NO314406B1 - Nye peptidderivater, farmasöytisk preparat inneholdende slike derivater, deres anvendelse, fremgangsmåter for deres fremstilling, ogmellomprodukter - Google Patents

Nye peptidderivater, farmasöytisk preparat inneholdende slike derivater, deres anvendelse, fremgangsmåter for deres fremstilling, ogmellomprodukter Download PDF

Info

Publication number
NO314406B1
NO314406B1 NO19954873A NO954873A NO314406B1 NO 314406 B1 NO314406 B1 NO 314406B1 NO 19954873 A NO19954873 A NO 19954873A NO 954873 A NO954873 A NO 954873A NO 314406 B1 NO314406 B1 NO 314406B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
pab
cha
pro
hooc
aze
Prior art date
Application number
NO19954873A
Other languages
English (en)
Other versions
NO954873L (no
NO954873D0 (no
Inventor
Karl Thomas Antonsson
Ruth Elvy Bylund
Nils David Gustafsson
Nils Olov Ingemar Nilsson
Original Assignee
Astrazeneca Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Astrazeneca Ab filed Critical Astrazeneca Ab
Publication of NO954873D0 publication Critical patent/NO954873D0/no
Publication of NO954873L publication Critical patent/NO954873L/no
Publication of NO314406B1 publication Critical patent/NO314406B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/06—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D239/08—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms directly attached in position 2
    • C07D239/12—Nitrogen atoms not forming part of a nitro radical
    • C07D239/14—Nitrogen atoms not forming part of a nitro radical with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, attached to said nitrogen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/62—Compounds containing any of the groups, X being a hetero atom, Y being any atom, e.g. N-acylcarbamates
    • C07C271/64—Y being a hydrogen or a carbon atom, e.g. benzoylcarbamates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D205/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D205/02—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D205/04—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon radicals, substituted by hetero atoms, attached to ring carbon atoms
    • C07D207/09—Radicals substituted by nitrogen atoms, not forming part of a nitro radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/08—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/18—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D211/26—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms with hydrocarbon radicals, substituted by nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/022—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -X-C(=O)-(C)n-N-C-C(=O)-Y-; X and Y being heteroatoms; n being 1 or 2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/022—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -X-C(=O)-(C)n-N-C-C(=O)-Y-; X and Y being heteroatoms; n being 1 or 2
    • C07K5/0222—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -X-C(=O)-(C)n-N-C-C(=O)-Y-; X and Y being heteroatoms; n being 1 or 2 with the first amino acid being heterocyclic, e.g. Pro, Trp
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • C07K5/06165—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic and Pro-amino acid; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører nye konkurrerende inhibitorer for trypsinlignende
serinproteaser, spesielt trombin og kininogenaser slik som kallikrein, deres syntese, farmasøytiske preparater inneholdende forbindelsene som aktive bestanddeler, og anvendelsen av forbindelsene som henholdsvis trombininhibitorer og antikoaguleringsmidler og som antiinflammatoriske inhibitorer. Videre angår oppfinnelsen nye mellomprodukter.
Blodkoagulering er den nøkkelprosess som er involvert i både hemostase (dvs. hindring av blodtap fra en skadet blodåre) og trombose (dvs. den patologiske okklusjon av en blodåre på grunn av blodlevring). Koagulering er resultatet av en kompleks serie av enzymatiske reaksjoner hvor et av slutrrinnene er omdannelse av proenzymet pro-trombin til det aktive enzymet trombin.
Trombin spiller en sentral rolle i koagulering. Det aktiverer blodplater, det omdanner fibrinogen til fibrinmonomerer som polymeriserer spontant til filamenter, og det aktiverer faktor XIII, som videre tverrbinder polymeren til uoppløselig fibrin. Videre aktiverer trombin faktor V og faktor XIII i en positiv tilbakematningsreaksjon. Trombininhibitorer forventes derfor å være effektive antikoaguleirngsmidler ved inhibering av blodplater, fibrindannelse og fibrinstabilisering. Ved inhibering av den positive til-bakematningsmekanismen forventes de å utøve inhibering tidlig i kjeden av hendelser som leder til koagulering og trombose.
Kininogenaser er serinproteaser som virker på kininogener til dannelse av kininer (bradykinin, kallidin og Met-Lys-bradykinin). Plasmakallikrein, vevkallikrein og mastcelletryptase representerer viktige kininogenaser.
Kininer (bradykinin, kallidin) er generelt involvert i inflammasjon. Den aktive inflammasjonsprosssen er for eksempel forbundet med forøket permeabilitet i blodkarene hvilket resulterer i ekstravasasjon av plasma inn i vevet. Det resulterende plasmaeksudat inneholder alle proteinsystemene i sirkulerende blod. De plasmaavledete kininogenene vil uunngåelig samvirke med forskjellige kallikreiner under kontinuerlig dannelse av kininer så lenge som den aktive plasmaeksudasjonsprosessen foregår. Plasmaeksudasjon oppstår uavhengig av de mekanismer som er involvert i inflammasjonen, enten den er allergisk, infeksjon eller andre faktorer (Persson et al, Editorial, Thorax, 1992,47:993-1000). Plasmaeksudasjon er således et trekk ved mange sykdommer inkludert astma, rhinitt, vanlig forkjølelse, og inflammatoriske tarmsykdommer. Spesielt når det gjelder allergi vil mastcelletryptase bli frigjort
(Salomonsson et al, Am. Rev. Respir. Dis., 1992,146:1535-1542) og bidrar derved til kinindannelse og andre patogene hendelser når det gjelder astma, rhinitt og tarmsykdommer.
Kininene er biologisk høyaktive stoffer med virkninger på glatt muskulatur, sekretoriske virkninger, neurogene virkninger, og virkninger som kan gj vedvarende inflammatoriske prosesser inkludert aktivering av fosfolipase A2 og øke vaskulær permeabilitet. Sistnevnte virkning induserer potensielt en ond sirkel med kininer som gir opphav til en generasjon av flere kininer osv.
Vevkallikrein spalter hovedsakelig lavmolekylvektig kininogen til dannelse av kallidin og plasmakallikrein frigjør fortrinnsvis bradykinin fra høymolekylvektig kininogen.
Trombininhibitorer basert på aminosyresekvensen omkring spaltningssetet for fibrinogen Aa-kjeden ble først rapportert av Blombåck et al i J. Clin. Lab. Invest. 24 suppl 107,59, (1969), som foreslo at sekvensen Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, heri referert til som P3-P2-P1 -sekvensen) var den beste inhibitoren.
I US 4.346.078 har S. Bajusz et al beskrevet trombininhibitoren H-DPhe-Pro-Agm, et dipeptidylderivat med en aminoalkylguanidin i Pl-stillingen.
Trombininhibitorer basert på peptidderivater med en syklisk aminoalkylguanidin, for eksempel 3-aminometyl-l-amidinopiperidin, i Pl-stillingen har blitt beskrevet i EP-A2-0.468.231.
I EP-A2-0.185.390 har S. Bajusz et al angitt at erstatning av agmatin med et arginin-aldehyd ga en trombininhibitor som hadde mye høyere virkningsgrad.
Kallikreininhibitorer basert på aminosyresekvensen omkring spaltningssetet Arg-Ser har tidligere blitt rapportert.
Argininklormetylketonene H-DPro-Phe-Arg-CH2Cl og H-D Phe-Phe-Arg-CH2C1 er rapportert som plasmakallikreininhibitorer av Kettner og Shaw i Biochemistry 1978, 17:4778-4784 ogMeth. Enzym. 1981, 80:826-842.
Likeledes er estere og amidiner inneholdende H-DPro-Phe-Arg-sekvensen rapportert av Fareed et al i Ann. N.Y. Acad. Sei. 1981, 370:765-784 som plasmakallikreininhibitorer. Inhibitorer til serinproteaser som er basert på elektrofile ketoner i stedet for aldehyder i Pl-stillingen er beskrevet i følgende patentdokumenter: EP-A2-0-195.212 beskriver peptidyl-a-ketoestere og -amider, EP-A1-0.362.002 beskriver fluoralkylamidketoner og EP-A2-0.364.344 beskriver a,fi,5-triketo-forbindelser som er i besittelse av forskjellige peptidaseinhiberende egenskaper.
Inhibitorer til trypsinlignende serinproteaser, slik som trombin og kallikrein, basert på C-terminale borsyrederivater av arginin og isotiouroniumanaloger derav er omtalt i EP-A2-0.293.881.
WO 92/04371 beskriver kinogenaseinhibitorer, for eksempel kallikreininhibitorer basert på derivater av arginin.
EP-Al-0.530.167 beskriver a-alkoksyketonderivater av arginin som trombininhibitorer.
Et formål med foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe nye og potente trypsinlignende serinproteaseinhibitorer, spesielt antikoagulerende midler og antiinflammatoriske forbindelser med konkurrerende inhiberende aktivitet mot deres enzym, dvs. forårsaker reversibel inhibering. Mer spesielt antikoaguleringsmidler for profylakse og behandling av tromboemboliske sykdommer slik som venøs trombose, pulmonal embolisme, arteriell trombose, spesielt myokardinfarkt og cerebral trombose, generelle hyperkoagulerbare tilstander og lokale hyperkoagulerbare tilstander, for eksempel etter angioplasti og korronare bypass-operasjoner, og andre situasjoner hvor trombin antas å spille en rolle, for eksempel Alzheimers sykdom, samt inhibering av kininogenaser for behandling av inflammatoriske, for eksempel astma, rhinitt, urticaria, inflammatorisk tarmsykdom, og artritt. Et ytterligere formål er å oppnå trombininhibitorer som er oralt biotilgjengelige og selektive med henblikk på inhibering av trombin i forhold til andre serinproteaser. Nok et formål med oppfinnelsen er å oppnå kininogenaseinhibitorer som kan gis oralt, rektalt, topisk, for eksempel dermalt, eller via inhaleringsveien.
Forbindelser
Det er i foreliggende sammenheng funnet nye peptidderivater som, enten som sådanne eller i form av fysiologisk akseptable salter, og inkludert stereoisomerer, er potente inhibitorer til serinproteaser, spesielt trombin og kininogenaser slik som kallikrein.
Ifølge foreliggende oppfinnelse er det således tilveiebrakt nye forbindelser som er kjennetegnet ved at de har den generelle formel (f):
hvor:
A^ representerer et strukturelt fragment av formel Ila, Hb eller lic;
hvor
k er et helt tall 0,1, 2, 3 eller 4;
q er et helt tall 0,1,2 eller 3;
Ri representerer H, en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller R^OOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og er eventuelt substituert i stillingen som er alfa til karbonylgruppen, og alfa-substituenten er en gruppe R^-(CH2)p-, hvorp er 0,1 eller 2 og Ri? er metyl, COOR^, hvor R<l2> er H eller en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, og R* * er H eller en alkylgruppe med 1-6 karbonatomer, eller
Ri representerer R<13->NH-CO-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og eventuelt er substituert alfa til karbonylgruppen med en alkylgruppe som har 1-4 karbonatomer og hvor R^ er H eller -CH^COOR^, hvor R^ er som definert ovenfor, eller
Ri representerer R<l2>oOC-CH2-OOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer, og hvor R<l2> er definert ovenfor, eller
R<1> representerer R14S02-, Ph(4-COOR12)-S02-, Ph(3-COOR12)-S02-, <p>h(2-COOR<12>)-S02-,hvorR<l2> er som definert ovenfor og R<l4> er en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller
Ri representerer -CO-R<l>^ hvor R<l5> er en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller Ri representerer -CO-ORl 5, hvor R<i5> er som definert ovenfor, eller
Ri representerer -CO-(CH2)p-COORl2 hvor R<i2> er som definert ovenfor og p er et helt tall 0,1 eller 2, eller
R<2> representerer H eller en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer eller R^OOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og, hvor R<2*> er H eller en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer;
R<3> representerer en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller
R<3> representerer en cyklopentyl-, cykloheksyl- eller en fenylgruppe;
R<4> representerer H eller en fenylgruppe;
A<2> representerer et strukturelt fragment av formel Ula, mb eller Ille
hvor:
p er et helt tall 0,1 eller 2;
m er et helt tall 1, 2, 3 eller 4;
Y representerer en metylengruppe, eller
Y representerer en etylengruppe, eller
Y representerer en n-propylengruppe,
R<3> er som definert ovenfor:
R<5> representerer H, eller
n er et helt tall 0,1, 2,3 eller 4;
B representerer et strukturelt fragment av formel IVa eller IVb,
hvor:
r er et helt tall 0 eller 1;
X<l> representerer CH2, NH eller er fraværende;
X<2> representerer CH2, NH eller C - NH;
X<3> representerer NH, C=NH, N-C(NH)-NH2 eller CH-C(NH)-NH2;
X^ representerer CH2 eller NH;
X<5> representerer C(NH)-NH2;
R<6>erH;
enten forbindelsen som sådan eller stereoisomerer derav eller i form av et fysiologisk akseptabelt salt.
Foretrukne kombinasjoner av X<*>, X<2>, X<3>, X<4> og r er:
Xl, X2 og X<4> er CH2, X<3> er CH-C(NH)-NH2 og r er 0, 1 eller,
X<*>, X<2> og X4 er CH2, X3 er N-C(NH)-NH2 og r er 0,1, eller X<1> og X<3> er NH, X<2> er C=NH, X<4> er CH2 og r er 0,1, eller
X<1> og X<4> er CH2, X<2> er C=NH, X<3> er NH og r er 0,1, eller
X<1> er CH2, X<2> og X<4> er NH, X<3> er C=NH og r er 1, eller
X<1>, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er CH-NH-C(NH)-NH2 og r er 0,1, eller X<1> er fraværende, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er CH-C(NH)-NH2 og r er 0, eller X<1> er fraværende, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er N-C(NH)-NH2 og r er 0;
spesielt foretrukne kombinasjoner av X^, X<2>, X<3>, X<4> og r er:
X<1>, X<2> og X4 er CH2, X3 er CH-C(NH)-NH2 og r er 1;
X<1>, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er N-C(NH)-NH2 og r er 0 eller 1;
X<1> er fraværende, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er N-C(NH)-NH2 og r er 0;
X<1> og X3 er NH, X<2> er C=NH, X<4> er CH2 og r er 1.
Forbindelser av formel I som har S-konfigurasjon på A<2->aminosyren er foretrukne, av disse er forbindelser som også har R-konfigurasjon på A<1->aminosyren spesielt foretrukne.
I foreliggende sammenheng kan betegnelsen "en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer" være rett eller forgrenet med mindre annet er spesifisert. En alkylgruppe med 1-4 karbonatomer kan være metyl, etyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, i-butyl, s-butyl og t-butyl.
I foreliggende sammenheng kan betegnelsen "en alkylgruppe med 1-6 karbonatomer" bety rett eller forgrenet med mindre annet er spesifisert. En alkylgruppe som har 1-6 karbonatomer kan være metyl, etyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, i-butyl, s-butyl, t-butyl, n-pentyl, i-pentyl, t-pentyl, neo-pentyl, n-heksyl eller i-heksyl. Når det refereres til umetning menes det en karbon-karbon-dobbeltbinding.
De bølgeformede linjene på karbonatomet i karbonylgruppen i formlene Ila, Ilb, lic, Illa, mb, Ille, på nitrogenatomet i formlene ma, mb, mc og på karbonatomet i ringsystemet i formlene IVa, IVb betegner fragmentets bindingsstilling.
Forkortelser er angitt til slutt heri.
Ifølge foreliggende oppfinnelse er det funnet at forbindelser av den generelle formel Ia, enten som sådanne eller i form av fysiologisk akseptable salter, og inkludert stereoisomerer, er potente inhibitorer ti! trombin:
hvor:
A<*> representerer et strukturelt fragment av formel Ila, Hb eller Ile fortrinnsvis Ila eller Ilb;
hvor:
k er et helt tall 0,1,2, 3 eller 4, fortrinnsvis 0,1;
q er et helt tall 0,1,2 eller 3, fortrinnsvis 1;
Ri representerer H, en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, ^OOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og eventuelt er substituert i den stilling som er alfa til karbonylgruppen, og alfa-substituenten er en gruppe R^-(CH2)p-, hvor p er 0,1 eller 2 og Ri? er metyl, fenyl, OH, COOR^<2>, hvor R^<2> er H eller en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, og R^ 1 er H eller en alkylgruppe med 1-6 karbonatomer, eller
Ri representerer R<13->NH-CO-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og eventuelt er substituert alfa til karbonylgruppen med en alkylgruppe som har 1-4 karbonatomer og hvor R^<3> er H eller -CH2COOR<I2> hvor R<*2> er som definert ovenfor, eller
Ri representerer R<l2>OOC-CH2-OOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og hvor R<l2> er som definert ovenfor, eller
Ri representerer Rl4S02-, Ph(4-COORl2)-S02-, Ph(3-COOR12)-S02-, Ph(2-COOR<l2>)-S02-hvorR<l2> er som definert ovenfor og R<i4> er en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller
Ri representerer -CO-R<l>^, hvor RIS er alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller Ri representerer -CO-OR<l>^, hvor R<l>^ er som definert ovenfor, eller
Ri representerer -CO-(CH2)p-COOR<l2>, hvor R<i2> er som definert ovenfor og p er et helt tall 0,1 eller 2, eller
Ri representerer fortrinnsvis Ri lOOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og RH erH;
R<2> representerer H eller en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller R<2l>00C-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og R<2i> er H eller en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer;
R<3> representerer en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer eller
R<3> representerer en cyklopentyl-, cykloheksyl- eller en fenylgruppe;
R<4> representerer en fenylgruppe;
A<2> representerer et strukturelt fragment av formel Illa, IHb eller Ule, fortrinnsvis Hia;
hvor:
p er et helt tall 0, 1 eller 2;
m er et helt tall 1, 2,3 eller 4, fortrinnsvis 2,3;
Y representerer en metylengruppe, eller
Y representerer en etylengruppe, eller
Y representerer en n-propylengruppe;
R<3> representerer en alkylgruppe med 1 -4 karbonatomer;
R<5> representerer H;
n er et helt tall 0,1, 2,3 eller 4, fortrinnsvis 1, 2, 3;
B representerer et strukturelt fragment av formel IVa eller IVb,
hvor:
X1, X2, X3, X4, X5 ogX<6> er som definert som ovenfor;
r et helt tall 0 eller 1;
R<6> er H;
foretrukne kombinasjoner av X<1>, X<2>, X<3>, X<4> og r er:
X<1>, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er CH-C(NH)-NH2 og r er 0 eller 1, eller x<l>, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er N-C(NH)-NH2 og r er 0 eller 1, eller Xl og X<3> er NH, X<2> er C=NH, X<4> er CH2 og r er 0 eller 1, eller
Xl og X<4> er CH2, X<2> er C=NH, X<3> er NH og r er 0 eller 1, eller
Xl er CH2, X<2> og X<4> er NH, X<3> er C=NH og r er 1, eller
X<1>, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er CH-NH-C(NH)-NH2 og r = 0 eller 1, eller X<l> er fraværende, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er CH-C(NH)-NH2 og r er 0; eller X<l> er fraværende, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er N-C(NH)-NH2 og r er 0;
spesielt foretrukne kombinasjoner av X', X<2>, X<3>, X<4> og r er:
Xl er fraværende, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er N-C(NH)-NH2 og r er 0, eller X<1>, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er CH-C(NH)-NH2 og r = 1, eller
X<1>, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er N-C(NH)-NH2 og r = 0 eller 1, eller Xl og X<3> er NH, X2 er C=NH, X<4> er CH2, r er 1;
X<5> representerer C(NH)-NH2.
Ifølge en foretrukket utførelse angår oppfinnelsen forbindelser av formel Ia,
hvor:
Al representerer et strukturelt fragment av formel Ila,
hvor:
k er 0 eller 1;
R.1 representerer R* lOOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer, spesielt metylen, etylen og Ri 1 er H;
R<2> representerer H;
R<3> representerer en cykloheksylgruppe;
A<2> representerer et strukturelt fragment av formel Illa,
hvor:
Y representerer en metylengruppe, en etylengruppe, eller en n-propylengruppe, fortrinnsvis representerer Y metylen, etylen;
R<5> representerer H;
B representerer et strukturelt fragment av formel F/a
hvor:
X<1> er fraværende, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er N-C(NH)-NH2, r er 0 og n er 1 eller 2; X1 og X3 er NH, X<2> er C=NH, X<4> er CH2, r er 1 og n er 2, eller
X<1>, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er CH-C(NH)-NH2, r er 1 og n er 1, eller
X1, X2 og X<4> er CH2, X<3> er N-C(NH)-NH2, r er 0 eller 1 og
n er 1 eller 2, eller
mer spesielt foretrukket er forbindelser hvor B representerer et strukturelt fragment av formel IVb hvor:
X<5> representerer C(NH)-NH2, R<6> er H og n = 1.
Foretrukne forbindelser ifølge oppfinnelsen er:
HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab
HOOC-CH2-CH2(R)Cgl-Aze-Pab
HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab
HOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab
(HOOC-CH2)2-(R)Cgl-Pro-Pab
H-(R)Cgl-Pic-Pab
HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)CgI-Pic-Pab
H-(R)Cha-Aze-Pab
HOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pab
HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab
HOOC-CH2-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/a
HOOC-CH2-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pabto
HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pab
HOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Aze-Pab
H-(R)Cha-Pro-Pab
HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pab
HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab
HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pab
HOOC-CH2-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab
HOOC-CH2-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/a
HOOC-CH2-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/b
HOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Pro-Pab
EtOOC-CH2-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pab
Ph(4-COOH)-S02-(R)Cha-Pro-Pab
H-(R)Cha-Pic-Pab
HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab
HOOC-CH2-(Rors)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/a
HOOC-CH2-(Rors)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/b
HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pic-Pab
HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab Me-OOC-CH2-CO-(R)-Cha-Pic-Pab H2N-CO-CH2-(R)Cha-Pic-Pab Boc-(R)Cha-Pic-Pab
Ac-(R)Cha-Pic-Pab
Me-S02-(R)Cha-Pic-Pab H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab HOOC-CH2-(R)Cha-Val-Pab HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Val-Pab H-(R)Hoc-Aze-Pab HOOC-CH2-CH2-(R)Hoc-Aze-Pab HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Hoc-Pro-Pab HOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Pab (HOOC-CH2)2-(R)Hoc-Pic-Pab HOOC-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2-(R)Tic-Pro-PabHOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Aze-Pig HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig H-(R)Cha-Aze-Pig
HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pac H-(R)Cha-Pro-Pac
H-(R)CgMle-Pab
H-(R)Cgl-Aze-Pab
HOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab MeOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab EtOOC-CH2-(R)Clg-Aze-Pab <n>BuOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab <n>HexOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab H-(R)Cgl-Pro-Pac HOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pac HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pac HOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pig HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pig HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pig (HOOC-C<H>2)2-(R)Cgl-Pro-Pig
HOOC-CH2-CH2(HOOC-CH2)-(R)Cha-Pro-Pig
HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp
HOOC-CH2-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp
H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp
HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp
H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig
HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-(RsS)Hig
H-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig
H-(R)Cgl-Aze-Rig
HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Rig
HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Rig
HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Rig
HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-(S)Itp
H-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig
H-(R)Cha-Pro-Mig
H-(R)Cha-Pro-Dig
H-(R)Cha-Aze-Dig
I øyeblikket er de spesielt foretrukne forbindelsene av formel Ia følgende:
HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab
HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pab
HOOC-CH2-(R)-Cha-Pro-Pab
HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pab
HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab
HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig
EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab
HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pac
HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pig
I ovenfor angitte forbindelser refererer bokstavuttrykkene /a og /b til en vesentlig ren stereoisomer ved karbonatomet betegnet "RorS". Stereoisomeren kan identifiseres for hver forbindelse under henvisning til den eksperimentelle delen heri. "R,S" refererer til en blanding av stereoisomerer.
Ifølge oppfinnelsen er det funnet at forbindelser av den generelle formel Ib, enten som sådanne eller i form av fysiologisk akseptable salter, og innbefatte stereoisomerer, er potente inhibitorer til kininogenaser:
hvor:
Al representerer et strukturelt fragment av formel Ila eller Hb;
hvor:
k er et helt tall 0,1, 2,3 eller 4, fortrinnsvis 0,1;
q er et helt tall 0,1,2 eller 3, fortrinnsvis 1;
Ri representerer H, en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller R* l(X)C-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og eventuelt er substituert i den stilling som er alfa til karbonylgruppen, og alfa-substituenten er en gruppe R^-(CH2)p-, hvor p er 0,1 eller 2,ogR<l7> er metyl, COOR<l2>, hvor R<i2> er H eller en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, og Ri 1 er H eller en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller
Ri representerer R<l3->NH-CO-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og eventuelt er substituert alfa til karbonylgruppen med en alkylgruppe som har 1-4 karbonatomer og hvor R<*3> er H eller -CH2COOR<l2> hvor R<i2> er som definert ovenfor, eller
Ri representerer R<l>^OOC-CE^-OOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer, og hvor R<l2> er som definert ovenfor, eller
Ri representerer Rl4sC>2-, Ph(4-COORl2)-S02-, Ph(3-COORl2)-S02, Ph(2-COORl<2>)-S02-, hvorRl<2> er som definert ovenfor og R<i4> er en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller
Ri representerer -CO-R<l>^, hvor R<l5> er en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller
R.' representerer -CO-OR^, hvor R<l5> er som definert ovenfor, eller
Ri representerer -CO-(CH2)p-COOR<l2>, hvor R^<2> er som definert ovenfor og p er 0,1 eller 2, eller
R<2> representerer H eller en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer eller R^<l>oOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og R<2>^ er H eller en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer;
R<3> representerer en alkylgruppe med 1 -4 karbonatomer, eller
R<3> representerer en cyklopentyl-, cykloheksyl- eller en fenylgruppe;
R<4> representerer H eller en fenylgruppe, fortrinnsvis H;
A<2> representerer et strukturelt fragment av formel mb eller Ille, fortrinnsvis Illb,
hvor:
p er et helt tall 0, 1 eller 2;
m er et helt tall 1, 2,3 eller 4, fortrinnsvis 2, 3;
R<3> er som definert ovenfor;
n er et helt tall 0,1,2,3 eller 4, fortrinnsvis 1, 2,3;
B representerer et strukturelt fragment av formel P/a eller I Vb,
hvor:
Xl,x2, X3, X<4> er som definert ovenfor;
R<6> er H;
r er et helt tall 0 eller 1;
foretrukne kombinasjoner av X^, X<2>, X<3> og X4 er:
X1, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er CH-C(NH)-NH2 og r er 0 eller 1, eller
X<l>, X2 og X<4> er CH2, X<3> er N-C(NH)-NH2 og r er 0 eller 1, eller
X<1> og X<3> er NH, X<2> er C=NH, X<4> er CH2 og r er 0 eller 1, eller
X<l> og X<4> er CH2, X<2> er C=NH, X<3> er NH og r er 0 eller 1, eller
Xl er CH2, X<2> og X<4> er NH, X<3> er C=NH og r er 1, eller
X<l>, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er CH-NH-C(NH)-NH2 og r er 0 eller 1, eller X<l> er fraværende, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er CH-C(NH)-NH2 og r er 0, eller X<l> er fraværende, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er N-C(NH)-NH2 og r er 0;
spesielt foretrukne kombinasjoner av X<*>, X<2>, X<3> og X<4> er:
X<l>, X<2> og X4 er CH2, X3 er CH-C(NH)-NH2 og r er 1, eller
X<l>, X<2> og X4 er CH2, X3 er N-C(NH)-NH2 og r er 1;
X<5> representerer C(NH)-NH2.
Foretrukne forbindelser ifølge oppfinnelsen er:
H-(R)-Pro-Phe-Pab
HOOC-CH2-(R)Pro-Phe-Pab
H-(R)Phe-Phe-Pab
HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab
HOOC-CH2-(R)Phe-Phe-Pab
H-(R)Cha-Phe-PAb
HOOC-CH2-(R)Cha-Phe-Pab
H-(R)Phe-Cha-Pab
HOOC-CH2-(R)Phe-Cha-Pab
H-(R)Cha-Cha-PAb
HOOC-CH2-(R)Cha-Cha-Pab
Det er videre funnet at forbindelser av den generelle formel V, enten som sådanne eller i form av fysiologisk akseptable salter, og innbefattende stereoisomerer, er potente inhibitorer til serin proteaser, spesielt trombin og kininogenaser slik som kallikrein etter oral eller parenteral administrasjon.
Ifølge oppfinnelsen er det således tilveiebrakt nye forbindelser som er kjennetegnet ved at de har den generelle formel V:
hvor:
Al representerer et strukturelt fragment av formel Ila, Hb eller He,
hvor:
k er et helt tall 0,1,2, 3 eller 4;
q er et helt tall 0,1,2 eller 3;
Ri representerer Ri lOOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og er eventuelt substituert i den stilling som er alfa til karbonylgruppen, og alfa-substituenten er en gruppe R<l7->(CH2)p-, hvor p er 0,1 eller 2 og R] 7 er COOR12, hvor R12 er H, en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer eller en benzylgruppe og Ri 1 er H eller en alkylgruppe med 1-6 karbonatomer, eller en benzylgruppe, eller
Ri representerer R<l3->NH-CO-alkyl-, h<y>or alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og er eventuelt substituert alfa til karbonylgruppen med en alkylgruppe som har 1-4 karbonatomer og hvor Ri3 er H eller -CH2COOR<I2>, hvor R<i2> er som definert ovenfor, eller
Ri representerer R<l2>OOC-CH2-OOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer, og hvor R<i2> er som definert ovenfor, eller
Ri representerer Rl4S02-, Ph(4-COOR12)-S02-, Ph(3-COOR<12>)-S02-, Ph(2-COOR<l2>)-S02", hvor Ri2 er som definert ovenfor og R<*4> er en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller
Ri representerer -CO-R<l>^, hvor R<l5> er en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller Ri representerer -CO-OR<l>^, hvor R<l5> er som definert ovenfor, eller
Ri representerer -CO-(CH2)p-COOR<l2>, hvor R<i2> er som definert ovenfor og p er et helt tall 0,1 eller 2, eller
R<2> representerer H eller en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer eller R<2l>00C-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og, hvor R<21> er H, en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer eller en benzylgruppe;
R<3> representerer en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller
R<3> representerer en cyklopentyl-, cykloheksyl- eller en fenylgruppe,
R<4> representerer H eller en fenylgruppe;
A<2> representerer et strukturelt fragment av formel IHa, Hlb eller HJc
p er et helt tall 0,1 eller 2;
m er et helt tall 1,2, 3 eller 4;
Y representerer en metylengruppe, eller
Y representerer en etylengruppe, eller
Y representerer en n-propylengruppe,
R<3> er som definert ovenfor;
R<5> representerer H,
n er et helt tall 0,1,2, 3 eller 4;
B representerer et strukturelt fragment av formel F/a eller F/b,
hvor:
r er et helt tall 0 eller 1;
x<l> representerer CH2, NH eller er fraværende;
X<2> representerer CH2, NH eller C=NH;
X<3> representerer NH, C=NH, N-C(NH)-NH2 eller CH-C(NH)-NH2;
X<4> representerer CH2 eller NH;
X<5> representerer C(NH)-NH2;
R<6>erH;
D er Z eller (Z)2;
Z er en benzoyloksykarbonylgruppe;
enten forbindelsen som sådan eller stereoisomerer derav eller i form av fysiologisk akseptabelt salt.
Benzyloksykarbonylgruppen (Z eller (Z)2) vil bindes til amidino- eller guanidinonitro-genene som er tilstede i B.
Foretrukne og spesielt foretrukne kombinasjoner er de samme som beskrevet for formel I ovenfor. (Kfr. også medfølgende krav 3-19).
Videre er det funnet at forbindelser av den generelle formel Va, enten som sådanne eller i form av fysiologisk akseptable salter, og innbefattende stereoisomerer, er potente inhibitorer til trombin etter oral eller parenteral administrasjon:
hvor:
Al representerer et strukturelt fragment av formel Ila, Db eller He, fortrinnsvis Ila eller Hb;
hvor:
k er et helt tall 0,1,2,3 eller 4, fortrinnsvis 0,1;
q er et helt tall 0,1,2, eller 3, fortrinnsvis 1;
Ri representerer Ri lOOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og eventuelt er substituert i den stilling som er alfa til karbonylgruppen, og alfa-substituenten er en gruppe R<l7->(CH2)p-, hvor p er 0,1 eller 2 og R1<7> er COORl<2>, hvor Ri2 er H eller en alkylgruppe med 1 -4 karbonatomer eller en benzylgruppe, og Ri 1 er H eller en alkylgruppe med 1-6 karbonatomer, eller en benzylgruppe, eller
Ri representerer Rl3 -NH-CO-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og eventuelt er substituert alfa til karbonylgruppen med en alkylgruppe som har 1-4 karbonatomer og hvor R<l3> er H eller -CH2COOR<I2> hvor R<i2> er som definert ovenfor, eller
Ri representerer Rl2OOC -CH2-OOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og hvor R<i2> er som definert ovenfor, eller
Ri representerer Rl4S02-, Ph(4-COORl2)-S02-, Ph(3-COORl2)-S02-, Ph(2-COOR<l2>)-S02- hvorR<l2> er som definert ovenfor og Ri4 er en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller
Ri representerer -CO-R^, hvor r<15> er alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller Ri representerer -CO-OR^, hvor r<!5> er som definert ovenfor, eller
Ri representerer -CO-(CH2)p-COOR<l2>, hvor R<l2> er som definert ovenfor og p er et helt tall 0,1 eller 2, eller
R<1> representerer fortrinnsvis R1 l<X)C-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og RH er som definert ovenfor: R<2> representerer H eller en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller R^<l>oOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og R<21> er H eller en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer eller en benzylgruppe;
R<3> representerer en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer; eller
R<3> representerer en cyklopentyl-, cykloheksyl- eller en fenylgruppe;
R<4> representerer H eller en fenylgruppe;
A2,B og n er definert som beskrevet under formel Ia ovenfor;
D er Z eller (Z)2;
Z representerer en benzyloksykarbonylgruppe.
Foretrukne hele tall, grupper eller kombinasjoner og spesielt foretrukne kombinasjoner er de samme som beskrevet for formel Ia ovenfor, men Ri 1 er H, en alkylgruppe med 1-6 karbonatomer eller en benzylgruppe.
Foretrukne forbindelser som har formel Va er:
BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z)
BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z)
(BnOOC-CH2)2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cgl-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pab(Z)
BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH2-(RorS)CH(CO0Bn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/a BnOOC-CH2-(RorS)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/b BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z) Ph(4-COOH)-S02-(R)Cha-Pro-Pab(Z) Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z) EtOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) MeOOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) H2H-CO-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z) Ac-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
Me-S02-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
BnOOC-CH2-(R)Cha-Val-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Hoc-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Hoc-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Pab(Z)
(BnOOC-CH2)2-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Tic-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2 BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2 BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pac(Z) BnOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab(Z)
MeOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
<n>BuOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
<n>HexOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pac(Z)
BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pac(Z)
BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pac(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pig(Z)
BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pig(Z)
BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pig(Z)
(BnOOC-CH2)2-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)
BnOOC-CH2-CH2(BnOOC-CH2)-(R)Cha-Pro-Pig(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z)
BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pri-(R,S)Hig(Z)
BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Rig(Z)
BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Rig(Z)
Spesielt foretrukne forbindelser er: BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z)
BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2
EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pac(Z)
BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pig(Z)
Videre er det funnet at forbindelser av den generelle formel Vb, enten som sådanne eller i form av fysiologisk akseptable salter, og innbefattende stereoisomerer, er potente inhibitorer til kallikrein etter oral eller parenteral administrasjon:
hvor:
Al representerer et strukturelt fragment av formel Ila eller Ilb,
hvor:
k er et helt tall 0, 1, 2, 3 eller 4, fortrinnsvis 0,1;
q er et helt tall 0,1,2, eller 3, fortrinnsvis 1;
Ri representerer Ri 'OOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og eventuelt er substituert i den stilling som er alfa til karbonylgruppen, og alfa-substituenten er en gruppe R1<7->(CH2)p-, hvor p er 0,1 eller 2 og R1<1> er COORl2, hvor Ri2 er H eller en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, og Ri 1 er H eller en alkylgruppe med 1-6 karbonatomer, eller en benzylgruppe, eller
Ri representerer R<l3->NH-CO-aIkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og eventuelt er substituert alfa til karbonylgruppen med en alkylgruppe som har 1-4 karbonatomer og hvor R<i3> er H eller -CH2COOR<I2> hvor R<i2> er som definert ovenfor, eller
Ri representerer R<l2>OOC-CH2-OOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og hvor R<i2> er som definert ovenfor, eller
Ri representerer Rl4S02-, Ph(4-COORl2)-S02-, Ph(3-COORl2)-S02-, Ph(2-COOR<l2>)-S02-, hvor R<i2> er som definert ovenfor og R<i4> er en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller
Ri representerer -CO-R^, hvor R<15> er alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller
Ri representerer -CO-OR<l>^, hvor r<!5> er som definert ovenfor, eller
Ri representerer -CO-(CH2)p-COOR<l2>, hvor R<i2> er som definert ovenfor og p er 0,1 eller 2;
R<2> representerer H eller en alkylgruppe med 1 -4 karbonatomer, eller R<2l>00C-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og R<21> er H eller en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer eller en benzylgruppe;
R<3> representerer en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller
R<3> representerer en cyklopentyl-, cykloheksyl- eller en fenylgruppe;
R<4> representerer H eller en fenylgruppe, fortrinnsvis H;
A<2>,B og n er definert som beskrevet under formel Ib ovenfor;
D representerer Z eller (Z)2, hvor Z har den ovenfor angitte betydning.
Foretrukne hele tall, grupper eller kombinasjoner og spesielt foretrukne kombinasjoner er de samme som beskrevet i formel Ib ovenfor, men R<11> er H, en alkylgruppe med 1-6 karbonatomer eller en benzylgruppe.
Foretrukne forbindelser som har formel Vb er:
Boc-(R)Pro-Phe-Pab(Z)
BnOOC-CH2-(R)Pro-Phe-Pab(Z)
Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z)
MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z)
BnOOC-CH2-(R)Phe-Phe-Pab(Z)
Forbindelse av formelen:
kan anvendes som et utgangsmateriale i syntesen av en peptidisk serinproteaseinhibitor, og spesielt i syntesen av peptidiske trombininhibitorer eller kininogenaseinhibitorer. Den kan benyttes som sådan eller med amidinogruppen enten mono- eller dibeskyttet ved nitrogenene med en beskyttende gruppe slik som benzyloksykarbonyl. Beskyttelse av amidinoderivatene utføres ved metoder som er kjent innen teknikken for amidinoforbindelser. Denne forbindelsen er heri betegnet "l-amidino-4-aminometylbenzen" eller
"H-Pab". Forbindelsen er tidligere beskrevet blant annet i Biochem. Pharm, vol 23, side 2247-2256.
Det strukturelle fragmentet av formelen:
har imidlertid ikke tidligere vært beskrevet som et strukturelt element i en farmasøytisk aktiv forbindelse, spesielt en peptisk forbindelse. Fragmentet gjør en serin proteaseinhibitor og spesielt en trombininhibitor eller kininogenaseinhibitor verdifull.
Forbindelse av formelen:
kan benyttes som et utgangsmateriale i syntesen av en trombininhibitor. Forbindelsen kan ha amidinogruppen enten mono- eller dibeskyttet ved nitrogenene med en beskyttelsesgruppe slik som benzyloksykarbonyl. Beskyttelse av amidinoderivatene utføres ved metoder som er kjent innen teknikken for amidinoforbindelser. Denne forbindelsen er heri betegnet "l-amidino-4-aminometylcykloheksan" eller "H-Pac". Forbindelsen er tidligere beskrevet i DE 2748295.
Det strukturelle fragmentet av formelen:
har imidlertid ikke tidligere vært beskrevet som et strukturelt element i en verdifull trombininhibitor.
I en utførelse tilveiebringer oppfinnelsen en ny forbindelse som er kjennetegnet ved at den har formelen:
som kan anvendes som et utgangsmateriale i syntese av en serin proteaseinhibitor, spesielt en trombininhibitor eller kininogenaseinhibitor. Forbindelsen kan ha amidinogruppen enten mono- eller dibeskyttet ved nitrogenene med en beskyttelsesgruppe slik som benzyloksykarbonyl. Beskyttelse av amidinoderivatene utføres ved metoder som er kjent innen teknikken for amidinoforbindelser. Denne forbindelsen betegnes heri "4-aminoetyl-l-amidinopiperidin" eller "H-Rig".
Det strukturelle fragmentet av formelen:
har imidlertid ikke tidligere vært beskrevet som et strukturelt element i en farmasøytisk aktiv forbindelse, spesielt en peptisk forbindelse. Fragmentet gjør en serinproteaseinhibitor, og spesielt en trombininhibitor eller kininogenaseinhibitor verdifull.
Oppfinnelsen tilveiebringer også en ny forbindelse som er kjennetegnet ved at den har formelen:
som kan anvendes som et utgangsmateriale i syntese av en serinproteaseinhibitor, spesielt en trombininhibitor eller kininogenaseinhibitor. Forbindelsen kan ha amidinogruppen enten mono- eller dibeskyttet ved nitrogenene med en beskyttelsesgruppe slik som benzyloksykarbonyl. Beskyttelse av amidinoderivatene utføres ved metoder som er kjent innen teknikken for amidinoforbindelser. Denne forbindelsen betegnes heri "l,3-diaza-2-imino-4-aminoetylcykloheksan" eller "H-Itp".
Det strukturelle fragmentet av formelen:
har imidlertid ikke tidligere vært beskrevet som et strukturelt element i en farmasøytisk aktiv forbindelse, spesielt en peptisk forbindelse. Fragmentet gjør en serinproteaseinhibitor, og spesielt en trombininhibitor eller kininogenaseinhibitor verdifull.
I nok en utførelse tilveiebringer oppfinnelsen nye forbindelser som er kjennetegnet ved at de har formelen:
hvor n er 1 eller 2,
s er 0 eller 1,
som kan anvendes som utgangsmaterialer i syntesen av serinproteaseinhibitorer, spesielt trombininhibitorer eller kininogenaseinhibitorer. Forbindelsene kan ha amidinogruppen enten mono- eller dibeskyttet ved nitrogenene med en beskyttende gruppe slik som benzyloksykarbonyl. Beskyttelse av amidinoderivatene utføres ved metoder som er kjent innen teknikken for amidinoforbindelser. Disse forbindelsene er heri betegnet:
l-amidino-3-aminometylpyrrolidin eller "H-Nig" når n er 1 og s er 1, l-amidino-3-aminoetylpyrroIidin eller "H-Hig" når n er 2 og s er 1, 3-aminometyl-l-amidinoazetidin eller "H-Mig" når n er 1 og s 0, 3-aminoetyl-l-amidinoazetidin eller "H-Dig" når n er 2 og s er 0.
Det strukturelle fragmentet av formelen:
har imidlertid ikke tidligere vært beskrevet som et strukturelt element i en farmasøytisk aktiv forbindelse, spesielt en peptisk forbindelse. Fragmentet gjør en serinproteaseinhibitor, og spesielt en trombininhibitor eller kinogenaseinhibitor verdifull.
Oppfinnelsen tilveiebringer også nye forbindelser som har amidinogruppen mono- eller dibeskyttet ved nitrogenene med en benzyloksykarbonylgruppe, og eksempler på slike forbindelser er: 4-aminometyl-1 -(N-benzyloksykarbonylamidino)benzen (H-Pab(Z)), 4-aminometyl-1 -(N,hT-di(benzyloksykarbonyl)amidino)benzen (H-Pab(Z)2), 4-aminometyl-1 -(N-benzyloksykarbonylamidino)cykloheksan (H-Pac(Z)), 4-aminometyl-1 -(N ,N'-di(betttyloksykaibonyl)amidino)cykloheksan (H-Pac(Z)2)} 4-aminoetyl-l -(N-benzyloksykarbonylamidinopiperidin) (H-Rig(Z)), 4-aminoetyl-1 -N,N'-di(benzyloksykarbonyl)amidinopiperidin (H-Rig(Z)2).
(3RS-1 -(N-benzyloksykarbonylamidino)-3-aminometylpyrrolidin (H-Nig(Z)), (3RS)-1 -(NsN'-di(benzyloksykarbonyl)amidino)-3-aminornetylpyrroIidin (H-Nig(Z)2), (3RS)-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)-3-aminoetylpyrrolidin (H-Hig(Z)), (3RS)-l-(N,N-di(beiizyloksykarbonyl)amidino)-3-aminoetylpyrro (H-Hig(Z)2), 3-aminometyl-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)azetidin (H-Mig(Z)), 3-aminometyl-l-(NfN'-di(benzyloksykarbonyl)amidino)azetidin (H-Mig(Z)2), 3-aminoetyl-1 -(N-benzyloksykarbonylamidino)azetidin (H-Dig(Z)), 3-aminoetyl-l-(N,N'-di(berizyloksykarbonyl)aniidino)azetidin(H-Dig(Z)2).
Disse forbindelsene anvendes som utgangsmaterialer i fremstillingen av de definerte peptidderivatene av formler I, Ia, Ib, V, Va og Vb.
Medisinsk og farmasøytisk anvendelse
Oppfinnelsen tilveiebringer anvendelse av forbindelser av formel I og V for fremstilling av farmasøytiske preparater for behandling av tilstander som angitt ovenfor og som definert i medfølgende krav 28 og 29.
De trombininhiberende forbindelsene ifølge oppfinnelsen forventes å være nyttige spesielt i dyr inkludert menneske for behandling eller forebyggelse av tromboser og hyperkoagulerbarhet i blod og vev. De forventes videre å være nyttige situasjoner hvor det er et uønsket overskudd av trombin uten tegn på hyperkoagulerbarhet, for eksempel slik som i Alzheimers sykdom og pancreatitt. Sykdomstilstander hvorved disse forbindelsene har en potensiell nyttevirkning, i behandling og/eller profylakse, inkluderer venøs trombose og pulmonar embolisme, arteriell trombose, slik som i myokardialt infarkt, ustabil angina, trombosebasert slag og perifer arteriell trombose og systemisk embolisme vanligvis fra atrium under arteriell fibrillering eller fra venstre ventrikkel etter transmuralt myokardinfarkt. Videre forventes det at disse forbindelsene har nyttevirkning i profylakse av arterosklerotiske sykdommer slik som coronar arteriell sykdom, cerebral arteriell sykdom og perifer arteriell sykdom. Videre forventes det at disse forbindelsene har synergistiske antitrombotiske effekter i kombinasjon med et antitrombotisk middel med en forskjellig virkningsmekanisme, slik som antiblodplatemidlet acetylsalicylsyre. Videre forventes det at disse forbindelsene er nyttige sammen med trombolytiske midler i trombotiske sykdommer, spesielt myokardialt infarkt. Videre forventes det at forbindelsene har nyttevirkning i profylakse for reokklusjon etter trombolyse, perkutan transluminal angioplasti (PTCA) og coronare bypassoperasjoner. Videre forventes det at forbindelsene har nyttevirkning i forebyggelse av retrombose etter mikrokirurgi og vaskulær kirurgi generelt. Videre forventes det at disse forbindelsene har nyttevirkning i behandling og profylakse av disseminert intravaskulær koagulasjon forårsaket av bakterier, multiple traumer, intoksikasjon eller noen annen mekanisme. Videre forventes det at disse forbindelsene er nyttige i antikoaguleringsmiddelbehandling når blod er i kontakt med fremmede overflater i kroppen slik som vaskulære implantater, vaskulære stenter, vaskulære katetre, mekaniske og biologiske proteser eller annen medisinsk anordning. Disse forbindelsene forventes videre å ha nyttevirkning i antikoaguleringsmiddelbehandling når blod er i kontakt med medisinske anordninger utenfor kroppen slik som under kardiovaskulær kirurgi ved bruk av hjerte-lungemaskin eller hemodialyse.
En ytterligere forventet nyttevirkning av foreliggende antikoagulantforbindelser er skylling av katetre og mekaniske innretninger som benyttes i pasienter in vivo, og som antikoagulanter for preservering av blod, plasma og andre blodprodukter in vitro.
De antiinflammatoriske inhiberende forbindelsene ifølge oppfinnelsen forventes å være nyttige spesielt i dyr inkludert menneske ved behandling eller profylakse av inflammatoriske sykdommer slik som astma, rhinitt, pankreatitt, uticaria, inflammatorisk tarmsykdommer, og artritt. En effektiv mengde av kininogenaseinhiberende forbindelser med eller uten en fysiologisk akseptabel bærer eller fortynningsmiddel kan anvendes alene eller i kombinasjon med andre terapeutiske midler.
Forbindelsene inhiberer aktiviteten til kallikreiner bestemt med kromogene substrater iføgle kjente prosedyrer. De antiinflammatoriske virkningene til foreliggende forbindelser kan for eksempel studeres ved deres inhibering av allergeninduserte eksudative inflammatoriske prosesser i luftveisslimhinne eller maveslimhinne.
Farmasøytiske preparater
Oppfinnelsen tilveiebringer også farmasøytiske preparater som inneholder forbindelser I og V ifølge oppfinnelsen, til bruk for mennesker og dyr, for behandling av tilstander hvor inhibering av trombin er nødvendig og av fysiologiske forstyrrelser spesielt inflammatoriske sykdommer, som definert i medfølgende krav 25 - 27.
Foreliggende forbindelser vil normalt bh' administrert oralt, rektalt, dermalt, nasalt, trakealt, bronkialt, parenteralt eller via inhaleringsveien, i form av farmasøytiske preparater omfattende den aktive bestanddelen enten som en fri base eller et farma-søytisk akseptabelt, ikke-toksisk, organisk eller uorganisk syreaddisjonssalt, for eksempel hydroklorid, hydrobromid, sulfat, hydrosulfat, nitrat, laktat, acetat, citrat, benzoat, suksinat, tartrat, trifluoracetat og lignende i en farmasøytisk akseptabel doseringsform. Avhengig av sykdommen og pasienten som skal behandles og administrasjons veien kan preparatene administreres i varierende doser.
Doseringsformen kan være et fast, halvfast eller flytende preparat fremstilt ved i og for seg kjente teknikker. Den aktive substansen vil vanligvis utgjøre mellom 0,1 og 99 vekt-% av preparatet, mer spesielt mellom 0,1 og 50 vekt-% for preparater beregnet for parenteral administrasjon og mellom 0,2 og 75 vekt-% for preparater egnet for oral administrasjon.
