 7,5, 500 мМ №С1, 5% глицерина, 250 мМ имидазола, 1 мМ ΝαΒ, 0,1 мкг/мл ОКК, 5 мМ ВМЕ, 1 х полная смесь ингибиторов протеазы, не содержащая ЭДТК. Соответствующие фракции анализировали с помощью 8Э8-ЕАСЕ и соответственно объединяли. Белок дополнительно очищали с помощью гель-фильтрации на колонке 8ирегбех 200, приведенной в равновесие со смесью 20 мМ Тп5-С1, рН 7,5, 500 мМ №С1, 5% глицерина, 1 мМ ΝαΒ, 0,1 мкг/мл ОКК, 5 мМ ДТТ, 1 х полная смесь ингибиторов протеазы, не содержащая ЭДТК. Соответствующие фракции анализировали с помощью 8Э8-ЕАСЕ и соответственно объединяли. Эти фракции разводили буфером А, содержащим 20 мМ Тп5-С1, рН 8,2, 5% глицерина, 1 мМ ΝαΒ, 0,1 мкг/мл ОКК, 5 мМ ДТТ при отношении количества фракций к количеству буфера, равном 1:10 об./об., и загружали в подготовленную колонку О-НЕ. После завершения загрузки образца промывали с помощью равного 3-5 об. колонки количества буфера А и 5% буфера В, содержащего 20 мМ Тп5-С1, рН 8,2, 1М №С1, 5% глицерина, 1 мМ ΝαΒ, 0,1 мкг/мл ОКК, 5 мМ ДТТ. Белок элюировали в градиентном режиме 5-30% буфера В. Обычно белок элюировался при ~200 мМ №С1. Соответствующие фракции анализировали с помощью 8Ό8ΡΑСΕ и соответственно объединяли. К объединенным фракциям добавляли такой же объем буфера для диализа (20 мМ Тп5-С1, рН 7,5, 500 мМ №С1, 50% глицерина, 1 мМ ΝαΒ, 0,1 мкг/мл ОКК, 5 мМ ДТТ) и затем проводили диализ против буфера для диализа с двумя заменами (одна замена в течение ночи). Белок хранили при -20°С.
С помощью описанных выше исследований получены следующие результаты.
- 68 018863
Пример Р13Ка/1С5О [мкмоль/л] Р13КЬ/1С50 [мкмоль/л] Р13Кб/1Сзо [мкмоль/л] Р13Кё/1С5о [мкмоль/л]
1 0,014 4,428 0,971 0,680
27 0,081 5,200 0,271 1,563
12 0,010 3,874 0,197 0,352
35 0,006 0,860 0,029 0,360
15 0,008 1,212 0,077 1,097
13 0,013 4,491 0,161 0,183
3 0,067 2,301 0,432 0,362
5 0,044 3,905 0,648 2,047
37 0,039 5,521 0,386 4,447
29 0,056 6,175 ' 0,804 0,684
18 0,019 4,137 0,538 0,612
51 0,113 8,838 0,690 3,480
47 0,094 2,903 0,156 1,875
59 0,064 3,497 0,881 0,917
64 0,010 0,692 0,032 0,451
61 0,072 6,113 0,901 1,517
66 0,013 2,740 0,298 0,435
42 0,012 3,165 0,289 0,858
63 0,016 1,2 0,098 0,79
Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, в частности предпочтительные соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, например, по данным биохимического исследования обладают по отношению к ΡΙ3Κα большей селективностью, чем по отношению к подтипам β, и/или δ, и/или γ. По данным исследования с использованием клеток эти соединения также предпочтительно обладают по отношению к ΡΙ3Κα большей селективностью, чем по отношению к подтипам β, и/или δ, и/или γ.
Пример В. Определение метаболического клиренса ίη νίίτο.
Аббревиатуры.
АЦН - ацетонитрил,
ВРМВ - всасывание, распределение, метаболизм и выведение,
АУП - автоматическое устройство для позиционирования лабораторного оборудования, %В - содержание растворителя В в % при ВЭЖХ,
БП - биологическое превращение (или метаболическая стабильность, или стабильность микросом), |С|1=0 - начальная (в момент времени 0) концентрация ИС ίη νίίτο,
СЬЬ - печеночный клиренс (мл/мин/кг),
СЫп1 - собственная скорость выведения (мкл реакционной смеси/мин/мг микросомного белка),
СЬ1п1,8 - собственная скорость выведения в пересчете на массу печени (мл реакционной смеси/мин/г печени),
Супо - яванский макак,
СУР(§) - цитохром(ы) Р450,
ΌίΗ2Θ - деионизированная вода,
ЕКЬ - коэффициент очищения в печени,
ИЭР - ионизация электрораспылением, &Ь - свободная фракция лекарственного средства в крови или плазме, £цт - свободная фракция лекарственного средства в микросомах,
ВС - внутренний стандарт, кт1с - скорость выведения для микросом,
ΚΡί - 0,05М буфер на основе фосфата калия, рН 7,4,
ЖХ-МС/МС - жидкостная хроматография с тандемной масс-спектрометрией,
ПОБ - предел обнаружения,
М - содержание микросомного белка при инкубации (мг/мл),
ΝΛΩΡΗ - β-никотинамидадениндинуклеотидфосфат, восстановленная форма,
НХС - новое химическое соединение,
НСС - неспецифическое связывание,
011 - кровоток в воротной вене (мл/мин/кг), об/мин - оборотов в минуту,
СО - стандартное отклонение,
8-Ό - 8ргадие-0аМеу,
8Р1 - коэффициент пересчета: миллиграммов микросомного белка на 1 г печени,
8Р2 - коэффициент пересчета: граммов печени на 1 кг массы тела животного, !1/2 - период полувыведения 1п νίίτο (мин),
- 69 018863
ИС - исследуемое соединение,
УДФГК - уридин-5'-дифосфоглюкуроновая кислота,
УГТ - уридин-5'-дифосфатглюкуронозилтрансферазы,
V - объем инкубируемой реакционной смеси (мкл).
Конечные концентрации исследуемого соединения и белка, а также длительность инкубации приведены ниже (табл. 1). Низкие концентрации исследуемого соединения выбраны для того, чтобы можно было использовать допущение о том, что кинетики реакций рассчитываются при концентрациях, меньших (или примерно равных) Кт. Известно, что ДМСО оказывает ингибирующее воздействие на активность СУР. Поэтому концентрация ДМСО в среде для инкубирования была ограничена значением, равным 0,01% (об./об.), чтобы мешающее влияние на метаболизм было сведено к минимуму.
Таблица 1
Конечные компоненты реакционной смеси и концентрации при инкубации для исследования метаболического клиренса
Компоненты реакционной смеси
0,05М буфер на основе фосфата калия, рН 7,4
М8С12
ΝΑϋΡΗ
УДФГК3
Аламетацин3
Микросомы печени
Исследуемое соединение
ΟΑΝ
ДМСО (растворитель исследуемого соединения)
Конечная концентрация в реакционной смеси_____________________________ мМ
2,0 мМ
1,0 мМ
1,0 мМ мкг/мг микросом печени
0,5 мг/мл
1,0 мкМ
0,06% (об./об.)
0,01% (об./об.) а Оптимальные компоненты, необходимые только для восстановления активности УГТ (уридин-5'-дифосфатглюкуронозилтрансфераз)
Типичный эксперимент проводят в 96-луночных планшетах при инкубировании со встряхиванием при 37°С. Скорость метаболического выведения ίη уйго определяют по данным, собранным в 4 момента времени (например, 0, 5, 15 и 30 мин), при реакции с участием кофактора (кофакторов) (ЫАОРН и/или УДФГК). Использующееся в качестве отрицательного контроля инкубирование в течение 30 мин (без кофактора) также проводили для оценки не связанных с СУР характеристик стабильности (например, химической нестабильности, не зависящего от СУР метаболизма). Обычно ИС в 10 мМ ДМСО разводят в соотношении 1:1000 в 0,6% АЦН (об./об.) в П1Н2О до 10 мкМ. Непосредственно перед проведением эксперимента 1,25 мг/мл микросомного белка суспендируют в 50 мМ КР1. Для оценки опосредуемого с помощью УГТ метаболизма суспензию сначала можно предварительно обработать путем проводимой в течение 5 мин на льду инкубации с аламетицином (25 мкг/мг микросомного белка). ИС (35 мкл) добавляют к 140 мкл суспензии микросом и получают 175 мкл смеси фермент-субстрат. Эту смесь ферментсубстрат предварительно инкубируют в течение 15 мин при 37°С. Инкубирование отрицательного контроля проводят в течение 30 мин путем объединения 25 мкл смеси фермент-субстрат с таким же объемом 50 мМ КР1, содерщего 4 мМ МдС12. После инкубации в течение 30 мин при 37°С реакцию останавливают путем добавления 50 мкл АЦН, содержащего внутренний стандарт МС (2 мкМ алпренолола). В момент времени Т=0 мин проводят обработку путем объединения 25 мкл смеси фермент-субстрат непосредственно с 50 мкл АЦН, содержащего внутренний стандарт МС (2 мкМ алпренолола). Добавляют 25 мкл раствора кофактора (2 мМ ЫАОРН в 50 мМ КР1 с добавлением 4 мМ МдС12; необязательно с включением 2 мМ УДФГК для исследований СУР+УГТ) для стимулирования полной остановки реакции.
Реакции в объеме в остальные моменты времени инициируют путем добавления 125 мкл раствора кофактора (2 мМ ЫАОРН в 50 мМ КР1 с добавлением 4 мМ МдС12) к оставшимся 125 мкл смеси фермент-субстрат. Для изучения метаболизма УГТ в раствор кофактора также включают 2 мМ УДФГК. В заданные моменты времени реакции (например, 5, 15, 30 мин) отбирают аликвоты реакционной смеси (50 мкл) и реакции останавливают путем добавления ацетонитрила (50 мкл), содержащего внутренний стандарт для масс-спектрометрии (2 мкМ алпренолола). Все образцы центрифугируют при ~3400 хд при 4°С в течение 10 мин, надосадочные жидкости исследуют с помощью ЖХ-МС/МС для количественного определения оставшегося ИС. Выраженное в процентах содержание ИС в пересчете на содержание в момент времени 0 используют для оценки константы скорости выведения (ктю) ίη уйго, которую можно использовать для расчета скоростей метаболического выведения ίη νίϋΌ.
Анализ образцов проводят с помощью системы высокоэффективной жидкостной хроматографиитандемной масс-спектрометрии (ЖХ/МС), включающей масс-спектрометр Аа!ег8 ОиаИго Ргет1еге, источник ионов ИЭР, автоматический пробоотборник СТС-НТ8 Ра1 и насос АдПеп! ЬС. Образцы разделяют на колонке АПапПс С18, 2,1x30 мм, 3,5 мкм с использованием резкого градиентного режима для подвиж
- 70 018863 ной фазы, представленного в табл. 2. Подвижная фаза А включает очищенную воду, содержащую 10 мМ формиата аммония. Подвижная фаза В включает ацетонитрил, содержащий 0,01% муравьиной кислоты. Скорость потока равна 1 мл/мин. Инжектируемый объем равен 10 мкл. Для очистки образца продукты элюирования в течение первых 30 с удаляют как отходы. Соединения детектируют с использованием программного обеспечения Ма88Ьупх/ОиапЬупх, с помощью которого накапливаются данные по интенсивностям для всех фрагментов, связанных с исследуемым соединением. После сбора необработанных данных программное обеспечение при необходимости может объединить профили до 3 фрагментов. Обычно интегрируют пик фрагмента, обладающий наибольшей интенсивностью.
Таблица 2 Градиентный режим для подвижной фазы для ВЭЖХ
Время (мин) %В
0,05
0,25
0,8595
1,0295
1,055
