JP2009060893A - 短干渉核酸(siNA)を用いる遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 - Google Patents
短干渉核酸(siNA)を用いる遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2009060893A JP2009060893A JP2008201593A JP2008201593A JP2009060893A JP 2009060893 A JP2009060893 A JP 2009060893A JP 2008201593 A JP2008201593 A JP 2008201593A JP 2008201593 A JP2008201593 A JP 2008201593A JP 2009060893 A JP2009060893 A JP 2009060893A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nucleic acid
- nucleotides
- sina
- double
- acid molecule
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 0 *C(*)([C@]1(*)C(*)(*)C(*)(*)C(*)(*)*1)I Chemical compound *C(*)([C@]1(*)C(*)(*)C(*)(*)C(*)(*)*1)I 0.000 description 2
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
- C12N15/8218—Antisense, co-suppression, viral induced gene silencing [VIGS], post-transcriptional induced gene silencing [PTGS]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/16—Otologicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1131—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
- C12N2310/111—Antisense spanning the whole gene, or a large part of it
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/317—Chemical structure of the backbone with an inverted bond, e.g. a cap structure
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/318—Chemical structure of the backbone where the PO2 is completely replaced, e.g. MMI or formacetal
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/321—2'-O-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/322—2'-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
- C12N2310/332—Abasic residue
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
- C12N2310/344—Position-specific modifications, e.g. on every purine, at the 3'-end
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
- C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/50—Physical structure
- C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/50—Methods for regulating/modulating their activity
- C12N2320/51—Methods for regulating/modulating their activity modulating the chemical stability, e.g. nuclease-resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2330/00—Production
- C12N2330/30—Production chemically synthesised
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Psychology (AREA)
Abstract
【解決手段】標的核酸配列に対するRNA干渉(RNAi)を媒介しうる小核酸分子,例えば,短干渉核酸(siNA),短干渉RNA(siRNA),二本鎖RNA(dsRNA),マイクロRNA(miRNA),および短ヘアピンRNA(shRNA)分子。小核酸分子は細胞,組織または生物における遺伝子発現の調節に応答する任意の疾病または状態の治療において有用である。
【選択図】なし
Description
のデュープレックスを含む(Elbashir et al.,2001,Genes Dev.,15,188)。ダイサーはまた,翻訳制御における関与が示唆されている保存された構造の前駆体RNAから21および22ヌクレオチドの小さな一時的RNA(stRNA)を切り出すことに関与することが示唆されている(Hutvagner et
al.,2001,Science,293,834)。RNAi応答はまた,一般にRNA誘導性サイレンシング複合体(RISC)と称されるエンドヌクレアーゼ複合体を特徴とし,これはsiRNAデュープレックスのアンチセンス鎖に相補的な配列を有する一本鎖RNAの切断を媒介する。標的RNAの切断は,siRNAデュープレックスのアンチセンス鎖に相補的な領域の中央部で生ずる(Elbashir et al.,2001,Genes Dev.,15,188)。
NAコンストラクトにおいて二本鎖RNA依存性蛋白質キナーゼPKRの活性化を妨げる目的で用いるためのある種の化学的修飾,特に2’−アミノまたは2’−O−メチルヌクレオチド,および2’−Oまたは4’−Cメチレン架橋を含むヌクレオチドを記載する。しかし,Kreutzerらも同様に,siRNA分子においてこれらの修飾がどの程度許容されるかについての実例または指針を提供していない。
により,および/または核酸分子の細胞取り込みを改良することにより,核酸分子の生物利用性を改良することができる。したがって,化学的に修飾された核酸分子の活性が天然の核酸分子と比較して,例えば,全RNA核酸分子と比較したときに低下したとしても,分子の改良された安定性および/またはデリバリーのため,修飾された核酸分子の全体の活性は天然の分子より高い可能性がある。天然の未修飾siRNAとは異なり,化学的に修飾されたsiNAはまた,ヒトにおいてインターフェロン活性を活性化する可能性を最小限にすることができる。
ドの長さである。
ヌクレオチドである。
必要とせず,二本鎖siNA分子の各鎖は約21ヌクレオチドの長さである。
とRNAi活性はなくなる(Elbashir et al.,2001,EMBOJ.,20,6877)。さらに,Elbashirら(上掲)はまた,siRNAを2’−O−メチルヌクレオチドで置換するとRNAi活性が完全に破壊されたことを報告する。Liら(国際公開WO00/44914)およびBeachら(国際公開WO01/68836)はいずれも,siRNAはリン酸−糖骨格またはヌクレオシドのいずれかに窒素またはイオウ複素原子の少なくとも1つを含む修飾を含むことができることを示唆するが,いずれの出願も,siRNA分子においてそのような修飾がどの程度許容されるかを教示しておらず,そのような修飾siRNAの例を提供していない。KreutzerおよびLimmer(カナダ特許出願2,359,180)もまた,dsRNAコンストラクトにおいて二本鎖RNA依存性蛋白質キナーゼPKRの活性化を妨げる目的で用いるためのある種の化学的修飾,特に2’−アミノまたは2’−O−メチルヌクレオチド,および2’−Oまたは4’−Cメチレン架橋を含むヌクレオチドを記載する。しかし,KreutzerおよびLimmerも同様に,siRNA分子においてこれらの修飾がどの程度許容されるかを示しておらず,そのようなsiRNAの例を提供していない。
ことができる。本発明のsiNA分子の3’末端ヌクレオチドオーバーハングは,核酸の糖,塩基,または骨格で化学的に修飾されたリボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドを含むことができる。3’末端ヌクレオチドオーバーハングは,1またはそれ以上の万能塩基リボヌクレオチドを含むことができる。3’末端ヌクレオチドオーバーハングは,1またはそれ以上の非環状ヌクレオチドを含むことができる。
各R1およびR2は,独立して,任意のヌクレオチド,非ヌクレオチド,またはポリヌクレオチドであり,これは天然に生ずるものであっても化学的に修飾されたものでもよく,各XおよびYは,独立して,O,S,N,アルキル,または置換アルキルであり,各ZおよびWは,独立して,O,S,N,アルキル,置換アルキル,O−アルキル,S−アルキル,アルカリール,またはアラルキルであり,W,X,Y,およびZは任意に全てOでなくてもよい]
を有する骨格修飾ヌクレオチド間結合を含む,1またはそれ以上(例えば,約1,2,3,4,5,6,7,8,9,10個またはそれ以上)のヌクレオチドを含む。
センス鎖,アンチセンス鎖,または両方の鎖に,式Iを有する化学的に修飾されたヌクレオチド間結合を有する1またはそれ以上(例えば,約1,2,3,4,5,6,7,8,9,10個またはそれ以上)のプリンヌクレオチドを含むことができる。別の態様においては,式Iのヌクレオチド間結合を有する本発明のsiNA分子はまた,式I−VIIのいずれかを有する化学的に修飾されたヌクレオチドまたは非ヌクレオチドを含む。
各R3,R4,R5,R6,R7,R8,R10,R11およびR12は,独立して,H,OH,アルキル,置換アルキル,アルカリールまたはアラルキル,F,Cl,Br,CN,CF3,OCF3,OCN,O−アルキル,S−アルキル,N−アルキル,O−アルケニル,S−アルケニル,N−アルケニル,SO−アルキル,アルキル−OSH,アルキル−OH,O−アルキル−OH,O−アルキル−SH,S−アルキル−OH,S−アルキル−SH,アルキル−S−アルキル,アルキル−O−アルキル,ONO2,NO2,N3,NH2,アミノアルキル,アミノ酸,アミノアシル,ONH2,O−アミノアルキル,O−アミノ酸,O−アミノアシル,ヘテロシクロアルキル,ヘテロシクロアルカリール,アミノアルキルアミノ,ポリアルキルアミノ,置換シリル,または式1を有する基であり;R9は,O,S,CH2,S=O,CHF,またはCF2であり,Bは,ヌクレオシド塩基,例えば,アデニン,グアニン,ウラシル,シトシン,チミン,2−アミノアデノシン,5−メチルシトシン,2,6−ジアミノプリン,または標的RNAに相補的であっても相補的でなくてもよい他の任意の天然に生じない塩基,または非ヌクレオシド塩基,例えば,フェニル,ナフチル,3−ニトロピロール,5−ニトロインドール,ネブラリン,ピリドン,ピリジノン,または標的RNAに相補的であっても相補的でなくてもよい他の任意の天然に生じない万能塩基である]
を有する1またはそれ以上(例えば,約1,2,3,4,5,6,7,8,9,10個またはそれ以上)のヌクレオチドまたは非ヌクレオチドを含む。
IIの化学的に修飾されたヌクレオチドまたは非ヌクレオチドを,センス鎖,アンチセンス鎖,または両方の鎖の3’末端に含むことができる。
各R3,R4,R5,R6,R7,R8,R10,R11およびR12は,独立して,H,OH,アルキル,置換アルキル,アルカリールまたはアラルキル,F,Cl,Br,CN,CF3,OCF3,OCN,O−アルキル,S−アルキル,N−アルキル,O−アルケニル,S−アルケニル,N−アルケニル,SO−アルキル,アルキル−OSH,アルキル−OH,O−アルキル−OH,O−アルキル−SH,S−アルキル−OH,S−アルキル−SH,アルキル−S−アルキル,アルキル−O−アルキル,ONO2,NO2,N3,NH2,アミノアルキル,アミノ酸,アミノアシル,ONH2,O−アミノアルキル,O−アミノ酸,O−アミノアシル,ヘテロシクロアルキル,ヘテロシクロアルカリール,アミノアルキルアミノ,ポリアルキルアミノ,置換シリル,または式1を有する基であり;R9は,O,S,CH2,S=O,CHF,またはCF2であり,Bは,ヌクレオシド塩基,例えば,アデニン,グアニン,ウラシル,シトシン,チミン,2−アミノアデノシン,5−メチルシトシン,2,6−ジアミノプリン,または標的RNAに相補的であっても相補的でなくてもよいように用いることができる他の任意の天然に生じない塩基,または非ヌクレオシド塩基,例えば,フェニル,ナフチル,3−ニトロピロール,5−ニトロインドール,ネブラリン,ピリドン,ピリジノン,または標的RNAに相補的であっても相補的でなくてもよい他の任意の天然に生じない万能塩基である]
を有する1またはそれ以上(例えば,約1,2,3,4,5,6,7,8,9,10個またはそれ以上)のヌクレオチドまたは非ヌクレオチドを含む。
チドを含み,ここで,式IIまたはIIIを有するヌクレオチドは反転のコンフィギュレーションである。例えば,式IIまたはIIIを有するヌクレオチドは,siNAコンストラクトに3’−3’,3’−2’,2’−3’,または5’−5’コンフィギュレーションで,例えば,siNA鎖の一方または両方の3’末端,5’末端,または3’末端および5’末端の両方に結合させることができる。
各XおよびYは,独立して,O,S,N,アルキル,置換アルキル,またはアルキルハロであり;各ZおよびWは,独立して,O,S,N,アルキル,置換アルキル,O−アルキル,S−アルキル,アルカリール,アラルキル,またはアルキルハロであり;W,X,YおよびZはすべてOではない]
を有する5’末端リン酸基を含む。
,または両方の鎖に,1またはそれ以上(例えば,約1,2,3,4,5,6,7,8,9,10個またはそれ以上)のピリミジンホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含むことができる。さらに別の非限定的例においては,本発明の例示的siNA分子は,センス鎖,アンチセンス鎖,または両方の鎖に,1またはそれ以上(例えば,約1,2,3,4,5,6,7,8,9,10個またはそれ以上)のプリンホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含むことができる。
の環状siNA分子は,siNA分子のループ部分のインビボでの分解により,3’末端オーバーハング,例えば約2ヌクレオチドを含む3’末端ヌクレオチドオーバーハングを有する二本鎖siNA分子が生成することができるように設計される。
各R3,R4,R5,R6,R7,R8,R10,R11,R12,およびR13は,独立して,H,OH,アルキル,置換アルキル,アルカリールまたはアラルキル,F,Cl,Br,CN,CF3,OCF3,OCN,O−アルキル,S−アルキル,N−アルキル,O−アルケニル,S−アルケニル,N−アルケニル,SO−アルキル,アルキル−OSH,アルキル−OH,O−アルキル−OH,O−アルキル−SH,S−アルキル−OH,S−アルキル−SH,アルキル−S−アルキル,アルキル−O−アルキル,ONO2,NO2,N3,NH2,アミノアルキル,アミノ酸,アミノアシル,ONH2,O−アミノアルキル,O−アミノ酸,O−アミノアシル,ヘテロシクロアルキル,ヘテロシクロアルカリール,アミノアルキルアミノ,ポリアルキルアミノ,置換シリル,または式1を有する基であり;R9は,O,S,CH2,S=O,CHF,またはCF2である]
を有する化合物を含む。
各R3,R4,R5,R6,R7,R8,R10,R11,R12,およびR13は,独立して,H,OH,アルキル,置換アルキル,アルカリールまたはアラルキル,F,Cl,Br,CN,CF3,OCF3,OCN,O−アルキル,S−アルキル,N−アルキル,O−アルケニル,S−アルケニル,N−アルケニル,SO−アルキル,アルキル−OSH,アルキル−OH,O−アルキル−OH,O−アルキル−SH,S−アルキル−OH,S−アルキル−SH,アルキル−S−アルキル,アルキル−O−アルキル,ONO2,N
O2,N3,NH2,アミノアルキル,アミノ酸,アミノアシル,ONH2,O−アミノアルキル,O−アミノ酸,O−アミノアシル,ヘテロシクロアルキル,ヘテロシクロアルカリール,アミノアルキルアミノ,ポリアルキルアミノ,置換シリル,または式Iを有する基であり;R9は,0,S,CH2,S=0,CHF,またはCF2であり,R2,R3,R8またはR13のいずれかは,本発明のsiNA分子への結合の点として働く]
を有する化合物を含む。
を有する化合物を含む。
3’末端,5’末端および3’末端の両方,またはそれらの任意の組み合わせにおいて,1またはそれ以上(例えば,約1,2,3,4,5,6,7,8,9,10個またはそれ以上)のロック核酸(LNA)ヌクレオチドを含む。
例えば,すべてのピリミジンヌクレオチドが2’−デオキシ−2’−フルオロピリミジンヌクレオチドであるか,あるいは複数のピリミジンヌクレオチドが2’−デオキシ−2’−フルオロピリミジンヌクレオチドである),かつ,アンチセンス領域中に存在する任意の(例えば,1またはそれ以上,またはすべての)プリンヌクレオチドは2’−O−メチルプリンヌクレオチドであり(例えば,すべてのプリンヌクレオチドが2’−O−メチルプリンヌクレオチドであるか,あるいは複数のプリンヌクレオチドが2’−O−メチルプリンヌクレオチドである),ここで,前記アンチセンス領域中に存在する3’末端ヌクレオチドオーバーハングを含む任意のヌクレオチドは2’−デオキシヌクレオチドである。
いてRNA干渉(RNAi)を媒介しうる本発明の化学的に修飾された短干渉核酸(siNA)分子を特徴とし,siNAは,センス領域およびアンチセンス領域を含み,センス領域は1またはそれ以上の2’−デオキシ−2’−フルオロピリミジンヌクレオチド(例えば,すべてのピリミジンヌクレオチドが2’−デオキシ−2’−フルオロピリミジンヌクレオチドであるか,あるいは,複数のピリミジンヌクレオチドが2’−デオキシ−2’−フルオロピリミジンヌクレオチドである),および1またはそれ以上のプリンリボヌクレオチド(例えば,すべてのプリンヌクレオチドがプリンリボヌクレオチドであるか,あるいは,複数のプリンヌクレオチドがプリンリボヌクレオチドである)を含み,アンチセンス領域は1またはそれ以上の2’−デオキシ−2’−フルオロピリミジンヌクレオチド(例えば,すべてのピリミジンヌクレオチドが2’−デオキシ−2’−フルオロピリミジンヌクレオチドであるか,あるいは,複数のピリミジンヌクレオチドが2’−デオキシ−2’−フルオロピリミジンヌクレオチドである),および1またはそれ以上の2’−O−メチルプリンヌクレオチド(例えば,すべてのプリンヌクレオチドが2’−O−メチルプリンヌクレオチドであるか,あるいは,複数のプリンヌクレオチドが2’−O−メチルプリンヌクレオチドである)を含む。センス領域の3’末端,5’末端,または3’末端および5’末端の両方に反転デオキシ無塩基修飾が存在していてもよい。センス領域はさらに任意に,約1−約4個(例えば,約1,2,3,または4個)の2’−デオキシリボヌクレオチドを有する3’末端オーバーハングを含む。末端キャップ修飾,例えば,本明細書に記載されるか図22に示されるいずれかの修飾が,アンチセンス配列の3’末端,5’末端,または3’末端および5’末端の両方に任意に存在していてもよい。アンチセンス領域はさらに任意に,約1−約4個(例えば,約1,2,3,または4個)の2’−デオキシヌクレオチドを有する3’末端ヌクレオチドオーバーハングを含んでいてもよく,オーバーハングヌクレオチドはさらに,1またはそれ以上(例えば,1,2,3,または4個)のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含んでいてもよい。これらの化学的に修飾されたsiNAの非限定的例は,図18および19および本明細書の表IVに示される。
−メトキシエチルヌクレオチド,4’−チオヌクレオチド,および2’−O−メチルヌクレオチドからなる群より選択されるか,あるいは複数のプリンヌクレオチドが,2’−デオキシヌクレオチド,ロック核酸(LNA)ヌクレオチド,2’−メトキシエチルヌクレオチド,4’−チオヌクレオチド,および2’−O−メチルヌクレオチドからなる群より選択される)。任意にセンス領域の3’末端,5’末端,または3’末端および5’末端の両方に反転デオキシ無塩基修飾が存在してもよい。センス領域は,任意に約1−約4個(例えば,約1,2,3,または4個)の2’−デオキシリボヌクレオチドを有する3’末端オーバーハングをさらに含んでいてもよい。末端キャップ修飾,例えば,本明細書に記載されるかまたは図22に示される任意の修飾が,アンチセンス配列の3’末端,5’末端,または3’末端および5’末端の両約1−約4個(例えば,約1,2,3,または4個)の2’−デオキシヌクレオチドを有する3’末端ヌクレオチドオーバーハングを含んでいてもよく,ここで,オーバーハングヌクレオチドはさらに,1またはそれ以上(例えば,1,2,3,または4個)のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含んでいてもよい。
94,本明細書の一部としてここに引用する)に記載される。用いられるコンジュゲートのタイプおよび本発明のsiNA分子のコンジュゲーションの程度は,同時にsiNAがRNAi活性を媒介する能力を維持しながら,siNAコンストラクトの改良された薬物動態学プロファイル,生物利用性,および/または安定性について評価することができる。このように,当業者は,例えば,当該技術分野において一般的に知られる動物モデルにおいて,種々のコンジュゲートで修飾されたsiNAコンストラクトをスクリーニングして,siNAコンジュゲート複合体がRNAiを媒介する能力を維持しながら改良された特性を有するかを判定することができる。
Chemistry,45,1628を参照)。
and Schepartz,J.Am.Chem.Soc.1991,173:6324;Richardson and Schepartz,J.Am.Chem.Soc.1991,773:5109;Ma et al.,Nucleic Acids Res.1993,27:2585およびBiochemistry 1993,32:1751;Durand et al.,Nucleic Acids Res.1990,75:6353;McCurdy et al.,Nucleosides&Nucleotides 1991,10:287;Jschke et al.,Tetrahedron Lett.1993,34:301;Ono et al.,Biochemistry 1991,30:9914;Arnold et al.,国際公開WO89/02439;Usman et al.,国際公開WO95/06731;Dudycz et al.,国際公開WO95/11910およびFerentz and
Verdine,J.Am.Chem.Soc.1991,773:4000(すべて本明細書の一部としてここに引用する)に記載されるものが挙げられる。"非ヌクレオチ
ド"はさらに,1またはそれ以上のヌクレオチドユニットの代わりに糖および/またはリ
ン酸置換のいずれかにより核酸鎖中に取り込むことができ,残りの塩基がその酵素活性を発揮することを可能とする任意の基または化合物を意味する。基または化合物は,般に認識されているヌクレオチド塩基,例えばアデノシン,グアニン,シトシン,ウラシルまたはチミンを,例えば糖のC1位に含まない場合,無塩基でありうる。
および5’末端の両方に存在してもよく,siNAはさらに任意に,siNA分子の3’末端に約1−約4個(例えば,約1,2,3,または4個)の末端2’−デオキシヌクレオチドを含んでいてもよく,ここで,末端ヌクレオチドはさらに1またはそれ以上(例えば,1,2,3,または4個)のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含むことができ,siNAはさらに任意に末端リン酸基,例えば5’末端リン酸基を含むことができる。
チセンス領域中に存在する任意のプリンヌクレオチドは2’−メトキシエチルプリンヌクレオチドであり(例えば,すべてのプリンヌクレオチドが2’−メトキシエチルプリンヌクレオチドであるか,あるいは複数のプリンヌクレオチドが2’−メトキシエチルプリンヌクレオチドである),および末端キャップ修飾,例えば,本明細書に記載されるかまたは図22に示される任意の修飾を含み,これは任意にアンチセンス配列の3’末端,5’末端,または3’末端および5’末端の両方に存在していてもよく,siNAはさらに任意に,siNA分子の3’末端に約1−約4個(例えば,約1,2,3,または4個)の末端2’−デオキシヌクレオチドを含んでいてもよく,ここで末端ヌクレオチドはさらに1またはそれ以上(例えば,1,2,3,または4個)のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含むことができ,siNAはさらに任意に,末端リン酸基,例えば5’末端リン酸基を含むことができる。
of Nucleic Acid Structure,Springer−Verlag ed.,1984を参照)を有する修飾ヌクレオチドを含むsiNA分子を特徴とする。このように,本発明の一本鎖siNA分子中に存在する化学的に修飾されたヌクレオチドは,好ましくは,ヌクレアーゼ分解に耐性であり,同時にRNAiを媒介する能力を維持する。
ものであってもよい。siNA分子を用いて,細胞または組織が所望の表現型を獲得するように,またはインビボで移植されたときに機能を発揮することができるように,細胞または組織において1またはそれ以上の遺伝子の発現を調節することができる。1つの態様においては,ある種の標的細胞を患者から抽出する。これらの抽出された細胞を,これらの細胞によるsiNAの取り込みに適した条件下で(例えば,デリバリー試薬,例えば,カチオン性脂質,リポソーム等を用いて,またはエレクトロポレーション等の手法を用いてsiNAの細胞内へのデリバリーを容易にすることにより),細胞中の特定のヌクレオチド配列を標的とするsiNAと接触させる。次に,細胞を同じ患者に再導入するか,または他の患者に導入する。エクスビボ用途の非限定的例としては,臓器/組織移植,組織移植,または肺疾病(例えば再狭窄)の治療または血管移植片における新脈管内膜過形成およびアテローム性動脈硬化症の予防における使用が挙げられる。そのようなエクスビボ用途はまた,心臓および末梢バイパス移植不全に伴う状態を治療するためにも用いることができる。例えば,そのような方法を末梢血管バイパス移植手術および心臓動脈バイパス移植手術と組み合わせて用いることができる。さらに別の用途としては,CNS病巣または傷害を治療するための移植,例えば,アルツハイマー病,パーキンソン病,てんかん,痴呆,ハンチントン病,または筋萎縮性側索硬化症(ALS)等の神経変性性状態の治療における使用が挙げられる。
よく,siNA鎖の一方は遺伝子のRNAに相補的な配列を含み;そして(b)生物における遺伝子の発現を調節するのに適した条件下でsiNA分子を生物に導入する,ことを含む。
1またはそれ以上の本発明のsiNA分子と接触させることを含む。
siNAコンストラクトの鎖のそれぞれにおいて塩基対形成したヌクレオチドの数を示し,例えば,19塩基対を有する21ヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖を有するsiNAコンストラクトについては,複雑性は419となる)を有するランダム化されたsiNAコンストラクトのライブラリを生成し;そして(b)標的RNA配列中のRNAi標的部位を決定するのに適した条件下で,上述の(a)のsiNAコンストラクトをアッセイする,の各工程を含む方法を特徴とする。別の態様においては,(a)のsiNA分子は,固定された長さ,例えば約23ヌクレオチドの長さの鎖を含む。さらに別の態様においては,(a)のsiNA分子は異なる長さのものであり,例えば,約19−約25(例えば,約19,20,21,22,23,24,または25)ヌクレオチドの長さの鎖を有する。1つの態様においては,アッセイは,本明細書の実施例7に記載されるような,再構成されたインビトロsiNAアッセイを含むことができる。別の態様においては,アッセイは,標的RNAが発現されている細胞培養系を含むことができる。別の態様においては,標的RNAのフラグメントを,例えば,ゲル電気泳動,ノザンブロット分析,またはRNAse保護アッセイにより検出可能なレベルの切断について分析して,標的RNA配列中の最も適当な標的部位を決定する。別の態様においては,標的RNA配列は,当該技術分野において知られるように,例えば,クローニングおよび/またはインビトロ系については転写により,インビボ系においては細胞発現により,得ることができる。
験者において組織拒絶を低減または予防する方法を特徴とし,該方法は,被験者における組織拒絶の低減または予防に適した条件下で被験者に本発明の組成物を投与することを含む。
iNA分子を含有する細胞はヒト細胞である。
下で行う。別の態様においては,上述の(c)におけるリンカー分子の切断は,オリゴヌクレオチドの脱保護の後に行う。別の態様においては,合成の方法は,調整多孔ガラス(CPG)またはポリスチレン等の固体支持体上での固相合成を含み,ここで,(a)の第1の配列は,スクシニルリンカー等の切断可能なリンカー上で,固体支持体を足場として用いて合成する。(a)において第2の鎖を合成するための足場として用いられる切断可能なリンカーは,固体支持体誘導化リンカーおよび(a)の切断可能なリンカーが同時にまたは別々に切断されるように,固体支持体誘導化リンカーと同様の反応性または異なる反応性を有することができる。1つの態様においては,結合したオリゴヌクレオチド配列を単離するために用いることができる(b)の化学成分は,トリチル基,例えばジメトキシトリチル基を含む。
et al.,米国特許出願10/201,394(本明細書の一部としてここに引用する)に記載されている。
の他のものが含まれる。
NA","短干渉核酸分子","短干渉オリゴヌクレオチド分子",または"化学的に修飾された短干渉核酸分子"との用語は,例えば,配列特異的様式でRNA干渉("RNAi")ま
たは遺伝子サイレンシングを媒介することにより,遺伝子発現またはウイルス複製をダウンレギュレートしうる任意の核酸分子を表す(例えば,Bass,2001,Nature,411,428−429;Elbashir et al.,2001,Nature,411,494−498;およびKreutzer et al.,国際公開WO00/44895;Zernicka−Goetz et al.,国際公開WO01/36646;Fire,国際公開WO99/32619;Plaetinck et al.,国際公開WO00/01846;Mello and Fire,国際公開WO01/29058;Deschamps−Depaillette,国際公開WO99/07409;およびLi et al.,国際公開WO00/44914;Allshire,2002,Science,297,1818−1819;Volpe et al.,2002,Science,297,1833−1837;Jenuwein,2002,Science,297,2215−2218;およびHall et al.,2002,Science,297,2232−2237;Hutvagner and Zamore,2002,Science,297,2056−60;McManus et al.,2002,RNA,8,842−850;Reinhart et al.,2002,Gene&Dev.,16,1616−1626;およびReinhart&Bartel,2002,Science,297,1831を参照)。本発明のsiNA分子の非限定的例は,図4−6および本明細書の表II,IIIおよびIVに示される。例えば,siNAは,自己相補的なセンス領域およびアンチセンス領域を含む二本鎖ポリヌクレオチド分子であってもよく,ここで,アンチセンス領域は標的核酸分子またはその一部中のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み,センス領域は標的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列を有する。siNAは2つの別々のオリゴヌクレオチドから組み立てることができ,ここで一方の鎖はセンス鎖であり,他方
