JP2005519991A

JP2005519991A - 抗炎症、抗ウイルスおよび抗血栓症活性を有するベンゾイソセレンアゾール誘導体ならびにそれらの使用

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Publication number: JP2005519991A
Application number: JP2004503452A
Authority: JP
Inventors: 慧慧 ▲曾▼
Original assignee: Peking University
Current assignee: Peking University
Priority date: 2001-06-08
Filing date: 2002-06-10
Publication date: 2005-07-07
Anticipated expiration: 2022-06-10
Also published as: CA2450087C; RU2003134946A; AU2002346271A1; US7495019B2; CA2450087A1; ATE540030T1; CN1166651C; US20090117204A1; WO2003095436A1; EP1422225B1; ES2378983T3; JP4500672B2; CN1390837A; US8609702B2; EP1422225A4; EP1422225A1; US20050014801A1; RU2324688C2

Abstract

【目的】
【構成】この発明は、以下の式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）のベンゾイソセレンアゾール誘導体ならびに、それらの医薬的に許容される塩に関する。前記誘導体は、抗炎症、抗ウイルスまたは抗血栓症において用いることができる。
【化１】

Description

（発明の分野）
本発明は、抗腫瘍、抗炎症および抗血栓症活性を有する新規ベンゾイソセレンアゾロニル誘導体ならびにそれらの使用に関する。また、本発明は、ベンゾイソセレンアゾロニル誘導体を含む医薬組成物、薬物製造におけるそれらの使用、炎症性疾患および癌疾患を治療ならびに血栓症を予防する方法にも関する。

（発明の背景）
セレン元素が生体において重要な機能を有するので、多くの研究者はセレンを含有する治療薬に集中している。しかし、無機セレンは吸収困難であり、血中に短い時間しか留まらず、活性が低く、毒性が高いという問題がある。無機セレンの特徴と比較して、有機セレン化合物はこれらについて非常に改善されている。

セレンは重要な微量元素である。長期にわたるセレンの欠乏（＜０．１ｐｐｍ）により、肝壊死、心筋損傷、癌およびリュウマチ性疾患を含む種々の疾患を引き起こしうる。

現在まで、ＧＳＨ−Ｐｘ様に機能し、試験管内でミクロソームの脂質過酸化を阻害し、過酸化損傷から身体を予防する効果を有するベンゾイソセレンアゾロン（ＢＩＳＡ）が知られている。以下の式の２−フェニル−（１，２）−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オン（（Ebselen）エブセレン）が、高抗酸化活性と低毒性（ＬＤ５０＞６８１０ｍｇ／Ｋｇ、マウス）を有するＧＳＨ−Ｐｘ様化合物の最も良いものである。

多くの研究者は、エブセレンを修飾してその抗腫瘍活性を向上させることに専念しているが、今までのところ、それを基にした抗腫瘍活性化合物の成功は報告されていない。従って、本発明の目的はエブセレンを修飾して、より高い抗炎症活性、より広い適合性、より低い毒性を有する新規ビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体を作ることである。その間に、「生体応答調整剤」特性を有する抗腫瘍性有機セレン化合物が、エブセレン修飾を通じて得られた。

