JPH09511500A

JPH09511500A - Ｎ−置換化グリシンを含むブラジキニン拮抗薬ペプチド

Info

Publication number: JPH09511500A
Application number: JP7523493A
Authority: JP
Inventors: エス．グッドフェロウ，バル; ブイ．マレーザ，マノイ; ティー．ウォーレイ，エリック; ディー．フィッツパトリック，ティモシー; ジー．クールマン，カレン
Original assignee: コーテック，インコーポレイティド
Priority date: 1994-03-09
Filing date: 1995-03-07
Publication date: 1997-11-18
Also published as: CN1150206C; WO1995024422A1; ZA951974B; TW408133B; CA2184824A1; AU1932595A; DE69533704D1; EP0813544A4; ATE280777T1; AU696429B2; CN1148393A; US5700779A; EP0813544B1; KR100360639B1; EP0813544A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、痛み及び炎症を含むブラジキニンにより媒介される症状の処置に有用な、Ｎ−置換化グリシンを含むブラジキニン型ペプチド、特にブラジキニン拮抗ペプチドを提供する。

Description

【発明の詳細な説明】Ｎ−置換化グリシンを含むブラジキニン拮抗薬ペプチド本発明はキニン、そしてより詳しくはブラジキニンレセプター拮抗薬に関する。ブラジキニン（BK）はカリクレインとして知られるエンドペプチダーゼのグループによるキニノーゲンのタンパク質分解により放出される内因性ペプチドホルモンである。ブラジキニンは末梢Ａ−及びＣ−繊維ニューロンの刺激を介して痛み及び痛覚過敏を含む数多くの病理生理学的応答を誘導する媒介因子である。BK は炎症反応において重要な役割を果たし、そしてぜん息を含む敗血症及び気管支肺炎に係る低血圧症等のいくつかの疾病状態に有意義な媒介因子であることが明らかである。 BK拮抗薬はBKの作用を妨げる又は抑制するのに有用であると考えられ、その結果上記の疾病は治癒又は軽減される。また、ブラジキニン拮抗薬が頭部外傷における水腫（膨潤）、ひどい火傷に由来する水腫及び痛み、片頭痛、並びに外科処置又は癌に係る痛みの処置において有用でありうる。ブラジキニンは配列Arg¹-Pro²-Pro³-Gly⁴-Phe⁵-Ser⁶-Pro⁷-Phe⁸-Arg⁸のノナペプチドである。ここで利用する番号付けは元のブラジキニンの構造に対する作動薬又は拮抗薬の関連配列を比較する分野において現状採用されている。K.G.Clae son及び共同研究者は（米国特許第 4,242,329号）、Pro⁷の代わりにＤ−フェニルアラニン又はＤ−プロリンを含むブラジキニン配列のトランケーション型ペプチドが、中程度ではあるが測定可能なブラジキニン拮抗活性を示すことを実証した。Stewartはブラジキニンペプチド配列の７位にD -Pheを組込み、これはブラジキニンレセプターに対する拮抗作用を有するペプチドをもたらした（米国特許第 4,801,613号）。理論的には興味深いが、これらの化合物は有用な薬剤として機能するために十分な効能及びインビボ安定性を欠いていた。 HoechstのG.Breipohl及び共同研究者(EPA 0,455,133A2)並びにSios-NovaのD.K yle及び共同研究者(PCT／US92／03031)は効能の高いブラジキニン拮抗薬を開発し、これはブラジキニン配列の７位にD-Tic、Ｄ−シクロヘキシルアラニン又は置換化Ｄ−プロリンのいづれかを含む。Hoechstの合成したこの化合物はD-Tic⁷ を含み、そして８位において複素環式アミノ酸を含まなくてはならず、ここでα −アミノ酸窒素及びα−炭素が複素環の中に含まれている。かかる残基の例にはとりわけL-Oic又はL-Ticが含まれる。Kyleは８位において類似の複素環又は置換化４−ヒドロキシプロリン又は置換化４−チオプロリン残基を含む化合物を合成した。Young及び共同実験者はＮ−ベンジルグリシンをブラジキニン配列の７位に組込み、そして中程度のブラジキニンレセプター拮抗活性を有するペプチドを得た（第13回アメリカン・ペプチド・シンポジウム、Edmonton，Alberta、1993 年６月20日）。従来の研究にもかかわらず、有用な拮抗特性を有する新規、且つ改良されたBK 拮抗薬を提供することについてのかなりのニーズがある。本発明の主たる目的はペプチド鎖の中にＮ−置換化グリシンを含むかかる拮抗薬を供することにある。本明細書において考慮するＮ−置換化グリシンを利用する有能なブラジキニン拮抗薬は今までに報告されていない。発明の概要本発明はＮ−置換化グリシンである１又は複数のアミノ酸残基を含むブラジキニンペプチド拮抗薬を提供し、ここでそのＮ−置換基はアルキル、シクロアルキル、複素環、芳香又は複素環芳香基である。これらの化合物はブラジキニンの非常に効能な作動薬であることが示され、そしてインビボでの優れた安定性及び作用期間が実証された。ブラジキニンの有能な拮抗薬として、本発明の化合物は、痛み、炎症、水腫、頭部傷害に係る水腫、咬傷及び刺傷、片頭痛、 SIRS／敗血症、慢性炎症、火傷、小細胞癌腫、ぜん息に係る気路過敏症及び気路炎症を含むブラジキニンにより媒介される症状の処置にとって有用であると考えられる。発明の詳細な説明広義に定義すると、本発明のブラジキニンレセプター作動薬は１又は複数のＮ −置換化グリシン残基を含むペプチドである。より詳しくは、本発明は次式（Ｉ）のブラジキニンレセプター拮抗薬を考慮する： Z¹-Z⁰-A¹-B²-C³-D⁴-E⁵-F⁶-G⁷-H⁸-I⁹-J¹⁰ （Ｉ）（式中、Ｚ¹は任意的に存在してなくてもよいが、しかし存在しているなら、水素、アセチル、アダマンチルカルボキシル、アダマンチルアセチル、(Ｃ₁〜Ｃ₈)アルキル、アルカノイル、アリールスルホニル、アルコキシカルボニル、又はジヒドロキヌクリジニル−カルボン酸の誘導体であり；Ｚ⁰は任意的に存在していてよく、又はＺ⁰及びＡ¹は、同一でも異なるものであってもよく、直結合、水素、又はＤもしくはＬアルギニン、ＤもしくはＬリジン、ＤもしくはＬオルニチン、又はH₂N(NH＝C)NHCH₂CH₂CH₂(CH₂)_nCO−（ここでｎ＝０〜３である）に由来するアミノ酸残基であるか、又は医療化学業界において慣用の一般的なアルギニンに代わる置換基であって生理学的pHにおいて正帯電ヘテロ原子を供するもの、例えばアルキルアミン、ベンズアミジン、ピペリジン、アルキルグアニジン又はアルキルホスホニウム成分含有のオルニチン、アルギニン又はリジンの類似体又は同族体であってよく、ただしＺ¹が存在しないときＺ⁰は直結合以外のものであり；更にＡ¹がH₂N(NH＝C)NHCH₂CH₂CH₂(CH₂)_nCO-（ここでｎ＝０〜３である）のとき、Ｚ¹及びＺ⁰は存在していなく；Ａ¹が水素であるときはＺ⁰ 及びＺ¹は存在しない；Ｂ²及びＣ³は同一でも異なるものであってもよく、プロリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、グリシン、セリン、スレオニン、チオプロリン、Ｎ−（メチル）セリン、Ｎ−（メチル）スレオニン、Ｎ−メチルフェニルアラニン、グリシン又はNR′CHR″CO（ここで、Ｒ′及びＲ″は独立して水素、アルキル（例えばＣ１−Ｃ８直鎖もしくは分枝鎖、又はＣ３−Ｃ８シクロアルキル）、アリール、ヘテロアリール又はアルキルアミノである）であり；Ｄ⁴はグリシン、アラニン又はチエニルアラニンであり； B²C³D⁴E⁵は−NH(CH₂)_nCO−により置き換えられていてよく、ここでｎは４〜14 の完全数であり；Ｅ⁵はフェニルアラニン、メチルにより置換されたフェニルアラニン、グリシン、シクロペンチルグリシン、シクロヘキシルグリシン、シクロヘキシルアラニン、２−インダングリシン、チエニルアラニン、Ｎ−（２−インダン）グリシン、又はＮ−置換化グリシンであり、ここでその置換基はアルキル（Ｃ１−Ｃ８）、シクロアルキル（Ｃ３−Ｃ８）、CH₂Ar，CH₂CH₂Ar（ここでArはアリール又はアルキルチエニルである）、芳香族アミノ酸、又はα−窒素もしくはα−炭素においてメチルもしくはエチル基により置換された芳香族アミノ酸であり；Ｆ⁶は中性、塩基性又は酸性の脂肪族又は芳香族アミノ酸であり、その側鎖は置換されていてよく、例えば置換化セリン、又はシステインであり、その置換基はＮ−（アルキル）−スクシニミジル、Ｎ−（アルキル）ピロリジノン、アルキル（Ｃ１−Ｃ20）、アルケニルアルキル（Ｃ２−Ｃ20）、アリール又はアルキルアリール（Ｃ７−Ｃ20）より選ばれる；Ｇ⁷は芳香族アミノ酸、例えばD-Tic，D-Dic、Ｄ−フェニルアラニン、インダングリシン、Ｄ−シクロペンチルグリシン、Ｄ−シクロヘキシルグリシン、Ｄ− プロリン、又は３もしくは４位においてアルキル、アリール、チオアルキル、チオアリール、オキシアルキルもしくはオキシアリールにより置換されたプロリンであるか；又はＮ−置換化グリシン残基であり、ここでその置換基はアリール、アルキルアリール、−CH₂R又は−CH₂CH₂R（ここでＲはインダン、インドール、ナフチル又はフェニルである）であり；Ｈ⁸は以下の構造式からの選ばれるアミノ酸残基であり又は（式中、ｍは１〜６の整数であり）；Ｒ₁はアルキル（Ｃ１−Ｃ12の直鎖又は枝分れ鎖）、シクロアルキル（Ｃ３− Ｃ８）、単環式又は多環式アリール、例えばフェニル又はナフチル、ヘテロアリール又は複素環であって炭素、窒素、酸素又は硫黄から選ばれる３〜８の原子の１又は複数の環を含むものであり；Ｒ¹は置換化シクロアルキルであって、アミノ、ベンゾ、ヒドロキシ、メルカプト、メルカプトアルキル、アルキル、オキシアルキル、アルキルオキシ、カルボキシル、ハロゲン、フェニル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アミノアルキル、アルキルアミノ又はカルボキシアミドより選ばれる１〜４個の置換基を有するものであってもよく；又はＲ¹は置換化アリール又はヘテロアリールであって、アミノ、フェニル、ヒドロキシ、メルカプト、メルカプトアルキル、アルキル、オキシアルキル、アルキルオキシ、カルボキシル、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アミノアルキル、アルキルアミノ又はカルボキシアミドより選ばれる１〜４個の置換基を含むものであってもよく；Ｒ²はＨ、メチル又は高級アルキル（例えば１〜８個の炭素原子の直鎖又は枝分れアルキル）、又はアミノ酸の酸性、塩基性もしくは中性側鎖（アルキル又は芳香族）であり；Ｈ⁸は、Ｇ⁷がＮ−置換化グリシンであるとき、cis−エンド− オクタヒドロインドール−２−カルボニルであり；Ｉ⁹は存在していないか、又は直結合、OH又は塩基性、酸性もしくは中性のアミノ酸、特にアルギニン又はリジン又はH₂N(NH＝C)NHCH₂CH₂CH₂(CH₂)_n−NH−（ここでｎ＝０〜３である）であるか、又は医療化学の業界に慣用のアルギニンに代わる一般の置換基であって生理学的pHにおいて正帯電したヘテロ原子を供するもの、例えばアルキルアミン、ベンズアミジン、ピペリジン、アルキルグアニジン又はアルキルホスホニウム成分含有のアルギニン又はリジンの類似体又は同族体であってよく、ただしＪ¹⁰が存在しているときはＩ⁹はOH以外のものであり、又はＪ¹⁰が存在していないときは直結合以外のものであり；そしてＪ¹⁰は存在していないか、又は存在しているなら、OHであるか、又は塩基性、酸性もしくは中性アミノ酸であるか、又はＯ−Ｒ、又はNHR(ここでＲは１〜15個の炭素原子を含むアルキル基（直鎖又は枝分れ鎖）である）である）。本発明は、ブラジキニンに関するペプチド配列への１又は複数のＮ−置換化グリシン残基の組込みが実体的なブラジキニン拮抗活性を有する拮抗薬を供するという発見に基づいている。副次的な特徴において、鎖内にＮ−置換化グリシンを含む一定のペプチドは有用な拮抗活性を示すことも発見した。しかしながら、本発明は主に、著しいブラジキニン拮抗活性を、以降に示すようにその他の有用な特性と共に示すような、鎖内にＮ−置換化グリシンを含む新規のペプチドに関する。重要には、本化合物の薬理学的プロフィールは高い効能の化合物、例えばHOE- 140、即ち次式のペプチド： D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg に関して得られるものよりも有意に異なる。 HOE-140は、２型ブラジキニン(BK₂)レセプターに対して著しく有能であるが、多くのインビトロ又はインビボ薬効プロフィールにおいて１型ブラジキニン(BK₁ )レセプターに対する活性を欠いている。最近のデーターは、Ｂ₁レセプターの様々なモデルが慢性炎症又は持続性痛覚過敏症状の様々なモデルにおいて重要であることを示している(Dray，A.ら、TIPS，14 287(1993))。本発明の好適な化合物はＢ₁レセプター拮抗モデル(LPS−処理したウサギの血圧アッセイ)において実体的なインビボ活性を示す。一方、HOE-104はこのアッセイにおいて活性を欠いていた。本明細書に開示する化合物は、本発明のＮ−置換化グリシンがはるかに経済的に合成され、そして複雑、且つ高価な残基、例えばOic又は４−置換化ヒドロキシプロリン又はチオプロリンのケースにおいて含まれている複数の立体中心がない点で、従来の化合物に勝る経済的利点を有する。本発明の好適な態様において、ブラジキニンレセプターの非常に効能な拮抗薬を、ブラジキニンペプチド配列の７又は８位にＮ−置換化グリシン残基を組込むことにより作り上げることができる。これらの化合物は、それらが制約された複素環式アミノ酸であって、その環が置換化プロリン又はオクタヒドロ−インドール−２−カルボン酸(Oic)の如くのアミノ酸残基窒素を含むものをもたない点で従来技術とは異なる。特に好適な態様は、上記の通りブラジキニンペプチド配列の８位にＮ−シクロペンチル−、Ｎ−シクロヘキシル−、Ｎ−アリール−又はＮ −アルキルアリールグリシンを含む化合物を含んで成る。組織内に様々なレセプターサブタイプが存在しうることを当業者は認識しているであろう。従って、特定の化学治療のための最も好適な態様は、治療処置を狙いとする疾病状態及びブラジキニン拮抗薬が狙いとする組織に依存するであろう。これらのパラメーターはヒトの臨床検査によってしか実際には調べることができないが、この開示内容において示している動物組織に対する作用及びレセプター結合性情報は活性化合物の選択の指針を担うことができる。本明細書で用いる「ブラジキニンレセプター拮抗薬」は、ブラジキニンがそのレセプターに対して結合する能力を阻止する又はブラジキニンのそのレセプターへの結合を有効なシグナル変換が起こらないような状況へと変えてしまうような分子と定義する。