PT701568E - Novos derivados de peptidos - Google Patents

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PT701568E
PT701568E PT94918636T PT94918636T PT701568E PT 701568 E PT701568 E PT 701568E PT 94918636 T PT94918636 T PT 94918636T PT 94918636 T PT94918636 T PT 94918636T PT 701568 E PT701568 E PT 701568E
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PT94918636T
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Nils Olov Ingemar Nilsson
Karl Thomas Antonsson
Ruth Elvy Bylund
Nils David Gustafsson
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Astrazeneca Ab
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Description

- 1 - j- L·, ^^
DESCRIÇÃO "NOVOS DERIVADOS DE PÉPTIDOS"
Esta invenção refere-se a novos inibidores competitivos de 5 proteases serinicas tipo tripsina, especialmente trombina e quininogenases tais como';çalicreína, às suas sinteses, composições farmacêuticas contendo os compostos como ingredientes activos, e à utilização dos compostos como inibidores de trombina e anti-coagulantes tais como 10 inibidores anti-inflamatórios, respectivamente. A invenção também se refere à nova utilização de compostos como materiais de partida na síntese de um inibidor de protease serínica. Além disso, a invenção refere-se a novos fragmentos estruturais em inibidores de protease serínica. 15
ANTECEDENTES A coagulação sanguínea é o processo chave envolvido na hemostasia (i.e. a prevenção de perda sanguínea a partir de 20 um vaso danificado) e na trombose (i.e. a oclusão patológica de um vaso sanguíneo por um coágulo sanguíneo). A coagulação é o resultado de uma série complexa de reacções enzimáticas, em que um dos passos finais é a conversão da proenzima protrombina na enzima activa trombina. 25 A trombina desempenha um papel central na coagulação. Activa plaquetas, converte o fibrinogénio em monómeros de fibrina, que polimerisa espontaneamente em filamentos, e activa o factor XIII, que por sua vez sofre ligação reticular do 30 polímero em fibrina insolúvel. A trombina activa ainda o factor V e o factor VIII numa reacção de retroalimentação positiva. Espera-se assim que os inibidores de trombina sejam anti-coagulantes eficazes por inibição das plaquetas, -2- ΐ formação de fibrina e estabilização de fibrina. Através da inibição do mecanismo de retroalimentação positivo espera-se que eles exerçam inibição precocemente na cadeia de eventos que levam à coagulação e à trombose. 5
As quininogenases são proteases serínicas que actuam sobre os quininogénios para produzir quininas (bradiquinina^vt calidina e Met-Lys-bradiquinina). A calicreina^ plasmática, calicreína dos tecidos e a triptase de mastócitos 10 representam quininogenases importantes.
As quininas (bradiquinina, calidina) estão geralmente envolvidas em inflamação. Por exemplo, o processo activo de inflamação está associado a uma permeabilidade aumentada dos 15 vasos sanguíneos, resultando em extravasação de plasma para o tecido. O exsudado plasmátiço subsequente contém todos os sistemas proteicos do sangue em circulação. Os quininogénios derivados do plasma irão inevitavelmente interagir com diferentes calicreínas, formando quininas continuamente 20 desde que o processo activo de exsudação de plasma se mantenha. A exsudação do plasma ocorre independentemente dos mecanismos que estão envolvidos na inflamação, quer seja alergia, infecção ou outros factores (Persson et ai., Editorial, Thorax, 1992, 47:993-1000). A exsudação do plasma 25 é assim uma característica de muitas doenças incluindo asma, rinite, constipação comum e doenças inflamatórias do intestino. Particularmente em caso de alergia será libertada triptase de mastócitos (Salomonsson et ai., Am. Rev. Respir. Dis., 1992, 146:1535-1542) para contribuir para a formação 30 de quinina e outros eventos patogénicos em asma, rinite e doenças intestinais.
As quininas são substâncias biologicamente altamente activas com efeitos no músculo liso, efeitos secretores, efeitos -3-
neurogénicos e acções que podem perpetuar processos inflamatórios incluindo activação de fosfolipase A2 e aumentando a permeabilidade vascular. Esta última acção induz potencialmente um circulo vicioso com as quininas 5 proporcionando a geração de mais quininas, etc. A calicreina dos tecidos cliva principalmente quininogénio de baixo peso molecular para ' prbduzir calidina e a calicreina do plasma liberta preferencialmente bradiquinina 10 a partir de quininogénio de alto peso molecular.
ANTECEDENTES DA TÉCNICA
Os inibidores de trombina baseados na sequência de 15 aminoácidos em redor do sitio de clivagem para a cadeia Aa do fibrinogénio foram primeiro relatados por Blombãck et al. em J. Clin. Lab. Invest. 24, suplem. 107, 59, (1969), que sugeriram a sequência Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, aqui referida como a sequência P3-P2-P1) como sendo o melhor inibidor. 20
Em US 4 346 078 Bajusz et al. descreveram o inibidor de trombina H-Dphe-Pro-Agm, um derivado de dipeptidilo com uma guanidina de aminoalquilo na posição Pl. 25 Os inibidores de trombina baseados em derivados peptidicos com uma guanidina de aminoalquilo cíclica, p. ex. 3-aminoetil-l-amidinopiperidina na posição P-l, foram revelados em EP-A2-0 468 231. 30
Em EP-A2-0 185 390 Bajusz et al. revelaram que a substituição de agmatina por um aldeído de arginina produziu um inibidor de trombina que possuía uma potência muito mais elevada. -4- -4- Γ U,
Os inibidores de trombina baseados em aldeído de arginina e ácido L-azetidina-2-carboxílico foram revelados em EP-A2-0 542 525. 5
Os inibidores de calicreína baseados na sequência de aminoácidos em redor·.· .dot. sítio de clivagem Arg-Ser foram relatados anteriormente. * - 10 As cetonas de clorometil de arginina H-Dpro-Phe-Arg-CH2Cl e H-D Phe-Phe-Arg-CH2C1 foram relatadas como inibidores de calicreína de plasma por Kettner e Shaw em Biochemistry 1978, 17:4778-4784 e Meth. Enzym. 1981, 80:826-842. 15 De igual modo, ésteres e amidas contendo a sequência H-Dpro-Phe-Arg foram relatados por Fareed et al. em Ann. N.Y. Acad. Sei. 1981, 370:765-784 como sendo inibidores de calicreína de plasma. 20 Os inibidores de proteases serínicas que se baseiam em cetonas electrofílicas em vez de em aldeídos na posição PI estão descritos nos seguintes documentos de patente: EP-A2-0 195 212 descrevendo ésteres α-cetopeptidilo e 25 amidas, EP-A1-0 362 002 descrevendo cetonas de fluoroalquilamida e EP-A2-0 364 344 descrevendo compostos α,β,δ-triceto possuindo diferentes propriedades inibidoras de peptidase. 30 Os inibidores de proteases serínicas tipo tripsina, tais como trombina e calicreína, baseados em derivados do ácido borónico do terminal C da arginina e análogos de isotiourónio destes foram revelados em EP-A2-0 293 881. -5-
L· t WO 92/04371 descrevendo inibidores de quininogenase, p. ex. inibidores de calicreina baseados em derivados de arginina. 5 EP-A1-0 530 167 descrevendo derivados de cetona a-alcoxilo de arginina como inibidores de trombina. REVELAÇÃO DA INVENÇÃO **> ' 10 Um objectivo da presente invenção é proporcionar novos e potentes inibidores de protease serinica tipo tripsina, especialmente anti-coagulantes e compostos anti-inflamatórios, com actividade inibidora competitiva em relação à sua enzima, i.e. causando inibição reversível. 15 Mais especificamente, anti-coagulantes para profilaxia e tratamento de doenças tromboembólicas, tais como trombose venosa, embolia pulmonar, trombose arterial, em particular enfarte do miocárdio e trombose cerebral, estados hipercoaguláveis gerais e estados hipercoaguláveis locais, 20 p. ex. após operações de angioplastia e de "bypass" coronário e outras situações em que se crê que a trombina desempenhe um papel, p. ex. doença de Alzheimer, bem como inibição de quininogenases para tratamento de desordens inflamatórias, p. ex. asma, rinite, urticária, doença 25 inflamatória do intestino e artrite. Outro objectivo é obter inibidores de trombina que sejam oralmente biodisponiveis e selectivos na inibição de trombina em relação a outras proteases serinicas. Outro objectivo da invenção é obter inibidores de quininogenase, que podem ser administrados 30 oralmente, rectalmente, topicamente, p. ex. dermicamente, ou através da via de inalação.
Compostos -6-
De acordo com a invenção, verificou-se que os compostos da Fórmula geral I, quer como tal quer sob a forma de sais farmaceuticamente aceitáveis, e incluindo estereoisómeros, são inibidores potentes de proteases serinicas, 5 especialmente trombina e quininogenases tais como calicreina:
A1-A2-NH— (CH2) n-B
Fórmula I em que:
em que: 20 k é um inteiro 0, 1, 2, 3 ou 4; m é um inteiro 1, 2, 3 ou 4; p L·, ^^ -7- q é um inteiro 0, 1, 2 ou 3; R1 representa H, um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de 5 carbono, ou RxlOOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e está possivelmente substituído na posição que é alfa em relação ao grupo carbonilo e- o substituinte álfá é um grupo R17-(CH2)P-, em que p é-0, 1 õu 2~ e R11 é metilo, fenilo, OH, COOR12, CONHR12, em que R12 é H ou 10 um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e R11 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 6 átomos de carbono, ou R1 representa Ph (4-COOR12) -CH2-, em que R12 é como definido acima, ou 15 R1 representa R13-NH-CO-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e está possivelmente substituído em alfa em relação ao carbonilo por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, em que R13 é H ou 20 um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono ou - CH2COOR12, em que R12 é como definido acima, ou R1 representa R12OOC-CH2~OOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e está possivelmente 25 substituído em alfa em relação ao carbonilo por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e em que R12 é como definido acima, ou R1 representa R14S02-, Ph (4-COOR12) -S02-, Ph (3-COOR12)-S02-, 30 Ph (2-COOR12) -SO2-, em que R12 é como definido acima e R14 é um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, ou -8- Γ u R1 representa -CO-R15, em que R15 é um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono, ou R1 representa -CO-OR15, em que R15 é como definido acima, ou 5 R1 representa -C0- (CH2) p-COOR12, em que R12 é como definido ·, acima e p é um inteiro 0, 1 ou 2, ou · R1 representa -CH2P0 (OR16) 2, -CH2S03H ou -CH2- (5- (1H) -10 tetrazolil), em que R16 é, individualmente a cada ocorrência, H, metilo ou etilo; R2 representa H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono ou R2100C-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 15 4 átomos de carbono e em que R21 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono; R3 representa um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e o grupo alquilo pode incorporar ou não um ou mais 20 átomos de flúor, ou R3 representa um grupo ciclopentilo, ciclohexil- ou fenilo, que pode ser substituído ou não por um grupo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, ou 25 R3 representa um grupo fenilo substituído por um grupo OR31, em que R31 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e k é 0, 1, ou 30 R3 representa um grupo 1-naftilo ou 2-naftilo e k é 0, 1, ou R3 representa um grupo cis- ou trans-decalino e k é 0, 1, ou -9-
R3 representa 4-piridilo, 3-pirrolidilo ou 3-indolilo, que podem ser ou não substituídos por um grupo OR31, em que R31 é como definido acima e k é 0, 1, ou 5 R3 representa Si (Me) 3 ou CH(R32)2, em que R32 é um grupo ciclohexil- ou um, grupo fenilo; Τ'ιΥ R4 representa H, um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, um grupo ciclohexil- ou um grupo fenilo; 0 A2 representa um fragmento estrutural de Fórmula Illa, Illb ou IIIc
15 em que: p é um inteiro 0, 1 ou 2; 20 m é um inteiro 1, 2, 3 ou 4; Y representa um grupo metileno, ou Y representa um grupo etileno e o anel de 5 membros 25 resultante pode incorporar ou não um ou dois átomos de flúor, um grupo hidroxilo ou um grupo oxo na posição 4, ou pode estar ou não insaturado, ou -10- r
Li
t Y representa -CH2-0-, -CH2-S-, -CH2-SO-, com a funcionalidade de heteroátomo na posição 4, ou 5 Y representa um grupo n-propileno e o anel de 6 membros resultante pode incorporar ou não na posição 5 um átomo de flúor, um. grupo hidroxilo ou um grupo oxo, incorporar- dois . átomos' de flúor numa das posições 4 ou 5 ‘'"ou4· dstar insaturados na posição 4 e 5, ou incorporar na posição 4 um 10 grupo alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, ou Y representa -CH2-0-CH2-, -CH2-S-CH2-, -CH2-SO-CH2-, ou Y representa -CH2-CH2-CH2-CH2-; 15 R3 é como definido acima; R5 representa H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, ou 20 R5 representa -(CH2)p-C00R51, em que p é 0, 1 ou 2 e R51 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono; n é um inteiro 0, 1, 2, 3 ou 4; B representa um fragmento estrutural de Fórmula IVa, IVb, IVc ou IVd 25 - 11 - ✓vvw- Xt"(CHjX V X1 H2N IVa tVb Wc . em que: 5 r é um inteiro 0 ou 1; X1 representa CH2, NH ou está ausente; X2 representa CH2, NH ou C=NH; 10 X3 representa NH, C=NH, N-C(NH)-NH2, C(NH)-NH2 ou CH-CH2-C(NH)-NH2; X4 representa CH2 ou NH; 15
Combinações preferidas de X1, X2, X3, X4 X1, X2 e X4 são ch2, X3 é CH-C (NH) -NH2 e X1, X2 e X4 são ch2, X3 é N-C(NH)-NH2 e r X1 e X3 são NH, X2 é c= :NH , X4 é CH2 e r é X1 e X4 são ch2, X2 é : C =NH, X3 é NH e r é X1 é CH2 , X2 : e X ;4 são 1 NH, X3 é C=NH e r é x1, X2 e X4 são ch2, X3 é CH-NH-C(NH)- •NH2 X1 está ausente, X2 e X4 são CH2, X3 é ou
X1 está ausente, X2 e X4 são CH2, X3 é N
IVd CH-C(NH)-NH2, ch- e r são r é 0, 1, ou, é 0, 1, ou ! 0, 1, ou ! 0, 1, ou ϊ 1, ou e r é 0, 1, ou CH-C(NH)-NH2 e r é C(NH)-NH2 e r é 0; 25 - 12- t
Combinações particularmente preferidas de X1, X2, X3, X4 e r são X1, X2 e X4 são CH2, X3 é CH-C(NH)-NH2 e r é 1; X1, X2 e X4 são CH2, X3 é N-C (NH)-NH2 e r é 0 ou 1; 5 X1 está ausente, X2 e X4 são CH2, X3 é N-C(NH)-NH2 e r é 0; X1 e X3 são NH, X2 é C=NH, X4 é CH2 e r é 1; X5 representa· C (NH)-NH2; . -> 10 R6 é H ou um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono; X6 representa CH ou N; 15 São preferidos os compostos de Fórmula I possuindo configuração S no aminoácido A2, desses compostos são particularmente preferidos os que possuem configuração R no aminoácido A1. 20 No presente contexto, o termo "um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono" pode ser linear ou ramificado salvo especificado em contrário. Um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono pode ser metilo, etilo, n-propilo, i- propilo, n-butilo, i-butilo, s-butilo e t-butilo. 25
No presente contexto, o termo "um grupo alquilo possuindo 1 a 6 átomos de carbono" pode ser linear ou ramificado salvo especificado em contrário. Um grupo alquilo possuindo 1 a 6 átomos de carbono pode ser metilo, etilo, n-propilo, i- 30 propilo, n-butilo, i-butilo, s-butilo, t-butilo, n-pentilo, i-pentilo, t-pentilo, neo-pentilo, n-hexilo ou i-hexilo.
Quando a insaturação é referida, pretende-se referir uma ligação dupla carbono-carbono. -13-
As linhas onduladas no átomo de carbono no grupo carbonilo nas Fórmulas lia, Ilb, IIc, Ild, lie, Illa, Illb, IIIc, no átomo de azoto nas Fórmulas Illa, Illb, IIIc e no átomo de carbono no sistema em anel nas Fórmulas IVa, IVb, IVc, IVd, b significam a posição da ligação no fragmento.
As abreviaturas estão listadas no final desta especificação. 10 De acordo com a invenção foi verificado que os compostos de Fórmula geral Ia, quer como tal ou na forma de sais fisiologicamente aceitáveis e incluindo estereoisómeros, são inibidores potentes de trombina: 15
A1-A2-NH—(CH2) n-B la em que: 20 A1 representa um fragmento estrutural de Fórmula lia, Ilb, IIc ou Ild, preferencialmente lia ou Ilb; em que: 25 k é um inteiro 0, 1, 2, 3 ou 4, preferencialmente 0, 1; q é um inteiro 0, 1, 2 ou 3, preferencialmente 1; R1 representa H, um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de 30 carbono, RuOOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e está possivelmente substituído na posição que é alfa em relação ao grupo carbonilo, e o substituinte em alfa é um grupo R17-(CH2)P-, em que p é 0, 1 ou 2 e R17 é metilo, fenilo, OH, COOR12, CONHR12, em que R12 é ι -14- Η ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e R11 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 6 átomos de carbono, ou 5 R1 representa Ph (4-COOR12)-CH2-, em que R12 é como definido acima, ou 10 R1 representa R13-NH-CO-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e está possivelmente substituído em alfa em relação ao carbonilo por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e em que R13 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono ou -15 CH2COOR12 em que R12 é como definido acima, ou R1 representa R12OOC-CH2-OOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e está possivelmente substituído em alfa em relação ao carbonilo por um grupo 20 alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e em que R12 é como definido acima, ou R1 representa R14SC2-, Ph (4-COOR12)-S02-, Ph (3-COOR12)-S02-, Ph (2-COOR12)-S02- em que R12 é como definido acima e R14 é um 25 grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono, ou R1 representa -CO-R15, em que R15 é um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono, ou 30 R1 representa -CO-OR15, em que R15 é como definido acima, ou R1 representa -C0-(CH2) P-COOR12, em que R12 é como definido acima e p é um inteiro 0, 1 ou 2, ou -15-
R1 representa -CH2PO (OR16) 2, -CH2S03H ou -CH2-(5-(1H)- tetrazolil), em que R16 é, individualmente e em cada ocorrência, H, metilo ou etilo;
Preferencialmente, R1 representa R11OOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e R11 é H. R2 representa· H ou um grupo alquilo possuindo 1—4 átdrffos*5 de- carbono, ou R21OOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e R21 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono; R3 representa um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e o grupo alquilo pode conter ou não um ou mais átomos de flúor, ou R3 representa um ciclopentilo, ciclohexil- ou um grupo fenilo que pode ou não estar substituído por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, ou R3 representa um grupo 1-naftilo ou 2-naftilo e k é 0, 1, ou R3 representa um grupo cis- ou trans-decalino e k é 0, 1, ou R3 representa Si (Me) 3 ou CH(R32)2, em que R32 é um grupo cilcohexil- ou fenilo; R4 representa um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, um grupo ciclohexilo ou fenilo, preferencialmente um grupo ciclohexilo ou um grupo fenilo; A2 representa um fragmento estrutural de Fórmula Illa, Illb ou IIIc, preferencialmente Illa; -16- em que: ρ é um inteiro 0, 1 ou 2; 5 m é um inteiro 1, 2, 3 ou 4, preferencialmente 2, 3; Y representa um grupo metileno; óu 10 Y representa um grupo etileno e o anel de 5 membros resultante pode conter ou não um ou dois átomos de flúor, um grupo hidroxilo ou um grupo oxo na posição 4, ou pode estar ou não insaturado, ou 15 Y representa -CH2-O-, -CH2-S-, CH2-SO-, com a funcionalidade de heteroátomo na posição 4, ou Y representa um grupo n-propileno e o resultante anel de 6 membros pode conter ou não na posição 5 um átomo de flúor, 20 um grupo hidroxilo ou um grupo oxo, conter dois átomos de flúor numa das posições 4 ou 5 ou estar insaturado na posição 4 e 5, ou possuir na posição 4 um grupo alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, ou 25 Y representa -CH2-0-CH2-, -CH2-S-CH2-, -CH2-SO-CH2-, ou Y representa -CH2-CH2-CH2-CH2-; R3 representa um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de 30 carbono, ou R3 representa um grupo Si(Me)3; - 17- p ^ R5 representa H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, preferencialmente H ou um grupo metilo, ou R5 representa - (CH2)p-COOR51, em que p é 0, 1 ou 2 e R51 é H ou 5 um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, preferencialmente p é 0 e R51 é H; n é um inteiro 0, -1,--2,-3 ou 4, preferencialmente 1, 2, 3; j 10 B representa um fragmento estrutural de Fórmula IVa, IVb, IVc ou IVd, preferencialmente IVa ou IVb em que: 15 20 25 X1, X2, X3, X4, X5 e X6 são como definidos acima; r é um inteiro 0 ou 1; R6 é H ou um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono, preferencialmente H; são combinações preferidas de X1, X2, X3, X4 e r X1, X2 e X4 são CH2, X3 é CH-C(NH)-NH2 e r é 0 ou 1, ou X1, X2 e X4 são CH2, X3 é N-C(NH)-NH2 e r é 0 ou 1, ou X1 e X3 são NH, X2 é C=NH, X4 é CH2 e r é 0 ou 1, ou X1 e X4 são CH2, X2 é C=NH, X3 é NH e r é 0 ou 1, ou X1 é CH2, X2 e X4 são NH, X3 é C=NH e r é 1, ou 30 -18- [- ^ ^—t X1, X2 e X4 são CH2, X3 é CH-NH-C(NH)-NH2 e r = 0 ou 1, ou ou X1 está ausente, X to e X4 são CH2, X3 é CH-C(NH)-NH2 e r é o, ou X1 está ausente, X2 e X4 são CH2, X3 é N· -C(NH)-NH2 e r é 0;
Conibinações particularmente preferidas de X1, X2,‘~X3,' X4 e r são 10 X1 está ausente, X2 e X4 são CH2, X3 é N-C(NH)-NH2 e r é 0, ou X1, X2 e X4 são CH2, X3 é CH-C(NH)-NH2 e r = 1, ou 15 X1, X2 e X4 são CH2/ X3 é N-C(NH)-NH2 e r = 0 ou 1, ou X1 e X3 são NH, X2 é C=NH, X4 é CH2 e r é 1; 20 X5 representa C(NH)-NH2; X6 representa CH ou N;
De acordo com uma realização preferida, a invenção refere-se 25 a compostos de Fórmula Ia, em que: A1 representa um fragmento estrutural de Fórmula lia, 30 em que: k é 0 ou 1;
-19- R1 representa RnOOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono, particularmente metileno, etileno e R11 é H; 5 R2 representa H; R3 representa um grupo ciclohexilo; A2 representa um fragmento estrutural de Fórmula Illa, em 10 que: Y representa um grupo metileno, um grupo etileno, ou um grupo n-propileno e o anel de 6 membros resultante pode 15 conter ou não na posição 4 um grupo alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, preferencialmente Y representa metileno, etileno; , R5 representa H; 20 B representa um fragmento estrutural de Fórmula IVa em que: 25 X1 está ausente, X2 e X4 são CH2, X3 é N-C(NH)-NH2, r é 0 e n é 1 ou 2; X1 e X3 são NH, X2 é C=NH, X4 é CH2, r é 1 e n é 2, ou X1, X2 e X4 são ch2, X3 é CH-C(NH)-NH2, r é 1 e n é 1, ou X1, X2 e X4 2, ou são ch2, X3 é N-C(NH)-NH2, r é 0 ou 1 e n é 1 ou -20-Γ u, t
Mais particularmente preferidos são os compostos em que B representa um fragmento estrutural de Fórmula IVb, em que: X5 representa C(NH)-NH2, R6 é H, e η = 1 5
Compostos preferidos da invenção são: HOOC-CHz- (R)Cgl-Aze-Pab ^ c ' HOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab 10 H00C-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Pro-Pab (HOOC-CH2) 2- (R) Cgl-Pro-Pab H-(R)Cgl-Pic-Pab 15 HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Cgl-Pic-Pab H-(R)Cha-Aze-Pab H00C-CH2-(R)Cha-Aze-Pab HOOC-CH2-(R, S)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab HOOC-CH2-(RouS)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/a 20 HOOC-CH2-(RouS)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/b HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pab HOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Aze-Pab H-(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pab 25 HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2- (Me) (R) Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-(RouS)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/a HOOC-CH2-(RouS)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/b 30 HOOC-CH2-NH-CO-CH2- (R)Cha-Pro-Pab EtOOC-CH2-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pab Ph (4-COOH)-S02-(R)Cha-Pro-Pab H-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab -21 - 5 10 15 20 25 HOOC-CH2- (RouS) CH (COOH) - (R) Cha-Pic-Pab/a HOOC-CH2- (RouS) CH (COOH) - (R) Cha-Pic-Pab/b HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pic-Pab HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CH2-CO- (R) Cha-Pic-Pab Me-OOC-CH2-CO- (R) Cha-Pic-Pab H2N-CO-CH2- (R) Cha-Pic-Pab Boc-(R)Cha-Pic-Pab Ac-(R)Cha-Pic-Pab Me-S02-(R)Cha-Pic-Pab H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cha- (R, S) betaPic-Pab HOOC-CH2- (R) Cha-Val-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Val-Pab H- (R)Hoc-Aze-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Hoc-Aze-Pab HOOC-CH2- (R, S) CH (COOH) - (R) Hoc-Pro-Pab HOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Pab (HOOC-CH2) 2-(R)Hoc-Pic-Pab HOOC-CH2-(R) Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Tic-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pig HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig H-(R)Cha-Aze-Pig HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pac H-(R)Cha-Pro-Pac H-(R)Cgl-Ile-Pab H-(R)Cgl-Aze-Pab HOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab MeOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab nBuOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab Γ 30 -22- Γ nHexOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab H-(R)Cgl-Pro-Pac HOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pac HOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Pro-Pac 5 HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pac HOOC-CH2- (R) Cha-Aze-Pig HOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pig HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pig (HOOC-CH2) 2-(R)Cgl-Pro-Pig 10 HOOC-CH2-CH2 (HOOC-CH2) - (R) Cha-Pro-Pig HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze- (R, S) Itp HOOC-CH2- (R) Cha-Aze- (R, S) Itp H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp HOOC-CH2- (R) Cha-Pic- (R, S) Itp 15 H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig HOOC-CH2-(R) Cgl-Pro-(R,S)Hig H-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig H-(R)Cgl-Aze-Rig 20 HOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Rig HOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Rig HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Rig HOOC-CH2-(R) Cha-Pro-(S) Itp H-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig 25 H-(R)Cha-Pro-Mig H-(R)Cha-Pro-Dig H-(R)Cha-Aze-Dig particularmente
Presentemente, os compostos de Fórmula 30 preferidos são HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pab HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pab -23-
HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pab HOOC-CH2- (R) Cha-Pic-Pab HOOC-CH2- (R)Cgl-Pro-Pig EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab 5 HOOC-CH2- (R)Cha-Pro-Pac HOOC-CH2- (R)Cha-Pro-Pig
Nas tabelas de compostos acima, as letras /a e /b reféYem-se a um estereoisómero substancialmente puro no átomo de 10 carbono denominado por "RouS". O estereoisómero pode ser identificado para cada composto com referência à parte experimental aqui referida. "R,S" refere-se a uma mistura de estereoisómeros. 15 De acordo com a invenção verificou-se que compostos de Fórmula geral Ib, como tal ou sob a forma de sais fisiologicamente aceitáveis, e incluindo estereoisómeros, são inibidores potentes de quininogenases: 20
A1-A2-NH—(CH2)n-B
Ib em que: 25 A1 representa um fragmento estrutural de Fórmula lia, Ilb ou lie, preferencialmente lia ou Ilb; em que: k é um inteiro 0, 1, 2, 3 ou 4, preferencialmente 0, 1; 30 q é um inteiro 0, 1, 2 ou 3, preferencialmente 1; R1 representa H, um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, ou R11OOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a f I__ -24- 4 átomos de carbono e está possivelmente substituído na posição que é alfa em relação ao grupo carbonilo, e o substituinte alfa é um grupo R17-(CH2)P-, em que p é 0, 1 ou 2 e R17 é metilo, fenilo, OH, COOR12, CONHR12, em que R12 é H ou 5 um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e R11 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 6 átomos de carbono, ou R1 representa Ph (4-COOR12) -0Η2-, em que R12 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, ou 10 R1 representa R13-NH-CO-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e está possivelmente substituído em alfa em relação ao carbonilo, por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono em que R13 é H ou 15 um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, ou - CH2COOR12 em que R12 é como definido acima, ou R1 representa R12OOC-CH2-OOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e está possivelmente 20 substituído em alfa em relação ao carbonilo, por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e em que R12 é como definido acima, ou R1 representa R14S02-, Ph (4-COOR12)-S02-, Ph(3-COOR12) -S02, 25 Ph (2-COOR12)-S02-, em que R12 é como definido acima e R14 é um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono, ou R1 representa -CO-R15, em que R15 é um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono, ou 30 R1 representa -CO-R15, em que R15 é como definido acima, ou R1 representa -CO-(CH2)p-COOR12, em que R12 é como definido acima e p é 0, 1 ou 2, ou -25- R1 representa -CH2PO (OR16) 2, -CH2SO3H ou -CH2- (5- (1H) -tetrazolil), em que R16 é, individualmente em cada ocorrência, H, metilo ou etilo; 5 R2 representa H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono ou R21OOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui la 4 átomos de carbono e R21 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono; 10 R3 representa um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono e o grupo alquilo pode conter ou não um ou mais átomos de flúor, ou 15 R3 representa um grupo ciclopentilo, ciclohexil- ou fenilo, que pode estar ou não substituído por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, ou R3 representa um grupo fenilo substituído por um grupo OR31, 20 em que R31 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e k é 0, 1, ou R3 representa um 1-naftilo ou grupo 1-naftilo e k é 0, 1, ou 25 R3 representa um grupo cis- ou trans-decalino e k é 0, 1, ou R3 representa 4-piridilo, 3-pirrolidilo ou 3-indolilo, que pode estar ou não substituído por um grupo OR31, em que R31 é como definido acima e k é 0, 1, ou 30 R3 representa Si (Me) 3 ou CH(R32)2, em que R32 é um grupo ciclohexilo ou fenilo; -26- R4 representa H, um grupo alquilo possuindo 1 a átomos de carbono, um grupo ciclohexilo ou fenilo, preferencialmente H; 5 A2 representa um fragmento estrutural de Fórmula Illb ou IIIc, preferencialmente Illb — ;—em que: 10 pé um inteiro 0, 1 ou 2; m é um inteiro 1, 2, 3 ou R3 é como definido acima; n é um inteiro 0, 1, 2, 3 4, preferencialmente 2, 3; ou 4, preferencialmente 1, 2, 3; 15 B representa um fragmento estrutural de Fórmula IVa, IVb, IVc ou IVd, preferencialmente IVa ou IVb; em que: 20 X1, X2, X3, X4 são como definidos acima; R6 é H ou um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono, preferencialmente H ou um grupo metilo; 25 r é um inteiro 0 ou 1; combinações preferidas de X1, X2, X3 e X4 são 30 X1, X2 e X4 são CH2, X3 é CH-C(NH)-NH2 e r é 0 ou 1, ou X1, X2 e X4 são CH2, X3 é N-C(NH)-NH2 e r é 0 ou 1, ou X1 e X3 são NH, X2 é C=NH, X4 é CH2 e r é 0 ou 1, ou
V Γ -27- X1 e X4 são CH2, X2 é C=NH, X3 é NH e r é 0 ou 1, ou X1 é CH2, X2 e X4 são NH, X3 é C=NH e r é 1, ou 5 X1/ X2 e X4 são CH2, X3 é CH-NH-C(NH)-NH2 e r é 0 ou 1, ou X1 está ausente, X2 e -X4· são CH2, X3 é CH-C(NH)-NH2 e r é 0, ou 10 X1 está ausente, X2 e X4 são CH2, X3 é N-C(NH)-NH2 e r é 0; combinações particularmente preferidas de X1, X2, x3 e X4 são 15 , X1, X2 e X4 são CH2, X3 é CH-C(NH)-NH2 e r é 1 ou, X1, X2 e X4 são CH2, X3 é N-C(NH)-NH2 e r é 1; X5 representa C(NH)-NH2; 20 X6 representa CH ou N.
Compostos preferidos da invenção são: 25 H-(R)Pro-Phe-Pab HOOC-CH2-(R)Pro-Phe-Pab H-(R)Phe-Phe-Pab HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab HOOC-CH2-(R)Phe-Phe-Pab 30 H-(R)Cha-Phe-Pab HOOC-CH2-(R)Cha-Phe-Pab H-(R)Phe-Cha-Pab HOOC-CH2-(R)Phe-Cha-Pab H-(R)Cha-Cha-Pab -28- HOOC-CH2- (R) Cha-Cha-Pab
Além disso, verificou-se que compostos de Fórmula geral V, como tal ou sob a forma de sais fisiologicamente aceitáveis, 5 e incluindo estereoisómeros, são inibidores potentes de proteases serinicas, especialmente trombina e quininogenases tais como calicreina, após administração oral *~bu 1 -·- , . \ . ·, , parentérica1: "
10 A1 - A2 - NH - (CH2)n - B - D
Fórmula V em que: 15 A1 representa um fragmento estrutural de Fórmula lia, Ilb IIc, Ild ou lie;
0c
R’
Da em que: 20 -29- -29-
Γ k é um inteiro 0, 1, 2, 3 ou 4; m é um inteiro 1, 2, 3 ou 4; 5 q é um inteiro 0, 1, 2 ou 3; R1 representa R1100C-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e está possivelmente substituído na posição que é alfa em relação ao grupo carbonilo, e o 10 substituinte alfa é um grupo R17-(CH2)P-, em que p é 0, 1 ou 2 e R17 é COOR12, CONHR12, em que R12 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono ou um grupo benzilo, e R11 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 6 átomos de carbono, ou um grupo benzilo, ou 15 R1 representa Ph (4-COOR12)-CH2-, em que R12 é como definido acima, ou 20 R1 representa R13-NH-CO-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e está possivelmente substituído em alfa em relação ao grupo carbonilo, por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e em que R13 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono ou 25 -CH2COOR12, em que R12 é como definido acima, ou R1 representa R12OOC-CH2-OOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono está possivelmente substituído em alfa em relação ao grupo carbonilo, por um 30 grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e em que R12 é como definido acima, ou -30- -30-
t R1 representa R14S02-, Ph (4-COOR12)-S02-, Ph (3-COOR12) -S02-, Ph (2-COOR12)-S02-, em que R12 é como definido acima e R14 é um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono, ou 5 R1 representa -C0-R15, em que R15 é um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono, ou R1 representa -CO-OR15> em que R15 é como definido acima, ou ‘ ' 10 R1 representa -CO- (CH2)p-COOR12, em que R12 é como definido acima e p é um inteiro 0, 1 ou 2, ou R2 representa H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono ou R21OOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 15 4 átomos de carbono e em que R21 é H, um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono ou um grupo benzilo; R3 representa um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono, e o grupo alquilo pode conter ou não um ou mais 20 átomos de flúor, ou R3 representa um grupo ciclopentilo, ciclohexil- ou fenilo, que pode estar ou não substituído por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, ou 25 R3 representa um grupo fenilo substituído por um grupo OR31, em que R31 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e k é 0, 1, ou 30 R3 representa um grupo 1-naftilo ou 2-naftilo e k é 0, 1, ou R3 representa um grupo cis- ou trans-decalino e k é 0, 1, ou -31 - R3 representa 4-piridilo, 3-pirrolidilo ou 3-indolilo, que pode estar ou não substituído por um grupo OR31, em que R31 é como definido acima e k é 0, 1, ou 5 R3 representa Si(Me)3 ou CH(R32)2, em que R32 é um grupo ciclohexil- ou fenilo; - R4-· representa H, um grupo alquilo possuindo l'a ‘4 átomos de carbono, um grupo ciclohexil- ou fenilo; 10 A2, B e n são definidos como descrito na Fórmula I acima; D é Z ou (Z) 2 / em que Z representa um grupo benziloxicarbonilo. 15 O grupo benziloxicarbonilo (Z ou (Z)2) ligar-se-á aos azotos de amidino ou guanidino presentes em B.
Combinações preferidas e particularmente preferidas são as 20 mesmas que descritas pela Fórmula I acima.
Além disso, verificou-se que os compostos de Fórmula geral Va, quer como tal ou sob a forma de sais fisiologicamente 25 aceitáveis, e incluindo estereoisómeros, são inibidores potentes de trombina após administração oral ou parentérica: A1 - A2 - NH - (CH2) n - B - D 30 Fórmula Va em que: A1 representa um fragmento estrutural de Fórmula lia, Ilb, IIc ou Ild, preferencialmente lia ou Ilb; -32- Γ u em que: k é um inteiro 0, 1, 2, 3 ou 4, preferencialmente 0, 1; 5 q é um inteiro 0, 1, 2 ou 3, preferencialmente 1; R1 representa RnOOC-alquil-, em -que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e está possivelmente substituído na 10 posição que é alfa em relação ao grupo carbonilo, e o substituinte alfa é um grupo R17-(CH2)P-, em que p é 0, 1 ou 2 e R17 é COOR12, CONHR12, em que R12 é H, um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono ou um grupo benzilo, e R11 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 6 átomos de carbono, 15 ou um grupo benzilo, ou R1 representa Ph (4-COOR12)-CH2-, em que R12 é como definido acima, ou 20 R1 representa R13-NH-CO-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e está possivelmente substituído em alfa em relação ao grupo carbonilo, por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e em que 25 R13 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono ou -CH2COOR12 em que R12 é como definido acima, ou R1 representa R12OOC-CH2-OOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e está possivelmente 30 substituído em alfa em relação ao carbonilo, por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e em que R12 é como definido acima, ou -33- R1 representa R14S02-, Ph (4-COOR12) -S02-, Ph (3-COOR12)-S02-, Ph (2-COOR12) -S02- em que R12 é como definido acima e R14 é um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, ou 5 R1 representa -CO-R15, em que R15 é um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono, ou R1 representa ^CO-R15, em que R15 é como definido acimã, ou' ~ 10 R1 representa -CO- (CH2)p-COOR12, em que R12 é como definido acima e p é um inteiro 0, 1 ou 2, ou
Preferencialmente R1 representa Ru00C-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e R11 é como 15 definido acima. R2 representa H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, ou R2100C-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e R21 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 20 a 4 átomos de carbono ou um grupo benzilo; 25 R3 representa um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono, e o grupo alquilo pode conter ou não um ou mais átomos de flúor, ou R3 representa um grupo ciclopentilo, ciclohexil- ou fenilo, 30 que pode estar ou não substituído por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, ou R3 representa um grupo 1-naftilo ou 2-naftilo e k é 0, 1, ou -34-
ΐ R3 representa um grupo cis- ou trans-decalino e k é 0, 1, ou R3 representa Si(Me)3 ou CH(R32)2, em que R32 é um grupo ciclohexil- ou fenilo; 5 R4 representa um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, um grupo ciclohexilo ou fenilo, preferencialmente • um grupo ciclohexilo ou fenilo; ~ 10 A2, B e n são definidos como descrito acima na Fórmula Ia; D é Z ou (Z)2; Z representa um grupo benziloxicarbonilo. 15 Inteiros, grupos ou combinações preferidos e combinações particularmente preferidas são os mesmos que os descritos para a Fórmula Ia acima, mas R11 é H, um grupo alquilo possuindo 1 a 6 átomos de carbono, ou um grupo benzilo. 20 Compostos preferidos de Fórmula Va são:
BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
BnOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) 25 BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z)
BnOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Pro-Pab (Z) (BnOOC-CH2)2- (R) Cgl-Pro-Pab (Z)
BnOOC-CH2-(R, S)CH(COOBn)-(R)Cgl-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pab(Z) 30 BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)
BnOOC-CH2-(RouS)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/a BnOOC-CH2-(RouS)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/b BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pab (Z) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Aze-Pab(Z) -35 Γ
BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z)
BnOOC-CH2- (Me) (R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pab (Z) BnOOC-CH2-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z) 5 BnOOC-CH2- (R, S) CH (COOBn) - (R) Cha-Pro-Pab (Z) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2- (R) Cha-Pro-Pab (Z)
Ph (4-C00H) -S02- (R) Cha-Pro-Pab.( Z )
Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab (Z) 10 BnOOC-CH2- (R, S) CH (COOBn) - (R) Cha-Pic-Pab (Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pic-Pab (Z)
EtOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
MeOOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) H2N-CO-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z) 15 Ac-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
Me-S02-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
BnOOC-CH2-(R)Cha-Val-Pab (Z)
BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha- (R, S) Val-Pab (Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Hoc-Aze-Pab (Z) 20 BnOOC-CH2- (R, S) CH (COOBn) - (R) Hoc-Pro-Pab (Z) BnOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Pab (Z) (BnOOC-CH2) 2- (R) Hoc-Pic-Pab (Z)
BnOOC-CH2-(R) Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) 25 BnOOC-CH2-CH2- (R) Pro (3- (S) Ph) -Pro-Pab (Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Tic-Pro-Pab (Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pig (Z) 2 BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2 BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pac(Z) 30 BnOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab(Z) MeOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) nBuOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) nHexOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
L-^ -36-
BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pac (Z)
BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pac(Z)
BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pac (Z)
BnOOC-CH2- (R) Cha-Aze-Pig (Z) 5 BnOOC-CH2-(R) Cha-Pro-Pig(Z)
BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pig(Z) (Bn00C-GH2<)e-.(R)Cgl-Pro-Pig(Z)
BnOOC-CH2-CH2(BnOOC-CH2)-(R) Cha-Pro-Pig (Z)
BnOOC-CH2- (R) Cha-Pic- (R, S) Itp (Z) 10 BnOOC-CH2-(R) Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z)
BnOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Rig (Z)
BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Rig (Z)
BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Rig(Z) 15 Compostos particularmente preferidos são:
BnOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z)
BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pab (Z)
BnOOC-CH2- (R) Cha-Pic-Pab (Z) 20 BnOOC-CH2- (R) Cgl-Pro-Pig (Z) 2 EtOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z)
BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pac (Z)
BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pig (Z) 25
Além disso, verificou-se que compostos de Fórmula geral Vb, quer como tal ou sob a forma de sais f isiologicamente aceitáveis, e incluindo estereoisómeros, são inibidores potentes de calicreina após administração oral ou 30 parentérica:
A1 - A2 - NH - (CH2)n - B - D Fórmula Vb r 1__ -37- em que: A1 representa um fragmento estrutural de Fórmula lia, Ilb ou 5 lie, preferencialmente lia ou Ilb; em que: -==. . - k é um inteiro 0, 1, 2, 3 ou 4, preferencialmente 0, 1; 10 q é um inteiro 0, 1, 2 ou 3, preferencialmente 1; R1 representa RnOOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e está possivelmente substituído na 15 posição que é alfa em relação ao grupo carbonilo, e o substituinte alfa é um grupo R17-(CH2)P-, em que p é 0, 1 ou 2 e R17 é COOR12, CONHR12, em que R11 é H ou vim grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, e R11 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 6 átomos de carbono, ou vim grupo 20 benzilo, ou R1 representa Ph(4-COOR12)-CH2-, em que R12 é como definido acima, ou 25 R1 representa R13-NH-CO-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e está possivelmente substituído em alfa em relação ao grupo carbonilo, por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e em que 30 R13 é H ou vim grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono ou -CH2COOR12 em que R12 é como definido acima, ou R1 representa R12OOC-CH2-OOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e está possivelmente -38- substituído em alfa em relação ao carbonilo, por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e em que R12 é como definido acima, ou 5 R1 representa R14S02-, Ph(4-C00R12)-S02-, Ph (3-COOR12) -S02,
Ph (2-COOR12) -S02-, em que R12 é como definido acima e R14 é um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono, ou -s R1 representa -CO-R15, em que R15 é um grupo alquilo possuindo 10 1-4 átomos de carbono, ou R1 representa -CO-R15, em que R15 é como definido acima, ou R1 representa -CO-(CH2) p-COOR12, em que R12 é como definido 15 acima e p é 0, 1 ou 2, ou R2 representa H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono ou R2100C-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e R21 é H, um grupo alquilo possuindo ,1 a 20 4 átomos de carbono ou um grupo benzilo; R3 representa um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, e o grupo alquilo pode conter ou não um ou mais átomos de flúor, ou 25 R3 representa um grupo ciclopentilo, ciclohexil- ou fenilo, que pode estar ou não substituído por um grupo alquilo 30 possuindo 1 a 4 átomos de carbono, ou R3 representa um grupo fenilo substituído por um grupo OR31, em que R31 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e k é 0, 1, ou -39- -39- t |~ Lc, R3 representa um grupo 1-naftilo ou 1-naftilo e k é 0, 1, ou R3 representa um grupo cis- ou trans-decalino e k é 0, 1, ou 5 R3 representa 4-piridilo, 3-pirrolidilo ou 3-indolilo, que , pqde ser ou não substituído por um grupo OR3?", hem.-que R31 é como definido acima e k é 0, 1, ou 10 R3 representa Si (Me) 3 ou CH(R32)2, em que R32 é um grupo ciclohexil- ou um grupo fenilo; R4 representa H, um grupo alquilo possuindo 1 a átomos de carbono, um grupo ciclohexil- ou um grupo fenilo, 15 preferencialmente H; A2, B e n são definidos como descrito na Fórmula Ib acima; D representa Z ou (Z)2. 20
Inteiros, grupos ou combinações preferidos e combinações particularmente preferidas são os mesmos que os descritos para a Fórmula Ib acima, mas R11 é H, um grupo alquilo possuindo 1 a 6 átomos de carbono, ou um grupo benzilo. 25
Compostos preferidos de Fórmula Vb são:
Boc-(R)Pro-Phe-Pab(Z) 30 BnOOC-CH2-(R) Pro-Phe-Pab (Z)
Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z)
MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z)
BnOOC-CH2- (R) Phe-Phe-Pab (Z) -40-
Um composto de fórmula: h2n
NH nh2 5 pode ser utilizado como materia-l·· de partida na síntese de um inibidor de protease serínica peptídico e em particular na síntese de inibidores de trombina peptídicos ou inibidores 10 de quininogenases. Pode ser utilizado como tal ou possuindo o grupo amidino mono- ou di-protegido nos azotos, com um grupo protector tal como benziloxicarbonilo. A protecção dos derivados de amidino é realizada através de métodos conhecidos na técnica para compostos amidino. Este composto 15 é aqui denominado "l-amidino-4-aminometilbenzeno" ou "H-Pab". O composto foi previamente revelado em inter alia Biochem. Pharm. Vol 23, p. 2247-2256. O fragmento estrutural de fórmula
20 produz um inibidor de protease serínica e, em particular, um 25 inibidor de trombina ou inibidor de quininogenases valioso.
Um composto de fórmula:
pode ser utilizado na síntese de um inibidor de trombina. 0 composto pode possuir o grupo amidino mono- ou di-protegido nos azotos com um grupo protector tal como 30 -41- Γ u benziloxicarbonilo. A protecção dos derivados de amidino é realizada através de métodos conhecidos na técnica de compostos amidino. Este composto é aqui denominado "1-amidino-4-aminometilciclohexano" ou "H-Pac". 5 O composto foi previamente revelado em DE 2748295. O fragment.o'es.tr:utural de fórmula --'v ' *··
10 é aqui tambén revelado como elemento estrutural num inibidor de trombina. 15
Um composto de fórmula:
20 pode ser utilizado como material de partida na síntese de um inibidor de protease serínica, especialmente um inibidor de trombina ou inibidor de quininogenase. 0 composto pode possuir o grupo amidino mono- ou di-protegido nos azotos com 25 um grupo protector tal como benziloxicarbonilo. A protecção dos derivados amidino é realizada através de métodos conhecidos na técnica para compostos amidino. Este composto é aqui denominado "4-aminoetil-l-amidino piperidina" ou "H-Rig". O fragmento estrutural de fórmula 0
30 -42- produz um inibidor de protease serinica, e em particular um inibidor de trombina ou inibidor de quininogenases valioso. 5 Um composto de fórmula:
10 pode ser utilizado como material de partida na síntese de um inibidor de protease serinica, especialmente um inibidor de trombina ou inibidor de quininogenase. O composto pode possuir o grupo amidino mono- ou di-protegido nos azotos com um grupo protector tal como benziloxicarbonilo. A protecção 15 dos derivados de amidino é realizada através de métodos conhecidos na técnica para compostos amidino. Este composto é aqui denominado "1,3-diaza-2-imino-4-aminoetil ciclohexano" ou "H-Itp". 20 O fragmento estrutural de fórmula o
25 produz um inibidor de protease serinica, e em particular um 30 inibidor de trombina ou inibidor de quininogenases valioso.
Compostos de fórmula:
-43- H2n-(CH2)n (CH2^
'-M n^nh h2n em que n é 1 ou 2 s é 0 ou 1, 5 podem ser utilizados como materiais de partida na síntese de inibidores de protease serínica, especialmente inibidores de trombina ou inibidores de quininogenase. 0 composto pode possuir o grupo amidino mono- ou di-protegido nos azotos com um grupo protector tal como benziloxicarbonilo. A protecção 10 dos derivados de amidino é realizada através de métodos conhecidos na técnica para compostos amidino. Estes compostos são denominados: l-amidino-3-aminometilpirrolidina ou "H-Nig" quando n é 1 e 15 s é 1 l-amidino-3-aminoetilpirrolidina ou "H-Hig" quando n é 2 e s é 1 3-aminometil-l-amidinoazetidina ou "H-Mig" quando n é 1 e s é 0 20 3-aminoetil-l-amidinoazetidina ou "H-Dig" quando n é 2 e s é 0 0 fragmento estrutural de fórmula
-44-
N-(CH2)n m)<XJ '-N \^mh2n
produz um inibidor de protease serinica, e em particular um inibidor de trombina ou inibidor de quininogenases valioso. Compostos possuindo o grupo amidino mono ou di-protegido nos azotos com um grupo benziloxicarbonilo, incluem 10 15 20 4-aminometil-l-(N- benziloxicarbonilamidino)benzeno(H-Pab(Z)), 4-aminometil-l-(N,Nf-di(benziloxicarbonil)amidino)benzeno (H-Pab(Z)2), 4-aminometil-l-(N-benziloxicarbonilamidino)ciclohexano(H-Pac (Z) ) , 4-aminometil-l- (N,N'-di(benziloxicarbonil)amidino)ciclohexano (H-Pac(Z)2), 4-aminoetil-l-(N-benziloxicarbonilamidinopiperidina (H- Rig(Z)), 4-aminoetil-l-N,N'-di(benziloxicarbonil)amidinopiperidina (H-Rig(Z) 2), (3RS)-1-(N-benziloxicarbonilamidino)-3-aminometilpirrolidina (H-Nig(Z)), (3RS)-1-(N, Ν' -di(benziloxicarbonil)amidino)-3--aminometilpirrolidina (H-Nig(Z)2) , (3RS)-1-(N-benziloxicarbonilamidino)-3-aminoetilpirrolidina (H-Hig(Z)), 25 -45- Γ
t (3RS)-1-(Ν,Ν'-di(benziloxicarbonil) amidino)-3-aminometilpirrolidina (H-Hig(Z)2), 3-aminometil-l-(N-benziloxicarbonilamidino)azetidina(H-Mig(Z)), 5 3-aminometil-l- (N,Ν'-di(benziloxicarbonil)amidino)azetidina(H-Mig(Z)2), 3-aminoetil-l-(N-benziloxicarbonilamidino)azetidina(H-Dig(Z) ) , 3-aminoetil-l- 10 (N,N' -di(benziloxicarbonil)amidino)azetidina(H-Dig (Z) 2) ,
Os referidos compostos são utilizados como material de partida na preparação dos derivados de péptido reivindicados de Fórmulas I, Ia, Ib, V, Va e Vb. 15
Utilização médica e farmacêutica A invenção também proporciona composições e métodos para o tratamento, num organismo humano ou animal, de condições nas 20 quais seja requerida a inibição de trombina e de desordens fisiológicas, especialmente doenças inflamatórias.
Espera-se que os compostos inibidores de trombina da invenção sejam úteis, em particular em animais, incluindo o 25 homem, no tratamento ou profilaxia de trombose e hipercoagulabilidade no sangue e nos tecidos. Também se espera ainda que sejam úteis em situações em que existe um excesso indesejável de trombina sem sinais de hipercoagulabilidade, por exemplo como na doença de 30 Alzheimer e pancreatite. Os estados de doença em que estes compostos possuem uma potencial utilidade, no tratamento e/ou profilaxia, incluem trombose venosa e embolia pulmonar, trombose arterial, tal como em enfarte do miocárdio, angina instável, ataque com base em -46- U, ^ trombose e trombose arterial periférica e embolia sistémica, usualmente do atrium durante fibrilhação arterial ou do ventrículo esquerdo após enfarte do miocárdio transmural. 5 Além disso, estes compostos possuem uma utilidade esperada na profilaxia do doenças de ateroesclerose tais como doença arterial coronária, ; doença arterial cerebral e doença arterial periférica. Além disso, espera-se que ' est^s ! compostos possuam efeitos anti-trombóticos sinergísticos, 10 quando combinados com qualquer agente anti-trombótico com um mecanismo de acção diferente, tal como o agente anti-plaquetas ácido acetilsalicílico. Além disso, espera-se que estes compostos sejam úteis conjuntamente com trombolíticos em doenças trombóticas, em particular enfarte do miocárdio. 15 Também, é esperado que estes compostos tenham utilidade na profilaxia para re-oclusão, após trombólise, angioplastia transluminal percutânea (PTCA) e operações de "bypass" coronário. Além disso, espera-se que estes compostos tenham utilidade na prevenção de re-trombose após microcirurgia e 20 cirurgia vascular em geral. Além disso, espera-se que estes compostos tenham utilidade no tratamento e na profilaxia de coagulação intravascular disseminada causada por bactéria, trauma múltiplo, intoxicação ou qualquer outro mecanismo. Além disso, espera-se que estes compostos tenham utilidade 25 em tratamento anticoagulante quando o sangue está em contacto com superfícies estranhas no corpo, tais como enxertos vasculares, garfos vasculares, catéteres vasculares, próteses mecânicas e biológicas ou qualquer outro dispositivo médico. Além disso, espera-se que estes 30 compostos tenham utilidade em tratamento anticoagulante quando o sangue está em contacto com dispositivos médicos fora do corpo, tal como durante cirurgia -47-
cardiovascular utilizando ou máquina coração-pulmão ou em hemodiálise.
