BRPI0918750B1 - derivado de 2-carboxamida cicloamino ureia, seu uso e sua composição farmacêutica - Google Patents

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Giorgio Caravatti
Robin Alec Fairhust
Pascal Furet
Vito Guagnano
Patricia Imbach
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Novartis Ag
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Abstract

COMPOSTOS ORGÂNICOS, USO DOS MESMOS E COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA. A presente invenção refere-se a um composto da fórmula (I) (I) ou um sal do mesmo, em que os substituintes são como definidos na descrição, às composições e uso dos compostos no tratamento de doenças melhoradas pela inibição da fosfatidilinositol 3-quinase.

Description

[0001] A presente invenção refere-se aos derivados de 2-carboxamida cicloamino ureia específicos, como novos compostos inibidores de fosfatidil-inositol (PI) 3-quinase, alfa-seletivos, seus sais farmaceuticamente aceitáveis, profármacos dos mesmos e processos para sua produção, Esta invenção também refere-se às composições destes compostos, ou sozinhos ou em combinação com pelo menos um agente terapêutico adicional, e opcionalmente em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável, Esta invenção ainda também referese aos métodos de uso destes compostos, ou sozinhos ou em combinação com pelo menos um agente terapêutico adicional, no tratamento de várias doenças, em particular, aquelas mediadas por um ou mais de atividade anormal dos fatores de crescimento, tirosina quinases de receptor, proteína serina/heroína quinases, receptores acoplados à proteína G e fosfolipídeo quinases e fosfatases,
[0002] Fosfatidilinositol 3-quinases (PI3Ks) compreendem uma família das quinases lipídicas que catalisam a transferência de fosfato para a posição D-3’ dos lipídios de inositol para produzir fosfoinositol3-fosfato (PIP), fosfoinositol-3,4-difosfato (PIP2) e fosfoinositol-3,4,5trifosfato (PIP3) que, por sua vez, agem como segundos mensageiros nas cascatas de sinalização atracando as proteínas contendo homologia à pleckstrina, FYVE, Phox e outros domínios de ligação de fosfolipídeo em uma variedade de complexos de sinalização frequentemente na membrana plasmática ((Vanhaesebroeck et al,, Annu. Rev. Biochem 70:535 (2001); Katso et al,, Annu. Rev. Cell Dev. Biol.17:615 (2001)), Da duas PI3Ks da classe 1, as PI3Ks da Classe 1A são heterodímeros compostos de uma subunidade catalítica de p110 (isoformas α, β, δ) constitutivamente associadas a uma subunidade regula dora que pode ser p85α, p55a, p50a, p85β ou p55y. A subclasse da Classe 1B tem um membro da família, um heterodímero composto de uma subunidade catalítica de p110y associada com uma das duas subunidades reguladoras, p101 ou p84 (Fruman et al., Annu Rev. Biochem. 67:481 (1998); Suire et al., Curr. Biol. 15:566 (2005)). Os domínios modulares das subunidades p85/55/50 incluem os domínios de Homologia de Src (SH2) que ligam os resíduos de fosfotirosina em um contexto de sequência específico no receptor ativado e tirosina quinases citoplásmicas, resultando na ativação e localização das PI3Ks da Classe 1A. PI3K da Classe 1B é ativada diretamente pelos receptores acoplados à proteína G que ligam um repertório diverso de ligantes peptídicos e não peptídicos (Stephens et al., Cell89:105 (1997)); Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol.17:615-675 (2001)). Por conseguinte, os produtos de fosfolipídeo resultantes de PI3K da classe I ligam a montante receptores com atividades celulares a jusante incluindo proliferação, sobrevivência, quimiotaxia, tráfego celular, motilidade, metabolismo, respostas inflamatórias e alérgicas, transcrição e tradução (Cantley et al., Cell64:281 (1991); Escobedo e Williams, Nature 335:85 (1988); Fantl et al., Cell69:413 (1992)).
[0003] Em muitos casos, PIP2 e PIP3 recrutam Akt, o produto do homólogo humano do oncogene viral v-Akt de, para a membrana plasmática onde atua como um ponto nodal para muitas vias de sinalização intracelular importantes para crescimento e sobrevivência (Fantl et al., Cell69:413-423 (1992); Bader et al., Nature Rev. Cancer5:921 (2005); Vivanco e Sawyer, Nature Rev. Cancer 2:489 (2002)). Regulação aberrante de PI3K, que frequentemente aumenta a sobrevivência através da ativação de Akt, é um dos eventos mais prevalecentes em câncer humano e foi mostrado ocorrer em níveis múltiplos. O gene supressor do tumor PTEN, que desfosforila os fosfoinositídeos na posição 3’ do anel de inositol e assim fazendo antagoniza a atividade de PI3K, é funcionalmente deletado em uma variedade de tumores. Em outros tumores, os genes para a isoforma p110α, PIK3CA, e para Akt são amplificados e expressão de proteína aumentada de seus produtos gênicos foi demonstrada em vários cânceres humanos. Além disso, mutações e translocação de p85α que servem para suprarregular o complexo de p85-p110 foram descritas em cânceres humanos. Por fim, mutações silenciosas (missense) somáticas em PIK3CA que ativam as vias de sinalização a jusante foram descritas em frequências significativas em uma ampla diversidade de cânceres humanos (Kang a el., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 102:802 (2005); Samuels et al., Science 304:554 (2004); Samuels et al., Cancer Cell7:561-573 (2005)). Estas observações mostram que desregulação da fosfoinositol-3 quinase e os componentes a montante e a jusante desta via de sinalização é uma das desregulações mais comuns associadas aos cânceres e doenças proliferativas em seres humanos (Parsons et al., Nature 436:792 (2005); Hennessey a el., Nature Rev. Drug Disc. 4:988-1004 (2005)).
[0004] Em vista do acima, inibidores de PI3K alfa seriam de valor particular no tratamento de doença proliferativa e outros distúrbios.
[0005] W02004/096797 revela certos derivados de tiazol como inibidores de PI3K gama e seu uso farmacêutico, particularmente para o tratamento de condições inflamatórias e alérgicas.
[0006] W0 2005/021519 também revela certos derivados de tiazol como inibidores de PI3K gama e seu uso farmacêutico, particularmente para o tratamento de condições inflamatórias e alérgicas.
[0007] W0 2006/051270 também revela certos derivados de tiazol como inibidores de PI3K alfa e seu uso farmacêutico, particularmente devido à atividade antitumoral.
[0008] W0 2007/129044 também revela certos derivados de tiazol como inibidores de PI3K alfa e seu uso farmacêutico, particularmente devido à atividade antitumoral.
[0009] Em vista da técnica anterior, há uma necessidade de prover mais compostos adequados para tratamento de doenças proliferativas, particularmente prover compostos tendo seletividade melhorada e/ou atividade mais alta / melhorada.
[0010] Descobriu-se agora que os derivados de 2-carboxamida cicloamino ureia da fórmula (I) dada abaixo têm propriedades farmacológicas vantajosas e inibem, por exemplo, PI3K (fosfatidilinositol 3quinase). Em particular, estes compostos preferivelmente mostram uma seletividade melhorada para PI3K alfa com respeito aos subtipos beta e/ou, delta e/ou gama. Consequentemente, os compostos da fórmula I são adequados, por exemplo, para serem usados no tratamento de doenças dependentes das PI3 quinases (em particular PI3K alfa, tais como aquelas mostrando supraexpressão ou amplificação de PI3K alfa, mutação somática de PIK3CA ou mutações da linhagem germinal ou mutação somática de PTEN ou mutações e translocação de p85a que servem para suprarregular o complexo de p85-p110), especialmente doenças proliferativas tais como doenças tumorais e leucemias.
[0011] Ainda, estes compostos preferivelmente mostram estabilidade metabólica melhorada e consequentemente liberação reduzida, conduzindo a perfis farmacocinéticos melhorados.
[0012] Em um primeiro aspecto, a presente invenção fornece compostos da fórmula (I)
Figure img0001
ou um sal do mesmo, em que
[0013] A representa heteroarila;
[0014] R1 representa (1) alquila opcionalmente substituída; (2) cicloalquila opcionalmente substituída; (3) arila opcionalmente substituída; (4) amina opcionalmente substituída; (5) sulfonila opcionalmente substituída; (6) halo;
[0015] R2 representa hidrogênio, deutério ou um substituinte como definido para R1;
[0016] R3 representa hidrogênio, halo, alquila opcionalmente substituída;
[0017] com a exceção de 1-({5-[2-(terc-butil)-pirimidin-4-il]-4-metiltiazol-2-il}-amida) de 2-amida de ácido (S)-pirrolidino-1,2-dicarboxílico.
[0018] A invenção pode ser apreciada mais completamente em referência à descrição seguinte, incluindo o glossário de termos seguinte e os exemplos finais. Para fins de brevidade, as revelações das publicações citadas neste relatório descritivo são aqui incorporadas por referência. Como aqui usado, os termos "incluindo", "contendo" e "compreendendo" são aqui usados em seu sentido aberto, não limitativo.
[0019] Qualquer fórmula dada aqui é intencionada representar compostos tendo as estruturas descritas pela fórmula estrutural como também certas variações ou formas. Em particular, os compostos de qualquer fórmula dada aqui podem ter centros assimétricos e, portanto, podem existir em formas enantioméricas diferentes. Se pelo menos um átomo de carbono assimétrico estiver presente em um composto da fórmula (I), um tal composto pode existir na forma opticamente ativa ou na forma de uma mistura de isômeros ópticos, por exemplo, na forma de uma mistura racêmica. Todos os isômeros ópticos e suas misturas, incluindo as misturas racêmicas, fazem parte da presente invenção. Desse modo, qualquer fórmula dada aqui é intencionada representar um racemato, uma ou mais formas enantioméricas, uma ou mais formas diastereoméricas, uma ou mais formas atropisoméricas, e misturas das mesmas. Além disso, certas estruturas podem existir como isômeros geométricos (isto é, isômeros cis e trans), como tautômeros, ou como atropisômeros.
[0020] Qualquer fórmula dada aqui é intencionada representar hidratos, solvatos, e polimorfos de tais compostos, e misturas dos mesmos.
[0021] Qualquer fórmula dada aqui é também intencionada representar formas não marcadas como também formas isotopicamente marcadas dos compostos. Compostos isotopicamente marcados têm as estruturas descritas pelas fórmulas dadas aqui exceto que um ou mais átomos são substituídos por um átomo tendo uma massa atômica ou número de massa selecionado. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos da invenção incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforos, flúor, e cloro, tais como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl, 125l, respectivamente. A invenção inclui vários compostos isotopicamente marcados como definidos aqui, por exemplo aqueles aos quais isótopos radioativos, tais como 3H, 13C, e 14C, estão presentes. Tais compostos de isotopicamente marcados são úteis em estudos metabólicos (preferivelmente com 14C), estudos cinéticos de reação (com, por exemplo 2H ou 3H), técnicas de detecção ou imageamento, tais como tomografia de emissão de positron (PET) ou tomografia computadorizada de emissão de fótons simples (SPECT) incluindo ensaios de distribuição de tecido de fármaco ou substrato, ou em tratamento radioativo de pacientes. Em particular, um composto marcado com 18F pode ser particularmente preferido para estudos de PET ou SPECT. Compostos isotopicamente marcados desta invenção e profármacos dos mesmos podem ser em geral preparados levando a cabo os procedimentos revelados nos esquemas ou nos exemplos e preparações descritas abaixo substituindo um reagente isotopicamente marcado facilmente disponível por um reagente não isotopicamente marcado.
[0022] Ainda, substituição com isótopos mais pesados, particularmente deutério (isto é, 2H ou D) pode para fornecer certas vantagens terapêuticas resultantes de maior estabilidade metabólica, por exemplo meia-vida in vivo aumentada ou requerimentos de dosagem reduzidos ou uma melhoria no índice terapêutico. É entendido que deutério neste contexto é considerado como um substituinte de um composto da fórmula (I). A concentração de um tal isótopo mais pesado, especificamente deutério, pode ser definida pelo fator de enriquecimento isotópico. O termo "fator de enriquecimento isotópico" como aqui usado significa a razão entre a abundância isotópica e a abundância natural de um isótopo especificado. Se um substituinte em um composto desta invenção for denotado deutério, tal composto tem um fator de enriquecimento isotópico para cada átomo de deutério designado de pelo menos 3500 (52,5% de incorporação de deutério em cada átomo de deutério designado), pelo menos 4000 (60% de incorporação de deutério), pelo menos 4500 (67,5% de incorporação de deutério), pelo menos 5000 (75% de incorporação de deutério), pelo menos 5500 (82,5% de incorporação de deutério), pelo menos 6000 (90% de incorporação de deutério), pelo menos 6333,3 (95% de incorporação de deutério), pelo menos 6466,7 (97% de incorporação de deutério), pelo menos 6600 (99% de incorporação de deutério), ou pelo menos 6633,3 (99,5% de incorporação de deutério). Nos compostos desta invenção qualquer átomo não especificamente designado como um isótopo particular é significado representar qualquer isótopo estável daquele átomo. A menos que do contrário declarado, quando uma posição for especificamente designada como "H" ou "hidrogênio", a posição é entendida ter hidrogênio em sua composição isotópica de abundância natural. Consequentemente, nos compostos desta invenção qualquer átomo especificamente designado como um deutério (D) é significado representar deutério, por exemplo nas faixas dadas acima.
[0023] Quando referir-se a qualquer fórmula dada aqui, a seleção de um radical particular de uma lista de possíveis espécies para uma variável especificada não intencionada a definir o radical para a variável aparecendo em outro lugar. Em outras palavras, onde uma variável aparecer mais de uma vez, a escolha das espécies de uma lista especificada é independente da escolha das espécies para a mesma variável em outro lugar na fórmula (onde uma ou mais até todas as expressões mais gerais nas modalidades caracterizadas como preferidas acima ou abaixo podem ser substituídas com uma definição mais específica, desse modo conduzindo a uma modalidade mais preferida da invenção, respectivamente).
[0024] Onde a forma plural (por exemplo compostos, sais) for usada, esta inclui o singular (por exemplo um só composto, um só sal). "Um composto" não exclui que (por exemplo em uma formulação farmacêutica) mais de um composto da fórmula (I) (ou um sal do mesmo) estejam presentes.
[0025] As definições gerais seguintes aplicar-se-ão neste relatório descritivo, a menos que do contrário especificado:
[0026] HALOGÊNIO (ou halo) denota flúor, bromo, cloro ou iodo, em particular flúor, cloro. Grupos substituídos com halogênio e radicais, tais como alquila substituída por halogênio (haloalquila) podem ser mono, poli ou per-halogenados.
[0027] HETEROÁTOMOS são átomos diferentes de Carbono e Hidrogênio, preferivelmente nitrogênio (N), oxigênio (O) ou enxofre (S), em particular nitrogênio.
[0028] GRUPOS CONTENDO CARBONO, radicais ou moléculas contém 1 a 7, preferivelmente 1 a 6, mais preferivelmente 1 a 4, o mais preferivelmente 1 ou 2, átomos de carbono. Qualquer grupo contendo carbono não-cíclico ou radical com mais de 1 átomo de carbono é de cadeia reta ou ramificada.
[0029] Os prefixos "INFERIOR" ou "C1-C7" denotam um radical tendo até e incluindo um máximo de 7, especialmente até e incluindo um máximo de 4 átomos de carbono, os radicais em questão sendo ou lineares ou ramificados com ramificação simples ou múltipla.
[0030] "ALQUILA"refere-se a um grupo alquila de cadeia reta ou de cadeia ramificada, preferivelmente representa uma Ci-i2alquila de cadeia reta ou cadeia ramificada, particularmente de preferência representa uma Ci-7alquila de cadeia reta ou cadeia ramificada; por exemplo, metila, etila, n ou iso-propila, n-, iso-, secou terc-butila, npentila, n-hexila, n-heptila, n-octila, n-nonila, n-decila, n-undecila, ndodecila, com preferência particular dada a metila, etila, n-propila, isopropila e n-butila e iso-butila. Alquila pode ser não substituída ou substituída. Substituintes exemplares incluem, mas não são limitados a deutério, hidróxi, alcóxi, halo e amino. Um exemplo de uma alquila substituída é trifluorometila. Cicloalquila pode também ser um substituinte para alquila. Um exemplo de um tal caso é o radical(alquil)-ciclopropila ou alcandiil-ciclopropila, por exemplo -CH2-ciclopropila. C1-C7alquila é preferivelmente alquila com de e incluindo 1 até e incluindo 7, preferivelmente de e incluindo 1 a e incluindo 4, e é linear ou ramificada; preferivelmente, alquila inferior é butila, tal como n-butila, secbutila, isobutila, terc-butila, propila, tal como n-propila ou isopropila, etila ou preferivelmente metila.
[0031] Cada parte da alquila de outros grupos como "alcóxi", "alcoxialquila", "alcoxicarbonila", "alcóxi-carbonilalquila", "alquilsulfonila", "alquilsulfoxila", "alquilamino", "haloalquila" terá o mesmo significado que descrito na definição supracitada de "alquila".
[0032] "ALCANDIILA" refere-se a um grupo alcandiila de cadeia reta ou de cadeia ramificada ligado por dois átomos de Carbono diferentes ao radical, preferivelmente representa uma C1-12 alcandiila de cadeia reta ou cadeia ramificada, particularmente de preferência representa uma C1-6 alcandiila de cadeia reta ou cadeia ramificada; por exemplo, metandiila (-CH2-), 1,2-etanodiila (-CH2-CH2-), 1,1-etanodiila ((-CH'CHs)-), 1,1-, 1,2-, 1,3-propanodiila e 1,1-, 1,2-, 1,3-, 1,4-butanodiila, com preferência particular dada a metandiila, 1,1-etanodiila, 1,2etanodiila, 1,3-propanodiila, 1,4-butanodiila,
[0033] "ALQUENDIILA" refere-se a um grupo alquendiila de cadeia reta ou cadeia ramificada ligado por dois átomos de Carbono diferentes à molécula, preferivelmente representa uma C2-6 alcandiila de cadeia reta ou cadeia ramificada; por exemplo, -CH=CH-, -CH=C(CH3)-, -CH=CH-CH2-, -C(CH3)= CH-CH2-, -CH=C(CH3)-CH2-, -CH=CH-C (CH3) H-, -CH=CH-CH=CH-, -C (CH3)=CH-CH=CH-, -CH=C(CH3)-CH=CH-, com preferência particular dada a -CH=CH-CH2-, -CH=CH-CH= CH-. Alquendiila pode ser substituída ou não substituída.
[0034] "CICLOALQUILA" refere-se a um carbociclo saturado ou parcialmente saturado, monocíclico, fundido policíclico, ou Espiro policíclico, tendo de 3 a 12 átomos no anel por carbociclo. Exemplos ilustrativos de grupos cicloalquila incluem os seguintes radicais: ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila e cicloexila. Cicloalquila pode ser não substituída ou substituída; substituintes exemplares são fornecidos na definição para alquila e também incluem alquila em si (por exemplo metila). Um radical como -(CH3)ciclopropila é considerado cicloalquila substituída.
[0035] "ARILA" refere-se a um sistema de anel homocíclico aromático (isto é, apenas Carbono como os átomos formadores do anel) com 6 ou mais átomos de carbono; arila é preferivelmente um radical aromático com ? a 14 átomos de carbono no anel, mais preferivelmente com 6 a 10 átomos de carbono no anel, tal como fenila ou naftila, preferivelmente fenila. Arila pode ser não substituída ou substituída por um ou mais, preferivelmente até três, mais preferivelmente até dois substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste em heterociclila não substituída ou substituída como descrito abaixo, especialmente pirrolidinila, tal como pirrolidino, oxopirrolidinila, tal como oxopirrolidino, Ci-C7-alquil-pirrolidinila, 2,5-di-(Ci-C7alquil) pirrolidinila, tal como 2,5-di-(Ci-C7alquil)-pirrolidino, tetra-hidrofuranila, tiofenila, Ci-C7-alquilpirazolidinila, piridinila, Ci-C7-alquilpiperidinila, piperidino, piperidino substituído por amino ou N-monoou N,N-di-[alquila inferior, fenila, Ci-C7-alcanoíla e/ou fenil-alquila inferior)-amino, piperidinila não substituída ou substituída com N-alquila inferior ligada por meio de um átomo de carbono no anel, piperazino, alquila inferiorpiperazino, morfolino, tiomorfolino, S-oxo-tiomorfolino ou S,S-dioxotiomorfolino; Ci-C7-alquila, amino-Ci-C7-alquila, N-Ci-C7-alcanoilaminoCi-C7-alquila, N-Ci-C7-alcanossulfonil-amino-Ci-C7-alquila, carbamoilCi-C7-alquila, [N-monoou N,N-di-(Ci-C7-alquil)-carbamoil]-Ci-C7-alquila, Ci-C7-alcanossulfinil-Ci-C7-alquila, Ci-C7-alcanossulfonil-Ci-C7alquila, fenila, naftila, monoa tri-[Ci-C7-alquila, halo e/ou ciano]-fenila ou mono a tri-[Ci-C7-alquila, halo e/ou ciano]-naftila; Cs-Cs-cicloalquila, mono a tri-[Ci-C7-alquila e/ou hidróxi]-C3-Cs-cicloalquila; halo, hidróxi, alcóxi inferior, alcóxi inferior-alcóxi inferior, (alcóxi inferior)-alcóxi inferior-alcóxi inferior, halo-Ci-C7-alcóxi, fenóxi, naftilóxi, fenilou naftil-alcóxi inferior; amino-Ci-C7-alcóxi, alcanoilóxi inferior, benzoilóxi, naftoilóxi, formila (CHO), amino, N-mono ou N,N-di-(Ci-C7-alquil)-amino, CiC7-alcanoilamino, Ci-C7-alcanossulfonilamino, carbóxi, alcóxi inferiorcarbonila, por exemplo; fenilou naftil-alcóxi inferior-carbonila, tal como benziloxicarbonila; Ci-C7-alcanoíla, tal como acetila, benzoíla, naftoíla, carbamoíla, carbamoíla N-mono ou N,N-dissubstituída, tal como carbamoíla N-monoou N,N-di-substituída em que os substituintes são selecionados de alquila inferior, (alcóxi inferior)-alquila inferior e hidróxi-alquila inferior; amidino, guanidino, ureído, mercapto, alquiltio inferior, fenilou naftiltio, fenilou naftil-alquila inferior-tio, alquila inferiorfeniltio, alquila inferior-naftiltio, halo-alquila inferior-mercapto, sulfo (SO3H), alcanossulfonila inferior, fenilou naftil-sulfonila, fenilou naftilalquila inferior-sulfonila, alquilfenilsulfonila, halo-alquila inferiorsulfonila, tal como trifluorometanossulfonila; sulfonamido, benzossulfonamido, azido, azido-Ci-C7-alquila, especialmente azidometila, C1-C7alcanossulfonila, sulfamoila, N-monoou N,N-di-(Ci-C7-alquil)-sulfamoila, morfolinossulfonila, tiomorfolinossulfonila, ciano e nitro; onde cada fenila ou naftila (também em fenóxi ou naftóxi) mencionadas acima como substituinte ou parte de um substituinte de alquila substituida (ou também de arila substituida, heterociclila etc, mencionadas aqui) é por si só não substituida ou substituida por um ou mais, por exemplo até três, preferivelmente 1 ou 2, substituintes independentemente selecionados de halo, halo-alquila inferior, tal como trifluorometila, hidróxi, alcóxi inferior, azido, amino, N-monoou N,N-di-(alquila inferior e/ou Ci-C7-alcanoil)-amino, nitro, carbóxi, alcóxi inferior-carbonila, carbamoila, ciano e/ou sulfamoila,
[0036] "HETEROCICLILA"refere-se a um radical heterociclico que é insaturado (= carregando o mais alto número possivel de ligações duplas conjugadas no(s) anel(eis), saturado ou parcialmente saturado e é preferivelmente um monociclico ou em um aspecto mais vasto da invenção anel biciclico, triciclico ou espirociclico; e tem 3 a 24, mais preferivelmente 4 a 16, o mais preferivelmente 5 a 10 e o mais preferivelmente 5 ou 6 átomos no anel; em que um ou mais, preferivelmente um a quatro, especialmente um ou dois átomos no anel são um heteroátomo (os átomos restantes do anel sendo portanto carbono), O anel de ligação (isto é, o anel que conecta à molécula) preferivelmente tem 4 a 12, especialmente 5 a 7 átomos no anel, O termo heterociclila também inclui heteroarila, O radical heterociclico (heterociclila) pode ser não substituido ou substituido por um ou mais, especialmente 1 a 3, substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste nos substituintes definidos acima para alquila substituída e / ou de um ou mais dos substituintes seguintes: oxo (=0), tiocarbonila (=S), imino (=NH), imino-alquila inferior, Ainda, heterociclila é especialmente um radical de heterociclila selecionado do grupo que consiste em oxiranila, azirinila, aziridinila, 1,2-oxatiolanila, tienila (= tiofenila), furanila, tetraidrofurila, piranila, tiopiranila, tiantrenila, isobenzofuranila, benzofuranila, cromenila, 2H-pirrolila, pirrolila, pirrolinila, pirrolidinila, imidazolila, imidazolidinila, benzimidazolila, pirazolila, pirazinila, pirazolidinila, tiazolila, isotiazolila, ditiazolila, oxazolila, isoxazolila, piridila, pirazinila, pirimidinila, piperidinila, piperazinila, piridazinila, morfolinila, tiomorfolinila, (S-oxo ou S,S-dioxo)-tiomorfolinila, indolizinila, azepanila, diazepanila, especialmente 1,4-diazepanila, isoindolila, 3H-indolila, indolila, benzimidazolila, cumarila, indazolila, triazolila, tetrazolila, purinila, 4H-quinolizinila, isoquinolila, quinolila, tetraidroquinolila, tetrahidroisoquinolila, deca-hidroquinolila, octa-hidroisoquinolila, benzofuranila, dibenzofuranila, benzotiofenila, dibenzotiofenila, ftalazinila, naftiridinila, quinoxalila, quinazolinila, quinazolinila, cinolinila, pteridinila, carbazolila, beta-carbolinila, fenantridinila, acridinila, perimidinila, fenantrolinila, furazanila, fenazinila, fenotiazinila, fenoxazinila, cromenila, isocromanila, cromanila, benzo[1,3]dioxol-5-ila e 2,3-diidro-benzo[1,4] dioxin-6-ila, cada um destes radicais sendo não substituídos ou substituídos por um ou mais, preferivelmente até três, substituintes selecionados daqueles mencionados acima para arila substituída e/ou de um ou mais dos seguintes substituintes: oxo (= 0), tiocarbonila (= S), imino (=NH), imino-alquila inferior,
[0037] "ARILALQUILA" refere-se a um grupo arila ligado à molécula por meio de um grupo alquila, tal como um grupo metila ou etila, preferivelmente fenetila ou benzila, em particular benzila, Similarmente, cicloalquil-alquila e heterociclil-alquila representa um grupo cicloalquila ligado à molécula por meio de um grupo alquila ou um grupo heterociclila ligado à molécula por meio de um grupo alquila. Em cada circunstância, arila, heterociclila, cicloalquila e alquila podem ser substituídas como definidas acima.
[0038] "TRATAMENTO" inclui tratamento profiláctico (preventivo) e terapêutico como também o retardo da progressão de uma doença ou distúrbio.
[0039] "DOENÇAS MEDIADAS POR PI3 QUINASE" (especialmente doenças mediadas por PI3K alfa ou doenças mediadas por supraexpressão ou amplificação PI3K alfa, mutação somática de PIK3CA ou mutações de linhagem germinal ou mutação somática de PTEN ou mutações e translocação de p85a que servem para suprarregular o complexo de p85-p110), são especialmente tais distúrbios que respondem de um modo benéfico (por exemplo melhora de um ou mais sintomas, retardo do princípio de uma doença, até cura temporária ou completa de uma doença) à inibição de uma PI3 quinase, especialmente inibição de PI3Kalfa ou uma forma mutante da mesma (onde entre as doenças a ser tratadas, doenças proliferativas tais como doenças tumorais e leucemias podem ser especialmente mencionadas).
[0040] "SAIS" (os quais, o que é significado por "ou sais dos mesmos" ou "ou um sal dos mesmos"), podem estar presentes sozinhos ou em mistura com o composto livre da fórmula (I) e são preferivelmente sais farmaceuticamente aceitáveis. Tais sais são formados, por exemplo, como sais de adição de ácido, preferivelmente com ácidos orgânicos ou inorgânicos, dos compostos da fórmula (I) com um átomo de nitrogênio básico, especialmente os sais farmaceuticamente aceitáveis. Ácidos inorgânicos adequados são, por exemplo, ácidos de halogênio, tal como ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ou ácido fosfórico. Ácidos orgânicos adequados são, por exemplo, ácidos carboxílicos ou ácidos sulfônicos, tais como ácido fumárico ou ácido metanossulfônico. Para propósitos de isolamento ou purificação é também possível usar sais farmaceuticamente inaceitáveis, por exemplo picratos ou percloratos. Para uso terapêutico, apenas sais farmaceuticamente aceitáveis ou compostos livres são empregados (onde aplicável na forma de preparações farmacêuticas), e estes são, portanto, preferidos. Em vista da relação íntima entre os compostos novos em forma livre e aqueles na forma de seus sais, incluindo aqueles sais que podem ser usados como intermediários, por exemplo na purificação ou identificação dos compostos novos, qualquer referência aos compostos livres será entendida anteriormente e doravante como referindo também aos sais correspondentes, quando apropriado e conveniente. Os sais dos compostos da fórmula (I) são preferivelmente sais farmaceuticamente aceitáveis; contraíons adequados que formam sais farmaceuticamente aceitáveis são conhecidos no campo.
[0041] "COMBINAÇÃO" refere-se a uma combinação fixa em uma forma de unidade de dosagem, ou um kit de partes para a administração combinada onde um composto da fórmula (I) e um par de combinação (por exemplo outro fármaco como explicado abaixo, também referido como "agente terapêutico" ou "coagente") pode ser administrado independentemente ao mesmo tempo ou separadamente dentro de intervalos de tempo, especialmente onde estes intervalos de tempo permitem que os pares de combinação mostrem um efeito cooperativa, por exemplo, sinergístico. Os termos "coadministração" ou "administração combinada" ou outros como utilizados aqui são significados abranger administração do par de combinação selecionado a um único sujeito em necessidade do mesmo (por exemplo um paciente), e é intencionado que incluem regimes de tratamento em que os agentes não necessariamente são administrados pela mesma rota de administração ou ao mesmo tempo. O termo "combinação farmacêutica" como aqui usado significa um produto resultante da mistura ou combinação de mais de um ingrediente ativo e inclui combinações fixas e não-fixas dos ingredientes ativos. O termo "combinação fixa" significa que os ingredientes ativos, por exemplo um composto da fórmula (I) e um par de combinação, são ambos administrados simultaneamente a um paciente na forma de uma entidade ou dosagem única. O termo "combinação não fixa" significa que os ingredientes ativos, por exemplo um composto da fórmula (I) e um par de combinação, são ambos administrados simultaneamente a um paciente como entidades separadas ou simultaneamente ou sequencialmente sem prazos específicos, em que tal administração fornece níveis terapeuticamente efetivos dos dois compostos no corpo do paciente. O último também se aplica à terapia de coquetel, por exemplo a administração de três ou mais ingredientes ativos.
[0042] Em modalidades preferidas, que são preferidas independente, coletivamente ou em qualquer combinação ou subcombinação, a invenção diz respeito a um composto da fórmula (I), em forma de base livre ou em forma de sal de adição de ácido, em que os substituintes são como definidos aqui.
[0043] Em uma modalidade vantajosa, a invenção diz respeito a um composto da fórmula IA
Figure img0002
em que os substituintes são como definidos para um composto da fórmula (I).
[0044] Em uma outra modalidade vantajosa, a invenção diz respeito a um composto da fórmula IB
Figure img0003
em que os substituintes são como definidos para um composto da fórmula (I).
[0045] Desse modo, um composto da fórmula (I) também inclui compostos da fórmula (IA) e (IB). No contexto desta invenção, as definições a seguir são também aplicáveis.
[0046] A preferivelmente representa heteroarila com um ou dois átomos de nitrogênio e 5 a 10 átomos formadores do anel.
