CZ290104B6

CZ290104B6 - Peptidový derivát, způsob jeho přípravy a použitía farmaceutický přípravek s jeho obsahem

Info

Publication number: CZ290104B6
Application number: CZ19953020A
Authority: CZ
Inventors: Thomas Karl Antonsson; Elvy Ruth Bylund; David Nils Gustafsson; Ingemar Olov Nils Nilsson
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 1993-06-03
Filing date: 1994-06-02
Publication date: 2002-05-15
Also published as: IL109634A0; YU33694A; GR3036258T3; EP0701568A1; SI0701568T1; US5939392A; IS1805B; UA65518C2; DE69427150D1; HU0103039D0; EG20671A; NO954873L; DE69427150T2; MY119155A; KR100339456B1; SK145495A3; SG48013A1; NO2004009I1; HU226825B1; JP2001322974A

Abstract

Jsou pops ny peptidov deriv ty obecn ho vzorce I, ve kter m jednotliv symboly maj specifick² v²znam, zp soby jejich synt zy, jejich pou it v terapii jako antikoagula n , antitrombonick a protiz n tliv inidla a tak farmaceutick p° pravky s jejich obsahem, jako i meziprodukt pro p° pravu takov²ch peptidov²ch deriv t .\

Description

Oblast techniky

Tento vynález se týká peptidových derivátů, způsobů jejich přípravy, jejich použití a terapii a farmaceutických přípravků s jejich obsahem, jakož i meziproduktů pro přípravu takových peptidových derivátů.

Dosavadní stav techniky

Krevní koagulace je klíčový proces zahrnutý jak v hemostáze (tj. zabránění ztrátě krve z poškozených cév) a trombóze (tj. patologickém uzavření krevních cév krevní sraženinou). Koagulace je výsledkem komplexu sérií enzymatických reakcí, kde jedním z konečných stupňů je konverze proenzymu protrombinu na účinný enzym trombin.

Trombin hraje ústřední úlohu v koagulaci. Aktivuje destičky, přeměňuje fibronogen na fibrinové monomery, které polymerují spontánně na vlákna a aktivuje faktor XIH, který naopak zesíťuje polymer na nerozpustný fibrin. Trombin dále aktivuje faktor V a faktor VII v pozitivním reakci zpětné vazby. Inhibitory trombinu jsou proto považovány za účinné antikoagulanty inhibicí destiček, tvorby fibrinu a stabilizací fibrinu. Při inhibicí mechanismu pozitivní zpětné vazby jsou považovány za působící inhibicí v řetězci událostí vedoucích ke koagulaci a trombóze.

Kininogenázy jsou serin proteázy, které působí na kininogeny za vzniku kininu (bradykinin, kallidin a Met-Lys-bradykinin). Plazmový kallikrein, tkáňový kallikrein, a tryptasa obrovských buněk představují důležité kininogenázy.

Kininy (bradykinin, kallidin) jsou obecně zahrnuty v zánětu. Například aktivní zánětlivý proces je spojen se zvýšenou permeabilitou krevních cév, vedoucí k extravasaci plazmy do tkáně. Vznikající plazmový exudát obsahuje všechny proteinové systémy obíhající krve. Z plazmy získané kininogeny nevyhnutelně budou interagovat s různými kallikreiny, za tvorby kininů, což pokračuje tak dlouho, dokud probíhá aktivní plazmový exudační proces. Plazmová exudace se objevuje nezávisle na mechanismech, které jsou zahrnuty v zánětu, ať je to alergie, infekce nebo jiné faktory (Persson a spol., Editorial, Thorax, 1992, 47:993-1000). Plazmová exudace je tak rysem mnoha chorob, zahrnujících astma, rýmu, nachlazení a zánětlivé střevní choroby. Zejména při alergii budě uvolňována tryptasa obrovských buněk (Salomonsson a spol., Am. Rev. Respir. Dis., 1992, 146:1535-1542) pro přispění ke tvorbě kininu a jiných patogenních stavů v astma, rýmě a intestinálních chorobách.

Kininy jsou biologicky vysoce aktivní substance s působením na hladké svaly, sekreci, sneurogenními účinky a působením, které může učinit zánětlivý proces trvalým, zahrnutím aktivity fosfolipasy A₂ a zvýšením vaskulámí permeability. Posledně uvedené působení potenciálně indukuje chybný oběh s kininy, poskytující generaci více kininů atd.

Tkáňový kallikrein štěpí převážně nízkomolekulámí kininogen za vzniku kallikreinu a plazmový kallikrein výhodně uvolňuje bradykinin z vysokomolekulámího kininogenu.

Inhibitory trombinu na bázi aminokyselinové sekvence, obklopující štěpící místo pro fibrinogen Aa řetězec, byly nejprve popsány Blombáckem a spol., v J. Clin. Lab. Invest. 24, suppl 107, 59 (1969), kde uvádí sekvenci Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, zde označovaná jako P3-P2-P1 sekvence) jako nej lepší inhibitor.

-1 CZ 290104 B6

V US 4346078 popsal S. Bajusz a spol., trombinový inhibitor H-DPhe-Pro-Agm, dipeptidylový derivát s aminoalkylguanidinem v Pl-poloze.

Inhibitory trombinu na bázi peptidových derivátů s cyklickým aminoalkylguanidinem, např. 3aminomethyl-l-aminopiperidinem, v Pl-poloze byly popsány v EP-A2-046823.

V EP-A2-0185390 popsal S. Bajusz a spol., že nahrazení agmatinu argininaldehydem poskytuje inhibitor trombinu, který je mnohem potentnější.

Inhibitory kallikreinu na bázi aminokyselinové sekvence, obklopující štěpící místo Arg-Ser byly popsány v poslední době.

Arginin-chlormethylketony H-DPrp-Phe-Arg-CH₂Cl a H-DPhe-Phe-Arg-CH₂Cl byly popsány jako inhibitory plazmového kallikreinu Kettnerem a Shewem v Biochemistry 1978, 17:4778— 4784 a Meth. Enzym. 1981, 80:826-842.

Podobně estery a amidy, obsahujíc sekvenci H-DPro-Phe-Arg byly popsány Farredem a spol. v An.N.Y. Acad. Sci. 1981, 370:765-784 jako inhibitory plazmového kallikreinu.

Inhibitory serin proteáz, které jsou na bázi elektrofilních ketonů místo aldehydů v Pl-poloze jsou popsány v následujících patentových spisech:

EP-A2-0 195 212, popisujícím peptidyl-a-ketoestery a amidy, EP-A1-0 362 002, popisujícím fluoralkylamidketony a EP-A2-0 364 344, popisujícím α,β,δ-triketosloučeniny, vykazující různé peptidázu inhibující vlastnosti.

Inhibitory trypsinu podobných serin proteáz, jako je trombin a kallikrein, na bázi derivátů argininu s C-koncovou kyselinou boritou a jejich isothiouroniové analogy byly uvedeny v EPA2-0 293 881.

WO 92/04371 popisuje kinogenázové inhibitory, např. inhibitory kallikreinu na bázi derivátů argininu.

EP-A1-0 530 167 popisuje α-alkoxyketonové derivát argininu jako trombinové inhibitory.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je peptidový derivát obecného vzorce I

A¹---A²----NH-----(CH₂)_n------B (I), kde

A¹ představuje strukturní fragment vzorce Ha, lib, líc, lid nebo Ile

-2CZ 290104 B6

kde k je celé číslo 0,1, 2, 3 nebo 4, m je celé číslo 1, 2, 3 nebo 4, q je celé číslo 0,1,2 nebo 3,

R¹ představuje vodík, alkylovou skupinu, mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo R¹¹OOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a je popřípadě substituovaná v poloze alfa ke karbonylové skupině a alfa substituent je skupina R¹⁷-(CH₂)_P-, kde p je 0, 1 nebo 2 a R¹⁷ je methyl, fenyl, OH, COOR¹², CONHR¹², kde R¹² je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku a R¹ je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 6 atomů uhlíku, nebo

R¹ představuje Ph(4-COOR¹²)-CH₂-, kde R¹² má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje R¹³-NH-CO-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a je popřípadě substituována v poloze alfa ke karbonylu alkylovou skupinou mající 1 až 4 atomy uhlíku a kde R¹³ je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo -CH₂COOR¹², kde R¹² má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje R^OOC-CHr-OOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a je popřípadě substituována alfa ke karbonylu alkylovou skupinou mající 1 až 4 atomy uhlíku a kde R¹² má výše definovaný význam, kde

R¹ představuje R¹⁴SO2-, Ph(4-COOR¹²)-SO2-, Ph(3-COOR¹²)-SO2-, Ph(2-COOR¹²)-SO2-, kde R¹² má výše definovaný význam a R¹⁴ je alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku, nebo

R¹ představuje -COO-R¹⁵, kde R¹⁵ je alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku, nebo

R¹ představuje -CO-OR¹⁵, kde R¹⁵ má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje -CO-(CH2)p-COOR¹², kde R¹² má výše definovaný význam a p je celé číslo 0,1 nebo 2, nebo

R¹ představuje -CH2PO(OR¹⁶)2, -CH₂SO₃H nebo -CH₂-(5-(lH)-tetrazolyl), kde R₁₆ je, jednotlivě při každém výskytu, vodík, methyl nebo ethyl,

R² představuje vodík nebo alkylovou skupinu mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo R²¹OOC-alkylkde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a kde R²¹ je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku,

R³ představuje alkylovou skupinu mající 1 až 4 atomy uhlíku a alkylová skupina může popřípadě nést atomy fluoru, nebo R³ představuje cyklopentyl, cyklohexyl- nebo fenylovou skupinu, která je popřípadě substituována alkylovou skupinou mající 1 až 4 atomy uhlíku, nebo

R³ představuje fenylovou skupinu substituovanou OR³¹ skupinou, kde R³¹ je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku a kde je 0, 1 nebo

R³ představuje 1-naftylovou nebo 2-naftylovou skupinu a k je 0, 1 nebo

R³ představuje cis- nebo trans-dekalinovou skupinu a k je 0, 1 nebo

R³ představuje 4-pyridyl, 3-pyrrolidinyl nebo 3-indolyl, který je popřípadě substituován OR³¹skupinou, kde R³¹ má výše definovaný význam a k je 0, 1 nebo

R³ představuje Si(Me)₃ nebo CH(R₃₂)₂, kde R³² je cyklohexyl- nebo fenylová skupina,

R⁴ představuje vodík, alkylovou skupinu mající 1 až 4 atomy uhlíku, cyklohexyl- nebo fenylovou skupinu,

A² představuje strukturní fragment vzorce Hla, Illb nebo Hic (Hla) (Illb) (Hic).

kde p je celé číslo 0, 1 nebo 2, m je celé číslo 1, 2, 3 nebo 4,

-4CZ 290104 B6

Y představuje methylenovou skupinu, nebo

Y představuje ethylenovou skupinu a výsledný 5-ti členný kruh popřípadě nese jeden nebo dva atomy fluoru, hydroxyskupinu nebo oxoskupinu v poloze 4, nebo je popřípadě nenasycen, nebo

Y představuje -CH₂-O-, -CH₂-S-, CH₂-SO-, s heteroatomovou funkčností v poloze 4, nebo

Y představuje n-propylenovou skupinu a výsledný 6-ti členný kruh popřípadě nese v poloze 5 jeden atom fluoru, hydroxyskupinu nebo oxoskupinu, nesoucí dva atomy fluoru v jedné z poloze 4 nebo 5 neboje nenasycen v poloze 4 a 5 nebo nese v poloze 4 alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, nebo

Y představuje —CH₂—O—CH₂—, —CH₂—S—CH₂—, —CH₂—SO—CH₂— nebo

Y představuje -CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-

R³ má výše definovaný význam,

R⁵ představuje vodík nebo alkylovou skupinu mající 1 až 4 atomy uhlíku, nebo

R⁵ představuje -(CH₂)_P-COOR⁵¹, kde p je 0, 1 nebo 2 a R⁵¹ je vodík nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku, n je celé číslo 0, 1, 2, 3 nebo 4,

B představuje strukturní fragment vzorce IVa, IVb, IVc nebo IVd

	1	*
	Ór X*	HjN	Q J
(IVá)	(IVb)	(IVc)	(IVd),

kde r je celé číslo 0 nebo 1,

X¹ představuje CH₂, NH nebo není přítomen,

X² představuje CH₂, NH nebo C=NH,

X³ představuje NH, C=NH, N-C(NH)-NH₂, CH-C(NH)-NH₂, CH-NH-C(NH)-NH₂ nebo CH-CH₂-C(NH)-NH₂,

X⁴ představuje CH₂ nebo NH,

-5CZ 290104 B6

X⁵ představuje C(NH)-NH₂ nebo NH-C(NH-NH₂);

X⁶ představuje CH je dusík,

R⁶ je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku, buď ve formě sloučeniny jako takové nebo jako jejich stereoizomery nebo ve formě fyziologicky přijatelné soli.

Dalším předmětem tohoto vynálezu je peptidový derivát obecného vzorce V

A¹----A²----- NH ----(CH₂)_n

kde

A¹ představuje strukturní fragment vzorce Ha, lib, líc, lid nebo Ile

kde k je celé číslo 0, 1,2, 3 nebo 4, m je celé číslo 1, 2, 3 nebo 4, q je celé číslo 0,1, 2 nebo 3,

-6CZ 290104 B6

R¹ představuje RⁿOOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a může být substituovaná v poloze alfa ke karbonylové skupině a alfa substituent je skupina R¹⁷(CH₂)_p- kde p je 0, 1 nebo 2 a R¹⁷ je COOR¹², CONHR¹², kde R¹² je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 6 atomů uhlíku, nebo benzylová skupina a R¹¹ je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 6 atomů uhlíku nebo benzylová skupina, nebo

R¹ představuje Ph(4-COOR¹²)-CH2-, kde R¹² má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje R¹³-NH-CO-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a je popřípadě substituována v poloze alfa ke karbonylou alkylovou skupinou mající 1 až 4 atomy uhlíku a kde R¹³ je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo -CH₂COOR¹², kde R¹² má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje R¹²OOC-CH₂-OOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a je popřípadě substituována v poloze alfa ke karbonylu alkylovou skupinou mající 1 až 4 atomy uhlíku a kde R¹² má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje R¹⁴SC>2-, Ph(4-COOR¹²)-SO2-, Ph(3-COOR¹²)-SO2- Ph(2-COOR¹²)-SO2kde R¹² má výše definovaný význam a R¹⁴ je alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku, nebo

R¹ představuje -CO-OR¹⁵, kde R¹⁵ má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje -CO-(CH2)p-COOR¹², kde R¹² má výše definovaný význam a p je celé číslo 0,1 nebo 2 nebo

R² představuje vodík nebo alkylovou skupinu mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo R²¹OOC-alkylkde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a kde R²¹ je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo benzylová skupina,

R³ představuje alkylovou skupinu mající 1 až 4 atomy uhlíku a alkylová skupina popřípadě nese jeden nebo více atomů fluoru, nebo

R³ představuje cyklopentyl, cyklohexyl- nebo fenylovou skupinu, která je popřípadě substituována alkylovou skupinou mající 1 až 4 atomy uhlíku, nebo

R³ představuje fenylovou skupinu substituovanou OR³¹ skupinou, kde R³¹ je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku a k je 0, 1 nebo

R³ představuje 1-naftylovou nebo 2-naíitylovou skupinu a k je 0,1 nebo

R³ představuje 4-pyridyl, 3-pyrrolidyl nebo 3-indolyl, který je popřípadě substituován OR³¹skupinou, kde R³¹ má výše definovaný význam a k je 0,1 nebo

R³ představuje Si(Me)3 nebo CH(R³²)2, kde R³² je cyklohexyl- nebo fenylová skupina,

-7CZ 290104 B6

A² představuje strukturní fragment vzorce lila, mb nebo Hic

kde p je celé číslo 0,1 nebo 2, m je celé číslo 1,2, 3 nebo 4,

Y představuje methylenovou skupinu, nebo

Y představuje -CH2-O-, -CH2-S-, CH2-SO-, s heteroatomovou funkčností v poloze 4, nebo

Y představuje n-propylenovou skupinu a výsledný 6-ti členný kruh popřípadě nese v poloze 5 jeden atom fluoru, hydroxyskupinu nebo oxoskupinu, nesoucí dva atomy fluoru v jedné z poloh 4 nebo 5 nebo je nenasycen v poloze 4 a 5 nebo nese v poloze 4 alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, nebo

Y představuje -CHr-O-CH₂-, -CH₂-S-CH₂-, -CH₂-SO-CH₂- nebo

Y představuje -CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-,

R má výše definovaný význam,

R⁵ představuje -(CH₂)_P-COOR¹⁵, kde p je 0, 1 nebo 2 a R⁵¹ je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku, n je celé číslo 0,1, 2 nebo 4,

-8CZ 290104 B6

B představuje strukturní fragment vzorce IVa, IVb, IVc nebo IVd

kde r je celé číslo 0 nebo 1,

X¹ představuje CH₂, NH nebo není přítomen,

X² představuje CH₂, NH nebo C=NH,

X⁴ představuje CH₂ nebo NH,

X⁵ představuje C(NH)-NH₂ nebo NH-C(NH-NH₂;

X⁶ představuje CH nebo dusík,

R⁶ je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku,

D je Z nebo (Z)₂,

Z je benzyloxykarbonylová skupina buď jako takový nebo jako jeho stereoizomery nebo ve formě fyziologicky přijatelné soli, jako meziprodukt pro přípravu svrchu uvedených sloučenin obecného vzorce I.

Výhodným provedením je peptidový derivát svrchu uvedeného obecného vzorce I nebo Ia,

- kde A¹ je strukturní fragment vzorce Ha nebo lib, kde R¹ představuje R^uOOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a R¹¹ je vodík,

- kde r je celé číslo 0 nebo 1,

X¹ představuje CH₂, NH nebo není přítomen,

X² představuje CH₂, NH nebo C=NH,

-9CZ 290104 B6

X³ představuje NH, C=NH, N-C(NH)-NH₂, CH-C(NH)-NH₂, CH-NH-C(NH)-NH₂ nebo CH-CH2-C(NH)-NH₂,

X⁴ představuje CH₂ nebo NH,

X⁵ představuje C(NH)-NH₂ nebo NH-C(NH-NH₂;

X⁶ představuje CH nebo dusík,

R⁶ je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku,

D je Z nebo (Z)₂,

Z je benzyloxykarbonylová skupina, buď jako takový nebo jako jeho stereoizomery nebo ve formě fyziologicky přijatelné soli,

- kde A² je strukturní fragment vzorce Hlb,

- kde B je strukturní fragment vzorce IVa, kde X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2, rje 1 anje 1,

- kde B je strukturní fragment vzorce IVa, kde X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je N-C(NH)NH2, rje 0 nebo 1 a n je 1 nebo 2, kde B je strukturní fragment vzorce IVb, kde X⁵ je C(NH)-NH₂ a R⁶ je vodík a n je 1,

- kde B je strukturní fragment vzorce IVa, kde X¹ a X³ jsou NH, X² je C=NH, X⁴ je CH₂, rje 1 anje 2, kde B je strukturní prvek vzorce IVa, kde X¹ není přítomen, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je NC(NH)-NH2, rje 0 a nje 1 nebo 2,

- kde n je 1 nebo 2, A¹ je strukturní fragment vzorce Ha, kde k je 0 nebo 1, R¹ představuje RⁿOOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku, R² představuje H, R³představuje cyklohexylovou skupinu, A²' představuje strukturní fragment vzorce lila, kde Y představuje methylenovou skupinu, ethylenovou skupinu nebo n-propylenovou skupinu a výsledný 6-členný kruh popřípadě nese v poloze 4 alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, R⁵ představuje vodík, B představuje strukturní fragment vzorce IVa, kde X¹, X² a X⁴jsou CH2, a X³ je CH-C(NH)-NH2 nebo N-C(NH)-NH₂, rje 0 nebo 1, nebo X¹ a X³ je NH, X² je C=NH, X⁴ je CH2, rje 1 nebo X¹ není přítomen, X² a X² jsou CH2, X³ je N-C(NH)NH₂ a rje 0, a

- kde n je 1, A¹ je strukturní fragment vzorce Ha, kde k je 0 nebo 1, R¹ představuje RⁿOOCalkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku, R² představuje vodík, R³ představuje cyklohexylovou skupinu, A² představuje strukturní fragment vzorce IDa, kde Y představuje methylenovou skupinu, ethylenovou skupinu nebo n-propylenovou skupinu a výsledný 6členný kruh popřípadě nese v poloze 4 alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, R⁵ představuje vodík, B představuje strukturní fragment vzorce IVb, kde X⁵ představuje C(NH)-NH₂ a R⁶ je vodík.

Výsledný peptidový derivát obecného vzorce I podle vynálezu je vybrán ze souboru sestávajícího z

- 10CZ 290104 B6

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pag (HOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pag H-(R)Cgl-Pic-Pab

HOOC-CH₂-(R,S)CH)COOH-(R)Cgl-Pic-Pab H-(R)-Cha-Aze-Pab HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab

HOOC-CH₂-(RS)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab

HOOC-CH₂-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/a HOOC-CH₂-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/b HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab

HOOC-CH₂-NH-CO-CH2-(R)Char-Aze-Pab H-(R)Cha-Pro-Pab

HOOC-CH₂-<R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH₂-(Me)(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(Me)(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH₂-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/a HOOC-CH₂-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/b HOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab EtOOC-CII₂—CH₂—CH₂—(R)Cha—Pro-Pab Ph(4-COOH)-SO₂-(R)Cha-Pro-Pab H-(R)Cha-Pic-Pab

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab

HOOC-CH₂-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/a HOOC-CH₂-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/b HOOC-CH₂-CH₂(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CH₂-CO-(R)Cha-Pic-Pab Me-OOC-CHr-CO-(R)Cha-Pic-Pab H₂N-CO-CHHR)Cha-Pic-Pab

Boc-(R)Cha-Pic-Pab Ac-(R)Cha-Pic-Pab

Me-SO₂-(R)Cha-Pic-Pab H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab HOOC-CH₂-CH₂(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab HOOC-CH₂-(R)Cha-Val-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Val-Pab H-(R)Hoc-Aze-Pab

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Hoc-Aze-Pab HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Hoc-Pro-Pab HOOC-CH₂-(R)Hoc-Pic-Pab (HOOC-CH₂)r-(R)-Hoc-Pic-Pab HOOC-CHr-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R)TiC“PrO“Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pig

-11 CZ 290104 B6

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig

H-(R)Cha-Aze-Pig

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pac

H-(R)Cha-Pro-Pac

H-(R)Cgl-Ile-Pag

H-(R)Cgl-Aze-Pab

HOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab

MeOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab

EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab ⁿBuOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab ⁿHexOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab

H-(R)Cgl-Pro-Pac

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pac

HOOC-CH₂-CH₂4R)CgUPro-Pac

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pac

HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pig

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig (HOOC-CH₂)r-(R)Cgl-Pro-Pig

HOOC-CH₂-CH₂(HOOC-CH₂)-(R)Cha-Pro-Pig

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp

HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp

H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp

H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig

H-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig

H-(R)Cgl-Aze-Rig

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Rig

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Rig

HOOC-CH2-CH₂-(R)Cha-Aze-Rig

HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-(S)Itp

H-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig

H-(R)Cha-Pro-Mig

H-(R)Cha-Pro-Dig

H-(R)Char-Aze-Dig, kde symboly a a b označují, že u sloučeniny s jedním asymetrickým centrem vyznačeným symbolem „RorS“ je neznámá absolutní stereochemická konfigurace, buď jako takový nebo jako stereomer nebo ve formě fyziologicky přijatelné soli.

Výhodný peptidový derivát obecného vzorce I podle vynálezu je vybrán ze souboru sestávajícího z

HOOC-CfMR)Cgl-Aze-Pab

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab

-12CZ 290104 B6

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig

EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pac

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig buď jako takový nebo jako stereoizomer nebo ve formě fyziologicky přijatelné soli.

Výhodný peptidový derivát obecného vzorce Ia podle vynálezu, který je vybrán ze souboru sestávajícího z

BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pag(Z)

BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) (BnOOC-CH₂)₂-(R)-Cgl-Pro-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R,S)Ch(COOBn)-(R)Cha-Aza-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(RorS)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/a

BnOOC-CH₂-(RorS)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/b

BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-CH₂-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn(R)Cha-Pro-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

Ph(4-COOH)-SO₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z>

BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

EtOOC-CO-fR)Cha-Pic-Pab(Z)

MeOOC-CH₂-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

H₂N-CO-CH₂(R)Cha-Pic-Pab(Z)

Ac-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

Me-SO₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Cha-Val-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-CH₂-{R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Hoc-Aze-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Hoc-Pro-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) (BnOOC-CH₂)₂-(R)Hoc-Pic-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z)

BnOOC-CHz-CHHRjTic-Pro-PabíZ)

BnOOC-CH₂-CHHR)Cgl-Aze-Pig(Z)₂

BnOOC-CHr-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)₂

-13CZ 290104 B6

BnOOC-CHr-(R)Cgl-Aze-Pac(Z)

BnOOC-(R,S)CH(Me)-(R)-Cha-Pro-Pab(Z)

MeOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) ⁿBuOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) ⁿHexOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pac(Z)

BnOOC-CH2-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pac(Z)

BnOOC-CH₂-CH₂_(R)Cha-Aze-Pac(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pig(Z)

BnOOC-CHr-(R)Cha-Pro-Pig(Z)

BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig(Z) (BnOOC-CH₂)₂-(RX:gl-Pro-Pig(Z)

BnOOC-CH₂-CH₂(BnOOC-CH₂)-(R)Cha-Pro-Pig(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Rig(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Rig(Z)

BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Rig(Z), kde symboly a a b označují, že sloučeniny s jedním asymetrickým centrem vyznačeným symbolem „RorS“ je neznámá absolutní stereochemická konfigurace, buď jako takový nebo jako stereoizomer nebo ve formě fyziologicky přijatelné soli.

Jiný výhodný peptidový derivát podle vynálezu je vybrán ze souboru sestávajícího z

BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)₂

EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pag(Z)

BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pac(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig(Z) buď jako takový nebo jako stereoizomer nebo ve formě fyziologicky přijatelné soli.

Výhodný peptidový derivát obecného vzorce I podle tohoto vynálezu je vybrán ze souboru sestávající z

H-(R)Pro-Phe-Pab

HOOC-CH₂-(R)Pro-Phe-Pab

H-(R)Phe-Phe-Pag

HOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Pab

HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab buď jako takový nebo jako stereoizomer nebo ve formě fyziologicky přijatelné soli.

Výhodný peptidový derivát obecného vzorce Ia podle tohoto vynálezu je vybrán ze souboru sestávajícího z

-14CZ 290104 B6

Boc-(R)Pro-Phe-Pab(Z)

BnOOC-CHr-(R)Pro-Phe-Pab(Z)

Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z)

MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Pab(Z) buď jako takový nebo jako stereoizomer nebo ve formě fyziologicky přijatelné soli.

Předmětem tohoto vynálezu je také způsob přípravy některé ze sloučenin vedených výše, jehož podstata spočívá v kondenzaci N-koncové chráněné aminokyseliny nebo dipeptidu nebo aminokyseliny, přičemž když je použita N-koncově chráněná aminokyselina, přidá se druhá aminokyselina ke sloučenině vzorce

H₂N-(CH₂)_n-X kde n je celé číslo 0,1, 2, 3 nebo 4,

X je B nebo B-D, kde B má význam definovaný u vzorce I a

D má význam definovaný u vzorce V, jako takovou nebo mající guanidinové nebo amidinové dusíky buď mono- nebo dichráněné amin chránící skupinou, nebo

X je skupina převeditelná na B, s následujícím odstraněním chránící skupiny nebo chránících skupin nebo odchráněním Nkoncového dusíku po alky láci N-koncového dusíku a je-li to žádoucí, odchráněním a je-li to žádoucí, tvorbou fyziologicky přijatelné soli a v těch případech, kdy reakce vede ke směsi stereoizomerů, jsou tyto popřípadě odděleny chromatografickými nebo rekrystalizačními technikami a je-li to žádoucí, je izolován jediný stereoizomer.

Zvláštní způsob pro přípravu některého peptidového derivátu uvedeného výše spočívá v tom, že

a) pro přípravu peptidového derivátu obecného vzorce I nebo V, kde B znamená strukturní fragment vzorce IVb, ve kterém R⁶ znamená atom vodíku a ostatní substituenty mají význam definovaný u obecného vzorce I nebo V,

N-koncově chráněný dipeptid obecného vzorce

W¹----A¹---A²-----OH, ve kterém

W¹ je N-koncová aminochránicí skupina, jako je terc.-butoxykarbonylová nebo benzyloxykarbonylová skupina,

A¹ a A² mají význam definovaný u obecných vzorců I nebo V,

- 15CZ 290104 B6 se kondenzuje se sloučeninou vzorce

ve kterém

Q¹ je -C(NH)-NH2, -C(NW²)-NH-W², -C(NH)-NH-W², -NH-C(NH)-NH2, -NH-C(NH)NH-W², -N(W²)-C(NH)-NH-W² nebo -NH-C(NW²)-NH-W², kde W² aminochránicí skupina, jako je terc.-butoxykarbonylová nebo benzyloxykarbonylová skupina, nebo

Q^l je-CN,-CO-NH₂ nebo-CS-NH₂, a n má význam definovaný u obecného vzorce I, a v připraveném meziproduktu, pokud Q¹ je -CN, -CO-NH2 nebo -CS-NH2, tato skupina se následně převede na amidinoskupinu nebo pokud Q¹ je NH2 nebo NH-W², kde W² má výše definovaný význam, W²-skupina, je-li Q¹ -NH-W², a kde W² v tomto případě je orthogonální k W¹, se odehrání a aminoskupina se následně převede na guanidinoskupinu, poskytující Q¹, které je -NH-C(NH)-NH₂,

b) pro přípravu peptidového derivátu obecného vzorce I nebo V, kde B znamená strukturní fragment vzorce IVb, ve kterém R⁶ znamená atom vodíku a ostatní substituenty mají význam definovaný u obecného vzorce I nebo V,

N-koncové chráněná aminokyselina obecného vzorce

W¹----A²-----OH, ve kterém

A² má význam definovaný u obecného vzorce I a

W¹ má význam definovaný výše, se kondenzuje se sloučeninou obecného vzorce

» ve kterém

Q¹ a n mají význam uvedený výše, a v připraveném meziproduktu se W¹ odehrání a získaný meziprodukt se kondenzuje s N-koncově chráněnou aminokyselinou obecného vzorce

W¹------A¹--------OH,

-16CZ 290104 B6 ve kterém

A¹ má význam definovaný u obecného vzorce I a

W¹ má význam definovaný výše, a poté se takto získaný meziprodukt zpracuje stejným způsobem jako je uvedeno pod a) výše,

c) pro přípravu peptidového derivátu obecného vzorce I nebo V, kde B znamená strukturní fragment vzorce IVa, ve kterém X¹, X² a X⁴ vždy představuje CH2, r znamená číslo 1, X³představuje skupinu vzorce CH-C(NH)-NH₂ nebo CH-NHC(NH)-NH₂ a ostatní substituenty mají význam definovaný u obecného vzorce I nebo V,

N-koncově chráněný dipeptid obecného vzorce

W¹-------_Ai----------_0Hj ve kterém

A¹ a A² mají význam definovaný u obecných vzorců I nebo V, se kondenzuje se sloučeninou obecného vzorce

ve kterém

Q¹ je -C(NH)-NH2, -C(NW²)-NH-W², -C(NH)-NH-W², -NH-C(NH)-NH2, -NH-C(NH)NH-W², -N(W²)-C(NH)-NH-W² nebo -NH-C(NW²}-NH-W², kde W² je aminochránicí skupina, jako je terc.-butoxykarbonylová nebo benzyloxykarbonylová skupina, nebo

Q¹ je-CN,-CO-NH₂ nebo-CS-NH₂, a n má význam definovaný u obecného vzorce I, a v připraveném meziproduktu, pokud Q¹ je -CN, -CO-NH2 nebo -CS-NH2, tato skupina se následně převede na amidinoskupinu nebo pokud Q¹ je NH2 nebo NH-W², kde W² má výše definovaný význam, W²-skupina, je-li Q¹ -NH-W², a kde W² v tomto případě je orthogonální k W¹, se odehrání a aminoskupina se následně převede na guanidinoskupinu, poskytující Q¹, které je -NH-C(NH)-NH₂,

d) pro přípravu peptidového derivátu obecného vzorce I nebo V, kde B znamená strukturní fragment vzorce IVa, ve kterém X¹, X² a X⁴ vždy představují CH2, r znamená číslo 1, X³představuje skupinu vzorce CH-C(NH)-NH2 nebo CH-NHC(NH)-NH₂ a ostatní substituenty mají význam definovaný u obecného vzorce I nebo V,

-17CZ 290104 B6

N-koncově chráněná aminoskupina obecného vzorce

W¹------A²-------OH, ve kterém

A² má význam definovaný u obecného vzorce I a

ve kterém

Q¹ a n mají význam uvedený výše, a v připraveném meziproduktu se W¹ odehrání a získaný meziprodukt se kondenzuje s Nkoncově chráněnou aminokyselinou obecného vzorce

W¹-------A¹------OH, ve kterém

A¹ má význam definovaný u obecného vzorce I a

W¹ má význam definovaný výše, a poté se takto získaný meziprodukt zpracuje stejným způsobem jako je uvedeno pod c) výše,

e) pro přípravu peptidového derivátu obecného vzorce I nebo V, kde B znamená strukturní fragment vzorce IVa, ve kterém r znamená číslo 0 nebo 1, když X¹, X² a X⁴ vždy představují CH2, či r představuje 0 nebo 1, když X² a X⁴ vždy představují CH2, X¹ chybí a X³ představuje skupinu vzorce N-C(NH)-NH₂ a ostatní substituenty mají význam definovaný u obecného vzorce I nebo V,

N-koncově chráněný dipeptid obecného vzorce

W¹-----A¹---A²------OH, ve kterém

A¹ a A² mají význam definovaný u obecných vzorců I nebo V,

-18CZ 290104 B6 se kondenzuje se sloučeninou vzorce

ve kterém

Q¹ je -C(NH)-NH₂, -C(NW²)-NH-W² nebo -C(NH)-NH-W², kde W² je aminochránicí skupina, jako je terc.-butoxykarbonylová nebo benzyloxykarbonylová skupina, nebo

Q² je rovno W² a r představuje číslo 0 nebo 1, když

X¹, X² a X⁴ vždy představují CH₂, nebo r představuje 0, když

X² a X⁴ vždy představují CH₂,

X¹chybí a

X³ představuje skupinu vzorce N-C(NH)-NH₂ a n má význam uvedený výše, nebo

Q² je W², pokud je orthogonální k W¹, a potom se odstraní skupina W², aminoskupina se následně převede na guanidinoskupinu za použití nechráněného, N-chráněného nebo Ν,Ν-dichráněného guanidinového činidla.

f) pro přípravu peptidového derivátu obecného vzorce I nebo V, kde B znamená strukturní fragment vzorce IVa, ve kterém r znamená číslo 0 nebo 1, když X¹, X² a X⁴ vždy představují CH2, či r představuje 0, když X² a X⁴ vždy představují CH2, X¹ chybí a X³ představuje skupinu vzorce N-C(NH)-NH₂ a ostatní substituenty mají význam definovaný u obecného vzorce I nebo V,

N-koncově chráněná aminoskupina obecného vzorce

W¹-----A²------OH, ve kterém

A² má význam definovaný u obecného vzorce I a

W¹ má význam uvedený výše,

-19CZ 290104 B6

ve kterém

X¹, X², X⁴, Q, r a n mají význam definovaný výše, a v připraveném meziproduktu se odehrání skupina W¹ a takto vzniklý meziprodukt se kondenzuje s N-koncově chráněnou aminokyselinou obecného vzorce

W¹------A¹------OH, ve kterém

A¹ má význam definovaný u obecného vzorce I a

W¹ má význam definovaný výše, a poté se takto získaný meziprodukt zpracuje stejným způsobem jako je uvedeno pod e) výše,

g) pro přípravu peptidového derivátu obecného vzorce I nebo V, kde B znamená strukturní fragment vzorce IVa, ve kterém X⁴ představuje CH₂, X¹ a X³ znamená NH, X² představuje C=NH a r znamená číslo 1, a ostatní substituenty mají význam definovaný u obecného vzorce I nebo V,

N-koncově chráněný dipeptid obecného vzorce

W¹-----A¹---A²-----OH, ve kterém

A¹ a A² mají význam definovaný u obecných vzorců I nebo V, se kondenzuje se sloučeninou vzorce

ve kterém

W³ je vodík nebo aminochránicí skupina, jako je arylsulfonylová skupina, benzyloxykarbonylová skupina nebo terc.-butoxykarbonylová skupina a

-20CZ 290104 B6 n má význam definovaný u obecného vzorce I,

h) pro přípravu peptidového derivátu obecného vzorce I nebo V, kde B znamená strukturní fragment vzorce IVa, ve kterém X⁴ představuje CH₂, X¹ a X³ znamenají NH, X² představuje C=NH a r znamená číslo 1, a ostatní substituenty mají význam definovaný u obecného vzorce I nebo V,

N-koncově chráněná aminokyselina obecného vzorce

W¹-----A²------OH, ve kterém

A² má význam definovaný u obecného vzorce I a

W¹ má význam definovaný výše, se kondenzuje se sloučeninou vzorce

ve kterém

W³ a n mají význam definovaný výše, a v připravovaném meziproduktu se odehrání skupina W¹ a takto vzniklý meziprodukt se kondenzuje s N-koncovou aminokyselinou obecného vzorce

W¹----A¹------OH, ve kterém

A¹ má význam definovaný u obecného vzorce I a

W¹ má význam definovaný výše, a připravené meziprodukty se převedou na koncový peptidový derivát jakýmkoliv z následujících způsobů, v závislosti na charakteru použitých Q¹- a Q²-skupin:

odstraněním chránící skupiny nebo chránících skupin, je-li

Q¹ ve významu -C(NH)-NH2, -C(NW²)-NH-W², -C(NH)-NH-W², -NH-C(NH)-NH2, -NHC(NH)-W², -N(W²)-C(NH)-NH-W² nebo -NH-C(NW²)-NH-W², kde W² má význam uvedený výše, nebo selektivním odchráněním W^-skupiny, když Q¹ nebo Q² znamenají -C(NW²)-NH-W², -C(NH)NH-W², -NH-C(NH)-NH-W², -N(W²)-C(NH)-NH-W² nebo -NH-C(NW²)-NH-W², kde W²má výše uvedený význam a v tomto případě musí být orthogonální k W¹, a potom se alkyluje N-koncový dusík a je-li to žádoucí, provede se odchránění.

-21 CZ 290104 B6

Předmětem tohoto vynálezu je rovněž jakýkoli peptidový derivát vymezený výše pro přípravu v terapii.

Výhodným provedením vynálezu je kterýkoliv peptidový derivát vymezený výše kromě případu kdy A² je strukturní fragment vzorce IHb, pro použití jako antikoagulační nebo antitrombotické činidlo.

Výhodným provedením vynálezu může být peptidový derivát použitý jako protizánětlivé činidlo.

Předmětem tohoto vynálezu také je farmaceutický přípravek, který obsahuje účinné množství kteréhokoli peptidového derivátu vymezeného výše spolu s jedním nebo více farmaceutickými nosiči.

Předmětný farmaceutický přípravek, obsahující účinné množství peptidového derivátu podle vynálezu spolu s jedním nebo více farmaceuticky přijatelnými nosiči nachází použití jako antikoagulační nebo antitrombotické činidlo, případně jako protizánětlivé činidlo.

Předmětem tohoto vynálezu je konečné použití peptidového derivátu jako účinného činidla pro výrobu farmaceutického přípravku pro inhibici trombinu v lidském nebo zvířecím organismu nebo pro výrobu farmaceutického přípravku pro inhibici kininogenáz v lidském nebo zvířecím organismu.

Dále se uvádí detailnější popis tohoto vynálezu v širších souvislostech.

Bylo zjištěno, že sloučeniny obecného vzorce I, buď jako takové nebo ve formě svých farmaceuticky přijatelných solí, včetně stereoizomerů, jsou potentnější inhibitory serin proteáz, zejména trombinu a kininogenáz jako je kallikrein.

U sloučenin vyjádřených vzorci znamenají připojené symboly ,,/a“ a ,,/b“ v podstatě čistý stereoizomer na atomu uhlíku označeném R nebo S. Stereoizomer může být identifikován pro každou sloučeninu s odkazem na popisnou část. „R,S“ označuje směs stereoizomerů. U sloučeniny s jedním asymetrickým centrem symbol „RorS“, který je zaměnitelně používán s označením „R nebo S“ znamená, že je neznámá absolutní stereochemická konfigurace.

Preferované kombinace X¹, X₂, X3, X4 a r jsou

X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2 a r je 0,1 nebo

X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a r je 0,1 nebo

X¹ a X³ jsou NH, X² je C=NH, X⁴ je CH₂ a r je 0,1 nebo

X¹ a X⁴ jsou CH₂, X² je C=NH, X³ je NH a R je 0,1 nebo

X¹ je CH₂, X² a X⁴ jsou NH, X³ je C=NH a r je 1 nebo

X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je CH-NH-C(NH)-NH2 a r je 0,1 nebo

X¹ není přítomno, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2 a R je 0 nebo

X¹ není přítomno, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a r je 0, zvláště výhodné kombinace X¹, X₂, X3, X4 a r jsou

-22CZ 290104 B6

X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2 a r je 1,

X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a r je 0 nebo 1,

X¹ není přítomno, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a r je 0 nebo

X¹ a X³ jsou NH, X² je C=NH, X⁴ je CH₂ a r je 1,

X⁵ představuje C(NH)-NH₂ nebo NH-C(NH)-NH₂,

R⁶ je H nebo alkylová skupina, mající 1-4 atomy uhlíku,

X⁶ představuje CH nebo N, sloučeniny vzorce I, mající S-konfíguraci na A² aminokyselině jsou preferovány, zvláště jsou preferovány tyto sloučeniny, mající také R-konfíguraci na A¹ aminokyselině.

V předloženém kontextu výraz „alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku“ může být přímá nebo rozvětvená, pokud není uvedeno jinak. Alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku, může být methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, iso-butyl sek. butyl a terc.butyl.

V předloženém kontextu výraz „alkylová skupina, mající 1 až 6 atomů uhlíku“ může být přímá nebo rozvětvená, pokud není uvedeno jinak. Alkylová skupina, mající 1 až 6 atomů uhlíku může být methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sek.butyl, terc.butyl, n-pentyl, isopentyl, terc.pentyl, neopentyl, n-hexyl nebo isohexyl. Pokud je uváděno nenasycení, je jím míněna dvojná vazba uhlík-uhlík.

Vlnité čáry na atomu uhlíku v karbonylové skupině ve vzorcích Ha, Kb, Rc, Dd, Re, Rla, IRb, IRc, na atomu dusíku ve vzorcích IRa, RIb, IRc a na atomu uhlíku v kruhovém systému ve vzorcích IVa, IVb, IVc, IVd označují vazebnou polohu fragmentu.

Zkratky jsou uvedeny na konci tohoto popisu.

Podle vynálezu bylo nalezeno, že sloučeniny obecného vzorce Ia, jak jako takové tak ve formě svých fyziologicky přijatelných solí a včetně stereoizomerů, jsou potentními inhibitory trombinu:

A¹-----A²------NH------(CH₂)_n--------B (Ia), kde

A¹ představuje strukturní fragment vzorce Ra, Rb, Rc, Hd, výhodně Ha nebo Rb kde k je celé číslo 0,1, 2, 3 nebo 4, výhodně 0,1, q je celé číslo 0, 1, 2 nebo 3, výhodně 1,

R¹ představuje H, alkylovou skupinu, mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo RⁿOOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a může být substituovaná v poloze alfa ke karbonylové skupině a alfa substituent je skupina R¹⁷-(CH₂)_P-, kde p je 0,1 nebo 2 a R¹⁷ je methyl, fenyl, OH, COOR¹², CONHR¹², kde R¹² je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku a R¹¹ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 6 atomů uhlíku, nebo

-23CZ 290104 B6

R¹ představuje R¹³-NH-CO-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a může být substituován alfa ke karbonylu s alkylovou skupinou, mající 1 až 4 atomy uhlíku a kde R¹³ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo -CH₂COOR¹², kde R¹² má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje R¹²OOC-CH2OOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a může být substituována alfa ke karbonylu alkylovou skupinou, mající 1 až 4 atomy uhlíku a kde R¹² má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje R¹⁴SOr-, Ph(4-COOR¹²)-SO₂-, Ph(3-COOR¹²)-SO2-, Ph(2-COOR¹²)-SO2-, kde R¹² má výše definovaný význam a R¹⁴ je alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku, nebo

R¹ představuje -COO-R¹⁵, kde R¹⁵ je alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku, nebo

R¹ představuje -CO-OR¹⁵, kde R¹⁵ má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje -CO-(CH₂)p-COOR¹², kde R¹² má výše definovaný význam a p je celé číslo 0,1 nebo 2, nebo

R¹ představuje -CH2PO(OR¹⁶)2, -CH2SO₃H nebo -CH2-(5-(lH)-tetrazolyl), kde R¹⁶ je, jednotlivě při každém výskytu, H, methyl nebo ethyl, výhodně R¹ představuje RⁿOOC-alkyl- kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a R¹¹ je H.

R představuje H nebo alkylovou skupinu, mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo R OOC-alkylkde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a kde R²¹ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku,

R³ představuje alkylovou skupinu, mající 1 až 4 atomy uhlíku a alkylová skupina může nebo nemusí nést jeden nebo více atomů fluoru, nebo

R³ představuje cyklopentyl, cyklohexyl- nebo fenylovou skupinu, která může nebo nemusí být substituována alkylovou skupinou, mající 1 až 4 atomy uhlíku, nebo

R³ představuje 1-naftylovou nebo 2-naftylovou skupinu a k je 0,1 nebo

R³ představuje cis- nebo trans-dekalinovou skupinu a k je 0,1 nebo

R⁴ představuje H, alkylovou skupinu, mající 1 až 4 atomy uhlíku, cyklohexyl- nebo fenylovou skupinu, výhodně cyklohexylovou nebo fenylovou skupinu,

A² představuje strukturní fragment vzorce IDa, Hlb nebo Hic, výhodně Hla, kde p je celé číslo 0,1 nebo 2, m je celé číslo 1, 2, 3 nebo 4, výhodně 2,3,

-24CZ 290104 B6

Y představuje methylenovou skupinu, nebo

Y představuje ethylenovou skupinu a výsledný 5-ti členný kruh může nebo nemusí nést jeden nebo dva atomy fluoru, hydroxyskupinu nebo oxoskupinu v poloze 4, nebo může nebo nemusí být nenasycen, nebo

Y představuje -CH₂-O-, -CH₂-S- CH₂-SO-, s heteroatomovou funkčností v poloze 4, nebo

Y představuje n-propylenovou skupinu a výsledný 6-ti členný kruh může nebo nemusí nést v poloze 5 jeden atom fluoru, hydroxyskupinu nebo oxoskupinu, nést dva atomy fluoru v jedné z poloh 4 nebo 5 nebo je nenasycen v poloze 4 a 5 nebo nese v poloze 4 alkylovou skupinu s 1 a 4 atomy uhlíku, nebo

Y představuje -CH₂-O-CH₂-, -CH₂-S-CH₂-, -CH₂-SO-CH₂- nebo

Y představuje -CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-,

R³ představuje alkylovou skupinu, mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo,

R³ představuje Si(Me)₃ skupinu,

R⁵ představuje H nebo alkylovou skupinu, mající 1 až 4 atomy uhlíku, výhodně H nebo methylskupinu, nebo

R⁵ představuje -(CH₂)_P-COOR⁵¹, kde p je 0, 1 nebo 2 a R⁵¹ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku, výhodně je p 0 nebo R⁵¹ je H, n je celé číslo 0,1, 2, 3 nebo 4, výhodně 1, 2, 3,

B představuje strukturní fragment vzorce IVa, IVb, IVc nebo IVd, výhodně IVa nebo IVb, kde

X¹, X², X³, X⁴, X⁵ a X⁶ mají výše definovaný význam, r je celé číslo 0 nebo 1,

R⁶ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku, výhodně H, preferované kombinace X¹, X², X³, X⁴ a r jsou

X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2 a r je 0,1 nebo

X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a r je 0, 1 nebo

X¹ aX³ jsouNH, X²jeC=NH, X⁴je CH₂arjeO, 1 nebo

X¹ a X⁴ jsou CH₂, X² je C=NH, X³ je NH a R je 0, 1 nebo

X¹ je CH₂, X² a X⁴ jsou NH, X³ je C=NH a r je 1 nebo

X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je CH-NH-C(NH)-NH2 a r je 0, 1 nebo

X¹ není přítomno, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2 a r je 0 nebo

-25CZ 290104 B6

X¹ není přítomno, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a r je 0, zvláště výhodné kombinace X¹, X², X³, X⁴ a r jsou

X¹ není přítomno, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a r je 0 nebo

X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2 a r je 1,

X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a r je 0 nebo 1,

X¹ a X³ jsou NH, X² je C=NH, X⁴ je CH₂ a r je 1,

X⁵ představuje C(NH)-NH₂ nebo NH-C(NH)-NH₂, výhodně C(NH)-NH₂,

X⁶ představuje CH nebo N, podle preferovaného provedení se vynález týká sloučeniny vzorce Ia, kde

A¹ představuje strukturní fragment vzorce Ha, kde k je 0 nebol,

R¹ představuje RⁿOOC-alkyl, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku, zejména methylen, ethylen a R¹¹ je H,

R² představuje H,

R³ představuje cyklohexylovou skupinu,

A² představuje strukturní fragment vzorce Dia, kde

Y představuje methylenovou skupinu, ethylenovou skupinu nebo n-propylenovou skupinu a výsledný 6-ti členný kruh může nebo nemusí nést v poloze 4 alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, výhodně Y představuje methylen, ethylen,

R⁵ představuje

B představuje strukturní fragment vzorce IVa, kde

X¹ není přítomno, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a r je 0, a n je 1 nebo 2,

X¹ a X³ jsou NH, X² je C=NH, X⁴ je CH₂, r je 1 a n je 2, nebo

X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2, r je 1 a n je 1, nebo

X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je N-C(NH)-NH2, r je 0 nebo 1 a n je 1 nebo 2, nebo zvláště jsou výhodné ty sloučeniny, kde B představuje strukturní fragment vzorce IVb, kde

-26CZ 290104 B6

X⁵ představuje C(NH)-NH₂, R⁶ je H a η = 1.

Preferované sloučeniny podle vynálezu jsou:

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab

HOOC-CH₂-(R)Clg-Pro-Pag

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab (HOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pab H-(R)Cgl-Pic-Pab

HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Cgl-Pic-Pag H-(R)Cha-Aze-Pab

HOOC-CH₂-(R)Clia-Aze-Pab HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab HOOC-CH₂-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/a HOOC-CH₂-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/b HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab

HOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab

H-(R)-Cha-Pro-Pab HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(Me)(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CHHRorS)CH(COOHHR)Cha-Pro-Pab/a HOOC-CH₂-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/b HOOC-CH₂-N-CO-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab EtOOC-CH₂-CH₂-Chr-(R)Cha-Pro-Pab Ph(4-COOH)-SO₂-(R)Cha-Pro-Pab

Ph(4-COOH)-SO₂-(R)-Cha-Pro-Pab

H-(R)Cha-Pic-Pab

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab

HOOC-CH₂-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/a

HOOC-CH2-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/b HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab

HOOC-CH₂-CO(R)Cha-Pic-Pab

Me-OOC-CH₂-(CO)- (R)Cha-Pic-Pab

H₂N-CO-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab

Boc-(R)Cha-Pic-Pab

Ac-(R)Cha-Pic-Pab

Me-SO₂-(R)Cha-Pic-Pab

H-(R)Cha-(R, S)betaPic-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CH₂-CHr-(R)Cha-Val-Pab H-(R)Hoc-Aze-Pab

HOOC-CHr-CHr-(R)Hoc-Aze-Pab

HOOC-CH₂-(R,S)CH(CHOOH)-(R)Hoc-Pro-Pab

-27CZ 290104 B6

HOOC-CHHR)Hoc-Pic-Pab (HOOC-CH₂)₂-(R)Hoc-Pic-Pab HOOC-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph-Pro-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R)Tic-Pro-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pig HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig H-(R)Cha-Aze-Pig HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig H-(R)Cha-Pro-Pac

H-(R)Cgl-Ile-Pab H-(R)Cgl-Aze-Pab HOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab MeOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pag BuOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab ⁿhexOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab H-(R)Cgl-Pro-Pab HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pac HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pac HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pac HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pic HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig (HOOC-CH₂)2-(R)Cgl-Pro-Pig HOOC-CH₂-CH₂(HOOC-CH₂)-(R)Cha-Pro-Pig HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig HOOC-CH₂-(R)Clg-Pro-(R,S)Hig H-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig H-(R)Cgl-Aze-Rib HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Rig HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Rig HOOC-CH2-CH₂-(R)Cha-Aze-Rig HOOC-CHr-(R)Cha-Pro-(S)Itp H-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig H-(R)Cha-Pro-Mig H-(R)Cha-Pro-Dig H-(R)Cha-Pro-Dig

Zvláště výhodné sloučeniny vzorce la jsou

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab HOOC-CH2-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab HOOC-CHr-(R)Cha-Pro-Pab

-28CZ 290104 B6

HOOC-CH₂-CH2-(R)Cha-Pro-Pab

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pac

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig

V uvedených tabulkách sloučenin znamenají písmena /a a /b v podstatě čistý stereoizomer na atomu uhlíku označeném „R nebo S“. Stereoizomer může být identifikován pro každou sloučeninu s odkazem na popisnou část. „R,S“ označuje směs stereoizomerů.

