HU229776B1 - Interleukin 15-re (IL-15-re) specifikus emberi antitestek - Google Patents
Interleukin 15-re (IL-15-re) specifikus emberi antitestek Download PDFInfo
- Publication number
- HU229776B1 HU229776B1 HU0402653A HUP0402653A HU229776B1 HU 229776 B1 HU229776 B1 HU 229776B1 HU 0402653 A HU0402653 A HU 0402653A HU P0402653 A HUP0402653 A HU P0402653A HU 229776 B1 HU229776 B1 HU 229776B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- human
- antibody
- cells
- antibodies
- seq
- Prior art date
Links
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 title claims description 298
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 title claims description 44
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 title claims description 44
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 137
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 113
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 56
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 44
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 43
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 41
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 37
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 35
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 35
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 32
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 31
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 29
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 29
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 29
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 28
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 24
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 claims description 23
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 22
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 21
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 19
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 19
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 17
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 14
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 13
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 12
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 12
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 12
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 10
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 9
- 239000004575 stone Substances 0.000 claims description 8
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 claims description 7
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 7
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 5
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 claims description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims description 5
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims description 5
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 claims description 4
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 4
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 230000000762 glandular Effects 0.000 claims description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 claims description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 claims description 2
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 6
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims 2
- 101001018064 Homo sapiens Lysosomal-trafficking regulator Proteins 0.000 claims 1
- 241000764238 Isis Species 0.000 claims 1
- 108060008225 Thiolase Proteins 0.000 claims 1
- 102000002932 Thiolase Human genes 0.000 claims 1
- 238000001467 acupuncture Methods 0.000 claims 1
- 230000000386 athletic effect Effects 0.000 claims 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 claims 1
- 108091036078 conserved sequence Proteins 0.000 claims 1
- 239000004489 contact powder Substances 0.000 claims 1
- 230000002070 germicidal effect Effects 0.000 claims 1
- 102000049826 human LYST Human genes 0.000 claims 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 claims 1
- 230000025020 negative regulation of T cell proliferation Effects 0.000 claims 1
- 238000010422 painting Methods 0.000 claims 1
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 claims 1
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 claims 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 claims 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 66
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 45
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 44
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 38
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 33
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 33
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 33
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 33
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 28
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 21
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 21
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 21
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 19
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 19
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 18
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 18
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 18
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 18
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 17
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 17
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 16
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 16
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 15
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 14
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 14
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 14
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 13
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 13
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 13
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 13
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 13
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 12
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 11
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 11
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 11
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 11
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 11
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 10
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 9
- -1 arglnine Chemical compound 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 9
- 230000006870 function Effects 0.000 description 9
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 8
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 7
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 6
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 6
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 6
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 6
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 6
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 6
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 6
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 6
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 6
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 6
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 6
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 6
- 101001055157 Homo sapiens Interleukin-15 Proteins 0.000 description 5
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 5
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 5
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 5
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 5
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 102000056003 human IL15 Human genes 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 5
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 5
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 230000001185 psoriatic effect Effects 0.000 description 5
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 4
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000283153 Cetacea Species 0.000 description 4
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 4
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 4
- OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 4
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 4
- ANHVRCNNGJMJNG-BZSNNMDCSA-N Tyr-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O ANHVRCNNGJMJNG-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 4
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 4
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 4
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 4
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 241001435619 Lile Species 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 3
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 3
- LDEBVRIURYMKQS-WISUUJSJSA-N Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO LDEBVRIURYMKQS-WISUUJSJSA-N 0.000 description 3
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 244000309466 calf Species 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 3
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 3
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 3
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 3
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 3
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 3
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 3
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VLIJAPRTSXSGFY-STQMWFEESA-N Arg-Tyr-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 VLIJAPRTSXSGFY-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 2
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- DPNWSMBUYCLEDG-CIUDSAMLSA-N Asp-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DPNWSMBUYCLEDG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 235000000832 Ayote Nutrition 0.000 description 2
- 101100506090 Caenorhabditis elegans hil-2 gene Proteins 0.000 description 2
- 101100351961 Caenorhabditis elegans pgp-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 2
- 240000004244 Cucurbita moschata Species 0.000 description 2
- 235000009854 Cucurbita moschata Nutrition 0.000 description 2
- 235000009804 Cucurbita pepo subsp pepo Nutrition 0.000 description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 2
- 241000272184 Falconiformes Species 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 2
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 2
- YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N Glu-Tyr Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- HAOUOFNNJJLVNS-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Ser Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HAOUOFNNJJLVNS-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N Gly-Ser-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 206010018498 Goitre Diseases 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 240000006240 Linum usitatissimum Species 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 2
- 102000019040 Nuclear Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010051791 Nuclear Antigens Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 241000282322 Panthera Species 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N Pro-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- OQPNSDWGAMFJNU-QWRGUYRKSA-N Ser-Gly-Tyr Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 OQPNSDWGAMFJNU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N Ser-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 2
- UNURFMVMXLENAZ-KJEVXHAQSA-N Thr-Arg-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O UNURFMVMXLENAZ-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 2
- FQPDRTDDEZXCEC-SVSWQMSJSA-N Thr-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FQPDRTDDEZXCEC-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 2
- YKRQRPFODDJQTC-CSMHCCOUSA-N Thr-Lys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN YKRQRPFODDJQTC-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 2
- GRIUMVXCJDKVPI-IZPVPAKOSA-N Thr-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O GRIUMVXCJDKVPI-IZPVPAKOSA-N 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 2
- ARKBYVBCEOWRNR-UBHSHLNASA-N Trp-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ARKBYVBCEOWRNR-UBHSHLNASA-N 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000010426 asphalt Substances 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 2
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 2
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 2
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 2
- 201000003872 goiter Diseases 0.000 description 2
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 2
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 2
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 2
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 2
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 235000015136 pumpkin Nutrition 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 2
- 210000005222 synovial tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 2
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 2
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 2
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N (1-carboxy-2-sulfanylethyl)azanium;chloride;hydrate Chemical compound O.Cl.SCC(N)C(O)=O QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RLLPVAHGXHCWKJ-IEBWSBKVSA-N (3-phenoxyphenyl)methyl (1s,3s)-3-(2,2-dichloroethenyl)-2,2-dimethylcyclopropane-1-carboxylate Chemical compound CC1(C)[C@H](C=C(Cl)Cl)[C@@H]1C(=O)OCC1=CC=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1 RLLPVAHGXHCWKJ-IEBWSBKVSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KPZGRMZPZLOPBS-UHFFFAOYSA-N 1,3-dichloro-2,2-bis(chloromethyl)propane Chemical compound ClCC(CCl)(CCl)CCl KPZGRMZPZLOPBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBOMLICNUCNMMY-KJFJCRTCSA-N 1-[(4s,5s)-4-azido-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-KJFJCRTCSA-N 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRQUFUKTQHISJB-YYADALCUSA-N 2-[(E)-N-[2-(4-chlorophenoxy)propoxy]-C-propylcarbonimidoyl]-3-hydroxy-5-(thian-3-yl)cyclohex-2-en-1-one Chemical compound CCC\C(=N/OCC(C)OC1=CC=C(Cl)C=C1)C1=C(O)CC(CC1=O)C1CCCSC1 KRQUFUKTQHISJB-YYADALCUSA-N 0.000 description 1
- VDHIEQOYPSVNIM-UHFFFAOYSA-N 2-hexyldecyl 2-ethylhexanoate Chemical compound CCCCCCCCC(CCCCCC)COC(=O)C(CC)CCCC VDHIEQOYPSVNIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WUIABRMSWOKTOF-OYALTWQYSA-N 3-[[2-[2-[2-[[(2s,3r)-2-[[(2s,3s,4r)-4-[[(2s,3r)-2-[[6-amino-2-[(1s)-3-amino-1-[[(2s)-2,3-diamino-3-oxopropyl]amino]-3-oxopropyl]-5-methylpyrimidine-4-carbonyl]amino]-3-[(2r,3s,4s,5s,6s)-3-[(2r,3s,4s,5r,6r)-4-carbamoyloxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)ox Chemical compound OS([O-])(=O)=O.N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1NC=NC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C WUIABRMSWOKTOF-OYALTWQYSA-N 0.000 description 1
- OGRXKBUCZFFSTL-UHFFFAOYSA-N 4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanol Chemical compound O=NN(C)CCCC(O)C1=CC=CN=C1 OGRXKBUCZFFSTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFTGQIQVUVTBJU-UHFFFAOYSA-N 5,6-dihydroimidazo[2,1-c][1,2,4]dithiazole-3-thione Chemical compound C1CN2C(=S)SSC2=N1 BFTGQIQVUVTBJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate Chemical compound C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP(O)(=O)O)=CNC2=C1 QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NNDLQUNWZOIESH-UHFFFAOYSA-N 8-hydroxy-7-[[7-[(8-hydroxy-5-sulfoquinoline-7-carbonyl)amino]-4-[3-[(8-hydroxy-5-sulfoquinoline-7-carbonyl)amino]propyl]heptyl]carbamoyl]quinoline-5-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=NC2=C(O)C(C(=O)NCCCC(CCCNC(=O)C=3C(=C4N=CC=CC4=C(C=3)S(O)(=O)=O)O)CCCNC(=O)C3=C(C4=NC=CC=C4C(=C3)S(O)(=O)=O)O)=CC(S(O)(=O)=O)=C21 NNDLQUNWZOIESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- QDGMZAOSMNGBLP-MRFFXTKBSA-N Ala-Trp-Tyr Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CC3=CC=C(C=C3)O)C(=O)O)N QDGMZAOSMNGBLP-MRFFXTKBSA-N 0.000 description 1
- 101100443255 Arabidopsis thaliana DIR10 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000239223 Arachnida Species 0.000 description 1
- CYXCAHZVPFREJD-LURJTMIESA-N Arg-Gly-Gly Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O CYXCAHZVPFREJD-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- CUQDCPXNZPDYFQ-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CUQDCPXNZPDYFQ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N Asp-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 206010063659 Aversion Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283724 Bison bonasus Species 0.000 description 1
- 101001042463 Bitis arietans C-type lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091007914 CDKs Proteins 0.000 description 1
- 101710180366 CDP-L-myo-inositol myo-inositolphosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 206010064063 CHARGE syndrome Diseases 0.000 description 1
- 101100505076 Caenorhabditis elegans gly-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100394073 Caenorhabditis elegans hil-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100505161 Caenorhabditis elegans mel-32 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100349264 Caenorhabditis elegans ntr-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100372243 Caenorhabditis elegans urm-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 235000017399 Caesalpinia tinctoria Nutrition 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N Carmustine Chemical compound ClCCNC(=O)N(N=O)CCCl DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000324343 Causa Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZHLKXBJTJHRTTE-UHFFFAOYSA-N Chlorobenside Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1CSC1=CC=C(Cl)C=C1 ZHLKXBJTJHRTTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100038215 Chromodomain-helicase-DNA-binding protein 7 Human genes 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 241001465977 Coccoidea Species 0.000 description 1
- 108091033380 Coding strand Proteins 0.000 description 1
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N Cyanide Chemical compound N#[C-] XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000015792 Cyclin-Dependent Kinase 2 Human genes 0.000 description 1
- 108010024986 Cyclin-Dependent Kinase 2 Proteins 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- 101150097493 D gene Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- NTSBMKIZRSBFTA-AIDOXSFESA-N Digoxigenin bisdigitoxoside Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)O[C@@H](O[C@@H]2C[C@@H]3[C@]([C@@H]4[C@H]([C@]5(CC[C@@H]([C@@]5(C)[C@H](O)C4)C=4COC(=O)C=4)O)CC3)(C)CC2)C[C@@H]1O NTSBMKIZRSBFTA-AIDOXSFESA-N 0.000 description 1
- 102100035966 DnaJ homolog subfamily A member 2 Human genes 0.000 description 1
- 101150105814 ERMN gene Proteins 0.000 description 1
- 101000633734 Echis ocellatus Snaclec 2 Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 101100001676 Emericella variicolor andK gene Proteins 0.000 description 1
- 241001522296 Erithacus rubecula Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108010008165 Etanercept Proteins 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 244000004281 Eucalyptus maculata Species 0.000 description 1
- 241001444201 Falco tinnunculus Species 0.000 description 1
- 244000182067 Fraxinus ornus Species 0.000 description 1
- 235000002917 Fraxinus ornus Nutrition 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 101150074355 GS gene Proteins 0.000 description 1
- 241001669573 Galeorhinus galeus Species 0.000 description 1
- 244000287680 Garcinia dulcis Species 0.000 description 1
- 241000237858 Gastropoda Species 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- GNBMOZPQUXTCRW-STQMWFEESA-N Gly-Asn-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 GNBMOZPQUXTCRW-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N Gly-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AJHCSUXXECOXOY-NSHDSACASA-N Gly-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 206010018852 Haematoma Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010019909 Hernia Diseases 0.000 description 1
- 101100297421 Homarus americanus phc-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000931210 Homo sapiens DnaJ homolog subfamily A member 2 Proteins 0.000 description 1
- 101500024558 Homo sapiens Pancreatic icosapeptide Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical class Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000221931 Hypomyces rosellus Species 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 1
- JHNJNTMTZHEDLJ-NAKRPEOUSA-N Ile-Ser-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O JHNJNTMTZHEDLJ-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- PRTZQMBYUZFSFA-XEGUGMAKSA-N Ile-Tyr-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)NCC(=O)O)N PRTZQMBYUZFSFA-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004556 Interleukin-15 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010017535 Interleukin-15 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 1
- 238000012449 Kunming mouse Methods 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N L-tryptophan-L-tyrosine Natural products C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 1
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 description 1
- PRSBSVAVOQOAMI-BJDJZHNGSA-N Lys-Ile-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN PRSBSVAVOQOAMI-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- YXPJCVNIDDKGOE-MELADBBJSA-N Lys-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O YXPJCVNIDDKGOE-MELADBBJSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010026749 Mania Diseases 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 241000361919 Metaphire sieboldi Species 0.000 description 1
- 229920001410 Microfiber Polymers 0.000 description 1
- 206010027646 Miosis Diseases 0.000 description 1
- 101100288554 Mus musculus Lcor gene Proteins 0.000 description 1
- 101100135666 Mus musculus Paxbp1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100366940 Mus musculus Stom gene Proteins 0.000 description 1
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 1
- AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N Naproxen Natural products C1=C(C(C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000475481 Nebula Species 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 241001045988 Neogene Species 0.000 description 1
- 241000881234 Nisia Species 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical class O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Chemical group 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- CUMXHKAOHNWRFQ-BZSNNMDCSA-N Phe-Asp-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CUMXHKAOHNWRFQ-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 241001674048 Phthiraptera Species 0.000 description 1
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 1
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 1
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 229920000388 Polyphosphate Polymers 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JARJPEMLQAWNBR-GUBZILKMSA-N Pro-Asp-Arg Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O JARJPEMLQAWNBR-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MGDFPGCFVJFITQ-CIUDSAMLSA-N Pro-Glu-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O MGDFPGCFVJFITQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001263 Psoriatic Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 description 1
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 1
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 235000004789 Rosa xanthina Nutrition 0.000 description 1
- 241000109329 Rosa xanthina Species 0.000 description 1
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 description 1
- RZEQTVHJZCIUBT-WDSKDSINSA-N Ser-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N RZEQTVHJZCIUBT-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- NLQUOHDCLSFABG-GUBZILKMSA-N Ser-Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O NLQUOHDCLSFABG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- OYEDZGNMSBZCIM-XGEHTFHBSA-N Ser-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OYEDZGNMSBZCIM-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- BTPAWKABYQMKKN-LKXGYXEUSA-N Ser-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O BTPAWKABYQMKKN-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- KMWFXJCGRXBQAC-CIUDSAMLSA-N Ser-Cys-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CO)N KMWFXJCGRXBQAC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Lys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N Ser-Pro-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- NVNPWELENFJOHH-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)N NVNPWELENFJOHH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- PCJLFYBAQZQOFE-KATARQTJSA-N Ser-Thr-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O PCJLFYBAQZQOFE-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 201000004283 Shwachman-Diamond syndrome Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010001 Silicosis Diseases 0.000 description 1
- 206010040867 Skin hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101150003725 TK gene Proteins 0.000 description 1
- 241000388430 Tara Species 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001080024 Telles Species 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 1
- 235000005764 Theobroma cacao ssp. cacao Nutrition 0.000 description 1
- 235000005767 Theobroma cacao ssp. sphaerocarpum Nutrition 0.000 description 1
- IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N Thr-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N 0.000 description 1
- IMULJHHGAUZZFE-MBLNEYKQSA-N Thr-Gly-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O IMULJHHGAUZZFE-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 1
- BIBYEFRASCNLAA-CDMKHQONSA-N Thr-Phe-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=CC=C1 BIBYEFRASCNLAA-CDMKHQONSA-N 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150116385 Tram1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- GRQCSEWEPIHLBI-JQWIXIFHSA-N Trp-Asn Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 GRQCSEWEPIHLBI-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N Trp-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 1
- HPYDSVWYXXKHRD-VIFPVBQESA-N Tyr-Gly Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC=C(O)C=C1 HPYDSVWYXXKHRD-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- SZEIFUXUTBBQFQ-STQMWFEESA-N Tyr-Pro-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O SZEIFUXUTBBQFQ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- 229910052770 Uranium Inorganic materials 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QVMHUALAQYRRBM-UHFFFAOYSA-N [P].[P] Chemical compound [P].[P] QVMHUALAQYRRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000012072 active phase Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 235000015107 ale Nutrition 0.000 description 1
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical group 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 230000007720 allelic exclusion Effects 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001668 ameliorated effect Effects 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 101150039027 ampH gene Proteins 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002058 anti-hyperglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002682 anti-psoriatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 239000002220 antihypertensive agent Substances 0.000 description 1
- 229940030600 antihypertensive agent Drugs 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 229940030999 antipsoriatics Drugs 0.000 description 1
- 239000003435 antirheumatic agent Substances 0.000 description 1
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 101150029595 ara gene Proteins 0.000 description 1
- 159000000032 aromatic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000011882 arthroplasty Methods 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 125000003289 ascorbyl group Chemical group [H]O[C@@]([H])(C([H])([H])O*)[C@@]1([H])OC(=O)C(O*)=C1O* 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 238000000429 assembly Methods 0.000 description 1
- 230000000712 assembly Effects 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 1
- WZSDNEJJUSYNSG-UHFFFAOYSA-N azocan-1-yl-(3,4,5-trimethoxyphenyl)methanone Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC(C(=O)N2CCCCCCC2)=C1 WZSDNEJJUSYNSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 238000009412 basement excavation Methods 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical group OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004217 benzyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003139 biocide Substances 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000011449 brick Substances 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 235000001046 cacaotero Nutrition 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000004568 cement Substances 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 208000030394 cerebellar neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 210000003477 cochlea Anatomy 0.000 description 1
- 235000019878 cocoa butter replacer Nutrition 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 210000005226 corpus cavernosum Anatomy 0.000 description 1
- 235000019788 craving Nutrition 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 1
- 229960001305 cysteine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 238000000766 differential mobility spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000005868 electrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002745 epiphysis Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960000403 etanercept Drugs 0.000 description 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 1
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000002964 excitative effect Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- PJMPHNIQZUBGLI-UHFFFAOYSA-N fentanyl Chemical compound C=1C=CC=CC=1N(C(=O)CC)C(CC1)CCN1CCC1=CC=CC=C1 PJMPHNIQZUBGLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002428 fentanyl Drugs 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 229940014144 folate Drugs 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000024 genotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001738 genotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229940084910 gliadel Drugs 0.000 description 1
- 108010084389 glycyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 210000004013 groin Anatomy 0.000 description 1
- 238000009499 grossing Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002837 heart atrium Anatomy 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 1
- 101150018238 hik2 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- BHEPBYXIRTUNPN-UHFFFAOYSA-N hydridophosphorus(.) (triplet) Chemical compound [PH] BHEPBYXIRTUNPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical class I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000000976 ink Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 235000000396 iron Nutrition 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- QRXWMOHMRWLFEY-UHFFFAOYSA-N isoniazide Chemical compound NNC(=O)C1=CC=NC=C1 QRXWMOHMRWLFEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003350 kerosene Substances 0.000 description 1
- DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N ketoprofen Chemical compound OC(=O)C(C)C1=CC=CC(C(=O)C=2C=CC=CC=2)=C1 DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000991 ketoprofen Drugs 0.000 description 1
- 238000003367 kinetic assay Methods 0.000 description 1
- 238000004898 kneading Methods 0.000 description 1
- 239000004922 lacquer Substances 0.000 description 1
- 229910052747 lanthanoid Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002602 lanthanoids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001418 larval effect Effects 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000008141 laxative Substances 0.000 description 1
- 229940125722 laxative agent Drugs 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 239000003658 microfiber Substances 0.000 description 1
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003547 miosis Effects 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940072709 motrin Drugs 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N naproxen Chemical compound C1=C([C@H](C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229960002009 naproxen Drugs 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000010807 negative regulation of binding Effects 0.000 description 1
- 230000007461 negative regulation of leukocyte chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 101150091879 neo gene Proteins 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- VXAPDXVBDZRZKP-UHFFFAOYSA-N nitric acid phosphoric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O.OP(O)(O)=O VXAPDXVBDZRZKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002826 nitrites Chemical class 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000422 nocturnal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002687 nonaqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000000820 nonprescription drug Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- OFPXSFXSNFPTHF-UHFFFAOYSA-N oxaprozin Chemical compound O1C(CCC(=O)O)=NC(C=2C=CC=CC=2)=C1C1=CC=CC=C1 OFPXSFXSNFPTHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003973 paint Substances 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000032696 parturition Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYMDGNCVAMGZFE-UHFFFAOYSA-N phenylbutazonum Chemical compound O=C1C(CCCC)C(=O)N(C=2C=CC=CC=2)N1C1=CC=CC=C1 VYMDGNCVAMGZFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000885 phytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920000098 polyolefin Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001205 polyphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011176 polyphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 229910052573 porcelain Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000020004 porter Nutrition 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 125000001107 pteroylglutamyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008262 pumice Substances 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 235000008001 rakum palm Nutrition 0.000 description 1
- 239000003087 receptor blocking agent Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000013643 reference control Substances 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000552 rheumatic effect Effects 0.000 description 1
- 208000009146 rhinoscleroma Diseases 0.000 description 1
- 210000004767 rumen Anatomy 0.000 description 1
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000005201 scrubbing Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- FESBVLZDDCQLFY-UHFFFAOYSA-N sete Chemical compound [Te]=[Se] FESBVLZDDCQLFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000020046 sherry Nutrition 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 201000009890 sinusitis Diseases 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000008261 skin carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000010153 skin papilloma Diseases 0.000 description 1
- 238000009491 slugging Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- UTFNEYQQWAACAU-UHFFFAOYSA-M sodium hydrogen sulfite nitric acid Chemical compound S(=O)([O-])O.[N+](=O)(O)[O-].[Na+] UTFNEYQQWAACAU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- LXMSZDCAJNLERA-ZHYRCANASA-N spironolactone Chemical compound C([C@@H]1[C@]2(C)CC[C@@H]3[C@@]4(C)CCC(=O)C=C4C[C@H]([C@@H]13)SC(=O)C)C[C@@]21CCC(=O)O1 LXMSZDCAJNLERA-ZHYRCANASA-N 0.000 description 1
- 238000010911 splenectomy Methods 0.000 description 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229910052572 stoneware Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 125000000446 sulfanediyl group Chemical group *S* 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 108010033090 surfactant protein A receptor Proteins 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 229930184616 taxin Natural products 0.000 description 1
- KOTXAHKUCAQPQA-AAUVPWARSA-N taxine Chemical compound C1([C@@H]([C@@H](O)C(=O)O[C@@H]2C=3/C[C@@](C([C@H](O)C4=C(C)[C@@H](OC(C)=O)CC(C4(C)C)[C@@H](OC(C)=O)\C=3)=O)(C)[C@@H](O)C2)N(C)C)=CC=CC=C1 KOTXAHKUCAQPQA-AAUVPWARSA-N 0.000 description 1
- 210000004876 tela submucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 210000001103 thalamus Anatomy 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000005028 tinplate Substances 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N toluene Substances CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 239000003021 water soluble solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052845 zircon Inorganic materials 0.000 description 1
- GFQYVLUOOAAOGM-UHFFFAOYSA-N zirconium(iv) silicate Chemical compound [Zr+4].[O-][Si]([O-])([O-])[O-] GFQYVLUOOAAOGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/32—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency specific for a neo-epitope on a complex, e.g. antibody-antigen or ligand-receptor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
A találmány tárgyát izolált, IL-15-öt (például, emberi IL-15-öt) specifikusan megkötni képes, emberi monoklonális antitestek, és ezen antitesteken alapuló készítmények és molekulák képezik. Az emberi antitestek előállíthatok transzfektómában vagy embertől eltérő állatban, például transzgénikus egérben, amelyben V-D-J rekombinációval és izotípus-átrendeződéssel lehetséges emberi monoklonális antitestek többféle izotípusát előállítani. A találmány tárgyát képezik továbbá az emberi antitesteket tartalmazó gyógyászati készítmények, az emberi antitesteket előállítani képes, embertől eltérő transzgénikus állatok, és hibridőmák, illetve az emberi antitestek alkalmazásával történő terápiás és diagnosztikai eljárások.
I&ierleutdsr iS-re ((L-lS-re) speelrikas emberi antitestek
Az interlenkíe-'l 5 (IL-15 > z\ mlaüasheho crtokmek közé tartozó. 14-15 kD motekuíarömegri giikoprotein. E estukín kmísílíativ expresszivta; különféle étekben é« szövetekben - így »xKKx;itákban és rnakrofágokbam Sbroblaszmfcbaxt, keratimmtukbars cs demdríbkns >.<?ífekhen is leinák már í'Wafdmarm és Tagava (1999); Bebsiger és Caligiuri 12Ó91)], Gyulladás „setén az tt -)5 espressziója íbkozólag szabályozott — lásd például IFN-y-val és LPS-sel, vagy vírusokkal, IraktéríntnAkkai vagy protozoákkal serkenteti isoaeeiták esetében leírtakat | Kinm» és mtsai, (1998)(: Wattosam és mlsss, (1998); Wsldmaanés Tagaya (1999?; Fohniger és Calígíuri (2001)1 Továbbá krónikás gyulladásos betegségekben, nőst amilyet): tó izületi esüz (rheumatoid arthritis), a lokálisan tennclődiltíIL-lS - a. sztaovisöis T-sejtek et&ítésé'vd és aktiválásával - feltehetően fokozza a gyatfadast ! .1 az 0 .8 z.tii ndikri a^ut i?\ok ívm \ ι e e oo<. a tó ep-e,- ρ.η.νοη,νηοίνη fk« iuiii c» «'sj' <, '•msi MUnnes és tntsai. (19961; Mdr.nes és mtsai, (1997); Mclsmes és kién·' (1998); Fehtnger és Cikgmn (2, o 0’
In vitro kísértetekkel kirnntetták,.hogy - a ko/os rcceptor.ilUroki'.ak kövönhetóeo - az 1L-I5 es az 11-2 számos: közös biológiai aktivitást mutat Az: 11-15, T-sciteken tévő recepiopa egyedi o-láneoí ÍLL- 15Hte), de az 11,-2 R-bea is meglévő p-láncot és y-látieot i&rhtasz. fámák kővoikeztaényekést, mindkét receptor ugyantól. a JaklSTAT-szígnálelsmekei.s&ateszza. Azonban, sz IL~2 és 1I.-LS, illetve ezek receptorai komplex szabályozása és dilfereneíálts expressziöja alapján az: in vívó funkciók közötti különbségek az trodalombaa ismertetésre kerülitek [Kírrttaxt és mtsai. (1998); Wsldmann és Tagaya (1999); Waldmano és xutsat. 12091)], Fontos» otegjegyezaörtk az 11,-(5 nem: nélkülözhető szerepet tölt be a természetes ölősejtek (NK-sejtek), NX-T-sejtek és az. epítéduiuon belüli limfomták fejlődésében, túlóiésébeo, terjedésében és tonkcíójában (Kennedy é.s mtsai. (2000); Lm. és mtsai. (2900)].
Az irodalomban már ismertették azt is, hogy ízületi esőzés páciensekből származó T-,sejtekben 1;..-15-tel etem se tsen est s,oe<.zn \l z <rt< c>ikx ttxt kalofes ,\fe'fnes <--· n s, \kín\s <s í i„v (1998)]. Továbbá, perifériáiis vérből származó, IL~i5-íei aktivált T-sójfékroi líimnfahsk, hogy - sejtek közötti érintkezéssel függő mechanizmus útján - jelentős TNF-o tetmelödés indukálnak. Moel a INF-et destruktív szerepet tőit be az ízületi csázban, e ei-okin gátlása csökkenti a betegség aktivitását (Baritett és mísai. 12809); Klippel (20í!<;ι, I mell es miaut \2t!0ök Maim vs Taxlor töAfe)] .Az US 57959ÓŐ sz; szabadalmi irat emlős 11-15 am&gonistáit ismerteti, belépve az lL-15 mnieinjeíl, II15 ellesi monoklonális antitesteket és 1L-1 ó-konjugátmnokaí, amelyek: esekkonttfc az IL-15 képességét arra, hogy stimulálja a T-llnríbekák pro! iterációját te CTLL-vizsgálatban.
Az alábbiakban s-öviáen összefoglalj ük a találmány szermti megoldást,
A találmány tárgyát képezi emberi monoklonális antitest, amely (a) emberi ílv i 5-fe kötődik;
tb> az 11 -15 által iaáuiíáhgytdlíKláskeiiö hatásokat gátolni képes;
U) CDR1. CDK2 és: CDR3 amiaosav-szskveneiát tartalmazó, emberi nehéziánc variábilis régiót és (DR1, CDR2 eak.DR.5 aminosav-szekvencát tartalmazó, enberi köt-nyüláne variábilis régiót tanalmz. ahol
V í a CPR3 amluoisiv-szekyeseiát tartalmazó emberi nehézlánc variábilis régió a szokvencloüsíában SEQ ID N«\ 2. azoik-sitoszátnon megadott aminosav-sgekvencia 19(1-(()7, anunosavait tartalmazza, es a GUS.3 aminoxav-szekveneiát tartalmazó emberi kötmyütáoc variábilis régió a szekvencktlssíában SEQ II) No. 4. azonosí8X11 87- ÍÖ45/SG tószátnou megadott andnosav-szukveoeiá 90-97, anusosav&it tartalmazza;
(íl) a C0R2 artnnosav-szekvenctát tartalmazó emberi nehezlánc variábilis régió .a szekveusigílstáfesta SBQ 5D No. 2, azoa-östtószámon megádon mninesav-szekvencia 5b~óö. smiuessvait tartalmazza, és a CDR2 <mi\vi- '\.M vitt trf.Ó n>i H''i\· \O«U-m?fS. WS IpJOs ><WO - M?Ő.iO M Q ID 4 ά,Ό aesbó^ámon megadott aminosav-szekveneia 51-57. aminosavait t&rtnhnnzzs;
<m) 3 CDR1 aminosav-szekveneiát tartalmazó emberi nehézláríc variábilis -régió a szekvencialístábau SEQ ÍÖ No. 2. azonosítószámon megadott amtnosav-szekvencia 25-25. aminosavait tartalmam, és a CDRÍ. atmnosav-szekvenetái tartalmazó emberi könnyülánc variábilis régió a :^8^venelafistábatt $KQ 5D W,. 4. azoaevddszámou megadott aaüaíssav-szekvencia 24-25. aminosavait tartalmazza.
Á találmány emberi II - 15-őt specifikusan megkötő, az ÍI.-15 által Indukál? gyullndáske5tő hatásokat géto.m «.epés teljesen emberi monoklonális antitest - első alkalommal megvalésholí - generálásán és izolálásán, illetve az Ilyen új ann testek jellemzésén és különféle, az Π..-Ι5 állal közvetített 'betegségek kezelésében betöltőit Híap.ss értékének bemutatásán alapul, A leírtak szerint például kimaísítuk, hogy ezek az emberi antilmek gátolják a gyulladásos betegségekben integrálisán egyaránt résztvevő WF-ö fennelődését és a t-sejtek proliferáetóját Eszerint, a találmány szerinti wuestek tökéletesebb módót blzfesiíanuk az. ilyen betegségek (és bármely más, IL-15 állal közvetített. «1 változás) kezelésére és megclozoxere avhat azért, mert egyedi specitkikasságíít (például, epitóp- és íajspecítlkusság), atfnutásí, íürteiesális aktivitási mutatnak és egyedi szerkezetnek, illetve annaka ténynek köszönbetően, hegy ezek az ant aestek tettes mert ékben emberiek, ezáltal lényegesen kevésbé- immtmogéssk és terápiássá hatékonyabbak és emberi pácienseknek történő beadásra alfeaímasabbttk, mint s korábban előállított antitestek (példád, egéreredetö és humanizált antitestek!. A találmány továbbá azon a felismerésen is alapúi, hogy az Π.- 1.5-oí: gátló mwstek, mútí példád a találmány szerinti antitestek, u terápiás célokra -· így gyulladásos betegségek, mint például izületi esóz, psoriasfe, 'öanszplantáeiós kilökődések és rákos megbetegedések···· is alkaferszluttök.
A. találmány szerinti izolált antitestek kézé az aatitestek .különféle- bmfspastti,. mist például IgGl, IgGl, &G:k 5gG4, igM, 5gAl, IgA2, IgAsee, Igö és IgE, tartoznak, Az k-O-rpu»ok jellemzően az 5gG 1 (például, IgGlkh IgGÖ és IgM izotigrsoksí foglalják utagnkban. Az antitestek lehetnek teljes hosszúságú antitestek ípéldául, IgGl vagy igG3 antitest) vagy íunnlmazhamsk mindössze egy étién zttdgéa-kötőhelyet {például, Fafe, F(afe’)2, Fv. egyszálú Fv-féagpientöra.
A találmány egyik megvalósítási módjában, .az emberi antitestek sekou-feináns antitestek, A találmány előnyös megvalósítást módjában, az emberi antitestet: emberi IgG-eredetü nehézláneoí és emberi te kosgyűláncot kódoló stukleotídazekvenelák kódolják, amelyek variábilis régiót a szekvesesaltstában NEQ ID No, 1, azonosítószámon megadott szekvencia és a szekvenviulisíábím SEQ IÖ No. 2, azonositőszámon megadott: szekvencia, megfelelően, szerinti nokleoiidszekvenGákat, vagy azok konzervatív módosításait tartalmazzák. A találmány egy másik megvalósítást módjában, az emberi antitest a szekvencialistában S.EQ lö No, 2, azonotilöszámon megadott sndnouav-szekve-reíát tartalmazó Igö mdfezlámí-erededi variábilis régiót, vagy annak koszervatlv változatait, és a sgökyenciatisiában SÍ.Q l£s No. 4. azouositöszáuK>n megadott, amtimsav-szekvenetáí tariaínmő κ kőn nyű lánc-eredetű variábilis tegtot, vagy annak konzervatív változatai? hordozza,
A találmány szerinti emberi antitesteket előállíthatjuk valamilyen g.udwjtben rekombináns úton, mint például az antitest nehéz- és kőnttyülancatt kódoló nukleinsavakat tartalmazó Iranszléktórt-akén? (például, őrökéleid CHO-sejteket vagy nyiroksejleket tartalmazó transzfer tóm a), vagy közvetlenül előállíthatlak az .asrtííesfeí töbíSI-KMSNG espresszáfó Isfeídómábőí (példád, ristiszgénllöK,, embertől különböző dllathök példád az autitesJet kódoló, emberi rtebezlánsra nézve transzgémlíns és· emberi kőnnyüiáRera nézve öartszgértíkos egérből származó 8sejteket tartalmazó, orökéleiü sejttel történt Ibriőval készek: hibridömábói). A találmány előnyös megvalósítási mótijá&an, az atáitestet emberi nehézláasot (tsnelynek variábilis téglája a azékvmtiaSstában SEQ 10 No. 1. tizonöstíószárRös megadott szekvenciái tartalmazza) és emberi köaeyőlaneot (amelynek variábilis régiója a szekvsserdtslában SEQ 2© Na 3. Mososítös-rismoa .megadott szekvenciát tariaünazza) kódoló ««kleotldszekvenciákat, vagy szók konzervatív módosításait tas-íalmazó I4§8? ebe vezesd biöridnmávat vagy gazdasejttel (például ClIO-sejrel) állíílak elő. Á leírásban szintén ismertetett antitestet 14®?, 140(15, 4Ó4.E4 és 4Q4A8 hlbrióómőkka! átütjük elő. A találmány előnyős megvalósítási snódjábas, az antitest specifikusan kötődik az 11,1 5 0-és/vagy γ-iáneáoak a kölcsóabatásbzn résztvevő dotnénjéti tévő epítópboz.
A találmány szerinti emberi antitestek specifikusan kötődnek az emberi lk-15-höz és gátoljak az 1E-15 gydladáskeltő hatást kiváltó képességét, példád gátolják az TNF-α termelődését és/vagy gátolják a (-sejteknek - így a P8MC vagy CT1.L-2' T-sejtek - az 8.-15-nek az IL-15 teesptoritoz, való kötődése következtében tönénő proliferáeíójat. 8JACQRE 3őöö műszerrel, rekómbínárts emberi 11,-15 (analizált vegyidet, „atmlyie·') és az antitest: (ligádban) aikaösazásával végzett tolüfril plazmonrezesartctás méréssel (SPR) meghatározottak szerint, az emberi antitestek jellemzően kevesebb, mint körülbelül 1.0'' M - mint példán! kevesebb, nőni feörnlheíd 1O'S M vagy 10Λ .M, vagy ennéi Is alacsonyabb - dísszociációs egyensúlyi áilandövaí (Kg) kötődnek az 11,-15boz. A találmány előnyös megvnlöstiási módjában, az antitest az emberi IL-1S-Í& koralheinl ő,5*!ós M dlszszoojáesős egyenstüyi állandóval -(Ko i koK-dsk
A találmány egy másik szempontja szerint, a találmány tárgyát a találmány szerinti tmíiíesfekei, vagy antigént kötő részeket kódoló auklesnsav-moletelák képezik. Eszermt, s találmány szerinti antitesteket kódoló nukfemsavakat tartalmazó rekotőhínáns expressziós vektorok és az ilyen vektorokkal írzaszfsktált gazdssejlek melleit a találmány szerinti antitesteknek e gazdaseítek tenyésztésével főricnő előállítására szolgáló eljárások is a találmány tárgyát képezik.
A találmány tárgya továbbá, a tsláteásy szerittb antitesteknek a szekveaeialísfában SEQ ID No, 2. azonosltőszámo© megadott smmesav-szekvesdát tartalmazó, nehézláne-eredetn variábilis régióját, vagy annak konzervatív változaiait, és a szokveneiaüstában SEQ 18 No, 4. azonosiiószáötor; megadott ammosavszefcvencíát tartalmazó, könny ü lánc ettedeüí variábilis régióját, vagy ásnák konzervatív változataié kódoló nddeotldszekvenciái tartalmazó expressziós vektor. Ilyen expressziós vektorok a teohíxtkábao jól ismertek, és ezek közé tartoznak példánk a rcükttlocíía-iizáíamökar alkalmazó ss vitro trtmszferipciös/íraaszlaeiós vektorok.
.A leírásban szántén ismertetünk transzgéníkas emberiül különböző állatbői, példád az IL-I S-őí specifikusan kötő stábért monökbnáüs antitestek különböző ízotíptrsaínak (például IgG, IgA és /vagy IgM) expressxáíásara képes transzgénikes egérből, származó izolált B-scjtokeí. Előnyős, ha az izolált B-sejteket tisztítom vagy dúsított 11,-15 antigén-késziíméstoycl és/vagy iL-15-őt sxpresszálö sejtekkel immnsizáü transz·· géidkíts. embertől különböző állatból, például transzgénlkus egérből nyerjük kí. Előnyös, ba a transzsénikns, embertől különböző állat, például transzgémkus egér. genomja emberi nefeézlánc-eredétS transzgént és emberi könnyű lánc-eredetű transzgém tartalmaz. Az izolált B-sejteket ezttfátr. az .11.-15 elleni emberi tnonokipttábs ,«r toskk >os rm. u \ m \ 'Iránra Nos? , λ , t tk ' ok <'tok n 1 1 b murává'
Eszerint, a találmány tárgyát az IL-IS-öt speclliknssn megkötni képes a. találmány szerinti emlmrt monoklonális antitestek termelésére képes hibridőma képezi A találmány egyik megvalósítást módjában, a í 00187-1045/SC ~ 4 hibridóma olyan, transzgenikus, embertől különböző állatból, például tsunszsénikas egérből nyerj B-sejtetzr, i'i . 'v< ge tonni viAi'tn !/törtet ot v ' ο, κ ',a>K etede u , e. ·~ uhu kcr.u lánc-eredete transzgént tanaisnaz. Az antitestet termelő hibridómák elöSfiltá&a céljából a tomsxgénikus,, embertől különböző állatot immunizálhatjuk tisztított vagy ílúsitot; 1L-15 antigén-készítménnyel és/vagy ΙΕ-15-öt expresszáió sejtekkel. találmány tárgyát képző előnyős bibridóíaák közé tartoznak a 14687,146115, 484E4 és 4Ő4AÓ hibridótnák.
Λ találmány még további szempontja szerint, a találmány tárgya Π..-15-öí speedíkasanmegkötni képes g: találmány szerinti manoktoálís antitestet expresszáíő banszgéníktts, embertől kölöttböző állat, például transzgétíikus egér. A találmány előnyős megvalóslíási módjában, a tmnszgénlkas állat olyan transzgenikus. egér, amelynek getvorpja emberi. netózláne-eredete trauszgént és emberi isortuyűiaoe-eredeta transzgéní tartalmaz. A transzgéníkus állatéi Immmdzálhsíjuk iisziiíott vagy dúsított 1L-15 amigén-készittnénnyel és/vagy ÍLi$-öí expresszáló sejtekkel. Előnyös, ha a transzgenikus, embertől különböző állat, például tnmszgéaikus egér, amely V-D-J tokombmáoiöval és izotipus-áírendszedéssel képes előállítani az emberi, mwofclosáüs antitestek többféle izotipusái, Az izotlpus-átreníféződés történtet például klasszikus vagy nem klasszikus áfétedéződéssel·
A találmány »5ég; további szoinpontja szerint, a találmány tárgyát lk-15-tel specifikusan reagálni képes a találmány szerinti estben ínonokkmátis anbtesíek előállítására szolgáló eljárások képezik. A találmány egyik meg valósítási móáiabaö, az eljárásban olyan tnmszgéoikus állatot, például trauszgénikus egeret, jnmmnhéluak tisztított vagv díbitott IL-15 araigén-készrtmémjyei és/vagy 11-15-őt expresszáló sejtekkel, amely állatgenomja emberi neberiam eretem tumszgém és emberi könnyiiláne-sredetü transzként tartalmaz. Ezt követően az állasból B-sejbtei (petete iéperederú ö-sejféketj áílitunk elő és mlelőma sejtekkel tuztonálíaíluk 11,-15 elleni emberi monoktoíten <ml;te.ne-<eé szekretálo, öfökáletü hibridóma sejtek előállítása céljából.
A tataimén) egy másik szempontja szerint, a találmány tárgya terápiás csoporthoz - például citotoxikus drog, enaámatíkusan akor taxin, vagy ásnák hagmeutama, radioízotóp, vagy kismolekulájú, rálseUenes: hatóanyag - konjugált IL-15 elleni a találmány szerinti etuberl antitest,
A találmány egy másik szempontja szerint, a találmány tárgyát legalább egy, a taláknásry szerinti, 1I.-15öt specifikusait megkötni képes emberi tnonokhuáiis antitestet és gyógyászati szempontból oltógadható hordozót tartalmazó készítmények, például gyógyászati és diagnosztíkm/készmoenyek. képezik., A készítmény ezenfelül tartalmazhat más terápiás ágensetet, mint például Innm-nssupptesszt',' ágenseket, vagy kemoterápiás ágenseket.