[0047] A particularmente de preferência representa uma heteroarila selecionada do grupo que consiste em:
Figure img0004
[0048] A muito particularmente de preferência representa uma heteroarila selecionada do grupo que consiste em:
Figure img0005
[0049] A o mais preferivelmente representa uma heteroarila selecionada do grupo que consiste em:
Figure img0006
[0050] R1 preferivelmente representa um dos substituintes a seguir:
[0051] Ci-C7-alquila não substituída ou substituída, preferivelmente substituída, em que os ditos substituintes são independentemente selecionados de uma ou mais, preferivelmente um a nove dos radicais seguintes: deutério, halo, ciano, Cs-Ci2-cicloalquila, Ci-C7-alquilamino, di(Ci-C7-alquil) amino, Ci-C7-alquilaminocarbonila, di(Ci-C7-alquil)aminocarbonila, Ci-C7-alcóxi, fenila (que é não substituída ou substituída por um ou mais, preferivelmente uma Ci-C7-alquila, Ci-C7-alcóxi, di(CiC7-alquil)amino-Ci-C7-alcóxi), fenóxi, (que é não substituído ou substituído por um ou mais, preferivelmente uma Ci-C7-alquila, Ci-C7-alcóxi, di(Ci-C7-alquil)amino-Ci-C7-alcóxi)>
[0052] Cs-Ci2-cicloalquila não substituída ou substituída em que os ditos substituintes são independentemente selecionados de uma ou mais, preferivelmente um a quatro dos radicais seguintes: deutério, halo, ciano, Ci-C7-alquila, Ci-C7-alquilamino, di(Ci-C7-alquil)amino, aminocarbonila, Ci-C7-alquilaminocarbonila, di(Ci-C7-alquil)aminocarbonila, Ci-C7-alcóxi, fenila (que é não substituída ou substituída por um ou mais, preferivelmente uma Ci-C7-alquila, Ci-C7-alcóxi, di(Ci-C7alquil)amino-Ci-C7-alcóxi), fenóxi, (que é não substituído ou substituído por um ou mais, preferivelmente uma Ci-C7-alquila, Ci-C7-alcóxi, di(Ci-C7-alquil)amino-Ci-C7-alcóxi)>
[0053] fenila não substituída ou substituída em que os ditos substituintes são independentemente selecionados de um ou mais, preferivelmente um a dois dos radicais seguintes: deutério, halo, ciano, Ci-C7 -alquila, Ci-C7-alquilamino, di(Ci-C7-alquil)amino, Ci-C7-alquilaminocarbonila, di(Ci-C7-alquil)aminocarbonila, Ci-C7-alcóxi;
[0054] amina não substituída, mono ou dissubstituída; em que os ditos substituintes são independentemente selecionados dos radicais seguintes: deutério, Ci-C7-alquila (que é não substituída ou substituída por um ou mais substituintes selecionados do grupo de deutério, flúor, cloro, hidróxi), Ci-C7-alquilcarbonila, fenila (que é não substituída ou substituída por um ou mais, preferivelmente um, Ci-C7-alquila, Ci-Czalcóxi, di(Ci-C7-alquil)amino-Ci-C7-alcóxi), fenilsulfonila (que é não substituída ou substituída por um ou mais, preferivelmente um, C1-C7alquila, Ci-C7-alcóxi, di(Ci-C7-alquil)amino-Ci-C7-alcóxi),
[0055] sulfonila substituída; em que o dito substituinte é selecionado dos radicais seguintes: Ci-C7-alquila (que é não substituída ou substituída por um ou mais substituintes selecionados do grupo de deutério, flúor, cloro, hidróxi), Ci-C7-alquilamino (em que a parte de alquila é não substituída ou substituída por um ou mais substituintes selecionados do grupo de deutério, flúor, cloro, hidroxila) di-Ci-C7alquilamino (em que a parte de alquila é não substituída ou substituída por um ou mais substituintes selecionados do grupo de deutério, flúor, cloro, hidroxila);
[0056] flúor, cloro,
[0057] Ri particularmente de preferência representa um dos substituintes seguintes:
[0058] Ci-C7-alquila não substituída ou substituída, preferivelmente substituída, em que os ditos substituintes são independentemente selecionados de uma ou mais, preferivelmente um a nove dos radicais seguintes: deutério, flúor, ou um a dois dos radicais seguintes: C3-C5cicloalquila;
[0059] C3-C5-cicloalquila opcionalmente substituída em que os ditos substituintes são independentemente selecionados de uma ou mais, preferivelmente um a quatro dos radicais seguintes: deutério, Ci-C4 -alquila (preferivelmente metila), flúor, ciano, aminocarbonila;
[0060] fenila opcionalmente substituída em que os ditos substituintes são independentemente selecionados de um ou mais, preferivelmente um a dois dos radicais seguintes: deutério, halo, ciano, Ci-C7alquila, Ci-C7-alquilamino, di(Ci-C7-alquil)amino, Ci-C7-alquilaminocarbonila, di(Ci-C7-alquil)aminocarbonila, Ci-C7-alcóxi;
[0061] amina opcionalmente mono ou dissubstituída; em que os ditos substituintes são independentemente selecionados dos radicais seguintes: deutério, Ci-C7-alquila (que é não substituída ou substituída por um ou mais substituintes selecionados do grupo de deutério, flúor, cloro, hidróxi), fenilsulfonila (que é não substituída ou substituída por um ou mais, preferivelmente um, Ci-C7-alquila, Ci-C7-alcóxi, di(Ci-@7alquil)amino-Ci-C7-alcóxi),
[0062] sulfonila substituída; em que dito substituinte é selecionado dos radicais seguintes: Ci-C7-alquila (que é não substituída ou substituída por um ou mais substituintes selecionados do grupo de deutério, flúor), pirrolidino, (que é não substituído ou substituído por um ou mais substituintes selecionados do grupo de deutério, hidróxi, oxo; particularmente um oxo),
[0063] flúor, cloro,
[0064] Ri muito particularmente de preferência representa:
[0065] ciclopropilmetila ou C3-C7-alquila substituída, opcionalmente ramificada, em que os ditos substituintes são independentemente selecionados de uma ou mais, preferivelmente um a nove dos radicais seguintes: deutério, flúor;
[0066] ciclopropila ou ciclobutila opcionalmente substituídas em que os ditos substituintes são independentemente selecionados de uma ou mais, preferivelmente um a quatro dos radicias seguintes: metila, deutério, flúor, ciano, aminocarbonila;
[0067] fenila opcionalmente substituída em que os ditos substituintes são independentemente selecionados de um ou mais, preferivelmente um a dois dos radicais seguintes: deutério, halo, ciano, Ci-C7alquila, Ci-C7-alquilamino, di(Ci-C7-alquil)amino, Ci-C7-alquilaminocarbonila, di(Ci-C7-alquil)aminocarbonila, Ci-C7-alcóxi;
[0068] amina opcionalmente mono ou dissubstituída; em que os ditos substituintes são independentemente selecionados dos radicais seguintes: deutério, Ci-C7-alquila (que é não substituída ou substituída por um ou mais substituintes selecionados do grupo de deutério, flúor, cloro, hidróxi), fenilsulfonila (que é não substituída ou substituída por um ou mais, preferivelmente um, Ci-C7-alquila, Ci-C7-alcóxi, di(Ci-C7alquil)amino-Ci-C7-alcóxi),
[0069] sulfonila substituída; em que o dito substituinte é selecionado dos radicais seguintes: Ci-C7-alquila (que é não substituída ou substituída por um ou mais substituintes selecionados do grupo de deutério, flúor), pirrolidino, (que é não substituído ou substituído por um ou mais substituintes selecionados do grupo de deutério, hidróxi, oxo; particularmente um oxo),
[0070] flúor, cloro,
[0071] Ri muito particularmente de preferência representa um dos substituintes seguintes: -C(CH))2CF3, C(CD))3, i-metilciclopropila; preferivelmente no contexto de (l-A) e (l-B),
[0072] R2 preferivelmente representa um substituinte como definido para Ri,
[0073] R2 ainda preferivelmente representa hidrogênio ou deutério,
[0074] R2 particularmente de preferência representa hidrogênio,
[0075] R2 em uma modalidade alternativa representa metila,
[0076] R3 preferivelmente representa (i) hidrogênio, (2) halo, (3) Ci-C7-alquila opcionalmente substituída, em que os ditos substituintes são independentemente selecionados de uma ou mais, preferivelmente um a três dos radicias seguintes: deutério, halo, Ci-C7-alquilamino, di(Ci-C7-alquil) amino,
[0077] R3 particularmente de preferência representa (i) hidrogênio, (2) flúor, cloro, (3) metila opcionalmente substituída, em que os ditos substituintes são independentemente selecionados de uma ou mais, preferivelmente um a três dos radicais seguintes: deutério, flúor, cloro, dimetilamino,
[0078] R3 muito particularmente de preferência representa hidrogênio, metila, CD3, CH2CI, CH2F, CJN'CHaK preferivelmente metila.
[0079] A invenção ainda diz respeito a um composto da fórmula (I) como definido aqui com a exceção de tais compostos onde R1 e / ou R2 representa(m) terc-butila.
[0080] A invenção ainda diz respeito aos profármacos farmaceuticamente aceitáveis de um composto da fórmula (I).
[0081] A invenção ainda diz respeito aos metabólitos farmaceuticamente aceitáveis de um composto da fórmula (I).
[0082] A invenção especialmente diz respeito aos compostos da fórmula (I) dada nos Exemplos, como também os métodos de fabricação descritos nos mesmos.
[0083] A presente invenção também diz respeito aos processos para a produção de um composto da fórmula (I). Em princípio todos os processos conhecidos que convertem duas aminas diferentes em um derivado de ureia correspondente são adequados e podem ser aplicados usando o respectivo material de partida.
[0084] Desse modo, a invenção diz respeito em particular a um processo para fabricação um composto da fórmula (I), que compreende reagir um composto da fórmula (II)
Figure img0007
ou com um composto da fórmula (IIIA)
Figure img0008
em que os substituintes são como definidos aqui e R3 pode adicionalmente representar Cloro, na presença de um agente ativador ("método A"), ou com um composto da fórmula (IIIB)
Figure img0009
em que R1 e R2 são como definidos aqui, R3 é como definido aqui e pode adicionalmente representar Cloro e RG representa um grupo reativo, tal como imidazolilcarbonila que pode reagir diretamente ou por meio da formação do intermediário de isocianato da fórmula (IIIE) ("método B"),
Figure img0010
em que os substituintes são como definidos em (IIIB), em cada caso opcionalmente na presença de um diluente e opcionalmente na presença de um auxiliar de reação e
[0085] restabelecer o composto resultante da fórmula (I) em forma livre ou em forma de um sal e, opcionalmente converter um composto da fórmula (I) obtenível de acordo com o método A ou método B em um composto diferente da fórmula (I), e/ou converter um sal obtenível de um composto da fórmula (I) em um sal diferente do mesmo, e/ou converter um composto livre obtenível da fórmula (I) em um sal do mesmo, e/ou separar um isômero obtenível de um composto da fórmula (I) de um ou mais isômeros obteníveis diferentes da fórmula I,
CONDIÇÕES DA REAÇÀO
[0086] O processo pode ser executado de acordo com os métodos conhecidos na técnica, ou como revelados abaixo nos Exemplos. Por exemplo um composto da fórmula II pode ser reagido com um composto da fórmula III em um solvente, por exemplo dimetilformamida, na presença de uma base por exemplo uma amina orgânica, por exemplo trietilamina.
[0087] Onde as temperaturas são anteriormente ou doravante dadas, "cerca de" tem que ser adicionado, como desvios secundários dos valores numéricos dados, por exemplo variações de ±10%, são toleráveis.
[0088] Todas as reações podem acontecer na presença de um ou mais diluentes e/ou solventes. Os materiais de partida podem ser usados em quantidades equimolares; alternativamente, um composto pode ser usado em excesso, por exemplo para funcionar como um solvente ou deslocar o equilíbrio ou para em geral acelerar as taxas de reação.
[0089] Auxiliares de reação, tais como ácidos, bases ou catalisadores, podem ser adicionados em quantidades adequadas, como conhecido no campo, requeridas por uma reação e em linha com procedimentos em geral conhecidos.
GRUPOS DE PROTEÇÃO
[0090] Se um ou mais outros grupos funcionais, por exemplo carbóxi, hidróxi, amino, sulfidrila ou outros são ou necessitam ser protegidos em um material de partida como descrito aqui ou qualquer outro precursor, porque eles não deveriam fazer parte na reação ou perturbar a reação, estes são tais grupos como são usualmente usados na síntese dos compostos de peptídeo, e também de cefalosporinas e penicilinas, como também derivados de ácido nucleico e açúcares. Grupos de proteção são tais grupos que já estão presentes nos compostos finais uma vez eles são removidos, enquanto os grupos que permanecem como substituintes não são grupos de proteção no sentido usado aqui que são grupos que são adicionados a um material de partida ou estágio intermediário e removidos para obter um composto final. Também no caso de conversões de um composto da fórmula (I) em um composto diferente da fórmula (I), grupos de proteção podem ser introduzidos e removidos, se útil ou requerido.
[0091] Os grupos de proteção já podem estar presentes nos precursores e deveriam proteger os grupos funcionais concernidos contra reações secundárias indesejadas, tais como acilações, etereficações, esterificações, oxidações, solvólise, e reações similares. É uma característica dos grupos de proteção que eles se doem facilmente, isto é, sem reações secundárias indesejadas, para remoção, tipicamente através de acetólise, protonólise, solvólise, redução, fotólise ou também por atividade enzimática, por exemplo sob condições análogas às condições fisiológicas, e que eles não estão presentes nos produtos finais. O especialista sabe, ou pode facilmente estabelecer, quais grupos de proteção são adequados com as reações mencionadas acima e abaixo.
[0092] A proteção de tais grupos funcionais por tais grupos de proteção, os próprios grupos de proteção, e suas reações de remoção são descritas por exemplo nos trabalhos de referência padrões, tais como J. F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, Londres e Nova Iorque 1973, em T. W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", Terceira Edição, Wiley, Nova Iorque 1999, em "The Peptides"; Volume 3 (editores: E. Gross e J. Meienhofer), Academic Press, Londres e Nova Iorque 1981, em "Methoden der organischen Chemie" (Methods of organic chemistry), Houben Weyl, 4a edição, Volume 15/I, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, em H.-D. Jakubke e H. Jescheit, "Aminosauren, Peptide, Proteine" (Amino acids, peptides, proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, e Basel 1982, e em Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate" (Chemistry of carbohydrates: monosaccharides and derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974.
REAÇÕES E CONVERSÕES OPCIONAIS
[0093] Um composto da fórmula (I) pode ser convertido em um composto diferente da fórmula I.
[0094] Em um composto da fórmula (I) em que R3 representa flúor; tal composto pode ser obtido convertendo o derivado de cloro correspondente no composto de flúor. Tais reações são conhecidas e referidas como reações de substituição. Esta conversão pode acontecer na etapa do material de partida da fórmula (IIIA ou B) ou converter um composto correspondente da fórmula I.
[0095] Em um composto da fórmula (I) em que um substituinte carrega um substituinte de amino ou amino-Ci-C7-alquila, o amino pode ser convertido em acilamino, por exemplo Ci-C7-alcanoilamino ou CiC7-alcanossulfonilamino, através de reação com um Ci-C7-alcanoilhalogeneto correspondente ou Ci-C7-alcanossulfonil-halogeneto, por exemplo um cloreto correspondente, na presença de uma base de nitrogênio terciária, tal como trietilamina ou piridina, na ausência ou presença de um solvente apropriado, um tal cloreto de metileno, por exemplo em temperatura na faixa de -20 a 50°C, por exemplo em cerca de temperatura ambiente.
[0096] Em um composto da fórmula (I) em que um substituinte carrega um substituinte de ciano, o ciano pode ser convertido em um grupo aminometila, por exemplo por hidrogenação na presença de um catalisador de metal apropriado, tal como Níquel de Raney ou Cobalto de Raney, em um solvente apropriado, por exemplo um alcanol inferior, tal como metanol e/ou etanol, por exemplo em temperatura na faixa de -20 a 50°C, por exemplo a cerca de temperatura ambiente.
[0097] Sais de um composto da fórmula (I) com um grupo formador de sal podem ser preparados de uma maneira conhecida per se. Sais de adição de ácido dos compostos da fórmula (I) podem ser desse modo obtidos através de tratamento com um ácido ou com um reagente de permuta de ânion adequado. Um sal com duas moléculas de ácido (por exemplo um di-halogeneto de um composto da fórmula I) pode também ser convertido em um sal com uma molécula de ácido por composto (por exemplo um mono-halogeneto); isto pode ser feito aquecendo em uma fundição, ou por exemplo aquecendo como um sólido sob um vácuo alto em temperatura elevada, por exemplo de 130 a 170°C, uma molécula do ácido que é expelida pela molécula de um composto da fórmula I. Usualmente, os sais podem ser convertidos em compostos livres, por exemplo tratando com compostos básicos adequados, por exemplo com carbonato de metal alcalino, hidrogenocarbonatos de metal alcalino, ou hidróxidos de metal alcalino, tipicamente carbonato de potássio ou hidróxido de sódio.
[0098] Misturas estereoisoméricas, por exemplo misturas de diastereômeros, podem ser separadas em seus isômeros correspondentes de uma maneira conhecida per se por meio dos métodos de separação adequados. Misturas diastereoméricas por exemplo podem ser separadas em seus diastereômeros individuais por meio de cristalização fracionada, cromatografia, distribuição de solvente, e procedimentos similares. Esta separação pode ocorrer ou no nível de um composto de partida ou em um composto da fórmula (I) em si. Os enantiômeros podem ser separados através da formação de sais diastereoméricos, por exemplo por formação de sal com um ácido quiral enantiomericamente puro, ou por meio de cromatografia, por exemplo por HPLC, usando substratos cromatográficos com ligantes quirais.
[0099] Deveria ser enfatizado que reações análogas às conversões mencionadas neste capítulo pode também ocorrer no nível dos intermediários apropriados (e, é desse, modo úteis na preparação dos materiais de partida correspondentes).
MATERIAIS DE PARTIDA:
[00100] Os materiais de partida das fórmulas II e III, como também outros materiais de partida mencionados aqui, por exemplo abaixo, podem ser preparados de acordo ou em analogia aos métodos que são conhecidos na técnica, são conhecidos na técnica e/ou estão comercialmente disponíveis. Até onde a produção dos materiais de partida não é particularmente descrita, os compostos ou são conhecidos ou podem estar analogamente preparados aos métodos conhecidos na técnica, por exemplo em WO 05/021519 ou WO04/096797, ou como revelado doravante. Materiais de partida novos, como também processos para a preparação dos mesmos, são igualmente uma modalidade da presente invenção. Nas modalidades preferidas, tais materiais de partida são usados e a reação selecionada é selecionada para permitir os compostos preferidos serem obtidos.
[00101] Nos materiais de partida (incluindo intermediários) que podem também ser usados e/ou obtidos como sais onde apropriado e conveniente, os substituintes são preferivelmente como definidos para um composto da fórmula (I).
[00102] A invenção também diz respeito aos compostos da fórmula (IIIA) ou um sal dos mesmos
Figure img0011
em que os substituintes são como definidos para um composto da fórmula (I).
[00103] A presente invenção ainda diz respeito aos processos para a produção de um composto da fórmula (IIIA). Em princípio, todos os processos conhecidos que acoplam dois componentes de arila/heteroarila (tais como reações do tipo Heck) em um derivado de ureia correspondente são adequados e podem ser aplicados usando o respectivo material de partida, A invenção desse modo também diz respeito a um processo para preparar um composto da fórmula (IIIA) compreendendo:
[00104] (Etapa 1) reagindo um composto da fórmula (IV)
Figure img0012
em que R3 é como definido aqui e pode adicionalmente representar halo, PG representa um grupo de proteção, tal como um grupo acila, com um composto da fórmula (V)
Figure img0013
em que R1, R2, A são como definidos aqui e Hal representa halo, tal como bromo, sob condições de Heck; opcionalmente na presença de um diluente e opcionalmente na presença de um auxiliar de reação;
[00105] (Etapa 2) seguido por remoção do grupo protetor, por exemplo sob condições acídicas; opcionalmente na presença de um diluente e opcionalmente na presença de um auxiliar de reação; e
[00106] restabelecer o composto resultante da fórmula (IIIA) em forma livre ou em forma de um sal e,
[00107] opcionalmente converter um composto da fórmula (IIIA) obtido em um composto diferente da fórmula (IIIA), e/ou converter um sal obtido de um composto da fórmula (IIIA) em um sal diferente do mesmo, e/ou converter um composto livre obtenível da fórmula (IIIA) em um sal do mesmo, e/ou separar um isômero obtenível de um composto da fórmula (IIIA) de um ou mais isômeros obtidos diferentes da fórmula (IIIA),
[00108] A invenção ainda diz respeito aos compostos da formula (IIIB) ou um sal dos mesmos
Figure img0014
em que R1, R2, A são como definidos para um composto da fórmula (I), RG representa um grupo reativo, particularmente imidazolilcarbonila que pode reagir diretamente ou por meio da formação do intermediário de isocianato da fórmula (IIIE), e R3 é como definido aqui e pode adicionalmente representar halo.
[00109] A presente invenção ainda diz respeito aos processos para a produção de um composto da fórmula (IIIB). Em princípio, todos os processos conhecidos que convertem uma amina ou sal da mesma em um derivado ativado correspondente são adequados e podem ser aplicados usando o respectivo material de partida. A invenção desse modo também diz respeito a um processo para preparar um composto da fórmula (IIIB) compreendendo reagir um composto da fórmula (IIIA)
Figure img0015
em que os substituintes são como definidos aqui, com um reagent ativador, tal como 1,1’-carbonildiimidazol, opcionalmente na presença de um diluente e opcionalmente na presença de um auxiliar de reação;
[00110] restabelecer o composto resultante da fórmula (IIIB) em forma livre ou em forma de um sal, e
[00111] opcionalmente converter um composto da fórmula (IIIB) obtido em um composto diferente da fórmula (IIIB), e/ou converter um sal obtido de um composto da fórmula (IIIB) em um sal diferente do mesmo, e/ou converter um composto livre obtenível da fórmula (IIIB) em um sal do mesmo, e/ou separar um isômero obtenível de um composto da fórmula (IIIB) de um ou mais isômeros obtidos diferentes da fórmula (IIIB).
[00112] A invenção também diz respeito aos compostos da fórmula (IIIC) ou um sal dos mesmos
Figure img0016
em que os substituintes são como definidos para um composto da fórmula (I).
[00113] A presente invenção ainda diz respeito aos processos para a produção de um composto da fórmula (IIIC). Em princípio, todas as reações de fechamento de anel são adequadas e podem ser aplicadas usando o respectivo material de partida. A invenção desse modo também diz respeito a um processo para preparar um composto da fórmula(IIIC), que compreende reagir um composto da fórmula (VI)
Figure img0017
em que R3 é como definido aqui e pode adicionalmente representar halo, com um composto da fórmula (VII)
Figure img0018
em que R1 é como definido aqui; opcionalmente na presença de um diluente e opcionalmente na presença de um auxiliar de reação; e
[00114] restabelecer o composto resultante da fórmula (IIIC) em forma livre ou em forma de um sal, e
[00115] opcionalmente converter um composto da fórmula (IIIC) obtido em um composto diferente da fórmula (IIIC), e/ou converter um sal obtido de um composto da fórmula (IIIC) em um sal diferente do mesmo, e/ou converter um composto livre obtenível da fórmula (IIIC) em um sal do mesmo, e/ou separar um isômero obtenível de um composto da fórmula (IIIC) de um ou mais isômeros obtidos diferentes da fórmula (IIIC).
[00116] A invenção ainda diz respeito aos compostos da fórmula (IIID) ou um sal dos mesmos
Figure img0019
em que R1 é como definido aqui, RG representa um grupo reativo, particularmente imidazolilcarbonila, R3 é como definido aqui e pode adicionalmente representar halo.
[00117] A presente invenção ainda diz respeito aos processos para a produção de um composto da fórmula (IIID). Em princípio, todos os processos conhecidos que convertem uma amina ou sal da mesma em um derivado ativado correspondente é adequado e pode ser aplicado usando o respectivo material de partida. A invenção desse modo também diz respeito a um processo para preparar um composto da fórmula(IIID), que compreende reagir um composto da fórmula (IIIC)
Figure img0020
em que os substituintes são como definidos acima, com um reagente ativador, tal como 1,1’-carbonildiimidazol, opcionalmente na presença de um diluente e opcionalmente na presença de um auxiliar de reação;
[00118] restabelecer o composto resultante da fórmula (IIID) em forma livre ou em forma de um sal, e
[00119] opcionalmente converter um composto da fórmula (IIID) obtido em um composto diferente da fórmula (IIID), e/ou converter um sal obtido de um composto da fórmula (IIID) em um sal diferente do mesmo, e/ou converter um composto livre obtenível da fórmula (IIID) em um sal do mesmo, e/ou separar um isômero obtenível de um composto da fórmula (IIID) de um ou mais isômeros obtidos diferentes da fórmula (IIID).
[00120] A invenção ainda diz respeito aos compostos da fórmula (VI) ou um sal dos mesmos
Figure img0021
em que R3é como definido aqui e pode adicionalmente representar halo.
[00121] A presente invenção ainda diz respeito aos processos para a produção de um composto da fórmula (VI). Em princípio, todos os processos conhecidos adequados para uma tal conversão podem ser aplicados usando o respectivo material de partida. A invenção desse modo também diz respeito a um processo para preparar um composto da fórmula (HID), que compreende reagir um composto da fórmula (IIX)
Figure img0022
em que R3 é como definido na fórmula (I) e pode adicionalmente representar halo, com um acetal de dimetilformamida, tal como DMFdimetilacetal, para obter um composto da fórmula (VI);
[00122] restabelecer o composto resultante da fórmula (IIID) na forma livre ou em forma de um sal, e
[00123] opcionalmente converter um composto da fórmula (IIX) obtido em um composto diferente da fórmula (IIX), e/ou converter um sal obtido de um composto da fórmula (IIX) em um sal diferente do mesmo, e/ou converter um composto livre obtenível da fórmula (IIX) em um sal do mesmo, e/ou separar um isômero obtenível de um composto da fórmula (IIX) de um ou mais isômeros obtidos diferentes da fórmula (IIX).
[00124] Os compostos da fórmula (I),
Figure img0023
também incluindo as subfórmulas (IA), (IB), e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em que
[00125] A representa heteroarila;
[00126] R1 representa (1) alquila opcionalmente substituída; (2) cicloalquila opcionalmente substituída; (3) arila opcionalmente substituída; (4) amina opcionalmente substituída; (5) sulfonila opcionalmente substituída; (6) halo;
[00127] R2 representa hidrogênio, deutério ou um substituinte como definido para R1;
[00128] R3 representa hidrogênio, halo, alquila opcionalmente substituída;
[00129] são úteis como produtos farmacêuticos. Portanto, a invenção diz respeito, em uma modalidade, às composições para uso humano ou veterinário onde inibição de PI3K é indicada. Esta modalidade também inclui o composto 1-({5-[2-(terc-butil)-pirimidin-4-il]-4-metiltiazol-2-il}-amida de 2-amida de ácido (S)-pirrolidino-1,2-dicarboxílico, mas alternativamente, exclui o dito composto.
[00130] Em uma modalidade, a invenção diz respeito ao tratamento de doenças proliferativas celulares tais como tumor e/ou crescimento de células cancerosas mediadas por PI3K. Doenças podem incluir aquelas mostrando supraexpressão ou amplificação de PI3Kalfa, mutação somática de PIK3CA ou mutações de linhagem germinal ou mutação somática de PTEN ou mutações e translocação de p85a que servem para suprarregular o complexo de p85-p110. Em particular, os compostos são úteis no tratamento de cânceres humanos ou animais (por exemplo, murinos), incluindo, por exemplo, sarcoma; pulmão; brônquios; próstata; mama (incluindo cânceres de mama esporádicos e portadores da doença de Cowden); pâncreas; câncer gastrintestinal; cólon; reto; carcinoma de cólon; adenoma colorretal; tiroide; fígado; duto biliar intraepático; hepatocelular; glândula adrenal; estômago; gástrico; glioma; glioblastoma; endometrial; melanoma; rim; pélvis renal; bexiga urinária; corpo uterino; cerviz uterina; vagina; ovário; mieloma múltiplo; esôfago; uma leucemia; leucemia mielogenosa aguda; leucemia mielogenosa crônica; leucemia linfocítica; leucemia mieloide; cérebro; um carcinoma do cérebro; cavidade oral e faringe; laringe; intestino delgado; linfoma de não-Hodgkin; melanoma; adenoma de cólon viloso; uma neoplasia; uma neoplasia de caráter epitelial; linfomas; um carcinoma mamário; carcinoma de células basais; carcinoma de células escamosas; ceratose actínica; doenças tumorais, incluindo tumores sólidos; um tumor do pescoço ou cabeça; policitemia vera; trombocitemia essencial; mielofibrose com metaplasia mieloide; e doença de Waldenstroem.
[00131] Em outras modalidades, a condição ou distúrbio (por exemplo mediados por PI3K) são selecionados do grupo que consiste em: policitemia vera, trombocitemia essencial, mielofibrose com metaplasia mieloide, asma, COPD, ARDS, síndrome de Loffler, pneumonia eosinofílica, infestação parasitária (em particular metazoários) (incluindo eosinofilia tropical), aspergilose broncopulmonar, poliarterite nodosa (incluindo síndrome de Churg-Strauss), granuloma eosinofílica, distúrbios relacionados aos eosinófilos que afetam as vias aéreas ocasionadas por reação de fármaco, psoríase, dermatite de contato, dermatite atópica, alopecia areata, eritema multiforme, dermatite herpetiforme, escleroderma, vitiligo, hipersensibilidade à agiite, urticária, penfigoide bolhoso, lúpus eritematoso, pênfigo, epidermólise adquirida bolhosa, distúrbios hematológicos autoimunes (por exemplo anemia hemolítica, anemia aplástica, anemia de célula vermelha pura e trombocitopenia idiopática), lúpus sistêmico eritematoso, policondrite, escleroderma, granulomatose de Wegener, dermatomiosite, hepatite ativa crônica, miastenia grave, síndrome de Steven-Johnson, jito idiopático, doença inflamatória do intestino autoimune (por exemplo colite ulcerativa e doença de Crohn), oftalmopatia endócrina, doença de Grave, sarcoidose, alveolite, pneumonite de hipersensibilidade crônica, esclerose múltipla, cirrose biliar primária, uveíte (anterior e posterior), fibrose pulmonar intersticial, artrite psoriática, glomerulonefrite, doenças cardiovasculares, aterosclerose, hipertensão, trombose venosa profunda, acidente vascular cerebral, infartação do miocárdio, angina instável, tromboembolismo, embolia pulmonar, doenças trombolíticas, isquemia arterial aguda, oclusões trombóticas periféricas, e doença da artéria coronária, lesões de reperfusão, retinopatia, tal como retinopatia diabética ou retinopatia induzida por oxigênio hiperbárico, e condições caracterizadas por pressão intraocular elevada ou secreção de humor aquoso ocular, tal como glaucoma,
[00132] Para os usos acima, a dosagem requerida variará, dependendo, claro, do modo de administração, da condição particular a ser tratada e do efeito desejado, Em geral, resultados satisfatórios são indicados para ser obtidos sistemicamente em dosagens diárias de cerca de 0,03 a cerca de 100,0 mg/kg por peso do corpo, por exemplo cerca de 0,03 a cerca de 10,0 mg/kg por peso do corpo, Uma dosagem diária indicada no mamífero maior, por exemplo seres humanos, é na faixa de cerca de 0,5 mg a cerca de 3 g, por exemplo cerca de 5 mg a cerca de 1,5 g, convenientemente administrada, por exemplo, em doses divididas até quatro vezes por dia ou em forma de retardo, Formas de dosagem de unidade adequadas para administração oral compreendem de ca, 0,1 a cerca de 500 mg, por exemplo cerca de 1,0 a cerca de 500 mg de ingrediente ativo,
[00133] Os compostos da fórmula (I) podem ser administrados por qualquer rota convencional, em particular enteralmente, por exemplo oralmente, por exemplo na forma de tabletes ou cápsulas, ou parenteralmente, por exemplo na forma de soluções injetáveis ou suspensões, topicamente, por exemplo na forma de loções, géis, unguentos ou cremes, através de inalação, intranasalmente, ou em uma forma de supositório,
[00134] Os compostos da fórmula (I) podem ser administrados em forma livre ou em forma de sal farmaceuticamente aceitável por exemplo como indicado acima, Tais sais podem ser preparados de maneira convencional e podem exibir a mesma ordem de atividade que os compostos livres,
[00135] Por conseguinte, a invenção também fornece: ■ um método para impedir ou tratar condições, distúrbios ou doenças mediadas pela ativação da enzima PI3K (por exemplo PI3 alfa quinase) por exemplo tal como indicado acima, em um sujeito em necessidade de tal tratamento, cujo método compreende administrar ao dito sujeito uma quantidade efetiva de um composto da fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; ■ um composto da fórmula (I), em forma livre ou em uma forma de sal farmaceuticamente aceitável como um produto farmacêutico, por exemplo em quaisquer dos métodos como indicados aqui; ■ um composto da fórmula (I) em forma livre ou em forma de sal farmaceuticamente aceitável para o uso como produto farmacêutico, por exemplo em quaisquer dos métodos como indicados aqui, em particular para o uso em uma ou mais doenças mediadas por fosfatidilinositol 3-quinase; ■ o uso de um composto da fórmula (I) em forma livre ou em forma de sal farmaceuticamente aceitável em quaisquer dos métodos como indicados aqui, em particular para o tratamento de uma ou mais doenças mediadas por fosfatidilinositol 3-quinase; ■ o uso de um composto da fórmula (I) em forma livre ou em forma de sal farmaceuticamente aceitável em quaisquer dos métodos como indicados aqui, em particular para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma ou mais doenças mediadas por fosfatidilinositol 3-quinase.
[00136] PI3K serve como um segundo nó de mensageiro que integra as vias de sinalização paralelas, evidência está surgindo que a combinação de um inibidor de PI3K com inibidores de outras vias será útil no tratamento de câncer e doenças proliferativas em seres humanos.
[00137] Cerca de 20-30% dos cânceres de mama humanos supraexpressam Her-2/neu-ErbB2, o alvo para o fármaco trastuzumab. Embora trastuzumab demonstre respostas duráveis em alguns pacientes expressando Her2/neu-ErbB2, apenas um subconjunto destes pacientes responde. Recente trabalho indicou que esta taxa de resposta limitada pode ser substancialmente melhorada pela combinação de trastuzumab com inibidores de PI3K ou a via de PI3K/AKT (Chan et al., Breast Can. Res. Treat. 91:187 (2005), Woods Ignatoski et al., Brit. J. Cancer 82:666 (2000), Nagata et al., Cancer Cell 6:117 (2004)).
[00138] Uma variedade das malignidades humanas expressam mutações de ativação ou níveis aumentados de Her1/EGFR e vários inibidores de anticorpos e de moléculas pequenas foram desenvolvidos contra este receptor de tirosina quinase incluindo tarceva, gefitinib e erbitux. Porém, embora os inibidores de EGFR demonstrem atividade antitumoral em certos tumores humanos (por exemplo, NSCLC), eles não aumentam a sobrevivência geral do paciente em todos os pacientes com tumores expressando EGFR. Isto pode ser racionalizado pelo fato que muitos alvos a jusante de Her1/EGFR são mutados ou desregulados em frequências altas em uma variedade de malignidades, incluindo a via de PI3K/Akt. Por exemplo, gefitinib inibe o crescimento de uma linhagem celular de adenocarcinoma em ensaios in vitro. No entanto, subclones destas linhagens celulares podem ser selecionados que são resistentes a gefitinib que demonstram ativação aumentada da via de PI3/Akt. Infrarregulação ou inibição desta via dá subclones resistentes sensíveis a gefitinib (Kokubo et al., Brit. J. Cancer 92:1711 (2005)). Além disso, em um modelo in vitrode câncer de mama com uma linhagem celular que abriga uma mutação de PTEN e supraexpressa inibição de EGFR da via de PI3K/Akt e EGFR produziu um efeito sinergístico (She et al., Câncer Cell 8:287-297(2005)). Estes resultados indicam que a combinação dos inibidores das vias de gefitinib e PI3K/Akt seria uma estratégia terapêutica atrativa em câncer.
[00139] A combinação de AEE778 (um inibidor de Her-2/neu/ErbB2, VEGFR e EGFR) e RAD001 (um inibidor de mTOR, um alvo a jusante de Akt) produziu maior eficácia combinada que qualquer agente sozinho em um modelo de xenoenxerto de glioblastoma (Goudar et al., Mol. Cancer. Ther. 4:101-112 (2005)).
[00140] Antiestrogênios, tais como tamoxifeno, inibem crescimento do câncer de mama através de indução da detenção do ciclo celular que requer a ação do inibidor do ciclo celular p27Kip. Recentemente, foi mostrado que ativação da via de Ras-Raf-Map Quinase altera o estado de fosforilação de p27Kip de modo que sua atividade inibidora apreendendo o ciclo celular é atenuada, assim contribuindo para a resistência antiestrogênio (Donovan, et al, J. Biol. Chem. 276:40888, (2001)). Como relatado por Donovan et al., inibição da sinalização de MAPK através de tratamento com inibidor de MEK invertida o estado de fosforilação aberrante de p27 em linhagens celulares de câncer de mama hormônio-refratário e assim tornando a sensibilidade ao hormônio restabelecida. Similarmente, a fosforilação de p27Kip por Akt também abroga seu papel para apreender o ciclo celular (Viglietto et al., Nat Med. 8:1145 (2002)).
[00141] Consequentemente, em um outro aspecto, os compostos das fórmulas I são usados no tratamento de cânceres hormôniodependentes, tais como cânceres de mama e de próstata. Por este uso, é visado para inverter a resistência do hormônio comumente vista nestes cânceres com agentes anticânceres convencionais.
[00142] Em cânceres hematológicos, tais como leucemia mielogenosa crônica (CML), translocação cromossômica é responsável pela BCR-Abl tirosina quinase constitutivamente ativada. Os pacientes afligidos são responsivos a imatinib, um inibidor da tirosina quinase de molécula pequena, como resultado da inibição da atividade da Abl quinase. Porém, muitos pacientes com doença em estágio avançada inicialmente respondem a imatinib, entretanto recaem depois devido às mutações de conferência de resistência no domínio da Abl quinase. Estudos in vitrodemonstraram que BCR-Ab1 emprega a via da RasRaf quinase para suscitar seus efeitos. Além disso, inibindo mais de uma quinase na mesma via fornece proteção adicional contra mutações de conferência de resistência.
[00143] Consequentemente, em outro aspecto, os compostos das fórmulas I são usados em combinação com pelo menos um agente adicional selecionado do grupo de inibidores de quinase, tais como Gleevec®, no tratamento de cânceres hematológicos, tais como leucemia mielogenosa crônica (CML). Por este uso, é visado inverter ou impedir a resistência ao dito pelo menos um agente adicional.
[00144] Porque ativação da via de PI3K/Akt desencadeia sobrevivência celular, inibição da via em combinação com terapias que desencadeiam apoptose em células cancerosas, incluindo radioterapia e quimioterapia, resultará em respostas melhoradas (Ghobrial et al., CA Cancer J. Clin 55:178-194 (2005)). Como um exemplo, combinação do inibidor de PI3 quinase com carboplatina demonstrou efeitos sinergísticos na proliferação in vitro e ensaios de apoptose como também na eficácia do tumor in vivo em um modelo de xenoenxerto de câncer ovariano (Westfall e Skinner, Mol. Cancer Ther. 4:1764-1771 (2005)).
