ES2432671T3 - 2-carboxamida cicloamino ureas útiles como inhibidores de PI3K - Google Patents

2-carboxamida cicloamino ureas útiles como inhibidores de PI3K Download PDF

Info

Publication number
ES2432671T3
ES2432671T3 ES10729848T ES10729848T ES2432671T3 ES 2432671 T3 ES2432671 T3 ES 2432671T3 ES 10729848 T ES10729848 T ES 10729848T ES 10729848 T ES10729848 T ES 10729848T ES 2432671 T3 ES2432671 T3 ES 2432671T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
amide
dihydro
quinazolin
thiazolo
dicarboxylic
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES10729848T
Other languages
English (en)
Inventor
Robin Alec Fairhurst
Marc Gerspacher
Robert Mah
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Novartis AG
Original Assignee
Novartis AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novartis AG filed Critical Novartis AG
Application granted granted Critical
Publication of ES2432671T3 publication Critical patent/ES2432671T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D513/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/428—Thiazoles condensed with carbocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D513/14—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)

Abstract

Un compuesto de fórmula I **Fórmula** en donde, A es un anillo arilo no sustituido o sustituido o un anillo heterocíclico sustituido fusionado al resto de la molécula enlas posiciones indicadas por el símbolo *; X-Y es (CH2)r o O(CH2)t o (CH2)tO en donde, r es 1, 2 o 3; t es 1 o 2; n es 0, 1 o 2; q es 0, 1, 2, 3 o 4; R1 representa, en cada aparición, halo; hidrox i;arilo no sustituido o sustituido; amino no sustituido o sustituido; alquilo C1-C7 no sustituido; C1-C7-alquiloel cual es sustituido una o más veces por hidroxi, C1-C7-alcoxi, amino no sustituido o sustituido, arilo oheterociclilo, y en donde arilo puede ser mono o polisustituido por halo; o Dos sustituyentes R1 sustituyentes forman juntos un alcanodiilo para formar una unidad estructural cíclica, sustitutidaopcionalmente por hidroxi o halo, o una sal de los mismos.