拮抗薬は伝統的な競合インヒビター又は非競合的なものでありうる。従って、レセプター拮抗薬は天然のリガンドと同一の部位又は方向において結合する必要はないが、しかしその分子がレセプターと物理的に相互作用してレセプターブロッキング活性を授けることが発揮可能であるべきである。本明細書において用いているその他の用語は以下の通りに定義できうる：「ブラジキニン型ペプチド」とは、２個のα−アミノ酸を接続する少なくとも１本のアミド結合を含み、且つ哺乳動物のブラジキニンレセプターに対する結合能力を有する分子である。ブラジキニン型ペプチドは作動薬、部分作動薬、拮抗薬であるか、又は（１ミリモル未満の濃度において哺乳動物のブラジキニンレセプターに測定できるほどに結合できることを除き）測定できるほどの生物活性を欠くものでありうる。「ヘテロ芳香族」又は「ヘテロアリール」なる語は、窒素、酸素もしくは硫黄を含む単環又は多環芳香環系を意味し、そして限定することなく、ピロール、ピリジン、インドール、オキサゾール、ピラゾール、ピリミジン、プリン、グアニン、アデニン、ピラジン、キノリン、イソキノリン、フラン、ベンゾフラン、ベンゾキサゾール、チオフェン、ベンゾチオフェン及びチアゾールが含まれる。「Ar」又は「アリール」なる語にはフェニル、ナフチル、ビフェニル、インダン、又はフルオレンが含まれる。「複素環」とは、炭素と、窒素、酸素又は硫黄から選ばれる少なくとも１個の原子とを含む、３〜８個の原子を含む１又は複数個の環に関する。これらには、上記に定義したヘテロ芳香族構造、並びにエポキシド、オキシラン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、アジリジン、β−ラクタム、γ−ラクタム、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジノン、ジアザピン、アザピン、オキサゾリジン又はオキサゾリジノンが含まれる。上記で「アルカノイル」又は「アルコキシ」についての言及があるとき、これらの語はそれぞれ２〜８及び１〜８個の炭素を含むものと解される。上記で、独立に、又は組合せて、例えば「このアルキルにおいて」としてアルキル置換基について言及したとき、それは１〜８個の炭素を含んで成りうる。上記でプロリンの３又は４位と言及したとき、それは以下に示している通りである：本明細書で用いる「アルギニン置換基」とは、医療化学業界において慣用のアルギニンに代わる一般の置換基であって、生理学的pHにおいて正に帯電したヘテロ原子を供するものを言う。これらには、限定することなく、アルギニン、オルニチン又はリジン含有のアルキルアミン、ベンズアミジン、ピペリジン、アルキルグアニジン又はアルキルホスホニウム成分の類似体又は同族体が含まれる。アミノ酸の説明において、European J.Biochemistry 138 9（1984）の記載に従うアミノ酸について一般に認められている３文字コードを一般に利用した。しかしながら、新規のＮ−置換化グリシンを説明するこれらの略語の一部の利用は混乱を招きうる。従って、明確にするため、本明細書において用いる一定の残基についてのいくつかの略語を以下に説明する：本願において用いている更なる略語は以下の通りである： Boc tert−ブチルオキシカルボニル Bop-Cl ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィニック・クロリド D-Dic ジヒドロイソキノリン−３−イル−カルボニル DMF ジメチルホルムアミド Oic cis−エンド−オクタヒドロインドール−２−カルボニル PyBrop ブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート TFA トリフルオロ酢酸 Tic １，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−イル−カルボニル本発明に係るペプチドは、当業者に理解されるであろうように、様々な慣用の方法で調製できる。例えば、多くのペプチドは当業界に公知の手順を利用する溶液又は固相法のいづれかにより合成できる(Stewart，J.ら.，Solid Phase Pepti de Synthesis，Pierce Chemical Company，（1984）（Bodanszky，M.ら.，The P ractice of Peptide Synthesis，Springer Verlag，1984．Bodansky，Principle s of Peptide Synthesis，Springer Verlag，(1984)）(Barany，G.ら、Int.J.Pe ptide Protein Res．30：705739(1987))。しかしながら、立体障害型Ｎ−置換化グリシンへのアミノ酸のカップリングは特製の縮合剤、例えばBop-Cl（Tung，R. D.ら、J.Am.Chem.Soc．107 4342(1985)）又はPyBrop(Coste，J.，Peptides：Pr oceedings of the Twenty-first European Peptide Symposium(1990))又はアシルクロリド(Beyermann，M.ら、J.Org.Chem．55，721-728，(1996))、又はアシルフルオリド(Carpino，L.A.ら、J.Am.Chem.Soc．112 9652(1990))であって適当な保護型アミノ酸に由来するものを用いてのみ達成できる。α−ハロカルボニル化合物によるアミン又はアニリンのＮ−アルキル化によるＮ−置換化グリシンの合成を可能とする固相法(Zuckermann，R.N.，J.Am.Chem.Soc．114 10646(1992) )は、固相合成によりＮ−置換化グリシンを含むペプチドを合成する公知の手法である。しかしながら、安価、且つ効率的なカップリング剤Bop-Clの利用を可能とする固相法は今までに報告されていない。新規のＮ−置換化グリシン又はＮ−置換化アミノ酸は以下の方法により合成できる：構造R₁NH₂のアミン又はアニリンを、構造Ａの適当な保護型α−ハロ−アセテートと、極性溶媒、例えばアセトニトリル、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラヒドロフラン又はジメチルホルムアミドの中で、追加の塩基、例えば第三アミン、金属水素化物、炭酸又は炭酸水素金属又はアンモニウムの添加を伴って又は伴わないで反応させ、Ｎ−置換化アミノ酸Ｂを生成する。当業界公知の方法によるα−アミノ酸基の保護（T.Green and P.G.M.Wutsは、ペプチド合成に適用される一般技法に適する多くの保護基の例を供している（Greene，T.ら、Protecti ve Groups in Organic Synthesis、第２版、John Wiley and Sons(1991)）は、ペプチド合成の慣用方法に適するアミノ酸誘導体Ｃを供する。（式中、Ｘ＝ハロゲン又は離核基、Ｐ₁及びＰ₂は保護基である）。他方、適当な保護型アミノ酸Ｄをクロリド、ブロミド、ヨージド、トシレート、メシレート、トリフレート等の如くの離核基Ｘを含む成分と反応させてＢを生成してよい。当業界公知の方法によるアミンの保護はペプチド合成のための中間体を供する(Greene，T.,ら、Protective Groups in Organic Synthesis、第２版、John Wiley and Sons，(1991))。一定の場合、ＸをＮ−保護型（ウレタン又はスルホンアミドをベースとする保護基）アミノ酸の、強塩基、例えばNaHによる脱プロトン化により形成されたアニオンに置き換え、アニオンのアルキル化により直接Ｃを生成してよい。（式中、Ｘ＝ハロゲン又は離核基、Ｐ₁及びＰ₂は保護基である。）最後に、中間体Ｂを還元アミノ化により形成してよく、この場合適当なアミンとアルデヒド又はケトンとを縮合してシック塩基又はイミンを形成し、これを水素及び触媒又は活性水素化試薬、例えばナトリウムシアノボロヒドリド又はナトリウムボロヒドリドで還元して所望のアミンＢにする。当業界公知の方法によるアミンの保護はペプチド合成に適する中間体Ｃを供する。（式中、Ｐ₁及びＰ₂は保護基であり、そしてR₃-CO-R₄は環式もしくは直鎖ケトンであるか、又は還元的アミノ化によりＲ₁を供するアルデヒドである）。ブラジキニン作動薬の治療用途には、ブラジキニン又はその密接な代謝物により媒介される外傷、炎症又は病理症状が含まれる。これらの症状には、咬傷、刺傷、一般の外傷、頭痛、炎症性腸炎を含む炎症症状、敗血症に係るショック又は低血圧、並びに痛み、特に外科又は歯科処置に係る痛みの処置が含まれうる。更に、ブラジキニン拮抗薬は、気路過敏症及び炎症、並びにぜん息に係るその他の症状の処置のために利用されうる。ブラジキニンは分裂促進剤として認定され、そして本発明に開示の化合物は抗癌剤としてのその用途を示唆しうるインビトロ活性を示す。これらの化合物は局所的に投与してよく、又は注射もしくは点滴によって、又は適当なビヒクル中の経口懸濁物として、又は錠剤、ピル、カプセル、カプレット等として投与されうる。投与の用量又は方法は、ブラジキニン拮抗薬の用途により規定され、そして最適用量を見つける臨床試験の日常的な方法により決定できうる。これらの用量は0.001mg／kg〜100mg／kgの活性化合物の範囲と予測される。本発明の化合物は、その酸性又は塩基性的性質に基づき塩を形成しうるアミノ酸より成り、そして本明細書に記載の化合物に由来する任意の薬理学的に許容される塩、例えば塩酸塩、酢酸塩、リン酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、アスコルビン酸塩、等は本発明の一部と考えられる。医療化学における一般的な手法は、ペプチドベースである既知の薬剤物質を改変して、より強い生物学的利用能を発揮するエステル又はアミドプロドラッグを作ることにあり、そして本明細書に開示の化合物由来のプロドラッグは本発明の一部を成る。プロドラッグをデザイン及び調製するための方法は医療化学論文に詳細されている（Bundgaard，H.，Design of Prodrugs，Elsevier(1985) ）。本発明の化合物はその他の生理学的薬剤、例えばキニン拮抗薬、例えばニューロキニン拮抗薬、又はオピオイド作動薬、プロテアーゼインヒビター、特にエラスターゼのインヒビターと一緒に、又はその他の鎮痛薬もしくは抗癌剤と組合せて投与されてよい。本発明に係る代表的な化合物には以下のものが含まれ、ここでNB ng，NChg，NCpg，NPeg，NMCh及びNPhgはそれぞれＮ−ベンジルグリシン、Ｎ−シクロヘキシルグリシン、Ｎ−シクロペンチルグリシン、Ｎ−フェニルエチルグリシン、Ｎ−メチルシクロヘキシルグリシン及びＮ−フェニルグリシンを表わしている：化合物１．D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-NBng-Oic 化合物２．D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-DTic-NChg 化合物３．D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-Igl ^* -NChg-Arg ^* アイソマーＡ化合物４．D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-Igl ^* -NChg-Arg ^* アイソマーＢ化合物５．D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NChg-Arg 化合物６．D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-NBng-Oic-Arg 化合物７．D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-NBng-NChg-Arg 化合物８．D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NCpg-Arg 化合物９．D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Phe-NChg-Arg 化合物10．D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Cpg-NChg-Arg 化合物11．D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-NPeg-Oic-Arg 化合物12．D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NMch-Arg 化合物13．δ-Gpa-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NChg-Arg 化合物14．δ-Gpa-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NChg-Arg 化合物15．D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NPhg-Arg 化合物16．D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Phe-NPhg-Arg 化合物17．D-Arg-Arg-Hyp-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NChg-Arg 化合物18．δ-Gpa-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NChg 上記の更に代表的な化合物は以下の通りの式（Ｉ）の化合物に該当する：Ｚ′は存在せず；Ｚ⁰はD-Argもしくはδ-Gpaであるか又は存在せず；Ａ¹はArg又はδ-Gpa；Ｂ²はPro又はHyp；Ｃ³はHyp；Ｄ⁴はGly；Ｅ⁵はThi；Ｆ⁶はSer；Ｇ⁷はNBng，NPeg，NChg又はDTic，Igl，D-PHe又はDCpg；Ｈ⁸はOic，Arg，NChg，MNch，NPhgであり、G⁷及びH⁸はN-置換化グリシンである；Ｉ⁹の少なくとも一方は存在していないか、又はArgである；そしてＪ¹⁰は存在せず。上記に記載のＮ−置換化グリシン残基は代表的なペプチドの７−及び／又は８ −位にあるが（BK配列番号付けを利用して）、Ｎ−置換化グリシンの位置は他でもよいことが認識されるであろう。同様に、例示以外のその他のＮ−置換基及び変更も本発明に従って利用できうる。例えば、典型的な化合物の有用な類似体が末端Arg基を削除することにより得られる。