Outra utilização esperada dos compostos anticoagulantes da 5 invenção está na lavagem de catéteres e dispositivos mecânicos utilizados em doentes in vivo, e como .anticoagulantes para a preservação de sangue*- plasma e outros produtos sanguíneos in vitro. 10 Espera-se que os compostos de inibição anti-inflamatórios da invenção sejam úteis em particular em animais, incluindo o homem, no tratamento ou profilaxia de doenças inflamatórias, tais como asma, rinite, pancreatite, urticária, doenças inflamatórias do intestino e artrite. Uma quantidade eficaz 15 de compostos inibidores de quininogenase com ou sem um transportador ou diluente fisiologicamente aceitável, pode ser utilizada isoladamente ou em combinação com outros agentes terapêuticos. 20 Estes compostos inibem a actividade de calicreinas, avaliadas com substratos cromogénicos de acordo com procedimentos conhecidos. As acções anti-inflamatórias dos presentes compostos podem por exemplo ser estudados pela sua inibição de processos inflamatórios exsudativos induzidos 25 por alergénicos na mucosa respiratória ou na mucosa gástrica.
Preparações farmacêuticas 30 Os compostos da invenção serão normalmente administrados por via oral, rectal, dérmica, nasal, traqueal, brônquica, parentérica, ou através da via de inalação, sob a forma de preparações farmacêuticas compreendendo o ingrediente activo, quer como uma base livre ou um sal -48- -48- t Γ de adição de ácido orgânico ou inorgânico não tóxico farmaceuticamente aceitável, p. ex. o cloridrato, bromidrato, sulfato, hidrossulfato, nitrato, lactato, 5 acetato, citrato, benzoato, succinato, tartarato, trifluoroacetato e afins numa forma de dosagem farmaceuticamente aceitável·.·.·:. Dependendo da desordem e do doente a ser .· tratado' e da via de administração, as * ' composições podem ser administradas em doses variáveis. 10 A forma de dosagem pode ser uma preparação sólida, semi-sólida ou liquida, preparada por técnicas conhecidas per se. Usualmente, a substância activa constituirá entre 0,1 e 99% em peso da preparação, mais especificamente entre 0,1 e 50% 15 em peso para preparações dirigidas para administração parentérica e entre 0,2 e 75% em peso para preparações adequadas para administração oral.
Doses diárias adequadas dos compostos da invenção em 20 tratamento terapêutico em humanos são desde aproximademente 0,001-100 mg/kg em peso corporal em administração perorai e 0,001-50 mg/kg em peso corporal em administração parentérica. 25 Preparação
Outro objectivo da invenção é o modo de preparação dos compostos. Os compostos de Fórmula I e V podem ser preparados através de processos compreendendo o acoplamento 30 de um dipéptido ou aminoácido protegido no terminal N, quando é utilizado um aminoácido em terminal N é adicionado um segundo aminoácido posteriormente utilizando métodos padrão, a um composto Γ -49-
Η2Ν-(CH2) η-X em que η é um inteiro 0, 1, 2, 3 ou 4, XéBou B-D, em que 5 B é como definido na Fórmula I e D é como definido na fórmula V como tal ou possuindo os azotos de guanidino ou amidinió-mono- ou di-protegidos com um grupo protecto? 'âWina tal como um grupo benziloxicarbonil-, terc-bútiloxicarbonil- ou p-toluenossulfonil- ou X é um grupo transferível para B 10 seguido por remoção do(s) grupo(s) de protecção ou desprotecção do azoto do terminal N, seguido por alquilação do azoto do terminal N e, se desejado, desprotecção através de métodos conhecidos e, se desejado, formar um sal fisiologicamente aceitável, e nos casos em que a reacção 15 resulta numa mistura de estereoisómeros, estes são separados opcionalmente através de técnicas padrão de cromatografia ou de re-cristalização, e se desejado é isolado um único estereoisómero. 20 Em maior detalhe, os compostos de Fórmula I ou V podem ser preparados por qualquer dos seguintes métodos: Método Ia 25 Acoplamento de um di-péptido protegido no terminal N, seleccionado a partir de A1 e A2 nas Fórmulas I ou V e preparados por acoplamento peptídico padrão, com um composto utilizando na fórmula
acoplamento peptídico convencional apresentado 30
V Γ U )*» -50- w—A1 — A2 —oh
HjN-(CHa)
em que n é como definido na Fórmula I W1 é um grupo de protecção amino do terminal N tal como terc-5 butiloxicarbonilo e benziloxicarbonilo e Q1 é -C(NH)-NH2, -C(NW2) -NH-W2, -C(NH) -NH-W2, -NH-C (NH) -NH2, -NH-C(NH)-NH-W2, - N (W2)-C (NH)-NH-W2 ou -NH-C (NW2)-NH-W2, em que W2 é um grupo de protecção de amina tal como terc-butiloxicarbonilo ou benziloxicarbonilo, ou Q1 é -CN, -CO-NH2 ou -CS-NH2, em que o 10 grupo é subsequentemente transferido para um grupo amidino (p. ex. dando Q1 = -C(NH)-NH2) por métodos conhecidos na técnica ou Q1 é NH2 ou NH-W2, em que W2 é como definido acima, em que o grupo amino é subsequentemente transferido para um grupo guanidino (dando Q1 = -NH-C (NH)-NH2) , após desprotecção 15 do grupo W2 quando Q1 é -NH-W2 (W2 neste caso deve ser ortogonal em relação a W1), por métodos conhecidos na técnica,
Os compostos finais podem ser realizados por qualquer dos seguintes métodos, dependendo da natureza do grupo Q1 utilizado:
Remoção do(s) grupo(s) de protecção (quando Q1 = -C(NH)-NH2, -C(NW2) -NH-W2, -C (NH) -NH-W2, -NH-C (NH)-NH2, -NH-C (NH)-NH-W2, -N (W2)-C (NH)-NH-W2 ou -NH-C (NW2)-NH-W2) , ou uma desprotecção 20 -51 -
selectiva do grupo W1 (p. ex. quando Q1 = -C (NW2)-NH-W2, - C (NH) -NH-W2, -NH-C (NH) -NH-W2, -N(W2)- C(NH)-NH-W2 ou -NH-C (NW2)-NH-W2 (W2 neste caso deve ser 5 ortogonal em relação a W1) seguido por alquilação do azoto do terminal N, através de métodos conhecidos na técnica e se desejado desprotecção .através de métodos conhecidos. Método Ib 10
Acoplamento de um aminoácido protegido no terminal N, seleccionado a partir de A2 nas Fórmulas I ou V e preparado por métodos convencionais, com um composto de fórmula
15 utilizando acoplamento peptidico convencional, apresentado na fórmula W1-A2 -O»
em que n, W1 e Q1 são como definido acima, seguido por desprotecção do grupo W1 e acoplamento com o aminoácido do 20 -52- terminal N, numa forma protegida, levando ao péptido protegido descrito no Método Ia. A síntese até aos 5 péptidos finais é então continuada de acordo com o Método
Ia. Método lia v,'~1 ' ‘ 10 Acoplamento de um di-péptido protegido no terminal N, seleccionado a partir de A1 e A2 nas Fórmulas I ou V e preparado através de acoplamento peptídico convencional, com um composto
15 utilizando acoplamento peptídico convencional, apresentado na fórmula
W«—A1 — A2 -OH
em que n é como definido na Fórmula I, W1 é um grupo de protecção amino do terminal N, tal como terc- 20 -53- -53- Γ L-ò ^ butiloxicarbonilo e benziloxicarbonilo e Q1 é -C(NH)-NH2, - C(NW2)-NH-W2, -C(NH)-NH-W2, -NH-C(NH)-NH2, -NH-C(NH)-NH-W2, - N (W2)-C (NH)-NH-W2 ou -NH-C (NW2)-NH-W2, em que W2 é um grupo de protecção de amina tal como terc-butiloxicarbonilo ou 5 benziloxicarbonilo, ou Q1 é -CN, -CO-NH2 ou -CS-NH2, em que o grupo é subsequentemente transferido para um grupo amidino (p. ex. dando Q1 = -C(NH)-NH2) por métodos conhecidos na técnica ou Q1 é NH2 ou NH-W2, 10 em que W2 é como definido acima, em que o grupo amino é subsequentemente transferido para um grupo guanidino (dando Q1 = -NH-C(NH)-NH2) , após desprotecção do grupo W2 quando Q1 é -NH-W2 (W2 neste caso deve ser ortogonal em relação a W1), por métodos conhecidos na técnica. 15
Os compostos finais podem ser realizados por qualquer dos seguintes métodos, dependendo da natureza do grupo Q1 utilizado:
Remoção do(s) grupo(s) de protecção (quando Q1 = -C(NH)-NH2, 20 -C(NW2)-NH-W2, -C(NH)-NH-W2, -NH-C(NH)-NH2, -NH-C (NH)-NH-W2, - N(W2)-C(NH)-NH-W2 ou -NH-C (NW2)-NH-W2) , ou uma desprotecção selectiva do grupo W1 (p. ex. quando Q1 = -C (NW2)-NH-W2, - C(NH)-NH-W2, -NH-C(NH)-NH-W2, -N (W2)-C(NH)-NH-W2 ou -NH-C (NW2) -NH-W2 (W2 neste caso deve ser ortogonal em relação a 25 W1) seguido por alquilação do azoto do terminal N, através de métodos conhecidos na técnica e se desejado desprotecção através de métodos conhecidos. Método Ilb 30
Acoplamento de um aminoácido protegido no terminal N, seleccionado a partir de A2 nas Fórmulas I ou V e preparado através métodos convencional, com um composto de fórmula -54- Γ
utilizando acoplamento peptídico convencional, apresentado na fórmula
W1- A2 —CH
em que n, W1 e Q1 são como definido acima, seguido de desprotecção do grupo W1 e acoplamento com o aminoácido do 10 terminal N, numa forma protegida, levando ao péptido protegido descrito no Método lia. A síntese até aos péptidos finais é então continuada de acordo com o Método lia. Método Illa 15
Acoplamento de um di-péptido protegido no terminal N, seleccionado a partir de A1 e A2 nas Fórmulas I ou V e preparado através de acoplamento peptídico convencional, com um composto -55 Γ L-^ ι
Ν—Q η2ν—(CH2)-—(
VI utilizando acoplamento peptidico convencional, apresentado na fórmula 5 w1— A1
-CH (CH,)T-^
HjN—(CH,) —Q*
Sc1-X* (CHdr->v Q* V-X* W’ A1 - A2 NH—(CH,)- em que n é como definido na Fórmula I e r é 0 ou 1, quando X1, X2 e X4 são CH2 ou r é 0 quando X2 e X4 são CH2 e X1 está 10 ausente, W1 é um grupo de protecção amino do terminal N tal como terc-butiloxicarbonilo e benziloxicarbonilo e Q2 é -C(NH)-NH2, -C(NW2)-NH-W2, ou -C (NH)-NH-W2, em que W2 é um grupo de protecção de amina tal como terc-butiloxicarbonilo ou benziloxicarbonilo, ou Q2 é igual a W2 em que o grupo 15 amino, após desprotecção do grupo W2 (W2 neste caso deve estar ortogonal em relação a W1), é subsequentemente transferido para um grupo guanidino utilizando um reagente de guanidinação não protegido, protegido em N ou di-protegido em N,N', através de métodos conhecidos na técnica 20 (dando Q2 = -C(NH)-NH2, -C (NW2)-NH-W2 ou -C (NH)-NH-W2) . -56- I y
Li >*. t
Os compostos finais podem ser realizados por qualquer dos seguintes métodos, dependendo da natureza do grupo Q2 utilizado:
Remoção do(s) grupo(s) de protecção (quando Q2 = -C(NH)-NH2, 5 -C (NW2)-NH-W2 ou -C (NH)-NH-W2), ou uma desprotecção selectiva do grupo W1 (p. ex. quando Q2 = -C (NW2)-NH-W2, -C (NH)-NH-W2, W2 neste caso deve ser ortogonal em relação a W1) seguido por alquilação do azoto do terminal N, 10 através de métodos conhecidos na técnica e se desejado desprotecção através de métodos conhecidos. Método Illb 15
Acoplamento de um aminoácido protegido no terminal N, seleccionado a partir de A2 nas Fórmulas I ou V e preparado por métodos convencionais, com um composto de fórmula
utilizando acoplamento peptídico convencional, apresentado na fórmula 20 -57- Γ
W1- ΑΖ -OH (ch àr-x·
HjN —(CHJ- { Ji—O» V_V* w1-A2-W—(CHj)^-^ Q* ,(CHa)r- / X* em que n, r, X1, X2 e X4, W1 e Q2 são como definido acima, seguido de desprotecção de um grupo W1 e acoplamento com o 5 aminoácido do terminal N, numa forma protegida, levando ao péptido protegido descrito no Método Illa. A síntese até aos péptidos finais é então continuada de acordo com o Método Illa. 10 Método IVa
Acoplamento de um di-péptido protegido no terminal N, seleccionado a partir de A1 e A2 nas Fórmulas I ou V e 15 preparado a partir de acoplamento peptídico convencional, com um composto
20 utilizando acoplamento peptídico convencional, apresentado na fórmula -58-
W1— A1 — A2 —OH
5
em que n é como definido na Fórmula I, W1 é um grupo de protecção amino no terminal N, tal como terc-butiloxicarbonilo ou benziloxicarbonilo e W3 é H ou um grupo de protecção amino, tal como arilsulfonilo, benziloxicarbonilo ou terc-butiloxicarbonilo. Os compostos finais podem ser obtidos por qualquer das seguintes vias: Remoção do(s) grupos(s) protectores, ou uma desprotecção selectiva do grupo W1 (W1 deve ser ortogonal em relação a W3) seguido por alquilação do azoto do terminal Ne, se desejado, desprotecção. 15 Método IVb
Acoplamento de um aminoácido protegido no terminal N, seleccionado a partir de A2 nas Fórmulas I ou V e preparado a partir métodos convencional, com um composto de fórmula
20 -59- utilizando acoplamento peptidico convencional, apresentado na fórmula 2
A
-OH
W1-A2-1«—(CHj)-
3 5 em que n, W1, e W3 são como definido acima, seguido de desprotecção do grupo W1 (W1 deve ser ortogonal em relação a W3) e acoplamento com o aminoácido do terminal N, numa forma protegida, levando ao péptido protegido descrito no Método IVa. A síntese até aos péptidos finais é então continuada de acordo com o Método IVa. 10 -60- p U,
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO A seguinte descrição é ilustrativa de aspectos da invenção. 5
PARTE EXPERIMENTAL
Procedimentos experimentais gerais. 10 Os espectros de massa foram registados num espectrómetro de massa de quadropólo triplo Finnigan MAT TSQ 700, equipado com um periférico de electroaspersão.
As medições de 1H RMN e 13C RMN foram realizadas em 15 espectrómetros BRUKER AC-P 300 e BRUKER AM 500, o primeiro operando a uma frequência 1H de 500, 14 MHz e uma frequência 13C de 125,76 MHz, e o segundo a frequências XH e 13C de 300,13 MHz e 75,46 MHz, respectivamente. 20 As amostras foram de cerca de 10-50 mg dissolvidas em 0,6 mL de qualquer dos seguintes solventes; CDCI3 (pureza isotópica > 99,8%), CD3OD (pureza isotópica > 99,95%), D2O (pureza isotópica > 99,98%) ou DMSO-d6 (pureza isotópica > 99,8%). Todos os solventes foram adquiridos a Dr. Glaser AG, 25 Basileia.
Os valores de deslocação química de *H e 13C em CDCI3 e CD3OD são relativos a tetrametilsilano como um padrão externo. As deslocações químicas de 3H em D2O são relativas ao sal de 30 sódio de ácido 3-(trimetilsilil)-d4-propanóico e as deslocações químical de 13C em D2O são referenciadas relativamente a 1,4-dioxano (67,3 ppm), ambos como padrões externos. A calibração com um padrão externo pode nalguns -61- ρ Ιχ ^^ casos provocar diferenças de deslocação menores em comparação com um padrão interno, contudo a diferença em deslocação química de é menor do 5 que 0,02 ppm e em 13C menor do que 0,1 ppm. 0 espectro de 1H RMN das sequências peptídicas contendo uma prolina ou um resíduo "tipo prolina" exibe frequentemente dois conjuntos de ressonâncias. Isto corresponde à 10 existência de duas conformações que contribuem em relação à rotação à volta da ligação amida, em que a prolina é a parte N da ligação amida. As conformações são denominadas cis e trans. Nos nossos compostos, as sequências (R)Cha-Aze-, (R)Cha-Pro- e (R)Cha-Pic- frequentemente dão origem a um 15 equilíbrio cis-trans com uma conformação como a conformação preponderante (>90%). Nesses casos, são apenas relatadas as deslocações químicas XH do rotâmero principal. Apenas nos casos em que os sinais do rotâmero menor são claramente resolvidos é que são relatados na documentação da RMN. 0 20 mesmo critério é válido para os sinais NH em CDCI3, apenas nos casos em que os sinais são claramente resolvidos é que são relatados na documentação de RMN. Isto implica que o número de protões relatados para alguns dos intermediários é menor do que o número de protões esperado a partir da 25 fórmula química. A Cromatografia em Camada Fina foi realizada em placas de vidro ou de alumínio revestidas com Silicagel 6OF254 comercial da Merck. A visualização foi realizada através de 30 uma combinação de luz UV seguido por aspersão com uma solução preparada misturando 372 mL de EtOH (95%), 13,8 mL de H2SO4 concentrado, 4,2 mL de ácido acético concentrado e 10,2 mL de reagente de p-metoxibenzaldeído ou de ácido fosfomolíbdico (5-10 p.t % em EtOH (95%)) e aquecimento. -62-
Foi realizada cromatografia "flash" em gel de sílica 60 da Merck (malha de 40-63 mm, 230-400) sob pressão de ar. 5 A cromatografia líquida de elevado desempenho de fase reversa (nos-Exemplos referida como RPLC) foi realizada^ mam--instrumento Waters M-590 equipado com três colunas’" C8 'de fase reversa Kromasil 100 (Eka-Nobel) possuindo diferentes dimensões para cromatografia analítica (4,6 mm x 250 mm), 10 semi-preparativa (1" x 250 mm) e preparativa (2" x 500 mm), com detecção a 226 nm. A liofilização foi realizada num dispositivo Leybold-Heraeus, modelo Lyovac GT 2. 15
Preparação de matérias primas Boc-(R)Pgl-OH 20 Preparado do mesmo modo como descrito para Boc-(R)Cha-OH (vide infra) a partir de H-(R)Pgl-OH.
Boc-(R)Cha-OH 25 A uma solução de H-(R) Cha-OH, 21,55 g (125,8 mmol), em 130 . mL de NaOH a 1 M e 65 mL de THF foram adicionadas 30 g (137,5 mmol) de (Boc)20 e a mistura foi agitada durante 4,5 h à temperatura ambiente. 0 THF foi evaporado e foram adicionados 150 mL adicionais de água. A fase aquosa 30 alcalina foi lavada duas vezes com EtOAc, depois acidificada com KHS04 a 2 M e extraída com 3 x 150 mL de EtOAc. A fase orgânica combinada foi lavada com água, solução salina e -63-
seca (Na2S04) . A evaporação do solvente produziu 30,9 g (90,5%) do composto do título, como um sólido branco.
Boc-(R)Hop-OH 5
Preparado do mesmo modo que descrito-vpara Boc-(R) Cha-OH, partindo de H-(R)Hop-OH. - - 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 1,45 (s, 9H) , 2,00 (m, 1H) , 2,22 10 (m, 1H), 2,75 (bt, 2H), 4,36 (bs, 1H), 5,05 (bs, 1H), 7,15- 7,33 (m, 5H). 4-(terc-butiloxicarbobilaminometil)piridina 15 A uma solução de 10,81 g (100 mmol) de 4-aminometilpiridina em 100 mL de THF foram adicionados 24 g (110 mmol) de B0C2O dissolvido em 70 mL de THF a 10°C durante 20 minutos. A solução foi deixada alcançar a temperatura ambiente e agitada durante 4 h (formou-se um precipitado durante a 20 reacção e o resíduo tornou-se vermelho). 0 solvente foi removido e o resíduo foi dissolvido em EtOAc e filtrado através de gel de sílica. A evaporação do solvente produziu o composto do título como um óleo vermelho que cristalizou em repouso. 0 produto bruto foi utilizado sem purificação 25 posterior. 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 1,45 (s, 9H) , 4,32 (d, 2H) , 5,05 (bs, 1H NH)), 7,2 (d, 2H), 8,55 (d, 2H). (H- 30 4-aminometil-l- (N-benziloxicarbonilamidino) -benzeno Pab(Z)) (i) 4-cianobenzilazida -64- Γ
Uma solução de 20,23 g (0,31 mol) de azida de sódio em 50 mL de água foi adicionada a 49,15 g (251 mmol) de brometo de 4-cianobenzilo em 200 mL de DMF à temperatura ambiente. 5 Ocorreu uma reacção exotérmica e após 1,5 h a mistura de reacção- foi··. diluída com 200 mL de tolueno (cuidado: De modo a- evitar separação de compostos de azida potencialmente explosivos, é aconselhável adicionar o 10 tolueno à mistura de reacção antes da adição da água) e 500 mL de água. A fase aquosa foi extraída com 2 x 50 mL adicionais de tolueno. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com 2 x 50 mL de água e solução salina e finalmente secos (MgSOí) e filtrados. A solução foi utilizada 15 como tal no passo seguinte. 1H-RMN (300 MHz, CDCL3) ; δ 4,4 (s, 2H), 7,4 (d, 2H) , 7,7 (d, 2H) . 20 (ii) 4-amidinobenzilazida
Foi feito borbulhar cloreto de hidrogénio numa mistura de 250 mL de etanol absoluto e a solução do passo (i) (aproximadamente 200 mL) acima a -5°C até à saturação. O 25 armazenamento a 8°C durante 24 h e evaporação da maior parte do solvente seguido de precipitação através da adição de éter anidro produziram cristais que foram isolados através de filtração e dissolvidos em 1,8 L de amónia alcoólica. Após 48 h, a maior parte do solvente foi removido e 200 mL 30 de solução de NaOH a 3,75 M foram adicionados, após o que 4-amidinobenzilazida precipitou como cristais incolores. Os cristais foram isolados por filtração. Neste momento, a produção de 4-amidinobenzilazida foi de 22,5 g (51% total).
t -65-
Cloridrato de etilimidatobenzilazida: 1H-RMN (500 MHz, CD3OD) ; δ 1,6 (t, 3H), 4,5 (s, 2H) , 4,65 (q, 2H), 4,8 (br s, 2H), 7,6 (d, 2H), 8,1 (d, 2H) 5 4-amidinobenzilazida: <- XH-RMN (500 MHz, CDC13) ; δ 4,3 (s, 2H) , 5,7 (br Js,· 3H) , 7,3 (d, 2H), 7,6 (d, 2H). 10 13C-RMN (125 MHz, CDCI3) : carbono da amidina: δ 165,5. (iii) 4- (benziloxicarbonilamidino)benzilazida
Os cristais de (ii) acima foram dissolvidos em 500 mL de 15 cloreto de metileno e a solução resultante foi seca (K2CO3) , filtrada e foram adicionados 27 mL (194 mmol) de trietilamina. Foram adicionados lentamente 25 mL de cloroformato de benzilo à solução agitada enquanto a mistura de reacção foi arrefecida num banho de gelo. Após 30 minutos 20 foram adicionados 2 mL extra de cloroformato de benzilo e a agitação foi continuada durante mais 30 minutos.
Subsequentemente, foi adicionada água e a fase aquosa foi ajustada para pH 7 com HC1 a 2 Μ. A fase orgânica foi seca (MgSOí) e o solvente foi removido em vácuo. Foi finalmente 25 isolada 4-(benziloxicarbonilamidino) benzilazida como cristais incolores a partir de éter/cloreto de metileno/hexano. 1H-RMN (500 MHz, CDC13) ; δ 4,4 (s, 2H) , 5,3 (s, 2H), 6,3-7,0 30 (br s, 1H), 7,3-7,4 (m, 5H), 7,5 (d, 2H) , 7,9 (d, 2H), 9,3-9,6 (br s, 1H). 13C-RMN (125 MHz, CDCI3) : carbono de amidina: δ 167,5. -66-
p U (iv) 4-aminometil-l-(N-benziloxicarbonilamidino)-benzeno (H-Pab(Z)) 5 Foram adicionados 26,3 g (100 mmol) de trifenilfosfina à temperatura ambiente à 4- (benziloxicarbonilamidino)benzilazida de (iii) acima, dissolvida em 160 mL de-THF.· rApós ~16 h foi adicionado 10 6,6 g (25 mmol) de trifenilfosfina adicional e a solução foi deixada repousar durante 4 h antes da remoção do solvente em vácuo. O resíduo foi dissolvido em cloreto de metileno e extraído com HC1 a 2 Μ. A fase aquosa foi lavada com cloreto de metileno e éter e foi subsequentemente tornada alcalina 15 com solução de hidróxido de sódio a 3,75 Μ. A extracção com cloreto de metileno seguida de secagem (K2CO3) e remoção do solvente em vácuo produziu 20 g (o rendimento total partindo de brometo de cianobenzilo é de 28%) de um óleo amarelo que solidificou após repouso. 20 XH-RMN (500 MHz, CDC13) ; δ 1,2-2,2 (br s, 2H) , 3,8 (s, 2H) , 5,2 (s, 2H) , 7,2-7,35 (m, 5H) , 7,4 (d, 2H) , 7,8 (d, 2H) , 9,1-9,6 (br s, 1H). 25 13C-RMN (125 MHz, CDCI3) : carbonos de amidina e de carbonilo: δ 164,6 e 168,17. H-Pig(Z)2 30 (i) 4-(terc-butiloxicarbonil-aminometil)piperidina A uma solução de 17,7 g de 4-terc-butiloxicarbonilaminometilpiridina em 125 mL de MeOH foi adicionado 2 g de Rh/Al203 a 5% e a mistura foi hidrogenada a -67- t 0,34 MPa durante a noite. ^-RMN demonstrou que a hidrogenação foi incompleta. Assim, o catalisador foi removido por filtração e o solvente foi removido em vácuo e o resíduo foi dissolvido em 100 mL de ácido acético, foi
5 adicionado 2 g de Rh/Al203 a 5% e a mistura foi hidrogenada durante 4 dias a 0,34 Mpa. 0 catalisador foi removido por filtração e .a- maior parte do ácido acético foi removida enu vácuo. Após-'adição de 50 mL de água ao resíduo, -a· mistura— foi tornada alcalina com NaOH 10
a 5 M e a fase aquosa foi extraída com 1 x 200 + 1 x 100 mL de CH2CI2. A fase orgânica combinada foi lavada com 25 mL de água e seca (MgSOí) . A evaporação do solvente produziu 17,2 g de um óleo acastanhado que foi dissolvido em 50 mL de éter 15 dietílico. A adição de 200 mL de pentano produziu um precipitado que foi removido por filtração para produzir 7,7 g de um pó castanho. A evaporação do líquido mãe produziu 7 g de um óleo branco. O pó castanho foi dissolvido em 100 mL de EtOAc e a fase orgânica foi lavada com 1 x 50 mL + 1 x 25 20 mL de KHSO4 a 1 Μ. A fase acídica combinada foi tornada alcalina com NaOH a 2 M e extraída com 1 x 200 + 1 x 75 mL de EtOAc. A fase orgânica combinada foi seca e evaporada para produzir 5,2 g do composto do título como um pó branco. 25 0 tratamento do óleo branco obtido a partir da água mãe acima do mesmo modo, produziu 3,4 g adicionais do produto. Rendimento total 40%. 1H-RMN (500 MHz, CDCI3, mistura de dois rotâmeros, 3:1): rotâmero principal: δ 1,11 (dq, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,49-1,60 (m, 1H), 1,63-1,70 (m, 2H), 2,58 (dt, 2H), 2,93-3,03 (m, 2H), 3,07 (m, 2H), 4,75 (bs, 1H (NH)). 30 -68- -68- t Γ
Os sinais resolvidos provenientes do rotâmero menor aparecem a δ 1,21 (dq) e 1,91 (dt). (ii) Boc-Pig (Z)2 5 A uma solução de 2 g (9,33 mmol) de 4-(terc- ..........butiloxicarbonilaminometil)piperidina em ...60. mL de CH3CN foi adicionado 3,34 g (9, 33 r"mmol) de N,Ν' -(dibenziloxicarbonil)metilisotioureia e a mistura foi 10 agitada a 60°C durante 22 h. O solvente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em EtOAc. A fase orgânica foi lavada com 2 x 20 mL de KHSO4 a 1 Μ, 1 x 20 mL de água, 1 x 20 mL de solução salina e seca (MgS04) . A evaporação do 15 solvente seguido por cromatografia "flash" utilizando éter de petróleo/EtOAc (1/1) como eluente produziu 2,43 g (50%) do produto desejado. 1H-RMN (500 MHz, CDCI3) : Alguns sinais, especialmente no anel 20 de piperidina, são selectivamente alargados devido a um processo de troca intramolecular. Isto é especialmente pronunciado para os grupos 2- e 6-CH2 do anel de piperidina, que exibe um pico largo variando entre 3,7 e 4,5 ppm. δ 1,19-1,31 (m, 2H) , 1,43 (s, 9H), 1,63-1,80 (m, 3H) , 2,66- 25 3,05 (m, 4H), 3,7-4,5 (bs, 2H), 4,65 (bt, 1H(NH)), 5,13 (s, 4H), 7,2-7,4 (m, 10H), 10,5 (bs, 1H(NH)). (iii) H-Pig(Z)2 30 Uma solução de 163 mg (0,31 mmol) de Boc-Pig (Z) 2 em 5 mL de EtOAc saturada com HCl(g) foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h e 20 minutos. O solvente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em 30 mL de CH2CI2. A fase orgânica foi lavada com 5 mL de NaOH a 2 Μ, 1 x 5 mL de água, 1x5 -69- mL de solução salina e seca (MgS04) . A evaporação do solvente produziu 100 mg (76%) do composto do titulo. 1H-RMN (500 MHz, CDCI3) : Alguns sinais, especialmente no anel 5 de piperidina, são alargados selectivamente devido a um processo de troca intramolecular. Isto é especialmente pronunciado para os grupos ,2- e 6-CH2 do anel de piperidina, que exibem um pico largo- variando entre 3,7 e 4,5 ppm. 10 δ 1,18-1,37 (m, 2H) , 1,46-1,63 (m, 1H), 1,68-1,83 (m, 2H), 2,57 (d, 2H), 2,86-3,03 (m, 2H), 3,7-4,5 (bs, 2H), 5,13 (s, 4H) , 7,2-7,4 (m, 10H). 15 Δ-ami nrwnftfcil -1 - (W-hgn7ÍloxiearbonilainiriinQ) -cielôhaxano (H-Pac(Z) X 2HC1). (i) Carbamato de N-[N-4-(benziloxicarbonil)amidinoben-zil]terc-butilo 20
Foram adicionados 1,466 g (6,7 mmol) de (Boc)20 a uma solução gelada agitada de 1,81 g (6,4 mmol) de 4- (benziloxicarbonil) amidinobenzilamina e 1 mL (7,1 mmol) de trietilamina em 25 mL de cloreto de metileno. Após 20 25 minutos foi adicionado mais cloreto de metileno e a mistura foi lavada com ácido acético a 5% e solução de carbonato de sódio a 10%. A secagem (sulfato de magnésio) e a remoção do solvente em vácuo deixaram um resíduo que podia ser cristalizado a partir de cloreto de metileno/hexano. O 30 rendimento foi de 1,66 g (68%). (ii) Carbamato de N-[Ν-4-amidinobenzil]terc-butilo L-l \ Γ -70-
Uma mistura de 1,60 g (4,2 mmol) de carbamato de N-[4-(benziloxicarbonil)amidinobenzil]terc-butilo, 5 mL de ácido acético e 160 mg de paládio a 10% em carvão em 50 mL de etanol foi agitada numa atmosfera de hidrogénio durante 2 h. 5 O catalisador foi removido por filtração através de celite e o solvente foi removido em vácuo para produzir o acetato do composto, do titulo em rendimento quantitativo. ·>-> . (iii) Carbamato de N-[4-amidinociclohexilmetil]terc-bu-tilo 10
Foram hidrogenados 17 mmol do acetato de carbamato de N-[4-amidinobenzil]terc-butilo em 100 mL de metanol na presença de 863 mg de ródio a 5% em alumínio a 3,4 MPa durante 20 h. 15 O catalisador foi removido por filtração e o solvente foi removido em vácuo. O resíduo foi dissolvido em água e a solução foi tornada básica com hidróxido de sódio. Extracção subsequente com cloreto de metileno, secagem das fases orgânicas combinadas (carbonato de potássio) e remoção do 20 solvente em vácuo produziu 3,8 g (87%) do composto do título. (iv) Carbamato de N-[N-4-(benziloxicarbonil)amidinocic-lo-hexilmetil]terc-butilo 25
Foram adicionados 1,25 mL (8,8 mmol) de cloroformato de benzilo a 0°C a uma solução agitada de 2,04 g (8 mmol) de carbamato de N-[4-amidinociclohexil]terc-butilo, 1,23 mL (8,8 mmol) de trietilamina e 197 mg de DMAP em 40 mL de 30 cloreto de metileno. Após 10 minutos a mistura de reacção foi diluída com solução de cloreto de metileno e extraída com água, ácido acético diluído e solução de hidrogenocarbonato de sódio. A fase orgânica foi aplicada a uma coluna de sílica e subsequente eluição com cloreto de -71 -
metileno contendo quantidades crescentes de acetato de etilo produziram 2,49 g (80%) do composto do titulo. (v) 4-aminometil-l-(N-benziloxicarbonilamidino)-ciclohexano 5 (H-Pac(Z) x 2HC1).
Foi passado cloreto de hidrogénio através de uma solução de 2 g (5,1 mmol) de carbamato de N-[4-(benziloxicarbonil)amidinociclohexilmetil]terc-butilo em 40 10 mL de acetato de etilo. Após 10 minutos foi adicionado metanol e após remoção de algum do solvente em vácuo o dicloridrato do composto do titulo foi cristalizado. 15 4-aminometil-l- (N-benziloxicarbonilamidino)piperidina (H-
Pig(Z) x HC1) (i) 4- (N-terc-butiloxicarbonilaminometil)-1-(N- benziloxicarbonilamidino)piperidina (Boc-Pig(Z)) 20
Foram misturados 7,8 g (36,4 mmol) de 4-(N-terc-butiloxicarbonilaminometil)piperidina e 8,98 g (40 mmol) de N-benziloxicarbonil-S-metilisotioureia em 25 mL de etanol. A mistura foi aquecida a 60-70°C durante seis horas e deixada 25 à temperatura ambiente durante dois dias. O solvente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em CH2CI2. A camada orgânica foi lavada duas vezes com KHS04 a 0,3 M e uma vez com solução salina. A camada orgânica combinada foi seca (Na2S04), filtrada e evaporada. O produto bruto foi 30 purificado por cromatografia "flash" utilizando um gradiente descontínuo de CH2Cl2/MeOH (100/0, 97/3, 95/5, 90/10) como eluente para produzir 5,22 g (37%) do produto do título. -72- -72-
^ (ii) H-Pig(Z) χ HC1 (4-aminometil-l-(N- benziloxicarbonilamidino)piperidina
Foram dissolvidos 5,22 g (13,5 mmol) de Boc-Pig(Z) em 100 mL 5 de acetato de etilo saturado com HC1 (g) . A mistura foi deixada em repouso durante uma hora e depois evaporada. O resíduo foi dissolvido, «m água e lavado com uma mistura de éter dietilico e-"acetato de etilo. A camada aquosa^ foi ° liofilizada para produzir 4,0 g (91%) do composto do título. 10 1H-RMN (D20, 300 MHz) : δ 1,40-1, 60 (m, 2H) , 2,05 (bd, 2H) , 2,19 (m, 1H), 3,07(d, 2H), 3,34(bt, 2H), 4,08 (bd, 2H), 5,40 15 (s, 2H), 7,5-7,63 (m, 5H) MS m/z 291 (M++l) 4-Aminoetil-l-benziloxicarbonilamidinopiperidina (H-Rig(Z)) 20 (i) l-Benziloxicarbonilamidino-4-hidroxietilpiperidina
Uma mistura de 6,2 g (0,028 mol) de 4-hidroxietilpiperidina e 3,6 g (0,028 mol) de N-benziloxicarbonil-S-25 metilisotioureia em 50 mL de acetonitrilo foram sujeitos a refluxo durante a noite. A evaporação e a cromatografia "flash" em gel de sílica com acetato de etilo produziram 3,5 g (41%) do composto do título. 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 1,1-1,85 (m, 7H) , 2,83 (bt, 2H) , 4,70 (bt, 2H), 4,18 (bd, 2H), 5,12 (s, 2H), 6,9-7,2 (m, 2H) , 7,2-7,5 (m, 5H). 30 (p u 'Κ -73- (ii) l-Benziloxicarbonilamidino-4-mesiloxietilpiperidina A uma solução gelada de 3,50 g (0,0115 mol) de 1-benziloxi-carbonilamidino-4-hidroxietilpiperidina, 1,15 g (0,0115 mol) 5 de trietilamina em 40 mL de cloreto de metileno e 10 mL de tetrahidrofurano, foi adicionado gota a gota 1,30 g (0,115 -mol·).·.de cloreto de mesilo. Λ.> l . A mistura de reacção foi deixada a agitar durante 1 h. A 10 mistura foi vertida em água e a camada orgânica foi mantida. A camada aquosa foi extraída com cloreto de metileno e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas (Na2SC>4) e evaporadas. O produto foi 15 utilizado sem purificação posterior no passo seguinte. Rendimento: 4,4 g (100%). ΧΗ RMN (500 MHz, CDC13) d 1,15-1,3 (m, 2H), 1,65-1,8 (m, 5H) , 2,84 (bt, 2H), 3,01 (s, 3H) , 4,20 (bd, 2H) , 4,27 (t, 2H) , 20 5,12 (s, 2H), 7,1-7,5 (m, 7H). (iii) 4-Azidoetil-l-benziloxicarbonilamidinopiperidina
Em 100 mL de dimetilformamida foram dissolvidos 4,4 g 25 (0,0115 mol) de l-benziloxicarbonilamidino-4- mesiloxietilpiperidina bruta e foi adicionado 4,5 g (0,069 mol) de azida de sódio. A mistura foi aquecida a 100°C durante 2,5 h. Foi então vertida em água e extraída três vezes com acetato de etilo. A fase orgânica combinada foi 30 lavada com água, seca (NaaSOí) e evaporada. 0 resíduo foi sujeito a cromatografia "flash" em gel de sílica utilizando acetato de etilo/heptano 1/1 como eluente. Rendimento: 3,0 g (79%). -74- -74- Γ t 1H-RMN (500 MHz, CDC13) δ 1,20 (dq, 2H) , 1,5-1,8 (m, 5H) , 2,85 (dt, 2H) , 3,35 (t, 2H) , 4,22 (bd, 2H) , 5,13 (s, 2H) , 6,9-7,2 (b, 2H), 7,2-7,45 (m, 5H). 5 (iv) 4-Aminoetil-l-benziloxicarbonilamidinopiperidina (H-Rig(Z)) A 30 mL de água foi adicionado 0,40 g de Pd/C a 10%. Foi dissolvido borohidreto de sódio, 1,0 g (0,031 mol), em 30 mL 10 de água e foi adicionado cuidadosamente ao sedimento agitado e gelado de Pd/C e água. Foi dissolvido 4-azidoetil-l-benziloxicarbonilamidinopiperidina, 2,9 g (8,8 mmol), em 80 mL de tetrahidrofurano e esta solução foi adicionada 15 gota a gota ao sedimento aquoso e gelado acima referido. Após 4 h de agitação à temperatura ambiente, a mistura foi novamente arrefecida em gelo e foram adicionados 30 mL de HC1 a 2 Μ. A mistura foi filtrada através de celite e a celite foi lavada com água adicional. O tetrahidrofurano foi 20 evaporado e a fase aquosa foi lavada com acetato de etilo. A fase aquosa foi tornada alcalina com NaOH a 2 M e extraída três vezes com cloreto de metileno. A fase orgânica combinada foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. 0 produto foi utilizado no passo seguinte sem purificação 25 adicional. 1H-RMN (500 MHz, CDC13) δ 1,1-1,5 (m, 6H) , 1,55-1,65 (m, 1H) , 1,73 (bd, 2H), 2,72 (b, 2H) , 2,81 (dt, 2H), 4,20 (bd, 2H) , 5,12 (s, 2H), 6,9-7,2 (b, 2H), 7,2-7,5 (m, 5H). 30 (3RS)-1- (N-benziloxicarbonilamidino)-3-aminometilpirrolidina(H-(R,S)Nig(Z) ) (i) (3RS)-3-hidroximetilpirrolidina -75- -75- u Γ
Foram misturados 16,4 g (0,0857 mol) de. (3RS)-l-benzil-3-hidroximetilpirrolidina (Ver H-(R,S)Hig(Z) (i) vide supra) com 1,6 g de Pd/C (10%), 5 mL de água e 150 mL de etanol e a 5 mistura foi hidrogenada a 0,26 MPa durante a noite. Após filtração através de hyflo e evaporação do solvente a 1H-RMN demonstrou que a reacção não estava completada. A^ continuação da hidrogenação a 0,26 MPa sobre 1,6 g1 de Pd/C**' . (10%) em 5 mL de água/150 mL de etanol durante três dias 10 completou a redução. A filtração através de hyflo e evaporação do solvente produziram o produto num rendimento quantitativo. 15 (ii) (3RS)-1-(N-benziloxicarbonilamidino)-3-hidroxime- tilpirrolidina
Foram dissolvidos 1,01 g (0,01 mol) de (3RS)-3- hidroximetilpirrolidina e 2,29 g (0,011 mol) de N- 20 benziloxicarbonil-O-metilisoureia (a amina não muito solúvel) em tolueno e aqueceu-se a 60°C durante três horas, seguido por agitação à temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi evaporada e a ^-RMN demonstrou que a reacção não estava completa. A mistura foi por isso dissolvida em 15 25 mL de acetonitrilo e aquecida até 60°C durante três horas, seguido por agitação à temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi evaporado e a mistura foi dissolvida em CH2CI2/ lavada uma vez com água, seca (Na2S04), filtrada e evaporada. O produto bruto foi purificado por cromatografia 30 "flash" utilizando CH2Cl2/MeOH 95/5 como eluente para produzir 0,70 g (25%) do produto. EM m/z 278 (M++l) -76- \1 (iii) (3RS)-1-(N-benziloxicarbonilamidino)-3-mesiloxi- metilpirrolidina
Foram dissolvidos 0,7 g (2,53 mmol) de (3RS)-1-(N-5 benziloxicarbonilamidino)-3-hidroximetilpirrolidina e 0,70 mL (5,05 mmol) de trietilamina em 15 mL de éter dietílico/CH2Cl2 1/1 e a mistura foi arrefecida até 0°C. * Foram adicionados lentamente 0,25 mL (3,29 mmol) de cloreto de metanossulfonilo em 3 mL de éter dietílico e a mistura de 10 reacção foi agitada a 0°C durante três horas. O solvente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo e extraído com uma solução de KHS04 a 0,3 Μ. A camada de água foi lavada uma vez com CH2CI2. A camada de água foi tornada neutra com solução de NaOH a 10 M e extraída duas vezes com 15 CH2C12. A camada orgânica combinada foi seca (Na2S04), filtrada e evaporada para produzir 0,450 g (50%) do composto do título. 20 (iv) (3RS)-1-(N-benziloxicarbonilamidino)-3-azidometil- pirrolidina
Foram dissolvidos 0,450 g (1,27 mmol) de (3RS)-1-(N- benziloxicarbonilamidino)-3-mesiloximetilpirrolidina e 0,124 25 g (1,9 mmol) de azida de sódio em 10 mL de dimetilformamida e aqueceu-se até 60°C durante quatro horas seguido por agitação à temperatura ambiente durante a noite. Foi adicionada água e a mistura foi extraída duas vezes com tolueno/acetato de etilo 2/1. A camada orgânica combinada 30 foi seca (Na2S04), filtrada e evaporada. O produto bruto foi purificado por cromatografia "flash" utilizando CH2Cl2/MeOH 95/5 como eluente para produzir 0,262 g (68%) do produto. EM m/z 303 (M++l)
L-L -77- (v) (3RS)-1-(N-benziloxicarbonilamidino)-3-aminometil- pirrolidina (H-(R,S)Nig(Z)) 5 Foram misturados 32 mg de Pd/C (10%) e 2,6 mL de H2O e passados por uma corrente suave de azoto. Foram adicionados 98 mg de NaBfy em 2,6 mlr· de-JfeO, seguido por uma adição lenta de 262 mg '(0,87 mmol) de (3RS)-1-(N- benziloxicarbonilamidino)-3-mesiloximetilpirrolidina 10 dissolvida em 7 mL de MeOH. A mistura foi deixada a repousar durante uma hora. Foram adicionados 5 mL de HC1 a 1 M e a mistura foi filtrada através de hyflo. O solvente orgânico foi evaporado sob pressão reduzida e a camada de água restante foi lavada uma vez com acetato de etilo, tornada 15 alcalina com solução de NaOH e extraída várias vezes com CH2CI2. A camada orgânica combinada foi seca (Na2S04) , filtrada e evaporada para produzir 130 mg (54%) do produto. 20 EM m/z 277 (M++l) (3RS) -1- (N-benziloxicarbonilamidino) -3-aminoetilpirrolidina (H-(R,S)Hig(Z)) 25 (i) (3RS)-l-benzil-3-hidroximetilpirrolidina
Foram adicionados lentamente 25,2 g (0,1063 mol) de (3RS)-1-benzil-2-oxo-4-metoxicarbonilpirrolidina a um sedimento de 6,22 g de hidreto de lítio e alumínio em 160 mL de éter 30 dietílico sob uma atmosfera de argon. A mistura foi agitada durante a noite e depois aquecida até ao refluxo durante uma hora. A mistura de reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente e foram adicionados 0,2 g de Na2SC>4 x 10 H2O seguido por uma adição lenta de, por essa ordem, 6 mL de água, 18 mL r -78- de solução de NaOH a 3,75 M e 6 mL de água. O sedimento foi seco do excesso de água com Na2S04/celite, filtrado e evaporado para produzir (20,3 g) do produto. 5 ^-RMN (CDC13, 300 MHz) : Ô 1, 64-1,77 (m, 1H), 1,93-2,07 (m, 1H), 2,27-2,40 (m, 2H) , 2,51 (dd, 1H), 2,62 (dd, 1H), 2,82 (m, -‘3?52 (dd, 1H) , 3,59 (s, 2H), 3,67 (dd, 1H.) >·;ι-7>.1'5- _ 7,40 '(rti; 5H) .... 10 (ii) (3RS)-l-benzil-3-clorometilpirrolidina A uma solução em refluxo de 15,3 g (0,08 mol) de (3RS)-1-benzil-3-hidroximetilpirrolidina em 220 mL de CHC13 foi adicionada lentamente uma solução de 330 mL de cloreto de 15 tionilo em 60 mL de CHC13 e o refluxo foi continuado durante uma hora. A mistura foi evaporada e o resíduo foi dissolvido em água. A camada de água foi lavada com acetato de etilo e depois 20 tornada alcalina com solução de NaOH a 0,2 Μ. A camada de água foi extraída três vezes com acetato de etilo e a camada orgânica combinada foi seca (Na2S04), filtrada e evaporada para produzir o produto num rendimento quantitativo (16,8 g) · 25 ^-RMN (CDC13, 300 MHz): Ô 1,55 (m, 1H), 2,05 (m, 1H) , 2,38 (dd, 1H), 2,48-2,64 (m, 3H; destes 2,58 (t, 2H)), 2,73 (dd, 1H), 3,51 (d, 2H), 3,60 (s, 2H), 7,2-7,4 (m, 5H) 30 (iii) (3RS)-l-benzil-3-cianometilpirrolidina
Foram dissolvidos 16,8 g (0,08 mol) de (3RS)-l-benzil-3-clorometilpirrolidina e 5,88 g (0,12 mol) de cianeto de sódio em 250 mL de sulfóxido de dimetilo. A mistura foi -79- -79- r u agitada a 60°C durante dois dias e à temperatura ambiente durante uma semana. Foi adicionada água e a mistura foi extraída três vezes com acetato de etilo. A camada orgânica combinada foi lavada com solução salina, seca (Na2SC>4) , 5 filtrada e evaporada para produzir 14,7 g (92%) do produto. ·-* . ^-RMN (CDC13, 500 MHz) : δ 1,55 (m,. 1H),,- >.2,13 (m, 1H) , 2,35 (dd, 1H), 2,42 (t, 2H) , 2,44-2,59 (m, 2H) , 2,65 (m, 1H) , 2,73 (dd, 1H), 3,61 (s, 2H), 7,2-7,4 (m, 5H) 10 (iv) (3RS)-l-benzil-3-aminoetilpirrolidina
Foram adicionados lentamente 14,7 g (0,0734 mol) de (3RS)-1-benzil-3-cianometilpirrolidina dissolvidos em 220 mL de éter 15 dietílico, a um sedimento de 2,94 g de hidreto de lítio e alumínio em 74 mL de éter dietílico sob uma atmosfera de argon. A mistura foi agitada durante a noite e foram adicionados à mistura 6 mL de água, 18 mL de 20 solução de NaOH a 3,75Me 6 ml de água. O sedimento foi seco do excesso de água com NaaSOí/celite, filtrado por sucção e evaporado para produzir 14,84 g (99%) do produto. 1H-RMN (CDCI3, 300 MHz): δ 1,41 (m, 1H) , 1,51 (q, 2H), 1,90-25 2,10 (m, 2H; destes 2,05 (dd, 1H) ) , 2,18 (m, 1H) , 2,43 (m, 1H) , 2,55-2,73 (m, 3H) , 2,80 (t aparente, 1H) , 3,58 (d aparente, 2H), 7,15-7,4 (m, 5H) (v) (3RS)-l-benzil-3-(N-terc-butiloxicarbonilaminoetil)-30 pirrolidina A uma mistura de 14,84 g (0,0726 mol) de (3RS)-l-benzil-3-aminoetilpirrolidina, 72,6 mL de solução de NaOH a 1M, 76 mL de água e 145 mL de THF, foram adicionados 17,44 g (0,08 -80- ^ ^^ mol) de dicarbonato de di-terc-butilo e a mistura foi agitada durante a noite. A solução foi concentrada e extraída três vezes com acetato de etilo. A camada orgânica combinada foi lavada com solução salina, seca (Na2SC>4), 5 filtrada e evaporada. O produto bruto foi purificado por cromatografia "flash" utilizando um gradiente descontínuo de CH2Cl2/MeOH (95/5r· 90/10) como eluente para produzir 14,69 g (80%) do produto."' " 10 1H-RMN (CDC13, 300 MHz): δ 1,25-1,65 (m, 12H; destes 1,40 (s, 9H)), 1,90-2,25 (m, 3H), 2,46 (m, 1H), 2,67 (m, 1H), 2,80 (t aparente, 1H), 3,09 (m, 2H) , 3,59 (s, 2H), 4,60 (bs, NH), 7,15-7,35 (m, 5H) 15 (vi) (3RS)-3-(N-terc-butiloxicarbonilaminoetil)pirrolidina
Foram hidrogenados 3,1 g (0,01 mol) de (3RS)-l-benzil-3-(N-terc-butiloxicarbonilaminoetil)pirrolidina a 0,28 MPa sobre 20 0, 6 g de catalisador de Pearlman (Pd(OH)2) em 40 mL de etanol (95%) durante a noite. Após filtração do catalisador através de celite e evaporação do solvente, a 1H-RMN demonstrou que a reacção não tinha sido completada. Por isso, 0,6 g do catalisador de Pearlman foi adicionado em 40 mL de etanol 25 (95%) mais uma vez e a mistura foi tratada sob atmosfera de H2 a 0,28 MPa durante a noite. A filtração através de celite e a evaporação do solvente produziram o produto num rendimento quantitativo (2,18 g) . 30 EM m/z 214 (M+) (vii) (3RS)-1-(N-benziloxicarbonilamidino)-3-aminoetil- pirrolidina (H-R,S)Hig(Z)) -81-
Foram dissolvidos 2,18 g (0,0102 mmol) de (3RS)-3-(N-terc-butiloxicarbonilaminoetil)pirrolidina e 2,81 g (0,0125 mol) de N-benxiloxicarbonil-S-metilisotioureia em 30 mL de tolueno e aqueceu-se a 60-70°C durante oito horas, seguido 5 por agitação à temperatura ambiente durante um dia. Foi adicionada solução de KHS04 a 0,3 M e a camada de água foi „ lavada com uma mistura do tolueno e acetato yde.j-ietilo e ’ deixada em repouso durante 2 dias durante os quais o grupo Boc foi removido. A fase de água acidificada foi tornada 10 alcalina e extraida durante quatro vezes com CH2CI2. A camada orgânica combinada foi seca (Na2S04), filtrada e evaporada para produzir 2,0 g (51%) do composto do titulo. 1H-RMN (CDCI3, 330 K, 300 MHz): δ 1,45-1,7 (m, 3H), 2,07 (m, 15 1H), 2,26 (m, 1H), 2,74 (t, 2H), 3,00 (t aparente, 1H), 3,33 (q aparente, 1H), 3,45-3,80 (m, 2H), 5,12 (s, 2H), 6,72 (bs, 2NH), 7,15-7,45 (m, 5H) 20 (4RS)-1,3-diaza-2-tosilimino-4-aminoetilciclohexano(H-(R, S) Itp (Ts)) (i) (4RS)-1,3-diaza-2-tosilimino-4-carboxiciclohexano 25
Preparado utilizando o mesmo método como descrito no Journal of Org. Chem., p. 46, 1971. (ii) (4RS)-1,3-diaza-2-tosilimino-4-hidroximetilciclo-hexano 30
Foram adicionados cuidadosamente 12,9 g (345 mmol) de L1AIH4 a um sedimento frio (temperatura de banho de gelo) de 9,9 g (33 mmol) de (4RS)-1,3-diaza-2-tosilimino-4- carboxiciclohexano em 330 mL de THF seco. A reacção foi -82- agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reacção foi processada de acordo com Fieser & Fieser, por exemplo por adição de 12,9 g de água, 38,7 g de NaOH a 3,75 M, 12,9 g de água, Na2SC>4, CH2CI2 e celite à mistura e 5 filtrada. A evaporação do solvente produziu 7,0 g (75%) do produto desejado. <. *..* .·«·-. - EM m/z 284 (M+ +1) . - 10 (iii) (4RS)-1,3-diaza-2-tosilimino-4-mesiloximetilciclo- hexano
Foram adicionados cuidadosamente 2,9 mL de MsCl (37,1 mmol) a um sedimento frio (temperatura de banho de gelo) de 7,0 g 15 (24,7 mmol) de (4RS)-1,3-diaza-2-tosilimino-4- hidroximetilciclohexano em 6,9 mL (49,4 mmol) de trietilamina e 125 mL de CH2CI2. Foi adicionada água após lh 15 min e a fase orgânica foi separada, seca (Na2S04) , 20 filtrada e evaporada para produzir o composto do titulo num rendimento quantitativo. EM m/z 362 (M+ +1) 25 (iv) (4RS)-1,3-diaza-2-tosilimino-4-cianometilciclo-hexano
Foram dissolvidos 8,9 g (24,7 mmol) de (4RS)-1,3-diaza-2-tosilimino-4-mesiloximetilciclohexano e 1,3 g (27,2 mmol) de NaCN em 75 mL de DMSO. Após agitação a 40°C durante 60 30 horas, foi adicionada uma quantidade adicional de 0,31 g (6 mmol) de NaCN, e a solução foi agitada a 65°C durante três horas. Foram adicionados 150 mL de água e os cristais precipitaram da solução. Estes foram removidos por filtração e secos para produzir 5,4 g (75%) do produto desejado. r L· -83- EM m/z 293 (M++ 1) (4RS)-1,3-diaza-2-tosilimino-4-aminoetilciclohexano (H- 5 (R,S)Itp(Ts))
Foram adicionados cuidadosamente 93 mg de LÍAIH4 a ,um sedimento arrefecido (temperatura de banho de gelo) de *-2,4-g (8,2 mmol) de (4RS)-1,3-diaza-2-tosilimino-4- 10 cianometilciclohexano em 90 mL de THF. Após agitação durante 2 horas foram adicionados 1 g de H2O, 3 g de NaOH a 3,7 5 Μ, 1 g de H20, Na2S04, celite e CH2C12. A mistura foi filtrada e o solvente foi removido sob vácuo para produzir 2,2 g (90%) do produto desejado. 15 3H RMN (500 MHz, MeOD) ; δ 1,52-1,71 (m, 3H) , 1,88-1, 96 (m, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,64-2,73 (m, 2H), 3,2-3,4 (m, 2H, parcialmente em sobreposição com o sinal do solvente), 20 3,44-3,53 (m, 1H), 7,28 (d, 2H), 7,71 (d, 2H) (4S)-1,3-diaza-2-tosilimino-4-aminoetilciclohexano (H- (S)Itp(Ts)) 25 Preparado do mesmo modo que o descrito para H-(R,S)Itp(Ts) partindo de ácido 2,4-diaminobutirico opticamente puro. 3H RMN (300,13 MHz, CDC13) ; δ 0,97-1,15 (s largo, ÍH) , 1,48-1,69 (m, 3H), 1,84-1, 95 (m, 1H), 2,37 (s, 3H) , 2, 68-2,82 (m, 30 1H), 2,86-2,98 (m, 1H) , 3,22-3,44 (m, 2H) , 3,45-3,58 (m, 1H), 7,19 (d, 2H), 7,72 (d, 2H) 13C RMN (300,13 MHz, CDCI3) ; δ carbono de guanidina 154,05 ί“\ι
U
-84- H-Aze-OEt χ HC1
Preparado do mesmo modo que o descrito para H-Pic-OEt x HC1 de H-Aze-OH {vide infra). 5 H-Aze-OMe x HC1 " ' Preparado de acordo com o procedimento descrito por Seebach D. et al. em Liebigs Ann. Chem., p. 687, 1990. 10 H-Pab(Z) x HC1
Preparado adicionando 1 equivalente molar de HC1 a 5 M em isopropanol a uma solução de H-Pab(Z) bruto em EtOH (cerca 15 de 1 g/10 mL) em que H-Pab(Z) x HC1 precipita imediatamente da solução. Após filtração o precipitado foi lavado 2 vezes com EtOH frio e seco para produzir o composto do titulo em rendimento quase quantitativo. 20 H-Pic-OEt x HC1 Ácido L-pipecolinico, 4,0 g (0,031 mol), foi precipitado em 100 mL de etanol abs. e foi borbulhado cuidadosamente HC1 (g) através da solução até ser obtida uma solução clara. Foi 25 arrefecida num banho de gelo e foram adicionados 17 mL de cloreto de tionilo gota a gota durante 15 min. O banho de gelo foi removido e a mistura foi sujeita a refluxo durante 2.5 h. O solvente foi evaporado e o produto foi obtido como o seu sal de cloridrato num rendimento quantitativo. 1H-RMN (300 MHz, D20): δ 1,33 (t, 3H) , 1,8-2,1 (m, 5H), 2,3- 2.5 (m, 1H), 3,1-3,3 (m, 1H), 3,5-3,7 (m, 1H), 4,14 (dd, 1H), 4,44 (q, 2H). 30 -85- p ^^ Η-(R,S)betaPic-ΟΜθ χ HC1
Uma mistura de 2,0 g (15,5 mmol) de ácido nipecótico em 8 mL de metanol foi arrefecida num banho de gelo e foi adicionado 5 2,76 g (23,2 mmol) de cloreto de tionilo. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas. 0 solvente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido numa pequena quantidade de- 'metanol/' "foi adicionado éter dietílico e H- '» (R, S)betaPic-OMe x HC1 precipitado como cristais brancos. Os 10 cristais 2,57 g (92%) foram isolados por filtração.
