SK283150B6

SK283150B6 - Peptidové deriváty, spôsob ich prípravy, farmaceutický prípravok s ich obsahom a ich použitie

Info

Publication number: SK283150B6
Application number: SK1454-95A
Authority: SK
Inventors: Karl Thomas Antonsson; Ruth Elvy Bylund; Nils David Gustafsson; Nils Olov Ingemar Nilsson
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 1993-06-03
Filing date: 1994-06-02
Publication date: 2003-03-04
Also published as: IS4166A; IS1805B; CZ290104B6; EP0701568A1; LTIP1947A; DE701568T1; HRP940311A2; HRP940311B1; EP1067136A1; CN1099425C; KR100339456B1; HUT74739A; US20050222395A1; DE122004000045I1; ES2128277T1; WO1994029336A1; JPH08511018A; SA94150051B1; NO954873D0; FI955828A0

Abstract

Kompetitívne inhibítory trypsínu podobných serín proteáze, ich príprava, farmaceutické prípravky obsahujúce tieto zlúčeniny ako účinné zložky a použitie zlúčenín ako trombínových inhibítorov, antikoagulantov a protizápalových činidiel a liečenie chorôb s nimi spojených, vzorca (I): A1-A2-NH-(CH2)n-B-D, kde A1 predstavuje štruktúrny fragment vzorca (IIa), (IIb), (IIc), A2 predstavuje štruktúrny fragment vzorca (IIIa), (IIIb), (IIIc), B predstavuje štruktúrny fragment vzorca (IVa), (IVb).ŕ

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka nových kompetitívnych inhibítorov trypsínu podobných serín proteáze, predovšetkým trombínu a kinigcnáz ako jc kalikrcín, ich syntézy, farmaceutických prostriedkov, obsahujúcich tieto zlúčeniny ako účinné zložky a použitia týchto zlúčenín ako trombínových inhibítorov a antikoagulantov a ako protizápalových inhibítorov. Vynález sa tiež týka nového použitia zlúčenín ako východiskových materiálov pri syntéze inhibítorov serín proteázy.

Doterajší stav techniky

Koagulácia krvi je kľúčový proces zahrnutý tak v hemostáze (t. j. zabráneniu straty krvi z poškodených ciev) ako aj trombóze (t. j. patologickom uzatvorení krvných ciev krvnou zrazeninou). Koagulácia je výsledkom komplexu sérií enzymatických reakcií, kde jedným z konečných stupňov je konverzia proenzýmu protrombínu na účinný enzým trombín.

Trombín má ústrednú úlohu v koagulácii. Aktivizuje doštičky, premieňa fibrinogén na fibrínové monoméry, ktoré spontánne polymerizujú na vlákna a aktivizuje faktor XIII, ktorý naopak zosieťuje polymér na nerozpustný fibrín. Trombín ďalej aktivizuje faktor V a faktor VII v pozitívnej reakcii spätnej väzby. Inhibítory trombínu sú preto považované za účinné antikoagulanty inhibíciou doštičiek, tvorbou fibrínu a stabilizáciou fibrínu. Pri inhibícii mechanizmu pozitívnej spätnej väzby sú považované za spôsobujúce inhibíciu v reťazci udalostí vedúcich ku koagulácii a trombóze.

Kininogenázy sú serín proteázy, ktoré pôsobia na kininogény za vzniku kinínu (bradykinín, kalidín a Met-Lyz-bradikinín). Plazmový kalikreín, tkanivový kalikreín a tryptáza obrovských buniek predstavujú dôležité kininogenázy.

Kiníny (bradykinín, kalidín) sú vo všeobecnosti zahrnuté v zápale. Napríklad aktívny zápalový proces je spojený so zvýšenou permeabilitou krvných ciev, vedúcich k extravazácii plazmy do tkaniva. Vznikajúci plazmový exudát obsahuje všetky proteínové systémy obiehajúcej krvi. Z plazmy získané kininogény budú bezpodmienečne interagovať s rôznymi kalikreínmi, pri tvorbe kinínov, čo pokračuje tak dlho, pokým prebieha aktívny plazmový exudačný proces. Plazmová exudácia sa objavuje nezávisle od mechanizmov, ktoré sú zahrnuté v zápale, či už je to alergia, infekcia alebo iné faktory (Persson a kol., Editorial, Thorax, 47, 993 - 1000, (1992)). Plazmová exudácia je tak rysom mnohých chorôb, zahrnujúcich astmu, nádchu, nachladnutie a zápalové črevné choroby. Predovšetkým pri alergii sa bude uvoľňovať tryptáza obrovských buniek (Salomonsson a kol., Am. Rev. Respir. Dis., 146, 1535 - 1542, (1992)) na prispenie k tvorbe kinínu a iných patogénnych stavov v astme, nádche a intestinálnych chorobách.

Kiníny sú biologicky vysoko aktívne látky s pôsobením na hladké svaly, sekréciu, s neurogénnymi účinkami a pôsobením, ktoré môže zapríčiniť pretrvávanie zápalového procesu, zahrnutím aktivácie fosfolipázy A₂ a zvýšením vaskulárnej permeability. Naposledy uvedené pôsobenie potencionálne indukuje chybný obeh s kinínmi, poskytujúci generáciu viacerých kinínov atď.

Tkanivový kalikreín štiepi prevažne nizkomolekulárny kininogén za vzniku kalikreínu a plazmový kalikreín výhodne uvoľňuje bradykinín z vysokomolekulárneho kininogénu.

Inhibítory trombínu na báze aminokyselinovej sekvencie, obklopujúce štiepiace miesto pre fibrinogén Aa reťazec, ako prvý opísali Blombäcke a kol., v J. Clin. Lab. In vest. 24, suppl. 107, 59, (1969), kde uvádza sekvenciu Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, tu označovanú ako P3-P2-P1 sekvencia) ako najlepší inhibítor.

V US 4 346 078 opísal S. Bajusz a kol., trombínový inhibítor H-DPhe-Pro-Agm, dipeptidylový derivát s aminoalkylguanínom v P1 -polohe.

Inhibítory trombínu na báze peptidových derivátov s cyklickým aminoalkylguanínom, napr. 3-aminometyl-l-aminopiperidínom, v Pl-polohc boli opísané v EP-A2-0 468 231.

V EP-A2-0 185 390 opísal Bajusz a kol., že nahradenie agmatínu arginínaldehydom poskytuje inhibítor trombínu, ktorý je oveľa potentnejší.

Inhibítory kalikreínu na báze aminokyselinovej sekvencie, obklopujúce štiepiace miesto Arg-Ser boli opísané v poslednom období.

Arginín-chlórmetylketóny H-DPro-Phe-Arg-CH₂Cl a H-DPhe-Phe-Arg-CHjCl opísal ako inhibítory plazmového kalikreínu Kettner a Shaw v Biochemistry 17, 4778 - 4784, (1978), a Meth. Enzým. 80, 826 - 842, (1981).

Podobne estery a amidy, obsahujúce sekvenciu H-DPro-Phe-Arg opísal Fareed a kol., v An. N.Y. Acad. Sci. 370, 765 - 784, (1981), ako inhibítory plazmového kalikreinu.

Inhibítory' serín proteáz, ktoré sú na báze elektrofilných ketónov namiesto aldehydov v PI-polohe sú opísané v nasledujúcich patentových spisoch:

EP-A2-0 195 212, opisujúcim peptidyl-a-ketoestery a amidy,

EP-A1-0 362 002, opisujúcim fluóralkylamidketóny a

EP-A2-0 364 344, opisujúcim α,β,δ-triketozlúčeniny, ktoré majú rôzne peptidázu inhibujúce vlastnosti.

Inhibítory' trypsínu podobných serín proteáz, ako je trombín a kalikreín, na báze derivátov arginínu s C-koncovou kyselinou boritou a ich izotiouróniové analógy boli uvedené v EP-A2-0 293 881.

WO 92/04371 opisuje kininogenázové inhibítory, napríklad inhibítory’ kalikreínu na báze derivátov arginínu.

EP-A1-0 530 167 opisuje α-alkoxyketónové deriváty arginínu ako trombinové inhibítory.

Podstata vynálezu

Predmetom predloženého vynálezu je poskytnutie nových potentných trypsínu podobných serín proteázových inhibítorov, predovšetkým antikoagulancií a protizápalových zlúčenín s kompetitívnou inhibičnou aktivitou proti ich enzýmu, t. j. spôsobujúcich reverzibilnú inhibíciu. Špecifickejšie, antikoagulantov na profylaxiu a liečbu tromboembolických ochorení, ako je cievna trombóza, pľúcna embólia, arteriálna trombóza, predovšetkým infarkt myokardu a mozgová trombóza, všeobecné hyperkoagulačné stavy a lokálne hyperkoagulačné stavy, napríklad po angioplastii a srdcovom by-pase a iných stavoch, kde sa predpokladá, že trombín má určitú úlohu, napríklad Alzheimerova choroba, ako aj inhibície kininogenáz na liečbu zápalových chorôb, napríklad astmy, nádchy, žihľavky, zápalových črevných ochorení a artritídy. Ďalším predmetom vynálezu je získanie trombínových inhibítorov, ktoré sú orálne biodostupné a selektívne pri inhibícii trombínu proti iným serín proteázam. Ďalším predmetom vynálezu je získanie kinonogenázových inhibítorov, ktoré sa môžu podávať orálne, rektálne, topicky, napríklad dermálne alebo inhalačným spôsobom.

Zlúčeniny

Podľa vynálezu sa zistilo, že peptidové deriváty všeobecného vzorca (I), buď samy osebe alebo vo forme svojich farmaceutický prijateľných solí, vrátane stereoizomérov, sú potentnejšími inhibítormi serín proteáz, predovšetkým trombínu a kininogenáz, ako je kalikreín:

A¹-----A²-----NH-----(CH₂)_n-----B (I), kde

A¹ predstavuje štruktúrny fragment vzorca (Ila), (Ilb) alebo (líc)

kde k je celé číslo 0, 1 alebo 2, q je celé číslo 0, 1,2 alebo 3,

R¹ predstavuje H, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka alebo RⁿOOC-alkyl-, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 4 atómy uhlíka a môže byť substituovaná v polohe a ku karbonylovej skupine a α-substituent je skupina R^l7-(CH₂)_p -, kde p je 0, 1 alebo 2 a R¹⁷ je metyl, COOR¹², kde R¹² je H alebo alkylová skupina, obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka a R je H alebo alkylová skupina, obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, alebo

R¹ predstavuje R¹³-NH-CO-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atómy uhlíka a kde R¹³ je H alebo -CHjCOOR¹², kde R¹² má definovaný význam, alebo

R¹ predstavuje R^l2OOC-CH₂-OOC-alkyl, kde alkylová skupina má 1 až 4 atómy uhlíka a kde R¹² má definovaný význam, alebo

R¹ predstavuje R¹⁴SO,-, Ph(4-COOR¹²)-SO2-, Ph(3-COOR¹²)-SO2-, Ph(2-COOR^l2)-SO₂-, kde R¹² má definovaný význam a R¹⁴ je alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, alebo

R¹ predstavuje -COO-R¹⁵, kde R¹⁵ je alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, alebo

R¹ predstavuje -CO-OR¹⁵, kde R¹⁵ má definovaný význam, alebo

R¹ predstavuje -CO-(CH₂)_p-COOR¹², kde R¹² má definovaný význam a p je celé číslo 0,1 alebo 2, alebo

R² predstavuje H alebo alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka alebo R^2lOOC-alkyl-, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 4 atómy uhlíka a kde R²¹ je H alebo alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka,

R³ predstavuje alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka a alkylová skupina môže alebo nemusí niesť atómy fluóru, alebo

R³ predstavuje cyklohexyl- alebo fenylovú skupinu,

R⁴ predstavuje H alebo fenylovú skupinu.

A² predstavuje štruktúrny fragment vzorca (Illa), (Illb) alebo (Hlc)

kde p je celé číslo 0, 1 alebo 2, m je celé číslo 1,2 alebo 3,

Y predstavuje metylénovú skupinu alebo

Y predstavuje etylénovú skupinu, alebo

Y predstavuje n-propylénovú skupinu,

R³ má definovaný význam,

R⁵ predstavuje H, n je celé číslo 1 alebo 2,

B predstavuje štruktúrny fragment vzorca (IVa) alebo (IVb) i

ilVa!

kde r je celé číslo 0 alebo 1,

X¹ predstavuje CH₂, NH alebo nie je prítomný,

X² predstavuje CH₂, NH alebo C=NH,

X³ NH, C=NH, N-C(NH)-NH₂, CH-C(NH)-NH₂,

X⁴ predstavuje CH2, preferované kombinácie X¹, X², X³, X⁴ a r sú X¹, X² a X⁴ sú CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2 a r je 0, 1 alebo X¹, X² a X⁴ sú CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a r je 0, 1 alebo X¹ a X³ sú NH, X² je C=NH, X⁴ je CH2 a r je 0, 1 alebo X¹a X⁴ sú CH2, X²je C=NH, X³ je NH a r je 0, 1 alebo X¹ je CH2, X² a X⁴ sú NH, X³ je C=NH a r je 1 alebo X¹, X² a X⁴sú CH2, X³ jc CH-NH-C(NH)-NH2 a r je 0, 1 alebo X¹ nie je prítomné, X² a X⁴ sú CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2 a r je 0 alebo X¹ nie je prítomné, X² a X⁴ sú CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 ar je 0, predovšetkým výhodné kombinácie X¹, X², X³, X⁴ a r sú X¹, X² a X⁴ sú CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2 a r je 1, X¹, X² aX⁴ sú CH2, X³jeN-C(NH)-NH2 arje 0 alebo 1, X¹ nie je prítomné, X² a X⁴ sú CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a r jeO alebo

X¹ a X³ súNH, X²jeC=NH, X⁴jeCH₂arje 1,

X⁵ predstavuje C(NH)-NH₂,

R⁶ je H, zlúčeniny vzorca (I), ktoré majú konfiguráciu na A² aminokyseline sú preferované, predovšetkým sú preferované tie zlúčeniny, ktoré majú R-konfiguráciu na A¹ aminokyseline.

V predloženom kontexte výraz „alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka“ môže byť priama alebo rozvetvená, ak nie je uvedené inak. Alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 4 atómy uhlíka, môže byť metyl, etyl, n-propyl, izopropyl, n-butyl, izobutyl, sek.-butyl a terc.-butyl.

V predloženom kontexte výraz „alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka“ môže byť priama alebo rozvetvená skupina, ak nie je uvedené inak. Alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 4 atómy uhlíka, môže byť metyl, etyl, n-propyl, izopropyl, n-butyl, izobutyl, sek.-butyl, tere.-butyl, n-pentyl, izo-pentyl, terc.pentyl, neopentyl, n-hexyl alebo izohexyl. Ak sa uvádza nenasýtenie, myslí sa tým dvojitá väzba uhlík-uhlík.

Vlnité čiary na atóme uhlíka v karbonylovej skupine vo vzorcoch (Ila), (Ilb), (líc), (IHa), (Illb), (Hlc), na atóme dusíka vo vzorcoch (Hla), (Illb), (IIIc) a na atóme uhlíka v kruhovom systéme vo vzorcoch (IVa), (IVb) označujú väzbovú polohu fragmentu.

Skratky sú uvedené na konci tohto opisu.

Podľa vynálezu sa zistilo, že zlúčeniny všeobecného vzorca (la), buď samy osebe alebo vo forme svojich fyziologicky prijateľných solí a vrátane izomérov, sú potentnými inhibitormi trombínu:

A¹-----A^z-----NII-----(CHj)_n-----B (la), kde

A¹ predstavuje štruktúrny fragment vzorca (Ila), (Ilb) alebo (líc), výhodne (Ila) alebo (Ilb), kde k je celé číslo 0, 1 alebo 2, výhodne 0,1, q je celé číslo 0, 1, 2 alebo 3, výhodne 1,

R¹ predstavuje H, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka alebo RⁿOOC-alkyl-, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 4 atómy uhlíka a môže byť substituovaná v polohe a ku karbonylovej skupine a α-substituent je skupina R¹⁷-(CH₂)_P-, kde p je 0, 1 alebo 2 a R¹⁷ je metyl, COOR¹², kde R¹² je H alebo alkylová skupina, obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka a R¹¹ je H alebo alkylová skupina, obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, alebo

R¹ predstavuje R¹³-NH-CO-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atómy uhlíka a kde R¹³ je H alebo -CH₂COOR¹², kde R¹² má definovaný význam, alebo

R¹ predstavuje R¹²OOC-CH₂-OOC-alkyl, kde alkylová skupina má 1 až 4 atómy uhlíka a kde R¹² má definovaný význam, alebo

R¹ predstavuje R^I4SO2-, Ph(4-COOR^l2)-SO2-, Ph(3-COOR¹²)-SO2-, Ph(2-COOR¹²)-SO2-, kde R¹² má definovaný význam a R¹⁴ je alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, alebo

R¹ predstavuje -CO-OR¹⁵, kde R¹⁵ má definovaný význam, alebo

R¹ predstavuje -CO-(CH₂)_P-COOR¹², kde R¹² má definovaný význam a p je celé číslo 0, 1 alebo 2, alebo výhodne R¹ predstavuje R^HOOC-alkyl-, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 4 atómy uhlíka a R¹¹ je H.

R² predstavuje H alebo alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka alebo R²¹OOC-alkyl-, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 4 atómy uhlíka a kde R²¹ je H alebo alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka,

R³ predstavuje cyklohexyl- alebo fenylovú skupinu,

R⁴ predstavuje H alebo fenylovú skupinu.

A² predstavuje štruktúrny fragment vzorca (Hla), (Illb) alebo (IIIc), výhodne (Hla), kde p je celé číslo 0, 1 alebo 2, m je celé číslo 1, 2 alebo 3, výhodne 2, 3,

Y predstavuje metylénovú skupinu alebo

Y predstavuje etylénovú skupinu, alebo

Y predstavuje n-propylénovú skupinu,

R³ má definovaný význam,

R⁵ predstavuje H, n je celé číslo 1 alebo 2,

B predstavuje štruktúrny fragment vzorca (IVa) alebo (IVb), kde r je celé číslo 0 alebo 1,

X¹ predstavuje CH₂, NH alebo nie je prítomný,

X² predstavuje CH₂, NH alebo C=NH,

X³ NH, C=NH, N-C(NH)-NH₂, CH-C(NH)-NH₂,

X⁴ predstavuje CH2, preferované kombinácie X¹, X², X³, X⁴ a r sú X¹, X² a X⁴ sú CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2 a r jc 0, 1 alebo X¹, X² a X⁴ sú CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a r je 0, 1 alebo X¹ a X³ súNH, X² je C=NH,X⁴je CH2arjeO, 1 alebo X¹a X⁴ sú CH,, X²je C=NH, X³ je NH a r je 0, 1 alebo X¹ je CH2, X² a X⁴ sú NH, X³ je C=NH a r je 1 alebo X¹, X² a X⁴sú CH2, X³ je CH-NH-C(NH)-NH₂ a r je 0, 1 alebo X¹ nie je prítomné, X² a X⁴ sú CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2 a r je 0 alebo

X¹ nie je prítomné, X² a X⁴ sú CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a rjeO, predovšetkým výhodné kombinácie X¹, X², X³, X⁴ a r sú

X¹ nie je prítomné, X² a X⁴ sú CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a r je 0 alebo

X¹, X² a X⁴ sú CH2, X³ jc CH-C(NH)-NH2 a r je 1,

X¹, X² a X⁴ sú CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a r je 0 alebo 1,

X¹ aX³ súNH, X² je C=NH, X⁴je CH₂ arje 1,

X⁵ predstavuje C(NH)-NH₂,

R⁶ je H, podľa preferovaného uskutočnenia vynálezu sa vynález týka zlúčenín vzorca (la), kde

A¹ predstavuje štruktúrny fragment vzorca (Ila), kde k je 0 alebo 1,

R¹ predstavuje R^llOOC-alkyl, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 4 atómy uhlíka, predovšetkým metylén, etylén a R¹¹ je H,

R² predstavuje H,

R³ predstavuje cyklohexylovú skupinu,

A² predstavuje štruktúrny fragment vzorca (111a), kde

Y predstavuje metylénovú skupinu, etylénovú skupinu alebo n-propylénovú skupinu, výhodne Y predstavuje metylén, etylén,

R⁵ predstavuje H,

B predstavuje štruktúrny fragment vzorca (IVa), kde

X' nie je prítomné, X² a X⁴ sú CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a rjeO,anje 1 alebo 2,

X¹ aX³ súNH, X² je C=NH, X⁴ je CH2, rje 1 an je 2 alebo X¹, X² a X⁴ sú CH2, X³ je CH-C(NH)-NH₂, r je 1 a n je 1, alebo

X¹, X² aX⁴ sú CH2, X³ je N-C(NH)-NH2, r je 0 alebo 1 a n je 1 alebo 2, alebo predovšetkým výhodné sú tie zlúčeniny, kde B predstavuje štruktúrny fragment vzorca (IVb), kde

X⁵ predstavuje C(NH)-NH₂, R⁶ je H a n = 1. Preferované zlúčeniny podľa vynálezu sú:

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab

HOOC-CH₂-CH₂-(R) Cgl-Aze-Pab HGOC-CH₂- (R)Cgl-Pro-Pab HOCC-CH₂“CH₂“ (R) Cgl-Pro-Pab (HOCC-CH₂) ₂- (R) Cgl -Pro-Pab H- (R) Cgl-Pic-Pab

HOOC-CH₂-(R, S) CH (COOH) - (R)Cgl-ΡίC-Pab

H-(R)Cha-Aze-Pab

HOOC-CHj-(R) Cha-Aze-Pab

HOOC-CH₂- (R, g] CH(COOH) - (R) eha-Aze-Pab

HOOC-CH₂- (R*^A*S) CH (COOH) - (R) Cha-A2e-Pab/a HOOC-CH₂- (R^S) CH (COOH) - (R) Cha-Ä2e-Pab/b HOOC-CH₂-CH₂- (R)Cha-Aze-Pab

HOOC-CH₂-NH-CO-CH₂- (R) Cha-Aze-Pab

H-(R)Cha-Pro-Pab

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab

HOOC-CH₂-(Me;(R)Cha-Pro-Pab

HOOC-CHj-CHj- (R) Cha-Pro-Pab

HOOC-CH₂-CH₂-(Me) (R) Cha-Pro-Pab

HOOC-CH₂- (R*‘*S}CK (COOH) -(R) Cha-Pro-Pab/a

HOOC-CH₂- (R***&) CH (COOH) - (R) Cha-Prc-Pab/b hooc-ch₂-NH-co-ch₂- (R) Cha-Pro-Pab EtOOC-CH₂-CH₂-CH₂- (R) Cha-Pro-Pab Ph( 4 -COOH) —SO₂ — (R) Cha-Pro-Pab

H-(R)Cha-Pic-Pab

HOOC-CHj- (R) Cha-Pic-Pah

HOOC-CH₂- (R***S) CH (COOH) - (R) Cha-Pic-Pab/a «/•i*

HOOC-CH₅‘(R $)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/b HOOC-CH₂-CH₃- (R) Cha-Pic-Pab HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CH₂-CO- (R)Cha-Pic-Pab Me-OOC-CH₂-CO- (R) Cha-Pic-Pab H₂N-CO-CH₂- (R) Cha-Pic-Pab Boe-(R)Cha-Pic-Pab Ac-(R)Cha-Pic-Pab Me-SO₂-(R)Cha-Pic-Pab H-(R)Cha-(R,S) betaPic-Pab HOOC-CH₂-CH₂- (R) Cha- (R, S) betaPic-Pab HOOC-CH₂- (R) Cha-Va 1-Pab HOOC-CH₂-CH₂- (R) Cha-Val-Pab H-(R)Hoc-Aze-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R) Hoc-Aze-Pab HOOC-CHj- (R _f S)CH (COOH) - (R) Hoc-Pro-Pab HOOC-CH₂- (R)Hcc-Pic-Pab (HOOC-CH₂) ₂- (R) Hoc-Pic-Pab HOOC-CH₂-(R)Pro(3- (S) Ph)-Pro-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R) Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R) Tic-Pro-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R) Cgl-Ä2e-?ig HOOC-CH₂- (R) Cgl-Pro-Pig H-(R)cha-Aze-Pig HOOC-CH₂- (R) Cgl-Aze-Pac H-(R)Cha-Pro-Pac H-(R)Cgl-Ile-Pab H-(R)Cgl-Aze-Pab HOOC- (R,S)CH(Me)- (R) Cha-Pro-Pab MeOOC-CH₃-(R) Cgl-Aze-Pab EtOOC-CH₂- (R) Cgl-Aze-Pab ⁿBuOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab ⁿHexOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab H-(R)Cg1-Pro-Fac Hooc-ch₂- (R) cha-Pro-Pac HOOC-CH₂-CH₂-(R) Cgl-Pro-Pac HOOC-CH₂-CH₂- (R) Cha-Aze-Pac

HOOC-CH₂-(R) Cha-Aze-Pig HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-PÍg HOOC-CB₂-CH₂- (R) Cha-Pro-Pig (HO0C-CH₂) ₂- (R) Cgl-Pro-Pig HOOC-CH₂-CH₂(HOOC-CH₂) - (R) Cha-Pro-Pig HOOC-CH₂- (R) Cgl-Αζβ-(R, S) Itp hoog-ch₂-(R) Cha-Aze- (R, s) itp H-(R)Cha-Pic-(R, S) Itp HOOC-CH₂- (R) Cha-Pia- (R, S) Itp H-(R)Cgl-Pro-(R,S) Hig HOOC-CH₂-(R) Cgl-Pro—(R, S) Hig H-(R)Cha-Pro-(R,S) Hig H-(R)Cgl-Aze-Rig HOOC-CH₂-(R) Cgl-Aze-Rig HOOC-CH₂- (R) Cha-Pro-Rig HOOC-CH₂-CH₃- (R) Cha-Aze-Rig HOOC-CK₂- (R) Cha-Pro- (S) Itp H-(R)Cha-Pro-(R,5) Hig H-(R)cha-Pro-Kig H-(R)Cha-Pro-Dig K-(R)Cha-Aze-Dig

Predovšetkým výhodné zlúčeniny vzorca (I) sú

HOOC-CH₂- (R) Cgl-Aze-Pab HOOC-CH₂-CH₃-(R) Cha-Aze-Pab HOOC-CH₂- (R) Cha-Pro-Pab HOOC-CH₂-CHj-(R) Cha-Pro-Pab HOOC-CH₂- (R) Cha-Pic-Pab HOOC-CHj-(R) Cgl-Pro-Pig EtooC-CHj- (R) Cgl-Aze-Pab HOOC-CHj-(R) Cha-Pro-Pac hooc-c.h₂- (R) cha-Pro—Pig

V uvedených tabuľkách zlúčenín znamenajú písmená /a a /b v podstate čistý stereoizomér na atóme uhlíka označenom „R alebo S“. Stereoizomér môže byť identifikovaný pre každú zlúčeninu s odkazom na opisnú časť. „R,S“ označuje zmes stereoizomérov.

Podľa vynálezu sa zistilo, že zlúčeniny všeobecného vzorca (Ib), buď samy osebe alebo vo forme fyziologicky prijateľných solí a vrátane stereoizomérov, sú potentnými inhibítormi kininogenáz:

A¹-----A²-----NH-----(CH₂)„-----B (Ib), kde

A¹ redstavuje štruktúrny fragment vzorca (Ha), (Ilb) alebo (líc), výhodne (Ha) alebo (Ilb), kde k je celé číslo 0, 1 alebo 2, výhodne 0,1, q je celé číslo 0,1, 2 alebo 3, výhodne 1,

R¹ predstavuje H, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka alebo R'’OOC-alkyl-, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 4 atómy uhlíka a môže byť substituovaná v polohe a ku karbonylovej skupine a α-substituent je skupina R^I7-(CH₂)_P-, kde p je 0, 1 alebo 2 a R¹⁷ je metyl, COOR¹², kde R¹² je H alebo alkylová skupina, obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka a R¹¹ je H alebo alkylová skupina, obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, alebo

R' predstavuje R¹⁴SO2-, Ph(4-COOR^I2)-S02-, Ph(3-COOR¹²)-SO2-, Ph(2-COOR^I2)-S02-, kde R¹² má definovaný význam a R¹⁴ je alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, alebo

R¹ predstavuje -CO-OR¹⁵, kde R¹⁵ má definovaný význam, alebo

R¹ predstavuje -CO-(CH₂)_p-COOR¹², kde R¹² má definovaný význam a p je celé číslo 0, 1 alebo 2, alebo

R³ predstavuje cyklohexyl- alebo fenylovú skupinu,

R⁴ predstavuje H alebo fenylovú skupinu.

A² predstavuje štruktúrny fragment vzorca (Hla), (Illb) alebo (IIIc), výhodne (Illb), kde p je celé číslo 0, 1 alebo 2, m je celé číslo 1, 2 alebo 3, výhodne 2, 3,

Y predstavuje metylénovú skupinu alebo

Y predstavuje etylénovú skupinu, alebo

Y predstavuje n-propylénovú skupinu,

R³ má definovaný význam,

R⁵ predstavuje H, n je celé číslo 1 alebo 2,

X¹ predstavuje CH₂, NH alebo nie je prítomný,

X² predstavuje CH₂, NH alebo C=NH,

X³ NH, C-NH, N-C(NH)-NH₂, CH-C(NH)-NH₂,

X⁴ predstavuje CH₂, preferované kombinácie X¹, X², X³, X⁴ sú

X¹, X² a X⁴ sú CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2 a r je 0, 1 alebo X', X² a X⁴ sú CH2) X³ je N-C(NH)-NH2 a r je 0, 1 alebo X’aX³ súNH, X² je C=NH, X⁴ je CH2arje 0, 1 aleboX¹a X⁴ sú CH2, X² je C=NH, X³ je NH a r je 0, 1 alebo X¹ je CH2, X² a X⁴ sú NH, X³ je C=NH a r je 1 alebo X¹, X² a X⁴sú CH2, X³ je CH-NH-C(NH)-NH₂ a r je 0, 1 alebo X¹ nie je prítomné, X² a X⁴ sú CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2 a r je 0 alebo

X¹ nie je prítomné, X² a X⁴ sú CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a rjeO, predovšetkým výhodné kombinácie X¹, X², X³, X⁴ sú X', X² a X⁴ sú CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2 a r je 1,

X¹, X² a X⁴ sú CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a r je 1,

X⁵ predstavuje C(NH)-NH₂,

R⁶jeH,

Preferované zlúčeniny podľa vynálezu sú: H(R)Pro-Phe-Pab, HOOC-CH₂-(R)Pro-Phe-Pab, H-(R)Phe-Phe-Pab, HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab, HOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Pab, H-(R)-Cha-Phe-Pab, HOOC-CH₂-(R)-Cha-Phe-Pab, H-(R)-Phe-Cha-Pab, HOOC-CH₂-(R)Phe-Cha-Pab, H-(R)Cha-Cha-Pab, HOOC-CH₂-(R)Cha-Cha-Pab

Ďalej sa zistilo, že zlúčeniny všeobecného vzorca (V) buď samy osebe alebo vo forme fyziologicky prijateľných solí a zahrnujúce stereoizoméry, sú potentnými inhibítormi serín proteáz predovšetkým trombínu a kinigenáz, ako je kalikreín, po orálnom alebo parenterálnom podaní:

A¹-----A²-----NH-----(CHj)„-----B----D (V), kde

A¹ predstavuje štruktúrny fragment vzorca (Ha), (Ilb), (líc)

k je celé číslo 0, I alebo 2, q je celé číslo 0, 1,2 alebo 3,

R¹ predstavuje R’^OC-alkyl-, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 4 atómy uhlíka a môže byť substituovaná v polohe a ku karbonylovej skupine a α-substituent je skupina R¹⁷-(CH₂)_P-, kde p je 0,1 alebo 2 a R¹⁷ je COOR¹², kde R¹² je H alebo alkylová skupina, obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka a R¹¹ je H alebo alkylová skupina, obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, alebo benzylová skupina, alebo

R¹ predstavuje R^l3-NH-CO-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atómy uhlíka a kde R¹³ je H alebo -CH₂COOR¹², kde R¹² má definovaný význam, alebo

R¹ predstavuje R¹²OOC-CH₂-OOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atómy uhlíka a kde R¹² má definovaný význam, alebo

R¹ predstavuje R¹⁴SO2-, Ph(4-COOR^l2)-SO2-, Ph(3-COOR^I2)-SO2-, Ph(2-COOR¹²)-SO2-, kde R¹² má definovaný význam a R¹⁴ je alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, alebo

R¹ predstavuje -COO-R¹⁵, kde R¹³ je alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, alebo

R¹ predstavuje -CO-OR¹⁵, kde R¹⁵ má definovaný význam, alebo

R² predstavuje H alebo alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka alebo R²¹OOC-alkyl-, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 4 atómy uhlíka a kde R²¹ je H alebo alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka alebo benzylová skupina,

R³ predstavuje alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka a alkylová skupina môže alebo nemusí niesť jeden alebo viac atómov fluóru, alebo

R³ predstavuje cyklohexyl- alebo fenylovú skupinu,

R⁴ predstavuje H alebo fenylovú skupinu,

A², B a n majú význam definovaný pod vzorcom (I),

D je Z alebo (Z)₂, kde Z predstavuje benzyloxykarbonylovú skupinu.

Benzyloxykarbonylová skupina (Z alebo (Z)₂) sa bude viazať k amidíno- alebo guanidíno- dusíkom prítomným v B.

Preferované a predovšetkým preferované kombinácie sú rovnaké ako sú opísané vo vzorci (I).

Ďalej sa zistilo, že zlúčeniny všeobecného vzorca buď samy osebe alebo vo forme farmaceutický prijateľných solí, vrátane stereoizomérov, sú potentnými inhibítormi trombínu po orálnom alebo parenterálnom podaní.

A¹----A²----NH----(CH₂)„----B----D (Va), kde

A¹ predstavuje štruktúrny fragment vzorca (Ha), (Ilb), (líc), výhodne (Ila) alebo (Ilb), kde k je celé číslo 0, 1 alebo 2, výhodne 0, 1, q je celé číslo 0, 1, 2 alebo 3, výhodne 1,

R¹ predstavuje RⁿOOC-alkyl-, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 4 atómy uhlíka a môže byť substituovaná v polohe a ku karbonylovej skupine a α-substituent je skupina R^I7-(CH,)_P-, kde p je 0,1 alebo 2 a R¹⁷ je COOR¹², kde R¹² je H alebo alkylová skupina, obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka a R¹¹ je H alebo alkylová skupina, obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, alebo benzylová skupina, alebo

R¹ predstavuje R¹⁴SO2-, Ph(4-COOR¹²)-SO2-, Ph(3-COOR¹²)-SO2-, Ph(2-COOR^l2)-SO2-, kde R¹² má definovaný význam a R¹⁴ je alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, alebo

R¹ predstavuje -CO-OR¹⁵, kde R¹⁵ má definovaný význam, alebo

R³ predstavuje cyklohexyl- alebo fenylovú skupinu,

R⁴ predstavuje H alebo fenylovú skupinu,

A², B a n majú význam definovaný pod vzorcom (I) vyššie,

D je Z alebo (Z)₂, kde Z predstavuje benzyloxykarbonylovú skupinu.

Preferované hodnoty, skupiny alebo kombinácie a predovšetkým preferované kombinácie sú rovnaké ako sú opísané pri vzorci (la), ale R¹¹ je H, alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka alebo benzylová skupina. Preferované zlúčeniny, obsahujúce vzorec (Va) sú:

BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Azc-Pab(Z) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) (BnOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH₂-(RS)CH(COOBn)-(R)Cgl-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab(Z) BnOOC-CHj-(R,S)CH(COOBn) - (R)Cha-Aíe-Pab(Zi BnOOC-CH₂-(R**S)CH (COOBn) - (R) Cha-Aze-Pab(Z)/a BnoOC-CHj- (R** S)CH(COOBn)-(B) Cha-Aze-Pab(Z) /b BnOOC-CH₂-CH₂-(R) Cha-Aze-Pab(Z) BnOOC-CHj-NH-CO-CH₂- (R) Cha-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CHj-(Me) (R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH₂-CH₂- (R) Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH₂-CH₂-(Me) (R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CHj-(R, S)CH(COOBn) - (R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH₂-NH-CO-CH₂- (R) Cha-Pro-Pab (Z) Ph(4-C00.:)-S0₂-(R) Cha-Pro-Pab(Z) Boe-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R) Cha-Pic-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R, S) CH (COOBn) - (R) Cha-Pic-Pab (Z) BnOOC-CH₂-CH₂- (R) Cha-Pic-Fab(Z) EtOOC-CO- (R) Cha-Pic-Pab [ Z) MeOOC-CH₂-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) H₂N-CO-CH₂-(R) Cha-Pic-Pab (Z) Ac-(R)Cha-Pic-Pab(Z) Me-SOj-(R)Cha-Pic-Pab (Z) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Val-Pab(Z) BnOOC-CH₂-CH₂- (R) Cha-(R,S)Va'.-Pab(Z) BnOOC-CH₂-CH₂- (R) Hoc-Aze-Pab( Z) BnOOC-CH₂- (R, S)CH(COOB - (R) HoC-Pro-Pab [Z) BnOOC--CH₂- (R) Hoc-Pic-Pab (2) (BnOOC-CH₂) ₂- (R) Hoc-Pic-Pab (Z) BnOOC-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph) -Pro-Pab(Z) BnOO€-CH₂-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH₂-CH₂- (R) Tic-Pro-Pab (Z) BnOOC-CH₂-CH₂- (R) Cgl-Aze-Pig (Z) ₂BnOOC-CH₂- (R)Cgl-Pro-Pig(Z)₂BnOOC-CH₂- (R) Cgl-Aze-Pac(Z) BnOOC- (R, S) CH (Me)- (R) Cha-Pro-Pab (Z) MeOOC-CHj- (R)Cgl-Aze-Pab(Z) EtOOC-CH₂-(R) Cgl-Axe-Pab (Z) ⁿBuOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) ⁿHexOoc-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) BnOOC-CHj-(R)Cha-Pro-Pac(Z) Bnooc-CH₂-CH₂- (R) Cgl-Pro-Pac (Z) BnOOC-CHj-CHj-(R)Cha-Aze-Pac(Z) BnOOC-CHj-(R)Cha-Aze-Pig(2) BnOOC-CH₂*(R)Cha-Pro-Pig(Z) BnOOC-CHj-CHj-(R)Cha-Pro-PigfZ) (BnOOC-CHj)j-(R)Cgl-Pro-Rig(z) BnOOC-CHj-CHj (Bnooc-CH₂) - (R) Cha-Pro-Pig (Z) Bnooc-CH₂- (R) Cha-Pic- (R, s) Itp (Z) BnOOC-CH₂-(R)cgl-Pro-{R,s)Hig(2) BnOOC-CHj-(R)Cgl-Aze-Rig(Z) Bnooc-CH₂-(R)Cha-Pro-Rig(Z) BnOOC-CH₂-CH₂-(R) Cha-Aze-Rlg (Z)

Predovšetkým preferované sú zlúčeniny

BnOOC-CH₂-CR)Cgl-Aze-Pab(Z)

Bnooc-ch₂ - (R) Cha-Pro-Pab (Z)

BnOOC-CH₂- (R) Cha-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig(Z) ₂Btooc-CHj-(R)cgl-Aze-Pab(ZJ BnOOC-CH₂- (R) Cha-Pro-Pac(Z) Bn ooc-CH₂-(R)cha-Prc-Pig(Z)

Okrem toho sa zistilo, že zlúčeniny všeobecného vzorca (Vb), buď samy osebe alebo vo forme svojich fyziologicky prijateľných solí, vrátane stereoizomérov, sú potentnými inhibítormi kalikreínu po orálnom alebo parenterálnom podaní:

A¹-----A²-----NH-----(CH₂)„-----B----D (Vb), kde

A¹ predstavuje štruktúrny fragment vzorca (Ha), (Ilb), kde k je celé číslo 0,1 alebo 2, výhodne 0,1, q je celé číslo 0, 1, 2 alebo 3, výhodne 1,

R¹ predstavuje R”OOC-alkyl-, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 4 atómy uhlíka a môže byť substituovaná v polohe a ku karbonylovej skupine a α-substituent je skupina R^I7-(CH₂)_P-, kde p je 0,1 alebo 2 a R¹⁷ je COOR¹², kde R¹² je H alebo alkylová skupina, obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka a R¹¹ je H alebo alkylová skupina, obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, alebo benzylová skupina, alebo

R¹ predstavuje -CO-OR¹⁵, kde R¹⁵ má definovaný význam, alebo

R¹ p redstavuje -CO-(CH₂)_p-COOR¹², kde R¹² má definovaný význam a p je celé číslo 0, 1 alebo 2, alebo

R² predstavuje H alebo alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka alebo R^2lOOC-alkyl-, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 4 atómy uhlíka a kde R²¹ je H alebo alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka alebo benzylová skupina,

R³ predstavuje cyklohexyl- alebo fenylovú skupinu,

R⁴ predstavuje H alebo fenylovú skupinu,

A², B a n majú význam definovaný pod vzorcom (I), D je Z alebo (Z)₂, kde Z predstavuje benzyloxykarbonylovú skupinu.

Preferované hodnoty, skupiny alebo kombinácie a predovšetkým výhodné kombinácie sú rovnaké ako sú opísané pri vzorci (Ib), ale R¹¹ je H, alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka alebo benzylskupina.

Preferované zlúčeniny podľa vynálezu sú:

Boc-(R)Pro-Phe-Pab(Z) BnOOC-CH₂-(R)Pro-Phe-Pab(Z) Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z) McOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Pab(Z)

SK 283150 Β6

Ďalšie uskutočnenie vynálezu sa týka nových zlúčenín, ktoré majú amidinoskupinu mono- alebo dichránenú na dusíkoch benzyloxykarbonylovou skupinou, kde príkladmi takýchto zlúčenín sú 4-aminometyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)benzén (H-Pab(Z)), 4-aminometyl-1 -(N,N'-di(benzyloxykarbonyl)amidino)benzén (H-Pab(Z)₂), 4-aminometyl-1 -(N-benzyloxykarbonylamidino)cyklohexán (H-Pac(Z)), 4-aminometyl-1 -(N,N'-di(benzyloxykarbonyl)amidino)cyklohexán (H-Pac(Z)₂), 4-aminometyl-1 -(N-benzyloxykarbony)lamidinopiperidín (H-Rig(Z)), 4-aminometyl-1 -N,N'-di(benzyloxykarbonyl)amidinopiperidin (H-Rig(Z)₂), (3RS)-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)-3-aminometylpyrolidín (H-Nig(Z)), (3RS)-l-(N,N'-di(benzyloxykarbonyl)amidino)-3-aminometylpyrolidín (H-Nig(Z)₂), (3 RS)-1 -(N-benzyloxykarbonylamidino)-3 -aminoetylpyrolidín (H-Hig(Z)), (3RS)-l-(N,N'-di(benzyloxykarbonyl)amidino)-3-aminoetylpyrolidín (H-Hig(Z)₂),

-aminomctyl-1 -(N-bcnzyloxykarbony lamidinojazctidín (H-Mig(Z)),

-aminometyl-1 -N,N'-di(benzyloxykarbonyl)amidino)azetidín (H-Mig(Z)j), 3-aminoetyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)azetidín (H-Dig(Z)),

-aminoetyl-1 -N,N'-di(benzyloxykarbonyl)amidino)azetidín (H-Dig(Z)₂).

Uvedené zlúčeniny sa používajú ako východiskové látky pri príprave nárokovaných peptidových derivátov vzorcov (1), (la), (Ib), (V), (Va) a (Vb).

Medikálne a farmaceutické použitie

Vynález tiež poskytuje prípravky a ich použitie na liečenie stavov ľudských alebo zvieracích organizmov, pri ktorých sa vyžaduje inhibícia trombínu a fyziologických porúch, predovšetkým zápalových ochorení.

Trombín ihnibujúce zlúčeniny podľa vynálezu sú považované za vhodné predovšetkým u živočíchov, vrátane človeka, na liečbu alebo profylaxiu trombózy a hyperkoagulability v krvi a tkanivách. Ďalej sa považujú za vhodné v situáciách, kedy je neželaný prebytok trombínu bez znakov hyperkoagulability, napríklad pri Alzhcimcrovej chorobe a pankreatitide. Chorobné stavy, v ktorých sú tieto zlúčeniny potencionálne využiteľné, pri liečbe a/alebo profylaxii, zahrnujú cievnu trombózu ako je infarkt myokardu, nestabilnú angínu, mŕtvicu na základe trombózy a periferálnu arteriálnu trombózu a systémový embolizmus zvyčajne z atria počas arteriálnej fibrilácie alebo z ľavého ventrikula po transmurálnom infarkte myokardu. Ďalej sa tieto zlúčeniny považujú za vhodné na profylaxiu aterosklerotických chorôb ako je koronárna arteriálna choroba, cerebrálna arteriálna choroba a periferálna arteriálna choroba. Ďalej sa tieto zlúčeniny považujú za zlúčeniny majúce synergistické antitromhotické účinky, ak sa kombinujú s akýmkoľvek antitrombotickým činidlom s rôznym mechanizmom pôsobenia, ako je činidlo proti zrážaniu doštičiek - kyselina acetylsalicylová. Ďalej sa o týchto zlúčeninách predpokladá, že sú vhodné spolu s trombolytikami pri trombolytických chorobách, predovšetkým pri infarkte myokardu. Ďalej sa predpokladá použiteľnosť týchto zlúčenín pri profylaxii re-oklúzie po trombolýze, perkutánnych trans-luminálnych angioplastických (PTCA) a koronárnych bypassových operáciách. Ďalej sa predpokladá použiteľnosť týchto zlúčenín pri prevencii retrombózy po mikrochirurgii a vaskulárnej chirurgii všeobecne. Ďalej sa predpokladá použiteľnosť týchto zlúčenín pri profylaxii roztrúsenej intravaskulámej koagulácie spôsobenej baktériami, násobnou traumou, intoxikáciou alebo akýmkoľvek iným mechanizmom. Ďalej sa tieto zlúčeniny pokladajú za vhodné na antikoagulantovú liečbu, ak je krv v kontakte s cudzími povrchmi v tele, ako sú vaskuláme transplantáty, vaskulárne kmene, vaskuláme katétre, mechanické a biologické protézy alebo akékoľvek iné medikálne prístroje. Ďalej majú tieto zlúčeniny predpokladanú účinnosť pri antikoagulantovom ošetrení, ak je krv v kontakte s lekárskymi zariadeniami mimo tela, ako je to pri kardiovaskulárnej chirurgii, alebo pri použití pristroja srdce-pľúca alebo pri hemodialýze.

Ďalšia predpokladaná využiteľnosť antikoagulantových zlúčenín podľa vynálezu je pri premývaní katétrov a mechanických zariadení použitých pri pacientoch in vivo a ako antikoagulancia na ochranu krvi, plazmy a iných krvných produktov in vitro.

Protizápalovo inhibujúce zlúčeniny podľa vynálezu sa pokladajú za využiteľné predovšetkým pre živočíchy, vrátane ľudí, pri liečbe alebo profylaxii zápalových chorôb ako je astma, nádcha, pankreatitída, urticaria, zápalové črevné choroby a artritída. Účinné množstvo kininogenázu inhibujúcej zlúčeniny s alebo bez fyziologicky prijateľného nosiča alebo riedidla sa môže použiť samotné alebo s inými terapeutickými činidlami.

Zlúčeniny inhibujú aktivitu kalikreínov spojených s chromogénnymi substrátmi známymi postupmi. Protizápalové pôsobenie predložených zlúčenín sa môže študovať napríklad ich inhibíciou alergénom indukovaných exudatívnych zápalových procesov v mukóze dýchacích ciest alebo črevnej mukóze.

Farmaceutické prípravky

Zlúčeniny podľa vynálezu sa budú bežne podávať orálne, rektálne, dermálne, tracheálne, bronchiálne, parenterálne alebo inhaláciou, vo forme farmaceutických prípravkov, obsahujúcich účinnú zložku buď ako voľnú bázu, alebo farmaceutický prijateľnú netoxickú organickú alebo anorganickú adičnú soľ s kyselinou, ako je napríklad hydrochlorid, hydrobromid, sulfát, hydrogensulfát, nitrát, laktát acetát, citrát, benzoát, sukcinát, tartrát, trifluóracetát a podobne, vo farmaceutický prijateľnej dávkovej forme. V závislosti od ochorenia, liečeného pacienta a spôsobu podania, sa môžu prípravky podávať v meniacich sa dávkach.

Dávkovou formou môže byť pevný, polopevný alebo kvapalný prípravok pripravený per se známymi technikami. Zvyčajne látka bude tvoriť medzi 0,1 a 99 % hmotnosti prípravku, špecifickejšie medzi 0,1 a 50 % hmotnosti prípravku, určených na parenterálne podanie a medzi 0,2 a 75 % hmotnosti pri prípravkoch vhodných na orálne podanie. Vhodné denné dávky zlúčenín podľa vynálezu na terapeutické ošetrenie ľudí sú asi 0,001 až 100 mg/kg telesnej hmotnosti pri perorálnom podaní a 0,001 až 50 mg/kg telesnej hmotnosti pri parenterálnom podaní.

Príprava

Ďalším predmetom vynálezu je spôsob prípravy zlúčenín. Zlúčeniny vzorca (I) a (V) sa môžu pripraviť spôsobmi, zahrnujúcimi kondenzáciu N-koncovo chráneného peptidu alebo aminokyseliny, ak sa použije aminokyselina pridá sa neskôr druhá aminokyselina pri použití štandardných metód ku zlúčenine vzorca

H₂N - (CH₂)_n - X, kde n je celé číslo 0, 1, 2, 3 alebo 4, X je B alebo B-D, kde B má význam definovaný pri vzorci (I) a D má význam definovaný pri vzorci (V) sama osebe, alebo obsahujúca guanidino alebo amidino dusíky buď mono-, alebo dichránené amín chrániacou skupinou, ako je benzyloxykarbonyl-, terc.bu-tyloxykarbonyl- alebo p-toluénsulfonylskupina alebo je X skupina, ktorá sa dá previesť na B po odstránení chrániacej skupiny (skupín) alebo ochránením Nkoncového dusíka po alkylácii N-koncového dusíka a ak sa to vyžaduje ochránením známymi metódami a ak sa to vyžaduje, tvorbou fyziologicky prijateľnej soli a v tých prípadoch, kedy reakcia vedie ku zmesi stereoizomérov, sa tieto prípadne oddelia štandardnými chromatografickými alebo rekryštalizačnými technikami a ak sa to vyžaduje, izoluje sa jediný stereoizomér.

Podrobnejšie sa môžu zlúčeniny vzorcov (I) alebo (V) pripraviť jednou z nasledujúcich metód.

Metóda la

Kondenzáciou N-koncovo chráneného dipeptidu, vybraného z A¹ a A² vo vzorcoch (I) alebo (V) a pripraveného štandardnou peptidovou kondenzáciou, so zlúčeninou vzorca

pri použití štandardnej peptidovej kondenzácie, podľa nasledujúcej reakčnej schémy

A¹ —A²—ch

kde n je definované pri vzorci (I), W¹ je N-koncová aminochrániaca skupina ako je terc.butyloxykarbonyl alebo benzyloxykarbonyl a Q¹ je -C(NH)-NH2, -C(NW²)-NH-W², -C-(NH)-NH-W², -NH-C(NH)-NH2, -NH-C(NH)-NH-W², -N(W²)-C(NH)-NH-W² alebo -NH-C(NW²)-NH-W², kde W² je aminochrániaca skupina ako je terc.butyloxykarbonyl alebo benzyloxykarbonyl, alebo Q¹ je -CN, -CO-NH2 alebo -CS-NH2, kde skupina sa následne prevedie na amidinoskupinu (napríklad poskytnutím Q¹ = -C(NH)-NH2) metódami známymi v odbore alebo Q¹ jc NH2 alebo NH-W², kde W² má definovaný význam, kde aminoskupina sa následne prevedie na guanidinoskupinu (Q¹ = -NH-C(NH)-NH2), po ochránení W² skupiny, ak Q¹ je -NH-W²(W² v tomto prípade musí byť ortogonálne k W¹), metódami známymi v odbore.