Description

2- carboxamida cicloamino ureas útiles como inhibidores de PI3K
La presente invención se relaciona con 2-carboxamida cicloamino ureas sustituidas, como nuevos compuestos inhibidores de fosfatidilo inositol (PI) 3-quinasa y sus sales farmacéuticamente aceptables. La invención también se relaciona con composiciones de estos compuestos, bien sea solos o en combinación con al menos un agente terapéutico adicional, y opcionalmente en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Esta invención se relaciona todavía adicionalmente con estos compuestos, bien sea solos o en combinación con al menos un agente terapéutico adicional, para uso en la profilaxis o tratamiento de un cierto número de enfermedades, en particular, las mediadas por una o más actividad anormal de factores de crecimiento, tirosina quinasa receptoras, proteína serina/heroína quinasas, receptores acoplados con proteína G y fosfolípido quinasas y fosfatasas.
Las fosfatidilinositol 3-quinasas (PI3K) comprenden una familia de quinasas lipídicas que catalizan la transferencia de fosfato a la posición D-3' de los lípidos de inositol para producir fosfoinositol-3-fosfato (PIP), fosfoinositol-3,4difosfato (PIP2) y fosfoinositol-3,4,5-trifosfato (PIP3) los cuales, a su vez, actúan como segundos mensajeros en las cascadas de señalización acumulando proteínas que contienen homología con pleckstrina, (FYVE, Fox y otros dominios enlazantes de fosfolípidos en una variedad de complejos de señalización frecuentemente en la membrana plasmática ((Vanhaesebroeck et al.,. Annu. Rev. Biochem 70:535 (2001); Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol.
17:615 (2001)). De las dos PI3K de Clase 1, la Clase 1A de PI3K son heterodímeros compuestos de una subunidad catalítica p110 (isoformas a, �, 5) asociados constitutivamente con una subunidad reguladora que puede ser p85a, p55a, p50a, p85� o p55y. La subclase Clase 1B tiene un miembro de familia, un heterodímero compuesto de una subunidad catalítica p110y asociada con una de dos subunidades reguladoras, p101 o p84 (Fruman et al, Annu Rev. Biochem 67:481 (1998). Suire et al., Curr. Biol. 15:566 (2005)). Los dominios modulares de las subunidades p85/55/50 incluyen dominios de homología con Src (SH2) que se enlazan a residuos de fosfotirosina en un contexto de secuencia específica sobre un receptor activado y tirosina quinasas citoplasmáticas, dando como resultado la activación y localización de las PI3K de Clase 1A. La PI3K de Clase 1B se activa directamente por receptores acoplados con proteínas G que se enlazan a un repertorio diverso de péptidos y de ligandos no peptídicos (Stephens et al., Cell 89:105 (1997)); Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17:615-675 (2001)). Consecuentemente, los productos de fosfolípidos resultantes de PI3K de la Clase I se enlazan a receptores corriente arriba con actividades celulares corriente abajo incluyendo proliferación, supervivencia, quimiotaxis, tráfico celular, motilidad, metabolismo, respuestas inflamatorias y alérgicas, transcripción y traducción (Cantley et al., Cell 64:281 (1991); Escobedo y Williams, Nature 335:85 (1988); Fantl et al., Cell 69:413 (1992)).
En muchos casos, la PIP2 y la PIP3 reclutan Akt, el producto del homólogo humano del oncógeno viral v-Akt, a la membrana plasmática donde actúa como punto modal para muchas rutas de señalización intracelular importantes para el crecimiento y supervivencia (Fantl et al., Cell 69:413-423(1992); Bader et al., Nature Rev. Cancer 5:921 (2005); Vivanco y Sawyer, Nature Rev. Cancer 2:489 (2002)). Regulación aberrante de PI3K, la cual frecuentemente incrementa la supervivencia a través de la activación de Akt, es uno de los eventos más prevalentes en el cáncer humano y ha demostrado presentarse en múltiples niveles. El gen supresor de tumores PTEN, el cual desfosforila los fosfoinosítidos en la posición 3' del anillo de inositol y al hacer así antagoniza la actividad de PI3K, se elimina funcionalmente en una variedad de tumores. En otros tumores, los genes de la isoforma p110a, PIK3CA, y para Akt son amplificados y se ha demostrado un incremento en la expresión proteínica de sus productos genéticos en varios cánceres humanos. Adicionalmente, las mutaciones y translocación de p85a que sirven para sobreregular el complejo p85-p110 han sido descritos en cánceres humanos. Finalmente, mutaciones de sentido contrario somáticas en PIK3CA que activan las rutas de señalización corriente abajo han sido descritas en frecuencias significativas en una amplia diversidad de cánceres humanos (Kang at el., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:802 (2005); Samuels et al., Science 304:554 (2004); Samuels et al., Cancer Cell 7:561 - 573 (2005)). Estas observaciones muestran que la desregulación de la fosfoinositol-3-quinasa y los componentes corriente arriba y corriente abajo de esta ruta de señalización es una de las desregulaciones más comunes asociadas con los cánceres humanos y las enfermedades proliferativas (Parsons et al., Nature 436:792 (2005); Hennessey at el., Nature Rev. Drug Disc. 4:988-1004 (2005)).
A la vista de lo anterior, los inhibidores de PI3K serían de valor particular en el tratamiento de enfermedades proliferativas y otros trastornos. La selectividad hacia la isoforma PI3K a es deseable, y propiedades deseables adicionales incluyen propiedades farmacocinéticas y/o estabilidad química mejoradas.
La WO2004/096797 divulga ciertos derivados de tiazol como inhibidores de PI3 quinasa y su uso como agentes farmacéuticos.
La WO 2005/021519 también divulga ciertos derivados de tiazol como inhibidores de PI3 quinasa y su uso como agentes farmacéuticos.
La US 2006/0106013 divulga ciertos derivados de tiazol como inhibidores de PI3 quinasa y su uso como agentes farmacéuticos.
Se ha encontrado ahora que las 2-carboxamida cicloamino ureas de la fórmula I dadas más adelante tienen propiedades farmacológicas ventajosas e inhiben, por ejemplo, las PI3 quinasas (fosfatidilinositol 3-quinasa). En particular, preferiblemente, estos compuestos muestran selectividad por los subtipos PI3K alfa versus beta y/o delta y/o gamma en el ensayo bioquímico y/o en el celular. Una propiedad adicional que es preferiblemente deseada para los compuestos de la fórmula I incluye una estabilidad mejorada, por ejemplo, estabilidad química mejorada, por ejemplo en forma sólida y/o en solución regulada. Por lo tanto, los compuestos de la fórmula I son adecuados, por ejemplo, para ser usados en el tratamiento de enfermedades que dependen de la PI3 quinasa (en particular PI3K alfa, tales como los que muestran mutación somática de PIK3CA o mutaciones en la línea germinal o mutación somática de PTEN), especialmente enfermedades proliferativas tales como enfermedades tumorales y leucemias.
En un primer aspecto, la presente invención provee compuestos de la fórmula I,
en donde,
A es un anillo arilo no sustituido o sustituido o un anillo heterocíclico sustituido fusionado al resto de la molécula en las posiciones indicadas por el símbolo *; X-Y es (CH2)r o O(CH2)t o (CH2)tO en donde, r es 1, 2 o 3; t es 1 o 2; n es 0, 1 o 2; q es 0, 1, 2, 3 o 4; R1 representa, en cada aparición, halo; hidroxi; arilo no sustituido o sustituido; amino no sustituido o sustituido; alquilo C1-C7 no sustituido; C1-C7-alquilo el cual es sustituido una o más veces por hidroxi, C1-C7-alcoxi, amino no sustituido o sustituido, arilo o
heterociclilo, y en donde arilo puede ser mono o polisustituido por halo; o dos sustituyentes R1 forman juntos un alcanodiilo para formar una unidad estructural cíclica, sustitutida opcionalmente por hidroxi o halo;
o una sal, solvato o hidrato de los mismos.
La invención puede ser apreciada más completamente con referencia a la siguiente descripción, incluyendo el siguiente glosario de términos y los ejemplos concluyentes. Tal como se utiliza aquí, los términos "que incluye", "que contiene" y "que comprende" se utilizan aquí en su sentido abierto no limitante.
Cualquier fórmula dada aquí pretende representar compuestos que tienen estructuras representadas por la fórmula estructural así como ciertas variaciones o formas. En particular, los compuestos de cualquier fórmula dada aquí pueden tener centros asimétricos y por lo tanto existen en diferentes formas estereoisoméricas tales como diferentes
formas enantioméricas. Si al menos está presente un átomo de carbono asimétrico en el compuesto de la fórmula I, tal compuesto puede existir en una forma ópticamente activa o en la forma de una mezcla de isómeros ópticos, por ejemplo, en la forma de una mezcla racémica. Así, un átomo de carbono asimétrico puede estar presente en una configuración (R)-, (S)- o (R, S)-, preferiblemente en la configuración (R) - o (S)-. Todos los isómeros ópticos y sus mezclas, incluyendo las mezclas racémicas, son parte de la presente invención. Así, cualquier fórmula dada aquí pretende representar un racemato, una o más formas enantioméricas, una o más formas diastereoméricas, una o más formas atropisométricas, y mezclas de los mismos. Adicionalmente, ciertas estructuras pueden existir como isómeros geométricos (por ejemplo isómeros cis y trans), como tautómeros, o como atropisómeros. Por ejemplo, sustituyentes en un doble enlace o un anillo pueden estar presentes en la forma cis- (=Z-) o trans (=E-). Los compuestos de la invención pueden estar presentes así como mezclas de isómeros o preferiblemente como isómeros puros, preferiblemente como enantiómeros-diastereómeros puros o enantiómeros puros.
Cualquier fórmula dada aquí pretende representar hidratos, solvatos y polimorfos de tales compuestos, y mezclas de los mismos.
Cualquier fórmula dada aquí pretende representar formas no marcadas así como formas isotópicamente marcadas de los compuestos. Los compuestos marcados isotópicamente tienen estructuras representadas por las fórmulas dadas aquí excepto que uno o más átomos son reemplazados por un átomo que tiene una masa atómica o número de masa seleccionado. Ejemplos de isótopos que pueden ser incorporados en compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 31P,32P, 35S 18F , 36Cl, 125I, respectivamente. Se incorporan diversos compuestos marcados isotópicamente de la presente invención, por ejemplo aquellos en los cuales los isótopos radiactivos tales como 3H, 13C, y 14C. Tales compuestos isotópicamente marcados son útiles en estudios metabólicos (preferiblemente con 14C), estudios de cinética de reacción (con, por ejemplo, 2H o 3H), detección o técnicas de formación de imágenes, tales como tomografía de emisión por positrones (PET) o tomografía computarizada de emisión de fotón individual (SPECT ) incluyendo ensayos de distribución de fármacos o de tejidos sustrato o en tratamientos radioactivos de pacientes. En particular, un compuesto marcado con 18F puede ser particularmente preferido para estudios de PET o SPECT. Adicionalmente, la sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio (2H) puede producir ciertas ventajas terapéuticas resultantes de la mayor estabilidad metabólica, por ejemplo vida media incrementada in vivo o requerimientos de dosificación reducidos. Los compuestos marcados isotópicamente de esta invención y profármacos de los mismos pueden prepararse en general llevando a cabo los procedimientos divulgados en los esquemas o en los ejemplos y en la preparaciones descritas más adelante sustituyendo un reactivo isotópicamente marcado fácilmente disponible por un reactivo marcado no isotópicamente.
Adicionalmente, la sustitución con isótopos más pesados, particularmente deuterio (esto es, 2H o D) puede producir ciertas ventajas terapéuticas resultantes de una estabilidad metabólica mayor, por ejemplo, vida media incrementada in vivo o requerimientos de dosificación reducidos o un mejoramiento en el índice terapéutico. Se entiende que el deuterio en este contexto es visto como un sustituyente en el compuesto de la fórmula (I). La concentración de tal isótopo más pesado, específicamente deuterio, puede ser definida por el factor de enriquecimiento isotópico. El término "factor de enriquecimiento isotópico" tal como se utiliza aquí significa la relación entre la abundancia isotópica y la abundancia natural de un isótopo especificado. Si un sustituyente en un compuesto de esta invención es deuterio denotado, tal compuesto tiene un factor de enriquecimiento isotópico para cada átomo de deuterio designado de al menos 3500 (52.5% de incorporación de deuterio en cada átomo de deuterio designado), al menos 4000 (60% de incorporación de deuterio), al menos 4500 (67.5% de incorporación de deuterio), al menos 5000 (75% de incorporación de deuterio), al menos 5500 (82.5% de incorporación de deuterio), al menos 6000 (90% de incorporación de deuterio), al menos 6333.3 (95% de incorporación de deuterio), al menos 6466.7 (97% de incorporación de deuterio), al menos 6600 (99% de incorporación de deuterio), o al menos 6633.3 (99.5% de incorporación de deuterio). En los compuestos de esta invención cualquier átomo no específicamente designado como isótopo particular pretende representar cualquier isótopo estable de ese átomo. A menos que se establezca otra cosa, cuando se designa una posición específicamente como "H" o "hidrógeno", se entiende que la posición tiene hidrógeno en su composición isotópica de abundancia natural. De acuerdo con lo anterior, en los compuestos de esta invención cualquier átomo designado específicamente como un deuterio (D) se entiende que representa deuterio, por ejemplo en los rangos dados anteriormente.
Cuando se hace referencia a cualquier fórmula dada aquí, la selección de una unidad estructural en particular de una lista de especies posibles para una variable especificada no pretende definir la unidad estructural para la aparición variable en cualquier lugar. En otras palabras, cuando aparece una variable más de una vez, la selección de las especies a partir de una lista especificada es independiente de la selección de las especies para la misma variable en cualquier lugar de la fórmula (donde una o más hasta todas las expresiones más generales en realizaciones caracterizadas como se prefieren más arriba o más abajo pueden ser reemplazadas con una definición más específica, llevando así a una realización más preferida de la invención, respectivamente).
Cuando se usa la forma plural (por ejemplo, compuestos, sales, preparaciones farmacéuticas, enfermedades y similares) esto incluye el singular (por ejemplo un compuesto individual, una sal individual, una preparación
farmacéutica individual, una enfermedad individual y similares). "Un compuesto" no excluye que (por ejemplo en una formulación farmacéutica) esté presente más de un compuesto de la fórmula (I) (o una sal del mismo).
Las sales son preferiblemente sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la fórmula (I) si portangrupos formadores de sales. Ácidos/bases requeridos para formar las sales son conocidos en general en el sector.
Las siguientes definiciones generales se aplicarán en esta especificación, a menos que se especifique otra cosa: halógeno (o halo) denota flúor, bromo, cloro o yodo, en particular flúor, cloro. Grupos y unidades estructurales sustituidos con halógeno, tales como alquilo sustituido por halógeno (halogenoalquilo) pueden ser mono-, poli- o perhalogenados.
Heteroátomos son átomos diferentes a carbono e hidrógeno, preferiblemente nitrógeno (N), oxígeno (O) o azufre (S), en particular nitrógeno.
"Alquilo" se refiere a un grupo alquilo de cadena recta o cadena ramificada, e incluye alquilo C1-7 y más preferiblemente alquilo C1-4. Tales grupos alquilo incluyen, por ejemplo, metilo, etilo, n- o iso-propilo,n-, iso-, sec- o tert-butilo,n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, dándose particular preferencia a metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo y iso-butilo. Alquilo puede ser no sustituido o sustituido. Los sustituyentes de ejemplo incluyen, pero no se limitan a hidroxi, alcoxi, halógeno (especialmente fluoro), amino y amino disustituido, amino sustituido mono- o dialquilo, acetilamino, morfolinilo, arilo. Un ejemplo de un alquilo sustituido es trifluorometilo. Cicloalquilo también puede ser un sustituyente para alquilo. Un ejemplo de tal caso es la unidad estructural (alquil)-cicloalquilo, tal como (alquil)ciclopropilo o (alquil)-ciclobutilo,e.g. metil-ciclopropilo o metil-ciclobutilo. Un ejemplo más específico de una unidad estructural (alquilo)-cicloalquilo incluye un tipo geminal de patrón de sustitución, por ejemplo, 1-alquilo cicloalquilo, tal como 1-metilo ciclopropilo. Otro ejemplo de cicloalquilo como sustituyente para alquilo es alcandinil-cicloalquilo, tal como alcandinilo ciclopropilo, por ejemplo -CH2-ciclopropilo, alquilo C1-C7 es alquilo con desde e incluyendo 1 hasta e incluyendo 7 átomos de carbono, preferiblemente desde e incluyendo 1 hasta e incluyendo 4 átomos de carbono (alquilo C1-C4) y es lineal o ramificado; preferiblemente, alquilo inferior es butilo, tal como n-butilo, secbutilo, isobutilo, tert-butilo, propilo, tal como n-propilo o isopropilo, etilo o preferiblemente metilo.
Cada parte alquilo de los otros grupos como "alcoxi", "alcoxialquilo”, "alcoxicarbonilo”, "alcoxicarbonilalquilo”, "alquilsulfonilo”, "alquilsulfoxilo”, "alquilamino", "halogenalquilo” tendrán el mismo significado como se describió en la definición anteriormente mencionada de "alquilo".
"Cicloalquilo-C3-7" se refiere a un carbociclo saturado o parcialmente saturado, monocíclico, policíclico fusionado o espiro policíclico, de 3 a 7 átomos de anillo por carbociclo. Ejemplos ilustrativos de grupos cicloalquilo incluyen las siguientes unidades estructurales: ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo, C3-C7-cicloalquilo puede ser sustituidos o no sustituidos; sustituyentes de ejemplo se proveen en la definición para alquilo. Un cicloalquilo C3-C7 también puede estar sustituido sobre otros grupos, por ejemplo, sobre un grupo alquilo.
"Arilo" se refiere a un sistema de anillo aromático carbocíclico insaturado, preferiblemente que tiene un sistema de anillo de no más de 16 átomos de carbono, especialmente no más de 10 átomos de carbono, por ejemplo que tiene de 6 a 16, preferiblemente de 6 a 10 átomos de carbono de anillo, es preferiblemente mono- o bicíclico, y es no sustituido o sustituido. Por ejemplo, arilo es fenilo no sustituido o sustituido.
"Heterociclilo" se refiere a un radical heterocíclico que es insaturado (en particular insaturado al máximo, por ejemplo, que porta el máximo número posible de dobles enlaces conjugados en los anillos), por ejemplo heteroarilo), saturado o parcialmente saturado en el anillo de enlazamiento y es preferiblemente un anillo monocíclico o en un aspecto más amplio de la invención bicíclico; tiene 3-16 átomos de anillo, más preferiblemente 4-10 átomos de anillo, donde al menos en el enlace de anillo al radical de la molécula de la fórmula (I) uno o más, preferiblemente 14 átomos de anillo, especialmente uno o dos átomos de anillo son un heteroátomo seleccionado del grupo consistente de nitrógeno, oxígeno y azufre; el anillo de enlazamiento que tiene preferiblemente 4-12 átomos de anillo, especialmente 4-7 átomos de anillo, por ejemplo 6-10 átomos de anillo, especialmente para heteroarilo, tal como 5, 6, 9 o 10 átomos de anillo. El heterociclilo puede ser no sustituido o sustituido por uno o más, especialmente 1 a 3, sustituyentes seleccionados independientemente del grupo consistente de alquilo o los sustituyentes definidos anteriormente para alquilo sustituido y/o de uno o más de los siguientes sustituyentes: oxo (=O), tiocarbonilo (=S), imino(=NH), imino-alquilo inferior, y para heteroarilos que contienen nitrógeno, incluyendo N-óxidos de los mismos.
"Tratamiento" incluye tratamiento profiláctico (preventivo) y terapéutico, así como el retardo de la progresión de una enfermedad o trastorno.
"Enfermedades mediadas por PI3 quinasa" (especialmente enfermedades mediadas por PI3K alfa) son especialmente tales desordenes que responden de una manera beneficiosa (por ejemplo mejora de uno o más síntomas, retardo de la aparición de una enfermedad, hasta cura temporal o completa de una enfermedad) a la inhibición de una PI3 quinasa, especialmente la inhibición de la PI3Kalfa (donde las enfermedades que se van a tratar incluyen aquellas que muestran mutación somática de PIK3CA o mutaciones de la línea germinal o mutaciones somáticas de PTEN). Las enfermedades que se van a tratar incluyen específicamente enfermedades
proliferativas tales como enfermedades tumorales, incluyendo tumores sólidos, leucemias, glioblastoma, cáncer de seno y cáncer de próstata.
"Sales" (las cuales, lo que se entiende por "o sales del mismo" o "o una sal del mismo"), pueden estar presentes solas o en mezcla con el compuesto libre de la fórmula I y son preferiblemente sales farmacéuticamente aceptables. Los grupos formadores de sales en un compuesto de la fórmula (I) son grupos o radicales que tienen propiedades básicas o ácidas. Los compuestos que tienen al menos un grupo básico o al menos un radical básico, por ejemplo, amino; un grupo amino secundario no formador de un enlace peptídico o un radical piridilo, pueden formar sales de adición ácidas, por ejemplo, con ácidos inorgánicos, tales como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico o un ácido fosfórico; o con ácidos carboxílicos orgánicos o sulfónicos adecuados, por ejemplo, ácidos alifáticos mono- o dicarboxílicos, tales como ácido trifluoroacético, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido hidroximaleico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico o ácido oxálico; o aminoácidos, tales como arginina o lisina; ácidos aromáticos carboxílicos, tales como ácido benzoico; ácido 2fenoxibenzoico; ácido 2-acetoxibenzoico; ácido salicílico; ácido 4-aminosalicílico; ácidos carboxílicos aromáticosalifáticos, tales como ácido mandélico o ácido cinámico; ácidos heteroaromáticos carboxílicos, tales como ácido nicotínico o ácido isonicotínico, ácidos alifáticos sulfónicos, tales como ácido metano, etano o 2hidroxietanosulfónico; o ácidos sulfónicos aromáticos, por ejemplo ácido benceno-, p-tolueno- o naftalen-2-sulfónico. Cuando hay presentes varios grupos básicos pueden formarse sales de adición mono- o poliácidas. Los compuestos de la fórmula (I) que tienen grupos ácidos, un grupo carboxi o un grupo hidroxi fenólico, pueden formar sales metálicas o de amonio, tales como sales de metales alcalinos o alcalinotérreos, por ejemplo, sales de sodio, potasio, magnesio o calcio; o sales de amonio con amoniaco o aminas orgánicas adecuadas, tales como monoaminas terciarias, por ejemplo trietilamina o tri(2-hidroxietil)-amina, o bases heterocíclicas, por ejemplo, N-etil-piperidina o N,N’-dimetilpiperazina. Las mezclas de sales son posibles. Los compuestos de la fórmula (I) que tienen grupos tanto ácidos como básicos pueden formar sales internas.
Para propósitos de aislamiento o purificación también es posible utilizar sales farmacéuticamente no aceptables, por ejemplo, picratos o percloratos. Para uso terapéutico, solo se emplean sales farmacéuticamente aceptables o los compuestos libres (cuando sean aplicables en la forma de preparaciones farmacéuticas), y por lo tanto estos son preferidos. A la vista de la relación cercana entre los compuestos novedosos en forma libre y los que están en forma de sus sales, incluyendo aquellas sales que pueden ser utilizadas como intermedios, por ejemplo en la purificación o identificación de los compuestos novedosos, cualquier referencia a los compuestos libres aquí anteriormente y de aquí en adelante debe entenderse como referencia también a las sales correspondientes, según sea apropiado y conveniente.
Los compuestos de la presente invención también pueden formar solvatos e hidratos, y como tales cualquier referencia a un compuesto de la fórmula (I) se entiende por lo tanto como referencia también al correspondiente solvato y/o hidrato del compuesto de la fórmula (I), según sea apropiado y conveniente.
Combinación, se refiere bien sea a una combinación fija en una forma de dosificación unitaria, o un conjunto de partes para la administración combinada donde un compuesto de la fórmula I y un asociado de combinación (por ejemplo, otro fármaco como se explica más adelante, también denominado como "agente terapéutico" o "coagente") puede ser administrado independientemente en el mismo momento o separadamente dentro de un intervalo de tiempo, especialmente cuando estos intervalos de tiempo permiten que los asociados de combinación muestren un efecto cooperativo, por ejemplo, sinérgico. Los términos "coadministración" o "administración combinada" o similares tal como se utilizan aquí pretenden abarcar la administración del asociado de combinación seleccionado a un sujeto individual que así lo requiere (por ejemplo un paciente), y pretenden incluir regímenes de tratamiento en los cuales los agentes no se administran necesariamente mediante la misma ruta de administración o al mismo tiempo. El término "combinación farmacéutica" tal como se utiliza aquí significa un producto que resulta de la mezcla o combinación de más de un ingrediente activo e incluye tanto combinaciones fijas como no fijas de los ingredientes activos. El término "combinación fija" significa que los ingredientes activos, por ejemplo, un compuesto de la fórmula I y un asociado de combinación, se administran ambos a un paciente simultáneamente en la forma de una entidad o dosificación individual. El término "combinación no fija" significa que los ingredientes activos, por ejemplo un compuesto de la fórmula I y un asociado de combinación, se administran ambos a un paciente como entidades separadas bien sea simultáneamente, concurrentemente o secuencialmente sin límites específicos de tiempo; en donde tal administración provee niveles efectivos terapéuticamente de los dos componentes en el cuerpo del paciente. Esto último se aplica también a la terapia de cóctel, por ejemplo, la administración de tres o más ingredientes activos.
En realizaciones preferidas, las cuales se prefieren independientemente, colectivamente, o en cualquier combinación
o subcombinación, la invención se relaciona con un compuesto de la fórmula I, en forma de base libre o en forma de sal, en donde los sustituyentes son como se define aquí.
Como se muestra en la fórmula I, el sustituyente alfa-amida está en la posición 2 sobre el anillo de pirrolidina y la estereoquímica en esta posición es como se dibuja.
El anillo A es preferiblemente un anillo heterocíclico de 5 a 6 miembros no sustituido o sustituido (preferiblemente un
heteroarilo) que contiene 1 o 2 heteroátomos seleccionados de N, S u O, en general al menos un heteroátomo es N. Más preferiblemente, el anillo A se selecciona de un anillo de piridina no sustituido o sustituido, anillo de pirimidina no sustituido o sustituido, anillo de tiazol no sustituido o sustituido, anillo de pirazol no sustituido o sustituido o anillo
5 de oxazol no sustituido o sustituido. Más preferible es un anillo de piridina no sustituido o sustituido, anillo de
pirimidina no sustituido o sustituido o un anillo de tiazol no sustituido o sustituido. Preferiblemente, el anillo A está fusionado al resto de la molécula de la fórmula I a través de átomos de carbono del anillo A.
El anillo A está sustituido preferiblemente por uno, dos o tres grupos R2, preferiblemente dos grupos R2, lo más 10 preferiblemente un grupo R2, seleccionado independientemente en cada aparición de, alquilo C1-C7 no sustituido o sustituido; amino no sustituido o sustituido; cicloalquilo C3-C7 no sustituido o sustituido. Preferiblemente, R2 es seleccionado de 15 alquilo C1-C7 no sustituido; di(C1-C7-alquil)amino; C1-C7-alquilo sustituido una o más veces por C3-C7-cicloalquilo o halo (preferiblemente fluoro); C3-C7-cicloalquilo no sustituido; C3-C7-cicloalquilo el cual es sustituido una o más veces por halo (preferiblemente fluoro), (halo-C1-C7-alquil) o C1-C7
20 alquilo; Más preferiblemente, R2 es seleccionado de metilo, t-butilo, dietilamino, ciclopropilmetilo, 2-fluoro-1,1-dimetiletilo o 2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etilo.
En otra realización, R2 es seleccionado de metilo, t-butilo, dietilamino, ciclopropilmetilo o 2-fluoro-1,1-dimetiletilo. El anillo A es seleccionado más preferiblemente de A1 o A2 o A3 o A4 o A5 o A6:
en donde,
Z es N o CH y R2 se define como se indicó más arriba. Preferiblemente, el anillo A es seleccionado de A1 o A2. X-Y preferiblemente representa (CH2)r o O(CH2)t en donde, r es 1, 2 o 3; t es 1 o 2; X-Y más preferiblemente representa (CH2)r o O(CH2)t en donde r es 2 y t es 1. Para eliminar dudas, esto es, X-Y es
preferiblemente -CH2-CH2- o -O-CH2- tal como en el último caso, la X en X-Y es la O en -O-CH2-. R1 preferiblemente representa, en cada aparición, halo; hidroxi; fenilo no sustituido o sustituido; di(C1-C7-alquil)amino; alquilo C1-C7 no sustituido; C1-C7-alquilo el cual es sustituido una o más veces por hidroxi, C1-C7-alcoxi, di(C1-C7-alquil)amino, di-(perdeuteroC1
C7-alquil)amino, fenilo, morfolinilo, acetilamino, o N-(C1-C7-alquil)-N-(fenilC1-C7-alquil) amino, y en donde
independientemente cada fenilo puede ser mono o polisustituido por halo.
R1 más preferiblemente representa, en cada aparición,
fluoro;
hidroxi;
fenilo no sustituido;
dimetilamino;
metilo; metilo, el cual es sustituido una o más veces (preferiblemente sustituido una vez) por hidroxi, metoxi, dimetilamino, di-(perdeuterometil)amino, fenilo, morfolinilo, acetilamino, o N-(metil)-N-(fenilmetil)amino, y en donde independientemente cada fenilo puede ser mono o polisustituido por fluoro.
R1 lo más preferiblemente representa, en cada aparición,
fluoro;
hidroxi;
fenilo no sustituido;
dimetilamino;
metilo;
hidroxi metilo;
metoxi metilo;
dimetilamino metilo;
di-(perdeuterometil)amino metilo;
bencilo;
morfolin-4-ilo metilo;
N-acetilamino metilo;
N-(metil)-N-(3-fluoro-fenilmetil)amino metilo.
Una realización de la presente invención incluye compuestos de la fórmula I en donde n es 0 o 1. Preferiblemente, n 5 es 1.
Otra realización de la presente invención incluye compuestos de la fórmula I donde q es 0, esto es, en donde el anillo heterocíclico que contiene nitrógeno está sustituido solamente por la amida en la posición 2. En esta realización, se prefiere que n sea 0 o 1, más preferiblemente 1.
Otra realización de la presente invención incluye compuestos de la fórmula I donde q es 1, esto es, donde el anillo
10 heterocíclico que contiene nitrógeno está sustituido solamente por la amida en la posición 2 y un grupo R1 individual. En esta realización se prefiere que n sea 0 o 1, más preferiblemente 1. En esta realización, el grupo R1 puede ser sustituido en la posición 2- (esto es, en el mismo carbono en el cual está sustituido por el grupo amida) o la posición 3- o posición 4- o posición 5- del anillo heterocíclico que contiene nitrógeno.
Preferiblemente, en esta realización, el grupo R1 está sustituido en la posición 3 del anillo heterocíclico que contiene 15 nitrógeno, esto es, compuestos de la fórmula IA:
donde los sustituyentes son definidos como para un compuesto de la fórmula (I).
Preferiblemente en los compuestos de la fórmula IA, n es 1, proveyendo así compuestos en donde el anillo heterocíclico que contiene nitrógeno es un anillo de pirrolidina, sustituido en la posición 2 por una amida que tiene la 20 estereoquímica dibujada, y en la posición 3 por un grupo R1.
Preferiblemente, el grupo R1 tiene una estereoquímica que es cis- a la amida en la posición 2, esto es, compuestos de acuerdo con la fórmula (IA'):
en donde los sustituyentes son como se define para el compuesto de la fórmula (I).
25 Preferiblemente en compuestos de la fórmula IA', n es 1, proveyendo así compuestos en donde el anillo heterocíclico que contiene nitrógeno es un anillo pirrolidina, sustituido en la posición 2 por una amida que tiene la estereoquímica dibujada, y en la posición 3 por un grupo R1 que tiene la estereoquímica dibujada, así la amida y los grupos R1 son cis- uno respecto al otro.
Una realización adicional de la presente invención incluye compuestos de la fórmula I donde Q es 2 o 3, así al menos dos sustituyentes R1 están presentes, seleccionado independientemente cada R1 de los grupos definidos como para la fórmula I aquí.
En esta realización, se prefiere que al menos cada uno de los dos R1 esté enlazado en la posición 3 del anillo de pirrolidina, y un tercer grupo R1 opcional, si está presente, esté enlazado en cualquier sitio del anillo heterocíclico que contiene nitrógeno. Se prefiere adicionalmente que n sea 1 y el tercer grupo R1, si está presente, esté enlazado en la posición 4- o 5- del anillo pirrolidina resultante, esto es, para proveer compuestos de la fórmula IB:
en donde los sustituyentes son como se define para un compuesto de la fórmula (I).
10 En compuestos de acuerdo con la fórmula IB, se prefiere que el tercer R1 esté enlazado en la posición 4- del anillo pirrolidina.
Una realización adicional de la presente invención incluye compuestos de la fórmula I en donde n es 1, y en donde dos grupos R1 están enlazados en la posición 3 del anillo pirrolidina, y junto con un alcandiilo, preferiblemente un cicloalquilo C3-C8, en particular un grupo ciclopropilo, esto es, para proveer compuestos de la fórmula IC:
en donde los sustituyentes son como se define para un compuesto de la fórmula (I) y el tercer grupo R1 es opcional, y si está presente, está enlazado preferiblemente en la posición 4- del anillo pirrolidina.
En cualquiera de las fórmulas (IA), (IA'), (IB) o (IQ), también pueden aplicarse las definiciones preferidas, si no se establece otra cosa, para el anillo A, X-Y, R1 y n.
20 La invención se relaciona adicionalmente con profármacos farmacéuticamente aceptables de un compuesto de fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC).
La invención se relaciona con metabolitos farmacéuticamente aceptables de un compuesto de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC).
La invención se relaciona especialmente con los compuestos de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) dadas en los 25 Ejemplos, así como con los métodos de manufactura descritos aquí.
La presente solicitud también divulga procesos para la producción de un compuesto de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC). En principio todos los procesos conocidos que convierten dos aminas diferentes en un derivado urea correspondiente son adecuados y pueden ser aplicados utilizando el material de partida respectivo.
Así, la solicitud en particular divulga un proceso que comprende hacer reaccionar un compuesto de la fórmula II
en donde los sustituyentes son como se definió anteriormente, bien con un compuesto de la fórmula IIIA
en donde los sustituyentes son como se definió anteriormente, en presencia de un agente activador ("método A") o con un compuesto de fórmula IIIB
en donde R1 es como se definió anteriormente; RG representa un grupo reactivo (tal como imidazolilcarbonilo) ("método B"), opcionalmente en cada caso en presencia de un diluyente y opcionalmente en presencia de un auxiliar de reacción y recuperación del compuesto resultante de la fórmula I en forma libre o en forma de una sal y,
convertir opcionalmente un compuesto de la fórmula I obtenible de acuerdo con el método A o el método B en un
15 compuesto diferente de la fórmula I, y/o convertir una sal obtenible de un compuesto de la fórmula I en una sal diferente del mismo, y/o convertir un compuesto libre obtenible de la fórmula I en una sal del mismo, y/o separar un isómero obtenible de un compuesto de la fórmula I a partir de uno o más isómeros diferentes obtenibles de la fórmula 1.
Condiciones de reacción
20 El proceso puede llevarse a cabo de acuerdo con métodos conocidos en la técnica, o como se divulgan más adelante en los Ejemplos. Por ejemplo, un compuesto de la fórmula II puede hacerse reaccionar con un compuesto de la fórmula IIIA o IIIB en un solvente, por ejemplo dimetilformamida, en presencia de una base, por ejemplo una amina orgánica, por ejemplo trietilamina.
Cuando se dan temperaturas aquí anteriormente o de aquí en adelante, "aproximadamente" tiene que ser agregado, puesto que son típicamente tolerables desviaciones menores de los valores numéricos dados, por ejemplo, variaciones de ± 10%.
Todas las reacciones pueden tener lugar en presencia de uno o más diluyentes y/o solventes. Los materiales de partida pueden ser utilizados en cantidades equimolares; alternativamente, un compuesto puede ser utilizado en exceso, por ejemplo, para funcionar como un solvente o para desplazar el equilibrio o para acelerar en general las ratas de reacción.
Los auxiliares de reacción, tales como ácidos, bases o catalizadores pueden ser agregados en cantidades adecuadas, como se conoce en el sector, según sean requeridos por una reacción y en línea con procedimientos conocidos en general.
Grupos protectores
Si es necesario proteger uno o más otros grupos funcionales, por ejemplo carboxi, hidroxi, amino, sulfhidrilo y similares en un material de partida como se describe aquí o en cualquier otro precursor, puesto que no toman parte en la reacción o perturban la reacción, estos son tales grupos como los utilizados usualmente en la síntesis de compuestos peptídicos, y también de cefalosporinas y penicilinas, así como de derivados de ácidos nucleicos y azúcares. Grupos protectores son tales grupos que no están presentes más en los compuestos finales una vez que han sido retirados, mientras que los grupos que permanecen como sustituyentes no son grupos protectores en el sentido utilizado aquí grupos que son agregados en un material de partida o etapa intermediaria y retirados para obtener un compuesto final. También en el caso de conversiones de un compuesto de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) en un compuesto diferente de las fórmulas (I), (IA), ( IA'), (IB) y/o (IC), los grupos protectores pueden ser introducidos y retirados, si es útilo o requerido.
Los grupos protectores pueden estar presentes ya en precursores y deberían proteger los grupos funcionales relacionados frente a reacciones secundarias indeseadas, tales como acilaciones, eterificaciones, esterificaciones, oxidaciones, solvólisis y reacciones similares. Es una característica de los grupos protectores que ellos tienden por sí mismos, fácilmente, esto es, sin reacciones secundarias indeseadas, a eliminarse, típicamente por acetólisis, protonólisis, solvólisis, reducción, fotólisis o también por actividad enzimática, por ejemplo bajo condiciones análogas a condiciones fisiológicas, y que no están presentes en los productos finales. El especialista sabe, o puede establecer fácilmente, qué grupos protectores son adecuados con las reacciones mencionadas antes y más adelante.
La protección de tales grupos funcionales por tales grupos protectores, los grupos protectores en sí mismos, y sus reacciones de eliminación se describen por ejemplo en trabajos estándar de referencia, tales como J. F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry". Plenum Press, London y New York 1973, in T. W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", Third edition, Wiley, New York 1599, in "The Peptides"; Volume 3 (editors: E. Gross y
J. Meienhofer), Academic Press, London y New York 1981, in "Métodoen der organischen Chemie" (Métodos of organic chemistry), Houben Weilo,4th edition, Volume 1511, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, in H.-D. Jakubke y H. Jescheit, "Aminosäuren, Peptide. Proteine" (Amino acids, peptides, proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, y Basel 1982, y in Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhidrate: Monosaccharide und Derivate" (Chemistry of carbohidrates: monosaccharides y derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974.
Reacciones y conversiones opcionales
Un compuesto de la fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) puede ser convertido en un compuesto diferente de la fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC).
En un compuesto de la fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) en donde un sustituyente porta un sustituyente amino o alquilo C1-C7 amino, el amino puede ser convertido en acilamino, por ejemplo, alcanoilamino C1-C7 por reacción con un halogenuro C1-C7 correspondiente, por ejemplo, un cloruro correspondiente, en presencia de una base nitrogenada terciaria, tal como trietilamina o piridina, en la ausencia o presencia de un solvente apropiado, tal como cloruro de metileno, por ejemplo a temperaturas en el rango de -20 a 50ºC, por ejemplo, a aproximadamente temperatura ambiente.
Las sales de un compuesto de fórmula (I), (IA), (lA'), (IB) y/o (IC) con un grupo formador de sales pueden ser preparadas de una manera conocida per se. Las sales de adición ácida de los compuestos de las fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) pueden ser obtenidas así por tratamiento con un ácido o con un reactivo de intercambio aniónico adecuado. Una sal con dos moléculas ácidas (por ejemplo un dihalogenuro de un compuesto de fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y / o (IC)) también puede ser convertido en una sal con una molécula de ácido por compuesto (por ejemplo un monohalogenuro); esto puede hacerse calentando hasta fusión, o por ejemplo calentando como sólido bajo alto vacío a temperatura elevada, por ejemplo de 130 a 170ºC, una molécula del ácido que está siendo expelido por molécula de un compuesto de fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC). Las sales pueden ser convertidas usualmente en compuestos libres, por ejemplo, por tratamiento con compuestos básicos adecuados, por ejemplo, con carbonatos
de metales alcalinos, hidrogenocarbonatos de metales alcalinos, o hidróxidos de metales alcalinos, típicamente carbonato de sodio o hidróxido de sodio.
Las mezclas estereoisoméricas, por ejemplo mezclas de diastereómeros, pueden ser separadas en sus correspondientes isómeros en una manera conocida per se por medio de métodos de separación adecuados. Las mezclas diastereoméricas por ejemplo pueden ser separadas en sus diastereómeros individuales por medio de cristalización fraccionada, cristalografía, distribución en solventes y procedimientos similares. Esta separación puede tener lugar bien sea a nivel de un compuesto de partida o en un compuesto de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) mismo. Los enantiómeros pueden ser separados a través de la formación de sales diastereoméricas, por ejemplo por formación de sales con un ácido quiral enantiómero puro, o por medio de cromatografía, por ejemplo por HPLC, utilizando sustratos cromatográficos con ligandos quirales.
Debe hacerse énfasis en que las reacciones análogas a las conversiones mencionadas aquí pueden tener lugar también al nivel de intermediarios apropiados (y son por lo tanto útiles en la preparación de los materiales de partida correspondientes).
Materiales de partida:
Los materiales de partida de las fórmulas II y III, así como otros materiales de partida mencionados aquí, por ejemplo más adelante, pueden ser preparados de acuerdo con o en analogía con métodos que son conocidos en la técnica, son conocidos en la técnica y/o están disponibles comercialmente. Hasta ahora puesto que no se describe particularmente la producción de los materiales de partida, los compuestos son bien sea conocidos o pueden ser preparados de manera análoga a métodos conocidos en la técnica, por ejemplo en WO 05/021519 o WO 04/096797,
o como se divulga aquí más adelante. Materiales de partida novedosos, así como procesos para la preparación de los mismos, son de la misma forma una realización de la presente invención. En las realizaciones preferidas, se utilizan tales materiales de partida y las reacciones escogidas se seleccionan de tal forma que permitan la obtención de los compuestos preferidos.