Boc-(R)Cgl-OH
Boc- (R) -Pgl-OH, 32,6 g (0,13 mol), foi dissolvido em 300 mL 15 de metanol e foi adicionado 5 g de Rh/Al203. A solução foi hidrogenada a 5,2 até 2,8 MPa durante 3 dias. Após filtração e evaporação do solvente a RMN demonstrou a presença de cerca de 25% do éster metílico do composto 20 do título. 0 material bruto foi dissolvido em 500 mL de THF e foram adicionados 300 mL de água e 20 g de LiOH. A mistura foi agitada durante a noite e o THF foi evaporado. A fase aquosa restante foi acidificada com KHSO4 e extraída três vezes com acetato de etilo. A camada orgânica combinada foi 25 lavada com água, seca (Na2SC>4) e evaporada para produzir 28,3 g (83%) do produto desejado. XH-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 0,9-1,7 (m, 20H), 4,0-4,2 (m, 1H), 5,2 (d, 1H). 30
Boc-(R)Cgl-OSu A uma solução gelada de 2,01 g (7,81 mmol) de Boc-(R)Cgl-OH e 1,83 g (15,6 mmol) de HOSu em 25 mL de CH3CN foi adicionado -86-
1,69 g (8,2 mmol) de DCC e a reacção foi deixada atingir a temperatura ambiente. Após agitação durante 3 dias o DCU precipitado foi removido por filtração e o solvente evaporado. 0 resíduo foi dissolvido em EtOAc e a fase 5 orgânica foi lavada com H20, KHS04, NaHC03, solução salina e seca (Na2S04) . A evaporação do solvente produziu o composto do título.,em rendimento quantitativo.
Boc-(R)Cha-Osu 10
Boc-(R)Cha-OH (1 eq.), HOSu (1,1 eq) e DCC ou CME-CDI (1,1 eq) foram dissolvidos em acetonitrilo (cerca de 2,5 mL/mmol de ácido) e agitados à temperatura ambiente durante a noite. O precipitado formado durante a reacção foi removido por 15 filtração, o solvente evaporado e o produto seco em vácuo. (Quando foi utilizado CME-CDI na reacção, o resíduo, após evaporação do CH3CN, foi dissolvido em EtOAc e a fase orgânica foi lavada com 20 água e seca). A evaporação do solvente produziu o composto do título. 1H-RMN (500 MHz, CDC13, 2 rotâmeros ca: razão 1:1) 0,85 -1,1 (m, 2H) , 1,1-1,48 (m, 4H) , 1,5-1,98 (m, 16H; destes 1,55 25 (bs, 9H)), 2,82 (bs, 4H), 4,72 (bs, 1H, rotâmero principal), 4,85 (bs, 1H, menor).
Boc-(R)Hoc-OH 30 Foi dissolvido em metanol (75 mL) 3,2 g (11,46 mmol) de Boc-(R)Hop-OH (ver acima). Foi adicionado 0,5 g de ródio em óxido de alumínio activado (Rh/Al203) e a mistura foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio a 0,41 MPa durante 18 h. 0 catalisador foi removido por filtração através de hyflo e o -87- -87- L·
r solvente foi evaporado produzindo o produto em rendimento quase quantitativo. 1H-RMN (500 MHz, CDC13) : δ 0,90 (m, 2H) , 1,08-1,33 (m, 6H) , 5 1,43 (s, 9H), 1,60-1,74 (m, 6H), 1,88 (bs, 1H) , 4,27 (bs, 1H) .
Boc-(R)Hoc-Osu 10 Preparado do mesmo modo que o descrito para Boc-(R) Cha-OSu de Boc-(R)Hoc-OH.
Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-OH 15 Preparado de acordo com o método descrito por J.Y.L. Chung et al. em Journal of Organic Chemistry, No 1, pp. 270-275, 1990.
Boc-(R)Cgl-Aze-OH 20 (i) Boc-(R)Cgl-Aze-OMe A uma mistura agitada de 3,86 g (15 mmol) de Boc-(R) Cgl-OH, 25 2,27 g (15 mmol) de H-Aze-OMe x HC1 e 2,75 g (22,5 mmol) de DMAP em 40 mL de CH3CN a 5°C, foi adicionado 3,16 g (16,5 mmol) de EDC. A mistura de reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 48 h. O solvente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em 150 mL de EtOAc e 20 mL de H2O. A camada 30 orgânica separada foi lavada com 2 x 20 mL de KHSO4 a 0,5 M, 2 x 10 mL de NaHC03 (saturado), 1 x 10 mL de H20, 1 x 10 mL de solução salina e seca (MgS04) . A evaporação do solvente produziu 4,91 g (92%) do composto do título que foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional. -88- ΧΗ RMN (500 ΝΗζ, CDC13, 0,1 g/mL): rotâmero principal, 0,83-1,35 (m, 5H), 1,38 (s, 9H), 1,47-1,84 (m, 6H), 2,18-2,27 (m, 1H), 2,50-2,62 (m, 1H), 3,72 (s, 3H) , 3,94-4,06 (m, 1H) , 5 4,07-4,15 (m, 1H), 4,39-4,47 (m, 1H), 4,68 (dd, J=9,l, J=5,1, 1H), 5,09 (d, J=9,2, 1H).
Picos resolvidos, a partir do rotâmero menor, 2,27-2,35 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,80-3,87 (m, 1H) , 3,88-3,95 (m, 1H)> 4,92 (d, J=9,2, 1H), 5,21 (dd, J=9,l, J=5, 1H). 10
(ii) Boc-(R)Cgl-Aze-OH A hidrólise de Boc-(R)Cgl-Aze-OMe foi realizada de acordo com o procedimento descrito para Boc-(R)Cha-Pic-OEt (vide 15 infra). O produto foi cristalizado a partir de
EtOH/acetona/água (1/1/3,95) rendimento de 80%. 1H-RMN (500 MHz, CDC13) : δ 0,85-1,3 (m, 5H) , 1,40 (s, 9H) , 1,5-1,9 (m, 6H) , 1,95-2,2 (m, 2H) , 3,92 (m, 1H) , 4,09 (m, 20 1H), 4,35 (m, 1H), 4,95 (m, 1H), 5,16 (bd, 1H).
Boc-(R)Cgl-Pic-OH (i) Boc-(R)Cgl-Pic-OMe 25
Foi adicionado cloreto de pivaloilo (1,0 mL, 8,1 mmol) a uma solução de Boc-(R)Cgl-OH (2,086 g, 8,1 mmol) e trietilamina (1,13 mL, 8,1 mmol) em tolueno (25 mL) e DMF (5 mL) . Uma mistura de H-Pic-OMe x HC1 (1,46 g, 8,1 mmol) e trietilamina 30 (1,13 mL, 8,1 mmol) em DMF (20 mL) foi subsequentemente adicionada a uma temperatura de banho de gelo. A mistura de reacção foi deixada aquecer lentamente até à temperatura ambiente e após 24 h foi diluída com água e extraída com tolueno. Após lavagem com KHSO4 a 0,3 M, Na2C03 a 10% e -89- solução salina, o solvente foi removido em vácuo para produzir 2,52 g (81%) de óleo incolor, que foi utilizado sem purificação adicional. 5 1H-RMN (500 MHz, CDCI3, 2 rotâmeros, razão 5:1) δ 0,8-1,8 (m, 25H), 2,25 (d, 1H), 2,75 (t, 1H, rotâmero menor), 3,3 (t, 1H)., 3,7 (s, 3H), 3,85 (d, 1H), 4,3 (t, 1H, rotâmero menor), -4,5-4,6 (m, 1H), 5,25 (d, 1H), 5,30 (d, 1H).
10 (ii) Boc-(R)Cgl-Pic-OH
Preparado de acordo com o procedimento para hidrólise de Boc-(R)Cha-Pic-OEt (vide infra) utilizando o produto de (i) acima. O produto foi cristalizado a partir de éter 15 isopropilico e hexano. :H-RMN (500 MHz, CDCI3, 2 rotâmeros, razão 5:1) δ 0,8-1,8 (m, 25H), 2,3 (d, 1H), 2,8 (t, 1H, rotâmero menor), 3,3 (t, 1H), 3,9 (d, 1H), 4,4 (t, 1H, menor), 4,5-4,6 (m, 20 1H) , 5,1 (s, 1H) , rotâmero menor), 5,3 (d, 1H) , 5,40 (d, 1H) .
2 5 Boc-(R)Cgl-Pro-OH
Foram misturados 3,59 g (31,24 mmol) de L-prolina com 20 mL de água e 1,18 g (29,7 mmol) de hidróxido de sódio. Foram adicionados à mistura 2,8 g (7,8 mmol) de Boc-(R)Cgl-OSu em 30 10 mL de DMF. Devido a problemas de solubilidade, foram adicionados mais 30 mL de DMF e a mistura de reacção foi agitada durante três dias. O solvente foi evaporado e foi adicionada água. A fase aquosa foi lavada com acetato de etilo, acidificada com solução de KHSO4 a 0,3 M e extraída -90- três vezes com acetato de etilo. A fase orgânica foi lavada uma vez com água e uma vez com solução salina, seca (Na2S04) , filtrada e evaporada para produzir 2,3 g (83%) do produto. 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 0,89-2,17 (m, 23H) , 2,37 (m, 1H) , 5 3,55 (q, 1H), 3,90 (bs, 1H) , 4,28 (t, 1H) , 4,52 (bs, 1H) , 5,22 (bs, 1H (NH)).
Boc-(R)Cha-Aze-OH 10 Preparado do mesmo modo como descrito para Boc-(R)Cha-Pic-OH partindo de Boc-(R)Cha-OH e H-Aze-OEt x HC1 (vide infra).
Boc-(R)Cha-Pro-OH 15 H-(S)Pro-OH (680 mmol) foi dissolvido em hidróxido de sódio a 0,87 M (750 mL) . Boc- (R) Cha-Osu (170 mmol) dissolvido em DMF (375 mL) foi adicionado gota a gota durante 20 min. A mistura de reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 20 h. A mistura foi 20 acidificada (KHSO4 a 2 M) e extraída três vezes com acetato de etilo. As camadas orgânicas foram combinadas e lavadas três vezes com água e uma vez com solução salina. Após secagem sobre sulfato de sódio e evaporação do solvente, o 25 xarope oleoso foi dissolvido em éter dietílico, o solvente evaporado e finalmente o produto seco em vácuo para produzir Boc-(R)Cha-Pro-OH como um pó branco em rendimento quase quantitativo. 30 1H-RMN (500 MHz, CDCI3, mistura de dois rotâmeros 9:1) δ 0,8-1,05 (m, 2H), 1,05-1,55 (m, 15H; deste 1,5 (bs, 9H) ) , 1,55-1,8 (m, 5H) , 1,8-2,15 (m, 3H) , 2,47 (m, 1H) , 3,48 (m, 1H) , 3,89 (m, 1H), 4,55 (m, 2H), 5,06 (m, 1H). Os sinais -91- ' resolvidos a partir do rotâmero menor aparecem a d 2,27 (m), 3,58 (m) , 4,33 (m), 5,0 (m) .
Boc- (Μθ) (R)Cha-Pro-OSu
(i) Boc-(Me)(R)Cha-Pro-OH
Preparado do mesmo modo que descrito acima para Boc-(-R) Cha--Pro-OH partindo de Boc-(Me)(R)Cha-OSu e de H-Pro-OH. (ii) Boc-(Me)(R)Cha-Pro-OSu
Preparado do mesmo modo que descrito para Boc-(R)Cha-OSu partindo de Boc-(Me)(R)Cha-Pro-OH.
Boc-(R)Cha-Pic-OH (ia) Boc-(R)Cha-Pic-OEt
Boc-(R)Cha-OH, 6,3 g (0,023 mol), foi dissolvido em 150 mL de CH2CI2. A solução foi arrefecida num banho de gelo e foram adicionados 6,3 g (0,047 mol) de N-hidroxibenzotriazole e 11,2 g (0,0265 mol) de CME-CDI. O banho de gelo foi removido após 15 min e a mistura de reacção foi agitada durante 4 h à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado e o resíduo dissolvido em 150 mL de DMF e arrefecido num banho de gelo. Foi adicionado H-Pic-OEtxHCl, 4,1 g (0,021 mol) e o pH ajustado para aproximadamente 9, pela adição de N-metilmorfolina. O banho gelado foi removido após 15 min e a mistura de reacção foi agitada durante 3 dias. O solvente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo e lavado com KHSO4 diluído (aq) , NaHC03 (aq) e água. A camada orgânica foi seca (Na2SC>4) -92- Γ e evaporada para produzir 7,7 g (89%) de Boc-(R)Cha-Pic-OEt, que foi utilizado sem purificação adicional. 1H-RMN (500 MHz, CDCI3, 2 rotâmeros, razão 3:1) d 0,7-1,0 (m, 5 2H) , 1,1-1,9 (m, 29H; deste 1,28 (t, 3H) ) , 1,45 (bs, 9H) , 2,01 (bd, 1H, rotâmero principal), 2,31 (bd, 1H), 2,88 (bt, 1H, menor), 3,30 (bt, 1H, principal), 3,80 (bd, 1H, principal), 4,15-4,3 (m, 2H), 4> 5-4',7 ‘(m, 2H, menor), 4,77 (bq, 1H, principal), 4,90 (bd, 1H, menor), 5,28 (bd, 1H, 10 principal), 5,33 (bd, 1H, principal). (ib) Boc-(R)Cha-Pic-OMe 400 μΐ (3,23 mmol) de cloreto de pivaloilo foi adicionado a 15 uma mistura agitada de 875 mg (3,22 mmol) de Boc-(R)Cha-OH e 450 μΐ (3,23 mmol) de trietilamina em 10 mL de tolueno e 2 mL de DMF. A mistura de 596 mg (3,32 mmol) de cloridrato de (S)-pipecolato metilo e 463 μΐ (3,32 mmol) de trietilamina em 5 mL de DMF foram adicionados ao precipitado resultante 20 após 45 minutos. Após 2 h foram adicionados 100 μΐ (0,72 mmol) de trietilamina e a agitação foi continuada durante mais 18 h. Foi adicionada água e tolueno à mistura de reacção e a fase orgânica foi lavada com KHS04 a 0,3 M, Na2CC>3 a 10%, e solução salina. A secagem (MgS04) e a remoção 25 do solvente em vácuo produziu 1,16 g do composto do titulo.
(ii) Boc-(R)Cha-Pic-OH
Boc-(R)Cha-Pic-OEt, 5,6 g (0,014 mol), foi misturado com 100 30 mL de THF, 100 mL de água e 7 g de LiOH. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. O THF foi evaporado e a solução aquosa foi acidificada com KHSO4 (aq) e extraída três vezes com acetato de etilo. A fase orgânica combinada foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada para
-93- produzir 4,9 g (94%) de Boc- (R) Cha-Pic-OH, que foi utilizado sem purificação adicional. 0 composto pode ser cristalizado a partir de éter de di-isopropilo/hexano. 5 0 éster metilico formado no procedimento (ib) acima pode ser hidrolizado utilizando o mesmo procedimento como descrito para o éster de etilo.«m (ii,) . 1H-RMN (500 MHz, CDCI3, 2 rotâmeros, razão 3,5:1) δ 0,8-1,1 10 (m, 2H), 1,1-2,1 (m, 27H; destes 1,43 (s, 9H, rotâmero principal), 1,46 (s, 9H, menor)), 2,33 (bd, 1H), 2,80 (bt, 1H, menor), 3,33 (bt, 1H, principal), 3,85 (bd, 1H, principal), 4,57 (bd, 1H, menor), 4,68 (m, 1H, menor), 4,77 (bq, 1H, principal), 5,03 (bs, 1H, menor), 5,33 (bd, 1H, 15 principal), 5,56 (m, 1H, principal).
Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OH (i) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-Ome 20 (ii)
Foram adicionados 0,9 mL de cloreto de pivaloilo (7,3 mmol) a uma solução de 2,0 g (7,3 mmol) de Boc-(R)Cha-OH e 0,81 mL (7,3 mmol) de 4-N-metilmorfolina, em 20 mL de acetonitrilo. Após agitação durante 1 h e 30 minutos foram adicionados 1,3 25 g (7,3 mmol) de H-(R, S) betaPic-OMe x HC1 e 1,62 mL (14,6 mmol) de 4-N-metilmorfolina, e a mistura de reacção foi agitada durante 24 h. O solvente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em tolueno e algum éter dietílico. Após lavagem com solução de KHSO4 e KHCO3 a 0,3M e secagem com 30 Na2S04 o solvente foi removido em vácuo. Cromatograf ia "flash" utilizando heptano/acetato de etilo (7/3) como eluente produziu 2,4 g (83%) do produto desejado.
(ii) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OH -94- Γ
Foi dissolvido 2,35 g (5,9 mmol) de Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OMe à temperatura ambiente em 35 mL de THF e foi adicionado 2,1 g de LiOH em 35 mL de água. Após agitação durante 5 h o 5 THF foi removido em vácuo. A fase aquosa foi acidificada com KHSO4 a 2M e extraida com acetato de etilo, seca sobre Na2S04 e evaporada para produzir 2,0 g (89%) do produto. - js c '7
Boc-(R)Cha-Val-OH 10 (i) Boc-(R)Cha-Val-OMe
Foi adicionado 3,1 mL (25 mmol) de cloreto de pivaloilo à temperatura ambiente a uma mistura agitada de 6,75 g (25 15 mmol) de Boc-(R)Cha-OH e 3,5 mL (25 mmol) de trietilamina em 50 mL de DMF. Após 3 horas foi adicionado 4,16 g (25 mmol) de cloridrato de éster de metilo da valina em 50 mL de DMF e 3,5 mL de trietilamina. Após agitação durante a noite, foram adicionados alguns cristais de DMAP e a mistura de 20 reacção foi aquecida até 50°C durante 5 minutos. O solvente foi removido em vácuo e foi adicionado éter e tolueno ao resíduo. A lavagem com KHS04 a 0,3 M e Na2C03 a 10% seguido por secagem (MgS04) e remoção do solvente em vácuo produziu 25 um resíduo que foi sujeito a cromatografia "flash" utilizando tolueno/acetato de etilo como eluente. O rendimento do composto do título foi de 6,99 g (77%). (ii) Boc-(R)Cha-Val-OH 30
Uma mistura de 8,73 g (23 mmol) de Boc-(R) Cha-Val-OMe e 5,6 g (230 mmol) de hidróxido de lítio em 75 mL de THF e 75 mL de água foi agitada durante 4 horas. O THF foi removido em vácuo e a restante solução foi diluída com água e extraída -95- -95- u Γ com éter. A acidificação com KHSO4 a 2M e extracção com acetato de etilo seguido por secagem (MgS04) e remoção do solvente em vácuo produziu 8,15 g (96%) do composto do titulo.
5 Boc-(R)Hoc-Aze-OH (i) Boc-(R)Hoc-Aze-OEt
Foi dissolvido à temperatura ambiente 1,0 g (3,5 mmol) de 10 Boc-(R) Hoc-OH e 0,95 g (7,0 mmol) de HOBt, em 15 mL de CH2CI2. A solução foi arrefecida num banho de gelo e foi adicionado 0,77 g (4,0 mmol) de EDC. O banho de gelo foi removido e a mistura de reacção foi agitada durante 3 h à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado e o resíduo 15 dissolvido em 20 mL de DMF. Foi adicionado 0,58 g (3,5 mmol) de H-(R)Aze-0H e o pH foi ajustado para aproximadamente 9 através da adição de N-metilmorfolina. A mistura de reacção foi agitada durante um dia. A mistura de reacção foi particionada entre água 20 e tolueno. A fase orgânica foi separada e lavada com KHSO4 a 0,3 M, KHCO3 diluído, solução salina, seca com NaS04 e evaporada. A cromatografia "flash" (EtOH a 1% em CH2CI2 e heptano: EtOAc) produziu 0,35 g (25%) do produto desejado. 25
(ii) Boc-(R)Hoc-Aze-OH
Foi dissolvido à temperatura ambiente 0,65 g (1,6 mmol) de Boc-(R) Hoc-Aze-OEt em 10 mL de THF e foi adicionado 0,59 q 30 de LiOH em 10 mL de água. Após agitação durante 24 horas foi adicionado KHS04 a 2 M e o THF foi removido em vácuo. A fase aquosa foi então tornada acídica com mais KHS04 a 2 M e )
: U -96- extraída com acetato de etilo, seca sobre Na2S04 e evaporada para produzir 0,5 g (85%) do composto do título.
Boc-(R)Hoc-Pro-OH 5
Preparado do mesmo modo que descrito para Boc-(R)Cha-Pro-OH de Boc-(R)Hoc-OSu. 1H-RMN (500 MHz, CDC13) : δ 0,80-0,94 (m, 2H) , 1,05-1,36 (m, 10 7H) , 1,36-1, 48 (bs, 9H) , 1,48-1,78 (m, 7H) , 1,98-2,14 (m, 2H), 2,34 (m, 1H), 3,48 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 4,43 (m, 1H), 4,52 (bd, 1H), 5,26 (bd, 1H), sinais de um rotâmero menor aparecem como: δ 1,92, 2,25, 3,58, 4,20 e 4,93.
15 Boc-(R)Hoc-Pic-OH (i) Boc-(R)Hoc-Pic-OMe
Preparado do mesmo modo como descrito para Boc-(R)Cha-Pic-20 OEt (vide supra) de Boc-(R)Hoc-OH e H-Pic-OMe x HC1.
(ii) Boc-(R)Hoc-Pic-OH
Preparado do mesmo modo como descrito para Boc-(R)Cha-Pic-OH 25 (vide supra) de Boc-(R)Hoc-Pic-OMe. 1H-RMN (500 MHz, CDC13) : δ 0,82-0, 97 (m, 2H) , 1,10-1,36 (m, 7H), 1,36-1,50 (bs, 9H) , 1,50-1,82 (m, 11H) , 2,35 (bd, 1H) 3,28 (bt. 1H) , 3,85 (bd, 1H) , 4,63 (m, 1H), 5,33 (bs, 1H) , 30 5,44 (bd, 1H) , sinais para um rotâmero menor aparecem a como: δ 1,88, 2,80, 4,25, 4,55 e 4,97.
Boc-(R)Pro-Phe-OH -97- Γ (i) Boc-(R)Pro-Phe-OMe A uma solução de 2,0 g (9,29 mmol) de Boc-(R)Pro-OH e 0,94 g (9,29 mmol) de trietilamina em 70 mL de tolueno/DMF (5/2), 5 foram adicionados 1,12 g (9,29 mmol) de cloreto de pivaloilo e a reacção foi agitada durante 30 minutos à temperatura -ambiente. A reacção foi arrefecida a 0°C e.. foi·, adicionada uma mistura de 2,0 g (9,29 mmol) de H-Phe-OMe e foram adicionados 0,94 g de trietilamina em 40 mL e a reacção foi 10 agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi diluída com tolueno e a fase orgânica foi lavada com 3 x 50 mL de KHS04 a 0,3 Μ, 1 x 50 mL de água e seca (Na2S04) . A evaporação do solvente produziu o composto do título em rendimento quantitativo, que foi utilizado no 15 passo seguinte sem purificação posterior.
(ii) Boc-(R)Pro-Phe-OH
Uma mistura de 4,0 g (10,6 mmol) de Boc-(R)Pro-Phe-OMe e 20 8,93 g (21,3 mmol) de LiOH x H2O em 140 mL de água/THF (1/1) foi agitada vigorosamente durante a noite à temperatura ambiente. O THF foi evaporado e a fase aquosa foi tornada acídica com KHSO4 a 1 M e extraída com 3 x 75 mL 25 de EtOAc. A fase orgânica combinada foi lavada com água e seca (Na2S04) . A filtração e evaporação do solvente produziram um resíduo que foi purificado por cristalização a partir de éter de di-isopropilo, para produzir 2,329 g (60%) do composto do título como um sólido branco cristalino. 30
Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-OH (i)
Boc- (R) Pro (3- (S) Ph) -Pro-OBn -98- A uma mistura de 1,61 g de Boc-(R) Pro (3-(S) Ph)-OH, 1,65 g de H-Pro-OBn x HC1 e 0,75 g de HOBt em 11 mL de DMF, foram adicionados 0,84 mL de NMM e 2,92 g de CME-CDI à temperatura ambiente e a mistura de reacção foi agitada durante três 5 dias. O solvente foi evaporado e o residuo foi dissolvido em 300 mL de EtOAc. A fase orgânica foi lavada com 2 x 100 mL de H20, 2 x 100 mL de KHS04 a-.-l Mv 3 x 100 mL de NaOH a 1 M, 3 x 100 mL de H20 e seca"'(MgS04) . A evaporação do solvente produziu 2,53 g de um óleo que foi purificado por 10 Cromatografia "flash" utilizando CH2Cl2/MeOH (97/3) como eluente para produzir 2,11 g (88%) do composto do titulo.
(ii) Boc- (R) Pro (3- (S) Ph) -Pro-OH 15 Foi dissolvido 0,94 g de Boc-(R) Pro (3-(S) Ph)-Pro-OBn em 70 mL de EtOH e hidrogenado sobre 0,42 g de Pd/C a 5% durante 3,5 horas. A filtração do catalisador e a evaporação do solvente originaram o composto do titulo como cristais brancos num rendimento quantitativo. 20
Boc-(R)Tic-Pro-OH
Preparado de acordo com o procedimento descrito por P.D. 25 Gesellchen e R.T. Shuman em EP-0 479 489-A2.
BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-Br A uma solução de p-TsOH x H-Gly-OBn (5 mmol) e trietilamina 30 (5 mmol) em 10 mL de CH2C12 foi adicionado ácido 2- bromoacético (5 mmol) dissolvido em 10 mL de CH2C12 e carbodiimida de diciclohexilo (5 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite e filtrada. A fase orgânica foi lavada duas vezes com KHS04 a 0,2 M, NaOH a -99- \ι 0,2 Μ, solução salina e seca. A evaporação e a cromatografia "flash" (CH2Cl2/MeOH, 95/5) originaram um rendimento quantitativo do composto desejado. 5 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 3,89 (s, 2H) , 4,05-4,11 (d, 2H) , 5,19 (s, 2H), 7,06 (bs, 1H), 7,3-7,4 (m, 5H).
Boe- (R) Cgl-Ile-OH · -> ' . - « -
Preparado do mesmo modo como descrito para Boc-(R)Cgl-Pro-OH 10 utilizando H-Ile-OH em vez de H-Pro-OH, num rendimento de 91%.
Boe-(R)Phe-Phe-OH 15 (i) Boc-(R)Phe-Phe-OMe
Boc-(R)Phe-OH (18,8 mmol; adquirido de Bachem Feinchemicalien AG), Phe-OMe (20,7 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (37,7 mmol) foram dissolvidos em 30 mL 20 de acetonitrilo. A solução foi arrefecida até á temperatura de água e gelo e foi adicionado cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (24,5 mmol). O banho de arrefecimento foi removido e a mistura de reacção 25 foi agitada durante a noite. O solvente foi então removido sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em 50 mL de acetato de etilo. A extracção da fase orgânica com fracções de 50 mL de hidrogenossulfato de potássio a 0,5 M, bicarbonato de sódio a 1 M e finalmente água, seguido por evaporação do solvente, produziu 7,5 g de Boc-(R)Phe-Phe-OMe (94%), que foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional. 30 -100- -100- u Γ
(ii) Boc-(R)Phe-Phe-OH
Boc-(R)Phe-Phe-OMe (16,4 mmol) foi dissolvido em 40 mL de tetrahidrofurano e foi rapidamente adicionado hidróxido de 5 litio (32,8 mmol) dissolvido em 20 mL de água. A mistura de reacção foi agitada durante 3,5 h após as quais o solvente ·, foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em 50 mL de acetato de etilo e extraído com 50 mL de sulfato de potássio a 0,5 M, seguido por 50 mL de água. O solvente 10 foi removido sob pressão reduzida originando 8,0 g de Boc-(R) Phe-Phe-OH (quant) como um sólido amorfo. XH RMN (200 MHz, d-CHCl3) ; δ 7,4-6,7 (m, 10H), 5,7-4,2 (m, 6H), 1,34 (s, 9H). HO-CH2-COOBn 15
Preparado de acordo com o procedimento descrito por Lattes A. et al em Buli. Soc. Chim. France., N° 11, pp 4018-23, 1971. 20 2- (orto-nitrobenzenossulfoniloxi) acetato de benzilo (2-N02) Ph-S02-0CH2-C00Bn 25 1,66 g (10 mmol) de glicolato de benzilo foi dissolvido em 25 mL de CH2C12 e 25 mL de éter dietílico. A mistura foi arrefecida até 0°C e foi adicionado 2,8 mL (20 mmol) de trietilamina. Enquanto a temperatura era mantida a 0°C, foi adicionado 2,44 g (11 mmol) de cloreto de orto- 30 nitrobenzenossulfonilo em pequenas porções durante 15 minutos. 0 sedimento foi agitado a 0°C durante 50 minutos e foram então adicionados 20 mL de água e 30 mL de CH2C12. As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com 20 mL de HC1 a 1 M e 20 mL de H20, secas (Na2S04), filtradas e -101- evaporadas em vácuo para originar 3,34 g de um resíduo que foi sujeito a cromatografia "flash", utilizando heptano:EtOAc 2:1 como eluente para originar 1,18 g (34%) do composto do título. 5 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 4,92 (s, 2H) , 5,17 (s, 2H) , 7,83 (m, 5H) , 7,76 (m, 3H)-,-· 8>-16 (dd, 1H) . 2-(para-nitrobenzenossulfoniloxi)acetato de benzilo (4-10 N02) Ph-S02-0CH2-C00Bn
Preparado de acordo com o mesmo procedimento que o descrito para 2-(orto-bitrobenzenossulfoniloxi)acetato de benzilo acima. 0 composto final foi obtido numa forma cristalina 15 após evaporação do solvente e suficientemente puro para utilização sem purificação adicional (rendimento de 64%). 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 4,79 (s, 2H) , 5,13 (s, 2H) , 7,2- 7.4 (m, 5H), 8,10 (d, 2H), 8,30 (d, 2H). 20
TfO-CH2COOMe
Foram adicionados 10,09 mL (60 mmol) de anidrido trifluorometanossulfónico dissolvido em CH2CI2, gota a gota a 25 uma mistura de 4,05 mL (50 mmol) de glicolato de metilo e 4.04 mL (50 mmol) de piridina em CH2C12 (totalmente 62,5 mL) a 0°C durante 25 minutos, e depois agitou-se a 0°C durante 1 h. Após lavagem com KHSO4 a 0,3 M e Na2C03 saturado, secagem (Na2S04) e filtração, a evaporação do solvente em vácuo 30 produziu 9,94 g (90%) do composto do título.
TfO-CH2COOEt - 102 - Γ u
Preparado do mesmo modo como descrito para TfO-CH2COOMe, partindo de glicolato de etilo.
TfO-CH2COO“Bu 5
Preparado do mesmo modo como o descrito para TfO-CH2COOMe, par-tindo de glicolato de butilo. p<--*j c. .
TfO-CH2COOBn 10
Preparado do mesmo modo como descrito para TfO-CH2COOMe, partindo de H0-CH2C00Bn.
TfO-CH2COO"Hex 15 (i) HO-CH2COOnHex A 215 mg (2,82 mmol) de ácido glicólico em 12,8 mL de CH3CN foi adicionado 719 mg (3,39 mmol) de iodeto de 1-hexilo e 20 429 mg (2,82 mmol) de DBU. Após agitação durante a noite e refluxo durante 4 h, o solvente foi evaporado, foi adicionado acetato de etilo e KHSO4 a 1 M e as fases foram separadas. A camada orgânica foi lavada 25 com solução salina, seca (MgS04) , filtrada e evaporada em vácuo para originar 333 mg (74%) do produto. (ii) TfO-CH2COOnHex 30 Preparado do mesmo modo como descrito para TfO-CH2COOMe partindo de H0-CH2C00nHex. -103- -103- t Γ H-Mig (Z) (3-aminometil-l- (N-benziloxicarbonilamidi.no) azetidina (i) 3-aminometil-l-benzidrilazetidina foi preparada de 5 acordo com a literatura, ver A.G. Anderson, Jr., e R. Lok, J. Org. Chem., 37, 3953, 1972. (ii) 3-(N-terc-butiloxicarbonilaminometil)-1-benzidrilzetidina 10 A 3,50 g (13,9 mmol) de 3-aminometil-l-benzidri-lazetidina dissolvida em 45 mL de THF foi adicionada uma solução de 0,56 g (13,9 mmol) de NaOH em 45 mL de H20. A mistura de reacção foi arrefecida até 0°C e foi adicionado 3,03 g (13,9 15 mmol) de dicarbonato de di-terc-butilo. O banho de arrefecimento foi removido após alguns minutos e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. O THF foi evaporado e o resíduo foi extraído com 3 x 45 mL de éter dietílico. A camada orgânica combinada foi lavada com 20 solução salina, seca com Na2S04 e filtrada. A evaporação do solvente produziu 4,6 g (94%) do composto do título. (iii) 3-(N-terc-butiloxicarbonilaminometil)azetidina 25 3,4 g (9,6 mmol.) de 3- (N-terc-butiloxicarbonilami-noetil) -1- benzidrilazetidina foi dissolvido em 170 mL de
MeOH e hidrogenado sobre 0,30 g de Pd(OH)2 a 5 MPa durante a noite. O catalisador foi removido por filtração e o solvente 30 evaporado. O produto bruto foi purificado por cromatografia "flash" utilizando MeOH/CH2Cl2, 1/9, seguido por MeOH (saturado com NH3 (g))/CH2Cl2, 1/9, como eluente para originar 1,2 g (67%) do composto do título. Γ -104- (iv) 3-(N-terc-butiloxicarbonilaminometil)-1-(N-benzilo-xi-carbonilamidino)azetidina (Boc-Mig(Z)) 0,9 g (4,8 mmol) de 3-(N-terc-butiloxicarbonilami- 5 nometil) azetidina e 1,3 g (6,3 mmol) de N-benzi-loxicarbonil-O-metilisoureia foram misturados em 6,5 mL de tolueno e aquecidos a 70°C durante 72 h e depois deixados à-. temperatura ambiente durante mais 72 h. A evaporação seguida' por cromatografia "flash" utilizando EtOAc seguido por MeOH 10 (saturado com NH3 (g)) /CH2CI2, 1/9, como eluente produziu 0,67 g (38%) do composto do título como um pó branco. (v) 3-aminometil-l-(N-benzilcarbonilamidino)azetidina (H-Mig(Z)) 15
Foram dissolvidos 0,67 g (1,85 mmol) de Boc-Mig(Z) em 10 mL de EtOAc saturado com HCl(g) e agitados durante 10 min. à temperatura ambiente. Foram adicionados gota a gota 10 mL de lima solução saturada de KOH(aq). As camadas foram separadas 20 e a fase aquosa extraída com 3x8 mL de EtOAc. As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com solução salina, secas com Na2SO« e evaporadas para produzir 0,43 g (89%) do composto do título. 25 1H-RMN (300 MHz, CDCI3) : δ 2,55-2,65 (m, 1H) , 2,84 (d, 2H) , 3,66 (dd, 2H) 4,03 (dd, 2H) 5,07 (s, 2H) , 7,2-7,4 (m, 5H) . 30 EM m/z 263 (M+ + 1) 3-aminoetil-l- (N-benziloxicarbonilamidino) azetidina (H-
Dig(Z)) -105 -
(i) ácido 3-carboxílico-l-benzidrilazetidina foi prepa-rado de acordo com a literatura, ver A.G. Anderson, Jr., e R. Lok, J. Org. Chem., 37, 3953, 1972. 5 (ii) 3-hidroximetil-l-benzidrilazetidina
Uma solução de 8,7 g (32,5 mmol) ’de ácido 3-carboxílico-l-benzidrilazetidina em 80 mL de THF seco foi adicionada 10 lentamente a uma suspensão de 4,9 g (130,2 mmol) de LiAlH4 em 30 mL de THF à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi sujeita a refluxo durante 3,5 h. 0 reagente hidreto em excesso foi hidrolisado através de adição cautelosa, após arrefecimento, de NH4Cl(aq), a mistura gelatinosa foi 15 filtrada e o bolo de filtração foi lavado repetidamente com THF. A evaporação do solvente produziu 7,1 g (86%) do composto do titulo como cristais amarelo-pálidos. (iii) 3-metanossulfonatometil-l-benzidrilazetidina 20 A uma solução de 6,62 g (26,1 mmol) de 3-hidroximetil-l-benzidrilazetidina em 50 mL de piridina seca foi adicionado 4,50 g (39,2 mmol) de cloreto de meta-nossulfonilo a 0°C. A mistura de reacção foi agitada durante lhe depois deixada 25 a repousar num frigorifico durante a noite. A mistura de reacção foi vertida para uma mistura de gelo e H20. 0 precipitado foi recolhido, lavado com H20 e seco em vácuo para originar 7,75 g (89,5%) 30 do composto do título. (iv) 3-cianometil-l-benzidrilazetidina -106 - Γ • A uma solução de 7,75 g (23,4 mmol) de 3-metanossulfonatometil-l-benzidrilazetidina em 50 mL de DMF foi adicionada uma solução de 3,44 g (70,0 mmol) de NaCN em 10 mL de H20. A mistura foi aquecida a 65°C durante 20 h, 5 arrefecida e vertida para uma mistura de gelo e H20. O precipitado foi recolhido, lavado com H20 e seco em vácuo para originar 5,7 g (93%) do-composto do titulo. (v) 3-aminoetil-l-benzidrilazetidina 10 5,7 g (21,7 mmol) de 3-cianometil-l-benzidrilazetidina foram adicionados lentamente a uma suspensão de 2,9 g (76,0 mmol) de LiAlH4 em 80 mL de THF seco à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi sujeita a refluxo durante 4h. O 15 reagente de hidreto em excesso foi hidrolisado por adição cautelosa, após arrefecimento, de NH4Cl(aq), a mistura gelatinosa foi filtrada e o bolo de filtração foi lavado repetidamente com THF. O solvente foi evaporado, o residuo foi dissolvido em..éter dietilico, lavado com solução salina 20 e seco com Na2S04. A evaporação do solvente produziu 5,0 g (87%) do composto do titulo. (vi) 3-(N-terc-butiloxicarbonilaminoetil)-1-benzidrila-zetidina 25 O composto do titulo foi preparado a partir de 3-aminoetil-1-benzidrilazetidina de acordo com o procedimento para 3-(N-terc-butiloxicarbonilaminoetil)-1-ben-30 zidrilazetidina, num rendimento de 6,5 g (95%). (vii) 3-(N-terc-butiloxicarbonilaminoetil)azetidina -107- 1 0 composto do título foi preparado a partir de 3-(N-terc-butiloxicarbonilaminoetil)-1-benzidrilazetidina de acordo com o procedimento para 3-(N-terc-butiloxi-carbonilaminometil)azetidina, num rendimento de 1,2 g (70%). 5 (viii) 3-(N-terc-butiloxicarbonilaminoetil)-1-(N-benzi- loxicarbonilamidino)azetidina (Boc-Dig(Z)) "j·> ·. ^ ?· O composto do título foi preparado a partir de 3-(N-terc-10 butiloxicarbonilaminoetil)azetidina de acordo com o procedimento para 3-(N-terc-butiloxicarbonilaminometil)-1-(N-benziloxicarbonilamidino)azetidina, num rendimento de 0,090 g (34%). 15 (ix) 3-aminoetil-l-(N-benziloxicarbonilamidino)azetidina (H-Dig(Z))
Foi dissolvido 0,589 g (1,56 mmol) de Boc-Dig(Z) em 10 mL de EtOAc, saturado com HCl(g) e agitado durante 10 min à 20 temperatura ambiente. Foi adicionado gota a gota 10 mL de uma solução saturada de KOH(aq). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com 3 x 8 mL de EtOAc. As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com solução salina, secas com Na2S04 e evaporadas para originar 0,415 g 25 (96%) do composto do título. 30 1H-RMN (500 MHz, CDC13) : δ 1,60 (dt, 2H), 2,52-2,54 (m, 3H), 3,53 (bs, 2H), 4,0 (bt, 2H) , 5,00 (s, 2H) , 7,17-7,31 (m, 5H) . -108 - | U, ^
Exemplos de Trabalho
Exemplo 1 5 HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) - . .- · · ; A uma mistura agitada de 3,40 g (10 mmol) de Boc-(R)Cgl-Aze-10 OH (Ver preparação das matérias primas) e 5,13 g de DMAP (42 mmol) em 120 mL de CH3CN foi adicionado 3,18 g de H-Pab(Z) x HC1 (Ver preparação das matérias primas).
Após agitação durante 2 horas à temperatura ambiente a 15 mistura foi arrefecida a -8°C e foi adicionado 2,01 g (10,5 mmol) de EDC. A reacção foi deixada atingir a temperatura ambiente e a agitação foi continuada durante 47 horas adicionais. O solvente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em 200 mL de EtOAc. A fase orgânica foi lavada 20 com 1 x 50 mL de água, 1 x 50 + 2 x 25 mL de KHSO4 a 0,5 M, 2
x 25 mL de NaHC03 (saturado), 1 x 50 mL de água e seca. A evaporação do solvente produziu 5,21 g (86%) do composto do título. 25 1H-RMN (500 MHz, CDC13) : δ 0,8-1,9 (m, 20H; deste 1,30 (s, 9H) ) , 2,35-2,6 (m, 2H) , 3,74 (bt, 1H) , 4,10 (m, 1H) , 4,25-4,4 (m, 2H) , 4,45-4,6 (m, 1H, rotâmeros) , 4,75-5,0 (m, 1H, rotâmeros), 5,08 (bd, 2H), 5,15 (s, 2H), 7,15-7,35 (m, 5H), 7,41 (d, 2H), 7,77 (d, 2H), 8,21 (m, 1H). 30 (ii) H-(R) Cgl-Aze-Pab(Z) A uma solução fria (temperatura de banho de gelo) de 18,8 g de HCl(g) em 195 mL de EtOAc foi adicionado 4,69 g (7,743 -109- -109-
f u nunol) de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) juntamente com 40 mL de EtOAc. A mistura de reacção foi permitida atingir a temperatura ambiente e foi agitada durante 30 min. Foi adicionado 140 mL de Et20 à solução clarificada, durante a 5 qual se formou um precipitado. A reacção foi deixada à temperatura ambiente durante 1 h e 40 minutos adicionais. 0 precipitado foi separado por filtração, lavado rapidamente com 150 mL de Et20 e seco em vácuo. 0 precipitado 'foi dissolvido em 50 mL de água e tornado alcalino com 15 mL de 10 NaOH a 2 Μ. A fase aquosa alcalina foi extraída com 1 x 100 + 1 x 50 mL de CH2C12. A fase orgânica combinada foi lavada còm 1 x 20 mL de água, 1 x 20 mL de solução salina e seca (MgSOí) . A evaporação do solvente produziu 3,44 g (88%) do composto do título. 15 1H-RMN (500 MHz, CDC13) : δ 0,8-2,0 (m, 11H) , 2,51 (m, 1H) , 2,67 (m, 1H), 3,07 (d, 1H), 4,11 (m, 1H), 4,18 (m, 1H) , 4,43 (dd, 1H), 4,53 (dd, 1H), 4,91 (m, 1H), 5,22 (s, 2H) , 7,2-7,4 (m, 7H), 7,45 (d, 2H), 8,51 (d, 2H). 20 (iii) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) 1,13 g (2,2 mmol) de H-(R) Cgl-Aze-Pab (Z) , 0,9 g (2,6 mmol) de 2-(orto-nitrobenzenossulfoniloxi) acetato de benzilo((2-25 NO2) Ph-S02-0CH2-C00Bn) (Ver preparação de matérias primas), 0,99 g (5,6 mmol) de K2C03 e 113 mL de CH3CN foram misturados e aquecidos num banho de óleo a 60°C durante 3h. O solvente foi evaporado em vácuo. Foi adicionado EtOAc e a mistura foi lavada com água, a fase orgânica foi extraída com KHSO4 a 1 M 30 e esta fase aquosa foi lavada com EtOAc. A fase aquosa acídica foi tornada alcalina com NaOH a 1 N para pH>8 e extraída com EtOAc. A fase orgânica foi lavada com água, seca (Na2S04), -110- filtrada e evaporada em vácuo para originar 1,17 g de um resíduo que foi duas vezes sujeito a cromatografia "flash", utilizando primeiro CH2Cl2/MeOH (saturado com NH3) 95/5 e depois éter dietílico/MeOH(saturado com NH3) 9/1 como 5 eluentes para originar 0,525 g (36%) do composto do título. -A - alqullação foi também realizada utilizando --i2-(para-' hítrobenzenossulfoniloxi) acetato de benzilo ( (4'-·Ν02) Ph-S02-OCH2-COOBn) (Ver preparação de matérias primas) utilizando o 10 mesmo procedimento que acima para originar o composto do título num rendimento de 52%. 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 0,85-2,15 (m, 11H) , 2,48 (m, 1H) , 2,63 (m, 1H), 2,88 (d, 1H), 3,24 (d, 1H) , 3,27 (d, 1H), 3,95 15 (m, 1H) , 4,05 (m, 1H) , 4,44 (m, 1H), 4,55 (m, 1H), 4,91 (m, 1H), 5,07 (s, 2 H), 5,22 (s, 2H), 7,2-7,4 (m, 10H), 7,45 (d, 2H), 7,79 (d, 2H), 8,42 (m, 1H). (iva) HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab x 2 HC1 20
BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z), 20 mg (0,031 mmol), foi dissolvido em 5 mL de metanol. Foram adicionadas algumas gotas de clorofórmio e Pd/C a 5% e a mistura foi hidrogenada à pressão atmosférica durante 1 h. Após filtração e 25 evaporação o produto foi liofilizado de água para originar 11 mg (72%) do composto do título. 1H-RMN (500 MHz, D20): δ 1,0-2,0 (m, 11H), 2,10 (m, 1H), 2,44 (m, 1H), 2,82 (m, 1H), 3,90 (s, 2H), 4,09 (d, 1H), 4,4-4,55 30 (m, 2H) , 4,66 (s, 2H), 5,08 (m, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,89 (d, 2H) . 13C-RMN (75,5 MHz, D20): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 167,3, 167,9, 169,9 e 172,4. t -111- (ivb) HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab
BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) foi dissolvido em EtOH (99%) e 5 hidrogenado sobre Pd/C a 5% à pressão atmosférica durante 5 horas. A filtração do catalisador através de celite evaporação do solvente produziu ,0 composto do titulo num rendimento de 97%. ^ ...... * 10 1H-RMN (500 MHz, CD3OD, mistura de dois rotâmeros) : rotâmero principal: δ 1,00-1,12 (m, 1H) , 1,13-1,34 (m, 4H), 1,55-1,70 (m, 3H) , 1,73-1,85 (m, 2H) , 1,94-2,02 (bd, 1H) , 2,32-2,42 (m, 1H) , 2,54-2,64 (m, 1H) , 2,95-3,10 (sistema AB plus d, 3H), 4,18-4,25 (bq, 1H), 4,28-4,32 (bq, 1H), 4,43-4,60 15 (sistema AB, 2H), 4,80-4,85 (dd, 1H), 7,48-7,54 (d, 2H), 7,66-7,71 (d, 2H).