A találmány még további szempontja szering a találmány tárgyát az IL-1S gyustsdásteitő hatásának mmt például az 11-1$ által indukált Tbih-s-teiuieiődés es vagy a f-sejtek prailféráetöjának gathsa, előnyösen á szerkezetileg rokon Sbhériék/citoktnek (/például IE-2) aktiv-nasanak /például ΤΝΕ-ο-ίΟΓ’κΙοοοο és/vagy a Tsejtsk proliíeráeié) gátlása nélkül·- egy vagy több, a mldhnány szerinti emberi: antitestek alkalmazásával történő gátlására szolgáló in vitro eljárások képezik.
A találmátív szériáit etnfceri antitestek alkalmsztetők külentéle, 11,-15 által közvetített betegségek kezelésére és/vagy megelőzésére oly módon, irogy az antitesteket az ilyen betegségektől szenvedő páesensekőek adjuk he,
A leírásban ismertetett eljárásokkal és készítményekkel kezelhető (enyhíthető) vagy megakadályozható betegségek például - minden korlátozás nélkül - a gyulladásos elváltozások, mint például arthritis (például psorísslsos arthritis és izületi: esáz, ideértve az aktív izületi esuzt és az ijjúkori: Izületi esőzt), gyulladásos bélbeIÖÖ i:$?-lÖ45/St$ tegség, Például az antitestekről kimutattuk, ángy-csökkentik a pamkemtostst. csökkentik az epidermisz megvastagodását éspsariasis esetén: csökkentik a keraóneelták proitferációját. Az antitestekről azt is kimutattok, hogy csökkenek a gyulladást és/vagy megakadályozzák az taxiiéit cstlzban résztvevő sktiválí leukociták kemntexisát. Az antitesteket ezenfelül álkaimazhaíiuk fertőző betegség, például HÍV fertőzés, kezelésére, Továbbá, az aubtesteket alkalmazhatjuk. jranszplantátumsk sík xude'-of ek kezelésére. Továbbá, az antitesteketalkalmazhattek ’ ’ \-.red-.')s»^rtd\z.rek 5 P'i ! vnftt<t\i. ..'LWi x eg^eges r xtt álltai dat,a «Mfejlődós és rakok, például T-sejt leukémia, fezeié χνο
A találmány szerinti emberi authestekc: kombn db.! >ak egy vagy több további terápiás ágensekkel, nrint például gytilladásgátlő áaesrsekkel, DMARÜ-eKL· u scuse-ncátfying msti-rhenmatic átugs. betegséget vnófdtv siló reumaeilenes drogok), ímmtnszuppresszt - tgvaxAke: kemoterápiás szerekkel, es psoriasis elfeni ágensekkel.
A találmány egyik: megvalósítási stödláháre az alanyt kezelhetjük egy vagy lőbb, sz antitestek gyalladáskeltö .hatásának gátlását foltozó ágenssel, például gsulladásgátló ágenssel, rntnt például szteroid természetű droggal vagy NSAIÖ-dré (uoasleroidal anririndaumuíopy drng. nem szteroid természetű, gyulíadásgátló drog), HotoX 'ge' '-ex kenu m.tvtcte ouTsl ’’ ' < >but t'-.u r n <o n as „de, at>kko\é nu'<\ítok nn pe dául rofeeoxsb iVioxx) és celecoxlb (£lelel>rex), INSAlD-ok. mint például ibupmfen (Motrin, Adrii), íénsprolea (Ríllbni, naproxén fNapnwn), sulüxlac (Ottoríl), dselofeaac (Voltaién), piroxieant (Feldeue), ketoprofen (Orttdis), dtfenisai (Dofefed), stabusgettw tWIa&s), «toáolao (Ledine), oxaprozín (Daypíok és indonteísetít Ondóéin).
A txláhnány egy másik megvalósítási utódjában, a találmány szerinti emberi antitestek egy vagy több DMAKD-dal ~ tnitít például tnetotrsxáí (kheunsate). lüdroxtkksrokin íFlaquenil), szulíaszateztn (Asalfídtne), pírt r st. mszinrézist gátldk, például lerlunomtde (Asava). II.-I receptort gátié ágensek, például anakiora í Kü-eret) és TNT-öt-S: blokkoló ágensek, például etanereepf (Huhrol), mtlsximsb (Rsmieaáe) és adaíímauiah kosnbíuáciőbalt történő beadásra szolgálnak,
A találmány egy másik megvalósítási tuődíábau, a találmány szeried emberi antitestek egy vagy több iammnszuppressziv ágenssel - mint például, dkioxporin (Sandimmnoe, Ifeorsl) és azaiiopría (Tsxnmat koitsbinádóban történd beadásra szolgálnak
A találmány egy másik megvalósítási íttódjában, a találmány szerinti emberi antitestek egy vagy több ketnoíerápiás ágenssel - mint például tloxorubtein (Adriamycítri,: eiszplatin (Plariöolj, bleömiein (Blenoxanel, earmustine (Gliadel). ctklofosstamid (Cyloxtm, Froeytnx, feeosar) és kloraiubueil (Leofceomí kombinációban történő beadásra szolgáinak. A találmány szerinti emberi asiitestek: besíigárzásos terápiával kombinké tóban történő beadásra is szolgálnak,.
A találmány egy másik snegvalódíási médiában, s találmány szerinti emberi antitestek egy vagy több, a psoriasis kezelésére szolgáló ágenssel mint például szénport, A vitamint, kertixont vagy más kortikoszteroíöokat tartalmazó, topíkálísan alkalmazandó gyógyszerek, orális vagy injektálható gyógyszerek, mint például korttkrts/tercídok. raetotrexát, retinoidok, például aeíereria (Neogitasots) vagy ciklosporin (Snndimmuné, \eorak kombinációban történő beadásra szolgálnak. Más kezelések soréit alkalmazhatunk napfény- vagy fetotemptat
A találmány egy másik. ínsgvniősitásl médiában, a találmány szerinti -emberi antitestek más antitestekkel
- példánl CQ4-re specirikus antitestek és ΙΙ.-2-re specifikus .antitestek kombinádohsm történő beadásra szolgáiíW1SaíŐ45/SG fisak. A tnlálruáoy szerinti ember! asstíteisfc és CD4~r« specifikus antitestek vagy 11,-2-re specifikus tmtileslek \ 'ί Ή va vük o w' i -' oart a t Au rak > « η. o e^,e„segvk es üo,’ br' n u r \>lbk<x co\ kv/e _ sere.
.4 leírásban isme-tetih-k egy 11.-15 antigén \aiajmlyen mintában valójelenlétének ín vitro vagy ín vivő kimutatására szolgáló eljárást, például 11,-15 által közvetített Itelegségek: diagímszkizálására. A tnlálmátty egyik megvalósítási módjában, az eljárást ágy végezzük el, begy & tesztelni kívánt ntiatáí - kontroll mintával párhuzamosan - olyan körülmények között érimkeztetjúk a találmány szerinti monoklonális antitesttel, vagy annak antigént kőtő részévek amely kőrtiltnények lehetővé teszik, hogy az antitest és az Ik-15 között komplex, alakuljon ki. Ezután a kompiezek kialakulását a mintákban Mmutaíiuk (például ELISA. alkalmazásával).. A kontroll és tesztelendő mintákban kialakult komplexek közötti, statiszlikailsg kitnatatbató bármilyen szignifikáns különbség jelzi az IL-15 jelenlétét a tesztelni kívánt mintában,
A találmány más ínlaldnnságai és előnyei az alábbi részletes leírásból és a szabadalmi ígénypontokböl egyértelműek lesznek.
Az alábbiakban röviden: leírtuk a találmányhoz tartozó ábrákat,
1. ábra; Az emberi 1Ε-Ι5ηη specifikus antitestek (146B7, 14ÖB5. 4Ö4E4 es 4Ö4&8) embert íL-15-höz fblt-15) es a mutáns lb-15 fehérjékhez (QIOSS es iákSQlbdS) történő kötődéséi matató grafikon. Az antitestekből készített higitásí sorozatokat ELISA-vsl vizsgáltunk az hlL-iö-hoz: vagy a nmtáss lk-15 fehérjékhez (01Ö8S és D8SQ1Ö8S) történő kötődésükre ttózvé,
...5 ab. \ -o3 . rí>te\.'\ 1 - rtmzok es \ .. η n 'sav r.t <. ekseruiah adun bEQ ti.) No. 2. és 5.EQ ID No. 4. nxonositószámon megadott szekvem ukl és nukleotiászekvenctái (a •./ekveodabstabarí SEQ ID No, 1. és SEQ ID: No. 3. azonosítöszámon megadott szekvenciák}:, megfelelően, Az ,ibu.ken jeleztük s vázrégiókat {íramework, FR, régiók) és kotnpíeruetrtantart meghatározás régiókat (CDR-ek).
4A-D. ábrák; Az lL-15 által közvetített TNF-α felszabadulás gátlása 14ŐB7 antitesttel. Emberi PBMC-t *”* órai n tnkuhaltios híl-íp (C po \)d ug trfi os 14nE antitest s.igv '.alamdv.'u t'eímusu kömre5! antitest ííí.í, I.M pg/W} kombinációsával. A termelődött TNF-ot mennyiségét FIISA-vat mértük. A grafikonokon két egészséges önkéntes hol származó adatokat tnotaíjnk be.
5. ábra; A 1407 antitestnek azíL-2 vagy 11-15 által közvetített TNF-α termelődésre a\akosok hatását bemutató grafikon. Embert EBhíC-t 72 órán át ínfetbálínak híL-lÖ (9, Öt), 1:ÖO ttg/mi} vagy Ml -2 í lob rg ml} és 14ÓS7 antitest (Ö, l, 1, l.Ö pg/ml) kötnbtöácíőtítval A. rentmlödötí TNf-a meunyíségét EL IS A-sal itkrtu.
ő, ábra; A 14687 Möli5, 404E4 és 4Ö4A8 antitestnek a GTI,L~2 felL-l$ által indukált proliferáoiójára gyakorolt hatását ábrázoló grafikon. hl'L-2 hiányában tartott ü'FLL-2 sejteket Ml,··IS (60 pg/mfi és 146B7 14ÓI-Í5, 4Ö4E4 és 404A.8 antitestekből készített hígkási sorozatok kombinációjával inkubáltuk 48 órán át. A 'f.ovívObícczi.'w.r. cpurt ( L η J· χψΜΟ'χί mrSt κ \ ' ,m ’-va.mevet a ’gortekek. termi,abstt mulatínk be..
7-9, ábrák: A MSB? (7. áhrak 4D4E4 (8. ábra) és 4Ö4A5 ami-esi (9. álnál 11.-15 által indukált PBMC p terrénum'. Ά lUiof -\M > .ötösein pemUato cnftken labort EBML-r 72 oran at jnkubafinns hlL~L5 (ti, 25, líIO ng/ml; rendien ?A., ŐA, és SA, ábrák) vagy hIE-2 fii, 10, IÖO ag/ml: 78.. 88, és 98. ábrák, megíéieoe'es IdőB'* antre^ t abrak mit t(X „msei. 10448 amuevt íw abwuV, \ ;d eg-íut> ko-nbtnaemmx'al A prqbíezácíő kilói ezésósr; (epsa) [Ltj-hmMin beépülését mértük.
to abm Λ t4oB7 untáért kmédA·.; Ιί\-γ.\Μ serkeoseo monomukhoz Ember! PBML-ket 2 napig, ínot<.i<>4S St!
/.
r'{\'B tejr\é».'tetn..nk UN-, <>0» 1 ml· uledetebe?! A'andasos vitonOt; nr\al es '.no?toe’tafou történt :apuzássul legalább 5008 sejt fluoreszeendáját határoztuk meg az egyes mintákba;?.. Az adatok s serkentési indexet íSX-fírtofeoűnöojsxs. nézve pozitív sejtek átlagos száma/átlagos háttérflaoreszceacia) mutstjás be.
II. ábra: Emberi monodtsk kötődése 14687 antitesthez (8 panel) vagy sz. izotipns kontroll antitesthez. (A panel). lArmeri FEMC-ket teeíáínmk, a sejteket líFAi-y jelenlétében tenyésztettük, majd seabd&gáíással izoláltuk. A sejteket: hetnatoxillanal utántestettűk, td. ábra: Emberi psoriasísos bőr kötődése 14687 atttlfosféez (8 pasmi) vagy szizotipas :k<míroil: ajnhesthe?. í A panel). Páciensektől. emberi psoriastsos iefegokeí gj’öjtMnk (a? érintettek. ItoZKájárukisávsl), és a vizsgalatig -80ftC-on tárolíuk. Szö veteket festetitek biotiteíált antitestekkel, majd a kötődött antitesteket rétekerede;ű perextdáz aktiválásával tettük iátkatővá,
OÁ., ábra: A sejtmaggal rendelkező sejtek aranya .14687 antitesttel vagy hordozóval kezek SCID egerekből származó izületi csázos szövetben (grafikon}. Szöveteket festettünk hematoxíiitmal es eoxmmd (ri&b) és Photo Shög (ver. 0.6) programmal analizáltuk. A bemutatott adatok .a sejtmagok átlagát és tsz átlagos hibát (s.ears.) ábrázolják (ts teljes terület arányában) 14687 antitesttel (iM) vagy hordozóval kezelt egerek (o~2) esetében. 138, ábra: Xenegráfi KA szövet ívpa-zenmUs ikkl festése 146137 antitesttel (8 panel) vagy EBS-sel kezdi SC1Í> egetekben (A panel·.
14, ábra: A -14687 aoróesttel végzett kezelés hatása SClS/psorkrsisos egetekben. Siopszíákat fixáltunk formalinhsu, pmafbnha ágysztnk. U&E-vel és Ki~67 sejtmag-antigénre testeitek. 14.4. ábra: ts prorfasis súlyosságának: értékelése az epidermisz vastagságának, a felhám és a ,,«;íe ^seg^-ek közötti távolság mérésével, H8. ábra: Az epidermisz, a felhám és a „reíe peg’-ek legmélyebb része közötti távolság mérésével megállapított vastagsága. f4'C. ábra:: A pamtóaaosls mértéke. 14D. ábra: A gyulladásos, egysejtmagvú sejtek száma az epidermisz.felső rétegében, 14E, ábra:: A Ki-ó7-re pozitív, ciklusosán visszatérő kera-modíák száma.
I S, ábra: A i 4687' antitesttel panel), CsA-val (8 panel) vagy hordozóval kezel; SCID egérbe átültetett psoriasisös, ember? bőr feslődése H&fcAek. A kaöszplasíádó mán háswj héttel az, egereknek PBS-t (piasefeo), CsA-t teikloxporin A) (Sandoz) (lö mg/kg minden második napost, 1.5 napon, át), vagy 14687 antitestet (28 mg/kg az '1. napon, 10 mgtkg ts S. és 15. napon) adtunk be. A legutolsó injekció után. egv héttel az egereket elöltük. és az egyes xenograftokböl 4 mm átmérőjű blopszlát vettünk. A fcfopsziákat formaimban Okátek, paraffinba ágyaztok. és H&E-vel festettük.
17, ábra: A 14687 antitest kötődése a reesptesTóz kötött ΙΕ-15-hoz. Lemezeket vontunk be ll,~ i SRö-val és lL-15-tel ínkubáltuk. Tíz perced később a lyukakhoz bioliidiált 14687 antitestei: adtunk A 14687 antitestnek a recepforlsoz kötött: IL- IS-höz történő kötődését ELlSA-kanvasóban, 405 ron-en mértük.
Id, ábra: A 14687 aotitest kötődése ksjóitejiekes exprosszáh IX-ló-receptor által. megkötött il,~15-höz, Mifote. 11..-IóR-et expresszáló Raji-sejteket lX-15-tel mkubáitenk ül percig, hioaoiiáii 14687 antitestet adtunk a sejtekhez. A 14687 antitest receptorhoz kötött ík-lS-bőz való kötődését FÁCS-analkdssd értekeitük.
Az alábbiakban részletese??! leírjak a teiáhoány szerinti megoldást.
A taláhsáíxy tárgyát az lt-i5 által közvetített különféle elváltozások (azaz az ÍI..-I5 gyulladáskeltő hatásai által ksvá-íoii elváltozások) kezelésére és diagnosztizálására szolgáló áj, antitesten alapuló gyógykezelés képez' A leírás szeriöti értelemben, az ,,1(,--13 gynliadáskeltö hatásai” kifejezés jelent bármely, az it-15 által otenkaz hmno-alte .agy sejt altul kv.-oeiuetí imtnmnalaszt. rsnnt poklául a l XF-o es ma» gyulladásos medtetor urrm lo? leset, e\ . I -sejtek összegytiiését/proiiiérádöiáí; A találmány szermd terápkíkbas az 11,-1 >ön jeie:rlévö iÖ01:k?-l:045íSG
-s valamelyik epltopot: -specifikasas megkötni képes, butáit .emberi mopöSteáfe aHiliesíes aikahnazusk,
A taiáteáuy egyik' íttegvalósitási módjába®, az emberi ajtóósleket elvan, netn emberi teszgéníkw áílatban, például truuszgénikus egérben állitjuk elő, amely V-D-J rekotubináo lóval és izotípus-áfrendezödéssei képes az H..-L5 ellesi emberi .momddonóiis antitestek többféle izotlpusát (példáéi, IgG, IgA és/vagy IgE} előállítási.. így, a találmány különböző szempontjai szerint a találmány tárgyát antitestek és azokból Részűit gyógyászati készítmények mellett, az. ilyen monoklonális antitestek előállítására szolgáló nem emberi transzgénikus állatok, B-seltek. gazdasejl-Wiszfekténsák, és hibridómák képezik, A leírásban ismertetünk a találmány szerinti aaíitöstek .alkalmazására szolgáló eljárásokat rs, amelyekkel kimutathatók azok a sejtek, amelyekhez 1I.-1S kötődik, és/vagy .amelyek az IL-15 által közvetítő·; fijnkciök itt vívó vagy is vitro gátlására szolgálnak, A teásba® ismertetőnk továbbá bizonyos ágenseknek az IL-15-őt kótö sejtekhez történő irányrtására szolgáló eljárásokat ss.
A salálotány jobb megértése céljából először bizonyos kiíéiezósefc meghatározására van szükség. További meghatározásokat a részletes bírásban Ismertetőnk.
A leírás szerinti értelembe®, sz „IL- I S”, „11.-15 antigén és .Jnterleukm-15 kifejezéseket egymással fel? eseréteöea alkalmazzuk, és e kifejezésbe tartozik bármely, a sejtek által természetes körülmények között expresszit változat vagy tzeíoma,.
A.leírás -szerinti értelemben, az „uístitest kifejezés magában foglalja a teljes antitesteket és bánnely, anivfw, un»< '<o u <j <m<, ' <o‘ í-'-u í \,ca ,-Á»\.>v<!t s< \ tt, t V , nt te-, ’Λ. v/es 'legalább két aébéslteof í.H) és azdsitoz áiszalfíd-h Idákkal kapcsolódó két könnyöiáneos (L), vagy azok snrigéskötö-részéí, tartalmaz. Az egyes; nebézláacok nebézlánc-eredetű variábilis régiót (rövidítve Víf) és nehézlánc-eredstd konstans régiót (rövidítve v<) tartalmaznak. A nehózlánc-ereáeni konstans régiót három dómén - ölt, CH2 és Cffi - alkotja. Az egyes könayáláncok kőnnyülánc-eredetű variábilis régiót (rövidítve vk) és kőnnyülánc-eredetö konstans régiét tartalmaznak. A könnyülánc-eredetu konstans régió; egy dómén - a CL alkotja, A Vy és Vt. régiók,Jkonzen.-áltabh régiókkal (vázrégiók. ER) kever; komplementaritást meghatározó régiókból (CBR-ek) álló. hipervaríahihtári régiók szerint tovább csoportosíthatók. Minden egyes V$s és Vt három CDR-ből ás uégy FR-bol áll, amelyek a C-terminálistól kiindulva az alább; sorrendben helyezkednek el; ÍRI. CDR1, FR.?.. CDR2, ÍR3, CDR3.PR4, A nehéz- os kösuniiláncoR variábilis régió; turtaknazzák a kérdéses att g,?; u !-oU ösva ;sro cro - ttououjen V a-trivA ksnst’- régies L·'?'e* ♦acttk r smm^rg -sb, ;; kötődéséi a gazda szöveteihez vagy íakterAoz. ideértve az immunrendszer különféle sejtjeit (például, effektor sejtek) és a klasszikus kompteesfrmdszer első komponensét (C1 g).
A leírás szerinti értelemben. valamely antitest. ,.antsgén-kőtó része” tvagy egyszerűen „antitesíresz” satuméi} antitest egy vagy több olyan frap-nentusnat jzlent·, amely no<k\ke:ok azzal;; Repesseggei. hogy specifikusan kőfödjön egy adott antigénhez (például, H,· 15-höz). Kimutatták. hogy egy adott amirest antigént kötő imdsciéjá.í a teljes bosszüságű antitest fragmentumai is képesek betölteni. Az „antigén-kőtö rész kifejezésbe tartozó kötófragmentumok közé somijuk például az alábbiakat: (il Fub fragmentum (a V£· VB, Ci.. és CH) doménekbol úhó mooovaiens fragmentum;, (ii? Eíab'h fragmentum {két egymással a esukiórégióban áiszullidluddal o^zekapcsoh Eab fragmentumból álló bivalens fragmentum), íiii) a VH és CH; do-tnéneRbö; álló íd fragmentum. (M egy adott antitest egyik karjának VL és doménjeíból álló ís- fragmentum, t v) egy adott V?.{ tejént tartalmazó dAb fm-amennm- [W&rd és nttstn.. Natúré 34j., 544-546 (1939)1, és (vi) izolált, komplementaritás·· meghatározó régió (CDR) 'vagy (vtj) két vagy több - igény szerint szimetikus linkeméi egymással őszszekapcsoh - szolalt CDR kombiuáoiöia. Továbbá, bar az Fv fragmentum két: doméujéf (V, és V·.,) kólSnálk;
100l8?-1045tSG ~
gének kódolják, rekombínáns eljárásokkal e gének osszekapcsolttatok valamilyen szintetikus linkerrel, igy itiyast ·, K’ h Ο μ í ki'1 ál Ibk ι > Ο vht i k j \ \ vteév P'fbi S.ttő„ ’odsc 1. 3<. V , ?s f U A t ’ í n kútnak (lásd, egyszáte Fv febtgle efesin FV, x<FV) [Bírd ós mtsai., Science 2,4,), 425-426 U98S); Huston ós mtsai., Proc, blat.1, Acad. Scf. USA kő, 5k?9-5k8.3 11988)). Az ilyen egyszálú antitesteket is egy adott antitest „anfigés-kötó részének tekbiiük. Ezeket sz aBtítest-fragtaentumokat a szakember szamara ismeri eljárásokkal állíthatjuk elő, és a O-agtstersdisítokm az intakt antitesteknél alkalmazottaknak megíeMŐea szkrincljíík.
A leírás szerinti értelemben, .a „rtíostoklonáiss antitest kifejezés olyan asttttestef jelent, amely egyetkm konkrét epitóp elten mutat kötőspeelílkusságot ós atflnitást. Eszerint, az „etnberi monoklonális aníiíesf olyan, egyetlen kötési speedimtást mutató antitest, amelynek variábilis és konaíans régiói emberi csíravaoalbast kódolt bmoanglöbuiín-szekvencsáböl szárrnazn&k. A találmány egyik megvalósítási nfedjábisn, az emberi monoklostális antitesteket olyan n-anszgémfcus, embertől különböző állatból, például trassszgénikus egérből származó B-selteket lázionáitatunk öröltelefe sejttel, amely egér genom-u emberi nebézlaníi-eredotti srauszgéat és: erőben irikssyuláneterédeíu traaszgóttt tartalmaz,
A leírás szerimi «rtelesoben, a „rekombínáns embert antitest'’ ki létezésbe beletertoznak mindazon emberi antitestek, amelyeket rekonibináns úton preparáltunk. expresszáltunk, készitetlíisik vagy szolaltunk. mint például iá) embert irammtglöhulim kódoló gem-kre ioeiszgéruktis vagy transzkromoszósstálís állatból (például egérből) vagy azokból készített hlbriáómából Izolált antitestek, t lásd az alábbi I. részt), (bjaz antitest expresszáiására trassztbrmált gaz.dásepből, például ttans/rektaniábol, izolált antitestek, (e) rekombínáns, kombinatorikai emberi antítestAőuyvIásból izolált antítéstek, es íd) emberi inzmunglobuhn gósssekvencíák más DNS-szekvenciákba történő beépítésével járó bármely más eljárással preparált, expresszák. készített vagy izolált antitestek, ilyen rekombínáns embert antitestek variábilis és konstans régiói emberi csiravcsalban kódolt jmmunglobslisaszekveoejábol származnak. A találmány bizonyos megvalósítási módjaiban, azonban, az ilyen rekombínáns emberi antitesteket in vitte mutagestezisnek (vagy ka emberi lg szekvenciára tmnszgénikus állatot alkalmazunk, akkor ín vivő szomatikus: mutagcstezíssek) vethetjük ató és így a rekombínáns antitestek VH és V) régióinak amiaosav-szekveoetái olyasok, hogy bár emberi esíravoualbars kódolt V(i és V; szekvenciáiból xzársmsznak vagy azzal rokonok, íettofeszeiés kbriílttiésyek között mégsem fordulnak elő az emberi esiravonal génrepertoárjáb;m isi fevo.
,A leírás szerinti érteletttben, n „keterológ antitestei’' azassíitesíet előállító, iranszgésíkus nem emberi szervezettel kapcsolatban alkalmazzuk. E kifejezés a tmnszgénikus, embertől különböző állattól eltérő organízmssbau, és általában a transzgémkos, esubertbl különböző állattól eltérő fajból származó annaosav-szekveamával vagy az azt kődeks ntsktóssav-szekvenorival megegyező szekvssriájú antitestet jelent.
A leírás szerinti értelemben, az „izolált antitest kifejezés olyan antitestei jelent, amely létryegébes mentes más, eltérő astigés-speeitíekású antitestektől (például, 11..-15-öt specifikusan kötő. Izolált antlíest. tenyegében taeutes az IL-15-től eltérő antmé-teket specifikusan megkötni képes antitestektől). Az 1L-15 valanxtiyík epilopját specdlktssao m.egkőím képes, izolált antitest, azonban, keresztreagálbat más rokon, citekinekkel vagy más fejből származó 1L-1S valamelyik epitőpjávaí. Azonban előnyős, ha az antitest tssirsdtg emberi lL-15-böz kötődik. Ezersfeittl, egy adott izolált antitest jellemzően mentes más sejtes ányagtöl és/vagy kemikáliától. A aialsomy ,'<?©'>. mvgsaí untam -©όρΆ-η. ll -15 te verve ettero speMtedáeu. „szolalt sn^nokkOctlts ,intsíe.>fek >< st b ·. ,)C - as < > meg tata o.ot < vtee.vtos, \ mr.is s/e'-mi. értetekben,„*p«cshku konxteri' e’ösa megb-n.sts’f.-otí .s-utgefetez saio Lotodett fe'vrt
1'50187-1045/50 .leifesnzd, hogy Bi.ACORE 3fe8ű műszerrel, rekesnbkfons emben IL-15 ínnah/ait tegyülert és sz antitest (Itgattduat) alkalmazásával végzett felületi plazmotrrezönaseius méréssel 1$PR) meghatároz otfok szériát. az ib'hí'· «svcv'tóoe mim .-.-.. rubetoi A \I - mi pe,dtu kexe-tób! i< * fkot,, lódul O'V ” Vv.ívíí V <,£·> CÜK sUUs'v' h'-ulűj Sav (\ '1 \0t0öK8. i s ,/ «. O , ' Ugl at trö/ U! Γ’^Ί, V OIC nezra urm-1 antigéntől vagy ahhoz közeli antigéntől eltérő, nem specifikus antigénnél (példánk BSA, kazein) legalább hétszer nagyabb affinitással köti. Az „antigént felismerő antitest” vagy „antigénre specifikus antitest” kilejézésekel az „egy adott antigént spécirtkusan kötő antitest'' kifejezéssel folcserélhetöeo; alkalmazzuk.
A. leírás szériáéi értelemben, a „Kt>'v kifejezés egy adott antdest-antigés kSfesönhsíás drsszociáciős egyensúly· állandójára vonatkozik.
A leírás szerinti éneimben, az .,!zot!pus-átrendeződés”kifejszésasra a jelenségre vonatkozik, amelyben egy adott antitest, osztálya vagy izetipusa az egyik ;lg osztályról egy másik lg osztályra változik,
A leírás szerinti értelemben, a „nem átváltott izotípus” kifejezés a nehézláneofc olyan izotipus-oszíályát jelend, ahol nem történt izobpu»-átrendeződés; a nem átválton izotipust kódoló CM gén jellemzőm a foukefenáns újrarendezett VDJ géntől 3' Irány bán közvetlenül elhelyezkedő első CH gén. Az rzoiiptis-átrendeződést klasszikus vagy nem klasszikus ízotlpus-átrendezöd-esi csoportokba tisztjük, Klasszikus izotipus-átrendsződés a transzgénben legalább egy átrendeződést szekvenciát alkotó régió közreműködésével történő rekombinációs események esetén fordái elő. Nem klasszikus izodpus-átrendeződés elfordulás^ például, embert σ.; és Xf, közötti homológ rekombináció esetén (S-asszoclált deléclő); Alternatív nem klasszikus izodpus-áírendezódésl medsafozimrs, mist például transzgenek közötti és/vagy kromoszómák közötti rekombináció, is előfordulhat és létrehozhat izotípus- au ctideiódésr.
A leírás v.. w értetekben, az „átrendeződési szekvencia/’ kifejezés az átrendeződési tököntblsúcídérí felelős íűNS-szefcveneiáfcsí jelend. A „átrendeződési donor” szekvencia, jellemzően g átrendeződési régió, a konstrukcíóuzon 5' regtóm, amcb uz ammde/odést rekombináció során törlődni lóg. Az „átrendeződési akceptor’ régié a törlendő régió és a helyettesnési konstans régió spéidánl, γ, a. stb.) közőst lesz. Mivel nincs olyan: specifikus hely, ahol a rekombsnáuiő rendszerint előfordul, a végső génszekveueiát ,a koasóukelőbdi jellemzően nem tehet előrejósotó,
A leifos szerint) értelemben, a „glikuziteelös mstázat” kifejezés egy adod febérjébez, ifodkrétabhan valamilyen. imnmngiobnlinrlshérjébez: kovalensén kapcsolódó szénhidrát-egységek mintázatát jelenik Egy adott heferoidg antitest gdköziláesős imrttázafom jellemző, hogy a nem embert transzgénikus állattátok által termeit antitesteken természetes körülmények között előforduló glikoziláeiós mintázathoz hasonlít, igy a szakember felismeri, hogy a heterelőg: antitest glikoziiáciés mintázata jobban hasonlít a nem emberi transzgérukus áílartinek fehérjék, gilkozdáslós mintázathoz, mint sas·» fejők esetében. ahonnan a tmnsxgén CB-géujei szárntaztak.
A .leírás szerinti értelemben, valaíu ilyen objektumra vonatkozó „természetes körülmény ek közön előtórdűlő” kifejezés azt jelend, hogy-az öbjekamr a íersfeszeíhen megtaiálharő. Például, egy adott szervezetben (így vírusokban is) jelenlévő polipeptid- vagy pohtaűkiöödd-ssekveneíát izolálhatunk a természetben előforduló kt a-vd ·.·. rí-. '..'vet u, urKt vám okosai >\ -< nem- ·. <?. . Άο- a kemc-es tei nesze <.\ a, tulstények között előfordul,
A lesfos szerinti értelemben, az „áteendeződört” kifejezés a nehéz lánc és könnyuláse iruísangfobuiis lőkusz olyan konfigurációját jelenti, ahol lényegében komplett Vj.: vagy V(. dornént kódoló konformációban V szegmens helyezkedik el kőzvetlettal & D-l vagy .1 szegmens, megfelelően, mellett. Átrendeződött imnumglobu1001S? -:ií)45/SC ka génlokosz a/o.a'Atomé az örökölt DNS-ssl történő összehasonlítással;: valamely átrendeződött fokasz légibb egy «tan et r afedott aepí&tKes/mn* femtofogiaefomet tartalmaz.
A leírás $ -erőt? c« ofembsn, egy .adott V szegmenssel kapcsolatban alkalmazott „sem átrendeződött” vagy ,paírsvonaí-eredeiít: konflgnrácló” kifejezések oiyao konfíg-ítecíóra. vonaí&oznsk, ahol a V szegmens nem mkombfeálódotí, igy D vagy .1 szegmens tnejteít kfesvesfettei helyezkednek ek
A leírás szerinti értelemben, a .afefoefestm-imheki.tta''' kifejezés DNS és RNS sttolekulákat jelent Egy adott nnklemsav-mofeknia. iebet: egyessxáfo vagy kettösszálö, de elönj öscn scttósszcdu DNS,
A leírás szerinti értelembe»,, az IE-15~et smgkötní kéfms antitestek! \agv antítest-réssekeí (pékiául, V«·, V:, CDR3t kódoló nukletnsavakkaí kapcsolatba» alkalmazott „izolált mikktusav-tnolekala'' kifejezés olyan naklemsav-molekűktt jeleni, amelybe® az antitestet vagy as antitest egy részéi kódoló tmkleoridszekvesela mentes más, az kk.-lS-töi eltérő antigéneket kötő antitesteket vagy antitest-részeket kódoló fUíkleottrissekversciákiók ttmely más· sukléotidszekvesöjsk az emberi genotnikns. DNS-bea a nukleinsavat természetes körülmények között esetleg övezhetik a szekvencia! tatában SEQ IP No. 1-4. azomtsttósztmtort megadott szekvenciák a találmány szerinti, emberi IL-IS elleni, 146B7 jeiti atrreo nehézláne- tV.fj és könny öiáncrégióit (Vb) tartalmazó oakleoiid- és aatlöosav-szekvertciáknak felelnek meg, Konkrétan, a szekveneialistában SEQ IP No. 1. és SEQ ID No. 2. azooosttószásrtön megadott szekvencia a 146B7 jelű antitest Vh domépjések, a szekvencialistában SEQ lö No. 3. és SEQ IO No. 4. azonosiíószátrton megadott szekvencia pedig a 14ÖB7 jelű antitest VL áoménjének felel wg:.
A találmány oltalmi köre kiterjed a. szekvescislistábarr SE'Q ID No. 14. azonosttószárnon megadok szekvenciák „konzervatív szskveneiatnödosításaírá” is, azaz olyas nukleottd- és asnutosavszekvencia-módosíiásokra. amelyek nem gyakorolnak jelentős hatást a sakleotidszekvenoia által kódolt vagy az aramosav-szekvettetás tartalmazó antitest jellemzőit, vagy nem változtatják meg azokat, ilyen, konzervatív szekvenciamödositások közé tartoznak nakleotid- vagy sstteösav-szöfesstítüsiók,. addfeiék és -delének, A szekvenciái istában SEQ ID No. 1-4, azsnosiiészátnos ssegsdott szekvenciákba módosításokat a technikában ismeri standard eljárásokká!, mint például irársyitoít möSageoezissei és PCR-tel közvetített muiagesezissei vihetünk be A konzervatív tmusosgv-szafesztifoeíók ósdién sz: smúmsavar hasonló oidaiíánoű taftmsvvaí helyettesítünk. Hasonló oldalláncú aminosavak családja a technikában ismert. E. családokba tartezrsak bázrkus oldalláncú s példánk lízin, arglnin, hisztidín), savas oldálláosokat (példánk aszparaginsav, ghtíammsav), töltés ttélküb, poláros oldaliáncokat (példánk gllcin, aszparagin, glstamin, szerte, íreotiis, tirozin, ciszteln, trlptefánj, poláros oidailáncokat (példánk alanss, valin, tettein, izeleaete, prolin, fenílalanin, msriosi»}, S-elsgszásokaí hordozó oldalláncokat (például, treogm,: valte. izoleucia) és aromás eldalláncokat: (például, tirozin, fendálitmn, irigtoísn, felsztídte) hordozó atnioosavak. így, az Π..-15 ellent emberi antitestben az előrejelzés szerint nem esszenciális atslnesavat elöoyösen az azonos oldailáneokttt hordozó aminosavak alkotta családból szamtaző aminosavval helyettesítjük..
bsstkg, a találmány egy mástk megvalósítási tnödtábatí, mteációkat vihetünk be az 11,-IS elleni antitestei kódolo szekvencia teljes hosszába vagy ásnák egy részébe, példáid telítési mötagenezissel, és az eredményűi kapott, 11-1^ elleni módosított antitesteket kötést aktivitásra nézve szkrteelheijíík.
k'szermt, az ismertetett (nehéz- és kön nyit íáne-eredetü variábilis régiói tníkleotidszekvenciák álfel kódolt ««estek és/vagy as Ismertetett (nehéz- és könsyűsönc-eredeiii varíaöiht tagtól axninosav-szekveneiákat (azaz a szekveacfeiistában SEQ ID No. 14. azonestíószátnott megadott szekvsretak'· nrtaínfezó antitestek közé tartoznak konzervatív módosításon: átesett: szekvenciák által kódolt vagy azokat tartalmazó, lényegében hasonló anílKW74045/SÖ testek. Az alábbiakban ísmertebök azt áz öliárást, ahogyan ilyen iényegebett hasonló antitestek elöáikthatók a táláintány tárgyát képező,a szekveneiallstáfean SEO ID No. 1-4. azonos kószámon tnegadoít szekvenciák roszei (azaz, nelfexláne- és könnyüláne-eredetu variábilis régiók) alapján,
A önkiéi«savakra vonatkozóan. a leírás szerinti értelemben, a „lényeges ntértékti horaológis” kifejezés jelzi, hogy két nokleirssav, vagy az azokból kijelölt szekvenciák, optimális összerendezése utáni összehasonlítás Szerint, á. megfelelő tmkleofidinzereiók vagy -áeléciök esetén, a nukioctidok legalább kórülbeiül 80%-a., általában legalább körülbelül 90-95%-a, és előnyösebben legalább körülbelül 98-99.5'fe~z azonos, Esetleg, lényeges mértékű honwlógia abban az esetben áll fenn, ha szelektív 1; i lm dizációs körülmények között a szegmentumok a komplensent szállal híhrídízáloak.
Két szekvencia közötti százalékos azonosság: a szekvenciákban közös, azonos poziciók: számátöi tngg (azaz %-os homológia:fí azonos pozíciók számafez Összes pozíciók száma '* löö), (igyeiembe véve azon rések számát, és az egyes rések hosszát, amelyeket a két szekvencia optimális összerendezése céljából szükséges volt beilfesztem. A szekvenciák összehasonlítása és két szekvencia közötti: százalékos azonosság nteghaíározáss történhet matematikai .algoritmus alkalmazásával flásd az alábbi, a: taláhaányt semmiben se-ro korlátozó példákban leírtakat).
Két naklsotídszekvencia közötti százalékos azonosság meghatározható a GCG szoftvercsomag (iütp:fwww,geg.cotn) részét képező GAP programmal (NWSgapdna,CMP mátrix; pap oeight: 48, 50, 68. 70, vngy 80; k-ngbt vreígkt: 1,2,: 3,4, S, vagy ö). Két nukleotid- vagy aminosav-szekvencia közötti százalékos azonosság kis, arOt-nt ·> az t M<-\ <.rs és W. Miller által kidolgozott [CABIOS 4, 1 {-1? < 1989)}. és az AÖGN programba (2.0 verzió) beépített algoritmus alkatmazásával (P AM 120 neigbt resldne tahié; gap lengik penalty: 12;: gap psnalty: 4). Ezenfelül. két amtnos&v-szeksvBcía közötti százalékos azottosság kiszámítható a GCG szofttervsomag pmp nv,w pop eorn rcazet képező G KP pmmau-ba beépített. Kcecleman e- U u<«.ch ?kf kak-lg··» zott algoritmust ÍJ. öíok Bioi. 48, 444-453 tartalmazó GAP programmal (Blossmn 62 mátrix vagy
PAM2SS mátrix; gap wíght: lö, 14,12, 18,8, ó, vagy 4; lenght weight; 1, 2, 3,4,5, vagy 6),
Á mlálmáray szerinti nukleinsav- vagy fehétjeszekvenciák alkalmazhatók „keresési szekvenciának”, amellyel a nyilvánosság számára elérhető adatbázisokban keresésre, például rokon szekvenciák keresésére, ulLaíroarhu'uuk, llxn kereseteket végezhetünk az Altrdtu! munkatársa; ahol kidolgozott N81 AST és XBLAbf pto^ia'ttokkd, fe 0 verzió· ÍAltsehm és mtsai.. ,1. Mól. Biok 215, 403-4W (1990)1:. A találmány szerinti· nJCe ííksv molekifakkai homológ nokleoudszekvenciák azonosítása céljából BLAST aakleehdkereséseket végezhetünk az NBLAS’f programmal (score-~lö0; wordieoght-12). A takbmány szerinti fehérjemslekmákkal homológ ammosav-sxekvetteiák azonosítása céljából Bt AST fehérjokereséseket végezhetünk az XBLAS1' progtamraal (seore-óO; wordleaghb-5). Abból a célból, hogy összehasonlításokhoz mseket tartalmazó M^zerenceze-etáie; jussunk, az Alisaiul és munkatársai által kidolgozott (fenéi; Acid Rés. 25. 3388-3483 tl99?)j Gapped BS..AST programokat alkalmazhatjuk. Ida ΒΕ.Α8Γ és Gapped Bi. AST programokat hasznosítunk, a megfelelő programok (például, XBLAS és MBLAST) alapbeállításait alkalmazhatjuk (lásd, httpÁwwis nebt nlts.jyh.gmk
A önkiéin··.»', ak 1.Ί a ttsek egész sejtekben, sejdfeátmoban, illetve részlegeseit tiszta vagy lényégében tw ta íörmabass. Egy adott: mddémsavat akkor tekintünk „izolállnak” vagy „iessyegében tfezritoímakfe ha utas settes komponensektől vagy·· szennyező anyagoktól - például: a sejtben található más oakfelnsavaktöl vagy fehérjéktől
-standard eljárások - így, alkalikusfSDS kezelés, CsCI oentritngáías, osxlopkromstogmfía, agarózgólen végzett |S)818?-l845íSG eíektrutörézis és a -technikában jől ismert más eljárások íCurtest Frotocols in Melecular Btöingy, szerk: Ausohei és mtsai., kiad.: Gteene Publishíng anó Witöy bsterseienee, New York (1987)) - alkalmazásával ;negtísxtitoáak,
A tslálmány szerinti, gyakran natív szekvencia (módosított restrikeiős helyek és hasonlók kivételével) lomoáisösu lévő, cDNS-ből, genotnikus DNS-ből vagy ezek keverékéből származó nukletssav-készsönényekcs mutációkat végezhetünk génszekveneíák előállítására szolgáló standard eljárások alkalmazásával. Ha szükséges, akkor a kódoló szekvenciák esetében e mutációk hatással lehetnek az amittosav-szekveaejára. .A találmány tárgyát képezik a natív V, D. J, átrendeződési-, konstans vagy más, a találmányban ismertetett szekvenciával lényegében homológ vagy abból származó DNS-szekvenciák (aixsl a „származó” kifejezés jelzi,, hogy egy adott szekvencia azonos vagy más szekvenciából lett módosítva).
\ Yra\ .'cn m erie'ermen, i í> adott n ikk-mms Am'?,! akkor van nukoeokepe'-ef; hapC'OÁY, ha más mkieinsav-szekvenciával funkcionális kapcsolatba lett helyezve. Például, promóter vagy az rRNS szintéziséf; serkentő szekvencia akkor van működőképesen kapcsolva egy adott kódolás szekvenciához, ha a promóter vagy az rtöNS szintézisét serkentő szekvencia hatást gyakorol a szekvencia -ranszkrípclójára.. Transzkripciós •szabályozó szekvenciák vonatkozásában, a működőképesen kapcsolt kifejezés azt jelenti, hogy a D'NSszekvenciákat folyamatosan, és ahol szükséges két fehérjét kódoló régtöt is folyamatosan, es leolvasási keretbe kapcsoljuk össze. Az átrendeződési szekvenciák esetében, a működőképesen kapcsol; ksiejezés azt jelest!, hogy a szekvenciák kó;x:;;ek az átrendeződési rekombinációt befolyásolni.