はアンチセンス鎖であり,アンチセンス鎖およびセンス鎖は自己相補的であり(すなわち,各鎖は,他方の鎖中のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み,例えば,アンチセンス鎖とセンス鎖とがデュープレックスまたは二本鎖構造を形成し,例えば,二本鎖領域は約19塩基対である);アンチセンス鎖は標的核酸分子またはその一部中のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み,センス鎖は標的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列を含む。あるいは,siNAは単一のオリゴヌクレオチドから組み立ててもよく,ここで,siNAの自己相補的センス領域およびアンチセンス領域は,核酸系または非核酸系のリンカーにより連結されている。siNAは,自己相補的センス領域およびアンチセンス領域を有するヘアピン二次構造を有するポリヌクレオチドであってもよく,ここで,アンチセンス領域は別の標的核酸分子またはその一部中のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み,センス領域は,標的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列を有する。siNAは2またはそれ以上のループ構造および自己相補的センス領域およびアンチセンス領域を含むステムを有する環状一本鎖ポリヌクレオチドであってもよく,ここで,アンチセンス領域は標的核酸分子またはその一部中のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み,センス領域は標的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列を有し,環状ポリヌクレオチドは,インビボまたはインビトロでプロセシングされて,RNAiを媒介しうる活性なsiNA分子を生ずることができる。siNAはまた,標的核酸分子またはその一部中のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を有する一本鎖ポリヌクレオチドを含んでいてもよく(例えば,そのようなsiNA分子がsiNA分子中に標的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列の存在を必要としない場合),ここで,一本鎖ポリヌクレオチドはさらに末端リン酸基,例えば5’−リン酸(例えば,Martinez et al.,2002,Cell.,110,563−574およびSchwarz eta l.,2002,Molecular Cell,10,537−568を参照),または5’,3’−二リン酸を含んでいてもよい。ある態様においては,本発明のsiNA分子は,別々のセンスおよびアンチセンス配列または領域を含んでいてもよく,ここで,センス領域およびアンチセンス領域は,当該技術分野において知られるヌクレオチドまたは非ヌクレオチドリンカー分子により共有結合により結合しているか,あるいは,イオン相互作用,水素結合,ファンデルワールス相互作用,疎水的相互作用,および/またはスタッキング相互作用により非共有結合的に結合している。ある態様においては,本発明のsiNA分子は,標的遺伝子のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含む。別の態様においては,本発明のsiNA分子は,標的遺伝子の発現の阻害が引き起こされるように,標的遺伝子のヌクレオチド配列と相互作用する。本明細書において用いる場合,siNA分子はRNAのみを含む分子に限定される必要はなく,化学的に修飾されたヌクレオチドおよび非ヌクレオチドも包含する。ある態様においては,本発明の短干渉核酸分子は2’−ヒドロキシ(2’−OH)含有ヌクレオチドを欠失している。本出願人は,ある態様において,RNAiを媒介するために2’−ヒドロキシ基を有するヌクレオチドの存在を必要としない短干渉核酸を記載する。すなわち,本発明の短干渉核酸分子は,任意にリボヌクレオチド(例えば,2’−OH基を有するヌクレオチド)を含まなくてもよい。しかし,RNAiを支持するためにsiNA分子中にリボヌクレオチドの存在を必要としないそのようなsiNA分子は,2’−OH基を有する1またはそれ以上のヌクレオチドを含む,結合したリンカーまたは他の結合しているかまたは会合している基,成分,または鎖を有することができる。任意に,siNA分子は,ヌクレオチド位置の約5,10,20,30,40,または50%にリボヌクレオチドを含むことができる。本発明の修飾短干渉核酸分子はまた,短干渉修飾オリゴヌクレオチド"siMON"と称される。本明細書において用いる場合,siNAとの用語は,配列特異的RNAiを媒介しうる核酸分子を記述するために用いられる他の用語,例えば,短干渉RNA(siRNA),二本鎖RNA(dsRNA),マイクロRNA(miRNA),短ヘアピンRNA(shRNA),短干渉オリゴヌクレオチド,短干渉核酸,短干渉修飾オリゴヌクレオチド,化学的に修飾されたsiRNA,転写後遺伝子サイレンシングRNA(ptgsRNA),および他のものと
同等であることを意味する。さらに,本明細書において用いる場合,RNAiとの用語は,配列特異的RNA干渉を記述する他の用語,例えば転写後遺伝子サイレンシング,または後成遺伝学(epigenetics)と同等であることを意味する。例えば,本発明のsiNA分子を用いて,転写後レベルまたは転写前レベルの両方で後成的に遺伝子をサイレンシングさせることができる。非限定的例においては,本発明のsiNA分子による遺伝子発現の後成的制御は,クロマチン構造のsiNA媒介性修飾により生じて遺伝子発現を変化させることができる(例えば,Allshire,2002,Science,297,1818−1819;Volpe et al.,2002,Science,297,1833−1837;Jenuwein,2002,Science,297,2215−2218;およびHall et al.,2002,Science,297,2232−2237を参照)。
おいて,プラスミド,ウイルスベクターまたは他のベクターから,またはウイルス,細菌,真菌において発現される遺伝子は,“外来”または"異種"遺伝子であると考えられる。このような遺伝子は,通常は宿主細胞において見いだされないが,標準的な遺伝子輸送手法により,またはウイルス,細菌または他の感染性病原体による感染の結果として導入される。
al.,1987,CSH Symp.Quant.Biol.LII pp.123−133;Frier et al,1986,Proc.Nat.Acad.Sci.USA 83:9373−9377;Turner et al.,1987,J.Am.Chem.Soc.109:3783−3785を参照)。相補性のパーセンテージは,核酸分子中の,第2の核酸配列と水素結合(例えば,ワトソン−クリック塩基対形成)を形成しうる連続する残基のパーセンテージを示す(例えば,10塩基中の5,6,7.8,9,10塩基は,50%,60%,70%,80%,90%,および100%の相補
性である)。"完全な相補性"とは,核酸配列の連続する残基がすべて第2の核酸配列中の同じ数の連続する残基と水素結合するであろうことを意味する。
ヌクレオチド"とは,β−D−リボフラノース成分の2’位にヒドロキシル基を有するヌ
クレオチドを意味する。この用語は,二本鎖RNA,一本鎖RNA,単離されたRNA,例えば部分的に生成されたRNA,本質的に純粋なRNA,合成RNA,組換え的に製造されたRNA,ならびに1またはそれ以上のヌクレオチドの付加,欠失,置換および/または変更により天然に生ずるRNAと異なるように変更されたRNAを含む。そのような
変更は,非ヌクレオチド物質の付加,例えば,siNAの末端または内部(例えばRNAの少なくとも1またはそれ以上のヌクレオチド)への付加を含むことができる。本発明のRNA分子中のヌクレオチドはまた,標準的ではないヌクレオチド,例えば,天然に生じないヌクレオチドまたは化学的に合成されたヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドを含むことができる。これらの変更されたRNAは,類似体または天然に生ずるRNAの類似体と称することができる。
の非限定的例は,Paul et al.,2002,Nature Biotechnology,19,505;Miyagishi and Taira,2002,Nature Biotechnology,19,497;Lee et al.,2002,Nature Biotechnology,19,500;およびNovina et al.,2002,Nature Medicine,advance online publication doi:10.1038/nm725に記載されている。
図1は,siNA分子を合成するスキームの非限定的例を示す。相補的siNA配列鎖である鎖1および鎖2をタンデムで合成し,切断可能な結合,例えばヌクレオチドスクシネートまたは無塩基スクシネートで結合させる。これは,固体支持体上の固相合成において用いられる切断可能なリンカーと同じであっても異なっていていてもよい。合成は固相でも液相でもよく,示される例においては合成は固相合成である。合成は,タンデムオリゴヌクレオチドの末端ヌクレオチド上にジメトキシトリチル基等の保護基が残るように実
施する。オリゴヌクレオチドを切断および脱保護すると,2つのsiNA鎖は自発的にハイブリダイズしてsiNAデュープレックスを形成するため,末端保護基の性質を利用してデュープレックスを精製することができる。これは,例えば,末端保護基を有するデュープレックス/オリゴヌクレオチドのみが単離されるトリチルオン精製法を適用することにより行うことができる。
に記載されるルシフェラーゼアッセイにおいて比較した。HeLa細胞におけるルシフェラーゼ発現のバックグラウンドレベルは,“細胞”の列に示される。化学的に修飾されたsiNAコンストラクトのセンス鎖およびアンチセンス鎖はRPI番号により示される(センス鎖/アンチセンス鎖)。これらのRPI番号に対応する配列は表Iに示される。
’−O−メチルまたは2’−デオキシ−2’−フルオロ修飾ヌクレオチドであり,これはリボヌクレオチド,デオキシヌクレオチド,万能塩基,または本明細書に記載される他の化学的修飾を含むことができる。アンチセンス鎖は,21ヌクレオチドを含み,任意に3’末端グリセリル成分を有していてもよく,ここで,2個の末端3’−ヌクレオチドは任意に標的RNA配列に相補的であってもよく,1個の3’末端ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有していてもよく,存在しうるすべてのピリミジンヌクレオチドは(NN)ヌクレオチドを除き2’−デオキシ−2’−フルオロ修飾ヌクレオチドであり,これはリボヌクレオチド,デオキシヌクレオチド,万能塩基,または本明細書に記載される他の化学的修飾を含むことができる。
。
胞を25nMのsiNAと複合体化した0.25μg/ウエルの脂質でトランスフェクトした。リボヌクレオチドおよび3’末端ジチミジンキャップを含むsiNAコンストラクト(RPI#30998/31074)を,2’−デオキシ−2’−フルオロピリミジンヌクレオチドおよびプリンリボヌクレオチドを含み,siNAのセンス鎖は5’および3’末端反転デオキシ無塩基キャップでさらに修飾されており,アンチセンス鎖は3’末端ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む化学的に修飾されたsiNAコンストラクト(RPI#31368/31369)とともに試験した。また,マッチした化学の反転対照(RPI#31370/31371),および2’−デオキシ−2’−フルオロピリミジンおよび2’−デオキシ−2’−フルオロプリンヌクレオチドを含み,siNAのセンス鎖が5’および3’末端反転デオキシ無塩基キャップでさらに修飾されており,アンチセンス鎖は3’末端ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む化学的に修飾されたsiNAコンストラクト(RPI#31372/31373)とも比較した。これはまた,マッチした化学の反転対照(RPI#31374/31375)と比較した。さらに,siNAコンストラクトはまた,未処理細胞,脂質でトランスフェクトした細胞,およびスクランブル化siNAコンストラクト(Scram1およびScram2)および脂質のみでトランスフェクトした細胞(トランスフェクション対照)とも比較した。図に示されるように,siNAコンストラクトはスクランブル化,未処理,およびトランスフェクション対照と比較して,BCL2 RNA発現の有意な減少を示す。
鎖は3’末端ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む化学的に修飾されたsiNAコンストラクト(RPI#31304/31305)と比較した。また,マッチした化学の反転対照(RPI#31316/31317)とも比較した。さらに,siNAコンストラクトはまた,未処理細胞,脂質でトランスフェクトした細胞およびスクランブル化siNAコンストラクト(Scram1およびScram2),および脂質のみでトランスフェクトした細胞(トランスフェクション対照)とも比較した。図に示されるように,いずれのsiNAコンストラクトもサイクリンD1 RNA発現の有意な減少を示す。
本発明の核酸分子の作用のメカニズム
以下の議論は,現在知られている短干渉RNAにより媒介されるRNA干渉の提唱され
るメカニズムを記載するが,限定を意味するものではなく,先行技術であると認めるものではない。本出願人は,本明細書において,化学的に修飾された短干渉核酸がsiRNA分子と類似のまたは改良されたRNAi媒介能力を有し,インビボで改良された安定性および活性を有すると予測されることを示す。したがって,この議論は,siRNAのみに限定されることを意味するものではなく,siNA全体に適用することができる。"RN
Aiを媒介する改良された能力"または"改良されたRNAi活性"とは,インビトロおよ
び/またはインビボで測定されたRNAi活性を含むことを意味し,ここで,RNAi活性はsiNAがRNAiを媒介する能力と本発明のsiNAの安定性との両方を反映する。本発明においては,これらの活性の積を,全RNA siRNAまたは複数のリボヌクレオチドを含むsiNAと比較して,インビトロおよび/またはインビボで増加させることができる。場合によっては,siNA分子の活性または安定性は低下するかもしれないが(すなわち,10分の1以下),siNA分子の全体的活性はインビトロおよび/またはインビボで増強される。
al.,2001,Science,293,834)。RNAi応答はまた,一般にRNA誘導性サイレンシング複合体(RISC)と称される,siRNAを含むエンドヌクレアーゼ複合体を特徴とし,これはsiRNAと相同な配列を有する一本鎖RNAの切断を媒介する。標的RNAの切断は,siRNAデュープレックスのガイド配列に相補的な領域の中央部で生ずる(Elbashir et al.,2001,Genes Dev.,15,188)。さらに,RNA干渉には,小さいRNA(例えば,マイクロRNAまたはmiRNA)に媒介される遺伝子サイレンシングが関与する場合もある。これはおそらくは,クロマチン構造を制御する細胞性メカニズムによるものであり,このことにより標的遺伝子配列の転写が妨害される(例えば,Allshire,2002,Science,297,1818−1819;Volpe et al.,2002,Science,297,1833−1837;Jenuwein,2002,Science,297,2215−2218;およびHall et al.,2002,Scie
nce,297,2232−2237を参照)。このように,本発明のsiNA分子は,RNA転写産物との相互作用を介して,あるいは特定の遺伝子配列との相互作用により,遺伝子サイレンシングを媒介するために用いることができ,そのような相互作用により転写レベルまたは転写後レベルのいずれかで遺伝子サイレンシングが生ずる。
et al.,2001,Cell,107,309);しかし,5’−リン酸を欠失したsiRNA分子は外的に導入したときに活性であり,このことは,インビボでsiRNAコンストラクトの5’−リン酸化が生じているかもしれないことを示唆する。
100ヌクレオチドを越える長さの核酸の合成は,自動化方法を用いては困難であり,そのような分子の治療コストは非常に高くなる。本発明においては,好ましくは,小さい核酸モチーフ("小さい"とは,100ヌクレオチド以下の長さ,好ましくは80ヌクレオチド以下の長さ,最も好ましくは50ヌクレオチド以下の長さの核酸モチーフ,例えば,別々のsiNAオリゴヌクレオチド配列またはタンデムで合成されたsiNA配列を表す)が外的デリバリーに用いられる。これらの分子は構造が簡単であるため,核酸が蛋白質および/またはRNA構造の標的領域に進入する能力が高い。本発明の例示的分子は化学的に合成するが,他の分子も同様に合成することができる。
すべて本明細書の一部としてここに引用する)。オリゴヌクレオチドの合成は,一般の核酸保護基およびカップリング基,例えば5’末端にジメトキシトリチル,および3’末端にホスホルアミダイトを用いて行う。非限定的例においては,394 Applied Biosystems,Inc.合成器で,0.2μmolスケールのプロトコルで,2’−O−メチル化ヌクレオチドについては2.5分間のカップリング工程,および2’−デオキシヌクレオチドまたは2’−デオキシ−2’−フルオロヌクレオチドについては45秒間のカップリング工程で,小スケールの合成を行う。表IIは,合成サイクルで用いる試薬の量および接触時間の概要を示す。あるいは,0.2μmolスケールでの合成は,96ウエルプレート合成機,例えば,Protogene(Palo Alto,CA)により製造される装置で,サイクルに最少の改変を加えて行うことができる。2’−O−メチル残基の各カップリングサイクルにおいては,ポリマー結合5’−ヒドロキシルに対して33倍過剰(60μLの0.11M=6.6μmol)の2’−O−メチルホスホルアミダイトおよび105倍過剰のS−エチルテトラゾール(60μLの0.25M=15μmol)を用いることができる。デオキシ残基の各カップリングサイクルにおいては,ポリマー結合5’−ヒドロキシルに対して22倍過剰(40μLの0.11M=4.4μmol)のデオキシホスホルアミダイトおよび70倍過剰のS−エチルテトラゾール(40μLの0.25M=10μmol)を用いることができる。394 Applied
Biosystems,Inc.合成機における平均カップリング収率は,トリチル画分の比色定量により決定して,典型的には97.5−99%である。394 Applied Biosystems,Inc.合成器で用いる他のオリゴヌクレオチド合成試薬は以下のとおりである:脱トリチル化溶液は塩化メチレン中3%TCA(ABI)であり
;キャッピングは,THF中16%N−メチルイミダゾール(ABI)およびTHF中10%無水酢酸/10%2,6−ルチジン(ABI)中で行い;酸化溶液は,THF中16.9mM I2,49mMピリジン,9%水(PERSEPTIVE(登録商標))であ
る。Burdick&Jackson合成等級アセトニトリルは試薬瓶から直接用いる。S−エチルテトラゾール溶液(アセトニトリル中0.25M)は,American International Chemical,Inc.から入手した固体から作成する。あるいは,ホスホロチオエート結合の導入のためには,ボーケージ試薬(3H−1,2−ベンゾジチオール−3−オン1,1−ジオキシド,アセトニトリル中0.05M)を用いる。
1で3回洗浄し,ボルテックスし,次に上清を最初の上清に加える。オリゴリボヌクレオチドを含む合わせた上清を乾燥して,白色粉末を得る。
での合成は,96ウエルプレート合成機,例えば,Protogene(Palo Alto,CA)により製造される装置で,サイクルに最少の改変を加えて行うことができる。2’−O−メチル残基の各カップリングサイクルにおいては,ポリマー結合5’−ヒドロキシルに対して33倍過剰(60μLの0.11M=6.6μmol)の2’−O−メチルホスホルアミダイトおよび75倍過剰のS−エチルテトラゾール(60μLの0.25M=15μmol)を用いることができる。リボ残基の各カップリングサイクルにおいては,ポリマー結合5’−ヒドロキシルに対して66倍過剰(120μLの0.11M=13.2μumol)のアルキルシリル(リボ)保護ホスホルアミダイトおよび150倍過剰のS−エチルテトラゾール(120μLの0.25M=30μmol)を用いることができる。394 Applied Biosystems,Inc.合成機における平均カップリング収率は,トリチル画分の比色定量により決定して,典型的には97.5−99%である。394 Applied Biosystems,Inc.合成器で用いる他のオリゴヌクレオチド合成試薬は以下のとおりである:脱トリチル化溶液は塩化メチレン中3%TCA(ABI)であり;キャッピングは,THF中16%N−メチルイミダ
ゾール(ABI)およびTHF中10%無水酢酸/10%2,6−ルチジン(ABI)中で行い;酸化溶液は,THF中16.9mM I2,49mMピリジン,9%水(PER
SEPTIVE(登録商標))である。Burdick&Jackson合成等級アセトニトリルは試薬瓶から直接用いる。S−エチルテトラゾール溶液(アセトニトリル中0.25M)は,American International Chemical,Inc.から入手した固体から作成する。あるいは,ホスホロチオエート結合の導入のためには,ボーケージ試薬(3H−1,2−ベンゾジチオール−3−オン1,1−ジオキシド,アセトニトリル中0.05M)を用いる。
テックスし,次に上清を最初の上清に加える。オリゴリボヌクレオチドを含む合わせた上清を乾燥して,白色粉末を得る。塩基脱保護オリゴリボヌクレオチドを無水TEA/HF/NMP溶液(1.5mL N−メチルピロリジノン,750μL TEAおよび1.0mL TEA・3HFの溶液300μL,HF濃度1.4M)に再懸濁し,65℃に加熱する。1.5時間後,オリゴマーを1.5M NH4HCO3で反応を停止させる。
Acids Symp.Ser.31,163を参照)。siNAコンストラクトは,一般的な方法を用いてゲル電気泳動により精製するか,または高速液体クロマトグラフィー(HPLC;Wincott et al.,(上掲)を参照,その全体を本明細書の一部としてここに引用する)により精製し,水に再懸濁する。
修飾(塩基,糖および/またはリン酸)を有する化学的に合成した核酸分子は,血清リボヌクレアーゼによる分解を防止することができ,このことによりその抗力を高めることができる(例えば,Eckstein et al.,国際公開WO92/07065;Perrault et al.,1990 Nature 344,565;Pieken et al.,1991 Science 253,314;Usman and
Cedergren,1992 Trends in Biochem.Sci.17,334;Usman et al.,国際公開WO93/15187;Rossi et al.,国際公開WO91/03162;Sproat,米国特許5,334,711;Gold et al.,US6,300,074およびBurgin et al.,(上掲)を参照(これらはすべて本明細書の一部としてここに引用する)。上述の参考文献はすべて,本明細書に記載される核酸分子の塩基,リン酸および/または糖成分になしうる種々の化学修飾を記載する。細胞中におけるその抗力を増強するよう修飾し,およびオリゴヌクレオチドの合成時間を短縮し化学物質の必要性を減少するために核酸分子から塩基を除去することが望ましい。
特定の組織または細胞タイプへのデリバリーのためにその安定性を調節することができるように設計する。核酸に基づく生物分解性リンカー分子の安定性は,リボヌクレオチド,デオキシリボヌクレオチド,および化学的に修飾されたヌクレオチド,例えば,2’−O−メチル,2’−フルオロ,2’−アミノ,2’−O−アミノ,2’−C−アリル,2’−O−アリル,および他の2’−修飾または塩基修飾ヌクレオチドの種々の組み合わせを用いることにより調節することができる。生物分解性核酸リンカー分子は,ダイマー,トリマー,テトラマー,またはより長い核酸分子,例えば,約2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,または20ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチドであることができ,またはリン酸に基づく結合,例えば,ホスホルアミデートまたはホスホジエステル結合を有する単一のヌクレオチドを含むことができる。生物分解性核酸リンカー分子はまた,核酸骨格,核酸糖,または核酸塩基修飾を含むことができる。
子,例えば,酵素的核酸分子(リボザイム),アロザイム,アンチセンス,2,5−Aオリゴアデニレート,デコイ,およびアプタマーの組み合わせが含まれる。
れは1−7個の炭素,より好ましくは1−4個の炭素を有する低級アルキルである。アルキルは置換されていてもされていなくてもよい。置換されている場合,置換基は,好ましくは,ヒドロキシル,シアノ,アルコキシ,=O,=S,NO2またはN(CH3)2,ア
ミノ,またはSHである。この用語は,また,少なくとも1つの炭素−炭素二重結合を含む不飽和炭化水素基であるアルケニル基を含み,直鎖,分枝鎖,および環状基を含む。好ましくは,アルケニル基は1−12個の炭素を有する。より好ましくは,これは1−7個の炭素原子,より好ましくは1−4個の炭素原子の低級アルケニルである。アルケニル基は置換されていてもされていなくてもよい。置換されている場合,置換基は,好ましくは,ヒドロキシル,シアノ,アルコキシ,=O,=S,NO2,ハロゲン,N(CH3)2,
アミノ,またはSHから選択される。"アルキル"との用語はまた,少なくとも1つの炭素−炭素三重結合を含む不飽和の炭化水素基を有するアルキニル基を含み,直鎖,分枝鎖,および環状基を含む。好ましくは,アルキニル基は1−12個の炭素を有する。より好ましくは,これは1−7個の炭素,より好ましくは1−4個の炭素を有する低級アルキニルである。アルキニル基は,置換されていてもされていなくてもよい。置換されている場合,置換基は,好ましくは,ヒドロキシル,シアノ,アルコキシ,=O,=S,NO2また
はN(CH3)2,アミノまたはSHである。
エステル"とは,−C(O)−OR’(式中,Rはアルキル,アリール,アルキルアリー
ルまたは水素のいずれかである)を表す。
(例えば5−ブロモウリジン)または6−アザピリミジンまたは6−アルキルピリミジン(例えば6−メチルウリジン),プロピンおよびその他のものが挙げられる(Burgin et al.,1996,Biochemistry,35,14090;Uhlman&Peyman,上掲)。この観点において,"修飾塩基"とは,1’位におけるアデニン,グアニン,シトシンおよびウラシル以外のヌクレオチド塩基またはそれらの同等物を意味する。
本発明のsiNA分子は,単独でまたは他の療法と組み合わせて,任意の疾病,感染または遺伝子発現に関連する状態,および細胞または組織における遺伝子産物のレベルに応答しうる他の適応症の治療に用いるために適合させることができる。例えば,siNA分子は,被験者に投与するためのリポソーム等のデリバリーベヒクル,担体および希釈剤,およびそれらの塩を含むことができ,および/または薬学的に許容しうる処方中に存在することができる。核酸分子のデリバリーの方法は,Akhtar et al.,1992,Trends Cell Bio.,2,139;Delivery Strate
gies for Antisense Oligonucleotide Therapeutics,ed.Akhtar,1995;Maurer et al.,1999,Mol.Membr.Biol.,16,129−140;Hofland and
Huang,1999,Handb.Exp.Pharmacol.,137,165−192;およびLee et al..2000,ACSSymp.Ser.,752,184−192(いずれも本明細書の一部としてここに引用する)に記載されている。Beigelman et al.,米国特許6,395,713およびSullivan et al.,PCT WO94/02595は,さらに,核酸分子をデリバリーするための一般的な方法を記載する。これらのプロトコルを用いて,事実上いかなる核酸分子もデリバリーすることができる。核酸分子は当業者に知られる種々の方法によって細胞に投与することができ,これには,限定されないが,リポソームへの封入,イオントホレシス,または他のベヒクル,例えば,ヒドロゲル,シクロデキストリン(例えば,Gonzalez et al.,1999,Bioconjugate Chem.,10,1068−1074を参照),生分解性ナノカプセル,および生体接着性小球体への組み込み,または蛋白質性ベクター(O’Hare and Normand,国際公開WO00/53722)によるものが含まれる。あるいは,核酸/ベヒクルの組み合わせを,直接注入により,または注入ポンプを用いることにより局所的にデリバリーする。本発明の核酸分子の直接注入は,標準的な針とシリンジの方法論を用いて,または例えばConry et al.,1999,Cliva.Cancer Res.,5,2330−2337およびBarry et al.,国際公開WO99/31262に記載される無針手法により,皮下,筋肉内,または皮膚内に行うことができる。当該技術分野における多くの例が,浸透圧ポンプ(Chun et al.,1998,Neuroscience Letters,257,135−138,D’Aldin et al.,1998,Mol.Brain Research,55,151−164,Dryden
et al.,1998,J.Endocrinol.,157,169−175,Ghirnikar et al.,1998,Neuroscience Letters,247,21−24を参照)または直接注入(Broaddus et al.,1997,Neurosurg.Focus,3,article 4)によるオリゴヌクレオチドのCNSデリバリー法を記載する。デリバリーの他の経路には,限定されないが,経口(錠剤または丸薬の形)および/または髄腔内デリバリー(Gold,1997,Neuroscience,76,1153−1158)が含まれる。核酸のデリバリーおよび投与のより詳細な記述は,Sullivan et al.,(上掲),Draper et al.,PCT WO93/23569,Beigelman et al.,PCT WO99/05094,およびKlimuk et al.,PCT WO99/04819に提供される(これらはすべて本明細書の一部としてここに引用する)。本発明の分子は医薬品として用いることができる。医薬品は,被験者における疾病状態を予防し,発症を調節しまたは治療する(症状をある程度,好ましくは症状をすべて軽減する)。
ム等のリポソーム処方,および融合誘導性ペプチドとコンジュゲートさせたオリゴヌクレオチド等のバイオコンジュゲートが含まれる。
9,1999)。本発明の核酸分子のデリバリー戦略の他の非限定的例には,Boado
et al.,1998,J.Pharm.Sci.,87,1308−1315;Tyler et al.,1999,FEBS Lett.,421,280−284;Pardridge et al.,1995,PNAS USA.,92,5592−5596;Boado,1995,Adv.Drug Delivery Rev.,15,73−107;Aldrian−Herrada et al.,1998,Nucleic Acids Res.,26,4910−4916;およびTyler et
al.,1999,PNAS USA.,96,7053−7058に記載される物質が含まれる。
ishing Co.(A.R.Gennaro edit.1985)(本明細書の一部としてここに引用する)に記載されている。例えば,保存剤,安定剤,染料,および風味剤を用いることができる。これらには,安息香酸ナトリウム,ソルビン酸,およびp−ヒドロキシ安息香酸のエステルが含まれる。さらに,抗酸化剤および懸濁剤を用いてもよい。
入またはスプレーにより,または直腸に投与することができる。本明細書において用いる場合,非経口的との用語には,経皮,皮下,血管内(例えば,静脈内),筋肉内,または髄腔内注射または注入の手法等が含まれる。さらに,本発明の核酸分子および薬学的に許容しうる担体を含む医薬処方が提供される。1またはそれ以上の本発明の核酸分子は,1またはそれ以上の無毒性の薬学的に許容しうる担体および/または希釈剤,および/またはアジュバント,および所望の場合には他の活性成分とともに存在することができる。本発明の核酸分子を含有する医薬組成物は,経口使用に適した形,例えば,錠剤,トローチ剤,菱形剤,水性または油性懸濁液,分散可能な粉体または顆粒,乳剤,硬カプセルまたは軟カプセル,またはシロップまたはエリキシル剤の形であることができる。
and Fiete,1980,Cell,22,611−620;Connolly
et al.,1982,J.Biol.Chem.,257,939−945)。Lee and Lee(1987,Glycoconjugate J.,4,317−328)は,ガラクトースと比較してレセプターに対してより高い親和性を有するN−アセチル−D−ガラクトースアミンを炭水化物成分として用いることによりこの高い特異性を得た。この"クラスタリング効果"はまた,マンノシル末端糖蛋白質またはグリココンジュゲートの結合および取込についても記載されている(Ponpipom et al.,1981,J.Med.Client.,24,1388−1395)。ガラクトース,ガラクトースアミンまたは葉酸に基づくコンジュゲートを使用して外来性化合物を細胞膜を超えて輸送することにより,例えば,肝疾患,肝臓の癌,または他の癌の治療に標的化デリバリー法を提供することができる。また,バイオコンジュゲートの使用により,治療に必要な治療用化合物の必要用量を低下させることができる。さらに,本発明の核酸バイオコンジュゲートを使用することにより,治療薬の生物利用性,薬力学,および薬物動態学的パラメータを調節することができる。そのようなバイオコンジュゲートの非限定的例は,Vargeese et al.,米国特許出願10/201,394,(2001年8月13日出願);およびMatulic−Adamic et al,米国特許出願60/362,016(2002年3月6日出願)に記載されている。
Proc.Natl.Acad.Sci. USA 83,399;Scanlon et al.,1991,Proc.Natl.Acad.Sci. USA ,88,10591−5;Kashani−Sabet et al.,1992 Antisense Res.Dev.,2,3−15;Dropulic et al.,1992
J.Virol 66,1432−41;Weerasinghe et al.,1991 J.Virol,65,5531−4;Ojwang et al.,1992
Proc.Natl.Acad.Sci. USA 89,10802−6;Chen
et al.,1992 Nucleic Acids Res.,20,4581−9;Sarver et al.,1990 Science 247,1222−1225;Thompson et al.,1995 Nucleic Acids Res.23,2259;Good et al.,1997,Gene Therapy,4,45)。当業者は,真核生物細胞中で任意の核酸を適当なDNA/RNAベクターか