Os sinais resolvidos do rotâmero menor aparecem como δ 0,95 (m), 1,43 (m), 2,24 (m), 2,84 (d), 3,96 (m) , 4,03 (m), 7,57 (bd), 7,78 (bd). 20 13C-RMN (125 MHz, CD3OD) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 168,0, 173,0, 176,3 e 179,0
Exemplo 2 25 HOOC-CH2-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab x 2 HC1 (i) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) 30 Preparado da mesma forma como descrito no Exemplo 1 (ii) por tratamento do sal cloridrato formado com base para obter a base livre. (ii) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab(Z) -112- -112- Γ L-Cj
Foram dissolvidos 0,19 g (0,38 mmol) de H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) 5 e 70 mg (0,43 mmol) de acrilato de benzilo em 2 mL de .isopropanol. A mistura foi deixada a assentar durante 6 dias. A cromatografia "flash" utilizando CH2C12/THF = s£c/2"«*'.· como eluente 'produziu 0,12 g (48%) do composto do titulo.''·' 10 XH RMN (500 MHz, CDC13) δ 0,8-1,9 (m, 10 H) , 1,95 (bd, 1 H) , 2,4-2,6 (m, 4 H) , 2,7-2,8 (m, 3 H; destes 2,79 (d, 1 H) ) ; 4,13 (m, 1 H), 4,37 (dd, 1 H) , 4,60 (dd, 1 H) , 4,97 (dd, 1 H), 5,09 (dd, 2 H), 5,22 (s, 2 H), 7,25-7,4 (m, 10 H), 7,47 (d, 2 H), 7,83 (d, 2 H), 8,61 (bt, 1 H). 15 . (iii) HOOC-CH2-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab x 2 HC1
Foram dissolvidos 0,10 g (0,15 mmol) de BnOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) em 10 mL de etanol e hidrogenados em Pd/C a 5% à 20 pressão atmosférica durante 1 h. A solução foi filtrada, evaporada e o produto bruto foi purificado em RPLC utilizando CH3CN/NH4OAc a 0,1 M (1/4). O produto resultante foi liofilizado, tratado com um excesso de HC1 conc. e liofilizado de novo para produzir 31 mg do 25 sal dicloridrato. ΧΗ RMN (300 MHz, D20) δ 0,8-2,1 (m, 11 H) , 2,38 (m, 1 H) , 2,7-2,9 (m, 3 H), 3,2-3,4 (m, 2 H), 3,98 (d, 1 H), 4,35-4,55 (m, 2 H), 4,60 (s, 2 H), 5,04 (dd, 1 H) , 7,59 (d, 2 H), 7,83 30 (d, 2 H) . 13C RMN (75 MHz, D20) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 167,2, 167,8, 172,3 e 175,5. -113-
Exemplo 3 H00C-CH2- (R) Cgl-Pro-Pab x 2 HC1 5 (i) Boc-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) ·, Boc- (R) Cgl-Pro-OH (Ver preparação dos materiais de partida), 2,3 g (6,49 mmol), DMAP, 2,38· g (19,47 mmol), e H-Pab(Z) (Ver preparação dos materiais de partida), 1,84 g (6,49 10 mmol) foram misturados em 30 mL de acetonitrilo. A mistura foi arrefecida a -15°C e foi adicionado EDC, 1,31 g (6,81 mmol). A temperatura foi deixada atingir a temperatura ambiente e a mistura foi agitada durante a noite. Após evaporação, o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo e 15 solução de KHSO4 a 0,3 Μ. A fase aquosa acidica foi extraída três vezes com acetato de etilo. A fase orgânica foi lavada duas vezes com uma solução de KHSO4 a 0,3 M, duas vezes com uma solução de NaHCCh e uma vez com solução salina, seca (Na2S04), filtrada e evaporada. 0 produto bruto foi 20 purificado por cromatografia "flash" em gel de sílica utilizando acetato de etilo como eluente para produzir 1,77 g (44%) do produto. 1H-RMN (500 MHz, CDCI3) : δ 0,9-1,49 (m, 14H) , 1,5-2,1 (m, 9H), 2,37 (bs, 1H), 3,53 (q, 1H) , 3,94 (bs, 1H), 4,02 (m, 1H) , 4,43 (bs, 2H) , 4,65 (d, 1H) , 5,09 (bs, 1H), 5,20 (s, 2H) , 7,18-7,4 (m, 5H), 7,45 (d, 2H), 7,62 (bs, 1H), 7,81 (m, 2H) . 30 (ii) H-(R)Cgl-Pro-Pab(Z)
Foram dissolvidos 1,45 g (2,34 mmol) de Boc-(R)Cgl-Pro-Pab (Z) em 75 mL de acetato de etilo saturado com HC1. A mistura foi deixada repousar durante 10 min. à temperatura - 114 - - 114 - L-Cj ^
V Γ ambiente. O solvente foi evaporado para produzir 1,3 g do sal dicloridrato do produto. 5 ^-RMN (500 MHz, D20) : δ 1,0-1,45 (m, 5H) , 1,58-2,2 (m, 9H) , 2,3-2,5 (m, 1H), 3, 7S-3y-90·, (m, 2H) , 4,25 (d, 2H), 4,5-4,66 (m, 3H), 5,49" (s, '2H);'7,45-7,7 (m, 7H), 7,87 (d, 2H). 10 A amina foi obtida dissolvendo o sal dicloridrato em solução de NaOH a 0,1 M e extraindo a fase aquosa três vezes com acetato de etilo. A fase orgânica foi lavada uma vez com solução salina, seca (Na2S04) , filtrada e evaporada para produzir 1,19 g (97%) do composto do título. 15 (iii) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z)
Foram misturados 0,340 g (0,65 mmol) de H-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) com 0,215 g (0,65 mmol) de Bn00C-CH2-0Tf (ver preparação de 20 materiais de partida), 0,299 g (2,17 mmol) de K2C03 em 4 mL de diclorometano e refluxados durante meia-hora. A mistura de reacção foi então agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi diluída com CH2C12 e a fase orgânica foi lavada uma vez com água e solução salina, 25 seca (Na2S04), filtrada e evaporada. O produto bruto foi purificado por cromatografia "flash" utilizando um gradiente descontínuo de CH2Cl2/MeOH (97/3 seguido de 95/5) para produzir 299 mg de uma mistura de dois produtos de acordo com TLC. A mistura foi então purificada ainda por 30 cromatografia "flash" utilizando um gradiente descontínuo de acetato de etilo/tolueno (9/1, 93/7, 95/5, 100/0) para produzir 46 mg (9%) de (BnOOC-CH2) 2-(R) Cgl-Pro-Pab (Z) , que eluíu primeiro da coluna seguido por 133 mg (31%) do produto desejado BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z). -115- -115- ví t XH-RMN (300 MHz, CDC13) : BnOOC-CH2-(R) Cgl-Pro-Pab(Z): δ 0,9-5 .1,3 (m, 5H) , 1,4-2,1 (m, 9H) , 2,3-2,4 (m, 1H) , 3,05 (d, 1H), 3,20-3,37 (sistema AB centrado em δ 3,29, 2 H), 3,5-3,6 (m·,*· 2H).,'·., 4,29-4,57 (sistema ABX centrado em d 4,·43ν^’;2 _H) ,. "4,62 (d, 1H) , 4,91 (singleto aparente, 2 ' H) , 5', 19”'(s, 2H), 6,75 (bs, NH), 7,1-7,5 (m, 12H) , 8,7-8,8 (m, 2 H+NH), 9,45 10 (bs, NH). 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : (BnOOC-CH2) 2- (R) Cgl-Pro-Pab (Z) : δ 0,68-0,9 (m, 2H), 1,0-1,3 (m, 3H) , 1,43 (bd, 1H), 1,55-2,0 (m, 7H), 2,05 (bd, 1H), 2,3-2,4 (m, 1H), 3,15 (d, 1H) , 3,25- 3,48 (m, 2H) , 3,55-3,79 (sistema AB centrado em d 3,67, 4 15 H) , 4,38-4,58 (si*stema AB centrado em d 4,48, 2H) , 4,68 (d, 1H) , 4,82-4,98 (sistema AB centrado em d 4,91, 4 H), 5,19 (s, 2H), 6,66 (bs, NH), 7,1-7,5 (m, 17H), 7,75 (d, 2H), 7,80 (t, NH), 9,37 (bs, NH). 20 13C-RMN (75 MHz, CDCI3) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 164,7, 168,1, 171,5, 172,3 e 172,6 (iv) HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) x 2 HC1 25 Foram misturados 0,133 g (0,20 mmol) de BnOOC-(R)Cgl-Pro-Pab (Z) com 0,060 g de Pd/C a 5%, 1 mL de solução de HC1 a 1 M e 10 mL de etanol. A mistura foi tratada sob atmosfera de H2 durante uma hora. Após filtração através de hyflo e evaporação do solvente o produto foi obtido com 90% de rendimento, 93 mg, através de liofilização duas vezes a partir de água. 30 Γ - 116 - 1H-RMN (300 ΜΗζ, D20) : δ 1,0-1,45 (m, 5Η) , 1,5-2,1 (m, 9Η) , 2,2-2,4 (m, 1Η), 3,55-3,85 (m, 4Η; destes 3,79(s, 2H)), 4,23 (d, 1H), 4,33-4,57 (m, 3H), 7,44 (d, 2H), 7,69 (d, 2H). 5 13C-RMN (75 MHz, D20) : carbonos -.devamidina e de carbonillo: δ 166,9, 167,2, 169,1, 174,5 ‘ " 10 Exemplo 4 HOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Pro-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Pro-Pab (Z) 15
Foram dissolvidos 0,406 g (0,782 mmol) de H-(R)Cgl-Pro-Pab (Z) (Ver Exemplo 3) em 3 mL de etanol e foram adicionados 132 μΐ (0,861 mmol) de acrilato de benzilo. A mistura de reacção foi agitada .durante três dias à temperatura 20 ambiente. A mistura foi evaporada e o produto bruto purificado por cromatografia "flash" utilizando um gradiente descontínuo de CH2Cl2:MeOH 95/5 e 90/10 como eluente para produzir 0,399 g (75%) do produto. 25 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 0,8-1,0 (m, 1H), 1,0-1,3 (m, 4H) , 1,35-2,2 (m, 9H) , 2,3-2,6 (m, 4H) , 2, 65-2,78 (m, 1H) , 3,05 (d, 1H), 3,4-3,6 (m, 2H) , 4,25-4,52 (sistema ABX central em d 4,40, 2H), 4,64 (dd, 1H), 5,05 (s, 2H), 5,20 (s, 2H) , 7,2-7,38 (m, 10H), 7,43 (d, 2H), 7,78 (d, 2H) . 30 13C-RMN (75 MHz, CDCI3) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 164,7, 167,9, 171,3, 172,7 e 175,4. (ii) HOOC-CH2-CH2-(R) Cgl-Pro-Pab x 2 HC1 -117- 1- ^^ vi '
Foram misturados 0,261 g (0,383 mmol) de BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) com 0,075 g de Pd/C a 5%, 1 mL de solução de HC1 a 1 M e 10 mL de etanol. A mistura foi hidrogenada à 5 pressão atmosférica durante duas horas.
Após filtração através de hyflo e evaporação do solvente foi** obtido o produto, 196 g (96%), por liofilização duas'· vezes ã'" partir de água. 10 ^-RMN (300 MHz, D20) : δ 1,17-1,40 (m, 5H) , 1,60-1,92 (m, 5H) , 1,92-2,2 (m, 4H) , 2,32-2,48 (m, 1H), 2,81 (t, 2H), 3,11-3,36 (sistema ABX2 centrado em δ 3,24, 2H), 3,63-3,90 (m, 2H) , 4,25 (d, 1H), 4,42-4,63 (m, 3H), 7,54 (d, 2H), 7,78 15 (d, 2H) 13C-RMN (75 MHz, D20): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 167,0, 167,30, 174,6 e 174,7. 20 Exemplo 5 (HOOC-CH2) 2- (R) Cgl-Pro-Pab x 2 HC1
Foram misturados 46 mg (0,056 mmol) de (BnOOC-CH2) 2-(R) Cgl-25 Pro-Pab(Z) (Ver Exemplo 3) com 25 mg de Pd/C a 5%, 0,7 mL de solução de HC1 a 1 M e 7 mL de etanol. A mistura foi hidrogenada à pressão atmosférica durante uma hora. 0 catalizador foi removido por filtração através de hyflo e o solvente evaporado. O produto final, 25 mg (77%), foi obtido por liofilização duas vezes a partir de água. 1H-RMN (300 MHz, D20) : δ 1,0-1,4 (m, 5H), 1,45-2,2 (m, 9H),
2,25-2,45 (m, 1H), 3,53-3,84 (m, 2H), 3,84-4,22 (sistema AB 30 -118- Γ centrado em δ 4,03, 4 Η), 4,26 (d, 1H), 4,35-4,6 (m, 3H), 7,53 (d, 2H), 7,77 (d, 2H) 13C-RMN (75 MHz, D20): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 5 167,1, 167,3, 170,6 e 174,5
Exemplo 6 10 H-(R)Cgl-Pic-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cgl-Pic-Pab(Z) 15 Foram adicionados 0,478 g (2,49 mmol) de EDC a -18°C a uma solução em agitação de 0,875 g (2,37 mmol) de Boc-(R)Cgl-Pic-OH (Ver preparação dos materiais de partida), 1,22 g (9,97 mmol) de DMAP, e 0,706 (2,49 mmol) de H-Pab(Z) (Ver preparação dos materiais de partida) numa mistura de 30 mL 20 de acetonitrilo e 1 mL de DMF. A mistura de reacção foi deixada alcançar a temperatura ambiente durante um par de horas e a agitação foi continuada durante 48 h. 0 solvente foi removido em vácuo e o residuo foi dissolvido em 50 mL de acetato de etilo. A solução foi lavada com 15 mL de água, 25 3x15 mL de KHS04 a 0,3 M, 2x15 mL de solução de Na2CC>3 e água. A remoção do solvente produziu um residuo que foi sujeito a cromatografia "flash" utilizando acetato de etilo/heptano 9:1 como eluente. O rendimento foi de 0,96 g (64%). 30 (ii) H-(R)Cgl-Pic-Pab(Z)
Cloreto de hidrogénio foi borbulhado através de uma solução de 0,56 g (0,88 mmol) de Boc-(R) Cgl-Pic-Pab (Z) em 25 mL de acetato de etilo. Após poucos minutos precipitaram cristais -119 - p Lc, ^^ da solução. Ο solvente foi removido sob vácuo e foram adicionados 50 mL de acetato de etilo. A lavagem com 2x15 mL de uma solução de hidróxido de sódio a 2 M e extracção da fase aquosa com 25 mL de acetato de etilo foram seguidas por 5 secagem (sulfato de sódio) dos extractos combinados e remoção do solvente em vácuo para produzir 0,448 g (95%) do produto 10 desejado. (iii) H-(R)Cgl-Pic-Pab x 2 HC1
Uma solução de 98 mg (0,18 mmol) de Η-Cgl-Pic-Pab(Z) em 5 mL 15 de etanol a 95% e 1 mL de água foi agitada numa atmosfera de hidrogénio durante 4 horas na presença de Pd/C a 5%. A mistura foi filtrada e foram adicionados 0,3 mL de ácido clorídrico a 1 Μ. O etanol foi removido em vácuo e o resíduo foi liofilizado para produzir 70 mg (81%) do composto 20 desejado. 1H-RMN (300 MHz, CD30D) : δ 1,00-1,56 (m, 7H) , 1,56-1,94 (m, 9H) , 2,32 (bd, 1H) , 3,32-3,45 (m, 1H) , 3,90 (bd, 1H) , 4,35 (d, 1H), 4,50 (s, 2H), 5,10-5,20 (m, 1H), 7,55 (d, 2H), 7,76 25 (d, 2H) 13C-RMN (75 MHz, D2O): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 167,2, 170,5 e 173,4. 30 Exemplo 7 HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Cgl-Pic-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cgl-Pic-Pab(Z) -120 -
Uma mistura de 350 mg (0,66 mmol) de H-(R) Cgl-Pic-Pab (Z) (Ver Exemplo 6) e 233 mg de maleato de dibenzilo em 2,5 mL de etanol foi deixada à temperatura ambiente durante 4 dias. 5 O etanol foi removido em vácuo e o resíduo foi sujeito a cromatografia "flash" utilizando acetato de etilo/heptano 9:1 como eluente para produzir 0,108 mg do produto. .„cn - 10 (ii) HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Cgl-Pic-Pab x 2 HC1
Foram hidrogenados 105 mg (0,13 mmol) de BnOOC-CH2-(R, S) CH (COOBn) - (R) Cgl-Pic-Pab (Z) em 5 mL de etanol a 95% e 1 mL de água durante 5 horas na presença de Pd/C a 5%. Foram 15 adicionados 0,3 mL de ácido clorídrico a 1 M e a mistura foi filtrada e o solvente foi removido em vácuo. O resíduo foi dissolvido em água e liofilizado para produzir 54 mg (73%) da substância desejada. 20 1H-RMN (300 MHz, CD3OD, mistura de dois diastereoisómeros 5/4) : δ 1,10-1, 60 (m, 7H), 1,60-2,04 (m, 9H) , 2,23-2,42 (m, 1H), 2,93-3,15 (m, 2H), 3,30-3,42 (m, 1H, parcialmente mascarado pelo pico MeOD), 3,71-3,95 (m, 1H) , 3,98-4,10 (m, 1H), 4,40-4,60 (m, 3H), 5,10-5,20 (m, 1H), 7,49-7,60 (m, 2H), 7,70-7,81 (m, 2H) 13C-RMN (75 MHz, D20): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 167,1, 168,95, 169,6 e 173,1. 30 EM m/z 516 (M+ +1)
Exemplo 8 H-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HC1 -121 - u, (i) Boc-(R)Cha-Aze-Pab(Z)
Foram adicionados 409 mg (2,13 mmol) de EDC a -18°C a uma 5 mistura em agitação de 0,72 g (2,03 mmol) de Boc-(R)Cha-Aze-OH (Ver preparação dos materiais de partida), 1,04 g (8,53 mmol) de DMAP, e 604 mg (2,13 ..mmol) de H-Pab(Z) (Ver preparação dos materiais de partida) em 20 mL de acetonitrilo. A mistura de reacção foi deixada alcançar a 10 temperatura ambiente durante a noite e o solvente foi subsequentemente removido em vácuo. O resíduo foi dissolvido em 40 mL de acetato de etilo e a fase orgânica foi sucessivamente lavada com 10 mL de água, 3x10 15 mL de KHSO4 a 0,3 M, 2x10 mL de Na2CC>3-NaCl (aq) , e finalmente 10 mL de solução salina. A secagem (Na2SC>4) e remoção do solvente em vácuo produziu um resíduo que foi sujeito a cromatografia "flash" utilizando acetato de etilo/metanol 9:1 como eluente para produzir 645 mg (51%) do 20 composto do título. (ii) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z)
Cloreto de hidrogénio foi borbulhado através de uma solução 25 de 640 mg (1,03 mmol) de Boc-(R) Cha-Aze-Pab (Z) em 25 mL de acetato de etilo. Após poucos minutos, as análises de TLC indicavam que reacção estava completa. Foi aplicado vácuo para remover o excesso de cloreto de hidrogénio e a mistura foi então diluída para 50 mL com acetato de etilo. A lavagem 30 com 2x15 mL de Na2C03 (aq) foi seguida por extracção da fase aquosa com 15 mL de acetato de etilo. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com água e secos (Na2C03) e o solvente foi removido em vácuo para produzir 513 mg (96%) de H-(R)Cha-Aze-Pab(Z). -122 - (iii) Η-(R)Cha-Aze-Pab χ 2 HC1
Foram hidrogenados 76 mg (0,15 mmol) de H-(R)Cha-Aze-Pab(Z) 5 dissolvidos em 5 mL de etanol a 95% e 1 ml de água à pressão atmosférica na presença de Pd/C a 5% durante 4 h. A remoção do catalizador por.filtração, adição de 0,4 mL de ácido clorídrico a 1 Me*evaporação do solvente em vácuo produziu ' um resíduo que foi dissolvido em 2 mL de água. A 10 liofilização produziu 57 mg (85%) do produto. 1H-RMN (500 MHz, D2O, 2 rotâmeros, mistura 3:1): δ 1,02-1,20 (m, 2H) , 1,22-1,92 (m, 11H), 2,40-2,50 (m, 1H), 2,80-2,90 (m, 1H), 4,25 (bt, 1H) , 4,40 (dq, 1H), 4,53 (dq, 1H) , 4,65 15 (s, 2H), 5,05-5,10 (m, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,88 (d, 2H).
Desvios químicos dos sinais resolvidos do rotâmero menor: δ 0,57 (m) , 0,85 (m) , 2,95 (m) , 4,06 (dq) , 4,17 (dq) , 4,63 (s), 5,33 (m), 7,70 (d), 7,93 (d). 20 13C-RMN (125 MHz, D2O): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 167,2, 170,4 e 172,8.
Exemplo 9 25 HOOC-CH2- (R) Cha-Aze-Pab x 2 HCl (i) BnOOC-CH2-(R) Cha-Aze-Pab (Z) 30 Foram adicionados 0,119 g (0,52 mmol) de bromoacetato de benzilo a uma mistura de 0,27 g (0,52 mmol) de H-(R)Cha-Aze-Pab (Z) (Ver Exemplo 8) e 0,158 g (1,14 mmol) de K2CO3 em 5,2 mL de acetonitrilo e aquecidos a 60 °C em banho de óleo durante 1 h. O solvente foi removido e foi adicionado -123 - acetato de etilo e água. As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com solução salina e seca (NaaSOí) . A evaporação em vácuo produziu 0,344 g de um resíduo que foi sujeito a cromatografia "flash" utilizando acetato de etilo 5 como eluente, e depois uma outra vez utilizando acetato de etilo:tetrahidrofurano:metanol saturado com NH3 (60:5:2) para .•'.produzir 0,163 g do produto desejado. - 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 0,7-1,0 (m, 2H) , 1,05-2,05 (m, 10 11H), 2,35-2,55 (m, 1H), 2,55-2,75 (m, 1H), 3,15-3,32 (m, 3H) , 3, 95-4,05 (t, 2H) , 4,4 e 4,5 (sistema ABX, 2H) , 4,8-4,95 (m, 1H) , 5,05 (s, 2H) , 5,2 (s, 2H) , 7,2-7,5 (m, 12H), 7,7-7,85 (d, 2H), 8,3-8,45 (t, 1H). 15 13C-RMN (75 MHz, CDC13) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 164,5, 167,8, 170,7, 171,9 e 175,9. (ii) HOOC-CH2- (R)Cha-Aze-Pab x 2 HC1 20 0,163 g (0,243 mmol) de BnOOC-CH2- (R)Cha-Aze-Pab(Z) dissolvidos em 5,5 mL de etanol (99,5%) e 0,7 mL de cloreto de hidrogénio (1 N) foram hidrogenados na presença de 0,17 g de Pd/C a 5% durante 4 h. A remoção do catalizador por 25 filtração e evaporação do solvente, seguidas por dissolução em água e liofilização produziu 107 mg (85%) do composto do título. 1H-RMN (500 MHz, CD30D, mistura de dois rotâmeros) : rotâmero principal: δ 0,95-1,95 (m, 13H), 2,3-2,4 (m, 1H) , 2,6-2,75 (m, 1H), 3,5-3,75 (m, 2H), 4,05-4,15 (m, 1H), 4,15-4,23 (m, 1H), 4,36-4,43 (m, 1H), 4,43-4,5 (m, 1H), 4,58-4,65 (m, 1H) , 4,83-4,88 (m, 1H), 7,5-7,6 (m, 2H) , 7,73-7,82 (m, 2H) . 30
u, -124 -
Os sinais resolvidos do rotâmero secundário aparecem a δ 2,2-2,3 (m) , 3, 95-4, 05 (m), 5,1-5,17 (m), 7,6-7,67 (m) . 13C-RMN (75 MHz, CD3OD) : carbonos de amidina e de carbonillo: 5 δ 168,2, 169,8, 168,9 e 172,3.
Exemplo 10 · . HOOC-CH2- (R, S) CH (COOH) - (R) Cha-Aze-Pab x 2 HCl 10 (i) BnOOC-CH2-(R, S) CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)
Uma mistura de 230 mg (0,443 mmol) de H-(R)Cha-Aze-Pab(Z) 15 (Ver Exemplo 8) e 144 mg (0,487 mmol) de maleato de dibenzilo em 1,5 mL de etanol a 95% foi agitada à temperatura ambiente durante 5 dias. Após remoção do etanol em vácuo, o resíduo foi sujeito a cromatografia "flash" utilizando acetato de etilo/metanol 95/5 como eluente para 20 produzir 54 mg (15%) do produto. (ii) HOOC-CH2-(R, S)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab
Foram hidrogenados 49 mg (0,06 mmol) de BnOOC-CH2- 25 (R, S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z) dissolvidos em 5 mL de etanol a 95% e 1 mL de água na presença de Pd/C a 5% durante 4,5 h. A remoção do catalizador por filtração e evaporação do solvente em vácuo produziu um resíduo que foi dissolvido em 0,2 mL de ácido clorídrico a 1 Μ. A 2 mL de água e 30 liofilização produziu 32 mg (93%) do produto. O espectro de 1H-RMN do composto do título em D20 exibiu dois conjuntos de sinais que se sobrepunham fortemente provenientes dos dois diastereoisómeros. Ressonâncias - 125- - 125- Γ L-ij adicionalmente resolvidas de um rotâmero menor integrando a aproximadamente 15% também aparecem no espectro. 1H-RMN (300 MHz , D20) : δ 1,03-2,00 (m, 13H) , 2,32-2,53 (m, 5 1H), 2,72-2,96 (m, 1H) / 3,06-3,28 (m, 2H), 4,10-4,55 (m, 4H) , 4,62 (bs, 2H), 5, 00 -5,10 (m, 1H), 7,55- -7,68 (m, 2H) , 7,80-7,94 (m, 2H) . , U"
Os sinais resolvidos do rotâmero menor aparecem a δ 0,65 (m), 10 0,80 (m), 4,00 (m), 5,24 (m), 5,35 (m). 13C-RMN (75 MHz, D2O): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 15 167,2, 169,0, 171,0, 172,3 e 174,1.
Exemplo 11 HOOC-CH2- (RouS)CH(COOH) -Cha-Aze-Pab/a x 2 HC1 20 (i) BnOOC-CHz-(RouS)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/a
Uma mistura de 2,0 g (3,8491 mmol) de H-(R)Cha-Aze-Pab(Z) (Ver Exemplo 8) e 1,37 g de maleato de dibenzilo em 10 mL de 25 etanol a 95% foi agitada à temperatura ambiente durante 4 dias. Após remoção do etanol em vácuo, o resíduo foi sujeito a cromatografia "flash" utilizando acetato de etilo/metanol 98/2 como eluente para produzir 1,024 g (32%) de BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z). Os dois diastereoisómeros 30 foram separados por RPLC utilizando (CH3CN/NH4OAC a 0,1 M 65/35) como eluente. Este diastereoisómero eluíu primeiro da coluna. Após remoção do acetonitrilo em vácuo, a fase aquosa foi extraída três vezes com acetato de etilo. A fase orgânica foi lavada uma vez com água, seca (NazSOí), filtrada -126- r e evaporada para produzir 0,352 g do composto do título como um estereoisómero puro. (ii) HOOC-CH2- (RouS) CH (COOH) - (R) Cha-Aze-Pab/a x 2 HCl 5
Foram hidrogenados 350 mg (0,43 mmol) de Bn00C-CH2-(RouS)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/a (0 diastereoisómero de (i) acima) dissolvidos em 15 mL de etanol a 95% e 3 mL de água na presença de Pd/C a 5% durante 4,5 h. A remoção do 10 catalizador por filtração e evaporação do solvente em vácuo produziu um resíduo que foi dissolvido em 5 mL de água e 1,0 mL de ácido clorídrico a 1 Μ. A 15 liofilização produziu 214 mg (87%) do produto como um estereoisómero puro. 1H-RMN (300 MHz, MeOD, mistura de dois rotâmeros) : 6 0,85-1,93 (m, 13H) , 2,25-2,38 (m, 1H) , 2,60-2,75 (m, 1H) , 2,88 20 (dd, 2H) , 3,92 (t, 1H) , 4,15-4,25 (m, 2H) , 4,30-4,43 (m, 1H), 4,56 (sistema AB, 2H), 4,76-4,86 (m, 1H, parcialmente obscuro pelo sinal do solvente), 7,59 (d, 2H), 7,78 (d, 2H).
Os sinais resolvidos do rotâmero menor aparecem a δ 0,70, 25 2,95, 3,82, 4,00, 5,08 e 7,83. 13C-RMN (75 MHz, D20): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 166,9, 168,8, 171,7, 172,3 e 173,8. 30 Exemplo 12 HOOC-CH2- (RouS) CH (COOH) - (R) Cha-Aze-Pab/b x 2 HCl (i) BnOOC-CH2-(RouS)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/b Γ -127- Ο composto do título foi obtido utilizando o mesmo procedimento como descrito no Exemplo 11 acima em BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z). Este diastereoisómero saiu 5 após o primeiro ter saído da coluna. Rendimento 0,537 g. (ii) HOOC-CH2- (RouS) CH (COOH) - (R) Cha-Aze-Pab/b x 2 HC1
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Foram hidrogenados 530 mg (0,65 mmol) de BnOOC-CH2-10 (RouS)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/b dissolvidos em 15 mL de etanol a 95% e 3 mL de água, na presença de Pd/C a 5% durante 5 h. A remoção do catalizador por filtração e evaporação do solvente em vácuo produziu um resíduo que 15 foi dissolvido em 6 mL de água e 1,0 mL de ácido clorídrico a 1 Μ. A liofilização produziu 290 mg (78%) do produto. 1H-RMN (300 MHz, MeOD, mistura de dois rotâmeros) : δ 0,86-1,90 (m, 13H) , 2,30-2,42 (m, 1H), 2,60-2,75 (m, 1H) , 2,75- 20 2,85 (m, 1H) , 2,95-3,05 (m, 1H) , 3,65-3,71 (m, 1H) , 4,00- 4,10 (m, 1H), 4,14-4,24 (m, 1H) , 4,36-4,62 (m, 3H) , 4,78- 4,86 (m, 1H parcialmente obscuro pelo sinal do solvente), 7,57 (d, 2H), 7,75 (d, 2H) . 25 Os sinais resolvidos do rotâmero menor aparecem a 6 0,78, 2,92, 3,82, 5,36 e 7,80. 13C-RMN (75 MHz, D20): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 166,8, 169,0, 172,0, 172,4 e 175,2. 30
Exemplo 13 HOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Aze-Pab x 2 HC1 -128- -128- Γ L-Cj ^ (i) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pab (Z)
Uma mistura de 182 mg (0,35 mmol) de H-(R) Cha-Aze-Pab (Z) (Ver Exemplo 8) e 62,5 mg (0,385 mmol) de acrilato de 5 benzilo em 1,5 mL de etanol a 95% foi agitada à temperatura ambiente durante 4 dias. O solvente foi removido em vácuo e o resíduo foi sujeito a cromatografia "flash" utiLizando acetato de etilo/metanol 9:1 como eluente para “prdduzir 200 mg (84%) do composto do título. 10 (ii) HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pab x 2 HC1 15 Foram hidrogenados 195 mg (0,29 mmol) de BnOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Aze-Pab (Z) dissolvidos em 10 mL de etanol a 95% e 2 mL de água, na presença de Pd/C a 5% durante 4 h. A remoção do catalizador por filtração e evaporação do solvente em vácuo produziu um resíduo que foi dissolvido em 2 mL de água 20 e 0,4 mL de ácido clorídrico a 1 Μ. A liofilização produziu 130 mg (86%) do produto. XH-RMN (500 MHz, CD3OD) : δ 0,98-1,27 (m, 2H) , 1,30-1,90 (m, 11H) , 2,27-2,35 (m, 1H), 2,65-2,74 (m, 1H) , 2,77 (t, 2H) , 25 3,32 (t, 2H), 4,10 (t, 1H), 4,17-4,25 (m, 1H), 4,40-4,49 (m, 1H), 4,55 (AB, 2H), 4,83-4,90 (m, 1H) , 7,58 (d, 2H) , 7,77 (d, 2H) . 13C-RMN (125 MHz, D20): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 30 167,0, 168,9, 172,4 e 174,6.
Exemplo 14 -129- HOOC-CH2-NH-CO-CH2- (R) Cha-Aze-Pab χ 2 HC1 (i) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2- (R) Cha-Aze-Pab (Z) 5
Uma mistura de 0,212 g (0,408 mmol) de H-(R)Cha-Aze-Pab(Z) (Ver Exemplo 8), 0,124 g (0,.89.- .-mmol) de K2C03 e 0,128 g (0,449 mmol) de BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-Br (Ver preparação dos materiais de partida) em 6 mL de acetonitrilo foi agitada a 10 50eC durante duas horas. Após evaporação do solvente o resíduo foi dissolvido em água e acetato de etilo. A camada aquosa foi extraída duas vezes com acetato de etilo e a camada orgânica combinada foi seca (Na2S04> , filtrada e evaporada. O produto foi purificado por cromatografia 15 "flash" utilizando um gradiente descontínuo de acetato de etilo/tetrahid-rofurano (85/15, 4/1, 7/3) para produzir 0,190 g (64%) do composto do título. 20 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 0,75-2,1 (m, 13H) , 2,43 (m, 1H) , 2,56 (d, 1H), 2,79 (m, 1H), 3,0-3,15 (m, 2H; destes 3,05 (d, 1H) ), 3,89-4,18 (m, 5H) , 4,8-4,98 (m, 2H) , 5,15 (s, 2H) , 5,18 (s, 2H), 7,2-7,47 (m, 12H) , 7,72 (t, NH) , 7,86 (d, 25 2H), 8,14 (bs, NH), 8,31 (dd, NH), 9,42 (bs, NH) 13C-RMN (75 MHz, CDC/3) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 164,5, 168,7, 169,22, 169,83, 171,7, 175,5 30 (ii) HOOC-CH2-NH-CO-CH2- (R) Cha-Aze-Pab x 2 HC1
Foram misturados 0,19 g (0,26 mmol) de BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R) Cha-Aze-Pab (Z) com 0,075 g de Pd/C a 5%, 1,5 mL de solução de HC1 a 1 N, 3 mL de água e 17 mL de etanol e a - 130- mistura foi hidrogenada à pressão atmosférica durante uma hora. A filtração do catalizador, evaporação do solvente seguido de liofilização da água produziu 144 mg (97%) do composto do titulo. 5 1H-RMN (D2O, 300 MHz, dois rotâmeros 4: 1): δ O 00 00 •1, 88 (m, 13H) , 2,25-2v42,.(on,. 1H) , 2,63-2,89 (m, 1H) , 3,94 (s, 2HU->- 3,.99 (dupleto ' aparente, 2H), 4,16 (t, 1H) , 4,28 ^ (q,!-lHr,-· 4,41 (q, 1H), 4,56 (s, 2H), 4,98 (dd, 1H) , 7,53 (d, 2H) , 10 7,77 (d, 2H).
Os sinais resolvidos a partir do rotâmero menor aparecem a δ 0,50 (bq), 0,77 (bq), 5,21 (dd), 7,56 (d) e 7,81 (d). 15 13C-RMN (D2O, 75 MHz): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 166,8, 166,9, 168,6, 172,3 e 173,4.
Os sinais resolvidos a partir do rotâmero menor aparecem a δ: 166,6, 169,6 e 172,0. 20
Exemplo 15 H-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HC1 25 (i) Boc-(R)Cha-Pro-Pab(Z)
Foram adicionados 135 mL (1,1 mmol) de cloreto de pivaloilo à temperatura ambiente a uma mistura em agitação de 0,155 mL (1,1 mmol) de trietilamina e 405 mg (1,1 mmol) de Boc-30 (R)Cha-Pro-OH (Ver preparação dos materiais de partida) em 5 mL de DMF. Após 3 h, foram adicionados 340 mg (1,1 mmol) de H-Pab(Z) (Ver preparação dos materiais de partida) em 5 mL de DMF e a agitação foi continuada durante a noite. A mistura de reacção foi diluída com água e extraída com acetato de -131- etilo/tolueno 1:1. A fase orgânica foi seca (MgS04) e o solvente foi removido por cromatografia "flash" utilizando acetato de etilo como eluente. 0 rendimento foi de 309 mg (49%). 5 (ii) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z)
Foi borbulhado cloreto de hidrogénio através de uma solução, até saturação, de 1,246 g (2 mmol) de Boc-(R)Cha-Pro-Pab(Z) 10 em 20 mL de acetato de etilo à temperatura ambiente. Após 30 minutos, foi adicionada uma solução de carbonato de cálcio (10%) e a fase orgânica que se separou foi seca (K2CO3) . 0 agente de secagem foi lavado com cloreto de metileno e o solvente foi evaporado das fases orgânicas combinadas para 15 produzir 1,11 g (100%) do composto do titulo. (iii) H-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HC1
Foram hidrogenados 100 g (0,19 mmol) de H-(R)Cha-Pro-Pab (Z) 20 dissolvidos em 15 mL de etanol na presença de 38 mg de Pd/C a 10% durante 1,5 h. A diluição da mistura de reacção com água destilada e remoção do catalizador por filtração seguido por remoção de etanol em vácuo e liofilização produziram o composto do titulo como um pó incolor. O 25 péptido foi finalmente convertido no dicloridrato por dissolução em ácido clorídrico seguido por liofilização, para produzir 90 mg (100%) do composto do título. ^-RMN (300 MHz, D20) : δ 1,0-2,0 (m, 13H) , 2,0-2,3 (m, 3H) , 30 2,3-2,5 (m, 1H), 3,6-3,7 (m, 1H), 3,8-3,9 (m, 1H) , 4,3-4,5 (t, 1H), 4,5-4,6 (m, 3H) , 7,4-7,6 (m, 3H) , 7,6-7,9 (m, 2H) . 13C-RMN (75 MHz, D2O): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 167,2, 170,0 e 174,9. -132 - P U, ^
Exemplo 16 HOOC-CH2-(R) Cha-Pro-Pab χ 2 HC1 5 (i) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z)
Uma mistura de· 268'img '(0', 5 mmol) de H-(R) Cha-Pro-Pab (Z) (Ver Exemplo 15), 90 μΐ (0,55 mmol) de bromoacetato de benzilo e 10 181 mg (1,3 mmol) de K2CO3 em 2 mL de acetonitrilo foi sonicada a 40°C durante 2,5 h. A mistura foi filtrada através de hyflo e o solvente foi removido em vácuo para produzir um resíduo que foi sujeito a cromatografia "flash" utilizando acetato de etilo como eluente para produzir 194 15 mg (57%) do composto do título. HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HC1 20 Foram hidrogenados 194 mg (0,28 mmol) de BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pab (Z) dissolvidos em 10 mL de etanol na presença de 77 mg de Pd/C a 10% durante 3 h. A mistura de reacção foi diluída com água e o catalizador foi removido por filtração. A evaporação do etanol em vácuo seguido de liofilização 25 produziu um resíduo branco. Foi adicionado ácido clorídrico e a solução resultante foi finalmente liofilizada para produzir 115 (68%) do produto desejado. 1H-RMN (300 MHz, D20) : δ 1,0-1,2 (m, 2H) , 1,2-1,5 (m, 3H) , 1,5-2,0 (m, 8H) , 2,0-2,3 (m, 3H), 2,3-2,5 (m, 1H) , 3,6-3,8 30 (m, 1H), 3,8-4,0 (m, 3H), 4,4-4,7 (m, 4H), 7,5-7,7 (d, 2H) , 7,7-7,9 (d, 2H) . 13C-RMN (75 MHz, D20): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 167,1, 168,2, 169,3 174,6.
- 133 -
Exemplo 17 HOOC-CH2- (Μθ) (R) Cha-Pro-Pab 5 (i) Boc-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z) -k A uma solução de 0,8 g (1,67 mmol) de Boc-(Me)(R)Cha-Pro-OSu (Ver preparação dos materiais de partida) em 3 mL de DMF foi adicionada uma solução de 0,562 g (1,85 mmol) de H-Pab(Z) 10 (Ver preparação dos materiais de partida) em 3 mL de DMF, e o pH da solução resultante foi ajustado a 8-9 com N-metilmorfolina, depois a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 2 dias. 15 A solução foi vertida em água, e a mistura resultante foi extraída com 3x 25mL de acetato de etilo. A solução orgânica foi lavada com solução de KHS04 a 1 M, solução de NaHCC>3 a 10%, água e solução salina, e seca (Na2SOí) . A evaporação do 20 solvente produziu 0,65 g (60%) do composto do título como um pó branco amarelado. (ii) Me-(R)Cha-Pro-Pab(Z) 25 Uma solução de 0,60 g (0,92 mmol) de Boc-(Me) (R) Cha-Pro-Pab (Z) em 50 mL de EtOH foi saturada com HC1 a 0°C, e a solução foi armazenada no frigorífico durante a noite. A solução resultante foi evaporada até à secura, e o resíduo foi dissolvido numa solução de Na2C03, extraída com 3x25 mL 30 de acetato de etilo. O extracto foi lavado com solução salina e evaporado para produzir 0,4 g (79%) do composto como um pó fofo branco. -134 - p Lc, ^^ • XH-RMN (CDC13, 300 ΜΗζ) : δ 0,8-1,0 (m, 2Η) , 1,1-1,4 (m, 5Η) , 1,4-1,55 (m, 1Η), 1,6-1,9 (m, 10Η) , 1,9-2,05 (m, 2Η), 2,05- 2.2 (m, 2Η) , 2,19 (s, 3Η) , 2,4-2,5 (m, 1Η) , 3,28 (dd, 1Η), 5 3,41 (q, 1Η) , 3,62 (m, 1Η), 4,42 (m, 2Η), 4,61 (d, 1Η) , 5,2 (s, 2Η), 7,2-7,45 (m, 7Η), 7,72 (t, 1Η), 7,79 (d, 2Η). (iii) BnOOC-CH2-(Me) (R)Cha-Pro-Pab(Ζ) 10 Uma mistura de 0,40 g (0,73 mmol) de Me-(R)Cha-Pro-Pab(Z), 0,17 g de BnOOC-CH2Br e 0,20 g (2 equiv.) de K2C03 (moído) em 15 mL de CH3CN foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura resultante foi evaporada, foi adicionado acetato de etilo, e a mistura foi lavada com água e solução 15 salina, seca (Na2SO,j) e evaporada. 0 produto bruto (0,69 g) foi sujeito a cromatograf ia "flash" (CH2Cl2/MeOH 10/1) produzindo 0,39 g (77%) de um óleo amarelo claro muito viscoso. 20 HOOC-CH2-(Me) (R)Cha-Pro-Pab A uma solução de 0,39 g (0,56 mmol) de BnOOC-CH2-(Me) (R) Cha-Pro-Pab (Z) em 30 mL de EtOH foram adicionados 0,1 g de Pd/C (10%), e a substância foi hidrogenada à pressão atmosférica. 25 A solução foi filtrada e evaporada, depois o material xaroposo foi liofilizado para produzir 0,25 g (95%) do composto como um pó branco cristalino. XH-RMN (300 MHz, CD3OD): δ 0,85-1,1 (m, 2H) , 1,1-1,4 (m, 6H), 30 1,5-1,85 (m, 9H) , 1,9-2,05 (m, 3H), 2,05-2,15 (m, 1H), 2,15- 2.3 (m, 1H), 2,57 (s, 3H), 3,32 (d, 1H), 3,55-3,75 (m, 2H) , 3,95-4,1 (m, 2H) , 4,35-4,5 (m, 3H) , 7,55 (d, 2H) , 7,72 (d, 2H) . -135 - p ^—ç. 13C-RMN (75 MHz, CD3OD) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 168,4, 171,5, 174,7, 175,1.
Exemplo 18 5 HOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Pro-Pab x 2 HC1 /·' (i) BnOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Pro-Pab (Z) 10 Uma mistura de 149 mg (0,28 mmol) de H-(R) Cha-Pro-Pab (Z) (Ver Exemplo 15) e 66 mg (0,4 mmol) de acrilato de benzilo em 1,5 mL de etanol foi mantida à temperatura ambiente durante 36 h. 0 solvente foi removido em vácuo e o resíduo foi sujeitoa cromatografia "flash" utilizando acetato de 15 etilo como eluente para produzir 124 mg (64%) do produto desejado. (ii) HOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Pro-Pab x 2 HC1 20 Foram hidrogenados 124 mg (0,18 mmol) de BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z) dissolvidos em 10 mL de etanol durante 1 h na presença de 55 mg de Pd/C a 10%. O catalizador foi removido por filtração e o solvente foi removido sob vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em ácido clorídrico e a solução 25 resultante foi liofilizada para produzir 87 mg (79%) do composto do título. 2,0-2,2 (m, 3H), (m, 1H), 3,3-3,4 4,3-4,6 (m, 4H) , 1H-RMN (300 MHz, D20) : Ô 1,0-2,0 (m, 13H) , 2,2-2,4 (m, 1H), 2,7-2,8 (t, 2H), 3,2-3,3 30 (m, 1H), 3,5-3,7 (m, 3H), 3,7-3,9 (m, 1H), 7,4-7,6 (m, 2H), 7,7,6-7,8 (m, 2H). 13C-RMN (75 MHz, D20): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 167,0, 168,3 e 174,6 (Dois carbonos estão sobrepostos). - 136-
Exemplo 19 HOOC-CH2-CH2- (Me) (R) Cha-Pro-Pab x 2 HC1 5 (i) BnOOC-CH2-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z) ' A uma solução de 274 mg (0,5 mmol·)' de Mè-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (Ver Exemplo 17) em 5 mL de EtOH (95%) foram adicionados 10 97,3 mg (0,6 mmol) de acrilato de benzilo e a reacção foi agitada à temperatura ambiente. Após 72 h, foi adicionada uma quantidade adicional de 16,2 mg (0,1 mmol) de acrilato de benzilo e a agitação continuou durante 24 h. O solvente foi evaporado e o resíduo foi sujeito a cromatografia 15 "flash" (CH2Cl2/MeOH (saturado com NH3), 95/5) para produzir 198 mg (56%) do composto do título. 20 1H-RMN (500 MHz, CDC13) : δ 0,8-2,0 (vários m, 16H), 2,14 (s, 3H) , 2,24-2,33 (m, 2H) , 2,38-2,46 (m, 1H) , 2,67 (t, 2H) , 3,32-3,40 (m, 2H), 3,71 (m, 1H), 4,36-4,44 (m, 2H), 4,58 (m, 1H) , 5,03 (s aparente, 2H) , 5,20 (s, 2H), 7,25-7,37 (m, 10H), 7,43 (d, 2H), 7,64 (t, 1H(NH)), 7,81 (d, 2H). 25 13C-RMN (125 MHz, CDCI3) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 164,7, 167,9, 171,7, 172,3 e 172,6. (ii) HOOC-CH2-CH2-(Me) (R) Cha-Pro-Pab x 2 HC1 30 A uma solução de 198 mg (0,27 mmol) de BnOOC-CH2-CH2-(Me) (R)Cha-Pro-Pab(Z) em 10 mL de EtOH e 1 mL de HC1 a 1 M, foram adicionados 60 mg de Pd/C a 5% (contendo H20 a 5% em peso) e a mistura foi hidrogenada à pressão atmosférica - 137-
durante 4 h. 0 catalizador foi removido por filtração e o solvente foi evaporado. 0 óleo que permaneceu foi dissolvido em água e liofilizado para produzir o composto do titulo num rendimento quantitativo. 5 1H-RMN (500 MHz, D20): Ô 1,08-1,2 (m, 2H) , 1,2-1,42 (m, 4H) , 1,68-1,91 (m, 5H) , 1,93-2,08 (m, 2H) , 2,09-2,26 (m, 3H) , 2,49 (m, 1H) , 2,95 (m/*'2H')V "3,03 (s, 3H) , 3,60 (bs aparente, 2H) , 3,82 (m, 1H) , 3,98 (m, 1H) , 4,53 (m, 1H) , 4,61 (bs, 10 2H), 4,64 (m, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,97 (d, 2H). 13C-RMN (75 MHz, D20): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 167,2, 167,8 e 174,5. Dois picos estão provavelmente sobrepostos. 15
Exemplo 20 HOOC-CH2- (RouS) CH (COOH) - (R) Cha-Pro-Pab/a x 2 HC1 20 (i) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pro-Pab(Z)
Uma mistura de 0,50 g (0,94 mmol) de H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (Ver Exemplo 15) e 0,28 g (0,94 mmol) de maleato de dibenzilo em 20 mL de EtOH foi mantida à temperatura 25 ambiente durante 5 dias. A evaporação do solvente seguida por cromatografia "flash" utilizando CH2Cl2/MeOH como eluente produziu 0,15 g (19%) da mistura diastereoisomérica. 1H-RMN (500 MHz, CDC13) : δ 0,7-2,1 (m, 17H), 2,3-2,4 (m, 1H) , 30 2,5-2,8 (m, 2H) , 3,2-3,7 (m, 4H), 4,46 (d, 1H), 4,65 (bd, 1H), 4,81 (d, 1H), 4,9-5,1 (m, 3H) , 5,20 (s, 2H), 7,1-7,4 (m, 15H), 7,4,-7,5 (m, 2H), 7,6-7,8 (m, 3H) . (ii) H00C-CH2- (RouS) CH (COOH) - (R) Cha-Pro-Pab/a x 2 HC1 -138- ^ U, ^
Uma mistura de 0,15 g (0,18 mmol) de BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pro-Pab(Z) foi dissolvida em 5 mL de etanol e foi hidrogenada com Pd/C a 5% à pressão atmosférica 5 durante 1 h. para produzir HOOC-CH2- (R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab. Os dois diastereoisómeros foram separados por RPLC utilizando.·..(CH3CN/NH4OAC a 0,1 M 15/85) como eluente, seguido de liófiiização a partir de HC1. Este diastereoisóníerd^eíiíiu primeiro da coluna. Rendimento 19 mg (18%). 10 1H-RMN (500 MHz, D20 , mistura de dois rotâmeros) rotâmero principal: δ 1,0-2,0 (m, 15H) , 2,15 (m, 2H), 2,44 (m, 1H), 3,00 (bd, 1H), 3,05 (bd, 1H) , 3, 69 (m, 1H), 3,84 (m, 1H) , 3,97 (bs, 1H), 4,5-4, 7 (m, 3H), 7,62 (d, 2H), 7,87 (d, 2H). 15 13C-RMN (75 MHz, D20): carbonos de amidina e de carbonillo: δ .167,2, 168,3, 173,8, 174,6 e 178,2. 20
Exemplo 21 HOOC-CH2~ (RouS) CH (COOH) - (R) Cha-Pro-Pab/b x 2 HC1 25 O composto do titulo foi obtido utilizando o mesmo procedimento como descrito no Exemplo 20 para HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab. Este diastereoisómero saiu da coluna depois do primeiro. Rendimento 19 mg (18%). 1H-RMN (500 MHz, D20, mistura de dois rotâmeros) rotâmero principal: : δ 1,0-2,0 (m, 14H), 2,15-2,25 (m, 3H), 2,44 (m, 1H), 3,11 (bd, 1H), 3,19 (bd, 1H) , 3,71 (m, 1H) , 3,92 (m, 1H), 4,03 (bs, 1H), 4,5-4,7 (m, 3H), 7,58 (d, 2H), 7,84 (d, 2H) . 30
-139-
Os sinais resolvidos provenientes do rotâmero menor aparecem a: δ 7,66 (d) e 7,91 (d). 5 iaC-RMN (75 MHz, D2O) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 167,3, 168,5 e 174,7. Dois carbonos estão provavelmente sobrepostos. ^ «...
Exemplo 22 10 HOOC-CH2-NH-CO-CH2- (R) Cha-Pro-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Pro-Pab (Z) 15 Foram misturados 0,246 g (0,460 mmol) de H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (Ver Exemplo 15), 0,140 g (1,01 mmol) de K2CO3e 0,145 g (0,506 mmol) de BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-Br (Ver preparação dos materiais de partida) em 6 mL de 20 acetonitrilo. A mistura foi agitada a 50°C durante 2 h 30 minutos, o solvente foi evaporado e o resíduo foi partilhado entre água e acetato de etilo. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída mais uma vez com acetato de etilo. A camada orgânica combinada foi seca (Na2SC>4) , 25 flitrada e evaporada para produzir 0,350 g de um óleo. O produto bruto foi purificado por cromatografia "flash" utilizando um gradiente descontínuo de CH2Cl2/MeOH 97/3, 95/5, 92,5/7,5 para produzir 0,227 g (67%) do composto do título. 30 13C-RMN (75 MHz, CDCI3) : δ 25,0, 26,0, 26,2, 26,4 26,7, 32,4, 34,2, 34,4, 40,8, 40,9, 42,9, 46,7, 50,5, 58,4, 60,2, 67,0, -140- Γ 67,2, 127,5, 127,8, 128,2, 128,3, 128,4, 128,5, 128,6, 128,6, 134,1, 135,2, 137,0, 142,6, 164,7, 168,9, 169,3, 170,4, 172,2, 175,0. 5 (ii) HOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R) Cha-Pro-Pab x 2 HC1
Foram misturados 0,,089 g (0,12 mmol) de BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Zj com 30 mg de Pd/C a 5% e dissolvidos em 10 mL de ácido acético. A mistura foi hidrogenada à pressão 10 atmosférica durante uma hora e meia. A filtração do catalizador através de hyflo e liofilização com 1 mL de ácido clorídrico a 1 N produziu 0,058 g (82%) do produto desejado. 15 1H-RNN (300 MHz, D20) : δ 0,9-2,2 (m, 16H), 2,25-2,47 (m, 1H) , 3,55-3,7 (m, 1H) , 3,7-4,1 (m, 5H) , 4,42 (t, 1H) , 4,48-4,6 (m, 3H), 7,51 (d, 2H), 7,77 (d, 2H). 13C-RMN (75 MHz, D20): carbonos de amidina e de carbonillo: 8 20 166,8, 167,1, 168,2, 173,6 e 174,6.
Exemplo 23
EtOOC-CH2-CH2-CH2-(R) Cha-Pro-Pab x HOAc 25 (i) EtOOC-CH=CH-CH2- (R) Cha-Pro-Pab(Z) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (Ver Exemplo 15) (275 mg, 0,51 mmol) foi tratado com K2CC>3 (141 mg, 1,02 mmol) e BrCH2CH=CH-OOEt (108 30 mq, 0,56 mmol) em CH3CN (10 mL) a 20°C durante 20 h. 0 solvente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em EtOAc (5 mL)/H20 (2 mL) . A camada orgânica foi separada, seca "flash" por (Na2S04) e concentrada, produzindo 397 mg de um óleo que foi purificado por cromatografia "flash" utilizando -141 - 1—^ -141 - 1—^ t 11
EtOAc/Heptano, 1/4 como eluente, para produzir 252 mg (77%) do composto do titulo. 1H-RMN (500 MHz, CDC13) : δ 0,8-1,05 (m, 2H) , 1,1-1,45 (m, 5 3H), 1,3 (t, 3H), 1,5-1,9 (m, 8H) , 1, 95-2,05 (m, 1H) , 2,1-2,15 (m, 1H), 2,45-2,55 (m, 1H) , 3,0 e 3,15 (dois d, 2H) , 3·; 35-3,4.5 . (m, 2H) , 3,55-3,65 (m, 1H), 4,15 (q, 2H)r-4 ,.3 . (d, ' 1Ή) , 4,6-4,7 (m, 2H) , 5,2 (s,2H), 5,85 (d, 1H)V 6,75 (dt, 1H), 5,3-5,4 (m, 4H), 7,45 (d, 2H), 7,85 (d, 2H). 10 13C—RMN (75,0 MHz, CDCI3) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 165,7, 171,2 e 175,7 (dois picos estão provavelmente sobrepostos). 15 (ii) EtOOC-CH2-CH2-CH2-(R) Cha-Pro-Pab x HOAc
Foi dissolvido em etanol EtOOCCH=CHCH2-(R) Cha-Pro-Pab (Z) (250 mg, 0,38 mmol) e hidrogenado na presença de Pd/C a 5% durante aproximadamente 2 h. A remoção do catalizador por 20 filtração e evaporação do solvente em vácuo produziu após purificação por RPLC utilizando (CH3CN/NH40ac a 0, 1M) como eluente, 70 mg (36%) do produto desejado. 25 1H-RMN (500 MHz, CD3OD) : δ 0,9-1,05 (m, 2H) , 1,15-1,55 (m, 5H) , 1,25 (t, 3H), 1,6-1,85 (m, 7H), 1,95-2,6 (m, 8H), 3,55-3,65 (m, 2H) , 3,8 (m, 1H) , 4,1 (q, 2H) , 4,45 (m e d, 2H) , 4,55 (d, 1H), 7,55 e 7,75 (dois d, 4H). 13C-RMN (75,0 MHz, CD30D) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 168,3, 173,2, 174,6 e 174,9.