Napokon sa zlúčeniny môžu vyrobiť akýmkoľvek z nasledujúcich postupov, v závislosti od charakteru použitej Q'-skupiny: odstránenie chrániacej skupiny (skupín) (kde Q¹ = -C(NH)-NH2, -C(NW²)-NH-W², -C(NW²)-NH-W², -C(NH)-NH-W², -NH-C(NH)-NH2, -NH-C(NH)-NH-W², -N(W²)-C(NH)-NH-W² alebo -NH-C(NW²)-NH-W²) alebo selektívnym ochránením W’-skupiny (napr. ak je Q¹ = = -C(NW²)-NH-W², -C(NH)-NH-W², -NH-C(NH)-NH-W², -N(W²)-C(NH)-NH-W² alebo -NHC(NW²)-NH-W² (W² v tomto prípade musí byť ortogonálne k W¹) s nasledujúcou alkyláciou N-koncového dusíka metódami známymi v odbore a ak sa požaduje ochránenie známymi metódami.

Metóda 1b

Kondenzáciou N-koncovo chránenej aminokyseliny, vybranej z A² vo vzorcoch (I) alebo (V) a pripravenej štandardnými metódami, so zlúčeninou vzorca

pri použití štandardnej peptidovej kondenzácie, podľa nasledujúcej schémy w’— A² —ch

kde n, W¹ a Q¹ majú definovaný význam s nasledujúcim ochránením W'-skupiny a kondenzáciou s N-kon-covou aminokyselinou, v chránenej forme, za vzniku chráneného peptidu opísaného v metóde la. Syntéza konečného peptidu potom pokračuje podľa metódy la.

Metóda Ha

Kondenzáciou N-koncovo chráneného dipeptidu, vybraného z A¹ a A² vo vzorcoch (I) alebo (V) a pripraveného štandardnou peptidovou kondenzáciou, so zlúčeninou vzorca h₂n—(CHJ

a' pri použití štandardnej peptidovej kondenzácie, podľa nasledujúcej schémy

kde n je definované pri vzorci (I), W¹ je N-koncová aminochrániaca skupina ako je terc.butyloxykarbonyl a benzyloxykarbonyl a Q¹ je -C(NH)-NH2, -C(NW²)-NH-W², -C-(NH)-NH-W², -NH-C(NH)-NH2, -NH-C(NH)-NH-W², -N(W²)-C(NH)-NH-W² alebo -NH-C(NW²)-NH-W², kde W² je aminochrániaca skupina ako je terc.butyloxykarbonyl alebo benzyloxykarbonyl, alebo Q¹ je -CN, -CO-NH2 alebo -CS-NH2, kde skupina sa následne prevedie na amidinoskupinu (napríklad poskytnutím Q¹ = -C(NH)-NH2) metódami známymi v odbore alebo Q¹ je NH2 alebo NH-W², kde W² má definovaný význam, kde aminoskupina sa následne prevedie na guanidinoskupinu (Q¹ = -NH-C(NH)-NH2), po ochránení W² skupiny, ak je Q¹ -NH-W²(W² v tomto prípade musí byť ortogonálne k W¹), metódami známymi v odbore.

Napokon sa zlúčeniny môžu vyrobiť akýmkoľvek z nasledujúcich postupov, v závislosti od charakteru použitej Q'-skupiny: odstránenie chrániacej skupiny (skupín) (kde

Q¹ = -C(NH)-NH2> -C(NW²)-NH-W², -C(NW²)-NH-W², -NH-C(NH)-NH2, -NH-C(NH)-NH-W², -N(W²)-C(NH)-NH-W² alebo -NH-C(NW²)-NH-W²), alebo selektívnym ochránením W'-skupiny (napr. ak je Q¹ = -C(NW²)-NH-W², -C(NH)-NH-W², -NH-C(NH)-NH-W², -N(W²)-C(NH)-NH-W² alebo -NH-C(NW²)-NH-W² (W² v tomto prípade musí byť ortogonálne k W¹) s nasledujúcou alkyláciou N-koncového dusíka metódami známymi v odbore a ak sa požaduje ochránenie známymi metódami.

Metóda Ilb

pri použití štandardnej peptidovej kondenzácie, podľa nasledujúcej schémy

W’— A² —CH

kde n, W¹ a Q¹ majú definovaný význam s nasledujúcim ochránením W’-skupiny a kondenzáciou s N-kon-covou aminokyselinou, v chránenej forme, za vzniku chráneného peptidu opísaného v metóde Ha. Syntéza konečného peptidu potom pokračuje podľa metódy Ila.

Metóda Hla

Kondenzáciou N-koncovo chráneného dipeptidu, vybraného z A¹ a A² vo vzorcoch (I) alebo (V) a pripraveného štandardnou peptidovou kondenzáciou, so zlúčeninou vzorca (CHjr-x·· h^-ích,;^ \__q,

X'-pri použití štandardnej peptidovej kondenzácie, podľa nasledujúcej schémy w'--A¹ -- A² —CH (CHJ—

H_aN—(CHJ—/ H-Q¹

X’------X¹ ? .(CH,)7-X'

W' A A --NH—(CHJ—( H—C? |

X’------X¹ kde n je definované pri vzorci (I) a r je 0, 1 ak X¹, X² a X⁴sú CH2 alebo akr je O ak X² a X⁴ sú CH2 a X¹ chýba, W¹ je N-koncová aminochrániaca skupina ako je terc.butyloxykarbonyl a benzyloxykarbonyl a Q² je -C(NH)-NH₂, -C(NW²)-NH-W² alebo -C-(NH)-NH-W², kde W² je aminochrániaca skupina ako je terc.butyloxykarbonyl alebo benzyloxykarbonyl, alebo Q² sa rovná W², kde sa aminoskupina po ochránení W² skupiny (W² v tomto prípade musí byť ortogonálne k W¹), následne prevedie na guanidinoskupinu použitím nechráneného, N-chráneného alebo N,N'-dichráneného guanidačného činidla metódami známymi v odbore (poskytnutím Q² = -C(NH)-NH₂, -C(NW²)-NH-W²alebo -C(NH)-NH-W²).

Napokon sa zlúčeniny môžu vyrobiť akýmkoľvek z nasledujúcich postupov, v závislosti od charakteru použitej Q²-skupiny: odstránenie chrániacej skupiny (skupín) (kde Q² = -C(NH)-NH₂, -C(NW²)-NH-W² alebo -C(NW²)-NH-W² alebo selektívnym chránením W'-skupiny (napr. ak je Q² = -C(NW²)-NH-W², -C(NH)-NH-W², (W² v tomto prípade musí byť ortogonálne k W¹) s nasledujúcou alkyláciou N-koncového dusíka metódami známymi v odbore a ak sa požaduje ochránenie známymi metódami.

Metóda Illb

Kondenzáciou N-koncovo chránenej aminokyseliny, vybranej z A² vo vzorcoch (I) alebo (V) a pripravenej štandardnými metódami, so zlúčeninou vzorca (CH,)—x* Η,Ν-ΚΗ,)—y__Q, X'---ť pri použití štandardnej peptidovej kondenzácie, podľa nasledujúcej schcmy

- A² —CH (CHJ—ť

H,N— (CHJ---Z\-O

X'X’ , 2 .(CHJ—ť ^W A NH—(CHJ—č \_q> j x¹x* kde n, r, X¹, X² a X⁴ W¹ a Q² majú definovaný význam s nasledujúcim ochránením W'-skupiny a kondenzáciou s Nkoncovou aminokyselinou, v chránenej forme, za vzniku chráneného peptidu opísaného v metóde IHa. Syntéza konečného peptidu potom pokračuje podľa metódy Hla.

Metóda IVa

pri použití štandardnej peptidovej kondenzácie, ako je uvedené v nasledujúcej schéme w’—A¹ — A² —CH

kde n má význam definovaný pri vzorci (I), W¹ je N-koncová aminochrániaca skupina ako je terc.butyloxykarbonyl alebo benzyloxykarbonyl a W³ je H alebo aminochrániaca skupina ako je arylsulfonyl, benzyloxykarbonyl alebo terc.butyloxykarbonyl.

Napokon sa zlúčeniny môžu vyrobiť akýmkoľvek z nasledujúcich spôsobov: odstránením chrániacej skupiny (skupín) alebo selektívnym chránením W'-skupiny (W¹musí byť ortogonálne k W³) s následnou alkyláciou N-koncového dusíka a ak sa požaduje, ochránením.

Metóda IVb

Η,Ν— (CHJ---( NH

H N—W¹ pri použití štandardnej peptidovej kondenzácie ako je znázornené ďalej

kde n, W² a W³ majú definovaný význam s nasledujúcim ochránením W'-skupiny (W¹ musí byť ortogonálne k W³) a kondenzáciou s Ν-koncovou aminokyselinou, v chránenej forme, za vzniku chráneného peptidu opísaného v metóde IVa. Syntéza na konečné peptidy sa potom uskutočňuje podľa metódy IVa.

Nasledujúci opis ilustruje aspekty' vynálezu.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Všeobecné experimentálne postupy

Hmotnostné spektrá sa zaznamenali na Finnigan MAT TSQ 700 triple quadropole hmotnostnom spektrometre opatrenom elektrosprejovým interfacesom 'H NMR a ¹³C NMR merania sa uskutočnili na spektrometroch BRUKER AC-P 300 a BRUKER AM 500, kde prvý pracuje pri 'H frekvencii 500,14 MHz a ^l3C frekvencii 125,76 MHz a druhý pri 'H a ^l3C frekvencii 300,13 MHz a 75,46 MHz.

Vzorky asi 10 - 50 mg sa rozpustili v 0,6 ml niektorého z nasledujúcich rozpúšťadiel: CDCI3 (izotopická čistota >

99,8 %), CD3OD (izotopická čistota > 99,95 %), D₂O (izotopická čistota > 99,98 %) alebo DMSO-d₆ (izotopická čistota > 99,8 %). Všetky rozpúšťadlá sa získali od Dr. Glaser AG, Bazilej.

‘H a ¹³C hodnoty chemického posunu v CDC13 a CD3OD sa vzťahujú na tetrametylsilán ako vnútorný štandard. ‘H chemické posuny v D2O sú vztiahnuté na sodné soli kyseliny 3-(trimetylsilyl)-d4-propánovej a¹³C chemické posuny v D2O sú vztiahnuté na 1,4-dioxán (67,3 ppm), 0bom ako vnútorným štandardom. Kalibrácia s vnútorným štandardom môže v niektorých prípadoch spôsobovať malé rozdiely posunu v porovnaní s vnútorným štandardom, rozdiel v 'H chemickom posune je menší ako 0,02 ppm a ^l3C menšie ako 0,1 ppm.

'H NMR spektrum peptidových sekvencií, obsahujúcich prolín alebo „prolínu podobný“ zvyšok často má dva sety rezonancií. Toto zodpovedá existencii dvoch prítom ných konformérov vzhľadom na rotáciu okolo amidovej väzby, kde prolín je časť amidovej väzby. Konforméry sú pomenované cis a trans. V našich zlúčeninách sekvencie (R)Cha-Aze-, (R)Cha-Pro- a (R)Cha-Pic často zvyšujú cistrans rovnováhu s jedným konformérom ako prevažujúcim konformérom (> 90 %). V takýchto prípadoch sa uvádzajú len 'H chemické posuny hlavného rotaméru. Iba v prípadoch, keď signály minoritného rotaméru sú jasne rozoznateľné, uvádzajú sa v NMR dokumentácii. Rovnaké kritérium platí pre NH-signály v CDC1₃, iba v tých prípadoch, kde signály sú jasne rozoznateľné, uvádzajú sa v NMR dokumentácii. Toto implikuje, že počet protónov uvádzaných pre niektoré z medziproduktov je menší ako počet protónov očakávaných podľa chemického vzorca.

Chromatografia na tenkej vrstve sa uskutočňuje na komerčnom Merck Silikagélom 60F₂₅₄ potiahnutých sklenených alebo hliníkových doštičkách. Vizualizácia sa uskutočnila kombináciou UV žiarenia s nasledujúcim postrekom roztokom pripraveným zmiešaním 372 ml EtOH (95 %), 13,8 ml koncentrovanej H₂SO₄, 4,2 ml koncentrovanej kyseliny octovej a 10,2 ml p-metoxybenzaldehydu alebo fosfomolybdénovej kyseliny (5 - 10 hmotn. % v EtOH (95 %)) a zahriatím.

Rýchla chromatografia sa uskutočnila na Merck Silikagéli 60 (40 - 63 mm, 230 - 400 mesh) pod tlakom vzduchu.

Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia s reverznou fázou (v príkladoch označovaná ako PLC) sa uskutočnila na Waters M-590 zariadení opatrenom troma kolónami Kromasil 100, C8 s reveznou fázou (Eka-Nobel), ktorá má rôzne rozmery pre analytickú (4,6 mm x 250 mm), semipreparatívnu (1 x 250 mm) a preparatívnu (2 x 500 mm) chromatografiu s detekciou pri 226 nm.

Sušenie vymrazovaním sa uskutočnilo na Leybold-Heraeus, model Lyovac GT 2.

Príprava východiskových materiálov

Boc-(R)Pgl-OH

Pripraví sa rovnakým spôsobom ako je opísané pre Boc-(R)Cha-OH (vide infra) z H-(R)Pgl-OH.

Boc-(R)Cha-OH

K roztoku H-(R)Cha-OH, 21,55 g (125,8 mmol) v 130 ml IM NaOH a 65 ml THF sa pridá 30 g (137,5 mmol) (Boc)₂O a zmes sa mieša počas 4,5 h pri laboratórnej teplote. THF sa odparí a pridá sa ďalších 150 ml vody. Alkalická vodná fáza sa premyje dvakrát EtOAc, potom sa okyslí 2M KHSO4 a extrahuje 3 x 150 ml EtOAc. Spojené organické fázy sa premyjú vodou, soľankou a sušia (Na₂SO₄). Odparením rozpúšťadla sa získa 30,9 g (90,5 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bielej pevnej látky.

Boc-(R)Hop-OH

Pripraví sa rovnakým postupom ako je opísaný pre Boc-(R)Cha-OH, vychádza sa z H-(R)Hop-OH.

'H-NMR (300 MHz, CDClj): δ 1,45 (s, 9H), 2,00 (m, IH), 2,22 (m, IH), 2,75 (bt, 2H), 4,36 (bs, IH), 5,05 (bs, IH), 7,15-7,33 (m, 5H).

4-(terc.Butyloxykarbonylaminometyl)pyridín

K roztoku 10,81 g (100 mmol) 4-aminometylpyridínu v 10 ml THF sa pridá 24 g (110 mmol) Boc₂0 rozpusteného v 70 ml THF pri teplote 10 °C počas 20 minút. Roztok sa nechá zahriať na laboratórnu teplotu a mieša sa 4 hodiny (počas reakcie sa vytvorí zrazenina a suspenzia sčervená).

Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa rozpustí v EtOAc a prefiltruje cez silikagél. Odparením rozpúšťadla sa získa zlúčenina uvedená v názve, vo forme červeného oleja, ktorý státím kryštalizuje. Surový produkt sa použije ďalej bez čistenia.

'H-NMR (300 MHz, CDClj): δ 1,45 (s, 9H), 4,32 (d, 2H), 5,05 (bs, IH (NH)), 7,2 (d, 2H), 8,55 (d, 2H).

4-Aminometyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)-benzén (H-Pab(Z)) (i) 4-Kyanobenzylazid

Roztok 20,23 g (0,31 mol) azidu sodného v 50 ml vody sa pridá k 49,15 g (251 mmol) 4-kyanobenzylbromidu v 200 ml DMF pri laboratórnej teplote. Reakcia je exotermná a po 1,5 hodine sa reakčná zmes zriedi 200 ml toluénu (Pozor: Z dôvodu zamedzenia separácie potencionálne explozívnych azidových zlúčenín je potrebné pridať toluén k reakčnej zmesi pred prídavkom vody) a 500 ml vody. Vodná fáza sa extrahuje ďalšími 2 x 50 ml toluénu. Spojené organické extrakty sa premyjú 2 x 50 ml vody a soľankou a napokon sa sušia (MgSO₄) a filtrujú. Roztok sa použije sám osebe v nasledujúcom stupni.

'H-NMR (300 MHz, CDClj): δ 4,4 (s, 2H), 7,4 (d, 2H), 7,7 (d, 2H).

(ii) 4-Amidinobenzylazid

Chlorovodík sa prebubláva zmesou 250 ml absolútneho etanolu a roztoku zo stupňa (i) (približne 200 ml) vyššie pri -5°C do nasýtenia. Uschováva sa pri teplote 8 °C počas 24 hodín a odparením väčšiny rozpúšťadla s nasledujúcim vyzrážaním prídavkom bezvodého éteru sa získajú biele kryštály, ktoré sa izolujú filtráciou a rozpustia v 1,8 1 alkoholového roztoku amoniaku. Po 48 hodinách sa rozpúšťadlo odparí a pridá sa 3,75 M roztok NaOH za vyzrážania 4-amidinobenzylazidu vo forme bezfarebných kryštálov. Kryštály sa izolujú filtráciou. V tomto bode bol výťažok 4-amidinobenzylazidu 22,5 g (celkom 51 %).

Hydrochlorid etylimidatobenzylazidu 'H-NMR (500 MHz, CDjOD): δ 1,6 (t, 3H), 4,5 s, 2H), 4,65 (q, 2H), 4,8 (br s, 2H), 7,6 (d, 2H), 8,1 (d, 2H).

4-Amidinobenzylazid:

'H-NMR (500 MHz, CDjOD): δ 4,3 (s, 2H), 5,7 (br s, 3H), 7,3 (d, 2H), 7,6 (d, 2H) ¹³C-NMR (125 MHz, CDClj): amidín uhlík: δ 165,5.

(iii) 4-(Benzyloxykarbonylamidino)benzylazid

Kryštály z (ii) sa rozpustia v 500 ml metylénchloride a výsledný roztok sa suší (K₂CO₃), filtruje a pridá sa 27 ml (194 mmol) trietylamínu. K roztoku sa za miešania pomaly pridá 25 ml benzylchlórformiátu a reakčná zmes sa pritom chladí na ľadovom kúpeli. Po 30 minútach sa pridajú ďalšie 2 ml benzylchlórformiátu a v miešaní sa pokračuje počas ďalších 30 minút. Potom sa pridá voda a vodná fáza sa upraví na pH 7 s 2M HC1. Organická fáza sa suší (MgSO₄) a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Napokon sa izoluje 4(benzyloxykarbonylamidino)benzylamid vo forme bezfarebných kryštálov z éteru/metylénchloridu/hexá-nu.

'H-NMR (500 MHz, CDClj): δ 4,4 (s, 2H), 5,3 (s, 2H),

6,3 - 7,0 (br s, IH), 7,3 - 7,4 (m, 5H), 7,5 (d, 2H), 7,9 (d, 2H), 9,3-9,6 (br s, IH).

¹³C-NMR (125 MHz, CDC1₃): amidín uhlík: δ 167,5.

(iv) 4-Aminometyl-1 -(N-benzyloxykarbonylamidino)benzén (H-Pab(Z))

26,3 g (100 mmol) trifenylfosfínu sa pridá pri laboratórnej teplote k 4-(benzyloxykarbonylamidino)benzylazidu z (iii) rozpustenému v 160 ml THF. Po 16 hodinách sa pridá ďalších 6,6 g (25 mmol) trifenylfosfínu a roztok sa nechá stáť počas 4 hodín pred odstránením rozpúšťadla vo vákuu. Zvyšok sa rozpusti v metylénchloride a extrahuje 2M HC1. Vodná fáza sa premyje metylénchloridom a éterom a potom sa zalkalizuje 3,75M roztokom hydroxidu sodného. Extrakciou metylénchloridom s nasledujúcim sušením (K₂CO₃) a odstránením rozpúšťadla vo vákuu sa získa 20 g (celkový výťažok vztiahnuté na východiskový kyanobcnzylbromid je 28 %) žltého oleja, ktorý státím tuhne.

'H-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 1,2 - 2,2 (šs, 2H), 3,8 (s, 2H), 5,2 (s, 2H), 7,2 - 7,35 (s, 5H), 7,4 (d, 2H), 7,8 (d, 2H), 9,1 -9,6 (br s, IH).

¹³C-NMR (125 MHz, CDClj): amidín a karbonyl uhlíky: δ 164,6 a 168,17.

H-PÍg(Z)₂ (i) 4-(terc-Butyloxykarbonyl-aminometyl)piperidin

K roztoku 17,7 g 4-terc butyloxykarbonylaminometylpiridínu v 125 ml MeOH sa pridajú 2 g 5 % Rh/Al₂O₃ a zmes sa hydrogenuje cez noc pri tlaku 0,34 MPa. 'H-NMR ukazuje, že hydrogenácia nie je úplná. Preto sa katalyzátor odfiltruje a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v 100 ml kyseliny octovej, pridajú sa 2 g 5 % Rh/Al₂O₃ a zmes sa hydrogenuje počas 4 dní pri tlaku 0,34 MPa. Katalyzátor sa odfiltruje a väčšina kyseliny octovej sa odstráni vo vákuu. Po pridaní 50 ml vody ku zvyšku sa zmes zalkalizuje IM NaOH a vodná fáza sa extrahuje 1 x x 200 + 1 x 100 ml CH₂C1₂. Spojené organické fázy sa premyjú 25 ml vody a sušia (MgSO₄). Odparením rozpúšťadla sa získa 17,2 g nahnedlého oleja, ktorý sa rozpustí v 50 ml dietyléteru. Pridaním 200 ml pentánu sa získa zrazenina, ktorá sa odfiltruje a získa sa 7,7 g hnedého prášku. Odparením materského lúhu sa získa 7 g bieleho oleja. Hnedý prášok sa rozpustí v 100 ml EtOAc a organická fáza sa premyje 1 x 50 ml + 1 x 25 ml 1 M KHSO₄. Spojené kyslé fázy sa zalkalizujú 2 M NaOH a extrahujú 1 x 200 ml + 1 x 75 ml EtOAc. Spojené organické fázy sa sušia a odparením sa získa 5,2 g zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bieleho prášku.

Spracovaním bieleho oleja získaného z uvedeného materského lúhu sa získa 3,4 g produktu. Celkový výťažok predstavuje 40 %.

'H-NMR (500 MHz, CDC1₃, zmes dvoch rotamérov, 3 : : 1): hlavný rotamér: δ 1,11 (dq, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,49 -

- 1,60 (m, IH), 1,63 - 1,70 (m, 2H), 2,58 (dt, 2H), 2,93 -

- 3,03 (m, 2H), 3,07 (m, 2H), 4,75 (bs, 1H(NH)).

Zreteľné signály získané z minoritného rotaméru sa objavujú pri δ 1,21 (dq) a 1,91 (dt).

(ii) Boc-Pig(Z)₂

K roztoku 2 g (9,33 mmol) 4-(terc.butyloxykarbonylaminometyl)piperidínu v 60 ml CH₃CN sa pridá 3,34 g (9,33 mmol) N,N'-(dibenzyloxykarbonyl)metylizotiomočoviny a zmes sa mieša pri teplote 60 °C počas 22 hodín. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v EtOAc. Organická fáza sa premyje 2 x 20 ml 1 M KHSO₄, 1 x 20 ml vody, 1 x 20 ml soľanky a suší sa (MgSO₄). Odparením rozpúšťadla s nasledujúcou rýchlou chromatografiou pri použití petroléteru/EtOAc (1/1) ako elučného činidla sa získa 2,43 g (50 %) požadovaného produktu.

‘H-NMR (500 MHz, CDCI3): Niektoré signály, predovšetkým v piperidínovom kruhu, sú selektívne rozšírené vďaka intramolekulámemu výmennému procesu. Toto je zreteľné pre 2- a 6-CH₂ skupiny piperidínového kruhu, ktorý má široký pik v rozmedzí od 3,7 do 4,5 ppm.

δ 1,19 - 1,31 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,63 - 1,80 (m, 3H),

2,66 - 3,05 (m, 4H), 3,7 - 4,5 (bs, 2H), 4,65 (bt, 1H(NH)), 5,13 (s, 4H), 7,2 - 7,4 (m, 10H), 10,5 (bs, 1H(NH)).

(iii) H-Pig(Z)₂

Roztok 163 mg (0,31 mmol) Boc-Pig(Z)₂ v 5 ml EtO -Ac nasýteného HCl (g) sa mieša pri laboratórnej teplote počas 3 hodín a 20 minút. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v 30 ml CH₂C1₂. Organická fáza sa premyje 5 ml 2 M NaOH, 1 x 5 ml vody, 1 x 5 ml soľanky a suší sa (MgSO₄). Odparením rozpúšťadla sa získa 100 mg (76 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (500 MHz, CDCI3): Niektoré signály, predovšetkým v piperidínovom kruhu, sú selektívne rozšírené vďaka intramolekulámemu výmennému procesu. Toto je zreteľné najmä pre 2- a 6-CH₂ skupiny piperidínového kruhu, ktorý má široký pik v rozmedzí od 3,7 do 4,5 ppm.

δ 1,18 - 1,37 (m, 2H), 1,46 - 1,63 (m, IH), 1,68 - 1,83 (m, 2H), 2,57 (d, 2H), 2,86 - 3,03 (m, 2H), 3,7 - 4,5 (bs, 2H), 5,13 (s, 4H), 7,2 - 7,4 (m, 10H).

4-Aminometyl-1 (N-benzyloxykarbonylamidino)cyklohexán (H-Pac(Z) x 2 HCl) (i) N-[N-4-(Benzyloxykarbonyl)amidinobenzyí]terc.butylkarbamát

1,466 g (6,7 mmol) (Boc)₂O sa za miešania pridá k ľadovo studenému roztoku 1,81 g (6,4 mmol) N-4-(benzyloxykarbonylj-amidinobenzylamínu a 1 ml (7,1 mmol) trietylamínu v 25 ml metylénchloridu. Po 20 minútach sa pridá ďalší metylénchlorid a zmes sa premyje 5 % kyselinou octovou a 10 % roztokom uhličitanu sodného. Sušením (síran horečnatý) a odstránením rozpúšťadla vo vákuu sa získa zvyšok, ktorý sa rekryštalizoval z metylénchloridu/hexánu. Výťažok predstavoval 1,66 g (68 %).

(ii) N-[4-Amidinobenzyl]terc.butylkarbamát

Zmes 1,60 g (4,2 mmol) N-[N-4-(benzyloxykarbonyl)amidinobenzyl]terc.butylkarbamátu, 5 ml kyseliny octovej a 160 mg 10 % paládia na uhlí v 50 ml etanolu sa mieša v atmosfére vodíka počas 2 hodín. Katalyzátor sa odstráni filtráciou cez celit a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Získa sa acetát zlúčeniny uvedenej v názve v kvantitatívnom výťažku.

(iii) N-[4-Amidinocyklohexylmetyl]terc.butylkarbamát mmol N-[N-4-amidinobenzyl]terc.butylkarbamátu sa hydrogenuje v 100 ml metanolu v prítomnosti 863 mg 5 % Rh na oxide hlinitom pri tlaku 3,4 MPa počas 20 hodín. Katalyzátor sa odstráni filtráciou a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa rozpustí vo vode a roztok sa zalkalizuje hydroxidom sodným. Nasledujúcou extrakciou metylénchloridom, sušením spojených organických fáz (uhličitan draselný) a odstránením rozpúšťadla vo vákuu sa získa

3,8 g (87 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(iv) N-[N-4-(Benzyloxykarbonyl)amidinocyklohexylmetyljterc.butylkarbamät

1,25 ml (8,8 mmol) benzylchlórformiátu sa za miešania pri teplote 0 °C pridá k N-[4-amidinocyklohexylmetyljterc.butylkarbamátu, 1,23 ml (8,8 mmol) trietylamínu a 197 mg DMAP v 40 ml metylénchloridu. Po 10 minútach sa reakčná zmes zriedi metylénchloridom a extrahuje vodou, zriedenou kyselinou octovou a roztokom hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáza sa nanesie na stĺpec silikagélu a eluuje sa metylénchloridom, obsahujúcim zvyšujúce sa množstvo etylacetátu. Získa sa 249 g (80 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(v) 4-Aminometyl-1 -(N-benzyloxykarbonylamidino)-cykl oh exán (H-Pac(Z) x 2 HCl)

Chlorovodík sa nechá prebublávať roztokom 2 g (5,1 mmol) N-[N-4-(benzyloxykarbonyl)amidinocyklohexylmetyljterc.butylkarbamátu v 40 ml etylacetátu. Po 10 minútach sa pridá metanol a po odstránení časti rozpúšťadla vo vákuu vykryštalizuje dihydrochlorid zlúčeniny uvedenej v názve.

4-Aminometyl-1 -(N-benzyloxykarbonylamidino)piperidín (H-Pig(Z) x HCl) (i) 4-(N-terc.Butyloxykarbonylaminometyl)-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)piperidín (Boc-Pig(Z))

7,8 g (36,4 mmol) 4-(N-terc.butyloxykarbonylaminometyl)piperidínu a 8,98 g (40 mmol) N-benzyloxykarbonyl-S-metylizotiomočoviny sa zmieša v 25 ml etanolu. Zmes sa zahrieva pri teplote 60 až 70 °C počas 6 hodín a nechá sa pri laboratórnej teplote dva dni. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v CH₂C1₂. Organická vrstva sa premyje dvakrát 0,3 M KHSO₄ a jedenkrát soľankou. Spojené vrstvy sa vysušia (Na₂SO₄), prefiltrujú a odparia. Surový produkt sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH (100/0, 97/3, 95/5, 90/10) ako elučného činidla a získa sa 5,22 g (37 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) H-Pig(Z) x HCl 4-Aminometyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)piperidín

5,22 g (13,5 mmol) Boc-Pig(Z) sa rozpustí v 100 ml etylacetátu nasýteného HCl (plynný). Zmes sa nechá stáť počas jednej hodný a potom sa odparí. Zvyšok sa zriedi vodou a premyje zmesou dietyléteru a etylacetátu. Vodná vrstva sa vymrazi a získa sa 4,0 g (91 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (D₂ 300 MHz): δ 1,40 - 1,60 (m, 2H), 2,05 (bd, 2H), 2,19 (m, IH), 3,07 (d, 2H), 3,34 (bt, 2H), 4,08 (bd, 2H), 5,40 (s, 2H), 7,5 - 7,63 (m, 5H).

MS m/z 291 (M⁺+l).

4-Aminoetyl-1 -benzyloxykarbonylamidinopiperidín (H-Rig(Z)) (i) 1 -Benzy loxykarbony lamidino-4-hydroxyety Ipiperidín

Zmes 6,2 g (0,028 mol) 4-hydroxyetylpiperidínu a 3,6 g (0,028 mol) N-benzyloxykarbonyl-S-metylizotiomočoviny v 50 ml acetonitrilu sa refluxuje cez noc. Odparením a rýchlou chromatografiou na silikagéli s etylacetátom sa získa 3,5 g (41 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (300 MHz, CDClj): δ 1,1 - 1,85 (m, 7H), 2,83 (bt, 2H), 4,70 (bt, 2H), 4,18 (bd, 2H), 5,12 (s, 2H), 6,9 - 7,2 (m, 2H), 7,2 - 7,5 (m, 5H).

(ii) 1 -Benzyloxykarbonylamidino-4-mezyloxyetylpiperidin

K ľadom chladenému roztoku 3,50 g (0,0115 mol) 1-benzyloxykarbonylamidino-4-hydroxyetylpiperidínu, 1,15 g (0,0115 mol) trietylamínu v 40 ml metylénchloridu a 10 ml tetrahydrofuránu sa prikvapká 1,30 g (0,115 mol) mezylchloridu. Reakčná zmes sa nechá miešať počas 1 hodiny. Zmes sa naleje do vody a organická vrstva sa oddelí. Vodná vrstva sa extrahuje metylénchloridom a spojené orga nické vrstvy sa premyjú vodou, vysušia (síran sodný) a odparia. Produkt sa použije bez ďalšieho čistenia v nasledujúcom stupni. Výťažok: 4,4 g (100 %).

'H-NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 1,15 - 1,3 (m, 2H), 1,65 - 1,8 (m, 5H), 2,84 (bt, 2H), 3,20 (bd, 2H), 4,27 (t, 2H), 5,12 (s, 2H), 7,1 - 7,5 (m, 7H).

(iii) 4-Azidoetyl-l-benzyloxykarbonylamidinopiperidín

V 100 ml dimetylformamidu sa rozpustí 4,4 g (0,0115 mol) surového 1 -benzyloxykarbonylamidino-4-mezyloxyetylpiperidínu a pridá sa 4,5 g (0,069 mol) azidu sodného. Zmes sa zahrieva pri teplote 100 °C počas 2,5 hodín. Potom sa naleje do vody a extrahuje trikrát etylacetátom. Spojené organické fázy sa premyjú vodou, vysušia (síran sodný) a odparia. Zvyšok sa rýchle chromatografuje na silikagéli pri použití etylacetátu- /heptánu 1/1 ako elučného činidla. Výťažok: 3,0 g (79 %).

’H-NMR (500 MHz, CDCI,): δ 1,20 (dq, 2H), 1,5 - 1,8 (m, 5H), 2,85 (dt, 2H), 3,35 (t, 2H), 4,22 (bd, 2H), 5,13 (s, 2H), 6,9 - 7,2 (b, 2H), 7,2 - 7,45 (m, 5H).

(iv) 4-Aminoetyl-1 -benzyloxykarbonylamidinopiperidín H-Rig(Z))

K 30 ml vody sa pridá 0,40 g 10 % Pd/C. Bórhydrid sodný, 1,0 g (0,031 mol) sa rozpustí v 30 ml vody a opatrne sa za miešania pridá k ľadom chladenej suspenzii Pd/C vo vode. 2,9 g (8,8 mmol) 4-azidoetyl-l-benzyloxykarbonylamidinopiperidínu sa rozpustí v tetrahydrofuráne a tento roztok sa prikvapká k ľadom chladenej uvedenej vodnej suspenzii. Po 4 hodinách miešania pri laboratórnej teplote sa zmes opäť ochladí ľadom a pridá sa 30 ml 2 M HC1. Zmes sa prefiltruje cez celit a celit sa premyje ďalšou vodou. Tetrahydrofurán sa odparí a vodná fáza sa premyje etylacetátom. Vodná fáza sa zalkalizuje 2 M NaOH a extrahuje trikrát metylénchloridom. Spojené organické fázy sa premyjú vodou, vysušia (síran sodný) a odparia. Produkt sa použije v nasledujúcom stupni bez ďalšieho čistenia.

‘H-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 1,1 - 1,5 (m, 611), 1,55 - 1,65 (m, IH), 1,73 (bd, 2H), 2,72 (b, 2H), 2,81 (dt, 2H),

4,20 (bd, 2H), 5,12 (s, 2H), 6,9 - 7,2 (b, 2H), 7,2 - 7,5 (m, 5H).

(3RS)-l-(N-Benzyloxykarbonylamidino)-3-aminometylpyrolidín (H-(R,S)Nig(Z)) (i) (3RS)-3-Hydroxymetylpyrolidín

16,4 g (0,0857 mol) (3RS)-l-benzyl-3-hydroxymetylpyrolidín (pozri H-(R,S)Hig(Z) (i) vide supra) sa zmieša s 1,6 g Pd/C, 5 ml vody a 150 ml etanolu a zmes sa hydrogenuje pri tlaku 0,26 MPa cez noc. Po filtrácii cez hyflo a odparení rozpúšťadla 'H-NMR ukazuje, že reakcia nie je komplexná. V hydrogenácii sa pokračuje pri tlaku 0,26 MPa nad 1,6 Pd/C (10 %) v 5 ml vody/150 ml etanolu počas troch dní až je reakcia kompletná. Filtráciou cez hyflo a odparením rozpúšťadla sa získa produkt v kvantitatívnom výťažku.

(ii) (3RS)-l-(N-Benzyloxykarbonylamidino)-3-hydroxymetylpyrolidín

0,01 g (0,01 mol) (3RS)-3-hydroxymetylpyrolidinu a 2,29 g (0,11 mol) N-benzyloxykarbonyl-O-metylizomočoviny sa rozpustí (amín nie je veľmi rozpustný) v toluéne a zahrieva sa pri teplote 60 °C počas troch hodín, potom sa mieša pri laboratórnej teplote cez noc. Zmes po odparení na ‘H-NMR ukazuje, že reakcia nie je kompletná. Zmes sa preto rozpustí v 15 ml acetonitrilu a zahrieva sa pri teplote 60 °C počas troch hodín a potom za miešania pri laboratór nej teplote cez noc. Rozpúšťadlo sa odparí a zmes sa rozpustí v CH₂C1₂, premyje sa jedenkrát vodou, vysuší (síran sodný), prefiltruje a odparí. Surový produkt sa čistí rýchlou chromatografíou pri použití CH₂C1₂ ako elučného činidla a získa sa 0,70 g (25 %) produktu.

MS m/z 278 (M⁺+l).

(iii) (3RS)-1 -(N-Benzyloxykarbonyiamidino)-3-mezyloxymetylpyrolidin

0,7 g (2,53 mmol) (3R,S)-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)-3-hydroxymctylpyrolidínu a 0,70 ml (5,05 mmol) trietylamínu sa rozpustí v 15 ml dietyléteru/CH₂C12 1/1 a zmes sa ochladí na teplotu 0 °C. Pomaly sa pridá 0,25 ml (3,29 mmol) metánsulfonylchloridu v 3 ml dietyléteru a reakčná zmes sa mieša pri teplote 0 °C počas troch hodín. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte a extrahuje sa 0,3 M roztokom KHSO₄. Vodná vrstva sa premyje jedenkrát s CH₂C1₂. Vodná vrstva sa zneutralizuje 10 M roztokom NaOH a extrahuje sa dvakrát CH₂C1₂. Spojené organické vrstvy sa vysušia (síran sodný), prefiltrujú a odparením sa získa 0,450 g (50 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(iv) (3RS)-l-(N-Benzyloxykarbonylamidino)-3-azidometylpyrolidín

0,450 g (1,27 mmol) (3R,S)-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)-3-mezyloxymetylpyrolidínu a 0,124 g (1,9 mmol) azidu sodného sa rozpustí v 10 ml dimetylformamidu a zahrieva sa pri teplote 60 °C počas štyroch hodín, potom sa mieša pri laboratórnej teplote cez noc. Pridá sa voda a zmes sa extrahuje dvakrát toluénom/etylacetátom 2/1. Spojené organické vrstvy sa vysušia (Na₂SO₄), prefiltrujú a odparia. Surový produkt sa čistí veľmi rýchlou chromatografíou pri použili CH₂Cl₂/MeOH 95/5 ako elučného činidla a získa sa 0,262 g (68 %) produktu.

MS m/z 303 (M⁺+l).

(v) (3R,S)-1 -(N-Benzyloxykarbonylamidino)-3-aminometylpyrolidín (H-(R,S)Nig(Z)) mg Pd/C (10 %) a 2,6 ml vody sa zmieša a cez zmes sa nechá prechádzať mierny prúd dusíka. Pridá sa 98 mg NaBH₄ v 2,6 mg (0,87 mmol) (3RS)-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)-3-mezyloxymetylpyrolidínu rozpusteného v 7 ml MeOH. Zmes sa nechá jednu hodinu stáť. Pridá sa 5 ml 1 M HC1 a zmes sa prefiltruje cez hyflo. Organické rozpúšťadlo sa odparí pri zníženom tlaku a zostávajúca vodná vrstva sa jedenkrát premyje etylacetátom, zalkalizuje sa roztokom NaOH a niekoľkokrát sa extrahuje CH₂C1₂. Spojené organické vrstvy sa vysušia (síran sodný), prefiltrujú a odparením sa získa 130 mg (54 %) produktu. MS m/z 277 (M⁺+l).

(3RS)-l-(N-Benzyloxykarbonylamidino)3-aminoetylpyrolidín (H-(R,S)Hig(Z)) (i) (3RS)-1 -Benzyl-3-hydroxyetylpyrolidín

25,2 g (0,1063 mol) (3RS)-l-benzyl-2-oxo-4-metoxykarbonylpyrolidínu sa pomaly pridá k suspenzii 6,22 g lítiumalumíniumhydridu v 160 ml dietyléteru pod atmosférou argónu. Zmes sa mieša cez noc a potom sa zahrieva za refluxu počas jednej hodiny. Reakčná zmes sa ochladí na laboratórnu teplotu a pridá sa 0,2 g Na₂SO₄ x 10 H₂O a potom pomaly, v uvedenom poradí 6 ml vody, 18 ml 3,75 M roztoku NaOH a 6 ml vody. Suspenzia sa vysuší a zbaví prebytku vody pomocou Na₂SO₄/celitu, prefiltruje a odparením sa získa 20,3 g produktu.

’H-NMR (CDClj, 500 MHz): δ 1,64 - 1,77 (m, 1H), 1,93 - 2,07 (m, 1H), 2,27 - 2,40 (m, 2H), 2,51 (dd, 1H), 2,62 (dd, 1H), 2,82 (m, 1H), 3,52 (dd, 1H), 3,59 (s, 2H),

3,67 (dd, 1H), 7,15 - 7,40 (m, 5H).

(ii) (3RS)-1 -Benzyl-3-chlóretylpyrolidín

K roztoku 15,3 g (0,08 mol) (3RS)-l-benzyl-3-hydroxyetylpyrolidínu v 220 ml CHClj sa za refluxu pomaly pridá roztok 330 ml tionylchloridu v 60 ml CHC1₃ v reíluxovaní sa pokračuje počas jednej hodiny. Zmes sa odparí a zvyšok sa rozpustí vo vode.

Vodná vrstva sa premyje etylacetátom a potom sa zalkalizuje 0,2 M roztokom NaOH. Vodná vrstva sa trikrát extrahuje etylacetátom a spojené organické vrstvy sa vysušia (síran sodný), prefiltrujú a odparením sa získa produkt v kvantitatívnom výťažku (16,8 g).

’H-NMR (CDCIj, 500 MHz): δ 1,55 (m, 1H), 2,05 (m, 1H), 2,38 (dd, 1H), 2,48 - 2,64 (m, 3H, z toho 2,58 (t, 2H)), 2,73 (dd, 1H), 3,51 (d, 2H), 3,60 (s, 2H), 7,2 - 7,4 (m, 5H).

(iii) (3RS)-1 -Benzyl-3-kyanoetylpyrolidín

16,8 g (0,08 mol) (3RS)-l-benzyl-3-chlóretylpyrolidínu a 5,88 g (0,12 mol) kyanidu sodného sa rozpustí v 250 ml dimetylsulfoxidu. Zmes sa mieša pri teplote 60 °C počas dvoch dní a pri laboratórnej teplote jeden týždeň. Pridá sa voda a zmes sa extrahuje trikrát etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyjú soľankou, vysušia (síran sodný), prefiltrujú a odparením sa získa 14,7 g (92 %) produktu.

’H-NMR (CDClj, 500 MHz): δ 1,55 (m, 1H), 2,13 (m, 1H), 2,35 (dd, 1H), 2,42 (t, 2H), 2,44 - 2,59 (m, 2H), 2,65 (m, 1H), 2,73 (dd, 1H), 3,61 (s, 2H), 7,2 - 7,4 (m, 5H).

(iv) (3RS)-1 -Benzy 1-3 -aminoetylpyrolidín

14,7 g (0,0734 mol) (3RS)-l-benzyl-3-kyanoetylpyrolidínu rozpusteného v 220 ml dietyléteru sa pomaly pridá ku kaši 2,94 g lítiumalumíniumhydridu v 74 ml dietyléteru pod argónovou atmosférou. Zmes sa mieša cez noc a ku zmesi sa pridá 6 ml vody, 18 ml 3,75 M roztoku NaOH a 6 ml vody. Suspenzia sa zbaví prebytku vody sušením pomocou Na₂SO₄/celitu, odfiltruje sa a odparením sa získa 14,84 g (99 %) produktu.

’H-NMR (CDClj, 300 MHz): δ 1,41 (m, 1H), 2,51 (q, 2H), 1,90 - 2,10 (m, 2H: z toho 2,05 (dd, 1H)), 2,18 (m, 1H), 2,43 (m, 1H), 2,55 - 2,73 (m, 3H), 2,80 (zjavný t, 1H), 3,58 (zjavný d, 2H), 7,15 - 7,4 (m, 5H).

(v) (3RS)-l-Benzyl-3-(N-terc.butyloxykarbonylaminoetyl)pyrolidín

K zmesi 14,84 g (0,0726 mol) (3RS)-l-benzyl-3-aminoetylpyrolidínu, 72,6 ml 1 M roztoku NaOH, 76 ml vody a 145 ml THF sa pridá 17,44 g (0,08 mol) diterc.butyldikarbonátu a zmes sa cez noc mieša. Roztok sa zahustí a extrahuje trikrát etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyjú soľankou, vysušia (Na₂SO₄), prefiltrujú a odparia. Surový produkt sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH (95/5, 90/10) ako elučného činidla a získa sa 14,69 g (80 %) produktu.

’H-NMR (CDClj, 300 MHz): δ 1,25 - 1,65 (m, 12H: z toho 1,40 (s, 9H)), 1,90 - 2,25 (m, 3H), 2,46 (m, 1H), 2,67 (m, 1H), 2,80 (zjavný t, 1H), 3,09 (m, 2H), 3,59 (s, 2H), 4,60 (bs, NH), 7,15 - 7,35 (m, 5H).

(vi) (3RS)-3-(N-terc.butyloxykarbonylaminoetyl)pyrolidín

3,1 g (0,01 mol) (3RS)-l-benzyl-3-(N-tcrc.butyloxykarbonylaminoetyl)pyrolidínu sa hydrogenuje pri tlaku 0,28 MPa nad 0,6 g Pearlmanovho katalyzátora (Pd(OH)₂) v 40 ml etanolu (95 %) cez noc. Po odfiltrovaní katalyzátora cez celit a odparení rozpúšťadla ukazuje ’H-NMR, že reakcia nie je kompletná. Preto sa ešte raz pridá 0,6 g Pearlmanovho katalyzátora v 40 ml etanolu (95 %) a zmes sa spracováva pod atmosférou H₂ pri tlaku 0,28 MPa cez noc. Filtráciou cez celit a odparením rozpúšťadla sa získa produkt v kvantitatívnom výťažku (2,18 g).

MS m/z 214 (M⁺) (vii) (3RS)-l-(N-Benzyloxykarbonylamidino)-3-aminoetylpyrolidín (H-(R,S)Hig(Z))

2,18 g (0,0102 mol) (3RS)-3-(N-terc.butyloxykarbonylaminoetyl)pyrolidínu a 2,81 g (0,025 mol) N-benzyloxykarbonyly-S-metylizotiomočoviny sa rozpustí v 30 ml toluénu a zahrieva sa pri teplote 60 až 70 °C počas 8 hodín a potom sa mieša jeden deň pri laboratórnej teplote. Pridá sa 0,3 M roztok KHSO₄ a vodná vrstva sa premyje zmesou toluénu a etylacetátu a nechá sa 2 dni, za tento čas sa odstráni Boe skupina. Kyslá vodná fáza sa zalkalizuje a extrahuje sa štyrikrát s CH₂C1₂. Spojené organické vrstvy sa vysušia (Na₂SO₄), prefiltrujú a odparením sa získa 2,0 g (51 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

’H-NMR (CDClj, 330 K, 300 MHz): δ 1,45 - 1,7 (m, 3H) 2,07 (m, 1H)), 2,26 (m, 1H), 2,74 (t. 2H). 3,00 (zjavný t, 1H), 3,33 (zjavný q, 1H), 3,45 - 3,80 (m, 2H), 5,12 (s, 2H), 6,72 (bs, 2 NH), 7,15 - 7,45 (m, 5H).

(4RS)-1,3 -Diaza-2-tozylimino-4-aminoety lcyklohexán (H-(R,S)Itp(Ts)) (i) (4RS)-l,3-diaza-2-tozylimino-4-karboxycyklohexán

Pripraví sa pri použití rovnakej metódy ako je opísaná v Joumal of Org. Chem., str. 46, 1971.

(ii) (4RS)-l,3-Diaza-2-tozylimino-4-hydroxymetylcyklohexán

12.9 g (345 mmol) LiAlH₄ sa opatrne pridá k studenej suspenzii (teplota ľadového kúpeľa) 9,9 g (33 mmol) (4RS)-l,3-diaza-2-tozylimino-4-karboxycyklohexánu v 330 ml suchého THF. Reakčná zmes sa mieša pri laboratórnej teplote cez noc. Reakčná zmes sa spracuje podľa Fieser & Fieser, napr. pridaním 12,9 g vody, 38,7 g 3,75 M NaOH,

12,9 g vody, Na₂SO₄, CH₂C1₂, celitu a odfiltruje sa. Odparením rozpúšťadla sa získa 7,0 g (75 %) požadovaného produktu.

MSm/z284(M⁺+ 1)- (iii) (4RS)-1,3 -Diaza-2-tozylimino-4-mezyloxymetylcyklohexán

2.9 ml M_XC1 (37,1 mmol) sa opatrne pridá ku studenej suspenzii (teplota ľadového kúpeľa) 7,0 g (24,7 mmol) (4RS)-1,3-diaza-2-tozylimino-4-hydroxymetylcyklohexánu v 6,9 ml (49,4 mmol) trietylamínu a 125 ml CH₂C1₂. Po 1 hodine a 15 minútach sa pridá voda a organická vrstva sa oddelí, vysuší (Na₂SO₄), prefiltruje a odparením sa v kvantitatívnom výťažku získa zlúčenina uvedená v názve.

MS m/z 362 (M⁺+ 1)- (iv) (4RS)-1,3-Diaza-2-tozylimino-4-kyanometylcyklohexán

8.9 g (24,7 mmol) (4RS)-l,3-diaza-2-tozylimino-4-mezyloxy- metylcyklohexánu a 1,3 g (27,2 mmol) NaCN sa rozpustí v 75 ml DMSO. Po miešaní pri teplote 40 °C počas 60 hodín sa pridá ďalšie množstvo - 0,31 g (6 mmol) NaCN a roztok sa mieša pri teplote 65 °C počas troch hodín. Pridá sa 150 ml vody a z roztoku sa vyzrážajú kryštály. Tieto sa odfiltrujú a vysušením sa získa 5,4 g (75 %) požadovaného produktu.

MS m/z 293 (M⁺+ 1)- (v) (4RS)-1,3-Diaza-2-tozylimino-4-aminoetylcyklohexán (H-(R,S)Itp(Ts))

935 mg LiAlH₄ sa opatrne pridá k studenej (teplota ľadového kúpeľa) suspenzii 2,4 g (8,2 mmol) (4RS)-1,3-diaza-2-tozylimino-4-kyanometylcyklohexánu v 90 ml THF. Po 2 hodinách miešania sa pridá 1 g H₂O, 3 g 3,75 M NaOH, 1 g H₂O, Na₂SO₄, celit a CH₂C1₂. Zmes sa odfiltruje a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa 2,2 g (90 %) požadovaného produktu.

'H-NMR (500 MHz, MeOD): δ 1,52 - 1,71 (m, 3H) 1,88 - 1,96 (m, IH), 2,37 (s, 3H), 2,64 - 2,73 (m, 2H), 3,2 - 3,4 (m, 2H, čiastočne sa prekrýva so signálom rozpúšťadla), 3,44 - 3,53 (m, IH), 7,28 (d, 2H), 7,71 (d, 2H).

(4 S)-1,3-Diaza-2-tozylimino-4-aminoetylcyklohexán (H-(S)Itp(Ts))

Pripraví sa rovnakým spôsobom ako je opísané pre H-(R,S)Itp(Ts), vychádza sa z opticky čistej kyseliny 2,4-diaminomaslovej.

'H-NMR (300,13 MHz, CDClj): δ 0,97 - 1,15 (s široký, IH) 1,48 - 1,69 (m, 3H), 1,84 - 1,95 (m, IH), 2,37 (s, 3H), 2,68 - 2,82 (m, IH), 2,86 - 2,98 (m, IH) 3,22 - 3,44 (m, 2H), 3,45 - 3,58 (m, IH) 7,19 (d, 2H), 7,72 (d, 2H).