ら発現させることができることを認識するであろう。そのような核酸の活性は,酵素的核酸によりそれらを一次転写産物から放出させることにより増大させることができる(Draper et al.,PCT WO93/23569,Sullivan et al.,PCT WO94/02595;Ohkawa et al.,1992 Nucleic Acids Symp.Ser.,27,15−6;Taira et al.,1991, Nucleic Acids Res.,19,5125−30;Ventura et al.,1993 Nucleic Acids Res.,21,3249−55;Chowrira et al.,1994 J.Biol.Chem.269,25856)。
et al.,2002,Nature Medicine,advance online publication doi:10.1038/nm725を参照)。
ーム(ORF);および/またはイントロン(介在配列)を含んでいてもよい。
リメラーゼII(pol II),またはRNAポリメラーゼIII(pol III)のプロモーターにより推進させることができる。pol IIまたはpol IIIプロモーターからの転写産物は,すべての細胞において高いレベルで発現される。あるタイプの細胞におけるあるpol IIプロモーターのレベルは,近くに存在する遺伝子制御配列(エンハンサー,サイレンサー等)の性質に依存する。原核生物RNAポリメラーゼ酵素が適当な細胞中で発現される限り,原核生物RNAポリメラーゼプロモーターもまた用いられる(Elroy−Stein and Moss,1990 Proc.Natl.Acad.Sci. USA ,87,6743−7;Gao and Huang 1993 Nucleic Acids Res.,21,2867−72;Lieberet.al.,1993 Methods Enzymol.,217,47−66;Zhou et al.,1990 Mol.Cell.Biol.,10,4529−37)。何人かの研究者が,そのようなプロモーターから発現した核酸分子が哺乳動物細胞中で機能しうることを示している(例えば,Kashani−Sabet et al.,1992 Antisense Res.Dev.,2,3−15;Ojwang et al.,1992 Proc.Natl.Acad.Sci. USA ,89,10802−6;Chen et al.,1992 Nucleic Acids Res.,20,4581−9;Yu et al.,1993 Proc.Natl.Acad.Sci. USA ,90,6340−4;L'Huillier et al
.,1992 EMBO J.11,4411−8;Lisziewicz et al.,1993 Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,90,8000−4;Thompson et al.,1995 Nucleic Acids Res.23,2259;Sullenger&Cech,1993,Science,262,1566)。より詳細には,転写ユニット,例えばU6小核(snRNA),転移RNA(tRNA)およびアデノウイルスVA RNAをコードする遺伝子に由来するものは,細胞中において高濃度の所望のRNA分子(例えばsiNA)を生成するのに有用である(Thompson et al.,(上掲);Couture and Stinchcomb,1996,(上掲);Noonberg et al.,1994,Nucleic Acid Res.,22,2830;Noonberg et al.,米国特許5,1624,803;Good et al.,1997,Gene Ther.4,45;Beicrelman et al.,国際公開WO96/18736)。上述のsiNA転写ユニットは,哺乳動物細胞中に導入するために種々のベクター中に組み込むことができる。ベクターとしては,限定されないが,プラスミドDNAベクター,ウイルスDNAベクター(例えばアデノウイルスまたはアデノ随伴ウイルスベクター),またはウイルスRNAベクター(例えばレトロウイルスまたはアルファウイルスベクター)が挙げられる(総説については,Couture and Stinchcomb,1996,(上掲)を参照)。
なように連結されており,配列は,siNA分子の発現および/またはデリバリーを可能とする様式で,開始領域,オープンリーディングフレームおよび終止領域に動作可能なように連結されている。さらに別の態様においては,発現ベクターは,a)転写開始領域;
b)転写終止領域;c)イントロン;およびd)少なくとも1つのsiNA分子をコードする核酸配列を含み;この配列は,核酸分子の発現および/またはデリバリーを可能とする様式で,開始領域,イントロンおよび終止領域に動作可能なように連結されている。
−末端に動作可能なように連結されており,配列は,siNA分子の発現および/またはデリバリーを可能とする様式で,開始領域,イントロン,オープンリーディングフレームおよび終止領域に動作可能なように連結されている。
本発明の例示的siNA分子は,切断可能なリンカー,例えば,スクシニル系リンカーを用いて,タンデムで合成する。本明細書に記載されるタンデム合成の後に,1段階精製プロセスを行って,RNAi分子を高収率で得る。この方法はハイスループットRNAiスクリーニングを支えるsiNA合成に非常に適しており,マルチカラムまたはマルチウエルの合成プラットフォームに容易に適合させることができる。
反応を停止させる。
rs C18 SepPak lgカートリッジを用いて,容易に行うことができる。サンプルを負荷し,1CVのH2Oまたは50mM NaOAcで洗浄する。失敗配列は1
CVの14%ACN(水性;50mM NaOAcおよび50mMNaClを含む)で溶出する。次にカラムを1CVのH2O等で洗浄し,例えば,1CVの1%水性トリフルオ
ロ酢酸(TFA)をカラムに通し,次にさらに1CVの1%水性TFAをカラムに加えて
約10分間放置することにより,カラム上で脱トリチル化を行う。残りのTFA溶液を除去し,カラムをH2Oで,次に1CVの1MNaClおよび再度のH2Oで洗浄する。次に,siNAデュープレックス生成物を,例えば,1CVの20%水性CANを用いて溶出する。
siNAコンストラクト中に化学的修飾を導入して,ヒト血清中におけるこれらのコンストラクトの安定性を,天然のsiNAオリゴヌクレオチド(2つのチミジンヌクレオチドオーバーハングを含む)と比較して測定した。RNAデュープレックスの血清安定性の実験は,2つのチミジンヌクレオチドオーバーハングを含む全RNAヌクレオチドからなるsiNAコンストラクトは15秒間の血清中半減期を有し,一方,化学的に修飾されたsiNAコンストラクトは,修飾の程度により,血清中で1−3日間安定なままであったことを明らかにした。RNAi安定性試験は,siNAの一方の鎖(鎖1)を内部標識し,1.5倍濃度の相補的siNA鎖(鎖2)(すべての標識された物質がデュープレックス型であったことを確実にするため)とともにデュープレックスを形成させることにより行った。次に,デュープレックスを形成したsiNAコンストラクトを,2μMsiNA(鎖2濃度)の最終濃度で,90%マウスまたはヒト血清中で,30秒,1分,5分,30分,90分,4時間10分,16時間24分,および49時間の各時間インキュベートすることにより,安定性について試験した。各時点のサンプルを15%変性ポリアクリルアミドゲルに流し,ホスホイメージャーで分析した。
目的とするRNA標的,例えばウイルスまたはヒトmRNA転写産物の配列を,例えばコンピュータフォールディングアルゴリズムを用いることにより,標的部位についてスクリーニングする。非限定的例においては,Genbank等のデータベースから得られる遺伝子またはRNA遺伝子転写産物の配列を用いて,標的に対して相補性を有するsiNA標的を生成する。そのような配列は,データベースから得ることができるか,または当
該技術分野において知られるように実験的に決定することができる。既知の標的部位,例えば,リボザイムまたはアンチセンス等の他の核酸分子を用いた研究に基づいて有効な標的部位であると決定されている標的部位,または疾病または健康状態と関連していることが知られている標的,例えば変異または欠失を含む部位を用いて,これらの部位を標的とするsiNA分子を設計することができる。種々のパラメータを用いて,標的RNA配列中でいずれの部位が最も適当な標的部位であるかを判定することができる。これらのパラメータには,限定されないが,二次または三次RNA構造,標的配列のヌクレオチド塩基組成,標的配列の種々の領域間のホモロジーの程度,またはRNA転写産物中の標的配列の相対的位置が含まれる。これらの判定に基づいて,RNA転写産物中の任意の数の標的部位を選択して,例えば,インビトロRNA切断アッセイ,培養細胞,または動物モデルを用いることにより,効力についてsiNA分子をスクリーニングすることができる。非限定的例においては,用いるべきsiNAコンストラクトのサイズに基づいて,転写産物中のいずれかの位置の1−1000個の標的部位を選択する。当該技術分野において知られる方法,例えば標的遺伝子発現の有効な減少を判定するマルチウエルまたはマルチプレートアッセイまたはコンビナトリアル/siRNAスクリーニングアッセイを用いて,siNA分子をスクリーニングするためのハイスループットスクリーニングアッセイを開発することができる。
以下の非限定的工程を用いて,所定の遺伝子配列または転写産物を標的とするsiNAの選択を行うことができる。
短干渉核酸(siNA)は,遺伝子制御の強力なツールであることが明らかになりつつある。全リボースsiNAデュープレックスはRNAi経路を活性化するが,上述の実施例2に示されるように,ヌクレアーゼ感受性および短い血清中の半減期のために,治療用化合物としてのその用途は限定されている。インビボ用途のためのヌクレアーゼ耐性siNAコンストラクトを開発するために,ルシフェラーゼmRNAを標的とし,安定化化学的修飾を含むsiNAの活性をHeLa細胞において調べた。この実験に用いたsiNA
オリゴヌクレオチド配列の配列は表Iに示される。修飾には,一方または両方のsiNA鎖におけるホスホロチオエート結合(P=S),2’−O−メチルヌクレオチド,または2’−フルオロ(F)ヌクレオチドおよび種々の3’末端安定化化学,例えば,3’−グリセリル,3’−反転無塩基,3’−反転チミジン,および/またはチミジンが含まれていた。安定化修飾,例えば本明細書に記載される修飾を含む活性なsiNAは,インビボ用途に有用であることが明らかとなるはずである。
果を示す。図に示されるように,これらの修飾は,対照siNAコンストラクトと比較したときに,同等またはより高いRNAi活性を示す。
ンストラクトと比較して,有意なRNAi活性を保持している。インビボで対照siGL2コンストラクトと比較したときに有意なRNAi活性を保持しているRPI30433/30430は,リボヌクレオチドを含まないsiNAコンストラクトであることに注目すべきである。したがって,このコンストラクトは,インビボでリボヌクレオチドを有するsiNAコンストラクトと同様のRNAi活性および改良された安定性を有すると予測される。
Iに示される。図に示されるように,化学的に修飾されたRPI30222/30546,30222/30224,30222/30551,30222/30557および30222/30558コンストラクトは,対照siNAコンストラクトと比較して有意なRNAi活性を保持する。
滴定アッセイを行って,全RNAヌクレオチドからなり,2つのチミジンヌクレオチドオーバーハングを含む対照siNAコンストラクト,およびセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方に5つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む化学的に修飾されたsiNAコンストラクトの両方について,RNAi活性に必要なsiNA濃度の下限範囲を決定した。アッセイは上述のように行ったが,ただし,siNAコンストラクトは2.5nM−0.025nMの最終濃度に希釈した。結果は図16に示される。図16に示されるように,化学的に修飾されたsiNAコンストラクトは,反転siNA配列対照と比較したとき,対照siNAコンストラクトと非常に類似する濃度依存的RNAi活性プロファイルを示した。
siNAの標的部位は,実施例4に記載されるsiNA分子のライブラリを用いて,あるいは本明細書の実施例9に記載されるようなインビトロsiNAシステムを用いて,標的RNAの配列を分析し,任意にフォールディング(siNAの標的へのアクセス可能性を判定するために分析される任意の所与の配列の構造)に基づいて標的部位に優先順位を付けることにより,選択した。siNA分子は,それぞれの標的に結合することができるように設計し,任意に個々にコンピュータフォールディングにより分析して,siNA分子が標的配列と相互作用しうるか否かを評価した。種々の長さのsiNA分子を選択して,活性を最適化することができる。一般に,標的RNAと結合するかさもなくばこれと相互作用する十分な数の相補的ヌクレオチド塩基が選択されるが,種々の長さまたは塩基組成のsiNAデュープレックスに適応させるように,相補性の程度を調節することができる。そのような方法論を用いることにより,siNA分子は,任意の既知のRNA配列,例えば,任意の遺伝子転写産物に対応するRNA配列中の部位を標的とするよう設計することができる。
いてアッセイする。合成siNAコンストラクトはまた,適当なアッセイ,例えば本明細書に記載されるルシフェラーゼレポーターアッセイまたはRNAi活性を定量しうる他の適当なアッセイを用いて,RNAi活性についても平行して試験する。ヌクレアーゼ安定性およびRNAi活性の両方を有する合成siNAコンストラクトは,さらに改変して,安定性および活性のアッセイにおいて再評価することができる。次に,任意の選択されたRNAを標的とするいずれかのsiNA配列に安定化活性siNAコンストラクトの化学的修飾を適用して,例えば,標的スクリーニングアッセイにおいて用いて,治療薬を開発するためのsiNA化合物のリードを拾い上げることができる(例えば,図24を参照)。
siNA分子は,RNAメッセージ中の種々の部位,例えば,本明細書に記載されるRNA配列中の標的配列と相互作用するよう設計することができる。siNA分子の一方の鎖の配列は,上述した標的部位配列に相補的である。siNA分子は,本明細書に記載される方法を用いて化学的に合成することができる。対照配列として用いられる不活性siNA分子は,siNA分子の配列を標的配列に相補的ではないようにスクランブル化することにより,合成することができる。一般に,siNAコンストラクトは,本明細書に記載されるように,固相オリゴヌクレオチド合成方法を用いて合成することができる(例えば,Usman et al.,米国特許5,804,683;5,831,071;5,998,203;6,117,657;6,353,098;6,362,323;6,437,117;6,469,158;Scaringe et al.,米国特許6,111,086;6,008,400;6,111,086を参照(いずれもその全体を本明細書の一部としてここに引用する))。
al.,米国特許5,631,360(その全体を本明細書の一部としてここに引用する)に記載されるように,2’−デオキシ−2’−アミノヌクレオシドにはN−フタロイル保護を用いることができる。
カップリング時間,異なる試薬/ホスホルアミダイト濃度,異なる接触時間,異なる固体支持体および固体支持体リンカー化学を用いることにより,カップリング効率を最適化することができる。siNAの脱保護および精製は,一般に記載されているようにして行うことができる(Usman et al.,米国特許5,831,071,米国特許6,353,098,米国特許6,437,117,およびBellon et al.,米国特許6,054,576,米国特許6,162,909,米国特許6,303,773(その全体を本明細書の一部としてここに引用する)またはScaringe(上掲))。さらに,脱保護条件を改変して,可能な限り最高の収量および純度のsiNAコンストラクトを得る。例えば,本出願人は,2’−デオキシ−2’−フルオロヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは不適切な脱保護条件下で分解しうることを見いだした。そのようなオリゴヌクレオチドは,水性メチルアミンを用いて約35℃で30分間脱保護する。2’−デオキシ−2’−フルオロ含有オリゴヌクレオチドがリボヌクレオチドをも含む場合には,水性メチルアミンで約35℃で30分間脱保護した後,TEA−HFを加え,反応液をさらに15分間約65℃に維持する。
RNAiを無細胞システムにおいて再現するインビトロアッセイを用いて,標的RNAに特異的なsiNAコンストラクトを評価する。アッセイは,Tuschlら(1999,Genes and Development,13,3191−3197)およびZamoreら(2000,Cell,101,25−33)に記載され,標的RNA用に適合させた系を含む。シンシチウム胚盤葉に由来するショウジョウバエ抽出物を用いてインビトロでRNAi活性を再構築する。標的RNAは,適当なプラスミドからT7RNAポリメラーゼを用いてインビトロ転写することにより,または本明細書に記載されるように化学合成により作製する。センスおよびアンチセンスsiNA鎖(例えば各20μM)は,緩衝液(例えば,100mM酢酸カリウム,30mM HEPES−KOH,pH7.4,2mM酢酸マグネシウム)中で90℃で1分間,次に37℃で1時間インキュベートすることによりアニーリングさせ,次に溶解緩衝液(例えば100mM酢酸カリウム,30mM HEPES−KOH(pH7.4),2mM酢酸マグネシウム)で希釈する。アニーリングは,アガロースゲルを用いてTBE緩衝液でゲル電気泳動し,臭化エチジウムで染色することによりモニターすることができる。ショウジョウバエの溶解物は,OregonRハエからの0−2時間齢の胚を用いて調製し,酵母糖蜜寒天上に回収し,絨毛膜を除去し溶解する。溶解物を遠心分離し,上清を単離する。アッセイは,50%溶解物[vol/vol],RNA(10−50pMの最終濃度),およびsiNA(10nMの最終濃度)を含む10%[vol/vol]溶解緩衝液を含有する反応混合物を含む。反応混合物はまた,10mMのクレアチンリン酸,10μg/mlのクレアチンホスホキナーゼ,100μMのGTP,100μMのUTP,100μMのCTP,500μMのATP,5mMのDTT,0.1U/μLのRNasin(Promega),および100μMの各アミノ酸を含む。酢酸カリウムの最終濃度は100mMに調節する。反応は氷上で予め組立て,25℃で10分間プレインキュベートした後にRNAを加え,25℃でさらに60分間インキュベートする。4倍容量の1.25x Passive Lysis Buffer(Promega)で反応を停止させる。標的RNAの切断は,RT−PCR分析または当該技術分野において知られる他の方法によりアッセイし,反応からsiNAが省略されている対照反応と比較する。
またはsiNAなしの対照反応からのRNA,およびアッセイにより生成する切断産物を表すバンドをPhosphorImager(登録商標)で定量することにより決定する。
上述したようにして,標的RNAを標的とするsiNA分子を設計し,合成する。これらの核酸分子は,例えば以下の方法を用いることにより,インビボで切断活性について試験することができる。
細胞(例えばHeLa)は,トランスフェクションの前日に,例えば,EGM−2(BioWhittaker)中で1x105細胞/ウエルで6−ウエルディッシュに播種す
る。siNA(例えば最終濃度20nM)およびカチオン性脂質(例えば最終濃度2μg/ml)を,ポリスチレン管でEGM基礎培地(BioWhittaker)中で,37℃で30分間複合体化させる。ボルテックスした後,複合体化したsiNAを各ウエルに加え,示される時間インキュベートする。最初の最適化実験のためには,細胞を例えば,1x103で96ウエルプレートに播種し,記載されるようにしてsiNA複合体を加え
る。siNAの細胞へのデリバリーの効率は,脂質と複合体化した蛍光siNAを用いて決定する。6ウエルディッシュ中の細胞をsiNAとともに24時間インキュベートし,PBSですすぎ,2%パラホルムアルデヒド中で室温で15分間固定する。siNAの取り込みは蛍光顕微鏡を用いて可視化する。
siNAのデリバリーの後,例えば,6ウエル用にはQiagenRNA精製キットを,または96ウエルアッセイ用にはRneasy抽出キットを用いて,細胞から総RNAを調製する。Taqman分析のためには,5’末端に共有結合させたレポーター染料(FAMまたはJOE)および3’末端にコンジュゲート化したクエンチャー染料TAMRAを有する二重標識プローブを合成する。1段階RT−PCR増幅は,例えば,ABI PRISM 7700 Sequence Detectorで,10μlの総RNA,100nMのフォワードプライマー,900nMのリバースプライマー,100nMのプローブ,1XTaqMan PCR反応緩衝液(PE−Applied Biosyst
ems),5.5mM MgCl2,300μMの各dATP,dCTP,dGTP,お
よびdTTP,10UのRNase阻害剤(Promega),1.25UのAmpliTaqGold(PE−Applied Biosystems)および10UのM−MLVリバーストランスクリプターゼ(Promega)から構成される50μlの反応液を用いて行う。熱サイクリング条件は,48℃で30分間,95℃で10分間,次に95℃で15秒間および60℃で1分間を40サイクルからなるものでありうる。mRNAレベルの定量は,段階的に希釈した総細胞RNA(300,100,33,11ng/rxn)から生成した標準に対して行い,平行してTaqMan反応で測定したβ−アクチンまたはGAPDH mRNAに対して標準化する。目的とする各遺伝子について,上側プライマーおよび下側プライマー,および蛍光標識したプローブを設計する。特定のPCR産物中へのSYBR GreenI染料のリアルタイム取り込みは,ガラスキャピラリー管で光サイクラーを用いて測定することができる。対照cRNAを用いて,各プライマー対について標準曲線を作成する。値は,各サンプルにおいてGAPDHに対する相対的発現として表す。
核抽出物は,標準的なマイクロ調製手法(例えば,Andrews and Faller,1991,Nucleic Acids Research,19,2499を参照)を用いて調製することができる。例えばTCA沈殿を用いて,上清からの蛋白質抽出物を調製する。等量の20%TCAを細胞上清に加え,氷上で1時間インキュベートし,5分間の遠心分離によりペレット化する。ペレットをアセトンで洗浄し,乾燥し,水に再懸濁する。細胞蛋白質抽出物を10%Bis−Tris NuPage(核抽出物)または4−12%Tris−グリシン(上清抽出物)ポリアクリルアミドゲルに流し,ニトロセルロース膜に移す。非特異的結合は,例えば,5%無脂乳とともに1時間インキュベートすることによりブロッキングすることができ,次に一次抗体で4℃で16時間反応させる。洗浄した後,二次抗体,例えば(1:10,000希釈)を室温で1時間適用し,SuperSignal試薬(Pierce)でシグナルを検出する。
当該技術分野において知られるように,種々の動物モデル,例えば,他の核酸技術,例えば酵素的核酸分子(リボザイム)および/またはアンチセンスを評価するために用いられる動物モデルを用いて,siNAコンストラクトをインビボでスクリーニングすることができる。このような動物モデルを用いて,本明細書に記載されるsiNA分子の効力を試験する。非限定的例においては,抗血管新生剤として設計されるsiNA分子を動物モデルにおいてスクリーニングすることができる。血管新生および/または転移に関係する遺伝子,例えば,VEGFR(例えば,VEGFR1,VEGFR2,およびVEGFR3)遺伝子に対する本発明の核酸(例えばsiNA)の抗血管新生効果を試験することができるいくつかの動物モデルが存在する。典型的には,ラットおよびウサギにおける血管新生の研究には角膜モデルが用いられてきた。この通常は無血管である組織においては,血管の補充を容易に追跡することができるためである(Pandey et al.,1995 Science 268:567−569)。これらのモデルにおいては,血管新生因子(例えば,bFGFまたはVEGF)で前処理した小さいテフロンまたはハイドロン(Hydron)のディスクを角膜中に外科的に形成したポケット中に挿入する。血管新生は,3から5日後にモニターする。VEGFR mRNAに対するsiNA分子を,同様にディスク中で輸送するか,または実験の経過期間にわたって眼に滴下する。他の眼のモデルにおいては,低酸素症がVEGFの増加した発現および網膜における血管新生の両方を引き起こすことが示されている(Pierce et al.,1995 Proc.Natl.Acad.Sci. USA.92:905−909;Shweiki
et al.,1992J.Clin.Invest.91:2235−2243)。
et al.,1993 Diabetologia 36:282−291;Pandey et al.1995(上掲);Zieche et al.,1992 Lab.Invest.67:711−715),成長因子を含むマトリゲルマトリクス内への血管の成長(Passaniti et al.,1992(上掲)),ホルモン操作後の雌生殖器新生血管形成(Shweiki et al.,1993 Clin.Invest.91:2235−2243),高度に脈管化した固形腫瘍における腫瘍成長の阻害を含むいくつかのモデル(O'Reilly et al.,1994 Cell
79:315−328;Senger et al.,1993 Cancer and
Metas.Rev.12:303−324;Takahasi et al.,1994 Cancer Res.54:4233−4237;Kim et al.,1993(上掲)),およびマウス網膜における過渡的低酸素症誘導性新生血管形成(Pierce et al.,1995 Proc.Natl.Acad.Sci. USA.92:905−909)が含まれる。
ない。ルイス肺およびB−16悪性腫瘍のモデルは両方とも,活発に転移する腫瘍細胞株(ルイス肺株3LLまたはD122,LLc−LN7;B−16−BL6悪性腫瘍)からの約106個の腫瘍細胞をC57BL/6Jマウス中に皮下移植することを含む。あるい
は,ルイス肺モデルは,腫瘍範囲(直径約0.8mm)の外科的移植により生成することができる。転移はまた,腫瘍細胞を直接静脈内に注射することによりモデル化することができる。ルイス肺モデルにおいては,移植の約14日後に微視的な転移を認めることができ,21−25日以内に定量化しうる巨視的な転移腫瘍が発達する。B−16悪性腫瘍は,同様な時間経過を示し,腫瘍新生血管形成は移植の4日後に始まる。これらのモデルにおいては,21−25日後には,同じ動物中に原発性および転移性腫瘍の両方が存在するため,効力の指標として多くの測定値をとることができる。原発性腫瘍体積および成長潜伏期間,ならびに微視的および巨視的転移肺病巣の数,または転移を示す動物の数を定量化することができる。また,寿命の増加のパーセンテージも測定することができる。すなわち,これらのモデルは,全身投与されたsiNA分子およびsiNA処方のスクリーニングのための,適当な一次効力アッセイを提供する。
この実験の目的は,VEGF誘導性血管新生のラット角膜モデルにおいて(上述を参照),VEGFR1を標的とするsiNAの抗血管新生活性を評価することであった。これらのsiNA分子は,RNA標的と相互作用することができないために不活性であるマッチした反転対照を有する。フィルターディスク法を用いてsiNA分子およびVEGFを共デリバリーした:Pandeyら(上記)が記載するように,直径0.057のニトロセルロースフィルターディスク(Millipore(登録商標))を適当な溶液に浸漬し,ラット角膜に外科的に移植した。
ーディスクによって誘導される正常な新生血管形成が低下されうる。
試験化合物および対照
R&D Systems VEGF,無担体,82mM Tris−Cl(pH6.9)中75μM
siNA,1.67μg/μL,部位2340(配列番号2;配列番号6)センス/アンチセンス
siNA,1.67μg/μL,部位2340の反転対照(配列番号19;配列番号20)センス/アンチセンス
siNA1.67μg/μL,部位2340(配列番号419;配列番号420)センス/アンチセンス
ハーラン・スプラグ・ドーリー(Harlan Sprague−Dawley)ラット,約225−250g
45匹の雄,1群につき5匹
ラットを2つの群で収容する。飼料,水,温度,および湿度は,1996年実験動物の管理と使用の指針(NRC)に基づく薬学試験施設標準作業手順書(SOP)にしたがって決定する。ラットは実験前の少なくとも7日間,施設に馴化される。この期間中,ラットは全体の健康について観察し,基礎血清学のために採血する。
各溶液(VEGFおよびsiNA)を表IIIに記載されている実験群に示された最終濃度に対する1倍溶液として調製した。
siNAのセンス鎖およびアンチセンス鎖を1.67mg/mL/鎖でH2O中で1分
間アニーリングした後,37℃で1時間インキュベートして,3.34mg/mLのデュープレックスsiNAを生成する。20μg/眼の処理のために,3.34mg/mLのデュープレックス6μLを眼に注入する(下記参照)。次に,用量反応アッセイのために,3.34mg/mLのデュープレックスsiNAを連続希釈することができる。
角膜移植のために,孔径0.45μmのニトロセルロースフィルター膜(Millipore Corporation)から調製した0.57mm径のニトロセルロースディスクを,氷上でカバーされたペトリ皿で,82mM TrisHCl(pH6.9)中の75μM VEGF 1μl中に30分間浸漬した。VEGFのベヒクル(83mM Tris−Cl pH6.9)のみで浸漬したフィルターディスクは,血管新生応答を誘導しない。
この実験において用いられたラット角膜モデルは,Kochら(上掲),およびPandeyら(上掲)から改変した。簡単には,0.5%ポビドンヨード溶液で角膜を洗浄した後,生理食塩水および2%リドカイン2滴を投与した。解剖顕微鏡(Leica MZ−6)下で,間質ポケットを作成し,予め浸漬したフィルターディスク(上記参照)を,その端が角膜輪部から1mmであるようにポケットに挿入した。
ディスク挿入直後,40〜50μmODの注射器(当実験室で構成)の先端を,VEGFを浸漬したフィルターディスクに直接隣接した角膜輪部の端から1mm離れた結膜組織内に挿入した。600ナノリットルの試験溶液(siNA,反転対照または滅菌水ベヒクル)を,シリンジポンプ(Kd Scientific)を用いて1.2μL/分の速度で施与した。次いで,注射器を取出し,70%エタノールで,次に滅菌水中で洗浄し,各注射の間には滅菌水に浸けた。試験溶液を注射した後,動物が全体の運動活動を回復するまで毛細血管瘤クリップを用いて瞼の閉鎖を維持した。処置後,37℃の加熱パッド上で動物を保温した。
ディスク移植の5日後に動物を安楽死させた後,0.4mg/kgアトロピンをim投与し,角膜をデジタル画像化した。コンピュータ制御形態計測機(Image Pro Plus,Media Cybernetics,v2.0)を用いて,血液充填角膜管から新血管表面積(NSA,ピクセルで表示)を死後計測した。フィルターディスクと輪部との間の最大新生血管形成領域の同一サイズの3つの部分から個々の平均NSAを3重の実験で測定した。これらの領域中の血液充填角膜管に対応するピクセル数を合計し,NSA指数を得た。次いで,群平均NSAを計算した。各処置群からのデータをVEGF/siNAベヒクル処理対照NSAに対して標準化し,最後にVEGF誘導性血管新生の阻害率として表した。
処置群平均の正規性を判定した後,VEGF−誘導性血管新生の群平均阻害率について分散の一元分析を行った。その後に,有意性について,アルファ=0.05でデュネット(Dunnett)(VEGF対照との比較)およびターキー・クレーマー(Tukey−Kramer)(すべての他の群平均の比較)を含む2つの事後検定を行った。統計学的分析はJMPv.3.1.6(SAS Institute)を用いて行った。
siNAコンストラクト(表I)を,A549細胞において,EGFR(HER1)RNA発現を低下させる効力について試験した。A549細胞を,トランスフェクションの時点で細胞が70−90%コンフルエントであるように,トランスフェクションの約24時間前に,96ウエルプレートに5,000−7,500細胞/ウエル,100μl/ウエルで播種した。トランスフェクションのためには,アニーリングしたsiNAを50μl/ウエルの容量でトランスフェクション試薬(リポフェクタミン2000,Invitrogen)と混合し,室温で20分間インキュベートした。siNAトランスフェクション混合物を細胞に加えて,150μlの容量中最終siNA濃度を25nMとした。各siNAトランスフェクション混合物を3回のsiNA処理用に3つのウエルに加えた。細胞をsiNAトランスフェクション混合物の連続的存在下で37℃で24時間インキュベートした。24時間において,処理した細胞の各ウエルからRNAを調製した。まずト
ランスフェクション混合物を有する上清を除去して廃棄し,次に細胞を溶解し,各ウエルからRNAを調製した。処理後の標的遺伝子の発現を,標的遺伝子および標準化用に対照遺伝子(36B4,RNAポリメラーゼサブユニット)についてRT−PCRにより評価した。3回の実験のデータを平均し,各処理について標準偏差を求めた。標準化したデータをグラフに表し,活性なsiNAによる標的mRNAの減少のパーセントをそれぞれの反転対照siNAと比較して判定した。