Exemplo 24 30 -142-
V t Γ
Ph (4-COOH) -SO2- (R) Cha-Pro-Pab x HC1 (i) Ph(4-COOH)-SO2-(R)Cha-Pro-Pab(Z) 5
Foram adicionados 64 mg (0,32 mmol) de ácido 4-clorossulfonilbenzóico à temperatura de um banho de gelo, a uma solução de 156 mg (0,2'9’ mmoT) de H-(R) Cha-Pro-Pab (Z) (Ver Exemplo 15) e 59 mg (0,58 mmol) de trietilamina em 4 mL 10 de cloreto de metileno. A mistura foi lentamente deixada a atingir a temperatura ambiente e após 24 horas, foi lavada com água e seca (Na2S04) . A remoção do solvente em vácuo e purificação do residuo por cromatografia "flash" utilizando acetato de etilo/metanol 9:1, seguido por cloreto de 15 metileno/metanol 3:1 como eluentes, produziu 82 mg (39%) do produto. (ii) Ph(4-COOH)-S02-(R)Cha-Pro-Pab x HC1 20 Foram hidrogenados 80 mg (0,11 mmol) de Ph(4-COOH)-SO2-(R) Cha-Pro-Pab (Z) com Pd/C a 5% em EtoH. O catalizador foi removido por filtração, o solvente evaporado e o produto bruto foi purificado por RPLC utilizando 25 (CH3CN/NH4OAc a 0,1 N 1/4) como eluente e finalmente convertida no sal cloridrato por liofilização do HC1, que produziu 21 mg (29%) do produto. 1H-RMN (300 MHz, CD3OD, mistura de dois rotâmeros) : δ 0,45-30 1,82 (m, 13H), 1,90-2,30 (m, 4H), 2,95-4,16 (vários m, total 3H), 4,35-4,68 (m, 3H), 7,54 (d, 2H), 7,74 (d, 1H), 7,80 (d, 1H), 7,90-8,00 (m, 2H) , 8,05-8,22 (m, 2H) . - 143 - - 143 - Γ u 13C-RMN (75 MHz, CD3OD) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 168,4, 173,4, 173,9 e 174,2. EM m/z 584 (M+ +1) 5
Exemplo 25 H-<R)Cha-Pic-Pab x 2 HC1 - · 10 (i) Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
Foram adicionados 3,57 g (18,6 mmol) de EDC a -15°C a uma mistura de 7,11 g (18,6 mmol) de Boc-(R)Cha-Pic-OH (Ver preparação dos materiais de partida), 9,07 g (74,2 mmol) de 15 DMAP e 5,26 g (18,6 mmol) de H-Pab(Z) (Ver preparação dos materiais de partida) em 200 mL de DMF. A temperatura foi deixada subir até 20°C durante a noite. O solvente foi removido em vácuo e foram adicionados tolueno e água. A fase orgânica foi lavada com água, KHSO4 a 1 M, Na2CQ3._a 10% e 20 solução salina. A secagem (MgSO*) e evaporação do solvente em vácuo produziu 13,63 g de um residuo que foi sujeito a cromatografia "flash" em gel de sílica utilizando acetato de etilo/tolueno 2:1 como eluente para produzir 9,5 g (79%) do composto do título. 25 XH-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 0,7-1,0 (m, 2H) , 1,0-2,2 (m, 25H) , 2.3- 2,5 (m, 1H), 2,9-3,1 (m, 1H), 3,8 (d, 1H), 4,3 (dd, 1H), 4.4- 4,6 (m, 2H) , 5,1 (s, 2H), 5,1-5,3 (m, 2H) , 7,2-7,3 (m, 5H), 7,35 (d, 2H), 7,4-7,5 (m, 1H), 7,75 (d, 2H). 13C-RMN (75 MHz, CDCI3) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 156,8, 164,6, 168,2, 170,0 e 173,4. (ii) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) 30 -144- -144- r
Lc» ^
Foi borbulhado cloreto de hidrogénio através de uma solução de 9,5 g (14,7 mmol) de Boc-(R)Cha-Pic-Pab (Z) em 100 mL de acetato de etilo à temperatura ambiente até saturação. Após 5 10 minutos foi adicionado solução de Na2CC>3 (10%) e a fase orgânica que se separou foi seca (K2CO3) e o solvente foi removido em vácuo para produzir o composto do ..titulo em rendimento quantitativo. - 10 1H-RMN (500 MHz, CD30D) : δ 0,85-1,05 (m, 2H) , 1,15-1,90 (m, 16H) , 2,25-2,35 (m, 1H) , 3,20-3,30 (m, 1H) , 3,80-3,90 (d, 1H), 3,90-4,0 (m, 1H), 4,4-4,5 (dois d, 2H) , 4,7 (br s, 5H), 5,15 (s, 2H), 5,20 (m, 1H), 7,25-7,45 (m, 2H), 7,85 (d, 7H) . 15 (iii) H-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HC1
Foram hidrogenados 55 mg (0,1 mmol) de H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) dissolvidos numa mistura de 5 mL de etanol e 0,45 mL de ácido clorídrico a 1 M, na presença de 33 mg de Pd/C a 10% 20 durante 1,5 h. A remoção do catalizador por filtração e evaporação so solvente em vácuo produziu um resíduo que foi sujeito a RPLC utilizando NH4OAc a 0,1 M/CH3CN como eluente. O péptido purificado foi finalmente convertido no sal dicloridrato por dissolução 25 em ácido clorídrico seguida de liofilização. A quantidade obtida foi de 17 mg (35%) do composto do título. 30 1 H-RMN (300 MHz, D20, 2 rotâmeros, mistura 3:1): δ 1,0-2,0 (m, 18H) , 2,33 (d, 1H), 3,4-3,5 (m, 1H), 3,8-3,9 (m, 1H) , 4,4-4,8 (m, 3H), 5,15-5,25 (m, 1H), 7,5-7,7 (m, 2H), 7,8-8,0 (m, 2H). - 145 - - 145 - Γ ΐ--1/ ^
Os sinais resolvidos do rotâmero menor aparecem a δ: 0,5-0,7 (m) e 3,0-3,1 (m) . 13C-RMN (75 MHz, D2O) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 5 167,3, 171,6 e 173,6.
Os sinais resolvidos para~o ro.tâmero menor aparecem a δ 170,6 e 172,4. 10 Exemplo 26 HOOC-CH2- (R) Cha-Pic-Pab x 2 HC1 (i)BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z) 15
Uma mistura de 742 mg (1,35 mmol) de H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (Ver Exemplo 25), 230 mL (1,45 mmol) de bromoacetato de benzilo e 558 mg (4 mmol) de K2C03 em 4 mL de acetonitrilo, foi sonicada' a· 40°C durante 40 minutos. O solvente foi. 20 removido e o resíduo foi sujeito a cromatografia "flash" para produzir 720 mg (77%) do produto desejado. 1H-RMN (500 MHz, CDC13) : Ô 0,8-1,0 (m, 2H) , 1,1-1,9 (m, 16H) , 2,1-2,4 (br s, 1 ou 2H), 2,4 (d, 1H), 3,0 (m, 1H) , 3,25 (d, 25 1H), 3,45 (d, 1H), 3,55-3,65 (m, 1H), 3,7 (m, 1H), 4,35 (dd, 1H) , 4,55 (dd, 1H), 4,80 (dois d, 2H) , 5,2 (s, 2H), 5,3 (m, 1H), 7,2-7,4 (m, 12H), 7,8 (d, 2H) . 30 13C-RMN (125 MHz, CDCI3) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 164,5, 167,9, 170,5, 173,4 e 175,5. (ii) HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HC1 -146 -
U t
Foram hidrogenados 509 mg (0,73 mmol) de BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z) dissolvidos em 25 mL de etanol na presença de 259 mg de Pd/C a 10% durante 4 h. A remoção do catalizador por filtração e evaporação do solvente em vácuo produziu um 5 resíduo que foi dissolvido em água destilada. Foi adicionado ácido clorídrico e a solução foi finalmente liofilizada para produzirr'281vmg. (79%) do composto do título. 'o 1H-RMN (500 MHz, D20, mistura de rotâmeros 4:1): rotâmero 10 principal: δ 1,0-2,0 (m, 18H), 2,25-2,40 (m, 1H) , 3,4-3,5 (m, 1H), 3,8-3,95 (m, 3H), 4,55-4,65 (dois d, 2H), 5,15 (m, 1H) , 7,55-7,75 (m, 2H), 7,8-8,0 (m, 2H). 13C-RMN (125 MHz, D20) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 15 167,3, 169,9, 170,3 e 173,5. O sinal resolvido para o rotâmero menor aparece a δ 166,9, 169,2 e 172,0.
Exemplo 27 20 HOOC-CH2- (RouS) CH (COOH) - (R) Cha-Pic-Pab/a x 2 HC1 (i) BnOOC-CH2- (R, S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pic-Pab(Z) 25 Uma mistura de 592 mg (1,1 mmol) de H-(R) Cha-Pic-Pab (Z) (Ver Exemplo 25) e 332 mg (1,1 mmol) de maleato de dibenzilo em 1 mL de etanol foi mantida à temperatura ambiente durante 1 semana. O solvente foi removido em vácuo 30 e o resíduo foi sujeito a cromatografia "flash" utilizando metanol/cloreto de metileno como eluente para produzir 275 mg (30%) da mistura diastereoisomérica. (ii) HOOC-CH2-(RouS)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/a x 2 HC1 - 147- Γ
Foram hidrogenados 275 mg de BnOOC-CH2- (R, S) CH (COOBn) - (R) Cha-Pic-Pab (Z) dissolvidos em 20 mL de etanol a 95%, durante 18 horas na presença de 75 mg de Pd/C a 10%. A mistura foi 5 filtrada através de hyflo e o solvente foi removido em vácuo. A adição de água seguida de liofilização produziu 166 mg de H00C-CH2-(R, S)CH(COOH)-(R)Cha-PicrPab. Os dois diastereoisómeros foram separados por RPLC utilizando (CH3CN/NH4OAC a 0,1 M 1/4) como eluente seguido por 10 liofilização do HC1. Este diastereoisómero eluiu primeiro da coluna. Rendimento 9 mg. 1H-FIMN (300 MHz, D20, mistura de rotâmeros) : δ 1,0-2,0 (m, 18H) , 2,25-2,4 (m, 1H) , 3,0-3,2 (m, 2H) , 3,4 (t, 1H) , 3,8 15 (d,1H), 4,05 (t, 1H), 4,5-4,7 (m, 3H) , 5,2 (s, 1H) , 7,55 (d, 2H), 7,9 (d, 2H).
Os sinais resolvidos do rotâmero menor aparecem a δ 4,0 (t) e 7,7(d). 20
Exemplo 28 HOOC-CHj- (RouS) CH (COOH) - (R) Cha-Pic-Pab/b x 2 HC1 25 O composto do titulo foi obtido utilizando o mesmo procedimento como descrito no Exemplo 27 em H00C-CH2- (R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab. Este diastereoisómero saiu da coluna após o primeiro. ^-RMN (500 MHz, D20, mistura de rotâmeros): δ 1,0-2,0 (m, 18H), 2,25-2,4 (m, 1H), 3,0-3,2 (m, 2H) , 3,5 (t, 1H), 3,85 (d, 1H), 4,15 (s, 1H), 4,5-4,7 (m, 3H), 5,15 (s, 1H), 7,55 (d, 2H), 7,8 (d, 2H). 30 -148 - U, ^
Os sinais resolvidos do rotãmero menor aparecem a δ 4,35(s), 7, 65(d) e 7,9 (d) . 5 Exemplo 29 HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Bic-:Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pic-Pab (Z) 10
Uma mistura de 851 mg (1,55 mmol) de H-(R) Cha-Pic-Pab (Z) (Ver Exemplo 25) e 269 mg (1,71 mmol) de acrilato de benzilo em 5 mL de etanol foi mantida à temperatura ambiente durante 40 h. O solvente foi removido em vácuo e o resíduo foi 15 sujeito a cromatografia "flash" utilizando cloreto de metileno/metanol como eluente para produzir 812 mg (74%) do produto. 1H-RMN (500 MHz, CDC13) : δ 0,8-1,0 (m, 2H) , 1,1-1,9 (m, 16H) , 20 2,3-2,5 (m, 3H), 2,6-2,8 (m, 2H), 3,0 (m, 1H), 3,5 (m, 1H), 3,6-3,7 (m, 1H), 4,3 (dd, 1H), 4,6 (dd, 1H), 4,95-5,05 (dois d, 2H) , 5,2 (s, 2H) , 5,3 (m, 1H) , 6,5-6,9 (br s, 1H) , 7,0- 7,1 (m, 1H) , 7,2-7,5 (m, 12H) , 7,75-7,85 (d, 2H) , 9,3-9,7 (br s, 1H). 25 (ii) HOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Pic-Pab x 2 HC1
Foram hidrogenados 780 mg (1,1 mmol) de BnOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Pic-Pab (Z) dissolvidos em 25 mL de etanol, durante 4 h na 30 presença de 306 mg de Pd/C a 15%. 0 catalizador foi removido por filtração e o solvente foi removido em vácuo. O resíduo foi dissolvido em ácido clorídrico e a solução resultante foi liofilizada para produzir 481 mg (78%) do composto do título.
U -149- 1H-RMN (500 MHz, D20): δ 0,95-1,1 (m, 2H) , 1,15-1,9 (m, 16H) , 2,2-2,3 (m, 1H) , 2,7-2,8 (t, 2H) , 3,2-3,3 (m, 3H), 3,4-3,5 (m, 1H), 3,75-3,85 (m, 1H) , 4,4-4,6 (m, 3H) , 5,15 (m, 1H) , 5 7,5-7,6 (m, 2H), 7,8-7,9 (m, 2H), 8,6-8,7 (m, 1H). a3c-RMN (125 MHz, CD3OD) : carbonos de amidina . e de carbonillo: δ 170,6, 175,9, 179,5 e 183,5. 10 Exemplo 30 HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab x HOAc (i) EtOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) 15
Foram adicionados 0,12 g de cloreto de etiloxalilo a uma mistura de 0,42 g (0,77 mmol) de H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (Ver
Exemplo 25) e 0,21 g (1,5 mmol) de K2CO3 em 10 mL de CH3CN à temperatura ambiente. Após 2 horas, foi adicionada uma 20 quantidade adicional de 0,07 g (0,5 mmol) de cloreto de etiloxalilo. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi removido em vácuo e o resíduo foi dissolvido em CH2CI2 e lavado com água. A evaporação e cromatografia "flash" (tolueno: acetato de 25 etilo 1:2 seguido por CH2Cl2:metanol) produziu 0,21 g (42%) do produto. (ii) HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) - 150 - 1 p U, ^
Foram dissolvidos 0,21 g (0,32 mmol) de EtOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) em 3 mL de THF e foram adicionados 0,17 g (4,2 mmol) de LiOH dissolvidos em 3 mL de água. A mistura foi agitada à 5 temperatura ambiente durante a noite e depois vertida em acetato de etilo/água. As fases foram separadas e a fase orgânica foi extraída com umfà' solução de KHCO3. A fase aquosa foi acidificada com"1 2 3 HC1 a 0,5 Μ (pH 1) e extraída com CH2CI2, seca sobre Na2SC>4 e evaporada para produzir 80 mg do produto. 10 (iii) HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab x HOAc HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) foi hidrogenado em Pd/C a 5% em EtOH. O catalizador foi removido por filtração e o solvente 15 evaporado. O resíduo foi sujeito a purificação por RPLC para produzir o composto do título. 1 H-RMN (500 MHz, DMSO-d6) : δ 0,8-1,0 (m, 2H) , 1,1-1,75 (m, 15H) , 1, 86-1,84 ^m,- 1H) , 2,13-2,2 (m, 1H) , 3,75-3,81 (m, 20 1H), 4,32, 4,44 (AB, 2H), 4,71-4,77 (m, 1H), 4,98-5,02 (m, 1H), 7,41 (d, 2H), 7,75 (d, 2H), 8,1-8,15 (m, 1H) , 8,22-8,27 (m, ,,1H), 9,32 (s largo), 9,90 (s largo). O sinal de um dos protões (3,25) está parcialmente obscurecido pelo sinal do solvente. 25 EM m/z 486 (M+ + 1) 2
Exemplo 31 3 0 HOOC-CH2-CO- (R) Cha-Pic-Pab (i) Me00C-CH2-C0-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
-151 -
Foram dissolvidos 0,39 g (0,72 mmol) de H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (Ver Exemplo 25) e 0,9 g (0,8 mmol) de malonato de monometilo em 40 mL de CH2CI2 e foram adicionados 0,16 g 5 (0,8 mmol) de DCC. A solução foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. O DCU precipitado foi removido por filtração:-'e7Ovfil.trado foi lavado com KHSO4 a 0,3 M e solução, de KHCO3 e seco (NaS04) . A evaporação do solvente seguida por cromatografia "flash" utilizando tolueno/acetato de etilo 10 (1/3) como eluente produziu 0,27 g (58%) do produto desejado. (ii) MeOOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab 15 Foram dissolvidos 90 mg (0,14 mmol) de MeOOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab (Z) em 10 mL de etanol e foram hidrogenados na presença de Pd/C a 5% durante 5 horas. A remoção do catalizador por filtração e evaporação do solvente produziram 50 mg (70%) do produto do titulo. 20 Hí-RMN (300 MHz, CD30D) : δ 0,85-1,1 (m, 2H) , 1,1-1,9 (m, 16H), 2,35-2,45 (m, 1H), 3,2-3,4 (m, 3H) , 3,7 (s, 3H), 3,95-4,05 (m, 1H), 4,4-4,55 (m, 3H), 5,15-5,25 (m, 1H), 7,4-7,55 (m, 2H), 7,7-7,85 (m, 2H). 25 13C-RMN (75 MHz, CD3OD): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 168,2, 168,7, 170,0, 172,4 e 174,6. EM m/z 514 (M+ + 1) 30 (iii) H00C-CH2-C0-(R)Cha-Pic-Pab
A uma solução de 0,14 g (0,27 mmol) de MeOOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab em 5 mL de metanol foram adicionados 2 mL de 0,5 M -152- de NaOH à temperatura ambiente. Após agitação durante 5 horas, foi adicionada água e o metanol foi removido em vácuo. A fase aquosa foi liofilizada. 0 material solúvel foi extraído dos sais orgânicos 5 insolúveis com etanol absoluto. 0 sólido que permaneceu após .. ..evaporação do solvente foi suspenso _em~água e 70 mg (52%) do composto do título foi isolado por filtração. 10 1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6) : δ 0,8-1,0 (m, 2H), 1,0-1,9 (m, 16H) , 2,15-2,30 (m, 1H) , 2,58-2,86 (AB, 2H) , 3,8-3,95 (m, 1H), 4,2-4,5 (m, 2H) , 4,7-4,85 (m, 1H) , 4,95-5,05 (m, 1H) , 7,40 (d, 2H), 7,77 (d, 2H) , 8,2-8,3 (m, 1H) , 9,3-9,4 (m, 1H) , 9,90 (s largo, 3H) . 0 sinal de um dos protões (3,21) 15 está parcialmente obscurecido pelo sinal do solvente. 13C-RMN (75 MHz, DMSO-dô) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 165,8, 168,8, 169,9, 172,2 e 172,4. 20 EM m/z 500 (M+ + 1)
Exemplo 32
MeOOC-CHz-CO- (R) Cha-Pic-Pab 25
Ver Exemplo 31 (ii) acima.
Exemplo 33 30 H2N-CO-CH2- (R) Cha-Pic-Pab (i) H2N-CO-CH2-(R) Cha-Pic-Pab (Z) Γ - 153 - A alquilação tentada de 455 mg (0,83 mmol) de H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (ver Exemplo 25) com 80 mg (0,86 mmol) de cloroacetamida em 3 mL de acetonitrilo na presença de 395 mg (2,86 mmol) de carbonato de potássio por sonicação a 40°C 5 revelou-se ser uma reacção extremamente lenta. Mesmo a adição· de, s-230 mg (2,6 mmol) de brometo de litio não - pareceu melhorar a velocidade de reacção. No ·*·* entanto, a adição de iodeto de litio e aqueci-10 mento/sonicação produziram pequenas quantidades de produto, de acordo com TLC. A adição de água, extracção com acetato de etilo/tolueno, secagem da fase orgânica (MgSOí) e remoção do solvente em vácuo produziu um resíduo que foi sujeito a cromatografia "flash" utilizando MeOH/CH2Cl2 como eluente 15 para produzir 118 mg (24%) do produto desejado. (ii) H2N-CO-CH2- (R) Cha-Pic-Pab x 2 HC1
Foram hidrogenados 118 mg (0,2 mmol) de H2N-CO-CH2-(R)Cha-20 Pic-Pab(Z) dissolvidos em 10 mL de etanol a 95% na presença de 143 mg de Pd/C a 10% durante 2 h. A mistura foi diluída com água destilada e ácido clorídrico e filtrada através de hyflo. A liofilização produziu 26 mg (24%) do produto desejado. 25 1H-RMN (300 MHz, CD3OD): δ 0,9-1,1 (m, 2H) , 1,1-1,9 (m, 16H) , 2,3 (d, 1H), 3,4 (t, 1H), 3,6 (sistema AB, 2H), 3,8 (d, 2H) , 4,35 (t, 1H), 4,5 (s, 2H) , 5,2 (s, 1H) , 7,55 (d, 2H) , 7,8 (d, 2H). 30
Exemplo 34
Boc-(R) Cha-Pic-Pab -154 - Γ L-Cj t
Foram hidrogenados 10 mg (0,015 mmol) de Boc- (R) Cha-Pic-Pab(Z) (Ver Exemplo 25) dissolvidos em 5 mL de etanol na presença de 38 mg de Pd/C a 10% durante 4 h. A remoção do catalizador por filtração e evaporação do solvente em vácuo, 5 seguidas pela dissolução do resíduo em água e liofilização produziu 7,6 mg (95%) do produto. ·' 1H-RMN (300 MHz, CD3OD) : δ 0,9-1,1 (m, 2H)·, 1, l-l/'9'"(m, 16H) , 2,4 (d, 1H) , 3,25 (t, 1H) , 4,0 (d, 1H) , 4,5 (sistema AB, 10 2H) , 4,5-4,6 (m, 1H) , 5,25 (s, 1H) , 7,45 (d, 2H) , 7,75 (d, 2H) .
Exemplo 35 15 Ac-(R)Cha-Pic-Pab x HC1 (i) Ac-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
Foram adicionados 0,06 g (0,8 mmol) de. cloreto de acetilo a 20 uma mistura de 0,37 g (0,68 mmol) de H-(R) Cha-Pic-Pab (Z) (Ver Exemplo 25) e 0,19 g (1,35 mmol) de K2CO3 em 10 mL de CH3CN à temperatura ambiente. Após agitação adicional durante 30 minutos à temperatura ambiente, o solvente foi removido em vácuo. O resíduo foi dissolvido em CH2CI2 e lavado com 25 água. Evaporação e cromatografia "flash" utilizando um gradiente descontínuo de CH2Cl2/MeOH (99,9/0,1, 99,8/0,2, 99,6/0,4, 99,2/0,8 e 98,4/1,6) produziu 0,24 g (60%) do produto. 30 (ii) Ac-(R)Cha-Pic-Pab x HC1
Ac-(R)Cha-Pic-Pab(Z) foi hidrogenado sobre Pd/C a 5% à pressão atmosférica. Após filtração do catalizador e evaporação do solvente o material bruto foi sujeito a -155-
purificação por RPLC utilizando CH3CN/NH4OAc a 0,1 M (35/65) como eluente. A remoção do solvente e excesso de NH4OAc seguida por liofilização de HC1 a 1 M produziu o composto do titulo. 5 1H-RMN (300 MHz, CD3OD) : δ 0,85-1,1 (m, 2H) , 1,15-2,0 (m, 19H) , 2,35-2,47 (m, 1H) , 3,2-3,33-. (m, 1H) , 3,95-4,05 (m 1H), 4,46-4,57 (ABX, 2H), 5/16-5;22 (m, 1H), 7,51 (d, 10 2H), 7,76 (d, 2H), 8,23 (m, 1H). 0 sinal de um dos protões é totalmente obscurecido pelo sinal do solvente. 13C-RMN (75 MHz, CD3OD) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 168,3, 172,5, 173,8, 175,1. 15 EM m/z 456 (M+ + 1)
Exemplo 36 20 Me-S02- (R) Cha-Pic-Pab x HC1 (i) Me-S02-(R) Cha-Pic-Pab (Z)
Uma solução de 48 mg (0,42 mmol) de cloreto de 25 metanossulfonilo em 0,5 mL de cloreto de metileno foi adicionada a 0°C a uma solução agitada de 209 mg (0,382 mmol) de H-(R)Cha-Pic-Pab(Z)(Ver Exemplo 25) e 0,11 mL (0,763 mmol) de trietilamina em 5 mL de cloreto de metileno. A mistura de reacção foi deixada alcançar a 30 temperatura ambiente durante a noite. A lavagem com água seguida de secagem (Na2S04) e evaporação do solvente em vácuo produziu um resíduo que foi sujeito a cromatografia "flash" utilizando acetato de etilo/metanol (95/5) como eluente para produzir 159 mg (67%) do produto. -156 - -156 - Γ L·, >5»— (ii) Me-S02-(R)Cha-Pic-Pab x HC1
Foram hidrogenados 150 mg (0,24 mmol) de Me-S02-(R) Cha-Pic-5 Pab(Z) dissolvidos em 5 mL de etanol a 95% e 1 mL de água, na presença de Pd/C a 5% durante 4 h. A remoção do catalizador por- filtração, adição de 0,2 mL de ácidos cloridricó' a 1 M e evaporação do solvente em vácuo » ·> 10 produziu vim resíduo que foi dissolvido em 2 mL de água e liofilizado para produzir 116 mg (86%) do produto. XH-RMN (500 MHz, CD3OD) : δ 0,90-1,10 (m, 2H) , 1,15-1,85 (m, 15 15H), 1,90 (bd, 1H) , 2,30 (bd, 1H) , 2,85 (s, 3H) , 3,35 (dt, 1H) , 3,90 (bd, 1H) , 4,45 (sistema AB, 2H) , 4,50-4,55 (m, 1H), 5,13 (dd, 1H), 7,50 (d, 2H), 7,75 (d, 2H). 13C-RMN (125 MHz, D20): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 20 166,8, 173,0 e 174,6.
Exemplo 37 H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab x 2 HC1 25 (i) Boc- (R) Cha- (R, S) betaPic-Pab (Z)
Foi adicionado EDC a -18°C a uma solução agitada de 1,0 g (2,6 mmol) de Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OH (Ver preparação dos 30 materiais de partida), 1,28 g (10,5 mmol) de DMAP, 0,74 g (2,6 mmol) de H-Pab-(Z) (Ver preparação dos materiais de partida) em 35 mL de DMF. A mistura de reacção foi deixada alcançar a temperatura ambiente durante a noite e o solvente foi subsequentemente removido em vácuo. 0 resíduo foi -157- Γ dissolvido em CH2C12 e a camada orgânica foi lavada sucessivamente com KHSO4 a 0,3 M, solução de KHC03 e solução salina. Secagem (Na2S04) e remoção do solvente produziram um resíduo que sujeito a cromatografia "flash" utilizando 5 heptano: acetato de etilo com metanol a 4% como eluente produziu 0,74 g (44%) do produto desejado. (ii) H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z) · 10
Foram dissolvidos 0,68 g (1,05 mmol) de Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z) em acetato de etilo saturado com HCl(g). A solução foi agitada durante 1 h à temperatura ambiente. Foi adicionada água e a mistura foi tornada alcalina com 15 K2CC>3. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo. A fase orgânica foi então lavada com água e seca (Na2S04> . A evaporação produziu 0,5 g (87%) do produto desejado. (iii) H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab x 2 . HC1 20
Foram dissolvidos 65 mg (0,19 mmol) de H-(R)Cha- betaPic (R, S) -Pab (Z) em 7 mL de etanol e hidrogenados na presença de Pd/C a 5% durante 4 horas. A remoção do catalizador por filtração, evaporação do solvente e 25 liofilização de HC1 a 1 M e água produziram 41 mg (71%) do produto. XH-RMN (300 MHz, D20, 2 diastereoisómeros 4/5, e rotâmeros) : δ 0,8-2,16 (m, ), 2,5-2,77 (m, 3H) , 3,13-3,43 (m, 3H) , 3,68-30 3, 94 (m, 1H) , 4,18-4,41 (m, 1H) , 4,41-4,52 (m, 3H) , 7,46-7,57 (m, 2H), 7,72-7,83 (m, 2H) .
Exemplo 38 -158- ¥ HOOC-CH2-CH2- (R)Cha- (R,S)betaPic-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha- (R, S) betaPic-Pab (Z) 5 Foram dissolvidos 0,21 g (0,38 mmol) de H-(R)Cha-(R, S)betaPic-Pab(Z) (ver Exemplo 37) em 2 mL de etanol. Foram adicionados 0,68 g (0,42 mmol) de acrilato de benzilo e a solução foi agitada durante 5 dias. Evaporação e cromatografia "flash" com CH2Cl2/MeOH (95/5) 10 como eluente produziram 0,19 g (70%) do produto desejado. (ii) HOOC-CH2-CH2-(R) Cha- (R,S) betaPic-Pab x 2 HC1 15
Foram dissolvidos 170 mg (0,24 mmol) de BnOOC-CH2-CH2-(R) Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z) em 10 mL de etanol e hidrogenados na presença de Pd/C a 5% durante 4 horas. A remoção do catalizador por filtração, evaporação do solvente e. 20 liofilização de HC1 a 1 M e água produziram 103 mg (77%) do produto. XH-RMN (300 MHz, D20, mistura de 2 diastereoisómeros 4/5 e rotâmeros): 8 0,92-2,03 (m, H), 2,51-2,78 (m, 1H), 3,21-3,52 25 (m, 1H), 3,88-4,01 (m, 1H), 4,07-4,3 (m, 2H), 4,4-4,71 (m, 2H), 7,59 (d, 2H), 7,86 (d, 2H). 13C-RMN (300,13 MHz, D20, mistura de 2 diastereoisómeros 4/5 e rotâmeros): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 167,0, 30 168,0, 168,1, 175,9, 176,0, 176,3, 176,4 e 178,2.
Exemplo 39 HOOC-CH2-(R) Cha-Val-Pab x 2 HC1 -159-
(i) Boc-(R)Cha-Val-Pab(Z)
Foram adicionados 1,77 g (9,2 mmol) de EDC a -12°C a uma 5 mistura de 3,41 g (9,2 mmol) de Boc-(R) Cha-Val-OH (Ver preparação dos materiais de partida), 2,61 g (9,2 mmol) de H-Pab(Z) · (Vec preparação dos materiais de partida), ,e. 4,.-5. g (36,8 mmol) de DMAP em 50 mL de DMF. A mistura^-de1· reacção foi deixada alcançar a temperatura ambiente durante a noite 10 e o processamento por diluição com água foi seguido por extração com tolueno, éter e acetato de etilo. A secagem subsequente (MgS04) dos extractos orgânicos combinados, remoção do solvente em vácuo e cromatografia 15 "flash" utilizando CH2Cl2/MeOH como eluente produziram 2,77 g (47%) do produto desejado. (ii) H-(R)Cha-Val-Pab(Z) 20 Foi borbulhado cloreto de hidrogénio através de uma solução de 2,77 g (4,4 mmol) de Boc- (R) Cha-Val-Pab (Z) em 75 mL de acetato de etilo. Após 15 minutos, foi adicionada solução de carbonato de sódio até pH 10 e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo. A secagem (carbonato de potássio) e a 25 remoção do solvente em vácuo produziram 1,8 g (77%) de H-(R)Cha-Val-Pab(Z). (iii) BnOOC-CH2- (R) Cha-Val-Pab (Z) 30 Uma mistura de 326 mg (0,61 mmol) de H-(R)Cha-Val-Pab(Z), 105 mL (0,67 mmol) de bromoacetato de benzilo, e 252 mg (1,83 mmol) de carbonato de potássio em 2 mL de acetonitrilo foi sonicada durante 2,5 h a 40°C. Foi adicionado mais acetonitrilo, de modo a dissolver o produto, e a mistura foi -160-Γ u
filtrada e o solvente foi removido em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia "flash" utilizando metanol/cloreto de metileno como eluente. O produto foi finalmente cristalizado de acetato de etilo para produzir 5 124 mg (30%) de cristais incolores. (iv) HOOC-CH2- (R)Cha-Val-Pab x 2 HC1 ·;,
Foram hidrogenados 124 mg (0,18 mmol) de BnOOC-CH2-(R) Cha-10 Val-Pab(Z) em 20 mL de etanol, durante 2 horas na presença de 25 mg de Pd/C a 10%. Foram adicionados 10 mL de THF e a hidrogenação foi continuada durante mais 2 horas a 50°C. A mistura foi filtrada através de hyflo e o 15 filtrado foi lavado com ácido clorídrico diluído. Os solventes orgânicos foram removidos dos filtrados combinados em vácuo. A liofilização da solução restante produziu 55 mg (50%) do composto desejado. 20 1H-RMN (500 MHz, D20) : δ 0,75-1,4 (m, 12H), 1,5-1,9 (m, 7H) , 2,0-2,15 (bs, 1H), 3,45 (sistema AB, 2H), 4,1 (m, 2H) , 4,5 (m, 2H), 7,5 (s, 2H), 7,7 (s, 2H), 8,9 (s, 1H).
Exemplo 40 25 HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Val-Pab x 2 HC1 (i) H-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z) 30 O composto do título foi preparado por acoplamento de Boc-(R)Cha-Val-OH com H-Pab(Z), utilizando o acoplamento pivaloílo como descrito para Boc-(R)Cha-Pic-OMe (Ver preparação dos materiais de partida). Uma total epimerização da valina ocorreu para produzir Boc-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z). -161- Γ Ο grupo protector Boc foi removido da mesma maneira como descrito para Boc-(R)Cha-Val-Pab(Z) (Ver Exemplo 39) para produzir o composto do titulo. 5 (ii) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z)
Uma solução de .1,007 g (1,9 mmol) de H-(R) Cha-(R, S) Val-Pab(Z) e 308 mg (1>9 mmol) de acrilato de benzilo em 3-mL de·7' etanol foi mantida a 40°C durante a noite. O solvente foi 10 removido em vácuo e o residuo foi purificado por cromatografia "flash" utilizando metanol/cloreto de metileno (10/90) como eluente para produzir 1,086 g (82%) do composto do titulo. 15 (iii) HOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Val-Pab x 2 HC1
Foram hidrogenados 1,086 g (1,6 mmol) de BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-(R,S) Val-Pab(Z) em 25 mL de THF e 14 mL de ácido 20 clorídrico a 0,5 M na presença de 233 mg de Pd/C a 10% durante 2 horas. A remoção do catalizador por filtração através de celite e remoção do THF em vácuo seguidos por liofilização da solução aguosa restante produziu um residuo do qual aproximadamente 300 mg foram sujeitos a HPLC 25 utilizando acetonitrilo a 25% em tampão de acetato de amónia a 0,1 M como eluente. Foram isoladas duas fracções principais, das quais a segunda fracção continha o composto do titulo. Foram isolados 67 mg do composto do titulo, como dicloridrato. 1H-RMN (500 MHz, D20): δ 1,0-1,15 (m, 12H), 1,2-1,4 (m, 7H) , 1,65-1,9 (m, 7H) , 2,15-2,25 (m, 1H) , 2,85 (t, 2H), 3,15-3,2 (m, 1H), 3,3-3,35 (m, 1H) , 4,15-4,2 (m, 1H) , 4,25 (d, 1H) , 4,55-4,65 (sistema AB, 2H), 7,65 (d, 2H) , 7,85 (d, 2H). 30 -162- j— Lc, ^ 13C-RMN (75 MHz, D20) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 167,0, 169,8, 173,96 e 174,04. 5 Exemplo 41 H-. (R) Hoc-Aze-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Hoc-Aze-Pab(Z) 10
Preparado da mesma forma descrita para Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (Ver Exemplo 25) por substituição de Boc-(R)Cha-Pic-OH por Boc-(R)Hoc-Aze-OH (Ver preparação de materiais de partida). 0 produto bruto foi sujeito a 15 cromatografia "flash" (Tolueno/EtOAc 1/6) para produzir 0,32 g (37%) do produto desejado. 20 (ii) H-(R)Hoc-Aze-Pab(Z)
Boc-(R)Hoc-Aze-Pab(Z) foi tratado da mesma forma como descrito para Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) no Exemplo 25 para produzir 0,23 g (88%) do composto do titulo. 25 (iii) H-(R)Hoc-Aze-Pab x 2 HC1
Foram dissolvidos 20 mg (0,037 mmol) de H-(R)Hoc-Aze-Pab(Z) em 3 mL de etanol e hidrogenados na presença de Pd/C a 5% 30 durante 4 horas à pressão atmosférica. A remoção do catalizador por filtração, evaporação do solvente e liofilização de HC1 a 1 M produziram 11 mg (63%) do produto. -163 -
^-RMN (300.13 MHz, D20, mistura de dois rotâmeros 3:1): rotâmero principal: δ 0,9-2,1 (m, 15H) , 2,4-2,6 (m, 1H), 2,7-3,0 (m, 1H), 4,1-4,3 (m, 1H), 4,35-4,56 (m, 1H) , 4,65
(s, 2H) , 5,0-5,11 (m, 1H) , 7,62 (d, 2H) , 7,9 (d, 2H) . O 5 sinal de um dos protões está totalmente obscurecido pelo sinal H-O-D.
Exemplo 42
10 HOOC-CH2-CH2- (R) Hoc-Aze-Pab x 2 TFA (i) BnOOC-CH2-CH2- (R) Hoc-Aze-Pab (Z)
Foram adicionados 0,067 g (0,41 mmol) de acrilato de benzilo 15 a uma solução de 0,2 g (0,37 mmol) de H-(R) Hoc-Aze-Pab (Z) (Ver Exemplo 41) em 2 mL de etanol (95%) à temperatura ambiente. A reacção foi deixada à temperatura ambiente durante 5 dias. O solvente foi removido 20 em vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia "flash" (CH2Cl2:MeOH, 96/4) para produzir 0,16 g (62%) do produto desejado. (ii) HOOC-CH2-CH2- (R) Hoc-Aze-Pab x 2 TFA 25
Foram dissolvidos 160 mg (0,23 mmol) de BnOOC-CH2-CH2- (R) Hoc-Aze-Pab (Z) em 10 mL de etanol e sujeitos a hidrogenação à pressão atmosférica na presença de Pd a 5% em carvão activado durante 3 horas. A remoção do catalizador por 30 filtração, evaporação do solvente e liofilização da água e TFA produziram 120 mg (87%) do produto. 1H-RMN (300,13 MHz, D20, 2 rotâmeros 3:1): rotâmero principal: δ 0,9-1,9 (m, 13H), 1,94-2,16 (m, 2H) , 2,38-2,55 t -164- (m, 1H), 2,7-2,97 (m, 3H) , 3,2-3,44 (m, 2H) , 4,16 (m, 1H) , 4,35-4,58 (m, 2H), 4,65 (s, 2H), 5,0-5,12 (m, 1H) , 7,63 (d, 2H), 7,87 (d, 2H). 5 13C-RMN (300, 13 MHz, D20) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 167,3, 168,7, 172,5 e 176,6.
Exemplo 43 ~' 10 HOOC-CH2- (R, S) CH (COOH) - (R) Hoc-Pro-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Hoc-Pro-Pab(Z)
Preparado a partir de Boc-(R)Hoc-Pro-OH (Ver preparação dos 15 materiais de partida) da mesma forma como descrito para Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) no Exemplo 25. Cromatografia "flash" utilizando acetato de etilo como eluente produziu 0,886 g (58%) do composto do titulo. 20 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 0,7-0,95 (m, 2H), 0,95-2,1 (m, 27H (destes 1,2 (s, 9H) ) , 2,1-2,4 (m, 1H) , 3,3-3,5 (m, 1H) , 3,65-3,95 (m, 1H), 4,0-4,2 (m, 1H), 4,2-4,45 (m, 2H), 4,45-4,6 (d, 1H) , 5,15 (bs aparente, 2H), 5,2-5,3 (d, 1H), 7,1-7,4 (m, 7H), 7,65 (m, 1H), 7,7-7,8 (d, 2H), 9,4 (bs, 1H). 25 13C-RMN (75 MHz, CDC13) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 156,3, 164,6, 168,1, 171,4 e 172,4. (ii) H-(R)Hoc-Pro-Pab(Z) 30
Foram adicionados 40 mL de acetato de etilo saturado com cloreto de hidrogénio a 0,82 g (1,266 mmol) de Boc-(R)Hoc-Pro-Pab (Z) a 0°C. A temperatura foi deixada subir para a temperatura ambiente. A reacção não estava completa após 1,5 - 165 - - 165 -
L-Cj ...... h e assim, foi borbulhado cloreto de hidrogénio através da mistura de reacção durante 5 minutos. 0 solvente foi evaporado e foi adicionado acetato de etilo saturado com carbonato de sódio e as fases foram separadas. A fase 5 orgânica foi lavada com solução salina e seca (Na2S04) e o solvente evaporado em vácuo para produzir o composto do titulo numa produção quase quantitativa. 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 0,75-0,95 (m, 2H) , 0,95-2,4 (m, 10 17H), 3,3-3,55 (m, 2H), 3,55-3,7 (m, 1H), 4,25-4,45 (m, 2H) , 4,5-4,6 (m, 1H), 5,15 (s, 2H), 7,15-7,35 (m, 5H), 7,35-7,45 (m, 2H), 7,6-7,7 (m, 1H), 7,7-7,85 (d, 2H). 13C-RMN (75 MHz, CDC13) : carbonos de amidina e de carbonillo: 15 δ 164,5, 167,8, 171,4 e 175,3. (iii) BnOOC-CH2- (R, S) CH(COOBn)-(R)Hoc-Pro-Pab (Z)
Foram adicionados a 0,15 g (0,5. mmol) de acrilato de benzilo 20 em 1,5 mL de EtOH (99%), 0,273 g (0,498 mmol) de H-(R)Hoc-
Pro-Pab (Z) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 10 dias. O solvente foi removido em vácuo e o residuo foi sujeito a cromatografia "flash", utilizando acetato de etilo como eluente para produzir 0,103 g (25%) de 25 BnOOC-CH2-(R,S)CH (COOBn) -(R) Hoc-Pro-Pab (Z) . 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 0,75-2,05 (m, 18H), 2,3-2,45 (m, 1H), 2,45-2,8 (m, 3H), 3,15-3,45 (m, 3H) , 3,5-3,65 (m, 1H) , 4,3-4,5 (m, 2H), 4,55-4,7 (m, 1H), 4,8 (s, 1H), 4,9-5,1 (m, 30 3H) , 5,2 (s, 2H) , 7,1-7,2 (m, 1H) , 7,2-7,4 (m, 13H) , 7,4- 7,45 (d, 2H), 7,6-7,8 (m, 3H). (iv) HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R) Hoc-Pro-Pab x 2 HC1 -166-
Foram hidrogenados 103 mg (0,122 mmol) de BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Hoc-Pro-Pab(Z) dissolvidos em 4 mL de etanol (99,5%) e 0,3 mL de clorofórmio, na presença de 111 mg de Pd/C a 5% durante 2 h. A remoção do catalizador por 5 filtração e evaporação do solvente seguidos de dissolução em água e liofilização apresentaram hidrogenação incompleta. A hidrogenação foi continuada na presença de etanol, HC1 a 1 N e Pd/C a 5% durante 5 horas. . - 10 A remoção do catalizador por filtração e evaporação do solvente seguidos por dissolução em água e liofilização produziram o composto do titulo. 1H-RMN (500 MHz, CD3OD, mistura de dois diastereoisómeros): δ 15 0,8-1,0 (m, 2H), 1,1-1,4 (m, 6H) , 1,6-1,8 (m, 5H), 1,9-2,15 (m, 5H) , 2,25-2,35 (m, 1H) , 2,9-3,2 (m, 2H) , 3,5-3,65 (m, 1H), 3,7-3,9 (2m, total 1H) , 4,15-4,4 (2m, total 1H) , 4,4-4,6 (m, 4H) , 7,5-7,6 (m, 20 2H), 7,7-7,85 (m, 2H). 13C-RMN (75 MHz, CDC13) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 167,9, 168,2, 168,3, 172,8 e 173,6, 174,3 e 174,4. Os sinais dos diastereoisómeros estão parcialmente sobrepostos. 25
Exemplo 44 HOOC-CH2-(R) Hoc-Pic-Pab x 2 HC1 30 (i) Boc-(R)Hoc-Pic-Pab(Z)
Preparado a partir de Boc-(R)Hoc-Pic-OH (Ver preparação dos materiais de partida) e H-Pab(Z) (Ver preparação dos materiais de partida) da mesma forma como descrito para Boc- - 167 - p U, ^^ (R)Cha-Pic-Pab(Ζ) (Ver Exemplo 25). Cromatografia "flash" utilizando acetato de etilo como eluente produziu 1,3 g (78%) do composto do titulo. 5 ^-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 0,75-0,95 (m, 2H) , 0,95-2,0 (m, 31H (destes 1,3 (s, 9H)) , 2,4-2,5 (m, 1H), 3,0-3,1 (m, 1H) , 3,8..· (m>·< 1H) , 4,2-4,45 (m, 2H) , 4,45-4,55 (m, 2H) ,. · 5y-l-5. «r(bs aparente, 3H), 5,25-5,3 (m, 1H) , 7,0 (bs, -1H),-7,15-7,5 (m, 7H), 7,7-7,85 (d, 2H), 9,45 (bs, 1H). 10 13C-RMN (75 MHz, CDCI3) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 156,6, 164,7, 168,1, 170,0 e 173,0. (ii) H-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) 15
Foram adicionados 100 mL de acetato de etilo saturado com cloreto de hidrogénio a 1,3 g (1,96 mmol) de Boc-(R)Hoc-Pic-Pab (Z) a 0°C. A temperatura foi deixada 20 Aumentar até à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado após 40 minutos e foram adicionados acetato de etilo e carbonato de sódio saturado e as fases foram separadas. A fase orgânica foi lavada com solução salina e seca (Na2S04) e o solvente evaporado em vácuo para produzir 25 0,85 g (77,5%) do produto. ^-RMN (300 MHz, CDCl3) : δ 0,75- 0,95 (m, 2H), 1,05-2,3 (m 25H), 3,0-3,15 (m, 1H), 3,6-3,75 (m, 2H) , 4,25-4,4 (m, 2H) 5,15 (bs aparente, 3H) , 7,05-7,2 (d, 2H) , 7,2-7,35 (m, 4H) 7,35-7,4 (d, 1H), 7,6-7, 8 (d, 2H) • 13C-RMN (75 MHz, CDCis) : carbonos de amidina e de carbonillo δ 164,5, 167,9, 170,8 e 175,7. - 168 - - 168 -
L-Ci (iii) BnOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Pab(Z)
Foram adicionados 0,171 g (0,748 mmol) de bromoacetato de benzilo a uma mistura de 0,4 g (0,712 mmol) de H-(R)Hoc- 5 Pic-Pab(Z) e 0,217 g (1,57 mmol) de K2CO3 em 7 mL de acetonitrilo. A mistura foi aquecida a 60°C em banho de óleo durante 1 h. 0 solvente foi removido··· e foram adicionados acetato de etilo e água. As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com solução salina e seca (Na2S04) . A 10 evaporação em vácuo produziu 0,626 g de um resíduo que foi sujeito a cromatografia "flash" utilizando acetato de etilo como eluente, para produzir 2 produtos. O primeiro composto eluído da coluna foi (BnOOC-CH2) 2 (R) Hoc-Pic-Pab (Z) (0,28 g) e o segundo composto eluído foi o composto do título 15 (0,27 g).
BnOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Pab(Z): 20 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 0,7-0,95 (m, 2H) , 1,0-1,75 (m, 18H) , 2,3-2,5 (m, 1 ou 2H) , 2,9-3,05 (m, 1H), 3,2-3,3 (m, 1H) , 3,35-3,5 (m, 2H) , 3,6-3,7 (m, 1H) , 4,35-4,55 (sistema ABX, 2H), 4,75 (s, 2H), 5,15 (s aparente, 3H) , 5,25-5,3 (m, 25 1H), 7,1-7,45 (m, 12H), 7,7-7,8 (d, 2H) . 13C-RMN (75 MHz, CDCI3) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 164,6, 167,9, 170,5, 173,4 e 175,0. 30 (iv) HOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Pab x 2 HC1
Foram hidrogenados 259 mg (0,365 mmol) de BnOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Pab (Z) dissolvidos em 7,8 mL de etanol (99,5%) e 1,2 mL de cloreto de hidrogénio (1 N) na presença de 280 mg de Pd/C -169 - r u a 5% durante 4 h. A remoção do catalizador por filtração e evaporação do solvente, seguidos por dissolução em água e liofilização produziram 170 mg (83%) do composto do titulo. 5 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 0,4-1,85 (m, 20H), 1,85-2,2 (m, 1H), 2,9-3,2 (m, 1H) , 3,4-3,9 (m, 3H) , 4,05-4,3 (m, 2H) , 4,3-5,05 (m, 2H)··, λ7.,,1-7,4 (m, 2H) , 7,4-7,7 (m, 2H) . 13C-RMN (75 MHz, CDCI3) : carbonos de amidina e de carbonillo: 10 δ 167,8, 168,6, 169,6 e 172,3.
Exemplo 45 (HOOC-CH2) 2“ (R) Hoc-Pic-Pab x 2 HC1 15 (i) (BnOOC-CH2) 2(R)Hoc-Pic-Pab(Z) O composto do titulo foi obtido na alquilação de H-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) como descrito no Exemplo 44 acima. 20 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 0,7-0,95 (m, 2H) , 0,95-1,95 (m, 18H), 2,35-2,5 (m, 1H), 2,9-3,05 (m, 1H) , 3,5-3,85 (m, 6H), 4,35-4,55 (m, 2H) , 4,9 (2s, 4H), 5,2 (s, 2H) , 5,25-5,35 (m, 25 1H), 7,1-7,45 (m, 16H), 7,5-7,65 (m, 1H) , 7,7-7,85 (d, 2H) . 13C-RMN (75 MHz, CDCI3) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 164,7, 167,9, 170,5, 172,0 e 172,4. 30 (ii) (HOOC-CH2) 2- (R) Hoc-Pic-Pab x 2 HC1
Foram hidrogenados 153 mg (0,178 mmol) de (BnOOC-CH2) 2-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) dissolvidos em 4,5 mL de etanol (99,5%) e 0,5 mL de cloreto de hidrogénio (1 N), na presença de 150 mg -170- t de Pd/C a 5% duarnte 3,5 h. A remoção do catalizador por filtração e evaporação do solvente seguidas por dissolução em água e liofilização produziram 109 mg (99%) de dicloridrato de (HOOC-CH2) 2- (R) Hoc-Pic-Pab. Este material 5 bruto (80% de pureza) foi sujeito a purificação por RPLC utilizando CH3CN/NH4OAC a 0,1 M, 1:4 como eluente. A remoção . do. solvente e excesso de NH4OAc seguida por .l-iofildzação de - HC1 a 1 M produziu o composto do titulo. 10 ^-RMN (500 MHz, D20, mistura de dois rotâmeros) : rotâmero principal: δ 0,95-2,15 (m, 20H), 2,25-2,35 (m, 1H) , 3,45-3,55 (m, 1H), 3,95-4,25 (m, 5H), 4,6-4,65 (m, 2H), 4,92-5,01 (m, 1H), 5,15-5,20 (m, 1H) , 7,58-7,63 (d, 2H) , 7,84-7,89 (d, 2H) . 15
Os sinais resolvidos provenientes do rotâmero menor aparecem a: δ 0,7-0,85 (m) , 2,35-3, 45 (m), 3,05-3,15 (m), 4,47-4,55 (m) , 4,55-4,6 (m) , 4,65-4,7 (m) , 7,63-7,67 (d), 7,89-7,95 (d) . 20 13C-RMN (75 MHz, D20): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 168,20, 169,70, 170,20 e 172,71. 25 Exemplo 46 HOOC-CH2- (R) Pro (3- (S) Ph) -Pro-Pab x 2 HC1 (i) Boc- (R) Pro (3- (S) Ph)-Pro-Pab (Z) 30
A uma solução de 570 mg (1,5 mmol) de Boc- (R) Pro (3- (S) Ph) -Pro-OH (Ver preparação dos materiais de partida), 425 mg (1,5 mmol) de H-Pab(Z) (Ver preparação dos materiais de partida) e 733 mg (6 mmol) de DMAP em 25 mL de CH3CN/DMF -171- -171-
u (1,5/1) foram adicionados 310 mg (1,62 mmol) de EDC e a mistura foi agitada durante 23 h à temperatura ambiente. A maior parte do solvente foi evaporado e foram adicionados 50 mL de água ao resíduo. A fase aquosa foi extraída com 1 x 5 75 e 2 x 50 mL de EtOAc. A fase orgânica combinada foi lavada com 1 x 20 + 1 x 10 mL de KHS04 a 1M, 1 x 15 mL de NaHC03 (aq), 3 x 15 mL de água,. 1 x 15 mL de solução salina e seca (MgS04) . A filtração e evaporação do solvente produziram 670 mg de um óleo que foi purificado por cromatografia 10 "flash" utilizando EtOAc como eluente que produziu 529 mg (55%) do composto do título. 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 1,26 (s, 9H) , 1,53-1,88 (m, 3H) , 2,1-2,31 (m, 3H), 2,52 (q, 1H), 3,58-3,77 (m, 4H) , 4,31 (d, 15 1H) , 4,35 e 4,47 (sistema ABX, 2H), 4,65 (dd, 1H), 5,19 (s, 2H), 7,1-7,37 (m, 10H), 7,42 (d, 2H) , 7,81 (d, 2H), 8,0 (t, 1H (NH)). 13C-RMN (75 MHz, CDCI3) : carbonos de amidina e de carbonillo: 20 δ 154,6, 164,6, 168,1, 171,1 e 171,3. (ii) H-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) 25 Foram dissolvidos 529 mg (0,81 mmol) de Boc-(R) Pro (3-(S) Ph) -Pro-Pab(Z) em 15 mL de EtOH/HCl (g, saturado) à temperatura ambiente e agitou-se durante 3 h. O solvente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em 70 mL de CH2CI2. A fase orgânica foi lavada com 1 x 10 mL de NaOH a 2 Μ, 1 x 10 mL de água, 1 30 x 10 mL de solução salina e seca (MgS04) . A filtração e evaporação do solvente produziu 403 mg (90%) do composto do título como um pó branco. -172- -172- t r 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 1,44-1,57 (m, 1H), 1,62-1,86 (m, 2H) 1,96-2,35 (m, 3H) , 2,45 (q, 1H) , 3,05-3,35 (m, 4H) , 3,83 (bd, 1H), 4,25-4,45 (m, 2H) , 4,53 (m, 1H) , 5,19 (s, 2H) , 7,16-7,37 (m, 10H) , 7,42 (d, 2H) , 7,66 (t, 1H, (NH) ) , 7,77 5 (d, 2H). 13C-RMN (7<5 'MHz, ' CDCI3) : carbonos de amidina e de carbonilio*!'-•δ 164/ 4,167-, 9, 171,1 e 173,0. · - - 10 (111) BnOOC-CH2- (R) Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab (Z)
Uma mistura de 200 mg (0,36 mmol) de·H-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab (Z), 105 mg (0,46 mmol) de Br-CH2-COOBn e 125 mg (0,90 mmol) de K2CO3 em 10 mL de CH3CN foi aquecida até 50 °C 15 durante 1 h e 30 minutos. O solvente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em 70 mL de EtOAc. A fase orgânica foi lavada com 10 mL de água e seca (MgSOí) . A filtração e evaporação do solvente produziram 260 mg de um óleo. O material bruto foi purificado por cromatografia "flash" 20 utilizando um gradiente descontínuo de CH2Cl2/MeOH (saturado com NH3) (95/5 seguido por 9/1) para produzir 182 mg (72%) do composto do título como um pó branco. 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 1,43-1,82 (m, 3H) , 1,96-2,13 (m, 25 1H), 2,14-2,22 (m, 1H) , 2,26-2,43 (m, 2H) , 3,02-3,14 (m, 2H), 3,24-3,51 (m, 4H), 3,83 (d, 1H), 4,29-4,46 (sistema ABX centrado em 4,37, 2H) , 4,58 (dd, 1H) , 4,97-5,1 (sistema AB centrado em 5,03, 2H), 5,19 (s, 2H), 7,16-7,38 (m, 15H), 7,43 (d, 2H), 7,5-7,8 (m, 3H, um NH). 30 13C-RMN (75 MHz, CDCI3) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 164,5, 167,9, 171,15, 171,2 e 172,7. (iv) HOOC-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab x 2 HC1 -173- -173- t r
Foram misturados 0,18 g (0,26 mmol) de BnOOC-CH2-(R) Pro(3-(S) Ph)-Pro-Pab (Z) com 0,075 g de Pd/C a 5%, 1,0 mL de solução de HC1 a 1 N, 1 mL de água e 10 mL de etanol, e a 5 mistura foi hidrogenada à pressão atmosférica durante uma hora. A filtração do catalizador através de hyflo, evaporação do solvente seguida de duas^li-ofilizações de .água produziram 129 mg de um produto bruto. Ό produto bruto foi purificado por RPLC utilizando um gradiente descontinuo de 10 NH4OAC a 0,1 M/CH3CN 4/1 seguido de 3/1. A evaporação seguida de liofilização da água e solução de HC1 a 1 N produziu 70 mg (50%) do produto puro. 1H-RMN (300 MHz, DzO) : δ 1,42-1,60 (m, 1H) , 1,65-1,83 (m, 15 1H) , 1,83-1,98 (m, 1H) , 2,03-2,20 (m, 2H) , 2,63 (t, 2H) ,
3,28-3,40 (m, 1H), 3,55-3,78 (m, 2H), 3,81-3,96 (sistema AB centrado em δ 3,88, 2H) , 4,06-4,19 (m, 1H), 4,37-4,61 (sistema AB centrado em δ 4,49, 2H), 4,48 (dd, 1H) , 4,70 (d, 1H), 7,35-7,58 (m, 7H), 7,74 ,(d, 2H). 20 13C-RMN (75 MHz, CDCI3) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 167,02, 167,2, 169,3 e 174,4.