^I3C NMR (300,13 MHz, CDC1₃): δ guanidínový uhlík 154,05.

H-Aze-OEt x HCI

Pripraví sa rovnakým spôsobom ako je opísané pre H-Pic-OEt x HCI z H-Aze-OH (vide infra).

H-Aze-OMe x HCI

Pripraví sa postupom, ktorý opísal Seebach D. a kol. v Liebigs Ann. Chem., str. 687, 1990.

H-Pab(Z) x HCI

Pripraví sa pridaním 1 mol ekvivalentu 5 M HCI v izopropanole k roztoku surového H-Pab(Z) v EtOH (asi 1 g/10 ml), pričom sa z roztoku okamžite zráža H-Pab(Z) x HCI. Po filtrácii sa zrazenina dvakrát premyje studeným EtOH a vysuší sa, čím sa získa takmer v kvantitatívnom výťažku zlúčenina uvedená v názve.

H-Pic-OEt x HCI

Kyselina L-pipekolínová, 4,0 g (0,031 mol) sa rozmieša v 100 ml absolútneho etanolu a HCI (plynný) sa opatrne prebubláva až do získania číreho roztoku. Zmes sa ochladí na ľadovom kúpeli a počas 15 min. sa prikvapká 17 ml tionylchloridu. Ľadový kúpeľ sa odstráni a zmes sa refluxuje počas 2,5 hod. Rozpúšťadlo sa odparí a produkt sa získa ako hydrochloridová soľ v kvantitatívnom výťažku.

'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,33 (t, 3H) 1,8 - 2,1 (m, 5H), 2,3 - 2,5 (m, IH), 3,1 - 3,3 (m, IH), 3,5 - 3,7 (m, IH), 4,14 (dd, IH), 4,44 (g, 2H).

H-(R,S)betaPic-OMe x HCI

Zmes 2,0 g (15,5 mmol) nipokotínovej kyseliny v 8 ml metanolu sa ochladí na ľadovom kúpeli a pridá sa 2,76 g (23,2 mmol) tionylchloridu. Zmes sa mieša pri laboratórnej teplote počas 20 hodín. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v malom množstve metanolu, pridá sa dietyléter a H-(R,S)betaPic-OMe x HCI sa vyzráža vo forme bielych kryštálov. Kryštály 2,57 g (92 %) sa izolujú filtráciou.

Boc-(R)Cgl-OH

Boc-(R)-Pgl-OH, 32,6 g (0,13 mol) sa rozpustí v 300 ml metanolu a pridá sa 5 g Rh/AI₂O₃. Roztok sa hydrogenuje pri tlaku 5,2 až 2,8 MPa počas 3 dní. Po filtrácii a odparení rozpúšťadla ukazuje NMR na prítomnosť asi 25 % metylesteru titulnej zlúčeniny. Surová látka sa rozpustí v 500 ml THF a 30 ml vody a pridá sa 20 g LiOH. Zmes sa mieša cez noc a THF sa odparí. Zvyšná vodná fáza sa 0kyslí KHSO4 a extrahuje sa trikrát etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou, vysušia (Na₂SO₄) a odparením sa získa 28,3 g (83 %) požadovaného produktu.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,9 - 1,7 (m, 20H), 4,0 -4,2 (m, IH), 5,2 (d, IH).

Boc-(R)Cgl-OSu

K ľadovo studenému roztoku 2,01 g (7,81 mmol) Boc-(R)Cgl-OH a 1,83 g (15,6 mmol) HOSu v 25 ml CH₃CN sa pridá 1,69 g (8,2 mmol) DCC a teplota sa vystúpiť na laboratórnu teplotu. Po 3 dňoch miešania sa vyzrážaný DCU odfiltruje a rozpúšťadlo sa odparí. Zvyšok sa rozpustí v EtOAc a organická fáza sa premyje H₂O, KHSO₄, NaHCO₃, soľankou a vysuší sa (Na₂SO₄). Odparením rozpúšťadla sa v kvantitatívnom výťažku získa zlúčenina uvedená v názve.

Boc-(R)Cha-OSu

Boc-(R)Cha-OH (1 ekv.), HOSu (1,1 ekv.) a DCC alebo CME-CDI (1,1 ekv.) sa rozpustí v acetonitrile (asi 2,5 ml/mmol kyseliny) a mieša sa pri laboratórnej teplote cez noc. Zrazenina vytvorená počas reakcie sa odfiltruje, rozpúšťadlo sa odparí a produkt sa vysuší za vákua, (ak sa v reakcii použije CME-CDI zvyšok sa po odparení CH₃CN, rozpustí v EtOAc a organická fáza sa premyje vodou a vysuší). Odparením rozpúšťadla sa získa zlúčenina uvedená v názve.

'H-NMR (500 MHz, CDC1₃, 2 rotaméry asi: pomer 1:1): δ 0,85-1,1 (m, 2H), 1,1 -1,48 (m, 4H), 1,5-1,98 (m, 16H, z toho 1,55 (bs, 9H)), 2,82 (bs, 4H), 4,72 (bs, IH, hlavný rotamér), 4,85 (bs, IH, minoritný).

Boc-(R)Hoc-OH

Boc-(R)Hop-OH (pozri vyššie), 3,2 g (11,46 mmol) sa rozpustí v metanole (75 ml). Pridá sa ródium na aktívnom oxide hlinitom (Rh/Al₂O₃), 0,5 g, a zmes sa mieša pod atmosférou vodíka pri tlaku 0,41 MPa počas 18 hodín. Katalyzátor sa odfiltruje cez hytlo a rozpúšťadlo sa odparí. Získa sa produkt v takmer kvantitatívnom výťažku.

'H-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,90 (m, 2H), 1,08 - 1,33 (m, 6H), 1,43 (s, 9H), 1,60 - 1,74 (m, 6H), 1,88 (bs, IH), 4,27 (bs, IH).

Boc-(R)Hoc-OSu

Pripraví sa rovnakým spôsobom ako je opísané pre Boc-(R)Cha-OSu z Boc-(R)Hoc-OH.

Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-OH

Pripraví sa podľa metódy, ktorú opísal J. Y. L. Chung a kol. v Joumal of Organic Chemistry, č. 1, str. 270 - 275, 1990.

Boc-(R)Cgl-Aze-OH (i) Boc-(R)Cgl-Aze-OMe

K zmesi 3,86 g (15 mmol) Boc-(R)Cgl-OH, 2,27 g (15 mmol) H-Aze-OMe x HCI a 2,75 g (22,5 mmol) DMAP v 40 ml CHjCN sa za miešania pri teplote 5 °C pridá 3,16 g (16,5 mmol) EDC. Reakčná zmes sa mieša pri laboratórnej teplote počas 48 hodín. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v 150 ml EtOAc a 20 ml H₂O. Oddelené organické vrstvy sa premyjú 2 x 20 ml 0,5 M KHSO₄, 2 x 10 ml NaHCO₃ (nasýtený), 1 x 10 ml H₂O, 1 x 10 ml soľanky a vysušia sa (MgSO₄). Odparením rozpúšťadla sa získa 4,91 g (92 %) zlúčeniny uvedenej v názve, ktorá sa použije bez ďalšieho čistenia v nasledujúcom stupni.

’H-NMR (500 MHz, CDC1₃, 0,1 g/ml): hlavný rotamér, δ 0,83 - 1,35 (m, 5H), 1,38 (s, 9H), 1,47 - 1,84 (m, 6H), 2,18 -2,27 (m, IH), 2,50 - 2,62 (m, IH), 3,72 (s, 3H), 3,94 - 4,06 (m, IH), 4,07 - 4,15 (m, IH), 4,39 - 4,47 (m, IH),

4,68 (dd, J = 9,1, J = 5,1, IH), 5,09 (dd, J = 9,2, IH).

Zjavné piky z minoritného rotaméru, 2,27 - 2,35 (m, IH), 3,77 (s, 3H), 3,80 - 3,87 (m, IH), 3,88 - 3,95 (m, IH), 4,92 (d, J = 9,2, IH), 5,21 (dd, J = 9,1, J5, IH).

(ii) Boc-(R)Cgl-Aze-OH

Hydrolýza Boc-(R)Cgl-Aze-Ome sa uskutočnila postupom opísaným pre Boc-(R)Cha-Pic-OEt (vide infra). Produkt sa kryštalizoval z EtOH/acetónu/vody (1/1/3,95), výťažok predstavoval 80 %.

‘H-NMR (500 MHz, CDClj): δ 0,85 - 1,3 (m, 5H), 1,40 (s, 9H), 1,5-1,9 (m, 6H), 1,95 -2,2 (m, 2H), 3,92 (m, IH), 4,09 (m, IH), 4,35 (m, IH), 4,95 (m, IH), 5,16 (bd, IH).

Boc-(R)Cgl-Pic-OH (i) Boc-(R)Cgl-Pic-OMe

Pivaloylchlorid (1,0 ml, 8,1 mmol) sa pridá k roztoku Boc-(R)Cgl-OH (2,086 g, 8,1 mmol) a trietylaminu (1,13 ml, 8,1 mmol) v toluéne (25 ml) a DMF (5 ml). Zmes H-Pic-OMe x HCI (1,46 g, á 1 mmol) a trietylaminu (1,13 ml, 8,1 mmol) v DMF sa postupne pridá pri teplote ľadového kúpeľa. Reakčná zmes sa nechá pomaly zahriať až na laboratórnu teplotu a po 24 hod. sa zriedi vodou a extrahuje toluénom. Po premytí 0,3 M KHSO₄, 10 % Na₂CO₃ a soľankou sa odstránením rozpúšťadlo vo vákuu získa 2,52 g (81 %) bezfarebného oleja, ktorý sa použije bez ďalšieho čistenia.

’H-NMR (500 MHz, CDC1₃, 2 rotaméry, pomer 5 : 1): : δ 0,8 - 1,8 (m, 25H), 2,25 (d, IH), 2,75 (t, IH, minoritný rotamér), 3,3 (t, IH), 3,7 (s, 3H), 3,85 (d, IH), 4,3 (t, IH, minoritný rotamér), 4,5 - 4,6 (m, IH). 5,25 (d, IH), 5,30 (d, IH).

(ii) Boc-(R)Cgl-Pic-OH

Pripraví sa podľa postupu pre hydrolýzu Boc-(R)Cha-Pic-OEt (vide infra) pri použití produktu z (i). Produkt sa kryštalizuje z diizopropyléteru a hexánu.

’H-NMR (500 MHz, CDC1₃, 2 rotaméry, pomer 5 : 1): : δ 0,8 - 1,8 (m, 25H), 2,3 (d, IH), 2,8 (t, IH, minoritný rotamér), 3,3 (t, IH), 3,9 (d, IH), 4,4 (t, IH, minoritný rotamér), 4,5 - 4,6 (m, IH), 5,1 (s, IH, minoritný rotamér), 5,3 (d, IH), 5,40 (d, IH).

Boc-(R)Cgl-Pro-OH

3,59 g (31,24 mmol) L-prolínu sa zmieša s 20 ml vody a 1,18 g (29,7 mmol) hydroxidu sodného. K zmesi sa pridá 2,8 g (7,8 mmol) Boc-(R)Cgl-OSu v 10 ml DMF. Vzhľadom na problém s rozpustnosťou sa pridá ďalších 30 ml DMF a reakčná zmes sa mieša počas troch dní. Rozpúšťadlo sa odparí a pridá sa voda. Vodná fáza sa premyje ctylacetátom, okysli sa 0,3 M roztokom KHSO₄ a trikrát sa extrahuje etylacetátom. Organická fáza sa premyje jedenkrát vodou, jedenkrát soľankou, vysuší sa (Na₂SO₄), prefiltruje a odparením sa získa 2,3 g (83 %) produktu.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,89 - 2.17 (m, 23H), 2,37 (m, IH), 3,55 (q, IH), 3,90 (bs, IH), 4,28 (t, IH), 4,52 (bs, 1 H), 5,22 (bs, 1H(NH)).

Boc-(R)Cha-Aze-OH

Pripraví sa rovnakým spôsobom ako je opísané pre Boc-(R)Cha-Pic-OH, vychádza sa z Boc-(R)Cha-OH a H-Aze-OEt x HCI (vide infra).

Boc-(R)Cha-Pro-OH

H-(S)-Pro-OH (680 mmol) sa rozpustí v 0,87 M hydroxide sodnom (750 ml). Boc-(R)Cha-OSu (170 mmol) rozpustený v DMF (375 ml) sa prikvapká počas 20 minút. Reakčná teplota sa udržiava na laboratórnej teplote počas 20 hodín. Zmes sa okysli (2 M KHSO₄) a extrahuje sa trikrát etylacetátom. Organické vrstvy sa spoja a premyjú sa trikrát vodou a jedenkrát soľankou. Po vysušení nad síranom sodným a odparení rozpúšťadla sa sirupovitý olej rozpustí v dietyléteri, rozpúšťadlo sa odparí a napokon sa produkt vysuší vo vákuu a získa sa Boc-(R)-Pro-OH vo forme bieleho prášku v takmer kvantitatívnom výťažku.

'H-NMR (500 MHz, CDC1₃, zmes dvoch rotamérov 9 : 1): δ 0,8 - 1,05 (m, 2H), 1,05 - 1,55 (m, 15H, z toho 1,5 (bs, 9H)), 1,55 - 1,8 (m, 5H), 1,8 - 2,15 (m, 3H), 2,47 (m, IH), 3,48 (m, IH), 3,89 (m, IH), 4,55 (m, 2H), 5,06 (bm IH), rozlíšené signály z minoritného rotaméru sa objavujú pri d

2.27 (m), 3,58 (m), 4,33 (m), 5,0 (m).

Boc-(Me(R)Cha-Pro-OSu (i) Boc-(Me)(R)Cha-Pro-OH

Pripraví sa rovnakým spôsobom ako je opísané pre Boc-(R)Cha-Pro-OH, vychádza sa z Boc-(Me)(R)Cha-OSu a H-Pro-OH.

(ii) Boc-(Me)(R)Cha-Pro-OSu

Pripraví sa rovnakým spôsobom ako je opísané pre Boc-(R)Cha-OSu, vychádza sa z Boc-(Me)(R)Cha-Pro-OH.

Boc-(R)Cha-Pic-OH (ia) Boc-(R)Cha-Pic-OEt

Boc-(R)Cha-OH, 6,3 g (0,023 mol) sa rozpustí v 150 ml CH₂C1₂. Roztok sa ochladí na ľadovom kúpeli a pridá sa

6,3 g (0,047 mol) N-hydroxybenzotriazolu a 11,2 g (0,0265 mol) CME-CDI. Ľadový kúpeľ sa po 15 minútach odstráni a reakčná zmes sa mieša počas 4 hodín pri laboratórnej teplote. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v 150 ml DMF a ochladí sa na ľadovom kúpeli. Pridá sa H-Pic-OEt x HCI, 4,1 g (0,021 mol), a pH sa upraví na približne 9 pridaním N-metylmorfolínu. Ľadový kúpeľ sa odstráni po 15 minútach a reakčná zmes sa mieša 3 dni. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte a premyje sa zriedeným KHSO₄ (vodným), NaHCO₃ (vodným a vodou). Organická vrstva sa vysuší (Na₂SO₄) a odparením sa získa 7,7 g (89 %) Boc-(R)Cha-Pic-OEt, ktorý sa použije bez ďalšieho čistenia.

'H-NMR (500 MHz, CDC1₃, 2 rotaméry, pomer 3 - 1): : d 0,7 - 1,0 (m, 2H), 1,1 -1,9 (m, 29H, z toho 1,28 (t, 3H)), 1,45 (bs, 9 H), 2,01 (bd, IH, hlavný rotamér), 2,31 (bd, IH), 2,88 (bd, IH, minoritný), 3,30 (bt, IH, majoritný), 3,80 (bd, IH, majoritný), 4,15 - 4,3 (m, 2H), 4,5 - 4,7 (m, 2H, majoritný) 4,77 (bq, IH, majoritný), 4,90 (bd, IH, minoritný),

5.28 (bd, IH, majoritný), 5,33 (bd, IH, majoritný).

(ib) Boc-(R)Cha-Pic-OMe

400 μΐ (3,23 mmol) pivaloylchloridu sa za miešania pridá k 875 mg (3,22 mmol) Boc-(R)Cha-OH a 450 μΐ (3,23 mmol) trietylamínu v 10 ml toluénu a 2 ml DMF. Zmes 596 mg (3,32 mmol) metyl-(S)-pipekolt hydrochloridu a 463 μΐ (3,32 mmol) trietylamínu v 5 ml DMF sa pridá k výslednej suspenzii po 45 minútach. Po 2 hod sa pridá 100 μΐ (0,72 mmol) trietylamínu a v miešaní sa pokračuje počas ďalších 18 hodín. K reakčnej zmesi sa pridá voda a toluén a organická fáza sa premyje 0,3 M KHSO₄, 10 % Na₂CO₃ a soľankou. Vysuší sa (MgSO₄) a odstránením rozpúšťadla vo vákuu sa získa 1,16 g zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) Boc-(R)Cha-Pic-OH

Boc-(R)Cha-Pic-OEt, 5,6 g (0,014 mol) sa zmieša so 100 ml THF, 100 ml vody a 7 g LiOH. Zmes sa mieša cez noc pri laboratórnej teplote. THF sa odparí a vodný roztok sa okyslí KHSO₄ (vodným) a trikrát sa extrahuje etylacetátom. Spojené organické fázy sa premyjú vodou, vysušia (Na₂SO₄) a odparením sa získa 4,9 g (94 %) Boc-(R)Cha-Pic-OH, ktorý sa použije bez ďalšieho čistenia. Zlúčenina sa môže kryštalizovať z diizopropyléteru/hexánu.

Metylester vytvorený v postupe (ib) sa môže hydrolyzovať pri použití rovnakého postupu ako je opísaný pre etylester v (ii).

'H-NMR (500 MHz, CDC1₃, 2 rotaméry, pomer 3,5 - 1): δ 0,8 - 1,1 (m, 2H), 1,1 - 2,1 (m, 27H, z toho 1,43 (s, 9H, hlavný rotamér)), 1,46 (s, 9H, minoritný), 2,33 (bd, IH), 2,80 (bt, IH, minoritný), 3,33 (bt, IH, majoritný), 3,85 (bd, IH, majoritný), 4,57 (bd, IH, minoritný), 4,68 (m, IH, minoritný), 4,77 (bq, IH, majoritný), 5,03 (bs, IH, minoritný), 5,33 (bd, IH, majoritný), 5,56 (m, IH, majoritný).

Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OH (i) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OMe

Pivaloylchlorid, 0,9 ml (7,3 mmol) sa pridá k roztoku 2,0 g (7,3 mmol) Boc-(R)Cha-OH a 0,81 ml (7,3 mmol) 4-N-metyl- morfolínu v 20 ml acetonitrilu. Po 1 h a 30 minútach miešania sa pridá 1,3 g (7,3 mmol) H-(R,S)beta/ic-OMe x HC1 a 1,62 ml (14,6 mmol) 4-N-metylmorfolínu a reakčná zmes sa mieša počas 24 hodín. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v dietyléteri. Po premytí 0,3 M KHSO₄ a roztokom KHCO₃ a vysušení Na₂SO₄ sa rozpúšťadlo odstráni vo vákuu. Rýchlou chromatografiou pri použití heptánu/etylacetátu (7/3) ako elučného činidla sa získa

2,4 g (83 %) požadovaného produktu.

(ii) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OH

Pri laboratórnej teplote sa 2,35 g (5,9 mmol) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OMe rozpustí v 35 ml THF a pridá sa 2,1 g LiOH v 35 ml vody. Po 5 hod. miešaní sa THF odstráni vo vákuu. Vodná fáza sa okyslí 2 M KHSO₄ a extrahuje sa etylacetátom, vysuší sa Na₂SO₄ a odparením sa získa 2,0 g (89 %) produktu.

Boc-(R)Cha-Val-OH (i) Boc-(R)Cha-Val-OMe

3,1 ml (25 mmol) pivaloylchloridu sa za miešania pridá pri laboratórnej teplote k 6,75 g (25 mmol) Boc-(R)Cha-OH a 3,5 ml (25 mmol) trietylamínu v 50 ml DMF. Po 3 hodinách sa pridá 4,16 g (25 mmol) hydrochloridu metylesteru valinu v 50 ml DMF a 3,5 ml trietylamínu. Po miešaní cez noc sa pridá malé množstvo DMAP a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 50 °C počas 5 minút. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a ku zvyšku sa pridá éter a toluén. Premytím 0,3 M KHSO₄ a 10 % Na₂CO₃ s nasledujú cim vysušením (MgSO₄) a odstránením rozpúšťadla vo vákuu sa získa zvyšok, ktorý' sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití toluénu/etylacetátu ako elučného činidla. Výťažok zlúčeniny uvedenej v názve bol 6,99 g (73 %).

(ii) Boc-(R)-Cha-Val-OH

Zmes 8,73 g (23 mmol) Boc-(R)Cha-Val-OMe a 5,6 g (230 mmol) hydroxidu lítneho v 75 ml THF a 75 ml vody sa mieša počas 4 hodín. THF sa odstráni vo vákuu a zostávajúci roztok sa zriedi vodou a extrahuje éterom. Okyslením 2 M KHSO₄ a extrakciou etylacetátom s nasledujúcim vysušením (MgSO₄) a odstránením rozpúšťadla vo vákuu sa získa 8,15 g (96 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

Boc-(R)Hoc-Aze-OH (i) Boc-(R)Hoc-Aze-OEt

Pri laboratórnej teplote sa 1,0 g (3,5 mmol) Boc-(R)Hoc-OH a 0,95 g (7,0 mmol) HOBt rozpustí v 15 ml CH₂C1₂. Roztok sa ochladí na ľadovom kúpeli a pridá sa 0,77 g (4,0 mmol) EDC. Ľadový kúpeľ sa odstráni a reakčná zmes sa mieša počas 3 h pri laboratórnej teplote. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v 20 ml DMF. Pridá sa 0,58 g (3,5 mmol) H-(R)Aze-OH a pH sa upraví na približne 9 prídavkom N-mctylmorfolínu. Reakčná zmes sa mieša jeden deň. Reakčná zmes sa rozdelí medzi vodu a toluén.Organická fáza sa oddelí a premyje 0,3M KHSO₄, zriedi sa KHCO₃, vysuší pomocou Na₂SO₄ a odparí sa. Rýchlou chromatografiou (1 % EtOH v CH₂C1₂ a heptánu : : EtOAc) sa získa 0,35 g (25 %) požadovaného produktu.

(ii) Boc-(R)Hoc-Aze-OH

Pri laboratórnej teplote sa 0,65 g (1,6 mmol) Boc-(R)Hoc-Aze-OEt rozpustí v 10 ml TI 1F a pridá sa 0,59 g LiOH v 10 ml vody. Po 24 h miešania sa pridá 2M KHSO₄a THF sa odstráni vo vákuu. Vodná fáza sa potom okyslí ďalším 2M KHSO₄ a extrahuje sa etylacetátom, vysuší sa nad Na₂SO₄ a odparením sa získa 0,5 g (85 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

Boc-(R)Hoc-Pro-OH

Pripraví sa rovnakým spôsobom ako je opísané pre Boc-(R)Cha-Pro-OH z Boc-(R)Hoc-OSu.

'H-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,80 - 0,94 (m, 2H), 1,05 - 1,36 (m, 7H), 1,36 - 1,48 (bs, 9H), 1,48 - 1,78 (m, 7H), 1,98 - 2,14 (m, 2H), 2,34 (m, IH), 3,48 (m, IH), 3,85 (m, III), 4,43 (m,lH), 4,52 (bd, IH), 5,26 (bd, IH), signály z minoritného rotaméru sa objavujú pri: δ 1,92, 2,25, 3,58,

4,20 a4,93.

Boc-(R)Hoc-Pic-OH (i) Boc-(R)Hoc-Pic-OMe

Pripraví sa rovnakým spôsobom ako je opísané pre Boc-(R)Cha-Pic-OEt (vide supra) z Boc-(R)Hoc-OH a H-Pic-OMe x HC1.

(ii) Boc-(R)Hoc-Pic-OH

Pripraví sa rovnakým spôsobom ako je opísané pre Boc-(R)Cha-Pic-OH (vide supra) z Boc-(R)Hoc-Pic-OMe. 'H-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,82 - 0,97 (m, 2H), 1,10 - 1,36 (m,7H), 1,36 - 1,50 (bs, 9H), 1,50 - 1,82 (m, 11 H), 2,35 (d, IH), 3,28 (bt, IH), 3,85 (bd, IH), 4,63 (m, IH), 5,33 (bs, IH), 5,44 (bd, IH), signály z minoritného rotaméru sa objavujú pri δ 1,88, 2,80, 4,25, 4,55 a 4,97.

Boc-(R)Pro-Phe-OH (i) Boc-(R)Pro-Phe-OMe

K roztoku 2,0 g (9,29 mmol) Boc-(R)Pro-OH a 0,94 g (9,29 mmol) trietylaminu v 70 ml toluénu/DMF (5/2) sa pridá 1,12 g (9,29 mmol) pivaloylchloridu a reakčná zmes sa mieša počas 30 minút pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa ochladí na 0 °C a pridá sa zmes 2,0 g (9,29 mmol) H-Phe-OMe a 0,94 g trietylaminu v 40 ml DMF a reakčná zmes sa mieša cez noc pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa zriedi toluénom a organická fáza sa premyje 3x50 ml 0,3M KHSO₄, 1 x 50 ml vody a vysuší sa (Na₂SO₄). Odparením rozpúšťadla sa získa zlúčenina uvedená v názve v kvantitatívnom výťažku, ktorá sa použije v nasledujúcom stupni bez ďalšieho čistenia.

(ii) Boc-(R)Pro-Phe-OH

Zmes 4,0 g (10,6 mmol) Boc-(R)Pro-Phe-OMe a 8,93 g (21,3 mmol) LiOH x H₂O v 140 ml vody/THF (1/1) sa intenzívne mieša pri laboratórnej teplote cez noc. THF sa odparí a vodná fáza sa okyslí IM KHSO₄ a extrahuje sa 3 x x 75 ml EtOAc. Spojené organické fázy sa premyjú vodou a vysušia (Na₂SO₄). Filtráciou a odparením rozpúšťadla sa získa zvyšok, ktorý sa čistí kryštalizáciou z diizopropyléteru a získa sa 2,329 g (60 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bielej kryštalickej pevnej látky.

Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-OH (i) Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-OBn

K zmesi 1,61 g Boc-(R)Pro(3-(S)Pb)-OH, 1,65 g H-Pro-OBn x HCI a 0,75 g HOBt v 11 ml DMF sa pridá 0,84 ml NMM a 2,92 g CME-CDI pri laboratórnej teplote a reakčná zmes sa mieša počas troch dní. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v 300 ml EtOAc. Organická fáza sa premyje 2 x 100 ml vody, 2 x 100 ml IM KHSO₄, 3 x 100 ml vody a vysuší (MgSO₄). Odparením rozpúšťadla sa získa 2,53 g oleja, ktorý sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití CH₂Cl₂/MeOH (97/3) ako elučného činidla a získa sa 2,11 g (88 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-OH

0,94 g Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-OBn sa rozpustí v 70 ml EtOH a hydrogenuje sa nad 42 g 5 % Pd/C počas 3,5 hodiny. Odfiltrovaním katalyzátora a odparením rozpúšťadla sa získa zlúčenina uvedená v názve vo forme bielych kryštálov v kvantitatívnom výťažku.

Boc-(R)Tic-Pro-OH

Pripraví sa podľa postupu opísaného P. D. Gesellchenom a R. T. Schumanom v EP-0 479 489-A2.

BnOOC-CH₂-NH-O-CH₂-Br

K roztoku -TsOH x H-Gly-OBn (5 mmol) a trietylamínu (5 mmol) v 10 ml CH₂CI₂ sa pridá kyselina 2-brómoctová (5 mmol) rozpustená v 10 ml CH₂C1₂ a dicyklohexylkarbodiimidu (5 mmol). Zmes sa mieša pri laboratórnej teplote cez noc a odfiltruje sa. Organická fáza sa premyje dvakrát 0,2M KHSO₄, 0,2M NaOH, soľankou a vysuší sa. Odparením a rýchlou chromatografiou (CH₂Cl₂/MeOH, 95/5) sa získa kvantitatívny výťažok požadovanej zlúčeniny.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 3,89 (s, 2H). 4,05 -4,11 (d, 2H), 5,19(s,2H), 7,06(bs, 1H), 7,3-7,4 (m, 5 H).

Boc-(R)Cgl-Ile-OH

Pripraví sa rovnakým spôsobom ako je opísané pre Boc-(R)Cgl-Pro-OH pri použití H-Ile-OH namiesto H-Pro-OH v 91 % výťažku.

Boc-(R)Phe-Phe-OH (i) Boc-(R)Phe-Phe-OMe

Boc-(R)Phe-OH (18,8 mmol: dostupný od Bachem Feinchemicalien AG), Phe-OMe (20,7 mmol) a 4-dimetylaminopyridín (37,7 mmol) sa rozpustí v 30 ml acetonitrilu. Roztok sa ochladí na teplotu ľad-voda a pridá sa hydrochlorid l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu (24,5 mmol). Chladiaci kúpeľ sa odstráni a reakčná zmes sa mieša cez noc. Rozpúšťadlo sa potom odstráni pri zníženom tlaku a zvyšok sa rozpustí v 50 ml etylacetátu. Extrakciou organickej fázy 50 ml podielmi 0,5M KHSO₄, IM hydrogenuhličitanu sodného a napokon vodou s nasledujúcim odparením rozpúšťadla sa získa 7,5 g Boc-(R)Phe-Phe-OMe (94 %), ktorý sa použije v nasledujúcom stupni bez ďalšieho čistenia.

(ii) Boc-(R)Phe-Phe-OH

Boc-(R)Phe-Phe-OMe (16,4 mmol) sa rozpusti v 40 ml tetrahydrofiiránu a rýchle sa pridá hydroxid lítny (32,8 mmol) rozpustený v 20 ml vody. Reakčná zmes sa mieša

3,5 h a potom sa rozpúšťadlo odstráni pri zníženom tlaku. Zvyšok sa rozpustí v 50 ml etylacetátu a extrahuje sa 50 ml 0,5M KHSO₄ a potom 50 ml vody. Rozpúšťadlo sa odstráni pri zníženom tlaku a získa sa 8,0 g Boc-(R)Phe-Phe-OH (kvánt.) vo forme amorfnej pevnej látky.

'H-NMR (200 MHz, d-CHCl₃): δ 7,4 - 6,7 (m, 10H), 5,7-4,2 (m, 6H), 1,34 (s, 9H).

HO-CH₂-COOBn

Pripraví sa postupom opísaným A. Lattesom a kol. v Bull. Soc. Chim. France., č. 11, str. 4018 -23, 1971.

Benzyl-2-(orto-nitrobenzénsulfonyloxy)acetát (2-NO₂)Ph-SO₂-PCH₂-COOBn

1,66 g (10 mmol) benzylglykolátu sa rozpustí v 25 ml CH₂C1₂ a 50 ml dietyléteru. Zmes sa ochladí na 0 °C a pridá sa 2,8 ml (10 mmol) trietylaminu. Pri udržiavaní teploty na 0 °C sa po malých častiach pridáva 2,44 g (11 mmol) orto-nitrobenzénsulfonylchloridu počas 15 minút. Suspenzia sa mieša pri 0 °C počas 50 minút a potom sa pridá 20 ml vody a 30 ml CH₂C1₂. Fáza sa oddelí a organická fáza sa premyje 20 ml IM HCI a 20 ml vody, vysuší sa (Na₂SO₄), prefiltruje a odparením vo vákuu sa získa 3,34 g zvyšku, ktorý sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití heptánu : EtOAc 2 : 1 ako elučného činidla a získa sa 1,18 g (34 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (300 MHz, CDClj): 4,92 (s, 2H), 5,17 (s, 2H),

7,83 (m, 5H), 7,76 (m, 3H), 8,16 (dd, 1H).

Benzyl-2-(para-nitrobenzénsulfonyloxy)acetát (4-NO₂)Ph-SO₂-PCH₂-COOBn

Pripraví sa rovnakým postupom ako je opísané pre benzyl-2-(orto-nitrobenzénsulfonyloxy)acetát. Konečná zlúčenina sa získa v kryštalickej forme po odparení rozpúšťadla a je dostatočne čistá na použitie bez ďalšieho čistenia (64 % výťažok).

'H-NMR (300 MHz, CDClj): δ 4,79 (s, 2H), 5,13 (s, 2H), 7,2 - 7,4 (m, 5H), 8,10 (d, 2H), 8,30 (d, 2H).

TfO-CH₂COOMe

10,09 ml (60 mmol) trifluórmetánsulfónanhydridu rozpusteného v CH₂C1₂ sa prikvapká k zmesi 4,05 ml (50 mmol) metylglykolátu a 4,04 ml (50 mmol) pyridínu v CH₂C1₂ (celkove 62,5 ml) pri 0 °C počas 25 minút a potom sa mieša pri 0 °C počas 1 h. Po premytí 0,3M KHSO₄ a nasýteným Na₂CO₃, vysušení (Na₂SO₄), filtrácii a odparení rozpúšťadla vo vákuu sa získa 9,94 g (90 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

TfO-CH₂COOEt

Pripraví sa rovnakým spôsobom ako je opísaný pre TfO-CH₂COOMe, vychádza sa z etylglykolátu.

TfO-CH₂COOn-Bu

Pripraví sa rovnakým spôsobom ako je opísaný pre TfO-CH₂COOMe, vychádza sa z butylglykolátu.

TfO-CH₂COOBn

Pripraví sa rovnakým spôsobom, aký je opísaný pre TfO-CH₂COOMe, vychádza sa z OH-CH₂COOBn.

TfO-CH₂COOn-Hex (i) HO-CH₂COOn-Hex

K 215 mg (2,82 mmol) kyseliny glykolovej v 12,8 ml CH₃CN sa pridá 719 mg (3,39 mmol) 1-hexyljodidu a 429 mg (2,82 mmol) DBU. Po miešaní cez noc a 4 h refluxu sa rozpúšťadlo odparí, pridá sa etylacetát a IM KHSO₄ a fáza sa oddelí. Organická vrstva sa premyje soľankou, vysuší (MgSO₄), prefiltruje a odparením vo vákuu sa získa 333 mg (74 %) produktu.

(ii) TfO-CH₂COOn-Hex

Pripraví sa rovnakým spôsobom ako je opísaný pre TfO-CH₂COOMe, vychádza sa z HO-CH₂COOn-Hex.’

H-Mig(Z) (3-aminometyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)azetidín (i) 3 -Aminometyl-1 -benzhydrylazetidín

Pripraví sa podľa literatúry, pozri A. G. Anderson, Jr., R. Lok, J. Org. Chem., 37, 3953, 1972.

(ii) 3-(N-terc.Butyloxykarbonylaminometyl)-l-benzhydrylazetidín

K 3,50 g (13,9 mmol) 3-aminometyl-l-benzhydrylazetidínu rozpusteného v 45 ml THF sa pridá roztok 0,56 g (13,9 mmol) NaOH v 45 ml H₂O. Reakčná zmes sa ochladí na 0 °C a pridá sa 3,03 g (13,9 mmol) diterc.butylkarbonátu. Chladiaci kúpeľ sa odstráni po niekoľkých minútach a zmes sa mieša pri laboratórnej teplote cez noc. THF sa odparí a zvyšok sa extrahuje 3 x 45 ml dietyléteru. Spojené organické vrstvy sa premyjú soľankou, vysušia Na₂SO₄ a odfiltrujú. Odparením rozpúšťadla sa získa 4,6 g (94 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(iii) 3-(N-terc.Butyloxykarbonylaminometyl)azetidín

3,4 g (9,6 mmol) 3-(N-terc.butyloxykarbonylaminometyl)-l-benzhydrylazetidínu sa rozpustí v 170 ml NaOH a hydrogenuje nad 0,30 g Pd(OH)₂ pri 5 mPa cez noc. Katalyzátor sa odfiltruje a rozpúšťadlo sa odparí. Surový produkt sa čistí rýchlou chromatografiou pri použití MeOH/CH₂C1₂, 1/9, potom MeOH (nasýtený NH₃ (plynný))/CH₂Cl₂, 1/9 ako elučným činidlom a získa sa 1,2 g (67 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(iv) 3-(N-terc.Butyloxykarbonylaminometyl)-l -(N-benzyloxykarbonylamidino)azetidín

0,9 g (4,8 mmol) 3-(N-terc.butyloxykarbonylaminometyl)azetidínu a 1,3 g (6,3 mmol) N-benzyloxykarbonyl-O-metylizomočoviny sa zmieša v 6,5 ml toluénu a zahrieva sa pri teplote 70 °C počas 72 h a potom sa ponechá pri laboratórnej teplote počas ďalších 72 h. Odparením a nasledujúcou rýchlou chromatografiou pri použití EtOAc a potom MeOH (nasýtený NH₃ (plyn)/CH₂Cl₂, 1/9 ako eluč ného činidla sa získa 0,67 g (38 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bieleho prášku.

(v) 3-Aminometyl-l -(N-benzyloxykarbonyl-amidino)azetidin (H-Mig(Z))

0,67 g (1,85 mmol) Boc-Mig(Z) sa rozpustí v 10 ml EtOH nasýteného HCl (plynný) a mieša sa počas 10 min. pri laboratórnej teplote. Prikvapká sa 10 ml nasýteného roztoku KOH (vod.). Vrstvy sa oddelia a vodná fáza sa extrahuje 3 x 8 ml EtOAc. Organické vrstvy sa spoja, premyjú sa soľankou, vysušia Na₂SO₄ a odparením sa získa 0,43 g (89 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

‘H-NMR (300 MHz, CDC1CH₂C1₃): δ 2,55 - 2,65 (m. IH), 2,84 (d, 2H), 3,66 (dd, 2H), 4,03 (dd, 2H), 5,07 (s, 2H), 7,2 - 7,4 (m, 5H).

MS m/z 263 (M’+l)

3-Aminoetyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)azetidín (H-Dig(Z)) (i) 3-Karboxylová kyselina-1 -benzhydrylazetidín Pripraví sa podľa literatúry, pozri A. G. Anderson, Jr. a R. Lok, J. Org. Chem., 37, 3953, 1972.

(ii) 3 -Hydroxymetyl-1 -benzhydrylazetidín

Roztok 8,7 g (32,5 mmol) 3-karboxylovej kyseliny-1-benzhydrylazetidínu v 80 ml suchého THF sa pridá pomaly k suspenzii 4,9 g (130,2 mmol) LiAlH₄ v 30 ml THF pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa refluxuje počas

3,5 h. Prebytok hydridového činidla sa hydrolyzuje opatrným pridávaním NH₄Cl(vod), za chladenia, želatinózna zmes sa odfiltruje a filtračný koláč sa opakovane premýva THF. Odparením rozpúšťadla sa získa 7,1 g (86 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme svetložltých kryštálov.

(iii) 3-Metánsulfonátometyl-l-benzhydrylazetidín

K roztoku 6,62 g (26,1 mmol) 3-hydroxymetyl-1-benzhydrylazetidínu v 50 ml suchého pyridínu sa pridá 4,50 g (39,2 mmol) metánsulfonylchloridu pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa mieša počas 1 hodiny a potom sa nechá stáť v chladničke cez noc. Reakčná zmes sa naleje do zmesi ľadu a vody. Zrazenina sa oddelí, premyje sa vodou a vysušením vo vákuu sa získa 7,75 g (89,5 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(iv) 3 -Kyanomety 1-1 -benzhydrylazetidínu

K roztoku 7,75 g (23,4 mmol) 3-metánsulfonátometyl-1-benzhydrylazetidínu v 50 ml DMF sa pridá roztok 3,44 g (70,0 mmol) NaCN v 10 ml vody. Zmes sa zahrieva pri teplote 65 °C počas 20 hodín, ochladí sa a naleje do zmesi ľadu a vody. Zrazenina sa oddelí, premyje sa vodou a vysuší vo vákuu, čím sa získa 5,7 g (93 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(v) 3-Aminoetyl-1 -benzhydrylazetidín

5,7 g (21,7 mmol) 3-kyanometyl-1 -benzhydrylazetidínu sa pomaly pridá k suspenzii 2,9 g (76,0 mmol) LíA1H₄ v 80 ml suchého THF pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa refluxuje počas 4 h. Prebytok hydridového činidla sa hydrolyzuje opatrným pridávaním, NH₄C1 (vod.), za chladenia, želatinózna zmes sa odfiltruje a filtračný koláč sa opakovane premyje THF. Rozpúšťadlo sa odparí, zvyšok sa rozpustí v dietyléteri, premyje soľankou a vysuší pomocou Na₂SO₄. Odparením rozpúšťadla sa získa 5,0 g (87 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(vi) 3-(N-terc.Butyloxykarbonylaminoetyl)-l-benzhydrylazetidín

Zlúčenina uvedená v názve sa pripraví z 3-aminoetyl-l-benzhydrylazetidínu podľa postupu pre 3-(N-terc.butyloxykarbonylaminoetyl)-l-benzhydrylazetidin, vo výťažku

6,5 g (95%).

(vii) 3-(N-terc.Butyloxykarbonylaminoetyl)azetidín

Zlúčenina uvedená v názve sa pripraví z 3-(N-terc.butyloxykarbonylaminoetyl)-l-benzhydrylazetidínu podľa postupu pre 3-(N-terc.butyloxykarbonylaminometyl)azetidín, vo výťažku 1,2 g (70 %).

(viii) 3-(N-terc.Butyloxykarbonylaminoetyl)-1 -(N-benzyloxykarbonylamidino)azetidín (Boc-Dig(Z))

Zlúčenina uvedená v názve sa pripraví z 3-(N-terc.butyloxykarbonylaminoetyl)azetidínu podľa postupu pre 3-(N-terc.butyloxykarbonylaminometyl)-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)azetidín, vo výťažku 0,090 g (34 %).

(ix) 3-Aminoetyi-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)azetidín (H-Dig(Z))

0,589 g (1,56 mmol) Boc-Dig(Z) sa rozpustí v 10 ml EtOAc nasýteného plynným HC1 a mieša sa počas 10 min. pri laboratórnej teplote. Prikvapká sa 10 ml nasýteného roztoku KOH (vod ). Vrstvy sa oddelia a vodná fáza extrahuje 3 x 8 ml EtOAc. Organické vrstvy sa spoja, premyjú soľankou, vysušia Na₂SO₄a odparením sa získa 0,415 g (96 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (500 MHz, CDClj): δ 1,60 (dt, 2H), 2,52 -

- 2,54 (m, 3H), 3,53 (bs, 2H), 4,0 (bt, 2H), 5,00 (s, 2H), 7,17-7,31 (m, 5H).

Pracovné príklady

Príklad 1

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

K zmesi 3,40 g (10 mmol) Boc-(R)Cgl-Aze-OH (pozri príprava východiskových materiálov) a 5,13 g DMAP (42 mmol) v 120 ml CHjCN sa za miešania pridá 3,18 g H-Pab(Z) x HC1 (pozri príprava východiskových materiálov). Po 2 hodinách miešania pri laboratórnej teplote sa zmes ochladí na teplotu -8 °C a pridá sa 2,01 g (10,5 mmol) EDC. Reakčná zmes sa nechá zahriať na laboratórnu teplotu a v miešaní sa pokračuje počas ďalších 47 hodín. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v 200 ml EtOAc. Organická fáza sa premyje 1 x 50 ml vody, 1 x 50 + 2 x 25 ml 0,5 ml KHSO₄, 2 x 25 ml NaHCOj (nasýtený), 1 x 50 ml vody a vysuší. Odparením rozpúšťadla sa získa 5,21 g (86 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

’H-NMR (500 MHz, CDClj): δ 0,8-1,9 (m, 2OH: z toho 1,30 (s, 9H)), 2,35 - 2,6 (m, 2H), 3,74 (bt, IH), 4,10 (m, IH), 4,25 - 4,4 (m, 2H), 4,45 - 4,6 (m, IH, rotaméry), 4,75 -

- 5,0 (m, IH, rotaméry), 5,08 (bd, 2H), 5,15 (s, 2H), 7,15 -

- 7,35 (m, 5H), 7,41 (d, 2H), 7,77 (d, 2H), 8,21 (m, IH).

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

K studenému (teplota ľadového kúpeľa) roztoku 18,8 g plynného HC1 v 195 ml EtOAc sa pridá 4,69 g (7,743 mmol) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) spolu so 40 ml EtOAc. Reakčná zmes sa nechá zahriať na laboratórnu teplotu a mieša sa počas 30 minút. K číremu roztoku sa pridá 140 ml Et₂O a vytvorí sa pritom zrazenina. Reakčná zmes sa ponechá pri laboratórnej teplote počas ďalšej 1 h a 40 minút. Zrazenina sa odfiltruje, rýchle sa premyje 150 ml Et₂O a vysuší sa vo vákuu. Zrazenina sa rozpustí v 50 ml vody a zalkalizuje sa 15 ml 2M NaOH. Alkalická vodná fáza sa extrahuje 1 x x 100 + 1 x 50 ml CH₂C1₂. Spojené organické fázy sa premyjú 1 x 20 ml vody, 1 x 20 ml soľanky a sušia (MgSO₄). Odparením rozpúšťadla sa získa 3,44 g (88 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (500 MHz, CDClj): δ 0,8 - 2,8 (m, 1III), 2,51 (m, IH), 2,67 (m, IH), 3,07 (d, IH), 4,11 (m, IH), 4,18 (M, IH), 4,43 (dd, IH), 4,53 (dd, IH), 4,91 (m, IH), 5,22 (s, 2H), 7,2 - 7,4 (m, 7H), 7,45 (d, 2H), 8,51 (d, 2H).

(iii) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

1,13 g (2,2 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z), 0,9 g (2,6 mmol) benzyl-2-(orto-nitrobenzénsulfonyloxy)acetátu ((2-NO₂)Ph-SO₂-OCH₂-COOBn) (pozri príprava východiskových materiálov), 0,99 g (5,6 mmol) K₂CO₃ a 113 ml CH₃CN sa zmieša a zahrieva pri teplote 60 °C na olejovom kúpeli počas 3 h. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu. Pridá sa EtOAc a zmes sa premyje vodou, organická fáza sa extrahuje IM KHSO₄ a táto vodná fáza sa premyje EtOAc. Okyslená vodná fáza sa zalkalizuje IN NaOH na pH > 8 a extrahuje sa EtOAc. Organická fáza sa premyje vodou, vysuší (Na₂SO₄), fdtruje a odparením vo vákuu sa získa 1,17 g zvyšku, ktorý sa dvakrát podrobí rýchlej chromatografíi pri použití najskôr CH₂Cl₂/MeOH (NHj-nasýtený) 95/5 a potom dietyléterom/MeOH (NHj-nasýtený) 9/1, ako elučného činidla a získa sa 0,525 g (36 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

Alkylácia sa tiež uskutočnila pri použití benzyl-2-(paranitrobenzénsulfonyloxy)acetátu((4-N0₂)Ph-S0₂-OCH₂-COOBn) (pozri príprava východiskových materiálov) pri použití rovnakého postupu ako vyššie, čím sa získa zlúčenina uvedená v názve v 52 % výťažku.

'H-NMR (300 MHz, CDClj): δ 0,85 - 2,15 (m, 11H), 2,48 (m, IH), 2,63 (m, IH), 2,88 (d, IH), 3,24 (d, IH), 3,27 (d, IH), 3,95 (m, IH), 4,05 (m, IH), 4,44 (m, IH), 4,55 (m, IH), 4,91 (m, IH), 5,07 (s, 2H), 5,22 (s, 2H), 7,2 - 7,4 (m, 10H), 7,45 (d, 2H), 7,79 (d, 2H), 8,42 (m, IH).

(iva) HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HC1

BnOOC-CH_;-(R)Cgl-Aze-Pab(Z), 20 mg (0,031 mmol) sa rozpustí v 5 ml etanolu. Pridá sa niekoľko kvapiek chloroformu a 5 % Pd/C a zmes sa hydrogenuje pri atmosférickom tlaku počas 1 h. Po filtrácii a odparení sa produkt íyofilizuje z vody za získania 11 mg (72 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (500 MHz, D₂O): δ 1,0 - 2,0 (m, 11 H), 2,10 (m, IH), 2,44 (m, IH), 2,82 (m, IH), 3,90 (s, 2H), 4,09 (d, IH), 4,4 - 4,55 (m, 2H), 4,66 (s, 2H), 5,08 (m, IH), 7,65 (d, 2H), 7,89 (d, 2H).

^I3C-NMR (75,5 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,3,167,9 a 172,4.

(ivb) HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab

BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) sa rozpustí v EtOH (99 %) a hydrogenuje sa nad 5 % Pd/C pri atmosférickom tlaku počas 5 hodín. Filtráciou katalyzátora cez celit a odparením rozpúšťadla sa získa zlúčenina uvedená v názve v 97 % výťažku.

'H-NMR (500 MHz, CD₃OD, zmes dvoch rotamcrov): hlavný rotamér: δ 1,00 - 1,12 (m, IH), 1,13 - 1,34 (m, 4H), 1,55 - 1,70 (m, 3H), 1,73 - 1,85 (m, 2H), 1,94 - 2,02 (bd, IH), 2,32 - 2,42 (m, IH), 2,54 - 2,64 (m, IH), 2,95 - 3,10 (AB-systém plus d, 3H), 4,18 - 4,25 (bq, IH), 4,28 - 4,32 (bq, IH). 4,43 - 4,60 (AB-systém, 211), 4,80 - 4,85 (dd, IH), 7,48 - 7,54 (d, 2H), 7,66 - 7,71 (d, 2H).

Signály z minoritného rotaméru sa objavujú pri δ 0,95 (m), 1,43 (m), 2,24 (m), 2,84 (d), 3,96 (m), 4,03 (m), 7,57 (bd), 7,78 (bd).

¹³C-NMR (125 MHz, CDjOD): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 168,0, 173,0, 176,3, 179,0.

Príklad 2

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HC1 (i) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

Pripraví sa rovnakým spôsobom ako je opísaný v príklade 1 (ii) spracovaním vytvorenej hydrochloridovej soli so zásadou za získania voľnej zásady.

(ii) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z), 0,19 g (0,38 mmol) a 70 mg (0,43 mmol) benzylakrylátu sa rozpustí v 2 ml izopropanolu. Zmes sa nechá stáť počas 6 dni. Rýchlou chromatografiou pri použití CH₂C1₂/THF 8/2 ako elučného činidla sa získa 0,12 g (48 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

‘H-NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 0,8 - 1,9 (m, 10H), 1,95 (bd, IH), 2,4 - 2,6 (m, 4H), 2,7 - 2,8 (m, 3H): z toho 2,79 (d, IH), 4,13 (m, IH), 4,37 (dd, IH), 4,60 (dd, IH), 4,97 (dd, IH), 5,09 (dd, 2H), 5,22 (s, 2H), 7,25 - 7,4 (m, 10H), 7,47 (d, 2H), 7,83 (d, 2H), 8,61 (bt, IH).

(iii) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HC1

BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z), 0,10 g (0,15 mmol) sa rozpustí v 10 ml etanolu a hydrogenuje nad 5 % Pd/C pri atmosférickom tlaku počas 1 h. Roztok sa prefiltruje, odparí a surový produkt sa čistí pomocou RPLC pri použití CH₃CN/0,lM NH₄OAc (1/4). Výsledný produkt sa suší vymrazcním, spracuje sa s prebytkom kone. HC1 a vysuší vymrazením opäť za získania 31 mg hydrochloridovej soli.

’H-NMR(300 MHz, D₂O) δ 0,8-2,1 (m, 1 IH), 2,38 (m, IH), 2,7 - 2,9 (m, 3H), 3,2 - 3,4 (m, 2H), 3,98 (m, IH), 4,35 -

- 4,55 (m, 2H), 4,60 (s, 2H), 5,04 (dd, IH), 7,59 (d, 2H),

7,83 (d, 2H).

¹³C NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,2, 167,8, 172,3 a 175,5.