Podle vynálezu bylo nalezeno, že sloučeniny obecného vzorce Ib, buď jako takové nebo ve formě fyziologicky přijatelných solí a včetně stereoizomerů, jsou potentními inhibitor kininogenáz:

A¹-------K²--------NH--------(CH₂)_n--------B (Ib), kde

A¹ představuje strukturní fragment vzorce Ila, Ub, nebo Ile, výhodně Ha nebo lib kde k je celé číslo 0, 1, 2, 3 nebo 4, výhodně 0,1, q je celé číslo 0, 1, 2 nebo 3, výhodně 1,

R¹ představuje H, alkylovou skupinu, mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo RⁿOOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a může být substituovaná v poloze alfa ke karbonylové skupině a alfa substituent je skupina R¹⁷-(CH2)p-, kde p je 0, 1 nebo 2 a R¹⁷ je methyl, fenyl, OH, COOR¹², CONHR¹², kde R¹² je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku a R¹¹ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 6 atomů uhlíku, nebo

R¹ představuje Ph(4-COOR¹²)-CH2-, kde R¹² je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku, nebo

R¹ představuje R^I3-NH-CO-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a může být substituován alfa ke karbonylu s alkylovou skupinou, mající 1 až 4 atomy uhlíku a kde R¹³ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo -CH₂COOR¹², kde R¹² má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje R¹²OOC-CH₂-OOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a může být substituována alfa ke karbonylu alkylovou skupinou, mající 1 až 4 atomy uhlíku a kde R¹² má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje R^SCV, Ph(4-COOR¹²)-SO2-, Ph(3-COOR¹²)-SO2-, Ph(2-COOR¹²)-S0₂-, kde R¹² má výše definovaný význam a R¹⁴ je alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku, nebo

R¹ představuje -CO-OR¹⁵, kde R¹⁵ má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje -CO-(CH₂)p-COOR¹², kde R¹² má výše definovaný význam a p je celé číslo 0, 1 nebo 2, nebo

-29CZ 290104 B6

R¹ představuje -CH2O(OR¹⁶)2, -CH₂SO₃H nebo -CHr-^-ílHJ-tetrazolyl), kde Ri6 je, jednotlivě při každém výskytu, H, methyl nebo ethyl,

R² představuje H nebo alkylovou skupinu, mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo R²¹OOC-alkylkde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a kde R²¹ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku,

R³ představuje fenylovou skupinu substituovanou OR³¹ skupinou, kde R³¹ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku a k je 0, 1 nebo

R³ představuje 1-naftylovou nebo 2-naftylovou skupinu a k je 0, 1 nebo

R³ představuje cis- nebo trans-dekalinovou skupinu a k je 0, 1 nebo

R³ představuje 4-pyridyl, 3-pyrrolidinyl nebo 3-indolyl, který může být nebo nemusí být substituován OR³¹ skupinou, kde R³¹ má výše definovaný význam a k je 0,1 nebo

R⁴ představuje H, alkylovou skupinu, mající 1 až 4 atomy uhlíku, cyklohexyl- nebo fenylovou skupinu,

A² představuje strukturní fragment vzorce Hla, IHb nebo Hic, výhodně IHb kde p je celé číslo 0, 1 nebo 2, m je celé číslo 1, 2, 3 nebo 4, výhodně 2, 3,

R³ má výše definovaný význam, n je celé číslo 0,1, 2, 3 nebo 4, výhodně 1,2,3,

B představuje strukturní fragment vzorce IVa, IVb, IVc nebo IVd, výhodně IVa nebo IVb.

X¹, X², X³, X⁴ mají výše definovaný význam,

R⁶ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku, vhodně H nebo methylová skupina, r je celé číslo 0 nebo 1, preferované kombinace X¹, X₂, X₃, X4 jsou

X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2 a r je 0, 1 nebo

X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a r je 0, 1 nebo

-30CZ 290104 B6

X¹ a X³ jsou NH, X² je C=NH, X⁴ je CH₂ a r je 0, 1 nebo

X¹ a X⁴ jsou CH₂, X² je C=NH, X³ je NH a r je 0, 1 nebo

X¹ je CH₂, X² a X⁴ jsou NH, X³ je C=NH a r je 1 nebo

X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je CH-NH-C(NH}-NH2 a r je 0,1 nebo

X¹ není přítomno, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2 a r je 0 nebo

X¹ není přítomno, X² a X⁴ jsou CH₂, X³ je N-C(NH)-NH2 a r je 0, zvláště výhodné kombinace X¹, X₂, X₃, X4 jsou

X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je CH-C(NH)-NH2 a r je 1,

X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je N-C(NH)-NH2 a r je 1,

X⁵ představuje C(NH)-NH₂ nebo NH-C(NH)-NH₂, výhodně C(NH)-NH₂,

R⁶ je H nebo alkylová skupina, mající 1-4 atomy uhlíku,

X⁶ představuje CH nebo N.

Preferované sloučeniny podle vynálezu jsou:

H-(R)Pro-Phe-Pab,

HOOC-CHHRjPro-Phe-Pab

H-(R)Phe-Phe-Pab

HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab

HOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Pab

H-(R)-Cha-Phe-Pab

HOOC-CH₂-(R)-Cha-Phe-Pab

H-(R)-Phe-Cha-Pab

HOOC-CH₂-(R)Phe-Cha-Pab

H-(R)Cha-Cha-Pab

HOC-CH₂-(R)Cha-Cha-Pab

Dále bylo nalezeno, že sloučeniny obecného vzorce V buď jako takové nebo ve formě fyziologicky přijatelných solí a zahrnující stereoizomery, jsou potentní inhibitor serin proteáz, zejména trombinu a kininogenáz jako je kallikrein, po orálním nebo parenterálním podání:

A¹-----A²--------NH-----(CH₂)_n------B-D (V), kde

A¹ představuje strukturní fragment vzorce Ila, lib, líc, Hd nebo Ile

-31 CZ 290104 B6

kde k je celé číslo 0, 1, 2, 3 nebo 4, m je celé číslo 1,2, 3 nebo 4, q je celé číslo 0,1, 2 nebo 3,

R¹ představuje RⁿOOC-alkyl- kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a může být substituovaná v poloze alfa ke karbonylové skupině a alfa substituent je skupina R¹⁷(CH₂)_P-, kde p je 0,1 nebo 2 a R¹⁷ je COOR¹², CONHR¹², kde R¹² je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku a R¹¹ je H nebo alkylová skupina, mající 1 a 6 atomů uhlíku, nebo benzylová skupina a R¹¹ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 6 atomů uhlíku, nebo benzylová skupina, nebo

R¹ představuje R¹³-NH-CO-alkyl, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a může být substituován alfa ke karbonylu alkylovou skupinou, mající 1 až 4 atomy uhlíku a kde R¹³ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo -CH₂COOR¹², kde R¹² má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje R¹²OOC-CH₂-OOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a může být substituována alfa ke karbonylu alkylovou skupinou, mající 1 až 4 atomy uhlíku a kde R¹²⁺má výše definovaný význam, nebo

-32CZ 290104 B6

R¹ představuje R^,4SO2- Ph(4-COOR¹²)-SO2- Ph(3-COOR¹²)-SO2- Ph(2-COOR¹²)-SO₂kde R¹² má výše definovaný význam a R¹⁴ je alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku, nebo

R¹ představuje -CO-OR¹⁵, kde R¹⁵ má výše definovaný význam, nebo

R² představuje H nebo alkylovou skupinu, mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo R²¹OOC-alkylkde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a kde R²¹ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo benzylová skupina,

R³ představuje fenylovou skupinu substituovanou OR³¹ skupinou kde R³¹ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku a k je 0,1 nebo

R³ představuje 1-nafiylovou nebo 2-naftylovou skupinu a k je 0,1 nebo

R³ představuje cis- nebo trans-dekalinovou skupinu a k je 0, 1 nebo

R³ představuje 4-pyridyl, 3-pyrrolidyl nebo 3-indolyl, který může být nebo nemusí být substituován OR³¹ skupinou, kde R³’ má výše definovaný význam a k je 0,1 nebo

R⁴ představuje H, alkylovou skupinu, mající 1 až 4 atomy uhlíku, cyklohexyl- nebo fenylová skupina,

A², B a n mají význam definovaný pod vzorcem I výše,

D a Z nebo (Z)₂, kde Z představuje benzyloxykarbonylovou skupinu.

Benzyloxykarbonyl skupina (Z nebo (Z)₂ se bude vázat k amidino- nebo guanidino- dusíkům přítomným v B.

Preferované a zvláště preferované kombinace jsou stejné jak jsou popsány u vzorce I výše.

Dále bylo nalezeno, že sloučeniny obecného vzorce buď jako takové nebo ve formě farmaceuticky přijatelných solí, včetně stereoizomerů, jsou potentními inhibitory trombinu po orálním nebo parenterálním podání.

A¹---A²-----NH------(CH₂)_n-----B-D (Va), kde

A¹ představuje strukturní fragment vzorce Ila, lib, líc, Ad, výhodně Ha nebo nb

-33 CZ 290104 B6 kde k je celé číslo 0, 1, 2, 3 nebo 4, výhodně 0, 1, q je celé číslo 0, 1, 2 nebo 3, výhodně 1,

R¹ představuje R^uOOC-alkyl- kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a může být substituovaná v poloze alfa ke karbonylové skupině a alfa substituent je skupina R¹⁷(CH₂)_P-, kde p je 0, 1 nebo 2 a R¹⁷ je COOR¹², CONHR¹², kde R¹² je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku a R¹¹ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 6 atomů uhlíku, nebo benzylová skupina, nebo

R¹ představuje R¹³-NH-CO-alkyl~, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a může být substituován alfa ke karbonylu s alkylovou skupinou, mající 1 až 4 atomy uhlíku a kde R¹³ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo -CH₂COOR¹², kde R¹² má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje R¹²OOC-CHr-OOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a může být substituována alfa ke karbonylu alkylovou skupinou, mající 1 až 4 atomy uhlíku a kde R¹² má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje R¹⁴SO2-, Ph(4-COOR¹²)-SO2-, Ph(3-COOR¹²)-SO2-, Ph(2-COOR¹²)-SO2-, kde R¹² má výše definovaný význam a R¹⁴ je alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku, nebo

R¹ představuje -CO-OR¹⁵, kde R¹⁵ má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje -CO-(CH₂)p-COOR¹² kde R¹² má výše definovaný význam a p je celé číslo 0, 1 nebo 2 nebo výhodně R¹ představuje RⁿOOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a R¹¹ má výše definovaný význam.

R² představuje H nebo alkylovou skupinu, mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo R²¹OOC-alkylkde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a kde R²¹ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku, nebo benzylová skupina,

R³ představuje 1-naftylovou nebo naftylovou skupinu a k je 0, 1 nebo

R³ představuje cis- nebo trans-dekalinovou skupinu a k je 0, 1 nebo

-34CZ 290104 B6

A², B a n mají význam definovaný pod vzorcem Ia výše,

D je Z nebo (Z)₂,

Z představuje benzyloxykarbonylovou skupinu.

Preferované hodnoty, skupiny nebo kombinace a zvláště preferované kombinace jsou stejné jako jsou popsány u vzorce Ia výše, ale R¹¹ je H, alkylová skupina, mající 1 až 6 atomů uhlíku nebo benzylová skupina.

Navíc bylo nalezeno, že sloučeniny dále uvedeného obecného vzorce Vb, buď jako takové nebo ve formě svých fyziologicky přijatelných solí, včetně stereoizomerů, jsou potenciálními inhibitory kallikreinu po orálním nebo parenterálním podání.

A¹-----A²-----NH-----(CH₂)_n—---B---D (Vb), kde

A¹ představuje strukturní fragment vzorce Ha, Db, nebo Ile, výhodně Ha nebo Db kde k je celé číslo 0, 1, 2, 3 nebo 4, výhodně 0, 1, q je celé číslo 0,1, 2, nebo 3, výhodně 1,

R¹ představuje R^uOOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a může být substituovaná v poloze alfa ke karbonylové skupině a alfa substituent je skupina R¹⁷(CH₂)_P-, kde p je 0,1 nebo 2 aR¹⁷je COOR¹², CONHR¹², kde R¹² je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku a R¹¹ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 6 atomů uhlíku, nebo benzylová skupina,

R¹ představuje R¹⁴SO2-, Ph(4-COOR¹²)-SO2-, Ph(3-COOR¹²)-SO2-, Ph(2-COOR¹²)-SO2-, kde R¹² má výše definovaný význam a R¹⁴ je alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo

R¹ představuje -CO-OR¹⁵, kde R¹⁵ je výše definovaný význam, nebo

-35CZ 290104 B6

R² představuje H nebo alkylovou skupinu, mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo R²¹OOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a kde R²¹ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku, nebo benzylová skupina,

R³ představuje fenylovou skupinu substituovanou OR³¹ skupinou, kde R³¹ je H nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku a k je 0,1 nebo

R³ představuje 1-naftylovou nebo 2-naftylovou skupinu a k je 0, 1 nebo

R³ představuje cis- nebo trans-dekalinovou skupinu a k je 0,1 nebo

R³ představuje 4-pyridyl, 3-pyrrolidyl nebo 3-indolyl, který může být nebo nemusí být substituován OR³¹ skupinou, kde R³¹ má výše definovaný význam a k je 0, 1 nebo

R³ představuje Si(Me)₃ nebo CH(R³²)2, kde R³² je cyklohexyl— nebo fenylová skupina,

A², B a n mají výše definovaný význam pod vzorce lb,

D představuje Z nebo (Z)₂.

Preferované hodnoty, skupiny nebo kombinace a zvláště výhodné kombinace jsou stejné jak byly popsány u vzorce lb výše, ale R¹¹ je H, alkylová skupina, mající 1 až 6 atomů uhlíku nebo benzylskupina.

Preferované sloučeniny podle vynálezu j sou:

Boc-(R)Pro-Phe-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Pro-Phe-Pab(Z)

Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z)

MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Pab(Z)

V dalším provedení se vynález týká nového použití sloučenin vzorce

jako výchozího materiálu v syntéze inhibitoru peptidických serin proteáz a zejména v syntéze peptidických trombin inhibitorů nebo kininogenázových inhibitorů. Může být použita jako taková nebo jako mající amidinoskupinu buď mono- nebo dichráněnou na dusících chránících skupinou jako je benzyloxykarbonyl. Chránění amidinoderivátů se provádí metodami známými v oboru pro

-36CZ 290104 B6 amidinosloučeniny. Tato sloučenina se zde nazývá „1-amidino—4-aminomethylbenzen“ nebo „H-Pab“. Sloučenina již byla dříve popsána v inter alia Biochem. Pharm. díl 23, str. 2247-2256.

Strukturní fragment vzorce

nicméně nebyl zatím popsán jako strukturní prvek ve farmaceuticky aktivní sloučenině, zejména peptické sloučenina. Fragment činí serin proteázový inhibitor a zejména trombin inhibitor nebo kininogenázové inhibitory cennými.

V dalším provedení se vynález týká nového použití sloučeniny vzorce

jako výchozího materiálu v syntéze trombin inhibitoru. Sloučenina může mít amidinoskupinu buď mono- nebo dichráněnou na dusících s chránící skupinou jako je benzyloxykarbonyl. Chránění amidino derivátů se provádí metodami známými v oboru amidino sloučenin. Tato sloučenina je zde pojmenována „l-amidino-4-aminomethylcyklohexan“ nebo „H-Pac“.

Tato sloučenina již byla popsána v DE 2748295.

Strukturní fragment vzorce

nicméně nebyl dosud popsán jako strukturní prvek v cenných inhibitorech trombinu.

V dalším provedení se vynález týká nové sloučeniny vzorce

-37CZ 290104 B6 a použití uvedené sloučeniny jako výchozího materiálu pro syntézu serin proteázového inhibitoru, zejména inhibitoru trombinu nebo inhibitoru kininogenázy. Sloučenina může mít amidinoskupinu buď mono nebo dichráněnou na dusících chránící skupinou jako je benzyloxykarbonyl. Chránění amidinoderivátů se provádí metodami známými v oboru amidinosloučenin. Sloučenina je nazvána „4-aminoethyl-l-amidinopiperidin“ nebo „H-Rig“.

Strukturní fragment vzorce

nicméně nebyl zatím popsán jako strukturní prvek ve farmaceuticky aktivní sloučenině, zejména peptické sloučenině. Fragment činí serin proteázový inhibitor a zejména trombin inhibitor nebo kininogenázové inhibitoiy cennými.

V dalším provedení se vynález týká nové sloučeniny vzorce

a použití uvedené sloučeniny jako výchozí látky při syntéze inhibitoru serin proteázy, zejména trombinového nebo kininogenázového inhibitoru. Sloučenina může mít amidinoskupinu buď mono- nebo dichráněnou na dusících chránící skupinou jako je benzyloxykarbonyl. Chránění amidinoderivátů se provádí metodami známými v oboru pro amidinosloučeniny. Tato sloučenina je nazvána „l,3-diaza-2-imino-4-aminocyklohexan“ nebo „H-Itp“.

Strukturní fragment vzorce

nicméně nebyl dosud popsán jako strukturní prvek v cenných ve farmaceuticky účinné sloučenině, zejména peptické sloučenině. Fragment činí inhibitor serin proteázy a zejména inhibitor trombinu nebo inhibitor kininogenázy cenným.

-38CZ 290104 B6

V dalším provedení se vynález týká nové sloučeniny vzorce

h₂n kde nje 1 nebo 2 sje 0 nebo 1, a použití uvedené sloučeniny jako výchozí látky v syntéze inhibitorů serin proteáz, zejména trombin inhibitorů nebo kininogenázových inhibitorů. Sloučenina může mít amidinoskupinu buď mono- nebo dichráněnou na dusících chránící skupinou jako je benzyloxykarbonyl. Chránění amidino derivátů se provádí metodami známými v oboru amidinosloučenin. Tyto sloučeniny jsou navzájem l-amidino-3-aminofenylpyrrolidin nebo „H-Nig“ kde nje 1 a sje 1, l-amidino-3-aminoethylpyrrolidin nebo ,,-Hig“ kde nje 2 a sje 1

3-aminomethyl-l-amidinoazetidin nebo „H-Mig“, kde njel a sje 0

3-aminoethyl-l-amidinoazetidin nebo „H-Dig“ kde nje 2 a sje 0.

Strukturní fragment vzorce

NH nicméně nebyl dosud popsán jako strukturní prvek ve farmaceuticky aktivní sloučenině, zejména peptické sloučenině. Fragment činí serin proteázový inhibitor a zejména trombin inhibitor nebo kininogenázový inhibitor cenným.

Další provedení vynálezu se týká nových sloučenin, majících amidinoskupinu mono nebo dichráněnou na dusících benzyloxykarbonylovou skupinou, kde příklady takových sloučenin jsou

4-aminomethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)benzen (H-Pab(Z)),

4-aminomethyl-l-(N,N-di(benzyloxykarbonyl)amidino)benzen (H-Pab(Z))₂,

-39CZ 290104 B6

4-aminomethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)cyklohexan (H-Pac(Z)), 4-aminomethyl-l-(N,N'-di(benzyloxykarbonyl)amÍdino)-cyklohexan (H-Pac(Z)₂), 4-aminomethyl-l-(N-benzyloxy-karbonylamidinopiperidin (H-Rig(Z)), 4-aminomethyl-l-N,N'-di(benzyloxykarbonyl)amidinopiperodin (H-Rig(Z)₂), (3RS)-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)-3-aminomethylpirrolidin(H--(Nig(Z)), (3RS)-l-(N,N'-di(benzyloxykarbonyl)amidino)-3-aminomethylpyrrolidin (H-Nig(Z)₂), (3RS)-l-(N-beiizyloxykarbonylamidino)-3-aminoethylpyrrolidin (H-Hig(Z)), (3RS)-l-(N,N-di(benzyloxykarbonyl)amidino)-3-aminoethylpyrrolidin (H-Hig(Z)2), 3-aminomethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)azetidin (H-Mig(Z)), 3-aminomethyl-l-(N,N'-di(benzyloxykarbonyl)amidino)azetidin (H-Mig(Z)₂), 3-aminoethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)azetidin (H-Dig(Z)), 3-aminoethyl-l-(N,N'-di(benzyloxykarbonyl)amidino)azetidin(H-Dig(Z)2).

Uvedené sloučeniny se používají jako výchozí materiály při přípravě nárokovaných peptidových derivátů vzorců I, Ia, Ib, V, Va a Vb.

Medikální a farmaceutické použití

Vynález také poskytuje přípravky a metody léčby stavů u lidských nebo zvířecích organismů, kde je vyžadována inhibice trombinu a fyziologických poruch, zejména zánětlivých onemocnění.

Trombin inhibující sloučeniny podle vynálezu jsou považovány za vhodné zejména u živočichů včetně člověka, pro léčbu nebo profylaxi trombózy a hyperkoagulability v krvi a tkáních. Dále jsou považovány za vhodné v situacích, kdy je nežádoucí přebytek trombinu bez znaků hyperkoagulability, například u Alzheimerovy choroby a pancreatitis. Chorobné stavy, ve kterých jsou tyto sloučeniny potenciálně využitelné, při léčbě a/nebo profylaxi, zahrnují cévní trombózu a pulmonámí embolismus, arteriální trombózu jako je infarkt myokardu, nestabilní angínu, mrtvici na základě trombózy a periferální arteriální trombózu a systémový embolismus obvykle z atria během arteriální fibrilace nebo z levého ventrikula po transmulrálním infarktu myokardu. Dále tyto sloučeniny jsou považovány za vhodné pro profylaxi artherosklerotických chorob jako je koronární arteriální choroba, cerebrální arteriální choroba a periferální arteriální choroba. Dále tyto sloučeniny jsou považovány za mající synergistické antitrombotické účinky, jsou-li kombinovány s jakýmkoliv antitrombotickým činidlem s různým mechanismem působení, jako je činidlo proti srážení destiček - kyselina acetylsalicylová. Dále se o těchto sloučeninách předpokládá, že jsou vhodné spolu s trombolytiky u trombotických chorob, zejména infarktu myokardu. Dále se předpokládá použitelnost těchto sloučenin v profylaxi re-okluze po trombolýze, perkutánní trans-luminální angioplastických (PTCA) a koronárních bypassových operacích. Dále se předpokládá použitelnost těchto sloučenin v prevenci retrombózy po mikrochirurgii a vaskulámí chirurgii obecně. Dále se předpokládá použitelnost těchto sloučenin v profylaxi roztroušení intravaskulámí koagulace způsobené bakteriemi, násobným traumatem, intoxikací nebo jakýmkoliv jiným mechanismem. Dále se tyto sloučeniny pokládají za vhodné pro antikoagulátovou léčbu, jestliže je krev v kontaktu s cizími povrchy v těle jako jsou vaskulámí transplantáty, vaskulámí kmeny, vaskulámí katétry, mechanické a biologické protézy nebo jakékoliv jiné medikální přístroje. Dále mají tyto sloučeniny předpokládanou účinnost při antikoagulantovém ošetření, jeli v kontaktu s lékařskými zařízeními mimo tělo, jako tomu je při kardiovaskulární chirurgii, nebo za užití přístroje srdce-plíce nebo při hemodialýze.

Další předpokládaná využitelnost antikoagulantových sloučenin podle vynálezu je při promývání katétrů a mechanických zařízení použitých u pacientů in vivo a jako antikoagulancia pro ochranu krve, plazmy a jiných krevních produktů in vitro.

-40CZ 290104 B6

Protizánětlivě inhibující sloučeniny podle vynálezu jsou pokládány za použitelné zejména u živočichů včetně lidí při léčbě nebo profylaxi zánětlivých chorob jako je astma, rýma, pancreatitis, urticaria, zánětlivé střevní choroby a athritis. Účinné množství kininogenázu inhibujících sloučení s nebo bez fyziologicky přijatelného nosiče nebo ředidla může být použito samotné nebo s jinými terapeutickými činidly.

Sloučeniny inhibují aktivitu kallikreinů spojených s chromogenními substráty známými postupy. Protizánětlivě působení předložených sloučenin může být například studováno jejich inhibicí alergenem indukovaných exudativních zánětlivých procesů v mukóze dýchacích cest nebo střevní mukóze.

Farmaceutické přípravky

Sloučeniny podle vynálezu budou normálně podávány orálně, rektálně, dermálně, nasálně, tracheálně, bronchiálně, parenterálně nebo inhalací, ve formě farmaceutických přípravků, obsahujících účinnou složku buď jako volnou bázi nebo farmaceuticky přijatelnou netoxickou organickou nebo anorganickou adiční sůl s kyselinou, jako je např. hydrochlorid, hydrobromid, sulfát, hydrogensulfát, nitrát, laktát, acetát, citrát, benzoát, sukcinát, tartrát, trifluoracetát a podobně, ve farmaceuticky přijatelné dávkové formě. V závislosti na chorobě, léčeném pacientovi a způsobu podání, mohou být připraveny podávány v měnících se dávkách.

Dávková forma může být pevný, polopevný nebo kapalný přípravek připravený per se známými technikami. Obvykle účinná substance bude tvořit mezi 0,1 a 99 % hmotnosti přípravku, specifičtěji mezi 0,1 a 50 % hmotnosti přípravků, zamýšlených pro parenterální podání a mezi 0,2 a 75 % hmotnosti u přípravků vhodných pro orální podání.

Vhodné denní dávky sloučenin podle vynálezu pro terapeutické ošetření lidí jsou asi 0,001 až 100 mg/kg tělesné hmotnosti při perorálním podání a 0,001 až 50 mg/kg tělesné hmotnosti při parenterálním podání.

Příprava

Dalším objektem vynálezu je způsob přípravy sloučenin. Sloučeniny vzorce I a V mohou být připraveny způsoby, zahrnujícími kondenzaci N-koncově chráněného dipeptidu nebo aminokyseliny, je-li aminokyselina použita přidá se druhá aminokyselina později za použití standardních metod ke sloučenině vzorce

H₂N - (CH₂)_n - X, kde n je celé číslo 0, 1, 2, 3 nebo 4, X je B nebo B-D, kde B má význam definovaný u vzorce I a D má význam definovaný u vzorce V jako takovou nebo mající guanidino nebo amidino dusíky buď mono nebo dichráněné amin chránící skupinou jako je benzyloxykarbonyl-, terc.butyloxykarbonyl- nebo p-toluensulfonylskupina nebo je X skupina převeditelná na B po odstranění chránící skupiny (skupin) nebo odchráněním N-koncového dusíku po alkylaci N-koncového dusíku a je-li to žádoucí odchráněním známými metodami a je-li to žádoucí tvorbu fyziologicky přijatelné soli a v těch případech, kdy reakce vede ke směsi stereoizomerů, jsou tyto popřípadě odděleny standardními chromatografickými nebo rekrystalizačními technikami a je-li to žádoucí je izolován jediný stereoizomer.

Podrobněji mohou být sloučeniny vzorců I nebo V připraveny jednou z následujících metod:

-41 CZ 290104 B6

Metoda la

Kondenzací N-koncově chráněného dipeptidu, vybraného z A¹ a A² ve vzorcích I nebo V a připraveného standardní peptidovou kondenzací, se sloučeninou vzorce

za použití standardní peptidové kondenzace, podle následujícího schématu w’--A¹ -- A² — CH w’— A¹

kde n je definováno u vzorce I, W¹ je N-koncová aminochránicí skupina jako je terc.butoxykarbonyl a benzyloxykarbonyl a Q^f je -C(NH)-NH2, -C(NW²)-NH-W², -C(NH)-NH-W², -NH-C(NH)-NH2, -NH-C(NH)-NH-W², -N(W²)-C(NH)-NH-W² nebo -NH-C(NW²>-NHW², kde W² je aminochránicí skupina jako je terc.butoxykarbonyl nebo benzyloxykarbonyl, nebo je Q*-CN, -CO-NH2 nebo -CS-NH2, kde skupina je následně převedena na amidinoskupinu (např. poskytnutím Q¹ = -C(NH)-NH2) metodami známými v oboru nebo je Q¹ NH2 nebo NHW², kde W² má výše definovaný význam, kde aminoskupina je následně převedena na guanidinoskupinu (Q¹⁼ -NH-C(NH)-NH2), po odchránění W²-skupiny, je-li Q’-NH-W² (W² v tomto případě musí být orthogonální k W¹), metodami známými v oboru.

Konečné sloučeniny mohou být vyrobeny jakýmkoliv z následujících postupů, v závislosti na charakteru použité Q-skupiny: odstranění chránící skupiny(skupin) (kde Q¹ = -C(NH)-NH2, -C(NH)-NH2, -C(NW²)-NH-W², -C(NH)-NH-W², -NH-C(NH)-NH2, -NH-C(NH)-NH-W², -N(W²)-C(NH>-NH-W² nebo -NH-C(NW²)-NH-W²) nebo selektivním odchráněním W¹skupiny (např. je-li Q¹ = -C(NW²)-NH-W², -C(NH)-NH-W², -NH-C(NH)-W², -N(W²)C(NH)-NH-W² nebo -NH-C(NW²)-NH-W² (W² v tomto případě musí být orthogonální k W¹) s následující alkylaci N-koncového dusíku metodami známými v oboru a je-li požadováno odchránění známými metodami.

-42CZ 290104 B6

Metoda Ib

Kondenzací N-koncově chráněné aminokyseliny, vybrané z A² ve vzorcích I nebo V a připravené standardními metodami, se sloučeninou vzorce

za použití standardní peptidové kondenzace, podle následujícího schématu

W'-- A² --CH

kde n, W¹ a Q¹ mají výše definovaný význam s následujícím odchráněním W’-skupiny a kondenzací s N-koncovou aminokyselinou v chráněné formě, za vzniku chráněného peptidu popsaného v metodě Ia. Syntéza konečného peptidu pak pokračuje podle metody Ia.

Metoda Ha

HjN—(CHa)

Q¹ za použití standardní peptidové kondenzace, podle následujícího schématu

-43 CZ 290104 B6

2

W¹--A -- A — OH

kde n je definováno u vzorce I, W¹ je N-koncová aminochránicí skupina jako je terc.butoxykarbonyl a benzyloxykarbonyl a Q¹ je -C(NH)-NH2, -C(NW²)-NH-W², -C(NH)-NH-W², -NHC(NH)-NH2, -NH-C(NH)-NH-W², -N(W²)-C(NH)-NH-W² nebo -NH-C(NW²)-NH-W², kde W² je aminochránicí skupina jako je terc.butyloxykarbonyl nebo benzyloxykarbonyl, neboje Q¹ -CN, -CO-NH2 nebo -CS-NH2, kde skupina je následně převedena na amidinoskupinu (např. poskytnutím Q¹ = -C(NH)-NH2) metodami známými v oboru nebo jen Q¹ NH2 nebo NHW², kde W² má výše definovaný význam, kde aminoskupina je následně převedena na guanidinoskupinu (Q¹ = -NH-C(NH)-NH2), po odchránění W²-skupiny, je-li Q -NH-W² (W² v tomto případě musí být orthogonální k W¹), metodami známými v oboru.

Konečné sloučeniny mohou být vyrobeny jakýmkoliv z následujících postupů, v závislosti na charakteru použité Q’-skupiny: odstranění chránící skupiny (skupin) (kde Q¹ = -C(NH)-NH2, -C(NW²)-NH-W², -C(NH)-NH-W², -NH-C(NH)-NH2, -NH-C(NH)-NH-W², -N(W²)C(NH)-NH-W² nebo -NH-C(NW²)-NH-W²) nebo selektivním odchráněním W’-skupiny (např. je-li Q¹ = -C(NW²)-NH-W², -C(NH)-NH-W², -NH-C(NH)-NH-W², -N(W²)-C(NH)-NH-W²nebo -NH-C(NW²)-NH-W² (W² v tomto případě musí být orthogonální kW¹) s následující alkylací N-koncového dusíku metodami známými v oboru a je-li požadováno odchránění známými metodami.

Metoda lib

Kondenzací N-koncově chráněné aminokyseliny, vybrané z A² ve vzorcích I nebo V a přípravě· né standardními metodami, se sloučeninou vzorce

-44CZ 290104 B6

kde n, W¹ a Q¹ mají výše definovaný význam a následujícím odchráněním W'-skupiny a kondenzací s N-koncovou aminokyselinou, v chráněné formě, za vzniku chráněného peptidu popsaného 5 v metodě Ha. Syntéza konečného peptidu pak pokračuje podle metody Ha.

Metoda IDa

Kondenzací N-koncově chráněného dipeptidů, vybraného z A¹ a A² ve vzorcích I nebo V a připraveného standardní peptidovou kondenzací, se sloučeninou vzorce

W¹--A¹ -- A² OH

X⁴

Q²/ X^J (CHsJt-X⁴ w’--A¹ -- A²--NH—(CHJ—Z\“O»

X’X

-45 CZ 290104 B6 kde nje definováno u vzorce I a r je 0,1 jestliže X¹, X² a X⁴jsou CH2 neboje R 0 jestliže X² a X⁴jsou ČH2 a X¹ chybí, W¹ je N-koncová aminochránicí skupina jako je terc.butyloxykarbonyl a benzyloxykarbonyl a Q² je -C(NH)-NH₂, -C(NW²)-NH-W², nebo -C(NH)-NH-W², kde W²je aminochránicí skupina jako je terc.butyloxykarbonyl nebo benzyloxykarbonyl, nebo je Q² je rovno W², kde se aminoskupina, po odchránění W² skupiny (W² v tomto případě musí být orthogonální k W¹), se následně převede na guanidinoskupinu použitím nechráněného, N-chráněného nebo Ν,Ν'-dichráněného guanidinačního činidla metodami známými v oboru (poskytnutím Q² = -C(NH)-NH₂, C(NW²)-NH-W² nebo -C(NH)-NH-W²).

Konečné sloučeniny mohou být vyrobeny jakýmkoliv z následujících postupů, v závislosti na charakteru použité Q²-skupiny: odstranění chránící skupiny(skupin) (kde Q²= -C(NH)-NH2, -C(NW²)-NH-W² nebo -C(NH)-NH-W², nebo selektivním odchráněním W'-skupiny (např. jeli Q²= -C(NW²)-NH-W², -C(NH)-NH-W², W² v tomto případě musí být orghogonální k W¹) s následující alkylací N-koncového dusíku metodami známými v oboru a je-li to požadováno odchráněním známými metodami.

Metoda nib

H₂N—(CHj)

X⁴ \ .

N—Q²/ x^a ₂ (CH₂)7~tf w’-- A*--W—C ď

X¹------X* kde n, r, X¹, X² a X⁴, W¹ a Q² mají výše definovaný význam s následujícím odchráněním W¹skupiny a kondenzací s N-koncovou aminokyselinou, v chráněné formě, za vzniku chráněného peptidového popsaného v metodě IDa. Syntéza konečného peptidu pak pokračuje podle metody Dia.

-46CZ 290104 B6

Metoda IVA

Kondenzací N-koncově chráněného dipeptidů vybraného z A¹ a A² ve vzorcích I nebo V a připraveného standardní peptidovou kondenzací, se sloučeninou vzorce

za použití standardní peptidové kondenzace, jak uvedeno v následujícím schématu w’— A¹

kde n má význam definovaný u vzorce I, W¹ je N-koncová aminochránicí skupina jako je terc.butyloxykarbonyl nebo benzyloxykarbonyl a W³ je H nebo aminochránicí skupina jako je arylsulfonyl, benzyloxykarbonyl nebo terc.butyloxykarbonyl. Konečné sloučeniny mohou být vyrobeny jakýmkoliv z následujících způsobů: odstraněním chránící skupiny (skupin) nebo selektivním odchráněním W^-skupiny (W¹ musí být orghogonální k W³) s následující alkylací N-koncového dusíku a je-li to žádoucí odchráněním.

Metoda IVb

-47CZ 290104 B6 za použití standardní peptidové kondenzace, jak znázorněno dále

W¹— —OH

kde n, W¹ a W³ mají výše definovaný význam s následujícím odchráněním W*-skupiny (W¹ musí být ortogonální k W³) a kondenzací s N-koncovou aminokyselinou, v chráněné formě, za vzniku chráněného peptidu popsaného v metodě IVa. Syntéza na konečné peptidy se pak provádí podle metody IVa.

Následující popis ilustruje aspekty vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Obecné experimentální postupy

Hmotové spektra byla zaznamenána na Finnigan MAT TSQ 700 triple quadropole hmotovém spektrometru opatřeném elektrosprejovým interfacem.

'Η NMR a ¹³C NMR měření byla provedena na spektrometrech BRUKER AC-P 300 a BRUKER AM 500, kde první pracuje při ‘H frekvenci 500,14 MHz a ^,3C frekvenci 125,76 MHz a druhý při ’H a ¹³C frekvenci 300,13 MHz a 75,46 MHz.

Vzorky asi 10 až 50 mg byly rozpuštěny v 0,6 ml některého z následujících rozpouštědel: CDC1₃(isotopická čistota > 99,8 %), CD₃OD (isotopická čistota > 99,95 %), D₂O (isotopická čistota > 99,98 %) nebo DMSO-dé (isotopická čistota > 99,8 %). Všechna rozpouštědla byla získána od Dr. Glase AG, Basilej.

’H a ¹³C hodnoty chemického posunu v CDC13 a CD3OD jsou vztaženy k tetramethylsilanu jako vnitřnímu standardu. ’H chemické posuny v D2O jsou vztaženy k sodné soli kyselin 3-(trimethylsilyl)-d4-propanové a ¹³C chemické posuny vD2O jsou vztaženy k 1,4-dioxanu (67,3 ppm), oběma jako vnitřním standardem. Kalibrace se vnitřním standardem může v některých případech působit malé rozdíly posunu ve srovnání se vnitřním standardem, rozdíl v 'H chemickém posunu je menší než 0,02 ppm a ¹³C menší než 0,1 ppm.

'Η NMR spektrum peptidových sekvencí, obsahujících prolin nebo „prolinu podobný“ zbytek často vykazuje dva sety rezonancí. Toto odpovídá existenci dvou přítomných konformerů vzhledem k rotaci kolem amidové vazby, kde prolin je N-část amidové vazby. Konformery jsou pojmenovány cis a trans. V našich sloučeninách sekvence (R)Cha-Aze-, (R)Cha-Pro- a (R)ChaPic často zvyšují cis-trans rovnováhu s jedním konformerem jako převažujícím konformerem

-48CZ 290104 B6 (> 90 %). V takových případech jsou uváděny pouze ’H chemické posuny hlavního rotameru. Pouze v případech, kdy signály minoritního rotameru jsou jasně rozpoznatelné, jsou uváděny v NMR dokumentaci. Stejné kriterium platí pro NH-signály v CDC1₃, pouze v těch případech, kde signály jsou jasně rozpoznatelné, jsou uváděny v NMR-dokumentaci. Toto implikuje, že počet protonů uváděných pro některé z meziproduktů je menší než počet protonů očekávaných podle chemického vzorce.

Chromatografie na tenké vrstvě se provádí na komerčním Měrek Silikagelem 6OF254 potažených skleněných nebo hliníkových destičkách. Vizualizace byla kombinací UV záření s následujícím postřikem roztokem připraveným smísením 372 ml EtOH (95%), 13,8 ml koncentrované H2SO4, 4,2 ml koncentrované kyseliny octové a 10,2 ml p-methoxybenzaldehydu nebo fosfomolybdenové kyseliny (5-10 hmotn. % v EtOH (95%)) a zahřátím.

Rychlá chromatografie byla prováděna na Měrek Silikagelu 60 (40-63 mm, 230-400 mesh) pod tlakem vzduchu.

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie s reverzní fází (v příkladech označována jako PLC) byla provedena na Waters M-590 zařízení vybaveném třemi kolonami Kromasil 100, C8 s reverzní fází (Eka-Nobel), majícími různé rozměry pro analytickou (4,6 mm x 250 mm), sepipreparativní (1“ x 250 mm) a preparativní (2“ x 500 mm) chromatografii s detekcí při 226 nm.

Sušení vymražením bylo provedeno na Leybold-Heraeus, model Lyovac GT 2.

Příprava výchozích materiálů

Boc-(R)Pgl-OH

Příprava se stejným způsobem jak popsáno pro Boc-(R)Cha-OH (vide infra) z H-(R)Pgl-OH.

Boc-(R)Cha-OH

K roztoku H-(R)Cha-OH, 21,55 g (125,8 mmol), ve 130 ml 1M NaOH a 65 ml THF se přidá 30 g (137,5 mmol) (Boc)₂O a směs se míchá 4,5 h při teplotě místnosti. THF se odpaří a přidá se dalších 150 ml vody. Alkalická vodná fáze se promyje dvakrát EtOAc, potom se okyselí 2M KHSO4 a extrahuje 3 x 150 ml EtOAc. Spojené organické fáze se promyjí vodou, solankou a suší (Na₂SO₄). Odpařením rozpouštědla se získá 30,9 g (90,5 %) titulní sloučeniny jako bílé pevné látky.

Boc-(R)Hop-OH

Připraví se stejným postupem jak je popsán pro Boc-(R)Cha-OH, vychází se z H-(R)Hop-OH.

’Η-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 1,45 (s, 9H), 2,00 (m, 1H), 2,22 (m, 1H), 2,75 (bt, 2H), 4,36 (bs, 1H), 5,05 (bs, 1H), 7,15-7,33 (m, 5H).

4-(terc.Butyloxykarbonylaminomethyl)pyridin

K roztoku 10,81 g (100 mmol) 4-aminomethylpyridinu ve 10 ml THF se přidá 24 g (110 mmol) Boc₂O rozpuštěného v 70 ml THF při 10 °C po 20 minut. Roztok se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 4 hodiny (vytvoří se sraženina během reakce a suspenze zčervená). Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se rozpustí v EtOAc a filtruje se přes silikagel. Odpařením rozpouštědla se získá titulní sloučenina jako červený olej, který stáním krystaluje. Surový produkt se použije dále bez čištění.

-49CZ 290104 B6 ’Η-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 1,45 (s, 9H), 4,32 (d, 2H), 5,05 (bs, 1H (NH)), 7,2 (d, 2H), 8,55 (d, 2H).

4-Aminomethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)-benzen (H-Pab(Z)) (i) 4-Kyanobenzylazid

Roztok 20,23 g (0,31 mol) azidu sodného v 50 ml vody se přidá ke 49,15 g (251 mmol) 4-kyanobenzylbromidu ve 200 ml DMF při teplotě okolí. Probíhá exotermní reakce a po 1,5 hodině se reakční směs zředí 200 ml toluenu (pozor: Za účelem zamezení separace potenciálně explozivních azidových sloučenin je žádoucí přidat toluen k reakční směsi před přídavkem vody) a 500 ml vody. Vodná fáze se extrahuje dalšími 2 x 50 ml toluenu. Spojené organické extrakty se promyjí 2 x 50 ml vody a solankou a nakonec se suší (MgSO₄) a filtrují. Roztok se použije jako takový v následujícím stupni.

’Η-NMR (300 MHz, CDC1₃); δ 4,4 (s, 2H), 7,4 (d, 2H), 7,7 (d, 2H).

(ii) 4-Amidinobenzylazid

Chlorovodík se probublává směsí 250 ml absolutního ethanolu a roztok ze stupně (i) (přibližně 200 ml) výše při -5 °C do nasycení. Uchovává se při 8 °C 24 h a odpařením většiny rozpouštědla s následujícím vysrážením přídavkem bezvodého etheru se získají bílé krystaly, které se izolují filtrací a rozpustí v 1,8 1 alkoholického amoniaku. Po 48 hodinách se rozpouštědlo odpaří a přidá se 3,57M roztok NaOH za vysrážení 4-amidinobenzylazidu jako bezbarvých krystalů. Krystaly se izolují filtrací. V tomto bodě byl výtěžek 4-amidinobenzylazidu 22,5 g (celkem 51 %).

Hydrochlorid ethylimidatobenzylazidu ’Η-NMR (500 MHz, CD₃OD): δ 1,6 (t, 3H), 4,5 (s, 2H), 4,65 (q, 2H), 4,8 (br s, 2H), 7,6 (d, 2H), 8,l(d,2H)

4-Amidinobenzylazid:

’H-NMR (500 MHz, CD₃OD): δ 4,3 (s, 2H), 5,7 (br s, 3H), 7,3 (d, 2H), 7,6 (d, 2H) ⁿC-NMR (125 MHz, CDC1₃): amidin uhlík: δ 165,5.

(iii) 4-(Benzyloxykarbonylamidino)benzylazid

Krystaly z (ii) výše se rozpustí v 500 ml methylenchloridu a výsledný roztok se suší (K₂CO₃), filtruje a přidá se 27 ml (194 mmol) triethylaminu. Pomalu se k míchanému roztoku přidá 25 ml benzylchlorformiátu a reakční směs se přitom chladí na ledové lázni. Po 30 minutách se přidají další 2 ml benzylchlorformiátu a v míchání se pokračuje dalších 30 minut. Potom se přidá voda a vodná fáze se upraví na pH 7 2M HC1. Organická fáze se suší (MgSO₄) a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Nakonec se izoluje 4-(benzyloxykarbonylamidino)benzylazid jako bezbarvé krystaly z etheru/methylenchloridu/hexanu.

’H-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 4,4 (s, 2H), 5,3 (s, 2H), 6,3-7,0 (br s 1H), 7,3-7,4 (m, 5H), 7,5 (d, 2H), 7,9 (d, 2H), 9,3-9,6 (br s, 1H).

’³C-NMR (125 MHz, CDC1₃): amidin uhlík: δ 167,5.

-50CZ 290104 B6 (iv) 4-Aminomethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)benzen (H-Pab(Z))

26,3 g (100 mmol) trifenylfosfinu se přidá při teplotě místnosti ke 4-(benzyloxykarbonylamidino)benzylazidu ze (iii) výše rozpuštěnému ve 160 ml THF. Po 16 h se přidá dalších 6,6 g (25 mmol) trifenylfosfinu a roztok se nechá stát 4 h při odstraněním rozpouštědla ve vakuu. Zbytek se rozpustí v methylenchoridu a extrahuje 2M HC1. Vodná fáze se promyje methylenchloridem a etherem a pak se zalkalizuje 3,75M roztokem hydroxidu sodného. Extrakcí methylenchloridem s následujícím sušením (K2CO3) a odstraněním rozpouštědla ve vakuu se získá 20 g (celkový výtěžek vztaženo na výchozí kyanobenzylbromid je 28 %) žlutého oleje, který stáním tuhne.

‘H-NMR (500 MHz, CDCI3): δ 1,2-2,2 (s, 2H), 3,8 (s, 2H), 5,2 (s, 2H), 7,2-7,35 (m, 5H), 7,4 (d, 2H), 7,8 (d, 2H), 9,1-9,6 (br s, 1H).

ⁿC-NMR (125 MHz, CDC1₃): amidin a karbonyl uhlíky: δ 164,6 a 168,17.

H-Pig(Z)₂ (i) 4-(terc.Butyloxykarbonyl-aminomethyl)piperidin

K roztoku 17,7 g 4-terc.butyloxykarbonylaminomethylpiridinu ve 125 ml MeOH se přidají 2 g 5% Rh/Al₂O₃ a směs se hydrogenuje přes noc při 0,34 MPa. ’Η-NMR ukazuje, že hydrogenace není úplná. Proto se katalyzátor odfiltruje a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se rozpustí ve 100 ml kyseliny octové, přidají se 2 g 5% Rh/Al₂O₃ a směs se hydrogenuje 4 dny při 0,34 MPa. Katalyzátor se odfiltruje a většina kyseliny octové se odstraní ve vakuu. Po přídavku 50 ml vody ke zbytku se směs zalkalizuje M NaOH a vodná fáze se extrahuje 1 x 200 + 1 x 100 ml CH₂C1₂. Spojené organické fáze se promyjí 25 ml vody a suší (MgSO₄). Odpařením rozpouštědla se získá 17,2 g hnědavého oleje, který se rozpustí v 50 ml diethyletheru. Přídavkem 200 ml pentanu se získá sraženina, která se odfiltruje a získá se 7,7 g hnědého prášku. Odpařením matečného louhu se získá 7 g bílého oleje. Hnědý prášek se rozpustí ve 100 ml EtOAc a organická fáze se promyje 1 x 50 ml + 1 x 25 ml 1M KHSO4. Spojené kyselé fáze se zalkalizují 2M NaOH a extrahují 1 x 200 m + 1 x 75 ml EtOAc. Spojené organické fáze se suší a odpařením se získá 5,2 g titulní sloučeniny jako bílého prášku.

Zpracováním bílého oleje získaného z výše uvedeného matečného louhu se získá 3,4 g produktu. Celkový výtěžek 40 %.

'H-NMR (500 MHz, CDCI3, směs dvou rotamerů, 3:1): hlavní rotamer: δ 1,11 (dq, 2H), 2,44 (s, 9H), 1,49-1,60 (m, 1H), 1,63-1,70 (m, 2H), 2,58 (dt, 2H), 2,93-3,03 (m, 2H), 3,07 (m, 2H), 4,75 (bs, 1H (NH)).

Zřetelné signály získané z minoritního rotamerů se objevují při δ 1,21 (dq) a 1,91 (dt).

(ii) Boc-Pig(Z)₂

K roztoku 2 g (9,33 mmol) 4-(terc.butyloxykarbonyl-aminomethyl)piperidinu v 60 ml CH3CN se přidá 3,34 g (9,33 mmol) N,N'-(dibenzyloxykarbonylo)methylisothiomočoviny a směs se míchá při 60 °C 22 h. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v EtOAc. Organická fáze se promyje 2 x 20 ml 1M HKSO₄, 1 x 20 ml vody, 1 x 20 ml solanky a suší se (MgSO4). Odpařením rozpouštědla s následující rychlou chromatografií za použití petroletheru/EtOAc (1/1) jako elučního činidla se získá 2,43 g (50 %) požadovaného produktu.

-51 CZ 290104 B6 *H-NMR (500 MHz, CDC1₃): Některé signály, zejména v piperidinovém kruhu, jsou selektivně rozšířeny díky intramolekulámímu výměnnému procesu. Toto je zejména zřetelné pro 2- a 6CH₂ skupiny piperidinového kruhu, který vykazuje široký pík v rozmezí od 3,7 do 4,5 ppm.

δ 1,19-1,31 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,63-1,80 (m, 3H), 2,66-3,05 (m, 4H), 3,7-4,5 (bs, 2H), 4,65 (bt, 1H(NH)), 5,13 (s, 4H), 7,2-7,4 (m, 10H), 10,5 (bs, 1H(NH)).

(iii) H-Pig(Z)₂

Roztok 163 mg (0,31 mmol) Boc-Pig(Z)₂ v 5 ml EtOAc nasyceného HCl(g) se míchá při teplotě okolí 3 h a 20 minut. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí ve 30 ml CH₂C1₂. Organická fáze se promyje 5 ml 2M NaOH, 1 x 5 ml vody, 1 x 5 ml solanky a suší se (MgSO₄). Odpařením rozpouštědla se získá 100 mg (76 %) titulní sloučeniny.

'H-NMR (500 MHz, CDCI3): Některé signály, zejména v piperidinovém kruhu, jsou selektivně rozšířeny díky intramolekulámímu výměnnému procesu. Toto je zejména zřetelné pro 2- a 6CH₂ skupiny piperidinového kruhu, který vykazuje široký pík v rozmezí od 3,7 do 4,5 ppm.

δ 1,18-1,37 (m, 3H), 1,46-1,63 (m, 1H), 1,68-1,83 (m, 2H), 2,57 (d, 2H), 2,86-3,03 (m, 3H), 3,7-4,5 (bs, 2H), 5,13 (s, 4H), 7,2-7,4 (m, 10H).

4-Aminomethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)cyklohexan (H-Pac(Z) x 2 HC1) (i) N-[N-4-(Benzyloxykarbonyl)amidinobenzyl]terc.butylkarbamát

1,466 g (6,7 mmol) (Boc)₂O se přidá k míchanému ledově studenému roztoku 1,81 g (6,4 mmol) 4-(benzyloxykarbonyl)amidmobenzylaninu a 1 ml (7,1 mmol) triethylaminu ve 25 ml methylenchloridu. Po 20 minutách se přidá další methylenchlorid a směs se promyje 5% kyselinou octovou a 10% roztokem uhličitanu sodného. Sušením (síran hořečnatý) a odstraněním rozpouštědla ve vakuu se získá zbytek, který byl krystalizován z methylenchoridu/hexanu. Výtěžek byl 1,66 g (68 %).

(ii) N-[N-4-Amidinobenzyl]terc .butylkarbamát

Směs 1,60 g (4,2 mmol) N-[4-(benzyloxykarbonyl)amidinobenzyl]terc.butylkarbamátu, 5 ml kyseliny octové a 160 mg 10% palladia na uhlí v 50 ml ethanolu se míchá v atmosféře vodíku 2 h. Katalyzátoru se odstraní filtrací přes celit a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu, získá se acetát titulní sloučeniny ve kvantitativním výtěžku.

(iii) N-[4-Amidinocyklohexylmethyl]terc .butylkarbamát mmol acetátu N-[4-amidinobenzyl]terc.butylkarbamátu se hydrogenuje ve 100 ml methanolu za přítomnosti 863 mg 5% Rh na oxidu hlinitém při 3,4 MPa po 20 h. Katalyzátor se odstraní filtrací a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Zbytek se rozpustí ve vodě a roztok se zalkalizuje hydroxidem sodným. Následující extrakcí methylenchloridem, sušením spojeným organických fází (uhličitan draselný) a odstraněním rozpouštědla ve vakuu se získá 3,8 g (87 %) titulní sloučeniny.

(iv) N-[N-4-(Benzyloxykabonyl)amidinocyklohexylmethyl]terc .butylkarbamát

1,25 ml (8,8 mmol) benzylchlorformiátu se přidá při 0 °C k míchanému roztoku 2,04 g (8 mmol) N-[4-amidinocyklohexyl]terc.butylkarbamátu, 1,23 ml (8,8 mmol) triethylaminu a 197 mg DMAP ve 40 ml methylenchloridu. Po 10 minutách se reakční směs zředí methylenchloridem a extrahuje vodou, zředěnou kyselinou octovou a roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Orga

-52CZ 290104 B6 nicka fáze se nanese na sloupec silikagelu a eluuje se methylenchloridem, obsahujícím zvyšující se množství ethylacetátu. Získá se 249 g (80 %) titulní sloučeniny.

(v) 4-Aminomethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)-cyklohexan (H-Pac(Z)x 2 HCl)

Chlorovodík se nechá procházet roztokem 2 g (5,1 mmol) N-[4-(benzyloxykarbonyl)amidinocyklohexylmethyljterc.butylkarbamátu ve 40 ml ethylacetátu. Po 10 minutách se přidá methanol a po odstranění části rozpouštědla ve vakuu vykiystaluje dihydrochlorid titulní sloučeniny.