Каждую скорость выведения микросом, кт1с, определяют по построенной по 4 точкам зависимости выведения, определяемой однократно. Необработанные данные ЖХ-МС/МС для плато реакции пересчитывают в интегрированные площади пиков анализируемых веществ для ИС и ВС. Для проведения стандартизованного сопоставления данных эти значения можно пересчитать в значения отношений площадей пиков анализируемое вещество:ВС.
Строят зависимость натурального логарифма, выраженного в процентах содержания ИС от времени протекания реакции (например, в моменты времени 0, 5, 20 или 30 мин), по сравнению с моментом времени 0 (на основании отношения площадей пиков). Наклон этой зависимости клиренса, кт1с, используют для расчета период полувыведения ίη νίΐτο, ΐ 1/2, с помощью уравнения (1). Для рассмотрения линейной кинетики реакции, когда это возможно, данные, соответствующие содержанию ИС, составляющему <10%, исключают из зависимости для клиренса. Значение 1 1/2 для реакции является ключевым показателем, использующимся для расчета СЫп1 (уравнение 2)
Уравнение (1): 1!/2 = 0,693/-кт1с;
Уравнение (2): С1ш1 = 0,693/-кт1с · У/М.
С помощью описанной выше методики получены следующие результаты.
Пример СУР Ме(СЬ-В.а/СЬ(1п1) [мкл.мин'1.мг'1] СУР Ме(СЬ-Ни/СЬ(1пО г -1 -Ιί [мкл.МИН .МГ 1
сравнительный пример
Ψ02004/096797, № 133 56 37
примеры, соответствующие настоящему изобретению
15 29 33
61 22 19
55 29 27
Пример С. Исследование ингибирования мутантов ΡΙ3Κα Е545К и Н1047В с помощью люминесцентного анализа с использованием люциферазы.
Люминесцентный анализ является общепринятой методикой для определения концентрации АТФ (аденозинтрифосфат) и поэтому его можно использовать для оценки активности многих киназ независимо от их субстрата. Люминесцентный анализ киназы Кша8е61о (Рготеда, Май180пЖ1, И8А) представляет собой гомогенную методику НТ8 определения активности киназы путем количественного определения количества АТФ, оставшегося в растворе после реакции киназы.
Фосфоинозит-3-киназу инкубировали при комнатной температуре в 50 мкл среды, содержащей 1 мкМ АТФ, 5 мМ МдС12, 50 мМ №С1, 5 мкг/мл фосфатидилинозита сои (ΛναηΙί Ро1аг 11р1й8, Са1. № 840044С), 0,015% октоглюкозида (81§та, Са1. № 09882), 0,01% ХЛАПС, 1 мМ ДТТ, 2,5% ДМСО и 10 мМ ТГ18-НС1 рН 7,5. Реакцию киназы инициировали путем добавления АТФ (предварительная инкубация фермента с ингибиторов в течение 15 мин) и останавливали через 1 ч с помощью 50 мкл К1па8еС1о® (Рготеда, са1. № У6714) и интенсивность люминесценции определяли с помощью считывающего устройства У1с1ог II (интегрирование в течение 0,1 с). Зависимости аппроксимировали с помощью нелинейной регрессии с использованием логистического уравнения (тойе1 205 о£ ХЬД1®, ΙΌ Ви8ше88 8о1и1юп8,
- 71 018863
6ш16£ог6, υΚ).
Принцип люминесцентного анализа (Кта§еС1о): ноГ>2у-^соон \з 3 + АТР + О;
Люцифераз Ο
Μο^
НгО + ¢0: + ΡΡί + ΑΜΦ* ЬУ
0“ люциферин окисленный люциферин
С использованием описанной выше системы исследования и белков ΡΙ3Κ, полученных из конструкций, приведенных в представленной ниже таблице, оценивали ингибирующую активность по отношению к мутантной и дикого типа ΡΙ3Κα. Результаты приведены в представленной ниже таблице.
Тип Код Конструкция
Дикий ВУ1075 р8 5 ϊ 8Н2(461 -568)-000000000000-р 110« П (21 -1068)-
ТИП ΗΪ3
Е545К ВУ1147 ρ85ί8Η2(461-568)-ΟΟΙ8ΟΟΟΟΟΙΜν-ρ110α(21-Ε542Κ- 1068)-Ηίϊ
Η1047В ΒΥ1097 р8518Н2(461-568)-СС180С0СО1МУ-р110α(21-Η1047Β- 1068)-ΗΪ8
Ингибирование мутантной и дикого типа ΡΙ3Κ-α.
Пример Р13К-альфа дикого типа Р13К-альфа Е545К. Р13К-альфа Н1047В.
1Сзо в нМ
5 8,2 6,7 7,7
15 4,6 4,0 4,8
61 3,9 2,7 3,6
ВУ1147. Активирующую мутацию Ε545Κ, обнаруживающуюся при многих типах рака, вводили в ΟΚΡ318 с помощью сайт-специфического мутагенеза с использованием набора для проведения мутагенеза ОшскСНапде ХЬ (81га1адепе). По методике, рекомендованной изготовителем, генерировали мутагенные праймеры д^6152-р15 (5’-СΤСΤСΤ6ΑΑΑΤСΑСΤΑΑ6СΑ66Α6ΑΑΑ6ΑΤΤΤΤ-3’) (8Ер ΙΌ ΝΟ: 21) и д^6152-р16 (5'-ΑΑΑΑΤСΤΤΤСΤССΤССΤΤΑСΤСΑΤΤΤСΑСΑСΑС-3') (8Ер ΙΌ ΝΟ: 22) ΟΚΤ544. Этот клон проверяли путем секвенирования и использовали в реакции Са1е\уау ЬК ^пуйгодеп) для переноса вставки в Са1е\уау адаптированный вектор рВ1иеВас4.5 (Шуйгодеп) с целью генерации вектора экспрессии бакуловируса ЬК561.
Домен киназы.
Последовательность белков для ВУ1147:
ΜΚΕΥΒΚΕΥΕΕ ΥΤΚΤ8ζ)ΕΙ0Μ ΚΚΤΑΙΕΑΡΝΕ Т1К1РЕЕ0С0 Τ0ΕΚΥ8ΚΕΥΙ
ΕΚΓΚΚΕΟΝΕΚ
ΕΙ0Κ.ΙΜΗΝΥΟ КЬКЗШЗЕП Б8К.ЕКЕЕЕ0Е ΚΚςΑΑΕΥΚΕΙ 0ΚΚ.ΜΝ8ΙΚΡ0 οιεαοοοοίΜ
121 УЕУЕСЕЬРКО М1УТЕЕСЬК.Е АТЫТ1КНЕЕ ΡΚΕΑΚΚΥΡΕΗ 0ЬЕ0БЕ88У1
РУ8УТ0ЕАЕК
181 ЕЕРРБЕТККЬ СБЕКХРОРРЬ ΚνίΕΡΥΟΝΚΕ ΕΚΙΕΝΚΕΙΟΡ АЮМРУСЕРБ
МУКБРЕУбЮЕ
241 ККЫЫЧУСКЕ АУБЕКВЕЖР ΗδΚΑΜΥνΥΡΡ ΝνΕδδΡΕΕΡΚ ηιυνκεβκοο πννίλννινδ
301 ΡΝΝΒΚΟΚΥΤΕ КШНБСУРЕО У1АЕА1КККТ К8МЕЬ88ЕрЕ КЬСУЕЕУрСК
У1ЕКУС0СБЕ
361 ΥΕίΕΚΥΡΕδΟ УКУ1К8С1МЬ ΟΚΜΡΝΕΜΕΜΑ КЕ8ЕУ8ОЬРМ
ΒΌΡΤΜΡ8Υ8Κ. ΚΙ8ΤΑΤΡΥΜΝ
421 ОЕТЗТКЗЬХУУ ШЗАЬШКЛ ΌΑΤΥνΝνΝΙΚ. Б1БК1УУКТС ΙΥΗΟΟΕΡΕΟΒ
ΝνΝΤΟΚνΡΌδ
481 ΝΡΚΨΝΕ'ΛΈΝΥ ΟΙΥΙΡΒΕΡΚ.Α АКЕСЕ81С8У ΚΟΚΚΟΑΚΕΕΗ
СРЬААУСРПМЬ РВУТБТЬУ8С
541 КМАЬЫЕ\УРУР ΗΟΕΕΒΕΕΝΡΙ ΟνΤΟδΝΡΝΚΕ ТРСЬЕЬЕРБХУ
Р88УУКРРВМ 8У1ЕЕНАРПУ8
601 ν8ΚΕΑΟΕ8Υ8 ΗΑΟΕδΝΚΕΑΚ ΒΝΕΕΚΕΝΒΚΕ 0ЕКА18ТКБР Е8Е1ТК0ЕКБ
ΓΕ^δΗΚΉΥϋν
661 Т1РЕ1БРКЕЕ ΕδνΚΨΝδΚΟΕ УАОМУСЬУКБ ХУРР1КРЕрАМ ΕΕΕΟΟΝΥΡϋΡ
МУКОРАУКСЕ
721 ЕКУЬТББКЬЗ ОУЫОЬУОУЬ ΚΥΕΟΥΕΒΝΕ,Ε УКРЬЬККАЕТ
ΝΟΚΙΟΗΡΡΡλν НЬК8ЕМН1ЧКТ
781 νδΟΚΡΟΕΙΧΕ ЗУСКАСОМУЬ КНШКОУЕАМ ΕΚΧΙΝΕΤΌΙΕ коеккбеток уомкрьуеом
- 72 018863
841 Р. к Ρ ΓίΓΜΟΑ I .<_) СРЬЗРЬИРАН ОЕОКЕКЕЕЕС ΚΙΜ88ΑΚΜΈ νΈΝΨΕΝΡΏΙΜ 8ΕΕΕΙΌΝΝΕΙ
901 ΙΡΚΝΟϋϋΕΚΟ ОМЬТЬЦПК! МЕИ1\\’<,)ХОС1. ОЬКМЕРУОСЬ ЗКЮСУОЫЕ ννΚΝ8ΗΤΙΜζ>
961 ЮСКаОЬКОА ЬОРИЗНТЪНО ΨΕΚϋΚΝΚΟΕΙ УОААГОЬРТК
ЗСАСУСУАТР ΙΕΟΙΟβΚΗΝδ
1021 ΝΙΜΥΚΟΟΟΡΙ. РНГОРОНРЕО ΗΚΚΚΚΡΟΥΚΚ ΕΚ V ΡIV Ι.ΤΕ) |>
РЫУ18КОА0 ЕСТКТКЕРЕК.
1081 ΐρΡΜΕΥΚΛΥΕ ΑΙΚΟΗΑΝΕΙΊ МЬЕ8ММЬ<380 МРЕЬЦ8РВО1
АУЖКТЬАЬО КТЕО Е АI .ΙΥΙ·
1141 ΜΚΟΜΝϋΑΗΗΟ «ΑΥΤ Ι КМГЖП ΗΤΙΚΟΙΙΛΕΝΕ ЬООАНННННН (8Е<2 ГО ΝΟ: 23).
ВУ1097. Активирующую мутацию Н1047К, обнаруживающуюся при многих типах рака, вводили в ОКГ318 с помощью сайт-специфического мутагенеза с использованием набора для проведения мутагенеза ОшскСйапде ХБ (81га1адепе). По методике, рекомендованной изготовителем, генерировали мутагенные праймеры ё^С152-р07 (5'-САААТСААТСАТССАССТСАТССТСССТССАСА-3') (8ЕО ΙΌ ΝΘ: 24) и ё^С152-р11 (5'-ТСТССАСССАССАТСАССТССАТСАТТСАТТТС-3') (БЕр ΙΌ ^: 25) ОКБ396. Этот клон проверяли путем секвенирования и использовали в реакции Са1е\тау БК (1пуфгодеп) для переноса вставки в Са1е\тау адаптированный вектор рВ1иеВас4.5 (1пу11годеп) с целью генерации вектора экспрессии бакуловируса БК480.
Домен киназы.
Последовательность белков для ВУ1097:
МКЕУОКЬУЕЕ УТКТЗЦЕЮМ ΚΚΤΑΙΕΑΡΝΕ Т1К1ЕЕЕОСО ΤΟΕΚΥ8ΚΕΥΙ
ΕΚΡΚΚΕΟΝΕΚ
ΕΙΟΚΙΜΗΝΥϋ КЬК8К18Е11 ОЗКНКЕЕЕОЬ ΚΚΟΑΑΕΥΚ.ΕΙ ΟΚΚΜΝ3ΙΚΡ6 οιβοοοοοιμ
121 УЕУЕСЬЬРЫО ΜίνΤίΕΟίΚΕ АТЫТ1КНЕЕ ΡΚΕΑΚΚΥΡίΗ ΟΕΕςϋΕδδΥΙ
РУ8УТОЕАЕК
181 ЕЕГЕОЕТКЕЬ СОЕКЕРОРГЬ ΚνίΕΡνΟΝΚΕ ΕΚΙΕΝΚΕΙΟΓ АЮМРУСЕГО МУКОРЕУОЭЕ
241 ВКРПЬОТСКЕ Л УПЕТПИ.ЖР ΗδΚΑΜΥνΥΡΡ ΝνΕδδΡΕίΡΚ
ΗΐΥΝΚίοκορ πννπννινδ
301 ΡΝΝϋΚ,ρΚΥΤΕ ΚΙΝΗϋΟνΡΕΟ У1АЕА1ККК.Т КЗМЕЬЗЗЕРЬ КЕСУЬЕУООК
УЮКУСОСРЕ
361 УЕЬЕКУРЕ8<2 УКУЦЩСШЬ ОК.МРЫЕМЬМА КЕ8ЬУ8рЬРМ
ЦСРТМР8У8К ΒΙ8ΤΑΤΡΥΜΝ
421 ОЕТЗТКЗЬ^У ΙΝδΑίΚΊΚΙΕ ΟΑΤΥνΝνΝΙΚ. ОЮК1УУКТС 1УНОаЕРЬСО
ΝνΝΤ(}ΚνΡ€8
481 ΝΡΚ\νΝΕ\ΥΕΝΥ ΟΙΥΙΡΟίΡΚΑ АК.ЬСЬ81С8У КОККСАКЕЕН
СРЬАЧУОШРЩ ΡϋΥΤϋΤΕνδΟ
541 КМАЫЧЬХУРУР ΗΟΕΕΠίΕΝΡΙ ΟνΤΟδΝΡΝΚΕ ТРСЕЕЬЕРП\У
Ρ88ννΚΡΡΟΜ 8νΐΕΕΗΑΝν/8
601 У8КЕАОР8У8 ΗΛΟίδΝΕίΑΚ ΠΝΕΕΓ2ΕΝΓ1ΚΕ ΟΕΚ.ΑΙ8ΤΚΟΡ ίδΕΙΤΕΟΕΚΌ
РЕХУЗНКНУСУ
661 Т1РЕ1ЬРКШ Ε8νΚλνΝ8Ρ.ϋΕ УАОМУСЬУКЦ λΥΡΡΙΚΡΕΟΑΜ ΕΙΧΟΟΝΥΡΟΡ
МУНОГАУКСЕ
721 ЕКУЬТООКЕВ <2ΥΕΙ(2Ενς>νΕ ΚΥΕΟΥΕϋΝΕΕ УВРЬЕККАЬТ
ΝΟΚΙΟΗΡΕΡΑΥ ΗΕΚ8ΕΜΗΝΚΤ
781 УЯОВРОЕЕЕЕ ΒΥΟΒΑΟΟΜΥί КНЫЧЕЦУЕАМ ЕКЬШЕТОЩ ΚΟΕΚΚϋΕΤΟΚ УОМКРЬУЕОМ
841 ΕΙΚΡΟΡΜΟΑίΟ ΟΡΕ8ΡΕΝΡΑΗ <2ЕО1ЧЕР.ЕЕЕС В1М88АКК.РЬ ’λ'ΕΝν.ΈΝΡΠΙΜ 8ΕΕΕΡΟΝΝΕΙ
901 ΙΡΚΝΟΟΟΕΚς ΟΜίΤίρίΙΚΙ ΜΕΡ1ΐν(}Ν(3ΟΕ ОЕКМЬРУбСХ 8ЮОСУОЕ1Е ννΚΝ8ΗΤΙΜ<2
961 ЮСКОСЬКОА Еррызнтшр ν,Τ.ΚΟΚΝΚΟΙΤ ΥΟΑΛΙΟΕΕΤΡ
ЗСАСУСУАТР ΙίαίΟΟΚΗΝδ
1021 ΝΙΜνΚϋΟΟΟΕ РНЮГОНРЬО ΗΚΚΚΚΡΟΥΚΒ ΕΚΎΡΕνίΤΟϋ
РЫУ18КСА0 ЕСТК.ТВ.ЕРЕВ
1081 ΡΟΕΜεΥΚΑΥί ΑΙΚ.ΟΗΑΝΕΕ1 ΝίΡ8ΜΜΕΟ8Ο МРЕ1Ю8РОО1 ΑΥΙΒΚΤΕΑίΟ ΚΤΕΟΕΑίΕΥΡ
1141 ΜΚΟΜΝΟΑΙΟΙΟ Ο»ΤΤΚΜΟ\νΐΡ ΗΤΙΚΟΗΑΕΝΕ ίΟΟΑΗΗΗΗΗΗ (8ΕΟ Ю
ΝΟ: 26).
- 73 018863 <110> Новартис АГ <120> Органические соединения <130> РАТ052777А <160> 26 <170> РаДепЫп уегзхоп 3.3 <210> 1 <211> 42 <212> ϋΝΑ <213> искусственная <220>
<223> Праймер ПЦР <400>1 дсеадсаДдс дадааеаСда СадаССаСае даадаасаса сс42 <210> 2 <211>45 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> Праймер ПЦР <400>2 дссДссасса ссессдссСд дееЬааСдсе деесаСасдС еедДс45 <210>3 <211>42 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> Праймер ПЦР <400>3
СасеадДссд ссСссассас сессдссДсс ассассСссд сс42 <210>4 <211> 1180 <212> РКТ <213> искусственная <220>
<223> Конструкция киназы ΡΙ3Κ <400> 4
МеС 1 Агд О1и Туг Азр 5 Агд Ьеи Туг <31и <31и 10 Туг ТЬг Агд ТЬг Зег 15 С1п
С1и Не <31п Мед 20 Ьуз Агд ТЬг А1а Не 25 С1и А1а РЬе Азп С1и 30 ТЬг Не
Ьуз Не РЬе С1и <31и С1п Суз С1п ТЬг <31п <31и Агд Туг Зег Ьуз О1и
40 45
Туг Не <Э1и Ьуз РЬе 50 Ьуз Агд <31и СГу 55 Азп С1и Ьуз С1и 60 Не С1п Агд
Не МеД ΗΪ3 Азп Туг Азр Ьуз Ьеи Ьуз Зег Агд Не Зег <31и Не Не
65 70 75 80
Азр Зег Агд Агд Агд Ьеи С1и С1и Азр Ьеи Ьуз Ьуз С1п А1а А1а <31и
85 90 95
Туг Агд <31и Не Азр Ьуз Агд МеЬ Азп Зег Не Ьуз Рго <31у О1у С1у
100 105 110
<31у С1у <31у <31у С1у С1у О1у <31у С1у Ьеи Уа1 <31и Суз Ьеи Ьеи Рго
115 120 125
Азп О1у МеД Не Уа1 ТЬг Ьеи С1и Суз Ьеи Агд С1и А1а ТЬг Ьеи Не
130 135 140
ТЬг Не Ьуз Н13 С1и Ьеи РЬе Ьуз <31и А1а Агд Ьуз Туг Рго Ьеи ΗΪ8
145 150 155 160
О1п Ьеи Ьеи С1п Азр <31и Зег Зег Туг Не РЬе Уа1 Зег Уа1 ТЬг <31п
165 170 175
<31и А1а <31и Агд С1и С1и РЬе РЬе Азр С1и ТЬг Агд Агд Ьеи Суз Азр
180 185 190
Ьеи Агд Ьеи РЬе О1п Рго РЬе Ьеи Ьуз Ча1 Не <31и Рго Уа1 С1у Азп
195 200 205
Агд <31и С1и Ьуз Не Ьеи Азп Агд С1и 11е <31у РЬе А1а Не С1у Мее
210 215 220
Рго Уа1 Суз <31и РЬе Азр МеД Уа1 Ьуз Азр Рго С1и Уа1 С1п Азр РЬе
225 230 235 240
