HU192646B

HU192646B - Process for preparing new n-alkyl-peptide aldehydes

Info

Publication number: HU192646B
Application number: HU844763A
Authority: HU
Inventors: Sandor Bajusz; Gyoergyne Szell; Gyula Horvath; Daniel Bagdy; Mariann Dioszegi; Zsuzsa Fittler; Eva Barabas; Laszlone Tomori; Ferencne Jozsa
Original assignee: Gyogyszerkutato Intezet
Priority date: 1984-12-21
Filing date: 1984-12-21
Publication date: 1987-06-29
Also published as: AU585561B2; US4703036A; ES550296A0; FI85980B; PT81746B; ES8708237A1; CN1025738C; CA1261547A; FI85980C; ATE68002T1; SU1384203A3; EP0185390A3; DK171403B1; FI855118A0; EP0185390B1; EP0185390A2; DK596385D0; IL77416A; HUT38954A; PT81746A

Description

A találmány tárgya eljárás I általános képletű új N-alkil-peptid-aldehid-sók ahol

Rj jelentése hidrogénatom vagy 1 —6 szénatomszámú egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, ⁵

R₂ jelentése 1-6 szénatomszámú egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, továbbá Rj és Ra az Xxx alfa-aminosav aminocsoportjához kapcsolódik,

Xxx jelentése D-fenilalanin-csoport vagy D-alloizoleucin-csoport,

Pro jelentése L-prolin-csoport,

Yyy jelentése L-, D- illetve DL-arginin-csoport és A jelentése savmaradék — előállítására. Rj és R₂ jelentése a fentiek értelmében 15 metil-, etil-, propil-, η-butil-, izo-butil- vagy n-hexilcsoport lehet. Yyy jelentése előnyösen L-arginin-csoport. A jelentése egy ásványi savmaradék, így pl. sósav-, kénsav-, foszforsav-maradék, vagy egy szerves savmaradék, így pl. ecetsav-, borkősav-, móléin- 20 sav-, furánsav-maradék lehet.

Ismeretes, hogy a véralvadék képződése és az alvadék oldása egyaránt proteolitikus reakció eredménye.

Az alvadékképződés folyamatában a kulcslépés a trombin-fibrinogén reakció, amelyben a vérplazmában 25 oldott fibrinogén átalakul a már nem oldódó fibrin polimerré. Az oldási folyamatban pedig a plazmin proteolitikus hatása érvényesül, a polimer fibrint lebontja oldható fragmentumokká. A terápiás felhasználásra szánt alvadásgátlóktól elváquk, hogy az al- 3θ vadási folyamat gátlása mellett az alvadék oldását (a plazmin-fibrin reakciót) ne akadályozzák.

Ilyen tulajdonságú alvadásgátlók a H-D-PhePro—Arg—H szerkezetű szabad tripeptid-aldehid-sók (169 870 lsz. és 184 368 lsz. magyar szabadalmi le- 35 írások). Ezek a vegyületek a plazmin-fibrin reakciót nem befolyásolják. Jelenlétükben - koncentrációtól függően — vagy nem keletkezik fibrin-alvadék, vagy laza alvadék keletkezik, amelyet a plazmin könnyen felold. Ismert azonban az is, hogy a szabad amino- 40 terminálisú tripeptid-aldehidek bomlékony vegyületek, kezdeti nagy enzimgátló hatásukat viszonylag gyorsan elvesztik, és csak a 184 368 lsz. magyar szabadalmi leírásban ismertetett H—D—Phe—Pro—Arg H— szulfát rendelkezik jelentős stabilitással, amenyi- 45 ben hűtött (5 °C-os) oldatban hosszabb időn át megőrzi kezdeti nagy aktivitását.

A H—D -Phe —Pro—Arg—H-szulfát stabilitását emelt hőmérsékleten vizsgálva megállapítottuk, hogy vizes oldatban 80—100 °C-on már néhány óra alatt, 50 37—40 °C-on 10-14 nap alatt gyakorlatilag teljesen átalakul egy — enzimgátló hatással már nem rendelkező — stabil triciklusos vegyületté, melynek szerkezetét tömeg- és NMR-spektroszkópiával igazoltuk (l,2,4,5,6,6a-hexahidro-l-benziI-2-oxo-8 [4’-quanidi- 55 no] butil-pirrolo [1,2-a], imidazolo [2,1-e], pirazin).

Azt is megállapítottuk, hogy a megfelelő acil-tripeptid-aldehidek nem szenvednek ilyen jellegű irreverzibilis átalakulást, de az acil-származékok, pl. a Boc— D-Phe—Pro— Arg— H-hemiszulfát (Boc jelenté- 60 se terc-butil-oxi-karbonil-csoport), a trombin-fibrinogén reakció mellett a plazmin-fibrin reakciót is számottevően gátolják [184 368 lsz. magyar szabadalmi leírás, valamint S. Bajusz et al., in: Peptides, Synthesis-Structure-Function (eds.: H.D. Rich and E Gross), Pierce Chem. Co., Rockford, Illinois, USA,

817. oldal], tehát az antikoaguláns terápiában kevésbé alkalmazhatók.

A találmány célja olyan új peptid-aldehidek előállítása, amelyek rendelkeznek az ismert H-D-PheP o— Arg— H-szulfát szelektív véralvadásgátló hatásávrl, de ennél stabilabbak, irreverzibilis ciklizálásra nem hajlamosak.

Azt találtuk, hogy a H-D-Phe-Pro-ArgE..H₂ SO₄ esetében fellépő irreverzibilis átalakulás, az említett vagy ahhoz hasonló triciklusos vegyület képződése elmarad az I általános képletű, azaz az aminot;rminálison alkilezett tripeptid-aldehideknél, pl. az Ν-metil-, N-etil- vagy N-izobutíl-D-fenilaianil-L-prolil- *

L-arginin-aldehid-szulfátnál [I általános képletben R, = H, R₂ = CH₃, CH₂ CH₃, illetve CH₂ CH(CH₃ X,

Xxx = D—Phe és (HA^ = H₂ S0₄ ]. Vizsgálataink során ’ í H-D-Phe-Pro-Arg-H-szulfátot, valamint a meg- ' telelő N-alkil-származékokat 10 mg/ml töménységben oldottuk vízben (pH = 6,0) és 40 °C-on tartottuk 5 napon át. Az anyagok szerkezetének változását kromatográfiás vizsgálattal és az antitrombin aktivitás meghatározásával követtük nyomon.

A szilikagél vékonyrétegben 30:20:6:11 arányú etil-acetát-piridin-ecetsav-víz elegyben végzett kromaOgráfiás vizsgálat egyértelműen mutatta, hogy a H-D-Phe-Pro-Arg-H.H₂SO₄ fokozatosan átalakul: a tripeptid-aldehidre jellemző folt (R_f = 0,40) nellett — ennek kárára — fokozatosan erősödik a triciklusos vegyület foltja (R_f = 0,60). Ezzel szemben az Ν-metil-, N-etil- és Ν-izoDutil-, valamint az N,Ndimetil-származék oldatának kromatográfiás vizsgálata nem utalt ilyen átalakulásra, csak a peptidek foltja (R_f = 0,43,0,50,0,64 illetve 0,37) volt látható.

Megjegyezzük, hogy az N-alkil-tripeptid-aldehidek egyéb sói, pl. acetátjuk sem alakul át a fentinek megfelelő triciklusos vegyületté, míg a H-D-Phe-Pro—

Arg—H-acetát különösen hajlamos ilyen átalakulásra.

Az antitrombin aktivitási értékeket az alábbi komponensekből álló rendszerben határoztuk meg:

0,2 ml 0,5%-os marhafibrinogén 0,9%-os konyhasó oldatban,

0,1 ml trisz(hidroximetil)-amino-metán-klórhidrát-sósav puffer (pH = 7,2), amely a pepti-doldatot tartalmazza, és

0,1 ml US Standard Humán Thrombin (N1H, Bethesda, Maryland, USA) 10 egység/ml oldat. J

A rendszer alvadási ideje a peptid nélkül 15 s „Schnither-Gross Coagulometer”-ben meghatározva (kontroll). A tripeptid-aldehid-szulfátok kezdeti aktivitásának jellemzésére azt a mólkoncentrációt adjuk meg, amelyben a peptid a rendszer alvadási idejét a kontroll ötszörösére nyújtja (I_g0 érték). Az oldatban lévő peptidek 1., 3. és 5. napon mért aktivitását a kezdeti (0. napon mért) aktivitás %-ában adjuk meg.

Az eredményeket az I. táblázatban foglaltuk össze.

192 646

I. táblázat

Tripeptid-aldehid-szulfátok antitrombin aktivitásának változása vizes oldatban (pH = 6,0) 40 °C-on

Peptid-aldehid³ Y—Pro—Arg—H.H₂ S0₄	Kezdeti aktivitás	1. nap	Aktivitás (%)
I ^D ^Aso	(0. nap)	3. nap	5. nap
Y = H-D-MePhe	0,25	(100 %)	100	100	100
H-D -EtPhe	0,21	(100%)	100	100	85
H—D—iBuPhe	0,31	(100%)	100	85	80
H-D-Phe	0,35	(100%)	100	50	40

(referens) ^aA rövidítések megfelelnek a szakirodalomnak [pl. Biochem. J., 126, 773 (1972)], valamint H— D— MePhe, H—D—EtPhe és H—D—iBuPhe jelentése N-metil-, Ν-etil-, illetve N-izobutil—D-fenilalanin-csoport.

A H—D—Phe—Pro—Arg—H.H₂SO₄ eredeti aktivitásának több, mint felét elveszti a megfigyelés ideje alatt. Ugyanakkor az N-metil-származék megőrzi eredeti hatékonyságát, az N-etil- és N-izobutil-vegyület 25 aktivitása pedig csak 15—20%-kal csökken. Az adott kísérleti körülmények között számolni kell az L-arginin-aldehid-terminális részleges racemizációjával is. Az N-etil- és N-izobutil-származéknál tapasztalt kis mértékű aktivitás-csökkenés erre vezethető vissza. 30

Megvizsgáltuk az N-alkil-tripeptid-aldehideknek a plazmin-fibrin reakcióra gyakorolt hatását is az N-metil-D-fenilalanil-L-prolil-L-arginin-aldehid-szulfát példáján az alábbi rendszerben:

0,2 ml 0,5%-os marhafibrinogén 0,9%-os konyha- 35 só oldatban,

0,1 ml trisz(hidroximetil)-amino-metán-klórhidrát-sósav puffer (pH - 7,2), amely a pepiidet tartalmazza,

0,1 ml pufferben oldott 0,1 egység plazmin 40 (KABI, Stockholm, Svédország) és

0,1 ml US Standard Humán Thrombin (NIH, Bethesda, Maryland, USA) 10 egység/ml.