4~Aminomethyl-l-(N-benzyIoxykarbonylamidino)piperidin (H-Pig(Z) x HCl) (i) 4-(N-terc.Butyloxykarbonylaminomethyl)-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)piperidin (Boc-Pig(Z))

7,8 g (36,4 mmol) 4-(N-terc.butyloxykarbonylaminomethyl)piperidinu a 8,98 g (40 mmol) Nbenzyloxykarbonyl-S-methylisothiomočoviny se smísí ve 25 ml ethanolu. Směs se zahřívá na 60 až 70 °C šest hodin a ponechá se při teplotě místnosti dva dny. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v CH2CI2. Organická vrstva se promyje dvakrát 0,32M KHSO4 a jednou solankou. Spojené organické vrstvy se suší (Na₂SO₄), filtrují a odpaří. Surový produkt se čistí rychlou chromatografií za použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH (100/0, 97/3, 95/5, 90/10) jako elučního činidla a získá se 5,22 g (37 %) titulního produktu.

(ii) H-Pig(Z) x HCl (4-aminomethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)piperidin

5,22 g (13,5 mmol) Boc-Pig(Z) se rozpustí ve 100 ml ethylacetátu nasycenému HCl (plynný). Směs se nechá jednu hodinu stát a pak se odpaří. Zbytek se zředí vodou a promyje se směsí diethyletheru a ethylacetátu. Vodná vrstva se vymrazí a získá se 4,0 g (91 %) titulní sloučeniny.

’Η-NMR (D₂, 300 MHz): δ 1,40-1,60 (m, 2H), 2,05 (bd, 2H), 2,19 (m, 1H), 3,07 (d, 2H), 3,34 (bt, 2H), 4,08 (bd, 2H), 5,40 (s, 2H), 7,5-7,63 (m, 5H)

MS m/z 291 (Nf+1)

4-Aminoethyl-l-benzyIoxykarbonylamidinopiperidin (H-Rig(Z)) (i) 1 -Benzyloxykarbonylamidino-4-hydroxyethylpiperidin

Směs 6,2 g (0,028 mol) 4-hydroxyethylpiperidinu a 3,6 g (0,028 mol) N-benzyloxykarbonyl-Smethylisothiomočoviny v 50 ml acetonitrilu se reflexuje přes noc. Odpařením a rychlou chromatografií na silikagelu s ethylacetátem se získá 3,5 g (41 %) titulní sloučeniny.

’Η-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 1,1-1,85 (m, 7H), 2,83 (bt, 2H), 4,70 (bt, 2H), 4,18 (bd, 2H), 5,12 (s, 2H), 6,9-7,2 (m, 2H), 7,2-7,5 (m, 5H).

(ii) l-Benzyloxykarbonylamidino-4-mesyloxyethylpiperidin

K ledem chlazenému roztoku 3,50 g (0,0115 mol) l-benzyloxykarbonylamidino-4-hydroxyethylpiperidinu, 1,15 g (0,0115 mol) triethylaminu ve 40 ml methylenchloridu a 10 ml tetrahydrofuranu se přikape 1,30 g (0,115 mol) metylchloridu. Reakční směs se nechá míchat 1 h. Směs se nalije do vody a organická vrstva se odebere. Vodná vrstva se extrahuje methylenchloridem a spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší (síran sodný) a odpaří. Produkt se použije bez dalšího čištění v následujícím stupni. Výtěžek: 4,4 g (100 %).

-53CZ 290104 B6

Ή-NMR (300 MHz, 6 1,15-1,3 (m, 2H), 1,65-1,8 (m, 5H), 2,84 (bt, 2H), 3,01 (s, 3H), 4,20 (bd, 2H), 4,27 (t, 2H), 5,12 (s, 2H), 7,1-7,5 (m, 7H).

(iii) 4-Azidoethyl-l-benzyloxykarbonylamidinopiperidin

Ve 100 ml dimethylformamidu se rozpustí 4,4 g (0,0115 mmol) surového 1-benzyloxykarbonylamidino—4-mesyloxyethylpiperidinu a přidá se 4,5 g (0,069 mol) azidu sodného. Směs se zahřeje na 100 °C na 2,5 h. Potom se nalije do vody a extrahuje třikrát ethylacetátem. Spojené organické fáze se promyjí vodou, suší (síran sodný) a odpaří se. Zbytek se rychle chromatografuje na silikagelu za použití ethylacetátu/heptanu 1/1 jako elučního činidla. Výtěžek: 3,0 g (79 %).

’H-NMR (500 MHz, CDC1₃) 81,20 (dq, 2H), 1,5-1,8 (m, 5H), 2,85 (dt, 2H), 3,35 (t, 2H), 4,22 (bd, 2H), 5,13 (s, 2H), 6,9-7,2 (b, 2H), 7,2-7,45 (m, 5H).

(iv) 4-Aminoethyl-l-benzyloxykarbonylamidinopiperidin (H-Rig(Z))

Ke 30 ml vody se přidá 0,40 g 10% Pd/C. Borohydrid sodný, 1,0 g (0,031 mol) se rozpustí ve 30 ml vody a opatrně se přidá k míchané a ledem chlazené suspenzi Pd/C ve vodě. 4-Azidoethyl-l-benzyloxykarbonylamidinopiperidin, 2,9 g (8,8 mmol), se rozpustí ve 80 ml tetrahydrofuranu a tento roztok se přikape k ledem chlazené výše uvedené vodné suspenzi. Po 4 h míchání při teplotě místnosti se směs opět ochladí ledem a přidá se 30 ml 2M HC1. Směs se filtruje přes celit a celit se promyje další vodou. Tetrahydrofuran se odpaří a vodná fáze se promyje ethylacetátem. Vodná fáze se zalkalizuje 2M NaOH a extrahuje třikrát methylenchloridem. Spojené organické fáze se promyjí vodou, suší (síran sodný) a odpaří. Produkt se použije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

Ή-NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 1,1-1,5 (m, 6H), 1,55-1,65 (m, 1H), 1,73 (bd, 2H), 2,72 (b, 2H), 2,81 (dt, 2H), 4,20 (bd, 2H), 5,12 (s, 2H), 6,9-7,2 (b, 2H), 7,2-7,5 (m, 5H).

(3RS)-l-(N-Benzyloxykarbonylaniidino)-3-aminomethylpyrrolidin (H-(R,S)Nig(Z)) (i) (3RS)-3-Hydroxymethylpyrrolidin

16,4 g (0,0857 mol) (3RS)-l-benzyl-3-hydroxymethylpyrrolidin (viz H-(R,S)-Hig(Z) (i) vide supra) se smísí s 1,6 g Pd/C, 5 ml vody a 150 ml ethanolu a směs se hydrogenuje při 0,26 MPa přes noc. Po filtraci přes hyflo a odpaření rozpouštědla Ή-NMR ukazuje, že reakce není kompletní. V hydrogenaci se pokračuje při 0,26 MPa nad 1,6 g Pd/C (10%) v 5 ml vody/150 ml ethanolu tři dny až je reakce kompletní. Filtrací přes hyflo a odpařením rozpouštědla se získá produkt ve kvantitativním výtěžku.

(ii) (3RS)-l-(N-Benzyloxykarbonylamidino)-3-hydroxymethylpyrrolidin

1,01 g (0,01 mol) (3RS)-3-hydroxymethylpyrrolidinu a 2,29 g (0,11 mol) N-benzyloxykarbonyl-O-methylisomočoviny se rozpustí (amin není příliš rozpustný) v toluenu a zahřívá na 60 °C tři hodiny, pak se míchá při teplotě místnosti přes noc. Směs se odpaří na Ή-NMR ukazuje, že reakce není kompletní. Směs se proto rozpustí v 15 ml acetonitrilu a zahřívá se na 60 °C tři hodiny a pak za míchání při teplotě místnosti přes noc. Rozpouštědlo se odpaří a směs se rozpustí v CH₂C1₂, promyje se jednou vodou, suší (síran sodný), filtruje a odpaří. Surový produkt se čistí rychlou chromatografii za použití CH₂C1₂ jako elučního činidla a získá se 0,70 g (25 %) produktu.

MS m/z 278 (M⁺+l)

-54CZ 290104 B6 (iii) (3RS)-l-(N-Benzyloxykarbonylamidino)-3-mesyloxymethylpynOlidin

0,7 g (2,53 mmol) (3RS)-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)-3-hydroxymethylpynOlidinu a 0,70 ml (5,05 mmol) triethylaminu se rozpustí v 15 ml diethyletheru/CH₂Cl₂ 1/1 a směs se ochladí na 0 °C. Pomalu se přidá 0,25 1 (3,29 mmol) methansulfonylchloridu ve 3 ml diethyletheru a reakční směs se míchá při 0 °C tři hodiny. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v ethylacetátu a extrahuje se 0,3M KHSO₄-roztokem. Vodná vrstva se promyje jednou CH₂C1₂. Vodná vrstva se zneutralizuje 10M NaOH-roztokem a extrahuje se dvakrát CH₂C1₂. Spojené organické vrstvy se suší (síran sodný), filtrují a odpařením se získá 0,450 g (50 %) titulní sloučeniny.

(iv) (3RS)-l-(N-Benzyloxykarbonylamidino)-3-azetidinomethylpyrrolidm

0,450 g (1,27 mmol) (3RS)-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)-3-mesyloxymethylpyrrolidinu a 0,124 g (1,9 mmol) azidu sodného se rozpustí v 10 ml dimethylformamidu a zahřívá se na 60 °C čtyři hodiny, pak se míchá při teplotě místnosti přes noc. Přidá se voda a směs se extrahuje dvakrát toluenem/ethylacetátem 2/1. Spojené organické vrstvy se suší (Na₂SO₄), filtrují a odpaří. Surový produkt se čistí rychlou chromatografií za použití CH₂Cl₂/MeOH 95/5 jako elučního činidla a získá se 0,262 g (68 %) produktu.

MS m/z 303 (M⁺+l) (v) (3RS)-l-(N-Benzyloxykarbonylamidino)-3-aminomethylpyrrolidin (H-(R,S)Nig(Z)) mg Pd/C (10%) a 2,6 ml vody se smísí a nechá se směsí procházet mírný proud dusíku. Přidá se 98 mg NaBFLi ve 2,6 mg (0,87 mmol) (3RS)-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)-3-mesyloxymethylpyrrolidinu rozpuštěného v 7 ml MeOH. Směs se nechá jednu hodinu stát. Přidá se 5 ml 1M HC1 a směs se filtruje přes hyflo. Organické rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a zbývající vodná vrstva se jednou promyje ethylacetátem, zalkalizuje se NaOH roztokem a několikrát se extrahuje CH₂C1₂. Spojené organické vrstvy se suší (síran sodný), filtrují a odpařením se získá 130 mg (54 %) produktu.

MS m/z 277 (M++1) (3RS)-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)-3-aminomethylpyrrolidin (H-(R,S)Hig(Z)) (i) (3RS)-l-Benzyl-3-hydroxymethylpyrrolidin

25,2 g (0,1063 mol) (3RS)-l-benzyl-2-oxo-4-methoxykarbonylpyrrolidinu se pomalu přidá k suspenzi 6,22 g lithiumaluminiumhydridu ve 160 ml diethyletheru pod atmosférou argonu. Směs se míchá přes noc pak se zahřívá pod refluxem jednu hodinu. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti a přidá se 0,2 g Na₂SO₄ x 10 H₂O a pak pomalu, v uvedeném pořadí 6 ml vody, 18 ml 3,75M NaOH-roztoku a 6 ml vody. Suspenze se suší a zbaví přebytku vody pomocí Na₂SO4/celitu, filtruje a odpařením se získá (20,3 g) produkt.

‘H-NMR (CDC1₃, 300 MHz): δ 1,64-1,77 (m, 1H), 1,93-2,07 (m, 1H), 2,27-2,40 (m, 2H), 2,51 (dd, 1H), 2,62 (dd, 1H), 2,82 (m, 1H), 3,52 (dd, 1H), 3,59 (s, 2H), 3,67 (dd, 1H), 7,15-7,40 (m, 5H).

(ii) (3RS)-l-Benzyl-3-chlormethylpyrrolidin

K reflucujícímu roztoku 15,3 g (0,08 mol) (3RS)-l-benzyl-3-hydroxymethylpyrrolidinu ve 220 ml CHC1₃ se pomalu přidá roztok 330 ml thionylchloridu v 60 ml CHC1₃ a v refluxování se pokračuje jednu hodinu. Směs se odpaří a zbytek se rozpustí ve vodě.

-55CZ 290104 B6

Vodná vrstva se promyje ethylacetátem a potom se zalkalizuje 0,2M NaOH-roztokem. Vodná vrstva se třikrát extrahuje ethylacetátem a spojené organické vrstvy se suší (síran sodný), filtrují a odpařením se získá produkt ve kvantitativním výtěžku (16,8 g).

’Η-NMR (CDClj, 300 MHz): δ 1,55 (m, 1H), 2,05 (m, 1H), 2,38 (dd, 1H), 2,48-2,64 (m, 3H; z toho 2,58 (t, 2H))), 2,73 (dd, 1H), 3,51 (d, 2H), 3,60 (s, 2H), 7,2-7,4 (m, 5H).

(iii) (3RS)-l-Benzyl-3-kyanomethylpyrrolidin

16,8 g (0,08 mol) (3RS)-l-benzyl-3-chlormethylpyrrolidinu a 5,88 g (0,12 mol) kyanidu sodného se rozpustí ve 250 ml dimethylsulfoxidu. Směs se míchá při 60 °C dva dny a při teplotě místnosti jeden týden. Přidá se voda a směs se extrahuje třikrát ethylacetátem. Spojené organické vrstvy se promyjí solankou, suší (síran sodný), filtrují a odpařením se získá 14,7 g (92 %) produktu.

'H-NM (CDC1₃, 500 MHz): δ 1,55 (m, 1H), 2,13 (m, 1H), 2,35 (dd, 1H), 2,42 (t, 2H), 2,44-2,59 (m, 2H), 2,65 (m, 1H), 2,73 (dd, 1H), 3,61 (s, 2H), 7,2-7,4 (m, 5H).

(iv) (3RS)-l-benzyl-3-aminoethylpyrrolidin

14,7 g (0,0734 mol) (3RS)-l-benzyl-3-kyanomethylpyrrolidinu rozpuštěného ve 220 ml diethyletheru se pomalu přidá ke kaši 2,94 g lithiumaluminiumhydridu v 74 ml diethyletheru pod argonovou atmosférou. Směs se míchá přes noc a ke směsi se přidá 6 ml vody, 18 ml 3,75M NaOH-roztoku a 6 ml vody. Suspenze se zbaví přebytku vody sušením pomocí Na₂SO₄/celitu, odfiltruje se sáním a odpařením se získá 14,84 g (99 %) produktu.

’Η-NMR (CDC1₃, 300 MHz): δ 1,41 (m, 1H), 1,51 (q, 2H), 1,90-2,10 (m, 2H; z toho 2,05 (dd, 1H))), 2,18 (m, 1H), 2,43 (m, 1H), 2,55—2,73 (m, 3H), 2,80 (zjevný t, 1H), 3,58 (zjevný d, 2H), 7,15-7,4 (m, 5H) (v) (3RS)-l-Benzyl-3-(N-terc.butyloxykarbonylaminoethyl)pyrrolidin

Ke směsi 14,84 g (0,0726 mol) (RS)-l-benzyl-3-aminoethylpyrrolidininu, 72,6 ml 1M NaOHroztok, 76 ml vody a 145 ml THF se přidá 17,44 g (0,08 mol) diterc.butyldikarbonátu a směs se přes noc míchá. Roztok se zahustí a extrahuje třikrát ethylacetátem. Spojené organické vrstvy se promyjí solankou, suší (Na₂SO₄), filtrují a odpaří. Surový produkt se čistí rychlou chromatografii za použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH (95/5, 90/10) jako elučního činidla a získá se 14,69 g (80%) produktu.

’Η-NMR (CDC1₃, 300 MHz): δ 1,25-1,65 (m, 12H; ztoho 1,40 (s, 9H)), 1,90-2,25 (m, 3H), 2,46 (m, 1H), 2,67 (m, 1H), 2,80 (zjevný t, 1H), 3,09 (m, 2H), 3,59 (s, 2H), 4,60 (bs, NH), 7,15-7,35 (m, 5H).

(ví) (3RS)-3-(N-terc-butyloxykarbonylaminoethyl)pyrrolidin

3,1 g (0,01 mol) (3RS)-l-benzyl-3-(N-terc.butyloxykarbonylaminoethyl)pyrrolidinu se hydrogenuje při 0,28 MPa nad 0,6 g Pearmanova katalyzátoru (Pd(OH)₂) ve 40 ml ethanolu (95%) přes noc. Po odfiltrování katalyzátoru přes celit a odpaření rozpouštědla ukazuje ’Η-NMR, že reakce není kompletní. Proto se přidá ještě jednou 0,6 g Pearlmanova katalyzátoru ve 40 ml ethanolu (95%) a směs se zpracovává pod atmosférou H₂ při 0,28 MPa přes noc. Filtrací přes celit a odpařením rozpouštědla se získá produkt ve kvantitativním výtěžku (2,18 g).

MSm/z214(M⁺)

-56CZ 290104 B6 (vii) (3 RS)-1 -(N-Benzyloxykarbonylainidino)-3-aminoethylpyrrolidin (H-(R, S)Hig(Z))

2,18 g (0,0102 mmol) (3RS)-3-(N-terc.butyloxykarbonylaminorthyl)pyrrolidinu a 2,81 g (0,0125 mol) N-benzyloxykarbonyl-S-methylisothiomočoviny se rozpustí ve 30 ml toluenu a zahřívá se na 60 až 70 °C osm hodin a pak se míchá jeden den při teplotě místnosti. Přidá se 0,3M roztok KHSO₄ a vodná vrstva se promyje směsí toluenu a ethylacetátu a nechá se 2 dny, za tuto dobu se odstraní Boc skupina. Kyselá vodná fáze se zalkalizuje a extrahuje se čtyřikrát CH2CI2. Spojené organické vrstvy se suší (Na₂SO₄), filtrují a odpařením se získá 2,0 g (51 %) titulní sloučeniny.

’Η-NMR (CDCIj, 330 K, 300 MHz): δ 1,45-1,7 (m, 3H), 2,07 (m, 1H), 2,26 (m, 1H), 2,74 (t, 2H), 3,00 (zjevný t, 1H), 3,33 (zjevný q, 1H), 3,45-3,80 (m, 2H), 5,12 (s, 2H), 6,72 (bs, 2 NH), 7,15-7,45 (m, 5H).

(4RS)-13-diaza-2-tosylimino-4-aminoethylcyklohexan (H-(R,S)Itp(ts)) (i) (4RS)-1,3-diaza-2-tosylimino-4-karboxycyklohexan

Připraví se za použití stejné metody jak je popsána v Joumal of Org. Chem., str. 46,1971.

(ii) (4RS)-1,3-diaza-2-tosylimino-4-hydroxymethylcyklohexan

12.9 g (345 mmol) LiAlHí s opatrně přidá ke studené suspenzi (teplota ledové lázně) 9,9 g (33 mmol) (4RS)-l,3-diaza-2-tosylimino-4-karboxycyklohexanu ve 330 ml suchého THF. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Reakční směs se zpracuje podle Fieser & Fieser, např. přídavkem 12,9 g vody, 38,7 g, 3,75M NaOH, 12,9 g vody, Na₂SO₄, CH₂C1₂ a celitu ke směsi a filtruje. Odpařením rozpouštědla se získá 7,0 g (75 %) požadovaného produktu.

MS m/z284(M⁺+ 1) (ii) (4RS)-1,3-diaza-2-tosylimino-4-mesyloxymethylcyklohexan

2.9 ml MxCl (37,1 mmol) se opatrně přidá ke studené suspenzi (teplota ledové lázně) 7,0 g (24,7 mmol) (4RS)-l,3-diaza-2-tosylimino-4-hydroxymethylcyklohexanu v 6,9 ml (49,4 mmol) triethylaminu a 125 ml CH₂C1₂. Po 1 hodinu 15 minutách se přidá voda a organická fáze se oddělí, suší (Na₂SO₄), filtruje a odpařením se získá titulní sloučenina ve kvantitativním výtěžku.

MS m/z 362 (M⁺ + 1) (iv) (4RS)-1,3-diaza-2-tosylimino-4-kyanomethyIcyklohexan

8.9 g (24,7 mmol) (4RS,-l,3-diaza-2-tosylimino-4-mesyloxymethylcyklohexanu a 1,3 g (27,2 mmol) NaCN se rozpustí v 75 ml DMSo. Po míchání při 40 °C po 60 hodin se přidá další množství - 0,31 g (6 mmol) NaCN a roztok se míchá při 65 °C tři hodiny. Přidá se 150 ml vody a z roztoku se vysrážejí krystaly. Tyto se odfiltrují a sušením se získá 5,4 g (75 %) požadovaného produktu.

MS m/z 293 (M* + 1)

-57CZ 290104 B6 (4RS)-l,3-diaza-2-tosylimmo-4-aminoethylcyklohexan (H-(R,S)Itp(Ts))

935 mg L1AIH4 se opatrně přidá ke studené (teplota ledové lázně) suspenzi 2,4 g (8,2 mmol) (4RS)-l,3-diaza-2-tosyliminocyklohexanu v 90 ml THF. Po 2 hodinách míchání se přidá 1 g H₂O, 3 g 3,75M NaOH, 1 g H₂O, Na₂SO₄, celit a CH₂C1₂. Směs se odfiltruje a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a získá se 2,2 g (90 %) požadovaného produktu.

‘H-NMR (500 MHz, MeOD); δ 1,52-1,71 (m, 3H), 1,88-1,96 (m, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,64-2,73 (m, 2H), 3,2-3,4 (m, 2H, částečně se překrývá se signálem rozpouštědla), 3,44-3,53 (m, 1H),

7,28 (d, 2H), 7,71 (d, 2H).

(4S)-13-diaza-2-tosylimíno-4-aminoethylcyklohexan (H-(S)Itp(Ts))

Připraví se stejným způsobem jak je popsáno pro H-(R,S)Itp(Ts), vychází se z opticky čisté kyseliny 2,4-diaminomáselné.

’H-MR (300,13 MHz, CDC1₃); δ 0,97-1,15 (s široký, 1H), 1,48-1,69 (m, 3H), 1,84-1,95 (m, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,68-2,82 (m, 1H), 2,86-2,98 (m, 1H), 3,22-3,44 (m, 2H), 3,45-3,58 (m, 1H), 7,19 (d, 2H), 7,72 (d, 2H).

¹³C NMR (300,13 MHz, CDC1₃); δ guanidinový uhlík 154,05

H-Aze-OEt x HC1

Připraví se stejným způsobem jak je popsáno pro H-Pic-OEt x HC1 z H-Aze-Oh (vide infra).

H-Aze-OMe x HC1

Připraví se postupem popsaným Seebachem D. a spol. v Liebigs Ann. Chem., str. 687,1990.

H-Pab(Z)xHCl

Připraví se přídavkem 1 ml ekvivalentu 5M HC1 v isopropanolu k roztoku surového H-Pab(Z) v EtOH (asi 1 g/10 ml), přičemž se ihned z roztoku sráží H-Pab(Z) x HC1. Po filtraci se sraženina promyje dvakrát studeným EtOH a suší se za získání titulní sloučeniny v téměř kvantitativním výtěžku.

H-Pic-OEt xHCl

Kyselina L-pipekolinová, 4,0 g (0,031 mol) se rozmíchá ve 100 ml abs. ethanolu a HC1 (plynný) a opatrně probublává do získání čirého roztoku. Ochladí se na ledové lázni a během 15 min se přikape 17 ml thionylchoridu. Ledová lázeň se odstraní a směs se refluxuje 2,5 h. Rozpouštědlo se odpaří a produkt se získá jako hydrochloridová sůl v kvantitativním výtěžku.

‘H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,33 (t, 3H), 1,8-2,1 (m, 5H), 2,3-2,5 (m, 1H), 3,1-3,3 (m, 1H), 3,5-3,7 (m, 1H), 4,14 (dd, 1H), 4,44 (q, 2H).

H-(R,S)betaPic-OMe x HC1

Směs 2,0 g (15,5 mmol) nepikotinové kyseliny v 8 ml methanolu se ochladí na ledové lázni a přidá se 2,76 g (23,2 mmol) thionylchloridu. Směs se míchá při teplotě místnosti 20 hodin.

-58CZ 290104 B6

Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v malém množství methanolu, přidá se diethylether a H-(R,S)betaPic-OMe x HC1 se vysráží jako bílé krystaly. Krystaly 2,57 g (92 %) se izolují filtrací.

Boc-(R)Cgl-OH

Boc-(R)-Pgl-OH, 32,6 g (0,13 mol) se rozpustí ve 300 ml methanolu a přidá se 5 g Rh/Al₂O₃. Roztok se hydrogenuje při 5,2 až 2,8 MPa po 3 dny. Po filtraci a odpaření rozpouštědla ukazuje NMR přítomnost asi 25 % methylesteru titulní sloučenina. Surový materiál se rozpustí v 500 ml THF a 30 ml vody a přidá se 20 g LiOH. Směs se míchá přes noc a THF se odpaří. Zbývající vodná fáze se okyselí KHSO₄ a extrahuje se třikrát ethylacetátem. Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší (Na₂SO₄) a odpařením se získá 28,3 g (83 %) požadovaného produktu.

Ή-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,9-1,7 (m, 20H), 4,0-4,2 (m, IH), 5,2 (d, IH).

Boc-(R)Cgl-OSu

K ledově studenému roztoku 2,01 g (7,81 mmol) Boc-(R)CgI-OH a 1,83 g (15,6 mmol) HOSu ve 25 ml CH₃CN se přidá 1,69 g (8,2 mmol) DCC a teplota se nechá stoupnout na teplotu místnosti. Po 3 dnech míchání se vysrážený DCU odfiltruje a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se rozpustí v EtOAc a organická fáze se promyje H₂O, KHSO4, NaHCO₃, solankou a suší (Na₂SO4). Odpařením rozpouštědla se získá titulní sloučenina ve kvantitativním výtěžku.

Boc-(R)Cha-OSu

Boc-(R)Cha-OH (1 ekv.), HOSu (1,1 ekv.) a DCC nebo CME-CDI (1,1 ekv.) se rozpustí v acetonitrilu (asi 2,5 ml/mmol kyseliny) a míchá se při teplotě místnosti přes noc. Sraženina vytvořená během reakce se odfiltruje, rozpouštědlo se odpaří a produkt se suší za vakua, (použije-li se v reakci CME-CDI zbytek se, po odpaření CH₃CN rozpustí v EtOAc a organická fáze se promyje vodou a suší). Odpařením rozpouštědla se získá titulní sloučenina.

^!H-NMR (500 MHz, CDC1₃, 2 rotamery asi: poměr 1:1) 0,85-1,1 (m, 2H), 1,1-1,48 (m, 4H), 1,5-1,98 (m, 16H; z toho 1,55 (bs, 9H)), 2,82 (bs, 4H), 4,72 (bs, IH, hlavní rotamer), 4,85 (bs, IH, minoritní).

Boc-(R)Hoc-OH

Boc-(R)Hop-OH (viz výše), 3,2 g (11,46 mmol) se rozpustí v methanolu (75 ml). Přidá se rhodium na aktivním oxidu hlinitém (Rh/Al₂O₃), 0,5 g, a směs se míchá pod atmosférou vodíku při 0,41 MPa 18 h. Katalyzátor se odfiltruje přes hyflo a rozpouštědlo se odpaří. Získá se produkt v téměř kvantitativním výtěžku.

Ή-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,90 (m, 2H), 1,08-1,33 (m, 6H), 1,42 (s, 9H), 1,60-1,74 (m, 6H), 1,88 (bs, IH), 4,27 (bs, IH).

Boc-(R)Hoc-OSu

Připraví se stejným způsobem jak je popsáno pro Boc-(R)Cha-Osu z Boc-(R)Hoc-OH.

Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-OH

Připraví se podle metody popsané J.Y.L. Chungem a spol. v Joumal of Organic Chemistry, č. 1, str. 270-275,1990.

-59CZ 290104 B6

Boc-(R)Cgl-Aze-OH (i) Boc-(R)Cgl-Aze-OMe

K míchané směsi 3,86 g (15 mmol) Boc-(R)Cgl-OH, 2,27 g (15 mmol) H-Aze-OMe x HC1 a 2,75 g (22,5 mmol) DMAP ve 40 ml CH₃CN při 5 °C se přidá 3,16 g (16,5 mmol) EDC. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti 48 h. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí ve 150 ml EtOAc a 20 ml H₂O. Oddělené organické vrstvy se promyjí 2 x 20 ml 0,5M KHSO₄, 2 x 10 ml NaHCO₃ (nasycený), 1 x 10 ml H₂O, 1 x 10 ml solanky a suší se (MgSO₄). Odpařením rozpouštědla se získá 4,91 g (92%) titulní sloučeniny, která se použije bez dalšího čištění v následujícím stupni.

‘H-NMR (500 MHz, CDC1₃, 0,1 g/ml): hlavní rotamer, 0,83-1,35 (m, 5H), 1,38 (s, 9H), 1,471,84 (m, 6H), 2,18-2,27 (m, 1H), 2,50-2,62 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,94-4,06 (m, 1H), 4,07-4,15 (m, 1H), 4,39-4,47 (m, 1H), 4,68 (dd, J=9,l, J=5,l, 1H), 5,09 (d, J=9,2, 1H).

Zjevné píky z minoritního rotameru, 2,27-2,35 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,80-3,87 (m, 1H), 3,883,95 (m, 1H), 4,92 (d, J=9,2, 1H), 5,21 (dd, J=9,l, J«5,1H).

(ii) Boc-(R)Cgl-Aze-OH

Hydrolýza Boc-(R)Cgl-Aze-OMe byla provedena postupem popsaným pro Boc-(R)Cha-PicOEt (vide infra). Produkt byl krystalován z EtOH/acetonu/vody (1/1/3,95) výtěžek 80 %.

Ή-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,85-1,3 (m, 5H), 1,4 (s, 9H), 1,5-1,9 (m, 6H), 1,95-2,2 (m, 2H), 3,92 (m, 1H), 4,09 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,95 (m, 1H), 5,16 (bd, 1H).

Boc-(R)Cgl-Pic-OH (i) Boc-(R)Cgl-Pic-OMe

Pivaloylchlorid (1,0 ml, 8,1 mmol) se přidá k roztoku Boc-(R)CglOH (2,086 g, 8,1 mmol) a triethylaminu (1,13 ml, 8,1 mmol) v toluenu (25 ml) a DMF (5 ml). Směs H-Pic-OMe x HC1 (1,46 g, 8,1 mmol) a triethylaminu (1,13 ml, 8,1 mmol) v DMF se postupně přidá při teplotě ledové lázně. Reakční směs se nechá pomalu ohřát až na teplotu místnosti a po 24 h se zředí vodou a extrahuje toluenem. Po promytí 0,3M KHSO4, 10% Ňa₂CO₃ a solankou se odstraněním rozpouštědla ve vakuu získá 2,52 g (81 % bezbarvého oleje, který se použije bez dalšího čištění.

Ή-NMR (500 MHz, CDC1₃, 2 rotamery, poměr 5:1) δ 0,8-1,8 (m, 25H), 2,25 (d, 1H), 2,75 (t, 1H, mimoritní rotamer), 3,3 (t, 1H), 3,7 (s, 3H), 3,85 (d, 1H), 4,3 (t, 1H, minoritní rotamer), 4,54,6 (m, 1H), 5,25 (d, 1H), 5,30 (d, 1H).

(ii) Boc-(R)Cgl-Pic-OH

Připraví se podle postupu pro hydrolýzu Boc-(R)Cha-Pic-OEt (vide infra) za použití produktu z (i) výše. Produkt se krystaluje z diisopropyletheru a hexanu.

Ή-NMR (500 MHz, CDC1₃, 2 rotamery, poměr 5:1) δ 0,8-1,8 (m, 25H), 2,3 (d, 1H), 2,8 (t, 1H, minoritní rotamer), 3,3 (t, 1H), 3,9 (d, 1H), 4,4 (t, 1H, minoritní), 4,5-4,6 (m, 1H), 5,1 (s, 1H, minoritní rotamer), 5,3 (d, 1H), 5,40 (d, 1H).

-60CZ 290104 B6

Boc-(R)Cgl-Pro-OH

3,59 g (31,24 mmol) L-prolinu se smísí se 20 ml vody a 1,18 g (29,7 mmol) hydroxidu sodného. Ke směsi se přidá 2,8 g (7,8 mmol) Boc-(R)Cgl-OSu v 10 ml DMF. Vzhledem k problému s rozpustností se přidá dalších 30 ml DMF a reakční směs se tři dny míchá. Rozpouštědlo se odpaří a přidá se voda. Vodná fáze se promyje ethylacetátem, okyselí 0,3M KHSO₄-roztokem a extrahuje se třikrát ethylacetátem. Organická fáze se promyje jednou vodou a jednou solankou, suší (Na₂SO4), filtruje a odpařením se získá 2,3 g (83 %) produktu.

’Η-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,89-2,17 (m, 23H), 2,37 (m, 1H), 3,55 (q, 1H), 3,90 (bs, 1H),

4,28 (t, 1H), 4,52 (bs, 1H), 5,22 (bs, 1H (NH)).

Boc-(R)Cha-Aze-OH

Připraví se stejným způsobem jak je popsáno pro Boc-(R)Cha-Pic-OH, vychází se z Boc(R)Cha-Oh a H-Aze-OEt x HC1 (vide infra).

Boc-(R)Cha-Pro-OH

H-(S)-Pro-OH (680 mmol) se rozpustí v 0,87M hydroxidu sodném (750 ml). Boc-(R)Cha.OSu (170 mmol) rozpuštěný v DMF (375 ml) se přikape během 20 minut. Reakční teplota se udržuje na teplotě místnosti 20 h. Směs se okyselí (2M KHSO₄) a extrahuje se třikrát ethylacetátem. Organické vrstvy se spojí a promyjí se třikrát vodou a jednou solankou. Po sušení nad síranem sodným a odpaření rozpouštědla se sirupovitý olej rozpustí v diethyletheru, rozpouštědlo se odpaří a nakonec se produkt suší ve vakuu a získá se Boc-(R)Cha-Pro-OH jako bílý prášek v téměř kvantitativním výtěžku.

’Η-NMR (500 MHz, CDC1₃, směs dvou rotamerů 9:1) δ 0,8-1,05 (m, 2H), 1,05-1,55 (m, 15H; z toho 1,5 (bs, 9H)), 1,55-1,8 (m, 5H), 1,8-2,15 (m, 3H), 2,47 (m, 1H), 3,48 (m, 1H), 3,89 (m, 1H), 4,55 (m, 2H), 5,06 (m, 1H); rozlišené signály z minoritního rotamerů se objevují při d 2,27 (m), 3,58 (m), 4,33 (m), 5,0 (m).

Boc-(Me)(R)Cha-Pro-OSu (i) Boc-(Me)(R)Cha-Pro-Oh

Připraví se stejným způsobem jak popsáno výše pro Boc-(R)Cha-Pro-OH, vychází se z Boc(Me)(R)Cha-OSu a H-Pro-OH.

(ii) Boc-(Me)(R)Cha-Pro-OSu

Připraví se stejným způsobem jak je popsán pro Boc-(R)Cha-Pro-OSU, vychází se z Boc(Me)(R)Cha-Pro-OH.

Boc-(R)Cha-Pic-OH (ia) Boc-(R)Cha-Pic-OEt

Boc-(R)Cha-OH, 6,3 g (0,023 mol) se rozpustí ve 150 ml CH₂C1₂. Roztok se ochladí na ledové lázni a přidá se 6,3 g (0,047 mol) N-hydroxybenzotriazolu a 11,2 g (0,0265 mol) CME-CDI. Ledová lázeň se po 15 minutách odstraní a reakční směs se míchá 4h při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí ve 150 ml DMF a ochladí se na ledové lázni. Přidá se H-Pic-OEt x HC1, 4,1 g (0,021 mol) a pH se upraví na přibližně 9 přídavkem N-methylmorfolinu. Ledová lázeň se odstraní po 15 minutách a reakční směs se míchá 3 dny. Rozpouští tědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v ethylacetátu a promyje se zředěným KHSO₄ (vod.), NaHCO₃ (vod.) a vodou. Organická vrstva se suší (Na₂SO₄) a odpařením se získá 7,7 g (89 %) Boc-(R)Cha-Pic-OEt, který se použije bez dalšího čištění.

'H-NMR (500 MHz, CDC1₃, 2 rotamery, poměr 3:1) d 0,7-1,0 (m, 2H), 1,1-1,9 (m, 29H; z toho

1,28 (t, 3H)), 1,45 (bs, 9H), 2,01 (bd, 1H, hlavní rotamer), 2,31 (bd, 1H), 2,88 (bt, 1H, minoritní), 3,30 (bt, 1H, majoritní), 3,80 (bd, 1H, majoritní), 4,15-4,3 (m, 2H), 4,5-4,7 (m, 2H), minoritní), 4,77 (bq, 1H, majoritní), 4,90 (bd, 1H, minoritní), 5,28 (bd, 1H, majoritní), 5,33 (bd, 1H, majoritní).

(ib) Boc-(R)Cha-Pic-OMe

400 μΐ (3,23 mmol) pivaloylchloridu se přidá k míchané směsi 875 mg (3,22 mmol) Boc(R)Cha-OH a 45 μΐ (3,23 mmol) triethylaminu v 10 ml toluenu a 2 ml DMF. Směs 596 mg (3,32 mmol) methyl-(S)-pipekolát hydrochlorid a 463 μΐ (3,32 mmol) triethylaminu v 5 ml DMF se přidá k výsledné suspenzi po 45 minutách. Po 2 h se přidá 100 μΐ (0,72 mmol) triethylaminu a v míchání se pokračuje dalších 18 h. K reakční směsi se přidá voda a toluen a organická fáze se promyje 0,3M KHSO₄, 10% Na₂CO₃ a solankou. Suší se (MgSO₄) a odstraněním rozpouštědla ve vakuu se získá 1,16 g titulní sloučeniny.

(ii) Boc-(R)Cha-Pic-OH

Boc-(R)Cha-Pic-OEt, 5,6 g (0,014 mol) se smísí se 100 ml THF, 100 ml vody a 7 g LiOH. Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. THF se odpaří a vodný roztok se okyselí KHSO₄ (vod.) a extrahuje se třikrát ethylacetátem. Spojené organické fáze se promyjí vodou, suší (Na₂SO₄) a odpařením se získá 4,9 g (94 %) Boc-(R)Cha-Pic-OH, který se použije bez dalšího čištění. Sloučenina může být krystalována z diisopropyletheru/hexanu.

Methylester vytvořený v postupu (ib) výše může být hydrolyzován za použití stejného postupu jak je popsán pro ethylester v (ii).

’Η-NMR (500 MHz, CDC1₃, 2 rotameiy, poměr 3,5:1) δ 0,8-1,1 (m, 2H), 1,1-2,1 (m, 27H; z toho 1,43 (s, 9H, hlavní rotamer), 1,46 (s, 9H, minoritní)), 2,33 (bd, 1H), 2,80 (bt, 1H, minoritní), 3,33 (bt, 1H, majoritní), 3,85 (bd, 1H, majoritní), 4,77 (bq, 1H, majoritní), 5,03 (bs, 1H, minoritní), 5,33 (bd, 1H, majoritní), 5,56 (m, 1H, majoritní).

Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OH (i) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OMe

Pivaloylchlorid 0,9 ml (7,3 mmol) se přidá k roztoku 2,0 g (7,3 mmol) Boc-(R)Cha-OH a 0,81 ml (7,3 mmol) 4-N-methylmorfolinu ve 20 ml acetonitrilu. Po 1 h a 30 minutách míchání sed přidá 1,3 g (7,3 mmol) H-(R,S)beta/ic-OMe x HC1 a 1,62 ml (14,6 mmol) 4-N-methylmorfolinu a reakční směs se 24 hodin míchá. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v toluenu a diethyletheru. Po promytí 0,3M KHSO₄ a KHCO₃-roztokem a sušení Na₂SO₄ se rozpouštědlo odstraní ve vakuu. Rychlou chromatografii za použití heptanu/ethylacetátu (7/3) jako elučního činidla se získá 2,4 g (83 %) požadovaného produktu.

(ii) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OH

Při teplotě místnosti se 2,35 g (5,9 mmol) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OMe rozpustí ve 35 ml THF a přidá se 2,1 g LiOH ve 35 ml vody. Po 5 h míchání se THF odstraní ve vakuu. Vodná fáze se okyselí 2M KHSO₄ a extrahuje se ethylacetátem, suší Na₂SO₄ a odpařením se získá 2,0 g (89 %) produktu.

-62CZ 290104 B6

Boc-(R)Cha-VaI-OH (i) Boc-(R)Cha-Val-OMe

3,1 ml (25 mmol) pivaloylchloridu se přidá při teplotě okolí k míchané směsí 6,75 g (25 mmol) Boc-(R)Cha-OH a 3,5 ml (25 mmol) triethylaminu v 50 ml DMF. Po 3 hodinách se přidá 4,16 g (25 mmol) hydrochloridu methylesteru valinu v 50 ml DMF a 3,5 ml triethylaminu. Po míchání přes noc se přidá malé množství DMAP a reakční směs se zahřívá na 50 °C 5 minut. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a přidá se ke zbytku ether a toluen. Promytím 0,3M KHSO4 a 10% Na₂CO3 s následujícím sušením (MgSO₄) a odstraněním rozpouštědla ve vakuu se získá zbytek, který se podrobí rychlé chromatografii za použití toluenu/ethylacetátu jako elučního činidla. Výtěžek titulní sloučeniny byl 6,99 g (73 %).

(ii) Boc-(R)Cha-Val-OH

Směs 8,73 g (23 mmol) Boc-(R)Cha-Val-OMe a 5,6 g (230 mmol) hydroxidu lithného v 75 ml THF a 75 ml vody se míchá po 4 hodiny. THF se odstraní ve vakuu a zbývající roztok se zředí vodou a extrahuje etherem. Okyselením 2M KHSO4 a extrakcí ethylacetátem s následujícím sušením (MgSO^ a odstraněním rozpouštědla ve vakuu se získá 8,15 g (96 %) titulní sloučeniny.

Boc-(R)Hoc-Aze-OH (i) Boc-(R)Hoc-Aze-OEt

Při teplotě místnosti se 1,0 g (3,5 mmol) Boc-(R)Hoc-OH a 0,95 g (7,0 mmol) HOBt rozpustí v 15 ml CH₂C1₂. Roztok se ochladí na ledové lázni a přidá se 0,77 g (4,0 mmol) EDC. Ledová lázeň se odstraní a reakční směs se míchá 3 h při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí ve 20 ml DMF. Přidá se 0,58 g (3,5 mmol) H-(R)Aze-OH a pH se upraví na přibližně 9 přídavkem N-methylmorfolinu. Reakční směs se míchá jeden den. Reakční směs se rozdělí mezi vodu a toluen. Organická fáze se oddělí a promyje 0,3M KHSO4, zředí se KHCO3, suší pomocí Na₂SO₄ a odpaří se. Rychlou chromatografii (1 % etOH v CH₂C1₂ a heptanu: EtOAc) se získá 0,35 g (25 %) požadovaného produktu.

(ii) Boc-(R)Hoc-Aze-OH

Při teplotě místnosti se 0,65 g (1,6 mmol) Boc-(R)Hoc-Aze-OEt rozpustí v 10 ml THF a přidá se 0,59 g LiOH v 10 ml vody. Po 24 h míchání se přidá 2M KHSO₄ a THF se odstraní ve vakuu. Vodná fáze se pak okyselí dalším 2M KHSO₄ a extrahuje se ethylacetátem, suší nad Na₂SC>4 a odpařením se získá 0,5 g (85 %) titulní sloučeniny.

Boc-(R)Hoc-Pro-OH

Připraví se stejným způsobem jak je popsáno pro Boc-(R)Cha-Pro-OH z Boc-(R)Hoc-OSu.

'H-NMR (500 MHz, CDCh): δ 0,80-0,94 (m, 2H), 1,05-1,36 (m, 7H), 1,36-1,48 (bs, 9H), 1,481,78 (m, 7H), 1,98-2,14 (m, 2H), 2,34 (m, 1H), 3,48 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 4,43 (m, 1H), 4,52 (bd, 1H), 5,26 (bd, 1H), signály z minoritního rotameru se objevují při: δ 1,92, 2,25, 3,58, 4,20 a 4,93.

Boc-(R)Hoc-Pic-OH (i) Boc-(R)Hoc-Pic-OMe

Připraví se stejným způsobem jak je popsáno pro Boc-(R)Cha-Pic-OEt (vide supra) z Boc(R)Hoc-OH a H-Pic-OMe x HC1.

-63 CZ 290104 B6 (ii) Boc-(R)Hoc-Pic-OH

Připraví se stejným způsobem jak je popsáno pro Boc-(R)Cha-Pic-OH (vide supra) z Boc(R)Hoc-Pic-OMe.

'H-NMR (500 MHz, CDCI3): δ 0,82-0,97 (m, 2H), 1,10-1,36 (m, 7H), 1,36-1,50 (bs, 9H), 1,501,82 (m, 11H), 2,35 (bd, 1H), 3,28 (bt, 1H), 3,85 (bd, 1H), 4,63 (m, 1H), 5,33 (bs, 1H), 5,44 (bd, 1H), signály z minoritního rotameru se projevují při δ 1,88, 2,80,4,25,4,55 a 4,97.

Boc-(R)Pro-Phe-OH (i) Boc-(R)Pro-Phe-OMe

K roztoku 2,0 g (9,29 mmol) Boc-(R)Pro-OH a 0,94 g (9,29 mmol) triethylaminu v 70 ml toluenu/DMF (5/2) se přidá 1,12 g (9,29 mmol) pivaloylchloridu a reakční směs se míchá 30 minut při teplotě místnosti. Reakční směs se ochladí na 0°C a přidá se směs 2,0 g (9,29 mmol) H-Phe-OMe a 0,94 g triethylaminu ve 40 ml DMF a reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se zředí toluenem a organická fáze se promyje 3 x 50 ml 0,3M KHSO4, 1 x 50 ml vody a suší se (Na2SO₄). Odpařením rozpouštědla se získá titulní sloučenina ve kvantitativním výtěžku, která se použije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

(ii) Boc-(R)Pro-Phe-OH

Směs 4,0 g (10,6 mmol) Boc-(R)Pro-Phe-OMe a 8,93 g (21,3 mmol) LiOH x H₂O ve 140 ml vody/THF (1/) se intenzivně míchá při teplotě místnosti přes noc. THF se odpaří a vodná fáze se okyselí 1M KHSO₄ a extrahuje 3 x 75 ml EtOAC. Spojené organické fáze se promyjí vodou a suší (Na2SO₄). Filtrací a odpařením rozpouštědla se získá zbytek, který se čistí krystalizací z diisopropyletheru a získá se 2,329 g (60 %) titulní sloučeniny jako bílé krystalické pevné látky.

Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-OH (i) Boc-(R)Pro(3-(S)Ph}-Pro-OBn

Ke směsi 1,61 g Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-OH, 1,65 g, H-Pro-OBn x HC1 a 0,75 g HOBt v 11 ml DMF se přidá 0,84 ml NMM a 2,92 g CME-CDI při teplotě místnosti a reakční směs se tři dny míchá. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí ve 300 ml EtOAc. Organická fáze se promyje 2 x 100 ml vody, 2 x 100 ml 1M KHSO₄, 3 x 100 ml 1M NaOH, 3 x 100 ml vody a suší (NMgSO4). Odpařením rozpouštědla se získá 2,53 g oleje, který se čistí rychlou chromatografií za použití CH2C12/MeOH (97/3) jako elučního činidla a získá se 2,11 g (88 %) titulní sloučeniny.

(ii) Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-OH

0,94 g Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-OBn se rozpustí v 70 ml EtOH a hydrogenuje se nad 42 g 5% Pd/C pro 3,5 hodiny. Odfiltrováním katalyzátoru a odpařením rozpouštědla se získá titulní sloučenina jako bílé krystaly v kvantitativním výtěžku.

Boc-(R)Tic-Pro-OH

Připraví se podle postupu popsaného P.D.Gesellchenem a R.T. Shumanem v EP-0479489-A2.

BnOOC-CH₂NH 0-CH₂-Br

K roztoku -TsOH x H-Gly-OBn (5 mmol) a triethylaminu (5 mmol) v 10 ml CH2CI2 se přidá kyselina 2-bromoctová (5 mmol) rozpuštěná v 10 ml CH2CI2 a dicyklohexylkarbodiimidu

-64CZ 290104 B6 (5 mmol). Směs se míchá při teplotě místnosti přes noc a odfiltruje se. Organická fáze se promyje dvakrát 0,2M KHSO₄, 0,2M NaOH, solankou a suší se. Odpařením a lychlou chromatografii (CH₂Cl₂/MeOH, 95/5) se získá kvantitativní výtěžek požadované sloučeniny.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 3,89 (s, 2H), 4,05^1,11 (d, 2H), 5,19 (s, 2H), 7,06 (bs, 1H), 7,37,4 (m, 5H).

Boc-(R)Cgl-Ile-OH

Připraví se stejným způsobem jak je popsáno pro Boc-(R)Cgl-Pro-OH za použití H-Ile-OH místo H-Pro-OH v 91% výtěžku.

Boc-(R)Phe-OH (i) Boc-(R)Phe-Phe-OMe

Boc-(R)Phe-OH (18,8 mmol; dostupný od Bachem Feinchemicalien AG), Phe-OMe (20,7 mmol) a 4-dimethylaminopyridin (37,7 mmol) se rozpustí ve 30 ml acetonitrilu. Roztok se ochladí na teplotu led-voda a přidá se hydrochlorid l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (24,5 mmol). Chladicí lázeň se odstraní a reakční směs se míchá přes noc. Rozpouštědlo se pak odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozpustí v 50 ml ethylacetátu. Extrakcí organické fáze 5.0 ml podíly 0,5M KHSO₄, 1M hydrogenuhličitanu sodného a nakonec vodou s následujícím odpařením rozpouštědla se získá 7,5 g Boc-(R)Phe-Phe-OMe (94 %), který se použije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

(ii) Boc-(R)Phe-PheOH

Boc-(R)Phe-Phe-OMe (16,4 mmol) se rozpustí ve 40 ml tetrahydrofuranu a rychle se přidá hydroxid lithný (32,8 mmol) rozpuštěný ve 20 ml vody. Reakční směs se míchá 3,5 h a pak se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v 50 ml ethylacetátu a extrahuje se 50 ml 0,5M KHSO₄ a pak 50 ml vody. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a získá se 8,0 g Boc-(R)Phe-Phe-OH (kvant.) jako amorfní pevná látka. ’Η-NMR (200 MHz, d-CHCl₃): δ 7,4-6,7 (m, 10H), 5,7^1,2 (m, 6H), 1,34 (s, 9H).

HO-CH₂-COOBn

Připraví se postupem popsaným A. Lattesem a spol. v Bull. Soc. Chim. France., č. 11, str. 4018— 23,1971.

Benzyl-2-(ortho-nitrobenzensulfonyloxy)acetát (2-NO₂)Ph-SOr-PCH₂-COOBn

1,66 g (10 mmol) benzylglykolátu se rozpustí ve 25 ml CH₂C1₂ a 25 ml diethyletheru. Směs se ochladí na 0 °C a přidá se 2,8 ml (10 mmol) triethylaminu. Při udržování teploty na 0 °C se po malých částech přidává 2,44 g (11 mmol) ortho-nitrobenzensulfonylchloridu během 15 minut. Suspenze se míchá při 0 °C 50 minut a pak se přidá 20 ml a 30 ml CH₂C1₂. Fáze se oddělí a organická fáze se promyje 20 ml 1M HC1 a 20 ml vody, suší se (Na₂SO₄), filtruje a odpařením ve vakuu se získá 3,34 g zbytku, který se podrobí rychlé chromatografii za použití heptanu:EtOAc 2:1 jako elučního činidla a získá se 1,18 g (34 %) titulní sloučeniny.

’Η-NMR (300 MHz, CDC1₃): 4,92 (s, 2H), 5,17 (s, 2H), 7,83 (m, 5H), 7,76 (m, 3H), 8,16 (dd, 1H).

-65CZ 290104 B6

Benzyl-2-(para-nitrobenzensulfonyloxy)acetát (4-NO₂)Ph-SO2-PCH2-COOBn

Připraví se stejným postupem jak je popsán pro benzyl-2-(ortho-nitrobenzensulfonyloxy)acetát výše. Konečná sloučenina se získá v krystalické formě po odpaření rozpouštědla a je dostatečně čistá pro použití bez dalšího čištění (64 % výtěžek).

’H-NMR (300 MHZ, CDCI3): δ 4,79 (s, 2H), 5,13 (s, 2H), 7,2-7,4 (m, 5H), 8,10 (d, 2H), 8,30 (d, 2H).

TfO-CH₂COOMe

10,09 ml (60 mmol) trifluormethansulfonanhydridu rozpuštěného v CH₂C1₂ se přikape ke směsi 4,05 ml (50 mmol) methylglykolátu a 4,04 ml (50 mmol) pyridinu v CH₂C1₂ (celkem 62,5 ml) při 0 °C během 25 minut a pak se míchá při 0 °C 1 h. Po promytí 0,3M KHSO4 a nasyceným Na₂CO₃, sušení (Na₂SO₄) a filtraci, odpaření rozpouštědla ve vakuu se získá 9,94 g (90 %) titulní sloučeniny.

TfO-CH₂COOEt

Připraví se stejným způsobem jak je popsáno pro TfO-CH₂COOMe, vychází se z ethylglykolátu.

TfO-CH₂COOⁿBu

Připraví se stejným způsobem jak je popsán pro Tfo-CH₂COOMe, vychází se z butylglykolátu.

TfO-CH₂COOBn

Připraví se stejným způsobem jak je popsáno pro TfO-CH₂COOMe, vychází se zHOCH₂COOBn.