Egnede daglige doser av foreliggende forbindelser i terapeutisk behandling av mennesker er ca 0,001-100 mg/kg kroppsvekt ved peroral administrasjon og 0,001-50 mg/kg kroppsvekt ved parenteral administrasjon.
Fremstilling
Oppfinnelsen tilveiebringer også fremgangsmåter for fremstilling av forbindelser ifølge oppfinnelsen som definert i medfølgende krav 1 -19, og disse fremgangsmåtene er kjennetegnet ved de trekk som fremgår fra medfølgende krav 21. Således kan forbindelsene av formel I og V fremstilles ved fremgangsmåter innbefattende kobling av et N-terminalt beskyttet dipeptid eller aminosyre, når en N-terminal aminosyre anvendes tilsettes en annen aminosyre etterpå ved bruk av standardmetoder, til en forbindelse:
hvor n er et helt tall 0,1,2,3 eller 4, X er B eller B-D hvor B er som definert i formel I og D er som definert i formel V som sådan eller med guanidino- eller amidinonitrogene enten mono- eller dibeskyttet med en aminbeskyttende gruppe slik som en
benzyloksykarbonyl-, tert-butyloksykarbonyl- eller p-toluensulfonylgruppe eller X er en gruppe som kan overføres til B fulgt av fjerning av beskyttelsesgruppen(e) eller fjerning
av beskyttelse fira N-terminalnitrogenet fulgt av alkylering av N-terminalnitrogenet og om ønsket fjerning av beskyttelse ved hjelp av kjente metoder og om ønsket dannelse av et fysiologisk akseptabelt salt, og i de tilfeller hvor reaksjonen resulterer i en blanding av stereoisomerer blir disse eventuelt separert ved standard kromatografiske eller ora-krystalliseringsteknikker, og om ønsket isoleres en enkelt stereoisomer.
Mer detaljert kan forbindelsene av formel I eller V fremstilles ved hvilken som helst av de følgende fremgangsmåter:
Fremgangsmåte Ia
Kobling av et N-terminalt beskyttet dipeptid, valgt fra og A<2> i formler I eller V og fremstilt ved standard peptidkobling, med en forbindelse
ved bruk av standardpeptidkoblmg, vist i formelen hvor n er som definert i formel I, W* er en N-terminal aminobeskyttelsesgruppe slik som tert-butyloksykarbonyl og benzyloksykarbonyl og Q<*> er -C(NH)-NH2» -C(NW<2>)-NH-W<2> eller -C(NH)-NH-W<2>, hvor W<2> er en aminbeskyttelsesgruppe slik som tert-butyloksykarbonyl eller benzyloksykarbonyl, eller Q<1> er -CN, -CO-NH2 eller -CS-NH<2>, hvor gruppen deretter overføres til en amidinogruppe (for eksempel slik at Q<1> = -C(NH)-NH2)ve<* metoder som er kjent innen teknikken. Sluttforbindelsene kan fremstilles på hvilken som helst av følgende måter, avhengig av typen av Ql -gruppe som benyttes: fjerning av beskyttelsesgruppen(e) når Ql = -C(NH)-NH2, -C(NW<2>)-NH-W<2> eller -C(NH)-NH-W<2>, eller en selektiv beskyttelsesfjeming av W<1->gruppen (for eksempel når Q<1> = C(NW<2>)-NH-W<2>, -C(NH)-NH-W<2>, -NH-C(NH)-NH-W<2>, -N(W<2>)-C(NH)-NH-W<2> eller -NH-C(NW<2>)-NH-W<2 >(W<2> må i dette tilfelle være ortogonal til W<*>) fulgt av alkylering av N-terminalnitrogenet ved metoder som er kjent innen teknikken og om ønsket beskyttelsesfjeming ved hjelp av kjente metoder.
Fremgangsmåte Ib
Kobling av en N-terminalt beskyttet aminosyre, valgt fra A<2> i formler I eller V og fremstilt ved standard metoder, med en forbindelse av formel
ved bruk av standardpeptidkobling, vist i formelen
hvor n, W^ og Q<*> er som definert ovenfor, fulgt av beskyttelsesfjeming av W * -gruppen og kobling med N-terminalaminosyren, i en beskyttet form, hvilket leder til det beskyttede peptidet beskrevet i fremgangsmåte Ia. Syntesen til sluttpeptidene fortsettes deretter ifølge fremgangsmåte Ia.
Fremgangsmåte Ila
Kobling av et N-terminal beskyttet dipeptid, valgt fra A<*> og A<2> i formler i I eller V og fremstilt ved standard peptidkobling, med en forbindelse
ved bruk av standardpeptidkobling, vist i formelen
hvor n er som definert i formel I, W * er en N-terminal aminobeskyttelsesgruppe slik som tertbutoksykarbonyl og benzyloksykarbonyl og Q 1 er -C(NH)-NH2, -C(NW<2>)-NH-W<2> eller -C(NH)-NH-W2 hvor W<2> er en aminbeskyttende gruppe slik som tert-butyloksykarbonyl eller benzyloksykarbonyl, eller Q<*> er CN, -CO-NH2 eller -CS-NH2, hvor gruppen deretter overføres til en amidinogruppe (for eksempel slik at Q^ = -C(NH)-NH2) ved metoder som er kjent innen teknikken.
Sluttforbindelsene kan fremstilles på hvilken som helst av de følgende måter, avhengig av typen av benyttet Q^-gruppe: fjerning av beskyttelsesgruppen(e) (når Q<*> = -C(NH)-NH2, -C(NW<2>)-NH-W<2>, -C(NH)-NH-W<2>, eller en selektiv beskyttelsesfjeming av W<1->gruppen (for eksempel når Q<1> = C(NW<2>)-NH-W<2>, -C(NH)-NH-W<2>, -NH-C(NH)-NH-W2, -N(W<2>)-C(NH)-NH-W<2> eller -NH-C(NW<2>)-NH-W<2> (W<2> må i dette tilfelle være ortogonal til W<1>) fulgt av alkylering av N-terminalnitrogenet ved metoder som er kjent innen teknikken og om ønsket beskyttelsesfjerning ved hjelp av kjente metoder.
Fremgangsmåte Hb
Kobling av en N-terminalt beskyttet aminosyre, valgt fra A<2> i formler I eller V og fremstilt ved standardmetoder, med en forbindelse av formel
ved bruk av standardpepitdkobling, vist i formelen
hvor n, W<*> og Ql er som definert ovenfor fulgt av beskyttelsesfjeming av W^-gruppen og kobling med den N-terminale aminosyren, i en beskyttet form, hvilket leder til det beskyttede peptidet beskrevet i fremgangsmåte Ila. Syntesen av sluttpeptidene fortsettes deretter ifølge fremgangsmåte Ila.
Fremgamgsmåte Illa
Kobling av et N-terminalt beskyttet dipeptid, valgt fra A<1> og A<2> i formler I eller V og fremstilt ved standard peptidkobling, med en forbindelse
ved bruk av standardpeptidkobling, vist i formelen hvor n er som definert i formel I, og r ér 0,1 når X1, X2 og X<4> er CH2 eller r er 0 når X2 og X<4> er CH2 og X<l> er fraværende, W<1> er en N-terminal aminobeskyttelsegruppe slik som tert-butyloksykarbonyl og benzyloksykarbonyl og Q<2> er -C(NH)-NH2, -C(NW<2>)-NH-W<2>, eller -C(NH)-NH-W<2>, hvor W<2> er en aminbeskyttende gruppe slik som tert-butyloksykarbonyl eller benzyloksykarbonyl, eller Q<2> er lik W<2> hvor amino-gruppen, etter beskyttelsesfjeming av W<2> gruppen (W<2> må i dette tilfelle ortogonal til W<*>), deretter overføres til en guanidinogruppe ved bruk av en ubeskyttet, N-beskyttet eller N,N'-dibeskyttet guanideringsreagens ved metoder som er kjent innen teknikken (hvilket gir Q<2> = -C(NH)-NH2, -C(NW<2>)-NH-W<2> eller -C(NH)-NH-W<2>).
Sluttforbindelsene kan fremstilles på hvilken som helst av følgende måter, avhengig av typen av benyttet Q<2->gruppe: fjerning av beskyttelsesgruppen(e) (når Q<2> = -C(NH)-NH2, -C(NW<2>)-NH-W<2> eller -C(NH)-NH-W<2>, eller en selektiv beskyttelsesfjeming av W<1->gruppen (for eksempel når Q<2> = -C(NW2)-NH-W2 -C(NH)-NH-W<2> (W<2> må i dette tilfelle være ortogonal til W^) fulgt av alkylering av N-terminalnitrogenet ved metoder kjent innen teknikken og om ønsket beskyttelsesfjeming ved hjelp av kjente metoder.
Fremgangsmåte Hlb
Kobling av en N-terminalt beskyttet aminosyre, valgt fra A<2> i formler I eller V og fremstilt ved standardmetoder, med en forbindelse av formel
ved bruk av standardpeptidkobling, vist i formelen
hvor n, r, x<l>.X<2> og X<4>, W<1> og Q<2> er som definert ovenfor fulgt av beskyttelsesfjerning av W<1->gruppen og kobling med N-terminalaminosyren, i en beskyttet form, hvilket leder til det beskyttede peptidet beskrevet i fremgangsmåte Ula. Syntesen til sluttpeptidene fortsettes deretter ifølge fremgangsmåte nia.
Fremgangsmåte IVa
Kobling av et N-terminalt beskyttet dipeptid, valgt fra A<1> og A<2> i formler I eller V og fremstilt ved standard peptidkobling, med en forbindelse ved bruk av standardpeptidkobling, vist i formelen
hvor n er som definert i formel I, W<*> er en N-terminal aminobeskyttelsesgruppe slik som tert-butyloksykarbonyl eller benzyloksykarbonyl og W<3> er H eller en aminobeskyttelsesgruppe slik som arylsulfonyl, benzyloksykarbonyl eller tert-butyloksykarbonyl. Sluttforbindelsene kan fremstilles på hvilken som helst av følgende måter: fjerning av beskyttelsesgruppen(e), eller en selektiv beskyttelsesfjerning av -gruppen (W<1> må være ortagonal til W<3>) fulgt av alkylering av N-terminalnitrogenet og om ønsket beskyttelsesfjeming.
Fremgangsmåte IVb
Kobling av en N-terminalt beskyttet aminosyre, valgt fra A<2> i formler I eller V og fremstilt ved standardmetoder, med en forbindelse av formel
ved bruk av standardpeptidkobling, vist i formelen
hvor n, W<*> og W<3> er som definert ovenfor fulgt av beskyttelses-erning av W<1->gruppen (W<1> må være ortogonal til W<3>) og kobling med N-terminal aminosyren, i en beskyttet form, hvilket leder til det beskyttede peptidet beskrevet i fremgangsmåte IVa. Syntesen til sluttpeptidene fortsettes deretter ifølge fremgangsmåte P/a.
I det følgende illustreres aspekter ved oppfinnelsen.
EKSPERIMENTELL DEL
Generelle eksperimentelle prosedyrer.
Massespektra ble registrert på et Finnigan MAT TSQ 700 trippel kvadropolmasse-spektrometer forsynt med et elektrospray-tilkoblingsutstyr.
^H NMR- og <13>C-NMR-målingene ble foretatt på Bruker AC-P 300- og Bruker AM 500-spektrometere, idet den førstnevnte arbeidet ved en ^H frekvens på 500,14 MHz og en <13>C frekvens på 125,76 MHz og sistnevnte ved ^H- og <l3>C-frekvens på henholdsvis 300,13 MHz og 75,46 MHz.
Prøvene var ca 10-50 mg oppløst i 0,6 ml av et av følgende oppløsningsmidler: CDCI3 (isotopisk renhet > 99,8 %), CD3OD (isotopisk renhet > 99,95 %), D2O (isotopisk renhet > 99,98 %) eller DMSO-d6 (isotopisk renhet > 99,8 %). Alle oppløsningsmidlene ble innkjøpt fra Dr. Glaser AG, Basel.
De kjemiske og <*3>C forskyvningsverdiene i CDCI3 og CD3OD er i forhold til tetra-metylsilan som en ekstern standard. De kjemiske <*>H forskyvningene i D2O er i forhold til natriumsaltet av 3-(trimetyIsilyl)-d4-propansyre og de kjemiske <l3>C forskyvningene i D20 er referert i forhold til 1,4-dioksan (67,3 ppm), begge som ekstern standard. Kalibrering med en ekstern standard kan i noen tilfeller forårsake mindre forskyvnings-forskjeller sammenlignet med en indre standard, men forskjellen i kjemisk ^H for-skyvning er mindre enn 0,02 ppm og i ^<3>C mindre enn 0,1 ppm.
<1>h NMR-spekteret til peptidsekvenser inneholdende en prolin- eller en "prolinlignende" rest viser ofte to sett av resonanser. Dette tilsvarer forekomsten av to medvirkende konformeringselementer med hensyn til rotasjonen omkring amidbindingen, hvor prolin er N-delen i amidbindingen. Konformeringselementene er betegnet cis og trans. I foreliggende forbindelser gir sekvensene (R)Cha-Aze-, (R)Cha-Pro- og (R)Cha-Pic- ofte opphav til en cis-trans-likevekt med et konformeringselement som det fremherskende konformeringselementet (> 90 %). Bare i disse tilfeller er de kjemiske ^H forskyvningene for hovedrotameren rapportert. Bare i de tilfeller hvor signalene til den underordnede rotameren klart er oppløst er de rapportert i NMR-dokumentasjonen. Det samme kriteriet gjelder for NH-signalene i CDCI3, bare i de tilfeller hvor signalene er klart oppløst er de rapportert i NMR-dokumentasjonen. Dette medfører at antall protoner som er rapportert for noen av mellomproduktene er mindre enn antallet protoner som er forventet fra den kjemiske formelen.
Tynnsjiktskromatografi ble utført på kommersielt Merck Silikagel 6OF254 belagt glass eller aluminiumplater. Visualisering foregikk ved en kombinasjon av UV-lys, fulgt av sprøyting med en oppløsning fremstilt ved blanding av 372 ml EtOH (95 %), 13,8 ml konsentrert H2SO4,4,2 ml konsentrert eddiksyre og 10,2 ml p-metoksybenzaldehyd eller fosfomolybdensyrereagens (5-10 vekt-% i EtOH (95 %)) og oppvarming.
Flashkromatografi ble utført på Merck Silica-gel 60 (40-63 mm, 230-400 mesh) under trykk av luft.
Reversfase-høyytelsevæskekromatografi (i eksemplene referert til som RPLC) ble utført på et Waters M-590-instrument utstyrt med tre reversfase-Kromasil 100.C8 kolonner (Eka-Nobel) med forskjellige dimensjoner for analytisk (4,6 mm x 250 mm), semi-preparativ (25 mm x 250 mm) og preparativ (50 mm x 500 mm) kromatografidetek-tering ved 226 nm.
Frysetørking ble foretatt på et Leybold-Heraeus, modell Lyovac GT 2 apparat.
Fremstilling av utgangsmaterialer
Boc-(R)Pgl-OH
Fremstilt på samme måte som beskrevet for Boc-(R)Cha-OH (se nedenfor) fra H-(R)Pgl-OH.
Boc-(R)Cha-OH
Til en oppløsning av H-(R)Cha-OH, 21,55 g (125,8 mmol) i 130 ml 1 M NaOH og 65
ml THF ble det tilsatt 30 g (137,5 mmol) (Boc)20 og blandingen ble omrørt i 4,5 timer ved romtemperatur. THF-materialet ble inndampet og ytterligere 150 ml vann ble tilsatt. Den alkaliske vandige fasen ble vasket to ganger med EtOAc, deretter surgjort med 2 M KHSO4 og ekstrahert med 3 x 150 ml EtOAc. Den kombinerte organiske fasen ble vasket med vann, saltoppløsning og tørket (Na2S04). Inndampning av oppløsnings-midlet ga 30,9 g (90,5 %) av tittelforbindelsen som et hvitt fast stoff.
Boc-(R)Hop-OH
Fremstilt ved den samme fremgangsmåten som beskrevet for Boc-(R)Cha-OH ved å starte fra H-(R)Hop-OH.
<l>H NMR (300 MHz, CDCI3): 5 1,45 (s, 9H), 2,00 (m, 1H), 2,22 (m, 1H), 2,75 (bt, 2H), 4,36 (bs, 1H), 5,05 (bs, 1H), 7,15-7,33 (m, 5H).
4-(tert-butyloksykarbonylaminometyl)pyridin
Til en oppløsning av 10,81 g (100 mmol) 4-aminometylpyridin i 100 ml THF ble det tilsatt 24 g (110 mmol) B0C2O oppløst i 70 ml THF ved 10°C i 20 minutter. Oppløs-ningen fikk nå romtemperatur og ble omrørt i 4 timer (et bunnfall ble dannet under reaksjonen og oppslemmingen ble rødfarget). Oppløsningsmidlet ble fjernet og resten ble oppløst i EtOAc og filtrert gjennom silisiumdioksydgel. Inndampning av oppløs-ningsmidlet ga tittelforbindelsen som en rød olje som krystalliserte ved henstand. Råproduktet ble benyttet uten ytterligere rensing.
c
<i>H-NMR (300 MHz, CDCI3): § 1,45 (s, 9H), 4,32 (d, 2H), 5,05 (bs, 1H (NH)), 7,2 (d, 2H), 8,55 (d, 2H).
4-aminometyl-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)benzen (H-Pab(Z))
(i) 4-cyanobenzylazid
En oppløsning av 20,23 g (0,31 mol) natriumazid i 50 ml vann ble tilsatt til 49,15 g (251 mmol) 4-cyanobenzylbromid i 200 ml DMF ved omgivelsestemperatur. En eksoterm reaksjon fant sted og etter 1,5 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med 200 ml toluen (forsiktig: for å unngå separering av de potensielt eksplosive azidforbindelsene er det anbefalelsesverdig å tilsette toluenen til reaksjonsblandingen før tilsetningen av vannet) og 500 ml vann. Den vandige fasen ble ekstrahert med ytterligere 2 x 50 ml toluen. De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med 2 x 50 ml vann og salt-oppløsning og sluttelig tørket (MgS04) og filtrert. Oppløsningen ble benyttet som sådan i det neste trinnet.
<*>H-NMR (300 MHz, CDCI3): 5 4,4 (s, 2H), 7,4 (d, 2H), 7,7 (d, 2H).
(ii) 4-amidinobenzylazid
Hydrogenklorid ble boblet inn i blandingen av 250 ml absolutt etanol og oppløsningen fra trinn (i) (ca 200 ml) over -5°C inntil metning. Oppbevaring ved 8°C i 24 timer og inndampning av mesteparten av oppløsningsmidlet fulgt av utfelling ved tilsetning av vannfri eter ga hvite krystaller som ble isolert ved filtrering og oppløst i 1,8 1 alkoholisk ammoniakk. Etter 48 timer ble mesteparten av oppløsningsmidlet fjernet og 200 ml 3,75 M NaOH oppløsning ble tilsatt hvoretter 4-amidinobenzylazid ble utfelt som fargeløse krystaller. Krystallene ble isolert ved filtrering. Ved dette punktet var utbyttet av 4-amidinobenzylazid 22,5 g (totalt 51 %).
Etylimidatobenzylazidhydroklorid:
^-NMR (500 MHz, CD3OD); 6 1,6 (t, 3H), 4,5 (s, 2H), 4,65 (q, 2H), 4,8 (br s, 2H), 7,6 (d, 2H), 8,1 (d, 2H)
4-amidinobenzylazid:
<*>H-NMR (500 MHz, CDCI3); 8 4,3 (s, 2H), 5,7 (br s, 3H), 7,3 (d, 2H), 7,6 (d, 2H).
<13>C-NMR (125 MHz, CDCI3): amidinkarbon: 6 165,6.
(iii) 4-(benzyloksykarbonylamidino)benzylazid
Krystallene fra (ii) ovenfor ble oppløst i 500 ml metylenklorid og den resulterende opp-løsningen ble tørket (K2CO3), filtrert og 27 ml (194 mmol) trietylamin ble tilsatt. 25 ml benzylklorformeat ble langsomt tilsatt til den omrørte oppløsningen mens reaksjonsblandingen ble avkjølt i et isbad. Etter 30 minutter ble ytterligere 2 ml benzylklorformeat tilsatt og omrøring ble fortsatt i ytterligere 30 minuntter. Deretter ble vann tilsatt og den vandige fasen ble justert til pH 7 med 2 M HC1. Den organiske fasen ble tørket (MgS04) og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum. 4-(benzyloksykarbonyl-amidino)benzylazid ble tilslutt isolert som fargeløse krystaller fra eter/metylenklorid/ heksan.
<!>H-NMR (500 MHz, CDCI3); 6 4,4 (s, 2H), 5,3 (s, 2H), 6,3-7,0 (br s, 1H), 7,3-7,4 (m, 5H), 7,5 (d, 2H), 7,9 (d, 2H), 9,3-9,6 (br s, 1H).
<13>C-NMR (125 MHz, CDCI3): amidinkarbon: S 167,5.
(iv) 4-aminometyl-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)benzen (H-Pab(Z))
26,3 g (100 mmol) trifenylfosfin ble tilsatt ved romtemperatur til 4-(benzyloksykarbo-nylamidino)benzylazid fra (iii) ovenfor oppløst i 160 ml THF. Etter 16 timer ble ytterligere 6,6 g (25 mmol) trifenylfosfin tilsatt og oppløsningen ble hensatt i 4 timer før fjerning av oppløsningsmidlet i vakuum. Resten ble oppløst i metylenklorid og ekstrahert med 2 M HC1. Den vandige fasen ble vasket med metylenklorid og eter og ble deretter gjort alkalisk med 3,75 M natriumhydroksydoppløsning. Ekstrahering med metylenklorid fulgt av tørking (K2CO3) og fjerning av oppløsningsmidlet i vakuum ga 20 g (det totale utbyttet med utgangspunkt i cyanobenzylbromid er 28 %) av en gul olje som stivnet ved henstand.
<i>H-NMR (500 MHz, CDCI3); 6 1,2-2,2 (br s, 2H), 3,8 (s, 2H), 5,2 (s, 2H), 7,2-7,35 (m, 5H), 7,4 (d, 2H), 7,8 (d, 2H), 9,1-9,6 (br s, 1H).
<13>C-NMR (125 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 8 164,6 og 168,17.
H-Pig(Z)2
(i) 4-(tert-butyloksykarbonylaminometyl)piperidin
Til en oppløsning av 17,7 g 4-tert-butyloksykarbonylaminometylpyridin i 125 ml MeOH ble det tilsatt 2 g 5 % RI1/AI2O3 og blandingen ble hydrogenert ved 0,34 MPa natten over. <1>H-NMR viste at hydrogeneringen var ufullstendig. Katalysatoren ble derfor frafiltrert og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum og resten ble oppløst i 100 ml eddiksyre, 2 g av 5 % RI1/AI2O3 ble tilsatt og blandingen ble hydrogenert i 4 dager ved 0,34 MPa. Katalysatoren ble frafiltrert og mesteparten av eddiksyren ble fjernet i vakuum. Etter tilsetning av 50 ml vann til resten ble blandingen gjort alkalisk med 5 M NaOH og vannfasen ble ekstrahert med 1 x 200 + 1 x 100 ml CH2Cl2. Den kombinerte organiske fasen ble vasket med 25 ml vann og tørket (MgS04). Inndampning av opp-løsningsmidlet ga 17,2 g av en brunaktig olje som ble oppløst i 50 ml dietyleter. Tilsetning av 200 ml pentan ga et bunnfall som ble frafiltrert til oppnåelse av 7,7 g av et brunt pulver. Inndampning av moderluten ga 7 g av en hvit olje. Det brune pulveret ble oppløst i 100 ml EtOAc og den organiske fasen ble vasket med 1 x 50 ml + 1 x 25 ml 1 M KHSO4. Den kombinerte suren fasen ble gjort alkalisk med 2 M NaOH og ekstrahert med 1 x 200 + 1 x 75 ml EtOAc. Den kombinerte organiske fasen ble tørket og inndampet og dette ga 5,2 g av tittelforbindelsen som et hvitt pulver.
Behandling av den hvite oljen oppnådd fra moderluten ovenfor på samme måte ga ytterligere 3,4 g av produktet. Totalt utbytte 40 %.
<1>H-NMR (500 MHz, CDCI3, blanding av to rotamerer, 3:1): hovedrotamer: 5 1,11 (dq, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,49-1,60 (m, 1H), 1,63-1,70 (m, 2H), 2,58 (dt, 2H), 2,93-3,03 (m, 2H), 3,07 (m, 2H), 4,75 (bs, 1H (NH)).
Oppløste signaler som skriver seg fra den underordnede rotameren viser seg ved 5 1,21 (dq)ogl,91(dt).
(ii) Boc-Pig(Z)2
Til en oppløsning av 2 g (9,33 mmol) 4-(tert-butyloksykarbonylaminometyl)piperidin i 60 ml CH3CN ble det tilsatt 3,34 g (9,33 mmol) N,N'-(dibenzyloksykarbonyl)metylisotiourea og blandingen ble omrørt ved 60°C i 22 timer. Oppløsningsmidlet ble inndampet og resten ble oppløst i EtOAc. Den organiske fasen ble vasket med 2 x 20 ml 1 M KHSO4,1 x 20 ml vann, 1 x 20 ml saltoppløsning og tørket (MgS04). Inndampning av oppløsningsmidlet fulgt av flashkromatografi ved bruk av petroleumeter/EtOAc (1/1) som elueringsmiddel ga 2,43 g (50 %) av det ønskede produktet.
<1>H-NMR (500 MHz, CDCI3): Noen signaler, spesielt i piperidinringen, blir selektivt utvidet på grunn av en intramolekylær utvekslingsprosess. Dette er spesielt uttalt for 2-og 6-CH2 gruppene i piperidinringen, som utviser en bred topp varierende fra 3,7 til 4,5 ppm. 6 1,19-1,31 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,63-1,80 (m, 3H), 2,66-3,05 (m, 4H), 3,7-4,5 (bs, 2H), 4,65 (bt, 1H (NH)), 5,13 (s, 4H), 7,2-7,4 (m, 10H), 10,5 (bs, 1H (NH)).
(iii) H-Pig(Z)2
En oppløsning av 163 mg (0,31 mmol) Boc-Pig(Z)2 i 50 ml EtOAc mettet med HCl(g) ble omrørt ved omgivelsestemperatur i 3 timer og 20 minutter. Oppløsningsmidlet ble inndampet og resten ble oppløst i 30 ml CH2CI2. Den organiske fasen ble vasket med 5 ml 2 M NaOH, 1 x 5 ml vann, 1 x 5 ml saltoppløsning og tørket (MgS04). Inndampning av oppløsningsmidlet ga 100 mg (76 %) av tittelforbindelsen.
^H-NMR (500 MHz, CDCI3): Noen signaler, spesielt i piperidinringen, blir selektivt utvidet på grunn av en intramolekylær utvekslingsprosess. Dette er spesielt uttalt for 2-og 6-CH2 gruppene i piperidinringen, som viser en bred topp varierende fra 3,7 til 4,5 ppm. 5 1,18-1,37 (m, 2H), 1,46-1,63 (m, 1H), 1,68-1,83 (m, 2H), 2,57 (d, 2H), 2,86-3,03 (m, 2H), 3,7-4,5 (bs, 2H), 5,13 (s, 4H), 7,2-7,4 (m, 10H). l-aminometyl-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)cykloheksan (H-Pac(Z) x 2HCI).
(i) N-[N-4-(benzyloksykarbonyl)amidinobenzyl]tert-butylkarbamat.
1,466 g (6,7 mmol) (Boc)20 ble tilsatt til en omrørt iskald oppløsning av 1,81 g (6,4 mmol) 4-(benzyloksykarbonyl)amidinobenzylamin og 1 ml (7,1 mmol) trietylamin i 25 ml metylenklorid. Etter 20 minutter ble mer metylenklorid tilsatt og blandingen ble vasket med 5 % eddiksyre- og 10 % natriumkarbonatoppløsning. Tørking (magnesium-
sulfat) og fjerning av oppløsningsmidlet i vakuum ga en rest som kunne krystalliseres fra metylenkloridVheksan. Utbytte var 1,66 (68 %).
(ii) N-[N-4-amidinobenzyl]tert-butylkarbamat
En blanding av 1,60 g (4,2 mmol) N-[4-(benzyloksykarbonyl)amidinobenzyl]tert-butyl-karbamat, 5 ml eddiksyre og 160 mg 10 % palladium-på-trekull i 50 ml etanol ble omrørt i en atmosfære av hydrogen i 2 timer. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering gjennom celitt og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og dette ga acetatet av tittelforbindelsen i kvantitativt utbytte.
(iii) N-[4-amidinocykloheksylmetyl]tert-butylkarbamat
17 mmol av acetatet av N-[4-amidinobenzyl]tert-butylkarbamat ble hydrogenert i 100 ml metanol i nærvær av 863 mg 5 % rhodium på aluminiumoksyd ved 3,4 MPa i 20 timer. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Resten ble oppløst i vann og oppløsningen ble gjort basisk med natriumhydroksyd. Etterfølgende ekstraksjon med metylenklorid, tørking av de kombinerte organiske fasene (kaliumkarbonat) og fjerning av oppløsningsmidlet i vakuum ga 3,8 g (87 %) av tittelforbindelsen.
(iv) N-[N-4-(benzyloksykarbonyl)amidinocykloheksylmetyl]tert-butylkarbamat.
1,25 ml (8,8 mmol) benzylklorformeat ble tilsatt ved 0°C til en omrørt oppløsning av 2,04 g (8 mmol) N-[4-amidinocykloheksyl]tert-butylkarbamat, 1,23 ml (8,8 mmol) trietylamin og 197 mg DMAP i 40 ml metylenklorid. Etter 10 minutter ble reaksjonsblandingen fortynnet med metylenklorid og ekstrahert med vann, fortynnet eddiksyre og natriumhydrogenkarbonatoppløsning. Den organiske fasen ble påført på en kolonne av silisiumdioksyd og etterfølgende eluering med metylenklorid inneholdende økende mengder etylacetat ga 2,49 g (80 %) av tittelforbindelsen. (v) 4-aminometyl-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)cykloheksan (H-Pac(Z) x 2HC1).
Hydrogenklorid ble ført gjennom en oppløsning av 2 g (5,1 mmol) N-[4-(benzyloksykarbonyl)amidinocykloheksylmetyl]tert-butylkarbamat i 40 ml etylacetat. Etter 10 minutter ble metanol tilsatt og ved fjerning av noe av oppløsningsmidlet i vakuum krystalliserte dihydrokloridet av tittelforbindelsen.
4-aminometyl-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)piperidin (H-Pig(Z) x HC1)
(i) 4-(N-tert-butyloksykarbonylaminometyl)-1 -(N-benzyloksykarbon-ylamidino) piperidin (Boc-Pig(Z))
7,8 g (36,4 mmol) 4-(N-tert-butyloksykarbonylaminometyI)piperidin og 8,98 g (40 mmol) N-benzyloksykarbonyl-S-metylisotiourea ble blandet i 25 ml etanol. Blandingen ble oppvarmet ved 60-70°C i 6 timer og hensatt ved romtemperatur i 2 dager. Oppløs-ningsmidlet ble inndampet og resten ble oppløst i CH2CI2. Det organiske laget ble vasket to ganger med 0,3 M KHSO4 og en gang med saltoppløsning. Det kombinerte organiske laget ble tørket (Na2S04), filtrert og inndampet. Råproduktet ble renset ved flashkromatografi ved bruk av en trinnvis gradient av CE^Ctø/MeOH (100/0, 97/3, 95/5,90/10) som elueringsmiddel og dette ga 5,22 g (37 %) av tittelproduktet.
(ii) H-Pig(Z) x HC1 (4-aminometyl-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)piperidin
5,22 g (13,5 mmol) Boc-Pig(Z) ble oppløst i 100 ml etylacetat mettet med HCl(g). Blandingen ble hensatt i 1 time og deretter inndampet. Resten ble oppløst i vann og vasket med en blanding av dietyleter og etylacetat. Vannlaget ble frysetørket og dette ga 4,0 g (91 %) av tittelforbindelsen.
^-NMR (D20, 300 MHz): 8 1,40-1,60 (m, 2H), 2,05 (bd, 2H), 2,19 (m, 1H), 3,07 (d, 2H), 3,34 (bt, 2H), 4,08 (bd, 2H), 5,40 (s, 2H), 7,5-7,63 (m, 5H)
MS m/z 291 (M<+>+1)
4-aminoetyl-l-benzyloksykarbonylamidinopiperidin (H-Rig(Z))
(i) 1 -benzyloksykarbonylamidino-4-hydroksyetyIpiperidin
En blanding av 6,2 (0,028 mol) 4-hydroksyetylpiperidin og 3,6 g (0,028 mol) N-benzyloksykarbonyl-S-metylisotiourea i 50 ml acetonitril ble tilbakeløpskokt natten over. Inndampning og flashkromatografi på silisiumdioksydgel med etylacetat ga 3,5 g (41 %) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (300 MHz, CDCI3): 5 1,1-1,85 (m, 7H), 2,83 (bt, 2H), 4,70 (bt, 2H), 4,18 (bd, 2H), 5,12 (s, 2H), 6,9-7,2 (m, 2H), 7,2-7,5 (m, 5H).
(ii) 1 -benzyloksykarbonylamidino-4-mesyloksyetylpiperidin
Til en isavkjølt oppløsning av 3,50 g (0,0115 mol) l-benzyloksykarbonylamidino-4-hydroksyetylpiperidin, 1,15 g (0,0115 mol) trietylamin i 40 ml metylenklorid og 10 ml tetrahydrofuran ble det dråpevis tilsatt 1,30 g (0,115 mol) mesylklorid. Reaksjonsblandingen fikk omrøres i 1 time. Blandingen ble helt i vann og det organiske laget bibeholdt. Det vandige laget ble ekstrahert med metylenklorid og de kombinerte organiske lagene ble vasket med vann, tørket (Na2SC>4) og inndampet. Produktet ble benyttet uten ytterligere rensing i det neste trinnet. Utbytte: 4,4 g (100 %).
<i>H NMR (500 MHz, CDCI3) d 1,15-1,3 (m, 2H), 1,65-1,8 (m, 5H), 2,84 (bt, 2H), 3,01 (s, 3H), 4,20 (bd, 2H), 4,27 (t, 2H), 5,12 (s, 2H), 7,1-7,5 (m, 7H).
(iii) 4-azidoetyl-1 -benzyloksykarbonylamidinopiperidin
1100 ml dimetylformamid ble det oppløst 4,4 g (0,0115 mol) uren 1-benzyloksy-karbonylamidino-4-mesyloksyetylpiperidin og 4,5 g (0,069 mol) natriumazid ble tilsatt. Blandingen ble oppvarmet ved 100°C i 2,5 timer. Den ble deretter helt i vann og ekstrahert med etylacetat tre ganger. Den kombinerte organiske fasen ble vasket med vann, tørket (Na2S04). Resten ble flashkromatografert på silisiumdioksydgel ved bruk av etylacetat/heptan 1/1 som elueringsmiddel. Utbytte 3,0 g (79 %).
<i>H-NMR (500 MHz, CDCI3) 8 1,20 (dq, 2H), 1,5-1,8 (m, 5H), 2,85 (dt, 3H), 3,35 (t, 2H), 4,22 (bd, 2H9, 5,13 (s, 2H), 6,9-7,2 (b, 2H), 7,2-7,45 (m, 5H).
(iv) 4-aminoetyl-l-benzyloksykarbonylamidinopiperidin (H-Rig(Z))
Til 30 ml vann ble det tilsatt 0,40 g 10 % Pd/C. Natriumborhydrid, 1,0 g (0,031 mol) ble oppløst i 30 ml vann og ble forsiktig tilsatt til den omrørte og isavkjølte oppslemmingen av Pd/C og vann. 4-azidoetyl-l-benzyloksykarbonylamidinopiperidin, 2,9 g (8,8 mmol), ble oppløst i 80 ml tetrahydrofuran og denne oppløsningen ble tilsatt dråpevis til den ovennevnte isavkjølte vandige oppslemmingen. Etter 4 timers omrøring ved romtemperatur ble blandingen isavkjølt på nytt og 30 ml 2 M HC1 ble tilsatt. Blandingen ble filtrert gjennom celitt og celitten ble skylt med ytterligere vann. Tetrahydrofuranen ble inndampet og den vandige fasen ble vasket med etylacetat. Den vandige fasen ble gjort alkalisk med 2 M NaOH og ekstrahert med metylenklorid tre ganger. Den kombinerte organiske fasen ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Produktet ble benyttet i det følgende trinnet uten ytterligere rensing.
<*>H-NMR (500 MHz, CDCI3) 8 1,1-1,5 (m, 6H), 1,55-1,65 (m, 1H), 1,73 (bd, 2H), 2,72 (b, 2H), 2,81 (dt, 2H), 4,20 (bd, 2H), 5,12 (s, 2H), 6,9-7,2 (b, 2H), 7,2-7,5 (m, 5H).
(3RS)-l-(N-benzyloksykarbonylamidmo)-3-aminometylpyrrolidin (H-(R,S)Nig(Z))
(i) (3RS)-3-hydroksymetyIpyrrolidin
16,4 g (0,0857 mol) (3RS)-l-benzyl-3-hydroksymetylpyrrolidin (Se H-(R,S)Hig(Z) (i) ovenfor) ble blandet med 1,6 g Pd/C (10 %), 5 ml vann og 150 ml etanol og blandingen ble hydrogenert ved 0,26 MPa natten over. Etter filtrering gjennom hyflo og inndampning av oppløsningsmidlet viste ^H-NMR at reaksjonen ikke var fullført. Fortsatt hydrogenering ved 0,26 MPa over 1,6 g Pd/C (10 %) i 5 ml vann/150 ml etanol i 3 dager fullførte reduksjonen. Filtrering gjennom hyflo og inndampning av oppløsningsmidlet ga produktet i et kvantitativt utbytte.
(ii) (3RS)-1 -(N-berizyloksykarbonylamidino)-3-hydroksymetylpyrrolidin
1,01 g (0,01 mol) (3RS)-3-hydroksymetylpyrrolidin og 2,29 g (0,011 mol) N-benzyloksykarbonyl-O-metylisourea ble oppløst (aminet var ikke særlig oppløselig) i toluen og oppvarmet til 60°C i 3 timer fulgt av omrøring ved romtemperatur natten over. Blandingen ble inndampet og ^H-NMR viste at reaksjonen ikke var fullstendig. Blandingen ble derfor oppløst i 15 ml acetonitril og oppvarmet til 60°C i 3 timer fulgt av omrøring ved romtemperatur natten over. Oppløsningsmidlet ble inndampet og blandingen ble oppløst i CH2CI2, vasket en gang med vann, tørket (Na2S04), filtrert og inndampet. Råproduktet ble renset ved flashkromatografi ved bruk CH2Cl2/MeOH 95/5 som elueringsmiddel og dette ga 0,70 g (25 %) av produktet.
MSm/z278 (M++l)
(iii) (3RS)-1 -(N-benzyloksykarbonylamidino)-3-mesyloksymetylpyrrolidin
0,7 g (2,53 mmol) (3RS)-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)-3-hydroksymetylpyrrolidin og 0,70 ml (5,05 mmol) trietylamin ble oppløst i 15 ml dietyleter/CH2Cl2 1/1 og blandingen ble avkjølt til 0°C. 0,25 ml (3,29 mmol) metansulfonylklorid i 3 ml dietyleter ble langsomt tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 3 timer. Opp-løsningsmidlet ble inndampet og resten ble oppløst i etylacetat og ekstrahert med en 0,3 M KHS04-oppløsning. Vannlaget ble vasket en gang med CH2CI2. Vannlaget ble gjort nøytralt med 10 M NaOH-oppløsning og ekstrahert to ganger med CH2CI2. Det kombinerte organiske laget ble tørket (Na2S02), filtrert og inndampet og dette ga 0,450 g (50 %) av tittelforbindelsen.
(iv) (3RS)-1 -(N-benzyloksykarbonylamidino)-3-azidometylpyrrolidin
0,450 g (1,27 mmol) (3RS)-l-N-benzyloksykarbonylamidino)-3-mestyloksymetyl-pyrrolidin og 0,124 g (1,9 mmol) natriuazid ble oppløst i 10 ml dimetylformamid og oppvarmet til 60°C i 4 timer fulgt av omrøring ved romtemperatur natten over. Vann ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert to ganger med toluen/etylacetat 2/1. Det kombinerte organiske laget ble tørket (Na2S04), filtrert og inndampet. Råproduktet ble renset ved flashkromatografi ved bruk av CH2Cl2/Me0H 95/5 som elueringsmiddel og dette ga 0,262 g (68 %) av produktet.
MS m/z 303 (M<+>+1)
(v) (3RS)-1 -(N-benzyloksykarbonylamidino)-3-aminometyIpyrrolidin (H-(R,S)Nig(Z)) 32 mg Pd/C (10 %) og 2,6 ml H2O ble blandet og en langsom strøm av nitrogen ble til-ført. 98 mg NaBH4 i 2,6 ml H2O ble tilsatt fulgt av en langsom tilsetning av 262 mg (0,87 mmol) (3RS)-1 -(N-benzyloksykarbonylamidino)-3-mesyloksymetylpyrrolidin oppløst i 7 ml MeOH. Blandingen ble hensatt i 1 time. 5 ml 1 M HC1 ble tilsatt og blandingen ble filtrert gjennom hyflo. Det organiske oppløsningsmidlet ble inndampet under redusert trykk og det gjenværende vannlaget ble vasket en gang med etylacetat, gjort alkalisk med NaOH-oppløsning og ekstrahert flere ganger med CH2CI2- Det kombinerte organiske laget ble tørket (Na2S04) filtrert og inndampet og dette ga 130 mg (54 %) av produktet.
MS m/z 277 (M<+>+1)
(3RS)-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)-3-aminoetylpyrroidin (H-(R,S)Hig(Z))
(i) (3RS)-1 -benzyl-3-hydroksymetylpyrrolidin
25,2 g (0,1063 mol) (3RS)-l-benzyl-2-okso-4-metoksykarbonylpyrrolidin ble langsomt tilsatt til en oppslemming av 6,22 g litiumaluminiumhydrid i 160 ml dietyleter under en argonatmosfære. Blandingen ble omrørt natten over og deretter oppvarmet til tilbakeløp i 1 time. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og 0,2 g Na2S04 x 10 H2O ble tilsatt fulgt av en langsom tilsetning av 6 ml vann, 18 ml 3,75 M NaOH-oppløsning og 6 ml vann i denne rekkefølgen. Oppslemmingen ble tørket for overskudd vann med Na2S04/celitt, filtrert og inndampet og dette ga (20,3 g) produktet.
<!>H-NMR (CDCI3, 300 MHz): 8 1,64-1,77 (m, 1H), 1,93-2,07 (m, 1H), 2,27-2,40 (m, 2H), 2,51 (dd, 1H), 2,62 (dd, 1H), 2,82 (m, 1H), 3,52 (dd, 1H), 3,59 (s, 2H), 3,67 (dd, 1H), 7,15-7,40 (m, 5H)
(ii) (3RS)-1 -benzyl-3-klormetylpyrrolidin
Til en tilbakeløpskokende oppløsning av 15,3 g (0,08 mol) (3RS)-l-benzyl-3-hydroksy-metylpyrrolidin i 220 ml CHCI3 ble det langsomt tilsatt en oppløsning av 330 ml tionylklorid i 60 ml CHCI3 og tilbakeløpskokingen ble fortsatt i 1 time. Blandingen ble inndampet og resten ble oppløst i vann. Vannlaget ble vasket med etylacetat og deretter gjort alkalisk med 0,2 M NaOH-oppløsning. Vannlaget ble ekstrahert tre ganger med etylacetat og det kombinerte organiske laget ble tørket (Na2S04), filtrert og inndampet og dette ga produktet i et kvantitativt utbytte (16,8 g).
<i>H-NMR (CDCI3, 300 MHz): 8 1,55 (m, 1H), 2,05 (m, IH), 2,38 (dd, 1H), 2,48-2,64 (m, 3H; derav 2,58 (t, 2H)), 2,73 (dd, 1H), 3,51 (d, 2H), 3,60 (s, 2H), 7,2-7,4 (m, 5H)
(iii) (3RS)-1 -benzyl-3-cyanometylpyrrolidin
16,8 g (0,08 mol) (3RS)-l-benzyl-3-klormetylpyrrolidin og 5,88 g (0,12 mol) natrium-cyanid ble oppløst i 250 ml dimetylsulfoksyd. Blandingen ble omrørt ved 60°C i to dager og ved romtemperatur i 1 uke. Vann ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert tre ganger med etylacetat. Det kombinerte organiske laget ble vasket med saltoppløsning, tørket (Na2S04), filtrert og inndampet og dette ga 14,7 g (92 %) av produktet.
^H-NMR (CDCI3, 500 MHz): 5 1,55 (m, 1H), 2,13 (m, 1H), 2,35 (dd, 1H), 2,42 (t, 2H), 2,44-2,59 (m, 2H), 2,65 (m, 1H), 2,73 (dd, 1H), 3,61 (s, 2H), 7,2-7,4 (m, 5H)
(iv) (3RS)-1 -benzyl-3-aminoetylpyrrolidin
14,7 g (0,0734 mol) (3RS)-l-benzyl-3-cyanometylpyrrolidin oppløst i 220 ml dietyleter ble langsomt tilsatt til en oppslemming av 2,94 g litiumaluminiumhydrid i 74 ml dietyleter under en argonatmosfære. Blandingen ble omrørt natten over og 6 ml vann, 18 ml 3,75 M NaOH-oppløsning og 6 ml vann ble tilsatt til blandingen. Oppslemmingen ble tørket for overskudd vann med Na2S04/celitt, filtrert ved sug og inndampet og dette ga 14,84 g (99 %) av produktet.
<i>H-NMR (CDCI3,300 MHz): 5 1,41 (m, 1H), 1,51 (q, 2H), 1,90-2,10 (m, 2H; derav 2,05 (dd, 1H)), 2,18 (m, 1H), 2,43 (m, 1H), 2,55-2,73 (m, 3H), 2,80 (tilsynelatende t, 1H), 3,58 (tilsynelatende d, 2H), 7,15-7,4 (m, 5H)
(v) (3RS)-1 -benzyl-3-(N-tert-butyloksykarbonylaminoetyI)pyrrolidin
Til en blanding av 14,84 g (0,0726 mol) (3RS)-l-benzyl-3-aminoetylpyrrolidin, 72,6 ml 1 M NaOH-oppløsning, 76 ml vann og 145 ml THF ble det tilsatt 17,44 g (0,08 mol) di-tert-butyldikarbonat og blandingen ble omrørt natten over. Oppløsningen ble konsentrert og ekstrahert tre ganger med etylacetat. Det kombinerte organiske laget ble vasket med saltoppløsning, tørket (Na2S04), filtrert og inndampet. Råproduktet ble renset ved flashkromatografi ved bruk av en trinnvis gradient av C^Ctø/MeOH (95/5,90/10) som elueringsmiddel og dette ga 14,69 g (80 %) av produktet.
<!>H-NMR (CDCI3, 300 MHz): S 1,25-1,65 (m, 12H; derav 1,40 (s, 9H)), 1,90-2,25 (m, 3H), 2,46 (m, 1H), 2,67 (m, 1H), 2,80 (tilsynelatende t, 1H), 3,09 (m, 2H), 3,59 (s, 2H), 4,60 (bs, NH), 7,15-7,35 (m, 5H)
(vi) (3RS)-3-(N-tert-butyloksykarbonylaminoetyl)pyrrolidin
3,1 g(0,01 mol) (3RS)-l-benzyl-3-(N-tert-butyloksykarbonylaminoetyl)pyrrolidinble hydrogenert ved 0,28 MPa over 0,6 g av Pearlman's katalysator (Pd(OH)2) i 40 ml etanol (95 %) natten over. Etter filtrering av katalysatoren gjennom celitt og inndampning av oppløsningemidlet viste ^H-NMR at reaksjonen ikke var fullstendig. Derfor ble 0,6 g av Pearlman's katalysator tilsatt i 40 ml etanol (95 %) en gang til og
blandingen ble behandlet under H2-atmosfære ved 0,28 MPa natten over. Filtrering gjennom celitt og inndampning av oppløsningsmidlet ga produktet i et kvantitativt utbytte (2,18 g).
MS m/z 214 (M<+>)
(vii) (3RS)-1 -(K-benzyloksykarbonylamidino)-3-aminoetylpyrrolidin (H-(R,S)Hig(Z))
2,18 g (0,0102 mol) (3RS)-3-(N-tert-butyloksykarbonylaminoetyl)pyrrolidin og 2,81 g (0,0125 mol) N-benzyloksykarbonyl-S-metylisotiourea ble oppløst i 30 ml toluen og oppvarmet til 60-70°C i 8 timer fulgt av omrøring ved romtemperatur i 1 dag. 0,3 M KHSO-oppløsning ble tilsatt og vannlaget ble vasket med en blanding av toluen og etylacetat og hensatt i 2 dager idet Boc-gruppen ble fjernet i løpet av denne tiden. Den sure vannfasen ble gjort alkalisk og ekstrahert fire ganger med CH2C12- Det kombinerte organiske laget ble tørket (Na2S04), filtrert og inndampet og dette ga 2,0 g (51 %) av tittelforbindelsen.
<J>H-NMR (CDC13,300 K, 300 MHz): 5 1,45-1,7 (m, 3H), 2,07 (m, 1H), 2,26 (m, 1H), 2,74 (t, 2H), 3,00 (tilsynelatende t, 1H), 3,33 (tilsynelatende q, 1H), 3,45-3,80 (m, 2H), 5,12 (s, 2H), 6,72 (bs, 2 NH), 7,15-7,45 (m, 5H)
(4RS)-l,3-diaza-2-tosylimino-4-aminoetylcykloheksan (H-(R,S)Itp(Ts))
(i) (4RS)-1,3-diaza-2-tosylimino-4-karboksycykloheksan
Fremstilt ved bruk av samme metode som beskrevet i Journal of Org. Chem., side 46, 1971.
(ii) (4RS)-1,3-diaza-2-tosylimino-4-hydroksymetylcykloheksan
12,9 g (345 mmol) UAIH4 ble forsiktig tilsatt til en kald oppslemming (isbadtemperatur) av 9,9 g (33 mmol) (4RS)-l,3-diaza-2-tosylimino-4-karboksycykloheksan i 330 ml tørr THF. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over. Reaksjonsblandingen ble bearbeidet ifølge Fieser & Fieser, for eksempel ved tilsetning av 12,9 g vann, 38,7 g 3,75 M NaOH, 12,9 g vann, Na2S04, CH2CI2 og celitt til blandingen. Inndampning av oppløsningsmidlet ga 7,0 g (75 %) av det ønskede produktet.
MS m/z 284 (M<+>+1)
(iii) (4RS)-1,3-diaza-2-tosylimino-4-mesyloksymetylcykloheksan
2,9 ml MsCl (37,1 mmol) ble forsiktig tilsatt til en kald (isbadtemperatur) oppslemming av 7,0 g (24,7 mmol) (4RS)-l,3-diaza-2-tosylimino-4-hydroksymetylcykloheksan i 6,9 ml (49,4 mmol) trietylamin og 125 ml CH2CI2. Vann ble tilsatt etter 1 time og 15 min og den organiske fasen ble separert, tørket (Na2SC>4), filtrert og inndampet og dette ga tittelforbindelsen i kvantitativt utbytte.
MS m/z 362 (M<+>+1)
(iv) (4RS)-1,3-diaza-2-tosylimino-4-cyanometylcykloheksan
8,9 g (24,7 mmol) (4RS)-l,3-diaza-2-tosylimino-4-mesyloksymetylcykloheksan og 1,3 (27,2 mmol) NaCN ble oppløst i 75 ml DMSO. Etter omrøring ved 40°C i 60 timer ble en ytterligere mengde av 0,31 g (6 mmol) NaCN tilsatt og oppløsningen ble omrørt ved 65DC i 3 timer. 150 ml vann ble tilsatt og krystaller ble utfelt fra oppløsningen. De ble frafiltrert og tørket og dette ga 5,4 g (75 %) av det ønskede produktet.
MS m/z 293 (M<+>+1)
(4RS)-l,3-diaza-2-tosylimino-4-aminoetylcykloheksan (H-(R,S)Itp(Ts))
935 mg UAIH4 ble forsiktig tilsatt til en avkjølt (isbadtemperatur) oppslemming av 2,4 g (8,2 mmol) (4RS)-l,3-diaza-2-tosylimino-4-cyanometylcykloheksan i 90 ml THF. Etter omrøring i 2 timer ble 1 g H2O, 3 g 3,75 M NaOH, 1 g H2O, Na2S04, celitt og CH2CI2 tilsatt. Blandingen ble filtrert og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum og dette ga 2,2 g (90 %) av det ønskede produktet.
<i>H NMR (500 MHz, MeOD): 8 1,52-1,71 (m, 3H), 1,88-1,96 (m, IH), 2,37 (s, 3H), 2,64-2,73 (m, 2H), 3,2-3,4 (m, 2H, delvis overlappende med oppløsningsmiddel-signalet), 3,44-3,53 (m, IH), 7,28 (d, 2H), 7,71 (d, 2H)
(4S)-l,3-diaza-2-tosyIimino-4-aminoetylcykloheksan (H-(S)Itp(Ts))
Fremstilt på samme måte som beskrevet for H-(R,S)Itp(Ts) ved å starte fra optisk ren 2,4-diaminosmørsyre.
^H-NMR (300,13 MHz, CDCI3); 5 0,97-1,15 (s bred, IH), 1,48-1,69 (m, 3H), 1,84-1,95 (m, IH), 2,37 (s, 3H), 2,68-2,82 (m, IH), 2,86-2,98 (m, IH), 3,22-3,44 (m, 2H), 3,45-3,58 (m, IH), 7,19 (d, 2H), 7,72 (d, 2H)
<13>C NMR (300,13 MHz, CDCI3): 5 guanidinkarbon 154,05
H-Aze-OEt x HC1
Fremstilt på samme måte som beskrevet for H-Pic-OEt x HC1 fra H-Aze-OH (se nedenfor).
H-Aze-OMe x HC1
Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet av Seebach D. et al i Liebigs Ann. Chem., side 687,1990.
H-Pab(Z) x HC1
Fremstilt ved tilsetning av 1 molekvivalent 5 M HC1 i isopropanol til en oppløsning av uren H-Pab(Z) i EtOH (ca 1 g/10 ml) hvorved H-Pab(Z) x HC1 umiddelbart utfelles fra oppløsningen. Etter filtrering ble bunnfallet vasket to ganger med kald EtOH og tørket og dette ga tittelforbindelsen i nesten kvantitativt utbytte.
H-Pic-OEt x HC1
L-pipecolinsyre, 4,0 g (0,031 mol), ble oppslemmet i 100 ml abs. etanol og HC1 (g) ble forsiktig boblet gjennom inntil en klar oppløsning ble oppnådd. Den ble avkjølt i et isbad og 17 ml tionylklorid ble tilsatt dråpevis i løpet av 15 min. Isbadet ble fjernet og blandingen ble tilbakeløpskokt i 2,5 timer. Oppløsningsmidlet ble inndampet og produktet ble oppnådd som dets hydrokloridsalt i et kvantitativt utbytte.
<i>H-NMR (300 MHz, D20): 6 1,33 (t, 3H), 1,8-2,1 (m, 5H), 2,3-2,5 (m, IH), 3,1-3,3 (m, IH), 3,5-3,7 (m, IH), 4,14 (dd, IH), 4,44 (q, 2H).
H-(R,S)betaPic-OMc x HC1
En blanding av 2,0 g (15,5 mmol) nipecotinsyre i 8 ml metanol ble avkjølt i et isbad og 2,76 g (23,2 mmol) tionylklorid ble tilsatt. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 20 timer. Oppløsningsmidlet ble inndampet og resten ble oppløst i en liten mengde metanol, dietyleter ble tilsatt og H-(R,S)betaPic-OMe x HC1 ble utfelt som hvite krystaller. Krystallene 2,57 g (92 %) ble isolert ved filtrering.
Boc-(R)Cgl-OH
Boc-(R)-PgI-OH, 32,6 g (0,13 mol), ble oppløst i 300 ml metanol og 5 g Rh/Al203 ble tilsatt. Oppløsningen ble hydrogenert ved 5,2 til 2,8 MPa i 3 dager. Etter filtrering og inndampning av oppløsningsmidlet viste NMR tilstedeværelsen av ca 25 % av metylesteren av tittelforbindelsen. Råmaterialet ble oppløst i 500 ml THF og 300 ml vann og 20 g LiOH ble tilsatt. Blandingen ble omrørt natten over og THF ble inndampet. Den gjenværende vannfasen ble surgjort med KHSO4 og ekstrahert tre ganger med etylacetat. Det kombinerte organiske laget ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet og dette ga 28,3 g (83 %) av det ønskede produktet.
^-NMR (300 MHz, CDCI3): 5 0,9-1,7 (m, 20H), 4,0-4,2 (m, IH), 5,2 (d, IH).
Boc-(R)Cgl-OSu
Til en iskald oppløsning av 2,01 g (7,81 mmol) Boc-(R)Cgl-OH og 1,83 g (15,6 mmol) HOSu i 25 ml CH3CN ble 1,69 g (8,2 mmol) DCC tilsatt og reaksjonsblandingen fikk nå romtemperatur. Etter omrøring i 3 dager ble det utfelte DCU materialet frafiltrert og oppløsningsmidlet fordampet. Resten ble oppløst i EtOAc og den organiske fasen ble vasket med H20, KHSO4, NaHC03, saltoppløsning og tørket (Na2S04). Inndampning av oppløsningsmidlet ga tittelforbindelsen i kvantitativt utbytte.
Boc-(R)Cha-OSu
Boc-(R)Cha-OH (1 ekv.), HOSu (1,1 ekv.) og DCC eller CME-CDI (1,1 ekv.) ble opp-løst i acetonitril (ca 2,5 ml/mmol syre) og omrørt ved romtemperatur natten over. Bunnfallet som ble dannet iløpet av reaksjonen ble frafiltrert, oppløsningsmidlet inndampet og produktet tørket i vakuum. (Da CME-CDI ble benyttet i reaksjonen ble resten, etter inndampning av CH3CN, oppløst i EtOAc og den organiske fasen vasket med vann og tørket). Inndampning av oppløsningsmidlet ga tittelforbindelsen.
^H-NMR (500 MHz, CDCI3,2 rotamerer ca: 1:1 forhold) - 0,85-1,1 (m, 2H), 1,1-1,48 (m, 4H), 1,5-1,98 (m, 16H; derav 1,55 (bs, 9H)), 2,82 (bs, 4H), 4,72 (bs, IH, hovedrotamer), 4,85 (bs, IH, underordnet).
Boc-(R)Hoc-OH
Boc-(R)Hop-OH (se ovenfor), 3,2 g (11,46 mmol) ble oppløst i metanol (75 ml). Rhodium på aktivert aluminiumoksyd (RI1/AI2O3), 0,5 g ble tilsatt og blandingen ble omrørt under en hydrogenatmosfære ved 0,41 MPa i 18 timer. Katalysatoren ble frafiltrert gjennom hyflo og oppløsningsmidlet inndampet og dette ga produktet i nesten kvantitativt utbytte.
<i>H-NMR (500 MHz, CDCI3): 5 0,90 (m, 2H), 1,08-1,33 (m, 6H), 1,43 (s, 9H), 1,60-1,74 (m, 6H), 1,88 (bs, IH), 4,27 (bs, IH).
Boc-(R)Hoc-OSu
Fremstilt på samme måte som beskrevet for Boc-(R)Cha-OSu fra Boc-(R)Hoc-OH.
Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-OH
Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet av J.Y.L. Chung et al i Journal of Organic Chemistry, nr 1, sidene 270-275,1990.
Boc-(R)Cgl-Aze-OH
(i) Boc-(R)Cgl-Aze-OMe
Til en omrørt blanding av 3,86 g (15 mmol) Boc-(R)Cgl-OH, 2,27 g (15 mmol) H-Aze-OMe x HC1 og 2,75 g (22,5 mmol) DMAP i 40 ml CH3CN ved 5°C ble 3,16 g (16,5 mmol) EDC tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 48 timer. Oppløsningsmidlet ble inndampet og resten ble oppløst i 150 ml EtOAc og 20 ml H2O. Det separerte organiske laget ble vasket med 2 x 20 ml 0,5 M KHSO4,2 x 10 ml NaHC03 (mettet), 1 x 10 ml H20,1 x 10 ml saltoppløsning og tørket (MgS04). Inndampning av oppløsningsmidlet ga 4,91 g (92 %) av tittelforbindelsen som ble benyttet uten ytterligere rensing i det neste trinnet.
<!>h NMR (500 MHz, CDCI3,0,1 g/ml): hovedrotamer, 0,83-1,35 (m, 5H), 1,38 )s, 9H), 1,47-1,84 (m, 6H), 2,18-2,27 (m, IH), 2,50-2,62 (m, IH), 3,72 (s, 3H), 3,94-4,06 (m, 1H), 4,07-4,15 (m, IH), 4,39-4,47 (m, IH), 4,68 (dd, J = 9,1, J = 5,1, IH), 5,09 (d, J = 9,2, IH. Oppløste topper fra underordnet rotamer, 2,27-2,35 (m, IH), 3,77 )s, 3H), 3,80-3,87 (m, IH), 3,88-3,95 (m, IH), 4,92 (d, J = 9,2, IH), 5,21 (dd, J = 9,1, J ~ 5. IH).
(ii) Boc-(R)Cgl-Aze-OH
Hydrolysen av Boc-(R)CgI-Aze-OMe ble utført ifølge fremgangsmåten beskrevet for Boc-(R)Cha-Pic-OEt (se nedenfor). Produktet ble krystallisert fra EtOH/aceton/vann (1/1/3,95) utbytte 80 %.
<!>h NMR (500 MHz, CDCI3): 8 0,85-1,3 (m, 5H), 1,40 (s, 9H), 1,5-1,9 (m, 6H), 1,95-2,2 (m, 2H), 3,92 (m, IH), 4,09 (m, IH), 4,35 (m, IH), 4,95 (m, IH), 5,16 (bd, IH).
Boc-(R)Cgl-Pic-OH
(i) Boc-(R)Cgl-Pic-OMe
Pivaloylklorid (1,0 ml, 8,1 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av Boc-(R)-Cgl-OH (2,086 g, 8,1 mmol) og trietylamin (1,13 ml, 8,1 mmol) i toluen (25 ml) og DMF (5 ml). En blanding av H-Pic-OMe x HC1 (1,46 g, 8,1 mmol) og trietylamin (1,13 ml, 8,1 mmol) i DMF (20 ml) ble deretter tilsatt ved isbadtemperatur. Reaksjonsblandingen fikk langsomt oppvarmes til romtemperatur og etter 24 timer ble den fortynnet med vann og ekstrahert med toluen. Etter vasking med 0,3 M KHSO4,10 % Na2CC>3 og saltopp-løsning ble oppløsningsmidlet fjernet i vakuum og dette ga 2,52 g (81 %) fargeløs olje som ble benyttet uten ytterligere rensing.
<!>h-NMR (500 MHz, CDCI3,2 rotamerer, 5:1 forhold) 8 0,8-1,8 (m, 25H), 2,25 (d, IH), 2,75 (t, IH, underordnet rotamer), 3,3 (t, IH), 3,7 (s, 3H), 3,85 (d, IH), 4,3 (t, IH, underordnet rotamer), 4,5-4,6 (m, IH), 5,25 (d, IH), 5,30 (d, IH).
(ii) Boc-(R)Cgl-Pic-OH
Fremstilt ifølge fremgangsmåten for hydrolyse av Boc-(R)Cha-Pic-OEt (se nedenfor) ved bruk av produktet fra (i) ovenfor. Produktet ble krystallisert fra diisopropyleter og heksan.
<i>H-NMR (500 MHz, CDCI3,2 rotamerer, 5:1 forhold) 8 0,8-1,8 (m, 25H), 2,3 (d, IH), 2,8 (t, IH, underordnet rotamer), 3,3 (t, IH), 3,9 (d, IH), 4,4 (t, IH, underordnet), 4,5-4,6 (m, IH), 5,1 (s, IH, underordnet rotamer), 5,3 (d, IH), 5,40 (d, IH).
Boc-(R)Cgl-Pro-OH
3,59 g (31,24 mmol) L-prolin ble blandet med 20 ml vann og 1,18 g (29,7 mmol) natriumhydroksyd. 2,8 g (7,8 mmol) av Boc-(R)Cgl-OSu i 10 ml DMF ble tilsatt til blandingen. På grunn av oppløselighetsproblem ble ytterligere 30 ml DMF tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt i 3 dager. Oppløsningsmidlet ble inndampet og vann tilsatt. Vannfasen ble vasket med etylacetat, surgjort med 0,3 M KHS04-oppløsning og ekstrahert tre ganger med etylacetat. Den organiske fasen ble vasket en gang med vann og en gang med saltoppløsning, tørket (Na2S04), filtrert og inndampet og dette ga 2,3 g (83 %) av produktet.
<i>H-NMR (300 MHz, CDCI3): 8 0,89-2,17 (m, 23H), 2,37 (m, IH), 3,55 (q, IH), 3,90 (bs, IH), 4,28 (t, IH), 4,52 (bs, IH), 5,22 (bs, IH (NH)).
Boc-(R)Cha-Aze-OH
Fremstilt på samme måte som beskrevet for Boc-(R)Cha-Pic-OH ved å starte fra Boc-(R)Cha-OH og H-Aze-OEt x HC1 (se nedenfor).
Boc-(R)Cha-Pro-OH
H-(S)Pro-OH (680 mmol) ble oppløst i 0,87 M natriumhydroksyd (750 ml). Boc-(R)Cha-OSu (170 mmol) oppløst i DMF (375 ml) ble tilsatt dråpevis i løpet av 20 min. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 20 timer. Blandingen ble surgjort (2 M KHSO4) og ekstrahert tre ganger med etylacetat. De organiske lagene ble kombinert og vasket tre ganger med vann og en gang med saltoppløsning. Etter tørking over natriumsulfat og inndampning av oppløsningsmidlet ble den sirupaktige oljen oppløst i dietyleter, oppløsningsmidlet ble inndampet og til slutt ble produktet tørket i vakuum og dette ga Boc-(R)Cha-Pro-PH som et hvitt pulver i nesten kvantitativt utbytte.
<i>H NMR (500 MHz, CDCI3, blanding av to rotamerer 9:1) 5 0,8-1,05 (m, 2H), 1,05-1,55 (m, 15H; derav 1,5 (bs, 9H)), 1,55-1,8 (m, 5H), 1,8-2,15 (m, 3H), 2,47 (m, IH), 3,48 (m, IH), 3,89 (m, IH), 4,55 (m, 2H), 5,06 (m, IH); Oppløste signaler fra den underordnede rotameren viser seg ved d 2,27 (m), 3,58 (m), 4,33 (m), 5,0 (m).
Boc-(Me) (R)Cha-Pro-OSu
(i) Boc-(Me) (R)Cha-Pro-OH
Fremstilt på samme måte som beskrevet ovenfor for Boc-(R)Cha-Pro-OH ved å starte fra Boc-(Me) (R)Cha-OSu og H-Pro-OH.
(ii) Boc-(Me) (R)Cha-Pro-OSu
Fremstilt på samme måte som beskrevet for Boc-(R)Cha-OSu ved å starte fra Boc-(Me)
(R)Cha-Pro-OH.
Boc-(R)Cha-Pic-OEt
(ia) Boc-(R)Cha-Pic-OEt
Boc-(R)Cha-OH, 6,3 g (0,023 mol) ble oppløst i 150 ml CH2CI2. Oppløsningen ble avkjølt i et isbad og 6,3 g (0,047 mol) N-hydroksybenzotriazol og 11,2 g (0,0265 mol) CME-CDI ble tilsatt. Isbadet ble fjernet etter 15 min og reaksjonsblandingen ble omrørt i 4 timer ved romtemperatur. Oppløsningsmidlet ble inndampet og resten oppløst i 150 ml DMF og avkjølt i et isbad. H-Pic-OEt x HC1,4,1 g (0,021 mol) ble tilsatt og pH-verdien justert til ca 9 ved tilsetning av N-metylmorfolin. Isbadet ble fjernet etter 15 min og reaksjonsblandingen ble omrørt i 3 dager. Oppløsningsmidlet ble inndampet og resten ble oppløst i etylacetat og vasket med fortynnet KOSO4 (vandig) NaHC03 (vandig) og vann. Det organiske laget ble tørket (Na2S04) og inndampet og dette ga 7,7 g (89 %) av Boc-(R)Cha-Pic-OEt som ble benyttet uten ytterligere rensing.