Агд Агд Азп Не Ьеи Азп Уа1 Суз Ьуз С1и А1а Уа1 Азр Ьеи Агд Азр
245 250 255
Ьеи Азп Зег Рго Нхз Зег Агд А1а МеД Туг Уа1 Туг Рго Рго Азп Уа1
260 265 270
<31и Зег Зег Рго 51и Ьеи Рго Ьуз Н15 Не Туг Азп Ьуз Ьеи Азр Ьуз
275 280 285
<31у <31п Не Не Уа1 Уа1 Не Тгр Уа1 Не Уа1 Зег Рго Азп Азп Азр
290 295 300
Ьуз О1п Ьуз Туг ТЬг Ьеи Ьуз Не Азп Ηίε Азр Суз \7а1 Рго (31и С1п
305 310 315 320
Уа1 Не А1а С1и А1а Не Агд Ьуз Ьуз ТЬг Агд Зег МеД Ьеи Ьеи Зег
325 330 335
Зег С1и С1П Ьеи 340 Ьуз ьеи Суз Уа1
Ьеи Ьуз Уа1 355 Суз С1у Суз Азр С1и 360
Зег <31п 370 Туг Ьуз Туг Не Агд 375 Зег
Азп Ьеи 385 МеС Ьеи МеС А1а 390 Ьуз С1и
Азр Суз РЬе ТЬг Мес 405 Рго Зег Туг
Рго Туг Мес Азп 420 <31у <31и ТЬг Зег
Зег А1а Ьеи 435 Агд Не Ьуз Не Ьеи 440
Не Агд 450 Азр Не Азр Ьуз Не 455 Туг
(Пу С1и 465 Рго Ьеи Суз Азр 470 Азп Уа1
Азп Рго Агд Тгр Азп 485 О1и Тгр Ьеи
Ьеи Рго Агд А1а 500 А1а Агд Ьеи Суз
Агд Ьуз <31у 515 А1а Ьуз С1и <31и Низ 520
Азп Ьеи 530 РЬе Азр Туг ТЬг Азр 535 ТЬг
Азп Ьеи 545 Тгр Рго Уа1 Рго 550 ΗΪ3 (31у
(31у Уа1 ТЬг С1у Зег 565 Азп Рго АЗП
С1и РЬе Азр Тгр 580 РЬе Зег Зег Уа1
Не (31и . <31и 595 Н13 А1а Азп Тгр Зег 600
Туг Зег 610 ΗΪ3 А1а С1у Ьеи Зег 615 Азп
Агд 625 С1и . Азп Азр Ьуз <31и 630 <31п Ьеи
Ьеи Зег <31и Не ТЬг 645 <31и <31п С1и
И13 Туг Суз Уа1 660 ТЬг Не Рго <31и
Уа1 Ьуз Тгр 675 Азп Зег Агд Азр <31и 680
Ьуз Азр 690 Тгр Рго Рго Не Ьуз 695 Рго
Суз 705 А5П Туг Рго Азр Рго 710 МеС Уа1
(Э1и Ьуз Туг Ьеи ТЬг 725 Азр Азр Ьуз
Уа1 <31п Уа1 Ьеи 740 Ьуз Туг С1и <31п
РЬе Ьеи Ьеи 755 Ьуз Ьуз А1а Ьеи ТЬг 760
РЬе Тгр 770 Низ Ьеи Ьуз Зег <31и 775 МеС
РЬе 785 <31у Ьеи Ьеи Ьеи <31и 790 Зег Туг
Ьуз Низ Ьеи Азп Агд 805 С1п νηΐ С1и
ТЬг Азр Не Ьеи 820 Ьуз σΐη С1и Ьуз
МеС Ьуз РЬе 835 Ьеи Уа1 σΐυ О1п МеС 840
Ьеи 01п 850 <Э1у РЬе Ьеи Зег Рго 855 Ьеи
Ьеи 865 Агд Ьеи С1и С1и Суз 870 Агд Не
Тгр Ьеи Азп Тгр <31и Азп Рго Азр
Ьеи С1и Туг С1п <31у Ьуз Туг Не
345 350
Туг РЬе Ьеи <31и Ьуз Туг Рго Ьеи 365
Суз 11е МеС Ьеи О1у Агд МеС Рго
380
Зег Ьеи Туг Зег <31п Ьеи Рго МеС
395 400
Зег Агд Агд 11е Зег ТЬг А1а ТЬг
410 415
ТЬг Ьуз Зег Ьеи Тгр Уа1 11е Азп
425 430
Суз А1а ТЬг Туг Уа1 Азп Уа1 Азп
445
Уа1 Агд ТЬг (31у 11е Туг ΗΪ3 С1у
460
Азп ТЬг С1п Агд Уа1 Рго Суз Зег
475 480
Азп Туг Азр 11е Туг Не Рго Азр
490 495
Ьеи Зег 11е Суз Зег Уа1 Ьуз С1у
505 510
Суз Рго Ьеи А1а Тгр <31у Азп Не 525
Ьеи Уа1 Зег <31у Ьуз МеС А1а Ьеи
540
Ьеи С1и Азр Ьеи Ьеи Азп Рго 11е
555 560
Ьуз <31и ТЬг Рго Суз Ьеи С1и Ьеи
570 575
Уа1 Ьуз РЬе Рго Азр МеС Зег Уа1
585 590
Уа1 Зег Агд О1и А1а 31у РЬе Зег
605
Агд Ьеи А1а Агд Азр Азп С1и Ьеи
620
Ьуз А1а 11е Зег ТЬг Агд Азр Рго
635 640
Ьуз Азр РЬе Ьеи Тгр Зег Нхз Агд
650 655
Не Ьеи Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ьеи Зег
665 670 \7а1 А1а С1п МеС Туг Суз Ьеи \7а1
685 <31и С1п А1а МеС С1и Ьеи Ьеи Азр
700
Агд <31у РЬе А1а Уа1 Агд Суз Ьеи
715 720
Ьеи Зег <31п Туг Ьеи Не <31п Ьеи
730 735
Туг Ьеи Азр Азп Ьеи Ьеи Уа1 Агд
745 750
Азп (31п Агд Не С1у Н1з РЬе РЬе 765
Ηίθ Азп Ьуз ТЬг Уа1 Зег <31п Агд
780
Суз Агд А1а Суз С1у МеС Туг Ьеи
795 800
А1а МеС <31и Ьуз Ьеи 11е Азп Ьеи
810 815
Ьуз Азр <31и ТЬг С1п Ьуз Уа1 С1п
825 830
Агд Агд Рго Азр РЬе МеС Азр А1а
845
Азп Рго А1а ΗΪ3 О1п Ьеи (31у Азп
860
МеС Зег Зег А1а Ьуз Агд Рго Ьеи
875 880
Не МеС Зег С1и Ьеи Ьеи РЬе <31п
885 890 895
Азп Азп <Э1и Не Не РЬе Ьуз Азп С1у Азр Азр Ьеи Агд С1п Азр Мер
900 905 910
Ьеи ТЬг Ьеи <31п Не Не Агд Не Мер <31и Азп Не Тгр <31п Азп (31п
915 920 925
<31у Ьеи Азр Ьеи Агд Мер Ьеи Рго Туг <31у Суз Ьеи Зег Не С1у Азр
930 935 940
Суз Уа1 С1у Ьеи Не <31и Уа1 Уа1 Агд Азп Зег Н13 ТЬг Не Мер С1п
945 950 955 960
Не С1п Суз Ьуз О1у <31у Ьеи Ьуз <31у А1а Ьеи О1п РЬе Азп Зег Н13
965 970 975
ТЬг Ьеи Н1з (31п Тгр Ьеи Ьуз Азр Ьуз АЗП Ьуз С1у С1и Не Туг Азр
980 985 990
А1а А1а Не Азр Ьеи РЬе ТЬг Агд Зег Суз А1а С1у Туг Суз Уа1 А1а 995 10001005
ТЬг РЬе 1010 Не Ьеи С1у Не <31у 1015 Азр Агд ΗΪ3 Азп Зег 1020 Азп Не МеР
Уа1 Ьуз Азр Азр С1у С1п Ьеи РЬе Н13 Не Азр РЬе С1у Н13 РЬе
1025 1030 1035
Ьеи Азр Н13 Ьуз Ьуз Ьуз Ьуз РЬе О1у Туг Ьуз Агд <31и Агд Уа1
1040 1045 1050
Рго РЬе Уа1 Ьеи ТЬг С1п Азр РЬе Ьеи Не Уа1 Не Зег Ьуз б1у
1055 1060 1065
А1а С1п (31и Суз ТЬг Ьуз ТЬг Агд С1и РЬе С1и Агд РЬе С1п С1и
1070 1075 1080
Мер Суз Туг Ьуз А1а Туг Ьеи А1а Не Агд <31п Ηί3 А1а Азп Ьеи
1085 1090 1095
РЬе Не Азп Ьеи РЬе Зег Мер МеР Ьеи <31у Зег <31у МеР Рго (31и
1100 1105 1110
Ьеи С1п Зег РЬе Азр Азр Не А1а Туг Не Агд Ьуз ТЬг Ьеи А1а
1115 1120 1125
Ьеи Азр Ьуз ТЬг С1и С1п С1и А1а Ьеи С1и Туг РЬе МеР Ьуз <31п
ИЗО 1135 1140
МеР Азп Азр А1а НЦз ΗΪ3 С1у С1у Тгр ТЬг ТЬг Ьуз МеР Азр Тгр
1145 1150 1155
11е РЬе Нхз ТЬг 11е Ьуз <31η Н13 А1а Ьеи Азп <31и Ней <31у <31у
1160 11651170
А1а Ηίε Ηίδ Нхз Нхз Нхз Н13
11751180 <210?5 <211> 28 <212> ДНК <213 ? искусственная <220?
<223? Праймер ПЦР <400? 5 сдадаарард асадареара сдаадаас <210? б <211? 30 <212? ДНК <213 ? искусственная <220?
<223? Праймер ПЦР <400?6
СддСРСааСд сСдЬСсаРас дСССдСсааС <210?7 <211?76 <212? ДНК <213? искусственная <220?
<223? Праймер ПЦР <400?7 дддасаадСС РдСасааааа адсаддсСас дааддадаЬа Сасараодсд адааеардар 60 адаССаРаСд аадааР76 <210? 8 <211?54 <212? ДНК <213> искусственная <220?
<223? Праймер ПЦР <400?8 асРдаадсаР ссРссРссРс ссссрссрдд РРРааРдсРд ррсарасдрр сдрс54 <210? э <211?54 <212> ДНК <213> искусственная <220?
<223? Праймер ПЦР <400? 9 аРРааассад даддаддадд аддаддаРдс РРсадОРРса РааРдссосс РдсР 54
Ьеи Азр Не Тгр А1а Уа1 Азр бег <31п Не А1а бег 140 Азр б1у бег 11е
130 135
Рго Уа1 Азр РЬе Ьеи Ьеи Рго ТЬг С1у Не Туг Не С1п Ьеи С1и Уа1
145 150 155 160
Рго Агд С1и А1а ТЬг Не бег Туг Не Ьуз <31п Мее Ьеи Тгр Ьуз О1п
165 170 175
Уа1 Н1з Азп Туг Рго Мее РЬе Азп Ьеи Ьеи МеС Азр Не Азр бег Туг
180 185 190
мее РЬе А1а Суз Уа1 Азп С1п ТЬг А1а Уа1 Туг <31и С1и Ьеи <31и Азр
195 200 205
С1и ТЬг Агд Агд Ьеи Суз Азр Уа1 Агд Рго РЬе Ьеи Рго Уа1 Ьеи Ьуз
210 215 220
Ьеи Уа1 ТЬг Агд бег Суз Азр Рго С1у С1и Ьуз Ьеи Азр бег Ьуз Не
225 230 235 240
<31у Уа1 Ьеи Не С1у Ьуз С1у Ьеи Н1з <31и РЬе Азр бег Ьеи Ьуз Азр
245 250 255
Рго С1и Уа1 Азп <31и РЬе Агд Агд Ьуз Мее Агд Ьуз РЬе бег С1и <31и
260 265 270
Ьуз Не Ьеи бег Ьеи Уа1 <Э1у Ьеи бег Тгр Мес Азр Тгр Ьеи Ьуз <31п
275 280 285
ТЬг Туг Рго Рго С1и ΗΪ8 С1и Рго Зег Не Рго <31и Азп Ьеи С1и Азр
2Э0 295 300
Ьуз Ьеи Туг С1у <31у Ьуз Ьеи Не Уа1 А1а Уа1 Н13 РЬе С1и Азп Суз
305 310 315 320
αΐη Азр Уа1 РЬе бег РЬе <31п УаХ Зег Рго Азп МеС Азп Рго Не Ьуз
325 330 335
Уа1 Азп С1и Ьеи А1а Не С1п Ьуз Агд Ьеи ТЬг Не Н13 <31у Ьуз С1и
340 345 350
Азр <31и Уа1 бег Рго Туг Азр Туг Уа1 Ьеи С1п Уа1 Зег С1у Агд Уа1
355 360 365
<31и Туг Уа1 РЬе С1у Азр Ηί3 Рго Ьеи Не С1п РЬе С1п Туг Не Агд
370 375 380
Азп Суз Уа1 Мее Азп Агд А1а Ьеи Рго Н13 РЬе Не Ьеи Уа1 О1и Суз
385 390 395 400
Суз Ьуз Не Ьуз Ьуз мее Туг С1и С1п С1и Мее Не А1а Не С1и А1а
405 410 415
А1а 11е Азп Агд Азп Зег Бег Азп Ьеи Рго Ьеи Рго Ьеи Рго Рго Ьуз
420 425 430
Ьуз ТЬг Агд Не Не бег ΗΪ8 Уа1 Тгр С1и Азп Азп Азп Рго РЬе С1п
435 440 445
Не Уа1 Ьеи \7а1 Ьуз (31у Азп Ьуз Ьеи Азп ТЬг 01и (31и ТЬг Уа1 Ьуз
450 455 460
Уа1 ΗΪ3 Уа1 Агд А1а <31у Ьеи РЬе Ηίε (31у ТЬг С1и Ьеи Ьеи Суз Ьуз
465 470 475 480
ТЬг Не Уа1 Зег Зег <31и Уа1 Зег 31у Ьуз Азп Азр Н13 Не Тгр Азп
485 490 495
С1и Рго Ьеи С1и РЬе Азр Не Азп Не Суз Азр Ьеи Рго Агд МеС А1а
500 505 510
Агд Ьеи Суз РЬе А1а Уа1 Туг А1а Уа1 Ьеи Азр Ьуз Уа1 Ьуз ТЬг Ьуз
515 520 525
Ьуз Зег ТЬг Ьуз ТЬг Не Азп Рго Бег Ьуз Туг С1п ТЬг 11е Агд Ьуз
530 535 540
А1а <31у Ьуз ν»1 Н1з Туг РГО Уа1 А1а Тгр νβΐ Азп ТЬг Мес Уа1 РЬе
545 550 555 560
Азр РЬе Ьуз С1у <31п Ьеи Агд ТЬг <31у Азр Не 11е Ьеи Н13 бег Тгр
565 570 575
Зег бег РЬе Рго Азр С1и Ьеи С1и С1и Мес Ьеи Азп Рго Мес С1у ТЬг
580 585 590
Уа1 С1п ТЬг Азп Рго Туг ТЬг О1и Азп А1а ТЬг А1а Ьеи Н1з Уа1 Ьуз
595 600 605
РЬе Рго С1и Азп Ьуз Ьуз С1п Рго Туг Туг Туг Рго Рго РЬе Азр Ьуз
610 615 620
Не Не С1и Ьуз А1а А1а (31и Не А1а Зег Зег Азр Зег А1а Азп Уа1
625 630 635 640
Зег Зег Агд <31у О1у Ьуз Ьуз РЬе Ьеи РГО Уа1 Ьеи Ьуз (31и Не Ьеи
645 650 655
Азр Агд Азр Рго Ьеи Зег <Э1п Ьеи Суз С1и Азп <31и МеС Азр Ьеи Не
660 665 670
Тгр ТЬг Ьеи Агд <31п Азр Суз Агд О1и 11е РЬе Рго О1п Зег Ьеи Рго
675 680 685
Ъуз Ьей Ьей 690 Ьей Бег 11е Ьуз Тгр Азп Ьуз Ьей <51и Азр Уа1 А1а СЪп
695 700
Ъеи <Э1П А1а Ьей Ьей С1п 11е Тгр Рго Ьуз Ьей Рго Рго Агд С1и А1а
705 710 715 720
Ьей <51и Ьей Ьей Азр РЬе Азп Туг Рго Азр <31п Туг νβΐ Агд <31и Туг
725 730 735
А1а Уа1 С1у Суз Ъеи Агд С1п МеС Зег Азр С1и <31и Ьей 5ег С1п Туг
740 745 750
Ьей Ьей С1П Ьей Уа1 <31п Уа1 Ъеи ьуз Туг О1и РГО РЬе Ьей Азр Суз
755 760 765
А1а ьей Бег Агд РЬе Ьей ьей С1и Агд А1а Ъеи О1у Азп Агд Агд 11е
770 775 780
<31у С1п РЬе Ьей РЬе Тгр ΗΪ3 Ьей Агд Бег <51и ν*1 Н13 Не Рго А1а
785 790 795 800
Уа1 Бег Уа1 31п РЬе С1у Уа1 Г1е Ьей С1и А1а Туг Суз Агд (31у Зег
805 810 815
Уа1 <31у НЬз Мес Ьуз Уа1 Ъеи Бег Ьуз С1п Уа1 (31и А1а Ъеи АЗП Ъуз
820 825 830
Ъеи Ьуз ТЬг Ьей Азп Бег Ъеи 11е Ьуз Ъеи Азп А1а Уа1 Ъуз Ъеи Азп
835 840 845
Агд А1а Ьуз О1у Ьуз СЪи А1а Мес Н1з ТЬг Суз Ьей Ьуз <31п Бег А1а
850 855 860
Туг Агд □1и А1а Ъеи Бег Азр Ьей σΐη Бег Рго Ьей Азп Рго Суз Уа1
865 870 875 880
Т1е Ьей Бег <31и Ьей Туг Уа1 С31и Ьуз Суз Ьуз Туг МеС Азр Бег Ъуз
885 890 895
Мес Ьуз Рго Ьей Тгр Ъеи Уа1 Туг Азп Азп Ьуз νβΐ РЬе б1у <31и Азр
900 905 910
5ег Уа1 аьу Уа1 Не РЬе Ьуз Азп 01у Азр Азр Ьей Агд <Э1п Азр МеС
915 920 925
ьей ТЬг Ьей С1п МеС Ьей Агд Ьей мес Азр Ьей Ьей Тгр Ьуз С1и А1а
930 935 940
О1у Ьей Азр Ьей Агд МеЬ Ьей Рго Туг С1у Суз Ьей А1а ТЬг <31у Азр
945 950 955 960
Агд Зег <31у Ьей Не С1и Уа1 Уа1 Зег ТЬг Зег <31и ТЬг 11е А1а Азр 965 970975
11е С1п Ьей Азп Зег Зег Азп Уа1 А1а А1а А1а А1а А1а РЬе Азп Ьуз 980 985990
Азр А1а Ьей Беи Азп Тгр Ьей Ьуз С1и Туг Азп Зег О1у Азр Азр Ьей 995 10001005
Азр Агд А1а 11е <31и <31и РЬе 1015 ТЬг Ьей Зег Суз А1а 1020 <31у Туг Суз