TfO-CH₂COOⁿHex (i) HO-CH₂COOHex

Ke 215 mg (2,82 mmol) kyseliny glykolové ve 12,8 ml CH₃CN se přidá 719 mg (3,39 mmol) 1hexyljodidu a 429 mg (2,82 mmol) DBU. Po míchání přes noc a 4 h refluxu se rozpouštědlo odpaří, přidá se ethylacetát a 1M KHSO4 a fáze se oddělí. Organická vrstva se promyje solankou, suší (MgSO4), filtruje a odpařením ve vakuu se získá 333 mg (74 %) produktu.

(ii) TfO-CH₂COOHex

Připraví se stejným způsobem jak je popsán pro TfO-CH₂COOMe, vychází se z HOCH₂COOⁿHex.

H-Mig(Z) (3-aminomethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)azetidin (i) 3-Aminomethyl-l-benzhydrylazetidin se připraví podle literatury, viz A.G.Anderson, Jr., a R. Lok. J. Org. Chem., 37, 3953, 1972.

(ii) 3-(N-terc.Butyloxykarbonylaminomethyl)-l-benzhydrylazetidin

Ke 3,50 g (13,9 mmol) 3-aminomethyl-l-benzhydrylazetidinu rozpuštěným ve 45 ml THF se přidá roztok 0,56 g (13,9 mmol) NaOH ve 45 ml H₂O. Reakční směs se ochladí na 0 °C a přidá se 3,03 g (13,9 mmol) di-terc.butyldikarbonátu. Chladicí lázeň se odstraní po několika minutách

-66CZ 290104 B6 a směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. THF se odpaří a zbytek se extrahuje 3 x 45 ml diethyletheru. Spojené organické vrstvy se promyjí solankou, suší Ňa₂SO₄ a odfiltruji. Odpařením rozpouštědla se získá 4,6 g (94 %) titulní sloučeniny.

(iii) 3-(N-terc.Butyloxykarbonylaminomethyl)azetidin

3,4 g (9,6 mmol) 3-(N-terc.butyloxykarbonylaminomethyl)-l-benzhydiylazetidinu se rozpustí ve 170 ml NaOH a hydrogenuje nad 0,30 g Pd(OH)₂ při 5 mPa přes noc. Katalyzátor se odfiltruje a rozpouštědlo se odpaří. Surový produkt se čistí rychlou chromatografíí za použití MeOH/CH₂Cl₂, 1/9, pak MeOH (nasycený NH₃ (plynný)/CH₂Cl₂, 1/9 jako elučním činidlem a získá se 1,2 g (67 %) titulní sloučeniny.

(iv) 3-(N-terc.Butyloxykarbonylaminomethyl)-l-(N-benzyloxykarbonyl-amidino)azetidin

0,9 g (4,8 mmol) 3-(N-terc.butyloxykarbonylaminomethyl)azetidinu a 1,3 g (6,3 mmol) Nbenzyloxykarbonyl-O-methylisomočoviny se smísí v 6,5 ml toluenu a zahřívá se na 70 °C 72 h a potom se nechá při teplotě místnosti dalších 72 h. Odpařením a následující rychlou chromatografíí za použití EtOAc a pak MeOH (nasycený NH₃ (plyn)/CH₂Cl₂, 1/9 jako elučního činidla se získá 0,67 g (38 %) titulní sloučeniny jako bílého prášku.

(v) 3-Aminomethyl-l -(N-benzyloxykarbonyl-amidino)azetidin (H-Mig(Z))

0,67 g (1,85 mmol) Boc-Mig(Z) se rozpustí v 10 ml EtOH nasyceného HC1 (plynný) a míchá se 10 min při teplotě místnosti. Přikape se 10 ml nasyceného roztoku KOH (vod.). Vrstvy se oddělí a vodná fáze se extrahuje 3 x 8 ml EtOAc. Organické vrstvy se spojí, promyjí se solankou, suší Na₂SO₄ a odpařením se získá 0,43 g (89 %) titulní sloučeniny.

‘H-NMR (300 MHz, CDC1CH₂C1₃): δ 2,55-2,65 (m, 1H), 2,84 (d, 2H), 3,66 (dd, 2H), 4,03 (dd, 2H), 5,07 (s, 2H), 7,2-7,4 (m, 5H).

MS m/z 263 (M⁺+l)

3-Aminoethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidíno)azetidin (H-Dig(Z)) (i) 3-Karboxylová kyselina-l-benzhydrylazidin se připraví podle literatury, viz A.G.Anderson, Jr. a R. Lok. J. Org. Chem., 37, 3953,1972.

(ii) 3-Hydroxymethyl-l-benzhydrylazetidin

Roztok 8,7 g (32,5 mol) 3-karboxylové kyseliny-l-benzhydrylazetidinu v 80 ml suchého THF se přidá pomalu k suspenzi 4,9 g (130,2 mmol) L1AIH4 ve 30 ml THF při teplotě místnosti. Reakční směs se refluxuje 3,5 h. Přebytek hydridového činidla se hydrolyzuje opatrným přidáváním, za chlazení, NH|Cl(vod), želatinozní směs se odfiltruje a filtrační koláč se opakovaně promývá THF. Opatřením rozpouštědla se získá 7,1 g (86 %) titulní sloučeniny jako světležlutých kiystalů.

(iii) 3-Methylsulfonatomethyl-l-benzydrylazetidin

K roztoku 6,62 g (26,1 mmol) 3-hydroxymethyl-l-benzydrylazetidinu v 50 ml suchého pyridinu se přidá 4,50 g (39,2 mmol) methansulfonylchloridu při 0 °C. Reakční směs se 1 hodinu míchá a pak se nechá stát v chladničce přes noc. Reakční směs se nalije do směsi ledu a vody. Sraženina se oddělí, promyje se vodou a sušením ve vakuu se získá 7,75 g (89,5 %) titulní sloučeniny.

-67CZ 290104 B6 (iv) 3-K.yanomethy 1-1 -benzhydry lazetidinu

K roztoku 7,75 g (23,4 mmol) 3-methansulfonátomethyl-l-benzhydrylazetidinu v 50 ml DMF se přidá roztok 3,44 g (70,0 mmol) NaCN v 10 ml vody. Směs se zahřeje na 20 h a 65 °C, ochladí a nalije do směsi ledu a vody. Sraženina se oddělí, promyje se vodou a suší ve vakuu, získá se 5,7 g (93 %) titulní sloučeniny.

(v) 3-Aminoethyl-l-benzhydrylazetidin

5,7 g (21,7 mmol) 3-kyanomethyl-l-benzhydrylazetidinu se pomalu přidá k suspenzi 2,9 g (76,0 mmol) LiAlFU v 80 ml suchého THF při teplotě místnosti. Reakční směs se refluxuje po 4 h. Přebytek hydridového činidla se hydrolyzuje opatrným přidáváním, za chlazení, NH₄Cl(vod), želatinózní směs se odfiltruje a filtrační koláč se promyje opakovaně THF. Rozpouštědlo se odpaří, zbytek se rozpustí v diethyletheru, promyje solankou a suší pomocí Na₂SO₄. Odpařením rozpouštědla se získá 5,0 g (87 %) titulní sloučeniny.

(vi) 3-(N-terc.Butyloxykarbonylaminoethyl)-l-benzhydiylazetidin

Titulní sloučenina se připraví ze 3-aminoethyl-l-benzydrylazetidinu podle postupu pro 3-(Nterc.butyloxykarbonylaminomethyl)-l-benzhydrylazetidinu, ve výtěžku 6,5 g (95 %).

(vii) 3-(N-terc.Butyloxykarbonylaminoethyl)azetidin

Titulní sloučenina se připraví ze 3-(N-terc.butyloxykarbonylaminoethyl)-l-benzhydrylazetidinu podle postupu pro 3-(N-terc.butyloxykarbonylaminomethyl)azetidin, ve výtěžku 1,2 g (70 %).

(viii) 3-(N-terc.Butyloxykarbonylaminoethyl)-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)azetidin (BocDig(Z))

Titulní sloučenina se připraví ze 3-(N-terc.butyloxykarbonylaminoethyl)azetidinu podle postupu pro 3-(N-terc.butyloxykarbonylaminomethyl) -l-(N-benzyloxykarbonylamidino)azetidin, ve výtěžku 0,090 g (34 %).

(ix) 3-Aminoethyl-l-(N-bezyloxykarbonylamidino)azetidin (H—dig(Z))

0,589 g (1,56 mmol) Boc-Dig(Z) se rozpustí v 10 ml EtOAc nasyceného plynným HC1 a míchá se 10 minut při teplotě místnosti. Přikape se 10 ml nasyceného roztoku KOH (vod.). Vrstvy se oddělí a vodná fáze se extrahuje 3 x 8 ml EtOAc. Organické vrstvy se spojí, promyjí solankou, suší Na₂SO₄ a odpařením se získá 0,415 g (96 %) titulní sloučeniny.

'H-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 1,60 (dt, 2H), 2,52-2,54 (m, 3H), 3,53 (bs, 2H), 4,0 (bt, 2H), 5,00 (s,2H), 7,17-7,31 (m,5H).

Pracovní příklady

Příklad 1

HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

K míchané směsi 3,40 g (10 mmol) Boc-(R)Cgl-Aze-OH (viz příprava výchozích materiálů) a 5,13 g DMAP (42 mol) ve 120 ml CH3CN se přidá 3,18 g H-Pab(Z) x HC1 (viz příprava výchozích materiálů). Po 2 hodinách míchání při teplotě místnosti se směs ochladí na -8 °C

-68CZ 290104 B6 a přidá se 2,01 g (10,5 mmol) EDC. Reakce se nechá ohřát na teplotu místnosti a v míchání se pokračuje dalších 47 hodin. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí ve 200 ml EtOAc. Organická fáze se promyje 1 x 50 ml vody, 1 x 50 + 2 x 25 ml 0,5 KHSO₄, 2 x 25 ml NaHCO₃(nasycený), 1 x 50 ml vody a suší. Odpařením rozpouštědla se získá 5,21 g (86 %) titulní sloučeniny.

Ή-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,8-1,9 (m, 2OH; ztého 1,30 (s, 9H)), 2,35-2,6 (m, 2H), 3,74 (bt, IH), 4,10 (m, IH), 4,25-4,4 (m, 2H), 4,45^1,6 (m, IH, rotamery), 4,75-5,0 (m, IH, rotamery), 5,08 (bd, 2H), 5,15 (s, 2H), 7,15-7,35 (m, 5H), 7,41 (d, 2H), 7,77 (d, 2H), 8,21 (m, IH).

(ii) H-(R)CglAze-Pab(Z)

Ke studenému (teplota ledové lázně) roztoku 18,8 g plynného HC1 ve 195 ml EtOAc se přidá 4,69 g (7,743 mmol) Boc-(R)Cgl)-Aze-Pab(Z) spolu se 40 ml EtOAc. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 30 minut. K čirému roztoku se přidá 140 ml Et₂O a vytvoří se přitom sraženina. Reakční směs se ponechá při teplotě místnosti další 1 h a 40 minut. Sraženina se odfiltruje, promyje se rychle 150 ml Et₂O a suší se ve vakuu. Sraženina se rozpustí v 50 ml vody a zalkalizuje se 15 ml 2M NaOH. Alkalická vodná fáze se extrahuje 1 x 100 + 1 x 50 ml CH₂C1₂. Spojené organické fáze se promyjí 1 x 20 ml vody, 1 x 20 ml solanky a suší (MgSO₄). Odpařením rozpouštědla se získá 3,44 g (88 %) titulní sloučeniny.

Ή-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,8-2,0 (m, 1 IH), 2,51 (m, IH), 2,67 (m, IH), 3,07 (d, IH), 4,11 (m, IH), 4,18 (m, IH), 4,43 (dd, IH), 4,53 (dd, IH), 4,91 (m, IH), 5,22 (s, 2H), 7,2-7,4 (m, 7H),

7,45 (d, 2H), 8,51 (d, 2H).

(iii) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

1,13 g (2,2 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z), 0,9 g (2,6 mmol) benzyl-2-(orto-nitrobenzensulfonyloxy)acetátu ((2-NO₂)Ph-SO₂-OCH₂-COOBn) (viz příprava výchozích materiálů), 0,99 g (5,6 mmol) K₂CO₃ a 113 ml CH₃Cn se smísí a zahřívá na 60 °C na olejové lázni po 3 h. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Přidá se EtOAc a směs se promyje vodou, organická fáze se extrahuje 1M KHSO4 a tato vodná fáze se promyje EtOAc. Okyselená vodná fáze se zalkalizuje IN NaOH na pH > 8 a extrahuje se EtOAc. Organická fáze se promyje vodou, suší (Na₂SO4), filtruje a odpařením ve vakuu se získá 1,17 g zbytku, který se dvakrát podrobí rychlé chromatografii za použití nejprve CH₂Cl₂/MeOH (NH₃-nasycený) 95/5 a pak diethyletherem/MeOH (Nenasycený) 9/1 jako elučního činidla a získá se 0,525 g (36 %) titulní sloučeniny.

Alkylace byla také provedena za použití benzyl-2-(para-nitrobenzensulfonyloxy)acetátu ((4NO₂(Ph-SO₂-OCH₂-COOBn) (viz přípravy výchozích materiálů) za použití stejného postupu jako výše za získání titulní sloučeniny v 52% výtěžku.

Ή-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,85-2,15 (m, 11H), 2,48 (m, IH), 2,63 (m, IH), 2,88 (d, IH), 3,24 (d, IH), 3,27 (d, IH), 3,95 (m, IH), 4,05 (m, IH), 4,44 (m, IH), 4,55 (m, IH), 4,91 (m, IH), 5,07 (s, 2H), 5,22 (s, 2H), 7,2-7,4 (m, 10H), 7,45 (d, 2H), 7,79 (d, 2H), 8,42 (m, IH).

(iva) HOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HC1

BnCOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z), 20 mg (0,031 mmol) se rozpustí v 5 ml methanolu. Přidá se několik kapek chloroformu a 5% PdPC a směs se hydrogenuje při atmosférickém tlaku 1 h. Po filtraci a odpaření se produkt lyofilizuje z vody za získání 11 mg (72 %) titulní sloučeniny.

Ή-NMR (500 MHz, D₂O): δ 1,0-2,0 (m, 1 IH), 2,10 (m, IH), 2,44 (m, IH), 2,82 (m, IH), 3,90 (s, 2H), 4,09 (d, IH), 4,4-4,55 (m, 2H), 4,66 (s, 2H), 5,08 (m, IH), 7,65 (d, 2H), 7,89 (d, 2H).

-69CZ 290104 B6 ^I3C-NMR (75,5 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,3,167,9 a 172,4.

(ivb) HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pag

BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) se rozpustí v EtOH (99%) a hydrogenuje se nad 5% Pd/C při atmosférickém tlaku 5 hodin. Filtrací katalyzátoru přes celit a odpařením rozpouštědla se získá titulní sloučenina v 97% výtěžku.

'H-NMR (500 MHz, CD₃OD, směs dvou rotamerů): hlavní rotamer: δ 1,00-1,12 (m, 1H), 1,13— 1,34 (m, 4H), 1,55-1,70 (m, 3H), 1,73-1,85 (m, 2H), 1,94-2,02 (bd, 1H), 2,32-2,42 (m, 1H), 2,54-2,64 (m, 1H), 2,95-3,10 (AB-systém plus d, 3H), 4,18-4,25 (bq, 1H), 428-4,32 (bq, 1H), 4,43-4,60 (AB-systém, 2H), 4,80-4,85 (dd, 1H), 7,48-7,54 (d, 2H), 7,66-7,71 (d, 2H).

Signály z minoritního rotamerů se objevují při δ 0,95 (m), 1,43 (m), 2,24 (m), 2,84 (d), 3,96 (m), 4,03 (m), 7,57 (bd), 7,78 (bd).

^,3C-NMR (125 MHz, CD₃OD): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 168,0, 173,0, 176,3 a 179,0.

Příklad 2

HOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HC1 (i) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

Připraví se stejným způsobem jak je popsán v příkladu 1 (ii) zpracováním vytvořené hydrochloridové soli s bází za získání volné báze.

(ii) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pag (Z)

H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z), 0,19 g (0,38 mmol) a 70 mg (0,43 mmol) benzylakrylátu se rozpustí ve 2 ml isopropanolu. Směs se nechá stát 6 dnů. Rychlou chromatografií za použití CH₂C1₂/THF= 8/2 jako elučního činidla se získá 0,12 g (48 %) titulní sloučeniny.

'H-NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 0,8-1,9 (m, 10H), 1,95 (bd, 1H), 2,4-2,6 (m, 4H), 2,7-2,8 (m, 3H); z toho 2,79 (d, 1H), 4,13 (m, 1H), 4,37 (dd, 1H), 4,60 (dd, 1H), 4,97 (dd, 1H), 5,09 (dd, 2H), 5,22 (s, 2H), 7,25-7,4 (m, 10H), 7,47 (d, 2H), 7,83 (d, 2H) 8,61 (bt, 1H).

(iii) HOOC-CHr-CHHRjCgl-Aze-Pab x 2 HC1

BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z), 0,10 g (0,15 mmol) se rozpustí v 10 ml ethanolu a hydrogenuje nad 5% Pd/C za atmosférického tlaku 1 h. Roztok se zfiltruje, odpaří a surový produkt se čistí pomocí RPLC za použití CH₃CN/O,1M NHiOAc (1/4). Výsledný produkt se suší vymražením, zpracuje se s přebytkem konc. HC1 a suší vymražením opět za získání 31 mg hydrochloridové soli.

'H-NMR (300 MHz, D₂O) δ 0,8-2,1 (m, 11H), 2,38 (m, 1H), 2,7-2,9 (m, 3H), 3,2-3,4 (m, 2H), 3,98 (d, 1H), 4,35—4,55 (m, 2H), 4,60 (s, 2H), 5,04 (dd, 1H), 7,59 (d, 2H), 7,83 (d, 2H).

¹³C NMR (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,2,167,8,172,3 a 175,5.

-70CZ 290104 B6

Příklad 3

HOOC-CH₂- (R)Cgl-Pro-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cgl-Pro-Pab(Z)

Boc-(R)Cgl-Pro-OH (viz příprava výchozích materiálů), 2,3 g (6,49 mmol), DMAP, 2,38 g (19,47 mmol) a H-Pab(Z) (viz příprava výchozích materiálů), 1,84 g (6,49 mmol) se smísí ve 30 ml acetonitrilu. Směs se ochladí na -15 °C a přidá se EDC, 1,31 g (6,81 mmol). Teplota se nechá stoupnout na teplotu místnosti a směs se míchá přes noc. Po odpaření se zbytek rozpustí v ethylacetátu a 0,3M roztoku KHSO₄. Kyselá vodná fáze se třikrát extrahuje ethylacetátem. Organická fáze se promyje dvakrát 0,3M roztokem KHSO₄, dvakrát roztokem NaHCO₃ a jednou solankou, suší se (Na₂SO4), filtruje a odpaří. Surový produkt se čistí rychlou chromatografií na silikagelu za použití ethylacetátu jako elučního činidla a získá se 1,77 g (44 %) produktu.

'H-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,9-1,49 (m, 14H), 1,5-2,1 (m, 9H), 2,37 (bs, 1H), 3,53 (q, 1H), 3,94 (bs, 1H), 4,02 (m, 1H), 4,43 (bs, 2H), 4,65 (d, 1H), 5,09 (bs, 1H), 5,20 (s, 2H), 7,18-7,4 (m, 5H), 7,45 (d, 2H), 7,62 (bs, 1H), 7,81 (m, 2H).

(ii) H-(R)Cgl-Pro-Pab (Z)

1,45 g (2,34 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) se rozpustí v 75 ml HCL nasyceného ethylacetátu. Směs se nechá stát 10 minut při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří a získá se 1,3 g dihydrochoridové soli produktu.

'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,0-1,45 m, 5H), 1,58-2,2 (m, 9H), 2,3-2,5 (m, 1H), 3,75-3,90 (m, 2H), 4,5-4,66 (m, 3H), 5,49 (s, 2H), 7,45-7,7 (m, 7H), 7,87 (d, 2H).

Amin se získá rozpuštěním dihydrochloridové soli v 0,lM NaOH-roztoku a extrakcí vodné fáze třikrát ethylacetátem. Organická fáze se promyje jednou solankou, suší (Na₂SO4), filtruje a odpařením se získá 1,19 g (97 %) titulní sloučeniny.

(iii) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z)

0,340 g (0,65 mmol) H-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) se smísí s 0,215 g (0,65 mmol) BnOOC-CH₂-OTf (viz příprava výchozích materiálů), 0,299 g (2,17 mmol) K₂CO ve 4 ml dichlormethanu a refluxuje se půl hodiny. Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se zředí CH₂C1₂ a organická vrstva se promyje jednou vodou a solankou, suší se (N₂ŠC>4), filtruje a odpaří. Surový produkt se čistí rychlou chromatografií za použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH (97/3 pak 95/5) a získá se 299 mg směsi dvou produktů podle TLC. Směs se pak čistí rychlou chromatografií za použití postupného gradientu ethylacetát/toluen (9/1,93/7, 95/5,100/0) a získá se 46 mg (9 %) (BnOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z), který se eluuje nejprve ze sloupce a je následován 133 mg (31 %) požadovaného produktu BnOOC-CH₂-(R)Clg-Pro-Pab(Z).

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): (BnOOC-CH₂)2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z): δ 0,9-1,3 (m, 5H), 1,4-2,1 (m, 9H), 2,3-2,4 (m, 1H), 3,05 (d, 1H), 3,20-3,37 (AB-systémy centrované při δ 3,29, 2H), 3,5— 3,6 (m, 2H), 4,29-4,57 (ABX systém centrovaný při d 4,43, 2H), 4,62 (d, 1H), 4,91 (zjevný singlet, 2H), 5,19 (s, 2H), 6,75 (bs, NH), 7,1-7,5 (m, 12H), 8,7-8,8 (m, 2H+NH), 9,45 (bs, NH).

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): (BnOOC-CH₂)r-(R)Cgl-Pro-Pab(Z): δ 0,68-0,9 (m, 2H), 1,0-1,3 (m, 3H), 1,43 (bd, 1H), 1,55-2,0 (m, 7H), 2,05 (bd, 1H), 2,3 (bd,) 1H), 2,3-2,4 (m, 1H), 3,15 (d, 1H), 3,25-3,48 (m, 2H), 3,55-3,79 (AB-systém centrovaný při d 3,67, 4H), 4,38-4,58 (ABXsystém centrovaný při d 4,48, 2H), 4,68 (d, 1H), 4,82-4,98 (AB-systém centrovaný při d 4,91, 4H), 5,19 (s, 2H), 6,66 (bs, NH), 7,1-7,5 (m, 17H), d, 2H), 7,80 (t, NH), 9,37 (bs, NH).

-71 CZ 290104 B6 ^I3C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 164,7, 168,1, 171,5, 172,3 a 172,6.

(iv) HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab x 2 HC1

0,133 g (0,20 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) se smísí s 0,60 g 5% Pd/C, 1 ml 1M HCl-roztoku a 10 ml ethanolu. Směs se zpracuje pod H₂-atmosférou jednu hodinu. Po filtraci přes hyflo a odpaření rozpouštědla se získá produkt v 90% výtěžku, 93 mg, vymrazením dvakrát z vody.

Ή-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,0-1,45 (m, 5H), 1,5-2,1 (m, 9H), 2,2-2,4 (m, 1H), 3,55-3,85 (m, 4H; z toho 3,79 (s, 2H)), 4,23 (d, 1H), 4,33^,57 (m, 3H), 7,44 (d, 2H), 7,69 (d, 2H).

¹³C-NRM (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 166,9,167,2,169,1,174,5.

Příklad 4

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH2-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z)

0,406 g (0,782 mmol) H-(R)Cgl-Pro-Pab-(Z) (viz příklad 3) se rozpustí ve 3 ml methanolu a přidá se 132 μΐ benzylakrylátu. Reakční směs se míchá tři dny při teplotě místnosti. Směs se odpaří a surový produkt se čistí rychlou chromatografií za použití postupného gradientu CH₂C1₂: MeOH (95/5 a 90/10) jako elučního činidla za získání 0,399 g (75 %) produktu.

Ή-NMR (300 MHz, CDCI3): 0,8-1,0 (m, 1H), 1,0-1,3 (m, 4H), 1,35-2,2 (m, 9H), 2,3-2,6 (m, 4H), 2,65-2,78 (m, 1H), 3,05 (d, 1H), 3,4-3,6 (m, 2H), 4,25-4,52 (ABX-systém centrální při d 4,40, 2H), 4,64 (dd, 1H), 5,05 (s, 2H), 5,20 (s, 2H), 7,2-7,38 (m, 10H), 7,43 (d, 2H), 7,78 (d, 2H).

ⁿC-NMR (75 MHz, CDCI3): amidinové a karbonylová uhlíky: δ 164,7, 167,9, 171,3, 172,7 a 175,4.

(ii) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab x 2 HC1

0,261 g (0,383 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) se smísí s 0,075 g 5% Pd/C, 1 ml 1M HCl-roztoku a 10 ml ethanolu. Směs se hydrogenuje při atmosférickém tlaku dvě hodiny. Po odfiltrování přes hyflo a odpaření rozpouštědla se získá produkt, 0,196 g (96 %), vymražovacím sušením dvakrát z vody.

’Η-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,17-1,40 (m, 5H), 1,60-1,92 (m, 5H), 1,92-2,2 (m, 4H), 2,322,48 (m, 1H), 2,81 (t, 2H), 3,11-3,36 (ABX₂-systém centrovaný při δ 3,24, 2H), 3,63-3,90 (m, 2H), 4,25 (d, 1H), 4,42-4,63 (m, 3H), 7,54 (d, 2H), 7,78 (d, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,0,167,30, 174,6 a 174,7.

-72CZ 290104 B6

Příklad 5 (HOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pab x 2 HCl mg (0,056 mmol) (BnOOC-CH₂)2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) (viz příklad 3) se smísí s 25 mg 5% Pd/C, 0,7 ml 1M HCl-roztoku a 7 ml ethanolu. Směs se hydrogenuje jednu hodinu při atmosférickém tlaku. Katalyzátor se odfiltruje přes hyflo a rozpouštědlo se odpaří. Konečný produkt 25 mg (77 %) se získá sušením vymražením dvakrát z vody.

Ή-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,0-1,4 (m, 5H), 1,45-2,2 (m, 9H), 2,25-2,45 (m, 1H), 3,53-3,84 (m. 2H), 3,84-4,22 (AB-systém centrovaný při δ 4,03, 4H), 4,26 (d, 1H), 4,35^4,6 (m, 3H), 7,53 (d,2H), 7,77 (d, 2H).

^bC-NMR (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,1, 167,3, 170,6 a 174,5.

Příklad 6

H-(R)Cgl-Pic-Pab x 2 HCl (i) Boc-(R)Cgl-Pic-Pab(Z)

0,478 g (2,49 mmol) EDC se přidá při -18 °C k míchanému roztoku 0,875 g (2,37 mmol) Boc(R)Cgl-Pic-OH (viz příprava výchozích materiálů), 1,22 g (9,97 mmol) DMAP a 0,706 g (2,49 mmol) H-Pab(Z) (viz příprava výchozích materiálů) ve směsi 30 ml acetonitrilu a 1 ml DMF. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti během dvou hodin a vmíchání se pokračuje 48 hodin. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se rozpustí v 50 ml ethylacetátu. Roztok se promyje 15 ml vody, 3 x 15 ml 0,3M KHSO₄, 2 x 15 ml Na₂CO₃ roztoku a vodou. Rozpouštědlo se odstraní a získá se zbytek, který se podrobí rychlé chromatografii za použití ethylacetátu/heptanu 9:1 jako elučního činidla. Výtěžek je 0,96 g (64 %).

(ii) H-(R)Cgl-Pic-Pab(Z)

Chlorovodík se probublává roztokem 0,56 g (0,88 mmol) Boc-(R)Cgl-Pic-Pab(Z) ve 25 ml ethylacetátu. Po pár minutách se vysrážejí krystaly z roztoku. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a přidá se 50 ml ethylacetátu. Promytím 2 x 15 ml 2M roztoku hydroxidu sodného a extrakcí vodné fáze 25 ml ethylacetátu s následujícím sušením (síran sodný) spojených extraktů a odstraněním rozpouštědla ve vakuu se získá 0,448 g (95 %) požadovaného produktu.

(iii) H-(R)Cgl-Pic-Pab x 2 HCl

Roztok 98 mg (0,18 mmol) H-Cgl-Pic-Pab(Z) v 5 ml 95% ethanolu a 1 ml vody se míchá v atmosféře vodíku 4 hodiny za přítomnosti 5% Pd/C. Směs se odfiltruje a přidá se 0,3 ml 1M kyseliny chlorovodíkové. Ethanol se odstraní ve vakuu a zbytek se suší vymražením za získání 70 mg (81 %) požadované sloučeniny.

’Η-NMR (300 MHz, CD₃OD): δ 1,00-1,56 (m, 7H), 1,56-1,94 (m, 9H), 2,32 (bd, 1H), 3,32-

3,45 (m, 1H), 3,90 (bd, 1H), 4,35 (d, 1H), 4,50 (s, 2H), 5,10-5,20 (m, 1H), 7,55 (d, 2H), 7,76 (d, 2H).

’³C-NMR (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,2, 170,5 a 173,4.

-73CZ 290104 B6

Příklad 7

HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Cgl-Pic-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cgl-Pic-Pab(Z)

Směs 350 mg (0,66 mmol) H-(R)Cgl-Pic-Pab(Z) (viz příklad 6) a 233 mg dibenzylmaleátu ve 2,5 ml ethanolu se 4 dny udržuje při teplotě místnosti. Ethanol se odstraní ve vakuu a zbytek se podrobí rychlé chromatografii za použití ethylacetátu/heptanu 9:1 jako elučního činidla a získá se 0,108 mg produktu.

(ii) HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Cgl-Pic-Pab x 2 HC1

105 mg (0,13 mmol) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cgl-Pic-Pab(Z) se rozpustí v 5 ml 95% ethanolu a 1 ml vody a hydrogenuje se 5 hodin za přítomnosti 5% Pd/C. Přidá se 0,3 ml 1M kyseliny chlorovodíkové a směs se odfiltruje a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Zbytek se rozpustí ve vodě a suší vymražením za získání 54 mg (73 %) požadované substance.

’Η-NMR (300 MHz, CD₃OD, směs dvou diastereomerů 5/4): δ 1,10-1,60 (m, 7H), 1,60-2,04 (m, 9H), 2,23-2,42 (m, 1H), 2,93-3,15 (m, 2H), 3,30-3,42 (m, 1H, částečně překrytý MeODpíkem), 3,71-3,85 (m, 1H), 3,98^1,10 (m, 1H), 4,40-4,60 (m, 3H), 5,10-5,20 (m, 1H), 7,49-7,60 (m, 2H), 7,70-7,81 (m, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,1, 168,95, 169,6 a 173,1.

MS m/z 516 (M⁺+l)

Příklad 8

H-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Aze-Pab(Z)

409 mg (2,13 mmol) EDC se přidá při -18 °C k míchané směsi 0,72 g (2,03 mmol) Boc-(R)ChaAze-OH (viz příprava výchozích materiálů), 1,04 g (8,53 mmol) DMAP a 604 mg (2,13 mmol) H-Pab(Z) (viz příprava výchozích materiálů) ve 20 ml acetonitrilu. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti přes noc a následně se rozpouštědlo odstraní ve vakuu. Zbytek se rozpustí ve 40 ml ethylacetátu a organická fáze se postupně promyje 10 ml vody, 3x10 ml 0,3M KHSO4, 2 x 10 ml Na₂CO₃-NaCI (vod.) a nakonec 10 ml solanky. Sušením (Na₂SO₄) a odstraněním rozpouštědla ve vakuu se získá zbytek, který se podrobí rychlé chromatografii za použití ethylacetátu/methanolu 9:1 jako elučního činidla a získá se 645 mg (51 %) titulní sloučeniny.

(ii) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z)

Chlorovodík se probublává roztokem 640 mg (1,03 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-Pab(Z) ve 25 ml ethylacetátu. Po pár minutách je reakce podle TLC kompletní. Pro odstranění přebytku chlorovodíku a směs se pak zředí na 50 ml ethylacetátem. Promytí 2 x 15 ml Na₂CO₃ (vod.) je následováno extrakcí vodné fáze 15 ml ethylacetátu. Spojené organické extraktory se promyjí vodou a suší (Na₂CO₃) a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Získá se 513 mg (96 %) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z).

-74CZ 290104 B6 (iii) H-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HC1 mg (0,15 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z) rozpuštěného v 5 ml 95% ethanolu a 1 ml vody se hydrogenuje při atmosférickém tlaku za přítomnosti 5% Pd/C 4 hodiny. Katalyzátor se odstraní filtrací a odpařením rozpouštědla ve vakuu se získá zbytek, který se rozpustí ve 2 ml vody. Sušením vymražením se získá 57 mg (85 %) produktu.

’Η-NMR (500 MHz, D₂O, 2 rotamery, směs 3:1): δ 1,02-1,20 (m, 2H), 1,22-1,92 (m, 11H), 2,40-2,50 (m, 1H), 2,80-2,90 (m, 1H), 4,25 (bt, 1H), 4,40 (dg, 1H), 4,53 (dq, 1H), 4,65 (s, 2H), 5,05-5,10 (m, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,88 (d, 2H).

Chemické posuny rozpoznávaných signálů z minoritního rotameru: δ 0,57 (m), 0,85 (m), 2,95 (m), 4,06 (dq) 4,17 (dq), 4,63 (s), 5,33 (m), 7,70 (d), 7,93 (d).

¹³C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,2, 170,4 a 172,8.

Příklad 9

HOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab(Z)

0,119 g (0,52 mmol) benzylbromacetátu se přidá ke směsi 0,27 g (0,52 mmol) H-(R)Cha-AzePab(Z) (viz příklad 8) a 0,158 g (1,14 mmol) K₂CO₃ v 5,2 ml acetonitrilu a zahřívá se na 60 °C na olejové lázni 1 h. Rozpouštědlo se odstraní a přidá se ethylacetát a voda. Fáze se oddělí a organická fáze se promyje solankou a suší (Na₂SO₄). Odpařením ve vakuu se získá 0,344 g zbytku, který se podrobí rychlé chromatografíí za použití ethylacetátu jako elučního činidla a pak za použití ethylacetátu tetrahydrofuranu :NH₃-nasyceného methanolu (60:5:2) se získá 0,163 g požadovaného produktu.

’Η-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,7-1,0 (m, 2H), 1,05-2,05 (m, 11H), 2,35-2,55 (m, 1H), 2,552,75 (m, 1H), 3,15-3,32 (m, 3H), 3,95-4,05 (t, 2H), 4,4 a 4,5 (ABX-systém, 2H), 4,8-4,95 (m, 1H), 5,05 (s, 2H), 5,2 (s, 2H), 7,2-7,5 (m, 12H), 7,7-7,85 (d, 2H), 8,3-8,45 (t, 1H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 164,5, 167,8, 170,7, 171,9 a 175,9.

(ii) HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HC1

0,163 g (0,243 mmol) BnOOC-CH7-(R)Cha-Aze-Pab(Z) se rozpustí v 5,5 ml ethanolu (99,5%) a 0,7 ml chlorovodíku (IN) a hydrogenuje se za přítomnosti 0,17 g 5% Pd/C 4 h. Katalyzátor se odstraní filtrací a odpařením rozpouštědla s následujícím rozpuštěním ve vodě a vymražením se získá 107 mg (85 %) titulní sloučeniny.

’H-NMR (500 MHz, CD₃OD, směs dvou rotamerů): hlavní rotamer: δ 0,95-1,95 (m, 13H), 2,32,4 (m, 1H), 2,6-2,75 (m, 1H), 3,5-3,75 (m, 2H), 4,05-4,15 (m, 1H), 4,15-4,23 (m, 1H), 4,364,43 (m, 1H), 4,43^1,5 (m, 1H), 4,58^1,65 (m, 1H), 4,83-4,88 (m, 1H), 7,5-7,6 (m, 2H), 7,737,82 (m, 2H).

Odštěpené signály z minoritního rotameru se objevují při δ 2,2-2,3 (m, 3,95-4,05 (m), 5,1-5,17 (m), 7,6-7,67 (m).

-75CZ 290104 B6 ^I3C-NMR (75 MHz, CD₃OD): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 168,2, 169,8,168,9 a 172,3.

Příklad 10

HOC-CH₂-(R,S)Ch(COOH)(R)Cha-Aze-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBnXR)Cha-Aze-Pab(Z)

Směs 230 mg (0,443 mmol) H-(H)Cha-Aze-Pab(Z) (viz příklad 8) a 144 mg (0,487 mmol) dibenzylmaleátu v 1,5 ml 95% ethanolu se míchá při teplotě okolí 5 dnů. Po odstranění ethanolu ve vakuu se zbytek podrobí rychlé chromatografii za použití ethylacetátu/methanolu 95/5 jako elučního činidla a získá se 54 mg (15 %) produktu.

(ii) HOOC-CHHR,S)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab mg (0,06 mmol) BnOOC-CHr-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z) rozpuštěných v 5 ml 95% ethanolu a 1 ml vody se hydrogenuje za přítomnosti 5% Pd/C 4,5 h. Katalyzátor se odstraní filtrací a odpařením rozpouštědla ve vakuu se získá zbytek, který se rozpustí ve 2 ml vody a 0,2 ml 1M kyseliny chlorovodíkové. Sušením vymražením se získá 32 mg (93 %) produktu.

’Η-NMR spektrum titulní sloučeniny v D₂O vykazuje dvě sady silně se překrývajících signálů získaných ze dvou diastereoizomerů. Dále se objevují ve spektru další odštěpené rezonance minoritního rotameru, tvořící přibližně 15 %.

’Η-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,03-2,00 (m, 13H), 2,32-2,53 (m, 1H), 2,72-2,96 (m, 1H), 3,063,28 (m, 2H) 4,10-4,55 (m, 4H), 4,62 (bs, 2H), 5,00-5,10 (m, 1H), 7,55-7,68 (m, 2H), 7,80-7,94 (m, 2H).

Odštěpené signály z minoritního rotameru se objevují při δ 0,65 (m), 0,80 (m), 4,00 (m), 5,24 (m), 5,35 (m).

’³C-NMR (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,2, 169,9, 171,0, 172,3 a 174,1.

Příklad 11

HOOC-CHr-(R nebo S)CH(COOH)-Cha-Aze-Pab/a x 2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-(R nebo S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/a

Směs 2,0 g (3,8491 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z)(viz příklad 8) a 1,37 g dibenzylmaleátu v 10 ml 95% ethanolu se míchá při teplotě okolí 4 dny. Po odstranění ethanolu ve vakuu se zbytek podrobí rychlé chromatografii za použití ethylacetátu/methanolu 98/2 jako elučního činidla a získá se 1,024 g (32 %) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z). Dva diastereoizomery se oddělí pomocí RPLC za použití (CH₃CN/O,1M NH4OAC 65/35) jako elučního činidla. Tento diastereomer se eluuje nejprve z kolony. Po odstranění acetonitrilu ve vakuu se vodná fáze extrahuje třikrát ethylacetátem. Organická fáze se jednou promyje vodou, suší (Na₂SO₄), filtruje a odpařením se získá 0,352 g titulní sloučeniny jako čistého stereoizomeru.

(ii) HOOC-CHHR nebo S)CH(COOH)-Cha-Aze-Pab/a x 2 HC1

350 mg (0,43 mmol) BnOOC-CHXR nebo S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/a (diastereomer z (i) výše rozpuštěného v 15 ml 95% ethanolu a 3 ml vody se hydrogenuje za přítomnosti 5%

-76CZ 290104 B6

Pd/C 4,5 h. Katalyzátor se odstraní filtrací a odpařením rozpouštědla ve vakuu se získá zbytek, který se rozpustí v 5 ml vody a 1,0 ml 1M kyseliny chlorovodíkové. Vymražením se získá 214 mg (87 %) produktu jako čistého stereoizomerů.

'H-NNR (300 MHz, MeOD, směs dvou rotamerů): δ 0,85-1,95 (m, 13H), 2,25-2,38 (m, 1H), 2,60-2,75 (m, 1H), 2,88 (dd, 2H), 3,92 (t, 1H), 4,15-4,25 (m, 2H), 4,30-4,43 (m, 1H), 4,56 (ABsystém, 2H), 4,76-4,86 (m, 1H, částečně z rozpouštědlového signálu), 7,59 (d, 2H), 7,78 (d, 2H).

Odštěpené signály z minoritního rotamerů se objevují při δ 0,70, 2,95, 3,82, 4,00, 5,08 a 7,83.

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 166,9, 168,8, 171,7, 172,3 a 173,8.

Příklad 12

HOOC-CH₂-(R nebo S)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/B x 2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-(R nebo S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/b

Titulní sloučenina se získá použitím stejného postupu jak je popsán v příkladu 11 výše pro BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z). Tento diastereomer vystupuje z kolony jako první. Výtěžek 0,537 g.

(ii) HOOC-CH₂-(R nebo S)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/b x 2 HC1

530 mg (0,65 mmol) BnOOC-CH₂-(R nebo S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/b rozpuštěného v 15 ml 95% ethanolu a 3 ml vody hydrogenuje za přítomnosti 5% Pd/C 5 h. Katalyzátor se odfiltruje a odpařením rozpouštědla ve vakuu se získá zbytek, který se rozpustí v 6 ml vody a 1,0 ml 1M kyseliny chlorovodíkové. Sušením vymražením se získá 290 mg (78 %) produktu.

’Η-NMR (300 MHz, MeOD, směs dvou rotamerů): δ 0,86-1,90 (m, 13H), 2,30-2,42 (m, 1H), 2,60-2,75 (m, 1H), 2,75-2,85 (m, 1H), 2,95-3,05 (m, 1H), 3,65-3,71 (m, 1H), 4,00-4,10 (m, 1H), 4,14-4,24 (m, 1H), 4,36-4,62 (m, 3H), 4,78-4,86 (m, 1H, částečně překrýván signálem rozpouštědla), 7,57 (d, 2H), 7,75 (d, 2H).

Odštěpené signály z minoritního rotamerů se objevují při δ 0,78,2,92,3,82, 5,36 a 7,80.

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 166,8, 169,0, 172,0, 172,4 a 175,2.

Příklad 13

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-CH2-(R)Cha-Aze-Pab(Z)

Směs 182 mg (0,35 mmol) H-(R)Cha-aze-Pab(Z) (viz příklad 8) a 62,5 mg (0,385 mmol) benzylakrylátu v 1,5 ml 95% ethanolu se míchá při teplotě místnosti 4 dny. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se podrobí rychlé chromatografíi za použití ethylacetátu/methanolu 9:1 jako elučního činidla za získání 200 mg (84 %) titulní sloučeniny.

-ΊΊCZ 290104 B6 (ii) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HC1

195 mg (0,29 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab(Z) rozpuštěného v 10 ml 95% ethanolu a 2 ml vody se hydrogenuje za přítomnosti 5% Pd/C 4 h. Katalyzátor se odfiltruje a odpařením rozpouštědla ve vakuu se získá zbytek, který se rozpustí ve 2 ml vody a 0,4 ml 1M kyseliny chlorovodíkové. Sušením vymražením se získá 130 mg (86 %) produktu.

’Η-NMR (300 MHz, CD₃OD): δ 0,98-1,27 (m, 2H), 1,30-1,90 (m, 11H), 2,27-2,35 (m, 1H), 2,65-2,74 (m, 1H), 2,77 (t, 2H), 3,32 (t, 2H), 4,10 (t, 1H), 4,17-4,25 (m, 1H), 4,40-4,49 (m, 1H), 4,55 (AB, 2H), 4,83-4,90 (m, 1H), 7,58 (d, 2H), 7,77 (d, 2H).

’³C-NMR (125 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,0, 168,9,172,4 a 174,6.

Příklad 14

HOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CHz-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Aze-Pag(Z)

Směs 0,212 g (0,408 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z) (viz příklad 8), 0,124 g (0,89 mmol) K₂CO₃a 0,128 g (0,449 mmol) BnOOC-CH₂-NH~CO~-CH₂-Br (viz příprava výchozích materiálů) v 6 ml acetonitrilu se míchá při 50 °C dvě hodiny. Po odpaření rozpouštědla se zbytek rozpustí ve vodě a ethylacetátu. Vodná vrstva se extrahuje dvakrát ethylacetátem a spojené organické vrstvy se suší (Na₂SO₄), filtruje a odpaří. Produkt se čistí rychlou chromatografií za použití postupného gradientu ethylacetát/tetrahydrofuran (85/15, 4/1, 7/3), a získá se 0,190 g (64 %) titulní sloučeniny.

’Η-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,75-2,1 (m, 13H), 2,43 (m, 1H), 2,56 (d, 1H), 2,79 (m, 1H), 3,0-3,15 (m, 2H; z toho 3,05 (d, 1H)), 3,89-4,18 (m, 5H), 4,8^1,97 (m, 2H), 5,15 (s, 2H), 5,18 (s, 2H), 7,2-7,47 (m, 12H), 7,72 (t, NH), 7,86 (d, 2H), 8,14 (bs, NH), 8,31 (dd, NH), 9,42 (bs, NH).

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 164,5, 168,7, 169,83, 171,7, 175,5.

(ii) HOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HC1

0,19 g (0,26 mmol) BnOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab(Z) se smísí s 0,075 g 5% Pd/C, 1,5 ml ln HCl-roztoku, 3 ml vody a 17 ml ethanolu a smě se hydrogenuje při atmosférickém tlaku po jednu hodinu. Odfiltrováním katalyzátoru, odpařením rozpouštědla s následujícím sušením vymražením z vody se získá 144 mg (97 %) titulní sloučeniny.

’Η-NMR (300 MHz, D₂O, dva rotameiy 4:1): δ 0,88-1,88 (m, 13H), 2,25-2,42 (m, 1H), 2,632,89 (m, 1H), 3,94 (s, 2H), 3,99 (zjevný dublet, 2H), 4,16 (t, 1H), 4,28 (q, 1H), 4,41 (q, 1H), 4,56 (s, 2H), 4,98 (dd, 1H), 7,53 (d, 2H), 7,77 (d, 2H).

Odštěpené signály z minoritního rotameru se objevují při δ 0,50 (bq), 0,77/bq), 5,21 (dd), 7,56 (d) a 7,81 (d).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): karbonyly a amidinové uhlíky při δ 166,8, 166,9, 168,6, 172,3 a 176,4.

Odštěpené signály z minoritního rotameru se objevují při δ 166,6, 169,6 a 172,0

-78CZ 290104 B6

Příklad 15

H-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

0,135 ml (1,1 mmol) pipvaloylchloridu se přidá při teplotě místnosti k míchané směsi 0,155 ml (1,1 mmol) triethylaminu a 405 mg (1,1 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (viz příprava výchozích materiálů) v 5 ml DMF. Po 3 hodinách se přidá 340 mg (l,lmmol) H-Pab(Z) (viz příprava výchozích materiálů) v 5 ml DMF a míchá se přes noc. Reakční směs se zředí vodou a extrahuje ethylacetátem/toluenem 1:1. Organická fáze se suší (MgSO₄) a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a získá se zbytek, který se podrobí rychlé chromatografii za použití ethylacetátu jako elučního činidla. Výtěžek činí 309 mg (49 %).

(ii) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

Chlorovodík se probublává roztokem 1,246 g (2 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-Pab(Z) ve 20 ml ethylacetátu při teplotě místnosti do nasycení. Po 30 minutách se přidá roztok uhličitanu sodného (10%) a organická fáze se oddělí a suší (K2CO3). Sušící činidlo se promyje methylenchloridem a rozpouštědlo se odpaří ze spojených organických fází a získá se 1,11 g (100 %) titulní sloučeniny.

(iii) H-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HC1

100 mg (0,19 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) rozpuštěného v 15 ml ethanolu se hydrogenuje za přítomnosti 38 mg 10% Pd/C po 1,5 h. Zředěním reakční směsi destilovanou vodou a odstraněním katalyzátoru filtrací s následujícím odstraněním ethanolu ve vakuu a sušením vymražením se získá titulní sloučenina jako bezbarvý prášek. Peptid se nakonec převede na dihydrochlorid rozpuštěním v kyselině chlorovodíkové s následujícím sušením vymražením a získá se 90 mg (100 %) titulní sloučeniny.

Ή-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,0-2,0 (m, 13H), 2,0-2,3 m, 3H), 2,3-2,5 (m, 1H), 3,6-3,7 (m, 1H), 3,8-3,9 (m, 1H), 4,3^1,5 (t, 1H), 4,5^1,6 (m, 3H), 7,4-7,6 (m, 3H), 7,6-7,9 (m, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,2, 170,0, 174,9.

Příklad 16

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

Směs 268 mg (0,5 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (viz příprava výchozích materiálů), 90 μΐ (0,55 mmol) benzylbromacetátu a 181 mg (1,3 mmol) K₂CO₃ ve 2 ml acetonitrilu se zpracovává ultrazvukem při 40 °C 2,5 h. Směs se filtruje přes hyflo a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a získá se zbytek, který se podrobí rychlé chromatografii za použití ethylacetátu jako elučního činidla za získání 194 mg (57 %) titulní sloučeniny.

HOOC-CH-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HC1

194 mg (0,28 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z) rozpuštěného v 10 ml ethanolu se hydrogenuje za přítomnosti 77 mg 10% Pd na uhlí 3 hodiny. Reakční směs se zředí vodou a katalyzátor se odstraní filtrací. Odpařením ethanolu ve vakuu s následujícím sušením vymražením se

-79CZ 290104 B6 získá bílý zbytek. Přidá se kyselina chlorovodíková a výsledný roztok se nakonec suší vymražením a získá se 115 mg (68 %) požadovaného produktu.

‘H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,0-1,2 (m, 2H), 1,2-1,5 (m, 3H), 1,5-2,0 (m, 8H), 2,0-2,3 (m, 3H), 2,3-2,5 (m, 1H), 3,6-3,8 (m, 1H), 3,8-4,0 (m, 3H), 4,4-4,7 (m, 4H), 7,5-7,7 (d, 2H), Ί,Ί7,9 (d, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,1, 168,2, 169,3,174,6.

Příklad 17

HOOC-CH₂-(Me)(R)Cha-Pro-Pab (i) Boc-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z)

K roztoku 0,8 g (1,67 mmol) Boc-(Me)(R)Cha-Pro-OSu (viz příprava výchozích materiálů) ve 3 ml DMF se přidá roztok 0,562 g (1,85 mmol) H-Pab(Z) (viz příprava výchozích materiálů) ve 3 ml DMF a pH výsledného roztoku se upraví na 8-9 N-methylmorfolinem, potom se roztok 2 dny míchá při teplotě místnosti. Roztok se nalije do vody a výsledná směs se extrahuje 3 x 25 ml ethylacetátu. Organický roztok se promyje 1M roztokem KHSO4, 10% roztokem NaHCO₃, vodou a solankou a suší se (Na₂SO4). Odpařením rozpouštědla se získá 0,65 g (60 %) titulní sloučenina jako žlutobílého prášku.

(ii) Me-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

Roztok 0,60 g (0,92 mmol) Boc-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z) v 50 ml EtOH se nasytí HC1 při 0 °C a roztok se uloží přes noc v chladničce. Výsledný roztok se dosucha odpaří a zbytek se rozpustí v Na₂CO₃ roztoku, extrahuje 3 x 25 ml ethylacetátu. Extrakt se promyje solankou a odpařením se získá 0,4 g (79 %) sloučeniny jako bílého vločkovitého prášku.

‘H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,8-1,0 (m, 2H), 1,1-1,4 (m, 5H), 1,4-1,55 (m, 1H), 1,6-1,9 (m, 10H), 1,9-2,05 (m, 2H), 2,05-2,2 (m, 2H), 2,19 (s, 3H), 2,4-2,5 (m, 1H), 3,28 (dd, 1H), 3,41 (q, 1H), 3,62 (m, 1H), 4,42 (m, 2H), 4,61 (d, 1H), 5,2 (s, 2H), 7,2-7,45 (m, 7H), 7,72 (t, 1H), 7,79 (d, 2H).

(iii) BnOOC-CH2-(Me)-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

Směs 0,40 g (0,73 mmol) Me-(R)Cha-Pro-Pab(Z), 0,17 g, BnOOC-CH₂Br a 0,20 g (2 ekv. K₂CO₃ (rozdrcený ve hmoždíři) v 15 ml CH₃CN se míchá při teplotě místnosti přes noc. Výsledná směs se odpaří, přidá se ethylacetát a směs se promyje vodou a solankou, suší (Na₂SC>4) a odpaří. Surový produkt (0,69 g) se podrobí rychlé chromatografii (CH₂Cl₂/MeOH 10/1) a získá se 0,39 g (77 %) světle žlutého, velmi viskózního oleje.

HOOC-CH₂-(Me)-(R)Cha-Pro-Pab

K roztoku 0,39 g (0,56 mmol) BnOOC-CHr-(Me)-(R)Cha-Pro-Pab(Z) ve 30 ml EtOH se přidá 0,1 g Pd/C (10%) a substance se hydrogenuje při atmosférickém tlaku. Roztok se filtruje a odpaří, potom se zbylý sirupovitý materiál suší vymražením a získá se 0,25 g (95 %) sloučeniny jako bílého krystalického prášku.

'H-NMR (300 MHz, CD₃OD): δ 0,85-1,1 (m, 2H), 1,1-1,4 (m, 6H), 1,5-1,85 (m, 9H), 1,9-2,05 (m, 3H), 2,05-2,15 (m, 1H), 2,15-2,3 (m, 1H), 2,57 (s, 3H), 3,32 (d, 1H), 3,55-3,75 (m, 2H),

3,95-4,1 (m, 2H), 4,35-4,5 (m, 3H), 7,55 (d, 2H), 7,72 (d, 2H).

-80CZ 290104 B6 ^,3C-NMR (75 MHz, CD₃OD): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 168,4, 171,5, 174,7, 175,1.

Příklad 18

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

Směs 149 mg (0,28 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (viz příklad 15) a 66 mg (0,4 mmol) benzylakrylátu v 1,5 ml ethanolu se udržuje při teplotě místnosti 36 h. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se podrobí rychlé chromatografii za použití ethylacetátu jako elučního činidla. Získá se 124 mg (64 %) požadovaného produktu.