Exemplo 47 25 HOOC-CH2-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH2-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) 30 A uma solução de 190 mg (0,34 mmol) de H-(R) Pro (3-(S) Ph) -Pro-Pab (Z) (Ver Exemplo 46) em 7 mL de EtOH (99%) foram adicionados 114 mg (0,70 mmol) de acrilato de benzilo e a mistura de reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. A evaporação do solvente seguida por -174- Γ L·, t cromatografia "flash" utilizando um gradiente descontinuo de CH2Cl2/MeOH (saturado com NH3) (95/5 seguido de 9/1) produziu 202 mg (83%) do composto do titulo. 5 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 1,5-1,71 (m, 2H) , 1,74-1,9 (m, * 1H), 1,9-2,05 (m, 1H), 2,2-2,64 (m, 5H) , 2,69-2,82 (m, 2H) , 2,84-2,96 (m, 1H) , ....3^18-3,4.8 . (m, 4H) , 4,28-4,44 (m, 2H) , 4,61 (m, 1H) , 4,48-5,08 (sistema AB centrado em 5,03, 2H)>, 5,19 (s, 2H) , 7,15-7,37 (m, 15H) , 7,44 (d, 2H) , 7,75-7,85 10 (m, 3H, um NH) . 13C-RMN (75 MHz, CDC13) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 164,6, 168,0, 171,2, 172,5 e 172,9. 15 (ii) HOOC-CH2-CH2- (R) Pro (3- (S) Ph) -Pro-Pab x 2 HC1
Foram misturados 0,20 g (0,28 mmol) de BnOOC-CH2-CH2- (R) Pro (3-(S) Ph)-Pro-Pab (Z) com 0,075 g de Pd/C a 5%, 1,0 mL de solução de HC1 a 1 N, 1 mL de água e 10 mL de etanol „e .a 20 mistura foi hidrogenada a pressão atmosférica durante uma hora. A filtração do catalizador através de hyflo, evaporação do solvente seguida por duas 25 liofilizações da água produziram 125 mg (79%) do composto do titulo. 1H-RMN (300 MHz, D20): δ 1,44 (m, 1H), 1,65-1,9 (m, 2H) , 2,0-2,2 (m, 2H) , 2,62 (q, 2H) , 2,83 (t, 2H) , 3,27-3,4 (m, 1H) , 30 3,4-3, 8 (m, 4H), 4,0-4,15 (m, 1H), 4,35-4,6 (m, 3H) , 4,68 (d, 1H), 7,35-7,6 (m, 7H), 7,77 (d, 2H). 13C-RMN (75 MHz, CDC13) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 166,2, 167,1, 174,1 e 174,2. -175-
Exemplo 48 HOOC-CH2-CH2- (R) Tic-Pro-Pab x 2 HC1 5 (i) Boc-(R)Tic-Pro-Pab(Z) < ·'>. >, _ . ... ···--'/. ···, . Preparado da mesma forma como descrito· para‘Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (Ver Exemplo 25) utilizando Boc-(R)Tic-Pro-OH (Ver 10 preparação dos materiais de partida) em vez de Boc-(R)Cha-Pic-OH. Cromatografia "flash" utilizando hepta-no/EtOAc (4/1) seguida por EtOAc como eluentes produziram 425 mg (37%) do composto do titulo. 15 ^-RMN (500 MHz, CDC13) : δ 1,35 (s, 9H) , 1,95-2,15 (m, 3H) , 2.4 (m, 1H), 2,8 (m, 1H) , 3,3 (m, 1H) , 3,55 (m, 2H) , 4,25- 4.4 (dois m, 2H), 4,55-4,7 (dois m, 2H) , 7,15-7,5 (m, 10H) , 7,85 (d, 2H). 9 20 13C-RMN (75,0 MHz, CDCI3) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 164,6, 171,5 e 171,6. (dois picos estão provavelmente sobrepostos) (ii) H-(R)Tic-Pro-Pab(Z) 25
Boc-(R)Tic-Pro-Pab(Z) (379 mg, 0,59 mmol) foi dissolvido em
EtOAc saturado com HC1 (g) e agitado à temperatura ambiente. A evaporação do solvente produziu 251 mg (79%) do composto 30 do titulo como um pó branco. 1H-RMN (500 MHz, CDC13) : δ 1,65-2,15 (dois m, 7H) , 2,45 (m, 1H), 2,75 (m, 1H) , 2,9 (m, 1H) , 3,0 (m, 1H) , 3,25 (m, 1H) , 3,55 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 4,35-4,55 (m, 2H) , 4,75 (d, 1H) , -176- Γ u 4,9 (s, 1H), 5,25 (s, 2H) , 6,8-7,45 (vários m, 8H) , 7,5 e 7,85 (dois d, 4H). 13C-RMN (75,0 MHz, . CDC13) : carbonos de amidina e de 5 carbonillo: δ 164,5, 171,3 e 172,7 (dois picos estão provavelmente sobrepostos). (iii) Bn02C-CH2-CH2- (R)Tic-Pfo-Pab(Z) 10 H- (R) Tic-Pro-Pab (Z) (140 mg, 0,26 mmol) foi tratado com acrilato de benzilo (63 mg, 0,39 mmol) em EtOH (1,3 mL) a 20°C durante 48 h. A evaporação do solvente e cromatografia "flash" utilizando (50% EtOAc/Heptano, depois 10% MeOH/EtOAc) como eluente produziu 133 mg (73%) do produto 15 desejado como um material sólido branco. 1H-RMN (500 MHz, CDC13) : δ 1,75-2,0 (dois m, 4H), 2,25 (m, 1H), 1,4-1,65 (m, 3H) , 2,7-2,95 (dois m, 4H), 3,05-3,2 (m, 2H) , 3,9 (m, 1H) , 4,45 (m, 2H) , 4,65 (m, 1H) , 5,1 (dois d, 20 2H) , 5,25 (s, 2H) , 6,85-7,45 (vários m, 12H) , 7,5 e 7,9 (dois d, 4H). 13C-RMN (75,0 MHz, CDCI3) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 171,5, 171,9 e 172,1 (dois picos estão 25 provavelmente sobrepostos). (iv) HOOC-CH2-CH2-(R) Tic-Pro-Pab x 2 HC1 30 Bn02C-CH2-CH2-(R) Tic-Pro-Pab (Z) (125 mg, 0,17 mmol) foi hidrogenado em Pd/C a 5% utilizando EtOH/HCl como solvente. A filtração do catalizador e liofilização produziram 73 mg (77%) do composto do titulo como um pó branco. - 177 - L-C. ... '^t. ^-RMN (500 MHz, D2O) : 52,1-2,35 (dois m, 3H), 2,6 (m, 1H), 2,95-3,1 (m, 2H), 3,25-3,5 (dois m, 2H) , 3,65 (m, 3H), 4,65 (s, 2H), 4,75 (m, 1H), 5,85 (s, 1H), 7,15-7,6 (três m, 4H), 7,6 e 7,85 (dois d, 4H). 5 13C-RMN (75,0 MHz, D2O): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 166,9, 167,1 e 174,3 (dois picos estão provavelmente* sobreposto"s)'.;'' 10 Exemplo 49 HOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pig x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pig(Z)2 15 A uma mistura de 0,623 g (1,83 mmol) de Boc-(R)Cgl-Aze-OH (Ver preparação dos materiais de partida), 0,816 g (1,92 mmol) de H-Pig(Z)2 (Ver preparação dos materiais de partida) e 0,89 g (7,3 mmol) de DMAP em 10 mL de diclorometano, foram 20 adicionados 0,368 g (1,92 mmol) de EDC e a mistura foi agitada durante a noite. A mistura foi diluída e lavada com KHSO4 a 0,3 M e uma vez com solução salina. A camada orgânica foi seca (Na2S04) , filtrada e evaporada para produzir 1,4 g de um produto bruto. Purificação por cromatografia "flash" 25 utilizando acetato de etilo como eluente produziu 0,3 g (22%) do produto puro. (ii) H-(R)Cgl-Aze-Pig(Z)2 30 Foram misturados 0,3 g (0,4 mmol) de Boc-(R)Cgl-Aze-Pig(Z)2 com 10 mL de diclorometano e 2,5 mL de ácido trifluoroacético. A mistura foi agitada durante uma hora e meia. Após evaporação do solvente, o resíduo foi dissolvido em diclorometano e lavado duas vezes com solução de NaOH a Γ
-178 - 0,2 Μ. A camada aquosa combinada foi extraída mais uma vez com diclorometano. A camada orgânica combinada foi seca (Na2S04) , filtrada e evaporada para produzir 0,24 g (93%) do produto. 5 1H-RMN (300 MHz, CDC13, 339K): δ 0,9-1,9 (m, 15H), 1,94 (bd, • 1H), 2,37-2,52 (m, 1H) , 2,65-2,8 (m, 1H)-, - 2,9-3* 08 (m, 3H) , 3,20 (t, 2H) , 4,05-4,28 (m, 4H)·, 4,86 (dd, 1H) , 5,16 (s, 4H), 7,2-7,42 (m, 10H), 7,98 (bs, NH). 10 . (iii) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Aze-Pig(Z)2
Foram dissolvidos 0,231 g (0,36 mmol) em 2 mL de etanol e foram adicionados 61 μΐ (0,40 mmol) de acrilato de benzilo. 15 A mistura de reacção foi agitada durante 5 dias à temperatura ambiente. A mistura foi evaporada e o produto bruto purificado por cromatografia "flash" utilizando um gradiente descontínuo de CH2Cl2/MeOH (95/5, 90/10) como eluente para produzir 0,218 g (75%) do produto puro. 20 1H-RMN (300 MHz, CDC13, 335K): δ 0,93 (bq, 1H), 1,02-1,85 (m, 14H) , 1,94 (bd, 1H) , 2,33-2,5 (m, 3H) , 2,58-2,77 (m, 2H) , 2,79-3,02 (m, 4H), 3,17 (t, 2H), 4,0-4,25 (m, 4H) , 4,86 (dd, 1H), 5,11 (s, 2H), 5,12 (s, 4H), 7,2-7,4 (m, 15H), 8,03 (bs, 25 NH), 10,35 (bs, NH). (iv) HOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pig x 2 HC1
Foram misturados 0,218 g (0,27 mmol) de BnOOC-CH2-CH2-(R) Cgl-30 Aze-Pig(Z)2 com 0,10 g de Pd/C a 5%, 1 mL de solução de HC1 a 1 Μ, 1 mL de água e 10 mL de etanol e a mistura foi
hidrogenada à pressão atmosférica durante uma hora. A filtração do catalizador através de hyflo, evaporação do Γ -179- solvente seguida por liofilização duas vezes da água produziu 134 mg (95%) do composto do titulo. ^-RMN (300 MHz, D20) : δ 1,0-1,4 (m, 7H) , 1,55-2,05 (m, 9H) , 5 2,22-2,34 (m, 1H) , 2,61-2,76 (m, 1H), 2,88 (t, 2H), 3,08 (bt, 2H), 3,19 (d, 2H), 3,34 (m, 2H), 3,83 (bd, 2H), 3,95 (d, 1H), 4,29-4,49 (m, 2H)·, -4,9.0 (dd, 1H).. , · -J'' ·’ * * 13C-RMN (75 MHz, D20): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 10 156,4, 167,6, 172,1 e 174,7.
Exemplo 50 HOOC-CH2- (R) Cgl-Pro-Pig x 2 HC1 15 (i) Boc-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2
Foram adicionados 0,568 g (2,96 mmol) de EDC a -15°C a uma mistura de 1 . ,g (2,82 mmol) de Boc-(R)Cgl-Pro-OH (Ver 20 preparação dos materiais de partida), 1,197 g (2,82 mmol) de H-Pig(Z)2 (Ver preparação dos materiais de partida) e 1,38 g (11,28 mmol) de DMAP em acetonitrilo. A temperatura foi deixada aumentar até à temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi evaporado em vácuo e foram adicionados 25 cloreto de metileno e KHSO4 a 1 M. As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com NaHC03 saturado, água e solução salina, a secagem (Na2S04) e evaporação dos solventes produziram 2,033 g de um resíduo que foi sujeito a cromatografia 30 "flash" utilizando acetato de etilo como eluente. Isto produziu dois produtos; 720 mg (34%) do composto do titulo que eluíram primeiro da coluna, seguido de 775 mg (44%) de -180- -180- \
L-Cj
Boc-(R)Cgl-Pro-Pig(Z) formado por perda de um dos grupos Z protectores. 1H-RMN (300 MHz, CDC13) ; Alguns sinais, especialmente no anel 5 piperidina, são selectivamente mais largos devido a um processo intramolecular de troca. Isto é especialmente pronunciado-^para os grupos 2- e 6-CH2 do anel de piperidina, que exibiam um pico largo variando desde 3,5 a 4,'5'ppiri.1' 10 δ 0,85-2,1 (m, 19H), 2,3-2,45 (m, 1H), 2,8-3,2 (m, 4H), 3,45-3,55 (m, 1H) , 3,55-3,65 (m, rotâmero menor), 3,8-3,93 (m, 1H), 3,97-4,1 (m, 1H), 4,52-4,62 (d, 1H) , 5,1 (bs aparente, 5H) , 7,12-7,41 (m, 10H) . 15 13C-RMN (75 MHz, CDCI3) : carbonos de amidina e de carbonillo: δ 155,2, 156,3, 171,0 e 172,1. (ii) H-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2 20 Foram dissolvidos 720 mg (0,946 mmol) de Boc-(R)Cgl-Pro-Pig (Z)2 em 35 mL de TFA/CH2C12, 1/4 e agitados durante 30 minutos. 0 solvente foi removido em vácuo e foi adicionado acetato de etilo e NaOH a 2 Μ. A camada orgânica foi lavada com água e solução salina, seca (Na2SC>4) e o solvente foi 25 evaporado em vácuo para produzir o composto do titulo num rendimento quantitativo. ^-RMN (300 MHz, CDCI3); Alguns sinais, especialmente no anel piperidina, são selectivamente mais largos devido a um 30 processo intramolecular de troca. Isto é especialmente pronunciado para os grupos 2- e 6-CH2 do anel de piperidina, que exibiam um pico largo variando desde 3,5 a 4,5 ppm. -181-
δ 0,8-2,15 (m, 19Η), 2,22-2,4 (m, 1Η), 2,75-2,98 (m, 2H), 2,98-3,18 (m, 2H) , 3,18-3,35 (m, 1H) , 3,35-3,5 (quart., 1H), 3,5-3,7 (m, 1H), 4,42-4,58 (d, 1H) , 5,1 (s, 4H), 7,1-7,5 (m, 5 10H). 13C-RMN (75 MHz, CDCI3) : carbonos de· amidina e de carbonillo: 5 154,96, 171,31, 174,82.. - *~-'- 10 (iii) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2
Foram adicionados 0,298 g (0,999 mmol) de BnOOC-CH2-OTf (ver preparação dos materiais de partida) a uma mistura de 0,64 g (0,999 mmol) de H-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2 e 0,531 g (2,996 mmol) 15 de K2CO3 em 6,4 mL de acetonitrilo, e aqueceu-se até ao refluxo. Após 1 h 20 min. a mistura foi lavada com água, seca (Na2SC>4) e o solvente evaporado em vácuo para produzir 729 mg de um resíduo que foi sujeito a cromatografia "flash" utilizando acetato de etilo como eluente. Isto produziu dois 20 produtos: 120 mg de (BnOOC-CH2)2-(R)Cgl-Pro-Pig (Z)2 que eluíu pimeiro da coluna e 142 mg (18%) do composto do título. XH-RMN (300 MHz, CDCI3) ; Alguns sinais, especialmente no anel piperidina, são selectivamente mais largos devido a um 25 processo intramolecular de troca. Isto é especialmente pronunciado para os grupos 2- e 6-CH2 do anel de piperidina, que exibiam um pico largo variando desde 3,5 a 4,6 ppm. δ 0, 94-2,27 (m, 19H), 2,28-2,43 (m, 1H) , 2,8-2,98 (m, 2H), 30 2,98-3,06 (m, 1H), 3,06-3,15 (d, 1H), 3,15-3,25 (m, 1H), 3,3-3,5 (m, 4H) , 4,5-4,61 (d, 1H), 5,1 (s, 6H) , 7,1-7,6 (m, 15H) , 10,52 (bs, 1H) . -184-
V
Foram hidrogenados 28 mg (0,042 mmol) de H-(R)Cha-Aze-Pig(Z)2 dissolvidos em 2 mL de etanol (99,5%) e 0,13 mL de cloreto de hidrogénio (1 N), na presença de 35 mg de Pd/C a 5% durante 4 h. A remoção do catalizador por filtração e 5 evaporação em vácuo do solvente, seguidas por dissolução em água e liofilização produziram 12 mg (60%) de dicloridrato de H-(R) Cha-Aze-Pig* . i 1H-RMN (300 MHz, 300 K, CD3OD); Alguns sinais, especialmente 10 no anel piperidina, são selectivamente mais largos devido a um processo intramolecular de troca. Isto é especialmente pronunciado para os grupos 2- e 6-CH2 do anel de piperidina, que exibiam um pico largo variando desde 3,7 a 4,5 ppm. δ 0,75-2, 1 (m, 18H) , 2,2-2,35 (m, 1H), 2,62-2,75 (m, 1H) 15 3,0-3,12 (t, 2H), 3,12-3,23 (d, 2H) , 3,85-3,95 (d, 2H) 3,95-4,0 4,72-4,78 (dd, 1H), (m, 1H) . 4,15-4,23 (m, 1H), 4,35-4,42 (m, 1H) 13C-RMN .(75 MHz, CD3OD) : guanidina: δ 157,6; carbonos 20 carbonilo: δ 170,0 e 172,6.
Exemplo 52 HOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pac x 2 HC1 25 (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pac(Z)
A uma solução de 0,47 g (1,4 mmol) de Boc-(R) Cgl-Aze-OH (Ver preparação dos materiais de partida), 0,40 g (1,4 mmol) de 30 H-Pac(Z) (Ver preparação dos materiais de partida) e 0,67 g (5,5 mmol) de DMAP em 5 mL de acetonitrilo, foram adicionados 0,27 g de EDC a 0°C. A - 185- \ mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite e subsequentemente diluída com acetato de etilo. A solução foi lavada com KHS04 (aq) e NaHC03 (aq), seca (Na2SC>4), filtrada e evaporada. Cromatografia "flash" utilizando acetato de etilo 5 seguido de acetato de etilo/metanol 98/2 como eluentes, produziu 0,25 g (30%) do composto do titulo como uma mistura de-. produtos 1,4-cis- e trans- em relação à~-parte'.· Pac da molécula. 10 XH-RMN (300 MHz, CDC13) : δ 0,8-2,0 (m, 29 H; destes 1,45 (s, 9 H) ) , 2,15 e 2,34 (m, 1 H, isómeros) , 2,45-2,7 (m, 2 H) , 3,0-3,4 (m, 2 H) , 3,85 (m, 1 H) , 4,14 (m, 1 H) , 4,33 (m, 1 H), 4,85 (m, 1 H) , 4,98 (m, 1 H) , 5,04 (s, 2 H) , 7,25-7,45 (m, 5 H), 7,8-7,9 (m, 1 H), 9,2-9,5 (m, 1 H). 15 (ii) H-(R)Cgl-Aze-Pac(Z) x HC1
Foi dissolvido Boc-(R)Cgl-Aze-Pac(Z), 0,25 g (0,41 mmol), em 100 mL de acetato de etilo e arrefeceu-se em banho de gelo. 20 Foi borbulhado HC1 (g) durante 5 min. e o solvente foi evaporado. XH-RMN (300 MHz, MeOD): δ 0,8-2,0 (m, 22 H) , 2,05-2,35 (m, 1 H), 2,4-2,55 (m, 1 H) , 2,6-2,75 (Μ, 1 H) , 3,00 (d, 1 H) , 25 3,05 e 3,37 (multipletos, 0,6 H e 0,4 H respectivamente, isómeros), 3,15-3,3 (m, 1 H), 4,05-4,2 (m, 2 H), 4,88 (dd, 1 H), 5,11 (s, 2 H), 7,2-7,45 (m, 5 H), 8,0-8,15 (m, 1 H). (iii) Bn02C-CH2- (R) Cgl-Aze-Pac (Z)
Uma mistura de 0,17 g (0,33 mmol) de H-(R) Cgl-Aze-Pac (Z) x HC1, 0,11 g (0,37 mmol) de trifliloxiacetato de benzilo e 0,14 g (1,0 mmol) de K2C03 em 5 mL de 30 -186- Γ u t acetonitrilo, foi agitada à temperatura ambiente durante 3 dias. 0 produto bruto foi sujeito a cromatografia "flash" com EtOAc/CH2Cl2/MeOH 95/20/5. Rendimento: 70 mg (32%). 5 "H-RMN (500 MHz, CDC13) : δ 0,85-2,3 (m, 20 H), 2,48 (m, 1 H) , 2,63 (m, 1 H), 2,87 (m, 1 H) , 3,05-3,25 (m, 1 H), 3,25-3,35 (m, 2 H), 3,38 (dd, 1 Η), 3.,-95-(m, 1 H), 4,08 (m, 1 H) , 4,88 (m, 1 H), 5,1-5,2 (m, 4 H), 5,9-6,3 (m, 1 H), 7,25-7,5 (m, 10 H), 8,00 e 8,08 (tripletos largos, 1 H, isómeros). 10 (iv) HO2C-CH2-(R)Cgl-Aze-Pac x 2 HC1
Bn02C-CH2-(R) Cgl-Aze-Pac (Z), 70 mg (0,11 mmol) , foi dissolvido em 5 mL de etanol, e foram adicionados Pd/C a 5% 15 e 0,1 mL de HC1 concentrado. A mistura foi hidrogenada à pressão atmosférica durante 1 h. Após filtração e
evaporação, o produto foi purificado através de RPLC preparativa utilizando NH4OAc a 0,1 M/CH3CN 4/1 como eluente. Após mudança do sal para o cloridrato e liofilização, o 20 composto do titulo foi obtido como uma mistura 45/55 de isómeros 1,4-cis- e trans- em relação à parte Pac da molécula. Rendimento: 40 mg (74%). 1H-RMN (500 MHz, D20) : δ 1,1-2,1 (m, 20 H) , 2,32 (m, 1 H) , 25 2,52 (m, 1 H) , 2,63 (m, 1 H) , 2,72 (m, 1 H) , 3,1-3,3 (m, 1 H), 3,40 (m, 1 H) , 3,8-3,95 (m, 2 H), 4,04 (d, 1 H) , 4,39 (m, 1 H) , 4,93 (m, 1 H). 13C-RMN (125 MHz, D20): carbonos de amidina e de carbonillo: δ 30 167,7, 172,0, 174,9 e 175,2.
Exemplo 53 -187- t Η-(R)Cha-Pro-Pac x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Pro-Pac (Z) 5 Foram adicionados 211 mg (1,1 mmol) de EDC a 0°C a uma solução agitada de 0,4 g (1,1 mmol) de H-Pac(Z) x 2 HCl (Ver preparação, dos materiais de partida), 0,4 g (1,1 mmol) •de1*' Boc-(R) Cha-Prõ-OH (Ver preparação de materiais de' partida)'," e 0,55 g de DMAP em 7 mL de acetonitrilo. A mistura de 10 reacção foi agitada a 0°C durante 1 h e à temperatura ambiente durante 2 h. O solvente foi removido em vácuo e o resíduo foi diluído com acetato de etilo e água. A fase orgânica foi lavada com ácido acético, água, e solução de hidrogenocarbonato de sódio e sêca(MgS04). A remoção do 15 solvente em vácuo produziu um resíduo que foi purificado por cromatografia "flash" utilizando acetato de etilo como eluente para produzir 196 mg (27%) do composto do título. (ii) H-(R)Cha-Pro-Pac(Z) * 20
Foi borbulhado cloreto de hidrogénio através de uma solução de 196 mg de Boc-(R) Cha-Pro-Pac (Z) em 25 mL de acetato de etilo. Após 10 minutos, a mistura de reacção foi diluída com cloreto de metileno e foi adicionada solução de hidróxido de 25 sódio. A fase aquosa foi extraída várias vezes com cloreto de metileno e as fases orgânicas combinadas foram secas (K2C03) e o solvente foi removido em vácuo para produzir 86 mg (52%) do composto do título. 30 (iii) H-(R)Cha-Pro-Pac x 2 HCl O composto do título foi preparado por hidrogenação de H-(R)Cha-Pro-Pac(Z) em etanol na presença de Pd/C a 10%. t Γ - 182- (iv) HOOC-CHa-(R)Cgl-Pro-Pig x 2 HC1
Foram hidrogenados 142 mg (0,176 mmol) de BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2 na presença de 0,88 mL de ácido clorídrico a 1 M, 5 10 mL de etanol (99,5%) e 180 mg de Pd/C a 5% durante 2 h. A remoção do catalizador por filtração em hyflo e filtro . millipore seguidos de evaporação do solvente . em. vácuo e liofilização produziram 95 mg de HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig x 2 HC1. Este material bruto (79% de pureza) foi purificado por 10 RPLC utilizando CH3CN/NH4OAC a 0,1 M 15/85 como eluente. A remoção do solvente e excesso de NH^OAc por liofilização, conversão a sal de ácido clorídrico por dissolução em ácido clorídrico a 1 M seguidos por liofilização produziram o composto do título. 15 XH-RMN (500 MHz, D20) ; δ 1,1-1,35 (m, 6H) , 1,63-2,14 (m, 13H), 2,26-2,36 (m, 1H), 3,01-3,23 (m, 4H), 3,49-3,62 (quart., 2H), 3,62-3,77 (m, 2H), 3,77-3,88 (d aparente, 2H), 4,18-4,32 (d, 1H), 4,37-4,5 (m,,lH). 20
Exemplo 51 H-(R)Cha-Aze-Pig x 2 HC1 25 (i) Boc-(R)Cha-Aze-Pig(Z) 2 A uma mistura bem agitada de 86 mg (0,243 mmol) de Boc-(R)Cha-Aze-OH (Ver preparação dos materiais de partida), 100 mg (0,236 mmol) de H-Pig(Z)2 (Ver preparação dos materiais de 30 partida) e 115 mg (0, 944 mmol) de DMAP em 5 mL de CH3CN, foram adicionados 50 mg (0,260 mmol) de EDC e a reacção foi agitada durante 20 h à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado e o resíduo foi -183 - -183 - Γ U, dissolvido em 70 mL de EtOAc e a fase orgânica foi lavada com 3 x 5 mL de KHS04 a 1 Μ, 1 x 5 mL de NaHCC>3, 3 x 5 mL de H2O, 1 x 5 mL de solução salina e seca (MgS04) . A filtração e evaporação do solvente produziu 141 mg de um óleo. O produto 5 bruto foi purificado por cromatografia "flash" (36 g de S1O2) utilizando um gradiente descontinuo de CH2Cl2/MeOH (97/3 seguido por 95/5) para· "produzir 43 mg (24%) do composto do titulo. ’ r " 10 (ii) H-(R)Cha-Aze-Pic(Z)2
Foi borbulhado cloreto de hidrogénio através de uma mistura de 43 mg (0,0565 mmol) de Boc-(R) Cha-Aze-Pig (Z) 2 em 10 mL de acetato de etilo durante 5 minutos. O solvente foi evaporado 15 em vácuo e foram adicionados acetato de etilo e solução de NaOH a 0,1 M. As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com água e solução salina e seca (Na2S04) . O solvente foi evaporado para produzir 38 mg, que foi sujeito a cromatografia·"flash" utilizando metanol saturado com NH3, a 20 10% em acetato de etilo como eluente para produzir 28 mg do produto desejado. 1H-RMN (300 MHz, CDCI3) ; Alguns sinais, especialmente no anel piperidina, são ^electivamente mais largos devido a um 25 processo intramolecular de troca. Isto é especialmente pronunciado para os grupos 2- e 6-CH2 do anel de piperidina, que exibia um pico largo variando desde 3,7 a 4,5 ppm. δ 0,75-1,85 (m, 18H), 2,35-2,53 (m, 1H) , 2,62-2,78 (m, 1H) , 2,8-3,0 (m, 2H), 3,0-3,28 (m, 2H), 3,28-3,37 (m, 1H), 3,97-30 4,18 (m, 2H), 4,8-4,9 (m, 1H), 5,1 (s, 4H) , 7,2-7,45 (m, 9H), 8,05-8,15 (m, 1H). (iii) H-(R)Cha-Aze-Pig x 2 HC1 -188- H-RMN (300 MHz, D2O; A ca: 1:1 mistura de isómeros 1-4-cis- e 1,4-trans- na parte Pac da molécula); δ 1,15-1,3 (q), 1,6-1,85 (m), 1,9-2,0 (m) , 2,0-2,1 (d), 2,1-2,15 (m), 2,15-2,2 (m) , 2,65-2,7 (m) , 2,7-2,8 (m), 2,95-3,0 (d), 3,15-3,2 (d), 5 5,4 (s), 7,45-7,55 (m).
Exemplo ^.54^ . "τα? '" · H-(R)Cgl-Ile-Pab x 2 HC1 10 (i) Boc-(R)Cgl-Ile-Pab(Z) A uma mistura agitada de 1,33 g (3,6 mmol) de Boc-(R)Cgl-Ile-OH (Ver preparação dos materiais de partida), 1,12 g 15 (3,9 mmol) de H-Pab(Z) (Ver preparação dos materiais de partida) e 1,76 g (14,4 mmol) de DMAP em 50 mL de CH3CN/DMF (1/1), foram adicionados 0,75 g (3,9 mmol) de EDC a +5°C. A mistura de reacção foi deixada alcançar a temperatura ambiente e foi deixada por 60 h. O CH3CN. foi removido por 20 evaporação e o resíduo foi vertido em 100 mL de água (formou-se um precipitado amarelo). A mistura foi extraída com 2 x 50 mL de EtOAc e a fase orgânica combinada foi lavada com 2 x 30 mL de NaHC03 (saturado) , 2 x 50 mL de HC1 a 0,2 Μ, 1 x 50 mL de solução salina e seca (MgSCM . Evaporação 25 seguida por cromatografia "flash" utilizando CH2CI2/THF (85/15) como eluente produziu 510 mg (24%) do composto do título. (ii) H-(R)Cgl-Ile-Pab(Z) 30
Foram dissolvidos 530 mg de Boc-(R) Cgl-Ile-Pab (Z) em 14 mL de CH2CI2/TFA (2,5/1) e agitou-se durante 2 h. à temperatura ambiente. Evaporação do solvente seguida de cromatografia "flash" utilizando CH2Cl2/MeOH (saturado -189-
? com NH3) (95/5) como eluente produziu o composto do título. 5 (iii) H-(R)Cgl-Ile-Pab x 2 HC1
Foram hidrogenados 75 mg (0,14 mmol') de H-(R)Cgl-Ile-Pab(Z) em Pd/C a 10% em 5 mL de EtOH, que continha um excesso de HC1 (g) para produzir o dicloridrato, a pressão atmosférica 10 durante 6 h. A adição de 2 g de carvão activado e 20 mL de EtOH seguida por filtração através de celite, evaporação do solvente e liofilização de água produziu 50 mg (89%) do composto do título como um pó branco. 15 XH-RMN (500 MHz, MeOD): δ 0,90 (t, 3H) , 0,94 (d, 3H), 1,1-2,0 (m, 14H) , 3,83 (bs, 1H) , 4,26 (d, 1H), 4,50 (m, 2H), 7,57 (bd, 2H), 7,78 (bd, 2H).
Exemplo 55 20 H-(R)Cgl-Aze-Pab A hidrogenação de 257 mg (5,08 mmol) de H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) (Ver Exemplo 1 (ii) ) em Pd/C a 5% em 6 mL de EtOH/H20 à 25 pressão atmosférica durante 6 h. seguida por filtração do catalizador, evaporação do solvente e liofilização da água produziu 200 mg (89%) do composto do título. 1H-RMN (500 MHz, D20): δ 1,0-2,0 (m, 11H), 2,25 (m, 1H), 2,70 30 (m, 1H), 3,30 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 4,30 (m, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,55 (m, 2H), 7,60 (m, 2H), 7,77 (m, 2H). EM m/z 372 (M+ + 1). - 190-
Exemplo 56 HOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab x HOAc 5 (i) BnOOC- (R, S) CH (Me) - (R) Cha-Pro-Pab (Z) » ·- . , o
Foram arrefecidos a -10°C 0,250 g (0,47 mmol) de H-(R)Cha-Pro-Pab (Z) (Ver Exemplo 15) dissolvidos em 5 mL de CH2CI2 e 10 foram adicionados lentamente 150 mg (0,48 mmol) de
TfOCH2COOBn (Ver preparação dos materiais de partida) dissolvidos em 3 mL de CH2CI2. Foram adicionados 200 mg (1,45 mmol) de carbonato de potássio e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 20 h. A mistura foi diluída com 15 CH2C12, extraída com água e seca (MgS04) . A evaporação do solvente seguida por cromatografia "flash" utilizando CH2Cl2/MeOH 9/1 como eluente produziram 150 mg (46%) do composto do título. 20 (ii) H00C-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab x HOAc
Foram hidrogenados 150 mg (0,2 mmol) de BnOOC-(R,S)CH(Me)-(R) Cha-Pro-Pab (Z) em 50 mg de Pd/C a 5% em 20 mL de EtOH à pressão atmosférica durante 4 h. A filtração do catalizador, 25 evaporação do solvente seguidos por purificação por RPLC, utilizando CH3CN/NH4OAC a 0,1 M 1/4 como eluente, produziu 35 mg (37%) do composto do título. 1H-RMN (500 MHz, MeOD) : δ 1,00 (m, 1H) , 1,20-1, 45 (m, 5H) , 30 1,5 (m, 1H), 1,6-1,8 (m, 6H), 1,9-2,1 (m, 6H), 2,25 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 3,5 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 4,15 (m, 1H), 435-4,6 (m, 3H) , 4,9 (m, parcialmente escondido pela linha HOD, 6H), 7,55 (d, 2H), 7,75 (d, 2H). -191- r
Exemplo 57
MeOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab x 2 HC1 5 (i) MeOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab(Z)
Foram dissolvidos 0,186 g (0,841 mmol) de TfO-GHsrrOQOMe. (Ver preparação dos materiais de partida)* ém CH2CI2 e lentamente adicionados a uma mistura de 0,425 g (0,841 mmol) de H-10 (R)Cgl-Aze-Pab(Z) (Ver Exemplo 1), 0,894 g (5,04 mmol) de K2CO3 em CH2C12 (no total 4,3 mL) à temperatura ambiente e agitou-se durante a noite. Foi adicionado mais" CH2CI2 e a mistura foi lavada com água e salino, seca, filtrada e o solvente foi evaporado em vácuo para produzir 0,51 g de um 15 resíduo que foi três vezes sujeito a cromatografia "flash" em gel de sílica utilizando, primeiro CH2Cl2/THF/MeOH (16/4/1), depois CH2C12/THF(NH3 a 2%) (8/2) e a última vez éter dietílico/MeOH (saturado com NH3) (95/5) como eluente. Isto produziu 0,324 g (67%) do composto do título. 20 (ii) MeOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HC1
Foram hidrogenados 220 mg (0,38 mmol) de Me00C-CH2~ (R) Cgl-Aze-Pab (Z) na presença de 1,14 mL de HC1 a 1 N, 6,5 mL de 25 MeOH e 300 mg de Pd/C durante 2 h. A remoção do catalizador por filtração em celite e filtro millipore seguidas por evaporação do solvente en vácuo e duas vezes liofilização produziram 178 mg (91%) do composto do título. 1H-RMN (500 MHz, D20) : δ 1,12-1,4 (m, 5H) , 1,68-1,81 (m, 2H) , 1,81-1,9 (m, 3H) , 1,97-2,1 (m, 1H) , 2,29-2,4 (m, 1H) , 2,68-2,8 (m, 1H) , 3,86 (s, 3H) , 4,1 (s, 2H) , 4,1-4,5 (d, 1H), 4,36-4,42 (t, 2H) , 4,59 (s, 2H) , 4,99-5,04 (m, 1H) , 7,65-7,7 (d, 2H), 7,8-7,85 (d, 2H). 30 -192- -192-
IL·^ 13C-RMN (75 MHz, MeOD): carbonos de amidina e de carbonillo; δ 146,78, 167,68, 168,15 e 172,29. 5
Exemplo 58
EtOOC-CH2- (R) Cgl-Azte-Pab "~x 2 HC1 10 (i) EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab (Z)
Foram dissolvidos 0,208 g (0,876 mmol) de TfO-CH2-COOEt (Ver preparação de matérias primas) em CH2CI2 e lentamente adicionados a uma mistura de 0,443 g (0,876 mmol) de H-15 (R)Cgl-Aze-Pab(Z) (Ver Exemplo 1) e 0,931 g (5,26 mmol) de K2CO3 em CH2CI2 (no total 4 mL) arrefecidos num banho de gelo. Após 2 h o banho de gelo foi removido e a agitação foi continuada à temperatura ambiente durante 2 horas. Foi adicionado mais -CH2C12 e a mistura foi lavada com água e 20 solução salina, seca, filtrada e o solvente foi evaporado sob vácuo para originar 0,51 g de um resíduo que foi sujeito a cromatografia "flash" utilizando éter dietílico/MeOH (saturado com NH3) (95/5) como eluente. Isto originou 0,387 g (75%) do composto do título. 25 (ii) EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HC1
Foram hidrogenados 395 mg (0,668 mmol) de EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z), na presença de 12 mL de EtOH (99,5%) e 390 mg de 30 Pd/C durante 5 h. A remoção do catalisador através de filtração em celite e filtro millipore, seguida por evaporação do solvente sob vácuo e liofilização duas vezes, produziu 281 mg (88%) de EtOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab. Foram -193 -
adicionados 2 equivalentes de HC1 a 1 N e liofilização três vezes produziu 288 mg (81%) do composto do titulo. 1H-RMN (500 MHz, D20); δ 1,05-1,48 (m, 8H), 1,6-2,05 (m, 6H), 5 2,15-2,33 (m, 1H), 2,58-2,79 (m, 1H), 3,89-4,0 (m, 3H), 4,2- 4,33 (m, 3H), 4,33-4,44 (m, 1H) , 4,44-4,66 (m, 2H), 4,91 (m, 1H (parcialmente mascarado pelo sinal H-O-D) ) , 7,54-7,63_^(d/*-.:t. 2H) , 7,-72-7,84 (d, 2H) . ·. - 10 Exemplo 59 ”BuOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab x HOAc (i) nBuOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) 15
Preparado do mesmo modo que o descrito para nHexOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) (Ver Exemplo 60 (i)) utilizando TfO-CH2- COOnBu como agente alquilante. O produto bruto foi purificado por cromatografia "flash" duas vezes, primeiro_ utilizando 20 CH2Cl2/MeOH (95/1) como eluente e depois CH2Cl2/álcool i-isopropílico (90/7) para produzir 324 mg (47%) do composto do titulo. (ii) nBuOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab x HOAc 25 A desprotecção foi realizada de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 57 (ii). O material bruto foi purificado por RPLC utilizando CH3CN (30%) em NH4OAc a 0,05 M e HOAc a 0,05 M como eluente para produzir 100 mg (53%) do composto 30 do título. 1H-RMN (300 MHz, MeOD); δ 0,85-2,1 (m, 18H) , 2,15-2,37 (m, 1H), 2,58-2,8 (m, 1H) , 3,7-5,0 (m, 10H), 4,88-5,0
-194 - (parcialmente mascarado pelo sinal H-O-D)), 7,46-7,65 (d, 2H), 7,71-7,88 (d, 2H). 13C-RMN (75 MHz, MeOD): carbonos de amidina e de carbonillo; 5 δ 146,8, 168,12, 168,2, 172,2. • ‘ Exemplo 60 nHexOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab x 2 HC1 10 (i) nHexOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
Foram dissolvidos 0,402 g (1,375 mmol) de TfO-CH2~COOnHex (Ver preparação de matérias primas) em CH2CI2 e lentamente 15 adicionados a uma mistura de 0,695 g (1,375 mmol) de H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) (Ver Exemplo 1), 1,463 g (8,25 mmol) de K2CO3 em CH2CI2 (no total 4 mL) a <-10°C. Após lho banho de C02-gelo foi removido e a agitação continuou à temperatura ambiente durante 45 minutos. Foi adicionado mais CH2C12 e a 20 mistura foi lavada com água e solução salina, seca, filtrada e o solvente foi evaporado sob vácuo para produzir 0,828 g de um residuo, que foi duas vezes sujeito a cromatografia "flash", primeiro utilizando éter dietilico/MeOH(saturado com NH3) (95/5), e depois CH2Cl2/MeOH (saturado com NH3) (95/5) 25 como eluente. Isto produziu 0,42 g (47%) do composto do titulo. (ii) nHexOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HC1 30 A hidrogenação de 400 mg (0,617 mmol) de nHexOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab (Z) na presença de 12 mL de THF e 400 mg de Pd/C durante 1,5 h não produziu desprotecção completa. A hidrogenação foi completada em 4 h na presença de 1,7 mL de HC1 a 1 N, 12 mL de MeOH e 340 mg de Pd/C. A remoção do -195 - fj- <U ^ catalisador por filtração em celite e filtro millipore, seguida por evaporação do solvente sob vácuo e liofilização duas vezes, produziu 287 mg (79%) do composto do titulo. 5 1H-RMN (300 MHz, MeOD) ; δ 0,8-2,13 (m, 22H), 2,13-2,31 (m, 1H), 2,61-2,81 (m, 1H), 3,93-4,15 (m, 3H), 4,15-4,37 (m, 3H) , 4,37-4,7 (m, 3H), 4,88-5,0 (m, 1H) (parcialmente 10 mascarado pelo sinal de H-O-D)), 7, 52-7,69 (d, 2H), 7,75-7,9 (d, 2H). 13C-RMN (75 MHz, MeOD): carbonos de amidina e de carbonillo; δ 146,84, 167,67, 167,84, 172,17. 15
Exemplo 61 H-(R)Cgl-Pro-Pac x 2 HC1 20 (i) Boc-(R)Cgl-Pro-Pac(Z)
Foram adicionados 377 mg (1,97 mmol) de EDC a 0°C a uma solução agitada de 708 mg (1,95 mmol) de Boc-(R)Cgl-Pro-OH (Ver preparação de matéria prima), 714 mg (2,0 mmol) H-25 Pac(Z) x 2 HC1 (Ver preparação de matéria prima) e 1, 078 g (8,8 mmol) de DMAP em 12,5 mL de acetonitrilo. A mistura de reacção foi deixada atingir a temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi primeiro purificado por cromatografia "flash", utilizando 30 metanol a 10% em cloreto de metileno como eluente, e subsequentemente por RPLC. Foram isoladas duas fracções (51 mg e 150 mg) produzindo EM m/z = 626 (M + 1). (ii) H-(R)Cgl-Pro-Pac (Z) - 196- - 196-
U
Foi borbulhado cloreto de hidrogénio numa solução de 141 mg (0,22 mmol) de Boc-(R) Cgl-Pro-Pac (Z) em 50 mL de acetato de etilo. Após 15 minutos foi adicionada uma solução de 5 carbonato de sódio a 10% e a fase orgânica •'' -1 " ,-» foi separada e seca (K2CO3) . A evaporação do solvente produziu 71 mg (61%) do produto. 10 (iii) H-(R)Cgl-Pro-Pac x 2 HC1
Uma mistura de 71 mg (0,14 mmol) de H-(R)Cgl-Pro-Pac(Z) e uma pequena espátula de Pd/C a 10% em 10 mL de etanol foi 15 hidrogenada à temperatura ambiente e pressão atmosférica durante 2 h. 0 catalisador foi removido por filtração e o solvente foi removido sob vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em 50 mL de água e 0,6 g de ácido clorídrico a 1 Μ. A liofilização produziu 38 mg (58%) do composto do título. 20 EM m/z 392 (M + 1)
Exemplo 62 25 HOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pac x HOAc (i) BnOOC-CH2-(R) Cha-Pro-Pac(Z)
Uma mistura de 84 mg (0,15 mmol) de H-(R)Cha-Pro-Pac(Z) (Ver 30 Exemplo 53 (ii)), uma espátula de carbonato de potássio e 47 mg de Tf0CH2-C00Bn (Ver preparação de matérias primas) em 3 mL de cloreto de metileno foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reacção foi filtrada e o solvente foi removido sob vácuo para produzir um resíduo que -197 - f u foi sujeito a cromatografia "flash" utilizando acetato de etilo/cloreto de metileno/metanol 95:20:5 como eluente. Foram isolados 29 mg do produto desejado. 5 (ii) HOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pac x HOAc
Uma mistura de 20 mg- de BríOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pac (Z) e 37 mg de Pd-C a 10% em 5 mL de etanol foi agitada durante 4 h à 10 temperatura ambiente e pressão atmosférica. A filtração do catalisador seguida por remoção do solvente e purificação por RPLC produziu o componente desejado. EM m/z = 464 (M + 1). 15
Exemplo 63 HOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Pro-Pac 20 (i) BnOOC-CH2-CH2-(R) Cgl-Pro-Pac (Z)
Uma solução de 0,35 g (0,64 mmol) de H-(R)Cgl-Pro-Pac(Z) (Ver Exemplo 61 (ii) ) , 124 mg (0,76 mmol) de acrilato de benzilo e 280 μΐ (2 mmol) de trietilamina em 1 mL de etanol 25 foi mantida à temperatura ambiente durante 3 dias. A remoção do solvente seguida de purificação por HPLC produziu 18 mg (4%) do composto do titulo. (ii) HOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Pro-Pac 30
Uma mistura de 18 mg de BnOOC-CH2~CH2- (R) Cgl-Pro-Pac (Z) e uma pequena espátula de Pd/C a 10% foi hidrogenada durante 2 h à temperatura ambiente e pressão atmosférica em EtOH. A filtração seguida por remoção do solvente sob vácuo e f Lc, \1 -198- dissolução em água e liofilização produziu 7 mg (78%) do composto do título. EM m/z =464 (M + 1).
Exemplo 64 5 HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pac (i) " Boc-(R)Cha-Aze-Pac(Z) > 10 Uma solução de 0,4 g (1,38 mmol) de H-Pac(Z) (Ver preparação de matéria prima de H-Pac(Z) x 2 HC1) , 0,5 g (1,41 mmol) de Boc-(R)Cha-Aze-OH(Ver preparação de matéria prima) e 0,67 g (5,5 mmol) de DMAP em 20 mL de acetonitrilo foi misturada a 0°C com uma solução de 0,26 g (1,4 mmol) de EDC em 15 mL de 15 acetonitrilo. A mistura de reacção foi mantida à temperatura ambiente durante a noite e o solvente foi subsequentemente removido sob vácuo. 0 resíduo foi fraccionado entre acetato de etilo e água. A fase aquosa foi extraída mais uma vez com acetato de etilo e as fases orgânicas combinadas foram 20 lavadas com solução de hidrogenos-sulfato de sódio, solução de carbonato de sódio e solução salina e depois seca (sulfato de sódio). A evaporação do solvente produziu 0,54 g (63%) do composto do título. 25 (ii) H-(R)Cha-Aze-Pac(Z)
Foi borbulhado cloreto de hidrogénio numa solução de 0,54 g (0,9 mmol) de Boc-(R)Cha-Aze-Pac(Z) em acetato de etilo. A solução foi mantida no frigorífico durante a noite e o 30 solvente foi então removido sob vácuo e o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo. A solução foi lavada com solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio, água e solução salina e seca (sulfato de sódio). A remoção do solvente produziu 0,35 g (77%) do produto. -199- (iii) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pac (Z) Uma solução de 180 mg (0,33 mmol) de H-(R)Cha-Aze-Pac (Z) e 5 53 mg (0,33 mmol) de acrilato de benzilo em etanol foi mantida à temperatura ambiente durante 60 h. 0 solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi dissolvido em ·<·. „
15 acetato de etilo. A solução foi lavada com solução de hidrogenossulfato de potássio e solução salina. A secagem (sulfato de sódio) e a remoção do solvente sob vácuo produziu um resíduo que foi purificado por cromatografia "flash", utilizando metanol a 10% em cloreto de metileno como eluente para produzir 150 mg (66%) do composto do título. (iv) HOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Aze-Pac x 2 HC1 20 25
Uma mistura de 115 mg de BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pac(Z) e 67 mg de Pd/C a 10% em 10 mL de etanol foi hidrogenada durante 1,5 h à temperatura ambiente e pressão atmosférica. A filtração seguida de remoção do solvente sob vácuo e dissolução do resíduo em água e 1,5 mL de ácido clorídrico a 1M produziram uma solução que foi liofilizada para produzir 30 mg (33%) do composto do título. EM m/z 464 (M + 1) .
Exemplo 65 30 HOOC-CHj-(R) Cha-Aze-Pig x 2 HC1 (i)
Boc-(R)Cha-Aze-Pig(Z) 1 -200- -200-
Γ
Foi adicionado 0,249 g (1,298 mmol) de EDC a <-15°C a uma mistura de 0,473 g (1,236 mmol) de Boc-(R)Cha-Aze-OH (Ver preparação de matérias primas), 0,404 g (1,236 mmol) de H-Pig(Z) x HC1 (Ver preparação de matérias primas) e 0,604 g 5 (4,94 mmol) de DMAP em 13,5 mL de DMF. A temperatura foi deixada subir até à temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi evaporado -sOb^vácuo e foi adicionado EtOAc e KHS04 a 2 M. 10 Foram separadas as fases e a fase orgânica foi lavada com
Na2C03 saturado e solução salina. Repetição do procedimento extractivo, secagem (Na2S04) , filtração e evaporação dos solventes produziram 0,612 g de um resíduo que foi sujeito a cromatografia "flash" utilizando EtOAc/MeOH 9/1 como 15 eluente. Isto produziu 407 mg (53%) do composto do título. (ii) H-(R)Cha-Aze-Pig(Z)
Foram dissolvidos 0,4 g (0,638 mmol) de Boc-(R)Cha-Aze-, 20 Pig(Z) em 24,4 mL de TFA/CH2C12 1/4, agitado durante 30 minutos num banho de gelo e durante 30 minutos à temperatura ambiente. O solvente foi removido sob vácuo e foram adicionados EtOAc e Na2C03 saturado. As fases foram separadas e a camada orgânica foi lavada com água e solução salina, 25 seca (Na2S04), filtrada e o solvente foi evaporado sob vácuo para produzir 336 mg (100%) do composto do título. (iii) BnOOC-CH2- (R) Cha-Aze-Pig (Z) 30 Foram lentamente adicionados 89 mL (0,562 mmol) de BnOOC-CH2-Br a uma mistura de 0,296 g (0,562 mmol) de H-(R) Cha-Aze-Pig (Z) e 0,171 g (1,236 mmol) de K2C03 em 6 mL de CH3CN aquecido a 60°C em banho de óleo. Após 1 h 45 minutos o solvente foi evaporado, foi adicionado EtOAc e a mistura foi
- 201 - lavada com água, seca (Na2C03) r filtrada e o solvente foi evaporado sob vácuo para produzir 346 mg de um resíduo que foi sujeito a cromatografia "flash" utilizando CH2Cl2/THF/MeOH (8/2/1) como eluente. Isto produziu 297 mg 5 (78%) do composto do título. (iv) ' HOOG-GH2- (R) Cha-Aze-Pig x 2 HC1 i 10 Foram hidrogenados 243 mg (0,36 mmol) de BnOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pig (Z) na presença de 1,7 mL de HC1 a 1 N, 10 mL de EtOH (99,5%) e 300 mg de Pd/C durante 2 h. A remoção do catalisador por filtração em celite e filtro millipore, seguida por evaporação do solvente sob vácuo e liofilização 15 duas vezes produziram 166 mg (88%) do composto do título. 1H-RMN (500 MHz, D20); δ 0,6-1,9 (m, 18H), 2,1-2,27 (m, 1H) , 2,52-2,76 (m, 1H) , 2,82-3,2 (m, 4H) , 3,46-3,61 (m, 1H), 3,61-3,81 (m, 2H), 3,81-4,0 (m, 2H), 4,0-4,24 (m, 2H), 4,24-20 4,4 (m, 1H).