Príklad 3

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cgl-Pro-Pab(Z)

Boc-(R)Cgl-Pro-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 2,3 g (6,49 mmol), DMAP, 2,38 g (19,47 mmol) a H-Pab(Z) (pozri príprava východiskových materiálov), 1,84 g (6,49 mmol) sa zmieša v 30 ml acetonitrilu. Zmes sa ochladí na -15 °C a pridá sa EDC, 1,31 g (6,81 mmol). Teplota sa nechá vystúpiť na laboratórnu teplotu a zmes sa mieša cez noc. Po odparení sa zvyšok rozpustí v etylacetáte a 0,3M roztoku KHSO₄. Kyslá vodná fáza sa trikrát extrahuje etylacetátom. Organická fáza sa premyje dvakrát 0,3M roztokom KHSO₄, dvakrát roztokom NaHCO₃ a raz soľankou, vysuší sa (Na₂SO₄), prefiltruje a odparí. Surový produkt sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagéli pri použití etylacetátu ako elučného činidla a získa sa 1,77 g (44 %) produktu.

'H-NMR (500 MHz, CDClj): Ô 0,9 -1,49 (m, 14H), 1,5 -

- 2,1 (m, 9H), 2,37 (bs, IH), 3,53 (q, IH), 3,94 (bs, IH), 4,02 (m, IH), 4,43 (bs, 2H), 4,65 (d, IH), 5,09 (bs, IH),

5,20 (s, 2H), 7,18 - 7,4 (m, 5H), 7,45 (d, 2H), 7,62 (bs, IH), 7,81 (m, 2H).

(ii) H-(R)Cgl-Pro-Pab(Z)

1,45 g (2,34 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) sa rozpustí v 75 ml etylacetátu nasýteného HC1. Zmes sa nechá stáť počas 10 min. pri laboratórnej teplote. Rozpúšťadlo sa odparí a získa sa 1,3 g dihydrochloridovej soli produktu.

‘H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,0 - 1,45 (m, 5H), 1,58 -

- 2,2 (m, 9H), 2,3 - 2,5 (m, IH), 3,75 - 3,90 (m, 2H), 4,25 (d, 2H), 4,5 - 4,66 (m, 3H), 5,49 (s, 2H), 7,45 - 7,7 (m, 7H), 7,87 (d, 2H).

Amín sa získa rozpustením dihydrochloridovej soli v 0,lM roztoku NaOH a extrakciou vodnej fázy trikrát etylacetátom. Organická fáza sa premyje raz soľankou, vysuší (Na₂SO₄), prefiltruje a odparením sa získa 1,19 g (97 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(iii) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z)

0,340 g (0,65 mmol) H-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) sa zmieša s 0,215 g (0,65 mmol) BnOOC-CH₂-OTf (pozri príprava východiskových materiálov), 0,299 g (2,17 mmol) K₂CO₃ v 4 ml dichlometáne a refluxuje sa počas 30 min. Reakčná zmes sa potom mieša cez noc pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa zriedi CH₂C1₂ a organická vrstva sa premyje raz vodou a soľankou, vysuší sa (Na₂SO₄), prefiltruje a odparí. Surový produkt sa čistí rýchlou chromatografiou pri použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH (97/3 potom 95/5) a získa sa 299 mg zmesi dvoch produktov podľa TLC. Zmes sa potom čistí rýchlou chromatografiou pri použití postupného gradienta etylacetát/toluén (9/1, 93/7, 95/5, 100/0) a získa sa 46 mg (9 %) (BnOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z), ktorý sa najskôr eluuje zo stĺpca nasledovaný 133 mg (31 %) požadovaného produktu BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z).

’H-NMR (300 MHz, CDC1₃): (BnOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z): δ 0,9 -1,3 (m, 5H), 1,4 - 2,1 (m, 9H), 2,3 - 2,4 (m, IH), 3,05 (d, IH), 3,20 - 3,37 (AB-systémy centrované pri δ 3,29, 2H), 3,5 - 3,6 (m, 2H), 4,29 - 4,57 (ABX systém centrovaný pri d 4,43, 2H), 4,62 (d, IH), 4,91 (zjavný singlet, 2H), 5,19 (s, 2H), 6,75 (bs, NH), 7,1-7,5 (m, 12H), 8,7 - 8,8 (m, 2H+NH), 9,45 (bs, NH).

'H-NMR (300 MHz, CDClj): (BnOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z): δ 0,68 - 0,9 (m, 2H), 1,0 - 1,3 (m, 3H), 1,43 (bd, IH), 1,55 - 2,0 (m, 7H), 2,05 (bd, IH), 2,3 (bd, IH), 2,3 - 2,4 (m, IH), 3,15 (d, IH), 3,25 - 3,48 (m, 2H), 3,55 -

- 3,79 (AB-systém centrovaný pri d 3,67, 4H), 4,38 - 4,58 (ABX-systém centrovaný pri d 4,48, 2H), 4,68 (d, IH), 4,82 - 4,98 (AB-systém centrovaný pri d 4,91, 4H), 5,19 (s, 2H), 6,66 (bs, NH), 7,1 - 7,7 (m, 17H), 7,75 (d, 2H), 7,80 (t, NH), 9,37 (bs, NH).

¹³C-NMR (75 MHz, CDCI₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 164,7,168,1,171,5, 172,3 a 172,6.

(iv) HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab x 2 HC1

0,133 g (0,20 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) sa zmieša s 0,60 g 5 % Pd/C, 1 ml IM roztoku HC1 a 10 ml etanolu. Zmes sa spracuje pod H₂-atmosférou počas jednej hodiny. Po filtrácii cez hyflo a odparení rozpúšťadla sa získa produkt v 90 % výťažku, 93 mg, vymrazením dvakrát z vody.

'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,0 - 1,45 (m, 5H), 1,5 -

- 2,1 (m, 9H), 2,2 - 2,4 (m, IH), 3,55 - 3,85 (m, 4H: z toho 3,79 (s, 2H), 4,23 (d, IH), 4,33 - 4,57 (m, 3H), 7,44 (d, 2H), 7,69 (d, 2H).

^I3C-NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 166,9,167,2,169,1, 174,5

Príklad 4

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z)

0,406 g (0,782 mmol) H-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) (pozri príklad 3) sa rozpustí v 3 ml etanolu a pridá sa 132 μΐ benzylakrylátu. Reakčná zmes sa mieša počas troch dní pri laboratórnej teplote. Zmes sa odparí a surový produkt sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití postupného gradientu CH₂C1₂: MeOH (95/5 a 90/10) ako elučného činidla za získania 0,399 g (75 %) produktu.

'H-NMR (300 MHz, CDClj): 0,8 - 1,0 (m, IH), 1,0 -

- 1,3 (m, 4H), 1,35 - 2,2 (m, 9H), 2,3 - 2,6 (m, 4H), 2,65 -

- 2,78 (m, IH), 3,05 (d, IH), 3,4 - 3,6 (m, 2H), 4,25 - 4,52 (ABX-systém centrálny pri d 4,40, 2H), 4,64 (dd, IH), 5,05 (s, 2H), 5,20 (s, 2H), 7,2 - 7,38 (m, 10H), 7,43 (d, 2H), 7.78 (d, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 164,7,167,9,171,3,172,7 a 175,4.

(ii) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab x 2 HCI

0,261 g (0,383 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) sa zmieša s 0,075 g 5 % Pd/C, 1 ml IM roztoku HCI a 10 ml etanolu. Zmes sa hydrogenuje pri atmosférickom tlaku počas dvoch hodín. Po odfiltrovaní cez hyflo a odparení rozpúšťadla sa získa produkt, 0,196 g (96 %), vymrazovacím sušením dvakrát z vody.

'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,17 - 1,40 (m, 5H), 1,60

- 1,92 (m, 5H), 1,92 - 2,2 (m, 4H), 2,32 - 2,48 (m, IH), 2,81 (t, 2H), 3,11 - 3,36 (ABX₂-systém centrovaný pri δ 3,24, 2H), 3,63 - 3,90 (m, 2H), 4,25 (d, IH), 4,42 - 4,63 (m, 3H), 7,54 (d, 2H), 7,78 (d, 2H).

^I3C-NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,0, 167,30, 174,6 a 174,7.

Príklad 5 (HOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pab x 2 HCI mg (0,056 mmol) (BnOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) (pozri príklad 3) sa zmieša s 25 mg 5 % Pd/C, 0,7 ml IM roztoku HCI a 7 ml etanolu. Zmes sa hydrogenuje počas jednej hodiny pri atmosférickom tlaku. Katalyzátor sa odfiltruje cez hyflo a rozpúšťadlo sa odparí. Konečný produkt 25 mg (77 %) sa získa sušením vymrazením z vody.

'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,0 - 1,4 (m, 5H), 1,45 -

- 2,2 (m, 9H), 2,25 - 22,45 (m, IH), 3,53 - 3,84 (m, 2H),

3,84 - 4,22 (AB-systém centrovaný pri δ 4,03, 4H), 4,26 (d, IH), 4,35 - 4,6 (m, 3H), 7,53 (d, 2H), 7,77 (d, 2H).

^I3C-NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,1, 167,3, 170,6 a 174,5.

Príklad 6 H-(R)Cgl-Pic-Pab x 2 HCI (i) Boc-(R)Cgl-Pic-Pab(Z)

0,48 g (2,49 mmol) EDC sa za miešania pridá pri teplote -18 °C k roztoku 0,875 g (2,37 mmol) Boc-(R)Cgl-Pic-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 1,22 g (9,97 mmol) DMAP a 0,706 g (2,49 mmol) H-Pab(Z) (pozri príprava východiskových materiálov) v zmesi 30 ml acetonitrilu a 1 ml DMF. Reakčná zmes sa nechá zahriať na laboratórnu teplotu počas dvoch hodín a v miešaní sa pokračuje ďalších 48 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v 50 ml etylacetátu. Roztok sa premyje 15 ml vody, 3 x 15 ml 0,3M KHSO₄, 2 x 15 ml roztoku Na₂CO₃ a vodou. Rozpúšťadlo sa odstráni a získa sa zvyšok, ktorý sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití etylacetátu/heptánu 9:1, ako elučného činidla. Výťažok predstavuje 0,96 g (64 %).

(ii) H-(R)Cgl-Pic-Pab(Z)

Chlorovodík sa prebubláva roztokom 0,56 g (0,88 mmol) Boc-(R)Cgl-Pic-Pab(Z) v 25 ml etylacetátu. Po niekoľkých minútach sa z roztoku vyzrážajú kryštály. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a pridá sa 50 ml etylacetátu. Premytím 2 x 15 ml 2M roztoku hydroxidu sodného a ex trakciou vodnej fázy 25 ml etylacetátu s nasledujúcim sušením (síran sodný) spojených extraktov a odstránením rozpúšťadla vo vákuu sa získa 0,448 g (95 %) požadovaného produktu.

(iii) H-(R)Cgl-Pic-Pab x 2 HCI

Roztok 98 mg (0,18 mmol) H-Cgl-Pic-Pab(Z) v 5 ml 95 % etanolu a 1 ml vody sa mieša v atmosfére vodíka počas 4 hodín v prítomnosti 5 % Pd/C. Zmes sa odfiltruje a pridá sa 0,3 ml IM kyseliny chlorovodíkovej. Etanol sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa suší vymrazením za získania 70 mg (81 %) požadovanej zlúčeniny.

'H-NMR (300 MHz, CD₃OD): δ 1,00 - 1,56 (m, 7H), 1,56 - 1,94 (m, 9H), 2,32 (bd, IH), 3,32 - 3,45 (m, IH), 3,90 (bd, IH), 4,35 (d, IH), 4,50 (s, 2H), 5,10 - 5,20 (m, IH), 7,55 (d, 2H), 7,76 (d, 2H).

^I3C-NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíkyδ 167,2,170,5 a 173,4.

Príklad 7 HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Cgl-Pic-Pab x 2 HCI (i) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cgl-Pic-Pab(Z)

Zmes 350 mg (0,66 mmol) H-(R)Cgl-Pic-Pab(Z) (pozri príklad 6) a 233 mg dibenzylmaleátu v 2,5 ml etanolu sa počas 4 dní udržiava pri laboratórnej teplote. Etanol sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití etylacetátu/heptánu 9:1, ako elučného činidla, čím sa získa 0,108 mg produktu.

(ii) HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Cgl-Pic-Pab x 2 HCI

105 mg (0,13 mmol) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cgl-Pic- -Pab(Z) sa rozpustí v 5 ml 95 % etanolu a 1 ml vody a hydrogenuje sa počas 5 hodín v prítomnosti 5 % Pd/C. Pridá sa 0,3 ml IM kyseliny chlorovodíkovej a zmes sa odfiltruje a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa rozpustí vo vode a vysuší vymrazením za získania 54 mg (73 %) požadovanej substancie.

'H-NMR (300 MHz, CD3OD, zmes dvoch diastereoizomérov 5/4): δ 1,10 - 1,60 (m, 7H), 1,60 - 2,04 (m, 9H), 2,23 - 2,42 (m, IH), 2,93 - 3,15 (m, 2H), 3,30-3,42 (m, IH, čiastočne prekrytý MeOD-pikom), 3,71 - 3,85 (m, IH), 3,98 - 4,10 (m, IH), 4,40 - 4,60 (m, 3H), 5,10 - 5,20 (m, IH), 7,49 - 7,60 (m, 2H), 7,70 - 7,81 (m, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,1, 168,95, 169,6 a 173,1.

MS m/z 516 (M⁺+1)

Príklad 8

H-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HCI (i) Boc-(R)Cha-Aze-Pab(Z)

409 mg (2,13 mmol) EDC sa za miešania pridá pri teplote -18 °C k zmesi 0,72 g (2,03 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OII (pozri príprava východiskových materiálov), 1,04 g (8,53 mmol) DMAP a 604 mg (2,13 mmol) H-Pab(Z) (pozri príprava východiskových materiálov) v 20 ml acetonitrilu. Reakčná zmes sa nechá zahriať na laboratórnu teplotu cez noc a následne sa rozpúšťadlo odstráni vo vákuu. Zvyšok sa rozpustí v 40 ml etylacetátu a organická fáza sa postupne premyje 10 ml vody, 3 x 10 ml 0,3M KHSO₄, 2 x 10 ml Na₂CO₃-NaCl (vod.) a napokon 10 ml soľanky. Vysušením (Na₂SO₄) a odstránením rozpúšťadla vo vákuu sa získa zvyšok, ktorý sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití etylacetátu/metanolu 9:1, ako elučného činidla a získa sa 645 g (51 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z)

Chlorovodík sa prebubláva roztokom 640 mg (1,03 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-Pab(Z) v 25 ml etylacetátu. Po niekoľkých minútach je reakcia podľa TLC kompletná. Na odstránenie prebytku chlorovodíka sa zmes zriedi na 50 ml etylacetátom. Premytie 2 x 15 ml Na₂CO₃ (vod.) nasleduje extrakcia vodnej fázy 15 ml etylacetátu. Spojené organické extrakty sa premyjú vodou a vysušia (Na₂CO₃) a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Získa sa 513 mg (96 %) H-(R)CHA-Aze-Pab(Z).

(iii) H-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HCI mg (0,15 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z) rozpusteného v 5 ml 95 % etanolu a 1 ml vody sa hydrogenuje pri atmosférickom tlaku v prítomnosti 5 % Pd/C počas 4 hodín. Katalyzátor sa odstráni filtráciou a odparením rozpúšťadla vo vákuu sa získa zvyšok, ktorý sa rozpustí v 2 ml vody. Sušením vymrazením sa získa 57 mg (85 %) produktu.

'H-NMR (500 MHz, D₂O, 2 rotaméry, zmes 3:1): δ 1,02 - 1,20 (m, 2H), 1,22 - 1,92 (m, 11H), 2,40 - 2,50 (m, IH), 2,80 - 2,90 (m, IH), 4,25 (bt, IH), 4,40 (dq, IH), 4,53 (dq, IH), 4,65 (s, 2H), 5,05 - 5,10 (m, IH), 7,65 (d, 2H), 7,88 (d, 2H).

Chemické posuny rozoznávaných signálov z minoritného rotaméru: δ 0,57 (m), 0,85 (m), 2,95 (m), 4,06 (dq), 4,17 (dq), 4,63 (s), 5,33 (m), 7,70 (d), 7,93 (d).

^I3C-NMR (75 MHz, CDClj): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,2, 170,4 a 172,8.

Príklad 9

HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HCI (i) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab(Z)

0,119 g (0,52 mmol) bcnzylbrómacctátu sa pridá k zmesi 0,27 g (0,52 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z) (pozri príklad 8) a 0,158 g (1,14 mmol) K₂CO₃ v 5,2 ml acetonitrilu a zahrieva sa pri teplote 60 °C olejovom kúpeli počas 1 h. Rozpúšťadlo sa odstráni a pridá sa etylacetát a voda. Fáza sa oddelí a organická fáza sa premyje soľankou a vysuší (Na₂SO₄). Odparením vo vákuu sa získa 0,344 g zvyšku, ktorý sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití etylacetátu ako elučného činidla a potom pri použití etylacetátu : : tetrahydrofúránu : metanolu nasýteného NH₃(60:5:2), získa sa 0,163 g požadovaného produktu.

'H-NMR (300 MHz, CDClj): δ 0,7 - 1,0 (m, 2H), 1,05 - 2,05 (m, 1 IH), 2,35 - 2,55 (m, IH), 2,55 - 2,75 (m, IH),

3.15 - 3,32 (m, 3H), 3,95 - 4,05 (t, 2H), 4,4 a 4,5 (ABX-systém, 2H), 4,8 - 4,95 (m, IH), 5,05 (s, 2H), 5,2 (s, 2H), 7,2 - 7,5 (m, 12H), 7,7 - 7,85 (d, 2H), 8,3 - 8,45 (t, IH).

ⁱ³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 164,5, 167,8, 170,7, 171,9 a 175,9.

(ii) HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HCI

0,163 g (0,243 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab(Z) sa rozpustí v 5,5 ml etanolu (99,5 %) a 0,7 ml chlorovodíka (IN) a hydrogenuje sa v prítomnosti 0,17 g 5 % Pd/C počas 4 h. Katalyzátor sa odstráni filtráciou a odparením rozpúšťadla s nasledujúcim rozpustením vo vode a vymrazením sa získa 107 mg (85 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (500 MHz, CD₃OD, zmes dvoch rotamérov): hlavný rotamér: δ 0,95 - 1,95 (m, 13H), 2,3 - 2,4 (m, IH),

2,6 - 2,75 (m, IH), 3,5 - 3,75 (m, 2H), 4,05 - 4,15 (m, IH),

4.15 - 4,23 (m, IH), 4,36 - 4,43 (m, IH), 4,43 - 4,5 (m, IH), 4,58 - 4,65 (m, IH), 4,83 - 4,88 (m, IH), 7,5 - 7,6 (m, 2H), 7,73 - 7,82 (m, 2H).

Odštiepené signály z minoritného rotaméru sa objavujú pri δ 2,2 - 2,3 (m), 3,95 - 4,05 (m), 5,1-5,17 (m), 7,6 - 7,67 (m).

^I3C-NMR (75 MHz, CD₃OD): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 168,2, 169,8, 168,9 a 172,3.

Príklad 10 HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HCI (i) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)

Zmes 230 mg (0,443 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pab-(Z) (pozri príklad 8) a 144 mg (0,487 mmol) dibenzylmaleátu v

1,5 ml 95 % etanolu sa mieša pri laboratórnej teplote počas 5 dní. Po odstránení etanolu vo vákuu sa zvyšok podrobí rýchlej chromatografii pri použití etylacetátu/metanolu 95/5 ako elučného činidla a získa sa 54 mg (15 %) produktu.

(ii) HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab mg (0,06 mmol) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z) rozpustených v 5 ml 95 % etanolu a 1 ml vody sa hydrogenuje v prítomnosti 5 % Pd/C počas 4,5 h. Katalyzátor sa odstráni filtráciou a odparením rozpúšťadla vo vákuu sa získa zvyšok, ktorý sa rozpustí v 2 ml vody a 0,2 ml IM kyseliny chlorovodíkovej. Sušením vymrazením sa získa 32 mg (93 %) produktu.

'H-NMR spektrum zlúčeniny uvedenej v názve v D₂O má dve súpravy silne sa prekrývajúcich signálov získaných z dvoch diastereoizomérov. Ďalej sa objavujú v spektre ďalšie odštiepené rezonancie minoritného rotaméru, tvoriace približne 15 %.

'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,03 - 2,00 (m, 13H), 2,32 -

- 2,53 (m, IH), 2,72 - 2,96 (m, IH), 3,06 - 3,28 (m, 2H), 4,10-4,55 (m, 4H), 4,62 (bs, 2H), 5,00 - 5,10 (1, IH), 7,55 -

- 7,68 (m, 2H), 7,80 - 7,94 (m, 2H).

Odštiepené signály z minoritného rotaméru sa objavujú pri δ 0,65 (m), 0,80 (m), 4,00 (m), 5,24 (m), 5,35 (m).

^I3C-NMR (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,2, 169,9, 171,0, 172,3 a 174,1.

Príklad 11

HOOC-CH₂-(R alebo S)CH(COOH)-Cha-Aze-Pab/ax 2 HCI (i) BnOOC-CH₂-(R alebo S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/a

Zmes 2,0 g (3,8491 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z) (pozri príklad 8) a 1,37 g dibenzylmaleátu v 10 ml 95 % etanolu sa mieša pri laboratórnej teplote počas 4 dní. Po odstránení etanolu vo vákuu sa zvyšok podrobí rýchlej chromatografii pri použití etylacetátu/metanolu 98/2 ako elučného činidla a získa sa 1,024 g (32 %) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z). Dva diastereoizoméry sa oddelia pomocou RPLC pri použití (CH₃CN/0,lM NH₄OAc 65/35) ako elučného činidla. Tento diastereoizomér sa eluuje z kolóny ako prvý. Po odstránení acetonitrilu vo vákuu sa vodná fáza extrahuje trikrát etylacetátom. Organická fáza sa raz premyje vodou, vysuší (Na₂SO₄), prefiltruje a odparením sa získa 0,352 g zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme čistého stereoizoméru.

(ii) HOOC-CH₂-(R alebo S)CH(COOH>CHA-Aze-Pab)ax 2 HCI

350 mg (0,43 mmol) BnOOC-CH₂-(R alebo S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/a (diastereoizomér z (I)) rozpusteného v 15 ml 95 % etanolu a 3 ml vody sa hydrogenuje za prítomnosti 5 % Pd/C 4,5 h. Katalyzátor sa odstráni filtráciou a odparením rozpúšťadla vo vákuu sa získa zvyšok, ktorý sa rozpustí v 5 ml vody a 1,0 ml IM kyseliny chlorovodíkovej. Vymrazením sa získa 214 mg (87 %) produktu ako čistého stereoisoméru.

'H-NMR (33 MHz, MeOD, zmes dvoch rotamérov): δ 0,85 - 1,93 (m, 13H), 2,25 - 2,38 (m, IH), 2,60 - 2,75 (m,

IH), 2,88 (dd, 2H), 3,92 (t, IH), 4,15 - 4,25 (m, 2H), 4,30 -

4,43 (m, IH), 4,56 (AB-systém, 2H), 4,76 - 4,86 (m, IH, čiastočne z rozpúšťadlového signálu), 7,59 (d,2H), 7,78 (d, 2H).

Odštiepené signály z minoritného rotaméru sa objavujú pri δ 0,70,2,95, 3,82, 4,00, 5,08 a 7,83.

^I3C-NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 166,9, 168,8,171,7, 172,3 a 173,8.

Príklad 12

HOOC-CH,-(R alebo S)CH(COOHHR)Cha-Aze-Pabd) x 2 HCI (i) BnOOC-CHríR alebo SjCH(COOBn>{R)Cha-Aze-Pab(Z)''b

Zlúčenina uvedená v názve sa získa použitím rovnakého postupu ako je opísaný v príklade 11 pre BnOOC-CH₂(R,S)-CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)). Tento diastereoizomér vystupuje z kolóny ako prvý. Výťažok predstavuje 0,537 g.

(ii) HOOC-CH₂-(R alebo S)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/b x 2 HCI

530 mg (0,65 mmol) BnOOC-CH₂-(R alebo S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/b rozpusteného v 15 ml 95 % etanolu a 3 ml vody sa hydrogenujú v prítomnosti 5 % Pd/C počas 5 h. Katalyzátor sa odfiltruje a odparením rozpúšťadla vo vákuu sa získa zvyšok, ktorý sa rozpustí v 6 ml vody a 1,0 ml IM kyseliny chlorovodíkovej. Sušením vymrazením sa získa 290 mg (78 %) produktu.

’H-NMR (300 MHz, MeOD, zmes dvoch rotamérovýô 0,86 - 1,90 (m, 13H), 2,30 - 2,42 (m, IH), 2,60 - 2,75 (m, IH), 2,75 - 2,85 (m, IH), 2,95 - 3,05 (m, IH), 3,65 - 3,71 (m, IH), 4,00 - 4,10 (m, IH), 4,14 - 4,24 (m, IH), 4,36 - 4,62 (m, 3H), 4,78 - 4,86 (m, IH, čiastočne prekrývaný signálom rozpúšťadla), 7,57 (d, 2H), 7,75 (d, 2H).

Odštiepené signály z minoritného rotaméru sa objavujú pri δ 0,78, 2,92, 3,82, 5,36 a 7,8.

ⁱ³C-NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 166,8,169,0,172,0, 172,4 a 175,2.

Príklad 13

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HCI (i) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab(Z)

Zmes 182 mg (0,35 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z) (pozri príklad 8) a 62,5 mg (0,385 mmol) benzylakrylátu v 1,5 ml 95 % etanolu sa mieša pri laboratórnej teplote počas 4 dní. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití etylacetátu/metanolu 9:1 ako elučného činidla, čím sa získa 200 mg (84 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HCI

195 mg (0,29 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab(Z) rozpusteného v 10 ml 95 % etanolu a 2 ml vody sa hydrogenuje v prítomností 5 % Pd/C počas 4 h. Katalyzátor sa odfiltruje a odparením rozpúšťadla vo vákuu sa získa zvyšok, ktorý sa rozpustí v 2 ml vody a 0,4 ml IM kyseliny chlorovodíkovej. Sušením vymrazením sa získa 130 mg (86 %) produktu.

'H-NMR (300 MHz, CD₃OD): δ 0,98 - 1,27 (m, 2H), 1,30 - 1,90 (m, 1 IH), 2,27 - 2,35 (m, IH), 2,65 - 2,74 (m, IH), 2,77 (t, 2H), 3,32 (t, 2H), 4,10 (t, IH), 4,17 - 4,25 (m, IH), 4,40 - 4,49 (m, IH), 4,55 (AB, 2H), 4,83 - 4,90 (m, IH), 7,58 (d, 2H), 7,77 (d, 2H).

¹³H-NMR (125 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,0, 168,9, 172,4 a 174,6.

Príklad 14

HOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HCI (i) BnOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab(Z)

Zmes 0,212 g (0,408 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z) (pozri príklad 8), 0,124 g (0,89 mmol) K₂CO₃ a 0,128 g (0,449 mmol) BnOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-Br (pozri príprava východiskových materiálov) v 6 ml acetonitrilu sa mieša pri teplote 50 °C počas dvoch hodín. Po odparení rozpúšťadla sa zvyšok rozpustí vo vode a etylacetáte. Vodná vrstva sa extrahuje dvakrát etylacetátom a spojené organické vrstvy sa vysušia (Na₂SO₄), prefiltruje a odparia. Produkt sa čistí rýchlou chromatografiou pri použití postupného gradientu etylacetát/tetrahydrofurán (85/15, 4/1, 7/3) a získa sa 0,190 g (64 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,75 - 2,1 (m, 13H),

2,43 (m, IH), 2,56 (d, IH), 2,79 (m, IH), 3,0 - 3,15 (m, 2H: z toho 3,05 (d, IH)), 3,89-4,18 (m, 5H), 4,8 - 4,98 (m, 2H), 5,15 (s, 2H), 5,18 (s, 2H), 7,2 - 7,47 (m, 12H), 7,72 (t, NH), 7,86 (d, 2H), 8,14 (bs, NH), 8,31 (dd, NH), 9,42 (bs, NH).

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 164,5,168,7, 169,83,171,7, 175,5.

(ii) HOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HCI

0,19 g (0,26 mmol) BnOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)-Cha-Aze-Pab(Z) sa zmieša s 0,075 g Pd/C, 1,5 ml IN roztoku HCI, 3 ml vody a 17 ml etanolu a zmes sa hydrogenuje pri atmosférickom tlaku počas jednej hodiny. Odfiltrovaním katalyzátora, odparením rozpúšťadla s nasledujúcim sušením vymrazením z vody sa získa 144 mg (97 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (300 MHz, D₂O, dva rotaméry 4:1): δ 0,88 - 1,88 (m, 13H), 2,25 - 2,42 (m, IH), 2,63 - 2,89 (m, IH), 3,94 (s, 2H), 3,99 (zjavný dublet, 2H), 4,16 (t, IH), 4,28 (q, IH), 4,41 (q, IH), 4,56 (s, 2H), 4,98 (dd, IH), 7,53 (d, 2H), 7,77 (d, 2H).

Odštiepené signály z minoritného rotaméru sa objavujú pri δ 0,50 (bq), 0,77 (bq), 5,21 (dd), 7,56 (d) a 7,81 (d).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): karbonyly a amidínové uhlíky pri δ 166,8, 166,9, 168,6,172,3 a 173,4.

Odštiepené signály z minoritného rotaméru sa objavujú pri 8 166,6, 169,6 a 172,0.

Príklad 15

H-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HCI (i) Boc-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

0,135 ml (1,1 mmol) pivaloylchloridu sa za miešania pridá pri laboratórnej teplote k zmesi 0,155 ml (1,1 mmol) trietylamínu a 405 mg (1,1 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (pozri príprava východiskových materiálov) v 5 ml DMF. Po troch hodinách sa pridá 340 mg (1,1 mmol) H-Pab(Z) (pozri príprava východiskových materiálov) v 5 ml DMF a mieša sa cez noc. Reakčná zmes sa zriedi vodou a extrahuje etylacetátom/toluénom 1:1. Organická fáza sa vysuší (MgSO₄) a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a získa sa zvyšok, ktorý sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití etylacetátu ako elučného činidla. Výťažok predstavuje 309 mg (49 %).

(ii) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

Chlorovodík sa prebubláva roztokom 1,246 g (2 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-Pab(Z) v 20 ml etylacetátu pri laboratórnej teplote do nasýtenia. Po 30 minútach sa pridá roztok uhličitanu sodného (10 %) a organická fáza sa oddelí a vysuší (K₂CO₃). Sušiace činidlo sa premyje metylénchloridom a rozpúšťadlo sa odparí zo spojených organických fáz a získa sa 1,11 g (100 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(iii) H-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HCI

100 mg (0,19 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) rozpusteného v 15 ml etanolu sa hydrogenuje v prítomnosti 38 mg 10 % Pd/C počas 1,5 h. Zriedením reakčnej zmesi destilovanou vodou a odstránením katalyzátora filtráciou s nasledujúcim odstránením etanolu vo vákuu a sušením vymrazenim sa získa zlúčenina uvedená v názve ako bezfarebný prášok. Peptid sa napokon prevedie na dihydrochlorid rozpustením v kyseline chlorovodíkovej s nasledujúcim sušením vymrazením a získa sa 90 mg (100 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,0 - 2,0 (m, 13H), 2,0 -

- 2,3 (m, 3H), 2,3 - 2,5 (m, IH), 3,6 - 3,7 (m, IH), 3,8 - 3,9 (m, IH), 4,3 - 4,5 (t, IH), 4,5 - 4,6 (m, 3H), 7,4 - 7,6 (m, 3H), 7,6 - 7,9 (m, 2H).

ⁿC-NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,2, 170,0,174,9.

Príklad 16

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HCI (i) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

Zmes 268 mg (0,5 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (pozri príprava východiskových materiálov), 90 μΐ (0,55 mmol) benzylbrómacctátu a 181 mg (1,3 mmol) K₂CO₃ v 2 ml acetonitrilu sa spracováva ultrazvukom pri teplote 40 °C počas 2,5 h. Zmes sa prefiltruje cez hyflo a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a získa sa zvyšok, ktorý sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití etylacetátu ako elučného činidla, za získania 194 mg (57 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HCI

194 mg (0,28 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z) rozpusteného v 10 ml etanolu sa hydrogenuje v prítomnosti 77 mg 10 % Pd na uhlí počas 3 hodín. Reakčná zmes sa zriedi vodou a katalyzátor sa odstráni filtráciou. Odparením etanolu vo vákuu s nasledujúcim sušením vymrazením sa získa biely zvyšok. Pridá sa kyselina chlorovodíková a výsledný roztok sa napokon vysuší vymrazením a získa sa 115 mg (68 %) požadovaného produktu, 'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,0 - 1,2 (m, 2H), 1,2 -

- 1,5 (m, 3H), 1,5 - 2,0 (m, 8H), 2,0 - 2,3 (m, 3H), 2,3 - 2,5 (m, IH), 3,6 - 3,8 (m, IH), 3,8 - 4,0 (m, 3H), 4,4 - 4,7 (m, 4H), 7,5 - 7,7 (d, 2H), 7,7 - 7,9 (d, 2H).

^I3C-NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,1, 168,2, 169,3, 174,6.

Príklad 17

HOOC-CH₂-(Me)(R)Cha-Pro-Pab (i) Boc-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z)

K roztoku 0,8 g (1,67 mmol) Boc-(Me)(R)Cha-Pro-OSu (pozri príprava východiskových materiálov) v 3 ml DMF sa pridá roztok 0,562 g (1,85 mmol) H-Pab(Z) (pozri príprava východiskových materiálov) v 3 ml DMF a pH výsledného roztoku sa upraví na 8-9 N-metylmorfolínom, potom sa roztok počas 2 dní mieša pri laboratórnej teplote. Roztok sa naleje do vody a výsledná zmes sa extrahuje 3 x x 25 ml etylacetátu. Organický roztok sa premyje IM roztokom KHSO₄, 10 % roztokom NaHCO₃, vodou a soľankou, vysuší sa (Na₂SO₄). Odparením rozpúšťadla sa získa 0,65 g (60 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme žltobieleho prášku.

(ii) Me-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

Roztok 0,60 g (0,92 mmol) Boc-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z) v 50 ml EtOH sa nasýti HCI pri teplote 0 °C a roztok sa uloží cez noc v chladničke. Výsledný roztok sa do sucha odparí a zvyšok sa rozpusti v roztoku Na₂CO₃, extra huje 3 x 25 ml etylacetátu. Extrakt sa premyje soľankou a odparením sa získa 0,4 g (79 %) zlúčeniny, vo forme bieleho vločkovitého prášku.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,8 - 1,0 (m, 2H), 1,1 -

- 1,4 (m, 5H), 1,4 - 1,55 (m, IH), 1,6 - 1,9 (m, 10H), 1,9 -

- 2,05 (m, 2H), 2,05 - 2,2 (m, 2H), 2,19 (s, 3H), 2,4 - 2,5 (m, IH), 3,28 (dd, IH), 3,41 (q, IH), 3,62 (m, IH), 4,42 (m, 2H), 4,61 (d, IH), 5,2 (s, 2H), 7,2 - 7,45 (m, 7H), 7,72 (t, IH), 7,79 (d,2H).

(iii) BnOOC-CH₂-(Me)-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

Zmes 0,40 g (0,73 mmol) Me-(R)Cha-Pro-Pab(Z), 0,17 g BnOOC-CH₂Br a 0,20 g (2 ekv. K₂CO₃) (rozdrvený v mažiari) v 15 ml CH₃CN sa mieša pri laboratórnej teplote cez noc. Výsledná zmes sa odparí, pridá sa etylacetát a zmes sa premyje vodou a soľankou, vysuší (Na₂SO₄) a odparí. Surový produkt (0,69 g) sa podrobí rýchlej chromatografii (CH₂Cl₂/MeOH 10/1) a získa sa 0,39 g (77 %) svetložltého, veľmi viskózneho oleja.

HOOC-CH₂-(Me)-(R)Cha-Pro-Pab

K roztoku 0,39 g (0,56 mmol) BnOOC-CH₂-(Me)-(R)Cha-Pro-Pab(Z) v 30 ml EtOH sa pridá 0,1 g Pd/C (10 %) a substancia sa hydrogenuje pri atmosférickom tlaku. Roztok sa prefiltruje a odparí, potom sa zvyšný sirupovitý materiál suší vymrazením a získa sa 0,25 g (95 %) zlúčeniny, vo forme bieleho kryštalického prášku.

'H-NMR (300 MHz, CD₃OD): δ 0,85 - 1,1 (m, 2H), 1,1 - 1,4 (m, 6H), 1,5 - 1,85 (m, 9H), 1,9 - 2,05 (m,3H), 2,05 - 2,15 (m, IH), 2,15 - 2,3 (m, IH), 2,57 (s, 3H), 3,32 (d, IH), 3,55 - 3,75 (m, 2H), 3,95 - 4,1 (m, 2H), 4,35 - 4,5 (m, 3H), 7,55 (d, 2H), 7,72 (d, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CD₃OD): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 168,4, 171,5, 174,7, 175,1.

Príklad 18 HOOC-CH,-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HCI (i) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

Zmes 149 mg (0,28 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (pozri príklad 15) a 66 mg (0,4 mmol) benzylakrylátu v 1,5 ml etanolu sa udržiava pri laboratórnej teplote počas 36 h. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití etylacetátu ako elučného činidla. Získa sa 124 mg (64 %) požadovaného produktu.

(ii) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HCI

124 mg (0,18 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z) rozpusteného v 10 ml etanolu sa hydrogenuje počas 1 h v prítomnosti 55 mg 10 % Pd/C. Katalyzátor sa odstráni filtráciou a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa rozpustí v kyseline chlorovodíkovej a výsledný roztok sa suší vymrazením a získa sa 87 mg (79 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,0 - 2,0 (m, 13H), 2,0 -

- 2,2 (m, 3H), 2,2 - 2,4 (m, IH), 2,7 - 2,8 (t, 2H), 3,2 - 3,3 (m, IH), 3,3 - 3,4 (m, IH), 3,5 - 3,7 (m, IH), 3,7 - 3,9 (m, IH), 4,3 - 4,6 (m, 4H), 7,4 - 7,6 (m, 2H), 7,7 - 7,8 (m, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,0, 168,3 a 174,6. (Dva uhlíky sa prekrývali).

Príklad 19 HOOC-CH₂-CH₂-(Me)(R)Cha-Pro-Pab x 2 HCI (i) BnOOC-CH₂-CH₂-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z)

K roztoku 274 mg (0,5 mmol) Me(R)Cha-Pro-Pab(Z) (pozri príklad 17) v 5 ml EtOH (99 %) sa pridá 97,3 mg (0,6 mmol) benzylakrylátu a reakčná zmes sa mieša pri la boratómej teplote. Po 72 hodinách sa pridá ďalších 16,2 mg (0,1 mmol) benzylakrylátu a v miešaní sa pokračuje počas 24 h. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa podrobí rýchlej chromatografii (CH₂Cl₂/McOH (nasýtený NH₃), 95/5) a získa sa 198 mg (50 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,8 - 2,0 (niekoľko m, 16H), 2,14 (s, 3H), 2,24 - 2,33 (m, 2H), 2,38 - 2,46 (m, IH), 2,67 (t, 2H), 3,32 - 3,40 (m, 2H), 3,71 (m, IH), 4,36 - 4,44 (m, 2H), 4,58 (m, IH), 5,03 (zjavný s, 2H), 5,20 (s, 2H), 7,25 - 7,37 (m, 10H), 7,43 (d, 2H), 7,64 (t, 1H(NH)), 7,81 (d, 2H).

^I3C-NMR (125 MHz, CDC1₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 164,7, 167,9, 171,7, 172,3 a 172,6.

(ii) HOOC-CH₂-CH₂-(Me)(R)Cha-Pro-Pab x 2 HCI

K roztoku 198 mg (0,27 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z) v 10 ml EtOH a 1 ml HCI sa pridá 60 mg 5 % Pd/C (obsahuje 50 % H₂O hmotn.) a zmes sa hydrogenuje pri atmosférickom tlaku počas 4 h. Katalyzátor sa odfiltruje a rozpúšťadlo sa odparí. Zvyšný olej sa rozpustí vo vode a vymrazením sa získa zlúčenina uvedená v názve v kvantitatívnom výťažku.

'H-NMR (500 MHz, D₂O): δ 1,08 - 1,2 (m, 2H), 1,2 -

- 1,42 (m, 4H), 1,68-1,91 (m, 5H), 1,93 - 2,08 (m, 2H), 2,09 - 2,26 (m, 3H), 2,49 (m, IH), 2,95 (m, 2H), 3,03 (s, 3H), 3,60 (zjavný bs, 2H), 3,82 (m, IH), 3,98 (m, IH), 4,53 (m, IH), 4,61 (bs, 2H), 4,64 (m, IH), 7,63 (d, 2H), 7,97 (d, 2H).

^I3C-NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,2, 167,8 a 174,5. Dve piky sa zrejme prekrývajú.

Príklad 20

HOOC-CH₂-(R alebo S)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/a x 2 HCI (i) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

Zmes 0,50 g (0,94 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (pozri príklad 15) a 0,28 g (0,94 mmol) dibenzylmaleátu v 20 ml EtOH sa udržiava pri laboratórnej teplote počas 5 dní. Odparením rozpúšťadla s nasledujúcou rýchlou chromatografiou pri použití CH₂Cl₂/MeOH ako elučného činidla sa získa 0,15 g (19 %) diastereoizomémej zmesi.

'H-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,7 - 2,1 (m, 17H), 2,3 -

- 2,4 (m, IH), 2,5 - 2,8 (m, 2H), 3,2 - 3,7 (m, 4H), 4,46 (d, IH), 4,65 (bd, IH), 4,81 (d, IH), 4,9 - 5,1 (m, 3H), 5,20 (s, 2H), 7,1 - 7,4 (m, 15H), 7,4 - 7,5 (m, 2H), 7,6 - 7,8 (m, 3H).

(ii) HOOC-CH₂-(R alebo S)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/a x 2 HCI

Zmes 0,15 g (0,18 mmol) HOOC-CH₂-(R alebo S)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab(Z) sa rozpustí v 5 ml etanolu a hydrogenuje sa nad 5 % Pd/C pri atmosférickom tlaku počas 1 h a získa sa HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab. Dva diastereoizoméry sa oddelia pomocou RPLC pri použití (CH₃CN/O,1M NH₄OAc 15/85) ako elučného činidla a nasleduje vymrazenie do sucha z HCI. Tento diastereoizomér sa eluuje ako prvý zo stĺpca. Výťažok predstavuje 19 mg (18 %).

'H-NMR (500 MHz, D₂O, zmes dvoch rotamérov) hlavný rotamér: δ 1,0 - 2,0 (m, 15H), 2,15 (m, 2H), 2,44 (m, IH), 3,00 (bd, IH), 3,05 (bd, IH), 3,69 (m, IH), 3,84 (m, IH), 3,97 (bs, IH), 4,5 - 4,7 (m, 3H), 7,62 (d, 2H), 7,87 (d, 2H).

^I3C-NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,2, 168,3, 173,8, 174,6 a 178,2.

Príklad 21

HOOC-CH₂-(R alebo SjCH(COOH>(R)Cha-Pro-Pab/b x 2 HCI

Zlúčenina uvedená v názve sa získa pri použití rovnakého postupu ako je opísaný v príklade 20 pre HOOC-CH₂-(R,S)CH-(COOHO)-(R)Cha-Pro-Pab. Tento diastereizoomér opustí kolónu po prvom diastereoizomére. Výťažok predstavuje 19 mg (18 %).

'H-NMR (500 MHz, D₂O, zmes dvoch rotamérov) hlavný rotamér: δ 1,0 - 2,0 (m, 14H), 2,15 - 2,25 (m, 3H),

2,44 (m, IH), 3,11 (bd, IH), 3,19 (bd, IH), 3,71 (m, IH), 3,92 (m, IH), 4,03 (bs, IH), 4,5 - 4,7 (m, 3H), 7,58 (d, 2H),

7,84 (d, 2H).

Odštiepené signály pochádzajúce z minoritného rotaméru sa objavujú pri δ 7,66 (d) a 7,91 (d).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,3, 168,5 a 174,7. Dva uhlíky sa pravdepodobne prekrývajú.

Príklad 22 HOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab/a x 2 HCI (i) BnOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

0,246 g (0,460 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (pozri príklad 15), 0,140 g (0,01 mmol) K₂CO₃ a 0,145 (0,506 mmol) BnOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-Br (pozri príprava východiskových materiálov) sa zmieša v 6 ml acetonitrilu. Zmes sa mieša pri teplote 50 °C počas 2 h 30 minút. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozdelí medzi vodu a etylacetát. Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje jedenkrát etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa vysušia (Na₂SO₄), prefiltruje a odparením sa získa 0,350 g oleja. Surový produkt sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití postupného gradientu CH₂CÍ₂/MeOH 97/3, 95/5, 92,5/7,5 a získa sa 0,227 g (67 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

¹³C-NMR (75 MHz, CDClj): δ 25,0, 26,0, 26,2, 26,7, 32,4, 34,2, 34,4, 40,8, 40,9, 42,9, 46,7, 50,5, 58,4, 60,2, 67,0, 67,2, 127,5, 127,8, 128,2, 128,3, 128,4, 128,5, 128,6, 134,1, 135,2, 137,0, 142,6, 164,7, 168,9, 169,3, 170,4, 172,2,175,0.

(ii) HOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HCI

0,089 g (0,12 mmol) BnOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z) sa zmieša s 30 mg 5 % Pd/C a rozpustí sa v 10 ml kyseliny octovej. Zmes sa hydrogenuje pri atmosférickom tlaku počas 1,5 hodiny, filtráciou katalyzátora cez hyflo a sušením vymrazením s 1 ml kyseliny chlorovodíkovej sa získa 0,058 g (82 %) požadovaného produktu.

'H-NMR (300 NHz, D₂O): δ 0,9 - 2,2 (m, 16H), 2,25 -

- 2,47 (m, IH), 3,55 - 3,7 (m, IH), 3,7 - 4,1 (m, 5H), 4,42 (t, IH), 4,48 - 4,6 (m, 3H), 7,51 (d, 2H), 7,77 (d, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 166,8, 167,1, 168,2, 173,6 a 174,6.

Príklad 23 EtOOC-CH₂-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab x HOAc (i) EtOOC-CH=CH-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (pozri príklad 15) (275 mg, 0,51 mmol) sa spracuje s K₂CO₃ (141 mg, 1,02 mmol) a BrCH₂CH=CHCOOEt (108 mg, 0,56 mmol) v CHjCN (10 ml) pri teplote 20 °C počas 20 h. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v EtOAc (5 ml/H₂0 (2 ml)). Organická vrstva sa oddelí, vysuší (Na₂SO₄) a zahustením sa získa 397 mg oleja, ktorý sa čistí rýchlou chromatografiou pri použití EtOAc/heptánu 1/4, ako elučného činidla a získa sa 252 mg (77 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,8 - 1,05 (m, 2H), 1,1 -

- 1,45 (m, 3H), 1,3 (t, 3H), 1,5-1,9 (m, 8H), 1,95 - 2,05 (m, IH), 2,1 - 2,15 (m, IH), 2,45 - 2,55 (m, IH), 3,0 a 3,15 (dva d, 2H), 3,35 - 3,45 (m, 2H), 3,55 - 3,65 (m, IH), 4,15 (q, 2H), 4,3 (d, IH), 4,6 - 4,7 (m, 2H), 5,2 (s, 2H), 5,85 (d, IH), 6,75 (dt, IH), 5,3 - 5,4 (m, 4H), 7,45 (d, 2H), 7,85 (d, 2H).

^I3C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 165,7, 171,2 a 175,7 (dva piky sa pravdepodobne prekrývajú).

(ii) EtOOC-CH₂-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab x HOAc

EtOOCCH-CHCH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (250 mg, 0,38 mmol) sa rozpustí v etanole a hydrogenuje sa v prítomnosti 5 % Pd/C približne 2 hodiny. Odstránením katalyzátora filtráciou a odparením rozpúšťadla vo vákuu sa získa po čistení RPLC pri použití (CH₃CN/O,1M NH₄OAc) ako clučného činidla 70 mg (36 %) požadovaného produktu.

'H-NMR (500 MHz, CD₃OD): δ 0,9 - 1,05 (m, 2H),

1,15 - 1,55 (m, 5H), 1,25 (t, 3H), 1,6 - 1,85 (m, 7H), 1,95 -

- 2,6 (m, 8H), 3,55 - 3,65 (m, 2H), 3,8 (m, IH), 4,1 (Q, 2H), 4,45 (m a d, 2H), 4,55 (d, IH), 7,55 a 7,55 a 7,75 (dvad, 4H).

^I3C-NMR (75 MHz, CD3OD): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 168,3, 173,2, 174,6 a 174,9.

Príklad 24

Ph(4-COOH)-SO₂-(R)Cha-Pro-Pab x HCl (i) Ph(4-COOH)-SO₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z) mg (0,32 mmol) kyseliny 4-chlórsulfonylbenzoovej sa pridá pri teplote ľadového kúpeľa k roztoku 156 mg (0,29 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (pozri príklad 15) a 59 mg (0,58 mmol) trietylamínu v 4 ml metylénchloridu. Zmes sa pomaly nechá zahriať na laboratórnu teplotu a po 24 hodinách sa premyje vodou a vysuší (Na₂SO₄). Odstránením rozpúšťadla vo vákuu a čistením zvyšku rýchlou chromatografiou pri použití etylacetátu/metanolu 9:1a potom metylénchloridu/metanolu 3 : 1 ako elučného činidla sa získa 82 mg (39 %) produktu.

(ii) Ph(4-COOH)-SO₂-(R)Cha-Pro-Pab x HCl mg (0,11 mmol) Ph(4-COOH)-SO₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z) sa hydrogenuje nad 5 % Pd/C v EtOH. Katalyzátor sa odfiltruje, rozpúšťadlo sa odparí a surový produkt sa čistí pomocou RPLC pri použití (CH₃CN/O,1M, NH₄OAc 1/4) ako elučného činidla a napokon sa prevedie na hydrochloridovú soľ vymrazením z HCl a takto sa získa 21 mg (29 %) produktu.

'H-NMR (300 MHz, CD3OD, zmes dvoch rotamérov): δ 0,45 - 1,82 (m, 13H), 1,90 - 2,30 (m, 4H), 2,95 - 4,16 (niekoľko m, celkom 3H), 4,35 - 4,68 (m, 3H), 7,54 (d, 2H), 7,74 (d, IH), 7,80 (d, IH), 7,90 - 8,00 (m, 2H), 8,05 -

- 8,22 (m, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CD3OD): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 168,4, 173,4,173,9 a 174,2.

MS m/z 584 (M⁺+ 1)

Príklad 25

H-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HCl (i) Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

3,57 g (18,6 mmol) EDC sa pridá pri -15 °C k zmesi 7,11 g (18,6 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 9,07 g (74,2 mmol) DMAP a 5,26 g (18,6 mmol) H-Pab(Z) (pozri príprava východiskových materiálov) v 200 ml DMF. Teplota sa nechá vystúpiť na 20 °C cez noc. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a pridá sa toluén a voda. Organická fáza sa premyje vodou, IM KHSO4, 10 % Na₂CO₃ a soľankou, vysušením (MgSO₄) a odparením rozpúšťadla vo vákuu sa získa 13,63 g zvyšku, ktorý sa podrobí rýchlej chromatografíi na silikagéli pri použití etylacetátu/tolucnu 2 : 1 ako elučného činidla a získa sa 9,5 g (79 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,7 - 1,0 (m, 2H), 1,0 -

- 2,2 (m, 25H), 2,3 - 2,5 (m, IH), 2,9 - 3,1 (m, IH), 3,8 (d, IH), 4,3 (dd, IH), 4,4 - 4,6 (m, 2H), 5,1 (s, 2H), 5,1 -

- 5,3 (m, 2H), 7,2 - 7,3 (m, 5H), 7,35 (d, 2H), 7,4 - 7,5 (m,lH), 7,75 (d, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 156,8, 164,6, 168,2, 170,0 a 173,4.