siNAコンストラクト(表I)を,例えばA549細胞において,PKC−アルファRNA発現を低下させる効力について試験する。トランスフェクションの時点で細胞が70−90%コンフルエントであるように,トランスフェクションの約24時間前に,96ウエルプレートに5,000−7,500細胞/ウエル,100μl/ウエルで細胞を播種する。トランスフェクションのためには,アニーリングしたsiNAを50μl/ウエルの容量でトランスフェクション試薬(リポフェクタミン2000,Invitrogen)と混合し,室温で20分間インキュベートする。siNAトランスフェクション混合物を細胞に加えて,150μlの容量中最終siNA濃度を25nMとする。各siNAトランスフェクション混合物を3回のsiNA処理用に3つのウエルに加える。細胞をsiNAトランスフェクション混合物の連続的存在下で37℃で24時間インキュベートする。24時間において,処理した細胞の各ウエルからRNAを調製する。まずトランスフェクション混合物を有する上清を除去して廃棄し,次に細胞を溶解し,各ウエルからRNAを調製する。処理後の標的遺伝子の発現を,標的遺伝子および標準化用に対照遺伝子(36B4,RNAポリメラーゼサブユニット)についてRT−PCRにより評価する。3回の実験のデータを平均し,各処理について標準偏差を求める。標準化したデータをグラフに表し,活性なsiNAによる標的mRNAの減少のパーセントをそれぞれの反転対照siNAと比較して判定する。
チセンス鎖が3’末端ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む,化学的に修飾されたsiNAコンストラクトをアッセイする。表IVに記載されるさらに別の安定化化学も同様に活性についてアッセイする。これらのsiNAコンストラクトを,適当なマッチした化学の反転対照と比較する。さらに,siNAコンストラクトはまた,未処理細胞,脂質およびスクランブル化siNAコンストラクトでトランスフェクトした細胞,および脂質のみでトランスフェクトした細胞(トランスフェクション対照)とも比較する。
siNAコンストラクト(表I)を,293T細胞において,Myc(c−Myc)RNA発現を低下させる効力について試験した。293T細胞を,トランスフェクションの時点で細胞が70−90%コンフルエントであるように,トランスフェクションの約24時間前に,96ウエルプレートに5,000−7,500細胞/ウエル,100μl/ウエルで播種した。トランスフェクションのためには,アニーリングしたsiNAを50μl/ウエルの容量でトランスフェクション試薬(リポフェクタミン2000,Invitrogen)と混合し,室温で20分間インキュベートした。siNAトランスフェクション混合物を細胞に加えて,150μlの容量中最終siNA濃度を25nMとした。各siNAトランスフェクション混合物を3回のsiNA処理用に3つのウエルに加えた。細胞をsiNAトランスフェクション混合物の連続的存在下で37℃で24時間インキュベートした。24時間において,処理した細胞の各ウエルからRNAを調製した。まずトランスフェクション混合物を有する上清を除去して廃棄し,次に細胞を溶解し,各ウエルからRNAを調製した。処理後の標的遺伝子の発現を,標的遺伝子および標準化用に対照遺伝子(36B4,RNAポリメラーゼサブユニット)についてRT−PCRにより評価した。3回の実験のデータを平均し,各処理について標準偏差を求めた。標準化したデータをグラフに表し,活性なsiNAによる標的mRNAの減少のパーセントをそれぞれの反転対照siNAと比較して判定した。
RNA発現を有意に低下させる。表IVに記載される追加の安定化化学も活性について同様にアッセイする。
siNAコンストラクト(表I)を,例えばA549細胞において,BCL2 RNA発現を低下させる効力について試験する。トランスフェクションの時点で細胞が70−90%コンフルエントであるように,トランスフェクションの約24時間前に,96ウエルプレートに5,000−7,500細胞/ウエル,100μl/ウエルで細胞を播種する。トランスフェクションのためには,アニーリングしたsiNAを50μl/ウエルの容量でトランスフェクション試薬(リポフェクタミン2000,Invitrogen)と混合し,室温で20分間インキュベートする。siNAトランスフェクション混合物を細胞に加えて,150μlの容量中最終siNA濃度を25nMとする。各siNAトランスフェクション混合物を3回のsiNA処理用に3つのウエルに加える。細胞をsiNAトランスフェクション混合物の連続的存在下で37℃で24時間インキュベートする。24時間において,処理した細胞の各ウエルからRNAを調製する。まずトランスフェクション混合物を有する上清を除去して廃棄し,次に細胞を溶解し,各ウエルからRNAを調製する。処理後の標的遺伝子の発現を,標的遺伝子および標準化用に対照遺伝子(36B4,RNAポリメラーゼサブユニット)についてRT−PCRにより評価する。3回の実験のデータを平均し,各処理について標準偏差を求める。標準化したデータをグラフに表
し,活性なsiNAによる標的mRNAの減少のパーセントをそれぞれの反転対照siNAと比較して判定する。
RNA発現を有意に低下させる。表IVに記載される追加の安定化化学も活性について同様にアッセイする。
siNAコンストラクト(表I)を,A549細胞において,CHK−1 RNA発現を低下させる効力について試験した。A549細胞を,トランスフェクションの時点で細胞が70−90%コンフルエントであるように,トランスフェクションの約24時間前に,96ウエルプレートに5,000−7,500細胞/ウエル,100μl/ウエルで播種した。トランスフェクションのためには,アニーリングしたsiNAを50μl/ウエルの容量でトランスフェクション試薬(リポフェクタミン2000,Invitrogen)と混合し,室温で20分間インキュベートした。siNAトランスフェクション混合物を細胞に加えて,150μlの容量中最終siNA濃度を25nMとした。各siNAトランスフェクション混合物を3回のsiNA処理用に3つのウエルに加えた。細胞をsiNAトランスフェクション混合物の連続的存在下で37℃で24時間インキュベートした。24時間において,処理した細胞の各ウエルからRNAを調製した。まずトランスフェクション混合物を有する上清を除去して廃棄し,次に細胞を溶解し,各ウエルからRNAを調製した。処理後の標的遺伝子の発現を,標的遺伝子および標準化用に対照遺伝子(36B4,RNAポリメラーゼサブユニット)についてRT−PCRにより評価した。3回の実験のデータを平均し,各処理について標準偏差を求めた。標準化したデータをグラフに表し,活性なsiNAによる標的mRNAの減少のパーセントをそれぞれの反転対照siNAと比較して判定した。
ストラクトはまた,未処理細胞,脂質でトランスフェクトした細胞およびスクランブル化siNAコンストラクト(Scram1およびScram2),および脂質のみでトランスフェクトした細胞(トランスフェクション対照)とも比較した。図に示されるように,いずれのsiNAコンストラクトも,適当な対照と比較して,CHK−1 RNA発現を有意に低下させる。表IVに記載される追加の安定化化学も活性について同様にアッセイする。
siNAコンストラクト(表I)を,例えばA549細胞において,BACE RNA発現を低下させる効力について試験する。トランスフェクションの時点で細胞が70−90%コンフルエントであるように,トランスフェクションの約24時間前に,96ウエルプレートに5,000−7,500細胞/ウエル,100μl/ウエルで細胞を播種する。トランスフェクションのためには,アニーリングしたsiNAを50μl/ウエルの容量でトランスフェクション試薬(リポフェクタミン2000,Invitrogen)と混合し,室温で20分間インキュベートする。siNAトランスフェクション混合物を細胞に加えて,150μlの容量中最終siNA濃度を25nMとする。各siNAトランスフェクション混合物を3回のsiNA処理用に3つのウエルに加える。細胞をsiNAトランスフェクション混合物の連続的存在下で37℃で24時間インキュベートする。24時間において,処理した細胞の各ウエルからRNAを調製する。まずトランスフェクション混合物を有する上清を除去して廃棄し,次に細胞を溶解し,各ウエルからRNAを調製する。処理後の標的遺伝子の発現を,標的遺伝子および標準化用に対照遺伝子(36B4,RNAポリメラーゼサブユニット)についてRT−PCRにより評価する。3回の実験のデータを平均し,各処理について標準偏差を求める。標準化したデータをグラフに表し,活性なsiNAによる標的mRNAの減少のパーセントをそれぞれの反転対照siNAと比較して判定する。
RNAの発現を有意に低下させる。そのようなスクリーニングから得られたリードを,次にさらにアッセイする。非限定的例においては,リボヌクレオチドおよび3’末端ジチミジンキャップを含むsiNAコンストラクト,ならびに,2’−デオキシ−2’−フルオロピリミジンヌクレオチドおよびプリンリボヌクレオチドを含み,siNAのセンス鎖が5’および3’末端反転デオキシ無塩基キャップでさらに修飾されており,アンチセンス鎖が3’末端ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む,化学的に修飾されたsiNAコンストラクトをアッセイする。表IVに記載されるさらに別の安定化化学も同様に活性についてアッセイする。これらのsiNAコンストラクトを,適当なマッチした化学の反転対照と比較する。さらに,siNAコンストラクトはまた,未処理細胞,脂質およびスクランブル化siNAコンストラクトでトランスフェクトした細胞,および脂質のみでトランスフェクトした細胞(トランスフェクション対照)とも比較する。
siNAコンストラクト(表I)を,A549細胞において,サイクリンD1 RNA発現を低下させる効力について試験した。A549細胞を,トランスフェクションの時点で細胞が70−90%コンフルエントであるように,トランスフェクションの約24時間前に,96ウエルプレートに5,000−7,500細胞/ウエル,100μl/ウエルで播種した。トランスフェクションのためには,アニーリングしたsiNAを50μl/ウエルの容量でトランスフェクション試薬(リポフェクタミン2000,Invitrogen)と混合し,室温で20分間インキュベートした。siNAトランスフェクション
混合物を細胞に加えて,150μlの容量中最終siNA濃度を25nMとした。各siNAトランスフェクション混合物を3回のsiNA処理用に3つのウエルに加えた。細胞をsiNAトランスフェクション混合物の連続的存在下で37℃で24時間インキュベートした。24時間において,処理した細胞の各ウエルからRNAを調製した。まずトランスフェクション混合物を有する上清を除去して廃棄し,次に細胞を溶解し,各ウエルからRNAを調製した。処理後の標的遺伝子の発現を,標的遺伝子および標準化用に対照遺伝子(36B4,RNAポリメラーゼサブユニット)についてRT−PCRにより評価した。3回の実験のデータを平均し,各処理について標準偏差を求めた。標準化したデータをグラフに表し,活性なsiNAによる標的mRNAの減少のパーセントをそれぞれの反転対照siNAと比較して判定した。
siNAコンストラクト(表I)を,A549細胞において,PTP−1B RNA発現を低下させる効力について試験した。A549細胞を,トランスフェクションの時点で細胞が70−90%コンフルエントであるように,トランスフェクションの約24時間前に,96ウエルプレートに5,000−7,500細胞/ウエル,100μl/ウエルで播種した。トランスフェクションのためには,アニーリングしたsiNAを50μl/ウエルの容量でトランスフェクション試薬(リポフェクタミン2000,Invitrogen)と混合し,室温で20分間インキュベートした。siNAトランスフェクション混合物を細胞に加えて,150μlの容量中最終siNA濃度を25nMとした。各siNAトランスフェクション混合物を3回のsiNA処理用に3つのウエルに加えた。細胞をsiNAトランスフェクション混合物の連続的存在下で37℃で24時間インキュベートした。24時間において,処理した細胞の各ウエルからRNAを調製した。まずトランスフェクション混合物を有する上清を除去して廃棄し,次に細胞を溶解し,各ウエルからRNAを調製した。処理後の標的遺伝子の発現を,標的遺伝子および標準化用に対照遺伝子(36B4,RNAポリメラーゼサブユニット)についてRT−PCRにより評価した。3回の実験のデータを平均し,各処理について標準偏差を求めた。標準化したデータをグラフに表し,活性なsiNAによる標的mRNAの減少のパーセントをそれぞれの反転対照siNAと比較して判定した。
イした。これはまた,マッチした化学の反転対照(RPI#31318/31319)とも比較した。さらに,siNAコンストラクトは,未処理細胞,脂質でトランスフェクトした細胞およびスクランブル化siNAコンストラクト(Scram1およびScram2),および脂質のみでトランスフェクトした細胞(トランスフェクション対照)とも比較した。図に示されるように,いずれのsiNAコンストラクトもPTP−1B RNA発現を有意に低下させる。表IVに記載される追加の安定化化学も活性について同様にアッセイする。
siNAコンストラクト(表I)を,例えばDLD1細胞において,ERG2 RNA発現を低下させる効力について試験する。トランスフェクションの時点で細胞が70−90%コンフルエントであるように,トランスフェクションの約24時間前に,96ウエルプレートに5,000−7,500細胞/ウエル,100μl/ウエルで細胞を播種する。トランスフェクションのためには,アニーリングしたsiNAを50μl/ウエルの容量でトランスフェクション試薬(リポフェクタミン2000,Invitrogen)と混合し,室温で20分間インキュベートする。siNAトランスフェクション混合物を細胞に加えて,150μlの容量中最終siNA濃度を25nMとする。各siNAトランスフェクション混合物を3回のsiNA処理用に3つのウエルに加える。細胞をsiNAトランスフェクション混合物の連続的存在下で37℃で24時間インキュベートする。24時間において,処理した細胞の各ウエルからRNAを調製する。まずトランスフェクション混合物を有する上清を除去して廃棄し,次に細胞を溶解し,各ウエルからRNAを調製する。処理後の標的遺伝子の発現を,標的遺伝子および標準化用に対照遺伝子(36B4,RNAポリメラーゼサブユニット)についてRT−PCRにより評価する。3回の実験のデータを平均し,各処理について標準偏差を求める。標準化したデータをグラフに表し,活性なsiNAによる標的mRNAの減少のパーセントをそれぞれの反転対照siNAと比較して判定する。
RNAの発現を有意に低下させる。そのようなスクリーニングから得られたリードを,次にさらにアッセイする。非限定的例においては,リボヌクレオチドおよび3’末端ジチミジンキャップを含むsiNAコンストラクト,ならびに,2’−デオキシ−2’−フルオロピリミジンヌクレオチドおよびプリンリボヌクレオチドを含み,siNAのセンス鎖が5’および3’末端反転デオキシ無塩基キャップでさらに修飾されており,アンチセンス鎖が3’末端ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む,化学的に修飾されたsiNAコンストラクトをアッセイする。表IVに記載されるさらに別の安定化化学も同様に活性についてアッセイする。これらのsiNAコンストラクトを,適当なマッチした化学の反転対照と比較する。さらに,siNAコンストラクトはまた,未処理細胞,脂質およびスクランブル化siNAコンストラクトでトランスフェクトした細胞,および脂質のみでトランスフェクトした細胞(トランスフェクション対照)とも比較する。表IVに記載される追加の安定化化学も活性について同様にアッセイする。
siNAコンストラクト(表I)を,A549細胞において,PCNA RNA発現を低下させる効力について試験した。A549細胞を,トランスフェクションの時点で細胞が70−90%コンフルエントであるように,トランスフェクションの約24時間前に,96ウエルプレートに5,000−7,500細胞/ウエル,100μl/ウエルで播種した。トランスフェクションのためには,アニーリングしたsiNAを50μl/ウエル
の容量でトランスフェクション試薬(リポフェクタミン2000,Invitrogen)と混合し,室温で20分間インキュベートした。siNAトランスフェクション混合物を細胞に加えて,150μlの容量中最終siNA濃度を25nMとした。各siNAトランスフェクション混合物を3回のsiNA処理用に3つのウエルに加えた。細胞をsiNAトランスフェクション混合物の連続的存在下で37℃で24時間インキュベートした。24時間において,処理した細胞の各ウエルからRNAを調製した。まずトランスフェクション混合物を有する上清を除去して廃棄し,次に細胞を溶解し,各ウエルからRNAを調製した。処理後の標的遺伝子の発現を,標的遺伝子および標準化用に対照遺伝子(36B4,RNAポリメラーゼサブユニット)についてRT−PCRにより評価した。3回の実験のデータを平均し,各処理について標準偏差を求めた。標準化したデータをグラフに表し,活性なsiNAによる標的mRNAの減少のパーセントをそれぞれの反転対照siNAと比較して判定した。
本発明のsiNA分子は,遺伝子発現を調節することにより種々の疾病および状態を治療するために用いることができる。本明細書に記載される方法を用いて,任意の数の標的遺伝子,例えば,限定されないが,癌,代謝性疾病,感染性疾病(例えば,ウイルス,細菌または真菌感染),神経学的疾病,筋骨格疾病,免疫系の疾病,シグナリング経路および細胞メッセンジャーに関連する疾病,およびトランスポートシステム,例えば分子ポンプおよびチャネルに関連する疾病に関連する遺伝子の発現を調節するよう,化学的に修飾されたsiNA分子を設計することができる。
受託番号AJ430458)が挙げられる。多くのウイルスゲノムの高い配列変動性のため,広範な治療用途のためのsiRNA分子の選択は,おそらくウイルスゲノムの保存領域を含むであろう。ウイルスゲノムの保存領域の非限定的例には,限定されないが,5’−非コーディング領域(NCR),3’−非コーディング領域(NCR)および/または内部リボソームエントリー部位(IRES)が挙げられる。種々のウイルスゲノムの保存領域に対して設計されたsiRNA分子は,種々の患者集団においてウイルス複製の有効な阻害を可能とし,ウイルスゲノムの非保存領域における変異のために進化するウイルス偽種に対するsiRNA分子の有効性を確実にするであろう。
本発明のsiNA分子は,種々の応用において,例えば,臨床,工業,環境,農業および/または研究の設定において,種々の診断用途,例えば分子標的(例えばRNA)の同定に用いることができる。そのようなsiNA分子の診断における使用は,再構成されたRNAi系,例えば,細胞溶解物または部分的に精製された細胞溶解物を利用することを含む。本発明のsiNA分子を診断手段として使用し,疾病に罹患した細胞内の遺伝的浮動および変異を検査するか,または細胞において内因性のまたは外来の(例えばウイルス)RNAの存在を検出することができる。siNA活性と標的RNAの構造との間の密接な関係により,分子のいずれの領域においても,標的RNAの塩基対形成および3次元構造を変更する変異を検出することができる。本発明に記載されるsiNA分子を複数使用することにより,インビトロならびに細胞および組織におけるRNAの構造および機能に重要なヌクレオチド変化をマッピングすることができる。siNA分子による標的RNAの切断を使用して,遺伝子の発現を阻害し,疾病または感染の進行における特定の遺伝子産物の役割を明らかにすることができる。このようにして,他の遺伝子標的を疾病の重要な介在物として明らかにすることができる。これらの実験は,組み合わせ療法の可能性を
提供することにより,疾病進行のよりよい治療につながるであろう(例えば,異なる遺伝子を標的とする多数のsiNA分子,既知の小分子阻害剤と組み合わせたsiNA分子,siNA分子および/または他の化学的または生物学的分子と組み合わせた間欠的治療)。本発明のsiNA分子の他のインビトロにおける使用は当該技術分野においてよく知られており,これには,疾病,感染または関連する健康状態に伴うmRNAの存在の検出が含まれる。そのようなRNAは,siNA分子で処理した後,標準的な方法論,例えば蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)を使用して切断産物の存在を判定することにより検出する。
る"との用語は,他の2つのいずれかと置き換えることができる。本明細書において用い
られる用語および表現は,説明の用語として用いるものであり,限定ではない。そのような用語および表現の使用においては,示されかつ記載されている特徴またはその一部の等価物を排除することを意図するものではなく,特許請求の範囲に記載される本発明の範囲中で種々の変更が可能であることが理解される。すなわち,好ましい態様および任意の特徴により本発明を特定的に開示してきたが,当業者には本明細書に記載される概念の変更および変種が可能であり,そのような変更および変種も特許請求の範囲に定義される本発明の範囲内であると考えられることが理解されるべきである。
Claims (83)
- センス鎖およびアンチセンス鎖から構成される化学的に合成された二本鎖核酸分子であって,
(a) 前記二本鎖核酸分子の各鎖は19−23ヌクレオチドの長さであり;
(b) センス鎖の少なくとも19ヌクレオチドはアンチセンス鎖に相補的であり;
(c) 前記二本鎖核酸分子のアンチセンス鎖は,19−23ヌクレオチドの配列ホモロジーを共有する1またはそれ以上のRNA転写産物の間の配列ホモロジーの領域に相補的な少なくとも19ヌクレオチドを有し;および
(d) 前記二本鎖核酸分子のセンス鎖は前記RNA転写産物と相同な配列を含む,
ことを特徴とする二本鎖核酸分子。 - 前記二本鎖核酸分子がリボヌクレオチドを含まない,請求項1記載の二本鎖核酸分子。
- 前記二本鎖核酸分子がリボヌクレオチドを含む,請求項1記載の二本鎖核酸分子。
- 2つの鎖がリンカー分子を介して連結している,請求項1記載の二本鎖核酸分子。
- 前記リンカー分子がポリヌクレオチドリンカーである,請求項4記載の二本鎖核酸分子。
- 前記リンカー分子が非ヌクレオチドリンカーである,請求項4記載の二本鎖核酸分子。
- センス鎖中のピリミジンヌクレオチドが2’−O−メチルピリミジンヌクレオチドである,請求項1記載の二本鎖核酸分子。
- センス鎖中のプリンヌクレオチドが2’−デオキシプリンヌクレオチドである,請求項1記載の二本鎖核酸分子。
- センス鎖中に存在するピリミジンヌクレオチドが2’−デオキシ−2’−フルオロピリミジンヌクレオチドである,請求項1記載の二本鎖核酸分子。
- センス鎖が,5’末端,3’末端,または5’末端および3’末端の両方に末端キャップ成分を有する,請求項1記載の二本鎖核酸分子。
- 前記末端キャップ成分が反転デオキシ無塩基成分である,請求項10記載の二本鎖核酸分子。
- 前記アンチセンス鎖のピリミジンヌクレオチドが2’−デオキシ−2’−フルオロピリミジンヌクレオチドである,請求項1記載の二本鎖核酸分子。
- 前記アンチセンス鎖のプリンヌクレオチドが2’−O−メチルプリンヌクレオチドである,請求項1記載の二本鎖核酸分子。
- 前記アンチセンス鎖中に存在するプリンヌクレオチドが2’−デオキシ−プリンヌクレオチドを含む,請求項1記載の二本鎖核酸分子。
- 前記RNA転写産物が外因性遺伝子によりコードされる,請求項1記載の二本鎖核酸分子。
- 前記外因性遺伝子がレセプターをコードする,請求項15記載の二本鎖核酸分子。
- 前記レセプターがVEGFR1およびVEGFR2である,請求項16記載の二本鎖核酸分子。
- 前記レセプターが上皮成長因子レセプターである,請求項16記載の二本鎖核酸分子。
- 前記RNA転写産物がウイルス遺伝子によりコードされる,請求項1記載の二本鎖核酸分子。
- 前記ウイルス遺伝子が複数の株のウイルスに由来する,請求項19記載の二本鎖核酸分子。
- 前記ウイルスがHIVである,請求項19記載の二本鎖核酸分子。
- 前記ウイルスが,HCV,HBV,RSV,およびインフルエンザからなる群より選択される,請求項19記載の二本鎖核酸分子。
- 二本鎖核酸分子の一方または両方の鎖の3’末端が1またはそれ以上のヌクレオチドオーバーハングを含む,請求項1記載の二本鎖核酸分子。
- 前記オーバーハングが1−4ヌクレオチドである,請求項23記載の二本鎖核酸分子。
- 前記オーバーハングが2ヌクレオチドである,請求項23記載の二本鎖核酸分子。
- 前記オーバーハングが修飾ヌクレオチドを含む,請求項23記載の二本鎖核酸分子。
- 前記修飾ヌクレオチドが,2’−デオキシ,2’−デオキシ−2’−フルオロ,2’−O−メチル,およびホスホロチオエート修飾ヌクレオチドからなる群より選択される,請求項26記載の二本鎖核酸分子。
- 請求項1記載の二本鎖核酸分子を薬学的に許容しうる担体または希釈剤中に含む組成物。
- RNA干渉(RNAi)により配列ホモロジーを共有する2以上のRNA転写産物の切断を指示する方法であって,前記RNA転写産物を,前記切断に適した条件下で請求項1−27のいずれかに記載の二本鎖核酸分子と接触させることを含む方法。
- 二本鎖核酸分子を製造する方法であって,
(a)約19−23ヌクレオチドの配列ホモロジーを有する1またはそれ以上の領域を有する2またはそれ以上のRNA転写産物を同定し;
(b)センス鎖およびアンチセンス鎖から構成される二本鎖核酸分子を合成し,ここで,前記二本鎖核酸分子の各鎖は19−23ヌクレオチドの長さであり;センス鎖の少なくとも19ヌクレオチドはアンチセンス鎖に相補的であり;前記二本鎖核酸分子のアンチセンス鎖の少なくとも19ヌクレオチドは,前記RNA転写産物間の配列ホモロジーの領域に対して相補的なヌクレオチド配列を有し;および前記二本鎖核酸分子のセンス鎖は前記RNA転写産物に相同な配列を含む,
ことを特徴とする方法。 - 前記二本鎖核酸分子がリボヌクレオチドを含まない,請求項30記載の方法。
- 前記二本鎖核酸分子がリボヌクレオチドを含む,請求項30記載の方法。
- 2つの鎖がリンカー分子を介して連結している,請求項30記載の方法。
- 前記リンカー分子がポリヌクレオチドリンカーである,請求項33記載の方法。
- 前記リンカー分子が非ヌクレオチドリンカーである,請求項33記載の方法。
- センス鎖中のピリミジンヌクレオチドが2’−O−メチルピリミジンヌクレオチドである,請求項30記載の方法。
- センス鎖中のプリンヌクレオチドが2’−デオキシプリンヌクレオチドである,請求項30記載の方法。
- センス鎖中に存在するピリミジンヌクレオチドが2’−デオキシ−2’−フルオロピリミジンヌクレオチドである,請求項30記載の方法。
- センス鎖が,5’末端,3’末端,または5’末端および3’末端の両方に末端キャップ成分を有する,請求項30記載の方法。
- 前記末端キャップ成分が反転デオキシ無塩基成分である,請求項39記載の方法。
- 前記アンチセンス鎖のピリミジンヌクレオチドが2’−デオキシ−2’−フルオロピリミジンヌクレオチドである,請求項30記載の方法。
- 前記アンチセンス鎖のプリンヌクレオチドが2’−O−メチルプリンヌクレオチドである,請求項30記載の方法。
- 前記アンチセンス鎖中に存在するプリンヌクレオチドが2’−デオキシ−プリンヌクレオチドを含む,請求項30記載の方法。
- 前記RNA転写産物が外因性遺伝子によりコードされる,請求項30記載の方法。
- 前記外因性遺伝子がレセプターをコードする,請求項44記載の方法。
- 前記レセプターがVEGFR1およびVEGFR2である,請求項45記載の方法。
- 前記レセプターが上皮成長因子レセプターである,請求項44記載の方法。
- 前記RNA転写産物がウイルス遺伝子によりコードされる,請求項30記載の方法。
- 前記ウイルス遺伝子が複数の株のウイルスに由来する,請求項48記載の方法。
- 前記ウイルスがHIVである,請求項49記載の方法。
- 前記ウイルスが,HCV,HBV,RSV,およびインフルエンザからなる群より選択される,請求項49記載の方法。
- 二本鎖核酸分子の一方または両方の鎖の3’末端が1またはそれ以上のヌクレオチドオーバーハングを含む,請求項30記載の方法。
- 前記オーバーハングが1−4ヌクレオチドである,請求項52記載の方法。
- 前記オーバーハングが2ヌクレオチドである,請求項52記載の方法。
- 前記オーバーハングが修飾ヌクレオチドである,請求項52記載の方法。
- 前記修飾ヌクレオチドが,2’−デオキシ,2’−デオキシ−2’−フルオロ,2’−O−メチル,およびホスホロチオエート修飾ヌクレオチドからなる群より選択される,請求項55記載の方法。
- センス鎖およびアンチセンス鎖から構成される二本鎖核酸分子を製造する方法であって,ここで,アンチセンス鎖は,2以上の標的RNA転写産物に相補的であり,該方法は,
(a)配列ホモロジーを有する1またはそれ以上の領域を有する2またはそれ以上のRNA転写産物を同定し;
(b)センス鎖およびアンチセンス鎖から構成される二本鎖核酸分子を合成し,ここで,前記二本鎖核酸分子の各鎖は19−23ヌクレオチドの長さであり;センス鎖の少なくとも19ヌクレオチドはアンチセンス鎖に相補的であり;前記二本鎖核酸分子のアンチセンス鎖中の少なくとも19ヌクレオチドは,前記RNA転写産物の間で配列ホモロジーを有する領域に相補的なヌクレオチド配列を有し;および前記二本鎖核酸分子のセンス鎖は,前記RNA転写産物に相同な配列を含む,
の各工程を含むことを特徴とする方法。 - 前記二本鎖核酸分子がリボヌクレオチドを含まない,請求項57記載の方法。
- 前記二本鎖核酸分子がリボヌクレオチドを含む,請求項57記載の方法。
- 2つの鎖がリンカー分子を介して連結している,請求項57記載の方法。
- 前記リンカー分子がポリヌクレオチドリンカーである,請求項60記載の方法。
- 前記リンカー分子が非ヌクレオチドリンカーである,請求項60記載の方法。
- センス鎖中のピリミジンヌクレオチドが2’−O−メチルピリミジンヌクレオチドである,請求項57記載の方法。
- センス鎖中のプリンヌクレオチドが2’−デオキシプリンヌクレオチドである,請求項57記載の方法。
- センス鎖中に存在するピリミジンヌクレオチドが2’−デオキシ−2’−フルオロピリミジンヌクレオチドである,請求項57記載の方法。
- センス鎖が5’末端,3’末端,または5’末端および3’末端の両方に末端キャップ成分を有する,請求項57記載の方法。
- 前記末端キャップ成分が反転デオキシ無塩基成分である,請求項66記載の方法。
- 前記アンチセンス鎖のピリミジンヌクレオチドが2’−デオキシ−2’−フルオロピリミジンヌクレオチドである,請求項57記載の方法。
- 前記アンチセンス鎖のプリンヌクレオチドが2’−O−メチルプリンヌクレオチドである
,請求項57記載の方法。 - 前記アンチセンス鎖中に存在するプリンヌクレオチドが2’−デオキシ−プリンヌクレオチドを含む,請求項57記載の方法。
- 前記RNA転写産物が外因性遺伝子によりコードされる,請求項57記載の方法。
- 前記外因性遺伝子がレセプターをコードする,請求項71記載の方法。
- 前記レセプターがVEGFR1およびVEGFR2である,請求項72記載の方法。
- 前記レセプターが上皮成長因子レセプターである,請求項72記載の方法。
- 前記RNA転写産物がウイルス遺伝子によりコードされる,請求項57記載の方法。
- 前記ウイルス遺伝子が,複数の株のウイルスに由来する,請求項75記載の方法。
- 前記ウイルスがHIVである,請求項76記載の方法。
- 前記ウイルスが,HCV,HBV,RSV,およびインフルエンザからなる群より選択される,請求項76記載の方法。
- 二本鎖核酸分子の一方または両方の鎖の3’末端が1またはそれ以上のヌクレオチドオーバーハングを含む,請求項57記載の方法。
- 前記オーバーハングが1−4ヌクレオチドである,請求項79記載の方法。
- 前記オーバーハングが2ヌクレオチドである,請求項79記載の方法。
- 前記オーバーハングが修飾ヌクレオチドを含む,請求項79記載の方法。
- 前記修飾ヌクレオチドが,2’−デオキシ,2’−デオキシ−2’−フルオロ,2’−O−メチル,およびホスホロチオエート修飾ヌクレオチドからなる群より選択される,請求項82記載の方法。
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US35858002P | 2002-02-20 | 2002-02-20 | |
US36312402P | 2002-03-11 | 2002-03-11 | |
US38678202P | 2002-06-06 | 2002-06-06 | |
US40678402P | 2002-08-29 | 2002-08-29 | |
US40837802P | 2002-09-05 | 2002-09-05 | |
US40929302P | 2002-09-09 | 2002-09-09 | |
US44012903P | 2003-01-15 | 2003-01-15 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006117199A Division JP2006271387A (ja) | 2002-02-20 | 2006-03-01 | 短干渉核酸(siNA)を用いる遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009060893A true JP2009060893A (ja) | 2009-03-26 |
JP2009060893A5 JP2009060893A5 (ja) | 2011-04-14 |
Family
ID=43446817
Family Applications (6)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2003569651A Pending JP2005524393A (ja) | 2002-02-20 | 2003-02-11 | 短干渉核酸(siNA)を用いるインターロイキン遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 |
JP2003573107A Withdrawn JP2005518803A (ja) | 2002-02-20 | 2003-02-20 | 短干渉核酸(siNA)を用いる遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 |
JP2003569811A Withdrawn JP2005517438A (ja) | 2002-02-20 | 2003-02-20 | 化学的に修飾した短干渉核酸(siNA)を用いる遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 |