(ii) HOO-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HC1

124 mg (0,18 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z) rozpuštěného v 10 ml ethanolu se hydrogenuje 1 h za přítomnosti 55 mg 10% Pd/C. Katalyzátor se odstraní filtrací a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Zbytek se rozpustí v kyselině chlorovodíkové a výsledný roztok se suší vymražením a získá se 87 mg (79 %) titulní sloučeniny.

’Η-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,0-2,0 (m, 13H), 2,0-2,2 (m, 3H), 2,2-2,4 (m, 1H), 2,7-2,8 (t, 2H), 3,2-2,3 (m, 1H), 3,3-3,4 (m, 1H), 3,5-3,7 (m, 1H), 3,7-3,9 (m, 1H), 4,3-4,6 (m, 4H), 7,47,6 (m, 2H), 7,7-7,8 (m, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,0, 168,3 a 174,6. (Dva uhlíky s překrývají).

Příklad 19

HOOC-CH₂-CH₂-(Me)(R)Cha-Pro-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH2-CH₂-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z)

K roztoku 274 mg (0,5 mmol) Me(R)Cha-Pro-Pab(Z) (viz příklad 17) v 5 ml EtOH (99 %) se přidá 97,3 mg (0,6 mmol) benzylakrylátu a reakční směs se míchá při teplotě místnosti. Po 72 h se přidá dalších 16,2 mg (0,1 mmol) benzylakrylátu a v míchání se pokračuje 24 h. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se podrobí lychlé chromatografii (CH₂Cl₂/MeOH(NH₃-nasycený), 95/5) a získá se 198 mg (50 %) titulní sloučeniny.

’Η-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,8-2,0 (několik m, 16H), 2,14 (s, 3H), 2,24-2,33 (m, 2H), 2,382,46 (m, 1H), 2,67 (t, 2H), 3,32-3,40 (m, 2H), 3,71 (m, 1H), 4,36-4,44 (m, 2H), 4,58 (m, 1H), 5,03 (zjevný s, 2H), 5,20 (s, 2H), 7,25-7,37 (m, 10H), 7,43 (d, 2H), 7,64 (t, 1H(NH)), 7,81 (d, 2H).

¹³C-NMR (125 MHz, CDC1₃): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 164,7, 167,9, 171,7, 172,3 a 172,6.

(ii) HOOC-CH2-CH₂-(Me)(R)Cha-Pro-Pab x 2 HC1

K roztoku 198 mg (0,27 mmol) OOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z) v 10 ml EtOH a 1 ml HC1 se přidá 60 mg 5% Pd/C (obsahuje 50 % H₂O hmotn.) a směs se hydrogenuje při atmosférickém tlaku 4 h. Katalyzátor se odfiltruje a rozpouštědlo se odpaří. Zbylý olej se rozpustí ve vodě a vymražením se získá titulní sloučenina ve kvantitativním výtěžku.

-81 CZ 290104 B6 ’Η-NMR (500 MHz, D₂O): δ 1,08-1,2 (m, 2H), 1,2-1,42 (m, 4H), 1,68-1,91 (m, 5H), 1,93-2,08 (m, 2H), 2,09-2,26 (m, 3H), 2,49 (m, 1H), 2,95 (m, 2H), 3,03 (s, 3H), 3,60 (zjevný bs, 2H), 3,82 (m, 1H), 3,98 (m, 1H), 4,53 (m, 1H), 4,61 (bs, 2H), 4,64 (m, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,97 (d, 2H).

ⁿC-NMR (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,2, 167,8 a 174,5. Dva píky se patrně překrývají.

Příklad 20

HOOC-CH₂-(R nebo S)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/a x 2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

Směs 0,50 g (0,94 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (voz příklad 15) a 0,28 g (0,94 mmol) dibenzylmaleátu ve 20 ml EtOH se udržuje při teplotě místnosti 5 dnů. Odpařením rozpouštědla s následující rychlou chromatografií za použití CH₂Cl₂/MeOH jako eluentu se získá 0,15 g (19%) diastereomemí směsi.

’Η-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,7-2,1 (m, 17H), 2,3-2,4 (m, 1H), 2,5-2,8 (m, 2H), 3,2-3,7 (m, 4H), 4,46 (d, 1H), 4,65 (bd, 1H), 4,81 (d, 1H), 4,9-5,1 (m, 3H), 5,20 (s, 2H), 7,1-7,4 (m, 15H), 7,4-7,5 (m, 2H), 7,6-7,8 (m, 3H).

(ii) HOOC-CHHR nebo S)CH(COOH)-<R)Cha-Pro-Pab/a x 2 HC1

Směs 0,15 g (0,18 mmol) HOOC-CH₂-(R nebo S)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab(Z) se rozpustí v 5 ml ethanolu a hydrogenuje se nad 5% Pd/C při atmosférickém tlaku 1 h a získá se HOOCCHr-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab. Dva diastereomeiy se oddělí pomocí RPLC za použití (CH3CN/0,lM NH4OAC 15/85) jako elučního činidla a následuje vymražení dosucha zHCl. Tento diastereomer se eluuje jako první ze sloupce. Výtěžek 19 mg (18 %).

'H-NMR (500 MHz, D₂O, směs dvou rotamerů) hlavní rotamer: δ 1,0-2,0 (m, 15H), 2,15 (m, 2H), 2,44 (m, 1H), 3,00 (bd, 1H), 3,05 (bd, 1H), 3,69 (m, 1H), 3,84 (m, 1H), 3,97 (bs, 1H), 4,54,7 (m, 3H), 7,62 (d, 2H), 7,87 (d, 2H).

^,3C-NMR (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,2, 168,3, 173,8, 174,6 a 178,2.

Příklad 21

IIOOC-CH₂-(R nebo S)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/b x 2 HC1

Titulní sloučenina se získá za použití stejného postupu jak je popsán v příkladu 20 pro HOOCCH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab. tento diastereomer opouští kolonu po prvním diastereomeru. Výtěžek 19 mg (18 %).

’HNMR (500 MHz, D₂O, směs dvou rotamerů) hlavní rotamer: δ 1,0-2,0 (m, 14H), 2,15-2,25 (m, 3H), 2,44 (m, 1H), 3,11 (bd, 1H), 3,19 (bd, 1H), 3,71 (m, 1H), 3,92 (m, 1H), 4,03 (bs, 1H), 4,5-4,7 (m, 3H), 7,58 (d, 2H), 7,84 (d, 2H).

Odštěpené signály pocházející z minoritního rotameru se objevují při δ 7,66 (d) a 7,91 (d).

-82CZ 290104 B6 ^|JC-NMR (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,3, 168,5 a 174,7. Dva uhlíky se pravděpodobně překrývají.

Příklad 22

HOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab/a x 2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

0,246 g (0,460 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (viz příklad 15), 0,140 g, (1,01 mmol) K₂CO₃a 0,145 g (0,506 mmol) BnOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-Br ((viz příprava výchozích materiálů) se smísí v 6 ml acetonitrilu. Směs se míchá při 50 °C 2 h 30 minut, rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozdělí mezi vodu a ethylacetát. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje jednou ethylacetátem. Spojené organické vrstvy se suší (Na₂SO₄), filtrují a odpařením se získá 0,350 g oleje. Surový produkt se čistí rychlou chromatografii za použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH 97/3, 95/5, 92,5/7,5 a získá se 0,227 g (67 %) titulní sloučeniny.

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 25,0, 26,0, 26,2, 26,7, 32,4, 34,2, 34,4, 40,8, 40,9, 42,9, 46,7, 50,5, 58,4, 60,2, 67,0, 67,2, 127,5, 127,8, 128,2, 128,3, 128,4, 128,5, 128,6, 134,1, 135,2, 137,0, 142,6, 164,7, 168,9, 169,3, 170,4, 172,2, 175,0.

(ii) HOOC-CH₂-NH-CO-CH2-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HC1

0,089 g (0,12 mmol) BnOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z) se smísí se 30 mg 5% Pd/C a rozpustí v 10 ml kyseliny octové. Směs se hydrogenuje při atmosférickém tlaku jeden a půl hodiny, filtrací katalyru přes hyflo a sušením vymražením s 1 ml kyseliny chlorovodíkové se získá 0,058 g (82 %) požadovaného produktu.

’Η-NMR (300 MHz, D₂O): δ 0,9-2,2 (m, 16H), 2,25-2,47 (m, 1H), 3,55-3,7 (m, 1H), 3,7-4,1 (m, 5H), 4,42 (t, 1H), 4,48-4,6 (m, 3H), 7,51 (d, 2H), 7,77 (d, 2H).

^I3C-NMR (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 166,8, 167,1, 168,2, 173,6 a 174,6.

Příklad 23

EtOOC-CH2-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab x HOAc (i) EtOOC-CH=CH-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (viz příklad 15) (275 mg, 0,51 mmol) se zpracuje sK₂CO₃ (141 mg, 1,02 mmol) a BrCH₂CH=CHCOOEt (108 mg, 0,56 mmol) vCH₃CN (10 ml) při 20 °C 20 h. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v EtOAc (5 ml/H₂0 (2 ml). Organická vrstva se oddělí, suší (Na₂SO₄) a zahuštěním se získá 397 mg oleje, který se čistí rychlou chromatografii za použití EtOAc/heptanu, 1/4 jako elučního činidla a získá se 252 mg (77 %) titulní sloučeniny.

’H-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,8-1,05 (m, 2H), 1,1-1,45 (m, 3H), 1,3 (t, 3H), 1,5-1,9 (m, 8H),

1,95-2,05 (m, 1H), 2,1-2,15 (m, 1H), 2,45-2,55 (m, 1H), 3,0 a 3,15 (dva d, 2H), 3,35-3,45 (m, 2H), 3,55-3,65 (m, 1H), 4,15 (q, 2H), 4,3 (d, 1H), 4,6-4,7 (m, 2H), 5,2 (s, 2H), 5,85 (d, 1H), 6,75 (dt, 1H), 5,3-5,4 (m, 4H), 7,45 (d, 2H), 7,85 (d, 2H).

-83CZ 290104 B6 ³C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 165,7, 171,2 a 175,7 (dva píky se pravděpodobně překrývají) (ii) EtOOC-CH₂-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab x HOAc

EtOOCCH=CHCH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (250 mg, 0,38 mmol) se rozpustí v ethanolu a hydrogenuje se za přítomnosti 5% Pd/C přibližně 2 hodiny. Odstraněním katalyzátoru filtrací a odpařením rozpouštědla ve vakuu se získá po čištění RPLC za použití (CH3CN/0,lM NHtOAc) jako elučního činidla 70 mg (36 %) požadovaného produktu.

’Η-NMR (500 MHz, CD3OD): δ 0,9-1,05 (m, 2H), 1,15-1,55 (m, 5H), 1,25 (t, 3H), 1,6-1,85 (m, 7H), 1,95-2,6 (m, 8H), 3,55-3,65 (m, 2H), 3,8 (m, 1H), 4,1 (q, 2H), 4,45 (m a d, 2H), 4,55 (d, 1H), 7,55 a 7,5 a 7,75 (dva d, 4H).

¹³C-NMR (75 MHz, CD3OD): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 168,3, 173,2, 174,6 a 174,9.

Příklad 24

Ph(4-COOH)-SO₂-(R)Cha-Pro-Pab x HC1 (i) Ph(4-COOH)-SO₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z) mg (0,32 mmol) kyseliny 4-chlorsulfonylbenzoové se přidá při teplotě ledové lázně k roztoku 156 mg (0,29 mmol) H-fR)Cha-Pro-Pab(Z) (viz příklad 15) a 59 mg (0,58 mmol) triethylaminu ve 4 ml methylenchloridu. Směs se pomalu nechá ohřát na teplotu místnosti a po 24 hodinách se promyje vodou a suší (Na₂SO₄). Odstraněním rozpouštědla ve vakuu a čištěním zbytu rychlou chromatografii za použití ethylacetátu/methanolu 9:1 a pak methylenchloridem/methanolem 3:1 jako elučním činidlem se získá 82 mg (39 %) produktu.

(ii) Ph(4-COOH)-SO₂-(R)Cha-Pro-Pab x HC1 mg (0,11 mmol) Ph(4-COOH)-SO₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z) se hydrogenuje nad 5% Pd/C v EtOH. Katalyzátor se odfiltruje, rozpouštědlo se odpaří a surový produkt se čistí pomocí RPLC za použití (CH₃CN/O,1M NH₄OAc 1/4) jako elučního činidla a nakonec se převede na hydrochloridovou sůl vymražením z HC1 a získá se tak 21 mg (29 %) produktu.

'H-NMR (300 MHz, CD3OD, směs dvou rotamerů): δ 0,45-1,82 (m, 13H), 1,90-2,30 (m, 4H),

2,95—4,16 (několik m, celkem 3H), 4,35-4,68 (m, 3H), 7,54 (d, 2H), 7,74 (d, 1H), 7,80 (d, 1H), 7,90-8,00 (m, 2H), 8,05-8,22 (m, 2H).

¹³C-NMR(75 MHz, CD₃OD): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 168,4, 173,4,173,9 a 174,2.

MS m/z 584 (Mf + 1)

Příklad 25

H-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

3,57 g (18,6 mmol) EDC se přidá při -15 °C ke směsi 7,11 g (18,6 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-OH (viz příprava výchozích materiálů), 9,07 g (74,2 mmol) DMAP a 5,26 g (18,6 mmol) H-Pab(Z) (viz příprava výchozích materiálů) ve 200 ml DMF. teplota se nechá stoupnout na 20 °C přes

-84CZ 290104 B6 noc. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a přidá se toluen a voda. Organická fáze se promyje vodou, 1M KHSO4, 10% Na₂CO3 a solankou, sušením (MgSO₄) a odpařením rozpouštědla ve vakuu se získá 13,63 g zbytku, který se podrobí rychlé chromatografii na silikagelu za použití ethylacetátu/toluenu 2:1 jako elučního činidla a získá se 9,5 g (79 %) titulní sloučeniny.

Ή-NMR (300 MHz, CDCh): δ 0,7-1,0 (m, 2H), 1,0-2,2 (m, 25H), 2,3-2,5 (m, 1H), 2,9-3,1 (m, 1H), 3,8 (d, 1H), 4,3 (dd, 1H), 4,4-4,6 (m, 2H), 5,1 (s, 2H), 5,1-5,3 (m, 2H), 7,2-7,3 (m, 5H), 7,35 (d, 2H), 7,4-7,5 (m, 1H), 7,75 (d, 2H).

^I3C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidinové a karbonylové uhlík: δ 156,8, 164,6, 168,2, 170,0 a 173,4.

(ii) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

Chlorovodík se probublává roztokem 9,5 g (14,7 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) ve 100 ml ethylacetátu při teplotě místnosti do nasycení. Po 10 min se přidá roztok Na₂CO₃ (10%) a organická fáze, která se oddělí se suší (K₂CO₃) a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a získá se tak titulní sloučenina ve kvantitativním výtěžku.

Ή-NMR (500 MHz, CD3OD): δθ,85-1,05 (m, 2H), 1,15-1,90 (m, 16H), 2,25-2,35 (m, 1H), 3,20-3,30 (m, 1H), 3,80-3,90 (d, 1H), 3,90-4,0 (m, 1H), 4,4-4,5 (dva d, 2H), 4,7 (br s, 5H), 5,15 (s, 2H), 5,20 (m, 1H), 7,25-7,45 (m, H), 7,85 (d, 2H).

(iii) H-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HC1 mg (0,1 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) rozpuštěného ve směsi 5 ml ethanolu a 0,45 ml 1M kyseliny chlorovodíkové se hydrogenuje za přítomnosti 33 mg 10% Pd/C 1,5 h. Katalyzátor se odstraní filtrací a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se zbytek se podrobí RPLC za použití 0,lM NH4OAC/CH3CN jako elučního činidla. Čištěný peptid se nakonec převede na dihydrochloridovou sůl rozpuštěním v kyselině chlorovodíkové s následujícím sušením vymražením. Výtěžek činí 17 mg (35 %) titulní sloučeniny.

Ή-NMR (300 MHz, D₂O, 2 rotamery, 3:1 směs): δ 1,0-2,0 (m, 18H), 2,33 (d, 1H), 3,4-3,5 (m, 1H), 3,8-3,9 (m, 1H), 4,4-4,8 (m, 3H), 5,15-5,25 (m, 1H), 7,5-7,7 (m, 2H), 7,8-8,0 (m, 2H).

Odštěpené signály z minoritních rotamerů se objevují při δ: 0,5-0,7 (m) a 3,0-3,1 (m) ¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,3,171,6 a 173,6.

Odštěpené signály z minoritních rotamerů se objevují při δ: 170,6 a 172,4.

Příklad 26

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

Směs 742 mg (1,35 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (viz příklad 25), 230 ml (1,45 mmol) benzylbromacetátu a 558 mg (4 mmol) K2CO3 ve 4 ml acetonitrilu se sonifikuje při 40 °C 40 minut. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se podrobí rychlé chromatografii a získá se 720 mg (77 %) požadovaného produktu.

-85CZ 290104 B6 ’Η-MR (500 MHZ, CDC1₃): δ 0,8-1,0 (m, 2H), 1,1-1,9 (m, 16H), 2,1-2,4 (br, s, 1 nebo 2H), 2,4 (d, 1H), 3,0 (m, 1H), 3,25 (d, 1H), 3,45 (d, 1H), 3,55-3,65 (m, 1H), 3,7 (m, 1H), 4,35 (dd, 1H), 4,55 (dd, 1H), 4,80 (dva d, 2H), 5,2 (s, 2H), 5,3 (m, 1H), 7,2-7,4 (m, 12H), 7,8 (d, 2H).

^I3C-NMR (125 MHz, CDClj): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 164,5, 167,9, 170,5, 173,4 a 175,5.

(ii) HOOC-CHr-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HC1

509 mg (0,73 mmol) BnOOC-CHr-(R)Cha-Pic-Pab(Z) rozpuštěného ve 25 ml ethanolu se hydrogenuje za přítomnosti 259 mg 10% Pd/C po 4 h. Katalyzátor se odstraní filtrací a odpařením rozpouštědla ve vakuu se získá zbytek, který se rozpustí v destilované vodě. Přidá se kyselina chlorovodíková a roztok se nakonec suší vymražením a získá se 281 mg (79 %) titulní sloučeniny.

’Η-NMR (500 MHz, D₂O, směs rotamerů 4:1): hlavní rotamer: δ 1,0-2,0 (m, 18H), 2,25-2,4 (m, 1H), 3,4-3,5 (m, 1H), 3,8-3,95 (m, 3H), 4,55-4,65 (dva d, 2H), 5,15 (m, 1H), 7,55-7,75 (m, 2H), 7,8-8,0 (m, 2H).

^,3C-NMR (125 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,3, 169,9,170,3 a 173,5.

Odštěpený signál pro minoritní rotamer se objevuje při δ 166,9,169,2 a 172,0.

Příklad 27

HOOC-CH₂-(R nebo S)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/a x 2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

Směs 592 mg (1,1 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (viz příklad 25) a 332 mg (1,1 mmol) dibenzylmaleátu v 1 ml ethanolu se udržuje při teplotě místnosti 1 týden. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se podrobí rychlé chromatografií za použití methanolu/methylenchloridu jako elučního činidla a získá se 275 mg (30 %) diastereomemí směsi.

(ii) HOOC-CH₂-(R nebo S)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/a x 2 HC1

275 mg BnOOC-CHr^RjSjCHÍCOOBnj-XRjCha-Pic-PabíZ) rozpuštěného ve 20 ml 95% ethanolu se hydrogenuje 18 hodin za přítomnosti 75 mg 10% Pd/C. Směs se zfiltruje přes hyflo a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Přídavkem vody a pak vysušením vymražením se získá 166 mg HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pic-Pab. Dva diastereomery se oddělí pomocí RPLC za použití (CH₃CN/O,1M nH₄OAc 1/4) jako elučního činidla s následujícím vysušením vymražením z HC1. Tento diastereomer eluuje z kolony jako první. Výtěžek 9 mg.

Odštěpené signály z minoritního rotamerů se objevují při δ 4,0 (t) a 7,7 (d).

Příklad 28

HOOC-CH₂-(R nebo S)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/b x 2 HC1

Titulní sloučenina se získá použitím stejného způsobu jak je popsán v příkladu 27 pro HOOCCH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab. Tento diastereomer opouští kolonu po uvedeném prvním diastereomeru.

-86CZ 290104 B6 'H-NMR (500 MHz, D₂O, směs rotamerů): δ 1,0-2,0 (m, 18H), 2,25-2,4 (m, 1H), 3,0-3,2 m, 2H), 3,5 (t, 1H), 3,85 (d, 1H), 4,15 (s, 1H), 4,5^1,7 (m, 3H), 5,15 (s, 1H), 7,55 (d, 2H), 7,8 (d, 2H).

Odštěpené signály z minoritního rotamerů se objevují při δ 4,35 (s), 7,65 (d) a 7,9 (d).

Příklad 29

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

Směs 851 mg (1,55 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (viz příklad 25) a 269 mg (1,71 mmol) benzylakrylátu v 5 ml ethanolu se udržuje při teplotě místnosti 40 h. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se podrobí rychlé chromatografii za použití methylenchloridu/methanolu jako elučního činidla a získá se 812 mg (74 %) produktu.

'H-NMR (500 MHz, CDCI3): δ 0,8-1,0 m, 2H), 1,1-1,9 (m, 16H), 2,3-2,5 (m, 3H), 2,6-2,8 (m, 2H), 3,0 (m, 1H), 3,5 (m, 1H), 3,6-3,7 (m, 1H), 4,3 (dd, 1H), 4,6 (dd, 1H), 4,95-5,05 (dva d, 2H), 5,2 (s, 2H), 5,3 (m, 1H), 6,5-6,9 (br s, 1H), 7,0-7,1 (m, 1H), 7,2-7,5 (m, 12H), 7,75-7,85 (d, 2H), 9,3-9,7 (br s, 1H).

(ii) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HC1

780 mg (1,1 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z) rozpuštěného ve 25 ml ethanolu se hydrogenuje 4 h za přítomnosti 306 mg 15% pd/C. Katalyzátor se odstraní filtrací a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Zbytek se rozpustí v kyselině chlorovodíkové a výsledný roztok se vysuší vymražením a získá se 481 mg (78 %) titulní sloučeniny.

'H-NMR (500 MHz, D₂O): δ 0,95-1,1 (m, 2H), 1,15-1,9 (m, 16H), 2,2-2,3 (m, 1H), 2,7-2,8 (t, 2H), 3,2-3,3 (m, 3H), 3,4-3,5 (m, 1H), 3,75-3,85 (m, 1H), 4,4-4,6 (m, 3H), 5,15 (m, 1H), 7,5-

7,6 (m, 2H), 7,8-7,9 (m, 2H), 8,6-8,7 (m, 1H).

¹³C-NMR(125 MHz, CD3OD): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 170,6,175,9, 179,5 a 183,5.

Příklad 30

HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab x HOAc (i) EtOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

0,12 g ethyloxalylchloridu se přidá ke směsi 0,42 g (0,77 mmol) H-(R)Cha-PÍc-Pab(Z) (viz příklad 25) a 0,21 g (1,5 mmol) K₂CO₃ v 10 ml CH₃CN při teplotě místnosti. Po 2 hodinách se přidá další množství 0,07 g (0,5 mmol) ethyloxalylchloridu. Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se rozpustí v CH₂C1₂ a promyje se vodou. Odpařením a rychlou chromatografií (toluen:ethylacetát 1:2, potom CH₂Cl₂:methanol) se získá 0,21 g (42 %) produktu.

(ii) HOO-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

0,21 g (0,32 mol) EtOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) se rozpustí ve 3 ml THF a přidá se 0,17 g (4,2 mmol) LiOH rozpuštěného ve 3 ml vody. Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a pak

-87CZ 290104 B6 se nalije na ethylacetát/vodu. Fáze se oddělí a organická fáze se extrahuje roztokem K2CO3. Vodná fáze se okyselí 0,5M HC1 (pH 1) a extrahuje se CH2CI2, suší nad Na₂SO₄ a odpařením se získá 80 mg produktu.

(iii) HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab x HOAC

HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) se hydrogenuje nad 5% Pd/C v EtOH. Katalyzátor se odfiltruje a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se podrobí čištění pomocí RPLC a získá se titulní sloučenina.

Ή-NMR (500 MHz, DMSO-dé): δ 0,8-1,0 (m, 2H), 1,1-1,75 (m, 15H), 1,86-1,94 (m, IH), 2,13-2,2 (m, IH), 3,75-3,81 (m, IH), 54,32, 4,44 (AB, 2H), 4,71-4,77 (m, IH), 4,98-5,02 (m, IH), 7,41 (d, 2H), 7,75 (d, 2H), 8,1-8,15 (m, IH), 8,22-8,27 (m, IH), 9,32 (široký s), 9,90 (široký s). Signál jednoho z protonů (3,25) je částečně... signál rozpouštědla.

MSm/z486 (M⁺+ 1)

Příklad 31

HOOC-CH₂-CO-(R)Cha-Pic-Pab (i) MeOOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

0,39 g (0,72 mmol) H-(R)-Cha-Pic-Pab(Z) (viz příklad 25) a 0,9 g (0,8 mmol) monomethylmalonátu se rozpustí ve 40 ml CH₂C1₂ a přidá se 0,16 g (0,8 mmol) DCC. Roztok se míchá při teplotě místnosti přes noc. Vysrážený DCU se odfiltruje a filtrát se promyje 0,3M KHSO4 a roztokem KHCO₃ a suší se (NaSO₄). Odpařením rozpouštědla a následující rychlou chromatografií za použití toluenu/ethylacetátu (1/3) jako elučního činidla se získá 0,27 g, (58 %) požadovaného produktu.

(ii) MeOOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab mg (0,14 mmol) MeOOC-CH₂-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) se rozpustí v 10 ml ethanolu a hydrogenuje za přítomnosti 5% Pd/C 5 hodin. Katalyzátor se odstraní filtrací a odpařením rozpouštědla se získá 50 mg (70 %) titulního produktu.

Ή-NMR (300 MHz, C₃OD): δ 0,85-1,1 (m, 2H), 1,1-1,9 (m, 16H), 2,35-2,45 (m, IH), 3,2-3,4 (m, 3H), 3,7 (s, 3H), 3,95-4,05 (m, IH), 4,4-4,55 (m, 3H), 5,15-5,25 (m, IH), 7,4-7,55 (m, 2H), 7,7-7,85 (m, 2H).

ⁿC-NMR (75 MHz, CD3OD): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 168,2, 168,7, 170,0, 172,4 a 174,6.

MSm/zóMÍM* + 1) (iii) HOOC-CH₂-CO-(R)Cha-Pic-Pab

K roztoku 0,14 g (0,27 mmol) meOOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab v 5 ml methanolu se přidají 2 ml 0,5M NaOH při teplotě místnosti. Po 5 hodinách míchání se přidá voda a methanol se odstraní ve vakuu. Vodná fáze se suší vymražením. Rozpustný materiál se extrahuje z nerozpustných anorganických solí absolutním ethanolem. Pevná látka zbylá po odpaření ethanolu se suspenduje ve vodě a filtrací se izoluje 70 mg (52 %) titulní sloučeniny.

Ή-NMR (300 MHz, DMSO-d₆): δ 0,8-1,0 (m, 2H), 1,0-1,9 (m, 16H), 2,15-2,30 (m, IH), 2,58, 2,86 (AB, 2H), 3,8-3,95 (m, IH), 4,2-4,5 (m, 2H), 4,7-4,85 (m, IH), 4,95-5,05 (m, IH), 7,40 (d,

-88CZ 290104 B6

2H), 7,77 (d, 2H), 8,2-8,3 (m, 1H), 9,3-9,4 (m, 1H), 9,90 (široký s, 3H). Signál jednoho z protonů (3,21) je částečně zastřen signálem rozpouštědla.

^I3C-NMR (75 MHz, DMSO-dé): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 165,8,168,8,169,9,172,2 a 172,4.

MS m/z 500 (M⁺ + 1)

Příklad 32

MeOOC-CH₂-CO-(R)Cha-Píc-Pab

Viz příklad 31 (ii) výše.

Příklad 33

H₂N-CO-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab (i) H₂N-CO-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

Alkylace 455 mg (0,83 mmol) H-fR)Cha-Pic-Pab(Z) (viz příklad 25) 80 mg (0,86 mmol) chloracetamidu ve 3 ml acetonitrilu za přítomnosti 395 mg (2,86 mmol) uhličitanu draselného se při zpracování ultrazvukem při 40 °C umění na extrémně suspenzní reakci. Ani přídavek 230 mg (2,6 mmol) bromidu lithného neposkytne zlepšení v reakční rychlosti. Avšak přídavek jodidu lithného a zahřívání/upracování ultrazvukem poskytne malá množství produktu podle TLC. Zpracováním přídavkem vody, extrakcí ethylacetátem/toluenem, sušením organické fáze (MgSO₄) a odstraněním rozpouštědla ve vakuu se získá zbytek, který se podrobí rychlé chromatografii za použití MeOH/CH₂Cl₂ jako elučního činidla. Získá se 118 mg (24 %) požadovaného produktu.

(ii) H₂N-CO-CH2-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HC1

118 mg (0,2 mmol) H₂N-CO-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z) rozpuštěného v 10 ml 95% ethanolu se hydrogenuje za přítomnosti 143 mg 10% Pd/C 2 h. Směs se zředí destilovanou vodou a kyselinou chlorovodíkovou a zfiltruje se přes hyflo. Sušením vymražením se získá 26 mg (24 %) požadovaného produktu.

’H-NMR (300 MHz, CDjOD): δ 0,9-1,1 (m, 2H), 1,1-1,9 (m, 16H), 2,3 (d, 1H)., 3,4 (t, 1H), 3,6 (AB-systém, 2H), 3,8 (d, 2H), 4,35 (t, 1H), 4,5 (s, 2H), 5,2 (s, 1H), 7,55 (d, 2H), 7,8 (d, 2H).

Příklad 34

Boc-(R)Cha-Pic-Pab mg (0,015 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (viz příklad 25) rozpuštěného v 5 ml ethanolu se hydrogenuje za přítomnosti 38 mg 10% Pd/C 4 h. Katalyzátor se odfiltruje a odpařením rozpouštědla ve vakuu s následujícím rozpuštěním zbytku ve vodě a sušením vymražením se získá

7,6 mg (95 %) produktu.

’Η-NMR (300 MHz, CD₃OD): δ 0,9-1,1 (m, 2H), 1,1-1,9 (m, 16H), 2,4 (d, 1H), 3,25 (t, 1H), 4,0 (d, 1H), 4,5 (AB-systém, 2H), 4,5^1,6 (m, 1H), 5,25 (s, 1H), 7,45 (d, 2H), 7,75 (d, 2H).

-89CZ 290104 B6

Příklad 35

Ac-(R)Cha-Pic-Pab x HCl (i) Ac-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

Acetylchlorid 0,06 g (0,8 mmol) se přidá ke směsi 0,37 g (0,68 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (viz příklad 25) a 0,19 g (1,35 mmol) K₂CO₃ v 10 ml CH₃CN při teplotě místnosti. Po míchání dalších 30 minut při teplotě místnosti se rozpouštědlo odstraní ve vakuu. Zbytek se rozpustí vCH₂C1₂ a promyje se vodou. Odpařením a lychlou chromatografií za použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH (99,9/0,1,99,8/0,2, 99,6/0,4,99,2/0,8 a 98,4/1,6) se získá 0,24 g (60 %) produktu.

(ii) Ac-(R)Cha-Pic-Pab x HCl

Ac-(R)Cha-Pic-Pab(Z) se hydrogenuje nad 5 % pd/C při atmosférickém tlaku. Po odfiltrování katalyzátoru a odpaření rozpouštědla se surový materiál podrobí čištění pomocí RPLC za použití CH₃CN/0,lM NH4OAC (35/65) jako elučního činidla. Odstraněním rozpouštědla a přebytku NH4OAC s následujícím sušením vymražením z 1M HCl se získá titulní sloučenina.

’Η-NMR (300 Mhz, CD₃OD): δ 0,85-1,1 (m, 2H), 1,15-2,0 (m, 19H), 2,35-2,47 (m, 1H), 3,23,33 (m, 1H), 3,95^1,05 (m, 1H), 4,46, 4,57 (ABX, 2H), 5,16-5,22 (m, 1H), 7,51 (d, 2H), 7,76 (d, 2H), 8,23 (m, 1H). Signál jednoho z protonů je úplně překryt signálem rozpouštědla.

’³C-NMR (75 MHz, CD₃OD): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 168,3, 172,5, 173,8,175,1,

MS m/z 456 (M⁺+ 1)

Příklad 36

Me-SOr-(R)Cha-Pic-Pab x HCl (i) Me-SOr-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

Roztok 48 mg (0,42 mmol) methansulfonylchloridu v 0,5 ml methylenchloridu se přidá při 0 °C k míchanému roztoku 209 mg (0,382 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (voz příklad 25) a 0,11 ml (0,763 mmol) triethylaminu v 5 ml methylenchloridu. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti přes noc. Promytím vodou s následujícím sušením (Na₂SO₄) a odpařením rozpouštědla ve vakuu se získá zbytek, který se podrobí rychlé chromatografii za použití ethylacetátu/methanolu (95/5) jako elučního činidla a získá se 159 mg (67 %) produktu.

(ii) Me-SOr-(R)Cha-Pic-Pab x HCl

150 mg (0,24 mmol) Me-SO₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z) rozpuštěného v 5 ml 95% ethanolu a 1 ml vody se hydrogenuje za přítomnosti 5% Pd/C 4 h. Odstraněním katalyzátoru filtrací, přídavkem 0,2 ml 1M kyseliny chlorovodíkové a odpařením rozpouštědla ve vakuu se získá zbytek, který se rozpustí ve 2 ml vody a sušením vymražením poskytne 116 mg (86 %) produktu.

'H-NMR (500 MHz, CD₃OD): δ 0,90-1,10 (m, 2H), 1,15-1,85 (m, 15H), 1,90 (bd, 1H), 2,30 (bd, 1H), 2,85 (s, 3H), 3,35 (dt, 1H), 3,90 (bd, 1H), 4,45 (AB-systém, 2H), 4,50-4,55 (m, 1H), 5,13 (dd, 1H), 7,50 (d, 2H), 7,75 (d, 2H).

’³C-NMR (125 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 166,8, 173,0 a 174,6.

-90CZ 290104 B6

Příklad 37

H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z)

EDC se přidá při -18 °C k míchanému roztoku 1,0 g (2,6 mmol) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPicOH (voz příprava výchozích materiálů), 1,28 g (10,5 mmol DMAP, 0,74 g (2,6 mmol) H-Pab-(Z) (viz příprava výchozích materiálů) ve 35 ml DMF. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti přes noc a rozpouštědlo se následně odstraní ve vakuu. Zbytek se rozpustí v CH2CI2 a organická vrstva se postupně promyje 0,3M KHSO₄, roztokem KHCO₃ a solankou. Sušením (Na₂SO₄) a odstraněním rozpouštědla se získá zbytek, který se podrobí rychlé chromatografíí za použití heptanu: ethylacetátu se 4 % methanolu jako elučního činidla a získá se 0,74 g (44 %) požadovaného produktu.

(ii) H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z)

0,68 g (1,05 mmol) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z) se rozpustí v ethylacetátu nasyceném HC1 (plynným). Roztok se míchá 1 h při teplotě místnosti. Přidá se voda a směs se zalkalizuje K₂CO₃. Vodná fáze se extrahuje ethylacetátem. Organická fáze se pak promyje vodou a suší (Na₂SO₄). Odpařením se získá 0,5 g (87 %) požadovaného produktu.

(iii) H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab x 2 HC1 mg (0,19 mmol) H-(R)Cha-betaPic(R,S)-Pab(Z) se rozpustí v 7 ml ethanolu a hydrogenuje se za přítomnosti 5% Pd/C 4 hodiny. Odstraněním katalyzátoru filtrací, odpařením rozpouštědla a sušením vymražením z 1M HC1 se získá 41 mg (71 %) produktu.

’Η-NMR (300 MHz, D₂O, 2 diastereomery 4/5 a rotamery): δ 0,8-2,16 (m), 2,5-2,77 (m, 3H), 3,13-3,45 (m, 3H), 3,68-3,94 (m, 1H), 4,18^1,41 (m, 1H), 4,41—4,52 (m, 3H), 7,46-7,57 (m, 2H), 7,72-7,83 (m, 2H).

Příklad 38

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z)

0,21 g (0,38 mmol) H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z) (viz příklad 37) se rozpustí ve 2 ml ethanolu. Přidá se 0,68 g (0,42 mmol) benzylakrylátu a roztok se 5 dnů míchá. Odpařením a rychlou chromatografíí s CH₂Cl₂/MeOH (95/5) jako elučním činidlem se získá 0,19 g (70 %) požadovaného produktu.

(ii) HOOC-CH2-CH₂-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab x 2 HC1

170 mg (0,24 mmol) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z) se rozpustí v 10 ml ethanolu a hydrogenuje se za přítomnosti 5% Pc/C 4 hodiny. Odstraněním katalyzátoru filtrací, odpařením rozpouštědla a sušením vymražením z 1M HC1 a vody se získá 103 mg (77 %) produktu.

*H-NMR (300 MHz, D₂O, směs 2 diastereomerů 4/5 a rotamerů): δ 0,92-2,03 (m, H), 2,51-2,78 (m, 1H), 3,21-3,52 (m,lH), 3,88^1,01 (m, 1H), 4,07-4,3 (m, 2H), 4,4-4,71 (m, 2H), 7,59 (d, 2H), 7,86 (d, 2H).

-91 CZ 290104 B6 ¹³C-NMR (300,13 MHz, D₂O, směs 2 diastereomerů 4/5 a rotamerů): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,0, 168,0, 168,1, 175,9, 176,0, 176,3, 176,4 a 178,2.

Příklad 39

HOOC-CH₂-(R)Cha-Val-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Val-Pab(Z)

1.77 g (9,2 mmol) EDC se přidá při -12 °C ke směsi 3,41 g (9,2 mmol) Boc-(R)Cha-Val-OH (viz příprava výchozích materiálů), 2,61 g (9,2 mmol) H-Pab(Z) (viz příprava výchozích materiálů) a 4,5 g (36,8 mmol) DMAP v 50 ml DMF. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti přes noc a zpracuje se ředěním vodou s následující extrakcí toluenu, etherem a ethylacetátem. Následným sušením (MgSC^) spojených organických extraktů, odstraněním rozpouštědla ve vakuu a rychlou chromatografií za použití CH₂Cl₂/MeOH jako elučního činidla se získá

2.77 g (47 %) požadovaného produktu.

(ii) H-(R)Cha-Val-Pab(Z)

Chlorovodík se probublává roztokem 2,77 g (4,4 mmol) Boc-(R)Cha-Val-Pab(Z) v 75 ml ethylacetátu. Po 15 minutách se přidá roztok uhličitanu sodného na pH 10 a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem. Sušením (uhličitan draselný) a odstraněním rozpouštědla ve vakuu se získá 1,8 g (77 %) H-(R)Cha-Val-Pab(Z).

(iii) BnOOC-CH2-(R)Cha-Val-Pab(Z)

Směs 326 mg (0,61 mmol) H-(R)Cha-Val-Pab(Z), 105 ml (0,67 mmol) benzylbromacetátu a 252 mg (1,83 mmol) uhličitanu draselného ve 2 ml acetonitrilu se zpracuje ultrazvukem po 2,5 h při 40 °C. Přidá se další acetonitril za účelem rozpuštění produktu a směs se filtruje a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Zbytek se čistí iychlou chromatografií za použití methanolu/methylenchloridu jako elučního činidla. Produkt se nakonec krystaluje z ethylacetátu a získá se 124 mg (30 %) bezbarvých krystalů.

(iv) HOOC-CH₂-(R)Cha-Val-Pab x 2 HC1

124 mg (0,18 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Val-Pab(Z) ve 20 ml ethanolu se hydrogenuje 2 hodiny za přítomnosti 25 mg 10% Pd/C. Přidá se 10 ml THF a v hydrogenací se pokračuje další 2 hodiny při 50 °C. Směs se filtruje přes hyflo a filtrační koláč se promyje zředěnou kyselinou chlorovodíkovou. Organická rozpouštědla se odstraní ze spojených filtrátů ve vakuu. Vymražením zbylého roztoku se získá 55 mg (50 %) požadované sloučeniny.

’Η-NMR (500 MHz, D₂O): δ 0,75-1,4 (m, 12H), 1,5-1,9 (m, 7H), 2,0-2,15 (bs, 1H), 3,45 (ABsystém, 2H), 4,1 (m, 2H), 4,5 (m, 2H), 7,5 (s, 2H), 7,7 (s, 2H), 8,9 (s, 1H).

Příklad 40

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Val-Pab x 2 HC1 (i) H-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z)

Titulní sloučenina se připraví kondenzací Boc-(R)Cha-Val-OH s H-Pab(Z) za použití pivaloyl kondenzace jak je popsána pro Boc-(R)Cha-Pic-OMe (viz příprava výchozích materiálů). Úplná

-92CZ 290104 B6 epimerizace valinu poskytne Boc-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z). Boc chránící skupina se odstraní stejným způsobem jak je popsán pro Boc-(R)Cha-Val-Pab(Z) (viz příklad 39) a získá se titulní sloučenina.

(ii) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z)

Roztok 1,007 g (1,9 mmol) H-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z) a 308 mg (1,9 mmol) benzylakrylátu ve 3 ml ethanolu se udržuje na 40 °C přes noc. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se čistí rychlou chromatografií za použití ethanolu/methylenchloridu (10/90) jako elučního činidla a získá se 1,086 g (82 %) titulní sloučeniny.

(iii) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Val-Pab x 2 HC1

1,086 g (1,6 mmol) BnOOC-CH₂-CHr-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z) se hydrogenuje ve 25 ml THF a 14 ml 0,5M kyseliny chlorovodíkové za přítomnosti 223 mg 10% Pd/C 2 hodiny. Katalyzátor se odstraní filtrací přes celit a THF se odstraní ve vakuu s následujícím sušením vymražením zbylého vodného roztoku. Získá se zbytek, ze kterého se přibližně 300 mg podrobí HPLC za použití 25% acetonitrilu v 0,lM pufru octanu amonného jako elučního činidla. Izolují se dvě hlavní frakce, z nichž druhá frakce obsahuje titulní sloučeninu. Izoluje se 67 mg titulní sloučeniny, jako dihydrochlorid.

*H-NMR (500 MHz, D₂O): δ 1,0-1,15 (m, 12H), 1,2-1,4 (m, 7H), 1,65-1,9 (m, 7H), 2,15-2,25 (m, 1H), 2,85 (t, 2H), 3,15-3,2 (m, 1H), 3,3-3,35 (m, 1H), 4,15-4,2 (m, 1H), 4,25 (d, 1H), 4,554,65 (AB-systém, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,85 (d, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,0, 169,8, 173,96 a 174,04.

Příklad 41

H-(R)HOC-Aze-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Hoc-Aze-Pab(Z)

Připraví se stejným způsobem jak je popsáno pro Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (viz příklad 25) nahrazením Boc-(R)Cha-Pic-OH Boc-(R)Hoc-Aze-OH (viz příprava výchozích materiálů). Surový produkt se podrobí rychlé chromatografíi (toluen/EtOAc 1/6) a získá se 0,32 g (37 %) požadovaného produktu.

(ii) H-(R)Hoc-Aze-Pab(Z)

Boc-(R)Hoc-Aze-Pab(Z) se zpracuje stejným způsobem jak je popsán pro Boc-(R)Cha-PÍcPab(Z) v příkladu 25 a získá se 0,23 g (88 %) titulní sloučeniny.

(iii) H-(R)HOC-Aze-Pab x 2 HC1 mg (0,037 mmol) H-(R)Hoc-Aze-Pab(Z) se rozpustí ve 3 ml ethanolu a hydrogenuje se za přítomnosti 5% Pd/C 4 hodiny při atmosférickém tlaku. Odstraní se katalyzátor filtrací, odpaří se rozpouštědlo a vymražením z 1M HC1 se získá 11 mg (63 %) produktu.

’Η-NMR (300,13 MHz, D₂O, směs dvou rotamerů 3:1): hlavní rotamer: δ 0,9-2,1 (m, 15H), 2,4-

2,6 (m, 1H), 2,7-3,0 (m, 1H), 4,1-4,3 (m, 1H), 4,35-4,56 (m, 1H), 4,65 (s, 2H), 5,0-5,11 (m, 1H), 7,62 (d, 2H), 7,9 (d, 2H). Signál jednoho z protonů je zcela zakryt H-O-D-signálem.

-93CZ 290104 B6

Příklad 42

HOOC-CH₂-CH₂-(R)HOC-Aze-Pab x 2 TFA (i) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Hoc-Aze-Pab(Z)

0,067 g (0,41 mmol) benzylakrylátu se přidá k roztoku 0,2 g (0,37 mmol) H-(R)Hoc-AzePab(Z) (viz příklad 41) ve 2 ml ethanolu (95%) při teplotě místnosti. Reakce se ponechá 5 dnů při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se čistí rychlou chromatografii (CH₂C1₂: MeOH 96/4) a získá se 0,16 g (62 %) požadovaného produktu.

(ii) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Hoc-Aze-Pab x 2 TFA

160 mg (0,23 mmol) BnOOC-CH2-CH₂-(R)Hoc-Aze-Pab(Z) se rozpustí v 10 ml ethanolu a podrobí hydrogenaci při atmosférickém tlaku za přítomnosti 5% Pd na uhlí po 3 hodiny. Odstraněním katalyzátoru filtrací, odpařením rozpouštědla a vymražením do sucha z vody a TFA se získá 120 mg (87 %) produktu.

*H-NMR (300,13 MHz, D₂O 2 rotamery 3:1): hlavní rotamer: δ 0,9-1,9 (m, 13H), 1,94-2,16 (m, 2H), 2,38-2,55 (m, 1H), 2,7-2,97 (m, 3H), 3,2-3,44 (m, 2H), 4,16 (m, 1H), 4,35—4,58 (m, 2H), 4,65 (s, 2H), 5,0-5,12 (m, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,87 (d, 2H).

¹³C-NMR (300,13 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,3,168,7,172,5 a 176,6.

Příklad 43

HOOC-CHr-(R,S)CH(COOH)-(R)Hoc-Pro-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Hoc-Pro-Pab(Z)

Připraví se z Boc-(R)Hoc-Pro-OH (viz příprava výchozích materiálů) stejným způsobem jak je popsán pro Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) v příkladu 25. Rychlou chromatografii za použití ethylacetátu jako eluentu se získá 0,886 g (58 %) titulní sloučeniny.

Ή-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,7-0,95 (m, 2H), 0,95-2,1 (m, 27H (z toho 1,2 (s, 9H)), 2,1-2,4 (m, 1H), 3,3-3,5 (m, 1H), 3,65-3,95 (m, 1H), 4,0-4,2 (m, 1H), 4,2^1,45 (m, 2H), 4,45-4,6 (d, 1H), 5,15 (zjevný bs, 2H), 5,2-5,3 (d, 1H), 7,1-7,4 (m, 7H), 7,65 (m, 1H), 7,7-7,8 (d, 2H), 9,4 (bs, 1H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 156,3, 164,6, 168,1, 171,4 a 172,4.

(ii) H-(R)Hoc-Pro-Pab(Z) ml ethylacetátu nasyceného chlorovodíkem se přidá k 0,82 g (1,266 mmol) Boc-(R)Hoc-ProPab(Z) při 0 °C, teplota se nechá stoupnout na teplotu místnosti. Reakce není po 1,5 h úplná a proto se chlorovodík probublává reakční směsí po 5 minut. Rozpouštědlo se odpaří a přidá se ethylacetát a nasycený uhličitan sodný a fáze se oddělí. Organická fáze se promyje solankou a suší (Na₂SO₄) a odpařením rozpouštědla ve vakuu se získá titulní sloučenina v podstatě ve kvantitativním výtěžku.

Ή-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,75-0,95 (m, 2H), 0,95-2,4 (m, 17H), 3,3-3,55 (m, 2H), 3,55-

3,7 (m, 1H), 4,25-4,45 (m, 2H), 4,5^1,6 (m, 1H), 5,15 (s, 2H), 7,15-7,35 (m, 5H), 7,35-7,45 (m, 2H), 7,6-7,7 (m, 1H), 7,7-7,85 (d, 2H).

-94CZ 290104 B6 ¹³C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 164,5, 167,8, 171,4 a 175,3.

(iii) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Hoc-Pro-Pab(Z)

K 0,15 g (0,5 mmol) benzylakrylátu v 1,5 ml EtOH (99%) se přidá 0,273 g (0,498 mmol) H(R)Hoc-Pro-Pab(Z) a směs se míchá při teplotě místnosti 10 dnů. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se podrobí rychlé chromatografií za použití ethylacetátu jako eluentu a získá se 0,103 g (25 %) BnOOC-CH₂-(R,S)Ch(COOBn)-(R)Hoc-Pro-Pab(Z).

‘H-NMR (300 Mhz, CDCI3): δ 0,75-2,05 (m, 18H), 2,3-2,45 (m, 1H), 2,45-2,8 (m, 3H), 3,153,45 (m, 3H), 3,5-3,65 (m, 1H), 4,3^4,5 (m, 2H), 4,55-4,7 (m, 1H), 4,8 (s, 1H), 4,9-5,1 (m, 3H), 5,2 (s, 2H), 7,1-7,2 (m, 1H), 7,2-7,4 (m, 13H), 7,4-7,45 (d, 2H), 7,6-7,8 (m, 3H).

(iv) HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH}-(R)Hoc-Pro-Pab x 2 HC1

103 mg (0,122 mmol) BnOOC-CH₂-(R,S)CB(COOBn)-(R)Hoc-Pro-Pab(Z) rozpouštědlo ve 4 ml ethanolu (99,5 %) a 0,3 ml chloroformu se hydrogenuje za přítomnosti 111 mg 5% Pd/C 2 h. Katalyzátor se odfiltruje a rozpouštědlo se odpaří s následujícím rozpuštěním ve vodě a vymražení se projeví neúplná hydrogenace. V hydrogenaci se pokračuje za přítomnosti ethanolu, IN HC1 a 5% Pd/C po 5 hodin.

Odfiltrováním katalyzátoru a odpařením rozpouštědla s následujícím rozpuštěním ve vodě a sušením vymrazením se získá titulní sloučenina.

’Η-NMR (500 MHz, CD3OD, směs dvou diastereoizomerů): δ 0,8-1,0 (m, 2H), 1,1-1,4 (m, 6H), 1,6-1,8 (m, 5H), 1,9-2,15 (m, 5H), 2,25-2,35 (m, 1H), 2,9-3,2 (m, 2H), 3,5-3,65 (m, 1H), 3,7-3,9 (2M, plně 1H), 4,15^1,44 (2m, plně 1H), 4,4-4,6 (m, 4H), 7,5-7,6 (m, 2H), 7,7-7,85 (m, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,9, 168,2, 168,3, 172,8, 173,6, 174,3 a 174,4. Signály ze dvou diastereomerů se částečně překrývají.

Příklad 44

HOOC-CH₂-(R)Hoc-Pic-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Hoc-Pic-Pab(Z)

Připraví se z Boc-(R)Hoc-Pic-OH (viz příprava výchozích materiálů) a H-Pab(Z) (viz příprava výchozích materiálů) stejným způsobem jak je popsáno pro Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (viz příklad 25). Rychlou chromatografií za použití ethylacetátu jako elučního činidla se získá 1,3 g (78 %) titulní sloučeniny.

’Η-NMR (300 Mhz, CDC1₃): δ 0,75-0,95 (m, 2H), 0,95-2,0 (m, 31H (z toho 1,3 (s, 9H), 2,4-2,5 (m, 1H), 3,0-3,1 (m, 1H), 3,8 (m, 1H), 4,2-4,45 (m, 2H), 4,45^1,55 (m, 2H), 5,15 (zjevný bs, 3H), 5,25-5,3 (m, 1H), 7,0 (bs, 1H), 7,15-7,5 (m, 7H), 7,7-7,85 (d, 2H), 9,45 (bs, 1H).

^I3C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 156,6, 164,7, 168,1, 170,0 a 173,0.

-95CZ 290104 B6 (ii) H-(R)Hoc-Pic-Pab(Z)

100 ml ethylacetátu nasyceného chlorovodíkem se přidá k 1,3 g (1,96 mmol) Boc-(R)Hoc-PicPab(Z) při 0 °C. Teplota se nechá stoupnout na teplotu místnosti. Rozpouštědlo se odpaří a přidá se ethylacetát a nasycený uhličitan sodný a fáze se oddělí. Organická fáze se promyje solankou a suší (Na₂SO₄) a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Získá se 0,85 g (77,5 %) produktu.

Ή-NMR (300 MHz, CDClj): δ 0,75-0,95 (m, 2H), 1,05-2,3 (m, 25H), 3,0-3,15 (m, 1H), 3,63,75 (m, 2H), 4,25-4,4 (m, 2H), 5,15 (zjevný bs, 3H), 7,05-7,2 (d, 2H), 7,2-7,35 (m, 4H), 7,357,4 (d, 1H), 7,6-7,8 (d,2H).

^,3C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 164,5,167,9,170,8 a 175,7.

(ii) BnOOC-CH₂-(R)Hoc-Pic-Pab(Z)

0,171 g (0,748 mmol) benzylbromacetátu se přidá ke směsi 0,4 g (0,712 mmol) H-(R)Hoc-PicPab(Z) a 0,217 g (1,57 mmol) K₂CO₃ v 7 ml acetonitrilu. Směs se zahřeje na 60 °C na olejové lázni na 1 h. Rozpouštědlo se odstraní a přidá se ethylacetát a voda. Fáze se oddělí a organická fáze se promyje solankou a suší (Na₂SO₄). Odpařením ve vakuu se získá 0,626 g zbytku, který se podrobí rychlé chromatografii za použití ethylacetátu jako elučního činidla a získají se dva produkty. První sloučenina se eluuje ze sloupce a je to (BnOOC-CH₂)₂(R)Hoc-Pic-Pab(Z) (0,28 g) a druhá eluovaná sloučenina je titulní sloučenina (0,27 g).