<i>H-NMR (500 MHz, CDC13, 2 rotamerer, 3:1 forhold) 8 0,7-1,0 (m, 2H), 1,1-1,9 (m, 29H; derav 1,28 (t, 3H)), 1,45 (bs, 9H), 2,01 (bd, IH, hovedrotamer), 2,31 (bd, IH), 2,88 (bt, IH, underordnet), 3,30 (bt, IH, hoved), 3,80 (bd, IH, hoved), 4,15-4,3 (m, 2H), 4,5-4,7 (m, 2H, underordnet), 4,77 (bq, IH, hoved), 4,90 (bd, IH, underordnet), 5,28 (bd, IH, hoved), 5,33 (bd, IH, hoved).
(ib) Boc-(R)Cha-Pic-OMe
400 ul (3,23 mmol) pivaloylklorid ble tilsatt til en omrørt blanding av 875 mg (3,22 mmol) Boc-(R)Cha-OH og 450 ul (3,23 mmol) trietylamin i 10 ml toluen og 2 ml DMF. En blanding av 596 mg (3,32 mmol) metyl-(S)-pipecolathydroklorid og 463 ul (3,32 mmol) trietylamin i 5 ml DMF ble tilsatt til den resulterende oppslemmingen etter 45 min. Etter 2 timer ble 100 ul (0,72 mmol) trietylamin tilsatt og omrøring ble fortsatt i ytterligere 18 timer. Vann og toluen ble tilsatt til reaksjonsblandingen og den organiske fasen ble vasket med 0,3 M KHSO4,10 % Na2C03 og saltoppløsning. Tørking (MgS04) og fjerning av oppløsningsmidlet i vakuum ga 1,16 g av tittelforbindelsen.
(ii) Boc-(R)Cha-Pic-OH
Boc-(R)Cha-Pic-OEt, 5,6 g (0,014 mol) ble blandet med 100 ml THF, 100 ml vann og 7 g LiOH. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over. THF-materialet ble inndampet og den vandige oppløsningen ble surgjort med KHSO4 (vandig) og ekstrahert tre ganger med etylacetat. Den kombinerte organiske fasen ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet og dette ga 4,9 g (94 %) Boc-(R)Cha-Pic-OH som ble benyttet uten ytterligere rensing. Forbindelsen kan krystalliseres fra diisopropyleter/heksan.
Metylesteren som ble dannet i fremgangsmåte (ib) ovenfor kan hydrolyseres ved bruk av samme prosedyre som beskrevet for etylesteren i (ii).
<i>H-NMR (500 MHz, CDCI3,2 rotamerer, 3,5:1 forhold) 8 0,8-1,1 (m, 2H), 1,1-2,1 (m, 27H; derav 1,43 (s, 9H, hovedrotamer), 2,46 (s, 9H, underordnet)), 2,33 (bd, IH), 2,80
(bt, IH, underordnet), 3,33 (bt, IH, hoved), 3,85 (bd, IH, hoved), 4,57 (bf, IH, underordnet), 4,68 (m, IH, underordnet), 4,77 (bq, IH, hoved), 5,03 (bs, IH, hoved), 5,33 (bd, IH, hoved), 5,56 (m, IH, hoved).
Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OH
(i) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OMe
Pivaloylklorid 0,9 ml (7,3 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av 2,0 g (7,3 mmol) Boc-(R)Cha-PH og 0,81 ml (7,3 mmol) 4-N-metylmorfolin i 20 ml acetonitril. Etter omrøring i 1 time og 30 min ble 1,3 g (7,3 mmol) H-(R,S)betaPic-OMe x HC1 og 1,62 ml (14,6 mmol) 4-N-metylmorfolin tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt i 24 timer. Oppløsningsmidlet ble inndampet og resten ble oppløst i toluen og noe dietyleter. Etter vasking med 0,3 M KHSO4 og KHCO3-oppløsning og tørking med Na2S04 ble opp-løsningsmidlet fjernet i vakuum. Flashkromatografi ved bruk av heptan/etylacetat (7/3) som elueringsmiddel ga 2,4 g (83 %) av det ønskede produktet.
(ii) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OH
Ved romtemperatur ble 2,35 g (5,9 mmol) av Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OMe oppløst i 35 ml THF og 2,1 g LiOH i 35 ml vann ble tilsatt. Etter omrøring i 5 timer ble THF-materialet fjernet i vakuum. Den vandige fasen ble surgjort med 2 M KHSO4 og ekstrahert med etylacetat, tørket over Na2S04 og inndampet og dette ga 2,0 g (89 %) av produktet.
Boc-(R)Cha-Val-OMe
(i) Boc-(R)Cha-Val-OMe
3,1 ml (25 mmol) pivaloylklorid ble tilsatt ved omgivelsestemperatur til en omrørt blanding av 6,75 g (25 mmol) Boc-(R)Cha-OH og 3,5 ml (25 mmol) trietylamin i 50 ml DMF. Etter 3 timer ble 4,16 g (25 mmol) valinmetylesterhydroklorid i 50 ml DMF og 3,5 ml trietylamin tilsatt. Etter omrøring natten over ble noen få krystaller DMAP tilsatt og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 50°C i 5 minutter. Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og eter og toluen ble tilsatt til resten. Vasking med 0,3 M KHSO4 og 10 % Na2C03 fulgt av tørking (MgS04) og fjerning av oppløsningsmidlet i vakuum ga
en rest som ble underkastet flashkromatografi ved bruk av toluen/etylacetat som elueringsmiddel. Utbytte av tittelforbindelsen var 6,99 g (73 %).
(ii) Boc-(R)Cha-Val-OH
En blanding av 8,73 g (23 mmol) Boc-(R)Cha-Val-OMe og 5,6 g (230 mmol) litiumhydroksyd i 75 ml THF og 75 ml vann ble omrørt i 4 timer. THF-materialet ble fjernet i vakuum og den gjenværende oppløsningen ble fortynnet med vann og ekstrahert med eter. Surgjøring med 2 M KHSO4 og ekstraksjon med etylacetat fulgt av tørking (MgSC«4) og fjerning av oppløsningsmidlet i vakuum ga 8,5 g (96 %) av tittelforbindelsen.
Boc-(R)Hoc-Aze-OEt
(i) Boc-(R)Hoc-Aze-OEt
Ved romtemperatur ble 1,0 g (3,5 mmol) Boc-(R)Hoc-OH og 0,95 g (7,0 mmol) HOBt oppløst i 15 ml CH2CI2- Oppløsningen ble avkjølt i et isbad og 0,77 g (4,0 mmol) EDC ble tilsatt. Isbadet ble fjernet og reaksjonsblandingen ble omrørt i 3 timer ved romtemperatur. Oppløsningsmidlet ble inndampet og resten oppløst i 20 ml DMF. 0,58 g (3,5 mmol) H-(R)Aze-OH ble tilsatt og pH-verdien justert til ca 9 ved tilsetning av N-metylmorfolin. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 1 dag. Reaksjonsblandingen ble skilt mellom vann og toluen. Den organiske fasen ble separert og vasket med 0,3 M KHSO4, fortynnet KHCO3, saltoppløsning, tørket med Na2S04 og inndampet. Flashkromatografi (1 % EtOH i CH2CI2 og heptan: EtOAc) ga 0,35 g (25 %) av det ønskede produktet.
(ii) Boc-(R)Hoc-Aze-OH
Ved romtemperatur ble 0,65 g (1,6 mmol) Boc-(R)Hoc-Aze-OEt oppløst i 10 ml THF og 0,59 g LiOH i 10 ml vann ble tilsatt. Etter omrøring i 24 timer ble 2 M KHSO4 tilsatt og THF-materialet ble fjernet i vakuum. Den vandige fasen ble deretter gjort sur med mer 2 M KHSO4 og ekstrahert med etylacetat, tørket over Na2$04 og inndampet og dette ga 0,5 g (85 %) av tittelforbindelsen.
Boc-(R)Hoc-Pro-OH
Fremstilt på samme måte som beskrevet for Boc-(R)Cha-Pro-OH fra Boc-(R)Hoc-OSu.
<i>H-NMR (500 MHz, CDCI3): 8 0,80-0,94 (m, 2H), 1,05-1,36 (m, 7H), 1,36-1,48 (bs, 9H), 1,48-1,78 (m, 7H9,1,98-2,14 (m, 2H), 2,34 (m, IH), 3,48 (m, IH), 3,85 (m, IH), 4,43 (m, IH), 4,52 (bd, 1H9, 5,26 (bd, IH), signaler av en underordnet rotamer viser seg ved: 8 1,92, 2,25,3,58,4,20 og 4,93.
Boc-(R)Hoc-Pic-OH
(i) Boc-(R)Hoc-Pic-OMe
Fremstilt på samme måte som beskrevet for Boc-(R)Cha-Pic-OEt (se ovenfor) fra Boc-(R)Hoc-OH og H-Pic-OMe x HC1.
(ii) Boc-(R)Hoc-Pic-OH
Fremstilt på samme måte som beskrevet for Boc-(R)Cha-Pic-OH (se ovenfor) fra Boc-(R)Hoc-Pic-OMe.
<i>H-NMR (500 MHz, CDCI3): 8 0,82-0,97 (m, 2H), 1,10-1,36 (m, 7H), 1,36-1,50 (bs, 9H), 1,50-1,82 (m, 11H), 2,35 (bd, IH), 3,28 (bt, IH), 3,85 (bd, IH), 4,63 (m, IH), 5,33 (bs, IH), 5,44 (bd, IH), signaler for en underordnet rotamer viser seg ved: 8 1,88,2,80, 4,25,4,55 og 4,97.
Boc-(R)Pro-Phe-OH
(i) Boc-(R)Pro-Phe-OMe
Til en oppløsning av 2,0 g (9,29 mmol) Boc-(R)Pro-OH og 0,94 g (9,29 mmol) trietylamin i 70 ml toluen/DMF (5/2) ble 1,12 g (9,29 mmol) pivaoloylklorid tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt i 30 minutter ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til 0°C og en blanding av 2,0 g (9,29 mmol) H-Phe-OMe og 0,94 g trietylamin i 40 ml DMF ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt natten over ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med toluen og den organiske fasen ble vasket med 3 x 50 ml 0,3 M KHSO4,1 x 50 ml vann og tørket (Na2SC<4). Inndampning av oppløsningsmidlet ga tittelforbindelsen i kvantitativt utbytte som ble benyttet i det neste trinnet uten ytterligere rensing.
(ii) Boc-(R)Pro-Phe-OH
En blanding av 4,0 g (10,6 mmol) Boc-(R)Pro-Phe-OMe og 8,93 g (21,3 mmol) LiOH x H2O i 140 ml vann/THF (1/1) ble kraftig omrørt natten over ved romtemperatur. THF-materialet ble inndampet og vannfasen ble gjort sur med 1 M KHSO4 og ekstrahert med 3 x 75 ml EtOAc. Den kombinerte organiske fasen ble vasket med vann og tørket (Na2S04). Filtrering og inndampning av oppløsningsmidlet ga en rest som ble renset ved krystallisering fra diisopropyleter og dette ga 2,329 g (60 %) av tittelforbindelsen som et hvitt krystallinsk fast stoff.
Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-OH
(i) Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-OBn
Til en blanding av 1,61 g Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-OH, 1,65 g H-Pro-OBn x HC1 og 0,75 g HOBt i 11 ml DMF ble 0,84 ml NMM og 2,92 g CME-CDI tilsatt ved romtemperatur og reaksjonsblandingen ble omrørt i 3 dager. Oppløsningsmidlet ble inndampet og resten ble oppløst i 300 ml EtOAc. Den organiske fasen ble vasket med 2 x 100 ml H2O, 2 x 100 ml 1 M KHSO4, 3 x 100 ml 1 M NaOH, 3 x 100 ml H20 og tørket (MgS04). Inndampning av oppløsningsmidlet ga 2,53 g av en olje som ble renset ved flashkromatografi ved bruk av CH2Cl2/MeOH (97/3) som elueringsmiddel hvilket ga 2,11 g (88 %) av tittelforbindelsen.
(ii) Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-OH
0,94 g Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-OBn ble oppløst i 70 ml EtOH og hydrogenert over 0,42 g 5 % Pd/C i 3,5 timer. Filtrering av katalysatoren og inndampning av oppløs-ningsmidlet ga tittelforbindelsen som hvite krystaller i et kvantitativt utbytte.
Boc-(R)Tic-Pro-OH
Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet av P.D. Gesellchen og R.T. Shuman i EP-0.479.489-A2.
BnOOC-CH2-NH- 0-CH2-Br
Til en oppløsning av p-TsOH x H-Gly-OBn (5 mmol) og trietylamin (5 mmol) i 10 ml CH2C12 ble det tilsatt 2-bromeddiksyre (5 mmol) oppløst i 10 ml CH2C12 og dicykloheksylkarbodiimid (5 mmol). Blandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over og filtrert. Den organiske fasen ble vasket to ganger med 0,2 M KHSO4, 0,2 M NaOH, saltoppløsning og tørket. Inndampning og flashkromatografi (CH2Cl2/MeOH, 95/5) ga et kvantitativt utbytte av den ønskede forbindelsen.
<i>H-NMR (300 MHz, CDCI3): 8 3,89 (s, 2H), 4,05-4,11 (d, 2H), 5,19 (s, 2H), 7,06 (bs, IH), 7,3-7,4 (m, 5H).
Boc-(R)Cgl-Ile-OH
Fremstilt på samme måte som beskrevet for Boc-(R)Cgl-Pro-OH ved bruk av H-Ile-OH, i steden for H-Pro-OH, i 91 % utbytte.
Boc-(R)Phe-Phe-OH
(i) Boc-(R)Phe-Phe-OMe
Boc-(R)Phe-OH (18,8 mmol; innkjøpt fra Bachem Feinchemicalien AG), Phe-OMe (20,7 mmol) og 4-dimetylaminopyridin (37,7 mmol) ble oppløst i 30 ml acetonitril. Oppløsningen ble avkjølt til isvanntemperatur og l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etyl-karbodiimidhydroklorid (24,5 mmol) ble tilsatt. Avkjølingsbadet ble fjernet og reaksjonsblandingen ble omrørt natten over. Oppløsningsmidlet ble deretter fjernet under redusert trykk og resten ble oppløst i 50 ml etylacetat. Ekstraksjon av den organiske fasen med 50 ml aliquoter av 0,5 M kaliumhydrogensulfat, 1 M natriumbikarbonat og til slutt vann fulgt av inndampning av oppløsningsmidlet ga 7,5 g Boc-(R)Phe-Phe-OMe (94 %) som ble benyttet i det neste trinnet uten ytterligere rensing.
(ii) Boc-(R)Phe-Phe-OH
Boc-(R)Phe-Phe-OMe (16,4 mmol) ble oppløst i 40 ml tetrahydrofuran og litiumhydroksyd (32,8 mmol) oppløst i 20 ml vann ble hurtig tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 3,5 timer hvoretter oppløsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk. Resten ble oppløst i 50 ml etylacetat og ekstrahert med 50 ml 0,5 M kaliumsulfat fulgt av 50 ml vann. Oppløsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk og dette ga 8,0 g Boc-(R)Phe-Phe-OH (kvantitativt) som et amorft fast stoff. <!>h NMR (200 MHz, d-CHCl3); 6 7,4-6,7 (m, 10H), 5,7-4,2 (m, 6H), 1,34 (s, 9H).
HO-CH2COOBn
Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet av Lattes A. et al i Bull. Soc. Chim. France, nr 11, sidene 4018-23, 1971.
Benzy]-2-(orto-nitrobenzensulfonyloksy)acetat(2-N02)Ph-S020CH2-COOBn
1,66 g (10 mmol) benzylglykat ble oppløst i 25 ml CH2CI2 og 25 ml dietyleter. Blandingen ble avkjølt til 0°C og 2,8 ml (10 mmol) trietylamin ble tilsatt. Mens temperaturen ble holdt ved 0°C ble 2,44 g (11 mmol) orto-nitrobenzensulfonylklorid tilsatt i små porsjoner i løpet av 15 min. Oppslemmingen ble omrørt ved 0°C i 50 min og deretter ble 20 ml vann og 30 ml CH2CI2 tilsatt. Fasene ble separert og den organiske fasen ble vasket med 20 ml 1 M HC1 og 20 ml H2O, tørket (Na2S04), filtrert og inndampet i vakuum og dette ga 3,34 g av en rest som ble underkastet flashkromatografi ved bruk av heptan:EtOac 2:1 som elueringsmiddel og dette ga 1,18 g (34 %) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (300 MHz, CDCI3): 8 4,92 (s, 2H), 5,17 (s, 2H), 7,83 (m, 5H), 7,76 (m, 3H), 8,16 (dd, IH).
Benzyl-2-(para-nitrobenzensulfonyloksy)acetat (4-N02)Ph-S020CH2-COOBn
Fremstilt ifølge den samme fremgangsmåten som beskrevet for benzyl-2-(orto-nitro-benzensulfonyloksy)acetat. Sluttforbindelsen ble oppnådd i en krystallinsk form etter inndampning av oppløsningsmidlet og var rent nok til å kunne benyttes uten ytterligere rensing (64 % utbytte).
<i>H-NMR (300 MHz, CDCI3): 5 4,79 (s, 2H), 5,13 (s, 2H), 7,2-7,4 (m, 5H), 8,10 (d, 2H), 8,30 (d, 2H).
Tfo-CH2COOMe
10,09 ml (60 mmol) trifluormetansulfonsyreanhydrid oppløst i CH2CI2 ble tilsatt dråpevis til en blanding av 4,05 ml (50 mmol) metylglykolat og 4,04 ml (50 mmol) pyridin i CH2CI2 (totalt 62,5 ml) ved 0°C i løpet av 25 min, og ble deretter omrørt ved 0°C i 1 time. Etter vasking med 0,3 M KHSO4 og mettet NaCC>3, tørking (Na2S04) og filtrering, ga inndampning av oppløsningsmidlet i vakuum 9,94 g (90 %) av tittelforbindelsen.
Tfo-CH2COOEt
Fremstilt på samme måte som beskrevet for Tfo-CH2COOMe ved å starte med etyl-glykolat.
Tfo-CH2COOnBu
Fremstilt på samme måte som beskrevet for Tfo-CH2COOMe ved å starte med butyl-glykolat.
Tfo-CH2COOBn
Fremstilt på samme måte som beskrevet for Tfo-CH2COOMe ved å starte med HO-CH2COOBn.
Tfo_CH2COOnHex
(i) HO-CH2COO<n>Hex
Til 215 mg (2,82 mmol) glykolsyre i 12,8 ml CH3CN ble det tilsatt 719 mg (3,39 mmol) 1-heksyliodid og 429 mg (2,82 mmol) DBU. Etter omrøring natten over og tilbakeløpskoking i 4 timer ble oppløsningsmidlet inndampet, etylacetat og 1 M KHSO4 ble tilsatt og fasene ble separert. Det organiske laget ble vasket med saltoppløsning, tørket (MgSC>4), filtrert og inndampet i vakuum og dette ga 333 mg (74 %) av produktet.
(ii) Tfo-CH2COOnHex
Fremstilt på samme måte som beskrevet for Tfo-CH2COOMe ved å starte med HO-CH2COOnHex.
H-Mig(Z) (3-aminometyl-l -(N-benzyloksykarbonylamidino)azetidin
(i) 3-aminometyl-1 -benzhydrylazetidin ble fremstilt ifølge litteraturen, kfr A.G. Anderson, Jr., og R. Lok, J. Org. Chem, 37, 3953,1972.
(ii) 3-(N-tert-butyloksykarbonylaminomeryl)-l-benzhydrylazetidin
Til 3,50 g (13,9 mmol) 3-aminometyl-l-benzhydrylazetidin oppløst i 45 ml THF ble det tilsatt en oppløsning av 0,56 g (13,9 mmol) NaOH i 45 ml H20. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til 0°C og 3,03 g (13,9 mmol) di-tert-butyldikarbonat ble tilsatt. Avkjølings-badet ble fjernet etter noen minutter og blandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over. THF-materialet ble inndampet og resten ble ekstrahert med 3 x 45 ml dietyleter. Det kombinerte organiske laget ble vasket med saltoppløsning, tørket med Na2S04 og filtrert. Inndampning av oppløsningsmidlet ga 4,6 g (94 %) av tittelforbindelsen.
(iii) 3-(N-tert-butyloksykarbonylaminometyl)azetidin
3,4 g (9,6 mmol) 3-(N-tert-butyloksykarbonylaminometyl)-l-benzhydrylazetidin ble oppløst i 170 ml MeOH og hydrogenert over 0,30 g Pd(OH)2 ved 5 MPa natten over. Katalysatoren ble frafiltrert og oppløsningsmidlet inndampet. Råproduktet ble renset ved flashkromatografi ved bruk av MeOH/CH2Cl2,1/9, fulgt av MeOH (mettet med NH3 (g)yCH2Cl2,1/9, som elueringsmiddel og dette ga 1,2 g (67 %) av tittelforbindelsen.
(iv) 3-(N-tert-butyloksykarbonylaminometyl)-l-(N-benzyloksykarbonylamidinoazetidin (Boc-Mig(Z))
0,9 g (4,8 mmol) 3-(N-tert-butyloksykarbonylaminometyl)azetidin og 1,3 g (6,3 mmol) N-benzyloksykarbonyl-O-metylisourea ble blandet i 6,5 ml toluen og oppvarmet til 70°C i 72 timer og deretter hensatt ved romtemperatur i ytterligere 72 timer. Inndampning fulgt av flashkromatografi ved bruk av EtOAc fulgt av MeOH (mettet med NH3 (g)/CH2Cl2,1/9 som elueringsmiddel ga 0,67 g (38 %) av tittelforbindelsen som et hvitt pulver.
(v) 3-aminometyl-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)azetidin (H-Mig(Z))
0,67 g (1,85 mmol) av Boc-Mig(Z) ble oppløst i 10 ml EtOAc mettet med HC1 (g) og omrørt i 10 min ved romtemperatur. 10 ml av en mettet oppløsning av KOH (vandig) ble tilsatt dråpevis. Lagene ble separert og den vandige fasen ble ekstrahert med 3x8 ml EtOAc. De organiske lagene ble kombinert, vasket med saltoppløsning, tørket med Na2S04 og inndampet hvilket ga 0,43 g (89 %) av tittelforbindelsen.
<*>H-NMR (300 MHz, CDCI3): S 2,55-2,65 (m, IH), 2,84 (d, 2H), 3,66 (dd, 2H), 4,03 (dd, 2H), 5,07 (s, 2H), 7,2-7,4 (m, 5H).
MS m/z 263 (M<+>+1)
3-aminoetyl-l -(N-benzyloksykarbonylamidino)azetidin (H-Dig(Z))
(i) 3-karboksylsyre-l-benzhydrylazetidin ble fremstilt ifølge litteraturen, kfr. A.G. Anderson, Jr. og R. Lok, J. Org. Chem., 37, 3953, 1972.
(ii) 3-hydroksymetyl-1 -benzhydrylazetidin
En oppløsning av 8,7 g (32,5 mmol) 3-karboksylsyre-l-benzhydrylazetidin i 80 ml tørr THF ble langsomt tilsatt til en suspensjon av 4,9 g (130,2 mmol) LiAlH4 i 30 ml THF ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble tilbakeløpskokt i 3,5 timer. Overskudd hydridreagens ble hydrolysert ved forsiktig tilsetning under avkjøling av NH4CI (vandig), den gelatinøse blandingen ble filtrert og filterkaken ble vasket gjentatte ganger med THF. Inndampning av oppløsningsmidlet ga 7,1 g (86 %) av tittelforbindelsen som blekgule krystaller.
(iii) 3-metansulfonatometyl-l-benzhydrylazetidin
Til en oppløsning av 6,62 (26,1 mmol) 3-hydroksymetyl-1-benzhydrylazetidin i 50 ml tørr pyridin ble 4,50 g (39,2 mmol) metansulfonylklorid tilsatt ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 1 time og deretter hensatt i et kjøleskap natten over. Reaksjonsblandingen ble helt i en blanding av is og H2O. Bunnfallet ble oppsamlet, vasket med H2O og tørket i vakuum og dette ga 7,75 g (89,5 %) av tittelforbindelsen.
(iv) 3-cyanometyl-1 -benzhydrylazetidin
Til en oppløsning av 7,75 g (23,4 mmol) 3-metansulfonatometyl-1-benzhydrylazetidin i 50 ml DMF ble det tilsatt en oppløsning av 3,44 g (70,0 mmol) NaCN i 10 ml H2O. Blandingen ble oppvarmet ved 65°C i 20 timer, avkjølt og helt i en blanding av is og H20. Bunnfallet ble oppsamlet, vasket med H2O og tørket i vakuum og dette ga 5,7 g (93 %) av tittelforbindelsen.
(v) 3-aminoetyl-l-benzhydrylazetidin
5,7 g (21,7 mmol) 3-cyanometyl-1-benzhydrylazetidin ble langsomt tilsatt til en suspensjon av 2,9 g (76,0 mmol) UAIH4 i 80 ml tørr THF ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble tilbakeløpskokt i 4 timer. Overskudd hydridreagens ble hydrolysert ved forsiktig tilsetning under avkjøling av NH4CI (vandig), den gelatinøse blandingen ble filtrert og filterkaken ble vasket gjentatte ganger med THF. Oppløsningsmidlet ble inndampet, resten ble oppløst i dietyleter, vasket med saltoppløsning og tørket med Na2S04- Inndampning av oppløsningsmidlet ga 5,0 g (87 %) av tittelforbindelsen.
(vi) 3-(N-tert-butyloksykarbonylaminoetyl)-1-benzhydrylazetidin
Tittelforbindelsen ble fremstilt fra 3-aminoetyl-l-benzhydrylazetidin ifølge fremgangsmåten for 3-(N-tert-butyloksykarbonylaminometyl)-l-benzhydrylazetidin, i et utbytte på 6,5 g (95 %).
(vii) 3-(N-tert-butyloksykarbonylaminoetyl)azetidin
Tittelforbindelsen ble fremstilt fra 3-(N-tert-butyloksykarbonylaminoetyl)-l-benzhydrylazetidin ifølge fremgangsmåten for 3-(N-tert-butyloksykarbonylaminometyl) azetidin, i et utbytte på 1,2 g (70%).
(viii) 3-(N-tetr-butyloksykarbonylaminoetyl)-1 -(N-benzyloksykarbonylamidino) azetidin (Boc-Dig(Z))
Tittelforbindelsen ble fremstilt fra 3-(N-tert-butyloksykarbonylaminoetyl)azetidin ifølge fremgangsmåten for 3-(N-tert-butyloksykarbonylaminometyl)-1 -(N-benzyloksykarbo-nylamidino)azetidin, i et utbytte på 0,090 g (34 %).
(ix) 3-aminoetyl-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)azetidin (H-Dig(Z))
0,589 g (1,56 mmol) av Boc-Dig(Z) ble oppløst i 10 ml EtOAc mettet med HC1 (g) og omrørt i 10 min ved romtemepratur. 10 ml av en mettet oppløsning av KOH (vandig) ble tilsatt dråpevis. Lagene ble separert og den vandige fasen ble ekstrahert med 3x8 ml EtOAc. De organiske lagene ble kombinert, vasket med saltoppløsning, tørket med Na2S04 og inndampet og dette ga 0,415 g (96 %) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (500 MHz, CDC13): 8 1,60 (dt, 2H), 2,52-2,54 (m, 3H), 3,53 (bs, 2H), 4,0 (bt, 2H), 5,00 (s, 2H), 7,17-7,31 (m, 5H).
ARBEIDSEKSEMPLER
EKSEMPEL 1
HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab
(i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
Til en omrørt blanding av 3,40 g (10 mmol) Boc-(R)Cgl-Aze-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer) og 5,13 g DMAP (42 mmol) i 120 ml CH3CN, ble det tilsatt 3,18 g H-Pab(Z) x HC1 (se fremstilling av utgangsmaterialer). Etter omrøring i 2 timer ved romtemperatur ble blandingen avkjølt til -8°C og 2,01 g (10,5 mmol) EDC ble tilsatt. Reaksjonen fikk nå romtemperatur og omrøringen ble fortsatt i ytterligere 47 timer. Oppløsningsmidlet ble inndampet og resten ble oppløst i 200 ml EtOAc. Den organiske fasen ble vasket med 1 x 50 ml vann, 1 x 50 + 2 x 25 ml 0,5 M KHSO4,2 x 25 ml NaHC03 (mettet), 1 x 50 ml vann og tørket. Inndampning av oppløsningsmidlet ga 5,21 g (86 %) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (500 MHz, CDCI3): 8 0,8-1,9 (m, 20H; derav 1,30 (s, 9H)), 2,35-2,6 (m, 2H), 3,74 (bt, IH), 4,10 (m, IH), 4,25-4,4 (m, 2H), 4,45-4,6 (m, IH, rotamerer), 4,75-5,0 (m, IH, rotamerer), 5,08 (bd, 2H), 5,15 (s, 2H), 7,15-7,35 (m, 5H), 7,41 (d, 2H), 7,77 (d, 2H), 8,21 (m, IH).
(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
Til en kald (isbadtemperatur) oppløsning av 18,8 g HC1 (g) i 195 ml EtOAc ble det tilsatt 4,69 g (7,743 mmol) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) sammen med 40 ml EtOAc. Reaksjonsblandingen fikk nå romtemperatur og ble omrørt i 30 min. 140 ml Et20 ble tilsatt til den klare oppløsningen hvorved det ble dannet et bunnfall. Reaksjonsblandingen ble hensatt ved romtemperatur i ytterligere 1 time og 40 minutter. Bunnfallet ble frafiltrert, hurtig vaseket med 150 ml Et20 og tørket i vakuum. Bunnfallet ble opp-løst i 50 ml vann og gjort alkalisk med 15 ml 2 M NaOH. Den alkaliske vannfasen ble ekstrahert med 1 x 100 + 1 x 50 ml CH2C12. Den kombinerte organiske fasen ble vasket med 1 x 20 ml vann, 1 x 20 ml saltoppløsning og tørket (MgS04). Inndampning av opp-løsningsmidlet ga 3,44 g (88 %) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (500 MHz, CDCI3): 8 0,8-2,0 (m, 1 IH), 2,51 (m, IH), 2,67 (m, IH), 3,07 (d, IH), 4,11 (m, IH), 4,18 (m, IH), 4,43 (dd, IH), 4,53 (dd, IH), 4,91 (m, IH), 5,22 (s, 2H), 7,2-7,4 (m, 7H), 7,45 (d, 2H), 8,51 (d, 2H).
(iii) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
1,13 g (2,3 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z), 0,9 g (2,6 mmol) benzyI-2-(orto-nitrobenzen-sulfonyloksy)acetat ((2-N02)Ph-S02-OCH2COOBn) (se fremstilling av utgangsmaterialer), 0,99 g (5,6 mmol) K2C03 og 113 ml CH3CN ble blandet og oppvarmet i et 60°C oljebad i 3 timer. Oppløsningsmidlet ble inndampet i vakuum. EtOAc ble tilsatt og blandingen ble vasket med vann, den organiske fasen ble ekstrahert med 1 M KHSO4 og denne vannfasen ble vasket med EtOAc. Den sure vannfasen ble gjort alkalisk med 1 N NaOH til pH > 8 og ekstrahert med EtOAc. Den organiske fasen ble vasket med vann, tørket (Na2S04), filtrert og inndampet i vakuum og dette ga 1,17 g av en rest som to ganger ble underkastet flashkromatografi ved bruk først av CH2Cl2/MeOH (Næ-rnettet) 95/5 og deretter dietyleter/MeOH (NH3-mettet) 9/1 som elueringsmidler og dette ga 0,525 g (36 %) av tittelforbindelsen.
Alkyleringen ble også utført ved bruk av benzyl-2-(para-nitrobenzensulfonyloksy) acetat ((4-NH2)Ph-S02-OCH2-COOBn) (se fremstilling av utgangsmaterialer) ved bruk av samme prosedyre som ovenfor og dette ga tittelforbindelsen i et utbytte på 52 %.
<i>H-NMR (300 MHz, CDCI3): 6 0,85-2,15 (m, 11H), 2,48 (m, IH), 2,63 (m, IH), 2,88 (d, IH), 3,24 (d, IH), 3,27 (d, IH), 3,95 (m, IH), 4,05 (m, IH), 4,44 (m, IH), 4,55 (m, IH, 4,91 (m, IH), 5,07 (s, 2H), 5,22 (s, 2H), 7,2-7,4 (m, 10H), 7,45 (d, 2H), 7,79 (d, 2H), 8,42 (m, IH).
(iva) HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HC1
BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z), 20 mg (0,031 mmol) ble oppløst i 5 ml metanol. Noen dråper kloroform og 5 % Pd/C ble tilsatt og blandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 1 time. Etter filtrering og inndampning ble produktet lyofilisert fra vann hvilket ga 11 mg (72 %) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (500 MHz, D2O): 8 1,0-2,0 (m, 1 IH), 2,10 (m, IH), 2,44 (m, IH), 2,82 (m, IH), 3,90 (s, 2H), 4,09 (d, IH), 4,4-4,55 (m, 2H), 4,66 (s, 2H), 5,08 (m, IH), 7,65 (d, 2H), 7,89 (d, 2H).
<13>C-NMR (75,5 MHz, D2O): amidin- og karbonylkarboner: 8 167,2,167,9, 169,9 og 172,4.
(ivb) HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab
BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) ble oppløst i EtOH (99 %) og hydrogenert over 5 % Pd/C ved atmosfæretrykk i 5 timer. Filtrering av katalysatoren gjennom celitt og inndampning av oppløsningsmidlet ga tittelforbindelsen i et utbytte på 97 %.
<i>H-NMR (500 MHz, CD3OD, blanding av to rotamerer): hovedrotamer: 8 1,00-1,12 (m, IH), 1,13-1,34 (m, 4H), 1,55-1,70 (m, 3H), 1,73-1,85 (m, 2H), 1,94-2,02 (bd, IH), 2,32-2,42 (m, IH), 2,54-2,64 (m, IH), 2,95-3,10 (AB-system pluss d, 3H), 4,18-4,25 (bq, IH), 4,28-4,32 (bq, IH), 4,43-4,60 (AB-system, 2H), 4,80-4,85 (dd, IH), 7,48-7,54 (d, 2H), 7,66-7,71 (d, 2H).
Oppløste signaler fra den underordnede rotameren opptrer ved 8 0,95 (m), 1,43 (m), 2,24 (m), 2,84 (d), 3,96 (m), 4,03 (m), 7,57 (bd), 7,78 (bd).
<13>C-NMR(125 MHz, CD3OD): amidin- og karbonylkarboner: 6 168,0,173,0, 176,3 og 179,0.
EKSEMPEL 2
HOOC-CH2-CH2-(R)-Cgl-Aze-Pab x 2 HC1
(i) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
Fremstilt på samme måte som beskrevet i eksempel 1 (ii) ved behandling av det dannede hydrokloridsaltet med base for oppnåelse av den frie basen.
(ii) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z), 0,19 g (0,38 mmol) og 70 mg (0,43 mmol) benzylakrylat ble oppløst i 2 ml isopropanol. Blandingen ble hensatt i 6 dager. Flashkromatografi ved bruk av CH2C12/THF ~ 8/2 som elueringsmiddel ga 0,12 g (48 %) av tittelforbindelsen.
<!>h NMR (500 MHz, CDCI3): 8 0,8-1,9 (m, 10H), 1,95 (bd, IH), 2,4-2,6 (m, 4H), 2,7-2,8 (m, 3H; derav 2,79 (d, IH)), 4,13 (m, IH), 4,37 (dd, IH), 4,60 (dd, IH), 4,97 (dd, IH), 5,09 (dd, 2H), 5,22 (s, 2H), 7,25-7,4 (m, 10H), 7,47 (d, 2H), 7,83 (d, 2H), 8,61 (bt,
IH).
(iii) HOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HC1
BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z), 0,10 g (0,15 mmol) ble oppløst i 10 ml etanol og hydrogenert over 5 % Pd/C ved atmosfæretrykk i 1 time. Oppløsningen ble filtrert, inndampet og råproduktet renset på RPLC ved bruk av CH3CN/0.1 M NH4OAC (1/4). Det resulterende produktet ble frysetørket, behandlet med et overskudd kons. HC1 og frysetørket på nytt hvilket ga 31 g av dihydrokloridsaltet.
<!>H-NMR (300 MHz, D20): 8 0,8-2,1 (m, 11H), 2,38 (m, IH), 2,7-2,9 (m, 3H), 3,2-3,4 (m, 2H), 3,98 (d, IH), 4,35-4,55 (m, 2H), 4,60 (s, 2H), 5,04 (dd, IH), 7,59 (d, 2H), 7,83 (d,2H).
<13>C NMR (75 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 167,2,167,8,172,3 og 175,5.
EKSEMPEL 3
HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab x 2 HC1
(i) Boc-(R)Cgl-Pro-Pab(Z)
Boc-(R)Cgl-Pro-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 2,3 g (6,49 mmol), DMAP, 2,38 g (19,47 mmol), og H-Pab(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialer), 1,84 g (6,49 mmol) ble blandet i 30 ml acetonitril. Blandingen ble avkjølt til -15°C og EDC, 1,31 g, (6,81 mmol) ble tilsatt. Temperaturen fikk nå romtemperatur og blandingen ble omrørt natten over. Etter inndampning ble resten oppløst i etylacetat og 0,3 M KHSC«4-opp-løsning. Den sure vannfasen ble ekstrahert tre ganger med etylacetat Den organiske fasen ble vasket to ganger med en 0,3 M KHSC^-oppløsning, to ganger med en NaHC03-oppløsning og en gang med saltoppløsning, tørket (Na2S04), filtrert og inndampet. Råproduktet ble renset ved flashkromatografi på silisiumdioksydgel ved bruk av etylacetat som elueringsmiddel og dette ga 1,77 g (44 %) av produktet.
^-NMR (500 MHz, CDC13): 5 0,9-1,49 (m, 14H), 1,5-2,1 (m, 9H), 2,37 (bs, IH), 3,53 (q, IH), 3,94 (bs, IH), 4,02 (m, IH), 4,43 (bs, 2H), 4,65 (d, IH), 5,09 (bs, IH), 5,20 (s, 2H), 7,18-7,4 (m, 5H), 7,45 (d, 2H), 7,62 (bs, IH), 7,81 (m, 2H).
(ii) H-(R)Cgl-Pro-Pab(Z)
1,45 g (2,34 mmol) av Boc-(R)Cgl-Pro-PabfZ) ble oppløst i 75 ml HCl-mettet etylacetat. Blandingen ble hensatt i 10 min ved romtemperatur. Oppløsningsmidlet ble inndampet og dette ga 1,3 g av dihydrokloridsaltet av produktet.
<i>H-NMR (300 MHz, D20): 6 1,0-1,45 (m, 5H), 1,58-2,2 (m, 9H), 2,3-2,5 (m, IH), 3,75-3,90 (m, 2H), 4,25 (d, 2H), 4,5-4,66 (m, 3H), 5,49 (s, 2H), 7,45-7,7 (m, 7H), 7,87 (d, 2H).
Aminet ble oppnådd ved oppløsning av dihydrokloridsaltet i 0,1 M NaOH-oppløsning og ekstrahering av vannfasen tre ganger med etylacetat. Den organiske fasen ble vasket en gang med saltoppløsning, tørket (Na2S04), filtrert og inndampet og dette ga 1,19 g (97 %) av tittelforbindelsen.
(iii) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z)
0,340 g (0,65 mmol) H-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) ble blandet med 0,215 g (0,65 mmol) BnOOC-CH2-OTf (se fremstilling av utgangsmaterialer), 0,299 g (2,17 mmol) K2CO3 i 4 ml diklormetan og tilbakeløpskokt i en halv time. Reaksjonsblandingen ble deretter omrørt natten over ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med CH2CI2 og det organiske laget ble vasket en gang med vann og saltoppløsning, tørket (Na2SC«4), filtrert og inndampet. Råproduktet ble renset ved flashkromatografi ved bruk av en trinnvis gradient av CH2Cl2/MeOH (97/3 fulgt av 95/5) og dette ga 299 mg av en blanding av to produkter ifølge TLC. Blandingen ble derfor ytterligere renset ved flashkromatografi ved bruk av en trinnvis gradient av etylacetat/toluen (9/1, 93/7, 95/5, 100/0) og dette ga 46 mg (9 %) av (BnOOC-CH2)2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) som eluerte først fra kolonnen fulgt av 133 mg (31 %) av det ønskede produktet BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z).
<i>H-NMR (300 MHz, CDCI3): BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z): 8 0,9-1,3 (m, 5H), 1,4-2,1 (m, 9H), 2,3-2,4 (m, IH), 3,05 (d, IH), 3,20-3,37 (AB-system sentrert ved 8 3,29, 2H), 3,5-3,6 (m, 2H), 4,29-4,57 (ABX-system sentrert ved d 4,43,2H), 4,62 (d, IH), 4,91 (tilsynelatende singlett, 2H), 5,19 (s, 2H), 6,75 (bs, NH), 7,1-7,5 (m, 12H), 8,7-8,8 (m, 2H+NH), 9,45 (bs, NH)
<i>H-NMR (300 MHz, CDCI3): (BnOOC-CH2)2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z): 8 0,68-0,9 (m, 2H), 1,0-1,3 (m, 3H), 1,43 (bd, IH), 1,55-2,0 (m, 7H), 2,05 (bd, IH), 2,3-2,4 (m, IH), 3,15 (d, IH), 3,25-3,48 (ABX-system sentrert ved d 3,67,4H), 4,38-4,58 (ABX-system sentrert ved d 4,48,2H), 4,68 (d, IH), 4,82-4,98 (AB-system sentrert ved d 4,91,4H), 5,19 (s, 2H), 6,66 (bs, NH), 7,1-7,5 (m, 17H), 7,75 (d, 2H), 7,80 (t, NH), 9,37 (bs, NH)
<13>C-NMR(75 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 8 164,7,168,1,171,5, 172,3 og 172,6
(iv) HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab x 2 HC1
9
0,133 g (0,20 mol) av BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z).ble blandet med 0,060 g 5 % Pd/C, 1 ml 1 M HCl-oppløsning og 10 ml etanol. Blandingen ble behandlet under H2-atmosfære i 1 time. Etter filtrering gjennom hyflo og inndampning av oppløsningsmidlet ble produktutbyttet 90 %, 93 mg, oppnådd ved frysetørking to ganger fra vann.
<i>H-NMR (300 MHz, D20): 8 1,0-1,45 (m, 5H), 1,5-2,1 (m, 9H), 2,2-2,4 (m, IH), 3,55-3,85 (m, 4H; derav 3,79 (s, 2H)), 4,23 (d, IH), 4,33-4,57 (m, 3H), 7,44 (d, 2H), 7,69 (d, 2H).
<13>c-NMR(75 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 166,9,167,2,169,1,174,5.
EKSEMPEL 4
HOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z)
0,406 g (0,782 mol) av H-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) (se eksempel 3) ble oppløst i 3 ml etanol og 132 jil (0,861 mmol) benzylakrylat ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 3 dager ved romtemperatur. Blandingen ble inndampet og råproduktet renset ved flashkromatografi ved bruk av en trinnvis gradient av CH2Cl2:MeOH 95/5 og 90/10 som elueringsmiddel og dette ga 0,399 g (75 %) av produktet.
<i>H-NMR (300 MHz, CDCI3): 8 0,8-1,0 (m, IH), 1,0-1,3 (m, 4H), 1,35-2,2 (m, 9H), 2,3-2,6 (m, 4H), 2,65-2,78 (m, IH), 3,05 (d, IH), 3,4-3,6 (m, 2H), 4,25-4,52 (ABX-system sentralt ved d 4,40,2H), 4,64 (dd, IH), 5,05 (s, 2H), 5,20 (s, 2H), 7,2-7,38 (m, 10H), 7,43 (d, 2H), 7,78 (d, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 8 164,7,167,9,171,3, 172,7 og 175,4.
(ii) HOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab x 2 HCI
0,261 g (0,383 mmol) av BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) ble blandet med 0,075 g 5 % Pd/C, 1 ml 1 M HCl-oppløsning og 10 ml etanol. Blandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 2 timer. Etter filtrering gjennom hyflo og inndampning av oppløs-ningsmidlet ble produktet 0,196 g (96 %) oppnådd ved frystetørking to ganger fra vann.
<i>H-NMR (300 MHz, D20): 8 1,17-1,40 (m, 5H), 1,60-1,92 (m, 5H), 1,92-2,2 (m, 4H), 2,32-2,48 (m, IH), 2,81 (t, 2H), 3,11-3,36 (ABX2-system sentrert ved 8 3,24,2H), 3,63-3,90 (m, 2H), 4,25 (d, IH), 4,42-4,63 (m, 3H), 7,54 (d, 2H), 7,78 (d, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, D2O): amidin- og karbonylkarboner: 8 167,0,167,30,174,6 og 174,7.
EKSEMPEL 5
(HOOC-CH2)2-(R)Cgl-Pro-Pab x 2 HCI
46 mg (0,056 mmol) av (BnOOC-CH2)2-(R)Cgl-Pro-Pab(2) (se eksempel 3) ble blandet med 25 mg 5 % Pd/C, 0,7 ml 1 M HCl-oppløsning og 7 ml etanol. Blandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 1 time. Katalysatoren ble frafiltrert gjennom hyflo og oppløsningsmidlet inndampet. Sluttproduktet 25 mg (77 %) ble oppnådd ved fryse-tørking to ganger fra vann.
<!>h-NMR (300 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 167,1,167,3, 170,6 og 174,5.
EKSEMPEL 6
H-(R)Cgl-Pic-Pab x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cgl-Pic-Pab(Z)
0,478 g (2,49 mmol) EDC ble tilsatt ved -18°C til en omrørt oppløsning av 0,875 g (2,37 mmol) Boc-(R)Cgl-Pic-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 1,22 g (9,97 mmol) DMAP, og 0,706 g (2,49 mmol) H-Pab(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialer) i en blanding av 30 ml acetonitril og 1 ml DMF. Reaksjonsblandingen fikk nå romtemperatur i løpet av et par timer og omrøring ble fortsatt i 48 timer. Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og resten ble oppløst i 50 ml etylacetat. Oppløsningen ble vasket med 15 ml vann, 3 x 15 ml 0,3 M KHSO4,2 x 15 ml Na2C03 oppløsning og vann. Fjerning av oppløsningsmidlet ga en rest som ble underkastet flashkromatografi ved bruk av etylacetat/heptan 9:1 som elueringsmiddel. Utbytte var 0,96 g (64 %).
(ii) H-(R)Cgl-Pic-Pab(Z)
Hydrogenklorid ble boblet gjennom en oppløsning av 0,56 g (0,88 mmol) Boc-(R)Cgl-Pic-Pab(Z) i 25 ml etylacetat. Etter et par minutter oppsto utfelling av krystaller fra opp-løsningen. Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og 50 ml etylacetat ble tilsatt. Vasking med 2 x 15 ml 2 M natriumhydroksydoppløsning og ekstraksjon av den vandige fasen med 25 ml etylacetat fulgt av tørking (natriumsulfat) av de kombinerte ekstraktene og fjerning av oppløsningsmidlet i vakuum hvilket ga 0,448 g (95 %) av det ønskede produktet.
(iii) H-(R)Cgl-Pic-Pab x 2 HCI
En oppløsning av 98 mg (0,18 mmol) H-Cgl-Pic-Pab(Z) i 5 ml 95 % etanol og 1 ml vann ble omrørt i en atmosfære av hydrogen i 4 timer i nærvær av 5 % Pd/C. Blandingen ble filtrert og 0,3 ml 1 M saltsyre ble tilsatt. Etanolen ble fjernet i vakuum og resten ble frysetørket og dette ga 70 mg (81 %) av den ønskede forbindelsen.
<i>H-NMR (300 MHz, CD3OD): 8 1,00-1,56 (m, 7H), 1,56-1,94 (m, 9H), 2,32 (bd, IH), 3,32-3,45 (m, IH), 3,90 (bd, IH), 4,35 (d, IH), 4,50 (s, 2H), 5,10-5,20 (m, IH), 7,55 (d, 2H), 7,76 (d, 2H).
<I3>c-NMR(75 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 167,2,170,5 og 173,4.
EKSEMPEL 7
HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Cgl-Pic-Pab x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cgl-Pic-Pab(Z)
En blanding av 350 mg (0,66 mmol) H-(R)Cgl-Pic-Pab(Z) (se eksempel 6) og 233 mg dibenzylmaleat i 2,5 ml etanol ble holdt ved romtemperatur i 4 dager. Etanolen ble fjernet i vakuum og resten ble underkastet flashkromatografi ved bruk av etylacetat/ heptan 9:1 som elueringsmiddel og dette ga 0,108 mg av produktet.
(ii) HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Cgl-Pic-Pab x 2 HCI
105 mg (0,13 mmol) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cgl-Pic-Pab(Z) oppløst i 5 ml 95 % etanol og 1 ml vann ble hydrogenert i 5 timer i nærvær av 5 % Pd/C. 0,3 ml 1 M saltsyre ble tilsatt og blandingen ble filtrert og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum. Resten ble oppløst i vann og frysetørket og dette ga 54 mg (73 %) av den ønskede substansen.
<i>H-NMR (300 MHz, CD3OD, blanding av to diastereomerer 5/4): 8 1,10-1,60 (m, 7H), 1,60-2,04 (m, 9H), 2,23-2,42 (m, IH), 2,93-3,15 (m, 2H), 3,30-3,42 (m, IH, delvis gjemt av MeOD-toppen), 3,71-3,95 (m, IH), 3,98-4,10 (m, IH), 4,40-4,60 (m, 3H), 5,10-5,20 (m, IH), 7,49-7,60 (m, 2H), 7,70-7,81 (m, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, D2O): amidin- og karbonylkarboner: 8 167,1,168,95,169,6 og 173,1.
MSm/z516(M<+>+l)
EKSEMPEL 8
H-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cha-Aze-Pab(Z)
409 mg (2,13 mmol) EDC ble tilsatt ved -18°C til en omrørt blanding av 0,72 g (2,03 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 1,04 g (8,53 mmol) DMAP, og 604 mg (2,13 mmol) H-Pab(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialer) i 20 ml acetonitril. Reaksjonsblandingen fikk nå romtemperatur natten over og oppløsnings-midlet ble deretter fjernet i vakuum. Resten ble oppløst i 40 ml etylacetat og den organiske fasen ble vasket suksessivt med 10 ml vann, 3 x 10 ml 0,3 M KHSO4,2x10 ml Na2CC>3-NaCl (vandig), og sluttelig 10 ml saltoppløsning. Tørking (Na2SC«4) og fjerning av oppløsningsmidlet i vakuum ga en rest som ble underkastet flashkromatografi ved bruk av etylacetat/metanol 9:1 som elueringsmiddel og dette ga 645 mg (51 %) av tittelforbindelsen.
(ii) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z)
Hydrogenklorid ble boblet gjennom en oppløsning av 640 mg (1,03 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-Pab(Z) i 25 ml etylacetat. Etter et par minutter viste TLC-analyse at reaksjonen var fullført. Vakuum ble påført for å fjerne overskudd hydrogenklorid og blandingen ble deretter fortynnet til 50 ml med etylacetat. Vasking med 2 x 15 ml Na2CC<3 (vandig) ble etterfulgt av ekstraksjon av den vandige fasen ble 15 ml etylacetat. De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med vann og tørket (Na2CC>3) og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og dette ga 513 mg (96 %) av H-(R)Cha-Aze-Pab(Z).
(iii) H-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HCI
76 mg (0,15 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z) oppløst i 5 ml 95 % etanol og 1 ml vann ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i nærvær av 5 % Pd/C i 4 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering, tilsetning av 0,4 ml 1 M saltsyre og inndampning av oppløsnings-midlet i vakuum ga en rest som ble oppløst i 2 ml vann. Frystetørking ga 57 mg (85 %) av produktet.
<i>H-NMR (500 MHz, D20, 2 rotamerer, 3:1 blanding): 6 1,02-1,20 (m, 2H), 1,22-1,92 (m, 1 IH), 2,40-2,50 (m, IH), 2,80-2,90 (m, IH), 4,25 (bt, IH), 4,40 (dq, IH), 4,53 (dq, IH), 4,65 (s, 2H), 5,05-5,10 (m, IH), 7,65 (d, 2H), 7,88 (d, 2H).
Kjemiske forskyvninger av oppløste signaler til den underordnede rotameren: 8 0,57 (m), 0,85 (m), 2,95 (m), 4,06 (dq), 4,17 )dq), 4,63 (s), 5,33 (m), 7,70 (d), 7,93 (d).
<13>C-NMR (125 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 167,2, 170,4 og 172,8.
EKSEMPEL 9
HOOC-CH2-(R)Ctaa-Aze-Pab x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pab(Z)
0,119 g (0,52 mmol) benzylbromacetat ble tilsatt til en blanding av 0,27 g (0,52 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z) (se eksempel 8) og 0,158 g (1,14 mmol) K2C03 i 5,2 ml acetonitril og oppvarmet til 60°C i et oljebad i 1 time. Oppløsningsmidlet ble fjernet og etylacetat og vann ble tilsatt. Fasene ble separert og den organiske fasen ble vasket med saltoppløsning og tørket (Na2S04). Inndampning i vakuum ga 0,344 g av en rest som ble underkastet flashkromatografi ved bruk av etylacetat som elueringsmiddel, og deretter en ytterligere gang ved bruk av etylacetat:tetrahydrofuran: NH3-mettet metanol (60:5:2) og dette ga 0,163 g av det ønskede produktet.
<i>H-NMR (300 MHz, CDC13); 8 0,7-1,0 (m, 2H), 1,05-2,05 (m, 1 IH), 2,35-2,55 (m, IH), 2,55-2,75 (m, IH), 3,15-3,32 (m, 3H), 3,95-4,05 (t, 2H), 4,4 og 4,5 (ABX-system, 2H), 4,8-4,95 (m, IH), 5,05 (s, 2H), 5,2 (s, 2H), 7,2-7,5 (m, 12H), 7,7-7,85 (d, 2H), 8,3-8,45 (t, IH).
<13>C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 5 164,5, 167,8, 170,7, 171,9 og 175,9.
(ii) HOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HCI
0,163 g (0,243 mmol) BnOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pab(Z) oppløst i 5,5 ml etanol (99,5 %) og 0,7 ml hydrogenklorid (1 N) ble hydrogenert i nærvær av 0,17 g 5 % Pd/C i 4 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering og inndampning av oppløsningsmidlet fulgt av oppløsning i vann og frysetørking ga 107 mg (85 %) av tittelforbindelsen.
<]>H-NMR (500 MHz, CD3OD, blanding av to rotamerer): hovedrotamer: 8 0,95-1,95 (m, 13H); 2,3-2,4 (m, IH), 2,6-2,75 (m, IH), 3,5-3,75 (m, 2H), 4,05-4,15 (m,l H), 4,15-4,23 (m, IH), 4,36-4,43 (m, IH), 4,43-4,5 (m, IH), 4,58-4,65 (m, IH), 4,83-4,88 (m, IH), 7,5-7,6 (m, 2H), 7,73-7,82 (m, 2H).
Oppløste signaler fra den underordnede rotameren viser seg ved 5 2,2-2,3 (m), 3,95-4,05 (m), 5,1-5,17 (m), 7,6-7,67 (m).
<13>C-NMR (75 MHz, CD3OD): amidin- og karbonylkarboner; 8 168,2,169,8, 168,9 og 172,3.
EKSEMPEL 10
HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)
En blanding av 230 mg (0,443 mol) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z) (se eksempel 8) og 144 mg (0,487 mmol) dibenzylmaleat i 1,5 ml 95 % etanol ble omrørt ved omgivelsestemperatur i 5 dager. Etter fjerning av etanolen i vakuum ble resten underkastet flashkromatografi ved bruk av etylacetat/metanol 95/5 som elueringsmiddel og dette ga 54 mg (15 %) av produktet.
(ii) HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab
49 mg (0,06 mmol) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z) oppløst i 5 ml 95 % etanol og 1 ml vann ble hydrogenert i nærvær av 5 % Pd/C i 4,5 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering og inndampning av oppløsningsmidlet i vakuum ga en rest som ble oppløst i 2 ml vann og 0,2 ml 1 M saltsyre. Frysetørking ga 32 mg (93 %) av produktet.
^H-NMR-spekteret til tittelforbindelsen i D20 viser to sett av sterkt overlappende signaler som skriver seg fra de to diastereomerene. Ytterligere oppløste resonanser av en underordnet rotamer, som samlet utgjør 15 %, viser seg også i spekteret.
<i>H-NMR (300 MHz, D20): 8 1,03-2,00 (m, 13H), 2,32 -2,53 (m, IH), 2,72-2,96 (m, IH), 3,06-3,28 (m, 2H), 4,10-4,55 (m, 4H), 4,62 (bs, 2H), 5,00-5,10 (m, IH), 7,55-7,68 (m, 2H), 7,80-7,94 (m, 2H).
Oppløste signaler fra den underordnede rotameren viser seg ved 8 0,65 (m), 0,80 (m), 4,00 (m), 5,24 (m), 5,35 (m).
<13>C-NMR (75 MHz D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 167,2,169,0, 171,0,172,3 og 174,1.
EKSEMPEL 11
HOOC-CH2-(RorS)CH(COOH)-Cha-Aze-Pab/a x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-(RorS)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/a
En blanding av 2,0 g (3,8491 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z) (se eksempel 8) og 1,37 g dibenzylmaleat i 10 ml 95 % etanol ble omrørt ved omgivelsestemperatur i 4 dager. Etter fjerning av etanolen i vakuum ble resten underkastet flashkromatografi ved bruk av etylacetat/metanol 98/2 som elueringsmiddel og dette ga 1,024 g (32 %) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z). De to diastereomerene ble separert ved RPLC ved bruk av (CH3CN/0,1 M NH4OAC 65/35) som elueringsmiddel. Denne diastereomeren eluerte først fra kolonnen. Etter fjerning av acetonitril i vakuum ble vannfasen ekstrahert tre ganger med etylacetat. Den organiske fasen ble vasket en gang med vann, tørket (Na2S04), filtrert og inndampet og dette ga 0,352 g av tittelforbindelsen som en ren stereoisomer.
(ii) HOOC-CH2-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/a 2 x HCI
350 mg (0,43 mmol) BnOOC-CH2-(RorS)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/a (Diastereomeren fra (i) ovenfor) oppløst i 15 ml 95 % etanol og 3 ml vann ble hydrogenert i nærvær av 5 % Pd/C i 4,5 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering og inndampning av oppløsningsmidlet i vakuum ga en rest som ble oppløst i 5 ml vann og 1,0 ml 1 M saltsyre. Frysetørking ga 214 mg (87 %) av produktet som en ren stereoisomer.
<i>H-NMR (300 MHz, MeOD, blanding av to rotamerer): S 0,85-1,93 (m, 13H), 2,25-2,38 (m, IH), 2,60-2,75 (m, IH), 2,88 (dd, 2H), 3,92 (t, IH), 4,15-4,25 (m, 2H), 4,30-4,43 (m, IH), 4,56 (AB-system, 2H), 4,76-4,86 (m, IH, delvis skjult av oppløsnings-middelsignalet), 7,59 (d, 2H), 7,78 (d, 2H).
Oppløste signaler som skriver seg fra den underordnede rotameren viser seg ved 8 0,70, 2,95, 3,82,4,00, 5,08 og 7,83.
<13>C-NMR (75 MHz D2): amidin- og karbonylkarboner: 8 166,9,168,8,171,7,172,3 og 173,8.
EKSEMPEL 12
HOOC-CH2-(RorS)CH(COOHMR)Cha-Aze-Pab/b x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-(RorS)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/b
Tittelforbindelsen ble oppnådd ved bruk av samme prosedyre som beskrevet i eksempel 11 ovenfor på BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z). Denne diastereomeren kom ut etter den første fra kolonnen. Utbytte 0,537 g.
(ii) HOOC-CH2-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/b x 2 HCI
530 mg (0,65 mmol) BnOOC-CH2-(RorS)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/b oppløst i 15 ml 95 % etanol og 3 ml vann ble hydrogenert i nærvær av 5 % Pd/C i 5 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering og inndampning av oppløsningsmidlet i vakuum ga en rest som ble oppløst i 6 ml vann og 1,0 ml 1 M saltsyre. Frysetørking ga 290 mg (78 %) av produktet.
<i>H-NMR (300 MHz, MeOD, blanding av to rotamerer): 5 0,86-1,90 (m, 13H), 2,30-2,42 (m, IH), 2,60-2,75 (m, IH), 2,75-2,85 (m, IH), 2,95-3,05 (m, IH), 3,65-3,71 (m,
1H), 4,00-4,10 (m, IH), 4,14-4,24 (m, IH), 4,36-4,62 (m, 3H), 4,78-4,86 (m, IH delvis skjult av oppløsningsmiddelsignalet), 7,57 (d, 2H), 7,75 (d, 2H).
Oppløste signaler som skriver seg fra en underordnet rotamer viser seg ved 8 166,8, 169,0, 172,0, 172,4 og 175,2.
EKSEMPEL 13
HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pab(Z)
En blanding av 182 mg (0,35 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z) (se eksempel 8) og 62,5 mg (0,385 mmol) benzylakrylat i 1,5 ml 95 % etanol ble omrørt ved romtemperatur i 4 dager. Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og resten ble underkastet flashkromatografi ved bruk av etylacetat/metanol 9:1 som elueringsmiddel og dette ga 200 mg (84 %) av tittelforbindelsen.
(ii) H00C-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HCI
195 mg (0,29 mmol) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pab(Z) oppløst i 10 ml 95 % etanol og 2 ml vann ble hydrogenert i nærvær av 5 % Pd/C i 4 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering og inndampning av oppløsningsmidlet i vakuum ga en rest som ble oppløst i 2 ml vann og 0,4 ml 1 M saltsyre. Frysetørking ga 130 mg (86 %) av produktet.
<i>H-NMR (500 MHz, CD3OD): 8 0,98-1,27 (m, 2H), 1,30-1,90 (m, 11H), 2,27-2,35 (m, IH), 2,65-2,74 (m, IH), 2,77 (t, 2H), 3,32 (t, 2H), 4,10 (t, IH), 4,17-4,25 (m, IH), 4,40-4,49 (m, IH), 4,55 (AB, 2H), 4,83-4,90 (m, IH), 7,58 (d, 2H), 7,77 (d, 2H).
<13>C-NMR (125 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 167,0,168,9,172,4 og 174,6.
EKSEMPEL 14
HOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Aze-Pab(Z)
En blanding av 0,212 g (0,408 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z) (se eksempel 8), 0,124 g (0,89 mol) K2C03 og 0,128 g (0,449 mmol) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-Br (se fremstilling av utgangsmaterialer) i 6 ml acetonitril ble omrørt ved 50°C i 2 timer. Etter inndampning av oppløsningsmidlet ble resten oppløst i vann og etylacetat. Vannlaget ble ekstrahert to ganger med etylacetat og det kombinerte organiske laget ble tørket (Na2S04), filtrert og inndampet. Produktet ble renset ved flashkromatografi ved bruk av en trinnvis gradient av etylacetaftetrahydrofuran (85/15, 4/1, 7/3) og dette ga 0,190 g (64 %) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (300 MHz, CDC13): 8 0,75-2,1 (m, 13H), 2,43 (m, IH), 2,56 (d, IH), 2,79 (m, IH), 3,0-3,15 (m, 2H; derav 3,05 (d, IH)), 3,89-4,18 (m, 5H), 4,8-4,98 (m, 2H), 5,15 (s, 2H), 5,18 (s, 2H), 7,2-7,47 (m, 12H), 7,72 (t, NH), 7,86 (d, 2H), 8,14 (bs, NH), 8,31 (dd, NH), 9,42 (bs, NH).
<13>C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 5 164,5,168,7,169,22, 169,83,171,7, 175,5.
(ii) HOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Aze-Pab x 2 HCI
0,19 g (0,26 mmol) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Aze-Pab(Z) ble blandet med 0,075 g 5 % Pd/C, 1,5 ml 1 N HCl-oppløsning, 3 ml vann og 17 ml etanol og blandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 1 time. Filtrering av katalysatoren, inndampning av oppløsningsmidlet fulgt av frysetørking fra vann ga 144 mg (97 %) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (D20,300 MHz, to rotamerer 4:1): 8 0,88-1,88 (m, 13H), 2,25-2,42 (m, IH), 2,63-2,89 (m, IH), 3,94 (s, 2H), 3,99 (tydelig dublett, 2H), 4,16 (t, IH), 4,28 (q, IH), 4,41 (q, IH), 4,56 (s, 2H), 4,98 (dd, IH), 7,53 (d, 2H), 7,77 (d, 2H).
Oppløste signaler fra den underordnede rotameren viser seg ved 8 0,50 (bq), 0,77 (bq), 5,21 (dd), 7,56 (d)og 7,81 (d).
<13>C-NMR (D2O, 75 MHz): karbonylene og amidinkarbonet ved 8 166,8,166,9,168,6, 172,3 og 173,4.
Oppløste signaler fra den underordnede rotameren viser seg ved 8: 166,6,169,6,172,0.
EKSEMPEL 15
H-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cha-Pro-Pab(Z)