JP2006117199A Withdrawn JP2006271387A (ja) | 2002-02-20 | 2006-03-01 | 短干渉核酸(siNA)を用いる遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 |
JP2008148596A Withdrawn JP2008289488A (ja) | 2002-02-20 | 2008-06-05 | 化学的に修飾した短干渉核酸(siNA)を用いる遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 |
JP2008201593A Pending JP2009060893A (ja) | 2002-02-20 | 2008-08-05 | 短干渉核酸(siNA)を用いる遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 |
Family Applications Before (5)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2003569651A Pending JP2005524393A (ja) | 2002-02-20 | 2003-02-11 | 短干渉核酸(siNA)を用いるインターロイキン遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 |
JP2003573107A Withdrawn JP2005518803A (ja) | 2002-02-20 | 2003-02-20 | 短干渉核酸(siNA)を用いる遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 |
JP2003569811A Withdrawn JP2005517438A (ja) | 2002-02-20 | 2003-02-20 | 化学的に修飾した短干渉核酸(siNA)を用いる遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 |
JP2006117199A Withdrawn JP2006271387A (ja) | 2002-02-20 | 2006-03-01 | 短干渉核酸(siNA)を用いる遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 |
JP2008148596A Withdrawn JP2008289488A (ja) | 2002-02-20 | 2008-06-05 | 化学的に修飾した短干渉核酸(siNA)を用いる遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20090023676A1 (ja) |
EP (18) | EP1432724A4 (ja) |
JP (6) | JP2005524393A (ja) |
AT (1) | ATE479774T1 (ja) |
AU (12) | AU2003207708A1 (ja) |
CA (3) | CA2476112A1 (ja) |
CY (2) | CY1117168T1 (ja) |
DK (4) | DK2287306T3 (ja) |
ES (3) | ES2394269T3 (ja) |
GB (2) | GB2397818B (ja) |
HK (1) | HK1065049A1 (ja) |
HU (1) | HUE036869T2 (ja) |
PT (2) | PT2287305E (ja) |
SI (2) | SI2902406T1 (ja) |
WO (9) | WO2003072704A2 (ja) |
Families Citing this family (236)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE19956568A1 (de) | 1999-01-30 | 2000-08-17 | Roland Kreutzer | Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens |
US7829693B2 (en) | 1999-11-24 | 2010-11-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene |
DE10100586C1 (de) | 2001-01-09 | 2002-04-11 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens |
US7491805B2 (en) | 2001-05-18 | 2009-02-17 | Sirna Therapeutics, Inc. | Conjugates and compositions for cellular delivery |
US7423142B2 (en) | 2001-01-09 | 2008-09-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes |
US8546143B2 (en) | 2001-01-09 | 2013-10-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene |
US7767802B2 (en) | 2001-01-09 | 2010-08-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes |
US9994853B2 (en) | 2001-05-18 | 2018-06-12 | Sirna Therapeutics, Inc. | Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference |
US20050171040A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-08-04 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of cholesteryl ester transfer protein (CEPT) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050261219A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-11-24 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
DE10163098B4 (de) | 2001-10-12 | 2005-06-02 | Alnylam Europe Ag | Verfahren zur Hemmung der Replikation von Viren |
US7745418B2 (en) | 2001-10-12 | 2010-06-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting viral replication |
DE10202419A1 (de) | 2002-01-22 | 2003-08-07 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines durch eine Chromosomen-Aberration entstandenen Zielgens |
US9181551B2 (en) | 2002-02-20 | 2015-11-10 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
US9657294B2 (en) | 2002-02-20 | 2017-05-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
GB0212302D0 (en) * | 2002-05-28 | 2002-07-10 | Isis Innovation | Method of selecting targets for gene silencing by RNA interference |
GB0212303D0 (en) * | 2002-05-28 | 2002-07-10 | Isis Innovation | Molecular targetting of IGF-1 receptor |
AU2003260370B2 (en) | 2002-08-05 | 2008-05-22 | Silence Therapeutics Gmbh | Further novel forms of interfering RNA molecules |
AU2003261449A1 (en) | 2002-08-07 | 2004-02-25 | Compositions for rna interference and methods of use thereof | |
US20050020521A1 (en) | 2002-09-25 | 2005-01-27 | University Of Massachusetts | In vivo gene silencing by chemically modified and stable siRNA |
US9827263B2 (en) | 2002-11-05 | 2017-11-28 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | 2′-methoxy substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations |
US9150605B2 (en) | 2002-11-05 | 2015-10-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation |
US7691998B2 (en) | 2002-11-14 | 2010-04-06 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting nucleoporin 62kDa (Nup62) |
US9839649B2 (en) | 2002-11-14 | 2017-12-12 | Thermo Fisher Scientific Inc. | Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality |
US9719092B2 (en) | 2002-11-14 | 2017-08-01 | Thermo Fisher Scientific Inc. | RNAi targeting CNTD2 |
WO2006006948A2 (en) | 2002-11-14 | 2006-01-19 | Dharmacon, Inc. | METHODS AND COMPOSITIONS FOR SELECTING siRNA OF IMPROVED FUNCTIONALITY |
US9228186B2 (en) | 2002-11-14 | 2016-01-05 | Thermo Fisher Scientific Inc. | Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality |
US9719094B2 (en) | 2002-11-14 | 2017-08-01 | Thermo Fisher Scientific Inc. | RNAi targeting SEC61G |
JP2006507841A (ja) | 2002-11-14 | 2006-03-09 | ダーマコン, インコーポレイテッド | 機能的siRNAおよび超機能的siRNA |
US8198427B1 (en) | 2002-11-14 | 2012-06-12 | Dharmacon, Inc. | SiRNA targeting catenin, beta-1 (CTNNB1) |
US9879266B2 (en) | 2002-11-14 | 2018-01-30 | Thermo Fisher Scientific Inc. | Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality |
US7635770B2 (en) | 2002-11-14 | 2009-12-22 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting protein kinase N-3 (PKN-3) |
US7655785B1 (en) | 2002-11-14 | 2010-02-02 | Rosetta Genomics Ltd. | Bioinformatically detectable group of novel regulatory oligonucleotides and uses thereof |
US7951935B2 (en) | 2002-11-14 | 2011-05-31 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting v-myc myelocytomatosis viral oncogene homolog (MYC) |
US9771586B2 (en) | 2002-11-14 | 2017-09-26 | Thermo Fisher Scientific Inc. | RNAi targeting ZNF205 |
US10011836B2 (en) | 2002-11-14 | 2018-07-03 | Thermo Fisher Scientific Inc. | Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality |
US7250496B2 (en) | 2002-11-14 | 2007-07-31 | Rosetta Genomics Ltd. | Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof |
US7612196B2 (en) | 2002-11-14 | 2009-11-03 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting cyclin-dependent kinase inhibitor 1B (p27, Kip1) (CDKN1B) |
US7619081B2 (en) | 2002-11-14 | 2009-11-17 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting coatomer protein complex, subunit beta 2 (COPB2) |
US7592442B2 (en) | 2002-11-14 | 2009-09-22 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting ribonucleotide reductase M2 polypeptide (RRM2 or RNR-R2) |
US8163896B1 (en) | 2002-11-14 | 2012-04-24 | Rosetta Genomics Ltd. | Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof |
US7977471B2 (en) | 2002-11-14 | 2011-07-12 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting TNFα |
US7217807B2 (en) | 2002-11-26 | 2007-05-15 | Rosetta Genomics Ltd | Bioinformatically detectable group of novel HIV regulatory genes and uses thereof |
EP1590430A4 (en) * | 2003-01-03 | 2009-08-05 | Gencia Corp | SiRNA-mediated post-transcriptional gene silencing of allopecia genes |
WO2004066989A1 (en) * | 2003-01-31 | 2004-08-12 | Novartis Ag | Down-regulation of target-gene with pei/single-stranded oligoribonucleotide comp lexes |
EP1605978B1 (en) | 2003-03-07 | 2010-09-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Therapeutic compositions |
DK2141234T3 (en) | 2003-03-21 | 2016-06-20 | Roche Innovation Ct Copenhagen As | Short interfering RNA (siRNA) analogues |
JP2006522158A (ja) * | 2003-04-03 | 2006-09-28 | アルナイラム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | iRNA複合体 |
US7595379B2 (en) | 2003-05-30 | 2009-09-29 | Agensys, Inc. | Antibodies and related molecules that bind to PSCA proteins |
DK1629088T3 (da) | 2003-05-30 | 2012-05-07 | Agensys Inc | Varianter af prostatastamcelleantigen (psca) og undersekvenser deraf |
US7541442B2 (en) | 2003-05-30 | 2009-06-02 | Agensys, Inc. | Antibodies and related molecules that bind to PSCA proteins |
US7888497B2 (en) | 2003-08-13 | 2011-02-15 | Rosetta Genomics Ltd. | Bioinformatically detectable group of novel regulatory oligonucleotides and uses thereof |
US7294704B2 (en) | 2003-08-15 | 2007-11-13 | Diadexus, Inc. | Pro108 antibody compositions and methods of use and use of Pro108 to assess cancer risk |
MXPA06002216A (es) | 2003-08-28 | 2006-04-27 | Novartis Ag | Interferencia de arn doble que tiene extremos romos y modificaciones 3'. |
CA2543013A1 (en) * | 2003-10-23 | 2005-05-19 | Sirna Therapeutics, Inc. | Rna interference mediated inhibition of nogo and nogo receptor gene expression using short interfering nucleic acid (sina) |
US7476729B2 (en) | 2003-10-24 | 2009-01-13 | Institut Curie | Dbait and uses thereof |
EP1526177A1 (en) | 2003-10-24 | 2005-04-27 | Institut Curie | Nucleic acids useful for triggering tumor cell lethality |
US20050191653A1 (en) * | 2003-11-03 | 2005-09-01 | Freier Susan M. | Modulation of SGLT2 expression |
US20070275918A1 (en) * | 2003-11-07 | 2007-11-29 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Induction of Cellular Senescence by Cdk4 Disruption for Tumor Suppression and Regression |
SE0303397D0 (sv) * | 2003-12-17 | 2003-12-17 | Index Pharmaceuticals Ab | Compounds and method for RNA interference |
EP1758998B1 (en) | 2004-01-30 | 2010-12-15 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Oligoribonucleotides and methods of use thereof for treatment of fibrotic conditions and other diseases |
US20070269889A1 (en) * | 2004-02-06 | 2007-11-22 | Dharmacon, Inc. | Stabilized siRNAs as transfection controls and silencing reagents |
US7858769B2 (en) | 2004-02-10 | 2010-12-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using multifunctional short interfering nucleic acid (multifunctional siNA) |
AU2005222902B2 (en) * | 2004-03-12 | 2010-06-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | iRNA agents targeting VEGF |
US20080199438A1 (en) * | 2004-03-16 | 2008-08-21 | Dnavec Research Inc. | Methods For Suppressing Tumor Proliferation |
WO2005090572A2 (en) * | 2004-03-24 | 2005-09-29 | Oncotherapy Science, Inc. | Compositions and methods for treating pancreatic cancer |
EP1757306A4 (en) * | 2004-04-09 | 2010-05-19 | Genecare Res Inst Co Ltd | AGENT INDUCING APOPTOSIS SPECIFIC TO CARCINOMA CELLS TARGETING A GENE INVOLVED IN STABILIZING CHROMOSOMES |
WO2005105157A2 (en) | 2004-04-23 | 2005-11-10 | The Trustees Of Columbia University In The City Ofnew York | INHIBITION OF HAIRLESS PROTEIN mRNA |
WO2005108572A1 (de) * | 2004-05-06 | 2005-11-17 | Medizinische Hochschule Hannover | Verbindungen und verfahren zur immunsuppression |
US7605250B2 (en) | 2004-05-12 | 2009-10-20 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting cAMP-specific phosphodiesterase 4D |
EP1784501B1 (en) | 2004-05-14 | 2015-11-18 | Rosetta Genomics Ltd | VIRAL AND VIRUS ASSOCIATED MicroRNAS AND USES THEREOF |
US7687616B1 (en) | 2004-05-14 | 2010-03-30 | Rosetta Genomics Ltd | Small molecules modulating activity of micro RNA oligonucleotides and micro RNA targets and uses thereof |
DE102004025881A1 (de) | 2004-05-19 | 2006-01-05 | Beiersdorf Ag | Oligoribonukleotide zur Beeinflussung des Haarwachstums |
US10508277B2 (en) | 2004-05-24 | 2019-12-17 | Sirna Therapeutics, Inc. | Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference |
US7795419B2 (en) | 2004-05-26 | 2010-09-14 | Rosetta Genomics Ltd. | Viral and viral associated miRNAs and uses thereof |
JP4468989B2 (ja) | 2004-08-16 | 2010-05-26 | クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド | Rtp801阻害剤の治療への使用 |
CN105251024A (zh) | 2004-08-23 | 2016-01-20 | 西伦蒂斯私人股份公司 | 眼病的治疗 |
RU2410430C2 (ru) | 2004-08-31 | 2011-01-27 | Силентис С.А.У. | Способы и композиции для ингибирования экспрессии рецептора p2х7 |
NZ553987A (en) | 2004-09-28 | 2011-01-28 | Quark Pharmaceuticals Inc | Oligoribonucleotides and methods of use thereof for treatment of alopecia, acute renal failure and other diseases |
US20090209619A1 (en) * | 2004-10-14 | 2009-08-20 | Zhiguo Wang | Depression of herg k+ channel function in mammallan cells and applications to the control of cancer cells division |
US20060253100A1 (en) | 2004-10-22 | 2006-11-09 | Medtronic, Inc. | Systems and Methods to Treat Pain Locally |
US7595159B2 (en) | 2004-11-03 | 2009-09-29 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Prediction of Parkinson's disease using gene expression levels of peripheral blood samples |
KR100780548B1 (ko) | 2004-12-08 | 2007-11-29 | 한국원자력연구원 | S-아데노실 메티오닌 디카르복실라제 mRNA에특이적인 작은 간섭 RNA 및 그를 유효성분으로포함하는 악성종양 치료제 |
AU2005313883B2 (en) * | 2004-12-09 | 2011-03-31 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inducing an immune response in a mammal and methods of avoiding an immune response to oligonucleotide agents such as short interfering RNAs |
AU2011203218B2 (en) * | 2004-12-09 | 2013-02-07 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inducing an immune response in a mammal and methods of avoiding an immune response to oligonucleotide agents such as short interfering RNAs |
CA2592099A1 (en) * | 2004-12-22 | 2006-06-29 | Nucleonics, Inc. | Conserved hbv and hcv sequences useful for gene silencing |
CA2593032C (en) | 2004-12-27 | 2015-12-22 | Silence Therapeutics Ag | Coated lipid complexes and their use |
DE602006009234D1 (de) * | 2005-03-02 | 2009-10-29 | Nat Inst Immunology | Hemmung der expression von spag9 mit sirnas |
GB0505081D0 (en) | 2005-03-14 | 2005-04-20 | Genomica Sau | Downregulation of interleukin-12 expression by means of rnai technology |
JP4982757B2 (ja) | 2005-04-15 | 2012-07-25 | 国立大学法人鳥取大学 | hTERT発現調節遺伝子 |
KR20060119412A (ko) * | 2005-05-20 | 2006-11-24 | 아주대학교산학협력단 | IL-6 발현 억제를 위한 siRNA 및 이를 함유하는조성물 |
WO2007010853A1 (ja) * | 2005-07-15 | 2007-01-25 | National University Corporation Nagoya University | エレクトロポレーション装置の制御方法 |
US7919583B2 (en) | 2005-08-08 | 2011-04-05 | Discovery Genomics, Inc. | Integration-site directed vector systems |
MX2008002369A (es) * | 2005-08-17 | 2008-03-18 | Sirna Therapeutics Inc | Moleculas cortas de acidos nucleicos de interferencia quimicamente modificadas que actuan de mediadoras de la interferencia del acido ribonucleico. |
GB0521351D0 (en) | 2005-10-20 | 2005-11-30 | Genomica Sau | Modulation of TRPV expression levels |
GB0521716D0 (en) | 2005-10-25 | 2005-11-30 | Genomica Sau | Modulation of 11beta-hydroxysteriod dehydrogenase 1 expression for the treatment of ocular diseases |
WO2007053803A2 (en) * | 2005-10-31 | 2007-05-10 | Centocor, Inc. | Antagonist of teb4 and methods of use |
EP1948674A4 (en) | 2005-11-02 | 2009-02-04 | Protiva Biotherapeutics Inc | MODIFIED SIRNA MOLECULES AND APPLICATIONS THEREOF |
US20070275922A1 (en) * | 2005-12-29 | 2007-11-29 | Alcon Manufacturing, Ltd. | RNAi-MEDIATED INHIBITION OF IGF1R FOR TREATMENT OF OCULAR ANGIOGENESIS |
NL2000439C2 (nl) | 2006-01-20 | 2009-03-16 | Quark Biotech | Therapeutische toepassingen van inhibitoren van RTP801. |
US7825099B2 (en) | 2006-01-20 | 2010-11-02 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Treatment or prevention of oto-pathologies by inhibition of pro-apoptotic genes |