しかしながら、本発明に係るペプチドの好適なグループは、７−及び／又は８−位（BK配列番号付けを利用して）がＮ−置換化グリシンであり、その置換基が有利にはフェニル、ベンジル、フェネチル、シクロアルキル、例えばシクロペンチルもしくはシクロヘキシル、又は低級アルキルシクロヘキシル、例えばメチルシクロヘキシルである式（Ｉ）の８〜 10個のアミノ酸を有する化合物を含んで成る。本発明に係る化合物のその他の好適なサブグループには以下に広がりうる： D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-(N-R)Gly-Arg又は D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-(N-R)Gly （式中、Ｒ、即ち、グリシン残基の置換基は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、メトキシ、エトキシ、順又はイソ−プロピルオキシ、CH₂OCH₂CH₃，CH₂ CH₂O-CH(CH₃)₂，CH₂CH₂OCH₂，CH₂CH₂OCF₃、チオメチル、チオエチル、チオプロピル（順又はイソプロピル）である）。本発明を以下の実施例により更に説明し、ここで拮抗薬は本発明の好適な態様で表わしている。これらの実施例は例示であり、本発明を限定するものではない。実施例実施例Ｉ典型的なペプチドの合成のための一般手法Ｃ−末端がアルギニンで終わるペプチドアミノ酸を全てアルファー窒素においてtert−ブトキシカルボニル基で保護した。セリンはベンジルエーテルとして保護した。アルギニンのグアニジンは、何らかのことわりのない限り、トシル基で保護した。ヒドロキシプロリンについては側鎖の保護を採用しなかった。樹脂の調製 Nα-Boc-Ng-p-トシル-L-アルギニン（グラム当り約0.25〜0.75当量）で事前誘導化しておいたPAM樹脂（一般に0.20〜２ｇ，Bachem）を、手動式固相ペプチド合成用にデザインされた槽の中に入れた（Stewart，J.M．ら，Solid Phase Peptide Synthesis，Pierce Chemical Company，(1984)）。この樹脂を25 mlのドライCH₂Cl₂で処理し、その際１分間にわたる窒素吹き込みにより攪拌を施した。溶液を排液し、そしてCH₂Cl₂による洗浄を繰り返した（２×25ml）。同様の洗浄をジメチルホルムアミド（３×25ml）で繰り返し、続いてジクロロメタンで洗った（３×25ml）。脱保護洗浄した樹脂をジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸の１：１の混合物 25mlで処理した。攪拌を窒素吹き込みにより５分間維持し、次いで溶媒を濾過除去した。この樹脂を再びジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸の１：１の混合物 25mlで処理した；攪拌を窒素吹き込みにより５分間維持し、次いで溶媒を濾過除去した。中和この樹脂をジクロロメタン（３×25ml）、ジメチルホルムアミド（２×25 ml）、次いで再びジクロロメタンで順に洗った。この樹脂をジクロロメタン中の 10％（ｖ／ｖ）のジイソプロピルエチルアミンの溶液で洗った（３×25ml）。微量の塩基を除去するため、この樹脂をジクロロメタンで洗った（３×25ml）。N-Boc-アミノ酸HOBtエステルとのカップリングのための手順４当量のBoc−保護型アミノ酸を最少量のDMFに溶かし、次いで４当量のHOBt（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール−一水和物）を加えた。これに４当量のDCC（ジシクロヘキシルカルボジイミド）を加えた。この反応体を室温で１時間攪拌した。ジシクロヘキシルウレアを濾過により除去し、そして得られる濾液をＮ−脱保護ペプチジル −樹脂を含むペプチド合成槽に入れた。攪拌を１時間続けた。立体障害型Ｎ−末端第２級アミン、例えばD-Tic，Oic又はＮ−置換化グリシン残基を含むペプチジル樹脂へのBoc-保護型アミノ酸のカップリング２当量のBoc- 保護型アミノ酸及び２当量のジイソプロピルエチルアミンを最少量のジクロロメタンに溶かした。この溶液を窒素のもとで０℃に冷却し、そして２当量のBop-Cl で処理した。この反応体を窒素のもとで０℃で３時間攪拌した。この均質な溶液をＮ−脱保護ペプチジル−樹脂を含むペプチド合成槽に入れ、次いで更に２当量のジイソプロピルエチルアミンを含む当容量のジメチルホルムアミドを加えた。特定の実施例において示した特定のケースにおいては、この手順において用いる試薬及び溶媒の量を２倍にすることにより４当量の活性化アミノ酸を採用した。カップリング後洗浄この樹脂をジメチルホルムアミド（３×25ml）、次いでジクロロメタン（３×25ml）で洗った。カップリングの完了の評価数個の樹脂粒子をKaiseにより開発された方法の改良法を利用してニンヒドリンと反応させ（Stewart，J.M．ら，Solid Phase Pept ide Synthesis，Pierce Chemical Company，(1984)）、反応が完了したかを定性的に調べた。反応が完了していたら、この樹脂を再びジクロロメタンで洗い、そして脱保護及びカップリングエ程を上記の通りに続行した。未反応のアミンが存在していることが認められたら、この樹脂を再び中和及びカップリング手順にかけた。Ｎ−アルキルアミノ酸残基はKaiser試薬にかけたときは奇妙な結果を供しうることがあり、かかるケースにおいては、少量のペプチジル樹脂サンプルの加水分解の後に行う定量アミノ酸分析の利用がカップリング反応の完了を決定するのに有用でありうる。HF脱保護ペプチド樹脂を慎重に乾かし、そしてHF反応用の特製の槽（Peninsul a Laboratories）に移し、そのペプチドを１mlのアニソールで処理し、次いで低温での約９mlのHFの縮合を行った。この反応を０℃で45〜60分続け、そしてHFを真空で慎重に除去した。樹脂／スキャベンジャー混合物を真空で１時間かけて乾かし、次いでその残渣を無水ジエチルエーテルで慎重に洗い、そして10％の酢酸溶液でペプチドを抽出した。酢酸溶液を固体となるまで凍結乾燥し、それを逆相調製用C18 HPLCクロマトグラフィー（Dynamax又はVydac30×2.5cm，10μ C18）により精製して所望のペプチドを得た。Ｃ−末端がOic又はＮ−置換化グリシンで終わるペプチドＣ末端Boc-アミノ酸(1.0mmol)を10mlの95％のエタノール及び３ mlのH₂Oの混合物の中に溶かした。炭酸水素セシウム（１mmol）を加え、そしてその反応体を１時間攪拌した。その溶媒を真空又はロータリーエバポレーターで除去した。少量のベンゼンを加え、そして微量の水が除かれ、白色のさらさらとした粉末が得られるまで真空で除去した。Merrifield樹脂（Bachem，１％架橋型、100〜200メッシュ、〜１meq／ｇ，1.0meq）及びセシウム塩を窒素パージしたドライなジメチルホルムアミド（６〜８ml／樹脂ｇ）の中に懸濁し、そしてその反応体を窒素のもとで50℃で24〜36時間攪拌した。この溶液を濾過し、そしてその樹脂を50mlづつの以下の溶媒で順に３回づつ洗った：ジメチルホルムアミド、 50％のジメチルホルムアミド水溶液、ジメチルホルムアミド、次いでエタノール。この樹脂を一夜乾燥させた。樹脂のBoc-アミノ酸置換密度の近似は、誘導化の際に樹脂により増量する質量により行った。Boc-アミノ酸誘導型樹脂はPAM樹脂について上記した通りにして、ペプチド合成のために調製し、且つ脱保護した。ペプチドの特性決定ここで利用するアミノ酸分析の方法は一般的なアミノ酸の正確な定量を担う。異常なアミノ酸の定量は往々にして外延的な方法の開発を要する。異常なアミノ酸、例えばD-Tic，Oic及びＮ−置換化グリシンは、アミノ酸分析器でのリテンションタイムにより定性的に同定できうる。似たような観点がペプチド配列決定にも適用できうる。定性的に同定できうるが、定量的に測定できない残基には星印（★）を付けた。データーの得られた化合物の全てについての配列が正しいことが見い出された；これは詳細の実験テキストにおいて明示している。特別な残基はペプチド配列決定により同定できるが、しかし異常な残基の定量は行わなかった。本目的のために利用した低分解圧レーザー脱着マス・スペクトルは約0.1％の精度をもって分子イオンの決定を可能にする。精度におけるこの予測のささいな制約は計算分子量と実験分子量との約１a.m.u.の差に起因し、それは若干の化合物に関して報告された。実施例II 化合物１の合成 D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-NBng-OicN-α-Boc-N-ベンジルグリシンエチルエステルＮ−ベンジルグリシンエチルエステル(1.0ｇ，5.17mmol，97.0％)及びトリエチルアミン(0.79ml，5.7mmol)のDM F(1.0ml)攪拌溶液に、ジ−tert−ブチルジカルボネート(1.28ｇ，5.7mmol)のDMF (2.0ml)溶液を加えた。得られる溶液を室温でＮ₂下で19時間攪拌した。DMFを真空でエバポレートし、そして得られる油を酢酸エチル（50ml）に溶かした。その酢酸エチル層を10％のNa₂CO₃溶液（２×25ml）、ブライン（２×30ml）で洗い、乾かし(MgSO₄)、そして溶媒をエバポレートして油として表題の化合物を得た（1 .48ｇ，98.0％）。¹H NMR(CDCl₃)，δ 1.2-1.3(t，3H)，1.49(s，9H)，3.8(s，1 H)，3.9(s，1H)，4.1-4.2(q，4H)，4.5-4.55(d，2H)，7.2-7.4(m，5H); ¹³C NMR (CDCl₃); δ13.95，14.04，28.06，28.12，47.54，47.93，50.85，51.33，60.70 ，80.16，80.33，127.22，127.31，127.93，128.36，137.195，137.43，155.40 ，155.56，169.67，169.71。N-α-Boc-N-ベンジルグリシン最少量の水に溶かしたNaOH(0.3ｇ，7.57mmol)を N-α-Boc-N-ベンジルグリシンエチルエステル（0.74ｇ，2.52mmol）のメタノール（5.0ml）攪拌溶液に加えた。この反応混合物を室温で18時間攪拌した。メタノールを真空でエバポレートし、そして得られる残渣を水に溶かした。水性層をクロロホルムで抽出し（２×50ml）、０℃に冷やし、次いでpHを１ＮのHClで2.0 に調整し、そしてその溶液を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層をブラインで洗い、乾かし(MgSO₄)、そして真空でエバポレートしてI.18ｇ(88 .0％)の表題の化合物を得た。¹H NMR(CDCl₃); δ 1.49(s，9H)，3.82(s，1H)，3 .98(s，1H)，4.52(s，1H)，4.56(s，1H)，7.2-7.4(m，5H)，11.5(br s，1H); ¹³ C NMR(CDCl₃)δ 28.19，28.26，47.43，47.57，50.85，51.49，80.92，81.10，1 27.46，127.52，128.08，128.6，136.98，137.16，155.58，155.99，175.40，17 5.70。 Nα-Boc-Oic樹脂（0.60ｇ，0.83meq／ｇ）を上記の通りにして調製した；このペプチドを上記の手順を利用して順にカップリングして樹脂から解裂させ、91.3 mgの粗材料を得た。HPLC精製(10〜65％のCH₃CH、0.1％のTFA、55分にわたる勾配、20ml／min)は、無色の凍結乾燥として46.1mgの化合物１を供した。レーザー脱着マス・スペクトル(LD-MS): 計算値1136(M+H); 実験値1136(M+H)。アミノ酸分析(AAA): Arg 2.06(2)，Hyp 0.83(1)，Pro 0.99(1)，Gly 0.99(1)，Thi^* ，Ser 1.12(1)，NBng^* ，Oic ^* 。適正な配列分析が得られた。実施例III 化合物２の合成 D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-DTic-NChgＮ−（シクロヘキシル）グリシンベンジルエステルシクロヘキシルアミン(14. 3ml，125mmol)を50mlのTHFに溶かし、そして窒素下で０℃に冷やした。この溶液に、ベンジル２−ブロモアセテート（7.93ml，50mmol）の50mlのTHF溶液に滴下した。この反応体を室温にまで温め、そして約15時間攪拌した。この溶媒を真空で除去し、次いで残渣を200mlのジクロロメタンに含ませ、そして10％の炭酸ナトリウム溶液で洗った。この炭酸ナトリウム溶液を50mlのジクロロメタンで２回抽出した。ジクロロメタン層を全て合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾かし、そして真空で濃縮した。この残渣をジオキサン中の４ＮのHCl 26mlで処理し、揮発物を真空で除去し、そしてその残渣を低温の無水ジエチルエーテルで粉砕した。その固体を回収し、そして減圧下で数時間かけて乾かし、微量のシクロヘキシルアミン塩酸塩の夾雑した15ｇの塩酸塩が得られた。この混合物を300mlのジクロロメタンに溶かし、そしてこの溶液を100mlの10％の炭酸ナトリウム溶液で洗った。その水性溶液をジクロロメタンで逆抽出した。ジクロロメタン層を全て合わせ、硫酸マグネシウムで乾かし、そして真空で乾かして（約１torr）油として11.63ｇの純粋な表題の化合物を得た。¹H NMR(CDCl₃)δ 1.0-1.32(m，4H); 1.55-1.78(m，4H); 1.83(m，2H); 2.41(tt，J＝10，4Hz，1H ); 3.48(s，2H); 5.17(s，2H); 7.36(s，5H); ¹³C NMR（DMSO）δ 24.62，25.82 ，33.08，48.02，56.12，66.28，128.15，128.36，135.47，142.53。Boc-N-（シクロヘキシル）グリシンベンジルエステルＮ−（シクロヘキシル）グリシンベンジルエステルを44.4mlのジオキサンに溶かし、そして44.4mlの１ＮのNaOH溶液を加え、次いでジ−tert−ブチルジカルボネート（10.68ｇ）を加えた。攪拌を約15時間続け、その後揮発物をロート・エバポレーションにより除去した。得られる残渣を100mlの水と100mlの酢酸エチルとで分配した。層分離させ、そして水性層を５％の亜硫酸カリウム溶液でpH３に酸性化した。その水性層を酢酸エチルで抽出し、そして全酢酸エチル溶液を合わせ、飽和炭酸水素ナトリウム溶液、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾かした。ロータリーエバポレーションによる除去及び高真空下での更なる乾燥は油としての14.50ｇの表題の化合物を供した。¹H NMR(CDCl₃)δ 0.95-1.55(m，14H); 1. 63(m，1H); 1.77(m，4H); 3.70-4.1(m，3H); 5.16(s，2H); 7.36(s，5H)。Boc-N-（シクロヘキシル）グリシン Boc-N-(シクロヘキシル)グリシンベンジルエステル（14.0ｇ，40mmol）を240mlの無水エタノールに溶かし、ドライ窒素でフラッシュし、そして不活性雰囲気のもとで1.5ｇの10％のパラジウム・オン・カーボンと慎重に合わせた。Parr装置を用い、窒素雰囲気を水素に置き換え（43 P.S.I.）、そしてその混合物を室温で24時間振騰させた。その混合物を窒素でパージし、そして触媒及び固体をセリートパッドを介する濾過により除去した。その濾液をロータリーエバポレーションにより濃縮し、そしてその残渣を300mlの酢酸エチルに含ませた。酢酸エチル層を150mlの１Ｎの水酸化ナトリウム溶液で抽出した。塩基性溶液を氷浴の中で１Ｎの塩酸溶液によりpH３にまで酸性化した。この酸性溶液を酢酸エチルで抽出した(３×100ml)。この溶液を飽和塩化ナトリウム溶液で洗い、そして真空で濃縮して無色の油にし、それを高真空で更に乾かした。得られるガラス／固体をヘキサンで粉砕し，その濾過及び乾燥は無色粉末の表題の化合物（8.89ｇ）を供した。M.P．103-104℃（未確定）分析（C₁₃H₂₃ NO₄）C，H，N; C:計算値 60.68; 実験値 60.77 H; 計算値 9.01; 実験値 9.20． N: 計算値 5.44;実験値 5.44．¹H NMR（CDCl₃）δ 1.07(m，1H); 1.10-1.55(m， 4H); 1.43(s，9H)，1.55-1.9(m，5H); 3.67-4.13(m，3H); 11.33(br s，1H); ¹³ C NMR(CDCl₃)δ 25.43，25.68，28.20，30.91，44.03，44.26，44.36，44.42，5 4.03，54.18，56.13，80.36，80.47，154.81，176.83。 Nα-Boc-NChg樹脂（0.63ｇ，0.79meq／ｇ）を上記の通りに調製した。ペプチドを上記の手順を利用して順にカップリングし、そして樹脂から解裂させ、71mg の粗材料を得た。HPLC精製(10〜65％のCH₃CN、0.1％のTFA、55分間にわたる勾配、20ml／min)は、無色凍結乾燥品としての23mgの化合物２を供した。LD-MS: 計算値1136.6(M+1); 実験値 1136.5(M+1)．AAA: Arg 2.01(2)，Hyp 0.81(1)，Pro 0.94(1)，Gly 0.98(1 )，Thi ^* ，Ser 1.27(1)，NChg^* ，Tic ^* 。適正な配列分析が得られた。実施例IV 化合物３及び４の合成 D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-Igl ^* -NChg-Arg^* 異性体Ａ及びＢ(D,L)-N-(Boc)-2-インダングリシン (D,L)-2-インダングリシンをPorter and S hiveの方法により調製した(Porter，T.H．and Shive，W.，J．Med．Chem．11 40 2(1968))。D,L-2-インダングリシン(3.36ｇ，17.54mmol)を水酸化ナトリウム（1 .76ｇ，1.1当量）を含むジオキサン（30ml）と水（15ml）との混合物の中に溶かした。ジ−tert−ブチルジカルボネート（4.35ｇ，19.3mmol）を加えた。この反応体を室温で18時間攪拌した。揮発物をロータリーエバポレーターで除去し、そして水性残留物をクロロホルムで抽出し、次いでHClでpH２〜３に酸性化し、そして酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル溶液をブラインで洗い、そして無水硫酸マグネシウムで乾かした。溶媒の除去は2.87ｇ（56％）の(D,L)-N-(Boc)-2-インダングリシンを供した。 Nα-Boc-Ng-p-トシル-L-アルギニンにより事前誘導化しておいたBoc-Ng-p-トシル-L-アルギニン樹脂（1.52ｇ，Bachem，1.0meq）を、手動式固相ペプチド合成用にデザインされた槽に入れた。ペプチドを上記の手順を利用して順にカップリングさせ、そして樹脂から解裂させ、330mgの粗材料を得た。この粗材料100mg のHPLC精製(10〜65％のCH₃CN、0.1％のTFA、55分間にわたる勾配、20ml／min)は、30.4mgの異性体（化合物３）及び31.5mgの異性体Ｂ（化合物４）を供した。HPLCリテンションタイム：（50分にわたる５−55％のCH₃CN 、0.1％のTFA、C18 5μ、分析用カラム）異性体Ａ（化合物３）27.9分; 異性体Ｂ（化合物４）28.6分。化合物３（異性体Ａ）：LD-MS：計算値1306(M+H); 実験値 1307（M+H）。AAA: Arg 3.36(3)，Hyp 0.93(1)，Pro 0.90(1)，Gly 0.90(1) ，Thi ^* ，Ser 0.91(1)，NChg^* ，Igl ^* 。化合物４（異性体Ｂ）LD-MS: 計算値 1306（M+H）実験値 1305.8（M+H）。AAA: Arg 3.43(3)，Hyp 0.92(1)，Pro 0 .89(1)，Gly 0.89(1)，Thi^* ，Ser 0.91(1)，NChg^* ，Igl ^* 。実施例Ｖ化合物５(CP-0597)の合成。 D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NChg-Arg Nα-Boc-Ng-p-トシル-L-アルギニンで事前誘導化しておいたBoc-Ng-p-トシル- L-アルギニンPAM樹脂を手動式固相ペプチド合成用にデザインされた槽の中に入れた。ペプチドを上記の手順を利用して順にカップリングさせ、そして樹脂から解裂させ、330mgの粗材料を得た。この合成を通じ、４当量の事前活性化Boc-アミノ酸を利用した。粗材料のHPLC精製(10−65％のCH₃CN、0.1％のTFA、55分間にわたる勾配、20ml／min)は131.8mgの化合物５を供した。HPLCリテンションタイム：（65分にわたる５−70％のCH₃CN、0.1％のTFA、C18 5μ、分析用カラム、R. t.＝30.3min.）LD-MS: 計算値1293; 実験値1293（M+H）アミノ酸分析：Arg 3.13(3)，Hyp 0.90(1)，Pro 0.95(1)，Gly 0.98(1)，Thi^* ，Ser 1.04(1)，NChg^* ，Tic ^* 。適正な配列分析が得られた。実施例VI 化合物６の合成 D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-NBng-Oic-Arg Na-Boc-Ng-p-トシル-L-アルギニンで事前誘導化しておいたNα-Boc-Ng-p-トシル-L-アルギニンPAM樹脂(0.240ｇ，Bachem，0.14meq)を手動式固相ペプチド合成用にデザインされた槽の中に入れた。ペプチドは上記の手順を利用して順にカップリングし、そして樹脂から解裂させた。粗材料の一部のHPLC精製(５〜55％のC H₃CN、0.1％のTFA、55分間にわたる勾配、20ml／min)は8.3mgの化合物６を供した。HPLC: R.t.＝14.0分（30分にわたる20−60％のCH₃CN、0.1％のTFA、C18 5μ 、分析用カラム）。LD-MS: 計算値1293; 実験値1293(M+H)。AAA: Arg 2.98(3)， Hyp 1.08(1)，Pro 0.97(1)，Gly 1.10(1)，Thi^* ，Ser 0.87(1)，NBng ^* ，Oic ^* 。適正な配列分析が得られた。実施例VII 化合物７の合成 D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-NBng-NChg-Arg Na-Boc-Ng-p-トシル-L-アルギニンで事前誘導化しておいたBoc-Ng-p-トシル-L -アルギニンPAM樹脂(0.240ｇ，Bachem，0.14meq)を手動式固相ペプチド合成用にデザインされた槽に入れた。ペプチドを上記の手順を利用して順にカップリングし、そして樹脂から解裂させた。粗材料の一部のHPLC精製(５−55％のCH₃CN、0. 1％のTFA、55分間にわたる勾配、20ml／min)は42mgの化合物７を供した。HPLC: R.t.＝13.5分（30分にわたる20−60％のCH₃CN、0.1％のTFA、C18 5μ、分析用カラム）。LD-MS: 計算値 1280; 実験値 1280。AAA: Arg 3.03(3)，Hyp 1.06(1 )，Pro 0.99(1)，Gly1.02(1)，Thi ^* ，Ser 0.90(1)，NBng^* ，NChg^* 。適正な配列分析が得られた。実施例VIII 化合物８の合成 D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NCpg-ArgＮ−シクロペンチルグリシンベンジルエステルベンジル−２−ブロモアセテート（3.30ml，20.0mmol）の20mlのCH₂Cl₂溶液をシクロペンチルアミン(8.60ｇ，1 00mmol)の20mlのCH₂Cl₂溶液に、０℃で撹拌しながら滴下した。ベンジル−２− ブロモアセテートの添加の完了後、その反応体を室温で17時間撹拌した。その有機溶媒を真空で除去し、次いでその残渣を酢酸エチルに含ませ、そして飽和Na₂C O₃溶液で洗った。この溶液を１ＮのHClで抽出した。その水性層をNa₂CO₃で塩基性にし、そしてクロロホルムで抽出した。その有機層を乾かし(MgSO₄)、そしてエバポレートした。その残渣をシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより、ヘキサン及びヘキサン／酢酸エチル（１：１，ｖ／ｖ）で順に溶出させて油として2.3ｇ（50.0％）の表題の化合物を得た。¹H NMR(CDCl₃)δ 1.25-1. 85(m，9H); 3.0-3.12(m，1H); 3.43(s，2H); 5.15(s，2H); 7.27-7.42(m，5H); ¹³ C NMR(CDCl₃)δ 23.72，32.71，49.53，59.03，66.24，128.1，128.32，135.4 2，172.29。N-α-Boc-N-シクロペンチルグリシンベンジルエステルＮ−シクロペンチルグリシンベンジルエステル(2.31ｇ，9.9mmol)及びトリエチルアミン(1.66ml，11.9 mmol)のDMF（3.0ml）撹拌溶液にジ−tert−ブチル−ジカルボネート(2.16ｇ，9. 9mmol)のDMF（3.0ml）溶液を加えた。得られる溶液を室温でＮ₂下で19時間撹拌した。DMFを真空でエバポレートし、そして得られる油を酢酸エチル（50ml）に溶かした。酢酸エチル層を10％のNa₂CO₃溶液（２×25ml）、ブライン（２×30ml ）で洗い、乾かし(MgSO₄)、そして溶媒をエバポレートして油として表題の化合物を得た（3.28ｇ，99.0％）。この化合物を更に精製することなく使用した。¹³ C NMR（CDCl₃）δ 23. 44，28.13，29.11，29.80，44.86，56.28，66.61，79.96，128.15，128.30，128 .46，135.5，155.0，170.48。N-α-Boc-シクロペンチルグリシン N-α-Boc-N-シクロペンチルグリシンベンジルエステル(3.28ｇ，9.9mmol)を、10％のパラジウム・オン・カーボン（0.33ｇ）を有する脱酸素エタノール（30ml）に溶かした。この反応混合物をParrハイドロジェネーターの中で水素のもとで（30P.S.I.）17時間撹拌した。それをセリートパッドで濾過し、そしてエタノールをエバポレートさせた。得られる残渣を酢酸エチルに溶かし、そして酢酸エチル層を低温の１ＮのHCl（100ml）、ブライン (２×100ml)で洗い、乾かし(MgSO₄)、そして真空でエバポレートした。得られる化合物を酢酸エチル／ヘキサンから再結晶させ、無色の固体として表題の化合物 1.09ｇ（47.0％）を得た。分析（C₁₂H₂₁NO₄）C，H，N; C: 計算値，59.24; 実験値 58.94，H: 計算値，8.70; 実験値 8.69.; N: 計算値，5.76; 実験値 6.0 0。¹H NMR(CDCl₃)δ 1.2-1.72(m，15H); 1.76-1.96(m，2H); 3.64-4.0(br s，2H ); 4.1-4.6(m，1H); 10.36（br s，1H）。 Boc-Ng-p-トシル-L-アルギニンPAM樹脂（1.52ｇ，Bachem，0.5meq）を手動式固相ペプチド合成用にデザインされた槽に入れた。ペプチドを上記の手順を利用して順にカップリングし、そして樹脂から解裂させた。このカップリングにおいて４当量の事前活性化アミノ酸を使用した。HF脱保護は428mgの粗材料を供した。100mgの粗材料のHPLC精製(10-65％のCH₃CN、0.1％のTFA、55分間にわたる勾配、20ml／min)は白色凍結乾燥品として22.3mgの化合物８を供した。HPLC: R.t.＝ 28.7分（65分間にわたる５−70％のCH₃CN、0.1％のTFA、C18 5μ、分析用カラム）。LD-MS: 計算値 1278.6 実験値 1279.6（M+1）。AAA: Arg 2.93(3)，Hyp 0. 96(1)，Pro 1.01(1)，Gly 1.04(1)，Thi^* ，Ser 0.90(1)，Tic ^* ，NCpg^* 。適正な配列分析が得られた。実施例IX 化合物９の合成 D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Phe-NChg-Arg Boc-Ng-p-トシル-L-アルギニンPAM樹脂（1.52ｇ，Bachem，0.5meq）を手動式固相ペプチド合成用にデザインされた槽の中に入れた。ペプチドを上記の手順を利用して順にカップリングし、そして樹脂から解裂させた。このカップリングにおいて４当量の事前に活性化しておいたアミノ酸を使用した。HF脱保護は586.7m gの粗材料を供した。100mgの粗材料のHPLC精製(10−65％のCH₃CN、0.1％のTFA、 55分間にわたる勾配、20ml／min)は72.8mgの化合物９を供した。HPLC: R.t.＝30 .5分（65分にわたる５−70％のCH₃CN、0.1％のTFA、C18 5μ、分析用カラム）。 LD-MS:計算値 1281.5 実験値 1281.5(M+H)。AAA: Arg 3.11(3)，Hyp 0.91(1)，P ro 0.95(1)，Gly 1.00(1)，Thi^* ，Ser 1.06(1)，Phe 0.97(1)，NChg^* 。