0,135 ml (1,1 mmol) pivaloylklorid ble tilsatt ved romtemperatur til en omrørt blanding av 0,155 ml (1,1 mmol) trietylamin og 405 mg (1,1 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer) i 5 ml DMF. Etter 3 timer ble 340 mg (1,1 mmol) H-Pab(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialer) i 5 ml DMF tilsatt og omrøring ble fortsatt natten over. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med vann og ekstrahert med etylacetat/ toluen 1:1. Den organiske fasen ble tørket (MgS04) og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og dette ga en rest som ble underkastet flashkromatografi ved bruk av etylacetat som elueringsmiddel. Utbytte var 309 mg (49 %).
(ii) H-fR)Cha-Pro-Pab(Z)
Hydrogenklorid ble boblet gjennom en oppløsning, inntil metning, av 1,246 g (2 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-Pab(Z) i 30 ml etylacetat ved romtemperatur. Etter 30 minutter ble natriumkarbonatoppløsning (10 %) tilsatt og den organiske fasen som skilte seg ut ble tørket (K2CO3). Tørkemidlet ble vasket med metylenklorid og oppløsningsmidlet ble inndampet fra de kombinerte organiske fasene og dette ga 1,11 g (100 %) av tittelforbindelsen.
(iii) H-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HCI
100 mg (0,19 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) oppløst i 15 ml etanol ble hydrogenert i nærvær av 38 mg 10 % Pd/C i 1,5 timer. Fortynning av reaksjonsblandingen med destillert vann og fjerning av katalysatoren ved filtrering fulgt av fjerning av etanolen i vakuum og frysetørking ga tittelforbindelsen som et fargeløst pulver. Peptidet ble til slutt omdannet til dihydrokloridet ved oppløsning i saltsyre fulgt av frysetørking og dette ga 90 mg (100 %) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (300 MHz, D2); 6 1,0-2,0 (m, 13H), 2,0-2,3 (m, 3H), 2,3-2,5 (m, IH), 3,6-3,7 (m, IH), 3,8-3,9 (m, IH), 4,3-4,5-(t, IH), 4,5-4,6 (m, 3H), 7,4-7,6 (m, 3H), 7,6-7,9 (m, 2H).
<13>C-NMR(75 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 167,2,170,0,174,9.
EKSEMPEL 16
HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z)
En blanding av 268 mg (0,5 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (se eksempel 15), 90 ul (0,55 mmol) benzylbromacetat og 181 mg (1,3 mmol) K2CO3 i 2 ml acetonitril ble sonikert ved 40°C i 2,5 timer. Blandingen ble filtrert gjennom hyflo og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og dette ga en rest som ble underkastet flashkromatografi ved bruk av etylacetat som elueringsmiddel og dette ga 194 mg (57 %) av tittelforbindelsen.
HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HCI
194 mg (0,28 mmol) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z) oppløst i 10 ml etanol ble hydrogenert i nærvær av 77 mg 10 % Pd på trekull i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med vann og katalysatoren fjernet ved filtrering. Inndampning av oppløsnings-midlet i vakuum fulgt av frysetørking ga en hvit rest. Saltsyre ble tilsatt og den resulterende oppløsningen ble til slutt frysetørket og dette ga 115 mg (68 %) av det ønskede produktet.
<i>H-NMR (300 MHz, D20); 8 1,0-1,2 (m, 2H), 1,2-1,5 (m, 3H), 1,5-2,0 (m, 8H), 2,0-2,3 (m, 3H), 2,3-2,5 (m, IH), 3,6-3,8 (m, IH), 3,8-4,0 (m, 3H), 4,4-4,7 (m, 4H), 7,5-7,7 (d, 2H), 7,7-7,9 (d, 2H).
<13>C-NMR(75 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 167,1,168,2,169,3,174,6.
EKSEMPEL 17
HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab
(i) Boc-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z)
Til en oppløsning av 0,8 g (1,67 mmol) av Boc-(Me)(R)Cha-Pro-OSu (se fremstilling av utgangsmaterialer) i 3 ml DMF ble det tilsatt en oppløsning av 0,562 g (1,85 mmol) H-Pab(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialer) i 3 ml DMF, og den resulterende oppløs-nings pH-verdi ble justert til 8-9 med N-metylmorfolin hvoretter oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur i 2 dager. Oppløsningen ble helt på vann og den resulterende blanding ble ekstrahert med 3 x 25 ml etylacetat. Den organiske oppløsningen ble vasket med 1 M KHS04-oppløsning, 10 % NaHC03, vann og saltoppløsning, og tørket (Na2S04). Inndampning av oppløsningsmidlet ga 0,65 g (60 %) av tittelforbindelsen som et gulaktig hvitt pulver.
(ii) Me-(R)Cha-Pro-Pab(Z)
En oppløsning av 0,60 g (0,92 mmol) av Boc-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z) i 50 ml EtOH ble mettet med HCI ved 0°C og oppløsningen ble oppbevart i et kjøleskap natten over. Den resulterende oppløsning ble inndampet til tørrhet og resten ble oppløst i Na2CH3 opp-løsning, ekstrahert med 3 x 25 ml etylacetat. Ekstraktet ble vasket med saltoppløsning og inndampet og dette ga 0,4 g (79 %) av forbindelsen som et hvitt dunaktig pulver.
<i>H-NMR (CDCI3, 300 MHz): 8 0,8-1,0 (m, 2H), 1,1-1,4 (m, 5H), 1,4-1,55 (m, IH), 1,6-1,9 (m, 10H), 1,9-2,05 (m, 2H), 2,05-2,2 (m, 2H), 2,19 (s, 2H), 2,4-2,5 (m, IH), 3,28 (dd, IH), 3,41 (q, IH), 3,62 (m, IH), 4,42 (m, 2H), 4,61 (d, IH), 5,2 (s, 2H), 7,2-7,45 (m, 7H), 7,72 (t, IH), 7,79 (d, 2H).
(iii) BnOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z)
En blanding av 0,40 g (0,73 mmol) Me-(R)Cha-Pro-Pab(Z), 0,17 g BnOOC-CH2Br og 0,20 g (2 ekviv.) K2C03 (bearbeidet i en morter) i 15 ml CH3CN ble omrørt ved romtemperatur natten over. Den resulterende blanding ble inndampet, etylacetat ble tilsatt og blandingen ble vasket med vann og saltoppløsning, tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet (0,69 g) ble underkastet flashkromatografi (CH2Cl2/MeOH 10/1) og dette ga 0,39 g (77 %) av en lysegul, meget viskøs olje.
HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab
Til en oppløsning av 0,39 g (0,56 mmol) BnOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z) i 30 ml EtOH ble det tilsatt 0,1 g Pd/C (10 %) og substansen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk. Oppløsningen ble filtrert og inndampet, hvoretter det gjenværende sirupaktige materialet ble frysetørket og dette ga 0,25 g (95 %) av forbindelsen som et hvitt krystallinsk pulver.
<i>H-NMR (300 MHz, CD3OD): 5 0,85-1,1 (m, 2H), 1,1-1,4 (m, 6H), 1,5-1,85 (m, 9H), 1,9-2,05 (m, 3H), 2,05-2,15 (m, IH), 2,15-2,3 (m, IH), 2,57 (s, 3H), 3,32 (d, IH), 3,55-3,75 (m, 3H), 3,95-4,1 (m, 2H), 4,35-4,5 (m, 3H), 7,55 (d, 2H), 7,72 (d, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, CD3OD): 8 0,85-1,1 (m, 2H), 1,1-1,4 (m, 6H), 1,5-1,85 (m, 9H), 1,9-2,05 (m, 3H), 2,05-2,15 (m, IH), 2,15-2,3 (m, IH), 2,57 (s, 3H), 3,32 (d, IH), 3,55-3,75 (m, 2H), 3,95-4,1 (m, 2H), 4,35-4,5 (m, 3H), 7,55 (d, 2H), 7,72 (d, 2H).
<13>C-NMR(75 MHz, CD3OD): amidin- og karbonylkarboner: 8 168,4,171,5,174,7, 175,1.
EKSEMPEL 18
HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z)
En blanding av 149 mg (0,28 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (se eksempel 15) og 66 mg (0,4 mmol) benzylakrylat i 1,5 ml etanol ble holdt ved romtemperatur i 36 timer. Opp-løsningsmidlet ble fjernet i vakuum og resten ble underkastet flashkromatografi ved bruk av etylacetat som elueringsmiddel og dette ga 124 mg (64 %) av det ønskede produktet.
(ii) HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HCI
124 mg (0,18 mmol) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z) oppløst i 10 ml etanol ble hydrogenert i 1 time i nærvær av 55 mg 10 % Pd/C. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Resten ble oppløst i saltsyre og den resulterende oppløsning ble frysetørket og dette ga 87 mg (79 %) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (300 MHz, D20): 6 1,0-2,0 (m, 13H), 2,0-2,2 (m, 3H), 2,2-2,4 (m, IH), 2,7-2,8 (t, 2H), 3,2-3,3 (m, IH), 3,3-3,4 (m, IH), 3,5-3,7 (m, IH), 3,7-3,9 (m, IH), 4,3-4,6 (m, 4H), 7,4-7,6 (m, 2H), 7,6-7,8 (m, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 5 167,0,168,3 og 174,6 (to karboner er overlappende).
EKSEMPEL 19
HOOC-CH2-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z)
Til en oppløsning av 274 mg (0,5 mmol) Me-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (se eksempel 17) i 5 ml EtOH (99 %) ble det tilsatt 97,3 mg (0,6 mmol) benzylakrylat og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur. Etter 72 timer ble en ytterligere mengde på 16,2 mg (0,1 mmol) benzylakrylat tilsatt og omrøringen fortsatt i 24 timer. Oppløsnings-midlet ble inndampet og resten ble underkastet flashkromatografi (CH2Cl2/MeOH (NH3-mettet), 95/5) og dette ga 198 mg (56 %) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (500 MHz, CDCI3): 5 0,8-2,0 (flere m, 16H), 2,14 (s, 3H), 2,24-2,33 (m, 2H), 2,38-2,46 (m, IH), 2,67 (t, 2H), 3,32-3,40 (m, 2H), 3,71 (m,I H), 4,36^,44 (m, 2H), 4,58 (m, IH), 5,03 (tydelig s, 2H), 5,20 (s, 2H), 7,25-7,37 (m, 10H), 7,43 (d, 2H), 7,64 (t, 1H,(NH)), 7,81 (d,2H).
<13>C-NMR (135 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 5 164,7,167,9,171,7, 172,3 og 172,6.
(ii) HOOC-CH2-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab x 2 HCI
Til en oppløsning av 198 mg (0,27 mmol) BnOOC-CH2-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z) i 10 ml EtOH og 1 ml 1 M HCI ble det tilsatt 60 mg 5 % Pd/C (inneholdende 50 % H20 beregnet på vekt) og blandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 4 timer. Katalysatoren ble frafiltrert og oppløsningsmidlet ble inndampet. Den gjenværende oljen ble oppløst i vann og frysetørket og dette ga tittelforbindelsen i et kvantitativt ubytte. <i>H-NMR (500 MHz, D20): 5 1,08-1,2 (m, 2H), 1,2-1,42 (m, 4H), 1,68-1,91 (m, 5H), 1,93-2,08 (m, 2H), 2,09-2,26 (m, 3H), 2,49 (m, IH), 2,95 (m, 2H), 3,03 (s, 3H), 3,60 (tydelig bs, 2H), 3,82 (m, IH), 3,98 (m, IH), 4,53 (m, IH), 4,61 (bs, 2H), 4,64 (m, IH), 7,63 (d, 2H), 7,97 (d, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 167,2,167,8 og 174,5. To topper er sannsynligvis overlappende.
EKSEMPEL 20
HOOC-CH2-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/a x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pro-Pab(Z)
En blanding av 0,50 g (0,94 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (se eksempel 15) og 0,28 g (0,94 mmol) dibenzylmaleat i 20 ml EtOH ble holdt ved romtemperatur i 5 dager. Inndampning av oppløsningsmidlet fulgt av flashkromatografi ved bruk av CH2Cl2/MeOH som elueringsmiddel ga 0,15 g (19 %) av den diastereomere blandingen.
<i>H-NMR (500 MHz, CDC13): 8 0,7-2,1 (m, 17H), 2,3-2,4 (m, IH), 2,5-2,8 (m, 2H), 3,2-3,7 (m, 4H), 4,46 (d, IH), 4,65 (bd, IH), 4,81 (d, IH), 4,9-5,1 (m, 3H), 5,20 (s, 2H), 7,1-7,4 (m, 15H), 7,4-7,5 (m, 2H), 7,6-7,8 (m, 3H).
(ii) HOOC-CH2-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/a x 2 HCI
En blanding av 0,15 g (0,18 mmol) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pro-Pab(Z) ble oppløst i 5 ml etanol og ble hydrogenert over 5 % Pd/C ved atmosfæretrykk i 1 time og dette ga HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-PAb. De to diastereomerene ble separert ved RPLC ved bruk av (CH3CN/0,1 M NH4OAC 15/85) som elueringsmiddel fulgt av frysetørking fra HCI. Denne diastereomeren eluerte først fra kolonnen. Utbytte 19 mg (18 %).
<*>H-NMR (500 MHz, D20, blanding av to rotamerer) hovedrotamer: 8 1,0-2,0 (m, 15H), 2,15 (m, 2H), 2,44 (m, IH), 3,00 (bd, IH), 3,05 (bd, IH), 3,69 (m, IH), 3,84 (m, IH), 3,97 (bs, IH), 4,5-4,7 (m, 3H), 7,62 (d, 2H), 7,87 (d, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 167,2,168,3,173,8, 174,6 og 178,2.
EKSEMPEL 21
HOOC-CH2-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/b x 2 HCI
Tittelforbindelsen ble oppnådd ved bruk av samme prosedyre som beskrevet i eksempel 20 på HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab. Denne diastereomeren kom ut av kolonnen etter den første. Utbytte 19 mg (18 %).
<i>H-NMR (500 MHz, D20, blanding av to rotamerer) hovedrotamer: 8 1,0-2,0 (m, 14H), 2,15-2,25 (m, 3H), 2,44 (m, IH), 3,11 (bd, IH), 3,19 (bd, IH), 3,71 (m, IH), 3,92 (m, IH), 4,03 (bs, IH), 4,5-4,7 (m, 3H), 7,58 (d, 2H), 7,84 (d, 2H).
Oppløste signaler som skriver seg fra den underordnede rotameren viser seg ved: 8 7,66 (d) og 7,91 (d).
<13>C-NMR (75 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 167,3,168,5 og 174,7. To karboner er sannsynligvis overlappende.
EKSEMPEL 22
HOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z)
0,246 g (0,460 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (se eksempel 15), 0,140 g (1,01 mmol) K2C03 og 0,145 g (0,506 mmol) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-Br (se fremstilling av utgangsmaterialer) ble blandet i 6 ml acetonitril. Blandingen ble omrørt ved 50°C i 2 timer og 30 min, oppløsningsmidlet ble inndampet og resten ble skilt mellom vann og etylacetat. Lagene ble separert og vannlaget ble ekstrahert en gang til med etylacetat. Det kombinerte organiske laget ble tørket (Na2S04), filtrert og inndampet og dette ga 0,350 g av en olje. Råproduktet ble renset ved flashkromatografi ved bruk av en trinnvis gradient av CH2Cl2/MeOH 97/3,95/5,92,5/7,5 hvilket ga 0,227 g (67 %) av tittelforbindelsen.
<13>C-NMR (75 MHz, CDCI3): 8 25,0,26,0, 26,2, 26,4, 26,7, 32,4, 34,2, 34,4,40,8,40,9, 42,9,46,7, 50,5, 58,4,60,2,67,0,67,2,127,5, 127,8, 128,2,128,3,128,4,128,5, 128,6, 143,1,135,2,137,0, 142,6, 164,7, 168,9, 169,3,170,4,172,2,175,0.
(ii) HOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Pro-Pab x 2 HCI
0,089 g (0,12 mmol) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z) ble blandet med 30 mg 5 % Pd/C og oppløst i 10 ml eddiksyre. Blandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i en og en halv time. Filtrering av katalysatoren gjennom hyflo og fryse-tørking med 1 ml 1 N saltsyre ga 0,058 g (82 %) av det ønskede produktet.
<i>H-NMR (300 MHz, D20): 8 0,9-2,2 (m, 16H), 2,25-2,47 (m, IH), 3,55-3,7 (n, IH), 3,7-4,1 (m, 5H), 4,42 (t, IH), 4,48-4,6 (m, 3H), 7,51 (d, 2H), 7,77 (d, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 166,8, 167,1, 168,2, 173,6 og 174,6.
EKSEMPEL 23
EtOOC-CH2-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pab x HOAc
(i) EtOAc-CH=CH-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z)
H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (se eksempel 15) (275 mg, 0,51 mmol) ble behandlet med K2CC-3 (141 mg, 1,02 mmol) og BrCH2CH=CHOOEt (108 mg, 0,56 mmol) i CH3CN (10 ml) ved 20°C i 20 timer. Oppløsningsmidlet ble inndampet og resten ble oppløst i EtOAc (5 ml)/H20 (2 ml). Det organiske laget ble separert, tørket (Na2S04) og konsentrert og dette ga 397 mg av en olje som ble renset ved flashkromatografi ved bruk av EtOAc/heptan, 1/4 som elueringsmiddel og dette ga 252 mg (77 %) av tittelforbindelsen.
<l>H-NMR(500 MHz, CDCI3): 8 0,8-1,5 (m, 2H), 1,1-1,45 (m, 3H), 1,3 (t, 3H), 1,5-1,9 (m, 8H), 1,95-2,05 (m, IH), 2,1-2,15 (m, IH), 2,45-2,55 (m, IH), 3,0 og 3,15 (to d, 2H), 3,35-3,45 (m, 2H), 3,55-3,65 (m,l H), 4,15 (q, 2H), 4,3 (d, IH), 4,6-4,7 (m, 2H), 5,2 (s, 2H), 5,85 (d, IH), 6,75 (dt, IH), 5,3-5,4 (m, 4H), 7,45 (d, 2H), 7,85 (d, 2H).
<13>C-NMR (75,0 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 8 165,7,171,2 og 175,7 (to topper er sannsynligvis overlappende).
(ii) EtOOC-CH2-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pab x HOAc
EtOOCCH=CHCH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (250 mg, 0,38 mmol) ble oppløst i etanol og hydrogenert i nærvær av 5 % Pd/C i ca 2 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering og inndampning av oppløsningsmidlet i vakuum ga etter rensing ved RPLC ved bruk av (CH3CN/0,1 M NH4OAC) som elueringsmiddel 70 mg (36 %) av det ønskede produktet.
<i>H-NMR (500 MHz, CD3OD): 8 0,9-1,05 (m, 2H), 1,15-1,55 (m, 5H), 1,25 (t, 3H), 1,6-1,85 (m, 7H), 1,95-2,6 (m, 8H), 3,55-3,65 (m, 2H), 3,8 (m, IH), 4,1 (q, 2H), 4,45 (m, og d, 2H), 4,55 (d, IH), 7,55 og 7,75 (to d, 4H).
<13>C-NMR (75,0 MHz, CD3OD): amidin- og karbonylkarboner: 8 168,3,173,2,174,6 og 174,9.
EKSEMPEL 24
Ph(4-COOH)-S02-(R)Cha-Pro-Pab x HCI
(i) Ph(4-COOH)-S02-(R)Cha-Pro-Pab(Z)
64 mg (0,32 mmol) 4-klorsulfonylbenzosyre ble tilsatt ved isbadtemperatur til en opp-løsning av 156 mg (0,29 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (se eksempel 15) og 59 mg (0,58 mmol) trietylamin i 4 ml metylenklorid. Blandingen fikk langsomt nå romtemperatur og etter 24 timer ble den vasket med vann og tørket (Na2SC»4). Fjerning av oppløsnings-midlet i vakuum og rensing av resten ved flashkromatografi ved bruk av etylacetat/ metanol 9:1 fulgt av metylenklorid/metanol 3:1 som elueringsmidler ga 82 mg (39 %) av produktet.
(ii) Ph(4-COOH)-S02-(R)Cha-Pro-Pab x HCI
80 mg (0,11 mmol) Ph(4-COOH)-S02-(R)Cha-Pro-Pab(Z) ble hydrogenert over 5 % Pd/C i EtOH. Katalysatoren ble frafiltrert, oppløsningsmidlet inndampet og råproduktet ble renset ved RPLC ved bruk av (CH3CN/0,! M NH4OAC 1/4) som elueringsmiddel og til slutt omdannet til hydrokloirdsaltet ved frysetørking fra HCI og dette ga 21 mg (29 %) av produktet.
^H-NMR (300 MHz, CD3OD, blanding av to rotamerer): 8 0,45-1,82 (m, 13H), 1,90-2,30 (m, 4H), 2,95-4,16 (flere m, totalt 3H), 4,35-4,68 (m, 3H), 7,54 (d, 2H), 7,74 (d, IH), 7,80 (d, IH), 7,90-8,00 (m, 2H), 8,05-8,22 (m, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, CD3OD): amidin- og karbonylkarboner: 8 168,4,173,4,173,9 og 174,2.
MS m/z 584 (M<+>+1).
EKSEMPEL 25
H-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
3,57 g (18,6 mmol) EDC ble tilsatt ved -15°C til en blanding av 7,11 g (18,6 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 9,07 g (74,2 mmol) DMAP og 5,26 g (18,6 mmol) H-Pab(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialer) i 200 ml DMF. Temperaturen fikk stige til 20°C natten over. Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og toluen og vann ble tilsatt. Den organiske fasen ble vasket med vann, 1 M KHSO4,10 % Na2C03 og saltoppløsning. Tørking (MgS04) og inndampning av oppløsningsmidlet i vakuum ga 13,63 g av en rest som ble underkastet flashkromatografi på silisiumdioksydgel ved bruk av etylacetat/toluen 2:1 som elueringsmiddel og dette ga 9,5 g (79 %) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (300 MHz, CDCI3): 8 0,71,0 (m, 2H), 1,0-2,2 (m, 25H), 2,3-2,5 (m, IH), 2,9-3,1 (m, IH), 3,8 (d, IH), 4,3 (dd, IH), 4,4-4,6 (m, 2H), 5,1 (s, 2H), 5,1-5,3 (m, 2H), 7,2-7,3 (m, 5H), 7,35 (d, 2H), 7,4-7,5 (m, IH), 7,75 (d, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 8 156,8,164,6,168,2, 170,0 og 173,4.
(ii) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
Hydrogenklorid ble boblet gjennom en oppløsning av 9,5 g (14,7 mmol) Boc-(R)-Cha-Pic-Pab(Z) i 100 ml etylacetat ved romtemperatur inntil metning. Etter 10 min ble Na2CC<3 oppløsning (10 %) tilsatt og den organiske fasen som skilte seg ut ble tørket (K2CO3) og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og dette ga tittelforbindelsen i kvantitiativt utbytte.
<i>H-NMR (500 MHz, CD3OD): 5 0,85-1,05 (m, 2H), 1,15-1,90 (m, 16H), 2,25-2,35 (m, IH), 3,20-3,30 (m, IH), 3,80-3,90 (d, IH), 3,90-4,0 (m, IH), 4,4-4,5 (to d, 2H), 4,7 (br s, 5H), 5,15 (s, 2H), 5,20 (m, IH), 7,25-7,45 (m, 7H), 7,85 (d, 2H).
(iii) H-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HCI
55 mg (0,1 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) oppløst i en blanding av 5 ml etanol og 0,45 ml 1 M saltsyre ble hydrogenert i nærvær av 33 mg 10 % Pd/C i 1,5 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering og inndampning av oppløsningsmidlet i vakuum ga en rest som ble underkastet RPLC ved bruk av 0,1 M NH4OAC/CH3CN som elueringsmiddel. Det rensede peptidet ble til slutt omdannet til dihydrokloridsaltet ved oppløsning i saltsyre fulgt av frysetørking. Utbytte var 17 mg (35 %) av tittelforbindelsen.
^-NMR (300 MHz, D20,2 rotamerer, 3:1 blanding): 8 1,0-2,0 (m, 18H), 2,33 (d, IH), 3,4-3,5 (m, IH), 3,8-3,9 (m, IH), 4,4-4,8 (m, 3H), 5,15-5,25 (m, IH), 7,5-7,7 (m, 2H), 7,8-8,0 (m, 2H).
Oppløste signaler fra den underordnede rotameren viser seg ved 8: 0,5-0,7 (m) og (3,0-3,1 (m)
<13>C-NMR (75 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 167,3,171,6 og 173,6.
Oppløste signaler fra den underordnede rotameren viser seg ved 8 170,6 og 172,4.
EKSEMPEL 26
HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
En blanding av 742 mg (1,35 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (se eksempel 25), 230 ml (1,45 mmol) benzylbromacetat og 558 mg (4 mmol) K2CO3 i 4 ml acetonitril ble sonikert ved 40°C i 40 min. Oppløsningsmidlet ble fjernet og resten ble underkastet flashkromatografi og dette ga 720 mg (77 %) av det ønskede produktet.
<i>H-NMR (500 MHz, CDCI3): 8 0,8-1,0 (m, 2H), 1,1-1,9 (m, 16H), 2,1-2,4 (br s, 1 eller 2H), 2,4 (d, IH), 3,0 (m, IH), 3,25 (d, IH), 3,45 (d, IH), 3,55-3,65 (m, IH), 3,7 (m, IH), 4,35 (dd, IH), 4,55 (dd, IH), 4,80 (to d, 2H), 5,2 (s, 2H), 5,3 (m, IH), 7,2-7,4 (m, 12H), 7,8 (d, 2H).
<13>c-NMR(125 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 8 164,5,167,9,170,5, 173,4 og 175,5.
(ii) HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HCI
509 mg (0,73 mmol) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z) oppløst i 25 ml etanol ble hydrogenert i nærvær av 259 mg 10 % Pd/C i 4 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering og inndampning av oppløsningsmidlet i vakuum ga en rest som ble oppløst i destillert vann. Saltsyre ble tilsatt og oppløsningen ble til slutt frysetørket og dette ga 281 mg (79 %) av tittelforbindelsen.
^-NMR (500 MHz, D2O, blanding av rotamerer 4:1): hovedrotamer: 8 1,0-2,0 (m, 18H) 2,25-2,40 (m, IH), 3,4-3,5 (m, IH), 3,8-3,95 (m, 3H), 4,55-4,65 (to d, 2H), 5,15 (m, IH), 7,55-7,75 (m, 2H), 7,8-8,0 (m, 2H).
<13>C-NMR (125 MHz, D2O): amidin- og karbonylkarboner: 8 167,3, 169,9,170,3 og 173,5.
Oppløst signal for den underordnede rotameren viser seg ved 8 166,9,169,2 og 172,0.
EKSEMPEL 27
HOOC-CH2-(RorS)CH(COOH)-(R)Cna-Pic-Pab/a x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
En blanding av 592 mg (1,1 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (se eksempel 25) og 332 mg (1,1 mmol) dibenzylmaleat i 1 ml etanol ble holdt ved romtemperatur i 1 uke. Opp-løsningsmidlet ble fjernet i vakuum og resten ble underkastet flashkromatografi ved bruk av metanol/metylenklorid som elueringsmiddel og dette ga 275 mg (30 %) av den diastereomere blandingen.
(ii) HOOC-CH2-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/a x 2 HCI
275 mg BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pic-Pab(Z) oppløst i 20 ml 95 % etanol ble hydrogenert i 18 timer i nærvær av 75 mg 10 % Pd/C. Blandingen ble filtrert gjennom hyflo og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Tilsetning av vann fulgt av frysetørking ga 166 mg HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab. De to diastereomerene ble separert ved RPLC ved bruk av (CH3CN=,1 M NH4OAC 1/4) som elueringsmiddel fulgt av frysetørking fra HCI. Denne diastereomeren eluerte først fra kolonnen. Utbytte 9 mg.
<i>H-NMR (300 MHz, D20, blanding av rotamerer): 8 1,0-2,0 (m, 18H), 2,25-2,4 (m,l H), 3,0-3,2 (m, 2H), 3,4 (t, IH), 3,8 (d, IH), 4,05 (t, IH), 4,5-4,7 (m, 3H), 5,2 (s, IH), 7,55 (d, 2H), 7,9 (d, 2H).
Oppløste signaler fra den underordnede rotameren viser seg ved 8 4,0 (t) og 7,7 (d).
EKSEMPEL 28
HOOC-CH2-(RorS)CH(COOH)-(R)Cba-Pic-Pab/b x 2 HCI
Tittelforbindelsen ble oppnådd ved bruk av samme prosedyre som beskrevet i eksempel 27 på HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab. Denne diastereomeren kom ut etter den første fra kolonnen.
<i>H-NMR (500 MHz, D2O, blanding av rotamerer): 6 1,0-3,0 (m, 18H), 2,25-2,4 (m, IH), 3,0-3,2 (m, 2H), 3,5 (t, IH), 3,85 (d, IH), 4,15 (s, IH), 4,5-4,7 (m, 3H), 5,15 (s, IH), 7,55 (d, 2H), 7,8 (d, 2H).
Oppløste signaler fra den underordnede rotameren viser seg ved S 4,35 (s), 7,65 (d) og 7,9 (d).
EKSEMPEL 29
HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
En blanding av 851 mg (1,55 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (se eksempel 25) og 269 mg (1,71 mmol) benzylakrylat i 5 ml etanol ble holdt ved romtemperatur i 40 timer. Opp-løsningsmidle ble fjernet i vakuum og resten ble underkastet flashkromatografi ved bruk av metylenklorid/metanol som elueringsmiddel og dette ga 812 mg (74 %) av produktet.
<i>H-NMR (500 MHz, CDCI3): 8 0,8-1,0 (m, 2H), 1,1-1,9 (m, 16H), 2,3-2,5 (m, 3H), 2.6- 2,8 (m, 2H), 3,0 (m, IH), 3,5 (m, IH), 3,6-3,7 (m, IH), 4,3 (dd, IH), 4,6 (dd, IH), 4,95-5,05 (to d, 2H), 5,2 (s, 2H), 5,3 (m, IH), 6,5-6,9 (br s, IH), 7,0-7,1 (m, IH), 7,2-7,5 (m, 12H), 7,75-7,85 (d, 2H), 9,3-9,7 (br s, IH).
(ii) HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HCI
780 mg (1,1 mmol) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z) oppløst i 25 ml etanol ble hydrogenert i 4 timer i nærvær av 306 mg 15 % Pd/C. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Resten ble oppløst i saltsyre og den resulterende oppløsning ble frysetørket og dette ga 481 mg (78 %) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (500 MHz, D20): 8 0,95-1,1 (m, 2H), 1,15-1,9 (m, 16H), 2,2-2,3 (m, IH), 2.7- 2,8 (t, 2H), 3,2-3,3 (m, 3H), 3,4-3,5 (m, IH), 3,75-3,85 (m, IH), 4,4-4,6 (m, 3H), 5,15 (m, IH), 7,3-7,6 (m, 2H), 7,8-7,9 (m, 2H), 8,6-8,7 (m, IH).
<13>C-NMR (125 MHz, CD3OD): amidin- og karbonylkarboner: 8 170,6, 175,9,179,5 og 183,5.
EKSEMPEL 30
HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab x HOAc
(i) EtOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
0,12 g etyloksalylklorid ble tilsatt til en blanding av 0,42 g (0,77 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (se eksempel 25) og 0,21 g (1,5 mmol) K2CO3 i 10 ml CH3CN ved romtemperatur. Etter 2 timer ble en ytterligere mengde på 0,07 g (0,5 mmol) etyloksalylklorid tilsatt. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over. Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og resten ble oppløsti CH2CI2 og vasket med vann. Inndampning og flashkromatografi (toluen: etylacetat 1:2 fulgt av CH2Cl2:metanol) ga 0,21 g (42 %) av produket.
(ii) HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
0,21 g (0,32 mmol) EtOOC-CO-(R)Cha-Pic-PAb(Z) ble oppløst i 3 ml THF og 0,17 g (4,2 mmol) LiOH oppløst i 3 ml vann ble tilsatt. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over og deretter helt på etylacetat/vann. Fasene ble separert og den organiske fasen ble ekstrahert med en KHC03-oppløsning. Den vandige fasen ble surgjort med 0,5 M HCI (pH 1) og ekstrahert med CH2C12, tørket over Na2S04 og inndampet og dette ga 80 mg av produktet.
(iii) HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab x HOAc
HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) ble hydrogenert over 5 % Pd/C i EtOH. Katalysatoren ble frafiltrert og oppløsningsmidlet inndampet. Resten ble renset ved RPLC og dette ga tittelforbindelsen.
<i>H NMR (500 MHz, DMSO-dg); 8 0,8-1,0 (m, 2H), 1,1-1,75 (m, 15H), 1,86-1,94 (m, IH), 2,13-2,2 (m, IH), 3,75-3,81 (m, IH), 4,32,4,44 (AB, 2H), 4,71-4,77 (m, IH), 4,98-5,02 (m, IH), 7,41 (d, 2H), 7,75 (d, 2H), 8,1-8,15 (m, IH), 8,22-8,27 (m, IH), 9,32 (bred s), 9,90 (bred s). Signalet til et av protonene (3,25) er delvis skjult av oppløsnings-middelsignalet.
MSm/z486(M<+>+l)
EKSEMPEL 31
HOOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab
(i) MeOOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
0,39 g (0,72 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (se eksempel 25) og 0,9 g (0,8 mmol) mono-metylmalonat ble oppløst i 40 ml CH2C12 og 0,16 g (0,8 mmol) DCC ble tilsatt. Opp-løsningen ble omrørt ved romtemperatur natten over. Det utfelte DCU-materialet ble fjernet ved filtrering og filtratet ble vasket med 0,3 M KHSO4 og KHC03-oppløsning og tørket (NaS04). Inndampning av oppløsningsmidlet fulgt av flashkromatografi ved bruk av toluen/etylacetat (1/3) som elueringsmiddel ga 0,27 g (58 %) av det ønskede produktet.
(ii) MeOOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab
90 mg (0,14 mmol) MeOOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) ble oppløst i 10 ml etanol og ble hydrogenert i nærvær av 5 % Pd/C i 5 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering og inndampning av oppløsningsmidlet ga 50 mg (70 %) av tittelproduktet.
<i>H-NMR (300 MHz, CD3OD): 5 0,85-1,1 (m, 2H), 1,1-1,9 (m, 16H), 2,35-2,45 (m, IH), 3,2-3,4 (m, 3H), 3,7 (s, 3H), 3,95-4,05 (m, IH), 4,4-4,55 (m, 3H), 5,15-5,25 (m, IH), 7,4-7,55 (m, 2H), 7,7-7,85 (m, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, CD3OD): amidin- og karbonylkarboner: 6 168,2,168,7,170,0, 172,4 og 174,6.
MSm/z514(M<+>+l)
(iii) HOOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab
Til en oppløsning av 0,14 g (0,27 mmol) MeOOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab i 5 ml metanol ble 2 ml 0,5 M NaOH tilsatt ved romtemperatur. Etter omrøring i 5 timer ble vann tilsatt og metanolen ble fjernet i vakuum. Den vandige fasen ble frysetørket. Det oppløselige materialet ble ekstrahert fra de uoppløselige uorganiske saltene med absolutt etanol. Det gjenværende faste stoffet etter inndampning av etanolen ble suspendert i vann og 70 mg (52 %) ble isolert ved filtrering.
<i>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 0,8-1,0 (m, 2H), 1,0-1,9 (m, 16H), 2,15-2,30 (m, IH), 2,58,2,86 (AB, 2H), 3,8-3,95 (m, IH), 4,2-4,5-(m, 2H), 4,7-4,85 (m, IH), 4,95-5,05 (m, IH), 7,40 (d, 2H), 7,77 (d, 2H), 8,2-8,3 (m, IH), 9,3-9,4 (m, IH), 9,90 (bred s, 3H). Signalet til et av protonene (3,21) er delvis skjult av oppløsningsmiddelsignalet.
<13>C NMR (75 MHz, DMSO-dg): amidin- og karbonylkarboner: 5 165,8,168,8,169,9, 172,2 og 172,4.
MS m/z 500 (M<+>+1).
EKSEMPEL 32
MeOOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab
Se eksempel 31 (ii) ovenfor.
EKSEMPEL 33
H2N-CO-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
(i) H2N-CO-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
Forsøk på alkylering av 455 mg (0,83 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (se eksempel 25) med 80 mg (0,86 mmol) kloracetamid i 3 ml acetonitril i nærvær av 395 mg (2,86 mmol) kaliumkarbonat ved sonikering ved 40°C viste seg å være en ekstremt treg reaksjon. Selv tilsetning av 230 mg (2,6 mmol) litiumbromid syntes ikke å forbedre reaksjonshastigheten. Tilsetning av litiumiodid og oppvarming/sonikering ga imidlertid små mengder av produkt, ifølge TLC. Opparbeidelse ved tilsetning av vann, ekstraksjon med etylacetat/toluen, tørking av den organiske fasen (MgS04) og fjerning av opp-løsningsmidlet i vakuum ga en rest som ble underkastet flashkromatografi ved bruk av MeOH/CH2Cl2 som elueringsmiddel og dette ga 118 mg (24 %) av det ønskede produktet.
(ii) H2H-CO-CH2-(R)Cha-Pic-Pab x 2 HCI
118 mg (0,2 mmol) H2N-CO-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z) oppløst i 10 ml 95 % etanol ble hydrogenert i nærvær av 143 mg 10 % Pd/C i 2 timer. Blandingen ble fortynnet med destillert vann og saltsyre og filtrert gjennom hyflo. Frysetørking ga 26 mg (24 %) av det ønskede produktet.
<i>H-NMR (300 MHz, CD3OD): 8 0,9-1,1 (m, 2H), 1,1-1,9 (m, 16H), 2,3 (d, IH), 3,4 (t, IH), 3,6 (AB-system, 2H), 3,8 (d, 2H), 4,35 (t, IH), 4,5 (s, 2H), 5,2 (s, IH), 7,55 (d, 2H), 7,8 (d, 2H).
EKSEMPEL 34
Boc-(R)Cha-Pic-Pab
10 mg (0,015 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (se eksempel 25) oppløst i 5 ml etanol ble hydrogenert i nærvær av 38 mg 10 % Pd/C i 4 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering og inndampning av oppløsningsmidlet i vakuum fulgt av oppløsning av resten i vann og frysetørking ga 7,6 mg (95 %) av produktet.
<i>H-NMR (300 MHz, CD3OD): 8 0,9-1,1 (m, 2H), 1,1-1,9 (m, 16H), 2,4 (d, IH), 3,25 (t, IH), 4,0 (d, IH), 4,5 (AB-system, 2H), 4,5-4,6 (m, IH), 5,25 (s, IH), 7,45 (d, 2H), 7,75 (d,2H).
EKSEMPEL 35
Ac-(R)Cha-Pic-Pab x HCI
(i) Ac-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
Acetylklorid 0,6 g (0,8 mmol) ble tilsatt til en blanding av 0,37 g (0,68 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (se eksempel 25) og 0,19 g (1,35 mmol) K2C03 i 10 ml CH3CN ved romtemperatur. Etter omrøring i ytterligere 30 minutter ved romtemperatur ble opp-løsningsmidlet fjernet i vakuum. Resten ble oppløst i CH2C12 og vasket med vann. Inndampning og flashkromatografi ved bruk av en trinnvis gradient av CH2Cl2/MeOH (99,9/0,1, 99,8/0,2, 99,6/0,4,99,2/0,8 og 98,4/1,6) ga 0,24 g (60 %) av produktet.
(ii) Ac-(R)Cha-Pic-Pab x HCI
Ac-(R)Cha-Pic-Pab(Z) ble hydrogenert over 5 % Pd/C ved atmosfæretrykk. Etter filtrering av katalysatoren og inndampning av oppløsningsmidlet ble råmaterialet underkastet rensing ved RPLC ved bruk av CH3CN/0,1 M NH4OAC (35/65) som eulerings-middel. Fjerning av oppløsningsmidlet og overskudd NH4OAC fulgt av frysetørking fra 1 M HCI ga tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (300 MHz, CD3OD): 5 0,85-1,1 (m, 2H), 1,15-2,0 (m, 19H), 2,35-2,47 (m, IH), 3,2-3,33 (m, IH), 3,95-4,05 (m, IH), 4,46,4,57 (ABX, 2H), 5,16-5,22 (m, IH), 7,51 (d, 2H), 7,76 (d, 2H), 8,23 (m, IH). Signalet til et av protonene er fullstendig skjult av oppløsningsmiddelsignalet.
<l>^C-NMR (75 MHz, CD3OD): amidin- og karbonylkarboner: 5 168,3,172,5,173,8, 175,1.
MS m/z 456 (M<+>+1).
EKSEMPEL 36
Me-S02-(R)Cata-Pic-Pab x HCI
(i) Me-S02-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
En oppløsning av 48 mg (0,42 mmol) metansulfonylklorid i 0,5 ml metylenklorid ble tilsatt ved 0°C til en omrørt oppløsning av 209 mg (0,382 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
(se eksempel 25) og 0,11 ml (0,763 mmol) trietylamin i 5 ml metylenklorid. Reakjons-blandingen fikk nå romtemperatur natten over. Vasking med vann fulgt av tørking (Na2S04) og inndampning av oppløsningsmidlet i vakuum ga en rest som ble underkastet flashkromatografi ved bruk av etylacetat/metanol (95/5) som elueringsmiddel og dette ga 159 mg (67 %) av produktet. * f
(ii) Me-S02-(R)Cha-Pic-Pab x HCI
150 mg (0,24 mmol) Me-S02-(R)Cha-Pic-Pab(Z) oppløst i 5 ml 95 % etanol og 1 ml vann ble hydrogenert i nærvær av 5 % Pd/C i 4 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering, tilsetning av 0,2 ml 1 M saltsyre og inndampning av oppløsningsmidlet i
vakuum ga en rest som ble oppløst i 2 ml vann og frysetørket og dette ga 116 mg (86 %) av produktet.
<i>H-NMR (500 MHz, CD3OD): 5 0.90-1,10 (m, 2H), 1,15-1,85 (m, 15H), 1,90 (bd, IH), 2,30 (bd, IH), 2,85 (s, 3H), 3,35 (dt, IH), 3,90 (bd, IH), 4,45 (AB-system, 2H), 4,50-4,55 (m, IH), 5,13 (dd, IH), 7,50 (d, 2H), 7,75 (d, 2H).
<13>C-NMR (125 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 5 166,8,173,0 og 174,6.
EKSEMPEL 37
H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z)
EDC ble tilsatt ved -18°C til en omrørt oppløsning av 1,0 g (2,6 mmol) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 1,28 g (10,5 mmol) DMAP, 0,74 g (2,6 mmol) H-Pab-(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialer) i 35 ml DMF. Reaksjonsblandingen fikk nå romtemperatur natten over og oppløsningsmidlet ble deretter fjernet i vakuum. Resten ble oppløst i CH2CI2 og det organiske laget ble vasket suksessivt med 0,3 M KHSO4, KHCO3-oppløsning og saltoppløsning. Tørking (Na2S04) og fjerning av oppløsningsmidlet ga en rest som ble underkastet flashkromatografi ved bruk av heptan:etylacetat med 4 % metanol som elueringsmiddel og dette ga 0,74 g (44 %) av det ønskede produktet.
(ii) H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z)
0,68 g (1,05 mmol) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z) ble oppløst i etylacetat mettet med HCI (g). Oppløsningen ble omrørt i 1 time ved romtemperatur. Vann ble tilsatt og blandingen ble gjort alkalisk med K2CO3. Vannfasen ble ekstrahert med etylacetat. Den organiske fasen ble deretter vasket med vann og tørket (Na2S04). Inndampning ga 0,5 g (87 %) av det ønskede produktet.
(iii) H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab x 2 HCI
65 mg (0,19 mmol) H-(R)Cha-betaPic(R,S)-Pab(Z) ble oppløst i 7 ml etanol og hydrogenert i nærvær av 5 % Pd/C i 4 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering, inndampning av oppløsningsmidlet og frysetørking fra 1 M HCI og vann ga 41 mg (71 %) av produktet.
<i>H-NMR (300 MHz, D20,2 diastereomerer 4/5, og rotamerer): 5 0,8-2,16 (m), 2,5-2,77 (m, 3H), 3,13-3,43 (m, 3H), 3,68-3,94 (m, IH), 4,18-4,41 (m, IH), 4,41-4,52 (m, 3H), 7,46-7,57 (m, 2H), 7,72-7,83 (m, 2H).
EKSEMPEL 38
HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z)
0,21 g (0,38 mmol) H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z) (se eksempel 37) ble oppløst i 2 ml etanol. 0,68 g (0,42 mmol) benzylakrylat ble tilsatt og oppløsningen ble omrørt i 5 dager. Inndampning og flashkromatografi med CH2Cl2/MeOH (95/5) som elueringsmiddel ga 0,19 g (70 %) av det ønskede produktet.
(ii) HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab x 2 HCI
170 mg (0,24 mmol) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z) ble oppløst i 10 ml etanol og hydrogenert i nærvær av 5 % Pd/C i 4 timer. Fjerning av katalystoren ved filtrering, inndampning av oppløsningsmidlet og frysetørking fra 1 M HCI og vann ga 103 mg (77 %) av produktet.
<i>H-NMR (300 MHz, D2O, blanding av 2 diastereomerer 4/5 og rotamerer): 5 0,92-2,03 (m, H), 2,51-2,78 (m, IH), 3,21-3,52 (m, IH), 3,88-4,01 (m, IH), 4,07-4,3 (m, 2H), 4,4-4,71 (m, 2H), 7,59 (d, 2H), 7,86 (d, 2H).
<l3>C NMR (300,13 MHz, D2O, blanding av 2 diastereomerer 4/5 og rotamerer): amidin-og karbonylkarboner: 5 167,0,168,0,168,1,175,9,176,0,176,3,176,4 og 178,2.
EKSEMPEL 39
HOOC-CH2-(R)Cha-Va]-Pab x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cha-Val-Pab(Z)
1,77 g (9,2 mmol) EDC ble tilsatt ved -12°C til en blanding av 3,41 g (9,2 mmol) Boc-(R)Cha-Val-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 2,61 g (9,2 mmol) H-Pab(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialer) og 4,5 g (36,8 mmol) DMAP i 50 ml DMF. Reaksjonsblandingen fikk nå romtemperatur natten over og opparbeidelse ved fortynning med vann ble fulgt av ekstraksjon med toluen, eter og etylacetat. Etterfølgende tørking (MgSC*4) av de kombinerte organiske ekstraktene, fjerning av oppløsningsmidlet i vakuum og flashkromatografi ved bruk av CH2Cl2/MeOH som elueringsmiddel ga 2,77 g (47 %) av det ønskede produktet.
(ii) H-(R)Cha-Val-Pab(Z)
Hydrogenklorid ble boblet gjennom en oppløsning av 2,77 g (4,4 mmol) Boc-(R)Cha-Val-Pab(Z) i 75 ml etylacetat. Etter 15 minutter ble natriumkarbonatoppløsning tilsatt til pH 10 og den vandige fasen ble ekstrahert med etylacetat. Tørking (kaliumkarbonat) og fjerning av oppløsningsmidlet i vakuum ga 1,8 g (77 %) av H-(R)Cha-Val-Pab(Z).
(iii) BnOOC-CH2-(R)Cha-Val-Pab(Z)
En blanding av 326 mg (0,61 mmol) H-(R)Cha-Val-Pab(Z), 105 ml (0,67 mmol) benzylbromacetat og 252 mg (1,83 mmol) kaliumkarbonat i 2 ml acetonitril ble sonikert 1 2,5 timer ved 40°C. Mer acetonitril ble tilsatt for å oppløse produktet og blandingen ble filtrert og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Resten ble renset ved flashkromatografi ved bruk av metanol/metylenklorid som elueringsmiddel. Produktet ble til slutt krystallisert fra etylacetat og dette ga 124 mg (30 %) av fargeløse krystaller.
(iv) HOOC-CH2-(R)-Cha-Val-Pab x 2 HCI
124 mg (0.18 mmol) BnOOC-CH2-(R)Cha-Val-Pab(Z) i 20 ml etanol ble hydrogenert i 2 timer i nærvær av 25 mg 10% Pd/C. 10 ml THF ble tilsatt og hydrogeneringen ble fortsatt i ytterligere 2 timer ved 50°C. Blandingen ble filtrert gjennom hyflo og filterkaken ble vasket med fortynnet saltsyre. De organiske oppløsningsmidlene ble fjernet
fra de kombinerte filtratene i vakuum. Frysetørking av den gjenværende oppløsningen ga 55 mg (50%) av den ønskede forbindelsen.
<i>H-NMR (500 MHz, D20); 8 0.75-1.4 (m, 12H), 1.5-1.9 (m, 7H), 2.0-2.15 (bs, IH), 3.45 (AB-system, 2H), 4.1 (m, 2H), 4.5 (m, 2H), 7.5 (s, 2H), 7.7 (s, 2H), 8.9 (s, IH).
EKSEMPEL 40
HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Val-Pab x 2 HCI
(i) H-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z)
Tittelforbindelsen ble fremstilt ved kobling av Boc-(R)Cha-Val-OH med H-Pab(Z) ved bruk av pivaloyl koblingen som beskrevet for Boc-(R)Cha-Pic-OMe (se fremstilling av utgangsmaterialer). En total epimerisering av valin oppsto hvilket ga Boc-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z). Den Boc-beskyttende gruppen ble fjernet på samme måte som beskrevet for Boc-(R)Cha-Val-Pab(Z) (se eksempel 39) hvilket ga tittelforbindelsen.
(ii) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z)
En oppløsning av 1.007 g (1.9 mmol) H-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z) og 308 mg (1.9 mmol) benzylakrylat i 3 ml etanol ble holdt ved 40°C natten over. Oppløsningsmiddelet ble fjernet i vakuum og resten ble renset ved flashkromatografi ved bruk av metanol/ metylenklorid (10/90) som elueringsmiddel og dette ga 1.086 g (82%) av tittelforbindelsen.
(iii) HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Val-Pab x 2 HCI
1.086 g (1.6 mmol) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z) ble hydrogenert i 25 ml THF og 14 ml 0.5 M saltsyre i nærvær av 223 mg 10% Pd/C i 2 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering gjennom celit og fjerning av THF i vakuum fulgt av frysetørking av den gjenværende vandige oppløsningen ga en rest på ca 300 mg som ble underkastet HPLC ved bruk av 25% acetonitril i 0.1 M ammoniumacetatbuffer som elueringsmiddel. To hovedfraksjoner ble isolert hvorav den andre fraksjonen inneholdt tittelforbindelsen. 67 mg tittel forbindelse som dihydrokloridet ble isolert.
<i>H-NMR (500 MHz, D20); 5 1.0-1.15 (m, 12H), 1.2-1.4 (m, 7H), 1.65-1.9 (m, 7H), 2.15-2.25 (m, IH), 2.85 (t, 2H), 3.15-3.2 (m, IH), 3.3-3.35 (m, IH), 4.15-4.2 (m, IH), 4.25 (d, IH), 4.55-4.65 (AB-system, 2H), 7.65 (d, 2H), 7.85 (d, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 167.0,169.8,173.96 og 174.04.
EKSEMPEL 41
H-(R)Hoc-Aze-Pab x 2 HCI
(i) Boc-(R)Hoc-Aze-Pab(Z)
Fremstilt på samme måte som beskrevet for Boc-(R)Cha-PicPab(Z) (se eksempel 25) ved å erstatte Boc-(R)Cha-Pic-OH med Boc-(R)Hoc-Aze-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer). Råproduktet ble underkastet flashkromatografi (toluen/EtOAc 1/6) og dette ga 0,32 G (37%) av det ønskede produktet.
(ii) H-(R)Hoc-Aze-Pab(Z)
Boc-(R)Hoc-Aze-Pab(Z) ble behandlet på samme måte som beskrevet for Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) i eksempel 25 for oppnåelse av 0.23 g (88%) av tittelforbindelsen.
(iii) H-(R)Hoc-Aze-Pab x 2 HCI
20 mg (0.037 mmol) av H-(R)Hoc-Aze-Pab(Z) ble oppløst i 3 ml etanol og hydrogenert i nærvær av 5% Pd/C i 4 timer ved atmosfæretrykk. Fjerning av katalysatoren ved filtrering, inndampning av oppløsningsmiddelet og frysetørking fra 1 M HCI ga 11 mg (63%) av produktet.
<i>H-NMR (300.13 MHz, D20, blanding av to rotamerer 3:1): hoved rotameter: 8 0.9-2.1 (m, 15H), 2.4-2.6 (m, IH), 2.7-3.0 (m, IH), 4.1-4.3 (m, IH), 4.35-4.56 (m, IH), 4.65 (s, 2H), 5.0-5.11 (m, IH), 7.62 (d, 2H), 7.9 (d, 2H). Signalet til et av protonene er fullstendig skjult av H-O-D-signalet.
EKSEMPEL 42
HOOC-CH2-CH2-(R)Hoc-Aze-Pab x 2 TFA
(i) BnOOC-CH2-CH2-(R)Hoc-Aze-Pab(Z)
0.067 g (0.41 mmol) benzylakrylat ble tilsatt til en oppløsning av 0,2 g (0.37 mmol) H-(R)Hoc-Aze-Pab(Z) (se eksempel 41) i 2 ml etanol (95%) ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble hensatt ved romtemperatur i 5 dager. Oppløsningsmiddelet ble fjernet i vakuum og resten ble renset ved flashkromatografi (CH2C12: MeOH, 96/4) for og dette ga 0,16 g (62%) av det ønskede produktet.
(ii) HOOC-CH2CH2-(R)Hoc-Aze-Pab x 2 TFA
160 mg (0.23 mmol) BnOOC-CH2-CH2-(R)Hoc-Aze-Pab(Z) ble oppløst i 10 ml etanol og underkastet hydrogenering ved atmosfæretrykk i nærvær av 5% Pd på trekull i 3 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtreringsinndampning av oppløsningsmiddelet og frysetørking fra vann og TFA ga 120 mg (87%) av produktet.
<*>H NMR (300.13 MHz, D20 2 rotamerer 3:1); hovedrotamer: 8 0.9-1.9 (m, 13H), 1.94-2.16 (m, 2H), 2.38-2.55 (m, IH), 2.7-2.97 (m, 3H), 3.2-3.44 (m, 2H), 4.16 (m, IH), 4.35-4.58 (m, 2H), 4.65 (s, 2H), 5.0-5.12 (m, IH), 7.63 (d, 2H), 7.87 (d, 2H)
<13>C NMR (300.13 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 167.3,168.7,172.5 og 176.6.
EKSEMPEL 43
HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Hoc-Pro-Pab x 2 HCI
(i) Boc-(R)Hoc-Pro-Pab-(Z)
Fremstilt fra Boc-(R)Hoc-Pro-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer) på samme måte som beskrevet for Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) i eksempel 25. Flashkromatografi ved bruk av etylacetat som elueringsmiddel ga 0.886 g (58%) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR. (300 MHz, CDCI3); 8 0.7-0.95 (m, 2H, 0.95-2.1 (m, 27H (derav 1.2 (s, 9H)), 2.1-2.4 (m, IH), 3.3-3.5 (m, IH), 3.65-3.95 (m, IH), 4.0-4.2 (m, IH), 4.2-4.45 (m, 2H), 4.45-4.6 (d, IH), 5.15 (tydelig bs, 2H), 5.2-5.3 (d, IH), 7.1-7.4 (m, 7H), 7.65 (m, IH), 7.7-7.8 (d, 2H), 9.4 (bs, IH).
<13>C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 8 156.3, 164.6, 168.1, 171.4 og 172.4.
(ii) H-(R)Hoc-Pro-Pab(2)
40 ml etylacetat mettet med hydrogenklorid ble tilsatt til 0.82 g (1,266 mmol) Boc-(R)Hoc-Pro-Pab(Z) ved 0°C. Temperaturen fikk stige til romtemperatur. Reaksjonen var ikke fullstendig etter 1,5 timer og derfor ble hydrogenklorid boblet gjennom reaksjonsblandingen i 5 minutter. Oppløsningsmiddelet ble inndampet og etylacetat og mettet natriumkarbonat ble tilsatt og fasene ble separert. Den organiske fasen ble vasket med saltoppløsning og tørket (Na2S04) og oppløsningsmiddelet inndampet i vakuum og dette ga tittelforbindelsen i nesten kvantitativt utbytte.
<i>H-NMR (300 MHz, CDCI3); 8 0.75-0.95 (m, 2H), 0.95-2.4 (m, 17H), 3.3-3.55 (m, 2H), 3.55-3.7 (m, IH), 4.25-4.45 (m, 2H), 4.5-4.6 (m, IH), 5.15 (s, 2H), 7.15.7.35 (m, 5H), 7.35-7.45 (m, 2H), 7.6-7.7 (m, IH), 7.7-7.85 (d, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 8 164.5,167-8,171.4 og 175.3.
(iii) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Hoc-Pro-Pab(Z)
Til 0.15 g (0.5 mmol) benzylakrylat i 1.5 ml EtOH (99%) bleO.273 g (0.498 mmol) H-(R)Hoc-Pro-Pab(Z) tilsatt og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 10 dager. Oppløsningsmiddelet ble fjernet i vakuum og resten ble underkastet flashkromatografi ved bruk av etylacetat som elueringsmiddel og dette ga 0,103 g (25%) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Hoc-Pro-Pab(Z).
<i>H-NMR (300 MHz, CDCI3); 8 0.75-2.05 (m, 18H), 2.3-2.45 (m, IH), 2.45-2.8 (m, 3H), 3.15-3.45 (m, 3H), 3.5-3.65 (m, IH), 4.3-4.5 (m, 2H), 4.55-4.7 (m, IH), 4.8 (s, IH), 4.9-5.1 (m, 3H), 5.2 (s, 2H), 7.1-7.2 (m, IH), 7.2-7.4 (m, 13H), 7.4-7.45 (d, 2H), 7.6-7.8 (m, 3H).
(iv) HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Hoc-Pro-Pab x 2 HCI
103 mg (0.122 mmol) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Hoc-Pro-Pab(Z) oppløst i 4 ml etanol (99.5%) og 0.3 ml kloroform ble hydrogenert i nærvær av 111 mg 5% Pd/C i 2 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering og inndampning av oppløsnings-middelet fulgt av oppløsning i vann og frysetørking viste ufullstendig hydrogenering. Hydrogeneringen ble fortsatt i nærvær av etanol, 1 N HCI og 5% Pd/C i 5 timer.
Fjerning av katalysatoren ved filtrering og inndampning av oppløsningsmiddelet fulgt av oppløsning i vann og frysetørking ga tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (500 MHz, CD3OD, blanding av to diastereomerer); 6 0.8-1.0 (m, 2H), 1.1-1.4 (m, 6H), 1.6-1.8 (m, 5H), 1.9-2.15 (m, 5H), 2.25-2.35 (m, IH), 2.9-3.2 (m, 2H), 3.5-3.65 (m, lh), 3.7-3.9 (2m, total IH), 4.15-4.4 (2m, total IH), 4.4-4.6 (m, 4H), 7.5-7.6 (m, 2H), 7.7-7.85 (m, 2H).
<13>C-NMR(75 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 8 167.9, 168.2, 168.3, 172.8,173.6,174.3 og 174.4. Signalene fra de to diastereomerene er delvis overlappende.
EKSEMPEL 44
HOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Pab x 2 HCI
(i) Boc-(R)Hoc-Pic-Pab(Z)
Fremstilt fra Boc-(R)Hoc-Pic-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer) og H-Pab(Z)
(se fremstilling av utgangsmaterialer) på samme måte som beskrevet for Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (se eksempel 25). Flashkromatografi ved bruk av etylacetat som elueringsmiddel ga 1,3 g (78%) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (300 MHz, CDCI3): 8 0.75-0.95 (m, 2H), 0.95-2.0 (m, 31H (derav 1.3 (s, 9H)), 2.4-2.5 (m, IH), 3.0-3.1 (m, IH), 3.8 (m, IH), 4.2-4.45 (m, 2H), 4.45-4.55 (m, 2H), 5.15 (tydelig bs, 3H), 5.25-5.3 (m, IH), 7.0 (bs, IH), 7.15-7.5 (m, 7H), 7.7-7.85 (d, 2H), 9.45 (bs, IH).
<13>C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 5 156.6,164.7,168.1, 170.0 og 173.0.
(ii) H-(R)Hoc-Pic-Pab(Z)
100 ml etylacetat mettet med hydrogenklorid ble tilsatt til 1.3 g (1.96 mmol) Boc-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) ved 0°C. Temperaturen fikk stige til romtemperatur. Oppløsnings-middelet ble inndampet etter 40 minutter og etylacetat og mettet natriumkarbonat ble tilsatt og fasene ble separert. Den organiske fasen ble vasket med saltoppløsning og tørket (Na2S04) og oppløsningsmiddelet inndampet i vakuum og dette ga 0.85 g (77.5%) av produktet.
<!>H-NMR (300 MHz, CDCI3): 5 0.75-0.95 (m, 2H), 1.05-2.03 (m, 25H), 3.0-3.15 (m, IH), 3.6-3.75 (m, 2H), 4.25-4.4 (m, 2H), 5.14 (tydelig bs, 3H), 7.05-7.2 (d, 2H), 7.2-7.35 (m, 4H), 7.35-7.4 (d, IH), 7.6-7.8 (d, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 6 164.5,167.9,170.8 og 175.7.
(iii) BnOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Pab(Z)
0.171 g (0.748 mmol) benzylbromacetat ble tilsatt til en blanding av 0.4 g (0.712 mmol) H-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) og 0.217 g (1.57 mmol) K2CO3 i 7 ml acetonitril. Blandingen ble oppvarmet til 60°C i et oljebad i 1 time. Oppløsningsmiddelet ble fjernet og etylacetat og vann ble tilsatt. Fasene ble separert og den organiske fasen ble vasket med saltopp-løsning og tørket (Na2S04). Inndampning i vakuum ga 0,026 g av en rest som ble underkastet flashkromatografi ved bruk av etylacetat som elueringsmiddel og dette ga to produkter. Den første forbindelsen som eluerte fra kolonnen var (BnOOC-CH2)2 (R)Hoc-Pic-Pab(Z) (0.28 g) og den andre forbindelsen som eluerte var tittelforbindelsen (0.27 g).
BnOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Pab(Z):
<l>H-NMR(300 MHz, CDCI3): 5 0.7-0.95 (m, 2H), 1.0-1.75 (m, 18H), 2.3-2.5 (m, 1 eller 2H), 2.9-3.05 (m, IH), 3.2-3.3 (m, IH), 3.35-3.5 (m, 2H), 3.6-3.7 (m, IH), 4.35-4.55 (ABX-system, 2H), 4.75 (s, 2H), 5.15 (tydelig s, 3H), 5.25-5.3 (m, IH), 7.1-7.45 (m, 12H), 7.7-7.8 (d, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 8 164.6,167.9,170.5, 173.4 og 175.0.
(iv) HOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Pab x 2 HCI
259 mg (0.365 mmol) BnOOC-CH2-(R)Hox-Pic-Pab(2) oppløst i 7.8 ml etanol (99.5%) og 1,2 ml hydrogenklorid (IN) ble hydrogenert i nærvær av 280 mg 5 % Pd/C i 4 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering og inndampning av oppløsningsmiddelet fulgt av oppløsning i vann og frysetørking ga 170 mg (83%) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (300 MHz, CDCI3): 8 0.4-1.85 (m, 20H), 1.85-2.2 (m, IH), 2.9-3.2 (m, IH), 3.4-3.9 (m, 3H), 4.05-4.3 (m, 2H), 4.3-5.05 (m, 2H), 7.1-7.4 (m, 2H), 7.4-7.7 (m, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 8 167.8,168.6,169.6 og 172.3.
EKSEMPEL 45
(HOOC-CH2)2-(R)Hoc-Pic-Pab x 2 HCI
(i) (BnOOC-CH2)2(R)Hoc-Pic-Pab(Z)