(ii) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

Chlorovodík sa prebubláva roztokom 9,5 g (14,7 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) v 100 ml etylacetátu pri laboratórnej teplote do nasýtenia. Po 10 min. sa pridá roztok Na₂CO₃ (10 %) a organická fáza, ktorá sa oddelí sa vysuší (K₂CO₃) a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa zlúčenina uvedená v názve v kvantitatívnom výťažku.

'H-NMR (500 MHz, CD₃OD): δ 0,85 - 1,05 (m, 2H),

1,15 - 1,90 (m, 16H), 2,25 - 2,35 (m, IH), 3,20 - 3,30 (m, IH), 3,80 - 3,90 (d, IH), 3,90 - 4,0 (m, IH), 4,4 - 4,5 (dva d, 2H), 4,7 (br s, 5H), 5,15 (s, 2H), 5,20 (m, IH), 7,25 -

- 7,45 (m, H), 7,85 (d, 2H).

(iii) H-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HCl mg (0,1 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) rozpusteného v zmesi 5 ml etanolu a 0,45 ml IM kyseliny chlorovodíkovej sa hydrogenuje v prítomnosti 33 mg 10 % Pd/C počas

1,5 h. Katalyzátor sa odstráni filtráciou a rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a získa sa zvyšok, ktorý sa podrobí RPLC pri použití 0,1 M NH₄OAc/CH₃CN ako elučného činidla. Čistený peptid sa napokon prevedie na dihydrochloridovú soľ rozpustením v kyseline chlorovodíkovej s nasledujúcim sušením vymrazením. Výťažok predstavuje 17 mg (35 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

‘H-NMR (300 MHz, D₂O, 2 rotaméry, 3:1 zmes): δ 1,0 -

- 2,0 (m, 18H), 2,33 (d, IH), 3,4 - 3,5 (m, IH), 3,8 - 3,9 (m, IH), 4,4 - 4,8 (m, 3H), 5,15 - 5,25 (m, IH), 7,5 - 7,7 (m, 2H), 7,8 - 8,0 (m, 2H).

Odštiepené signály z minoritných rotamérov sa objavujú pri δ: 0,5 - 0,7 (m) a 3,0 - 3,1 (m).

^I3C-NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,3,171,6 a 173,6.

Odštiepené signály z minoritných rotamérov sa objavujú pri δ: 170,6 a 172,4.

Príklad 26

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HCl (i) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

Zmes 742 mg (1,35 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (pozri príklad 25), 230 ml (1,45 mmol) benzylbrómacetátu a 558 mg (4 mmol) K₂CO₃ v 4 ml acetonitrilu sa sonifikuje pri teplote 40 °C počas 40 minút. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa podrobí rýchlej chromatografíi a získa sa 720 mg (77 %) požadovaného produktu.

'H-NMR (500 MHz, CDClj): δ 0,8 - 1,0 (m, 2H), 1,1 -

- 1,9 (m, 16H) 2,1 - 2,4 (br s, 1 alebo 2H), 2,4 (d, IH), 3,0 (m, IH), 3,25 (d, IH), 3,45 (d, IH), 3,55 - 3,65 (m, IH), 3,7 (m, IH), 4,35 (dd, IH), 4,55 (dd, IH), 4,80 (dva d, 2H), 5,2 (s, 2H), 5,3 (m, IH), 7,2 - 7,4 (m, 12H), 7,8 (d, 2H).

¹³C-NMR (125 MHz, CDCI3): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 164,5, 167,9, 170,5, 173,4 a 175,5.

(ii) HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HCl

509 mg (0,73 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z) rozpusteného v 25 ml etanolu sa hydrogenuje v prítomnosti 259 mg 10 % Pd/C počas 4 h. Katalyzátor sa odstráni filtrá ciou a odparením rozpúšťadla vo vákuu sa získa zvyšok, ktorý sa rozpustí v destilovanej vode. Pridá sa kyselina chlorovodíková a roztok sa napokon suší vymrazením a získa sa 281 mg (79 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (500 MHz, D₂O, zmes rotamérov 4 : 1): hlavný rotamér: δ 1,0 - 2,0 (m, 18H), 2,25 - 2,4 (m, IH), 3,4 - 3,5 (m, IH) 3,8 - 3,95 (m, 3H), 4,55 - 4,65 (dva d, 2H), 5,15 (m, IH), 7,55 - 7,75 (m, 2H), 7,8 - 8,0 (m, 2H).

^I3C-NMR (125 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,3, 169,9, 170,3 a 173,5.

Odštiepený signál pre minoritný rotamér sa objavuje pri δ 166,9, 161,2 a 172,0.

Príklad 27

HOOC-CHj-(R alebo S)CH(COOHXR)Cha-Pic-Pab/ax 2 HCI (i) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

Zmes 592 mg (1,1 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (pozri príklad 25) a 332 mg (1,1 mmol) dibenzylmaleátu v 1 ml etanolu sa udržiava pri laboratórnej teplote 1 týždeň. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití metanolu/metylénchloridu ako elučného činidla a získa sa 275 mg (30 %) diastereoizomémej zmesi.

(ii) HOOC-CH₂-(R alebo S)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/a x 2 HCI

275 mg BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pic-Pab(Z) rozpusteného v 20 ml etanolu sa hydrogenuje počas 18 hodín v prítomnosti 75 mg 10 % Pd/C. Zmes sa prefiltruje cez hyflo a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Prídavkom vody a potom vysušením vymrazením sa získa 166 mg HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pic-Pab. Dva diastereoizoméry sa oddelia pomocou RPLC pri použití (CH₃CN/O,1M NH₄OAc 1/4) ako elučného činidla s nasledujúcim vysušením vymrazením z HCI. Tento diastereoizomér eluuje z kolóny ako prvý. Výťažok predstavuje 9 mg.

Odštiepené signály z minoritného rotaméru sa objavujú pri δ 4,0 (t) a 7,7 (d).

Príklad 28

HOOC-CH₂-(R alebo S)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/b x 2 HCI

Zlúčenina uvedená v názve sa získa použitím rovnakého spôsobu aký je opísaný v príklade 27 pre HOOC-CH₂-(R,S)CH-(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab. Tento diastcrcoizomér opustí kolónu po prvom diastereoizomére.

’H-NMR (500 MHz, D₂O, zmes rotamérov): δ 1,0 - 2,0 (m, 18H), 2,25 - 2,4 (m, IH), 3,0 - 3,2 (m, 2H), 3,5 (t, IH),

3,85 (d, IH), 4,15 (s, IH), 4,5 - 4,7 (m, 3H), 5,15 (s, IH), 7,55 (d, 2H), 7,8 (d, 2H).

Odštiepené signály z minoritného rotaméru sa objavujú pri δ 4,35 (s), 7,65 (d), a 7,9 (d).

Príklad 29

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HCI (i) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

Zmes 851 mg (1,55 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (pozri príklad 25) a 269 mg (1,71 mmol) benzylakrylátu v 5 ml etanolu sa udržiava pri laboratórnej teplote počas 40 h. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití metylénchloridu/metanolu ako elučného činidla a získa sa 812 mg (74 %) produktu.

'H-NMR (500 MHz, CDClj): δ 0,8 - 1,0 (m, 2H), 1,1 - 1,9 (m, 16H), 2,3 - 2,5 (m, 3H), 2,6 - 2,8 (m, 2H), 3,0 (m, IH), 3,5 (m, IH), 3,6 - 3,7 (m, IH), 4,3 (dd, IH), 4,6 (dd, IH), 4,95 - 5,05 (dva d, 2H), 5,2 (s, 2H), 5,3 (m, IH), 6,5 -

- 6,9 (br s, IH), 7,0 - 7,1 (m, IH), 7,2 - 7,5 (m, 12H), 7,75 -7,85 (d, 2H), 9,3-9,7 (br s, IH).

(ii) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HCI

780 mg (1 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z) rozpusteného v 25 ml etanolu sa hydrogenuje počas 4 h v prítomnosti 306 mg 15 % Pd/C. Katalyzátor sa odstráni filtráciou a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa rozpustí v kyseline chlorovodíkovej a výsledný roztok sa vysuší vymrazením a získa sa 481 mg (78 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

’H-NMR (500 MHz, D₂O): δ 0,95 - 1,1 (m, 2H), 1,15 -

- 1,9 (m, 16H), 2,2 - 2,3 (m, IH), 2,7 - 2,8 (t, 2H), 3,2 - 3,3 (m, H), 3,4 - 3,5 (m, IH), 3,75 - 3,85 (m, IH), 4,4 - 4,6 (m, 3H), 5,15 (m, IH), 7,5 - 7,6 (m, 2H), 7,8 - 7,9 (m, 2H), 8,6-8,7 (m, IH).

¹³C-NMR (125 MHz, CDjOD): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 170,6, 175,9, 179,5 a 183,5.

Príklad 30 HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab x HOAc (i) EtOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

0,12 g etyloxalylchloridu sa pridá k zmesi 0,42 g (0,77 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (pozri príklad 25) a 0,21 g (1,5 mmol) K₂CO₃ v 10 ml CHjCN pri laboratórnej teplote. Po 2 hodinách sa pridá ďalšie množstvo 0,07 g (0,5 mmol) etyloxalylchloridu. Zmes sa mieša cez noc pri laboratórnej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v CH₂C1₂ a premyje vodou. Odparením a rýchlou chromatografiou (toluén/etylacetát 1 : 2, potom CH₂Cl₂/metanol) sa získa 0,21 g (42 %) produktu.

(ii) HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

0,21 g (0,32 mmol) EtOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) sa rozpustí v 3 ml THF a pridá sa 0,17 g (4,2 mmol) LiOH rozpusteného v 3 ml vody. Zmes sa mieša cez noc pri laboratórnej teplote a potom sa naleje na etylacetát/vodu. Fáza sa oddelí a organická fáza sa extrahuje roztokom K₂CO₃. Vodná fáza sa okysli 0,5M HCI (pH 1) a extrahuje sa CH₂C1₂, vysuší nad Na₂SO₄ a odparením sa získa 80 mg produktu.

(iii) HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab x HOAC

HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) sa hydrogenuje nad 5 % Pd/C v EtOH. Katalyzátor sa odfiltruje a rozpúšťadlo sa odparí. Zvyšok sa podrobí čisteniu pomocou RPLC a získa sa zlúčenina uvedená v názve.

'H-NMR (500 MHz, DMSO-D₆): δ 0,8 - 1,0 (m, 2H), 1,1-1,75 (m, 15H), 1,86- 1,94 (m, IH), 2,13 -2,2 (m, IH), 3,75-3,81 (m, IH), 54,32, 4,44 (AB, 2H), 4,71 - 4,77 (m, IH), 4,98 - 5,02 (m, IH), 7,41 (d, 2H), 7,75 (d, 2H), 8,1 -

- 8,15 (m, IH), 8,22 - 8,27 (m, IH), 9,32 (široký s), 9,90 (široký s). Signál jedného z protónov (3,25) je čiastočne signálom rozpúšťadla.

MS m/z 486 (M⁺ + 1)

Príklad 31

HOOC-CH₂-CO-(R)Cha-Pic-Pab (i) MeOOC-CH₂-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

0,39 g (0,72 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (pozri príklad 25) a 0,9 g (0,8 mmol) monometylmalonátu sa rozpustí v 40 ml CH₂C1₂ a pridá sa 0,16 g (0,8 mmol) DCC. Roztok sa mieša pri laboratórnej teplote cez noc. Vyzrážaný DCU sa odfiltruje a filtrát sa premyje 0,3M KHSO₄ a roztokom KHCO₃ a vysuší sa (Na₂SO₄). Odparením rozpúšťadla a nasledujúcou rýchlou chromatografiou pri pou žití toluénu/etylacetátu (1/3) ako elučného činidla sa získa 0,27 g (58 %) požadovaného produktu.

(ii) MeOOC-CH₂-CO-(R)Cha-Pic-Pab mg (0,14 mmol) MeOOC-CH₂-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) sa rozpustí v 10 ml etanolu a hydrogenuje za prítomnosti 5 % Pd/C počas 5 hodín. Katalyzátor sa odstráni filtráciou a odparením rozpúšťadla sa získa 50 mg (70 %) produktu uvedeného v názve.

'H-NMR (300 MHz, C₃OD): δ 0,85 - 1,1 (m, 2H), 1,1 -

- 1,9 (m, 16H), 2,35 - 2,45 (m, IH), 3,2 - 3,4 (m, 3H), 3,7 (s, 3H), 3,95 - 4,05 (m, IH), 4,4 - 4,55 (m, 3H), 5,15 - 5,25 (m, IH), 7,4 - 7,55 (m, 2H), 7,7 - 7,85 (m, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CD₃OD): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 168,2, 168,7, 170,0, 172,4 a 174,6.

MS m/z 514 (M⁺+ 1) (iii) HOOC-CH,-CO-(R)Cha-Pic-Pab

K roztoku 0,14 g (0,27 mmol) MeOOC-CH₂-CO-(R)Cha-Pic-Pab v 5 ml metanolu sa pridajú 2 ml 0,5M NaOH pri laboratórnej teplote. Po 5 hodinách miešania sa pridá voda a metanol sa odstráni vo vákuu. Vodná fáza sa vysuší vymrazením. Rozpustný materiál sa extrahuje z nerozpustných anorganických solí absolútnym etanolom. Pevná látka, ktorá zostala po odparení etanolu sa suspenduje vo vode a filtráciou sa izoluje 70 mg (52 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

‘H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆): δ 0,8 - 1,0 (m, 2H), 1,0 - 1,9 (m, 16H), 2,15 - 2,30 (m, IH), 2,58, 2,86 (AB, 2H), 3,8 - 3,95 (m, IH), 4,2 - 4,5 (m, 2H), 4,7 - 4,85 (m, IH), 4,95 - 5,05 (m, IH), 7,40 (d, 2H), 7,77 (d, 2H), 8,2 -

- 8,3 (m, IH), 9,3 - 9,4 (m, IH), 9,90 (široký s, 3H). Signál jedného z protónov (3,21) je čiastočne zastretý signálom rozpúšťadla.

¹³C-NMR (75 MHz, DMSO-d₆): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 165,8, 168,8, 169,9, 172,2 a 172,4. MS m/z 500 (M⁺+ 1)

Príklad 32

MeOOC-CH₂-CO-(R)Cha-Pic-Pab Pozri príklad 31 (ii).

Príklad 33

H₂N-CO-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab (i) H₂N-CO-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

Alkylácia 455 mg (0,83 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (pozri príklad 25) 80 mg (0,86 mmol) chlóracetamidu v 3 ml acetonitrilu v prítomnosti 395 mg (2,86 mmol) uhličitanu draselného sa pri spracovaní ultrazvukom pri 40 °C zmení na extrémne suspenznú reakciu. Ani prídavok 230 mg (2,6 mmol) bromidu lítneho neposkytne zlepšenie v reakčnej rýchlosti. Ale prídavok jodidu lítneho a zahrievanie/spracovanie ultrazvukom poskytne malé množstvá produktu podľa TLC. Spracovaním prídavkom vody, extrakciou etylacetátom/toluénom, vysušením organickej fázy (MgSO₄) a odstránením rozpúšťadla vo vákuu sa získa zvyšok, ktorý sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití MeOH/CH₂Cl₂ ako elučného činidla. Získa sa 118 mg (24 %) požadovaného produktu.

(i i) H₂N-CO-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HCI

118 mg (0,2 mmol) H₂N-CO-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z) rozpusteného v 10 ml 95 % etanolu sa hydrogenuje v prítomnosti 143 mg 10 % Pd/C počas 2 h. Zmes sa zriedi destilovanou vodou a kyselinou chlorovodíkovou a prefiltruje sa cez hyflo. Sušením vymrazením sa získa 26 mg (24 %) požadovaného produktu.

'H-NMR (300 MHz, CD₃OD): δ 0,9 - 1,1 (m, 2H), 1,1 -

- 1,9 (m, 16H), 2,3 (d, IH), 3,4 (t, IH), 3,6 (AB-systém, 2H), 3,8 (d, 2H), 4,35 (t, IH), 4,5 (s, 2H), 5,2 (s, IH), 7,55 (d, 2H), 7,8 (d, 2H).

Príklad 34

Boc-(R)Cha-Pic-Pab mg (0,015 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (pozri príklad 25) rozpusteného v 5 ml etanolu sa hydrogenuje v prítomnosti 38 mg 10 % Pd/C počas 4 h. Katalyzátor sa odfiltruje a odparením rozpúšťadla vo vákuu s nasledujúcim rozpustením zvyšku vo vode a sušením vymrazením sa získa 7,6 mg (95 %) produktu.

'H-NMR (300 MHz, CD₃OD): δ 0,9 - 1,1 (m, 2H), 1,1 -

- 1,9 (m, 16H), 2,4 (d, IH), 3,25 (t, IH), 4,0 (d, IH), 4,5 (AB-systém, 2H), 4,5-4,6 (m, IH), 5,25 (s, IH), 7,45 (d, 2H), 7,75 (d, 2H).

Príklad 35

Ac-(R)Cha-Pic-Pab x HCI (i) Ac-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

Acetylchlorid 0,06 g (0,8 mmol) sa pridá k zmesi 0,37 g (0,68 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (pozri príklad 25) a 0,19 g (1,35 mmol) K₂CO₃ v 10 ml CH₃CN pri laboratórnej teplote. Po miešaní pri laboratórnej teplote počas ďalších 30 minút sa rozpúšťadlo odstráni vo vákuu. Zvyšok sa rozpusti v CH₂C1₂ a premyje sa vodou. Odparením a rýchlou chromatografiou pri použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH (99,9/0,1, 99,8/0,2, 99,6/0,4, 99,2/0,8 a 98,4/1,6) sa získa 0,24 g (60 %) produktu.

(ii) Ac-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HCI

Ac-(R)Cha-Pic-Pab(Z) sa hydrogenuje nad 5 % Pd/C pri atmosférickom tlaku. Po odfiltrované katalyzátora a odparení rozpúšťadla sa surový materiál podrobí čisteniu pomocou RPLC pri použití CH₃CN/O,1M NH₄OAc (35/65) ako elučného činidla. Odstránením rozpúšťadla a prebytku NH₄OAc s nasledujúcim sušením vymrazením z IM HCI sa získa zlúčenina uvedená v názve.

'H-NMR (300 MHz, CD₃OD): δ 0,85 - 1,1 (m, 2H), 1,15-2,0 (m, 19H), 2,35-2,47 (m, IH), 3,2 - 3,33 (m, IH), 3,95 - 4,05 (m, IH), 4,46, 4,57 (ABX, 2H), 5,16 - 5,22 (m, IH), 7,51 (d,2H), 7,76 (d, 2H), 8,23 (m, IH). Signál jedného z protónov je úplne prekrytý signálom z rozpúšťadla.

^I3C-NMR (75 MHz, CD₃OD): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 168,3, 172,5, 173,8, 175,1.

MSm/z456(M⁺+ 1)

Príklad 36

Me-SO₂-(R)Cha-Pic-Pab x HCI (i) Me-SO₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

Roztok 48 mg (0,42 mmol) metánsulfonylchloridu v 0,5 ml metylénchloridu sa za miešania pridá pri 0 °C k roztoku 209 mg (0,382 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (pozri príklad 35) a 0,11 ml (0,763 mmol) trietylamínu v 5 ml metylénchloridu. Reakčná zmes sa nechá zahriať na laboratórnu teplotu cez noc. Premytím vodou s nasledujúcim vysušením (Na₂SO₄) a odparením rozpúšťadla vo vákuu sa získa zvyšok, ktorý sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití etylacetátu/metanolu (95/5) ako elučného činidla a získa sa 159 mg (67 %) produktu.

(ii) Me-SO₂-(R)Cha-Pic-Pab x HCI

150 mg (0,24 mmol) Me-SO₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z) rozpusteného v 5 ml 95 % etanolu a 1 ml vody sa hydrogenuje v prítomnosti 5 % Pd/C počas 4 h. Odstránením katalyzáto ra filtráciou, pridaním 0,2 ml IM kyseliny chlorovodíkovej a odparením rozpúšťadla vo vákuu sa získa zvyšok, ktorý sa rozpustí v 2 ml vody a sušením vymrazenim poskytne 116 mg (86 %) produktu.

'H-NMR (500 MHz, CD₃OD): δ 0,90 - 1,10 (m, 2H),

1,15 - 1,85 (m, 15H), 1,90 (bd, 1H), 2,30 (bd, 1H), 2,85 (s, 3H), 3,35 (dt, 1H), 3,90 (bd, 1H), 4,45 (AB-systém, 2H), 4,50-4,55 (m, 1H), 5,13 (dd, 1H), 7,50 (d, 2H), 7,75 (d, 2H).

¹³C-NMR (125 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 166,8, 173,0 a 174,6.

Príklad 37

H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z)

EDC sa za miešania pridá pri teplote -18 °C k roztoku 1,0 g (2,6 mmol) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 1,28 g (10,5 mmol) DMAP, 0,74 g (2,6 mmol) H-Pab-(Z) (pozri príprava východiskových materiálov) v 35 ml DMF. Reakčná zmes sa nechá zahriať na laboratórnu teplotu cez noc a rozpúšťadlo sa následne odstráni vo vákuu. Zvyšok sa rozpustí v CH₂C1₂ a organická vrstva sa postupne premyje 0,3M KHSO₄, roztokom KHCO₃ a soľankou. Vysušením (Na₂SO₄) a odstránením rozpúšťadla sa získa zvyšok, ktorý' sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití heptánu/etylacetátu so 4 % metanolu ako elučného činidla a získa sa 0,74 g (44 %) požadovaného produktu.

(ii) H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z)

0,68 g (1,05 mmol) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z) sa rozpustí v etylacetáte nasýtenom HC1 (plynným). Roztok sa mieša počas 1 h pri laboratórnej teplote. Pridá sa voda a zmes sa zalkalizuje K₂CO₃. Vodná fáza sa extrahuje etylacetátom. Organická fáza sa potom premyje vodou a vysuší (Na₂SO₄). Odparením sa získa 0,5 mg (87 %) požadovaného produktu.

(iii) H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab x 2 HC1 mg (0,19 mmol) H-(R)Cha-betaPic(R,S)-Pab(Z) sa rozpustí v 7 ml etanolu a hydrogenuje sa v prítomnosti 5 % Pd/C počas 4 hodín. Odstránením katalyzátora filtráciou, odparením rozpúšťadla a sušením vymrazenim z IM HC1 sa získa 41 mg (71 %) produktu.

'H-NMR (300 MHz, D₂O, 2 diastereoizoméry 4/5 a rotaméry): δ 0,8 - 2,16 (m), 2,5 - 2,77 (m, 3H), 3,13 - 3,43 (m, 3H), 3,68 - 3,94 (m, 1H), 4,18 - 4,41 (m, 1H), 4,41 - 4,52 (m, 3H), 7,46 - 7,57 (m, 2H), 7,72 - 7,83 (m, 2H).

Príklad 38 HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z)

0,21 g (0,38 mmol) H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z) (pozri príklad 37) sa rozpustí v 2 ml etanolu, pridá sa 0,68 g (0,42 mmol) benzylakrylátu a roztok sa mieša počas 5 dní. Odparením a rýchlou chromatografiou s CH₂Cl₂/MeOH (95/5) ako elučným činidlom sa získa 0,19 g (70 %) požadovaného produktu.

(ii) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab x 2 HC1

170 mg (0,24 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z) sa rozpustí v 10 ml etanolu a hydrogenuje sa v prítomnosti 5 % Pd/C počas 4 hodín. Odstránením katalyzátora filtráciou, odparením rozpúšťadla a sušením vymrazenim z IM HC1 a vody sa získa 103 mg (77 %) produktu.

'H-NMR (300 MHz, D₂O, zmes 2 diastereoizomérov 4/5 a rotamérov): δ 0,92 - 2,03 (m, H), 2,51 - 2,78 (m, 1H), 3,21 -3,52 (m, 1 H), 3,88 - 4,01 (m, 1 H), 4,07 - 4,3 (m, 2H), 4,4 - 4,71 (m, 2H), 7,59 (d, 2H), 7,86 (d, 2H).

^I3C-NMR (300,13 MHz, D₂O, zmes 2 diastereoizomérov 4/5 a rotamérov): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,0,168,0,168,1,175,9, 176,0,176,3,176,4 a 178,2,

Príklad 39

HOOC-CH₂-(R)Cha-Val-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Val-Pab(Z)

1,77 g (9,2 mmol) EDC sa pridá pri teplote -12 °C k zmesi 3,41 g (9,2 mmol) Boc-(R)Cha-Val-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 2,61 g (9,2 mmol) II-Pab(Z) (pozri príprava východiskových materiálov) a 4,5 g (36,8 mmol) DMAF v 50 ml DMF. Reakčná zmes sa nechá zahriať na laboratórnu teplotu cez noc a spracuje sa riedením vodou s nasledujúcou extrakciou toluénom, éterom a etylacetátom. Následným vysušením (MgSO₄) spojených organických extraktov, odstránením rozpúšťadla vo vákuu a rýchlou chromatografiou pri použití CH₂Cl₂/MeOH ako elučného činidla sa získa 2,77 g (47 %) požadovaného produktu.

(ii) H-(R)Cha-Val-Pab(Z)

Chlorovodík sa prebubláva roztokom 2,77 g (4,4 mmol) Boc-(R)Cha-Val-Pab(Z) v 75 ml etylacetátu. Po 15 minútach sa pridá roztok uhličitanu sodného na pH 10 a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom. Vysušením (uhličitan draselný) a odstránením rozpúšťadla vo vákuu sa získa 1,8 g (77 %) H-(R)Cha-Val-Pab(Z).

(iii) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Val-Pab(Z)

Zmes 326 mg (0,61 mmol) H-(R)Cha-Val-Pab(Z), 105 ml (0,67 mmol) benzylbrómacetátu a 252 mg (1,83 mmol) uhličitanu draselného v 2 ml acetonitrilu sa spracuje ultrazvukom počas 2,5 h pri teplote 40 “C. Pridá sa ďalší acetonitril na účely rozpustenia produktu a zmes sa prefiltruje a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití metanolu/metylénchloridu ako elučného činidla. Produkt sa nakoniec kryštaluje z etylacetátu a získa sa 124 mg (30 %) bezfarebných kryštálov.

(iv) HOOC-CH₂-(R)Cha-Val-Pab x 2 HC1

124 mg (0,18 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Val-Pab(Z) v 20 ml etanolu sa hydrogenuje počas 2 hodín v prítomnosti 25 mg 10 % Pd/C. Pridá sa 10 ml THF a v hydrogenácii sa pokračuje počas ďalších 2 hodín pri teplote 50 °C. Zmes sa prefiltruje cez hyflo a filtračný koláč sa premyje zriedenou kyselinou chlorovodíkovou. Organické rozpúšťadlá sa odstránia zo spojených filtrátov vo vákuu. Vymrazenim zvyšného roztoku sa získa 55 mg (50 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (500 MHz, D₂O): δ 0,75 - 1,4 (m, 12H), 1,5 - 1,9 (m, 711), 2,0 - 2,15 (bs. III), 3,45 (AB-systém, 2H),

4,1 (m, 2H), 4,5 (m, 2H), 7,5 (s, 2H), 7,7 (s, 2H), 8,9 (s, 1H).

Príklad 40

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Val-Pab x 2 HC1 (i) H-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z)

Zlúčenina uvedená v názve sa pripraví kondenzáciou Boc-(R)Cha-Val-OH s H-Pab(Z) pri použití pivaloyl kondenzácie ako je opísaná pre Boc-(R)Cha-Pic-OMe (pozri príprava východiskových materiálov). Úplná epimerizácia valínu poskytne Boc-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z). Boe chrániaca skupina sa odstráni rovnakým spôsobom ako je opí saný pre Boc-(R)Cha-Val-Pab(Z) (pozri príklad 39) a získa sa zlúčenina uvedená v názve.

(ii) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z)

Roztok 1,007 g (1,9 mmol) H-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z) a 308 mg (1,9 mmol) benzylakrylátu v 3 ml etanolu sa udržiava pri teplote 40 °C cez noc. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografíou pri použití metanolu/metylénchloridu (10/90) ako elučného činidla a získa sa 1,086 g (82 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(iii) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Val-Pab x 2 HC1

1,086 g (1,6 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z) sa hydrogenuje v 25 ml THF a 14 ml 0,5M kyseliny chlorovodíkovej v prítomnosti 223 mg 10 % Pd/C počas 2 hodiny. Katalyzátor sa odstráni filtráciou cez celit a THF sa odstráni vo vákuu s nasledujúcim sušením vymrazením zvyšného vodného roztoku. Získa sa zvyšok, z ktorého sa približne 300 mg podrobí HPLC pri použití 25 % acetonitrilu v 0,1 M pufru octanu amónneho ako elučného činidla. Izolujú sa dve hlavné frakcie, z ktorých druhá frakcia obsahuje zlúčeninu uvedenú v názve. Izoluje sa 67 mg zlúčeniny uvedenej v názve, ako dihydrochlorid.

‘H-NMR (500 MHz, D₂O): δ 1,0 - 1,15 (m, 12H), 1,2 - 1,4 (m, 7H), 1,65 - 1,9 (m, 7H), 2,15 - 2,25 (m, IH), 2,85 (t, 2H), 3,15 - 3,2 (m, IH), 3,3 - 3,35 (m, IH), 4,15 - 4,2 (m, IH), 4,25 (d, IH), 4,55 - 4,65 (AB-systém, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,85 (d, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,0, 169,8, 173,96 a 174,04.

Príklad 41

H-(R)Hoc-Aze-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Hoc-Aze-Pab(Z)

Pripraví sa rovnakým spôsobom ako je opísaný pre Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (pozri príklad 25) nahradením Boc-(R)Cha-Pic-OH Boc-(R)Hoc-Aze-OH (pozri príprava východiskových materiálov). Surový produkt sa podrobí rýchlej chromatografii (toluén/EtOAc 1/6) a získa sa 0,32 g (37 %) požadovaného produktu.

(ii) H-(R)Hoc-Aze-Pab(Z)

Boc-(R)Hoc-Aze-Pab(Z) sa spracuje rovnakým spôsobom ako je opísaný pre Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) v príklade 25 a získa sa 0,23 g (88 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(iii) H-(R)Hoc-Aze-Pab x 2 HC1 mg (0,037 mmol) H-(R)Hoc-Aze-Pab(Z) sa rozpustí v 3 ml etanolu a hydrogenuje sa v prítomnosti 5 % Pd/C počas 4 hodín pri atmosférickom tlaku. Katalyzátor sa odstráni filtráciou, rozpúšťadlo sa odparí a vymrazením z IM HC1 sa získa 11 mg (63 %) produktu.

'H-NMR (300,13 MHz, D₂O, zmes dvoch rotamérov 3:1): hlavný rotamér: δ 0,9 - 2,1 (m, 15H), 2,4 - 2,6 (mn, IH), 2,7 - 3,0 (m, IH), 4,1 - 4,3 (m, IH), 4,35 - 4,56 (m, IH), 4,65 (s, 2H), 5,0 - 5,11 (m, IH), 7,62 (d, 2H), 7,9 (d, 2H). Signál jedného z protónov je celkom zakrytý H-O-D-signálom.

Príklad 42

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Hoc-Aze-Pab x 2 TFA (i) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Hoc-Aze-Pab(Z)

0,067 g (0,41 mmol) benzylakrylátu sa pridá k roztoku 0,2 g (0,37 mmol) H-(R)Hoc-Aze-Pab(Z) (pozri príklad 41) v 2 ml etanolu (95 %) pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa ponechá 5 dní pri laboratórnej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí rýchlou chro matografíou (CH₂Cl₂/MeOH 96/4) a získa sa 0,16 g (62 %) požadovaného produktu.

(ii) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Hoc-Aze-Pab x 2 TFA

160 mg (0,23 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Hoc-Aze-Pab(Z) sa rozpustí v 10 ml etanolu a podrobí hydrogenácii pri atmosférickom tlaku v prítomnosti 5 % Pd na uhlí počas 3 hodín. Odstránením katalyzátora filtráciou, odparením rozpúšťadla a vymrazením do sucha z vody a TFA sa získa 120 mg (87 %) produktu.

*H-NMR (300,13 MHz, D₂O, 2 rotaméry 3:1): hlavný rotamér: δ 0,9 - 1,9 (m, 13H), 1,94 - 2,16 (m, 2H), 2,38 -

- 2,55 (m, IH), 2,7 - 2,97 (m, 3H), 3,2 - 3,44 (m, 2H), 4,16 (m, IH), 4,35 - 4,58 (m, 2H), 4,65 (s, 2H), 5,0 - 5,12 (m, IH), 7,63 (d, 2H), 7,87 (d, 2H).

¹³C-NMR (300,13 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,3, 168,7, 172,5 a 176,6.

Príklad 43 HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Hoc-Pro-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Hoc-Pro-Pab(Z)

Pripraví sa z Boc-(R)Hoc-Pro-OH (pozri príprava východiskových materiálov) rovnakým spôsobom ako je opísaný pre Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) v príklade 25. Rýchlou chromatografíou pri použití etylacetátu ako elučného činidla sa získa 0,886 g (58 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

’H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,7 - 0,95 (m, 2H), 0,95

- 2,1 (m, 27H: z toho 1,2 (s, 9H), 2,1 - 2,4 (m, IH), 3,3 -

- 3,5 (m, IH), 3,65 - 3,95 (m, IH), 4,0 - 4,2 (m, IH), 4,2 -

- 4,45 (m, 2H), 4,45 - 4,6 (d, IH), 5,15 (zjavný bs, 2H), 5,2

- 5,3 (d, IH), 7,1 - 7,4 (m, 7H), 7,65 (m, IH), 7,7 - 7,8 (d, 2H), 9,4 (bs, IH).

^,3C-NMR (75 MHz, CDCI₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 156,3, 164,6, 168,1, 171,4 a 172,4.

(ii) H-(R)Hoc-Pro-Pab(Z) ml etylacetátu nasýteného chlorovodíkom sa pridá k 0,82 g (1,266 mmol) Boc-(R)Hoc-Pro-Pab(Z) pri 0 °C, teplota sa nechá vystúpiť na laboratórnu teplotu. Reakcia nie je po 1,5 h úplná a preto sa chlorovodík prebubláva reakčnou zmesou počas 5 minút. Rozpúšťadlo sa odparí a pridá sa etylacetát a nasýtený uhličitan sodný a fáza sa oddelí. Organická fáza sa premyje soľankou a vysuší (Na₂SO₄) a odparením rozpúšťadla vo vákuu sa získa zlúčenina uvedená v názve v podstate v kvantitatívnom výťažku.

’H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,75 - 0,95 (m, 2H), 0,95 - 2,4 (m, 17H), 3,3 - 3,55 (m, 2H) 3,55 - 3,7 (m, IH),

4,25 - 4,45 (m, 2H), 4,5 - 4,6 (m, IH), 5,15 (s, 2H), 7,15 -

- 7,35 (m, 5H), 7,35 - 7,45 (m, 2H), 7,6 - 7,7 (m, IH), 7,7 -

- 7,85 (d, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 164,5, 167,8, 171,4 a 175,3.

(iii) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Hoc-Pro-Pab(Z)

K 0,15 g (0,5 mmol) benzylakrylátu v 1,5 ml EtOH (99 %) sa pridá 0,273 g (0,498 mmol) H-(R)Hoc-Pro-Pab(Z) a zmes sa mieša pri laboratórnej teplote počas 10 dní. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití etylacetátu ako elučného činidla a získa sa 0,103 g (25 %) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Hoc-Pro-Pab(Z).

’H-NMR (300 MHz, CDClj): δ 0,75 - 2,05 (m, 18H), 2,3 - 2,45 (m, IH), 2,45 - 2,8 (m, 3H), 3,15 - 3,45 (m, 3H),

3,5 - 3,65 (m, IH), 4,3 - 4,5 (m, 2H), 4,55 - 4,7 (m, IH), 4,8 (s, IH), 4,9 - 5,1 (m, 3H), 5,2 (s, 2H), 7,1 - 7,2 (m, IH), 7,2 -

- 7,4 (m, 13H), 7,4 - 7,45 (d, 2H), 7,6 - 7,8 (m, 3H).

(iv) HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Hoc-Pro-Pab x 2 HCI

103 mg (0,122 mmol) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Hoc-Pro-Pab(Z) rozpusteného v 4 ml etanolu (99,5 %) a 0,3 ml chloroformu sa hydrogenuje v prítomnosti 111 mg 5 % Pd/C počas 2 h. Katalyzátor sa odfiltruje a rozpúšťadlo sa odparí s nasledujúcim rozpustením vo vode a vymrazením sa prejaví neúplná hydrogenácia. V hydrogenácii sa pokračuje v prítomnosti etanolu, IN HCI a 5 % Pd/C počas 5 hodín.

Odfiltrovaním katalyzátora a odparením rozpúšťadla s nasledujúcim rozpustením vo vode a sušením vymrazením sa získa zlúčenina uvedená v názve.

1H-NMR (500 MHz, CDjOD, zmes 2 diastereoizomérov): δ 0,8 - 1,0 (m, 2H), 1,1 - 1,4 (m, 6H), 1,6 - 1,8 (m, 5H), 1,9 - 2,15 (m, 5H), 2,25 - 2,35 (m,lH), 2,9 - 3,2 (m, 2H), 3,5 - 3,65 (m, 1H), 3,7 - 3,9 (2M, plne 1H), 4,15 -

- 4,44 (2m, plne 1H), 4,4 - 4,6 (m, 4H), 7,5 - 7,6 (m, 2H), 7,7 - 7,85 (m, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,9, 168,2, 168,3, 172,8, 173,6, 174,3 a 174,4. Signály z dvoch diastereoizomérov sa čiastočne prekrývajú.

Príklad 44

HOOC-CH₂-(R)Hoc-Pic-Pab x 2 HCI (i) Boc-(R)Hoc-Pic-Pab(Z)

Pripraví sa z Boc-(R)Hoc-Pic-OH (pozri príprava východiskových materiálov) a H-Pab(Z) (pozri príprava východiskových materiálov) rovnakým spôsobom ako je opísaný pre Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (pozri príklad 25). Rýchlou chromatografiou pri použití etylacetátu ako elučného činidla sa získa 1,3 g (78 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

’H-NMR (300 MHz, CDClj): δ 0,75 - 0,95 (m, 2H), 0,95 - 2,0 (m, 31H) ztoho 1,3 (s, 9H), 2,4 - 2,5 (m, 1H), 3,0 -

- 3,1 (m, 1H), 3,8 (m, 1H), 4,2 - 4,45 (m, 2H), 4,45 - 4,55 (m, 2H), 5,15 (zjavný bs, 3H), 5,25 - 5,3 (m, 1H), 7,0 (bs, 1 H), 7,15 - 7,5 (m, 7H), 7,7 - 7,85 (d, 2H), 9,45 (bs, 1H).

’³C-NMR (75 MHz, CDCI₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 156,6, 164,7, 168,1, 170,0 a 173,0.

(ii) H-(R)Hoc-Pic-Pab(Z)

100 ml etylacetátu nasýteného chlorovodíkom sa pridá k 1,3 g (1,96 mmol) Boc-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) teplote pri 0 °C. Teplota sa nechá vystúpiť na laboratórnu teplotu. Rozpúšťadlo sa odparí a pridá sa etylacetát a nasýtený uhličitan sodný a fáza sa oddelí. Organická fáza sa premyje soľankou a vysuší (Na₂SO₄) a rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu. Získa sa 0,85 g (77,5 %) produktu.

’H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,75 - 0,95 (m, 2H), 1,05 - 2,3 (m, 25H), 3,0 - 3,15 (m, 1H), 3,6 - 3,75 (m, 2H),

4,25 - 4,4 (m, 2H), 5,15 (zjavný bs, 3H), 7,05 - 7,2 (d, 2H),

7,2 - 7,35 (m, 4H), 7,35 - 7,4 (d, 1H), 7,6 - 7,8 (d, 2H).

’³C-NMR (75 MHz, CDCI₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 164,5, 167,9, 170,8 a 175,7.

(iii) BnOOC-CH₂-(R)Hoc-Pic-Pab(Z)

0,171 g (0,748 mmol) benzylbrómacetátu sa pridá k zmesi 0,4 g (0,712 mmol) H-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) a 0,217 g (1,57 mmol) K₂CO₃ v 7 ml acetonitrilu. Zmes sa zahreje na teplotu 60 °C na olejovom kúpeli na 1 h. Rozpúšťadlo sa odstráni a pridá sa etylacetát a voda. Fáza sa oddelí a organická fáza sa premyje soľankou a vysuší (Na₂SO₄). Odparením vo vákuu sa získa 0,626 g zvyšku, ktorý sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití etylacetátu ako elučného činidla a získajú sa dva produkty. Prvá zlúčenina sa eluuje zo stĺpca a je ňou (BnOOC-CH₂)₂-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) (0,28

g) a druhá eluovaná zlúčenina je zlúčenina uvedená v názve (0,27 g).

BnOOC-CH₂-(R)Hoc-Pic-Pab(Z):

’H-NMR (300 MHz, CDClj): δ 0,7 - 0,95 (m, 2H), 1,0

- 1,75 (m, 18H), 2,3 - 2,5 (m, 1 alebo 2H), 2,9 - 3,05 (m, 1H), 3,2 - 3,3 (m, 1H), 3,35 - 3,5 (m, 2H), 3,6 - 3,7 (m, 1H), 4,35, 4,55 (ABX-systém, 2H), 4,75 (s, 2H, 5,15 (zjavný s, 3H), 5,5 - 5,3 (m, 1H), 7,1 - 7,45 (m, 12H), 7,7 -

- 7,8 (d, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 164,6, 167,9, 170,5, 173,4 a 175,0.

(iv) HOOC-CH₂-(R)Hoc-Pic-Pab x 2 HCI

259 mg (0,365 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Hoc-Píc-Pab(Z) rozpusteného v 7,8 ml etanolu (99,5 %) a 1,2 ml chlorovodíka (IN) sa hydrogenuje za prítomnosti 280 mg 5 % Pd/C počas 4 h. Odstránením katalyzátora filtráciou a odparením rozpúšťadla s nasledujúcim rozpustením vo vode a sušením vymrazením sa získa 170 mg (83 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

’H-NMR, (300 MHz, CDClj): δ 0,4 - 1,85 (m, 20H),

1,85 - 2,2 (m, 1H), 2,9 - 3,2 (m, 1H), 3,4 - 3,9 (m, 3H), 4,05 -

- 4,3 (m, 2H), 4,3 - 5,05 (m, 2H), 7,1 - 7,4 (m, 2H), 7,4 -

- 7,7 (m, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,8, 168,6, 169,6 a 172,3.

Príklad 45 (HOOC-CH₂)₂-(R)Hoc-Pic-Pab x 2 HCI (i) (BnOOC-CH₂)₂-(R)Hoc-Pic-Pab(Z)

Zlúčenina uvedená v názve sa získa alkyláciou H-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) ako je opísané v príklade 44.

’H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,7 - 0,95 (m,2H), 0,95 -1,95 (m, 18H), 2,35 - 2,5 (m, 1H), 2,9 - 3,05 (m, 1H), 3,5 -

- 3,85 (m, 6H), 4,35 - 4,55 (m, 2H), 4,9 (2s, 4H), 5,2 (s, 2H), 5,25 - 5,35 (m, 1H), 7,1 - 7,45 (m, 16H), 7,5 - 7,65 (m, 1H), 7,7-7,85 (d, 2H).

’³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 164,7, 167,9, 170,5, 172,0 a 172,4.

(ii) (HOOC-CH₂)₂-(R)Hoc-Pic-Pab x 2 HCI

153 mg (0,178 mmol) (BnOOC-CH₂)₂-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) rozpusteného v 4,5 ml etanolu (99,5 %) a 0,5 ml chlorovodíka (IN) sa hydrogenuje v prítomnosti 150 mg 5 % Pd/C počas 3,5 h. Odstránením katalyzátora filtráciou a odparením rozpúšťadla sa získa 109 mg (99 %) (HOOC-CH₂)₂-(R)Hoc-Pic-Pab dihydrochloridu. Tento surový materiál (80 % čistota) sa podrobí čisteniu pomocou RPLC pri použití CH₃CN/0,lM NH₄OAc, 1:4 ako elučného činidla. Odstránením rozpúšťadla a prebytku NH₄OAc s nasledujúcim sušením vymrazením z IM HCI sa získa zlúčenina uvedená v názve.

’H-NMR (500 MHz, D₂O, zmes dvoch rotamérov): hlavný rotamér: δ 0,95 - 2,15 (m. 20H), 2,25 - 2,35 (m, 1H), 3,45 - 3,55 (m, 1H), 3,95 - 4,25 (m, 5H), 4,6 - 4,65 (m, 2H), 4,92 - 5,01 (m, 1H), 5,15 - 5,20 (m, 1H), 7,58 - 7,63 (d, 2H), 7,84 - 7,89 (d, 2H).

Odštiepené signály pochádzajúce z minoritného rotaméru sa objavujú pri: δ 0,7 - 0,85 (m), 2,35 - 3,45 (m), 3,05 -

- 3,15 (m), 4,47 - 4,55 (m), 4,55 - 4,6 (m), 4,65 - 4,7 (m), 7,63 - 7,67 (d), 7,89 - 7,95 (d).

’³C-NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 168,20, 169,70, 170,20 a 172,71.

Príklad 46

HOOC-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab x 2 HCI (i) Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z)

K roztoku 570 mg (1,5 mmol) Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 425 mg (1,5 mmol) H-Pab(Z) (pozri príprava východiskových materiálov) a 733 mg (6 mmol) DMAP v 25 ml CH3CN/DMF (1,5/1) sa pridá 310 mg (1,62 mmol) EDC a zmes sa mieša počas 23 hodín pri laboratórnej teplote. Väčšina rozpúšťadla sa odparí a ku zvyšku sa pridá 50 ml vody. Vodná fáza sa extrahuje 1 x 75 ml a 2 x 50 ml EtOAc. Spojené organické fázy sa premyjú 1 x 20 + 1 x 10 ml IM KHSO₄, 1 x 15 ml NaHCOj (vod.), 3 x 15 ml vody, 1 x x 15 ml soľanky a vysuší sa (MgSO₄). Filtráciou a odparením rozpúšťadla sa získa 670 mg oleja, ktorý sa čistí rýchlou chromatografiou pri použití EtOAc ako elučného činidla a získa sa 529 mg (55 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 1,26 (s, 9H), 1,53 -

- 1,88 (m, 3H), 2,1 - 2,31 (m, 3H), 2,52 (q, IH), 3,58 - 3,77 (m, 4H), 4,31 (d, IH), 4,35 a 4,47 (ABX-systém, 2H), 4,65 (dd, 1 H), 5,19 (s, 2H), 7,1 - 7,37 (m, 10H), 7,42 (d, 2H), 7,81 (d, 2H), 8,0 (t, 1H(NH)).

ⁿC-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 154,6, 164,6, 168,1, 171,1 a 171,3.

(ii) H-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z)

529 mg (0,81 mmol) Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) sa rozpustí v 15 ml EtOH/HCl (plynný, nasýtený) pri laboratórnej teplote a mieša sa počas 3 h. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v 70 ml CH₂CI₂. Organická fáza sa premyje 1 x 10 ml 2M NaOH, 1 x 10 ml vody, 1 x 10 ml soľanky a vysuší sa (MgSO₄). Filtráciou a odparením rozpúšťadla sa získa 403 mg (90 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bieleho prášku.

'H-NMR (300 MHz, CDClj): δ 1,44 - 1,57 (m, IH), 1,62 - 1,86 (m, 2H), 1,96 - 2,35 (m, 3H), 2,45 (q, IH), 3,05 -

- 3,35 (m, 4H), 3,83 (bd, IH), 4,25 - 4,45 (m, 2H), 4,53 (m, IH), 5,19 (s, 2H), 7,16 - 7,37 (m, 10H), 7,42 (d, 2H), 7,66 (t, 1H,(NH)), 7,77 (d, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 164,4, 167,9, 171,1 a 173,0.

(iii) BnOOC-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z)

Zmes 200 mg (0,36 mmol) H-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z), 105 mg (0,46 mmol) Br-CH₂-COOBn a 125 mg (0,90 mmol) K₂CO₃ v 10 ml CH₃CN sa zahrieva pri teplote 50 °C počas 1,5 h. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v 70 ml EtOAc. Organická fáza sa premyje 10 ml vody a vysuší (MgSO₄). Filtráciou a odparením sa získa 260 mg oleja. Surový materiál sa čistí rýchlou chromatografiou pri použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH (nasýtený NH₃) (95/5 potom 9/1) a získa sa 182 mg (72 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bielej pevnej látky.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 1,43 - 1,82 (m, 3H), 1,96-2,13 (m, IH), 2,14 - 2,22 (m, IH), 2,26 - 2,43 (m, 2H), 3,02 - 3,14 (m, 2H), 3,24 - 3,51 (m, 4H), 3,83 (d, IH), 4,29 - 4,46 (ABX-systém centrovaný pri 4,37, 2H), 4,58 (dd, IH), 4,97 - 5,1 (AB-systém centrovaný pri 5,03, 2H), 5,19 (s, 2H), 7,16 - 7,38 (m, 15H), 7,43 (d, 2H), 7,5 -7,8 (m, 3H, jeden NH).

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 164,5, 167,9, 171,15, 171,2 a 172,7.

(iv) HOOC-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab x 2 HC1

0,18 g (0,26 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) sa zmieša s 0,075 g 5 % Pd/C, 1,0 ml IN roztokom HC1, 1 ml vody a 10 ml etanolu a zmes sa hydrogenuje pri atmosférickom tlaku počas jednej hodiny. Filtráciou katalyzátora cez hyflo, odparením rozpúšťadla s nasledujúcim vymrazením do sucha dvakrát z vody sa získa 129 mg surového produktu. Surový produkt sa čistí pomocou RPLC pri použití postupného gradientu 0,lM NH₄OAc/CH₃CN 4/1, potom 3/1. Odparením s nasledujúcim sušením vymrazením z vody a IN roztoku HC1 sa získa 70 mg (50 %) čistého produktu.

'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,42 - 1,60 (m, IH), 1,65 -

- 1,83 (m, IH), 1,83 - 1,98 (m, IH), 2,03 - 2,20 (m, 2H), 2,63 (t, 2H), 3,28 - 3,40 (m, IH), 3,55 - 3,78 (m, 2H), 3,81 -

- 3,96 (AB-systém centrovaný pri δ 3,88, 2H), 4,06 - 4,19 (m, IH), 4,37 - 4,61 (AB-systém centrovaný pri δ 4,49, 2H), 4,48 (dd, IH), 4,70 (d, IH), 7,35 - 7,58 (m, 7H), 7,74 (d, 2H).

^I3C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,02, 167,2, 169,3 a 174,4.

Príklad 47

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z)

K roztoku 190 mg (0,34 mmol) H-(R)Pro-(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) (pozri príklad 46) v 7 ml EtOH (99 %) sa pridá 114 mg (0,70 mmol) benzylakrylátu a reakčná zmes sa mieša pri laboratórnej teplote počas 24 h. Odparením rozpúšťadla s nasledujúcou rýchlou chromatografiou pri použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH (nasýtený NH₃) (95/5 potom 9/1) sa získa 202 mg (83 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (300 MHz, CDClj): δ 1,5 - 1,71 (m, 2H), 1,74 - 1,9 (m, IH), 1,9 - 2,05 (m, IH), 2,2 - 2,64 (m, 5H), 2,69 - 2,82 (m, 2H), 2,84 - 2,96 (m, IH), 3,18 - 3,48 (m, 4H), 4,28 - 4,44 (m, 2H), 4,61 (m, IH), 4,48 - 5,08 (AB-systém centrovaný pri 5,03, 2H), 5,19 (s, 2H), 7,15 -

- 7,37 (m, 15H), 7,44 (d, 2H), 7,75 - 7,85 (m, 3H, jeden NH).

^I3C-NMR (75 MHz, CDClj): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 164,6,168,0, 171,2, 172,5 a 172,9.