[00145] Além de câncer e doenças proliferativas, há evidência cumulativaque os inibidores das PI3 quinases da Classe 1A e 1B seriam terapeuticamente úteis em outras áreas de doença. A inibição de p110β, o produto da isoforma de PI3K do gene PIK3CB, foi mostrada estar envolvida na ativação de plaquetas induzida por cisalhamento (Jackson et al., Nature Medicine 11:507-514 (2005)). Desse modo, um inibidor de PI3K que inibe p110β seria útil como um agente isolado ou em combinação em terapia antitrombótica. A isoforma p110δ, o produto do gene PIK3CD, é importante na função e diferenciação de células B (Clayton et al., J. Exp. Med. 196:753-763 (2002)), respostas de antigenos dependentes e independentes de células T (Jou et al., Mol. Cell. Biol. 22:8580-8590 (2002)) e diferenciação de mastócitos (Ali et al., Nature 431:1007-1011 (2004)). Desse modo, espera-se que os inibidores de p110δ sejam úteis no tratamento de doenças autoimunes desencadeias por células B e asma. Por fim, a inibição de p110y, o produto da isoforma do gene PI3KCG, resulta em resposta de células T, mas não B, reduzida (Reif et al., J. Immunol. 173:2236-2240 (2004)) e sua inibição demonstra eficácia em modelos animais de doenças autoimunes (Camps et al., Nature Medicine 11:936-943 (2005), Barber et al., Nature Medicine 11:933-935 (2005)).
[00146] A invenção ainda fornece composições farmacêuticas compreendendo pelo menos um composto da fórmula (I), junto com um excipiente farmaceuticamente aceitável adequado para administração em um sujeito humano ou animal, ou sozinho ou junto com outros agentes anticânceres.
[00147] A invenção ainda fornece métodos de tratar sujeitos humanos ou animais sofrendo de uma doença proliferativa celular, tal como câncer. A invenção desse modo fornece métodos de tratar um sujeito humano ou animal em necessidade de tal tratamento, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto da fórmula (I) ou sozinho ou em combinação com um ou mais outros agentes anticânceres. Em particular, composições serão formuladas como uma combinação terapêutica ou serão administradas separadamente. Agentes anticânceres adequados para uso com um composto da fórmula (I) incluem, mas não são limitados a, um ou mais compostos selecionados do grupo que consiste em inibidores de quinase, antiestrogênios, antiandrógenos, outros inibidores, fármacos quimioterapêuticos de câncer, agentes de alquilação, agentes quelantes, modificadores de resposta biológica, vacinas de câncer, agentes para terapia antissenso como expostos abaixo:
[00148] INIBIDORES DE QUINASE: Inibidores de quinase para o uso como agentes anticânceres junto com o composto da fórmula (I) incluem inibidores do Receptor das quinases do Fator de Crescimento Epidérmico (EGFR) tais como quinazolinas de moléculas pequenas, por exemplo gefitinib (US 5457105, US 5616582, e US 5770599), ZD-6474 (WO 01/32651), erlotinib (Tarceva®, US 5,747, 498 e WO 96/30347), e lapatinib (US 6,727,256 e WO 02/02552); Receptor dos inibidores da quinase do Fator de Crescimento Endotelial Vascular (VEGFR), incluindo SU-11248 (WO 01/60814), SU 5416 (US 5,883,113 e WO 99/61422), SU 6668 (US 5,883,113 e WO 99/61422), CHIR-258 (US 6,605,617 e US 6,774,237), vatalanib ou PTK-787 (US 6,258,812), VEGF-trap (WO 02/57423), B43-Genistein (WO-09606116), fenretinide (p-hidroxifenilamina de ácido retinoico) (US 4,323,581), IM-862 (WO 02/62826), bevacizumab ou Avastin® (WO 94/10202), KRN-951, 3-[5-(metilsulfonilpiperadino metil)-indolil]-quinolona, AG-13736 e AG-13925, pirrolo[2,1f][1,2,4]triazinas, ZK-304709, Veglin®, VMDA-3601, EG-004, CEP-701 (US 5,621,100), Cand5 (WO 04/09769); inibidores da Erb2 tirosina quinase tais como pertuzumab (WO 01/00245), trastuzumab, e rituximab; inibidores da Akt proteína quinase, tais como RX-0201; inibidores da Proteína Quinase C (PKC), tais como LY-317615 (WO 95/17182), e perifosina (US 2003171303); inibidores de Raf/Map/MEK/Ras quinase incluindo sorafenib (BAY 43-9006), ARQ-350RP, LErafAON, BMS354825 AMG-548, e similares revelados em WO 03/82272; inibidores da quinase do Receptor do Fator de Crescimento de Fibroblasto (FGFR); inibidores da Quinase Célula-Dependente (CDK), incluindo CIC-202 ou roscovitina (WO 97/20842 e WO 99/02162); inibidores da quinase do Receptor do Fator de Crescimento Derivados de Plaquetas (PDGFR) tais como CHIR-258, 3G3 mAb, AG-13736, SU-11248 e SU6668; e inibidores da Bcr-Abl quinase e proteínas de fusão tais como STI-571 ou Gleevec® (imatinib).
[00149] ANTIESTROGÊNIOS: Agentes de visamento de estrogênio para o uso na terapia anticâncer junto com o composto da fórmula (I) incluem Moduladores do Receptor de Estrogênio Seletivo (SERMs) incluindo tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno; inibidores da aromatase incluindo Arimidex® ou anastrozol; Reguladores do Receptor de Estrogênio (ERDs) incluindo Faslodex® ou fulvestrant.
[00150] ANTIANDRÓGENOS: Agentes de visamento de andrógenos para o uso em terapia anticâncer junto com o composto da fórmula (I) incluem flutamida, bicalutamida, finasterida, aminoglutetamida, cetoconazol, e corticosteroides.
[00151] OUTROS INIBIDORES: Outros inibidores para o uso como agentes anticânceres junto com o composto da fórmula (I) incluem inibidores da proteína farnesil transferase incluindo tipifarnib ou R115777 (US 2003134846 e WO 97/21701), BMS-214662, AZD-3409, e FTI-277; inibidores da topoisomerase incluindo merbarono e diflomotecan (BN-80915); inibidores da proteína da cinesina mitótica do fuso (KSP) incluindo SB-743921 e MKI-833; moduladores da proteassoma tais como bortezomib ou Velcade® (US 5.780.454), XL-784; e inibidores da ciclooxigenase 2 (COX-2) incluindo fármacos anti-inflamatórios não esteroidais I (NSAIDs).
[00152] FÁRMACOS QUIMIOTERAPÊUTICOS PARA CÂNCER: Agentes quimioterapêuticos para câncer particulares para o uso como agentes anticânceres junto com o composto da fórmula (I) incluem anastrozol (Arimidex®), bicalutamida (Casodex®), sulfato de bleomicina (Blenoxane®), bussulfano (Myleran®), injeção de bussulfano (Busulfex®), capecitabina (Xeloda®), N4-pentoxicarbonil-5-deóxi-5-fluorocitidina, carboplatina (Paraplatin®), carmustina (BiCNU®), clorambucila (Leukeran®), cisplatina (Platinol®), cladribina (Leustatin®), ciclofosfamida (Cytoxan® ou Neosar®), citarabina, arabinosídeo de citosina (Cytosar-U®), injeção de lipossoma de citarabina (DepoCyt®), dacarbazina (DTIC-Dome®), dactinomicina (Actinomicina D, Cosmegan), cloridrato de daunorrubicina (Cerubidine®), injeção de lipossoma de citrato de daunorrubicina (DaunoXome®), dexametasona, docetaxel (Taxotere®), cloridrato de doxorrubicina (Adriamicina®, Rubex®), etoposide (Vepesid®), fosfato de fludarabina (Fludara®), 5-fluorouracila (Adrucil®, Efudex®), flutamida (Eulexin®), tezacitibina, Gencitabina (difluorodeoxicitidina), hidroxiureia (Hydrea®), Idarrubicina (Idamicina®), ifosfamida (IFEX®), irinotecan (Camptosar®), L-asparaginase (ELSPAR®), cálcio de leucovorina, melfalano (Alqueran®), 6-mercaptopurina (Purinethol®), metotrexato (Folex®), mitoxantrona (Novantrone®), milotarg, paclitaxel (Taxol®), fênix (Yttrium90/MX-DTPA), pentostatina, polifeprosan 20 com implante de carmustina (Gliadel®), citrato de tamoxifeno (Nolvadex®), teniposide (Vumon®), 6-tioguanina, tiotepa, tirapazamina (Tirazone®), cloridrato de topotecano para injeção (Hycamptin®), vinblastina (Velban®), vincristina (Oncovin®), e vinorelbina (Navelbine®).
[00153] AGENTES ALQUILANTES: Agentes alquilantes para o uso junto com o composto da fórmula (I) incluem VNP-40101M ou cloretizina, oxaliplatina (US 4.169.846, WO 03/24978 e WO 03/04505), glufosfamida, mafosfamida, etopofos (US 5.041.424), prednimustina; treossulfano; bussulfano; irofluven (acilfulveno); penclomedina; pirazoloacridina (PD-115934); O6-benzilguanina; decitabina (5-aza-2-deoxicitidina); brostalicina; mitomicina C (MitoExtra); TLK-286 (Telcyta®); temozolomida; trabectedina (US 5.478.932); AP-5280 (formulação de Platinato de Cisplatina); porfiromicina; e clearazida (meclorethamina).
[00154] AGENTES QUELANTES: Agentes quelantes para o uso junto com o composto da fórmula (I) incluem tetratiomolibdato (WO 01/60814); RP-697; T84.66 Chimeric (cT84.66); gadofosveset (Vasovist®); deferoxamina; e bleomicina opcionalmente em combinação com eletroporação (EPT).
[00155] MODIFICADORES DE RESPOSTA BIOLÓGICA: Modificadores de resposta biológica, tais como moduladores imunes, para o uso junto com o composto da fórmula (I) incluem estaurosprina e análogos macrocíclicos dos mesmos, incluindo UCN-01, CEP-701 e midostaurina (vide WO 02/30941, WO 97/07081, WO 89/07105, US 5.621,100, WO 93/07153, WO 01/04125, WO 02/30941, WO 93/08809, WO 94/06799, WO 00/27422, WO 96/13506 e WO 88/07045); esqualamina (WO 01/79255); DA-9601 (WO 98/04541 e US 6.025,387); alentuzumab; interferonas (por exemplo IFN-a, IFN-b etc.); interleucinas, especificamente IL-2 ou aldesleucina como tambémIL-1, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, e variantes biológicas ativas dos mesmos tendo sequências de aminoácido maiores que 70% da sequência humana nativa; altretamina (Hexalen®); SU 101 ou leflunomida (WO 04/06834 e US 6.331.555); imidazoquinolinas tais como resiquimod e imiquimod (US 4.689.338, 5.389.640, 5.268.376, 4.929.624, 5.266.575, 5.352.784, 5.494.916, 5.482.936, 5.346.905, 5.395.937, 5.238.944, e 5.525.612); e SMIPs, incluindo benzazóis, antraquinonas, tiossemicarbazonas, e triptantrinas (WO 04/87153, WO 04/64759, e WO 04/60308).
[00156] VACINAS PARA CÂNCER: Vacinas anticânceres para o uso junto com o composto da fórmula (I) incluem Avicine®(TetrahedronLett. 26:2269-70 (1974)); oregovomab (OvaRex®); Theratope® (STn-KLH); Vacinas de Melanoma; série GI-4000 (GI-4014, GI-4015, e GI-4016) que são direcionadas para cinco mutações na proteína de Ras; GlioVax-1; MelaVax; Advexin® ou INGN-201 (WO 95/12660); Sig/E7/LAMP-1, codificando HPV-16 E7; Vacina de MAGE-3 ou M3TK (WO 94/05304); HER-2VAX; ACTIVE, que estimula células T específicas para tumores; vacina de câncer de GM-CSF; e vacinas com base em monocitogenes de Listeria.
[00157] TERAPIA ANTISSENSO: Agentes anticânceres para o uso junto com o composto da fórmula (I) também incluem composições antissenso, tais como AEG-35156 (GEM*-640); AP-12009 e AP-11014 (oligonucleotídeos antissensos TGF-beta2-específicos); AVI-4126; AVI-4557; AVI-4472; oblimersen (Genasense®); JFS2; aprinocarsen (WO 97/29780); GTI-2040 (oligo antissenso de mRNA de ribonucleotídeo R2reductase) (WO 98/05769); GTI-2501 (WO 98/05769); oligodeoxinucleotídeos antissensos de c-Raf encapsulados em lipossoma (LErafAON) (WO 98/43095); e Sirna-027 (mRNA de VEGFR-1 de visamento terapêutico com base em RNAi).
[00158] O composto da fórmula (I) pode também ser combinado em uma composição farmacêutica com substâncias broncodilatadoras ou de fármacos anti-histamínicos. Tais fármacos broncodilatadores incluem agentes anticolinérgicos ou antimuscarínicos, em particular brometo de ipratrópio, brometo de oxitrópio, e brometo de tiotrópio, e agonistas de β-2-adrenorreceptor tais como salbutamol, terbutalina, salmeterol, carmoterol, milveterol e, especialmente, formoterol ou indacaterol. Substâncias de fármaco anti-histamínico coterapêuticas incluem cloridrato de cetirizina, fumarato de clemastina, prometazina, loratadina, difenidramina de desloratadina e cloridrato de fexofenadina.
[00159] A invenção fornece em um outro aspecto uma combinação compreendendo um composto da fórmula (I) e um ou mais compostos que são úteis para o tratamento de uma doença trombolítica, doença cardíaca, acidente vascular cerebral, etc. Tais compostos incluem aspirina, uma estreptoquinase, um ativador de plasminogênio de tecido, uma uroquinase, um anticoagulante, fármacos antiplaquetas (por exemplo, PLAVIX; bissulfato de clopidogrel), uma estatina (por exemplo, LIPITOR ou Atorvastatina de cálcio), ZOCOR (Sinvastatina), CRESTOR (Rosuvastatina), etc.), um bloqueador Beta (por exemplo, Atenolol), NORVASC (besilato de amlodipina), e um inibidor de ACE (por exemplo, lisinopril).
[00160] A invenção fornece em um outro aspecto uma combinação compreendendo um composto da fórmula (I) e um ou mais compostos que são úteis para o tratamento anti-hipertensão. Tais compostos incluem inibidores de ACE, agente redutores de lipídios tais como estatinas, LIPITOR (Atorvastatina de cálcio), bloqueadores do canal de cálcio tais como NORVASC (besilato de amlodipina).
[00161] A invenção fornece em um outro aspecto uma combinação compreendendo um composto da fórmula (I) e um ou mais compostos selecionados do grupo que consiste em fibratos, beta-bloqueadores, inibidores de NEPI, antagonistas do receptor de angiotensina-2 e inibidores de agregação de plaquetas.
[00162] A invenção fornece em um outro aspecto uma combinação compreendendo um composto da fórmula (I) e um composto adequado para o tratamento de doenças inflamatórias, incluindo artrite reumatoide. Tal composto pode ser selecionado do grupo que consiste em inibidores de TNF-a tais como anticorpos monoclonais anti-TNF-a (tais como REMICADE, CDP-870) e D2E7 (HUMIRA) e moléculas de fusão da imunoglobulina do receptor de TNF (tais como ENBREL), inibidores de IL-1, antagonistas do receptor ou IL-1Ra solúvel (por exemplo, KINERET ou inibidores de ACE), agentes anti-inflamatórios não esteroidais (NSAIDS), piroxicam, diclofenaco, naproxeno, flurbiprofeno, fenoprofeno, cetoprofeno ibuprofeno, fenamatos, ácido mefenâmico, indometacina, sulindaco, apazona, pirazolonas, fenilbutazona, aspirina, inibidores de COX-2 (tais como CELEBREX (celecoxib), PREXIGE (lumiracoxib)), inibidores de metaloprotease (preferivelmente inibidores seletivos de MMP-13), inibidores de p2x7, inibidores de a2a, NEUROTIN, pregabalina, metotrexato de dose baixa, leflunomida, hidroxicloroquina, d-penicilamina, auranofina ou ouro parenteral ou oral.
[00163] A invenção fornece em um outro aspecto uma combinação compreendendo um composto da fórmula (I) e um composto adequado para o tratamento de osteoartrite. Tal composto pode ser selecionado do grupo que consiste em agentes anti-inflamatórios não esteroidais padrões (doravante NSAID) tais como piroxicam, diclofenaco, ácidos propiônicos tais como naproxeno, flurbiprofeno, fenoprofeno, cetoprofeno e ibuprofeno, fenamatos tais como ácido mefenâmico, indometacina, sulindaco, apazona, pirazolonas tais como fenilbutazona, salicilatos tais como aspirina, inibidores de COX-2 tais como celecoxib, valdecoxib, lumiracoxib e etoricoxib, analgésicos e terapias de intraarticulares tais como corticosteroides e ácidos hialurônicos tais como hialgan e sinvisc.
[00164] A invenção fornece em um outro aspecto uma combinação compreendendo um composto da fórmula (I) e um agente antiviral e/ou um composto anti-sepsia. Tal agente antiviral pode ser selecionado do grupo que consiste em Viracept, AZT, aciclovir e fanciclovir. Tal composto anti-sepsia pode ser selecionado do grupo que consiste em Valant.
[00165] A invenção fornece em um outro aspecto uma combinação compreendendo um composto da fórmula (I) e um ou mais agentes selecionados do grupo que consiste em agentes de CNS tais como antidepressivos (sertralina), fármacos anti-parquinsonianos (tais como deprenil, L-dopa, Requip, Mirapex; inibidores de MAOB (tais como selegina e rasagilina); inibidores de comP (tais como Tasmar); inibidores de A-2; inibidores de reabsorção de dopamina; antagonistas de NMDA; agonistas de Nicotina; agonistas de Dopamina; e inibidores de sintase de óxido nítrico neuronal).
[00166] A invenção fornece em um outro aspecto uma combinação compreendendo um composto da fórmula (I) e um ou mais fármacos anti-Alzheimer. Tal fármaco anti-Alzheimer pode ser selecionado do grupo que consiste em donepezil, tacrina, inibidores de α2δ, NEUROTIN, pregabalina, inibidores de COX-2, propentofilina ou metrifonato.
[00167] A invenção fornece em um outro aspecto uma combinação compreendendo um composto da fórmula (I) e agentes de osteoporose e/ou um agente imunossupressor, Tais agentes de osteoporose podem ser selecionados do grupo que consiste em EVISTA (cloridrato de raloxifeno), droloxifeno, lasofoxifeno ou fosomax. Tais agentes imunossupressores podem ser selecionados do grupo que consiste em FK-506 e rapamicina.
[00168] Em outro aspecto das modalidades preferidas, kits que incluem um ou mais compostos da fórmula (I) um par de combinação como revelados aqui são fornecidos. Kits representativos incluem um composto inibidor de PI3K (por exemplo, um composto da fórmula (I)) e uma bula ou outra indicação incluindo direções para tratar uma doença proliferativa celular administrando a uma quantidade do inibidor de PI3K do(s) composto(s).
[00169] Em geral, os compostos da fórmula (I) serão administrados em uma quantidade terapeuticamente efetiva por quaisquer dos modos aceitos de administração para agentes que servem utilidades similares. A quantidade atual do composto da fórmula (I), isto é, o ingrediente ativo, dependerá de numerosos fatores tais como a severidade da doença a ser tratada, a idade e saúde relativa do sujeito, a potência do composto usada, a rota e forma de administração, e outros fatores. O fármaco pode ser administrado mais de uma vez ao dia, preferivelmente algumas vezes ao dia. Todos destes fatores estão dentro da habilidade do clínico assistente. Quantidades terapeuticamente efetivas dos compostos das fórmulas I podem variar de cerca de 0,05 a cerca de 50 mg por quilograma do peso do corpo do recipiente por dia; preferivelmente cerca de 0,1-25 mg/kg/dia, mais preferivelmente de cerca de 0.5 a 10 mg/kg/dia. Desse modo, para administração a uma pessoa de 70 kg, a faixa de dosagem será mais preferivelmente cerca de 35-70 mg por dia.
[00170] Em geral, os compostos da fórmula (I) serão administrados como composições farmacêuticas por qualquer uma das rotas seguintes: administração oral, sistêmica (por exemplo, transdérmica, intranasal ou através de supositório), ou parenteral (por exemplo, intramuscular, intravenosa ou subcutânea). A maneira preferida de administração é oral usando um regime de dosagem diário conveniente que pode ser ajustado de acordo com o grau de aflição. Composições podem ter a forma de tabletes, pílulas, cápsulas, semissólidos, pós, formulações de liberação contínua, soluções, suspensões, elixires, aerossóis, ou qualquer outra composição apropriada. Outra maneira preferida para administrar os compostos da fórmula (I) é inalação. Este é um método efetivo para liberar um agente terapêutico diretamente ao trato respiratório.
[00171] A escolha da formulação depende de vários fatores tais como o modo de administração do fármaco e biodisponibilidade da substância do fármaco. Para liberação por meio de inalação, o composto pode ser formulado como solução líquida, suspensões, propulsores de aerossol ou pó seco e carregada em um dispensador adequado para administração. Há vários tipos de dispositivos de inalação farmacêutica inaladores nebulizadores, inaladores dosimetrados (MDI) e inaladores de pó seco (DPI). Dispositivos nebulizadores produzem um fluxo de ar de velocidade alta que leva os agentes terapêuticos (que são formulados em uma forma líquida) a pulverizar-se como uma névoa que é carregada para dentro do trato respiratório do paciente. MDIs tipicamente são formulação empacotadas com um gás comprimido. Sob atuação, o dispositivo descarrega uma quantidade medida de agente terapêutico por gás comprimido, desse modo fornecendo um método seguro de administrar uma quantidade fixa de agente. DPI dispensa agentes terapêuticos na forma de um pó de fluxo livre que pode ser dispersado no fluxo de ar inspiratório do paciente durante a inspiração pelo dispositivo. Para alcançar um pó de fluxo livre, o agente terapêutico é formulado com um excipiente tal como lactose. Uma quantidade medida do agente terapêutico é armazenada em uma forma de cápsula e é dispensada com cada atuação.
[00172] A invenção também diz respeito às formulações em que o tamanho de partícula de um composto da fórmula (I) entre 10 1000 nm, preferivelmente 10 400 nm. Tais formulações farmacêuticas foram especialmente desenvolvidas para fármacos que mostram biodisponibilidade ruim com base no princípio que a biodisponibilidade pode ser aumentada aumentando a área de superfície, isto é, diminuindo o tamanho da partícula. Por exemplo, U. S. 4.107.288 descreve uma formulação farmacêutica tendo partículas na faixa de tamanho de 10 a 1.000 nm em que o material ativo é suportado em uma matriz reticulada de macromoléculas. U. S. 5.145.684 descreve a produção de uma formulação farmacêutica em que a substância de fármaco é pulverizada para nanopartículas (tamanho de partícula médio de 400 nm) na presença de um modificador de superfície e depois dispersa em um meio líquido para dar uma formulação farmacêutica que exibe biodisponibilidade notavelmente alta. Ambos os documentos são incluídos por referência.
[00173] Em um outro aspecto, a invenção fornece composições farmacêuticas compreendendo uma (quantidade terapeuticamente eficaz) de um composto da fórmula (I), e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável. Excipientes aceitáveis são não tóxicos, auxiliam na administração, e não adversamente afetam o benefício terapêutico do composto da fórmula I. Tal excipiente pode ser qualquer sólido, líquido, semissólido ou, no caso de uma composição de aerossol, excipiente gasoso sendo em geral disponível a alguém de habilidade na técnica.
[00174] Excipientes farmacêuticos sólidos incluem amido, celulose, talco, glicose, lactose, sacarose, gelatina, malte, arroz, farinha, greda, sílica-gel, estearato de magnésio, estearato de sódio, monoestearato de glicerol, cloreto de sódio, leite desnatado secado e outros.
[00175] Excipientes líquidos e semissólidos podem ser selecionados de glicerol, propileno glicol, água, etanol e vários óleos, incluindo aqueles de origem de petróleo, animal, vegetal ou sintética, por exemplo, óleo de amendoim, óleo de soja, óleo mineral, óleo de gergelim, etc. Veículos líquidos preferidos, particularmente para soluções injetáveis, incluem água, dextrose salina, aquosa, e glicóis.
[00176] Gases comprimidos podem ser usados para dispersar um composto da fórmula (I) em forma de aerossol. Gases inertes adequados para este propósito são nitrogênio, dióxido de carbono, etc. Outros excipientes farmacêuticos adequados e suas formulações são descritos em Remington’s Pharmaceutical Sciences, editado por E. W. Martin (Mack Publishing Company, 18a edição, 1990).
[00177] A quantidade do composto em uma formulação pode variar dentro da faixa total empregada por aqueles versados na técnica. Tipicamente, a formulação conterá, em uma base de porcentagem em peso (%p), de cerca de 0,01-99,99 %p de um composto da fórmula (I) com base na formulação total, com o equilíbrio sendo um ou mais excipientes farmacêuticos adequados. Preferivelmente, o composto está presente em um nível de cerca de 1-80 %p.
[00178] A invenção ainda diz respeito às composições farmacêuticas compreendendo (isto é contendo ou consistindo em) pelo menos um composto da fórmula (I) e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[00179] Composições farmacêuticas compreendendo um composto da fórmula (I) em forma livre ou em forma de sal farmaceuticamente aceitável em associação com pelo menos um excipiente aceitável farmacêutico (tal como um veículo e/ou diluente) podem ser fabricadas de maneira convencional misturando os componentes.
[00180] Composições farmacêuticas combinadas compreendendo um composto da fórmula (I) em forma livre ou forma de sal farmaceuticamente aceitável e compreendendo ainda um par de combinação (ou em uma forma de unidade de dosagem ou como um kit de partes) em associação com pelo menos um veículo e/ou diluente farmacêuticos aceitáveis podem ser fabricadas de maneira convencional misturando com um veículo e/ou diluente farmaceuticamente aceitáveis com os ditos ingredientes ativos.
[00181] Por conseguinte, a invenção fornece em outros aspectos: ■ uma composição farmacêutica combinada, por exemplo para o uso em quaisquer dos métodos descritos aqui, compreendendo um composto da fórmula (I) em forma livre ou forma de sal farmaceuticamente aceitável em associação com um diluente e/ou veículo farmaceuticamente aceitável. ■ uma composição farmacêutica combinada compreendendo um composto da fórmula (I) em forma livre ou em forma de sal farmaceuticamente aceitável como ingrediente ativo; um ou mais material(is) de veículo farmaceuticamente aceitável(is) e / ou diluentes e opcionalmente uma ou mais outras substâncias de fármaco. Tal composição farmacêutica combinada pode ser na forma de uma forma unitária de dosagem ou como um kit de partes. ■ uma composição farmacêutica combinada compreendendo uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto da fórmula (I) em forma livre ou em forma de sal farmaceuticamente aceitável e uma segunda substância de fármaco, para administração simultânea ou sequencial. ■ um método como definido acima compreendendo coadministração, por exemplo concomitantemente ou em sequência, de uma quantidade não-tóxica terapeuticamente efetiva de um composto da fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e pelo menos uma segunda substância de fármaco, por exemplo como indicado acima, ■ uma combinação farmacêutica, por exemplo um kit, compreendendo a) um primeiro agente que é um composto da fórmula (I) como revelado aqui, em forma livre ou em forma de sal farmaceuticamente aceitável, e b) pelo menos um coagente, por exemplo como indicado acima; por meio do qual tal kit pode compreender instruções para sua administração,
[00182] Os exemplos seguintes dos compostos da fórmula (I) ilustram a invenção sem limitar seu escopo, Métodos para preparar tais compostos são descritos doravante, EXEMPLO 1: 1-{[5-(2TERC -BUTIL-PIRIDIN-4-IL)-4-METIL-TIAZOL-2IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0024
[00183] Et3N (1 lução de [5-(2-terc-butil-piridin-4-il)-4-metil-tiazol-2-il]-amida de ácido imidazol-1-carboxílico (Etapa 1,1) (1,26 g, 3,7 mmol) e L-prolinamida (0,548 g, 4,8 mmol, 1,3 eq) em DMF (25 ml), sob uma atmosfera de argônio. A mistura de reação é agitada por 14 h em ta, extinta por adição de uma solução saturada de NaHCOs, e extraída com EtOAc. A fase orgânica é lavada com uma solução saturada de NaHCOs, secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (DCM/MeOH, 1:0 p 94:6), seguido por trituração em Et2O para fornecer 1,22 g do composto do título como um sólido esbranquiçado: ESI-MS: 388,1 [M+H]+; ÍR = 2,35 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,36 (DCM/MeOH, 9:1). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 1,32 (s, 9 H) 1,75-1,95 (m, 3 H) 1,97 2,13 (m, 1 H) 2,39 (s, 3 H) 3,38-3,50 (m, 1 H) 3,52-3,65 (m., 1 h) 4,10-4,40 (m, 1 H) 6,94 (br. s., 1 h) 7,22 (d, 1 H) 7,30 7,48 (m, 2 H) 8,49 (d, 1 H) 10,87 (br. s., 1 h)
[00184] ETAPA 1.1: [5-(2TERC -BUTIL-PIRIDIN-4-IL)-4-METIL-TIAZOL-2-IL]-AMIDA DE ÁCIDO IMIDAZOL-1-CARBOXÍLICO
Figure img0025
[00185] Uma mistura de 5-(2-terc-butil-piridin-4-il)-4-metil-tiazol-2ilamina (Etapa 1.2) (1 g, 4,05 mmol) e 1,1’-carbonildiimidazol (0,984 g, 6,07 mmol, 1,5 eq) em DCM (50 ml) é agitada por 4 h a refluxo e deixada esfriar. O precipitado resultante é colhido através de filtração para fornecer 1,26 g do composto do título como sólido branco: ESI-MS: 340,2 [M-H]-; ÍR = 2,85 min (Sistema 1).
[00186] ETAPA 1.2: 5-(2TERC -BUTIL-PIRIDIN-4-IL)-4-METIL-TIAZOL-2-ILAMINA
Figure img0026
[00187] Uma mistura de N-[5-(2-terc-butil-piridin-4-il)-4-metil-tiazol2-il]-acetamida (Etapa 1.3) (2 g, 7 mmol), uma solução aquosa a 6N de HCl (10 ml) e EtOH (50 ml) é agitada por 2 h a 85°C, deixada esfriar, extinta por adição de uma solução saturada de NaHCO) e extraída com DCMIMeOH (9:1, vIv). A fase orgânica é lavada com uma solução saturada de NaHCO), secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (DCMIMeOH, 1:0 p 96:4) para fornecer 1,21 g do composto do título como um sólido amarelo: ESI-MS: 248,1 [M+H]+; TLC: Rf = 0,36 (DCMIMeOH, 9:1).
[00188] ETAPA 1.3: N-[5-(2-TERC-BUTIL-PIRIDIN-4-IL)-4-METILTIAZOL-2-IL]-ACETAMIDA
Figure img0027
[00189] Uma mistura de 2-acetamido-4-metiltiazol (1,2 g, 7,7 mmol, 1,1 eq), carbonato de césio (4,55 g, 14 mmol, 2 eq), tetrafluoroborato de tri-terc-butilfosfínio (0,406 g, 1,4 mmol, 0,2 eq), acetato de paládio (II) (0,15 g, 0,7 mmol, 0,1 eq) e 4-bromo-2-terc-butil-piridina (Etapa 1.4) (1,5 g, 7 mmol) em DMF (50 ml) é agitada por 1,5 h a 90°C sob uma atmosfera de argônio, deixada esfriar, extinta por adição de uma solução saturada de NaHCO3 e filtrada através de um bloco de celite. O filtrado é extraído com EtOAc. A fase orgânica é lavada com uma solução saturada de NaHCOs, secada (N^SO4), filtrada e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (DCM/MeOH, 1:0 p 97:3) para fornecer 2,02 g do composto do título como um sólido amarelo: ESI-MS: 290,1 [M+H]+; TLC: Rf = 0,35 (DCM/MeOH, 9:1).
[00190] ETAPA 1.4: 4-BROMO-2TERC -BUTIL-PIRIDINA
Figure img0028
[00191] Uma mistura de 2-terc-butil-1H-piridin-4-ona (Etapa 1.5) (4,25 g, 28 mmol) e POBr3 (8,88 g, 31 mmol, 1,1 eq) é aquecida a 120°C, agitada por 15 min, permitida esfriar, extinta por adição de uma solução saturada de NaHCO) e é extraída com DCM/MeOH (9:1, v/v). A fase orgânica é lavada com uma solução saturada de NaHCO), secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 95:5) para fornecer 5,18 g do composto do título como um óleo amarelo: ESI-MS: 214,0 / 216,0 [M+H]+; tR = 2,49 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,35 (Hex/EtOAc, 1:1).
[00192] ETAPA 1.5: 2TERC -BUTIL-1H-PIRIDIN-4-ONA
Figure img0029
[00193] Uma mistura de 2-terc-butil-piran-4-ona (Etapa 1.6) (5,74 g, 37,7 mmol) e uma solução aquosa a 30% de hidróxido de amónio (100 ml) é agitada por 1 h a refluxo, deixada esfriar e concentrada. O resíduo é triturado com MeOH (200 ml) e filtrado. O filtrado é concentrado e o resíduo purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (DCM/MeOH/NHsaq, 94:5:1 p 92:7:1) para fornecer 4,46 g do composto do título como um sólido amarelo: ESI-MS: 152,0 [M+H]+; ÍR = 1,45 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,11 (DCM/MeOH, 9:1),
[00194] ETAPA 1,6: 2TERC -BUTIL-PIRAN-4-ONA
Figure img0030
[00195] Uma mistura de 5-hidróxi-1-metóxi-6,6-dimetil-hepta-1,4dien-3-ona (Etapa 1,7) (6,8 g, 36,9 mmol) e TFA (5,65 ml, 74 mmol, 2 eq) em benzeno (250 ml) é agitada por 14 h em ta e concentrada. Purificação do resíduo através de cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 1:0 p 75:25) fornece 5,74 g do composto do título como um óleo amarelo: ESI-MS: 153,1 [M+H]+; tR = 3,21 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,22 (Hex/EtOAc, 1:1).