A leírás Szerinti értelemben, a „vektor” olyas sukleinsávohölekrda, amely- a hozzá kapcsok más nekleinsav transzportálásant képes, A vektorok egyik típusa a ..plazmid, atnely olyat; cirkuláris, kettős-szálú DNShurok, amelybe további DNS-szegmensek ligálhatők. A vektorok egy másik típusát s vúttsvektorok alkotják, amelyeknél további DNS-szegmenseket ágálhatunk a vírus gertomjába. Bizonyos vektorok, a kérdéses vektorokat tartalmazó, ntegfeíeló gazdasejíben autonóm replikáctóra képesek í például, baktériumból származórepukásíös origót hordozó bakteriális vektorok és episzómálls emiósvektorokl. Már. vektorok (például, nem epíszőtttális erslősvektötök) a gazdaseáhe történő bevitel esetén beépíthetők a gázoláséit genomjába, es igy a gazda geoomjávai egybe repb&álődmtk. Továbbá, bizonyos vektorok képesek a hozzájuk működőképesen kapcsolt gének expressxiéjái irányítani. A leírás szerinti érielemben, az dyen vektorokat „rekombiaáns exprosssiős vektorok’' (vagy egyszerűen „expressziös vektorok) néven említjük. Általában, a rekombináns DNS eljárásokban alkalmazható expressziös vektorok gyakran plazmidok formájában léteznek. .A leírás szerinti értelemben, > »-ei \ekto kém ·.telux -tbxn pi-zindof . lkaién'mk Λ mind e^ vAr mtepvesek euvw^-a •í&fcserélhetően alkaimazfcatók. Azonban, a telaímány tárgykörébe tartoznak az expressziös vektorok: más-femáí. mint például olyan virusvektorok (például, replikádéra képtelen rofmvlrusók» adenovirtssok és -adéítojsszovtek vírusoké amelyek egyeneríCKU Junkc'okat véig áltatnak
A leírás szerinti értelemben, a „rekombináns gazdasejt” (vagy egyszerűen „gazdnspii”) kifejezés olystn sejtet jelem, amelybe rekombmátts vektort vittünk be. Egyértelmű, hogy az ilyen kifejezések nemcsak a konkrét senet. hanem az ilyen sej; utódjait is jelenti. Mivel, mutációk \agy környezeti hatásos következtében, bizonyos módosítások előfordulhatnak a következő generációban, az ilyen utód. de facto, feltehetően nem azonos az eredeti sejttel, azonban az ilyen sejt is a leírás szerinti értelemben alkalmazott „gazdasejí” kifejezésbe tartozik.
A bírás szerinti értelemben^ «z „alany” kifejezésbe tartozik az -ember ős bármely, embertől különböző állat. Pólósul, a találmány szerinti eljárásokat és készltoxtoyefceí alkahnaxhatonk gyulladásos betegségben - sutot wkmö45/sö
-14pétdául arthritis, például ízületi csúz - szenvedő alásy kezelésére. A leírás szériáit érteismbesy a .^emberiől különböző állat” kifejezésbe tartozik minden gerinces, például emlősök és nem emlősök, mto például nem em béri ioetniösök, juh, eh, tehén, csirkék- kétéltűek, hallök, stb,
A találmány különböző szempontjait az alábbi alfejezetckben résélétespn elírjuk,
A találmány szerinti emberi mortöklosrilis multesteket kíilöuíéte ismert eliárásukkm, mint például a Kókler és Msllsteia által leírt {Natúré 256.495 (1975 il standard, szomatikus sejtek hibridizációján alapélé eljárással, Sár előnyösek & szomatikus sejtek hibridizációjával történő eljárások, elvben, a monokloaúlís antitestek előállítására szolgáié egyéb eljárások - például. B-lítnfociták vírusokkal vagy onkogénekkel történő transzferna-ása. embert antitesteket ködeié génkor vAai a» ‘-Arneri fag-knunusá'-; eljárásnál - s alkalmazhatók
A találmány szerinti emberi tnonoklonális antitesteket termelő hibrídómák előállítására alkalmas előnyös álíntrendszer az égémeodszer. Hibrídómák egérben történő előállítása ·· így. az rmmuiüzálási rendek, illetve az Immunizált lepsfetek izolálására és faionálásáxa szolgáló eljárások - a technikában jól femert.
A találmány egyik megvalósítási módjában, az IL-15 elleni emberi monoklenália antitesteket sz emberi humtmrendszer, és nem az egéreredetö immunrendszer részeit hordozó, transzgénikus vagy rtanszkromoszómáiís egér alkalmazásával állítják elő. A találmány egyik megvalósítási módjában, a találmányban transzgésiims, „BáMab egér” elnevezésű egeret aShsltna/nnk, amely az étrendéZsilen -emberi nehériánc (μ.és γ) és a κ könnyüláíte imtuturglöbtditt szekvenciákat, es az endogén μ és κ iokuszékai maktlyálé, célzott mutációkat [Lonberg: éS: rotsaL, ölaiure 368. 856-859 (1994)1 együtt kódoló, embert insnuuglobulro-mmiisfeiszokat: tartalmaz. Eszei 'itt, az egérben az egéreredető Igéd vagy κ gxpresszíója leesökken, és. immunizálás esetén, a bevitt smben neíte; kme- és kömmléne-ersdetd transzgének csoport-áttendézedésen és szomatikus mutáción átes ve magas affinitssú emberi Igöu monoklonális antitesteket generálnak [Lonberg és mtsai. (1994), rolni lenti; -áttekiatve Lonberg, Handbook of Expertraentaí Pharmacoíogy 1 i 3. 49-1(51 (1994); Lonberg és Huszar, lat. Rév. Immunoi L*. 65-{U (19*55); Hordma és Lotmerg, Ληη. Ν λ’, Ae,nl Au 7 6-t, 536-546 feőOSíj, a HuMab egét előállítása a IL részben van leírva és az irodalomban ismert ffaylor és mtsai,, Noel. .Aeid Rés. 29, 6287-5295 (1992); Chen és mtsai., int. immunoi. 5. 647-656 (1995); Tuailloa -és mtsai,, Proc. Kati. Acaő- Sci;. USA 99, 3726-3^24 {lóo.tti; Chot a» mtsai.. Natúré Génét. 4, 117-123 (1993); Clten és mtsai,, EMBO I. .12, 821-83(5 fe094s- Tnailion és roísah, A femmnol. 152. 2912-2929 (19945; Lonberg és mtsai., Natúré 3o8. 854-859 {1994); Lonberg, HandbookofLxperimemai Phartnacology 1.1.3,49-191 ( 1994); LoubergésLíasz.n, bd Rév. Immuno). 13, 65-93 (1995 >; Hsrding és Lonberg, Attn. N. ¥. Acad, Sci, 704,536-546 11995); Fisluvild és ottsaL, Natúré Bioteehnol. .14, 845-851 (|99óí; lásd még az US 5.545.806 sz., US 5 569.825 sz., US 5.625.126 sz., US 5.653.425 sz„ US 5.789.650 az.. US 5.877.597 sz, US 5.661.016 sz„ US 5.814.318 sz., US 5.874.299 és US 5.77(5,429 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadulod iratokat (Loáhers és Kay, és GenPbarm imern&tiörtal); US 5.545,807 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi irat (Smani és mtsai,); WÖ 98124884 sz nemzetközi közzétételi irat (1998. június 1).); WO 94/25585 sz. nemzetközi közzétételi írat (1994. rsoverober lö.); WÖ 4- 122~ \/ nemzetközi közzétételi irat (1993. jünios 24,); WÖ 92/22645 sz, nemzetközi közzétételi irat (1992, decentbej 23,); WÖ 92/93918 sz. nemzetközi közzétételi írat (1992. oíároios (9.)j. A 110012 iranszgémkns KuMafe egér előállítását konkrétan a 2, példában: írjuk le..
fetnupfeáfesok
Az )1--15 elleni teljesest emberi mcuoklonálls antitestek előállítása eeljáisöl, emberi Inwtsígtóbsiro géi(K3I87-1045/SG
-15nekei íurtalmaző transzgétükas vagy trasszkromoszőmáhs egereket (például, HCol2. í-ICo vagy KM egerei) tsrinssferníálhatusk tisztított vagy dúsított IL~ 15'készítménnyel és/vagy 1.1,-:5-6- expresszáló sejtekkel, például az inMaionibau leírtak szerint ILonhetg e? ndvü,, Nstrne 3é§> 856-859 (19941; Ftshwtid és mtsai., Natúré Bloteebsol. 14,845-851 (1996):; WO 98/24864 sz, nemzetközi közzétételi irat]. Esetleg, egereket tmummzáíhaSnnk: ©miben ít-15-öt ködölő DbkS-seí. Előnyös, M sz egerek az első !f5)í?tt)rti.záláskor 6·· 16 hetes koróak. Példáiul,. az iL-15 antigént (5-5Ő pg) íartalnmzó, tisztított vagy tkishoít készittnesyí alkalmazhatunk a BuMab egér iutmperttoneális ínummizálására:.. Abban az esetheti, ha az IL-15 antigént tartalmazó, tisztított vagy dúsított készítmény nem eredményez-: antitesteket, az ksmanválasz elősegítésére az egeteket tmsnnntzálbaljak az 11,-15öt expresszálö sejtekkel, például sejivoaalisk
A kőiönfeíe antigénekkel kapcsolatban feiibnhnoződott ismeretanyag szerint a HuMafc transzgéníkns egerek akkor reagálunk a fesjobhan, ha először Prewá-féíe komplett adjnvánshan felvett antigénnel intraperitoneális (IP) vagy szubkután (SC) innönnizálást, majd kmund-ieie ínkomplett .adjuvánsban felvett antigénnel mindet tn«s,'dtk t 'ion vcg/unv IP immunizálást (maxisaim kö aíkalottitztal), Az iranmnválaszt redwtbiíálistm veti vórtnirttakbói készített plazmammtákkal nyömonkővethetjük az immunizálás; teljes időtartama alatt. A plazmát szfeinelhsiitifc LLISA-val (lásd alább), és a megfelelő- szintű, ft-15 elleni embert immunglobulint termelő egereket atkaimazhaíjuis fúzióra. Az egereknek az elöiés és a lépeltávolítás előtt 3- nappal rásegítő iátravénős injekcióban antigént adhmunk be.
A.J.5.v.hv,ii v.....iyy,,..v\nokifín tó ajt,'esteve* tér nek) htbrmo cloOlma
11..-15 ellet)! embert wnoklonáits antitesteket termelő hifertdónták előállítására, Immttttizált egerekből lépsejteket és nyivokesotnőböl: származó sejtekét izolálhatunk és megfelelő örökéleta s<jt vonalhoz, mint példás! sgértmelőtísi-seiívonaiboz, fezionáltathafjak. Az eredményül: kapott bibridémákat az antigénre speedlkus antitestek termelésére nézve szkt'taefeetjiik Példás I, immunizált: egerek lépőből származó, kalőnállö lírnibcitákm tartafeaző sejtszuszpenziókat 5P2-'O-Ag8 653 kódjelt), egéreredetü, nem szekretálő, mielóma sej:fekfeez(ATCC, CRL 1530) Ibzíonáitaibatirik 50%-os EEG alkalmazásával. Lyukasként .· körülbelül (Mik sejtet lapos fenekű zoikrotiter-lemezre vibmünk át, majd a szokásos reagensek mellett (ŐM feetáhs: Clooe >$erum~oí, 5-(059 origen bibridőma klónozó fektéit ÜGESSI) és (MíAT-oi: (Sigma) tartalmazó szelektív tápoisfelban tskúbáljuk 2 hétig. Körülbelül két héttel később, a sejteket HAT helyett :HT-t tartaimszö iépoláatban tenyészthetjük. Ezután, egyed: lyukakat vizsgálónk ELISA-val 1:..-15 ellet-i: emberi mosokloaális IgM és IgG antitestek jeleokhévte nézve. Miután a idhrklómák intenzív növekedésnek ináabak, általában lö-14 nap mán a iápoldaíot megvizsgáljak, Az antitestet szekretálö hibridómákat átletsezeljük, újra szktineljük, és ha valamelyiket emberi IgO-re nézve még minőm pozitívnak találjuk, akkor az IL-15 elleni monsklonábs tnüitestekef korlátozott hígítás alkahnazásávai legalább kétszer vzabklősözhatjuk. A. stabil szabklőnokní in vitro tenyésztl-ettök a szöveuet-yésztő tápoldalban történő antitest előállítás, és azvtmítest jellemzése célíáből.
Il-JAklho)iig)d^^
A találmány szerinti emberi antitestek elhal lifkatők gazeasé't-i'asszfektömában, például, a technikába® ismert rekombináns DNS eljárások és géntranszl'ekeíös eljárások ^MotUson, Science 229, 1202 11985)) alkalmazásával
Például, a találmány egyék megoldásában, az érdeklődésre, számoítartó géniek). például emberi antitestet kődsdő gének, expressziős vektorba - min; például eüfeartöla expressziős piazmidba, mist amilyet a WO
87/Ö4462 sz., WO §9/0 lönő sz, nesíízetközi közzétételi iratokban, es EP 338 841 sz, emópai közzétételi iratban i(M(87-lÖ45/SG ismertetett GS génezpresszíős rendszer alkalmaz: - varr n.j- ,- tecbuk, ο, n )Mne» ,vpvw.<« 'rtak/uK ísgá!hatök, Az .antitestet hódoló, klőtrozoff: géneket hordozó tiszfoott pk-zmidot bevihetjük sukatíóta gazdasejíekbe, mini például, GEfÖ-sejfekbe vagy MSO-scjtekbe vagy esetleg más eukariótu sejtekbe, mim amilyenek a növényi eredetű sejtek., élesztő- vagy gombasejrek, Az e gének bevitelére szolgáló eljárások lehetnek a tecixsikábatt ismert eljárások, mist például elektroporáció, lipofoetis, lípofeGntnírt vagy mások, Miután e géneket beviítök tt gazdasejtekbe, azonosíthatjuk és kiválaszthatjuk az antitestet expresszálö sejteket. E sejtek tesznek a tmnszfékfomák, antekckben az cxpresszitis szintet fokozhatjuk és e sejteket anutestek termelése céljából félsz. nerithaíjnk, Rcknmbtnans antitestek izolálhatok és tísztiíhatók e tenyészetek foMúvoxhól és/vagy a sejtekEsetleg az: antitest kódoló, klónozott gének más expressziét; rertászerben, mini például E, cohbam vagy '.ulanulyen komplett szervezetben expresszálhatók vagy szintetikusan expresszáihatók.
FA' jvj k <K ’m , n, r£ Vn v- 4 Λ> s ι
Az antitestek főként a hat nehézlárse- és könnyúlánc-eredetti, komplementaritást. meglratároző régiókat (CDR-eket) alkotó aminosavak vajas lépnek kölcsönhatásba a megcélzott amígénekkel, Ezért, a CDK-ekes belüli amlnosav-szekvenciák az egyedi antitestek között sokkal diverzebb. mint aCfíkfaa kívüli szekvenciák. Mivel, a CDR-szekvencták felelősek az antitestek és antigének közötti legtöbb köíesönhatásérf, lehetséges a természetes körülmények között előforduló specifikus antitestek tulajdonságokat utánzó, rekombináns antitesteket expresszálni úgy, hogy különféle tulajdonságokat mutató különféle antitestekből szármázó \ a izekre ne Iákba ültetett, természetes körülmények között előforduló specifikus antitestekből x/rtte>.zo «'2>K s/,'k<. mexákat magukban foglaló expressziás vektorokat készítünk [Rteehmsnn és mtsai., Natúré H3 527 t'APfo. Jones és mtsai., .Natúré 321., 522-525 (19R6J; Queen és mtsai., Proc. Natl. .Acad. Sci. IX A Só, 13« >2^* U«>35 11989)1, Ilyen vázszekveneták elérhetők a nagyközönség számára elérhető, esiravonal-etedc',! .imaesteket kódoló gén'Λν,.Ί υ-u!*! ’aletazo f>\\ .a itb osoklvl 1 zm ? s n^ond eredetű mt \ az ^rut estite- ·. \sh k gémszekvenciák tói különböznek abban, hogy nem tartalmaznak teljesen összeáílitott változékony géneket, amelyek a. VfDt.1 kapcsolat sorát} alakulnak ki a B-sejtek érése során. CsirtiYonai-eredefii szekvenciák különbözni fognák a variábilis régió mentén egyenletesen elhelyezkedő, egyedi, magas affinitása másodlagos repertoárba tartozó afoitesí-szekvettefáktei. Például, szomatikus mutációkat viszonylag kevés számban találunk s vázrógíó aminotermmáite részén. Például, a szomatikus mutációk viszonylag “tsvan fordulnak elő az 1, vázrégio áminotermíuálís részén és a 4. vázréaiő katboKitenaiuális részén. Továbbá, számos szomatikus mutáció nem változtatja megjelentésen az átültért kötési tulajdonságait. E célból, nincs szükség arra, hogy egy adott antitest teljes DNS-szekvenciái át előállítsuk -az eredeti antitestéhez, hasonló kötési: fuiajdőösáaá, intakt rekombiísáss antitest elkészítéséhez IPCT US 99 05535 sz nemzetközi bejelentés. 19«e. merem? 12.1 A CDR régiókat áthidaló nehéz- és könnyúláneot kódoló részleges szekvencia jellemzően elegendő e célra. A részleges szekvenciát alkalmazzuk annak megheíarczasára. hogy a csíravonal melyik variábilis és csatlakozó génszegtnensei vesznek reszt a rekembimins antitestet kodoló variábilis régtök kialakításában. A csiravonaii-etedetn szekveircist ezután a xartabslm regsok húnyzó része etek pótlására alkalmazzuk. Nehézlánc- és köisnytiláno-eredcfti ieader szekvenciák a tehesse totuo lch.a,adnak és a végső antitest iüiajdösságitmnk alakításában nem játszanak szerepet. A iruns/o restek póriasa edjubel, klónozott eDNS-szekvenciákat lígáeidvsl vagy EÜR-aínpliEkáelövak szintetikus vligonukieondokkai kombmálhaúntk. Esetleg, a telles variábilis régió megszintetizáfhaíó rövid, egymással átfedő obgcnukleottdok snrvzatakést, ás ezeket PCR-auipbőkáciöval kotnblnáfva juthatunk egy adott teljes
WÍ87-W45/SÖ
-πszimetikus variábilis régiói tartalmazó klönboz. Ezen eljárásnak vannak bizonyos előnyei, mint példáid hizotsyos restrikciós helyek eliminálására, be-kelésére, vagy koskrét kofemok optimalizálására.
Egy adott hibridómóhől származó sehéxláíte- ós kőnnyuláns-íranszkriptunrokat kódoló íuikiooliászekvgneiákar alkalmazzuk szinretikus oiígotmideotídök egy-rsássalátfedő sorozatának tervezésére. iákból a célból, bogi a természetes szekvenciáknak megfelelő, amiawavakat kódoló kapacifesu, sriotetikös. V-szekvenesákat állltsarik elő. A szinterike» nohóidánc- és: κ-láne-szekvenciák háromfeteképpeatérhetnek el a természetes szekvenciáktól: ismétlődőnnkleoiidházísoi; sorát megszakítjuk abból a célból, hogy elősegítsük az: obgomskleotidok szintézisét és a PCR-amplifíkáeiöv, optimális transzlációs ioiciációs helyekét épitsikrk be a Kozák-fele szabály szerint (Kozák, I. Bioi. Chem. .20.6, 19867-19k?b (HEH)]; és Hindin helyeket viszünk be a transzlációs inicláeiös hely éktől 3' Irányba.
Misei a nehózlase- és misei pediga kőnavuláne-eredeíü t arsabih» regsok esetében az opí imahzált kódoló ~ és a megfelelő oem kódoló -· szál szekvenciákat 3Ö-5Ö nukleotid hos/ás&gu vakus vtkrn kordinéiül a megfelelő: nem kódoló ohgonukieotki felére, daraboljuk szét. Így, az egyes láncoknál. az ohgöttuMeoridök egymással átfedő, keitösszálú sorozatokká állíthatók Össze, amelyek IStMoö lukleittidokhő ,feo szegmenseket hidalnak át. írtakeslet eztttr etnpk Ikt v alkalmazz jL 1*9 409 -teó, riRO&br tílo Rí i\ , mpl h<a, os értekék előállítására, jellemző, hogy egyetlen variábilis régióból származó ehgenukieosíthsorozatol két készletre bot?tsrrk le, amelyeket elkülönülten amplífíkáleok két. átfedésben lévő RCR-termék előállítására. Ezeket az átfedő termékeket ezután PCR-amplíőkációval kombinálva alakítjuk ki a teljes variábilis régiót. Szükség lehet arra is, hogy a oehéziáae- és könnyüíánc-eredetű konstans régióba olyan fragmentumot (Ideértve a κ könnyüíánc Bbsl helyét, vagy a gamma nehezlánc -esetében az Ageí helyet) illesztőnk he a kCR-ampliilkáció soráss abból a célból, hogy a generált fragmentumokat az expressziós: veklorkonsírukclókba kottnyon kiőooz.ha-ók legyenek.
A rekonstruált «stódáne- éykörusyólátií-eredeíü: variábilis régiókat szuíán klónozott promóterrel, looder szekvenciával, tran- n hricíásotrail, konstans régióval, 3’ nem hartszlálödő régióval, pohadeniláció» és transzkripciós termtue os szekvesetákkai kombinálunk expressziós vektoritonstrnkefek készítése céljából. A nehéz- és könnyűkttkot kódoló evpresszlés konstrukciókat egyetlen vektorba kombittólhatíak, msáá gazdasejtbe ko-transzfektálhatjuk, sorozatosan. írsuszfekíálfediuk, vagy elkülönülten transzfektálhaljnk, mid ezeket: &zlosáíva jpttmfca nündkét szálat: sspresszáhr gasdasejlbez.
Az emberi. ígös-r expresszálására szolgáló vektor előállításában alkalmazható piazwdokat: az alábbiakban ismertetjük (I. példa). A glazrniáokat agy alakítsuk ki, hogy a RCE-rol ampliSkált V nehéz- és V κ ι kuppM wrsnsulas.eo’ tarabodv í !)\$ όό·>λ „'·,.'\:1Ά a Lakna/m mű uk a tehes eeaez’\eos e,- >onnst’!ane<'t fodolo mmigéoek rekousduáiására.. E pUzm\k>kat atkain'azbatluk emberi: íg£A«: VW rortttesfek kotsplett expmszálására. A taláhnány szoros. νφ,νοϊϊ ember: antuestefc közé tartoznak l'göd, tgvr.h fel. tg \ IgM, és igö antitestek is. Hasonló plhznsdnk készíthetők más esbőziáac-izodgusok, vagy λ (latnfedal köstavűláncokal. Inttölmazó antitestek espresszálásárs, így a leírásban bemutatott Π..-15 elleni emberi antitestek fe-tfefe, 14 Ή5,4ÍI4A8 és 4Ö4E4) szerkezeti saíariaga?í alkfemn.fefetts, (.hat., veAc'euleg Okon fl -l> ehet» ensbert antitestek ckriílfrtsái?, „meh-'v uegtartják a találmány szerinti antitestek legalább egy tunkeionáris sajátságát, miig például az íL-lá-böz töriénó kötődést. Előnyösebb, ha a 146B7. 147115, 404A8 és 4Ö4E4 antitestek CDR-fegíói közül egyet vagy többet: trtiKtt uuht, iVi.'.ivU, .‘ADR.kk^ n kenibtr oo C, arasovsa, xortmnmu us. a Ool, ,efed ho;\ W.obi íekoutblnáns módon készített, találmány szériád, it-15 elleni emberi antitesteket áiliísojtk elő.
HittiÓ?- I045.SC *
-lö
Egy további megvalósítás: mód szerint a adáiníány tárgya 11,-1 S elieni antitest eiőálliíását'a szolgáló eljárás, amelyben;
(1) Emberi rteisézláiíé-ercdetö vázrégiőkat és emberi nehéziárse-eredető CDR-efeet tattaisrsaző,. a találmány szerinti antitestet álktoak elő, amelyben az emberi Kehézlásto-eredetó Gi>R-ek közöl legalább egy íarisimsz a 2. ábrás bemutatott CDR-ek arainosav-szekvenetái (vagy a sKekveRcíaEsíábas SEQ ID Nó. 2. azöaesóöszámon megadott szekvenciában lévő megfelelő arsmosavak szekvenciái) közöl kiválasztott amtsosavszekvenciát; és (2) emberi köimvittáno-ereáetö vázrégiókat és emberi kömxyílláíte-ereáetü GDR-ekeí tartalmazó antitestet sál Utónk elő, amelyben az emberi könnyőlánc-etódotó GDR-ek közül legalább egy tartalmaz a $. ábrás benmtatott CBMt ammosav-szekvencíáí (vagy a szekveuciabstábaa SEQ ifi No. 4. trzoKosítőszánton megadőtí szekvenciában lévő megfelelő aminosavak szekvenciái) közül kiválasztott amEinosav-szekvcKciát;
almi m antitest megtartja ít- 15-őt kötő képességét
Az antitest i!,-;5-ö; kötő képességét stasdard kötési vizsgálatokkal, mint példás! a példákban leírtakkal (példán!, ELIS A-val), imtsrozhatidí meg.
A Emilekben ismertetett találmány szerinti rekombínáns antitestek tortaimazzák a J4Ő87 antitest Keltezés könnyőiáitésbak CDR3 doménlelt a I46B7 antitest CDR2 domémett es a KIS? .antitest GflRi áomérgeiíis.
Az. íL-15 szimpla kötésén kívül, a génsebészeti álon előállított antitesteket, példán!m fentiekben leírt antitestek, szeiektsihatjok & találmány szerinti antitestek más mtikcíonálts tnitgrtonságatnak iernttartásám nézve, például;
<I> emberi lf-15 kötése és íí-15 által mdttkált gyölísőáskeltő hatások gátlása;
(2) aTNF-ö Π..-15 által issisxkálí temjelésések vagy T-sejtek prolítícráeíőjáöak gátlása;
(3 s 31ACORE 3ÖOÖ műszerrel, rekombínáns emberi ÍL-15 (analizált vegyüiet) és az ámítást (iígandnmá alkalmazásával végzett ddett plazmonrezonaaeiás méréssel (SPR) meghatározottak szerint az 1L-15 kötése kevesebb mint körülbelül 1 \í álsszociácfos egyensidvi. állandóval (Kö);
(4) az IL-IS β- és/vagy '/láncán lévő kölcsönhatási dómén valamely epitőpiáfeoz való kötődés;
(5) az emberi 11-1S Asp amtsosavának az emberi 11,-15 receptor ^egységéhez való kötődésének és/vagy az ember; íl-l 5 Gin1* armttösavának as estei 11-1.5 receptor y-egységéhez vaió kötődésének tnegztrvarása;
(ó) receptorhoz kötőik embert í!-:t5~höz való kötődés:
(7) kötődés ttz emberi 11-15-höz és az e-tttberí 11-15 pttrakeraíesisr isdttkáló képességének gátlása;
(S) kötődés az emberi' 11,-15-höz és az emberi íL-15 epiderntlsz-megvasíagodást indukáló képességének gátlása;
(9) kötődés az emberi !L-TS-ltoz és ez emberi 11-15-nek a kemínoetták proliferációját htoríkáló képességének gátlást}; és/vagy (lö) kötődés az, emberi 11,-i5-höz és az emberi Π..-15-nek az aktival! leukociták kemotaxisál indukáló képességének gátlása.
Í!a±5eilgn;jnmxír:. mpnokooelantií^tefejelfegSS
A találmány szerinti emberi nsoaoklonáíis antitesteket az IL-lS-lkto való kötődésre nézve killőhléle ismer; eljárások aíkalmazásával teilesnezltetjük, Attnláfeanf: az antitesteket ki tnduhricém ELISA -va! jellemezzük, Rövides,. mikrodter-lensezekct vonhatónk be ISS-beó oldott tisztított 11,-: 5-tel. maid ttz irreleváns téitérjékeí példán! PBS-ben oldott, borjtieredető szérumalbuminnsl blokkoljak. lt-15-te.t immtmizáll egerekből származó.
; 00187-1045. SG
-19-.
különböző mértékben hígított plazmát adunk az egyes lyukakhoz, és 1-2 órán át 37°C-oa lakúba Íjuk. A lemezekét PHS/Tween 20 oldattal mossuk. majd alkalikus foszfatázhoz konjugált, emberi IgG Fe-te specifikus, kecskeeredefá .políklonális reagenssel 1 őrárs £(.3750-08 ínkubáljuk. Mosás után, & lemezeket: ABTS szríbszüátunrmai hívjak elő, és az OD 405 run-en mért mérésével analizáljuk. Előnyös;, ha a legmagasabb (keféket kífejtesztett egereket alkalmazzuk fúziókra.
A fentiekben leírt ELISA vizsgálatot alkalmazhatjuk antitestek, igy az ÍI.-1S immunogénnet pozttiv teakciót mutató antitesteket termelő bíbriMrták .sakrinelésére, ÍL-15-öt. előnyösen magas affinításssü, .megkötni képes hiöridótnákat szühkíóöozhaijsk és tovább jeMemezhetjük. A kiindulási sejtek reaktivitását (ELISA szerinti megtartó egyes hibridőmák közül egyet klánt kiválasztunk sejtbank készítésére és antitest-tisztítására,.
Az IL-'iS elleni emberi antitestek tisztítására, a kiválasztott hibridómákat forgó üvegekben (kétliteres íőrgőüvegí vagy más tenyésztési rendszerekbe··! szaporítjuk. A tenyészetekből származó féíülnszokat szűrhetjük:, tömény&hetiűk, majd. protein A Sephaföse-nn (Fbatísíacia, Piseataway. NI) végzet· affinitáskromategráfiával tisztíthatjuk a fehérjét. Miután a puffért PBS-re cseréltük, a koncentrációt az OD 2S0 am-en történő mérésével (extinkctós koefficiens; 1,43} vagy előnyösen, nefelomieriás analízissel .meghatározzuk, .Az Igö-t ellenőri?·· hetjűfe néteiektKsíorézíssd. és antigénre specifikus eljárással,.
Annak, meghatározására, hogy a kiválasztöd, 11,-15 ellem emberi monoklonális antitestek egyedi epítópokhoz kötődnek-e, az egyes ístfitestsket kereskedelmi íbfgalomim beszerezhető reagensekkel (Piértte, Rockford, 1.D bíotinMfeatjsffc. A biotlndált Msfe kötődéséi: streptavidinnal jelzett próbával mutathatjuk ki. Á tsfíi, o estek oo típusai ak n' >h.v > ot pus l A k 1 ?» ^ge/re unk a u, m sabar tsnert cba« s snk alkalmazásával. Például, a mikrofiíer-iemezzík lyukait bevodhafipk 10 gg/nü ember elfed lg-vei <'4Έ, 1.2 h). Majd 5%-os BS A-val törtem .blokkolás után, a lemezeket 1:0 pg/ml twnoklonálés antitesttel vagy fisztíteü izötipus-konaoiíokkal resgálíaljnk (szobahőmésék let, 2 óra), A lyukakat vagy emberi IgGl-él. vagy pedig: más, emberi izodpasia specifikus, konjugált próbákkal magáüatpik. A'lemezeket a fentiekben leírtak szerint hívtuk elő es analizáljuk.
A njceokicnáíis antitesteknek: II..-1 S-öí expresszálö elő sejtekhez valő kötődésének tesztelésére, áramlási ritometriát alkalmazhatunk, Röviden, membránhoz kötött ÍL-15-őt expresszálö sejtvosalakat étvágy emberi PBMC-ket standard kőrülmen\<ri, között tenyésztünk, majd PBS-ben <·:· ö,l% BSA, 0,01% N&Hs) különböző koncentrációban oldott monoklonális antitestekkel keveriúk össze <4°C, 1 h). Mosás után, a sejteket fiuereszcetts jelzéssel ellátott ember elleni ígG antitestekkel reagáltatjuk az elsődleges antitesttel végzett festés során alkalmazott körülmények között. A miutáktsl FACScan műszerrel fény és öhlaiszőrás alkalmazásával analizálhattuk ágy, hog\ egyetlen sejtre kapaznak és meghatározzuk a jelzett antitestek kötődését. Esetleg fluoreszcens mikroszkópián alapuló vizsgálatot is végezhetünk az áramlási citometriás vizsgálat mellett vagy a helyett. A sejteket pontosan a fentiekben leírtak szerint festjük, és fluoreszcens mikroszkóppal vizsgáljuk. í zen eljárás tehetővé teszi egyedi sejtek láthatóvá teleiét, szórtban sz antigén sűrűségétől (üggifet & vizsgálat kevésbé érzékeny lehet.
11.-t 5 elleni emberi l«fi-keí az 1L-15 mtiigénael kapcsolatos reaktivitás szempontjából tesztelhetünk Átestem bloteal is. Rm acn.il.,-15-öt expresszálö sejtekből sejlklvonatet készíthetünk és a kivonatot oáaiumdodecdsxriilátet tartal.m<wA. psliátólamid-gélw végzett eleküoferézissel elválasztjuk. Az elektroforézis után. az elválasztott: antigéneket. nhroeelluíőz-niessbránfs transzieráljuk, 20%-os egérszéntmmai blokkoljuk, és a tesztelni kívánt monokltmáíiá antitestekkel ínkubáljuk, Az emberi IgG kötődését ember elleni, alkalikus foszfátázzal
100127-1045, SG
20· konjogák Isö-vel nanathatjA ki es BCIP/NBT sztebszsrátumoí tartalmazó tábferiákkal (Sigma Chem.. Co., St touis. MÖ* hívjuk eső.
V transzgénlkus cs tmnszkrom oszómá fis, emhertóikőlőuböző
pes, a tmannany szertári emberi menokionsús atáiíeslels expresszálására képes traaszkromoszómáiís embertől különböző áilarok, unni: például transzgénikas vagy trznszkrorncszottsális egerek, képezik. A találmány előnyös megvalósítási módjában, a találmány tárgya emberi nelrézláneot kódoló traasxgént hordozó íraaszgéaifcas vagy írnnszkromoszómálls egerek képezik, amelyek íL-lS antigénnel és/vagy ΙΙ.-15-öt expresszálő sejtekkel történ
Ínímníílzálást követően lk-15 elleni a találmány szerinti emberi antitesteket termelnek. As emberi nehéziánoot kódoló transzgéo beépíthető az egér kroínoszőstsális: :DNS-ébe, ez tönéoik a transzgénikus állatok esetében, lásd például HuMafe egerek, amelyeket részletssen leírunk, és: a példákban ismertetünk. Esetleg, az emberi nehéziáncet kódoló iranszgén exjrafowoszómlísa& is fenntartható. ez történik a WO 02/43473 sz. nemzetközi közzétételi iratban 0.1003. június 6.) ismertetett transzkrorooszóínális ipéldául &M j egerek esetében. Ilyen transzgénikus és iranszkromoszómális egerek. V-D-.I rekombinációs és izottpas-átrendezödési folyamatot követően, képesek az 1X45 elleni emberi msmoktoijáiís antitestek tebbieto jzoiípusát termelni. Az Izöripes-fetouderikiés törteteket például klasszikus vagy neta klasszikus izotípos-ádendeződéssel.
Olyan, Izsnszgésriirtts vagy írauszkromoszósteáEs emberiül különböző állatok tervezésekor, mnsiyek Idegen antigénnel történt serkentésre heterológ snütest-repertoártal váktSzs?inak, arra van szükség, hogy a ranszgémkus allatokbsn a heterológ mmmnglöbulinoksí'kódoló iranszgéneka B-sejtek fejlődésének őtvösaián pontosan működjenek. Ebbe beletartozik, például, a heterológ: nehézláneot kódoló trtmszgéa izotípusáuak. átrendeződése, Eszerint, a transzgénekeí.ágy alakítjuk ki, hegy egyrészt az izorípns-áírendezódést, másrészt pedig az alabbí aniítesick közül egy vagy több termelődését lehetővé tegyék: il) magas szintit és sejíspeertlkus expresszié, Í2) S'unketooáh's génaírendeződés, |3> uíléhkus kizárás aktiválása és az tara adott válasz, (4> megfelelő primer repertoár expresszálása, 15) jelátvitel Iszigoál-traeszdnkeiő), tő) szomatikus bipermtriáció. és (7) az ipimanválasz során a trawgéntkuá antitestet kódoló iotesz dominálása.
Nem szükséges a fentiekben említeti összes feltételnek megieletó, Eéldául, a találmány azon tnegvaleaíSási módjaiban, amelyekben a transzgénlkas egér endogén Immunglobulinját kódoló lókusz funkcloná&an tönkretettük. a traaszgénuefc: nem szükséges az alledrizárást aktiválni. Továbbá, a találmány azon megvalósítást módjaiban, amelyekben a transzgm fuokcktsálisan átrendezett Imrasmglobnlin nehéz- és/vagy könoyöiáncát kódoló gfeit inrtalsnaz, a tnasndm tehetek azaz funkcionális géitáöőudezódés nem szükséges, legalábbis arra a transzferre, nézve, amely már átrendeződött <a. molekuláris immunológiával kapcsolatos háttér-információkért lásd: femdnmstetal ímmanology, szerk.:: Wílllatn, kiad.: Ráveti Press, JXY.j.
A taíálmásty bizonyos megvalósítási módjaiban, a találmány szerűm emberi monokkmáiis antitestek előállításúra a'.Lnma/en tsetr. ember; íranveemkus vagy traaszkmui.'s/eínalfe ültetői esem on.ü.mak genkevricteiben átrendezőit, at m rendezeti, vagy génkészletükben átrendezőit és át nem rendezett heterológ immungíobulm-eredstű nehezlsns- és korsoyűiánc-transzyénekid hordoznak. Minden egyes öohézláaoöt kódoló íranszgés tartalmaz legalább egy Cy gént tartalmaz. Szentéiül, a nehézláneot kódoló transzáén tartalmazhat az izotlpus átrendeződéséhez szükséges szekvenciákat, amelyek képesek clösegnent a tmnszgánfkos állat B-sejtiéíben többszörös C{: géneket kódoló heterológ transzáén Izotípasánuk átrendeződését. Ilyen, az izetípas átrendeződéséhez
1Ő0IŐ7- Í045 SG
-21szűkséges szekvencia származhat a trstuszgérs Cí; génekburásául szolgáló fej csiravonalának immuugióbuimk'kus 'J'.ío természetes: körülmények között: dőlóríiuiő szekvencia. vagy származhat olyan fajból, amelybe & i an- írn u márukelőí he kívánjak építem {nassxgémkas állat), Pékláuk transzáé» ikos egér előállítására alkalmazott emberi trosagén-teosí-rskerő· nagyobb gyakorisággal vált ki iztsttpua-átrerídezödéssel járó eseményt,- te olyan átrendeződési szekvenciákat: tartalmaz, melyek tomiteak az egér nehézíáocáf kódoló lokaszhtm természetes- körülmények kozott előforduló szekveuelákhoz., ahogyaat feltételezhető. hogy az egében lévő átrsndézödösí szekvenciák sz egér átrendeződésért felelős: rekombínáz •enzimrendszerrel való működésre optisrsalizálödnak, mig az emberi átrendeződést .szekvenciák nem. Átrendeződési szekvenciákat hagyományos klónozást eljárásokkal Izolálhatunk és klónozhatunk, vagy immuaglobalin-eredetö átrendeződési régiókat kódoló szekvenciákon alapulva tervezett, egymással átfedő szintetikus ollgonukleotidokból megszinterizáffeatjuk de sovo jMlils és ittasai., Mset Acid Ros, 15, 7305-7316(1991); Sideras és mtsai.. Inti, Immunoi,. L 631-Μ2 idfeWj. »A fentiekben Ismertetett minden egyes tmaszgénikus állatban ömkcionálisan átrendeződött, iramunglohullttí kódoló nehéziánc- es könnydláos-transzgéíteket lalákmk a traaszgérúkus állat B-sejijeinek jelentős {legalább 10%) hányadában.
A találmány szerinti tzanszgémkus állatuk előállítására alkalmazott: tfunszgének közte tartozik legalább egy -variábilb genszegmetslomoí kódoló Döfe-t tartalmazó nehezk'mc-transzgen, legalább egy, diverritás kódoló génszegínenmm, legalább «gy, kapcsolódást kódoló génszeginentutn, és legalább egy, konstans régiót kódoló génsze&tnenten. Az imsmmglohuiis^ kóusyii láncát hordozó franszgért tartalmaz legalább egy, variábilis génszegmeníömot, legalább egy, kapcsolódást kódold géoszegrsensnmot, és legalább egg k.mut<rns: régiét kódoló génszegmeutumot. A könnyű- és nehéziánc- génszegruentuntoí kódoló génszegmeníuutok heteroiógok arra trattszgéttskus állatra nézve, atnelyhö! szármszfátk, vagy amelyek a transzgenlkus, embertől kösönböző állattól eltérd fajból származó immpnglobuiiu ncbézláae- és kőnnyniánc-génszegmetrtumát ködeié DMS-aek feleinek: meg, A találmány egyik szempontja szerint, atrsnszgént ügy alakítjuk ki, hogy az egyedi genszegmentunmk ne tegyenek átresifezstték, aztsz :ne: égy legyetssk űjrarendezettek. hogy funkoioasiís kötrnyü- vagy nebéziáncot kódoljanak, ilyen ót nem rendeződött trauszgének elősegítik a V. 1A cs j, szegmentumok rekombinációját (feírkelonábs átrendeződés) és előnyös, ha. az 11,-15 amigéntrel történt kstettseg eseten a frans.zgenAoSí, embertől különböző állatfean ax erednrényüi kapott, ájrarendezödöfí im:mímciohujtn-uctíe/iaucö.íu clo'-egátk a D régió egy részének vagy teljes egészének beépülését.
A találmány egy alternatív megvalósítási módjában, a tmnssgének átrendeződén „mini lokuszA tariafsnaznak. Ilyen írsusxgének jellemzően tartalmazzák: a C, D, és: f szegmentumok lényeges részét, és a V gétíszegmetítamek részhalmazát. Ax ilyen fwszg&s-konstnikciókban, a különféle szabályozó szekvenciák, például promőterek, az rRNS szintézisét serkentő szekvenciák, osztályváhásl-régiók, splice donor ás sgiiee akceptor szekvenciák az. RNS processzálása céljából, rekombinációs szignálok és hasonlók, tstrtaknszzák a heteroiőg: DNS-höl származó tnegtelcid szekvenciákat, ilyen szabályozó szekvenciák beépíthetők a taláimányhan aláaknázott embertől különböző állattal azonos vagy azzal rokon fajokból származó transzgénhe, kéidául, emberi intmrtngksbuiínöóí .származó génszegmentuniókat kombinálhatunk valamilyen rágcsálóból származó, az rfeHS szintézisét serkentő. imtuunglobuiin-eredetd szekvenciával abból a célhói. hogy a keststrukeiőt transiígénikus egerekben alkalmazzuk. Esetleg. szírttetlkus szabályozó szekvenciát építhetünk a. transzgénbe, ahol az Ilyen szintetikus. szabályozó szekvencia nem homológ olyas, Ihnkclonáiis ONS-szekvenclával, amelyről í- C'·' \.í\ v es ge ' mm te-n ^z. <, ke ulmeu\ v\ vozott e oío dúl Sz met,kin s.m' d>,'zo szekmi87-1045/SG venciákat konszenzus szabályok, mint például spb.cs akceptor helyet vagy promóser/az rk/NS szintézisét serke®.tő moOwstöt' kódoló megfelelő szekvenciát specifikáló szabályok. szerint tervezünk. Béláéul, a tonnészaies körülmények között előtibráulő csiravöaul lg lokuszával összehasonlítva, egy adok mini lokusz tartalmazza. a genoroi eredetik legalább egy belső íazaz nem az illető rész végén elhelyezkedő), nem esszenciális DriS-rész (példáid, közbenső szekvencia; kifess vagy annak egy része) delémójáí hordozó önmungtofexltSrktexsnak egy részét.