(ii) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab x 2 HC1

0,20 g (0,28 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) sa zmieša s 0,075 g 5 % Pd/C, 1,0 ml IN roztoku HC1,1 ml vody a 10 ml etanolu a zmes sa hydrogenuje pri atmosférickom tlaku počas jednej hodiny. Filtráciou katalyzátora cez hyflo, odparením rozpúšťadla s nasledujúcim vymrazením dosucha dvakrát z vody sa získa 125 mg (79 %) zlúčeniny uvedenej vo názve.

‘H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,44 (m, IH), 1,65 - 1,9 (m, 2H), 2,0 - 2,2 (m, 2H), 2,62 (q, 2H), 2,83 (t, 2H), 3,27 -

- 3,4 (m, IH), 3,4 - 3,8 (m, 4H), 4,0 - 4,15 (m, IH), 4,35 -

- 4,6 (m, 3H), 4,68 (d, IH), 7,35 - 7,6 (m, 7H), 7,77 (d, 2H).

^UC-NMR (75 MHz, CDClj): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 166,2, 167,1, 174,1 a 174,2.

Príklad 48

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Tic-Pro-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Tic-Pro-Pab(Z)

Pripraví sa rovnakým spôsobom ako je opísaný pre Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (pozri príklad 25) pri použití Boc-(R)Tic-Pro-OH (pozri príprava východiskových materiálov) namiesto Boc-(R)Cha-Pic-OH. Rýchlou chromatografiou pri použití heptánu/EtOAc (4/1), potom EtOAc ako elučných činidiel sa získa 425 mg (37 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (500 MHz, CDClj): δ 1,35 (s, 9H), 1,95 -

- 2,15 (m, 3H), 2,4 (m, IH), 2,8 (m, IH), 3,3 (m, IH), 3,55 (m, 2H), 4,25 - 4,4 (dva m, 2H), 4,55 - 4,7 (dva m, 2H), 7,15-7,5 (m, 10H), 7,85 (d, 2H).

¹³H-NMR (75,0 MHz, CDClj): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 164,6, 171,5 a 171,6 (dva piky sa pravdepodobne prekrývajú).

(ii) H-(R)Tic-Pro-Pab(Z)

Boc-(R)Tic-Pro-Pab(Z) (379 mg, 0,59 mmol) sa rozpustí v EtOAc nasýtenom HCl(plyn) a mieša sa pri laboratórnej teplote. Odparením rozpúšťadla sa získa 251 mg (79 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bieleho prášku.

‘H-NMR (500 MHz, CDClj); δ 1,65 - 2,15 (dva m, 7H), 2,45 (m, IH), 2,75 (m, IH), 2,9 (m, IH), 3,0 (m, IH),

3.25 (m, IH), 3,55 (m, IH), 3,85 (m, IH), 4,35 - 4,55 (m, 2H), 4,75 (d, IH), 4,9 (s, IH), 5,25 (s, 2H), 6,8 - 7,45 (niekoľko m, 8H), 7,5 a 7,85 (dva d, 4H).

¹³C-NMR (75,0 MHz, CDClj): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 164,5, 171,3 a 172,7 (dva piky sa pravdepodobne prekrývajú).

(iii) BnO₂C-CH₂-CH₂-(R)Tic-Pro-Pab(Z)

H-(R)Tic-Pro-Pab(Z) (140 mg, 0,26 mmol) sa spracuje s benzylakrylátom (63 mg, 0,39 mmol) v EtOH (1,3 ml) pri teplote 20 °C počas 48 h. Odparením rozpúšťadla a rýchlou chromatografiou pri použití (50 % EtOAc/heptánu potom 10 % MeOH/EtOAc) ako elučného činidla sa získa 133 mg (73 %) požadovaného produktu, vo forme bielej pevnej látky.

'H-NMR (500 MHz, CDClj): δ 1,75 - 2,0 (dva m, 4H),

2.25 (m, IH), 1,4 - 1,65 (m, 3H), 2,7 - 2,95 (dva m, 4H), 3,05 - 3,2 (m, 2H), 3,9 (m, IH), 4,45 (m, 2H), 4,65 (m, IH), 5,1 (dva d, 2H), 5,25 (s, 2H), 6,85 - 7,45 (niekoľko m, 12H), 7,5 a 7,9 (dva d, 4H).

^I3C-NMR (75,0 MHz, CDC1₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 171,5, 171,9 a 172,1 (dva piky sa pravdepodobne prekrývajú).

(iv) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Tic-Pro-Pab x 2 HCI

BnO₂C-CH₂-CH₂-(R)Tic-Pro-Pab(Z) (125 mg, 0,17 mmol) sa hydrogenuje nad 5 % Pd/C pri použití EtOH/HCl ako rozpúšťadla. Filtráciou katalyzátora a sušením vymrazením sa získa 73 mg (77 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bieleho prášku.

'H-NMR (500 MHz, D₂O): δ 2,1 - 2,35 (dva m, 3H),

2,6 (m, IH), 2,95 - 3,1 (m, 2H), 3,25 - 3,5 (dva m, 2H), 3,65 (m, 3H), 4,65 (s, 2H), 4,75 (m, IH), 5,85 (s, IH), 7,15 - 7,6 (tri m, 4H), 7,6 a 7,85 (dva d, 4H).

^I3C-NMR (75,0 MHz, CDClj): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 166,9, 167,1 a 174,3 (dva piky sa pravdepodobne prekrývajú).

Príklad 49

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pig x 2 HCI (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pig(Z)₂

K zmesi 0,623 g (1,83 mmol) Boc-(R)Cgl-Aze-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 0,816 g (1,92 mmol) H-Pig(Z)₂ (pozri príprava východiskových materiálov) a 0,89 g (7,3 mmol) DMAP v 10 ml dichlórmetánu sa pridá 0,368 g (1,92 mmol) EDC a zmes sa mieša cez noc. Zmes sa zriedi a premyje sa 0,3M KHSO₄ a jedenkrát soľankou. Organická vrstva sa vysuší (Na₂SO₄), prefiltruje a odparením sa získa 1,4 g surového produktu. Čistením rýchlou chromatografiou pri použití etylacetátu ako elučného činidla sa získa 0,3 g (22 %) čistého produktu.

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pig(Z)₂

0,3 g (0,4 mmol) Boc-(R)Cgl-Aze-Pig(Z) sa zmieša s 10 ml dichlórmetánu a 2,5 ml kyseliny trifluóroctovej. Zmes sa mieša počas jeden a pol hodiny. Po odparení roz púšťadla sa zvyšok rozpustí v dichlórmetáne a premyje sa dvakrát 0,2M roztokom NaOH. Spojené vodné vrstvy sa extrahujú ešte raz dichlórmetánom. Spojené organické vrstvy sa vysušia (Na₂SO₄), prefiltrujú a odparením sa získa 0,24 g (93 %) produktu.

'H-NMR (300 MHz, CDClj, 339 K): δ 0,9 - 1,9 (m, 15H), 1,94 (bd, IH), 2,37 - 2,52 (m, IH), 2,65 - 2,8 (m, IH), 2,9 - 3,08 (m, 3H), 3,20 (t, 2H), 4,05 - 4,28 (m, 4H), 4,86 (dd, IH), 5,16 (s, 4H), 7,2 - 7,42 (m, 10H), 7,98 (bs, NH).

(iii) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pig(Z)₂

0,231 g (0,36 mmol) sa rozpustí v 2 ml etanolu a 61 μΙ (0,40 mmol) benzylakrylátu. Reakčná zmes sa mieša počas päť dní pri laboratórnej teplote. Zmes sa odparí a surový produkt sa čisti rýchlou chromatografiou pri použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH (95/5, 90/10) ako elučného činidla a získa sa 0,218 g (75 %) čistého produktu.

'H-NMR (300 MHz, CDClj, 335 K): δ 0,93 (bq, IH), 1,02 - 1,85 (m, I4H), 1,94 (bd, IH), 2,33 - 2,5 (m, 3H), 2,58 - 2,77 (m, 2H), 2,79 - 3,02 (m, 4H), 3,17 (t, 2H), 4,0 -

- 4,25 (m, 4H), 4,86 (dd, IH), 5,11 (s, 2H), 5,12 (s, 4H), 7,2 -

- 7,4 (m, 15H), 8,03 (bs, NH), 10,35 (bs.NH).

(iv) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pig x 2 HCI

0,218 g (0,27 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pig(Z)₂ sa zmieša s 0,10 g 5 % Pd/C, 1 ml IM roztoku HCI, 1 ml vody a 10 ml etanolu a zmes sa hydrogenuje pri atmosférickom tlaku počas jednej hodiny. Filtráciou katalyzátora cez hyflo, odparením rozpúšťadla s nasledujúcim vymrazením do sucha dvakrát z vody sa získa 134 mg (95 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,0 - 1,4 (m, 7H), 1,55 -

- 2,05 (m, 9H), 2,22 - 2,34 (m, IH), 2,61 - 2,76 (m, IH), 2,88 (t, 2H), 3,08 (bt, 2H), 3,19 (d, 2H), 3,34 (m, 2H), 3,83 (bd, 2H), 3,95 (d, IH), 4,29 - 4,49 (m, 2H), 4,90 (dd, IH).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 156,4, 167,6, 172,1 a 174,7.

Príklad 50

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig x 2 HCI (i) Boc-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)₂

0,568 g (2,96 mmol) EDC sa pridá pri teplote -15 °C k zmesi 1 g (2,82 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 1,197 g (2,82 mmol) H-Pig(Z)₂(pozri príprava východiskových materiálov) a 1,38 g (11,28 mmol) DMAP v acetonitrile. Teplota sa nechá vystúpiť na laboratórnu teplotu cez noc. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a pridá sa metylénchlorid a IM KHSO₄. Fáza sa oddelí a organická fáza sa premyje nasýteným NaHCOj, vodou a soľankou, vysuší sa (Na₂SO₄) a odparením rozpúšťadla sa získa 2,033 g zvyšku, ktorý sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití etylacetátu ako elučného činidla. Získajú sa dva produkty: 720 mg (34 %) zlúčeniny uvedenej v názve, ktorá sa eluuje z kolóny ako prvá nasledovaná 775 mg (44 %) BnOOC-(R)Cgl-Pro-Pig(Z) vzniknutého stratou jednej chrániacej Z skupiny.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃) niektoré signály, predovšetkým v piperidínovom kruhu sú selektívne širšie vďaka intramolekulárnemu výmennému procesu. Toto je významné najmä pre 2- a 6-CH₂ skupiny piperidínového kruhu, ktoré majú široký pik v rozmedzí od 3,5 do 4,5 ppm.

δ 0,85-2,1 (m, 19H), 2,3 - 2,45 (m, IH), 2,8 - 3,2 (m, 4H), 3,45 - 3,55 (m, IH), 3,55 - 3,65 (m, minoritný rotamér), 3,8 - 3,93 (m, IH), 3,97 - 4,1 (m, IH), 4,52 - 4,62 (d, IH), 5,1 (zjavný bs, 5H), 7,12 - 7,41 (m, 10H).

^,3C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 155,2, 156,3, 171,0 a 172,1.

(ii) H-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)₂

720 mg (0,946 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)₂ sa rozpustí v 35 ml TFA/CH₂C1₂ 1/4 a mieša sa počas 30 minút. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a pridá sa etylacetát a 2M NaOH. Organická vrstva sa premyje vodou a soľankou, vysuší (Na₂SO₄) a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, získa sa zlúčenina uvedená v názve v kvantitatívnom výťažku.

’H-NMR (300 MHz, CDC1₃): niektoré signály v piperidínovom kruhu sú selektívne širšie vďaka intramolekulárnemu výmennému procesu. Toto je výrazné najmä pre 2- a 6-CH₂ skupiny piperidínového kruhu, ktoré majú široké rozmedzie pikov od 3,5 do 4,5 ppm.

δ 0,8 - 2,15 (m, 19H). 2,22 - 2,4 (m, IH), 2,75 - 2.98 (m, 2H), 2,98 - 3,18 (m, 2H), 3,18 - 3,35 (m, IH), 3,35 - 3,5 (kvárt., IH), 3,5 - 3,7 (m, IH), 4,42 - 4,58 (d, IH), 5,1 (s, 4H), 7,1-7,5 (m, 10H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 154,96, 171,31,174,82.

(iii) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)₂

0,298 g (0,999 mmol) BnOOC-CH-OTf (pozri príprava východiskových materiálov) sa pridá k zmesi 0,64 g (0,999 mmol) H-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)₂ a 0,531 g (2,996 mmol) K₂CO₃ v 6,4 ml acetonitrilu a zahrieva sa pod refluxom. Po 1 h 20 min. sa zmes premyje vodou, vysuší (Na₂SO₄) a rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a získa sa 729 mg zvyšku, ktorý sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití etylacetátu ako elučného činidla. Získajú sa tak dva produkty: 120 mg (BnOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)₂, ktorý sa eluuje z kolóny ako prvý a 142 mg (18 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

’H-NMR (300 MHz, CDC1₃): niektoré signály v piperidínovom kruhu sú selektívne širšie vďaka intramolekulárnemu výmennému procesu. Toto je výrazné predovšetkým pre 2- a 6-CH₂ skupiny piperidínového kruhu, ktoré majú široké rozmedzie pikov od 3,5 do 4,6 ppm.

δ 0,94 - 2,27 (m, 19H), 2,28 - 2,43 (m, IH), 2,8 - 2,98 (m, 2H), 2,98 - 3,06 (m, IH), 3,06 - 3,15 (d, IH), 3,15 -

- 3,25 (m, IH), 3,3 - 3,5 (m, 4H), 4,5 - 4,61 (d, IH), 5,1 (s, 6H), 7,1 - 7,6 (m, 15H), 10,52 (bs, IH).

(iv) HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig x 2 HC1

142 mg (0,176 mmol) BOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)₂sa hydrogenuje v prítomnosti 0,88 ml IM kyseliny chlorovodíkovej, 10 ml etanolu (99,5 %) a 180 mg 5 % Pd/C počas 2 h. Odstránením katalyzátora filtráciou cez hyflo a millipore filter s nasledujúcim odparením rozpúšťadla vo vákuu a sušením vymrazením sa získa 95 mg HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig x 2 HC1. Tento surový materiál (79 % čistota) sa čistí pomocou RPLC pri použití CH₃CN/O,1M NH₄OAc 15/85 ako elučným činidlom. Odstránením rozpúšťadla a prebytku NH₄OAc sušením vymrazením, prevedením na soľ kyseliny chlorovodíkovej rozpustením v IM kyseliny chlorovodíkovej s nasledujúcim vymrazením sa získa zlúčenina uvedená v názve.

’H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,1 -1,35 (m, 6H), 1,63 -

- 2,14 (m, 13H), 2,26 - 2,36 (m, IH), 3,01 - 3,23 (m, 4H), 3,49 - 3,62 (kvárt., 2H), 3,62 - 3,77 (m, 2H), 3,77 - 3,88 (zjavný d, 2H), 4,18 - 4,32 (d, IH), 4,37 - 4,5 (m, IH).

Príklad 51

H-(R)Cha-Aze-Pig x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Azc-Pig(Z)₂

K zmesi 86 mg (0,243 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 100 mg (0,236 mmol) H-Pig(Z)₂ (pozri príprava východiskových materiálov) a 115 mg (0,944 mmol) DMAP v 5 ml CH₃CN sa pri intenzívnom miešaní pridá 50 mg (0,260 mmol) EDC a reakčná zmes sa mieša počas 20 h pri laboratórnej teplote. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v 70 ml EtOAc a organická fáza sa premyje 3 x 5 ml IM KHSO₄, 1 x 5 ml NaHCO₃, 3 x 5 ml H₂O, 1 x 5 ml soľanky a vysuší (MgSO₄). Filtráciou a odparením rozpúšťadla sa získa 141 mg oleja. Surový produkt sa čistí rýchlou chromatografiou (36 g SiO₂) pri použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH (97/3 potom 95/5) a získa sa 43 mg (24 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) H-(R)Cha-Aze-Pig(Z)₂

Chlorovodík sa prebubláva zmesou 43 mg (0,0565 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-Pig(Z)₂ v 10 ml etylacetátu počas 5 minút. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a pridá sa etylacetát a 0,lM roztok NaOH. Fázy sa oddelia a organická fáza sa premyje vodou a soľankou a vysuší (Na₂SO₄). Rozpúšťadlo sa odparí a získa sa 38 mg, ktoré sa podrobia rýchlej chromatografii pri použití 10 % metanolu (nasýteného NH₃) v etylacetáte ako elučného činidla a získa sa 28 mg požadovaného produktu.

’H-NMR (300 MHz, CDC1₃): niektoré signály v piperidínovom kruhu sú selektívne širšie vďaka intramolekulárnemu výmennému procesu. Toto je výrazné predovšetkým pre 2- a 6-CH₂ skupiny piperidínového kruhu, ktoré majú široké rozmedzie pika od 3,5 do 4,5 ppm.

δ 0,75 - 1,85 (m, 18H), 2,35 - 2,53 (m, IH), 2,62 - 2,78 (m, IH), 2,8 - 3,0 (m, 2H), 3,0 - 3,28 (m, 2H), 3,28 - 3,37 (m, IH), 3,97 - 4,18 (m, 2H), 4,8 - 4,9 (m, IH), 5,1 (s, 4H),

7,2 - 7,5 (m, 9H), 8,05 - 8,15 (m, IH).

(iii) H-(R)Cha-Aze-Pig x 2 HC1 mg (0,042 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pig(Z)₂ rozpusteného v 2 ml etanolu (99,5 %) a 0,13 ml chlorovodíka (IN) sa hydrogenuje v prítomnosti 35 mg 5 % Pd/C počas 4 h. Katalyzátor sa odfiltruje a vo vákuu sa odparí rozpúšťadlo, potom sa rozpustením vo vode a sušením vymrazením získa 12 mg (60 %) H-(R)Cha-Aze-Pig dihydrochloridu.

’H-NMR (500 MHz, 300 K, CD₃OD): niektoré signály v piperidínovom kruhu sú selektívne širšie vďaka intramolekulárnemu výmennému procesu. Toto je výrazné predovšetkým pre 2- a 6-CH₂ skupiny piperidínového kruhu, ktoré majú široké rozmedzie pikov od 3,7 do 4,5 ppm.

δ 0,75 - 2,1 (m, 18H), 2,2 - 2,35 (m, IH), 2,62 - 2,75 (m, IH), 3,0 - 3,12 (t, 2H), 3,12 - 3,23 (d, 2H), 3,85 - 3,95 (d, 2H), 3,95 - 4,0 (dd, IH), 4,15 - 4,23 (m, IH), 4,35 - 4,42 (m, 1 H), 4,72-4,78 (m, IH).

^I3C-NMR (75 MHz, CDjOD): guanidín: δ 157,6: karbonylové uhlíky: δ 170,0 a 172,6.

Príklad 52

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pac x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pac(Z)

K roztoku 0,47 g (1,4 mmol) Boc-(R)Cgl-Aze-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 0,40 g (1,4 mmol) H-Pac(Z) (pozri príprava východiskových materiálov) a 0,67 g (5,5 mmol) DMAP v 5 ml acetonitrilu sa pridá 0,27 g EDC pri teplote 0 °C. Zmes sa mieša pri laboratórnej teplote cez noc a potom sa zriedi etylacetátom. Roztok sa premyje KHSO₄ (vod.) a NaHCO₃ (vod.), vysuší (Na₂SO₄),

SK 283150 Β6 prefiltruje a odparí. Rýchlou chromatografiou pri použití etylacetátu a potom etylacetátu/metanolu 98/2 ako elučného činidla sa získa 0,25 g (30 %) zlúčeniny uvedenej v názve ako zmesi 1,4-cis- a trans-produktov vzhľadom na Pac časť molekuly.

'H-NMR (500 MHz, CDClj): δ 0,8 - 2,0 (m, 29H: z toho 1,45 (s. 9H)), 2,15 a 2,34 (m, 1H, izoméry), 2,45 - 2,7 (m, 2H), 3,0-3,4 (m, 2H),3,85 (m, 1H), 4,14 (m, 1 H), 4,33 (m, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,98 (m, 1H), 5,04 (s, 2H), 7,25 - 7,45 (m, 5H), 7,8 - 7,9 (m, 1H), 9,2 - 9,5 (m, 1H).

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pac(Z) x HCI

Boc-(R)Cgl-Aze-Pac(Z), 0,25 g (0,41 mmol) sa rozpusti v 100 ml etylacetátu a ochladí sa na ľadovom kúpeli. HCI (plyn) sa prebubláva 5 min. a rozpúšťadlo sa odparí.

'H-NMR (300 MHz, MeOD): δ 0,8 - 2,0 (m, 22H), 2,05 - 2,35 (m, 1H), 2,4 - 2,55 (m, 1H), 2,6 - 2,75 (m, 1H), 3,00 (d, 1H), 3,05 a 3,37 (multiplety, 0,6 H a 0,4H, izoméry), 3,15 - 3,3 (m, 1H), 4,05 - 4,2 (m, 2H), 4,88 (dd, 1 H), 5,11 (s, 2H), 7,2 - 7,45 (m, 5H), 8,0 - 8,15 (m, 1 H).

(iii) BnO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pac(Z)

Zmes 0,17 g (0,33 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pac(Z) x HCI, 0,11 g (0,37 mmol) benzyltrifluóroxyacetátu a 0,14 g (1,0 mmol) K₂CO₃ v 5 ml acetonitrilu sa mieša pri laboratórnej teplote 3 dni. Surový produkt sa spracuje rýchlou chromatografiou s EtOAc/CH₂Cl₂/MeOH 95/20/5. Výťažok 70 mg (32 %).

'H-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,85 - 2,3 (m, 20H), 2,48 (m, 1H), 2,63 (m, 1H), 2,87 (m, 1H), 3,05 - 3,25 (m, 1H), 3,25 - 3,35 (m, 2H), 3,38 (dd, 1H), 3,95 (m, 1H), 4,08 (m, 1H), 4,88 (m, 1H), 5,1-5,2 (m, 4H), 5,9 - 6,3 (m, 1H), 7,25 - 7,5 (m, 10H), 8,00 a 8,08 (široké triplety, 1H, izoméry).

(iv) HO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pac(Z)

BnO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pac(Z) 70 mg (0,11 mmol) sa rozpustí v 5 ml etanolu a pridá sa 5 % Pd/C a 0,1 ml kone. HCI. Zmes sa hydrogenuje pri atmosférickom tlaku počas 1 h. Po filtrácii a odparení sa produkt čistí preparatívnou RPLC pri použití 0,1 M NH₄OAc/CH₃CN 4/1 ako elučným činidlom. Po zmene soli na hydrochlorid a sušení vymrazením sa získa zlúčenina uvedená v názve ako 45/55 zmes 1,4-cis- a trans-izomérov vzhľadom na Pac časť molekuly. Výťažok 40 mg (74 %).

'H-NMR (500 MHz, D₂O): δ 1,1 - 2,1 (m, 20H), 2,32 (m, 1H), 2,52 (m, 1H), 2,63 (m, 1H), 2,72 (m, 1H), 3,1 - 3,3 (m, 1H), 3,40 (m, 1H), 3,8 - 3,95 (m, 2H), 4,04 (d, 1H), 4,39 (m, 1 H), 4,93 (m, 1H).

^bC-NMR (125 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 167,7, 172,0, 174,9 a 175,2.

Príklad 53

H-(R)-Cha-Pro-Pac x 2 HCI (i) Boc-(R)Cha-Pro-Pac(Z)

211 mg (1,1 mmol) EDC sa za miešania pridá pri teplote 0 °C k roztoku 0,4 g (1,1 mmol) H-Pac(Z) x 2 HCI (pozri príprava východiskových materiálov), 0,4 g (1,1 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (pozri príprava východiskových materiálov) a 0,55 g DMAP v 7 ml acetonitrilu. Reakčná zmes sa mieša pri teplote 0 °C počas 1 h a pri laboratórnej teplote počas 2 h. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa zriedi etylacetátom a vodou. Organické fázy sa premyjú kyselinou octovou, vodou a roztokom hydrogenuhličitanu sodného a vysuší sa (MgSO₄). Odstránením rozpúšťadla vo vákuu sa získa zvyšok, ktorý sa čistí rýchlou chromatografiou pri použití etylacetátu ako elučné ho činidla a získa sa 196 mg (27 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) H-(R)Cha-Pro-Pac(Z)

Chlorovodík sa prebubláva roztokom 196 mg Boc-(R)Cha-Pro-Pac(Z) v 25 ml ety lacetátu. Po 10 minútach sa reakčná zmes zriedi metylénchloridom a pridá sa roztok hydroxidu sodného. Vodná fáza sa extrahuje niekoľkokrát metylénchloridom a spojené organické fázy sa vysušia (K₂CO₃) a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a získa sa 86 mg (52 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(iii) H-(R)Cha-Pro-Pac x 2 HCI

Zlúčenina uvedená v názve sa pripraví hydrogenáciou H-(R)Cha-Pro-Pac(Z) v etanole v prítomnosti 10 % Pd/C.

'H-NMR (300 MHz, D₂0: ca: 1 : 1 zmes 1,4-cis- a 1,4-trans izomérov v Pac časti molekuly): δ 1,15 - 1,3 (q), 1,6 -

- 1,85 (m), 1,9 - 2,0 (m), 2,0 - 2,1 (d), 2,1 - 2,15 (m), 2,15 -

- 2,2 (m), 2,65 - 2,7 (m), 2,7 - 2,8 (m), 2,95 - 3,0 (d), 3,15 -

- 3,2 (d), 5,4 (s), 7,45 - 7,55 (m).

Príklad 54

H-(R)Cgl-Ile-Pab x 2 HCI (i) Boc-(R)Cgl-Ile-Pab(Z)

K zmesi 1,33 g (3,6 mmol) Boc-(R)Cgl-Ile-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 1,12 g (3,9 mmol) H-Pab(Z) (pozri príprava východiskových materiálov), 1,76 g (14,4 mmol) DMAP v 50 ml CHjCN/DMF (1/1) sa za miešania pridá 0,75 g (3,9 mmol) EDC pri teplote +5 °C. Reakčná zmes sa nechá zahriať na laboratórnu teplotu a ponechá sa takto počas 60 h. CH₃CN sa odstráni odparením a zvyšok sa naleje do 100 ml vody (vytvorí sa žltá zrazenina). Zmes sa extrahuje 2 x 50 ml EtOAc a spojené organické fázy sa premyjú 2 x 30 ml NaHCO₃ (nasýtený), 2 x 50 ml 0,2M HCI, 1 x 50 ml soľanky a vysuší sa (MgSO₄). Odparením a nasledujúcou rýchlou chromatografiou pri použití CH₂C1₂/THF (85/15) ako elučného činidla sa získa 510 mg (24 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) H-(R)Cgl-Ile-Pab(Z)

530 mg Boc-(R)Cgl-Ile-Pab(Z) sa rozpustí v 14 ml CH₂C1₂/TFA (2,5/1) a mieša sa počas 2 h pri laboratórnej teplote. Odparením rozpúšťadla s nasledujúcou rýchlou chromatografiou pri použití CH₂Cl₂/MeOH (nasýtený NH₃) ako elučným činidlom sa získa zlúčenina uvedená v názve.

(iii) H-(R)Cgl-Ile-Pab x 2 HCI mg (0,14 mmol) H-(R)Cgl-Ile-Pab(Z) sa hydrogenuje nad 10 % Pd/C v 5 ml EtOH, ktorý obsahuje prebytok HCI (g) a získa sa dihydrochlorid, pri atmosférickom tlaku počas 6 h. Prídavkom 2 g aktívneho uhlia a 20 ml EtOH s nasledujúcou filtráciou cez celit, odparením rozpúšťadla a vymrazením do sucha z vody sa získa 50 mg (89 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bieleho prášku.

'H-NMR (500 MHz, MeOH): δ 0,90 (t, 3H), 0,94 (d, 3H), 1,1 - 2,0 (m, 14H), 3,83 (bs, 1H), 4,26 (d, 1H), 4,50 (m, 2H), 7,57 (bd, 2H), 7,78 (bd, 2H).

Príklad 55

H-(R)Cgl-Aze-Pab

Hydrogenáciou 257 mg (5,08 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) (pozri príklad 1 (ii)) nad 5 % Pd/C v 6 ml EtOH/H₂O pri atmosférickom tlaku počas 6 h s nasledujúcou filtráciou katalyzátora, odparením rozpúšťadla a vymrazením do sucha z vody sa získa 200 mg (89 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

‘H-NMR (500 MHz, D₂O): δ 1,0 - 2,0 (m, 11H), 2,25 (m, IH), 2,70 (m, IH), 3,30 (m, IH) 3,75 (m, IH), 4,30 (m, IH), 4,45 (m, IH), 4,55 (m, 2H), 7,60 (m, 2H), 7,77 (m, 2H).

MS m/z 372 (M⁺ + 1)

Príklad 56

HOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab x HOAc (i) BnOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

0,250 g (0,47 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (pozri príklad 15) rozpusteného v 5 ml CH2CI2 sa ochladí na teplotu -10 C a pomaly sa pridá 150 mg (0,48 mmol) TfOCH₂COOBn (pozri príprava východiskových materiálov) rozpusteného v 3 ml CH₂C1₂. Pridá sa 200 ml (1,45 mmol) uhličitanu draselného a zmes sa mieša pri laboratórnej teplote počas 20 h. Zmes sa zriedi CH₂C1₂, extrahuje sa vodou a vysuší (MgSO₄). Odparením rozpúšťadla s nasledujúcou rýchlou chromatografiou pri použití CH₂Cl₂/MeOH 9/1 ako elučného činidla sa získa 150 mg (46 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) HOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab x HOAc

150 mg (0,2 mmol) BnOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab(Z) sa hydrogenuje nad 50 mg 5 % Pd/C v 20 ml EtOH pri atmosférickom tlaku počas 4 h. Filtráciou katalyzátora, odparením rozpúšťadla s nasledujúcim čistením RPLC pri použití CH₃CN/O,1M NH₄OAc 1/4 ako elučného činidla sa získa 35 mg (37 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

’H-NMR (500 MHz, MeOD): δ 1,00 (m, IH), 1,20 -

- 1,45 (m, 5H), 1,5 (m, IH), 1,6 - 1,8 (m, 6H), 1,9-2,1 (m, 6H), 2,25 (m, IH) 3,25 (m, IH), 3,5 (m, IH), 3,85 (m, IH) 4,15 (m, IH), 4,35 - 4,6 (m, 3H), 4,9 (m, čiastočne bránený HOD čiarou, 6H), 7,55 (d, 2H), 7,75 (d, 2H).

Príklad 57

MeOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HCI (i) MeOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

0,186 g (0,841 mmol) TfO-CH₂-COOMe (pozri príprava východiskových materiálov) sa rozpustí v CH₂C1₂ a pomaly sa pridá k zmesi 0,425 g (0,841 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) (pozri príklad 1), 0,894 g (5,04 mmol) K₂CO₃v CH₂C1₂ (celkom 4,3 ml) pri laboratórnej teplote a mieša sa cez noc. Pridá sa ďalší CH₂C1₂ a zmes sa premyje vodou a soľankou, vysuší, prefiltruje a rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a získa sa 0,51 g zvyšku, ktorý sa trikrát podrobí rýchlej chromatografii na silikagéli pri použití najprv CH₂Cl₂/THF/MeOH (16/4/1), potom CH₂C1₂/THF (2 % NH₃) (8/2) a napokon dietyléterom/MeOH (nasýtený NH₃) (95/5) ako elučným činidlom. Získa sa takto 0,324 g (67 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) MeOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HCI

220 mg (0,38 mmol) MeOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) sa hydrogenuje v prítomnosti 1,14 ml IN HCI, 6,5 ml MeOH a 300 mg Pd/C počas 2 h. Katalyzátor sa odstráni filtráciou cez celit a millipor filter s nasledujúcim odparením rozpúšťadla vo vákuu a dvakrát sušením vymrazením sa získa 178 g (91 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

‘H-NMR (500 MHz, D₂O): δ 1,12 - 1,4 (m, 5H), 1,68 -1,81 (m, 2H), 1,81-1,9 (m, 3H), 1,97 - 2,1 (m, IH), 2,29 -

- 2,4 (m, IH), 2,68 - 2,8 (m, IH), 3,86 (s, 3H), 4,1 (s, 2H), 4,1 - 4,5 (d, IH), 4,36 - 4,42 (t, 2H), 4,59 (s, 2H), 4,99 -

- 5,04 (m, IH), 7,65 - 7,7 (d, 2H), 7,8 - 7,85 (d, 2H).

¹³C-NMR (75 MIIz, MeOD): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 146,78, 167,68, 168,15, 172,29.

Príklad 58

EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Azc-Pab x 2 HCI (i) EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

0,208 g (0,876 mmol) TfO-CH₂-COOEt (pozri príprava východiskových materiálov) sa rozpustí v CH₂C1₂ a pomaly sa pridá k zmesi 0,443 g (0,876 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) (pozri príklad 1) a 0,931 g (5,26 mmol) K₂CO₃ v CH₂C1₂ (celkom 4 ml) ochladenom na ľadovom kúpeli. Po 2 h sa ľadový kúpeľ odstráni a v miešaní sa pokračuje pri laboratórnej teplote počas 2 h. Pridá sa ďalší CH₂C1₂ a zmes sa premyje vodou a soľankou, vysuší, prefiltruje a rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu, čím sa získa 0,51 g zvyšku, ktorý sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití dietyléteru/MeOH (nasýtený NH₃) (95/5) ako elučného činidla. Získa sa 0,387 g (75 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HCI

395 mg (0,668 mmol) EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) sa hydrogenuje v prítomnosti 12 ml EtOH (99,5 %) a 390 mg Pd/C počas 5 h. Odstránením katalyzátora filtráciou cez celit a millipor filtre s nasledujúcim odparením rozpúšťadla vo vákuu a vymrazením dvakrát do sucha sa získa 281 mg (88 %) EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab. Pridajú sa 2 ekvivalenty IN HCI a sušením trikrát vymrazením sa získa 288 mg (81 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

’H-NMR (500 MHz, D₂O): δ 1,05 - 1,48 (m, 8H), 1,6 - 2,05 (m, 6H), 2,15 - 2,33 (m, IH), 2,58 - 2,79 (m, IH), 3,89 - 4,0 (m, 3H), 4,2 - 4,33 (m, 3H), 4,33 - 4,44 (m, IH), 4,44 - 4,66 (m, 2H), 4,91 (m, IH (čiastočne tienený H-O-D signálom)), 7,54 - 7,63 (s, 2H), 7,72 - 7,84 (d, 2H).

Príklad 59 n-BuOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab x HOAc

Pripraví sa rovnakým spôsobom ako je opísaný pre n-BuOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) (pozri príklad 60 (i)) pri použití TfO-CHj-COOn-Bu ako alkylačného činidla. Surový produkt sa čistí rýchlou chromatografiou dvakrát, najprv pri použití CH₂Cl₂/MeOH (95/1) ako elučného činidla a potom CH₂Cl₂/i-propylalkoholu (90/7) a získa sa 324 mg (47 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) n-BuOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab x HOAc

Chránenie sa uskutoční postupom opísaným v príklade 57 (ii). Surový materiál sa čistí pomocou RPLC pri použití CHjCN (30 %) v 0,05M NH₄OAc ako elučného činidla sa získa 100 mg (53 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

’H-NMR (500 MHz, MeOD): δ 0,85 - 2,1 (m, 18H), 2,15 - 2,37 (m, IH), 2,58 - 2,8 (m, IH), 3,7 - 5,0 (m, 10H), 4,88 - 5,0 (čiastočne prekrytý H-O-D signálom), 7,46 - 7,65 (d, 2H), 7,71 -7,88 (d, 2H).

^I3C-NMR (75 MHz, MeOH): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 146,8, 168,12, 168,2, 172,2.

Príklad 60 n-HexOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HCI (i) n-HexOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

0,402 g (1,375 mmol) TfO-CH₂-COOn-Hex (pozri príprava východiskových materiálov) sa rozpustí v CILCL a pomaly sa pridá k zmesi 0,695 g (1,375 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) (pozri príklad 1), 1,463 g (8,25 mmol) K₂CO₃v CH₂C1₂ (celkom 4 ml) pri < -10 °C. Po 1 h sa kúpeľ CO₂ľad odstráni a v miešaní sa pokračuje pri laboratórnej teplote počas 45 minút. Pridá sa ďalší CH₂C1₂ a zmes sa premyje vodou a soľankou, vysuší, filtruje a rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a získa sa 0,828 g zvyšku, ktorý sa dvakrát podrobí rýchlej chromatografii, najprv použitím dietyléteru/MeOH (nasýtený NH₃) (95/5) a potom CH₂Cl₂/MeOH (nasýtený NH₃) (95/5) ako elučného činidla. Získa sa 0,42 g (47 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) n-HexOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HCl

Hydrogenáciou 400 mg (0,617 mmol) n-HexOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) v prítomnosti 12 ml THF a 400 mg Pd/C počas 1,5 h sa nedosiahne kompletné odstránenie. Hydrogenácia bola úplná po 4 hodinách v prítomnosti 1,7 ml IN HCl, 12 ml MeOH a 340 mg Pd/C. Odstránením katalyzátora filtráciou cez celit a millipor filter s nasledujúcim odparením rozpúšťadla vo vákuu a dvakrát vymrazením do sucha, sa získa 287 mg (79 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (300 MHz, MeOD): δ 0,8 - 2,13 (m, 22H), 2,13 - 2,31 (m, IH), 2,61 - 2,81 (m, IH), 3,93 - 4,15 (m, 3H), 4,15 - 4,37 (m, 3H), 4,37 - 4,7 (m, 3H), 4,88 - 5,0 (m, IH (čiastočne prekrytý H-O-D signálom)), 7,52 - 7,69 (d, 2H), 7,75 - 7,9 (d, 2H).

^I3C-NMR (75 MHz, MeOD): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 146,84, 167,67, 167,84, 172,17.

Príklad 61 H-(R)Cgl-Pro-Pac x 2 HCl (i) Boc-(R)Cgl-Pro-Pac(Z)

377 mg (1,97 mmol) EDC sa za miešania pridá pri teplote 0 °C k roztoku 708 mg (1,95 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 714 mg (2,0 mmol) H-Pac(Z) x 2 HCl (pozri príprava východiskových materiálov) a 1,078 g (8,8 mmol) DMAP v 12,5 ml acetonitrilu, reakčná zmes sa nechá zahriať na laboratórnu teplotu cez noc. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa najprv čistí rýchlou chromatografiou pri použití 10 % metanolu v metylénchloride ako elučného činidla a potom pomocou RPLC. Boli izolované dve frakcie (51 mg a 150 mg) poskytujúce MS m/z = 626 (M+l).

(ii) H-(R)Cgl-Pro-Pac(Z)

Chlorovodík sa prebubláva roztokom 141 mg (0,22 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-Pac(Z) v 50 ml etylacetátu. Po 15 minútach sa pridá 10 % roztok uhličitanu sodného a organická fáza sa oddelí a vysuší (K₂CO₃). Odparením rozpúšťadla sa získa 71 mg (61 %) produktu.

(iii) H-(R)Cgl-Pro-Pac x 2 HCl

Zmes 71 mg (0,14 mmol) H-(R)Cgl-Pro-Pac(Z) a na špičku špachtle 10 % Pd/C v 10 ml etanolu sa hydrogenuje pri laboratórnej teplote a atmosférickom tlaku počas 2 h. Katalyzátor sa odstráni filtráciou a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa rozpustí v 50 ml vody a 0,6 g IM kyseliny chlorovodíkovej. Vymrazením do sucha sa získa 38 mg (58 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

MS m/z 392 (M+l)

Príklad 62

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pac x HOAc (i) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pac(Z)

Zmes 84 mg (0,15 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pac(Z) (pozri príklad 53 (ii)), jedna špachtľa uhličitanu draselného a 47 mg TfOCH₂-COOBn (pozri príprava východiskových materiálov) v 3 ml metylénchloridu sa mieša pri laboratórnej teplote cez noc, reakčná zmes sa filtruje a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a získa sa zvyšok, ktorý sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití etylacetátu/mety lénchloridu/metanolu 95 : 20 : 5 ako elučného činidla. Izoluje sa 29 mg požadovaného produktu.

(ii) HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pac x HOAc

Zmes 29 mg BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pac(Z) a 37 mg 10 % Pd/C v 5 ml etanolu sa mieša počas 4 h pri laboratórnej teplote a atmosférickom tlaku. Filtráciou katalyzátora s nasledujúcim odstránením rozpúšťadla a čistením pomocou RPLC sa získa požadovaná zlúčenina.

MS m/z = 464 (M + 1)

Príklad 63

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pac (i) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pac(Z)

Roztok 0,35 g (0,64 mmol) H-(R)Cgl-Pro-Pac(Z) (pozri príklad 61 (ii)), 124 mg (0,76 mmol) benzylakrylátu a 280 μΐ (2 mmol) trietylamínu v 1 ml etanolu sa udržuje pri laboratórnej teplote počas 3 dní. Odstránením rozpúšťadla s nasledujúcim čistením pomocou HPLC sa získa 18 mg (4 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pac

Zmes BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pac(Z) a malej špachtle 10 % Pd/C sa hydrogenuje počas 2 h pri laboratórnej teplote a atmosférickom tlaku v EtOH. Filtráciou s nasledujúcim odstránením rozpúšťadla vo vákuu a rozpustením vo vode a vymrazením do sucha sa získa 7 mg (78 %) zlúčeniny uvedenej v názve. MS m/z = 464 (M+l).

Príklad 64

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pac (i) Boc-(R)Cha-Aze-Pac(Z)

Roztok 0,4 g (1,38 mmol) H-Pac(Z) (pozri príprava východiskového materiálu H-Pac(Z) x 2 HCl), 0,5 g (1,41 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH (pozri príprava východiskových materiálov) a 0,67 g (5,5 mmol) DMAP v 20 ml acetonitrilu sa zmieša pri teplote 0 °C s roztokom 0,26 g (1,4 mmol) EDC v 15 ml acetonitrilu. Reakčná zmes sa udržiava pri laboratórnej teplote cez noc a potom sa rozpúšťadlo odstráni vo vákuu. Zvyšok sa rozdelí medzi etylacetát a vodu. Vodná fáza sa extrahuje ešte raz etylacetátom a spojené organické fázy sa premyjú roztokom hydrogensíranu sodného, roztokom uhličitanu sodného a soľankou a potom sa vysušia (síran sodný). Odparením rozpúšťadla sa získa 0,54 g (63 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) H-(R)Cha-Aze-Pac(Z)

Chlorovodík sa prebubláva roztokom 0,54 g (0,9 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-Pac(Z) v etylacetáte. Roztok sa udržiava v chladničke cez noc a rozpúšťadlo sa potom odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte. Roztok sa premyje vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, vodou a soľankou a vysuší (síran sodný). Odstránením rozpúšťadla sa získa 0,35 g (77 %) produktu.

(iii) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pac(Z)

Roztok 180 mg (0,33 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pac(Z) a 53 mg (0,33 mmol) benzylakrylátu v etanole sa udržiava pri laboratórnej teplote počas 60 h. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte. Roztok sa premyje roztokom hydrogensíranu draselného a roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou. Vysušením (síran sodný) a odstránením rozpúšťadla vo vákuu sa získa zvyšok, ktorý sa čistí rýchlou chromatografiou pri použití 10 % metanolu v metylénchloride ako elučným činidlom a získa sa 150 mg (66 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(iv) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pac x 2 HCl

Zmes 115 mg BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pac(Z) a 67 mg 10 % Pd-C v 10 ml etanolu sa hydrogenuje počas 1,5 h pri laboratórnej teplote a atmosférickom tlaku. Filtrá ciou s nasledujúcim odstránením rozpúšťadla vo vákuu a rozpustením zvyšku vo vode a 1,5 ml IM kyseliny chlorovodíkovej sa získa roztok, ktorý sa sušil vymrazením a poskytol 30 mg (33 %) zlúčeniny uvedenej v názve. MS m/z 464 (M + 1)

Príklad 65

HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pig x 2 HCI (i) Boc-(R)Cha-Aze-Pig(Z)

0,249 g (1,298 mmol) EDC sa pridá pri < -15 °C k zmesi 0,473 g (1,236 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 0,404 g (1,236 mmol) H-Pig(Z) x HCI (pozri príprava východiskových materiálov) a 0,604 g (4,94 mmol) DMAP v 13,5 ml DMF. Teplota sa nechá vystúpiť na laboratórnu teplotu cez noc. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a pridá sa EtOAc a 2M KHSO₄. Fáza sa oddelí a organické fázy sa premyjú nasýteným Na₂CO₃ a soľankou. Opakovaním extrakčného postupu, vysušením (Na₂SO₄), filtráciou a odparením rozpúšťadla sa získa 0,612 g zvyšku, ktorý sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití EtOAc/MeOH 9/1 ako elučného činidla. Získa sa 407 mg (53 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) H-(R)Cha-Aze-Pig(Z)

0,4 g (0,638 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-Pig(Z) sa rozpustí v 24,4 ml TFA/CH₂C1₂ 1/4, mieša sa počas 30 minút na ľadovom kúpeli a 30 minút pri laboratórnej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a pridá sa EtOAc a nasýtený Na₂CO₃. Fáza sa oddelí a organická vrstva sa premyje vodou a soľankou, vysuší (Na₂SO₄), prefiltruje a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa 336 mg (100 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(iii) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pig(Z) ml (0,562 mmol) BnOOC-CH₂-Br sa pomaly pridá k zmesi 0,296 g (0,562 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pig(Z) a 0,17 g (1,236 mmol) K₂CO₃ v 6 ml CH₃CN zahriatym na 60 °C na olejovom kúpeli. Po 1 h 45 min. sa rozpúšťadlo odparí, pridá sa EtOAc a zmes sa premyje vodou, vysuší (Na₂SO₄), prefiltruje a odparením rozpúšťadla vo vákuu sa získa 346 mg zvyšku, ktorý sa podrobí rýchlej chromatografii pri použití CH₂Cl₂/THF/MeOH (8/2/1) ako elučného činidla. Získa sa 297 mg (78 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(iv) HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pig x 2 HCI

243 mg (0,36 mmol) HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pig(Z) sa hydrogenuje v prítomnosti 1,7 ml IN HCI, 10 ml EtOH (99,5 %) a 300 mg Pd/C počas 2 h. Katalyzátor sa odstráni filtráciou cez celit a millipor filter s nasledujúcim odparením rozpúšťadla vo vákuu a dvakrát sušením vymrazením sa získa 166 mg (88 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (500 MHz, D₂O): δ 0,6 - 1,9 (m, 18H), 2,1 -

- 2,27 (m, IH), 2,52 - 2,76 (m, IH), 2,82 - 3,2 (m,4H), 3,46 -

- 3,61 (m, IH), 3,61 - 3,81 (m, 2H), 3,81 - 4,0 (m, 2H), 4,0 -

- 4,24 (m, 2H), 4,24 - 4,4 (m, IH).

Príklad 66

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig x 2 HCI (i) Boc-(R)Cha-Pro-Pig(Z)

K zmesi 0,3495 g (0,95 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 0,464 g (3,8 mmol) DMAP, 0,310 g (0,95 mmol) H-Pig(Z) x HCI (pozri príprava východiskových materiálov) v 5 ml CH₂C1₂ sa pridá 0,192 g (1 mmol) EDC a zmes sa mieša cez noc pri laboratórnej teplote. Zmes sa odparí a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte. Organická fáza sa premyje dvakrát 0,3M

KHSO4 a raz soľankou. Organická vrstva sa vysuší (Na₂SO₄), prefiltruje a odparí. Surový produkt sa čistí rýchlou chromatografiou pri použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH (100/0, 97/3, 95/5, 90/10) ako elučného činidla a získa sa 307 mg zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) H-(R)Cha-Pro-Pig(Z)

0,306 g (0,48 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-Pig(Z) sa rozpustí v 30 ml HCI nasýteného etylacetátu. Zmes sa nechá pol hodiny stáť. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v CH₂C1₂. Organická vrstva sa premyje dvakrát 0,2M NaOH. Spojené vodné vrstvy sa extrahujú jedenkrát CH₂C1₂ a spojené organické vrstvy sa vysušia (Na₂SO₄), prefiltrujú a odparením sa získa 257 mg (99 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(iii) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig(Z)

Zmes 0,256 g (0,473 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pig(Z), 0,144 g (1,04 mmol) K₂CO₃ a 82 μΐ (0,521 mmol) benzylbrómacetátu v 6 ml acetonitrilu sa za miešania zahrieva počas dvoch hodín pri teplote 60 °C. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v CH₂C1₂, premyje sa jedenkrát vodou a jedenkrát soľankou, vysuší (Na₂SO₄), prefiltruje a rozpúšťadlo sa odparí. Surový produkt sa čistí rýchlou chromatografiou pri použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH (97/3, 95/5, 90/10 ako elučného činidla a získa sa 0,2 g produktu (90 % čistota podľa RPLC). Konečné čistenie sa uskutoční na chromatotróne (Harrison research, model 7924T) na 2 mm silikagélových platniach v CH₂Cl₂/MeOH 95/5 a získa sa 0,158 g (48 %) čistého produktu.

(iv) HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig x 2 HCI

0,158 g (0,227 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig(Z) sa zmieša s 0,075 g Pd/C (5 %), 1 ml IN roztoku HCI a 10 ml etanolu. Zmes sa hydrogenuje pri atmosférickom tlaku počas jednej hodiny. Filtráciou cez celit a odparením rozpúšťadla s nasledujúcim vymrazením do sucha dvakrát z vody sa získa 119 mg (97 %) produktu.

'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 0,95 - 1,44 (m, 7H), 1,52 (m, IH), 1,60 - 2,20 (m, 13H), 2,39 (m, IH), 3,07 - 3,32 (m, 4H), 3,68 (m, IH), 3,77 - 4,02 (m, 5H: z toho 3,98 (s, 2H)), 4,44 - 4,58 (m, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): karbonylové a guanidinové uhlíky: δ 156,5, 168,3,174,5.

Príklad 67

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig x 2 HCI (i) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig(Z)

0,297 g (0,55 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pig(Z) (pozri príklad 66 (ii)) sa rozpustí v 2 ml etanolu a pridá sa 90 μΐ (0,59 mmol) benzylakrylátu. Reakčná zmes sa mieša počas štyroch dní pri laboratórnej teplote. Rozpúšťadlo sa odparí a surový produkt sa chromatografuje na chromatotróne (Harrison research, model 7924T) pri použití 2 mm silikagélovej doštičky s postupným gradientom CH₂Cl₂/MeOH (95/5, 90/10) ako elučným činidlom sa získa 0,338 g (87 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig x 2 HCI

0,238 g (0,227 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig(Z) sa zmieša s 0,120 g Pd/C (5 %), 1,2 ml IN roztoku HCI a 15 ml etanolu. Zmes sa hydrogenuje pri atmosférickom tlaku počas jednej hodiny. Filtráciou katalyzátora cez celit, odparením rozpúšťadla s nasledujúcim vymrazením do sucha dvakrát z vody sa získa 178 mg (95 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 0,82 - 1,45 (m, 8H), 1,45 -

- 2,15 (m, 13H), 2,29 (m, IH), 2,83 (t, 2H), 2,9 - 3,4 (m, 6H), 3,57 (bq, IH), 3,67 - 3,87 (m, 3H), 4,25 - 4,43 (m, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): karbonylové a amidínové uhlíky: δ 156,3,168,2, 174,3, 174,6.

MS m/z 479 (M⁺+l)

Príklad 68 (HOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pig x 2 HC1

120 mg (0,126 mmol) (BnOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)₂ (pozri príklad 50 (iii)) sa hydrogenuje za prítomnosti 0,75 ml IN HC1, 7 ml EtOH (99,5 %) a 150 mg Pd/C počas 4 h. Odstránením katalyzátora filtráciou cez celit a millipor filter a odparením rozpúšťadla vo vákuu sa nasledujúcim vymrazenim získa 66 mg (90 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (500 MHz, D₂O): δ 1,05 - 1,38 (m, 7H), 1,53 -

- 1,64 (d, IH), 1,64-2,14 (m, IH), 2,27 - 2,39 (m, IH), 3,03 - 3,28 (m, 4H), 3,58 - 3,70 (m, IH), 3,7 - 3,8 (m, IH),

3,8 - 3,9 (d, 2H), 4,07 - 4,22 (m, 2H), 4,22 - 4,35 (m, IH), 4,38-4,5 (m, IH).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 156,28, 162,73,170,14,174,01.