[00196] ETAPA 1.7: 5-HIDRÓXI-1-METÓXI-6,6-DIMETIL-HEPTA1,4-DIEN-3-ONA
Figure img0031
[00197] LiHMDS (1M em THF, 100 ml, 2 eq) é acrescentado a gotas a uma solução gelada (-78°C) de 4-metóxi-3-buten-2-ona (10 ml, 100 mmol, 2 eq) em THF (400 ml). Após uns 30 min agitando a -78°C, uma solução de cloreto de pivaloíla (6,12 ml, 50 mmol) em THF (100 ml) é adicionada, A mistura resultante é deixada aquecer-se para ta por 2 h e extinta por adição de uma solução saturada de NH4Cl, THF é removido sob vácuo. A mistura concentrada é extraída com Et2O. A fase orgânica é lavada com salmoura, secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 1:0 p 85:15) para fornecer 6,83 g do composto do título como um óleo amarelo: ESI-MS: 185,1 [M+H]+; TLC: Rf = 0,87 (Hex/EtOAc, 1:1), EXEMPLO 2: 1-{[5-(2-CICLOPROPIL-PIRIDIN-4-IL)-4-METIL-TIAZOL2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0032
[00198] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes, Na Etapa 1,1, a mistura de reação é agitada por 4 h a refluxo, Na Etapa 1,2, a mistura de reação é agitada por 2 h a 85°C, Na Etapa 1,3, 4cloro-2-(1-metil-ciclopropil)-piridina (Etapa 2,1) é usada e a mistura de reação é agitada por 2 h a 150°C, Composto do título: ESI-MS: 372,1 [M+H]+; TLC: Rf = 0,35 (DCM/MeOH, 9:1),
[00199] ETAPA 2,1: 4-CLORO-2-CICLOPROPIL-PIRIDINA
Figure img0033
[00200] O composto do título é preparado de acordo com uma modificação de um procedimento descrito na literatura [Comins, D, L,; Mantlo, N, B,, Journal of Organic Chemistry, (1985), 50, 4410-4411],
[00201] Brometo de ciclopropilmagnésio (0,5M em THF, 100 ml, 50 mmol, 2,2 eq) é acrescentado em uma porção a uma suspensão gelada (-78°C) de cloridrato de 4-cloropiridina (3,4 g, 22 mmol) em THF (68 ml). Após uns 10 min agitando a -78°C, cloroformato de fenila (2,76 ml, 22 mmol) é adicionado a gotas. A mistura de reação é agitada a -78°C por 15 min, deixado aquecer-se para ta, extinta por adição de uma solução aquosa a 20% de NH4@l e extraída com Et20 (2 x 100 ml). A fase orgânica é lavada com uma solução saturada de NaHCO) (50 ml), secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. Ao resíduo dissolvido em tolueno (100 ml), uma solução de o-cloranila (6 g, 24,2 mmol, 1,1 eq) em AcOH glacial (50 ml) é adicionada. A mistura de reação é agitada por 14 h em ta, esfriada para 0°C, basificada por adição de uma solução aquosa a 10% de NaOH e filtrada através de um bloco de celite. A camada orgânica do filtrado é lavada com H2O (20 ml) e extraída com uma solução aquosa a 10% de HCl () x 25 ml). As camadas acídicas combinadas são basificadas por adição de solução aquosa a 20% de NaOH e extraídas com DCM (3 x 25 ml). A fase orgânica é lavada com H2O (50 ml), secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel (DCM/MeOH, 1:0 p 99:1) para fornecer 0,951 g do composto do título como um óleo incolor: ESI-MS: 154,1 [M+H]+; tR = 1,41 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,85 (DCM/MeOH, 9:1). EXEMPLO 3: 1-({5-[2-(2-FLUORO-FENIL)-PIRIDIN-4-IL]-4-METILTIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2DICARBOXÍLICO
Figure img0034
[00202] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas usando 4-cloro-2-(2-fluoro-fenil)piridina (Etapa 3.1) e agitando a mistura correspondente por 2 h a 150°C na Etapa 1.3: ESI-MS: 426,1 [M+H]+; tR = 2,60 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,40 (DCM/MeOH, 9:1).
[00203] ETAPA 3.1: 4-CLORO-2-(2-FLUORO-FENIL)-PIRIDINA
Figure img0035
[00204] Uma mistura de ácido 2-fluorofenilborônico (141 mg, 1 mmol, 1,2 eq) em EtOH (1 ml) é acrescentada a uma mistura de 4cloro-2-iodo-piridina [Choppin, S.; Gros, P.; Fort, Y., European Jorunal of Organic Chemistry (2001), (3), 603-606] (200 mg, 0,84 mmol), PdCh(dppf) (18 mg, 0,025 mmol, 0,03 equiv) e Na2CO3 (2 M de solução em H2O, 1,68 ml, 3,36 mmol, 4 equiv) em tolueno (2 ml) a 105°C, sob uma atmosfera de argônio. A mistura de reação é agitada a 105°C por 1 h, deixada esfriar para ta, extinta por adição de uma solução saturada de NaHCO3 e extraída com EtOAc. A fase orgânica é lavada com uma solução saturada de NaHCO3, secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 1:0 p 97:3) para fornecer 127 mg do composto do título como um sólido branco: ESI-MS: 208,1 [M+H]+; tR = 4,66 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,27 (Hex/EtOAc, 9:1). EXEMPLO 4: 1-{[5-(2-CICLOBUTIL-PIRIDIN-4-IL)-4-METIL-TIAZOL-2IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0036
[00205] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes, No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 4 h em ta, diluída com EtOAc e H2O, e extraída com EtOAc, Após secagem e concentração da fase orgânica, o resíduo é purificado através de trituração em DCM, Na Etapa 1,3, a mistura de reação é agitada por 2 h a 120°C, esfriada, diluída com EtOAc e H2O, filtrada através de um bloco de celite e extraída com EtOAc, Após secagem e concentração da fase orgânica, o resíduo é purificado através de trituração em Et2O, Na Etapa 1,5, a mistura de reação é agitada por 1 h a 80°C e trituração em MeOH não é executada, Na Etapa 1,7, 4-metóxi-3-buten-2-ona em THF é adicionada a uma solução gelada (-78°C) de LiHMDS em THF, Após 30 min, cloreto de ciclobutilcarbonila é adicionado em THF e a mistura de reação é deixada alcançar ta por 18 h,
[00206] Composto do título: ESI-MS: 386,1 [M+H]+; TLC: Rf = 0,11 (DCM/MeOH, 95:5), EXEMPLO 5: 1-({4-METIL-5-[2-(1-METIL-CICLOPROPIL)-PIRIDIN-4IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0037
[00207] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes, Na Etapa 1,1, a mistura de reação é agitada por 14 h a refluxo, Na Etapa 1,2, a mistura de reação é agitada por 1 h a 85°C, Na Etapa 1,3, a mistura de reação é agitada por 3 h a 120°C, Na Etapa 1,5, a mistura de reação é agitada por 1 h a 65-70°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.7, cloreto de 1-metil-ciclopropanocarbonila (Etapa 5.1) é usado.
[00208] Composto do título: ESI-MS: 386,1 [M+H]+; TLC: Rf = 0,40 (DCM/MeOH, 9:1). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 0,71 0,87 (m, 2 H) 1,11 1,26 (m, 2 H) 1,47 (s, 3 H) 1,74 1,96 (m, 3 H) 2,002,15 (m, 1 H) 2,39 (s, 3 H) 3,35 3,52 (m, 1 H) 3,52 3,73 (m, 1 H) 4,10-4,40 (m, 1 H) 6,93 (br. s., 1 h) 7,15 (dd, 1 H) 7,27 (s, 1 H) 7,35 (s, 1 H) 8,40 (d, 1 H) 10,99 (br. s., 1 h)
[00209] ETAPA 5.1: CLORETO DE 1-METIL-CICLOPROPANOCARBONIL
Figure img0038
[00210] Uma mistura de ácido 1-metil-ciclopropanocarboxílico (10 g, 100 mmol) e cloreto de oxalila (10,49 ml, 120 mmol, 1,2 eq) em CHCh (80 ml) é agitada por 4 h a 70°C. A mistura de reação é concentrada para fornecer 11,8 g do composto do título como um óleo amarelo que é usado sem outra purificação. EXEMPLO 6: 1-({4-METIL-5-[2-(1-METIL-CICLOBUTIL)-PIRIDIN-4-IL]TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2DICARBOXÍLICO
Figure img0039
[00211] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é extinguida por diluição com EtOAc e JO, e extraída com EtOAc. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 2 h a 100°C. Na Etapa 1.3, a mistura de reação é agitada por 3 h a 100°C, diluída com EtOAc/JO, e extraída com EtOAc. Após secagem e concentração da fase orgânica, o resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 1:4). Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 2 h a 80°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.7, 4-metóxi-3-buten-2-ona (50 mmol) em THF (100 ml) é acrescentado a uma solução gelada (-78°C) de LiHMDS (1M em THF, 100 ml) em THF (200 ml). Após 30 min, cloreto de 1-metil-ciclobutano (Etapa 6.1) é adicionado e a mistura de reação é deixada alcançar ta por 18 h.
[00212] Composto do título: ESI-MS: 400,1 [M+H]+; TLC: Rf = 0,06 (DCM/MeOH/NJaq, 94:5:1).
[00213] ETAPA 6.1: CLORETO DE 1-METIL-CICLOBUTANOCARBONIL
Figure img0040
[00214] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 5.1 mas usando ácido 1-metil-ciclobutanocarboxílico [Cowling, S. J.; Goodby, J. W., Chemical Communications, (2006), (39), 4107-4109]. EXEMPLO 7: 1-{[5-(2-TERC-BUTIL-PIRIDIN-4-IL)-TIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0041
[00215] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 16 h em ta, extinta por diluição com EtOAc/H2O, e extraída com EtOAc. Na Etapa 1.1, a mistura de reação é agitada por 2 h a refluxo. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 1 h a 100°C. Na Etapa 1.3, N-tiazol-2-il-acetamida é usada. A mistura de reação é agitada por 2 h a 120°C, diluída com EtOAc/H2O e extraída com EtOAc. Após secagem e concentração da fase orgânica, o resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 1:1), seguido por trituração em Et2O.
[00216] Composto do título: ESI-MS: 374,1 [M+H]+; tR = 2,16 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,10 (DCM/MeOH/NH)aq, 94:5:1). EXEMPLO 8: 1-{[5-(2-ISOPROPIL-PIRIDIN-4-IL)-4-METIL-TIAZOL-2IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0042
[00217] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 16 h em ta, extinta por diluição com EtOAc/H2O, e extraída com EtOAc. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 2 h a 100°C. Na Etapa 1.3, 4-cloro-2isopropil-piridina (Etapa 8.1) é usada. A mistura de reação é agitada por 3 h a 150°C, diluída com EtOAc/H2O, e extraída com EtOAc. Após secagem e concentração da fase orgânica, o resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 25:75).
[00218] Composto do título: ESI-MS: 374,1 [M+H]+; tR = 1,99 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,10 (DCM/MeOH/NH)aq, 94:5:1).
[00219] ETAPA 8.1: 4-CLORO-2-ISOPROPIL-PIRIDINA
Figure img0043
[00220] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 2.1 mas usando cloreto de isopropilmagnésio (2M em THF): ESI-MS: 156,0 [M+H]+; TLC: Rf = 0,32 (DCM). EXEMPLO 9: 1-{[5-(2-CICLOBUTIL-PIRIDIN-4-IL)-TIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0044
[00221] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 16 h em ta, diluída com DCM/H2O e extraída com DCM. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 2 h a 100°C e o produto bruto não é purificado. Na Etapa 1.3, N-tiazol-2-il-acetamida é usada. A mistura de reação é agitada por 3 h a 120°C, extinta por diluição com EtOAc/H2O, e extraída com EtOAc. Após secagem e concentração da fase orgânica, o resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 2:3). Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 1 h a 80°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.7, Na Etapa 1.7, 4metóxi-3-buten-2-ona (50 mmol) em THF (100 ml) é acrescentada a uma solução gelada (-78°C) de LiHMDS (1M em THF, 100 ml) em THF (200 ml). Após 30 min, cloreto de ciclobutilcarbonila é adicionado e a mistura de reação é deixada alcançar ta por 18 h.
[00222] Composto do título: ESI-MS: 372,1 [M+H]+; TLC: Rf = 0,13 (DCM/MeOH / NH)aq, 91,5:7,5:1). EXEMPLO 10: 1-({5-[2-(1-METIL-CICLOPROPIL)-PIRIDIN-4-IL]-TIAZOL -2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0045
[00223] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. Na Etapa 1.1, a mistura de reação é agitada por 14 h a refluxo. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 1 h a 85°C. Na Etapa 1.3, Ntiazol-2-il-acetamida é usada e a mistura de reação é agitada por 4 h a 120°C. Na Etapa 1.5, trituração não é executada em MeOH. Na Etapa 1.7, cloreto de 1-metil-ciclopropanocarbonila (Etapa 5.1) é usado.
[00224] Composto do título: ESI-MS: 372,1 [M+H]+; TLC: Rf = 0,43 (DCM/MeOH, 9:1). EXEMPLO 11: 1-({5-[2-(1-TRIFLUOROMETIL-CICLOPROPIL)-PIRIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0046
[00225] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. Na Etapa 1.1, a mistura de reação é agitada por 14 h a refluxo. Na Etapa 1.3, N-tiazol-2-il-acetamida é usada. A mistura de reação é agitada por 2 h a 120°C. Na Etapa 1.4, 1,2-dicloroetano (2,55 ml por mmol de piridin-4-ona) é usado como o solvente. A mistura de reação é agitada por 1 h a 83°C e extraída com EtOAc após ser extinta. Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 1 h a 65°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.7, cloreto de 1-trifluorometil-ciclopropanocarbonila (Etapa 11.1) é usado.
[00226] Composto do título: ESI-MS: 426,0 [M+H]+; tR = 2,35 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,25 (DCM/MeOH, 9:1).
[00227] ETAPA 11.1: CLORETO DE 1-TRIFLUOROMETIL-CICLOPROPANOCARBONILA
Figure img0047
[00228] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 5.1 mas usando ácido 1-trifluorometilciclopropanocarboxílico. EXEMPLO 12: 1-({5-[2-(2,2,2-TRIFLUORO-1,1-DIMETIL-ETIL)-PIRIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0048
[00229] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 5 h em ta. Na Etapa 1.1, a mistura de reação é agitada por 14 h a refluxo. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 1 h a 85°C e extraída com EtOAc após ser extinta. Na Etapa 1.3, N-tiazol-2-il-acetamida é usada. A mistura de reação é agitada por 2,5 h a 120°C. Na Etapa 1.4, a mistura de reação é agitada por 1 h a 83°C e extraída com EtOAc após ser extinta. Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 1 h a 65°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.6, o produto bruto não é purificado. Na Etapa 1.7, cloreto de 3,3,3-trifluoro-2,2-dimetil-propionila (Etapa 12.1) é usado.
[00230] Composto do título: ESI-MS: 428,0 [M+H]+; tR = 2,75 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,21 (DCM/MeOH, 9:1).
[00231] ETAPA 12.1: CLORETO DE 3,3,3-TRIFLUORO-2,2-DIMETIL-PROPIONILA
Figure img0049
[00232] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 5.1 mas usando ácido 3,3,3-trifluoro-2,2dimetil-propiônico. EXEMPLO 13: 1-({5-[2-(1-TRIFLUOROMETIL-CICLOBUTIL)-PIRIDIN4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO -1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0050
[00233] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 18 h em ta, extinta por diluição com DCM/H2O e extraída com DCM. Na Etapa 1.1, a mistura de reação é agitada por 1 h a refluxo. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 1 h a 100°C e extraída com DCM após ser extinta. Na Etapa 1.3, N-tiazol-2-il-acetamida é usada. A mistura de reação é agitada por 5 h a 120°C, extinta por diluição com EtOAc/H2O e extraída com EtOAc. Na Etapa 1.4, 1,2-dicloroetano (2,26 ml por mmol de piridin-4-ona) é usado como o solvente. A mistura de reação é agitada por 1 h a refluxo e extraída com DCM após ser extinta. Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 1 h em ta e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.6, a mistura de reação é agitada por 18 h em ta. Na Etapa 1.7, 4-metóxi-3-buten-2-ona em THF é adicionada a uma solução gelada (-78°C) de LiHMDS em THF. Após 30 min, cloreto de 1-trifluorometil-ciclobutanocarbonila (Etapa 13.1) em THF é adicionado. A mistura de reação é deixada alcançar ta por 18 h e extraída com EtOAc após ser extinta.
[00234] Composto do título: ESI-MS: 440,0 [M+H]+; tR = 2,68 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,08 (DCM/MeOH / NH3aq, 91,5:7,5:1).
[00235] ETAPA 13.1: CLORETO DE 1-TRIFLUOROMETIL-CICLOBUTANOCARBONILA
Figure img0051
[00236] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 5.1 mas usando ácido 1-trifluorometil-ciclobutanocarboxílico e agitando a mistura de reação por 2 h a refluxo. EXEMPLO 14: 1-({4-METIL-5-[2-(1-TRIFLUOROMETIL-CICLOPROPIL)-PIRIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0052
[00237] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. Na Etapa 1.1, a mistura de reação é agitada por 14 h a refluxo. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 1 h a 85°C e extraída com EtOAc após ser extinta. Na Etapa 1.3, a mistura de reação é agitada por 2 h a 120°C. Na Etapa 1.4, 1,2-dicloroetano (2,55 ml por mmol de piridin4-ona) é usado como o solvente. A mistura de reação é agitada por 1 h a 83°C e extraída com EtOAc após ser extinta. Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 1 h a 65°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.7, cloreto de 1-trifluorometil-ciclopropanocarbonila (Etapa 11.1) é usado.
[00238] Composto do título: ESI-MS: 440,0 [M+H]+; tR = 2,65 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,36 (DCM/MeOH, 9:1). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 1,41 (s, 4 H) 1,70-1,90 (m, 3 H) 2,00 2,10 (m, 1 H) 2,40 (s, 3 H) 3,36 3,52 (m, 1 H) 3,52-3,65 (m, 1 H) 4,10-4,40 (m, 1 H) 6,95 (br. s., 1 h) 7,37 (d, 2 H) 7,47 (s, 1 H) 8,52 (d, 1 H) 10,94 (br. s., 1 h) EXEMPLO 15: 1-({4-METIL-5-[2-(2,2,2-TRIFLUORO-1,1-DIMETILETIL)-PIRIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0053
[00239] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. Na Etapa 1.1, a mistura de reação é agitada por 14 h a refluxo. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 1 h a 85°C e extraída com EtOAc após ser extinta. Na Etapa 1.3, a mistura de reação é agitada por 2,5 h a 120°C. Na Etapa 1.4, a mistura de reação é agitada por 1 h a 83°C e extraída com EtOAc após ser extinta. Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 1 h a 65°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.6, o produto bruto não é purificado. Na Etapa 1.7, cloreto de 3,3,3-trifluoro-2,2-dimetil-propionila (Etapa 12.1) é usado.
[00240] Composto do título: ESI-MS: 442,0 [M+H]+; tR = 3,02 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,35 (DCM/MeOH, 9:1). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 1,60 (s, 6 H) 1,70-1,95 (m, 3 H) 1,99 2,16 (m, 1 H) 2,40 (s, 3 H) 3,38 3,51 (m, 1 H) 3,51 3,69 (m, 1 H) 4,10-4,40 (m, 1 H) 6,95 (br. s., 1 h) 7,39 (d, 2 H) 7,53 (s, 1 H) 8,58 (d, 1 H) 10,93 (br. s., 1 h).
[00241] Em um procedimento alternativo o composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes: N,N-Dimetilacetamida é usada em vez de DMF e a mistura é agitada a 65°C por 2 h. Na Etapa 1.1, cloroformato de fenila (adicionado lentamente) é usado em vez de 1,1’carbonildiimidazol e a reação é realizada em THF na presença de N,Ndietil-isopropilamina em temperatura ambiente (1,5 h). Na Etapa 1.2, a mistura de reação é aquecida sob agitação por 5 h sob (refluxo) e extraída com EtOAc após ser extinta. Na Etapa 1.3, a mistura de reação é agitada por 2 h a 100°C. Na Etapa 1.4, a reação é passada em tolueno usando 1,1 equivalente de POBr3 e 1,1 equivalente de tripropilamina e a mistura é agitada por 2 h a 80°C e extraída com EtOAc após ser extinta. Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 1 h a 65°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.6, tolueno é usado em vez de benzeno e o produto bruto não é purificado. Na Etapa 1.7, cloreto de 3,3,3-trifluoro-2,2-dimetil-propionila (Etapa 12.1) é usado. EXEMPLO 16: 1-({4-METIL-5-[2-(1-TRIFLUOROMETIL-CICLOBUTIL)PIRIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0054
[00242] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes, No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 72 h em ta, extinta por diluição com DCM/H2O e extraída com DCM, Na Etapa 1,1, a mistura de reação é agitada por 1 h a refluxo, Na Etapa 1,2, a mistura de reação é agitada por 2 h a 100°C e extraída com DCM após ser extinta, Na Etapa 1,3, a mistura de reação é agitada por 6 h a 120°C, extinta por diluição com EtOAc/H2O, filtrada através de um bloco de celite e extraída com EtOAc, Na Etapa 1,4, 1,2-dicloroetano (2,26 ml por mmol de piridin-4-ona) é usado como o solvente, A mistura de reação é agitada por 1 h a refluxo e extraída com DCM após ser extinta, Na Etapa 1,5, a mistura de reação é agitada por 1 h em ta e trituração em MeOH não é executada, Na Etapa 1,6, a mistura de reação é agitada por 18 h em ta, Na Etapa 1,7, 4-metóxi-3-buten-2-ona em THF é adicionada a uma solução gelada (-78°C) de LiHMDS em THF, Após 30 min, cloreto de 1-trifluorometil-ciclobutanocarbonila (Etapa 13,1) em THF é adicionado, A mistura de reação é deixada alcançar ta por 18 h e extraída com EtOAc após ser extinta,
[00243] Composto do título: ESI-MS: 454,1 [M+H]+; tR = 2,90 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,22 (DCM/MeOH / NH3aq, 91,5:7,5:1), EXEMPLO 17: 1-({5-[2-(1-METIL-CICLOBUTIL)-PIRIDIN-4-IL]TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2DICARBOXÍLICO
Figure img0055
[00244] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes, No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 24 h em ta, extinta por diluição com EtOAc/H2O, e extraída com EtOAc, Na Etapa 1,2, a mistura de reação é agitada por 2 h a 100°C e extraída com DCM após ser extinta, Na Etapa 1,3, N-tiazol-2-il-acetamida é usada, A mistura de reação é agitada por 3 h a 100°C, diluída com EtOAc/H2O, e extraída com EtOAc, Após secagem e concentração da fase orgânica, o resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 25:75), Na Etapa 1,5, a mistura de reação é agitada por 2 h a 80°C e trituração em MeOH não é executada, Na Etapa 1,7, 4metóxi-3-buten-2-ona em THF é adicionada a uma solução gelada (78°C) de LiHMDS em THF, Após 30 min, cloreto de 1-metil-ciclobutano (Etapa 6,1) em THF é adicionado e a mistura de reação é deixada alcançar ta por 18 h,
[00245] Composto do título: ESI-MS: 386,1 [M+H]+; tR = 2,32 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,05 (DCM/MeOH/NH3aq, 94:5:1), EXEMPLO 18: 1-({5-[2-(1-CIANO-CICLOPROPIL)-PIRIDIN-4-IL]-4METIL-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0056
[00246] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes, No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 16 h em ta, extinta por diluição com EtOAc/H2O, e extraída com EtOAc, Na Etapa 1,1, 1-[4-(2amino-4-metil-tiazol-5-il)-piridin-2-il]-ciclopropanocarbonitrila (Etapa 18,1) é usada e a mistura de reação é agitada por 2 h a refluxo,
[00247] Composto do título: ESI-MS: 397,0 [M+H]+; tR = 2,90 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,08 (DCM/MeOH/NH)aq, 94:5:1), 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 1,69 1,93 (m, 7 H) 2,00-2,20 (m, 1 H) 2,42 (s, 3 H) 3,38-3,50 (m, 1 H) 3,50-3,65 (m, 1 H) 4,10-4,40 (m, 1 H) 6,94 (br, s,, 1 h) 7,34 (dd, 1 H) 7,37 (br, s,, 1 h) 7,47 (s, 1 H) 8,47 (d, 1 H)
[00248] ETAPA 18,1: 1-[4-(2-AMINO-4-METIL-TIAZOL-5-IL)-PIRIDIN-2-IL]-CICLOPROPANOCARBONITRILA
Figure img0057
[00249] Uma mistura de éster de terc-butila de ácido {5-[2-(1-cianociclopropil)-piridin-4-il]-4-metil-tiazol-2-il}-carbâmico (Etapa 18,2) (295 mg), DCM (4 ml) e TFA (1 ml) é agitada por 2 h em ta e depois concentrada, O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (DCM/MeOH/NH3aq, 94:5:1) para fornecer 182 mg do composto do título: ESI-MS: 257,1 [M+H]+; tR = 2,54 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,30 ((DCM/MeOH/NH3aq, 94:5:1),
[00250] ETAPA 18,2: ÉSTER DE TERC -BUTILA DE ÁCIDO {5-[2(1-CIANO-CICLOPROPIL)-PIRIDIN-4-IL]-4-METIL-TIAZOL-2-IL}CARBÂMICO
Figure img0058
[00251] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 1.3, mas usando 1-(4-bromo-piridin-2-il)ciclopropanocarbonitrila (Etapa 18.3) e éster de terc-butila de ácido (4metil-tiazol-2-il)-carbâmico (Etapa 18.4). A mistura de reação é agitada por 2 h a 100°C, extinta por diluição com EtOAc/H2O, e extraída com EtOAc. O produto bruto é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 1:1) para fornecer 122 mg do composto do título como um sólido branco: ESI-MS: 357,1 [M+H]+; tR = 4,86 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,29 (Hex/EtOAc, 1:1).
[00252] ETAPA 18.3: 1-(4-BROMO-PIRIDIN-2-IL)-CICLOPROPANOCARBONITRILA
Figure img0059
[00253] LiHMDS (1M em tolueno, 17,6 ml, 17,6 mmol, 3,1 eq) é acrescentado a gotas a uma mistura gelada (-5°C) de 4-bromo-2fluoro-piridina [Marsais, F., et al, Journal of Organic Chemistry, (1992), 57, 565-573] (1 g, 5,7 mmol), ciclopropanocarbonitrila (1,25 ml, 17 mmol, 3 eq), peneiras moleculares 4 A e tolueno (20 ml). A mistura de reação é deixada aquecer-se para ta, agitada por 16 h, vertida em H2O e filtrada. O filtrado é diluído com EtOAc/H2O e extraído com EtOAc. A fase orgânica é lavada com H2O e salmoura, secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 9:1), para fornecer 620 mg do composto do título como um sólido branco: ESI-MS: 223,1/225,1 [M+H]+; tR = 4,22 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,25 (Hex/EtOAc, 9:1).
[00254] ETAPA 18.4: ÉSTER DE TERC-BUTILA DE ÁCIDO (4METIL-TIAZOL-2-IL)-CARBÂMICO
Figure img0060
[00255] Uma solução de di-terc-butil-dicarbonato (21 g, 96,5 mmol, 1,1 eq) em t-BuOH (50 ml) é acrescentada a uma solução de 4-metil-2aminotiazol (10 g, 87,7 mmol) e DMAP (1,1 g, 8,8 mmol, 0,1 eq) em tBuOH (50 ml), A mistura de reação é agitada por 72 h em ta e concentrada. O resíduo é diluído com EtOAc/H2O e extraído com EtOAc. A fase orgânica é lavada com H2O e salmoura, secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (DCM/MeOH, 98:2), para fornecer 15,2 g do composto do título como um sólido branco: ESI-MS: 215,1 [M+H]+; tR = 3,43 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,30 (DCM/MeOH, 98:2). EXEMPLO 19: 1-({5-[2-(1-CIANO-CICLOBUTIL)-PIRIDIN-4-IL]-4-METIL-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0061
[00256] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 6 h em ta. Na Etapa 1.1, 1-[4-(2-amino-4-metil-tiazol-5-il)-piridin-2-il]-ciclobutanocarbonitrila (Etapa 19.1) é usada e a mistura de reação é agitada por 3 h a refluxo.
[00257] Composto do título: ESI-MS: 411,1 [M+H]+; TLC: Rf = 0,36 (DCM/MeOH, 9:1).
[00258] ETAPA 19.1: 1-[4-(2-AMINO-4-METIL-TIAZOL-5-IL)-PIRIDIN-2-IL]-CICLOBUTANOCARBONITRILA
Figure img0062
[00259] Uma mistura de éster de terc-butila de ácido {5-[2-(1-cianociclobutill)-piridin-4-il]-4-metil-tiazol-2-il}-carbâmico (Etapa 19.2) (300 mg), DCM (5 ml) e TFA (1 ml) é agitada por 4 h em ta, extinta por adição de uma solução saturada de NaHCO3 (50 ml), e extraída com DCM (3 x 75 ml). A fase orgânica é lavada com uma solução saturada de NaHCO) (2 x 50 ml), secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (DCM/MeOH, 1:0 p 96:4) para fornecer 181 mg do composto do título como um sólido amarelo: ESI-MS: 271,1 [M+H]+; tR = 2,48 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,45 (DCM/MeOH, 9:1).
[00260] ETAPA 19.2: ÉSTER DE TERC -BUTILA DE ÁCIDO {5-[2(1-CIANO-CICLOBUTIL)-PIRIDIN-4-IL]-4-METIL-TIAZOL-2-IL}CARBÂMICO
Figure img0063
[00261] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 1.3, mas usando 1-(4-bromo-piridin-2-il)-ciclobutanocarbonitrila (Etapa 19.3) e éster de terc-butila de ácido (4-metiltiazol-2-il)-carbâmico (Etapa 18.4). A mistura de reação é agitada por 3 h a 100OC. Composto do título: ESI-MS: 371,1 [M+H]+; tR = 4,86 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,66 (Hex/EtOAc, 1:1).
[00262] ETAPA 19.3: 1-(4-BROMO-PIRIDIN-2-IL)-CICLOBUTANOCARBONITRILA
Figure img0064
[00263] LiHMDS (1M em tolueno, 17,7 ml, 17,7 mmol, 3,1 eq) é acrescentado a gotas a uma solução gelada (-5°C) de 4-bromo-2fluoro-piridina [Marsais, F., et al, Journal of Organic Chemistry, (1992), 57, 565-573] (1 g, 5,7 mmol) e ciclobutanocarbonitrila (1,39 g, 17,1 mmol, 3 eq) em tolueno (20 ml). A mistura de reação é deixada aquecer-se para ta, agitada por 5 h, extinta por adição de uma solução saturada de NaHCO3 (50 ml) e filtrada através de um bloco de celite. O filtrado é extraído com EtOAc (3 x 75 ml). A fase orgânica é lavada com uma solução saturada de NaHCO3 (2 x 50 ml), secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 1:0 p 95:5) para fornecer 933 mg do composto do título como um óleo amarelo: ESI-MS: 237,0/239,0 [M+H]+; tR = 4,27 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,30 (Hex/EtOAc, 9:1). EXEMPLO 20: 1-({5-[2-(1-CARBAMOIL-CICLOBUTIL)-PIRIDIN-4-IL]4-METIL-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0065
[00264] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 3 h em ta. Na Etapa 1.1, amida de ácido 1-[4-(2-amino-4-metil-tiazol-5-il)-piridin-2-il]-ciclobutanocarboxílico (Etapa 20.1) é usada e a mistura de reação é agitada por 12 h a refluxo.
[00265] Composto do título: ESI-MS: 429,1 [M+H]+; tR = 2,90 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,11 (DCM/MeOH, 9:1).
[00266] ETAPA 20.1: AMIDA DE ÁCIDO 1-[4-(2-AMINO-4-METILTIAZOL-5-IL)-PIRIDIN-2-IL]-CICLOBUTANOCARBOXÍLICO
Figure img0066
[00267] Uma mistura de éster de terc-butila de ácido {5-[2-(1-cianociclobutil)-piridin-4-il]-4-metil-tiazol-2-il}-carbâmico (Etapa 19.2) (640 mg, 1,73 mmol) e ácido sulfúrico concentrado é agitada por 40 min a 0°C, permitida aquecer para ta, agitada por 1 h, extinta por adição de uma solução saturada de NaHCO) (50 ml) e extraída com DCM (3 x 75 ml). A fase orgânica é lavada com uma solução saturada de NaHCO) (2 x 50 ml), secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (DCM/MeOH/NH)aq, 99:0:1 p 93:6:1) para fornecer 35 mg do composto do título como um sólido amarelo: ESI-MS: 289,1 [M+H]+; TLC: Rf = 0,32 (DCM/MeOH, 9:1). EXEMPLO 21: 1 -({5-[2-(2DIMETILAMINO-1,1-DIMETIL-ETIL)PIRIDIN -4-IL]-4-METIL-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0067
[00268] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. Na Etapa 1.1, 5-[2-(2-dimetilamino-1, 1 -dimetil-etil)-piridin-4-il]-4-metiltiazol-2-ilamina (Etapa 21.1) é usada e a mistura de reação é agitada por 14 h a refluxo.
[00269] Composto do título: ESI-MS: 431,1 [M+H]+; TLC: Rf = 0,12 (DCM/MeOH, 9:1).
[00270] ETAPA 21.1: 5-[2-(2-DIMETILAMINO-1,1-DIMETIL-ETIL)PIRIDIN-4-IL]-4-METIL-TIAZOL-2-ILAMINA
Figure img0068
[00271] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 19.1 mas usando éster de terc-butila de ácido {5-[2-(2-dimetilamino-1,1-dimetil-etil)-piridin-4-il]-4-metil-tiazol-2-il}-carbâmico (Etapa 21.2) e agitando a mistura de reação por 2 h em ta. Composto do título: ESI-MS: 291,1 [M+H]+; tR = 2,48 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,11 (DCM/MeOH, 9:1).
[00272] ETAPA 21.2: ÉSTER DE TERC -BUTILA DE ÁCIDO {5-[2(2-DIMETILAMINO-1,1-DIMETIL-ETIL)-PIRIDIN-4-IL]-4-METIL-TIAZOL -2-IL}-CARBÂMICO
Figure img0069
[00273] Formaldeído (36% em H2O, 0,144 ml, 1,87 mmol, 2 eq) é acrescentado a uma mistura de éster de terc-butila de ácido {5-[2-(2amino-1, 1 -dimetil-etil)-piridin-4-il]-4-metil-tiazol-2-il}-carbâmico (Etapa 21.3) (0,34 g, 0,94 mmol) e acetoxiboroidreto de sódio (0,6 g, 2,82 mmol, 3 eq) em 1,2-dicloroetano (10 ml). A mistura de reação é agitada por 1 h em ta e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (DCM/MeOH/NH3aq, 99:0:1 p 97:2:1) para fornecer 0,222 g do composto do título como um sólido branco: ESI-MS: 391,2 [M+H]+; tR = 4,27 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,15 (DCM/MeOH, 9:1),
[00274] ETAPA 21,3: ÉSTER DE TERC -BUTILA DE ÁCIDO {5-[2(2-AMINO-1,1-DIMETIL-ETIL)-PIRIDIN-4-IL]-4-METIL-TIAZOL-2-IL}CARBÂMICO
Figure img0070
[00275] LÍAIH4 (1M em THF, 3,06 ml, 3,06 mmol, 1,5 eq) é acrescentado a uma solução de éster de terc-butila de ácido {5-[2-(cianodimetiI-metiI)-piridin-4-iI]-4-metiI-tiazoI-2-iI}-carbâmico (Etapa 21,4) (0,73 g, 2,04 mmoI) em THF (10 mI), sob uma atmosfera de argônio. A mistura de reação é agitada por 2 h em ta, extinta por adição de H2O (20 mI) e extraída com EtOAc (2 x 75 mI). A fase orgânica é Iavada com uma soIução saturada de NaHCO3 (2 x 50 mI), secada (Na2SO4), fiItrada e concentrada, O resíduo é purificado através de cromatografia de coIuna em síIica-geI (DCM/MeOH/NH3aq, 99:0:1 p 94:5:1) para fornecer 318 mg do composto do títuIo como um sóIido marrom: ESIMS: 363,1 [M+H]+; TLC: Rf = 0,11 (DCM/MeOH, 9:1).
[00276] ETAPA 21.4: ÉSTER DE TERC -BUTILA DE ÁCIDO {5-[2(CIANO-DIMETIL-METIL)-PIRIDIN-4-IL]-4-METIL-TIAZOL-2-IL}-CARBÂMICO
Figure img0071
[00277] O composto do títuIo é preparado em anaIogia ao procedimento descrito na Etapa 1,3, mas usando 2-(4-iodo-piridin-2-iI)-2-metiIpropionitrila (Etapa 21.5) e éster de terc-butila de ácido (4-metil-tiazol2-il)-carbâmico (Etapa 18.4). A mistura de reação é agitada por 3 h a 100oC. Composto do título: ESI-MS: 359,1 [M+H]+; TLC: Rf = 0,47 (Hex/EtOAc, 1:1).
[00278] ETAPA 21.5: 2-(4-IODO-PIRIDIN-2-IL)-2-METIL-PROPIONITRILA
Figure img0072
[00279] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 19.3, mas usando 2-fluoro-4-iodopiridina. Composto do título: ESI-MS: 273,0 [M+H]+; tR = 4,22 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,36 (Hex/EtOAc, 9:1).
[00280] EXEMPLO 22: 1-{[5-(2-DIETILAMINO-PIRIDIN-4-IL)-4-METIL -TIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2DICARBOXÍLICO
Figure img0073
[00281] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 18 h em ta, extinta por diluição com DCM/H2O e extraída com DCM. Na Etapa 1.1, a mistura de reação é agitada por 1 h a refluxo. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 1 h a 100OC e extraída com DCM após ser extinta. Na Etapa 1.3, dietil-(4-iodo-piridin-2-il)-amina (Etapa 22.1) é usado. A mistura de reação é agitada por 16 h a 120oC, extinta por diluição com EtOAc/HO, filtrada através de um bloco de celite e extraída com EtOAc.