En los materiales de partida (incluyendo intermediarios) que también pueden ser utilizados y/o obtenidos como sales cuando sea apropiado y expeditivo, los sustituyentes son preferiblemente como se definió para un compuesto de la fórmula (I), (IA), (IA'). (IB) y/o (IC).
Composiciones farmacéuticas, usos y métodos de tratamiento. La presente invención también se relaciona con compuestos de fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) tal como se divulga aquí para uso como agentes farmacéuticos. La presente invención incluye en una realización composiciones que comprenden un compuesto de la fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC), por ejemplo para uso humano o veterinario, por ejemplo, cuando la inhibición de PI3K está indicada. En una realización, la invención se relaciona con compuestos para uso en el tratamiento de enfermedades proliferativas celulares tales como un tumor (benigno o maligno) y/o crecimiento celular canceroso, por ejemplo mediado por PI3K. Las enfermedades pueden incluir aquellas que muestren mutación somática de PIK3CA o mutaciones en la línea germinal o alguna mutación somática de PTEN. En particular, los compuestos pueden ser útiles en el tratamiento de cánceres humanos o animales (por ejemplo murínicos), incluyendo, por ejemplo, sarcoma; pulmón; bronquios; próstata; seno (incluyendo cánceres de seno esporádicos y pacientes de enfermedad de Cowden); páncreas; cáncer gastrointestinal; colon; recto; carcinoma de colon; adenoma colorrectal; tiroides; hígado; ducto biliar intrahepático; hepatocelular; glándula adrenal; estómago; gástrico; glioma; gleoblastoma; endométrico; melanoma; riñón; pelvis renal; vejiga urinaria; corpus uterino; cérvix uterina; vagina; ovario; mieloma múltiple; esófago; una leucemia; leucemia mielogenosa aguda; leucemia mielogenosa crónica; leucemia linfocítica; leucemia mieloide; cerebro; un carcinoma del cerebro; cavidad oral y faringe; laringe; intestino delgado; linfoma no Hodgkin; melanoma; adenoma velloso del colon; una neoplasia; una neoplasia de carácter epitelial; linfomas; un carcinoma mamario; carcinoma de células basales; carcinoma de células escamosas; queratosis actínica; enfermedades tumorales, incluyendo tumores sólidos; un tumor de cuello o cabeza; policitemia vera; trombocitemia esencial; y mielofibrosis con metaplasia mieloide.
En otras realizaciones, la condición o trastorno (por ejemplo, mediados por PI3K) se selecciona del grupo consistente de: una hiperproliferación epidérmica, hiperplasia de la próstata, una neoplasia, una neoplasia de carácter epitelial, síndrome de Cowden, enfermedad de Lhermitte-Dudos o síndrome de Bannayan-Zonana, asma, COPD, ARDS, síndrome de Loffler, neumonía eosinofílica, infestación parasítica (en particular metazoaria) (incluyendo eosinofilia tropical), aspergiliosis broncopulmonar, poliarteritis nodosa (incluyendo síndrome de Churg-Strauss), granuloma eosinofílico, trastornos relacionados con eosinófilos que afectan las vías respiratorias ocasionados por reacción a fármacos, psoriasis, dermatitis por contacto, dermatitis atópica, alopecia areata, eritema multiforme, dermatitis herpetiformis, escleroderma, vitíligo, angiitis por hipersensibilidad, urticaria, penfigoide buloso, lupus eritematoso, penfisus, epidermolisis bulosa acquisita, trastornos hematológicos autoinmunes (por ejemplo, anemia hemolítica, anemia aplástica, anemia pura de glóbulos rojos y trombocitopenia idiopática), lupus eritematoso sistémico, policondritis, escleroderma, granulomatosis de Wegener, dermatomiositis, hepatitis activa crónica, miastenia gravis, síndrome de Steven-Johnson, enfermedad celíaca idiopática, enfermedad autoinmune inflamatoria de los intestinos (por ejemplo, colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn), oftalmopatía endocrina, enfermedad de
Grave, sarcoidosis, alveolitis, neumonitis por hipersensibilidad crónica, esclerosis múltiple, cirrosis biliar primaria, uveítis (anterior y posterior), fibrosis pulmonar intersticial, artritis psoriática, glomerulonefritis, enfermedades cardiovasculares, aterosclerosis, hipertensión, trombosis venosa profunda, apoplejía, infarto del miocardio, angina inestable, tromboembolismo, embolismo pulmonar, enfermedades trombolíticas, isquemia arterial aguda, oclusiones trombóticas periféricas, y enfermedades de las arterias coronarias, lesiones por reperfusión, retinopatía, tales como retinopatía diabética o retinopatía inducida por oxígeno hiperbárico, y condiciones caracterizadas por presión intraocular elevada o secreción de humor acuoso ocular, tales como glaucoma.
Para los anteriores usos la dosis requerida desde luego variará dependiendo del modo de administración, la condición particular que se va a tratar y el efecto deseado. En general, se indica que resultados satisfactorios se obtienen sistémicamente en dosis diarias desde aproximadamente 0.03 a 10.0 mg/kg por peso corporal. Una dosificación diaria indicada en mamíferos mayores, por ejemplo humanos está en el rango de aproximadamente 0.5 mg a aproximadamente 1 g, administrados convenientemente, por ejemplo, en dosis divididas de hasta cuatro veces al día o en forma retardada. Formas de dosificación unitarias adecuadas para administración oral comprenden de cerca de 0.1 a 500 mg de ingrediente activo.
Los compuestos de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) pueden ser administrados por cualquier ruta convencional, en particular por vía entérica, por ejemplo por vía oral, por ejemplo en la forma de tabletas o cápsulas,
o por vía parenteral, por ejemplo en la forma de soluciones o suspensiones inyectables, tópicamente, por ejemplo en la forma de lociones, geles, ungüentos o cremas, por inhalación, por vía intranasal, o en forma de supositorio.
Los compuestos de la fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) pueden ser administrados en forma libre o en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, por ejemplo como se indicó anteriormente. Tales sales pueden ser preparadas de manera convencional y exhiben el mismo orden de actividad que los compuestos libres.
Consecuentemente, la invención también provee:
•
un compuesto de la fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) en la forma libre o en una forma de sal farmacéuticamente aceptable para uso como agente farmacéutico, por ejemplo en cualquiera de los métodos tales como se indican aquí, en particular para el uso en una o más enfermedades mediadas por fosfatidilinositol 3-quinasa.
•
el uso de un compuesto de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) en la forma libre o en forma de una sal farmacéuticamente aceptable en cualquiera de los métodos indicados aquí, en particular para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de una o más enfermedades mediadas por fosfatidilinositol 3-quinasa.
La PI3K sirve como segundo nódulo mensajero que integra rutas de señalización paralelas, surgiendo la evidencia de que la combinación de un inhibidor de PI3K con inhibidores de otras rutas puede ser útilo en el tratamiento de cáncer y enfermedades proliferativas en humanos. Aproximadamente 20-30% de los cánceres de seno humanos sobreexpresan Her-2/neu-ErbB2, el objetivo del fármaco trastuzumab. Aunque el trastuzumab ha demostrado respuestas durables en algunos pacientes que expresan el Her2/neu-ErbB2, solamente un subconjunto de estos pacientes responde. Trabajos recientes han indicado que esta velocidad de respuesta limitada puede ser mejorada sustancialmente mediante la combinación de trastuzumab con inhibidores de PI3K o de la ruta de PI3K/AKT (Chan et al., Breast Can. Res. Treat. 91:187 (2005), Woods Ignatoski et al., Brit. J. Cancer 82:666 (2000), Nagata et al., Cancer Cell 6:117 (2004)).
Una variedad de enfermedades malignas humanas expresan mutaciones activadoras a niveles incrementados de Her1/EGFR y se ha desarrollado un cierto número de anticuerpos e inhibidores de moléculas pequeñas contra el receptor de tirosina quinasa incluyendo tarceva, gefitinib y erbitux. Sin embargo, mientras que los inhibidores de EGFR demuestran actividad antitumoral en ciertos tumores humanos (por ejemplo, NSCLC), fracasan en incrementar la supervivencia del paciente en todos los pacientes con tumores que expresan EGFR. Esto puede ser racionalizado por el hecho de que muchos objetivos corriente abajo de la Hert/EGFR son mutados o desregulados a altas frecuencias en una variedad de enfermedades malignas, incluyendo la ruta de PI3K/Akt. Por ejemplo, el gefitinib inhibe el crecimiento de una línea celular de adenocarcinoma en ensayos in vitro. No obstante, pueden seleccionarse subclones de estas líneas que son resistentes al gefitinib que demuestran activación incrementada de la ruta de PI3/Akt. La subregulación o inhibición de esta ruta hace que los subclones resistentes sean sensibles al gefitinib (Kokubo et al., Brit. J. Cancer 92:1711 (2005)). Adicionalmente, en un modelo in vitro de cáncer de seno con una línea celular que aloja una mutación PTEN y sobreexpresa la inhibición EGFR de tanto la ruta PI3K/Akt como EGFR produjo un efecto sinérgico (She et al., Cancer Cell 8:287-297(2005)). Estos resultados indican que la combinación de gefitinib e inhibidores de la ruta de PI3K/Akt sería una estrategia terapéutica atractiva en cáncer.
La combinación del AEE778 (un inhibidor de Her-2/neu/ErbB2, VEGFR y EGFR) y RAD001 (un inhibidor de mTOR, un objetivo corriente abajo del Akt) produce una eficacia combinada mayor que solos o en un modelo de xenoinjerto de glioblastoma (Goudar et al., Mol. Cancer. Ther. 4:101-112 (2005)).
Los antiestrógenos, tales como tamoxifén, inhiben el crecimiento del cáncer de seno a través de la inducción de una detención del ciclo celular que requiere la acción del inhibidor del ciclo celular p27kip. Recientemente, se ha
demostrado que la activación de la ruta de la quinasa Ras-Raf-MAP altera el estatus de fosforilación de p27kip de tal forma que su actividad inhibitoria en la detención del ciclo celular se atenúa, contribuyendo de esta manera a la resistencia antiestrógenos (Donovan, et al, J. Biol. Chem. 276:40888, (2001)). Según lo reportan Donovan et al., la inhibición de la señalización de MAPK a través del tratamiento con el inhibidor de MEK reversa el estatus de fosforilación aberrante de p27 en líneas celulares de cáncer de seno refractarias a las hormonas y haciendo así restaura la sensibilidad de las hormonas. De la misma forma, la fosforilación de p27kip por Akt también abroga su papel para detener el ciclo celular (Viglietto y col., Nat. Med.. 8:1145 (2002)).
De acuerdo con lo anterior, la presente invención provee, en un aspecto adicional, compuestos de las fórmulas (I), (IA), (IA’), (IB) y/o (IC) para uso en el tratamiento de cánceres dependientes de hormonas, tales como cánceres de seno y próstata. Mediante este uso, se busca reversar la resistencia a las hormonas vista comúnmente en estos cánceres con agentes anticancerígenos convencionales.
En cánceres hematológicos, tales como leucemia mielogenosa crónica (CML), la translocación cromosómica es responsable de la tirosina quinasa BCR-Abl activada constitutivamente. Los pacientes afligidos responden a imatinib, una pequeña molécula inhibidora de tirosina quinasa, como resultado de la inhibición de la actividad Abl de quinasa. Sin embargo, muchos pacientes con enfermedad en estado avanzado responden inicialmente al imatinib, pero luego relapsan entonces debido a mutaciones que confieren resistencia en el dominio de la Abl quinasa. Estudios in vitro han demostrado que el BCR-Ab1 emplea la ruta de Ras-Raf quinasa para disparar sus efectos. Además, la inhibición de más de una quinasa en la misma ruta provee una protección adicional contra mutaciones que confieren resistencia.
De acuerdo con lo anterior, en otro aspecto, la presente invención provee los compuestos de las fórmulas (I), (IA), (IA’), (IB) y/o (IC) para uso en combinación con al menos un agente seleccionado del grupo de inhibidores de quinasa, tales como Gleevec®, en el tratamiento de cánceres hematológicos, tales como leucemia mielogenosa crónica (CML). Mediante este uso, se busca reversar o evitar la resistencia a dicho al menos un agente adicional.
Debido a que la activación de la ruta PI3K/Akt induce la supervivencia celular, la inhibición de la ruta en combinación con terapias que inducen la apoptosis en células cancerosas, incluyendo radioterapia y quimioterapia, dará como resultado respuestas mejoradas (Ghobrial et al., CA Cancer J. Clin 55:178-194 (2005)). Como ejemplo, la combinación del inhibidor de PI3 quinasa con carboplatino demostró efectos sinérgicos tanto en proliferación in vitro como en pruebas de apoptosis así como en eficacia en tumores in vivo en un modelo de xenoinjerto de cáncer de ovario (Westfall y Skinner, Mol. Cancer Ther. 4:1764-1771 (2005)).
Además del cáncer y las enfermedades proliferativas, hay evidencia acumulada de que los inhibidores de PI3 quinasas de clase 1A y 1B sería terapéuticamente útiles en otras áreas de enfermedades. La inhibición de p110 , el producto isoforme de PI3K del gen PIK3CB, ha demostrado estar involucrado en la activación de plaquetas inducidas por desgarramiento (Jackson et al., Nature Medicine 11:507-514(2005)). Así, un inhibidor de PI3K que inhibe p110 sería útilo como agente individual o en combinación en una terapia antitrombótica. La isoforma p1108, el producto del gen de PIK3CD, es importante en la función y diferenciación de las células B (Clayton et al., J. Exp. Med. 196:753-763 (2002)), respuestas a antígenos de células T dependientes e independientes (Jou et al., Mol. Cell. Biol. 22:8580-8590 (2002)) y diferenciación de mastocitos (Ali et al., Nature 431:1007-1011 (2004)). Así, se espera que los inhibidores p1108 sean útiles en el tratamiento de enfermedades autoinmunes impulsadas por células B y asma. Finalmente, la inhibición de p110y, el producto isoformo del gen PI3KCG, da como resultado una respuesta reducida en células T pero no en B (Reif et al., J. Immunol. 173:2236-2240 (2004)) y su inhibición demuestra eficacia en modelos animales de enfermedades autoinmunes (Camps et al., Nature Medicine 11:936-943 (2005), Barber et al., Nature Medicine 11:933-935 (2005)).
La invención provee adicionalmente composiciones farmacéuticas que comprenden al menos un compuesto de la fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC), junto con un excipiente farmacéutico aceptable adecuado para administración a un sujeto humano o animal, bien sea solo o junto con otro agente terapéutico, por ejemplo, otro agente anticáncer.
En particular, las composiciones serán formuladas juntas como una terapia de combinación o administradas separadamente. Los agentes anticáncer adecuados para uso con un compuesto de la fórmula I incluyen, pero no se limitan a, uno o más compuestos seleccionados del grupo consistente de inhibidores de quinasa, antiestrógenos, antiandrógenos, otros inhibidores, fármacos quimioterapéuticos contra el cáncer, agentes alquilantes, agentes quelantes, modificadores de la respuesta biológica, vacunas contra el cáncer, agentes para terapia antisentido como se define a continuación:
A. Inhibidores de Quinasa: Los inhibidores de quinasa para uso como agentes anticáncer en conjunción con un compuesto de la fórmula (I), (IA), (IA’), (IB) y/o (IC) incluyen inhibidores de las quinasas del Receptor del Factor de Crecimiento Epidérmico (EGFR) tales como moléculas pequeñas de quinazolina, por ejemplo gefitinib (US 5457105, US 5616582, y US 5770599), ZD-6474 (WO 01/32651), erlotinib (Tarceva®, US 5,747,498 y WO 96/30347), y lapatinib (US 6,727,256 y WO 02/02552); inhibidores de quinasa del Receptor de Factor de Crecimiento Endotelial Vascular (VEGFR), incluyendo SU-11248 (WO 01/60814), SU 5416 (US 5,883,113 y WO 99/61422), SU 6668 (US
5,883,113 y WO 99/61422), CHIR-258 (US 6,605,617 y US 6,774,237), vatalanib o PTK-787 (US 6,258,812), VEGF-Trap (WO 02/57423), B43-Genistein (WO-09606116), fenretinide (ácido retinoico p-hidroxiphenilamina) (US 4,323,581), IM-862 (WO 02/62826), bevacizumab o Avastin® (WO 94/10202), KRN-951, 3-[5-(metilsulfonilpiperadina metil)-indolil]-quinolona, AG-13736 y AG-13925, pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazinas, ZK-304709, Veglin®, VMDA-3601, EG004, CEP-701 (US 5,621,100), Cand5 (WO 04/09769); inhibidores de la tirosina quinasa Erb2 tales como pertuzumab (WO 01/00245), trastuzumab, y rituximab; inhibidores de proteína quinasa Akt, tales como RX-0201; inhibidores de Proteína Quinasa C (PKC), tales como LY-317615 (WO 95/17182), y perifosina (US 2003171303); inhibidores de quinasa Raf/Map/MEK/Ras incluyendo sorafenib (BAY 43-9006), ARQ- 350RP, LErafAON, BMS354825 AMG-548, y otros divulgados en WO 03/82272; inhibidores de la quinasa del Receptor de Factor de Crecimiento de Fibroblastos (FGFR); inhibidores de la Quinasa Dependiente de Células (CDK), incluyendo CIC-202
o roscovitina (WO 97/20842 y WO 99/02162); inhibidores de quinasa del Factor de Crecimiento Derivado de Plaquetas (PDGFR) tales como CHIR-258, 3G3 mAb, AG-13736, SU-11248 y SU6668; e inhibidores de quinasa Bcr-Abl y proteínas de fusión como STI-571 o Gleevec® (imatinib).
B.
Antiestrógenos: Agentes que tienen el estrógeno como objetivo para uso en terapia anticáncer en conjunción con un compuesto de las fórmulas (I), (IA), (IA’), (IB) y/o (IC) incluyen Moduladores del Receptor de Estrógeno Selectivo (SERM) incluyendo tamoxifén, toremifene, raloxifene; inhibidores de aromatasa incluyendo Arimidex® o anastrozole; Subreguladores del Receptor de Estrógeno (ERD) incluyendo Faslodex® o fulvestrant.
C.
Antiandrógenos: Agentes que apuntan a andrógenos para uso en terapia anticáncer en conjunción con un compuesto de las fórmulas (I), (IA), (IA’), (IB) y/o (IC) incluyendo flutamida, bicalutamida, finasteride, aminoglutetamida, ketoconazol, y corticosteroides.
D.
Otros inhibidores: Otros inhibidores para uso como agentes anticáncer en conjunción con un compuesto de la fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) incluyen inhibidores de la proteína farnesilo transferasa incluyendo tipifarnib o R115777 (US 2003134846 y WO 97/21701), BMS-214662, AZD-3409, y FTI-277; inhibidores de topoisomerasa incluyendo merbarone y diflomotecan (BN-80915); inhibidores de la proteína de asa de quinesina mitótica (KSP) incluyendo SB-743921 y MKI-833; moduladores del proteasoma tales como bortezomib o Velcade® (US 5,780,454), XL-784; e inhibidores de la ciclooxigenasa 2 (COX-2) incluyendo fármacos antiinflamatorios no esteroidales (NSAID).
E.
Fármacos Quimioterapéuticos contra el Cáncer: Agentes quimioterapéuticos contra el cáncer en particular para uso como agentes anticáncer en conjunción con un compuesto de la fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) incluyen anastrozol (Arimidex®), bicalutamida (Casodex®), bleomicina sulfato (Blenoxano®), busulfan (Myleran®), busulfan inyección (Busulfex®), capecitabine (Xeloda®), N4-pentoxycar l-5-desoxi-5-fluorocitidina, carboplatino (Paraplatin®), carmustine (BiCNU®), clorambucilo (Leukeran®), cisplatino (Platinol®), cladribine (Leustatin®), ciclofosfamida (Cytoxan® o Neosar®), cytarabine, citosina arabinósido (Cytosar-U®), cytarabine liposoma inyección (DepoCyt®), dacarbazina (DTIC-Dome®), dactinomicina (Actinomicina D, Cosmegan), daunorubicin clorhidrato (Cerubidine®), daunorubicin citrato liposoma inyección (DaunoXome®), dexametasona, docetaxel (Taxotere®, US 2004073044), doxorubicin clorhidrato (Adriamicina ®, Rubex®), etoposide (Vepesid®), fludarabine fosfato (Fludara®), 5fluorouracilo (Adrucil®, Efudex®), flutamida (Eulexin®), tezacitibine, Gemcitabine (difluorodesoxicitidine), hidroxiurea (Hidrea®), Idarubicin (Idamicina ®), ifosfamida (IFEX®), irinotecan (Camptosar®), L-asparaginase (ELSPAR®), leucovorin calcio, melphalan (Alkeran®), 6-mercaptopurina (Purinathol®), metotrexato (Folex®), mitoxantrona (Novantrone®), mylotarg, paclitaxel (Taxol®), phoenix (Yttrium90/MX-DTPA), pentostatin, polifeprosan 20 con implante de carmustina (Gliadel®), tamoxifen citrato (Nolvadex®), teniposide (Vumon®), 6-tioguanina, tiotepa, tirapazamina (Tirazone®), topotecan clorhidrato para inyección (Hycamptin®), vinblastina (Velban®), vincristina (Oncovin®), y vinorelbina (Navelbine®).
F.
Agentes Alquilantes: Agentes alquilantes para uso en conjunción con un compuesto de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) incluyen VNP-40101M o doretizine, oxaliplatino (US 4,169,846, WO 03/24978 y WO 03/04505), glufosfamida, mafosfamida, etopophos (US 5,041,424), prednimustine; treosulfan; busulfan; irofluven (acylfulvene); penclomedine; pirazoloacridina (PD-115934); O6-bencilguanina; decitabine (5-aza-2-desoxicitidina); brostallicin; mitomicina C (MitoExtra); TLK-286 (Telcyta®); temozolomide; trabectedin (US 5,478,932); AP-5280 (Formulación de platinato de Cisplatino); porfiromicina; y clearazide (mecloretamina).
G.
Agentes Quelantes: Agentes quelantes para uso en conjunción con un compuesto de la fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) incluyen tetratiomolibdato (WO 01/60814); RP-697; Chimeric T84.66 (cT84.66); gadofosveset (Vasovist®); deferoxamina; y bleomicina opcionalmente en combinación con electroporación (EPT).
H.
Modificadores de la Respuesta Biológica: Modificadores de la respuesta biológica, tales como moduladores inmunes, para uso en conjunción con un compuesto de la fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) incluyen estaurosporina y análogos macrocíclicos de la misma incluyendo UCN-01, CEP-701 y midostaurin (see WO 02/30941, WO 97/07081, WO 89/07105, US 5,621,100, WO 93/07153, WO 01/04125, WO 02/30941, WO 93/08809, WO 94/06799. WO 00/27422, WO 96/13506 y WO 88/07045); squalamina (WO 01/79255); DA-9601 (WO 98/04541 y US 6,025,387); alemtuzumab; interferones (e.g. IFN-a, IFN-b etc.); interleuquinas, específicamente IL-2 o aldesleuquina así como IL-1, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, variantes biológicas activas de las mismas que
tiene secuencias de aminoácidos superiores al 70% de la secuencia humana nativa; altretamina (Hexalen®); SU 101
o leflunomide (WO 04/06834 y US 6,331,555); imidazoquinolinas tales como resiquimod y imiquimod (US 4,689,338, 5,389,640, 5,268,376, 4,929,624, 5,266,575, 5,352,784, 5,494,916, 5,482,936, 5,346,905, 5,395,937, 5,238,944, y 5,525,612); y SMIPs, incluyendo benzazoles, antraquinonas, tiosemicarbazonas, y triptantrinas (WO 04/87153, WO 04/64759, y WO 04/60308).
I.
Vacunas Contra el Cáncer: Vacunas anticáncer para uso en conjunción con un compuesto de fórmula (I), (IA), (IA’), (IB) y/o (IC) incluyen Avicine® (Tetrahedron Lett. 26:2269-70 (1974)): oregovomab (OvaRex®); Theratope® (STn-KLH); Melanoma Vaccines; GI-4000 series (GI-4014, GI-4015, y GI-4016), los cuales están dirigidos a cinco mutaciones en la proteína Ras; GlioVax-1; MelaVax; Advexin® o INGN-201 (WO 95/12660); Sig/E7/LAMP-1, encoding HPV-16 E7; MAGE-3 Vaccine o M3TK (WO 94/05304); HER-2VAX; ACTIVE, el cual estimula las céluas T específicas para tumores; vacuna contra el cáncer GM-CSF; y vacunas basadas en Listeria monocitogenes.
J.
Terapia Antisentido: Agentes anticáncer para uso en conjunción con un compuesto de la fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) también incluyen composiciones antisentido, tales como AEG-35156 (GEM-640); AP-12009 y AP-11014 (oligonucleótidos antisentido específicos para TGF-beta2); AVI-4126; AVI-4557; AVI-4472; oblimersen (Genasense®); JFS2: aprinocarsen (WO 97/29780); GTI-2040 (un oligo antisentido de ARNm de R2 ribonucleótido reductasa) (WO 98/05769); GTI-2501 (WO 98/05769); oligodesoxinucleótidos antisentido de c-Raf encapsulados en liposomas (LErafAON) (WO 98/43095): y Sirna-027 (ARNm de VEGFR-1 direccionado a terapias basadas en ARNi).
Un compuesto de la fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) también puede ser combinado en una composición farmacéutica con sustancias farmacéuticas broncodilatadoras o antihistamínicas. Tales fármacos broncodilatadores incluyen agentes anticolinérgicos o antimuscarínicos, en particular glicopirrolato, bromuro de ipratropio, bromuro de oxitropio, y bromuro de tiotropio, OrM3, aclidinio, CHF5407, GSK233705 y agonistas del adrenoreceptor -2 tales como salbutamol, terbutalina, salmeterol, carmoterol, milveterol y especialmente, indacaterol y formoterol. Sustancias farmacéuticas antihistamínicas coterapéuticas incluyen clorhidrato de cetirizina, fumarato de clemastina, prometazina, loratadine, desloratadine, difenhidramina y clorhidrato de fexofenadina.
La invención provee en un aspecto adicional una combinación que comprende un compuesto de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) y uno o más compuestos que son útiles para el tratamiento de una enfermedad trombolítica, una enfermedad cardíaca, apoplejía, etc. Tales compuestos incluyen aspirina, una estreptoquinasa, un activador del plasminógeno de los tejidos, una uroquinasa, un anticoagulante, fármacos antiplaquetas (por ejemplo, PLAVIX®; bisulfato de clopidogrel), una estatina (LIPITOR o Atorvastatina calcio), ZOCOR (simvastatina), Crestor (rosuvastatina), etc.), un bloqueador Beta (por ejemplo atenolol), NORVASC (amlodipina besilato), y un inhibidor de ACE (por ejemplo lisinopril).
La invención provee en un aspecto adicional una combinación que comprende un compuesto de las fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) y uno o más compuestos que son útiles para el tratamiento de la antihipertensión. Tales compuestos incluyen inhibidores de ACE, agentes que hacen disminuir los lípidos tales como estatinas, LIPITOR (Atorvastatina calcio), bloqueadores del canales de calcio tales como NORVASC (besilato de amlodipina).
La invención provee en un aspecto adicional una combinación que comprende un compuesto de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) y uno o más compuestos seleccionados del grupo consistente de fibratos, bloqueadores beta, inhibidores de NEPI, antagonistas del receptor de angiotensina-2 e inhibidores de la agregación de plaquetas.
La invención provee en un aspecto adicional una combinación que comprende un compuesto de fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) y un compuesto adecuado para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, incluyendo artritis reumatoide. Tal compuesto puede ser seleccionado del grupo consistente de inhibidores de TNF-a, tales como anticuerpos monoclonales anti-TNF-a (tales como REMICADE, CDP-870) y D2E7 (HUMIRA) y moléculas de fusión de inmunoglobulina del receptor TNF (tales como ENBREL), inhibidores de IL-1, antagonistas del receptor o IL-1 soluble Ra (por ejemplo inhibidores de KINERET o ICE), agentes antiinflamatorios no esteroidales (NSAIDS), piroxicam, diclofenac, naproxen, flurbiprofen, fenoprofen, ketoprofen ibuprofen, fenamates, ácido mefenámico, indometacin, sulindac, apazone, pirazolonas, fenilbutazona, aspirina, inhibidores de COX-2 (tales como CELEBREX (celecoxib), PREXIGE (lumiracoxib)), inhibidores de metaloproteasa (preferiblemente inhibidores selectivos de MMP13), inhibidores p2X7, inhibidores a2a, NEUROTIN, pregabalin, metotrexato en dosis baja, leflunomide, hidroxixcloroquina, dpenicillamina, auranofina u oro parenteral u oral.
La invención provee en un aspecto adicional una combinación que comprende un compuesto de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) y un compuesto adecuado para el tratamiento de osteoartritis. Tal compuesto puede ser seleccionado del grupo consistente de agentes antiinflamatorios estándar no esteroidales (de aquí en adelante NSAID) tales como piroxicam, diclofenaco, ácidos propiónicos tales como naproxen, flurbiprofen, fenoprofen, ketoprofeno e ibuprofeno, fenamatos tales como ácido mefenámico, indometacina, sulindac, apazona, pirazolonas tales como fenilbutazona, salicilatos tales como aspirina, inhibidores de COX-2 tales como celecoxib, valdecoxib, lumiracoxib y etoricoxib, analgésicos y terapias intraarticulares tales como corticosteroides y ácidos hialurónicos tales como hyalgan y synvisc.
La invención provee en un aspecto adicional una combinación que comprende un compuesto de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) y un agente antiviral y/o un compuesto antisepsis. Tal agente antiviral puede ser seleccionado del grupo consistente de Viracept, AZT, aciclovir y famciclovir. Tales compuestos antisepsis pueden ser seleccionados del grupo consistente de Valant.
La invención provee en un aspecto adicional una combinación que comprende un compuesto de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) y uno o más agentes seleccionados del grupo consistente de agentes CNS tales como antidepresivos (sertraline), y fármacos antiparkinson (tales como deprenilo, L-dopa, Requip, inhibidores de Mirapex: MAOB (tales como selegina y rasagilina); inhibidores de comP (tales como Tasmar); inhibidores de A-2; inhibidores de la retoma de dopamina; antagonistas de NMDA; agonistas de nicotina, agonistas de dopamina; e inhibidores de óxido nítrico sintasa neuronal).
La invención provee en un aspecto adicional una combinación que comprende un compuesto de fórmula (I), (IA), (IA’), (IB) y/o (IC) y uno o más fármacos anti-Alzheimer. Such anti-Alzheimer. El fármaco puede ser seleccionado del grupo consistente de donepezilo, tacrine, a25inhibitors, NEUROTIN, pregabalin, inhibidores COX-2, propentofillina o metrifonato.
La invención provee en un aspecto adicional una combinación que comprende un compuesto de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) y agentes de anosteoporosis y/o un agente inmunosupresor. Tales agentes para la osteoporosis pueden ser seleccionados del grupo consistente de EVISTA (clorhidrato de raloxifeno), droloxifene, tasofoxifene o fosomax. Tales agentes inmunosupresores pueden ser seleccionados del grupo consistente de FK506 y rapamicina.
En otro aspecto de las realizaciones preferidas, se divulgan aquí y proveen kits que incluyen uno o más compuestos de la fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) y un asociado de combinación. Kits representativos incluyen un compuesto inhibidor de PI3K (por ejemplo un compuesto de fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC)) y un inserto de empaque u otra etiqueta que incluya instrucciones para tratar una enfermedad proliferativa celular administrando una cantidad inhibidora de PI3K del compuesto.
En general, los compuestos de la fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) serán administrados en una cantidad terapéuticamente efectiva por cualquiera de los modos aceptados de administración para agentes que sirven para propósitos similares. La cantidad real del compuesto de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC), esto es el ingrediente activo, dependerá de numerosos factores tales como la severidad de la enfermedad que se va a tratar, la edad y la salud relativa del sujeto, la potencia del compuesto usado, la ruta y forma de administración y otros factores. El fármaco puede ser administrado más de una vez al día, preferiblemente una o dos veces al día. Todos estos factores están dentro de la capacidad del médico a cargo. Cantidades terapéuticamente efectivas del compuesto de las fórmulas I pueden variar desde aproximadamente 0.05 hasta aproximadamente 50 mg por kilogramo de peso corporal del receptor por día; preferiblemente de forma aproximada 0.1-25 mg/kg/día, más preferiblemente, desde aproximadamente 0.5 hasta 10 mg/kg/día. Así, para administración a una persona de 70 kg, el rango de dosificación estaría más probablemente alrededor de 35-70 mg por día.
En general, los compuestos de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) pueden ser administrados como composiciones farmacéuticas por una cualquiera de las siguientes rutas: administración oral, sistémica (por ejemplo transdérmica, intranasal o por supositorio), o parenteral (por ejemplo, intramuscular, intravenosa o subcutánea). La manera preferida de administración es oral utilizando un régimen de dosificación diaria que puede ser ajustado de acuerdo con el grado de aflicción. Las composiciones pueden tomar la forma de tabletas, píldoras, cápsulas, semisólidos, polvos, formulaciones de liberación sostenida, soluciones, suspensiones, elíxires, aerosoles o cualquier otra composición apropiada. Otra forma preferida para administrar compuestos de la fórmula I es inhalación. Este es un método efectivo para administrar un agente terapéutico directamente en el tracto respiratorio.
La selección de la formulación depende de diversos factores tales como modo de administración del fármaco y la biodisponibilidad de la sustancia fármaco. Para administración a través de inhalaciones, el compuesto puede ser formulado como una solución líquida, suspensiones, propelentes de aerosol o polvo seco y cargado en un dispensador adecuado para administración. Hay varios tipos de dispositivos para inhalación farmacéuticainhaladores nebulizadores, inhaladores de dosis medidas (MDI) e inhaladores de polvo seco (DPI). Los dispositivos de nebulizador producen una corriente de aire a alta velocidad que hace que los agentes terapéuticos (los cuales están formulados en una forma líquida) se asperjan en forma de una niebla que es llevada hacia el tracto respiratorio del paciente. Los MDI típicamente son una formulación empacada con un gas comprimido. Al accionarlo, el dispositivo descarga una cantidad medida del agente terapéutico mediante gas comprimido, permitiendo así un método confiable de administrar una cantidad fija de agente. El DPI dispensa agentes terapéuticos en la forma de un polvo de flujo libre que puede ser dispersado en la corriente de aire que inspira el paciente, durante la respiración mediante el dispositivo. Con el fin de alcanzar un polvo de flujo libre, el agente terapéutico se formula con un excipiente tal como lactosa. Una cantidad medida del agente terapéutico se almacena en forma de cápsula y se dispensa con cada accionamiento.
La invención también se relaciona con formulaciones en donde el tamaño de partícula de un compuesto de la fórmula I está entre 10 - 1000 nm, preferiblemente 10 - 400 nm. Tales formulaciones farmacéuticas han sido desarrolladas especialmente para fármacos que muestran pobre biodisponibilidad con base en el principio de que la biodisponibilidad puede ser incrementada incrementando el área superficial, esto es, disminuyendo el tamaño de partícula. Por ejemplo, La US 4,107,288 describe una formulación farmacéutica que tiene partículas en el rango de tamaño de 10 a 1000 nm en el cual el material activo está soportado sobre una matriz entrecruzada de macromoléculas. La US 5,145,684 describe la producción de una formulación farmacéutica en la cual la sustancia fármaco es pulverizada a nanopartículas (partículas de tamaño promedio de 400 nm) en presencia de un modificador superficial y luego se dispersan en un medio líquido para dar una formulación farmacéutica que exhibe biodisponibilidad notablemente alta. Ambos documentos se incluyen como referencia.
En un aspecto adicional, la invención provee composiciones farmacéuticas que comprenden una (cantidad terapéuticamente efectiva) de un compuesto de la fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC), y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable. Excipientes aceptables son no tóxicos, auxilian en la administración, no afectan adversamente el beneficio terapéutico del compuesto de la fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC). Tal excipiente puede ser cualquier sólido, líquido, semisólido o en el caso de una composición en aerosol, cualquier excipiente gaseoso que esté disponible en general para una persona experimentada en la técnica.
Excipientes farmacéuticos sólidos incluyen almidón, celulosa, talco, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, tiza, sílica gel, estearato de magnesio, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, cloruro de sodio, leche desengrasada, y similares .
Excipientes líquidos y semisólidos pueden ser seleccionados de glicerol, propilen glicol, agua, etanol y diversos aceites, incluyendo de petróleo, de origen animal, vegetal o sintético, por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo, etc. Vehículos líquidos preferidos, particularmente para soluciones inyectables, incluyen agua, solución salina, dextrosa acuosa y glicoles. Se pueden utilizar gases comprimidos para dispersar un compuesto de las fórmulas I en forma de aerosol. Gases inertes adecuados para este propósito son nitrógeno, dióxido de carbono, etc. Otros excipientes farmacéuticos adecuados y sus formulaciones se describen en Remington’s Pharmaceutical Sciences, edited by E. W. Martin (Mack Publishing Company, 18th ed., 1990). La cantidad del compuesto en una formulación puede variar dentro del rango completo empleado por las personas experimentadas en la técnica. Típicamente, la formulación contendrá, en una base de porcentaje en peso (% p) aproximadamente 0.01-99,99% p de un compuesto de fórmula I con base en la formulación total, siendo el balance de uno o más excipientes farmacéuticos adecuados. Preferiblemente, el compuesto está presente en un nivel de aproximadamente 1-80% en peso.
La invención se relaciona adicionalmente con composiciones farmacéuticas que comprenden (esto es contienen o consisten de) al menos un compuesto de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.
Composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) en forma libre
o en forma de sal farmacéuticamente aceptable en asociación con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable (tal como un vehículo y/o un diluyente) pueden ser manufacturados de manera convencional mezclando los componentes.
Composiciones farmacéuticas combinadas que comprenden un compuesto de las fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) en forma libre o en forma de una sal farmacéuticamente aceptable y adicionalmente que comprenden un asociado de combinación (bien sea una forma de unidad de dosificación o como un conjunto de partes) en asociación con al menos un vehículo y/o diluyente farmacéuticamente aceptables pueden ser manufacturados de manera convencional mezclando con un vehículo y/o diluyente farmacéuticamente aceptable dichos ingredientes activos.
Consecuentemente, la invención provee en aspectos adicionales
•
una composición farmacéutica combinada, por ejemplo para uso con cualquier método descrito aquí, que comprende un compuesto de la fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable en asociación con un diluyente y/o vehículo farmacéuticamente aceptable.
•
una composición farmacéutica combinada que comprende un compuesto de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable como ingrediente activo; uno o más materiales portadores y/o diluyentes farmacéuticamente aceptables y opcionalmente una o más sustancias farmacéuticas adicionales. Tal composición farmacéutica combinada puede estar en la forma de una forma de dosificación unitaria
o como un conjunto de partes.
• una composición farmacéutica combinada que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable y una segunda sustancia fármaco, para administración simultánea o secuencial.
• una combinación farmacéutica, por ejemplo un kit, que comprende a) un primer agente que es un compuesto de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) como se divulga aquí, en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, y b) al menos un coagente, por ejemplo como se indicó anteriormente; por lo tanto tal kit puede comprender instrucciones para su administración.
Los siguientes ejemplos de compuestos de las fórmulas (I), (IA), (IA'), (IB) y/o (IC) ilustran la invención sin limitar el
alcance de la misma. Se describen los métodos para preparar tales compuestos. Las temperaturas se miden en grados Celsius. A menos que se indique otra cosa, las reacciones tienen lugar a temperatura ambiente y los MS se obtienen con ESI. Se usan los siguientes métodos de HPLC/MS en la preparación y análisis de los Intermediarios y Ejemplos:
Métodos A1 a A3 (LCMS: HPLC/MS analítica): Sistema: Agilent, 1100 Series con Waters Micromass ZQ 2000 ESI+ y/o ESI-Columna: XBridge C18, 3 x 30 mm, 2.5 micron Temperatura: 50ºC Eluyente A: H2O, que contiene 5% de CH3CN y 0.8% de HCOOH Eluyente B: CH3CN, que contiene 0.6% de HCOOH Rata de flujo: 1.2-2.4 mL/min Método A1: método Polar4a_p_100-900 y método Polar4a_pn_100-900: Gradiente: 0 - 2.9 min: 1 % a 95% de B Método A2: método Fast4_p_100-900 y método Fast4a_pn_100-900: Gradiente: 0 - 2.4 min: 10% a 95% de B Método A3: método Slow4a_pn_100-900: Gradiente: 0 - 4.4 min: 5% a 95% de B Método B (HPLC preparativa) Instrumento: Sistema Waters HPLC preparativa, columna: Sunfire™ Prep C18 OBD™
5 micron 30 X 100 mm, temperatura: 25ºC, eluyente: gradiente de 5 - 100% CH3CN en TFA acuoso al 0,05% 20
minutos, rata de flujo: 30 ml/minuto, detección: UV 254 nm. Método C (HPLC preparativa) Instrumento: Sistema Waters HPLC preparativa, columna: Sunfire™ Prep C18 OBD™ 5 micron 30 X 100 mm, temperatura: 25 °C, eluyente: gradiente de 5 - 50% CH3CN en TFA acuoso al 0,05% 20 minutos, rata de flujo: 30 ml/minuto, detección: UV 254 nm.
Método D (HPLC analítica): Gradiente lineal 2-100% CH3CN (0.1%TFA) y H2O (0.1 % TFA) in 5 min + 1.5 min 100%
CH3CN (0.1%TFA); detección at 215 nm, rata de flujo 1 mUmin at 30 °C. Columna: Nucleosilo 100-3 C18 (70 x 4mm) Método E (HPLC preparativa/MS) Instrumento Sistema Gilson HPLC preparativa, columna: Sunfire™ Prep C18 OBD™ 5 micron 30 X 100 mm, temperatura: 25ºC, eluyente: gradiente de 5 - 100A CH3CN en TFA acuoso al 0,05% 20 minutos, rata de flujo: 30 ml/minuto, detección: UV 254 nm.
Método F (HPLC analítica) Instrumento: Shimadzu SIL-10A, Método: Gradiente lineal 2-100% CH3CN (0.1%TFA) y H2O (0.1% TFA) en 4 min + 2 min 100% CH3CN (0.1 %TFA): regreso a -100% CH3CN (0.1%TFA) en 3 min.; detección a 215 nm, rata de flujo 2 mL/min at RT. Columna: Nucleosil OD-5-100 C18 (150 x 4.6 mm)
Método G (HPLC analítica) Instrumento: Sistema: Agilent 1100 Series Columna: HP Hypersilo BDS C18, 4 x 125 mm, 5 micron Temperatura: 25°C Eluyente A: H2O, que contiene 0.1% v/v TFA
Eluyente B: CH3CN, que contiene 0.1% v/v TFA Gradiente: 10% - 100% B in 5 min, 2.5 min con 100% B, luego - 10% B in 1 min Rata de flujo: 1.5 mL/min Detección: UV 215 nm Método H (HPLC analítica) Instrumento: Sistema: Agilent 1100 Series Columna: Macherey-Nagel Nucleosilo 100-3 C18HD, 4 x 125 mm, 3 micron Temperatura: 30°C Eluyente A: H2O, que contiene 0.1% v/v TFA Eluyente B: CH3CN, que contiene 0.1% v/v TFA Gradiente: 2% - 100% B in 7 min, 2 min con 100% B, luego - 2% B en 1 min Rata de flujo: 1.0 mL/min Detección: UV 215 nm Método I (LCMS: HPLC analítica/MS): Sistema: Waters Acquity UPLC con Waters Micromass ZQ 2000 ESI+/-Columna: Acquity HSS T3 C18, 2.1 x 50 mm, 1.8 micron Temperatura: 50 °C Eluyente A: H2O, que contiene 0.05% v/v HCOOH y 3.75 mM acetato de amonio Eluyente B: CH3CN, que contiene 0.04% HCOOH Gradiente: 2% - 98% B in 4.3 min, 0.7 min con 98% B, luego - 2% B in 0.1 min y 0.9 min con 2% B Rata de flujo: 1.0 mUmin Método J (LCMS: HPLC analítica/MS): Sistema: Agilent 1100 Series; MS: G1946D Columna: Symmetry C8, 2.1 x 50mm, 3.5 micron Eluyente A: H2O, que contiene 0.1% v/v HCOOH Eluyente B: CH3CN, que contiene 0.1% v/v HCOOH Gradiente: 0 - 3.3 min: 5% to 95% of B Rata de flujo: 1.0 mUmin Método K (LCMS: HPLC analítica/MS): Sistema: Waters Acquity UPLC Columna: Acquity HSS T3 C18, 2.1 x 50 mm, 1.8 micron Eluyente A: H2O, que contiene 0.05% v/v HCOOH y 0.05% acetato de amonio Eluyente B: acetonilrilo, que contiene 0.04% HCOOH
Gradiente: 2% - 98% B in 1.7 min, 0.45 min con 98% B, luego - 2% B in 0.04 min
Rata de flujo: 1.2 ml/min
Método L (LCMS: HPLC analítica/MS):
Sistema: Waters Aquity UPLC; MS: Waters AQ Detector
5 Columna: Aquity HSS, 1.8 mm 2.1 x 50mm, 3/pk
Eluyente A: H2O, que contiene 0.1 % v/v HCOOH
Eluyente B: CH3CN, que contiene 0.1% v/v HCOOH
Gradient; 0-1.5 min: 10% to 95% of B, luego 1 min: 95% B
Rata de flujo: 1.2 mL/min 10 ESI-MS:
Instrumentoo Micromass Platform II