A találmány előnyös megvalósítási módjában, az Π„-15 elleni emberi asöfeslek: generálására alkalmazott, a WO 98/24884 sz, nemzetközt közzétételt írat 12. példájában leírt íranszgás 1példánkpHCl vagy pi-IC2) legalább egy, jellemzően 2-10, és rtena 25-50 kóptájáí -artahnazó írantógénikus vagy trsaszkrömoszömálls állatot a WO 98/2-1-88^ sz. nemzetközi közzétételi írat 5., 6., 8 . vagy 14, példájában/leírt kőnnyülánc-ttaísszgeu egyetlen kópiá-át tartalmazó állónál pározíatmk. és a kapott utódokat pedig a. WO 98/24884 sz. nemzetközi közzétételi irat 10. példájában leír;, .lK-deléeiöt hordozo állatjai pároztattuk. Az állatokat e három jellemvonás mindegyikére nézve homozigótává tenyésztettük. ilyen állatok genotípusa az alábbiakat .tartalmazza·: emberi nshszláncoi kódoló átrendezetlen mini {osonsz t lásd; WO 98/24884 sz, nemzetközi közzétételi irat 12, példán) egyebem kópiája (haploíd kromoszómánként), újrarendezett, emberi v kőnnyűláne-kon,stmkci.ó (lásd; WO 98 24884 sz. nemzetközi közzétételi irat 14, példája) egyetlen kopárja jhsploid kromoszómánként), és delécio az eger endogén nehéziáncái: kódoló egyes fókuszokban, amely ekávoliöa az összes fenkctoitálts JH; szegmemaötoi (lásd; WO 98-24884 sz, nemzetközi közzétételi irat 19. példája). Ilyen állatokat pároztaittink a .h; szegmentum deiécsójára (lásd; WO 98/24884 sz, nemzetközi' közzétételi írat 10, példája) nézve homo sgota egerekkel abból a célból, hogy a J., szegmentum deláeiőjára homológ és az: emberi nefeézláoc- és temvtik nc-kosstrufeciókra nézve pedig betniztóorn unxfekhnz jussunk, A kapott állatokat antigénekkel injektáltok, és ezen autígéaek elleni emberi mén en d \ en s estek tei 5 JeMse a h.-b ra tűk.
.Az ilyen állatokból izolált B-sejtek az emberi nehéz- és: köímyőláficok tekintetében rnonospecitikosak, mivel az egyes génekből esak egyesien kópiás hordoznak. Továbbá, az emberi és egéreredetn oeln-z- es körmytsktueok tekintetében is mosospecitikosak lesznek, mivel az egér endogén nehezláneát kódoló genkóptak. a Ji( régióba a WO 98/24884 sz. nemzetközt közzétételi Irat: 9. és 1-8. példájában leírtak szerint bevitt deteuok következtében nem műkődnek. T-övábbá, a B-sejiek lényeges hányadaaz emberi és egéreredetű kötmvuláncok tekintetében monospeeiltkas, mivel az újrnrssdezödött, emberi κ körmyőlánsot kódoló gé® egyetlen kópiája i-lióiiküsati és izotlpusosan ís kizárja: ;rz .«gér endogén κ és λ láncát kódoló gének újrarendeződését a S-sejtek jelentős hányadában.
A UxAnirvban eka m <W tt s s/ntn a··, <.s ι s'U tx a?M ben lényegében 'hasonló, jelentős .mennyiségű teinmnglobulátí termeinek, így például, a találmány azon megys\fHUsi nío,ha)b,.n ahol endogén lg geoeset -n.A.uvaln.nx. a .eves nrmeogbbulm-í ontok 0 1 0 murai -zernm, előny ösen 9,5-5 nig/tul szérum, ideális esetben legalább körülbelül 1,8 mg-’mi szérum tartományba esnek.
így vípcs sr '-.zz-rikux< b ix VÍUíLV P , t fel'otí ezt.
s e vro'·., \ . itt ’t\l nt> > \ ''i in ko U xk 1 91 8/ nA .A a tm , x ® e x tt i^roii Ak n alacsonyabb lesz. Általában, a lép és a nyirokcsomó B-sejíjeinek körülbelül 19%-áriál több, előnyösen 40-80%;s kizárólag ember; IgG fehérjét expresszit.
Ideális esetben, a repertoár körülbelül a natív egérnél -apaszíaltakkai egyezik meg, általában legalább körülbelül 10%-os. előnyösen 25-50%-os vagy annál íöhb.Általában legalább ezer különbek immunglobulin (íde109187-1945/Sö á!ls: esetben Igö), előnyösen töMffi vagy ennél is több, fog tsr;ne!ödni, elsősorban az egér geo<s?njáb& bevitt különböző V, J. és D régiók számától függően. Ezen itumunglobulinok jellemzően. felismerik a magasan immusogen fehérjéknek, például Síaphylococcus-eredetü protein A, körülbelül a felél vagy annál többéi, jellemzően. az előre kiválasztod antigénekkel szemben az linntunglobnlínok offisriritsa (&») 19 M alá esik, mini példáid 10'a M. 10 M ki vagy iG'hí M, vagy akár ennél alacsonyabb.
A találmány bizonyos megvalósítási módjaiban, előnyös lehet, ba olyan egeret állítunk eló. amelyben egy adott, előre meghatározott antlgén-n'pusm adott antitest-válasz esetén a V gének kiválasztása egy előre meghatározod repertoárra korlátozódik. Előre meghatározott repetloátá uehé.dm:c-hsnszgéü tmtalnsazhat, például. az emberekben az előre meghatározott sntigés-ítpasra adott antitest-válaszban előnyösen alkalmazott, emberi Vf> géneket. Írieíleg, egy -adod, definiált repertoárból bizonyos VH géneket különféle okokból (példáid, alacsony yaloszmőség arra nézve, hogy a meghatározott antigénre a kérdéses gén magas affinitásé V régiót kódol; szotnarikas imitációra és affinitás-koncentrálásra való csökkent hajlam; vagy ha bizonyos emberekben ámnunögéuak) kizárhatunk !gv különböző nehéziáne- vagy feö:nnyüláEn;-génszegmentti-m<>kat tariateaző transzgéu őjra átrendeződések megelőzően, az ilyen génszegmentumokat könnyen azonosíthatjuk, példán! hihridizábissal vagyöNS-szekvenálással (mivel ezek a transzgénlkus állattól eltérő szervezetből származnak).
A fentiekben leírt ííanszgémkus es transzkromöszőmsiis egereket innriuírizálhaíjiik, példán;, 11.-15 antigént tartalmazó tisztított vagy dúsítod keszüméitnyel és/vagy IL-15-öt expresszálö sejtekkel. Esetleg, a. íranszgénikas egereket: emberi 11-15-öt kódok) DNS-’Cs ímswnizálhatjuk, Ezt követben az egerek B-sejiekeí termelnek, amelyek intraírsnszg&t átrendeződési rekombinációval osztály-átrendeződésen scis-so/hchíug) métanek át és ΪΙ,-115-tel reagáló immunglobulinokat expresszáfaak. As immunglobulinok lehetnek emberi antitestek (másnéven „emberi szekvencia antitestek”}, amelyekben a nehéz- és kőimyüláneot alkotó polípeptideket. szo~ inatikns mutációval vagy V régiót érintő rekombinációs kapcsolódásból, dlelve csíravonal által kódolt szekvenciákból származó szekveneiákaí esetleg tartalmazó, emberi transzgén-szekvenciák kódolják. Ezek az emberi antitesteket az emberi ¥{. vagy ¥í} és emberi J(. vagy E?n és íB génszeginentum által kődoh pobpcpsidszekvenc iával lényegeven azonosnak tekintjük, bár szomatikus mutáció és különféle V-J és V-D-l rekombinációs kapcsolódások eredmésyekám más, nem csíravonal eredetű, szekvmáák is.jelet! lehetitek. Az egyes antitestláncok variábilis régióit jellemzően legalább 80%-ban emberi esírsvoxnd-eredetü V, J, és a nebéziumok esetében (xdig D génszementautök kódolják. Gyakran előfordul, hogy az emberi csíravonal-szekvenciák oka! kódol! variábilis régiók legalább 85%-a jelen van a transzgénbea, gyakran: a variábilis régiók 90 '/agy 95%-át,. vagy ennél :is nagyobb részétu transzgénbeo jelei;lévő emberi: csimvmud-szckvcnoák hódolják. Azonban, mivel á uemt cshsvosal-eredetű szekvenciákat szomuttküs mutációval, V! és. Vili kapcsol-;kiássál vittük b, az emberi'. aathost-sKekveseidk gyakran: tartalmaznak variábilis régiót kódoló olyan vokve-ftoiaktt vés kevésbé gyükrao, konstans régiét: kódoló szekvenciákat), amelyeket' nem emberi V, D vagy .1 sz<gmcn.umok kódolnak (lásd az egerek eslravonalábait lévő emberi transggés(cl> p icMcmző, hogy az ilyen, .sem CMrax onal-ereáetú szekvenciák (vagy egyedi nakleoridheiyek) CDR-ekbea vagv ?/ok közelében, illetve olyan régiókban, ahol ismert, hogy ott szotnariktis mutációk szoktak előfordulni, csox'ttowinak.
A meghatározott, ant igéid megkötő antitestük képződhetiték wt^psslitmideaődé^sl, így emberi ydáscot (mint például yl, y2a, yéS, vagy v3> kódoló szekvenciái és emberi könnyű láncot (mint példáid x) kódoló szekvenciát tartalmazó emberi antitestek tennelödnek. Ilyen, izotipus-átrcndeződéssel képződött emberi szekvencia gyakran tartalma?, egy vagy több, jellemzően a. vsriáfedis régióban és gyakran a CDR. körülbelül ló amlaosaván
100187-IÖ45/SG
-24helüi található, .szomatikus mutációt, amelyet sz affinitást érés: és aartgéa általi B-sfilt-kíválasztás. különösen pedig sz anilgésnel végzett iákővetkezö második (vagy második) provokáció eredményez. Ezen magas afünitásu embert antitestek kötési affinitásai (Ko). Iö'; M„ sóst például BT* M, IS'” M vagy Ifi'”’ M, esetleg auaáí alacsonyabb,
A találmány egy másik szempontjába otagábas foglalja a tmaszgémkua vagy transzkromoszómális egemkhól származó B-sej teket, A B-sejreket nikuhnazhatjok; emberi (l..-15-öt magas (például 10'' M~uát alacsonyabb) affinitással megkötő embert monekienálls antitesteket ezpresszalo hsbri dómok generálására, így a találmány egy másik megvalósítási módjában, a találmány tárgya olyas a találmány szerinti antitestet termeit? hibridóma, amely antitest a BÍAC'ORE 3000 műszerrel, rekombináns emberi 1I..-I5 (analizál· vegyület) és az auíues· (hsandurnl alkalmazásával végzett felületi plazmotsrezonanciás méréssel ISPR'i meghatározottak szerint, kevesebb mist körülbelül 10' M - mini például kevesebb mint körülbelül 10s M. iö'ft M vagy IQ'1” M, vagy ennél is alacsonyabb - afRaitással tKö) kod az embert IL-15-ót, ahol az antitest az alábbiakat tartalmazza:
(1) emberi V; génsaegmen&KBöt -és emberi )t szegmentemet kódoló pohpepdd-szekvenc iával lényegében azonos polipeptiá-szekveoekgó, könnyűSáne-ersdefü variábilis régióból, és (2} emberi Cj. génszegmentemol kódoló polipcptid-szckveneiával lényegében azonos pokpepttd-szekvemeiájá, könnyúláne-erettesü konstans régióból álló emberi kOnnyűláoeos kódoló szekvencia; és í, 1 < emben VH gcnszcgmentamot, rgens ,-zermt D-régiot, és emberi .IS szegmentumot kódoló peitpepadsze»< vette sasai mnvegefem azonos pobpepó.l s ^kwteisjó, aubézlásc-eredthü variábilis régióból, es «2) embert Cf; gc nszeg monon re ’ fe\o o pré-pept d-xZvkvetciávsii lényegében azonos poílpepbd-szexeenciáut, nebe/kmc eredeto kenteans regínból Jio on boti nehezlaocot kódoló szekvencia,
-V 11.-14 ellen n tgas afimtus; maone, embert mormkfonálts antitestek kite|!cv:c%r eio-cgnhe s az fiúsben r tuS , ·- tegmlxé s/armez·'· ev non untok repertoárjának, integrált on bo, mu t ryjebu n- rar.szgéstí tartalmazó tmnszgeniktss egérben történő kiterjesztésére szolgáló eljárás, amelyoen a' curindf megró t emberi .isnnms.globuíin-transzgént nem tartalmazó v régiót ködeié génszegmemumokai ínoabn. zo \ gén transzáén! Levisszük s genomba, Gyakorta megesik az, hogy a V régiót kódoló transageu emberi VH vagy VL (VK) génszegmetitum-sorozatot - a tenneszetes Körülmények között az emberi genomban előforduló formájában vagy esetleg níkomömáns eljárásuk alkalmazásával egyenként egymáshoz üleszrie tvű« <.,/> esetleg a kikapcsolt: vagy kihagyott: V géoszsgmontumokat tartalmazó, éiesztóeredeíti mesrémoves νο-neszen a, A YAC gyakran legalább öt vagy annál több funkcionális V génszfigmestuntot tartalmaz. FI ben a saltezetbsn, a V repertoár kiterjesztésén alapuló eljárással lehetséges olyan transzgén .Ikus, egeret előad hon, .mtets a V régiót kódold transzgénen lévő V régiót kötloló gén slhtl kódol! variábilis régiót: és azethbetí lg fiarszgenen kódolt C régiót tartalmazd immmsgl<;bn.hn-iáncot expresszál. A repertoár kherjesziésérs alapuló ebara^al, legalább öt különálló V gént tartalmazó trtmszgénikus egeret lehet clóáliitanfi igy az egerek tartalmazhatnak legalább 24, vagy annál több V gént. Bizonyos V génszegmentumok lehetitek mnkbdéskóptei.enok (például pszeuöegének és hasonlók); e szegmentutnok belyreáibihaíök vagy bs szükséges, akkor & szakember számára ismert, rekombináns eljárásokkal deletáihatók.
Miután sz egér eslravonakit ágy módóskottuL hogy olyan kiterjesztett V szegmentumokat tartalmazó V szegmenseket hordozó, iunkcionális YAC-< tartalmazzon. amely lényegében tűnés jeles a. J és: € génszegmenfomokaí wtateaaá embert lg tmaszgénben. a törzset tenyészthetjük és más genetikai hátterekbe vihetjük he, igy olyan hátterekbe, ahol kiíerieszíott V szegmentum-repertoárt hordozó fenketonális YAC-ot slte100187-1045/80
-7<.
ró lg transzgént hordozó egerek esíravonalába tenyésztéssel illesztettük be. Kiterjesztett V szagnsentumrepertqáris, többszörös, feskcicaáli» V'AC-ok emberi lg ttanszgénnel (vagy többszörös, emberi, lg teanszgénekkei) végzendő twnka céliából csteavosalbtt illeszthetők be, Bár a leírásban YAC transzáén nősen említettük, ha ilyen transzgének beistegráidának. a gettómba, akkor lényegében elvesztik az élesztőből á/attwv <mk\enmákas, példáid az élesztőben való .ntaonótn replikádéhoz szükséges szekvenciákat; mintán az élesztőben tcrenö repbkáelóra a továbbiakban nincs szükség (azaz, egétetedetü ES-sejthe vagy egéreredstu prozriomba történő bevitelt megelőzően), igény szerint, az Ilyen szekvenciákat génsebészed eljárásokkal {példán! restrikciós emésztéssel és: pulzáli mezővel végzett géleiektrolbrézissel, vagy más alkalmas eljárással) ekávoliífetjuk. Az emberi immunglobulint kódoló szekvencia expressztójára vonatkozó jellemvonás: felszsperitására szolgáló ellátások. közé tartozik az lg transsgéít(ek)ct, és igény szerint kiterjesztett V szegraeatrartreperriíáfá, fentetonális: YAC-oi tartalmazó, ttmtszgénikus egér szaporítása. A YAC bán ;elen lehetetek mind VH és mind pedig VL gőnszegmsstömok. A transzgéniktis egerei bármely, a gyakorlat! szakember számára kívánatos hátterű egérrel ^áraztathatjuk, így más, emberi ixariszgénekeí így emberi lg transzgéneket és/vagy más emberi: hnsifeiiákból szármázó fehérjéket ködoló transzgénekeí - hordozó egerekkel. Emberi eredetű szekvenciára, magas: aiímlíású, inumraglobóliíi előállítható kiterjesztett Y szegmennunrepertoárú YAC transzgént hordozó írnnszgértikus egér' áltat. Sár a femekben. leírtuk a találmány szerinti franszgéniku» állat előnyös megvalósítási módját, más, az alábbi négy csoportba osztályozott oiegvaiósitási módok is lehetségesek:
Ϊ, tljra át ne® rendeződött és njrareadezödőtt immungiobulin-eredsíű kfenyőláncot: kődöld tramzgént. tartalmazó, trauszgénikus állatok:
B. híjra át nem rendeződött immunglőbulin-eredetö nehéz- és újra át nem rendeződött immangloböliueredeíti ktey&í&neoí láncot kódoló transzként tartalmazó, teamszgémkus állatok:
Hl. Újra átrendeződött, immungíobulln-eredetó nehéz- és újra át nem rendeződött inmmngíeWisveredetu kSonyölárssot láncot kódoló transzgént tartalmazó, transzgémkus alteok::
IV. tijra átrendeződött immnngiobuhn-eredeid nehéz- és újra áteeadezödört íninrasglobateesadalű környöíáscot láncot kódoló transzgést tartalmazó, transzgeníkus· állatok.
A. teartszgéniktis állatok e kategóriái között az előnyös sorrendek az alábbiak: 1Ι>Ι>ίΠ>ϊΥ, ahol az endogén: könnyűláncískai kódoló géneket (vagy legalábbis a s gént) homológ rekorabiaációval (vagy más eljárással) kiStőtfSk, és. í>ri>IO>ÍV, ahol az endogén: köfinyúláncokaí kódoló géneket nem Slőttük kí és alíélikus kizárás következtében domoánsakaak: kell leiratuk.
HLAnjbes^
A találmány egy másik szempontja szériát, a találmány tárgya terápiás csoporttal, például cltotoxtmal, droggal (például immúrtszupprasszánssal) vagy radsoszotöppal konjngált. emberi il.- i 5 elfed a találmány szerinti muKokiosális antitest. Ha ezen antitesteket eítotoxinhoz konjugáljuk. ezeket az autitest-konjugátumokaí „Irarautttoxittoknak nevezzük. Ciíofoxls vagy vhotöxikns ágens lehet bármily es. a sejtekre káros t példán! ölő hatáső) ágens, Ilyenek példán! az alábbiak.: távol, vltohalazin 8. aratóié iáin D, etidiumbround, emeriu. mdotnlcln. etopozid, teuopozíd, viskrísznn, virmkisxíls, koihrcin, dexorubieta, dihidroxianlraem-diott, mitox&níros, mthatrtíefa, aktinottriein D, i-debfdroteszíoszleroő, gíSkókorttkoidok, próbáin, tetrakam, lldokam, prupranolok, és psurouőcirs, és nsfsak analógjai vagy homológjai, Terápiás ágensek közé - mlíiden korlátozás nélkül - az alábbiak tartóznák: .ammtetabolttikaraok (például, metotrexát, ó-merkaptopuriu, ó-tiogusniu, eferabln, 5-ílaorouraeil, dekgrbszin), alkiiezó ágensek (például, meklrőretamm, tloepa klorambnell, tnelfábs. karnrasztist i 0(118'?· 1045 A<1
-26<Ö$NU) es iomnsztin tCCMl), ciktofazfamíd, tee&s, dibromonatnmtol, szierpiozoiocm, nilíomíem C, és <isz-diktorodíamíí-~pbtimzm (H.) (ÖDF) crszplatin), antfseiklmek (poklául, dausxsrubuán (korábbi nevén dannon-ikm? es dororobicinj, antibiotikumok (például, dakíittömfem (korábbi sevén afctiuomfein}, bleomlcin, mibamíein, és íiritrzmicin (AMC), mlíózist gátló ágensek (például. vinkriszíin és visbktsztml R-l 5-tel kapcsolatos elváltozás, például rák, kezelésére szolgáld eitotoxikux radísgyógyszer eioállításá céljából. a találmány szerinti aotiíestet kxinjugálteíhatisk radioixotöppai, például radioaktív jóddal.
A találmány szerinti antltest-kosuugótenokm alkalmazhatjuk, egy adott biológiai válasz módosítására, A terápiás csoportot úgy konstruáljuk, hogy nem ko-iátozödton a klasszikus terápiás ágensekre. Féldáui, s drogcsoport lehet a kívánt biológiai aktivitást kifejtő fehérje \agy polipeptid Ilyen fehérje lehet például oszínmiikusan. aktív toxin, vágy annak aktív itegmérduróá, útin· például abrnt, nem A, Fseudomooas-ból származó exotoxú·, vagy di kérte toxia; vagy olyas feherie, mint a tuíntunekrözis-lakíor vagy a y-iatej-feroa; vagy a <' i'gta teoev/ rodoOíuu kepe·» fenére rmte peteat Irrio-otex xatercukm-, ( ,l-! ) mu.iC ' < .1C2), mterieukm-ö („It-ó), grasuiocitaereáeiű makro fagRo Hordákat serkentő faktor („GM-CSF”), gr«ttochakotíóníákat serkentő faktort .O-CSF·’*?. vagymás citokiaeR Illetve növekedési ktktorok.
Ilyet! terápiás csoportok antitestekhez Λ konjugálására .alkáhruis ellátások jól ismertek (Amoa es mtsai., „Moroclonal Amibodies fór femsunetmgeiiogof Dmgsfe Csnccr TfeerapyA Monoclonal Aotihodíes and Caneer i'herapy. 24,1-250, szerkó Reisfeid és ratsai,, kiad.: Alatt R. Liss (.1985):; i-lellstmm és mtsai,, „Arilibodies fór Drug Delivery', Cottftc-lled Drug Dskvery, 623-653, szerk.:: Robinson és misai., kiad,: Marcel Dekker !re, íHS~); Tbmpe, „Antít-uh Camers of Cytotoxic Agents in Caneer Therapy: a feaevt. Mosódénál Araibödíes '84: Bíologica; and Ciliden! Applications. 475-5ÖÖ, szerk.: Pmchera és mtsaj., (1985); „Analysss. Sesuks. :utd Furi-re prospeetive of the Therapeuiic Őse of Radiolábeled Atáihody itt Caneer Therapy'. Monoc lónál Attíibodies fór Caneer Eteteetí.en and Therapy, 3Ö3-31Ó, szerk.:: Baldwin és mtsai,, kiad.:.' Acadenric Press (19351: Ikorpe és nttsai.. bntmtnk Rév. 63, 11:9-:158 11982}].
láC-Gyógyászati keszúmonxek
A találmány egy rumok szempontja szermt, a találmány tárgyát készitaésty, például egy vagy főbb, íaláltnány szerinti esőben monoklooátts antitestei, vagy unnak asugóekötő-feszét, és gyógyászati szempontból elfogadható hordozó kombinációját tartalmazó gyógyászati készítmény., képezi.. A telálmány előnyős megvalósítási módjában, a készítmények több (például sgy vagy két), találmány szerinti izolált esőben antitest kombinációját tartalmazzák. Előnyös., ha a készítményben lévő egyes antitestek az: 1L-I5 különálló, előre kiválasztott epsiópjak kötik.
A ialálmásy szerintr gyógyászati készítmények kombinációs tetápiáfem - azaz más ágensekkel kotnbirsálva - is alfedmazhatok. Például, a kombinációs tompáiban a találmány szeriuli készítményt kombinálhatjuk legalább egy vagy több további, terápiás ágenssel, például gyaliadásgátió ágensekkel. DMARD-okktri tdínsase modifvisrg attti-rhegtttarie drags, betegségei módosító reumaelten&s dtögskk inmamszuppresszlv ágensekkel, kemoterápiás szerekkel, és psoriasís ellem ágensekkel. A találmány szerinti készítményt beadhatjuk radioaktív terápiával kapcsolatosan is, Más antitestekkel - például Ci'M-re specifikus antitestek és JL-3-re specifikus antitestek - való együttes beadás is a. tahdmásy tárgykörébe tartozik, ilyen, CD-i- te specifikus- antitestekkel és 1L-2,re speetrikus antitestekkel készült, kombinációkat különöset! alkalmasnak véljük az amotmtnun betegségek és írímszpiefeádös kilökődések kezelésére.
A leírás szerinti értelemben, a „gyógyászati szén-pontból elfogadható hordozó’' kifejezés jelent bármiW0183-4045/6Ö
-27íyen és mtndetv feiolögkiííag kmupsirbííís oldószert, diszpergálő közeget bevonatot, aruibakteriálss és gombásodás elleni ágenseket, isötöfrsku» és abszorpciót tófeítetó ágenseket, és hasonlókat. Előnyös, ba a hordozó alkalmas intravénás, iutninmszkalárts, szubkután, paroatetális, gerincvelőbe történő vagy epidenrtális t például, injekcióval vagy infúzióval történő) beadásra. A beadás módjának lőggvényéhett, az aktív vegyűlet (azaz antitest biápeciftkus és jntíittspeeííitos ntelekula) bevönható a vegyűletet esetleg Inak» váló a savas vagy más természetes köráiményektöt védő anyaggal.
A leírás szerinti értelemben, a „gyógyászait szempontból elfogadható ső” kifejezés olyan so i k rt amely megőrzi a kiindulási vegyidéi biológiai aktivitását és nem vált ki semmilyen nem kívánt to teológia hatást sem [Berge és mtsai,, J. bhann. Sei, őö, 1-19 t19?7}j. Ilyen sók lehetnek például savas adőkiús sók és házikas addiciós sók. Savas add&áős sók közé tartoznak a nem toxikus szervetlen savakból származó sók, például bldrokiorittok, nitritek, iőszSttok, 'szulfátok, hidrobromtdok, hídrojodidok, íószforossavak sót mellett a nem •toxikus szerves savak, például alifás mono- és dikarhoxilsavak, fenollal szubsztítuált karhexilsavsk, bidroxi.karfeozii-savak, aromás savak, alifás és aromás szttitottsavak és hasonlók, Bázlkus addíciós sók közé lartözsak alkálifémekből és alkáll-íölófaefcből. például nátrium, kálium, magnézium, kalcium és hasonlók mellett nem töxrku», szerves uirmckhők nnnt példán N,\'-thbeotlenien.srtnn. N-rretilghtemn n. koropr.teun kod», dietasolamln, etllén -diasriía, prőkain és hasonlók, származó sók.
A találmány szerinti készítmény beadhatjuk különféle. a technikában ismén: djásámt A szakember számára egyértelmű, hogy & beadás útja-é»''vagy módja ez elérni kívánt eredményektől függ. Az akiív vegyületeket: elké-szhfeetlök a vegyűletet a gyors felszabadulástól védő hordozókkal, Így előállíthatunk szabály ozott felssahíídul.ást biztosíié kőszsístesyt, mint például inpíantátumokat. traoszdejntális tapaszokat, és jnikrokspu \í xv It reniBierekf A arrt„ Kbo t t <. bo\ »-[ nm h\ p hm k - i \ o a tik’ polúmhldriáeket poligbfeolsavaf kollagént polloífö-észterekeá és lejsav-polimert - iv alkalmazhatunk. Számos, 11yen készítmények előállítására szolgáló eljárás van szahadaítnaztatva vagy ezeket a szakember általában ismeri [Sastatneá and Controlled Relesse Drog Delivery Systems, szerk.: Robinson. kiad.: Marcel Dekker, fac„ New York (1978)),
Ha a találmány szerinti készítményt: bizonyos módokon történő beadása esetén szükséges, hogy a vegyületet, vegyidet inaktiválődásáí megakadályozó anyaggal bevonjuk vagy azzal egyutí adjuk be. Például, egy adott alanynak a vegyűletet beadhatjuk megfelelő -hordozóban, például isposzómákban, vagy díluessheo. Gyógyászati szempontból elfogadható áiiueus lehet sóoldat vagy vizes puíferoldat. Llposzóroák közé tartoznak víz - olajban - vízben CGF enntizíók és:hagyományos itpevzórnák (Strejao és mtsai., I. Neuroümntrooi. 7. 2.7 ( 1984)1,
Gyógyászati szempontból elfogadható hordozók közé tartoznak steril vizes oldatok vagy diszperziók év re, er ne t_m re kes/ult ster:· sr akta h.-.to éltettek \ agy djszpcrt mk előállttá ma alkalmas rterú poro*. Λ 'echrrkábim ismert: az ilyen közegek es ágensek alkalmazása a győgyászatilag aktív anyagok előállítására. Azon hagyományos közeg vagy ágens kivételével, amely közeg vagy ágens inkompatibilis az aktív vegynlettel, bőrmély hagymnányos ágens vagy közeg alkalmazása a találmány szerinti gyógyászati készítményben rt találmásy tárgykörébe tartozik. A készítményekbe kiegészítő aktív vegy ideiek is beépíthetők.
Jdtemzó, hogy a terápiás késztttménvekaek sterilnek és a gyártási és raktározási kőrüknésyck között stabiluk kell lenniük \ név tmorveket t'ma In mat'uk o’dauem nuks-Virui/v'L·’ s * pes/otnaLLtí, mgs max a magas dmgkoncent-ráeiő: biztosítósára alkalmas, rendezett szerkezeiken! A hordoz > például vizet, otanob, políok (például, glíeerint. proptténglikolt és íóiyékouy pölí-etílenglikolD, és ezek alkalmas keverékét 'tartalmazó
I őől 87-10-15 SG oldószer vagy díszpemós: közeg, A megfelelő Iblyéköítyságot íénntariltetejttk példán; bevouatok, mini amilyen a lecitro, alkalmazásával diszperziók esetében az előirt mmesemáfet biztosításával és a íélilietakíív anyagok alkalsnazásávat, Sok esetben előnyös, ha a készítmény tartalmaz izotonlkusságot biztosító ágensekei - például cukrokat. poiíaikoholokat, mint példáid tnantsitoh.. szóróitok -, vagy sátríamklorídot. Az injektálható készítmények elhúzódó ábszerpeiéjat úgy vtitóstíhaijuk meg, ba a készítményhez az abszorpciót fcéxlslsetö ágeask például mpxsosmeasrát sókat és zseiatiut, adnak.
Steril, infektálhaté oldatokat álfehatuek sió oly mődon, hogy az aktív vegyűlet előirt meany íségát megtétele oldatba építjük be a fentiekben felsorolt összetevők egyikével vagy azok valamilyen kombinációjával együtt, és: míkroszürásse) sterilizáljak. A diszperziókat általában úgy állójuk elő, hogy az aktív vegyűíetet as alaptsl szolgáló diszperziós közeget és a feuttekben felsorolt összetevők közöl előirt anyagot tartalmazó, steril hordozóba épkjttk he. Steril, injektálható okiatok készítésére szolgáló, steril porok esetében, az elkészítés előnyös módja a vákuum-szárítás és fbgyaszíva-szárhás (iioóiizálás), amely -az akhv összetevőt és bármely más. az előzőleg sterilre szűrt oldalban lé vő szükséges összetevőt tana Imazö port eredményez.
A. beadási rendeket ágy választjuk meg, hogy az optimális 'választ {például terápiás választ) biztosítsák. Például, beadható egyetlen boltosként, számos megoszlott dózisban is beadható egy bizonyos időtartam alatt vagy a dózis csökkenthetet vagy növelhető terápiás helyzet követelményeinek megfelelően. Például, a találmány szeriun emberi antitestek szubkután iojekclöként beadhatók. hetente egyszer vagy kétszer illetve havonta egyszer vagy kétszer. Kőlősőseo: előnyős, ha a beadás megkönnyítésére es a dozirozás egységes voltának biztosítására, a pszsmíerális; készítményeket egységes dózisokba (dórisegysegekbe) formuiázzuk. A leírás szerinti értelemben, a ..dózisegység” főnna olyan, tizikaíiag különálló egységet jelent, amely egységnyi dózisként alkalmas a kezelni kívánt alany egységes dozúosására; az egyes dózisok a kívánt terápiás hatás kiváltására kíszánsstott, előre meghatározott mennyiségű aktív vegyűíetet és az előirt gyógyászati hordozót tartalmazzák. A találmány szerinti dózisegység-tómták jellemzőit az alábbi tényezők határozzák meg és az alábbi tényezőktől lügg: ta) az aktív vegyidet egyedi jellemzői és az elérni kívánt: konkrét terápiás hatás, és (bl «gyedekben fellépő érzékenység kt etesse kapcsok? os ?/>t,vn ek v vem ; tteA keveres i„J νν??,ben re le l<o etek
Gyógyászati szempontból elfogadható antioxídánsok például az alábbiak: ί 1) vizoldékony antioxídánsok, mint; például asskorbstsav, cisztem-hidreklorid, uáiriüm-díszállat, náírittm-meíabiszaifit uátrmmszulfit és hasötilök; (2) óimban oldódó -antioxídánsok. mint például aszkorbilpalmstát baíilezett hídrosiastizoi <BH\> bút ifeze te. hidroxi toluol (SÍIT), lecitin, propíigailál, alfa-tokoíéroi, és hasonlók: 13) fémkelátot képző ágensek, mitttpéldául. cttoSínsav.ettiéödiiSiíRÍís-tetoaeeeísav (EDTA), szóróitól, borkösav. íoszforsav és hasonlók.
A terápiás Itesrimtotsyekre vonatkozóan, a lalálmáay szerinti formaláclók közé tartoznak orálisan, nazálisait, topihálíssn (ideértve a szájöregen és nyelv-alatti bevitelt), rekíábstm. vagináikba és/vagy p&mnteráiísaa. beadható formuláelok. A formuláé tokát kényelmesen kiszerelhetjük egységnyi dózis formájában és előállíthatjuk a gyógyszerészeli technikában ismert bármely eljárással. Az egyetlen egységnyi dózis elő;;;Irtásához az aktívösszetevőnek a hordozóanyaggal kombinálható ntettnyisége függ a kezelni kívánt alanytól és a beadás konkrét: módjától. Az egyetlen egységnyi dózis előállításához az aktív összetevőnek a hordozóanyaggal kombinálható mennyisége áWábaa a készítmény azon mennyisége, amely a terápiás hatást kiváltja. Általában, ha a kőszitmény mennyiségét lóó'G-n&k tekintsük, akkor ez a menny iség az akriv összetevőnek körhiheíül ít,öől.-§{)%-&. előnyösen körülbelül ö,ö0$-7Ö%-a, legelőnyösebben körülbelül 0,01 -3ö%-a,
Vaginán át történő beadásra alkalmas, találmány szerint; ídrrnuláelék közé tartózó pesszáríuntok, tatopoíŐölk7-iíMSAG
-29ίκόρ ktéas ·,. g, h \ pM)* < h a \, $ y tlyeu bordozőkai: tartalmazó spray tamlációk a íenhtdfeabnu jól ismertek. A ulal naiv sz.» « i <s' tnoaek: nydlsalis vagy transzdexmáib. beadásra szolgáló dózisfortrtái közé tartoznak go-ok spt j\ »v > e km sv », ά >zták, kfoutek, borogató vizek, gélek, oldatok, tapaszok és itthalálészerek. Az skdv vegyületeket sterd körülmények kezek összekeverhetjük gyógyászait szempontból elfogadható hordozóval, és ha szükséges bármilyen tartósítószerrel, pufiméi vagy hajtogázzat.
A foírás szerinti: értetette), a „paremefohs beadás” és a „paseaterálisaB beadva” kifejezés az entefolis es topikális beadástól eltérő - általába» injekcióval történő - beadási módokat, így - minden korlátozás- nélkül ~ intravénás, íiitratnuszkakiris, btraarieriálls, isíraisaefeeáHs, latrakapszuláris, iatrsofbitális. bnraterdiális, iuírademtális, mtrttperiloneálís:. tmnszíracbcáiis. szubkután, szubkudkulárls, irtrwtikuláris, sznbkapszfoárís, sznbarscbnoidábs, foirssptnális, egiáurális és tsüsoszíernális mmkciókai és infúziókat jelent,
A találmány szerte! gyógyászati ksszkrsényekben alkalmazható vizes vagy nem vizes hordozók közé tartozik például a viz, etanol, poifofok (tfont példánk gbcerol, propilénglikol, polietílénglikol, és hasonlók), és ezek alkalmas keverékei, .zöiáségolajok, mist: például olívaolaj, és injektálható szerves észterek, mint etifofeáí. A mcgfolsfo folyékonyságot fontáarthaffok például bevonások, mint amilyen a létein. alkalmazásával,, diszperziók esetében.az elölrtszewseiséret hhAosltásával és a felöletakllv anyagok alkalmazásával.
E készítmények tarifomuzbmaak aájwáasotet: - például tartósítószereket nedvesítő szereket emulgeátó szereket és dixzpepgálő szereket — ín, A uíikroorgatírz-musok megjelenésének megakadályozását sterilizációs folyamatokkal (lásd fenő) és kálóidéi© gnbhateríális és gomhaeliehes szerek, példáid parsbén, kiórbutanöí, fonolszofosnsav, és hasonlók, hozzáadásával. Kívánatos lehel továbbá az is, hogy s.zoíoniknsságot biztosító ágenseket mint példáid cukrokat, fokritrmktoriifos és hasonlőkataáínok a készítményekhez. Ezenfelül. az injektálható gyógyászait forma ©llfoződö abszorpcióját olyan ágensek segítségével érttetjük eh amelyek az abszorpciót késleltetik tpckl.ifo, sdtonmiusi-monosztoarát és zselatin).
Ha a találmány szériáit vegyületeket gyógyszerként embernek és állatoknak beadhatjuk önmagukhtm vagy 0,00 i -90% (előnyösebben '0,065-70%» mint példáid 0,01-30%) aktív összetevő és gyógy ászait szempontból elfogadható hordozó kombinációját inrifomaaó gyógyászati készítményként,
A beadás módjától foggedenul. a találmány szerinti, alkalmas .hidraiáit formában alkaimazbfoó vegyületek. és/vagy a találmány szerinti gyógyászati készítmények a szakember számara ismeri, hagyomásyös eljárásokkal foroífoázhsfok gyógyászati szempontból elfogadható dózisfonfoíkha.
A 'találmány szerinti gyógyászati késziünényben az aktív Összetevő dózisának: aktuális- szintje változtatható ügy, hogy egy adott páciens, összetétel, és beadási mód esetében a lávám terápiás- válasz eléréséhez elegeudö mennyiségű aktív összetevőt tartaitriazztm, anélkül, hogy toxikus lenne a páciensre. A dózis kiválasztott szintje külősfols fomjaknkfoeíikfo faktortól - így az alkalmazón, találmány szerinti konkrét készítményektől, vagy azok észtereitől, sóitól vagy asofojaitól, a beadás módjától, a beadás időpontjától. az alkalmazón konkrét vegyület iciüritlési rátájától, a kezelés időtartamától, más drogostól, a konkrétet a lkai mázott készítményekkel kombinálva alkalmazod vegyi) leiektől és/vagy anyagoktól, a kezelni kívánt páciens korától, nemétől, testtömegétől, állapotától, általános egészségi állapotától, és megelőző orvosi kórtörténetétől, és hasonló, a gyógyászait technikában :issso« mkíofoldől - függ. A gyakorló orvos vagy állatorvos könnyén meg tudja ádspfomt, és fol tudta tn. a \> Ass'gcs zwiA a a* k ar«t «w t a.eket v mén ivk.Például, a gyakori© ©r ,a , vgv állatorvos .a gyógyászati készítményben alkalmazott, találmány szerinti vegyietekből kezdetben a kívánt terápiás hálás elérés© céljából szükségesnél alacsonyabb dózisokat, jelölhet ki, majd -a dózist fokozatosan addig noveb, ásóig a
10018-!04? KG
-3όkivánt hatást eí nem éri. Általában, a találmány szerinti készítmóayek alkalmas napi dózisa a vegyület azon ötennyiségo, -amely a kérdéses terápiás hatás dereséhez szükségest legalacsonyabb dózis. Ilyen, hatékony dózis áltáléban a fentiekben leírt laktatóktól fogg. Sl&ayös, ha a beadás módja az intravénás. Intramuszkölárís. mtrapertioasátis. vagy szbbkntán, előnyösen a célhavert hely középpontjához közelebb eső helyre történő beadás. Ha szükséges, a terápiás készítmények hatékony napi dozüat tteadmtijnk két. hárma, négy, Öt, hat vagy több áldozásként, a nap során egymástól snogtelelő intervaltutnokkJ dkülönítetten, igény szerint egységnyi dózisfermsiibati, Bár a találmány szerinti vegyületet öEtmagában is beadhatjuk, előnyös, ha a: vegySfeíei gyógyászati lórenatócíőbss {kó^ritriiénykém) adjuk be.
Terápiás készítmények beadhatók a technikában ismeri gyógyászati eszközökkel Péidáui, a jaláhsasy előnyős megvalósítási módjában, a találmány szerinti készítményt beadhatjuk foseiköíi, higodertrbkns injektáló eszköznek példád a?, US 5309.163 sz . US S.3S3A51 sz., US 5.312.335 sz., US 5,064.413 sz., US 4.941.839 sz., Ub 4.79ÖS24 sz., vagy US 4.596.556 sz. amerikai egyesült á&mokbeti szabadalmi irtstófcb® ismerteteti eszközökkel A mlálmáayhan alkalmazható jól Ismert inpladátumnkat és modulokig példád az US 4.487.6Ö3 ss.. amerikai egyesült .államokbeli szabadalmi írat ismertet; amelybe® a. gyógyszert: szabsílyoziiató ütemben adagoló, bedkribstő mikromfozíós-pumtrá· írnak le; a bőrön at történő beadásra alkalmas, terápiás: eszközt ismertetnek az US 4,436. :194 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi iratban; a gyógyszert: precíz tólziós: rátávsí adagoló gyógyászat; infúzióst pumpát irtsak ie az US 4.447233 sz, amerikai egyest1 llamokfeeii szabadalmi iratban;: folyamatos dtogbevitdre alkalmas, változtatható áramlást biztosító, be„ k *ulb btózíóS: · eszközt ismertet az US 4.447.224 sz. amerikai egyesült állatnokbeli szabadalmi irat; több kamrás kompatósentómot tartalmazó, ozmotikus árogbeviteli-rendszert ismertet az US 4 459,196 sz, amerikai egyesük államokbeli· ssahadaísti dó;: ús ozmotikus díogbeviteli-reodszert írtak le az US 4.475.196 sz. amerikai egyesült áiferapkfeeh szabadalmi hídban, A szakember számos más ilyen mpkmtátsmokai, beviteli rendszereket és modulokat ismer.