実施例Ｘ化合物10。 D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Cpg-NChg-ArgN-α-Boc-シクロペンチルグリシンＤ−シクロペンチルグリシンをDunnの方法により合成した(Hill，J.T．and Dunn，F.W.，J．Org．Chem．30 1321(1965))。Ｄ−シクロペンチルグリシン（3.93ｇ，27.5mmol）及び水酸化ナトリウム（27.5 ml，１Ｍ溶液）を150mlのジオキサンと75mlの水との混合物に加えた。この溶液を０℃に冷やし、そしてジ−tert−ブチルジカルボネート（6.60ｇ，30.2mmol）を加えた。この反応混合物を室温に温め、そして約15時間撹拌した。揮発物を真空で除去し、そしてその残渣を水に含ませ、５％のNaOHを用いてpH９にまで塩基性にした。その水性層を酢酸エチルで３回抽出し、そして合わせた抽出物をブラインで洗い、無水硫酸ナトリウムで乾かし、そして真空で濃縮してガラス状の5.44ｇ（81.5％）の表題の化合物を得た。¹H NMR(CDCl₃)δ 1.15-1.9(m，8H)1.45(s，9H); 2.25(m，1H); 3.99（dd，0.3 2H）4.25(dd，0.68H); 5.01(d，7.0Hz，0.68H); 6.27（d，7.0Hz，0.32H）。 NH及びα-Hはロータマー（rotamers）に由来する２つのシグナルを生成した。 Boc-Ng-p-トシル-L-アルギニンPAM樹脂（1.52ｇ，Bachem，0.5meq）を手動式固相ペプチド合成用にデサインされた槽に入れた。ペプチドは上記の手順を利用して順にカップリングし、そして樹脂から解裂させた。４当量の事前に活性化しておいたアミノ酸をカップリングに用いた。HF脱保護は349mgの粗材料を供した。100mgの粗材料のHPLC精製(10−65％のCH₃CN、0.1％のTFA、55分間にわたる勾配、20ml／min)は30.2mgの化合物10を供した。HPLC: R.t.＝29.2分（65分にわたる５−70％のCH₃CN、0.1％のTFA、C18 5μ、分析用カラム）。LD-MS: 計算値 1 258.9 実験値 1258.9（M+H）。AAA: Arg 3.13(3)，Hyp 0.92(1)，Pro 0.96(1)， Gly 0.98(1)，Thi^* ，Ser 1.02(1)，Cpg ^* ，NChg^* 。実施例ＸＩ化合物11の合成 D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-NPeg-Oic-ArgＮ−フェネチルグリシンベンジルエステル塩酸塩ベンジル−２−ブロモアセテート(3.3ml，20.0mmol)のCH₂Cl₂（30ml）溶液をフェネチルアミン(12.6ml，100m mol)のCH₂Cl₂（30ml）溶液に０℃で撹拌しながら滴下した。室温にまで温めた後、この反応体を24時間撹拌し、次いで濾過し、その溶媒を真空でエバポレートした。得られる残渣を酢酸エチルに溶かし、そしてブラインで洗い、そして硫酸ナトリウムで乾かした。酢酸エチルを真空でエバポレートした。その粗材料をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーを用い、ヘキサン及び酢酸エチル−ヘキサン（９：１，ｖ／ｖ）で順に溶出させて精製した。生成物を含む画分は不純物として微量のベンジル−２−ブロモアセテートを有していた。この部分をCHCl₃ に再溶解し、そして１ＮのHClで洗った。そのクロロホルム層を乾かし、そして HCl塩を石油エーテルで沈殿した。2.3ｇの無色の固体が得られた。¹H NMR(CDCl₃ )δ 1.95(br s，1H)，2.73-2.9(m，3H); 3.44(s，2H)，5.12(s，2H)，7.13-7.36 (m，10H)．¹³C NMR（CDCl₃）δ 36.17，50.46，50.63，66.32，26.06，128.18， 128.3，128.4，128.50，135.4，139.4，171.88。N-α-Boc-N-フェネチルグリシンベンジルエステルＮ−フェネチルグリシンベンジルエステル（2.30ｇ，8.54mmol）及びトリエチルアミン(1.31ml，9.4mmol) のDMF（3.0ml）撹拌溶液にジ−tert−ブチルジカルボネート（1.87ｇ，8.54mmol ）のDMF溶液(3.0ml)を加えた。得られる溶液を室温でＮ₂下で22時間撹拌した。D MFを真空でエバポレートし、そして得られる油を酢酸エチル（50ml）に溶かした。その酢酸エチル層を10％のNa₂CO₃溶液（２×25ml）、ブライン（２×30ml）で洗い、乾かし(MgSO₄)、そしてその溶媒をエバポレートし、油として表題の化合物3.13ｇ（98.0％）を得た。¹H NMR(CDCl₃)δ 1.37，1.44(ロータマー，9H); 2. 75-2.9(m，2H); 3.33-3.55(m，2H); 3.8，3.92(ロータマー，2H); 5.15(s，2H) ，7.1-7.4(m，10H); ¹³C NMR(CDCl₃)δ 28.09，28.20，34.64，35.02，49.16，5 0.07，50.39，66.62，66.68，80.12，126.18，126.26，128.14，128.21，128.31 ，128.38，128.43，128.73，135.41，138.95，138.99，154.85，155.49，169.84 ，169.89。N-α-Boc-N-フェネチルグリシン N-α-Boc-N-フェネチルグリシンベンジルエステル（3.13ｇ，8.47mmol）をエタノール（50ml）に溶かし、そして窒素で慎重に脱気してからその溶液に10％のPd／C(0.3ｇ)を懸濁した。その反応混合物を水素雰囲気（約40P.S.I.）下でParrハイドロジェネーターで18時間撹拌した。次にその混合物をセリートパッドで濾過し、そしてエタノールをエバポレートした。得られる残渣を酢酸エチルに溶かし、そして低温の１ＮのHCl（100 ml）、ブライン(２×100ml)で洗い、乾かし(MgSO₄)、そして真空でエバポレートして無色の固体として2.16ｇ（88.2％）の表題の化合物を得た。¹H NMR(CDCl₃) δ 1.45(s，9H); 2.8-2.92(m，2H)，3.44-3.6(m，2H)，3.8，3.92(ロータマー， 2H)，7.12-7.36(m，5H)，11.32(br s，1H); ¹³C NMR（CDCl₃）δ 34.65，35.01 ，49.15，49.69，50.37，50.55，80.64，80.77，126.32，126.42，128.5，128.5 6，128.80，138.79，138.93，155.97，175.32，176.02。 Nα-Boc-Ng-p-トシル-L-アルギニンで事前誘導化しておいたBoc-Ng-p-トシル- L-アルギニンPAM樹脂（1.52ｇ，Bachem，0.5meq）を手動式固相ペプチド合成用にデザインされた槽に加えた。ペプチドを上記の手順を利用して順にカップリングし、そして樹脂から解裂させた。このカップリングにおいて４当量の事前活性化アミノ酸を利用した。HF脱保護は487mgの粗材料を供した。100mgの粗材料のHP LC精製(10−70％のCH₃CN、0.1％のTFA、60分間にわたる勾配、20ml／min)は無色の凍結乾燥品として23.0mgの化合物11を供した。HPLC: R.t.＝32.8分（65分にわたる５−70％のCH₃CN、0.1％のTFA、C18 5μ、分析用カラム）。LD-MS: 計算値 1305，実験値 1305。AAA: Arg3.16(3)，Hyp 0.91(1)，Pro 0.94(1)，Gly 1.00( 1)，Thi^* ，Ser 1.00(1)，Oic ^* ，NPeg。実施例ＸII 化合物12の合成 D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NMch-ArgＮ−シクロヘキサンメチルグリシンベンジルエステル 2.38ｇ（10mmol）のベンジル２−ブロモアセテート及び5.66ｇのシクロヘキサンメチルアミンから出発して、この化合物をＮ−フェネチルグリシンベンジルエステルと同じ手順を利用して合成した。この生成物は塩酸塩の沈殿により精製した。次いで塩酸塩をCHCl₃ に溶かし、そしてCHCl₃層をNa₂CO₃（10％）で洗って油として1.3ｇ（52.0％）の表題の化合物を得た。HCl塩の¹³C NMR。δ 25.21，25.27，25.72，25.83，30.43 ，30.68，30.84，34.64，37.58，46.25，47.46，54.17，68.11，128.63，128.70 ，128.81，134.243，165.63。N-α-Boc-N-シクロヘキサンメチルグリシンベンジルエステルこの手順はBoc-N -フェネチルグリシンベンジルエステルについてと同じであり、1.39ｇのＮ−シクロヘキサンメチルグリシンベンジルエステルから出発した。油として、1.8ｇ（94.0％）を得た。N-α-Boc-N-シクロヘキサンメチルグリシンこの手順はBoc-N-フェネチルグリシンと同じとし、1.80ｇのN-α-Boc-N-シクロヘキサンメチルグリシンベンジルエステルから出発した。無色固体として1.28ｇ（95.0％）が得られた。¹H NMR(C DCl₃)δ 0.84-1.8(m，20H); 3.04-3.2(m，2H); 3.9-4.04(ロータマー，2H); 11. 44(br s，1H); ¹³C NMR(CDCl³)δ 25.67，25.78，26.25，26.36，28.13，28.19 ，28.24，30.59，30.63，30.72，36.85，37.08，37.69，45.53，49.08，49.69， 54.47，54.62，80.17，80.37，155.46，156.37，174.68，175.06。 Boc-Ng-p-トシル-L-アルギニンPAM樹脂（1.52ｇ，Bachem，0.5meq）を手動式固相ペプチド合成用にデザインされた槽に入れた。ペプチドは上記の手順を利用して順にカップリングし、そして樹脂から解裂させた。このカップリングに４当量の事前活性化アミノ酸を使用した。HF脱保護は480mgの粗材料を供した。HPLC精製(50−70％のCH₃CN、0 .1％のTFA、60分間にわたる勾配、20ml／min)は白色凍結乾燥品として全部で191 mgの化合物12を供した。HPLC: R.t.＝33.7分（65分にわたる５−70％のCH₃CN、0 .1％のTFA、C18 5μ、分析用カラム）。LD-MS: 計算値 1307，実験値 1308（M+ H）。AAA: Arg 3.16(3)，Hyp 0.91(1)，Pro 0.94(1)，Gly 1.00(1)，Thi^* ，Ser 0.99(1)，Tic ^* ，NMch^* 。実施例ＸIII 化合物13 δ-Gpa-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NChg-Arg Boc-Ng-p-トシル-L-アルギニンMerrfield樹脂（4.20ｇ，Bachem RBoc 20，0.4 8meq／ｇ）を手動式固相ペプチド合成用にデザインされた槽の中に入れた。ペプチドは順にカップリングしてテトラペプチドを形成し（Ser-(OBn)カップリング）、次いでそのプロセスをGly，Hyp，Pro及びArgの付加のためにCS-BIO自動式ペプチドシンセサイザーに移行せしめた。このペプチジル樹脂の一部（0.53ｇ）を反応槽から取り出した。その樹脂サンプルを上記の通りにしてTFAで脱保護し、そしてN-(Boc)-d-アミノバレリン酸をHOBt／ジイミド活性化のために上記の手順を利用してカップリングした。この残基を上記の通りにしてトリフルオロ酢酸により脱保護し、そしてジクロロメタン、ジクロロメタン中の10％のジイソプロピルエチルアミン、ジクロロメタン、そして最後にDMFで順に洗浄して中和した。この樹脂を0.566ｇの1H-ピラゾール-1-カルボキサミジン（Bernatowic2，M.S．ら，J．Org．Chem．57 2497(1992)）と0.76mlのジイソプロピルエチルアミンの2 0mlのDMF中の混合物と共に47℃で2.25時間加熱した。この樹脂をジクロロメタン及びジメチルホルムアミドで洗い、そして1H-ピラゾール-1-カルボキサミジンとの反応を更に２回繰り返した。この樹脂を順に、ジクロロメタン、メタノール、次いでジクロロメタンで洗い、そして真空乾燥した。HF脱保護は無色の凍結乾燥品としての80mgの化合物13を供した。HPLC: R.t.＝22.6分（50分にわたる５−55 ％のCH₃CN、0.1％のTFA、C18 5μ、分析用カラム）。LD-MS: 計算値 1278（M+H ），実験値1278.7(M+H)。実施例ＸIV 化合物14 δ-Gpa-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NChg-Arg Boc-Ng-p-トシル-L-アルギニンMerrfield樹脂（4.20ｇ，Bachem RBoc 20，0.4 8meq／ｇ）を手動式固相ペプチド合成用にデザインされた槽の中に入れた。ペプチドは順にカップリングしてテトラペプチドを形成し（Ser-(OBn)カップリング）、次いでそのプロセスをGly，Hyp及びProの付加のためにCS-BIO自動式ペプチドシンセサイザーに移行せしめた。このペプチジル樹脂の一部（0.26ｇ）を反応槽から取り出した。その樹脂サンプルを上記の通りにしてTFAで脱保護し、そしてN-(Boc)-d-アミノバレリン酸をHOBt／ジイミド活性化のために上記の手順を利用してカップリングした。この残基を上記の通りにしてトリフルオロ酢酸により脱保護し、そしてジクロロメタン、ジクロロメタン中の10％のジイソプロピルエチルアミン、ジクロロメタン、そして最後にDMFで順に洗浄して中和した。この樹脂を0.405ｇの1H-ピラゾール-1-カルボキサミジン(Bernatowic2，M.S．ら，J ．Org．Chem．14 48-58(1959))と0.545mlのジイソプロピルエチルアミンとの14. 5mlのDMF中の混合物と共に47℃で2.25時間加熱した。この樹脂をジクロロメタン及びジメチルホルムアミドで洗い、そして1H-ピラゾール-1-カルボキサミジンとの反応を更に２回繰り返した。この樹脂を順に、ジクロロメタン、メタノール、次いでジクロロメタンで洗い、そして真空乾燥した。HF脱保護は無色の凍結乾燥品としての30mgの化合物14を供した。HPLC: R.t.＝22.3分（50分にわたる５−55％のCH₃CN、0.1％のTFA、C18 5μ、分析用カラム）。LD-MS: 計算値 1123（M+H），実験値1123(M+H)。