Tittelforbindelsen ble oppnådd i alkyleringen H-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) som beskrevet i ovenstående eksempel 44.
<X>H-NMR (300 MHz, CDCI3): 8 0.7-0.95 (m, 2H), 0.95-1.95 (m, 18H), 2.35-2.5 (m, IH), 2.9-3.05 (m, IH), 3.5-3.85 (m, 6H), 4.35-4.55 (m, 2H), 4.9 (2s, 4H), 5.2 (s, 2H), 5.25-5.35 (m, IH), 7.1-7.45 (m, 16H), 7.5-7.65 (m, IH), 7.7-7.85 (d, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 8 164.7,167.9, 170.5, 172.0 og 172.5.
(ii) (HOOC-CH2)2-(R)Hoc-Pic-Pab x 2 HCI
153 mg (0.178 mmol) (BnOOC-CH2)2"(R)Hoc-Pic-Pab(Z) oppløst i 4.5 ml etanoil (99.5%) og 0.5 ml hydrogenklorid (IN) ble hydrogenert i nærvær av 150 mg 5% Pd/C i
3,5 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering og inndampning av oppløsnings-middelet fulgt av oppløsning i vann og frysetørking ga 109 mg (99%) av (HOOC-CH2)2-(R)Hoc-Pic-Pab dihydroklorid. Dette råmaterialet (80% renhet) ble underkastet rensing ved RPLC ved bruk av CH3CN/O.I M NH4OAC, 1:4 som elueringsmiddel. Fjerning av oppløsningsmiddelet og overskudd NH4OAC fulgt av frysetørking fra 1 M HCI ga tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (500 MHz, D2O, blanding av to rotamerer): hovedrotamer: 8 0.95-2.15 (m, 20H), 2.25-2.35 (m, IH), 3.45-3.55 (m, IH), 3.95-4.25 (m, 5H), 4.6-4.65 (m, 2H), 4.92-5.01 (m, IH), 5.15-5.20 (m, IH), 7.58-7.63 (d, 2H), 7.84-7.89 (d, 2H).
Oppløste signaler som skriver seg fra den underordnede rotameren viser seg ved: 8 0.7-0-85 (m), 2.35-3.45 (m), 3.05-3.15 (m), 4.47-4.55 (m), 4.55-4.6 (m), 4.65-4.7 (m), 7.63-7.67 (d), 7-89-7.95 (d).
<13>C-NMR(75 MHz, D2O): amidin- og karbonylkarboner: 8 168.20,169.70,170.20 og 172.71.
EKSEMPEL 46
HOOC-CH2-(R)Pro(3-(S)ph)-Pro-Pab x 2 HCI
(i) Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z)
Til en oppløsning av 570 mg (1.5 mmol) Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 425 mg (1.5 mmol) H-Pab(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialer) og 733 mg (6 mmol) DMAP i 25 ml CH3CN/DMF (1.5/1) ble 310 mg (1.62 mmol) EDC tilsatt og blandingen ble omrørt i 23 timer ved romtemperatur. Mesteparten av oppløsningsmiddelet ble inndampet og 50 ml vann ble tilsatt til resten. Vannfasen ble ekstrahert med 1 x 75 og 2 x 50 ml EtOAc. Den kombinerte organiske fasen ble vasket med 1 x 20 + l x 10 ml IM KHSO4, 1 x 15 ml NaHC03 (vandig), 3 x 15 ml vann, 1 x 15 ml saltoppløsning og tørket (MgS04). Filtrering og inndampning av opp-løsningsmiddelet ga 670 mg av en olje som ble renset ved flashkromatografi ved bruk av EtOAc som elueringsmiddel hvilket ga 529 mg (55%) av tittelforbindelsen. <i>H-NMR (300 MHz, CDCI3): 5 1.26 (s, 9H), 1.53-1.88 (m, 3H), 2.1-2.31 (m, 3H), 2.52 (q, IH), 3.58-3.77 (m, 4H), 4.31 (d, IH), 4.35 og 4,47 (ABX-system, 2H), 4.65 (dd, IH), 5.19 (s, 2H), 7.1-7.37 (m, 10H), 7.42 (d, 2H), 7.81 (d, 2H), 8.0 (t, IH (NH)).
<13>C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 8 154.6, 164.6, 168.1, 171.1 og 171.3.
(ii) H-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z)
529 mg (0.81 mmol) av Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) ble oppløst i 15 ml EtOAc/ HCI (g, mettet) ved romtemperatur og omrørt i 3 timer. Oppløsningsmiddelet ble inndampet og resten ble oppløst i 70 ml CH2CI2. Den organiske fasen ble vasket med 1 x 10 ml 2 M NaOH, 1 x 10 ml vann, 1 x 10 ml saltoppløsning og tørket (MgS04). Filtrering og inndampning av oppløsningsmiddelet ga 403 mg (90%) av tittelforbindelsen som et hvitt pulver.
<i>H-NMR (300 MHz, CDCI3): 8 1.44-1.57 (m, IH), 1.62-1.86 (m, 2H), 1.96-2,35 (m, 3H), 2.45 (q, IH), 3.05-3.35 (m, 4H), 3.83 (bd, IH), 4.25-4.45 (m, 2H), 4.53 (m, IH), 5.19 (s, 2H), 7.16-7.37 (m, 10H), 7.42 (d, 2H), 7.66 (t, IH), (NH)), 7.77 (d, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 8 164.4,167.9,171.1 og 173.0.
(iii) BnOOC-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z)
En blanding av 200 mg (0.36 mmol) H-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z), 105 mg (0.46 mmol) Br-CH2-COOBn og 125 mg (0.90 mmol) K2CO3 i 10 ml CH3CN ble oppvarmet til 50°C i 1 time og 30 minutter. Oppløsningsmiddelet ble inndampet og resten ble oppløst i 70 ml EtOAc. Den organiske fasen ble vasket med 10 ml vann og tørket (MgS04). Filtrering og inndampning av oppløsningsmiddelet ga 260 mg av en olje. Råmaterialet ble renset ved flashkromatografi ved bruk av en trinnvis gradient av CH2Cl2/MeOH (NH3-mettet) (95/5 fulgt av 9/1) og dette ga 182 mg /72%) av tittelforbindelsen som et hvitt fast stoff.
<!>H-NMR (300 MHz, CDCI3): 8 1.43-1.82 (m, 3H), 1.96-2.13 (m, IH), 2.14-2.22 (m, IH), 2.26-2.43 (m, 2H), 3.02-3.14 (m, 2H), 3.24-3.51 (m, 4H), 3.83 (d, IH), 4.29-4.46
(ABX-system sentrert ved 4.37,2H), 4.58 (dd, IH), 4.97-5.1 (AB-system sentrert ved 5.03,2H), 5.19 (s, 2H), 7.16-7.38 (m, 15H), 7.43 (d, 2H), 7.5-7.8 (m, 3H, one NH).
<l>^C-NMR (75 HMz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 5 164.5,167.9, 171.15, 171.2 og 172.7.
(iv) HOOC-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab x 2 HCI
0.18 g (0.26 mmol) av BnOOC-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) ble blandet med 0.075 g 5% pD/C, 1.0 ml IN HCl-oppløsning, 1 ml vann og 10 ml etanol og blandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 1 time. Filtrering av katalysatoren gjennom hyflo, inndampning av oppløsningsmiddelet fulgt av frysetørking to ganger fra vann ga 129 mg av et råprodukt. Råproduktet ble renset ved RPLC ved bruk av en trinnvis gradient av 0,1 M NH4OAC/CH3CN 4/1 fulgt av 3/1. Inndampning fulgt av frysetørking fra vann og 1 N HCl-oppløsning ga 70 mg (50%) av det rene produktet.
<l>H-NMR(300 MHz, D20): 5 1.42-1.60 (m, IH), 1.65-1.83 (m, 1H)„ 1.83-1.98 (m, IH), 2.03-2.20 (m, 2H), 2.63 (t, 2H), 3.28-3.40 (m, IH), 3.55-3.78 (m, 2H), 3.81-3.96 (AB-system sentralt ved 8 3.88, 2H), 4.06-4.19 (m, IH), 4.37-4.61 (AB-system sentralt ved 8 4.49,2H), 4.48 (dd, IH), 4.70 (d, IH), 7.35-7.58 (m, 7H), 7.74 (d, 2H)
<13>C-NMR (75 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 8 167.02, 167.3,169.3 og 174.4.
EKSEMPEL 47
HOOC-CH2-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z)
Til en oppløsning av 190 mg (0.34 mmol) H-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) (se eksempel 46) i 7 ml EtOH (99%) ble tilsatt 114 mg (0.70 mmol) benzylakrylat og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 24 timer. Inndampning av oppløsningsmiddelet fulgt av flashkromatografi ved bruk av en trinnvis gradient av CH2Cl2/MeOH(NH3-mettet) (95/5 fulgt av 9/1) ga 202 mg (83%) av tittelforbindelsen. 1 H-NMR (300 MHz, CDC13): 8 1.5-1.71 (m, 2H), 1.74-1.9 (m, IH), 1.9-2.05 (m, IH), 2.2-2.64 (m, 5H), 2.69-2.82 (m, 2H), 2.84-2.96 (m, IH), 3.18-3.48 (m, 4h), 4.28-4.44 (m, 2H), 4.61 (m, IH), 4.48-5.08 (AB-system sentrert ved 5.03,2H), 5.19 (s, 2H), 7.15-7.37 (m, 15H), 7.44 (d, 2H), 7.75-7.85 (m, 3H, enNH).
<13>C-NMR (74 MHzm CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 8 164.6, 168.0,171.2, 172.5 og 172.9.
(ii) HOOC-CH2-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab x 2 HCI
0.20 g (0.28 mmol) BnOOC-CH2-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) ble blandet med
0.075 g 5% Pd/C, 1,0 ml IN HCl-oppløsning, 1 ml vann og 10 ml etanol og blandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 1 time. Filtrering av katalysatoren gjennom hyflo, inndampning av oppløsningsmiddelet fulgt av frysetørking to ganger fra vann ga 125 mg (79%) av tittelforbindelsen.
H-NMR (300 MHz, D20): 8 1.44 (m, IH), 1.65-1.9 (m, 2H), 2.0-2.2 (m, 2H), 2.62 (q, 2H), 2.83 (t, 2H), 3.27-3.4 (m, IH), 3.4-3.8 (m, 4H), 4.0-4,15 (m, IH), 4.35-4.6 (m, 3H), 4.68 (d, IH), 7.35-7.6 (m, 7H), 7.77 (d, 2H).
<13>c-NMR(75 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 8 166.2,167.1,174.1 og 174.2.
EKSEMPEL 48
HOOC-CH2-CH2-(R)Tic-Pro-Pab x 2 HCI
(i) Boc-(R)Tic-Pro-Pab(Z)
Fremstilt på samme måte som beskrevet for Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) (se eksempel 25) ved bruk av Boc-(R)Tic-Pro-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer) i stedenfor Boc-(R)Cha-Pic-OH. Flashkromatografi ved bruk av heptan/EtOAc (4/1) fulgt av EtOAc som elueringsmidler ga 425 mg (37%) av tittelforbindelsen. <1> H-NMR (500 MHz, CDCI3): 8 1.35 (s, 9H), 1.95-2.15 (m, 3H), 2.4 (m, IH), 2.8 (m, IH), 3.3 (m, IH), 3.55 (m, 2H), 4.25-4.4 (to m, 2H), 4.55-4.7 (to m, 2H), 7.15-7.5 (m, 10H), 7.85 (d, 2H).
<13>C-NMR (75.0 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 6 164.6,171.5 og 171.6.
(to topper er sannsynligvis overlappende).
(ii) H-(R)Tic-Pro-Pab(Z)
Boc-(R)Tic-Pro-Pab(Z) (379 mg, 0.59 mmol) ble oppløst i EtOAc mettet med HCI (g) og omrørt ved romtemperatur. Inndampning av oppløsningsmiddelet ga 251 mg (79%) av tittelforbindelsen som et hvitt pulver. 1 H-NMR (500 MHz, CDC13): 8 1.65-2.15 (to m, 7H), 2.45 (m, IH), 2.75 (ra, IH), 2.9 (m, IH), 3.0 (m, IH), 3.25 (m, IH), 3.55 (m, IH), 3.85 (m, IH), 4.35-4.55 (m, 2h), 4.75 (d, IH), 4.9 (s, IH), 5.25 (s, 2H), 6.8-7.45 (flere m, 8H), 7.5 og 7.85 (to d, 4H).
<13>C-NMR (75.0 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 8 164.5,171.3 og 172.7 (to topper er sannsynligvis overlappende).
(iii) Bn02C-CH2-CH2-(R)Tic-Pro-Pab(Z)
H-(R)Tic-Pro-Pab(Z) (140 mg, 0.26 mmol) ble behandlet med benzylakrylat (63 mg, 0.39 mmol) i EtOH (1.3 ml) ved 20°C i 48 timer. Inndampning av oppløsningsmiddelet og flashkromatografi ved bruk av (50% EtOAc/heptan deretter 10% MeOH/EtOAc) som elueringsmiddel ga 133 mg (73%) av det ønskede produkt som et hvitt fast materiale.
<!>h NMR (500 MHz, CDCI3): 8 1.75-2.0 (to m, 4H), 2.25 (m, IH), 1.4-1.65 (m, 3H), 2.7-2.95 (to m, 4H), 3.05-3.2 (m, 2H), 3.9 (m, IH), 4.45 (m, 2H), 4.65 (m, IH), 5.1 (to d, 2H), 5.25 (s, 2H), 6.85-7.45 (flere m, 12H), 7.5 og 7.9 (to d, 4H).
<13>C-NMR (75.0 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 8 171.5,171.9 og 172.1 (to topper er sannsynligvis overlappende).
(iv) HOOC-CH2-CH2-(R)Tic-Pro-Pab x 2 HCI
Bn02C-CH2-CH2-(R)Tic-Pro-Pab(Z) (125 mg, 0.17 mmol) ble hydrogenert over 5% Pd/C ved bruk av EtOH/HCl som oppløsningsmiddel. Filtrering av katalysatoren og frysetørking ga 73 mg (77%) av tittelforbindelsen som et hvitt pulver.
<l>H NMR (500 MHz, D20): 8 2.1-2.35 (to m, 3H), 2.6 (m, IH), 2.95-3.1 (m, 2H), 3.25-3.5 (to ra, 2H), 3.65 (ra, 3H), 4.65 (s, 2H), 4.75 (m, IH), 5.85 (s, IH), 7.15-7.6 (tre ra, 4H), 7.6 og 7.85 (to d, 4H).
<13>C-NMR (75.0 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 166.9,167.1 og 174.3 (to topper er sannsynligvis overlappende).
EKSEMPEL 49
HOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Aze-Pig x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pig(Z)2
Til en blanding av 0.623 g (1.83 mmol) Boc-(R)Cgl-Aze-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 0.816 g (1,92 mmol) H-Pig(Z)2 (se fremstilling av utgangsmaterialer) og 0.89 g (7.3 mmol) DMAP i 10 ml diklormetan ble det tilsatt 0.368 g (1.92 mmol) EDC og blandingen ble omrørt natten over. Blandingen ble fortynnet og vasket med 0.3 M KHSO4 og en gang med saltoppløsning. Det organiske laget ble tørket (Na2S04), filtrert og inndampet og dette ga 1,4 g av et råprodukt. Rensing ved flashkromatografi ved bruk av etylacetat som elueringsmiddel ga 0,3 g (22%) av det rene produktet.
(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pig(Z)2
0.3 g (0.4 mmol) Boc-(R)Cgl-Aze-Pig(Z)2 ble blandet med 10 ml diklormetan og 2,5 ml trifluoreddiksyre. Blandingen ble omrørt i 1,5 time. Etter inndampning av oppløsnings-middelet ble resten oppløst i diklormetan og vasket to ganger med 0,2 M NaOH-oppløsning. Det kombinerte vannlaget ble ekstrahert en gang til med diklormetan. Det kombinerte organiske laget ble tørket (Na2S04), filtrert og inndampet og dette ga 0,24 g (93%) av produktet. 1 H-NMR (300 MHz, CDCI3, 339K): 8 0.9-1.9 (m, 15H), 1.94 (bd, IH), 2.37-2.52 (m, IH), 2.65-2.8 (m, IH), 2.9-3.08 (m, 3H), 3.20 (t, 2h), 4.05-4.28 (m, 4H), 4.86 (dd, IH), 5.16 (s, 4H), 7.2-7.42 (ra, 10H), 7.98 (bs, NH).
(iii) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Aze-Pig(Z)2
0.231 g (0.36 mmol) ble oppløst i 2 ml etanol og 61 ul (0.40 mmol) benzylakrylat ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 5 dager ved romtemperatur. Blandingen ble inndampet og råproduktet renset ved flashkromatografi ved bruk av en trinnvis gradient av CH2Cl2/MeOH (95/5,90/10) som elueringsmiddel og dette ga 0,218 g (75%) av det rene produktet.
1 H-NMR (300 MHz, CDC13,335K): 8 0.93 (bq, IH), 1.02-1.85 (m, 14H), 1.94 (bd, IH), 2.33-2.5 (m, 3H), 2.58-2.77 (m, 2H), 2.79-3.02 (m, 4H), 3.17 (t, 2H), 4.0-4.25 (m, 4H), 4.86 (dd, IH), 5.11 (s, 2H), 5.12 (s, 4H), 7.2-7.4 (m, 15H), 8.03 (bs, NH), 10.35
(bs, NH)
(iv) HOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Aze-Pig x 2 HCI
0.218 g (0.27 mmol) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Aze-Pig(Z)2 ble blandet med 0.10 g 5% Pd/C, lml IM HCl-oppløsning, 1 ml vann og 10 ml etanol og blandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 1 time. Filtrering av katalysatoren gjennom hyflo, inndampning av oppløsningsmiddelet fulgt av frysetørking to ganger fra vann ga 134 mg (95%) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (300 MHz, D20): 8 1.0-1.4 (m, 7H), 1.55-2.05 (m, 9H), 2.22-2.34 (m, IH), 2.61-2.76 (m, IH), 2.88 (t, 2H), 3.08 (bt, 2H), 3.19 (d, 2H), 3.34 (m, 2H), 3.83 (bd, 2H), 3.95 (d, IH), 4.29-4.49 (m, 2H), 4.90 (dd, IH)
<13>C-NMR (75 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 156.4, 167.6, 172.1 og 174.7.
EKSEMPEL 50
HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2
0.568 g (2.96 mmol) EDC ble tilsatt ved -15°C til en blanding av 1 g (2.82 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 1.197 g (2.82 mmol) H-Pig(Z)2 (se fremstilling av utgangsmaterialer) og 1.38 g (11.28 mmol) DMAP i acetonitril.
Temperaturen fikk stige til romtemperatur natten over. Oppløsningsmiddelet ble inndampet i vakuum og metylenklorid og 1 M KHSO4 ble tilsatt. Fasene ble separert og den organiske fasen ble vasket med mettet NaHC03, vann og saltoppløsning, hvoretter tørking (Na2S04) og inndampning av oppløsningsmidlene ga 2,033 g av en rest som ble underkastet flashkromatografi ved bruk av etylacetat som elueringsmiddel. Dette ga to produkter: 720 mg (34%) av tittelforbindelsen som eluerte først fra kolonnen fulgt av 775 mg (44%) Boc-(R)Cgl-Pro-Pig(Z) dannet ved tap av en av Z-beskyttelsesgruppene.
<i>H-NMR (300 MHz, CDCI3); noen signaler, spesielt i piperidinringen, er selektivt bredere på grunn av en intramolekylær utvekslingsprosess. Dette er spesielt utpreget for 2- og 6-CH2 gruppene i piperidinringen, som viser en bred topp varierende fra 3,5 til 4,5 ppm. 5 0.85-2.1 (m, 19H), 2.3-2.45 (m, IH), 2.8-3.2 (m, 4H), 3.45-3.55 (m, IH), 3.55-3.65 (m, underordnet rotamer), 3.8-3.93 (m, IH), 3.97-4.1 (m, IH), 4.52-4.62 (d, IH), 5.1 (tydelig bs, 5H), 7.12-7.41 (m, 10H).
13ONMR (75 MHz, CDCI3): amidin- og karbonylkarboner: 6 155.2,156.3,171.0 og 172.1.
(ii) H-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2
720 mg (0.946 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2 ble oppløst i 35 ml TFA/CH2CI2.1/4 og omrørt i 30 minutter. Oppløsningsmiddelet ble fjernet i vakuum og etylacetat og 2M NaOH ble tilsatt. Det organiske laget ble vasket med vann og saltoppløsning, tørket (Na2S04) og oppløsningsmiddelet ble inndampet i vakuum og dette ga tittelforbindelsen i kvantitativt utbytte.
^-NMR (300 MHz, CDCI3); noen signaler, spesielt i piperidinringen, er selektivt bredere på grunn av en intramolekylær utvekslingsprosess. Dette er spesielt utpreget for 2- og 6-CH2 gruppene i piperidinringen, som viser en bred topp varierende fra 3.5 til 4.5 ppm. 8 0.8-2.15 (m, 19H), 2.22-2.4 (m, IH), 2.75-2.98 (m, 2H), 2.98-3.18 (m, 2H), 3.18-3.35 (m, IH), 3.35-3.5 (kvart., IH), 3.5-3.7 (m, IH), 4.42-4.58 (d, IH), 5.1 (s, 4H), 7.1-7.5 (m, 10H).
<13>C-NMR (75 MHz, CDC13): amidin- og karbonylkarboner; 6 154.96, 171.31,174.82.
(iii) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2
0.298 g (0.999 mol) BnOOC-CH2-OTf (se fremstilling av utgangsmaterialer) ble tilsatt til en blanding av 0.64 g (0.999 mmol) H-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2 og 0.531 g (2.996 mmol) K2CO3 i 6.4 ml acetonitril og oppvarmet til tilbakeløp. Etter 1 time og 20 minutter ble blandingen vasket med vann, tørket (Na2S04) og oppløsningsmiddelet inndampet i vakuum og dette ga 729 mg av en rest som ble underkastet flashkromatografi ved bruk av etylacetat som elueringsmiddel. Dette ga to produkter: 120 mg av (BnOOC-CH2)2_
(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2 som eluerte først fra kolonnen og 142 mg (18%) av tittelforbindelsen. 1 H-NMR (300 MHz, CDCI3); noen signaler, spesielt i piperidinringen, er selektivt bredere på grunn av en intramolekylær utvekslingsprosess. Dette er spesielt utpreget for 2- og 6-CH2 gruppene i piperidinringen, som utviser en bred topp varierende fra 3.5 til 4.6 ppm. 8 0.94-2.27 (m, 19H), 2.28-2.43 (m, IH), 2.8-2.98 (m, 2H), 2.98-3.06 (m, IH), 3.06-3.15 (d, IH), 3.15-3.25 (m, IH), 3.3-3.5 (m, 4H), 4.5-4.61 (d, IH), 5.1 (s, 6H), 7.1-7.6 (m, 15H), 10.52 (bs, IH).
(iv) HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig x 2 HCI
142 mg (0.176 mmol) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2 ble hydrogenert i nærvær av 0.88 ml 1 M saltsyre, 10 ml etanol (99.5%) og 180 mg 5% Pd/C i 2 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering på hyflo og millipor filter fulgt av inndampning av oppløs-ningsmiddel i vakuum og frysetørking ga 95 mg HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig x 2 HCI. Dette råmaterialet (79% renhet) ble renset på RPLC ved bruk av CH3CN/O.I M NH4OAC 15/85 som elueringsmiddel. Fjerning av oppløsningsmiddelet og overskudd NH4OAC ved frysetørking, omdannelse til saltsyresalt ved oppløsning i 1 M saltsyre fulgt av frysetørking ga tittelforbindelsen. 1 H-NMR (500 MHz, D20); 8 1.1-1.35 (m, 6H), 1.63-2.14 (m, 13H), 2.26-2.36 (m, IH), 3.01-3.23 (m, 4H), 3.49-3.62 (kvart., 2H), 3.62-3.77 (m, 2H), 3.77-3.88 (tydelig d, 2H), 4.18-4.32 (d, IH), 4.37-4.5 (m, IH).
EKSEMPEL 51
H-(R)Cha-Aze-Pig x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cha-Aze-Pig(Z)2
Til en godt omrørt blanding av 86 mg (0.243 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 100 mg (0.236 mmol) H-Pig(Z)2 (se fremstilling av utgangsmaterialer) og 115 mg (0.944 mmol) i DMAP i 5 ml CH3CN ble 50 mg (0.260 mmol) EDC tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt i 20 timer ved romtemperatur. Oppløsningsmiddelet ble inndampet og resten ble oppløst i 70 ml EtOAc og den organiske fasen ble vasket med 3 x 5 ml 1 M KHS04,1 x 5 ml NaHC03,3 x 5 ml H20,1 x. 5 ml saltoppløsning og tørket (MgS04). Filtrering og inndampning av oppløsningsmiddelet ga 141 mg av en olje. Råproduktet ble renset ved flashkromatografi (36 g Si02) ved bruk av en trinnvis gradient av CH2Cl2/MeOH (97/3 fulgt av 95/5) og dette ga 43 mg (24%) av tittelforbindelsen.
(ii) H-(R)Cha-Aze-Pig(Z)2
Hydrogenklorid ble boblet gjennom en blanding av 43 mg (0.0565 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-Pig(Z)2 i 10 ml etylacetat i løpet av 5 minutter. Oppløsningsmiddelet ble inndampet i vakuum og etylacetat og 0,1 M NaOH-oppløsning ble tilsatt. Fasene ble separert og den organiske fasen ble vasket med vann og saltoppløsning og tørket (Na2S04). Oppløsningsmiddelet ble inndampet og dette ga 38 mg som ble underkastet flashkromatografi ved bruk av 10% NH3-mettet metanol i etylacetat som elueringsmiddel og dette ga 28 mg av det ønskede produktet. 1 H-NMR (300 MHz, CDCI3); noen signaler, spesielt i piperidinringen, er selektivt bredere på grunn av en intramolekylær utvekslingsprosess. Dette er spesielt utpreget for 2- og 6-CH2 gruppene i piperidinringen som viser en bred topp varierende fra 3.7 til 4.5 ppm. 8 0.75-1.85 (m, 18H), 2.35-2.53 (m, IH), 2.62-2.78 (m, IH), 2.8-3.0 (m, 2H), 3.0-3.28 (m, 2H), 3.28-3.37 (m, IH), 3.97-4.19 (m, 2H), 4.8-4.9 (m, IH), 5.1 (s, 4H), 7.2-7.45 (m,9H), 8.05-8.15 (m, IH).
(iii) H-(R)Cha-Aze-Pig x 2 HCI
28 mg (0.042 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pig(Z)2 oppløst i 2 ml etanol (99.5%) og 0.13 ml hydrogenklorid (1 N) ble hydrogenert i nærvær av 35 mg 5% Pd/C i 4 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering og inndampning i vakuum av oppløsningsmiddelet fulgt av oppløsning i vann og frysetørking ga 12 mg (60%) H-(R)Cha-Aze-Pig dihydroklorid. 1 H-NMR (500 MHz, 300 K, CD3OD); noen signaler, spesielt i piperidinringen er selektivt bredere på grunn av en intramolekylær utvekslingsprosess. Dette er spesielt utpreget for 2- og 6-CH2 gruppene i piperidinringen som viser en bred topp varierende fra 3.7 til 4.5 ppm. 8 0.75-2.1 (m, 18H), 2.2-2.35 (m, IH), 2.62-2.75 (m, IH), 3.0-3.12 (t, 2H), 3.12-3.23 (d, 2H), 3.85-3.95 (d, 2H), 3.95-4.0 (dd, IH), 4.15-4.23 (m, IH), 4.35-4.42 (m, IH), 4.72-4.78 (m, IH).
<13>C-NMR(75 MHz, CD3OD): guanidin: 8 157.6; karbonylkarboner: 8 170.0 og 172.6.
EKSEMPEL 52
HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pac x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pac(Z)
Til en oppløsning av 0.47 g (1.4 mmol) Boc-(R)Cgl-Aze-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 0.40 g (1.4 mmol) H-Pac(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialer) og 0.67 g (5.5 mmol) DMAP i 5 ml acetonitril ble 0.27g EDC tilsatt ved 0°C. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over og deretter fortynnet med etylacetat. Oppløsningen ble vasket med KHSO4 (vandig) og NaHC03 (vandig), tørket (Na2S04), filtrert og inndampet. Flashkromatografi ved bruk av etylacetat fulgt av etylacetat/ metanol 98/2 som elueringsmidler ga 0.25 g (30%) av tittelforbindelsen som en blanding av 1,4-cis- og- trans-produkter i forhold til molekylets Pac-del. 1 H-NMR (500 MHz, CDCI3): 8 0.8-2.0 (m, 29H; derav 1.45 (s, 9H)), 2.15 og 2.34 (m, IH, isomerer), 2.45-2.7 (m, 2H), 3.0-3.4 (m, 2H), 3.85 (m, IH), 4.14 (m, IH), 4.33 (m, IH), 4.85 (m, IH), 4.98 (m, IH), 5.04 (s, 2H), 7.25-7.45 (m, 5H), 7.8-7.9 (m, IH), 9.2-9.5 (m, IH).
(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pac(Z) x HCI
Boc-(R)Cgl-Aze-Pac(Z), 0.25 g (0.41 mmol), ble oppløst i 100 ml etylacetat og avkjølt i et isbad. HCI (g) ble boblet gjennom i 5 minutter og oppløsningsmiddelet ble inndampet.
<i>H-NMR (300 MHz, MeOD): 6 0.8-2.0 (m, 22H), 2.05-2.35 (m, IH), 2.4-2.55 (m, IH), 2.6-2.75 (M, IH), 3.00 (d, IH), 3.05 og 3.37 (multiplets, 0.6 H og 0.4 H respektivt, isomerer), 3.15-3.3 (m, IH), 4.05-4.2 (m, 2H), 4.88 (dd, IH), 5.11 (s, 2H), 7.2-7.45 (m, 5H), 8.0-8.15 (m, IH).
(iii) Bn02C-CH2-(R)Cgl-Aze-Pac(Z)
En blanding av 0.17 g (0.33 mmol) H-(R)-Cgl-Aze-Pac(Z) x HCI, 0.11 g (0.37 mmol) benzyltriflyloksyacetat og 0.14 g (1.0 mmol) K2CO3 i 5 ml acetonitril ble omrørt ved romtemperatur i 3 dager. Råmaterialet ble flashkromatografert med EtOAc/CH2Cl2/ MeOH 95/20/5. Utbytte: 70 mg (32%). 1 H-NMR (500 MHz, CDCI3): 8 0.85-2.3 (m, 20H), 2.48 (m, IH), 2.63 (m, IH), 2.87 (m, IH), 3.05-3.25 (m, IH), 3.25-3.35 (m, 2H), 3.38 (dd, IK), 3.95 (m, IH), 4.08 (m, IH), 4.88 (m, IH), 5.1-5.2 (m, 4H), 5.9-6.3 (m, IH), 7.25-7.5 (m, 10H), 8.00 og 8.08 (brede triplets, IH, isomerer).
(iv) H02C-CH2-(R)Cgl-Aze-Pac x 2 HCI
Bn02C-CH2-(R)Cgl-Aze-Pac(Z), 70 mg (0.11 mmol), ble oppløst i 5 ml etanol, og 5% Pd/C og 0.1 ml kons. HCI ble tilsatt. Blandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 1 time. Etter filtrering og inndampning ble produktet renset ved preparativ RPLC ved bruk av 0.1 M NH4OAC/CH3CN 4/1 som elueringsmiddel. Etter endring av salt til hydrokloridet og frysetørking ble tittelforbindelsen oppnådd som en 45/55-blanding av 1,4-cis- og- trans-isomerer i forhold til molekylets Pac-del. Utbytte: 40 mg (74%).
<i>H-NMR (500 MHz, D20) 8 1.1-2.1 (m, 20H), 2.32 (m, IH), 2.52 (m, IH), 2.63 (m, IH), 2.72 (m, IH), 3.1-3.3 (m, IH), 3.40 (m, IH), 3.8-3.95 (m, 2H), 4.04 (d, IH), 4.39 (m, IH), 4.93 (m, IH).
<13>C-NMR (125 MHz, D2O) amidin- og karbonylkarboner: 5 167.7, 172.0, 174.9 og 175.2.
EKSEMPEL 53
H-(R)Cha-Pro-Pac x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cha-Pro-Pac(Z)
211 mg (1.1 mmol) EDC ble tilsatt ved 0°C til en omrørt oppløsning av 0,4 g (1.1 mmol) H-Pac(Z) x 2 HCI (se fremstilling av utgangsmaterialer), 0.4 g (1.1 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 0.55 g DMAP i 7 ml acetonitril. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 1 time og ved romtemperatur i 2 timer. Opp-løsningsmiddelet ble fjernet i vakuum og resten ble fortynnet med etylacetat og vann. Den organiske fasen ble vasket med eddiksyre, vann og natriumhydrogenkarbonatopp-løsning og tørket (MgS04). Fjerning av oppløsningsmiddelet i vakuum ga en rest som ble renset ved flashkromatografi ved bruk av etylacetat som elueringsmiddel og dette ga 196 mg (27%) av tittelforbindelsen.
(ii) H-(R)Cha-Pro-Pac(Z)
Hydrogenklorid ble boblet gjennom en oppløsning av 196 mg Boc-(R)Cha-Pro-Pac(Z) i 25 ml etylacetat. Etter 10 minutter ble reaksjonsblandingen fortynnet med metylenklorid og natriumhydroksyd oppløsning ble tilsatt. Den vandige fasen ble ekstrahert flere ganger med metylenklorid og de kombinerte organiske fasene ble tørket (K2CO3) og oppløsningsmiddelet ble fjernet i vakuum og dette ga 86 mg (52%) av tittelforbindelsen.
(iii) H-(R)Cha-Pro-Pac x 2 HCI
Tittelforbindelsen ble fremstilt ved hydrogenering av H-(R)Cha-Pro-Pac(Z) i etanol i nærvær av 10% Pd/C.
H-NMR (300 MHz, D20; A ca: 1:1 blanding av 1,4-cis- og 1,4-trans isomerer i Pac-delen av molekylet); 8 1.15-1.3 (q), 1.6-1.85 (m), 1.9-2.0 (m), 2.0-2.1 (d), 2.1-2.15 (m), 2.15-2.2 (m), 2.65-2.7 (m), 2.7-2.8 (m), 2.95-3.0 (d), 3.15-3.2 (d), 5.4 (s), 7.45-7.55 (m).
EKSEMPEL 54
H-(R)Cgl-Ile-Pab x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cgl-Ile-Pab(Z)
Til en omrørt blanding av 1.33 g (3.6 mmol) Boc-(R)Cgl-Ile-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 1.12 g (3.9 mmol) H-Pab(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialer) og 1.76 g (14.4 mmol) DMAP i 50 ml CH3CN/DMF (1/1) ble det tilsatt 0.75 g (3.9 mmol) EDC ved +5°C. Reaksjonsblandingen fikk nå romtemperatur og ble hensatt i 60 timer. CH3CN ble fjernet ved inndampning og resten ble helt i 100 ml vann (et gult bunnfall ble dannet). Blandingen ble ekstrahert med 2 x 50 ml EtOAc og den kombinerte organiske fasen ble vasket med 2 x 30 ml NaHC03 (mettet), 2 x 50 ml 0.2 M HCI, 1 x 50 ml saltoppløsning og tørket (MgS04). Inndampning fulgt av flashkromatografi ved bruk av CH2CI2/THF (85/15) som elueringsmiddel ga 510 mg (24%) av tittelforbindelsen.
(ii) H-(R)Cgl-Ile-Pab(Z)
530 mg Boc-(R)Cgl-Ile-Pab(Z) ble oppløst i 14 ml CH2CI2/TFA (2.5/1) og omrørt i 2 timer ved romtemperatur. Inndampning av oppløsningsmiddelet fulgt av flashkromatografi ved bruk av CH2Cl2/MeOH(NH3-mettet) (95/5) som elueringsmiddel ga tittelforbindelsen).
(iii) H-(R)Cgl-Ile-Pab x 2 HCI
75 mg (0.14 mmol) H-(R)Cgl-Ile-Pab(Z) ble hydrogenert over 10% Pd/C i 5 ml EtOH, som inneholdt et overskudd HCl(g) til oppnåelse av dihydrokloridet, ved atmosfæretrykk i 6 timer. Tilsetning av 2 g aktivert trekull og 20 ml EtOH fulgt av filtrering gjennom celit, inndampning av oppløsningsmiddelet og frysetørking fra vann ga 50 mg (89%) av tittelforbindelsen som et hvitt pulver.
<!>h-NMR (500 MHz, MeOD): 8 0.90 (t, 3H), 0.94 (d, 3H), 1.1-2.0 (m, 14H), 3.83 (bs, IH), 4.26 (d, IH), 4.50 (m, 2H), 7.57 (bd, 2H), 7.78 (bd, 2H).
EKSEMPEL 55
H-(R)Cgl-Aze-Pab
Hydrogenering av 257 mg (5.08 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) (se eksempel 1 (ii)) over 5% Pd/C i 6 ml EtOH/H20 ved atmosfæretrykk i 6 timer fulgt av filtrering av katalysatoren, inndampning av oppløsningsmiddelet og frysetørking fra vann ga 200 mg (89%) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (500 MHz, D20): 8 1.0-2.0 (m, 1 IH), 2.25 (m, IH), 2.70 (m, IH), 3.30 (m, IH), 3.75 (m, IH), 4.30 (m, IH), 4.45 (m, IH), 4.55 (m, 2H), 7.60 (m, 2H), 7.77 (m, 2H).
MS m/z 372 (M++1).
EKSEMPEL 56
HOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab x HOAc
(i) BnOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab(Z)
0.250 g (0.47 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z) (se eksempel 15) oppløst i 5 ml CH2CI2 ble avkjølt til -10°C og 150 mg (0.48 mmol) TfOCH2COOBn (se fremstilling av utgangsmaterialer) oppløst i 3 ml CH2CI2 ble langsomt tilsatt. 200 mg (1.45 mmol) kaliumkarbonat ble tilsatt og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 20 timer. Blandingen ble fortynnet med CH2CI2, ekstrahert med vann og tørket (MgS04). Inndampning av oppløsningsmiddelet fulgt av flashkromatografi ved bruk av CH2Cl2/MeOH 9/1 som elueringsmiddel ga 150 mg (46%) av tittelforbindelsen.
(ii) HOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab x HOAc
150 mg (0,2 mmol) BnOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab(Z) ble hydrogenert over 50 mg 5 % Pd/C i 20 ml EtOH ved atmosfæretrykk i 4 timer. Filtrering av katalysatoren, inndampning av oppløsningsmiddelet fulgt av rensing ved RPLC ved bruk av CH3CN/0.I M NH4OAC 1/4 som elueringsmiddel ga 35 mg (37%) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (500 MHz, MeOD): 8 1.00 (m, IH), 1.20-1.45 (m, 5H), 1.5 (m, IH), 1.6-1.8 (m, 6H), 1.9-2.1 (m, 6H), 2.25 (m, IH), 3.25 (m, IH), 3.5 (m, IH), 3.85 (m, IH), 4.15 (m, IH), 4.35-4.6 (m, 3H), 4.9 (m, delvis skjult av HOD-linjen, 6H), 7.55 (d, 2H), 7.75 (d,2H).
EKSEMPEL 57
MeOOC-CH2-(R)CgJ-Aze-Pab x 2 HCI
(i) MeOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
0.186 g (0.841 mmol) TfO-CH2-COOMe (se fremstilling av utgangsmaterialer) ble opp-løst i CH2CI2 og langsomt tilsatt til en blanding av 0.425 g (0.841 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) (se eksempel 1), 0.894 g (5,04 mmol) K2CO3 i CH2CI2 (totalt 4.3 ml) ved romtemperatur, og omrørt natten over. Mer CH2CI2 ble tilsatt og blandingen ble vasket med vann og saltoppløsning, tørket, filtrert og oppløsningsmiddelet ble inndampet i vakuum og dette ga 0.51 g av en rest som tre ganger ble underkastet flashkromatografi på silisiumdioksydgel ved bruk først av CH2Cl2/THF/MeOH (16/4/1), deretter CH2CI2/THF (2%NH3) (8/2) og til slutt dietyleter/MeOH (NH3-mettet) (95/5) som elueringsmiddel. Dette ga 0.324 g (67%) av tittelforbindelsen.
(ii) MeOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HCI
220 mg (0,38 mmol) MeOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) ble hydrogenert i nærvær av 1.14 ml 1 N HCI, 6.5 ml MeOH og 300 mg Pd/C i 2 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering på celit og milliporefilter fulgt av inndampning av oppløsningsmiddelet i vakuum og frysetørking to ganger ga 178 mg (91%) av tittelforbindelsen.
<l>H-NMR(500MHz, D20); 8 1.12-1.4 (m, 5H), 1.68-1.81 (m, 2H), 1.81-1.9 (m, 3H), 1.97-2.1 (m, IH), 2.29-2.4 (m, IH), 2.68-2.8 (m, IH), 3.86 (s, 3H), 4.1 (s, 2H), 4.1-4,5 (d, IH), 4.36-4.42 (t, 2H), 4.59 (s, 2H), 4.99-5.04 (m, IH), 7.65-7.7 (d, 2H), 7.8-7.85 (d, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, MeOD): amidin- og karbonylkarboner; 8 146.78, 167.68,168.15, 172.29.
EKSEMPEL 58
EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HCI
(i) EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
0.208 g (0.876 mmol) TfO-CH2-COOEt (se fremstilling av utgangsmaterialer) ble oppløst i CH2C12 og langsomt tilsatt til en blanding av 0.443 g (0.876 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) (se eksempel 1) og 0.93lg (5.26 mmol) K2C03 i CH2C12 (totalt 4 ml) avkjølt på et isbad. Etter 2 timer ble isbadet fjernet og omrøring ble fortsatt ved romtemperatur i 2 timer. Mer CH2C12 ble tilsatt og blandingen ble vasket med vann og
saltoppløsning, tørket, filtrert og oppløsningsmiddelet ble inndampet i vakuum og dette ga 0,51 g av en rest som ble underkastet flashkromatografi ved bruk av dietyleter/MeOH (NH3-mettet) (95/5) som elueringsmiddel. Dette ga 0.387 g (75%) av tittelforbindelsen.
(ii) EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HCI
395 mg (0.668 mmol) EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) ble hydrogenert i nærvær av 12 ml EtOH (99.5%) og 390 mg Pd/C i 5 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering på celit og millipore filter, fulgt av inndampning av oppløsningsmiddelet i vakuum og frysetørking to ganger ga 281 mg (88%) EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab. 2 ekvivalenter av 1 N HCI ble tilsatt og frysetørking tre ganger ga 288 mg (81%) av tittelforbindelsen. 1 H-NMR (500 MHz, D20); 5 1.05-1.48 (m, 8H), 1.6-2.05 (m, 6H), 2.15-2.33 (m, IH), 2.58-2.79 (m, IH), 3.89-4.0 (m, 3H), 4.2-4.33 (m, 3H), 4.33-4.44 (m, IH), 4.44-4.66 (m, 2H), 4.91 (m, IH), delvis skjult av H-O-D-signalet)), 7.54-7.63 (d, 2H), 7.72-7.84 (d, 2H).
EKSEMPEL 59
<n>BuOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab x HOAc
(i) <O>BuOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
Fremstilt på samme måte som beskrevet for <n>HexOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) (se eksempel 60 (i)) ved bruk av TfO-CH2-COO<n>Bu som alkyleringsmiddel. Råproduktet ble renset ved flashkromatografi to ganger, først ved bruk av CH2Cl2/MeOH (95/1) som elueringsmiddel og deretter CH2Cl2/i-propylalkohol (90/7) og dette ga 324 mg (47%) av tittelforbindelsen.
(ii) <n>BuOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab x HOAc
Fjerning av beskyttelse ble foretatt ifølge den prosedyre som er beskrevet i eksempel 57 (ii). Råmaterialet ble renset på RPLC ved bruk av CH3CN (30%) i 0.05 M NH4OAC og 0.05 M HOAc som elueringsmiddel og dette ga 100 mg (53%) av tittelforbindelsen. 1 H-NMR (300 MHz, MeOD); 6 0.85-2.1 (m, 18H), 2.15-2.37 (m, IH), 2.58-2.8 (m, IH), 3.7-5.0 (m, 10H), 4.88-5.0 (delvis skjult av H-O-D-signalet)), 7.46-7.65 (d, 2H), 7.71-7.88 (d, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, MeOD): amidin- og karbonylkarboner; 8 146.8,168.12,168.2, 172.2.
EKSEMPEL 60
<n>HexOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HCI
(i) <n>HexOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
0.402 g (1.375 mmol) TfO-CH2-COO<n>Hex (se fremstilling av utgangsmaterialer) ble oppløst i CH2CI2 og langsomt tilsatt til en blanding av 0.695 g (1.375 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) (se eksempel 1), 1.463 g (8.25 mmol) K2CO3 i CH2CI2 (totalt 4 ml) ved
<-10°C. Etter 1 time ble C02-isbadet fjernet og omrøring ble fortsatt ved romtemperatur i 45 minutter. Mer CH2CI2 ble tilsatt og blandingen ble vasket med vann og saltoppløs-ning, tørket, filtrert og oppløsningsmiddelet ble inndampet i vakuum og dette ga 0.828 g av en rest som to ganger ble underkastet flashkromatografi, først ved bruk av dietyleter/MeOH (NH3-mettet) (95/5) og deretter CH2Cl2/Me0H (NH3-mettet) (95/5) som elueringsmiddel. Dette ga 0.42 g (47%) av tittelforbindelsen.
(ii) <n>HexOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HCI
Hydrogenering av 400 mg (0.617 mmol) <n>HexOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-pab(Z) i nærvær av 12 ml THF og 400 mg Pd/C i 1,5 timer ga ikke fullstendig beskyttelsesfjeming. Hydrogeneringen ble fullført i løpet av 4 timer i nærvær av 1.7 ml 1 N HCI, 12 ml MeOH og 340 mg Pd/C. Fjerning av katalysatoren ved filtrering på celit og milliporefilter, fulgt av inndampning av oppløsningsmiddel i vakuum og frysetørking to ganger ga 287 mg (79%) av tittelforbindelsen. 1 H-NMR (300 MHz, MeOD); 8 0.8-2.13 (m, 22H), 2.13-2.31 (m, IH), 2.61-2.81 (m, IH), 3.93-4.15 (m, 3H), 4.15-4.37 (m, 3H), 4.37-4.7 (m, 3H), 4.88-5.0 (m, IH (delvis skjult av H-O-D-signalet)), 7.52-7.69 (d, 2H), 7.75-7.9 (d, 2H).
<l3>C-NMR (75 MHz, MeOD): amidin- og karbonylkarboner; 8 146-84,167.67, 167.84, 172.17.
EKSEMPEL 61
H-(R)Cgl-Pro-Pac x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cgl-Pro-Pac(Z)
377 mg (1.97 mmol) EDC ble tilsatt ved 0°C til en omrørt oppløsning av 708 mg (1.95 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 714 mg (2.0 mmol) H-Pac(Z) x 2 HCI (se fremstilling av utgangsmaterialet) og 1.078 g (8.8. mmol) DMAP i 12.5 ml acetonitril. Reaksjonsblandingen fikk nå romtemperatur natten over. Oppløs-ningsmiddelet ble fjernet i vakuum og resten ble først renset ved flashkromatografi ved bruk av 10% metanol i metylenklorid som elueringsmiddel, og deretter ved RPLC. To fraksjoner (51 mg og 150 mg) hvilket gir MS m/z = 626 (M + 1) ble isolert.
(ii) H-(R)Cgl-Pro-Pac(Z)
Hydrogenklorid ble boblet inn i en oppløsning av 141 mg (0.22 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-Pac(Z) i 50 ml etylacetat. Etter 15 minutter ble 10% natriumkarbonatoppløsning tilsatt og den organiske fasen ble separert og tørket (K2CO3). Inndampning av oppløsnings-middelet ga 71 mg (61%) av produktet.
(iii) H-(R)Cgl-Pro-Pac x 2 HCI
En blanding av 71 mg (0.14 mmol) H-(R)Cgl-Pro-Pac(Z) og en liten spatel med 10% Pd/C i 10 ml etanol ble hydrogenert ved romtemperatur og atmosfæretrykk i 2 timer. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og oppløsningsmiddelet ble fjernet i vakuum. Resten ble oppløst i 50 ml vann og 0.6 g 1 M saltsyre. Frysetørking ga 38 mg (58%) av tittelforbindelsen.
MS m/z 392 (M + 1).
EKSEMPEL 62
HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pac x HOAc
(i) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pac(Z)
En blanding av 84 mg (0.15 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pac(Z) (se eksempel 53 (ii)), en spatel kaliumkarbonat, og 47 mg TfOCH2-COOBn (se fremstilling av utgangsmaterialer) i 3 ml metylenklorid ble omrørt ved romtemperatur natten over. Reaksjonsblandingen ble filtrert og filtratet ble fjernet i vakuum og dette ga en rest som ble underkastet flashkromatografi ved bruk av etylacetat/metylenklorid/metanol 95:20:5 som elueringsmiddel. 29 mg av det ønskede produkt ble isolert.
(ii) HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pac x HOAc
En blanding av 29 mg BnOOC-CH2"(R)Cha-Pro-Pac(Z) og 37 mg 10% Pd-C i 5 ml etanol ble omrørt i 4 timer ved romtemperatur og atmosfæretrykk. Filtrering av katalysatoren fulgt av fjerning av oppløsningsmiddelet og rensing ved RPLC ga den ønskede forbindelsen.
MS m/z = 464 (M + 1).
EKSEMPEL 63
HOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pac
(i) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pac(Z)
En oppløsning av 0.35 g (0.64 mmol) H-(R)Cgl-Pro-Pac(Z) (se eksempel 61 (ii)), 124 mg (0.76 mmol) benzylakrylat og 280 ul (2 mmol) trietylamin i 1 ml etanol ble holdt ved romtemperatur i 3 dager. Fjerning av oppløsningsmiddelet fulgt av rensing ved HPLC ga 18 mg (4%) av tittelforbindelsen.
(ii) HOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pac
En blanding av 18 mg BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pac(Z) og en liten spatel 10%
Pd/C ble hydrogenert i 2 timer ved romtemperatur og atmosfæretrykk i EtOH. Filtrering fulgt av fjerning av oppløsningsmiddel i vakuum og oppløsning i vann og frysetørking ga 7 mg (78 %) av tittelforbindelsen. MS m/z = 464 (M + 1).
EKSEMPEL 64
HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pac
(i) Boc-(R)Cha-Aze-Pac(Z)
En oppløsning av 0.4 g (1.38 mmol) H-Pac(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialet H-Pac(Z) x 2 HCI), 0.5 g (1.41 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH (se fremstilling av utgangsmaterialet), og 0.67 g (5.5 mmol) DMAP i 20 ml acetonitril ble blandet ved 0°C med en oppløsning av 0.26 g (1.4 mmol) EDC i 15 ml acetonitril. Reaksjonsblandingen ble holdt ved romtemperatur natten over og oppløsningsmiddelet ble deretter fjernet i vakuum. Resten ble skilt mellom etylacetat og vann. Den vandige fasen ble esktrahert en gang til med etylacetat og de kombinerte organiske fasene ble vasket med natrium-hydrogensulfat oppløsning, natriumkarbonatoppløsning og saltoppløsning og deretter tørket (natriumsulfat). Inndampning av oppløsningsmiddelet ga 0.54 g (63%) av tittelforbindelsen.
(ii) H-(R)Cha-Aze-Pac(Z)
Hydrogenklorid ble boblet inn i en oppløsning av 0.54 g (0.9 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-Pac(Z) i etylacetat. Oppløsningen ble holdt i kjøleskap natten over og oppløsnings-middelet ble deretter fjernet i vakuum og resten ble oppløst i etylacetat. Oppløsningen ble vasket med vandig natriumhydrogenkarbonat oppløsning, vann og saltoppløsning og tørket (natriumsulfat). Fjerning av oppløsningsmiddelet ga 0,35 g (77%) av produktet.
(iii) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pac(Z)
En oppløsning av 180 mg (0,33 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pac(Z) og 53 mg (0,33 mmol) benzylakrylat i etanol ble holdt ved romtemperatur i 60 timer. Oppløsningsmiddelet ble fjernet i vakuum og resten ble oppløst i etylacetat. Oppløsningen ble vasket med kalium-hydrogensulfatoppløsning og natriumhydrogenkarbonatoppløsning og saltoppløsning. Tørking (natriumsulfat) og fjerning av oppløsningsmiddelet i vakuum ga en rest som ble renset ved flashkromatografi ved bruk av 10% metanol i metylenklorid som elueringsmiddel og dette ga 150 mg (66%) av tittelforbindelsen.
(iv) HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pac x 2 HCI
En blanding av 115 mg BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pac(Z) og 67 mg 10% Pd/C i 10 ml etanol ble hydrogenert i 1.5 timer ved romtemperatur ved atmosfæretrykk. Filtrering fulgt av fjerning av oppløsningsmiddelet i vakuum og oppløsning av resten i vann og 1,5 ml 1 M saltsyre ga en oppløsning som ble frysetørket og dette ga 30 mg (33%) av tittelforbindelsen.
MS m/z 464 (M + 1).
EKSEMPEL 65
HOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pig x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cha-Aze-Pig(Z)
0.249 g (1.298 mmol) EDC ble tilsatt ved <-15°C til en blanding av 0.473 g (1.236 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 0.404 g (1.236 mmol) H-Pig(Z) x HCI (se fremstilling av utgangsmaterialer) og 0.604 g (4.94 mmol) DMAP i 13.5 ml DMF. Temperaturen fikk stige til romtemperatur natten over. Opp-løsningsmiddelet ble inndampet i vakuum og EtOAc og 2 M KHSO4 ble tilsatt. Fasene ble separert og den organiske fasen ble vasket med mettet Na2C03 og saltoppløsning. Gjentagelse av ekstraksjonsprosedyren, tørking (Na2S04), filtrering og inndampning av oppløsningsmidlene ga 0.612 g av en rest som ble underkastet flashkromatografi ved bruk av EtOAc/MeOH 9/1 som elueringsmiddel. Dette ga 407 mg (53%) av tittelforbindelsen.
(ii) H-(R)Cha-Aze-Pig(Z)
0.4 g (0.638 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-Pig(Z) ble oppløst i 24.4 ml TFA/CH2Cl2 1/4, omrørt i 30 minutter på et isbad, og i 30 minutter ved romtemperatur. Oppløsnings-middelet ble fjernet i vakuum og EtOAc og mettet Na2C03 ble tilsatt. Fasene ble separert og det organiske laget ble vasket med vann og saltoppløsning, tørket (Na2S04), filtrert og oppløsningsmiddelet ble inndampet i vakuum og dette ga 336 mg (100 %) av tittelforbindelsen.
(iii) BnOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pig(Z)
89 ml(0.562 mmol) BnOOC-CH2-Br ble langsomt tilsatt til en blanding av 0.296 g (0.562 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pig(Z) og 0.171 g (1.236 mmol) K2C03 i 6 ml CH3CN oppvarmet til 60°C på et oljebad. Etter 1 time og 45 minutter ble oppløsningsmiddelet inndampet, EtOAc ble tilsatt, og blandingen ble vasket med vann, tørket (Na2S04), filtrert og oppløsningsmiddelet ble inndampet i vakuum og dette ga 346 mg av en rest som ble underkastet flashkromatografi ved bruk av CH2Cl2/THF/MeOH (8/2/1) som elueringsmiddel. Dette ga 297 mg (78%) av tittelforbindelsen.
(iv) HOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pig x 2 HCI
243 mg (0,36 mmol) BnOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pig(Z) ble hydrogenert i nærvær av 1.7 ml 1 N HCI, 10 ml EtOH (99.5%) og 300 mg Pd/C i 2 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering på celit og milliporefilter fulgt av inndampning av oppløsningsmiddelet i vakuum og frysetørking to ganger ga 166 mg (88%) av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (500 MHz, D20); 8 0.6-1.9 (m, 18H), 2.1-2.27 (m, IH), 2.52-2.76 (m, IH), 2.82-3.2 (m, 4H), 3.46-3.61 (m, IH), 3.61-3.81 (m, 2H), 3.81-4.0 (m, 2H), 4.0-4.24 (m, 2H), 4.24-4.4 (m, IH).
EKSEMPEL 66
HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pig x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cha-Pro-Pig(Z)
Til en blanding av 0.3495 g (0.95 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 0.464 g (3.8 mmol) DMAP, 0.310 g (0.95 mmol) H-Pig(Z) x HCI (se fremstilling av utgangsmaterialer) i 5 ml CH2CI2 ble det tilsatt 0.192 g (1 mmol) EDC og blandingen ble omrørt natten over ved romtemperatur. Blandingen ble inndampet og resten ble oppløst i etylacetat. Den organiske fasen ble vasket to ganger med 0.3 M KHSO4 og en gang med saltoppløsning. Det organiske laget ble tørket (Na2SC«4) filtrert og inndampet. Råproduktet ble renset ved flashkromatografi ved bruk av et trinnvis gradient av CH2Cl2/MeOH (100/0, 97/3, 95/5,90/10) som elueringsmiddel og dette ga 307 mg av tittelforbindelsen.
(ii) H-(R)Cha-Pro-Pig(Z)
0.306 g (0.48 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-Pig(Z) ble oppløst i 30 ml HCl-mettet etylacetat. Blandingen ble hensatt i 1/2 time. Oppløsningsmiddelet ble inndampet og resten ble oppløst i CH2CI2. Det organiske laget ble vasket to ganger med 0.2 M NaOH. Det kombinerte vannlaget ble ekstrahert en gang med CH2CI2 og det kombinerte organiske laget ble tørket (Na2S04), filtrert og inndampet og dette ga 257 mg (99%) av tittelforbindelsen.
(iii) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pig(Z)
En blanding av 0.256 g (0.473 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pig(Z), 0.144 g (1.04 mmol) K2CO3 og 82 ul (0.521 mmol) bensylbromacetat i 6 ml acetonitril ble oppvarmet til 60°C i 2 timer under omrøring. Oppløsningsmiddelet ble inndampet og resten ble oppløst i CH2CI2, vasket en gang med vann og en gang med saltoppløsning, tørket (Na2S04), filtrert og oppløsningsmiddelet inndampet. Råproduktet ble renset ved flashkromatografi ved bruk av en trinnvis gradient av CH2Cl2/MeOH (97/3,95/5, 90/10) som elueringsmiddel og dette ga 0.2 g produkt (90% rent ifølge RPLC). Den sluttlige rensingen ble foretatt på en kromatotron (Harrison research, model 8924T) på en 2 mm silisiumdioksydplate i CH2Cl2/MeOH 95/5 hvilket ga 0.158 g (48%) rent produkt.
(iv) HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pig x 2 HCI
0.158 g (0.227 mmol) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pig(Z) ble blandet med 0.075 g Pd/C (5%), 1.0 ml IN HCl-oppløsning og 10 ml etanol. Blandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 1 time. Filtrering gjennom celit og inndampning av oppløsnings-middelet fulgt av frysetørking to ganger fra vann ga 119 mg (95%) av produktet.
<i>H-NMR (D20, 300 MHz): 8 0.95-1.44 (m, 7H), 1.52 (m, IK), 1.60-2.20 (m, 13H), 2.39 (m, IH), 3.07-3.32 (m, 4H), 3.68 (m, IH), 3.77-4.02 (m, 5H; derav 3.98 (s, 2H), 4.44-4.58 (m, 2H).
<13>C-NMR (D20, 75 MHz): karbonyl- og guanidinkarboner: 8 156.5,168.3,169.6, 174.5.
EKSEMPEL 67
HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pig x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pig(Z)
0.297 g (0.55 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pig(Z) (se eksempel 66 (ii)) ble oppløst i 2 ml etanol og 90 ul (0.59 mmol) bensylakrylat ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 4 dager ved romtemperatur. Oppløsningsmiddelet ble inndampet og råproduktet kromat-ografert på en kromatotron (Harrison research, model 7924T) ved bruk av en 2 mm silisiumdioksydplate med en trinnvis gradient av CH2Cl2/MeOH (95/5,90/10) som elueringsmiddel og dette ga 0.338 g (87%) av tittelforbindelsen.
(ii) HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pig x 2 HCI
0.238 g (0.227 mmol) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pig(Z) ble blandet med 0.120 g Pd/C, 1.2 ml IN HCl-oppløsning og 15 ml etanol. Blandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 1 time. Filtrering av katalysatoren gjennom cellit, inndampning av oppløsningsmiddelet fulgt av frysetørking to ganger fra vann ga 178 mg (95%) av tittelforbindelsen. 1 H-NMR (D20, 300 MHz): 8 0.82-1.45 (m, 8H), 1.45-2.15 (m, 13H), 2.29 (m, IK), 2.83 (t, 2H), 2.9-3.4 (m, 6H), 3.57 (bq, IH), 3.67-3.87 (m, 3H), 4.25-4.43 (m, 2H).
<13>C-NMR (D2O, 75 MHz): karbonyl- og guanidinkarboner: 8 156.3,168.2,174.3, 174.6
MS m/z 479 (M<+>+1)
EKSEMPEL 68
(HOOC-CH2)2-(R)Cgl-Pro-Pig x 2 HCI
120 mg (0.126 mmol) (BnOOC-CH2)2-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2 (se eksempel 50 (iii) ble hydrogenert i nærvær av 0.75 ml 1 N HCI, 7 ml EtOH (99.5%) og 150 mg (Pd/C i 4 timer. Fjerning av katalysatoren ved filtrering på cellit og milliporefilter og inndampning av oppløsningsmiddelet i vakuum fulgt av frysetørking ga 66 mg (90%) av tittelforbindelsen.
<!>h-NMR (500 MHz, D20); 8 1.05-1.38 (m, 7H), 1.53-1.64 (d, IH), 1.64-2.14 (m, 11H), 2.27-2.39 (m, IH), 3.03-3.28 (m, 4H), 3.58-3.70 (m, IH), 3.7-3.8 (m, IH), 3.8-3.9 (d, 2H), 4.07-4.22 (m, 2H), 4.22-4.35 (m, IH), 4.38-4.5 (m, IH).
<13>C-NMR(75 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner; 8 156.28,166.73,170-14, 174.01.
EKSEMPEL 69
HOOC-CH2-CH2-(HOOC-CH2)-(R)Cha-Pro-Pig(Z)
Til en kald (isbad temperatur) blanding av 100 mg (0.14 mmol) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro(Z) (se eksempel 67 (i)) og 80 mg (0.57 mmol) kaliumkarbonat i 4 ml CH2CI2 ble det forsiktig tilsatt en oppløsning av 64 mg (0.21 mmol) TfO-CH2-COOBn oppløst i 1 ml CH2CI2. Reaksjonsblandingen ble hensatt ved 0°C i 30 minutter og fikk deretter nå romtemperatur i løpet av 2 timer hvoretter den ble oppvarmet til tilbakeløp i 30 minutter og til slutt hensatt natten over ved romtemperatur. Inndampning av oppløs-ningsmiddelet fulgt av flashkromatografi ved bruk av CH2Cl2/MeOH (97/3) som elueringsmiddel ga 65 mg (54%) av tittelforbindelsen.
(ii) HOOC-CH2-CH2-(HOOC-CH2)-(R)Cha-Pro-Pigx 2 HCI
65 mg (0.08 mmol) BnOOC-CH2-CH2-(BnOOC-CH2)-(R)Cha-Pro-Pig(Z) ble oppløst i 10 ml EtOH/lM HCI (9/1) og hydrogenert over 10% Pd/C i 3 timer ved atmosfæretrykk. Filtrering av katalysatoren, inndampning av oppløsningsmiddelet fulgt av frysetørking fra vann ga 40 mg (97%) av tittelforbindelsen som et hvitt pulver.
<13>C-NMR (125 MHz, MeOD): amidin- og karbonylkarboner: 8 157.5,167.2, 169.1, 173.7 og 174.1.
EKSEMPEL 70
HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp x HCI
(i) Boc-(R)CgI-Aze-(R,S)Itp(Ts)
Boc-(R)Clg-Aze-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer) (400 mg, 1.17 mmol), H-(R,S)Itp(Ts) (se fremstilling av utgangsmaterialer) (366 mg, 1.23 mmol) og DMAP (286 mg, 2.34 mmol) ble oppløst i CH3CN (6 ml) og avkjølt til 5°C. EDC (236 mg, 1.23 mmol) ble tilsatt og den resulterende blanding ble omrørt ved romtemperatur natten over. CH3CN ble fjernet og resten ble oppløst i MeOH/EtOAc/H20. Det separerte organiske laget ble vasket med K2CO3 (mettet), 2 M KHSO4, saltoppløsning og tørket (Na2S04). Inndampning av oppløsningsmiddelet resulterte i et hvitt fast stoff, 688 mg (85%).
MSm/z620(M+ + 1)
(ii) H-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts)