Á tsiáhnáuy fcfeonvo* megvoiősí tási módjaiban, a lalábsárty szerinti, emberi moookloiiáhs aatitesteket ftoauiázbaljök a mcg&sde ,n utó eloszlás bíztositósátrt:. Példád, a vér-agy gát (BBB.s számos, erősen hidrofób <,együletet e/<:r \nnaL m/tesítasar,., hogy a !a1,i, suti’, χ/es -rt v .'gvu'ek-s, áthaladjanak a BB8-n u.m'-tnstbc szükséges}:, a vegyületeket tórmdázhatiuk.. például. liposzömákban. Itposzótnák gyártását például az US 4.522.811 sz., US 5.374.548 sz. és US 5,399,331 sz. amerikai egyeséit államokbeli szabadalmi hat ismerted, A hposzömák tarrtslmazhaitjak egy vagy több. specifikus sejtekhez vagy szervekhez szeiektivea tmxszporiátódo csoportot, fokozva ezzel a célzok dregbevitdt [lásd például. Ranade. J, Clis. kb&rm&cok 29, 685 (1989}}. Célbsjuttatö csoportok közé tartozik például az alábbiak: foiát vagy biotin [US: 5,416,1516 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi irat, Low és mtsai, I; mamto2idok [Umez&’Aa és mtsai., Bjecters. Biophys. te. Commazi, 153, 1038 (19S8)J; antitestek [Bloeman és mtsai., Ϊ-ΈΒ8 Lett. 557. 140 (19935: Osvais és mtsai,, Aatíatimsh. Agenís Chcmoshcr. 29, I8Ö (19955); felületaktív protein A receptor [Brrscoe és mtsai,, Ara, ,1. Physiol. 1233, 134 (199551; a találmány szerinti fonmdáciőkai és a találmány szfirinű molekulák komponenseit esetleg tartalmazó. különböző készítmények. pí20 [Schreíer és mtsai:., 5. Bioi.. Chem, 269. 9099 (1994); Kemamm és taukkanen, 1 IBb le», 34o. 12' < 190;\ KiOsón és Mer, temuwmeihods 4, 273 (1994)1. A találmány egyik megvakww módjábstt, a t.dalmanv szerinti terápiás vegyületeket llposzémákba íortnuiázzuk, a találmány előirt >Aehb mv«v,dúsítási jmkhab.ot, a itpv»zomák céibajattató csoportot tartalmaznak. A találmány legelőnyösebb mm .tiósít-ist módjában, a Itposzómkhar, lévő terápiás vegyületeket botos injekcióként adjuk be a .tumor vagy fertőzés Középpontjához közelebb csn helyre. A készlhnényoek a ..fecskendővel való könnyű lel100187-1045 SG szlvhatóság biztosítására ioíyckmrwík kell .tennie. A. készítménynek a gyártási és tárolási kőriihtriayek között stabilnak kell. feaw. és toosöani keli a mikroorganizmusok, példáal baktériumok és gombák, kontamináló hatása el lem védelmet
A leírás szerinti ótteíet»benx szülöd csózzal kapcsolatban alkalmazott ..terápiásán hatékony dózis” meg' határozta a. páciensekben' ». javulás előzetes meghatározásának (Pre-ltaiftón DeSniüon of Improvetneal) ACR2Ö értekének, előnyösebbért a javulás előzetes meghatározásának ACR5P értékének.. még előnyösebben a javulás előzetes meghatározásának ACR7Ö értékének .megállapításával történik.
A javulás előzetes meghatározásának ACR20 értékét az alábbiak szerint állapítjuk meg: zöóf-osnáí nagyobb, vagy azzal.-egyenlő mértékű javulás az érzékeny Ízületek számában (Tender jóim Count, ΓΟ) és adóztat ízületek: számában (Swllea Jóim Cotrnr, SWJ) és 20%-osnál nagyobb, vagy azzal egyenlő mértéké javulás a következő 5 diagnózis közűi 3-ban: páciensben jelentkező fájdalom értékelése ÍPaíient P&tn Assessment, VAS), a páciens globális diagnózisa (Pátiéul: Global assessmest, VAS), a gyakorló orvos globális véleménye (Physisiart Global Assessínsst, VAS), a páciens önmaga által megállapított nyilvánvaló rokkantság (Patejtt SellAssesseá Dísablllty, HAQ), ókat fázisú reaktáns (Acate Phase Reacianl. CRP vagy ESB1
ÁCR5Ő es ACR7Sfenekeket ugyanígy, 50 vagy 70%-osnál nagyobb, vagy azzal egyenlő mértékű javulásként. megfelelően, határozzuk meg. További tesztetekért lásd Felsős és mtsai., American College of Rheumaiology Preliminary Defínitíon <<f Imprc-vemeul in Rkemrnrten! Arthritis, Arthritis Rheumatism 3S, 727735 <1995).
Egy adott vegyidéi rákos megbetegedést gátló képesseget az emberi daganatok értékelésére alkalmas állati modelleken vizsgálhatjuk Esetleg. eg\ adott készítmény ezen fulsj-.ktns.iga crtekelhctö úgy ί», ho a szakember számára ismert is vitte pótlási vizsgálatban megvizsgáljuk a készítmény gátlást képességét. Terápiásai? bstókoöy mennyiségit terápiás vagyaiét képes csökkenteni a daganat méretét, vagy egy adott alanyban valahogy másként eaybiteni a szimpióatákst. A szakember az ilyen mennyiséget bizonyos faktorok - mint például. az alany arérete, az alanynál tapasztalt: szimptómák súlyossága, és a kiválasztott konkrét vegyűlet vagy beadási mód - alapján képes meghatározni.
Az antitestek azon tulajdonságát, hogy képesek-e kezelni -vagy mcgakadályozsi a psomsist.értékelhetjük a technikában jól ismert ellátások szerint.
A készítménynek siertisek és jfe.lyCkvm.msk keli lennie ahhoz, hogy fecskendővel be lehessen adót \ víz melleit, a hordozó lehet izotömás psfferek sooldat, etanol, pokol (például, glicerin, propilénglikol és folyékony 'pob-etilénglikol, és hasonlók), és. ezek alkalmas kévéteké. A megfelelő folyékonyságot fenntarthatjuk példáiul bevonatok, mint amilyen a leeitin, alkalmazásával. diszperziók esetében az előirt szemesemére? biztosításával és a.felületaktív agyagok alkalsiazásával. Sok esetben előnyös, ha a készítmény tartalmaz izotonlknsságot biztosító ágenseket - például cukrokat, políolkohoiokart mint például tn&nnitolt, szorbitolt vagy aátriamklorírtot. Az s, e\t< 'ha o ον- ΐ u oe-v e húrodé e\Z05pv utat úgy \Λ \m k msg h„ , k 'szunx nshez ,u ná^m'Os.sot kes.ctte..·' ágenst, peré,t J ne mvte,,r,u sok.-. ,X/\, In.th. ahtnu
Ha biztosijuk az aktív vegyüie- megfelelő védelmét (lásd lenn), a vegyűlet orálisan i$: beadható, példán! semleges diluenssel vagy asszimilálható fogyasztható hordozóval együtt.
1001S7-1C45/SG késell&teáök
A. miátoány szerinti, 11.-15 elleni emberi antitesteket (ideértve: az antitestek szártnazx'kah: es kenteg.mnníort es ez .nsíUer-fokcl t irtaíuu.-'n ko/umenyekv? Jkaima.'hauuk kulonkte m sure es m \no durgnoszokai és: terápiás alkuimnzásrskban,
A találmány «gyík tttegvalósitási médjábnu, a találmány szerinti emberi antitestek a. H. -13 által a Tsejtekbeu és/vagy monoeiiákban/inakmíáuokbsm íadakált ΪΝΕ-α: terwlés gátlásában való alkalmazásra szolgálnak, előnyösen ágy, hogy más eitokínek, például IL-2. állal indukált TNE-tz termelést nem gátoljuk, Ha az antitestet !t-l5-tei érimkeatetjűk(például, az antitestet egy adóit alanynak beadjuk), gátoljuk az l'L-15-nek az IL-15 receptoron át történő jelátviteléi, és Így gátoljuk a T-sejrekben és/vogy ntonöcilákbam’makrolhgokban a TNF-α termelést is, íL-1 5-re specifikus epitopokst (például, konkrét alegységeket, mini például a gamma alegységet) kötő, előnyös ««estek bár előnyösen gátolják az IL-lő ál-al asáökálí TNF-α termelést, nem zavarják meg a szerkezetileg rokon élteidnek, mint amilyen az 1L-2, által indukált TNF-α termelést.
A találmány egy másik megvalósítási módjában, a találmány szerinti emberi antitestek a T-sepw ri -'5 által indukált összegyűlésének és/vagy proliíéráeiőjáoak gátlásában való nlkahttazásra szolgáinál, elemese·} anélkül, hogy gátolnánk más. szerkezetileg rokon chokinek. mint amilyen az lt-2, által indukált t^e.tprelíiéráciot. Minin TNF-o. termelés esetében, fea az antitestet 11 -15-tel erm-keztetjök (például, az antitestet v.g> adok alanyo&k beadjuk), gátoljuk az IL-15-nek az IL-IS reeepmron nt törtette jelátvitelét, ás így gátoljuk a Tsejtek iil.-15-tei történő serkentését:.
A találmány még további megvalósítást módjában, a találmány tárgya a találmány szerinti emberi antitestek 11-15 által közvetített elváltozások (például autoimmun betegségek. mini amilyen a psoriasís, izületi esuz, vagy gyulladásos bélbetegség, vagy lenéző betegség, mist amilyen a lílV) kezelésére vagy megelőzésére szolgáló eljárásban való alkalmazásra szolgál. Az. eljárásban egy adott alanynak a betegség kezelésére vagy h egelo/cv. e aU. mm, - x ?a\ v- \ üp k s Salaim mv von t e ubert autite*- u \ Η ’ς aln I ko/vemet betegség kezelése vagy megakadályozása céljából, az antitest beadható önmagában vagy más terápiás ágenssel, mint például gyulladásgátló ágenssel, például sztezoid típusú vagy nem szteroid típusú gyuiladásgádő ágenssel, vagy az antitesttől, kapcsolatban vagy szinergists módon ható eítotozismal együtt.
A találmány előnyös megvalósítást módjában, a találmány szsfbdi emberi antitestek íztíteri esáz (rheumatoid arthritis, RÁ) kezelésébe!? vágy megakadályozásában való slksísnazssra szolgák Az antitesíek korlátozzak az il-15-rtek bizonyos gyulladásos betegségek, mint például RA, előrehaladásában játszott: szerepét. Az RA gyulladásos loíyaoutóamak beindításában és íémnurtásábun T-sejtek, különösen a CD4-r T-sejtek, vesznek részt, A TNE-et, egy másik eiteidm szinten szerepet játszik abban a gyulladásos fitiyamaíban, amely egyértelműen az RA-ban szenvedő páciensek ízületeinek roncsolódásához és munkaképtelenné válásához: vezet. Az 1L-15 helyi sxnneiizálőáása kulcsszerepet tolt láe a T-sejtek aktiválásábun és összegyűlésében, illetve s ΪΝΕ<x és más, gyulladásos citokinek mdukálásábun. Az IL-15 az RÁ előrehaladásában betöltött szerepébe tartozik egy olyan folyatnak amelyben az lt-15 a nt&krofágök által szintetizált 11.-15 a T-sejtek összegyűlését indukálja.
aktnak 5 -tejte ekkor A? t vart rrtiU\ a náktotegov cko^a^ o„u ,A INI > te m, odéV tt.ekalnak s serkentett makroiágak még: több IL-15 szmtézrsét és még több T-sejt aktiválását segítik elő, igy folytatva a eiklüst A TW-ot-ra és a mafeeBgöha krimiéi! itatásai mellett az IL-13 aktiválja a neulroriieket és hatást gyakorol a helyi B-sejtek általi immungiobulin-szekrécióra, és különöseit a reumás faktorok szintézisére.
ksKerint, a találmány szeri-só, ÍL-15 elten· antitesteket aikstlmazhatjuk az l.L-15 lent említette RA-t okozó hatásainak megelőzésére vagy blokkolására, és igy alkalmazhatjuk e betegség megelőzésére vagy kezelésére,
Félíláub a találmány szerinti, IL-15 elleni antitesteket alknhnazásatiuk gyuliudásgátlásra és/vagy az RA-ta résztvevő: aktivált: lenkeeilnk kemofas kának megelőzésére.
Í8W7-ÍQ45/$<J
A találmány szerinti emberi^ antitestek alkalmazhatók szerkezed károsodások előrehaladásának megelőzésére olyas pátensek esetében, akik metotrexátro nem megfelelte reagáltak, vagy alkalmazhatók olyan, közepes vagy súlyos aktív teled esóztól szenvedd paciensekben a szét kezelt károsodások jeleinek es sziótptó* matek csökkentésére, illetve a károsodások késleltetésére, amely pácienseknél a LMARD-dal végzett kezelés eredménymk-rte bizonyult.
Λ találmány szerroti emberi antitestek alkalmazhatók az 1L--1.S más liafásamak: blokkolására vagy gátlására is. Különféle sejtek és tervetek (példánk xsjsmocíták, makrolagok, ribroblassk dendritikos sejtek, és keratinomnte expresszálnak Ιϊ..-15-οί. A keratmociták az epidermisz és a nyálkahártyát alkotó szövet epitéiiélis bélésének fö összetevői. A kersfinociták szaporodását ciíokiuek és növekedési faktorok haroelyefc: közéi néhányat taagak a keratteciták termelnek) komplex hálózata szabályozza. Á. kerafinocítákbél származó IL-15 reszt <<-' a F-\Ojtc,\ rokíiomicnoöaMbu, p'ol temető? ter. a psotea^tsos ptekoítet, való nJelesuktteo Szamos olyan betegséget ismerünk, nutelyber; a keratteciták számának növekedése bizrsnyrss, rokon betegségek szimptótnáiérf felelős epidermális roperptemhoz vezet, E betegségek közé tartoznak krónikás betegségek, adni például psoriasts és utópikus dermatttm. és olyast állapotok, mint amilyen a kéz krónikus ekcémája, érintkezési bórgyuitadás, i'HPY-vei kapcsolatos) vírusos szemölcsök, a bőr T-sejt límtetája, kőrös sehgyögytdás, mint például tebetes következtében történő kóros sebgyógyttlás, Eszerint, a íatóteáay szerinti antitestek ilyen elváltozások kezelésére vagy megelőzésére szolgáló eljárásokban való alkalmazásra szolgálnak, amelyek során a találmány s/ermn. Ii -15 ellem embert antitest a betegség: kezelésére vagy megelőzésére alkalmas mennyiségben egy adott páciensnek beadjak. Például, a találmány szerinti, 11.-15 elleni antitesteket alkalmazhaduk psoriasisban a psrsketsnosis blokkolására vagy gátlására, psoriasishtm sz epidermisz vastagságának esökkemésére, és psoriasisban a kerafirmcifás proliiérácicjának csökkentésére.
,V 11 -; 5 modulálja a bélrendszer epitéllumsejtjelnek működését is [Keineeker és mtsai., Gastroeneterol.. i l t. 17ÖÖ-1713 (literi. Specifikusan, az 11..-1 5 képes módositásokní kiváltam u nyáikakartya. epkéiium sejtjeiben és a bélrendszerből származó epiíéliumerdetö sejtvonaíakban. és ezért részi vesz st gyulladásos tebetegség, például a hasért betegség, patogenezisében. .Az il..-15 ilyen betegségekben betöltőd szerepét bsstiri betegségben ‘tersen» Uzelete' pavctte sekombe „z k,-'1' tetcs. vetetts fe sza vnxlasu mua a WO ÖV Ő1582 sz. ncuizetközi közzétételi tratl. Így, kimutatták, hogy az I.L-15 közvetlenül részt vesz:a hasűri betegség beindításában és fenntartásában. Eszerint, a taiálroáuy egy másik megvalósítást módjában, a találmány szerinti:, íL-15 ellem emberi antitestek (azaz az 11..-15 gynlhdsskeliö hatását gátló antitestek) a hasért betegség kezelésére vagy megelőzésére alkalmas mennyiségben páciensnek beadva hasért betegség kezelésében és te-agy megakadályozásában való alkalmazásra szolgálnak.
Ezenfelül, ügy talattuk, h»gv sz 11 15 elősegíti az új véredénysk kialakulását «gy ueevaszknlerixáelős vagy angiogenesis elnew.C'm RAun,íf?.m Eszerint, a találmány szerte antitestek még tedbóí alkalmazása közé tartozik a neovaszkukifirzctosai mro betegségek megelőzése vagy kezelése, Érbetegségek közé tartoznak, a gyulladásos betegségek mellett, a te neevaszkölarizáeiöo alapuló vagy azzal jellemezhető válloztte.
A találmány szerinti emberi antitestek alkateazhsttök nz lk-i 5, fertőző betegségekkel - rolni például 1-Í1V - kapcsolatos hatásainak blokkolására vagy gátlására. Eszerint, a találmány szerte antitestek másik alkalmazdaába tartozik a fertőző betegségek - mint például JI1Y-I - megakadályozása vagy kezelése.
Példán!, az antitesteket alkalmazhatjuk különféle, az 1L-15 által közvetíted betegségek itt vitro vagy in vivő diagnosztizálására. Speeidkastm, az antitesteket aikalroazhsitttk 11,-15 szintek kimutatására, vagy olyan ldÖI87-Kí457SÖ sejtek szintjeinek ittogbatározásáta, -melyek. it-15-öt teriáltrtamk. a membránjaik fetóttén vagy az 11-Ί5 receptetokhísz kötve (receptorhoz kötötte embert IL-15}. Az 11,-15 ilyen: szirtijeinek kimutatását bizonyos betegségek szimpiőmáival korrelálbstők, Esetleg, at antitesteket slkttimszhatjíík az IL-i 5 azon funkcióinak gátlására, vagy blokkolására, másfelől, az IL-15 fenkeioja által okozott betegség szimptótnáínak megelőzésére vagy enyhítésére.
.Ahogyan a lentiekben leírtuk, tt találmány szerinti antitesteket beadhatjuk egy vagy több terápiás ágenssel -- példán!, Immanszappressziv ágenssel vagy gyű iladásgásló ágenssel - együtt abból a célból, hogy fokozzuk, az általános gyulladásgátió hatást. Az antitestet kapcsolhatjuk az ágenshez (fomrunkomptexkentj vagy beadhatjuk az ágenstől slkatönttifen. £z utóbbi esetben (elkülönített beadásX az unritesfet besdbatjsk az ágens előtt átért vagy azzal megegyezően. Alkalmas terápiás ágensek köze tarfozrutk: példáéi gyullsdásgátló ágensek, Dkí.ÁRD-ok (disease-modiíymg asü-rheuwane drags, betegséget: módosító reumaelien.es drogok), inmrunsztsppressziv ágensek, kemoterápiás szerek, és psoríssis ellesi ágensek. Á találmány szerinti emberi antitestek bsadlsatók besugárzási terápiával kapcsolatosait ís.
A találmány egy másik meg valósítási módjában, a találmány szerinti embert antitestek más antitestekkel való beadásra szolgál, mint például Cl)4-re specifikus antitestekkel és lL-2-re specifikus antitestekkel. A találmány szerinti: emberi antitestek kombinációját. CD4-re specifikus antitestekkel vagy Π,-2-re specifikus antitestekkel,. kölönősen atkahnaznak tekintjük autoimmun betegségek és transzplantációs kilökődések kex-riévére.
A lehás-batt szirtién ismertettük a találmány szerinti, Π..-1.5 ellett! emberi artiiiesteket, és igény szerint, azok: alkalmazásának leírását tartalmazó készleteket. Ezek mellett, a készlet tartalmazhat egy vagy több további reagenst, mist például üasausszuppresszív reagenst, vagy egy vagy több, találmány szerinti antitestet (például, az első emberi antitest .által: kötött epiroptöl eiterö epitőphoz kötődő, komplementer aktivnoxá embert snittest t
Eszerint, a találmány szerinti antitestekkel kezelt pácienseknek beadhatunk (a taláimattj s/oontt emberi antitest beadását megelőzően, szimultán, vagy azt követően) más, az emberi mtitestek «etaptax hatosat fokozóvagy növelő terápiás ágenst is, mist példáéi gy ulkidásgátló ágenst,
A találmány még további meg valósé ás > módjában, a találmány szeritől emberi antitestek más vegyületek (például. Terápiás ágensek, jelzések, etfofoxínok, immmszuppresszanxok, stb,} célzott (az: ilyen vegyöieteknek az antitesthez való kapcsolásával} eljuttatásában való alkalmazásra szolgálnak olyast sejtekre, amelyek felszínéhez: IX.-15 kötődött fel (például membránhoz kötött vagy ÖL-15 receptorhoz kötött lE-f 5). így, a telráshtm ismertetünk. IT.-l5-öt és (L--15 receptort evorasszálö sejtek ex vivő, rn \d-ro vagy ín vivő lokalizálására szolgáló eljárásokat: is (például, kinnttethate' jrizessel, mint ahtilyen a radioizotóp, fluoreszcens vegyidet, enzim, enzim kofoktor).
A tnlálmány mris üteg valósítási módjait az alábbi példákban inak le, \ tedúhoám. -vvtum ’-ot.goteL.sf .<.· a-abbi peldtkkal tovább ti fosztod sok, azonban e n. telük a tsks.m&nv1 semmiben sem korlátozzák,
EÉIti)Ári
Lágfe
Cmu-val célzott egér generálása
A píCEmu piazmid a Baib-'c geaomíkus A-fágkőtsyteárből (teforeu és Ceti 22, 1 §? (19£ö)j előállított. a mu gént is magában foglaló, egércrectető Ig-ből származó nehézlánc teskuor EcoRl-Xboi fragmentumát
I8Ö187-1Ö45/SÖ
-3btaxteltnazza.. g geoomikttsfragmitaoirtoí a pfCEh-1191-1 plazmid [Marsh és mtsai., Gene 32, 481-435 ti 984)1 EeoRl/'Xhoí helyeire szubklŐHoztuk:. A giCEmu plazmádban a neKvUtx ‘ \\\λs A KoRt ich t-M 5’ i tmb s > > '-mu ux lm vk c xs,?, ·. ν *l -ϊ í Utó l ' j j, e' η χ x m\ - n ? ·<
«.«•ónjától körtilbe-lül I kb-m léve Xhol helyig lerísdnek hú .axonban, a mu átváltási ismétlődő régió legnagyobb részét £. etaba történő passzfesolás során dfilstáíódott.
A céíbajuttató vektoré az alábbiak «' ni hb <» <nk -κ· \ρ J mu .la nudl ' . o- < ko i'ndiil Mr u feagmcnnuíror kivágtak és HindlILSnstí enzimekkel emésztett pBlnescnpt vektorba · Stratagene, La Jolla, CA) szübkíénozLík. E píCEmu Eagteestum.a CmtxMől 5' irányban körülbelül l kfc~re található Hindii! helytől a tmui-cn belül léve Smai heh tg terjed. A? etedtnoneüt k-axut pkt/nudvt Smal ’xpel enzimekkel emexzteüuh ös a plCEma plazmádból kivágod körülbelül 4 kb méretű - a Crau 3’ végén lévő Smal. helytől a Cmu tdoiső ezunjatö! közvetlenül 5’ irányban lévő Xbál helyig terjedd - SmaEXbal fragmetamot az emésztett plazmidha tóllesőet&tk \.·· etultaüysi kapuét, p'fAMl elnevezésű plazmidot a Smal helynél linearíznbuk, és egy neo sxpfeaöztós kazettát illesztésiünk be, E kazetta az egérerederü tószfogiieerát kinéz tpgkt promóter taJSzkAptanális szabályozása alatt IXbaLTagl fegmeaíum; Adta és misaj,, Geáe öö, 55-74 t.E’S'’], tártálmázzá a jkv gént es a pgk pehnden iacmx hetaí fital! ibuditt fracnteimtri, Bocr ex utat, B-eenem tícnct 2S, 2l)9 3(?h/AMb] r Li/ettat r t'K’ p r/tdb<'l i\taev\z ex rrsai, Coll tA Lta t ín) (tat)] tanjük elő, amelyből a neo kazskát EcoRl/ilínálIl íragtnen tant ként vágtuk kt és EcoRl/Hindlil enzimekkel emésztett ρ0ΕΜ-7Ζί?Α} piaznödha szábklősüzva kaptuk a pGEM-? (KJÍ) konstrukciót A neo kazettát EeoRLSsíi emésztéssel kivágtuk a pGEhd-7 (KJÍ) korsstmkeióbók tompnvéguvé alakítottuk és a pTARl plazmid Somi helyére szubkk'tazttA, a genemtas Cmu szekvenciákkal ellentétes orientációban. Az eredményül kapott pkísmidot Motí enzimmel hnearizáííuk, és herpes mmplex. virttaöl származó itmxlixtkmáz (tk) kazettát illcszteétak be, hogy lehetővé tegyük a homológ rekomhinánseka; hordozó ES kiónok fddúsuláaát [Mansour és mtsai., Matere 336. 348-352 (1988)), £ kazetta tartalmazza az egéreredetö pgk promóter és poiiadeoiláeiós hely által közrsíbgotí, tk gént kódoló szekvenciákat iTybafevócz és mísaz, Cell 65, 1153-1163 (199! )j. A kao>tí ( ΜΡ céíbajuttató vektor tartalmaz egy összesen mintegy 5,3 kb méretű, a nehéziáncot kódoló ioktjsszai hömelóg szakaszt, amelyet az első Crna exon egyedi Smaí helyére klónozva a neo ekoresszíős kazettába illesztedühk be. A. eétbajoítátó vektort, ES-sejtekbe történő elekíroporáelöt megelőzően - a ptenúdszekvenciáknu belül hasító ital eszanmél lírtearizáhuk,
Λ8-1 ES· sejteket íXlcMttfeon ös Bradléy, Célt 52, 1073-1085 (1990)] mitotikusan inaktív SNL7Ö/7 tefer sejtek tömgen [mint fenni szaporiíottök lényegébe® a Rofeerison és mtsai. által leírtak szerint (Rofcortsort és mtsai., 1 eralocareótomas és Esubrionlc Stem Cellst A Practical Approach, 71-112., szexk.: Robertson, kiad.; Oxford, i'EL Press t b’8”t; A linearízáit CMD célbajnttató vektor! llasty ös mísai. áltaí leírt eljárás (Hasty és mtsak, Natúré 350;, 243-246 <1991)] alkalmazásával ekkétopoxáitek Λ8-1 sejtekbe, Eiektroporúk sejteket lőí) nnn-es csészékre iemezekünh kt t-2*IO6 sejtksösze sűrűségben. Huszonnégy órával később, a lápoldatboz <í4 i8-at (az aktív komponens tekintetében 200 pg/ml koncentrációban) és FIAIM (5*íö' M) adtak, és drogra rezísztens klőnokat szaporítottunk fel 8-9 nap alatt. Klánokat vettünk lék tripszinetak két részre osztottuk és tovább saaporhottuk. Az egyes klőnokból szárajtta sejtek lelet le fagyasztó tóik, es a má«k telő! a '•ektor- és céíszekvesciák közötti homológ rekombinációra nézve analizáltuk,
Southern biot hibridizációval DNS analízist végeztünk, A kiötlőkből. DNS-í izoláltak a kábé és sttsak
1ŐŐ1S7-IÖ45/SG álítd leírtak szerint (Lmrd és nttsai,, Nucl. Add Rés, 19. 4293 (i 99Dj. ízoláh: genomtkus DNSEt 8pei-el emésztettünk és egy 9 IS bp mérettl Saól fragmentumml próba, lásd is ábra) teszteltük, amely a tm; müsnskus enhsncer és tt mtt. átváltási rógió közöd;, szekversclával bihridizál, Az ,<A” próba a vad típusú lokuszbaa egy 9,9 kb Spel fiagineráutHol, és a CMI> eéibajeltalő vektorral lmu;ológ rekombinációval tekornbluálódott ma lokuszból pedig egy áiagnoszftkus 7ró kb sávéi: mulat ki (a neo expresszié» kazetta Spel helyéi tártaimat), A G418-ra és FXAU-ra rezisztens, Southern biot tsnnlizissel ansíszal? 1132 klón kézül 3-ban atatattuk ki a nm lokusznál történi homelög rókesnbináeiöi jelző 7,6 kb Spei .sávot, A antik igazolására, hogy a vektor homológ módon integrálódott a.nm génbe, e 3 idóöt tovább etnésztettük Bell., BstXÍ. és LcoR.1 enzimekkel. Amikor „A’· próbával hibridlzáltuk, a B:glL BstXk és EcoRI enzitnekkei emészted vad típusú DNS-sei készük. Sombora btoíbar, 15,7. 7,3 és 12,5 kb fragmentumokat (megfélelóen) nmiatimtk ki, inig a céibaveú ;«« alléi jelenlétéi 7,7.6,6 és 14,5 kb ttagmerttumok (tneglblelöen)jeizik, Mind a 5. Spei enzrnntei történt esnésztéssei kimutatott, poztró kiön rmnutta a -várt Bgli, BstXl, és· EcoRI restrikciós fragmentumokat, amely a· neo génnek a Cmed eaenbs való bei fczíődését igazolta.
A^&wA^?ásiís,mrá.ss?s§íéjfe
A barom célzott (264,272 és 408 azortoslrószámu) £$ kiönt kioivssztottuk és CS7BUÖÍ hlasztocisztakba injektáltuk (lásd, Bradley, Tfer&tösarc'ísssmas és Embrionic Sióm Cella; A Fraeílcal Approach. 11.3-151, szerk.; Robertsoa, kiad.: öxlörd, 1R.L Press (1987)):. Injektált biasztoeiszíákat élvembe»: nőstények tnerusaixt transzferáltuk a bevitt ES-soitek és a gazda blasztoessztákból származó keveréknek megfelelő, kimérikus egerek előállítása céljából. Az ES-sejíek részvételének mértékéi a kimérábaa ügy batározbitjnk rseg. hogy vizaábstm megbecsüljük az ES-sejtvos&ihol származó agait bevonat mennyiségét a fekete C57BL/6J háttéren. A 272-es és 408-as klóook csak alacsony százalékos kimérákat (azaz aktcsotty mértékű agntt pigrnentáeió} produkállak, azonban a 264-es klón magas arányban produkált hím kimérákat B kimérákat €5713:1203 nőstényekkel pároztmíuk és aguts leszármazoítakat generáltunk, amely jelzi az E8-sejt genontjánák csíravonnlba történt transzmisszióját A célzott ma génre sranyule szkrrnelést sarokból vett biopsziákól származó, Bgli enzimmel: emésztett DNS Southern biot muönos.’,U végeztük. rVz agníl utódoknak körülbelül az 5d%-ásak esetében találtunk, bibridizáió 7.7 kb mérető Bgli fragtrton’un’O’ a vad opusa 15 “ kb sut tt,ellett nmeh skmmt^ífaba « edzett tris gén evtrnon.dör tettem trauszíutssz tóját,
Ik»StóÍM^gSSSkel®lMA2SösMO Rmkmona h* tóSfefeáltelÉaig
Amsük xsegbaíátvzásara, hogy a nee kazettának a e mai-he történt illesztése inaké.,iba c az ig nehezksncát kódoló gént, a 264-es kimérni tartalmazó klónt - a JH génszegiuentnm deieeténna; a nehtvlanc expressztojánsk inaktiválását sretitnenyező fCbeo és mtsai., immunoi. 5, 847-656 11993)) - 3HD mutációra homozigóta egérbe vittük be, Négy agnti uródoí generáltunk:. Ezekből az állatokból, az 1 hónapos korban, nyert szérumot ego retedéin IgM jelenlétére nézve ELISA-val: vizsgáltuk. A ttégy utód közül kettőből teljesen hiányzott ez igöl (lásd I, táblázat), A négy állat geítoEpusátuk meghatározására, larokbói vett bíopszjáböl preparált. Bgll-ei emésztett és „A próbával hlbsáttlzált (1, ábra), illetve Stuf-et etrtészlett és 473 bp EcoRi Stai íragntentuttttttál (mint lenn) hlbrldlzáis: DKS-t Seaíkera blottal: analizáltuk. Az mutRzis kimutatta, hogy az állatokban, amelyek nem expresszálnak szértnneredatu IgM-et, a nebézláucot kódoló lekuv egük alléije a JHD mutációt hordozza, a másik allé; pedig a Gmu; mutációt. A 3HD mutációm nezse hvuoztgote egetek a vad opusra jellemző szérum: lg szintekei mulatnak. Ezek az sadatok benntlayák. hogy a Latul mutx'o makttvaha a -«ο, gén eypressaiöjár.
föttl: 87-1043/80 ~ >7 *
1. táblázat
Egér | Szénán IgM í gg/ml): | tg lebcoasic genotípusa |
42 | <0,902 | CM13-JH13 |
43 | 196 | X4H0 |
............................44............. | <0.002 | CMLXlilD |
45 | {74 | <4H13 |
i29sRLón | 15:3 | ó/j- |
4.110 | <0,002 | 41 ID Ilin |
Az 1, táblázat bemutaíja: a szénösweáe^ IgM szintien (FidbÁ) a CM.D és JH D mutációkat (CMIXIRD) hordozó, a JHD ntnmdóra nézve betfemigóta (r/4á(D), vad típusé (129Sv x CSOIkL-M-bl egerek (-'-!, és a ílffi mmáeióra ijörnozigőta, B-sejtre nézve hiányos egerek (4HD/4RD) esetében.
A A€t?!2 ttam- --'en a ott SC kb nen ι cm·. k lor e> nAts ho In r trw ο ί'ύ 'M (1994)] és a pVxő 25 kb mérete Inzertjének együttes- ÍRjelttálásával állítottuk dó. A. pVxó plazmklo· a;; alábbiak szerint készítettük,
Az euiberi csira vonalból szánrwo Vs-1-18(DR-Í4) gént a körülbelül 2,5 kb 5’ szegélyező, és az 5 kb 3’ szegélyezi) geocmíkus szekvenciával együtt tartalmazó 8,5 kb Hluttlll/bali ÖNS-fi-sgmentümot pS.P72 plazmidvekíofba (Promega, Msdison, Wl) szabklónozütk a p343,7.16 plazmid előállításit céljából. Az emberi cstravonalbói származó Va 5-51 (BP-73) gént a körülbelül 5 kb 5' szegélyező, és az 1 kb 3’ szegélyező gexíotnikns szekvenciával együtt tartalmazó: 7 kb mérető Bamill/Hindlll DNS-Fragmsnínmst a pBR322-Ön alapuló pGPl f plazmid klónozó vektorba (Taylor és mtsai.. Náci. Add Rés. 20, 6287-6293 (10920 klónozva álli-tottük elő a p251f píazundct. A pGPl Xből származó di: klónozó vektort, a pGPl k-t (a szekvepeiahsfában SEQ 113 Ne 14. azonos tío--,'úrnőn megadott szekvencia) EcőRV/Bamril' enzimekkel esttészlettők, és az embm csirawnalfcvl j'anna/o \\t 3-23 (ΠΡ-4-7) gént a körülbelül 4: :kb 5’ szegélyező, és: az 5 kb 3’ szegélyezd gv no k t- masai egyre- tretakna/o 10 -,b ituvtu ' ωΚ\ bamrii l)\ó-ín,g.'ia íren na ogil υ», \ \a pott: pl 12.2RR ~ ?l3zmJ«'i Barslli Seal enzmiekkel eniészíettők és ősszeligáltttk a p251í-hói tisztított, 7 kb SamktBSdí Inzerttel. A kapott:pVx4 plasnudot .Xkol-el emésztettük és összellgáltuk a p343.7. id 8,5 kb méreíii Xliöí/Sail inzerttével.
Olyan klánhoz jytelhmk, amely a V8 1-18 gént a másik két V génnel azenos oriemádőbas tarínlsnazla. Ezt a kkmt. amelyet pVxó-sak neveztünk eh Nötl-el emésztettük és a tisztítóit .26 kb inzertet a pHC2 8(1 kb méretű Notl Ismerőével együtt 0:1 moláris arányban) másfél napos kora (€578(261 s 13BA/24)F2 embriók pronakleuszába sn ekt ittak a ífegan és misai. által lelrsak: szedni: [Bogán és mtsai., Manipnls.ii.ng the Moase Ernbryo, A Laberalory Marssal, kiad.: Colö Spring: Harhor kaboratory Press, Plainvlew ΝΎ 11994)1, Az injektált em-bríéfeból kllejlőddtt,Vx6 és HC2 eredőül szekvenciákat tartalmazó iranszgéniRus egerekből bárom, egymástól független tt-ovészvcmalat alapítottunk. F bárom vonalnak (HCOÍ2U4881, 110012)15083 ős , 4A' ·ίί\'λο o ... h,\ \ ‘ θ'-ο χ m t u ‘ p·. dfen h»*t v MD ^uti ot (k>x < < a mlvti. 1 MBO I 12 SÍ .-Ό 099iv 3 skt.on)9272 transzgettt ]fsslnvsld és nttka.. Natúré Bto-echnok 14,
845-85:1: ():996)1 hordozd: egerekkel pároztstttik. Az eredményül kapott egerek emberi nehézláncoi és te könnyű100187-1045/Sö
-38iáncot kódoló traaszgésete sxpresszáirsak és· egyébkám pedig 'homozigóták sz ögéreredatit endogén néfeéz- és κ könnyalsncot kódoló loLusa ieitiíhőtébesí.
A fentiekben leírtak szerint eiöálHfórt, és a Vfetiarex eégíől (San Jósé. CA, USA)beszerzett UCe42 és HCo7 transzgéasfcus egereket Fteuxtd-iele ko-nplert (CFA. kaíalőgusszásna; 121024LA, Difeö; Labsr&isrfes, Detnoir. Michigan, USA) vagy Fxetatd-féie inbompleu siijnváassal (1CFA, katelőgussasma: 121Í95LÁ, Dühe Laboratones) kiegészített, emberi rekotnbmáas lL~t5-tei szabkxóán. (SC), iutraperhööeáhsarÍ (IC), vagy iötiavé®»»3ίί (IV í immunizáltoak. ímmmfeáláskor számos esetben KJUd-vaí .kapcsolt ML- 15-St alkalmaztofe. Számos. Freund-feíe komplett vagy Fxetmd-féle mkompfett: adjavásstó 'kiegészített híL-lS-tó. történt rásegítő oltás, uíáa, az egerek szórómat teszteltük az K45 eltel estben antitestek jteitiétóre íteve.
o?.ínjyHz;uasLreoü os saort'í ,’go (.>/< 45,zLaXL. fiXACáCá
170699 | SC | 52 i.g bil 1 ~ ί. Γ \ ,. π (Dtibo, katalógusszáma: 12IÖ24LA1 |
910799 | SC | 12 tg ItiC-l 5 ICFAAsm (Difco, kstelógusazámai 121Í95LA) |
159799 | SC | 12 tg h?L-15 iCFÁ-te |
020899 | SC | 17 í g 111 fe K. .0 ki A bán. |
070999 | SC | 12 μ§ bíC4 S-&LH ÍCFÁ-te· |
2S0999 | SC | 12 tg ML45-KLH CFA-bart |
Lí 1099 | IV | 30 p.g hí 14 5 PBS-tiea |
121099 | ÍV | 39 tg bíL-15 PBS-ben |
151099 ezen egérből származó oytekesoteó- és lépsejtek Mziójs SF2/0~víti
Ctefe-AAACCLOVUfeó
201099 IP 23 tg Mt-t 5-KIH CFA-bao (Diíeo. katóóguwánu: i' 4241 U
031199 IF 124 ng hH-fe. 12.5 ng UL-fe-KI H ICfeUbun tUste.
I2H95LA) kataiögusszároa:
41199
121199 19 I 199
ÍV 12,5 gg blL-l 5. U,S.M Μί,-05-ΚΧΗ
ÍV 12,5 (ig hít.» 15,12,5 gg bit-15-KLÖ ezen egérből származó nyirokcsomó- és lépsejtek Száója SFXŐ-val
Tápoidal
190 bíCtei peoxtóUmtó, 100 tg/mi streptormcimtó, 5 íbM náírmmplraváíteL 0,5 ;aM S-merkaptoetanolíai (Lóé Technologies. Faísley, Skóciai és 10%, hővel inaktivált foetáíts borjúszérummal ilUVlone, Utak, USA) hegesztett, láceves által módosított Duíbeeco-féle tápold&t dscoves Moditied Dulbeeeo's Médium).
CA_A4VC_ >A^CkX<lLfe44_ snl Origea Hyhritie®» Cfertmg: tasior-rai (ICEH, Gshhersburg, MD, USA), ííAJ-tal (i fiola, a gysziő .áltó javasolt íkotmentóciófcan Sigma Gbemtel Co>, St Louis, MU, USA) és 0,5 isgtisl kaasmichtól (Life
4047· 445. SG
-39Technologies, Psistey, Skócia) kiegészített Élte.
mi Orlgen Bybriden-a Cfening Fnotor-ras {IGEN, öaiiitersbnrg, MO, USA), HA'T-tfl (1 fiola, a gyártó által javasok kmeestmac^s Stgxaa Chemteai Co., St Lotas, MO, USA) és 9,5 tagúnl kanomisionel (Life Teciiselegles, Palsley, bkomat eiegészitett FPM.
Hited'ma tózkésejnyimtógarahésÁ^ t’ferfoomák előállítása céljából, az egerekből eltávolitottuk a lép. lágyéktáj; és az aorta fotói oynnkesootílkat. A lépből és nyirokcsomóból különálló sejteket tartalmazó szeszgenziói készítettjük és a szuszpenziót: SE2I9 utielőmasejtekkel kevertük össze 1:2 arányban. A sej:teket lecenuúfogáltuk és az üledéket óvatosan :íeiszuszpexíáákuk: 1 ml poiíefiléngkkolban ($&% név, ESS-ben, Slgma-Aídriel® Erviné, Ük) ÓTte-on. A sejteket 1 porcig: kevertük, majd 25 snl FPM-2-t adtunk a sznszgenzienoz, és 37'C-oo Jü-óö percig mkubáftuk. .Az inkubálás arán, a sejtéte: ö,75* tó sojí'iyuk koncentrációban í fbÖ gl térfogatban), 76-lynkú fersrezeken, FSMben ííikubóliuk. Három nappal később, a lyukakhoz löfi pl FSM-eí adtunk.
HhL~i 3~iel íommnizáli HCo-7 és HCoí2 egerek légének és nyirokcsomóinak fúziója számos. az IL-1S ellőni antitesteket termelő hibridótnái eredményezett. Az alábbi négy, az, i.t-15 eted, teljesen emberi aof .testeket termelő stabil klőnokat ízolákuk.: fi t ttetyD7F7B? másnéven I4ÓB7; í2) íóDB2E12A3:B5 másnévea l-föiió, (2) 404CC1IB7E4 másnéven 4Q4E.4; és (4) 4Ó4ESÍ2E7A8 orásnéven 4<)4 4A E klánok mindegyike az embert IgOl/k alosztályba tartozott.