1010
Уа1 А1а Зег Туг Уа1 Ьей С1у Не С1у Азр Агд Н13 Зег Азр Азп
1025 1030 1035
11е МеС Уа1 Ьуз Ьуз ТЬг С1у С1п Ьей РЬе Н13 Не Азр РЬе О1у
1040 1045 1050
Н13 Не Ьей С1у Азп РЬе Ьуз Зег Ьуз РЬе <31у Не Ьуз Агд <31и
1055 1060 1065
Агд Уа1 Рго РЬе Не Ьей ТЬг Туг Азр РЬе Не ΗΪ3 Уа1 Не <31п
1070 1075 1080
σΐη <31у Ьуз ТЬг <31у Азп ТЬг <31и Ьуз РЬе С1у Агд РЬе Агд С1п
1085 1090 1095
Суз Суз С1и Азр А1а Туг Ьей Не Ъеи Агд Агд Ηί3 С1у Азп Ьей
1100 1105 1110
РЬе Не ТЬг Ьей РЬе А1а Ьей МеС Ьей ТЬг А1а С1у Ьей Рго С1и
1115 1120 1125
Ьей ТЬг 5ег ν&1 Ьуз Азр Не <31п Туг Ьей Ьуз Азр Зег Ьей А1а
ИЗО 1135 1140
Ьей С1у Ьуз Зег <31и (31и С1и А1а Ъеи Ьуз С1П РЬе Ьуз С1п Ьуз
1145 1150 1155
РЬе Азр С1и А1а Ьей Агд <31и Зег Тгр ТЬг ТЬг Ьуз Уа1 Азп Тгр
1160 1165 1170
МеС А1а Ηίε ТЬг Уа1 Агд Ьуз Азр Туг Агд Зег С1у А1а Н13 ΗΪ3
1175 1180 1185
Н1з Ηί3 Н13 Н13 С1у А1а
1190
<210> <211> <212> <213> 13 966 РКТ искусственная
<220>
<222 !> Конструкция кинаг <ы ΡΙ ЗК
<40С >> 13
МеС 5ег <31и 31и Зег С1п А1а РЬе б1п Агд С1п Ьеи ТЬг А1а Ьеи Не
1 5 10 15
С1у Туг Азр Уа1 ТЬг Азр Уа1 Зег Азп Уа1 ΗΪ8 Азр Азр С1и Ьеи 01и
20 25 30
РЬе ТЬг Агд Агд С1у Ьеи Уа1 ТЬг Рго Агд Мее А1а С1и Уа1 А1а Зег
35 40 45
Агд Азр Рго Ьуз Ьеи Туг А1а Мее ΗΪ3 Рго Тгр Уа1 ТЬг Зег Ьуз Рго
50 55 60
Ьеи Рго <31и Туг Ьеи Тгр Ьуз Ьуз Не А1а Азп Азп Суз Не РЬе Не
65 70 75 80
Уа1 Не ΗΪ3 Агд Зег ТЬг ТЬг Зег <31п ТЬг Не Ьуз Уа1 Зег Рго Азр
85 90 95
Аер ТЬг Рго О1у А1а Не Ьеи <31п Зег РЬе РЬе ТЬг Ьуз Мее А1а Ьуз
100 105 110
Ьуз Ьуз Зег Ьеи Мее Азр Не Рго О1и Зег <31п Зег (31и С1п Азр РЬе
115 120 125
Уа1 Ьеи Агд Уа1 Суз С1у Агд Азр <31и Туг Ьеи Уа1 О1у С1и ТЬг Рго
130 135 140
Не Ьуз Азп РЬе С1п Тгр Уа1 Агд ΗΪ3 Суз Ьеи Ьуз Азп <31у (Ни б1и
145 150 155 160
Не ΗΪ3 Уа1 Уа1 Ьеи Азр ТЬг Рго Рго Азр Рго А1а Ьеи Азр С1и Уа1
165 170 175
Агд Ьуз <31и <31и Тгр Рго Ьеи Уа1 Азр Азр Суз ТЬг <31у Уа1 ТЬг <31у
180 185 190
Туг ΗΪ3 <31и <31п Ьеи ТЬг Не ΗΪ3 <31у Ьуз Аер Н13 С1и Зег Уа1 РЬе
195 200 205
ТЬг ν&ι Зег Ьеи Тгр Азр Суз Азр Агд Ьуз РЬе Агд Уа1 Ьуз Не Агд
210 215 220
б1у Не Азр Не Рго 7а 1 Ьеи Рго Агд Азп ТЬг Азр Ьеи ТЬг Уа1 РЬе
225 230 235 240
Уа1 □ 1и А1а Азп 11е <31п Η13 <31у С1п <31п Уа1 Ьеи Суз <31п Агд Агд
245 250 255
ТЬг Зег Рго Ьуз Рго РЬе ТЬг (31и С1и Уа1 Ьеи Тгр Азп Уа1 Тгр Ьеи
О1и РЬе Зег 260 Ьуз 265 270 Азп
11е Ьуз Не Азр 280 Ьеи Рго ЬуЗ <31у А1а 285 Ьеи Ьеи
275
Ьеи С1п 11е Туг Суз <31у Ьуз А1а Рго А1а Ьеи Зег Зег Ьуз А1а 2ег
290 295 300
А1а С1и Зег Рго Зег Зег <31и Зег Ьуз <31у Ьуз Уа1 Агд Ьеи Ьеи Туг
305 310 315 320
Туг Уа1 Азп Ьеи Ьеи Ьеи Не Азр ΗΪ3 Агд РЬе Ьеи Ьеи Агд Агд С1у
325 330 335
<31и Туг Уа1 Ьеи ΗΪ3 МеЬ Тгр 31п Не Зег С1у Ьуз <31у С1и Азр С1п
340 345 350
С1у Зег РЬе А8П А1а Азр Ьуз Ьеи ТЬг Зег А1а ТПг Азп Рго Азр Ьуз
355 360 365
<31и Азп Зег МеЬ Зег Не Зег 11е Ьеи Ьеи Азр Азп Туг Суз Н1з Рго
370 375 380
Не А1а Ьеи Рго Ьуз Н1з (31п Рго ТЬг Рго Аер Рго <31и С1у Азр Агд
385 390 395 400
Уа1 Агд А1а С1и МеБ Рго Азп <л1п Ьеи Агд Ьуз С1п Ьеи С1и А1а Не
405 410 415
Не А1а ТЬг Азр Рго Ьеи Азп Рго Ьеи ТЬг А1а <31и Азр Ьуз <31и Ьеи
420 425 430
Ьеи Тгр Н1з РЬе Агд Туг (31и Зег Ьеи ьуз ΗΪ3 Рго Ьуз А1а Туг Рго
435 440 445
Ьуз Ьеи РЬе Зег Зег V*! Ьуз Тгр О1у С1п <31п (31и Не Уа1 А1а Ьуз
450 455 460
ТИг Туг <31п Ьеи Ьеи А1а Агд Агд С1и Уа1 Тгр Азр С1п Зег А1а Ьеи
465 470 475 480
Азр Уа1 <31у Ьеи ТЪг МеЬ С1п Ьеи Ьеи Азр Суз Азп РЬе Зег Азр С1и
485 490 495
Азп Уа1 Агд А1а Не А1а Уа1 С1п Ьуз Ьеи <31и Зег Ьеи О1и Азр Азр
500 505 510
Авр Уа1 Ьеи ΗΪ8 Туг Ьеи Ьеи С1п Ьеи νβΐ «31п А1а Уа1 Ьуз РЬе С1и
515 520 525
Рго Туг Н13 Азр Зег А1а Ьеи А1а Агд РЬе Ьеи Ьеи Ьуз Агд <31у Ьеи
530 535 540
- 79 018863
Агд 545 Азп Ьуз Агд Не <31у 550 ΗΪ3 РЬе Ьеи РЬе Тгр 555 РЬе Ьеи Агд Зег С1и 560
Не А1а С1п Бег Агд Н13 Туг С1п <31п Агд РЬе А1а Уа1 Не Ьеи О1и
565 570 575
А1а Туг Ьеи Агд <31у Суз <31у ТЬг А1а МеС Ьеи ΗΪ3 Азр РЬе ТЬг σΐη
580 585 590
С1п Уа1 С51п Уа1 Не <31и МеС Ьеи С1п Ьуз Уа1 ТЬг Ьеи Азр Не Ьуз
595 600 605
Бег Ьеи Бег А1а <31и Ьуз Туг Азр Уа1 Бег Зег С1п ν&1 Не Зег σΐη
610 615 620
Ьеи ьуз С1п Ьуз Ьеи <51и АЗП Ьеи О1п Азп Бег <31п Ьеи Рго (31и Бег
625 630 635 640
РЬе Агд Уа1 Рго Туг Азр Рго <51у Ьеи Ьуз А1а С1у А1а Ьеи А1а Не
645 650 655
СЯи Ьуз Суз Ьуз Уа1 Мес А1а Бег Ьуз Ьуз Ьуз Рго Ьеи Тгр Ьеи (Ни
660 665 670
РЬе Ьуз Суз А1а Азр Рго ТЬг А1а Ьеи Бег Азп (31и ТЬг Не С1у Не
675 680 685
Не РЬе Ьуз Нлз С1у Азр Азр Ьеи Агд <31п Азр МеС Ьеи Не Ьеи <31п
690 695 700
Не Ьеи Агд Не МеС 61и Зег Не Тгр (31и ТЬг СЯи Бег Ьеи Азр Ьеи
705 710 715 720
Суз Ьеи Ьеи Рго туг О1у Суз Не Бег ТЬг <31у Азр Ьуз Г1е <51у МеС
725 730 735
Не <31и Не Уа1 Ьуз Азр А1а ТЬг ТЬг Не А1а Ьуз Не <31п <Э1п Зег
740 745 750
ТЬг Уа1 С1у Азп ТЬг (31у А1а РЬе Ьуз Азр <31и Уа1 Ьеи Азп Нхз Тгр
755 760 765
Ьеи Ьуз <31и Ьуз Бег Рго ТЬг 31и (31и Ьуз РЬе <31п А1а А1а Уа1 61и
770 775 780
Агд РЬе Уа1 Туг Бег Суз А1а <31у Туг Суз Уа1 А1а ТЬг РЬе ν®1 Ьеи
785 790 795 800
<31у Не С1у Азр Агд Н13 Азп Азр Азп Не МеС Не ТЬг С1и ТЬг С1у
805 810 815
Азп Ьеи РЬе Н1з Не Азр РЬе <31у Н13 Не Ьеи <Э1у Азп Туг Ьуз Бег
820 825 830
РЬе Ьеи С1у Не Азп Ьуз С1и Агд Уа1 Рго РЬе Уа1 Ьеи ТЬг Рго Азр
835 840 845
РЬе Ьеи РЬе Уа1 МеС <31у ТЬг Бег С1у Ьуз Ьуз ТЬг Бег Рго Ηίε РЬе
850 855 860
С1п Ьуз ₽Ье <31п Азр Не Суз Уа1 Ьуз А1а Туг Ьеи А1а Ьеи Агд Ηίε
865 870 875 880
Н13 ТЬг Азп Ьеи Ьеи Не 11е Ьеи РЬе Бег МеС МеС Ьеи Мес ТЬг С1у
885 890 895
МеС Рго б1п Ьеи ТЬг Бег Ьуз С1и Азр Не <31и Туг Не Агд Азр А1а
900 905 910
Ьеи ТЬг Уа1 С1у Ьуз Азп С1и С1и Азр А1а Ьуз Ьуз Туг РЬе Ьеи Азр
915 920 925
С1п Не С1и Уа1 Суз Агд Азр Ьуз <31у Тгр ТЬг Уа1 С1П РЬе Азп Тгр
930 935 940
РЬе Ьеи Ηίε Ьеи Уа1 Ьеи <31у Не Ьуз С1п <31у <31и Ьуз ΗΪ3 Бег А1а
945 950 955 960
Н13 Н13 Ηίε Ηίε ΗΪ3 Ηίε
965 <210> 14 <211> 45 <212> ДНК <213 > искусственная <220>
<223> Праймер ПЦР <400>14
СссСссСссС ссСссСссСд дСССааСдсС дССсаСасдС ССдСс45 <210>15 <211> 26 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> Праймер ПЦР <400> 15 аСдсссссСд дддСддасСд ссссаС 26 <210> 16 <211> 26 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> Праймер ПЦР :400> 16
ЛассдссСд ссдссеьедд асасдС :210:
:211:
:212:
:213:
ДНК искусственная :220:
223:
Праймер ПЦР <400:
аССааассад даддаддадд аддаддассс ссСддддСдд асСдссссаС дда :210:
:211:
:212:
:213:
ДНК искусственна:
:220: :223
Праймер ПЦР <400: адссссдСда СддсдаСддс даСдсдсссс сБдссСдьСд ссСССддаса сдССдС :210:
:211:
:212:
:213:
ДНК искусственная ;22 0:
:223:
Праймер ПЦР <400; дддассасЬС сдСасаадаа адсьдддссь аадссссдсд аСддСдаСдд
СдадСдсСс·
<210> <211> <212> <213> 20 1169 РКТ искусственная
<220> <223> Конструкция киназы ΡΙ3Κ
<400> 20
МеС Агд С1и Туг Азр Агд Ьеи Туг С1и <31и Туг ТЬг Агд ТЬг Зег С1п
1 5 10 15
С1и 11е <31п МеЬ Ьуз Агд ТЬг А1а Не <31и . На РЬе Азп <31и . ТЬг Не
20 25 30
Ьуз . Не РЬе (31и <31и 61п Суз С1п ТЬг С1п ι 31и Агд Туг Зег Ьуз <31и
35 40 45
Туг • Не С1и Ьуз РЬе Ьуз Агд С1и <31у Азп ' 31и Ьуз 01и 11е ; С1п Агд
50 55 60
Не : Мес Н13 Азп Туг Азр Ьуз Ьеи Ьуз Зег . Агд Не Зег (31ц ι 11е Не
65 70 75 80
Азр Зег Агд Агд Агд Ьеи С1и С1и Азр Ьеи Ьуз Ьуз С31п А1а А1а С1и
85 90 95
Туг Агд С1и 11е Азр Ьуз Агд МеЬ Азп Зег Т1е Ьуз Рго (31у С1у С1у
юо 105 110
<31у <31у С1у Рго Рго С1у Уа1 Азр Суз Рго МеЬ <31и РЬе Тгр ТЬг Ьуз
115 120 125
С1и С1и Азп <31п Зег Уа1 Уа1 Уа1 Азр РЬе Ьеи Ьеи Рго ТЬг 31у Уа1
130 135 140
Туг Ьеи Азп РЬе Рго Уа1 Зег Агд Азп А1а Азп Ьеи Зег ТЬг Не Ьуз
145 150 155 160
<Э1п Ьеи Ьеи Тгр Ηίε Агд А1а С1п Туг <31и Рго Ьеи РЬе Н13 МеС Ьеи
165 170 175
Зег <31у Рго <Э1и А1а Туг Уа1 РЬе ТЬг Суз 11е Азп С1п ТЬг А1а <31и
180 185 190
<31п (31п С1и Ьеи <31и Азр С1и <31п Агд Агд Ьеи Суз Азр Уа1 С1п Рго
195 200 205
РЬе Ьеи Рго Уа1 Ьеи Агд Ьеи Уа1 А1а Агд С1и С1у Азр Агд Уа1 Ьуз
210 215 220
Ьуз Ьеи Не Азп Зег <31п 11е Зег Ьеи Ьеи 11е С1у ьуз С1у Ьеи ΗΪ3
225 230 235 240
О1и РЬе Азр Зег Ьеи Суз Азр Рго О1и Уа1 АЗП Азр РЬе Агд А1а ьуз
245 250 255
Мег Суз 61П РЬе суз □1и С1и А1а А1а А1а Агд Агд С1п О1п Ьеи С31у
260 265 270
Тгр С1и А1а тгр Ьеи С1 п Туг Зег РЬе Рго Ьеи С1п Ьеи О1и Рго зег
275 280 265
А1а <31п ТЬг Тгр (31у Рго <Э1у ТЬг Ьеи Агд Ьеи Рго АЗП Агд А1а Ьеи
290 295 300
Ьеи ναΐ Азп Уа1 Ьуз РЬе О1и С1у Зег С1и С1и Зег РЬе ТЬг РЬе С1п
305 310 315 320
Уа1 Зег ТЬг Ьуз Авр Уа1 Рго Ьеи А1а Ьеи МеС А1а Суз А1а Ьеи Агд
325 330 335
Ьуз Ьуз А1а ТЬг Уа1 РЬе Агд С1п Рго Ьеи Уа1 С1и С1п РГО С1и Азр
340 345 350
Туг ТЬг Ьеи 31п Уа1 Азп <31у Агд ΗΪ3 С31и Туг Ьеи Туг С1у Зег Туг
355 360 355
- 81 018863
Рго Ьеи Суз <31п 370 Рке <31п Туг 11е Суз Зег Суз Ьеи Нхз Зег С1у Ьеи
375 380
Ткг Рго 1 ΗΪ3 Ьеи ткг Мек Уа1 Ηίβ Зег Зег Зег Не Ьеи А1а Мек Агд
385 390 395 400
Азр С1и ι С1п Зег Азп Рго А1а Рго С1П Уа1 С1п Ьуз Рго Агд А1а Ьуз
405 410 415
Рго Рго Рго Не Рго А1а Ьуз Ьуз Рго Зег Зег Уа1 Зег Ьеи Тгр Зег
420 425 430
Ьеи С1и 1 С1п Рго Рке Агд 11е С1и Ьеи Не <31п С1у Зег Ьуз Уа1 Азп
435 440 445
А1а Азр 1 01и Агд МеЬ Ьуз Ьеи Уа1 Уа1 С1п А1а 31у Ьеи Рке ΗΪ3 С1у
450 455 460
Азп С1и 1 МеН Ьеи Суз Ьуз Ткг Уа1 Зег ЗеГ Зег С1и Уа1 Зег Уа1 Суз
465 470 475 480
Зег <51и Рго Уа1 Тгр Ьуз <31п Агд Ьеи С1и Рке Азр 11е Азп Не Суз
485 490 495
Азр Ьеи Рго Агд МеС А1а Агд Ьеи Суз Рке А1а Ьеи Туг А1а Уа1 Не
500 505 510
С1и Ьуз А1а Ьуз Ьуз А1а Агд Зег Ткг Ьуз Ьуз Ьуз Зег Ьуе Ьуе А1а
515 520 525
Азр Суз Рго 11е А1а Тгр А1а Азп Ьеи Мек Ьеи Рке Азр Туг Ьуз Азр
530 535 540
О1п Ьеи Ьуз Ткг С1у <31и Агд Суз Ьеи Туг Мек Тгр Рго Зег Уа1 Рго
545 550 555 560
Азр О1и Ьуз С1у С1и Ьеи Ьеи Азп Рго Ткг С1у Ткг Уа1 Агд Зег Азп
565 570 575
Рго Азп Ткг Азр Зег А1а А1а А1а Ьеи Ьеи . Не Суз Ьеи Рго <31и Уа1
580 585 590
А1а Рго Н15 РГО Уа1 Туг Туг РГО А1а Ьеи (31и Ьуз 11е Ьеи <31и Ьеи
595 600 605
С1у Апд Нхз Зег <31и Суз Уа1 Нхз Уа1 Ткп (21и С1и С1и <31п Ьеи С1п
610 615 620
Ьеи Агд С1и Не Ьеи <31и Агд Агд О1у • Зег • б1у С1и Ьеи Туг С1и Нхз