（本発明の要旨）
本発明の一観点によれば、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）

［前記式中、
Ｒは、Ｃ_1-6アルキレン、フェニリデン、ビフェニリデン、トリフェニリデンまたは以下の基：

（ただし、Ｍ＝Ｐｔ、ＰｄまたはＲｈ）
であり、
Ｒ’は、糖残基または以下の基：

（ただし、Ｒ’’は、Ｃｌ、Ｈ₂Ｏ、ＯＨ、ＢｒまたはＩであり、
Ｒ’’’は、―Ｈ、−ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅ＯＨ、−ＣＨ₂ＯＨ、−ＣＨ₂ＣＯＮＨ₂、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯＯＨ、−ＣＨ₂（ＣＨ₂）₄ＮＨ₂、−ＣＨ₂ＣＯＯＨ、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯＮＨ₂、−（ＣＨ₂）₃ＣＨ、−（ＣＨ₂）₃ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂、−（ＣＨ₂）₃ＣＨＣＨ₂、−ＣＨ₃、−ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅、−ＣＨ₂ＳＨまたは−ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣＨ₃である）
であり、
Ｒ’’’’は、―Ｈ、−ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅ＯＨ、−ＣＨ₂ＯＨ、−ＣＨ₂ＣＯＮＨ₂、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯＯＨ、−ＣＨ₂（ＣＨ₂）₄ＮＨ₂、−ＣＨ₂ＣＯＯＨ、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯＮＨ₂、−（ＣＨ₂）₃ＣＨ、−（ＣＨ₂）₃ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂、−（ＣＨ₂）₃ＣＨＣＨ₂、−ＣＨ₃、−ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅、−ＣＨ₂ＳＨまたは−ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣＨ₃である］
のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体およびそれらの医薬的に許容される塩が提供される。

本発明の別の観点によれば、活性成分として上記化合物（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）またはそれらの医薬的に許容される塩と、医薬的に許容される賦形剤または担体とを含む医薬組成物が提供される。

本発明のさらに別の観点によれば、癌および炎症性疾患の治療または血栓症の予防のための薬剤製造における、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。

本発明のさらに別の観点によれば、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体またはそれらの医薬的に許容される塩の治療的に効果的な投与量を、治療が必要な患者に投与する工程を含む、ヒトを含む哺乳類の炎症性疾患および癌疾患の治療または血栓症の予防のための方法が提供される。

本発明のさらに別の観点によれば、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体またはそれらの医薬的に許容される塩の治療的に効果的な投与量を、他の抗炎症剤、抗腫瘍剤または抗血栓症剤と組み合わせて、治療が必要な患者に投与する工程を含む、ヒトを含む哺乳類の炎症性疾患および癌疾患の治療または血栓症の予防のための方法が提供される。

（発明の詳細な説明）
本発明によるベンゾイソセレンアゾロニル誘導体は、エブセレンの活性ファーマコアを考慮し、官能基を増強するよう設計された。その構造の特徴ゆえ、本発明の化合物は、生体において多標的であり、従って複合的生物活性を示す。その化合物は、癌への阻害作用の他にも、生体応答調節剤として機能する抗腫瘍剤であるという事実のため、それらは新規な抗腫瘍剤である。

本発明の一実施態様によれば、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）

この実施態様において、好ましい化合物は、Ｒが、Ｃ_1-4アルキレン、フェニリデンまたはビフェニリデン基である一般式（Ｉ）のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体である。特に好ましいのは、ＲがＣ₂−アルキレンまたはビフェニリデン基である化合物である。

Ｒ’として、１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシル基が好ましい。

Ｒ’’’およびＲ’’’’として、独立して、−Ｈ、−ＣＨ₃、−ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅、−ＣＨ₂ＳＨまたは−ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣＨ₃を表すのが好ましい。

本発明によるベンゾイソセレンアゾロニル誘導体は、当該分野の当業者に知られる方法または、本発明の明細書中に記載の方法のいずれに従っても製造することができる。例えば、２−（クロロセレノ）ベンゾイルクロライドを、冷却下、窒素雰囲気下に、適当な有機溶媒中で対応するジアミンまたはアミノ糖と反応させ、その後当該分野の当業者に公知な標準的処置を用いて単離し、所望の化合物を得る。

ＲまたはＲ’が金属複合体である本発明によるベンゾイソセレンアゾロニル誘導体は、白金化合物材料を用いることにより、当該分野の当業者に公知の方法に従い、製造することができる。

本発明によるベンゾイソセレンアゾロニル誘導体またはそれらの塩は、純粋な物質の形態または適当な医薬組成物の形態で投与することができる。前記医薬組成物は、いずれかの許容される投与経路を経て、他の剤と任意に組み合わせ、活性成分として一般式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の化合物を含む。従って、本発明はまた、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）のベンゾイソセレンアゾロニル誘導体またはそれらの医薬的に許容される塩と、医薬的に許容される賦形剤または担体とを含む医薬組成物を含み、その医薬組成物は、炎症性疾患および癌疾患を治療するか、または血栓症を予防するのに用いることができる。