A.lúbndóir:ák.s^nelé>te
A fúzió után 7-11 nappal, a lyukakat: az emberi atnltestek: jelenlétére aézs® szkrinoltük az alábbi ELfSAk alkalmazásával:
.-tekteeri toG-neLaterotóíteb^
Az emberi IgG-oek a tenyészet felűlószóiban való jeietáeleaek szkrmelésére szolgáló l· 1 ISA kivitelezés· éhez, Nuac Maxison» ELISA-lemez egyes lyukaihoz iöö pl, fossiáííal pofeelt sóöláalban <PB$> oldott 0,9 pg ml kouceutractoju. ny ui-o-e-kenoynianc-antrtesteket (DA:KG, Glosbup, Dánia) adtunk és 12 órán át, szobahőmérsékleten í.okabaltok, Miután a lemezt csirkcszérummsl {2%, Lile Technologies., Eaisley, Skócia) és Tween-29-al (ő.őS'lá) kiegészített EBS-sel <P8STC> blokkoltuk, a tenyészet felnfuszólhól vett mintákat adtunk az, egyes lyizkakhoz. Másfél órás inkubálás után. a lemezeket mostuk és BBSTC-he® oldod, 8,5 pgimf koncentrációjú, tormaperoxidázzai konjugált nyál-o-ember IgG-£ <Fa£b2-fegmmuraok) (DAKO, ölostrup, Dánia) adtunk: a lyukakhoz. Egyénbe fokubálús után, a lyukakat mostuk, májú n gyártó útmutatásai szerint hezzáadiuk a szabsztrátnínot (Alkí'S; 2,2’-szinobisz-3-etilbeazínízofe-szuiíbn-av s es az antitest kötődésé? 495 nm-en. E1S08
EOSA-leolvasobaa (Bio-Tek ínstruments, Wioooski, VT, USA? ooekehük Az Et-1.5ellem:speelllkus ^testekleleÍdéténekszkrmelésére.:szolgálőEEf$Á
Emberi ígívk antitesteket tartalmazó lyukakat teszteltünk az-11-15 elleni specifikus antitestek jelenlétének szkríselésére szolgáló: ELlSA-vtd, A? FI IS A kit itelozeséhez, Nőne Maxísorp ELÍSA-lemez egyes lyukaihoz 190 «1, foszfáttal púdereit sóoldaiban (BBS) oldott, 1 ágúul koncenimcrőj:ó:lL--I5--öí adtunk és 12 Órán át, szobabómérsékietef? inkuhálíuk:. Mintán a lemezt csirkeszémsutnál (27>, Life Technologies. Paisfey, Skócia) és Twea-28-af f0.05%! kiegészített EBS-sel tPBSTCj blokkoltuk, a tenyészet folülüszóibói vett mintákat adtunk sz egyes lyukakhoz. Másfél órás Inkubálás után, a lemezeket mostuk és FBSTC-ben 1/SflOÖ arányban oldott,
I08Í87-1045/SG tormaperoxlúázzai koojagált: «-emberi IgG-t {Jaekson fommnöResearek, West Grove, Fennsyfvsma, BSA) adtunk a lyukakhez, Egyórás iakuhálás után. a lyukakat s®osíh&c. majd a gyártó úőnutatásai szerint hozzáadtuk a sznbsztrátutnot (ABTS; 2,2'-azmobÍ8Z«3-ettlbenztta?,oi}n-»zullonssv) és az antitest kötődését 405 nm-s®, EIA08 ELISA· leolvasóban (Bio-Tek lasfeuméms, Wtrwski, VT. USA) értékeltük.
b%n iStfen e. n,texak>, ) h»h d,—-a<t 0(- \Att b«n '.%a a v tA ko<% <. e * vitásával (0,5 sejt'mit szubklönczíuk-.
Körülbelül 10 nap múlva a szabktówkat a tóniiekbcs említeti 1.1. -15 EETSA-val teszteltük. A számos szubktótiozási eljárás sotán, az- tSM-eí táztsonként FC.M-e® keresztül fPM-re cseréltük. A szubklónok ízctípusát, as alábbiakban leírt ELlSA-val határuziuk meg.
AzjT4£dfeüjmíií(^^.izm
Az izotipus analizálására szolgáló ELISA kivitelezésére. Nunc Maxtsorp EÍASA-leme? egyes lyukaihoz 100 μΐ. foszfáttal pvífterelt sorúdéiban íPEAí elöott, 100 ugönl koneentrae-vban emberi Ec ellesi antitestet (Jtícksott hnmnnoteeaíeh. Ur>· bnnc. Pennsj Ivama, USA? adtunk és 12 tárán át, szobahőmérsékleten: jaknbáitufc. Mintán- a lemezt csjtkeszerantmü (2Α>. 1 tie Technologies, Psístey, Skócia) és Ttvses-SŐ-al (0,05%) kiegészített PSS-sel (PBSTO blokkoltuk, az egye» lyukakhoz a tenyészet felöfezóiból vett mintákat .adtok. Másfél Áfás 1 nkahálás- níá®, a lemezeket mosbak és a Irakakba -alkalíkus (öszláíázzai kerti egált egériariM'gö 1 ci (Zynmá, plaaís, landt, vagy tormaperoxidázzal koxyugált cgér-a-ílalgGO-at (Zymsd) töhSd&k, Egyórás: mkubálás után, a lyukakat u-osink. majd a gyártó útmutatásai szerint itozzáadísk a szubsatrátumöt (ABT5; 2,2'aziítofeísz-3-eidbvn/uazoHn-sztj|fonsav) és az smlfest kötődését 495 ntn-ea, EL8Ö8 LLÍSA-teolvasófean (BícTék fsstrnménís, W-trnoskt. VT, USA) értékeltük.
anritestekeullwspecifkltása
Ahhoz hogy it-15-re spee-tikn'. amitexA textntasan kópss®^ legyenek működni, és it-15 által indukált gyultadáskekó hatásokat gátolni, a.-· antitestek nek lel keh ismerni az lL-15-nck az IL-2R3-iás;c és/vagy az Π..-15 receptor y-iá®ca közötti köicsőnhatáshan résztvevő epiíbpjait.
Mutáns fefeértélíst (lásd Petiit és mtsai.) alkafetazmsk az TE-15 -ellem teljesen emberi antitestek - 140137, 145115, 404Ab és 4Ö4E4 - epdóuspeíóEciidsásíík értékelésére. Az alkalmazod IL-15 mutánsok közé tartozik a QfÜ8S(a 108. helyen lévő Gin Ser-re csereivé; mutáció a y-iá®c kőiesofthatási helyen) és aDSSQMS (a 108. helyen lévő Gin Ser-re cserélve és a 8. helyen lévő Asp Ser-re cserélve; mutációk az IL-15 3 és y-láneának kölcsönhatási helyén) 1L-15 mutáns.
hb_Vjc^\ uifkos__ -OB' ,14 LA 40-i (A e·, 4< 414 entiteyojnl «Jw mm, ο Τ I' tel e^síc, történő kötödéséstek iheghstározására szolgáló ELISA
As tITSA kivitelezéséhez. Musté- ELiSA-lcs5.es egyes lyukaihoz töö μί, foszfáttal paribreh sőoldatban (PSS): oldott, 1 trgms kc-ncerí-ráekg» IsIE-LS-öt vagy mután» 011.45 fehérjét adtunk és 12 érán át, -\‘\4mm<'<ketem -«af'uiuk Vexac .. emud mmw ’,ηοχξΐ-,2\\ I ttv %%bnv\\£.,.% Pa.Uw S\0v3>,s Avee®-20-al 10,05%! ktejteviu-tt PÖS-svi (PBbfO MckkoRak, maid a hlI-15-re '.pecíriku.' an-iiestekhc: ke szült higltási sorozattal inkabáltuk. A lemezeket mostuk és PBSTC-ben 1/5(8)0 arányban oldod, lorstaperoxidászal korgugáh cKtmberi IgG-t (.laeksaa InnsurtoRcsearéh, West Grove, Psnnsylva®)®, USA) íidtusik a lyukakhoz, Egyóms mkubáhís után, a lyukakat mostuk, majd a gyárrá útmutatásai szerint hozzáadtuk a •SBübsastráíamöt (ABTS:; 2(2’:-,wmobm4-'-«íiíben!ri:ta&üb‘Szulíomsv> és az antitest kötődését 405 nm-en, ELSŐS
1001874 Ö45/SG
-4)
ELlSA-leolvasőban (Bks-Tek Instroments, Winooski, VT. USA} énékehük.
Az IL-15-re specifikus, teljesen emberi I46B7, 14ÓH5, 444AR .es 4Ö4E4 antitestek hit- 15-hoz és QICÁS, illetve D8SQIÖ8S mutáns 11.-15 lehériékhez történő kötődéséi az 1. ábrán mutátjők be. Se»! a. I4ő87 se® pedig a I4ŐH5 sem volt képes kötni ezeket a inntáns ÍL-15 fehérjéket. MiVél nnndkét nmtáus hordozza a QiOdS mutációt, a 1468? és 146HS által felismeri epíióp az it-15, az Π..-15 receptor v-láncával köicsőtJitatásba lépő kritikus doménje® beiül található, A 4Ö4A8 és 4Ö4E4 képes köb» a mutáns fehérjéket ezért ezek az antitestek az 11..-15 p és v-táneászk kölcsönhatási helyé»: kiéül eső epböpet ismernek fel A. 14687 és I4ŐH5 sz 1L15 receptor γ-láncávai kölesőrtbatásba lépő régiónálköti az ih-15-δί, Bzegsl\ -ag a találmány szeriíbh ÍL-15 elleni teljesen emberi antitestek alkalmazásával végzett: prcilforáciős: vizsga v ' n \< ármazó adatokkal Ahogyan az alábhinkban részletesen leírtai, w'ra a 4<M \X sem pedig a 404E4 setn képes gátolni a CTí.l.-2-sej;ek és «mberi PShíC-k ít-15 által indokait pr<'i'f«avfo»í!, Továbbá, az íl-15-nek az 11,-15 receptor y-láncávai történő kölesőnbglásáríak blokkolásával: kikerült gátolni a proliié rációt.
ő. példa
AJáóHVAteésVK.régtoiái.kódpió szekvenciák
A ;~teö7 átíendeeett \\( és VL doménjesnek nukleotid- é.« következhetett mnínosav-szekveseláját az alábbi eljárásokkal határoztuk üteg. E szekvenciák információt szolgáltatnak az alkalmazod ¥H és V·, . osiravooat-csaláefokkai kapesoistban; s osiravoaal-szekveneiákban elöfotdnlö ponítnutéciók az állat immunizálása sói » ali sojfek aSrnhásérésének eredménye.
Í\\S-preparálás iehes RMS-í prepútáltonk 5* I Öf' 14687 bibridéma sejtből RNAzo! (Bionesesls, Psole, Angisa} aikaltuazssávah a gyártó átmutatásaí szerint.
A 1.468 -W :'Zam»:ze KNS-höl (3 pg teljes RNS) AMV reverz tonsszkripínzy portér (Roche Diagnositss mnfokh Mannáé»» \,» ei-w/zz) s'tgo dffi 1 (Pronega, Mados-st, V.L 1 SA), dMf (Fhet.i.nge. \knfoeuu Corp., USA}: és RNAsin (hromega) alkalmazásával készítettünk cDhiS-t (a gyárié? úbnoíatásai szerint).
Az alkalmazott láncfedkó-párok:
Ve
FR1 5’ láscínáitóh (31 (3)
A8Ő2 CAg gíK CAg CTg gTg CAg TG A863 :SAg gTg: CAg CTg KTg gÁg TG AfíóS gAg gTg CAg CTg gTg CAg TC
V„
14} (5) (ö) .(73:
th) leader 5’ láneinditók:
AGA5 ATggAC Tgg ACC Tgg AgC ATC ABhö ATg gAA TTg ggg CTg AgC Tg: A887 ATg gAg TTT ggR CTg AgC: Tg Afíhk ATg: AAA CAC CTg Tgg: TTC TTC AB89 AT g ggg ICA ACC aCC ATC CT
VH 3’ láneindstó 19} A890 F < ‘' \g ggg e \ \ gAC CgA Tgg
Íöi}Ih?-lÖ45iSG
V..:
ERI 5' táneirtdliók
Gi | ABS | RÁC ATC CAs Aís AYC CAz IC |
C) | ABO | gYC ATC YRg Aíg ACC C.Ag TC |
P) | AB 10 | gAT Λ ΓΤ zTg ATg ACC CAg AC |
14) | AB Cl | gAA ATT g'íg I Tg ACR C Ag TC |
0) | ΛΒΙ2 | g k.A \ ΓΆ g ÍR .Víg Ae A C Ag FC |
yi | ABC | gA Í gTT gTg A í g ACA CAG TC |
í?) | AB 14 | gAA ATT sTg CTg ACT CAg IC |
Vx leader láncittóílők:
(8 ? AB 1.23 CCC gCT Cag Cí C Cí g ggg GTC CTg (Ö! AB 1.24 CCC TgC TCA gC Ϊ CCT ggg gCT gC (10) EB EB CCC AgC gCAgCT TCTCTT CCÍ CCC gC
01} ABÍ2Ő ATg gAA CCA Tgn AAg CCC CAg CAC AgC
V,. 3' iáneiuditó (12} EB 16 Cg g gA A. gAÍ g AA gAC Ag A Tg
CCTtokt/B <-O < e tolv.to. η P dvCEUSE B'B
PCR-reaksriókat Amph/ÍAu vvírenzzal {Pemn-Eímer) GertoAntp PCR. System C'öO rendszere© í\ - ι ι' λ •'phed B os.'-C r*> k >- ervatv. t,A. LtoAt vegemk.
PCR-Gkhix:
44»e | 2 pere | ||
; 1 ciklus | orc | 30 tnp | |
BE/ 72°C | // mp. mint 30 top | tsz CC | |
30 ciklus | ACC | // mg | |
>5eC | 30 mp | ||
72Χ' | 30: tnp | ||
32:,C | 10 perc |
Intés-CC-s-a
A Vues VuÁCók któEXgaúgtpCmΓ- V<yÍ<;r.Systgni.Cbe
Miután a. PCR-temékeket agazézseíett analizáltuk, a ieraxékeket 8-400 vagy 8-300 mifcmcesjtriíuga oszlop (Amersfeant Pbamacsa Rinteeb -te,,. Fwafomy, Mi, HSA), vagy a Ql.AEX H Gél Extraction Kit tOíagea CmbH,: Hilden, Németország) alkalmazóéval ssztitoiítút, Az egy es kísértetekhez. 2, egymástóliüggedeaül, FI vagy ieader iánertuldókkal atopiüikáh, A/í: és Vt régiót tartalmazó PCR-terméket pöEMT-Vector Systeto Ebe. (Rrötoegá) kiósyzttmk a gyártó útmutatásai aluppm,
E. coli ÖHSa-ba történt íransziltrmáiás stán, egyedi telepeket szkriueltünk koitóríia-BCR-rel T? és SFÓ láneinditék alkalmazásával (30 ciklus 5S°C-0K}, Egyedi telepekből plazmiá-DbiS-t preparáltunk <<Jisgexs Spin íslaiprep kit: Qtageni. További analízis céljából Neel/Metí enzimekkel (NE: Biolabs, Egyesült Királyság, és
Roehe Dsasnosíies} emésztést végeztünk és a kapott Slagmentonsokní agarqzgéles analizáltuk.
Í00187-1045/SG
A pi iF MT- Ve. Sor '•'Vsicm 1-be ionosst k lenn Art. kendő·.')'! a Y ϊ .'-.dokaí p'.\>/ek\ c-saltnk !' es '<p:. láncindfiékaí :(&rogentee, Lóik, Belgium; alkabnazlattk az ΛΒ1 Prisni StgDye Terminator Cyele Ready Reaciloa O ( Applied Bíosystems, Wamagmn, Egyesült Királyság) szekvenáíó készlettel kombinálva, a gyártó útmutatásai alapján. A reakcióka t ABIRRiSM 377 Szekvenáíó berendezésen (Applied Biosysiems) végeztük és a sz-.'k.emrn-m i l)\<Sü·, Kvsm.mli orograrnsral anakí-aknk ' vvo.'Mk! \B\St N.s ouwn.” cpe.üam.ae.uk.siínt-dots/pnbisí.' itató htot), cakavonal-eredetö V-gén szekvenciákkal egyeztettük.
A ΜόΒ V, e» V - régióinak.kl^czástó
A 4ί'&-* t jbj xlómábót származó V és VL régiókat BCR-rel ainpltfikáliuk és a eDNS-szekveneín meghatározása céljából pGEMT-Vector System 1-be klotx'Puk. A nukleotidszskvaueiákat és mrazokből következtetett. amínosav-szokvencxákat a 2. ábrás sa szekveiujJt»tafean SEO ID No. 1. és 2. azonosúószámon megadott szekvenciák) ás a 3. ábrán (a szekvencialistáb&n SEQ ÍD No. 3. és 4. azonosuószátnon megadott szekvenciák), tnegfeteioös, matatjuk be.. Az. ábrákon jeleztük a váz (FR) és a komplementaritást meghatározó régiókat (CDR). A VBASK-bes végzett egyeztetés szerisí, a I46B7 Vti régiója az alábbi esxravonal-eredetü családba tartozik: V)-f5-5í (VjéS alcsoport),/02-15/173 (D^-szegmentum), JH4b (1-H-szegmentum), A VBASE-ben végzett egyeztetés szerint, a 14ÓB7 Vt régiója az alábbi csiravonal-eredeíti családba tartozik: A27 (VAU alcsoport) és V (-1 :,;xzis.sn-emi.ms A '% és V:;;. dontenekkel kapcsolatos további írtferntációk a Rabat-ísle adatbázisban <hbp;//íítrtntrt:O;brttg.nwtt,edtt): vagy a http://VP3ss.com honlapokon érhetők- «I
6. példa
A 14687 kötési affistsdásának leljamzói
A 14687 affeitltásáttélsztní pfeztttonivzsnaáQás (SER) ellátással, B1ACÖRE 3(100 műszer alkalmazásával analizáltak a bienaolekuláos tchérje-kölesösbaíssok meghatározása céljából, Kimutattuk a bíomoleknla felszínhez történt kötődése eredményeként, a felszíni rétegben bekövetkezett tömegkoneeníráció-változás eredményeként az SPR-jelteen lőném safe'/ásokaS. Az: alíinltási az alábbi definíciók alkalmazásával fejeztük ki: kj-asszíxááeiő.s ráta konstans (M'!see'\k ky----d!sszoc.iáeiós ráta konstans (seck Ky-asszoetációs egyensúlyi állandó’-'ks/AílM'5); ésK;y--disszo<tö<<os ensólyí ί&ηύό^ΚΙΜ),
Különböző eljár ->kat Og, ztunk a 146B7 emberi 1L-.15 (810-15) fehérjével szembeni aOinítasának meg határozására, Két különböze ο ιόι (Itnmunex Corp., Seattíe, USA; Peproíeeh, Rocky Hill, N.t, USA; származó emberi rekombiuáus lt-»5-».v k, tx-Sölíouk CMS szenzorchíphez, A szenzorcbiphez kapcsolt vegyületet tekintetlek liganduntimk. Más kísérletekben hgasdumként 14687 antitestet alkalmaztok.
Az egyes kinetikai analízisben, attal-tzák vegyuletként 1:4687 vagy hll;.-15 a szenzordúphez kötött ligandamhoz való kötődését hasonlstoifetk Össze a 14Ö87 vagy ML-15,- mint analizált vegyűleteknék CMS -szetszorcblphez, mint referencia kontrolihoz történő kötődésé vel. Az analizált vegyületböl készült hígítás! sorozatot (ó, 3,135, 6,25, 13.5,25. 50 ug/ml) teszteltünk, Langmuir i rt tuoddlhen, asszociációs és djsszöeíácíes görbéket illesztettünk monomer kölcsönhatás megtetárpeásátex a ks es fej: ínegáltaphásg. Illetve a KA és Κ» kiszámítása cellából. .Az összes adatot Rí \-i s rtnanen programmal (ver. 3.1) analizáltuk Btvalens kölcsönhatás esetén a „blvafeíss analizál? vegyüíet'' medel't alkahzsazmk. Az -analíziseket az alapvonal eltolódásához:komgátísk.
A 146S7 antitest alnoitásáoak meghatározására, B:1ACÖRE3ÖÓÖ műszeren mértüké. 14687 antitest affinitását két, különböző gyártótól (hnmunev és Beproteeh) származó emberi rekotnbináus ÍL- 15-hez. Λ ΙαΆ-Γ
ItgfíOdumkéni és a hí 1,-15 analizált vegyöleikén? történt alkalmazásával. meghatároztak a monot alens kekken1(101 Ó7-ÍÖ45/SÖ hatást (görbeillesztés, Lertgmtsif 1A).
Ά 1-W17 hit · 15 -re ílmotopox Corp.) vonatkozó atthátásál az alábbiaknak mértük;
Az ssszoGitóés sála konstans fe: i ,07 í±0. 17> * áÖ;' kf Sec!
A d-sszouaraes rata korstous fe r>,>ot~ts ,Wj * |G 1 s<o )
Az esszocláeids egyejrfelyi áil&rsdö KA: 1,55 feödll) * 10' M'!
A.disszoeiáciős egyensúlyi állandó Kö: 6,59 í±ö,á,fe * IO'S M
A I46B7 antitest affinitásának tneghaiárözásáta. i; gázáranként. IL-iS-öt (Tmmunex Corp,) analizált vegsáífetkéot pedig 14687 antitestet alkalmazrunk. A kapott adatok analizálásával (az antitest bivalens kölcsönhatására alkalmazod kstopnöir 11 1; /otimúluszíessel s meghatároztok az antitest aviálrását,
A HóB'T bO.,-1 S-re {Immuno Cotp.) vonatkozó avtditásáí az alábbiaknakmértük:
Az esszoéiáeiós ráta fcömtass· fe. 7.30 (:0),81) * W' M''sec':
A disszoeiáelós ráta konstans fe; I ,45 (±2,05) * ló sec'1
Az asszociációs egyensúlyi állandó K< 5,03 (±3,40) * ΒΙΑ·!··!'
A dísszociációs egyensúlyi állandóKt>:· 1,55 (i 1,24.! * lö'9 M
Meghatároztak a 14687 affinitását és avidítását a Peprotsch -től származó U,-ÍS-tol szemben is. A két különböző forrásból beszerzőit 11,-15 között az affinitás vagy svídítás tekhrfeíében nem találtunk lényeges kik lősbséget.
Ati,yrtao a Íeníi pzkkib.m. a Ct; 1 -2 tekm 1- es Pb\iC-knek az ettmert tnierienk'.n-;5 íltli- = 5? attd indukált proliterációjának 11.-15 elleni teljesen emberi antstestekkei való gátlására voaslkozőan leírtaik, pilóta iáin beépüléssel mértek szerint, a 14687. dózistól függően gátolta az II.-1S által indukált proliferácsőt. Az: 50%-os gátlásnál megállapított: ICfe. koncentráció - amely használhatóbb tnódja az e proiiferáerós gátlást kísérletekből az alllniías tneghatározásáttak - értékét 3.1:1:0,91 nM-sak számítóitok. Ezer; l€fe érték megfelel a BlACOlíE 30öÖ: rabszerrel méri; aviditáatíak ffey 1,55 aki) · ahol-a mérés során hgandumkent 14M37 antitestet, analizált vegyhletkéni pedig rekombináns IL-iS-ötaíkaimaziutsk - és Igazolta a kapod atfinhási es ja uh tásl mérési eredményeket.
7, példa
ΗΠ.-15 által indukált TAF-tz termelés gátlása 11.-15 elleni, teljesen emberi antitestekkel
V 11-15 olktn, til;es^n etttben. 140bA <4?1l5. -k'd.ád es 4ö~I * antstextes hatas.it \t Simlnts TT -1 * al lal iuáíAáli TNE-sz termelésre nézve, egészséges önkéntesekből származó perifériális vérből tisztított: raonomikleáris sejtek (P8MC) alkalmazásával az alábbi eljárást .követve. Áz: Tk-15-re votmlkozó sgeefficitás értékelésére, megvizsgáltak ezen antitestek hatását az Γ 2 a ml közveti tett 'WF-se tensteiésre nézve is, bej Penyészet \ enx (.v^uLt 2 fel . ct'ntr 1 \> λ! n fexm > ’ 1 « \í t.g ni -napion n t (I, ·. A Jen k<'?x fe'siev ,χ 1' os 1 >% tmd ra-tsx.v \x;a ? to jt.sran.moi <lo í fene 1 ul (Vi art. 1 mzo R. All-.64ö t :ipo Ida sban tartottuk.
Perifériális vérből kivont mononukleárís sejtek (P8MCT bsztitása t uxv.'temkho, ,? *. *\ ess. raxme ft - cm tor' sor g\« ttrutts „χ, t fe ez & koaguláció ellen, heparint adtunk, A T’BMC-ket bieoll (Pfeatmaekt, Ilppsala, Svédország) alkalmazásával végzett sóröséggradleos eentrifegáléssal íisAltoítuk,
1ÖÖ1A7-IÖ45/SG
-45Tesztyegyül&t:
1Τ1Ι.-Ι5. katalógusszáma: 687Ö-Ö11 (laununex Corp.. Sestile, WA,. USA)
ΓΊ << t -or Bei ek \ 3\ V' - orv η 8 n u i o
Az alkalmazón teljesen emberi antitestek: 14687 (070101 sz. iníniaj és 14óB7ItD.IWÖ7,404A8 (030:101 s/ «mifii o te0 (t sop I m.u'o * v tt pás -t. i1 ' . <n'test <4 Ή, ; h’gopg ntnas les tökké:
P8MC-t teuyészteitarüt háromszoros vagy négyszeres ismétlésben. 96-íyukü, lapöátésékü. lemezen, 1,5 * 10” sejt/lynk mennyiségben, bíL-2 vagy hit-15 jelenlétében vagy hiányában, .11.-15 elleni antitestek hozzáadásával vagy anélkül. Negatív kontroliként izotípus kontroll antitestet (TI) aikahnaztunk. A prolilsráció posniv kontrolijaként konkanavalin Att (2,5 yg.'ml. Calbiocbem) adtunk bizonyos lyukakhoz, A sejteket 72: órán át; 3?oCroa és 5% CQ> tartaiont mellett inkubáltuk. A felttlászókar összegyűjtöttük .azentberl TNF-« mennyiségének fiLISA-val :(ö-CyTech, (ilrecht. Hollandia) történő meghatározására.
A 14687 és az Izotípus fente!! mhitest hatásait teszteltük PBblC-khen a hlL-15 altul közvetített W-a termelésre. A 14687 dózistól fílggően gátolta a fill,-!5 által közvetett TNF-rt termelést, mig az izöítpus kontroli antitest sem gátolta a hite-15 által indukált W-a termelési (4, ábra). Két, egészséges önkéntestől származó adatokat nnhatink be. A 4Θ4Ε4 vagy a 404Ah arttest sem volt képes gátolni a blL-ld által közvetíteti: TN8-U termeiért
Az 11.-15 elleni antitestek specifikusságáííak megállapít cte-t ovimból, értékeltük az antitesteknek a hlL-2 által közvetített T’NF-ot termelésre gyakorolt hatását. A :4687 twt tettet: ki gátló hatást nklL-2 által közvetített TNE-et terme lésre (5. ábra), A 4Ó4F4 vagy a 4(4 A 8 antitest nem volt uepes: dózistól függő módost gátolni a hik2 által közvetített TAF-et termelést.
A. hIí..-2 által közvetített: TNF-o: termelés dózistól fiiggö gátlását csak a 1.4687 antitest: esetében tapaszisiink, míg a 404E4 vagy a 4Q4AS antitesteknél nem figyeltünk meg Ilyen hatást, A gátló hatás a hit- í 5-re \ oh specifikus; as IL-2 által közvetített TNF-ö termelést az antitestek nem gátolták.
6. példa
CTbte-2 és FBMC, emberi imerleuksn-15 (hlL-IS) által indtskáit prolífcrációjánafc gátlása 11,-15
Az IL-15 elleni, teljesen emberi, 14687.146145, 4Ó4A8 és 4Ö4E4 antitesteket teszteltük CTLL-2 sejtek: (öülis és ttttsúí. (167S) és puriléttáíis vérből származó menottuklsáris sejtek: (FBMF t hlitekuazásával T-segíek proliterációjái gátló képesség szempontjából.
A tenyészeteket .2 ?»M .L-gimatnínt, lÖöNf/tnl pemrillirtí. 100 pg/n-l steeutoroletat (Lile Toefemlogíes. Iktisley, Skócia jós lö%. hővel inaktivált ibetáii» borjászénnttot (HyCIene, Ut&b, USA) íartaíínazö REMI-164(1 tápoldaihati tartottuk.
A fenti: tápokkttban tartott CTLL-2 sejtekhez töillis és mtsai, (I$78) 36 Eteti hll.-2-t (Chiron Benelux
BV, Aatsterdttra, Hollandia) adtunk és s kísérlet megkezdése előtt hlL-2-re nézve 3-4 napon át: éheztettnk. Alkalmazás előtt, a CT11.-2 scpokot háromszor mostuk.
I00187-IÖ45/SG
Egészséges Snkmtosekból azok belegyezésével, friss, emberi véri gyéjtöttilstk, és a vérhez a koaguláció elten ’í'pjm', adtunk. Á PBMC-ket Fieoll (Eharötaeía, Uppsala, Svédország) aktaimazásával végzett 'Uririeggraötoos cerstrimgálással tisztítottuk.
Lyzri ogyumt fiit k&íaiógu^záraa: 6870-Oi 1 (Iramnnex Corp,, Seattle WA. VSA) fiíL-5 (Chiroo Bemste BV, Amsterdw, BoBandla)
A CTLF-2 vizsgáksibtos alkafenaxüt atsiiíestekei a 8: ábrás matatjuk be: 14ÓB7,146B5,404A8 és 4Ö4E4 antitostok,
P8MC vizsgálatban aikslmazois, 11,-15 ettem antitestek: 146B7 (070101 sz, nzisia), 404Á8 (03Ö1Ö1 sz. minta) és404E4 {080lö: sz. minta).
Az egyes kísérletekben a sejteket 5 * 103 sejtdyufc mensysségben, háromszoros isméöéshes, 06-lyukú lemezekre transzferáltok (hlt-2 vagy WL-15 jelenlétében vagy hiányában). A. proiiisrációrs gyakorolt hatás értékelésére a lyekakbm.a négy, IL·! 5 elleni assihesl valamelyiké: adtuk. A sejteket 37“C-on és 5% COj tartatom mellett ló órán át inkubáltuk. Begyűjtés (Harvester 96 Mach 11 M, Totmec, Orange, CT, USA) dóst 4 órával a sejtekhez f/Hj-hmídint (I pChlyuk; Aasmham Life Sciences, Liriie Cbaltont Suckiahantsbire, Egyesük Királysági adtunk.
Ahogyan a h. ábrán bemutattuk, a CTLF-2 sejtek 1L-Í5 által indukált proliforációja dózistól függően csökkeni a 14ÓB7 és 14ÓH5 aaSitostök esetében (lásd esőkként fííj-dmidia beépülése lecsökkeni). A 4Ó4A.8 és 40484 antitestek nem blokkolták a CTLL.-2 sejtek 1.1,-V5 állal indukál· prolr&ráráójűt.
PBMC-t tenyésztettünk háromszoros vagy négyszeres ismétlésben, 96-lyuhá, laposiéseká lemezen. 1,5 * 1 ír sejfelyuk mennyiségben, hIL-2 vagy ldL-15 jelenlétében vagy hiányában, 11,-15 elleni antitestek hozzáadásával vagy anélkül. Negatív kontroliként izoöpus kontroll antitestei (TI) alkalmaztunk. A. prtdribrácsó pezniv kontrolljaként konkanavalin A-t (2,5 .ugdnl, Calbiochent) adtunk bizonyos lyukakhoz. A sejteket ?2 órán át, 37’h''-on és 5%; GCF tortafos» mellett inkubáltuk. Begyűjtés· (Hsrvesier 96, Tourtec, örauge, CT, USA) előtt 16 érával a sejtekhez: l ’Hj-tlmldisí i i pCVlyuk; Ainersham Lile Scfesees, Iá: tte Chaitont, Bímkinhmsslnre, Egyesült Királyság) adtunk.
A 14687 dózistól 18^0 mértékben gátolta a ('kfi-iimidisrlL-15 álial indukált beépülései és -· ennek, küveikesíeben - gátolta a prohtorSciói (ÍCSíto3,110,91 n&í). A 4S4A8 és 404F4 antitestek nem blokkolták a FBMC, Π-lő ,'Jí.d indukált pm-ld.:á..i'í,tt koMbH kt.-«l.uk efedmetm» aiapiUti a I4mH5 untísesiet sem teszteltük. A 14o8~, -K»4\b es 4041% antitestek ILfiő-m vonatkozó speeidkusságának igazolására. ezeket az antitesteket az JL-2 alul köziemet: p-oiiteraetom is vizsgáltuk, A tesztek antitestek egyke sem gyakorolt kásást a.z il -.? okai közvetített proliién.,©:© abraks
Egészséges önkéntesekből, azok be i. 1 , unbes; PBMC ke! ab’tottonk elő.
146B7 antitest (MDX015 sz, prepa ,k s 0 edn Isv Milpttos. CA, VSA
100187-5 045/SO ,-41
X ,züv<.3x»nsd<.-' ‘ré '-H51 -Os/O’’ DMSO o<re < \> n*c \vgbetes! ms d „ » M
NMCOj-bas. <1 mgriní-es vógbigitás) oldoénk, Az: antitesthez (1 rel-ss oldat) mi&lgm^őWst ŐöO ul biotin oldatot adtunk (sötét. 2 óra, szohahömérsákloiíi, Aotiiest-bfetin oldatot. dializálmnk sltífe-a-lyzsr™ diaiizískazeiíábar. (I 0.000 MWCö, Piérix Fc-or A ,tw. ifelhisrdia) <12 óra, 4‘'€): a nőre kötődői? bintiaellávdn.is eclreM ó lakőv érkező napon, a bíotnikík antitestek k-wenu-acicjai speMTefouimetriasa! (Tsr^pee 2l OOpro, ÖD 280 nm) meghatároztuk.
.ferifértájnsyvőrsrekentésg
11,-15 redukálására, egészséges öítkéáiesektői vénás vért gyűjtöttünk. FBMC-kot ’vnvS/u-ttöHM. 2 mM L~ gfefamfof, 5 NBZm) penicillint, 50 pg/rei steepíomicreí (BioWhittaker Europe) ás 10%, hővel maki ivók loetátis x>n av unó? A' ito 1t24l \h t ,o ; V, t-οπ Inc > t\,\t> « v> RPMH'-.u „p<. ra.\u (Ro\\, ,tU.’i _ t topé) maximum 2 napig (3?*€), és serkentehtmk 500 NE. tat lFN-γ- vai (Boehringer sngelboim)..
Ámmlári, “jhiiökiod
A sej tehet 10% emberi .AS szérumot <CLB, Amsterdam, ifollMditt) tartalmazó. 2 mM L-gluíaminl, 5 NEvní penicillin!, 50 pg/ml streptorrdcins (BsoWbirtaker Europe) ás 10%, bével inaktivált (bétáiig- bojjúszérumot töptimum C241, Mulúcell, Wisent Inc.» kíegészttett RPM1-1640 tápoldatban (ösöWbíttafeer Buropei riöiokubáhuk. Perníeabíiízáiás f20 perc. 4nC, Cyrefi>;;Cyropertn':'í Kjf Reuott ö»vu sn \Ή>>, >o ( \tc Perm.AVas.h'-w pufíend (Cyiofix/Cytopesm™ töt) végzett mosás alán, a .PSkíC-keí: .áramlása euömetrssvsl IL15-fel festékük. A festési folyama? során a folyamatos penneahiiilást IVm Wa>h™ pylterrei (Cytofoc < stoportaM töt) biztosítottadé. A sejteket bsoti-tilált 1407 antitesttel vagy? bionntult hlg<~ri~el un.uhaltck (20 t g rel, 30 pere, 4*C) és Eezm/Wiash'·' púderrel mostuk, majd strepatavidia-ilkoer-friimei (D.AKl ?} nkubreiuk 50 percig (4°C>. Mintánként legalább 5001) sejt esetében, áramlási dtostelmvaí (FACSCslifeu, Bcuv) l >«. <re>.ors), monocitákxa kapuzva reeghttiárezíuk a fluoreszcencia intenzitását (CeliQuest Pro program a ka/nma-reai) kz adatok a serfcentósi indexei (SX) mutatják be, amelyet az alábbiak szerrel sztaitoKuok ki S l rtiuorecxenciára nézve pozitív festés átlaga í/fátlsgos báírér-fluoreszeenoía).
tatuimoifökémfe l ftrtc 5 «Onouhivbat Jcr\-.dri 1 > wtnuausrea te ,νπηυahboí < nxtun u<puaumma, k<v< tettunk. Miután 5 * 10* sejtet (200 ni) SnperfeostA-Pius mikroszkóp lemezekre (Meszel) centrifugáltunk, a lemezeket levegőn msgszáriíotiuk (<őö pere), 2%~os p&referrealdehid/PBS-ben fixáltuk (8 perc, 4®C), PBS-ael n őriül te'Vvuot o-e e. ttcgs l \ testi» <. ot s ^do^m prepantu toxat pBs Ko (t<' l s' ponti
PR8\ amit a festési folyamat ezt köveid részeiben aüdtatuutuik) penseabilizáiíuk. Az endogén peroxidáaahuvuas blokkolására, .a eiíespin preparátumokat 0,05%-os (\ \ h eltromsavfoszfát pnfferfees (pH 5,8.) hígított indrögátj-peroxiddal (:H?O'> refutökak <20 puse, s'vMu'wterselUen PBSS se! \ egerei mosás titán, az endogén bfetisaktivitási a gyártó msui,oa-re ihpym i<l<'kk»'ituk >,Βκ««.η Aleckmg Kn. Vektor ! ab.. DAKO). PBSS-sei végzett stoéás után, a τ cm spoeutkcs helyek blokkolása ve'rebol a citospir. prepirsiureokat 10%»os. PBSS-bes oldott A3 szérummal ív 18. Amsterdam, iktilandias reketölmk <50 perel Ezt tünetem, tt ritospiu preparátumokat bsetisrták primer antitesttel (b0 perc. .mhy-.'üSR-r'R'hk'í> PB^S-sel tegzes mosás utíre, biatiísiált iormaperoxkiázzal komptexalt rtrcp’uvdsanal (streptASOenplex HRP, DAtöri ? 1 Wö FHSS-bes, ·; 2% emberi ΛΒ szerűm t inkubáituk ?.'» pere, savhattdttteo-okteO. PBtbrt-sel u-g/er? mosás után, a IffkP aktivitás krereiatá11)0187- 1Ö45ZSG
-4§sára a etespín pteparátumokat á-atencMteíiikafbazollal (0.5 ng nh e* H<>, vei íő,01%) inkubúhuk 150 mM nátmmácefot puffer, pH 4Λ 10 perc, szobahemőrséklA), A dtosmn preparattnnokat cs<ápvizfeen moslak 5 percig, kéísstoxílrnnai (DAKOt festettük 1 percig, itejd isméi osapviZbcn mostuk 5 percig, és femmonnr-ha vagy glyeergel-be (ΡΆΚΗ» beágyaztuk,
Λ 14687 auátesí IFN-y által serkentett emberi tntxax'úakhoz való kötődéséi a tő. ahaa mutahuk be Sioimilált 1.4687 nem serkentett monomtákboz való kötődése muratía, hogy a sem serkentett pestekben 11.-15 vau jelen, fia a monocitákat serkentünk IEN~y~ve!, a 14687 antitest sefeteez való kötődése fokozódik, a kötődés maximumát: a. tenyésztés első napján érte el. A klsGl kontroll. antitest kissé kötődik a nem serkentett monocháktez. IFŐí-y-te « torlene scAejus esetén, az Fcy receptorok fokozott exgressziója a raoaoeitákoa a hlgGl kötődésének növeuc cse· v C5.% tw, luptagnátekémia
A 11. ábra bemutatja az emberi ntonociták · 4687-vel, vagy a hlgGl: kontroll antitesttel törtenő festödesét. A sejtek Í4687 antitesttel történt inknhálása után a citoplazma egyértelműen vörösre: festöéölt, azonban a kontroll: antitest esetében nem figyeltünk nseg ilyen jelenséget. Eszerint, a. snőnocitákban a 146B7 kötődik a klL-15-hűz és e kötődést fokozölag szabályőzödéit az IFN-y-vei történt serkentést kővetően, A 11. ábra szerint, az 11,-15: fesíödése elsődlegesen teracelluláris.
kémiával l®«őíggkofotek
Emberi psoriaslsös bőr — szövetmintákat: gyűjtöttünk az érintettek beleegyezésével (l.oalse Vílhdscn, Department of Itemaíology, Gentofe ünlvershy ffospúaí, Koppenhága, Dánia}.
1:4687 antitest (MDXÖIS sz, preparátum), Medarex: Inc. Mllphas, CA. USA.
N-hlőrosrszakeiniísido-biotlat (Sigma) először DMSO-ban (löö íng/sol-es végldalíás) ;maj.d 0,1 M NailCÖ?-ban (1 mg/nd-es végbigitás) oldottuk. Az átülteikhez fi ml-es oldal} nnillgranunonkéíü 6Ö0 gl fefotin oldatot adtunk (sötét, 2 óra, szobahőmérséklet}, Antitest-biten oldatot dializáítnak slide-a-lyzer™ ώ t /’4.< /< t ib m í ló Ή (. \l\sf o foerec °e to Su.eÍtee Π vundte ,12 esa s- < ' a f efn sete oh ' ot n est i sobtas vcoabol \ ífees etkez' f spnn <·. biosnolah ni Etetek kon,<.nu.EíOteí ^pekno'.otontetr.asal A loo-mce zlOOpro, ÖD 280 nm) stegbatározluk,
A vizsgálatig a szöveteket -8ÖcC-oa tároltuk, A felolvasztás utás, a szövetnretszeteket acetonban festek t í'\n v.t'twnv ..,>o es^^ot 1 ,o. »*ünk ptoxajo >\s ' Ί kkolav'm , musteteket 0,05%-os (v/v's, cilromsav/iőszfát pufferbea (pH 5,8,) hígított hídrogéa-peroxíddal (HAL) Inktibálfok (20 pere. szobanöntérséklet). ESS-Tsveen 28 oldatlal fPSST, 0,0554 v-'vj végzett mosás után, tsz endogén őfotlnakfeitást s gyártó úbn«tatásai alapján blokkoltak (Biottn Bloeking: O, Vector Láb,, DAKÖ). BBST-vsl végzett mosás alán, a nem spscí&ns helyek blokkolása céljából a szövetmetszeteket 10%-ös, PRST-beu oldott AB szérummal <CLB, Amsterdam, Hollandia} mknbáitok (30- perc}. Ezt kővetően, a szérumot télitaáuk és a metszeteket: 2% AH szérumot tartalmazó LBS-bes hígított, biotteiáli primer antitesttel »f>0 perc, szobaltomer1 Őiíl8?-.lí545/:Sős •49x ksí ί.-· ?3ö| λμ·> a ,ii bnfsmlA >·> « apOxoxidv zzvi κου.χιΙ >u*i}v<lnn,i (streptASContplex/llRR, DÁKÖ) (1: 100 FBb-bea, ·* 2% emberi AB szénán·) Inkuháltuk (36 perc, szobahőmérséklet),. PBST-vo vc„ ut mosás «táti, a HRP aktivitás kttnataíásáta a metszeteket 3-amlno-9~etiikarbazollal (0,5 !>!!,;<. 5 C> st. 0 ¢, lnne \A ó * ι ν'n tna ruift ’ fulu pH-u ö ’x-j, \mpmo5tk \;et> A ntefszetekeí csapv »κη mostuk 5 percig, hemato’uiianal tDAROt tetettük i percig, majd ismét ssapvízbsa mostuk 3 percig, és iáramouat-ba vagy giycergd-be tÖAROt beágyaztuk.
A psoríasisos bőrben tevő kumtinociták eiioplazmája, a I46B7 antitesttel teteti szövetmotszetekben egyértelműen meg festődön:, azonban a kontroli antitestek esetében nem a vizsgáit szövetben nem óg\ éltünk meg festödéss {12, abr&i a 1468? testi a psoriasisos plakkokbói gyűjtött, IL- lS-re nézve pozitív keseamoatakatí.
áJ*&gLÍlz*£<felgm^n.g&t^ íteűLYggDiteek feihovialis szövet - fiatalkori izületi esúzos páciensektől, áz érintettek beleegyezésé vek Imgyüitvs (Aiexei Orom, Dtvlslon of ftediatrie Rheumatoiogy, Chiliben’» Hosphal Modieaf Center Cincmnati, Öt!, US Aj.