BnOOC-CH₂-(R)Hoc-Pic-Pab(Z):

Ή-NRM (300 MHz, CDCI3): δ 0,7-0,95 (m, 2H), 1,0-1,75 (m, 18H), 2,3-2,5 (m, 1 nebo 2H), 2,9-3,05 (m, 1H), 3,2-3,3 (m, 1H), 3,35-3,5 (m, 2H), 3,6-3,7 (m, 1H), 4,35, 4,55 (ABX-systém, 2H), 4,75 (s, 2H, 5,15 (zjevným), 3H), 5,5-5,3 (m, 1H), 7,1-7,45 (m, 12H), 7,7-7,8 (d, 2H).

^I3C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 164,6, 167,9, 170,5, 173,4 a 175,0.

(iv) HOOC-CH₂-(R)Hoc-Pic-Pab x 2 HC1

259 mg (0,365 mmol) BnOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) rozpuštěného v 7,8 ml ethanolu (95,5%) a 1,2 ml chlorovodíku (IN) se hydrogenuje za přítomnosti 280 mg 5% Pd/C 4 h. Odstraněním katalyzátoru filtrací a odpařením rozpouštědla s následujícím rozpuštěním ve vodě a sušením vymražením se získá 170 mg (83 %) titulní sloučeniny.

Ή-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,4-185 (m, 20H), 1,85-2,2 (m, 1H), 2,9-3,2 (m, 1H), 3,4-3,9 (m, 3H), 4,05—4,3 (m, 2H), 4,3-5,05 (m, 2H), 7,1-7,4 (m, 2H), 7,4-7,7 (m, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,8,168,6,169,6 a 172,3.

Příklad 45 (HOOC-CH₂)₂-(R)Hoc-Pic-Pab x 2 HC1 (i) (BnOOC-CH₂)₂(R)Hoc-Pic-Pab(Z)

Titulní sloučenina se získá alkylací H-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) jak je popsáno v příkladu 44 výše.

-96CZ 290104 B6 ’Η-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,7-0,95 (m, 2H), 0,95-1,95 (m, 18H), 2,35-2,5 (m, 1H), 2,93,05 (m, 1H), 3,5-3,85 (m, 6H), 4,35-4,55 (m, 2H), 4,9 (2s, 4H), 5,2 (s, 2H), 5,25-5,35 (m, 1H),

7,1-7,45 (m, 16H), 7,5-7,65 (m, 1H), 7,7-7,85 (d, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDClj): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 164,7, 167,9, 170,5, 172,0 a 172,4.

(ii) (HOOC-CH₂)₂(R)Hoc-Pic-Pab x 2 HC1

153 mg (0,178 mmol) (BnOOC-CH₂)₂(R)Hoc-Pic-Pab(Z) rozpuštěného ve 4,5 ml ethanolu (99,5%) a 0,5 ml chlorovodíku (IN) se hydrogenuje za přítomnosti 150 mg 5% Pd/C 3,5 h. Odstraněním katalyzátoru filtrací a odpařením rozpouštědla s následujícím rozpuštěním ve vodě a sušením vymražením se získá 109 mg (99 %) (HOOC-CH₂)₂(R)Hoc-Pic-Pab dihydrochloridu. Tento surový materiál (80% čistota) se podrobí čištění pomocí RPLC za použití CH₃CN/0,l, NH4OAC, 1:4 jako elučního činidla. Odstraněním rozpouštědla a přebytku NH4OAC s následujícím sušením vymražením z 1M HC1 se získá titulní sloučenina.

’Η-NMR (500 MHz, D₂O, směs dvou rotamerů): hlavní rotamer: δ 0,95-2,15 (m, 20H), 2,252,35 (m, 1H), 3,45-3,55 (m, 1H), 3,95-4,25 (m, 5H), 4,6-4,65 (m, 2H), 4,92-5,01 (m, 1H), 5,155,20 (m, 1H), 7,58-7,63 (d, 2H), 7,84-7,89 (d, 2H).

Odštěpené signály pocházející z minoritního rotameru se objevují při: δ 0,7-0,85 (m), 2,35-3,45 (m), 3,05-3,15 (m), 4,47-4,55 (m), 4,55-4,6 (m), 4,65-4,7 (m), 7,63-7,67 (d), 7,89-7,95 (d).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 168,20,169,70, 170,20 a 172,71.

Příklad 46

HOOC-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Pro(3-(SPh)-Pro-Pab(Z)

K roztoku 570 mg (1,5 mmol) Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-OH (viz příprava výchozích materiálů), 425 mg (1,5 mmol) H-Pab(Z) (viz příprava výchozích materiálů a 733 mg (6 mmol) DMAP ve 25 ml CH3CN/DMF (1,5/1) se přidá 310 mg (1,62 mmol) EDC a směs se míchá 23 hodin při teplotě místnosti. Většina rozpouštědla se odpaří a přidá se 50 ml vody ke zbytku. Vodná fáze se extrahuje 1 x 75 ml a 2 x 50 ml EtOAc. Spojené organické fáze se promyjí 1 x 20 + 1 x 10 ml 1M KHSO4, 1 x 15 ml NaHCChfyod.), 3 x 15 ml vody, 1 x 15 ml solanky a suší se (MgSO₄). Filtrací a odpařením rozpouštědla se získá 670 mg oleje, který se čistí rychlou chromatografii za použití EtOAc jako elučního činidla a získá se 529 mg (55 %) titulní sloučeniny.

’Η-NMR (300 Mhz, CDClj): δ 1,26 (s, 9H), 1,53-1,88 (m, 3H), 2,1-2,31 (m, 3H), 2,52 (q, 1H), 3,58-3,77 (m, 4H), 4,31 (d, 1H), 4,35 a 4,47 (ABX-systém, 2H), 4,65 (dd, 1H), 5,19 (s, 2H),

7,1-7,37 (m, 10H), 7,42 (d, 2H), 7,81 (s, 2H), 8,0 (t, 1H(NH)).

¹³C-NMR (75 Mhz, CDCI3): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 154,6, 164,6, 168,1, 171,1 a 171,3.

(ii) H-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z)

529 mg (0,81 mmol) Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) se rozpustí v 15 ml EtOH/HCl (plynný, nasycený) při teplotě místnosti a míchá se 3 h. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v 70 ml CH₂C1₂. Organická fáze se promyje 1 x 10 ml 2M NaOH, lx 10 ml vody, 1 x 10 ml

-97CZ 290104 B6 solanky a suší se (MgSO₄). Filtrací a odpařením rozpouštědla se získá 403 mg (90 %) titulní sloučeniny jako bílého prášku.

'H-NMR (300 Mhz, CDCI3): δ 1,44-1,57 (m, 1H), 1,62-1,86 (m, 2H), 1,96-2,35 (m, 3H), 2,45 (q, 1H), 3,05-3,35 (m, 4H), 3,83 (bd, 1H), 4,25-4,45 (m, 2H), 4,53 (m, 1H), 5,19 (s, 2H), 7,167,37 (m, 10H), 7,42 (d, 2H), 7,66 (t, 1H, (NH)), 7,77 (s, 2H).

^I3C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 164,4, 167,9,171,1 a 173,0.

(iii) BnOOC-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z)

Směs 200 mg (0,36 mmol) H-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z), 105 mg (0,46 mmol) Br-CH₂COOBn a 125 mg (0,90 mmol) K₂CO₃ v 10 ml CH₃CN se zahřívá na 50 °C 1 h a 30 minut. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v 70 ml EtOAc. Organická fáze se promyje 10 ml vody a suší (MgSO₄). Filtrací a odpařením rozpouštědla se získá 260 mg oleje. Surový materiál se čistí rychlou chromatografií za použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH(NH₃-nasycený) (95/5 potom 9/1) a získá se 182 mg (72 %) titulní sloučeniny jako bílé pevné látky.

'H-NMR (300 Mhz, CDC1₃): δ 1,43-1,82 (m, 3H), 1,96-2,13 (m, 1H), 2,14-2,22 (m, 1H), 2,262,43 (m, 2H), 3,02-3,14 (m, 2H), 3,24-3,51 (m, 4H), 3,83 (d, 1H), 4,29-4,46 (ABX-systém centrovaný při 4,37, 2H), 4,58 (dd, 1H), 4,97-5,1 (AB-systém centrovaný při 5,03, 2H), 5,19 (s, 2H), 7,16-7,38 (m, 15H), 7,43 (d, 2H), 7,5-7,8 (m, 3H, jeden NH).

¹³C-MNR (75 MHz, CDC1₃): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 164,5, 167,9, 171,15, 171,2 a 172,7.

(iv) HOOC-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab x 2 HC1

0,18 g (0,26 mmol) BnOOC-CHr-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) se smísí s 0,075 g 5% Pd/C, 1,0 ml IN HCl-roztokem, 1 ml vody a 10 ml ethanolu a smě se hydrogenuje při atmosférickém tlaku jednu hodinu. Filtrací katalyzátoru přes hyflo, odpařením rozpouštědla s následujícím vymražením dosucha dvakrát z vody se získá 129 mg surového produktu. Surový produkt se čistí pomocí RPLC za použití postupného gradientu 0,lM NH₄OAc/CH₃CN 4/1 potom 3/1. Odpařením s následujícím sušením vymražením z vody a 1N-HC1 roztoku se získá 70 mg (50%) čistého produktu.

'H-NMR (300 Mhz, D₂O): δ 1,42-1,60 (m, 1H), 1,65-1,83 (m, 1H), 1,83-1,98 (m, 1H), 2,032,20 (m, 2H), 2,63 (t, 2H), 3,28-3,40 (m, 1H), 3,55-3,78 (m, 2H), 3,81-3,96 (AB-systém centrován při δ 3,88, 2H), 4,06-4,19 (m, 1H), 4,37-4,61 (AB-systém centrován při δ 4,49, 2H), 4,48 (dd, 1H), 4,70 (d, 1H), 7,35-7,58 (m, 7H), 7,74 (d, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 16,02, 167,2, 169,3 a 174,4.

Příklad 47

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab x 2 HCI (i) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z)

Z roztoku 190 mg (0,34 mmol) H-(R)Pro-(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) (viz příklad 46) v 7 ml EtOH (99%) se přidá 114 mg (0,70 mmol) benzylakrylátu a reakční směs se míchá při teplotě místnosti 24 h. Odpařením rozpouštědla s následující rychlou chromatografií za použití postupného gra

-98CZ 290104 B6 dientu CH₂C12/MeOH(NH3-nasycený) (95/5 potom 9/1) se získá 202 mg (83 %) titulní sloučeniny.

‘H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 1,15-1,71 (m, 2H), 1,74-1,9 (m, 1H), 1,9-2,05 (m, 1H), 2,22,64 (m, 5H), 2,69-2,82 (m, 2H), 2,84-2,96 (m, 1H), 3,18-3,48 (m, 4H), 4,28-4,44 (m, 2H), 4,61 (m, 1H), 4,48-5,08 (AB-systém centrovaný při 5,03, 2H), 5,19 (s, 2H), 7,15-7,37 (m, 15H), 7,44 (s, 2H), 7,75-7,85 (m, 3H, jeden NH).

¹³C-NMR (75 Mhz, CDC1₃): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 164,6. 168,0, 171,2, 172,5 a 172,9.

(ii) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab x 2 HC1

0,20 g (0,28 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) se smísí s 0,075 g 5% Pd/C, 1,0 ml IN roztoku HC1, 1 ml vody a 10 ml ethanolu a směs se hydrogenuje při atmosférickém tlaku jednu hodinu. Filtrací katalyzátoru přes hyflo, odpařením rozpouštědla s následujícím vymražením dosucha dvakrát z vody se získá 125 mg 79 % titulní sloučeniny.

’Η-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,44 (m, 1H), 1,65-1,9 (m, 2H), 2,0-2,2 (m, 2H), 2,62 (q, 2H), 2,83 (t, 2H), 3,27-3,4 (m, 1H), 3,4-3,8 (m, 4H), 4,0-4,15 (m, 1H), 4,35-4,6 (m, 3H), 4,68 (d, 1H), 7,35-7,6 (m, 7H), 7,77 (d, 2H).

’³C-NMR (75 MHz, CDClj): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 166,2,167,1,174,1 a 174,2.

Příklad 48

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Tic-Pro-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Tic-Pro-Pab(Z)

Připraví se stejným způsobem jak je popsáno pro Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (viz příklad 25) za použití Boc-(R)Tic-Pro-OH (viz příprava výchozích materiálů) místo Boc-(R)Cha-Pic-OH. Rychlou chromatografii za použití heptanu/EtOAc (4/1), potom EtOAc jako elučními činidly se získá 425 mg (37 %) titulní sloučeniny.

’Η-NMR (500 MHz, CDCI3): δ 1,35 (s, 9H), 1,95-2,15 (m, 3H), 2,4 (m, 1H), 2,8 (m, 1H), 3,3 (m, 1H), 3,55 (m, 2H), 4,25^1,4 (dva m, 2H), 4,55-4,7 (dva m, 2H), 7,15-7,5 (m, 10H), 7,85 (d, 2H).

’³C-NMR (75,0 MHz, CDClj): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 164,6, 171,5 a 171,6 (dva píky se pravděpodobně překrývají).

(ii) H-(R)Tic-Pro-Pab(Z)

Boc-(R)Tic-Pro-Pab(Z) (379 mg, 0,59 mmol) se rozpustí v EtOAc nasyceném HC1 (plyn) a míchá se při teplotě místnosti. Odpařením rozpouštědla se získá 251 mg (79 %) titulní sloučeniny jako bílého prášku.

'H-NMR (500 Mhz, CDClj): δ 1,65-2,15 (dva m, 7H), 2,45 (m, 1H), 2,75 (m, 1H), 2,9 (m, 1H), 3,0 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 4,35-4,55 (m, 2H), 4,75 (d, 1H), 4,9 (s, 1H), 5,25 (s, 2H), 6,8-7,45 (několik m, 8H), 7,5 a 7,85 (dva d, 4H).

-99CZ 290104 B6 ’³C-NMR (75,0 MHz, CDC1₃): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 164,5, 171,3 a 172,7 (dva píky se pravděpodobně překrývají).

(iii) BnO₂C-CH₂-CH₂-(R)Tic-Pro-Pab(Z)

H-(R)Tic-Pro-Pab(Z) (140 mg, 0,26 mmol) se zpracuje s benzylalkrylátem (63 mg, 0,39 mmol) v EtOH (1,3 ml) při 20 °C po 48 h. Odpařením rozpouštědla a rychlou chromatografií za použití (50 % EtOAc/heptanu potom 10% MeOH/EtOAc) jako elučního činidla se získá 133 mg (73 %) požadovaného produktu jako bílé pevné látky.

’Η-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 1,75-2,0 (dva m, 4H), 2,25 (m, 1H), 1,4-1,65 (m, 3H), 2,7-2,95 (dva m, 4H), 3,05-3,2 (m, 2H), 3,9 (m, 1H), 4,45 (m, 2H), 4,65 (m, 1H), 5,1 (dva d, 2H), 5,25 (s, 2H), 6,85-7,45 (několik m, 12H), 7,5 a 7,9 (dva d, 4H).

’³C-NMR (75,0 mHz, CDC1₃): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 171,5,171,9 a 172,1 (dva píky se pravděpodobně překrývají).

(iv) HOOC-CH2-CH₂-(R)Tic-Pro-Pab x 2 HC1

BnO₂C-CH₂-CH₂-(R)Tic-Pro-Pab(Z) (125 mg, 0,17 mmol) se hydrogenuje nad 5% Pd/C za použití EtOH/HCl jako rozpouštědla. Filtrací katalyzátoru a sušením vymražením se získá 73 mg (77 %) titulní sloučeniny jako bílého prášku.

’H-NMR (500 Mhz, D₂O): δ 2,1-2,35 (dva m, 3H), 2,6 (m, 1H), 2,95-3,1 (m, 2H), 3,25-3,5 (dva m, 2H), 3,65 (m, 3H), 4,65 (s, 2H), 4,75 (m, 1H), 5,85 (s, 1H), 7,15-7,6 (tři m, 4H), 7,6 a 7,85 (dva d, 4H).

ⁱ³C-NMR (75,0 MNz, CDC1₃): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 166,9, 167,1 a 174,3 (dva píky se pravděpodobně překrývají).

Příklad 49

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pig x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pig(Z)₂

Ke směsi 0,623 g (1,83 mmol) Boc-(R)Cgl-Aze-OH (viz příprava výchozích materiálů), 0,816 g (1,92 mmol) H-Pig(Z)₂ (viz příprava výchozích materiálů) a 0,89 g (7,3 mmol) DMAP v 10 ml dichlormethanu se přidá 0,368 g (1,92 mmol) ECC a směs se míchá přes noc. Směs se zředí a promyje se 0,3M KHSO₄ a jednou solankou. Organická vrstva se suší (Na₂SO₄), filtruje a odpařením se získá 1,4 g surového produktu. Čištěním rychlou chromatografií za použití ethylacetátu jako elučního činidla se získá 0,3 g (22 %) čistého produktu.

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pig(Z)₂

0,3 g (0,4 mmol) Boc-(R)Cgl-Aze-Pig(Z) se smísí s 10 ml dichlormethanu a 2,5 ml kyseliny trifluoroctové. Směs se míchá jeden a půl hodiny. Po odpaření rozpouštědla se zbytek rozpustí v dichlormethanu a promyje se dvakrát 0,2M NaOH roztokem. Spojené vodné vrstvy se extrahují ještě jednou dichlormethanem. Spojené organické vrstvy se suší (Na₂SO₄), filtrují a odpařením se získá 0,24 g (93 0) produktu.

-100CZ 290104 B6 ‘H-NMR (300 Mhz, CDC1₃, 339 K): δ 0,9-1,9 (m, 15H), 1,94 (bd, 1H), 2,37-2,52 (m, 1H), 2,65-2,8 (m, 1H), 2,9-3,08 (m, 3H), 3,20 (t, 2H), 4,05-4,28 (m, 4H), 4,86 (dd, 1H), 5,16 (s, 4H),

7,2-7,42 (m, 10H), 7,98 (bs,NH).

(iii) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pig(Z)₂

0,231 g (0,36 mmol) se rozpustí ve 2 ml ethanolu a 61 μΐ (0,40 mmol) benzylakrylátu. Reakční směs se míchá pět dnů při teplotě místnosti. Směs se odpaří a surový produkt se čistí rychlou chromatografii za použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH (95/5, 90/10), jako elučního činidla a získá se 0,218 g (75 %) čistého produktu.

’Η-NMR (300 MHz, CDC1₃, 335 K): δ 0,93 (bq, 1H), 1,02-1,85 (m, 14H), 1,94 (bd, 1H), 2,332,5 (m, 3H), 2,58-2,77 (m, 2H), 2,79-3,02 (m, 4H), 3,17 (t, 2H), 4,0-4,25 (m, 4H), 4,86 (dd, 1H), 5,11 (s, 2H), 5,12 (s, 4H), 7,2-7,4 (m, 15H), 8,03 (bs, NH), 10,35 (bs, NH).

(iv) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pig x 2 HC1

0,218 g (0,27 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pig(Z)₂ se smísí s 0,10 g 5% Pd/C, 1 ml 1M HCl-roztoku, 1 ml vody a 10 ml ethanolu a směs se hydrogenuje při atmosférickém tlaku jednu hodinu. Filtrací katalyzátoru přes hyflo, odpařením rozpouštědla s následujícím vymražením dosucha dvakrát z vody se získá 134 mg (95 %) titulní sloučeniny.

'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,0-1,4 (m, 7H), 1,55-2,05 (m, 9H), 2,22-2,34 (m, 1H), 2,61-2,76 (m, 1H), 2,88 (t, 2H), 3,08 (bt, 2H), 3,19 (d, 2H), 3,34 (m, 2H), 3,83 (bd, 2H), 3,95 (d, 1H), 4,294,49 (m, 2H), 4,90 (dd, 1H).

ⁿC-NMR (75 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 156,4, 167,6, 172,1 a 174,7.

Příklad 50

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig x 2 HC1 (i) BOC-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)₂

0,568 g (2,96 mmol) EDC se přidá při -15 °C ke směsi 1 g (2,82 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-OH (voz příprava výchozích materiálů) 1,197 g (2,82 mmol) H-Pig(Z)₂ (viz příprava výchozích materiálů) a 1,38 g (11,28 mmol) DMAP v acetonitrilu. Teplota se nechá stoupnout na teplotu místnosti přes noc. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a přidá se methylenchlorid a 1M KHSO4. Fáze se oddělí a organická fáze se promyje nasyceným NaHCO₃, vodou a solankou, suší se (Na₂SO₄) a odpařením rozpouštědla se získá 2,003 g zbytku, který se podrobí rychlé chromatografii za použití ethylacetátu jako elučního činidla. Získají se dva produkty; 720 mg (34 %) titulní sloučeniny, která se eluuje z kolony první následovaná 775 mg (44%) BnOC-(R)Cgl-ProPig(Z) vzniklého ztrátou jedné chránící Z skupiny.

’H-NMR (300 MHz, CDC1₃): některé signály, zejména v piperidinovém kruhu jsou selektivně širší díky intramolekulámímu výměnnému procesu. Toto je zvláště významné pro 2- a 6-CH₂skupiny piperidinového kruhu, které vykazují široký pík v rozmezí od 3,5 do 4,5 ppm.

δ 0,85-2,1 (m, 19H), 2,3-2,45 (m, 1H), 2,8-3,2 (m, 4H), 3,45-3,55 (m, 1H), 3,55-3,65 (m, minoritní rotamer), 3,8-3,93 (m, 1H), 3,97-4,1 (m, 1H), 4,52-4,62 (d, 1H), 5,1 (zjevný bs, 5H), 7,12-7,41 (m, 10H).

’³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 155,2, 156,3,171,0 a 172,1.

-101CZ 290104 B6 (ii) H-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)₂

720 mg (0,946 mmol) Boc-(R)Clg-Pro-Pig(Z)2 se rozpustí ve 35 ml TFA/CH₂C1₂ 1/4 a míchá se 30 minut. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a přidá se ethylacetát a 2M NaOH. Organická vrstva se promyje vodou a solankou, suší (Na₂SO₄) a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu, získá se titulní sloučenina ve kvantitativním výtěžku.

’Η-NMR (300 Mhz, CDCh): některé signály v piperidinovém kruhu jsou selektivně širší díky intramolekulárnímu výměnnému procesu. Toto je zejména výrazné pro 2- a 6-CH₂ skupiny piperidinového kruhu, které vykazují široké rozmezí píku od 3,5 do 4,5 ppm.

δ 0,8-2,15 (m, 19H), 2,22-2,4 (m, 1H), 2,75-2,98 (m, 2H), 2,98-3,18 (m, 2H), 3,18-3,35 (m, 1H), 3,55-3,5 (kvart., 1H), 3,5-3,7 (m, 1H), 4,42-4,58 (d, 1H), 5,1 (s, 4H), 7,1-7,5 (m, 10H).

^I3C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 154,96,171,31,174,82.

(iii) BnOOC-CH₂-(R)Cgl.Pro-Pig(Z)₂

0,298 g (0,999 mmol) BnOOC-CH-OTf (viz příprava výchozích materiál) se přidá ke směsi 0,64 g (0,999 mmol) H-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)₂ a 0,531 g (2,996 mmol) K₂CO₃ v 6,4 ml acetonitrilu a.zahřívá se pod refluxem. Po 1 h 20 min se směs promyje vodou, suší (Na₂SO₄) a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se 729 mg zbytku, který se podrobí rychlé chromatografíi za použití ethylacetátu jako elučního činidla. Získají se tak dva produkty: 120 mg (BnOOC-CH₂)2-(R)CglPro-Pig(Z)₂, který se eluuje z kolony první a 142 mg (18 %) titulní sloučeniny.

’Η-NMR (300 MHz, CDCI3): některé signály v piperidinovém kruhu jsou selektivně širší díky intramolekulárnímu výměnnému procesu. Toto je zejména výrazné pro 2- a 6-CH₂ skupiny piperidinového kruhu, které vykazují široké rozmezí píku od 3,5 do 4,6 ppm.

δ 0,94-2,27 (m, 19H), 2,28-2,43 (m, 1H), 2,8-2,98 (m, 2H), 2,98-3,06 (m, 1H), 3,06-3,15 (d, 1H), 3,15-3,25 (m, 1H), 3,3-3,5 (m, 4H), 4,5^1,61 (d, 1H), 5,1 (s, 6H), 7,1-7,6 (m, 15H), 10,2 (bs, 1H).

(iv) HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig x 2 HC1

142 mg (0,176 mmol) BOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)₂ se hydrogenuje za přítomnosti 0,88 ml 1M kyseliny chlorovodíkové, 10 ml ethanolu (99,5%) a 180 mg 5% Pd/C 2 h. Odstraněním katalyzátoru filtrací přes hyflo a millipore filtr s následujícím odpařením rozpouštědla ve vakuu a sušením vymražením se získá 95 mg HOOC-CH₂-(R)Clg-Pro-Pig x 2 HC1. Tento surový materiál (79% čistota) se čistí pomocí RPLC za použití CH3Cn/0,lM NHtOAc 15/85 jako elučním činidlem. Odstraněním rozpouštědla a přebytku NH|OAc sušením vymražením, převedením na sůl kyseliny chlorovodíkové rozpuštěním v 1M kyselině chlorovodíkové s následujícím vymražením se získá titulní sloučenina.

'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,1-1,35 (m, 6H), 1,63-2,14 (m, 13H), 2,26-2,36 (m, 1H), 3,013,23 (m, 4H), 3,49-3,62 (kvant., 2H), 3,62-3,77 (m, 2H), 3,77-3,88 (zjevný d, 2H), 4,18-4,32 (d, 1H), 4,37—4,5 (m, 1H).

- 102CZ 290104 B6

Příklad 51

H-(R)Cha-Aze-Pig x 2 HCI (i) Boc-(R)Cha-Aze-Pig(Z)2

K dobře míchané směsi 86 mg (0,243 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH (viz příprava výchozích materiálů), 100 mg (0,236 mmol) H-Pig(Z)₂ (viz příprava výchozích materiálů) a 115 mg (0,944 mmol) DMAP v 5 ml CH₃CN se přidá 50 mg (0,260 mmol) EDC a reakce se míchá 20 h při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v 70 ml EtOAc a organická fáze se promyje 3 x 5 ml 1M KHSO₄, 1 x 5 ml NaHCO₃, 3 x 5 ml H₂O, 1 x 5 ml solanky a suší (MgSO₄). Filtrací a odpařením rozpouštědla se získá 141 mg oleje. Surový produkt se čistí rychlou chromatografii (36 g SiO₂) za použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH (97/3 potom 95/5) a získá se 43 mg (24 %) titulní sloučeniny.

(ii) H-(R)Cha-Aze-Pig(Z)₂

Chlorovodík se probublává směsí 43 mg (0,0565 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-Pig(Z)₂ v 10 ml ethylacetátu během 5 minut. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a přidá se ethylacetát a 0,lM NaOH-roztok. Fáze se oddělí a organická fáze se promyje vodou a solankou a suší (Na₂SO₄). Rozpouštědlo se odpaří a získá s 38 mg, které se podrobí rychlé chromatografii za použití 10% NH₃-nasyceného methanolu v ethylacetátu jako elučního činidla a získá se 28 mg požadovaného produktu.

’Η-NMR (300 MHz, CDC1₃): některé signály v piperidinovém kruhu jsou selektivně širší díky intramolekulámímu výměnnému procesu. Toto je zejména výrazné pro 2- a 6-CH₂ skupiny piperidinového kruhu, které vykazují široké rozmezí píku od 3,5 do 4,5 ppm.

δ 0,75-1,85 (m, 18H), 2,35-2,53 (m, 1H), 2,62-2,78 (m, 1H), 2,8-3,0 (m, 2H), 3,0-3,28 (m, 2H), 3,28-3,37 (m, 1H), 3,97^1,18 (m, 2H), 4,8-4,9 (m, 1H), 5,1 (s, 4H), 7,2-7,5 (m, 9H), 8,05-8,15 (m, 1H).

(iii) H-(R)Cha-Aze-Pig x 2 HCI mg (0,042 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pig(Z)₂ rozpuštěného ve 2 ml ethanolu (99,5%) a 0,13 ml chlorovodíku (IN) se hydrogenuje za přítomnosti 35 mg 5% Pd/C 4 h. Katalyzátor se odfiltruje a ve vakuu se odpaří rozpouštědlo, potom se rozpuštěním ve vodě a sušením vymražením získá 12 mg (60 %) H-(R)Cha-Aze-Pig dihydrochloridu.

’Η-NMR (500 MHz, 300 K, CD₃OD): některé signály v piperidinovém kruhu jsou selektivně širší díky intramolekulámímu výměnnému procesu. Toto je zejména výrazné pro 2- a 6-CH₂skupiny piperidinového kruhu, které vykazují široké rozmezí píku od 3,7 do 4,5 ppm.

δ 0,75-2,1 (m, 18H), 2,2-2,35 (m, 1H), 2,62-2,75 (m, 1H), 3,0-3,12 (t, 2H), 3,12-3,23 (d, 2H), 3,85-3,95 (d, 2H), 3,95-4,0 (dd, 1H), 4,15^1,23 (m, 1H), 4,35-4,42 (m, 1H), 4,72-4,78 (m, 1H).

^,3C-NMR (75 MHz, CD₃OD): guanidin: δ 157,6; karbonylové uhlíky: δ 170,0 a 172,6.

-103CZ 290104 B6

Příklad 52

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pac x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pac(Z)

K roztoku 0,47 g (1,4 mmol) Boc-(R)Cgl-Aze-OH (viz příprava výchozích materiálů), 0,40 g (1,4 mmol) H-Pac(Z) (viz příprava výchozích materiálů) a 0,67 g (5,5 mmol) DMAP v 5 ml 10 acetonitrilu se přidá 0,27 g EDC při 0 °C. Směs se míchá při teplotě místnosti přes noc a potom se zředí ethylacetátem. Roztok se promyje KHSO₄ (vod.) a NaHCO₃ (vod.), suší (Na₂SO₄), filtruje a odpaří. Rychlou chromatografií ze použití ethylacetátu a pak ethylacetátu/methanolu 98/2 jako elučního činidla se získá 0,25 g (30 %) titulní sloučeniny jako směsi 1,4-cis- a transproduktů vzhledem k Pac části molekuly.

Ή-NMR (500 Mhz, CDCI3): δ 0,8-2,0 (m, 29H; z toho 1,45 (s, 9H)), 2,15 a 2,34 (m, 1H, izomery), 2,45-2,7 (m, 2H), 3,0-3,4 (m, 2H), 3,85 (m, 1H), 4,14 (m, 1H), 4,33 (m, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,98 (m, 1H), 5,04 (s, 2H), 7,25-7,45 (m, 5H), 7,8-7,9 (m, 1H), 9,2-9,5 (m, 1H).

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pac(Z) x HC1

Boc-(R)Cgl-Aze-Pac(Z), 0,25 g (0,41 mmol) se rozpustí ve 100 ml ethylacetátu a ochladí se na ledové lázni. HC1 (plyn) se probublává 5 min a rozpouštědlo se odpaří.

Ή-NMR (300 MHz, MeOD): δ 0,8-2,0 (m, 22H), 2,05-2,35 (m, 1H), 2,4-2,55 (m, 1H), 2,62,75 (m, 1H), 3,00 (d, 1H), 3,05 a 3,37 (multiplety, 0,6 H a 0,4H, izomery), 3,15-3,3 (m, 1H), 4,05-4,2 (m, 2H), 4,88 (dd, 1H), 5,11 (s, 2H), 7,2-7,45 (m, 5H), 8,0-8,15 (m, 1H).

(iii) BnO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pac(Z)

Směs 0,17 g (0,33 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pac(Z) x HC1, 0,11 g (0,37 mmol) benzyltriflyloxyacetátu a 0,14 g (1,0 mmol) K₂CO₃ v 5 ml acetonitrilu se míchá při teplotě místnosti 3 dny. Surový produkt se zpracuje rychlou chromatografií s EtOAc/CH₂ci2/MeOH 95/20/5. Výtěžek 70 mg (32 %).

Ή-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,85-2,3 (m, 20H), 2,48 (m, 1H), 2,63 (m, 1H), 2,87 (m, 1H), 3,05-3,25 (m, 1H), 3,25-3,35 (m, 2H), 3,38 (dd, 1H), 3,95 (m, 1H), 4,08 (m, 1H), 4,88 (m, 1H), 5,1-5,2 (m, 4H), 5,9-6,3 (m, 1H), 7,25-7,5 (m, 10H), 8,00 a 8,08 (široké triplety, 1H, izomery).

(iv) HO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pac x 2 HC1

BnO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pac(Z), 70 mg (0,11 mmol) se rozpustí v 5 ml ethanolu a přidá se 5% pd/C a 0,1 ml konc. HC1. Směs se hydrogenuje při atmosférickém tlaku 1 h. Po filtraci odpaření se produkt čistí preparativní RPLC za použití 0,lM NH4OAc/CH₃Cn 4/1 jako elučním činidlem. 45 Po změně soli na hydrochlorid a sušení vymražením se získá titulní sloučeniny jako 45/55 směs 1,4-cis- a trans-izomerů vzhledem k Pac části molekuly. Výtěžek 40 mg (74 %).

Ή-NMR (500 MHz, D₂O): δ 1,1-2,1 (m, 20H), 2,32 (m, 1H), 2,52 (m, 1H), 2,63 (m, 1H), 2,72 (m, 1H), 3,1-3,3 (m, 1H), 3,40 (m, 1H), 3,8-3,95 (m, 2H), 4,04 (d, 1H), 4,39 (m, 1H), 4,93 (m, 50 1H).

¹³C-NMR (125 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 167,7, 172,0,174,9 a 175,2.

-104CZ 290104 B6

Příklad 53

H-(R)-Cha-Pro-Pac x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Pro-Pac(Z)

211 mg (1,1 mmol) EDC se přidá při O °C k míchanému roztoku 0,4 g (1,1 mmol) H-Pac(Z) x 2 HC1 (viz příprava výchozích materiálů), 0,4 g (1,1 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (viz příprava výchozích materiálů) a 0,55 g DMAP v 7 ml acetonitrilu. Reakční směs se míchá při 0 °C 1 h a při teplotě místnosti 2 h. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se zředí ethylacetátem a vodou. Organické fáze se promyjí kyselinou octovou, vodou a roztokem hydrogenuhličitanu sodného a suší se (MgSO₄). Odstraněním rozpouštědla ve vakuu se získá zbytek, který se čistí rychlou chromatografíí za použití ethylacetátu jako elučního činidla a získá se 196 mg (27 %) titulní sloučeniny.

(ii) H-(R)Cha-Pro-Pac(Z)

Chlorovodík se probublává roztokem 196 mg Boc-(R)Cha-Pro-Pac(Z) ve 25 ml ethylacetátu. Po 10 minutách se reakční směs zředí methylenchloridem a přidá se roztok hydroxidu sodného. Vodná fáze se extrahuje několikrát methylenchloridem a spojené organické fáze se suší (K₂CO₃) a.rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a získá se 86 mg (52 %) titulní sloučeniny.

(iii) H-(R)Cha-Pro-Pac x 2 HC1

Titulní sloučenina se připraví hydrogenací H-(R)Cha-Pro-Pac(Z) v ethanolu za přítomnosti 10% Pd/C.

’Η-NMR (300 MHz, D₂O; ca: 1:1 směs 1,4-cis- a 1,4-trans izomerů vPac části molekuly): δ 1,15-1,3 (q), 1,6-1,85 (m), 1,9-2,0 (m), 2,0-2,1 (d), 2,1-2,15 (m), 2,15-2,2 (m), 2,65-2,7 (m), 2,7-2,8 (m), 2,95-3,0 (d), 3,15-3,2 (d), 5,4 (s), 7,45-7,55 (m).

Příklad 54

H—(R)Cgl-Ile—Pab x 2 HC1 (i) Boc-fR)Cgl-Ile-Pab(Z)

K míchané směsi 1,33 g (3,6 mmol) Boc-(R)Cgl-Ile-OH (viz příprava výchozích materiálů), 1,12 g (3,9 mmol) H-Pab(Z) (viz příprava výchozích materiálů) a 1,76 g (14,4 mmol) DMAP v 50 ml CH₃CN/DMF (1/1) se přidá 0,75 g (3,9 mmol) EDC při +5 °C. Reakční se nechá ohřát na teplotu místnosti a ponechá se tak 60 h. CH3CN se odstraní odpařením a zbytek se nalije do 100 ml vody (vytvoří se žlutá sraženina). Směs se extrahuje 2 x 50 ml EtOAc a spojené organické fáze se promyjí 2 x 30 ml NaHCO3(nasycený), 2 x 50 ml 0,2M HC1, 1 x 50 ml solanky a suší se (MgSO₄). Odpařením a následující rychlou chromatografíí za použití CH₂C1₂/THF (85/15) jako elučního činidla se získá 510 mg (24 %) titulní sloučeniny.

(ii) H-(R)Cgl-Ile-Pab(Z)

530 mg Boc-(R)Cgl-Ile-Pab(Z) se rozpustí ve 14 ml CH₂C1₂/TFA (2,5/1) a míchá se 2 h při teplotě místnosti. Odpařením rozpouštědla s následující rychlou chromatografíí za použití Ch₂Cl₂/MeOH (nasycený NH₃) (95/5) jako elučním činidlem se získá titulní sloučenina.

- 105CZ 290104 B6 (iii) H-(R)Cgl-Ile-Pab x 2 HC1 mg (0,14 mmol) H-(R)Cg!-Ile-Pab(Z) se hydrogenuje nad 10% Pd/C v 5 ml EtOH, který obsahuje přebytek HCl(g) a získá se dihydrochlorid, při atmosférickém tlaku po 6 h. Přídavkem 2 g aktivního uhlí a 20 ml EtOH s následující filtrací přes celit, odpařením rozpouštědla a vymražením dosucha z vody se získá 50 mg (89 %) titulní sloučeniny jako bílého prášku.

'H-NMR (500 Mhz, MeOH): δ 0,90 (t, 3H), 0,94 (d, 3H), 1,1-2,0 (m, 14H), 3,83 (bs, 1H), 4,26 (d, 1H), 4,50 (m, 2H), 7,57 (bd, 2H), 7,78 (bd, 2H).

Příklad 55

H-(R)Cgl-Aze-Pab

Hydrogenací 257 mg (5,08 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) (viz příklad 1 (oo)) nad 5% Pd/C v 6 ml EtOH/H₂O při atmosférickém tlaku po 6 h s následující filtrací katalyzátoru, odpařením rozpouštědla a vymražením dosucha z vody se získá 200 mg (89 %) titulní sloučeniny.

'H-NMR (500 Mhz, D₂O): δ 1,0-2,0 (m, 11H), 2,25 (m, 1H), 2,70 (m, 1H), 3,30 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 4,30 (m, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,55 (m, 2H), 7,60 (m, 2H), 7,77 (m, 2H).

MS m/z 372 (M⁺+ 1).

Příklad 56

HOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab x HOAc (i) BnOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

0,250 g (0,47 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (viz příklad 15) rozpuštěného v 5 ml CH₂C1₂ se ochladí na -10 °C a pomalu se přidá 150 mg (0,48 mmol) TfOCH₂COOBn (viz příprava výchozích materiálů) rozpuštěného ve 3 ml CH₂C1₂. Přidá se 200 mg (1,45 mmol) uhličitanu draselného a směs se míchá při teplotě místnosti 20 h. Směs se zředí CH₂C1₂, extrahuje se vodou a suší (MgSO₄). Odpařením rozpouštědla s následující rychlou chromatografíí za použití CH₂Cl₂/MeOH 9/1 jako elučního činidla se získá 150 mg (46 %) titulní sloučeniny.

(ii) HOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab x HOAc

150 mg (0,2 mmol)BnOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab(Z) se hydrogenuje nad 50 mg 5% Pd/C ve 20 ml EtOH při atmosférickém tlaku po 4 h. Filtrací katalyzátoru, odpařením rozpouštědla s následujícím čištěním RPLC za použití CH₃CN/0,lM NHjOAc 1/4 jako elučního činidla se získá 35 mg (37 %) titulní sloučeniny.

'H-NMR (500 MHz, MeOD): δ 1,00 (m, 1H), 1,20-1,45 (m, 5H), 1,5 (m, 1H), 1,6-1,8 (m, 6H), 1,9-2,1 (m, 6H), 2,25 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 3,5 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 4,15 (m, 1H), 4,35^1,6 (m, 3H), 4,9 (m, částečně bráněný HOD čarou, 6H), 7,55 (d, 2H), 7,75 (d, 2H).

-106CZ 290104 B6

Příklad 57

MeOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HC1 (i) MeOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

0,186 g (0,841 mmol) TfO-CH₂-COOMe (viz příprava výchozích materiálů) se rozpustí vCH₂C1₂ a pomalu se přidá ke směsi 0,425 g (0,841 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) (viz příklad 1), 0,894 g (5,04 mmol) K₂CO₃ v CH₂C1₂ (celkem 4,3 ml) při teplotě místnosti a míchá se přes noc. Přidá se další CH₂C1₂ a směs se promyje vodou a solankou, suší, filtruje a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se 0,51 g zbytku, který se třikrát podrobí rychlé chromatografii na silikagelu za použití nejprve CH₂Cl₂/THF/MeOH (16/4/1), potom CH₂C1₂/THF (2% NH₃) (8/2) a nakonec diethyletherem/MeOH(NH₃-nasycený) (95/5) jako elučním činidlem. Získá se tak 0,324 g (67 %) titulní sloučeniny.

(ii) MeOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HC1

220 mg (0,38 mmol) MeOOC-CH^RjCgl-Aze-PabíZ) se hydrogenuje za přítomnosti 1,14 ml IN HC1, 6,5 ml MeOH a 300 mg Pd/C po 2 h. Katalyzátor se odstraní filtrací přes celit a millipor filtr a následujícím odpařením rozpouštědla ve vakuu a dvakrát sušením vymražením se získá 178 g (91 %) titulní sloučeniny.

'H-NMR (500 MHz, D₂O): δ 1,12-1,4 (m, 5H), 1,68-1,81 (m, 2H), 1,81-1,9 (m, 3H), 1,97-2,1 (m, 1H), 2,29-2,4 (m, 1H), 2,68-2,8 (m, 1H), 3,86 (s, 3H), 4,1 (s, 2H), 4,1-4,5 (d, 1H), 4,364,42 (t, 2H), 4,59 (s, 2H), 4,99-5,04 (m, 1H), 7,65-7,7 (d, 2H), 7,8-7,85 (d, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, MeOD): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 146,78, 167,68, 168,15, 172,29.

Příklad 58

EtOOOC-CHr-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HC1 (i) EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

0,208 g (0,876 mmol) TfO-CH₂-COOEt (viz příprava výchozích materiálů) se rozpustí v CH₂C1₂a pomalu se přidá ke směsi 0,443 g (0,876 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) (viz příklad 1) a 0,931 g (5,26 mmol) K₂CO₃ v CH₂C1₂ (celkem 4 ml) ochlazenému na ledové lázni. Po 2 h se ledová lázeň odstraní a míchání se pokračuje při teplotě místnosti 2 h. Přidá se další CH₂C1₂ a směs se promyje vodou a solankou, suší, filtruje a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se 0,51 g zbytku, který se podrobí rychlé chromatografii za použití diethyletheru/MeOH(NH₃-nasycený) (95/5) jako elučního činidla. Získá se tak 0,387 g (75 %) titulní sloučeniny.

(ii) EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HC1

395 mg (0,668 mmol) EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) se hydrogenuje za přítomnosti 12 ml EtOH (99,5 %) a 390 mg Pd/C 5 h. Odstraněním katalyzátoru filtrací na celitu a millipor filtru s následujícím odpařením rozpouštědla ve vakuu a vymražením dvakrát dosucha se získá 281 mg (88 %) EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab. Přidají se 2 ekvivalenty IN HC1 a sušením vymražením třikrát se získá 288 mg (81 %) titulní sloučeniny.

’Η-NMR (500 MHz, D₂O): δ 1,05-1,48 (m, 8H), 1,6-2,05 (m, 6H), 2,15-2,33 (m, 1H), 2,582,79 (m, 1H), 3,89-4,0 (m, 3H), 4,2-4,33 (m, 3H), 4,33^1,44 (m, 1H), 4,44-4,66 (m, 2H), 4,91 (m, 1H (částečně stíněný H-O-D signálem)), 7,54-7,63 (d, 2H), 7,72-7,84 (d, 2H).

- 107CL 290104 B6

Příklad 59

BuOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab xHOAc (i) ⁿBuOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

Připraví se stejným způsobem jak je popsán pro ⁿHexCOO-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) (viz příklad 60 (i)) se použití TfO-CH₂-COOBu jako alkylačního činidla. Surový produkt se čistí 10 rychlou chromatografií dvakrát, nejprve za použití CH₂Cl₂/MeOH (95/1) jako elučního činidla a pak CH₂Cl₂/i-propylalkoholu (90/7) a získá se 324 mg (47 %) titulní sloučeniny.

(ii) ⁿBuOOC-CH₂-(R)Clg-Aze-Pab x HOAc

Odchránění se provede postupem popsaným v příkladu 57 (ii). Surový materiál se čistí pomocí RPLC za použití CH₃CN (30 %) v 0,05M MH4OAC a 0,05 M HOAc jako elučního činidla se získá 100 mg (53 %) titulní sloučeniny.

’Η-NMR (500 MHz, MeOD): δ 0,85-2,1 (m, 18H), 2,15-2,37 (m, 1H), 2,58-2,8 (m, 1H), 3,720 5,0 (m, 10H), 4,88-5,0 (částečně překrytý H-o-D signálem)), 7,46-7,65 (d, 2H), 7,71-7,88 (d,

2H).

¹³C-NMR(75 MHz, MeOH): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 146,8, 168,12, 168,2,172,2.

Příklad 60

HexOOC-CHr-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HCl (i) ⁿHexOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

0,402 g (1,375 mmol) TfO-CH₂-COOHex (viz příprava výchozích materiálů) se rozpustí vCH₂Cl₂ a pomalu se přidá ke směsi 0,695 g (1,375 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) (viz příklad 1), 1,463 g, (8,25 mmol) K₂CO₃ v CH₂C1₂ (celkem 4 ml) při < -10 °C. Po 1 h se lázeň COr35 led odstraní a v míchání se pokračuje při teplotě místnosti 45 minut. Přidá se další CH₂C1₂a směs se promyje vodou a solankou, suší, filtruje a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se 0,828 g zbytku, který se dvakrát podrobí rychlé chromatografii, nejprve použitím diethyletheru/MeOH (NH₃-nasycený) (95/5) a pak CH₂Cl₂/MeOH (NH₃-nasycený) (95/5) jako elučního činidla. Získá se 0,42 g (47 %) titulní sloučeniny.

(ii) HexOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HCl

Hydrogenací 400 mg (0,617 mmol) ⁿHexOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) za přítomnosti 12 ml THF a 400 mg Pd/C po 1,5 h se nedosáhne kompletního odchránění. Hydrogenace byla úplná za 45 4 h za přítomnosti 1,7 ml IN HCl, 12 ml MeOH a 340 mg Pd/C. Odstraněním katalyzátoru filtrací přes celit a millipor filtr s následujícím odpařením rozpouštědla ve vakuu a dvakrát vymražením dosucha, se získá 287 mg (79 %) titulní sloučeniny.

’H-NMR(300 Mhz, MeOD): δ 0,8-2,13 (m, 22H), 2,13-2,31 (m, 1H), 2,61-2,81 (m, 1H), 3,9350 4,15 (m, 3H), 4,15^1,37 (m, 3H), 4,37-4,7 (m, 3H), 4,88-5,0 (m, 1H (částečně překrytý H-O-D signálem)), 7,52-7,69 (d, 2H), 7,75-7,9 (d, 2H).

’³C-NMR (75 Mhz, MeOD): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 146,84,167,6,167,84,172,17.

-108CZ 290104 B6

Příklad 61

H-(R)Cgl-Pro-Pac x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cgl-Pro-Pac(Z)

377 mg (1,97 mmol) EDC se přidá při O °C k míchanému roztoku 708 mg (1,95 mmol) Boc(R)Cgl-Pro-OH (viz příprava výchozích materiálů), 714 mg (2,0 mmol) H-Pac(Z) x 2 HC1 (viz příprava výchozích materiálů) a 1,078 g (8,8 mmol) DMAP ve 12,5 ml acetonitrilu. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti přes noc. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se nejprve čistí rychlou chromatografií za použití 10% methanolu v methylenchloridu jako elučního činidla a potom pomocí RPLC. Byly izolovány dvě frakce (51 mg a 150 mg) poskytující MS m/z = 626 (M+l).

(ii) H-(R)Cgl-Pro-Pac(Z)

Chlorovodík se probublává roztokem 141 mg (0,22 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-Pac(Z) v 50 ml ethylacetátu. Po 15 minutách se přidá 10% roztok uhličitanu sodného a organická fáze se oddělí a suší (K₂CO₃). Odpařením rozpouštědla se získá 71 mg (61 %) produktu.

(iii) H-(R)Cgl-Pro-Pac x 2 HC1

Směs 71 mg (0,14 mmol) H-(R)Cgl-Pro-Pac(Z) a na špičku špachtle 10% Pd/C v 10 ml ethanolu se hydrogenuje při teplotě místnosti a atmosférickém tlaku 2 h. Katalyzátor se odstraní filtrací a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Zbytek se rozpustí v 50 ml vody a 0,6 1M kyseliny chlorovodíkové. Vymražením dosucha se získá 38 mg (58 %) titulní sloučeniny.

MS m/z 392 (M+l)

Příklad 62

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pac x HOAc (i) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pac(Z)

Směs 84 mg (0,15 mmol) H-(R) Cha-Pro-Pac(Z) (viz příklad 53 (ii), jedna špachtle uhličitanu draselného a 47 mg TfOCH₂-COOBn (viz příprava výchozích materiálů) ve 3 ml methylenchloridu se míchá při teplotě místnosti přes noc. Reakční směs se filtruje a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a získá se zbytek, který se podrobí rychlé chromatografií za použití ethylacetátu/methylenchloridu/methanolu 95:20:5 jako elučního činidla. 29 mg požadovaného produktu se izoluje.

(ii) HOOC-CHHRjCha-Pro-Pac x HOAc

Směs 29 mg BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pac(Z) a 37 mg 10% Pd-C v 5 ml ethanolu se míchá 4 h při teplotě místnosti a atmosférickém tlaku. Filtrací katalyzátoru s následujícím odstraněním rozpouštědla a čištěním pomocí RPLC se získá požadovaná sloučenina.

MS m/z = 464 (M+l)

-109CZ 290104 B6

Příklad 63

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pac (i) BnOOC-CH2-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pac(Z)

Roztok 0,35 g (0,64 mmol) H-(R)Cgl-Pro-Pac(Z) (viz příklad 61 (ii)), 124 mg (0,76 mmol) benzylakrylátu a 280 μ! (2 mmol) triethylaminu v 1 ml ethanolu se udržuje na teplotě místnosti 3 dny. Odstraněním rozpouštědla s následujícím čištěním pomocí HPLC se získá 18 mg (4 %) titulní sloučeniny.

(ii) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pac

Směs BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pac(Z) a malé špachtle 10% Pd/C se hydrogenuje 2 h při teplotě místnosti a atmosférickém tlaku v EtOH. Filtrací s následujícím odstraněním rozpouštědla ve vakuu a rozpuštěním ve vodě a vymražením dosucha se získá 7 mg (78 %) titulní sloučeniny.

MS m/z = 464 (M+l)

Příklad 64

HOOC-CHr-CHr-(R)Cha-Aze-Pac (i) Boc-(R)Cha-Aze-Pac(Z)

Roztok 0,4 g (1,38 mmol) H-Pac(Z) (viz příprava výchozího materiálů H-Pac(Z) x 2 HC1), 0,5 g (1,41 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH (viz příprava výchozích materiálů) a 0,67 g (5,5 mmol) DMAP ve 20 ml acetonitrilu se smísí při 0°C s roztokem 0,26 g (1,4 mmol) EDC v 15 ml acetonitrilu. Reakční směs se udržuje na teplotě místnosti přes noc a potom se rozpouštědlo odstraní ve vakuu. Zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a vodu. Vodná fáze se extrahuje ještě jednou ethylacetátem a spojené organické fáze se promyjí roztokem hydrogensíranu sodného, roztokem uhličitanu sodného a solankou a pak se suší (síran sodný). Odpařením rozpouštědla se získá 0,54 g (63 %) titulní sloučeniny.

(ii) H-(R)Cha-Aze-Pac(Z)

Chlorovodík se probublává roztokem 0,54 g (0,9 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-Pac(Z) v ethylacetátu. Roztok se udržuje v chladničce přes noc a rozpouštědlo se pak odstraní ve vakuu a zbytek se rozpustí v ethylacetátu. Roztok se promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a solankou a suší (síran sodný). Odstraněním rozpouštědla se získá 0,35 g (77 %) produktu.

(iii) BnOOC-CHr-CHHRjCha-Aze-PactZ)

Roztok 180 mg (0,33 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pac(Z) a 53 mg (0,33 mmol) benzylakrylátu v ethanolu se udržuje na teplotě místnosti 60 h. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se rozpustí v ethylacetátu. Roztok se promyje roztokem hydrogensíranu draselného a roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Sušením (síran sodný) a odstraněním rozpouštědla ve vakuu se získá zbytek, který se čistí rychlou chromatografíí za použití 10% methanolu v methylenchloridu jako elučním činidle a získá se 150 mg (66 %) titulní sloučeniny.

-110CZ 290104 B6 (iv) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pac x 2 HC1

Směs 115 mg BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pac(Z) a 67 mg 10% Pd-C v 10 ml ethanolu se hydrogenuje po 1,5 h při teplotě místnosti a atmosférickém tlaku. Filtrací s následujícím odstraněním rozpouštědla ve vakuu a rozpuštěním zbytku ve vodě a 1,5 ml 1M kyseliny chlorovodíkové se získá roztok, který byl sušen vymražením a poskytl 30 mg (33 %) titulní sloučeniny.

MS m/z464 (M+l).