625 630 635 640
<31и Ьуз Азр Ьеи Уа1 Тгр Ьуз Ьеи Агд ΗΪ5 <31и Уа1 С1п С1и Нхз Рке
645 650 655
Рго С1и А1а Ьеи А1а Агд Ьеи Ьеи Ьеи Уа1 ’ Гкг Ьуз Тгр Азп Ьуз Нхз
660 665 670
С1и Азр Уа1 А1а О1п Мек Ьеи Туг Ьеи Ьеи ι Суз Зег Тгр Рго С1и Ьеи
675 680 685
Рго Уа1 Ьеи Зег А1а Ьеи <31и Ьеи Ьеи Азр : Рке Зег Рке Рго Азр Суз
690 695 700
Ηί з Уа1 С1у Зег Рке А1а Не Ьуз Зег Ьеи . Агд Ьуз Ьеи Ткг Азр Азр
705 710 715 720
С1и Ьеи РНе <31п Туг Ьеи Ьеи <31п Ьеи Уа1 < 31п Уа1 Ьеи Ьуз Туг С1и
725 730 735
Зег Туг Ьеи Азр Суз <31и Ьеи Ткг Ьуз Рке Ьеи Ьеи Азр Агд А1а Ьеи
740 745 750
А1а Азп Агд Ьуз Не С1у НХЗ Рке Ьеи Рке 1 Тгр Нхз Ьеи Агд Зег <Э1и
755 760 765
Мек Нхз Уа1 Рго Зег Уа1 А1а Ьеи Агд Рке С1у Ьеи 11е Ьеи С1и А1а
770 775 780
Туг Суз Агд С1у Зег Ткг ΗΪ8 НХЗ Мек Ьуз Уа1 Ьеи Мек Ьуз <31п 01у
785 790 795 800
С1и А1а Ьеи Зег Ьуз Ьеи Ьуз А1а Ьеи Азп Азр Рке Уа1 Ьуз Ьеи Зег
805 810 815
Зе г С1п Ьуз Ткг Рго Ьуз Рго С1п Ткг Ьуз С1и Ьеи Мек Нхз Ьеи Суз
820 825 830
Мек Агд <31п О1и А1а Туг Ьеи С1и А1а Ьеи Зег Нхз Ьеи <31п Зег Рго
835 840 845
Ьеи Азр Рго Зег Ткг Ьеи Ьеи А1а С1и Уа1 Суз Уа1 С1и С1п Суз Ткг
850 855 860
РНе Мек Азр Зег Ьуз Мек Ьуз Рго Ьеи Тгр Не Мек Туг Зег Азп <31и
865 870 875 880
С1и А1а С1у Зег (31у <31у Зег Уа1 С1у Не Не Рке Ьуз Азп С1у Азр
885 890 895
Азр Ьеи Агд С1п Азр Мек Ьеи Ткг Ьеи <31п Мек 11е С1п Ьеи Мек Азр
900 905 910
Уа1 Ьеи Тгр Ьуз 01п <31и <31у Ьеи Азр Ьеи Агд Мек Ткг Рго Туг 31у
915 920 925
Суз Ьеи 930 Рго ТЬг С1у Азр Агд ТЬг <31у Ьеи 11е <31и Уа1 Уа1 Ьеи Агд
935 940
8ег Азр ТЬг Не А1а Азп 11е <31п Ьеи Азп Ьуз Зег Азп МеС А1а А1а
94 5 950 955 960
ТЬг А1а А1а РЬе АЗП Ьуз Азр А1а Ьеи Ьеи Азп Тгр Ьеи Ьуз Зег Ьуз
965 970 975
Азп Рго С1у <Э1и А1а Ьеи Азр Агд А1а Не С1и 31и РЬе ТЬг Ьеи Зег
980 985 990
Суз А1а С1у Туг Суз Уа1 А1а ТЬг Туг Уа1 Ьеи О1у 11е <31у Азр Агд
995 1000 1005
Низ Зег 1010 Азр Азп Не Мес Не 1015 Агд О1и Зег С1у 01п 1020 Ьеи РЬе Низ
Не Азр РЬе <31у Низ РЬе Ьеи С1у Азп РЬе Ьуз ТЬг Ьуз РЬе <31у
1025 1030 1035
Не Азп Агд С1и Агд Уа1 Рго РЬе Не Ьеи ТЬг Туг Азр РЬе Уа1
1040 1045 1050
Низ Уа1 Не С1п σΐη С1у Ьуз ТЬг Азп Азп Зег <31и Ьуз РЬе <31и
1055 1060 1065
Агд РЬе Агд С1у Туг Суз <31и Агд А1а Туг ТЫ Не Ьеи Агд Агд
1070 1075 1080
Низ <Э1у Ьеи Ьеи РЬе Ьеи Низ Ьеи РЬе А1а Ьеи МеС Агд А1а А1а
1085 1090 1095
<31у Ьеи Рго <31и Ьеи Зег Суз Зег Ьуз Азр Не С1п Туг Ьеи Ьуз
1100 1105 1110
Лвр Зег Ьеи А1а Ьеи 61у Ьуз ТЬг С1и <31и С1и А1а Ьеи Ьуз Низ
1115 1120 1125
РЬе Агд Уа1 Ьуз РЬе Азп С1и А1а Ьеи Агд С1и Зег Тгр Ьуз ТЬг
ИЗО 1135 1140
Ьуз Уа1 Азп Тгр Ьеи А1а ΗΪ3 Азп Уа1 Зег Ьуз Азр Азп Агд С1п
1145 1150 1155
С1и Ьеи <31у <31у А1а Н13 Низ Низ Низ Низ Низ
1160 1165 <210? 21 <211? 33 <212? ДНК <213? искусственная <220>
<223> Праймер ПЦР <400> 21 сСсьссдааа СсасСаадса ддадааадас ССС <210> 22 <211> 33 <212? ДНК <213? искусственная <220?
<223? Праймер ПЦР <400> 22 аааасссссс сссСдсссад сдассссада дад зз <210> 23 <211> 1180 <212> РЕ.Т <213> искусственная <220?
<223> Конструкция киназы ΡΙ3Κ <400> 23
МеС Агд 1 (31и Туг Азр Агд Ьеи Туг С1и СХи Туг ТЬг Агд ТЬг 5ег αΐη 15
5 10
С1и Т1е αΐη МеС Ьуз Агд ТЬг А1а 11е (31и А1а РЬе Азп <31и ТЬг 11е
20 25 30
Ьуз 11е РЬе (31и <ЗХи С-1п Суз ОХп ТЬг <31п <31и Агд Туг Зег Ьуз <31и
35 40 45
Туг 11е С1и Ьуз РЬе Ьуз Агд С1и С1у Азп С1и Ьув <31и Не С1п Агд
50 55 60
Не МеС Н1з Азп. Туг Азр Ьуз Ьеи Ьуз 5ег Агд Не Зег <31и 11е Не
6Б 70 75 80
АЗр Зег Агд Агд Агд Ьеи <31и <31и Азр Ьеи Ьуз Ьуз <31п А1а А1а СХи
85 90 95
Туг Агд <31и 11е Аэр Ьуз Агд МеС Азп Зег 11е Ьуз Рго <31у <31у 11е
100 105 110
Зег С1у СХу С1у С1у «ЗХу 11е МеС Уа1 Ьеи Уа1 01и Суз Ьеи Ьеи Рго
115 120 125
АЗп СХу МеС 11е Уа1 ТЬг Ьеи (31и Суз Ьеи Агд С1и А1а ТЬг Ьеи 11е
130 135 140
ТЬг Не Ьуз ΗΪ3 О1и Ьеи РЬе Ьуз С1и А1а Агд Ьуз Туг Рго Ьеи Ηίε
145 150 155 160
- 83 018863
С1п Ьеи Ьеи С1п Азр <31и Зег Зег Туг 11е РЬе Уа1 Зег Уа1 ТЬг С1п
165 170 175
<31и А1а С1и Агд С1и <31и РЬе РЬе Азр С1и ТЬг Агд Агд Ьеи Суз Азр
180 185 190
Ьеи Агд Ьеи РЬе С1п Рго РЬе Ьеи Ьуз Уа1 Не <31и Рго Уа1 <31у Азп
195 200 205
Агд <31и С1и Ьуз Не Ьеи Азп Агд <31и Не <31у РЬе А1а Не <31у МеР
210 215 220
Рго Уа1 Суз (31и РЬе Азр Мес Уа1 Ьуз Азр Рго С1и Уа1 С1п Азр РЬе
225 230 235 240
Агд Агд Азп Не Ьеи Азп νβΐ Суз Ьуз <31и А1а Уа1 Азр Ьеи Агд Азр
245 250 255
Ьеи Азп Зег Рго ΗΪ3 Зег Агд А1а Мес Туг Уа1 Туг Рго Рго Азп νβΐ
260 265 270
С1и Зег Зег Рго С1и Ьеи Рго Ьуз Н13 Не Туг Азп Ьуз Ьеи Азр Ьуз
275 280 285
<31у О1п Не Не Уа1 Уа1 Не Тгр Уа1 Не Уа1 Зег Рго Азп Азп Азр
290 295 300
Ьуз О1п Ьуз Туг ТЬг Ьеи Ьуз 11е Азп Н13 Авр Суз Уа1 Рго <51и С1п
305 310 315 320
νβΐ Не А1а <31и А1а Не Агд Ьуз Ьуз ТЬг Агд Зег МеС Ьеи Ьеи Зег
325 330 335
Зег (31и <31п Ьеи Ьуз Ьеи Суз Уа1 Ьеи С1и Туг <31п С1у Ьуз Туг Не
340 345 350
Ьеи Ьуз Уа1 Суз <Э1у Суз Азр <31и Туг РЬе Ьеи (31и Ьуз Туг Рго Ьеи
355 360 365
Зег С1п Туг Ьуз Туг Не Агд Зег Суз Не Мес Ьеи <31у Агд Мер Рго
370 375 380
Азп Ьеи меь Ьеи мес А1а Ьуз С1и Зег Ьеи Туг Зег <31п Ьеи Рго МеР
385 390 395 400
Азр Суз РЬе ТЬг МеС Рго Зег Туг Зег Агд Агд Не Зег ТЬг А1а ТЬг
405 410 415
Рго Туг МеС Азп <31у <31и ТЬг Зег ТЬг Ьуз Зег Ьеи Тгр Уа1 Не Азп
420 425 430
Зег А1а Ьеи Агд Не Ьуз Не Ьеи Суз А1а ТЬг Туг Уа1 Азп Уа1 Азп
435 440 445
11е Агд Азр Не Азр Ьуз Не Туг Ча1 Агд ТЬг С1у Не Туг ΗΪ3 <31у
450 455 460
<Э1у С1и РГО Ьеи Суз Азр Азп Уа1 Азп ТЬг С1п Агд Уа1 Рго Суз Зег
465 470 475 480
Азп Рго Агд Тгр Азп <31и Тгр Ьеи Азп Туг Азр Не Туг 11е Рго Азр
485 490 495
Ьеи Рго Агд А1а А1а Агд Ьеи Суз Ьеи Зег Не Суз Зег Уа1 Ьуз <Э1у
500 505 510
Агд Ьуз (31у А1а Ьуз С1и <31и Н13 Суз Рго Ьеи А1а Тгр <31у Азп Не
515 520 525
Азп Ьеи РЬе Азр Туг ТЬг Азр ТЬг Ьеи Уа1 Зег С1у Ьуз Мес А1а Ьеи
530 535 540
Азп Ьеи Тгр Рго Уа1 Рго Н13 (31у Ьеи <31и Азр Ьеи Ьеи Азп Рго Не
545 550 555 560
<31у Уа1 ТЬг С1у Зег Азп Рго Азп Ьуз (31и ТЬг Рго Суз Ьеи С1и Ьеи
565 570 575
С1и РЬе Азр Тгр РЬе Зег Зег Уа1 Уа1 Ьуз РЬе Рго Азр МеР Зег Уа1
580 585 590
11е С1и С1и ΗΪ3 А1а Азп Тгр Зег Уа1 Зег Агд (31и А1а О1у РЬе Зег
595 600 605
Туг Зег Н13 А1а С1у Ьеи Зег Азп Агд Ьеи А1а Агд Азр Азп С1и Ьеи
610 615 620
Агд <31и Азп Азр Ьуз С1и С1п Ьеи Ьуз А1а Не Зег ТЬг Агд Азр Рго
625 630 635 640
Ьеи Зег С1и 11е ТЬг Ьуз С1п <31и Ьуз Азр РЬе Ьеи Тгр Зег Н13 Агд
645 650 655
Н1з Туг Суз Уа1 ТЬг 11е Рго <31и 11е Ьеи Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ьеи 5ег
660 665 670
Уа1 Ьуз Тгр Азп Зег Агд Азр <31и Уа1 А1а С1п Мес Туг Суз Ьеи Уа1
675 680 685
Ьуз Азр Тгр Рго Рго 11е Ьуз Рго <31и <31п А1а МеС 61и Ьеи Ьеи Азр
690 695 700
Суз Азп Туг Рго Азр Рго МеР Уа1 Агд О1у РЬе А1а Уа1 Агд Суз Ьеи
705 710 715 720
О1и Ьуз Туг Ьеи ТЬг 725 Азр Азр Ьуз Ьеи Зег С1п Туг Ьеи 730 Не С1п 735 Ьеи
Уа1 <31п Уа1 Ьеи Ьуз Туг <31и С1п Туг Ьеи Азр Азп Ьеи Ьеи Уа1 Агд
740 745 750
РЬе Ьеи Ьеи Ьуз Ьуз А1а Ьеи ТЬг АЗП С1п Агд 11е С1у ΗΪ8 РЬе РЬе
755 760 765
РЬе Тгр Нхз Ьеи Ьуз Зег О1и МеС Н13 Азп Ьуз ТЬг Уа1 Зег <31п Агд
770 775 780
РЬе С1у Ьеи Ьеи Ьеи С1и Зег Туг Суз Агд А1а Суз <31у МеС Туг Ьеи
785 790 795 800
Ьуз ΗΪ8 Ьеи Азп Агд С1п Уа1 <31и А1а МеС С1и Ьуз Ьеи Не Азп Ьеи
805 810 815
ТЬг Азр Не Ьеи Ьуз С1п <31и Ьуз Ьуз Азр (31и ТЬг <31п Ьуз Уа1 <31п
820 825 830
МеД Ьуз РЬе Ьеи Уа1 С1и <31п МеС Агд Агд Рго Азр РЬе Мес Азр А1а
835 840 845
Ьеи С1п С1у РЬе Ьеи Зег Рго Ьеи Азп Рго А1а Ηίε <31п Ьеи О1у Азп
850 855 860
Ьеи Агд Ьеи <31и С1и Суз Агд 11е МеС Зег Зег А1а Ьуз Агд Рго Ьеи
865 870 875 880
Тгр Ьеи Азп Тгр С1и Азп Рго Азр Не МеС Зег С1и Ьеи Ьеи РЬе С1п
885 890 895
Азп Азп <31и Не 11е РЬе Ьуз Азп <Э1у Азр Азр Ьеи Агд <31п Азр МеС
900 905 910
Ьеи ТЬг Ьеи С51п Не Не Агд Не Мес С1и Азп Не Тгр <31п Азп С1п
915 920 925
С1у Ьеи Азр Ьеи Агд Мес Ьеи Рго Туг <31у Суз Ьеи Зег Не С1у Азр
930 935 940
Суз Уа1 О1у Ьеи Не <31и Уа1 Уа1 Агд Азп Зег Ηΐε ТЬг Не МеС <31п
945 950 955 960
Не С1п Суз Ьуз <31у <21у Ьеи Ьуз <31у А1а Ьеи <31п РЬе Азп Зег Ηί3
965 970 975
ТЬг Ьеи Ηί3 <31п Тгр Ьеи Ьуз Азр Ьуз Азп Ьуз <31у <31и Не Туг Азр
980 985 990
ТЬг А1а А1а Не Азр Ьеи Не РЬе ТЬг Агд Зег Суз А1а О1у Туг 100' Азп Суз Не Уа1 А1а МеС
РЬе 1010 995 Не Ьеи С1у С1у 1015 1000 Азр Агд ΗΪ3 Азп Зег 1020
Уа1 ьуз Азр Азр С1у <Э1п Ьеи РЬе Ηίε Не Αερ РЬе С1у Ηίε РЬе
1025 1030 1035
Ьеи ДЗр Нхз Ьуз Ьуз Ьуз Ьуз РЬе <31у туг Ьуз Агд С1и Агд Уа1
1040 1045 1050
Рго РЬе Уа1 Ьеи ТЬг С1п Азр РЬе Ьеи Не Уа1 Не Бег Ьуз С1у
1055 1060 1065
А1а <31п <Э1и Суз ТЬг Ьуз ТЬГ Агд 01и РЬе С1и Агд РЬе С1п С1и
1070 1075 1080
Мес Суз Туг ьуз А1а Туг Ьеи А1а Не Агд <31п Н13 А1а Дзп Ьеи
1085 1090 1095
РЬе Не Азп Ьеи РЬе Бег Мес Мее Ьеи <31у Зег С1у Мес Рго С1и
1100 1105 1110
Ьеи С1п Зег РЬе Азр Азр Не А1а Туг 11е Агд Ьуз ТЬг Ьеи А1а
1115 1120 1125
Ьеи Азр Ьуз ТЬг С1и С1п С1и А1а Ьеи С1и Туг РЬе Мес Ьуз С1п
1150 1135 1140
Мес. Азп Азр А1а Ηίε Ηίε С1у С1у Тгр ТЬг ТЬг Ьуз Мес Азр Тгр
1145 1150 1155
Не РЬе Н1з ТЬг Не Ьуз αΐη Ηί9 А1а Ьеи Азп С1и Ьеи 61у С1у
1160 1165 1170
А1а ΗΪ3 Ηίε Ηίε Н13 ΗΪ3 ΗΪ3
1175 1180
<210> 24 <211> 33 <212> ДНК <213 > искусственная <220>
<223> Праймер ПЦР <400>24 саааСдааСд аСдсасдСса сддйддссдд аса33 <210>25 <211>33 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> Праймер ПЦР
искусственная
Конструкци
- 86 018863
- 87 018863
А1а (31п О1и Суз ТЬг Ьу8 ТЬГ 1075 Агд С1и РЬе <31и Агд 1080 РЬе С1п <31и
1070
МеС: Суз Туг Ьуз А1а Туг Ьеи А1а Т1е Агд С1п Ηί3 А1а Азп Ьеи
1085 1090 1095
РЬе 11е Азп Ьеи РЬе Зег МеС МеС; Ьеи С1у £ег С1у МеС. Рго С1и
1100 1105 1110
Ьеи С1п зег РЬе Аар Азр 11е А1а Туг Не Агд Ьуз ТЬг Ьеи А1а
1115 1120 1125
Ьеи Азр ьуз тЬг О1и С1п <31и А1а Ьеи С1и Туг РЬе МеС Ьуз С1п
ИЗО 1135 1140
меь Ав П Азр А1а Агд ΗΪ3 О1у С1у Тгр ТЬг ТЬг Ьуз Мес. Азр Тгр
1145 1150 1155
Не РЬе Н13 ТЬг Пе Ьуз <31п Н15 А1а Ьеи. Азп <31и Ьеи <31у <31у
1160 1165 1170
А1а Н13 ΗΪ5 Н13 ΗΪ3 Н15 Н£в
1175 1180