A rendszerben keletkező fibringél oldódásának ideje peptid nélkül 10.60 S. (kontroll). 45

Referens-vegyületként a H-D-Phe-Pro-Arg-Hszulfátot, valamint a fentebb említett Boc—D—PhePro —Arg—H.j H₂ S0₄ acil-tripeptid-aldehid-hemiszulfátot használtuk. Az eredményeket a II. táblázatban foglaltuk össze. 50

Az adatokból kitűnik, hogy az N-alkil-tripeptidaldehid az amino-terminálisú analóghoz hasonlóan viselkedik. Kis mennyiség esetén a keletkező alvadék a kontrollidő alatt oldódik fel, nagyobb mennyiség esetén a keletkező gél laza szerkezetű, illetve nem is kép- 55 ződik alvadék. Ugyanakkor az acil-tripeptid-aldehidhemiszulfát koncentrációtól függően növeli a fibrinalvadék plazminos hidrolízisének (oldásának) idejét.

A fenti vizsgálatokból kitűnik, hogy az új, aminoterminálison alkilezett tripeptid-aldehidek az ismert 60 H-D-Phe-Pro-Arg-H-szulfátnál lényegesen állandóbb vegyületek, s ugyanakkor ez utóbbihoz hasonlóan szelektív alvadásgátlók, a trombin-fíbrinogén reakció hatékony gátlása mellett a plazmin-fibrin reakció lefutását nem akadályozzák. 65 ^bI₈₀ = az a umol-ban megadott peptid-mennyiség 1 1 reakcióelegyben, amelynél a rendszer alvadási ideje a kontroll ötszörösére nyúlik.

II, táblázat

Tripeptid-aldehidek hatása a plazmin-fibrin reakcióra

Peptid-aldehid³	Peptidtartalom μ mól	A fíbrin-alvadék oldás-ideje (s)^b
H —D -MePhe —Pro-	0,18	10.60
—Arg-H.H₂ SO₄	0,36 0,72	c nincs alvadék
H-D-Phe—Pro-	0,18	10.60
—Arg—H.H₂S0₄	0,36	_c
(referens)	0,72	nincs alvadék
Boc—D Phe —Pro-	0,18	10.60
—Arg—H.AJH₂SO₄	0,36	20.60
(referens)	0,72	40.60

^aA rövi ütések jelentését lásd az I. táblázatnál, ill. Boc jelentése t-butil-oxi-karbonil-csoport. ^bA fíbrin-alvadék oldás-ideje peptid nélkül 10.60 s. ^cAz olcás-idő nem határozható meg, az alvadék laza szerkezetű.

Az I általános képletű új N-alkil-tripeptid-aldehidek jelentős mértékű véralvadásgátló hatást mutatnak in vivő körülmények között is. Vizsgálatainkban 2-3 kg súlyú új-zélandi hím nyulaknak intravénásán, illetve orálisan adtuk a peptideket oldószerként fiziológiás konyhasó-oldatot alkalmazva. Intravénás adásmódnál 0,5-2,0 mg/kg,h dózisban 6 ml/h sebességgel 3 órás infúziót alkalmaztunk. Orálisan 20—30 mg/kg/p?ptidet adtunk 2 ml térfogatban. A vegyületek beadása után 30 perces időközökben vérmintákat vettünk a nyulak fülvénájából és Thrombelastographban meghatároztuk a teljes vér alvadási idejét [H.Hartel: Zschr. f. clin. Med. 153, 423 (1955)]. Egyidejűleg meghatároztuk a plazma trombin-idejét is [R.T.S. Jim: J. Láb. Clin. Med. 50, 45 (1957)]. A terápiás

-3192 646 hatás (M. Verstraete és R. Verwilghen: in Drug Treatment, 2nd ed., Ed.:G.S. Avery, Churcill Livingstone, Edinburgh-London, 1980, p. 919) kiváltásához szükséges legkisebb dózisokat a III. táblázatban tüntettük fel. Referensvegyületként a H-D-PhePro Arg—H.H₂SO₄ szerepel.

Az adatokból látszik, hogy az N-alkil-tripeptid-aldehidek hatékonysága a kontroll-vegyületével megegyező vagy ahhoz hasonló.

III. táblázat

N-Alkil-tripeptid-aldehidek véralvadásgátló hatása in vivő (új-zélandi hím nyulakon)

T ripept id-al deh id^a Y —Pro — Arg —H ,H₂ S0₄	Legkisebb hatásos dózis
intravénásán mg/kg/h	orálisan mg/kg
Y = H-D-MePhe	0,5	20
H-D-EtPhe	0,5	20
H-D—iBuPhe	0,5	20
D-Me₂ Phe	2,0	30
H-D-Phe	0,5	20
(referens)

^aA rövidítések jelentését lásd az I. táblázatnál, valamint

D—Me₂Phe jelentése Ν,Ν-dimetil—D-fenilalanin-csoport és

H—D—MeAle jelentése N-metil- D-alloizoleucin-csoport.

A találmány értelmében az I általános képletű Nalkil-tripeptid-aldehideket úgy állítjuk elő, hogy az amino-terminálás felőli dipeptid-résszel mint sav-komponenssel acilezzük a guanidino-csoportján védett arginin-laktámot, a keletkezett védett tripeptid-laktámot védett tripeptid-aldehiddé redukáljuk, a védőcsoporto(ka)t eltávolítjuk, és végül az N-alkil-tripeptid-aldehidet valamilyen só formában elkülönítjük.

A fentiek alapján a találmány eljárás az I általános képletű - mely képletben R_t, R₂, Xxx, Pro, Yyy és A jelentése a fenti — új N-alkil-peptid-aldehid-sók előállítására, amely abban áll, hogy az N -védett arginin-laktámot a peptidkémiában ismert módon valamely N-terminálisán védőcsoporttal ellátott és N-mono-alkil- vagy Ν,Ν-dialkil-Xxx—Pro—OH dipeptiddel — ahol Xxx és Pro jelentése a fenti - kondenzáljuk, majd az így kapott védett tripeptid-laktámot védett tripeptid-aldehiddé redukáljuk, a védőcsoporto(ka)t eltávolítjuk és az N-alkil- vagy Ν,Ν-dialkil-tripeptid-aldehid sót izoláljuk.

A kiindulási Xxx—Pro—OH dipeptidet a találmány értelmében az alábbiak szerint állíthatjuk elő: az Nterminálisán védőcsoporttal ellátott Xxx aminosavat kondenzáljuk a peptidkémiában ismert módon L-prolinnal, és az így kapott védett dipeptidet alkilezzük; vagy egy szabad N-termináiisú Xxx-Pro dipeptidet mono- vagy dialkilezünk. Eljárhatunk úgy is, hogy az amino-csoportján mono-alkilezett és védőcsoporttal efátott vagy dialkilezett Xxx aminosavat kondenzáljuk a peptidkémiában ismert módon L-prolinnal.

A találmány szerinti eljárás egy előnyös foganatosítási módja szerint úgy járunk el, hogy a D-fenilalanil-L-prolin N-benzil-oxi-karbonil-származékát metilezzük metil-jodiddal nátrium-hidrid jelenlétében, a keletkezett N-benzil-oxi-karbonil-N-metil-D-fenilalanil-L-prolint vegyes anhidriden keresztül kapcsoljuk az Νω-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámhoz. A képződött védett tripeptid-laktámot litium-alumínium-hidriddel N-benzil-oxi-karbonil-N-metil-D-fenila' anil - L - prol il - Νω - benzil -ox i-karbon il - L-arg inin -al dehiddé redukáljuk, majd a védőcsoportokat kénsav jelenlétében végzett hidrogenolizisse! eltávolítjuk, és a keletkezett N-metil-D-fenilalanil-L-prolil-L-argininalc-ehid-szulfátot elkülönítjük.

A találmány szerinti eljárás egy másik előnyös foganatosítási módja szerint úgy járunk el, hogy a D-fer il-alanil-L-prolint formaldehid jelenlétében hidrogénezzük. A keletkezett N, N-dimetil-D-fenilalanil-Lprolint vegyes anhidriden keresztül Νω-benzil-oxikarbonil-L-arginin-laktámhoz kapcsoljuk, a képződött védett tripeptid-laktámot litium-alumínium-hididdel N, N-dimetil-D-fenilalanil-L-prolil-Nw-benziloxi-karbonil-L-arginin-aldehiddé redukáljuk, majd a rédőcsoportot kénsav jelenlétében végzett hidrogenoizíssel lehasítjuk, és a keletkezett N,N-dimetil-D‘enilanil-L-prolil-L-arginin-aldehid-szulfátot elkülönítjük.

A találmány szerinti eljárás egy további előnyös foganatosítási módja szerint úgy járunk el, hogy D-fenilalanint acetaldehid jelenlétében hidrogénezünk, a keletkezett N-etil-D-fenilalanint ellátjuk benzil-oxi-karbonil-védőcsoporttal, majd 2,4,5-triklórfenil-észterré alakítjuk, és L-prolinnal kondenzáljuk. A keletkezett N-benzil-oxi-karbonil-N-etil-D-fenilalanil-L-prolint vegyes anhidriden keresztül Νω-benzil-oxi-karbonüL-arginin-laktámhoz kapcsoljuk, A képződött védett tripeptid-laktámot N-benzil-oxi-karbonil-N-etil-D-fenilalanil-L-prolil-Nw-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehiddé redukáljuk litium-alumínium-hidriddel, majd a védőcsoportokat kénsav jelenlétében végzett hidrogenolizissel lehasítjuk, és a keletkezett N-etil-D-fenilalanil-L-prolil-L-arginin-aldehid-szulfátot elkülönítjük. Redukálószerként egyéb komplex fémhidridet, így például nátrium-dihidro-bisz-(2-metoxi-etoxi)-aIuminátot (Red-A1^R) is alkalmazhatunk.

A találmány szerinti eljárással előállított 1 általános képletű D,L,L-konfigurációjú peptid-aldehidek némely esetben D,L,D-konfigurációjú terméket tartalmazhatnak, amely azonban az anyagok terápiás felhasználhatóságát nem befolyásolja.