Příklad 65

HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pig x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Aze-Pig(Z)

0,249 g (1,298 mmol) EDC se přidá při < -15 °C ke směsi 0,473 g (1,236 mmol) Boc-(R)ChaAze-OH (voz příprava výchozích materiálů), 0,404 g (1,236 mmol) H-Pig(Z) x HC1 (viz příprava výchozích materiálů) a 0,604 g (4,94 mmol) DMAP ve 13,5 ml DMF. Teplota se nechá stoupnout na teplotu místnosti přes noc. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a přidá se EtOAc a 2M KHSO₄. Fáze se oddělí a organické fáze se promyjí nasyceným Na₂CO₃ a solankou. Opakováním extrakčního postupu, sušením (Na₂SO₄), filtrací a odpařením rozpouštědla se získá 0,612 g zbytku, který se podrobí rychlé chromatografíi za použití EtOAc/MeOH 9/1 jako elučního činidla. Získá se tak 407 mg (53 %) titulní sloučeniny.

(ii) H-(R)Cha-Aze-Pic(Z)

0,4 g (0,638 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-Pig(Z) se rozpustí ve 24,4 ml TFA/CH₂CL₂ 1/4, míchá se 30 minut na ledové lázni a 30 minut při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a přidá se EtOAc a nasycený Na₂CO₃. Fáze se oddělí a organická vrstva se promyje vodou a solankou, suší (Na₂SO₄), filtruje a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu, čímž se získá 336 mg (100 %) titulní sloučeniny.

(iii) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pig(Z) ml (0,562 mmol) BnOOC-CH₂Br se pomalu přidá ke směsi 0,296 g (0,562 mmol) H-(R)ChaAze-Pig(Z) a 0,171 g (1,236 mmol) K₂CO₃ v 6 ml CH₃CN zahřátým na 60 °C na olejové lázni. Po 1 h 45 min se rozpouštědlo odpaří, přidá se EtOAc a směs se promyje vodou, suší (Na₂SO₄), filtruje a odpařením rozpouštědla ve vakuu se získá 346 mg zbytku, který se podrobí rychlé chromatografíi za použití CH₂CL₂/THF/MeOH (8/2/1) jako elučního činidla. Získá se 297 mg (78 %) titulní sloučeniny.

(iv) HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pig x 2 HC1

243 mg (0,36 mmol) HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pig(Z) se hydrogenuje za přítomnosti 1,7 ml IN HC1, 10 ml EtOH (99,5%) a 300 mg Pd/C 2 h. Katalyzátoru se odstraní filtrací přes celit a milipor filtr s následujícím odpařením rozpouštědla ve vakuu a dvakrát sušením vymražením se získá 166 mg (88 %) titulní sloučeniny.

'H-NMR (500 MHz, D₂O): δ 0,6-1,9 (m, 18H), 2,1-2,27 (m, 1H), 2,52-2,76 (m, 1H), 2,82-3,2 (m, 4H), 3,46-3,61 (m, 1H), 3,61-3,81 (m, 2H), 3,81-4,0 (m, 2H), 4,0-4,24 (m, 2H), 4,24-4,4 (m, 1H).

-111 CZ 290104 B6

Příklad 66

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Pro-Pig(Z)

Ke směsi 0,3495 g (0,95 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (viz příprava výchozích materiálů), 0,464 g (3,8 mmol) DMAP, 0,310 g (0,95 mmol) H-Pig(Z) x HC1 (viz příprava výchozích materiálů) v 5 ml CH₂C1₂ se přidá 0,192 g (1 mmol) EDC a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Směs se odpaří a zbytek se rozpustí v ethylacetátu. Organická fáze se promyje dvakrát 0,3M KHSO₄ a jednou solankou. Organická vrstva se suší (Na₂SO₄), filtruje a odpaří. Surový produkt se čistí rychlou chromatografii za použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH (100/0, 97,3, 95/5, 90/10) jako elučního činidla a získá se 307 mg titulní sloučeniny.

(ii) H-(R)Cha-Pro-Pig(Z)

0,306 g (0,48 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-Pig(Z) se rozpustí ve 30 ml HC1 nasyceného ethylacetátu. Směs se nechá půl hodiny stát. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v CH₂C1₂. Organická vrstva se promyje dvakrát 0,2M NaOH. Spojené vodné vrstvy se extrahují jednou CH₂C1₂a spojené organické vrstvy se suší (Na₂SO₄), filtrují a odpařením se získá 257 mg (99 %) titulní sloučeniny.

(iii) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig(Z)

Směs 0,256 g (0,473 mmol) H-<R)CHa-Pro-Pig(Z), 0,144 g (1,04 mmol) K₂CO₃ a 82 μΐ (0,521 mmol) benzylbromacetátu v 6 ml acetonitrilu se zahřívá dvě hodiny na 60 °C za míchání. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v CH₂C1₂, promyje se jednou vodou a jednou solankou, suší (Na₂SO₄), filtruje a rozpouštědlo se odpaří. Surový produkt se čistí rychlou chromatografií za použití postupného gradientu CH₂Cl₂/MeOH (97/3, 95/5, 90/10) jako elučního činidla a získá se 0,2 g produktu (90% čistota podle RPLC). Konečné čištění se provede na chromatotronu (harrison research, model 7924T) na 2mm silikagelových plotnách v CH₂Cl₂/MeOH 95/5 a získá se 0,158 g (48 %) čistého produktu.

(iv) HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig x 2 HC1

0,158 g (0,227 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig(Z) se smísí s 0,075 g Pd/C (5%), 1 ml 1NHC1 roztoku a 10 ml ethanolu. Směs se hydrogenuje při atmosférickém tlaku jednu hodinu. Filtrací přes celit a odpařením rozpouštědla s následujícím vymražením dosucha dvakrát z vody se získá 119 mg (97 %) produktu.

Ή-NMR (300 MHz, D₂O): δ 0,95-1,44 (m, 7H), 1,52 (m, 1H), 1,60-2,20 (m, 13H), 2,39 (m, 1H), 3,07-3,32 (m, 4H), 3,68 (m, 1H), 3,77-4,02 (m, 5H; z toho 3,98 (s, 2H), 4,44-4,58 (m, 2H).

^bC-NMR (75 MHz, D₂O): karbonylové a guanidinové uhlíky: δ 156,5, 168,3,174,5.

Příklad 67

HOOC-CH2-CH₂-(R)Clia-Pro-Pig x 2 HC1 (i) BnOOC-CH2-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig(Z)

0,297 g (0,55 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pig(Z) (viz příklad 66 (ii)) se rozpustí ve 2 ml ethanolu a přidá se 90 μΐ (0,59 mmol) benzylakrylátu. Reakční směs se čtyři dny míchá při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří a surový produkt se chromatografuje na chromatotronu (Harrison

-112CZ 290104 B6 research, model 7924T) za použití 2 ml silikagelu destičky s postupným gradientem CH₂C1₂/MeOH (95/5, 90/10) jako elučním činidlem se získá 0,338 g (87 %) titulní sloučeniny.

(ii) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig x 2 HC1

0,238 g (0,227 mmol BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig(Z) se smísí s 0,120 g (Pd/C (5%) 1,2 ml IN HCl-roztoku a 15 ml ethanolu. Směs se hydrogenuje při atmosférickém tlaku jednu hodinu. Filtrací katalyzátoru přes celit, odpařením rozpouštědla s následujícím vymražením dosucha dvakrát z vody se získá 178 mg (95 %) titulní sloučeniny.

’Η-NMR (300 mHz, D₂O): δ 0,82-1,45 (m, 8H), 1,45-2,15 (m, 13H), 2,29 (m, 1H), 2,83 (t, 2H), 2,9-3,4 (m, 6H), 3,57 (bq, 1H), 3,67-3,87 (m, 3H), 4,25^1,43 (m, 2H).

¹³C-NMR (75 Mhz, D₂O): karbonylové a amidinové uhlíky: δ 156,3, 168,2, 174,3, 174,6.

MSm/z479 (M⁺+l)

Příklad 68 (HOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pig x 2 HC1

120 mg (0,126) mmol (BnOOC-CH₂)2-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)₂ (viz příklad 50 (iii)) se hydrogenuje za přítomnosti 0,75 ml IN HC1, 7 ml EtOH (99,5%) a 150 mg Pd/C 4 h. Odstraněním katalyzátoru filtrací přes celit a millipor filtr a odpařením rozpouštědla ve vakuu se získá s následujícím vymražením 66 mg (90 %) titulní sloučeniny.

’H-NMR (500 MHz, D₂O): δ 1,05-1,38 (m, 7H), 1,53-1,64 (d, 1H), 1,64-2,14 (m, 11H), 2,272,39 (m, 1H), 3,03-3,28 (m, 4H), 3,58-3,70 (m, 1H), 3,7-3,8 (m, 1H), 3,8-3,9 (d, 2H), 4,07-4,22 (m, 2H), 4,22—4,35 (m, 1H), 4,38-4,5 (m, 1H).

’³C-NMR (75 Mhz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 156,28, 168,73, 170,14, 174,01.

Příklad 69

HOOC-CH₂-CH₂-(HOOC-CH₂)-(R)Cha-Pro-Pig x2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-CH₂-(HOOC-CH₂)-(R)Cha-Pro-Pig(Z)

Ke studené (teplota ledové lázně) směsi 100 mg (0,14 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(HOOC-CH₂)(R)Cha-Pro-Pig(Z) (viz příklad 67 (i)) a 80 mg (0,57 mmol) uhličitanu draselného ve 4 ml CH₂C1₂ se opatrně přidá roztok 64 mg (0,21 mmol) TfO-CH₂-COOBn rozpuštěného v 1 ml CH₂C1₂. Reakční směs se nechá při 0 °C 30 minut a pak se nechá ohřát na teplotu místnosti na 2 h a pak se zahřívá pod refluxem 30 minut a nakonec se nechá stoupnout na teplotu místnosti. Odpařením rozpouštědla s následující rychlou chromatografií za použití CH₂Cl₂/MeOH (97/3) jako elučního činidla se získá 65 mg (54 %) titulní sloučeniny.

(ii) HOOC-CH₂-CH₂-(HOOC-CH₂)-(R)Cha-Pro-Pig x 2 HC1 mg (0,08 mmol BnOOC-CH₂-CH₂-(HOOC-CH₂}-(R)Cha-Pro-Pig(Z) se rozpustí v 10 ml EtOH/lM HC1 (9/1) a hydrogenuje se nad 10% Pd/C 3 h při atmosférickém tlaku. Filtrací katalyzátoru a odpařením rozpouštědla s následujícím sušením vymražením z vody se získá 40 mg (97 %) titulní sloučeniny jako bílého prášku.

-113 CZ 290104 B6 ¹³C-NMR (125 MHz, MeOD): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 157,5, 167,2, 169,1, 173,7 a 174,1.

Příklad 70

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-(R,S)ltp x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts)

Boc-(R)Cgl-Aze-OH (viz příprava výchozích materiálů (400 mg, 1,17 mmol), H-(R,S)Itp(Ts) (viz příprava výchozích materiálů) (366 mg, 1,23 mmol) a DMAP (286 mg, 2,34 mmol) se rozpustí v CH3CN (6 ml) a ochladí se na 5 °C. Přidá se EDC (236 mg, 1,23 mmol) a výsledná směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Odstraní se CH₃CN a zbytek se rozpustí v MeOH/EtOAc/H₂O. Oddělené organické vrstvy se promyjí K₂CO3(nas.), 2M KHSO4, solankou a suší (Na₂SO4). Odpařením rozpouštědla se získá bílá pevná látka, 688 mg (85 %).

MS m/z 620 (M⁺+l) (ii) H-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts)

Boc-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts) (500 mg, 0,8 mmol) se rozpustí v CH₂C1₂ (50 ml) a HC1 (g) se probublává roztokem asi 4 min. Po 45 min se rozpouštědlo odstraní odpařením a výsledný produkt se rozpustí v EtOAc/MeOH/H₂ a kyselý roztok se zpracuje se 2 M NaOH (vod) na pH=8-9. Organická vrstva se oddělí a suší (Na₂SO₄), odpařením rozpouštědla se získá 425 mg (100 %) titulní sloučeniny jako bílé pevné látky.

MS m/z 520 (M⁺+ 1) (iii) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts)

H-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts) (400 mg, 0,77 mmol), benzyl-2-(para-nitrobenzylsulfonyloxy)acetát (viz příprava výchozích materiálů) (325 mg, 0,92 mmol) a K₂CO₃ (235 mg, 1,7 mmol) se míchá v CH3CN (5 ml) při 45 °C. Po několika hodinách byla přeměna pouze 25% a proto byla teplota zvýšena na 60 °C a přidáno další množství benzyl-2-(para-nitrobenzensulfonyloxy)acetátu. Reakce se míchá 48 h (vých. mat.: produkt 25/63) a pak se zpracuje. Rozpouštědlo se odpaří a přidá se EtOAc/H₂O ke zbytku. Fáze se oddělí a vodná fáze se extrahuje EtOAc a pak se spojené organické fáze promyjí K₂CO₃ (nas.), 2M KHSO4, H₂ a suší (Na₂SO4). Takto se získá, po zpětné extrakci kyselého KHSO4, asi 340 mg, které se čistí pomocí RPLC. Získá se 34 mg (7 %) titulní sloučeniny.

MS m/z 668 (M⁺+ 1) (iv) HOOC-CHHRjCgl-Aze-ÍR^jltp x 2 HC1

BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts) (34 mg, 0,05 mmol) se rozpustí v THF (5 ml) aNH₃(G) se destiluje (40 ml) do reakční baňky se chladičem se suchým ledem. Na (pevný) se přidá a objeví se tmavomodrá barva. Reakční směs se míchá 5 min před tím, než se přeruší HOAc (50 μΐ). Odstraní se chladič se suchým ledem a NH₃(kap.) se nechá odpařit. Ke zbytku se přidá H₂O a HOAc na pH=7. Sušením vymražením a preparativní RPLC se získá několik frakcí, které se analyzují pomocí FAB-MS. Dvě frakce obsahují požadovanou sloučeninu, 3 mg (10%) po sušení vymražením se 2,2 ekv. 1M HC1:

MS m/z 424 (M⁺ + 1)

-114CZ 290104 B6

Příklad 71

HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp (i) Boc-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts)

Boc-(R)Cha-Aze-OH (viz příprava výchozích materiálů) (169 mg, 0,5 mmol), H-(R,S)Itp(Ts) (viz příprava výchozích materiálů) (155 mg, 0,52 mmol) DMAP (122 mg, 1 mmol) se rozpustí vCH₃CN (2,5 ml) a ochladí se na 5 °C. Přidá se EDC x HC1 (115 mg, 0,6 mmol) a výsledná směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Po míchání přes noc se přidá odděleně (0,5 ekv.) H(R,S)Itp(Ts) a EDC. Reakční směs se míchá další noc a zpracuje jak je uvedeno pro Boc-(R)CglAze-(R,S)Itp(Ts) (viz příklad 70) výše). Získá se tak 260 mg surového produktu. Čištěním pomocí RPLC se získá 180 mg (57 %) titulní sloučeniny.

MS m/z 634 (M⁺ + 1).

(ii) H-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts)

Boc-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts) (180 mg, 0,28 mmol) se rozpustí v CH₂C1₂ (20 ml) a HC1 (g) se probublává roztokem asi 4 min. Po 45 min se rozpouštědlo odstraní odpařením a výsledný produkt se rozpustí v CH₂C1₂ a promyje se 2M NaOH na pH % 8. Fáze se oddělí a organická fáze se suší (Na₂SC>4) a odpařením se získá 163 mg (asi 100 %).

MS m/z 534 (M⁺+l).

(iii) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts)

H-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts) (80 mg, 0,15 mmol), K₂CO₃ (45 mg, 0,33 mmol) a Br-CH₂COOBn (39 mg, 0,17 mmol) se míchá v CH₃CN (1,5 ml) při 60 °C 2,5 h. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v EtOAc/H₂O. Fáze se oddělí a organická fáze se promyje 10% kyselinou citrónovou a suší (Na₂SO4). Odpařením rozpouštědla se získá 171 mg surového produktu, který se čistí pomocí RPLC a získá se 53 mg (52 %) titulní sloučeniny.

MS m/z 681 (M⁺+ 1) (iv) HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp

BnOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts) (50 mg, 0,07 mmol) se zpracuje jak je popsáno pro BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts) (viz příklad 70 (iv)). Získá se tak směs produktů, která se čistí pomocí RPLC a získá se 12 mg 1:1 směsi titulní sloučeniny spolu s redukovanou sloučeninou, která se objevuje při hmotnosti 439 (m/z).

MS m/z 438 (M⁺ + 1)

Příklad 72

H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Ts)

Při teplotě místnosti se 2,1 g (5,5 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-OH (viz příprava výchozích materiálů), 1,0 g (8,2 mmol) DMAP a 1,7 g (5,8 mmol) H-(R,S)Itp(Ts) (viz příprava výchozích materiálů) se rozpustí ve 40 ml acetonitrilu. Po několika minutách míchání se přidá 1,1 g

-115CZ 290104 B6 (5,8 mmol) EDC a v míchání se pokračuje 60 h. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se rozpustí v CH2CI2, promyje se vodou, 0,3M KHSO4 a KHCO3 (vod.) a suší (Na₂SO₄). Odpařením rozpouštědla a filtrací přes silikagel se získá 2,43 g (67 %) produktu.

MS m/z 661 (M⁺+ 1) (ii) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp

2,4 g (3,6 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Ts) se rozpustí v 15 ml THF aNH₃(g) se kondenzuje do baňky a pak se přidá na. Reakce se přeruší po 5 min kyselinou octovou a NH₃ a THF se odpaří. Zbytek se suší vymražením a čistí RPLC (CH₃CN/O,1M NHjOAc, 6/4) a získá se 0,93 g (51 %) požadovaného produktu.

MS m/z 507 (M⁺+ 1) (iii) H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp x 2 HC1

Při teplotě místnosti se 50 mg (0,099 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp rozpustí v ethylacetátu nasyceném HC1 (g). Po 2 h míchání se rozpouštědlo odstraní ve vakuu. Zbytek se suší vymražením ve vakuu třikrát z vody a získá se 35 mg (74 %) požadovaného produktu.

MS m/z 407 (M⁺+ 1)

Příklad 73

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z)

Při teplotě místnosti se 0,84 g (1,66 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp (viz příklad 72) rozpustí v 10 ml CH2CI2 a 10 ml 0,5M NaOH. Po míchání po 3 h se fáze oddělí a organická vrstva se promyje vodou a suší se nad Na₂SO₄. Odpařením a rychlou chromatografií (ethylacetát/heptan 9/1) se získá 0,5 g (47 %) požadovaného produktu.

MS m/z 641 (M* + 1) (ii) H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z)

Při teplotě místnosti se 0,5 g (0,78 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z) rozpustí v ethylacetátu nasyceném HC1. Přidá se voda a směs se zalkalizuje pomocí K2CO3. Fáze se oddělí. Vodná fáze se extrahuje CH2CI2 a organická fáze se promyje vodou. Spojené organické fáze se pak suší (Na₂SO₄). Odpařením rozpouštědla se získá 0,3 g (71 %) požadovaného produktu.

MS m/z 541 (M⁺+ 1) (iii) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z)

0,29 g (0,5 mmol) H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z), 0,15 g (1 mmol) K2CO3 se vyjme do 25 ml acetonitrilu. Přidá se 154 mg (0,6 mmol) benzylbromacetátu a směs se míchá při 50 °C 4 h. Odpařením a čištěním pomocí RPLC (acetonitril:0,lM NH₄OAc 70:30) se získá asi 200 mg požadovaného produktu.

- 116CZ 290104 B6 (iv) HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp x 2 HC1

200 mg BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z) se rozpustí v ethanolu. Přidá se malá lžička 10% Pd na uhlí a směs se hydrogenuje 4 h. Filtrací přes hyflo, odpařením rozpouštědla s následujícím vysušením vymražením z vody se získá 53 mg požadovaného produktu.

'H-NMR (300,13 MHz, D₂O): δ 1,0-2,35 (přesahující m, 22H), 3,28-3,51 (m, 5H), 3,51-3,64 (m, 1H), 3,75-4,03 (m, 3H), 5,03-5,14 (s, široký, 1H). Signál jednoho z protonů je částečně stíněn H-O-D-signálem.

MSm/z465 (M⁺+l)

Příklad 74

H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cgl-Pro-(R,S)-Hig(Z)

Ke směsi 1,0 g (2,95 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-OH (viz příprava výchozích materiálů), 1,44 g (11,8 mmol) DMAP, 1,12 g (3,25 mmol) H-(R,S)Hig(Z) (viz příprava výchozích materiálů) v 15 ml CH₂C1₂ se přidá 0,62 g (3,2 mmol) EDC a směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v ethylacetátu. Když se organická vrstva promyje dvakrát 0,3M KHSO₄-roztokem, oddělí se z organické vrstvy olej. Ethylacetátová vrstva se suší (Na₂SO₄) a filtruje. Olej a vodná vrstva se pak extrahují CH₂C1₂. Organická vrstva se suší (Na₂SO₄), filtruje a spojí s výše uvedenou EtOAc fází. Odpařením a čištěním surového produktu na chromatotronu (Harrison research, model 7924T) za použití 2mm silikagelových destiček s postupným gradientem CH₂Cl₂/MeOH (97/3, 90/10) jako elučního činidla se získá 1,1 g (59 %) titulní sloučeniny.

(ii) H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig x 2 HC1 mg (0,13 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z) se rozpustí v 50 ml ethylacetátu nasyceného HC1. Směs se nechá stát jednu hodinu, odpaří a zbytek se rozpustí v 10 ml ethanolu. 40 mg Pd/C (5%), 1 ml vody a 0,5 ml 1M roztoku HC1 a směs se hydrogenuje při atmosférickém tlaku přes noc. Odfiltrováním katalyzátoru přes celit a odpařením rozpouštědla s následujícím sušením vymražením třikrát z vody se získá titulní sloučenina v 75% výtěžku.

’Η-NMR (D₂O, 300 MHz): δ 0,95-1,35 (m, 5H), 1,50-2,45 (m, 15H), 3,02 (bt, 1H), 3,1-3,8 (m, 7H), 4,13 (d, 1H), 4,38 (bd, 1H).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): karbonylové a guanidinové uhlíky: δ 154,8,168,9,174,4.

MSm/z393 (M*+l)

Příklad 75

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig x 2 HCI (i) H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z) g (1,6 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z) (viz příklad 74 (i)) se rozpustí ve 100 ml ethylacetátu nasyceného HCI a směs se nechá stát jednu hodinu. Směs se odpaří a zbytek se rozpustí

-117CZ 290104 B6 v CH₂C1₂. Organická vrstva se promyje dvakrát 0,2M NaOH-roztokem, suší se (Na₂SO₄), filtruje a odpařením se získá 0,825 g (98 %) titulní sloučeniny.

(ii) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z)

0,442 g (0,839 mmol) H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z), 0,256 g (1,85 mmol) K₂CO₃ a 145 μΐ (0,521 mmol) benzylbromacetátu se smísí ve 12 ml THF. Směs se míchá při 40 °C jednu hodinu a při teplotě místnosti přes noc. Po odpaření rozpouštědla se zbytek rozpustí v CH₂C1₂ a promyje jednou vodou a jednou solankou. Organická vrstva se suší (Na₂SO₄), filtruje a odpaří a surový 10 produkt se čistí na chromatotronu (Harrison research, model 7924T) za použití 2mm silikagelových destiček postupným gradientem CH₂Cl₂/MeOH (97/3, 95/5, 90/10) jako elučním činidlem za získání 0,165 g (29 %) titulní sloučeniny.

(iii) HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig x 2 HC1

0,165 g (0,25 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z) se smísí s 0,50 g Pd/C (5%), 0,7 ml 1M HCl-roztoku a 10 ml ethanolu. Směs se hydrogenuje při atmosférickém tlaku čtyři hodiny. Filtrací katalyzátoru přes celit a odpařením rozpouštědla následovaným sušením vymražením dvakrát z vody se získá 0,1 g (75 %) produktu.

‘H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,05-1,45 (m, 5H), 1,55-2,5 (m, 15H), 3,08 (bt, 1H), 3,2^1,05 (m, 9H), 4,30 (d, 1H), 4,44 (m, 1H).

^I3C-NMR (75 Mhz, D₂O): karbonylové a guanidinové uhlíky: 6 154,9,167,2, 169,4, 174,1.

Příklad 76

H-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig(Z)

0,72 g (1,95 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (viz příprava výchozích materiálů), 0,95 g (7,8 mmol) DMAP, 0,74 g (2,14 mmol) 82% čistého H-(R,S)Hig(Z) (viz příprava výchozích materiálů) 35 v 10 ml CH₂C1₂ se přidá 0,486 g (2,54 mmol) EDC a směs se míchá při teplotě místnosti 3 dny.

Směs se zředí CH₂C1₂ a promyje vodou, dvakrát 0,3M roztokem KHSO₄ a jednou solankou. Organická vrstva se suší (Na₂SO₄), filtruje a odpaří a surový produkt se čistí rychlou chromatografií za použití CH₂Cl₂/MeOH 95/5 jako elučního činidla, získá se 0,450 g (33 %) produktu.

(ii) H-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig x 2 HC1 mg (0,078 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig(Z) se rozpustí ve 20 ml ethylacetátu nasyceného HC1. Směs se nechá jednu hodinu stát, odpaří se a zbytek se rozpustí v 10 ml ethanolu. Přidá se 20 mg Pd/C a 0,3 ml 1M HC1 roztoku a směs se hydrogenuje při atmosférickém tlaku dvě 45 hodiny. Odfiltrováním katalyzátoru přes celit s následujícím vymražením dosucha dvakrát z vody se získá 28 g (78 %) titulní sloučeniny.

’Η-NMR (D₂O, 300 MHz): δ 0,9-1,6 (m, 6H), 1,6-2,5 (m, 16H), 3,09 (t, 1H), 3,31 (t, 1H), 3,37-

3,74 (m, 4H), 3,81 (m, 1H), 4,35-4,47 (m, 2H).

¹³C-NMR (75 Mhz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 154,9, 169,8,174,5.

-118CZ 290104 B6

Příklad 77

H-(R)Cgl-Aze-Rig x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Rig(Z)

K roztoku 0,50 g (1,6 mmol) H-Rig(Z) (viz příprava výchozích materiálů) 0,59 g (1,6 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH (viz příprava výchozích materiálů), 0,84 g (6,9 mmol) dimethylaminopyridinu ve 30 ml acetonitrilu a 5 ml dimethylformamidu se přidá 0,33 g (1,7 mmol) N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylkarbodiimid-hydrochloridu. Reakce se míchá 3 dny, pak se odpaří a rozdělí se mezi vodný hydrogensíran draselný a methylenchlorid. Methylenchloridová vrstva se promyje vodným hydrogenuhličitanem sodným, suší (Na₂SO₄) a odpaří. Surový materiál se odfiltruje odsátím přes sloupeček silikagelu s methylenchloridem/methanolem 9/1 a získá se po odpaření 0,78 g (76 %) požadované sloučeniny.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,8-1,9 (m, 27 H), 2,4-2,6 (m, 2H), 2,78 (bt, 2H), 3,15-3,4 (m, 2H), 3,80 (bt, 1H), 4,0-4,4 (m, 4H), 4,75 (bt, 1H), 4,97 (bd, 1H), 5,08 (s, 2H), 7,1-7,4 (m, 7H),

7,74 (b, 1H).

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Rig(Z) x 2 HC1

Baňka, obsahující Boc-(R)Cgl-Aze-Rig(Z), 0,76 g (1,2 mmol) v 50 ml ethylacetátu se ochladí na ledové lázni. 5 min se probublává suchý HC1 a odpařením roztoku se získá 0,74 g (100 %) dihydrochloridu jako bílého prášku.

*H-NMR (300 Mhz, MeOD): δ 1,1-2,0 (m, 18H), 2,23 (m, 1H), 2,68 (m, 1H), 3,15-3,45 (m, 4H), 3,72 (bd, 1H), 3,9-4,0 (bd, 2H), 4,27 (m, 1H), 4,39 (m, 1H), 4,78 (m, 1H), 5,30 (s, 2H), 7,37,5 (m, 5H).

(iii) H-(R)Cgl-Aze-Rig x 2 HC1

Baňka, obsahující roztok 20 mg H-(R)Cgl-Aze-Rig(Z) a malé množství 5% Pd/C se hydrogenuje při atmosférickém tlaku 1 h. Směs se filtruje přes celit a odpaří, zbytek se lyofílizuje s několika kapkami konc. HC1 přidanými pro získání produktu. Výtěžek 8 mg (52 %).

'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,1-2,0 (m, 18 H), 2,37 (m, 1H), 2,75 (m, 1H), 3,08 (bt, 2H), 3,39 (bt, 2H), 3,8-4,0 (m, 3H) 4,35^1,5 (m, 2H), 4,90 (m, 1H).

¹³C-NMR (75,5 MHz, D₂O): guanidinové a karbonylové uhlíky: δ 172,2,169,4,156,4.

Příklad 78

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Rig x 2 HC1 (i) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Rig(Z)

Směs 0,20 g (0,33 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Rig(Z) (viz příklad 77), 0,13 g uhličitanu draselného, 80 mg jodidu sodného, 10 ml tetrahydrofuranu a 10 ml acetonitrilu se zahřívá na 60 °C lOh. Rozpouštědla se odpaří a surový materiál se zpracuje rychlou chromatografií na silikagelu za použití methylenchloridu/methanolu 92/8 jako elučního činidla. Výtěžek 0,13 g (58 %).

-119CZ 290104 B6 'H-NMR (300 MHz, CDClj): δ 0,9-2,1 (m, 18H), 2,45 (m, 1H), 2,61 (m, 1H), 2,81 (m, 2H), 2,88 (d, 1H), 3,2-3,5 (m, 4H), 3,94 (m, 1H), 4,0-4,25 (m, 3H), 4,85 (m, 1H), 5,12 (s, 2H), 5,14 (s, 2H), 6,9-7,2 (b, 2H), 7,2-7,5 (m, 10H), 7,95 (m, 1H).

(ii) HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Rig x 2 HC1

Směs 0,12 g (0,18 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Rig(Z), 5 ml ethanolu, 3 kapek konc. HC1 a malého množství 5% Pd/C se hydrogenuje při atmosférickém tlaku 1 h. Směs se filtruje přes celit a odpaří. Zbytek se lyofilizuje ve vodě a získá se 91 mg (98 %) produktu.

'H-NMR (500 MHz, D₂O): δ 1,1-1,9 (m, 17H), 2,0 (m, 1H), 2,29 (m, 1H), 2,70 (m, 1H), 3,10 (m, 2H), 3,34 (t, 2H), 3,83 (bd, 2H), 3,89 (dd, 2H), 4,00 (d, 1H), 4,35 (m, 2H), 4,87 (m, 1H).

¹³C-NMR (125,8 MHz, D₂O): guanidinové a karbonylové uhlíky: δ 171,8, 169,6, 167,7,156,3.

Příklad 79

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Rig x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Pro-Rig(Z)

K roztoku 0,25 g (0,82 mmol) 4-aminoethyl-l-benzyloxykarbonylamidinopiperidinu (HRig(Z)), (viz příprava výchozích materiálů), 0,32 g (0,82 mmol Boc-(R)Cha-Pro-OH (viz příprava výchozích materiálů), 0,40 g (3,3 mmol) dimethylaminopyridinu v 10 ml acetonitrilu a 2 ml dimethylformamidu se přidá 0,165 g (0,86 mmol) N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylkarbodiimid-hydrochloridu. Reakce se nechá míchat 3 dny, pak se odpaří a rozdělí se mezi vodný hydrogensíran draselný a methylenchlorid. Methylenchloridová vrstva se promyje vodným hydrogenuhličitanem sodným a vodou, suší (Na₂SO₄) a odpaří. NMR spektrum surového produktu bylo uspokojivé s produkt, který obsahuje něco dimethylformamidu byl použit v následujícím stupni bez dalšího čištění.

'H-NMR (500 Mhz, CDClj): δ 0,8-2,2 (m, 32H; z toho 1,41 (s, 9H)), 2,34 (m, 1H), 2,77 (bt, 2H), 3,10 (m, 1H), 3,29 (m, 1H), 3,40 (m, 1H), 3,83 (m, 1H), 4,17 (m, 2H), 4,30 (m, 1H), 4,54 (m, 1H), 5,07 (m, 1H), 5,08 (s, 2H), 7,03 (m, 1H), 7,05-7,4 (m, 7H).

(ii) H-(R)Cha-Pro-Rig(Z)

Baňka, obsahující surový produkt Boc-(R)Cha-Pro-Rig(Z) ve 100 ml ethylacetátu se ochladí v ledové lázni. 5 min se probublává suchý HC1 a roztok se odpaří a zbaví přebytku HC1. Produkt se rozpustí ve vodě a extrahuje se dvakrát ethylacetátem pro odstranění dimethylformamidu z předchozího stupně. Vodná fáze se zalkalizuje pomocí naHCOj (vod.) a extrahuje se dvakrát methylenchloridem. Spojené organické fáze se promyjí vodou, suší (Na₂SO₄) a odpaří. Získá se 0,37 g (81 %) ze dvou stupňů.

‘H-NMR (300 MHz, CDClj): δ 0,8-2,4 (m, 24H), 2,82 (bt, 2H), 3,26 (m, 2H), 3,42 (bq, 1H), 3,70 (m, 2H), 4,19 (m, 2H), 4,49 (bd, 1H), 5,11 (s, 2H), 6,9-7,5 (m, 8H).

(iii) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Rig(Z)

Směs 0,18 g (0,32 mmol) H-(R)Cha-Pro-Rig(Z), přebytek uhličitanu draselného a 10 ml acetonitrilu se zahřívá 2 h na 60 °C. Rozpouštědla se odpaří a surový materiál se rychle chromatografuje na silikagelu za použití dimethylformamidu se přidá 0,17 g (0,86 mmol) N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylkarbodiimid-hydrochloridu. Reakce se míchá 3 dny, pak se odpaří a roz

-120CZ 290104 B6 dělí se mezi vodný hydrogensíran draselný a methylenchlorid. Methylenchloridová vrstva se promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší (Na₂SO₄) a odpaří. Surový produkt, který obsahuje určité množství dimethylformamidu se použije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

’Η-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 0,85 (m, 1H), 0,97 (m, 1H), 1,1-1,75 (m, 26H, z toho 1,41 (s, 9H)), 1,82 (bd, 1H), 2,53 (m, 2H), 2,77 (bt, 2H), 3,25 (m, 2H), 4,03 (q, 1H), 4,08 (m, 1H), 4,18 (m, 2H), 4,29 (m, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,97 (m, 1H), 5,09 (s, 2H), 7,1-7,4 (m, 7H), 7,65 (m, 1H).

(ii) H-(R)Cha-Aze-Rig(Z)

Baňka, obsahující surový produkt Boc-(R)Cha-Aze-Rig(Z) ve 100 ml ethylacetátu se ochladí na ledové lázni. Surový HCI se probublává 5 min a roztok se odpaří pro odstranění přebytku HCI. Produkt se rozpustí ve vodě a extrahuje se dvakrát ethylacetátem. pro odstranění dimethylformamidu z předchozího stupně. Vodná fáze se zalkalizuje pomocí NaHCO₃ (vod.) a extrahuje dvakrát methylenchloridem. Spojené organické fáze se promyjí vodou, suší (Na₂SO₄) a odpaří. Výtěžek 0,31 g (70 %) ze dvou stupňů.

’Η-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 0,8-1,9 (m, 20H), 2,48 (m, 1H), 2,72 (m, 1H), 2,85 (bt, 2H), 3,25 (m, 1H), 3,35 (m, 2H), 4,05 (q, 1H), 4,1-4,25 (m, 3H), 4,86 (m, 1H), 5,12 (s, 2H), 6,9-7,2 (m, 2H), 7,2-7,45 (m, 5H), 7,93 (m, 1H).

(iii) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Rig(Z) methylenchloridu/methanolu 95/5 jako elučního činidla. Výtěžek 0,20 g (88 %).

'H-NMR (300 Mhz, CDC1₃): δ 0,8-2,1 (m, 23H), 2,37 (m, 1H), 3,1-3,5 (m, 7H), 4,0-4,2 (m, 2H), 4,54 (m, 1H), 5,1 (m, 4H), 6,9-7,5 (m, 13H).

(iv) HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Rig x 2 HCI

Směs 0,15 g (0,21 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Rig(Z), 10 ml ethanolu, 4 kapek konc. HCI a malého množství 5% PdPC se hydrogenuje při atmosférickém tlaku 1 h. Směs se filtruje přes celit a odpaří. Zbytek se lyofílizuje ve vodě a získá se 95 mg (64 %) produktu.

’H-NMR (500 MHz, MeOD): δ 0,85-2,1 (m, 23H), 2,30 (m, 1H), 3,10 (m, 2H), 3,25 (m, 1H), 3,35 (m, 1H), 3,54 (m, 1H), 3,85^1,0 (m, 3H), 4,03 (d, 1H), 4,41 (m, 1H), 4,50 (m, 1H).

’³C-NMR (125,8 MHz, D₂O): guanidinové a karbonylové uhlíky: δ 174,0, 168,9, 168,1,157,5.

Příklad 80

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze—Rig x 2 HCI (i) Boc-(R)Cha-Aze-Rig(Z)

K roztoku 0,25 g (0,82 mmol 4-aminoethyl-l-benzyloxykarbonylamidinopiperidinu (H-Rig(Z)), (viz příprava výchozích materiálů), 0,31 g (0,86 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH (vi přípravy výchozích materiálů), 0,40 g (3,3 mmol) dimethylaminopyridinu v 10 ml acetonitrilu a 2 m.

Roztok 0,31 g (0,57 mmol) H-(R)Cha-Aze-Rig(Z) a 93 mg (0,57 mmol) benzylakiylátu v 5 ml ethanolu se nechá stát při teplotě místnosti jeden týden. Odpaří se a zpracuje iychlou chromatografií na silikagelu za použití methylenchloridu/methanolu 94/6 jako elučního činidla. Výtěžek: 0,20 g (49 %).

-121 CZ 290104 B6

Ή-NMR (500 MHz, CDCIj): δ 0,8-1,0 (m, 2H), 1,1-1,8 (m, 18H), 2,48 (m, 1H), 2,54 (bt, 2H), 2,68 (m, 2H), 2,81 (bt, 2H), 2,87 (m, 1H), 3,20 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 3,31 (m, 1H), 4,04 (q, 1H), 4,1-4,2 (m, 3H), 4,84 (dd, 1H), 5,05-5,15 (m, 4H), 7,0-7,5 (m, 12H), 8,03 (m, 1H).

(iv) HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Rig x 2 HC1

Vyrobí se titulní sloučenina a čistí se stejným způsobem jak je popsán v příkladu 80 z 0,20 g (0,28 mmol) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Rig(Z). Výtěžek 30 mg (19 %) dihydrochloridové soli.

Ή-NMR (500 Mhz, CDClj): δ 1,0-1,9 (m, 20H), 2,33 (m, 1H), 2,70 (m, 1H), 2,83 (m, 2H), 3,10 (m, 2H), 3,3-3,4 (m, 4H), 3,85 (bd, 2H), 3,92 (m, rotamer), 4,14 (t, 1H), 4,17 (m, rotamer), 4,31 (m, 1H), 4,46 (m, 1H), 4,89 (m, 1H), 5,18 (m, rotamer).

^bC-NMR (125,8 Mhz, D₂O): guanidinové a karbonylové uhlíky: δ 175,4, 171,8, 168,8,156,3.

Příklad 81

HOOC-CHr-(R)Cha-Pro-(S)Itp x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Pro-(S)Itp(Ts)

Při teplotě místnosti se 0,87 g (2,36 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (viz příprava výchozích materiálů), 0,78 g (4,72 mmol) DMAP a 0,70 g (2,36 mmol) H-(S)Itp(Ts) (viz příprava výchozích materiálů) se rozpustí ve 12 ml acetonitrilu. Po 20 minutách míchání se přidá 0,59 g (3,07 mmol) EDC. Po 18 hodinách se rozpouštědlo odstraní ve vakuu a zbytek se rozpustí v CH₂C1₂, promyje se vodou, kyselinou citronu (10%) KHCO₃ (vod.), vodou a suší se (Na₂SO4). Odpařením se získá

1,74 g (> 100% výtěžek (čistota asi 60 %)) požadovaného produktu, který se použije v následujícím stupni bez čištění.

FAB-MS: m/z = 647 (M⁺ + 1) (ii) H-(R)Cha-Pro-(S)Itp(Ts)

Boc-chránicí skupina se odstraní stejným způsobem jak byl popsán pro Boc-(R)Cha-Pic(R,S)Itp(Z) (viz příkladu 72 (ii)) a získá se 0,75 g (81 %) titulní sloučeniny.

FAB-MS: m/z = 547 (M⁺ + 1) (iii) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-(S)Itp(Ts)

0,75 g (1,37 mmol) H-(R)Cha-Pro-(S)Itp(Ts), 0,37 g (2,74 mmol) K₂CO₃ se vyjme do 15 ml acetonitrilu. Přidá se 0,39 g (1,65 mmol) benzylbromacetátu a směs se míchá při 50 °C 2 h. Odpařením rozpouštědla s následující rychlou chromatografií za použití ethylacetátu/methanolu 95/5 jako elučního činidla se získá asi 530 mg požadovaného produktu.

FAB-MS: m/z = 695 (M⁺ + 1) (iv) HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-(S)Itp x 2 HC1

0,53 g (0,76 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-(S)Itp(Ts) se rozpustí v 15 ml THF. NH₃ (g) se kondenzuje do baňky a přidá se Na (m). Reakce se přeruší po 30 min kyselinou octovou a odpaří se NH₃ a THF. Zbytek se vymrazí dosucha z vody a surový produkt se čistí pomocí RPLC

- 122CZ 290104 B6 (acetonitril/Ο,ΙΜ HOAc 15/85) a získá se 0,25 g (61 %) požadovaného produktu po vymražení dosucha z vodné HC1.

‘H-NMR (500,13 MHz, D₂O): δ 0,9-2,09 (přesahující m, 20H), 2,22-2,35 (m, 1H), 3,2-3,36 (m, 4H), 3,44-3,62 (přesahující m, 2H), 3,7-3,8 (m, 1H), 3,87-3,99 (m, 2H), 4,33^1,48 (přesahující m, 2H).

¹³C-NMR (500,13 MHz, D₂O): karbonylové a guanidinové uhlíky: δ 154,3, 168,1,169,0 a 174,2.

Příklad 82

H-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Pro-(S,R)Nig(Z)

174 mg (0,471 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (viz příprava výchozích materiálů) 229 mg (1,87 mmol) DMAP, 130 mg (0,471 mmol) H-(R,S)Nig(Z) (viz příprava výchozích materiálů) se smísí ve 2 ml CH₂C1₂ a přidá se 117 mg (0,61 mmol) EDC a směs se čtyři dny míchá. Směs se zředí CH₂C1₂ a promyje vodou, dvakrát 0,3M roztokem KHSO₄ a jednou solankou. Organická vrstva se suší (Na₂SO₄), filtruje a odpařením se získá surový produkt, který se čistí dvakrát rychlou chromatografií za použití CH₂Cl₂/MeOH 95/5 jako elučního činidla jako prvního a CH₂Cl₂/MeOH 97/3 jako elučního činidla podruhé a získá se 0,104 g (35 %) titulní sloučeniny.

MS: m/z = 627 (M⁺+l) (ii) H-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig x 2 HC1 mg (0,16 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig(Z) se rozpustí v 15 ml ethylacetátu nasyceného HC1. Směs se nechá stát půl hodiny. Směs se odpaří a zbytek se rozpustí v 6 ml ethanolu a 8 mg Pd/C (5%) a přidá se 0,1 ml 1M HVl-roztoku a směs se hydrogenuje při atmosférickém tlaku jeden a půl hodiny. Po filtraci přes hyflo a odpaření rozpouštědla se získají 4 mg titulní sloučeniny.

'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ 0,9-1,58 (m, 6H), 1,58-2,45 (m, 13H), 2,65 (m, 1H), 3,19 (m, 1H), 3,34 (d, 2H), 3,4-3,73 (m, 4H), 3,82 (m, 1H), 4,34-4,49 (m, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O): karbonylové a guanidinové uhlíky: δ 155,1, 169,9 a 174,8.

Příklad 83

H-((R)Pro-Phí>-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Pro-Phe-Pab(Z)

Ke směsi 1,2 g (3,31 mmol) Boc-(R)Pro-Phe-OH (viz příprava výchozích materiálů) a 1,70 g (13,91 mmol) DMAP ve 40 ml CH3CN při teplotě místnosti se přidá 0,98 g (3,35 mmol) HPab(Z) (viz příprava výchozích materiálů) rozpuštěného v 1 ml DMF. Po 2 h míchání se reakční směs ochladí na -18 °C a přidá se po částech 0,66 g (3,48 mmol) EDC a reakce se ponechá přes noc při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí ve 100 ml EtOAc a promyje se 1 x 30 ml vody, 3 x 30 ml 0,3M KHO₄,1 x 30 ml Na₂CO3,1 x 30 ml vody a suší se, odpařením rozpouštědla s následující rychlou chromatografií za použití CH₂Cl₂/MeOH (95/5) jako elučního činidla se získá 0,691 g (38 %) titulní sloučeniny.

-123CZ 290104 B6 (ii) H-(R)Pro-Phe-Pab(Z)

0,673 g Boc-(R)Pro-Phe-Pab(Z) se rozpustí ve 30 ml EtOAc a roztok se nasytí HCI(g) za několik minut (z roztoku se vysráží bílá sraženina). Rozpouštědlo a přebytek HC1 se odpaří a ke zbytku se přidá 60 ml EtOAc a organická fáze se promyje dvakrát 20 ml 2M NaOH. Promývací voda se extrahuje 1 x 25 ml EtOAc, extrakt se spojí s další EtOAc-fází a spojené organické fáze se promyjí vodou, suší a odpařením se získá 560 mg (98 %) požadovaného produktu.

Ή-NMR (300 MHz, D₂O): δ 1,5-1,74 (m, 3H), 1,98-2,05 (m, IH), 2,78-2,85 (m, IH), 2,902,96 (m, IH), 3,0-3,2 (ABX-systém centrován při 3,1, 2H), 3,62 (dd, IH), 4,3-4,45 (ABXsystém centrován při 4,37, 2H), 4,58 (q, IH), 5,22 (s, 2H), 6,96 (bt, IH), 7,1-7,4 (m, 10H), 7,46 (d, 2H), 7,76 (d, 2H), 8,12 (d, IH).

(iii) H-(R)Pro-Phe-Pab x 2 HC1

200 mg H-(R)Pro-Phe-Pab(Z) se rozpustí v 10 ml 95% EtOH a 2 ml vody a směs se hydrogenuje nad 5% Pd/C při atmosférickém tlaku 5 h. Filtrací katalyzátoru a přídavkem 1 ml 1M HC1 s následujícím odpařením a vymražením dosucha z vody se získá titulní sloučenina v 88% výtěžku.

Ή-NMR (500 MHz, CDClj): δ 1,51-1,59 (m, IH), 1,69-1,80 (m, IH), 1,87-1,97 (m, IH), 2,192,29 (m, IH), 2,90 (dd, IH), 3,20-3,33 (m, 3H, částečně zakrytý pikem rozpouštědla), 4,27-4,54 (AB-systém centrovaný při 4,48, 2H), 4,75-4,81 (m, IH), 4,87 (s, 2H), 7,2-7,3 (m, 5H), 7,45 (d, 2), 7,75 (d, 2H).

¹³C-NMR (125 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 166,7, 170,1 a 173,4.

Příklad 84

HOOC-CH₂-(R)Pro-Phe-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH2-(R)Pro-Phe-Pab(Z)

Ke kaši 244 mg (0,463 mmol) H-(R)Pro-Phe-Pab(Z) (viz příklad 83) a 159,9 mg (1,157 mmol) K₂CO₃ v 8 ml DMF/CH₃CN (5/3) se přidá 127,2 mg (0,555 mmol) benzylbromacetátu rozpuštěného ve 2 ml DMF a směs se míchá při 60 °C 1,5 h a přes noc při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v 50 ml EtOAc, promyje se 2 x 20 ml vody a suší (Na₂SO₄). Odpařením rozpouštědla s následující rychlou chromatografíí za použití CH₂Cl₂/MeOH (9/1) se získá 176 mg (56 %) titulní sloučeniny jako bílé pevné látky.

Ή-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 1,45-1,80 (m, 3H), 2,06 (m, IH), 2,54 (m, IH), 2,92-3,28 (m,6H), 4,3-4,5 (ABX-systém centrovaný při δ = 4,4, 2H), 4,60 (dd, IH), 5,10 (zjevný s, 2H), 5,2 (zjevný s, 2H), 7,1-7,4 (m, 15H), 7,43 (d, 2H), 7,75 (d, 2H), 7,932 (d, IH).

(ii) HOOC-CH₂-(R)Pro~Phe-Pab x 2 HC1

170 mg (0,252 mmol) BnOOC-CH₂-(R)Pro-Phe-Pab(Z) se rozpustí ve 12 ml EtOH/voda (5/1) a hydrogenuje se nad 5% Pd/C při atmosférickém tlaku po 4,5 h. Katalyzátor se odfiltruje, rozpouštědlo se odpaří a zbytek se vysuší vymražením z HC1 (aq.) a získá se titulní sloučenina.

Ή-NMR (500 MHz, CD3OD): δ 1,62 (m, IH), 1,82 (m, IH), 2,08 (m, IH), 2,38 (m, IH), 2,90 (dd, IH), 3,25-3,35 (m, 2H), částečně překrývaný pikem rozpouštědla), 3,80 (m, IH), 4,08-4,19

- 124CZ 290104 B6 (AB-systém centrovaný při δ = 4,19, 2H), 4,39 (m, 1H), 4,45-4,58 (AB-systém centrovaný při δ = 4,50, 2H), 4,80 (m, 1H), 7,20-7,35 (m, 5H), 7,45 (d, 2H), 7,75 (D, 2H).

’³C-NMR (125 MHz, D₂O): amidinové a karbonylové uhlíky: δ 166,8,169,1,169,5 a 173,2.

Příklad 85

H-(R)Phe-Pab (i) Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z)

Boc-(R)Phe-Phe-OH (16,4 mmol) (viz příprava výchozích materiálů), Pab(Z)-HCl (18,0 mmol) a 4-dimethylaminopyridinu (24,6 mmol) se rozpustí v 50 ml acetonitrilu. Roztok se ochladí na teplotu led-voda a přidá se hydrochlorid l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu. Chladicí lázeň se odstraní a reakční směs se míchá přes noc. Rozpouštědlo se pak odpaří za sníženého tlaku, zbytek se rozpustí v 50 ml ethylacetátu a výsledný roztok se extrahuje 50 ml vody. Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z) vysrážený ze dvoufázové směsi se odfiltruje a promytím vodou se získá 8,7 g (78 %) po sušení za vakua při 45 °C po 24 h.

'H-NMR (200 MHz, d-CHClj a d4-CH₃OH): δ 8,35-7,0 (m, 19H), 4,63 (t, 1H), 4,3-4,1 (m, 1H), 3,40-2,70 (m, 6H), 1,30 (s, 9H).

(ii) H-(R)Phe-Phe-Pab(Z)

Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (10,3 mmol) se rozmíchá v 70 ml ethylacetátu a přidá 31 ml 3,3M ethylacetátu/HCl. Suspenze se míchá 4 h, potom se hydrochloridová sůl H-(R)Phe-Phe-Pab(Z) odfiltruje a promyje několika podíly ethylacetátu. Sůl se rozpustí ve směsi 50 ml methylenchloridu, 50 ml 1M uhličitanu draselného a asi 5 ml ethanolu. Organická vrstva se oddělí a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a získá se 5,0 g H-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (84 %).

'H-NMR (200 MHz, d₆-DMSO): δ 9,1 (s, 2H), 8,59 (m, 1H), 8,1 (m, 1H), 7,90 (d, 2H), 7,4-7,0 (m, 17H), 5,09 (s, 2H), 4,58 (m, 1H), 4,31 (m, 2H), 3,1-2,7 (m, 4H).

(iii) H-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,42 mmol) se rozpustí v 10 ml tetrahydrofuranu a 1 ml vody. K roztoku se přidá palladium na aktivním uhlí (42 mg) a směs se hydrogenuje při 315 kPa tlaku vodíku v Parrově třepací aparatuře 2 dny. Po úplné hydrogenolýze se směs zředí metanolem a katalyzátor se odfiltruje. Odpařením rozpouštědel se získá surový H-(R)Phe-Phe-Pba, který se čistí chromatografíí na neutrálním oxidu hlinitém (70-230 mesh) za eluce methylenchloridemmethanolem-hydroxidem amonným (80:20:2). Získá se 76 mg titulní sloučeniny (41 %).

'H-NMR (200 MHz, d₆-DMSO): δ 7,61 (d, 2H), 7,4-7,0 (m, 12H), 4,64 (m, 1H), 4,44 (m, 2H), 4,13 (t, 1H), 3,1-2,8 (m, 4H).

Příklad 86

HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab (i) MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z)

H-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,87 mmol) (viz příklad 85 (ii)) se rozpustí v 10 ml tetrahydrofuranu. Roztok se ochladí na lázni led-voda a přidá se triethylamin (1,73 mmol) a pak methyloxalylchlorid (0,95 mmol). Chladicí lázeň se odstraní a reakční směs se míchá 18 h při teplotě míst

-125CZ 290104 B6 nosti. Reakční směs se zředí ethylacetátem a extrahuje se vodou. Organická fáze se oddělí a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a získá se 0,45 g MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (78 %), který se použije v následujícím stupni bez dalšího čištění. TSP-MS nalezeno jako m/z 664 (vypočteno pro MH⁺ (C37H38N5O7) 664).

(ii) HOOC-CO-(R)Ph-Phe-Pab(Z)

MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,68 mmol) se rozpustí ve 4 ml tetrahydrofuranu a 2 ml vody. Přidá se hydroxid lithný (2,6 mmol) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti 1,5 h. Po úplné hydrolýze se reakční směs zředí 25 ml vody a okyselí přídavkem 0,5 ml kyseliny octové. Sraženina se odfiltruje a promyje se několika podíly vody a získá se 0,40 g surového HOOCCO-(R)Phe-Pab(Z) po sušení za vakua při 45 °C po 24 h. Surový produkt se rozmíchá v 10 ml ethanolu a 1 ml vody. Roztok se refluxuje a nerozpustná titulní sloučenina se odfiltruje, získá se 0,23 g HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z), (41 % ve dvou stupních).