Eluyente: MeOH al 15% v/v en H2O que contiene 0.2% v/v de una solución de hidróxido de amonio al 25%
Rata de flujo: 0.05 mL/min
En los siguientes ejemplos, se usan las abreviaturas dadas a continuación:
atm. atmósfera
CDI 1,1’-carbonildiimidazol
CH3CN acetonitrilo
DAST Trifluoruro de dietilaminoazufre
DCE 1,2-dicloroetano
DCM Diclorometano
DMF N,N-dimetilformamida
DMSO dimetilo sulfóxido
Et2O dietilo éter
EtOAc Acetato de etilo
EtOH Etanol
eq Equivalente
h Horas
H2O Agua
HPLC Cromatografía Líquida de Alto rendimiento
HV Alto vacío
LCMS Cromatografía líquida acoplada con espectrometría de masas
LiHMDS litio bis(trimetilsilil)amida
MeOH metanol
mL
mililitro
min
minuto
MS-ESI
Espectrometría de masas con ionización por electroaspersión
MW
Microondas
NaHCO3
Bicarbonato de sodio
Na2SO4
Sulfato de sodio
NH4Cl
Cloruro de amonio
RM
Mezcla de reacción
Rf
Relación de frentes en TLC
rt
Temperatura ambiente
TEA
Trietilamina
TFA
Ácido trifluoroacético
THF
Tetrahidrofurano
TLC
Cromatografía de capa delgada
tR
Tiempo de retención
UV
Ultravioleta
Intermediario A: Ácido Imidazol-1-carboxílico (8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida
8-tert-Butil-4,5-dihidro-triazolo[4,5-h]quinazolin-2-ilamina (Etapa A.1, 0.319 g, 1.225 mmol) y CDI (278 mg, 1.715 mmol) fueron agregados a DCM (5 ml) y DMF (0.25 ml) bajo una atmósfera de argón. Después de 18 horas el residuo fue enfriado a 4ºC y el precipitado fue recolectado por filtración. El sólido fue secado a 50ºC en alto vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo pálido. LCMS:: tR 0,95 min y M+H 319.0 (el método A2) para éster metílico del ácido (8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-carbámico; el producto de la reacción del compuesto del título con MeOH durante la preparación de la muestra como solución en MeOH.
Etapa A.1: 8-tert-Butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-ilamina
El intermediario A.1 fue obtenido por dos rutas diferentes. Ambas rutas parten de 2-amino-5,6-dihidro-4Hbenzotiazol-7-ona y se describen a continuación:
Ruta 1:
A una mezcla de N’-{6-[1-dimetilamino-met-(E)-iliden]-7-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-benzotiazol-2-yl}-N,Ndimetil15 formamidina (Etapa A.2, 2.2 g, 7.90 mmol) en 2-metoxietanol (20 mL) se agregó a temperatura ambiente hidróxido
de sodio (1.185 g, 29.6 mmol) y clorhidrato de 2,2-dimetil-propionamidina (1.620 g, 11.85 mmol). La mezcla de reacción fue agitada a 125ºC durante 3 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción fue diluida con MeOH, adsorbida sobre sílica gel y purificada por cromatografía instantánea (CombiFlash® Companion sistema®, con columna de sílica gel RediSep®, eluyente: DCM / MeOH / Amoniaco 95:5:0.5). LC: tR 3.64 min (método D). MS: M+H = 261. 1H-NMR in DMSO-d6: 8.24 (s, 1H); 7.70 (s, 2H); 2.89 - 2.84 (m, 2H); 2.76 - 2.71 (m, 2H); 1.28 (s, 9H).
Etapa A.2: N’-{6-[1-Dimetilamino-met-(E)-iliden]-7-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-benzotiazol-2-yl}-N,N-dimetil-formamidina
Una suspensión de 2-amino-5,6-dihidro-4H-benzotiazol-7-ona (3.5 g, 20.81 mmol) en dimetoximetidimetilamina (12
10 mL, 90 mmol) fue calentada a 100ºC con agitación durante 65 horas. La mezcla de reacción fue evaporada entonces hasta sequedad in vacuo y el residuo fue suspendido en EtOAc. Después de 1 hora a 4ºC, se retiró el sólido por filtración, se lavó con EtOAc y luego se secó bajo alto vacío a 60ºC para dar el producto del título puro en forma de cristales color marrón. LC: tR 3.25 min (método D). MS: M+H = 279. 1H-NMR in DMSO-d6: 8.40 (s, 1H); 7.23 (s, 1H);
3.15 (s, 3H); 3.05 (s, 6H); 2.97 (s, 3H); 2.91 (t, 2H); 2.67 (t, 2H).
15 Ruta 2:
Se agregó carbonato de potasio (0.434 g, 3.14 mmol) a una mezcla de N-(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5h]quinazolin-2-il)-acetamida (Etapa A.3, 0.38 g, 1.257 mmol) en MeOH. La mezcla de reacción fue agitada a 50ºC durante 52 horas, luego se enfrió hasta temperatura ambiente y se evaporó al vacío para dar una masa roja. Se 20 agregó agua (20 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas adicionales. La suspensión roja fue enfriada entonces a 4ºC y filtrada para dar después del secado bajo alto vacío el compuesto del título en forma de un sólido color beige. LCMS: tR 0.99 min y M+H = 261 (método A3). 1H-NMR in DMSO-d6, 400 MHz): 8.24 (s, 1H);
7.70 (s, 2H); 2.89 - 2.84 (m, 2H); 2.76 - 2.71 (m, 2H); 1.28 (s, 9H).
Etapa A.3: N-(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-acetamida
Se agregó piridina (13 mL) a N-(6-enformil-7-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-benzotiazol-2-il)-acetamida (Etapa A. 4, 3.05 g,
12.8 mmol) y clorhidrato de tert-butilamidina (1.788 g, 12.8 mmol) y la mezcla se calentó en un recipiente cerrado a 160ºC durante 6.5 horas. Después de enfriar la mezcla de reacción se filtró para dar un sólido. El licor madre de la
filtración fue evaporado para dar material sólido adicional. Los sólidos combinados fueron triturados repetidamente con CH3CN caliente y los licores madre de CH3CN caliente fueron evaporados para dar un sólido que demostró ser predominantemente el producto del título. El producto crudo fue disuelto en cerca de 10 ml de una solución de DMSO al 10% en MeOH para dar una solución naranja ligeramente turbia que se filtró y agregó gota a gota a agua (100 ml) a temperatura ambiente con agitación. El sólido precipitado fue recolectado por filtración para dar el compuesto del título en forma de un sólido naranja. LCMS: tR 1.37 min y M+H = 303.0 (método A3). 1H-NMR in DMSO-d6, 400 MHz: 12.40 (s, 1H); 8.44 (s, 1H); 2.88 - 3.00 (m, 4H); 2.17 (s, 3H); 1.32 (s, 9H).
Etapa A.4: N-(6-Formil-7-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-benzotiazol-2-il)-acetamida
10 Se agregó solución de LiHMDS (1 M, 27.7 mL) a lo largo de 10 minutos a una suspensión de N-(7-oxo-4,5,6,7tetrahidrobenzotiazol-2-il)-acetamida (Etapa A.5, 2.0 g, 9.23 mmol) en THF seco (20 mL) enfriado a -78ºC bajo una atmósfera de argón. La mezcla de reacción fue agitada entonces a -78ºC durante 2.5 horas y se agregó formiato de metilo (2.308 ml, 36.9 mmol) gota a gota durante 30 minutos. La mezcla de reacción fue calentada entonces lentamente hasta temperatura ambiente y luego se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. La mezcla de
15 reacción fue vertida en HCl 1 M acuoso (70 ml) y extraída 3 X con DCM, secada sobre Na2SO4 y evaporada para dar el compuesto del título en forma de un sólido. HPLC: tR 3.65 min (método D). MS: M-H = 237. 1H-NMR en DMSO-d6 (400 MHz): 12.50 (s, br, 1H); 7.55 (s, 1H); 2.90 - 2.60 (m, 4H); 2.15 (s, 3H).
Etapa A.5: N-(7-Oxo-4,5,6,7-tetrahidro-benzotiazol-2-il)-acetamida
20 A anhídrido acético (80 mL) se agregó a temperatura ambiente 2-amino-5,6-dihidro-4H-benzotiazol-7-ona (10 g, 59.4 mmol) y la suspensión resultante fue calentada a reflujo. Después de 1.75 horas de agitación a reflujo, la mezcla de reacción se dejó enfriar con agitación y se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente antes de enfriar con un baño de hielo/NaCl, y se recolectó un sólido por filtración. El sólido fue triturado entonces dos veces con acetona en reflujo (10 mL luego 15 mL) antes de filtrar y secar bajo vacío a 40ºC para dar el producto del título, en forma de un
25 sólido beige. HPLC: tR 3.47 min (método D). MS: M-H = 211.1. 1H-NMR in DMSO-d6 (600 MHz): 12.55 (s, br, 1 H);
2.84 (t, 2H); 2.48 (t, 2H); 2.17 (s, 3H); 2.065 (qt, 2H).
Intermediario B: amida del ácido (2S,4R)-4-Dimetilamino-pirrolidin-2-carboxílico
Una solución de metilo éster del ácido (2S,4R)-4-dimetilamino-pirrolidin-2-carboxílico (Etapa B.1, 225 mg) y 30 amoniaco 7 M en MEOH (7 mL) se dejó durante 18 horas a temperatura ambiente en un recipiente sellado. La evaporación y trituración con Et2O dio el compuesto del título en forma de un sólido blanco.
Etapa B.1 Metilo éster del ácido (2S,4R)-4-Dimetilamino-pirrolidin-2-carboxílico
Una mezcla de 1-bencilo éster 2-metilo éster del ácido (2S,4R)-4-dimetilamino-pirrolidin-1,2-dicarboxílico (Etapa B.2, 420 mg), paladio al 10% sobre carbono (80 mg) y MeOH (10 mL) fue agitada durante 16 horas bajo una atmósfera de nitrógeno. La filtración y evaporación dieron el compuesto del título el cual fue utilizado sin purificación en las siguientes etapas.
Etapa B.2 1- bencilo éster 2-metilo éster del ácido (2S,4R)-4-Dimetilamino-pirrolidin-1,2-dicarboxílico
Se agregó cianoborohidruro de sodio (200 mg) a una mezcla de 1-bencilo éster 2-metilo éster de ácido (2S,4R)-4amino-pirrolidin-1,2-dicarboxílico (400 mg), formalina (0.68 ml), ácido acético (0.72 ml), trietilamina (0.2 ml) y MeOH (2 ml) y la mezcla se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue sometida a partición
10 entre DCM y solución acuosa de NaHCO3, evaporándose las capas de DCM y purificándose por cromatografía de fase normal, eluyente; gradiente de EtOAc a 20% de EtOH en EtOAc, para dar el componente activo en UV predominante. El material sometido a cromatografía fue tomado con HCl 1 M, lavado con Et2O 2X, la fase acuosa se basificó con NaHCO3, se extrajo 3X con Et2O, se secó sobre Na2SO4 y se evaporó para dar el compuesto del título en forma de un aceite amarillo pálido.
15 Intermediario C: Ácido imidazol-1-carboxílico (8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida
A una mezcla de 2-amino-8-N,N-dietilamino-4,5-dihidrotiazolo[4,5-h]quinazolina (Etapa C.1, 1 g, 3.63 mmol) en DCM (35 mL) se agregó CDI (1.178 g, 7.26 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 40ºC durante 90 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, el sólido fue recolectado por filtración para dar el compuesto del título. HPLC: tR 4.11
20 min (método D). MS: M+H = 334 for metilo éster del ácido (8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)carbámico como producto de la reacción del compuesto del título con MeOH.
Etapa C.1: 2-Amino-8-dietilamino-4,5-dihidrotiazolo[4,5-h]quinazolina
A N’-{6-[1-dimetilamino-met-(E)-iliden]-7-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-benzotiazol-2-yl}-N,N-dimetil-formidina (Etapa A.2, 1
25 g, 3.59 mmol) en 2-metoxietanol (10 mL) se agregó NaOH (0.539 g, 13.47 mmol) y N,N-dietilguanidina (0.454 g, 3.94 mmol) bajo argón a temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue agitada durante 3.5 h a 125ºC y luego enfriada hasta temperatura ambiente. Después de la evaporación in vacuo el residuo fue disuelto en HCl 0.1 M (50 mL) y lavado con EtOAc. La capa acuosa fue entonces basificada con NaOH 6 N y extraído 3 X con EtOAc. Las capas orgánicas fueron secadas sobre Na2SO4, se evaporaron y se secaron bajo alto vacío a 60ºC para dar el compuesto
30 del título en forma de cristales naranja. LC: tR 3.60 min (método D). MS: M+H = 276. 1 H-NMR in DMSO-d6: 7.91 (s, 1H); 7.59 (s, 2H); 3.50 (q, 4H); 2.69 (dd, 4H); 1.07 (t, 6H).
Intermediario D: amida del ácido (2S,3S)-3-Metil-pirrolidin-2-carboxílico
Se agregó una solución 4 M de HCl en 1,4-dioxano (1.5 mL) a una suspensión de ácido (2S,3S)-3-metilpirrolidin-2carboxílico (0.5 g) en EtOH (5 mL) a temperatura ambiente y la mezcla se calentó a reflujo durante 20 horas. La mezcla de reacción fue evaporada y se agregó una solución 7 M de amoniaco en MeOH (5.6 mL). La mezcla de reacción fue mantenida a temperatura ambiente durante 6 días y luego evaporada, el residuo fue triturado con MeOH (0.5 mL) y filtrado y lavado con MeOH frio (2 mL) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco. 1HNMR (d6-DMSO, 400 MHz): 8.06 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 3.60 (d, 1H), 3.25-3.14 (m, 2H), 2.24-2.15 (m, 1H), 2.09-1.98 (m, 1H), 1.57-1.45 (m, 1H), 1.13 (d, 3H).
Intermediario E: Amida del ácido (R)-2-Bencil-pirrolidin-2-carboxílico
Una mezcla de (3R,7aR)-7a-bencil-3-triclorometil-tetrahidro-pirrolo[1,2-c]oxaxol-1-ona (1.40 g, preparada como se describe por Wang y Germanas Synlett 1999, 33-36.) y amoniaco 7 M en MeOH (15 ml) fue calentada a 50ºC durante 3 días en un recipiente sellado. La mezcla de reacción enfriada fue evaporada entonces y triturada con cloroformo para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco.
15 Intermediario F Amida del ácido (S)-2-Metil-pirrolidin-2-carboxílico
Una solución de butilo éster del ácido (S)-2-metil-pirrolidin-2-carboxílico (Etapa F.1, 2.3 g) en una solución 7 M de amoniaco en MeOH (22.2 ml) fue calentada en una bomba a 70ºC durante 10 días. La evaporación de la mezcla de reacción y la trituración con hexanos (20 mL) dio el compuesto del título en forma de un sólido blancuzco. 1H-NMR
20 (d6-DMSO, 400 MHz): 7.40 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 2.95-2.84 (m, 1H), 2.72-2.60 (m, 1H), 2.06-1.95 (m, 1H), 1.66-1.44 (m, 2H), 1.42-1.30 (m, 1 H), 1.22 (s, 3H).
Etapa F.1: Butilo éster del ácido (S)-2-Metil-pirrolidin-2-carboxílico
Se agregó HCl concentrado (2 ml) a una suspensión de ácido (S)-2-metil-pirrolidin-2-carboxílico (2 g) en butan-1-ol
25 (50 ml) el cual fue calentado a 60ºC durante 18 horas y luego a reflujo durante 4 días. Se evaporó la mezcla de reacción, se sometió a partición entre NaHCO3 acuoso saturado y DCM, se extrajo 3X con DCM, se secó sobre Na2SO4 y se evaporó. El aceite aislado fue destilado con kugelrohr a 10 mbar para dar el compuesto del título en forma de un aceite incoloro claro de la fracción que destila a una temperatura de horno de 100-120ºC.
Intermediario G: Amida del ácido (R)-2-Metoximetil-pirrolidin-2-carboxílico
Una mezcla de (3R,7aR)-7a-metoximetil-3-triclorometil-tetrahidro-pirrolo[1,2-c]oxazol-1-ona (Etapa G.1, 0.6 g) y amoniaco 7 M en MeOH (6 mL) fue almacenada a temperatura ambiente durante dos días en un recipiente sellado. La mezcla de reacción fue luego evaporada para dar el compuesto del título en forma de un aceite amarillo pálido en cual fue utilizado sin purificación adicional.
Etapa G.1: (3R,7aR)-7a-Metoximetil-3-triclorometil-tetrahidro-pirrolo[1,2-c]oxazol-1-ona
Una solución de 1M de diisopropilamida de litio en una mezcla 3:5 de hexanos/THF (8.25 ml) fue agregada gota a gota a (3R,7aS)-3-triclorometil-tetrahidro-pirrolo[1,2-c]oxazol-1-ona (1.51 g, preparada como lo describen Wang y
10 Germanas Synlett 1999, 33-36.) en THF (5 ml) a -78ºC. Después de agitar durante 30 minutos a -78ºC se agregó metoximetilclorruro (1.14 ml). La mezcla de reacción luego se dejó calentar a - 30 °C over 3 h y se agregó agua. La capa acuosa se extrajo con DCM, las capas orgánicas combinadas se evaporaron y el residuo fue purificado entonces por cromatografía de fase normal, eluyendo con DCM, lo que dio el compuesto del título como un aceite amarillo pálido.
15 Intermediario H: Amida del ácido (R)-2-Dimetilaminometil-pirrolidin-2-carboxílico
Una mezcla de (3R,7aR)-7a-dimetilaminometil-3-triclorometil-tetrahidro-pirrolo[1,2-c]oxazol-1-ona (Etapa H.1, 0.26 g) y amoniaco 7 M en MeOH (4 mL) fue calentada a 50ºC durante 3 días en un recipiente sellado. La mezcla de reacción enfriada fue evaporada entonces para dar el compuesto del título en forma de un aceite color pardo que fue
20 utilizado sin purificación adicional. MS: M+H = 172.1.
Etapa H.1: (3R,7aR)-7a-Dimetilaminometil-3-triclorometil-tetrahidro-pirrolo[1,2-c]oxazol-1-ona
Una solución 1 M de diisopropilamida de litio en una mezcla 3:5 de hexanos/THF (8.25 ml) fue agregada gota a gota a (3R,7aS)-3-triclorometil-tetrahidro-pirrolo[1,2-c]oxazol-1-ona (1.51 g, preparada como lo describen Wang y 25 Germanas Synlett 1999, 33-36.) en THF (5 ml) a -78ºC. Después de agitar durante 30 minutos at -78ºC se agregó sal de Eschenmoser (2.78 g). La mezcla de reacción se dejó entonces calendar hasta -40ºC con agitación vigorosa durante 1 hora y se mantuvo durante al menos 2 horas a -40ºC. Se agregó entonces agua y la capa acuosa extraída con DCM, las capas orgánicas combinadas secadas sobre Na2SO4 y evaporadas. El residuo fue purificado entonces por cromatografía de fase normal eluyendo con un gradiente de DCM a EtOAc al 20% en DCM para dar el
30 compuesto del título en forma de un aceite amarillo pálido (M+H = 301/303/305 3:3:1).
Intermediario 1: Amida del ácido d6-(R)-2-Dimetilaminometil-pirrolidin-2-carboxílico
d6-(3R,7aR)-7a-Dimetilaminometil-3-triclorometil-tetrahidro-pirrolo[1,2-c]oxazol-1-ona (Etapa I.1, 440 mg, 1.430 mmol) fue disuelta en amoniaco en MeOH (10.2 ml, 71.4 mmol) en un recipiente sellado y calentado a 75ºC durante 5 días. La mezcla de reacción se evaporó y trituró 2X con CHCl3 para dar el producto del título en forma de un sólido
5 marrón pálido.
Etapa I.1: d6-(3R,7aR)-7a-Dimetilaminometil-3-triclorometil-tetrahidro-pirrolo[1,2-c]oxazol-1-ona
(3R,7aR)-1-Oxo-3-triclorometil-dihidro-pirrolo[1,2-c]oxazole-7a-carbaldehído (obtenida como se describe en J. Org. Chem. 2006, 71(1), 97-102, 1 g, 3.67 mmol), dimetilamina-d7 en THF (1.0 mL, 14.09 mmol), ácido acético (0.525 mL,
10 9.17 mmol) y DCE (4 mL) fueron combinados bajo argón y se agregó porción a porción triacetoxiborohidruro de sodio (1.089 g, 5.14 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 3 horas la mezcla de reacción fue tomada en DCM, y sometida a partición con NaOH 1 M extrayendo una vez más con DCM. Las capas orgánicas fueron combinadas, luego lavadas dos veces con agua antes de ser secadas sobre Na2SO4. La solución fue evaporada hasta la mitad de su volumen y se agregó HCl 1 M en H2O, las capas se separaron y la capa acuosa se
15 lavó dos veces con DCM. El pH de las capas acuosas fue ajustado a aproximadamente 8 con solución saturada de Na2CO3 y se extrajo tres veces con DCM. Las capas orgánicas fueron secadas sobre Na2SO4 y evaporadas, para dar el producto deseado del título en forma de un aceite amarillo pálido.
Intermediario J: Amida del ácido (R)-2-Hidroximetil-pirrolidin-2-carboxílico
20 Se agregó (3R,7aR)-7a-Hidroximetil-3-triclorometil-tetrahidro-pirrolo[1,2-c]oxazol-1-ona (Etapa J.1, 308 mg, 1.122 mmol) a amoniaco 7 M en MeOH (8.014 mL, 56.1 mmol) bajo argón y se calentó a 75ºC en un recipiente sellado durante 72 horas y luego se evaporó para dar el compuesto del título en forma de un aceite pardo pálido viscoso que fue utilizado sin purificación adicional.
Etapa J.1: (3R,7aR)-7a-Hidroximetil-3-triclorometil-tetrahidro-pirrolo[1,2-c]oxazol-1-ona.
Se agregó triacetoxiborohidruro de sodio (544 mg, 2.57 mmol) a (3R,7aR)-1-oxo-3-triclorometil-dihidropirrolo[1,2c]oxazole-7a-carbaldehído (obtenido como se describe en J. Org. Chem. 2006, 71(1), 97-102, 500 mg, 1.835 mmol) en DCE (4 mL). La mezcla de reacción se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente luego se tomó en DCM, la capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre Na2SO4 y se evaporó. El producto crudo fue purificado utilizando una
30 columna de sílica gel con 20 g de RediSep® (eluyente DCM a MeOH al 10% en DCM) para dar el compuesto del título en forma de un aceite amarillo pálido claro.
Intermediario K: Amida del ácido (R)-2-{[(3-Fluoro-bencil)-metil-amino]-metil}-pirrolidin-2-carboxílico
(3R,7aR)-7a-{[(3-Fluoro-bencil)-metil-amino]-metil}-3-triclorometil-tetrahidropirrolo[1,2-c]oxazol-1-ona (Etapa K.1, 385 mg, 0.973 mmol) se agregó así al amoniaco 7 M en MeOH (6.950 mL, 48.7 mmol) bajo argón y se calentó en un recipiente sellado a 50ºC durante 6 días y luego a 75ºC durante 5 días. La mezcla de reacción fue entonces evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea utilizando una columna de sílica gel RediSep® de 12 g (eluyente MeOH al 5% en DCM) para dar el compuesto del título en forma de un aceite amarillo.
Etapa K.1: (3R,7aR)-7a-{[(3-Fluoro-bencil)-metil-amino]-metil}-3-triclorometil-tetrahidro-pirrolo[1,2-c]oxazol-1-ona
Se agregó triacetoxiborohidruro de sodio (889 mg, 4.19 mmol) a una mezcla de (3R,7aR)-7a-[(3-fluoro-bencilamino)
10 metil]-3-triclorometil-tetrahidro-pirrolo[1,2-c]oxazol-1-ona (Etapa K.2, 400 mg, 1.048 mmol), formaldehído (37% en H2O, 0.102 mL, 1.36 mmol) y ácido acético (0.150 mL, 2.62 mmol) en DCE (4 mL) bajo una atmósfera de argón. Después de 2 horas a temperatura ambiente la mezcla de reacción fue sometida a partición entre DCM y agua. Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre Na2SO4 y evaporadas para dar el compuesto del título en forma de un aceite pardo pálido que fue utilizado sin purificación adicional.
15 Etapa K.2: (3R,7aR)-7a-[(3-Fluoro-bencilamino)-metil]-3-triclorometil-tetrahidro-pirrolo[1,2-c]oxazol-1-ona
Se agregó triacetoxiborohidruro de sodio (544 mg, 2.57 mmol) a (3R,7aR)-1-oxo-3-triclorometil-dihidropirrolo[1,2c]oxazole-7a-carbaldehído (obtenida como se describe en J. Org. Chem. 2006, 71(1), 97-102, 500 mg, 1.835 mmol), 3-fluorobencilamina (0.251 mL, 2.20 mmol) y ácido acético (0.263 mL, 4.59 mmol) en DCE (4 mL) bajo una
20 atmósfera de argón. La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 3 horas, luego sometida a partición entre agua y DCM, siendo la combinada orgánica secada sobre Na2SO4 y evaporada para dar el compuesto del título en forma de un aceite de amarillo pálido que fue utilizado sin purificación adicional.
Intermediario L: Amida del ácido (S)-Azetidin-2-carboxílico
25 Una mezcla de bencilo éster del ácido (S)-2-carbamoil-azetidin-1-carboxílico (Etapa L.1, 1.8 g) y paladio al 10% sobre carbono (0.2 g) en MeOH (25 ml) fue agitado bajo una atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 5 horas. La filtración y evaporación dio el compuesto del título el cual fue utilizado sin purificación subsiguiente.
Etapa L.1: Éster bencílico del ácido (S)-2-Carbamoil-azetidin-1-carboxílico
Una mezcla de 1-bencilo éster 2-metilo éster del ácido (S)-azetidin-1,2-dicarboxílico (2.5 g) y amoniaco 7 M en MeOH (10 ml) fue mantenida a temperatura ambiente durante 18 horas en un recipiente sellado. La mezcla de reacción fue evaporada para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco el cual fue utilizado sin purificación adicional. MS: M+H 235.1 y M-H 233.1.
Intermediario M: Amida del ácido (2S,4R)-4-fluoro-pirrolidin-2-carboxílico
Una solución 1.25 M de HCl en EtOH (2.3 ml) fue agregada a una suspensión de ácido (2S,4R)-4-fluoro-pirrolidin-2carboxílico (0.25 g) en EtOH (2 ml) a temperatura ambiente y la mezcla se calentó durante 62 horas a 55ºC. La
10 mezcla de reacción fue evaporada y se agregó una solución 7 M de amoniaco en MeOH (5.6 ml). La mezcla de reacción fue mantenida a temperatura ambiente durante 36 horas y luego evaporada, triturándose el residuo con MeOH (0.5 ml) y filtrado para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco. 1H-NMR (d6-DMSO, 400 MHz): 7.68 (s, 1 H), 7.37 (s, 1H), 5.30 (d, 1H), 3.96 (t, 1H), 3.40-3.12 (m, 2H), 2.48-2.31 (m, 1H), 2.02-1.81 (m, 1H).
Intermediario N: amida del ácido (2S,4S)-4-Fluoro-pirrolidin-2-carboxílico
Una mezcla de tert butilo éster del ácido (2S,4S)-2-carbamoil-4-fluoro-pirrolidin-1-carboxílico (1.0 g), HCl concentrado (0.6 ml) y 1-butanol (10 ml) se calentó durante 48 horas a 50ºC. La mezcla de reacción fue evaporada y sometida a partición en DCM y NaHCO3 acuoso, las capas de DCM fueron secadas sobre Na2SO4 y evaporadas. Se agregó una solución de amoniaco 7 M en metanol (10 ml) al residuo y la mezcla fue almacenada durante 60 horas a
20 temperatura ambiente en un recipiente sellado. La evaporación y trituración con EtOH dio el compuesto del título en forma de un sólido blanco.
Intermediario O: Amida del ácido (1S,5R)-2-Aza-biciclo[3.1.0]hexano-1-carboxílico
Una mezcla de etilo éster del ácido (1S,5R)-2-aza-biciclo[3.1.0]hexano-1-carboxílico (2.5 g, preparado por el
25 procedimiento de Hercouet Tetrahedron Asymmetry 1996, 7, 1267-1268.) y amoniaco 7 M en MeOH (20 ml) se calentó en un recipiente sellado a 80ºC durante 5 días. La mezcla de reacción enfriada fue evaporada y triturada con hexanos/DCM para dar el compuesto del título como un sólido beige. 1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 7.15 (s, 1H),,
7.04 (s, 1 H), 3.00 - 2.91 (m, 1 H), 2.67 (q, 1H), 1.94 - 1.83 (m, 1 H), 1.74 - 1.67 (m, 1 H), 1.64 - 1.55 (m, 1H), 1.38
1.31 (m, 1 H), 0.90 (t, 1H)).
30 Intermediario P: Amida del ácido (2S,3R)-3-Metil-pirrolidona-2-carboxílico
La amida del ácido (2S,3R)-3-Metil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico (Etapa P.1, 1.1 g, 4.76 mmol) y Pd sobre carbón al 10% (0.101 g, 0.947 mmol) en MeOH (20 mL) fueron agitados bajo una atmósfera de H2. Durante 46 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue filtrada entonces a través de un Filtro de Membrana Fluoropore
(0.2 µm FG) y evaporado. El residuo fue disuelto en DCM y evaporado hasta sequedad para dar el compuesto del título en forma de cristales blancos. MS: M+H = 129.0. 1H-NMR (d6-DMSO, 600 MHz): 7.34 (s, br,1H), 7.10 (s, br, 1H), 3.48 (d, 1H), 3.0.2 - 2.97 (m, 1H), 2.80 - 2.75 (m, 1H), 2.35- 2.28 (m, 1 H), 1.88 - 1.81 (m, 1H), 1.39 - 1.32 (m, 1H), 0.83 (d, 3H).
Etapa P.1: Amida del ácido (2S,3R)-3-Metil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico
Se agregó trimetilaluminio en tolueno (2 M, 3.23 mL) gota a gota a una mezcla de cloruro de amonio (0.346 g, 6:47
mmol) en tolueno (3.2 mL) a 0ºC bajo una atmósfera de argón, con la formación de gas metano. La mezcla de
reacción se dejó calentar entonces hasta temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 15
minutos adicionales antes de agregar lentamente éster metílico del ácido (2S,3R)-3-metil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin15 2-carboxílico (preparado como se describe en Tetr. Lett. 1997, 38 (1), 85-88; 1.6 g, 6.47 mmol). La mezcla de
reacción se agitó a temperatura ambiente durante 56 horas, se agregó entonces HCl 1 M con enfriamiento y la
mezcla de reacción se lavó 3 X con DCM. La fase acuosa fue basificada con Na2CO3, extraída 3X con DCM y las
capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4. La evaporación dio el compuesto del título en forma de un
aceite amarillento. MS: M+H = 233.2. HPLC: tR 3.17 min (método D). 1H-NMR (d6-DMSO, 600 MHz): 7.37 - 7.33 (m, 20 2H), 7.30 (t, 2H), 7.25 (s, br, 1H), 7.21 (t, 1H), 7.12 (s, br, 1H), 3.55 (q, 1H), 3.40 (d, 1H), 2.71 (t, 1H), 2.28- 2.22 (m,
1H), 2.21 - 2.16 (m, 1H), 1.71 (qt, 1H), 1.38 - 1.31 (m, 1H), 1.21 (d, 3H), 0.90 (d, 3H).
Intermediario Q: Amida del ácido (2S,4S)-4-Dimetilamino-pirrolidin-2-carboxílico
Una solución de butilo éster del ácido (2S,4S)-4-dimetilamino-pirrolidin-2-carboxílico (Etapa Q.1, 326 mg) y
25 amoniaco 7 M en MeOH (8 ml) fue dejada en reposo durante 18 horas a temperatura ambiente en un recipiente sellado. La filtración, evaporación y trituración con Et2O/MeOH dio el compuesto del título en forma de un sólido beige.
Etapa Q.1: Butilo éster del ácido (2S,4S)-4-Dimetilamino-pirrolidin-2-carboxílico
30 Se agregó HCl concentrado (0.3 ml) a una mezcla de dihidroclorhidrato de metilo éster del ácido (2S,4S)-4dimetilamino-pirrolidin-2-carboxílico (400 mg) y 1-butanol (4 ml) y se calentó durante 18 horas a 115ºC. Después de enfriar la mezcla de reacción fue evaporada y sometida a partición entre DCM y solución de NaHCO3 acuosa y las
capas de DCM se secaron y se evaporaron para dar el compuesto del título en forma de un aceite color marrón que fue utilizado sin purificación adicional.
Intermediario R: Amida del ácido (2S,4S)-4-Hidroxi-pirrolidin-2-carboxílico
Una solución de clorhidrato de metilo éster del ácido (2S,4S)-4-hidroxi-pirrolidin-2-carboxílico (1 g) en una solución 7M de amoniaco en MeOH (10 ml) fue agitada durante 18 horas y luego evaporada y triturada con Et2O. El residuo fue disuelto en el volumen mínimo de MeOH caliente y dejado en reposo a 4ºC durante 4 horas. El compuesto del título fue aislado por filtración en forma de un sólido blanco.
Intermediario S: Amida del ácido (2S,4R)-4-hidroxi-pirrolidin-2-carboxílico
Una solución de bencilo éster del ácido (2S,4R)-4-hidroxi-pirrolidin-2-carboxílico (1 g) en amoniaco 880 (5 ml) se agitó durante 18 horas y luego se evaporó y trituró con Et2O para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco. 1H-NMR (d6-DMSO, 400 MHz): 9.15 (s, br, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 5.56 (s, 1 H), 4.40 (s, 1 H), 4.27
4.16 (m, 1H), 3.27 (d, 1H), 3.02 (d, 1H), 2.33-2.19 (m, 1H), 1.89-1.76 (m, 1H).
15 Intermediario T: Ácido imidazol-1-carboxílico (7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida
Se disolvió 7-tert-Butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-ilamina (Etapa T.1, 175 mg, 0.659 mmol) en DCM (10 mL), se agregó entonces CDI (297 mg, 1.648 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. El compuesto del título fue aislado por filtración, lavado con DCM y secado bajo HV.
20 Etapa T.1: 7-tert-Butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-ilamina
N-(7-tert-Butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-acetamida (Etapa T.2, 225 mg, 0.732 mmol) fue disuelta en EtOH (10 ml), se agregó entonces HCl al 36% (1.48 g, 14.64 mmol), y la mezcla de reacción se calentó a reflujo. Después de 18 horas a reflujo la mezcla de reacción fue enfriada a temperatura ambiente y ajustada a pH 8-9
25 mediante la adición de solución acuosa de bicarbonato de sodio al 5%, se extrajo con EtOAc, y lavó dos veces con H2O. La capa orgánica fue secada sobre Na2SO4 y evaporada para dar el producto del título (tR 4.408 min (Método F)).
Etapa T.2: N-(7-tert-Butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-acetamida
Se disolvió N-(6-Bromo-7-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-benzotiazol-2-il)-acetamida (Etapa T.3, 473 mg, 1.635 mmol) en MeOH (10 mL), se agregaron 2,2-dimetiltio propionamida (230 mg, 1.962 mmol) y fosfomolibdato de amonio (307 mg, 0.164 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 25ºC durante 20 horas. La mezcla de reacción fue dejada entonces en reposo durante 2 días antes de agitar a 50ºC durante 24 horas. La mezcla fue extraída con EtOAc/H2O. Las capas orgánicas fueron secadas sobre Na2SO4 y evaporadas. El material crudo fue sometido a cromatografía con 30 g de sílica gel, eluyente DCM/ MeOH= 99:1. Las fracciones que contenían el producto fueron evaporadas y liofilizadas desde dioxano para dar 225 mg del compuesto del título en forma de un sólido blanco (M+H = 308; M-H = 306; tR 5.525 min (Método F)).
Etapa T.3: N-(6-Bromo-7-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-benzotiazol-2-il)-acetamida
Se disolvió N-(7-Oxo-4,5,6,7-tetrahidro-benzotiazol-2-il)-acetamida (Etapa T.4, 2.286 g, 10.87 mmol) en AcOH (60 ml), luego se agregó bromo (1.74 g, 10.87 mmol) disuelto en AcOH (10 mL) lentamente y la mezcla de reacción fue calentada a 75ºC durante 20 horas. El color cambió de rojo a beige. La mezcla se evaporó y el residuo se disolvió en MeOH (10 ml) y precipitó con H2O. La mezcla fue filtrada y secada sobre HV. El material crudo fue sometido a cromatografía con MPLC C18H2O 0,1% TFA / CH3CN 0.1% TFA, gradiente 0-50%. Las fracciones que contenían el producto fueron neutralizadas con NaHCO3, extraídas con EtOAc y liofilizadas desde dioxano para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (M+H = 291; M-H = 289; tR 4.29 (Método F)). 1H-NMR (d5-DMSO, 600.13 MHz) 12.75 (s, 1 H) 4.95 (t, 1 H). 2.95-2.84 (m, 2H), 2.62-2.52 (m, 1H), 2.40-2.30 (m, 1H), 2.20 (s, 3H).
Etapa T.4: N-(7-Oxo-4,5,6,7-tetrahidro-benzotiazol-2-il)-acetamida
A anhídrido acético (80 mL) se agregó a temperatura ambiente 2-amino-5,6-dihidro-4H-benzotiazol-7-ona (10 g, 59.4 mmol) y la suspensión amarilla se calentó hasta reflujo. Después de 1.75 horas en agitación a esta temperatura, la mezcla de reacción se dejó enfriar con agitación y se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Después de enfriar adicionalmente con un baño de hielo/NaCl, se filtró la suspensión. El sólido fue sometido entonces dos veces a reflujo con acetona (10 ml y luego 15 ml) y se filtró. El sólido resultante fue secado bajo vacío a 40ºC durante la noche para producir el compuesto del título en forma de un sólido beige (HPLC: tR 3.47 min (Método A3), M-H = 211.1), 1H-NMR in DMSO-d6 (600 MHz): 12.55 (s, br, 1 H); 2.84 (t, 2H): 2.48 (t, 2H); 2.17 (s, 3H); 2.065 (qt, 2H)).
Intermediario U: Ácido imidazol-1-carboxílico (7-(2-fluoro-1,1-dimetil-etil)-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il]amida
Se disolvió 7-(2-Fluoro-1,7-dimetil-etil)-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-lamina (Etapa U.1 61.6 mg, 0.217 mmol) en DCM (2 mL), y se agregó CDI (297 mg, 1.648 mmol) para dar una solución incolora clara. La mezcla de reacción se dejó en reposo durante la noche a temperatura ambiente para dar una suspensión blanca. La mezcla fue enfriada a 4ºC durante 1 hora y luego se filtró, se lavó con DCM y se secó bajo vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (análisis de una muestra en MeOH; M+H = 342.0 mostró producto de carbamato de metilo en MS; tR 2.14 min (Método A3)).
Etapa U.1 7-(2-Fluoro-1,1-dimetil-etil)-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-lamina
Se disolvió 3-Fluoro-2,2-dimetihtiopropionamida (Etapa U.2, 394 mg, 2.331 mmol) en EtOH, se agregaron N-(6bromo-7-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-benzotiazol-2-il)-acetamida (Etapa T.3, 473 mg, 1.635 mmol) y fosfomolibdato de amonio (80 mg, 0.042 mmol) para dar una suspensión amarilla. La mezcla de reacción fue calentada a reflujo para dar una suspensión azul-verde oscura. La mezcla de reacción fue agitada a 65ºC durante 3 días. La mezcla de reacción fue filtrada y el filtrado se evaporó. El residuo fue tomado en DMF y purificado por HPLC preparativo (método E). Las fracciones que contenían el producto fueron combinadas y evaporadas para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (M+H = 284.1; tR 1.30 min (Método A3)).
Etapa U.2 3-Fluoro-2,2-dimetil-tiopropionamida
El compuesto del título fue preparado por el procedimiento de Boys, M. L.; Downs, V. L. Synth. Commun. 2006, 36,
295. Se agregó hidrato de hidrógeno sulfuro de sodio (3.89 g, 69.4 mmol, higroscópico) a una solución de 3-fluoro2,2-dimetil-propionitrilo (Etapa U.3, 1.17 g, 11.57 mmol) y clorhidrato de dietilo amina (7.61 g, 69.4 mmol) en 1,4dioxano (7 mL) y H2O (7 mL) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue calentada a 55ºC y luego agitada durante 3 días a esta temperatura. La mezcla de reacción se diluyó con agua (50 ml) y se extrajo 5X con EtOAc (50 ml). Las capas orgánicas fueron secadas sobre Na2SO4 y se evaporaron para dar un aceite naranja. Se agregó entonces DCM (5 ml) para dar una suspensión blanca. La suspensión fue filtrada y el filtrado fue purificado con cromatografía instantánea sobre sílica gel eluyendo con DCM. Las fracciones que contenían el producto fueron evaporadas para dar el compuesto del título en forma de un aceite amarillo pálido (M+H = 136.1, M-H = 134.1; tR
0.69 min (Método A3)). 19F-NMR (d6-DMSO, 400 MHz 218ppm (t, 1F)).
Etapa U.3 3-Fluoro-2,2-dimetil-propionitrilo
Se combinaron 3-Fluoro-2,2-dimetil-propionamida (Etapa U.4, 1.82 g, 15.28mmol) y pentóxido de fósforo (2.168 g,
15.28 mmol) para dar un polvo blanco de flujo libre el cual fue calentado con un baño de aceite a una temperatura de baño de 180ºC durante 50 minutos bajo una atmósfera de argón. Se aplicó entonces lentamente un vacío de 300 mbar destilando un aceite incoloro claro móvilo el cual formó un sólido ceroso de bajo punto de fusión por reposo del compuesto del título. 19F-NMR (d6-DMSO, 400 MHz 219.5 ppm (t, 1F)).
Etapa U.4 3-Fluoro-2,2-dimetil-propionamida
Se agregó fluoruro de 3-Fluoro-2,2-dimetil-propionilo (DE3326874 y DE3611195, 2.5 g, 20.47 mmol) a 0ºC a una mezcla de amoníaco acuoso (10 ml) y THF (20 ml). La mezcla de reacción se dejó entonces calentar hasta temperatura ambiente y se dejó en reposo durante la noche a temperatura ambiente. El volumen fue reducido en un 50% bajo vacío para dar una suspensión blanca espesa. La suspensión fue extraída con DCM/H2O. Las capas orgánicas fueron secadas sobre Na2SO4 y evaporadas para dar el compuesto del título en forma de un sólido cristalino blanco.
Intermediario V: Ácido imidazol-1-carboxílico (7-ciclopropilmetil-4,5-dihidro-benzo [1,2-;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida
7-Ciclopropilmetil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-ilamina (Etapa V.1, 72 mg, 0.273 mmol) fue disuelta en 5 mL de DCM, se agregó CDI (73.9 mg, 0.410 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. Se agregó CDI adicional (37 mg, 0.205 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas adicionales. La mezcla fue filtrada, lavada con DCM y el filtrado fue evaporado para dar el compuesto del título (M+H = 322.1; M-H = 320.2 MS-ES en MeOH muestra el producto carbamato de metilo).
Etapa V.1 7-Ciclopropilmetil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-ilamina
N-(7-Ciclopropilmetil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3;4-d’]bistiazol-2-il)-acetamida (Etapa V.2, 180 mg, 0.589 mmol) se
10 disolvió en EtOH (10 mL) y se agregó HCl al 36% (1.193g, 11.79 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 90ºC durante 16 horas luego se enfrió y se extrajo con EtOAc/H2O. La capa orgánica fue secada sobre Na2SO4 y se evaporó. Los materiales crudos fueron sometidos a cromatografía con MPLC C18 H2O 0.1% TFA, gradiente 0-50%. Las fracciones que contenían el producto fueron neutralizadas con NaHCO3, extraídas con EtOAc y liofilizadas desde dioxano para dar el compuesto del título (M+H = 264.2; M-H = 262.1; tR 4.183 min (Método F)).
15 Etapa V.2 N-(7-Ciclopropilmetil-4.5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-acetamida
N-(6-Bromo-7-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-benzotiazol-2-il)-acetamida (Etapa T.3, 347 mg, 1.200 mmol) fue disuelta en MeOH (10 mL) y 2-ciclopropil-tioacetamida (Can.J.Chem 1995 Vol.73 1468-1477, 166 mg, 1.440 mmol) y se agregó fosfomolibdato de amonio (225 mg, 0.120 mmol). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 20 20 horas y luego se calentó a 50ºC durante 3 horas, 60ºC durante 2 horas y luego se sometió a reflujo durante 24 horas. La mezcla de reacción fue sometida a partición entre EtOAc/H2O. La capa orgánica fue secada sobre Na2SO4 y evaporada. El material crudo fue sometido a cromatografía con HPLC C18 H2O 0.1% TFA/ CH3CN 0.1 % TFA, gradiente 0-50%. Las fracciones que contenían el producto fueron neutralizadas con NaHCO3, extraídas con EtOAc y liofilizadas desde dioxano para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (M+H = 306.2; M-H =
25 304.2; tR 5.12 min (Método F)).
Ejemplo 1: 2-amida 1-1(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo [4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,4R)4-Dimetilaminopirrolidin-1,2-dicarboxílico
A una solución de ácido imidazol-1-carboxílico (8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida
30 (Intermediario A, 45.1 mg, 0.127 mmol) en DMF (1 mL) se agregó amida del ácido (2S,4R)-4-dimetilamino-pirrolidin2-carboxílico (intermediario B, 22 mg, 0.140 mmol) y trietilamina (0.053 ml, 0.382 mmol). La mezcla de reacción fue agitada entonces a temperatura ambiente durante 17 horas y purificada por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron combinadas y eluidas a través de un cartucho de 300 mg de Bond Elut
SCX. El cartucho fue luego lavado con una solución 7 M de amoniaco en MeOH y evaporado para dar el compuesto del título. MS: M+H = 444. HPLC: tR 3.17 min (método D).
Ejemplo 2: 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-cihidro-.tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,3S)-3-Metilpirrolidin-1,2-dicarboxílico
Una mezcla de amida del ácido (2S,3S)-3-metil-pirrolidin-2-carboxílico (Intermediario D, 6.24 mg, 0.049 mmol), ácido imidazol-1-carboxílico (8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario C, 18 mg, 0.049 mmol) y trietilamina (0.020 mL, 0.146 mmol) en DMF (0.4 mL) fue agitada a temperatura ambiente durante 6 horas. La mezcla de reacción fue purificada entonces directamente por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron luego filtradas a través de un cartucho de 300 mg de Bond Elut SCX-. El cartucho fue luego eluido con una solución de amoníaco 7 M en MeOH y el eluyente se evaporó para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo. MS: M+H = 430.1. HPLC: tR 3.72 min (método D). 1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz):
11.05 (s, 1 H); 8.04 (s, 1H); 7.44 (s, br, 1 H); 6.95 (s, br, 1H); 3.78 (s, br, 1 H); 3.60 - 3.50 (m, 6H); 2.82 (s, br, 4H);
2.18 (s, br, 1H); 2.03 (s, br, 1H); 1.55 (s. br, 1H); 1.10 (t, 6H); 1.05 (d, 3H).
Ejemplo 3: 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (R)-2-Bencil-pirrolidin1,2-dicarboxílico
A una mezcla de ácido imidazol-1-carboxílico (8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario C, 50 mg, 0.135 mmol) en DMF (1 mL) se agregó amida del ácido (R)-2-bencil-pirrolidin-2-carboxílico (Intermediario E, 33.2 mg, 0.162 mmol) y trietilamina (0.057 mL, 0.406 mmol). La mezcla de reacción fue agitada durante 21 horas a 40ºC y luego se purificó directamente con HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron eludidas a través de un cartucho de 300 mg de Bond Elut - SCX. El cartucho fue eluido entonces con solución de amoniaco 7 M en MeOH y evaporado para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo. MS: M+H = 506.1. HPLC: tR 4.38 min (método D).
Ejemplo 4: 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (S)-2-Metil-pirrolidin1,2-dicarboxílico
A una mezcla de ácido imidazol-1-carboxílico (8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario C, 15 mg, 0.203 mmol) en DMF (2 mL) se agregó amida del ácido (S)-2-metil-pirrolidin-2-carboxílico (intermediario F, 39 mg, 0.305 mmol) y trietilamina (0.085 mL, 0.609 mmol). La mezcla de reacción fue agitada a 40ºC durante 17 horas y luego se purificó directamente por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron eluidas a través de un cartucho de 300 mg de Bond Elut - SCX. Después el cartucho fue luego eluido con solución de amoniaco 7 M en MeOH y se evaporó para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo MS: M+H = 430.2. HPLC: tR 3.80 min (método D).
Ejemplo 5: 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo [4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (R)-2-Metoximetilpirrolidin-1,2-dicarboxílico
Una mezcla de ácido imidazol-1-carboxílico (8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario C, 75 mg, 0.203 mmol), amida del ácido (R)-2-metoximetil-pirrolidin-2-carboxílico (intermediario G,
35.3 mg, 0.223 mmol) y trietilamina (0.085 mL, 0.609 mmol) en DMF (2 mL) se agitó durante 6 horas a 40ºC. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la mezcla de reacción se disolvió en MeOH (1 mL) y se purificó directamente por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron eluidas a través de un cartucho de 300 mg de Bond Elut - SCX. El cartucho fue eluido entonces con solución de amoniaco 7 M en MeOH y se evaporó para dar el producto del título en forma de un sólido amarillo. MS: M+H = 460.1. HPLC: tR 3.94 min (método D).
Ejemplo 6: 2-amida 1-((8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo [4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del acido (R)-2-Dimetilaminometilpirrolidin-1,2-dicarboxílico
Ácido imidazol-1-carboxílico (8-tert-butil-4,6-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario A, 132 mg,
0.372 mmol) fue agregado a una mezcla de amida del ácido (R)-2-dimetilaminometil-pirrolidin-2-carboxílico (Intermediario H, 70 mg, 0.409 mmol) y Trietilamina (0.155 mL. 1.115 mmol) en DMF (1 mL) a temperatura ambiente. Después de 18 horas se agregó MeOH (0.5 ml), la mezcla de reacción se filtró a través de un filtro de membrana de PTFE y se purificó por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron combinadas y evaporadas para eliminar el CH3CN y luego se basificaron mediante la adición de NaHCO3 sólido para dar un precipitado amarillo blancuzco. Después de enfriar a 4ºC, el sólido fu recolectado por filtración y luego purificado adicionalmente por HPLC preparativa (método C). Las fracciones que contenían el producto fueron eluidas a través de un cartucho de 300 mg de Bond Elut ~ SCX. El cartucho fue luego eluido con una solución de amoniaco 7 M en solución de MeOH y se evaporó para dar el producto del título en forma de un vidrio amorfo amarillo. LCMS: tR 0.98 min y M+H = 458.1 (método A3). 1H-NMR (CD3OD, 400 MHz): 8.28 (s, 1H); 3.92 - 3.82 (m, 1H); 3.67 - 3.44 (m, 2H);