Boc-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts) (500 mg, 0.8 mmol) ble oppløst i CH2C12 (50 ml) og HCl(g) ble boblet gjennom oppløsningen i ca 4 min. Etter 45 min. ble oppløsnings-middelet fjernet ved inndampning og det resulterende produkt ble oppløst i EtOAc/ MeOH/H20 og den sure oppløsningen ble behandlet med 2 M NaOH (vandig) til pH = 8-9. Det organiske laget ble separert og tørket (Na2S04). Inndampning av oppløsnings-middelet ga 425 mg (100%) av tittelforbindelsen som et hvitt fast stoff.
MS m/z 520 (M++ 1)
(iii) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts)
H-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts) (400 mg, 0.77 mmol), benzyl-2-(para-mtrobenzensulfonyl-oksy)acetat (se fremstilling av utgangsmaterialer) (325 mg, 0.92 mmol) og K2CO3 (235 mg, 1.7 mmol) ble omrørt i CH3CN (5 ml) ved 45°C. Etter noen timer var omdannelsen kun 25% og temperaturen ble derfor øket til 60°C og en ytterligere mengde av benzyl-2-(para-nitrobenzensulfonyloksy)acetat ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 48 timer, (utgangsmateriale:produkt/25:63) og deretter opparbeidet. Oppløsningsmiddelet ble inndampet og EtOAc/H20 ble tilsatt til resten. Fasene ble separert og vannfasen ble vasket to ganger med EtOAc og deretter ble den kombinerte organiske fasen vasket med K2C03 (mettet), 2 M KHSO4, H20 og tørket Na2S04). Dette ga etter tilbakeekstrak-sjon av det sure KHSO4, omkring 340 mg som ble renset ved RPLC. Dette ga 34 mg (7%) av tittelforbindelsen.
MSm/z668(M<+>+l).
(iv) HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp x 2 HCI
BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts) (34 mg, 0.05 mmol) ble oppløst i THF (5 ml) og NH3(g) ble destillert (40 ml) i en reaksjonskolbe med en tørriskjøler. Na(s) ble tilsatt og en dyp blå farge viste seg. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 5 minutter før den ble stoppet med HOAc (50 ul). Tørriskjøleren ble fjernet og NH3(1) fikk fordampe. Til resten ble det tilsatt H20 og HOAc til pH=7. Frysetørking og preparativ RPLC ga flere fraksjoner som ble analysert med FAB-MS. To fraksjoner inneholdt den ønskede forbindelsen, 3 mg (10%) etter frysetørking med 2.2 ekv. av 1 M HCI.
MSm/z424(M+ + 1).
EKSEMPEL 71
HOOC-CH2-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp
(i) Boc-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts)
Boc-(R)Cha-Aze-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer) (169 mg, 0.5 mmol), H-(R,S)Itp(Ts) (se fremstilling av utgangsmaterialer) (155 mg, 0.52 mmol), DMAP (122 mg, 1 mmol) ble oppløst i CH3CN (2.5 ml) og avkjølt til 5°C. EDC x HCI (115 mg, 0.6 mmol) ble tilsatt og den resulterende blanding ble omrørt ved romtemperatur natten over. Ekstra (0.5 ekv.) H-(R,S)Itp(Ts) og EDC ble tilsatt etter omrøring natten over. Reaksjonsblandingen ble omrørt en natt til og opparbeidet som beskrevet for Boc-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts) (se eksempel 70) ovenfor. Dette ga 260 mg råprodukt. Rensing ved RPLC ga 180 mg (57%) av tittelforbindelsen.
MSm/z634(M+ + 1).
(ii) H-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts)
Boc-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts) (180 mg, 0.28 mmol) ble oppløst i CH2CI2 (20 ml) og HCl(g) ble boblet gjennom oppløsningen i ca 4 min. Etter 45 min. ble oppløsnings-middelet fjernet ved inndampning og det resulterende produktet ble oppløst i CH2C12 og vasket med 2 M NaOH til pH=8-9. Fasene ble separert og den organiske fasen ble tørket (Na2S04) og inndampet og dette ga 163 mg (ca 100%).
MS m/z 534 (M<+> + 1).
(iii) BnOOC-CH2-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts)
H-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts) (80 mg, 0.15 mmol), K2CO3 (45 mg, 0.33 mmol) og Br-CH2COOBn (39 mg, 0.17 mmol) ble omrørt i CH3CN (1.5 ml) ved 60°C i 2,5 timer. Oppløsningsmiddelet ble inndampet og resten ble oppløst i EtOAc/H20. Fasene ble separert og den organiske fasen ble vasket med 10% sitronsyre og tørket (Na2S04). Inndampning av oppløsningsmiddelet ga 171 mg råprodukt som ble renset ved RPLC og dette ga 53 mg (52%) av tittelforbindelsen.
MS m/z 681 (M++l).
(iv) HOOC-CH2-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp
BnOOC-CH2-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts) (50 mg, 0.07 mmol) ble behandlet som beskrevet for BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts) (se eksempel 70 (iv)). Dette ga en produktblanding som ble renset ved RPLC hvilket ga 12 mg av en 1:1 blanding av tittelforbindelsen sammen med en redusert form som viser seg ved masse 439 (m/z).
MSm/z438(M<+> + 1)
EKSEMPEL 72
H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Ts)
Ved romtemperatur ble 2.1 g (5,5 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 1.0 g (8.2 mmol) DMAP og 1.7 g (5.8 mmol) H-(R,S)Itp(Ts) (se fremstilling av utgangsmaterialer) oppløst i 40 ml acetonitril. Etter noen minutter med omrøring ble 1.1 g (5.8 mmol) EDC tilsatt og omrøringen ble fortsatt i 60 timer. Opp-løsningsmiddelet ble fjernet i vakuum og resten ble oppløst i CH2CI2, vasket med vann, 0.3 M KHSO4 og KHCO3 (vandig) og tørket (Na2S04). Inndampning av oppløsnings-middelet og filtrering gjennom silisiumdioksydgel ga 2.43 g (67%) av produktet.
MS m/z 661 (M<+> + 1)
(ii) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp
2.4 g (3.6 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Ts) ble oppløst i 15 ml THF og NH3 (g) ble kondensert inn i kolben fulgt av tilsetning av Na. Reaksjonsblandingen ble stoppet etter 5 min. med eddiksyre og NH3 og THF ble inndampet. Resten ble frysetørket fra vann og renset ved RPLC (CH3CN/0,1M NH4OAC, 6/4) og dette ga 0.93 g (51%) av det ønskede produktet.
MSm/z507(M+ + 1)
(iii) H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp x 2 HCI
Ved romtemperatur ble 50 mg (0.099 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp oppløst i etylacetat mettet med HCI (g). Etter omrøring i 2 timer ble oppløsningsmiddelet fjernet i vakuum. Resten ble frysetørket fra vann tre ganger og dette ga 35 mg (74%) av det ønskede produktet.
MS m/z 407 (M++1).
EKSEMPEL 73
HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z)
Ved romtemperatur ble 0.84 g (1.66 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp (se eksempel 72) oppløst i 10 ml CH2CI2 og 10 ml 0,5M NaOH. 0,29 ml (1.82 mmol) Z-Cl ble tilsatt dråpevis. Etter omrøring i 3 timer ble fasene separert og den organiske fasen ble vasket med vann og tørket over Na2S04 Inndampning og flashkromatografi (etylacetat/heptan 9/1) ga 0.5 g (47%) av det ønskede produktet.
MS m/z 641 (M++1).
(ii) H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z)
Ved romtemperatur ble 0.5 g (0.78 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z) oppløst i etylacetat mettet med HCI. Vann ble tilsatt og blandingen ble gjort basisk med K2CO3. Fasene ble separert. Vannfasen ble ekstrahert med CH2CI2 og den organiske fasen ble vasket med vann. Den kombinerte organiske fasen ble deretter tørket (Na2S04). Inndampning av oppløsningsmiddelet ga 0,3 g (71%) av det ønskede produktet.
MS m/z 541 (M<+> + 1).
(iii) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z)
0.29 g (0,5 mmol) H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z), 0.15 g (1 mmol) K2C03 ble opptatt i 25 ml acetonitril. 154 mg (0,6 mmol) benzylbromacetat ble tilsatt og blandingen ble omrørt ved 50°C i 4 timer. Inndampning og rensing ved RPLC (acetonitril:0.IM NH4OAC 70:30) ga ca 200 mg av det ønskede produktet.
(iv) HOOC-CH2-(R)-Pic-(R,S)Itp x 2 HCI
200 mg BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z) ble oppløst i etanol. En liten skje med 10% Pd på trekull ble tilsatt og blandingen ble hydrogenert i 4 timer. Filtrering gjennom hyflo, inndampning av oppløsningsmiddelet fulgt av frysetørking fra vann ga 53 mg av det ønskede produktet. 1 H-NMR (300.13 MHz, D20); 6 1.0-2.35 (overlapping m, 22H), 3.28-3.51 (m, 5H), 3.51-3.64 (m, IH), 3.75-4.03 (m, 3H), 5.03-5.14 (s broad, IH). Signalet til et av protonene er delvis skjult av H-O-D-signalet.
MS m/z 465 (M++1).
EKSEMPEL 74
H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z)
Til en blanding av 1,0 g (2,95 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer) 1,44 g (11,8 mmol) DMAP, 1,12 g (3,25 mmol) H-(R,S)Hig(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialer) i 15 ml CH2CI2 ble det tilsatt 0,62 g (3,2 mmol) EDC og blandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over. Oppløsningsmidlet ble inndampet og resten ble oppløst i etylactat. Da det organiske laget ble vasket to ganger med en 0,3 M KHS04~oppløsning skilte en olje seg ut fra det organiske laget. Etylacetatlaget ble tørket (Na2S04) og filtrert. Olje- og vannlaget ble deretter ekstrahert med CH2CI2 og det organiske laget ble tørket (Na2S04), filtrert og kombinert med EtOAc-fasen fra ovenfor. Inndampning og rensing av råproduktet på en kromatotron (Harrison research, modell 7924T) ved bruk av en 2 mm silisiumdioksydplate med en trinnvis gradient av CH2Cl2/MeOH (97/3,95/5, 90/10) som elueringsmiddel ga 1,1 g (59 %) av tittelforbindelsen.
(ii) H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig x 2 HCI
81 mg (0,13 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z) ble oppløst i 50 ml etylacetat mettet med HCI. Blandingen ble hensatt i 1 time, inndampet og resten ble oppløst i 10 ml etanol. 40 mg Pd/C (5 %), 1 ml vann og 0,5 ml 1 M HCl-oppløsning ble tilsatt og blandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk natten over. Filtrering av katalysatoren gjennom celitt og inndampning av oppløsningsmidlet fulgt av frysetørking tre ganger fra vann ga tittelforbindelsen i 75 % utbytte.
i H-NMR (300 MHz, D20): 5 0,95-1,35 (m, 5H), 1,50-2,45 (m, 15H), 3,02 (bt, IH), 3,1-3,8 (m, 7H), 4,13 (d, IH), 4,38 (bd, IH).
<13>C-NMR (D2O, 75 MHz): karbonyl- og guanidinkarboner: 5 154,8,168,9,174,4.
MS m/z 393 (M<+>+1).
EKSEMPEL 75
HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig x 2 HCI
(i) H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z)
1 g (1,6 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z) (se eksempel 74 (i)) ble oppløst i 100 ml etylacetat mettet med HCI, og blandingen ble hensatt i 1 time. Blandingen ble inndampet og resten ble oppløst i CH2CI2. Det organiske laget ble vasket to ganger med 0,2 M NaOH-oppløsning, tørket (Na2S04), filtrert og inndampet og dette ga 0,825 g (98 %) av tittelforbindelsen.
(ii) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z)
0,442 g (0,839 mmol) H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z), 0,256 g (1,85 mmol) K2C03 og 145 ul (0,521 mmol) benzylbromacetat ble blandet i 12 ml THF. Blandingen ble omrørt ved 40°C i 1 time og ved romtemperatur natten over. Etter inndampning av oppløsnings-midlet ble resten oppløst i CH2CI2 og vasket en gang med vann og en gang saltopp-løsning. Det organiske laget ble tørket (NaS04), filtrert og inndampet og råproduktet ble renset på en kromatotron (Harrison research, modell 7924T) ved bruk av en 2 mm silisiumdioksydplate med en trinnvis gradient av C^C^/MeOH (97/3,95/5,90/10) som elueringsmiddel og dette ga 0,165 g (29 %) av tittelforbindelsen.
(iii) HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig x 2 HCI
0,165 g (0,25 mmol) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z) ble blandet med 0,050 g Pd/C (5 %), 0,7 ml 1 M HCl-oppløsning og 10 ml etanol. Blandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 4 timer. Filtrering av katalysatoren gjennom celitt og inndampning av oppløsningsmidlet fulgt av fryestørking to ganger fra vann ga 0,1 g (75 %) av produktet.
<*>H-NMR (300 MHz, D20): 6 1,05-1,45 (m, 5H), 1,55-2,5 (m, 15H), 3,08 (bt, IH), 3,2-4,05 (m, 9H), 4,30 (d, IH), 4,44 (m, IH).
<13>C-NMR (D20,75 MHz): karbonyl- og guanidinkarboner: 5 154,9,167,2,169,4, 174,1.
EKSEMPEL 76
H-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig(Z)
0,72 g (1,95 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 0,95 g (7,8 mmol) DMAP, 0,74 g (2,14 mmol) 82 % ren H-(R,S)Hig(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialer) i 10 ml CH2CI2 ble tilsatt til 0,486 g (2,54 mmol) EDC og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 3 dager. Blandingen ble fortynnet med CH2CI2 og vasket med vann, to ganger med 0,3 M KHSOij-oppløsning og en gang med salt-oppløsning. Det organiske laget ble tørket (Na2SC«4), filtrert og inndampet og råproduktet ble renset ved flashkromatografi ved bruk av CH2Cl2/MeOH 95/5 som elueringsmiddel og dette ga 0,450 g (33 %) av produktet.
(ii) H-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig x 2 HCI
50 mg (0,078 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig(Z) ble oppløst i 20 ml etylacetat mettet med HCI. Blandingen ble hensatt i 1 time, inndampet og resten ble oppløst i 10 ml etanol. 20 mg Pd/C (5 %) og 0,3 ml 1 M HCl-oppløsning ble tilsatt og blandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 2 timer. Filtrering av katalysatoren gjennom celitt og inndampning av oppløsningsmidlet fulgt av frysetørking to ganger fra vann ga 28 mg (76 %) av tittelforbindelsen. 1 H-NMR (300 MHz, D20): 8 0,9-1,6 (m, 6H), 1,6-2,5 (m, 16H), 3,09 (t, IH), 3,31 (t, IH), 3,37-3,74 (m, 4H), 3,81 (m, IH), 4,35-4,47 (m, 2H).
<13>C-NMR(D20, 75 MHz): karbonyl- og guanidinkarboner: 8 154,9,169,8,174,5.
EKSEMPEL 77
H-(R)Cgl-Aze-Rig x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cgl-Aze-Rig(Z)
Til en oppløsning av 0,50 g (1,6 mmol) H-Rig(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialer), 0,59 g (1,6 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 0,84 g (6,9 mmol) dimetylaminopyridin i 30 ml acetonitril og 5 ml dimetylformamid ble det tilsatt 0,33 g (1,7 mmol) N-(3-dimetylaminopropyl)-N'-etylkarbodiimidhydroklorid. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 3 dager og deretter inndampet og skilt mellom vandig kaliumhydrogensulfat og metylenklorid. Metylenkloridlaget ble vasket med vandig natriumbikarbonat og vann, tørket (Na2SC<4) og inndampet. Råmaterialet ble sugefiltrert gjennom en pute av silisiumdioksydgel med metylenklorid/metanol 9/1 og dette ga 0,78 g (76 %) av den ønskede forbindelsen etter inndampning.
<i>H-NMR (300 MHz, CDC13): 8 0,8-1,9 (m, 27H), 2,4-2,6 (m, 2H), 2,78 (bt, 2H), 3,15-3,4 (m, 2H), 3,80 (bt, IH), 4,0-4,4 (m, 4H), 4,75 (bt, IH), 4,97 (bd, IH), 5,08 (s, 2H), 7,1-7,4 (m, 7H), 7,74 (b, IH).
(ii) H-(R)Cgl-Aze-Rig(Z) x 2 HCI
En kolbe inneholdende Boc-(R)-Cgl-Aze-Rig(Z), 0,76 g (1,2 mmol) i 50 ml etylacetat ble avkjølt i et isbad. Tørr HCI ble boblet gjennom i 5 min og oppløsningen ble inndampet og dette ga 0,74 g (100 %) av dihydrokloridet som et hvitt pulver.
<i>H-NMR (300 MHz, MeOD): 8 1,1-2,0 (m, 18H), 2,23 (m, IH), 2,68 (m, IH), 3,15-3,45 (m, 4H), 3,72 (bd, IH), 3,9-4,0 (bd, 2H), 4,27 (m, IH), 4,39 (m, IH), 4,78 (m, IH), 5,20 (s, 2H), 7,3-7,5 (m, 5H).
(iii) H-(R)Cgl-Aze-Rig x 2 HCI
En kolbe inneholdende en oppløsning av 20 mg H-(R)Cgl-Aze-Rig(Z) og en liten mengde 5 % Pd/C ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 1 time. Blandingen ble filtrert gjennom celitt og inndampet. Resten ble lyofilisert med noen dråper kons. HCI tilsatt for oppnåelse av produktet. Utbytte: 8 mg (52 %).
<i>H-NMR (300 MHz, D20): 5 1,1-2,0 (m, 18H), 2,37 (m, IH), 2,75 (m, IH), 3,08 (bt, 2H), 3,39 (bt, 2H), 3,8-4,0 (m, 3H), 4,35-4,5 (m, 2H), 4,90 (m, IH).
<13>C-NMR(75,5 MHz, D20): guanidin- og karbonylkarboner: 8 172,2,169,4,156,4.
EKSEMPEL 78
HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Rig(Z)
(i) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Rig(Z)
En blanding av 0,20 g (0,33 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Rig(Z) (se eksempel 77), 0,13 g kaliumkarbonat, 80 mg natriumiodid, 10 ml tetrahydrofuran og 10 ml acetonitril ble oppvarmet ved 60°C i 10 timer. Oppløsningsmidlene ble inndampet og råmaterialet ble flashkromatografert på silisiumdioksydgel ved bruk av metylenklorid/metanol 92/8 som elueringsmiddel. Utbytte: 0,13 g (58 %).
<i>H-NMR (300 MHz, CDC13): 8 0,9-2,1 (m, 18H), 2,45 (m, IH), 2,61 (m, IH), 2,81 (m, 2H), 2,88 (d, IH), 3,2-3,5 (m, 4H), 3,94 (m, IH), 4,0-4,25 (m, 3H), 4,85 (m, IH), 5,12 (s, 2H), 5,14 (s, 2H), 6,9-7,2 (b, 2H), 7,2-7,5 (m, 10H), 7,95 (m, IH).
(ii) HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Rig x 2 HCI
En blanding av 0,12 g (0,18 mmol) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Rig(Z), 5 ml etanol, 3 dråper kons. HCI og en liten mengde 5 % Pd/C ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 1 time. Blandingen ble filtrert gjennom celitt og inndampet. Resten ble lyofilisert i vann og dette ga 91 mg (98 %) av produktet.
<i>H-NMR (500 MHz, D20): 8 1,1-1,9 (m, 17H), 2,00 (m, IH), 2,29 (m, IH), 2,70 (m, IH), 3,10 (m, 2H), 3,34 (t, 2H), 3,83 (bd, 2H)i 3,89 (dd, 2H), 4,00 (d, IH), 4,35 (m, 2H), 4,87 (m, IH).
<13>C-NMR (125,8 MHz, D20): guanidin- og karbonylkarboner: 8 171,8,169,6,167,7, 156,3.
EKSEMPEL 79
HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Rig x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cha-Pro-Rig(Z)
Til en oppløsning av 0,25 g (0,82 mmol) 4-aminoetyl-l-benzyloksykarbonylamidinopiperidin (H-Rig(Z)), (se fremstilling av utgangsmaterialer), 0,32 g (0,82 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 0,40 g (3,3 mmol) dimetylaminopyridin i 10 ml acetonitril og 2 ml dimetylformamid ble det tilsatt 0,165 g (0,86 mmol) N-(3-dimetylaminopropyl)-N'-etylkarbodiimidhydroklorid. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 3 dager, deretter inndampet og skilt mellom vandig kaliumhydrogensulfat og metylenklorid. Metylenkloridlaget ble vasket med vandig natriumbikarbonat og vann, tørket (Na2SC<4) og inndampet. NMR-spekteret til råproduktet var tilfreds-stillende og produktet som inneholdt noe dimetylformamid ble benyttet i det neste trinnet uten ytterligere rensing. 1 H-NMR (500 MHz, CDC13): 5 0,8-2,2 (m, 32H; derav 1,41 (s, 9H)), 2,34 (m, IH), 2,77 (bt, 2H), 3,10 (m, IH), 3,29 (m, IK), 3,40 (m, IH), 3,83 (m, IH), 4,17 (m, 2H), 4,30 (m, IH), 4,54 (m, IH), 5,07 (m, IH), 5,08 (s, 2H), 7,03 (m, IK), 7,05-7,4 (m, 7H).
(ii) H-(R)Cha-Pro-Rig(Z)
En kolbe inneholdende råproduktet av Boc-(R)Cha-Pro-Rig(Z) i 10 ml etylacetat ble avkjølt i et isbad. Tørr HCI ble boblet gjennom i 5 min og oppløsningen ble inndampet for å bli kvitt overskuddet av HCI. Produktet ble oppløst i vann og ekstrahert to ganger med etylacetat for å fjerne dimetylformamidet fra det tidligere trinnet. Den vandige fasen ble gjort alkalisk med NaHCC>3 (vandig) og ekstrahert to ganger med metylenklorid. Den kombinerte organiske fasen ble vasket med vann, tørket (Na2SC«4) og inndampet. Utbytte: 0,37 g (81 %) over to trinn. '
i H-NMR (300 MHz, CDCI3): 8 0,8-2,4 (m, 24H), 2,82 (bt, 2H), 3,26 (m, 2H), 3,42 (bq, IK), 3,70 (m, 2H), 4,19 (m, 2H), 4,49 (bd, IH), 5,11 (s, 2H), 6,9-7,5 (m, 8H).
(iii) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Rig(Z)
En blanding av 0,18 g (0,32 mmol) H-(R)Cha-Pro-Rig(Z), et overskudd av kaliumkarbonat og 10 ml acetonitril ble oppvarmet ved 60°C i 2 timer. Oppløsningsmidlene ble inndampet og råmaterialet ble flashkromatografert på silisiumdioksydgel ved bruk av metylenkloridVmetanol 95/5 som elueringsmiddel. Utbytte: 0,20 g (88 %).
<i>H-NMR (300 MHz, CDC13): 8 0,8-2,1 (m, 23H), 2,37 (m, IH), 3,1-3,5 (m, 7H), 4,0-4,2 (m, 2H), 4,54 (m, IH), 5,1 (m, 4H), 6,9-7,5 (m, 13H).
(iv) HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Rig x 2 HCI
En blanding av 0,15 g (0,21 mmol) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Rig(Z), 10 ml etanol, 4 dråper kons. HCI og en liten mengde 5 % Pd/C ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 1 time. Blandingen ble filtrert gjennom celitt og inndampet. Resten ble lyofilisert i vann og dette ga 95 mg (64 %) av produktet. 1 H-NMR (500 MHz, MeOD): 8 0,85-2,1 (m, 23H), 2,30 (m, IH), 3,10 (m, 2H), 3,25 (m, IH), 3,35 (m, IH), 3,54 (m, IH), 3,85-4,0 (m, 3H), 4,03 (d, IH), 4,41 (m, IH), 4,50 (m, IH).
<13>C-NMR (125,8 MHz, D20): guanidin- og karbonylkarboner: 8 174,0,168,9,168,1, 157,7.
EKSEMPEL 80
I
HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Rig x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cha-Aze-Rig(Z)
Til en oppløsning av 0,25 g (0,82 mmol) 4-aminoetyl-l-benzyloksykarbonylamidinopiperidin (H-Rig(Z)), (se fremstilling av utgangsmaterialer), 0,31 g (0,86 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 0,40 g (3,3 mmol) dimetylaminopyridin i 10 ml acetonitril og 2 ml dimetylformamid ble det tilsatt 0,17 g (0,86 mmol)N-(3-dimetylaminopropyI)-N'-etylkarbodiimidhydroklorid. Reaksjonsblandingen fikk omrøres i 3 dager, ble deretter inndampet og skilt mellom vandig kaliumhydrogensulfat og metylenklorid. Metylenkloridlaget ble vasket med vandig natriumbikarbonat og vann, tørket (Na2S04). Råproduktet som inneholdt noe dimetylformamid ble benyttet i det neste trinnet uten ytterligere rensing. 1 H-NMR (500 MHz, CDCI3): 5 0,85 (m, IH), 0,97 (m, IH), 1,1-1,75 (m, 26H; derav 1,41 (s, 9H)), 1,82 (bd, IH), 2,53 (m, 2H), 2,77 (bt, 2H), 3,24 (m, 2H), 4,03 (q, IK), 4,08 (m, IH), 4,18 (m, 2H), 4,29 (m, IH), 4,78 (m, IH), 4,97 (m, IH), 5,09 (s, 2H), 7,1-7,4 (m, 7H), 7,65 (m, IH).
(ii) H-(R)Cha-Aze-Rig(Z)
En kolbe inneholdende råproduktet av Boc-(R)Cha-Aze-Rig(Z) i 100 ml etylacetat ble avkjølt i et isbad. Tørr HCI ble boblet gjennom i 5 min og oppløsningen ble inndampet for å bli kvitt overskuddet av HCI. Produktet ble oppløst i vann og ekstrahert to ganger med etylacetat for å fjerne dimetylformamidet fra det tidligere trinnet. Den vandige fasen ble gjort alkalisk med NaHC03 (vandig) og ekstrahert to ganger med metylenklorid. Den kombinerte organiske fasen ble vasket med vann, tørket (NaSC>4). og inndampet. Utbytte: 0,31 g (70 %) over to trinn. 1 H-NMR (300 MHz, CDCI3): 5 0,8-1,9 (m, 20H), 2,48 (m, IH), 2,73 (m, IH), 2,85 (bt, IH), 3,25 (m, IH), 3,35 (m, 2H), 4,05 (q, IH), 4,1-4,25 (m, 3H), 4,86 (m, IK), 5,12 (s, 2H9, 6,9-7,2 (m, 2H9, 7,2-7,45 (m, 5H9, 7,93 (m, IH).
(iii) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Rig(Z)
En oppløsning av 0,31 g (0,57 mmol) H-(R)Cha-Aze-Rig(Z) og 93 mg (0,57 mmol) benzylakrylat i 5 ml etanol ble hensatt ved romtemperatur i en uke. Den ble inndampet og flashkromatografert på silisiumdioksydgel ved bruk av metylenklorid/metanol 94/6 som elueringsmiddel. Utbytte: 0,20 g (49 %). 1 H-NMR (500 MHz, CDCI3): 5 0,8-1,0 (m, 2H), 1,1-1,8 (m, 18H), 2,48 (m, IH), 2,54 (bt, 2H), 2,68 (m, 2H9,2,81 (bt, 2H), 2,87 (m, IH), 3,20 (m, 1H9,3,25 (m, IH), 3,31 (m, IH), 4,04 (q, IH), 4,1-4,2 (m, 3H9,4,84 (dd, IH), 5,05-5,15 (m, 4H), 7,0-7,5 (m, 12H), 8,03 (m, IH).
(iv) HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Rig x 2 HCI
Tittelforbindelsen ble fremstilt og renset på samme måte som beskrevet i eksempel 80 fra 0,20 g (0,28 mmol) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Rig(Z). Utbytte: 30 mg (19 %) av dihydrokloirdsaltet. 1 H-NMR (500 MHz, CDCI3): 8 1,0-1,9 (m, 20H), 2,33 (m, IH), 2,70 (m, IH), 2,83 (m, 2H), 3,10 (m, 2H), 3,3-3,4 (m, 4H), 3,85 (bd, 2H), 3,92 (m, rotamer), 4,14 (t, IH), 4,17 (m, rotamer), 4,31 (m, IH), 4,46 (m, IH), 4,89 (m, 1H9, 5,18 (m, rotamer).
<13>C-NMR (125,8 MHz, D20) guanidin- og karbonylkarboner: 8 175,4,171,8,168,8, 156,3.
EKSEMPEL 81
HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-(S)Itp x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cha-Pro-(S)Itp(Ts)
Ved romtemperatur ble 0,87 g (2,36 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 0,78 g (4,72 mmol) DMAP og 0,70 g (2,36 mmol) H-(S)ItpfTs) (se fremstilling av utgangsmaterialer) oppløst i 2 ml acetonitril. Etter omrøring i 20 min ble 0,59 g (3,07 mmol) EDC tilsatt. Etter 18 timer ble oppløsningsmidlet fjernet i vakuum og resten ble oppløst i CH2C12, vasket med vann, sitronsyre (10 %), KHCO3 (vandig), vann og tørket med Na2S04- Inndampning ga 1,74 g (> 100 % utbytte (renhet ca 60 %)) av det ønskede produktet. Dette produktet ble benyttet i det neste trinnet uten ytterligere rensing.
FAB-MS: m/z = 647 (M<+>+l)
(ii) H-(R)Cha-Pro-(S)Itp(Ts)
Den Boc-beskyttende gruppen ble fjernet på samme måte som beskrevet for Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z) (se eksempel 72 (ii)) og dette ga 0,75 g (81 %) av tittelforbindelsen.
FAB-MS: m/z = 547 (M<+>+1)
(iii) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-(S)Itp(Ts)
0,75 g (1,37 mmol) H-(R)Cha-Pro-(S)Itp(Ts), 0,38 g (2,74 mmol) K2C03 ble opptatt i 15 ml acetonitril. 0,39 g (1,65 mmol) benzylbromacetat ble tilsatt og blandingen ble omrørt ved 50°C i 2 timer. Inndampning av oppløsningsmidlet fulgt av flashkromato-
grafi ved bruk av etylacetat/metanol 95/5 som elueringsmiddel ga ca 530 mg av det ønskede produktet.
FAB-MS: m/z 695 (M<+>+1)
(iv) HOOC-CH2-(R)Cha-PTO-(S)Itp x 2 HCI
0,53 g (0,76 mmol) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-(S)Itp(Ts) ble oppløst i 15 ml THF, NH3 (g) ble kondensert i kolben og Na (m) ble tilsatt. Reaksjonen ble stoppet etter 30 min med eddiksyre, og NH3 og THF ble inndampet. Resten ble frysetørket fra vann og råproduktet ble renset ved RPLC (acetonitril/0,1 M HOAc 15/85) ga 0,25 g (61 %) av det ønskede produktet etter frysetørking fra vandig HCI. 1 H-NMR (500,13 MHz, D20): 6 0,9-2,09 (overlapping m, 20H), 2,22-2,35 (m, IH), 3,2-3,36 (m, 4H), 3,44-3,63 (overlapping m, 2H), 3,7-3,8 (m, IH), 3,87-3,99 (m, 2H), 4,33-4,48 (overlapping m, 2H).
<13>C-NMR (500,13 MHz, D20); karbonyl- og guanidinkarboner: 5 154,3,168,1, 169,0 og 174,2.
EKSEMPEL 82
H-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig x 2 HCI
(i) Boc-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig x 2 HCI
174 mg (0,471 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 229 mg (1,87 mmol) DMAP, 130 mg (0,471 mmol) H-(R,S)Nig(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialer) ble blandet i 2 ml CH2C12 og 117 mg (0,61 mmol) EDC ble tilsatt og blandingen ble omrørt i 4 dager. Blandingen ble fortynnet med CH2C12 og vasket med vann, to ganger med 0,3 M KHS04-oppIøsning og en gang med saltoppløsning. Det organiske laget ble tørket (Na2S04), filtrert og inndampet og råproduktet ble renset to ganger ved flashkromatografi ved bruk av CH2Cl2/MeOH 95/5 som elueringsmiddel den første gangen og CH2Cl2/MeOH 97/3 som elueringsmiddel den andre gangen, og dette ga 0,104 g (35 %) av tittelforbindelsen.
MSm/z627(M<+>+l)
(ii) H-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig x 2 HCI
10 mg (0,016 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig(Z) ble oppløst i 15 ml etylacetat mettet med HCI. Blandingen ble hensatt i en halv time. Blandingen ble inndampet og resten ble oppløst i 6 ml etanol og 8 mg 5 % Pd/C (5 %) og 0,1 ml 1 M HCl-oppløsning ble tilsatt og blandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i en og en halv time. Filtrering gjennom hyflo og inndampning av oppløsningsmidlet ga 4 mg av tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (300 MHz, D20): 5 0, 9- 1, 58 (m, 6H), 1,58-2,45 (m, 13H), 2,65 (m, IH), 3,19 (m, IH), 3,34 (d, 2H), 3,4-3,73 (m, 4H), 3,82 (m, IH), 4,34-4,49 (m, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz, D20): karbonyl- og guanidinkarboner: 8 155,1,169,9 og 174,8.
EKSEMPEL 83
H-(R)Pro-Phe-Pab x 2 HCI
(i) Boc-(R)Pro-Phe-Pab(Z)
Til en blanding av 1,2 g (3,31 mmol) Boc-(R)Pro-Phe-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer) og 1,70 g (13,91 mmol) DMAP i 40 ml CH3CN ved romtemperatur ble 0,98 g (3,35 mmol) H-Pab(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialer) oppløst i 1 ml DMF, tilsatt. Etter omrøring i 2 timer ble reaksjonsblandingen avkjølt til -18°C og 0,66 g (3,48 mmol) EDC ble tilsatt porsjonsvis og reaksjonsblandingen hensatt ved romtemperatur natten over. Oppløsningsmidlet ble inndampet og resten ble oppløst i 100 ml EtOAc og vasket med 1 x 30 ml vann, 3 x 30 ml 0,3 M KHSO4,1 x 30 ml Na2C03,1 x 30 ml vann og tørket. Inndampning av oppløsningsmidlet fulgt av flashkromatografi ved bruk av CH2Cl2/MeOH (95/5) som elueringsmiddel ga 0,691 g (38 %) av tittelforbindelsen.
(ii) H-(R)Pro-Phe-Pab(Z)
0,673 g Boc-(R)Pro-Phe-Pab(Z) ble oppløst i 30 ml EtOAc og oppløsningen ble mettet med HCI (g) i noen minutter (et hvitt fast stoff ble utfelt fra oppløsningen). Oppløs-ningsmidlet og overskudd HCI ble inndampet og 60 ml EtOAc ble tilsatt til resten og den organiske fasen ble vasket med 2 x 20 ml 2 M NaOH. Vaskevannet ble ekstrahert med 1 x 25 ml EtOAc som ble kombinert med den andre EtOAc-fasen og den kombi-
nerte organiske fasen ble vasket vann, tørket og inndampet og dette ga 560 mg (98 %) av det ønskede produktet.
<i>H-NMR (500 MHz, CDC13): 8 1,5-1,74 (m, 3H), 1,98-2,05 (m, IH), 2,78-2,85 (m, IH), 2,90-2,96 (m, IH), 3,0-3,2 (ABX-system sentrert ved 3,1,2H), 3,62 (dd, IH), 4,3-4,45 (ABX-system sentrert ved 4,37, 2H), 4,58 (q, IH), 5,22 (s, 2H), 6,96 (bt, IH), 7,1-7,4 (m, 10H), 7,46 (d, 2H), 7,76 (d, 2H), 8,12 (d, 1H9.
(iii) H-(R)Pro-Phe-Pab x 2 HCI
200 mg H-(R)Pro-Phe-Pab(Z) ble oppløst i 10 ml 95 % EtOH og 2 ml vann og blandingen ble hydrogenert over 5 % Pd/C ved atmosfæretrykk i 5 timer. Filtrering av katalysatoren og tilsetning av 1 M HCI fulgt av inndampning og frysetørking fra vann ga tittelforbindelsen i et utbytte på 88 %.
<i>H-NMR (500 MHz, CDCI3): 8 1,51-1,59 (m, IH), 1,69-1,80 (m, IH), 1,87-1,97 (m, IH), 2,19-2,29 (m, IH), 2,90 (dd, IH), 3,20-3,33 (m, 3H, delvis skjult av oppløsnings-middeltoppen), 4,27 (m, IH), 4,43-4,54 (AB-system sentrert ved 4,48, 2H), 4,75-4,81 (m, IH), 4,87 (s, 2H), 7,2-7,3 (m, 5H), 7,45 (d, 2H), 7,75 (d, 2H9.
<13>C-NMR(125 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 166,7, 170,1 og 173,4.
EKSEMPEL 84
HOOC-CH2-(R)Pro-Phe-Pab x 2 HCI
(i) BnOOC-CH2-(R)Pro-Phe-Pab(Z)
Til en oppslemming av 244 mg (0,462 mmol) H-(R)Pro-Phe-Pab(Z) (se eksempel 83) og 159,9 mg (1,157 mmol) K2C03 i 8 ml DMF/CH3CN (5/3) ble det tilsatt 127,2 mg (0,555 mmol) benzylbromacetat oppløst i 2 ml DMF og blandingen ble omrørt ved 60°C i 1,5 timer og ved romtemperatur natten over. Oppløsningsmidlet ble inndampet og resten ble oppløst i 50 ml EtOAc, vasket med 2 x 20 ml vann og tørket (Na2S04) Inndampning av oppløsningsmidlet fulgt av flashkromatografi ved bruk av CH2Cl2/MeOH (9/1) som elueringsmiddel ga 176 mg (56 %) av tittelforbindelsen som et hvitt fast stoff. 1 H-NMR (300 MHz, CDCI3): 8 1,45-1,80 (m, 3H), 2,06 (m, IH), 2,54 (m, IH), 2,92-3,28 (m, 6H), 4,3-4,5 (ABX-system sentrert ved 8 4,4,2H), 4,60 (dd, IH), 5,10 (tydelig s, 2H), 5,2 (tydelig s, 2H), 7,1-7,4 (m, 15H), 7,43 (d, 2H), 7,75 (d, 2H), 7,932 (d, IH).
(ii) HOOC-CH2-(R)Pro-Phe-Pab x 2 HCI
170 mg (0,252 mmol) BnOOC-CH2-(R)Pro-Phe-Pab(Z) ble oppløst i 12 ml EtOH/vann (5/1) og hydrogenert over 5 % Pd/C ved atmosfæretrykk i 4,5 timer. Katalysatoren ble frafiltrert, oppløsningsmidlet inndampet og resten frysetørket fra HCI (vandig) hvilket ga tittelforbindelsen.
<i>H-NMR (500 MHz, CD3OD): 8 1,62 (m, IH), 1,82 (m, IH), 2,08 (m, IH), 2,38 (m, IH), 2,90 (dd, IH), 3,25-3,35 (m, 2H, delvis skjult av oppløsningsmiddeltoppen), 3,80 (m, IH), 4,08-4,19 (AB-system sentrert ved 8 4,19, 2H), 4,39 (m, 1H9,4,45-4,58 (AB-system sentrert ved 8 4,50,2H), 4,80 (m, IH), 7,20-7,35 (m, 5H), 7,45 (d, 2H), 7,75 (D, 2H).
<13>C-NMR (125 MHz, D20): amidin- og karbonylkarboner: 8 166,8,169,1,169,5 og 173,2.
EKSEMPEL 85
H-(R)Phe-Phe-Pab(Z)
Boc-(R)Phe-Phe-OH (16,4 mmol) (se fremstilling av utgangsmaterialer), Pab(Z)-HCl (18,0 mmol) og 4-dimetylaminopyridin (24,6 mmol) ble oppløst i 50 ml acetonitril. Oppløsningen ble avkjølt til isvanntemperatur og l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etyl-karbodiimidhydroklorid (21,3 mmol) ble tilsatt. Avkjølingsbadet ble fjeret og reaksjonsblandingen ble omrørt natten over. Oppløsningsmidlet ble deretter inndampet under redusert trykk, resten ble oppløst i 50 ml etylacetat og den resulterende oppløsning ekstrahert med 50 ml vann. Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z) som felte seg ut fra tofasebland-ingen ble filtrert og vasket med vann hvilket ga 8,7 g (78 %) etter tørking under vakuum ved 45°C i 24 timer. <l>H NMR (200 MHz, d-CHCl3 og d4-CH30H); 5 8,35-7,00 (m, 19H), 4,63 (t, IH), 4,3-4,1 (m, IH), 3,40-2,70 (m, 6H), 1,30 (s, 9H).
(ii) H-(R)Phe-Phe-Pab(Z)
Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (10,3 mmol) ble oppslemmet i 70 ml etylacetat og 31 ml 3,3 M etylacetat/HCl ble tilsatt. Oppslemmingen ble omrørt i 4 timer hvoretter hydrokloridsaltet av H-(R)Phe-Phe-Pab(Z) ble frafiltrert og vasket med flere porsjoner etylacetat. Saltet ble oppløst i en blanding av 50 ml metylenklorid, 50 ml 1 M kaliumkarbonat og ca 5 ml etanol. Det organiske laget ble oppsamlet og oppløsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk og dette ga 5,0 g H-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (84 %). 1 H-NMR (200 MHz, d6-DMSO); 8 9,1 (s, 2H), 8,59 (m, IH), 8,1 (m, IK), 7,90 (d, 2H), 7,4-7,0 (m, 17H), 5,09 (s, 2H), 4,58 (m, IH), 4,31 (m, 2H), 3,1-2,7 (m, 4H9. (iii) H-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,42 mmol) ble oppløst i 10 ml tetrahydrofuran og 1 ml vann. Palladium på trekull (42 mg) ble tilført til oppløsningen og blandingen ble hydrogenert ved 310 KPa-hydrogentrykk i et Parr-rysteapparat i 2 dager. Etter fullstendig hydrogenolyse ble blandingen fortynnet med metanol og katalysatoren ble frafiltrert. Inndampning av oppløsningsmidlet ga urent H-(R)Phe-Phe-Pab som ble renset ved kromatografi på nøytralt aluminiumoksyd (70-230 mesh) ved eluering med metylenklorid-metanol-ammoniumhydroksyd (80:20:2). Utbytte 76 mg av tittelforbindelsen (41 %). <i>H NMR (200 MHz, d6-DMSO); 8 7,61 (d, 2H), 7,4-7,0 (m, 12H), 4,64 (m, IH), 4,44 (m, 2H), 4,13 (t, IH), 3,1-2,8 (m, 4H).
EKSEMPEL 86
HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab
(i) MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z)
H-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,87 mmol) (se eksempel 85 (ii)) ble oppløst i 10 ml tetrahydrofuran. Oppløsningen ble avkjølt på et bad med isvann og trietylamin (1,73 mmol) fulgt av metyloksalylklorid (0,95 mmol) ble tilsatt. Avkjølingsbadet ble fjernet og reaksjonsblandingen omrørt i 18 timer ved omgivelsestemperatur. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med etylacetat og ekstrahert med vann. Den organiske fasen ble oppsamlet og oppløsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk og dette ga 0,45 g MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (78 %) som ble benyttet i det neste trinnet uten ytterligere rensing. TSP-MS funnet m/z 664 (beregnet for MH<+> (037^3^07) 664).
(ii) HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z)
MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,68 mmol) ble oppløst i 4 ml tetrahydrofuran og 2
ml vann. Litiumhydroksyd (2,6 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 1,5 timer. Etter fullstendig hydrolyse ble reaksjonsblandingen fortynnet med 25 ml vann og surgjort ved tilsetning av 0,5 ml eddiksyre. Bunnfallet ble filtrert og vasket med flere porsjoner vann og dette ga 0,40 g urent HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) etter tørking under vakuum ved 45°C i 24 timer. Råproduktet ble oppslemmet i 10 ml etanol og 1 ml vann. Oppløsningen ble bragt til tilbakeløp og den uoppløselige tittelforbindelsen ble frafiltrert, og dette ga 0,23 g HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (41 % over to trinn). tø NMR (200 MHz, dg-DMSO); 8 8,62 (m, 2H), 8,41 (d, IH), 7,89 (d, 2H), 7,4-6,9 (m, 17H), 5,10 (s, 2H), 4,54 (m, 2H), 4,34 (m, 2H), 3,2-2,6 (m, 4H).
(iii) HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab
HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,20 mmol) ble oppslemmet i 20 ml tetrahydrofuran og 5 ml vann. Palladium på trekull (52 mg) ble tilført til oppløsningen og blandingen ble hydrogenert ved 310 KPa-hydrogentrykk i et Parr-rysteapparat i 2 dager. Etter fullstedig hydrogenolyse ble blandingen fortynnet med 40 ml metanol og katalysatoren ble frafiltrert. Inndampning av oppløsningsmidlene ga 50 mg av tittelforbindelsen (49 %). <t>ø-NMR (200 MHz, d6-DMSO); 5 9,2 (s), 8,78 (d), 8,60 (m), 7,91 (m), 7,79 (d, 2H), 7,35-6,8 (m, 12H), 4,6-4,0 (m, 4H), 3,0-2,6 (m, 4H).
EKSEMPEL 87
HOOC-CH2-(R)Phe-Phe-Pab
(i) BnOOC-CH2-(R)Phe-Phe-Pab(Z)
H-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,87 mmol) (se eksempel 85 (ii)) og natriumkarbonat (2,6 mmol) ble oppslemmet i 10 ml acetonitril. Iodbenzylacetat (0,95 mmol) ble tilsatt til blandingen og oppløsningen ble oppvarmet til 30°C og omrørt ved denne temperaturen i 2 dager. Etter fullstendig alkylering ble oppløsningsmidlet fjernet og resten oppløst i 10 ml etylacetat. Oppløsningen ble hurtig ekstrahert med 10 ml vann og fra den opp-samlede organiske fasen felte tittelforbindelsen seg ut. BnOOC-CH2-(R)Phe-Phe-Pab(Z) ble frafiltrert og tørket under vakuum ved 45°C i 24 timer og dette ga 177 mg BnOOC-CH2-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (28 %). <t>ø NMR (200 MHz, CDCI3); 8 7m79 (d, 2H), 7,5-7,1 (m, 22H), 6,55 (t, IH), 5,21 (s, 2H), 5,03 (s, 2H), 4,64 (m, IH), 4,41 (m, 2H), 3,3-2,6 (m, 7H).
(ii) BnOOC-CH2-(R)Phe-Phe-Pab(Z)
BnOOC-CH2-(R)Phe-Phe-Pab(Z) (0,32 mmol) ble oppslemmet i 30 ml tetrahydrofuran og 3 ml vann. Palladium på trekull (41 mg) ble tilført til oppløsningen og blandingen ble hydrogenert ved 310 KPa-hydrogentrykk i et Parr-rysteapparat i 2 dager. Etter fullstendig hydrogenolyse ble blandingen fortynnet med 40 ml vann og katalysatoren ble frafiltrert. Inndampning av oppløsningsmidlene ga 95 mg av tittelforbindelsen (59 %). TSP-MS funnet m/z 502 (beregnet for MH<+> (C28H32N5C>4) 502).
EKSEMPEL 88
H-(R)Cha-Pro-Mig
(i) Boc-(R)Cha-Pro-Mig(Z)
Til en omrørt blanding av 0,344 g (0,93 mmol Boc-(R)Cha-Pro-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 0,245 g (0,93 mmol) H-Mig(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialer) og 0,227 g (1,86 mmol) DMAP i 10 ml CH3CN ble 0,232 g (1,21 mmol) EDC tilsatt ved -10°C. Reaksjonsblandingen fikk nå romtemperatur og ble hensatt i 5 dager. CH3CN ble inndampet og resten ble oppløst i EtOAc og vasket med H2O, NaHC03 (vandig) og saltoppløsning. Det organiske laget ble tørket med Na2S04 og inndampet. Råproduktet ble renset ved flashkromatografi ved bruk av en gradient av EtOAc/MeOH, 95/5 til 90/10, som elueringsmiddel og dette ga 0,340 g (60 %) av tittelforbindelsen.
(ii) H-(R)Cha-Pro-Mig(Z)
0,34 g (0,55 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-Mig(Z) ble oppløst i 8 ml EtOAc mettet med HCI (g) og omrørt i 10 min ved romtemperatur. 10 ml av en mettet oppløsning av KOH (vandig) ble tilsatt dråpevis. Lagene ble separert og den vandige fasen ble ekstrahert med 3 x 8 ml EtOAc. De organiske lagene ble kombinert, vasket med saltoppløsning, tørket med Na2S04 og inndampet og dette ga 0,286 g (100 %) av tittelforbindelsen.
(iii) H-(R)Cha-Pro-Mig
0,050 g (0,132 mmol) H-(R)Cha-Pri-Mig(Z) ble oppløst i 3 ml MeOH og hydrogenert over 10 % Pd/C ved atmosfæretrykk natten over. Oppløsningen ble filtrert gjennom celitt og oppløsningsmidlet inndampet og dette ga 0,040 g (80 %) av tittelforbindelsen. 1 H-NMR (500 MHz, MeOD): 5 0.92-1,02 (m, 2H), 1,18-1,47 (m, 6H), 1,66-1,73 (m, 4H), 1,85-2,04 (m, 4H), 2,17-2,22 (m, IH), 2,95-2,98 (m, IH), 3,12-3,16 (m, IH), 3,47-3,55 (m, 2H), 3,62-3,66 (m, IH), 3,75-3,78 (m, IH), 3,85-3,89 (m, IH), 4,05^,12 (m, 3H), 4,34-4,37 (m, IH).
Signaler fra en underordnet rotamer viser seg ved: 8 3,4, 3,7,4,13-4,16,4,3.
MS m/z 379 (M++I).
EKSEMPEL 89
H-(R)Cha-Pro-Dig
(i) Boc-(R)Cha-Pro-Dig(Z)
Til en omrørt blanding av 0,280 g (0,76 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH (se fremstilling av utgangsmaterialer), 0,210 g (0,76 mmol) H-Dig(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialer) og 0,186 g (1,52 mmol) DMAP i 8 ml CH3CN ble 0,189 g (0,99 mmol) EDC tilsatt ved -10°C. Reaksjonsblandingen fikk nå romtemperatur og ble hensatt i 4 dager. CH3CN ble inndampet og resten ble oppløst i EtOAc og vasket med H2O, NaHC03 (vandig) og saltoppløsning. Det organiske laget ble tørket med Na2S04 og inndampet. Råproduktet ble renset ved flashkromatografi ved bruk av en gradient av EtOAc/MeOH, 95/5 til 90/10, som elueringsmiddel og dette ga 0,210 g (44 %) av tittelforbindelsen.
(ii) H-(R)Cha-Pro-Dig(Z)
0,210 g (0,33 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-Dig(Z) ble oppløst i 8 ml EtOAc mettet med HCI (g) og omrørt i 10 min ved romtemperatur. 8 ml av en mettet oppløsning av KOH (vandig) ble tilsatt dråpevis. Lagene ble separert og den vandige fasen ble ekstrahert med 3 x 8 ml EtOAc. De organiske lagene ble kombinert, vasket med saltoppløsning, tørket med Na2S04 og inndampet og dette ga 0,146 g (83 %) av tittelforbindelsen.
(iii) H-(R)Cha-Pro-Dig
0,046 g (0,087 mmol) H-(R)Cha-Pro-Dig(Z) ble oppløst i 3 ml MeOH og hydrogenert over 10 % Pd/C ved atmosfæretrykk natten over. Oppløsningen ble filtrert gjennom celitt og oppløsningsmidlet inndampet og dette ga 0,040 g (100 %) av tittelforbindelsen.
<t>ø-NMR (500 MHz, MeOD): 6 0,90-1,04 (m, 2H), 1,10-1,47 (m, 6H), 1,66-1,74 (m, 4H), 1,78-2,05 (m, 4H), 2,13-2,21 (m, IH), 2,74-2,83 (m, IH), 2,94-2,99 (m, 1H9, 3,15-3,29 (m, IH), 3,44-3,57 (m, 2H), 3,65-3,87 (m, 3H9,4,07-4,25 (m, 3H), 4,35-4,39 (m, 2H).
Signaler fra en underordnet rotamer vises ved: 8 4,29-4,32.
MS m/z 393 (M<+>+1)
EKSEMPEL 90
H-(R)Cba-Aze-Dig
(i) Boc-(R)Cha-Aze-Dig(Z)
Tittelforbindelsen ble fremstilt fra Boc-(R)Cha-Aze-OH og H-Dig(Z) (se fremstilling av utgangsmaterialer) ifølge fremgangsmåten for Boc-(R)Cha-Pro-Dig(Z) i et utbytte på 0,253 g (54%).
(ii) H-(R)Cha-Aze-Dig(Z)
Tittelforbindelsen ble fremstilt fra Boc-(R)Cha-Aze-Dig(Z) ifølge fremgangsmåten for Boc-(R)Cha-Pro-Dig(Z) i et utbytte på 0,210 g (100 %).
(iii) H-(R)Cha-Aze-Dig
0,060 g (0,117 mmol) H-(R)Cha-Aze-Dig(Z) ble opplast i 3 ml MeOH og hydrogenert over 10 % Pd/C ved atmosfæretrykk natten over. Oppløsningen ble filtrert gjennom celitt og oppløsningsmidlet inndampet og dette ga 0,042 g (95 %) av tittelforbindelsen. 1 H-NMR (500 MHz, MeOD): 5 0.91-1,02 (m, 2H), 1,18-1,48 (m, 6H), 1,66-1,90 (m, 8H), 2,15-2,17 (m, IH), 2,66-2,68 (m, IH), 2,80-2,83 (m, IH), 3,14-3,29 (m, IH), 3,39-3,44 (m, 1H9, 3,72-3,80 (m, 2H9, 4,01-4,04 (m, 1H9,4,14-4,23 (m, 2H9,4,48-4,49 (m, 1H9,4,60-4,64 (m, IH).
Signaler fra en underordnet rotamer vises ved: 8 2,25, 2,6,4,3,4,67.
MS m/z 379 (M<+>+1).
Eksempler på farmasøytiske preparater
Forbindelsen ifølge foreliggende forbindelse kan formuleres i faste doseringsformer for oral administrasjon slik som enkle tabletter, belagte tabletter eller modifiserte tabletter med frigjøringsvirkning. Flytende eller faste-halvfaste doseringsformer for rektal administrasjon. Lyofilisert substans eller væsker som emulsjon eller suspensjon for parenteral bruk. Flytende, faste eller halvfaste doseringsformer for topisk administrasjon,
I aerosoler under trykk eller i tørrpulver-inhalatorer for oral eller nasal inhalering.
EKSEMPEL Pl
Tabletter for oral administrasjon
1000 tabletter fremstilles fra følgende bestanddeler:
Den aktive bestanddelen og laktose blandes med en vandig oppløsning av polyvinyl-pyrrolidon. Blandingen tørkes og males for dannelse av granuler. Den mikro-krystallinske cellulosen og deretter magnesiumstearatet blir så tilblandet. Blandingen presses deretter i en tablettmaskin hvilket gir 1000 tabletter, som hver inneholder 100 mg aktiv bestanddel.
EKSEMPEL P2
Oppløsning for parenteral administrasjon
En oppløsning fremstilles fra følgende bestanddeler:
Natriumhydroksyd for pH-justering ad pH 5-7
Vann for injeksjon opptil 1000 ml.
Den aktive bestanddelen og natriumkloridet oppløses i vannet. pH-verdien justeres med 2 M NaOH til pH 3-9 og oppløsningen fylles i sterile ampuller.
EKSEMPEL P3
Tabletter for oral administrasjon
1-4 blandes og en vandig oppløsning av 5 tilsettes. Blandingen tørkes og males og 6 innblandes. Blandingen presses deretter i en tablettmaskin.
EKSEMPEL B6
Inhalatorpulver
Den aktive forbindelsen mikroniseres i en strålemølle til en partikkelstørrelse som er egnet for inhalering (massediameter < 4 um).
100 mg av det mikroniserte pulveret fylles i en flerdose-pulverinhalator (Turbohaler<®>). Inhalatoren er utstyrt med en doseringsenhet som avleverer en dose på 1 mg.
Biologi
Bestemmelse av trombin- levringstid ( TD:
Human trombin (T 6769, Sigma Chem Co) i bufferoppløsning, pH 7,4,100 ul, og inhibitoroppløsning, 100 ul, ble inkubert i 1 min. Oppsamlet normalt sitratbehandlet humanplasma, 100 ul, ble deretter tilsatt og levringstiden målt i en automatisk anordning (KC 10, Amelung).
Levringstiden i sekunder ble plottet mot inhibitorkonsentrasjonen, og IC5øTT-verdien ble bestemt ved interpolasjon.
ICfoTT-verdien er den konsentrasjon av inhibitor som fordobler trombin-levringstiden for humanplasma.
Bestemmelse av aktivert partiell tromboplastintid ( APTTl
APTT ble bestemt i et oppsamlet, normalt, sitratbehandlet humanplasma med reagensen PTT Automated 5 produsert av Stago. Inhibitorene ble tilsatt til nevnte plasma (10 ul inhibitoroppløsning til 90 ul plasma) og APTT ble bestemt i blandingen ved bruk av koagulasjonsanalysatoren KC10 (Amelung) ifølge instruksjonene fra reagensprodu-senten. Levringstiden i sekunder ble plottet mot inhibitorkonsentrasjonen i plasma og IC5oAPTT-verdien ble bestemt ved interpolasjon.
IC5oAPTT-verdien er definert som den konsentrasjon av inhibitor i plasma som for-doblet den aktiverte partielle tromboplastintiden.
Bestemmelse av trombintid ex vivo
Inhiberingen av trombin etter oral administrasjon av forbindelsene ble undersøkt i bevisste rotter som 2 dager forut for forsøket hadde blitt utstyrt med et kateter for blodprøvetakning fra karotidarterien. På forsøksdagen ble blodprøver fjernet ved fastsatte tidspunkt etter administrasjonen av forbindelsen i plastreagensrør inneholdende en natriumsitratoppløsning (0,13 mol pr 1) og 9 deler blod. Reagensrørene ble sentri-fugert for oppnåelse av blodplatefattig plasma. Plasmaet ble benyttet for bestemmelse av trombintid som beskrevet i det nedenstående.
Det sitratbehandlede rotteplasmaet, 100 ul, ble fortynnet med en saltoppløsning, 0,9 %, 100 ul, og plasmakoagulasjon ble startet ved tilsetning av human trombin (T 6769, Sigma Chem Co, USA) i en bufferoppløsning, pH 7,4, 100 ul. Levringstiden ble målt i en automatisk anordning (KC 10, Amelung, Tyskland).
Bestemmelse av inhiberingskonstanten Kj for plasmakallikrein
Kj bestemmelser ble foretatt med en kromogen substratmetode og utført i en Cobas Bio-sentrifugalanalysator produsert av Roche (Basel, Sveits). Resterende enzymaktivitet
etter inkubasjon av humanplasmakallikrein med forskjellige konsentrasjoner av testfor-bindelse ble bestemt ved tre forskjellige substratkonsentrasjoner, og målt som for-andring i optisk absorbans ved 405 nm og 37°C.
Human plasmakallekrein (E.C.3.4.21.34, Chromogenix AB, Molndal, Sverige), 250 ul av 0,4 nkat/ml i buffer (0,05 mol/l Tris-HCl, pH 7,4,10,15 justert med NaCl) med bovin albumin 5 g/l (eat no 810033 ICI Biochemicals Ltd, High Wycombe, Bucks, GB) ble inkubert i 300 s med 80 ul testforbindelseoppløsning i 0,15 mol/l NaCl inneholdende albumin 10 g/l. Ytterligere 10 ul vann ble tilført i dette trinnet. 40 ul kallikreinsubstrat (S-2302, Chromogenix AB, 1,25, 2,0 eller 4,0 mmol/1 i vann) ble deretter tilsatt sammen med ytterligere 20 ul vann, og absorbansendringen overvåket.
Kj ble evaluert utfra Dixon-plots, dvs. grafiske fremstillinger av inhibitorkonsentrasjon mot 1/ AA/min) hvor dataene for de forskjellige substratkonsentrasjonene danner rette linjer som skjærer hverandre ved x= -Kj.
Forsøksresultater
Nedenstående Tabell 1 angir oppnådde data som viser at forbindelsene i ovenfor angitte eksempler har evne til å inhibere trombinlevringstid i human plasma. Videre angir nedenstående Tabell 2 data som viser at den eksemplifiserte forbindelsen er en kallikreininhibitor.
FORKORTELSER
Ac = Acetyl
aq = Vandig
Aze = azetidin-2-karboksylsyre
betaPic = piperidin-3-karboksylsyre
Boe = tert-butyloksykarbonyl
Boc-DigfZ) = 3-(N-tert-butyloksykiui3onylammoetyl)-l-(K-ber^
karbonylamidino)azetidin
Boc-Mig(Z) = 3-(N-tert-butyloksykarbonylaminometyl)-1 -(N-benzyloksy-karbonylamidino)azetidin
Boc-Pig(Z) = 4-(N-tert-butyloksykarbonylarnmometyl)-l-(^-berizyIoksy^
karbonylamidino)piperidin
Boc-Pig(Z)2 = 4-(N-tetr-butyloksykarbonylammome^^
olesykarbonylarm\uno)piperidin
Brine = mettet vann/NaCl-oppløsning
Bn = Benzyl
Bu = Butyl
Cgl = Cykloheksylglysin
Cha = 6-cykloheksylalanin
CME-CDI = 1 -cykloheksyI-3-(2-morfolinoetyl)-karbodiimidmeto-p-toluen-sulfonat
DBU= l,8-diazabicyklo[5.4.0]undec-7-en
DCC = Dicykloheksylkarbodiimid
DCU = Dicyklheksylurea
DMAP = N,N-dimetylaminopyridin
DMF = Dimetylformamid
DMSO = Dimetylsulfoksyd
EDC = l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydroklorid Et = Etyl
EtOAc = Etylacetat
EtOH = Etanol
Gly = Glysin
h = Timer
HCI = Saltsyre
Hex = Heksyl
HOAc = Eddiksyre
HOBt = N-hydroksybenzotriazol
Hoc = Homocykloheksylalanin
Hop = Homofenylalanin
HOSu = N-hydroksysuksinimid
H-Dig(Z) = 3-aminoetyl-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)azetidin H-Dig = 3-aminoetyl-l-amidinoazetidin
H-(R,S)Hig(Z) = (3RS)-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)-3-aminoetyl-pyrrolidin
H-(R,S)Hig = (3RS)-l-amidino-3-aminoetylpyrrolidin
H-Hig = 1 -amidino-3-aminoetylpyrrolidin
H-(R,S)Itp(Ts) = (4RS)-I,3-diaza-2-tosyIimino-4-aminoetylcykloheksan H-(R,S)Itp = (4S)-1,3-diaza-2-imino-4-aminoetylcykloheksan
H-Itp = l,3-diaza-2-imino-4-aminoetylcykloheksan H-Mig(Z) = 3-aminometyl-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)azetidin H-Mig = 3-aminometyl-l-amidinoazetidin
H-(R,S)Nig(Z) = (3RS)-1 -(N-benzyloksykarbonylamidino)-3-aminometyl-pyrrolidin
H-(R,S)Nig(Z) = (3RS)-l-amimno-3-aminometylpyrrolidin
H-Nig = l-amidino-3-arninometylpyrrolidin
H-Pab= l-amidino-4-aminometylbenzen
H-Pab(Z) = 4-aminometyl- l-(N-benzyloksykarbonylamidino)benzen
H-Pac = l-amidino-4-aminometylcykloheksan
H-Pac(Z) = 4-aminometyl-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)cykloheksan H-Pig = 4-aminometyl-1 -amidinopiperidin
H-Pig(Z) = 4-aminometyl- l-(N-benzyloksykarbonylamidino)piperidin H-Pig(Z)2 = 4-aminometyl-1 -(N,N'-dibenzyloksykarbonylamidino)piperidin H-Rig(Z) = 4-aminoetyl-1 -(N-benzyloksykarbonylamidino)piperidin
H-Rig = 4-aminoetyl-1-N-amidinopiperidin
Me = Metyl
MeOH = Methanol
Mpa = mega pascal
Ms = Mesyl
NMM = N-metylmorfolin
Pd/C = palladium på trekull
Pgl = Fenylglysin
Phe = Fenylalanin
Pic = Pipecolinsyre
Pro = Prolin
RPLC = reversfase-høyytelsevæskekromatografi
Tf= Trifluormetylsulfonyl
TFA = Trifluoreddiksyre
THF = Tetrahydrofuran
Tic = l-karboksy-l,2,3,4-tetrahydroisoquionolin
Ts = Tosyl
Val = Valin
Z = Benzyloksykarbonyl
Prefikser n, s, i og t har deres vanlige betydninger: normal, iso, sek og tertiær. Stereo-kjemien for aminosyrene er ifølge standard (S) dersom ikke annet er angitt.
De bølgeformede linjene på nitrogenatomene i de strukturelle formlene i det nedenstående betegner fragmentets bindingsposisjon).