[00282] Composto do título: ESI-MS: 403,2 [M+H]+; tR = 2,38 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,10 (DCM/MeOH/NH)aq, 91,5:7,5:1).
[00283] ETAPA 22.1: DIETIL-(4-IODO-PIRIDIN-2-IL)-AMINA
Figure img0074
[00284] Uma mistura de 2-fluoro-4-iodopiridina (2 g, 8,97 mmol), dietil amina (2,77 ml, 26,9 mmol, 3 eq) e K2CO3 (2,48 g, 17,94 mmol, 2 eq) em DMF (20 ml) é agitada por 18 h a 100°C, deixada esfriar para ta, diluída com EtOAc/H2O e extraída com EtOAc. A fase orgânica é lavada com H2O e salmoura, secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/Et2O, 98:2) para fornecer 2,3 g do composto do título como um óleo amarelo: ESI-MS: 277,1 [M+H]+; TLC: Rf = 0,52 (Hex/Et2O, 98:2).
[00285] EXEMPLO 23: 1-{[5-(2-DIETILAMINO-PIRIDIN-4-IL)-TIAZOL2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0075
[00286] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 18 h em ta, extinta por diluição com DCM/H2O e extraída com DCM. Na Etapa 1.1, a mistura de reação é agitada por 1 h a refluxo. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 1 h a 100°C e extraída com DCM após ser extinta. Na Etapa 1.3, dietil-(4-iodo-piridin-2-il)-amina (Etapa 22.1) e N-tiazol-2il-acetamida são usadas. A mistura de reação é agitada por 5 h a 120°C, extinta por diluição com EtOAc/H2O, filtrada através de um bloco de celite e extraída com EtOAc.
[00287] Composto do título: ESI-MS: 389,2 [M+H]+; tR = 2,28 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,34 (DCM/MeOH/NH)aq, 91,5:7,5:1). EXEMPLO 24: 1-{[5-(3TERC-BUTIL-3H-BENZOIMIDAZOL-5-IL)-TIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0076
[00288] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 5 h em ta. Na Etapa 1.1, a mistura de reação é agitada por 14 h a refluxo. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 1 h a 85°C e extraída com EtOAc após ser extinta. Na Etapa 1.3, 6-bromo-1terc-butil-1H-benzoimidazol (Etapa 24.1) e N-tiazol-2-il-acetamida são usados. A mistura de reação é agitada por 7 h a 120°C.
[00289] Composto do título: ESI-MS: 413,2 [M+H]+; tR = 2,29 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,45 (DCM/MeOH, 9:1).
[00290] ETAPA 24.1: 6-BROMO-1-TERC-BUTIL-1H-BENZOIMIDA-ZOL
Figure img0077
[00291]Uma mistura de 4-bromo-N*2*-tec-butil-benzeno-1,2-diamina (Etapa 24.2) (2,14 g, 8,80 mmol) e trietilortoformato (14,7 ml, 88 mmol) é agitada por 1 h a 148°C, deixada esfriar e concentrada. O resíduo purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel (DCM/ MeOH, 1:0 p 99:1) para fornecer 1,74 g do composto do título como um sólido branco: ESI-MS: 253,0 / 255,0 [M+H]+; tR = 2,88 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,54 (DCM/MeOH, 9:1).
[00292] ETAPA 24.2: 4-BROMO-N*2*TERC -BUTIL-BENZENO-1,2DIAMINA
Figure img0078
[00293] Uma suspensão de (5-bromo-2-nitro-fenil)-terc-butil-amina (Etapa 24.3) (6 g, 21,97 mmol) e níquel de Raney (2 g) em MeOH/THF (1:1 v/v, 600 ml) é agitada por 9 h em ta, sob uma atmosfera de hidrogênio. A mistura de reação é filtrada através de um bloco de celite e concentrada. O resíduo purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 97:3 p 3:1) para fornecer 4,4 g do composto do título como um óleo preto: ESI-MS: 243,0 / 245,0 [M+H]+; tR = 2,75 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,89 (Hex/EtOAc, 1:1).
[00294] ETAPA 24.3: (5-BROMO-2-NITRO-FENIL)-TERC-BUTILAMINA
Figure img0079
[00295] Uma mistura de 4-bromo-2-fluoro-nitrobenzeno (4 g, 18,2 mmol) e terc-butilamina (4,78 ml, 45,5 mmol, 2,5 eq) em EtOH (80 ml) é agitada por 15 h a 85°C, deixada esfriar e concentrada. O resíduo purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 1:0 p 99:1) para fornecer 4,8 g do composto do título como um sólido laranja: ESI-MS: 273,0 / 275,0 [M+H]+; tR = 5,68 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,49 (Hex/EtOAc, 9:1). EXEMPLO 25: 1-{[5-(3-TERC-BUTIL-2-METIL-3H-BENZOIMIDAZOL5-IL)-TIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0080
[00296] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. Na Etapa 1.1, a mistura de reação é agitada por 14 h a refluxo. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 1 h a 85°C e extraída com EtOAc após ser extinta. Na Etapa 1.3, 6-bromo-1-terc-butil-2-metil-1Hbenzoimidazol (Etapa 25.1) e N-tiazol-2-il-acetamida são usados. A mistura de reação é agitada por 5 h a 120°C.
[00297] Composto do título: ESI-MS: 427,2 [M+H]+; tR = 2,37 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,38 (DCM/MeOH, 9:1).
[00298] ETAPA 25.1: 6-BROMO-1TERC -BUTIL-2-METIL-1H-BENZOIMIDAZOL
Figure img0081
[00299] Uma mistura de 6-bromo-1-terc-butil-2-etoximetil-2-metil2,3-diidro-1H-benzoimidazol (Etapa 25.2) (2,04 g, 6,51 mmol) e TFA (10 ml) é agitada em ta durante a noite, extinta por adição de uma solução saturada de NaHCO3 (100 ml) e extraída com EtOAc (2 x 150 ml). A fase orgânica é lavada com uma solução saturada de NaHCO3 (2 x 50 ml), secada (N^Sθ4), filtrada e concentrada. O resíduo purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel (DCM/MeOH, 1:0 p 98:2) para fornecer 1,05 g do composto do título como um sólido branco: ESI-MS: 267,0 / 269,0 [M+H]+; tR = 2,99 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,58 (DCM/MeOH, 9:1).
[00300] ETAPA 25.2: 6-BROMO-1TERC -BUTIL-2-ETOXIMETIL-2METIL-2,3-DI-HIDRO-1H-BENZOIMIDAZOL
Figure img0082
[00301] Uma mistura de 4-bromo-N*2*terc -butil-benzeno-1,2diamina (Etapa 24.2) (2,14 g, 8,80 mmol) e trietilortoacetato (16,2 ml, 88 mmol, 10 eq) é agitada por 1 h a 142°C, deixada esfriar e concentrada. O resíduo purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 1:0 p 95:5) para fornecer 2,04 g do composto do título como um óleo roxo: ESI-MS: 313,0 / 315,0 [M+H]+; TLC: Rf = 0,67 (Hex/EtOAc, 9:1). EXEMPLO 26: 1-{[5-(3-ETIL-3H-BENZOIMIDAZOL-5-IL)-4-METIL-TIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0083
[00302] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. Na Etapa 1.1, a mistura de reação é agitada por 15 h a refluxo. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 3 h a 85°C e extraída com EtOAc após ser extinta. Na Etapa 1.3, 6-bromo-1-etil-1H-benzoimidazol (Etapa 26.1) e N-tiazol-2-il-acetamida são usados. A mistura de reação é agitada por 14 h a 120°C.
[00303] Composto do título: ESI-MS: 399,1 [M+H]+; tR = 1,73 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,25 (DCM/MeOH, 9:1).
[00304] ETAPA 26.1: 6-BROMO-1-ETIL-1H-BENZOIMIDAZOL
Figure img0084
[00305] Uma mistura de 4-bromo-N*2*-etil-benzeno-1,2-diamina (Etapa 26.2) (2 g, 9,3 mmol) e trietilortoformiato (15,5 ml, 93 mmol, 10 eq) é agitada por 1 h a 148°C, deixada esfriar e concentrada. O resíduo purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel (DCM/MeOH, 1:0 p 98:2) para fornecer 2,05 g do composto do título como um sólido branco: ESI-MS: 225,1 / 227,1 [M+H]+; tR = 2,31 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,58 (DCM/MeOH, 9:1).
[00306] ETAPA 26.2: 4-BROMO-N*2*-ETIL-BENZENO-1,2-DIAMINA
Figure img0085
[00307] Uma suspensão de (5-bromo-2-nitro-fenil)-etil-amina (Etapa 26.3) (6 g, 24,48 mmol) e níquel de Raney (2 g) em MeOH/THF (1:1 v/v, 600 ml) é agitada por 9 h em ta, sob uma atmosfera de hidrogênio. A mistura de reação é filtrada através de um bloco de celite e concentrada. O resíduo purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 95:5 p 85:15) para fornecer 4,51 g do composto do título como um óleo preto: ESI-MS: 213,1 / 215,1 [M-H]-; tR = 2,53 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,57 (Hex/EtOAc, 1:1).
[00308] ETAPA 26.3: (5-BROMO-2-NITRO-FENIL)-ETIL-AMINA
Figure img0086
[00309] Uma mistura de 4-bromo-2-fluoro-nitrobenzeno (6 g, 27,3 mmol), metilamina (2M em MeOH, 34,1 ml, 68,2 mmol, 2,5 eq) e EtOH (80 ml) é agitada por 15 h a 85°C, deixada esfriar e concentrada. O resíduo purificado por trituração para fornecer 6 g do composto do título como um sólido amarelo: tR = 5,13 min (Sistema 1). EXEMPLO 27: 1-[(5-{2-[1-(4-METÓXI-FENIL)-1-METIL-ETIL]-PIRIDIN4-IL}-4-METIL-TIAZOL-2-IL)-AMIDA] DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0087
[00310] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 24 h em ta, extinta por diluição com EtOAc/H2O. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 2 h a 100°C e extraída com DCM após ser extinta. Na Etapa 1.3, a mistura de reação é agitada por 3 h a 100°C, extinta por diluição com EtOAc/H2O e extraída com EtOAc. Na Etapa 1.4, 1,2-dicloroetano (4,3 ml por mmol de piridin-4-ona) é usado como o solvente. A mistura de reação é agitada por 1 h a refluxo, vertida em uma solução saturada de NaHCO3 e extraída com DCM. Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 23 h a 80°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.6, a mistura de reação é agitada por 21 h em ta. Na Etapa 1.7, 4-metóxi-3-buten-2-ona em THF é adicionada a uma solução gelada (78°C) de LiHMDS em THF. Após 30 min, cloreto de 2-(4-metóxi-fenil)2-metil-propionila (Etapa 27.1) em THF é adicionado e a mistura de reação é deixada alcançar ta por 16 h.
[00311] Composto do título: ESI-MS: 480,0 [M+H]+; tR = 3,05 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,13 (DCM/MeOH / NH3aq, 94:5:1).
[00312] ETAPA 27.1: CLORETO DE 2-(4-METÓXI-FENIL)-2METIL-PROPIONILA
Figure img0088
[00313] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 5.1 mas usando ácido 2-(4-metóxi-fenil)-2metil-propiônico e agitando a mistura de reação por 3 h a refluxo. EXEMPLO 28: 1-[(5-{2-[1-(4-METÓXI-FENIL)-1-METIL-ETIL]-PIRIDIN4-IL}-TIAZOL-2-IL)-AMIDA] DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0089
[00314] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 16 h em ta, extinta por diluição com EtOAc/H2O. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 2 h a 100°C e extraída com DCM após ser extinta. Na Etapa 1.3, N-tiazol-2-il-acetamida é usada. A mistura de reação é agitada por 5 h a 100°C, extinta por diluição com EtOAc/HO e extraída com EtOAc. Na Etapa 1.4, 1,2-dicloroetano (4,3 ml por mmol de piridin-4-ona) é usado como o solvente. A mistura de reação é agitada por 1 h a refluxo, vertida em uma solução saturada de NaHCOs e extraída com DCM. Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 23 h a 80°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.6, a mistura de reação é agitada por 21 h em ta. Na Etapa 1.7, 4-metóxi-3-buten-2-ona em THF é adicionada a uma solução gelada (-78°C) de LiHMDS em THF. Após 30 min, cloreto de 2-(4-metóxi-fenil)-2-metil-propionila (Etapa 27.1) em THF é adicionado e a mistura de reação é deixada alcançar ta por 16 h.
[00315] Composto do título: ESI-MS: 466,1 [M+H]+; tR = 2,91 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,23 (DCM/MeOH / NHsaq, 94:5:1). EXEMPLO 29: 1-[(5-{2-[1-(4-METÓXI-FENIL)-CICLOPROPIL]-PIRIDIN -4-IL}-4-METIL-TIAZOL-2-IL)-AMIDA] DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0090
[00316] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 21 h em ta, extinta por diluição com EtOAc/H2O. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 3 h a 100°C e extraída com DCM após ser extinta. Na Etapa 1.3, a mistura de reação é agitada por 6 h a 100°C, extinta por diluição com EtOAc/H2O e extraída com EtOAc. Na Etapa 1.4, 1,2-dicloroetano (4,3 ml por mmol de piridin-4-ona) é usado como o solvente. A mistura de reação é agitada por 1 h a refluxo, vertida em uma solução saturada de NaHCOs e extraída com DCM. Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 18 h a 80°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.6, a mistura de reação é agitada por 18 h em ta. Na Etapa 1.7, 4-metóxi-3-buten-2-ona em THF é adicionada a uma solução gelada (78°C) de LiHMDS em THF. Após 30 min, cloreto de 1-(4-metóxi-fenil)ciclopropanocarbonila (Etapa 29.1) em THF é adicionado e a mistura de reação é deixada alcançar ta por 16 h.
[00317] Composto do título: ESI-MS: 478,1 [M+H]+; tR = 2,65 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,09 (DCM/MeOH / NHsaq, 94:5:1).
[00318] ETAPA 29.1: CLORETO DE 1-(4-METÓXI-FENIL)-CICLOPROPANOCARBONILA
Figure img0091
[00319] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 5.1 mas usando ácido 1-(4-metóxi-fenil)ciclopropilcarboxílico e agitando a mistura de reação por 3 h a refluxo. EXEMPLO 30: 1-[(5-{2-[1-(4-METÓXI-FENIL)-CICLOPROPIL]-PIRIDIN -4-IL}-TIAZOL-2-IL)-AMIDA] DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0092
[00320] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 16 h em ta, extinta por diluição com EtOAc/H2O. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 3 h a 100°C e extraída com DCM após ser extinta. Na Etapa 1.3, N-tiazol-2-il-acetamida é usada. A mistura de reação é agitada por 28 h a 100°C, extinta por diluição com EtOAc/H2O e extraída com EtOAc. Na Etapa 1.4, 1,2-dicloroetano (4,3 ml por mmol de piridin-4-ona) é usado como o solvente. A mistura de reação é agitada por 1 h a refluxo, vertida em uma solução saturada de NaHCOs e extraída com DCM. Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 18 h a 80°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.6, a mistura de reação é agitada por 18 h em ta. Na Etapa 1.7, 4-metóxi-3-buten-2-ona em THF é adicionada a uma solução gelada (-78°C) de LiHMDS em THF. Após 30 min, cloreto de 1-(4-metóxi-fenil)-ciclopropanocarbonila (Etapa 29.1) em THF é adicionado e a mistura de reação é deixada alcançar ta por 16 h.
[00321] Composto do título: ESI-MS: 464,1 [M+H]+; tR = 2,90 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,06 (DCM/MeOH / NHsaq, 94:5:1). EXEMPLO 31: 1-{[5-(2-{1-[4-(3-DIMETILAMINO-PROPOXI)-FENIL]-1METIL-ETIL}-PIRIDIN-4-IL)-4-METIL-TIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0093
[00322] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 18 h em ta, extinta por diluição com EtOAc/H2O. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 7 h a 100°C e extraída com DCM após ser extinta. Na Etapa 1.3, (3-{4-[1-(4-bromo-piridin-2-il)-1-metil-etil]-fenoxi}-propil)-dimetil-amina (Etapa 31.1) é usada. A mistura de reação é agitada por 2 h a 120°C, extinta por diluição com EtOAc/H2O e extraída com EtOAc.
[00323] Composto do título: ESI-MS: 551,1 [M+H]+; tR = 2,38 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,05 (DCM/MeOH / NHsaq, 94:5:1).
[00324] ETAPA 31.1: (3-{4-[1-(4-BROMO-PIRIDIN-2-IL)-1-METILETIL]-FENÓXI}-PROPIL)-DIMETIL-AMINA
Figure img0094
[00325] Hidróxido de sódio (pelotas são finamente moídas, 0,488 g, 12,2 mmol, 5 eq) é acrescentado a uma solução de 4-[1-(4-bromopiridin-2-il)-1-metil-etil]-fenol (Etapa 31,2) (0,714 g, 2,44 mmol) em DMF (5 ml), A mistura é agitada por 20 min em ta, Cloridrato de 3dimetilamino-1-propilcloreto (0,611 g, 3,87 mmol, 1,6 eq) é adicionado. A mistura de reação é aquecida a 90°C, agitada por 10 h, deixada esfriar, diluída com EtOAc/H2O e extraída com EtOAc. A fase orgânica é lavada com H2O e salmoura, secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel (DCM/MeOH / NHsaq, 94:5:1) para fornecer 0,398 g do composto do título como um óleo marrom impuro que é usado sem outra purificação: ESI-MS: 377,1 / 379,0 [M+H]+; TLC: Rf = 0,22 (DCM/MeOH / NHsaq, 94:5:1).
[00326] ETAPA 31.2: 4-[1-(4-BROMO-PIRIDIN-2-IL)-1-METIL-ETIL] -FENOL
Figure img0095
[00327] BBr3 (1M em DCM, 23 mmol, 8 eq) é acrescentado a gotas a uma solução gelada (0°C) de 4-bromo-2-[1-(4-metóxi-fenil)-1-metiletil]-piridina (Etapa 31.3) (0,878 g, 2,87 mmol) em DCM (42 ml), sob uma atmosfera de argônio. A mistura de reação é agitada por 1 h a 0°C, deixada aquecer-se para ta, agitada por 18 h, esfriada para 0°C e extinta por adição de MeOH anidro. A mistura é concentrada, diluída com uma solução aquosa a 6M de HCl, agitada por 1 h, neutralizada para pH 7 e extraída com DCM. A fase orgânica é secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo é usado sem purificação.
[00328] ETAPA 31.3: 4-BROMO-2-[1-(4-METÓXI-FENIL)-1-METILETIL]-PIRIDINA
Figure img0096
[00329] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito nas Etapas 1.4 a 1.7 mas com as modificações seguintes. Na Etapa 1.4, 1,2-dicloroetano (4,3 ml por mmol de piridin-4-ona) é usado como o solvente. A mistura de reação é agitada por 1 h a refluxo, vertida em uma solução aquosa saturada de NaHCO3 e extraída com DCM. Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 23 h a 80°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.6, a mistura de reação é agitada por 21 h em ta. Na Etapa 1.7, 4-metóxi-3-buten-2ona em THF é adicionada a uma solução gelada (-78°C) de LiHMDS em THF. Após 30 min, cloreto de 2-(4-metóxi-fenil)-2-metil-propionila (Etapa 27.1) em THF é adicionado e a mistura de reação é deixada alcançar ta por 16 h.
[00330] Composto do título: ESI-MS: 306,0 / 308,0 [M+H]+; tR = 3,94 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,55 (Hex/EtOAc, 7:3). EXEMPLO 32: 1-({4-METIL-5-[2-(1D3 -METIL-CICLOBUTIL)-PIRIDIN4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0097
[00331] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 18 h em ta, extinta por diluição com DCM/H2O, e extraída com DCM. Na Etapa 1.1, a mistura de reação é agitada por 1 h a refluxo. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 1 h a 100°C e extraída com DCM após ser extinta. Na Etapa 1.3, o catalisador de paládio é acrescentado à mistura aquecida dos reagentes restantes e a mistura resultante é agitada por 1 h a 120°C, diluída com EtOAc/H2O e extraída com EtOAc. Após secagem e concentração da fase orgânica, o resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 1:4). Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 3 h a 80°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.7, 4-metóxi-3-buten-2-ona em THF é adicionada a uma solução gelada (-78°C) de LiHMDS em THF. Após 30 min, cloreto de 1d3 -metil-ciclobutano (Etapa 32.1) em THF é adicionado e a mistura de reação é deixada alcançar ta por 16 h.
[00332] Composto do título: ESI-MS: 403,2 [M+H]+; TLC: Rf = 0,22 (DCM/MeOH/NHsaq, 91,5:7,5:1).
[00333] ETAPA 32.1: CLORETO DE 1-D3-METIL-CICLOBUTANOCARBONILA
Figure img0098
[00334] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 5.1 mas usando ácido 1d3 -metil-ciclobutanocarboxílico que é preparado de acordo com um procedimento descrito [Cowling, S. J.; Goodby, J. W., Chemical Communications, (2006), (39), 4107-4109] mas usando d3 -metil-iodeto. EXEMPLO 33: 1-({5-[2-(1D3 -METIL-CICLOBUTIL)-PIRIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2DICARBOXÍLICO
Figure img0099
[00335] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes, No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 18 h em ta, extinta por diluição com DCM/H2O e extraída com DCM, Na Etapa 1,1, a mistura de reação é agitada por 1 h a refluxo, Na Etapa 1,2, a mistura de reação é agitada por 1 h a 100°C e extraída com DCM após ser extinta, Na Etapa 1,3, N-tiazol-2-il-acetamida é usada, O catalisador de paládio é acrescentado à mistura aquecida dos reagentes restantes, A mistura resultante é agitada por 7 h a 120°C, diluída com EtOAc/H2O, filtrada através de um bloco de celite e extraída com EtOAc, Após secagem e concentração da fase orgânica, o resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 1:4), Na Etapa 1,5, a mistura de reação é agitada por 3 h a 80°C e trituração em MeOH não é executada, Na Etapa 1,7, 4-metóxi-3-buten-2-ona em THF é adicionada a uma solução gelada (-78°C) de LiHMDS em THF, Após 30 min, cloreto de 13Í3 -metil-ciclobutano (Etapa 32,1) em THF é adicionado e a mistura de reação é deixada alcançar ta por 16 h,
[00336] Composto do título: ESI-MS: 389,2 [M+H]+; tR = 2,30 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,11 (DCM/MeOH/NHsaq, 91,5:7,5:1), EXEMPLO 34: 1-({4-D3 -METIL-5-[2-(1-METIL-CICLOPROPIL)-PIRIDIN -4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0100
[00337] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes, Na Etapa 1,1, a mistura de reação é agitada por 8 h a refluxo, Na Etapa 1,2, a mistura de reação é agitada por 1 h a 85°C e extraída com EtOAc após ser extinta. Na Etapa 1.3, 2-acetamido-4-d3 -metil-tiazol (Etapa 34.1) é usado. A mistura de reação é agitada por 2 h a 120°C. Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 1 h a 65-70°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.7, cloreto de 1-metil-ciclopropanocarbonila (Etapa 5.1) é usado.
[00338] Composto do título: ESI-MS: 389,2 [M+H]+; tR = 2,12 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,35 (DCM/MeOH, 9:1).
[00339] ETAPA 34.1: 2-ACETAMIDO-4-D3 -METIL-TIAZOL
Figure img0101
[00340] Uma mistura de 1-bromo-propan-2-ona-ds [Challacombe, K., et al, Journal of the Chemical Society Perkin Trans. I, (1988), 22132218] (1,25 g, 8,8 mmol) e 1-acetil-2-tioureia (1 g, 8,8 mmol) em EtOH (20 ml) é agitada por 2 h a 85°C, deixada esfriar e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 85:15 p 1:1) para fornecer 1,08 g do composto do título como um sólido laranja: ESI-MS: 160,0 [M+H]+; TLC: Rf = 0,25 (Hex/EtOAc, 1:1). EXEMPLO 35: 1-({4-D3-METIL-5-[2-(2,2,2-TRIFLUORO-1,1-DIMETILETIL)-PIRIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0102
[00341] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. Na Etapa 1.1, a mistura de reação é agitada por 8 h a refluxo. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 1 h a 85°C e extraída com EtOAc após ser extinta. Na Etapa 1.3, 2-acetamido-4-c-metil-tiazol (Etapa 34.1) é usado. A mistura de reação é agitada por 2 h a 120°C. Na Etapa 1.4, a mistura de reação é agitada por 1 h a 83°C e extraída com EtOAc após ser extinta. Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 1 h a 65°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.6, o produto bruto não é purificado. Na Etapa 1.7, cloreto de 3,3,3trifluoro-2,2-dimetil-propionila (Etapa 12.1) é usado.
[00342] Composto do título: o API-ES-MS: 445,1 [M+H]+; tR = 3,00 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,51 (DCM/MeOH, 9:1). EXEMPLO 36: 1-({4-DIMETILAMINOMETIL-5-[2-(1D3 -METIL-CICLOBUTIL)-PIRIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0103
[00343] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 18 h em ta, extinta por diluição com DCM/H2O e extraída com DCM. Na Etapa 1.1, a mistura de reação é agitada por 2 h a refluxo. Na Etapa 1.2, N-{4-dimetilaminometil-5-[2-(13-metil-ciclobutil)-piridin-4-il]-tiazol-2-il}-acetamida (Etapa 36.1) é usado. A mistura de reação é agitada por 1 h a 100°C e extraída com DCM após ser extinta.
[00344] Composto do título: ESI-MS: 446,1 [M+H]+; TLC: Rf = 0,40 (DCM/MeOH/NHsaq, 89:10:1).
[00345] ETAPA 36.1: N-{4-DIMETILAMINOMETIL-5-[2-(1-D3-METIL -CICLOBUTIL)-PIRIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-ACETAMIDA
Figure img0104
[00346] Uma mistura de N-{4-bromometil-5-[2-(1d3 -metil-ciclobutil)piridin-4-il]-tiazol-2-il}-acetamida (Etapa 36.2) (150 mg, 0,391 mmol), cloridrato de dimetilamina (38,3 mg, 0,470 mmol, 1,2 eq) e carbonato de césio (293 mg, 0,900 mmol, 2,3 eq) em DMF (2 ml) é agitada por 2 h em ta, diluída com EtOAc/H2O, e extraída com EtOAc. A fase orgânica é lavada com H2O e salmoura, secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo purificado por trituração em Et2O para fornecer 89 mg do composto do título como um sólido branco: ESI-MS: 348,2 [M+H]+.
[00347] ETAPA 36.2: N-{4-BROMOMETIL-5-[2-(1-D3-METIL-CICLOBUTIL)-PIRIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-ACETAMIDA
Figure img0105
[00348] NBS (554 mg, 3,06 mmol, 1,1 eq) é acrescentado a uma solução de N-{4-metil-5-[2-(1-d3-metil-ciclobutil)-piridin-4-il]-tiazol-2-il}acetamida (Etapa 36.3) (846 mg, 2,78 mmol) em CCl4 (20 ml) e CHCl3 (16 ml). A mistura de reação é agitada por 1 h em ta, lavada com H2O e salmoura, secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 1:4) para fornecer 572 mg do composto do título como um sólido amarelo pálido: ESI-MS: 383,0 / 385,0 [M+H]+; tR = 3,12 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,45 (Hex/EtOAc, 1:4).
[00349] ETAPA 36.3: N-{4-METIL-5-[2-(1-D3-METIL-CICLOBUTIL)PIRIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-ACETAMIDA
Figure img0106
[00350] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito nas Etapas 1.3 a 1.7 mas com as modificações seguintes. Na Etapa 1.3, a mistura de reação é agitada por 1 h a 120°C e extinta por diluição com EtOAc/H2O. Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 3 h a 80°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.7, 4-metóxi-3-buten-2-ona em THF é adicionada a uma solução gelada (-78°C) de LiHMDS em THF. Após 30 min, cloreto de 13-3 metil-ciclobutano (Etapa 32.1) em THF é adicionado e a mistura de reação é deixada alcançar ta por 16 h.
[00351] Composto do título: ESI-MS: 305,2 [M+H]+; TLC: Rf = 0,24 (Hex/EtOAc, 1:4). EXEMPLO 37: 1-({4-CLORO-5-[2-(2,2,2-TRIFLUORO-1,1-DIMETILETIL)-PIRIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0107
[00352] Uma mistura de 4-cloro-5-[2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)piridin-4-il]-tiazol-2-ilamina (Etapa 37.1) (100 mg, 0,311 mmol) e fosgênio (0,164 ml, 0,311 mmol) em piridina (2 ml) é agitada por 1 h a 105°C. L-Prolinamida (106 mg, 0,932 mmol, 3 eq) é adicionada. A mistura resultante é agitada por 30 min a 105°C, deixada esfriar, extinta por adição de uma solução saturada de NaHCOs (100 ml), e extraída com EtOAc (2 x 100 ml), A fase orgânica é lavada com uma solução saturada de NaHCOs (100 ml), secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (DCM/MeOH, 99:1 p 94:6) para fornecer 46 mg do composto do título como um sólido amarelo: ESI-MS: 461,9 [M+H]+; tR = 3,60 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,28 (DCM/MeOH, 9:1).
[00353] ETAPA 37.1: 4-CLORO-5-[2-(2,2,2-TRIFLUORO-1,1-DIMETIL-ETIL)-PIRIDIN-4-I L]-TIAZO L-2ILAMINA
Figure img0108
[00354] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito nas Etapas 1.2 a 1.7 mas com as modificações seguintes. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 3 h a 85°C e extraída com EtOAc após ser extinta. Na Etapa 1.3, N-(4-cloro-tiazol-2il)-acetamida (Etapa 37.2) é usada. A mistura de reação é agitada por 2 h a 120°C. Na Etapa 1.4, a mistura de reação é agitada por 1 h a 83°C e extraída com EtOAc após ser extinta. Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 1 h a 65°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.6, o produto bruto não é purificado. Na Etapa 1.7, cloreto de 3,3,3-trifluoro-2,2-dimetil-propionila (Etapa 12.1) é usado.
[00355] Composto do título: ESI-MS: 322,1 [M+H]+; tR = 3,58 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,45 (DCM/MeOH, 9:1).
[00356] ETAPA 37.2: N-(4-CLORO-TIAZOL-2-IL)-ACETAMIDA
Figure img0109
[00357] Uma mistura de N-(4-oxo-4,5-diidro-tiazol-2-il)-acetamida (Etapa 37,3) (14,8 g, 94 mmol) e POCI3 (175 ml, 20 eq) é aquecida a 105°C, agitada por 15 min, deixada esfriar e concentrada. O resíduo é vertido sobre geIo-H2O e extraído com EtOAc (2 x 100 ml). A fase orgânica é lavada com uma solução saturada de NaHCOs (2 x 100 ml), secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (DCM/MeOH, 99:1) para fornecer 13,9 g do composto do título como um sólido branco: ESI-MS: 177,0 [M+H]+; tR = 2,74 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,66 (DCM/MeOH, 9:1).
[00358] ETAPA 37.3: N-(4-OXO-4,5-DI-HIDRO-TIAZOL-2-IL)-ACETAMIDA
Figure img0110
[00359] Uma mistura de pseudotioidantoína (16 g, 138 mmol) e anidrido acético (16,9 ml, 179 mmol, 1,3 eq) em piridina (150 ml) é aquecida a 115°C, agitada por 1 h e deixada esfriar. O precipitado resultante é colhido através de filtração para fornecer 12,64 g do composto do título como um sólido marrom: ESI-MS: 159,0 [M+H]+. EXEMPLO 38: 1-({4-FLUOROMETIL-5-[2-(2,2,2-TRIFLUORO-1,1-DIMETIL-ETIL)-PIRIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0111
[00360] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 18 h em ta, extinta por diluição com DCM/H2O e extraída com DCM. Na Etapa 1.1, a mistura de reação é agitada por 1 h a refluxo, concentrada e o material bruto resultante é usado sem purificação. Na Etapa 1.2, N-{4-fluorometil-5[2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-piridin-4-il]-tiazol-2-il}-acetamida (Etapa 38.1) é usada. A mistura de reação é agitada por 1 h a 100°C e extraída com DCM após ser extinta. O material bruto não é mais purificado.
[00361] Composto do título: ESI-MS: 460,0 [M+H]+; TLC: Rf = 0,44 (DCM/MeOH/NHsaq, 91,5:7,5:1]
[00362] ETAPA 38.1: N-{4-FLUOROMETIL-5-[2-(2,2,2-TRIFLUORO -1,1-DIMETIL-ETIL)-PIRIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-ACETAMIDA
Figure img0112
[00363] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito nas Etapas 1.3 a 1.7 mas com as modificações seguintes. Na Etapa 1.3, N-(4-fluorometil-tiazol-2-il)-acetamida (Etapa 38.2) é usada. A mistura de reação é agitada por 7 h a 90°C, por 5 h a 100°C e extinta por diluição com EtOAc e H2O. Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 1 h a 65°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.6, o produto bruto não é purificado. Na Etapa 1.7, cloreto de 3,3,3-trifluoro-2,2-dimetil-propionila (Etapa 12.1) é usado.
[00364] Composto do título: ESI-MS: 362,1 [M+H]+; tR = 4,18 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,29 (Hex/EtOAc, 1:1).
[00365] ETAPA 38.2: N-(4-FLUOROMETIL-TIAZOL-2-IL)-ACETAMIDA
Figure img0113
[00366] Uma mistura de 1-cloro-3-fluoro-propan-2-ona (Etapa 38.3) (1,14 g, 10,3 mmol) e N-acetil-2-tioureia (1,22 g, 10,3 mmol) em EtOH (10 ml) é agitada por 1,5 h a refluxo, deixada esfriar e concentrada. O resíduo é dissolvido em DCM/H2O e extraído com DCM. A fase orgânica é secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (Hex/EtOAc, 1:1) para fornecer 0,143 g do composto do título: ESI-MS: 173,1 [M-H]-; tR = 1,98 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,21 (Hex/EtOAc, 1:1).
[00367] ETAPA 38.3: 1-CLORO-3-FLUORO-PROPAN-2-ONA
Figure img0114
[00368] 1-Fluoro-3-cloroisopropanol (2,7 ml, 31,2 mmol) é adicionado lentamente a um frasco contendo 30 ml do reagente de Jones (preparado adicionando 230 ml de ácido sulfúrico concentrado a 267 g de trióxido de cromo em 700 ml de H2O e diluindo com H2O a 1 L) esfriado para 5°C. A mistura de reação é deixada aquecer-se para ta, agitada por 18 h, vertida em uma solução saturada de NaHCOs e extraída com Et2O. A fase orgânica é lavada com salmoura, secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (DCM) para fornecer 1,14 g do composto do título como um óleo amarelo impuro. EXEMPLO 39: 1-{[5-(5-BENZENOSSULFONILAMINO-6-CLORO-PIRIDIN-3-IL)-4-METIL-TIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0115
[00369] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 1.3 mas com as modificações seguintes. 1[(4-metil-tiazol-2-il)-amida] de 2-amida de ácido (S)-pirrolidino-1,2dicarboxílico (Etapa 39.2) e N-(5-bromo-2-cloro-piridin-3-il)-benzenossulfonamida (etapa 39.1) são usadas. O catalisador de paládio é acrescentado à mistura aquecida dos reagentes restantes e a mistura resultante é agitada por 3 h a 135°C, diluída com EtOAc e H2O, filtrada através de um bloco de celite e extraída com EtOAc. Após secagem e concentração da fase orgânica, o resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel e através de HPLC de fase reversa. Composto do título: ESI-MS: 519,0 / 521,1 [M-H]-; tR = 3,33 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,09 (DCM/MeOH/NHsaq, 84:15:1).