Claims (12)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ или его фармацевтически приемлемая соль, в которой К1 обозначает один из следующих заместителей: (1) незамещенный или замещенный С1С7-алкил, где указанные заместители независимо выбраны из 1-9 фрагментов дейтерия или фтора, или 12 фрагментов С3-С5-циклоалкила; (2) необязательно замещенный С3-С5-циклоалкил, где указанные заместители независимо выбраны из 1-4 следующих заместителей: дейтерий, С£-С4-алкил, фтор, цианогруппа, аминокарбонил; (3) необязательно замещенный фенил, где указанные заместители независимо выбраны из 1-2 следующих фрагментов: дейтерий, галоген, цианогруппа, С1-С7-алкил, С1-С7алкиламиногруппа, ди(С1-С7-алкил)аминогруппа, С1-С7-алкиламинокарбонил, ди(С1-С7-алкил)аминокарбонил, С1-С7-алкоксигруппа; (4) необязательно моно- или дизамещенный амин; где указанные заместители независимо выбраны из следующих фрагментов: дейтерий, С1-С7-алкил (который является незамещенным или содержит один или более заместителей, выбранных из группы, включающей дейтерий, фтор, хлор, гидроксигруппу), фенилсульфонил (который является незамещенным или содержит один из следующих заместителей: С1-С7-алкил, С1-С7-алкоксигруппа, ди(С1-С7-алкил)амино-С1-С7алкоксигруппа); (5) замещенный сульфонил; где указанный заместитель выбран из следующих фрагментов: С1-С7-алкил (который является незамещенным или содержит один или более заместителей, выбранных из группы, включающей дейтерий, фтор), пирролидиновую группу (которая является незамещенной или содержит один или более заместителей, выбранных из группы, включающей дейтерий, гидроксигруппу, оксогруппу); (6) фтор, хлор;
    К3 обозначает (1) водород, (2) фтор, хлор, (3) необязательно замещенный метил, где указанные заместители независимо выбраны из 1-3 следующих фрагментов: дейтерий, фтор, хлор, диметиламиногруппа.
  2. 2. Соединение по п.1, в котором К1 обозначает (1) циклопропилметил или необязательно замещенный разветвленный С3-С7-алкил, где указанные заместители независимо выбраны из 1-9 фрагментов дейтерия или фтора; (2) необязательно замещенный циклопропил или циклобутил, где указанные заместители независимо выбраны из 1-4 следующих заместителей: метил, дейтерий, фтор, цианогруппа, аминокарбонил; (3) необязательно замещенный фенил, где указанные заместители независимо выбраны из 1-2 следующих фрагментов: дейтерий, галоген, цианогруппа, С£-С7-алкил, С1-С7-алкиламиногруппа, ди(С1С7-алкил)аминогруппа, С£-С7-алкиламинокарбонил, ди(С1-С7-алкил)аминокарбонил, С£-С7-алкоксигруппа; (4) необязательно моно- или дизамещенный амин; где указанные заместители независимо выбраны из следующих фрагментов: дейтерий, С1-С7-алкил (который является незамещенным или содержит один или более заместителей, выбранных из группы, включающей дейтерий, фтор, хлор, гидроксигруппу), фенилсульфонил (который является незамещенным или содержит один из следующих заместителей: С1-С7-алкил, С1-С7-алкоксигруппа, ди(С1-С7-алкил)амино-С1-С7-алкоксигруппа); (5) замещенный сульфонил; где указанный заместитель выбран из следующих фрагментов: С1-С7-алкил (который являет
    - 88 018863 ся незамещенным или содержит один или более заместителей, выбранных из группы, включающей дейтерий, фтор), пирролидиновую группу (которая является незамещенной или содержит один или более заместителей, выбранных из группы, включающей дейтерий, гидроксигруппу, оксогруппу); (6) фтор, хлор;
    К3 обозначает водород, метил, СЭ3, СН2С1, СН2Р, СН2Ы(СН3)3.
  3. 3. Соединение по п.1 или 2, в котором К1 обозначает -С(СН3)2СР3, С(СЭ3)3 или 1метилциклопропил.
  4. 4. Соединение по любому из пп.1-3, в котором К3 обозначает метил.
  5. 5. Соединение в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли, выбранное из группы, включающей
    2-амид,1-{[5-(2-трет-бутилпиридин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид} (§)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-{[5-(2-циклопропилпиридин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид} (§)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-({5-[2-(2-фторфенил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2-ил}амид) (§)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-{[5-(2-циклобутилпиридин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид} (§)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-({4-метил-5-[2-(1-метилциклопропил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил)амид) (§)-пирролидин-
    1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-([4-метил-5-[2-(1-метилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил]амид) (§)-пирролидин-1,2дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-([5-(2-трет-бутилпиридин-4-ил)тиазол-2-ил]амид} (§)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-{[5-(2-изопропилпиридин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид} (§)-пирролидии-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-{[5-(2-циклобутилпиридин-4-ил)тиазол-2-ил]амид} (§)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид, 1-({5-[2-(1 -метилциклопропил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (§)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-({5-[2-(1-трифторметилциклопропил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (§)-пирролидин-
    1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-({5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил)амид) (§)-пирролидин-
    1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид, 1-({5-[2-(1 -трифторметилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил)амид) (§)-пирролидин-1,2дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-({4-метил-5-[2-(1-трифторметилциклопропил)пиридин-4-ил)тиазол-2-ил}амид) (§)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (§)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-({4-метил-5-[2-(1-трифторметилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил)амид) (§)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид, 1-({5-[2-(1 -метилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (§)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-((5-[2-(1-цианоциклопропил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2-ил}амид) (§)-пирролидин-
    1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид, 1-({5-[2-(1 -цианоциклобутил)пиридин-4-ил] -4-метилтиазол-2-ил}амид) (§)-пирролидин-1,2дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-({5-[2-(1-карбамоилциклобутил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2-ил}амид (§)-пирролидин-
    1,2-дикарбоновой кислоты);
    2-амид,1-({5-[2-(2-диметиламино-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2-ил}амид) (§)пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-([5-(2-диэтиламинопиридин-4-ил)-4-метилтиазол-2-ил]амид) (§)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-{[5-(2-диэтиламинопиридин-4-ил)тиазол-2-ил]амид} (§)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-[(5-{2-[1-(4-метоксифенил)-1-метилэтил]пиридин-4-ил}-4-метилтиазол-2-ил)амид] (§)пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-[(5-{2-[1-(4-метоксифенил)-1-метилэтил]пиридин-4-ил}тиазол-2-ил)амид] (§)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-[(5-{2-[1-(4-метоксифенил)циклопропил]пиридин-4-ил}-4-метилтиазол-2-ил)амид] (§)пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    - 89 018863
    2-амид,1-[(5-{2-[1-(4-метоксифенил)циклопропил]пиридин-4-ил}тиазол-2-ил)амид] (§)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-{[5-(2-{1-[4-(3-диметиламинопропокси)фенил]-1-метилэтил}пиридин-4-ил)-4метилтиазол-2-ил]амид} (§)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-({4-метил-5-[2-(1-й3-метилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (Б)-пирролидин-
    1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-({5-[2-(1-й3-метилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (§)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-({4-й3-метил-5-[2-(1-метилциклопропил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (Б)-пирролидин-
    1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-({4-й3-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (§)пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-({4-диметиламинометил-5-[2-(1-й3-метилциклобутил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (§)пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-({4-хлор-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]гиазол-2-ил}амид) (§)пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-({4-фторметил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амид) (§)пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-({5-[2-(2-фтор-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]-4-метилтиазол-2-ил}амид) (Б)-пирролидин-
    1,2-дикарбоновой кислоты;
    2-амид,1-({5-[2-(2-фтор-1-фторметил-1-метилэтил)пиридин-4-ил]-4-мстилтиазол-2-ил}амид (§)пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты.
  6. 6. Соединение 2-амид,1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]тиазол-2ил}амид) (§)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты структуры в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли.
  7. 7. Применение соединения формулы (1А) по любому из пп.1-6 в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения рака.
  8. 8. Применение по п.7, где рак выбран из группы, включающей саркому, рак легких, бронхов, предстательной железы, молочной железы (включая спорадические типы рака молочной железы и страдающих болезнью Коудена), поджелудочной железы, желудочно-кишечный рак, толстой кишки, прямой кишки, карциному толстой кишки, колоректальную аденому, щитовидной железы, печени, внутрипеченочного желчного протока, гепатоцеллюлярный рак, рак надпочечников, желудка, желудочно-кишечного тракта, глиому, глиобластому, эндометрия, меланому, почек, почечной лоханки, мочевого пузыря, тела матки, шейки матки, влагалища, яичников, множественную миелому, пищевода, лейкоз, острый миелолейкоз, хронический миелолейкоз, лимфолейкоз, миелолейкоз, головного мозга, карциному головного мозга, полости рта и глотки, гортани, тонкого кишечника, неходжкинскую лимфому, меланому, ворсинчатую аденому толстой кишки, неоплазию, неоплазию эпителиального характера, лимфомы, карциному молочной железы, базально-клеточную карциному, плоскоклеточную карциному, старческий кератоз, опухолевые заболевания, включая солидные опухоли; опухоли головы или шеи, истинную полицитемию, эссенциальную тромбоцитемию, миелофиброз с миелоидной метаплазией и болезнь Вальденстрема.
  9. 9. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения формулы (1А) по любому из пп.1-6 в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли и один или более фармацевтически приемлемых инертных наполнителей.
  10. 10. Фармацевтическая композиция по п.9, предназначенная для лечения рака.
  11. 11. Применение соединения по любому из пп.1-6 или его фармацевтически приемлемой соли для лечения рака.
  12. 12. Применение по п.11, где рак выбран из группы, включающей саркому, рак легких, бронхов, предстательной железы, молочной железы (включая спорадические типы рака молочной железы и страдающих болезнью Коудена), поджелудочной железы, желудочно-кишечный рак, толстой кишки, прямой кишки, карциному толстой кишки, колоректальную аденому, щитовидной железы, печени, внутрипеченочного желчного протока, гепатоцеллюлярный рак, рак надпочечников, желудка, желудочно-кишечного тракта, глиому, глиобластому, эндометрия, меланому, почек, почечной лоханки, мочевого пузыря, тела матки, шейки матки, влагалища, яичников, множественную миелому, пищевода, лейкоз, острый миелолейкоз, хронический миелолейкоз, лимфолейкоз, миелолейкоз, головного мозга, карциному головного
    - 90 018863 мозга, полости рта и глотки, гортани, тонкого кишечника, неходжкинскую лимфому, меланому, ворсинчатую аденому толстой кишки, неоплазию, неоплазию эпителиального характера, лимфомы, карциному молочной железы, базально-клеточную карциному, плоскоклеточную карциному, старческий кератоз, опухолевые заболевания, включая солидные опухоли; опухоли головы или шеи, истинную полицитемию, эссенциальную тромбоцитемию, миелофиброз с миелоидной метаплазией и болезнь Вальденстрема.
EA201100447A 2008-09-10 2009-09-08 Органические соединения EA018863B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP08164104 2008-09-10
US9667408P 2008-09-12 2008-09-12
PCT/EP2009/061644 WO2010029082A1 (en) 2008-09-10 2009-09-08 Organic compounds