Príklad 69 HOOC-CH₂-CH₂-(HOOC-CH₂)-(R)Cha-Pro-Pig x 2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-CH₂-(HOOC-CH₂)-(R)Cha-Pro-Pig(Z)

K studenej (teplota ľadového kúpeľa) zmesi 100 mg (0,14 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig(Z) (pozri príklad 67 (i)) a 80 mg (0,57 mmol) uhličitanu draselného v 4 ml CH₂C1₂ sa opatrne pridá roztok 64 mg (0,21 mmol) TfO-CH₂-COOBn rozpusteného v 1 ml CH₂C1₂. Reakčná zmes sa nechá pri teplote 0 °C počas 30 minút a potom sa nechá zahriať na laboratórnu teplotu na 2 h a následne sa zahrieva pod refluxom počas 30 minút a napokon sa nechá vystúpiť na laboratórnu teplotu. Odparením rozpúšťadla s nasledujúcou rýchlou chromatografiou pri použití CH₂Cl₂/MeOH (97/3) ako elučného činidla sa získa 65 mg (54 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) HOOC-CH2-CH₂-(HOOC-CH₂HR)Cha-PiO-Pig x 2 HC1 mg (0,08 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(HOOC-CH₂)-(R)Cha-Pro- -Pig(Z) sa rozpustí v 10 ml EtOH/lM HC1 (9/1) a hydrogenuje sa nad 10 % Pd/C počas 3 h pri atmosférickom tlaku. Filtráciou katalyzátora a odparením rozpúšťadla s nasledujúcim sušením vymrazenim z vody sa získa 40 mg (97 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bieleho prášku.

¹³C-NMR (125 MHz, MeOD): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 157,5, 167,2, 169,1 173,7 a 174,1.

Príklad 70 HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts)

Boc-(R)Cgl-Aze-OH (pozri príprava východiskových materiálov) (400 mg, 1,17 mmol), H-(R,S)Itp(Ts) (pozri príprava východiskových materiálov) (366 mg, 1,23 mmol) a DMAP (286 mg, 2,34 mmol) sa rozpustí v CH₃C1 (6 ml) a ochladí sa na teplotu 5 °C, pridá sa EDC (236 mg, 1,23 mmol) a výsledná zmes sa mieša pri laboratórnej teplote cez noc. Odstráni sa CH₃CN a zvyšok sa rozpustí v MeOH/EtOAc/H₂O. Oddelené organické vrstvy sa premyjú K₂CO₃(nasýtený), 2M KHSO₄, soľankou a vysušia (Na₂SO₄). Odparením rozpúšťadla sa získa biela pevná látka, 688 mg (85 %).

MS m/z 620 (M⁺+l) (ii) H-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts)

Boc-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts) (500 mg, 0,8 mmol) sa rozpustí v CH₂CI₂ (50 ml) a HC1 (g) sa prebubláva roztokom asi 4 min. Po 45 min. sa rozpúšťadlo odstráni odparením a výsledný produkt sa rozpustí v EtOAc/MeOH/H₂ a kyslý roztok sa spracuje s 2M NaOH (vodný) na pH = 8-9. Organická vrstva sa oddelí a vysuší (Na₂SO₄). Odparením rozpúšťadla sa získa 425 mg (100 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bielej pevnej látky.

MS m/z 520 (M⁺ + 1) (iii) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts)

H-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts) (400 mg, 0,77 mmol), benzyl-2-(para-nitrobenzénsulfonyloxy)acetát (pozri príprava východiskových materiálov) (325 mg, 0,92 mmol) a K₂CO₃ (235 mg, 1,7 mmol) sa mieša v CH₃CN (5 ml) pri teplote 45 °C. Po niekoľkých hodinách bola premena len 25 % a preto sa teplota zvýšila na 60 °C a pridalo sa ďalšie množstvo benzyl-2-(para-nitrobenzénsulfonyloxy)acetátu. Reakčná zmes sa mieša počas 48 h (východiskový materiál : produkt 25/63) a potom sa spracuje. Rozpúšťadlo sa odparí a k zvyšku sa pridá EtOAc/H₂O. Fázy sa oddelia a vodná fáza sa extrahuje EtOAc a potom sa spojené organické fázy premyjú K₂CO₃ (nasýtený), 2M KHSO₄, H₂O a vysušia (Na₂SO₄). Takto sa získa, po spätnej extrakcii kyslého KHSO₄, asi 340 mg, ktoré sa prečistia pomocou RPLC. Získa sa 34 mg (7 %) zlúčeniny uvedenej v názve. MS m/z 668 (M⁺+ 1) (iv) HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-(R,S)ltp x 2 HC1

BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts) (34 mg, 0,05 mmol) sa rozpustí v THF (5 ml) a NH₃(g) sa destiluje (40 ml) do reakčnej banky s chladičom so suchým ľadom. Pridá sa Na (pevný) a objaví sa tmavomodrá farba. Reakčná zmes sa mieša počas 5 min. predtým, ako sa preruší HOAc (50 pl). Chladič so suchým ľadom sa odstráni a NH₃(kvap.) sa nechá odpariť. K zvyšku sa pridá H₂O a HOAc na pH = 7. Sušením vymrazenim a preparatívnou RPLC sa získa niekoľko frakcii, ktoré sa analyzujú pomocou FAB-MS. Dve frakcie obsahujú požadovanú zlúčeninu, 3 mg (10 %) po sušení vymrazenim s 2,2 ekv. IM HC1: MS m/z 424 (M⁺ + 1)

Príklad 71

HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp (i) Boc-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts)

Boc-(R)Cha-Aze-OH (pozri príprava východiskových materiálov) (169 mg, 0,5 mmol), H-(R,S)Itp(Ts) (pozri príprava východiskových materiálov) (155 mg, 0,52 mmol) DMAP (122 mg, 1 mmol) sa rozpustí v CH₃CN (2,5 ml) a ochladí sa na teplotu 5 °C. Pridá sa EDC x HC1 (115 mg, 0,6 mmol) a výsledná zmes sa mieša pri laboratórnej teplote cez noc. Po miešaní cez noc sa pridá oddelene (0,5 ekv.) H-(R,S)Itp(Ts) a EDC. Reakčná zmes sa mieša ďalšiu noc a spracuje ako je uvedené pre Boc-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts) (pozri príklad 70). Získa sa takto 260 mg surového produktu. Čistením pomocou RPLC sa získa 180 mg (57 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

MS m/z 634 (M¹ + 1) (ii) H-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts)

Boc-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts) (180 mg, 0,28 mmol) sa rozpustí v CH₂C1₂ (20 ml) a HC1 (g) sa prebubláva roztokom počas asi 4 min. Po 45 min. sa rozpúšťadlo odstráni odparením a výsledný produkt sa rozpustí v CH₂C1₂ a premyje sa 2M NaOH na pH = 8. Fázy sa oddelia a organická fáza sa vysuší (Na₂SO₄) a odparením sa získa 163 mg (asi 100%).

MS m/z 534 (M¹ +1).

(iii) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts)

H-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts) (80 mg, 0,15 mmol), K₂CO₃ (45 mg, 0,33 mmol) a Br-CH₂-COOBn (39 mg, 0,17 mmol) sa mieša v CH₃CN (1,5 ml) pri teplote 60 °C počas 2,5 h. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v EtOAc/H₂O. Fázy sa oddelia a organická fáza sa premyje 10 % kyselinou citrónovou a vysuší (Na₂SO₄). Odparením rozpúšťadla sa získa 171 mg surového produktu, ktorý sa čistí pomocou RPLC a získa sa 53 mg (52 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

MS m/z 681 (M⁺+ 1) (iv) HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-(R,S)ltp

BnOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts) (50 mg, 0,07 mmol) sa spracuje ako je opísané pre BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-(R,S)ltp(Ts) (pozri príklad 70 (iv)). Získa sa tak zmes produktov, ktorá sa čistí pomocou RPLC a získa sa 12 mg 1 : : 1 zmesi zlúčeniny uvedenej v názve spolu s redukovanou zlúčeninou, ktorá sa objavuje pri hmotnosti 439 /m/z/. MS m/z 438 (M⁺+ 1)

Príklad 72

H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp x 2 HCI (i) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Ts)

Pri laboratórnej teplote sa 2,1 g (5,5 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 1,0 g (8,2 mmol) DMAP a 1,7 g (5,8 mmol) H-(R,S)Itp(Ts) (pozri príprava východiskových materiálov) rozpustí v 40 ml acetonitrilu. Po niekoľkých minútach miešania sa pridá 1,1 g (5,8 mmol) EDC a v miešaní sa pokračuje počas 60 h. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozpusti v CH₂C1₂, premyje sa vodou, 0,3M KHSO₄a KHCO₃ (vodný) a vysuší (Na₂SO₄). Odparením rozpúšťadla a filtráciou cez silikagél sa získa 2,43 g (67 %) produktu.

MS m/z 661 (M⁺+ 1) (ii) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp

2,4 g (3,6 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Ts) sa rozpustí v 15 ml THF a NH₃(g) sa kondenzuje do banky a potom sa pridá Na. Reakcia sa preruší po 5 min. kyselinou octovou a NH₃ a THF sa odparí. Zvyšok sa suší vymrazením a čistí RPLC (CH₃CN/O,1M NH₄OAc, 6/4) a získa sa 0,93 g (51 %) požadovaného produktu.

MS m/z 507 (M⁺+ 1) (iii) H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp x 2 HCI

Pri laboratórnej teplote sa 50 mg (0,099 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp rozpustí v etylacetáte nasýtenom HCI (g). Po 2 h miešania sa rozpúšťadlo odstráni vo vákuu. Zvyšok sa suší vymrazením vo vákuu trikrát z vody a získa sa 35 mg (74 %) požadovaného produktu.

MS m/z 407 (M⁺+ 1)

Príklad 73

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp x 2 HCI (i) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z)

Pri laboratórnej teplote sa 0,84 g (1,66 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp (pozri príklad 72) rozpustí v 10 ml CH₂C1₂ a 10 ml 0,5M NaOH. Po miešaní počas 3 h sa fázy oddelia a organická vrstva sa premyje vodou a vysuší nad Na₂SO₄. Odparením a rýchlou chromatografiou (etylace tát/heptán 9/1) sa získa 0,5 g (47 %) požadovaného produktu.

MS m/z 641 (M⁺ + 1) (ii) H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z)

Pri laboratórnej teplote sa 0,5 mg (0,78 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z) rozpustí v etylacetáte nasýtenom HCI. Pridá sa voda a zmes sa zalkalizuje pomocou K₂CO₃. Fázy sa oddelia. Vodná fáza sa extrahuje CH₂C1₂ a organická fáza sa premyje vodou. Spojené organické fázy sa potom vysušia (Na₂SO₄). Odparením rozpúšťadla sa získa 0,3 g (71 %) požadovaného produktu.

MS m/z 541 (M⁺+ 1) (iii) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z)

0,29 g (0,5 mmol) H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z), 0,15 g (1 mmol) K₂CO₃ sa vytrepe do 25 ml acetonitrilu. Pridá sa 154 mg (0,6 mmol) benzylbromacetátu a zmes sa mieša pri 50 °C počas 4 h. Odparením a čistením pomocou RPLC (acetonitril/Ο,ΙΜ NH₄OAc 70/30) sa získa asi 200 mg požadovaného produktu.

(iv) HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp x 2 HCI

200 mg BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-(R,S)ítp(Z) sa rozpustí v etanole. Pridá sa malá lyžička 10 % Pd/C na uhlí a zmes sa hydrogenuje počas 4 h. Filtráciou cez hyflo, odparením rozpúšťadla s nasledujúcim vymrazením z vody sa získa 53 mg požadovaného produktu.

'H-NMR (300,13 MHz, D₂O): δ 1,0 - 2,35 (presahujúci m, 22H), 3,28 - 3,51 (m, 5H), 3,51 - 3,64 (m, IH), 3,75 -

- 4,03 (m,3H), 5,03 - 5,14 (s široký, IH). Signál jedného z protónov je čiastočne tienený H-O-D-signálom.

MS m/z 465 (M⁺+ 1)

Príklad 74

H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig x 2 HCI (i) Boc-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z)

K zmesi 1,0 g (2,95 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 1,44 g (11,8 mmol) DMAP, 1,12 g (3,25 mmol) H-(R,S)Hig(Z) (pozri príprava východiskových materiálov) v 15 ml CH₂C1₂ sa pridá 0,62 g (3,2 mmol) EDC a zmes sa mieša pri laboratórnej teplote cez noc. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte. Po premytí organickej vrstvy dvakrát 0,3M roztokom KHSO₄ sa z organickej vrstvy oddelí olej. Etylacetátové vrstvy sa vysušia (Na₂SO₄) a filtrujú. Olej a vodná vrstva sa vysuší (Na₂SO₄), prefiltruje a spojí s uvedenou EtOAc fázou. Odparením a čistením surového produktu na chromatotróne (Harrison research, model 7924T) pri použití 2 mm silikagélových doštičiek s postupným gradientom CH₂Cl₂/MeOH (97/3, 95/5, 90/10) ako elučného činidla sa získa 1,1 g (59 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig x 2 HCI mg (0,13 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z) sa rozpustí v 50 ml etylacetátu nasýtenom HCI. Zmes sa nechá stáť počas jednej hodiny, odparí sa a zvyšok sa rozpustí v 10 ml etanolu. 40 mg Pd/C (5 %), 1 ml vody a 0,5 ml IM roztoku HCI a zmes sa hydrogenuje pri atmosférickom tlaku cez noc. Odfiltrovaním katalyzátora cez celit a odparením rozpúšťadla s nasledujúcim sušením vymrazením trikrát z vody sa získa zlúčenina uvedená v názve v 75 % výťažku.

’H-NMR (D₂O, 300 MHz): δ 0,95 - 1,35 (m, 5H), 1,50 -

- 2,45 (m, 15H), 3,02 (bt, IH), 3,1 - 3,8 (m, 7H), 4,13 (d, IH), 4,38 (bd, IH).

ⁱ³C-NMR (75 MHz, D₂O): karbonylové a guanidínové uhlíky: 154,8, 168,9,174,4.

MS m/z 393 (M⁺+ 1)

Príklad 75

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig x 2 HCI (i) H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z) g (1,6 mmol) Bo-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z) (pozri príklad 74 (i)) sa rozpustí v 100 ml etylacetátu nasýteného HCI a zmes sa nechá stáť jednu hodinu. Zmes sa odparí a zvyšok sa rozpustí v CH₂C1₂. Organická vrstva sa premyje dvakrát 0,2M roztokom NaOH, vysuší sa (Na₂SO₄), prefiltruje a odparením sa získa 0,825 g (98 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z)

0,442 g (0,839 mmol) H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z), 0,256 g (1,85 mmol) K₂CO₃ a 145 μΐ (0,521 mmol) benzylbrómacetátu sa zmieša v 12 ml THF. Zmes sa mieša pri teplote 40 °C počas jednej hodiny a pri laboratórnej teplote cez noc. Po odparení rozpúšťadla sa zvyšok rozpustí v CH₂C1₂ a premyje jedenkrát vodou a jedenkrát soľankou. Organická vrstva sa vysuší (Na₂SO₄), prefiltruje a odparí a surový produkt sa čistí na chromatotróne (Harrison research, model 7924T) pri použití 2 mm silikagélových doštičiek postupným gradientom CH₂Cl₂/MeOH (97/3, 95/5, 90/10) ako elučným činidlom, čím sa získa 0,165 g (29 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(iii) HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig x 2 HCI

0,165 g (0,25 mmol) BnOOC-CH,-(R)Cgl-Pro-<R,S)Hig(Zj sa zmieša s 0,50 g Pd/C (5 %), 0,7 ml 1M roztoku HCI a 10 ml etanolu. Zmes sa hydrogenuje pri atmosférickom tlaku počas štyroch hodín. Filtráciou katalyzátora cez celit a odparením rozpúšťadla nasledovným sušením vymrazením dvakrát z vody sa získa 0,1 g (75 %) produktu.

'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,05 - 1,45 (m, 5H), 1,55 - 2,5 (m, 15H), 3,08 (bt, IH), 3,2 - 4,05 (m, 9H), 4,30 (d, 1 H), 4,44 (m, IH).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): karbonylové a guanidínové uhlíky: δ 154,9,167,2, 169,4, 174,1.

Príklad 76

H-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig x 2 HCI (i) Boc-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig(Z)

0,72 g (1,95 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 0,85 g (7,8 mmol) DMAP, 0,74 g (2,14 mmol) 82 % čistého H-(R,S)Hig(Z) (pozri príprava východiskových materiálov) v 10 ml CH₂CI₂ sa pridá 0,486 g (2,54 mmol) EDC a zmes sa mieša pri laboratórnej teplote počas 3 dní. Zmes sa zriedi CH₂C1₂ a premyje vodou, dvakrát 0,3 M roztokom KHSO₄ a jedenkrát soľankou. Organická vrstva sa vysuší (Na₂SO₄), prefiltruje a odparí a surový produkt sa čistí rýchlou chromatografiou pri použití CH₂Cl₂/MeOH 95/5 ako elučného činidla. Získa sa 0,450 g (33 %) produktu.

(ii) H-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig x 2 HCI mg (0,078 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig(Z) sa rozpustí v 20 ml etylacetátu nasýteného HCI. Zmes sa nechá jednu hodinu stáť, odparí sa a zvyšok sa rozpustí v 10 ml etanolu. Pridá sa 20 mg Pd/C a 0,3 ml IM roztoku HCI a zmes sa hydrogenuje pri atmosférickom tlaku počas 2 hodín. Odfiltrovaním katalyzátora cez celit s nasledujúcim vymrazením do sucha dvakrát z vody sa získa 28 g (76 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

‘H-NMR (D₂O, 300 MHz): δ 0,9 - 1,6 (m, 6H), 1,6 -

- 2,5 (m, 16H), 3,09 (t, IH), 3,31 (t, IH), 3,37 - 3,74 (m, 4H), 3,81 (m, IH), 4,35 - 4,47 (m, 2H) ^l3C-NMR (75 MHz, D₂O): amidínové a karbonylové uhlíky: δ 154,9, 169,8,174,5

Príklad 77

H-(R)Cgl-Aze-Rig x 2 HCI (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Rig(Z)

K roztoku 0,50 g (1,6 mmol) H-Rig(Z) (pozri príprava východiskových materiálov) 0,59 g (1,6 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH (pozri príprava východiskových materiálov, 0,84 g (6,9 mmol) dimetylaminopyridínu v 30 ml acetonitrilu a 5 ml dimetylformamidu sa pridá 0,33 g (1,7 mmol) N-(3-dimetylaminopropyl)-N'-etylkarbonyldiimidhydrochloridu. Reakčná zmes sa mieša počas 3 dní, potom sa odparí a rozdelí sa medzi vodný hydrogensíran draselný a metylénchlorid. Metylénchloridová vrstva sa premyje vodným hydrogenuhličitanom sodným, vysuší (Na₂SO₄) a odparí. Surový materiál sa odfiltruje odsatím cez stĺpec silikagélu s metylénchloridom/metanolom 9/1 a po odparení získa sa 0,78 g (76 %) požadovanej zlúčeniny.

‘H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,8 -1,9 (m, 27H), 2,4 -

- 2,6 (m, 2H), 2,78 (bt, 2H), 3,15 - 3,4 (m, 2H), 3,80 (bt, IH), 4,0 - 4,4 (m, 4H), 4,75 (bt, IH), 4,97 (bd, IH), 5,08 (s, 2H), 7,1 - 7,4 (m, 7H), 7,74 (b, IH).

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Rig(Z) x 2 HCI

Banka obsahujúca Boc-(R)Cgl-Aze-Rig(7.), 0,76 g (1,2 mmol) v 50 ml etylacetátu sa ochladí na ľadovom kúpeli. 5 min. sa prebubláva suchý HCI a odparením roztoku sa získa 0,74 g (100 %) dihydrochloridu vo forme bieleho prášku.

'H-NMR (300 MHz, MeOD): δ 1,1 - 2,0 (m, 18H), 2,23 (m, IH), 3,15 - 3,45 (m, 4H), 3,72 (bd, IH), 3,9 - 4,0 (bd, 2H), 4,27 (m, IH), 4,39 (m, IH), 4,78 (m, IH), 5,30 (s, 2H), 7,3 - 7,5 (m, 5H).

(iii) H-(R)Cgl-Aze-Rig x 2 HCI

Banka, obsahujúca roztok 20 mg H-(R)Cgl-Aze-Rig(Z) a malé množstvo 5 % Pd/C sa hydrogenuje pri atmosférickom tlaku počas 1 hod. Zmes sa prefiltruje cez celit a odparí. Zvyšok sa lyofilizuje s niekoľkými kvapkami kone. HCI pridanými pre získanie produktu. Výťažok predstavuje 8 mg (52 %).

‘H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,1 - 2,0 (m, 18H), 2,37 (m, IH), 2,75 (m, IH), 3,08 (bt, 2H), 3,39 (bt, 2H), 3,8 - 4,0 (m, 3H), 4,35 - 4,5 (m, 2H), 4,9 (m, IH).

¹³C-NMR (75,5 MHz, D₂O): guanidínové a karbonylové uhlíky: δ 172,2, 169,4, 156,4.

Príklad 78

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Rig x 2 HCI (i) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Rig(Z)

Zmes 0,20 g (0,33 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Rig(Z) (pozri príklad 77), 0,13 g uhličitanu draselného, 80 mg j odídu sodného, 10 ml tetrahydrofuránu a 10 ml acetonitrilu sa zahrieva pri teplote 60 °C počas 10 hodín. Rozpúšťadlá sa odparia a surový materiál sa spracuje rýchlou chromatografiou na silikagéli pri použití metylénchloridu/metanolu 92/8 ako elučného činidla. Výťažok predstavuje 0,13 g (58 %).

‘H-NMR (300 MHz, CDClj): δ 0,9 - 2,1 (m, 18H), 2,45 (m, IH), 2,61 (m, IH), 2,81 (m, 2H), 2,88 (d, IH), 3,2 - 3,5 (m, 4H), 3,94 (m, IH), 4,0 - 4,25 (m, 3H), 4,85 (m, IH), 5,12 (s, 2H), 5,14 (s, 2H), 6,9 - 7,2 (b, 2H), 7,2 -7,5 (m, 10H), 7,95 (m, IH).

(ii) HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Rig x 2 HCI

Zmes 0,12 g (0,18 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Rig(Z), 5 ml etanolu, 3 kvapiek kone. HCl a malého množstva 5 % Pd/C sa hydrogenuje pri atmosférickom tlaku počas 1 hodiny. Zmes sa prefiltruje cez celit a odparí. Zvyšok sa lyofilizuje vo vode a získa sa 91 mg (98 %) produktu.

’H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,1 - 1,9 (m, 17H), 2,00 (m, IH), 2,29 (m, IH), 2,70 (m, IH), 3,10 (m, 2H), 3,34 (t, 2H), 3,83 (bd, 2H), 3,89 (dd, 2H), 4,00 (d, IH), 4,35 (m, 2H), 4,87 (m, IH).

¹³C-NMR (125,5 MHz, D₂O): guanidínové a karbonylové uhlíky: δ 171,8, 169,6, 167,7, 156,3.

Príklad 79

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Rig x 2 HCl (i) Boc-(R)Cha-Pro-Rig(Z)

K roztoku 0,25 g (0,82 mmol) 4-aminoetyl-l-benzyloxykarbonylamidinopiperidínu (H-Rig(Z)), (pozri príprava východiskových materiálov), 0,32 g (0,82 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 0,40 g (3,3 mmol) dimetylaminopyridínu v 10 ml acetonitrilu a 2 ml dimetylformamidu sa pridá 0,165 g (0,86 mmol) N-(3-dimetylaminopropyl)-N^,-etylkarbodiimid hydrochloridu. Reakčná zmes sa nechá miešať počas 3 dní, potom sa odparí a rozdelí sa medzi vodný hydrogensíran draselný a metylénchlorid. Metylénchloridová vrstva sa premyje vodným hydrogenuhličitanom sodným a vodou, vysuší sa (Na₂SO₄) a odparí. NMR spektrum surového produktu bolo uspokojivé a produkt, ktorý obsahoval malé množstvo dimetylformamidu sa použil v nasledujúcom stupni bez ďalšieho čistenia.

’H-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,8 - 2,2 (m, 32H, z toho 1,41 (s, 9H)), 2,34 (m, IH), 2,77 (bt, 2H), 3,10 (m, IH), 3,29 (m, IH), 3,40 (m, IH), 3,83 (m, IH), 4,17 (m, 2H), 4,30 (m, IH), 4,54 (m, IH), 5,07 (m, IH), 5,08 (s, 2H), 7,03 (m, IH), 7,05 - 7,4 (m, 7H).

(ii) H-(R)Cha-Pro-Rig(Z)

Banka, obsahujúca surový produkt Boc-(R)Cha-Pro-Rig(7.) v 100 ml etylacetátu sa ochladí na ľadovom kúpeli. Počas 5 min. sa prebubláva suchý HCl a roztok sa odparí a zbaví prebytku HCl. Produkt sa rozpustí vo vode a extrahuje dvakrát etylacetátom s cieľom odstránenia dimetylformamidu z predchádzajúceho stupňa. Vodná fáza sa zalkalizuje pomocou NaHCO₃ (vod.) a extrahuje sa dvakrát metylénchloridom. Spojené organické fázy sa premyjú vodou, vysušia (Na₂SO₄) a odparia. Získa sa 0,37 g (81 %) z dvoch stupňov.

’H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,8 - 2,4 (m, 24H), 2,82 (bt, 2H), 3,26 (m, 2H), 3,42 (bq, IH), 3,70 (m, 2H), 4,19 (m, 2H), 4,49 (bd, IH), 5,11 (s, 2H), 6,9 -7,5 (m, 8H).

(iii) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Rig(Z)

Zmes 0,18 g (0,32 mmol) H-(R)Cha-Pro-Rig(Z), prebytok uhličitanu draselného a 10 ml acetonitrilu sa zahrieva počas 2 hodín pri teplote 60 °C. Rozpúšťadlá sa odparia a surový materiál sa rýchle chromatografuje na silikagéli pri použití metylénchloridu/metanolu 95/5 ako elučného činidla. Výťažok predstavuje 0,20 g (88 %).

’H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,8 - 2,1 (m, 23H), 2,37 (m, IH), 3,1 - 3,5 (m, 7H), 4,0 - 4,2 (m, 2H), 4,54 (m, IH), 5,1 (m, 4H), 6,9 - 7,5 (m, 13H).

(iv) HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Rig x 2 HCl

Zmes 0,15 g (0,21 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Rig(Z), 10 ml etanolu, 4 kvapiek kone. HCl a malého množstva 5 % Pd/C sa hydrogenuje pri atmosférickom tla ku počas 1 hod. Zmes sa odfiltruje cez celit a odparí. Zvyšok sa lyofilizuje vo vode a získa sa 95 mg (64 %) produktu.

’H-NMR (500 MHz, MeOD): δ 0,85 - 2,1 (m, 23H),

2.30 (m, IH), 3,10 (m, 2H), 3,25 (m, IH), 3,35 (m, IH), 3,54 (m, IH), 3,85 - 4,0 (m, 3H), 4,03 (d, IH), 4,41 (m, IH), 4,50 (m, IH).

¹³C-NMR (125,5 MHz, D₂O): guanidínové a karbonylové uhlíky: δ 174,0, 168,9, 168,1, 157,5.

Príklad 80

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Rig x 2 HCl (i) Boc-(R)Cha-Aze-Rig(Z)

K roztoku 0,25 g (0,82 mmol) 4-aminoetyl-l-benzyloxykarbonylamidinopiperidínu (H-Rig(Z)), (pozri príprava východiskových materiálov), 0,31 g (0,86 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 0,40 g (3,3 mmol) dimetylaminopyridínu v 10 ml acetonitrilu a 2 ml dimetylformamidu sa pridá 0,17 g (0,86 mmol) N-(3-dimctylaminopropyl)-N'-etylkarbodnmid hydrochloridu. Reakčná zmes sa mieša počas 3 dní, potom sa odparí a rozdelí sa medzi vodný hydrogensíran draselný a metylénchlorid. Metylénchloridová vrstva sa premyje vodným hydrogenuhličitanom sodným a vodou, vysuší sa (Na₂SO₄) a odparí. Surový produkt, ktorý obsahuje určité množstvo dimetylformamidu sa použije v nasledujúcom stupni bez ďalšieho čistenia.

’H-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,85 (m, IH), 0,97 (m, IH), 1,1 - 1,75 (m, 26H, z toho 1,41 (s, 9H)), 1,82 (bd, IH), 2,53 (m, 2H), 2,77 (bt, 2H), 3,25 (m, 2H), 4,03 (q, IH), 4,08 (m, IH), 4,18 (m, 2H), 4,29 (m, IH), 4,78 (m, IH), 4,97 (m, IH), 5,09 (s, 2H), 7,1 - 7,4 (m, 7H), 7,65 (m, IH).

(ii) H-(R)Cha-Aze-Rig(Z)

Banka, obsahujúca surový produkt Boc-(R)Cha-Aze-Rig(Z) v 100 ml etylacetátu sa ochladí v ľadovom kúpeli. Počas 5 min. sa prebubláva suchý HCl a roztok sa odparí a zbaví prebytku HCl. Produkt sa rozpustí vo vode a extrahuje dvakrát etylacetátom s cieľom odstránenia dimetylformamidu z predchádzajúceho stupňa. Vodná fáza sa zalkalizuje pomocou NaHCO₃ (vod.) a extrahuje sa dvakrát metylénchloridom. Spojené organické fázy sa premyjú vodou, vysušia (Na₂SO₄) a odparia. Výťažok predstavuje 0,31 g (70 %) z dvoch stupňov.

’H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,8 - 1,9 (m, 20H), 2,48 (m, IH), 2,73 (m, IH), 2,85 (bt, IH), 3,35 (m, 2H), 4,05 (q, IH), 4,1 - 4,25 (m, 3H), 4,86 (m, IH), 5,12 (s, 2H),

6,9 -7,2 (m, 2H), 7,2 - 7,45 (m, 5H), 7,93 (m, IH).

(iii) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Rig(Z)

Zmes 0,31 g (0,57 mmol) H-(R)Cha-Aze-Rig(Z) a 93 mg (0,57 mmol) benzylakrylátu v 5 ml etanolu sa nechá stáť pri laboratórnej teplote jeden týždeň. Zmes sa odparí a spracuje rýchlou chromatografiou na silikagéle pri použití metylénchloridu/metanolu 94/6 ako elučného činidla. Výťažok predstavuje 0,20 g (49 %).

’H-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,8 - 1,0 (m, 2H), 1,1 - 1,8 (m, 18H), 2,48 (m, IH), 2,54 (bt, 2H), 2,68 (m, 2H), 2,81 (bt, 2H), 2,87 (m, IH), 3,20 (m, IH), 3,25 (m, IH),

3.31 (m, IH), 4,04 (q, IH), 4,1 - 4,2 (m, 3H), 4,84 (dd, IH), 5,05 - 5,15 (m, 4H), 7,0-7,5 (m, 12H), 8,03 (m, IH).

(iv) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Rig x 2 HCl

Pripraví sa zlúčenina uvedená v názve a čistí sa rovnakým spôsobom ako je opísaný v príklade 80 z 20,0 g (0,28 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Rig(Z). Výťažok predstavuje 30 mg (19 %) dihydrochloridovej soli.

'H-NMR 500 MHz,CDClj): δ 1,0-1,9 (m,20H), 2,33 (m, IH), 2,70 (m,lH), 2,83 (m,2H), 3,10 (m, 2H), 3,3-3,4 (m, 4Η), 3,85 (bd, 2H), 3,92 (m, rotamér), 4,14 (t,lH), 4,17 (m, rotamér), 4,31 (m,lH), 4,46 (m, IH), 4,89 (m, IH),

5,18 (m, rotamér).

¹³C-NMR (125,8 MHz, D₂O): guanidínové a karbonylové uhlíky: δ 175,4, 171,8, 168,8, 156,3.

Príklad 81

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-(S)Itp x 2 HCI (i) Boc-(R)Cha-Pro-(S)Itp(Ts)

Pri laboratórnej teplote sa 0,87 g (2,36 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 0,78 g (4,72 mmol) DMAP a 0,70 g (2,36 mmol) H(S)Itp(Ts) (pozri príprava východiskových materiálov) rozpustí v 12 ml acetonitrilu. Po 20 minútach miešania sa pridá 0,59 g (3,07 mmol) EDC. Po 18 hodinách sa rozpúšťadlo odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v CH₂C1₂, premyje sa vodou, kyselinou citrónovou (10 %), KHCO₃(vod.), vodou a vysuší sa (Na₂SO₄). Odparením sa získa l, 74 g (< 100 % výťažok (čistota asi 60 %)) požadovaného produktu, ktorý sa použije v nasledujúcom stupni bez čistenia.

FAB-MS: m/z = 647 (M⁺+ 1) (ii) H-(R)Cha-Pro-(S)Itp(Ts)

Boc-chrániaca skupina sa odstráni rovnakým spôsobom ako bol opísaný pre Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z) (pozri príklad 72 (ii) a získa sa 0,75 g (81 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

FAB-MS: m/z = 547 (M⁺+ 1) (iii) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-(S)Itp(Ts)

0,75 g (1,37 mmol) H-(R)Cha-Pro-(S)Itp(Ts), 0,38 g (2,74 mmol) K₂CO₃ sa vytrepe do 15 ml acetonitrilu. Pridá sa 0,39 g (1,65 mmol) benzylbrómacetátu a zmes sa mieša pri teplote 50 °C počas 2 hodín. Odparením rozpúšťadla s nasledujúcou rýchlou chromatografiou pri použití etylacetátu/metanolu 95/5 ako elučného činidla sa získa asi 530 g požadovaného produktu. FAB-MS: m/z = 695 (M⁺+l) (iv) HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro(S)Itp x 2 HCI

0,53 g (0,76 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-(S)Itp(Ts) sa rozpustí v 15 ml THF. NH₃ (g) sa kondenzuje do banky a pridá sa Na (m). Reakcia sa preruší po 30 min. kyselinou octovou a odparí sa NH₃ a THF. Zvyšok sa vymrazí do sucha z vody a surový produkt sa čistí pomocou RPLC (acetonitril/0,1 M HOAc 15/85) a získa sa 0,25 g (61 %) požadovaného produktu po vymrazení do sucha z vodnej HCI.

'H-NMR (500 MHz, D₂O): δ 0,9 - 2,09 (presahujúce m, 20H), 2,22 - 2,35 (m, IH), 3,2 - 3,36 (m, 4H), 3,44 - 3,62 (presahujúce m, 2H), 3,7 - 3,8 (m, IH), 3,87 - 3,99 (m, 2H), 4,33 - 4,48 (presahujúce m, 2H).

^I3C-NMR (500,13 MHz, D₂O): karbonylové a guanidínové uhlíky: δ 154,3, 168,1, 169,0 a 174,2.

Príklad 82

H-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig x 2 HCI (i) Boc-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig(Z)

174 mg (0,471 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (pozri príprava východiskových materiálov) 229 mg (1,78 mmol) DMAP, 130 mg (0,471 mmol) H-(R,S)Nig(Z) (pozri príprava východiskových materiálov sa zmieša v 2 ml CH₂C1₂ a pridá sa 117 mg (0,61 mmol) EDC a zmes sa mieša počas 4 dní. Zmes sa zriedi CH₂C1₂ a premyje sa vodou, dvakrát 0,3 M roztokom KHSO₄ a jedenkrát soľankou. Organická vrstva sa vysuší (Na₂SO₄), odfiltruje a odparením sa získa surový produkt, ktorý' sa dvakrát čistí rýchlou chromatografiou pri použití CH₂Cl₂/MeOH 95/5 ako prvého elučného činidla a CH₂Cl₂/MeOH 97/3 ako druhého elučného činidla a získa sa 0,104 g (35 %) zlúčeniny uvedenej v názve. MS: m/z =627 (M⁺+ 1) (ii) H-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig x 2 HCI mg (0,016 mol) Boc-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig(Z) sa rozpustí v 15 ml etylacetátu nasýteného HCI. Zmes sa nechá stáť pol hodiny. Zmes sa odparí a zvyšok sa rozpusti v 6 ml etanolu a 8 mg Pd/C (5 %) a pridá sa 0,1 ml IM HV1-roztoku a zmes sa hydrogenuje pri atmosférickom tlaku počas 1,5 hodiny. Po filtrácii cez hyflo a odparení rozpúšťadla sa získajú 4 mg zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 0,9 -1,58 (m, 6H), 1,58 - 2,45 (m, 13H), 2,65 (m, IH), 3,19 (m, IH), 3,34 (m, 2H), 3,4 - 3,73 (m, 4H), 3,82 (m, IH), 4,34 - 4,49 (m, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): karbonylové a guanidínové uhlíky: δ 155,1, 169,9 a 174,8.

Príklad 83

H-(R)Pro-Phe-Pab x 2 HCI (i) Boc-(R)Pro-Phe-Pab(Z)

K zmesi 1,2 g (3,31 mmol) Boc-(R)Pro-Phe-OH (pozri príprava východiskových látok a 1,70 g (13,91 mmol) DMAP v 40 ml CH₃CN sa pri laboratórnej teplote pridá 0,98 g (3,35 mmol) H-Pab(Z) (pozri príprava východiskových materiálov) rozpustneného v 1 ml DMF. Po 2 hod. miešania sa reakčná zmes ochladí na teplotu -18 °C a po častiach sa pridá 0,66 g (3,48 mmol) EDC a reakčná zmes sa nechá cez noc pri laboratórnej teplote. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpusti v 100 ml EtOAc a premyje sa 1 x x 30 ml vody, 3 x 30 ml 0,3M KHSO₄, 1 x 30 ml Na₂CO₃, 1 x 30 ml vody a vysuší sa. Odparením rozpúšťadla s nasledujúcou týchlou chromatografiou pri použití CH₂Cl₂/MeOH (95/5) ako elučného činidla sa získa 0,691 g (38 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) H-(R)Pro-Phe-Pab(Z)

0,673 g Boc-(R)Pro-Phe-Pab(Z) sa rozpustí v 30 ml EtOAc a roztok sa nasýti HCI (g) počas niekoľkých minút (z roztoku sa vyzráža biela zrazenina). Rozpúšťadlo a prebytok HCI sa odparí a ku zvyšku sa pridá 60 ml EtOAc a organická fáza sa dvakrát premyje 20 ml 2M NaOH. Premývacia voda sa extrahuje 1 x 25 ml EtOAc, extrakt sa spojí s ďalšou EtOAc fázou a spojené organické fázy sa premyjú vodou, vysušia a odparením sa získa 560 mg (98 %) požadovaného produktu.

'H-NMR (500 MHz, CDClj): δ 1,5 - 1,74 (m, 3H), 1,98 - 2,05 (m, IH), 2,78 - 2,85 (m, IH), 2,90 - 2,96 (m, IH), 3,0 - 3,2 (ABX-systém centrovaný pri 3,1, 2H), 3,62 (dd, IH), 4,3 - 4,45 (ABX-systém centrovaný pri 4,37, 2H), 4,58 (q, IH), 5,22 (s, 2H), 6,96 (bt, IH), 7,1 - 7,4 (m, 10H), 7,46 (d, 2H), 7,76 (d, 2H), 8,12 (d, IH).

(iii) H-(R)Pro-Phe-Pab x 2 HCI

200 mg H-(R)Pro-Phe-Pab(Z) sa rozpustí v 10 ml 95 % EtOH a 2 ml vody a zmes sa hydrogenuje nad 5 % Pd/C pri atmosférickom tlaku počas 5 hod. Filtráciou katalyzátora a pridaním 1 ml IM HCI s nasledujúcim odparením a vymrazením do sucha z vody sa získa zlúčenina uvedená v názve v 88 % výťažku.

'H-NMR (500 MHz, CDClj): δ 1,51 - 1,59 (m, IH), 1,68 - 1,80 (m, IH), 1,87 - 1,97 (m, IH), 2,19 - 2,29 (dd, IH), 3,20 - 3,33 (m, 3H, čiastočne zakrytý pikom rozpúšťadla), 4,27 - 4,54 (AB-systém centrovaný pri 4,48, 2H), 4,75 - 4,81 (m, IH), 4,87 (s, 2H), 7,2 - 7,3 (m, 5H), 7,45 (d, 2H), 7,75 (d, 2H).

NMR (125 MHz, D_;O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 166,7, 170,1 a 173,4.

Príklad 84

HOOC-CH₂-(R)Pro-Phe-Pab x 2 HCI (i) BnOOC-CH₂-(R)Pro-Phe-Pab(Z)

Ku kaši 244 mg (0,463 mmol) H-(R)Pro-Phe-Pab(Z) (pozri príklad 83) a 159,9 mg (1,157 mol) K₂CO₃ v 8 ml DMF/CH₃CN (5/3) sa pridá 127,2 mg (0,555 mmol) benzylbrómacetátu rozpusteného v 2 ml DMF a zmes sa mieša pri teplote 60 °C počas 1,5 hod a cez noc pri laboratórnej teplote. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozpustí v 50 ml EtOAc, premyje sa 2 x 20 ml vody a vysuší sa (Na₂SO₄). Odparením rozpúšťadla s nasledujúcou rýchlou chromatografiou pri použití CH₂Cl₂/MeOH (9/1) sa získa 176 mg (56 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky.

'H-NMR (300 MHz, CDClj): δ 1,45 - 1,80 (m, 3H), 2,06 (m, IH), 2,54 (m, IH), 2,92 - 3,28 (m, 6H), 4,3 - 4,5 (ABX-systém centrovaný pri δ = 4,4, 2H), 4,60 (dd, IH),

5,10 (zjavný s, 2H), 5,2 (zjavný s, 2H), 7,1 - 7,4 (m, 15H), 7,43 (d, 2H), 7,75 (d, 2H), 7,932 (d, IH).

(ii) HOOC-CH₂-(R)Pro-Phe-Pab x 2 HCI

170 mg (0,252 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Pro-Phe-Pab(Z) sa rozpustí v 12 ml EtOH/voda (5/1) a hydrogenuje sa nad 5 % Pd/C pri atmosférickom tlaku počas 4,5 hod. Katalyzátor sa odfiltruje, rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa vysuší vymrazením z HCI (aq.) a získa sa zlúčenina uvedená v názve.

'H-NMR (500 MHz, CD₃OD): δ 1,62 (m, IH), 1,82 (m, IH), 2,08 (m, IH), 2,38 (m, IH), 2,90 (dd, IH), 3,25 -

- 3,35 (m, 2H, čiastočne prekrývaný pikom rozpúšťadla), 3,80 (m, IH), 4,08 - 4,19 (AB-systém centrovaný pri δ=4,19, 2H) 4,39 (m, IH), 4,45 - 4,58 (AB-systém centrovaný pri δ= 4,50, 2H), 4,80 (m, IH), 7,20 - 7,35 (m, 5H), 7,45 (d, 2H), 7,75 (d, 2H).

¹³NMR (125 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 166,8, 169,1, 169,5 a 173,2.

Príklad 85 H-(R)Phe-Phe-Pab (i) Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z)

Boc-(R)Phe-Phe-OH (16,4 mmol) (pozri príprava východiskových materiálov), Pab(Z)-HCl (18,0 mmol) a 4-dimetylaminopyridín (24,6 mmol) sa rozpustí v 50 ml acetonitrilu. Roztok sa ochladí na teplotu ľad-voda a pridá sa hydrochlorid 1 -(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu. Chladiaci kúpeľ sa odstráni a reakčná zmes sa mieša cez noc. Rozpúšťadlo sa potom odparí pri zníženom tlaku, zvyšok sa rozpustí v 50 ml etylacetátu a výsledný roztok sa extrahuje 50 ml vody. Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z) vyzrážaný z dvojfázovej zmesi sa odfiltruje a premytím vodou sa získa 8,7 g (78 %) produktu, po vysušení vo vákuu pri teplote 45 °C počas 24 hodín.

'H-NMR (200 MHz, d-CHClj a d4-CH₃OH): δ 8,35 -

- 7,00 (m, 19H), 4,63 (t, IH), 4,3 - 4,1 (m, IH), 3,40 - 2,70 (m, 6H), 1,30 (s, 9H).

(ii) H-(R)Phe-Phe-Pab(Z)

Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (10,3 mmol) sa rozmieša v 70 ml etylacetátu a pridá sa 31 ml 3,3 M etylacetátu/HCl. Suspenzia sa mieša počas 4 hodín, potom sa hydrochloridová soľ H-(R)Phe-Phe-Pab(Z) odfiltruje a premyje sa niekoľkými podielmi etylacetátu. Soľ sa rozpustí v zmesi 50 ml metylénchloridu, 50 ml IM uhličitanu draselného a asi 5 ml etanolu. Organická vrstva sa oddelí a rozpúšťadlo sa odstráni pri zníženom tlaku a získa sa 5,0 g H-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (84 %).

(iii) H-(R)Phe-Phe-Pab

H-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,42 mmol) sa rozpustí v 10 ml tetrahydrofuránu a 1 ml vody. K roztoku sa pridá paládium na aktívnom uhlí (42 mg) a zmes sa hydrogenuje pri 315 kPa tlaku vodíka v Parrovej trepacej aparatúre počas 2 dní. Po úplnej hydrogenoiýze sa zmes zriedi metanolom a katalyzátor sa odfiltruje. Odparením rozpúšťadiel sa získa surový H-(R)Phe-Phe-Pab, ktorý sa čistí chromatografiou na neutrálnom oxide hlinitom (70 - 230 mesh) pri eluovaní metylénchloridom-metanolom-hydroxidom amónnym (80 : : 20 : 2). Získa sa 76 mg zlúčeninv uvedenej v názve (41 %).

'H-NMR (200 MHz, d₆-DMSO): δ 7,61 (d, 2H), 7,4 -

- 7,0 (m, 12H), 4,64 (m, IH), 4,44 (m, 2H), 4,13 (t, IH), 3,1 -

- 2,8 (m, 4H).

Príklad 86

HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab (i) MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z)

H-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,87 mmol) (pozri príklad 85 (ii) ) sa rozpustí v 10 ml tetrahydrofuránu. Roztok sa ochladí na kúpeli ľad-voda a pridá sa trietylamín (1,73 mmol) a potom metyloxalylchlorid (0,95 mmol). Chladiaci kúpeľ sa odstráni a reakčná sa mieša počas 18 hodín pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa zriedi etylacetátom a extrahuje sa vodou. Organická fáza sa oddelí a rozpúšťadlo sa odstráni pri zníženom tlaku a získa sa 0,45 g MeOOC-CO-(R)Phc-Phe-Pab(Z) (78 %), ktorý sa použije v nasledujúcom stupni bez ďalšieho čistenia. TSP-MS nájdené ako m/z 664 (vypočítané pre MH⁺ (C₃₇Hj₈N₅O₇) 664).

(ii) HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z)

MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,68 mmol) sa rozpustí v 4 ml tetrahydrofuránu a 2 ml vody. Pridá sa hydroxid litny (2,6 mmol) a reakčná zmes sa mieša pri laboratórnej teplote počas 1,5 hodiny. Po úplnej hydrolýze sa reakčná zmes zriedi 25 ml vody a okyslí sa prídavkom 0,5 ml kyseliny octovej. Zrazenina sa odfiltruje a premyje sa niekoľkými podielmi vody, čím sa získa 0,40 g surového HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (41 % v dvoch stupňoch).

'H-NMR (200 MHz, d₆-DMSO): δ 8,62 (m, 2H), 8,41 (d, IH), 7,89 (d, 2H), 7,4 - 6,9 (m, 17H), 5,10 (s, 2H), 4,54 (m, 2H), 4,34 (m, 2H), 3,2 - 2,6 (m, 4H).

(iii) HOOC-CO-(R)Phc-Phe-Pab

HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,20 mmol) sa rozmieša v 20 ml tetrahydrofuránu a 5 ml vody. K roztoku sa pridá paládium na aktívnom uhlí (52 mg) a zmes sa hydrogenuje pri 315 kPa tlaku vodíka v Parrovej trepacej aparatúre počas 2 dní. Po úplnej hydrogenoiýze sa zmes zriedi 40 ml metanolu a katalyzátor sa odfiltruje. Odparením rozpúšťadla sa získa 50 mg zlúčeniny uvedenej v názve (49 %).

'H-NMR (200 MHz, d₆-DMSO): δ 9,2 (s), 8,78 (d), 8,60 (m), 7,91 (d, 2H), 7,35- 6,8 (m, 12H), 4,6 - 4,0 (m, 4H), 3,0 - 2,6 (m, 4H).

Príklad 87

HOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Pab (i) BnOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Pab(Z)

H-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,87 mmol) (pozri príklad 85 (ii) ) a uhličitan draselný (2,6 mmol) sa rozmieša v 10 ml acetonitrilu. K zmesi sa pridá jódbenzylacetát (0,95 mmol) a roztok sa zahreje na teplotu 30 °C a pri tejto teplote sa mieša počas 2 dni. Po úplnej alkylácii sa rozpúšťadlo odstráni a zvyšok sa rozpustí v 10 ml etylacetátu. Roztok sa rýchle extrahuje 10 ml vody a z oddelenej organickej fázy sa vyzráža v názve uvedená zlúčenina. BnOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Pab(Z) sa odfiltruje a vysuší vo vákuu pri teplote 45 °C počas 24 hodín a získa sa 177 mg (28 %) BnOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Pab(Z).

’H-NMR (200 MHz, CDClj): δ 7,79 (s, 2H), 7,5 - 7,1 (m, 22H), 6,55 (t, IH), 5,21 (s, 2H), 5,03 (s, 2H), 4,64 (m, IH), 4,41 (m, 2H), 3,3 - 2,6 (m, 7H).

(ii) HOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Pab

BnOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,32 mmol) sa rozmieša v 30 ml tetrahydrofuránu a 3 ml vody. K roztoku sa pridá paládium na aktívnom uhlí (41 mg) a zmes sa hydrogenuje pri 315 kPa tlaku vodíka v Parrovej trepacej aparatúre počas 2 dní. Po úplnej hydrogenolýze sa zmes zriedi 40 ml vody a katalyzátor sa odfiltruje. Odparením rozpúšťadiel sa získa 95 mg zlúčeniny uvedenej v názve (59 %). TPS-MS nájdené ako m/z je 502 (vypočítané pre MH⁺(C₂₈H₃₂N₅O₄)502).

Príklad 88

H-(R)Cha-Pro-Mig (i) Boc-(R)Cha-Pro-Mig(Z)

K zmesi 0,344 g (0,93 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (pozri príprava východiskových materiálov), 0,245 g (0,93 mmol) H-Mig(Z) (pozri príprava východiskových materiálov) a 0,227 g (1,86 mmol) DMAP v 10 ml CHjCN sa za miešania pridá 0,232 g (1,21 mmol) EDC pri teplote -10 °C. Reakčná zmes sa nechá zahriať na laboratórnu teplotu a ponechá sa počas 5 dní. CHjCH sa odparí a zvyšok sa rozpustí v EtOAc a premyje sa vodou, NaHCO₃ (aq.) a soľankou. Organická vrstva sa vysuší (Na₂SO₄) a odparí. Surový produkt sa prečisti rýchlou chromatografiou pri použití gradientu EtOAc/MeOH 95/5 ako elučného činidla a získa sa 0,340 g (60 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) H-(R)Cha-Pro-Mig(Z)

0,34 g (0,55 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-Mig(Z) sa rozpustí v 8 ml EtOAc nasýteného HCI (g) a mieša sa počas 10 min. pri laboratórnej teplote. Po kvapkách sa pridá 10 ml nasýteného KOH (aq.). Vrstvy sa oddelia a vodná fáza sa extrahuje 3 x 8 ml EtOAc. Organické vrstvy sa spoja, premyjú sa soľankou, vysušia (Na₂SO₄) a odparením sa získa 0,286 g (100 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(iii) H-(R)Cha-Pro-Mig

0,050 g (0,132 mmol) H-(R)Cha-Pro-Mig(Z) sa rozpustí v 3 ml MeOH a hydrogenuje sa nad 10 % Pd/C pri atmosférickom tlaku cez noc. Roztok sa prefiltruje cez celit a rozpúšťadlo sa odparí a získa sa 0,040 g (80 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

’H-NMR (500 MHz, MeOD): δ 0,92 - 1,02 (m, 2H),

1,18 - 1,47 (m, 6H), 1,66 - 1,73 (m, 4H), 1,85 - 2,04 (m, 4H), 2,17 - 2,22 (m, IH), 2,95 - 2,98 (m, IH), 3,12 - 3,16 (m, IH), 3,47 - 3,55 (m, 2H), 3,62 - 3,66 (m, IH), 3,75 - 3,78 (m, IH), 3,85 - 3,89 (m, IH), 4,05 - 4,12 (m, 3H), 4,34 - 4,37 (m, IH).