US7910566B2 (en) | 2006-03-09 | 2011-03-22 | Quark Pharmaceuticals Inc. | Prevention and treatment of acute renal failure and other kidney diseases by inhibition of p53 by siRNA |
GB0605337D0 (en) | 2006-03-17 | 2006-04-26 | Genomica Sau | Treatment of CNS conditions |
US8329888B2 (en) | 2006-03-23 | 2012-12-11 | Santaris Pharma A/S | Small internally segmented interfering RNA |
DK2666859T3 (en) * | 2006-04-03 | 2019-04-08 | Roche Innovation Ct Copenhagen As | PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING ANTI-miRNA ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDES |
GB0608838D0 (en) | 2006-05-04 | 2006-06-14 | Novartis Ag | Organic compounds |
US8927704B2 (en) | 2006-06-08 | 2015-01-06 | Amino Up Chemical Co., Ltd | Sense oligonucleotide capable of controlling the expression of iNOS and composition comprising the same |
NZ574033A (en) | 2006-06-08 | 2013-03-28 | Amino Up Chemical Co Ltd | Method for controlling the amount of gene product, and agent for controlling the amount of gene product |
US7915399B2 (en) | 2006-06-09 | 2011-03-29 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Modified siRNA molecules and uses thereof |
EP2026843A4 (en) | 2006-06-09 | 2011-06-22 | Quark Pharmaceuticals Inc | THERAPEUTIC USES OF RTP801L INHIBITORS |
JP2010501172A (ja) | 2006-08-25 | 2010-01-21 | オンコセラピー・サイエンス株式会社 | 肺癌に対する予後マーカーおよび治療標的 |
US20100034736A1 (en) * | 2006-09-07 | 2010-02-11 | Consejo Superior De Investigaciones Cientificas | Identification of cancer stem cells using genetic markers |
JP5876637B2 (ja) * | 2006-10-18 | 2016-03-02 | マリーナ バイオテック,インコーポレイテッド | ニックまたはギャップの入った核酸分子およびそれらの使用 |
JP2010507387A (ja) | 2006-10-25 | 2010-03-11 | クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド | 新規のsiRNAおよびその使用方法 |
US20100009920A1 (en) | 2006-12-13 | 2010-01-14 | Yusuke Nakamura | Ttk as tumor marker and therapeutic target for lung cancer |
DE102007001370A1 (de) | 2007-01-09 | 2008-07-10 | Curevac Gmbh | RNA-kodierte Antikörper |
JP2010518880A (ja) | 2007-02-26 | 2010-06-03 | クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド | Rtp801のインヒビター及びその疾患の治療における使用 |
WO2008109359A1 (en) * | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Mdrna, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting pdgfr family gene expression and uses thereof |
WO2008109492A1 (en) * | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Mdrna, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting igf1r gene expression and uses thereof |
WO2008109378A2 (en) * | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Mdrna, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting pdgfr gene expression and uses thereof |
WO2008109454A2 (en) * | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Mdrna, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting fos gene expression and uses thereof |
US7812002B2 (en) | 2007-03-21 | 2010-10-12 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Oligoribonucleotide inhibitors of NRF2 and methods of use thereof for treatment of cancer |
EP2136788B1 (en) | 2007-03-30 | 2011-10-26 | Bind Biosciences, Inc. | Cancer cell targeting using nanoparticles |
US11078262B2 (en) | 2007-04-30 | 2021-08-03 | Allergan, Inc. | High viscosity macromolecular compositions for treating ocular conditions |
JP5296328B2 (ja) | 2007-05-09 | 2013-09-25 | 独立行政法人理化学研究所 | 1本鎖環状rnaおよびその製造方法 |
DK2170403T3 (da) | 2007-06-27 | 2014-06-16 | Quark Pharmaceuticals Inc | Sammensætninger og fremgangsmåder til hæmning af ekspressionen af proapoptotiske gener |
US8435510B2 (en) | 2007-08-08 | 2013-05-07 | Sutter West Bay Hospitals | Platelet derived growth factor receptor supports cytomegalovirus infectivity |
WO2009025763A2 (en) | 2007-08-16 | 2009-02-26 | Schepens Eye Research Institute | Therapeutic compositions for treatment of inflammation of ocular and adnexal tissues |
BRPI0815757A2 (pt) | 2007-08-24 | 2015-02-18 | Oncotherapy Science Inc | Os genes pkib e naalad2 como alvos do tratamento e do diagnóstico do câncer de próstata |
KR20100075858A (ko) | 2007-08-24 | 2010-07-05 | 온코세라피 사이언스 가부시키가이샤 | 암 관련 유전자,cdca5,epha7,stk31 및 wdhd1 |
EP2548962B1 (en) | 2007-09-19 | 2016-01-13 | Applied Biosystems, LLC | Sirna sequence-independent modification formats for reducing off-target phenotypic effects in rnai, and stabilized forms thereof |
JP5646997B2 (ja) * | 2007-10-03 | 2014-12-24 | クォーク ファーマシューティカルズ インコーポレーティッドQuark Pharmaceuticals,Inc. | 新規siRNA構造 |
WO2009074076A1 (fr) * | 2007-11-29 | 2009-06-18 | Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd | Molécule complexe interférant avec l'expression de gènes cibles, et ses méthodes de préparation |
WO2009082817A1 (en) | 2007-12-27 | 2009-07-09 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Silencing of polo-like kinase expression using interfering rna |
US9309313B2 (en) | 2008-01-09 | 2016-04-12 | The Schepens Eye Research Institute, Inc. | Therapeutic compositions for treatment of ocular inflammatory disorders |
EP2245459A1 (en) | 2008-01-23 | 2010-11-03 | Herlev Hospital | Ykl-40 as a general marker for non-specific disease |
US9040492B2 (en) * | 2008-03-31 | 2015-05-26 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | Double-stranded lipid-modified RNA having high RNA interference effect |
AU2009238175C1 (en) | 2008-04-15 | 2023-11-30 | Arbutus Biopharma Corporation | Novel lipid formulations for nucleic acid delivery |
EP2770057A1 (en) | 2008-04-15 | 2014-08-27 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Silencing of CSN5 gene expression using interfering RNA |
WO2009144704A2 (en) | 2008-04-15 | 2009-12-03 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | siRNA COMPOUNDS FOR INHIBITING NRF2 |
USRE48948E1 (en) | 2008-04-18 | 2022-03-01 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Clonidine compounds in a biodegradable polymer |
WO2009131733A1 (en) * | 2008-04-21 | 2009-10-29 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Gab2 amplification in melanoma |
WO2009147684A2 (en) | 2008-06-06 | 2009-12-10 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treatment of ear disorders |
WO2010008562A2 (en) | 2008-07-16 | 2010-01-21 | Recombinetics | Methods and materials for producing transgenic animals |
EP2329044B1 (en) | 2008-08-27 | 2016-05-18 | Oncotherapy Science, Inc. | Prmt1 for target genes of cancer therapy and diagnosis |
NZ592241A (en) | 2008-09-15 | 2012-11-30 | Herlev Hospital | Ykl-40 as a marker for gastrointestinal cancers |
JP2011251912A (ja) * | 2008-09-22 | 2011-12-15 | Gifu Prefecture Kenkyu Kaihatsu Zaidan | マイクロrna―143誘導体を含有する医薬 |
US20100239632A1 (en) | 2009-03-23 | 2010-09-23 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Drug depots for treatment of pain and inflammation in sinus and nasal cavities or cardiac tissue |
WO2011019423A2 (en) | 2009-05-20 | 2011-02-17 | Schering Corporation | Modulation of pilr receptors to treat microbial infections |
KR101702689B1 (ko) | 2009-06-16 | 2017-02-06 | 큐알엔에이, 인크. | Pon1에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 파라옥소나제 1(pon1) 관련된 질환의 치료 |
CA2767127A1 (en) | 2009-07-01 | 2011-01-06 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Novel lipid formulations for delivery of therapeutic agents to solid tumors |
US8716464B2 (en) | 2009-07-20 | 2014-05-06 | Thomas W. Geisbert | Compositions and methods for silencing Ebola virus gene expression |
WO2011031600A1 (en) | 2009-09-10 | 2011-03-17 | Schering Corporation | Use of il-33 antagonists to treat fibrotic disease |
WO2011038160A2 (en) | 2009-09-23 | 2011-03-31 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for silencing genes expressed in cancer |
CA2776568A1 (en) | 2009-11-26 | 2011-06-03 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Sirna compounds comprising terminal substitutions |
WO2011084357A1 (en) | 2009-12-17 | 2011-07-14 | Schering Corporation | Modulation of pilr to treat immune disorders |
WO2011084193A1 (en) | 2010-01-07 | 2011-07-14 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide compounds comprising non-nucleotide overhangs |
CN101787366B (zh) * | 2010-03-04 | 2012-09-19 | 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 | 一种特异抑制Rab27B基因表达的DNA片段及其应用 |
JP2013539456A (ja) | 2010-07-28 | 2013-10-24 | アルコン リサーチ,リミテッド | VEGFAをターゲティングするsiRNA及びinvivo治療のための方法 |
WO2012024170A2 (en) | 2010-08-17 | 2012-02-23 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF HEPATITIS B VIRUS (HBV) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
EP3372684B1 (en) | 2010-08-24 | 2020-10-07 | Sirna Therapeutics, Inc. | Single-stranded rnai agents containing an internal, non-nucleic acid spacer |
WO2012028703A1 (en) * | 2010-09-02 | 2012-03-08 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Method for the prognosis of the progression of cancer |
EP2433644A1 (en) | 2010-09-22 | 2012-03-28 | IMBA-Institut für Molekulare Biotechnologie GmbH | Breast cancer therapeutics |
WO2012058210A1 (en) | 2010-10-29 | 2012-05-03 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACIDS (siNA) |
EP2638912A4 (en) | 2010-11-12 | 2015-01-21 | Nat Univ Corp Ehime Univ | COMPOSITIONS WITH AN ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE AGAINST MICRO RNA |
JP2014510265A (ja) | 2011-02-02 | 2014-04-24 | アムジェン インコーポレイテッド | Igf−1rの阻害に関する方法および組成物 |
KR20140066671A (ko) * | 2011-06-27 | 2014-06-02 | 메디뮨 엘엘씨 | 자가면역 질환에서 사용되는 마이크로rna-31 조성물 및 방법 |
SG194751A1 (en) | 2011-06-30 | 2013-12-30 | Arrowhead Res Corp | Compositions and methods for inhibiting gene expression of hepatitis b virus |
US10865383B2 (en) | 2011-07-12 | 2020-12-15 | Lineage Cell Therapeutics, Inc. | Methods and formulations for orthopedic cell therapy |
WO2013014073A1 (en) | 2011-07-22 | 2013-01-31 | Universite De Strasbourg | Phospholipid-detergent conjugates and uses thereof |
US9567585B2 (en) * | 2011-11-10 | 2017-02-14 | Shire Human Genetic Therapies, Inc. | Antisense oligonucleotide modulators of serotonin receptor 2C and uses thereof |
EP2776042B1 (en) | 2011-11-11 | 2019-03-20 | Duke University | Combination drug therapy for the treatment of solid tumors |
WO2013074974A2 (en) * | 2011-11-18 | 2013-05-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Modified rnai agents |
US9352042B2 (en) | 2012-02-24 | 2016-05-31 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Trialkyl cationic lipids and methods of use thereof |
WO2013134766A2 (en) * | 2012-03-09 | 2013-09-12 | The Johns Hopkins University | Identification of molecular pathways and methods of use thereof for treating retinal neurodegeneration and other neurodegenerative disorders |
TWI480043B (zh) * | 2012-05-01 | 2015-04-11 | Univ Kaohsiung Medical | 用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物 |
US20150299696A1 (en) | 2012-05-02 | 2015-10-22 | Sirna Therapeutics, Inc. | SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) COMPOSITIONS |
US9434951B2 (en) * | 2012-05-22 | 2016-09-06 | University Of Massachusetts | Compositions and methods for decreasing leukocyte extravasation and vessel fluid leakage |
WO2013192233A1 (en) * | 2012-06-18 | 2013-12-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and method for improved cellular uptake of antisense compounds |
US8980259B2 (en) | 2012-07-20 | 2015-03-17 | Novartis Ag | Combination therapy |
WO2014018375A1 (en) | 2012-07-23 | 2014-01-30 | Xenon Pharmaceuticals Inc. | Cyp8b1 and uses thereof in therapeutic and diagnostic methods |
EP2700949A1 (en) | 2012-08-24 | 2014-02-26 | IMG Institut für medizinische Genomforschung Planungsgesellschaft M.B.H. | Use of biliverdin reductase proteins as cancer marker |
GB201215857D0 (en) | 2012-09-05 | 2012-10-24 | Sylentis Sau | siRNA and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions |
BR112015004452A2 (pt) | 2012-09-05 | 2017-08-08 | Sylentis Sau | sirna e seu uso em métodos e composições para o tratamento e/ou prevenção de condições oculares |
US9540640B2 (en) | 2012-09-06 | 2017-01-10 | Health Research, Inc. | Compositions and methods for inhibiting hypdxia induced damage |
ES2935257T3 (es) * | 2013-03-15 | 2023-03-03 | Univ Chicago | Métodos y composiciones relacionadas con la actividad de las células T |
KR20230074604A (ko) | 2013-04-20 | 2023-05-30 | 더 리서치 인스티튜트 앳 네이션와이드 칠드런스 하스피탈 | 엑손 2-표적 U7snRNA 폴리뉴클레오티드 작제물의 재조합형 아데노 부속 바이러스 전달 |
US10961531B2 (en) * | 2013-06-05 | 2021-03-30 | Agex Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for induced tissue regeneration in mammalian species |
WO2015082080A1 (en) | 2013-12-05 | 2015-06-11 | Silence Therapeutics Gmbh | Means for lung specific delivery |
US11078462B2 (en) | 2014-02-18 | 2021-08-03 | ReCyte Therapeutics, Inc. | Perivascular stromal cells from primate pluripotent stem cells |
US10011837B2 (en) | 2014-03-04 | 2018-07-03 | Sylentis Sau | SiRNAs and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions |
SG11201608936UA (en) | 2014-05-19 | 2016-12-29 | Pfizer | Substituted-6,8-dioxabicyclo[3.2.1]octane-2,3-diol compounds as targeting agents of asgpr |
US10240127B2 (en) | 2014-07-03 | 2019-03-26 | ReCyte Therapeutics, Inc. | Exosomes from clonal progenitor cells |
US9790509B2 (en) | 2014-07-18 | 2017-10-17 | Oregon Health & Science University | 5′-triphosphate oligoribonucleotides |
CA2957661A1 (en) | 2014-08-09 | 2016-02-18 | Kevin FLANIGAN | Methods and materials for activating an internal ribosome entry site in exon 5 of the dmd gene |
JOP20200092A1 (ar) | 2014-11-10 | 2017-06-16 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | تركيبات iRNA لفيروس الكبد B (HBV) وطرق لاستخدامها |
CA2965696A1 (en) | 2014-11-12 | 2016-05-19 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Treatment of hormonal disorders of growth |
RU2563989C1 (ru) * | 2014-11-20 | 2015-09-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научный центр "Институт иммунологии" Федерального медико-биологического агентства России (ФГБУ "ГНЦ Институт иммунологии" ФМБА России) | Композиция для подавления экспрессии гена цитокина интерлейкина-4 |
AU2016306275A1 (en) | 2015-08-07 | 2018-02-08 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | RNAi therapy for Hepatitis B virus infection |
WO2017129763A1 (en) | 2016-01-28 | 2017-08-03 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of signet ring cell gastric cancer |
MA45328A (fr) | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Avidity Biosciences Llc | Compositions acide nucléique-polypeptide et utilisations de celles-ci |
MA45469A (fr) | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Avidity Biosciences Llc | Acides nucléiques de bêta-caténine et leurs utilisations |
MA45470A (fr) | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Avidity Biosciences Llc | Acides nucléiques kras et leurs utilisations |
MA45349A (fr) | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Avidity Biosciences Llc | Acides nucléiques egfr et leurs utilisations |
US20190242875A1 (en) * | 2016-05-10 | 2019-08-08 | National University Corporation Tokyo Medical And Dental University | Expression Inhibitor of Inflammation Promoting Factor, Screening Method for Active Ingredient Thereof, Expression Cassette Useful for Said Method, Diagnostic Agent and Diagnosis Method |
US10036024B2 (en) | 2016-06-03 | 2018-07-31 | Purdue Research Foundation | siRNA compositions that specifically downregulate expression of a variant of the PNPLA3 gene and methods of use thereof for treating a chronic liver disease or alcoholic liver disease (ALD) |