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201100447A1 EA201100447A1 (ru) 2011-10-31
EA018863B1 true EA018863B1 (ru) 2013-11-29

Family

ID=40350060

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201100447A EA018863B1 (ru) 2008-09-10 2009-09-08 Органические соединения

Country Status (49)

Country Link
US (4) US8227462B2 (ru)
EP (1) EP2331537B1 (ru)
JP (1) JP5486601B2 (ru)
KR (1) KR101290844B1 (ru)
CN (1) CN102149711B (ru)
AR (2) AR073369A1 (ru)
AU (1) AU2009290904B2 (ru)
BR (1) BRPI0918750B8 (ru)
CA (1) CA2734819C (ru)
CL (1) CL2011000504A1 (ru)
CO (1) CO6351738A2 (ru)
CR (1) CR20110059A (ru)
CU (1) CU24000B1 (ru)
CY (2) CY1117078T1 (ru)
DK (1) DK2331537T3 (ru)
DO (1) DOP2011000070A (ru)
EA (1) EA018863B1 (ru)
EC (1) ECSP11010880A (ru)
ES (1) ES2560673T3 (ru)
GE (1) GEP20135991B (ru)
HK (1) HK1156305A1 (ru)
HN (1) HN2011000699A (ru)
HR (1) HRP20160014T1 (ru)
HU (2) HUE025884T2 (ru)
IL (1) IL210976A (ru)
JO (1) JO3121B1 (ru)
LT (1) LTC2331537I2 (ru)
MA (1) MA32604B1 (ru)
ME (1) ME01284B (ru)
MX (1) MX2011002597A (ru)
MY (1) MY151556A (ru)
NI (1) NI201100049A (ru)
NL (1) NL301071I2 (ru)
NO (1) NO2020037I1 (ru)
NZ (1) NZ590754A (ru)
PA (1) PA8841901A1 (ru)
PE (1) PE20110796A1 (ru)
PL (1) PL2331537T3 (ru)
PT (1) PT2331537E (ru)
RS (1) RS54476B1 (ru)
SI (1) SI2331537T1 (ru)
SM (1) SMP201100019B (ru)
SV (1) SV2011003853A (ru)
TN (1) TN2011000053A1 (ru)
TW (1) TWI453206B (ru)
UA (1) UA104147C2 (ru)
UY (1) UY32096A (ru)
WO (1) WO2010029082A1 (ru)
ZA (1) ZA201100699B (ru)

Families Citing this family (100)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AR044519A1 (es) * 2003-05-02 2005-09-14 Novartis Ag Derivados de piridin-tiazol amina y de pirimidin-tiazol amina
CN102089007B (zh) 2008-07-11 2013-05-15 诺瓦提斯公司 (a)磷酸肌醇3-激酶抑制剂和(b)ras/raf/mek通路调节剂的组合产品
UA104147C2 (ru) * 2008-09-10 2014-01-10 Новартис Аг Производная пирролидиндикарбоновой кислоты и ее применение в лечении пролиферативных заболеваний
US8293753B2 (en) * 2009-07-02 2012-10-23 Novartis Ag Substituted 2-carboxamide cycloamino ureas
AR082418A1 (es) 2010-08-02 2012-12-05 Novartis Ag Formas cristalinas de 1-(4-metil-5-[2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-piridin-4-il]-tiazol-2-il)-amida de 2-amida del acido (s)-pirrolidin-1,2-dicarboxilico
AU2015203865B2 (en) * 2010-11-08 2016-11-03 Novartis Ag Use of 2-carboxamide cycloamino urea derivatives in the treatment of EGFR dependent diseases or diseases that have acquired resistance to agents that target EGFR family members
TR201802943T4 (tr) * 2010-11-08 2018-03-21 Novartis Ag (S)-pirolidin-1,2-dikarboksilik asit 2-amid 1-({4-metil-5-[2-(2,2,2-trifloro-1,1-dimetil-etil)-piridin-4-il]-tiyazol-2-il}amid)'in egfr'ye bağlı hastalıkların veya egfr familya üyelerini hedefleyen ajanlara karşı direnç edinmiş hastalıkların tedavisinde kullanımı.
UA112539C2 (uk) * 2011-03-03 2016-09-26 Новартіс Аг Спосіб одержання похідних 2-карбоксамідциклоаміносечовини
WO2012148846A1 (en) * 2011-04-25 2012-11-01 Novartis Ag Combination of a phosphatidylinositol-3-kinase (pi3k) inhibitor and a mtor inhibitor
WO2012175522A1 (en) 2011-06-21 2012-12-27 Novartis Ag Polymorphs of (s)-pyrrolidine-1,2-dicarboxylic acid 2-amide 1-({4-methyl-5-[2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimethyl-ethyl)-pyridin-4-yl]-thiazol-2-yl}-amide
MX359406B (es) * 2011-07-01 2018-09-27 Novartis Ag Terapia de combinación que comprende un inhibidor de cdk4/6 y un inhibidor de pi3kpara usarse en el tratamiento de cáncer.
BR112014004587A2 (pt) * 2011-08-31 2017-03-14 Novartis Ag combinações sinérgicas de inibidores de pi3k- e de mek
US20140235630A1 (en) * 2011-09-30 2014-08-21 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Compositions and methods for the treatment of proliferative diseases
JP6180420B2 (ja) * 2011-10-14 2017-08-16 ノバルティス アーゲー 増殖性疾患の治療のためのｈｓｐ９０阻害剤と組み合わせた２−カルボキサミドシクロアミノウレア誘導体
KR20140096035A (ko) * 2011-10-28 2014-08-04 노파르티스 아게 위장 기질 종양을 치료하는 방법
RU2014122198A (ru) * 2011-11-02 2015-12-10 Новартис Аг Производные 2-карбоксамид циклоамино мочевины для применения в лечении vegf-зависимых заболеваний
CA2865071C (en) 2012-02-22 2020-06-23 Sanford-Burnham Medical Research Institute Sulfonamide compounds and uses as tnap inhibitors
EA028984B1 (ru) * 2012-03-29 2018-01-31 Новартис Аг Применение (s)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты 2-амид 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}амида) для лечения рака
KR20150002623A (ko) * 2012-03-30 2015-01-07 노파르티스 아게 신경모세포종, 유잉 육종 또는 횡문근육종의 치료에 사용하기 위한 화합물
CA2868392A1 (en) 2012-05-23 2013-11-28 Estelle DOUDEMENT Compositions and methods of obtaining and using endoderm and hepatocyte cells
US8980259B2 (en) 2012-07-20 2015-03-17 Novartis Ag Combination therapy
AU2013299841B8 (en) 2012-08-07 2017-01-05 Array Biopharma Inc. Pharmaceutical combinations comprising a B-Raf inhibitor, an EGFR inhibitor and optionally a PI3K-alpha inhibitor
RU2705095C2 (ru) * 2012-08-16 2019-11-05 Новартис Аг Комбинация ингибитора pik3 и ингибитора с-мет
AU2013318205B2 (en) * 2012-09-20 2016-05-19 Novartis Ag Pharmaceutical combination comprising a phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor|and an aromatase inhibitor
WO2014075754A1 (en) * 2012-11-16 2014-05-22 Merck Patent Gmbh 3-aminocyclopentane carboxamide derivatives
EP2742940B1 (en) 2012-12-13 2017-07-26 IP Gesellschaft für Management mbH Fumarate salt of (R)-3-(6-(4-methylphenyl)-pyridin-3-yloxy)-l-aza-bicyclo-[2.2.2]octane for adminstration once daily, twice daily or thrice daily
BR112015017331B1 (pt) 2013-01-23 2022-01-11 Astrazeneca Ab Compostos de formula i, forma cristalina, uso dos compostos, combinação e composição
BR112015023203A8 (pt) 2013-03-15 2018-01-23 Constellation Pharmaceuticals Inc métodos para tratamento de câncer, método para aumentar a eficiência de um tratamento de câncer, método para retardar e/ou prevenir o desenvolvimento de câncer, método para tratar um indivíduo com câncer, método para aumentar a sensibilidade para um agente de terapia para câncer, método para estender um período de sensibilidade e método para estender a duração da resposta para uma terapia para câncer.
CN112641787A (zh) * 2013-03-21 2021-04-13 诺华股份有限公司 包含B-Raf抑制剂和第二抑制剂的组合疗法
BR112015025101A2 (pt) * 2013-04-05 2017-07-18 Sanofi Sa composição antitumoral que compreende um inibidor pi3kbeta-seletivo e um inibidor pi3kalfa-seletivo
WO2014191938A1 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Novartis Ag Combination therapy containing a pi3k-alpha inhibitor and fgfr kinase inhibitor for treating cancer
CN105283180A (zh) * 2013-06-11 2016-01-27 诺华股份有限公司 Pi3k抑制剂与微管去稳定剂的药物组合
WO2014203152A1 (en) 2013-06-18 2014-12-24 Novartis Ag Pharmaceutical combinations
JP2016527305A (ja) 2013-08-08 2016-09-08 ノバルティス アーゲー Ｐｉｍキナーゼ阻害剤の組合せ
LT3033086T (lt) 2013-08-14 2021-12-27 Novartis Ag Kombinuota terapija vėžiui gydyti
WO2015048312A1 (en) 2013-09-26 2015-04-02 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
KR20160095035A (ko) * 2013-12-06 2016-08-10 노파르티스 아게 알파-이소형 선택성 포스파티딜이노시톨 3-키나제 억제제를 위한 투여 요법
EP3094340A1 (en) * 2014-01-15 2016-11-23 Novartis AG Pharmaceutical combinations
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
KR20160110963A (ko) 2014-02-11 2016-09-23 노파르티스 아게 암 치료를 위한 pi3k 억제제를 포함하는 제약 조합물
TWI777174B (zh) 2014-03-14 2022-09-11 瑞士商諾華公司 針對lag-3之抗體分子及其用途
WO2016040892A1 (en) 2014-09-13 2016-03-17 Novartis Ag Combination therapies
EP3200775B1 (en) 2014-10-03 2019-11-20 Novartis AG Combination therapies
MX2017004359A (es) 2014-10-03 2017-06-23 Novartis Ag Composiciones farmaceuticas que comprenden alpelisib.
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
CN114920840A (zh) 2014-10-14 2022-08-19 诺华股份有限公司 针对pd-l1的抗体分子及其用途
CN104844589B (zh) * 2014-12-26 2018-04-20 中国科学院合肥物质科学研究院 一种pi3k激酶抑制剂
US10449211B2 (en) 2015-03-10 2019-10-22 Aduro Biotech, Inc. Compositions and methods for activating “stimulator of interferon gene”—dependent signalling
WO2016151501A1 (en) 2015-03-25 2016-09-29 Novartis Ag Pharmaceutical combinations
US20160375033A1 (en) 2015-06-29 2016-12-29 Genentech, Inc. Methods of treatment with taselisib
SI3317284T1 (sl) 2015-07-02 2020-02-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Spojine benzoksazepin oksazolidinona in načini uporabe
EP3878465A1 (en) 2015-07-29 2021-09-15 Novartis AG Combination therapies comprising antibody molecules to tim-3
EP3964528A1 (en) 2015-07-29 2022-03-09 Novartis AG Combination therapies comprising antibody molecules to lag-3
EP3380097A2 (en) 2015-08-28 2018-10-03 Novartis AG Pharmaceutical combination comprising (a) the alpha-isoform specific pi3k inhibitor alpelisib (byl719) and (b) an akt inhibitor, preferably mk-2206, afuresertib or uprosertib, and the use thereof in the treatment/prevention of cancer
US20190060309A1 (en) 2015-08-28 2019-02-28 Novartis Ag Mdm2 inhibitors and combinations thereof
WO2017037574A1 (en) 2015-08-28 2017-03-09 Novartis Ag Combinations of the cdk4/6 inhibitor lee011 and the mek1/2 inhibitor trametinib, optionally further comprising the pi3k inhibitor byl719 to treat cancer
JP2018525425A (ja) 2015-08-28 2018-09-06 ノバルティス アーゲー がんを治療または予防するためのリボシクリブとダブラフェニブの組み合わせ
EP3341023A1 (en) 2015-08-28 2018-07-04 Novartis AG Combination therapy using pi3k inhbitor and mdm2 inhibitor
CN108348514A (zh) 2015-08-28 2018-07-31 诺华股份有限公司 含pi3k抑制剂alpelisib和cdk4/6抑制剂ribociclib的药物组合以及其在治疗/预防癌症中的应用
TW201726140A (zh) 2015-09-17 2017-08-01 瑞典商阿斯特捷利康公司 治療癌症之新型生物標記及方法
CN105294546B (zh) * 2015-10-29 2017-12-08 天津市斯芬克司药物研发有限公司 一种吡啶化合物及其制备方法
MX2018005298A (es) 2015-11-02 2018-06-22 Novartis Ag Regimen de dosificacion para un inhibidor de fosfatidilinositol 3-quinasa.
AU2016348391A1 (en) 2015-11-03 2018-05-17 Janssen Biotech, Inc. Antibodies specifically binding TIM-3 and their uses
WO2017093905A1 (en) 2015-12-03 2017-06-08 Novartis Ag Treatment of cancer with a pi3k inhibitor in a patient preselected for having a pik3ca mutation in the ctdna
AU2016369537B2 (en) 2015-12-17 2024-03-14 Novartis Ag Antibody molecules to PD-1 and uses thereof
WO2018009466A1 (en) 2016-07-05 2018-01-11 Aduro Biotech, Inc. Locked nucleic acid cyclic dinucleotide compounds and uses thereof
WO2018060833A1 (en) 2016-09-27 2018-04-05 Novartis Ag Dosage regimen for alpha-isoform selective phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor alpelisib
WO2018092064A1 (en) 2016-11-18 2018-05-24 Novartis Ag Combinations of mdm2 inhibitors and bcl-xl inhibitors
CN106674200B (zh) * 2016-12-21 2019-04-12 西安交通大学 一种含有l-脯氨酰胺片段的化合物及其制备方法和应用
UY37695A (es) 2017-04-28 2018-11-30 Novartis Ag Compuesto dinucleótido cíclico bis 2’-5’-rr-(3’f-a)(3’f-a) y usos del mismo
CN110785187B (zh) 2017-06-22 2024-04-05 诺华股份有限公司 针对cd73的抗体分子及其用途
EP3642240A1 (en) 2017-06-22 2020-04-29 Novartis AG Antibody molecules to cd73 and uses thereof
EP3694511A1 (en) 2017-10-13 2020-08-19 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Combination treatment of pancreatic cancer
WO2019101871A1 (en) 2017-11-23 2019-05-31 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) A new marker for predicting the sensitivity to pi3k inhibitors
JP2021504384A (ja) 2017-12-01 2021-02-15 ノバルティス アーゲー Ｌｓｚ１０２及びアルペリシブを含む医薬品の組合せ
MX2020005753A (es) * 2017-12-08 2020-08-20 Vertex Pharma Procesos para producir moduladores de regulador de conductancia transmembranal de fibrosis quistica.
JP7268049B2 (ja) 2018-03-08 2023-05-02 インサイト・コーポレイション ＰＩ３Ｋ－γ阻害剤としてのアミノピラジンジオール化合物
AU2019276514B2 (en) 2018-05-30 2023-12-14 Jiangsu Hansoh Pharmaceutical Group Co., Ltd. Inhibitor containing tricyclic derivative, preparation method therefor, and application thereof
AR126019A1 (es) 2018-05-30 2023-09-06 Novartis Ag Anticuerpos frente a entpd2, terapias de combinación y métodos de uso de los anticuerpos y las terapias de combinación
US20210214459A1 (en) 2018-05-31 2021-07-15 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
US11046658B2 (en) 2018-07-02 2021-06-29 Incyte Corporation Aminopyrazine derivatives as PI3K-γ inhibitors
US20220047567A1 (en) * 2018-09-10 2022-02-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the treatment of neurofibromatosis
CA3115103A1 (en) * 2018-10-05 2020-04-09 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Pi3k inhibitors and uses thereof
US20220040324A1 (en) 2018-12-21 2022-02-10 Daiichi Sankyo Company, Limited Combination of antibody-drug conjugate and kinase inhibitor
EP3971175A4 (en) 2019-05-13 2022-11-09 Luoxin Healthcare Science and Technology Development (Beijing) Ltd. CRYSTAL FORM OF A QUINAZOLINONE COMPOUND AND PROCESS FOR THEIR PRODUCTION
CN111995541A (zh) * 2019-05-27 2020-11-27 润佳（苏州）医药科技有限公司 含有稳定重同位素的酰胺官能团的化合物及其应用
US20220354863A1 (en) 2019-07-02 2022-11-10 Inserm (Institut National De La Santè Et De La Recherch Médicale) Methods for the prophylactic treatment of cancer in patients suffering from pancreatitis
US20220354452A1 (en) 2019-07-02 2022-11-10 Inserm (Institut National De La Santé Et De La Rechrche Médical) Use of ultrafast elasticity imaging for detecting pancreatic cancers
WO2021001431A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of pi3ka-selective inhibitors for treating metastatic disease in patients suffering from pancreatic cancer
EP4031578A1 (en) 2019-09-18 2022-07-27 Novartis AG Entpd2 antibodies, combination therapies, and methods of using the antibodies and combination therapies
KR20220119610A (ko) 2019-11-25 2022-08-30 상하이 한서 바이오메디컬 컴퍼니 리미티드 3개의 융합된 고리 유도체-함유 염 또는 결정 형태 및 이의 약학 조성물
CN113045564A (zh) * 2019-12-27 2021-06-29 上海天慈国际药业有限公司 一种阿培利司的制备方法
EP4126815A1 (en) 2020-03-25 2023-02-08 Risen (Suzhou) Pharma Tech Co., Ltd. Stable heavy isotopes in amide functional groups and uses thereof
WO2022016420A1 (zh) * 2020-07-22 2022-01-27 罗欣药业(上海)有限公司 一种喹唑啉酮类化合物的晶型、其制备方法及应用
CN117279627A (zh) 2021-05-03 2023-12-22 诺华股份有限公司 阿培利司配制品
WO2023083330A1 (zh) * 2021-11-12 2023-05-19 百极优棠(广东)医药科技有限公司 Drak2抑制剂及其制备方法和应用
EP4230196A1 (en) 2022-02-21 2023-08-23 Som Innovation Biotech, S.A. Compounds for use in the treatment of dystrophinopathies
WO2024089272A1 (en) 2022-10-28 2024-05-02 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale New inhibitors of phosphatidylinositol 3-kinase
WO2024100236A1 (en) 2022-11-11 2024-05-16 Astrazeneca Ab Combination therapies for the treatment of cancer