3.04 - 2.88 (m, 4H); 2.85 - 2.71 (m, 1 H); 2.56 (s, br, 6H); 2.29 - 2.19 (m, 1 H); 2.08 -1.87 (m, 3H); 1.37 (s, 9H).
Ejemplo 7: 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido d6-(R)-2Dimetilaminometil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico
Ácido imidazol-1-carboxílico (8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario A, 91 mg,
0.256 mmol) y trietilamina (0.036 mL, 0.256 mmol) fueron agregados a amida del ácido d6-(R)-2-dimetilaminometilpirrolidin-2-carboxílico (Intermediario I, 50 mg, 0.282 mmol) suspendido en DMF (2 mL) bajo una atmósfera de argón. La mezcla de reacción fue luego agitada durante for 2.75 horas a 40ºC y luego purificada directamente por HPLC preparativa dos veces (método B y luego método C). Cada vez, las fracciones que contenían el producto fueron combinadas y eluidas a través de un cartucho de 300 mg de Bond Elut 300 - SCX. El cartucho fue luego eluido con una solución de amoníaco 7 M en MeOH y se evaporó para dar un sólido amarillo. El sólido fue suspendido en DCM, filtrado y secado in vacuo para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo. LCMS: tR 1.21 min y M+H = 464.0 (método A1).
Ejemplo 8: 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo [4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (R)-2-Hidroximetilpirrolidin-1,2-dicarboxílico
Ácido Imidazol-1-carboxílico (8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5,h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario C, 50 mg,
0.135 mmol) fue agregado a una mezcla de amida del ácido (R)-2-hidroximetil-pirrolidin-2-carboxílico (Intermediario J, 25.4 mg, 0.176 mmol) y trietilamina (0.047 mL, 0.338 mmol) en DMF (1 mL) a temperatura ambiente. Después de 18 horas a temperatura ambiente la mezcla de reacción fue filtrada a través de una membrana de PTFE y purificada por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron combinadas y filtradas a través de un cartucho Bond Elut - SCX. El cartucho fue entonces eluido con una solución de amoníaco 7 M en MeOH y evaporada para dar un vidrio naranja que fue recristalizado desde MeOH/agua para producir el compuesto del título en forma de un sólido amarillo. LCMS: tR 1.09 min y M+H = 446.0 (método A3).
Ejemplo 9: 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h] quinazolin-2-il)-amida] del ácido (R)-2-Hidroximetilpirrolidin-1,2-dicarboxílico
Ácido imidazol-1-carboxílico (8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario A, 124 mg,
0.350 mmol) fue agregado a una mezcla de amida del ácido (R)-2-hidroximetil-pirrolidin-2-carboxílico (Intermediario J, 63 mg, 0.350 mmol) y trietilamina (0.049 mL, 0.350 mmol) en DMF (2 mL). La mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas a 40ºC luego se dejó en reposo durante 18 horas a temperatura ambiente y luego se purificó directamente por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron eluidas a través de un cartucho de 300 mg de Bond Elut - SCX. El cartucho fue luego eluido con una solución 7 M de amoniaco en MeOH y se evaporó para dar un sólido amarillo. El sólido aislado fue suspendido entonces en DCM, filtrado y secado para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo/blancuzco pálido. LCMS: tR 1.31 min y M+H = 430.9 (método A1).
Ejemplo 10: 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (R)-2-{[(3-Fluorobencil)-metil-aminol-metil)-pirrolidin-1.2-dicarboxílico
Ácido imidazol-1-carboxílico (8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario A, 40.1 mg,
0.113 mmol) y trietilamina (0.047 mL, 0.339 mmol) fueron agregados a amida del ácido (R)-2-{[(3-fluoro-bencil)-metilamino]-metil}-pirrolidin-2-carboxílico (Intermediario K, 30 mg, 0.113 mmol) suspendido en DMF (1 mL) a temperatura ambiente bajo argón. La mezcla de reacción fue agitada durante 2.5 h a 40ºC y luego purificada directamente por HPLC (método C), Las fracciones que contenían el producto fueron eluidas a través de un cartucho de 300 mg Bond Elut - SCX. el cartucho fue eluido con una solución de amoniaco 7 M en MeOH y evaporado hasta dar un sólido amarillo. El sólido fue triturado con DCM, filtrado y secado para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo pálido. LCMS: tR 0.81 min y M+H = 552.3 (método A2).
Ejemplo 11: 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (S)-2-Metil-pirrolidin1,2-dicarboxílico
La amida del ácido (S)-2-Metil-pirrolidin-2-carboxílico (Intermediario F, 22.14 mg, 0.169 mmol) y trietilamina (0.035 mL, 0.254 mmol) fueron agregadas a ácido imidazol-1-carboxílico (8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2il)-amida (Intermediario A, 30 mg, 0.085 mmol) en DMF (1 mL) bajo argón a temperatura ambiente. Después de
5 agitar durante 16 horas a temperatura ambiente la mezcla de reacción fue purificada directamente por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron eluidas a través de un cartucho de 300 mg de Bond Elut - SCX. El cartucho luego fue eluido con una solución 7 M de amoniaco en MeOH y evaporado para dar el compuesto del título en forma de un sólido cristalino amarillo. MS: M+H = 415.1. HPLC: tR -3.73 min (método D).
Ejemplo 12: 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (S)-Pirrolidin-1,210 dicarboxílico
Amida del ácido (S)-Pirrolidin-2-carboxílico (148 mg, 1.299 mmol) y trietilamina (0.272 mL, 1.949 mmol) se agregaron a ácido imidazol-1-carboxílico (8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario C, 240 mg,
0.65 mmol) y (DMF (1 ml) bajo argón a temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue agitada durante 15.5 horas
15 a temperatura ambiente y luego purificada con HPLC preparativa (método C). Las fracciones que contenían el producto fueron combinadas y filtradas a través de un cartucho Bond Elut – SCX. El cartucho fue luego eluido con una solución 7 M de amoniaco en MeOH y evaporado para dar el compuesto del título en forma de cristales naranja. MS: M+H = 416.1 HPLC: tR 3.56 min (método D).
Ejemplo 13: 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (S)-Azetidin-1,220 dicarboxílico
Una mezcla de amida del ácido (S)-azetidin-2-carboxílico (intermediario L, 26.4 mg, 0.264 mmol), ácido imidazol-1carboxílico (8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario C, 75 mg, 0.203 mmol) y trietilamina (0.085 mL, 0.609 mmol) en DMF (2 mL) fue agitado a 40ºC durante 2 horas. La mezcla de reacción fue
25 purificada entonces directamente por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron eluidas a través de un cartucho de 300 mg Bond Elut – SCX. El cartucho fue eluido entonces con una solución 7 M de amoniaco en MeOH y evaporado para dar el compuesto del título en forma de un sólido cristalino blanco. MS: M+H = 442.1. HPLC: tR 3.56 min (método D).
Ejemplo 14: 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (S)-Pirrolidin-1,230 dicarboxílico
La amida del ácido (S)-Pirrolidin-2-carboxílico (16 mg, 0.14 mmol) fue agregada a una mezcla de ácido imidazol-1carboxílico (8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario A, 45 mg, 0.127 mmol) y
trietilamina (0.053 mL, 0.381 mmol) en DMF (1 mL) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue dejada en reposo durante la noche a temperatura ambiente, luego se evaporó y el residuo se cristalizó desde MeOH y agua. El compuesto del título fue recolectado por filtración. MS: M+H = 401.1 (MS-ESI). 1H-NMR (CD3OD, 400 MHz): 8.31 (s, 1H), 4.46 (d, 1H), 3.77 - 3.54 (m, 2H), 3.08 - 2.90 (m, 4H). 2.33 - 2.23 (m, 1 H), 2.13 - 2.00 (m, 3H), 1.38 (s, 9H)).
Ejemplo 15: 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido 5-Metil-pirrolidin-1,2dicarboxílico
A una suspensión de ácido imidazol-1-carboxílico (8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario C, 75 mg, 0.203 mmol) en DMF (2 mL) se agregó amida del ácido 5-metil-pirrolidin-2-carboxílico (preparado como se describe en Arch. Pharm., 1936, 274, 40; 39 mg. 0.305 mmol) y trietilamina (0.085 mL, 0.609 mmol). La mezcla de reacción fue agitada a 40ºC durante 2.5 horas y luego purificada directamente por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron eluidas a través de un cartucho Bond Elut -SCX. El cartucho fue entonces eluido con una solución 7 M de amoniaco en MeOH, evaporado y el residuo triturado con DCM para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo. LCMS: tR 0.77 min y M+H = 430.0 (método A2).
Ejemplo 16: 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h] quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,4R)-4-Fluoropirrolidin-1,2-dicarboxílico
Al ácido imidazol-1-carboxílico (8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario C, 75 mg,
0.203 mmol) en DCM (2 mL) se agregó la amida del ácido (2S,4R)-4-fluoro-pirrolidin-2-carboxílico (Intermediario M,
40.2 mg, 0.305 mmol) y trietilamina (0.085 mL, 0.609 mmol). La mezcla de reacción fue agitada a 40ºC durante 17.5 horas y luego purificado directamente por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron eluidas a través de un cartucho Bond Elut - SCX. El cartucho luego fue eluido con una solución de amoniaco 7 M en MeOH y evaporada para dar el compuesto del título como un sólido amarillo. HPLC: tR 3.66 min (método D). MS: M+H = 434.1.
Ejemplo 17: 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h] quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,4S)-4-Fluoropirrolidin-1,2-dicarboxílico
A ácido imidazol-1-carboxílico (8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario C, 17 mg,
0.046 mmol) en DMF (0.4 mL) se agregó amida del ácido (2S,4S)-4-fluoro-pirrolidin-2-carboxílico (Intermediario N,
6.08 mg, 0.046 mmol) y trietilamina (0.019 mL, 0.138 mmol). La mezcla de reacción fue agitada a 40ºC durante 17 horas y luego se purificó directamente por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron eluidas a través de un cartucho Bond Elut - SCX. El cartucho fue eluido entonces con una solución 7 M de amoniaco en MeOH y evaporada para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo. HPLC: tR 3.55 min (método D). MS: M+H = 434.1.
Ejemplo 18: 1-amida 2-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo [4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (1S,5R)-2-Azabiciclo[3.1.0]hexano-1,2-dicarboxílico
La amida del ácido (1S,5R)-2-Aza-biciclo[3.1.0]hexano-1-carboxílico (Intermediario O, 208 mg, 1.65 mmol) fue agregada a una mezcla en agitación de la amida (8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida del ácido imidazol-1-carboxílico (Intermediario A, 532 mg, 1.5 mmol) y trietilamina (0.627 mL, 4.50 mmol) en DMF (4 mL) a temperatura ambiente. Después de 56 y 80 horas se agregaron porciones adicionales de amida del ácido (1S,5R)-2aza-biciclo[3.1.0]hexano-1-carboxílico (Intermediario O, 104 mg, 0.825 mmol) y la mezcla de reacción se dejó en reposo durante 18 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue filtrada entonces a través de una membrana de PTFE y se purificó por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron eluidas a través de un cartucho de Bond Elut - SCX. El cartucho fue eluido entonces con solución de amoniaco 7 M en MeOH y se evaporó. El residuo fue purificado por una segunda vez por HPLC preparativa (método B) y aislado de la misma manera. El producto crudo fue entonces recristalizado desde una mezcla 1:1 de agua: MeOH para dar el compuesto del título en forma de un sólido cristalino amarillo. LCMS: tR 1.22 min y M+H = 413.1 (método A3). 1H-NMR (d6-DMSO, 400 MHz): 11.22 (s, 1H), 8.40 (s, 1 H); 7.33 (s, br, 1H); 7.05 (s, br, 1H); 3.97 - 3.84 (m, 1H); 3.64
3.52 (m, 1H); 3.01 - 2.83 (m, 4H); 2.28 - 2.13 (m, 1H); 1.95 - 1.74 (m, 3H); 1.33 (s, 9H); 1.04 - 0.97 (m, 1 H)).
Ejemplo 19: 1- amida 2-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (1S,5R)-2-Azabiciclo[3.1.0]hexano-1,2-dicarboxílico
A ácido imidazol-1-carboxílico (8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario C. 75 mg,
0.203 mmol) en DCM (2 mL) se agregó amida del ácido (1S,5R)-2-aza-biciclo[3.1.0]hexano-1-carboxílico (Intermediario O, 38.4 mg, 0.305 mmol) y trietilamina (0.085 mL, 0.609 mmol). La mezcla de reacción fue agitada a 40ºC durante 17.5 horas y luego purificada directamente por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron eluidas a través de un cartucho Bond Elut - SCX. El cartucho fue eluido entonces con una solución 7 M de amoniaco en MeOH y evaporado para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo. HPLC: tR 3.73 min (método D). MS: M+H = 428.1.
Ejemplo 20: 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h] quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,3R)-3-Metilpirrolidin-1,2-dicarboxílico
Al ácido imidazol-1-carboxílico (8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario A, 60 mg,
0.169 mmol) en DMF (1 mL) se agregó amida del ácido (2S,3R)-3-metil-pirrolidin-2-carboxílico (Intermediario P, 32.5 mg, 0.254 mmol) y trietilamina (0.071 mL, 0.508 mmol). La mezcla de reacción fue agitada bajo argón durante 2 horas a temperatura ambiente y luego se purificó directamente por HPLC preparativa (método B). El CH3CN fue evaporado a partir de las fracciones que contenían el producto y el líquido remanente se eluyó entonces a través de un cartucho Bond Elut - SCX. El cartucho fue eluido entonces con una solución de amoniaco 7 M en MeOH y evaporado. El residuo fue triturado en metanol y el compuesto del título fue recolectado en forma de cristales blancos después de la filtración y secado. HPLC: tR 3.66 (método D). MS: M+H = 495.1. 1H-NMR (CD3OD, 600 MHz): 7.96 (s, 1H), 4.04 (d, 1H), 3.47 (t, 1H), 3.18 (q, 1H), 2.71 - 2.67 (m, 2H), 2.64 - 2.58 (m, 2H), 2.24 - 2.15 (m, 1H), 1.76 (s, br, 1H), 1.53, (s, br, 1H), 1.03 (s, 9H), 0.78 (d, 3H).
Ejemplo 21: 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h] quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,3R)-3-Metilpirrolidin-1,2-dicarboxílico
A ácido imidazol-1-carboxílico (8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario C, 82 mg,
0.222 mmol) en DMF (1.5 mL) se agregó bajo argón amida del ácido (2S,3R)-3-metil-pirrolidin-2-carboxílico (Intermediario P, 42.7 mg, 0.333 mmol) y trietilamina (0.093 mL, 0.666 mmol). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 2 horas y luego se purificó directamente por HPLC preparativa (método B). El CH3CN fue eliminado bajo vacío de las fracciones que contenían el producto y la solución remanente fue eluida a través de un cartucho Bond Elut - SCX. El cartucho fue eluido entonces con una solución 7 M de amoniaco en MeOH, evaporado y el residuo triturado con metanol para dar el compuesto del título en forma de un sólido cristalino blanco. HPLC: tR 3.74 (método D). MS: M+H = 430.1. 1H-NMR (CD3OD, 600 MHz): 7.62 (s, 1 H), 4.03 (d, 1H), 3.46 (t, 1H),
3.26 (q, 4H), 3.17 (q, 1H), 2.54 (s, 4H), 2.24 - 2.15 (m, 1H), 1.80 - 1.72 (m, 1H), 1.58 - 1.47 (m, 1H), 0.83 (t, 6H), 0.77 (d, 3H).
Ejemplo 22: 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo [4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,4S)-4Dimetilamino-pirrolidin-1,2-dicarboxílico
Al ácido imidazol-1-carboxílico (8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario C, 60 mg,
0.162 mmol) en DMF (1.5 mL) se agregó amida del ácido (2S,4S)-4-dimetilamino-pirrolidin-2-carboxílico (Intermediario Q, 28.1 mg, 0.179 mmol) y trietilamina (0.068 mL, 0.487 mmol). La mezcla de reacción fue agitada a 40ºC durante 17 horas y luego se purificó directamente por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron pasadas a través de un cartucho Bond Elut - SCX. El cartucho fue luego eluido con una solución de amoníaco 7 M en MeOH. La solución fue evaporada para dar el compuesto del título. HPLG: tR 3.23 min (método D). MS: M+H = 459.1.
Ejemplo 23: 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido 5-Fenil-pirrolidin-1,2dicarboxílico
A una suspensión de ácido imidazol-1-carboxílico (8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario C, 65 mg, 0.176 mmol) en DMF= (2 mL) se agregó amida del ácido 5-fenil-pirrolidin-2-carboxílico (preparada como se describe en la patente de los Estados Unidos 3164597, Ejemplo 42, 50.2 mg, 0.264 mmol) y trietilamina (0.074 mL, 0.528 mmol). La mezcla de reacción fue agitada a 40ºC durante 2 horas y luego purificada directamente por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron pasadas a través de un cartucho Bond Elut - SCX. El cartucho fue eluido entonces con una solución de amoniaco 7 M en MeOH. La solución fue evaporada y el residuo fue triturado en DCM para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo. LCMS: tR 0.99 min y M+H = 492.0 (método A2).
Ejemplo 24: 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido Azetidin-1,2dicarboxílico
A una solución de ácido imidazol-1-carboxíllico (8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario A, 100 mg, 0.282 mmol) en DMF (2 mL) se agregó amida del ácido azetidin-2-carboxílico (56.5 mg,
0.564 mmol) y trietilamina (0.118 mL), 0.846 mmol). La mezcla de reacción fue agitada bajo atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 16 horas y luego se purificó directamente por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron pasadas a través de un cartucho Bond Elut – SCX. El cartucho fue eluido entonces con una solución de amoníaco 7 M en MeOH. La solución fue evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea sobre sílica gel, eluyendo con DCM / MeOH 95:5 que contenía 0.5% 880 HN3 para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo. HPLC: tR 3.55 min (método D). MS: M+H = 387.1.
Ejemplo 25: 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (S)-Azetidin-1,2dicarboxílico
La amida del ácido (S)-Azetidin-2-carboxílico (Intermediario L, 68.1 mg, 0.680 mmol) fue agregada a una mezcla en agitación de ácido imidazol-1-carboxílico (8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario A, 241 mg, 0.680 mmol) y trietilamina (0.284 mL, 2.040 mmol) en DMF (3 mL) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se dejó en reposo durante 66 horas a temperatura ambiente y luego se purificó directamente por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron evaporadas para retirar el CH3CN y luego se basificaron con NaHCO3. La fase acuosa fue extraída entonces 4X con MeOH al 10% en DCM, las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se evaporaron para dar un sólido que fue triturado con MeOH/agua para dar el compuesto del título en forma de un sólido cristalino blancuzco. LCMS: tR 1.08 min y M+H =
386.9 (método A3).
Ejemplo 26: 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4.5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,4S)-4-Hidroxipirrolidin-1,2-dicarboxílico
A una suspensión de ácido imidazol-1-carboxílico (8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario C, 75 mg, 0.203 mmol) en DMF (2 mL) se agregó amida del ácido (2S,4S)-4-hidroxi-pirrolidin-2carboxílico (Intermediario R, 39.6 mg, 0.305 mmol) y trietilamina (0.113 mL, 0.812 mmol). La mezcla de reacción fue agitada a 40ºC durante 2.5 horas y luego se purificó directamente por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron pasadas a través de un cartucho Bond Elut - SCX. El cartucho fue eluido entonces con una solución de amoníaco 7 M en MeOH. La solución fue evaporada para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo. HPLC: tR 3.44 min (método D). MS: M+H = 432.1.
Ejemplo 27: 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,4R)-4-Hidroxipirrolidin-1,2-dicarboxílico
A una suspensión de ácido imidazol-1-carboxílico (8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario C, 75 mg, 0.203 mmol) en DMF (2 mL) se agregó amida del ácido (2S,4R)-4-hidroxi-pirrolidin-2carboxílico (Intermediario S, 39.6 mg, 0.305 mmol) y trietilamina (0.113 mL, 0.812 mmol), La mezcla de reacción se agitó a 40ºC durante 4.5 horas y luego se purificó directamente por HPLC preparativa (método B). Las fracciones que contenían el producto fueron pasadas a través de un cartucho Bond Elut - SCX. EL cartucho fue eluido entonces con una solución de amoníaco 7 M en MeOH. La solución fue evaporada y el residuo fue recristalizado en DCM para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo. HPLC: tR 3.31 min (método D). MS: M+H = 432.1.
Ejemplo 28: 2-amida 1-[(7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida] del ácido (S)-Pirrolidin-1,2dicarboxílico
Se agregaron L-Prolinamida (59.4 mg, 0.521 mmol) y TEA (0.121 mL, 0.868 mmol) a ácido imidazol-1-carboxílico (7tert-butil-4,5-dihidro-benzo(1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida (Intermediario T, 156 mg, 0.434 mmol) en DMF (1 mL). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 10 minutos. La mezcla fue extraída con EtOAc/H2O. La capa orgánica fue secada sobre Na2SO4 y evaporada. El material crudo fue sometido a cromatografía con MPLC C18 H2O 0.1% TFA / CH3CN 0.1% TFA, gradiente 0-50%. Las fracciones que contenían el producto fueron neutralizadas con NaHCO3, extraídas con EtOAc y liofilizadas desde dioxano para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (M+H = 406; M-H = 404; tR 4.75 min (Método F). 1H-NMR (d6-DMSO, 600.13 MHz) 10.80 (s, 1H) 7.40 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 4.30 (s, 1 H) 3.65-3.55 (m 1H), 3.48-3.38 (m, 1H), 3.10 (t, 2H), 2.94 (t, 2H), 2.14-2.05 (m, 1H), 1.95-1.78 (m, 3H), 1.40 (s, 9H)).
Ejemplo 29: 2-amida 1-[(7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’] bistiazol-2-il)-amida] del ácido (S)-2-Metilpirro(idin-1,2-dicarboxílico
La amida del ácido (S)-2-Metil-pirrolidin-2-carboxílico (Intermediario F, 7.7 mg, 0.060 mmol) y TEA (0.014 mL, 0.100 mmol) fueron agregados a ácido imidazol-1-carboxílico (7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d]bistiazol-2-yl}-amida (Intermediario T, 18 mg, 0.050 mmol) en DMF (3 mL). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 10 minutos, luego extraída con EtOAc/H2O. La capa orgánica fue secada sobre Na2SO4 y evaporada. El material crudo fue sometido a cromatografía con MPLC C18 H2O 0.1% TFA / CH3CN 0.1% TFA, gradiente 0-50%. Las fracciones que contenían producto fueron neutralizadas con NaHCO3, extraídas con EtOAc y liofilizadas desde dioxano para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco. (M+H = 420; M-H = 418; tR 4.875 min (Método F). 1H-NMR (d6-DMSO, 600.13 MHz) 10.60 (s, br, 1 H) 7.68 (s, 1H), 6.86 (s, 1 H), 3.68-3.60 (m 1H), 3.60-3.50 (m 1 H), 3.08 (t, 2H), 2.90 (t, 2H), 2.10-1.98 (m, 1H), 1.94-1.68 (m, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.37 (s, 9H)).
Ejemplo 30: 2-amida 1-[(7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida] del ácido (S)-Azetidin-1,2dicarboxílico
La amida del ácido (S)-Azetidin-2-carboxílico (Intermediario L, 37.1 mg, 0.370 mmol) y TEA (0.14 mL, 1.010 mmol) se agregaron a ácido imidazol-1-carboxílico (7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida (Intermediario T, 121 mg, 0.337 mmol) en DMF (2 mL). La mezcla de reacción fue agitada durante 5 minutos y luego dejada en reposo durante 2 días a temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue filtrada y purificada directamente por HPLC preparativa (método E). Las fracciones que contenían producto se fueron combinadas y
filtradas a través de cartucho de 300 mg Bond Elute -SCX. El cartucho fue lavado entonces con solución de amoniaco 7 M en MeOH (2 ml). El filtrado fue evaporado para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (M+H = 391.8; M-H = 389.8; tR 1.84 min (Método A3). 1H-NMR (d6-DMSO, 400 MHz) 11.12 (s, 1H) 7.52 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 4.74-4.62 (m, 1H), 3.92 (t, 2H), 3.08 (t, 2H), 2.90 (t, 2H), 2.46-2.36 (m, 1H), 2.18-2.02 (m, 1H), 1.39 (s, 9H)).
Ejemplo 31: 2-amida 1-[(7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo [1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida] del ácido (2S,4R)-4Dimetilamino-pirrolidin-1,2-dicarboxílico
La amida del ácido (2S,4R)-4-Dimetilamino-pirrolidin-2-carboxílico (Intermediario B, 9.33 mg, 0.059 mmol) y TEA
(0.019 ml, 0.135 mmol) fueron agregados a ácido imidazol-1-carboxílico (7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4d’]bistiazol-2-il)-amida (Intermediario T, 19.4 mg, 0.054 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla de reacción fue agitada durante 5 minutos y luego se dejó en reposo durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue filtrada y purificada directamente por HPLC preparativa (método E). Las fracciones que contenían el producto fueron combinadas y filtradas a través de un cartucho de 300 mg Bond Elute - SCX. El cartucho fue luego lavado con solución de amoniaco 7 M en MeOH. El filtrado fue evaporado para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (M+H = 449.1; M-H = 447.3; tR 1.47 min (Método A3). 1H-NMR (d6-DMSO, 400 MHz) 7.40 (s, 1H), 7.00 (s, 1H), 4.44-4.25 (m, 1H), 3.86-3.76 (m 1H), 3.35-3.25 (m 1H), 3.08 (t, 2H), 2.92 (t, 2H), 2.96-2.78 (m, 1H), 1.18 (s, br, 6H), 2.08-1.85 (m, 2H), 1.38 (s, 9H)).
Ejemplo 32: 2-amida 1-{[7-(2-fluoro-1,1-dimetil-etil)-4,5-dihidro-benzo[1,2-d; 3,4-d’]bistiazol-2-il]-amida} del ácido (S)Pirrolidin-1,2-dicarboxílico
Se agregaron L-Prolinamida (23.98 mg, 0.210 mmol) y TEA (0.080 mL, 0.573 mmol) al ácido imidazol-1-carboxílico [7-(2-fluoro-1,1-dimetil-etil)-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il]-amida (Intermediario U, 72.1 mg, 0.191 mmol) en DMF (1 mL). La mezcla de reacción fue agitada durante 5 minutos y luego dejada en reposo durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue evaporada y triturada con MeOH (2 mL) y H2O (1 mL). La mezcla fue enfriada a 4ºC. La suspensión fue filtrada y lavada con MeOH/H2O=2:1 fría y el sólido secado bajo alto vacío a 40ºC para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (M+H = 424.0; M-H = 422.1; tR 1.7 min (Método A3). 1H-NMR (d6-DMSO, 400MHz) 7.19 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 4.58 (s, 1H) 4.44 (s, 1 H), 4.28 (s, br, 1H) 3.64-3.50 (m 1 H), 3.48-3,38 (m 1H), 3.10 (t, 2H), 2.92 (t, 2H), 2.18-1.98 (m, 1H), 1.94.1.78 (m, 3H), 1.38 (s, 6H) 19F-NMR (d6-DMSO, 600.13 MHz) 219 ppm (t, 1F)).
Ejemplo 33: 2-amida 1-[(7-ciclopropilmetil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’] bistiazol-2-il)-amida] del ácido (S)Pirrolidin-1,2-dicarboxílico
Se agregaron L-Prolinamida (16.7 mg, 0.147 mmol) y TEA (0.027 mL, 0.196 mmol) a ácido imidazol-1-carboxílico (7ciclopropilmetil-4,5-dihidro-benzo [1,2-;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida (Intermediario V, 35 mg, 0.098 mmol) en DMF (1.5 mL). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 15 minutos y luego extraída con EtOAc/H2O. La capa orgánica fue secada sobre Na2SO4 y evaporada. El material crudo fue sometido a
cromatografía con MPLC C18 H2O 0.1% TFA / CH3CN 0.1% TFA, gradiente 0-50%. Las fracciones que contenían el producto fueron neutralizadas con NaHCO3, extraídas con EtOAc y liofilizadas desde dioxano para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (M+H = 404; M-H = 402; tR 4.49 min (Método F). 1H-NMR (d6-DMSO, 600.13 MHz) 10.78 (s, 1H) 7.40 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 4.28 (s, br, 1H) 3.65-3.55 (m, 1H), 3.48-3.38 (m, 1H), 3.08 (t, 2H), 2.97 (t, 2H), 2.84 (d, 2H), 2.14-2.04 (m, 1H), 1.93-1.72 (m, 3H), 1.10 (q, 1H), 0.60-0.50 (m, 2H), 0.40-0.38 (m, 2H)).
Ejemplo 34: 2-amida 1-[(7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’] bistiazol-2-il)-amida] del ácido (2S,3S)-3-Metilpirrolidin-1,2-dicarboxílico
La amida del ácido (2S,3S)-3-Metil-pirrolidin-2-carboxílico (Intermediario D, 13.37 mg, 0.104 mmol) y TEA (0.039 mL,
0.278 mmol) fueron agregados a ácido imidazol-1-carboxílico (7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)amida (Intermediario T, 25 mg, 0.070 mmol) en DMF (2 mL). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 10 minutos y luego extraída con EtOAc/H2O. La capa orgánica fue secada sobre Na2SO4 y evaporada. El material crudo fue liofilizado desde dioxano sin purificación adicional para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (M+H = 420.1; M-H = 418.1; tR 4.85 min (Método F). 1H-NMR (d6-DMSO, 600:13 MHz)
10.78 (s, br, 1 H) 7.44 (s, br, 1H), 6.97 (s, br, 1H), 3.90-3.70 (m, 1H) 3.62-3.42 (m, 2H), 3.08 (t, 2H), 2.94 (t, 2H), 2.22-2.12 (m, 1H), 2.06-1.94 (m, 1H), 1.58-1.48 (m, 1 H), 1.39 (s, 9H). 1.04 (d, 3H)).
Ejemplo 35: 1-amida 2-[(7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo [1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida] del ácido (1S,5R)-2-Azabiciclo[3.1.0]hexano-1,2-dicarboxílico
El compuesto del título fue sintetizado de manera similar a lo descrito para el Ejemplo 34 utilizando el intermediario O en lugar del intermediario D. (M+H =418.0; M-H = 416.1; tR 4.90 min (Método F). 1H-NMR (d6-DMSO, 600.13 MHz)
10.78 (s, br, 1H) 7.40 (s, br, 1 H), 7.06 (s, br, 1H), 3.92-3,82 (m, 1H) 3.62-3.52 (m, 1H), 3.08 (t, 2H), 2.94 (t, 2H), 2.26-2.14 (m, 1H), 1.92-1.72 (m, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.05-0.95 (m, 1H)).
Ejemplo 36: 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,3S)-3-(Acetilaminometil)-pirrolidin-1,2-dicarboxílico
Se agregó trietilamina (0.339 mmol) a una solución de ácido imidazol-1-carboxílico (8-tert-butil-4,5-dihidrotiazolo[4,5h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario A) (0.113 mmol) y amida del ácido (2S,3S)-3-(acetilamino-metil)-pirrolidin-2carboxílico (Etapa 36.1) (0.135 mmol) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 85 minutos, la mezcla de reacción fue concentrada. El residuo fue purificado por cromatografía en columna de sílica gel seguida por trituración con Et2O para producir el compuesto del título en forma de un sólido amarillo. HPLC: tR = 4.20 min (método H); LCMS: tR= 1.48 min, [M+H]+ 472 (método I); TLC: Rf = 0.14 (9:1 CH2Cl2/MeOH); 1H-NMR (d6-DMSO, 600 MHz):
11.15 (br s, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.81 (br s, 1H), 7.53 (br s, 1H), 7.13 (br s, 1 H), 4.28 (m, 1H), 3.74 (m, 1H), 3.40 (m, 1H), 3.25 (m, 1H), 2.98 (m, 2H), 2.93 (m, 3H), 2.42 (m, 1 H), 2.02 (m, 1H), 1.82 (s, 3H), 1.74 (m, 1H), 1.33 (s, 9H).
Etapa 36.1: Amida del ácido (2S,3S)-3-(Acetilamino-metil)-pirrolidin-2-carboxílico
Una mezcla de amida del ácido (2S,3S)-3-(acetilamino-metil)-1-(S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico (Etapa 36.2)
(0.48 mmol) y Pd al 10% sobre carbón, humedecido con 50% de agua (Aldrich 330108) (0.096 mmol) en MeOH (5 L) fue hidrogenada durante 6.5 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue filtrada entonces a través de un Filtro de Membrana Fluoropore (0,2 µm FG) y evaporada. El residuo fue disuelto en CH2Cl2 y evaporado hasta sequedad para producir el compuesto del título en forma de un sólido blancuzco. ESI-MS: [M+H]+ 186: TLC: Rf =
0.08 (200:20:1 CH2Cl2/MeOH/conc. NH4OH).
Etapa 36.2: Amida del ácido (2S,3S)-3-(Acetilamino-metil)-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico
10 Se agregó ácido tioacético (2.312 mmol) a amida del ácido (2S,3S)-3-azidometil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2carboxílico (Etapa 36.3) (0.578 mmol) a temperatura ambiente con la formación de gas nitrógeno. Después de agitar durante 16 horas, la mezcla de reacción fue diluida con Et2O, los sólidos fueron retirados por filtración y el filtrado fue concentrado. El residuo fue purificado por cromatografía en columna de sílica gel para producir el compuesto del título en forma de un aceite amarillo claro (olor a tiol). HPLC: tR = 3.71 min (método H); LC-MS: tR= 0.64 min, [M+H]+
15 290 (método I); TLC: Rf = 0.38 (200:20:1 CH2Cl2/MeOH/conc. NH4OH).
Etapa 36.3: Amida del ácido (2S,3S)-3-Azidometil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico
Se agregó trimetilaluminio en tolueno (2 M, 15.95 mmol) gota a gota a una mezcla de NH4Cl (15.95 mmol) en tolueno: (2 mL) a 0ºC con la formación de gas metano. La mezcla de reacción se dejó calendar hasta temperatura 20 ambiente, y se agitó durante 15 minutos adicionales y luego se trató lentamente con una solución de metilo éster del ácido (2S,3S)-3’-azidometil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico (Etapa 36.4) (7. 98 mmol) en tolueno (8 mL). Se agregó reactivo adicional dado a partir de NH4Cl (15,95 mmol) en tolueno (2 mL) y trimetilaluminio en tolueno (2 M,
15.95 mmol) a 0ºC después de 18 horas. Después de agitar durante 44 horas, la mezcla se enfrió a 0ºC, se detuvo con HCl 1 M y luego se lavó con CH2Cl2 (3 X). La fase acuosa se basificó con una solución saturada de 1:1 de
25 NaHCO3/solución saturada de sal de Rochelle y se extrajo con THF (10 X). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas (Na2SO4), filtradas y concentradas. El residuo se purificó utilizando una columna de sílica gel RediSep® para producir el compuesto del título en forma de un aceite amarillo. HPLC: tR = 2.50 min (método G); ESI-MS: [M+H]+ 274; TLC: Rf = 0.26 (3:1 Hex/EtOAc).
Etapa 36.4: Metilo éster del ácido (2S,3S)-3-Azidometil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico
Se agregó azida de sodio (5.34 mmol) a una solución de metilo éster del ácido (2S,3R)-3-iodometil-1-((S)-1-feniletil)pirrolidin-2-carboxílico (Etapa 36.5) (3.56 mmol) en DMF (30 mL) a temperatura ambiente. Después de 18 horas, la
mezcla de reacción fue vertida sobre agua y extraída con MTBE (2X). Las fases orgánicas combinadas fueron lavadas con salmuera, secadas (Na2SO4), filtradas y concentradas. El residuo fue purificado utilizando una columna de sílica gel RediSep® para producir el compuesto del título en forma de un aceite marrón. HPLC: tR = 3.26 min (método G); ESI-MS: [M+H]+ 289.
Etapa 36.5: Metilo éster del ácido (2S,3R)-3-Iodometil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico
Una solución de metilo éster del ácido [but-3-enil-((S)-1-fenil-etil)-amino]-acético [432555-77-6] (20.22 mmol) en THF (10 mL) fue agregada lentamente a una solución de diisopropilamida de litio (24.26 mmol) en hexanos/THF 1:2 (30 mL) a -78ºC. La mezcla de reacción se calentó a 0ºC, se agitó durante 1 hora y luego se reenfrió a -78ºC. Se agregó una solución de bromuro de zinc (50.5 mmol) en Et2O (40 ml) y la mezcla de reacción se calentó entonces hasta temperatura ambiente. Después de agitar durante 1 hora, la mezcla se enfrió a 0ºC y se agrego yodo (22.24 mmol) en porciones. La mezcla de reacción fue agitada a 0ºC durante 2 horas y a temperatura ambiente durante otras 2 horas, se diluyó con Et2O y luego se lavó sucesivamente con una solución saturada de Na2S2O3 y una solución saturada de NH4Cl. Las capas acuosas fueron luego retroextraídas con Et2O. Las fases orgánicas combinadas fueron secadas (Na2SO4), filtradas y concentradas. El residuo fue purificado por cromatografía de columna en sílica gel para producir el compuesto del título en forma de un aceite rojo. HPLC: tR = 3.46 min (método G); ESI-MS: [M+H]+ 374.
Ejemplo 37: 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,3S)-3-Morfolin-4ilmetil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico
Se agregó trietilamina (0.423 mmol) a una solución de ácido imidazol-1-carboxílico (8-tert-butil-4,5-dihidrotiazolo[4,5h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario A) (0.141 mmol) y amida del ácido (2S,3S)-3-(acetilamino-metil)-pirrolidin-2carboxílico (Etapa 37.1) (0.155 mmol) en DMF (0.5 mL) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 3 horas la mezcla de reacción fue concentrada. El residuo fue purificado por cromatografía de columna en sílica gel para producir el compuesto del título en forma de un sólido blanco. HPLC: tR = 4.04 min (método H); LCMS: tR=1.36 min, [M+H]+ 500 (método I); TLC: Rt = 0.09 (19:1 CH2Cl2/MeOH), 1H-NMR (d6-DMSO, 600 MHz): 11.15 (br s, 1 H), 8.39 (m, 1H), 7.37 (br s, 1H), 7.05 (s, 1H), 4.27 (m, 1H), 3.70 (m, 1H), 3.59 (m, 4H), 3.42 (m, 1H), 2.97 (m, 2H), 2.90 (m, 2H), 2.58 (m, 1H), 2.38 (m, 4H), 2.35 (m, 1H), 2.17 (m, 1H), 2.02 (m, 1 H), 1.75 (m, 1H), 1.32 (s, 9H).
Etapa 37.1: Amida del ácido (2S,3S)-3-Morfolin-4-ilmetil-pirrolidin-2-carboxílico
Una mezcla de amida del ácido (2S,3S)-3-morfolin-4-ilmetil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico (Etapa 37.2)
(1.046 mmol) y Pd al 10% sobre carbón, se humedeció con agua al 50% (Aldrich 330108) (0.105 mmol) en MeOH (5 mL) se hidrogenó durante 6.5 horas a temperatura ambiente. Las mezclas de reacción fueron filtradas entonces a través de un Filtro de Membrana Fluoropore (0.2 µm FG) y se evaporaron. El residuo fue disuelto en CH2Cl2 y se evaporó hasta sequedad para producir el compuesto del título en forma de un aceite incoloro. ESI-MS: [M+H]+ 214; TLC: Rf = 0.14 (200:20:1 CH2Cl2/MeOH/conc. NH4OH).
Etapa 37.2: Amida del ácido (2S,3S)-3-Morfolin-4-ilmetil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico
Se agregó trimetilaluminio en tolueno (2 M, 2.89 mmol) gota a gota a una mezcla de NH4Cl (2.89 mmol) en tolueno (3 mL) a 0ºC con la formación de gas metano. La mezcla de reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente, se agitó durante 15 minutos adicionales y luego se trató lentamente con una solución de metilo éster del 5 ácido (2S,3S)-3-morfolin4-ilmetil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico (Etapa 37.3) (1.444 mmol) en tolueno (9 mL). Se agregó reactivo adicional preparado a partir de NH4Cl (2.89 mmol) en tolueno (2 mL) y trimetilaluminio en tolueno (2 M, 2.89 mmol) a 0ºC después de 18 horas. Después de agitar durante 60 horas, la mezcla fue enfriada a 0ºC, se detuvo con HCl 1 M y se lavó con CH2Cl2 (3X). La fase acuosa se basificó con una solución saturada de 1:1 de NaHCO3/solución saturada de sal de Rochelle y se extrajo con THF (10 X). Las capas orgánicas combinadas se 10 secaron (Na2SO4), filtraron y concentraron. El residuo fue purificado por cromatografía en columna de sílica gel para producir el compuesto del título en forma de un aceite amarillo. HPLC: tR = 2.18 min (método G); ESIMS: [M+H]+
318.
Etapa 37.3: Metilo éster del ácido (2S,3S)-3-Morfolin-4-ilmetil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico
15 Una mezcla de metilo éster del ácido (2S,3R)-3-iodometil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico (Etapa 36.5) (7.07 mmol), K2CO3 (21.22 mmol) y morfolina (10.61 mmol) en CH3CN (24 mL) se agitó a 50ºC durante 62 horas. La mezcla de reacción fue vertida sobre hielo agua y extraída con EtOAc (3X). Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas sucesivamente con agua y salmuera, secadas (Na2SO4), filtradas y concentradas. El residuo fue purificado usando una columna de sílica gel RediSep® para producir el compuesto del título en forma de un aceite amarillo.
20 HPLC: tR = 2.56 min (método G); ESI-MS: [M+H]+ 333.
Ejemplo 38: 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5’-h] quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,3R)-3-Hidroxipirrolidin-1,2-dicarboxílico
El compuesto del título fue sintetizado utilizando la metodología descrita para el Ejemplo 20 utilizando amida del
25 ácido (2S,3R)-3-hidroxipirrolidin-2-carboxílico (H. Fukushima et al. Bioorg. Med. Chem. 2004, 12, 6053; H. Ji et al. J. Med. Chem. 2006, 49(21), 6254) en vez del intermediario P. LCMS: tR = 1.45 min, M+H = 417.0, M-H=415 (método J). 1H-NMR (d6-DMSO, 600.13 MHz): 12-11 (s, br, 1H) 8.4 (s, 1H), 7.2-6.9 (m, 2H), 5.2 (s, 1H), 4.4 (s, 1H), 4.25 (s, br, 1H), 3.6 (m, 1H); 3.45 (m, 1H), 2.95 (m, 2H), 2.9 (m, 2H), 2.0 (m, 1H), 1.9 (m, 1H), 1.3 (s, 9H).
Ejemplo 39: 2-amida 1-[(7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d,3,4-d’] bistiaxol-2-il)-amida] del ácido (2S,3R)-3-Metil30 pirrolidin-1,2-dicarboxílico
El compuesto del título fue sintetizado utilizando la metodología descrita para el Ejemplo 34 usando amida del ácido (2S,3R)-3-metilpirrolidin-2-carboxílico (Intermediario P) en vez del intermediario D.
LCMS: tR =1.32 min, M+H= 420.0, M-H = 418.1 (método J). 1H-NMR (d6-DMSO, 400 MHz): 10.65 (s, br, 1 H) 7.39 (s, br, 1H), 6.99 (s, br, 1H), 4.2 (m, 1H), 3.67 (t, 1H), 3.3 (m, 1H), 3.08 (t, 2H), 2.93 (t, 2H), 2.38 (m, 1H), 1.95 (m, 1H),
1.7 (m, 1 H), 1.39 (s, 9H), 0.97 (d 3H).
Ejemplo 40: 2-amida 1-[(8-metil-4H-5-oxa-1-tia-3,7-diaza-ciclopenta[a]naftalen-2-il)-amida] del ácido (2S,3R)-3-Metilpirrolidin-1,2-dicarboxílico
10 El compuesto del título fue preparado partiendo de ácido imidazol-1-carboxílico (8-metil-4H-5-oxa-1-tia-3,7-diazaciclopenta[a]naftalen-2-il)-amida (Etapa 40.1) utilizando la metodología de síntesis descrita en la preparación del Ejemplo 20. LCMS: tR = 0.29 min, M+H = 374.0, M-H = 372 (método J). 1H-NMR 1H-NMR (CD3OD, 400 MHz): 7.9 (s, 1H), 7.0 (s, 1H), 5.27 (s, 2H), 4.38 (d, 1H), 3.8 (dd, 1H), 3.5 (m, 1H), 2.5 (m, 1H), 2.4 (s, 1 H), 2.08 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.12 (d, 3H).
15 Etapa 40.1: Ácido Imidazol-1-carboxílico (8-metil-4H-5-oxa-1-tia-3,7-diaza-ciclopenta[a]naftalen-2-il)-amida
Se preparó ácido imidazol-1-carboxílico (8-metil-4H-5-oxa-1-tia-3,7-diaza-ciclopenta[a]naftalen-2-il)-amida a partir de N-(8-metil-4H-5-oxa-1-tia-3,7-diaza-ciclopenta[a]naftalen-2-il)-acetamida (Etapa 40.2) utilizando la metodología de síntesis descrita para la preparación del intermediario A.
20 Etapa 40.2: N-(8-metil-4H-5-oxa-1-tia-3,7-diaza-ciclopenta[a]naftalen-2-il)-acetamida
Una mezcla de 463 mg (1.53 mmol) N-[4-(4-bromo-6-metil-piridin-3-iloximetil)-tiazol-2-il]-acetamida (Etapa 40.3), 900 mg (2.71 mmol) de carbonato de cesio, 30.4 mg (0.135 mmol) de acetato de paladio y 81 mg (0.271 mmol) tetrafluoroborato de tributilfosfina en 3 mL de DMF se agitó a 115ºC durante 7 horas bajo argón. Luego la mezcla de reacción fue vertida sobre agua, se agregó EtOAc y después de una filtración sobre una capa de medio Hyflo Super Gel (Fluka 56678), el filtrado fue extraído con EtOAc (2X). Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con agua y salmuera, secadas (MgSO4) y filtradas. El filtrado fue concentrado in vacuo para dejar un residuo que fue purificado sobre sílica gel (= -100% EtOAc en heptano) para producir 93 mg del compuesto del título en forma de un sólido. LCMS: tR = 0.27 min, M+H = 262, M-H 260 (método J).
Etapa 40.3: N-[4-(4-Bromo-6-metil-piridin-3-iloximetil)-tiazol-2-il]-acetamida
A una solución de 270 mg (1.44 mmol) 4-bromo-6-metil-piridin-3-ol (Etapa 40.4) en DMF (5 mL), se agregaron 44.8 mg de NaH (1.87 mmol) y esta mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. Se agregaron 301 mg (1.58 mmol) de 2-acetamido-4-(clorometil)-1,3-tiazol (Apollo OR15549) y la agitación se continuó a temperatura ambiente durante otras 17 horas. La mezcla de reacción fue vertida sobre agua y extraída con EtOAc (2X). Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con agua y salmuera, secadas (MgSO4) y filtradas. El filtrado fue concentrado in vacuo para dejar 350 mg del compuesto del título (sólido blanco) considerado suficientemente puro sin purificación adicional. LCMS: tR = 1.36 min, M+H = 342 (79Br), 344 (81Br) (método J).
Etapa 40.4: 4-Bromo-6-metil-piridin-3-ol
Se disolvieron 920 mg (3.05 mmol) de 4-bromo-5-metoximetoxi-2-metil-piridina (Etapa 40.5) en 5 mL de MeOH, se agregó HCl concentrado (1 mL, 12 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. Mientras se concentraba la muestra in vacuo, el compuesto del título cristalizó (en forma de clorhidrato). La filtración produjo 570 mg de cristales blancos. 1H-NMR (d6-DMSO. 400 MHz): 8.19 (s, 1 H), 8.04 (s, 1H), 2.53 (s, 3H).
Etapa 40.5: 4-Bromo-5-metoximetoxi-2-metil-piridina
Una solución de 1000 mg (6.53 mmol) 5-metoximetoxi-2-metil-piridina (J.-P. Behr et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003, 13(10), 1713) en 10 mL de THF fue enfriada a -78ºC, en donde se agregaron 4.03 mL (6.85 mmol) de t-BuLi (solución 1.7M en pentano). La mezcla resultante fue agitada bajo argón durante 1 hora, luego se agregaron 2.126 g
(6.53 mmoles) de 1,2-dibromotetracloroetano (en 5 ml de THF). La agitación se continuó durante 1 hora a -78ºC y la mezcla de reacción fue calentada a temperatura ambiente. Se agregó solución saturada de NH4Cl y la mezcla acuosa fue extraída con EtOAc (2X). Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con H2O y salmuera, secadas (MgSO4) y filtradas. El filtrado fue concentrado in vacuo para dejar un residuo que fue purificado sobre sílica gel (EtOAc / hexano = 1:1) para producir 920 mg del compuesto del título en forma de un aceite. LCMS: tR = 0.29 min, M+H = 232 (79Br), 234 (81Br) (método J).