実施例ＸＶ化合物15 D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NPhg-ArgFmoc-D-Tic酸クロリド１当量のFmoc-D-TicをCH₂Cl₂（0.3Ｍ）に溶かし、そしてスターバー及び還流コンデンサーの付いたフラスコに入れた。塩化チオニル（ 10当量）を撹拌しながら加え、そしてその混合物を窒素のもとで２時間還流させた。その反応混合物をロータリーエバポレーションにより濃縮し、そしてその残渣をCH₂Cl₂で希釈し、そして再び濃縮して過剰の塩化チオニルを除去した。これを２回繰り返し、そして得られる酸クロリドを微粉末が得られるまでヘキサンで粉砕（又はそうでなければCH₂Cl₂／ヘキサンで再結晶化）せしめた。更に精製することなく用いた。Fmoc-D-Tic-N-フェニルグリシンＮ−フェニルグリシン（1.2当量）をフラスコの中でドライTHF（0.5Ｍ）に懸濁し、そして３当量のジイソプロピル−エチルアミンを加えた。このフラスコを氷浴に入れ、そして窒素のもとで15分撹拌した。１当量のFmoc-D-Tic酸クロリドをドライTHF（0.15Ｍ）に溶かし、そしてこの冷却フラスコにゆっくり加えた。直ちに沈殿が起こり、そしてその反応体を室温にまで温め、そして２時間撹拌した。反応が完了したら、溶媒をロータリーエバポレーションにより除去し、その残渣を酢酸エチルに含ませ、そして５％のKHSO₄ ，H₂O、次いでブラインで洗った。Na₂SO₄による乾燥、ロータリーエバポレーション、及び高真空のもとでの設置は白色フォームをもたらした。ジペプチドを純度のためにHPLCにより分析し（C₁₈RPカラム、4.6×250mm，１ml／minの流速、30−100％のCH₃CN／0.1％のTFA 含有H₂Oの勾配、254nmでの検出）、そして更に浄化することなく利用した。Arg-OHMP樹脂へのFmoc-D-Tic-NPhg-OHの付加：ペプチジル樹脂（0.25mmol）へのFmoc-D-Tic-NPhg-OHジペプチド（約0.785mmol）のカップリングは、立体障害型Ｎ−置換化アミノ酸へのＮ−保護型アミノ酸のカップリングに関して上記した条件下でBop-Clを用いて実施した。ペプチド合成：Fmoc-D-Tic-NPhg-Arg-OHMP樹脂をDMFでの20％のピペリジンとの反応により脱保護した（２×30分）。次いでこの樹脂を順に、DMFで３回、ジクロロメタンで２回、メタノールで２回、そしてジクロロメタンで２回洗った。Fm oc-セリン-(O-t-Bu)-OHを上記のBop-Cl手順を利用してカップリングした。この樹脂をABIモデル431自動式ペプチドシンセサイザーに移し、そして更なる残基を標準のFmoc／HBTVカップリング手順を利用して付加した(ABI 431 Fmoc Procedur e，Applied Biosystems Model 431A Peptide Synthesizer User's Manual，Vers ion 2.0，1992年２月)。次にこの樹脂をジクロロメタンで数回洗い、そして無水窒素流中で乾かした。次いでこの樹脂を0.5mlのチオアニソール及び0.25mlのエタンジチオールを含む10mlのトリフルオロ酢酸で処理した。この反応体を室温で３時間バブリングした。この混合物を濾過し、そしてその樹脂を１mlのトリフルオロ酢酸で洗った。合わせた濾液を真空で濃縮し、そしてその残渣を無水ジエチルエーテルで処理し、そして氷浴温度に15分放置した。次いでその沈殿物を濾過により集め、そして低温無水ジエチルエーテルでよく洗い、そして真空で乾かし、205mgの無色の粉末を得た。少量のこの材料のHPLC精製(0.35％のCH₃CN 、0.1％のTFA、50分間にわたる勾配，10ml／min)は無色の凍結乾燥として10mgの化合物15を供した。HPLC: R.t.＝20.9分（50分にわたる５−55％のCH₃CN、0.1％のTFA、C18 5μ、分析用カラム）。LD-MS: 計算値 1287.5（M+H），実験値 128 7.5（M+H）。適正なアミノ酸分析データーが得られた。実施例ＸVI 化合物16 D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Phe-NPhg-Arg ジペプチドFmoc-D-Phe-NPhg-OHを、化合物15におけるFmoc-D-Tic-NPhg-OHを調製するのに利用した方法に従って調製した。ジペプチドFmoc-D-Phe-NPhg-OH（約 0.5mmol）を、化合物15に記載の手順を利用してArg-HMP樹脂（0.25mmol）にカップリングさせた。化合物15において記載の通りにしてペプチドを合成し、そして樹脂から解裂させて260mgの粗ペプチドを得た。75mgのこの材料のHPLC精製(５− 50％のCH₃CN、0.1％のTFA、60分間にわたる勾配、10ml／min)は無色凍結品として18.9mgの化合物16を供した。HPLC: R.t.＝21.9分（50分にわたる５−55％のCH₃ CN、0.1％のTFA、C18 5μ、分析用カラム）。LD-MS: 計算値 1275(M+H)，1298 (M+Na); 実験値 1274(M+H)，1298(M+Na)。実施例ＸVII 化合物17 D-Arg-Arg-Hyp-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NChg-Arg Boc-Ng-p-トシル-L-アルギニンMerrifield樹脂（4.2ｇ，Bachem RBOC 20，0.4 8meq／ｇ）を手動式固相ペプチド合成用にデザインされた槽の中に入れた。ペプチドを上記の手順を利用して順にカップリングし、そして樹脂から解裂させた。このカップリングにおいて４当量の事前に活性化されたアミノ酸を用いた。HF脱保護は1. 05ｇの粗材料を供した。この材料のごく一部のHPLC精製(０−65％のCH₃CN、0.1 ％のTFA、50分間にわたる勾配、10ml／min)は無色凍結乾燥として化合物17を供した。適正なアミノ酸及びペプチド配列データーが得られた。実施例ＸVIII−生物学的データー本発明の最も好適な化合物はブラジキニンの拮抗薬であり、そしてそれはブラジキニンの作用が関与する疾病状態又は生理学的症状における治療処置にとって幅広い用途を有する。以下のプロトコールは、本明細書において利用する、本発明に係る様々な化合物のインビトロ及びインビボでのブラジキニン拮抗活性を決定するためのアッセイ、並びに特異性及びインビボ安定性の特性化のためのアッセイを説明している。インビトロＢ₂拮抗活性測定標準のラット子宮pA₂アッセイを以下の通りに実施した：雌のSprague-Dawleyラット（200〜250ｇ）をスチルベステロール(100μｇ／kg )で予備処置し、そして18時間後に頭を強打して殺し、そして解剖した。子宮角を取り出し、De Jalon溶液を含む４mlの組織バスの中で31℃で１ｇの休息張力下に置き、そして通気した。濃度−効果曲線を拮抗薬の非存在下及び存在下でブラジキニンについて作製した（15分内プレインキュベーションして）。拮抗薬の効能はArunlakshana and Schildの方法(Arunlakshana，O.，Schild，H.O.，Br．J ．Pharmacology 14 48-58(1959))に従って計算した。最大の拮抗薬濃度（通常10^-5 モル）への暴露の後、各組織を10分間隔で40分間洗い、その後濃度−効果曲線を再びブラジキニンについて作製した。この時点でのブラジキニンについてpD₂ （−log〔ブラジキニンに対する最大のオリジナル応答の50％を供するモル濃度〕）を計算し、そしてブラジキニンについての当初のコントロール濃度−効果曲線のpD₂と比較した。同時コントロールに比してのｐ２値の差は拮抗応答の「％回収率」を反映した。インビトロＢ₁拮抗活性の測定雌のニュー・ジーランド・ホワイトウサギをペントバルビタール（80mg／kgの i.v.）の過剰投与で殺し、そして胸大動脈を取り出した。らせん片をKrebs溶液( 118.3mMのNaCl，4.7mMのKCl，2.5mMのCaCl₂，1.2mMのMgSO₄，1.2mMのKH₂PO₄，2. 5mMのNaHCO₃，25mMのグルコース及び2.8mMのインドメタシン)を含む５mlの組織バスの中に２ｇの休息張力下で設置し、そして95％Ｏ₂／５％のCO₂を通気した。デス-Arg⁹-ブラジキニンについての２通りの濃度−効果曲線を１及び３時間において作製した。５時間目に、デス-Arg⁹-ブラジキニンを10^-7Ｍの最終濃度となるようにバスに加えた。これは45分に至るまで安定、持続型、及び延期型の収縮をもたらした。IC₅₀又は50％の収縮復帰を供する濃度を、得られるトレーシングから計算した。得られる結果を表１に示す。安定性試験血漿サンプルを健康な男性及び女性のボランティア又はギニアピッグからの全血流の採取により調製した。サンプルをナトリウムヘパリンを含む培養チューブに集め、そして４℃で2000rpmにて10分間遠心した。上清画分をアスピレーションにより取り出し、そしてバイアルの中で−20℃で保存した。ラット又はブタの肺及び腎の皮質膜を、肺についてはSkidgel（Booth，A.G．ら、Biochemical Jou rnal 142，575-581(1974)）により又は腎臓についてはBooth(Erdos，E.G.ら,Bio chemical Pharmacology 33 3471-3478(1984))により述べられた示差遠心を利用して調製した。膜調製品を−20℃で保存した。ブラジキニン拮抗薬をPBS(0.0132 Ｍのリン酸塩、0.1454ＭのNaCl，pH7.2)の中で１mMの濃度に希釈した。このワーキング溶液10μｌを一連のエッペンドルフチューブに導入し、ヒトもしくはギニアピッグの血漿（90μｌ）又はコントロールブランクとしてのPBSを入れ、そして様々な時間にわたりインキュベートした。各時点で、反応をアセトニトリル又はエタノール中の100μｌの１ＮのHClの添加により止めた。サンプルを約15分間放置し、そして14,000rpmで10分間遠心した。上清画分を取り出し、0.22μＭのフィルター(Millipore)で濾過し、そしてHPLC（Ｃ18；水中で12−80％のアセトニトリル：共に0.1％のトリフルオロ酢酸を含む；214nmでモニター）により分析した。ブタ腎臓肺調製品をPBSで１：10に希釈し；ラットの腎臓調製品をPBSで１：10 0に希釈し；ブタ肺調製品をPBSで１：１に希釈した。ブラジキニン拮抗薬溶液（ 10μｌ）を一連のエッペンドルフチューブに加え、次いで対応の希釈膜調製品（ 90μｌ）を加えた。様々な時点で反応を100μｌのエタノールの添加により止め、遠心し、そして上記の通りにしてHPLCにより分析した。HPLCピークの消失についての半減期をコンピュータプログラムENZFIT（Elsevier）を利用して決定した。安定性データーを表２に示す。両化合物共、化合物１〜12について述べた固相ペプチド合成の慣用の方法により合成した。ギニアピッグの回腸に対する拮抗薬の結合回腸を頸部の脱臼した雄の白子のHartley系ギニアピッグから採取した。回腸に氷冷食塩水をフラッシュし、めくり返し、そしてコットンガーゼでぬぐった。次にこの組織を−70℃で保存した。使用の際、35ｇの回腸を氷の上で融解し、組織チョッパーで細く粉砕し、そしてタンパク質インヒビターカクテル（１mMの１，10−フェナントロリン、５μｇ／mlのダイズマメ・トリプシン・インヒビター、100μｇ／mlのバシトラシン、１mMのベンズアミジン及び100μＭのフェニルメチルスルホニルフリオリド）を含むTESホモジネーションバッファー（25mM，pH6 .8）に加えた。この混合物をBrinkman PT-20 Polytron(７に設定、４×20秒の間隔)の中でホモジナイズし、そして示差遠心（1000×ｇ、４℃、10分）にかけた。そのペレットを捨て、そしてその溶液を新鮮なホモジネーションバッファーを用いてもとの容積にもどし、次いで43,000ｇ、４℃で15分遠心した。そのペレットを慎重にホモジネーションバッファーに再懸濁し、そして前と同じように遠心した。再びその上清液を捨て、そしてそのペレットをTESバッファー（25mM，pH6 .8）に懸濁し、そして遠心した（43,000ｇ、15分）。最終ペレットを５容量(165 ml)のTESバッファーに再懸濁し、ml当り約2.0mgのタンパク質とし、そして使用するまで−70℃に保存した。インキュベーションを、20μｌのトリチウムラベル化ブラジキニン溶液(0.3nM)、20μｌの非特異的コントロール、薬剤又はビヒクル、150μｌのアッセイバッファー（25mMのTES、pH6.8、１mMの１，10−フェナントロリン、１mMのDTT、２μＭのカプトロプリル、140μｇ／mlのバシトラシン、100μＭのチオルファン及び0.1％の牛血清アルブミン）並びに初期結合を開始せしめるために最後に加える125μｌの希釈膜(0.2mg／mlの最終濃度のために１：４に希釈)より成る0.315mlの全容量で実施した。このアッセイはポリプロピレンチューブの中で実施し、そしてサンプルを24℃で45分インキュベートさせた。次にこの混合物を0.1％の水性ポリエチレンイミンで予備処理した（＞２時間）Whatman GF／Bガラスファイバーフィルターですばやく濾過した。次にこのフィルター及びチューブを、10mMのトリス（pH 7.5）、100mMのNaCl及び0.02％の牛血清アルブミンを含む1.0mlづつの氷冷洗浄バッファーで８回洗った。放射能を液体シンチレーションカウンティングにより決定した。 CP-0597とも呼んでいる化合物５及び標準品のデーターを表２に示す。 CP-0597（実施例５） CP-127は出願番号07／859,582号のExample １に開示の、次式の二量体である：この化合物はそれ自体非常に活性なブラジキニン拮抗薬である。インビボ生物学的データーウサギの血圧雄のニュー・ジーランド・ホワイトウサギをペントバルビタールで麻酔し、そして大腿動脈に血圧の記録のためにカヌーレを挿入した。カヌーレは化合物のボーラス注射又は連続点滴のために大腿静脈に設置した。大腿動脈カテーテルをGo uld圧力変換器に接続し、そして血圧を記録し、そしてGrassポリグラフレコーダーで表示せしめた。平衡時間の後、特定の実験手順を開始した。 BK₂ED₅₀−安定な基底血圧の達成の後、動物に約15〜25％の血圧低下をもたらす(0.2及び0.4nmolのi.v.)ブラジキニンのボーラス注射を投与した。ブラジキニンを、ED₅₀（即ち、ブラジキニンに対する最大応答を50％下げるCP-0597の用量）の決定のために、様々な用量のCP-0597(化合物５)(0.01，0.03及び0.10μｇ／ kg／minのi.v.)の有無で試験した。この系において、ED₅₀は0.051±0.006μｇ／ kg／min(29.2pmol／kg／min)であることが見い出された。 