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004096797A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-11 Novartis Ag Inhibitors of phosphatidylinositol 3-kinase
WO2005021519A2 (en) * 2003-08-28 2005-03-10 Novartis Ag 5-phenyl-4-methyl-thiazol-2-yl-amine derivatives as inhibitors of phosphatidylinositol 3 kinase enzymes (pi3) for the treatment of inflammatory airway diseases

Family Cites Families (51)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4649146A (en) * 1983-01-31 1987-03-10 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Thiazole derivatives and pharmaceutical composition comprising the same
DE3703435A1 (de) 1987-02-05 1988-08-18 Thomae Gmbh Dr K Neue thiazole, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und verfahren zu ihrer herstellung
EP0373226B1 (en) 1988-04-15 1994-06-15 Taiho Pharmaceutical Company, Limited Carbamoyl-2-pyrrolidinone compounds
US5028726A (en) * 1990-02-07 1991-07-02 The University Of Vermont And State Agricultural College Platinum amine sulfoxide complexes
US5780653A (en) * 1995-06-07 1998-07-14 Vivorx Pharmaceuticals, Inc. Nitrophenyl, 10-deacetylated substituted taxol derivatives as dual functional cytotoxic/radiosensitizers
JP2001505585A (ja) 1996-12-16 2001-04-24 藤沢薬品工業株式会社 新規アミド化合物およびそれらの一酸化窒素シンターゼ阻害剤としての用途
US6187797B1 (en) * 1996-12-23 2001-02-13 Dupont Pharmaceuticals Company Phenyl-isoxazoles as factor XA Inhibitors
DK0970207T3 (da) * 1997-02-10 2009-07-13 Genentech Inc Heregulin-varianter
CA2302417A1 (en) 1997-10-27 1999-05-06 Takeda Chemical Industries, Ltd. Adenosine a3 receptor antagonists
CA2332325A1 (en) 1998-06-18 1999-12-23 Bristol-Myers Squibb Company Carbon substituted aminothiazole inhibitors of cyclin dependent kinases
ATE309241T1 (de) * 1999-09-10 2005-11-15 Merck & Co Inc Tyrosin kinase inhibitoren
GB0000313D0 (en) * 2000-01-10 2000-03-01 Astrazeneca Uk Ltd Formulation
CN100355751C (zh) * 2000-03-29 2007-12-19 西克拉塞尔有限公司 2－取代的4－杂芳基－嘧啶、其组合物及其用途
DE60134679D1 (de) 2000-10-20 2008-08-14 Eisai R&D Man Co Ltd Stickstoff enthaltende aromatische Heterozyklen
DE60208630T2 (de) 2001-05-11 2006-08-17 Pfizer Products Inc., Groton Thiazolderivate und ihre Verwendung als cdk-Inhibitoren
HUP0401748A3 (en) * 2001-08-13 2011-03-28 Janssen Pharmaceutica Nv 2-amino-4,5-trisubstituted thiazolyl derivatives, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
WO2003015778A1 (en) 2001-08-17 2003-02-27 Merck & Co., Inc. Tyrosine kinase inhibitors
CA2460909A1 (en) * 2001-09-28 2003-04-10 Cyclacel Limited N-(4-(4-methylthiazol-5-yl) pyrimidin-2-yl) -n-phenylamines as antiproliferative compounds
AR038703A1 (es) 2002-02-28 2005-01-26 Novartis Ag Derivados de 5-feniltiazol y uso como inhibidor de quinasa p i 3
TW200416221A (en) * 2002-10-30 2004-09-01 Vertex Pharma Compositions useful as inhibitors of ROCK and other protein kinases
AU2003302084A1 (en) 2002-11-15 2004-06-15 Bristol-Myers Squibb Company Open chain prolyl urea-related modulators of androgen receptor function
CA2513399A1 (en) * 2003-01-10 2004-07-29 Threshold Pharmaceuticals, Inc. Treatment of cancer with 2-deoxyglucose
GB0305152D0 (en) 2003-03-06 2003-04-09 Novartis Ag Organic compounds
EP1664006A2 (en) * 2003-09-06 2006-06-07 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of atp-binding cassette transporters
AU2005205201B2 (en) 2004-01-12 2011-05-12 Merck Serono Sa Thiazole derivatives and use thereof
CA2572314A1 (en) * 2004-06-29 2006-01-12 Christopher N. Farthing Pyrrolo[2,3-d]pyrimidines that modulate ack1 and lck activity
SE0402735D0 (sv) * 2004-11-09 2004-11-09 Astrazeneca Ab Novel compounds
CN105288630A (zh) * 2005-02-18 2016-02-03 阿布拉科斯生物科学有限公司 治疗剂的组合和给予方式以及联合治疗
DE102005024157A1 (de) 2005-05-23 2006-11-30 Amedo Gmbh Nadelpositioniersystem
US7799814B2 (en) 2005-05-24 2010-09-21 Merck Serono S.A. Thiazole derivatives and use thereof
ZA200710104B (en) 2005-05-24 2009-03-25 Serono Lab Thiazole derivatives and use thereof
DE102005024790A1 (de) 2005-05-26 2006-12-07 Eos Gmbh Electro Optical Systems Strahlungsheizung zum Heizen des Aufbaumaterials in einer Lasersintervorrichtung
US7655446B2 (en) * 2005-06-28 2010-02-02 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Crystal structure of Rho-kinase I kinase domain complexes and binding pockets thereof
DE102005048072A1 (de) 2005-09-24 2007-04-05 Bayer Cropscience Ag Thiazole als Fungizide
CA2633569A1 (en) 2005-12-12 2007-06-21 Genelabs Technologies, Inc. N-(5-membered heteroaromatic ring)-amido anti-viral compounds
GB0525671D0 (en) 2005-12-16 2006-01-25 Novartis Ag Organic compounds
CA2635830A1 (en) * 2006-01-23 2007-07-26 Laboratoires Serono S.A. Thiazole derivatives and use thereof
US20070259855A1 (en) * 2006-04-06 2007-11-08 Udo Maier Thiazolyl-dihydro-indazole
EP2016075A1 (en) * 2006-05-03 2009-01-21 AstraZeneca AB Thiazole derivatives and their use as anti-tumour agents
GB0610243D0 (en) 2006-05-23 2006-07-05 Novartis Ag Organic compounds
GB0612630D0 (en) * 2006-06-26 2006-08-02 Novartis Ag Organic compounds
FR2904190B1 (fr) 2006-07-25 2008-12-12 Inst Rech Pour Le Dev I R D Et Utilisation d'inocula fongiques pour l'amelioration de la production maraichere
TW200827368A (en) 2006-11-21 2008-07-01 Genelabs Tech Inc Amido anti-viral compounds
WO2008124000A2 (en) 2007-04-02 2008-10-16 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Thiazole derivatives as androgen receptor modulator compounds
JP5615700B2 (ja) 2007-05-25 2014-10-29 アボット ゲーエムベーハー ウント カンパニー カーゲー 代謝型グルタミン酸受容体２（ｍｇｌｕ２受容体）の陽性調節剤としての複素環化合物
WO2009003009A1 (en) 2007-06-26 2008-12-31 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Substituted pyrrolidine as anti-infectives
SI2178865T1 (sl) 2007-07-19 2015-11-30 Lundbeck, H., A/S 5-členski heterociklični amidi in sorodne spojine
ITMI20072396A1 (it) 2007-12-20 2009-06-21 Dachi S R L "apparato di chiusura di contenitori di materiale biologico"
KR20100093129A (ko) * 2007-12-20 2010-08-24 노파르티스 아게 Ｐｉ ３ 키나제 억제제로서 사용되는 티아졸 유도체
WO2009080705A2 (en) 2007-12-20 2009-07-02 Novartis Ag Bis-thiazole derivatives, process for their preparation and their use as medicaments
UA104147C2 (ru) * 2008-09-10 2014-01-10 Новартис Аг Производная пирролидиндикарбоновой кислоты и ее применение в лечении пролиферативных заболеваний

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004096797A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-11 Novartis Ag Inhibitors of phosphatidylinositol 3-kinase
WO2005021519A2 (en) * 2003-08-28 2005-03-10 Novartis Ag 5-phenyl-4-methyl-thiazol-2-yl-amine derivatives as inhibitors of phosphatidylinositol 3 kinase enzymes (pi3) for the treatment of inflammatory airway diseases

Also Published As

Publication number Publication date
NL301071I1 (nl) 2020-11-11
ME01284B (me) 2013-06-20
TWI453206B (zh) 2014-09-21
US20140186469A1 (en) 2014-07-03
CO6351738A2 (es) 2011-12-20
WO2010029082A1 (en) 2010-03-18
CY2020037I2 (el) 2021-03-12
CY1117078T1 (el) 2017-04-05
GEP20135991B (en) 2013-12-25
AR073369A1 (es) 2010-11-03
ZA201100699B (en) 2012-08-29
TN2011000053A1 (en) 2012-09-05
IL210976A0 (en) 2011-04-28
MX2011002597A (es) 2011-07-21
DOP2011000070A (es) 2011-03-31
AR112074A2 (es) 2019-09-18
NI201100049A (es) 2011-07-26
BRPI0918750B8 (pt) 2021-05-25
US20120263712A1 (en) 2012-10-18
HUE025884T2 (en) 2016-05-30
SMAP201100019A (it) 2011-05-06
ES2560673T3 (es) 2016-02-22
EA201100447A1 (ru) 2011-10-31
CA2734819A1 (en) 2010-03-18
JO3121B1 (ar) 2017-09-20
SMP201100019B (it) 2012-01-18
LTC2331537I2 (lt) 2022-01-10
ECSP11010880A (es) 2011-04-29
US8227462B2 (en) 2012-07-24
NL301071I2 (nl) 2020-12-01
SI2331537T1 (sl) 2016-02-29
JP2012502080A (ja) 2012-01-26
NZ590754A (en) 2012-08-31
LTPA2020534I1 (lt) 2020-12-28
SV2011003853A (es) 2011-05-16
KR101290844B1 (ko) 2013-07-29
HUS2000044I1 (hu) 2020-12-28
MY151556A (en) 2014-06-13
DK2331537T3 (en) 2016-01-25
US20100105711A1 (en) 2010-04-29
UA104147C2 (ru) 2014-01-10
MA32604B1 (fr) 2011-09-01
EP2331537A1 (en) 2011-06-15
CN102149711A (zh) 2011-08-10
US8476268B2 (en) 2013-07-02
US8710085B2 (en) 2014-04-29
NO2020037I1 (no) 2020-11-16
BRPI0918750B1 (pt) 2020-12-22
CU20110052A7 (es) 2011-12-28
PE20110796A1 (es) 2011-11-04
PT2331537E (pt) 2016-03-03
CY2020037I1 (el) 2021-03-12
IL210976A (en) 2014-09-30
BRPI0918750A2 (pt) 2020-08-04
RS54476B1 (en) 2016-06-30
KR20110038737A (ko) 2011-04-14
JP5486601B2 (ja) 2014-05-07
HK1156305A1 (en) 2012-06-08
CU24000B1 (es) 2014-06-27
TW201014851A (en) 2010-04-16
UY32096A (es) 2010-04-30
CL2011000504A1 (es) 2011-07-15
PA8841901A1 (es) 2010-06-28
CA2734819C (en) 2017-10-24
CN102149711B (zh) 2014-09-10
AU2009290904B2 (en) 2012-08-30
PL2331537T3 (pl) 2016-06-30
HN2011000699A (es) 2013-12-02
HRP20160014T1 (hr) 2016-02-12
US20140005232A1 (en) 2014-01-02
CR20110059A (es) 2011-03-28
EP2331537B1 (en) 2015-10-28
AU2009290904A1 (en) 2010-03-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA018863B1 (ru) Органические соединения
JP5976778B2 (ja) キナーゼ阻害剤としてのピラゾリル−ピリミジン誘導体
KR102470598B1 (ko) 메틸/플루오로-피리디닐-메톡시 치환된 피리디논-피리디닐 화합물 및 플루오로-피리미디닐-메톡시 치환된 피리디논-피리디닐 화합물
EA021421B1 (ru) Производные хинолинов и хиноксалинов в качестве ингибиторов протеинтирозинкиназы, способ их получения, содержащая их фармацевтическая композиция и способ лечения заболеваний с применением таких соединений
HUE026041T2 (en) Pyrrolo-triazinone derivatives as P13K inhibitors
KR20080063806A (ko) 단백질 키나제 억제제로서의 피라졸로피리미딘
ES2432671T3 (es) 2-carboxamida cicloamino ureas útiles como inhibidores de PI3K
AU2020295006B2 (en) Cycloalkyl and heterocycloalkyl benzisoxazole sulfonamide derivatives
JP2023099049A (ja) ＰＩ３Ｋ－γ阻害剤としてのアミノピラジンジオール化合物
EP2448935B1 (en) Substituted 2-carboxamide cycloamino ureas
EP3113780B1 (en) Hiv protease inhibitors
US9359300B2 (en) Methyl/difluorophenyl-methoxy substituted pyridinone-pyridinyl compounds, methyl-pyridinyl-methoxy substituted pyridinone-pyridinyl compounds, and methyl-pyrimidinyl-methoxy substituted pyridinone-pyridinyl compounds

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ MD

MA4A Surrender of the eurasian patent at the request of the proprietor in the following designated state(s)

Designated state(s): TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): KG

ND4A Extension of term of a eurasian patent