Ejemplo 41: 2-amida 1-[(7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida] del ácido (2S,3S)-3-Morfolin4-ilmetil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico
El compuesto del título fue sintetizado utilizando la metodología descrita por el Ejemplo 34 usando amida del ácido 5 (2S,3S)-3-morfolin- 4-ilmetil-pirrolidin-2-carboxílico (Etapa 37.1) en vez del intermediario D.
LCMS: tR = 0.68 min, M+H = 505.3.0, M-H = 503.2 (método J). 1H-NMR (d6-DMSO, 600.13 MHz): 10.65 (s, b, 1H),
7.4 (s, b, 1H), 7.05 (s, b, 1H), 4.3 (s, b, 1H), 3.7 (m, 1H), 3.6 (m, 4H), 3.3 (m, 1H), 3.1 (t. 2H), 2.9 (t, 2H), 2.6 (m, 1H),
2.4 (m, 1H), 2.35 (m, 4H), 2.15 (m, 1H), 2.0 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.35 (s, 9H),
Ejemplo 42: 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo [4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,3R)-3-Metoximetil10 pirrolidin-1,2-dicarboxílico
Se agregó trietilamina (0.525 mmol) a una solución de ácido imidazol-1-carboxílico (8-tert-butil-4,5-dihidrotiazolo[4,5h]quinazolin-2-il)-amida (Intermediario A) (0.175 mmol) y amida del ácido (2S,3R)-3-metoximetil-pirrolidin-2carboxílico (Etapa 42.1) (0.192 mmol) en DMF (0.7 mL) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 3 horas,
15 la mezcla de reacción fue concentrada. El residuo fue purificado por cromatografía en columna de sílica gel para producir el compuesto del título en forma de un sólido blanco. HPLC: tR = 2.84 min (método G); LCMS: tR= 1.71 min, [M+H]+ 445 (método I); TLC: Rf = 0.41 (19:1 CH2Cl2/MeOH); 1H-NMR (d6-DMSO, 600 MHz): 11.15 (br s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.42 (br s, 1H), 7.05 (br s, 1H), 4.27 (m, 1H), 3.74 (m, 1H), 3.46 (m, 1H), 3.42 (m, 1H), 3.24 (s, 3H), 3.16 (m, 1H), 2.98 (m, 2H), 2.91 (m, 2H), 2.54 (m, 1H), 2.03 (m, 1 H), 1.77 (m, 1 H), 1.32 (s, 9H).
20 Etapa 42.1: amida del ácido (25,3R)-3-Metoximetil-pirrolidin-2-carboxílico
El compuesto del título fue preparado en analogía con el procedimiento descrito en la Etapa 37.1 pero se usó amida del ácido (2S,3R)-3-metoximetil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico (Etapa 42.2) en lugar de la amida del ácido (2S,3S)-3-morfolin-4-ilmetil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico
25 El compuesto del título fue obtenido en forma de un sólido blanco. ESI-MS: [M+H]+ 159.
Etapa 42.2: Amida del ácido (2S,3R)-3-Metoximeti)-1-((S)-1-fenil-etil)-piroplidin-2-carboxílico
El compuesto del título fue preparado en analogía con el procedimiento descrito en la Etapa 37.2 pero se utilizó éster metílico del ácido (2S,3R)-3-metoximetil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico (Etapa 42.3) en lugar de éster metílico del ácido (2S,3S)-3-morfolin-4-ilmetil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico.
El compuesto del título fue obtenido en forma de un aceite amarillo. HPLC: tR = 2.35 min (método G); LC-MS: tR=
0.47 min, [M+H]+ 263 (método K); TLC: Rf= 0.05 (1:1 Heptanes/EtOAc).
Etapa 42.3: éster metílico del ácido (2S,3R)-3-Metoximetil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico
Una mezcla de (3aR,6aS)-1-((S)-1-fenil-etil)-hexahidro-furo[3,4-b]pirrol-6-ona [805246-48-4] (17.05 mmol), KOH
(71.60 mmol) y yodometano (68.20 mmol) en tolueno (79 mL) fue agitada a 80ºC durante 1.5 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se sometió a partición entre agua y MTBE. La capa acuosa fue extraída con MTBE (3X). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2SO4), filtraron y concentraron. El residuo fue purificado por cromatografía de columna en sílica gel para producir el compuesto del título en forma de un aceite amarillo. HPLC: tR= 2.98 min (método G); LC-MS: tR= 0.69 min, [M+H]+ 278 (método K); TLC: Rf = 0.25 (1:3 Heptanes/EtOAc).
Ejemplo 43: 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,3S)-3Dimetilaminometil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico
Se agregó trietilamina (0.305 mmol) a una solución de ácido imidazol-1-carboxílico (8-tert-butil-4,5-dihidrotiazolo[4,5h]quinazolin-2-il)-amida (intermediario A) (0.102 mmol) y amida del ácido (2S,3S)-3-dimetilaminometil-pirrolidin-2carboxílico (Etapa 43.1) (0.102 mmol) en DMF (0.3 mL) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 0.5 horas, la mezcla de reacción se concentró y se secó durante la noche bajo vacío a 50ºC. El residuo fue suspendido en EtOAc (1 mL), se filtró y secó bajo vacío para producir el compuesto del título en forma de un sólido blanco. HPLC: tR = 4.01 min (método H); LCMS: tR= 1.33 min, [M+H]+ 458 (método I); TLC: Rf = 0.08 (4:1 CH2Cl2/MeOH); 1H-NMR (d6-DMSO, 600 MHz): 11.14 (br s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.42 (br s, 1H), 7.06 (br s, 1H), 4.27 (m, 1H), 3.71 (m, 1H), 3.42 (m, 1H), 2.98 (m, 2H), 2.90 (m, 2H), 2.52 (m, 1H), 2.33 (m, 1 H), 2.18 (m, 1H), 2.18 (s, 6H), 2.01 (m, 1H),
1.72 (m, 1H), 1.32 (s, 9H).
Etapa 43.1: Amida del ácido (2S,3S)-3-Dimetilaminometil-pirrolidin-2-carboxílico
El compuesto del título fue preparado en analogía con el procedimiento descrito en la Etapa 37.1 pero se usó la amida del ácido (2S,3S)-3-dimetilaminometil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico (Etapa 43.2) en lugar de la amida del ácido (2S,3S)-3-morfolin-4-ilmetil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico. También, la hidrogenación se llevó a cabo bajo una presión de 4 bar.
El compuesto del título fue obtenido en forma de un aceite amarillo. ESI-MS: [M+H]+ 172.
Etapa 43.2: Amida del ácido (2S,3S)-3-Dimetilaminometil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico
Una mezcla de amida del ácido (2S,3S)-3-aminometil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico (Etapa 43.3) (0.418 mmol), cianoborohidruro de sodio (2.86 mmol) y formaldehído acuoso al 37% (2.14 mmol) en MeOH (3.3 mL) se agitó a 55ºC durante 16 horas. La mezcla de reacción fue enfriada a temperatura ambiente y concentrada. El residuo fue purificado usando una columna de sílica gel RediSep® para producir el compuesto del título en forma de una espuma blanca. HPLC: tR 3.59 min (método H); LC-MS: tR= 0.86 min, [M+H]+ 276 (método I); TLC: Rf = 0.13 (9:1 CH2Cl2/MeOH).
Etapa 43.3: Amida del ácido (2S,3S)-3-Aminometil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico
10 Una mezcla de la amida del ácido (2S,3S)-3-azidometil-1-((S)-1-fenil-etil)-pirrolidin-2-carboxílico (Etapa 36.3) (0.723 mmol) y trifenilfosfina (0.867 mmol) en THF (3 mL) fue agitada a temperatura ambiente durante 25 horas. La mezcla de reacción fue concentrada para producir el compuesto del título crudo en forma de un sólido marrón claro. HPLC: tR 3.53 min (método H); ESI-MS: [M+H]+ 248.
Ejemplo 44: 2-amida 1-{[8-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il]-amida} del ácido 15 (2S,3R)-3-Metil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico
Se agregó trietilamina (1.714 mmol) a una solución de ácido imidazol-1-carboxílico [8-(2,2 ,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il]-amida (Etapa 44.1) (0.490 mmol) y amida del ácido (2S,3R)-3-metil-pirrolidin2-carboxílico (intermediario P) (0.979 mmol) en DMF (1.5 mL) a temperatura ambiente. Después de agitar durante
20 1.5 horas, se concentró la mezcla de reacción. El residuo fue diluido con solución saturada de NaHCO3 y se extrajo con EtOAc (2X). Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas sucesivamente con agua y salmuera, secadas (Na2SO4), filtradas y concentradas. El residuo fue purificado utilizando una columna en sílica gel RediSep® para producir el compuesto del título en forma de un sólido beige. HPLC: tR = 5.77 min (método H); LCMS: tR= 2.18 min, [M+H]+ 469 (método I); TLC: Rf = 0.16 (19:1 CH2Cl2/MeOH); 1H-NMR (d6-DMSO, 600 MHz): 11.19 (br s, 1H), 8.50 (s,
25 1H), 7.43 (br s, 1H). 7.01 (br s, 1H), 4.18 (m, 1H), 3.72 (m, 1H), 3.40 (m, 1 H), 3.03 (m, 2H), 2.94 (m, 2H), 2.38 (m, 1H), 1.97 (m, 1H), 1.70 (m, 1H), 1.58 (s, 6H), 0.99 (d, 3H).
Etapa 44.1: Ácido imidazol-1-carboxílico [8-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il]amida
El compuesto del título fue preparado en analogía con el procedimiento descrito para el Intermediario A pero en la Etapa A.3 se utilizó clorhidrato de 3,3,3-trifluoro-2,2-dimetil-propionamidina (Etapa 44.2) en lugar de clorhidrato de tert-butilamidina.
El compuesto del título fue obtenido en forma de un sólido blanco. HPLC: tR = 6.73 min (método H); LCMS: tR= 1.11 min, [M+H]+ 373 (método J). Nota: para propósitos de caracterización, el compuesto del título fue disuelto en MeOH -> derivado carbamato de metilo.
Etapa 44.2: Clorhidrato de 3,3,3-Trifluoro-2,2-dimetil-propionamidina
3,3,3-Trifluoro-2,2-dimetil-propionitrilo (Etapa 44.3) (12.40 mmol) fue agregado a una solución de metóxido de sodio
10 (recién preparado a partir de 48.40 mmol de sodio metálico y 102 ml de MeOH) a temperatura ambiente. Después de 4 horas, se agregó ácido acético (48.40 mmol) y luego NH4Cl (14.88 mmol) lentamente y la mezcla de reacción fue calentada entonces a 70ºC durante 40 horas. Después de concentrar (40ºC, 100 mbar) la mezcla de reacción, el residuo fue suspendido en acetona, filtrado y secado bajo vacío para producir el compuesto del título en forma de un sólido blanco. ESI-MS: [M+H]+ 155.
15 Etapa 44.3: 3,3,3-Trifluoro-2,2-dimetil-propionitrilo
Una mezcla de 3,3,3-trifluoro-2,2-dimetil-proplonamida (Etapa 44.4) (121.2 mmol) y pentóxido de fósforo (121.2 mmol) fue calentada lentamente a 200ºC y se recolectó el destilado resultante. El compuesto del título fue obtenido en forma de un líquido incoloro.
20 Etapa 44.4: 3,3,3-Trifluoro-2,2-dimetil-proplonamida
Se agregó cloruro de oxalilo (140.8 mmol) gota a gota a una solución de ácido 3,3,3-trifluoro-2,2-dimetil-propiónico [889940-13-0] (128 mmol) en CH2Cl2 (128 mL) a 0ºC. Se agregaron unas pocas gotas de DMF hasta que se observó liberación de gas y luego se continuó la agitación durante 30 minutos. Después de calentar hasta temperatura
25 ambiente y agitar durante una noche, la mezcla de reacción fue concentrada (40ºC, 00 mbar). El residuo fue disuelto en THF (128 ml), enfriado a 0ºC y luego tratado lentamente con una solución de amoniaco acuoso concentrado (64 ml). Después de agitar a 0ºC durante 30 minutos y luego a temperatura ambiente durante 4 horas, la mezcla de reacción fue concentrada a la mitad de su volumen para dar una suspensión blanca espesa. Después de filtrar y secar, el compuesto del título fue obtenido en forma de un sólido blanco. ESI-MS: [M+H]+ 156.
30 Ejemplo 45: 2-amida 1-{[8-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetiletil)-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il]-amida} del ácido (2S,3R)-3-Metoximetil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico
Se agregó trietilamina (1.714 mmol) a una solución de ácido imidazol-1-carboxílico [8-(2.2 ,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)4,5-dihidro-triazolo[4,5-h]quinazolin-2-il]-amida (Etapa 44.1) (0.490 mmol) y amida del ácido (2S,3R)-3metoximetilpirrolidin-2-carboxílico (Etapa 42.1) (0.0.979 mmol) en DMF (1.5 mL) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 2 horas, la mezcla de reacción fue concentrada. El residuo fue diluido con solución saturada de NaHCO3 y extraído con EtOAc (2X). Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas sucesivamente con agua y salmuera, secadas (Na2SO4), filtradas y concentradas. El residuo fue purificado utilizando una columna de sílica gel RediSep® para producir el compuesto del título en forma de un sólido beige. HPLC: tR = 5.71 min (método H); LCMS: tR=2.15 min, [M+H]+ 499 (método I); TLC: Rf=0.40 (19:1 CH2Cl2/MeOH); 1H-NMR (d6-DMSO, 600 MHz):
11.23 (br s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.42 (br s, 1H), 7.06 (br s, 1H), 4.27 (m, 1H), 3.74 (m, 1H), 3.46 (m, 1H), 3.42 (m, 1H),
3.24 (s, 3H), 3.16 (m, 1H), 3.03 (m, 2H), 2.94 (m, 2H), 2.55 (m, 1H), 2.03 (m, 1H), 1.77 (m, 1H), 1.58 (s, 6H).
Ejemplo 46: 2-amida 1-[(8-tert-butil-4H-5-oxa-1-tia-3,7-diaza-ciclopenta[a]naftalen-2-il)-amida] del ácido (2S,3R)-3Metil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico
LCMS: tR = 0.50 min, M+H =416. M-H = 414 (método L). 1H-NMR (d6-DMSO, 400 MHz): 8.05 (s, 1 H), 7.37 (bs, 1H),
7.09 (s, 1H), 6.97 (bs, 1H), 5.31 (s, 2H), 4.18 (m, 1H), 3.69 (dd, 1H), 3.39 (m, 1 H), 2.35 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.71 (m, 1H), 1.27 (s, 9H), 0.975 (d, 3H).
El compuesto del título fue preparado a partir de 2-tert-butil-5-metoximetoxi-piridina utilizando la metodología de síntesis descrita para la preparación del Ejemplo 40. El material de partida 2-tert-butil-5-metoximetoxi-piridina fue preparado a partir de 2-bromo-5-metoximetoxi-piridina como se describe a continuación:
2-tert-Butil-5-metoximetoxi-piridina:
6.69 g (74.7 mmol) de cianuro de cobre (I) en 15 ml de THF seco fueron enfriados a -75ºC, donde se adicionaron gota a gota 149 ml (149 mmol) de una solución 1M de cloruro de tert-butilmagnesio. La agitación se continuó durante 40 minutos, Después de esto, se agregaron 4.07g (18.67 mmol) de 2-bromo-5-metoxirnetoxi-piridina (Zhong, W. et al. WO2008147547) disueltos en 30 ml de THF seco, gota agota. La mezcla de reacción fue agitada a -75ºC durante 1 hora y luego se dejó alcanzar la temperatura ambiente, donde se continuó la agitación durante otras 6 horas. Luego se agregaron 30 ml de amoniaco acuoso al 25% a la mezcla de reacción. La mezcla fue filtrada y extraída dos veces con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con agua, secadas (MgSO4), filtradas y concentradas in vacuo. El residuo fue purificado por cromatografía sobre sílica gel (EtOAc, heptano) para producir
2.64 g del compuesto del título puro en forma de un aceite. LCMS: tR = 0.55 min, M+H = 196 (método K).
Ejemplo 47: 2-amida 1-[(8-tert-butil-4H-5-oxa-1-tia-3,7-diaza-ciclopenta[a]naftalen-2-il)-amida] del ácido (2S,3S)-3Dimetilaminometil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico
El compuesto del título fue preparado utilizando la metodología de síntesis descrita para la preparación del Ejemplo 46 y usando amida del ácido (2S,3S)-3-dirmetilaminometil-pirrolidin-2-carboxílico (Etapa 43.1) en vez de la amida del ácido (2S,3R)-3-metil-pirrolidin-2-carboxílico en la última etapa de la síntesis.
LC-MS: tR = 0.24 min, M-H = 457 (método L). 1H-NMR (d6-DMSO, 400 MHz): 11.15 (bs, 1 H), 8.03 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 7.0 (s, 1H), 5.28 (s, 2H), 4.23 (m, 1 H), 3.65 (m, 1H), 3.40 (m, 1H), 2.6-2.45 (m, 2H), 2.30 (m, 1 H),
2.17 (s, 6H), 2.15 (m, 1H) 1.70 (m, 1H), 1.27 (s, 9H).
Ejemplo 48: 2-amida 1-{[8-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-4H-5-oxa-1-tia-3,7-diaza-ciclopenta[a]naftalen-2-il]-amida} del ácido (2S,3R)-3-Metil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico
LC-MS: tR = 1.59 min, M+H = 470 (método F). 1H-NMR (d6-DMSO, 400 MHz): 11.25 (bs, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.00 (s, 1H), 5.40 (s, 2H), 4.19 (s, 1H), 3.71 (m, 1H), ca. 3.4 (m, 1H), 2.5-2.35 (m, 1H), 1.99 (m, 1H), 1.68 (m, 1H), 1.56 (s, 6H), 0.99 (d, 3H).
El compuesto del título fue preparado partiendo de 4-bromo-5-metoximetoxi-2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetiletil)-piridina utilizando la metodología de síntesis descrita para la preparación de los Ejemplos 40 y 42.
La 4-Bromo-5-metoximetoxi-2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-piridina fue preparada como sigue:
a) 4-Bromo-5-metoximetoxi-2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-piridina:
El compuesto del título fue preparado utilizando la metodología de síntesis como se describe para la preparación del Ejemplo 40, etapa 40.5 en forma de un aceite. LCMS (método L): tR = 1.26 min, M+H = 328 (79Br), 330 (81Br)
b) 5-Metoximetoxi-2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-piridina
15 Se disolvieron en 20 ml de diclorometano 1.7 g (4.13 mmol) de ácido 2,2,2-trifluoro-1-(5-metoximetoxi-piridin-2-il)-1metil- etilo éster metanosulfónico. La mezcla de reacción fue enfriada a 0ºC donde se agregaron 2.065 ml (4.13 mmol) de trimetilaluminio lentamente. La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 20 horas. Después de eso se agregó agua lentamente y la mezcla fue extraída 2 veces con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con agua y salmuera, secadas (MgSO4), filtradas y concentradas in vacuo. El residuo
fue purificado por cromatografía sobre sílica gel (EtOAc, heptano) para producir 0.55 g de compuesto del título puro. LCMS (método L): tR = 1.09 min, M+H = 250.
c) Ácido 2,2,2-trifluoro-1-(5-metoximetoxi-piridin-2-il)-1-metil-etilo éster metanosulfónico
A una mezcla en agitación de 0.213 g (8.44 mmol) de hidruro de sodio en 6 ml de THF seco, se agregaron 1.06 g
(4.22 mmol) de 1,1,1-trifluoro-2-(5-metoximetoxi-piridin-2-il)-propan-2-ol (disuelta en 4.9 ml de THF seco) gota a gota a 0ºC. Después de terminar la adición, se continuó con la agitación durante 3 horas a temperatura ambiente. Luego se agregó cloruro de metanosulfonilo (disuelto en 7.3 ml de THF seco) a temperatura ambiente y la agitación continuó durante otras 2 horas. Luego se agregaron agua y solución saturada de NaHCO3. La mezcla se extrajo 2 veces con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con agua y salmuera, secadas (MgSO4), filtradas y concentradas in vacuo para producir 1.7 g del compuesto del título, el cual se utilizó directamente en la etapa siguiente. LCMS (método L): tR = 0.96 min, M+H = 330.
d) 1,1,1-Trifluoro-2-(5-metoximetoxi-piridin-2-il)-propan-2-ol
Una mezcla de 1.48 g (4.58 mmol) de 5-metoximetoxi-2-(2,2,2-trifluoro-1-metil-1-trimetilsilaniloxi-etil)-piridina y 5 ml de HCl 2N (10 mmol) en 15 ml de THF fue agitada a temperatura ambiente durante 2 horas. Después de eso la mezcla de reacción se vertió sobre agua y se ajustó el pH de 1-2 mediante la adición de HCl 2N. La mezcla de reacción fue extraída 2 veces con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con agua y salmuera, secadas (MgSO4), filtradas y concentradas in vacuo para producir 1.06 g del compuesto del título en forma de un aceite (pureza de 88%), el cual fue usado en la etapa siguiente sin purificación. LCMS (método L): tR = 0.88 min, M+H = 252.
e) 5-Metoximetoxi-2-(2,2,2-trifluoro-1-metil-1-trimetilsilaniloxi-etil)-piridina
Una mezcla de 1.12 g (6.18 mmol) de 1-(5-metoximetoxi-piridin-2-il)-etanona, 1.055 g (7.42 mmol) de trimetilo (trifluormetil)silano y 0.025 g de acetato de sodio (0.309 mmol) en 9 ml de DMF se agitó durante 1 hora a 0ºC y 1 hora a temperatura ambiente. Después de eso la mezcla de reacción fue vertida sobre agua y se ajustó a un pH de 1-2 con la adición de HCl 2N. La mezcla de reacción fue extraída 2 veces con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con agua y salmuera, secadas (MgSO4), filtradas y concentradas in vacuo. El residuo fue purificado por cromatografía sobre sílica gel (EtOAc, heptano) para producir 1.87 g del compuesto del título puro en forma de un aceite. LCMS (método L): tR = 1.38 min, M+H = 324.
f) 1-(5-Metoximetoxi-piridin-2-il)-etanona:
Se agregó NaH a una solución de 1 g (7.29 mmol) de 1-(5-hidroxi-piridin-2-il)-etanona (Anichem) en 15 ml de DMF a 0ºC. Después de agitar esta mezcla durante 1 hora, se agregó 0.78 ml (8.75 mmol) MOMCI a 0ºC. Luego la mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción fue vertida sobre agua y extraída 2 veces con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con agua y salmuera, secadas (MgSO4), filtradas y concentradas in vacuo. El residuo fue purificado por cromatografía sobre sílica gel (EtOAc, heptano) para producir 1.12 g del compuesto del título en forma de un aceite. LCMS (método L): tR = 0.66 min, M+H = 182.
Ejemplo 49: 2-amida 1-{[7-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il]-amida} del ácido (2S,3R)-3-Metil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico
LCMS: tR = 0.97 min, M+H = 474, M-H = 414 (método L). 1H-NMR (d6-DMSO, 400 MHz): 10.7 (bs, 1H), 7.37 (s, 1H),
5 6.97 (s, 1H), 4.18 (m, 1H), 3.69 (dd, 1 H), 3.39 (m, 1H), 3.14 (t, 2H), 2.95 (t, 2H), 2.34 (m, 1H), 1.94 (m, 1H), 1.68 (m, 1 H), 1.62 (s, 6H), 0.965 (d, 3H). El compuesto del título fue preparado a partir de 2,2-dimetil-tiopropionamida utilizando la metodología de síntesis descrita para la preparación del Ejemplo 39. El material de partida, 3,3,3trifluoro-2,2-dimetiltiopropionamida fue preparado como se describe a continuación:
Preparación de 3,3,3-trifluoro-2,2-dimetil-tiopropianamida:
10 a) 3,3,3-Trifluoro-2,2-dimetil-propionamida
Una mezcla de 2 g (12.81 mmol) de ácido 3,3,3-trifluoro-2,2-dimetilpropiónico (Aldrich), 2.077 g (12.81 mmol) de carbonildiimidazol y 5.55 ml (64.1 mmol) de amoniaco acuoso en 50 ml de CH2Cl2 se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. Después de esto, se agregó dietilo éter y la mezcla resultante fue lavada con HCl 0.1 N, NaOH 0.1
15 N, agua y salmuera. La capa orgánica fue secada (MgSO4), filtrada y concentrada in vacuo para producir 1.15 g del compuesto del título en forma de cristales blancos, el que fue usado en la siguiente etapa sin purificación adicional. MS: M+H = 156.
b) 3,3,3-Trifluoro-2,2-dimetil-tiopropionamida
20 Una mezcla de 1.05 g (6.77 mmol) de 3,3,3-trifluoro-2,2-dimetil-propionamida y 1.48 g (3.66 mmol) de reactivo de Lawesson en 32 ml de THF seco fue agitada a temperatura de reflujo durante 20 horas. Después de esto la mezcla de reacción fue enfriada a temperatura ambiente y concentrada in vacuo. El residuo fue purificado por cromatografía sobre sílica gel (heptano, EtOAc) para producir 0.81 g del compuesto del título en forma de cristales blancos puros. MS: M+H = 172.
25 Utilizando amida del ácido (2S,3R)-3-metoximetil-pirrolidin-2-carboxílico (Etapa 42.1) en la última etapa de la síntesis se preparó el siguiente ejemplo de la misma manera:
Ejemplo 50: 2-amida 1-{[7-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetiletil)-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il]-amida} del ácido (2S,3R)-3-Metoximetil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico
30 LC-MS: tR = 0.96 min, M+H = 504, M-H = 502 (método L). 1H-NMR (d6-DMSO, 400 MHz): 10.76 (bs, 1H), 7.34 (bs, 1H), 7.02 (bs, 1H), 4.29 (m, 1H), 3.45 (m, 1H), 3.42 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 3.14 (m, 3H), 2.97 (m, 2H), 2.48 (m, 1H),
1.97 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.62 (s, 6H).
Ejemplo 51: 2-amida 1-[(7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[ 1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida] del ácido (2S,3S)-3Dimetilaminometil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico
El compuesto del título fue preparado usando la metodología de síntesis descrita para la preparación del Ejemplo 39 y usando amida del ácido (2S,3S)-3-dimetilaminometil-pirrolidin-2-carboxílico (Etapa 43.1) en lugar de amida del ácido (2S,3R)-3-metilpirrolidin-2-carboxílico en la última etapa de la síntesis.
LC-MS: tR = 0.91 min, M+H = 463, M-H = 461 (método L). 1H-NMR (d6-DMSO, 400 MHz): 10.7 (bs, 1H), 7.36 (s, 1H),
7.01 (bs, 1H), 4.28 (m, 1H), 3.67 (dd, 1H), 3.39 (m, 1H), 3.07 (m, 2H), 2.92 (m, 2H), 2.5-2.44 (m, 2H), 2.30 (m, 1H),
2.14 (s, 6H), 1.95 (m, 1H), 1.40 (m, 1H), 1.36 (s, 9H).
Eficiencia como inhibidores de la PI3 quinasa
Prueba con PI3K KinaseGlo: Se dispensaron 50 nL de diluciones de compuesto en placas negras de 384 pozos de bajo volumen Non Binding Styrene (NBS) (Costar Cat. No. NBS#3676). Se transfirió l-a-fosfatidilinositol (PI), provisto como una solución de 10 mg/ml en metanol, a un tubo de vidrio y se secó bajo un haz de nitrógeno. Se resuspendió en OctilGlucósido al 3% (OG) por sometimiento a vortex y se almacenó a 4ºC. El KinaseGlo Luminescent Kinase Assay (Promega, Madison/WI, USA) es un método de HTS homogéneo para medir la actividad de quinasa cuantificando la cantidad de ATP que permanece en solución después de una reacción con quinasa.
Se agregaron 5 µL de una mezcla de PI/OG con el subtipo de PI3K (Tabla 1). Las reacciones con quinasa fueron iniciadas mediante la adición de 5 µl de una mezcla de ATP que contiene en un volumen final de 10 µL TRIS-HCl 10 mM pH 7.5, MgCl2 3mM, NaCl 50 mM, CHAPS al 0.05%, DTT 1mM y ATP 1 µM, y sucedió a temperatura ambiente. Las reacciones se detuvieron con 10 µl de KinaseGlo y las placas fueron leídas 10 minutos después en un lector Synergy2 utilizando un tiempo de integración de 0.1 segundos por pozo. Se agregó 2.5 µM de un inhibidor panclass 1 PI3 de quinasa (estándar) a las places de ensayo para generar el 100% de inhibición de la reacción de la quinasa, y el 0% de inhibición fue dado por el vehículo solvente (DMSO al 90% en agua). El estándar fue utilizado como compuesto de referencia e incluido en todas las placas de ensayo en la forma de 16 puntos de dilución en duplicado.
Tabla 1 PI3Ks por KinaseGlo: condiciones de ensayo y protocolo de reactivos
Vol (10 µL)
Enzima (nM) ATP (µM) PI/OG (µM/ mg/ml) NaCl (mM) Mg2+ (mM) CHAPS (%) DTT (mM) Tiempo (minutos)
PI3Ka
10 1 11/10 50 3 0.05 1 30
PI3K
25 1 11/10 50 3 0.05 1 30
PI3Ky
150 1 22/20 50 3 0.05 1 90
PI3Kd
10 1 11/10 50 3 0.05 1 30
Clonación de PI3Ks
Los constructos de PI3Ka, PI3K y PI3K5 son fusión del dominio p85a iSH2 y las respectivas isoformas p110. El fragmento p85a y los genes de isoformas p110 fueron generados por PCR a partir de una primera cadena ADNc generada por RT-PCR a partir de ARN comercial de placenta, testículos y cerebro como se describe más abajo. El constructo de PI3Ky fue obtenido de Roger Williams lab, MRC Laboratory of Molecular Biology, Cambridge, UK (November, 2003) y está descrito (Pacold, Michael E.; Suire, Sabine; Perisic, Olga; Lara-Gonzalez, Samuel; Davis, Colin T.; Walker, Edward H.; Hawkins, Phillip T.; Stephens, Len; Eccleston, John F.; Williams, Roger L. Crystal structure y functional analysis of Ras binding to its effector fosfoinositide 3-kinase gamma. Cell (2000), 103(6), 931943).
Constructos y proteínas de PI3Ka
BV1075: el constructo para Baculovirus HV-1075 fue generado por una ligación en tres partes consistente de un fragmento p85 y un fragmento p110a clonado en el vector pBlueBac4.5. El fragmento p85 fue derivado del plásmido p1661-2 digerido con Nhe/Spe. El fragmento p110a derivado de este clon fue verificado por secuenciamiento y 5 utilizado en LR410 como un fragmento SpeI/HindIII. Para la generación del vector de expresión LR410 del baculovirus se utilizó la reacción LR de compuerta para transferir el inserto en el pBlueBac4.5 adaptada Gateway (Invitrogen) vector. El vector de clonación pBlueBac4.5 (Invitrogen) fue digerido con el Nhe/HindIII. Esto dio como resultado el constructo PED 153.8. El componente p85 (iSH2) fue generado por PCR utilizando ORF 318 (descrito más arriba) como plantilla y un cebador de avance KAC1028 (5’-GCTAGCAT-GCGAGAATATGATAGAT10 TATATGAAG-AATATACC) (SEQ ID No. 1) y dos cebadores reversos, KAC1029 (5’-GCCTC-CACCAC-CTCCGCCTG-GTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC) (SEQ ID No. 2) y KAC 1039 (5’-TACTAGTC-CGCCTCCAC-CACCTCCGCCTCCACCACCTCCGCC) (SEQ ID No. 3). Los dos cebadores reversos se superponen e incorporan el enlazador 12x Gli y la secuencia terminal N en el gen p110a en el sitio Spel. El enlazador 12x Gli reemplaza el enlazador individual Gli en el constructo BV1052. El fragmento de PCR fue clonado en pCR2.1 TOPO (Invitrogen).
15 De los clones resultantes, se determinó que el p1661-2 era correcto por secuenciamiento. El plásmido fue digerido con Nhe y SpeI y el fragmento resultante fue aislado en gel y purificado para subclonación.
El fragmento de clonación p110a fue generado por digestión enzimática del clon LR410 (véase más arriba) con Spe I y HindIII. El sitio SpeI es la región de codificación del gen p110a. El fragmento resultante fue aislado en gel y purificado por subclonación. El vector de clonación, pBlueBac4.5 (Invitrogen) fue preparado por digestión enzimática
20 con el Nhe y HindIII. El vector de corte fue purificado con una columna Qiagen y luego desfosforilado con fosfatasa alcalina de intestino de ternera (CIP) (BioLabs). Después de terminar la reacción con CIP el vector de corte fue purificado de nuevo en columna para generar el vector final. Se llevó a cabo una ligación en tres partes utilizando ligasa Roche Rapid y las especificaciones del proveedor. El plásmido final fue verificado por secuenciamiento.
Dominio de quinasa.
25 Secuencia proteínica de BV 1075:
Constructos y proteínas de PI3K BV949: Los productos PCR para el dominio inter SH2 (iSH2) de las subunidades p85 PI3Ka, PI3K y PI3K5 y para la subunidad p110 de longitud completa fueron generados y fusionados por superposición por PCR. El producto iSH2 PCR fue obtenido a partir de una primera cadena de ADNc generada por RT-PCR a partir de ARN humano comercial de placenta, testículos y cerebro (Clontech), inicialmente utilizando los cebadores gwG130-p01 (5’-CGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3’) (SEQ ID No. 5) y gwG130-p02 (5’-TGGTTT-AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3’) (SEQ ID No. 6). Subsecuentemente, en una reacción de PCR secundaria se agregaron sitios y enlazantes AttB1 de recombinación Gateway en el extremo 5’ y en el extremo 3’ del fragmento p85 iSH2 respectivamente, utilizando cebadores gwG130-p03 (5’-GGGACAAGTT-TGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATATACATATGCGA-GAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3’) (SEQ ID No. 7) y gwG130-p05 (5’-ACTGAAGCATCCTCCTC-CTCCTCCT-CCTGGTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC-3’) (SEQ ID No. 8). El fragmento p110 fue obtenido por PCR utilizando como plantilla un clon p110 (de fuente desconocida cuya secuencia fue verificada) usando cebadores gwG130-p04 (5’-ATTAAAC-CAGGAGGAGGAGGAGGAGGATGCTT-CAGTTTCATAATGCCTCCTGCT -3’) (SEQ ID No. 9) el cual contiene las secuencias enlazadoras y el extremo 5’ de p110 y gwG130-p06 (5’-AGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCCAGATC-TG-TAGTCTTTCCGAA-CTGTGTG-3’) (SEQ ID No. 10) el cual contiene secuencias para el extremo 3’ del p110- fusionado a una etiqueta de Histidina. La proteína de fusión p85-iSH2/ p110 fue ensamblada superponiendo por PCR una reacción de los enlazantes en el extremo 3’ del fragmento iSH2 y el extremo 5’ del fragmento p110 , utilizando el cebador gwG130-p03 mencionado anteriormente y un cebador que contiene una etiqueta de Histidina superpuesta y las secuencias de recombinación de AttB2 (5’-GGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTTAAGCTCCGTGATGGTGATGGTGA TGTGCTCC-3’) (SEQ ID No. 11). El producto final fue recombinado en una reacción o Gateway (Invitrogen) en el vector donante pDONR201 (Invitrogen) para generar el clon de entrada ORF253. Este clón fue verificado por secuenciamiento y utilizado en una reacción LR Gateway (Invitrogen) para transferir el inserto en el vector adaptado pBlueBac4.5 Gateway (Invitrogen) para generación del vector de expresión de baculovirus LR280. Este LR280 tiene una mutación de aminoácido en la secuencia p85.
Dominio de quinasa.
Secuencia de proteína de BV949: Dominio de quinasa.
Constructo de PI3Ky y proteína
Constructo obtenido del laboratorio de Roger Williams, MRC Laboratory of Molecular Biology, Cambridge, UK (November, 2003). Descripción del constructo en (Pacold, Michael E.; Suire, Sabine; Perisic, Olga; Lara-Gonzalez, Samuel; Davis, Colin T.; Walker, Edward H.; Hawkins, Phillip T.; Stephens, Len; Eccleston, John F.; Williams, Roger
L. Crystal structure y functional analysis of Ras binding to its effector fosfoinositide 3-kinase gamma. Cell (2000), 103(6), 931-943). Los constructos carecen del aa 144 del terminal N.
Secuencia de proteínas de BV950:
Constructo y proteína de PI3K5
BV1060: Productos de PCR para el dominio inter SH2 (iSH2) de la subunidad p85 y para la subunidad p1105 de longitud completa se generaron y fusionaron por superposición por PCR. El producto de PCR iSH2 fue generado 15 utilizando como plantilla el ORF318 (véase anteriormente) y los cebadores gwG130-p03 (5’- GGGACAAG-TTTGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATATACAT-ATGC-GAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3’) (SEQ ID No. 7) y gwG154-p04 (5’-TCCTCCTCCT-CCTCCTC-CTGGTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC-3’) (SEQ ID No. 14). El fragmento p1105 fue obtenido a partir de la primera cadena de ADNc generada por RT-PCR a partir de ARN humano comercial de placenta, testículos y cerebro (Clontech), utilizando inicialmente los cebadores gwG154-p01 20 (5’-ATGCCCCCTGGGGTGGACTGCCCCAT-3’) (SEQ ID No. 15) y gwG154-p02 (5’-CTACT-GCCTGT-TGTCTTTGGACACGT-3’) (SEQ ID No. 16). En una reacción de PCR subsecuente se agregaron las secuencias enlazadoras y una etiqueta de Histidina en el extremo 5’ y extremo 3’ del fragmento de p1105 respectivamente, utilizando cebadores gw154-p03 (5’-ATTAAACCAGGAGGAGGAGGAGGAGGACCCCCTGGGGTGGAC-TGCCCCATGGA-3’) (SEQ ID No. 17) y gwG154-p06 (5’-AGCTCCGTGATGGTGATGGTGAT-GTGCT25 CCCTGCCTGTTGTCTTTGGACACGTTGT-3’) (SEQ ID No. 18). La proteína de fusión p85-iSH2/p1105 fue ensamblada en una tercera reacción de PCR por enlazadores de superposición en el extremo 3’ del fragmento iSH2 y el extremo 5’ del fragmento p1105, utilizando el cebador gwG130-p03 antes mencionado y un cebador que contiene una etiqueta de Histidina superpuesta y las secuencias de recombinación AttB2 Gateway (Invitrogen) (5’
GGG-ACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTTAA-GCTCCGTGATGGTGATGGTGAGTGCTCC-3’) (SEQ ID No. 19). Este producto final fue recombinado en una reacción o Gateway en el vector donador pDONR201 (Invitrogen) para generar el clon de entrada ORF319. Este clon fie verificado por secuenciamiento y usado en una reacción LR Gateway (Invitrogen) para transferir el inserto en el vector adaptado pBlueBac4.5 Gateway (Invitrogen) para la generación del vector de expresión de baculovirus LR415.
Secuencia de proteína de BV1060:
Purificación de los constructos de PI3Ka, PI3K y PI3Ky
PI3Ka, PI3K y PI3Ky fueron purificados en dos etapas cromatográficas: cromatografía de afinidad inmovilizada por
10 metal (IMAC) en una resina de sefarosa Ni (GE Healthcare) y filtración por gel utilizando una columna Superdex 200 26/60 (GE Healthcare). Todos los reguladores fueron enfriados a 4ºC y se llevó a cabo la lisis con enfriamiento sobre hielo. El fraccionamiento por columna fue ejecutado a temperatura ambiente. Todos los reguladores utilizados para purificar PI3K contenían 0.05% de Tritón X100, además de lo que se describe más adelante.
Típicamente se resuspendieron células congeladas a partir de 10 L de cultivo de células Tn5 en regulador de
15 "Regulador de Lisis " Tris-Cl 20 mM, pH 7.5, NaCl 500 mM, glicerol al 5%, imidazol 5 mM, NaF 1 mM, ácido okadaico (OAA) 0.1 µg/mL, BME 5 mM, 1 x cóctel inhibidor de proteasa completo -libre de EDTA (20 tabletas/1 Litro de regulador, Roche Applied Sciences), benzonasa (regulador 25U/mL, EMD Biosciences) a una relación de 1:6 v/v en pellas a relación de regulador de Lisis, y se sometieron a lisis mecánicamente propinando 20 impactos utilizando un pestillo de ajuste apretado. El lisado fue centrifugado a 45,000 g durante 30 minutos, y el sobrenadante fue cargado
20 sobre una columna IMAC preequilibrada (3 mL de resina/100 mL de lisado). La columna fue lavada con 3-5 volúmenes de columna de Regulador de Lisis, seguido por un segundo lavado de 3-5 volúmenes de columna con Tris-Cl 20 mM, pH 7.5, NaCl 500 mM, glicerol al 5%, imidazol 45 mM, NaF 1 mM, OAA 0.1 µpg/mL, BME 5 mM, 1x cóctel inhibidor de proteasa completo – libre de EDTA. La proteína fue eluida con Tris-Cl 20 mM, pH 7.5, NaCl 0.5 M, glicerol al 5%, imidazol 250 mM, NaF 1 mM, OAA 0.1 µg/mL, BME 5 mM, 1x cóctel inhibidor de proteasa completo –
25 libre de EDTA. Las fracciones pertinentes fueron analizadas por SDS-PAGE y reunidas concordantemente. La proteína fue purificada adicionalmente por filtración por gel sobre una columna de Superdex 200 26/60 equilibrada en Tris-Cl 20 mM, pH 7.5, NaCl 0.5 M, glicerol al 5%, NaF 1 mM, DTT 5 mM, 1 x cóctel inhibidor de proteasa completo – libre de EDTA. Las fracciones pertinentes fueron analizadas por SDS-PAGE y reunidas concordantemente. Se agregó un volumen igual de regulador de diálisis (Tris-Cl 20 mM, pH 7.5, NaCl 500 mM,
glicerol al 50%, NaF 5 mM, DTT 5 mM) al conjunto y luego se dializó contra Regulador de Diálisis en dos cambios (un cambio durante la noche). La proteína fue almacenada a -20ºC.
Purificación de PI3K5
El PI3K5 fue purificado en tres etapas cromatográficas: cromatografía de afinidad inmovilizada con metal sobre una resina de Sefarosa Ni (GE Healthcare), filtración por gel utilizando una columna Superdex 200 26/60 (GE Healthcare) y finalmente en una etapa de intercambio iónico sobre una columna Q-HP (GE Healthcare). Todos los reguladores fueron enfriados a 4ºC y la lisis se llevó a cabo enfriada sobre hielo. El fraccionamiento de la columna fue ejecutado a temperatura ambiente.
Se resuspendieron típicamente células congeladas a partir de 10 L de un cultivo de células Tn5 en “Regulador de Lisis” Tris-Cl 20 mM, pH 7.5, NaCl 500 mM, glicerol al 5%, imidazol 5 mM, NaF 1 mM, 0.1 µg/mL de ácido okadaico (OAA), BME 5 mM, 1 x cóctel inhibidor de proteasa completo – libre de EDTA- (20 tabletas/1 L de regulador, Roche Applied Sciences), benzonasa (25 U/mL de regulador de lisis, EMD Biosciences) a una relación de 1:10 v/v en pellas a la relación de Regulador de Lisis, y se sometieron a lisis mecánicamente propinando 20 golpes utilizando un pistilo de ajuste apretado. El lisado fue centrifugado a 45,000 g durante 30 minutos, y el sobrenadante fue cargado sobre una columna IMAC preequilibrada (5 mL de resina/100 mL de lisado). La columna fue lavada con 3-5 volúmenes de columna de Regulador de Lisis, seguida por un segundo lavado de 3-5 volúmenes de columna con 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, NaCl 500 mM, glicerol al 5%, imidazol 40 mM, NaF 1 mM, OAA 0.1ug/mL, BME 5 mM, 1 x cóctel de inhibidor de proteasa completo – libre de EDTA. La proteína fue eluida con Tris-Cl 20 mM, pH 7.5, NaCl 500 mM, glicerol al 5%, imidazol 250 mM, NaF 1 mM, OAA 0.1mg/mL, BME 5 mM, 1 x cóctel inhibidor de proteasa completo – libre de EDTA. Las fracciones pertinentes fueron analizadas por SDS-PAGE y reunidas concordantemente. La proteína fue purificada adicionalmente por filtración por gel sobre una Superdex 200 equilibrada con Tris-Cl 20 mM, pH 7.5, NaCl 500 mM, glicerol al 5%, NaF 1 mM, OAA 0.1ug/mL, DTT 5 mM, 1 x cóctel inhibidor de proteasa completo – libre de EDTA. Las fracciones pertinentes fueron analizadas por SDS-PAGE y reunidas concordantemente. Estas fracciones fueron diluidas 1:10 v/v de volumen de reserva a una relación de regulador con "Regulador A" Tris-Cl 20 mM, pH 8.2, glicerol al 5%, NaF 1 mM, 0.1 µg/mL OAA, DTT 5 mM y cargadas en una columna Q-HP preparada. Después de que la carga de la muestra se completó se lavó con Regulador A y "Regulador B" al 5% Tris-Cl 20 mM, pH 8.2, NaCl 1 M, glicerol al 5% glicerol, NaF 1 mM, OAA 0.1ug/mL, DTT 5 mM con 3-5 volúmenes de columna. Se eluyó la proteína utilizando un gradiente 5%-30% de Regulador B. Típicamente la proteína eluye en NaCl aproximadamente 200 mM. Las fracciones pertinentes fueron analizadas por SDS-PAGE y reunidas concordantemente. Se agregó un volumen igual de Regulador de diálisis (Tris-Cl 20 mM, pH 7.5, NaCl 500 mM, glicerol al 50%, NaF 1 mM, OAA 0.1 µg/mL, DTT 5 mM) a la reserva y luego se dializó contra Regulador de Diálisis con dos cambios (un cambio durante la noche). La proteína fue almacenada a -20ºC.
Los siguientes resultados se obtuvieron utilizando los ensayos descritos anteriormente.
Ejemplo No.
PI3Kalpha /IC50 [umol I-1] PI3Kbeta/ IC50 [umol I-1] PI3Kgamma /IC50 [umol-1] PI3Kdelta /IC50 [umol I-1]
1
0.004 1.238 0.067 0.18
2
0.0055 0.332 0.09 0.03
3
0.045 0.121 1.59 0.74
4
0.0065 0.143 0.176 0.22
5
0.0055 0.047 0.153 0.046
6
0.016 1.63 0.50 0.47
7
0.0235 3.136 0.233 0.051
8
0.0095 0.276 0.180 0.198
9
0.0085 0.087 0.141 0.072
10
0.018 0.449 0.282 0.054
11
0.005 0.047 0.129 0.018
12
0.006 0.516 0.230 0.053
13
0.009 0.277 0.104 0.118
14
0.004 0.268 0.191 0.016
(continuación) LISTADO DE SECUENCIAS
Ejemplo No.
PI3Kalpha /IC50 [umol I-1] PI3Kbeta/ IC50 [umol I-1] PI3Kgamma /IC50 [umol-1] PI3Kdelta /IC50 [umol I-1]
16
0.0055 0.297 0.074 0. 060
17
0.008 0.389 0.153 0.236
18
0.0105 0.374 0.155 0.028
19
0.0055 0.588 0.123 0.077
20
0.0035 0.155 0.080 0.011
21
< 0.003 0.519 0.237 0.036
22
0.0235 6.905 0.262 1.895
24
0.007 0.135 0.098 0.024
25
0.0055 0.346 0.122 0.045
26
0.0065 0.328 0.138 0.058
27
0.0045 0.397 0.097 0.072
28
0.0155 2.035 0.336 0.331
29
0.008 0.721 1.358 0.892
30
0.023 2.135 0.119 0.294
31
0.0515 5.825 1.226 1.940
32
0.007 1.092 0.131 0.043
33
0.0695 5.079 0.909 0.860
34
0.0125 1.818 0.166 0.156
35
0.009 2.908 0.195 0.354
36
0.012 0.51 n.d. 0.04
37
0.004 0.182 n.d. 0.019
38
0.009 0.866 n.d. 0.044
39
0.013 1.612 0.334 0.265
41
0.024 3.046 n.d. 0.496
42
0.008 0.409 n.d. 0.032
43
0.005 0.771 n.d. 0.045
44
0.007 0.073 n.d. 0.049
45
0.0065 0.061 n.d. 0.024
46
0.0055 1.148 n.d. 0.157
47
0.003 6.168 n.d. 1.620
48
0.006 0.920 n.d. 0.019
49
0.004 1.248 n.d. 0.101
50
0.009 0.555 n.d. 0.113
51
0.005 3.285 n.d. 0.278
n.d. = no hecho.
<110> Novartis AG
<120> 2-Carboxamida cicloamino ureas
<130> PAT053554A
<150> US 61/270028
<151> 2009-07-02
<160> 20
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 42
<212> ADN
<213> Artificial
<220>
<223> Cebador para PCR
<400> 1 gctagcatgc gagaatatga tagattatat gaagaatata cc 42
<210> 2
<211> 45
<212> ADN
<213> Artificial
<220>
<223> Cebador para PCR
<400> 2 gcctccacca cctccgcctg gtttaatgct gttcatacgt ttgtc 45
<210> 3
<211> 42
<212> ADN
<213> Artificial
<220>
<223> Cebador para PCR
<400> 3 tactagtccg cctccaccac ctccgcctcc accacctccg cc 42
<210> 4
<211> 1180
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Constructo de PI3K quinasa
<400> 4
<210> 5
<211> 28
<212> ADN 5 <213> Artificial
<220>
<223> Cebador para PCR
<400> 5
cgagaatatg atagattata tgaagaat 28 10 <210> 6
<211> 30
<212> ADN
<213> Artificial
<220> 15 <223> Cebador para PCR
<400> 6
tggtttaatg ctgttcatac gtttgtcaat 30
<210> 7
<211> 76
<212> ADN
<213> Artificial
<220>
<223> Cebador para PCR
<400> 7
<210> 8
<211> 54
<212> ADN
<213> Artificial
<220>
<223> Cebador para PCR
<400> 8 actgaagcat cctcctcctc ctcctcctgg tttaatgctg ttcatacgtt tgtc 54
<210> 9
<211> 54
<212> ADN
<213> Artificial
<220>
<223> Cebador para PCR
<400> 9 attaaaccag gaggaggagg aggaggatgc ttcagtttca taatgcctcc tgct 54
<210> 10
<211> 57
<212> ADN
<213> Artificial
<220>
<223> Cebador para PCR
<400> 10
agctccgtga tggtgatggt gatgtgctcc agatctgtag tctttccgaa ctgtgtg 57
<210> 11
<211> 61
<212> ADN
<213> Artificial
<220>
<223> Cebador para PCR
<400> 11
10 <210> 12
<211> 1194
<212> PRT
<213> Artificial
<220> 15 <223> Constructo de PI3K quinasa
<400> 12
<210> 13
<211> 966
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Constructo de PI3K quinasa
<400> 13
<210> 14
<211> 45
<212> ADN 5 <213> Artificial
<220>
<223> Cebador para PCR
<400> 14
tcctcctcct cctcctcctg gtttaatgct gttcatacgt ttgtc 45 10 <210> 15
<211> 26
<212> ADN
<213> Artificial
<220>
<223> Cebador para PCR
<400> 15 atgccccctg gggtggactg ccccat 26
<210> 16
<211> 26
<212> ADN
<213> Artificial
<220>
<223> Cebador para PCR
<400> 16 ctactgcctg ttgtctttgg acacgt 26
<210> 17
<211> 53
<212> ADN
<213> Artificial
<220>
<223> Cebador para PCR
<400> 17 attaaaccag gaggaggagg aggaggaccc cctggggtgg actgccccat gga 53
<210> 18
<211> 56
<212> ADN
<213> Artificial
<220>
<223> Cebador para PCR
<400> 18 agctccgtga tggtgatggt gatgtgctcc ctgcctgttg tctttggaca cgttgt 56
<210> 19
<211> 60
<212> ADN
<213> Artificial
<220>
<223> Cebador para PCR <400> 19 gggaccactt tgtacaagaa agctgggttt aagctccgtg atggtgatgg tgagtgctcc 60
<210> 20
<211> 1169
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Constructo de PI3K quinasa
<400> 20