Signály minoritného rotaméru sa objavujú pri δ 3,4, 3,7, 4,12-4,16,4,3.

MSm/z379(M⁺+ 1)

Príklad 89 (i) Boc-(R)Cha-Pro-Dig(Z)

K zmesi 0,280 g (0,76 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (pozri východiskových materiálov), 0,210 g (0,76 mmol) H-Dig(Z) (pozri príprava východiskových materiálov) a 0,186 g (1,52 mmol) DMAP v 8 ml CH₃CN sa za miešania pridá 0,189 g (0,99 mmol) EDC pri teplote -10 °C. Reakčná teplota sa nechá vystúpiť na laboratórnu teplotu a takto sa nechá počas 4 dní. CH₃CN sa odparí a zvyšok sa rozpustí v EtOH a premyje sa vodou, NaHCO₃ (aq.) a soľankou. Organická vrstva sa vysuší (Na₂SO₄) a odparí. Surový produkt sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití gradientu EtOAc/MeOH 95/5 ako elučného činidla a získa sa 0,210 g (44 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(ii) H-(R)Cha-Pro-Dig(Z)

0,210 g (0,33 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-Dig(Z) sa rozpustí v 8 ml EtOAc nasýteného HCI (g) a mieša sa počas 10 minút pri laboratórnej teplote. Prikvapká sa 8 ml nenasýteného roztoku KOH (aq.). Vrstvy sa oddelia a vodná fáza sa extrahuje 3 x 8 ml EtOAc. Organické vrstvy sa spoja, premyjú soľankou, vysušia (Na₂SO₄) a odparením sa získa 0,146 g (83 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

(iii) H-(R)Cha-Pro-Dig

0,046 g (0,087 mmol) H-(R)Cha-Pro-Dig(Z) sa rozpustí v 3 ml MeOH a hydrogenuje sa nad 10 % Pd/C pri atmosférickom tlaku cez noc. Roztok sa filtruje cez celit a rozpúšťadlo sa odparí a získa sa 0,040 g (100 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

’H-NMR (500 MHz, MeOD): δ 0,90 - 1,04 (m, 2H),

1,10 - 1,47 (m, 6H), 1,66 - 1,74 (m, 4H), 1,78 - 2,05 (m, 4H), 2,13-2,21 (m, IH), 2,74 - 2,83 (m, IH), 2,94 -

- 2,99 (m, IH), 3,15 - 3,29 (m, IH), 3,44 - 3,57 (m, 2H), 3,65 - 3,87 (m, 3H), 4,07 - 4,25 (m, 3H), 4,35 - 4,39 (m, 2H).

Signály minoritného rotaméru sa objavujú pri δ 4,29 -4,32.

MS m/z 393 (M⁺+ 1)

Príklad 90

H-(R)Cha-Aze-Dig (i) Boc-(R)Cha-Aze-Dig(Z)

Zlúčenina uvedená v názve sa pripraví z Boc-(R)Cha-Aze-OH a H-Dig(Z) (pozri príprava východiskových materiálov) podľa postupu pre Boc-(R)-Cha-Pro-Dig(Z) vo výťažku 0,253 g (54 %).

(ii) H-(R)Cha-Aze-Dig(Z)

Zlúčenina uvedená v názve sa pripraví z Boc-(R)Cha-Aze-Dig(Z) podľa postupu pre Boc-(R)Cha-Pro-Dig(Z) vo výťažku 0,210 g (100%).

(iii) H-(R)Cha-Aze-Dig

0,060 g (0,117 mmol) H-(R)Cha-Aze-Dig(Z) sa rozpustí v 3 ml MeOH a hydrogenuje sa nad 10 % Pd/C pri atmosférickom tlaku cez noc. Roztok sa filtruje cez celit a odparením rozpúšťadla sa získa 0,042 g (95 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

'H-NMR (500 MHz, MeOD): δ 0,91 - 1,02 (m, 2H),

1,18 - 1,48 (m, 6H), 1,66 - 1,90 (m, 8H), 2,15 - 2,17 (m, IH), 2,66 - 2,68 (m, IH), 2,80 - 2,83 (m, IH), 3,14 -

- 3,29 (m, IH), 3,39 - 3,44 (m, IH), 3,72 - 3,80 (m, 2H),

4,01 - 4,04 (m, 1H), 4,14 - 4,23 (m, 2H), 4,48 - 4,49 (m, 1H), 4,60-4,64 (m, 1H).

Signály minoritného rotaméru sa objavujú pri δ 2,25, 2,6, 4,3,4,67.

MS m/z 372 (M⁺+ 1).

Príklady farmaceutických prípravkov

Zlúčenina podľa vynálezu môže byť formulovaná do pevných dávkových foriem na orálne podanie, ako sú ploché tablety, potiahnuté tablety alebo tablety s upraveným uvoľňovaním, kvapalných alebo pevných, alebo polopevných dávkových foriem na rektálne podanie, ako lyofilizované substancie alebo kvapaliny ako emulzie alebo suspenzie na parenterálne použitie, ako kvapalné, pevné alebo polopevné dávkové formy na topickú aplikáciu.

Do tlakových aerosólov alebo do inhalátorov prášku na orálne alebo nasálne podanie.

Príklad P1

Tablety na orálne podanie

Pripraví sa 1000 tabliet s nasledujúcich zložiek: účinná zložka 100 g, laktóza 200 g, polyvinylpyrolidón 30 g, mikrokryštalická celulóza 30 g, stearát horečnatý 6 g.

Účinná zložka a laktóza sa zmiešajú s vodným roztokom polyvinylpyrolidónu. Zmes sa vysuší a melie za tvorby granúl. Potom sa primieša mikrokryštalická celulóza a ďalej stearát horečnatý. Zmes sa následne lisuje na tabletovacom zariadení a získa sa 1000 tabliet, každá s hmotnosťou 100 mg účinnej zložky.

Príklad P2

Roztok na parenterálne podanie

Pripraví sa roztok z nasledujúcich zložiek: účinná látka 5 g, chlorid sodný pre injekcie 6 g, hydroxid sodný na úpravu pH na pH 5 - 7, voda pre injekcie do 1000 ml.

Účinná zložka a chlorid sodný sa rozpustia vo vode. pH sa upraví 2M NaOH na pH 3 - 9 a roztok sa plní do sterilných ampúl.

Príklad P3

Tablety na orálne podanie

1. účinná zložka 150 g,

2. kremičitan hlinitosodný 20 g,

3. parafín 120 g,

4. mikrokryštalická celulóza 20 g,

5. hydroxypropylcelulóza 5 g,

6. stearylfumarát sodný 3 g.

- 4 sa zmiešajú a pridá sa vodný roztok 5. Zmes sa suší a melie a primieša sa 6. Zmes sa potom lisuje na tabletovacom zariadení.

Príklad B6

Inhalačný prášok

Účinná zlúčenina sa mikronizuje na dýzovom mlyne na častice s veľkosťou vhodnou na inhaláciu (hmotnostný priemer < 4 pm).

100 mg mikronizovaného prášku sa naplní do práškového viacdávkového inhalátora (Turbohaler^R). Inhalátor je opatrený dávkovacou jednotkou, ktorá dodáva dávku 1 mg.

Biológia

Stanovenie času trombinovej zrazeniny (Thrombin clotting Time (TT)):

Ľudský trombín (T 6769, Sigma Chem. Co.) v roztoku pufra, pH 7,4, 100 p a roztoku inhibítora, 100 pl, sa inkubuje jednu minútu. Potom sa pridá Poolovaná normálna cit rátovaná ľudská plazma, 100 pl a meria sa čas tvorby zrazeniny v automatickom zariadení (KC 10, Amelung).

Čas tvorby zrazeniny v sekundách sa vynesie proti koncentrácii inhibítora a stanoví sa IC₅₀TT interpoláciou.

IC₅₀TT je koncentrácia inhibítora, ktorá zdvojnásobuje čas zrážania trombínu v ľudskej plazme.

Stanovenie času aktivovaného parciálneho tromboplastinu (APTT)

APTT sa stanoví v poolovanej normálnej ľudskej citrátovanej plazme s činidlom PTT Automated 5 vyrobenom formou Stago. K plazme sa pridali inhibítory (10 21 roztoku inhibítora k 90 pl plazmy) a APTT sa stanovil v zmesi použitím koagulačného analyzéra KC10 (Amelung) podľa inštrukcií výrobcu činidla. Čas zrážania v sekundách sa vyniesol proti koncentrácii inhibítora v plazme a IC₅₀APTT sa stanovil interpoláciou.

IC50APTT je definovaná ako koncentrácia inhibítora v plazme, ktorá zdvojnásobuje čas aktivovaného parciálneho trombopastinu.

Stanovenie trombínového času ex vivo

Inhibícia trombínu po orálnom podaní zlúčenín sa hodnotila na bdelých krysách, ktorým sa dva dni pred pokusom zaviedol katéter na odber vzoriek krvi z krčnej tepny. V deň pokusu sa vzorky odoberali v stanovených časoch po podaní zlúčeniny do plastových skúmaviek, obsahujúcich 1 diel roztoku citrátu sodného (0,13 mol na I) a 9 dielov krvi. Skúmavky sa odstreďovali na získanie plazmy chudobnej na doštičky. Plazma sa použila na stanovenie trombínového času ako je opísané.

Citrátovaná plazma krýs, 100 pl, sa zriedi salinickým roztokom, 0,9 %, 100 pl, a koagulácia plazmy sa začne prídavkom ľudského trombínu (T 6769, Sigma Chem. Co., USA) v roztoku pufra, pH 7,4, 100 pl. Čas tvorby zrazeniny sa meria v automatickom zariadení (KC 10, Amelung, Nemecko).

Stanovenie inhibičnej konštanty Kj pre ľudský kalikreín

Vykonali sa stanovenia K; metódou s chromogénnym substrátom na Cobas Bio odstredivkovom analyzátore vyrobenom firmou Roche (Bazilei, Švajčiarsko). Zostatková enzýmová aktivita po inkubácii ľudského plazmového kalikreínu s rôznymi koncentráciami testovanej zlúčeniny sa stanovila pri troch rôznych koncentráciách substrátu a merala sa ako zmena v optickej absorbancii pri 450 nm a teplote 37 °C.

Ľudský plazmový kalikreín (E.C.3,4,21,34, Chromogenix AB, Môlndal, Švédsko) 250 pl 0,4 nkat/ml v pufre (0,05 mol/1 Tris-HCl, pH 7,4,1 0,15 upravené s NaCl) s hovädzím albumínom 5 g/1 (kat. č. 810033, ICI Biochemicals Ltd, High Wycombe, Bucks, GB) sa inkuboval 300 s roztokom testovanej zlúčeniny v 0,15 mol/1 NaCl obsahujúceho 10 g/1 albumínu. V tomto stupni sa pridalo 10 pl vody. Potom sa pridalo 40 pl kalikreínového substrátu (S-2302, Chromogenix AB, 1,25, 2,0 alebo 4,0 mmol/1 vo vode) spolu s ďalšími 20 pl vody a sledovala sa absorbancia.

Kj sa hodnotila z Dixonových grafov, t. j. diagramov koncentrácie inhibítora l/_A/min.), kde údaje z rôznych substrátových koncentrácii tvoria stúpajúcu čiaru, ktorá sa prerušuje pri x = -K,.

Tabuľka 1

Príklad	plC50 TT
¹	HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab	8.05
Kí»)	Bn-OOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)	4.88
r	HOOC-CH2CH2-(R)Cgl-Aze-Pab	7.92
3	HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab	7.92
4	HOOC-CH2CH2-(R)Cgl-Pro-Pab	7.93
5	(HOOC-CH2)2-(R)Cgl-Pro-Pab	7.27
6	H-(R)Cgl-Pic-Pab	7.67
7	HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Cgl-Plc-Pab	7.38
8	H-(R)Cha-Aze-Pab	8.26
9	HOOC-CH2<R)Cha-Aze-Pab	7.97
10	HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Azc-Pab	8.10
11	HOOC-CH2-(Ri*S)CH(COOH)-(R)Cha-Azc-PaWa	8.03
12	HOOC-CH2-(I¥tS)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/b	8.05
13	HOOC-CH2CH2-(R)Cha-Aze-Pab	8.22
14	HOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Aze-Pab	7.82
15	H-(R)Cha-Pm-Pab	8.17
16	HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pab	8.55
17	HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab	8.12
18	HOOC-CH2CH2-(R)Cha-Pro-Pab	8.14 1
19	HOOC-CH2CH2P-(Me)(R)Cha-Pro-Pab	7.95 j
20	HOOC-CH2-(lW»S)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/a	7.90
21	HOOC-CH2-(R*uS)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/b	7.93
22	HOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Clia-Pro.Pab	8.01
23	Et-OOC-(CH2)3-(R)Cha-Pro-Pab	7.98
24	Ph(4-COOH)-SO2-(R)Cha-Pra-Pab	7.67
25'	H-(R)Cha-Pic-Pab	8.08
26	HOOC-CH2<R)Cha-Pic-Pab	8.27
27	HOOC-CH2-(RfckŕS)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/'a	7.92
28	HOOC-CH2-(Ri*S)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/b	7.89
29	HOOC-CH2CH2-(R)Cha-Pic-Pab	8.18
31	HOOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab	6.81
32	Mc-OOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab	6.85
33	H2N-CO-CH2-(R.)Cha-Pic-Pab	8.05
34	Boc-(R)Cha-Pic-Pab	7.18
35	Ac-(R)Cha-Píc-Pab	6.79
36	Me-SO2-(R)Cha-Píc-Pab	8.09
37	H-(R)Cha-(R,S)bctaPic-Pab	6.91
38	HOOC-CH2CH2-(R)Cha-(R,S)bctaPic-Pab	6,55
I 39	HOOC-CH2-(R)Cha-Val-Pab	7.86
40	HOOC-CH2CH2-(R)Cha-Val-Pab	7.03
41	H-(R)Hoc-Azc-Pab	7.79
42	HOOC-CH2CH2-(R)Hoc-Aze-Pab	7.75
43	HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Hoc-Pro-Pab	7.67
44	HOOC-CH2-(R)Hoc*Pic-Pab	7.85
45	(HOOC-CH2)2-(R)IIoc-Píc-Pab	6.96
46	HOOC-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab	8.12
47	HOOC-CH2CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab	8.05
48	HOOC-CH2CH2-(R)Tic-Pro-Pab	6.23
49	HOOC-CH2CW2-(R)Cgl-Aze-Pig	7.64

\|50	HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig	7.58
51	H-(R)Cha-Azc-Pig	7.44
52	HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pac	7.52
53	H-(R)Cha-Pro-Pac	7.65
54	H-(R)Cgl-lle-Pab	6.34
55	H-(R)Cgl-Aze-Pah	7.98
56	HOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab	8.03
57	Me-OOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab	8.01
58	Et-OOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab	8.05
58(1)	Et-OOC-CH2-(r)Cgl-Aze-Pab(Z)	5.03
59	nBu-OOC-CH2-(R)CgI-Aze-Pab	7.92
60	nHex-OOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab	7.65
61	H-(R)Cgl-Pn>-Pac	7.74
62	HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pac	8.02
63	BOOC-CH2CH2-(R)Cgl-Pro-Pac	7.82
64	HOOC-CH2CH2/R)Cha-Aze-Pac	7.86
65	HOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pig	7.99
66	HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pig	8.05
67	BOOC-CH2CH2-(R)Cha-Pro-Pig	7.92
68	(HOOC-CH2)2-(R)Cgl-Pro-Pig	6.73
69	HOOC-CH2CH2(HOOC-CH2)-(R)Clia-Pro-Pig	7.39
70	HOOC-CB2-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp	6.74
71	HOOC-CH2-(R)Cha-Aze-(R^)Jtp	7.04
72	H-(R)Cha-Pic-Itp	6.73
73	HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp	7.42
74	H-(R)Cgl-Prc-(R,S)Hig	7.27
75	HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig	7.53
76	H-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig	7.70
77	H-(R)Cgl-Aze-Rig	6.67
78	H00C-CH2-(R)Cgl-Aze-Rig	7.09
79	H00C-CH2-(R)Cha-Pro-Rig	7.42
80	HOOC-CH2CH2-(R)Cha-Azc-Rig	6.75
81	H00C-CH2-(R)Cha-Pro-(S)Jtp	7.31
82	H-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig	7.11
88	H-(R)Cha-Pro-Mig	6.57
89	H-(R)Cha-Pro-Dig	7.89
90	H-(R)Cha-Aze-Dig	7.85

Skratky:
ÄC=	acetyl
aq=	vodný
Aze=	azetidín-2- karboxylová kyselina
betaPic=	piperidín-3-karboxylová kyselina
Boc=	terc.butyloxykarbonyl
Boc-Dig(Z)=	3-( N-terc. butyloxykarbonylaminoetyl)-l-(W-benzyloxykarbonylaniidino)azetidin

SK 283150 Β6

Boc-Mig(Z)=

Boc-Pig(Z)= Boc-PigfZlj· soíanka®

Bn®

Bu=

Cgl=

Cha®

CME-CDI®

DBU®

DCC=

DCU®

DMAP=

DMF®

DMSO®

EDC®

Et“

EtOAc=

EtOH®

Gly= h®

HC1

Hex=

HOAc®

HOBt=

HOC=

Hop®

HOSU=

H-Dig(2)®

H-Dig=

H—(R,S)Híg(Z)H-(R,S)HÍg®

H-Hig®

H-(R,S)Itp(Ts)=

H-(R,S)Itp=

H-(S)Itp(Ts)=

H-(S)Itp=

H-Itp=

H-Migtž)H-Mig=

H-(R,S)Nig(Z)=

H-(RS)Nig=

H-Pab=

H-Pab(Z)®

H-Pac=

H-Pac(Z)=

H-Pig=

H-Pig(Z)H-Pig(z)₂H-Rog(Z)=

H-Rig=

He®

MeOH=

MPa=

Ms=

NMM®

Pd/C=

Pgl®

3- (N-terc.butyloxykarbonylaninoraetyl )-l-(N-benzyloxykarbonylajňdino)azetidin

4- (N-terc.butyloxykarbonylaminoetyl)“l-(N'-benzyloxykarbonylamidino)piperidín 4-(N-terc.butyloxykarbonyiaBinoetyl)-l-(N,tf’-dibenzylcxykarbonyLanidino)piperidin nasýtený vodný/NaCl roztok benzyl butyl cyklohexylglycin β-cyklohexylalanin l-cyklohexyl-3-(2-morfolinoetyl)karbodlinid-neto-p-toluénsulfonát l,8-diazabicyklo(5.4.0]undec-7-én dicyklohexylkarbodiímLd dlcyklohexyliiočovina

N,N-dimetylaeinopyridín dimetylformanid diroetylsulfoxid l-(3-dinietylaBÍnopropyl)-3etylénkarbodiinid hydrochlorid etyl etylacetát etanol glycin hodiny kyselina chlorovodíková hexyl kyselina octová H-hydroxybenzotriazol homocyklohexylalanín honofenylalanín N-hydrcxysukcínimid 3-aminoetyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)azetidin 3-aminoetyl-l-amidlnoazetidin (3RS)-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)-3-aminoetylpyrolidín (3RS)-l-amidino-3-aminoetylpyrolidín l-amidino-3-aninoetylpyrolidin (4RS)-l,3-diaža-2-tozylinino-4-aminoetylcyklohexán (4RS)-l,3-diaza-2-imino-4-anir.oetylcyklohexán (4R)-l,3-diaza-2-tozylimino-4-aroinoetylcyklohexán (4R)-1,3-diaza-2-imino-4-aminoetylcyklohexán l,3-diaza-2-inino-4-aininoetylcyklohexán 3-aninoaetyl-l-(N-ben2yloxykarbonylamidinojazetidín

3- aminometyl-l-anidinoa2etidin (3RS)-1-(N-benzyloxykarbonylanidino)-3-aaínonietylpyrolidín (3RS)-l-anidino-3-aminometylpyrolidin l-anidíno-4-aninonetylbenzén

4- aminometyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidinojbenzén l-amidino-4-aminonetylcyklohexán 4-aninoBetyl-l-(N-ben2yloxykarbonylanidincjcyklohexán

4-aminometyl-l-anidinopÍperidín 4-amincmetyl-l-(K-benzyloxykarbonylamidinojpxperidin

4-arainonetyl-l-(Ni N¹-dibenzyloxykarbonylaraldino)piperidin 4-aainoetyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidinojpiperidín 4-aminoetyl-l-N-anidinopiperí.dín netyl metanol megapascal rnezyl

N-metylmorfolín paládium na aktívnom uhli fenylglycin

Phe= Pic= Pro® RPLC®

Tf=

TFA=

THF®

TiC= ľs= val®

-y '“NH

Pab (nsl) fenylalanín pipekolínová kyselina prolín vysokotlaková kvapalinová chromatografia s reverznou fázou triíluôrmetylsulfonyl kyselina trifluóroctcvá tetrahydrofurán l-karboxy-1,2,3,4-tetrahydroizochinolin tozyl valín benzyloxykarbonyl

Prefíxy n, s, i a t majú svoje zvyčajné významy: normálny, izo, sek. a terciárny. Stereochémia pre aminokyseliny nie je uvedená (S) ak nie je uvedené inak.

(vlnité čiary na atómoch dusíka v štruktúrnych vzorcoch uvedených ďalej označujú väzbovú polohu fragmentu).

Pae

Pig (n=l) Rig <n=2)

lep (r>s2)

Nig (n = lj

Hig (n=2)

Mig (n=l) Dig |η>.η

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Peptidový derivát všeobecného vzorca (I)

A¹-----A²-----NH-----(CH₂)_n-----B (I), kde

A¹ predstavuje štruktúrny fragment vzorca (Ha), (Ilb) alebo (líc) (fc·) (.»>

kde k je celé číslo 0,1 alebo 2, q je celé číslo 0, 1, 2 alebo 3,

R¹ predstavuje H, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka alebo R”OOC-alkyl-, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 4 atómy uhlíka a môže byť substituovaná v polohe a ku karbonylovej skupine a α-substituent je skupina R¹⁷-(CH₂)_P-, kde p je 0, 1 alebo 2 a R¹⁷ je metyl, COOR¹², kde R¹² je H alebo alkylová skupina, obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka a R¹¹ je H alebo alkylová skupina, obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, alebo

R¹ predstavuje R¹³-NH-CO-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atómy uhlíka a kde R¹³ je H alebo -CH₂COOR¹², kde R¹² má definovaný význam, alebo

R¹ predstavuje R¹²OOC-CH₂-OOC-alkyl, kde alkylová skupina má 1 až 4 atómy uhlíka a kde R¹² má definovaný význam, alebo

R¹ predstavuje R¹⁴SO2-, Ph(4-COOR¹²)-SO2-, Ph(3-COOR¹²)-SO2-, Ph(2-COOR¹²)-SO2-, kde R¹² má definovaný význam a R¹⁴ je alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, alebo

R¹ predstavuje -COO-R¹⁵, kde R¹⁵ je alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, alebo

R¹ predstavuje -CO-OR¹⁵, kde R¹⁵ má definovaný význam, alebo

R¹ predstavuje -CO-(CH₂)_P-COOR¹², kde R¹² má definovaný význam a p je celé číslo 0, 1 alebo 2, alebo

R² predstavuje H alebo alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka alebo R^2lOOC-alkyl-, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 4 atómy uhlíka a kde R²¹ je H alebo alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka,

R³ predstavuje alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka a alkylová skupina môže alebo nemusí niesť atómy fluóru, alebo

R³ predstavuje cyklohexyl- alebo fenylovú skupinu,

R⁴ predstavuje H alebo fenylovú skupinu.

A² predstavuje štruktúrny fragment vzorca (Hla), (Illb) alebo (Hlc)

P m

Y

Y

Y

R³

R⁵n

B (IVb) je celé číslo 0, 1 alebo 2, je celé číslo 1, 2 alebo 3, predstavuje metylénovú skupinu alebo predstavuje etylénovú skupinu, alebo predstavuje n-propylénovú skupinu, má definovaný význam, predstavuje H, je celé číslo 1 alebo 2, predstavuje štruktúrny fragment vzorca (IVa) alebo íiv·· kde r je celé číslo 0 alebo 1,

X¹ predstavuje CH₂, NH alebo nie je prítomný,

X² predstavuje CH₂, NH alebo C=NH,

X³ NH, C=NH, N-C(NH)-NH₂, CH-C(NH)-NH₂,

X⁴ predstavuje CH₂,

X⁵ predstavuje C(NH)-NH₂,

R⁶ je H, buď vo forme zlúčeniny samej osebe, alebo ako jej stereoizoméry, alebo vo forme fyziologicky prijateľnej soli.
2. Zlúčenina všeobecného vzorca (V) podľa nároku 1

A¹----A²-----NH----(CH₂)_n----B

D (V), kde

A¹ predstavuje štruktúrny fragment vzorca (Ila), Ilb), (líc) .<>> (.wj I») kde k je celé číslo 0, 1 alebo 2, q je celé číslo 0,1, 2 alebo 3,

R¹ predstavuje R’'OOC-alkyl-, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 4 atómy uhlíka a môže byť substituovaná v polohe a ku karbonylovej skupine a α-substituent je skupina R^l7-(CH₂)_p-, kde p je 0, 1 alebo 2 a R¹⁷ je COOR¹², kde R¹² je H alebo alkylová skupina, obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka a R¹¹ je H alebo alkylová skupina, obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, alebo benzylová skupina, alebo

R¹ predstavuje R¹³-NH-CO-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atómy uhlíka a kde R¹³ je H alebo -CH₂COOR¹², kde R¹² má definovaný význam, alebo

R¹ predstavuje R^l2OOC-CH₂-OOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atómy uhlíka a kde R¹² má definovaný význam, alebo

R¹ predstavuje R¹⁴SO2-, Ph(4-COOR¹²)-SO2-, Ph(3-COOR¹²)-SO2-, Ph(2-COOR¹²)-SO2-, kde R¹² má definovaný význam a R¹⁴ je alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, alebo

R¹ predstavuje -COO-R¹⁵, kde R¹⁵ je alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, alebo

R¹ predstavuje -CO-OR¹⁵, kde R¹⁵ má definovaný význam, alebo

R¹ predstavuje -CO-(CH₂)_P-COOR¹², kde R¹² má definovaný význam a p je celé číslo 0,1 alebo 2, alebo

R² predstavuje H alebo alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka alebo R²¹OOC-alkyl-, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 4 atómy uhlíka a kde R²¹ je H alebo alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka alebo benzylová skupina,

R³ predstavuje alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka a alkylová skupina môže alebo nemusí niesť jeden alebo viac atómov fluóru, alebo

R³ predstavuje cyklohexyl- alebo fenylovú skupinu,

R⁴ predstavuje H alebo fenylovú skupinu,

A² predstavuje štruktúrny fragment vzorca (Hla), (Illb) alebo (IIIc) kde p je celé číslo 0,1 alebo 2, m je celé číslo 1, 2 alebo 3,

Y predstavuje metylénovú skupinu alebo

Y predstavuje etylénovú skupinu, alebo

Y predstavuje n-propylénovú skupinu, R³ má definovaný význam,

R⁵ predstavuje H, n je celé číslo 1 alebo 2, B predstavuje štruktúrny fragment vzorca (IVa) alebo (IVb)

I (ιν«·

Μ») kde r je celé číslo 0 alebo 1,

X¹ predstavuje CH₂, NH alebo nie je prítomný,

X² predstavuje CHj, NH alebo C=NH,

X³ NH, C=NH, N-C(NH)-NH₂, CH-C(NH)-NH₂,

X⁴ predstavuje CH₂,

X⁵ predstavuje C(NH)-NH₂,

R⁶ je H,

D je Z alebo (Z)₂,

Z je benzyloxykarbonylová skupina, ktorá sa viaže k amidínovým alebo guanidínovým dusíkom prítomným v B buď sama osebe,, alebo ako jej stereoizoméry alebo vo forme fyziologicky prijateľnej soli.
3. Zlúčenina podľa nárokov 1 alebo 2, kde A¹ je štruktúrny fragment vzorca (Ha) alebo (Ilb).
4. Zlúčenina podľa jedného alebo viacerých z predchádzajúcich nárokov 1 až 3, kde R¹ predstavuje RⁿOOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atómy uhlíka a R¹¹je H.
5. Zlúčenina podľa jedného alebo viacerých z predchádzajúcich nárokov 1 až 4, kde A² je štruktúrny fragment vzorca (Hla).
6. Zlúčenina podľa jedného alebo viacerých z predchádzajúcich nárokov 1 až 4, kde A² je štruktúrny fragment vzorca (Illb).
7. Zlúčenina podľa jedného alebo viacerých z predchádzajúcich nárokov 1 až 6, kde B je štruktúrny fragment vzorca (IVa), kde X¹, X² a X⁴ sú CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2, r je 1 an je 1.
8. Zlúčenina podľa jedného alebo viacerých z predchádzajúcich nárokov 1 až 6, kde B je štruktúrny fragment vzorca (IVa), kde X¹, X² a X⁴ sú CH2, X³ je N-C(NH)-NH2, r je 0 alebo 1 a n je 1 alebo 2.
9. Zlúčenina podľa jedného alebo viacerých z predchádzajúcich nárokov 1 až 6, kde B je štruktúrny fragment vzorca (IVb), kde X⁵je C(NH)-NH₂ a R⁶ je H an je 1.
10. Zlúčenina podľa jedného alebo viacerých z predchádzajúcich nárokov 1 až 6, kde B je štruktúrny fragment vzorca (IVa), kde X¹ aX³ sú NH, X²je C=NH, X⁴ je CH₂, r je 1 a n je 2.
11. Zlúčenina podľa jedného alebo viacerých z predchádzajúcich nárokov 1 až 6, kde B je štruktúrny fragment vzorca (IVa), kde X¹ nie je prítomný, X² a X⁴ sú CH2, X³ je N-C(NH)-NH2, r je 0 a n je 1 alebo 2.
12. Zlúčenina podľa nároku 1 alebo 2, kde n je 1 alebo 2, A¹ je štruktúrny fragment vzorca (Ha), kde k je 0 alebo 1, R¹ predstavuje RⁿOOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atómy uhlíka, R² predstavuje H, R³ predstavuje cyklohexylovú skupinu, A² predstavuje H štruktúrny fragment vzorca (IIla), kde Y predstavuje metylénovú skupinu, etylénovú skupinu alebo n-propylénovú skupinu a výsledný 6-členný kruh môže alebo nemusí niesť v polohe 4 alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, R⁵ predstavuje H, B predstavuje štruktúrny fragment vzorca (IVa), kde X¹, X² a X⁴ sú CH2 a X³ je CH-C(NH)-NH2 alebo N-C(NH)-NH₂, r je 0 alebo 1, alebo X¹ a X³ je NH, X² je C=NH, X⁴ je CH₂, r je 1 alebo X¹ nie je prítomný, X² a X⁴ sú CH2, X³ je N-C(NH)-NH2, r jc 0.
13. Zlúčenina podľa nároku 1 alebo 2, kde n je 1, A¹ je štruktúrny fragment vzorca (Ha), kde k je 0 alebo 1, R¹predstavuje R'^OC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atómy uhlíka, R² predstavuje H, R³ predstavuje cyklohexylovú skupinu, A^x predstavuje H štruktúrny fragment vzorca (Hla), kde Y predstavuje metylénovú skupinu, etylénovú skupinu alebo n-propylénovú skupinu a výsledný 6-členný kruh môže alebo nemusí niesť v polohe 4 alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, R⁵ predstavuje H, B predstavuje štruktúrny fragment vzorca (IVb), kde X⁵ predstavuje C(NH)-NH₂aR⁶jeH.
14. Zlúčenina podľa nároku 1, vybraná zo skupiny zahrnujúcej

HOOC-CHj-(R)Cgl-Aze-Pab

HOQC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab (HOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pab H-(R)Cgl-Pic-Pab HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Cgl-Pic-Pab H-(R)Cha-Aže-Pab HOOC-CHj-’ (R) Cha-ÄZe-Pab H00C-CH₂- (R, S) CH (COOH) - (R) Cha-Aze-Pab HOOC-CH₂- (R****5) CH (COOH) - (R) Cha-Aze-Pab/a HOOC-CHj- (R*^) CH (COOH) - (R) Cha-Aze-Fab/b H0oC-CH--CH₂-(R)Cha-Aze-Pab HOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab H-(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab Hooc-CHj-(Me)(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(Me)(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH₂- ch (COOH) - (R)Cha-Pro-Pab/a

HOOC-CH₂- (R* S) CH (COOH) - (R)Cha-Pro-Pab/b HOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab EtOOC-CH₂-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab Ph(4-COOH)-SO₂-(R)Cha-Pro-Pab H-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CH₂- (R G) CH (COOH) - (R) Cha-Pic-Pab/a HOOC-CH₂- (R***Š) CH (COOH) - (R)Cha-Pic-Pab/b HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CH₂-CO-(R)Cha-Pic-Pab Mr-OOC-CH₂“CO- (R)Cha-Pic-Pab H₂N-CO~CH₂-(R)Cha-Pic-Pab Bou-(R)Cha-Pic-Pab Ac-(R)Cha-Pic-Pab

Me-SO₂-(R)Cha-Pic-Pab

H—(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab HOOC-CHj-CKj- (R) Cha-(R, S) betaPie-Pab HOOC-CHj-(R)Cha-Val-Pab HOOC-CK₂-CH₂- (R) Cha-Val-Pab H-(R) Hoc-Aze-Pab

HOOC-CH₂-CH₂ - (R) Hoc-Aza-Päb HOOC-CHj- (R, S) CH (COOH) - (R) Hoc-Pro-Pab HOOC-CH₂-(R)Hoc-PÍC-Pab (HOOC-CHj) ₂- (R) Koc-Pic-Pab HOOC-CHj- (R) Pro(3-(S)Ph) -Pro-Pab HOOC-CH₂-CHj-(R) Pro(3-(S) Ph) -Pro-Pab HOOC-CMj-CHj- (R) Tic-Pro-Pab HOOC-CH₂-CH₃-(R> Cgl-Aze-Pig HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-PŽg H- (R)Cha-Aze-Pig HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pac H- (R)cha-Pro-Pac H- (R)Cgl-Ile-Pab H-(R)Cgl-Aze-Pab HOOC-(R, S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab MeOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab BuOOC-CKj- (R)Cgl-Aie-Pab HexOOC-CHj - (R) Cgl-Aze-Pab H-(R)Cgl-Pro-Pac HOOC-CHj-(R) cha-Pro-Pac hooc-ch₂-ch₂- (R) Cgl-Pro-Pac ' HOOC—CHj-CHj- (R) Cha-Aze-Pac HOOC-CHj-fR) Cha-Aze-Pig Hoac-CH,- (R) Cha-Pro-Pig HOOC-CHj-CH₂-(R) Cha-Pro-Pig (HOOC~CH₂) j — (R)Cgl-Pro-Pig HOOC-CH₂-CHj (HOOC-CHj) - (R) Cha-Pro-Pig KOOC-CHj-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp HOOC-CHj-(R)Cha-A2e·(R,S)Itp H- (R) Cha-Pi C-(R,S)Itp

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-(R,S) Itp

H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig

HOOC- CH₂- (R) Cg 1 -Pro- (R, S} Hig

H-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig

H-(R)Cgl-Aze-Rig

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Rig Hooc-CH₂-(R)Cha-Pro-Rig HOOC-CH₂-CH₂- (R) Cha-Aze-Rig HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-(S) Itp H-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig H-(R)Cha-Pro-Mig H-(R)Cha-Pro-Dig H-(R)Cha-Aze-Dig buď sama osebe, alebo ako stereoizomér, alebo vo forme fyziologicky prijateľnej soli.
15. Zlúčenina podľa nároku 1, vybraná zo skupiny zahrnujúcej

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab HOCC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pah HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab hooc-ch₂-(R)Cgl-Pro-Pig EtOOC-CHj-(R)Cgl-Aze-Pab HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pac HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig buď sama osebe, alebo ako stereoizomér, alebo vo forme fyziologicky prijateľnej soli.
16. Zlúčenina podľa nároku 2, vybraná zo skupiny zahrnujúcej

BnOOC-CH-- (R) Cgl-Aze-Pab (Z)

BnOOC—CHj — CHj - (R) Cgl-Aze-Pab(Z)

DnOOC—CHj-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) Bnooe-CHj-CHj- (R) Cgl-Pro-Pab(Z) (BnOOC-CKj) ₂- (R) Cgl-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH₂-(R, S) CH (COOBn) - (R) Cgl-Pic-Pab (Z) BnOOC-CH₂- (R) Cha-Aze-Pab (Z) BnOOC-CH₂-(R,s) CH (COOBn) - (R) Cha-Aze-Pab (Z) Br.00C-CH₂-(R^J;cH(C00Bn)-(R)cha-A2e-Pab(Z)/a Bnooc-CH₂-(R S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z) /b Bnooc-CH₂-CK₂ - (R) Cha-Aze-Pab (Z) Bnooc-CH₂-NH-CO-CH₂- (R) cha-A2e-?ab(Z) BnOOC-CH₂- (R) Cha-Pro-Pab (Z) BnOOC-CH₂-(Me) (R) Cha-Pro-Pab(Z) Bn0oc-CH₂-cH₂-(R)cha-Pro-Pab(Z) BnOoc-cH₂-CHj-(Me) (R) Cha-Pro-Pab(z) Bnooc-CH₂- (R,S) CH(COOBn) -(R) Cha-Pro-Pab,Z) Bnooc-CH₂-NH-co-CH₂-(R) cha-Pro-Pab(Z) ľh (4-COOH) -so₂- (R) cha-Pro-Pab(Z) Boe-(R)Cha-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH₂-(R) Cha-Pic-Pab(Z) Bnooc-Cbľj- (R, S) CH (COOBn) - (R) Cha-Pic-Pab (z) BnOOC-CH₂-CH₂- (R) Cha-Pic-Pab(Z) EtCOC-CO- (R) Cha-Pic-Pab (Z) MeOOC-CH₂-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) H₂N-CO-CH₂- (R) Cha-Pic-Pab(Z) Ac- (R) Cha-Pic-Pab (z) He-SOj-(R)Cha-Pic-Pab (2) Bnooc-CH₂- (R) Cha-Val-Pab (Z) Bnooc-CH₂-CH₂- (R) Cha- (R, S) Val-Pab (2) BnOOC-CH₂-CH₂- (R) Hoc-Aze-Pab(Z> BbOOC-CH₂-(R, S) CH(COOBn)-,R) Hoc-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH₂- (R)Hoc-Pic-Pab(Z) (BnOOC-CH₂)₂-(R) Hoc-Pic-Pab(Z) Bnooc-cH₂- (R)Pro(i-(S) Ph) -pro-pab(z) BnOOC-CH₂-CH₂-(R) Pro [3-(S) Ph) -Pro-Pab(Z) Bnooc-CH₂-CH₂-(R) Tic-Pro-Pab (Z) BnOOC-CH₂-CH₂- (R) Cgl-Aze-Pig (Z)₂Bnooc-CH₂-(R) Cgl-Pro-Pig (Z)₂BnOOC-CH₂-(R) Cgl-Aze-Pac f Z)

BnOOC-(R, S) CH (Me) - (R)Cha-Pro-Pab(Z) MeOOC-CH₂- (R) Cgl-Aze-Pab(Z) Etooc-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) BuOOC-CH₂-(R) Cgl-Aze-Pab,Z) ⁿHexOOC-CH₂-(R) Cgl-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH₂- (R)Cha-Pro-Pac(Z) Bn00C-CH₂-CH₂- (R) Cgl-Pro-Pac(Z) BnOOC-CB₂-CH₂- (R) Cha-Aze-Pac (Z) Bnooc-CHj- (R) cha-Aze-Pig (Z) BnOOC-CHj-(R)Cha-Pro-Pig(Z) BnOOC-CH₂-CH₂- (R) Cha-Pro-Pig (Z) (BnOOC-CH₂) ₂- (R) Cgl-Pro-Pig (Z) BnOOC-CHj-CH₂ (BnOOC-CH₂) - (R) Cha-Pro-Pig (Z) BnOOC-CH₂- (R)Cha-Pic-(R, S) Itp(Z) BnOOC-CHj- (R) Cgl-Pro-(R, s) Hig(Z) BnooC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Rig(Z) BnOOC-CH₂-(R) Cha-Pro-Rig (Z) Bn00C-CH₂-CH₂- (R) Cha-Aze-Rig (Z) buď sama osebe, alebo ako stereoizomér, alebo vo forme fyziologicky prijateľnej soli.
17. Zlúčenina podľa nároku 2, vybraná zo skupiny zahrnujúcej

Bnooc-CHj-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) BnOOC-CHj-(R)Cha-Pro-Pab,Z) Bnooc-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab)Z) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig(z) ₂Bt00C-CH₂-(R) Cgl-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pac(Z) Bnooc-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig(Z) buď sama osebe, alebo ako stereoizomér, alebo vo forme fyziologicky prijateľnej soli.
18. Zlúčenina podľa nároku 1, vybraná zo skupiny zahrnujúcej

H-(R)Pro-Phe-Pab

HOOC-CH₂-(R)Pro-Phe-Pab

H-(R)Phe-Phe-Pab HOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Pab HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab buď sama osebe, alebo ako stereoizomér, alebo vo forme fyziologicky prijateľnej soli.
19. Zlúčenina podľa nároku 2, vybraná zo skupiny zahrnujúcej

Boe-(R) Pro-Phe-Pab (Z)

BnOOC-CHj- (R) Pro-Phe-Pab (Z) Boe- (R) Phe-Phe-Pab (Z) MeOOC-CO-(R) Phe-Phe-Pab(Z) Bnooc-CH₂- (R) Phe-Phe-Pab (Z) buď sama osebe, alebo ako stereoizomér, alebo vo forme fyziologicky prijateľnej soli.
20. Spôsob prípravy zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa kondenzáciu N-koncovo chráneného peptidu alebo aminokyseliny, ak sa použije aminokyselina, pridá sa neskôr druhá aminokyselina pri použití štandardných metód ku zlúčenine vzorca

H₂N-(CH₂)„-X kde n je celé číslo 0, 1, 2, 3 alebo 4, X je B alebo B-D, kde B má význam definovaný pri vzorci (1) a D má význam definovaný pri vzorci (V), samu osebe alebo obsahujúcu guanidino alebo amidino dusíky buď mono, alebo dichránené amín chrániacou skupinou, ako je benzyloxykarbonyl-, terc.bu-tyloxykarbonyl- alebo p-toluénsulfonylskupina alebo je X skupina, ktorá sa dá previesť na B po odstránení chrániacej skupiny (skupín) alebo ochránením Nkoncového dusíka po alkylácii N-koncového dusíka a ak sa to vyžaduje ochránením známymi metódami a ak sa to vyžaduje, tvorbou fyziologicky prijateľnej soli a v tých prípa53 doch, kedy reakcia vedie ku zmesi stereoizomérov, sa tieto prípadne oddelia štandardnými chromatografickými alebo rekryštalizačnými technikami a ak sa to vyžaduje, izoluje sa jediný stereoizomér.
21. Spôsob prípravy derivátu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje:

a) Metódu la kondenzáciou N-koncovo chráneného dipeptidu, vybraného z A¹ a A² vo vzorcoch (I) alebo (V) použitím štandardnej peptidovej kondenzácie podľa reakcie

A¹ — A² -m kde n je definované pri vzorci (I), W¹ je N-koncová aminochrániaca skupina ako je terc.butyloxykarbonyl alebo benzyloxykarbonyl a Q¹ je -C(NH)-NH2, -C(NW²)-NH-W², -C-(NH)-NH-W², -NH-C(NH)-NH2, -NH-C(NH)-NH-W², -N(W²)-C(NH)-NH-W² alebo -NH-C(NW²)-NH-W², kde W² je aminochrániaca skupina ako je terc.butyloxykarbonyl alebo benzyloxykarbonyl, alebo Q¹ je -CN, -CO-NH2 alebo -CS-NH2, kde skupina sa následne prevedie na amidinoskupinu (napríklad poskytnutím Q¹ = -C(NH)-NH2) metódami známymi v odbore alebo Q¹ je NH2 alebo NH-W², kde W² má definovaný význam, kde aminoskupina sa následne prevedie na guanidinoskupinu (Q¹ = -NH-C(NH)-NH2), po ochránení W² skupiny, ak Q¹ je -NH-W²(W² v tomto prípade musí byť ortogonálne k W¹), metódami známymi v odbore.

b) Metóda lb kondenzáciou N-koncovo chránenej aminokyseliny, vybranej z A² vo vzorcoch (1) alebo (V) a pripravenej štandardnými metódami pri použití štandardnej peptidovej kondenzácie, podľa nasledujúcej schémy

W— A² —oh kde n, W¹ a Q¹ majú definovaný význam s nasledujúcim ochránením W'-skupiny a kondenzáciou s N-kon-covou aminokyselinou, v chránenej forme, za vzniku chráneného peptidu opísaného v metóde la.

c) Metóda Ila kondenzáciou N-koncovo chráneného dipeptidu, vybraného z A¹ a A² vo vzorcoch (I) alebo (V) pri použití štandardnej peptidovej kondenzácie, podľa nasledujúcej schémy ^w'— A¹ — A² —c» kde n je definované pri vzorci (I), W¹ je N-koncová aminochrániaca skupina ako je terc.butyloxykarbonyl a benzyloxykarbonyl a Q¹ je -C(NH)-NH2, -C(NW²)-NH-W², -C-(NH)-NH-W², -NH-C(NH)-NH2, -NH-C(NH)-NH-W², -N(W²)-C(NH)-NH-W² alebo -NH-C(NW²)-NH-W², kde W² je aminochrániaca skupina ako je terc.butyloxykarbonyl alebo benzyloxykarbonyl, alebo Q¹ je -CN, -CO-NH₂ alebo -CS-NH₂, kde skupina sa následne prevedie na amidinoskupinu alebo Q¹ je NH2 alebo NH-W², kde W² má definovaný význam, kde aminoskupina sa následne prevedie na guanidinoskupinu (Q¹ = -NH-C(NH)-NH2), po ochránení W²-skupiny, ak Q¹ je -NH-W² (W² v tomto prípade musí byť ortogonálne k W¹), metódami známymi v odbore.

d) Metóda Ilb kondenzáciou N-koncovo chránenej aminokyseliny, vybranej z A² vo vzorcoch (I) alebo (V) pri použití štandardnej peptidovej kondenzácie, podľa nasledujúcej schémy

W’— A² —CH kde n, W¹ a Q¹ majú definovaný význam s nasledujúcim ochránením W'-skupiny a kondenzáciou s N-kon-covou aminokyselinou, v chránenej forme, za vzniku chráneného peptidu opísaného v metóde Ha.

e) Metóda Hla kondenzáciou N-koncovo chráneného dipeptidu, vybraného z A¹ a A² vo vzorcoch (I) alebo (V) pri použití štandardnej peptidovej kondenzácie, podľa nasledujúcej schémy

W'— A¹ - A² —CH

2 .(CH,)—X* ^w' A A ---NH—(CH,)- ( N— a’ j x'------x’ kde nje definované pri vzorci (I) a r je 0 alebo 1 ak X¹, X²a X⁴ sú CH2 alebo ak r je O ak X² a X⁴ sú CH2 a X¹ chýba, W¹ je N-koncová aminochrániaca skupina ako je tere.-butyloxykarbonyl a benzyloxykarbonyl a Q² je -C(NH)-NH₂, -C(NW²)-NH-W² alebo -C-(NH)-NH-W², kde W² je aminochrániaca skupina ako je terc.butyloxykarbonyl alebo benzyloxykarbonyl, alebo Q² sa rovná W², kde sa aminoskupina po ochránení W² skupiny (W² v tomto prípade musí byť ortogonálne k W¹), následne prevedie na guanidínoskupinu použitím nechráneného, N-chráneného alebo N,N'54

-dichráneného guanidačného činidla metódami známymi v odbore.

f) Metóda Illb kondenzáciou N-koncovo chránenej aminokyseliny, vybranej z A² vo vzorcoch (I) alebo (V) pri použití štandardnej peptidovej kondenzácie, podľa nasledujúcej schémy w’— A² —ch (chj—ť

H,N—(CH,)—Z\_Q*

X’X’ , .(CHJ—X* ^W' --W—(CHJ—ζQ x'x kde n, r, X¹, X² a X⁴, W¹ a Q² majú definovaný význam s nasledujúcim ochránením W¹-skupiny a kondenzáciou s Nkoncovou aminokyselinou, v chránenej forme, za vzniku chráneného peptidu opísaného v metóde Illa.

g) Metóda IVa kondenzáciou N-koncovo chráneného dipeptidu, vybraného z A¹ a A² vo vzorcoch (I) alebo (V) pri použití štandardnej peptidovej kondenzácie, ako je uvedené v nasledujúcej schéme w’— A¹ — A² —ch ^w'—A¹ — A²—m—(chj—\nn u^-C > · kde n má význam definovaný pri vzorci (I), W¹ je N-koncová aminochrániaca skupina ako je terc.butyloxykarbonyl alebo benzyloxykarbonyl a W³ je H alebo aminochrániaca skupina ako je arylsulfonyl, benzyloxykarbonyl alebo terc.butyloxykarbonyl.

h) Metóda IVb kondenzáciou N-koncovo chránenej aminokyseliny, vybranej z A² vo vzorcoch (I) alebo (V) pri použití štandardnej peptidovej kondenzácie ako je znázornené = -C(NW²)-NH-W², -C(NH)-NH-W², -NH-C(NH)-NH-W², -N(W²)-C(NH)-NH-W² alebo -NH-C(NW²)-NH-W² (W² v tomto prípade musí byť ortogonálne k W¹) s nasledujúcou alkyláciou N-koncového dusíka a ak sa to požaduje ochránením.
22. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19 na použitie v terapii.
23. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5 alebo 7 až 17 na použitie ako antikoagulačné alebo antitrombotické činidlo.
24. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 4, 6 až 10 alebo 18 až 19 na použitie ako protizápalové činidlo.
25. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje účinné množstvo zlúčeniny uvedenej v nárokoch 1 až 19 spolu s jedným alebo viacerými farmaceutickými nosičmi.
26. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje účinné množstvo zlúčeniny uvedenej v nárokoch 1 až 5 alebo 7 až 17 spolu s jedným alebo viacerými farmaceutický prijateľnými nosičmi na použitie ako antikoagulačné alebo antitrombotické činidlo.
27. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje účinné množstvo zlúčeniny uvedenej v nárokoch 1 až 4, 6 až 10 alebo 18 až 19 spolu s jedným alebo viacerými farmaceutický prijateľnými nosičmi na použitie ako protizápalové činidlo.
28. Použitie zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5 alebo 7 až 17 ako účinné činidlo na výrobu farmaceutického prípravku na inhibíciu trombínu v ľudskom alebo zvieracom organizme.
29. Použitie zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 4, 6 až 10 alebo 18 až 19 ako účinné činidlo na výrobu farmaceutického prípravku na inhibíciu kininogenáz v ľudskom alebo zvieracom organizme.