Claims (36)

1. Forbindelse, karakterisert ved den generelle formel: hvor: A' representerer et strukturelt fragment av formel Ila, Hb eller De; hvor k er et helt tall 0, 1,2,3 eller 4; q er et helt tall 0, 1,2 eller 3; Ri representerer H, en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller R* lOOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og er eventuelt substituert i stillingen soni er alfa til karbonylgruppen, og alfa-substituenten er en gruppe R<17->(CH2)p-, hvor p er 0,1 eller 2 og Ri? er metyl, COOR<*2>, hvor R^2 er H eller en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, og R<*1> er H eller en alkylgruppe med 1-6 karbonatomer, eller Ri representerer R^-NH-CO-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og eventuelt er substituert alfa til karbonylgruppen med en alkylgruppe som har 1-4 karbonatomer og hvor R<13> er H eller -CH2COOR<12>, hvor R<*2> er som definert ovenfor, eller
R.<1> representerer R<l2>OOC-CH2-OOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer, og hvor R<i2> er definert ovenfor, eller Ri representerer Rl4S02-, Ph(4-COOR12)-S02-, Ph(3-COOR12)-S02-, Ph(2-COOR^2)-S02-, hvor R^<2> er som definert ovenfor og R<*4> er en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller Ri representerer -CO-R^, hvor R<15> er en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller Ri representerer -CO-OR*^ hvor R<l5> er som definert ovenfor, eller Ri representerer -CO-(CH2)p-COOR^<2>, hvor R<*2> er som definert ovenfor og p er et helt tall 0,1 eller 2, eller R<2> representerer H eller en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer eller R<2>^OOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og, hvor R<2*> er H eller en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer; R<3> representerer en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller R<3> representerer en cyklopentyl-, cykloheksyl- eller en fenylgruppe; R<4> representerer H eller en fenylgruppe; A<2> representerer et strukturelt fragment av formel nia, DTb eller JHc hvor: p er et helt tall 0, 1 eller 2; m er et helt tall 1, 2,3 eller 4; Y representerer en metylengruppe, eller Y representerer en etylengruppe, eller Y representerer en n-propylengruppe, R<3> er som definert ovenfor: R<5> representerer H, eller n er et helt tall 0,1, 2,3 eller 4; B representerer et strukturelt fragment av formel IVa eller F/b, hvor: r er et helt tall 0 eller 1; X<l> representerer CH2, NH eller er fraværende; X<2> representerer CH2, NH eller C = NH; X<3> representerer NH, C=NH, N-C(NH)-NH2 eller CH-C(NH)-NH2; X<4> representerer CH2 eller NH; X<5> representerer C(NH)-NH2; R6 er H; enten forbindelsen som sådan eller stereoisomerer derav eller i form av et fysiologisk akseptabelt salt.
2. Forbindelse, karakterisert ved den generelle formel: hvor: Al representerer et strukturelt fragment av formel JJa, Ub eller De; k er et helt tall 0,1, 2,3 eller 4; q er et helt tall 0,1, 2 eller 3; Ri representerer R^OOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og er eventuelt substituert i den stilling som er alfa til karbonylgruppen, og alfa-substituenten er en gruppe R<17->(CH2)p-, hvor p er 0,1 eller 2 og R17 er COOR12, hvor R12 er H, en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer eller en benzylgruppe og R^ er H eller en alkylgruppe med 1-6 karbonatomer, eller en benzylgruppe, eller Ri representerer R<13->NH-CO-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1 -4 karbonatomer og er eventuelt substituert alfa til karbonylgruppen med en alkylgruppe som har 1-4 karbonatomer og hvor R<13> er H eller -CH2COOR<12>, hvor R<12> er som definert ovenfor, eller Ri representerer R<l2>OOC-CH2-OOC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer, og hvor R<i2> er som definert ovenfor, eller Ri representerer R14S02-, Ph(4-COORl2)-S02-, Ph(3-COORl2)-S02-, Ph(2-COOR<l2>)-S02-, hvorR<l2> er som definert ovenfor og R* 4 er en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller Ri representerer -CO-R<I5>, hvor R<i5> er en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller Ri representerer -CO-Or<15>, hvor R<l5> er som definert ovenfor, eller Ri representerer -CO-(CH2)p-COOR<l2>, hvor R<i2> er som definert ovenfor og p er et helt tall 0,1 eller 2, eller R<2> representerer H eller en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer eller R<2l>00C-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og, hvor R<21> er H, en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer eller en benzylgruppe; R<3> representerer en alkylgruppe med 1-4 karbonatomer, eller R<3> representerer en cyklopentyl-, cykloheksyl- eller en fenylgruppe, eller R<4> representerer Heller en fenylgruppe; A<2> representerer et strukturelt fragment av formel Ula, IHb eller Ule hvor: p er et helt tall 0,1 eller 2; m er et helt tall 1,2, 3 eller 4; Y representerer en metylengruppe, eller Y representerer en etylengruppe, eller Y representerer en n-propylengruppe, R<3> er som definert ovenfor: R<5> representerer H, n er et helt tall 0,1, 2,3 eller 4; B representerer et strukturelt fragment av formel IVa eller IVb, hvor: r er et helt tall 0 eller 1; x<l> representerer CH2, NH eller er fraværende; X<2> representerer CH2, NH eller C=NH; X<3> representerer NH, C=NH, N-C(NH)-NH2 eller CH-C(NH)-NH2; X<4> representerer CH2 eller NH; X^ representerer C(NH)-NH2; R<6> er H; D er Z eller (Z)2; Z er en benzoyloksykarbonylgruppe; enten forbindelsen som sådan eller stereoisomerer derav eller i form av fysiologisk akseptabelt salt.
3. Forbindelse ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at A<*> er et strukturelt fragment av formel Ila eller Hb.
4. Forbindelse ifølge et eller flere av de foregående krav 1-3, hvor R^ representerer Ri lOCC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer og Ri 1 er H.
5. Forbindelse ifølge et eller flere av de foregående krav 1-4, karakterisert ved at A<2> er et strukturelt fragment av formel Ula.
6. Forbindelse ifølge et eller flere av de foregående krav 1-4, karakterisert ved at A<2> er et strukturelt fragment av formel Illb.
7. Forbindelse ifølge et eller flere av de foregående krav 1-6, karakterisert ved at B er et strukturelt fragment av formel IVa, hvor X<1>, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er CH-C(NH)-NH2, r er 1 og n er 1.
8. Forbindelse ifølge et eller flere av de foregående krav 1-6, karakterisert ved at et strukturelt fragment av formel IVa, hvor X<1>, X<2> og X<4> er CH2, X<3> N-C(NH)-NH2, r er 0 eller 1 og n er 1 eller 2.
9. Forbindelse ifølge et eller flere av de foregående krav 1-6, karakterisert ved at B er et strukturelt fragment av formel IVb, hvor R<6> er H og n er 1.
10. Forbindelse ifølge et eller flere av de foregående krav 1 -6, karakterisert ved at B er et strukturelt element av formel IVa, hvor X<1> og X<3> er NH, X<2> er C=NH, X<4> er CH2, r er 1 og n er 2.
11. Forbindelse ifølge et eller flere av de foregående krav 1-6, karakterisert ved at B er et strukturelt element av formel IVa, hvor X<1> er fraværende, X<2> og X<4> er CH2, X<3> er N-C(NH)-NH2, r er 0 og n er 1 eller 2.
12. Forbindelse ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at n er 1 eller 2, A<1> er et strukturelt fragment av formel Ila, hvor k er 0 eller 1, R<1 >representerer Ri lOCC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer, R<2> representerer H, R<3> representerer en cykloheksylgruppe, A<2> representerer et strukturelt fragment av formel Illa, hvor Y representerer en metylengruppe, en etylengruppe, eller en N-propylengruppe, R^ representerer H, B representerer et strukturelt fragment av formel IVa hvor X<1>, X<2> og X<4> er CH2 og X<3> er CH-C(NH)-NH2 elelr N-C(NH)-NH2, r er 1 eller X<1> og X<3> er NH, X<2> er C=NH, X<4> er CH2, r er 1, eller X<1> er fraværende, X2 og X<4> er CH2, X3 er N-C(NH)-NH2, r er 0.
13. Forbindelse ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at n er 1, A<1> er et strukturelt fragment av formel Ila hvor k er 0 eller 1, Ri representerer R* lOCC-alkyl-, hvor alkylgruppen har 1-4 karbonatomer, R<2> representerer H, R<3 >representerer en cykloheksylgruppe, A<2> representerer et strukturelt fragment av formel Illa hvor Y representerer en metylengruppe, en etylengruppe, eller en n-propylengruppe, R<5> representerer H, B representerer et strukturelt fragment av formel IVb, hvor R<*>> er H.
14. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den er valgt fra: HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab HOOC-CH2-CH2(R)Cgl-Aze-Pab HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab (HOOC-CH2)2-(R)Cgl-Pro-Pab H-(R)Cgl-Pic-Pab HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Cgl-Pic-Pab H-(R)Cha-Aze-Pab HOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pab HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab HOOC-CH2-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/a HOOC-CH2-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/b HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pab HOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Aze-Pab H-(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/a HOOC-CH2-(RorS)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/b HOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Pro-Pab EtOOC-CH2-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pab Ph(4-COOH)-S02-(R)Cha-Pro-Pab H-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CH2-(Rors)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/a HOOC-CH2-(Rors)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/b HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab Me-OOC-CH2-CO-(R)-Cha-Pic-Pab H2N-CO-CH2-(R)Cha-Pic-Pab Boc-(R)Cha-Pic-Pab Ac-(R)Cha-Pic-Pab Me-S02-(R)Cha-Pic-Pab H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab HOOC-CH2-(R)Cha-Val-Pab HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Val-Pab H-(R)Hoc-Aze-Pab HOOC-CH2-CH2-(R)Hoc-Aze-Pab HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Hoc-Pro-Pab HOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Pab (HOOC-CH2)2-(R)Hoc-Pic-Pab HOOC-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2-(R)Tic-Pro-PabHOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Aze-Pig HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig H-(R)Cha-Aze-Pig HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pac H-(R)Cha-Pro-Pac H-(R)Cgl-Ile-Pab H-(R)Cgl-Aze-Pab HOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab MeOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab EtOOC-CH2-(R)Clg-Aze-Pab <n>BuOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab <n>HexOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab H-(R)Cgl-Pro-Pac HOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pac HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pac HOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pig HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pig HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pig (HOOC-CH2)2-(R)Cgl-Pro-Pig HOOC-CH2-CH2(HOOC-CH2)-(R)Cha-Pro-Pig HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp HOOC-CH2-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig H-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig H-(R)Cgl-Aze-Rig HOOC-CH2-(R)CgI-Aze-Rig HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Rig HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Rig HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-(S)Itp H-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig H-(R)Cha-Pro-Mig H-(R)Cha-Pro-Dig H-(R)Cha-Aze-Dig enten som sådan eller stereoisomer derav eller i form av et fysiologisk akseptabelt salt.
15. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den er valgt fra: HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pab HOOC-CH2-(R)-Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pac HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pig enten som sådan eller stereoisomer derav eller i form av et fysiologisk akseptabelt salt.
16. Forbindelse ifølge krav 2, karakterisert ved at den er valgt fra BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) (BnOOC-CH2)2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cgl-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH2-(RorS)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/a BnOOC-CH2-(RorS)CH(COOBn)-(R)Cha-Aze-Pab(Z)/b BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z) Ph(4-COOH)-S02-(R)Cha-Pro-Pab(Z) Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z) EtOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) MeOOC-CH2-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) H2H-CO-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z) Ac-(R)Cha-Pic-Pab(Z) Me-S02-(R)Cha-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Val-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Hoc-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R,SJCH(COOBn)-(R)Hoc-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) (BnOOC-CH2)2-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Tic-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2 BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2 BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pac(Z) BnOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab(Z) MeOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) <n>BuOOC-CH2-(R)CgI-Aze-Pab(Z) <n>HexOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pac(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pac(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pac(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pig(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pig(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Pig(Z) (BnOOC-CH2)2-(R)Cgl-Pro-Pig(Z) BnOOC-CH2-CH2(BnOOC-CH2)-(R)Cha-Pro-Pig(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pri-(R,S)Hig(Z) BnOOC-CH2-(R)Cgi-Aze-Rig(Z) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Rig(Z) enten som sådan eller stereoisomer derav eller i form av et fysiologisk akseptabelt salt.
17. Forbindelse ifølge krav 2, karakterisert ved at den er valgt fra BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2 EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pac(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pig(Z) enten som sådan eller stereoisomer derav eller i form av et fysiologisk akseptabelt salt.
18. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den er valgt fra H-(R)Pro-Phe-Pab HOOC-CH2-(R)Pro-Phe-Pab H-(R)Phe-Phe-Pab HOOC-CH2-(R)Phe-Phe-Pab HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab enten som sådan eller stereoisomer derav eller i form av et fysiologisk akseptabelt salt.
19. Forbindelse ifølge krav 2, karakterisert ved at den er valgt fra Boc-(R)Pro-Phe-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Pro-Phe-Pab(Z) Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z) MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Phe-Phe-Pab(Z) enten som sådan eller stereoisomer derav eller i form av et fysiologisk akseptabelt salt.
20. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-19, karakterisert ved at fremgangsmåten omfatter kobling av en N-terminalt beskyttet aminosyre eller dipeptid eller aminosyre, når en N-terminal aminosyre anvendes blir en annen aminosyre tilsatt etterpå ved bruk av standardmetoder til en forbindelse hvor n er et helt tall 0,1,2, 3 eller 4, X er B eller B-D, hvor B er som definert i formel I og D er som definert i formel V som sådan eller med guanidino- eller amidinonitro-genene enten mono- eller dibeskyttet med en aminbeskyttelsesgruppe slik som en benzyloksykarbonyl- eller tertbutyloksykarbonyl- eller p-toluensulfonylgruppe eller X er en gruppe som kan overføres til B fulgt av fjerning av beskyttelsesgruppen(e) eller fjerning av beskyttelsen fra N-terminal nitrogenet fulgt av alkylering av N-terminalnitrogenet og, om ønsket, fjerning av beskyttelse ved hjelp av kjente metoder og om ønsket dannelse av et fysiologisk akseptabelt salt, og i de tilfeller hvor reaksjonen resulterer i en blanding av stereoisomerer, blir disse eventuelt separert ved standard kromatografiske eller omkrystalliseringsteknikker, og, om ønsket, isoleres en enkelt stereoisomer.
21. Fremgangsmåte ifølge krav 20 for fremstilling av en forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-19, karakterisert ved at fremgangsmåten omfatter: a) (Fremgangsmåte Ia) kobling av et N-terminalt beskyttet dipeptid, valgt fra A* og A<2> i formler I eller V ved anvendelse av standard peptidkobling, vist som følger hvor n er som definert i formel I, W"! er en N-terminal aminobeskyttelsesgruppe slik som tert-butyloksykarbonyl og benzyloksykarbonyl og Q<1> er -C(NH)-NH2, -C(NW<2>)-NH-W<2>, -C(NH)-NH-W<2>, hvor W<2> er en aminbeskyttelsesgruppe, slik som tert-butyloksykarbonyl eller benzyloksykarbonyl, eller Q<1_>er -CN, -CO-NH2 eller -CS-NH<2>, hvor gruppen deretter overføres til en amidinogruppe, ved metoder som er kjent innen teknikken; b) (Fremgangsmåte Ib) kobling av en N-terminalt beskyttet aminosyre, valgt fra A<2> i formler I eller V og fremstilt ved bruk av standardpeptidkobling, vist i det følgende: hvor n, W<*> og Q<*> er som definert ovenfor fulgt av beskyttelsesfjeming av W<*->gruppen og kobling med N-terminalaminosyren, i en beskyttet form, hvilket leder til det beskyttede peptidet beskrevet i fremgangsmåte Ia ovenfor; c) (Fremgangsmåte Ila) kobling av et N-terminalt beskyttet dipeptid, valgt fra A^ og A<2 >i formler i I eller V ved bruk av standardpeptidkobling, som vist i det følgende hvor n er som definert i formel l, W^ er en N-terminal aminobeskyttelsesgruppe slik som tert.butoksykarbonyl og benzyloksykarbonyl og Q* er -C(NH)-NH2, -C(NW<2>)-NH-W<2>, -C(NH)-NH-W2 hvor W<2> er en aminbeskyttende gruppe slik som tertbutyloksykarbonyl eller benzyloksykarbonyl, eller Q 1 er -CN, -CO-NH2 eller CS-NH2, hvor gruppen deretter overføres til en amidinogruppe, ved metoder som er kjent innen teknikken; d) (Fremgangsmåte Hb) kobling av en N-terminalt beskyttet aminosyre, valgt fra A<2> i formler I eller V ved bruk av standardpeptidkobling, som vist i det følgende hvor n, W<*> og Ql er som definert ovenfor fulgt av beskyttelsesfjeniing av W^-gruppen og kobling med den N-terminale aminosyren, i en beskyttet form, hvilket leder til det beskyttede peptidet beskrevet i fremgangsmåte JJa ovenfor; e) (Fremgarngsmåte HJa) kobling av et N-terminalt beskyttet dipeptid, valgt fra A<1> og A<2> i formler I eller V ved bruk av standardpeptidkobling, vist i det følgende, hvor n er som definert i formel I, og r er 0 eller 1 når X<1>, X<2> og X<4> er CH2 eller r er 0 når X<2> og X<4> er CH2 og X<1> er fraværende, er en N-terminal aminobeskyttelsesgruppe slik som tert-butyloksykarbonyl og benzyloksykarbonyl og Q<2> er -C(NH)-NH2, -C(NW<2>)-NH-W<2>, eller -C(NH)-NH-W<2>, hvor W<2> er en aminbeskyttende gruppe slik som tert-butyloksykarbonyl eller benzyloksykarbonyl, eller Q<2> er lik W<2> hvor amino-gruppen, etter beskyttelsesfjeming av W<2> gruppen (W<2> må i dette tilfelle ortogonal i forhold til W<1>), deretter overføres til en guanidinogruppe ved bruk av en ubeskyttet, N-beskyttet eller N,N'-dibeskyttet guanideringsreagens ved fremgangsmåter som er kjent innen teknikken; f) (Fremgangsmåte mb) kobling av en N-terminalt beskyttet aminosyre, valgt fra A<2> i formler I eller V ved bruk av standardpeptidkobling, som vist i det følgende hvor n, r, X<l>, X<2> og X<4>, W<1> og Q<2> er som definert ovenfor, fulgt av beskyttelsesfjeming av W<*->gruppen og kobling med N-terminalaminosyren, i en beskyttet form, hvilket leder til det beskyttede peptidet beskrevet i fremgangsmåte Hia ovenfor, g) (Fremgangsmåte IVa) kobling av et N-terminalt beskyttet dipeptid, valgt fra A * og A<2> i formler I eller V ved bruk av standard peptidkobling, vist i det følgende hvor n er som definert i formel I, W1 er en N-terminal aminobeskyttelsesgruppe slik som tert-butyloksykarbonyl eller benzyloksykarbonyl og W<3> er H eller en aminobeskyttelsesgruppe slik som arylsulfonyl, benzyloksykarbonyl eller tert-butyloksykarbonyl; h) (Fremgangsmåte IVb) kobling av en N-terminalt beskyttet aminosyre, valgt fra A<2> i formler I eller V ved bruk av standardpeptidkobling, vist i det følgende hvor n , W<1> og W<3> er som definert ovenfor, fulgt av beskyttelsesfjeming av W<1->gruppen og kobling med den N-terminale aminosyren, i en beskyttet form, hvilket leder til det beskyttede peptidet beskrevet i fremgangsmåte IVa, hvorved sluttforbindelsene kan fremstilles på hvilken som helst av følgende måter, avhengig av typen av Ql- eller Q<2->gruppene som er benyttet: fjerning av beskyttelses-gruppen(e) (når Q<1> = -C(NH)-NH2, -C(NW<2>)-NH-W<2> eller -C(NH)-NH-W<2>, eller selektiv beskyttelsesfjeming fra W<1->gruppen (for eksempel når Q<1> eller Q<2> = C(NW<2>)-NH-W2 -C(NH)-NH-W<2>, -NH-C(NH)-NH-W<2>, -N(W<2>)-C(NH)-NH-W<2> eller -NH-C(NW<2>)-NH-W<2> (W<2> må i dette tilfelle være ortogonal i forhold til W<1>) fulgt av alkylering av N-terminalnitrogenet og om ønsket beskyttelsesfjeming.
22. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-19, karakterisert ved at den er beregnet for bruk i terapi.
23. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-5 eller 7-17, karakterisert ved at den er beregnet for bruk som et antikoaguleringsmiddel eller antitrombotisk middel.
24. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-4,6-10 eller 18-19, karakterisert ved at den er beregnet for bruk som et anti-infiammatorisk middel.
25. Farmasøytisk preparat, karakterisert ved at det omfatter en effektiv mengde av en forbindelse som angitt i krav 1-19 i forbindelse med en eller flere farmasøytiske bærere.
26. Farmasøytisk preparat, karakterisert ved at det omfatter en effektiv mengde av en forbindelse som angitt i hvilket som helst av kravene 1-5 eller 7-17 i forbindelse med en eller flere farmasøytiske bærere, for bruk som et antikoaguleringsmiddel eller antitrombotisk middel.
27. Farmasøytisk preparat, karakterisert ved at det omfatter en effektiv mengde av en forbindelse som angitt i hvilket som helst av kravene 1-4, 6-10 eller 18-19 i forbindelse med en eller flere farmasøytiske bærere, for bruk som et antiinflammatorisk middel.
28. Anvendelse av en forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-5 eller 7-17 som en aktiv bestanddel for fremstilling av et farmasøytisk preparat for inhibering av trombin i en human eller animalsk organisme.
29. Anvendelse av en forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-4, 6-10 eller 18-19 som en aktiv bestanddel for fremstilling av et farmasøytisk preparat for inhibering av kininogenaser i en human eller animalsk organisme.
30. Forbindelse, karakterisert ved at den er 4-aminometyl-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)benzen enten som sådan, i form av et salt eller beskyttet med en benzyloksykarbonylgruppe ved det andre nitrogenet.
31. Forbindelse, karakterisert ved at den er 4-aminometyl- l-(N-benzyloksykarbonylamidino)cykloheksan enten som sådan, i form av et salt eller beskyttet med en benzyloksykarbonylgruppe ved det andre nitrogenet.
32. Forbindelse, karakterisert ved at den har formelen: enten som sådan eller med amidinogruppen enten mono- eller dibeskyttet ved nitrogenene med en beskyttelsesgruppe, eller i form av et salt.
33. Forbindelse, karakterisert ved at den har formelen: enten som sådan eller med amidinogruppen enten mono- eller dibeskyttet ved nitrogenene med en beskyttelsesgruppe, eller i form av et salt.
34. Forbindelse, karakterisert ved at den er 4-aminoetyl-1-benzyloksykarbonylamidinopiperidin enten som sådan, i form av et salt eller beskyttet med en benzyloksykarbonylgruppe ved det andre nitrogenet.
35. Forbindelse, karakterisert ved at den har formelen: hvor n er 1 eller 2 og s er 0 eller 1, enten som sådan eller med amidinogruppen enten mono- eller dibeskyttet ved nitrogenene med en beskyttelsesgruppe, eller i form av et salt.
36. Forbindelse, karakterisert ved at den er (3RS)-1-(N-benzyloksykarbonylamidino)-3-aminometylpyrrolidin, (3RS)-l-(N-benzyloksykarbonyl-amidino)-3-aminoetylpyrrolidin, 3-aminometyl-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)azetidin, 3-aminoetyl-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)azetidin eller enten som sådan, i form av et salt eller beskyttet med en benzyloksykarbonylgruppe ved det andre nitrogenet.
NO19954873A 1993-06-03 1995-11-30 Nye peptidderivater, farmasöytisk preparat inneholdende slike derivater, deres anvendelse, fremgangsmåter for deres fremstilling, ogmellomprodukter NO314406B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE19939301916A SE9301916D0 (sv) 1993-06-03 1993-06-03 New peptides derivatives
PCT/SE1994/000535 WO1994029336A1 (en) 1993-06-03 1994-06-02 New peptide derivatives