Claims (14)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto de fórmula I
    en donde,
    5 A es un anillo arilo no sustituido o sustituido o un anillo heterocíclico sustituido fusionado al resto de la molécula en las posiciones indicadas por el símbolo *; X-Y es (CH2)r o O(CH2)t o (CH2)tO en donde, r es 1, 2 o 3; t es 1 o 2;
    10 n es 0, 1 o 2; q es 0, 1, 2, 3 o 4; R1 representa, en cada aparición, halo; hidroxi;
    15 arilo no sustituido o sustituido; amino no sustituido o sustituido; alquilo C1-C7 no sustituido; C1-C7-alquiloel cual es sustituido una o más veces por hidroxi, C1-C7-alcoxi, amino no sustituido o sustituido, arilo o
    heterociclilo, y en donde arilo puede ser mono o polisustituido por halo; o 20 Dos sustituyentes R1 sustituyentes forman juntos un alcanodiilo para formar una unidad estructural cíclica, sustitutida opcionalmente por hidroxi o halo, o una sal de los mismos.
  2. 2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde El anillo A es sustituido por uno, dos o tres grupos R2, seleccionado independientemente en cada aparición de, C1-C7-alquilo no sustituido o sustituido;
    25 amino no sustituido o sustituido; C3-C7-cicloalquilo no sustituido o sustituido,
    o una sal de los mismos.
  3. 3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2, en donde
    R2 es seleccionado de alquilo C1-C7 no sustituido; di(C1-C7-alquil)amino; C1-C7-alquilo sustituido una o más veces por C3-C7-cicloalquilo o halo; C3-C7-cicloalquilo no sustituido; C1-C7-cicloalquilo el cual es sustituido una o más veces por halo, (halo-C1-C7-alquil) o C1-C7-alquilo,
    o una sal de los mismos.
  4. 4.
    Un compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, en donde
    el anillo A es s un anillo de 5 o 6 miembros no sustituido o sustituido que contiene 1 o 2 heteroátomos seleccionados de N, S o O, en donde al menos un heteroátomo es N, o una sal de los mismos.
  5. 5.
    Un compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, en donde
    el anillo A es seleccionado de un anillo piridina no sustituido o sustituido, un anillo pirimidina no sustituido o sustituido o un anillo tiazol no sustituido o sustituido,
    o una sal de los mismos.
  6. 6.
    Un compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, en donde X-Y representa (CH2)r o O(CH2)t en donde r es 2 y t es 1.
  7. 7.
    Un compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, en donde R1 representa, en cada aparición, halo; hidroxi; fenilo no sustituido o sustituido; di(C1-C7-alquil)amino; alquilo C1-C7 no sustituido; C1-C7-alquilo el cual es sustituido una o más veces por hidroxi, C1-C7-alcoxi, di(C1-C7-alquil)amino, di-(perdeuteroC1
    C7-alquil)amino, fenilo, morfolinilo, acetilamino, o N-(C1-C7-alquil)-N-(fenilC1-C7-alquil)amino, y en donde independientemente cada fenilo puede ser mono o polisustituido por halo.
  8. 8.
    Un compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, en donde n es 1 y q es 1.
  9. 9.
    Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, seleccionado de:
    2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h] quinazolin-2-il)-amida]; del ácido (2S,4R)-4-Dimetilamino-pirrolidin1,2-dicarboxílico 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,3S)-3-Metil-pirrolidin-1,2
    dicarboxílico;
    2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] dicarboxílico;
    del ácido (R)-2-Bencil-pirrolidin-1,2
    2-amida
    1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (S)-2-Metil-pirrolidin-1,2
    dicarboxílico;
    2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (R)-2-Metoximetil-pirrolidin-1,2dicarboxílico;
    2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (R)-2-Dimetilaminometil-pirrolidin
    1,2-dicarboxílico; 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido d6-(R)-2-Dimetilaminometil-pirrolidin1,2-dicarboxílico;
    2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (R)-2-Hidroximetil-pirrolidin-1,2
    dicarboxílico; 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (R)-2-Hidroximetil-pirrolidin-1,2dicarboxílico;
    2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (R)-2-{[(3-Fluoro-bencil)-metil
    amino]-metil}-pirrolidin-1,2-dicarboxílico; 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (S)-2-Metil-pirrolidin-1,2dicarboxílico;
    2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (S)-Pirrolidin-1,2-dicarboxílico; 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (S)-Azetidin-1,2-dicarboxílico; 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (S)-Pirrolidin-1,2-dicarboxílico; 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido 5-Metil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico; 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,4R)-4-Fluoro-pirrolidin-1,2
    dicarboxílico;
    2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,4S)-4-Fluoro-pirrolidin-1,2dicarboxílico; 1-amida 2-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (1S,5R)-2-Aza-biciclo[3.1.0]hexano
    1,2-dicarboxílico;
    1-amida 2-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (1S,5R)-2-Azabiciclo[3.1.0]hexano-1,2-dicarboxílico; 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,3R)-3-Metil-pirrolidin-1,2
    dicarboxílico;
    2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,3R)-3-Metil-pirrolidin-1,2dicarboxílico; 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,4S)-4-Dimetilamino-pirrolidin
    1,2-dicarboxílico; 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido 5-Fenil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico; 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido Azetidin-1,2-dicarboxílico; 2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (S)-Azetidin-1 ,2-dicarboxílico; 2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,4S)-4-Hidroxi-pirrolidin-1,2
    dicarboxílico;
    2-amida 1-[(8-dietilamino-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,4R)-4-Hidroxi-pirrolidin-1,2dicarboxílico; 2-amida 1-[(7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida] del ácido (S)-Pirrolidin-1,2-dicarboxílico; 2-amida 1-[(7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida] del ácido (S)-2-Metil-pirrolidin-1,2
    dicarboxílico; 2-amida 1-[(7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida] del ácido (S)-Azetidin-1,2-dicarboxílico;
    2-amida 1-[(7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida] del ácido (2S,4R)-4-Dimetilaminopirrolidin-1,2-dicarboxílico;
    2-amida 1-{[7-(2-fluoro-1,1-dimetil-etil)-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il]-amida} del ácido (S)-Pirrolidin-1,2dicarboxílico;
    2-amida 1-[(7-ciclopropilmetil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida] del ácido (S)-Pirrolidin-1,2dicarboxílico;
    2-amida 1-[(7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida] del ácido (2S,3S)-3-Metil-pirrolidin-1,2dicarboxílico;
    1-amida 2-[(7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida] del ácido (1S,5R)-2-Azabiciclo[3.1.0]hexano-1,2-dicarboxílico;
    2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,3S)-3-(Acetilamino-metil)pirrolidin-1,2-dicarboxílico;
    2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,3S)-3-Morfolin-4-ilmetil-pirrolidin1,2-dicarboxílico;
    2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,3R)-3-Hidroxi-pirrolidin-1,2dicarboxílico;
    2-amida 1-[(7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida] del ácido (2S,3R)-3-Metil-pirrolidin-1,2dicarboxílico;
    2-amida 1-[(8-metil-4H-5-oxa-1-tia-3,7-diaza-ciclopenta[a]naftalen-2-il)-amida] del ácido (2S,3R)-3-Metil-pirrolidin-1,2dicarboxílico;
    2-amida 1-[(7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida] del ácido (2S,3S)-3-Morfolin-4-ilmetilpirrolidin-1,2-dicarboxílico;
    2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,3R)-3-Metoximetil-pirrolidin-1,2dicarboxílico;
    2-amida 1-[(8-tert-butil-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il)-amida] del ácido (2S,3S)-3-Dimetilaminometilpirrolidin-1,2-dicarboxílico;
    2-amida 1-{[8-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il]-amida} del ácido (2S,3R)-3Metil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico;
    2-amida 1-{[8-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-4,5-dihidro-tiazolo[4,5-h]quinazolin-2-il]-amida} del ácido (2S,3R)-3Metoximetil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico;
    2-amida 1-[(8-tert-butil-4H-5-oxa-1-tia-3,7-diaza-ciclopenta[a]naftalen-2-il)-amida] del ácido (2S,3R)-3-Metil-pirrolidin1,2-dicarboxílico;
    2-amida 1-[(8-tert-butil-4H-5-oxa-1-tia-3,7-diaza-ciclopenta[a]naftalen-2-il)-amida] del ácido (2S,3S)-3Dimetilaminometil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico;
    2-amida 1-{(8-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-4H-5-oxa-1-tia-3,7-diaza-ciclopenta[a]naftalen-2-il]-amida} del ácido (2S,3R)-3-Metil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico;
    2-amida 1-{(7-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il]-amida} del ácido (2S,3R)-3Metil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico;
    2-amida 1-{(7-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il]-amida} del ácido (2S,3R)-3Metoximetil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico;
    2-amida 1-[(7-tert-butil-4,5-dihidro-benzo[1,2-d;3,4-d’]bistiazol-2-il)-amida] del ácido (2S,3S)-3-Dimetilaminometilpirrolidin-1,2-dicarboxílico.
  10. 10.
    Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y opcionalmente un agente terapéutico adicional, junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
  11. 11.
    Un compuesto de la fórmula (I), de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento de una enfermedad dependiente de un lípido y/o proteína quinasa.
  12. 12.
    Uso de un compuesto de la fórmula (I), de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una sal
    5 farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de una enfermedad dependiente de lípido y/o proteína quinasa.
  13. 13. Un compuesto para uso de acuerdo con la reivindicación 11 o el uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 12, en donde la enfermedad es una enfermedad dependiente de una quinasa lipídica dependiente de una PI3K de Clase I.
    10 14. Un compuesto para uso de acuerdo con la reivindicación 11 o el uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 12, en donde la enfermedad es una enfermedad dependiente de una quinasa lipídica dependiente de una PI3K de la Clase I seleccionada del grupo consistente de PI3Kalpha, PI3Kbeta, PI3Kdelta, PI3Kgamma.
  14. 15. Un compuesto para uso de acuerdo con la reivindicación 11 o el uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 12, en donde la enfermedad es una enfermedad proliferativa; un tumor benigno o maligno; un cáncer 15 seleccionado de sarcoma; de pulmones; bronquios; próstata; seno (incluyendo cánceres esporádicos de seno y pacientes de enfermedad de Cowden); páncreas; cáncer gastrointestinal; de colon; recto; carcinoma de colon; adenoma colorrectal; tiroides; hígado; ducto biliar intrahepático; hepatocelular; glándula adrenal; estómago; gástrico; glioma; glioblastoma; endométrico; melanoma; riñón; pelvis renal; vejiga urinaria; corpus uterino; cérvix uterina; vagina; ovario; mieloma múltiple; esófago; una leucemia; leucemia mielogenosa aguda; leucemia mielogenosa
    20 crónica; leucemia linfocítica; leucemia mieloide; cerebro; un carcinoma del cerebro; cavidad oral y faringe; laringe; intestino delgado; linfoma no Hodgkin; melanoma; adenoma de colon velloso; una neoplasia; una neoplasia de carácter epitelial; linfomas; un carcinoma mamario; carcinoma de células basales; carcinoma de células escamosas; queratosis actínica; enfermedades tumorales, incluyendo tumores sólidos; un tumor del cuello o cabeza; policitemia vera; trombocitemia esencial; y mielofibrosis con metaplasia mieloide.
ES10729848T 2009-07-02 2010-06-30 2-carboxamida cicloamino ureas útiles como inhibidores de PI3K Active ES2432671T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US27002809P 2009-07-02 2009-07-02
US270028P 2009-07-02
PCT/EP2010/059254 WO2011000855A1 (en) 2009-07-02 2010-06-30 2-carboxamide cycloamino ureas useful as pi3k inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2432671T3 true ES2432671T3 (es) 2013-12-04