Kermöma-biopteák - az érmének beteg;· e/cte el: gyűjtött szövetminták (totósé Völsdsen, Deparfnsent ofDenmaclogy, Genofte ( mterolv Itepna, C'ppennagtn tenia),
A1 au <visMl)\é is ρ?~ρ’ it! Mvkrev ,c AíiKus í, v (. S '
H6B7 antitest t 15-ÖORÍ>JWO? sz, preparáttm·; Mcns'ex 1 κ Mt p « s, CA, USA} az izületi osúzzal kapesoküns kísérletekhez,
Ikllfe^fefea^ffiLtó^^tó^Míá^kszwe^oitafótnárakfe
Friss sztnoviáiis szövetet gyűjtöttünk fiatalkori izületi csúzos páciensektől azok valamelyik tetessek sebészi eltávolítása és ínás Ízülettel történő helyettesítése cián. A mintákat, steril körülmények között:gyűjtöttük. A teljes sztnoviííHs szövetminta feisprháss után nyert fragmentumokat, az egyes preparátumok homogenitásának biztosítása céljából gondosan összekevertük. Az összekevert szöveteket <2-4 grati/állat; ottlanfcéut' löö: mg) SC1D NOD egerek Uackson 1. aboratories) hátába szubkután beültettük, A graft beültetés napján és a beültetés után 7, 14 és 21 nappal az egerekbe Ϊ.4687 antitestet <500 pg, hp.) vagy R8S*t adtunk be. Az Mátokat a. beültetés után 28 nappal elöltük. Szinoviálís gráf tokát metszettünk ki és fetmalmbas feáltuk Begtatöxilinkozíunal történő festés céljából,
SsjAlÁvertoŰ72b:SA!.Viyh:7SAlAAö.AlC.:fLCŰviji:>öAynöy7^zSryp;yv>
.MáésásdUüssW&áiásiüij&L^^
Miután a S€1I> egér és embert szirov i uk szövet alkotta kimérákbói származó szövetekről digitális képékét (2ŐÓ0A2ÖŐÖ, jpg) készitettünk (XIÖ objektív, Zeiss mikroszkóp; Axiovlsiou szoftvert, az adatokat szánd* tógéppel ansitzáftnk (Adobe: Pbottosbop ver, óik Adobe Systems, Monntain Vi«w. CA? és & felbontást IöÖfeSMÖ pixelre csökkentettük. Az.egye» meu/eteket beiül, hat Xlö mezőt választottunk ki ügy, begy azok a legjobban tükrözzék a képen lévő szövet általános teíödését, Az összes testődötf sejtmag kiválasztása (varázsvessző a sötét sejtmagon, lö-es tolerancia) mán, elkészítettük s kiválasztott terület optikai sűrűségi grafikonját és az átlagos festödest tntetizites rögzítettük {hssonló/kép hisztogramm (similarrimage hístogran?? utasítás kiválasztás» uhfe), Ezt köveidet!, kivátezíeítuk a hátteret és kvaniitesiíuk annak teíödését (varázsvessző a hátié1.04187-1445/80
50res, 10-es totemneia).. A festödés erősségét a sejtnmg festedáse és a háttér festőd黩 közötti külSöbségnek. vetítik Ezt az értőket neveztük tetszőleges egységekben megadott, fotokémiai indexnek. A bernulatott adatok átlagos adatok ds szók hibahatárai (s.e,m.). Az adatokat Sfodest-feie t-teszítel analizáltak.
: 'bfokLdkk^kOlfeAIAőAC bi- Α^ΛόΧ'.ί,.νΙ kom, v mu Ah m
Két páciens psoriasisos pakkjából származó fceratöma bioírsziákat .szétválasztottuk és C.B-i7 SCID egerekbe iJsoksoa Laboratories) transzpiamáimk. A transzplantáció után három héttel a transzpornál: egereknek BBS-t (oiaeebo), lő sápon át, minden második ttap lö mg/kg £sA-l (ciklospurin A) tSaadoz). vagy az: első napors 2í) mg/kg,. a R és 13. napos pedig 10 mg/kg 14ŐB7 antitestet adtunk be Az utolsó injekció atáa egy héttel az egereket elöltük, és az egyes xvnograftokhóí 4 mm-es biopszlát gyűjtöttünk. A biopsziákat formaimban nyaltuk, paraiBnba ágyaztuk és Heoratoxthtt-Bezutnai illetve Ki-b7 sejtmag-antigénre festettük.
feáAljfikálága
A BeHistosiiis-Eozinstd festett szöveteket az epidermisz vastagságára (utók a paraketanosís mértékére (0-3 pímtszüm) és az epidermisz felső rétegében a gyulladásos monónnkfeárís: sejtek számára nézve értékeltük. A Kr-ö?-re festett rtteíszeieken négyzettnillíméíereskéní tttsgáilapitoitnk a visszatérő kerafinoehák szántát. Az egyes, 4-4 egér alkotta kezelési esesportökm, középértákekei. számítottunk, és az egyes páciensekből származó adatokat átlagoltak, fo- s.e.sn.),.
A metszetek mikroszkópos vizsgálat® kimutatta, hogy a legsötétebbre festődön sejtek a beszűrődő sejtek közé tartoznak, fezért, a sejtmagok szántát (amelyet relatív felszánt területként mértünk) a beszőrődés mértekének tekintettük. A 14ŐB7 injektálása a gyulladásos szinovlábs sző veibe, a. hordozóval tőrtért kezeléssel ''s$zehasonllíva lecsökkentette a beszűrődő se jtek számát (13a. ábra. p-<0.05,!. A 13b. ábra illusztrálja a 14όΒ7 antitestnek az átültetett szlnoviáli» szövetbe történő aejtbeszürődésre gyakorolt hatásait, és bemutatja. hogy a hordozóval történt kezeléssel összevetve, a sötét nukleuszí tartalmazó sejtek szórna lecsökkent.
bCllfopsooíuds.nmdell
A 14, ábra mutatja be a 14ÖB7 astítesttfo kezelt vagy kontroli kezelést kapott SCID/psoriasis egereket A hordozóval (BBS) összehasonlítva, a 143B7 csökkentette a psoriasis súlyosságát: (amit az epidermisz sfestum coroeuru rétege és a „rete pefo'-ek kezdete közötti rész vastagságának mérésével állapítottunk meg) (14A. ábra):; PBS (177,:8442/2 um), CsA (91 ,0415,2 pm), 14Ő137 (ő2,349,1 pm). Az. epideinrisz siratom comew rétege és a „iteóí peg’y-ek legmélyebb része: közötti rész vastagságában is csökkenést, ügyeltünk meg (lőB. ábra); BBS (433,843:2,1 ^m), C'sA (393,8462,9 pm), és I46B7 (298,0433,8 pm). Továbbá, a parakeratesfe roétíéke csőkkent a I4őfe? kezelés: eredményekést (14C, ábra); PBS (:1,0:0.),4), CsA. (1,340.3). és 146B7 (0,540,3). Ezenfelül, tz ettders!»/ -e »o te operett a 1 46'te a gud ctta.os nonotukle.r» »epek tevmmt t i-d.5. aurai: PBS í53.3é 5,9 ínoooíu.k.e.om tett). CsA 5 '4»-sOS és 14éB7 ί 1 6,440.1). Az emberi Ki-ó? ieheríe expressziója szorosan kötődik a sejtek proliferáciéjáboz. Az interiázis sorún, az antigént kizárólag a sejtmagon beiül lehet kintnlafei, mag obtöziskőr a fehérje legnagyobb része: a kromoszómák felszínére kerül. Mivel a Kí-67 fehérje a sejteikíus összes aktív fázisában (6(1 s, S, ö(2), és mitözis) jelen vas, de a nyugvó sejtekből (6(00 hiányzik. s.,’,zio ma ke; om tea t settpopulecío u.}omérett nosCxedesr fe/isunk ov-’batm' mted'o' \ cteAkenu a Ki-ő?-re pozitív. keringő kemtínoteták számát (lőB, ábra): PBS (247,9477,01, CsA íl 16,0±24,is, és felóB?
(73,849,9),
100187-1045/SG
V zt ,j! v υ v i p n\á. >v.i,\.n a 1l'iH ; -, ,. \· , xe^yut ke te ,s n ,< < \ rhi L \ s sejtek feexzúrődéséí a gyulladt szövetbe. Továbbá, beültetett, .emberi pscrustaov ^lakkokat tartalmazó SC1Ö egerekben, a CsA-hoz képest n 146S7antitesttel végzett kezelés csökkentette a psoríasis súlyosságát Valóban, a 14ŐB7 antitesttel végzete kezelés eredményeként a gyulladás. a* sptéetnovz vastagsága, ax osztódó keratlnöcnák száma és tt parafceratosts súlyossága jelentős mértékben esőkként a? embert'8C1D egerekben.
Teszivegyület h IgG i embert kontrolt antitest (Sigma)
1-folP antitest - (MDAOIS sz. preparátum: Meáarex Inc.).
UL-lSHa-t köustitntivsn expresszál» Raji-sejtek (martin Glenrac, Téoovós Research Laboratories,. Sómbampfon General l-tospítal, Soatkainptoú, Egyesült Királyság}.
N-kidroxúzukciulmido-blotlnt (SIgma) először DMSO-ban (löd mgéml-es véghtgitás) majd 0,1 M NaHCOrbsa (1 mgónt-es véghígitás) oldottuk. Az aníilesiitez (1 ml-es oldat) miiiigramtttéfikéní bOÖ pl bíotin «kfeM adtunk (sötét, 2 óra, szobabőmétséktel). Aatitest-biutis oldatot uiaitzálttmk slirié-d-lytser^ dialtziskazctíában (IB.8ÖÖ klWCO, Pterce, Eerbio Science, Hollandia) (12 óta, 4aC) a nem kötődött bíolio eitávoiltás céljából. A rákövetkező napon, a blotlsllált antitestek koncentrációját spekbofoíometriával (Uhrosgee zlOOpto, OD 280 nm) meghatározni.
:41dígí4immgSLtLGjBIAi®^
Laijostenekh rniktöiitet-lemezekst: (Gremer) IL-lSRcí-val (BA.D bystems, Mínaeapobs, MN, HSA) vontunk be (12 éra, szobahőmérséklet), majd a kmmxeket PBS-set és csirkéből származó szérummal (2%> inkuháhuk (6Ö pere, szobahőmérséklet), A lemezeket PBS- >H \ >·ft 04»,, }v>zen 20: PBSTt mostak, ért kővetően különböző hsgitású, Jeteden Ι:1,-15ό1 (50 pl, femwsm Seat.le. I '-uV mkúbáltuk. Tíz perc múlva, különböző kooeenmiciójú bioíiiíitált.antitesteket)5u pl)adtunk:a lyukaknoz vX> posees inkubálás, szobahőmérsékleten). A lemezeket PBST-vel mostuk, majd: PBST-C-vet (PBST és 2% eshkeszérum) 1:10000 arányban higitott strepíavídm-retekperoxídáz komplexszel (CI..B, Amsterdam, Hollandia) Ínkubáltuk (óö pere, szobahőmérséklet). Végül a lemezeket mostuk, majd ABTS-sel (azinobisz-3-etlbenzt-azobn-szultbnsav. Rcche Ebagttosíics, Maratheim, Németország} ABTS-pufferben inouba. uk a gyártő útmutatásai alapján. A szinrcaketőt. 2%-os oxálsawal állítottuk te. A kötődést.405 nm-en, £í.Sö& EI.íSA-leotvasóijan (Bté-Tek Instruments Winooskí, VT, USA) értékelték.
Rab-sebeket löff-es összeérhet: AB szérumét (Ci.B, Amsterdam. Hollandia) tartalmazö FACS pullerbea (FBS. ο,ο5% BS A, 0.02% N&NO.) momkuhaituk (2» perc, 4Ύ1). Rali-seitekeí (1-2*10* setém!) íranszlétálbmk a lyvkaKba, és ezekhez Sóul, 10®/» embert AB szérumot íaffstmszé FACS pufférben különböző mértékben hígított IL-15-őt adtunk. Miután a sejteket 30 perein Ínkubáltuk (4°C), majd FACS púderben kétszer mostuk. a lyukakhoz 50 )d bsoiisdtálí wftteStet 04687 vagy hlgGí) adtunk és 30 percig ínkubáltuk (4°C). A sejteket FACS pufférrel kétszer mostuk, majd 200 pl FACS pufférben (elvették, és mintánként legalább SOÖO sejt esetében. áramlási eiíomeíriával (FACSCabóur, Bestén Dickíttsott) meghatároztuk a íiuoteszeencia intenzitását
1Ö0137-1045ÍSÖ
3?, (ÜeBQsmt. 'Pro- program aikabmízásáva®,. Az adatok a serkentés! indexei mutatják be, amelyet az alábbiak: szerísc számítoltunk ki: S.L ==: ttiuareszetrociárs nézve pozitív festés átlagaid adagos háttér-duoreszceufiiai. BUSA
A LléS? antitest IL-lő-fL-íSRa komplexhez való kötődését EUSA-hsn a 17. ábrás mutatlak be, A 146® 7 kötődése nő a reeeptöránoz kötött IL-IS konceotráínbinak növekedésével.. A kontroll antitest nem kötődőit az II.-15-höz vagy i L-15R-hez.
A 14613? antitest. Kaji-sejteken lévő 11,-15-IL-ISRöt komplexhez való kötődését a 13. ábra ntaddid be. A 146®? antitest koneentr&e létől függő módon kötődik az IL-lS-lL-i SKa komplexhez, Megfigyelésem szermt, a htgG t nem kötődik a Kaji-sejíekeu lévő ÍL-15-11,- 15®.« komplexhez (18. ábra),
A 14.6137 képes kötődni a receptorához már kötődőit iL-15-sőz kapcsolódat. A 146®7 az IL-15 olyan en topjához. kötődik, -amely séta vesz részt az IL- 1 S-nek a receptorához való kapesolődásában.
SSStCZSMCTALXSSA
A).léte ÍS®, Eh Ab, ' <32® » EtSSW MBIWS3EA AgEEO'flA :A3A 3ATSALLÉKÉ® 23 Ofe-íő! <3Ó0> 2A0-02hP:2 <350> ÖS 60/ sí 4 /EB --'3,- 7001-08-20
ALőöo 4
Al'7Ő:> EASASEó EB BBSOfáíWS YőASAtM A ,2 <2: lí> 1 <22 I> 330
A202V ÓLA
-íLOÁB LAKK ΑΑΚΕΕΚΕ
SZZ: o:v <221:> 2LK
-<222:> U)< . . í 320) <4000 I lM)187-104:5/Stj
999 Qlv 1 | 9^9 V.%1 | tag ctg gtg cag tet aga | Alá | gag gtg aaa rag cec ggg Glu Vai Lys lys és©· Gly | 989 Gl« | 48 | ||||||||||
Gi® | Lse Vai Gin 5 | W | siy | |||||||||||||
10 | 15 | |||||||||||||||
tefc | ctg | as.g | etr. | fccc | tgt | 83$ | gtt | tet | gga | CISC | tec | ttt | ac© | ecc | tag | 98 · |
Ser | Lea | Lys | Iie | Ser | Cys | Lys | Vaj. | Ser | Gly | Tyr | The | Aha | Thr | Thr Tyr | ||
20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
T93 | at© | 99© | tgg | gtg | epe | cag | afeg | ccc | 999 | aaa | get | ctg | gag | tat | atg | 144 |
Trp | 22« | Gly | Trp | Val | Arg Gin | «et | Vro | c.iy | lys | Gly | Lee | Glu | Tyr | hét | ||
35 | 48 | 45 | ||||||||||||||
999 | at© | éte- | tel | cet | ggfc | gsc | tet | gat | ace | aga | tar | agc | cég | tec | tt© | 192 |
W | Ize | lié | Tyr | ?» | Gly Asp | Sex | w | Thr | Arg | Tyr | Ser | Fr© | Ser | Phe | ||
52 | 55 | 60 | ||||||||||||||
sas | ggc | es© | gtc | se© | at© | tea | ÍJGC | gac | tag | tec | atc | agc | sec | ©ce- | ta© | 240 |
Gin | Őíy | Gin | val | Thr | Iie | Ser | Al® | Asp | lys | Ser | 11® | Ser | Thr | tlié | ’lyt | |
SS | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
©tg | eag | &99 | agc | ege | ctg | aag | gcc | teg | gac | acc | gcc | atg | tat | ta© | tgt | 288 |
Leu | Gin | Trp | Ser | Ser | Lee | Lys | Alá | Ser | Aap | Thr | Alá | hét | Tyr | Tyr | Cys | |
05 | 98 | 95 | ||||||||||||||
9©9 | &g® | 999 | W | aac | tgg | esc | tgc | ttt | gac | ta© | tgg | gg© | cag | gga | ace | 338 |
A.lh: | Arg Giy Gly | Asn | Trp | Ast. | Cys | Fbe | Asp | Tyr | Ttp | siy | Gin | Giy | Thr | |||
100 | 105 | 118 | ||||||||||||||
ctg gtc | aee | gtc | tec | tea | gr© | tec | acc | s&g | 99© | CCS | te© | gt© | tte | ee© | 384 | |
leu | Val | Thr | Val | Ser | Ser | Aia | Ser | Thr | Lys | Gly | Pro | Ser | vai | Ft© |
US 120 US
Ctg «03 Lee Alá
130
39© <2'iŰV 2 <214> 132 <212> 3®3 <333> 12330 3A2122S <4203 2
Giu | val | Gin | Leu | Val | Sin | Ser | Giy | Alá | Cin | Val | Lys | lys | Pro | Giy | 01© |
1 | 5 | W | IS | ||||||||||||
Ser | Leu | Lys | lla | Ser | Cys | Lys | Vei | Ser | Gly | Tyr | Phe | Ah® | Thr | Thr | Tyr |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
2rp | 1 le | Giy | Ttp | Val | Arg | Gi© | két | Pro | Sly | Lys | Giy | len | Glu | Tyr | Ne© |
35 | 48 | 45 | |||||||||||||
GIv | 12® | Tle | Tyr | Pro | Gly | Asp | Ser | Asp | Thr | Arg | Tyr | Ser | Pr© | Ser | Phe |
.90 | 55 | «8 | |||||||||||||
Gin | Giy | Gin | Vai | *XA>A? | 12« | Ser | Al® | Asp | Lys | Ser | Tle | Ser | Thr | Alá | Tyr |
83 | 7(3 | 75 | 00 | ||||||||||||
Lee | Gin | Trp | Ser | Ser | Lee | Lys | Al® | Ser | Asp | Thr | Alá | hat | Tyr | Tyr | Cys |
SS | 98 | 95 | |||||||||||||
Al® | Arg | Gly | Giy | Ash | Trp | Asn | Oys | Phe | Asp | Tyr | Trp | Gly | Gin | Giy | Thr |
100 | 103 | 110 | |||||||||||||
Lep | Vai | Thr | Vei | Ser | Ser | Aia | Ser | Thr | Lya | Gly | Pro | Ser | Vei | The | Ft© |
125 | 120 | 125 |
len Aia 130 <3i3> 3 vilii- 333 <2i3r 223 <233.> 3220 3221323 ;0öi 8 7-3 045.33
-S4-
<222 | B G | SS | ||||||||||||||
<22:7 | B i | 37 . . | , OB | 57 i | ||||||||||||
<BÖÖ> | ||||||||||||||||
gaa | art | 2&3 | fefcg | a cg | cag | fcct | cca | 39« | aee | CtS | tét | ttg | fcct | cca | ggg | 48 |
Gio | Hs | val | Lea | Thr | Gin | Ser | ©ro | Giy | Thr | Fee | Ser | Lse | Ser | Pro | Giy | |
2 | S | 10 | IS | |||||||||||||
gae | aga | gcc | acc | efct | tcc | tee | «39 | gcc | agt | cag | agt | gtt | <&<$c | aga | sec | .95 |
Glo | Atg | Alá | The | Lse | Sár | Cys | Arc | Ál a | Ser | Girs | Ser | Val | Ser | Sár | Ser | |
20 | 25 | 38 | ||||||||||||||
t®C | fcta | gcc | tgg | fcac | cég | tag | aaa | cet | ggc | eag | get | ccc | 399 | ctc | ctc | .144 |
Tyr | LöO | Ála | Trp | Tyr | Gin | SX»· | Lys | ©ro | Giy | Gin | Alá | Pro | Arg | Leó | tea | |
33 | 48 | O | ||||||||||||||
stc | tat | ggt | goa | tcc | ege | agg | cet | ast | ggc | atc | cca | gac | agg | ttc | agt | 152 |
iie | Tyr | Giy | Alá | Sár | Arg | Arg | Áia | Thr | Giy | lle | Pro | Asp | Arg | ©he | Ser | |
58 | 55 | 88 | ||||||||||||||
9§':C | agt | 85§ | tét | 9W | aca | gac | ttc | act | ere | acc | ate | agc | aga | ctg | S«3 | 249 |
Giy | Sár | Giy | Ser | Giy | Thr | Asp | The | Thr | Fen | Thr | lle | Ser | Arg | Lee | Gic | |
65 | 73 | “S | 80 | |||||||||||||
cet | gaa | gat | tett | gca | g”3 | tat | tao | tgt | cag | egg | tat | ggt | agc | tea | cac | ©SS |
©ro | Gin | Aap | Phe | Alá | Val | Tyr | Tyr | Cys | Gin | Arg | Tyr | Giy | Ser | Ser | öia |
85 | SÖ | SS | |||||||||||
act tfcfc ggo | cag | 333 | acc | aag ctg | 3»g | st* | sgc | ege | act | gtg | gcfc | gc® | 336 |
Thr ©he Giy | Gin | Gry | Thr | Lys Tea | Glo | lis | Ser | Arg | Thr | Vai | Alá | Alá | |
30 | 185 | 119 | |||||||||||
c©a tót gtc | ttc | ate | ttc | heg | 357 | ||||||||
©re Ser '«. | ©he | lle | ©he | Pro | |||||||||
US | |||||||||||||
<2137 4 | |||||||||||||
<2BB 139 | |||||||||||||
BB' FAT | |||||||||||||
<2 3 B ·· EEB'sö | SXETWiS |
<$8ΒΒ; 4
Glo | iie | Val | 1©W | Thr | Gin. | Ser | ©ro | Giy | Thr | Leó | Ser | Leó | ser | ©ro | Giy |
1 | 5 | 13 | 15 | ||||||||||||
Glo | Arg | Alá | Thr | Lee | Ser | Gys | Arg | Alá | Ser | Sin | Ser | Val | Ser | Ser | Sör |
28 | 25 | 30 | |||||||||||||
Tyr | Fsa | Aia | Trp | Tyr | Gin | Sle | Fyo | Pro | 81 y | Gin | Alá | Pro | Arg | Leó | Leó |
35 | 4 Ρ | 73 | |||||||||||||
lle | Tyr | Giy | Alá | Ser | Arg | Arg | Are | Thr | Sly | 11® | pro | Aap | Arg | Phe | Ser |
53 | 55 | 68 | |||||||||||||
Giy | Ser | Giy | Ser | Sly | Thr | Aap | ©ha | Thr | lao | Thr | iis | Ser | Arg | Geo | G.U |
SS | 79 | 75 | 80 | ||||||||||||
Pro | Giu | Asp | Phe | Alá | Val. | Tyr | Tyr | Cys | Arg | Tyr | Giy | Ser | Ser | His | |
55 | 38 | 93 | |||||||||||||
Thr | Phe | Giy | Glo | ily | Thr | lys | Lea | Cla | üe | Ser | Arg | Thr | Vai | Alá | Ai® |
108 | 1.0 5 | 118 | |||||||||||||
Pro | Sex | vai | Pne | iie | ©he | Pro |
115
BO187 -1Ö45/SÖ
AVATKOZÁSOK
Beiben X :M., Mattís R- W.s Fk'K'broáxm R, M., Tesser J. R„ SehíERL H.v Keystoae E. €,, Genovese
M. ü.., Waste M C, MereWd L. W , W<nvr 4, í„, Markéssuo J. aed Fsaois B, R, (2400} A eomparisoB eí elaneteept and methofcrexate in patienb Altit e&rly ritenmateid arthritis, H Esgl 3 Med 343. 1586-93.
Fe'nniger 7.A. and Ctijigturi M.A. (2001) Interleulán 1.5: bt Megy and relevaíice to hunján disease. Stood 97: 14-28.
fishwilá D.M.» OlVormel! S.t,, Sengoedtca I, Iludsoa DA , Hatdiag E, Besrthard S.L,, Josses fí,. R&y R.M.. Higgins K.M.. Schramm SLR. and .Laaterg N, (1996) Tiiglí-<tttd«y barna 'nmedösal aaiibodies front a növel stratn oímmiloeostrassgemormce. Natúré hioieekn. 19; 895-53,
Gilhs S„ Fenn M, M.. On W, and Sáriik K. A, i; 978) Teell gmAth í&ctor; paramétere of prodecíion ;rt;d a quaotítative niietOaxsay fos scíivby. J fowaaol7 29, 2027-32,
Kennedy Μ K . vi al i 10073 Keserűbb' deferri sn natural kdler and aiemen CO8 1 eell bneages m 1L15 de&teni srácé, I, Exp, Med, t9L 771-:80
Kásása, t, Vasaes 8, and Nielsers Ο. !L (1998) ínterieakm-15 and its roíe in ehronic inilannaatory dtseases, ItrOarenr Rés 97, 2854?,
Klippel.1. H, (2000) Bielogic thetrtpy ior rfeeataafoxd arthritis, 19 Engl JMeá 393,, 1640-1.,
Kóbier G. and MOstein C, (1975) Condanoas cnhtjres of Ibsed oel.ls seoteiing anabody of predelmed speciftetty. Narure 254: 495-7.
Liu C. C, Perussia B. and Young .1, IV (2000) The emergtsg role öf 8,-15 in NK-eed deveíopmsnt. ínmumoi Today 21, 113- 6.
Lövell D. .1., Gtannsni Ε. H.. líetfi' A,, CáwkweS G, IV, Sáh’eratm. El IV, Noéim.1. V» Síéin L, IV, GedsÜa A., Ilowtte N. T.. Walbee C, A„ Whittnore L and Étnek 8. R. (2000? Etanercept írt elbldren svíth polyariieular javeniie rfeeetnsteid arthritis, fsdiairie. Rbeansafofogy Coliadéra; ive Stndy Gronp, N Engl. 5 Med 342, 763-9
Matat R N, and Táyiör P. C, (2000) Ánti-eyíokise sherapy for riíeirnrttíekl arthritis, Anna Rév Med. 51, 207-29,
Moinnes 1. IV, al- Mugbales -V, Eteld M·, Leang 8, Haang f, P., DIxen R., Starrock R. D„, Wiikinsos 's G and Ltevv I 7 ;RGn) ; de rok-of tnterkusiír-15 ta 1 -teli msgsatton and aet \at^<n n rhennWosd a thrrm Mai Med 2, 175-82.
Mckntes h 8,, Learig. 8. Ρ., Smrrock R. ÍV, Ι-kdd M, and Liew F, Y, (1997) lníerleokin-i5 nrediaiss T eeSi-depenáent regaiahon of tumor necrosie feeíor-tdph» prodsetion bt rbesmntioid arthritis . Mai Med 3, 189-95.
MAnnex 1 8 and l ina. 1 V ίΙυ’-Α) loterieuk-n 15- 3 prosníbinsanory role m rheumatoid arthnu» syjtovitis, Inantmol Today 19,75-9.
Oppeaheimsr-Marks, et al. (1997) I Glia, htoestig. 101; 1261-72. Pefeií: D. K,, Rónáért T. P., Eisentnan .L, Srfoxvw» Pajtiért ,R., Bernt C., Lynch D,:,
Miller 8,, Yosí 3,, ömWsin K, H, and Gorslsotz W, lt (1997) SírtteOne-hmclion stúdiós of Inlerfeusis 1.5· astag site-specific matagenesis, pGÍyöthyles5© glyceí cosmgalieu, and bomology modelmg. J Bioidon 272, 2312-8,
Rrtehstz, et al, (1998) L hntsartol. lS0::5é59~íkk
Wakhnann T,, Tagaya Y. and Ramihr© R.. (1098) ínterle»kia-2, mtertekta-15, and their recepíors. Int: Rév imnmnoi 1A, 205-26.
Wítldímmn T. A„ Dubois·$. ttad Tagava Y. (2001) Contrasting RMes oFIL-2 aadTL-15 irt the Life and Fteaih of Lyeipboeyíes. Itnpiicaíioos fer lómrmtíSíhetupy. fomrurtity 14,105-110,
100187-1045·SG
-56Wakkoassa Τ. Λ, and Tssgaya V. t'l999j The utaltlfacesed íegtslaüoaof ;»t§rkakin-i5 expressz» and the mié oTtbis eytokíse In NK coli dinemriiaíloa and hőst fespoaa® to íraracelkibr pathogeas. Anno Kev Immunoi Π, 19-49.
A szakember egyszerű -rutin vizsgálatok siskán megbizeöywdhtü afelől» vagy nyilvánvaló szfeíárst hogy & uAia'ánv tri tvtnestetett, specitite toegvalőak&n soőáíaissk szásw ekvivalens® Khezüs. Ilyen ekvivs.lenseket az abhbs igénypontok magukban foglalják. Az igtóygmntokbaa lein magvalósítást módok MrmOyea kombinációja a blálssxáay okádni körébe ssrtoalb
Claims (5)
- SZABADALMI sCÉNYPONTOK1. izolált, emberi monoktonábs antitest, amely (<;) emberi IL-ló-böz kötődik;(bt aa 1 1. 1 5 áltat indukált gyidfedáskettő hatásokat. gáfebii képit»; és 5 (e) CDRI. CDR2 és CDR? &tnísöwv-w^wn«t^· ririateaző, emberi nehezfese variábilis régiét ésCDRI, CDR2 és CDR? ajamesav-szíekveReWw^mtó» ettőeri k&myfiláae variábilis régiót tartalma^ abol (1) a CD.R3 wíamv-writwróái. tarfeimaző emberi tfehézláos variábilis régió a szekvenolaristéhao. SEQ ID No. 2. szonosítószámot! megadott stntnosav-szekvencja 100-t07. aminosavait tartalmazza. és a CDR.3 aminosav-szekveneiát tartalmazó emberi könnyüíánc variábilis régió & szekvencialistában SEQ ID Ne.ΙÖ 4, azötiositószámon megadott aminos&v -szekvencia 90-9?. a-nínosavajt tartalmazza;(10 a CDR2 antinosav-szekvenciát tartalmazó etnhetj nehézi-inc variábilis régió a széki mio feli; táiiao Stl.Q 113 No. 2. azooosnószátnof; megadott armoc-sav-szekvcncia 50 óó. aminosavait tartalmazza, es a CDR? amirtösav-szókveneiát tartalmazó emberi köonyüiáne variábilis régió a szekvenciaüstában SEQ ID .No, 4. azonositószánxm megadott arotnossv-azek verte ia 5 í -57. aminosavait tartalmazza; és15 «ι ρ χ s'iOt' t,< is Nui'i.,! w '>),< ηΚ'?Λ v ?b '< sgiőn s/i'Ms\*e ;SFQ 113 No, 2, azonos kószámon megadott aminosav-szekvencta .11-35. aminosavait tarsairoazza, es a CI3RI amínosav-szekvííKiát tartalmazó emberi köttnyiilanc variábilis régió a szekveacialtstőban SEQ N? No, 4, azooosi'tószámon megadott annnosav-szekvencia z4- ?5. aminosavait tartalmazza.
- 2. Az 1. igánypottt szerinti antitest, amely20 (a) gátolja a ΓNF-α termelődést;(b) gátolja a 'r~sejtprohferá.riőí;íe) gátolja a keratmoeiták probteráctójáí; és (d) gátolja az akti vált Imikomták kemofexlsát,
- 3. Az I. vagy & 2. igénypont szerinti afeifesi, amely nem kötődik a mutáns 11,-15 QIÖSS és25 DSSQ10SS fehérjékhez.
- 4 Az eiöz.ö igénypontok bármelyike szerinti antitest, amely a szekvetxi3í;srában SEQ ID No. 2, azonosítószámen megadott iunt-xísav-szek-venctát tartalmazó,. emberi nebézlánc variábilis régiót és a szekvemrialistában SEQ 113 No. 4. azonosítósz&moxs ntegaóoit atninosav-szekvenmá· tartalmazó, emberi könnyőtáoe variábilis régiót, vagy azok konzervatív szekvvndamódoskásaií tartalmazza.30 S. Az előző igénypontok bármelyike szerinti antitest, amely antitest IgGl. ígG2, IgCfe, l'gCfe, IgM.IgÁC l.gA2, IgAstx, IgD vagy IgE antitest.6, Az előző igénypontok bármelyike 'szerinti antitest, amely Igöi nebézláncot és x-kötinydláncot Wtalmag.7. A;z efezó Igéttyponiok bármelyike szeristi asttltesk atsiely teljes sotifest,, amkesí-feagöifeittím vagy 35 egyiáséő antitest,S. Az elózó igénypontok bármelyike szerinti antitest, amelyet emberi nebóziánc-transzgént ós emberi könnyőláne-transzgént tartalmazó genomó, h&ttszgéttiktt?, etttbettől különbőzé állatból előállított B-sejt és órökéieril sett ínziójat tartalmazó hibridóma vagy emberi nebézláoeot és ember! kSnoy&láoewt kődoki wkieotidszekvettriát iarfelmaző tmaszfektőtna fentiéi.40 9. Az előző IgósypotAők Amelyike szerinti amim stsfeiy ferislww áh áfeifesi: soilgfet kőtő .rá58 szét id. ό; ν/ύ·.·,< eljárás, amely T-sejtekben vagy tnonociíákhao, I1..-15 áltól, de nem az IE-2 által, indukált TNF-« 'termelődés gátlására szolgál. azsu/ yede??;esve, hogy az. lb-15-öt az 1-9. igény port tok bármelyike szerinti antitesttel érintkemtjük.