BK₁ED₅₀−実験の12〜18時間前に、ウサギにＥ．コリ（E.coli）由来のリポ多糖(LPS)を静脈注射した（10μｇ／動物）。エンドトキシンの事前投与は血管系におけるBK₁レセプターのアップレギュレーションをもたらし、そしてBK₁拮抗活性の評価を可能にする。事前に存在しているBK₂及び誘発型BK₁レセプターの双方の刺激は低血圧をもたらす。血圧の平衡の後、動物にブラジキニンのボーラス注射(0.2及び0.4nmol)並びにデス−Arg⁹ブラジキニン(4.0及び8.0nmol)のボーラス注射を施した。双方の作動薬を上昇していくCP-0597の用量(１，３及び10μｇ／ kg／min)の有無で試験した。この系におけるBK₁活性についてのED₅₀は2.9±0.92 μｇ／kg／min(1.7nmol／kg／min)であることが見い出された。HOE140は10μｇ／kg／minに至るまで用量において不活性であった。静脈内CP-0597の特異性血圧平衡の後、アセチルコリン（20nmol）、ノルエピネフリン（20nmol）、サブスタンスｐ（20pmol）、アンジオテンシン(100pmol)、アンジオテンシンII（２pmol）及びブラジキニン(200pmol)に対する応答を生起させ、各血管作用剤をC P-0597の投与(0.1μｇ／kg／min のi.v.)の後に再試験し、そして事前拮抗応答と比較した。この試験において、ブラジキニンに対する応答は拮抗型であり、一方その他の血管作用剤に対するそれはコントロールと比べて影響を受けなかった。静脈点滴したCP-0597の作用期間 CP-0597(0.1μｇ／kg／min)を上記の特異性実験のために静脈点滴した。特異性実験の終了後、CP-0597の点滴を止め、そしてブラジキニン(0.2及び0.4nmol) に対する応答を、最初の30分間は５分の間隔で、そして１時間に至るまでは15分の間隔で試験した。点滴を止めてから１時間後も、ブラジキニンに対する応答の 100％阻害があった。ラットの血液雄のSprague-Dawleyラットをペントバルビタールで麻酔し、そして大腿動脈を血圧の記録のためにカヌーレ挿入せしめた。各動物における両大腿静脈に、試験化合物の投与のためにカヌーレ挿入を施した。大腿動脈カテーテルをGould圧力変換器に接続し、そして血圧を記録し、そしてGrassポリグラフレコーダーに表示せしめた。平衡期間の後、特定の実験手順を開始した。皮下CP-0597の特異性血圧の平衡の後、アセチルコリン（20nmol）、ノルエピネフリン（１nmol）、サブスタンスｐ（２pmol）、アンジオテンシン（20pmol）、アンジオテンシンII （２pmol）及びブラジキニン（20pmol）に対する応答を生起させた。次に動物を CP-0597(1.0mg／kgのs.c.)で処置した。s.c.注射の30分後、各血管作用剤を再試験し、そして事前拮抗応答と比較した。この試験において、ブラジキニンに対する応答は拮抗型であり、一方、その他の血管作用剤に対するそれはコントロールに比して影響を受けていなかった。CP-059のi.v.ボーラス注射の作用期間血圧の平衡後、ブラジキニン（10及び20pmolのi.a.）に対する応答をコントロール応答として生起させた。次いでCP-0597をi.v.ボーラスとして投与し（３，1 0又は30mg／kg）、そしてブラジキニンに対する応答を５分間隔で、応答がコントロールレベルにもどるまで再試験した。３μｇ／kgでは、その応答は約50％阻害され、そして30分でコントロールにもどった。10及び30μｇ／kgでは、応答は 100％阻害され、60分でコントロールレベルの50％にもどり、そして90分で応答は完全に復帰した。皮下CP-0597の作用期間平均動脈血圧の平衡の後、動物にブラジキニン（10及び20pmolのi.a.）を付与してコントロール応答を達しめた。次いで動物にCP-0597(１及び３mg／kgのs.c. )の皮下注射を与えた。CP-0597の注射の30分後及びそれから30分の間隔をおいてから、応答がコントロールレベルにもどるまで動物をブラジキニンで再試験した。１mg／kgのs.c.では、応答は注射後３時間目においてもまだ100％阻害されていた。３mg／kgのs.c.では、応答は注射の５時間目においてもまだ100％阻害されていた。インビボ生物学データーを表３にまとめた。表１は、Ｎ−置換化グリシン残基をブラジキニン配列の８位に含む非常に効能なブラジキニン拮抗薬が開発できることを示す。例えば、化合物５，８，13，15 及び17は、薬剤として有能な効果についての強い性質を示唆する効能を有する非常に効能な拮抗薬である。化合物４，７，11及び12は機能組織アッセイとしてラットの子宮を利用し、作動薬であることが見い出された。当業者は、作動薬が心臓予防薬として有能でもあることを理解できるであろう。更に、ブラジキニン拮抗薬の開発業界の当業者は、１タイプの組織に対する作動薬が別のタイプの組織に対する拮抗薬となりうることを理解できるであろう。例えば、Stewartはブラジキニン配列の７位においてD-Pheを含むブラジキニン拮抗薬を開示する。NPC-360の如くの６位及び７位にD-Pheを含むStewartの拮抗薬（ギニアピッグの回腸データーに基づく）はラットの子宮に対する作動薬であることが見い出されている（米国特許第 4,693,993 号及びJ.StewartのBradykinin Antagonists；Basic and Clinical Research，p. 60，991参照のこと）。事実、類似の現象がここで開示する選定化合物に付随する。例えば、化合物12はラットの子宮組織に対する作動薬であることが示されたが、しかしギニアピッグの回腸に対しては非常に強い結合定数をもつ拮抗活性を示した（Ki＝0.2ピコモルのギニアピッグ回腸）。高度の組織特異性を有する化合物は、一の組織に対しては拮抗活性が所望され得、しかしながら他の組織に対しては作動活性が所望され得る場合、二重作用薬剤として機能し得る。かかる考察は心臓予防剤の開発に特に適応する。本発明の最も好適な化合物は７位に芳香族Ｄ−アミノ酸、そして８位にＮ−置換化グリシンを含み、ここでその置換基は中ぐらいのサイズのシクロアルキル又はフェニルである。これらの類似体は数多くの組織のタイプに対するBK２拮抗活性をもたらす。芳香環とシクロアルキル環との間へのメチレン単位の導入は数多くの組織のタイプに対する作動活性についての性質を高める。同様に、７位でのＮ−ベンジルグリシン又は環置換化Ｎ−ベンジルグリシンは中程度の効能の拮抗薬を、８位にOicの如くのコンホメーション的に拘束された残基があることを条件として、供する。もし追加のメチレンスペーサーをグリシンＮ−置換に加えると、注目の多数の組織に対する作動性を供する幾何学的な拡張が予測される。同様に、８位の拘束残基が非拘束残基、例えばLeu又はN-Chgに置き換えられると、注目の数多くの組織に対する弱い作動活性が予測される。Ｎ−置換化グリシン残基の選定の置換（特に８位での）固有の価値は、置換基の賢明な選定がブラジキニンレセプターに対する化合物の結合に対してすばらしい効果を奏することにあり、この場合有能な拮抗薬又は非常に強い結合性の作動薬が供される。Ｎ−置換化グリシン残基の導入は薬剤に関する非常に良好な性質を有する非常に効能な分子の開発を可能にする。Ｎ−置換化グリシンの導入により授かる最も重要な性質の一つは、酵素分解に対する安定性である。表２は、８位にＮ−置換化グリシンを有する好適な化合物、例えば化合物５が、選定の組織に対する非常に効能なレセプター結合性を示すことを示した。これらの類似体は共有の米国特許出願第07／859,582 号のExample １に開示のブラジキニン拮抗薬CP-127の如くのブラジキニン又は薬剤よりもはるかに効能である。より重要には、表２は重要な酵素系による分解に対する化合物５のめざましい安定性を示した。ペプチド薬剤はペプチダーゼにより急速分解される。特に、ブラジキニンに近縁の分子はアミノペプチダーゼ、カルボキシペプチダーゼ（CP）、並びにエンドペプチダーゼ、例えば中性エンドペプチダーゼ(NEP)及びアンジオテンシン変換酵素(ACE)により急速分解される。ヒト血漿はカルボキシペプチダーゼＮ及びアミノペプチダーゼＭの作用に由来してペプチダーゼ活性に富んでいる。本開示内容に記載の調製品は上記の如くのプロテアーゼ酵素に由来する強力な活性を示す：表２にまとめた安定性アッセイはインビトロ試験を示す。生存動物における血漿又は腎臓もしくは肺組織中の個々の化合物の実際の安定性は変わりうる。しかしながら、インビトロアッセイは、インビボ実験のために多くの動物を犠牲にしてしまうことなく、多くの化合物の比較についての再現性のある方法を供する。即ち、血漿及び組織調製品のこのバッテリーは、ペプチド薬が遭遇しがちなプロテアーゼ酵素活性に対するペプチドの安定性についての非常に広域なスクリーニングを可能にする。化合物５は非常に効能であり、これらの試験全てにおいて６時間以上の半減期を有していた。それに対し、ブラジキニンは有意に弱い安定性を示した。化合物５はCP-127より安定であることも認められた。その他の対照化合物、例えばScios-Novaにより開発された７位に置換化プロリンそして８位にOi cを含むNPC17761及びNPC17731は決定的なアッセイにおいて測定可能なほどに低い安定性を示した。表３に紹介するデーターはインビトロとインビボ試験との間の相関を確認せしめしている。化合物５は生存ウサギにおけるBK２レセプターでのブラジキニンの作用をブロッキングするうえで極めて有能である(ED50は0.051μｇ／kg／min)。更に、化合物５は生存ウサギにおいて実体的なBK１ブロッキング活性を示す(2.9 μｇ／kg／ min)。双方のアッセイは毒性ショックにおけるブラジキニンの低血圧性効果に非常に相関しており、そしてSIS／敗血症の処置における効能を予測するうえで注目される。例示の化合物は生存動物において有能であるのみならず、この化合物は長い作用期間も示す（ウサギはi.v.の60分目において100％阻害されていた）。事実、皮下投与（３mg／kg；ラット）後５時間まで作動的作用を完全に阻止する効能が実証された。ペプチド誘発型作動薬に由来するかかる安定性は非常にまれであり、そして薬剤としてＮ−置換グリシンを含む作動薬の良好な有用性についての性質を示す。最後に、低血圧性効果の阻止がブラジキニンレセプターの阻止に関係しているということを実証するラビット及びラットの双方の血圧モデルを利用する試験を実施した。その他の血管作用剤、例えばアセチルコリン、ノルエピネフリン、サブスタンスＰ、アンジオテンシン及びアンジオテンシンIIの活性は化合物５により影響されなかった。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９６年４月１５日【補正内容】請求の範囲１．ブラジキニン拮抗薬であるペプチドであって、ペプチド鎖内に１又は複数個のＮ−置換化グリシン残基を含むペプチド。２．前記拮抗薬が次式に従って規定される Z¹-Z⁰-A¹-B²-C³-D⁴-E⁵-F⁶-G⁷-H⁸-I⁹-J¹⁰ （式中：Ｚ¹は任意的に存在していないが、しかし存在しているなら、水素、アセチル、アダマンチルカルボキシル、アダマンチルアセチル、（Ｃ₁−Ｃ₈）−アルキル、−アルカノイル、アリールスルホニルもしくはアルコキシカルボニル基であるか、又はジヒドロキヌクリジニル−カルボン酸の誘導体であり；Ｚ⁰及びＡ¹は、同一でも異なっていてもよく、直結合、水素、ＤもしくはＬアルギニン、ＤもしくはＬリジン、ＤもしくはＬオルニチンを含んで成るアミノ酸残基誘導体、H₂N(NH＝C)NHCH₂CH₂CH₂(CH₂)_nCO−（式中、ｎ＝０〜３である）であるか、又はアルギニン置換基であり、ただしＺ¹が存在していないときはＺ⁰は直結合であることを条件とし；Ｂ²及びＣ³は、同一でも異なるものであってもよく、プロリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、セリン、スレオニン、Ｎ−メチル−セリン、Ｎ−メチル− スレオニン、Ｎ−メチルフェニルアラニン、グリシン及びNR′CHR″COであり、ここでＲ′及びＲ″は独立して水素、Ｃ１−Ｃ８直鎖もしくは枝分れアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及びアルキルアミノ基より選ばれ；Ｄ⁴はグリシン、アラニン又はチエニルアラニンであり； B²C³D⁴E⁵は−NH(CH₂)_nCO−（ここでｎは４〜14の完全数である）により置き換えられていてよく；Ｅ⁵はフェニルアラニン、メチルにより置換されたフェニルアラニン、グリシン、シクロペンチルグリシン、シクロヘキシルグリシン、シクロヘキシルアラニン、２−インダングリシン、チエニルアラニン、Ｎ−（２−インダン）グリシン又はＮ−置換化グリシンであり、ここでその置換基はＣ₁−Ｃ₈アルキル、シクロアルキル、CH₂Ar又はCH₂CH₂Arであり、ここでArはアリール、アルキルチエニル又は芳香族アミノ酸、又はメチルもしくはエチルによりα−窒素もしくはα−炭素において置換された芳香族アミノ酸である；Ｆ⁶は脂肪族又は芳香族アミノ酸であり；Ｇ⁷はD-Tic，D-Dic，D-Phe、インダングリシン、Ｄ−シクロペンチルグリシン、Ｄ−シクロヘキシルグリシン、Ｄ−プロリン、又はアルキル、アリール、チオアルキル、チオアリール、オキシアルキルにより３又は４位において置換されたプロリン、又は次式のＮ−置換化アミノ酸残基であり（式中、Ｒ₃はアリール、アルキルアリール、−CH₂R又は−CH₂CH₂Rであり、ここでＲはインダン、インドール、ナフチル又はフェニルである）；Ｈ⁸はOic又は次式のＮ−置換化アミノ酸残基であり：（式中、ｍ＝１〜６であり、Ｒ₁は（Ｃ１−Ｃ12）アルキル；（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル又は単環式アリール又は多環式アリールであり、任意的にＮ，Ｏ及びＳより選ばれる１又は複数個のヘテロ原子を含んで成り；そして任意的にアミノ、ベンゾ、ヒドロキシ、メルカプト、メルカプトアルキル、アルキル、オキシアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、ハロゲン、フェニル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アミノアルキル、アルキルアミノ又はカルボキシアミドにより置換されている）；Ｒ²はＨ、（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、又はアミノ酸側鎖であり；ただしＧ⁷又はＨ⁸の少なくとも一方は前記Ｎ−置換化アミノ酸残基であることを条件とし；Ｉ⁹は存在していないか、又は直結合、OH、アミノ酸、又はH₂N(NH＝C)NHCH₂CH₂ CH₂(CH₂)_n−NH−（ここでｎ＝０〜３である）、又はアルギニン置換基であり、ただしＪ¹⁰が存在しているときはＩ⁹はOH以外であり、そしてＪ¹⁰が存在していないときは存在していないか直結合以外のものであり；そしてＪ¹⁰は存在していないか、又は存在しているなら、OH又はアミノ酸、−OR又は −NHRであり、ここでＲはアルキルである）、請求項１記載のブラジキニン拮抗薬であるペプチド。