Exemplo 66 HOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pig x 2 HC1 25 (i) Boc-(R)Cha-Pro-Pig(Z) A uma mistura de 0,3495 g (0,95 mmol) de Boc-(R)Cha-Pro-OH (Ver preparação de matérias primas), 0,464 g (3,8 mmol) de 30 dmap, 0,310 g (0,95 mmol) de H-Pig(Z) x HC1 (Ver preparação de matérias primas) em 5 mL de CH2CI2 foram adicionados 0,192 g (1 mmol) de EDC e a mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura foi evaporada e o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo. A fase orgânica foi -202- lavada duas vezes com KHSO4 a 0,3 M e uma vez com solução salina. A camada orgânica foi seca (Na2S04), filtrada e evaporada. 0 produto bruto foi purificado por cromatografia "flash" utilizando um gradiente descontinuo de CH2Cl2/MeOH 5 (100/0, 97/3, 95/5, 90/10) como eluente para produzir 307 mg do composto do titulo. (ii) H-(R)Cha-Pro-Pig(Z) 10 Foram dissolvidos 0,306 g (0,48 mmol) de Boc-(R)Cha-Pro-Pig (Z) em 30 mL de acetato de etilo saturado com HC1. A mistura foi deixada em repouso durante meia hora. 0 solvente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em CH2C12. A camada orgânica foi lavada duas vezes com NaOH a 0,2 Μ. A camada 15 aquosa combinada foi extraída uma vez com CH2C12 e a camada orgânica combinada foi seca (Na2S04), filtrada e evaporada para produzir 257 mg (99%) do composto do título. (iii) BnOOC-CH2- (R)Cha-Pro-.Pig(Z) 20
Uma mistura de 0,256 g (0,473 mmol) de H-(R)Cha-Pro-Pig(Z), 0,144 g (1,04 mmol) de K2C03 e 82 μΐ (0,521 mmol) de bromoacetato de benzilo em 6 mL de acetonitrilo foi aquecida a 60°C durante duas horas durante agitação. O solvente foi 25 evaporado e o resíduo foi dissolvido em CH2C12, lavado uma vez com água e uma vez com solução salina, seco (Na2S04), filtrado e o solvente evaporado. 0 produto bruto foi purificado por cromatografia "flash" utilizando um gradiente descontínuo de CH2Cl2/MeOH (97/3, 95/5, 90/10) como eluente 30 para produzir 0,2 q de produto (90% puro de acordo com RPLC). A purificação final foi realizada num chromatotron (Harrison research, modelo 7924T) numa placa de sílica de 2 mm em CH2Cl2/MeOH 95/5 produzindo 0,158 g (48%) do produto puro. % • U 1
-203- (iv) HOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pig x 2 HC1
Foram misturados 0,158 g (0,227 mmol) de Bn00C-CH2-(R)Cha-5 Pro-Pig(Z) com 0,075 g de Pd/C (5%), 1,0 mL de solução de . HC1 a 1 N e 10 mL de etanol. A mistura foi hidrogenada a pressão atmosférica durante uma hora. A filtração através de celite e evaporação do solvente por . - 10 liofilização da água duas vezes produziu 119 mg (97%) do produto 1H-RMN (D20, 300 MHz) : δ 0, 95-1,44 (m, 7H) , 1,52 (m, 1H) , 15 1,60-2,20 (m, 13H) , 2,39 (m, 1H) , 3,07-3,32 (m, 4H) , 3,68 (m, 1H), 3,77-4,02 (m, 5H; deste 3,98 (s, 2H), 4,44-4,58 (m, 2H) 13C-RMN (D2O, 75 MHz): carbonos carbonilo e guanidina: δ 20 156,5, 168,3, 174,5
Exemplo 67 HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pig x 2 HC1 25 (i) BnOOC-CH2-CH2- (R)Cha-Pro-Pig(Z)
Foram dissolvidos 0,297 g (0,55 mmol) de H-(R)Cha-Pro-Pig(Z) (Ver Exemplo 66 (ii) ) em 2 mL de etanol e foi adicionado 90 30 μΐ (0,59 mmol) de acrilato de benzilo. A mistura de reacção foi agitada durante quatro dias à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado e o produto bruto foi sujeito a cromatografia num chromatotron (Harrison research, modelo 7924T) utilizando uma placa de sílica de 2 mm com um -204- r'u^ gradiente descontínuo de CH2Cl2/MeOH (95/5, 90/10) como eluente para produzir 0,338 g (87%) do composto do título. (ii) HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pig x2 HC1 5
Foram misturados 0,238 g (0,227 mmol) de BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-'Pro-Pig(Z) com 0,120 g de Pd/C (5%), ^--1,-2- mL. de solução de HC1 a 1 N e 15 mL de etanol. A mistura foi hidrogenada à pressão atmosférica durante uma hora. A 10 filtração do catalisador através de celite e evaporação do solvente seguida de liofilização de água duas vezes produziram 178 mg (95%) do composto do título. 15 1H-RMN (D20, 300 MHz) : δ 0,82-1,45 (m, 8H) , 1,45-2,15 (m, 13H) , 2,29 (m, 1H), 2,83 (t, 2H), 2,9-3,4 (m, 6H) , 3,57 (bq, 1H), 3,67-3,87 (m, 3H), 4,25-4,43 (m, 2H) 13C-RMN (D20, 75 MHz): carbonos carbonilo e guanidina: δ 20 156,3, 168,2, 174,3, 174,6 EM m/z 479 (M++l)
Exemplo 68 25 (HOOC-CH2)2“ (R)Cgl-Pro-Pig x 2 HC1
Foram hidrogenados 120 mg (0,126 mmol) de (BnOOC-CH2) 2-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2 (Ver Exemplo 50 (iii)) na presença de 0,75 30 mL de HC1 a 1 N, 7 mL de EtOH (99,5%) e 150 mg de Pd/C durante 4 h. A remoção do catalisador por filtração de celite e filtro millipore e evaporação do solvente sob vácuo seguido de liofilização produziram 66 mg (90%) do composto do título. -205- -205- t Γ 1H-RMN (500 MHz, D20) ; δ 1,05-1,38 (m, 7H), 1,53-1, 64 (d, 1H), 1,64-2,14 (m, 11H), 2,27-2,39 (m, 1H), 3,03-3,28 (m, 4H) , 3,58-3,70 (m, 1H) , 3,7-3,8 (m, 1H) , 3,8-3,9 (d, 2H) , 5 4,07-4,22 (m, 2H), 4,22-4,35 (m, 1H), 4,38-4,5 (m, 1H) . 13C-RMN (75 MHz, D20) : carbonos 'de amidina e de carbonillo; δ 156,28, 166,73, 170;14, 174,01. ; 10
Exemplo 69 HOOC-CH2-CH2- (HOOC-CH2) - (R) Cha-Pro-Pig x 2 HC1 15 (i) BnOOC-CH2-CH2-(BnOOC-CH2)-(R) Cha-Pro-Pig (Z) A uma mistura fria (temperatura de banho de gelo) de 100 mg (0,14 mmol) de BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pig(Z) (Ver Exemplo 67 (i)) e 80 mg (0,57 mmol) de carbonato de potássio em 4 ml 20 de CH2C12 foi adicionada cuidadosamente uma solução de 64 mg (0,21 mmol) de TfO-CH2-COOBn dissolvidos em 1 mL de CH2C12. A mistura de reacção foi deixada a 0°C durante 30 minutos e depois deixada atingir a temperatura ambiente durante 2 h após as quais foi aquecida até ao refluxo durante 30 minutos 25 e finalmente deixada durante a noite à temperatura ambiente. A evaporação do solvente seguida por cromatografia "flash" utilizando CH2Cl2/MeOH (97/3) como eluente originou 65 mg (54%) do composto do titulo. 30 (i.i) HOOC-CH2-CH2-(HOOC-CH2) - (R) Cha-Pro-Pig x 2 HC1
Foram dissolvidos 65 mg (0,08 mmol) de BnOOC-CH2-CH2-(BnOOC-CH2)-(R) Cha-Pro-Pig (Z) em 10 mL de EtOH/HCl a 1 M (9/1) e hidrogenados sobre Pd/C a 10% durante 3 h a pressão -206-
atmosférica. A filtração do catalisador, evaporação do solvente seguido por liofilização de água produziram 40 mg (97%) do composto do titulo como um pó branco. 5 13C-RMN (125 MHz, MeOD): carbonos de amidina e de carbonilo: δ 157,5, 167,2, 169,1, 173,7 e 174,1. 10
Exemplo 70 HOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-(R,S) Itp x 2 HC1 15 (i) Boc-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts)
Boc-(R)Cgl-Aze-OH (Ver preparação de matérias primas) (400 mg, 1,17 mmol), H-(R,S)Itp(Ts) (Ver preparação de matérias primas) (366 mg, 1,23 mmol) e DMAP (286 mg, 2,34 mmol) foram 20 dissolvidos em CH3CN (6 mL) e arrefecidos a 5°C. Foi adicionado EDC (236 mg, 1,23 mmol) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. O CH3CN foi removido e o resíduo foi dissolvido em MeOH/EtOAc/foO. A camada orgânica separada foi lavada com K2CO3 (sat), KHSO4 a 25 2 M, solução salina e seca (Na2S04). A evaporação do solvente resultou num sólido branco, 688 mg (85%). EM m/z 620 (M+ + 1) 30 (ii) H-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts)
Boc-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts) (500 mg, 0,8 mmol) foi dissolvido em CH2C12 (50 mL) e foi borbulhado HC1 (g) através da solução durante cerca de 4 min. Após 45 min o solvente -207-
-207- 'V
U κ foi removido por evaporação e o produto resultante foi dissolvido em Et0Ac/Me0H/H20 e a solução acidica foi tratada com NaOH(aq) a 2 M até pH = 8-9. A camada orgânica foi separada e seca (Na2S04) . A evaporação do solvente resultou 5 em 425 mg (100%) do composto do titulo como um sólido branco. EM m/z 520 (M+ +1) 10 (iii) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts) H-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts) (400 mg, 0,77 mmol), 2-(para-15 nitrobenzenossulfoniloxi)acetato de benzilo (Ver preparação de matérias primas) (325 mg, 0,92 mmol) e K2CO3 (235 mg, 1,7 mmol) foram agitados em CH3CN (5 mL) a 45°C. Após algumas horas a conversão foi de apenas 25% e consequentemente a temperatura foi aumentada para . 60°C e foi adicionada uma 20 quantidade adicional de 2-(para- nitrobenzenossulfoniloxi)acetato de benzilo. A reacção foi agitada durante 48 h, (m de partida:produto/25:63), e depois processada. O solvente foi evaporado e foi adicionado Et0Ac/H20 ao resíduo. As fases 25 foram separadas e a fase aquosa foi lavada duas vezes com EtOAc e depois a fase orgânica combinada foi lavada com K2C03(sat), KHSO4 a 2 M, H20 e seca (Na2S04) . Isto resultou, após retro-extracção do KHS04 acídico, uns 340 mg que foram purificados por RPLC. Isto produziu 34 mg (7%) do composto 30 do titulo. EM m/z 668 (M+ + 1). (iv) HOOC-CH2~(R) Cgl-Aze-(R,S) Itp x 2 HC1 Χλ -208-
BnOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-(R, S) Itp (Ts) (34 mg, 0,05 mmol) foi dissolvido em THF (5 mL) e NH3(g) foi destilado (40 mL) para o frasco de reacção com um refrigerador de gelo seco. Foi 5 adicionado Na(s) e apareceu uma cor azul profunda. A reacção foi agitada durante 5 min antes de ter sido interrompida com HOAc (50 pL). O refrigerador de gelo seco foi removido e o NH3(1) foi deixado evaporar. Foram adicionados ao resíduo H20 e HOAc até pH = 7. A liof ilização e RPLC preparativa 10 produziram várias fracções que foram analisadas com FAB-EM. Duas fracções continham o composto desejado, 3 mg (10%) após liofilização com 2,2 eq de HC1 a 1 M: 15 EM m/z 424 (M+ + 1) .
Exemplo 71
HOOC-CH2- (R) Cha-Aze- (R, S) Itp , A 20 (i) Boc-(R) Cha-Aze-(R, S) Itp (Ts)
Boc-(R)Cha-Aze-OH (Ver preparação de matérias primas) (169 mg, 0,5 mmol), H-(R,S)Itp(Ts) (Ver preparação de matérias 25 primas) (155 mg, 0,52 mmol), DMAP (122 mg, 1 mmol) foram dissolvidos em CH3CN (2,5 mL) e arrefecidos a 5°C. Foi adicionado EDC x HC1 (115 mg, 0,6 mmol) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Foram adicionados (0,5 eq) extra de H-(R,S)Itp(Ts) e 30 F.nc após agitação durante a noite. A mistura de reacção foi agitada durante mais uma noite e processada como descrito no caso de Boc-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts) acima (Ver Exemplo 70). Isto produziu 260 mg do produto bruto. A purificação por RPLC produziu 180 mg (57%) do composto do título
-209- EM m/z 634 (M+ + 1) . (ii) H- (R) Cha-Aze- (R, S) Itp (Ts) 5
Boc-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts) (180 mg, 0,28 mmol) foi dissolvido em CH2CI2 (20 mL) e foi borbulhado HC1 (g> natçavés da solução durante cerca de 1 min. Após '45 min o solvente foi removido por evaporação e o produto resultante foi 10 dissolvido em CH2CI2 e lavado com NaOH a 2 M até pH = 8-9. As fases foram separadas e a fase orgânica foi seca (Na2S04) e evaporada para produzir 163 mg (cerca de 100%): 15 EM m/z 534 (M+ + 1). (iii) BnOC-CH2-(R) Cha-Aze- (R,S) Itp (Ts) H-(R) Cha-Aze-(R, S) Itp (Ts) (80 mg, 0,15 mmol), K2CO3 (45 mg, 20 0,33 mmol) e Br-CH2COOBn (39 mg, 0,17 mmol) foram agitados em CH3CN (1,5 mL) a 60°C durante 2,5 h. O solvente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em EtOAc/H20. As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com ácido cítrico a 10% e seca (Na2SC>4) . A evaporação do solvente produziu 171 mg 25 de produto bruto, que foi purificado por RPLC produzindo 53 mg (52%) do composto do título. EM m/z 681 (M+ + 1). 30 (iv) H00C-CH2-(R) Cha-Aze-(R,S) Itp
BnOOC-CH2-(R) Cha-Aze-(R, S) Itp (Ts) (50 mg, 0,07 mmol) foi tratado como descrito para BnOOC-CH2- (R) Cgl-Aze- (R, S) Itp (Ts) (Ver Exemplo 70 (iv)). Isto produziu uma mistura de produto -210- P Lei que foi purificada numa RPLC produzindo 12 mg de uma mistura 1:1 do composto do título juntamente com uma forma reduzida que aparece a uma massa de 439 (m/z). 5 EM m/z 438 (M+ + 1)
Exemplo 72 <- H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp x 2 HC1 10 (i) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Ts) 15 Foi dissolvido à temperatura ambiente 2,1 g (5,5 mmol) de Boc-(R)Cha-Pic-OH (Ver preparação de matérias primas), 1,0 g (8,2 mmol) de DMAP e 1,7 g (5,8 mmol) de H-(R,S)Itp(Ts) (Ver preparação de matérias primas), em 40 mL de acetonitrilo. Após alguns minutos de agitação foi adicionado 1,1 g (5,8 20 mmol) de EDC e a agitação foi continuada durante 60 horas. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi dissolvido em CH2CI2» lavado com água, KHS04 e KHCO3 (aq) a 0,3 M e seco (Na2S04) . A evaporação do solvente e filtrado através de gel de silíca produziu 2,43 g (67%) do produto. 25 EM m/z 661 (M+ + 1) (ii) Boc-(R)Cha-Pic-(R, S)Itp 30 Foram dissolvidos 2,4 g (3,6 mmol) de Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Ts) em 15 mL de THF e NH3 (g) foi condensado para um frasco seguido de adição de Na. A reacção foi interrompida após 5 min com ácido acético e ο NH3 e o THF foram evaporados. 0 resíduo foi liofilizado de água e purificado
-211- por RPLC (CH3CN/NH4OAC a 0,1 M, 6/4) para produzir 0,93 g (51%) do produto desejado. EM m/z 507 (M+ + 1) 5 (iii) H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp x 2 HC1 · M *; '*, À temperatura ambiente, 50 mg (0,099 mmol) de Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp foram dissolvidos em acetato de etilo saturado 10 com HC1 (g) . Após agitação durante 2 h, o solvente foi removido sob vácuo. O resíduo foi liofilizado de água três vezes para produzir 35 mg (74%) do produto desejado. 15 EM m/z 407 (M+ + 1)
Exemplo 73 HOOC-GH2-(R) Cha-Pic-(R,S) Itp x 2 HC1 20 (i) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z) À temperatura ambiente, 0,84 g (1,66 mmol) de Boc-(R)Cha-Pic- (R,S) Itp (Ver Exemplo 72) foi dissolvido em 10 mL de 25 CH2CI2 e 10 mL de NaOH a 0,5 M. Foi adicionado gota a gota 0,29 mL (1,82 mmol) de Z-Cl. Após agitação durante 3 h as fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com água e seca sobre Na2S04. A evaporação e cromatografia "flash" (acetato de etilo/heptano 9/1) produziram 0,5 g (47%) do 30 produto desejado. EM m/z 641 (M+ + 1) (ii) H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z) Γ u. t -212- À temperatura ambiente, 0,5 g (0,78 mmol) de Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z) foi dissolvido em acetato de etilo saturado com HC1. Foi adicionada água e a mistura foi tornada básica com 5 K2CO3. As fases foram separadas. A fase aquosa foi extraída com CH2C12 e a fase orgânica foi lavada com água. A fase orgânica combinada foi então seca (Na2S04) . A ev-apopação do solvente produziu 0,3 g (71%) do produto-desejado. 10 EM m/z 541 (M+ + 1) (iii) BnOOC-CH2-(R) Cha-Pic-(R,S)Itp(Z) 15
Foram vertidos 0,29 g (0,5 mmol) de H-(R)Cha-Pic-(R, S) Itp (Z) , 0,15 g (1 mmol) de K2CO3 em 25 mL de acetonitrilo. Foi adicionado 154 mg (0,6 mmol) de
bromoacetato de benzilo e a mistura foi agitada a 50 °C
20 durante 4 h. A evaporação e purificação por RPLC (acetonitrilo:NH4OAC a 0,1 M 70:30) produziram cerca de 200 mg do produto desejado. (iv) H00C-CH2-(R) Cha-Pic-(R,S) Itp x 2 HC1 25
Foram dissolvidos em etanol 200 mg de BnOOC-CH2-(R) Cha-Pic-(R,S)Itp(Z). Foi adicionada uma pequena colher de Pd a 10% em carvão e a mistura foi hidrogenada durante 4h. A filtração através de hyflo, evaporação do solvente seguida por liofilização de água produziram 53 mg do produto desejado. *Η RMN (300,13 MHz, D20) ; δ 1,0-2,35 (m sobreposta, 22H) , 3,28-3,51 (m, 5H) , 3,51-3,64 (m, 1H) , 3,75-4,03 (m, 3H) , 30 -213- V Γ u
5,03-5,14 (s largo, 1H) . O sinal de um dos protões está parcialmente obscurecido pelo sinal de H-O-D. EM m/z 465 (M+ + 1) 5
Exemplo 74 H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig x2 HC1 10 (i) Boc-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z) A uma mistura de 1,0 g (2,95 mmol) de Boc-(R)Cgl-Pro-OH (Ver preparação de matérias primas), 1,44 g (11,8 mmol) de DMAP, 1,12 g (3,25 mmol) de H-(R,S)Hig(Z) (Ver preparação de 15 matérias primas) em 15 mL de CH2CI2 foi adicionado 0,62 g (3,2 mmol) de EDC e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi evaporado e· ;o resíduo foi dissolvido em acetato de 20 etilo. Quando a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução de KHS04 a 0,3 M separou-se um óleo da camada orgânica. A camada de acetato de etilo foi seca (Na2SC>4) e filtrada. O óleo e a camada aquosa foram então extraídos com CH2C12. A camada orgânica foi seca (Na2SC>4) , filtrada e 25 combinada com a fase EtOAc de acima. A evaporação e purificação do produto bruto num chromatotron (Harrison research, modelo 7924T) utilizando uma placa de sílica de 2 mm com um gradiente descontínuo de CH2Cl2/MeOH (97/3, 95/5, 90/10) como eluente para produzir 1,1 g (59%) do composto do 30 título. (ii) H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig x 2 HC1 \
Li -214- 5 10
Foram dissolvidos 81 mg (0,13 mmol) de Boc-(R)Cgl-Pro-(R, S)Hig(Z) em 50 mL de acetato de etilo saturado com HC1. A mistura foi deixada em repouso durante uma hora, evaporada e o residuo foi dissolvido em 10 mL de etanol. Foram adicionados 40 mg de Pd/C /5%), 1 mL de água e 0,5 mL de solução de HC1 a 1 M e a mistura foi hidrogenada a pressão atmosférica --durante a noite. A filtração do catalisador,, , através de' celite e evaporação do solvente seguido pór liofilização três vezes de água produziu o composto do titulo num rendimento de 75%. 1H-RMN (D20, 300 MHz) : δ 0,95-1,35 (m, 5H) , 1,50-2,45 (m, 15H) , 3,02 (bt, 1H), 3,1-3,8 (m, 7H) , 4,13 (d, 1H) , 4,38 (bd, 1H) 15 13C-RMN (D20, 75 MHz) : carbonos de carbonilo e de guanidina: δ 154,8, 168,9, 174,4 EM m/z 393 (M+ + 1) 20
Exemplo 75 HOOC-CH2- (R) Cgl-Pro- (R, S) Hig x 2 HCl 25 (i) H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z)
Foi dissolvido 1 g (1,6 mmol) de Boc-(R) Cgl-Pro-(R, S) Hig (Z) (Ver Exemplo 74 (i) ) em 100 mL de acetato de etilo saturado com HCl e a mistura foi deixada em repouso durante uma hora. 30 a mistura foi evaporada e o residuo foi dissolvido em CH2CI2. A camada orgânica foi lavada duas vezes com solução de NaOH a 0,2 M, seca (Na2S04), filtrada e evaporada para produzir 0,825 g (98%) do composto do titulo. - 215 - | L-Cj -^k. (ii) BnOOC-CH2- (R) Cgl-Pro- (R, S) Hig (Z)
Foram misturados 0,442 g (0,839 mmol) de H-(R)Cgl-Pro-(R, S) Hig (Z), 0,256 g (1,85 mmol) de K2C03 e 145 μΐ,
5 (0,521 mmol) de bromoacetato de benzilo, em 12 mL de THF. A mistura foi agitada a 40°C durante uma hora e à temperatura . . ambiente durante a noite. Após evaporação do solvente o resíduo foi dissolvido em CH2C12 e lavado uma vez com água e uma vez com solução salina. A camada orgânica foi seca 10 (Na2S04), filtrada e evaporada e o produto bruto foi purificado num chromatotron (Harrison research, modelo 7924T) utilizando uma placa de sílica de 2 mm com um gradiente descontínuo de CH2Cl2/MeOH (97/3, 95/5, 90/10) como eluente para produzir 0,165 g (29%) do composto do título. 15 (iii) HOOC-CH2-(R) Cgl-Pro-(R,S) Hig x 2 HC1
Foi misturado 0,165 g (0,25 mmol) de BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z) com 0,050 g de Pd/C (5%), 0,7 mL de 20 solução de HC1 a 1 M e 10 mL de etanol. A mistura foi hidrogenada a pressão atmosférica durante quatro horas. A filtração do catalisador através de celite e evaporação do solvente seguido por lioflização duas vezes de água produziu 25 0,1 g (75%) do produto. ^-RMN (D20, 300 MHz) : δ 1,05-1, 45 (m, 5H) , 1,55-2,5 (m, 15H) , 3,08 (bt, 1H), 3,2-4,05 (m, 9H) , 4,30 (d, 1H) , 4,44 (m, 1H) 13C-RMN (D20, 75 MHz) : carbonos de carbonilo e de guanidina: δ 154,9, 167,2, 169,4, 174,1
Exemplo 7 6 30 L-Ci
V Γ - 216 - Η-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig(Z) 5 A 0,72 g (1,95 mmol) de Boc-(R)Cha-Pro-OH (Ver preparação de matérias primas), -0-,^95-^^(7,8 mmol) de DMAP, 0,74 g (2,14 mmol) de H- (R, S) Hig (Z) 82% puro (Ver preparação de matér-ias primas) em 10 mL de CH2CI2 foi adicionado 0,486 g (2,54 mmol) 10 de EDC e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3 dias. A mistura foi diluída com CH2CI2 e lavada com água, duas vezes com solução de KHSO4 a 0,3 M e uma vez com solução salina. A camada orgânica foi seca (Na2S04) , filtrada e evaporada e o produto bruto foi purificado por 15 cromatograf ia "flash" utilizando CH2Cl2/MeOH 95/5 como eluente para produzir 0,450 g (33%) do produto. (ii) H-(R)Cha-Pro-(R, S)Hig x 2 HC1 20
Foi dissolvido 50 mg (0,078 mmol) de Boc-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig(Z) em 20 mL de acetato de etilo saturado com HC1. A mistura foi deixada em repouso durante uma hora, evaporada e 25 o resíduo foi dissolvido em 10 mL de etanol. Foi adicionado 20 mg de Pd/C (5%) e 0,3 mL de solução de HC1 a 1 M e a mistura foi hidrogenada à pressão atmosférica durante duas horas. A filtração do catalisador através de celite e evaporação do solvente seguida por liofilização de água duas vezes produziu 28 mg (76%) do composto do título. ^-RMN (D20, 300 MHz) : δ 0,9-1,6 (m, 6H) , 1,6-2,5 (m, 16H), 3,09 (t, 1H), 3,31 (t, 1H), 3,37-3,74 (m, 4H) , 3,81 (m, 1H), 4,35-4,47 (m, 2H) 30 V j Γ -217- 13C-RMN (D20, 75 MHz): carbonos de carbonilo e de guanidina: δ 154,9, 169,8, 174,5. 5 Exemplo 77 H-(R)Cgl-Aze-Rig x 2 HC1 «_·*.,» „ . (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Rig(Z) 10 A uma solução de 0,50 g (1,6 mmol) de H-Rig(Z) (Ver preparação de matérias primas), 0,59 g (1,6 mmol) de Boc-(R)Cha-Aze-OH (Ver preparação de matérias primas), 0,84 g (6,9 mmol) de dimetilaminopiridina em 30 mL de acetonitrilo 15 e 5 mL de dimetilformamida foi adicionado 0,33 g (1,7 mmol) de cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N' - etilcabodiimida. A reacção foi deixada a agitar durante 3 dias e depois evaporada e fraccionada entre hidrogenossulfato de potássio aquoso e cloreto de metileno. 20 A camada de cloreto de metileno foi lavada com bicarbonato de sódio aquoso e água, seca (Na2S04) e evaporada. O material bruto foi filtrado por sucção através de uma pilha de gel de silica com cloreto de 25 metileno/metanol 9/1 para produzir 0,78 g (76%) do composto desejado após evaporação. XH RMN (300 MHz, CDC13) : δ 0,8-1,9 (m, 27H) , 2,4-2,6 (m, 2H), 2,78 (bt, 2H), 3,15-3,4 (m, 2H), 3,80 (bt, 1H), 4,0-4,4 (m, 30 4H) , 4,75 (bt, 1H), 4,97 (bd, 1H), 5,08 (s, 2H), 7,1-7,4 (m, 7H), 7,74 (b, 1H). (ii) H-(R)Cgl-Aze-Rig(Z) x 2 HC1 -218-
U t
Um frasco contendo Boc- (R) Cgl-Aze-Rig (Z), 0,76 g (1,2 mrtiol), em 50 mL de acetato de etilo foi arrefecido num banho de gelo. Foi borbulhado HC1 seco através da solução durante 5 min e a solução foi evaporada para produzir 0,74 g (100%) do 5 dicloridrato como um pó branco. 1H-RMN (300 MHz, MeOD) : δ 1,.,1-2·, 0 (m,. 18H) , 2,23 (m, 1H) , 2,68 (m, 1H), 3,15-3-,45 (m, 4H) , 3,72 (bd, 1H) , 3,9-4,0 (bd, 2H), 4,27 (m, 1H), 4,39 (m, 1H), 4,78 (m, 1H) , 5,30 (s, 2H), 10 7,3-7,5 (m, 5H) . (iii) H-(R)Cgl-Aze-Rig x 2 HC1
Um frasco contendo uma solução de 20 mg de H- (R) Cgl-Aze-15 Rig(Z), e uma pequena quantidade de Pd/C a 5% foi hidrogenada a pressão atmosférica durante 1 h. A mistura foi filtrada através de celite e evaporada. O resíduo foi liofilizado com algumas gotas de HC1 conc. adicionadas para produzir o produto.· Rendimento: 8 mg (52%). 20 1H-RMN (300 MHz, D20): δ 1,1-2,0 (m, 18H), 2,37 (m, 1H) , 2,75 (m, 1H) , 3,08 (bt, 2H) , 3,39 (bt, 2H) , 3,8-4,0 (m, 3H) , 25 4,35-4,5 (m, 2H), 4,90 (m, 1H). 13C-RMN (75,5 MHz, D20) : carbonos de guanidina e de carbonilo: δ 172,2, 169,4, 156,4. 30 F.xemplo 78 HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Rig x 2 HCl (i)
BnOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Rig (Z) -219- -219-
Γ
Uma mistura de 0,20 g (0,33 mmol) de H-(R)Cgl-Aze-Rig(Z) (Ver Exemplo 77), 0,13 g de carbonato de potássio, 80 mg de iodeto de sódio, 10 mL de tetrahidrofurano e 10 mL de 5 acetonitrilo foi aquecida a 60°C durante 10 h. Os solventes foram evaporados e o material bruto foi sujeito a cromatografià''"fla'sh" em gel de sílica utilizando cloreto de- ·*’ η metileno/metanol 92/8 como eluente. Rendimento:· 0,13 g (58%). 10 1H-RMN (300 MHz, CDCI3) δ 0,9-2,1 (m, 18H) , 2,45 (m, 1H) , 2, 61 (m, 1H) , 2,81 (m, 2H) , 2,88 (d, 1H), 3 , 2-3,5 (m, 4H) , 3, 94 (m, 1H) , 4,0-4,25 (m, 3H) , 4,85 (m, 1H) , 5,12 (s, 2H), 5,14 (s, 2H) , 6,9-7,2 (b, 2H), 7,2-7,5 (m, 10H) , 7,95 (m, 15 1H). (ii) H00C-CH2-(R) Cgl-Aze-Rig x 2 HC1
Uma mistura de 0,12 g (0,18 mmol) de BnOOC-CH2·-(R) Cgl-Aze-20 Rig(Z), 5 mL de etanol, 3 gotas de HC1 conc. e uma pequena quantidade de Pd/C a 5% foi hidrogenada a pressão atmosférica durante 1 h. A mistura foi filtrada 25 através de celite e evaporada. O resíduo foi liofilizado em água para produzir 91 mg (98%) do produto. XH-RMN (500 MHz, D20) : δ 1,1-1,9 (m, 17H) , 2,00 (m, 1H) , 2,29 (m, 1H), 2,70 (m, 1H), 3,10 (m, 2H), 3,34 (t, 2H), 3,83 (bd, 2H) , 3,89 (dd, 2H) , 4,00 (d, 1H). 4,35 (m, 2H) , 4,87 (m, 1H). 13C RMN (125,8 MHz, D2O) : carbonos de guanidina e carbonilo: δ 171,8, 169,6, 167,7, 156,3. 30 -220- -220- t jf-' U κ
Exemplo 79 HOOC-CH2-(R) Cha-Pro-Rig x 2 HC1 5 (i) Boc-(R)Cha-Pro-Rig(Z) A uma solução de 0,25 g (0,82' mmol) de 4-aminoetil-l-benziloxicarbonilamidinopiperidina(H-Rig(Z)) , (Ver 10 preparação de matérias primas), 0,32 g (0,82 mmol) de Boc-(R)Cha-Pro-OH (Ver preparação de matérias primas), 0,40 g (3,3 mmol) de dimetilaminopiridina em 10 mL de acetonitrilo e 2 mL de dimetilformamida foi adicionado 0,165 g (0,86 mmol) de cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-Ν' -15 etilcarbodiimida. A reacção foi deixada a agitar durante 3 dias e depois evaporada e fraccionada entre hidrogenossulfato de potássio aquoso e cloreto de metileno. A camada de cloreto de metileno foi lavada com bicarbonato de sódio aquoso e água, seca (Na2SC>4) e evaporada. O espectro 20 de RMN do produto bruto foi satisfatório e o produto que continha alguma dimetilformamida foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional. 25 1H-RMN (500 MHz, CDC13) δ 0,8-2,2 (m, 32H; deste 1,41 (s, 9H) ), 2,34 (m, 1H), 2,77 (bt, 2H), 3,10 (m, 1H), 3,29 (m, 1H), 3,40 (m, 1H), 3,83 (m, 1H), 4,17 (m, 2H) , 4,30 (m, 1H), 4,54 (m, 1H), 5,07 (m, 1H), 5,08 (s, 2H), 7,03 (m, 1H), 30 7,05-7,4 (m, 7H). (ii) H-(R)Cha-Pro-Rig(Z) - 221 -
I
Um frasco contendo o produto bruto de Boc-(R)Cha-Pro-Rig(Z) em 100 mL de acetato de etilo foi arrefecido num banho de gelo. Foi borbulhado HC1 seco através da solução durante 5 min e a solução foi evaporada para remover o excesso de HC1. 5 O produto foi dissolvido em água e extraído duas vezes com acetato de etilo para remover a dimetilfomamida do passo anterior. A fase aquosa foi tornada alcalina com NaHC03 (aq) e extraída duas Vezes com cloreto de metileno. A fase · orgânica combinada foi lavada com água, seca (Na2S04) e 10 evaporada. Rendimento: 0,37 g (81%) nos dois passos. 1H-RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,8-2,4 (m, 24H) , 2,82 (bt, 2H) , 3,26 (m, 2H) , 3,42 (bq, 1H), 3,70 (m, 2H) , 4,19 (m, 2H), 4,49 (bd, 1H), 5,11 (s, 2H), 6,9-7,5 (m, 8H). 15 (iii) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Rig(Z)
Uma mistura de 0,18 g (0,32 mmol) de H-(R)Cha-Pro-Rig(Z), um excesso de carbonato de potássio e 10 mL de acetonitrilo foi, 20 aquecida a 60°C durante 2 h. Os solventes foram evaporados e o material bruto foi sujeito a cromatografia "flash" em gel de sílica utilizando cloreto de metileno/metanol 95/5 como eluente. Rendimento: 0,20 g (88%). 25 1H-RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,8-2,1 (m, 23H) , 2,37 (m, 1H) , 3,1-3,5 (m, 7H), 4,0-4,2 (m, 2H), 4,54 (m, 1H), 5,1 (m, 4H), 6,9-7,5 (m, 13H) . 30 (iv) H00C-CH2-(R)Cha-Pro-Rig x 2 HC1
Uma mistura de 0,15 g (0,21 mmol) de BnOOC-CH2-(R) Cha-Pro-Rig (Z), 10 mL de etanol, 4 gotas de HC1 conc. e uma pequena -222- Γ L-c, t quantidade de Pd/C a 5% foi hidrogenada a pressão atmosférica durante 1 h. A mistura foi filtrada através de celite e evaporada. 0 resíduo foi liofilizado em água para produzir 95 mg (64%) do produto. 5 1H-RMN (500 MHz, MeOD) δ 0,85-2,1 (m, 23H) , 2,30 (m, 1H) , 3,10 · (m>. 2.H) , 3,25 (m, 1H) , 3,35 (m, 1H) , 3,54{mrn JLH,) 3,85-4,0 (m, 3H), 4,03 (d, 1H), 4,41 (m, 1H), 4,50'(m, 1H). 10 13C-RMN (125,8 MHz, D20) : carbonos de guanidina e de carbonilo: δ 174,0, 168,9, 168,1, 157,5.
Exemplo 80 15 HOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Aze-Rig x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Aze-Rig(Z) A uma solução de 0,25 g (0,82 mmol), ,de 4-aminoetil-l-20 benziloxi-carbonilamidinopiperidina (H-Rig(Z)), (Ver preparação de matérias primas), 0,31 g (0,86 mmol) de Boc-(R)Cha-Aze-OH (Ver preparação de matérias primas), 0,40 g (3,3 mmol) de dimetilaminopiridina em 10 mL de acetonitrilo e 2 mL de dimetilformamida foi adicionado 0,17 g (0,86 mmol) 25 de cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'- etilcarbodiimida. A reacção foi deixada a agitar durante 3 dias, depois evaporada e fraccionada entre hidrogenossulfato de potássio aquoso e 30 cloreto de metileno. A camada de cloreto de metileno foi lavada com bicarbonato de sódio aquoso e água, seca (NaaSOí) e evaporada. O produto bruto que continha alguma dimetilformamida foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional. -223- Γ ^-RMN (500 MHz, CDC13) 6 0,85 (m, 1H) , 0,97 (m, 1H) , 1,1· 1,75 (m, 26H; deste 1,41 (s, 9H)), 1, 82 (bd, 1H), 2,53 (m 2H), 2,77 (bt , 2H), 3,25 (m, 2H), 4, 03 (q, 1H), 4,08 (m 1H) , 4,18 (m, 2H), 4, 29 (m, 1H), 4, 78 (m, 1H), 4,97 (m, 1H) 5,09 (s, 2H), 7,1-7,4 (m, 7H), 7,65 (m, 1H) . (ii) Η-(R)Cha-Aze-Rig(Z)
10 15
Um frasco contendo o produto bruto de Boc-(R)Cha-Aze-Rig (Z) em 100 mL de acetato de etilo foi arrefecido num banho de gelo. Foi borbulhado HC1 seco através da solução durante 5 min e a solução foi evaporada para remover o excesso de HC1. O produto foi dissolvido em água e extraído duas vezes com acetato de etilo para remover a dimetilformamida do passo anterior. A fase aquosa foi tornada alcalina com NaHC03 (aq) e extraída duas vezes com cloreto de metileno. A fase orgânica combinada foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. Rendimento:.0,31 g (70%) nos dois passos. 20 ^-RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,8-1,9 (m, 20H) , 2, 48 (m, 1H) 2,73 (m, 1H), 2,85 (bt, 2H) , 3,25 (m, 1H) , 3,35 (m, 2H) 4,05 (q, 1H), 4,1-4,25 (m, 3H), 4,86 (m, 1H), 5,12 (s, 2H) 6, 9-7 ,2 (m, 2H), 7,2-7,45 (m, 5H), 7,93 (m, 1H) . 25 (iii) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Rig (Z)
Uma solução de 0,31 g (0,57 mmol) de H-(R)Cha-Aze-Rig(Z) e 93 mg (0,57 mmol) de acrilato de benzilo em 5 mL de etanol 30 foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante uma semana. Foi evaporada e sujeita a cromatografia "flash" em gel de sílica utilizando cloreto de metileno/metanol 94/6 como eluente. Rendimento: 0,20 g (49%). -224- XH-RMN (500 MHz, CDC13) δ 0,8-1,0 (m, 2H), 1,1-1,8 (m, 18H) , 2,48 (m, 1H), 2,54 (bt, 2H), 2,68 (m, 2H), 2,81 (bt, 2H), 2,87 (m, 1H), 3,20 (m, 1H), 3,25 (m, 1H) , 3,31 (m, 1H), 4,04 (q, 1H), 4,1-4,2 (m, 3H), 4,84 (dd, 1H) , 5,05-5,15 (ro, 4H) , 5 7,0-7,5 (m, 12H), 8,03 (m, 1H). (iv) HOOC-CH2-CH2- (R)Cha-Aze-Rig x 2 HC1 O composto do título foi produzido e purificado do mesmo 10 modo que o descrito no Exemplo 80 a partir de 0,20 g (0,28 mmol) de BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Rig- (Z) . Rendimento: 30 mg (19%) do sal de dicloridrato. 1H-RMN (500 MHz, CDC13) δ 1,0-1,9 (m, 20H) , 2,33 (m, 1H) , 15 2,70 (m, 1H), 2,83 (m, 2H) , 3,10 (m, 2H), 3,3-3,4 (m, 4H) , 3,85 (bd, 2H) , 3,92 (m, rotâmero) , 4,14 (t, 1H) , 4,17 (m, rotâmero) , 4,31 (m, 1H) , 4,46 (m, 1H), 4,89 (m, 1H) , 5,18 (m, rotâmero). 20 13C RMN (125,8 MHz, D20) carbonos de guanidina e de carbonilo: δ 175,4, 171,8, 168,8, 156,3.
Exemplo 81 25 HOOC-CH2- (R) Cha-Pro- (S) Itp x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Pro-(S)Itp(Ts)
Foi dissolvido à temperatura ambiente 0,87 g (2,36 mmol) de 30 Boc-(R)Cha-Pro-OH (Ver preparação de matérias primas), 0,78 g (4,72 mmol) de DMAP e 0,70 g (2,36 mmol) de H-(S)Itp(Ts) (Ver preparação de matérias primas) , em 12 mL de acetonitrilo. Após agitação durante 20 minutos foi adicionado 0,59 g (3,07 mmol) de EDC. Após 18 horas o -225- -225-
t solvente foi removido sob vácuo e o residuo foi dissolvido em CH2CI2, lavado com água, ácido cítrico (10%), KHCO3 (aq) , água e seco com Na2SC>4. A evaporação produziu 1,74 g (rendimento > 100% (pureza de cerca de 60%)) do produto 5 desejado. Este foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional. FAB-EM: m/z = 647 (M+ + 1) 10 (ii) H-(R)Cha-Pro-(S)Itp(Ts) O grupo de protecção de Boc foi removido do mesmo modo que o descrito para Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z) (Ver Exemplo 72 (ii) ) para produzir 0,75 g (81%) do composto do título. 15 FAB-EM: m/z = 547 (M+ + 1) (iii) BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro- (S) Itp (Ts) 20 Em 15 mL de acetonitrilo foram incorporados 0,75 g (1,37 mmol) de H-(R) Cha-Pro-(S) Itp (Ts) , 0,38 g (2,74 mmol) de K2CO3. Foi adicionado 0,39 g (1,65 mmol) de bromoacetato de benzilo e a mistura foi agitada a 50°C durante 2 h. A evaporação do solvente seguida de cromatografia "flash" 25 utilizando acetato de etilo/metanol 95/5 como eluente produziu cerca de 530 mg do produto desejado. FAB-EM: m/z = 695 (M+ + 1) 30 (iv) HOOC-CH2-(R) Cha-Pro-(S) Itp x 2 HC1
Foi dissolvido 0,53 g (0,76 mmol) de BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro-(S)Itp(Ts) em 15 mL de THF. Foi condensado NH3 (g) no frasco -226-
e foi adicionado Na (m) . A reacção foi interrompida após 30 min com ácido acético e o NH3 e o THF foram evaporados. O resíduo foi liofilizado de água e o produto bruto foi purificado por RPLC (acetonitrilo/HOAc a 0,1 M 15/85) e 5 produziu 0,25 g (61%) do produto desejado após liofilização de HC1 aquoso. 1H-RMN (500,13 MHz, D20); δ 0,9-2,09 (m sobreposta, 20H), 2,22-2,35 (m, 1H) , 3,2-3,36 (m, 4H) , 3,44-3,62 (m 10 sobreposta, 2H) , 3,7-3,8 (m, 1H) , 3,87-3,99 (m, 2H) , 4,33-4,48 (m sobreposta, 2H). 13C-RMN (500,13 MHz, D20); carbonos de carbonilo e de guanidina: δ 154,3, 168,1, 169,0 e 174,2 15
Exemplo 82 H-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig x 2 HC1 20 (i) Boc-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig(Z)
Foi misturado 174 mg (0,471 mmol) de Boc-(R)Cha-Pro-OH (Ver preparação de matérias primas), 229 mg (1,87 mmol) de DMAP, 130 mg (0,471 mmol) de H-(R,S)Nig(Z) (Ver preparação de 25 matérias primas) , em 2 mL de CH2C12 e foi adicionado 117 mg (0,61 mmol) de EDC e a mistura foi agitada durante quatro dias. A mistura foi diluída com CH2C12 e lavada com água, duas vezes com solução de KHS04
30 a 0,3 M e uma vez com solução salina. A camada orgânica foi seca (Na2S04), filtrada e evaporada e o produto bruto foi purificado duas vezes por cromatografia "flash" utilizando CH2Cl2/MeOH 95/5 como eluente da primeira vez e CH2Cl2/MeOH -227- -227- t r— L-l 97/3 como eluente da segunda vez, para produzir 0,104 g (35%) do composto do título. EM m/z 627 (M+ + 1) 5 (ii) H-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig x 2 HC1
Foi' dissolvido 10 mg (0,016 mmol) de Boc-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig(Z) em 15 mL de acetato de etilo saturado com HC1. A 10 mistura foi deixada em repouso durante meia hora. A mistura foi evaporada e o resíduo foi dissolvido em 6 mL de etanol e foi adicionado 8 mg de Pd/C a 5% e 0,1 mL de solução de HC1 a 1 M e a mistura foi hidrogenada à pressão atmosférica durante uma hora e meia. Após filtração através de hyflo e 15 evaporação do solvente foi produzido 4 mg do composto do título 1H-RMN (300 MHz, D20) : δ 0,9-1,58 (m, 6H) , 1,58-2,45 (m, 13H), 2,65 (m, 1H), 3,19 (m, 1H), 3,34 (d, 2H), 3,4-3,73 (m, 20 4H), 3,82 (m, 1H), 4,34-4,49 (m, 2H). 13C-RMN (75 MHz, D20): carbonos de carbonilo e de guanidina: δ 155,1, 169,9 e 174,8. 25 Exemplo 83 H-(R)Pro-Phe-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Pro-Phe-Pab(Z) 30
A uma mistura de 1,2 g (3,31 mmol) de Boc-(R)Pro-Phe-OH (Ver preparação de matérias primas) e 1,70 g (13,91 mmol) de DMAP -228- -228-
t em 40 mL de CH3CN à temperatura ambiente, foi adicionado 0,98 g (3,35 mmol) de H-Pab(Z) (Ver preparação de matérias primas) dissolvido em 1 mL de DMF. Após agitação durante 2 h a mistura de reacção foi arrefecida a -18°C e foi adicionado 5 0, 66 g (3,48 mmol) de EDC, em porções, e a reacção foi deixada à temperatura ambiente durante a noite. 0 solvente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em 100 mL de EtOAc e lavado com 1 x 30 mL de água, 3 x’30'mL de KHS04 a 0,3 Μ, 1 x 30 mL de Na2C03, 1 x 30 mL de água e seco. A evaporação do 10 solvente seguido por cromatografia "flash" utilizando CH2Cl2/MeOH (95/5) como eluente produziu 0,691 g (38%) do composto do título. (ii) H-(R)Pro-Phe-Pab(Z) 15
Foi dissolvido 0,673 g de Boc-(R) Pro-Phe-Pab (Z) em 30 mL de EtOAc e a solução foi saturada com HCl(g) durante alguns minutos (precipitou um sólido branco da solução). O solvente e o HC1 em excesso foram evaporados e foi adicionado 60 mL 20 de EtOAc ao resíduo e a fase orgânica foi lavada com 2 x 20 mL de NaOH a 2 Μ. A água de lavagem foi extraída com 1 x 25 mL de EtOAc, que foi combinado com a outra fase de EtOAc e a fase orgânica combinada foi lavada com água, seca e evaporada para produzir 560 mg (98%) do produto desejado. 25 1H-RMN (500 MHz, CDC13) : δ 1,5-1,74 (m, 3H), 1,98-2,05 (m, 1H), 2,78-2,85 (m, 1H), 2,90-2,96 (m, 1H), 3,0-3,2 (sistema ABX centrado a 3,1, 2H), 3,62 (dd, 1H), 4,3-4,45 (sistema ABX centrado a 4,37, 2H), 4,58 (q, 1H), 5,22 (s, 2H), 6,96 30 (bt, 1H), 7,1-7,4 (m, 10H), 7,46 (d, 2H), 7,76 (d, 2H), 8,12 (d, 1H). (iii) H-(R)Pro-Phe-Pab x 2 HC1 -229-Γ v u
Foi dissolvido 200 mg de H-(R) Pro-Phe-Pab (Z) em 10 mL de EtOH a 95% e 2 mL de água e a mistura foi hidrogenada sobre Pd/C a 5% a pressão atmosférica durante 5 h. A filtração do catalisador e a adição de 1 mL de HC1 a 1 M seguido por 5 evaporação e liofilização da água produziu o composto do título num rendimento de 88%. v 1 · - * «· ^-RMN (500 MHz, ' CD3OD) : δ 1,51-1,59 (m, 1H) , 1, 69-1,80-«<m; 1H), 1,87-1, 97 (m, 1H) , 2,19-2,29 (m, 1H) , 2,90 (dd, 1H) , 10 3,20-3,33 (m, 3H, parcialmente mascarado pelo pico do solvente), 4,27 (m, 1H) , 4,43-4,54 (sistema AB centrado a 4,48, 2H) , 4,75-4,81 (m, 1H) , 4,87 (s, 2H) , 7,2-7,3 (m, 5H) , 7,45 (d, 2H), 7,75 (d, 2H). 15 13C-RMN (125 MHz, D2O) : carbonos de amidina e de carbonilo: δ 166,7, 170,1 e 173,4.
Exemplo 84 20 HOOC-CH2- (R) Pro-Phe-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH2-(R) Pro-Phe-Pab(Z) A um sedimento de 244 mg (0,463 mmol) de H-(R)Pro-Phe-Pab(Z) 25 (Ver Exemplo 83) e 159,9 mg (1,157 mmol) de K2CO3 em 8 mL de DMF/CH3CN (5/3) foi adicionado 127,2 mg (0,555 mmol) de bromoacetato de benzilo dissolvido em 2 mL de DMF e a mistura foi agitada a 60°C durante 1,5 h e à temperatura ambiente durante a noite. 0 solvente foi evaporado e o 30 resíduo foi dissolvido em 50 mL de EtOAc, lavado com 2 x 20 mL de água e seco (Na2S04) . A evaporação do solvente seguida por cromatografia "flash" -230- -230- li t utilizando CH2Cl2/MeOH (9/1) como eluente produziu 176 mg (56%) de composto do título como um sólido branco.
1H-RMN (300 MHz), CDCI3) : δ 1,45-1,80 (m, 3H) , 2,06 (m, 1H) , 5 2,54 (m, 1H), 2,92-3,28 (m, 6H) , 4,3-4,5 (sistema ABX centrado em δ = 4,4, 2H) , 4,60 (dd, 1H) , 5,10 (s aparente, .2H),-'-5,2 (s aparente, 2H), 7,1-7,4 (m, 15H) , 7,43 (d,i 2H), 7,75 (d, 2H) , 7,932 (d, 1H) . ^ 10 (ii) HOOC-CH2-(R) Pro-Phe-Pab x 2 HC1
Foram dissolvidos 170 mg (0,252 mmol) de BnOOC-CH2~(R)Pro-Phe-Pab (Z) em 12 mL de EtOH/água (5/1) e hidrogenados sobre Pd/C a 5% a pressão atmosférica durante 4,5 h. O catalisador 15 foi removido por filtração, o solvente evaporado e o resíduo liofilizado de HCl(aq) para produzir o composto do título. 1H-RMN (500 MHz, CD3OD) : δ 1,62 (m, 1H) , 1,82 (m, 1H) , 2,08 (m, 1H) , 2,38 (m, 1H) , 2,90 (dd, 1H) , 3,25-3,35 (m, 2H) , 20 parcialmente mascarado pelo pico do solvente), 3,80 (m, 1H) , 4,08-4,19 (sistema AB centrado a δ = 4,19, 2H), 4,39 (m, 1H) , 4,45-4,58 (sistema AB centrado a δ = 4,50, 2H), 4,80 (m, 1H), 7,20-7,35 (m, 5H), 7,45 (d, 2H), 7,75 (D, 2H). 25 13C-RMN (125 MHz, D2O) : carbonos de amidina e de carbonilo: δ 166,8, 169,í, 169,5 e 173,2.