[00370] ETAPA 39.1: N-(5-BROMO-2-CLORO-PIRIDIN-3-IL)BENZENOSSULFONAMIDA
Figure img0116
[00371] Uma solução de cloreto de benzenossulfonila (1,23 ml, 9,62 mmol, 2 eq) em DCM (50 ml) é acrescentada por 15 min a gotas a uma solução de 3-amino-5-bromo-2-cloropiridina [Jouve, K.; Bergman, J., Journal of Heterocyclic Chemistry, (2003), 40(2), 261-268] (1 g, 4,81 mmol) e piridina (1,94 ml, 24 mmol, 5 eq) em DCM (20 ml), sob uma atmosfera de argônio. A mistura resultante é agitada por 20 h em ta, concentrada, diluída com H2O e extraída com DCM. A fase orgânica é lavada com salmoura, secada (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (DCM) para fornecer 163 mg do composto do título como um sólido branco: ESI-MS: 346,9 [M-H]-; tR = 4,33 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,23 (DCM).
[00372] ETAPA 39.2: 1-[(4-METIL-TIAZOL-2-IL)-AMIDA] DE 2AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0117
[00373] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas usando (4-metil-tiazol-2-il)-amida de ácido imidazol-1-carboxílico (Etapa 39,3), A mistura de reação é agitada misturando por 18 h em ta e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (DCM/MeOH/NHsaq, 94:5:1) seguido por trituração em Et2O. Composto do título: ESI-MS: 253,2 [M-H]-> TLC: Rf = 0,18 (DCM/MeOH/NHsaq, 84:15:1).
[00374] ETAPA 39.3: (4-METIL-TIAZOL-2-IL)-AMIDA DE ÁCIDO IMIDAZOL-1-CARBOXÍLICO
Figure img0118
[00375] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 1.1 mas usando 2-acetamido-4-metiltiazol e agitando a mistura de reação por 5,5 h a refluxo. EXEMPLO 40: 1-{[5-(5-BENZENOSSULFONILAMINO-6-CLORO-PIRIDIN-3-IL)-TIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0119
[00376] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 1.3 mas com as modificações seguintes. 1tiazol-2-ilamida de 2-amida de ácido (S)-pirrolidino-1,2-dicarboxílico (Etapa 40.1) e N-(5-bromo-2-cloro-piridin-3-il)-benzenossulfonamida (etapa 39.1) são usados. O catalisador de paládio é acrescentado à mistura aquecida dos reagentes restantes e a mistura resultante é agitada por 6 h a 120°C, concentrada, diluída com DCM/MeOH, filtrada através de um bloco de celite e o filtrado é concentrado. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel e através de HPLC de fase reversa. Composto do título: ESI-MS: 506,9 [M+H]+; tR = 3,21 min (Sistema 1).
[00377] ETAPA 40.1: 1-TIAZOL-2-ILAMIDA DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0120
[00378] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas usando tiazol-2-ilamida de ácido imidazol-1-carboxílico (Etapa 40.2). A mistura de reação é agitada misturando por 18 h em ta e concentrada. O resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel (DCM/MeOH/NH3aq, 94:5:1) seguido por trituração em EtOAc. Composto do título: ESI-MS: 239,2 [M-H]-; TLC: Rf = 0,11 (DCM/MeOH/NH3aq, 84:15:1).
[00379] ETAPA 40.2: TIAZOL-2-ILAMIDA DE ÁCIDO IMIDAZOL-1CARBOXÍLICO
Figure img0121
[00380] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 1.1 mas usando N-tiazol-2-il-acetamida e agitando a mistura de reação por 5 h a refluxo. EXEMPLO 41: 1-{[5-(6-AMINO-5-TRIFLUOROMETIL-PIRIDIN-3-IL)-4METIL-TIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0122
[00381] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 1,3 mas com as modificações seguintes, 1[(4-metil-tiazol-2-il)-amida] de 2-amida de ácido (S)-pirrolidino-1,2-dicarboxílico (Etapa 39,2) e 5-bromo-3-trifluorometil-piridin-2-ilamina (WO 2007095588) são usados, O catalisador de paládio é acrescentado à mistura aquecida dos reagentes restantes e a mistura resultante é agitada por 3 h a 120°C, diluída com DCM/H2O e extraída com DCM, Após secagem e concentração da fase orgânica, o resíduo é purificado através de cromatografia de coluna em sílica-gel e através de HPLC de fase reversa, Composto do título: ESI-MS: 413,1 [M-H]-> TLC: Rf = 0,27 (DCM/MeOH/NHsaq, 89:10:1), EXEMPLO 42: 1-({4-METIL-5-[2-(1-METIL-CICLOPROPIL)-PIRIMIDIN4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0123
[00382] {4-metil-5-[2-(1-metil-ciclopropil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-il}amida de ácido imidazol-1-carboxílico (4,0 g) é acrescentada a uma solução agitada de amida de L-prolina (1,48 g) e trietilamina (4,1 ml) em DMF (46 ml) em temperatura ambiente. A mistura de reação repousada em temperatura ambiente 22 horas, evaporada e o composto do título é obtido como um sólido branco após cristalização com metanol (60 ml) e água (20 ml). HPLC/MS: tempo de retenção 1,24 minutos, M+H 387.1 e M-H 385.2.
[00383] ETAPA 42.1: {4-METIL-5-[2-(1-METIL-CICLOPROPIL)-PIRIMIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA DE ÁCIDO IMIDAZOL-1-CARBOXÍLICO
Figure img0124
[00384] Carbonil diimidazol (4,56 g) é acrescentado a uma solução de 4-metil-5-[2-(1-metil-ciclopropil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina (10,5 g) e trietilamina (4,28 ml) em DMF (26 ml) em temperatura ambiente e depois aquecida por 2 horas a 80°C. Após esfriar, o composto do título é isolado através de filtração.
[00385] ETAPA 42.2: 4-METIL-5-[2-(1-METIL-CICLOPROPIL)-PIRIMIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-ILAMINA
Figure img0125
[00386] Hidróxido de sódio em pó (5,86 g) é acrescentado a uma solução de N’-[5-(3-dimetilamino-acriloil)-4-metil-tiazol-2-il]-N, N-dimetilforMAMidina (13 g, preparada como descrito por S. Wang et al J. Med. Chem. 2004, 47, 1662-1675,) e cloridrato de 1-metil-ciclopropanocarboxamidina (7,2 g, preparado como descrito em EP0227415) em 2metoxietanol (98 ml) e a mistura aquecida a 125°C por 1 hora com agitação. A mistura de reação é esfriada, água é adicionada, e o composto do título isolado através de filtração. ESI-MS: M+H 247 e M-H 245. EXEMPLO 43: 1-{[5-(2-ISOPROPIL-PIRIMIDIN-4-IL)-4-METILTIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2DICARBOXÍLICO
Figure img0126
[00387] [5-(2-isopropil-pirimidin-4-il)-4-metil-tiazol-2-il]-amida de ácido Imidazol-1-carboxílico (50 mg) é acrescentada a uma solução de amida de L-prolina (19 mg) e trietilamina (26 μl) em DMF (152 μl) em temperatura ambiente. A mistura é agitada por 2 horas a 40°C e depois purificada através de cromatografia preparativa de fase reversa. As frações contendo o composto do título são capturadas com uns 300 mg de BondElut SPE, cartucho de SCX e depois liberadas com 7M de amónia em solução de metanol (1 ml). O composto do título é obtido por evaporação. ESI-MS: M+H 275 e M-H 273.
[00388] ETAPA 43.1: {4-METIL-5-[2-ISOPROPIL-PIRIMIDIN-4-IL]TIAZOL-2-IL}-AMIDA DE ÁCIDO IMIDAZOL-1-CARBOXÍLICO
Figure img0127
[00389] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 42, mas usando 4-metil-5-[2-isopropil-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2-(1-metil-ciclopropil)pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina. EXEMPLO 44: 1-{[5-(2-BENZIL-PIRIMIDIN-4-IL)-4-METIL-TIAZOL-2IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0128
[00390] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 43, mas usando 4-metil-5-[2-benzil-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2-isopropil-pirimidin-4-il]tiazol-2-ilamina. ESI-MS: M+H 423 e M-H 421. EXEMPLO 45: 1 -{[5-(2-ETIL-PIRIMIDIN-4-IL)-4-METIL-TIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0129
[00391] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 43, mas usando 4-metil-5-[2-etil-pirimidin4-il]-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2-isopropil-pirimidin-4-il]tiazol-2-ilamina. ESI-MS: M+H 361 e M-H 359. EXEMPLO 46: 1-{[5-(2-METOXIMETIL-PIRIMIDIN-4-IL)-4-METIL-TIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2DICARBOXÍLICO
Figure img0130
[00392] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 43, mas usando 4-metil-5-[2-metoximetilpirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2-isopropil-pirimidin -4-il]-tiazol-2-ilamina. ESI-MS: M+H 377 e M-H 375, EXEMPLO 47: 1-({5-[2-(2,6-DICLORO-BENZIL)-PIRIMIDIN-4-IL]-4METIL-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0131
[00393] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 43, mas usando 4-metil-5-[2-(2,6-diclorobenzil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2-isopropilpirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina. ESI-MS: M+H 491,493 e M-H 489, 491. EXEMPLO 48: 1-{[5-(2-ISOBUTIL-PIRIMIDIN-4-IL)-4-METIL-TIAZOL2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0132
[00394] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 43, mas usando 4-metil-5-[2-isobutil-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2-isopropil-pirimidin-4-il]tiazol-2-ilamina. ESI-MS: M+H 389 e M-H 387. EXEMPLO 49: 1-({5-[2-(4-METÓXI-FENOXIMETIL)-PIRIMIDIN-4-IL]-4METIL-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0133
[00395] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 43, mas usando 4-metil-5-[2-(4-metóxi-fenoximetil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2-isopropilpirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina. ESI-MS: M+H 469 e M-H 467. EXEMPLO 50: 1-({5-[2-(3-METÓXI-FENOXIMETIL)-PIRIMIDIN-4-IL]-4METIL-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0134
[00396] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 43, mas usando 4-metil-5-[2-(3-metóxifenoximetil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2-isopropil-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina. ESI-MS M-H 467. EXEMPLO 51: 1-({5-[2-(2-FLUORO-FENIL)-PIRIMIDIN-4-IL]-4-METILTIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2DICARBOXÍLICO
Figure img0135
{5-[2-(2-fluoro-fenil)-pirimidin-4-il]-4-metil-tiazol-2-il}-amida de ácido de Imidazol-1-carboxílico (415 mg) é acrescentada a uma solução de amida de L-prolina (137 mg) e trietilamina (182 μl) em DMF (1,1 ml) em temperatura ambiente, A mistura é agitada por 18 horas a 40°C, evaporada e cristalizada de metanol (8 ml) e água (2 ml) para dar o composto do título como um sólido branco, ESI-MS: M+H 427 e M-H 425,
[00397] ETAPA 51,1: {5-[2-(2-FLUORO-FENIL)-PIRIMIDIN-4-IL]-4METIL-TIAZOL-2-IL}-AMIDA DE ÁCIDO IMIDAZOL-1-CARBOXÍLICO
Figure img0136
[00398] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 43, mas usando 4-metil-5-[2-(2-fluoro-fenil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2-(1-metil-ciclopropil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina, EXEMPLO 52: 1-{[5-(2-TRIFLUOROMETIL-PIRIMIDIN-4-IL)-4-METILTIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2DICARBOXÍLICO
Figure img0137
[00399] Amida de L-prolina (9 mg) é acrescentado a uma solução de [5-(2-trifluorometil-pirimidin-4-il)-4-metil-tiazol-2-il]-amida de ácido imidazol-1-carboxílico (25 mg) e trietilamina (12 μl) em DMF (71 μl) em temperatura ambiente. A mistura é agitada por 18 horas a 25°C e purificada através de cromatografia preparativa de fase reversa. Frações contendo o composto do título são capturadas com uns 300 mg de BondElut SPE, cartucho de SCX e depois liberadas com 7M de amônia em solução de metanol (1 ml). O composto do título é obtido por evaporação. ESI-MS: M+H 401 e M-H 399.
[00400] ETAPA 52.1: {4-METIL-5-[2-TRIFLUOROMETIL-PIRIMIDIN -4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA DE ÁCIDO IMIDAZOL-1-CARBOXÍLICO
Figure img0138
[00401] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 43, mas usando 4-metil-5-[2-trifluorometilpirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2-(1-metil-ciclopropil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina. EXEMPLO 53: 1-({4-METIL-5-[2-(1,1,2-TRIMETIL-PROPIL)-PIRIMIDIN -4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1&2-DICARBOXÍLICO
Figure img0139
[00402] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 51, mas usando 4-metil-5-[2-(1,1,2-trimetilpropil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2-(2-fluorofenil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina. ESI-MS: M+H 417 e M-H 415, EXEMPLO 54: 1-[(5-{2-[1-(4-METÓXI-FENIL)-1-METIL-ETIL]-PIRIMIDIN-4-IL}-4-METIL-TIAZOL-2-IL)-AMIDA] DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0140
[00403] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 51, mas usando 5-{2-[1-(4-metóxi-fenil)-1metil-etil]-pirimidin-4-il}-4-metil-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2(2-fluoro-fenil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina. ESI-MS: M+H 495 e M-H 493. EXEMPLO 55: 1-({5-[2-(2-FLUORO-1-FLUOROMETIL-1-METIL-ETIL)PIRIDIN-4-IL]-4-METIL-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0141
[00404] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes, No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 6 h em ta, Na Etapa 1,1, a mistura de reação é agitada por 15 h a refluxo, Na Etapa 1,2, a mistura de reação é agitada por 1 h a 100°C e extraída com EtOAc após ser extinta, Na Etapa 1,3, a mistura de reação é agitada por 2 h a 120°C, Na Etapa 1,4, a mistura de reação é agitada por 30 min a 85°C e extraída com EtOAc após ser extinta, Na Etapa 1,5, a mistura de reação é agitada por 1 h a 65°C e trituração em MeOH não é executada, Na Etapa 1,6, o produto bruto não é purificado, Na Etapa 1,7, cloreto de 3-fluoro-2-fluorometil-2-metil-propionila (Etapa 55,1) é usado,
[00405] Composto do título: ESI-MS: 424,1 [M+H]+; tR = 2,40 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,35 (DCM/MeOH, 9:1),
[00406] ETAPA 55,1: CLORETO DE 3-FLUORO-2-FLUOROMETIL2-METIL-PROPIONILA
Figure img0142
[00407] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 5,1 mas usando ácido 3-fluoro-2-fluorometil2-metil-propiônico (Etapa 55,2),
[00408] ETAPA 55,2: ÁCIDO 3-FLUORO-2-FLUOROMETIL-2METIL-PROPIÔNICO
Figure img0143
[00409] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 73.2 mas usando éster de metila de ácido 3fluoro-2-fluorometil-2-metil-propiônico (preparação WO 2007/053394). ESI-MS: 137,0 [M-H]-. EXEMPLO 56: 1-({4-METIL-5-[2-(1,1-DIMETIL-PROPIL)-PIRIMIDIN-4IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0144
[00410] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 43, mas usando 4-metil-5-[2-(1,1-dimetilpropil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2-isopropilpirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina. ESI-MS: M+H 403 e M-H 401. EXEMPLO 57: 1-({4-METIL-5-[2-(1-METIL-1-P-TOLIL-ETIL)PIRIMIDIN -4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0145
[00411] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 43, mas usando 4-metil-5-[2-(1-metil-1-ptolil-etil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2-isopropilpirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina. ESI-MS: M+H 479 e M-H 477, EXEMPLO 58: 1-({4-METIL-5-[2-(1-FENIL-CICLOPENTIL)-PIRIMIDIN4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO -1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0146
[00412] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 43, mas usando 4-metil-5-[2-(1-fenilciclopentil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2-isopropil-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina. ESI-MS: M+H 477 e M-H 475. EXEMPLO 59: 1-({4-METIL-5-[2-CICLOPROPIL-PIRIMIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0147
[00413] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 43, mas usando 4-metil-5-[2-ciclopropilpirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2-isopropil-pirimidin -4-il]-tiazol-2-ilamina. ESI-MS: M+H 373 e M-H 371, EXEMPLO 60: 1-({4-METIL-5-[2-CICLOBUTIL-PIRIMIDIN-4-IL]-TIAZOL 2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0148
[00414] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 52, mas usando 4-metil-5-[2-ciclobutilpirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2-trifluorometil-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina. ESI-MS: M+H 387 e M-H 385. EXEMPLO 61: 1-{[5-(2-D9-TERC-BUTIL-PIRIMIDIN-4-IL)-4-METIL-TIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2DICARBOXÍLICO
Figure img0149
[5-(2-d9-terc-butil-pirimidin-4-il)-4-metil-tiazol-2-il]-amida de ácido de imidazol-1-carboxílico (0,82 g) é acrescentada a uma solução agitada de amida de L-prolina (0,29 g) e trietilamina (0,81 ml) em DMF (5 ml) em temperatura ambiente. A mistura de reação é repousada em temperatura ambiente por 22 horas, depois evaporada e o composto do título é obtido duas vezes como um sólido branco após cristalização com 2:1 metanol: água. HPLC/MS: tempo de retenção 1,27 minutos, M+H 398,3 e M-H 396,3.
[00415] ETAPA 61.1: [5-(2-d9-terc-butil-pirimidin-4-il)-4-metil-tiazol2-il]-amida de ácido lmidazol-1-carboxílico
Figure img0150
[00416] Carbonil diimidazol (0,77 g) é acrescentado a uma solução agitada de 5-(2-d9-terc-butil-pirimidin-4-il)-4-metil-tiazol-2-ilamina (1,11 g) em DMF (4,3 ml) em temperatura ambiente. A mistura de reação é depois repousada por 18 horas a 25°C após durante cujo tempo o composto do título é isolado através de filtração.
[00417] ETAPA 61.2: 5-(2-DG-TERC-BUTIL-PIRIMIDIN-4-IL)-4-METlL-TlAZOL-2-lLAMlNA
Figure img0151
[00418] Hidróxido de sódio em pó (3,71 g) é acrescentado a uma solução de N’-[5-(3-dimetilamino-acriloil)-4-metil-tiazol-2-il]-N, N-dimetilformamidina (5,51 g) e cloridrato de d9-2,2-dimetil-propionamidina (4,50 g) em 2-metoxietanol (41 ml) e a mistura é aquecida a 125°C por 1 hora com agitação. A mistura de reação é esfriada, água é adicionada, e o produto bruto é isolado através de filtração. o produto bruto é purificado por HPLC preparativa e as frações contendo o composto do título divididas entre diclorometano e bicarbonato de sódio aquoso. O composto do título é obtido como um sólido amarelo após evaporação das camadas de diclorometano secadas. HPLC/MS: tempo de retenção 1,12 minutos, M+H 258,4.
[00419] ETAPA 61.3: CLORIDRATO DE D9-2,2-DIMETIL-PROPIONAMIDINA
Figure img0152
[00420] Uma solução a 2M de trimetilalumínio em tolueno (61 ml) é acrescentada a gotas a uma suspensão de cloreto de amónio (6,53 g) em tolueno (46 ml) esfriada com um banho de gelo. A mistura de reação é agitada por 4 horas em temperatura ambiente e éster de butila de ácido d9-2,2-dimetil-propiónico (6,3 g) é adicionado. Após aquecer para 80°C durante 4 dias a mistura de reação é esfriada para 0°C e metanol (200 ml) é adicionado a gotas. Após agitação e sonicação por 1 hora em temperatura ambiente a mistura de reação é filtrada através de Hyflo, lavando com metanol, e o filtrado é evaporado para dar o composto do título como um sólido esbranquiçado.
[00421] ETAPA 61.4: ÉSTER DE BUTILA DE ÁCIDO DG-2,2DIMETIL-PROPIÔNICO
Figure img0153
[00422] Cloreto de d9-terc-butila (5,0 g) é acrescentado em porções a uma suspensão de magnésio (1,50 g) em tetra-hidrofurano (20 ml), ativado com uma quantidade catalítica de iodo, mais de 1 hora com aquecimento como requerido para manter um refluxo fixo. A mistura de reação é depois aquecida por um adicional de uma hora para assegurar formação de Grignard completa. A solução de Grignard acima é depois acrescentada a gotas a uma solução de éster de butila de ácido imidazol-1-carboxílico (7,5 g, preparado como descrito por T. O Werner e A.G.M. Barrett J. Org. Chem. 2006, 71, 4302-4304,) em tetrahidrofurano (40 ml) esfriada com um banho de gelo. A mistura de reação é agitada por 18 horas em temperatura ambiente, água (200 ml) é adicionada, a mistura é filtrada através de Hyflo, o filtrado é extraído com éter dietílico e as camadas de éter dietílico secadas em sulfato de sódio e evaporadas para dar o composto do título.
[00423] EXEMPLO 62: 1-({4-METIL-5-[2-(2-METIL-CICLOPROPIL)PIRIMIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0154
[00424] {4-metil-5-[2-(2-metil-ciclopropil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-il}amida de ácido imidazol-1-carboxílico (50 mg) é acrescentada a uma solução agitada de amida de L-prolina (18 mg) e trietilamina (25 μl) em DMF (147 μl) em temperatura ambiente. A mistura de reação é agitada a 40°C por 2 horas e purificada através de cromatografia preparativa de fase reversa. Frações contendo o composto do título são capturadas com uns 300 mg de BondElut SPE, cartucho de SCX e depois liberadas com 7M de amónia em solução de metanol (1 ml). O composto do título é obtido por evaporação. ESI-MS: M+H 387 e M-H 385.
[00425] ETAPA 62.1: {4-METIL-5-[2-(2-METIL-CICLOPROPIL)PIRIMIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA DE ÁCIDO IMIDAZOL-1CARBOXÍLICO
Figure img0155
[00426] Carbonil diimidazol (487 mg) é acrescentado a uma solução de 4-metil-5-[2-(2-metil-ciclopropil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina (370 mg) e trietilamina (251 μl) em DMF (1,5 ml) em temperatura ambiente e depois aquecida por 2 horas a 40°C. A mistura de reação é evaporada e triturada com clorofórmio. O composto do título é isolado através de filtração.
[00427] ETAPA 62.2: 4-METIL-5-[2-(2-METIL-CICLOPROPIL)-PIRIMIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-ILAMINA
Figure img0156
[00428] Hidróxido de sódio em pó (300 mg) é acrescentado a uma solução de N’-[5-(3-dimetilamino-acriloil)-4-metil-tiazol-2-il]-N, N-dimetilformamidina (1 g, preparado como descrito por S. Wang et al J. Med. Chem. 2004, 47, 1662-1675,) e cloridrato de cis / trans 2-metil-ciclopropanocarboxamidina (0,61 g, preparado como descrito em WO 03/087064) em 2-metoxietanol (3,8 ml) e a mistura aquecida a 125°C por 1 hora com agitação. A mistura de reação é esfriada, filtrada, lavando com água para dar o composto do título. MS: M+H 247 e M-H 245.EXEMPLO 63: 1-{[5-(2-DIETILAMINO-PIRIMIDIN-4-IL)-4-METIL-TIAZOL -2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0157
[00429] [5-(2-dietilamino-pirimidin-4-il)-4-metil-tiazol-2-il]-amida de ácido de Imidazol-1-carboxílico
[00430] (40 mg) são acrescentados a uma solução agitada de amida de L-prolina (14 mg) e trietilamina (19 μl) em DMF (147 μl) em temperatura ambiente, A mistura de reação é agitada a 40°C por 2 horas e purificada através de cromatografia preparativa de fase reversa, Frações contendo o composto do título são capturadas com uns 300 mg de BondElut SPE, cartucho de SCX e depois liberadas com 7M de amónia em solução de metanol (1 ml), O composto do título é obtido por evaporação, ESI-MS: M+H 404 e M-H 402,
[00431] ETAPA 63,1: [5-(2-DIETILAMINO-PIRIMIDIN-4-IL)-4-METIL -TIAZOL-2-IL]-AMIDA DE ÁCIDO IMIDAZOL-1-CARBOXÍLICO
Figure img0158
[00432] Carbonil diimidazol (437 mg) é acrescentado a uma solução de [4-(2-amino-4-metil-tiazol-5-il)-pirimidin-2-il]-dietil-amina (355 mg) e trietilamina (207 μl) em DMF (1,4 ml) em temperatura ambiente e depois aquecida para 18 horas a 80°C, A mistura de reação é evaporada e triturada com clorofórmio. O composto do título é isolado através de filtração.
[00433] ETAPA 63.2: [4-(2-AMINO-4-METIL-TIAZOL-5-IL)-PIRIMIDIN-2-IL]-DIETIL-AMINA
Figure img0159
[00434] Hidróxido de sódio em pó (150 mg) é acrescentado a uma solução de N’-[5-(3-dimetilamino-acriloil)-4-metil-tiazol-2-il]-N, N-dimetilformamidina (0,5 g, preparada como descrito por S. Wang et al J. Med. Chem. 2004, 47, 1662-1675,) e 1,1-dietilguanidina (259 mg) em 2-metoxietanol (1,9 ml) e a mistura aquecida a 125°C por 1 hora com agitação. A mistura de reação é concentrada sob vácuo e purificada através de cromatografia de fase normal, eluente; DCM/EtOAc, para dar o composto do título. ESI-MS: M+H 264 e M-H 262. EXEMPLO 64: 1-({4-METIL-5-[2-(2,2,2-TRIFLUORO-1,1-DIMETILETIL)-PIRIMIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0160
[00435] {4-metil-5-[2-(2,2,2-trif luoro-1, 1 -dimetil-etil)-pirimidin-4-il]tiazol-2-il}-amida de ácido imidazol-1-carboxílico (69 mg) é acrescentada a uma solução agitada de amida de L-prolina (22 mg) e trietilamina (53 mg) em DMF (1 ml) em temperatura ambiente. A mistura de reação é repousada em temperatura ambiente por 22 horas, depois evaporada e o composto do título é obtido como um sólido branco após cristalização com metanol (2 ml) e água (1 ml). HPLC/MS: tempo de retenção 1,80 minutos, M+H 443,1 e M-H 441,2.
[00436] ETAPA 64.1: {4-METIL-5-[2-(2,2,2-TRIFLUORO-1,1-DIMETIL-ETIL)-PIRIMIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-IL}-AMIDA DE ÁCIDO IMIDAZOL -1-CARBOXÍLICO
Figure img0161
[00437] Carbonil diimidazol (38 mg) é acrescentado a uma solução de 4-metil-5-[2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2ilamina (65 mg) em DCM (1 ml) e DMF (0,2 ml) em temperatura ambiente e depois é repousada por 18 horas a 25°C. Após esfriar o composto do título é isolado através de filtração.
[00438] ETAPA 64.2: 4-METIL-5-[2-(2,2,2-TRIFLUORO-1,1-DIMETIL-ETIL)-PIRIMIDIN-4-IL]-TIAZOL-2-ILAMINA
Figure img0162
[00439] Hidróxido de sódio em pó (0,42 g) é acrescentado a uma solução de N’-[5-((E)-3-dimetilamino-acriloil)-4-metil-tiazol-2-il]-N,Ndimetil-formamidina (0,93 g, preparada como descrito por S. Wang et al J. Med. Chem. 2004, 47, 1662-1675) e cloridrato de 3,3,3-trifluoro2,2-dimetil-propionamidina (0,54 g) em 2-metoxietanol (7 ml) e a mistura é aquecida a 125°C por 1 hora com agitação. A mistura de reação é esfriada, água é adicionada, e a camada aquosa é extraída 4 vezes com 10% de metanol em diclorometano. As camadas orgânicas combinadas são purificadas através de cromatografia de fase invertida e bicarbonato de sódio é acrescentado às frações contendo o composto do título para dar um precipitado branco que é colhido através de filtração. HPLC/MS: tempo de retenção 1,47 minutos, M+H 303,1.
[00440] ETAPA 64.3: CLORIDRATO DE 3,3,3-TRIFLUORO-2,2-DIMETIL-PROPIONAMIDINA
Figure img0163
[00441] O composto do título é sintetizado seguindo o procedimento descrito na etapa 61.3 com as modificações seguintes. Éster de butila de ácido 3,3,3-trifluoro-2,2-dimetil-propiônico é usado em vez de éster de butila de ácido dg-2,2-dimetil-propiônico e a mistura é agitada 3 dias a 80°C. O produto bruto é absorvido em DCM tratado com uma quantidade pequena de HCl em EtOH e evaporado. O resíduo é triturado com DCM, filtrado e secado para dar o composto do título como um sólido esbranquiçado.
[00442] ETAPA 64.4: ÉSTER DE BUTILA DE ÁCIDO 3,3,3-TRIFLUORO-2,2-DIMETIL-PROPIÔNICO
Figure img0164
[00443] Ácido 3,3,3-trifluoro-2,2-dimetil-propiônico (3,0 g, 19,2 mmol) e uma gota de DMF é dissolvida em 30 ml de DCM e tratada a gotas em TA com cloreto de oxalila (1,85 ml, 21,1 mmol). Após 2 h, a evolução gasosa cessou e a mistura é tratada lentamente com trietil amina (5,36 ml, 38,4 mmol) seguido por n-butanol (2,1 ml, 23 mmol). A mistura é agitada durante noite, o solvente evaporado e o resíduo agitado com hexanos. O sólido é filtrado e o filtrado é evaporado em um óleo marrom-vermelho. Destilação de Kugelrohr (1 kPa (10 mbar), 60-80°C temperatura de forno) dá o composto do título como um líquido incolor. EXEMPLO 65: 1-({5-[2-(ETIL-METIL-AMINO)-PIRIMIDIN-4-IL]-4-METIL-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0165
[00444] Uma mistura de 1-{[5-(2-metanossulfinil-pirimidin-4-il)-4-metil-tiazol-2-il]-amida} de 2-amida de ácido (S)-pirrolidino-1,2-dicarboxílico (60 mg) e N-etilmetilamina (45 mg) é aquecida por 18 horas a 80°C em um tubo vedado. O produto bruto é depois purificado através de cromatografia preparativa de fase reversa. Frações contendo o composto do título são capturadas com uns 300 mg de BondElut SPE, cartucho de SCX e depois liberadas com 7M de amónia em solução de metanol (1 ml). O composto do título é obtido por evaporação. ESI-MS: M+H 390.
[00445] ETAPA 65.1: 1-{[5-(2-METANOSSULFINIL-PIRIMIDIN-4-IL) -4-METIL-TIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0166
[00446] Ácido meta-cloroperoxibenzoico (0,50 g) foi acrescentado a uma solução de 1-{[4-metil-5-(2-metilsulfanil-pirimidin-4-il)-tiazol-2-il]amida} de 2-amida de ácido (S)-pirrolidino-1,2-dicarboxílico (1,7 g) em diclorometano (8,5 ml) a 0°C. Após 1 hora, a mistura de reação é evaporada e purificada através de cromatografia de fase normal, eluindo com um gradiente de diclorometano / metanol, para dar o composto do título como um sólido amarelo. ESI-MS: M+H 395 e M-H 393.
[00447] ETAPA 65.2: 1-{[4-METIL-5-(2-METILSULFANILPIRIMIDIN-4-IL)-TIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0167
[00448] [4-metil-5-(2-metilsulfanil-pirimidin-4-il)-tiazol-2-il]-amida de ácido de Imidazol-1-carboxílico (1,0 g) é acrescentado a uma solução agitada de amida de L-prolina (379 mg) e trietilamina (0,51 ml) em DMF (3 ml) em temperatura ambiente. A mistura de reação é agitada a 40°C por 2 horas, depois evaporada e o composto do título é obtido como um sólido laranja após precipitação com diclorometano e água. ESIMS: M+H 379 e M-H 377.
[00449] ETAPA 65.3: [4-METIL-5-(2-METILSULFANIL-PIRIMIDIN-4IL)-TIAZOL-2-IL]-AMIDA DE ÁCIDO IMIDAZOL-1-CARBOXÍLICO
Figure img0168
[00450] Carbonil diimidazol (1,77 g) é acrescentado a uma solução de 4-metil-5-(2-metilsulfanil-pirimidin-4-il)-tiazol-2-ilamina (1,3 g) em trietilamina (0,84 ml) e DMF (5,5 ml) em temperatura ambiente e agitada por 2 horas a 80°C. Após esfriar o composto do título é isolado através de filtração.
[00451] ETAPA 65.4: 4-METIL-5-(2-METILSULFANIL-PIRIMIDIN-4IL)-TIAZOL-2-ILAMINA
Figure img0169
[00452] Hidróxido de sódio em pó (1,09 g) é acrescentado a uma solução de N’-[5-(3-dimetilamino-acriloil)-4-metil-tiazol-2-il]-N, N-dimetilformamidina (2,0 g, preparada como descrito por S. Wang et al J. Med. Chem. 2004, 47, 1662-1675,) e tioureia (0,57 g) em etanol (25 ml) e a mistura é aquecida a refluxo por 3 horas com agitação. A mistura de reação é esfriada para temperatura ambiente e água depois iodeto de metila (0,47 ml) é adicionado. Após 1 hora em temperatura ambiente, o etanol é removido por evaporação e água é adicionada e o pH é ajustado para 7 com 2N de ácido clorídrico aquoso. O composto do título é depois obtido através de filtração. ESI-MS: M+H 239 e M-H 237. EXEMPLO 66:1-{[5-(6-CICLOPROPIL-PIRAZIN-2-IL)-4-METIL-TIA-ZOL-2-IL]-AMDA} DE 2-AMIDA DE ACIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXILICO
Figure img0170
[00453] [5-(6-ciclopropil-pirazin-2-il)-4-metil-tiazol-2-il]-amida de ácido imidazol-1-carboxílico (78 mg) é acrescentada a uma solução agitada de amida de L-prolina (30 mg) e trietilamina (83 μl) em DMF (1 ml) em temperatura ambiente, A mistura de reação é repousada em temperatura ambiente por 18 horas, evaporada e o composto do título é obtido como um sólido amarelo I branco após cristalização com metanol (1 ml) e água (0,5 ml), HPLCIMS: tempo de retenção 1,40 minutos, M+H 373,1 e M-H 371,3,
[00454] ETAPA 66,1: [5-(6-CICLOPROPIL-PIRAZIN-2-IL)-4-METILTIAZOL-2-IL]-AMIDA DE ÁCIDO IMIDAZOL-1-CARBOXÍLICO
Figure img0171
[00455] Carbonil diimidazol (74 mg) é acrescentado a uma solução de 5-(6-ciclopropil-pirazin-2-il)-4-metil-tiazol-2-ilamina (96 mg) em DMF (2 ml) em temperatura ambiente e é repousada por 18 horas em temperatura ambiente, A mistura de reação é filtrada, lavando com diclorometano, para dar o composto do título,
[00456] ETAPA 66,2: 5-(6-CICLOPROPIL-PIRAZIN-2-IL)-4-METILTIAZOL-2-ILAMINA
Figure img0172
[00457] Ácido clorídrico concentrado (0,4 ml) é adicionado à N-[5(6-ciclopropil-pirazin-2-il)-4-metil-tiazol-2-il]-acetamida (120 mg) em etanol (9 ml) em temperatura ambiente e a mistura é aquecida a refluxo por 18 horas. A mistura de reação esfriada é evaporada, neutralizada com carbonato de hidrogênio de sódio aquoso e extraída com 10% de metanol em DCM. Os extratos orgânicos combinados são secados em sulfato de sódio e evaporados para dar o composto do título. HPLC/MS: tempo de retenção 0,93 minutos, M+H 233,3.