３．Ｚ¹が水素である、請求項２記載のブラジキニン拮抗薬。４．Ｚ⁰及びＡ¹が同一又は異なるものであり、そしてＬアルギニン、Ｄ−アルギニン、H₂N(NHC)NHCH₂CH₂CH₂(CH₂)_n CO−（ここでｎ＝０〜３である）、及びアルキルアミン、ベンズアミジン、ピペリジン、アルキルグアニジン又はアルキルホスホニウム成分含有のアルギニン、オルニチン又はリジンの類似体又は同族体より成るアルギニン置換基より成る群から選ばれる、請求項２記載のブラジキニン拮抗薬。５．Ｂ²及びＣ³が同一又は異なるものであり、そしてプロリン及びヒドロキシプロリンより成る群から選ばれる、請求項２記載のブラジキニン拮抗薬。６．Ｄ⁴がグリシンである、請求項２記載のブラジキニン拮抗薬。７．Ｅ⁵がフェニルアラニン、シクロペンチルグリシン、シクロヘキシルグリシン又はチエニルアラニンである、請求項２記載のブラジキニン拮抗薬。８．Ｆ⁶がセリン、システイン、置換化セリン又はシステインであり、ここでその置換側鎖がＮ−（アルキル）スクシニミジル、Ｎ−（アルキル）ピロリジノン、Ｃ１−Ｃ20アルキル、Ｃ２−Ｃ20アルケニルアルキル、アリール及びアルキルアリールより成る群から選ばれる、請求項２記載のブラジキニン拮抗薬。９．Ｇ⁷がD-Tic、Ｄ−フェニルアラニン、Ｄ−シクロペンチルグリシン、又はアルキル、アリール、オキシアルキル置換基により４位において置換されたＤ− プロリン、又は置換化グリシン残基であり、ここでＲ３がアリール、アルキルアリール又は−CH₂Rであり、ここでＲがインダン、インドール、ナフチル又はフェニルである、請求項２記載のブラジキニン拮抗薬。 10．B²C³D⁴E⁵がNH(CH₂)_nCOであり、ここでｎ＝４〜14である、請求項２記載のブラジキニン拮抗薬。 27．８〜10個のアミノ酸残基を含んで成り、ここで８位及び／又は９位のアミノ酸残基がＮ−置換化グリシン残基であり、ここで前記位置はＮ−末端から順に数えたものである、請求項１記載のペプチド。 28．Ｇ⁷がNbng，Npeg，Nchg，Dtic，Igl，Dphe又はDcpgであり；そしてＨ⁸がO ic，Nchg，Mnch又はNphgである、請求項２記載のペプチド。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 38/55 ＡＤＤＡ６１Ｋ 37/64 ＡＤＤＡＤＳＡＤＳＡＤＵＡＤＺＡＤＺＡＤＵＣ０７Ｋ 7/18 ＡＣＤ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ウォーレイ，エリックティー. アメリカ合衆国，コロラド 80403，ゴールデン，ウエストセブンティセブンスプレイス 15955 (72)発明者フィッツパトリック，ティモシーディー. アメリカ合衆国，コロラド 80304，ブルダー，カルミアアベニュ＃７ 1260 (72)発明者クールマン，カレンジー. アメリカ合衆国，コロラド 80209，デンバー，サウスエマーソンストリート 565

Claims

【特許請求の範囲】１．ブラジキニン拮抗薬であるペプチドであって、ペプチド鎖内に１又は複数個のＮ−置換化グリシン残基を含むペプチド。２．前記拮抗薬が次式に従って規定される Z¹-Z⁰-A¹-B²-C³-D⁴-E⁵-F⁶-G⁷-H⁸-I⁹-J¹⁰ （式中：Ｚ¹は任意的に存在していないが、しかし存在しているなら、水素、アセチル、アダマンチルカルボキシル、アダマンチルアセチル、（Ｃ₁−Ｃ₈）−アルキル、−アルカノイル、アリールスルホニルもしくはアルコキシカルボニル基であるか、又はジヒドロキヌクリジニル−カルボン酸の誘導体であり；Ｚ⁰及びＡ¹は、同一でも異なっていてもよく、直結合、水素、ＤもしくはＬアルギニン、ＤもしくはＬリジン、ＤもしくはＬオルニチンを含んで成るアミノ酸残基誘導体、H₂N(NH＝C)NHCH₂CH₂CH₂(CH₂)_nCO−（式中、ｎ＝０〜３である）であるか、又はアルギニン置換基であり、ただしＺ¹が存在していないときはＺ⁰は直結合であることを条件とし；Ｂ²及びＣ³は、同一でも異なるものであってもよく、プロリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、セリン、スレオニン、Ｎ−メチル−セリン、Ｎ−メチル− スレオニン、Ｎ−メチルフェニルアラニン、グリシン及びNR′CHR″COであり、ここでＲ′及びＲ″は独立して水素、Ｃ１−Ｃ８直鎖もしくは枝分れアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及びアルキルアミノ基より選ばれ；Ｄ⁴はグリシン、アラニン又はチエニルアラニンであり； B²C³D⁴E⁵は−NH(CH₂)_nCO−（ここでｎは４〜１４の完全数である）により置き換えられていてよく；Ｅ⁵はフェニルアラニン、メチルにより置換されたフェニルアラニン、グリシン、シクロペンチルグリシン、シクロヘキシルグリシン、シクロヘキシルアラニン、２−インダングリシン、チエニルアラニン、Ｎ−（２−インダン）グリシン又はＮ−置換化グリシンであり、ここでその置換基はＣ₁−Ｃ₈アルキル、シクロアルキル、CH₂Ar又はCH₂CH₂Arであり、ここでArはアリール、アルキルチエニル又は芳香族アミノ酸、又はメチルもしくはエチルによりα−窒素もしくはα−炭素において置換された芳香族アミノ酸である；Ｆ⁶は脂肪族又は芳香族アミノ酸であり；Ｇ⁷はD-Tic，D-Dic、Ｄ−フェニルアラニン、２−インダングリシン、Ｄ−シクロペンチルグリシン、Ｄ−シクロヘキシルグリシン、Ｄ−プロリン、及びアルキル、アリール、チオアルキル、チオアリール、オキシアルキル又はオキシアリール置換基により３又は４位において置換されたプロリン、並びにＮ−置換化グリシン残基（ここで、その置換基はアリール、アルキルアリール基、−CH₂R、又は−CH₂CH₂Rであり、ここでＲはインダン、インドール、ナフチル又はフェニルである）より成る群から選ばれ；Ｈ⁸は以下の構造のアミノ酸残基であり：又は（式中、ｍ＝１〜６であり、そしてＲ₁はＣ１−Ｃ12アルキル置換化又は未置換の、Ｃ３−Ｃ８置換化又は未置換のシクロアルキル、置換化又は未置換の単環式アリール又は多環式アリール、ヘテロアリール、又は複素環であって炭素、窒素、酸素もしくは硫黄より選ばれる３〜８個の原子の１又は複数個の環を含むものである）；Ｒ²はＨ、メチルもしくは高級アルキル、又は酸性、塩基性もしくは中性アルキル、又は芳香族アミノ酸側鎖であり；Ｉ⁹は存在していないか、又は直結合、OH、アミノ酸、又はH₂N(NH＝C)NHCH₂CH₂ CH₂(CH₂)_n−NH−（ここでｎ＝０〜３である）、又はアルギニン置換基であり、ただしＪ¹⁰が存在しているときはＩ⁹はOH以外であり、そしてＪ¹⁰が存在していないときは存在していないか直結合以外のものであり；そしてＪ¹⁰は存在していないか、又は存在しているなら、OH又はアミノ酸、−OR又は −NHRであり、ここでＲはアルキルである）、請求項１記載のブラジキニン拮抗薬であるペプチド。３．Ｚ¹が水素である、請求項２記載のブラジキニン拮抗薬。４．Ｚ⁰及びＡ¹が同一又は異なるものであり、そしてＬアルギニン、Ｄ−アルガニン、H₂N(NHC)NHCH₂CH₂CH₂(CH₂)_nCO−（ここでｎ＝０〜３である）、及びアルキルアミン、ベンズアミジン、ピペリジン、アルキルグアニジン又はアルキルホスホニウム成分含有のアルギニン、オルニチン又はリジンの類似体又は同族体より成るアルギニン置換基より成る群から選ばれる、請求項２記載のブラジキニン拮抗薬。５．Ｂ²及びＣ³が同一又は異なるものであり、そしてプロリン及びヒドロキシプロリンより成る群から選ばれる、請求項２記載のブラジキニン拮抗薬。６．Ｄ⁴がグリシンである、請求項２記載のブラジキニン拮抗薬。７．Ｅ⁵がフェニルアラニン、シクロペンチルグリシン、シクロヘキシルグリシン又はチエニルアラニンである、請求項２記載のブラジキニン拮抗薬。８．Ｆ⁶がセリン、システイン、置換化セリン又はシステインであり、ここでその置換側鎖がＮ−（アルキル）スクシニミジル、Ｎ−（アルキル）ピロリジノン、Ｃ１−Ｃ20アルキル、Ｃ２−Ｃ20アルケニルアルキル、アリール及びアルキルアリールより成る群から選ばれる、請求項２記載のブラジキニン拮抗薬。９．Ｇ⁷がD-Tic、Ｄ−フェニルアラニン、Ｄ−シクロペンチルグリシン、又はアルキル、アリール、オキシアルキル置換基により４位において置換されたＤ− プロリン、又は置換化グリシン残基であり、ここでその置換基はアリール、アルキルアリール又は−CH₂Rであり、ここでＲはインダン、インドール、ナフチル又はフェニルである、請求項２記載のブラジキニン拮抗薬。 10．B²C³D⁴E⁵がNH(CH₂)_nCOであり、ここでｎ＝４〜14である、請求項２記載のブラジキニン拮抗薬。 11．Ｒ₁が、アミノ、ヒドロキシ、メルカプト、メルカプトアルキル、アルキル、オキシアルキル、アルキルオキシ、カルボキシル、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アミノアルキル、アルキルアミノ又はカルボキシアミド基より成る群から選ばれる１〜４個の置換基を含む置換化アリール、ヘテロアリール又はシクロアルキル基である、請求項２記載のブラジキニン拮抗薬。 12．Ｉ⁹がアルギニンもしくはリジン、又はアルキルアミン、ベンズアミジン、ピペリジン、アルキルグアニジンもしくはアルキルホスホニウム成分含有のアルギニン、オルニチンもしくはリジンの類似体もしくは同族体より成るアルギニン置換基である、請求項２記載のブラジキニン拮抗薬。 13．Ｎ−シクロペンチルグリシン、Ｎ−シクロヘキシルグリシン、Ｎ−フェニルグリシン、Ｎ−フェネチルグリシン又はＮ−メチルシクロヘキシルグリシンより成る群から選ばれるＮ−置換化アミノ酸を含むブラジキニン型ペプチド。 14．８位にＮ−置換化アミノ酸を含むブラジキニン型ペプチドであって、その置換基がＮ−置換化アミノ酸のα−炭素を含む環を形成していない、ブラジキニン型ペプチド。 15．Ｒ¹がシクロペンチルもしくはシクロヘキシル、フェニル、又はアルキル −インダンの誘導体である、請求項２記載のブラジキニン拮抗薬。 16．次式 D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-(N-R)Gly-Arg又は D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-(N-R)Gly （式中、Ｒはグリシン残基の置換基であり、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、メトキシ、エトキシ、順もしくはイソ−プロピルオキシ、CH₂OCH₂CH₃， CH₂CH₂O-CH(CH₃)₂，CH₂CH₂OCH₃，CH₂CH₂OCF₃、チオメチル、チオエチル、チオプロピル（順もしくはイソプロピル）で置換されたシクロ−ヘキシルである）として規定される、請求項２記載の化合物。 17．次式 D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NChg； D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-Igl-NChg-Arg； D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Phe-NChg-Arg；又は D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Cpg-NChg-Arg として規定される、請求項２記載の化合物。 18．次式 D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NChg-Arg；又は D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NCpg-Arg として規定される、請求項２記載の化合物。 19．次式 D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-NBng-Oic； D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-NBng-Oic-Arg；又は D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-NBng-NChg-Arg から選ばれる、請求項１記載の化合物。 20．次式 D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-NPeg-Oic-Arg；又は D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NMch-Arg から選ばれる、請求項１記載の化合物。 21．次式 δ-Gpa-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NChg-Arg； δ-Gpa-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NChg-Arg； δ-Gpa-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NChg；又は δ-Gpa-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NChg から選ばれる、請求項２記載の化合物。 22．次式 D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-NPhg-Arg；又は D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Phe-NPhg-Arg から選ばれる、請求項２記載の化合物。 23．ブラジキニン又は密接に関連する代謝物が既知の病原、媒介因子又はホルモンシグナルとなっている病理症状を処置するための方法であって、治療的に有効な量の請求項１記載の化合物を投与することを含んで成る方法。 24．前記病理症状が痛み又は炎症である、請求項23記載の方法。 25．心臓血管不全を処置するための方法であって、治療的に有効な量の請求項１記載の化合物を投与することを含んで成る方法。 26．前記心臓血管不全が虚血、脈管損傷又は心臓血管組織損傷より成る、請求項25記載の方法。 27．８〜10個のアミノ酸残基を含んで成り、ここで８位及び／又は９位のアミノ酸残基がＮ−置換化グリシン残基であり、ここで前記位置はＮ−末端から順に数えたものである、請求項１記載のペプチド。