Exemplo 85 H-(R)Phe-Phe-Pab (i) Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z) 30 -231 - U, ^
Foram dissolvidos Boc-(R)Phe-Phe-OH (16,4 mmol) (ver preparação de matérias primas), Pab(Z)-HCl (18,0 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (24,6 mmol) em 50 mL de acetonitrilo. A solução foi arrefecida à temperatura de gelo-água e foi 5 adicionado cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (21,3 mmol). O banho de arrefecimento foi removido e a mistura de reacção' foi agitada durante a noite. O solvente foi depois evaporado sob pressão reduzida, o resíduo dissolvido em 50 mL de acetato de etilo e a solução 10 resultante extraida com 50 mL de água. Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z) precipitado a partir da mistura de duas fases foi filtrado e lavado com água produzindo 8,7 g (78%) após secagem sobre vácuo a 45°C durante 24 h. XH RMN (200 MHz, d-CHCl3 e d4-CH3OH); δ 8,35-7,00 (m, 19H) , 4,63 (t, 1H), 4,3-4,1 (m, 1H), 15 3, 40-2,70 (m, 6H), 1,30 (s, 9H) . (ii) H-(R)Phe-Phe-Pab (Z)
Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z) · (10,3 mmol) foi suspenso em 70 mL de 20 acetato de etilo e foi adicionado 31 mL de acetato de etilo a 3,3 M/HC1. A suspensão foi agitada durante 4 h após as quais o sal de cloridrato de H-(R) Phe-Phe-Pab (Z) foi removido por filtração e lavado com várias porções de acetato de etilo. O sal foi dissolvido numa mistura de 50 mL 25 de cloreto de metileno, 50 mL de carbonato de potássio a 1 M e cerca de 5 mL de etanol. A camada orgânica foi recolhida e o solvente foi removido em condições de pressão reduzida produzindo 5,0 g de H-(R) Phe-Phe-Pab (Z) (84%). XH RMN (299 MHz, de-DMSO); δ 9,1 (s, 2H), 8,59 (m, 1H), 8,1 (m, 1H), 7,90 30 (d, 2H), 7,4-7,0 (m, 17H), 5,09 (s, 2H), 4,58 (m, 1H) , 4,31 (m, 2H), 3,1-2,7 (m, 4H). -232-
-232- V
Lc, (iii) H-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,42 mmol) foi dissolvido em 10 mL de tetrahidrof urano e 1 mL de água. Foi carregado na solução paládio em carvão (42 mg) e a mistura foi hidrogenada a 45 psi de pressão de hidrogénio num 5 dispositivo de agitação de Parr, durante 2 dias. Após hidrogenólise completa a mistura foi diluida com metanol e o catalisador.-· foi; removido por filtração. A evaporação d.os^ solventes produziu H-(R) Phe-Phe-Pab bruto, · <que ·· foi purificado através de cromatografia em alumina neutra (Malha 10 de 70-230) eluindo com cloreto de metileno-metanol-hidróxido de amónio (80:20:2). Rendimento de 76 mg do composto do titulo (41%). XH RMN (200 MHz, d6-DMSO); δ 7,61 (d, 2H), 7,4-7,0 (m, 12H), 4,64 (m, 1H) , 4,44 (m, 2H) , 4,13 (t, 1H), 3,1-2,8 (m, 4H). 15
Exemplo 86 HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab 20 (i) MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) H-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,87 mmol) (ver Exemplo 85 (ii)) foi dissolvido em 10 mL de tetrahidrofurano. A solução foi arrefecida num banho de água gelada e foi adicionado 25 trietilamina (1,73 mmol) seguido de cloreto de metiloxalilo (0,95 mmol). O banho de arrefecimento foi removido e a mistura de reacção agitada durante 18 h a temperatura ambiente. A mistura de reacção foi diluida com acetato de etilo e extraída com água. A fase orgânica foi recolhida e o 30 solvente foi removido sobre pressão reduzida produzindo 0,45 g de MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (78%) o qual foi utilizado na fase seguinte sem purificação adicional. TSP-EM encontrado m/z 664 (calculado para MH+ (C37H38N5O7) 664) . -233- (ii) HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Ζ)
MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Ζ) (0,68 mmol) foi dissolvido em 4 mL de tetrahidrof urano e 2 mL de água. Foi adicionado 5 hidróxido de lítio (2,6 mmol) e a mistura de reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 h. Após hidrólise *··>. completa a mistura de reacção foi diluída-com 2-5 mL de água e acidificada por adição de 0,5 mL de ácido acético. O precipitado foi filtrado e lavado com várias porções de água 10 produzindo 0,40 g de HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) bruto após secagem sobre vácuo a 45°C durante 24 h. O produto bruto foi suspenso em 10 mL de etanol e 1 mL de água. A solução foi conduzida até ao refluxo e o composto do titulo insolúvel foi removido por filtração, produzindo 0,23 g de HOOC-CO-15 (R) Phe-Phe-Pab (Z) (41% no fim dos dois passos). *H RMN (200 MHz, de-DMSO) ; δ 8,62 (m, 2H) , 8,41 (d, 1H) , 7,89 (d, 2H) , 7,4-6,9 (m, 17H) , 5,10 (s, 2H), 4,54 (m, 2H), 4,34 (m, 2H) , 3,2-2,6 (m, 4H) . 20 (iii) HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab
HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,20 mmol) foi suspenso em 20 mL de tetrahidrofurano e 5 mL de água. Foi carregado paládio em carvão (52 mg) à solução e a mistura foi hidrogenada a 45 25 psi de pressão de hidrogénio num dispositivo de agitação de Parr durante 2 dias. Após hidrogenólise completa a mistura foi diluída com 40 mL de metanol e o catalisador foi removido por filtração. A evaporação dos solventes produziu 50 mg do composto do título (49%) . *H RMN (200 MHz, d6~DMSO) ; 30 δ 9,2(s), 8,78(d), 8,60(m), 7,91(m), 7,79(d, 2H), 7,35-6,8(m, 12H), 4,6-4,0(m, 4H), 3,0-2,6(m, 4H).
Exemplo 87 -234- 1— Γ HOOC-CH2- (R) Phe-Phe-Pab (i) BnOOC-CH2-(R) Phe-Phe-Pab(Z) 5 H-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,87 mmol) (ver Exemplo 85 (ii)) e
carbonato de potássio -'(2/6” mniol) foram suspensos em 10 mL de acetonitrilo: Foi' adicionado acetato de iodobenzilo (0,95 mmol) à mistura e a solução foi aquecida a 30°C e agitada a 10 essa temperatura durante 2 dias. Após alquilação completa o solvente foi removido e o resíduo dissolvido em 10 mL de acetato de etilo. A solução foi rapidamente extraída com 10 mL de água e o composto do título precipitou a partir da fase orgânica recolhida. BnOOC-CH2(R) Phe-Phe-Pab(Z) foi 15 removido por filtração e seco sob vácuo a 45°C durante 24 h produzindo 177 mg de BnOOC-CH2-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (28%). *H RMN (200 MHz, CDC13) ; δ 7,79(d, 2H), 7,5-7,l(m, 22H), 6,55(t, 1H), 5,21(s, 2H), 5,03 (s, 2H), 4,64(m, 1H), 4,41(m2H), 3,3-2,6(m, 7H). 20 (ii) BnOOC-CH2-(R) Phe-Phe-Pab(Z)
BnOOC-CH2-(R) Phe-Phe-Pab(Z) (0,32 mmol) foi suspenso em 30 mL de tetrahidrofurano e 3 mL de água. Foi carregado paládio em 25 carvão (41 mg) à solução e a mistura foi hidrogenada a 45 psi de pressão de hidrogénio num dispositivo de agitação de Parr durante 2 dias. Após hidrogenólise completa a mistura foi diluída com 40 mL de água e o catalisador foi removido por filtração. A evaporação dos solventes produziu 95 mg do 30 composto do título (59%). TSP-EM revelou m/z 502 (calculado para MH+ (C28H32N504) 502) .
Exemplo 88 -235-
H-(R)Cha-Pro-Mig (i) Boc-(R)Cha-Pro-Mig(Z) 5 A uma mistura agitada de 0,344 g (0,93 mmol) de Boc-(R)Cha-Pro-OH '“(vefi preparação de matérias primas), 0,245. ’g^0-,93,^ mmol) de H-Mig(Z) (ver preparação de matérias primas) e 0,227 g (1,86 mmol) de DMAP em 10 mL de CH3CN, foi adicionado 10 0,232 g (1,21 mmol) de EDC a -10°C. A mistura de reacção foi deixada atingir a temperatura ambiente e em repouso durante 5 dias. 0 CH3CN foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em EtOAc e lavado com H2O, NaHC03(aq) e solução salina. A camada orgânica foi seca com Na2S04 e evaporada. O produto bruto foi 15 purificado por cromatografia "flash" utilizando um gradiente de EtOAc/MeOH, 95/5 a 90/10 como eluente para produzir 0,340 g (60%) do composto do título. (ii) H-(R)Cha-Pro-Mig(Z) 20
Foi dissolvido 0,34 g (0,55 mmol) de Boc-(R)Cha-Pro-Mig(Z) em 8 mL de EtOAc saturado com HCl(g) e agitado durante 10 min. à temperatura ambiente. Foi adicionado gota a gota 10 mL de uma solução saturada de KOH(aq). As camadas foram 25 separadas e a fase aquosa foi extraída com 3 x 8 mL de EtOAc. As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com solução salina, secas com Na2SC>4 e evaporadas para produzir 0,286 g (100%) do composto do título. 30 (i i i.) H-(R)Cha-Pro-Mig
Foi dissolvido 0,050 g (0,132 mmol) de H-(R)Cha-Pro-Mig(Z) em 3 mL de MeOH e hidrogenado sobre Pd/C a 10% a pressão atmosférica, durante a noite. A solução foi -236- ' filtrada através de celite e o solvente foi evaporado para produzir 0,040 g (80%) do composto do titulo. 1H-RMN (500 MHz, MeOD): δ 0,92-1,02 (m, 2H) , 1,18-1,47 (m, 6H), 1,66-1,73 (m, 4H), 1,85-2,04 (m, 4H), 2,17-2,22 (m, 1H), 2,95-2,98 (m, 1H), 3,12-3,16 (•m-, 1H), 3,47-3,55 (m, 2H), 3,62-3,66 (m, 1H) •3,75-3,78 (m, 1H), 3,85-3,89 (m, 1H), 4,05-4,12 (m, 3H), 4,34-4,37 (m, 1H) . 10
Os sinais de um rotâmero menor aparecem a: δ 3,4, 3,7, 4,13-4,16, 4,3. EM m/z 379 (M+ + 1) 15
Exemplo 89 H-(R)Cha-Pro-Dig 20 (i) Boc-(R)Cha-Pro-Dig(Z) A uma mistura agitada de 0,280 g (0,76 mmol) de Boc-(R)Cha-Pro-OH (ver preparação de matérias primas), 0,210 g (0,76 mmol) de H-Dig(Z) (ver preparação de matérias primas) e 25 0,186 g (1,52 mmol) de DMAP em 8 mL de CH3CN foi adicionado 0,189 g (0,99 mmol) de EDC a -10°C. A mistura de reacção foi
deixada atingir a temperatura ambiente e em repouso durante 4 dias. O CH3CN foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em EtOAc e lavado com H20, NaHC03 (aq) e solução salina. A 30 camada orqânica foi seca com Na2S04 e evaporada. O produto bruto foi purificado por cromatografia "flash" utilizando um gradiente de EtOAc/MeOH, 95/5 a 90/10, como eluente para produzir 0,210 g (44%) do composto do título. -237- Γ (ii) H-(R)Cha-Pro-Dig(Z)
Foi dissolvido 0,210 g (0,33 mmol) de Boc-(R)Cha-Pro-Dig(Z) em 8 mL de EtOAc saturado com HC1 (g) e agitado durante 10 5 min à temperatura ambiente. Foi adicionado gota a gota 8 mL de uma solução saturada de KOH(aq). As camadas foram separadas e a ΐβεβ·· aquosa foi extraída com 3 x 8 mL de EtOAc: As Camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com' solução salina, secas com Na2S04 e evaporadas para produzir 10 0,146 g (83%) do composto do título. (iii) H-(R)Cha-Pro-Dig
Foi dissolvido 0,046 g (0,087 mmol) de H-(R)Cha-Pro-Dig(Z) 15 em 3 mL de MeOH e hidrogenado sobre Pd/C a 10% a pressão atmosférica durante a noite. A solução foi filtrada através de celite e o solvente foi evaporado para produzir 0,040 g (100%) do composto do título. 20 1H-RMN [ (500 MHz, MeOD): δ 0,90-1,04 (m, 2H) , 1,10-1,47 (m, 6H) , 1,66-1,74 (m, 4H), 1,78-2,05 (m, 4H) , 2,13-2,21 (m, 1H) , 2,74-2,83 (m, 1H), 2,94-2,99 (m, 1H) , 3,15-3,29 (m, 1H) , 3,44-3,57 (m, 2H), 3,65-3,87 (m, 3H) , 4,07-4,25 (m, 3H), 4,35-4,39 (m, 2H). 25
Sinais de um rotâmero menor aparecem a: δ 4,29-4,32. EM m/z 393 (M+ + 1) 30 Exemplo 90 H-(R)Cha-Aze-Dig (i) Boc-(R)Cha-Aze-Dig(Z) -238- Γ u 0 composto do titulo foi preparado a partir de Boc-(R)Cha-Aze-OH e H-Dig(Z) (ver preparação de matérias primas), de acordo com o procedimento para Boc-(R)Cha-Pro-Dig(Z) num 5 rendimento de 0,253 g (54%). ^ (ii) ‘H- (R) Cha-Aze-Dig (Z) O composto do titulo foi preparado a partir de Boc-(R)Cha-10 Aze-Dig(Z), de acordo com o procedimento para Boc-(R)Cha-Pro-Dig(Z) num rendimento de 0,210 g (100%). (iii) H-(R)Cha-Aze-Dig 15 Foi dissolvido 0,060 g (0,117 mmol) de H-(R)Cha-Aze-Dig(Z) em 3 mL de MeOH e hidrogenado sobre Pd/C a 10% a pressão atmosférica durante a noite. A solução foi filtrada através de celite e o solvente foi evaporado para produzir 0,042 g (95%) do composto do titulo. 20 1H-RMN (500 MHz ;, MeOD) : δ 0,91-1,02 (m, 2H) , 1,18-1,48 (m 6H), 1,66-1,90 (m, 8H) , 2,15-2,17 (m, 1H) , 2,66-2,68 (m 1H), 2,80-2,83 (m, 1H) , 3,14-3,29 (m, 1H), 3,39-3,44 (m 1H), 3,72-3,80 (m, 2H) , 4,01-4,04 (m, 1H), 4,14-4,23 (m 2H), 4,48-4,49 (m, 1H), 4,60-4,64 (m, 1H) *
Sinais de um rotâmero menor aparecem a: δ 2,25, 2,6, 4,3, 4,67. 30 EM m/z 379 (M+ + 1).
Exemplos de preparações farmacêuticas -239-
Os compostos de acordo com a invenção podem ser formulados em formas de dosagem para administração oral, tais como comprimidos simples, comprimidos revestidos ou comprimidos de libertação modificada. Formas de dosagem líquida ou 5 sólida-semi-sólida para administração rectal. Substância liofilizada ou líquidos como emulsão ou suspensão para utilização parentérica. Formas de. dosagem líquida, sólida ou semi-sólida para administração tópica. 10 Em aerossóis pressurizados ou em inaladores de pó seco para inalação oral ou nasal.
Exemplo PI 15 Comprimidos para administração oral São preparados 1000 comprimidos a partir dos seguintes ingredientes: 20 Composto activo 100 g
Lactose 200 g
Polipirrolidona de vinilo 30 g
Celulose microcristalina 30 g
Estearato de magnésio 6 g 25 O constituinte activo e a lactose são misturados com uma solução aquosa de polipirrolidona de vinilo. A mistura é seca e moída para formar grânulos. São então misturados a celulose microcristalina e depois o estearato de magnésio. A 30 mistura é então comprimida numa máquina de comprimidos produzindo 1000 comprimidos, cada um contendo 100 mg do constituinte activo.
Exemplo P2 -240-
Solução para administração parentérica É preparada uma solução a partir dos seguintes ingredientes: 5
Composto activo 5 g
Cloreto de" sódio para injecção 6 g (f··'!
Hidróxido de sódio para ajuste de pH para pH 5-7 10 Água para inj. até 1000 mL 0 constituinte activo e o cloreto de sódio são dissolvidos na água. O pH é ajustado com NaOH a 2 M para pH 3-9 e a solução é utilizada para enchimento de ampolas estéreis. 15
Exemplo P3
Comprimidos para administração oral 20 1. Composto activo 150 g 2. Silicato de sódio e alumínio 20 g 3. Parafina 120 g 4. Celulose microcristalina 20 g 5. Hidroxipropilcelulose 5 g 25 6. Fumarato de estearil de sódio 3 g 1-4 são misturados e é adicionada uma solução aquosa de 5. A mistura é seca e moída e é misturado 6. A mistura é então comprimida numa máquina de comprimidos. 30
Exemplo B6 Pó para inalação -241- O composto activo é micronizado num moinho de jacto até um tamanho de partículas adequado para inalação (diâmetro de massa < 4 μπι) . 5 É utilizado 100 mg do pó micronizado para enchimento de um inalador de multidose de pó (Turbohaler®) . O inalador está • equipado com uma unidade de dosagem . que distribui uma dose de 1 mg. 10 Biologia
Determinação do Tempo de Coagulação de Trombina (TT):
Foram incubados durante um min trombina humana (T 6769, 15 Sigma Chem Co) em solução tampão, pH 7,4, 100 μΐ, e solução inibidora, 100 pL. Foi então adicionado plasma humano citratado normal reunido, 100 pL, e o tempo de coagulação foi medido num dispositivo automático (KC 10, Amelung). 20 O tempo de coagulação em segundos foi registado contra a concentração do inibidor e foi determinado o IC50TT por interpolação. IC50TT é a concentração de inibidor que duplica o tempo de 25 coagulação de trombina para plasma humano.
Determinação do Tempo de Tromboplastina Parcial Activada (APTT) 30 Foi determinado o APTT em plasma citratado humano normal reunido, com o reagente PTT Automated 5 fabricado por Stago. Os inibidores foram adicionados ao plasma (10 pL de solução de inibidor para 90 pL de plasma) e o APTT foi determinado na mistura utilizando o analisador de coagulação KC10
- 242 - de inibidor para 90 μΣ de plasma) e o APTT foi determinado na mistura utilizando o analisador de coagulação KC10 (Amelung), de acordo com as instruções do produtor do reagente. O tempo de coagulação em segundos foi registado 5 contra a concentração de inibidor em plasma e o ICsoAPTT foi determinado por interpolação. O IC50APTT é definido como a concentração de inibidor· em plasma que duplica o Tempo de Tromboplastina Parcial 10 Activada.
Determinação do tempo de trombina ex vivo A inibição de trombina após administração oral dos compostos 15 foi examinada em ratos conscientes que dois dias antes da experiência foram equipados com um catéter para recolha de amostras de sangue da artéria carótida. No dia experimental foram recolhidas amostras de sangue a tempos fixos após a administração do composto em tubos de plástico contendo (1 20 parte de solução de citrato de sódio (0,13 mol por L) e 9 partes de sangue. Os tubos foram centrifugados para obter plasma pobre em plaquetas. 0 plasma foi utilizado para determinação do tempo de trombina como descrito abaixo. 25 O plasma de rato citratado, 100 μΣ, foi diluído com uma solução salina, 0,9%, 100 μΣ, e a coagulação do plasma foi iniciada através da adição de trombina humana (T 6769, Sigma Chem Co, USA) numa solução tampão, pH 7,4, 100 μΐ^ O tempo de coagulação foi medido num dispositivo automático (KC 10, 30 Amelung, Alemanha) .
Determinação da constante de inibição Kj para calicreína do plasma -243- -243- t r
As determinações de Ki foram realizadas através de um método de substrato cromogénico e realizadas num analisador centrífugo Cobas Bio fabricado pela Roche (Basileia, Suiça). A actividade enzimática residual após incubação de 5 calicreína de plasma humano com várias concentrações do composto do teste, foi determinada a três diferentes concentrações de substrato e medida como 10 alteração na densidade óptica a 405 nm e 37°C.
Calicreína de plasma humano (E.C.3.4.21.34, Chromogenix AB, Mõlndal, Suécia), 250 pL de 0,4 nkat/mL em tampão (Tris-HCl a 0,05 mol/L, pH 7,4, 1 0,15 ajustado com NaCl) com albumina 15 bovina a 5 g/L (cat n° 810033, ICI Biochemicals Ltd, High Wycombe, Bucks, GB), foi incubada durante 300 s com 80 pL da solução de composto do teste em 0,15 mol/L de NaCl contendo albumina 10 g/L. Foi fornecido neste teste 10 pL adicionais de água. Depois, foi adicionado 40 , pL de substrato de 20 calicreína (S-2302, Chromogenix AB, 1,25, 2,0 ou 4,0 mmol/L em água) juntamente com outros 20 pL de água, e a alteração da absorvância foi monitorizada.
Foi avaliada a Ki a partir de registos de Dixon, i.e. 25 diagramas da concentração de inibidor versus l/(AA/min), em que os resultados para as diferentes concentrações de substrato formam linhas rectas que interceptam a x = -Ki. -244- ABREVIATURAS Ac = 5 aq = Aze = betaPic = 10 Boc = Boc-Dig(Z) = 15 Boc-Mig(Z) = 20 Boc-Pig(Z) = 25 Boc-Pig(Z)2 =
Solução salina = Bn = Bu = acetilo aquoso ácido azetidina-2- carboxílico ácido piperidina-3- carboxílico terc-butiloxicarbonilo 3- (N-terc-butiloxicarbonil-aminoetil)-1-(N-benziloxicarbonilamidino) azetidina 3- (N-terc-butiloxicarbonil-aminometil)-1-(N-benziloxicarbonilamidino) azetidina 4- (N-terc-butiloxicarbonil-aminometil)-1-(N-benziloxicarbonilamidino) piperidina 4-(N-terc-butiloxicarbonil-aminometil)-1-(N-Ν' -dibenziloxicarbonilamidino ) piperidina água saturada/solução de NaCl benzilo butilo 30 -245-
Cgl Cha CME-CDI = 5 DBU = DCC = 10 DCU = DMAP = DMF = DMSO = EDC = 15 Et = EtOAc = EtOH = 20 Gly = h = HC1 -Hex = HOAc = 25 HOBt = Hoc = Hop = HOSu = H-Dig(Z) = 30 H-Dig =
Ciclohexilglicina β-ciclohexilalanina l-ciclohexil-3-(2- morfolinoetil)carbodiimida meto-p-toluenossulfonato 1,8-diazabiciclo [5.4.0] .. % undec-7-eno diciclohexilcarbodiimida diciclohexilureia N,N-dimetilaminopiridina dimetilformamida sulfóxido de dimetilo cloridrato de 1—(3— dimetilaminopropil)-3- etilcarbodiimida etilo acetato de etilo etanol glicina horas ácido clorídrico hexilo ácido acético N-hidroxibenzotriazole
Homociclohexilalanina
Homofenilalanina N-hidroxisuccinimida 3-aminoetil-l-(N- benziloxicarbonilamidino) azetidina 3-aminoetil-l- amidinoazetidina -246- Γ
U t H-(R,S)Hig(Z) H-(R,S)Hig = 5 H-Hig = H- (R, S) Itp (Ts) 10 H-(R,S)Itp = H-(S)ItpíTs) = 15 H-(S)Itp = H-Itp = 20 H-Mig(Z) = H-Mig = 25 H-(R,S)Nig(Z) H-(R,S)Nig = 30 H-Nig = H-Pab = (3RS)-1-(N- benxiloxicarbonilamidino)-3-aminoetilpirrolidina (3RS)-l-amidino-3-aminoetil pirrolidina l-amidino-3-aminoetil-pirrolidina , (4RS)-1,3-diaza-2- tosilimino-4- aminoetilciclohexano (4RS)-1,3-diaza-2-imino-4- aminoetilciclohexano (4 S)-1,3-diaza-2- tosilimino-4- aminoetilciclohexano (4S)-1,3-diaza-2-imino-4- aminoetil-ciclohexano 1,3-diaza-2-imino-4- aminoetilciclohexano 3-aminometil-l-(N- benziloxicarbonilamid- ino)azetidina 3-aminometil-l-amidino- azetidina (3RS)-1-(N- benziloxicarbonilamidino)-3-aminometil-pirrolidina (3RS)-l-amidino-3-aminometilpirrolidina l-amidino-3-aminometilpirrolidina l-amidino-4-aminometilbenzeno p L-c, H-Pab(Z) 5 H-Pac = H-Pac(Z) 10 H-Pig = H-Pig(Z) 15 H-Pig(Z)2 H-Rig(Z) 20 H-Rig = Me = MeOH = 25 Mpa -Ms = NMM = Pd/C = Pgl = Phe = Pic = Pro = -247- 4-aminometil-l-(N-benziloxicarbonilamidino)b enzeno l-amidino-4-aminometilciclohexano 1 4-aminometil-l-(N- benziloxicarbonilamidino)c iclohexano 4-aminometil-l-amidino-piperidina 4-aminometil-l-(N-benziloxi carbonil-amidino)-piperidina 4-aminometil-l-(N, Ν' -dibenziloxicarbonilamidino )piperidina 4-aminoetil-l-(N-benziloxicarbonilamidino)p iperi-dina 4-aminoetil-l-N-amidino piperidina metilo metanol mega Pascal mesilo N-metilmorfolina paládio em carvão fenilglicina fenilalanina ácido pipecolinico prolina 30 -248- | í—^ ^^
RPLC
Tf = 5 TFA ; THF ^ Tic 10 Ts = Vai Z =
Cromatografia líquida de fase reversa de elevado desempenho trifluorometilsulfonilo ácido trifluoroacético tetrahidrofurano.. · 1-carboxi-l,2,3,4- tetrahidroisoquinolina tosilo valina beziloxicarbonilo
Os prefixos n, s, i e t possuem os seus significados usuais: 15 normal, iso, sec e terciário. A estereoquímica para os aminoácidos é por defeito (S) salvo referência em contrário. -249- ABREVIATURAS (continuação, as linhas onduladas nos átomos de azoto nas fórmulas estruturais abaixo, significam a posição de ligação do fragmento.)
•nh
Pig (n*l) Pac (n=l)
Rig (n=2)
Itp (n=2)
Nig (n=l) Hig (n=2)
Mig (n=l) Dig (n=2)
Lisboa, 30 de Abril de 2001
O AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL 5

Claims (20)

  1. -1-
    t REIVINDICAÇOES 1. Composto de fórmula geral A1-A2-nh— (CH2) n-B Fórmula I
    èm que: A1 representa um fragmento estrutural de Fórmula lia, Ilb, IIc, Ild ou lie;
    em que: k é um inteiro 0, 1, 2, 3 ou 4; 15 -2- -2- Γ L-Cj ^ι. m é um inteiro 1, 2, 3 ou 4; q é um inteiro 0, 1, 2 ou 3; R1 representa H, um grupo alquilo possuindo 1 a 4 5 átomos de carbono, ou R11OOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e é possivelmente substituído na posição em que está alfa em relação ao grupo carbonilo, e o substituinte alfa é um grupo R17-(CH2)P-, em que p é 10 0, 1 ou 2 e R17 é metilo, fenilo, OH, COOR12, CONHR12, em que R12 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, e R11 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 6 átomos de carbono, ou 15 R1 representa Ph (4-COOR12)-CH2-, em que R12 é como definido acima, ou R1 representa R13-NH-CO-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e é 20 possivelmente substituído em alfa em relação ao carbonilo por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e em que R13 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono ou
  2. 25 -CH2COOR12, em que R12 é como definido acima, ou R1 representa R12OOC-CH2-OOC-alquil-, em que o. grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e é possivelmente substituído em alfa em relação ao 30 carbonilo por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e em que R12 é como definido acima, ou 5 10 15 20 25 -3- r R1 representa R14S02-, Ph (4-COOR12)-S02-, Ph(3- COOR12)-S02-, Ph (2-COOR12)-S02- em que R12 é como definido acima e R14 é um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono, ou R1 representa -CO-R15, em que R15 é um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos dè carbono, ou ' r~' - - R1 representa -CO-OR15, em que R15 é como definido acima, ou R1 representa -CO-(CH2) p-C00R12, em que R12 é como definido acima e p é um inteiro 0, 1 ou 2, ou R1 representa -CH2PO (OR16) 2, -CH2S03H ou -CH2-(5-(1H)-tetrazolil) em que R16 é, individualmente em cada ocorrência, H, metilo ou etilo; R2 representa H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono ou R21OOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e em que R21 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono; R3 representa um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono, e o grupo alquilo pode ou não conter um ou mais átomos de flúor, ou R3 representa um grupo ciclopentilo, ciclohexil- ou fenilo, que pode ou não ser substituído por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, ou 30 -4- R3 representa um grupo fenilo substituído por um grupo OR31, em que R31 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e k é 0, 1, ou 5 R3 representa um grupo 1-naftilo ou 2-naftilo e k é 0, 1, ou R3'representa um grupo cis- ou trans-decalino e k é 0, 1, ou 10 R3 representa 4-piridilo, 3-pirrolidilo ou 3-indolilo, que podem ou não ser substituídos por um grupo OR31, 15 em que R31 é como acima definido e k é 0, 1, ou R3 representa Si (Me) 3 ou CH(R32)2, em que R32 é um grupo ciclohexil- ou fenilo; 20 R4 representa H, um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, um grupo ciclohexilo ou fenilo; A2 representa um fragmento estrutural de Fórmula Illa, Illb ou IIIc
    em que: 25 p é um inteiro 0, 1 ou 2; m é um inteiro 1, 2, 3 ou 4; Y representa um grupo metileno, ou Y representa um grupo etileno e o anel. de 5 membros resultante pode conter -ou não um ou mais átomos de flúor, um grupo hidroxilo ou um grupo oxo na posição 4, ou pode ou estar ou não insaturado, ou Y representa -CH2-0-, -CH2-S-, -CH2-SO-, com a funcionalidade de heteroátomo na posição 4, ou Y representa um grupo n-propileno e o anel de 6 membros resultante pode conter ou não na posição 5 um átomo de flúor, um grupo hidroxilo ou um grupo oxo, conter dois átomos de flúor numa das posições 4 ou 5 ou estar insaturado nas posições 4 e 5, ou conter na posição 4 um grupo alquilo com 1 ou 4 átomos de carbono, ou Y representa -CH2-O-CH2-, -CH2-S-CH2-, -CH2-SO-CH2-, ou Y representa -CH2-CH2-CH2-CH2-; R3 é como definido acima; R5 representa H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, ou -6- \l R5 representa - (CH2) p-COOR51, em que p é 0, 1 ou 2 e R51 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono; 5 n é um inteiro 0, 1, 2, 3 ou 4; B representa -um"«fragmento estrutural de Fórmula IVa,- IVb',' 1VC ou IVd I
    10 em que: r é um inteiro 0 ou 1; X1 representa CH2 ou, NH ou está ausente; 15 X2 representa CH2, NH ou C=NH; X3 representa NH, C=NH, N-C(NH)-NH2, CH-C(NH)-NH2, CH-NH-C (NH)-NH2 ou CH-CH2-C (NH) -NH2; 20 X4 representa CH2 ou NH; X5 representa C(NH)-NH2; 25 X6 representa CH ou N; Γ -7- R6 é Η ou um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono; qualquer dos compostos como tal ou estereoisómeros 5 destes ou na forma de um sal fisiologicamente aceitável. "2. Composto de fórmula geral 10 A1-A2-nh—(CH2)n-B—D Fórmula V em que 15 A1 representa um fragmento estrutural de Fórmula lia, Ilb, IIc, Ild ou He;
    em que: 20 k é um inteiro 0, 1, 2, 3 ou 4; -8- -8- L·. \ r m é um inteiro 1, 2, 3 ou 4; q é um inteiro 0, 1, 2 ou 3; 5 R1 representa R11OOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e está possivelmente substituído na posição que é alfa em relação ao grupo carbonilo, e o substituinte alfa é um grupo R17-(CH2)P-, em que p é 0, 1 ou 2 e R17 é COOR12, 10 CONHR12, em que R12 é H, um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono ou um grupo benzilo, e R11 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 6 átomos de carbono, ou um grupo benzilo, ou 15 R1 representa Ph (4-COOR12)-CH2-, em que R12 é como definido acima, ou R1 representa R13-NH-CO-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1,( a 4 átomos de carbono e está 20 possivelmente substituído em alfa em relação ao grupo carbonilo, por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e em que R13 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono ou
  3. 25 -CH2COOR12, em que R12 é como definido acima, ou R1 representa R12OOC-CH2~OOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e está possivelmente substituído em alfa em relação ao 30 grupo carbonilo, por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e em que R12 é como definido acima, ou
    -9- u
    R1 representa R14S02-, Ph(4-COOR12)-S02-, Ph(3- COOR12)-SO2-, Ph(2-C00R12)-S02-, em que R12 é como definido acima e R14 é um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono, ou 5 R1 representa -CO-R15, em que R15 é um grupo alquilo possuindo t-4' átomos de carbono, ou f g- R1 representa -CO-OR15, em que R15 é como definido 10 acima, ou R1 representa -CO-(CH2)p-COOR12, em que R12 é como definido acima e p é um inteiro 0, 1 ou 2, ou 15 R2 representa H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono ou R2100C-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono e em que R21 é H, um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de . carbono ou um grupo benzilo; 20 R3 representa um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono, e o grupo alquilo pode conter ou não um ou mais átomos de flúor, ou 25 R3 representa um grupo ciclopentilo, ciclohexil- ou fenilo, que pode estar ou não substituído por um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, ou R3 representa um grupo fenilo substituído por um 30 grupo OR31, em que R31 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono e k é 0, 1, ou R3 representa um grupo 1-naftilo ou 2-naftilo e k é 0, 1, ou -10- -10-
    r R3 representa um grupo cis- ou trans-decalino e k é 0, 1, ou R3 representa 4-piridilo, 3-pirrolidilo ou 3-5 indolilo, que pode estar ou não substituído por um grupo OR31, em que R31 é como definido acima e k é 0, 1, ou R3 representa Si (Me) 3 ou CH(R32)2/ em que R32 é um grupo ciclohexil- ou fenilo; R4 representa H, um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono, um grupo ciclohexilo ou fenilo; A2, representa um fragmento estrutural de Fórmula Illa, Illb ou IIIc
    Btb em que: 20 p é um inteiro 0, 1 ou 2; m é um inteiro 1, 2, 3 ou 4; Y representa um grupo metileno, ou 25 -11- Y representa um grupo etileno e o anel de 5 membros resultante pode incorporar ou não um ou dois átomos de flúor, um grupo hidroxilo ou um grupo oxo na posição 4, ou pode estar ou não insaturado, ou 5 Y representa -CH2-0-, -CH2-S-, -CH2-SO-, com a funcionalidade do heteroátomo na posição 4, ou Y representa um grupo n-propileno e o anel de 6 10 membros resultante pode incorporar ou não na posição 5 um átomo de flúor, um grupo hidroxilo ou um grupo oxo, incorporar dois átomos de flúor numa das posições 4 ou 5 ou estar insaturado na posição 4 e 5, ou incorporar na posição 4 um grupo alquilo 15 com 1 a 4 átomos de carbono, ou Y representa -CH2-0-CH2-, -CH2-S-CH2-, -CH2-SO-CH2-, ou 20 Y representa -CH2-CH2-CH2-CH2-; R3 é como definido acima; R5 representa H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 25 átomos de carbono, ou R5 representa - (CH2)p-COOR51, em que p é 0, 1 ou 2 e R51 é H ou um grupo alquilo possuindo 1 a 4 átomos de carbono; N é um inteiro 0, 1, 2, 3 ou 4; 30 -12- -12- u Γ Β representa um fragmento estrutural de Fórmula IVa, IVb, IVc ou IVd
    em que: r é um inteiro 0 ou 1; X1 representa CH2, NH ou está ausente; X2 representa CH2, NH ou C=NH; X3 representa NH, C=NH, N-C(NH)-NH2, CH-C(NH)-NH2, CH-NH-C (NH) -NH2 ou CH-CH2-C (NH)-NH2; X4 representa CH2 ou NH; X5 representa C(NH)-NH2; X6 representa CH ou N; R6 é H ou um grupo alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono; D é Z ou (Z)2; Z é um grupo benziloxicarbonilo que se liga aos azotos de amidino ou guanidino presentes em B; -13-
    5 3 4 10 5 15 6 20 7 25 8 qualquer dos compostos como tal ou estereoisómeros destes ou na forma de um sal fisiologicamente aceitável. Composto de acordo com as reivindicações 1 ou 2, em que A1 é um fragmento estrutural de Fórmula lia ou Ilb. Composto de acordo com uma ou mais das reivindicações anteriores 1-3, em que R1 representa RuOOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos .de carbono e R11 é H. . Composto de acordo com uma ou mais das reivindicações anteriores 1-4, em que A2 é um fragmento estrutural de Fórmula IIIa. Composto de acordo com uma ou mais das reivindicações anteriores 1-4, em que A2 é um fragmento estrutural de Fórmula Illb. Composto de acordo com uma ou mais das reivindicações anteriores 1-6, em que B é um fragmento estrutural de Fórmula IVa, em que X1, X2 e X4 são CH2, X3 é CH-C(NH)-NH2, r é 1 e n é 1. . Composto de acordo com uma ou mais das reivindicações anteriores 1-6, em que B é um fragmento estrutural de Fórmula IVa, em que X1, X2 e X4 são CH2, X3 é N-C(NH)-NH2, réOoulenélou 2. Composto de acordo com uma ou mais das reivindicações anteriores 1-6, em que B é um 30 9 - 14- fragmento estrutural de Fórmula IVb, em que R6 é H e n é 1.
  4. 10. Composto de acordo com uma ou mais das 5 reivindicações anteriores 1-6, em que B é um elemento estrutural de Fórmula IVa, em que X1 e X3 são NH, X2 é C=NH, X4 é CH2, ré 1 e n é 2.
  5. 11. Composto de acordo com uma ou mais das reivin- 10 dicações anteriores 1-6, em que B é um elemento estrutural de Fórmula IVa, em que X1 está ausente, X2 e X4 são CH2, X3 é N-C(NH)-NH2, réOenélou 2. 15 20 25
  6. 12. Composto de acordo com as reivindicações 1 ou 2, em que n é 1 ou 2, A1 é um fragmento estrutural de Fórmula lia, em que k é 0 ou 1, R1 representa R11OOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono, R2 representa H, R3 representa um grupo ciclohexilo, A2 representa um fragmento estrutural de Fórmula II Ia em que Y representa um grupo metileno, um grupo etileno, ou um grupo n-propileno e o anel de 6 membros resultante pode ou não conter na posição 4 um grupo alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, R5 representa Η, B representa um fragmento estrutural de Fórmula IVa, em que X1, X2 e X4 são CH2 e X3 é CH-C(NH)-NH2 ou N-C(NH)-NH2, r é 0 ou 1, ou X1 e X3 são NH, X2 é C=NH, X4 é CH2, r é 1, ou X1 está ausente, X2 e X4 são CH2, X3 é N-C(NH)-NH2, r é 0.
  7. 13. Composto de acordo com as reivindicações 1 ou 2, em que n é 1, A1 é um fragmento estrutural de Fórmula lia, em que k é 0 ou 1, R1 representa RuOOC-alquil-, em que o grupo alquilo possui 1 a 4 átomos de 30 -15- f u carbono, R2 representa H, R3 representa um grupo ciclohexilo, A2 representa um fragmento estrutural de Fórmula IIIa em que Y representa um grupo metileno, um grupo etileno, ou um grupo n-propileno e o anel de 6 membros resultante pode ou não conter na posição 4 um grupo alquilo com 1 a 4 átomos de - - carbono, R5 representa Η, B representa um fragmento estrutural de Fórmula IVa, em que R6 é H.
  8. 14. Composto seleccionado de HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab HOOC-CH2- (R) Cgl-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Pro-Pab (HOOC-CH2) 2- (R) Cgl-Pro-Pab H-(R)Cgl-Pic-Pab HOOC-CHz- (R, S) CH (COOH) - (R) Cgl-Pic-Pab H-(R)Cha-Aze-Pab HOOC-CHz- (R) Cha-Aze-Pab HOOC-CH2- (R, S) CH (COOH) - (R) Cha-Aze-Pab HOOC-CH2- (RouS) CH (COOH) - (R) Cha-Aze-Pab/a HOOC-CHz- (RouS) CH (COOH) - (R) Cha-Aze-Pab/b HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pab HOOC-CH2-NH-CO-CH2- (R) Cha-Aze-Pab H-(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pab HOOC-CH2- (Me) (R) Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2- (Me) (R) Cha-Pro-Pab HOOC-CH2- (RouS) CH (COOH) - (R) Cha-Pro-Pab/a HOOC-CH2- (RouS) CH (COOH) - (R) Cha-Pro-Pab/b HOOC-CH2-NH-CO-CH2- (R) Cha-Pro-Pab EtOOC-CH2-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pab -16- Γ u Ph(4-COOH)-S02-(R) Cha-Pro-Pab H-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CH2- (RouS) CH (C.OOH) - (R) Cha-Pic-Pab/a 5 HOOC-CH2-(RouS)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/b HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pic-Pab HOOC-CO-(R) Cha-Pic-Pab. h , ... HOOC-CH2-CO- (R) Cha-.-Pic-Pab Me-OOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab 10 H2N-CO-CH2-(R)Cha-Pic-Pab Boc-(R)Cha-Pic-Pab Ac-(R)Cha-Pic-Pab Me-S02-(R)Cha-Pic-Pab H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab 15 HOOC-CH2-CH2- (R) Cha- (R, S) betaPic-Pab HOOC-CH2-(R)Cha-Val-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Val-Pab H-(R)Hoc-Aze-Pab HOOC-CH2-CH2-.(R) Hoc-Aze-Pab 20 HOOC-CH2-(R, S)CH(COOH)-(R)Hoc-Pro-Pab HOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Pab (HOOC-CH2) 2~ (R) Hoc-Pic-Pab HOOC-CH2- (R) Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab 25 HOOC-CH2-CH2- (R) Tic-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pig HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig H-(R)Cha-Aze-Pig HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pac 30 H-(R)Cha-Pro-Pac H-(R)Cgl-Ile-Pab H-(R)Cgl-Aze-Pab HOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab MeOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab -17- EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab nBuOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab nHexOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab H-(R)Cgl-Pro-Pac 5 HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pac HOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Pro-Pac HOOC-'CH'2-CH2- (R) Cha-Aze-Pac ' HÕOC'-CH2-(R)Cha-Aze-Pig · ' ’ HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pig 10 HOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Pro-Pig (HOOC-CH2) 2- (R) Cgl-Pro-Pig HOOC-CH2-CH2 (HOOC-CH2) - (R) Cha-Pro-Pig HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp HOOC-CH2-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp 15 H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-(R, S)Itp H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig H-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig 20 H-(R)Cgl-Aze-Rig HOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Rig HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Rig HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Rig HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-(S)Itp 25 H-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig H-(R)Cha-Pro-Mig H-(R)Cha-Pro-Dig H-(R)Cha-Aze-Dig 30 quer como tal ou estereoisómeros destes ou na forma de um sal fisiologicamente aceitável.
  9. 15. Composto seleccionado de -18- 5 HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pab HOOC-CH2-(R) Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pab HOOC-CH2- (R) Cha-Pic-Pab HOOC-CH2-(R) Cgl-Pro-Pig EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab HOOC-CH2-(R) Cha-Pro-Pac HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pig 10 guer como tal ou estereoisómeros destes ou na forma de um sal fisiologicamente aceitável.
  10. 16. Composto seleccionado de 15 BnOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) BnOOC-CH2-(R) Cgl-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Pro-Pab (Z) 20 (BnOOC-CH2) 2- (R) Cgl-Pro-Pab (Z) BnOOC-CH2- (R, S) CH (COOBn) - (R) Cgl-Pic-Pab (Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pab(Z) 25 BnOOC-CH2-(R, S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab (Z) BnOOC-CH2-(RouS)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/a BnOOC-CH2- (RouS) CH (COOBn) - (R) Cha-Aze-Pab (Z) /b BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pab (Z) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2- (R) Cha-Aze-Pab (Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pab (Z) BnOOC-CH2-CH2- (Me) (R) Cha-Pro-Pab (Z) BnOOC-CH2-(R, S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2- (R) Cha-Pro-Pab (Z) Ph(4-COOH)—S02—(R)Cha-Pro-Pab(Z) 30 -19-
    Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH2- (R) Cha-Pic-Pab (Z) BnOOC-CH2- (R, S) CH (COOBn) - (R) Cha-Pic-Pab (Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pic-Pab (Z) 5 EtOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) MeOOC-CH2-CO- (R) Cha-Pic-Pab (Z) H2N-CO-CH2- (R) Cha-Pic-Pab (Z) Ac-(R)Cha-Pic-Pab(Z) Me-S02- (R) Cha-Pic-Pab (Z) 10 BnOOC-CH2- (R) Cha-Val-Pab (Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha- (R, S) Val-Pab (Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Hoc-Aze-Pab (Z) BnOOC-CH2- (R, S) CH (COOBn) - (R) Hoc-Pro-Pab (Z) BnOOC-CH2- (R) Hoc-Pic-Pab (Z) 15 (BnOOC-CH2) 2-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R) Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Pro (3- (S) Ph) -Pro-Pab (Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Tic-Pro-Pab (Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pig (Z) 2 20 BnOOC-CH2- (R) Cgl-Pro-Pig (Z) 2 BnOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pac (Z) BnOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab(Z) MeOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) EtOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) 25 nBuOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab (Z) nHexOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pac (Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pac(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pac(Z) 30 BnOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pig(Z) BnOOC-CH2-(R) Cha-Pro-Pig(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pig(Z) (BnOOC-CH2) 2-(R)Cgl-Pro-Pig(Z) BnOOC-CH2-CH2 (BnOOC-CH2) - (R) Cha-Pro-Pig (Z) -20-
    BnOOC-CH2- (R) Cha-Pic- (R, S) Itp (Z) BnOOC-CH2- (R) Cgl-Pro- (R, S) Hig (Z) BnOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Rig (Z) BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Rig (Z) 5 BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Rig (Z) · quer como tal ou estereoisómeros destes ou na fo-rpia-' de um sal fisiologicamente aceitável·.
  11. 17. Composto seleccionado de BnOOC-CH2- (R)Cgl-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pab (Z) BnOOC-CH2- (R) Cha-Pic-Pab(Z) 15 BnOOC-CH2- (R) Cgl-Pro-Pig (Z) 2 EtOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pac (Z) BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pig (Z) 20 quer como tal ou estereoisómeros destes ou na forma de um sal fisiologicamente aceitável.
  12. 18. Composto seleccionado de 25 H-(R)Pro-Phe-Pab H00C-CH2- (R) Pro-Phe-Pab H-(R)Phe-Phe-Pab H00C-CH2- (R) Phe-Phe-Pab H00C-C0-(R)Phe-Phe-Pab 30 quer como tal ou estereoisómeros destes ou na forma de um sal fisiologicamente aceitável. 19. Composto seleccionado de -21- Boc-(R)Pro-Phe-Pab(Z) BnOOC-CHz-(R)Pro-Phe-Pab(Z) Boc-(R)Phe-Phe-Pab (Z) MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) BnOOC-CHz- (R) Phe-Phe-Pab(Z) quer como tal ou estereoisómeros -de.stes ou na forma de um sal fisiologicamente aceitável. 10 20. 15 Processo para preparar um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-19, cujo processo compreende o acoplamento de qualquer aminoácido protegido no terminal N ou dipéptido ou aminoácido, quando é utilizado um aminoácido no terminal N é adicionado um segundo aminoácido posteriormente utilizando métodos convencionais, a iam composto H2N- (ch2) n- 20 25 em que n é um inteiro 0, 1, 2, 3 ou 4, XéBou B-D, em que B é como definido na Fórmula I e D é como definido na Fórmula V como tal ou possuindo os azotos de guanidino ou amidino mono- ou di-protegidos com um grupo protector amina tal como um grupo benziloxicarbonil-, terc-butiloxicarbonil- ou p-toluenosulfonil- ou X é um grupo transferível para B seguido por remoção do(s) grupo(s) de protecção ou desprotecção do azoto do terminal N, seguido por alquilação do azoto do terminal N e, se desejável, desprotecção através de métodos conhecidos e, se desejável, formar um sal fisiologicamente aceitável, e nos casos em que a reacção resulta numa mistura de estereoisómeros, estes são separados opcionalmente através de técnicas convencionais de cromatografia 30 -22- ou de re-cristalização, e se desejável é isolado um único estereoisómero. 21 5 10 Processo de acordo com a reivindicação 20 para preparação de um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-19, cujo processo compreende: ^«rn i f.* j > a) (Método Ia) Acoplamento de um di-péptido*" protegido no terminal N, seleccionado a partir de A1 e Az nas Fórmulas I ou V utilizando acoplamento peptidico convencional, apresentado na fórmula w1— A1 — A2 —OH
    em que n é como definido na Fórmula I, W1 é um grupo 15 de protecção amino do terminal N tal como terc- butiloxicarbonilo e benziloxicarbonilo e Q1 é -C(NH)-NH2, -C(NW2)-NH-W2, -C(NH)-NH-W2, -NH-C(NH)- NH2, -NH-C(NH)-NH-W2, -N(W2)-C(NH)-NH-W2 OU -nh-C (NW2)-NH-W2, em que W2 é um grupo de protecção 20 amina tal como terc-butiloxicarbonilo ou benziloxicarbonilo, ou Q1 é -CN, -CO-NH2 ou -CS-NH2, em que o grupo é subsequentemente transferido para um grupo amidino ou Q1 é NH2 ou NH-W2, em que W2 é -23- i -23- i 5 10 como definido acima, em que o grupo amino é subsequentemente transferido para um grupo guanidino (dando Q1 = -NH-C(NH)-NH2), após despro-tecção do grupo W2 quando Q1 é -NH-W2 (W2 neste caso deve ser ortogonal em relação a W1) , por métodos conhecidos na técnica. b) (Método Ib) Acoplamento de' um aminoácido protegido no terminal N, seleccionado a partir de A2 nas Fórmulas I ou V e preparado utilizando acoplamento peptidico convencional, apresentado na fórmula W— A2 —OH
    em que n, W1 e Q1 são como definido acima, seguido 15 por desprotecção do grupo W1 e acoplamento com o aminoácido do terminal N, numa forma protegida, levando ao péptido protegido descrito no Método Ia acima, 20 c) (Método lia) Acoplamento de um di-péptido protegido no terminal N, seleccionado a partir de A1 e A2 nas Fórmulas I ou V utilizando acoplamento peptídico convencional, apresentado na fórmula W1—A1 — Aá —OH
    w1 A1 A2-”N—(CHj) em que n é como definido na Fórmula I, W1 é um grupo de protecção amino do terminal N, tal como terc-butiloxicarbonilo e benziloxicarbonilo e Q1 é -C(NH)-NH2, -C(NW2) -NH-W2, -C(NH)-NH-W2, -NH-C(NH)- NH2, -NH-C(NH)-NH-W2, -N(W2)-C(NH)-NH-W2 ou -nh-C(NW2) -NH-W2, em que W2 é um grupo de protecção amina tal como terc-butiloxicarbonilo ou benziloxicarbonilo, ou Q1 é -CN, -CO-NH2 ou CS-NH2, em que o grupo é subsequentemente transferido para um grupo amidino ou Q1 é NH2 ou NH-W2, em que W2 é como definido acima, em que o grupo amino é subsequentemente transferido para um grupo W1-A1 - A2 -OH r(CHi)T-X*
    -25- p L·, ^ guanidino (dando Q1 = -NH-C (NH)-NH2) , após desprotecção do grupo W2 quando Q1 é -NH-W2 (W2 neste caso deve ser ortogonal em relação a W1) , por métodos conhecidos na técnica. d) (Método Ilb) Acoplamento de um aminoácido protegido no terminal N, seleccionado a partir de. A?-> nas Fórmulas I ou V utilizando acoplamento peptídico convencional, apresentado na fórmula
    em que n, W1 e Q1 são como definido acima, seguido de desprotecção do grupo W1 e acoplamento com o aminoácido do terminal N, numa forma protegida, levando ao péptido protegido descrito no Método lia 15 acima, e) (Método Illa) Acoplamento de um di-péptido protegido no terminal N, seleccionado a partir de A1 e A2 nas Fórmulas I ou V utilizando acoplamento peptídico convencional, apresentado na fórmula 20 -26- ρ L·, em que η é como definido na Fórmula I e r é 0 ou 1, quando X1, X2 e X4 são CH2 ou r é 0 quando X2 e X4 são CH2 e X1 está ausente, W1 é um grupo de protecção amino do terminal N tal como terc-butiloxicarbonilo e benziloxicarbonilo e Q2 é -C(NH)-NH2, -C(NW2)-NH-W2, ou -C(NH) -NH-W2, em que W2 é um grupo de protecção amina- tal. como terc-butiloxicarbonilo ou · benziloxicarbonilo, ou Q2 é igual a W2 em que o grupo amino, após desprotecção do grupo W2 (W2 neste caso deve estar ortogonal em relação a W1), é subsequentemente transferido para um grupo guanidino utilizando um reagente de guanidinação não protegido, protegido em N ou diprotegido em N,N', através de métodos conhecidos na técnica, f) (Método Illb) Acoplamento de um aminoácido protegido no terminal N, seleccionado a partir de A2 nas Fórmulas I ou V utilizando acoplamento peptidico convencional, apresentado na fórmula w— A2 —OH ’ (CH2)—X< HjN-t-ÍCHj)
    w*- A2-W—(CHa)
    V-Q2 X1-X2 -27- p U, ^^ em que η, r, X1, X2 e X4, W1 e Q2 são como definido acima, seguido de desprotecção do grupo W1 e acoplamento com o aminoácido do terminal N, numa forma protegida, levando ao péptido protegido 5 descrito no Método Illa acima, . *T.‘ · g) (Método -' 'IVa) Acoplamento de um di-péptido protegido' rio ‘terminal N, seleccionado a partir de A1· e A2 nas Fórmulas I ou V utilizando acoplamento 10 peptidico padrão, apresentado na fórmula w— A1 — A2 —oh
    em que n é como definido na Fórmula I, W1 é um grupo de protecção amino no terminal N, tal como terc-butiloxicarbonilo ou benziloxicarbonilo e W3 é H ou 15 um grupo de protecção amino, tal como arilsulfonilo, benziloxicarbonilo ou terc-butiloxicarbonilo. h) (Método IVb) Acoplamento de um aminoácido protegido no terminal N, seleccionado a partir de A2 20 -28-
    nas Fórmulas I ou V e utilizando acoplamento peptidico padrão, apresentado na fórmula W1
    -OH
    em que n, W1, e W3 são como definido acima, seguido 5 de desprotecção grupo W1 e acoplamento com o aminoácido do terminal N, numa forma protegida, levando ao péptido protegido descrito no Método Iva, 10 os produtos finais podem ser obtidos por quaisquer dos seguintes modos, dependendo da natureza dos grupos Q1- ou Q2- utilizados: Remoção do(s) grupo(s) de protecção (quando Q*= -C(NH)-NH2, -C (NW2)-NH-W2, -C (NH) -NH-W2, -NH-C(NH)-NH2, -NH-C (NH) -NH-W2, -N(W2)-15 C (NH) -NH-W2 ou -NH-C (NW2)-NH-W2) , ou uma desprotecção selectiva do grupo W1 (p. ex. quando Q1 ou Q2 = -C(NW2)-NH-W2, -C(NH)-NH-W2, -NH-C (NH)-NH-W2, -N(W2)-C(NH)-NH-W2 ou -NH-C (NW2)-NH-W2 (W2 neste caso deve estar ortogonal em relação a W1), seguido por -29- alquilação do azoto do terminal N e se desejado, desprotecção.
  13. 22. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 5 1-19 para utilização em terapia.
  14. 23. Composto de acordo com qualquer, das reivindicações 1-5 ou 7-17 para utilização como um agente anti-coagulante ou anti-trombótico. 10
  15. 24. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-4, 6-10 ou 18-19 para utilização como agente anti-inflamatório.
  16. 25. Preparação farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um composto como descrito nas reivindicações 1-19, em associação com um ou mais veículos farmacêuticos.
  17. 26. Preparação farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um composto como descrito em qualquer das reivindicações 1-5 ou 7-17, em associação com um ou mais veiculos farmacêuticos para utilização como um agente anti-coagulante ou anti-trombótico. 25
  18. 27. Preparação farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um composto como descrito em qualquer das reivindicações 1-4, 6-10 ou 18-19, em associação com um ou mais veiculos farmacêuticos para utilização 30 como um agente ant.i-inflamatório.
  19. 28. Utilização de um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-5 ou 7-17 como um ingrediente activo para fabricar uma preparação farmacêutica -30- para inibição de trombina num organismo humano ou animal.
  20. 29. Utilização de um composto de acordo com qualquer das 5 reivindicações 1-4, 6-10 ou 18-19 como um ingrediente activo para fabricar uma preparação farmacêutica> para inibição de quininogenases num , organismo humano ou animal. 10 Lisboa, 30 de Abril de 2001 O AGENTE OFICIAI. DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL 15
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