EP3269732A1 (en) * | 2016-07-11 | 2018-01-17 | Rhemastem SRLS | Therapeutic medium for the treatment of cancer |
JOP20170161A1 (ar) | 2016-08-04 | 2019-01-30 | Arrowhead Pharmaceuticals Inc | عوامل RNAi للعدوى بفيروس التهاب الكبد ب |
EP3315125A1 (en) | 2016-10-31 | 2018-05-02 | Silence Therapeutics (London) Ltd | Lipid nanoparticle formulation |
CA3043768A1 (en) | 2016-11-29 | 2018-06-07 | PureTech Health LLC | Exosomes for delivery of therapeutic agents |
EP3551641A4 (en) | 2016-12-08 | 2021-01-13 | University of Utah Research Foundation | STAUFEN1 ACTIVE SUBSTANCES AND RELATED PROCEDURES |
MX2019008199A (es) | 2017-01-06 | 2019-11-25 | Avidity Biosciences Llc | Composiciones de acido nucleico polipeptido y metodos de induccion de la omision de exon. |
BR112019014282A2 (pt) | 2017-01-10 | 2020-03-03 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | Agentes de rnai de antitripsina (aat) alfa-1, composições incluindo agentes de rnai de aat, e métodos de uso |
US11324820B2 (en) | 2017-04-18 | 2022-05-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods for the treatment of subjects having a hepatitis b virus (HBV) infection |
CN110650727A (zh) * | 2017-04-19 | 2020-01-03 | 拜奥-帕斯控股股份有限公司 | 用于igf-1r抑制的p-乙氧基核酸 |
AU2018254485A1 (en) * | 2017-04-19 | 2019-10-31 | Bio-Path Holdings, Inc. | P-ethoxy nucleic acids for IGF-1R inhibition |
US20200199541A1 (en) | 2017-06-16 | 2020-06-25 | Imba - Institut Für Molekulare Biotechnologie Gmbh | Blood vessel organoid, methods of producing and using said organoids |
GB201711809D0 (en) | 2017-07-21 | 2017-09-06 | Governors Of The Univ Of Alberta | Antisense oligonucleotide |
CN111315882A (zh) * | 2017-11-09 | 2020-06-19 | 国立大学法人东京医科齿科大学 | 癌症促进因子表达抑制剂、其有效成分的筛选方法、对该方法有用的表达盒、诊断药和诊断方法 |
MX2020005860A (es) | 2017-12-06 | 2020-09-09 | Avidity Biosciences Inc | Composiciones y metodos de tratamiento de atrofia muscular y distrofia miotonica. |
WO2019168897A2 (en) * | 2018-02-28 | 2019-09-06 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Methods for treating cancer using combinations of anti-btnl2 and immune checkpoint blockade agents |
US11946046B2 (en) | 2018-06-14 | 2024-04-02 | University Of Utah Research Foundation | Staufen1 regulating agents and associated methods |
CN108977445B (zh) * | 2018-06-29 | 2021-05-25 | 山东农业大学 | 拟南芥microRNA400在调控植物耐镉性中的应用 |
WO2020011743A1 (en) | 2018-07-09 | 2020-01-16 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense oligonucleotides targeting mafb |
WO2020011653A1 (en) | 2018-07-09 | 2020-01-16 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense oligonucleotides targeting kynu |
US10857174B2 (en) | 2018-07-27 | 2020-12-08 | United States Government As Represented By The Department Of Veterans Affairs | Morpholino oligonucleotides useful in cancer treatment |
US20210292768A1 (en) * | 2018-08-08 | 2021-09-23 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Compositions and agents against nonalcoholic steatohepatitis |
JP2021533767A (ja) | 2018-08-13 | 2021-12-09 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. | B型肝炎ウイルス(HBV)dsRNA物質組成物およびその使用方法 |
KR102097794B1 (ko) * | 2018-09-17 | 2020-04-06 | 차의과학대학교 산학협력단 | 신규한 miRNA smR-167 및 폐암 예방 또는 치료를 위한 이의 용도 |
IL297818A (en) | 2018-12-21 | 2023-01-01 | Avidity Biosciences Inc | Anti-transferrin receptor antibodies and uses thereof |
WO2020225779A1 (en) | 2019-05-09 | 2020-11-12 | Istituto Pasteur Italia - Fondazione Cenci Bolognetti | Rig-i agonists for cancer treatment and immunotherapy |
JP2023537798A (ja) | 2020-03-19 | 2023-09-06 | アビディティー バイオサイエンシーズ,インク. | 顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーを処置するための組成物および方法 |
WO2021195469A1 (en) | 2020-03-27 | 2021-09-30 | Avidity Biosciences, Inc. | Compositions and methods of treating muscle dystrophy |
AU2022345098A1 (en) | 2021-09-16 | 2024-04-04 | Avidity Biosciences, Inc. | Compositions and methods of treating facioscapulohumeral muscular dystrophy |
WO2023144798A1 (en) | 2022-01-31 | 2023-08-03 | Genevant Sciences Gmbh | Ionizable cationic lipids for lipid nanoparticles |
WO2023144792A1 (en) | 2022-01-31 | 2023-08-03 | Genevant Sciences Gmbh | Poly(alkyloxazoline)-lipid conjugates and lipid particles containing same |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999013886A1 (en) * | 1997-09-17 | 1999-03-25 | East Carolina University | Multiple target hybridizing nucleic acids, their preparation, compositions, formulation, kits and applications |
US5998203A (en) * | 1996-04-16 | 1999-12-07 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Enzymatic nucleic acids containing 5'-and/or 3'-cap structures |
WO2001075164A2 (en) * | 2000-03-30 | 2001-10-11 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Rna sequence-specific mediators of rna interference |
Family Cites Families (121)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
PT88550A (pt) | 1987-09-21 | 1989-07-31 | Ml Tecnology Ventures Lp | Processo para a preparacao de reagentes de ligacao nao nucleotidicos para sondas nucleotidicas |
WO1990014090A1 (en) * | 1989-05-19 | 1990-11-29 | Hem Research, Inc. | SHORT THERAPEUTIC dsRNA OF DEFINED STRUCTURE |
JP3058686B2 (ja) | 1989-08-31 | 2000-07-04 | シティ・オブ・ホープ | キメラdna―rna触媒活性配列 |
US5962219A (en) | 1990-06-11 | 1999-10-05 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: chemi-selex |
DE552178T1 (de) | 1990-10-12 | 1994-02-03 | Max Planck Gesellschaft | Abgeänderte ribozyme. |
DE4216134A1 (de) | 1991-06-20 | 1992-12-24 | Europ Lab Molekularbiolog | Synthetische katalytische oligonukleotidstrukturen |
ATE515510T1 (de) * | 1991-12-24 | 2011-07-15 | Isis Pharmaceuticals Inc | Durch dna-abschnitte unterbrochene modifizierte oligonukleotide |
US5652094A (en) | 1992-01-31 | 1997-07-29 | University Of Montreal | Nucleozymes |
WO1993023569A1 (en) | 1992-05-11 | 1993-11-25 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Method and reagent for inhibiting viral replication |
US6469158B1 (en) | 1992-05-14 | 2002-10-22 | Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated | Synthesis, deprotection, analysis and purification of RNA and ribozymes |
US5977343A (en) | 1992-05-14 | 1999-11-02 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Synthesis, deprotection, analysis and purification of RNA and ribozymes |
US20030125270A1 (en) | 2000-12-18 | 2003-07-03 | Lawrence Blatt | Enzymatic nucleic acid treatment of diseases or conditions related to hepatitis C virus infection |
US5804683A (en) | 1992-05-14 | 1998-09-08 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Deprotection of RNA with alkylamine |
ATE171210T1 (de) * | 1992-07-02 | 1998-10-15 | Hybridon Inc | Selbststabilisierte oligonukleotide als therapeutika |
EP0786522A2 (en) | 1992-07-17 | 1997-07-30 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Enzymatic RNA molecules for treatment of stenotic conditions |
US6174868B1 (en) * | 1992-09-10 | 2001-01-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treatment of hepatitis C virus-associated diseases |
US5985558A (en) * | 1997-04-14 | 1999-11-16 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense oligonucleotide compositions and methods for the inibition of c-Jun and c-Fos |
CA2154363A1 (en) | 1993-01-22 | 1994-08-04 | Bruce A. Sullenger | Localization of therapeutic agents |
WO1995002051A2 (en) * | 1993-07-10 | 1995-01-19 | Biognostik Gesellschaft für Biomolekulare Diagnostik mbH | A pharmaceutical composition comprising antisense-nucleic acid for prevention and/or treatment of neuronal injury, degeneration and cell death and for the treatment of neoplasms |
US6410322B1 (en) * | 1993-07-27 | 2002-06-25 | Hybridon Inc | Antisense oligonucleotide inhibition of vascular endothelial growth factor expression |
US5731294A (en) * | 1993-07-27 | 1998-03-24 | Hybridon, Inc. | Inhibition of neovasularization using VEGF-specific oligonucleotides |
JPH09502092A (ja) | 1993-09-02 | 1997-03-04 | リボザイム・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 非ヌクレオチドを含有する酵素性核酸 |
US5990090A (en) * | 1993-09-20 | 1999-11-23 | The University Of Michigan | Methods and compositions for treatment of diseases |
US5624803A (en) | 1993-10-14 | 1997-04-29 | The Regents Of The University Of California | In vivo oligonucleotide generator, and methods of testing the binding affinity of triplex forming oligonucleotides derived therefrom |
CA2174339A1 (en) | 1993-10-27 | 1995-05-04 | Lech W. Dudycz | 2'-amido and 2'-peptido modified oligonucleotides |
WO1995022600A1 (en) * | 1994-02-22 | 1995-08-24 | Immusol, Inc. | Ribozyme therapy for hepatitis b infection |
US5902880A (en) | 1994-08-19 | 1999-05-11 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | RNA polymerase III-based expression of therapeutic RNAs |
US5627053A (en) | 1994-03-29 | 1997-05-06 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid |
US5646262A (en) | 1994-07-28 | 1997-07-08 | Georgetown University | Antisense oligonucleotides against hepatitis B viral replication |
US6146886A (en) | 1994-08-19 | 2000-11-14 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | RNA polymerase III-based expression of therapeutic RNAs |
US5753613A (en) | 1994-09-30 | 1998-05-19 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Compositions for the introduction of polyanionic materials into cells |
US5885613A (en) | 1994-09-30 | 1999-03-23 | The University Of British Columbia | Bilayer stabilizing components and their use in forming programmable fusogenic liposomes |
US5820873A (en) | 1994-09-30 | 1998-10-13 | The University Of British Columbia | Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof |
CA2207593A1 (en) | 1994-12-13 | 1996-06-20 | John Gustofson | Method and reagent for treatment of arthritic conditions, induction of graft tolerance and reversal of immune responses |
US5716824A (en) | 1995-04-20 | 1998-02-10 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | 2'-O-alkylthioalkyl and 2-C-alkylthioalkyl-containing enzymatic nucleic acids (ribozymes) |
US5889136A (en) | 1995-06-09 | 1999-03-30 | The Regents Of The University Of Colorado | Orthoester protecting groups in RNA synthesis |
EP0866865B1 (en) * | 1995-11-14 | 2002-02-06 | Vimrx Holdings, Ltd. | Chimeric oligomers having an rna-cleavage activity |
EP1108724B1 (en) | 1996-01-16 | 2007-09-19 | Sirna Therpeutics, Inc. | Synthesis of methoxy nucleosides and enzymatic nucleic acid molecules |
US5849902A (en) | 1996-09-26 | 1998-12-15 | Oligos Etc. Inc. | Three component chimeric antisense oligonucleotides |
US6248878B1 (en) | 1996-12-24 | 2001-06-19 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Nucleoside analogs |
US6001311A (en) | 1997-02-05 | 1999-12-14 | Protogene Laboratories, Inc. | Apparatus for diverse chemical synthesis using two-dimensional array |
WO1998044101A1 (en) * | 1997-03-28 | 1998-10-08 | The Research Foundation Of State University Of New York | Antisense oligonucleotides for mitogen-activated protein kinases as therapy for breast cancer |
US6395713B1 (en) | 1997-07-23 | 2002-05-28 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Compositions for the delivery of negatively charged molecules |
CA2301166A1 (en) * | 1997-07-24 | 1999-02-04 | Yuan-Peng Zhang | Liposomal compositions for the delivery of nucleic acid catalysts |
AR013269A1 (es) | 1997-08-04 | 2000-12-13 | Scras | Producto que contiene por lo menos un rna de doble filamento combinado con por lo menos un agente anti-viral, para la utilizacion terapeutica en eltratamiento de una enfermedad viral, en especial de la hepatitis viral |
IL135000A0 (en) | 1997-09-12 | 2001-05-20 | Exiqon As | Bi- and tri-cyclic nucleoside, nucleotide and oligonucleotide analogues |
US6054576A (en) | 1997-10-02 | 2000-04-25 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Deprotection of RNA |
CA2228977A1 (en) * | 1997-11-07 | 1999-05-07 | Martin G. Sirois | Localized oligonucleotide therapy for preventing restenosis |
US5932580A (en) * | 1997-12-01 | 1999-08-03 | Yissum Research And Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | PDGF receptor kinase inhibitory compounds their preparation and compositions |
AU1922999A (en) | 1997-12-16 | 1999-07-05 | Baylor College Of Medicine | Needle-free injection of formulated nucleic acid molecules |
US6506559B1 (en) * | 1997-12-23 | 2003-01-14 | Carnegie Institute Of Washington | Genetic inhibition by double-stranded RNA |
US6111086A (en) | 1998-02-27 | 2000-08-29 | Scaringe; Stephen A. | Orthoester protecting groups |
SK287538B6 (sk) * | 1998-03-20 | 2011-01-04 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Syntetický gén obsahujúci dispergovanú alebo cudzorodú deoxyribonukleovú molekulu, génový konštrukt obsahujúci tento syntetický gén a prípravok obsahujúci tento syntetický gén |
ATE507299T1 (de) | 1998-04-08 | 2011-05-15 | Commw Scient Ind Res Org | Verfahren und mittel zum erhalt von veränderten phänotypen |
JP2003525017A (ja) | 1998-04-20 | 2003-08-26 | リボザイム・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド | 遺伝子発現を調節しうる新規な化学組成を有する核酸分子 |
GB9827152D0 (en) | 1998-07-03 | 1999-02-03 | Devgen Nv | Characterisation of gene function using double stranded rna inhibition |
WO2000020592A1 (en) * | 1998-10-07 | 2000-04-13 | Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. | Glucose-dependent insulinotropic peptide for use as an osteotropic hormone |
WO2000021560A1 (en) * | 1998-10-09 | 2000-04-20 | Ludwig Institute For Cancer Research | Flt4 (VEGFR-3) AS A TARGET FOR TUMOR IMAGING AND ANTI-TUMOR THERAPY |
US6069008A (en) * | 1998-11-25 | 2000-05-30 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of NF-kappa-B p65 subunit expression |
AU776150B2 (en) * | 1999-01-28 | 2004-08-26 | Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. | Composition and method for (in vivo) and (in vitro) attenuation of gene expression using double stranded RNA |
DE19956568A1 (de) | 1999-01-30 | 2000-08-17 | Roland Kreutzer | Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens |
AU3369900A (en) * | 1999-02-19 | 2000-09-04 | General Hospital Corporation, The | Gene silencing |
US5998206A (en) * | 1999-02-23 | 1999-12-07 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense inhibiton of human G-alpha-12 expression |
JP2002537828A (ja) | 1999-03-10 | 2002-11-12 | フォゲン リミティド | 細胞への物質のデリバリー |
EP2363478B1 (en) | 1999-04-21 | 2019-07-24 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for inhibiting the function of polynucleotide sequences |
KR100782896B1 (ko) | 1999-05-04 | 2007-12-06 | 엑시콘 에이/에스 | L-리보-lna 유사체 |
JP2003502383A (ja) * | 1999-06-21 | 2003-01-21 | マードック チルドレンズ リサーチ インスティチュート | 医学的障害の予防及び/又は治療のための方法 |
CN1360631A (zh) | 1999-07-09 | 2002-07-24 | 美国家用产品公司 | 在质粒序列转录过程中防止畸变rna形成的方法和组合物 |
US20040002153A1 (en) * | 1999-07-21 | 2004-01-01 | Monia Brett P. | Modulation of PTEN expression via oligomeric compounds |
AUPQ201499A0 (en) * | 1999-08-04 | 1999-08-26 | Unisearch Limited | Treatment of inflammatory and malignant diseases |
WO2001016346A1 (en) * | 1999-08-30 | 2001-03-08 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Production of 3-hydroxypropionic acid in recombinant organisms |
WO2001029058A1 (en) | 1999-10-15 | 2001-04-26 | University Of Massachusetts | Rna interference pathway genes as tools for targeted genetic interference |
