TWI480043B - 用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物 - Google Patents

用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物 Download PDF

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TWI480043B
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用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組 成物
本發明係關於一種醫藥組成物,特別是用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌之醫藥組成物。
乳癌是女性最常見的惡性腫瘤之一,包含雌激素受體陽性型乳癌(estrogen receptor-positive breast cancer)與雌激素受體陰性型乳癌(estrogen receptor-negative breast cancer),前者癌細胞保留全部或部分的雌激素受體,一旦雌激素(estrogen)與雌激素受體結合,即活化癌細胞內一連串的訊息傳遞路徑,使癌細胞快速地增生或轉移,因此,雌激素受體陽性型乳癌的發生、生長與轉移皆受雌激素的控制與調節;後者癌細胞的雌激素受體係完全喪失或僅保留少數,其生長完全不受雌激素的控制與調節,故預後狀況較差。
乳癌的發病率在已開發國家一向高於開發中國家,其發病原因尚且不明,然習用技術已知乳癌的發生與基因、性別、年齡、雌激素的分泌及環境皆有相關,近年來更有研究指稱長期暴露於塑化劑可提升女性罹患乳癌的風險。
乳癌的習用治療方法包含手術切除、放射線治療、化學治療及荷爾蒙治療,前兩者係屬局部控制,而後兩者則屬全身性的療法,多係依照患者病情或腫瘤分期而選擇單獨或合併使用前述四種治療方法。其中,荷爾蒙治療為 術後常見的輔助性治療,主要係阻斷雌激素與癌細胞的接觸與反應,從而抑制癌細胞生長及繁殖,可減少癌細胞轉移,以避免復發,為治療雌激素受體陽性型乳癌的第一線療法。
然而,前述之習用治療方法對於雌激素受體陰性型乳癌的治療卻成效不彰,特別係由塑化劑引發的乳癌。直至目前,塑化劑致乳癌的致癌機轉仍未臻明朗,因此,在治療上困難重重,往往造成預後不良、易復發及高致死率等問題,因而有必要針對雌激素受體陰性型乳癌,特別係由塑化劑引發的乳癌,提供新興的治療手段,以改善乳癌的治療成效。
本發明之主要目的係提供一種用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,係可以用以改善雌激素受體陰性型乳癌,特別係由塑化劑所引發的乳癌。
本發明之又一目的係提供一種用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,係可以避免雌激素受體陰性型乳癌之轉移與復發。
為達到前述發明目的,本發明所運用之技術手段包含有:一種用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,係包含由芳香烴受體抑制劑、芳香烴受體拮抗劑、組蛋白去乙醯化酶6抑制劑、組蛋白去乙醯化酶6拮抗劑、cAMP反應元件結合蛋白抑制劑及蛋白磷酸化 激酶抑制劑所組成的群組。
本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,其中該芳香烴受體抑制劑係選自由芳香烴受體之干擾RNA及3’,4’-二甲氧基黃酮所組成的群組。
本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,其中該組蛋白去乙醯化酶6抑制劑係組蛋白去乙醯化酶6之干擾RNA。
本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,其中該cAMP反應元件結合蛋白抑制劑係cAMP反應元件結合蛋白之干擾RNA。
本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,其中該芳香烴受體之干擾RNA包含如SEQ ID NO:1及2所示的序列。
本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,其中該組蛋白去乙醯化酶6之干擾RNA包含如SEQ ID NO:3及4所示的序列。
本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,其中該組蛋白去乙醯化酶6之干擾RNA包含如SEQ ID NO:5及6所示的序列。
本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,其中該cAMP反應元件結合蛋白之干擾RNA包含如SEQ ID NO:7及8所示的序列。
本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型 乳癌的醫藥組成物,其中該用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物更包含醫藥上可接受之載劑。
本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,其中該載劑係一核酸轉殖試劑。
本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,其中該芳香烴受體之干擾RNA的使用劑量為1~10ng/μl。
本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,其中該3’,4’-二甲氧基黃酮的使用劑量為1~5μM。
本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,其中該組蛋白去乙醯化酶6之干擾RNA的使用劑量為1~10ng/μl。
本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,其中該cAMP反應元件結合蛋白之干擾RNA的使用劑量則為1~10ng/μl。
本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,其中該用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物為口服劑或注射劑。
為了讓本發明之上述和其他目的、特徵和優點能更明確被了解,下文將特舉本發明較佳實施例,並配合所附圖式,作詳細說明如下。
本發明係提供一種用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,包含芳香烴受體抑制劑、芳香烴受體拮抗劑、組蛋白去乙醯化酶6抑制劑、組蛋白去乙醯化酶6拮抗劑、cAMP反應元件結合蛋白抑制劑、蛋白磷酸化激酶抑制劑或由前述成分所組成的群組;該用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物可以抑制癌細胞生長、減少癌細胞轉移、改善雌激素受體陰性型乳癌的預後狀況。
請參照第1圖所示,為本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物的作用機轉,係參考自本案申請人近期發表的期刊(Hsieh T-H.,et al.,(2012)Phthalates induce proliferation and invasiveness of estrogen receptor-negative breast cancerthrough the AhR/HDAC6/cMyc singling pathway.The FASEB Journal. 26,778-787),環境中的塑化劑(phthalate)1,如鄰苯二甲酸酯(n-butyl benzyl phthalate;BBP)及鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate;DBP),可由皮膚或經消化道進入人體,活化芳香烴受體(aryl hydrocarbon receptor;AhR)2,提升該芳香烴受體的細胞膜轉移作用,開啟下游非基因的傳遞路徑,依序活化環化磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate;cAMP)3、蛋白磷酸化激酶A(protein kinase A;PKA)4及cAMP反應元件結合蛋白(cAMP responsive element binding protein 1;CREB1)5,最後該cAMP反應元件結合蛋白5結合於組蛋白去乙醯化酶6的 啟動子(histone deacetylase 6;HDAC6)6,使組蛋白去乙醯化酶6大量表現,進而誘發cMyc基因7的表現,促成癌細胞增生與轉移,前述癌細胞形成之路徑,與雌激素的分泌反應無關。此外,戴奧辛(未繪示)也同樣會活化該芳香烴受體2,啟動下游環化磷酸腺苷3/蛋白磷酸化激酶A4/cAMP反應元件結合蛋白5的訊號傳遞路徑,誘發cMyc基因7的表現,促成癌細胞增生與轉移。
而本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物即係單獨或合併利用芳香烴受體抑制劑、芳香烴受體拮抗劑、組蛋白去乙醯化酶6抑制劑、組蛋白去乙醯化酶6拮抗劑、cAMP反應元件結合蛋白抑制劑及蛋白磷酸化激酶抑制劑等成分,阻斷由塑化劑或戴奧辛啟動的訊號傳遞路徑(AhR-cAMP/PKA/CREB1-HDAC6-cMyc),從而抑制癌細胞增生、轉移,以有效治療雌激素受體陰性型乳癌,或者改善該雌激素受體陰性型乳癌的預後狀況。其中,該芳香烴受體抑制劑可以係芳香烴受體之干擾RNA、3’,4’-二甲氧基黃酮(3’,4’-dimethoxyflavone;3’,4’-DMF)或其組合物,該芳香烴受體之干擾RNA係呈siRNA形式,且正股siRNA係具有如SEQ ID NO:1所示序列,反股siRNA係具有SEQ ID NO:2所示序列;該組蛋白去乙醯化酶6抑制劑係組蛋白去乙醯化酶6之干擾RNA(HDAC siRNA),係包含如SEQ ID NO:3及4,或5及6所示的核酸序列,該組蛋白去乙醯化酶6之干擾RNA同樣可呈小段干擾RNA(siRNA)、小髮夾型核醣核 酸RNA(shRNA)或微小RNA(miRNA)的形式;該cAMP反應元件結合蛋白抑制劑係cAMP反應元件結合蛋白之干擾RNA,包含如SEQ ID NO:7及8所示的核酸序列,係可以呈小段干擾RNA(siRNA)、小髮夾型核醣核酸RNA(shRNA)或微小RNA(miRNA)之形式;該蛋白磷酸化激酶抑制劑則係蛋白磷酸化激酶抑制劑H89。
前述之干擾RNA(包含芳香烴受體之干擾RNA、組蛋白去乙醯化酶6之干擾RNA及cAMP反應元件結合蛋白之干擾RNA)係由該技術領域慣用之方法進行合成,包含利用合適的表現系統以重組RNA之方式合成或以化學方法合成。該表現系統可為熟知該技術領域者所慣用之真核系統,如酵母菌;原核系統,如大腸桿菌(E.coli );或病毒系統,如巨細胞病毒(CMV)載體。然而,該前述之干擾RNA也可以另以標準化的化學方法直接合成。
此外,本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物較佳是製成口服劑或注射劑等劑型,如錠劑、丸劑、注射劑等,以便於施用於一個體,如小鼠或人類。其中,該芳香烴受體之干擾RNA的使用劑量為1~10ng/μl,較佳為5ng/μl;該3’,4’-二甲氧基黃酮的使用劑量為1~5μM,較佳為1μM;該組蛋白去乙醯化酶6之干擾RNA的使用劑量為1~10ng/μl,較佳為5ng/μl;該cAMP反應元件結合蛋白之干擾RNA的使用劑量則為1~10ng/μl,較佳為5ng/μl。
本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型 乳癌的醫藥組成物較佳是更包含一醫藥上可接受之載劑或賦型劑,該載劑可以係藥理學上與前述芳香烴受體抑制劑、芳香烴受體拮抗劑、組蛋白去乙醯化酶6抑制劑、組蛋白去乙醯化酶6拮抗劑、cAMP反應元件結合蛋白抑制劑、以及蛋白磷酸化激酶抑制劑性質相容的鹽類試劑或水溶液,較佳是為一核酸轉殖試劑,如LT1轉殖試劑,以提升本發明之芳香烴受體之干擾RNA、組蛋白去乙醯化酶6之干擾RNA及cAMP反應元件結合蛋白之干擾RNA送至個體細胞之效率,以有效阻斷由塑化劑或戴奧辛啟動的訊號傳遞路徑(AhR-cAMP/PKA/CREB1-HDAC6-cMyc),抑制癌細胞增生,使該用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物可發揮較佳的療效。該賦型劑則可選用為溶劑、注射劑或澱粉糊等,以將使本發明之抗乳癌藥劑進一步製成便於注射或口服之劑型。
本發明已經由實驗證實,確實可阻斷塑化劑或戴奧辛引發癌細胞增生的訊號傳遞路徑,達到治療雌激素受體陰性型乳癌,特別是由塑化劑所引發的雌激素受體陰性型乳癌的功效。以下為本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物的功效驗證。
置備數株乳癌細胞株,包含MCF-7、T-47D、ZR-75-1、MDA-MB-231、MDA-MB-435及SK-BR-3(American Type Culture Collection,Manassas,VA,USA),利用一培養基,於37℃、含5%二氧化碳之環境分別培養前述數株乳癌細胞株,其中,該培養基包含DMEM/F12(Life Technologies,Grand Island,NY,USA)、10%胎牛血清蛋白(Sigma,St.Louis,MO,USA)及1%抗生素penicilla/streptomycin(Invitrogen,Carlbad,CA,USA)。另外,購置鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸二丁酯、3’,4’-二甲氧基黃酮及蛋白磷酸化激酶抑制劑H89(Calbuichem,San Diego,CA,USA),並分別配置成1微莫耳濃度(μM)備用。
請參照第2圖,係前述數株乳癌細胞株之芳香烴受體mRNA的表現量,本試驗是利用一商用RNA分離套組-Trizol(Invitrogen,Carlbad,CA,USA)取得各乳癌細胞株之RNA檢體,以一反轉錄系統(Reverse Transcription System,Promega,Madison,WI,USA)合成各RNA檢體的cDNA,再利用定量聚合酶連鎖反應分析芳香烴受體mRNA的表現量,其中,本試驗係利用ABI-7500(Applied Biosystems,Foster City,CA,USA)進行該定量聚合酶連鎖反應,並且所採用的引子對(AhR引子對)係包含由SEQ ID NO:9及10所示的序列。
由第2圖結果可知,雌激素受體陰性型乳癌之細胞株中(包含MDA-MB-231、MDA-MB-435及SK-BR-3),芳香烴受體的表現量明顯較雌激素受體陽性型乳癌之細胞株為高,顯示該芳香烴受體的表現與雌激素受體陰性型乳癌的發生確有相關。
請參照第3圖所示,係該乳癌細胞株MDA-MB-231分別與鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸二丁酯、3’,4’-二甲氧 基黃酮、芳香烴受體之干擾RNA或其組合共培養後,其細胞內環化磷酸腺苷的表現量。其中,該乳癌細胞株MDA-MB-231係隨機分配至9組,並依照第1表所列之處理方式,分別培養各組之乳癌細胞株MDA-MB-231,本試驗係先將乳癌細胞株MDA-MB-231與3’,4’-二甲氧基黃酮或芳香烴受體之干擾RNA預先培養1小時後,再與塑化劑(鄰苯二甲酸酯或鄰苯二甲酸二丁酯)共同培養2小時。前述9組乳癌細胞株的蛋白質檢體係於培養後,先以100毫莫耳濃度鹽酸溶液溶裂細胞,再進一步利用一商用環化磷酸腺苷測量套組(cAMP-EIA kit,Cayman Chemical,Ann Arbor,MI,USA)定量各組細胞中的環化磷酸腺苷。
由該第3圖結果,塑化劑可活化乳癌細胞中的芳香烴受體,啟動環化磷酸腺苷/蛋白磷酸化激酶A/cAMP反應元件結合蛋白的訊號傳遞路徑,進而引發癌細胞增生,然而,3’,4’-二甲氧基黃酮及芳香烴受體之干擾RNA可阻斷由塑化劑誘發產生的環化磷酸腺苷。
請參照第4圖,係該乳癌細胞株MDA-MB-231分別經鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸二丁酯誘發後,乳癌細胞內磷酸化cAMP反應元件結合蛋白(Ser133 phosphorylation CREB1;CREB1-P)與總cAMP反應元件結合蛋白的表現量。其中,6組乳癌細胞株MDA-MB-231係先與1微莫耳濃度(1μM)之3’,4’-二甲氧基黃酮或蛋白磷酸化激酶抑制劑H89預先培養一小時,再與塑化劑(鄰苯二甲酸酯或鄰苯二甲酸二丁酯)共同培養2小時,最後利用免疫印跡法(immunoblotting)分析各組乳癌細胞內磷酸化cAMP反應元件結合蛋白的表現情形。
本試驗之免疫印跡法係以冰磷酸緩衝液分別清洗各組的乳癌細胞株,再利用一商用蛋白質抽取溶劑(M-PER mammalian protein extraction reagent,Thermo Scientific,Franklin,MA,USA)進行均質處理,以獲得各組乳癌細胞株的蛋白質檢體。將各蛋白質檢體分別點在聚二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride membrane;Millipore,Bedford,MA,USA)上,依序與抗磷酸化cAMP反應元件結合蛋白抗體、抗cAMP反應元件結合蛋白抗體與抗β機動蛋白抗體(Sigma)反應。
由該第4圖結果,因塑化劑而引發環化磷酸腺苷的過表現,會進一步導致蛋白激酶A的活化,使轉錄因子-cAMP反應元件結合蛋白第133位置的絲胺酸發生磷酸化,然而,前述由塑化劑引發的現象卻可被3’,4’-二甲氧基黃酮及蛋白磷酸化激酶抑制劑H89所阻斷。
請參照第5圖所示,係該乳癌細胞株MDA-MB-231分別經鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸二丁酯誘發後,乳癌細胞內組蛋白去乙醯化酶6的啟動子與cAMP反應元件結合蛋白的結合關係。同前一試驗,其中6組乳癌細胞株MDA-MB-231係先與1微莫耳濃度(1μM)之3’,4’-二甲氧基黃酮或蛋白磷酸化激酶抑制劑H89預先培養一小時,再與塑化劑(鄰苯二甲酸酯或鄰苯二甲酸二丁酯)共同培養2小時,接著利用免疫沉澱分析法(immunoprecipitation analyse)沉澱乳癌細胞中的cAMP反應元件結合蛋白,最後再以染色體免疫沉澱分析法(chromatin immunoprecipition assay),分離該cAMP反應元件結合蛋白上的核酸,並以聚合酶連鎖反應進行分析。
其中,各組的乳癌細胞株同樣係先利用該商用蛋白質抽取溶劑進行均質處理,取得各組乳癌細胞株的蛋白質檢體,再依序與蛋白質G磁珠(protein G beads,Roce,Indianapolis,IN)於4℃培養兩小時、與抗免疫球蛋白G抗體(anti-IgG,Santa Cruz)、抗cAMP反應元件結合蛋白抗體及抗LEF1/TCF4抗體(epitomics)分別反應,其中,該抗免疫球蛋白G抗體係作為負對照,而抗LEF1/TCF4抗體則 係內部對照。另一方面,本試驗的染色體免疫沉澱分析法則係直接利用一商用染色體免疫沉澱分析套組(ChIP assay kit,Upstae Biotechnology,Lake Placid,NY,USA)進行分析,而聚合酶連鎖反應所選用的引子對(HDAC6啟動子引子對)係包含如SEQ ID NO:11及12所示序列。
而該第5圖結果顯示,塑化劑可誘導cAMP反應元件結合蛋白的磷酸化,並使磷酸化的AMP反應元件結合蛋白結合於組蛋白去乙醯化酶6的啟動子,開啟組蛋白去乙醯化酶6的表現;然而,此現象同樣可被3’,4’-二甲氧基黃酮及蛋白磷酸化激酶抑制劑H89所阻斷。
第6圖係該乳癌細胞株MDA-MB-231分別經鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸二丁酯誘發後,細胞內組蛋白去乙醯化酶6的表現量。而其中數組係先與1微莫耳濃度(1μM)之3’,4’-二甲氧基黃酮或蛋白磷酸化激酶抑制劑H89預先培養一小時,或者經轉殖入芳香烴受體之干擾RNA(5ng/μl)或cAMP反應元件結合蛋白之干擾RNA(5ng/μl),再與1微莫耳濃度(1μM)塑化劑(鄰苯二甲酸酯或鄰苯二甲酸二丁酯)共同培養24小時,最後再利用定量聚合酶連鎖反應定量各組中組蛋白去乙醯化酶6的表現量。
按第6圖結果,塑化劑可誘使乳癌細胞中,組蛋白去乙醯化酶6的過表現;然而,此現象可分別被3’,4’-二甲氧基黃酮、蛋白磷酸化激酶抑制劑H89、芳香烴受體之干擾RNA或cAMP反應元件結合蛋白之干擾RNA所阻 斷。
前述數試驗可證實塑化劑,如鄰苯二甲酸酯及鄰苯二甲酸二丁酯可活化芳香烴受體,開啟環化磷酸腺苷-蛋白磷酸化激酶A-cAMP反應元件結合蛋白的訊號傳遞路徑(cAMP/PKA/CREB1),使組蛋白去乙醯化酶6大量表現,造成乳癌細胞增生與惡化;然而,利用芳香烴受體抑制劑(如芳香烴受體之干擾RNA、3’,4’-二甲氧基黃酮)、組蛋白去乙醯化酶6抑制劑(如組蛋白去乙醯化酶6之干擾RNA)、cAMP反應元件結合蛋白抑制劑(如cAMP反應元件結合蛋白之干擾RNA)及蛋白磷酸化激酶抑制劑(如蛋白磷酸化激酶抑制劑H89)則可抑制由塑化劑所引發的訊號傳遞路徑(cAMP/PKA/CREB1),避免乳癌細胞過度增生。
請參照第7圖,係乳癌細胞株MDA-MB-231及SK-BR-3分別經鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸二丁酯誘發後,二株乳癌細胞株中組蛋白去乙醯化酶6的表現量。其中一組乳癌細胞株MDA-MB-231及SK-BR-3,係先與1微莫耳濃度(1μM)之3’,4’-二甲氧基黃酮預先培養一小時,再與塑化劑(鄰苯二甲酸酯或鄰苯二甲酸二丁酯)共同培養2小時,本試驗同樣係利用定量聚合酶連鎖反應分析各組乳癌細胞株中,組蛋白去乙醯化酶6的表現量。
而第7圖結果顯示,兩組乳癌細胞株中的組蛋白去乙醯化酶6,皆會受塑化劑的誘發而過度表現,再次證實雌激素受體陰性型乳癌與塑化劑之間的關連性。
下段試驗係進一步驗證本發明之用以治療塑化劑引 發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物的功效。
第8圖所示係經鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸二丁酯誘發後之乳癌細胞,其組蛋白去乙醯化酶6的表現明顯因塑化劑的影響而提升,該組蛋白去乙醯化酶6可催化α-微管蛋白(α-tubulin)的脫乙醯作用,促進乳癌細胞的增生與浸潤。
第9圖則顯示,本發明之組蛋白去乙醯化酶6之干擾RNA,可專一性地抑制乳癌細胞中該組蛋白去乙醯化酶6的表現。其中控制組干擾RNA(control siRNA)係作為此試驗的負對照,係包含如SEQ ID NO:13及14所示的核酸序列。
第10至13圖分別係經塑化劑誘導之乳癌細胞株,其乳癌細胞的活動能力(如第10圖)、分化能力(如第11圖)及細胞浸潤能力(如第12及13圖)。其中,部份組別之乳癌細胞株係先轉殖入本發明之組蛋白去乙醯化酶6之干擾RNA(包含HDAC6 siRNA-1與HDAC6 siRNA-2,轉入劑量皆為5ng/μl)或控制組干擾RNA(5ng/μl),再與1微莫耳濃度(1μM)塑化劑(鄰苯二甲酸酯或鄰苯二甲酸二丁酯)共同培養,之後再利用細胞增生比色法(XTT assay)分別各組乳癌細胞的活動、分化及細胞浸潤能力。
由第10至13圖結果,乳癌細胞的活動、分化及細胞浸潤能力皆受塑化劑的誘發而明顯提升;然而,藉由組蛋白去乙醯化酶6之干擾RNA的轉殖,則可抑制組蛋白去乙醯化酶6的表現及其下游的訊號傳遞反應,進而抑制 乳癌細胞的活動、分化及細胞浸潤能力。
由以上各試驗均可證實,本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物在投藥至一個體後,可有效阻斷由塑化劑或戴奧辛啟動的訊號傳遞路徑(AhR-cAMP/PKA/CREB1-HDAC6-cMyc),抑制組蛋白去乙醯化酶6的表現,進而達到控制癌細胞增生、轉移及浸潤的功效,以改善雌激素受體陰性型乳癌的預後狀況,特別係由塑化劑所引發的雌激素受體陰性型乳癌。
本發明之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,包含芳香烴受體抑制劑、芳香烴受體拮抗劑、組蛋白去乙醯化酶6抑制劑、組蛋白去乙醯化酶6拮抗劑、cAMP反應元件結合蛋白抑制劑、蛋白磷酸化激酶抑制劑或由前述成分所組成的群組,可阻斷塑化劑或戴奧辛所引發的訊息傳遞路徑,避免雌激素受體陰性型乳癌的增生與惡化,為本發明之功效。
雖然本發明已利用上述較佳實施例揭示,然其並非用以限定本發明,任何熟習此技藝者在不脫離本發明之精神和範圍之內,相對上述實施例進行各種更動與修改仍屬本發明所保護之技術範疇,因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
1‧‧‧塑化劑
2‧‧‧芳香烴受體
3‧‧‧環化磷酸腺苷
4‧‧‧蛋白磷酸化激酶A
5‧‧‧cAMP反應元件結合蛋白
6‧‧‧組蛋白去乙醯化酶6
67‧‧‧cMyc基因
第1圖:塑化劑引發雌激素受體陰性型乳癌之訊息傳遞路徑。
第2圖:乳癌細胞株之芳香烴受體mRNA表現量示意圖。
第3圖:乳癌細胞株之環化磷酸腺苷表現量示意圖。
第4圖:乳癌細胞株之磷酸化cAMP反應元件結合蛋白表現量示意圖。
第5圖:乳癌細胞株之組蛋白去乙醯化酶6的啟動子與cAMP反應元件結合蛋白的結合關係示意圖。
第6圖:乳癌細胞株之組蛋白去乙醯化酶6表現量示意圖。
第7圖:乳癌細胞株之組蛋白去乙醯化酶6表現量示意圖。
第8圖:乳癌細胞株之組蛋白去乙醯化酶6表現量示意圖。
第9圖:乳癌細胞株之組蛋白去乙醯化酶6表現量示意圖。
第10圖:乳癌細胞株之活動能力示意圖。
第11圖:乳癌細胞株之分化能力示意圖。
第12圖:乳癌細胞株之細胞浸潤能力示意圖。
第13圖:乳癌細胞株之細胞浸潤能力示意圖。
<110> 高雄醫學大學
<120> 用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物
<130> PK12537
<160> 14
<210> 1
<211> 19
<212> RNA
<213> AhR siRNA sense
<400> 1
<210> 2
<211> 19
<212> RNA
<213> AhR siRNA antisense
<400> 2
<210> 3
<211> 19
<212> RNA
<213> HDAC6 siRNA-1 sense
<400> 3
<210> 4
<211> 19
<212> RNA
<213> HDAC6 siRNA-1 antisense
<400> 4
<210> 5
<211> 19
<212> RNA
<213> HDAC6 siRNA-2 sense
<400> 5
<210> 6
<211> 19
<212> RNA
<213> HDAC6 siRNA-2 antisense
<400> 6
<210> 7
<211> 19
<212> RNA
<213> CREB1 siRNA sense
<400> 7
<210> 8
<211> 19
<212> RNA
<213> CREB1 siRNA antisense
<400> 8
<211> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> AhR forward primer
<400> 9
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> AhR reverse primer
<400> 10
<210> 11
<211> 15
<212> DNA
<213> HDAC6 forward primer
<400> 11
<210> 12
<211> 18
<212> DNA
<213> HDAC6 reverse primer
<400> 10
<210> 13
<211> 19
<212> RNA
<213> control siRNA-1 sense
<400> 13
<210> 14
<211> 19
<212> RNA
<213> control siRNA antisense
<400> 14
1‧‧‧塑化劑
2‧‧‧芳香烴受體
3‧‧‧環化磷酸腺苷
4‧‧‧蛋白磷酸化激酶A
5‧‧‧cAMP反應元件結合蛋白
6‧‧‧組蛋白去乙醯化酶6
7‧‧‧cMyc基因

Claims (5)

  1. 一種用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,係包含:一芳香烴受體抑制劑,且該芳香烴受體抑制劑係選自由芳香烴受體之干擾RNA及3’,4’-二甲氧基黃酮所組成的群組;其中該芳香烴受體之干擾RNA係呈siRNA形式,且正股siRNA係具有如SEQ ID NO:1所示序列,反股siRNA係具有SEQ ID NO:2所示序列。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,其中更包含醫藥上可接受之載劑。
  3. 如申請專利範圍第2項所述之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,其中該載劑係一核酸轉殖試劑。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,其中該芳香烴受體之干擾RNA的使用劑量為1~10ng/μl。
  5. 如申請專利範圍第1項所述之用以治療塑化劑引發之雌激素受體陰性型乳癌的醫藥組成物,其中該3’,4’-二甲氧基黃酮的使用劑量為1~5μM。
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