Family

ID=42357253

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES10729848T Active ES2432671T3 (es) 2009-07-02 2010-06-30 2-carboxamida cicloamino ureas útiles como inhibidores de PI3K

Country Status (15)

Country Link
US (1) US8357707B2 (es)
EP (1) EP2448946B1 (es)
JP (1) JP2012531454A (es)
KR (1) KR20120046723A (es)
CN (1) CN102471351A (es)
AR (1) AR077366A1 (es)
AU (1) AU2010268058A1 (es)
BR (1) BR112012000035A2 (es)
CA (1) CA2766853A1 (es)
EA (1) EA201200087A1 (es)
ES (1) ES2432671T3 (es)
MX (1) MX2012000178A (es)
TW (1) TW201103944A (es)
UY (1) UY32748A (es)
WO (1) WO2011000855A1 (es)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8293753B2 (en) * 2009-07-02 2012-10-23 Novartis Ag Substituted 2-carboxamide cycloamino ureas
RU2014149145A (ru) 2012-05-23 2016-07-20 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Композиции и способы получения и применения эндодермальных клеток и гепатоцитов
PL3129021T3 (pl) * 2014-04-08 2021-05-31 Incyte Corporation Leczenie nowotworów złośliwych z komórek b za pomocą skojarzenia inhibitora jak i pi3k
KR20170084558A (ko) * 2016-01-12 2017-07-20 삼성전자주식회사 전자 장치 및 그의 동작 방법
CN106946669B (zh) * 2017-03-21 2020-09-15 国家电网公司 一种环保绝缘气体联产工艺及工业化生产装置
CN106986757B (zh) * 2017-04-24 2020-11-24 国家电网公司 一种环保绝缘气体生产工艺及工业生产装置
CN107935884B (zh) * 2017-11-30 2020-06-12 北京宇极科技发展有限公司 全氟腈的制备方法
CN108424375B (zh) * 2018-04-20 2020-06-02 北京宇极科技发展有限公司 全氟腈的制备方法

Family Cites Families (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS57175189A (en) 1981-04-21 1982-10-28 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd Benzothiazole derivative and its preparation
MY156407A (en) 2002-02-28 2016-02-26 Novartis Ag 5-phenylthiazole derivatives and use as p13 kinase inhibitors
US7632858B2 (en) 2002-11-15 2009-12-15 Bristol-Myers Squibb Company Open chain prolyl urea-related modulators of androgen receptor function
GB0305152D0 (en) 2003-03-06 2003-04-09 Novartis Ag Organic compounds
AR044519A1 (es) 2003-05-02 2005-09-14 Novartis Ag Derivados de piridin-tiazol amina y de pirimidin-tiazol amina
GB0315966D0 (en) 2003-07-08 2003-08-13 Cyclacel Ltd Compounds
GB0320197D0 (en) 2003-08-28 2003-10-01 Novartis Ag Organic compounds
RU2006111093A (ru) 2003-09-06 2007-10-27 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед (Us) Модуляторы атр-связывающих кассетных транспортеров
BRPI0506749A (pt) 2004-01-12 2007-05-22 Applied Research Systems derivados de tiazol e uso dos mesmos
GB0415364D0 (en) * 2004-07-09 2004-08-11 Astrazeneca Ab Pyrimidine derivatives
DE102004048877A1 (de) 2004-10-07 2006-04-13 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg PI3-Kinasen
UY29149A1 (es) 2004-10-07 2006-05-31 Boehringer Ingelheim Int Tiazolil-dihidro-indazoles
AU2005293607A1 (en) * 2004-10-07 2006-04-20 Boehringer Ingelheim International Gmbh PI3 kinases
GB0423653D0 (en) * 2004-10-25 2004-11-24 Piramed Ltd Pharmaceutical compounds
SE0402735D0 (sv) 2004-11-09 2004-11-09 Astrazeneca Ab Novel compounds
EP1888546B1 (en) 2005-05-24 2015-07-08 Merck Serono SA Thiazole derivatives and use thereof
DE102005048072A1 (de) 2005-09-24 2007-04-05 Bayer Cropscience Ag Thiazole als Fungizide
CN101331125A (zh) 2005-12-12 2008-12-24 健亚生物科技公司 N-(5-元杂芳香环)-酰胺基抗病毒化合物
ITRM20050166U1 (it) * 2005-12-15 2007-06-16 Salice Arturo Spa Cerniera per mobile.
GB0525671D0 (en) 2005-12-16 2006-01-25 Novartis Ag Organic compounds
US20090029997A1 (en) 2006-01-23 2009-01-29 Laboratoires Serono Sa Thiazole Derivatives and Use Thereof
PE20070978A1 (es) 2006-02-14 2007-11-15 Novartis Ag COMPUESTOS HETEROCICLICOS COMO INHIBIDORES DE FOSFATIDILINOSITOL 3-QUINASAS (PI3Ks)
US20070238746A1 (en) 2006-04-06 2007-10-11 Trixi Brandl Thiazolyl-dihydro-chinazoline
US7517995B2 (en) 2006-04-06 2009-04-14 Boehringer Ingelheim International Gmbh Thiazolyl-dihydro-cyclopentapyrazole
US7691868B2 (en) 2006-04-06 2010-04-06 Boehringer Ingelheim International Gmbh Thiazolyl-dihydro-quinazoline
TW200827368A (en) 2006-11-21 2008-07-01 Genelabs Tech Inc Amido anti-viral compounds
WO2008064054A2 (en) 2006-11-21 2008-05-29 Boehringer Ingelheim International Gmbh Compounds which modulate the cb2 receptor
WO2008124000A2 (en) 2007-04-02 2008-10-16 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Thiazole derivatives as androgen receptor modulator compounds
WO2009003009A1 (en) 2007-06-26 2008-12-31 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Substituted pyrrolidine as anti-infectives
JP2010533680A (ja) * 2007-07-18 2010-10-28 ノバルティス アーゲー 二環ヘテロアリール化合物およびそれらのキナーゼ阻害剤としての使用
PA8809001A1 (es) * 2007-12-20 2009-07-23 Novartis Ag Compuestos organicos
CL2009000780A1 (es) * 2008-03-31 2010-01-15 Genentech Inc Compuestos derivados de heterociclil-pirano-heterociclilo, heterociclil-oxepina-heterociclilo, benzopirano-heterociclilo y benzoxepina-heterociclilo sustituidos; composicion farmaceutica; procedimiento de preparacion de la composicion; kit farmaceutico; y su uso en el tratamiento del cancer, mediado por la inhibicion de pi3k.

Also Published As

Publication number Publication date
AU2010268058A1 (en) 2012-01-19
CN102471351A (zh) 2012-05-23
BR112012000035A2 (pt) 2018-06-19
KR20120046723A (ko) 2012-05-10
TW201103944A (en) 2011-02-01
US20110003786A1 (en) 2011-01-06
US8357707B2 (en) 2013-01-22
WO2011000855A1 (en) 2011-01-06
EA201200087A1 (ru) 2012-07-30
CA2766853A1 (en) 2011-01-06
UY32748A (es) 2011-01-31
EP2448946B1 (en) 2013-07-24
AR077366A1 (es) 2011-08-24
JP2012531454A (ja) 2012-12-10
MX2012000178A (es) 2012-02-28
EP2448946A1 (en) 2012-05-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2432671T3 (es) 2-carboxamida cicloamino ureas útiles como inhibidores de PI3K
ES2437595T3 (es) Derivados de tiazol usados como inhibidores de la PI 3 quinasa
ES2560673T3 (es) Derivados de 1-((5-heteroariltiazol-2-il)aminocarbonil)pirrolidin-2-carboxamida como inhibidores de la fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K) útiles en el tratamiento de enfermedades proliferativas
JP6309505B2 (ja) 複素環式化合物及びその使用
ES2700433T3 (es) Derivados de pirrolo[2,3-d]pirimidina como inhibidores de quinasas Janus
CA2724192C (en) Substituted imidazo- and triazolopyrimidines, imidazo- and pyrazolopyrazines and imidazotriazines as gsk3beta-inhibitors
US20100298286A1 (en) Organic Compounds
KR20160068832A (ko) 헤테로사이클릭 화합물 및 그의 용도
US8293753B2 (en) Substituted 2-carboxamide cycloamino ureas
EP3113780B1 (en) Hiv protease inhibitors
WO2022187693A1 (en) Covalent cdk2-binding compounds for therapeutic purposes
US10745377B2 (en) Piperidine or piperazine linked imidazole and triazole derivatives and methods of use