[00458] ETAPA 66.3: N-[5-(6-CICLOPROPIL-PIRAZIN-2-IL)-4-METIL-TIAZOL-2-IL]-ACETAMIDA
Figure img0173
[00459] Argônio borbulhado através de uma mistura de 2-ciclopropil-6-cloropirazina (154 mg, preparada pelo método de A. Furstner et al J. Am. Chem. Soc. 2002, 214, 13856-13863,), 2-acetamido-4-metiltiazol (200 mg), acetato de paládio (24 mg), tetrafuoroborato de tri-tercbutilfosfônio (61 mg) e carbonato de césio (678 mg) em DMF (3 ml) em temperatura ambiente durante 5 minutos. A mistura de reação é aquecida em um frasco vedado sob uma atmosfera de argônio durante 45 minutos a 150°C em um aparelho de micro-ondas Biotage Initiator™. A mistura de reação é filtrada e purificada por HPLC preparativa. As frações contendo o composto do título são combinadas e evaporadas para remover a acetonitrila e o composto do título obtido como um sólido bege através de filtração. HPLC/MS: tempo de retenção 1,65 minutos, M+H 275,3. EXEMPLO 67: 1-{[4-METIL-5-(5-TRIFLUOROMETIL-PIRIDIN-3-IL)TIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2DICARBOXÍLICO
Figure img0174
[00460] Carbonil diimidazol (29 mg) é acrescentado a uma solução agitada de 4-metil-5-(5-trifluorometil-piridin-3-il)-tiazol-2-ilamina (42 mg) e trietilamina (50 μl) em DMF (1 ml) em temperatura ambiente e a mistura é repousada por 18 horas em temperatura ambiente, Amida de L-prolina (20 mg) é adicionada e a mistura de reação é repousada por 8 horas em temperatura ambiente, evaporada e o composto do título é obtido como um sólido branco após cristalização com metanol (3 ml) e água (1,5 ml), ESI-MS: M+H 400,
[00461] ETAPA 67,1: 4-METIL-5-(5-TRIFLUOROMETIL-PIRIDIN-3IL)-TIAZOL-2-ILAMINA
Figure img0175
[00462] Cloreto de trimetilsilila (0,3 ml) é adicionado à N-[4-metil-5(5-trifluorometil-piridin-3-il)-tiazol-2-il]-acetamida (44 mg) em etanol (2 ml) em temperatura ambiente e a mistura é agitada em temperatura ambiente por 4,5 horas, A reação é depois aquecida para 50°C por 18 horas, esfriada, evaporada e o composto do título é obtido através de filtração após trituração com éter dietílico,
[00463] ETAPA 67,2: N-[4-METIL-5-(5-TRIFLUOROMETIL-PIRIDIN -3-IL)-TIAZOL-2-IL]-ACETAMIDA
Figure img0176
[00464] Argônio borbulhado através de uma mistura de cloridrato de ácido 5-(trifuorometil)-3-piridinilborônico (263 mg, preparado como descrito em WO 2007/134828), 2-acetilamino-5-iodo-4-metiltiazol (260 mg, preparado como descrito em WO 2006/125807), 1,1’-bis(difenilfosfino)-ferrocenodicloro paládio (II) (38 mg), carbonato de sódio (488 mg) em DME (2,3 ml) e água (2,3 ml) em temperatura ambiente durante 5 minutos. A mistura de reação é aquecida em um frasco vedado sob uma atmosfera de argônio durante 30 minutos a 80°C, e depois durante 60 minutos a 80°C, em um aparelho de micro-ondas BiotageInitiator™. Após esfriar, a mistura de reação é extraída com DCM, as camadas orgânicas combinadas evaporadas com sílica-gel e purificadas através de cromatografia de fase normal (eluente; gradiente de DCM para 1:1 DCM: acetato de etila). As frações contendo o produto são depois trituradas com metanol (5 ml), DMF (0,3 ml) e água (1,3 ml) e filtradas para dar o composto do título como um sólido bege.
[00465] EXEMPLO 68: 1-{[5-(6-Dw-DIETILAMINO-PIRAZIN-2-IL)-4METIL-TIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0177
[00466] [5-(6-d10-dietilamino-pirazin-2-il)-4-metil-tiazol-2-il]-amida de ácido Imidazol-1-carboxílico (82 mg) é acrescentada a uma solução agitada de amida de L-prolina (28 mg) e trietilamina (78 μl) em DMF (1 ml) em temperatura ambiente. A mistura de reação é repousada em temperatura ambiente por 14 horas, evaporada e o composto do título é obtido como um sólido amarelo / branco após cristalização com metanol (1 ml) e água (0,5 ml). HPLC/MS: tempo de retenção 1,41 minutos, M+H 414,2 e M-H 412,3.
[00467] ETAPA 68.1: [5-(6-Dw-DIETILAMINO-PIRAZIN-2-IL)-4-METIL-TIAZOL-2-IL]-AMIDA DE ÁCIDO IMIDAZOL-1-CARBOXÍLICO
Figure img0178
[00468] Carbonil diimidazol (78 mg) é acrescentado a uma solução de 5-(6-d10-dietilamino-pirazin-2-il)-4-metil-tiazol-2-ilamina (121 mg) em DMF (2 ml) em temperatura ambiente e é repousada 3,5 horas em temperatura ambiente. A mistura de reação é filtrada, lavando com diclorometano, para dar o composto do título.
[00469] ETAPA 68.2: 5-(6-Dw-DIETILAMINO-PIRAZIN-2-IL)-4-METIL-TIAZOL-2-ILAMINA
Figure img0179
[00470] Ácido clorídrico concentrado (0,4 ml) é adicionado à N-[5(6-d10-dietilamino-pirazin-2-il)-4-metil-tiazol-2-il]-acetamida (140 mg) em etanol (9 ml) em temperatura ambiente e a mistura é aquecida a refluxo por 40 horas. A mistura de reação esfriada é evaporada, neutralizada com carbonato de hidrogênio de sódio aquoso e extraída com 10% de metanol em DCM. Os extratos orgânicos combinados são secados em sulfato de sódio e evaporados para dar o composto do título. HPLC/MS: tempo de retenção 1,17 minutos, M+H 274,4.
[00471] ETAPA 68.3: N-[5-(6-Dw-DIETILAMINO-PIRAZIN-2-IL)-4METIL-TIAZOL-2-IL]-ACETAMIDA
Figure img0180
[00472] Argônio borbulhado através de uma mistura de 2-dw-dietilamino-6-cloropirazina (293 mg), 2-acetamido-4-metiltiazol (300 mg), acetato de paládio (24 mg), tetrafuoroborato de tri-terc-butilfosfônio (61 mg) e carbonato de césio (1,02 g) em DMF (3 ml) em temperatura ambiente durante 5 minutos. A mistura de reação é aquecida em um frasco vedado sob uma atmosfera de argônio durante 45 minutos a 150°C em um aparelho de micro-ondas Biotage Initiator™, filtrada e purificada por HPLC preparativa. As frações contendo o composto do título são combinadas e evaporadas para remover acetonitrila e o composto do título obtido como um sólido bege através de filtração. HPLC/MS: tempo de retenção 1,68 minutos, M+H 316,3.
[00473] ETAPA 68.4: 2-Dw-DIETILAMINO-6-CLOROPIRAZINA
Figure img0181
[00474] d10-Dietilamina (0,5 g) é acrescentada a uma mistura agitada de 2,6-dicloropirazina (0,93 g) e carbonato de potássio (1,41 g) em acetonitrila (4 ml) em temperatura ambiente. A mistura de reação é depois aquecida a 55°C por 60 horas, esfriada, água é adicionada e depois extraída com diclorometano. Os extratos orgânicos combinados são secados em sulfato de sódio, evaporados e purificados através de cromatografia de fase normal, eluente DCM, para dar o composto do título. HPLC/MS: tempo de retenção 2,10 minutos, M+H 196,4 e 198,4. EXEMPLO 69: 1-{[5-(6-DIETILAMINO-PIRAZIN-2-IL)-4-METIL-TIAZOL -2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0182
[00475] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 68, mas usando dietilamina no lugar de d10-dietilamina. HPLC/MS: tempo de retenção 1,43 minutos, M+H 404,2 e 402,3. EXEMPLO 70: 1-{[5-(2-CICLOPROPILMETIL-PIRIMIDIN-4-IL)-4-METIL-TIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0183
[00476] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 42, mas usando [5-(2-ciclopropilmetilpirimidin-4-il)-4-metil-tiazol-2-il]-amida de ácido imidazol-1-carboxílico no lugar de {4-metil-5-[2-(1-metil-ciclopropil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-il}amida de ácido imidazol-1-carboxílico, P.f. 220-222°C, ESI-MS [M+H]+ 387,1, TLC: Rf = 0,2 (DCM/EtOH 95:5).
[00477] ETAPA 70.1: [5-(2-CICLOPROPILMETIL-PIRIMIDIN-4-IL)4-METIL-TIAZOL-2-IL]-AMIDA DE ÁCIDO IMIDAZOL-1-CARBOXÍLICO
Figure img0184
[00478] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 42.1, mas usando 5-(2-ciclopropilmetil-pirimidin-4-il)-4-metil-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2-(1-metil-ciclopropil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina e a reação é agitada por 15 h. P.f. 240-243°C, ESI-MS [M+H]+ 305,1, TLC: Rf = 0,35 (DCM/EtOH 95:5).
[00479] ETAPA 70.2: 5-(2-CICLOPROPILMETIL-PIRIMIDIN-4-IL)-4METIL-TIAZOL-2-ILAMINA
Figure img0185
[00480] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 42.2, mas usando cloridrato de 2-ciclopropilacetamidina no lugar de cloridrato de 1-metil-ciclopropanocarboxamidina. P.f. 198-200oC, ESI-MS [M+H]+ 247,1, TLC: Rf = 0,25 (DCM/EtOH 95:5). EXEMPLO 71: 1-({5-[2-(2-FLUORO-1,1-DIMETIL-ETIL)-PIRIMIDIN-4IL]-4-METIL-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0186
[00481] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 42, mas usando {5-[2-(2-fluoro-1,1-dimetiletil)-pirimidin-4-il]-4-metil-tiazol-2-il}-amida de ácido imidazol-1-carboxílico no lugar de {4-metil-5-[2-(1-metil-ciclopropil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2il}-amida de ácido imidazol-1-carboxílico. P.f. 187-190OC, ESI-MS [M+H]+ 407,1, TLC: Rf = 0,3 (DCM/EtOH 95:5)
[00482] ETAPA 71.1: {5-[2-(2-FLUORO-1,1-DIMETIL-ETIL)-PIRIMIDIN-4-IL]-4-METIL-TIAZOL-2-IL}-AMIDA DE ÁCIDO IMIDAZOL-1-CARBOXÍLICO
Figure img0187
[00483] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 42.1, mas usando 5-[2-(2-fluoro-1,1-dimetiletil)-pirimidin-4-il]-4-metil-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2-(1metil-ciclopropil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina e a reação é agitada por 16 h a 80OC.
[00484] ETAPA 71.2: 5-[2-(2-FLUORO-1,1-DIMETIL-ETIL)-PIRIMIDIN-4-IL]-4-METIL-TIAZOL-2-ILAMINA
Figure img0188
[00485] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 42.2, mas usando cloridrato de 3-fluoro-2,2dimetil-propionamidina no lugar de cloridrato de 1-metil-ciclopropanocarboxamidina. ESI-MS [M+H]+ 267,1, TLC: Rf = 0,4 (DCM/EtOH 95:5). EXEMPLO 72: 1-{[5-(2-TERC-BUTIL-6-METIL-PIRIMIDIN-4-IL)-4-METILTIAZOL-2-IL]-AMIDA} DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2DICARBOXÍLICO
Figure img0189
[00486] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 42, mas usando [5-(2-terc-butil-6-metilpirimidin-4-il)-4-metil-tiazol-2-il]-amida de ácido imidazol-1-carboxílico no lugar de {4-metil-5-[2-(1-metil-ciclopropil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-il}amida de ácido imidazol-1-carboxílico. P.f. 197-199°C, ESI-MS [M+H]+ 403,1, TLC: Rf = 0,3 (DCM/ EtOH 95:5)
[00487] ETAPA 72.1: [5-(2-TERC-BUTIL-6-METIL-PIRIMIDIN-4-IL)4-METIL-TIAZOL-2-IL]-AMIDA DE ÁCIDO IMIDAZOL-1-CARBOXÍLICO
Figure img0190
[00488] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 42.1, mas usando 5-(2-terc-butil-6-metilpirimidin-4-il)-4-metil-tiazol-2-ilamina no lugar de 4-metil-5-[2-(1-metilciclopropil)-pirimidin-4-il]-tiazol-2-ilamina e a reação é agitada por 16 h. ESI-MS [M-H]355,2.
[00489] ETAPA 72.2: 5-(2-TERC-BUTIL-6-METIL-PIRIMIDIN-4-IL)4-METIL-TIAZOL-2-ILAMINA
Figure img0191
[00490] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 1.2, mas usando N-[5-(2-terc-butil-6-metil-pirimidin-4-il)-4-metil-tiazol-2-il]-acetamida no lugar de N-[5-(2-terc-butilpiridin-4-il)-4-metil-tiazol-2-il]-acetamida e usando 2 N de HCl. A mistura de reação é agitada 16 h em RT e depois 3 h a 90°C. ESI-MS [M+H]+ 263,1.
[00491] ETAPA 72.3: N-[5-(2-TERC-BUTIL-6-METIL-PIRIMIDIN-4IL)-4-METIL-TIAZOL-2-IL]-ACETAMIDA
Figure img0192
[00492] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 1.3, mas usando 4-bromo-2-terc-butil-6-metilpirimidina no lugar de 4-bromo-2-terc-butil-piridina. ESI-MS [M+H]+ 305,2.
[00493] ETAPA 72.4: 4-BROMO-2-TERC-BUTIL-6-METIL-PIRIMIDINA
Figure img0193
[00494] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 1.4, mas usando 2-terc-butil-6-metil-3H-pirimidin-4-ona no lugar de 2-terc-butil-1H-piridin-4-ona. ESI-MS [M+H]+ 229/231,0, TLC: Rf = 0,58 (Hexanos/DCM 7:3) EXEMPLO 73: 1-({5-[2-(2-FLUORO-1,1-DIMETIL-ETIL)-PIRIDIN-4-IL]4-METIL-TIAZOL-2-IL}-AMIDA) DE 2-AMIDA DE ÁCIDO (S)-PIRROLIDINO-1,2-DICARBOXÍLICO
Figure img0194
[00495] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito no Exemplo 1 mas com as modificações seguintes. No Exemplo 1, a mistura de reação é agitada por 6 h em ta. Na Etapa 1.1, a mistura de reação é agitada por 15 h a refluxo. Na Etapa 1.2, a mistura de reação é agitada por 1 h a 100°C e extraída com EtOAc após ser extinta. Na Etapa 1.3, a mistura de reação é agitada por 4 h a 120°C. Na Etapa 1.4, a mistura de reação é agitada por 30 min a 85°C e extraída com EtOAc após ser extinta. Na Etapa 1.5, a mistura de reação é agitada por 1 h a 70°C e trituração em MeOH não é executada. Na Etapa 1.6, o produto bruto não é purificado. Na Etapa 1.7, cloreto de 3-fluoro-2,2-dimetil-propionila (Etapa 76.1) é usado.
[00496] Composto do título: ESI-MS: 406,1 [M+H]+; tR = 2,20 min (Sistema 1); TLC: Rf = 0,47 (DCM/MeOH, 9:1).
[00497] ETAPA 73.1: CLORETO DE 3-FLUORO-2,2-DIMETILPROPIONILA
Figure img0195
[00498] O composto do título é preparado em analogia ao procedimento descrito na Etapa 5,1 mas usando ácido 3-fluoro-2,2-dimetilpropiônico (Etapa 73.2).
[00499] ETAPA 73.2: ÁCIDO 3-FLUORO-2,2-DIMETIL-PROPIÔNICO
Figure img0196
[00500] Uma solução de 6,9 g (38,6 mmol) éster de metila de ácido de 3-fluoro-2,2-dimetil-propiônico em 30 ml de metanol é tratado com 38,6 ml (77 mmol) de 2N de NaOH e a mistura aquecida a refluxo por 3 horas. A mistura é esfriada para RT e o solvente evaporado. O resíduo é dividido entre água e DCM. A fase aquosa é acidificada pela adição de 50 ml de 2N HCl e extraída com acetato de etila. A fase orgânica é lavada com salmoura, secada com sulfato de sódio e evaporada. O resíduo incolor é agitado com hexanos, material insolúvel é removido através de filtração e o filtrado é evaporado para dar o composto do título como um sólido incolor. ESI-MS: 119,0 [M-H]-.
[00501] ETAPA 73.3: ÉSTER DE METILA DE ÁCIDO 3-FLUORO2,2-DIMETIL-PROPIÔNICO
Figure img0197
[00502] 27 ml de uma solução de 1 M de fluoreto de tetrabutilamônio em THF são adicionados lentamente e sob resfriamento em gelo a uma solução de 7,25 g (27,4 mmol) de éster de metila de ácido 2,2dimetil-3-trifluorometanossulfonilóxi-propiônico em 150 ml de THF. A solução resultante é agitada 6 h a 0°C e depois 10 h em RT. O solvente é evaporado cuidadosamente e o resíduo dividido entre DCM e salmoura. A fase orgânica é lavada com salmoura, secada com sulfato de sódio e evaporada cuidadosamente. O óleo marrom é destilado em um forno de Kugelrohr (temperatura do forno 120 a 150°C) para dar o composto do título como um líquido incolor.
[00503] ETAPA 73.4: ÉSTER DE METILA DE ÁCIDO 2,2-DIMETIL3-TRIFLUOROMETANOSSULFONILÓXI-PROPIÔNICO
Figure img0198
[00504] A uma solução de 3,64 g (27,5 mmol) de éster de metila de ácido 3-hidróxi-2,2-dimetil-propiônico e 4,82 ml (41,3 mmol) de 2,6lutidina em 50 ml de DCM seco é lentamente adicionado anidrido de ácido trifluoro-metanossulfônico (5,12 ml, 30,3 mmol) a -70°C e sob nitrogênio. A solução amarela é agitada 5 min. a -70°C depois o banho refrescante é removido e a mistura agitada 3 h em RT. Alteração da cor de amarelo para laranja para marrom. DCM (50 ml) é adicionado e a solução é lavada duas vezes com 2 N de HCl, secada com sulfato de sódio e evaporada à secura. O resíduo marrom é secado sob vácuo e o composto do título usado sem outra purificação. TLC: Rf = 0,72 (EtOAc/hexanos 1:2).
CONDIÇÕES DE HPLC ANALÍTICA:
[00505] Gradiente linear 20-100% solvente A em 5 min + 1,5 min 100% solvente A; detecção a 215 nm, taxa de fluxo 1 mL/min a 30°C. Coluna: Nucleosil 100-3 C18 (70 x 4,0 mm). Solvente A = CH3CN + 0,1% TFA; Solvente B = H2O + 0,1% TFA.
CONDIÇÕES DE MS:
[00506] Instrumento: Micromassa Plataforma II, eluente: 15% metanol em água contendo 0,2% de uma solução a 25% de hidróxido de amónio
[00507] ESPECTROS DE 1H-RMN foram medidos em um Espectrómetro Varian Mercury 400 nos solventes indicados, Abreviações: br: vasto; s: singleto; d: dupleto; t: tripleto; q: quarteto; ppm: parte por milhões,
CONDIÇÕES DE HPLC/MS:
[00508] Instrumento: Hewlett Packard Agilent série 1100, coluna: XBridge™ C18 2,5 microns 3,0 X 30 mm, temperatura: 50°C, eluente: sistema de 2 canais: Canal A 5% acetonitrila em água, Canal B acetonitrila contendo 1,0% ácido fórmico
Figure img0199
[00509] detecção: Agilent 1100 PAI 210-350 nm e Waters Micromass ZQ 2000 ESI+ e ESI-HPLC PREPARATIVA:
[00510] Instrumento: sistema de HPLC preparativa Gilson, coluna: Sunfire™ Prep C18 OBD™ 5 microns 30 X 100 mm, temperatura: 25°C, eluente: gradiente de 5 100% acetonitrila em 0,05% ácido trifluoroacético aquoso por 20 minutos, taxa de fluxo: 30 ml/minuto, detecção: UV 254 nm, ABREVIAÇÕES E ACRÔNIMOS: BBr3 tribrometo de boro tBuP,HBF4 tetrafluoroborato de tri-terc-butilfosfinio DCM diclorometano DIEA di-isopropiletilamina DMAP 4-(dimetilamino)piridina DME 1,2-dimetoxietano DMF dimetil formamidaDMP 1,3-dimetil-3,4,5,6-tetra-hidro-2-(1 H)-pirimidinona DMSO dimetilsulfóxido Hex hexano L litro(s) LiHMDS bis(trimetilsilil)amida de litio m.p. ponto de fundição MPLC cromatografia liquida de pressão média NBS N-bromossuccinimida NMP 1-metil-2-pirrolidona PdCh(dppf) [1,1’-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) Pd(PPh))4 tetraquis(trifenilfosfina)pal+dio(0) Rf razão de frentes (TLC) ta temperatura ambiente TFA ácido trifluoroacético THF tetra-hidrofurano TLC cromatografia de camada fina tR tempo de retenção v volume p. peso
EXEMPLO A: EFICIÊNCIA COMO INIBIDORES DE PI3 QUINASE
[00511] ENSAIO DE PI3K KINASEGLO: 50 nL de diluições do compostosão dispensados sobre placas de Estireno Não Ligantes (NBS) de volume baixo, de 384 poços, preta (Co-Star Cat. No. NBSV3676). La-fosfatidilinositol (PI), fornecido como solução de 10 mg/ml em metanol, foi transferido para um tubo de vidro e secado sob feixe de nitrogênio. Foi depois ressuspenso em 3% de OctilGlucosideo (OG) submetendo a vórtice e armazenado a 4°C. O Ensaio de Quinase Luminescente KinaseGlo (Promega, Madison/WI, EUA) é um método de HTS homogêneo de medir a atividade de quinase quantificando a quantidade de ATP que permanece na solução seguindo uma reação de quinase.
[00512] 5 μl de uma mistura de PI/OG com o subtipo PI3K foram adicionados (Tabela 1). Reações de quinase foram iniciadas por adição de 5 μl de mistura de ATP contendo em um volume final de 10 μl de 10 mM de TRIS-HCl pH 7,5, 3 mM de MgCh, 50 mM de NaCl, 0,05% de CHAPS, 1mM de DTT e 1 μM de ATP, e ocorreu em temperatura ambiente. As reações foram interrompidas com 10 μl de KinaseGlo e as placas foram lidas 10 min depois em uma leitora de Synergy2 usando um tempo de integração de 0,1 segundo por poço. 2,5 μM de um inibidor de PI3 quinase da classe pan 1 (padrão) foram acrescentados às placas de ensaio para gerar a inibição de 100% da reação de quinase, e a inibição de 0% foi dada pelo veículo de solvente (90% de DMSO em água). O padrão foi usado como um composto de referência e incluído em todas as placas de ensaio na forma de 16 pontos de diluição em duplicata. TABELA 1 PI3KS POR KINASEGLO: CONDIÇÕES DE ENSAIO E PROTOCOLO DE REAGENTE
Figure img0200
Clonagem das PI3Ks.
[00513] Os construtos de PI3Kα, PI3Kβ e PI3KÕ são fusão do domínio de iSH2 de p85 e as respectivas isoformas de p110. O fragmento de p85α e os genes da isoforma de p110 foram gerados por PCR do cDNA da primeira fita gerados por RT-PCR de RNA comercial da placenta, testículos e cérebro como descrito abaixo. O construto de PI3Ky foi obtido de Roger Williams Lab, MRC Laboratory of Molecular Biology, Cambridge, UK (novembro, 2003) e é descrito (Pacold, Michael E.; Suire, Sabine; Perisic, Olga; Lara-Gonzalez, Samuel; Davis, Colin & & & & T.; Walker, Edward H.; Hawkins, Phillip T.; Stephens, Len; Eccleston, John F.; Williams, Roger L. Crystal structure and functional analysis of Ras binding to its effector phosphoinositide 3-kinase gamma. Cell (2000), 103(6), 931-943). Construtos de PI3Kα e proteínas
Figure img0201
[00514] BV1075: O construto para Baculovirus BV-1075 foi gerado por uma ligação compreendida de três partes de um fragmento de p85 e um fragmento de p110α clonado no vetor pBlueBac4.5. O fragmento de p85 foi derivado de p1661-2 do plasmídeo digerido com Nhe/Spe. O fragmento de p110α derivado do clone foi verificado através de sequenciação e usado em um LR410 como um fragmento de SpeI/HindIII. Para a geração do vetor de expressão de baculovírus LR410, a reação de LR Gateway para transferência da inserção para dentro do vetor de pBlueBac4.5 (Invitrogen) adaptado à Gateway foi usada. O vetor de clonagem pBlueBac4.5 (Invitrogen) foi digerido com Nhe/HindIII. Este resultou no construto PED 153.8. O componente de p85 (iSH2) foi gerado por PCR usando ORF 318 (descrita acima) como um modelo e um iniciador direto KAC1028 (5’GCTAGCATGCGAGAATATG ATAGAT-TATATGAAG-AATATACC) (SEQ ID NO: 1) e dois iniciadores reversos, KAC1029 (5’-GCCTCCACCAC-CTCC GCCTG-GTTTAATGC TG TT CATACGTTTGTC) (SEQ ID NO: 2) e KAC1039 (5’TACTAGTC-CGCCTC CAC-CACCTCCGCCTCCACC ACCTCCGCC) (SEQ ID NO: 3). Os dois iniciadores reversos sobrepõem e incorporam o ligador de 12x Gly e a sequência N-terminal do gene p110α ao sítio de SpeI. O ligador de Gly 12x substitui o ligador de Gly simples no construto de BV1052. O fragmento de PCR foi clonado em pCR2.1 TOPO (Invitrogen). Dos clones resultantes, p1661-2 foi determinado estar correto através de sequenciação. Este plasmídeo foi digerido com Nhe e Spel e o fragmento resultante foi isolado em gel e purificado por subclonagem.
[00515] O fragmento de clonagem de p110a foi gerado por digesto enzimático do clone LR410 (vide acima) com Spe l e Hindlll. O sítio de Spel está na região de codificação do gene de p110a. O fragmento resultante foi isolado em gel e purificado por subclonagem. O vetor de clonagem, pBlueBac4.5 (lnvitrogen) foi preparado através de digestão enzimática com Nhe e Hindlll. O vetor cortado foi purificado com coluna de Qiagen e depois defosforilado com fosfatase alcalina de lntestino de Bezerro (ClP) (BioLabs). Após conclusão da reação de ClP, o vetor cortado foi novamente purificado em coluna para gerar o vetor final. Uma ligação de três partes foi executada usando Roche Rapid ligase e as especificações do vendedor. O plasmídeo final foi verificado através de sequenciação.
[00516] Domínio da quinase.
[00517] Sequência da proteína de BV 1075: 1 MREYDRLYEE YTRTSQElQM KRTAlEAFNE TlKlFEEQCQ TQERYSKEYl EKFK REGNEK 61 ElQRlMHNYD KLKSRlSEll DSRRRLEEDL KKQAAEYREl DKRMNSlKPG GGGGGGGGGG 121 GLVECLLPNG MlVTLECLRE ATLlTlKHEL FKEARKYPLH QLLQDESSYl FVSVTQEAER 181 EEFFDETRRL CDLRLFQPFL KVlEPVGNRE EKlLNRElGF AlGMPVCEFD MVKDPEVQDF 241 RRNlLNVCKE AVDLRDLNSP HSRAMYVYPP NVESSPELPK HlYNKLDKGQ llVVlWVlVS 301 PNNDKQKYTL KlNHDCVPEQ VlAEAlRKKT RSMLLSSEQL KLCVLEYQGK YlLKVCGCDE 361 YFLEKYPLSQ YKYlRSClML GRMPNLMLMA KESLYSQLPM DCFTMPSYSR RISTATPYMN 421 GETSTKSLWV INSALRIKIL CATYVNVNIR DIDKIYVRTG IYHGGEPLCD NVNTQRVPCS 481 NPRWNEWLNY DIYIPDLPRA ARLCLSICSV KGRKGAKEEH CPLAWGNINL FDYTDTLVSG 541 KMALNLWPVP HGLEDLLNPI GVTGSNPNKE TPCLELEFDW FSSVVKFPDM SVIEEHANWS 601 VSREAGFSYS HAGLSNRLAR DNELRENDKE QLKAISTRDP LSEITEQEKD FLWSHRHYCV 661 TIPEILPKLL LSVKWNSRDE VAQMYCLVKD WPPIKPEQAM ELLDCNYPDP MVRGFAVRCL 721 EKYLTDDKLS QYLIQLVQVL KYEQYLDNLL VRFLLKKALT NQRIGHFFFW HLKSEMHNKT 781 VSQRFGLLLE SYCRACGMYL KHLNRQVEAM EKLINLTDIL KQEKKDETQK VQMKFLVEQM 841 RRPDFMDALQ GFLSPLNPAH QLGNLRLEEC RIMSSAKRPL WLNWENPDIM SELLFQNNEI 901 IFKNGDDLRQ DMLTLQIIRI MENIWQNQGL DLRMLPYGCL SIGDCVGLIE VVRNSHTIMQ 961 IQCKGGLKGA LQFNSHTLHQ WLKDKNKGEI YDAAIDLFTR SCAGYCVATF ILGIGDRHNS 1021 NIMVKDDGQL FHIDFGHFLD HKKKKFGYKR ERVPFVLTQD FLIVISKGAQ ECTKTREFER 1081 FQEMCYKAYL AIRQHANLFI NLFSMMLGSG MPELQSFDDI AYIRKTLALD KTEQEALEYF 1141 MKQMNDAHHG GWTTKMDWIF HTIKQHALNE LGGAHHHHHH (SEQ ID NO: 4) Construtos de PI3Kβ e proteínas
Figure img0202
[00518] BV949: produtos de PCR para o interdomínio de SH2 (iSH2) da subunidade de p85 PI3Kα, PI3Kβ e PI3Kδ e para a subunidade de p110β completa foram gerados e fundidos sobrepondo PCR. O produto de PCR de iSH2 foi obtido do cDNA da primeira fita gerada por RT-PCR de RNA de placenta, testículos e cérebro humanos comerciais (Clontech), inicialmente usando os iniciadores gwG130-p01 (5’-CGAGAATATGATAGATTATA TGAAGAAT-3’) (SEQ ID NO: 5) e gwG130-p02 (5’-TGGTTT-AATGCTGTT CATACGTTTGTCAAT-3’)). Subsequentemente, em uma reação de PCR secundária, os sítios de AttB1 de combinação de Gateway e as sequências ligantes foram adicionados na terminação 5’ e terminação 3’ do fragmento de iSH2 de p85, usando os iniciadores gwG130-p03 (5’-GGGACAAGTT TGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATATACATATGCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3’) (SEQ ID NO: 7) e gwG130-p05 (5’ACTGAAG CATCCTCCTC-CTCCTCCTCCTGGTTTAATGCTGTTCA TACGTTTGTC-3’) (SEQ ID NO: 8). O fragmento de p110β foi obtido por PCR usando como modelo um clone de p110β (de fonte desconhecida que foi a sequência verificada) usando os iniciadores gwG130-p04 (5’-ATTAAACCAGGAGGAGGA GGAGGAGGATGCTTCAGTTTCATAATGCCTCCTGCT -3’) (SEQ ID NO: 9) contendo as sequências ligantes e a terminação 5’ de p110β e gwG130-p06 (5’AGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCCAGATC-TGTAGTCTTTC CGAA-CTGTGTG-3’) (SEQ ID NO: 10) contendo as sequências da terminação 3’ de p110β fundido a um marcador de Histidina. A proteína de fusão de p85-iSH2 / p110β foi montada por uma PCR de sobreposição de uma reação dos ligadores na terminação 3’ do fragmento de iSH2 e da terminação 5’ do fragmento p110β, usando o iniciador de gwG130-p03 supracitado e um iniciador contendo um marcador de Histidina de sobreposição e as sequências de recombinação de AttB2 (5’-GGGACCACTTTGTACAAGAAA GCTGGGT TTAAGCTCCGTGAT GGTGATGGTGATGTGCTCC-3’) (SEQ ID NO: 11). Este produto final foi recombinado em uma reação de OR Gateway (Invitrogen) no vetor doador pDONR201 (Invitrogen) para gerar o clone de entrada ORF253. Este clone foi verificado através de sequenciação e usado em uma reação de LR Gateway (Invitrogen) para transferir a inserção no vetor pBlueBac4.5 adaptado à Gateway (Invitrogen) para geração do vetor de expressão de baculovírus LR280. Este LR280 tem uma mutação de aminoácido na sequência de p85.
[00519] Domínio da quinase.
[00520] Sequência da proteína de BV949: 1 MREYDRLYEE YTRTSQEIQM KRTAIEAFNE TIKIFEEQCQ TQERYSKEYl EKFKREGKEK 61 EIQRIMHNYD KLKSRISEII DSRRRLEEDL KKQAAEYREI DKRMNSIKPG GGGGGCFSFI 121 MPPAMADILD IWAVDSQIAS DGSIPVDFLL PTGIYIQLEV PREATISYIK QMLWKQVHNY 181 PMFNLLMDID SYMFACVNQT AVYEELEDET RRLCDVRPFL PVLKLVTRSC DPGEKLDSKI 241 GVLIGKGLHE FDSLKDPEVN EFRRKMRKFS EEKILSLVGL SWMDWLKQTY PPEHEPSIPE 301 NLEDKLYGGK LIVAVHFENC QDVFSFQVSP NMNPIKVNEL AIQKRLTIHG KEDEVSPYDY 361 VLQVSGRVEY VFGDHPLIQF QYIRNCVMNR ALPHFILVEC CKIKKMYEQE MIAIEAAINR 421 NSSNLPLPLP PKKTRIISHV WENNNPFQIV LVKGNKLNTE ETVKVHVRAG LFHGTELLCK 481 TIVSSEVSGK NDHIWNEPLE FDINICDLPR MARLCFAVYA VLDKVKTKKS TKTINPSKYQ 541 TIRKAGKVHY PVAWVNTMVF DFKGQLRTGD IILHSWSSFP DELEEMLNPM GTVQTNPYTE 601 NATALHVKFP ENKKQPYYYP PFDKIIEKAA EIASSDSANV SSRGGKKFLP VLKEILDRDP 661 LSQLCENEMD LIWTLRQDCR EIFPQSLPKL LLSIKWNKLE DVAQLQALLQ IWPKLPPREA 721 LELLDFNYPD QYVREYAVGC LRQMSDEELS QYLLQLVQVL KYEPFLDCAL SRFLLERALG 781 NRRIGQFLFW HLRSEVHIPA VSVQFGVILE AYCRGSVGHM KVLSKQVEAL NKLKTLNSLI 841 KLNAVKLNRA KGKEAMHTCL KQSAYREALS DLQSPLNPCV ILSELYVEKC KYMDSKMKPL 901 WLVYNNKVFG EDSVGVIFKN GDDLRQDMLT LQMLRLMDLL WKEAGLDLRM LPYGCLATGD 961 RSGLIEVVST SETIADIQLN SSNVAAAAAF NKDALLNWLK EYNSGDDLDR AIEEFTLSCA 1021 GYCVASYVLG IGDRHSDNIM VKKTGQLFHI DFGHILGNFK SKFGIKRERV PFILTYDFIH 1081 VIQQGKTGNT EKFGRFRQCC EDAYLILRRH GNLFITLFAL MLTAGLPELT SVKDIQYLKD 1141 SLALGKSEEE ALKQFKQKFD EALRESWTTK VNWMAHTVRK DYRSGAHHHH HHGA (SEQ ID NO: 12)
[00521] Domínio da quinase. Construto de PI3Ky e proteína
Figure img0203
[00522] Construto obtido de Roger Williams Lab, Laboratory of MRC de Biologia Molecular, Cambridge, UK (novembro, 2003). Descrição do construto em (Pacold, Michael E.; Suire, Sabine; Perisic, Olga; o LaraGonzález, Samuel; Davis, Colin T.; Passeador, Edward H.; Hawkins, Phillip T.; Stefens, Len; Eccleston, John F.; Williams, Roger L., Estrutura de cristal e análise funcional de Ras que liga a seu gama de 3quinase de fosfoinositide efetor. Cell (2000), 103(6), 931-943). Construtos que carecem o 144 aa N-terminal.