A találmány foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. A példákban megadott R¹ értékeket szilikagél (Kieselgel G, Reanal, Budapest) rétegkromatográfiával határoztuk meg az alábbi oldószerekben:

1. etil-acetát-piridin-ccetsav-víz (960 206:11)

2. etil-acetát-piridin-ecetsav-viz (480:20.6:11)

3. etil-acetát-piridin-ecetsav-víz (240 2 0 6:11)

4. etil-acetát-piridin-ecetsav-víz (120:206:11)

5. etil-acetát-piridin-ecetsav-víz (60:20:6:11)

6. etil-acetát-piridin-ecetsav-víz (30:20:6:11)

192 646

1. példa ~χ·

N-metil-D-feniblanil-L -prolil-L -arginin -aldehid szulfát előállítása _: .

1. lépés: N-benzil-oxi-karbonil-N-metil-D-fenilalanil-L-prolil-Ntj-benzil-oxí-karbonÍl-L-arginin-laktám

42,95 g (0,11 mól) N-t-butil-oxi-karbonil-Nw-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot szuszpendálunk 110 ml vízmentes kloroformban és hozzáadunk 275 ml sósavas etil-acetátot (töménység: 0,11-0,15 g/ml) keverés közben. A reakcióelegyet 3 óra keverés után 400 ml/díet il-éterrel hígítjuk, a kivált kristályos anyagot kiszűrjük, kétszer 100 ml diétil-éterrel és kétszer 50 ml acetonnal mosfeük, majd vákuum exszikkátorba helyezzük foszfor-pentoxid és kálium-hidroxid mellé. Egy óra szárítás után az anyagot feloldjuk 100 ml dimetilformamidban, lehűtjük —15 °C-ra, és ezen a hőmérsékleten hozzáadunk keverés közben 20 ml trietil-amint, majd még 10—15 ml trietil-amint, hogy a gőztérben a bázisfelesleg kimutatható legyen. A kapott szuszpenziót az alábbi vegyes anhidridhez adjuk.

50,9 g (0,1 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-metil-Dfenilalanil-L-prolin-ciklohexil-ammónium-sót feloldunk 200 ml dietil-éterben és 120 ml In kénsavban. A die tiléteres fázist háromszor 30 ml vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, és 25—30. 10₂Pa nyomáson 40 °C-os fürdőről bepároljuk. A maradékot és 11,2 ml (0,1 mól) N-metil-morfolint feloldunk 70 ml dimetilformamidban, lehűtjük —15 °C-ra, és ezen a hőmérsékleten hozzáadunk 13,2 ml (0,1 mól) izobutil-oxi-karbonil-kloridot. Az adagolás (3—5 perc) után még 5 percig keverjük, majd a keletkezett vegyes anhidridhez adjuk a fenti dimetil-formamidos szuszgenziót. A reakcióelegyet egy órán át kerveijük —15 C-on és égy órán át 0 °C-on, majd 200 ml benzollal hígítjuk, és a kivált sókat kiszűrjük. A benzoldimetilformamidos oldathoz 150 ml vizet adunk, és a fázisokat elválasztjuk. A vizes-dimetilformamidos alsó fázist háromszor 50 ml benzollal kivonatoljuk. A benzolos oldatokat egyesítjük, háromszor 30 ml vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, cs 20—25 millibar nyömáson máx/40 °C-os fürdőről bepároljuk. Az olajos maradékot feloldjuk 60 ml 8:2 arányú benzol-tetrahidro-furán elegyben és 750 g Kieselgel—60-t tartalmazó oszlopon kromatografáljuk a benzol-tetrahidro-furán elegyben. A frakciók anyagtartalmát szilikagél rétegkromatográfiával ellenőrizzük etil-acetát-piridin-ecetsav-víz (480:20:6:11) rendszerben, a kívánt termék R^f értéke 0,70—0,76. A főterméket tisztán tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, 20—25 millibár nyomáson max. 40 °C-os fürdőről bepároljuk körülbelül 100 ml térfogatra. Ezt a párlási maradékot 500 ml petroléterrel elkeverjük. A keletkező szuszpenziót szűrjük, kétszer 100 ml petroléterrel mossuk, és vákuum exszlkkatorbari szárítjuk kénsav és paraffin-forgács mellett, 45 g '(6i>%) cím szerinti terméket kapunk.

l^aJp° ⁼+13,5° (c=l, tetjgJi’4^röf^uXánban).

R? =0,70 0,76. 7.' '' '

Elemzési eredmény a C₃₇.H₄₂O₇N₆ (682,75) képletre vonatkoztatva:

számított: C% = 65,08; H% = 6,20; N% = 12,31; talált: C%=65,4; H% = 6,4; N% = 12,1.

2. lépés: N-benzil-oxi-karbonil-N-metil-D-fenilalanil - L - prolii -Νω - benzil -ox i -karbonil - L argi-nin-aldehid fii :o; ?

34,15 g (0,05 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-metilD-fenirtanil-L-prolil-Nw-benziJ-oxi-karboniI-L-argininlaktámut (1. példa, 1. lépés) feloldunk 150 ml tetráhidro-furánban, lehűtjük —20 ΐ-ra, és keverés közben hozzáadunk 0,0375 mól litium-alurtiínium-hidridet tetrahiiro-furánban oldva. A redukció előrehaladását rétegki omatográfiával követjük etij-acetát-piridinecetsav-víz (240:20:6:11) rendszerben.(a laktam, és xl aldehid R^f értéke kb. 0,8 illetve 0,5). Szükség szerint adagolunk további litium-alumínium-hjdfidet, majd a reakcióelegyet hűtés és keverés közben pH = 2-re savanyítjuk 1 n kénsavval. Az oldatot zavarosodásig hígítjuk vízzel (kb. 300 ml), majd IdráZzuk kétszer 100 ml n-hexánnal. Ezután a vizes-tet.rahidro-fuíános oldatot kivonatoljuk kétszer 250 ml metilén-kloriddal. Az egyesített metilén-kloridos oldatokat mossuk kétszer 50 ml vízzel, kétszer 50 ml 5%-osnátriumhidrogénkarbonát-oldattal, ismét kétszer 50 ml vízzel, majd vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, és 20—25 millibár nyomáson max. 40 ΐ-os fürdőről betöményítji k 50-60 ml-re. A maradékhoz 100 ml benzolt adunk, és az előbbivel azonos módon betöményítjük. A maradék oldatot 100 ml ciklohexánnal higitjuk. A kivált csapadékot kiszűrjük, kétszer 30 ml ciklohexánnal mossuk, és vákuum exszikJeáXqrbípi számítjuk paraffin-forgács mellett 27 g (7Ö%) cím szerinti termeket kapunk, mely az elemanalízis szerint tartalmaz i mól ciklohexánt. ·,

R³ = 3,52-0,62. [a]³⁰ = + 16,8° (c=l, tetrahidro-furánbán) 777.7: '

Elemzési eredmény a C_{3 7}H₄₄O₇N^r6 ,d₆É_t'₂ (768,93) képletre vonatkoztatva: -.müi-ioMi--..1-.

számított: C% = 67,16; H% = 7,34;W^W37^n;-^ü;' talál : C% = 66,6; H% = 7,2;‘W'7YÖ,4 lépés: N-meti]-D-fenilalanú-l>p/Blii-Í^;árgífim-áldehid-szulfát f'f³' rnq

23,1 g (0,03 mól) N-benzil-O'ki-karoofeí-lQ^métiiϋ-ΓοηΐΙβΙβηΐΙ-νρΓοΙΐΙ-Νω-ΕβηζΐΙ-οχΫ-ΜϊΑί&βΙί’-ΐΛίαίί·⁰¹⁵nin-ildehidet (1. példa, 2. lépés)^|elrilÖÜnk Í5Ö ml etanolban, hozzáadunk 50 ml ion'rtjehWsΨΐζέί,'ϊδ ml 1 n kénsavat és 3 g 10%-os Pd/C..líátaiizátort,'majd hidrogénezzük. A reakció előréhájaííásat vékony rétegkromatográfiával követjük az^'étiíHb'étát-piridin-ecetsav-víz (30:20:6:11) rendszerién''kiindulási anyrg, köztitermék és végtermék R^'értéke kb. 0,9, 0,7, illetve 0,4). A reakció végé#¹ V.katalizátort kiszűrjük és háromszor 30 ml, íöitíti^ni/efSff Vfezei mossuk. A szűrletet és mosófolj/ÍÍÜékÓt' egyesítjük, maid rotációs bepárlóban körülbelül )ÖÓ7 ml-re töményítjük. A maradék vizes ójAtPÍ ÍÖÓ ml-re híg tjük ionmentes vízzel, és eUenőrrkíiük, hogy a pH 6,0-6,5 között van-e. A pH-t szükség; in) niődosítjrk 0,1 n kénsavval, illetve OH^ciklusú ioncserélő gyantával (pl. AG 1X8), s végül az¹, oldatot lefagyasztjuk és liofilizáljuk. 12,4 g (75%)cím szerinti terméket kapunk. - ,, -í,

R* = 0,39—0,47. [a]³⁰ = -131° (c=l, vízben)_;7 Elemzési eredmény a C₂ (Η,Ο) (547,37) képletre vonatkoztatva;; , szá mított: C% = 46,07; H% = 7,13; N% -15,35;

S% = 5,12;

-5192 645 talált: C% = 46,4; H% = 7,2; N% = 15,05;

S% = 5,0

Az acetát só: R* = 0,39-0,47. [a]²⁰ = 114 ° (c =1, vízben). ^D

A kiindulási anyagokat az alábbi módon állítjuk eló': N-benzil-oxi-karbonil-N-metil-D-fenilalanil-L-prolin előállítása.

A. lépés: benzil-oxi-karbonil-D-fenilalanin-2,4,5triklór-fenilészter

60,0 g (0,2 mól) benzil-oxi-karbonil-D-fenilalanint [H. Yajima és K. Kubo: J. Am. Chem. Soc. 87, 20392044 (1965)] és 39,4 g (0,2 mól) 2,4,5-triklór-fenolt feloldunk 200 ml tetrahidro-furánban, lehűtjük 5—10 'C-ra, és keverés közben hozzáadunk 41,2 g (0,2 mól) diciklohexil-karbodiimidet körülbelül 30 perc alatt. A reakcióelegyet 6 órán át keverjük hűtés nélkül. A kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, háromszor 50 ml tetrahidro-furánnal mossuk, majd az egyesített tetrahidro-furános oldatokat csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 300 ml forró etanolból kikristályosítjuk, szűrjük, kétszer 50 ml 5-10 °C-os etanollal mossuk és vákuum exszikkátorban szárítjuk. 72 g (75%) cím szerinti terméket kapunk.