発明の化合物または組成物は、固形、半固形、凍結乾燥粉末または液体の形態で、経口、鼻腔内、直腸内、経皮的または非経口を含む多数の経路により投与することができるが、それらには限定されない。例えば、この組成物は、錠剤、座剤、丸剤、軟および硬ゼラチンカプセル剤、顆粒剤、液剤、懸濁剤またはエアゾールの形態で用いることができる。厳密な投与量の単一形態が好ましい。この医薬組成物は、通常の賦形剤または担体と、１以上の発明の化合物とを含む。この組成物は、さらに他の治療剤等を含んでもよい。

一般に、投与方法に応じて、医薬的に許容な組成物は、活性成分として本発明の化合物１〜９９重量％と、適当な医薬賦形剤９９〜１重量％とを含んでもよい。好ましい組成物は、約５〜７５重量％の本発明の化合物を含み、残りは適当な賦形剤または担体である。

好ましい投与経路は、疾患の重篤度に応じて調整できる通常の１日投与量プロトコルを用いる、静脈注射によるものである。本発明による化合物またはそれらの医薬的に許容される塩は、注射剤用剤形に調剤されてもよい。例えば、約０．５〜５０重量％の活性剤としての本発明の化合物を、液状賦形剤または担体（例えば、水、生理食塩水、グルコース水溶液、エタノールおよびグリセロール）中に分散させ、液剤または懸濁剤を形成する。

この医薬組成物は、液剤または懸濁剤の形態で投与することができ、例えば、本発明の化合物（例えば、約０．５〜２０重量％）と任意な他のアジュバントとを、担体（水、生理食塩水、グルコース水溶液、エタノールおよびグリセロールを含むが、これに限定されない）中に溶解または分散させることにより得ることができる。

さらに、必要であれば、本発明による医薬組成物は、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝液、抗酸化剤等のような補助物質を含んでもよい。詳細な例としては、クエン酸、ソルビタンモノラウリン酸塩、トリエタノールアミンオレイン酸塩、ブチルヒドロキシベンゼン等である。

本発明の組成物の製品は、当該分野の当業者によく知られるか、明白な方法のいずれかにより得ることができる（例えば、「レミントンの薬学（Remington's Pharmaceutical Sciences）、１８版、Mack Publishing Company、Easton、ペンシルバニア、1990」参照）。それにはかかわらず、本発明の組成物は、関係する疾患を治療するのに効果的な量の本発明の化合物を含む。

本発明の別の観点によれば、ヒトを含む哺乳類の炎症性疾患および癌疾患の治療または血栓症の予防のための方法が提供される。その方法は、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体またはそれらの医薬的に許容される塩の治療的に効果的な投与量を、治療が必要な患者に投与する工程を含む。

本発明のさらに別の観点によれば、ヒトを含む哺乳類の炎症性疾患および癌疾患の治療または血栓症の予防のための方法が提供される。その方法は、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体またはそれらの医薬的に許容される塩の治療的に効果的な投与量を、他の抗炎症剤、抗腫瘍剤または抗血栓症剤と組み合わせて、治療が必要な患者に投与する工程を含む。

本発明のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体が他の抗炎症剤、抗腫瘍剤または抗血栓症剤と共に適用される場合には、次々と、または同時に投与されてもよい。例えば、本発明のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体が最初に投与され、次に他の抗炎症剤、抗腫瘍剤または抗血栓症剤が投与される。代わりに、他の抗炎症剤、抗腫瘍剤または抗血栓症剤が最初に投与され、次いで本発明のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体またはそれらの医薬的に許容される塩が投与される。

好ましい実施態様においては、他の抗腫瘍剤は、シスプラチン、タキソール、シクロホスファミド、イソホスファミド、メトトレキセート、フルオロウラシル、エピルビシン（Epirubicin）、ダウノマイシン、アドリアマイシン、マイトマイシン、ピンヤンマイシン（Pingyangmycin）、カーボプラチン（Carboplatin）、ロムスチン、カルムスチンまたはそれらの組み合わせを含む。