[00523] Sequência de proteína de BV950: 1 MSEESQAFQR QLTALIGYDV TDVSNVHDDE LEFTRRGLVT PRMAEVASRD PKLYAMHPWV 61 TSKPLPEYLW KKIANNCIFI VIHRSTTSQT IKVSPDDTPG AILQSFFTKM AKKKSLMDIP 121 ESQSEQDFVL RVCGRDEYLV GETPIKNFQW VRHCLKNGEE IHVVLDTPPD PALDEVRKEE 181 WPLVDDCTGV TGYHEQLTIH GKDHESVFTV SLWDCDRKFR VKIRGIDIPV LPRNTDLTVF 241 VEANIQHGQQ VLCQRRTSPK PFTEEVLWNV WLEFSIKIKD LPKGALLNLQ IYCGKAPALS 301 SKASAESPSS ESKGKVRLLY YVNLLLIDHR FLLRRGEYVL HMWQISGKGE DQGSFNADKL 361 TSATNPDKEN SMSISILLDN YCHPIALPKH QPTPDPEGDR VRAEMPNQLR KQLEAIIATD 421 PLNPLTAEDK ELLWHFRYES LKHPKAYPKL FSSVKWGQQE IVAKTYQLLA RREVWDQSAL 481 DVGLTMQLLD CNFSDENVRA IAVQKLESLE DDDVLHYLLQ LVQAVKFEPY HDSALARFLL 541 KRGLRNKRIG HFLFWFLRSE IAQSRHYQQR FAVILEAYLR GCGTAMLHDF TQQVQVIEML 601 QKVTLDIKSL SAEKYDVSSQ VISQLKQKLE NLQNSQLPES FRVPYDPGLK AGALAIEKCK 661 VMASKKKPLW LEFKCADPTA LSNETIGIIF KHGDDLRQDM LILQILRIME SIWETESLDL 721 CLLPYGCIST GDKIGMIEIV KDATTIAKIQ QSTVGNTGAF KDEVLNHWLK EKSPTEEKFQ 781 AAVERFVYSC AGYCVATFVL GIGDRHNDNI MITETGNLFH IDFGHILGNY KSFLGINKER841 VPFVLTPDFL FVMGTSGKKT SPHFQKFQDI CVKAYLALRH HTNLLIILFS MMLMTGMPQL 901 TSKEDIEYIR DALTVGKNEE DAKKYFLDQI EVCRDKGWTV QFNWFLHLVL GIKQGEKHSA 961 HHHHHH (SEQ ID NO: 13) Construto de PI3Kδ e proteína
Figure img0204
[00524] BV1060: produtos de PCR para o interdomínio de SH2 (iSH2) da subunidade de p85 e para a subunidade de p110δ completa foram gerados e fundidos por PCR de sobreposição. O produto de PCR de iSH2 foi gerado usando como um modelo o ORF318 (vide acima) e os iniciadores gwG130-p03 (5’GGGACAAGTTTGTACAAA AAAGCAGGCTACGAAGGAGATATAC ATATGCGAGAATATGATAGA TTATATGAAGAAT-3’) (SEQ ID NO: 7) e gwG154-p04 (5’-TCCTCC TCCT-CCTCCTCCTGGTTTAATGCTGTTCAT ACGTTTGTC-3’) (SEQ ID NO: 14). O fragmento p110δ foi obtido do cDNA da primeira fita gerada por RT-PCR de RNA de placenta, testículos e cérebro humanos comerciais (Clontech), usando inicialmente os iniciadores gwG154-p01 (5’ATGCCCCCTGGGGTGGACTGCCCCAT-3’) (SEQ ID NO: 15) e gwG154-p02 (5’-CTACTGCCTGT-TGTCTTTGGACACGT-3’) (SEQ ID NO: 16). Em uma reação de PCR, as sequências de ligador subsequentes e um marcador de Histidina foram adicionados à terminação 5’ e terminação 3’ do fragmento de p110δ respectivamente, usando os iniciadores gw154-p03 (5’-ATTAAACCAGGAGGAGGAGGAGGAG GACCCCCTGGGGTGGACTG CCCCATGGA-3’) (SEQ ID NO: 17) e gwG154-p06 (5’-AGCTCCGTGA TGGTGA TGGTGATGTGCTCCCT GCCTGTTGTCTTTGGACACGTTGT-3’) (SEQ ID NO: 18). A proteína de fusão p85-iSH2 / p110δ foi montada em uma terceira reação de PCR pelos ligadores de sobreposição na terminação 3’ do fragmento de iSH2 e na terminação 5’ do fragmento p110δ, usando o iniciador de gwG130-p03 supracitado e um iniciador contendo um marcador de Histidina de sobreposição e as sequências de recombinação Gateway (Invitrogen) AttB2 (5’-GGG-ACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTTA AGC TCCG TGATGGTGATGGTGAGTGCTCC-3’) (SEQ ID NO: 19). Este produto final foi recombinado em uma reação de OR Gateway no vetor doador pDONR 201 (Invitrogen) para gerar o clone de entrada de ORF319. Este clone foi verificado através de sequenciação e usado em uma reação LR Gateway (Invitrogen) para transferir a inserção para dentro do vetor pBlueBac4.5 adaptado à Gateway (Invitrogen) para geração do vetor de expressão de baculovírus LR415. Sequência da proteína de BV1060: 1 MREYDRLYEE YTRTSQEIQM KRTAIEAFNE TIKIFEEQCQ TQERYSKEYI EKFKREGNEK 61 EIQRIMHNYD KLKSRISEII DSRRRLEEDL KKQAAEYREI DKRMNSIKPG GGGGGPPGVD 121 CPMEFWTKEE NQSVVVDFLL PTGVYLNFPV SRNANLSTIK QLLWHRAQYE PLFHMLSGPE 181 AYVFTCINQT AEQQELEDEQ RRLCDVQPFL PVLRLVAREG DRVKKLINSQ ISLLIGKGLH 241 EFDSLCDPEV NDFRAKMCQF CEEAAARRQQ LGWEAWLQYS FPLQLEPSAQ TWGPGTLRLP 301 NRALLVNVKF EGSEESFTFQ VSTKDVPLAL MACALRKKAT VFRQPLVEQP EDYTLQVNGR 361 HEYLYGSYPL CQFQYICSCL HSGLTPHLTM VHSSSILAMR DEQSNPAPQV QKPRAKPPPI 421 PAKKPSSVSL WSLEQPFRIE LIQGSKVNAD ERMKLVVQAG LFHGNEMLCK TVSSSEVSVC 481 SEPVWKQRLE FDINICDLPR MARLCFALYA VIEKAKKARS TKKKSKKADC PIAWANLMLF 541 DYKDQLKTGE RCLYMWPSVP DEKGELLNPT GTVRSNPNTD SAAALLICLP EVAPHPVYYP 601 ALEKILELGR HSECVHVTEE EQLQLREILE RRGSGELYEH EKDLVWKLRH EVQEHFPEAL 661 ARLLLVTKWN KHEDVAQMLY LLCSWPELPV LSALELLDFS FPDCHVGSFA IKSLRKLTDD 721 ELFQYLLQLV QVLKYESYLD CELTKFLLDR ALANRKIGHF LFWHLRSEMH VPSVALRFGL 781 ILEAYCRGST HHMKVLMKQG EALSKLKALN DFVKLSSQKT PKPQTKELMH LCMRQEAYLE 841 ALSHLQSPLD PSTLLAEVCV EQCTFMDSKM KPLWIMYSNE EAGSGGSVGI IFKNGDDLRQ 901 DMLTLQMIQL MDVLWKQEGL DLRMTPYGCL PTGDRTGLIE VVLRSDTIAN IQLNKSNMAA 961 TAAFNKDALL NWLKSKNPGE ALDRAIEEFT LSCAGYCVAT YVLGIGDRHS DNIMIRESGQ 1021 LFHIDFGHFL GNFKTKFGIN RERVPFILTY DFVHVIQQGK TNNSEKFERF RGYCERAYTI 1081 LRRHGLLFLH LFALMRAAGL PELSCSKDIQ YLKDSLALGK TEEEALKHFR VKFNEALRES 1141 WKTKVNWLAH NVSKDNRQEL GGAHHHHHH (SEQ ID NO: 20) Purificação dos construtos PI3Kα, PI3Kβ e PI3Ky PI3Ka, PI3Kβ e PI3Ky foram purificados em duas etapas cromatográficas: cromatografia de afinidade imobilizada de metal (IMAC) em uma resina de Ni sefarose (GE Healthcare) e filtração em gel utilizando uma coluna Superdex 200 26/60 (GE Healthcare). Todos os tampões foram esfriados para 40C e lise foi executada esfriada em gelo. Fracionamento da coluna foi executado em temperatura ambiente. Todos os tampões usados para purificar PI3Kβ continham 0,05% de Triton X100 além do que é descrito abaixo. Tipicamente as células congeladas de 10 L da cultura de células Tn5 foram ressuspensas em "Tampão de Lise" 20 mM de TrisCl,pH 7,5, 500 mM de NaCl, 5% de glicerol, 5 mM de imidazol, 1 mM de NaF, 0,1 ug/mL de ácido ocadaico (OAA), 5 mM de BME, 1 x coquetel de inibidor de protease Completo livre de EDTA (20 tabletes/1 L de tampão, Roche Applied Sciences), benzonase (25U/mL de tampão, EMD Biosciences) a uma razão de 1:6 v/v de pelota para razão de Tampão de Lise, e mecanicamente lisadas dando 20 batidas usando uma mão de almofariz de encaixe apertado, O lisado foi centrifugado a 45,000 g durante 30 minutos, e o sobrenadante foi carregado sobre uma coluna de IMAC pré-equilibrada (3 ml de resina/100 ml de lisado), A coluna foi lavada com 3-5 volumes da coluna de Tampão de Lise, seguido por uma segunda lavagem de 3-5 volumes de coluna com 20 mM de Tris-Cl, pH 7,5, 500 mM de NaCl, 5% de glicerol, 45 mM de imidazol, 1 mM de NaF, 0,1 μg/mL de OAA, 5 mM de BME, 1x coquetel de inibidor de protease Completo livre de EDTA, Proteína foi eluída com 20 mM de Tris-Cl, pH 7,5, 0,5 M de NaCl, 5% de glicerol, 250 mM de imidazol, 1 mM de NaF, 0,1 μg/mL de OAA, 5 mM de BME, 1x coquetel de inibidor de protease Completo livre de EDTA, Frações pertinentes foram analisadas através de SDS-PAGE e foram consequentemente agrupadas, A proteína foi ainda purificada por filtração de gel em uma coluna Superdex 200 26/60 equilibrada em 20 mM de TrisCl, pH 7,5, 0,5 M de NaCl, 5% de glicerol, 1 mM de NaF, 5 mM de DTT, 1x coquetel de inibidor de protease Completo livre de EDTA, Frações pertinentes foram analisadas através de SDS-PAGE e foram agrupadas consequentemente, Um volume igual de Tampão de Diálise (20 mM de Tris-Cl, pH 7,5, 500 mM de NaCl, 50% de glicerol, 5 mM de NaF, 5 mM de DTT) foi acrescentado ao fundo geral e depois submetido à diálise contra duas alterações do Tampão de Diálise (uma alteração durante a noite), Proteína foi armazenada a -20OC,
Purificação de PI3KÕ
[00525] PI3KÕ foi purificada em três etapas cromatográficas: cromatografia de afinidade imobilizada de metal em uma resina de Ni Sepharose (GE Healthcare, filtração em gel utilizando uma coluna de Superdex200 26/60 (GE Healthcare), e por fim uma etapa de permuta de ions em uma coluna de Q-HP (GE Healthcare). Todos os tampões foram esfriados para 40C e lise foi executada esfriada em gelo. Fracionamento da coluna foi executado em temperatura ambiente.
[00526] Tipicamente células congeladas de 10 L da cultura de células de Tn5 foram ressuspensas em "Tampão de Lise" 20 mM de TrisCl,pH 7,5, 500 mM de NaCl, 5% de glicerol, 5 mM de imidazol, 1 mM de NaF, 0,1 μg/mL de ácido ocadaico (OAA), 5 mM de BME, 1 x coquetel de inibidor de protease Completo livre de EDTA (20 tabletes/1 L de tampão, Roche Applied Sciences), benzonase (25U/mL de tampão de lise, EMD Biosciences) a uma razão de 1:10 v/v de pelota para razão de Tampão de Lise, e mecanicamente lisadas dando 20 batidas usando uma mão de almofariz de encaixe apertado. O lisado foi centrifugado a 45.000 g durante 30 minutos, e o sobrenadante foi carregado sobre uma coluna de IMAC pré-equilibrada (5 ml de resina/100 ml de lisado). A coluna foi lavada com 3-5 volumes de coluna de Tampão de Lise, seguido por uma segunda lavagem de 3-5 volumes de coluna com 20 mM de Tris-Cl, pH 7,5, 500 mM de NaCl, 5% de glicerol, 40 mM de imidazol, 1 mM de NaF, 0,1 ug/mL de OAA, 5 mM de BME, 1 x coquetel de inibidor de protease Completo livre de EDTA. Proteina foi eluida com 20 mM de Tris-Cl, pH 7,5, 500 mM de NaCl, 5% de glicerol, 250 mM de imidazol, 1 mM de NaF, 0,1 μg/mL de OAA, 5 mM de BME, 1 x coquetel de inibidor de protease Completo livre de EDTA. Frações pertinentes foram analisadas através de SDS-PAGE e foram consequentemente agrupadas. A proteina foi ainda purificada por filtração em gel em uma Superdex 200 equilibrada em 20 mM de Tris-Cl, pH 7,5, 500 mM de NaCl, 5% de glicerol, 1 mM de NaF, 0,1 ug/mL de OAA, 5 mM de DTT, 1 x coquetel de inibidor de protease Completo livre de EDTA. Frações pertinentes foram analisadas através de SDSPAGE e consequentemente agrupadas. Estas frações foram diluidas 1:10 v/v do volume de fundo geral (pooí) em razão de tampão com "Tampão A"20 mM de Tris-Cl, pH 8,2, 5% de glicerol, 1 mM de NaF, 0,1 μg/mL de OAA, 5 mM de DTT e carregado sobre uma coluna de QHP preparada, Após o carregamento da amostra ser completado, foi lavada com Tampão A e 5% de "Tampão B" 20 mM de Tris-CI, pH 8,2, 1 M de NaCl, 5% de glicerol, 1 mM de NaF, 0,1 ug/mL de OAA, 5 mM de DTT para 3-5 volumes da coluna, Foi eluída a proteína usando um gradiente de 5%-30% de Tampão B, Tipicamente a proteína elui a ~200 mM de NaCl, Frações pertinentes foram analisadas através de SDS-PAGE e consequentemente agrupadas, Um volume igual de Tampão de Diálise (20 mM de Tris-Cl, pH 7,5, 500 mM de NaCl, 50% de glicerol, 1 mM de NaF, 0,1 μg/mL de OAA, 5 mM de DTT) foi acrescentado ao fundo geral e depois submetido à diálise contra duas alterações do Tampão de Diálise (uma alteração durante a noite), Proteína foi armazenada a -20OC,
[00527] Os resultados seguintes foram obtidos usando os ensaios acima descritos,
Figure img0205
Figure img0206
[00528] Compostos da presente invenção, em particular, os compostos preferidos da presente invenção, mostram uma seletividade melhorada para PI3K alfa com respeito aos subtipos beta e/ou delta e/ou gama por exemplo como medido em um ensaio bioquímico. Aqueles compostos também preferivelmente mostram seletividade para PI3K alfa com respeito aos subtipos beta e/ou delta e/ou gama como medido no ensaio celular. EXEMPLO B: DETERMINAÇÃO DA LIBERAÇÃO METABÓLICA IN VITRO Abreviações ACN Acetonitrila ADME Absorção, Distribuição, Metabolismo e Excreção ALP Posicionador da utilidade laboratorial automatizada % B % de solvente de HPLC B BT Biotransformação (ou estabilidade metabólica ou estabilidade microssomal) [C]t=0 Concentração inicial (tempo zero) in vitro de TA CLh Liberação hepática (mL/min/kg) Clint Taxa de depuração intrínseca (μl de volume da reação/min/mg de proteína microssomal) CLint,s Taxa de depuração intrínseca escalonada para massa hepática (ml de volume da reação/min/g de fígado) Cyno Cinomólogo CYP(s) Citocromo P450(s)DiJO Água deionizada ERh Razão de extração hepática ESI Ionização por eletropulverização fub Fração livre do fármaco no sangue ou plasma fum Fração livre do fármaco nos microssomas IS Padrão interno k mic Taxa de eliminação nos microssomas KPi 0,05M de tampão de fosfato de potássio, pH 7,4 LC-MS/MS Espectrometria de massa em tandem acoplada à cromatografia líquida LOD Limite de detecção M Conteúdo de proteína microssomal na incubação (mg/ml) NADPH Fosfato de dinucleotídeo de adenina β-nicotinamida, forma reduzida, NCE Entidade química nova NSB Ligação não específica Qh Fluxo sanguíneo do portal (mL/min/kg) RPM Rotações por minuto SD Desvio-padrão S-D Sprague-Dawley SF1 Fator escalar: mg de proteína microssomal por grama de fígado SF2 Fator escalar: grama de fígado por kg do peso do corpo do animal t1/2 Meia-vida de depuração in vitro (min) TA Artigo de teste UDPGA Ácido 5’difosfoglucurônico de uridina UGT Uridina 5’difosfato glucuronosiltransferases V Volume de incubação da reação (μl) Concentrações finais do artigo de teste e da proteína, como também duração da incubação, estão mostradas abaixo,(Tabela 1). Concentrações de artigo de teste baixas foram selecionadas para obedecer a suposição que as cinéticas da reação são avaliadas a uma concentração menor que (ou cerca de igual a) Km.
[00529] DMSO é conhecido ter um efeito inibidor na atividade de CYP. Portanto, a concentração de DMSO nos meios de incubação foi restringida a 0,01% (v/v) de modo que a interferência para o processo metabólico é minimizada. TABELA 1 COMPONENTES E CONCENTRAÇÕES FINAIS DA REAÇÃO NAS INCUBAÇÕES DE DEPURAÇÃO METABÓLICA
Figure img0207
a Componentes opcionais requeridos apenas para reconstituir a atividade de UGT (Uridina 5’difosfato glucuronosiltransferases).
[00530] Um experimento típico é executado em formato de 96 poços com incubação de agitação a 37°C. A taxa de depuração metabólica in vitroé derivada dos dados colhidos em quatro vezes (por exemplo, 0, 5, 15 e 30 minutos) em uma reação incluindo cofator(es) (NADPH e/ou UDPGA). Uma incubação de controle negativo de 30 minutos (menos cofator) é também executada para avaliar os problemas de estabilidade de CYP-não relacionados (por exemplo, instabilidade química, metabolismo CYP-independente).
[00531] Em geral, TA’s em 10 mM de DMSO são diluídos 1:1000 em 0,6% de ACN (v/v) em DÍH2O para 10 μM. Imediatamente antes do começo do experimento, 1,25 mg/ml de proteína microssomal é suspenso em 50 mM KPi. A suspensão pode ser primeiro pré-tratada através de incubação de 5 min em gelo com alameticina para avaliação do metabolismo mediado por UGT (25 μg/mg de proteína microssomal). TA (35 μl) é acrescentado a 140 μl das suspensões microssomais para 175 μl da mistura de enzima-substrato. Esta mistura de enzima-substrato é pré-incubada por 15 min a 37°C. A incubação de controle negativo de 30 min é processada combinando 25 μl da mistura de enzima-substrato com um volume igual de 50 mM de KPi contendo 4 mM de MgCl2, Seguindo uma incubação de 30 minutos a 37OC, a mistura é extinguida adicionando 50 μl de ACN contendo o MS interno padrão (2 μM de alprenolol). O ponto de tempo T=0 min é processado combinando diretamente 25 μl da mistura de enzima-substrato com 50 μl de ACN contendo o MS interno padrão (2 μM de alprenolol). 25 μl da solução de cofator são adicionados (2 mM de NADPH em 50 mM de KPi mais 4 mM de MgCh; opcionalmente incluindo 2 mM de UDPGA para ensaios de CYP+UGT) para simular a mistura de reação extinta completa.
[00532] As reações de volume para os pontos de tempo restantes são iniciadas por adição de 125 μl de solução de cofator (2 mM de NADPH em 50 mM de KPi mais 4 mM de MgCl2) aos 125 μl restantes da mistura de enzima-substrato. Para metabolismo de UGT, 2 mM de UDPGA são incluídos na solução de cofator, também. Em pontos de tempo de reação específicos (por exemplo, 5, 15, 30 minutos), alíquotas de reação (50 μl) são removidas e as reações são terminadas por adição de acetonitrila (50 μl) contendo interno padrão de espectrometria de massa (2 μM de alprenolol). Todas as amostras são centrifugadas a ~3400xg a 40C por 10 min e os sobrenadantes são analisados por LC-MS/MS para quantificação de TA restante. A porcentagem de TA restante, com relação a 0 minuto, é usada para estimar a constante da taxa de eliminação in vitro(kmic) que pode ser usada para calcular as taxas de depuração metabólica in vitro.
[00533] Análise das amostras é executada em um sistema de cromatografia líquida de desempenho alto-espectometria de massa em tandem (LC/MS) que consiste em um espectrômetro de massa Waters Quattro Premiere, uma fonte de íon de ESI, um autotestador de CTCHTS Pal, e uma bomba de Agilent LC. As amostras são separadas em uma coluna C18 Atlantic, 2,1x30 mm, 3,5 microns usando o gradiente de fase móvel rápido esboçado na Tabela 2. Fase móvel A consiste em água purificada contendo 10 mM de formato de amônio. Fase móvel B consiste em acetonitrila contendo 0,01% de ácido fórmico. A taxa de fluxo é 1 mL/min. O volume de injeção é 10 μl. Os primeiros 30 segundos do eluato são desviados para sobras para limpeza total da amostra. Os compostos são detectados usando o software MassLynx/QuanLynx que coleta os dados de intensidade para todos os fragmentos relacionados ao peso molecular do composto de teste. Após coletânea dos dados brutos, o software pode combinar os perfis de até 3 fragmentos de qualidade, se necessário. Em geral, o pico de fragmento de intensidade mais forte é integrado. TABELA 2: GRADIENTE DE FASE MÓVEL PARA HPLC
Figure img0208
[00534] Cada taxa de eliminação microssomal, k mic, é com base em uma curva de eliminação de 4 pontos testada em singleto. Dados brutos de LC-MS/MS são retornados para uma placa de reação como áreas de pico de analito integradas ao TA e IS. Estes valores podem ser convertidos nas razões de área de pico de analito:IS para unificar as comparações dos dados.
[00535] O ponto de tempo de reação (por exemplo, 0, 5, 20 ou 30 min) é representado em gráfico versus o logaritmo natural da porcentagem de TA restante com relação a 0 minuto (com base na razão de área de pico relativa). O declive deste diagrama de depuração, k mic, é usado para calcular a meia-vida in vitro, t1/2, como mostrado na Eq. (1). Para focalizar na cinética de reação linear, sempre que possível, pontos de dados que representam < 10% de TA restante são em geral excluídos da definição do declive de diagrama de depuração. O 11/2 da reação é o valor experimental do núcleo usado para calcular Clint (Eq. 2) Eq. (1): t1/2 = 0,693/-kmic Eq (2): Clint = 0,693/-kmic V/M
[00536] Os resultados seguintes foram obtidos usando o procedimento acima descrito:
Figure img0209
EXEMPLO C: INIBIÇÃO DE MUTANTES DE PI3K ALFA E545K H1047R DETERMINADOS EM UM ENSAIO DE LUMINESCÊNCIA DE LUCIFERASE
[00537] Luminescência é um estágio de leitura bem estabelecido para determinar as concentrações de ATP e pode, desse modo, ser usado para seguir a atividade de muitas quinases independente de seu substrato. O Ensaio de Quinase Luminescente KinaseGlo (Promega, Madison/WI, EUA) é um método de HTS homogêneo de medir a atividade de quinase quantificando a quantidade de ATP que permanece na solução seguindo uma reação de quinase.
[00538] Fosfoinositídeo 3-quinase foi incubada em temperatura ambiente em meio de 50 μl contendo 1 μM de ATP, 5 mM de MgCh, 50 mM de NaCl, 5 μg/ml de fosfatidilinositol de soja (lipídios da Avanti Polar, Cat. No. 840044C), 0,015% de octoglucosídeo (Sigma, Cat. No. O9882), 0,01% de CHAPS, 1 mM de DTT, 2,5% de DMSO, e 10 mM de Tris-HCl pH 7,5. A reação de quinase foi iniciada pela adição de ATP (pré-incubação de 15 min da enzima com inibidor) e parada após 1 h com 50 μl de KinaseGlo® (Promega, cat. No. V6714) e luminescência foi medida por uma leitora Victor II (integração de 0,1 s). Curvas foram ajustadas através de regressão não linear usando a equação logística (modelo 205 de XLfit®, ID Business Solutions, Guildford, UK).
[00539] Princípio de ensaio do Ensaio de Luminescência (KinaseGlo):
Figure img0210
[00540] Usando o sistema de ensaio acima e usando proteínas de PI3K obtidas dos construtos mostrados na tabela seguinte,
Figure img0211
a atividade inibidora contra PI3Kalfa do tipo selvagem e mutante foi avaliada. Os resultados estão mostrados na tabela seguinte.
[00541] Inibição de PI3Kalfa do tipo selvagem e mutante:
Figure img0212
[00542] BV1147: A mutação ativadora E545K encontrada em muitos cânceres foi introduzida em ORF318 através de mutagênese sítio-dirigida com o kit de mutagênese QuickChange XL (Stratagene). Usando o método recomendado pelo fabricante e os iniciadores mutagênicos gwG152-p15 (5’-CTCTCTGAAATCACTAAGCAGGAGAAAGATTTT-3’) (SEQ ID NO: 21) e gwG152-p16 (5’-AAAATCTTTCT-CCTGCTTAGT GATTTCAGAGAG-3’) (SEQ ID NO: 22) ORF544 foi gerado. Este clone foi verificado através de sequenciação e usado em uma reação de LR Gateway (Invitrogen) para transferir a inserção para dentro do vetor pBlueBac4.5 adaptado à Gateway (Invitrogen) para geração do vetor de expressão de baculovírus LR561.
[00543] Domínio da quinase.
[00544] Sequência da proteína de BV 1147: 1 MREYDRLYEE YTRTSQEIQM KRTAIEAFNE TIKIFEEQCQ TQERYSKEYI EKFKREGNEK 61 EIQRIMHNYD KLKSRISEII DSRRRLEEDL KKQAAEYREI DKRMNSIKPG GISGGGGGIM 121 VLVECLLPNG MIVTLECLRE ATLITIKHEL FKEARKYPLH QLLQDESSYI FVSVTQEAER 181 EEFFDETRRL CDLRLFQPFL KVIEPVGNRE EKILNREIGF AIGMPVCEFD MVKDPEVQDF 241 RRNILNVCKE AVDLRDLNSP HSRAMYVYPP NVESSPELPK HIYNKLDKGQ IIVVIWVIVS301PNNDKQKYTL KINHDCVPEQ VIAEAIRKKT RSMLLSSEQL KLCVLEYQGK YILKVCGCDE 361YFLEKYPLSQ YKYIRSCIML GRMPNLMLMA KESLYSQLPM DCFTMPSYSR RISTATPYMN 421GETSTKSLWV INSALRIKIL CATYVNVNIR DIDKIYVRTG IYHGGEPLCD NVNTQRVPCS 481 NPRWNEWLNY DIYIPDLPRA ARLCLSICSV KGRKGAKEEH CPLAWGNINL FDYTDTLVSG 541 KMALNLWPVP HGLEDLLNPI GVTGSNPNKE TPCLELEFDW FSSVVKFPDM SVIEEHANWS 601 VSREAGFSYS HAGLSNRLAR DNELRENDKE QLKAISTRDP LSEITKQEKD FLWSHRHYCV 661 TIPEILPKLL LSVKWNSRDE VAQMYCLVKD WPPIKPEQAM ELLDCNYPDP MVRGFAVRCL 721 EKYLTDDKLS QYLIQLVQVL KYEQYLDNLL VRFLLKKALT NQRIGHFFFW HLKSEMHNKT 781 VSQRFGLLLE SYCRACGMYL KHLNRQVEAM EKLINLTDIL KQEKKDETQK VQMKFLVEQM 841 RRPDFMDALQ GFLSPLNPAH QLGNLRLEEC RIMSSAKRPL WLNWENPDIM SELLFQNNEI 901 IFKNGDDLRQ DMLTLQIIRI MENIWQNQGL DLRMLPYGCL SIGDCVGLIE VVRNSHTIMQ 961 IQCKGGLKGA LQFNSHTLHQ WLKDKNKGEI YDAAIDLFTR SCAGYCVATF ILGIGDRHNS 1021 NIMVKDDGQL FHIDFGHFLD HKKKKFGYKR ERVPFVLTQD FLIVISKGAQ ECTKTREFER 1081 FQEMCYKAYL AIRQHANLFI NLFSMMLGSG MPELQSFDDI AYIRKTLALD KTEQEALEYF 1141 MKQMNDAHHG GWTTKMDWIF HTIKQHALNE LGGAHHHHHH (SEQ ID NO: 23).
[00545] BV1097: A mutação ativadora H1047R encontrada em muitos cânceres foi introduzida no ORF318 através de mutagênese sítiodirecionada com o kit de mutagênese QuickChange XL (Stratagene).
[00546] Usando o método recomendado pelo fabricante e os iniciadores mutagênicos gwG152-p15 (5’-CTCTCTGAAATCACTAAGCAGG AGAAA GATTTT-3’) (SEQ ID NO: 21) e gwG152-p16 (5’-AAAATCTTT CT-CCTGC TTAGTGATTTCAGAGAG-3’) (SEQ ID NO: 22) ORF544 foi gerado. Este clone foi verificado através de sequenciação e usado em uma reação de LR Gateway (Invitrogen) para transferir a inserção para dentro do vetor pBlueBac4.5 adaptado à Gateway (Invitrogen) para geração do vetor de expressão de baculovírus LR480.
[00547] Domínio da quinase.
[00548] Sequência da proteína de BV 1097: 1 MREYDRLYEE YTRTSQEIQM KRTAIEAFNE TIKIFEEQCQ TQERYSKEYI EKFKREGNEK 61 EIQRIMHNYD KLKSRISEII DSRRRLEEDL KKQAAEYREI DKRMNSIKPG GISGGGGGIM 121 VLVECLLPNG MIVTLECLRE ATLITIKHEL FKEARKYPLH QLLQDESSYI FVSVTQEAER 181 EEFFDETRRL CDLRLFQPFL KVIEPVGNRE EKILNREIGF AIGMPVCEFD MVKDPEVQDF 241 RRNILNVCKE AVDLRDLNSP HSRAMYVYPP NVESSPELPK HIYNKLDKGQ IIVVIWVIVS 301 PNNDKQKYTL KINHDCVPEQ VIAEAIRKKT RSMLLSSEQL KLCVLEYQGK YILKVCGCDE 361 YFLEKYPLSQ YKYIRSCIML GRMPNLMLMA KESLYSQLPM DCFTMPSYSR RISTATPYMN 421 GETSTKSLWV INSALRIKIL CATYVNVNIR DIDKIYVRTG IYHGGEPLCD NVNTQRVPCS 481 NPRWNEWLNY DIYIPDLPRA ARLCLSICSV KGRKGAKEEH CPLAWGNINL FDYTDTLVSG 541 KMALNLWPVP HGLEDLLNPI GVTGSNPNKE TPCLELEFDW FSSVVKFPDM SVIEEHANWS 601 VSREAGFSYS HAGLSNRLAR DNELRENDKE QLKAISTRDP LSEITEQEKD FLWSHRHYCV 661 TIPEILPKLL LSVKWNSRDE VAQMYCLVKD WPPIKPEQAM ELLDCNYPDP MVRGFAVRCL 721 EKYLTDDKLS QYLIQLVQVL KYEQYLDNLL VRFLLKKALT NQRIGHFFFW HLKSEMHNKT 781 VSQRFGLLLE SYCRACGMYL KHLNRQVEAM EKLINLTDIL KQEKKDETQK VQMKFLVEQM 841 RRPDFMDALQ GFLSPLNPAH QLGNLRLEEC RIMSSAKRPL WLNWENPDIM SELLFQNNEI 901 IFKNGDDLRQ DMLTLQIIRI MENIWQNQGL DLRMLPYGCL SIGDCVGLIE VVRNSHTIMQ 961 IQCKGGLKGA LQFNSHTLHQ WLKDKNKGEI YDAAIDLFTR SCAGYCVATF ILGIGDRHNS 1021 NIMVKDDGQL FHIDFGHFLD HKKKKFGYKR ERVPFVLTQD FLIVISKGAQ ECTKTREFER 1081 FQEMCYKAYL AIRQHANLFI NLFSMMLGSG MPELQSFDDI AYIRKTLALD KTEQEALEYF 1141 MKQMNDARHG GWTTKMDWIF HTIKQHALNE LGGAHHHHHH (SEQ ID NO: 26).

Claims (9)

1. Composto, caracterizado pelo fato de ser 1-({4-metil-5-[2(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-piridin-4-il]-tiazol-2-il}-amida) de 2-amida de ácido (S)-pirrolidino-1,2-dicarboxílico e apresentar a fórmula
Figure img0213
em forma livre ou em forma de sal farmaceuticamente aceitável.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser para uso como um produto farmacêutico.
3. Uso de um composto como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.
4. Uso de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado de sarcoma; pulmão; brônquios; próstata; mama; pâncreas; câncer gastrointestinal; cólon; reto; carcinoma de cólon; adenoma colorretal; tiroide; fígado; duto biliar intraepático; hepatocelular; glândula adrenal; estômago; gástrico; glioma; glioblastoma; endometrial; melanoma; rim; pélvis renal; bexiga urinária; corpo uterino; cervix uterina; vagina; ovário; mieloma múltiplo; esôfago; uma leucemia; leucemia mielogenosa aguda; leucemia mielogenosa crônica; leucemia linfocítica; leucemia mieloide; cérebro; um carcinoma do cérebro; cavidade oral e faringe; laringe; intestino delgado; linfoma de não-Hodgkin; melanoma; adenoma de cólon viloso; uma neoplasia; uma neoplasia de caráter epitelial; linfomas; um carcinoma mamário; carcinoma de células basais; carcinoma de células escamosas; ceratose actínica; doenças tumorais, incluindo tumores sólidos; um tumor do pescoço ou cabeça; policitemia vera; trombocitemia essencial; mielofibrose com metaplasia mieloide; e doença de Waldenstroem.
5. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto como definido na reivindicação 1 e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.
6. Composição farmacêutica combinada, adaptada para administração simultânea, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente efetiva do composto como definido na reivindicação 1 e uma quantidade terapeuticamente efetiva de um ou mais pares de combinação; e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.
7. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 5 ou 6, caracterizada pelo fato de ser para uso no tratamento de câncer.
8. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é para uso no tratamento de câncer.
9. Composto de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado de sarcoma; pulmão; brônquios; próstata; mama; pâncreas; câncer gastrointestinal; cólon; reto; carcinoma de cólon; adenoma colorretal; tiroide; fígado; duto biliar intraepático; hepatocelular; glândula adrenal; estômago; gástrico; glioma; glioblastoma; endometrial; melanoma; rim; pélvis renal; bexiga urinária; corpo uterino; cervix uterina; vagina; ovário; mieloma múltiplo; esôfago; uma leucemia; leucemia mielogenosa aguda; leucemia mielogenosa crônica; leucemia linfocítica; leucemia mieloide; cérebro; um carcinoma do cérebro; cavidade oral e faringe; laringe; intestino delgado; linfoma de não-Hodgkin; melanoma; adenoma de cólon viloso; uma neoplasia; uma neoplasia de caráter epitelial; linfomas; um carcinoma mamário; carcinoma de células basais; carcinoma de células escamosas; ceratose actínica; doenças tumorais, incluindo tumores sólidos; um tumor do pescoço ou cabeça; policitemia vera; trombocitemia essencial; mielofibrose com metaplasia mieloide; e doença de Waldenstroem.
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