GB9927444D0 (en) * | 1999-11-19 | 2000-01-19 | Cancer Res Campaign Tech | Inhibiting gene expression |
DE10160151A1 (de) | 2001-01-09 | 2003-06-26 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Zielgens |
DE10100586C1 (de) | 2001-01-09 | 2002-04-11 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens |
WO2001038551A1 (en) | 1999-11-29 | 2001-05-31 | Cold Spring Harbor Laboratory | Regulation of polycomb group gene expression for increasing seed size in plants |
RU2164944C1 (ru) | 1999-12-09 | 2001-04-10 | Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН | Способ изменения генетических свойств организма |
WO2001049844A1 (en) | 1999-12-30 | 2001-07-12 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Compositions and methods for gene silencing |
IT1316982B1 (it) | 2000-01-17 | 2003-05-26 | Univ Roma | Isolamento e caratterizzazione di un gene per il silenziamento genicoda n.crassa e suoi usi. |
US6602857B1 (en) * | 2000-01-18 | 2003-08-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of PTP1B expression |
US6261840B1 (en) * | 2000-01-18 | 2001-07-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of PTP1B expression |
WO2003070918A2 (en) * | 2002-02-20 | 2003-08-28 | Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated | Rna interference by modified short interfering nucleic acid |
US8202979B2 (en) | 2002-02-20 | 2012-06-19 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid |
CA2403397A1 (en) * | 2000-03-16 | 2001-09-20 | Genetica, Inc. | Methods and compositions for rna interference |
GB2377221B (en) | 2000-03-17 | 2004-08-18 | Benitec Australia Ltd | Genetic silencing |
EP2319864A3 (de) | 2000-03-22 | 2012-11-21 | Sanofi-Aventis Deutschland GmbH | Nematodes as model organisms for the investigation of neurodegenerative diseases, in particular parkinson's disease, use and method |
GB0007268D0 (en) | 2000-03-24 | 2000-05-17 | Cyclacel Ltd | Cell cycle progression proteins |
US20100305186A1 (en) | 2000-05-30 | 2010-12-02 | Johnson & Johnson Research Pty Limited | Methods for mediating gene suppression |
WO2001096388A2 (en) * | 2000-06-09 | 2001-12-20 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of colon cancer |
WO2001096584A2 (en) * | 2000-06-12 | 2001-12-20 | Akkadix Corporation | Materials and methods for the control of nematodes |
HUP0302779A3 (en) * | 2000-06-23 | 2005-12-28 | Schering Ag | Combinations and compositions which interfere with vegf/vegf and angiopoietin/tie receptor function and their use (ii) |
EP1311277A4 (en) * | 2000-07-18 | 2004-08-25 | Joslin Diabetes Center Inc | FIBROSIS MODULATION METHOD |
US6613567B1 (en) * | 2000-09-15 | 2003-09-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense inhibition of Her-2 expression |
AU2001296305B2 (en) * | 2000-09-26 | 2007-12-06 | Duke University | RNA aptamers and methods for identifying the same |
JP2002117576A (ja) * | 2000-10-03 | 2002-04-19 | Tdk Corp | 光記録媒体および光学的情報記録方法 |
WO2002059298A2 (en) * | 2000-10-26 | 2002-08-01 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Gab2(p97) gene and methods of use thereof |
ATE405585T1 (de) | 2000-11-09 | 2008-09-15 | Cenix Bioscience Gmbh | Eukaryontische zellteilungsgene und deren verwendung in der diagnostik sowie in der behandlung von proliferativen erkrankungen |
TR200401292T3 (tr) | 2000-12-01 | 2004-07-21 | Max@Planck@Gesellschaft�Zur�F�Rderung�Der�Wissenschaften | RNAÁgirişimineÁyolÁaçanÁküçükÁRNAÁmolekülleri |
EP1233059A1 (en) * | 2001-02-09 | 2002-08-21 | ARTEMIS Pharmaceuticals GmbH | Influenza viruses with enhanced transcriptional and replicational capacities |
US20030087855A1 (en) | 2001-09-13 | 2003-05-08 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of protein kinase R expression |
EP1386004A4 (en) | 2001-04-05 | 2005-02-16 | Ribozyme Pharm Inc | MODULATION OF GENE EXPRESSION ASSOCIATED WITH INFLAMMATORY PROLIFERATION AND GROWTH OF NEURITIES BY METHODS INVOLVING NUCLEIC ACID |
US20030130186A1 (en) | 2001-07-20 | 2003-07-10 | Chandra Vargeese | Conjugates and compositions for cellular delivery |
US20040019001A1 (en) * | 2002-02-20 | 2004-01-29 | Mcswiggen James A. | RNA interference mediated inhibition of protein typrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering RNA |
WO2003070910A2 (en) * | 2002-02-20 | 2003-08-28 | Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated | INHIBITION OF VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR (VEGF) AND VEGF RECEPTOR GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
AU2002312059B2 (en) | 2001-05-25 | 2009-01-15 | Duke University | Modulators of pharmacological agents |
EP1390385A4 (en) * | 2001-05-29 | 2004-11-24 | Sirna Therapeutics Inc | MODULATION OF DISEASES AND DISEASES OF THE FEMALE REPRODUCTION SYSTEM BASED ON NUCLEIC ACID |
EP1572902B1 (en) * | 2002-02-01 | 2014-06-11 | Life Technologies Corporation | HIGH POTENCY siRNAS FOR REDUCING THE EXPRESSION OF TARGET GENES |
CA2476530A1 (en) * | 2002-02-14 | 2003-08-21 | City Of Hope | Methods for producing interfering rna molecules in mammalian cells and therapeutic uses for such molecules |
AUPS078002A0 (en) * | 2002-02-27 | 2002-03-21 | Unisearch Limited | Dnazyme therapeutics |
WO2003099227A2 (en) * | 2002-05-23 | 2003-12-04 | Ceptyr, Inc. | Modulation of ptp1b signal transduction by rna interference |
AU2003237686A1 (en) * | 2002-05-24 | 2003-12-12 | Max-Planck Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. | Rna interference mediating small rna molecules |
CA2388441A1 (en) * | 2002-06-10 | 2003-12-10 | Wei-Ping Min | Immunomodulation using rna interference |
AU2003260370B2 (en) | 2002-08-05 | 2008-05-22 | Silence Therapeutics Gmbh | Further novel forms of interfering RNA molecules |
EP1389637B1 (en) | 2002-08-05 | 2012-05-30 | Silence Therapeutics Aktiengesellschaft | Blunt-ended interfering RNA molecules |
US20050020521A1 (en) * | 2002-09-25 | 2005-01-27 | University Of Massachusetts | In vivo gene silencing by chemically modified and stable siRNA |
US9150605B2 (en) * | 2002-11-05 | 2015-10-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation |
US20040248299A1 (en) * | 2002-12-27 | 2004-12-09 | Sumedha Jayasena | RNA interference |
AU2004210972A1 (en) * | 2003-02-11 | 2004-08-26 | Immusol Incorporated | siRNA libraries optimized for predetermined protein families |
CA2528963A1 (en) * | 2003-06-27 | 2005-01-13 | Sirna Therapeutics, Inc. | Rna interference mediated treatment of alzheimer's disease using short interfering nucleic acid (sina) |
US8240498B2 (en) | 2006-10-31 | 2012-08-14 | Crown Packaging Technology, Inc. | Resealable closure |
CN107249491A (zh) | 2015-06-01 | 2017-10-13 | 奥林巴斯株式会社 | 医疗用机械手 |
-
2003
- 2003-01-28 EP EP03705941A patent/EP1432724A4/en not_active Withdrawn
- 2003-01-28 AU AU2003207708A patent/AU2003207708A1/en not_active Abandoned
- 2003-02-05 AU AU2003219712A patent/AU2003219712A1/en not_active Abandoned
- 2003-02-05 EP EP03715980A patent/EP1476458A4/en not_active Withdrawn
- 2003-02-05 WO PCT/US2003/003473 patent/WO2003072704A2/en not_active Application Discontinuation
- 2003-02-11 CA CA002476112A patent/CA2476112A1/en not_active Abandoned
- 2003-02-11 AU AU2003211082A patent/AU2003211082A1/en not_active Abandoned
- 2003-02-11 AU AU2003219751A patent/AU2003219751A1/en not_active Abandoned
- 2003-02-11 WO PCT/US2003/004347 patent/WO2003070886A2/en not_active Application Discontinuation
- 2003-02-11 EP EP03742769A patent/EP1472269A4/en not_active Withdrawn
- 2003-02-11 EP EP03716024A patent/EP1472267A4/en not_active Withdrawn
- 2003-02-11 JP JP2003569651A patent/JP2005524393A/ja active Pending
- 2003-02-11 WO PCT/US2003/004566 patent/WO2003070744A1/en active Application Filing
- 2003-02-18 EP EP03742820A patent/EP1470256A4/en not_active Withdrawn
- 2003-02-18 EP EP03742821A patent/EP1549660A4/en not_active Withdrawn
- 2003-02-18 WO PCT/US2003/004909 patent/WO2003070903A2/en not_active Application Discontinuation
- 2003-02-18 AU AU2003216311A patent/AU2003216311A1/en not_active Abandoned
- 2003-02-18 WO PCT/US2003/004907 patent/WO2003070968A2/en not_active Application Discontinuation
- 2003-02-18 AU AU2003247204A patent/AU2003247204A1/en not_active Abandoned
- 2003-02-20 EP EP10008930.9A patent/EP2287306B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-20 EP EP03743684.7A patent/EP1423406B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-20 WO PCT/US2003/004951 patent/WO2003070970A2/en not_active Application Discontinuation
- 2003-02-20 ES ES10008930T patent/ES2394269T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-20 PT PT100089291T patent/PT2287305E/pt unknown
- 2003-02-20 ES ES14195627.6T patent/ES2667672T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-20 DK DK10008930.9T patent/DK2287306T3/da active
- 2003-02-20 JP JP2003573107A patent/JP2005518803A/ja not_active Withdrawn
- 2003-02-20 EP EP03716126A patent/EP1458741B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-20 DK DK03743684.7T patent/DK1423406T3/da active
- 2003-02-20 EP EP03713549A patent/EP1476574A4/en not_active Withdrawn
- 2003-02-20 JP JP2003569811A patent/JP2005517438A/ja not_active Withdrawn
- 2003-02-20 GB GB0406022A patent/GB2397818B/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-20 WO PCT/US2003/005044 patent/WO2003070911A2/en not_active Application Discontinuation
- 2003-02-20 CA CA002459532A patent/CA2459532A1/en not_active Abandoned
- 2003-02-20 DK DK14195627.6T patent/DK2902406T3/en active
- 2003-02-20 WO PCT/US2003/005162 patent/WO2003070914A2/en not_active Application Discontinuation
- 2003-02-20 AU AU2003221258A patent/AU2003221258B2/en not_active Expired
- 2003-02-20 GB GB0404912A patent/GB2396616B/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-20 AU AU2003217594A patent/AU2003217594A1/en not_active Abandoned
- 2003-02-20 WO PCT/US2003/005028 patent/WO2003074654A2/en active Application Filing
- 2003-02-20 EP EP10008929.1A patent/EP2287305B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-20 EP EP14195627.6A patent/EP2902406B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-20 EP EP18203871.1A patent/EP3459963A1/en not_active Withdrawn
- 2003-02-20 PT PT141956276T patent/PT2902406T/pt unknown
- 2003-02-20 SI SI200332566T patent/SI2902406T1/en unknown
- 2003-02-20 SI SI200332420T patent/SI2287305T2/en unknown
- 2003-02-20 AT AT03743684T patent/ATE479774T1/de active
- 2003-02-20 AU AU2003216315A patent/AU2003216315A1/en not_active Abandoned
- 2003-02-20 CA CA002455447A patent/CA2455447A1/en not_active Abandoned
- 2003-02-20 AU AU2003216324A patent/AU2003216324B2/en not_active Expired
- 2003-02-20 EP EP08075778A patent/EP2042510A3/en not_active Withdrawn
- 2003-02-20 EP EP03742826A patent/EP1470257A4/en not_active Withdrawn
- 2003-02-20 HU HUE14195627A patent/HUE036869T2/hu unknown
- 2003-02-20 AU AU2003213163A patent/AU2003213163A1/en not_active Abandoned
- 2003-02-20 ES ES10008929.1T patent/ES2534045T5/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-20 EP EP21166750.6A patent/EP3926046A3/en not_active Withdrawn
- 2003-02-20 DK DK10008929.1T patent/DK2287305T4/en active
- 2003-02-20 EP EP17209752.9A patent/EP3354656B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-20 EP EP10008931A patent/EP2278004B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2004
- 2004-10-15 HK HK04107996.5A patent/HK1065049A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-03-01 JP JP2006117199A patent/JP2006271387A/ja not_active Withdrawn
-
2008
- 2008-06-05 JP JP2008148596A patent/JP2008289488A/ja not_active Withdrawn
- 2008-08-05 JP JP2008201593A patent/JP2009060893A/ja active Pending
- 2008-08-29 US US12/201,759 patent/US20090023676A1/en not_active Abandoned
-
2010
- 2010-08-18 AU AU2010212416A patent/AU2010212416B2/en not_active Expired
-
2012
- 2012-05-15 US US13/471,857 patent/US8648185B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2015
- 2015-04-06 CY CY20151100330T patent/CY1117168T1/el unknown
-
2018
- 2018-04-26 CY CY20181100444T patent/CY1120292T1/el unknown
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5998203A (en) * | 1996-04-16 | 1999-12-07 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Enzymatic nucleic acids containing 5'-and/or 3'-cap structures |
WO1999013886A1 (en) * | 1997-09-17 | 1999-03-25 | East Carolina University | Multiple target hybridizing nucleic acids, their preparation, compositions, formulation, kits and applications |
WO2001075164A2 (en) * | 2000-03-30 | 2001-10-11 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Rna sequence-specific mediators of rna interference |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
JPN6011016216; Nature Vol.411, 2001, p.494-498 * |
JPN6011016217; Genes and Development Vol.15, 2001, p.188-200 * |
JPN6012029227; The EMBO Journal Vol.20, No.23, 2001, p.6877-6888 * |
JPN6012029229; Molecular Cell Vol.6, 2000, p.1077-1087 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DK2287305T3 (en) | RNA Interference-Mediated Inhibition of Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA) | |
JP2007300926A (ja) | 短干渉核酸(siNA)を用いるアルツハイマー病のRNA干渉媒介性治療 | |
JP2009000105A (ja) | 短干渉核酸(siNA)を用いた血管内皮成長因子および血管内皮成長因子レセプター遺伝子発現のRNA干渉媒介阻害 | |
JP2005517430A (ja) | 短干渉核酸(siNA)を用いる蛋白質チロシンホスファターゼ−1b(ptp−1b)遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 | |
JP2005517452A (ja) | 短干渉核酸(siNA)を用いるBCL2遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 | |
JP2005517433A (ja) | 短干渉核酸(siNA)を用いるTNFおよびTNFレセプタースーパーファミリー遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 | |
JP2006502694A (ja) | 短干渉核酸(siNA)を用いるHIV遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 | |
JP2007523649A (ja) | 多機能短鎖干渉核酸(多機能siNA)を用い、RNA干渉を介した遺伝子発現の阻害 | |
JP2013078311A (ja) | 短干渉核酸(siNA)を用いるC型肝炎ウイルス(HCV)遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 | |
JP2005517423A (ja) | 短干渉核酸(siNA)を用いるTGF−ベータおよびTGF−ベータレセプター遺伝子の発現のRNA干渉媒介性阻害 | |
EP1710307A2 (en) | RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) | |
JP2007505605A (ja) | 低分子干渉核酸(siNA)を使用したRNA干渉により媒介される血管内皮増殖因子遺伝子発現および血管内皮増殖因子遺伝子受容体遺伝子発現のRNA干渉媒介性抑制 | |
JP2007505605A6 (ja) | 低分子干渉核酸(siNA)を使用したRNA干渉により媒介される血管内皮増殖因子遺伝子発現および血管内皮増殖因子遺伝子受容体遺伝子発現のRNA干渉媒介性抑制 | |
ES2350763T3 (es) | Inhibición de la expresión génica mediada por interferencia de arn usando un ácido nucleico de interferencia corto (anic). | |
AU2006203725B2 (en) | RNA interference by modified short interfering nucleic acid | |
JP2007527709A (ja) | 短鎖干渉核酸(siNA)を用いた、RNA干渉を介したGPRA及び/又はAAA1遺伝子発現の阻害 | |
JP2005517437A (ja) | 短干渉核酸(siNa)を用いる表皮成長因子レセプター遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110228 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110329 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20110609 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20110614 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120612 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20120906 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20120911 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20121009 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20121012 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20121109 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20121114 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20121212 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20130611 |