Op.: 139-141 ΐ. [a]²⁰ +37° (c= 1, dimetilformamidban).

Elemzési eredmény a C₂₃H₁₈O₄NC1₃ (478,75) képletre vonatkoztatva:

számított: C% = 57,70;H% = 3,79;N% = 2,92;

Cl% = 22,22;

talált: C% = 57,7; H% = 3,9; N% = 3,0;

Cl% = 22,2.

B. lépés: benzil-oxi-karbonil-D-fenilalanil-L-prolin

71,8 g (0,15 mól) benzil-oxi-karbonil-D-fenilalanin-2,4,5-triklór-fenil-észtert (1. példa. A. lépés) feloldunk keverés közben szobahőmérsékleten 180 ml vízmentes píridinben és hozzáadunk 17,3 g(0,15 mól) L-prolint, valamint 21,0 ml (0,15 mól) trietil-amint. A keverést a prolin feloldódásáig folytatjuk, majd a reakcióelegyet 4-6 órán át állni hagyjuk. A reakcióelegyet betöményítjük 80—100 ml-re 13—20. 10₂ Pa nyomáson max. 40 °C-os fürdőről, és a maradékot 250 ml vízben és 90 ml dietil-éterben feloldjuk. A vizes fázist kirázzuk kétszer 30 ml dietill-é terrel, az egyesített éteres fázisokat mossuk kétszer 30 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd az egyesített vizes fázisokat pH = 2-re savanyítjuk 3 n sósavval. Az elkülönített olajos terméket háromszor 120 ml etil-acetáttal kivonjuk, az egyesített etil-acetátos oldatokat mossuk háromszor 40 ml vízzel, szárítjuk vízmentes nátrium-szulfáton, és 15-20. 10₂ Pa nyomáson max. 40 °C-os fürdőről betöményítjük 50—100 ml-re. A maradékot 200 ml éterrel kristályosítjuk. A kristályokat kiszűrjük, kétszer 40 ml éterrel mossuk és levegőn szárítjuk.

50,4 g (85%) cím szerinti terméket kapunk.

Op.: 132-133 °C. [aj²⁰ = --36,4 ⁰ (c= 2, dimetilformamidban).

R? =0,5.

Elemzési eredmény a C₂₂H₂₄0₅N₂ (396,43) képletre vonatkoztatva:

számított: C% =66,65;H% = 6,10;N% = 7,07; talált: C%=66,4; H% = 6,25;N% = 7,2.

C. lépés: N-benzil-oxi-karbonil-N-metil-D-fenilalanil-L-prolin-ciklohexil-ammónium-só

39,6 g (0,1 mól) benzil-oxi-karbonil-D-fenilalanil-L-prolint (1. példa, B. lépés) és 50 ml (0,8 mól) metil-jodidot feloldunk 300 ml vízmentes tetrahidro-furánban. Az oldatot lehűtjük 0 °C-ra, és keverés közben hozzáadunk 13,2 g (0,3 mól) nátrium-hidriddiszperziót 8-10 részletben. A keverést szobahőmérsékleten folytatjuk 2 órán át. Ezt követően a reakcióelegyhez adunk 500 ml etil-acetátot (a keletkezett nátrium-hidroxid elbontására), majd óvatosan 10 ml vizet (a nátrium-hidrid feleslegének elbontására). Az oldatot 15—20 millibár nyomáson max. 40 °C-os fürdőről bepároljuk. A maradékot feloldjuk 250 ml vízben és 100 ml dietil-éterben. A vizes fázis mossuk 100 ml dietil-éterrel, az egyesített dietil-éteres fázisokat pedig 50 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonáttal. A hidrogén-karbonátos és vizes fázist egyesítjük, 5 n kálium-hidrogén-szulfáttal pH = 2-re savanyítjuk és kétszer 150 ml etil-acetáttal kirázzuk. Az egyesített etil-acetátos fázisokat mossuk 100 ml vízzel, 50 ml 10%-os nátrium-tioszulfát-oldattal, ismét 100 ml vízzel, majd vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és 15—20 millibár nyomáson max. 40 °C-os fürdőről bepároljuk. A maradékot feloldjuk 600 ml benzolban, hozzáadunk 12 ml (0,105 mól) ciklohexil-amint, és éjszakán át állni hagyjuk szobahőmérsékleten. A kivált kristályokat kiszűrjük, kétszer 200 ml benzollal mossuk és vákuum exszikkátorban szárítjuk paraffinforgács mellett. 38,2 g (75%) cím szerinti terméket kapunk.

Rj = 0,53 -0,60 (és ciklohexíl-amin: 0,01 —0,05).

Op.: 160—163 ’C. [a]^° = +12,1° (c=l, metanolban).

Elemzési eredmény a C₂₃H₂₆0_sN₂ .C₆H! ₃N(509,63) képletre vonatkoztatva: számított: C% = 68,34; H% = 7,71;N% = 8,25; talált: C% = 68,5; H% = 7,8; N% = 8,3.

Na -t -butil-oxi - karbonil -Νω - benzil-oxi-karbonil - L argininlaktám előállítása.

D. lépés:Να-t-butil-oxi-karbonil-Nw-benzil-oxikarbonil-L-argin in-hidrát

65,8 g (0,2 mól) t-butil-oxi-karbonil-L-argininklórhidrát-hidrátot [D. Yamashiro és munkatársai: J. Am. Chem. Soc. 94, 2855—2859 (1972)] feloldunk 100 ml 4 n nátrium-hidroxidban, lehűtjük 5—10 °C-ra és keverés mellett hozzáadunk 80 ml (0,5 mól) benzil-oxi-karbonil-kloridot és kb. 150 ml 4 n nátriumhidroxidot úgy, hogy a reakcióelegy pH-ja 12 felett legyen. Az adagolás befejezés után a reakcióelegyet még 3—4 órán át keverjük, majd 150 ml vízzel hígítjuk és 100 ml dietil-éterrel kirázzuk. A rendszer három fázisra válik szét. Az alsó két fázist még kétszer 100 ml dietil-éterrel mossuk, hozzáadunk 300-400 ml metanolt, hogy homogén oldatot kapjunk, és a pH-t szükség szerint 12-re állítjuk 4 n nátrium-hidroxiddal. 6—8 óra állás után az oldatot kétszer 100 ml 1:1 arányú petroléter-dietil-éter eleggyel kirázzuk, majd a pH-t 6—7-re állítjuk jégecettel (kb. 50 ml szükséges). Ezt követően az oldatot kivonatoljuk háromszor 140 ml metilén-kloriddal, a metilén-kloridos oldatokat egyesítjük, kétszer 60 ml vízzel mossuk, és 25—30. 10₂ Pa nyomáson körülbelül 40 °C-os fürdőről bepároljuk. A maradékhoz 300 ml benzolt és 600 ml vizet adunk, 2-3 órán át 20 °C-on keverjük, majd

192 646 °C-on állni hagyjuk éjszakán át. A kivált kristályokat kiszűrjük, 300 ml vízzel és 300 ml benzollal mossuk, és vákuum exszikkátorban szárítjuk foszfor-pentoxid és paraffin-forgács mellett.

g (70%) cím szerinti terméket kapunk.

Op.: 122-124 °C. [a]^° = -20,7° (c= 1, piridinben).

Elemzési eredmény a Ci₉H_2gO₆N₄.H₂O (426,46) képletre számolva:

számított: C% = 53,51; H% = 7,09; N% = 13,14; talált: C% = 53,35; H% = 7,2; N% = 13,1.

E. lépés: Na-t-butil-oxi-karbonil-Nw-benzil-oxi-karbonil-L-arginin -laktám

59,7 g (0,14 mól) Na-t-butil-oxi-karbonil-Ncj-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-hidrátot (1. példa, D. lépés) és 19,6 g (0,14 mól) trietil-amint feloldunk 200 ml tetrahidrofuránban. Az oldatot —10 °C-ra hűtjük, és ezen a hőmérsékleten hozzáadunk keverés közben

18,5 ml (0,14 mól) izobutil-oxi-karbonil-kloridot, majd 10 perc után 19,6 ml (0,14 mól) trietil-amint. A reakcióelegyet tovább keverjük egy órán át 0 °C-on és egy órán át hűtés nélkül, majd keverés közben egy liter jeges vízhez öntjük. A kivált kristályokat kiszűrjük, kétszer 100 ml jeges vízzel mossuk, majd feloldjuk 280 ml kloroformban. A kloroformos oldatot 100 ml jeges vízzel mossuk, és vízmentesen kalcium-kloridon szárítjuk, majd 20-25. 10₂ Pa nyomáson max. 40 °C-os fürdőről bepároljuk. Kristályos maradékot kapunk, amit 70 ml petroléterben szuszpendálunk, szűrünk, kétszer 30 ml petroléterrel mosunk, és vákuum exszikkátorban szárítunk foszfor-pentoxid mellett. 44 g (81%) cím szerinti terméket kapunk.

Op.: 164—166 °C. [a]²⁰ = —24° (c=l, tetrahidro-furánban).

Elemzési eredmény a C₁₉H₂₆0₅N₄ (390,43) képletre vonatkoztatva:

számított: C% = 58,44; H% = 6,71; N% = 14,35; talált: C% = 58,7; H% = 6,8; N%=14,1.

2. példa

NN -Dimetil-D-fenilalanil-L-prolil-L-argimn-aldehid-szulfát előállítása

1. lépés: N,N-dimetil-D-fenilalanil-L-prolil-Najbenzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktám-klórhidrát

4,3 g (0,011 mól) Na-t-butil-oxi-karbonil-Νωbenzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot (1. példa, E. lépés) az 1. példa 1. lépésében leírt módon alakítunk át arányos mennyiségű oldószerek és reagensek felhasználásával. A kapott szuszpenziót az alábbi vegyes anhidridhez adjuk.

3,26 g (0,01 mól) N,N-dimetil-D-fenilalani]-L-prolinhidrátot és 2,2 ml (0,02 mól) N-metil-morfolint feloldunk 50 ml benzol és 5 ml etanol elegyében. Az oldatot 40—50. 10² Pa nyomáson 40 °C-os fürdőről betöményítjük 10-15 ml-re, majd még négyszer 40 mi benzolt ledesztillálunk, az utolsó alkalommal szárazra párolunk. A maradékot feloldjuk 10 ml dimetilformamidban és lehűtjük -15 °C-ra.

Ezen a hőmérsékleten hozzáadunk 1,32 ml (0,01 mól) izobutil-oxi-karbonil-kloridot, majd 5 perc után a fenti dimetilformaniidos szuszpenziót. A reakcióelegyet egy órán át keverjük —15 °C-on és egy órán át 0 °C-on, majd 40 ml etil-acetátot adunk hozzá és a kivált sókat kiszűrjük. A szűrlethez 20 ml vizet adunk a fázisokat elválasztjuk. A vizes-dimetilformamidos fázist háromszor 5 ml etil-acetáttal kirázzuk. Az etilacetát os fázisokat egyesítjük, mossuk kétszer 15 ml vízzel, kétszer 15 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, ismét kétszer 15 ml vízzel, majd vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és 20—25. 10₂ Pa nyomáson 40 °C-os fürdőről 10—15 ml-re töményítjük. A maradék oldathoz annyi sósavas etil-acetátot adunk, hogy a gőztérben a sav kimutatható legyen, majd 30^40 ml dietil-éterrel hígítjuk. A kivált csapadékot kiszűrjük, dietil-éterrel mossuk és vákuum exszikkátorban szárítjuk kénsav és kálium-hidroxid melle t. 2,7 g (45%) cím szerinti terméket kapunk,

R =0,43 [a]²⁰ ~ —56,0° (c=l, kloroformban).

Elemzési eredmény a C₃₀H₃.0.,1%. 9/5 HCI. 2H₂O (666,13) képletre vonatkoztatva:

számí’ott: C% = 54,09; H% = 6,9; N% = 12,62;

Cl% = 9,58;

talált C% = 54,0; H% = 7,0; N% = 12,6;

Cl% = 9,8.

2. épés: N.N-dimetil-D-fenilalanil-L-prolil-Ncj-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehid-szulfát

2,4 g (0,004 mól) N,N-dimetil-D-fenilalanil-L-prolil-Nu. -benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktám-klórhidrátot (2. példa, 1. lépés) feloldunk 15 ml tetrahidro-furánban, lehűtjük —20 °C-ra, és keverés közben hozzáadunk 0,003 mól litium-alumínium-hidridet tetrahidro-furános oldatban. A redukció előrehaladását rétegkrcmatográfiával követjük az etil-acetát-piridinecetsav-víz (60:20:6:11) rendszerben (a laktám és az aldehii R₍ értéke kb. 0,35, illetve 0,2). Szükség szerint adagolunk további litium-alumínium-hidrid-oldatot, n ajd a reakcióelegyet hűtés és keverés közben pH = 5-re savanyítjuk 1 n kénsawal. Az oldatot zavaroscdásig hígítjuk vízzel (kb. 30 ml), majd kétszer 15 ml kloroformmal kirázzuk. Ezután a vizes tetrah drofurános fázist háromszor 20 ml n-butanollal kivonatjuk. A n-butanolos oldatokat egyesítjük, 10 ml n-butanollal telített vízzel mossuk, és 15—20· 10₂ Pa nyomáson max. 40 °C-os fürdőről 5—10 ml-re töményítjük. A maradékot 30 ml éterrel hígítjuk, a kivált csapadékot szűrjük, kétszer 10 ml dietil-éterrel és kétszer 10 ml petroléterrel mossuk, majd feloldjuk 20 ml kloroform és 5 ml metanol elegyében. A nem oldódó részt kiszűrjük, a szűrletet az előbbi módon be pároljuk.

A maradékként kapott olajos terméket 30 ml dietil-éterrel elkeverjük. Az így keletkező csapadékot kiszűrjük, kétszer 20 ml dietil-éterrel és kétszer 20 ml petroléterrel mossuk, vákuum exszikkátorban szárítjuk paraffin-forgács, kénsav és kálium-hidroxid mellet . 2,25 g (85%}cím szerinti terméket kapunk.

R⁵ =0 48—0.54. f

Elemzési eredmény a C₃₀H_3SO₅ N₆ ,H₂ SO₄ (660,73) képleti e vonatkoztatva:

számít itt: C% = 54,53;H% = 6,10;N% = 12,72;

S% = 4,84;

talált: C% = 55,0; H% = 6,5; N% = 12,1;

S% = 4,7.

3. lépés: N,N-dimetil-D-fenilalanil-L-prolil-L-arginin-aldehid-szulfát

1,32 g (0,002 mól) N,N-dimetil-D-fenilalanilL-proli!-N-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehid-szulfá7

-71 1 tót (2. példa, 2. lépés) feloldunk 5 ml ionmentes víz és 15 ml etanol elegyében, hozzáadunk 0,2 g 10%-os Pd/C katalizátort és hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük és kétszer 10 ml ionmentes vízzel mossuk. A szűrletet és mosó folyadékot 15-20· 10₂ Pa nyomáson max. 40 °C-os fürdőről 5—10 ml-re töményítjük, majd ionmentes vízzel 20 ml-re hígítjuk, és ellenőrizzük, hogy a pH 6,0-6,5 között van-e. A pH-t szükség szerint módosítjuk 0,1 n kénsawal, illetve OH^- ciklusú ioncserélő gyantával (pl. AG 1x8), s végül az oldatot lefagyasztjuk és liofilizáljuk. 0,85 g (80%) cím szerinti terméket kapunk.

R6 = 0,35-0,39

Elemzési eredmény a C_{2 2}H₃₄O₃N₆ .H₂ S0₄. 3(H₂O) (566,67) képletre vonatkoztatva:

számított: C% = 46,60; H% = 7,47;N% = 14,82;

S% = 5,66;

talált: C%=45,5; H% = 7,4; N% = 14,3;

S% = 5,2.

A kiindulási N,N-dimetil-D-fenilalanil-L-prolin-hidrátot az alábbiak szerint állíthatjuk elő:

11,9 g (0,03 mól) benzil-oxi-karbonil-D-fenilalanil-L-prolint (1. példa, B. lépés) feloldunk 200 ml 50%-os vizes metanolban, hozzáadunk 9,7 ml (kb. 0,12 mól) 37%-os vizes formaldehid-oldatot és 6 g 10%-os Pd/C katalizátort, majd hidrogénezzük. A reakció előrehaladását rétegkromatográfiával követjük az etil-acetát-piridin-ecetsav-víz (30:206:11) rendszerben (a kiindulási anyag és a végtermék R_f értéke 0,95, illetve 0,45). A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, kétszer 50 ml vizes metanollal mossuk és az egyesített oldatokat 20—25 millibár nyomáson 40 °C-os fürdőről bepároljuk. A maradékot feloldjuk 60 ml etilacetátban, hozzáadunk 0,5 ml vizet és 5—10 °C-on állni hagyjuk éjszakán át. A kivált kristályokat kiszűrjük, kétszer 15 ml 5-10 °C-os etilacetáttal mossuk és vákuum exszikkátorban szárítjuk paraffin-forgács, kénsav és kálium-hidroxid mellett. 6,5 g (67%) cím szerinti terméket kapunk.

Op.:228-229 °C. [a]*° = -159° (c=l, vízben).

Elemzési eredmény a C₁₆H₂₂O₃N₂.H₂O (308,37) képletre vonatkoztatva: számított: C% = 62,31; H% = 7,85;N% = 9,08; talált: C% = 62,5; H% = 8,0; N% = 8,95.

3. példa

N-Etil-D-fenilalanil-L-prolil-L-arginin-aldehid-szulfát előállítása

1. lépés: N-benzil-oxi-karbonil-N-etil-D-fenilalanil-L-prolil-Nco-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktám

2,1 g (0,005 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-etil-Dfenilalanil-L-prolint és 2,15 g (0,0055 mól) Να-t butil -oxi-karbonil-Nw-benzil-oxi-karbonil -L-arginin -laktámot (1. példa, E. lépés) az 1. példa 1. lépésében leír módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával — átalakítunk, illetve kondenzálunk. A reakciőelegy feldolgozásánál, az oszlopkromatográfia során azonban a frakciók anyagtartalmát 8:2 arányú benzol-tetrahidro-furán rendszerben vizsgáljuk rétegkromatográfiával. A főterméket (R^=0,4— 0,5) tisztán tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, 15-20- 10₂ Pa nyomáson bepároljuk kb. 40 °C-os fürdőről, majd a maradékot diizopropil-éterrel eldörzsöljük, szűrjük, diizopropil-éterrel mossuk és vá8

646 2 kuum exszikkátorban szárítjuk kénsav és paraffin-forgács mellett. 1,9 g (54%) cím szerinti terméket kapunk.

=0,75-0,85.

¹ 2. lépés: N-benzil-oxi-karbonil-N-etil-D-fenilalanil-L-prolil-Ncü-benzil-oxi-karbonil-Larginin-aldehid

1,4 g (0,002 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-etil-Dfenilalanil-L-prolil-Nw-benzil-oxi-karbonil-L-argininlaktámot (3. példa, 1. lépés) az 1. példa 2. lépésében le írt módon — arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával — átalakítunk. 1,15 g (72%) cím szerinti terméket kapunk, mely az elemanalizis szerint tartalmaz 1 mól ciklohexánt.

Rj =0,55-0,65.

Elemzési eredmény a C_3gH₄₆0₇N₆ .CgHi ₂ (782,95) képletre vonatkoztatva:

számított: C% = 67,49; H% = 7,47; N% = 10,73;

talált: C%=67,6; H% = 7,5; N% = 10,5.

3. lépés: N-etil-D-fenilalanil-L-prolil-L-argínin-aldehid-szulfát

0,78 g (0,001 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-etilDfenilalanil-L-prolil-Noo-benzil-oxi-karbonil-L-argi25 nin-aldehidet (3. példa, 2. lépés) az 1. példa 3. lépésében leírt módon — arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával — átalakítunk. 0,75 g (70%) cím szerinti terméket kapunk.

^R- ⁼⁰’⁴^’⁵·

Elemzési eredmény a C₂₂H₃₄O₃N₆.5/6 (H₂S0₄).

3.5 (H₂ O) (575,27) képletre vonatkoztatva: számított: C% =45,93;H% = 7,48;N% = 14,61;

S% = 4,64;

taréit: C%=46,1; H% = 7,6; N% = 14,2;

S% = 4,6.

A kiindulási N-benzil-oxi-karbonil-N-etil-D-fenilalanil-L-prolint az alábbi módon állíthatjuk elő :

A. lépés:N-etil-D-fenilalanin

8,25 g (0,05 mól) D-fenilalanint feloldunk 100 ml

20%-os vizes etanolban, hozzáadunk 5,65 ml (0,1 mól) acetaldehidet és 2 g 10%-os Pd/C katalizátort, majd két napon át hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, 60 ml 2 n sósavval mossuk, és a vizes olda45 tokát 4 n nátrium-hidroxiddal pH= 7-re állítjuk. A kivá't anyagot kiszűrjük, háromszor 20 ml vízzel mossuk, és vákuum exszikkátorban szárítjuk vízmentes kalcium-klorid mellett.

4,85 g (50%) cím szerinti terméket kapunk.

—53°(c=l,0,l n nátrium-hidroxidban).

Elemzési eredmény a C, jHjjOjN (193,24) képletre vonatkoztatva:

számított: C% = 68,37; H% = 7,82;N% = 7,25; talált: C% = 68,5; H% = 7,65;N% = 7,2.

B. lépés: N-benzil-oxi-karbonil-N-etil-D-fenilalanin

2.5 g (0,015 mól) N-etil-D-fenilalanint (3. példa, A. lépés) feloldunk 22,5 ml 2 n nátrium-hidroxidban, hozzáadunk 10 ml dioxánt, majd 5-10 °C-ra történő hűrés után 2,5 ml (kb. 0,017 mól) benzil-oxi-karbonil kloridot és 3 órán át keverjük hűtés közben. A reakcióelegyet 40 ml vízzel hígítjuk és 30 ml dietil-éter petroléter 1:1 arányú elegyével kirázzuk. Három fázisú rendszert kapunk. Az alsó két fázist ismét kirázzul 30 ml dieti-éterrel, majd az egyesített dietil-éteres

192 646 oldatokat 20 ml vízzel. A vizes fázisokat egyesítjük és 1 n kénsavval pH = 2-re savanyítjuk. Az elkülönülő terméket háromszor 30 ml etil-acetáttal kivonjuk.

Az etil-acetátos oldatokat egyesítjük, kétszer 20 ml vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, majd 15 20 millibar nyomáson max. 40 °C-os fürdőről bepároljuk. 2,7 g (55%) cím szerinti tennétek kapunk olaj formában.

R* = 0,5-0,6.

C. lépés:N-benzil-oxi-karbonil-N-etil-D-fenilalanil-L-prolin

2,6 g (0,008 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-etil-Dfenilalanint (3. példa, 2. lépés) feloldunk 10 ml tetra-hidro-furánban, 0 °C-on hozzáadunk 1,6 g (0,008 mól) 2,4,5-triklór-fenolt és 1,65 g (0,008 mól) diciklohexil-karbodimidet, majd szobahőmérsékleten állni hagyjuk 4 órán át. A reakcíóelegyet szűrjük, és 15—20 millibár nyomáson kb. 40 °C-os fürdőről bepároljuk. A maradékot 40 ml benzolban feloldjuk, mossuk kétszer 20 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonátoldattal és kétszer 20 ml vízzel, majd vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és 15-20 millibár nyomáson kb. 40 °C-os fürdőről bepároljuk. A maradék olajos terméket feloldjuk 10 ml piridinben, hozzáadunk 0,92 g (0,008 mól) L-prolint és 1,12 ml (0,008 mól) trietil-amint, majd szobahőmérsékleten keverjük a prolin feloldódásáig. Ezt követően az oldatot állni hagyjuk 4-5 órán át, majd 15-20 millibár nyomáson bepároljuk kb. 40 °C-os fürdőről. A maradékot feloldjuk 25 ml vízben és 10 ml dietil-éterben. A vizes fázist mossuk kétszer 10 ml dietil-éterrel, és az egyesített dietil-éteres oldatokat kétszer 10 ml 5%-os nátriumhidrogén-karbonát-oldattal. A vizes oldatokat egyesítjük, és pH = 2-re savanyítjuk 3 n sósavval. Az elkülönülő terméket kivonjuk háromszor 15 ml benzollal, a benzolos oldatokat egyesítjük, kimossuk háromszor 5 ml vízzel, szárítjuk vízmentes nátrium-szulfáton, majd bepároljuk 15—20· 10₂ Pa nyomáson kb. 40 °C-os fürdőről. 2,2 g (64%) cím szerinti terméket kapunk olaj formában.

R* =0,5-0,6.

4. példa

N-izobutil-D-fenilalanil-L-prolil-L-argimn-aldehidszulfát előállítása

1. lépés: N-benzil-oxi-karbonil-N-izobutil-D-fenilalanil-L-prolil-Ncu-benzil-oxi-karbonil-Larginin-laktam

2,26 g (0,005 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-izobutil-D-fenilalanil-L-prolint és 2,15 g (0,0055 mól) Να-t-b util-oxi-karbonil-Ncu-benzil-oxi-karbonil-L-argininlaktámot (1. példa, E. lépés) az 1. példa 1. lépésében leírt módon — arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával — átalakítunk, illetve kondenzálunk. A reakcióelegy feldolgozásánál, az oszlopkromatográfia során, a frakciók anyagtartalmát etil-acetát -piridin-ecet sav-víz (480:20 6:11) rendszerben vizsgáljuk rétegkromatográfiával, és a 0,75—0,85 R értékkel vándorló anyagot tisztán tartalmazó frakciókat gyűjtjük össze. Az egyesített frakciókat 15—20 · 10₂ Pa nyomáson bepároljuk kb. 40 °C-os fürdőről, majd a maradékot petroléterrel eldörzsöljük, szűrjük, petroléterrel mossuk és vákuum exszikkátorban paraffin-forgács mellett szárítjuk.

2,7 g (75%) cím szerinti terméket kapunk.

R/; =0,75-0,85. [aV° = -5,8° (c=l, tetrahidrofuránban).

Elemzési eredmény a C₄₀H_4gO₇N₆. 2/3 (C₄H_gO) (772,90) képletre vonatkoztatva:

számított: C% = 66,30; H% = 6,95; N% = 10,87; talált: C% = 65,0; H% = 6,8; N% = 10,80.

2. lépés: N-benzil-oxi-karbonil-N-izobutil-D-fenilalanil-L-prolil-Ncü-benzil-oxi-karboníl-Larginin-aldehid

1,45 g (0,002 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-izobutil-D-fenilalanil-L-prolil-Noj-benzil-oxi-karbonil-Larginin-laktámot (4. példa, 1. lépés) az 1. példa 2. lépésében leírt módon — arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával - redukáltunk.

1,0 g (62%) cím szerinti terméket kapunk.

Rj! =0.24 [a]p° =+2,3 (c=l, tetrahidro-furánban).

Elemzési eredmény a C₄₀H₅₀O₇N₆.1/4 (C₆H_i2) (747,81) képletre vonatkoztatva:

₂₀ számított: C% = 66,64;H% = 7,14;N% = 11,24; talált: C% = 66,3; H% = 7,1; N% = 11,2.

3. lépés: N-izobutil-D-fenilalanil-L-prolil-L-argininaldehid-szulfát

0,8 g (0,001 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-izo25 butil-D-fenilalanil-L-prolil-Nw-benzil-oxi-karbonil-Larginin-aldehidet (4. példa, 2. lépés) az 1. példa 3. lépésében leírt módon — arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával — átalakítunk. 0,45 g (80%) cím szerinti terméket kapunk.

³⁰ R® =0,64

Elemzési eredmény a C₂₄H_3gO₃N₆.H₂SO₄.4(H₂O) (628,74) képletre vonatkoztatva:

számított: C% = 45,84;H% = 7,69;N% = 13,36;

S% = 5,1;

C%=45,8; H% = 7,2; N%=13,4; S%=4,9.

A kiindulási N-benzil-oxi-karbonil-N-izobutil-D-fenilalanil-L-prolint az alábbiak szerint készíthetjük:

₄q A. lépés:N-izobutil-D-fenilalanin

8,25 g (0,05 mól) D-fenilalaninból kiindulva a 3.

példa A. lépésében leírt módon járunk el, azzal az eltéréssel, hogy acetaldehid helyett 9,1 ml (0,1 mól) izobutiraldehidet használunk. 8,7 g (70%) cím szerinti ₄g terméket kapunk.

[a]p° = -29,9° (c=l, 0,1 n nátrium-hidroxidban).

Elemzési eredmény a Cj ₃H, ₉O₂N.l/2 (H₂O) (230,30) képletre vonatkoztatva:

számított: C% = 67,79;H% = 8,75;N% = 6,08;

⁵⁰ talált: C% = 67,2; H% = 8,9; N% = 6,15.

B. lépés:N-benzil-oxi-karbonil-N-izobutil-D-fenilalanjn 3,32 g (0,015 mól) N-izobutil-D-fenilalanint (4. pé da, A. lépés) a 3. példa B. lépésében leirt mó55 non a akítunk' át. 3,2 g (60%) cím szerinti terméket kapunk olaj formájában.

R₍. = 0 6-0,7.

C. lépés: N-benzil-oxi-karbonil-N-izobutil-D-fenilalanil-L-prolin gQ 2,85 g (0,008 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-izobutil-E'-fenilalaninból (4. példa, B. lépés) kiindulva a 3. példa C. lépésében leírt módon járunk el. 2,45 g (67%) cím szerinti terméket kapunk olaj formában.

R* =0,65-0,70.

talált:

192 646

5. példa

N-metil-D-alloizoleucil-L-prolil-L-arginin-aldehidszulfát előállítása

1. lépés: N-benzil-oxi-karbonil-N-metil-D-alloizoleucil-L-prolil-Nw-benzil-oxi-karbonil-L- 5 arginin-laktám

4.3 g (0,011 mól) Na-t-butil-oxi-karbonil-Ncc-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot (1. példa, E. lépés) és 4,8 g (0,01 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-metil-Dalloizoleucil-L-prolin-ciklohexil-ammónium-sót, az 1. 10 példa 1. lépésében leírt módon — arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával — átalakítunk, illetve kondenzálunk. Az oszlopkromatográfia során a 0,74-0,80 R² értékkel vándorló anyagot tisztán tartalmazó frakciókat gyűjtünk össze. Az össze- 15 gyűjtött frakciók bepárlása után a maradékot 40 ml diizopropil-éterrel dörzsöljük el, a csapadékot kiszűrjük kétszer 20 ml diizopropil-éterrel mossuk, és vákuum exszikkátorban szárítjuk kénsav és paraffin-forgács mellett. 4,3 g (66%) cím szerinti terméket ka- 20 púnk.

R² =0,74-0,80.

Elemzési eredmény a C₃₄H₄₄O₇N₆ (648,74) képletre vonatkoztatva: 25 számított: C% = 62,94; H% = 6,84; N% = 12,96; talált: C% = 63,1; H% = 6,9; N% = 12,7.

2. lépés: N-benzil-oxi-karbonil-N-metil-D-alloizoleucil-L-prolil-Ncu-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehid 30

3,25 g (0,005 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-metilD-alloizoleucil-L-prolil-Nöj-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot (5, példa, 1. lépés) az 1. példa 2. lépésében leírt módon — arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával - átalakítunk. 2,5 g 35 (66%) cím szerinti terméket kapunk, amely az elemanalizis szerint 1 mól ciklohexánt is tartalmaz.

R³ =0,55.

Elemzési eredmény a C₃₄H₄₆O₇N₆. C₆Hi₂ (734,91) képletre vonatkoztatva: ^υ számított: C% = 65,37; H% = 7,95; N% = 11,43; talált: C% = 65,0; H% = 7,8; N% = 11,6.

3. lépés: N-metíl-D-alloizoleucil-L-prolil-L-argininaldehid-szulfát

1,47 g (0,002 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-metilD-alloízoleucil-L-prolil-Ncu-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehidet (5. példa. 2. lépés) az 1. példa 3. lépésében leírt módon — arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával — átalakítunk.

0,85 g (87%) cím szerinti terméket kapunk.

R_f ⁶ =0,4.

Elemzési eredmény a C_{7 8}H₃₄O₃N₆ .H₂S0₄.4 (H₂0) (552,65) képletre vonatkoztatva:

számított: C% = 39,12; H% = 8,02; N% = 15,21; 55

S% = 5,80;

talált: C% = 39,2; H% = 7,70;N% = 15,1;

S% = 5,7.

A kiindulási N-benzil-oxi-karbonil-N-metil-D-alloizoleucil-L-prolin-ciklohexil-ammónium-sót az alábbi 60 módon szintetizáljuk:

A. lépés:N-benzil-oxi-karbonil-D-alloizoleucil-Lprolin-ciklohexil-ammónium-só

13.3 g (0,05 mól) benzil-oxi-karbonil-D-alloizoleucint [M. Winitz és munkatársai:!. Am. Chem. Soc. θ®

98, 2423-2430 (1956)] és 9,9 g (0,05 mól) 2,4,5-trik'ór-fenolt feloldunk 50 ml etil-acetátban, hozzáadunk 10,2 g (0,05 mól) diciklohexil-karbodiimidet és éjszakán át állni hagyjuk. A kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, s szűrletet 15-20 · 10₂ Pa nyomáson bepároljuk kb. 40 °C-os fürdőről. A maradékot feloldjuk 100 ml n-hexánban, kirázzuk 20 ml 1 n nátriim-hidroxiddal és kétszer 20 ml vízzel, majd vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és az előbbi módon bepároljuk. A maradékot feloldjuk 50 ml piridinben, hozzáadunk 5,7 g (0,05 mól) L-prolint és 7,0 ml (C,05 mól) trietil-amint, majd a prolin feloldódásáig keverjük, és ezt követően állni hagyjuk éjszakán át. A reakcióelegyet 15—20 millibar nyomáson bepároljuk kb. 40 °C-os fürdőről. A maradékot feloldjuk 50 m': 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldatban és 50 m’ dietil-éterben. A vizes fázist mossuk kétszer 30 ml éterrel, majd pH = 3-ra savanyítjuk 3 n sósavval. Az elkülönülő anyagot kivonjuk háromszor 30 ml etilacetáttal, az etil-acetásos oldatokat egyesítjük, mossuk háromszor 30 ml vízzel, szárítjuk vízmentes nátrii m-szulfáton és az előbbi módon bepáróljuk. A maradékot feloldjuk 100 ml diizopropil-éterben, hozzáadunk 6,0 ml (0,052 mól) ciklohexil-amint és állni hagyjuk 4—5 órán át. A kivált kristályos anyagot kiszűrjük, háromszor 30 ml diizopropil-éterrel mosSUK és vákuum exszikkátorban szárítjuk kérisav és kálium-hidroxid mellett. 14,5 g (62%) cím szerinti terméket kapunk.

OP.: 138-140°C. R³ =0,35-0,40. [α]^2θ = -30,7° (cl, metanolban). ^D

Elemzési eredmény a Ci ₉ H_{2 6} O₅ N₂ ,C₆ H, ₃ N (461,59) képletre vonatkoztatva: számított: C% = 65,05;H% = 8,52;N% = 9,10; talált: C% = 65,4; H% = 8,5; N% = 9,05.

B. lépés :N-benzil-oxi-karbonil-N-metil-D-alloizoleucil-L-prolin-ciklohexil-ammónium-só

9,25 g (0,02 mól) benzil-oxi-karbonil-D-alloízolercil-L-prolin-ciklohexil-ammónium-sót (5. példa, A. lépés) feloldunk 50 ml dietil-éterben és 50 ml 0,5 n ké isavban. A vizes fázist kirázzuk 20 ml dietil-éterrel, és az egyesített éteres oldatokat háromszor 30 ml vízzel, majd vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és 20-30 millibar nyomáson kb. 40 °C-os fürdőről bepá: óljuk. A párlási maradékként kapott N-benzil-oxikai bonil-D-alloizoleucil-L-prolint az 1. példa 3. lépését en leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával — alakítjuk tovább.

8,1 g (85%) cím szerinti terméket kapunk.

Op.: 120-123 °C. R³ =0,55-60. [α]^2θ =+43,8° (c=l, metanolban). ^{f D}

Elemzési eredmény a C₂₀H₂₈O₅N₂ ,C₆H₁₃N (4^5,61) képletre vonatkoztatva: számított: C% = 65,65; H% = 8,69; N% = 8,83; talált: C% = 65,6; H% = 8,7; N% = 8,75.

5. példa

N-n-hexil-D-fenilalanil-L-prolil-L-arginin-aldehidszulfát előállítása

1. lépés: N-benzil-oxi-karbonil-N-n-hexil-D-fenilalanil-L-prolil-Nw-benzil-oxi-karbonil-Larginin-aldehid

3,5 g (0,01 mól) N-n-hexil-D-fenilalanil-L-prolint (A. lépés) feloldunk 10 ml dioxán és 14 ml 2 n nátrium-hidroxid elegyében, majd 5—10 °C-on hozzáadvnk 2,1 ml (0,028 mól) benzil-oxi-karbonil-klo10

-101

192 646 ridot, és 4 órán át keveijük. Ezt követően a reakcióelegyet hígítjuk 30 ml vízzel és kétszer 20 ml petroléterrel kirázzuk. A vizes fázist 1 n kénsavval savanyítjuk (pH = 2—3) és háromszor 20 ml etil-acetáttal kirázzuk. Az egyesített etil-acetátos oldatokat mossuk háromszor 10 ml vízzel, vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, majd 20—25 · 1¾ Pa nyomáson bepároljuk. 2,9 g (60%) olajos terméket kapunk.

R² =0,48.

' A fenti terméket és 2,58 g (0,0066 mól) Na-t-butil-oxi-karbonil-Nw-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot (1. példa, E. lépés) az 1. példa 1. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával — átalakítunk, illetve kondenzálunk. Az oszlopkromatográfia során a főterméket (R² = 0,68) tisztán tartalmazó frakciókat összegyűjtjük és 20—25 · 10₂ Pa nyomáson bepároljuk. 2,7 g (60%) olajos terméket kapunk.

R³ -0,68.

¹A fenti terméket az 1. példa 2. lépésében leírt módon — arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával - átalakítjuk. 2,2 g (80%) cím szerinti terméket kapunk.

R² =0,53.

Elemzési eredmény a C₄₂H₅₄O₇N₆ (699,82) képletre vonatkoztatva:

számított: C% = 66,82;H% = 7,21;N% = 11,13; talált: C% = 66,5; H%=7,4; N% = 11,4;

2. lépés: N-n-hexil-D-fenilalanil-L-prolil-L-argininal-dehid-szulfát

0,74 g (0,001 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-nhexil-D-fenilalanil-L-prolil-Nw-benzil-oxi-karbonil-Larginin-aldehidet (6. példa, 1. lépés) az 1. példa 3. lépésében leírt módon — arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával — átalakítunk. 0,52 g (80%) cím szerinti terméket kapunk.

R² =0,75. f

Elemzési eredmény a C₂₆H₄₂O₃N₆.H₂SO₄.4(H₂O) (656,79) képletre vonatkoztatva:

számított: C% = 47,54; H% = 7,98;N% = 12,80;

S%=4,88;

talált: C%=47,6; H% = 8,1; N% = 12,7;

S%=4,8.

A kiindulási N-hexil-D-fenilalanil-L-prolint az alábbiak szerinti állíthatjuk elő:

7,9 g (0,02 mól) benzil-oxi-karbonil-D-fenilalanilL-prolint (1. példa, B. lépés) és 4,9 ml (0,04 mól) kapron-aldehidet feloldunk 100 ml 80%-os etanolban és 6 g 10%-os csontszenes palládium-katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, és a szűrletet bepároljuk. A kristályos maradékot 20 ml vízben szuszpendáljuk, szűrjük, kétszer 10 ml vízzel mossuk, és vákuum exszikkátorban szárítjuk foszfor-pentoxid jelenlétében. 3,0 g (60%) cím szerinti terméket kapunk.

R³ = 0,6. [o]²’ = -97,3° (c=l, 0,1 n nátrium-hidroxidban).

Elemzési eredmény a C₂₀H₃₀O₃N₂ (346,45) képletre vonatkoztatva:

számított: C% = 69,33; H% = 8,73;N% = 8,08; talált: C% = 68,9; H% = 8,8; N% = 8,0.

7. példa

N-metil-D-fenilalanill-prolil-D-arginin-aldehidszulfát előállítása

1. lépés: N-benzil-oxi-karbonil-N-metil-D-fenilalanil-L-prolil-Ntc-benzil-oxi-karbonil-D-arginin-laktám

4,3 ξ (0,011 mól) Na-t-butil-oxi-karbonil-Nco-benzil-oxi-karbonil-D-arginin-laktámot és 5,09 g (0,01 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-metil-D-fenilalanil-Lprolin-i iklohexil-ammónium-sót (1. példa c. lépés) az

1. példa 1. lépésében leírt módon — arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával — átalakítunk. illetve kondenzálunk. 4,5 g (65%) cím szerinti terméket kapunk.

[α]θ° - +28,3° (c=l, tetrahidro-furánban).

R = 0 55-0,65 (etil-acetátban, R = 0,7-0,8 (D,L,L forma)

Elemzési eredmény a C₃₇H₄₂O₇N₆ (682,75) képletre vonatkoztatva:

számított: C% = 65,08; H% = 6,20;N% = 12,31; talált: C%=65,2; H% = 6,3; N% = 12,2.

2. lépés: N-benzil-oxi-karbonil-N-metil-D-fenilalanil-L-prolil-Ncj-benzil-oxi-karbonil-D-arginin-aldehid

3,41 g (0,005 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-metilD-fenilalanil-L-prolil-Nw-benzil-oxi-karbonil-D-arginin-lak^ámot (7. példa 1. lépés) redukálunk az 1. példa 2. lépésében leírt módon arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával. 2,7 g (70%) cím szerinti terméket kapunk, amely az elemanalizis szerint 1 mól ciklohexánt tartalmaz.

R³ = 0,57-0,67. [α]^2θ = +45,5° (c=l, tetrahidro-furánban).

Elemzési eredmény a C₃₇H₄₄O₇N₆.C₆H₁₂ (768,93) képletre vonatkoztatva:

számítc tt: C% = 67,16;H%> = 7,34;N% = 10,93; talált: C%=66,9; H% = 7,1; N% = 10,8.

3. lépés N-metil-D-fenilalanil-L-prolil-D-arginin-aldehid-szulfát

2,31 g (0,003 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-metilD-fenil;ilanil-L-prolil-Neo-benzil-oxi-karbonil-D-arginin-ald< hidet (7. példa 2. lépés) hidrogénezünk az 1. példa 3. lépésében leírt módon arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával. 1,24 g (75%) cím sze'inti terméket kapunk.

R® = 0,39-0,47. [a]²⁰ = -75° (c=l, vízben).

A ki ndulási Na-t-butil-oxi-karbonil-N<x>-benzil-oxikarbonil-D-arginin-laktám-ol az alábbiak szerint állíthatjuk elő:

5,97 g (0,014 mól) Na-t-butil-oxi-karbonil-Νωbenzil-cxi-karbonil-D-arginin-hidrátot, melyet az 1. példa D. lépése szerint állítottunk elő azzal a különbséggel, hogy t-butil-oxi-karbonil-D-arginin-klórhidráthidrátból indulunk ki, átalakítunk az 1. példa E. lépése szeri it arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával.

g (73%) cím szerinti terméket kapunk.

Op.: 155-56° [ez] ²⁰ =+24° (c=l, tetrahidro-furánben). ^D <5. példa

N-metil-D-fenilalanil-L-prolll-DL-arginin-aldehidszi, Ifát előállítása

1. ^;épés: N-benzil-oxi-karbonil-N-metil-D-fenilala11

-111

192 646 nil-L-prolil-Ncü-benzil-oxi-karbonil-DL-arginin-laktám

4,3 g (0,011 mól) Na-t-butil-oxi-karbonil-Nw-benzil-oxi-karbonil-DL-arginin-laktámot és 5,09 g (0,010 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-metil-D-fenilalanil-Lprolin-ciklohexil-ammönium-sót (1. példa C. lépés) az 1. példa 1. lépésében leírt módon - arányos menynyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával átalakíthatunk.

4,0 g (60%) cím szerinti terméket kapunk.

[α]θ° = +20° (c=l, tetrahidro-furánban).

Etil-acetátban elválik a két diasztereomer:

R = 0,55-0,65 (D,L,D forma) és R = 0,7-0,8 (D,L, L'forma).

2. lépés: N-benzil-oxi-karbonil-N-metil-D-fenilalanil-L-prolil-Nw-benzil-oxi-karbonil-DL-arginin-aldehid

3,41 g (0,005 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-metilD-fenilalanil-L-prolil-Nco-benzil-oxi-karbonil-DL-arginin-laktámot (8, példa 1. lépés) átalakítunk arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával ’az 1. példa 2. lépésében leírt módon. 2.9 g (75%) cím szerinti terméket kapunk, amely 1 mól ciklohexánt tartalmaz.

R³ = 0,52-0,67 [a]³⁰ = +32,5° (c=l, tetrahidro-furánban).

3. lépés: N-metil-D-fenilalanil-L-prolil-DL-argininaldehid-szulfát

2,31 g (0,003 mól) N-benzil-oxi-karbonil-N-metilD-fcnil-alanil-L-prolil-Ncj-benzil-oxi-karbonil-DL-arginin-aldehidet (8. példa 2. lépés) az 1. példa 3. lépése szerinti átalakítunk. 1,15 g (70%) cím szerinti terméket kapunk.

R® =0,39-0,47 [a]™ = -109° (c=l, vízben).

9. példa

Gyógyszerkészitmény előállítása illetve 12 órás intravénás infúzió céljára alkalmas 2 ampullás készítményt a következőképpen állítjuk elő: 420—840 g N-metil-D-fenilalanil-L-prolil-Larginin-aldehid-szulfát hatóanyagot és 40-80 mg humán albumint együtt liofilizálunk. Az így liofilizált ampulla tartalmát felhasználás előtt oldjuk 100—200 ml steril, pirogénmentes izotóniás konyhasó oldatban.

Claims

Szabadalmi igénypontok

1. Eljárás az I általános képletű új N-alkil-peptid-aldehid-sók - ahol

Rí jelentése hidrogénatom vagy 1 —6 szénatomszámú egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport,

R₂ jelentése 1 —6 szénatomszámú egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, továbbá Rí és R₂ az Xxx alfa-aminosav aminocsoportjához kapcsolódik,

Xxx jelentése D-fenilalanin-csoport, vagy Dallo-izoleucin-csoport,

Pro jelentése L-prolin-csoport,

Yyy jelentése L-arginin-csoport és

A jelentése savmaradék előállítására, azzal jellemezve, hogy az Νω-védett argininlaktámot valamely N-terminálisán védőcsoporttal ellátott és N-mono-alkil- vagy N,N-dialkil-Xxx-ProOH dipeptiddel — ahol Xxx és Pro jelentése a fenti — kondenzáljuk, majd az így kapott védett tripeptid-laktámot, redukáljuk, majd az így kapott védett tripep5 t:d-aldehidről a védőcsoporto(ka)t eltávolítjuk és az Nalkil- vagy Ν,Ν-dialkil-tripeptid-aldehid-sót elkülönítjük.

Elsőbbsége: 1984. 12. 21.
2. Az 1. igénypont szerint eljárás, azzal jellemezve,

10 hogy dipeptidként N-benzil-oxi-karbonil-N-metil-Df jnilalanil-L-prolint alkalmazunk.

Ilsőbssége: 1984. 12.21.
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy dipeptidként N,N-dimetÜ-D-fenilalanil-L-pro15 Ént alkalmazunk.

Elsőbbsége: 1984. 12. 21.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy dipeptidként N-benzil-oxi-karbonil-N-etil-Dfmilalanil-L-prolint alkalmazunk.

20 Elsőbbsége: 1984. 12. 21.
5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy dipeptidként N-benzil-oxi-karbonil-N-ízobutil-D-fenilalanilL-prolint alkalmazunk.

Elsőbbsége: 1984. 12.21.

25
6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy dipeptidként N-benzil-oxi-karbonil-N-n-hexil-D-fenilalanil-L-prolint alkalmazunk.

Elsőbbsége: 1984. 12. 21.
7. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemez30 ve, hogy dipeptidként N-benzil-oxi-karbonil-N-metilD-alloizoleucil-L-prolint alkalmazunk.

Elsőbbsége: 1984. 12. 21.
8. Eljárás főként véralvadásgátló gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy egy vagy

35 Több az 1. igénypont szerinti eljárással előállított I általános képletű vegyületet — ahol R,, R₂, Xxx, Pro, Yyy és A jelentése az 1. igénypontban megadott — kívánt esetben egyéb, gyógyászati hatékonyságú, az ί általános képletű vegyületekkel szinergizmust nem

40 mutató vegyülettel és a gyógyszerkészítésben haszná’atos oldó-, vivő-, hordozó és segédanyagokkal együtt isszekeverjük a gyógyszerkészítésben szokásos mólon, gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.

Elsőbbsége: 1984. 12.21.

45
9. Eljárás az I általános képletű új N-alkil-peptidddehid-sók - ahol

Rj jelentése hidrogénatom vagy 1—6 szénatomszámú egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport,

50 R₂ jelentése 1 —6 szénatomszámú egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, továbbá Rí és R₂ az Xxx alfa-aminosav aminocsoportjához kapcsolódik,

Xxx jelentése D-fenilalanin-csoport, vagy D-al55 loizoleucin-csoport,

Pro jelentése L-prolin-csoport,

Yyy jelentése L-,D-vagy DL-arginin-csoport és

A jelentése savmaradék — előállítására, azzal jellemezve, hogy az Νω-védett ar60 ginin-laktámot valamely N-terminálisán védőcsoporttal ellátott és N-mono-alkil- vagy N,N-dialkil-XxxPro-OH dipeptiddel - ahol Xxx és Pro jelentése a fenti - kondenzáljuk, majd az így kapott védett tripeptid-laktámot redukáljuk, majd az így kapott védett

65 tripeptid aldehidről a védőcsoporlo(ka)t eltávolítjuk

-12192 646 2 és az N-alkil- vagy N,N-dialkil-tripeptid-aldehid-sót elkülönítjük.

Elsőbbsége :1985. 11. 11.
10. Eljárás főként véralvadásgátló gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy egy vagy több a 9. igénypont szerinti eljárással előállított I általános képletű vegyületet - ahol R_t, R₂, Xxx, Pro, Yyy és A jelentése a 9. igénypontban megadott — kívánt esetben egyéb, gyógyászati hatékonyságú, az I általános képletű vegyületekkel szinergizmust nem mutató vegyülettel és a gyógyszerkészítésben használatos oldó-, vivő-, hordozó és segédanyagokkal együtt

5 összekeverjük és a gyógyszerkészítésben szokásos módon, gyógyszerkészítménnyé alakítunk.