'H-NMR (200 MHz, ds-DMSO): δ 8,62 (m, 2H), 8,41 (d, 1H), 7,89 (d, 2H), 7,4-6,9 (m, 17H), 5,10 (s, 2H), 4,54 (m, 2H), 4,34 (m, 2H), 3,2-2,6 (m, 4H).

(iii) HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab

HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,20 mmol) se rozmíchá ve 20 ml tetrahydrofuranu a 5 ml vody. K roztoku se přidá palladium na aktivním uhlí (52 mg) a směs se hydrogenuje při 315 kPa vodíku v Parrově třepací aparatuře 2 dny. Po úplné hydrogenolýze se směs zředí 40 ml methanolu a katalyzátor se odfiltruje. Odpařením rozpouštědla se získá 50 mg titulní sloučeniny (49 %).

’Η-NMR (200 MHz, d₆-DMSO): δ 9,2 (s), 8,78 (d), 8,60 (m), 7,91 (d, 2H), 7,35-6,8 (m, 12H), 4,6-4,0 (m, 4H), 3,0-2,6 (m, 4H).

Příklad 87

HOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Pab (i) BnOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Pab(Z)

H-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,87 mmol) (viz příklad 85 (ii)) a uhličitan draselný (2,6 mmol) se rozmíchá v 10 ml acetonitrilu. Ke směsi se přidá jodbenzylacetát (0,95 mmol) a roztok se zahřívá na 30 °C a míchá při této teplotě 2 dny. Po úplné alkylaci se rozpouštědlo odstraní a zbytek se rozpustí v 10 ml ethylacetátu. Roztok se rychle extrahuje 10 ml vody a z oddělené organické fáze se vysráží titulní sloučenina. BnOOC-CH₂(R)Phe-Phe-Pab(Z) se odfiltruje a suší za vakua při 45 °C 24 h a získá se 177 mg BnOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (28 %).

’H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ 7,79 (d, 2H), 7,5-7,1 (m, 22H), 6,55 (t, 1H), 5,21 (s, 2H), 5,03 (s, 2H), 4,64 (m, 1H), 4,41 (m, 2H), 3,3-2,6 (m, 7H).

(ii) BnOOC-CH2-(R)Phe-Phe-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,32 mmol) se rozmíchá ve 30 ml tetrahydrofuranu a 3 ml vody. K roztoku se přidá palladium na aktivním uhlí (41 mg) a směs se hydrogenuje při 315 kPa tlaku vodíku v Parrově třepací aparatuře 2 dny. Po úplné hydrogenolýze se směs zředí 40 ml vody a katalyzátor se odfiltruje. Odpařením rozpouštědel se získá 95 mg titulní sloučeniny (59 %). TSP-MS nalezeno jako m/z 502 (vypočteno pro MH* (C₂gH₃₂N₅O4)502).

-126CZ 290104 B6

Příklad 88

H-(R)Cha-Pro-Mig (i) Boc-(R)Cha-Pro-Mig(Z)

K míchané směsi 0,344 g (0,93 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (viz příprava výchozích materiálů), 0,245 g (0,93 mmol) H-Mig(Z) (viz příprava výchozích materiálů) a 0,227 g (1,86 mmol) DMAP v 10 ml CH₃CN se přidá 0,232 g (1,21 mmol) EDC při -10 °C. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a ponechá 5 dnů. CH₃CN se odpaří a zbytek se rozpustí v EtOAc a promyje se vodou, NaHCO₃ (aq.) a solankou. Organická vrstva se suší (Na₂SO₄) a odpaří. Surový produkt se čistí rychlou chromatografií za použití gradientu EtOAc/MeOH 95/5 jako elučního činidla a získá se 0,340 g (60 %) titulní sloučeniny.

(ii) H-(R)Cha-Pro-Mig(Z)

0,34 g (0,55 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-Mig(Z) se rozpustí v 8 ml EtOAc nasyceného HC1 (g) a míchá se 10 min při teplotě místnosti. Po kapkách se přidá 10 ml nasyceného KOH(aq.). Vrstvy se oddělí a vodná fáze se extrahuje 3 x 8 ml EtOAc. Organické vrstvy se spojí, promyjí se solankou, suší (Na₂SO₄) a odpařením se získá 0,286 g (100 %) titulní sloučeniny.

(iii) H-(R)Cha-Pro-Mig

0,050 g (0,132 mmol) H-(R)-Cha-Pro-Mig(Z) se rozpustí ve 3 ml MeOH a hydrogenuje se nad 10 % Pd/C při atmosferickém tlaku přes noc. Roztok se filtruje přes celit a rozpouštědlo se odpaří a získá se 0,040 g (80 %) titulní sloučeniny.

‘H-NMR (500 MHz, MeOD): δ 0,92-1,02 (m, 2H), 1,18-1,47 (m, 6H), 1,66-1,73 (m, 4H), 1,852,04 (m, 4H), 2,17-2,22 (m, 1H), 2,95-2,98 (m, 1H), 3,12-3,16 (m, 1H), 3,47-3,55 (m, 2H), 3,62-3,66 (m, 1H), 3,75-3,78 (m, 1H), 3,85-3,89 (m, 1H), 4,05-4,12 (m, 3H), 4,34-4,37 (m, 1H).

Signály z minoritního rotamerů se objevují při δ 3,4, 3,7,4,13-4,16,4,3.

MS m/z 379 (M⁺+ 1)

Příklad 89 (i) Boc-(R)Cha-Pro-Dig(Z)

K míchané směsi 0,280 g (0,76 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (viz příprava výchozích materiálů), 0,210 g (0,76 mmol) H-Dig(Z) (viz příprava výchozích materiálů) a 0,186 g (1,52 mmol) DMAP v 8 ml CH₃CN se přidá 0,189 g (0,99 mmol) EDC při -10 °C. Reakční směs se nechá stoupnout na teplotu místnosti a ponechá tak 4 dny. CH₃CN se odpaří a zbytek se rozpustí v EtOH a promyje vodou, NaHCO₃(aq.) a solankou. Organická vrstva se suší (Na₂SO₄) a odpaří. Surový produkt se čistí rychlou chromatografií za použití gradientu EtOAc/MeOH 95/5 jako elučního činidla a získá se 0,210 g (44 %) titulní sloučeniny.

(ii) H-(R)Cha-Pro-Dig(Z)

0,210 g (0,33 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-Dig(Z) se rozpustí v 8 ml ETOAc nasyceného HC1 (g) a míchá se 10 min při teplotě místnosti. Přikape se 8 ml nasyceného roztoku KOH (aq.). Vrstvy

-127CZ 290104 B6 se oddělí a vodná fáze se extrahuje 3 x 8 ml EtOAc. Organické vrstvy se spojí, promyjí se solankou, suší (Na₂SO₄) a odpařením se získá 0,146 g (83 %) titulní sloučeniny.

(iii) H-(R)Cha-Pro-Dig

0,046 g (0,087 mmol) H-(R)Cha-Pro-Dig(Z) se rozpustí ve 3 ml MeOH a hydrogenuje nad 10% Pd/C při atmosférickém tlaku přes noc. Roztok se filtruje přes celit a rozpouštědlo se odpaří a získá se 0,040 g (100 %) titulní sloučeniny.

’Η-NMR (500 MHz, MeOD): δ 0,90-1,04 (m, 2H), 1,10-1,47 (m, 6H), 1,66-1,74 (m, 4H), 1,782,05 (m, 4H), 2,13-2,21 (m, 1H), 2,74-2,83 (m, 1H), 2,94-2,99 (m, 1H), 3,15-3,29 (m, 1H), 3,44-3,57 (m, 2H), 3,65-3,87 (m, 3H), 4,07-4,25 (m, 3H), 4,35^1,39 (m, 2H).

Signály z minoritních rotamerů se objevují při: δ 4,29-4,32.

MS m/z 393 (M⁺ + 1)

Příklad 90

H-(R)Cha-Aze-Dig (i) Boc-(R)Cha-Aze-Dig(Z)

Titulní sloučenina se připraví z Boc-(R)Cha-Aze-OH a H-Dig(Z) (viz příprava výchozích materiálů) podle postupu pro Boc-(R)Cha-Pro-Dig(Z) ve výtěžku 0,253 g (54 %).

(ii) H-(R)Cha-Aze-Dig(Z)

Titulní sloučenina se připraví z Boc-(R)Cha-Aze-Dig(Z) podle postupu pro Boc-(R)ChaDig(Z) ve výtěžku 0,210 g (100 %).

(iii) H-(R)Cha-Aze-Dig

0,060 g (0,117 mmol) H-(R)Cha-Aze-Dig(Z) se rozpustí ve 3 ml MeOH a hydrogenuje nad 10% Pd/C při atmosférickém tlaku přes noc. Roztok se filtruje přes celit a odpařením rozpouštědla se získá 0,042 g (95 %) titulní sloučeniny.

’H-NMR (500 MHz, MeOD): δ 0,91-1,02 (m, 2H), 1,18-1,48 (m, 6H), 1,66-1,90 (m, 8H), 2,152,17 (m, 1H), 2,66-2,68 (m, 1H), 2,80-2,83 (m, 1H), 3,14-3,29 (m, 1H), 3,39-3,44 (m, 1H), 3,72-3,80 (m, 2H), 4,01-4,04 (m, 1H), 4,14-4,23 (m, 2H), 4,48-4,49 (m, 1H), 4,60-4,64 (m,lH).

Signály z minoritního rotamerů se objevují při: δ 2,25, 2,6,4,3,4,67.

MS m/z 379 (M⁺+ 1).

Příklady farmaceutických přípravků

Sloučenina podle vynálezu může být formulována do pevných dávkových forem pro orální podání jako jsou ploché tablety, potažené tablety nebo tablety s upraveným uvolňováním, kapalných nebo pevných nebo polopevných dávkových forem pro rektální podání, jako lyofilizované substance nebo kapaliny jako emulze nebo suspenze pro parenterální použití, jako kapalné, pevné nebo polopevné dávkové formy pro topickou aplikaci.

- 128CZ 290104 B6

Do tlakovaných aerosolů nebo do inhalátorů prášku pro orální nebo nasální podání.

Příklad PÍ

Tablety pro orální podání

Připraví se 1000 tablet z následujících složek:

účinná složka 100g laktóza 200g polyvinylpyrrolidon 30g mikrokrystalická celulóza 30g stearát hořečnatý 6g

Účinná složka a laktóza se smísí s vodným roztokem polyvinylpyrrolidonu. Směs se suší a mele za tvorby granulí. Mikrokrystalická celulóza a potom stearát hořečnatý se pak přimísí. Směs se potom lisuje na tabletovacím zařízení a získá se 1000 tablet, každá o hmotnosti 100 mg účinné složky.

Příklad P2

Roztok pro parenterální podání

Připraví se roztok z následujících složek:

účinná sloučenina 5 g chlorid sodný pro injekce 6 g hydroxid sodný pro úpravu pH na pH 5-7 voda pro injekce do 1000 ml

Účinná složka a chlorid sodný se rozpustí ve vodě. pH se upraví 2M NaOH na pH 3-9 a roztok se rozplní do sterilních ampulí.

Příklad P3

Tablety pro orální podání

1. účinná složka	150g
2. křemičitan hlinitosodný	20 g
3. parafín	120 g
4. mikrokrystalická celulóza	20 g
5. hydroxypropylcelulóza	5g
6. stearylfumarát sodný	3g

až 4 se smísí a přidá se vodný roztok 5. Směs se suší a mele a přimísí se 6. Směs se pak lisuje na tabletovacím zařízení.

-129CZ 290104 B6

Příklad B6

Inhalační prášek

Účinná sloučenina se mikronizuje na tryskovém mlýnu na částice o velikosti vhodné pro inhalaci (hmotnostní průměr < 4 pm).

100 mg mikronizovaného prášku se naplní do práškového vícedávkového inhalátoru (Turboha10 ler^R). Inhalátor je opatřen dávkovači jednotkou, která doručuje dávku 1 mg.

Biologie

Stanovení doby trombinové sraženiny (Thrombin clotting Time (TT)):

Lidský trombin (T 6769, Sigma Chem. Co.) v roztoku pufru, pH 7,4,100 μΐ, a roztoku inhibitoru, 100 μΐ, se inkubuje jednu minutu. Potom se přidá Poolovaná normální citrátovaná lidská plazma, 100 μΐ a měří se doba tvorby sraženiny v automatickém zařízení (KC 10, Amelung).

Doba tvorby sraženiny v sekundách se vynese proti koncentraci inhibitoru a stanoví se IC₅₀TT interpolací.

IC₅oTT je koncentrace inhibitoru, která zdvojnásobuje dobu srážení trombinu v lidské plazmě.

Stanovení doby aktivovaného parciálního tromboplastinu (APTT)

APTT se stanoví v poolované normální lidské citrátované plazmě s činidlem PTT Automated 5 vyrobeném firmou Stago. Ke plazmě byly přidány inhibitory (10 21 roztoku inhibitoru k 90 μΐ plazmy) a APTT byla stanovena ve směsi použitím koagulačního analyzéru KC10 (Amelung) 30 podle instrukcí výrobce činidla. Doba srážení v sekundách byla vynesena proti koncentraci inhibitoru v plazmě a IC₅₀APTT byla stanovena interpolací.

IC50APTT je definována jako koncentrace inhibitoru v plazmě, která zdvojnásobuje dobu aktivovaného parciálního trombopastinu.

Stanovení trombinového času ex vivo

Inhibice trombinu po orálním podání sloučenin byla hodnocena na bdělých krysách, které dva dny před pokusem byly opatřeny katétrem pro odběr vzorků krve z krkavice. V den pokusu byly 40 vzorky odebírány ve stanovených časech po podání sloučeniny do plastových zkumavek, obsahujících 1 díl roztoku citrátu sodného (0,13 mol na 1) a 9 dílů krve. Zkumavky byly odstřeďovány pro získání plazmy chudé na destičky. Plazma byla použita pro stanovení trombinového času, jak je popsáno dále.

Citrátovaná krysí plazma, 100 μΐ, se zředí salinickým roztokem, 0,9%, 100 μΐ, a koagulace plazmy započne přídavkem lidského trombinu (T 6769, Sigma Chem Co, USA) v roztoku pufru, pH7,4, 100 μΐ. Doba tvorby sraženiny se měří v automatickém zařízení (KC 10, Amelung, Německo).

Stanovení inhibiční konstanty K pro lidský kallikrein

Byla provedena stanovení Kj metodou se chromogenním substrátem a provedena na Cobas Bio odstředivkovém analyzátoru vyrobené firmou Roche (Basilej, Švýcarsko). Zbytková enzymová aktivita po inkubaci lidského plazmového kalikreinu s různými koncentracemi testované slouče

-130CZ 290104 B6 niny byla stanovena při třech různých koncentracích substrátu a měřena jako změna v optické absorbanci při 405 nm a 37 °C.

Lidský plazmový kalikrein (E.C.3.4.21.34, Chromogenix AB, Molndal, Švédsko), 250 μΐ 5 0,4 nkat/ml v pufru (0,05 mol/1 Tris-HCl, pH 7,4, 1 0,15 upraveno sNaCl) s hovězím albuminem 5 g/1 (kat. č. 810033, ICI Biochemicals Ltd, High Wycombe, Bucks, GB) byl inkubován 300 s roztokem testované sloučeniny v 0,15 mol/1 NaCl obsahujícího 10 g/1 albuminu. V tomto stupni bylo přidáno 10 μΐ vody. Potom bylo přidáno 40 μΐ kallikreinového substrátu (S-2302, Chromogenix AB, 1,25, 2,0 nebo 4,0 mmol/1 ve vodě) spolu s dalšími 20 μΐ vody a byla sledována změna ío absorbance.

Ki byla hodnocena z Dixonových grafů, tj. diagramů koncentrace inhibitoru proti Ι/ΛΑ/min), kde data z různých substrátových koncentrací tvoří stoupající čáru, která se přerušuje při x= -Kj.

Zkratky:

Ac=	acetyl
aq= Aze= betaPic= Boc= Boc-Dig(Z)=	vodný azetidin-2-karboxylová kyselina piperidin-3-karboxylová kyselina terč .buty loxykarbony 1 3-{N-terc.butyloxykarbonylaminoethyl)-l-(Nbenzyloxykarbonylamidino)azetidin
Boc-Mig(Z)=	3-(N-terc.butyloxykarbonylaminoethyl)-l-(N- benzyloxykarbonylamidino)azetidin
Boc-Pig(Z)=	4-(N-terc.butyloxykarbonylaminoethyl)-l-(N- benzyloxykarbonylamidino)piperidin
Boc-Pig(Z)₂=	4-(N-terc.butyloxykarbonylaminoethyl)-l-(N,N'dibenzyloxykarbonylamidino)piperidin
solanka= Bn= Bu= Cgl= Cha=	nasycený vodný/NaCl roztok benzyl butyl cyklohexylglycin β-cyklohexylalanin
CME-CDI=	l-cyklohexyl-3-(2-morfolinoethyl)karbodiimidmetho-p- toluensulfonát
DBU= DCC= DCU= DMAP= DMF= DMSO= EDC= Et= EtOAc= EtOH=	l,8-diazabicyk!o[5.4.0]undec-7-en dicyklohexylkarbodiimid dicyklohexylmočovina N,N-dimethylaminopyridin dimethylformamid dimethylsulfoxid l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid hydrochlorid ethyl ethylacetát ethanol

-131 CZ 290104 B6

Gly=	glycin
h=	hodiny
HCI=	kyselina chlorovodíková
Hex=	hexyl
HOAc=	kyselina octová
HOBt=	H-hydroxybenzotriazol
Hoc=	homocyklohexylalanin
Hop=	homofenylalanin
HOSu=	N-hydroxysukcinimid
H-Dig(Z)=	3-aminoethyl-l-(N-benzyloxykarbonyl-amidino)azetidin
H-Dig=	3-aminoethyl-l-amidinoazetidin
H-(R,S)Hig(Z)=	(3RS)-l-{N-benzyloxykarbonylamidino)-3-aminoethylpyrrolidm
H-(R,S)Hig=	(3RS)-l-amidino-3-aminoethyl-pyrrolidin
H-Hig=	l-amidino-3-aminoethylpyrrolidin
H-(R,S)Itp(Ts)=	(4RS)-l,3-diaza-2-tosylimino-4-aminoethylcyklohexan
H-(R,S)Itp=	(4RS)-l,3-diaza-2-imino-4-aminoethylcyklohexan
H-(S)Itp(Ts)=	(4S)-l,3-diaza-2-tosylimino-4-aminoethylcyklohexan
H-(S)Itp=	l,3-diaza-2-imino-4-aminoethylcyklohexan
H-Itp=	l,3-diaza-2-imino-4-aminoethylcyklohexan
H-Mig(Z)=	3-aminomethyl-l-(N-benzyloxykarbonyl-amidino)azetidin
H-Mig=	3-aminomethyl-l-amidinoazetidin
H-(R,S)Nig(Z)=	(3RS)-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)-3-aminomethylpyrrolidin
H-(R,S)Nig=	(3 RS}-1 -amidino-3-aminomethylpyrrolidin
H-Pab=	l-amidino-4-aminomethylbenzen
H-Pab(Z)=	4-aminomethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)benzen
H-Pac=	l-amidino-4-aminomethylcyklohexan
H-Pac(Z)=	4-aminomethyl-1 -(N-benzyloxykarbonylamidino-)cyklohexan
H-Pig=	4-aminomethyl-l-amidinopiperidin
H-Pig(Z)=	4-aminomethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)-piperidin
H-Pig(Z)=	4-aminomethyl-l-(N,N'-dibenzyloxykarbonylamidino)piperidin
H-Rog(Z)=	4-aminoethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)piperidin
H-Rig=	4-aminoethyl-l-N-amidinopiperidin
Me=	methyl
MeOH=	methanol
Mpa=	megapascal
Ms=	mesyl
NMM=	N-methylmorfolin
Pd/C=	palladium na aktivním uhlí
Pgl=	fenylglycin
Phe=	fenylalanin
Pic=	pikolinová kyselina
Pro=	prolin

- 132CZ 290104 B6

RPLC= Tf= TFA= THF= Tic= Ts= Val= Z= Ph=

vysokotlaková kapalinová chromatografie s reverzní fází trifluormethylsulfonyl kyselina trifluoroctová tetrahydrofuran l-karboxy-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin tosyl valin benzyloxykarbonyl fenyl

Prefixy n, s, i a t mají své obvyklé významy: normální, iso, sek a terciární. Stereochemie pro aminokyseliny je neuvedena (S) pokud není uvedeno jinak.

(vlnité čáry na atomech dusíku ve strukturních vzorcích uvedených dále označují vazebnou polohu fragmentu).

Pab (n=l)

Pig (n=l)

Rig (n=2)

Pac (n=l)

Nig (n=l)

Hig (n=2)

Mig (n=l)

Dig (n®2)

-133CZ 290104 B6

Tabulka 1

Příklad	plC50 TT
1	HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab	8,05
l(iii)	Bn-OOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)	4,88
2	HOOC-CH₂CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab	7,92
3	HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab	7,92
4	HOOC-CH₂CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab	7,93
5	(HOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pab	7,27
6	H-(R)Cgl-Pic-Pab	7,67
7	HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Cgl-Pic-Pab	7,38
8	H-(R)Cha-Aze-Pab	8.26
9	HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab	7,97
10	HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab	8,10
11	HOOC-CH₂-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/a	8,03
12	HOOC-€HHRorS)CH(COOHHR)Cha-Aze-Pab/b	8,05
13	HOOC-CH₂CH₂-(R)Cha-Aze-Pab	8,22
14	HOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab	7,82
15	H-(R)Cha-Pro-Pab	8,17
16	HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab	8,55
17	HOOC-CHŤ-(Me)(R)Cha-Pro-Pab	8,12
18	HOOC-CH₂CH₂-(R)Cha-Pro-Pab	8,14
19	HOOC-CH₂-CH₂-(Me)(R)Cha-Pro-Pab	7,95
20	HOOC-CHHRorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/a	7,90
21	HOOC-CH₂-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/b	7,93
22	HOOC-CHr-NH-CO-CHHRjCha-Pro-Pab	8,01
23	Et-OOC-CCH₂)₃-(R)Cha-Pro-Pab	7,98
24	Ph(4-COOH)-SO₂-(R)Cha-Pro-Pab	7,67
25	H-(R)Cha-Pic-Pab	8,08
26	HOOC-CHHRJCha-Pic-Pab	8,27
27	HOOC-CH₂-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/a	7,92
28	HOOC-CHHRorS)CH(COOHHR)Cha-Pic-Pab/b	7,89
29	HOOC-CH₂CH₂-(R)Cha-Pic-Pab	8,18
31	HOOC-CH₂-CCHR)Cha-Pic-Pab	6,81
32	Me-OOC-CH₂-CO-(R)Cha-Pic-Pab	6,85
33	H₂N-CO-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab	8,05
34	Boc-(R)Cha-Pic-Pab	7,18
35	Ac-(R)Cha-Pic-Pab	6,79
36	Me-SO₂-(R)Cha-Pic-Pab	8,09
37	H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab	6,91
38	HOOC-CH₂CH2-(R)Cha-<R,S)betaPic-Pab	6,55
39	HOOC-CH₂-(R)Cha-Val-Pab	7,86
40	HOOC-CH₂CH₂-(R)Cha-Val-Pab	7,03
41	H-(R)Hoc-Aze-Pab	7,79
42	HOOC-CH₂CH₂-(R)Hoc-Aze-Pab	7,75
43	HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Hoc-Pro-Pab	7,67
44	HOOC-CH₂-(R)Hoc-Pic-Pab	7,85
45	(HOOC-CH₂)₂-(R)Hoc-Pic-Pab	6,96
46	HOOC-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab	8,12
47	HOOC-CH₂CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab	8,05
48	HOOC-CH₂CH₂-(R)Tic-Pro-Pab	6,23
49	HOOC-CH₂CH₂-(R)Cgl-Aze-Pig	7,64

- 134CZ 290104 B6

50	HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig	7,58
51	H-(R)Cha-Aze-Pig	7,44
52	HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pac	7,52
53	H-(R)Cha-Pro-Pac	7,65
54	H-(R)Cgl-Ile-Pab	6,34
55	H-(R)Cgl-Aze-Pab	7,98
56	HOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab	8,03
57	Me-OOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab	8,01
58	Et-OOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab	8,05
58(i)	Et-OOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)	5,03
59	nBu-OOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab	7,92
60	nHex-OOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab	7,65
61	H-(R)Cgl-Pro-Pac	7,74
62	HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pac	8,02
63	HOOC-CH₂CH₂-(R)Cgl-Pro-Pac	7,82
64	HOOC-CH₂CH₂-(R)Cha-Aze-Pac	7,86
65	HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pig	7,99
66	HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig	8,05
67	HOOC-CH₂CH₂-(R)Cha-Pro-Pig	7,92
68	(HOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pig	6,73
69	HOOC-CH₂CH₂(HOOC-CH₂)-(R)Cha-Pro-Pig	7,39
70	HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp	6,74
71	HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp	7,04
72	H-(R)Cha-Pic-Itp	6,73
73	HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp	7,42
74	H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig	7,27
75	HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig	7,53
76	H-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig	7,70
77	H-(R)Cgl-Aze-Rig	6,67
78	HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Rig	7,09
79	HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Rig	7,42
80	HOOC-CH₂CH₂-(R)Cha-Aze-Rig	6,75
81	HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-(S)Itp	7,31
82	H-(R)Cha-PiO-(R,S)Nig	7,11
88	H-(R)Cha-Pro-Mig	6,57
89	H-(R)Cha-Pro-Dig	7,89
90	H-(R)Cha-Aze-Dig	7,85

- 135-

Claims

1. Peptidový derivát obecného vzorce

A¹---A²----NH----(CH₂)_n-----B kde

A¹ představuje strukturní fragment vzorce Ha, lib, líc, lid nebo lle kde k je celé číslo 0,1,2,3 nebo 4, m je celé číslo 1, 2, 3 nebo 4, q je celé číslo 0, 1, 2 nebo 3,

R¹ představuje vodík, alkylovou skupinu, mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo RⁿOOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a je popřípadě substituovaná v poloze alfa ke karbonylové skupině a alfa substituent je skupina R’⁷-(CH2)p-, kde p je 0, 1 nebo 2 a R¹⁷ je methyl, fenyl, OH, COOR¹², CONHR¹², kde R¹² je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku a R¹¹ je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 6 atomů uhlíku, nebo

-136CZ 290104 B6

R¹ představuje R^I3-NH-CO-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a je popřípadě substituována v poloze alfa ke karbonylu alkylovou skupinou mající 1 až 4 atomy uhlíku a kde R¹³je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo -CH₂COOR¹², kde R¹² má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje R¹²OOC-CH₂-OOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a je popřípadě substituována alfa ke karbonylu alkylovou skupinou mající 1 až 4 atomy uhlíku a kde R¹² má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje R¹⁴SO2- Ph(4-COOR¹²)-SO2-, Ph(3-COOR¹²)-SO2- Ph(2-COOR¹²)-SO2kde R¹² má výše definovaný význam a R¹⁴ je alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku, nebo

R¹ představuje -CO-OR¹⁵, kde R¹⁵ má výše definovaný význam, nebo

R¹ představuje -CH2PO(OR¹⁶)2, -CH₂SO₃H nebo -CHr-(5-(lH)-tetrazolyl), kde R_]6 je, jednotlivě při každém výskytu, vodík, methyl nebo ethyl,

R² představuje vodík nebo alkylovou skupinu mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo R^2lOOC-alkylkde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a kde R²¹ je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku,

R³ představuje alkylovou skupinu mající 1 až 4 atomy uhlíku a alkylová skupina může popřípadě nést atomy fluoru, nebo

R³ představuje 1-naftylovou nebo 2-naftylovou skupinu a k je 0, 1 nebo

R³ představuje cis- nebo trans-dekalinovou skupinu a k je 0,1 nebo

R³ představuje 4-pyridyl, 3-pyrrolidinyl nebo 3-indolyl, který je popřípadě substituován OR³¹skupinou, kde R³¹ má výše definovaný význam a k je 0,1 nebo

A² představuje strukturní fragment vzorce lila, Illb nebo Hic

-137CZ 290104 B6 kde p je celé číslo 0, 1 nebo 2, m je celé číslo 1, 2, 3 nebo 4,

Y představuje methylenovou skupinu, nebo

Y představuje -CH2-O-, -CH₂-S- CH₂-SO-, s heteroatomovou funkčností v poloze 4, nebo

Y představuje-CH₂CH₂-CH₂-CH₂-

R³ má výše definovaný význam,

R⁵ představuje -(CH₂)_P-COOR⁵¹, kde p je 0, 1 nebo 2 a R⁵¹ je vodík nebo alkylová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku, n je celé číslo 0,1,2, 3 nebo 4,

B představuje strukturní fragment vzorce IVa, IVb, IVc nebo IVd

-138CZ 290104 B6 kde r je celé číslo 0 nebo 1,

X¹ představuje CH₂, NH nebo není přítomen,

X² představuje CH₂, NH nebo C=NH,

X⁴ představuje CH₂ nebo NH,

X⁵ představuj e C(NH)-NH₂ nebo NH-C(NH)-NH₂;

X⁶ představuje CH nebo dusík,

R⁶ je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku, buď ve formě sloučeniny jako takové nebo jako jejich stereoizomerů nebo ve formě fyziologicky přijatelné soli.

2. Peptidový derivát obecného vzorce V

A¹---A²---NH---(CH₂)_n----B - D (V), kde

A¹ představuje strukturní fragment vzorce Ha, lib, líc, lid nebo Ile

-139CZ 290104 B6 kde k je celé číslo 0,1,2,3 nebo 4, m je celé číslo 1,2,3 nebo 4, q je celé číslo 0, 1,2 nebo 3,

R¹ představuje R^HOOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a může být substituovaná v poloze alfa ke karbonylové skupině a alfa substituent je skupina R¹⁷(CH₂)_P-, kde p je 0, 1 nebo 2 a R¹⁷ je COOR¹², CONHR¹², kde R¹² je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku a R¹¹ je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 6 atomů uhlíku, nebo benzylová skupina a R¹¹ je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 6 atomů uhlíku nebo benzylová skupina, nebo

R¹ představuje Ph(4-COOR^I2)-CH₂- kde R¹² má výše definovaný význam, nebo

- 140CZ 290104 B6

R¹ představuje R^,4SO2- Ph(4-COOR^,2)-SO2-, Ph(3-COOR^,2)-SO2- Ph(2-COOR¹²)-SO2kde R¹² má výše definovaný význam a R¹⁴ je alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku, nebo

R¹ představuje -CO-OR¹⁵, kde R¹⁵ má výše definovaný význam, nebo

R³ představuje fenylovou skupinu substituovanou OR³¹ skupinou, kde R^jl je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku a k je 0,1 nebo

R³ představuje 1-naftylovou nebo 2-naftylovou skupinu a k je 0,1 nebo

R³ představuje cis- nebo trans-dekalinovou skupinu a k je 0,1 nebo

A² představuje strukturní fragment vzorce lila, Illb nebo IIIc (lila) (Illb) kde p je celé číslo 0, I nebo 2,

-141CZ 290104 B6 m je celé číslo 1,2, 3 nebo 4,

Y představuje methylenovou skupinu, nebo

5 Y představuje ethylenovou skupinu a výsledný 5-ti členný kruh popřípadě nese jeden nebo dva atomy fluoru, hydroxyskupinu nebo oxoskupinu v poloze 4, nebo je popřípadě nenasycen, nebo

Y představuje -CH₂-O-, -CHr-S-, CH₂-SO-, s heteroatomovou funkčností v poloze 4, nebo

Y představuje -CH₂-O-CH₂- -CH₂-S-CH₂~, -CH^SO-CHr- nebo

Y představuje-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-

20 R³ má výše definovaný význam,

R⁵ představuje -(CH₂)_P-COOR⁵¹, kde p je 0, 1 nebo 2 a R⁵¹ je vodík nebo alkylová skupina 25 mající 1 až 4 atomy uhlíku, n je celé číslo 0,1,2, 3 nebo 4, kde

35 r je celé číslo 0 nebo 1,

X¹ představuje CH₂, NH nebo není přítomen,

X² představuje CH₂, NH nebo C=NH,

X³ představuje NH, C=NH, N-C(NH)-NH₂, CH-C(NH)-NH₂, CH-NH-C(NH)-NH₂ nebo CH-CH₂-C(NH}-NH₂,

X⁴ představuje CH₂ nebo NH,

- 142CZ 290104 B6

X⁵ představuje C(NH)-NH2 nebo NH-C(NH)-NH2;

X⁶ představuje CH nebo dusík,

R⁶ je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku,

D je Z nebo (Z)₂,

Z je benzyloxykarbonylová skupina buď jako takový nebo jako jeho stereoizomery nebo ve formě fyziologicky přijatelné soli, jako meziprodukt pro přípravu sloučenin podle nároku 1.

3. Peptidový derivát podle nároku 1 nebo 2, kde A^{8 * 1} je strukturní fragment vzorce Ha nebo lib.

4. Peptidový derivát podle jednoho nebo více z předchozích nároků 1 až 3, kde R¹ představuje RⁿOOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku a R¹¹ je vodík.

5. Peptidový derivát podle jednoho nebo více z předchozích nároků 1 až 4, kde

r. je celé číslo 0 nebo 1,

X¹ představuje CH2, NH nebo není přítomen,

X² představuje CH₂, NH nebo C=NH,

X³ představuje NH, C=NH, N-C(NH)-NH2, CH-C(NH)-NH2, CH-NH-C(NH)-NH2 nebo CH-CH2-C(NH)-NH2,

X⁴ představuje CH₂ nebo NH,

X⁵ představuje C(NH)-NH₂ nebo NH-C(NH)-NH2;

X⁶ představuje CH nebo dusík,

R⁶ je vodík nebo alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku,

D je Z nebo (Z)₂,

Z je benzyloxykarbonylová skupina, buď jako takový nebo jako jeho stereoizomery nebo ve formě fyziologicky přijatelné soli.

6. Peptidový derivát podle jednoho nebo více z předchozích nároků 1 až 4, kde A² je strukturní fragment vzorce Illb.

7. Peptidový derivát podle jednoho nebo více z předchozích nároků 1 až 6, kde B je strukturní fragment vzorce IVa, kde X¹, X² a X⁴ jsou CH₂, X je CH-C(NH)-NH₂, r je 1 a n je 1.

8. Peptidový derivát podle jednoho nebo více z předchozích nároků 1 až 6, kde B je strukturní fragment vzorce IVa, kde X¹, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je N-C(NH)NH2, r je 0 nebo 1 a n je 1 nebo

2.

-143CZ 290104 B6

9. Peptidový derivát podle jednoho nebo více z předchozích nároků 1 až 6, kde B je strukturní fragment vzorce IVb, kde X⁵ je C(NH)-NH₂ a R⁶ je vodík a n je 1.

10. Peptidový derivát podle jednoho nebo více z předchozích nároků 1 až 6, kde B je strukturní fragment vzorce IVa, kde X¹ a X³ jsou NH, X² je ΟΝΗ, X⁴ je CH₂, r je 1 a n je 2.

11. Peptidový derivát podle jednoho nebo více z předchozích nároků 1 až 6, kde B je strukturní prvek vzorce IVa, kde X¹ není přítomen, X² a X⁴ jsou CH2, X³ je N-C(NH)-NH2, r je 0 a n je 1 nebo 2.

12. Peptidový derivát podle nároku 1 nebo 2, kde n je 1 nebo 2, A¹ je strukturní fragment vzorce Ha, kde k je 0 nebo 1, R¹ představuje RⁿOOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku, R² představuje H, R³ představuje cyklohexylovou skupinu, A² představuje strukturní fragment vzorce lila, kde Y představuje methylenovou skupinu, ethylenovou skupinu nebo npropylenovou skupinu a výsledný 6-členný kruh popřípadě nese v poloze 4 alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, R⁵ představuje vodík, B představuje strukturní fragment vzorce IVa, kde X¹, X² a X⁴ jsou CH2 a X³ je CH-C(NH)-NH2 nebo N-C(NH)-NH₂, r je 0 nebo 1, nebo X¹ a X³je NH, X² je C=NH, X⁴ je CH2, r je 1 nebo X¹ není přítomen, X² a X⁴ jsou CH2, X³ jeN-C(NH)NH₂, r je 0.

13. Peptidový derivát podle nároku 1 nebo 2, kde n je 1, A¹ je strukturní fragment vzorce Ha, kde k je 0 nebo 1, R¹ představuje RⁿOOC-alkyl-, kde alkylová skupina má 1 až 4 atomy uhlíku, R² představuje vodík, R³ představuje cyklohexylovou skupinu, A² představuje strukturní fragment vzorce lila, kde Y představuje methylenovou skupinu, ethylenovou skupinu nebo npropylenovou skupinu a výsledný 6-členný kruh popřípadě nese v poloze 4 alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, R⁵ představuje vodík, B představuje strukturní fragment vzorce IVb, kde X⁵ představuje C(NH)-NH₂ a R⁶ je vodík.

14. Peptidový derivát podle nároku 1, kteiý je vybrán ze souboru sestávajícího z

HOOC-CHr-fRjCgl-Aze-Pab

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab

HOOC-CHz-fRjCgl-Pro-Pab

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab (HOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pab H-(R)Cgl-Pic-Pab

HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Cgl-Pic-Pab

H-(R)Cha-Aze-Pab

HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab

HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab HOOC-CH₂-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/a HOOC-CH2-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/b HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab

HOOC-CH₂-NH-CO-CH2-(R)Cha-Aze-Pab

H-(R)Cha-Pro-Pab

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab

HOOC-CH₂-(Me)(R)Cha-Pro-Pab

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab

HOOC-CH₂-CH₂-(Me)(R)Cha-Pro-Pab

HOOC-CH₂-(RorS)CH(COOHXR)Cha-Pro-Pab/a HOOC-CH₂-(RorS)CH(COOH>-(R)Cha-Pro-Pab/b

- 144CZ 290104 B6

HOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab

EtOOC-CH₂-CH₂-CH2-(R)Cha-Pro-Pab Ph(4-COOH)-SO₂-(R)Cha-Pro-Pab H-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CH₂-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/a HOOC-CH₂-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/b HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CH₂-CO-(R)Cha-Pic-Pab Me-OOC-CH₂-CO-(R)Cha-Pic-Pab H₂N-CO-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab

Boc-(R)Cha-Pic-Pab Ac-(R)Cha-Pic-Pab Me-SO₂-(R)Cha-Pic-Pab H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab HOOC-CH₂-(R)Cha-Val-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Val-Pab H-(R)Hoc-Aze-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R)Hoc-Aze-Pab HOOC-CH₂-(R,S)CH(COOH>-(R)Hoc-Pro-Pab HOOC-CH₂-(R)Hoc-Pic-Pab (HOOC-CH₂)₂-(R)Hoc-Pic-Pab HOOC-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab HOOC-CH2-CH₂-(R)Tic-Pro-Pab HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pig HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig

H-(R)Cha-Aze-Pig

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pac H-(R)Cha-Pro-Pac H-(R)Cgl-Ile-Pab

H-(R)Cgl-Aze-Pab HOOC-(R,S)CH(Me}-(R)Cha-Pro-Pab MeOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab BuOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab ⁿHexOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab H-(R)Cgl-Pro-Pac HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pac HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pac HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pac HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pig HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig (HOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pig

-145CZ 290104 B6

HOOC-CH₂-CH₂(HOOC-CH₂}-(R)Cha-Pro-Pig

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp

HOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp

H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp

H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig

H-fR)Cha-Pro-(R,S)Hig

H-(R)Cgl-Aze-Rig

HOOC-CHr-(R)Cgl-Aze-Rig

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Rig

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Rig

HOOC-CHr-(R)Cha-Pro-(S)Itp

H-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig

H-(R)Cha-Pro-Mig

H-(R)Cha-Pro-Dig

H-(R)Cha-Aze-Dig, kde symboly a a b označují, že u sloučeniny s jedním asymetrickým centrem vyznačeným symbolem „RorS“ je neznámá absolutní stereochemická konfigurace, buď jako takový nebo jako stereoizomer nebo ve formě fyziologicky přijatelné soli.

15. Peptidový derivát podle nároku 1, který je vybrán ze souboru sestávajícího z

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab

HOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab

HOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig

EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab

HOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pac

HOOC-CHHRjCha-Pro-Pig buď jako takový nebo jako stereoizomer nebo ve formě fyziologicky přijatelné soli.

16. Peptidový derivát podle nároku 2, kteiý je vybrán ze souboru sestávajícího z

BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z)

BnOOC-CH2-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) (BnOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pab(Z)

BnOOC-CHHR,S)CH(COOBn)-(R)Cgl-Pic-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(RorS)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/a

BnOOC-CU₂-(RorS)CII(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/b

-146CZ 290104 B6

BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH₂-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH₂-CH₂-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH₂-NH-CO-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z) Ph(4-COOH)-SO₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z) Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z) EtOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) MeOOC-CH₂-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) H₂N-CO-CH₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z) Ac-(R)Cha-Pic-Pab(Z) Me-SO₂-(R)Cha-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Val-Pab(Z) BnOOC-CH₂-CHr-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Hoc-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH₂-(R,S)CH(COOBn)-(R)Hoc-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH₂-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) (BnOOC-CH₂)₂-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Tic-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pig(Z)₂BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)₂BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pac(Z) BnOOC-(R,S)CH(MeHR)Cha-Pro-Pab(Z) MeOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) ⁿBuOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) ⁿHexOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pac(Z) BnOOC-CH2-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pac(Z) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Pac(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pig(Z) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig(Z) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Pro-Pig(Z) (BnOOC-CH₂)₂-(R)Cgl-Pro-Pig(Z) BnOOC-CH₂-CH₂(BnOOC-CH₂)-(R)Cha-Pro-Pig(Z) BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z) BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Rig(Z)

-147CZ 290104 B6

BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Rig(Z) BnOOC-CH₂-CH₂-(R)Cha-Aze-Rig(Z), kde symboly a a b označují, že u sloučeniny s jedním asymetrickým centrem vyznačeným 5 symbolem „RorS“ je neznámá absolutní stereochemická konfigurace, buď jako takový nebo jako stereoizomer nebo ve formě fyziologicky přijatelné soli.

17. Peptidový derivát podle nároku 2, který je vybrán ze souboru sestávajícího z

BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Cha-Pro-Pab(Z)

BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)₂

15 EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pac(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pig(Z) buď jako takový nebo jako stereoizomer nebo ve formě fyziologicky přijatelné soli.

18. Peptidový derivát podle nároku 1, kteiý je vybrán ze souboru sestávajícího z

H-(R)Pro-Phe-Pab

HOOC-CH₂-(R)Pro-Phe-Pab

25 H-(R)Phe-Phe-Pab

HOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Pab HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab buď jako takový nebo jako stereoizomer nebo ve formě fyziologicky přijatelné soli.

19. Peptidový derivát podle nároku 2, který je vybrán ze souboru sestávajícího z

Boc-(R)Pro-Phe-Pab(Z)

BnOOC-CH₂-(R)Pro-Phe-Pab(Z)

35 Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z)

MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) BnOOC-CHr-(R)Phe-Phe-Pab(Z) buď jako takový nebo jako stereoizomer nebo ve formě fyziologicky přijatelné soli.

20. Způsob přípravy sloučeniny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 19, vyznačující se t i m, že zahrnuje kondenzaci N-koncově chráněné aminokyseliny nebo dipeptidu nebo aminokyseliny, přičemž když je použita N-koncově chráněná aminokyselina, přidá se druhá aminokyselina ke sloučenině vzorce

H₂N - (CH₂)_n - X, kde

50 n je celé číslo 0, 1,2,3 nebo 4,

X je B nebo B-D,

-148CZ 290104 B6 kde B má význam definovaný u vzorce I a

X je skupina převeditelná na B, s následujícím odstraněním chránící skupiny nebo chránících skupin nebo odchráněním N-koncového dusíku po alkylaci N-koncového dusíku a je-li to žádoucí, odchráněním a je-li to žádoucí, tvorbou fyziologicky přijatelné soli a v těch případech, kdy reakce vede ke směsi stereoizomerů, jsou tyto popřípadě odděleny chromatografickými nebo rekiystalizačními technikami a je-li to žádoucí, je izolován jediný stereoizomer.

21. Způsob podle nároku 20 pro přípravu peptidového derivátu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 19, vyznačující se t í m , že zahrnuje

N-koncově chráněný dipeptid obecného vzorce

W¹--A¹—A²--OH, ve kterém

HjN—(CHs) ve kterém

Q¹ je -C(NH)-NH2, -C(NW²)-NH-W², -C(NH)-NH-W², -NH-C(NH)-NH2, -NH-C(NH>NH-W², -N(W²)-C(NH)-NH-W² nebo -NH-C(NW²)-NH-W², kde W² je aminochránicí skupina, jako je terc.-butoxykarbonylová nebo benzyloxykarbonylová skupina, nebo

Q¹ je-CN,-CO-NH₂ nebo-CS-NH₂, a n má význam definovaný u obecného vzorce I, a v připraveném meziproduktu, pokud Q¹ je -CN, -CO-NH2 nebo -CS-NH2, tato skupina se následně převede na amidinoskupinu nebo pokud Q¹ je NH2 nebo NH-W², kde W' má výše definovaný význam, W²-skupina, je-li Q¹ -NH-W², a kde W² v tomto případě je orthogonální

-149CZ 290104 B6 k W¹, se odehrání a aminoskupina se následně převede na guanidinoskupinu, poskytující Q¹, které je -NH-C(NH)-NH₂,

N-koncově chráněná aminokyselina obecného vzorce

W¹--A²--OH, ve kterém

A² má význam definovaný v nároku 1 a

HjN—(CMj) ve kterém

W'--A¹--OH, ve kterém

A¹ má význam definovaný v nároku 1 a

c) pro přípravu peptidového derivátu obecného vzorce I nebo V, kde B znamená strukturní fragment vzorce IVa, ve kterém X¹, X² a X⁴ vždy představují CH2, r znamená číslo 1, X³ představuje skupinu vzorce CH-C(NH)-NH2 nebo CH-NHC(NH)-NH₂ a ostatní substituenty mají význam definovaný u obecného vzorce I nebo V,

N-koncově chráněný dipeptid obecného vzorce

W’--A¹—A²--OH, ve kterém

-150CZ 290104 B6

HjN—(CH ve kterém

Q' je -C(NH)-NH₂, -C(NW²)-NH-W², -C(NH)-NH-W², -NH-C(NH)-NH₂, -NH-C(NH)NH-W², -N(W²)-C(NH)-NH-W² nebo -NH-C(NW²)-NH-W², kde W² je aminochránicí skupina, jako je terc.-butoxykarbonylová nebo benzyloxykarbonylová skupina, nebo

Q¹ je-CN,-CO-NH₂ nebo-CS-NH₂, a n má význam definovaný u obecného vzorce I, a v připraveném meziproduktu, pokud Q¹ je -CN, -CO-NH2 nebo -CS-NH2, tato skupina se následně převede na amidinoskupinu nebo pokud Q* je NH2 nebo NH-W², kde W² má výše definovaný význam, W²-skupina, je-li Q¹ -NH-W², a kde W² v tomto případě je orthogonální k W¹, se odehrání a aminoskupina se následně převede na guanidinoskupinu, poskytující Q¹, které je -NH-C(NH)-NH2,

N-koncově chráněná aminokyselina obecného vzorce

W¹—A²--OH, ve kterém

A² má význam definovaný v nároku 1 a

W¹ má význam definovaný výše, se kondenzuje se sloučeninou obecného vzorce ve kterém

Q¹ a n mají význam uvedený výše,

- 151 CZ 290104 B6

V ·» a v připraveném meziproduktu se W¹ odehrání a získaný meziprodukt se kondenzuje s N-koncově chráněnou aminokyselinou obecného vzorce

W’--A¹--OH, ve kterém

A¹ má význam definovaný v nároku 1 a

10 W¹ má význam definovaný výše, a poté se takto získaný meziprodukt zpracuje stejným způsobem jako je uvedeno pod c) výše,

e) pro přípravu peptidového derivátu obecného vzorce I nebo V, kde B znamená strukturní

15 fragment vzorce IVa, ve kterém r znamená číslo 0 nebo 1, když X¹, X² a X⁴ vždy představují CH2, či r představuje 0, když X² a X⁴ vždy představují CH2, X* chybí a X³ představuje skupinu vzorce N-C(NH)-NH₂ a ostatní substituenty mají význam definovaný u obecného vzorce I nebo V,

20 N-koncově chráněný dipeptid obecného vzorce

W¹ A¹—A²--OH, ve kterém

W^! je N-koncová aminochránici skupina, jako je terc.-butoxykarbonylová nebo benzyloxykarbonylová skupina,

35 ve kterém

Q¹ je -C(NH)-NH₂, -C(NW²}-NH-W² nebo -C(NH)-NH-W², kde W² je aminochránici skupina, jako je terc.-butoxykarbonylová nebo benzyloxykarbo40 nylová skupina, nebo

Q² je rovno W² a r představuje číslo 0 nebo 1, když

45 X¹, X² a X⁴ vždy představují CH₂, nebo r představuje 0, když

X² a X⁴ vždy představují CH₂, X¹ chybí a

-152CZ 290104 B6

X³ představuje skupinu vzorce N-C(NH)-NH2 a n má význam uvedený výše, nebo

Q² je W², pokud je orthogonální k W¹, a potom se odstraní skupina W², aminoskupina se následně převede na guanidinoskupinu za použití nechráněného, N-chráněného nebo Ν,Ν-dichráněného guanidinového činidla,

f) pro přípravu peptidového derivátu obecného vzorce I nebo V, kde B znamená strukturní fragment vzorce IVa, ve kterém r znamená číslo 0 nebo 1, když X¹, X² a X⁴ vždy představují CH2, či r představuje 0, když X² a X⁴ vždy představují CH2, X¹ chybí a X³ představuje skupinu vzorce NC(NH)-NH₂ a ostatní substituenty mají význam definovaný u obecného vzorce I nebo V,

N-koncově chráněná aminokyselina obecného vzorce

W¹--A²--OH, ve kterém

A² má význam definovaný v nároku 1 a

W¹ má význam uvedený výše, se kondenzuje se sloučeninou vzorce (CHjT-ť ^,)ň\

V--&

ve kterém

W¹--A¹--OH, ve kterém

A¹ má význam definovaný v nároku 1 a

g) pro přípravu peptidového derivátu obecného vzorce I nebo V, kde B znamená strukturní fragment vzorce IVa, ve kterém X⁴ představuje CH₂, X¹ a X³ znamenají NH, X² představuje C=NH a r znamená číslo 1, a ostatní substituenty mají význam definovaný u obecného vzorce I nebo V,

-153CZ 290104 B6 rN-koncově chráněný dipeptid obecného vzorce

W¹--A¹—A²--OH, ve kterém

A¹ a A² mají význam definovaný u obecných vzorců I nebo V, se kondenzuje se sloučeninou vzorce ve kterém

W³ je vodík nebo aminochránicí skupina, jako je arylsulfonylová skupina, benzyloxykarbonylová skupina nebo terc.-butoxykarbonylová skupina a n má význam definovaný v nároku 1,

N-koncově chráněná aminokyselina obecného vzorce

W¹—A²—OH, ve kterém

A² má význam definovaný v nároku 1 a

W¹ má význam definovaný výše, se kondenzuje se sloučeninou vzorce ve kterém

W³ a n mají význam definovaný výše,

-154CZ 290104 B6 a v připraveném meziproduktu se odehrání skupina W¹ a takto vzniklý meziprodukt se kondenzuje s N-koncovou aminokyselinou obecného vzorce

W¹--A¹--OH, ve kterém

A¹ má význam definovaný v nároku 1 a

odstraněním chránící skupiny nebo chránících skupin, je-li Q¹ ve významu -C(NH)-NH2, -C(NW²)-NH-W², -€(NH)-NH-W², -NH-C(NH)-NH₂, -NH-C(NH)-NH-W², -N(W²)C(NH)-NH-W² nebo -NH-C(NW²)-NH-W², kde W² má význam uvedený výše, nebo selektivním odchráněním W'-skupiny, když Q¹ nebo Q² znamenají -C(NW²)-NH-W², -C(NH)NH-W², -NH-C(NH)-NH-W²,

-N(W²)-C(NH)-NH-W² nebo -NH-C(NW²)-NH-W², kde W² má výše uvedený význam a v tomto případě musí být orthogonální k W¹, a potom se alkyluje N-koncový dusík a je-li to žádoucí, provede se odchránění.

22. Peptidový derivát podle kteréhokoliv z nároků 1 až 19 pro použití v terapii.

23. Peptidový derivát podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 nebo 7 až 17 pro použití jako antikoagulační nebo antitrombotické činidlo.

24. Peptidový derivát podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, 6 až 10 nebo 18 a 19 pro použití jako protizánětlivé činidlo.

25. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje účinné množství peptidového derivátu podle nároků 1 až 19 spolu s jedním nebo více farmaceutickými nosiči.

26. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje účinné množství peptidového derivátu podle nároků 1 až 5 nebo 7 až 17 spolu s jedním nebo více farmaceuticky přijatelnými nosiči pro použití jako antikoagulační nebo antitrombotické činidlo.

27. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje účinné množství peptidového derivátu podle nároků 1 až 4, 6 až 10 nebo 18 až 19 spolu s jedním nebo více farmaceuticky přijatelnými nosiči pro použití jako protizánětlivé činidlo.

28. Použití peptidového derivátu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 nebo 7 až 17 jako účinného činidla pro výrobu farmaceutického přípravku pro inhibici trombinu v lidském nebo zvířecím organismu.

29. Použití peptidového derivátu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, 6 až 10 nebo 18 až 19 jako účinného činidla pro výrobu farmaceutického přípravku pro inhibici kininogenáz v lidském nebo zvířecím organismu.