- 5 II. /« ví?,-<> eljárás 11..-.15 áltól, de ttem 0.-2 áh.sl indekál; T-sejtpreiiferáeiő gátlására uerzzí/kke/ezve, ncgy m 1 9 bítí^^Kiks5· ttó-'f'u*'» ^s'íttí^Ltí Ϊ6.'ϊ?'λ„.ΐ cí*r.»k2^i»'tií.i k l 2. A 11 igénypont szerint; eljárás, ahol a T-sejtek pertíériáhs vérbői szármázó monotntkteáris sejtek tFBMC-ks vagy CTLE-2 sejtek.1.3. Emberi tiehézlátie-íranszgént és emberi könnyöláne-ímn-zzgéns mrtólrmtzo grmötrtú, transz,gérbkus. 10 emberi ól különböző áiletbői előállított B-sejt és őrökéietú sej; fúzsójál tartóbtmzó bibridótitó, ahol a hibridőnm az 1-9. igénypontok bártnelyske szerint; antitestet termel.14, Emberi nalteidáosot ós emlteri kösnyőiáneot kódoló ítókfebtsavtikíd tartalmazó trasaztektőntó, ahol a teaw4Wő.tns az; 1-9, igóiwbntok Wmsiyike szerish aerikatből ktmwtbato nmsmyisdgdi temek15, A 14, igénypont szerinti.ttanszfektóma, ahol a aaktemvak a szokvenclalistábatt SEQ ID ko, 1,15 sportos kószámét! ntegodott saukleotidszekvenciat és a szekvencia listában SEQ lö No. 3. azonositöszámon megadott tmkteotidszekvenciá; vagy ezek konzervatív szék venriaetódositásah taítóitnttzzák.lő. Az. 1-8. igénypontok bármelyike szerinti antiteste; expressz.;; lő, ttasszgénskns, e;nber;ői különböző állat, amelynek genotnis emberi nebézláo.e-transzyérti és emberi könnsdliáne-ttanszgém tartalma?..17 Eljárás az T-9. igénypontok bármelyike szerinti antitest elöálihására omö//etteo?;trtóy hogy 2Ö emberi nehézláne-transzgém' és emberi könnyű láne-Ototazgónt tartóimazó eenomó, iraoszgótriktjs, etnberlől kteőobOz.0 álhitből izolált és emberi íl..-15-;ei vagy ember'- il.- :5-ot ezpmsszáiő sejttel ímmmhzáii Bsejfeket mlelőma .sejtekkel Ibztonáitmk emberi, 11,-15-re spedíikt:;;, monoklonális antitesteket szekretáló, , A', , n' tV vtó,! 0Ύ ías ,' ?bo , 'x bo χ <, ’kií is >'pj< >< m >, nt eS 's a hibriáóma-tenyészet leitUüsZójábó; izoláljak az IL-IS-m speeiískm:, emberi monoklonális timheste08 g»t18, Az 1-9. Igénypontok bármelyike szériái! sntitaslet, valamint terápiás ágenst tortalmazó immunkonjngálwt19, A lg. Igénypont szermti Imn’tíakonjngáítsíis, amelyben a terápiás ágens immuossuppressziv ágens, etlc’oxikos ágens vagy & következők köztll választott gyuitodásgsdó ágensek bármelyike: szteroid típusú30 aytilittdásizálló ágens, nem szteroid típusú gyulladásgátló ágens vagy DMAKi>20 Az 1-8. Igénypontok bármelyike szerint! antitestet és gyógyászét! szempontból eliogoáható hordozta iartóbnazó gyógyászati készítmény.IN A 2ö igénypont szerimi készítmény, amely terápiás ágenst is jartulmiu.22 A 21. igénypont szerin;! készítmény, ameiybes az ágens Immwmzuppressziv ágens; antitest. 35 osoíiasis kezeiésdre szolgáló ágens; a következők közül váissztoti eytdladástohiő ágorss sztereód típusú gyoTiodásgó-tlö ágens er netn s:ztere;d típusú gyttlktdásgállö ágetis; a következők közül választott DMARD tütóoS'eváf, etanereepi és it; isis kunk', vagy a következő kemoterápiás ágensek bármelyüké: doxorttbiéto.dszplailn, bieomicin, kennosztiti, eikiototszEmrid és kioromboeU.22. A 22, igénypont széria; 1 készítmény amelyben az srortmaszuppreasste ágens elktosporm 41) 24, A 2.3. leészypöní szerimi készítmény, amelyben az at-ílies; CDn-re specifikus ;mt;te»i vagy IL-li-re fesast,25, Αχ M. igénypontok bármelyiké sxeriats aotkest emfe test terápiás kezelésének eijfefefess tőrisse staammx&stss,2 b, Az í< ggfeifeok bátmelyike szerinti antitest alkalmazása peoriafe feritig gymilfeeos bél5 betegség» rák, tmafeeetáelOe kifekőslés vssgy fertőző betegség kezelésére vstgy megelőzésére szolgáló gyógyászati kfelméoy gyfeásfe22. A :2ő, igánygcast szerinti aikeimsfe, fel ex feriris festi asáx,2b, A 2b, vegy 27, igénypont sxesmti sdkabwfe fed a Ategség kezelése va^t megelőzése aragábsa foglalja ttzás lerilgtás bgétts bettdfe Is.W 2§. A 28, Igénypont széfet slkalmafe ahol a terápiás sw a 22-24. igazygzmtok bármelyike szerint de&mUt,20. Sijáfe 11,.-12 éled kézfeitert Ategségaek IL-15 fegés vagy O-fe-őt efeesszáiö sejt jeleolétáoek kitmtfesával történő dlagsmfezákásártf mnfeam amely elléms sosátt a festet és akotmstü sfetét áz .1-9, sgfegs« «tfe felefed olyas kérifenáaynk kőxákérialkexseífefe amely fertővé feszi, hogy ex 1L15 IS A sx felest Azon fegdsz zfedjos fes és fewbfe « kamglex fefeéfe fel tt komplex klalafeásáfe a feda és a fetroll mfe kOzöfri fedés ez 1L-12 jekmléfére fe a mitnéfe,21. IWter, amely ax K Igéttypsemk bfealyik® sxoferi felest variábilis Agiéjfe kődoíő oakteotifeekveoeMl tfefesaa,20 22, A 21, tfeygwi éfettit mátleiosav χ .sxskvefetOsfebmt OBQ ID No, 1, <ezortőstfőszfe«z megfen sfesfefe a xfeAwfeOsfebán S8Q 02 No. 2, temafeémfeoe megfest sfeverssla, va^y ezek kottfe'fef v szeksmaekenbdosiiásal közti S választan otskfetrtiriátekvmsefet tartalmaz,22. Bapzassfes vekfe amely az K igfegafek bármelyike széfet antitest feeylBfefelg naifefefek vagy nehéz- és kfefefefek variábilis régióját kétfelé sfefefeefefeét tartalma^ fel a25 kfeyldfe rrnkkfedexekvefea a mzfeerfeltslfen SEQ 02 No, 3. ttxomfefeáomn saegfeit mfeösav» saekveaeiát mrixlmaz» és a rtehéxlám; onkleotiriszakveoela a szeksvfexlrifáfe ®Q ID Nő, l, aaxteosliőszámon megadott aodóosav-azeksametát tartalmaz,24. A 23, igénypont szeriről exptwxfes vetet htriafetxő nmzszlékiőma,
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US31473101P | 2001-08-23 | 2001-08-23 | |
PCT/US2002/026769 WO2003017935A2 (en) | 2001-08-23 | 2002-08-23 | Human antibodies specific for interleukin 15 (il-15) |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HUP0402653A2 HUP0402653A2 (hu) | 2005-03-29 |
HUP0402653A3 HUP0402653A3 (en) | 2010-01-28 |
HU229776B1 true HU229776B1 (hu) | 2014-07-28 |
Family
ID=23221192
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU0402653A HU229776B1 (hu) | 2001-08-23 | 2002-08-23 | Interleukin 15-re (IL-15-re) specifikus emberi antitestek |
Country Status (25)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7153507B2 (hu) |
EP (1) | EP1425389B1 (hu) |
JP (2) | JP4359503B2 (hu) |
KR (1) | KR100911951B1 (hu) |
CN (1) | CN100557018C (hu) |
AT (1) | ATE531390T1 (hu) |
AU (1) | AU2002332628B2 (hu) |
BR (1) | BR0212136A (hu) |
CA (1) | CA2456648C (hu) |
CY (1) | CY1112447T1 (hu) |
DK (1) | DK1425389T3 (hu) |
EA (1) | EA014802B1 (hu) |
ES (1) | ES2375271T3 (hu) |
HK (1) | HK1066828A1 (hu) |
HU (1) | HU229776B1 (hu) |
IL (2) | IL160358A0 (hu) |
MX (1) | MXPA04001486A (hu) |
NO (1) | NO333152B1 (hu) |
NZ (1) | NZ531211A (hu) |
PL (1) | PL217752B1 (hu) |
PT (1) | PT1425389E (hu) |
RS (1) | RS51829B (hu) |
SI (1) | SI1425389T1 (hu) |
WO (1) | WO2003017935A2 (hu) |
ZA (1) | ZA200401144B (hu) |
Families Citing this family (269)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2385745C (en) | 2001-06-08 | 2015-02-17 | Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. | Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies |
US7329405B2 (en) | 2001-08-23 | 2008-02-12 | Genmab A/S | Human antibodies specific for interleukin 15 (IL-15) |
JP4359503B2 (ja) | 2001-08-23 | 2009-11-04 | ゲンマブ エー/エス | インターロイキン15(il−15)に特異的なヒト抗体 |
US7247304B2 (en) * | 2001-08-23 | 2007-07-24 | Genmab A/S | Methods of treating using anti-IL-15 antibodies |
GB0208817D0 (en) * | 2002-04-17 | 2002-05-29 | European Molecular Biology Lab Embl | Method for producing monoclonal antibodies |
US8715664B2 (en) | 2005-05-16 | 2014-05-06 | Abbvie Biotechnology Ltd. | Use of human TNFα antibodies for treatment of erosive polyarthritis |
RS20050724A (en) * | 2003-02-26 | 2007-11-15 | Genmab A/S., | Human antibodies specific for interleukin 15(il-15) |
NZ570709A (en) | 2003-06-13 | 2010-04-30 | Univ Pennsylvania | Nucleic acid sequences encoding and compositions comprising IgE signal peptide and/or IL-15 and methods for using the same |
US20050123542A1 (en) * | 2003-11-06 | 2005-06-09 | Genmab A/S | Methods for treating disorders involving monocytes |
NZ554520A (en) * | 2004-10-22 | 2010-03-26 | Amgen Inc | Methods for refolding of recombinant antibodies |
JP2008523132A (ja) * | 2004-12-13 | 2008-07-03 | サイトス バイオテクノロジー アーゲー | Il−15抗原アレイとその使用法 |
MX2007015476A (es) | 2005-06-14 | 2008-02-25 | Amgen Inc | Formulaciones de proteina autoamortiguadoras. |
US20070190057A1 (en) * | 2006-01-23 | 2007-08-16 | Jian Wu | Methods for modulating mannose content of recombinant proteins |
US9399061B2 (en) * | 2006-04-10 | 2016-07-26 | Abbvie Biotechnology Ltd | Methods for determining efficacy of TNF-α inhibitors for treatment of rheumatoid arthritis |
US9605064B2 (en) | 2006-04-10 | 2017-03-28 | Abbvie Biotechnology Ltd | Methods and compositions for treatment of skin disorders |
US20080131374A1 (en) * | 2006-04-19 | 2008-06-05 | Medich John R | Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis |
JP2010518115A (ja) | 2007-02-09 | 2010-05-27 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗Robo4抗体およびそれらのための使用 |
WO2008154543A2 (en) | 2007-06-11 | 2008-12-18 | Abbott Biotechnology Ltd. | Methods for treating juvenile idiopathic arthritis |
JP5570989B2 (ja) * | 2007-08-31 | 2014-08-13 | アムジエン・インコーポレーテツド | 固体タンパク質製剤 |
CA2698809C (en) * | 2007-09-14 | 2023-10-17 | Amgen Inc. | Homogeneous antibody populations |
AU2008304111B2 (en) | 2007-09-27 | 2014-04-24 | Amgen Inc. | Pharmaceutical formulations |
EP3381445B1 (en) | 2007-11-15 | 2023-10-25 | Amgen Inc. | Aqueous formulation of antibody stablised by antioxidants for parenteral administration |
TWI580694B (zh) | 2007-11-30 | 2017-05-01 | 建南德克公司 | 抗-vegf抗體 |
EP2098536A1 (en) | 2008-03-05 | 2009-09-09 | 4-Antibody AG | Isolation and identification of antigen- or ligand-specific binding proteins |
CA2717905A1 (en) * | 2008-03-24 | 2009-10-01 | Abbott Biotechnology Ltd. | Methods and compositions for treating bone loss |
CU23716A1 (es) | 2008-09-30 | 2011-10-05 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | Péptido antagonista de la actividad de la interleucina-15 |
UA109633C2 (uk) | 2008-12-09 | 2015-09-25 | Антитіло людини проти тканинного фактора | |
WO2011014457A1 (en) | 2009-07-27 | 2011-02-03 | Genentech, Inc. | Combination treatments |
DK2473522T3 (en) | 2009-09-02 | 2016-11-28 | Genentech Inc | Smoothened MUTANT AND METHODS OF USING THE SAME |
WO2011050333A1 (en) | 2009-10-23 | 2011-04-28 | Amgen Inc. | Vial adapter and system |
ES2565208T3 (es) | 2009-12-11 | 2016-04-01 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anticuerpos anti-VEGF-C y métodos de uso de los mismos |
CN107095846A (zh) | 2009-12-21 | 2017-08-29 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 抗体配制剂 |
WO2011156373A1 (en) | 2010-06-07 | 2011-12-15 | Amgen Inc. | Drug delivery device |
LT2580243T (lt) | 2010-06-09 | 2020-01-27 | Genmab A/S | Antikūnai prieš žmogaus cd38 |
ES2647388T3 (es) | 2010-06-15 | 2017-12-21 | Genmab A/S | Conjugados farmacológicos de anticuerpos humanos contra factor tisular |
EP2625197B1 (en) | 2010-10-05 | 2016-06-29 | Genentech, Inc. | Mutant smoothened and methods of using the same |
AU2012236573B2 (en) | 2011-03-31 | 2016-06-02 | Amgen Inc. | Vial adapter and system |
EP2699293B8 (en) | 2011-04-20 | 2022-07-20 | Amgen Inc. | Autoinjector apparatus |
CN102250243B (zh) * | 2011-07-01 | 2013-08-28 | 华绍炳 | 抗白细胞介素-15抗体 |
EP2734538B2 (en) * | 2011-07-18 | 2024-07-03 | IBA Lifesciences GmbH | Method of reversibly staining a target cell |
US9987428B2 (en) | 2011-10-14 | 2018-06-05 | Amgen Inc. | Injector and method of assembly |
WO2014081780A1 (en) | 2012-11-21 | 2014-05-30 | Amgen Inc. | Drug delivery device |
DK2958941T3 (da) * | 2013-02-20 | 2019-06-24 | Innate Pharma | Forbindelse, der binder specifikt til kir3dl2, til anvendelse til behandling af perifert t-cellelymfom |
US10653779B2 (en) | 2013-03-13 | 2020-05-19 | Genentech, Inc. | Formulations with reduced oxidation |
CN110538322A (zh) | 2013-03-13 | 2019-12-06 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 抗体配制剂 |
IL269947B (en) | 2013-03-13 | 2022-08-01 | Genentech Inc | The compounds with reduced oxidation |
HUE049707T2 (hu) | 2013-03-13 | 2020-11-30 | Hoffmann La Roche | Csökkent oxidációjú kiszerelések |
US20140314778A1 (en) | 2013-03-13 | 2014-10-23 | Genentech, Inc. | Formulations with reduced oxidation |
EP2968760B1 (en) | 2013-03-15 | 2024-01-03 | Amgen Inc. | Drug cassette, autoinjector, and autoinjector system |
CN105121628B (zh) | 2013-03-15 | 2020-03-24 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 具有抗氧化剂的细胞培养组合物和多肽生产方法 |
US10492990B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-12-03 | Amgen Inc. | Drug cassette, autoinjector, and autoinjector system |
WO2014149357A1 (en) | 2013-03-22 | 2014-09-25 | Amgen Inc. | Injector and method of assembly |
EP3049441B1 (en) | 2013-09-27 | 2019-11-27 | F. Hoffmann-La Roche AG | Anti-pdl1 antibody formulations |
US11097055B2 (en) | 2013-10-24 | 2021-08-24 | Amgen Inc. | Injector and method of assembly |
EP3957345A1 (en) | 2013-10-24 | 2022-02-23 | Amgen, Inc | Drug delivery system with temperature-sensitive control |
CN105899535A (zh) | 2013-12-17 | 2016-08-24 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用pd-1轴结合拮抗剂和抗cd20抗体治疗癌症的方法 |
NZ720515A (en) | 2013-12-17 | 2022-12-23 | Genentech Inc | Methods of treating cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes |
MX2016007965A (es) | 2013-12-17 | 2016-10-28 | Genentech Inc | Terapia de combinacion que comprende agonistas de union a ox40 y antagonistas de union al eje pd-1. |
US20170044232A1 (en) | 2014-02-04 | 2017-02-16 | Genentech, Inc. | Mutant smoothened and methods of using the same |
WO2015119906A1 (en) | 2014-02-05 | 2015-08-13 | Amgen Inc. | Drug delivery system with electromagnetic field generator |
JP6588461B2 (ja) | 2014-03-31 | 2019-10-09 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗血管新生剤及びox40結合アゴニストを含む併用療法 |
SG11201609219QA (en) | 2014-05-07 | 2016-12-29 | Amgen Inc | Autoinjector with shock reducing elements |
US10646652B2 (en) | 2014-06-03 | 2020-05-12 | Amgen Inc. | Controllable drug delivery system and method of use |
EP2963057A1 (en) | 2014-07-02 | 2016-01-06 | Calypso Biotech SA | Antibodies to IL-15 |
AU2015318001B2 (en) | 2014-09-15 | 2021-03-25 | Genentech, Inc. | Antibody formulations |
MX2021014323A (es) | 2014-10-14 | 2023-02-02 | Amgen Inc | Dispositivo de inyección de fármaco con indicadores visuales y audibles. |
MA54716A (fr) | 2014-10-23 | 2021-11-17 | Amgen Inc | Réduction de la viscosité de formulations pharmaceutiques |
BR112017010198A2 (pt) | 2014-11-17 | 2017-12-26 | Genentech Inc | terapia de combinação compreendendo agonistas de ligação a ox40 e antagonistas de ligação ao eixo de pd-1 |
JP6716566B2 (ja) | 2014-12-19 | 2020-07-01 | アムジエン・インコーポレーテツド | 近接センサ付き薬物送達装置 |
WO2016100055A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-23 | Amgen Inc. | Drug delivery device with live button or user interface field |
CN107636170A (zh) | 2015-02-04 | 2018-01-26 | 健泰科生物技术公司 | 突变型Smoothened及其使用方法 |
MX2017010466A (es) | 2015-02-17 | 2018-06-06 | Amgen Inc | Dispositivo de administracion de farmacos con sujecion asistida de vacio y/o respuestas. |
WO2016138434A1 (en) | 2015-02-27 | 2016-09-01 | Amgen Inc. | Drug delivery device having a needle guard mechanism with a tunable threshold of resistance to needle guard movement |
AU2016280070B2 (en) | 2015-06-17 | 2022-09-15 | Genentech, Inc. | Methods of treating locally advanced or metastatic breast cancers using PD-1 axis binding antagonists and taxanes |
JOP20200312A1 (ar) | 2015-06-26 | 2017-06-16 | Novartis Ag | الأجسام المضادة للعامل xi وطرق الاستخدام |
TW202340452A (zh) | 2015-08-04 | 2023-10-16 | 美商再生元醫藥公司 | 補充牛磺酸之細胞培養基及用法 |
SI3334747T1 (sl) | 2015-08-13 | 2024-02-29 | Amgen Inc. | Globinsko nabito filtriranje proteinov, ki vežejo antigen |
WO2017039786A1 (en) | 2015-09-02 | 2017-03-09 | Amgen Inc. | Syringe assembly adapter for a syringe |
US11351308B2 (en) | 2015-12-09 | 2022-06-07 | Amgen Inc. | Auto-injector with signaling cap |
JP7008023B2 (ja) | 2015-12-30 | 2022-01-25 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 低減されたポリソルベート分解を有する製剤 |
AU2016381694A1 (en) | 2015-12-30 | 2018-07-05 | Genentech, Inc. | Use of tryptophan derivatives for protein formulations |
US11154661B2 (en) | 2016-01-06 | 2021-10-26 | Amgen Inc. | Auto-injector with signaling electronics |
AU2017205089B2 (en) | 2016-01-08 | 2023-10-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Methods of treating CEA-positive cancers using PD-1 axis binding antagonists and anti-CEA/anti-CD3 bispecific antibodies |
AU2017213826A1 (en) | 2016-02-04 | 2018-08-23 | Curis, Inc. | Mutant smoothened and methods of using the same |
ES2814287T3 (es) | 2016-03-15 | 2021-03-26 | Amgen Inc | Reducir la probabilidad de rotura de cristal en dispositivos de administración de fármaco |
US11767362B1 (en) | 2016-03-15 | 2023-09-26 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods of treating cancers using PD-1 axis binding antagonists and anti-GPC3 antibodies |
WO2017189089A1 (en) | 2016-04-29 | 2017-11-02 | Amgen Inc. | Drug delivery device with messaging label |
US11389588B2 (en) | 2016-05-02 | 2022-07-19 | Amgen Inc. | Syringe adapter and guide for filling an on-body injector |
MX2018013616A (es) | 2016-05-13 | 2019-02-21 | Amgen Inc | Montaje de cubierta protectora de vial. |
WO2017200989A1 (en) | 2016-05-16 | 2017-11-23 | Amgen Inc. | Data encryption in medical devices with limited computational capability |
TW201802121A (zh) | 2016-05-25 | 2018-01-16 | 諾華公司 | 抗因子XI/XIa抗體之逆轉結合劑及其用途 |
WO2017209899A1 (en) | 2016-06-03 | 2017-12-07 | Amgen Inc. | Impact testing apparatuses and methods for drug delivery devices |
US20180002417A1 (en) | 2016-06-15 | 2018-01-04 | Celimmune Llc | Methods and Compositions for the Treatment of Celiac Disease, Non-Celiac Gluten Sensitivity, and Refractory Celiac Disease |
EP3478342A1 (en) | 2016-07-01 | 2019-05-08 | Amgen Inc. | Drug delivery device having minimized risk of component fracture upon impact events |
CN109476748B (zh) | 2016-08-08 | 2023-05-23 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于癌症的治疗和诊断方法 |
WO2018034784A1 (en) | 2016-08-17 | 2018-02-22 | Amgen Inc. | Drug delivery device with placement detection |
WO2018067987A1 (en) | 2016-10-06 | 2018-04-12 | Amgen Inc. | Reduced viscosity protein pharmaceutical formulations |
CN114917185B (zh) | 2016-10-21 | 2023-11-14 | 美国安进公司 | 药物配制品及其制备方法 |
EP3532127A1 (en) | 2016-10-25 | 2019-09-04 | Amgen Inc. | On-body injector |
PE20191497A1 (es) | 2016-12-21 | 2019-10-21 | Cephalon Inc | Anticuerpos que se unen especificamente a il-15 humana y usos de estos |
CA3048156A1 (en) | 2016-12-23 | 2018-06-28 | Novartis Ag | Factor xi antibodies and methods of use |
JP2020503976A (ja) | 2017-01-17 | 2020-02-06 | アムジエン・インコーポレーテツド | 注入デバイスならびに関連する使用および組立方法 |
AU2018220538B2 (en) | 2017-02-17 | 2023-12-14 | Amgen Inc. | Drug delivery device with sterile fluid flowpath and related method of assembly |
JP7280189B2 (ja) | 2017-02-17 | 2023-05-23 | アムジエン・インコーポレーテツド | 薬物送達装置用の挿入機構 |
JP2020508803A (ja) | 2017-03-06 | 2020-03-26 | アムジエン・インコーポレーテツド | 作動防止特徴部を備える薬物送達デバイス |
EP3592402A1 (en) | 2017-03-07 | 2020-01-15 | Amgen Inc. | Needle insertion by overpressure |
IL303449B2 (en) | 2017-03-09 | 2024-08-01 | Amgen Inc | Insertion mechanism for a drug delivery device |
SI3600491T1 (sl) | 2017-03-28 | 2023-11-30 | Amgen Inc. | Sistem in postopek za sestavljanja droga bata in brizge |
AU2018257917B2 (en) | 2017-04-24 | 2023-05-04 | University Of Massachusetts | Diagnosis and treatment of vitiligo |
US20200048367A1 (en) | 2017-04-28 | 2020-02-13 | Amgen Inc. | N-acetylated and non-acetylated dipeptides containing arginine to reduce the viscosity of viscous compositions of therapeutic polypeptides |
WO2018226515A1 (en) | 2017-06-08 | 2018-12-13 | Amgen Inc. | Syringe assembly for a drug delivery device and method of assembly |
AU2018282077B2 (en) | 2017-06-08 | 2023-11-23 | Amgen Inc. | Torque driven drug delivery device |
EP3641857A1 (en) | 2017-06-22 | 2020-04-29 | Amgen Inc. | Device activation impact/shock reduction |
MX2019015479A (es) | 2017-06-23 | 2020-02-20 | Amgen Inc | Dispositivo electronico de administracion de farmacos con tapa accionada por un conjunto de conmutador. |
JP7408398B2 (ja) | 2017-07-14 | 2024-01-05 | アムジエン・インコーポレーテツド | 二重ねじりばねシステムを有する針挿入後退システム |
EP3655063A1 (en) | 2017-07-21 | 2020-05-27 | Amgen Inc. | Gas permeable sealing member for drug container and methods of assembly |
WO2019022951A1 (en) | 2017-07-25 | 2019-01-31 | Amgen Inc. | DRUG DELIVERY DEVICE WITH GEAR MODULE AND ASSEMBLY METHOD THEREOF |
EP3658206A1 (en) | 2017-07-25 | 2020-06-03 | Amgen Inc. | Drug delivery device with container access system and related method of assembly |
CN110869768B (zh) | 2017-08-01 | 2023-11-21 | 安进公司 | 实时制备用于质谱分析的多肽样品的系统和方法 |
WO2019028191A1 (en) | 2017-08-01 | 2019-02-07 | Amgen Inc. | SYSTEMS AND METHODS FOR PERFORMING REAL-TIME GLYCAN ASSAY OF A SAMPLE |
US20200164155A1 (en) | 2017-08-09 | 2020-05-28 | Amgen Inc. | Hydraulic-pneumatic pressurized chamber drug delivery system |
WO2019036181A1 (en) | 2017-08-18 | 2019-02-21 | Amgen Inc. | BODY INJECTOR WITH STERILE ADHESIVE PATCH |
US11103636B2 (en) | 2017-08-22 | 2021-08-31 | Amgen Inc. | Needle insertion mechanism for drug delivery device |
ES2939292T3 (es) | 2017-10-04 | 2023-04-20 | Amgen Inc | Adaptador de flujo para dispositivo de administración de fármacos |
WO2019070552A1 (en) | 2017-10-06 | 2019-04-11 | Amgen Inc. | DRUG DELIVERY DEVICE COMPRISING A LOCKOUT ASSEMBLY AND ASSOCIATED ASSEMBLY METHOD |
IL273323B1 (en) | 2017-10-09 | 2024-06-01 | Amgen Inc | Drug delivery device with drive assembly and related assembly method |
EP3703779A1 (en) | 2017-11-03 | 2020-09-09 | Amgen Inc. | Systems and approaches for sterilizing a drug delivery device |
US20200261648A1 (en) | 2017-11-06 | 2020-08-20 | Amgen Inc. | Drug delivery device with placement and flow sensing |
US12053618B2 (en) | 2017-11-06 | 2024-08-06 | Amgen Inc. | Fill-finish assemblies and related methods |
EP3706826A1 (en) | 2017-11-10 | 2020-09-16 | Amgen Inc. | Plungers for drug delivery devices |
CA3084486A1 (en) | 2017-11-16 | 2019-05-23 | Amgen Inc. | Autoinjector with stall and end point detection |
CA3079540A1 (en) | 2017-11-16 | 2019-05-23 | Amgen Inc. | Door latch mechanism for drug delivery device |
MA51617A (fr) | 2018-01-17 | 2020-11-25 | Amgen Inc | Mécanisme d'administration de médicament |
WO2019173026A1 (en) | 2018-03-07 | 2019-09-12 | Amgen Inc. | Controlled dispense syringe |
WO2019173785A1 (en) | 2018-03-09 | 2019-09-12 | Amgen Inc. | Backflow prevention mechanism for drug delivery device |
EP4321870A3 (en) | 2018-03-13 | 2024-04-03 | Amgen Inc. | Methods for the preparation of trypsin-resistant polypeptides for mass spectrometric analysis |
MA52015A (fr) | 2018-03-13 | 2021-01-20 | Amgen Inc | Digestion séquentielle de polypeptides pour une analyse par spectrométrie de masse |
SG11202007756XA (en) | 2018-03-30 | 2020-09-29 | Amgen Inc | Camera-based drug container inspection |
US11583633B2 (en) | 2018-04-03 | 2023-02-21 | Amgen Inc. | Systems and methods for delayed drug delivery |
US10835685B2 (en) | 2018-05-30 | 2020-11-17 | Amgen Inc. | Thermal spring release mechanism for a drug delivery device |
US11083840B2 (en) | 2018-06-01 | 2021-08-10 | Amgen Inc. | Modular fluid path assemblies for drug delivery devices |
CA3103017A1 (en) | 2018-06-23 | 2019-12-26 | Genentech, Inc. | Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, a platinum agent, and a topoisomerase ii inhibitor |
WO2020018789A1 (en) | 2018-07-18 | 2020-01-23 | Genentech, Inc. | Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, an antimetabolite, and a platinum agent |
WO2020023220A1 (en) | 2018-07-24 | 2020-01-30 | Amgen Inc. | Hybrid drug delivery devices with tacky skin attachment portion and related method of preparation |
CN112469454B (zh) | 2018-07-24 | 2024-01-26 | 安进公司 | 用于施用药物的输送装置 |
US20210228815A1 (en) | 2018-07-24 | 2021-07-29 | Amgen Inc. | Hybrid drug delivery devices with grip portion |
MX2021000749A (es) | 2018-07-24 | 2021-03-29 | Amgen Inc | Dispositivos de suministro para administrar farmacos. |
WO2020028009A1 (en) | 2018-07-31 | 2020-02-06 | Amgen Inc. | Fluid path assembly for a drug delivery device |
CA3106537A1 (en) | 2018-08-08 | 2020-02-13 | Genentech, Inc. | Use of tryptophan derivatives and l-methionine for protein formulation |
EP3836988A1 (en) | 2018-08-17 | 2021-06-23 | Amgen Inc. | Activation mechanism for drug delivery device |
EP3857230B1 (en) | 2018-09-21 | 2023-06-07 | F. Hoffmann-La Roche AG | Diagnostic methods for triple-negative breast cancer |
US20210346601A1 (en) | 2018-09-24 | 2021-11-11 | Amgen Inc. | Interventional dosing systems and methods |
AU2019350660A1 (en) | 2018-09-28 | 2021-03-18 | Amgen Inc. | Muscle wire escapement activation assembly for a drug delivery device |
CA3110529A1 (en) | 2018-10-02 | 2020-04-09 | Amgen Inc. | Injection systems for drug delivery with internal force transmission |
AU2019355979A1 (en) | 2018-10-05 | 2021-03-18 | Amgen Inc. | Drug delivery device having dose indicator |
CA3112355A1 (en) | 2018-10-15 | 2020-04-23 | Amgen Inc. | Drug delivery device having damping mechanism |
EA202191038A1 (ru) | 2018-10-15 | 2021-07-06 | Эмджен Инк. | Способ платформенной сборки для устройства доставки лекарственного средства |
TWI831847B (zh) | 2018-11-01 | 2024-02-11 | 美商安進公司 | 部分針頭縮回之藥物遞送裝置及其操作方法 |
EP3873563A1 (en) | 2018-11-01 | 2021-09-08 | Amgen Inc. | Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction |
MA54048A (fr) | 2018-11-01 | 2022-02-09 | Amgen Inc | Dispositifs d'administration de médicament avec rétraction partielle de l'organe d'administration de médicament |
WO2020124008A1 (en) | 2018-12-14 | 2020-06-18 | Amgen Inc. | System suitability method for use with protein concentration determination by slope |
US11534547B2 (en) | 2019-01-24 | 2022-12-27 | Amgen Inc. | Drug delivery systems and methods with pressure sensitive control |
JP7483723B2 (ja) | 2019-01-24 | 2024-05-15 | アムジエン・インコーポレーテツド | 背圧検知による薬剤送達のシステム及び方法 |
EP3924015A1 (en) | 2019-02-12 | 2021-12-22 | Amgen Inc. | Dosing systems and approaches |
WO2020167702A1 (en) | 2019-02-12 | 2020-08-20 | Amgen Inc. | Take-home drug delivery system |
WO2020167704A1 (en) | 2019-02-12 | 2020-08-20 | Amgen Inc. | Continuous dosing systems and approaches |
WO2020167910A1 (en) | 2019-02-12 | 2020-08-20 | Amgen Inc. | Systems and approaches for drug delivery device reconstitution |
EP3924019A1 (en) | 2019-02-12 | 2021-12-22 | Amgen Inc. | Continuous dosing systems and approaches |
EP3924018A1 (en) | 2019-02-12 | 2021-12-22 | Amgen Inc. | Continuous dosing systems and approaches |
EP3924083B1 (en) | 2019-02-14 | 2024-05-15 | Amgen Inc. | Systems and methods for preparing a sample and performing a real-time assay of the sample |
EP3928101A1 (en) | 2019-02-20 | 2021-12-29 | Amgen Inc. | Methods of determining protein stability |
WO2020180967A1 (en) | 2019-03-04 | 2020-09-10 | Amgen Inc. | In vivo reversibility of high molecular weight species |
AU2020245573A1 (en) | 2019-03-27 | 2021-09-30 | Amgen Inc. | Methods of fingerprinting therapeutic proteins via a two-dimensional (2D) nuclear magnetic resonance technique at natural abundance for formulated biopharmaceutical products |
EP3952950A1 (en) | 2019-04-08 | 2022-02-16 | Amgen Inc. | Automated drug delivery device and container |
US20220143319A1 (en) | 2019-04-09 | 2022-05-12 | Amgen Inc. | Drug delivery device with smart grip |
WO2020214492A1 (en) | 2019-04-17 | 2020-10-22 | Amgen Inc. | Cassette for an autoinjector and related methods |
AU2020263289A1 (en) | 2019-04-24 | 2021-09-16 | Amgen Inc. | Syringe sterilization verification assemblies and methods |
US20220152304A1 (en) | 2019-04-24 | 2022-05-19 | Amgen Inc. | Injector accessories |
MA56121A (fr) | 2019-06-05 | 2022-04-13 | Amgen Inc | Procédés d'identification d'attributs de protéines thérapeutiques |
CN114341189A (zh) | 2019-06-12 | 2022-04-12 | 奥美药业有限公司 | 全新il-15前药及其应用 |
CN114007672A (zh) | 2019-06-20 | 2022-02-01 | 美国安进公司 | 支持无线通信的药物递送装置和方法 |
US20220362474A1 (en) | 2019-07-18 | 2022-11-17 | Amgen Inc. | Drug delivery device having pressurized vessel |
US20220249778A1 (en) | 2019-07-18 | 2022-08-11 | Amgen Inc. | Sealing arrangement for drug delivery device |
MX2022001112A (es) | 2019-08-01 | 2022-02-16 | Amgen Inc | Dispositivo de suministro de farmacos con medicion de la temperatura y metodo relacionado. |
CA3148261A1 (en) | 2019-08-23 | 2021-03-04 | Amgen Inc. | Drug delivery device with configurable needle shield engagement components and related methods |
WO2021046070A1 (en) | 2019-09-03 | 2021-03-11 | Amgen Inc. | Injection device for drug delivery and packaging for the injection device |
EP4025276A1 (en) | 2019-09-03 | 2022-07-13 | Amgen Inc. | Activatable injection device for drug delivery |
EP4028078A1 (en) | 2019-09-12 | 2022-07-20 | Amgen Inc. | Backflow prevention mechanism for drug delivery device |
AU2020348947A1 (en) | 2019-09-16 | 2022-03-10 | Amgen Inc. | Method for external sterilization of drug delivery device |
CA3152549A1 (en) | 2019-09-30 | 2021-04-08 | Amgen Inc. | Drug delivery device |
CA3155062A1 (en) | 2019-09-30 | 2021-04-08 | Amgen Inc. | Drug delivery device |
US20210093792A1 (en) | 2019-09-30 | 2021-04-01 | Amgen Inc. | Drug delivery device and methods of delivering a drug |
CN118161706A (zh) | 2019-09-30 | 2024-06-11 | 美国安进公司 | 药物递送装置 |
WO2021067208A1 (en) | 2019-09-30 | 2021-04-08 | Amgen Inc. | Drug delivery device |
BR112022005996A2 (pt) | 2019-09-30 | 2022-07-12 | Amgen Inc | Dispositivo de administração de fármaco |
WO2021071780A1 (en) | 2019-10-07 | 2021-04-15 | Amgen Inc. | Drug delivery devices having light-activated ultrasonic fluid delivery |
US20220355025A1 (en) | 2019-10-07 | 2022-11-10 | Amgen Inc. | Needle insertion mechanism for drug delivery device |
US20220362484A1 (en) | 2019-10-07 | 2022-11-17 | Amgen Inc. | Drug delivery device |
EP4041649A1 (en) | 2019-10-07 | 2022-08-17 | Amgen Inc. | Packages for pharmaceutical products and methods of assembly |
AU2020362062A1 (en) | 2019-10-08 | 2022-03-17 | Amgen Inc. | Temperature indicator for drug delivery device |
WO2021071917A1 (en) | 2019-10-08 | 2021-04-15 | Amgen Inc. | Cassette for an autoinjector and related methods |
EP4041345A1 (en) | 2019-10-08 | 2022-08-17 | Amgen Inc. | Drug delivery device |
US20240100247A1 (en) | 2019-10-08 | 2024-03-28 | Amgen Inc. | Needle insertion mechanism for drug delivery device |
WO2021076540A1 (en) | 2019-10-18 | 2021-04-22 | Amgen Inc. | Drug delivery device and system |
AU2020368455A1 (en) | 2019-10-18 | 2022-04-07 | Amgen Inc. | Systems and approaches for drug delivery device reconstitution |
US20240091440A1 (en) | 2019-10-18 | 2024-03-21 | Amgen Inc. | Drug delivery device and system |
CA3153762A1 (en) | 2019-10-18 | 2021-04-22 | Amgen Inc. | Systems and approaches for drug delivery device reconstitution |
US20220401643A1 (en) | 2019-10-21 | 2022-12-22 | Amgen Inc. | Drug product container and drug delivery system |
WO2021081283A1 (en) | 2019-10-24 | 2021-04-29 | Amgen Inc. | Drug delivery device |
MX2022004943A (es) | 2019-10-24 | 2022-05-16 | Amgen Inc | Sistemas y enfoques para la administracion de farmacos. |
US20220387700A1 (en) | 2019-10-24 | 2022-12-08 | Amgen Inc. | Systems and methods for drug delivery |
EP4048345A1 (en) | 2019-10-24 | 2022-08-31 | Amgen, Inc | Drug delivery device and system |
US20220378657A1 (en) | 2019-10-24 | 2022-12-01 | Amgen Inc. | Systems and components for drug delivery and components for preparation of the same |
EP4054673A1 (en) | 2019-11-07 | 2022-09-14 | Amgen Inc. | Drug delivery system and method of use |
US20230001099A1 (en) | 2019-12-02 | 2023-01-05 | Amgen Inc. | Lockout mechanism for drug delivery device |
WO2021113070A1 (en) | 2019-12-05 | 2021-06-10 | Amgen Inc, | Flow restrictor for drug delivery device |
AU2021205981A1 (en) | 2020-01-11 | 2022-07-14 | AskGene Pharma, Inc. | Novel masked cytokines and methods of use thereof |
CN114901330A (zh) | 2020-01-13 | 2022-08-12 | 美国安进公司 | 针头护罩移除器、药物递送装置、以及相关方法 |
WO2021173603A1 (en) | 2020-02-24 | 2021-09-02 | Amgen Inc. | Containers and systems for use during external sterilization of drug delivery devices |
WO2021188223A1 (en) | 2020-03-16 | 2021-09-23 | Amgen Inc. | Drug delivery member insertion sensing assemblies, drug delivery devices, and related methods |
CA3170808A1 (en) | 2020-03-17 | 2021-09-23 | Amgen Inc. | Controlled dispense syringe |
US20230135301A1 (en) | 2020-04-28 | 2023-05-04 | Amgen Inc. | Packaging label |
MX2022014688A (es) | 2020-05-22 | 2022-12-16 | Amgen Inc | Sistema de almacenamiento y metodo para almacenar y transportar medicamentos. |
AU2021293038A1 (en) | 2020-06-16 | 2023-02-02 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Methods and compositions for treating triple-negative breast cancer |
WO2022051445A1 (en) | 2020-09-02 | 2022-03-10 | Amgen Inc. | Easy open apparatus for medicament storage carton |
EP4210805A1 (en) | 2020-09-09 | 2023-07-19 | Amgen Inc. | Swallowable drug delivery devices |
WO2022055761A1 (en) | 2020-09-11 | 2022-03-17 | Amgen Inc. | Inline uv flow device for sterilizing flow cytometry sheath fluid |
CA3195365A1 (en) | 2020-09-18 | 2022-03-24 | Amgen Inc. | Methods of processing a sample for peptide mapping analysis |
JP2023545425A (ja) | 2020-10-12 | 2023-10-30 | アムジエン・インコーポレーテツド | 長期薬剤保管装置及び方法 |
JP2023549083A (ja) | 2020-11-04 | 2023-11-22 | アムジエン・インコーポレーテツド | 薬物送達デバイスアセンブリ及び薬物送達デバイス用アクセサリ |
JP2023549088A (ja) | 2020-11-04 | 2023-11-22 | アムジエン・インコーポレーテツド | 薬物送達デバイスアセンブリ及び薬物送達デバイスのためのアクセサリ |
EP4240448A1 (en) | 2020-11-04 | 2023-09-13 | Amgen Inc. | Drug delivery device assembly and accessory for drug delivery device |
US20230381426A1 (en) | 2020-11-04 | 2023-11-30 | Amgen Inc. | Drug delivery device assembly and accessory for drug delivery device |
EP4240747A1 (en) | 2020-11-05 | 2023-09-13 | Amgen Inc. | Materials and methods for protein processing |
US20240115462A1 (en) | 2021-02-03 | 2024-04-11 | Amgen Inc. | High-throughput automated reconstitution of lyophilized drug product |
US20240082110A1 (en) | 2021-02-03 | 2024-03-14 | Amgen Inc. | Coaxial needle adapter and guide bracket for robotic liquid handling platform |
CN116782993A (zh) | 2021-02-03 | 2023-09-19 | 美国安进公司 | 用于药物加工的系统和方法 |
EP4304683A1 (en) | 2021-03-08 | 2024-01-17 | Amgen Inc. | Manufacturing process for hollow plunger rod |
CA3209084A1 (en) | 2021-03-10 | 2022-09-15 | Amgen Inc. | Drug delivery device |
CN116963793A (zh) | 2021-03-10 | 2023-10-27 | 美国安进公司 | 药物递送装置、用于药物递送装置的子组件、注射器保持器以及组装方法 |
IL305212A (en) | 2021-03-10 | 2023-10-01 | Amgen Inc | A drug delivery device with a removable cap |
BR112023019565A2 (pt) | 2021-03-25 | 2023-11-14 | Amgen Inc | Dispositivo de administração de fármacos |
IL305701A (en) | 2021-03-31 | 2023-11-01 | Amgen Inc | A sound-detection-based injection time measurement system for drug delivery devices |
AU2022261835A1 (en) | 2021-04-22 | 2023-08-31 | Amgen Inc. | Methods and systems for automated syringe quality evaluation |
US20240197989A1 (en) | 2021-04-28 | 2024-06-20 | Amgen Inc. | Systems for out-patient treatment of a patient, and related methods |
EP4341945A1 (en) | 2021-05-17 | 2024-03-27 | Amgen Inc. | Feedback system and method for a drug product |
US20240208680A1 (en) | 2021-05-21 | 2024-06-27 | Amgen Inc. | Method of optimizing a filling recipe for a drug container |
EP4348141A1 (en) | 2021-06-01 | 2024-04-10 | Amgen Inc. | Lyophilization system |
WO2022260925A1 (en) | 2021-06-08 | 2022-12-15 | Amgen Inc. | Drug delivery devices, finger-grip elements, and related methods |
WO2022266272A1 (en) | 2021-06-17 | 2022-12-22 | Amgen Inc. | Drug delivery device having shock absorber |
AU2022296519A1 (en) | 2021-06-23 | 2024-01-18 | Amgen Inc. | Syringes, assemblies, and methods of manufacture |
US20240269380A1 (en) | 2021-06-28 | 2024-08-15 | Amgen Inc. | Safety device for drug delivery system |
WO2023287562A1 (en) | 2021-07-16 | 2023-01-19 | Amgen Inc. | Systems and approaches for drug processing single-use hardware |
AU2022356197A1 (en) | 2021-09-29 | 2024-02-08 | Amgen Inc. | Apparatuses, systems and methods for plunger-stopper depth measurement in pre-filled syringes |
TW202322863A (zh) | 2021-10-06 | 2023-06-16 | 美商安進公司 | 用於藥物遞送裝置的衝擊啟動式制動特徵 |
AU2022359717A1 (en) | 2021-10-06 | 2024-04-04 | Amgen Inc. | Impact activated retention feature for drug delivery device |
EP4415780A1 (en) | 2021-10-11 | 2024-08-21 | Amgen Inc. | Characterization apparatus for drug delivery devices or subcomponents thereof |
WO2023081324A1 (en) | 2021-11-05 | 2023-05-11 | Amgen Inc. | Drug delivery devices, components for use within drug delivery devices |
AU2022388727A1 (en) | 2021-11-09 | 2024-05-16 | Amgen Inc. | Production of therapeutic proteins |
TW202335693A (zh) | 2021-11-29 | 2023-09-16 | 美商安進公司 | 活塞桿移除力方法及設備 |
TW202335692A (zh) | 2021-12-03 | 2023-09-16 | 美商安進公司 | 注射器中的塞子放置 |
AU2023231110A1 (en) | 2022-03-11 | 2024-08-15 | Amgen Inc. | Adjustable depth autoinjector |
WO2023196111A1 (en) | 2022-04-06 | 2023-10-12 | Amgen Inc. | Packaging for drug delivery device |
WO2024028448A1 (en) | 2022-08-04 | 2024-02-08 | Calypso Biotech Sa | Il-15 inhibitors useful for the treatment of atopic dermatitis |
WO2024040020A1 (en) | 2022-08-15 | 2024-02-22 | Absci Corporation | Quantitative affinity activity specific cell enrichment |
WO2024039575A1 (en) | 2022-08-18 | 2024-02-22 | Amgen Inc. | Needle shield for syringe |
WO2024039707A1 (en) | 2022-08-18 | 2024-02-22 | Amgen Inc. | Needle shield assembly for a syringe |
WO2024049793A1 (en) | 2022-08-30 | 2024-03-07 | Amgen Inc. | System and method of limiting subvisible particles in a syringe |
CN117209605B (zh) * | 2023-11-09 | 2024-01-30 | 北京百普赛斯生物科技股份有限公司 | 特异性结合il-15的抗体及其应用 |
Family Cites Families (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1991010741A1 (en) * | 1990-01-12 | 1991-07-25 | Cell Genesys, Inc. | Generation of xenogeneic antibodies |
US6255458B1 (en) * | 1990-08-29 | 2001-07-03 | Genpharm International | High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin |
US5574138A (en) | 1993-03-08 | 1996-11-12 | Immunex Corporation | Epithelium-derived T-cell factor |
US5591630A (en) * | 1994-05-06 | 1997-01-07 | Immunex Corporation | Monoclonal antibodies that bind interleukin-15 receptors |
US5795966A (en) | 1995-02-22 | 1998-08-18 | Immunex Corp | Antagonists of interleukin-15 |
US6258352B1 (en) | 1995-04-02 | 2001-07-10 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Compositions and methods of treating thrombocytopenia with IL-15 |
WO1996034096A1 (en) | 1995-04-28 | 1996-10-31 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US5660824A (en) | 1995-05-24 | 1997-08-26 | Grabstein; Kenneth H. | Muscle trophic factor |
EP0927254B1 (en) | 1996-04-26 | 2005-06-22 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Antagonists of interleukin-15 |
PT932417E (pt) | 1996-10-17 | 2003-07-31 | Immunomedics Inc | Conjugado de toxina nao antigenico e proteina de fusao de sistema receptor de interiorizacao |
DK1273304T4 (da) | 1997-02-21 | 2009-08-31 | Amgen Inc | Anvendelse af interleukin-15 |
AU6118998A (en) * | 1997-02-28 | 1998-09-18 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | Pluripotent cells having disrupted intrinsic genes |
GB9814892D0 (en) | 1998-07-10 | 1998-09-09 | Kennedy Rheumatology Inst | Treatment of celiac disease |
AU6689700A (en) | 1999-07-06 | 2001-01-22 | Silvia Bulfone-Paus | Method of treating psoriasis with il-15 antagonist |
JP4359503B2 (ja) | 2001-08-23 | 2009-11-04 | ゲンマブ エー/エス | インターロイキン15(il−15)に特異的なヒト抗体 |
-
2002
- 2002-08-23 JP JP2003522458A patent/JP4359503B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2002-08-23 PL PL371946A patent/PL217752B1/pl unknown
- 2002-08-23 SI SI200230971T patent/SI1425389T1/sl unknown
- 2002-08-23 PT PT02796411T patent/PT1425389E/pt unknown
- 2002-08-23 EA EA200400345A patent/EA014802B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-08-23 ES ES02796411T patent/ES2375271T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-08-23 DK DK02796411.3T patent/DK1425389T3/da active
- 2002-08-23 IL IL16035802A patent/IL160358A0/xx unknown
- 2002-08-23 HU HU0402653A patent/HU229776B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2002-08-23 KR KR1020047002642A patent/KR100911951B1/ko active IP Right Grant
- 2002-08-23 BR BR0212136-0A patent/BR0212136A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-08-23 RS YU15104A patent/RS51829B/sr unknown
- 2002-08-23 EP EP02796411A patent/EP1425389B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-08-23 MX MXPA04001486A patent/MXPA04001486A/es active IP Right Grant
- 2002-08-23 US US10/226,615 patent/US7153507B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-08-23 AT AT02796411T patent/ATE531390T1/de active
- 2002-08-23 CN CNB028207785A patent/CN100557018C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2002-08-23 NZ NZ531211A patent/NZ531211A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-08-23 AU AU2002332628A patent/AU2002332628B2/en not_active Expired
- 2002-08-23 CA CA2456648A patent/CA2456648C/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-08-23 WO PCT/US2002/026769 patent/WO2003017935A2/en active IP Right Grant
-
2004
- 2004-02-12 ZA ZA200401144A patent/ZA200401144B/en unknown
- 2004-02-12 IL IL160358A patent/IL160358A/en unknown
- 2004-02-20 NO NO20040752A patent/NO333152B1/no not_active IP Right Cessation
- 2004-12-06 HK HK04109618.9A patent/HK1066828A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2009
- 2009-05-08 JP JP2009113689A patent/JP2009256354A/ja not_active Abandoned
-
2012
- 2012-01-16 CY CY20121100045T patent/CY1112447T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
HU229776B1 (hu) | Interleukin 15-re (IL-15-re) specifikus emberi antitestek | |
TW213486B (hu) | ||
CN103957935B (zh) | 抗cgrp或抗cgrp‑r抗体或抗体片段用于治疗或预防慢性和急性形式的腹泻的用途 | |
CN102316897B (zh) | Notch结合剂和拮抗剂及其应用方法 | |
DE69734109T2 (de) | Humanisierung von anti-carcinoembryonalen Antigen anti-idiotypischen Antikörper und dessen Verwendung als Tumorvakzin und zur Markierung | |
DE60127143T2 (de) | Bispezifische Antikörper gegen CD19 und CD16 und deren Verwendung | |
DE60317677T2 (de) | Ox40 (=cd134) rezeptor agonisten und therapeutische verwendung | |
DE69531148T2 (de) | Bibliotheken aus polyklonalen antikörpern | |
CN102209556B (zh) | 改良的抗cd19抗体 | |
HU230586B1 (hu) | Anti-ErbB antitest/maytansinoid konjugátumok alkalmazása rákos betegségek kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására | |
CN103709250B (zh) | 抗cd20的人单克隆抗体 | |
CN100497389C (zh) | 表皮生长因子受体(egfr)的人单克隆抗体 | |
CN112125915A (zh) | 一种喜树碱衍生物及其偶联物 | |
CN101263158B (zh) | 表达人源化免疫球蛋白的转基因动物中b细胞凋亡的抑制 | |
JPH02503514A (ja) | 抗体におけるまたは抗体に関する改良 | |
CN110214026A (zh) | 双特异性抗muc16-cd3抗体和抗muc16药物结合物 | |
CN107849132A (zh) | 人源化的和亲和力成熟的针对FcRH5的抗体和使用方法 | |
AU2016247113A1 (en) | Novel modulators and methods of use | |
HU230947B1 (hu) | Eljárások anti-TNF-alfa ellenanyagok beadására | |
HUE034482T2 (hu) | Eljárások osteoarthritis következtében fellépõ fájdalom kezelésére idegi növekedési faktor antagonista vagy azt tartalmazó készítmények beadásával | |
CN105859887A (zh) | 拮抗性抗il-7 受体抗体及方法 | |
EA023555B1 (ru) | АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ, СВЯЗЫВАЮЩИЕ c-fms ЧЕЛОВЕКА | |
US10925971B2 (en) | Methods of treating PRLR positive breast cancer | |
JPH09506507A (ja) | Ca55.1抗原指向性結合構造 | |
EP3969120A2 (en) | Therapeutic compositions and methods for treating cancer in combination with analogs of interleukin proteins |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |