CN1238003A - 含有蛋白酶和蛋白酶抑制剂的液体洗衣洗涤剂组合物 - Google Patents

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J·M·麦基维尔
A·C·胡伯
C·W·肖恩德斯
L·A·史密斯
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    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C11D3/38663—Stabilised liquid enzyme compositions

Abstract

本发明描述了含有去污表面活性剂、蛋白酶和蛋白酶抑制剂的含水液体洗涤剂组合物，所述蛋白酶抑制剂选自蛋白质、肽和肽衍生物，例如肽醛和肽三氟甲基酮，其中在该洗衣洗涤剂组合物中的蛋白酶活性低于在没有蛋白酶抑制剂情况下的活性的1%，在洗涤中游离蛋白酶的百分数与在洗衣洗涤剂组合物中游离蛋白酶的百分数的比例大于约100，优选大于约200，更优选大于约400。

Description

含有蛋白酶和蛋白酶抑制剂的液体洗衣洗涤剂组合物
                   发明领域
本发明涉及含蛋白酶的液体洗衣洗涤剂组合物。更具体地说，本发明涉及含有去污表面活性剂、蛋白酶和选自蛋白质、肽和肽衍生物例如肽醛和肽三氟甲基酮的蛋白酶抑制剂的液体洗衣洗涤剂组合物。
                    发明背景
含蛋白酶的含水液体洗涤剂是公知的，尤其在洗衣领域中。在这种含蛋白酶的含水液体洗涤剂中普遍遇到的问题是在组合物中的第二种酶例如淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶被蛋白酶的降解现象和蛋白酶对其自身蛋白酶的降解现象。结果第二种酶或蛋白酶自身在洗涤剂组合物中的稳定性受到影响，因此洗涤剂组合物的作用不太好。
应此问题，已建议使用各种蛋白酶抑制剂或稳定剂。例如，各种参考文献提出使用以下的化合物以助于酶的稳定：蛋白质、苄脒盐酸盐、低级脂肪醇或羧酸、多元醇和硼化合物的混合物、芳族硼酸酯，和钙，特别是甲酸钙。近来，发现某些肽醛和肽三氟甲基酮有稳定蛋白酶的作用。
尽管这些化合物在液体洗涤剂中已取得各种成功，但仍然需要稳定的含蛋白酶的液体洗衣洗涤剂组合物。
背景技术
已提出了使用各种蛋白酶抑制剂或稳定剂。例如US4566985提出了使用苄脒盐酸盐；EP376705提出了使用低级脂肪醇或羧酸；EP381262提出了使用多元醇和硼化合物的混合物；和EP91870072.5提出了使用芳族硼酸酯。还参见1991年7月9日颁布的美国专利5030378。还参见US4261868；US4404115；US4318818；和EP130756。
使用肽衍生物抑制蛋白酶似乎已公开在治疗方面的申请中。EP293881公开了使用肽硼酸作为类似胰蛋白酶的丝氨酸蛋白酶的抑制剂。EP185390和US4399065公开了使用某些肽醛衍生物抑制血液凝固。J90029670公开了使用光学活性a-氨基醛抑制一般的酶。还参见“三肽醛对凝血酶和胰蛋白酶的抑制”，Int.J.Peptide ProteinRes.，第12卷(1978)，第217-221页；Gaal,Bacsy&Rappay,和“三肽醛蛋白酶抑制剂可抑制体外促乳素和生长激素的释放”，内分泌学，第116卷，第4期(1985)，第1426-1432页；Rappay,Makara,Bajusz&Nagy。某些肽醛还被公开在EP-A-473502中，其用于抑制蛋白酶介导的皮肤刺激。
特别参见EP185390、WO94/04651,1994年3月3日公布；WO94/04652,1994年3月3日公布，EP583536,1994年2月23日公布，EP583535,1994年2月3日公布、EP583534,1994年2月23日公布，WO93/13125,1993年7月8日公布，US4529525、US4537706、US4537707和US5527487。
                      发明概述
本发明是一种液体洗衣洗涤剂组合物，其包含：a)有效量的去污表面活性剂；b)活性蛋白酶；和c)选自蛋白质、肽和肽衍生物的蛋白酶抑制剂，优选蛋白酶抑制剂是具有下式的肽衍生物：
               Z-B-NH-CH(R)-C(O)-X其中B是包含1-5个氨基酸部分的肽链；X是氢或CF3；Z是N-封端部分，其选自氨基磷酸酯[(R”O)2(O)P-]、亚磺酰胺[(SR”)2-]、磺酰胺[(R”(O)2S-]、磺酸[SO3H]、次膦酰胺[(R”)2(O)P-]、氨磺酰衍生物[R”O(O)2S-]、硫脲[(R”)2N(O)C-]、硫代氨基甲酸酯[R”O(S)C-]、膦酸酯[R”P(O)OH]、酰氨基磷酸酯[R”O(OH)(O)P-]、氨基甲酸酯(R”O(O)C-)和脲(R”NH(O)C-)，其中每个R”独立选自直链或支链C1-C6未取代的烷基、苯基、C7-C9烷芳基和环烷基部分，其中环烷基环可以跨C4-C8，并且可含有一种或多种选自O、N和S的杂原子(优选的R”选自甲基、乙基和苄基)；R选自直链或支链C1-C6未取代的烷基、苯基和C7-C9烷基芳基部分。
其中在该洗衣洗涤剂组合物中的蛋白酶活性低于在没有蛋白酶抑制剂情况下的活性的1％，在洗涤中游离蛋白酶的百分数与在洗衣洗涤剂组合物中游离蛋白酶的百分数的比例大于约100，优选大于约200，更优选大于约400。
优选本发明液体洗衣洗涤剂组合物包含，按组合物重量计：a)约1％-约95％，优选约8％-约70％所说的去污表面活性剂；b)约0.0001％-约5％，优选约0.0003％-约0.1％活性蛋白酶；c)约0.00001％-约5％，优选约0.0001％-约1％，更优选约0.0006％-约0.5％所述的蛋白酶抑制剂；d)任选地，约0.01％-约1％，优选约0.05％-约0.5％钙离子；和e)任选地，约0.25％-约10％，优选约0.5％-约5％硼酸或能够产生硼酸的化合物，优选含有二元醇。
其中在该洗衣洗涤剂组合物中的蛋白酶活性低于在没有蛋白酶抑制剂情况下的活性的1％，在洗涤中游离蛋白酶的百分数与在洗衣洗涤剂组合物中游离蛋白酶的百分数的比例大于约100，优选大于约200，更优选大于约400。
本发明优选的组合物还优选包含蛋白酶抑制剂和蛋白酶，其中抑制剂与蛋白酶的摩尔比大于1∶1，优选大于约1.1∶1，更优选大于约1.2∶1。对于抑制剂是蛋白质，优选比例(抑制剂∶蛋白酶)在约1∶1-约3∶1，更优选约1.1∶1-约2∶1。对于抑制剂是肽变体，优选比例(抑制剂∶蛋白酶)在约1∶1-约20∶1，更优选约2∶1-约10∶1。
此外，本发明的液体洗衣洗涤剂组合物包含：a)有效量的去污表面活性剂；b)活性蛋白酶；和c)选自蛋白质、肽和肽衍生物的蛋白酶抑制剂，优选蛋白酶抑制剂是具有下式的肽衍生物：
                  Z-B-NH-CH(R)-C(O)-X其中B是包含1-5个氨基酸部分的肽链；X是氢或CF3；Z是N-封端部分，其选自氨基磷酯酯[(R”O)2(O)P-]、亚磺酰胺[(SR”)2-]、磺酰胺[(R”(O)2S-]、磺酸[SO3H]、次膦酰胺[(R”)2(O)P-]、氨磺酰衍生物[R”O(O)2S-]、硫脲[(R”)2N(O)C-]、硫代氨基甲酸酯[R”O(S)C-]、膦酸酯[R”P(O)OH]、酰氨基磷酸酯[R”O(OH)(O)P-]、氨基甲酸酯(R”O(O)C-)和脲(R”NH(O)C-)，其中每个R”独立选自直链或支链C1-C6未取代的烷基、苯基、C7-C9烷芳基和环烷基部分，其中环烷基环可以跨C4-C8，并且可含有一种或多种选自O、N和S的杂原子(优选的R”选自甲基、乙基和苄基)；R选自直链或支链C1-C6未取代的烷基、苯基和C7-C9烷基芳基部分；其中抑制剂与蛋白酶的摩尔比大于1∶1，优选大于约1.2∶1，更优选大于约1.5∶1，和其中所说的组合物在该洗衣洗涤剂组合物中的蛋白酶活性低于在没有蛋白酶抑制剂情况下的活性的1％，在洗涤中游离蛋白酶的百分数与在洗衣洗涤剂组合物中游离蛋白酶的百分数的比例大于约100，优选大于约200，更优选大于约400。
用于本发明的蛋白酶优选是枯草蛋白酶型的蛋白酶，它们可选自AlcalaseR、枯草蛋白酶BPN’、蛋白酶A、蛋白酶B和它们的混合物。
在用于洗衣的重垢洗涤剂组合物的优选实施方案中，该液体洗涤剂组合物还包含有效量的一种或多种以下酶：脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶和它们的混合物。对于洗衣组合物，优选第二种酶是脂肪酶，其是通过克隆来自胎毛腐质霉(Humicola lanuginosa)的基因并在米曲霉中表达该基因得到的。脂肪酶的用量为约10-约18000脂肪酶单位/克，优选约60-约6000单位/克。
在用于洗衣的另一优选的组合物中，第二种酶是由Humicolainsolens得到的纤维素酶，其用量按总组合物重量计为约0.0001％-约0.1重量％所说的纤维素酶。
本发明组合物可含有另外的去污添加剂，包括，但不限于：一种或多种以下组分：增泡剂、助洗剂、污垢解脱聚合物、聚丙烯酸盐聚合物、分散剂、染料转移抑制剂、染料、香料、加工助剂、增白剂和它们的混合物。另外，对于洗衣组合物，去污表面活性剂一般按总组合物的重量计，以约10％-约70％的含量存在。而且，洗衣组合物可任选地包含有效量的钙离子源和/或硼酸源和二元醇。洗衣组合物一般任选地，但优选地包含约0.25％-约10％，优选约0.5％-约5％，更优选约0.75％-约3重量％硼酸或能够产生硼酸的化合物和二元醇，例如1,2-丙二醇。
除非另外具体说明，本文所有百分数和比例是按重量计，引用的所有文献在本文引用作参考。
                      发明详述
定义-本发明洗涤剂组合物包含“有效量”或“去除污渍改进量”的本文定义的各组分。“有效量”或“去除污渍改进量”是指当由消费者洗涤时，能够可测量地改善从带污垢织物上清洗污垢或去除污渍的任何数量。一般地，该量可很宽范围地变化。
根据本发明的含水液体洗衣洗衣洗涤剂组合物包含三个必要组分：(A)选自本文所述的蛋白质、肽和肽衍生物，优选肽醛和肽三氟甲基酮或其混合物的蛋白酶抑制剂，(B)蛋白酶或其混合物，和(C)去污表面活性剂。根据本发明的组合物优选还包含(D)钙离子源，(E)洗涤剂相容的第二种酶或其混合物，(F)硼酸和二元醇，并且可另外包含(G)其它的任选组分。
蛋白酶抑制剂-本发明洗涤剂组合物包含作为第一种必要组分的蛋白酶抑制剂，其选自蛋白质、肽和肽衍生物。
优选的蛋白质是火鸡卵类粘蛋白，水蛭抑制剂，链霉菌属枯草蛋白酶抑制剂，由其它的链霉菌包括吸水链霉菌、维及尼链霉菌、嗜热普通链霉菌、嗜热链霉菌(Streptomyces thermotolerans)、嗜热链霉菌(Streptomyces thermophilus)得到的枯草蛋白酶抑制剂，大麦胰凝乳蛋白酶抑制剂、蛔虫属蛋白酶抑制剂、南瓜属蛋白酶抑制剂和它们的变体。
优选的肽衍生物是具有下式的肽醛和肽三氟甲基酮，或它们的混合物：
               Z-B-NH-CH(R)-C(O)-X其中B是包含1-5个氨基酸部分的肽链；X是氢或CF3；Z是N-封端部分，其选自氨基磷酸酯[(R”O)2(O)P-]、亚磺酰胺[(SR”)2-]、磺酰胺[(R”(O)2S-]、磺酸[SO3H]、次膦酰胺[(R”)2(O)P-]、氨磺酰衍生物[R”O(O)2S-]、硫脲[(R”)2N(O)C-]、硫代氨基甲酸酯[R”O(S)C-]、膦酸酯[R”P(O)OH]、酰氨基磷酸酯[R”O(OH)(O)P-]、氨基甲酸酯(R”O(O)C-)和脲(R”NH(O)C-)，其中每个R”独立选自直链或支链C1-C6未取代的烷基、苯基、C7-C9烷芳基和环烷基部分，其中环烷基环可以跨C4-C8，并且可含有一种或多种选自O、N和S的杂原子(优选的R”选自甲基、乙基和苄基)；和R选自直链或支链C1-C6未取代的烷基、苯基和C7-C9烷基芳基部分。
优选的R部分选自甲基、异丙基、仲丁基、异丁基、-C6H5、-CH2-C6H5和-CH2CH2-C6H5，其分别衍生自氨基酸Ala、Val、Ile、Leu、PGly(苯基甘氨酸)、Phe和HPhe(高苯基丙氨酸)，这是通过将羧酸基团转化成醛或三氟甲基酮基团。虽然这些部分由此不再是氨基酸(和它们可由或不能由氨基酸前体合成)，但为了简化说明这里适用的抑制剂，抑制剂的醛部分被表示为由氨基酸得到，这是通过在类似氨基酸的后面加上“H”[例如，“-AlaH”表示化学部分“-NHCH(CH3)C(O)H”]。通过在类似氨基酸后面加上“CF3”可类似地表示三氟甲基酮(例如“-AlaCF3”表示化学部分“-NHCH(CH3)C(O)CF3”]。
优选的B肽链选自具有根据以下通式的氨基酸序列的肽链：
       Z-A5-A4-A3-A2-A1-NH-CH(R)-C(O)-X使得以下的氨基酸当存在时是：A1选自Ala、Gly；A2，若存在，选自Val、Ala、Gly、Ile；A3，若存在，选自Phe、Leu、Val、Ile；A4，若存在，是任何氨基酸，但优选选自Gly、Ala；A5，若存在，是任何氨基酸，但优选是Gly、Ala、Lys。
本发明的醛可由相应的氨基酸来制备，由此，所说氨基酸的C-末端由羧基转化为醛基团。这种醛可由公知的方法制备，例如如在US5015627、EP185930、EP583534和DE3200812中所述。
本发明的三氟甲基酮可由相应的氨基酸来制备，由此，所说氨基酸的C-末端由羧基转化为三氟甲基酮基团。这种三氟甲基酮可由公知的方法制备，例如如在EP583535中所述。
尽管不想受理论的约制，但相信本发明的蛋白酶抑制剂结合液体洗涤剂组合物中的蛋白酶，由此抑制了所说的蛋白酶。当在水中稀释时，由于蛋白酶/蛋白酶抑制剂配合物的离解，而使蛋白水解活性恢复。
本发明所说蛋白酶抑制剂的N-末端被一种N-封端部分保护基团所保护，所说的N-封端部分保护基团选自氨基甲酸酯、脲、磺酰胺、膦酰胺、硫脲、亚磺酰胺、磺酸、次膦酰胺、硫代氨基甲酸酯、酰氨基磷酸酯和膦酰胺。但在本发明高度优选的实施方案中，所说蛋白酶抑制剂的N-末端被氨基甲酸甲基、乙基或苄基酯[CH3O-(O)C-；CH3CH2O-(O)C-；或C6H5CH2O-(O)C-]；甲基、乙基或苄基脲[CH3NH-(O)C-；CH3CH2NH-(O)C-；或C6H5CH2NH-(O)C-]；甲基、乙基或苄基磺酰胺[CH3SO2-；CH3CH2SO2-；或C6H5CH2SO2-]，和酰氨基磷酸甲基、乙基或苄基酯[CH3O(OH)(O)P-；CH3CH2O(OH)(O)P-；或C6H5CH2O(OH)(O)P-]基团保护。
N-封端基团的合成可见于以下参考文献中：有机化学中的保护基团，Greene,T.,Wuts,P.,John Wiley&Sons，纽约，1991，第309-405页；March,J，高等有机化学，Wiley Interscience,1985，第445,469页，Carey,F.Sundberg,R.，高等有机化学，B部分，PlenumPress，纽约，1990，第686-89页；Atherton,E.,Sheppard,R.，固相肽合成，Pierce Chemical,1989，第3-4页；Grant,G.，合成肽，W.H.Freeman&Co.1992，第77-103页；Stewart,J.,Young,J.固相肽合成，第2版，IRL Press,1984，第3、5、11、14-18、28-29页。Bodansky,M.，肽合成原理，Springer-Verlag,1988，第62、203、59-69页；Bodansky,M.，肽化学，Springer-Verlag,1988，第74-81页，Bodansky,M.,Bodansky,A.，肽合成的实验操作，Springer-Verlag,1984，第9-32页。
用于本发明的蛋白酶抑制剂的实例是：
                                      CH3SO2Phe-Gly-Ala-Leu-H,CH3SO2Val-Ala-Leu-H,C6H5CH2O(OH)(O)P-Val-Ala-Leu-H,C6H5CH2O(OH)(O)P-Val-Ala-Leu-CF3,CH3CH2SO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H,C6H5CH2SO2-Val-Ala-Leu-H,C6H5CH2O(OH)(O)P-Leu-Ala-Leu-H,C6H5CH2O(OH)(O)P-Phe-Ala-Leu-H,CH3O(OH)(O)P-Leu-Gly-Ala-Leu-H.
在下文的合成实施例中，公开了合成某些这些肽蛋白酶抑制剂的方法。
          合成实施例1
四肽醛Moc-Ala-Phe-Gly-Ala-LeuH的合成(A)Ala-Leu-OMe.HCl：向溶解在50ml MeOH中并冷却至0℃的3.0g(14.83mmol)Ala-Leu-OH的溶液中滴加入2.43ml(33.36mmol)亚硫酰氯。该溶液在室温下搅拌过夜，蒸发至干燥，得到定量回收的所需产品。(b)Cbz-Gly-Ala-亮氨酸甲酯：向在CH2Cl2中的0.414g(1.98mmol)Cbz-Gly-OH和0.500g(1.98mmol)Ala-Leu-OMe.HCl的溶液中加入0.607ml TEA，然后立即加入0.355ml DEPC。该溶液搅拌过夜，蒸发，剩余物分配在EtOAc和1N HCl中。有机相用饱和NaHCO3和饱和NaCl连续洗涤、干燥(MgSO4)和蒸发得到0.650g纯产品。(c)Moc-Ala-Phe-OH：向溶解在4.23ml 1N NaOH并冷却至0℃的1.0g(4.23mmol)Ala-Phe的溶液中滴加入氯代甲酸甲酯。同时，加入在另一加料漏斗中的另外的4.23ml 1N NaOH，使得pH保持在9.0-9.5。添加完成后，反应在0℃下搅拌30分钟，在室温下搅拌2小时。此时，该溶液被冷却至0℃,pH调节至9.5。用EtOAc(1X,100ml)洗涤该碱性溶液。水相(0℃)然后被调至pH=2.5(2N HCl)，并用EtOAc(3X,50ml)萃取、干燥(MgSO4)和蒸发得到1.07g纯产品。(d)Moc-Ala-Phe-Gly-Ala-Leu-OMe：向在10ml MeOH中的0.500g(1.22mmol)Cbz-Gly-Ala-亮氨酸甲酯的溶液中加入0.100g10％Pd/C。该溶液在0.600ml 4.0M HCl/二噁烷存在下被加氢1小时(在球压下)，通过硅藻土过滤、蒸发。该残留物被悬浮在CH2Cl2中，加入0.342ml(2.45mmol)TEA，然后加入0.359g(1.22mmol)Moc-Ala-Phe-OH和0.219ml(1.34mmol)DEPC。搅拌过夜后，蒸发掉溶剂，剩余物分配在EtOAc和1N HCl中并用饱和NaHCO3和NaCl连续洗涤。干燥、蒸发和经柱色谱得到0.450g纯产品。(e)Moc-Ala-Phe-Gly-Ala-亮氨醇(Leucinol)：将0.182g(1.64mmol)CaCl2溶解在4ml乙醇和2mlTHF的混合物中来制备溶液。该混合物被冷却至-15℃，加入0.450g(0.820mmol)Moc-Ala-Phe-Gly-Ala-Leu-OMe，然后加入0.124g(3.28mmol)NaBH4。该反应被搅拌2小时，用10ml HCl骤冷。蒸发溶剂，剩余的水层用EtOAc分配。有机相然后用饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤。干燥(MgSO4)、蒸发和经色谱得到0.256g纯产品。(f)Moc-Ala-Phe-Gly-Ala-LeuH：向1.8L CH2Cl2中加入0.623g(1.47mmol)Dess-Martin全碘烷(periodinane)，然后搅拌10分钟来制备溶液。该溶液然后被冷却至0℃，并一次性加入0.256g(0.490mmol)Etoc-Phe-Gly-Ala-亮氨醇。反应继续进行2小时，倒入在30ml饱和NaHCO3中的2.55g(10.47mmol)Na2S2O3组成的溶液中。搅拌10分钟后，该混合物用EtOAc(2X,50ml)萃取。合并的萃取液经干燥(MgSO4)、蒸发和经硅胶色谱得到0.125g纯产品。
             合成实施例2
三肽醛Etoc-Phe-Gly-Ala-LeuH的合成(a)Ala-Leu-OMe.HCl：向溶解在4.5L MeOH中并冷却至0℃的450g(2.20mol)Ala-Leu-OH的溶液中滴加入178.6ml(4.95mol)亚硫酰氯。该溶液在室温下搅拌过夜，蒸发至干燥，得到543g(97.1％收率)要被原样使用的所需产品。(b)Etoc-Phe-Gly-OH：向溶解在2026ml 1N NaOH并冷却至0℃的450g(2.03mol)Phe-Gly的溶液中滴加入氯代甲酸甲酯(3.1ml,40.0mmol)。同时，加入在另一加料漏斗中的另外的2026ml1N NaOH，使得pH保持在9.0-9.5。添加完成后，反应在0℃下搅拌30分钟，在室温下搅拌2小时。此时，该溶液被冷却至0℃,pH调节至9.5。用EtOAc(1X,4L)洗涤该碱性溶液。水相(0℃)然后被调至pH=2.5(2N HCl)，并用EtOAc(3X,8L)萃取、干燥(MgSO4)、过滤和除去溶剂得到546g(91.3％，收率)纯产品。(c)Etoc-Phe-Gly-Ala-Leu-OMe：向在8升CH2Cl2中的470g(1.86mol)Etoc-Phe-Gly-OH和546g(1.86mol)Ala-Leu-OMe.HCl的溶液中加入570ml(4.09mol)TEA，然后加入310.4ml(2.046mol)DEPC。搅拌过夜后，蒸发溶剂，用EtOAc(4L)取代。该溶液连续用各2升2N HCl、饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤。有机相然后干燥(MgSO4)、过滤和蒸发得到916g(93％收率)所需物质。(d)Etoc-Phe-Gly-Ala-亮氨醇：向在1L乙醇和1L THF的45.10g(0.406mol)CaCl2的溶液中加入100g(0.203mol)Etoc-Phe-Gly-Ala-Leu-OMe，该混合物被冷却至-15℃。向该溶液中小心加入30.7g(0.812mmol)NaBH4，然后搅拌2小时。反应然后用100ml 0.1NHCl骤冷。该溶液被转移至4L 1N HCl中，用EtOAc(3X,2.75L)萃取。合并的EtOAc层用4L饱和NaHCO3洗涤、干燥(MgSO4)和蒸发。用醚(4L)研制(两次)，得到69.2g(73.4％收率)产品。(e)Etoc-Phe-Gly-Ala-LeuH：向1.8L CH2Cl2中加入165.4g(0.39mol)Dess-Martin全碘烷，然后搅拌10分钟来制备溶液。该溶液然后冷却至0℃，并一次性加入60g(0.13mol)Etoc-Phe-Gly-Ala-亮氨醇。反应继续进行105分钟，倒入6L H2O、393gNaHCO3和431.7g(1.74mol)Na2S2O3组成的溶液中。搅拌10分钟后，分离相，用CH2Cl2进行另外2次萃取(每次1.5L)。合并的萃取物经干燥(MgSO4)、蒸发和用(2X,1L)醚研制，得到51.7g(86.2％收率)产品。
合成实施例3
三肽三氟甲基酮Moc-Phe-Gly-Ala-LeuCF3的合成(a)N-三苯甲游基亮氨酸甲酯：向在100mlCH2Cl2中的2.50g(13.8mmol)Leu-OMe.HCl的溶液中滴加入3.86ml TEA(27.5mmol)。滴加完成后，将在15mlCH2Cl2中的3.76g(13.5mmol)的氯化三苯甲烷滴加入。该混合物被搅拌4小时。该溶液用5％EtOAc/石油醚稀释并用水洗涤。有机相经(MgSO4)干燥、过滤，并除去溶剂。残留物经硅胶色谱得到4.8g纯产物(90％收率)。(b)N-三苯甲游基亮氨醛(Leucinal)：向在100mlTHF中的4.70g(12.2mmol)的N-三苯甲游基亮氨酸甲酯的冷(0℃)溶液中滴加入在THF中的28.1ml的1.5M氢化二异丁基铝(42.2mol)溶液。溶液在该温度下被搅拌6小时，用饱和的酒石酸Na-K骤冷反应，用EtOAc萃取，干燥(MgSO4)，过滤，并除去溶剂。使用所回收的4.13g所需物质，不需要提纯。在-78℃下，向在20mlCH2Cl2中的1.29g(14.9mmol)草酰氯溶液中，滴加入在5ml CH2Cl2中的2.26ml DMSO(29.8mmol)。滴加完成后，加入在10ml CH2Cl2中的4.13g(11.5mmol)粗制的N-三苯甲游基亮氨醇。该溶液被温至0℃，并倒入水和醚的混合物中。分离相，干燥(MgSO4)醚相，蒸发得到1.37g所需的化合物。(c)5-甲基-3-三苯甲游基氨基-1,1,1-三氟-2-己醇：向在THF中的1.37g(3.83mmol)N-三苯甲游基亮氨醛和0.653ml(4.59mmol)的CF3TMS的溶液中一次加入0.121g(0.383mmol)的氟化四丁基铵三水合物。该溶液在室温下被搅拌3小时并除去溶剂。将残留物溶解在EtOAc中，用水洗涤，干燥(MgSO4)并除去溶剂，得到1.20g产物，经硅胶色谱得到(0.760g纯产品)。(d)3-(N-(Cbz-Gly-Ala)-5-甲基-1,1,1-三氟-2-己醇：向在10ml二噁烷中的1.21g(2.83mmol)5-甲基-3-三苯甲游基氨基-1,1,1-三氟-2-己醇的溶液中加入在二噁烷中的5ml 4.0M HCl。该溶液在室温下被搅拌2小时，除去溶剂。残留物用醚研制，过滤固体物质。得到的HCl盐(0.627g,2.83mmol)悬浮在10ml CH2Cl2中，并加入Z-Gly-Ala-OH(0.793g,2.83mmol)。向该混合物中加入0.870ml(6.23mmol)TEA，然后立即加入0.473ml(3.12mmol)DEPC。该混合物被搅拌过夜，去除溶剂。将残留物溶解在EtOAc中，用1N HCl、饱和NaHCO3和盐水洗涤。产品溶液经干燥(MgSO4)、过滤，除去溶剂得到1.06g产品。(e)Moc-Phe-OH-L-苯基丙氨酸(5.0g,30.2mmol)溶解在30ml 1NNaOH中，并冷却至0℃。滴加入氯代甲酸甲酯(2.53ml,31.8mmol)，同时加入在另一加料漏斗中的30ml 1N NaOH。添加完成后，该溶液用200ml EtOAc洗涤，水相被酸化至pH=2。该混合物用EtOAc(2×100ml)萃取、干燥(MgSO4)、过滤、除去溶剂得到6.0g产品。(f)3-(N-(Moc-Phe-Gly-Ala)-5-甲基-1,1,1-三氟-2-己醇：向在5ml MeOH中的1.06g(2.37mmol)3-(N-(Cbz-Gly-Ala)-5-甲基-1,1,1-三氟-2-己醇的溶液中加入0.35g Pd/C。该浆液被脱气，在氢气的正压力下被加氢过夜。该浆液通过硅藻土过滤，去除溶剂。将残留物溶解在CH2Cl2中，并加入0.528g(22.37mmol)Moc-Phe-OH。向该混合物中加入0.732ml(5.22mmol)TEA，然后加入0.395ml(2.61mmol)DEPC。该溶液被搅拌过夜，去除溶剂。残留物经硅胶色谱得到0.720g纯产品。(g)Moc-Phe-Gly-Ala-LeuCF3：向在15ml CH2Cl2中的1.59g(3.75mmol)的Dess-Martin全碘烷浆液中加入在5ml CH2Cl2中的0.650g(1.25mmol)3-(N-(Moc-Phe-Gly-Ala)-5-甲基-1,1,1-三氟-2-己醇，该浆液被搅拌3小时。向该混合物中加入在饱和NaHCO3中的6.51g(25.2mmol)Na2S2O3，得到的溶液被搅拌10分钟。用EtOAc萃取该溶液，有机相经干燥(MgSO4)、过滤，除去溶剂。残留物经硅胶色谱得到0.445g纯产品。
                  合成实施例4
         二肽醛Moc-Gly-Ala-LeuH的合成(a)Ala-Leu-OMe.HCl：向溶解在50ml MeOH中并冷却至0℃的3.0g(14.83mmol)Ala-Leu-OH的溶液中滴加入2.43ml(33.36mmol)亚硫酰氯。该溶液在室温下搅拌过夜，蒸发至干燥，得到定量收率的所需产品。(b)Cbz-Gly-Ala-亮氨酸甲酯：向在CH2Cl2中的0.414g(1.98mmol)Cbz-Gly-OH和0.500g(1.98mmol)Ala-Leu-OMe.HCl的溶液中加入0.607mlTEA，然后立即加入0.355ml DEPC。该溶液搅拌过夜，然后蒸发。剩余物分配在EtOAc和1N HCl中，有机相用饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤、干燥(MgSO4)和蒸发得到650mg纯产品。(c)Moc-Gly-Ala-亮氨酸甲酯：向溶解在20ml MeOH中的2.0g(4.90mmol)Cbz-Gly-Ala-亮氨酸甲酯的溶液中加入0.200g 10％Pd/C。在2.45ml(9.81mmol)4.0M HCl/二噁烷存在下加氢2小时，之后该反应被彻底脱气，通过硅藻土过滤除去催化剂。蒸发MeOH得到1.45g纯产品，将其悬浮在45ml CH2Cl2中并冷却至0℃。向该溶液中加入1.45ml(3.25mmol)TEA，然后加入0.362ml氯代甲酸甲酯。搅拌过夜后，蒸发CH2Cl2，剩余物分配在EtOAc和1N HCl中。分离有机相，按顺序用NaHCO3和NaCl洗涤。干燥(MgSO4)、蒸发和经色谱提纯得到0.820g所需产品。(d)Moc-Gly-Ala-亮氨醇：向在25ml乙醇和15mlTHF中的0.168g(1.51mmol)CaCl2的溶液中加入0.250g Moc-Gly-Ala-亮氨酸甲酯。该溶液被冷却至-15℃，一次性加入0.114g(3.02mmol)NaBH4。搅拌2小时后，该反应用20ml 1N HCl骤冷，在旋转蒸发器(rotovape)上浓缩，用EtOAc(2×50ml)萃取。合并的萃取物用饱和NaHCO3和NaCl洗涤、干燥(MgSO4)、蒸发。经硅胶提纯得到0.167g纯产品。(e)Moc-Gly-Ala-LeuH向5ml CH2Cl2中加入0.418g(0.989mmol)Dess-Martin全碘烷，然后搅拌10分钟来制备溶液。接着一次性加入0.100g(0.330mmol)Moc-Gly-Ala-亮氨醇。反应搅拌2小时，并倒入含有1.72g(6.93mmol)Na2S2O3的25ml饱和NaHCO3溶液中。再搅拌10分钟后，该溶液用EtOAc(3X,50ml)萃取、干燥(MgSO4)和蒸发。经硅胶色谱得到0.016g所需产品。
                    合成实施例5
      二肽三氟甲基酮Moc-Gly-Ala-LeuCF3的合成(a)N-三苯甲游基亮氨酸甲酯：向在100mlCH2Cl2中的2.50g(13.8mmol)Leu-OMe.HCl的溶液中滴加入3.86ml TEA(27.5mmol)。滴加完成后，将在15mlCH2Cl2中的3.76g(13.5mmol)的氯化三苯甲烷滴加入。该混合物被搅拌4小时。该溶液用5％EtOAc/石油醚稀释并用水洗涤。有机相经(MgSO4)干燥、过滤，并除去溶剂。残留物经硅胶色谱得到4.8g纯产物(90％收率)。(b)N-三苯甲游基亮氨醛：向在100mlTHF中的4.70g(12.2mmol)的N-三苯甲游基亮氨酸甲酯的冷(0℃)溶液中滴加入在THF中的28.1ml的1.5M氢化二异丁基铝(42.2mol)溶液。溶液在该温度下被搅拌6小时，用饱和的酒石酸Na-K骤冷反应，用EtOAc萃取，干燥(MgSO4)，过滤，并除去溶剂(使用回收的4.13g所需物质，不需要提纯)。在-78℃下，向在20mlCH2Cl2中的1.29g(14.9mmol)草酰氯溶液中，滴加入在5ml CH2Cl2中的2.26mlDMSO(29.8mmol)。滴加完成后，加入在10ml CH2Cl2中的4.13g(11.5mmol)粗制的N-三苯甲游基亮氨醇。该溶液被温至0℃，并倒入水和醚的混合物中。分离相，干燥(MgSO4)醚相，蒸发得到1.37g所需的化合物。(c)5-甲基-3-三苯甲游基氨基-1,1,1-三氟-2-己醇：向在THF中的1.37g(3.83mmol)N-三苯甲游基亮氨醛和0.653ml(4.59mmol)的CF3TMS的溶液中一次加入0.121g(0.383mmol)的氟化四丁基铵三水合物。该溶液在室温下被搅拌3小时并除去溶剂。残留物溶解在EtOAc中，用水洗涤，干燥(MgSO4)并除去溶剂，得到1.20g产物，经硅胶色谱得到(0.760g纯产品)。(d)3-(N-(Moc-Gly-Ala)-5-甲基-1,1,1-三氟-2-己醇：向在10ml二噁烷中的1.21g(2.83mmol)5-甲基-3-三苯甲游基氨基-1,1,1-三氟-2-己醇的溶液中加入在二噁烷中的5ml 4.0M HCl。该溶液在室温下被搅拌2小时，除去溶剂。残留物用醚研制，过滤固体物质。得到的HCl盐(0.627g,2.83mmol)悬浮在10ml CH2Cl2中，并加入Moc-Gly-Ala-OH(0.577g,2.83mmol)。向该混合物中加入0.870ml(6.23mmol)TEA，然后立即加入0.473ml(3.12mmol)DEPC。该混合物被搅拌过夜，去除溶剂。残留物溶解在EtOAc中，用1N HCl、饱和NaHCO3和盐水洗涤。产品溶液经干燥(MgSO4)、过滤，除去溶剂得到0.650g产品。(e)Moc-Gly-Ala-LeuCF3：向在15ml CH2Cl2中的2.63g(6.21mmol)的Dess-Martin全碘烷浆液中加入在5ml CH2Cl2中的0.714g(2.07mmol)3-(Moc-Gly-Ala)-5-甲基-1,1,1-三氟-2-己醇，该浆液被搅拌3小时。向该混合物中加入在50ml饱和NaHCO3中的10.88g(43.47mmol)Na2S2O3，得到的溶液被搅拌10分钟。用EtOAc萃取该溶液，有机相经干燥(MgSO4)、过滤，除去溶剂。残留物经硅胶色谱得到0.450g纯产品。
                    合成实施例6
            Ms-Phe-Gly-Ala-LeuH的合成(a)Ms-Phe-Gly-OH：向溶解在9ml 1N NaOH中并冷却至0℃的2.0g(9.0mmol)Phe-Gly-OH的溶液中同时加入0.766ml(9.9mmol)甲磺酰氯和在另外的加料漏斗中的9ml 1N NaOH。添加完成后，反应在0℃搅拌15分钟，在室温下搅拌1小时。此时，溶液冷却至0℃，pH被调节至9.5，用EtOAc(1X,50ml)洗涤。水相(0℃)然后被调至pH=2.5(2N HCl)，用EtOAc(3X,50ml)萃取，干燥(MgSO4)、过滤、除去溶剂得到2.0g纯产品。(b)Ms-Phe-Gly-Ala-亮氨醇：将0.500g(1.67mmol)N-Ms-Phe-Gly-OH溶解在15mlTHF中，冷却至-15℃，并加入0.366ml(3.33mmol)NMM，然后加入0.216ml(1.67mmol)氯代甲酸异丁酯来制备溶液。该溶液被搅拌5分钟，加入在10ml THF和最小量DMF混合物中的0.374g(1.67mmol)Ala-亮氨醇.HCl。在0℃下继续搅拌15分钟，在室温下搅拌2小时。用5ml 1N HCl骤冷溶液，用EtOAc(3X,50ml)萃取，用饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤合并的萃取物。得到的有机相然后干燥(MgSO4)、过滤、蒸发和经硅胶色谱得到0.260g所需物质。(c)Ms-Phe-Gly-Ala-LeuH：将0.337g(0.798mmol)Dess-Martin全碘烷加入5ml CH2Cl2中并搅拌10分钟制备溶液。向该溶液中一次加入0.125g(0.266mmol)N-Ms-Phe-Gly-Ala-亮氨醇。继续反应，直至TLC表示完全转化，此时该溶液被倒入25ml含有1.8g(5.586mmol)Na2S2O3的饱和NaHCO3中。搅拌10分钟后，用EtOAc(3X,50ml)萃取混合物。合并的萃取物经干燥(MgSO4)、蒸发和硅胶色谱，得到0.048g产物。
                  合成实施例7：
             醛蛋白酶抑制剂的合成
Moc-Leu-OH-将L-亮氨酸(5.0g,38.2mmol)溶解在38ml 1N NaOH中，并冷却至0℃。滴加入氯代甲酸甲酯(3.1ml,40.0mmol)，同时加入在另一加料漏斗中的1N NaOH，保持pH在9.0-9.5。添加完成和pH稳定在9.0-9.5后，该溶液用200ml EtOAc洗涤，水相然后被酸化至pH=2。该混合物用EtOAc(2×100ml)萃取、干燥(MgSO4)、过滤、除去溶剂得到7.15g纯产品。
Moc-Leu-亮氨醇-向冷却至-15℃的在100ml THF中的3.5g(18.52mmol)Moc-Leu-OH溶液中加入2.04ml(18.52mmol)N-甲基吗啉，然后立即加入2.4ml(18.52mmol)氯代甲酸异丁酯。搅拌10分钟后，加入在25ml THF中的2.37ml(18.52mmol)亮氨醇，该反应在-15℃下搅拌0.5小时，在室温下搅拌1小时。该混合物然后用100mlH2O稀释，蒸发THF。剩余的水相分配在EtOAc和1N HCl中，有机相用NaHCO3洗涤、干燥(MgSO4)和蒸发得到5.33g纯产品。
Moc-Leu-LeuH-制备含有悬浮于100ml CH2Cl2中的4.4g(10.41mmol)Dess-Martin全碘烷的溶液并搅拌10分钟。向该溶液中加入1.0g(3.47mmol)Moc-Leu-亮氨醇，溶液在室温下搅拌2小时，然后倒入含有18g(72.87mmol)Na2S2O3的100ml饱和NaHCO3中。该溶液被搅拌10分钟，然后用EtOAc(2X,125ml)萃取、干燥(MgSO4)和蒸发溶剂。经硅胶色谱得到0.550g纯产品。
                   合成实施例8
           三氟甲基酮蛋白酶抑制剂的合成
N-三苯甲游基亮氨酸甲酯：向在100mlCH2Cl2中的2.50g(13.8mmol)Leu-OMe.HCl的溶液中滴加入3.86ml TEA(27.5mmol)。滴加完成后，将在15mlCH2Cl2中的3.76g(13.5mmol)的氯化三苯甲烷滴加入。该混合物被搅拌4小时。该溶液用5％EtOAc/石油醚稀释并用水洗涤。有机相经(MgSO4)干燥、过滤，并除去溶剂。残留物经硅胶色谱得到4.8g纯产物(90％收率)。
N-三苯甲游基亮氨醛：向在100mlTHF中的4.70g(12.2mmol)的N-三苯甲游基亮氨酸甲酯的冷(0℃)溶液中滴加入在THF中的28.1ml的1.5M氢化二异丁基铝(42.2mol)溶液。溶液在该温度下被搅拌6小时，用饱和的酒石酸Na-K骤冷反应，用EtOAc萃取，干燥(MgSO4)，过滤，并除去溶剂。使用所回收的4.13g所需物质，不需要提纯。在-78℃下，向在20mlCH2Cl2中的1.29g(14.9mmol)草酰氯溶液中，滴加入在5ml CH2Cl2中的2.26mlDMSO(29.8mmol)。滴加完成后，加入在10ml CH2Cl2中的4.13g(11.5mmol)粗制的N-三苯甲游基亮氨醇。该溶液被温至0℃，并倒入水和醚的混合物中。分离相，干燥(MgSO4)醚相，蒸发得到1.37g所需的化合物。
5-甲基-3-三苯甲游基氨基-1,1,1-三氟-2-己醇：向在THF中的1.37g(3.83mmol)N-三苯甲游基亮氨醛和0.653ml(4.59mmol)的CF3TMS的溶液中一次加入0.121g(0.383mmol)的氟化四丁基铵三水合物。该溶液在室温下被搅拌3小时并除去溶剂。残留物溶解在EtOAc中，用水洗涤，干燥(MgSO4)并除去溶剂，得到1.20g产物，经硅胶色谱得到(回收0.760g纯产品)。
Moc-Ala-OH-将丙氨酸(5.0g,56.2mmol))溶解在56ml 1N NaOH中，并冷却至0℃。滴加入氯代甲酸甲酯(5.57ml,58.9mmol)，同时加入在另一加料漏斗中的1N NaOH，保持pH在9.0-9.5。添加完成和pH稳定在9.0-9.5后，该溶液用200ml EtOAc洗涤，水相然后被酸化至pH=2。该混合物用EtOAc(2×100ml)萃取、干燥(MgSO4)、过滤、除去溶剂得到7.15g纯产品。
3-(N-(Moc-Ala))-5-甲基-1,1,1-三氟-2-己醇：向在10ml二噁烷中的1.21g(2.83mmol)5-甲基-3-三苯甲游基氨基-1,1,1-三氟-2-己醇的溶液中加入在二噁烷中的5ml 4.0M HCl。该溶液在室温下被搅拌2小时，除去溶剂。残留物用醚研制，过滤固体物质。得到的HCl盐(0.627g,2.83mmol)悬浮在10ml CH2Cl2中，并加入Moc-Ala-OH(0.416g,2.83mmol)。向该混合物中加入0.870ml(6.23mmol)TEA，然后立即加入0.473ml(3.12mmol)DEPC。该混合物被搅拌过夜，去除溶剂。残留物溶解在EtOAc中，用1N HCl、饱和NaHCO3和盐水洗涤。产品溶液经干燥(MgSO4)、过滤，除去溶剂得到0.650g产品。
Moc-Ala-LeuCF3：向在15ml CH2Cl2中的2.63g(6.21mmol)的Dess-Martin全碘烷浆液中加入在5ml CH2Cl2中的0.650g(2.07mmol)3-(Moc-Ala)-5-甲基-1,1,1-三氟-2-己醇，该浆液被搅拌3小时。向该混合物中加入在50ml饱和NaHCO3中的10.88g(43.47mmol)Na2S2O3，得到的溶液被搅拌10分钟。用EtOAc萃取该溶液，有机相经干燥(MgSO4)、过滤，除去溶剂。残留物经硅胶色谱得到0.425g纯产品。
                         合成实施例9：
另外的肽醛根据以下方法合成。一些中间体由供应商处购买，在这些情况下，其在步骤中被注明。根据Martin,J.Org.Chem.,1983,48,4155的方法合成Dess-Martin全碘烷。Ⅰ．Z-Gly-Ala-Leu-OMe-向在250ml二氯甲烷中的Z-Gly-Ala-OH(20.0g,0.071M)和Leu-OMe.HCl(12.9g,0.071M)溶液中经10分钟滴加入21.9ml(0.157M)三乙胺(TEA)。之后，加入11.9ml(0.078M)氰基膦酸二乙酯(DECP)。该混合物被搅拌过夜，除去溶剂。残留物溶解在乙酸乙酯中，用1N HCl、饱和NaHCO3和盐水洗涤。溶液用MgSO4干燥、过滤和除去溶剂。回收29.0g产品，通过TLC测定，其是均一的。
                                           13C NMR(CDCl3)15.93,18.60,21.77,22.69,24.72,40.80,44.20,48.70,50.87,52.13,65.28,66.84,127.92,128.00,128.41,136.36,156.76,169.31,172.58,173.24.Ⅱ．Moc-Phe-Gly-Ala-Leu-OMe-将Z-Gly-Ala-Leu-OMe(29.0g,0.071M)溶解于300mlMeOH和在二噁烷中的35ml 4.0M HCl中。向该溶剂混合物中分批加入5.8g 10％Pd/C。该浆液用吸气器脱气，通过球形瓶引入H2。该浆液保持在H2的正压下并搅拌过夜。该浆液通过硅藻土和烧结的玻璃漏斗过滤，用MeOH彻底洗涤。除去溶剂，残留物用醚研制。过滤该浆液，在真空下干燥滤饼。回收20.2g灰白色的粉末。将该粗制的产品和Moc-Phe-OH(15.3g,0.068M)溶解在500ml CH2Cl2中，滴加入29.9ml TEA(0.143M)，然后滴加入11.7ml(0.072M)DECP。该混合物被搅拌过夜，除去溶剂。将残留物溶解在EtOAc中，并用1N HCl、饱和NaHCO3和盐水洗涤。有机相被干燥(MgSO4)、过滤和除去溶剂，得到21.3g产品。
     13C NMR(CDCl3)16.66,16.83,20,01,22.46,23.41,25.40,40.11,41.72,43.75,49.39,51.37,52.87,56.42,65.92,77.39,77.55,77.81,78.24,127.42,128.96,129.19,130.09,137.41,157.62,169.00,172.63,173.24,174.00.Ⅲ．Moc-Phe-Gly-Ala-亮氨醇-将Moc-Phe-Gly-Ala-Leu-OMe(21.3g,44.5mmol)溶解在400ml EtOH和250mlTHF的混合物中。该溶液被冷却至0℃，加入9.88g(89.0mmol)CaCl2。在5分钟内，该浆液被均质化，经5分钟分批加入6.73g(178.0mmol)NaBH4。该溶液在0℃下搅拌2小时，小心地用1N HCl骤冷反应。在真空下除去EtOH和THF，剩余的含水混合物用500ml EtOAc萃取。有机相用饱和NaHCO3、盐水洗涤，用MgSO4干燥。过滤和除去溶剂得到20.0g灰白色结晶物质。经硅胶色谱(3.5％MeOH/CH2Cl2)得到13.0g纯产品。
                                                         Rf=0.3(10％MeOH/CH2Cl2),13C NMR(CDCl3)17.50,22.23,23.12,24.84,37.22,39.76,43.96,49.88,50.93,52.48,58.22,65.27,98.46,98.54,127.04,128.68,129.10,136.62,157.85,170.71,173.85,174.45Ⅳ．Moc-Phe-Gly-Ala-LeuH-将29.9g(70.7mmol)Dess-Martin全碘烷悬浮在500ml CH2Cl2中并搅拌10分钟。将Moc-Phe-Gly-Ala-亮氨醇(10.6g,23.5mmol)溶解在100ml CH2Cl2中并以中等速度加入全碘烷浆液中。该混合物被搅拌1小时，倒入含有123g Na2S2O3的150ml NaHCO3中。该混合物被搅拌15分钟，用EtOAc萃取。有机相被干燥、过滤，然后除去溶剂。经硅胶色谱(3.5％MeOH/CH2Cl2)得到5.1g纯白色固体，其是甲氧基半缩醛和醛的混合物。13C NMR(CDCl3,CD3OD)17.62,17.94,21.53,21.71,22.99,23.30,23.39,24.54,37.05,37.70,37.92,38.24,42.87,49.83,51.79,52.14,52.40,56.75,57.19,98.40,99.18,127.00,128.60,129.06,136.44,157.27,169.19,169.67,172.73,173.40,200.43.Ⅴ．Moc-Phe-OH-将L-苯基丙氨酸(5.0g,30.2mmol)溶解在30ml 1NNaOH中，并冷却至0℃。滴加入氯代甲酸甲酯(2.53ml,31.8mmol)，同时加入在另一加料漏斗中的30ml 1N NaOH。添加完成后，该溶液用200ml EtOAc洗涤，水相被酸化至pH=2。该混合物用EtOAc(2×100ml)萃取、干燥(MgSO4)、过滤、除去溶剂得到6.0g纯产品。
13C NMR(CDCl3)37.75,52.57,54.64,128.63,129.35,135.74,156.77,175.76.Ⅵ．Mac--Phe-OH-在室温下，向在Et2O中的1.00g(2.34mmol)Phe-OBn.PTSA的溶液中加入0.36ml(2.57mmol)TEA。然后加入10ml MeOH，接着滴加入在4ml Et2O中的0.14ml(2.34mmol)异氰酸甲酯。反应混合物被倒入50ml水中，分离相。有机相用MgSO4干燥、过滤和除去溶剂，得到0.66g产品(96％收率)。                                 13C NMR(CDCl3)27.05,38.47,53.45,54.64,65.90,127.43,127.85,128.48,129.28,130.27,135.23,136.22,158.17,173.08.向在25ml MeOH中的该粗制产品(2.11mmol)的溶液中加入0.120gPd/C,该浆液被脱气。该浆液在通过球形瓶得到的H2正压力下搅拌1.5小时。浆液通过硅藻土过滤，用MeOH洗涤滤饼。除去溶剂得到0.430g产品13C NMR26.50,37.92,54.28,126.69,128.28,129.28,136.65,159.36,175.33.Ⅶ．Mac-Phe-Gly-Ala-亮氨醇-向在15ml DMF中的0.200gMac-Phe-OH(0.900mmol)和0.253g Gly-Ala-Leu-OMe.HCl(0.818mmol，根据对于化合物Ⅱ所概述的方法，通过加氢以上Ⅰ产生的)的溶液中加入0.250ml TEA(1.80mmol)，然后加入0.147ml DECP(0.900mmol)。该混合物被搅拌过夜，除去溶剂。残留物再溶解在EtOAc中，连续用0.3N HCl、饱和NaHCO3、盐水洗涤。溶液被干燥、过滤、除去溶剂，得到0.300g产品。将该粗制的产品(0.628mmol)溶解在17ml EtOH中，并冷却至0℃。向该溶液中加入在4ml THF中的0.140gCaCl2(1.25mmol)。向得到的浆液中一次性加入0.095gNaBH4。45分钟后，该溶液用水骤冷，用EtOAc萃取。有机相用MgSO4干燥、过滤、除去溶剂。在使用4％MeOH/CH2Cl2下，经色谱得到0.200g纯产品。                                                    13C NMR(CD3OD)16.84,21.05,22.60,24.51,25.66,37.41,39.73,42.67,49.65,56.63,64.33,126.63,128.32,128.96,137.12,160.01,170.45,173.60,175.03.Ⅷ．Mac-Phe-Gly-Ala-Leu-H-向在15ml CH2Cl2中的Dess-Martin全碘烷(0.565g,1.33mmol)浆液中加入在CH2Cl2中的Mac-Phe-Gly-Ala-亮氨醇(0.200g,0.445mmol)的悬浮液，得到的浆液搅拌0.5小时。该混合物被倒入含有2.32g Na2S2O3的饱和NaHCO3中，该溶液被搅拌10分钟，接着用EtOAc萃取。有机相被MgSO4干燥、过滤、除去溶剂。剩余物经硅胶色谱得到0.081g产品。
                                        13C NMR(10％CD3OD inCDCl3)17.18,17.43,21.35,21.55,23.26,23.34,24.40,24.47,26.36,26.60,37.25,37.38,38.60,42.86,42.97,51.77,51.93,54.94,56.75,57.00,98.7,99.32,126.87,128.49,128.91,136.51,159.53,159.55,169.93,170.39,173.63,173.85,174,70.Cbz=苄酯基Gly=甘氨酸Ala=丙氨酸Leu=亮氨酸Phe=苯基丙氨酸OMe=甲酯TEA=三乙胺DECP=氰基膦酸二乙酯TLC=薄层色谱MeOH=甲醇Pd/C=载于活性碳上的钯EtOH=乙醇THF=四氢呋喃Mac=甲基氨基羰基Ms=甲磺酰基Moc=甲氧羰基Etoc=乙氧羰基
蛋白酶-本发明液体洗涤剂组合物中的另一必要组分是活性蛋白酶。还包括蛋白酶的混合物。蛋白酶可来自动物、植物或微生物(优选)源。用于本发明洗涤剂组合物中的蛋白酶包括(但不限于)胰蛋白酶、枯草蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶-型的蛋白酶。用于本发明优选的是枯草蛋白酶-型的蛋白酶。特别优选的是由枯草芽孢杆菌和/或地衣形芽孢杆菌得到的细菌丝氨酸蛋白酶。蛋白酶在这种液体洗涤剂组合物中通常以足以提供每克组合物0.005-0.1Anson单位(AU)活性存在。
适合的蛋白酶包括Novo Industri A/S Alcalase(优选的)、Esperase、Savinase(Copenhagen,Denmark),Gist-brocades’Maxatase、Maxacal和Maxapem15(蛋白酶工程的Maxacal)(Delft,Netherlands)和枯草蛋白酶BPN和BPN’(优选的)，其是商业可得到的。优选的蛋白酶还有改性的细菌丝氨酸蛋白酶，例如由Genencor International,Inc.(旧金山，加利福尼亚)制备的那些，它们描述在1987年4月28日申请的欧洲专利251446中(特别是第17、24和98页)，在本文其被称为“蛋白酶B”，和1991年7月9日颁布的Venegas的美国专利5030378中，其涉及改性的细菌丝氨酸蛋白酶(Genencor International)，在本文其被称为“蛋白酶A”(与BPN’相同)。特别参见美国专利5030378第2和3栏，其中有全面的描述，包括蛋白酶A和其变体的氨基酸序列。优选的蛋白酶则选自Alcalase(Novo Industri A/S)、BPN’、蛋白酶A和蛋白酶B(Genencor)和它们的混合物。蛋白酶B是最优选的。
另一种优选的蛋白酶被称为“蛋白酶D”，其是具有在自然界中没有发现的氨基酸序列的羰基水解酶变体，它从羰基水解酶前体衍生得到，这种衍生是根据解淀粉芽孢杆菌枯草菌溶素的编号，用不同的氨基酸取代在所述羰基水解酶中相当于位置+76处的氨基酸残基，也优选结合取代相当于选自+99,+101,+103,+104,+107,+123,+27,+105,+109,+126,+128,+135,+156,+166,+195,+197,+204,+206,+210,+216,+217,+218,+222,+260,+265，和/或+274位置处的一个或多个氨基酸残基，如在GenencorInternational的1995年4月20日公布的WO95/10615中所述的。
可用的蛋白酶还描述在PCT公开：The Procter&Gamble Company的1995年11月9日公布的WO95/30010；The Procter&Gamble Company的1995年11月9日公布的WO95/30011；The Procter&Gamble Company的1995年11月9日公布的WO95/29979。
根据本发明的组合物包括液体洗衣洗涤剂组合物，其中抑制剂与蛋白酶的摩尔比大于1∶1，优选大于约1.1∶1，更优选大于约1.2∶1。
蛋白酶活性：
对于本发明目的，需要测定在洗衣洗涤剂组合物和洗衣洗涤中的蛋白酶活性。这些测定可按以下进行。
(1)在组合物中：
将1ml含有表面活性剂的基本制剂的样品与适当量的蛋白酶和抑制剂混合。抑制剂和蛋白酶混合约10分钟后，加入10μl的20mg/ml基质(琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基丙氨酸)。混合样品，放入分光光度计中。在410nm下，在20分钟内监测光密度。(在前期，光密度下降，大概是由于光程中气泡的数目减少)。在最后的10分钟内，光密度上升相对是线性的，测定此增加速度。
在无抑制剂的情况下，还使用相同技术测定蛋白酶活性。但若加入全部量的蛋白酶，基质的消耗会太快，不会得到有意义的测定。因此，使用无蛋白酶的含有表面活性剂的基本制剂产品，向其中加入占产品量1％的蛋白酶。按以上所述测定该速度，将数值进行比较。
根据本发明的组合物在该组合物中的蛋白酶活性低于在没有蛋白酶抑制剂情况下的活性的1％，优选低于其活性的约0.8％。
(2)在洗涤中：
制备1ml混以适当量的蛋白酶和抑制剂的含表面活性剂的基本制剂溶液(允许抑制剂和蛋白酶混合10分钟或更长时间)。然后通过将100μl该样品与64ml 6格令/加仑水混合使样品稀释，然后将1000μl该样品溶液用10μl的20mg/ml琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基丙氨酸进行测定。在410nm下，按光密度的增加来测定蛋白酶活性。使用没有抑制剂的对照样品来指示蛋白酶总量。根据该实验方法，优选的组合物提供至少约40％蛋白酶活性。
本发明组合物在洗涤中游离蛋白酶的百分数与在洗衣洗涤剂组合物中游离蛋白酶的百分数的比例大于约100，优选大于约200，更优选大于约400。
去污表面活性剂-有效量的，一般约1-95％，优选约8-70重量％去污表面活性剂是本发明中的另一种必要组分。该去污表面活性剂可选自阴离子型、非离子型、阳离子型、两性、两性离子表面活性剂和它们的混合物。通过选择去污表面活性剂的类型和用量以及本文公开的其它附加组分，本发明洗涤剂组合物可配制成用于洗衣清洗方面。所使用的特定表面活性剂因此可在宽范围内变化。
本发明的益处特别在含有对酶苛刻的组分例如某些洗涤助洗剂和表面活性剂的组合物中被断定。这些包括(但不限于)阴离子表面活性剂例如烷基醚硫酸盐、直链烷基苯磺酸盐、烷基硫酸盐等。以下描述了适合的表面活性剂。
阴离子表面活性剂-可使用的一类阴离子表面活性剂包括烷基酯磺酸盐。它们是合乎需要的，因为它们可用能再生的非石油源料制备。烷基酯磺酸盐表面活性剂组分的制备可根据在技术文献中公开的公知方法进行。例如，C8-C20羧酸的直链酯可按照“美国油化学会志”(“The Journal of the American Oil Chemists Society”),52(1975)，第323-329页的方法，用气态SO3磺化。适合的原料包括天然的脂肪类物质如由牛油、棕榈油和椰子油等衍生的物质。
特别适合于洗衣应用的优选的烷基酯磺酸盐表面活性剂包括具有以下结构式的烷基酯磺酸盐表面活性剂：
                   R3-CH(SO3M)-C(O)-OR4其中R3是C8-C20烃基，优选烷基，或其组合，R4是C1-C6烃基，优选烷基，或其组合，M是形成可溶性盐的阳离子。适合的盐包括金属盐例如钠、钾和锂盐，以及取代或未取代的铵盐，例如甲基-、二甲基-、三甲基-和季铵阳离子，例如四甲基铵和二甲基基啶鎓和得自烷醇胺例如单乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺的阳离子。优选R3是C10-C16烷基，R4是甲基、乙基或异丙基。特别优选的是甲基酯磺酸盐，其中R3是C14-C16烷基。
烷基硫酸盐表面活性剂是另一类用于本发明的重要的阴离子表面活性剂。当与多羟基脂肪酸酰胺(见以下)结合使用时，除了具有优良的全面清洗能力外，包括在宽范围温度、洗涤浓度和洗涤时间下对油脂/油的良好清洗能力，还可得到烷基硫酸盐的溶解作用以及在液体洗涤剂配方中的改善的配制能力，它们是式ROSO3M的水溶性盐或酸，其中R优选是C10-C24烃基，优选具有C10-C20烷基部分的烷基或羟烷基，更优选C12-C18烷基或羟烷基，M是H或阳离子，例如碱金属阳离子(例如钠、钾、锂)，取代的或未取代的铵阳离子例如甲基、二甲基和三甲基铵和季铵阳离子例如四甲基铵和二甲基基啶鎓，以及那些由烷醇胺例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺和其混合物衍生的阳离子等。一般对于较低的洗涤温度(例如低于约50℃)，优选烷基链为C12-C16，而对较高的洗涤温度(例如高于约50℃)，优选C16-C18烷基链。
烷基烷氧基化硫酸盐表面活性剂是另一类适用的阴离子表面活性剂。这些表面活性剂是一般具有式RO(A)mSO3M的水溶性盐或酸，其中R是未取代的C10-C24烷基或具有C10-C24烷基部分的羟烷基，优选C12-C20烷基或羟烷基，更优选C12-C18烷基或羟烷基，A是乙氧基或丙氧基单元，m值大于0，一般在约0.5至约6之间，更优选在约0.5至约3之间，M是H或阳离子，其可以是例如金属阳离子(例如钠、钾、锂、钙、镁等)、铵或取代的铵阳离子。烷基乙氧基化硫酸盐以及烷基丙氧基化硫酸盐是本文预期的。取代铵阳离子的具体实例包括甲基、二甲基、三甲基铵阳离子和季铵阳离子例如四甲基铵和二甲基基啶鎓，以及那些由烷醇胺例如单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺和其混合物衍生的阳离子。例举的表面活性剂有C12-C18烷基聚乙氧基化物(1.0)硫酸盐，C12-C18烷基聚乙氧基化物(2.25)硫酸盐，C12-C18烷基聚乙氧基化物(3.0)硫酸盐和C12-C18烷基聚乙氧基化物(4.0)硫酸盐，其中M可方便地选自钠和钾。
其它阴离子表面活性剂-其它可用于洗涤目的的阴离子表面活性剂也可包括在本发明的组合物中。这些可包括皂的盐(包括例如钠、钾、铵和取代的铵盐例如单、二和三乙醇胺盐)、C9-C20直链烷基苯磺酸盐、C8-C22伯或仲烷烃磺酸盐、C8-C24烯烃磺酸盐、通过磺化碱土金属柠檬酸盐的热解产物制得的磺化的多羧酸，例如在英国专利说明书No.1,082,179中所描述的；烷基甘油磺酸盐、脂肪酰基甘油磺酸盐、脂肪油酰基甘油硫酸盐、烷基酚环氧乙烷醚硫酸盐、石蜡烃磺酸盐、烷基磷酸盐、羟乙磺酸盐例如酰基羟乙磺酸盐、N-酰基牛磺酸盐、氨基乙磺酸甲酯的脂肪酸酰胺、烷基琥珀酰胺酸盐和磺基琥珀酸盐、磺基琥珀酸单酯(特别是饱和和不饱和的C12-C18单酯)和磺基琥珀酸二酯(特别是饱和和不饱和的C6-C14二酯)、N-酰基肌氨酸盐、烷基多糖的硫酸盐例如烷基多葡萄糖苷硫酸盐(非离子性的非硫酸化的化合物，在以下被描述)、支链的伯烷基硫酸盐和烷基聚乙氧基羧酸盐例如那些具有式RO(CH2CH2O)kCH2COO-M+的盐，其中R是C8-C22的烷基，k为0至10的整数，M是形成可溶性盐的阳离子和用羟乙磺酸酯化并用氢氧化钠中和的脂肪酸。树脂酸和氢化树脂酸也是适合的，例如松香、氢化松香，以及存在于松浆油或由松浆油衍生的树脂酸和氢化树脂酸。进一步的例子被给在“表面活性剂和洗涤剂”(第Ⅰ和Ⅱ卷，由Schwartz,Perry及Berch编著)书中。许多这种表面活性剂也一般性地公开在1975年12月30日授予Laughlin等人的美国专利3,929,678，第23栏58行至29栏23行中(本文引用作参考)。
非离子洗涤剂表面活性剂-适合的非离子洗涤剂表面活性剂一般公开在1975年12月30日颁布的Laughlin等的美国专利3929678中，第13栏14行至第16栏6行，其在本文引用作参考。可用的非离子表面活性剂的说明性的非限制类型列在下面。
烷基酚的聚环氧乙烷、聚环氧丙烷和聚环氧丁烷的缩合产物。一般，聚环氧乙烷的缩合物是优选的。这些化合物包括具有含约6至约12个碳原子的为直链或支链构型的烷基的烷基酚与氧化烯的缩合产物。在优选的实施方案中，每摩尔烷基酚中存在的环氧乙烷的量等于约5至约25摩尔。商业上可购得的这种类型的非离子表面活性剂包括IgepalCO-630，是由GAF Corporation出售的；和TritonX-45,X-114,X-100和X-102，它们都是由Rohm&Haas公司出售的。这些化合物通常称为烷基酚烷氧基化物(例如烷基酚乙氧基化物)。
脂肪醇与约1至约25摩尔环氧乙烷的缩合产物。脂肪醇的烷基链既可以是直链的也可以是支链的，可以是伯醇或仲醇，并一般含有约8至约22个碳原子。特别优选的是按每摩尔醇计，具有含约10至约20个碳原子的烷基的醇与约2至约18摩尔环氧乙烷的缩合产物。商业上可购得的这种类型的非离子表面活性剂的实例包括Tergitol15-S-9(C11-C15直链仲醇与9摩尔环氧乙烷的缩合产物)、Tergitol24-L-6 NMW(C12-C14伯醇与6摩尔环氧乙烷的缩合产物，并具有窄的分子量分布)，两种均由Union Carbide Corporation出售；由Shell Chemical Company出售的Neodol45-9(C14-C15直链醇与9摩尔环氧乙烷的缩合产物)，Neodol23-6.5(C12-C13直链醇与6.5摩尔环氧乙烷的缩合产物)，Neodol45-7(C14-C15直链醇与7摩尔环氧乙烷的缩合产物)，Neodol45-4(C14-C15直链醇与4摩尔环氧乙烷的缩合产物)；由Procter&Gamble Company出售的KyroEOB(C13-C15醇与9摩尔环氧乙烷的缩合产物)。此类非离子表面活性剂一般称为“烷基乙氧基化物”。
环氧乙烷与通过环氧丙烷与丙二醇缩合形成的疏水基的缩合产物。这些化合物的疏水部分优选具有分子量约1500至约1800，并表现出水不溶解性。往该疏水部分上加成聚氧乙烯部分倾向于增加总体分子的水溶性，并且产物的液体特征被维持到聚氧乙烯的含量为缩合产物总重量的约50％这一点处，这相当于与多至约40摩尔环氧乙烷缩合。这种类型化合物的实例包括一些商业上可购得的Pluronic表面活性剂，它由BASF出售。
环氧乙烷与由环氧丙烷和乙二胺反应得到的产物的缩合产物。这些产物的疏水部分由乙二胺与过量的环氧丙烷的反应产物构成，并且一般具有约2500至约3000的分子量。该疏水部分与环氧乙烷缩合到一定程度，即缩合产物含有约40％至约80重量％聚氧乙烯，并且具有约5000至约11000的分子量。这种类型非离子表面活性剂的实例包括一些商业上可购得的Tetronic化合物，由BASF出售。
半极性非离子表面活性剂是一类特殊的非离子表面活性剂，其包括水溶性氧化胺，其包含一个约10至约18个碳原子的烷基部分和2个选自含有约1至约3个碳原子的烷基和羟烷基的部分；水溶性氧化膦，其包含一个约10至约18碳原子的烷基部分和2个选自含有约1至约3个碳原子的烷基和羟烷基的部分；和水溶性亚砜，其包含一个约10至约18个碳原子的烷基部分和一个选自含有约1至约3个碳原子的烷基和羟烷基部分的部分。
半极性非离子洗涤剂表面活性剂包括具有下式的氧化胺表面活性剂：
R3(OR4)xN(O)(R5)2其中R3是含有约8至约22个碳原子的烷基、羟烷基或烷基苯基、或它们的混合物；R4是含有约2至约3个碳原子的亚烷基或羟亚烷基或它们的混合物；x为0至约3；每个R5是含有约1至约3个碳原子的烷基或羟烷基或含有约1至约3个环氧乙烷基团的聚环氧乙烷基团。R5基团可彼此连接，例如通过氧或氮原子连接形成环结构。
这些氧化胺表面活性剂特别包括C10-C18烷基二甲基氧化胺和C8-C12烷氧基乙基二羟乙基氧化胺。
在1986年1月21日颁发给Llenado的美国专利4,565,647中公开的烷基多糖，其具有一个含约6至约30个碳原子，优选约10至约16个碳原子的疏水基团和一个多糖例如多苷亲水基团，该亲水基团含有约1.3至约10，优选约1.3至约3，最优选约1.3至约2.7个糖单元。可以使用任何含有5或6个碳原子的还原糖，例如葡萄糖、半乳糖，和可用半乳糖基部分取代糖基部分。(疏水基任选地连接在2-、3-、4-等位置上，从而得到与葡糖苷或半乳糖苷相对的葡萄糖或半乳糖)。糖间键可以是例如在前一个糖单元的2-、3-、4-和/或6-位与另一个糖单元的一个位置之间。
任选但较低优选的是聚氧化烯链可以连接疏水部分和多糖部分。优选的氧化烯是环氧乙烷。典型的疏水基包括含有约8至约18，优选约10至约16个碳原子的饱和或未饱和的支链或非支链的烷基。优选，烷基是直链饱和烷基。烷基可含有多至约3个羟基和/或聚氧化烯链可含有多至约10个，优选低于5个氧化烯部分。适合的烷基多糖是辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基和十八烷基、二、三、四、五和六葡糖苷、半乳糖苷、乳糖苷、葡萄糖、果糖苷、果糖和/或半乳糖。适合的混合物包括椰子油烷基、二、三、四和五葡糖苷和牛油烷基四、五和六葡糖苷。
优选的烷基多苷具有下式：
R2O(CnH2nO)t(糖基)x其中R2选自烷基、烷基苯基、羟烷基、羟烷基苯基和其混合物，其中烷基含有约10至约18个碳原子，优选约12至约14个碳原子；n是2或3，优选2；t是0至约10，优选0；x是约1.3至约10，优选约1.3至约3，最优选约1.3至约2.7。糖基优选是由葡萄糖衍生的。为制备这些化合物，首先制得醇或烷基聚乙氧基醇，然后与葡萄糖或葡萄糖源反应形成葡糖苷(在1位连接)。另外的糖基单元然后可在其1位与前一个糖基单元的2-、3-、4-和/或6-位之间连接，优选主要与2位之间连接。
具有下式的脂肪酸酰胺：
                   R5-C(O)-N(R7)2其中R6是含约7-约21个(优选约9-约17)个碳原子的烷基，每个R7选自氢、C1-C4烷基、C1-C4羟烷基和-(C2H4O)xH，其中x为约1-约3。
优选的酰胺是C8-C20氨酰胺、单乙醇酰胺、二乙醇酰胺和异丙醇酰胺。
阳离子表面活性剂-阳离子洗涤表面活性剂也可包括在本发明洗涤剂组合物中。阳离子表面活性剂包括铵盐表面活性剂例如烷基二甲基卤化铵，以及具有下式的那些表面活性剂：
[R2(OR3)y][R4(OR3)y]2R5N+X-其中R2是在烷基链中含有约8至约18个碳原子的烷基或烷基苄基，每个R3选自-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、-CH2CH(CH2OH)-、-CH2CH2CH2-和其混合物；每个R4选自C1-C4烷基、C1-C4羟烷基、苄基、由连接两个R4基团形成的环结构、-CH2CHOHCHOHCOR6CHOHCH2OH，其中R6是分子量小于约1000的任何己糖或己糖聚合物，以及当y不为0时R6是氢；R5是同R4相同的基团，或者是烷基链，其中R2加R5的碳原子总数不多于约18个；每个y是0至约10，并且y值总和为0至约15；x是任何一种相容的阴离子。
适用于本发明的其它阳离子表面活性剂还描述在1980年10月14日颁布的Cambre的美国专利4228044中，其在本文引用作参考。
其它表面活性剂-两性表面活性剂可掺入本发明洗涤剂组合物中。这些表面活性剂可广义地被描述为仲或叔胺的脂族衍生物，或者杂环仲和叔胺的脂族衍生物，其中脂族基团可以是直链或支链的。脂族取代基之一含有至少约8个碳原子，典型地约8至约18个碳原子，并且至少有一个脂族取代基含有水增溶性的阴离子基团，例如羧基、磺酸根、硫酸根。两性表面活性剂的实例参见1975年12月30日授予Laughlin等的美国专利3,929,678，第19栏18-35行。
两性离子表面活性剂也可掺入本发明洗涤剂组合物中。这些表面活性剂可广义地被描述为仲和叔胺的衍生物、杂环仲和叔胺的衍生物，或季铵盐、季磷鎓或叔锍化合物的衍生物。两性离子表面活性剂的实例参见1975年12月30日授予Laughlin等的美国专利3,929,678，第19栏38行至22栏48行。两性和两性离子表面活性剂一般与一种或多种阴离子和/或非离子表面活性剂组合使用。
多羟基脂肪酸酰胺表面活性剂-本发明的液体洗涤剂组合物还可含有增强酶量的多羟基脂肪酸酰胺表面活性剂。“增强酶量”意思是指组合物的配方师可选择掺入组合物中的多羟基脂肪酸酰胺的量，使得改善洗涤剂组合物中的酶的清洗性能。一般，对于常规用量的酶，掺入约1重量％的多羟基脂肪酸酰胺来增强酶的性能。
本发明的洗涤剂组合物一般包含约1重量％的多羟基脂肪酸酰胺表面活性剂，优选约3％-约30％多羟基脂肪酸酰胺。多羟基脂肪酸酰胺表面活性剂组分包括以下结构式的化合物：
                   R2-C(O)-N(R1)-Z其中：R1为氢，C1-C4烃基，2-羟乙基，2-羟丙基，或其混合物，优选C1-C4烷基，更优选C1或C2烷基，最优选C1烷基(即甲基)；R2为C5-C31烃基，优选直链C7-C19烷基或链烯基，更优选直链C9-C17烷基或链烯基，最优选直链C11-C15烷基或链烯基或其混合物；和Z为具有直接连有至少3个羟基的直链烃基链的多羟基烃基，或其烷氧基化衍生物(优选乙氧基化或丙氧基化)。Z优选在还原胺化反应中由还原糖衍生得到；更优选Z为糖基。适宜的还原糖包括葡萄糖，果糖，麦芽糖，乳糖，半乳糖，甘露糖和木糖。作为原料，除了以上所列的单个糖之外，可以使用高葡萄糖玉米糖浆、高果糖玉米糖浆和高麦芽糖玉米糖浆。由这些玉米糖浆可得到用于Z的混合糖组分。应当认识到这里绝对没有打算排除其它适宜的原料。Z优选选自-CH2(CHOH)n-CH2OH,-CH(CH2OH)(CHOH)n-1-CH2OH,-CH2-(CHOH)2(CHOR’)(CHOH)-CH2OH，和其烷氧基化衍生物，其中n为3至5的整数，包括3和5,R’是H或环状的或脂族的单糖。最优选的是n为4的糖基，具体是-CH2-(CHOH)4-CH2OH。
R1可以是例如N-甲基、N-乙基、N-丙基、N-异丙基、N-丁基、N-2-羟乙基或N-2-羟丙基。
R2-CO-N＜可以是例如椰子油酰胺、硬脂酰胺、油酰胺、月桂酰胺、肉豆蔻酰胺、癸酰胺、棕榈酰胺、牛油酰胺等。
Z可以是1-脱氧葡糖基、2-脱氧果糖基、1-脱氧麦芽糖基、1-脱氧乳糖基、1-脱氧半乳糖基、1-脱氧甘露糖基、1-脱氧麦芽三糖基等。
制备多羟基脂肪酸酰胺的方法在本领域中是公知的。一般，它们可通过以下方法制备：将烷基胺与还原糖在还原胺化反应中进行反应，形成相应的N-烷基多羟基胺，然后在缩合/酰胺化步骤中，将N-烷基多羟基胺与脂肪族酯或甘油三酯反应形成N-烷基、N-多羟基脂肪酸酰胺产物。制备含有多羟基脂肪酸酰胺的组合物的方法公开在例如1959年2月18日公布的Thomas Hedley&Co.,Ltd.的英国专利说明书809060；1960年12月20日颁布的E.R.Wilson的美国专利2965576，和1955年3月8日颁布的Anthony M.Schwartz的美国专利2703798，和1934年12月25日颁布的Piggott的美国专利1985424中，其在本文均引用作参考。
第二种酶-本发明优选的组合物还包含性能增强量的洗涤剂相容的第二种酶。“洗涤剂相容”意思是与液体洗涤剂组合物中的其它组分例如去污表面活性剂和洗涤助洗剂相容。这些第二种酶优选选自脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶和它们的混合物。术语“第二种酶”不包括以上讨论的蛋白酶，所以具有第二种酶的每种组合物含有至少两种酶，包括至少一种蛋白酶。在组合物中使用的第二种酶的量是根据酶的类型变化。一般，优选使用约0.0001-0.3％重量，更优选0.001-0.1％重量这些第二种酶。还可使用相同类型的酶(例如脂肪酶)的混合物或两种或多种类型(例如纤维素酶和脂肪酶)的混合物。可使用精制或非精制形式的酶。
适用于液体洗涤剂组合物中的任何脂解酶都可以用于这些组合物中。本发明适用的脂肪酶包括由细菌和霉菌源得到的那些。
适宜的细菌脂肪酶包括由假单胞菌属族的微生物，如司徒茨氏(stutzeri)假单胞菌ATCC 19.154产生的那些脂肪酶，如公开在英国专利1372034中，该文献在本文引用作参考。适合的脂肪酶包括与由微生物荧光假单胞菌IAM1057产生的脂肪酶的抗体表现出阳性免疫交叉反应的那些脂肪酶。该脂肪酶和其提纯方法描述在1978年2月24日公开的日本专利申请53-20487中。这种脂肪酶可从AmanoPharmaceutical Co.Ltd.,Nagoya，日本，按商品名脂肪酶P“Amano”购得，下文称之为“Amano-P”。使用根据Quchterlony(Acta,Med.Scan.,133，第76-79页(1950))的标准和已知的免疫扩散方法，这种脂肪酶与Amano-P抗体应表现出阳性免疫交叉反应。这些脂肪酶和它们与Amano-P的免疫交叉反应的方法还描述在1987年11月17日授权的Thom等的美国专利4,707,291中，该文献在本文引用作参考。其典型的实例是Amano-P脂肪酶、来自莓实假单胞菌(Pseudomonas fragi)FERM P 1339(以商品名Amano-B购得)的脂肪酶、来自还原氮假单胞菌变异的lipolyticum FERM P 1338(以商品名Amano-CES购得)的脂肪酶、来自Chromobacter viscosum例如Chromobacter viscosum var.lipolyticum NRRLB 3673的脂肪酶，它们在商业上从Toyo Jozo Co.,Tagata，日本购得，和另外的由美国生化公司，U.S.A和Disoynth Co.，荷兰购得的Chromobacter viscosum脂肪酶和来自唐菖蒲假单胞菌的脂肪酶。
适合的霉菌脂肪酶包括由胎毛腐质霉和Thermomyceslanuginosus产生的那些脂肪酶。最优选的是克隆来自胎毛腐质霉的基因并将该基因表达在米曲霉中得到的脂肪酶，如在欧洲专利申请0258 068(Novo Industri A/S)中描述的，在商业上可按商品名Lipolase从Novo Nordisk A/S购得。
这些组合物中可使用每克脂肪酶约10至18,000，优选约60至6,000脂肪酶单位(LU/g)。脂肪酶单位是在固定的pH，即pH是9.0下，温度是30℃，基质是3.3重量％橄榄油和3.3％阿拉伯树胶的乳液，在5mmol/l三羟甲基氨基甲烷缓冲液中存在13mmol/l Ca++和20mmol/l NaCl下每分钟产生1mmol可滴定的脂肪酸的脂肪酶量。
本发明优选的组合物抑制蛋白酶在组合物中的活性，使得在90°F下脂肪酶在组合物中的半衰期是至少1个月。
适用于液体洗涤剂组合物中的任何纤维素酶都可用在这些组合物中。用于本发明的适合纤维素酶包括由细菌和霉菌源得到的那些纤维素酶。优选它们的最佳pH在5-9.5之间。可使用约0.0001-0.1重量％纤维素酶。
适合的纤维素酶公开在1984年3月6日颁布的Barbesgoard等人的美国专利US4435307中，该文献在本文引用作参考，其公开了由Humicola insolens产生的霉菌纤维素酶。适宜的纤维素酶还公开在GB-A-2075028；GB-A-2095275和DE-OS-2247832中。
这种纤维素酶的实例是由Humicola insolens的菌株(灰色腐质霉变异的thermoidea)，特别是腐质霉菌株DSM1800产生的纤维素酶，和由芽孢杆菌N霉菌产生的纤维素酶或由属于气单胞菌属的霉菌产生的纤维素酶212，和由海生软体动物(Dolabella AuriculaSolander)的肝胰腺中提取的纤维素酶。
适用于液体洗涤剂组合物中的任何淀粉酶都可用在本发明这些组合物中。淀粉酶包括例如由地衣形芽孢杆菌的特殊菌株得到的淀粉酶，其被更详细地描述在英国专利说明书1296839(Novo)中。淀粉分解蛋白质包括，例如RapidaseR、International Bio-Synthetics,Inc.和TermamylR Novo Industries。
可使用约0.0001％-0.55％，优选0.0005-0.1重量％淀粉酶。
钙-本发明组合物可任选地包含钙离子源。任何水溶性钙盐都可用作钙离子源，包括乙酸钙、甲酸钙、二甲苯磺酸钙和丙酸钙。二价离子，例如锌和镁离子可完全替代钙离子或替代一部分。因此，在本发明液体洗涤剂组合物中，钙离子源可被另外的二价离子源部分代替。
用于本发明的钙是酶可及的。因此，优选的组合物基本上不含螯合剂，例如能够形成可溶于组合物中的钙配合物的多酸。但可使用少量的螯合剂，例如多酸或多酸的混合物。酶可及的钙被定义为酶组分可有效得到的量的钙离子。因此，从实施的观点看，在不存在任何储藏的螯合剂下，酶可及的钙是组合物中的可溶性钙，例如在20℃下，钙配合物的平衡常数等于或大于1.5。
硼酸-本发明组合物还任选地含有约0.25％-约10％，优选约0.5％-约5％，更优选约0.75％-约3重量％硼酸或在组合物中能形成硼酸的化合物(以硼酸为基准计算)。硼酸是优选的，尽管其它化合物例如氧化硼、硼砂和其它的碱金属硼酸盐(例如原-、偏-、焦硼酸钠，五硼酸钠)也是适合的。取代的硼酸(例如苯基硼酸、丁烷硼酸和对溴苯基硼酸)也可用于代替硼酸。
本发明组合物还可含有仅含有碳、氢和氧原子的多元醇，特别是二元醇。它们优选含有约2-约6个羟基。实例包括丙二醇(特别是1,2-丙二醇，其是优选的)、乙二醇、甘油、山梨醇、甘露糖醇、葡萄糖和它们的混合物。多元醇一般为组合物重量的约1％-约15％，优选约1.5％-约10％，更优选约2％-约7％。
任选组分-洗涤剂助洗剂可任选地包括在本发明组合物中，特别是对于洗衣组合物。可使用无机以及有机助洗剂。当存在助洗剂时，组合物一般将包含至少约1％助洗剂，并且其可以是无机或有机助洗剂。液体洗衣配方优选包含约3％-30％，更优选约5％-20重量％洗涤助洗剂。
无机助洗剂包括，但不限于，以下的碱金属、铵和烷醇铵盐：聚磷酸盐(例如三聚磷酸盐、焦磷酸盐和玻璃状聚合的偏磷酸盐)、膦酸盐、肌醇六磷酸、硅酸盐、碳酸盐(包括碳酸氢盐和倍半碳酸盐)、硫酸盐和硅铝酸盐。也可使用硼酸盐助洗剂及含有在洗涤剂贮存或洗涤条件下可产生硼酸盐的形成硼酸盐物质的助洗剂(下文总称为“硼酸盐助洗剂”)。非硼酸盐助洗剂优选用于预期在低于约50℃，特别是低于约40℃的洗涤条件下使用的本发明组合物中。
硅酸盐助洗剂的实例是碱金属硅酸盐，特别是那些SiO2∶Na2O的比率在1.6∶1至3.2∶1范围内的碱金属硅酸盐和层状硅酸盐，如在1987年5月12日颁布的H.P.Rieck的美国专利US4664839中描述的层状硅酸钠，该文献在本文引用作参考。但其它的硅酸盐也是可用的，例如硅酸镁，其可作为颗粒配方中的松脆剂、作为氧漂白剂的稳定剂和控泡体系的组分。
碳酸盐助洗剂的实例是在1973年11月15日公开的德国专利申请2321001(其公开的内容在本文引用作参考)中的碱土金属和碱金属碳酸盐，包括碳酸钠和倍半碳酸钠和它们与超细碳酸钙的混合物。
硅铝酸盐助洗剂可用于本发明中。硅铝酸盐助洗剂在最流行的市售重垢颗粒洗涤剂组合物中是最重要的，在液体洗涤剂配方中也是重要的助洗剂成分。硅铝酸盐助洗剂包括具有下列经验式的助洗剂：
                     Mz(zAlO2.ySiO2)其中M是钠、钾、铵或取代的铵，z是约0.5-约2；y是1；该物质的镁离子交换能力是每克无水硅铝酸盐至少约50毫克当量CaCO3硬度。优选的硅铝酸盐是具有下式的沸石助洗剂：
                    Naz[(AlO2)z(SiO2)y].xH2O其中z和y为至少是6的整数，z与y的摩尔比在1.0至约0.5的范围内，x是约15至约264的整数。
有用的硅铝酸盐离子交换材料是商业上可购买的。这些硅铝酸盐可以是结晶或无定形结构，并且可以是天然存在的硅铝酸盐或是合成得到的。制备硅铝酸盐离子交换材料的方法公开在1976年10月12日颁布的Krummel等人的美国专利US3985669中，在此引入作为参考。用于本文的优选的合成结晶硅铝酸盐离子交换材料可以按注册商标为沸石A、沸石P(B)和沸石X购买到。在特别优选的实施方案中，结晶硅铝酸盐离子交换材料具有下式：
                  Na12[(AlO2)12(SiO2)12].xH2O其中x为约20至约30，尤其是约27。该物质称为沸石A。硅铝酸盐优选具有直径约0.1-10微米的颗粒度。
聚磷酸盐的具体实例是三聚磷酸碱金属盐、焦磷酸钠、钾和铵盐、焦磷酸钠、钾和铵盐、正磷酸钠和钾、聚偏/磷酸钠，其中聚合度为约6-约21，和肌醇六磷酸的盐。
膦酸盐助洗剂盐的实例是乙烷1-羟基-1,1-二膦酸的水溶性盐，特别是钠和钾盐，亚甲基二膦酸的水溶性盐例如三钠盐和三钾盐，和取代的亚甲基二膦酸的水溶性盐，例如亚乙基、异亚丙基、苄基亚甲基和卤代亚甲基膦酸三钠和三钾。上述类型的膦酸盐助洗剂盐公开在1964年12月1日和1965年10月19日授权给Diehl的美国专利3159581和3213030；1969年1月14日授权给Roy的美国专利3422021和1968年9月3日和1969年1月14授权给Quimby的美国专利3400148和3422137，其公开内容在本文引用作参考。
对于本发明目的优选的有机洗涤剂助洗剂包括各种多羧酸盐化合物。这里所用的″多羧酸盐″是指具有多个羧酸根基团，优选至少3个羧酸根基团的化合物。
多羧酸盐助洗剂通常可以以酸形式加入组合物中，但也可以以中和盐的形式加入。当以盐的形式使用时，碱金属，如钠、钾和锂或烷醇铵盐是优选的。
在多羧酸盐助洗剂中包括多种类型有用的材料。一类重要的多羧酸盐助洗剂包含醚多羧酸盐。许多醚多羧酸盐已公开用作洗涤剂助洗剂。可用的醚多羧酸盐的实例包括如公开在1964年4月7日授权的Berg的美国专利3128287和1972年1月18日授权的Lamberti等的美国专利3635830中的氧联二琥珀酸盐，这两篇文献在本文引用作参考。
可用作本发明助洗剂的特定类型的醚多羧酸盐包括具有以下通式的那些：
       CH(A)(COOX)-CH(COOX)-O-CH(COOX)-CH(COOX)(B)其中A是H或OH；B是H或-O-CH(COOX)-CH2(COOX)；X是H或成盐的阳离子。例如，在以上通式中，如果A和B都是H，则该化合物是氧联二琥珀酸和其水溶性盐。若A是OH,B是H，则该化合物是酒石酸单琥珀酸(TMS)和其水溶性盐。如果A是H,B是-O-CH(COOX)-CH2(COOX)，则该化合物是酒石酸二琥珀酸(TDS)和其水溶性盐。这些助洗剂的混合物是本发明特别优选使用的。特别优选的是TMS和TDS以重量比TMS∶TDS为约97∶3-约20∶80的混合物。这些助洗剂公开在1987年5月5日授权给Bush等的美国专利4663071中。
适合的醚多羧酸盐还包括环状化合物，特别是脂环族化合物，如在美国专利US3923679；US3835163；US4158635；US4120874和US4102903中所描述的那些，这些文献在本文引用作参考。
其他有用的助洗剂包括由以下结构式表示的醚羟基多羧酸盐：
          HO-[C(R)(COOM)-C(R)(COOM)-O]n-H其中M是氢或使得到的盐是水溶性的阳离子，优选碱金属、铵或取代的铵阳离子，n是约2-约15(优选n是约2-约10，更优选n平均为约2-约4)，各R是相同或不同的，并选自氢、C1-4烷基或C1-4取代的烷基(优选R是氢)。
其它的醚多羧酸盐包括马来酸酐与乙烯或乙烯基甲基醚的共聚物，1,3,5-三羟基苯-2,4,6-三磺酸，和羧甲氧基琥珀酸。
有机多羧酸盐助洗剂还包括多乙酸的各种碱金属、铵和取代铵盐。实例包括乙二胺四乙酸和次氮基三乙酸钠、钾、锂、铵和取代的铵盐。
还包括多羧酸盐，例如苯六甲酸，琥珀酸，氧联二琥珀酸，聚马来酸，苯-1,3,5-三羧酸，羧甲氧基琥珀酸和它们的可溶性盐。
柠檬酸盐助洗剂，例如柠檬酸和其可溶性盐(特别是钠盐)是重垢液体洗涤剂配方中特别重要的多羧酸盐助洗剂，但其也可以包括在颗粒组合物中。
其它的羧酸盐助洗剂包括公开在1973年3月28日授权的Diehl的美国专利3723322中的羧酸化的碳水化合物，该文献在本文引用作参考。
还适合于本发明洗涤剂组合物中的是在1986年1月28日授权的Bush的美国专利US4566984中公开的3,3-二羧基-4-氧杂-1,6-己二酸盐以及有关的化合物，该文献在本文引用作参考。有用的琥珀酸助洗剂包括C5-C20烷基琥珀酸和它们的盐。这种类型中特别优选的化合物是十二碳烯基琥珀酸。烷基琥珀酸一般具有通式：R-CH(COOH)CH2(COOH)，即琥珀酸的衍生物，其中R是烃基，例如C10-C20烷基或链烯基，优选C12-C16烷基或链烯基，或其中R可被羟基、磺基、次硫酸基、砜取代基取代，如上述专利中描述的。
琥珀酸盐助洗剂优选以其水溶性盐的形式使用，包括钠、钾、铵和烷醇铵盐。
琥珀酸盐助洗剂的具体实例包括：月桂基琥珀酸盐，肉豆寇基琥珀酸盐、棕榈基琥珀酸盐、2-十二碳烯基琥珀酸盐(优选)，2-十五碳烯基琥珀酸盐等。月桂基琥珀酸盐是该组中优选的助洗剂，并被描述在1986年11月5日公开的欧洲专利申请86200690.5/0200263中。
可用的助洗剂的实例还包括羧甲基氧基丙二酸、羧甲基氧基琥珀酸、顺式-环己烷六甲酸、顺式环戊烷四甲酸钠和钾；水溶性聚丙烯酸盐(分子量高于约2000的这些聚丙烯酸盐还可有效地用作分散剂)，和马来酸酐与乙烯基甲基醚或乙烯的共聚物。
其他适合的多羧酸盐是公开在1979年3月13日授权的Crutchfield等人的美国专利US4144226中的聚缩醛羧酸盐，该文献在本文引用作参考。这些聚缩醛羧酸盐可通过在聚合条件下，将二羟乙酸酯和聚合引发剂放在一起来制备。得到的聚缩醛羧酸酯然后连接化学稳定的端基，以稳定该聚缩醛羧酸盐，避免在碱性溶液中快速解聚，转化成相应的盐，并加入表面活性剂中。
多羧酸盐助洗剂还公开在1967年3月7日授权的Diehl的美国专利US3308067中，该文献在本文引用作参考。这类物质包括脂族羧酸例如马来酸、衣康酸和亚甲基丙二酸的均聚和共聚物的水溶性盐。
还可使用本领域公知的其它有机助洗剂。例如，可使用具有长链烃基的单羧酸和其可溶性盐。这些包括通常称为“皂”的物质。典型地使用链长C10-C20。该烃基可以是饱和或不饱和的。
其它任选组分包括污垢解脱剂、螯合剂、粘土污垢去除/抗再沉积剂、聚合分散剂、漂白剂、增白剂、抑泡剂、溶剂和美学试剂。

Claims (10)

1．一种液体洗衣洗涤剂组合物，其包含：
a)有效量的去污表面活性剂；
b)活性蛋白酶；和
c)选自蛋白质、肽和肽衍生物的蛋白酶抑制剂，
其中在该洗衣洗涤剂组合物中的蛋白酶活性低于在没有蛋白酶抑制剂情况下的活性的1％，在洗涤中游离蛋白酶的百分数与在洗衣洗涤剂组合物中游离蛋白酶的百分数的比例大于100，优选大于200，更优选大于400。
2．根据权利要求1的液体洗衣洗涤剂组合物，其中蛋白质抑制剂是具有下式的肽衍生物：
                  Z-B-NH-CH(R)-C(O)-X
其中B是包含1-5个氨基酸部分的肽链；X是氢或CF3；Z是N-封端部分，其选自氨基磷酸酯、亚磺酰胺、磺酰胺、磺酸、次膦酰胺、氨磺酰衍生物、硫脲、硫代氨基甲酸酯、膦酸酯、酰氨基磷酸酯、氨基甲酸酯和脲；和R选自直链或支链C1-C6未取代的烷基、苯基和C7-C9烷基芳基部分。
3．根据权利要求1或2的液体洗衣洗涤剂组合物，其包含：
a)8％-70％所说的去污表面活性剂；
b)0.0001％-5％活性蛋白酶；
c)0.00001％-5％蛋白酶抑制剂；
其中抑制剂与蛋白酶的比例大于1∶1，优选大于1.1∶1，更优选大于1.2∶1。
4．根据任一权利要求1-3的液体洗衣洗涤剂组合物，其中封N端的Z部分选自(R”O)2(O)P-、(SR”)2-、R”(O)2S-、SO3H、(R”)2(O)P-、R”O(O)2S-、(R”)2N(O)C-、R”O(S)C-、R”-P(O)OH、R”O(OH)(O)P-、R”O(O)C-和R”NH(O)C-，其中每个R”独立选自直链或支链C1-C6未取代的烷基、苯基、C7-C9烷芳基和环烷基部分，其中环烷基环可以跨C4-C8，并且可含有一种或多种选自O、N和S的杂原子，优选的R”选自甲基、乙基和苄基。
5．根据任一权利要求1-5的液体洗衣洗涤剂组合物，其中抑制剂与蛋白酶的比例在1∶1-20∶1范围，更优选在2∶1-10∶1范围。
6．根据任一权利要求1-5的液体洗涤剂组合物，其中所说的蛋白酶是枯草蛋白酶型的蛋白酶。
7．根据权利要求6的液体洗涤剂组合物，其中所说的蛋白酶选自AlcalaseR、枯草蛋白酶BPN’、蛋白酶A、蛋白酶B和它们的混合物。
8．根据任一权利要求1-7的液体洗衣洗涤剂组合物，其还包含有效量的一种或多种以下第二种酶：脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶和它们的混合物。
9．根据任一权利要求1-8的液体洗衣洗涤剂组合物，其还包含一种或多种以下组分：增泡剂、助洗剂、污垢解脱聚合物、聚丙烯酸盐聚合物、分散剂、染料转移抑制剂、染料、香料、加工助剂、增白剂和它们的混合物。
10．根据权利要求8的液体洗衣洗涤剂组合物，其中所说的第二种酶是脂肪酶，且其中在组合物中的蛋白酶活性还受到抑制，使得在90°F下脂肪酶在组合物中的半衰期是至少1个月。
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