好ましい実施態様においては、他の抗炎症剤は、アスピリン、インドメタシン、セファロスポリン、マクロライド類またはそれらの組み合わせを含む。

好ましい実施態様においては、他の抗血栓症剤は、アスピリンを含む。

本発明によるベンゾイソセレンアゾロニル誘導体の投与量は、癌疾患に対しては０．０５〜２５０ｍｇ／体重ｋｇの範囲であり、炎症性疾患に対しては１〜１００ｍｇ／体重ｋｇの範囲であり、血栓症を予防するためには１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲である。

他の抗炎症剤、抗腫瘍剤または抗血栓症剤と併せられる場合、本発明のベンゾイソセレンアゾロニル誘導体の投与量は、著しく、単独で用いられるときの約１／１０〜半分まで減らされる。

本発明に関するより詳細な説明は以下のとおりである。

１，２−ビス［（１，２）−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オンイル］エタン（Ｅ００３）
テトラヒドロフラン中の２−（クロロセレノ）ベンゾイルクロライド１ｇを、エチレンジアミン０．１４ｍｌとトリエチルアミン１．２９ｍｌとの攪拌溶液に、窒素雰囲気下、氷浴中で冷却しながら、滴下して加えた。白色沈殿物が生じた。３時間攪拌後、薄黄色懸濁液が生成した。溶媒を真空下に蒸発させ、薄黄色残渣を吸引し、水で洗浄し、その後、ＤＭＳＯから再結晶し、表題の化合物を得た。収量：０．１ｇ（１１％）、ｍ．ｐ．＞３２０℃。ＥＩ−ＭＳ：（ｍ／ｚ）（ｍ⁺）４２４；¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：７．３７−７．９８（８Ｈ、ｍ、ＡｒＨ）、４．０２（４Ｈ、ｓ、−ＣＨ₂ＣＨ₂−）。

４，４’−ビス［（１，２）−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オンイル］−ビフェニル（Ｅ００２）
テトラヒドロフラン中の２−（クロロセレノ）ベンゾイルクロライド０．５ｇを、ビフェニル−ジアミン０．１８２ｇとトリエチルアミン０．６２ｍｌとの攪拌溶液に、窒素雰囲気下、氷浴中で冷却しながら、滴下して加えた。３時間攪拌後、白色沈殿物が生成し、それを吸引し、テトラヒドロフランおよびエタノールで洗浄した。ＤＭＳＯから再結晶した後、薄茶色沈殿物の表題の化合物を得た。収量：０．１ｇ（１８．２％）、ｍ．ｐ．＞３２０℃。ＥＩ−ＭＳ：（ｍ／ｚ）（ｍ⁺）５５０；¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：７．４８−８．１２（ｍ、１６Ｈ、ＡｒＨ）。

２−（１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシル）−（１，２）−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オン（Ｅ００１）
１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−Ｄ−グルコサミン７３０ｍｇを、窒素雰囲気下、氷浴中で冷却しながら、クロロホルム中に溶解させた。クロロホルム中の２−（クロロセレノ）ベンゾイルクロライド０．５５１ｇの溶液を、攪拌下にそこへゆっくりと滴下した。２時間後、反応溶液を、溶離液として石油：酢酸エチル＝３：１を用いてシリカゲルカラムで分離した。薄黄色固体として、表題の化合物を得た。収量：２００ｍｇ（１８．０％）、ｍ．ｐ．７３−７５℃。ＩＲ１７４５（−ＣＯ）；ＵＶ（ＣＨＣｌ₃）３２０ｎｍ、２６０ｎｍ（イソセレンアゾール環）。ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）５６６．３（Ｍ＋Ｋ）。¹ＨＮＭＲ：δＨ（ｐｐｍ）７．２４−８．１２（４Ｈ、ｍ、ＡｒＨ）、６．２０（１Ｈ、ｄ、糖中のアノマーＨ）、３．９７−５．６４（ｍ、６Ｈ、糖：Ｈ）、１．８２−２．１６（１２Ｈ、ｍ、−ＣＯＣＨ₃）。¹³ＣＮＭＲ：δ（ｐｐｍ）１６６．７７、１６８．６６、１６９．２９、１６９．６１、１７０．４４（−ＣＯ）、１２４．２２、１２６．２８、１２８．８１、１３２．３７、１３８．３０（ベンゼン中の炭素）、９１．４３、（糖中の炭素、Ｃ−１）、６０．１５、６１．３５、６８．３５、７１．９１、７２．３５、（糖中の炭素、Ｃ−２、３、４、５、６）、２０．３４、２０．４８、２０．５５、２０．７８（−ＣＯＣＨ₃）。

１，２−ジアミノシクロヘキサノ白金−２−グリシン−［（１，２）−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オン］の合成
１）Ｋ₂ＰｔＣｌ₄の合成
１０％ヒドラジン水溶液を、８０℃で、徹底的に攪拌しながら、７ｍｌのＨ₂Ｏ中の０．７ｇ（１．４４ｍｍｏｌ）のＫ₂ＰｔＣｌ₆攪拌溶液に滴下して加えた。反応が続き、暗赤色溶液が生成した。残存Ｋ₂ＰｔＣｌ₆および金属白金をろ過し、廃棄した。ろ液を濃縮して、赤色針状結晶としてＫ₂ＰｔＣｌ₄を得た。収量：０．５ｇ（８４％）。

２）１，２−ジアミノシクロヘキサノ白金（ＩＩ）の合成
２ｍｌＨ₂Ｏ中のＫ₂ＰｔＣｌ₄（０．２ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）の溶液を、沸騰水浴上で、光照射を避けながら、０．６ｇＨ₂Ｏ中のＫＩ（０．８ｇ）の溶液と混合した。温度をすばやく８０℃に上昇させ、暗所中で３０分保持した。０．０５ｇの１，２−ジアミノシクロヘキサン固体をその溶液に加えると、黄色沈殿物が生成した。その沈殿物を吸引し、少量の氷水、エタノールおよびジエチルエーテルで洗浄した。収量：０．２１ｇ（７８％）。

３）１，２−ジアミノシクロヘキサノ白金−２−グリシン−［（１，２）−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オン］
０．０２ｇの２−グリシンエチルエステル−［（１，２）−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オン］を、０．５ｍｌのクロロホルムに溶解させた。その後、１５ｍｌのＮａＯＨ溶液（１ｍｏｌ／Ｌ）をそこへ加えた。その溶液を１０時間５０〜６０℃で保温した。黄色水層を集めた後、１５ｍｌのＮａＯＨ溶液（１ｍｏｌ／Ｌ）を再度加えて、そのエステルを完全に加水分解した。ＨＣｌ（１ｍｏｌ／Ｌ）を合わせた水層に加えて酸性にし、その結果、２−グリシン−［（１，２）−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オン］の不溶性生成物が沈殿した。不溶性固体を吸引して乾燥させた。収量：０．０２５ｇ。

０．０１５ｇの１，２−ジアミノシクロヘキサノ白金を０．１５ｍｌの水中に溶解させ、黄色ペーストを形成した。０．５ｍｌのＨ₂Ｏ中のＡｇＮＯ₃（０．００９ｇ）の溶液を、攪拌しながら４時間にわたって、光照射を避けながら、そのペーストに加えた。形成したＡｇＩ黄色沈殿物を廃棄し、残渣を少量の氷水で洗浄した。このとき、ろ液の１滴に１ＭＫＣｌの１滴を混合しても、白色濁りは生じなかった。

０．０１５ｇの２−グリシン−［（１，２）−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オン］に、０．００３６ｇのＫＯＨと２ｍｌの水を加えて、黄色懸濁液を得た。その黄色懸濁液を、９０分間暗所で１，２−ジアミノシクロヘキサノ白金の攪拌溶液と混合し、ろ過し、減圧下に乾燥させて黄色結晶を得た。収量：２５ｍｇ（５０％）。ＦＡＢ：ｍ／ｚ（Ｍ＋１）５６６、Ｆａｒ−ＩＲ３４０ｃｍ^-1（Ｐｔ−Ｏ）、ＩＲ４２０ｃｍ^-1（Ｐｔ−Ｎ）。

化合物による癌細胞の成長阻害実験
ＳＲＢアッセイ（付着細胞）を実施例で適用した。癌細胞（３〜５×１０⁴セル／ｍｌ）を、５％ＣＯ₂と飽和湿度の空気中、３７℃で２４時間、９６ウェルプレート（１８０μｌ／ウェル）中に接種した。異なる濃度の試験化合物の溶液２０μｌを各ウェルに接種し、５％ＣＯ₂と飽和湿度の空気中、３７℃で、指示された時間の間、培養を続けた。指示された時間の後、培養溶液を廃棄し、その後１００μｌの１０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を加え、４℃の冷蔵庫内に１時間置いて細胞を固定化させた。その溶液を廃棄し、そのプレートを蒸留水で洗浄した。遠心分離により乾燥した後、５０μｌのＳＲＢ溶液（１％ＨＡｃを含む０．４％）を各ウェルに加え、１０分間周囲温度で置いた。過剰のＳＲＢ溶液を廃棄した後、９６ウェルプレートを１％酢酸塩溶液で５回洗浄し、結合していないＳＲＢを除去した。遠心分離により乾燥した後、そのプレートをさらに空気中で乾燥させた。１００μｌの１０ｍｍｏｌ／Ｌトリス溶液（ｐＨ１０．５、塩基性、緩衝溶液なし）を各ウェルに加え、細胞と結合しているＳＲＢを完全に溶解させた。均質化の後、各ウェルのＯＤ値を９６ウェルマイクロプレートリーダー（TECAN SUNRISE Magellan米国）により５４０ｎｍで測定した。ここで、ＯＤ値のデータ＝ＯＤ値（ＭＴＴまたはＳＲＢ＋細胞）−ＯＤ値（ＭＴＴまたはＳＲＢ、遊離セル）。ＯＤ±ＳＤは、平行な群に対してである。細胞生存率および薬物阻害率を以下の式に従い、算出した。
細胞生存率％＝（処理した群のＯＤ／コントロールのＯＤ値）×１００％
薬物阻害率％＝［１−（処理した群のＯＤ値）／コントロールのＯＤ値］×１００％
上記ＳＲＢ方法に従い、Ｅ００３をＢｅｌ−７４０２（ヒト肝臓癌細胞）、ＫＢ（ヒト鼻咽頭癌細胞）およびＨｅｌａ（ヒト子宮頚癌細胞）中でスクリーニングした。その結果を表１に示す。

さらに、Ｅ００３のＩＣ₅₀を、上記と同じ方法を用いて９種類のヒト癌細胞ラインについて異なるときに測定した。癌細胞ラインの成長に対するＥ００３の阻害効果は、表２に挙げた。

腫瘍重量に対する化合物の効果
ルイス肺癌組織を蘇生させ、通常の手法に従い二次培養させた。一片のルイス肺癌を、接種および成長のため、各Ｃ５７マウス背中の皮下の位置に移植した。ルイス肺癌細胞を生理食塩水中に分散させ、１０⁶／ｍｌの細胞懸濁液を形成した。０．２〜０．３ｍｌの懸濁駅を、各Ｃ５７マウスに接種した。

マウスを無作為に各群１０匹ずつの３つの群に分けた。処理群において、マウスには５０ｍｇ／ｋｇの量のＥ００３を腹腔内注射した。参照群においては、ＤＤｐ、２ｍｇ／ｋｇ。負のコントロール群（溶媒群）においては、０．５％ＣＭＣ−Ｎａ。各群の全体体積は、同じである。マウスが死ぬまで、移植の第２日めから３日間、Ｅ００３を腹腔内により投与した。Ｃ５７マウスを７０％アルコールで殺菌した。ルイス肺癌組織を除去し、写真を撮影して、重量を測定した。その後、皮下腫瘍を更なる分析のためホルムアルデヒドで固定した。

ＤＤＰおよびＥ００３の腫瘍体積に対する効果を表３に示す。

表３の結果から、ルイス肺癌細胞におけるＥ００３の阻害効果がＤＤＰの効果より強いことが分る。

他の抗腫瘍剤と組み合わせた本発明の共同作用
この実施例において、他の抗腫瘍剤としてのタキソール、アドリアマイシンおよびシスプラチンのそれぞれと組み合わせた化合物Ｅ００３の癌細胞の成長に対する効果を、実施例６に説明した方法と同様にして測定した。化合物００３を、抗腫瘍剤と共に、後に、または前に、４．０時間の間隔をおいて投与した。

注記：
（１）記号および濃度
Ｅ：Ｅｂ、μｍｏｌ／Ｌで；Ａ：アドリアマイシン、ｍｇ／Ｌで；ＤＤＰ：シスプラチン、μｍｏｌ／Ｌで；Ｔ：タキソール、ｍｇ／Ｌで。
（２）投与方法
ＥおよびＡは、例えば、投与方法を説明するための例である。Ｅ＋Ａは、ＥとＡが表に挙げる異なる濃度で同時に投与されることを表す。Ｅ−Ａは、Ｅの投与がＡより４時間先に行われることを表す。Ａ−Ｅは、Ａの投与がＥより４時間先に行われることを表す。他は、前記説明と同様である。

抗炎症活性
試験化合物Ｅ００１、Ｅ００２およびＥ００３の抗炎症活性を、マウスのキシレン誘導耳水腫において測定した。マウスを１つの非処理コントロール群、３つの参照群および３つの処理群に無作為に分けた。各群には１０匹の動物がいる。試験化合物、生理食塩水および参照薬物（インドメタシン、アスピリンおよびエブセレン）をそれぞれ経口で投与した。耳水腫を、投与の１時間後にキシレン（耳毎に０．５ｍｌ）を右耳の内表面に局所投与することにより誘導した。２時間後、マウスを殺した。直径８ｍｍの耳重量における変化を正確なマイクロメーターで測定した。各化合物のキシレン誘導耳水腫に対する阻害率を、耳重量に従い算出し、その結果を表７に挙げた。

本発明の化合物は、アスピリンやインドメタシンよりも高い抗炎症活性を示したと結論づけられる。

血栓症に対する本発明の化合物の効果
オスＳＤラット（３００〜４００ｇ）を無作為に１つの非処理コントロール群（０．２５％ＣＭＣ）、１つのＡＳＡ参照群（０．２５％ＣＭＣ、２、３のトゥイーン−８０）および３つの処理群（化合物Ｅ００１、Ｅ００２およびＥ００３）に分けた。各群には５匹の動物がいる。本発明の化合物および参照薬物を、それぞれ経口で３０ｍｇ／ｋｇの量で投与した。投与の１時間後に、それら動物にウレタンで麻酔をかけた。首動脈を手術して分離し、ＯＴ値を測定した（刺激条件：電気、３ｍＡ；時間、１８０秒）。この結果を表８に示す。

Claims

一般式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）

［前記式中、
Ｒは、Ｃ_1-6アルキレン、フェニリデン、ビフェニリデン、トリフェニリデンまたは以下の基：

（ただし、Ｍ＝Ｐｔ、ＰｄまたはＲｈ）
であり、
Ｒ’は、糖残基または以下の基：

（ただし、Ｒ’’は、Ｃｌ、Ｈ₂Ｏ、ＯＨ、ＢｒまたはＩであり、
Ｒ’’’は、―Ｈ、−ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅ＯＨ、−ＣＨ₂ＯＨ、−ＣＨ₂ＣＯＮＨ₂、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯＯＨ、−ＣＨ₂（ＣＨ₂）₄ＮＨ₂、−ＣＨ₂ＣＯＯＨ、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯＮＨ₂、−（ＣＨ₂）₃ＣＨ、−（ＣＨ₂）₃ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂、−（ＣＨ₂）₃ＣＨＣＨ₂、−ＣＨ₃、−ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅、−ＣＨ₂ＳＨまたは−ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣＨ₃である）
であり、
Ｒ’’’’は、―Ｈ、−ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅ＯＨ、−ＣＨ₂ＯＨ、−ＣＨ₂ＣＯＮＨ₂、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯＯＨ、−ＣＨ₂（ＣＨ₂）₄ＮＨ₂、−ＣＨ₂ＣＯＯＨ、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯＮＨ₂、−（ＣＨ₂）₃ＣＨ、−（ＣＨ₂）₃ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂、−（ＣＨ₂）₃ＣＨＣＨ₂、−ＣＨ₃、−ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅、−ＣＨ₂ＳＨまたは−ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣＨ₃である］
のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体およびそれらの医薬的に許容される塩。
Ｒが、Ｃ_1-6アルキレンである請求項１に記載のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体。
Ｒが、エチレンである請求項２に記載のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体。
Ｒが、フェニリデンまたはビフェニリデン基である請求項１に記載のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体。
Ｒが、ビフェニリデン基である請求項４に記載のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体。
Ｒ’が、１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシル基である請求項１に記載のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体。
Ｒ’’’およびＲ’’’’が、独立して、−Ｈ、−ＣＨ₃、−ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅、−ＣＨ₂ＳＨまたは−ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣＨ₃である請求項１に記載のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体。
活性成分として請求項１に記載の一般式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体またはそれらの医薬的に許容される塩と、医薬的に許容される賦形剤または担体とを含む医薬組成物。
他の抗炎症剤、抗腫瘍剤または抗血栓症剤をさらに含む請求項８に記載の医薬組成物。
他の抗腫瘍剤が、シスプラチン、アドリアマイシン、タキソールまたはそれらの組み合わせを含む請求項９に記載の医薬組成物。
他の抗炎症剤が、アスピリン、インドメタシンまたはそれらの組み合わせを含む請求項９に記載の医薬組成物。
他の抗血栓症剤が、アスピリンを含む請求項９に記載の医薬組成物。
癌および炎症性疾患の治療または血栓症の予防のための薬剤製造における、請求項１に記載の一般式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体またはそれらの医薬的に許容される塩の使用。
請求項１に記載の一般式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体またはそれらの医薬的に許容される塩の治療的に効果的な投与量を、治療が必要な患者に投与する工程を含む、ヒトを含む哺乳類の炎症性疾患および癌疾患の治療または血栓症の予防のための方法。
請求項１に記載の一般式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体またはそれらの医薬的に許容される塩の治療的に効果的な投与量を、他の抗炎症剤、抗腫瘍剤または抗血栓症剤と組み合わせて、治療が必要な患者に投与する工程を含む、ヒトを含む哺乳類の炎症性疾患および癌疾患の治療または血栓症の予防のための方法。
一般式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体またはそれらの医薬的に許容される塩と、他の抗炎症剤、抗腫瘍剤または抗血栓症剤とが、同時に投与される請求項１５に記載の方法。
一般式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体またはそれらの医薬的に許容される塩が最初に投与され、次いで他の抗炎症剤、抗腫瘍剤または抗血栓症剤が投与される請求項１５に記載の方法。
他の抗炎症剤、抗腫瘍剤または抗血栓症剤が最初に投与され、次いで一般式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）のビスベンゾイソセレンアゾロニル誘導体またはそれらの医薬的に許容される塩が投与される請求項１５に記載の方法。
他の抗腫瘍剤が、シスプラチン、アドリアマイシン、タキソールまたはそれらの組み合わせを含む請求項１５〜１８のいずれかに記載の方法。
他の抗炎症剤が、アスピリン、インドメタシンまたはそれらの組み合わせを含む請求項１５〜１８のいずれかに記載の方法。
他の抗血栓症剤が、アスピリンを含む請求項１５〜１８のいずれかに記載の方法。