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO954873D0 NO954873D0 (no) 1995-11-30
NO954873L NO954873L (no) 1996-02-01
NO314406B1 true NO314406B1 (no) 2003-03-17

Family

ID=20390165

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO19954873A NO314406B1 (no) 1993-06-03 1995-11-30 Nye peptidderivater, farmasöytisk preparat inneholdende slike derivater, deres anvendelse, fremgangsmåter for deres fremstilling, ogmellomprodukter
NO2004009C NO2004009I1 (no) 1993-06-03 2004-12-13 Melagatran, stereoisomerer derav eller fysiologisksalter eller estrer derav

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO2004009C NO2004009I1 (no) 1993-06-03 2004-12-13 Melagatran, stereoisomerer derav eller fysiologisksalter eller estrer derav

Country Status (40)

Country Link
US (4) US5723444A (no)
EP (2) EP0701568B1 (no)
JP (3) JP3205558B2 (no)
KR (1) KR100339456B1 (no)
CN (2) CN1099425C (no)
AT (1) ATE200783T1 (no)
BR (1) BR9406746A (no)
CA (1) CA2162900C (no)
CZ (1) CZ290104B6 (no)
DE (3) DE69427150T2 (no)
DK (1) DK0701568T3 (no)
EE (1) EE03264B1 (no)
EG (1) EG20671A (no)
ES (1) ES2128277T3 (no)
FI (1) FI119812B (no)
GR (1) GR3036258T3 (no)
HK (1) HK1031375A1 (no)
HR (1) HRP940311B1 (no)
HU (2) HU0103039D0 (no)
IL (2) IL123996A (no)
IS (1) IS1805B (no)
LT (1) LT3768B (no)
LU (1) LU91173I2 (no)
MX (1) MX9404114A (no)
MY (1) MY119155A (no)
NL (1) NL300178I2 (no)
NO (2) NO314406B1 (no)
NZ (1) NZ267534A (no)
PL (1) PL181968B1 (no)
PT (1) PT701568E (no)
RS (1) RS49576B (no)
RU (1) RU2142469C1 (no)
SA (1) SA94150051B1 (no)
SE (1) SE9301916D0 (no)
SG (1) SG48013A1 (no)
SI (1) SI0701568T1 (no)
SK (1) SK283150B6 (no)
TW (1) TW403731B (no)
UA (1) UA65518C2 (no)
WO (1) WO1994029336A1 (no)

Families Citing this family (125)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5583146A (en) * 1992-12-02 1996-12-10 Bristol-Myers Squibb Company Heterocyclic thrombin inhibitors
SE9900043D0 (sv) * 1999-01-11 1999-01-11 Astra Ab New use
US6984627B1 (en) * 1993-06-03 2006-01-10 Astrazeneca Ab Peptide derivatives
SE9301916D0 (sv) * 1993-06-03 1993-06-03 Ab Astra New peptides derivatives
US5854234A (en) * 1993-10-21 1998-12-29 G. D. Searle & Co. Amidino dervatives useful as nitric oxide synthase inhibitors
JP4561696B2 (ja) * 1994-01-27 2010-10-13 三菱化学株式会社 プロリンアミド誘導体
US5707966A (en) * 1994-03-04 1998-01-13 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5705487A (en) * 1994-03-04 1998-01-06 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5602101A (en) * 1994-03-04 1997-02-11 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5726159A (en) * 1994-03-04 1998-03-10 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
ZA951617B (en) 1994-03-04 1997-02-27 Lilly Co Eli Antithrombotic agents.
CA2143533A1 (en) * 1994-03-04 1995-09-05 Kenneth D. Kurz Antithrombotic agents
US5885967A (en) * 1994-03-04 1999-03-23 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
ZA951618B (en) * 1994-03-04 1996-08-27 Lilly Co Eli Antithrombotic agents
AU2790895A (en) * 1994-06-10 1996-01-05 Universitaire Instelling Antwerpen Purification of serine protease and synthetic inhibitors thereof
DE4421052A1 (de) * 1994-06-17 1995-12-21 Basf Ag Neue Thrombininhibitoren, ihre Herstellung und Verwendung
SE9404196D0 (sv) * 1994-12-02 1994-12-02 Astra Ab New antithrombotic formulation
DE4443390A1 (de) * 1994-12-06 1996-06-13 Basf Ag Neue dipeptidische p-Amidinobenzylamide mit N-terminalen Sulfonyl- bzw. Aminosulfonylresten
EP0809651A1 (de) * 1995-02-10 1997-12-03 Basf Aktiengesellschaft Thrombininhibitoren
MX9706069A (es) * 1995-02-17 1997-10-31 Basf Ag Nuevos inhibidores de la trombina.
US5914319A (en) * 1995-02-27 1999-06-22 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5710130A (en) * 1995-02-27 1998-01-20 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5629324A (en) * 1995-04-10 1997-05-13 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
US5610308A (en) * 1995-05-18 1997-03-11 Bristol-Myers Squibb Company Process for preparing intermediates for thrombin inhibitors
SA96170106A (ar) * 1995-07-06 2005-12-03 أسترا أكتيبولاج مشتقات حامض أميني جديدة
JP2008024720A (ja) * 1995-07-26 2008-02-07 Mitsubishi Chemicals Corp ペニシラミンアミド誘導体
EA000966B1 (ru) 1995-07-26 2000-08-28 Мицубиси Кемикал Корпорейшн Производные пеницилламинамида
EP0865445B1 (en) * 1995-12-09 2003-04-02 Akzo Nobel N.V. 3-aminoethyl-n-amidino-2,5-dihydropyrrole derivatives having arginine mimetic properties
GB9526273D0 (en) * 1995-12-21 1996-02-21 Astra Ab New prodrugs
TWI238827B (en) * 1995-12-21 2005-09-01 Astrazeneca Ab Prodrugs of thrombin inhibitors
SE9600216D0 (sv) * 1996-01-18 1996-01-18 Hans Arne Hansson Styrning av läkningsprocesser
CA2246256A1 (en) * 1996-02-13 1997-08-21 Akzo Nobel Nv Serine protease inhibitors
TW523513B (en) * 1996-03-01 2003-03-11 Akzo Nobel Nv Serine protease inhibitors
TW442452B (en) 1996-03-01 2001-06-23 Akzo Nobel Nv Serine protease inhibitors having an alkynylamino side chain
US5811402A (en) * 1996-03-22 1998-09-22 Eli Lilly And Company Antithrombotic diamides
SE9602145D0 (sv) * 1996-05-31 1996-05-31 Astra Ab New improved formulation for treatment of thromboembolism
SE9602263D0 (sv) 1996-06-07 1996-06-07 Astra Ab New amino acid derivatives
AU3496297A (en) * 1996-06-25 1998-01-14 Eli Lilly And Company Anticoagulant agents
US6200967B1 (en) 1996-06-25 2001-03-13 Eli Lilly And Company Anticoagulant agents
SE9602646D0 (sv) 1996-07-04 1996-07-04 Astra Ab Pharmaceutically-useful compounds
US6756389B2 (en) * 1996-08-09 2004-06-29 Cambridge Neuroscience, Inc. Pharmaceutically active compounds and methods of use
US5792761A (en) * 1996-08-12 1998-08-11 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
DE19632773A1 (de) * 1996-08-14 1998-02-19 Basf Ag Neue Thrombininhibitoren
DE19632772A1 (de) 1996-08-14 1998-02-19 Basf Ag Neue Benzamidine
IL121474A0 (en) * 1996-08-23 1998-02-08 Akzo Nobel Nv Thrombin inhibitors
SE9603724D0 (sv) * 1996-10-11 1996-10-11 Astra Ab New pharmaceutical parenteral formulation of a thrombin inhibitor
US5798377A (en) * 1996-10-21 1998-08-25 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
US5869487A (en) * 1996-10-24 1999-02-09 Merck & Co., Inc. Pyrido 3,4-B!pyrazines for use as thrombin inhibitors
AR013084A1 (es) 1997-06-19 2000-12-13 Astrazeneca Ab Derivados de amidino utiles como inhibidores de la trombina, composicion farmaceutica, utilizacion de dichos compuestos para la preparacion demedicamentos y proceso para la preparacion de los compuestos mencionados
EP1009758B1 (en) * 1997-08-29 2005-06-01 Tularik Limited Meta-benzamidine derivatives as serine protease inhibitors
US6740682B2 (en) 1997-08-29 2004-05-25 Tularik Limited Meta-benzamidine derivatives as serine protease inhibitors
US6087373A (en) * 1997-09-23 2000-07-11 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
SE9704543D0 (sv) 1997-12-05 1997-12-05 Astra Ab New compounds
DE19755682A1 (de) * 1997-12-15 1999-06-17 Knoll Ag Verfahren zur Ermittlung eines Dosierungschemas für Thrombininhibitoren
EP1049673A1 (de) * 1998-01-26 2000-11-08 Basf Aktiengesellschaft Heterocyclische amidine als kallikrein protease inhibitoren
EP1051431A1 (de) 1998-01-26 2000-11-15 Basf Aktiengesellschaft Thrombininhibitoren
JP2003529528A (ja) 1998-04-24 2003-10-07 ３−ディメンショナル ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド プロテアーゼインヒビターとしてのアミノ酸アミジノヒドラゾン、アルコキシグアニジン、およびアミノグアニジン
SE9802938D0 (sv) 1998-09-01 1998-09-01 Astra Ab Improved stability for injection solutions
SE9802939D0 (sv) 1998-09-01 1998-09-01 Astra Ab New process
SE9802973D0 (sv) 1998-09-03 1998-09-03 Astra Ab Immediate release tablet
SE9802974D0 (sv) * 1998-09-03 1998-09-03 Astra Ab New crystalline forms
EP0987274A1 (en) * 1998-09-15 2000-03-22 Hoechst Marion Roussel Deutschland GmbH Factor VIIa Inhibitors
SE9804313D0 (sv) * 1998-12-14 1998-12-14 Astra Ab New compounds
KR20000047461A (ko) * 1998-12-29 2000-07-25 성재갑 트롬빈 억제제
KR100639274B1 (ko) 1999-01-13 2006-10-27 아스트라제네카 아베 신규 아미디노벤질아민 유도체 및 트롬빈 억제제로서의 용도
SE9900070D0 (sv) 1999-01-13 1999-01-13 Astra Ab New use
DE50008510D1 (de) 1999-04-09 2004-12-09 Abbott Gmbh & Co Kg Niedermolekulare inhibitoren von komplementproteasen
AR023510A1 (es) 1999-04-21 2002-09-04 Astrazeneca Ab Un equipo de partes, formulacion farmaceutica y uso de un inhibidor de trombina.
US6239132B1 (en) 1999-04-23 2001-05-29 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
AR023819A1 (es) * 1999-05-03 2002-09-04 Astrazeneca Ab FORMULACIoN FARMACEUTICA, KIT DE PARTES Y UTILIZACION DE DICHA FORMULACION
ATE279435T1 (de) 1999-05-10 2004-10-15 Abbott Gmbh & Co Kg Salze von thrombininhibitoren
WO2000074682A1 (en) 1999-06-04 2000-12-14 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
EP1059302A1 (en) * 1999-06-08 2000-12-13 Aventis Pharma Deutschland GmbH Factor VIIa inhibitors
SE9902550D0 (sv) * 1999-07-02 1999-07-02 Astra Ab New crystalline forms
CA2383358A1 (en) * 1999-08-31 2001-03-08 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions of a novel serine protease inhibitor
SE0001803D0 (sv) 2000-05-16 2000-05-16 Astrazeneca Ab New compounds i
DE10029015A1 (de) * 2000-06-15 2001-12-20 Curacyte Ag Hemmstoffe für den Gerinnungsfaktor Xa
DE10029014A1 (de) 2000-06-15 2001-12-20 Univ Schiller Jena Urokinase-Hemmstoffe
US6433186B1 (en) 2000-08-16 2002-08-13 Astrazeneca Ab Amidino derivatives and their use as thormbin inhibitors
WO2002044324A2 (en) 2000-10-06 2002-06-06 Xenoport, Inc. Bile-acid derived compounds for enhancing oral absorption and systemic bioavailability of drugs
DE10049937A1 (de) * 2000-10-06 2002-04-11 Knoll Ag Niedermolekulare Inhibitoren von Serinproteasen mit Polyhydroxyalkyl- und Polyhydroxycycloalkylresten
US6462021B1 (en) 2000-11-06 2002-10-08 Astrazeneca Ab Use of low molecular weight thrombin inhibitor
US7129233B2 (en) 2000-12-01 2006-10-31 Astrazeneca Ab Mandelic acid derivatives and their use as thrombin inhibitors
AR035216A1 (es) 2000-12-01 2004-05-05 Astrazeneca Ab Derivados de acido mandelico ,derivados farmaceuticamente aceptables, uso de estos derivados para la fabricacion de medicamentos, metodos de tratamiento ,procesos para la preparacion de estos derivados, y compuestos intermediarios
US6528503B2 (en) 2000-12-18 2003-03-04 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
AU2002230836A1 (en) 2000-12-18 2002-07-01 Merck & Co., Inc. Benzylamine derivatives and their use as thrombin inhibitors
CA2436176A1 (en) 2001-02-09 2002-08-22 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
DE10117730A1 (de) 2001-04-09 2002-10-10 Basf Ag Umsetzung von (Di)Aminen in Gegenwart einer Lysinoxidase und eines Reduktionsmittels
AR034517A1 (es) * 2001-06-21 2004-02-25 Astrazeneca Ab Formulacion farmaceutica
DE10133786A1 (de) * 2001-07-16 2003-02-06 Boehringer Ingelheim Pharma Verwendung von Thrombin-Inhibitoren zur Behandlung von Arthritis
SE0103590D0 (sv) 2001-10-26 2001-10-26 Astrazeneca Ab New Combination
SE0200198D0 (sv) 2002-01-23 2002-01-23 Astrazeneca Ab New use
AU2003219039A1 (en) 2002-03-11 2003-09-22 Curacyte Ag Urokinase inhibitors, production and use thereof
DE10210590A1 (de) * 2002-03-11 2003-10-02 Curacyte Ag Hemmstoffe des Gerinnungsfaktors Xa, ihre Herstellung und Verwendung
US7084134B2 (en) 2002-05-02 2006-08-01 Merk & Co., Inc. Thrombin inhibitors
WO2003099328A1 (en) 2002-05-21 2003-12-04 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials for treating inflammatory conditions
SE0201659D0 (sv) 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab Modified release pharmaceutical formulation
SE0201661D0 (sv) 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab New salts
AU2003302238A1 (en) 2002-12-03 2004-06-23 Axys Pharmaceuticals, Inc. 2-(2-hydroxybiphenyl-3-yl)-1h-benzoimidazole-5-carboxamidine derivatives as factor viia inhibitors
DE10301300B4 (de) 2003-01-15 2009-07-16 Curacyte Chemistry Gmbh Verwendung von acylierten 4-Amidino- und 4-Guanidinobenzylaminen zur Inhibierung von Plasmakallikrein
US7781424B2 (en) * 2003-05-27 2010-08-24 Astrazeneca Ab Modified release pharmaceutical formulation
SE0301879D0 (sv) * 2003-06-25 2003-06-25 Astrazeneca Ab New process
DE10342108A1 (de) * 2003-09-11 2005-04-14 Curacyte Chemistry Gmbh Basisch-substituierte Benzylaminanaloga als Inhibitoren des Gerinnungsfaktors Xa, ihre Herstellung und Verwendung
FR2867780B1 (fr) * 2004-03-19 2006-05-19 Servier Lab Nouveaux derives de 4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo (1,2-a) pyrazine-6-carboxamides, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
WO2005095327A1 (ja) 2004-03-31 2005-10-13 Ajinomoto Co., Inc. アニリン誘導体
US7795205B2 (en) 2004-04-12 2010-09-14 Canyon Pharmaceuticals, Inc. Methods for effecting regression of tumor mass and size in a metastasized pancreatic tumor
US20060189925A1 (en) * 2005-02-14 2006-08-24 Gable Jennifer H Methods and apparatus for extracting and analyzing a component of a bodily fluid
WO2006117358A1 (en) * 2005-05-03 2006-11-09 Bayer Cropscience Sa New heterocyclylethylamide derivatives
US7524354B2 (en) * 2005-07-07 2009-04-28 Research Foundation Of State University Of New York Controlled synthesis of highly monodispersed gold nanoparticles
EP2407561A3 (en) * 2006-03-06 2012-05-30 Humagene, Inc. A method for the preparation of recombinant human fibrinogen
DE102006050672A1 (de) * 2006-10-24 2008-04-30 Curacyte Discovery Gmbh Hemmstoffe des Plasmins und des Plasmakallikreins
TW200827336A (en) 2006-12-06 2008-07-01 Astrazeneca Ab New crystalline forms
US20090061000A1 (en) * 2007-08-31 2009-03-05 Astrazeneca Ab Pharmaceutical formulation use 030
GB0807828D0 (en) * 2008-04-29 2008-06-04 Vantia Ltd Aminopyridine derivatives
CN102924567B (zh) * 2008-10-28 2014-06-04 上海医药工业研究院 一类肽化合物、其制备方法及用途
US20110165279A1 (en) * 2010-01-06 2011-07-07 Academia Sinica Office of Public Affairs (Technology Licensing) Sweet potato trypsin inhibitor and methods for treating inflammation and hyperalgesia
WO2012004678A2 (en) 2010-07-07 2012-01-12 The Medicines Company (Leipzig) Gmbh Serine protease inhibitors
CN102464701B (zh) 2010-11-08 2015-10-21 上海医药工业研究院 一类新型化合物、其制备方法及用途
WO2012075287A2 (en) * 2010-12-01 2012-06-07 The University Of Mississippi Novel selective inhibitors of prolylcarboxypeptidase
DE102014108210A1 (de) 2014-06-11 2015-12-17 Dietrich Gulba Rodentizid
KR20210016545A (ko) * 2018-05-29 2021-02-16 오메로스 코포레이션 Masp-2 억제제 및 사용 방법
US11584714B2 (en) 2018-05-29 2023-02-21 Omeros Corporation MASP-2 inhibitors and methods of use
JP2023504543A (ja) 2019-12-04 2023-02-03 オメロス コーポレーション Ｍａｓｐ－２阻害剤および使用方法
JP2023504542A (ja) 2019-12-04 2023-02-03 オメロス コーポレーション Ｍａｓｐ－２阻害剤および使用方法
EP4070658A1 (de) 2021-04-06 2022-10-12 BIORoxx GmbH Verwendung von blutgerinnungshemmenden verbindungen als rodentizide

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2748295A1 (de) * 1977-10-27 1979-05-03 Bayer Ag Neue derivate des bpti
HU178398B (en) * 1979-06-12 1982-04-28 Gyogyszerkutato Intezet Process for producing new agmatine derivatives of activity against haemagglutination
US4568636A (en) * 1981-03-25 1986-02-04 Pentapharm Ag Tripeptide derivatives
US4395401A (en) * 1981-09-09 1983-07-26 Smithkline Beckman Corporation Renally active dipeptides
HU192646B (en) 1984-12-21 1987-06-29 Gyogyszerkutato Intezet Process for preparing new n-alkyl-peptide aldehydes
ZA86746B (en) 1985-02-04 1986-09-24 Merrell Dow Pharma Novel peptidase inhibitors
DE3505555A1 (de) * 1985-02-18 1986-09-11 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Neue oligopeptidylargininolderivate und deren homologe, verfahren zu deren herstellung, deren verwendung und diese enthaltende mittel
PT84170B (pt) * 1986-01-24 1989-03-30 Sanofi Sa Processo para a preparacao de derivados n alfa-substituidos das n alfa-aril-sulfonilaminoacil d-amidinofenil-alaninamidas
DE3606480A1 (de) * 1986-02-28 1987-09-03 Behringwerke Ag Oligopeptidylnitrilderivate, diese enthaltende mittel, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
US5187157A (en) 1987-06-05 1993-02-16 Du Pont Merck Pharmaceutical Company Peptide boronic acid inhibitors of trypsin-like proteases
EP0362002B1 (en) 1988-09-01 1995-07-26 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. HIV protease inhibitors
ZA897514B (en) 1988-10-07 1990-06-27 Merrell Dow Pharma Novel peptidase inhibitors
US5273982A (en) * 1990-03-09 1993-12-28 Hoffmann-La Roche Inc. Acetic acid derivatives
US5110812A (en) * 1990-06-04 1992-05-05 Bristol-Myers Squibb Co. Azetidin-2-one derivatives as serine protease inhibitors
US5037819A (en) * 1990-06-04 1991-08-06 Bristol-Myers Squibb Company Azetidin-2-one derivatives as serine protease inhibitors
TW201303B (no) 1990-07-05 1993-03-01 Hoffmann La Roche
GB9017694D0 (en) * 1990-08-13 1990-09-26 Sandoz Ltd Improvements in or relating to organic chemistry
GB9019558D0 (en) 1990-09-07 1990-10-24 Szelke Michael Enzyme inhibitors
IL99538A0 (en) * 1990-09-27 1992-08-18 Merck & Co Inc Fibrinogen receptor antagonists and pharmaceutical compositions containing them
NZ239846A (en) * 1990-09-27 1994-11-25 Merck & Co Inc Sulphonamide derivatives and pharmaceutical compositions thereof
IL99527A (en) * 1990-09-28 1997-08-14 Lilly Co Eli Tripeptide antithrombotic agents
GB9024129D0 (en) * 1990-11-06 1990-12-19 Thrombosis Research Trust Inhibitors and substrates of thrombin
KR920703558A (ko) * 1990-11-15 1992-12-18 원본미기재 메타-치환 페닐알라닌 유도체
DE4115468A1 (de) * 1991-05-11 1992-11-12 Behringwerke Ag Amidinophenylalaninderivate, verfahren zu deren herstellung, deren verwendung und diese enthaltende mittel als antikoagulantien
SE9102462D0 (sv) * 1991-08-28 1991-08-28 Astra Ab New isosteric peptides
CZ333492A3 (en) * 1991-11-12 1993-09-15 Lilly Co Eli Dipeptide of l-azetidine-2-carboxylic acids and l-argininaldehyde, process of its preparation and pharmaceutical preparation in which said dipeptide is comprised
SE9103612D0 (sv) * 1991-12-04 1991-12-04 Astra Ab New peptide derivatives
US5583146A (en) * 1992-12-02 1996-12-10 Bristol-Myers Squibb Company Heterocyclic thrombin inhibitors
US5780631A (en) * 1993-06-03 1998-07-14 Astra Aktiebolag Starting materials in the synthesis of thrombin and kininogenase inhibitors
SE9301916D0 (sv) * 1993-06-03 1993-06-03 Ab Astra New peptides derivatives
AU1025795A (en) * 1994-01-27 1995-08-03 Mitsubishi Chemical Corporation Prolineamide derivatives
US5707966A (en) * 1994-03-04 1998-01-13 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5726159A (en) * 1994-03-04 1998-03-10 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5705487A (en) * 1994-03-04 1998-01-06 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
SE504185C2 (sv) * 1994-11-08 1996-12-02 Astra Ab Lagringsstabil vattenlösning för infusion av trombininhibitorer
SE9404196D0 (sv) * 1994-12-02 1994-12-02 Astra Ab New antithrombotic formulation
US5710130A (en) * 1995-02-27 1998-01-20 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
TWI238827B (en) * 1995-12-21 2005-09-01 Astrazeneca Ab Prodrugs of thrombin inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
DE69427150D1 (de) 2001-05-31
ATE200783T1 (de) 2001-05-15
EP0701568B1 (en) 2001-04-25
NO954873L (no) 1996-02-01
CN1099425C (zh) 2003-01-22
JP2001322974A (ja) 2001-11-20
EP1067136A1 (en) 2001-01-10
US5939392A (en) 1999-08-17
FI955828A (fi) 1995-12-04
CZ302095A3 (en) 1996-04-17
AU6986994A (en) 1995-01-03
DE122004000045I1 (de) 2005-04-21
LTIP1947A (en) 1994-12-27
CN1278530A (zh) 2001-01-03
CN1178905C (zh) 2004-12-08
US5723444A (en) 1998-03-03
AU684086B2 (en) 1997-12-04
BR9406746A (pt) 1996-03-19
ES2128277T3 (es) 2001-07-01
NL300178I2 (nl) 2005-10-03
SI0701568T1 (en) 2001-08-31
RS49576B (sr) 2007-04-10
HK1031375A1 (en) 2001-06-15
ES2128277T1 (es) 1999-05-16
DE69427150T2 (de) 2001-09-06
CA2162900A1 (en) 1994-12-22
GR3036258T3 (en) 2001-10-31
LU91173I2 (fr) 2005-07-11
YU33694A (sh) 1997-12-05
NO2004009I1 (no) 2004-12-20
SA94150051B1 (ar) 2006-06-12
CA2162900C (en) 2009-06-09
IS1805B (is) 2002-03-08
DE122004000045I2 (de) 2011-06-16
PL181968B1 (pl) 2001-10-31
LT3768B (en) 1996-03-25
SK145495A3 (en) 1996-10-02
MY119155A (en) 2005-04-30
EG20671A (en) 1999-11-30
FI955828A0 (fi) 1995-12-04
HU9503445D0 (en) 1996-01-29
CZ290104B6 (cs) 2002-05-15
PL311819A1 (en) 1996-03-18
IS4166A (is) 1994-12-04
IL109634A0 (en) 1994-08-26
UA65518C2 (en) 2004-04-15
NL300178I1 (nl) 2005-05-02
TW403731B (en) 2000-09-01
HU0103039D0 (en) 2001-09-28
RU2142469C1 (ru) 1999-12-10
EP0701568A1 (en) 1996-03-20
SK283150B6 (sk) 2003-03-04
JP2002047264A (ja) 2002-02-12
NO954873D0 (no) 1995-11-30
IL123996A (en) 2008-07-08
HUT74739A (en) 1997-02-28
MX9404114A (es) 1995-01-31
SE9301916D0 (sv) 1993-06-03
US20050222395A1 (en) 2005-10-06
IL109634A (en) 1999-04-11
DK0701568T3 (da) 2001-06-18
HU226825B1 (en) 2009-11-30
HRP940311A2 (en) 1996-10-31
FI119812B (fi) 2009-03-31
PT701568E (pt) 2001-08-30
WO1994029336A1 (en) 1994-12-22
US5602253A (en) 1997-02-11
JPH08511018A (ja) 1996-11-19
NZ267534A (en) 1997-08-22
CN1127509A (zh) 1996-07-24
HRP940311B1 (en) 2002-02-28
SG48013A1 (en) 1998-04-17
KR100339456B1 (ko) 2002-12-06
JP3205558B2 (ja) 2001-09-04
EE03264B1 (et) 2000-04-17
DE701568T1 (de) 1999-06-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5723444A (en) Starting materials in the synthesis of thrombin and kinogenase inhibitors
US5780631A (en) Starting materials in the synthesis of thrombin and kininogenase inhibitors
US5955433A (en) Method of thrombin inhibition
US6455671B1 (en) Thrombin inhibitors, the preparation and use thereof
EP0956294B1 (de) Thrombininhibitoren
JPH07278095A (ja) アルギニンアルデヒドの亜硫酸水素塩付加物
US5852051A (en) Dipeptide p-amidinobenzylamides with N-terminal sulfonyl or aminosulfonyl radicals
US7144902B1 (en) Prodrugs of thrombin inhibitors
US6984627B1 (en) Peptide derivatives
AU684086C (en) New peptide derivatives

Legal Events

Date Code Title Description
SPCF Filing of supplementary protection certificate

Spc suppl protection certif: SPC/NO 2004 009

Filing date: 20041213

MM1K Lapsed by not paying the annual fees