FI120691B - Ei-terapeuttinen menetelmä kasvuhormonin vapautumisen edistämiseksi eläimessä - Google Patents
Ei-terapeuttinen menetelmä kasvuhormonin vapautumisen edistämiseksi eläimessä Download PDFInfo
- Publication number
- FI120691B FI120691B FI20050467A FI20050467A FI120691B FI 120691 B FI120691 B FI 120691B FI 20050467 A FI20050467 A FI 20050467A FI 20050467 A FI20050467 A FI 20050467A FI 120691 B FI120691 B FI 120691B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- ala
- trp
- dphe
- lys
- peptide
- Prior art date
Links
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 title claims abstract description 56
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 title claims abstract description 54
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 title claims abstract description 54
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 38
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 title claims description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 title claims description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 113
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 32
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 25
- 125000000030 D-alanine group Chemical group [H]N([H])[C@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 claims description 20
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 12
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims description 11
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 claims description 11
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 9
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 claims description 8
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 claims description 8
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 7
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 7
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 6
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 claims description 6
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 6
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 claims description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 5
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims description 5
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 59
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 53
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 53
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 46
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 43
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 39
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 29
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 27
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 27
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 24
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 23
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 20
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 230000003578 releasing effect Effects 0.000 description 18
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 17
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 17
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 16
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 16
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 16
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 12
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 11
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 9
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 9
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 9
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 8
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 8
- 102100033367 Appetite-regulating hormone Human genes 0.000 description 7
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 7
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 7
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101710119601 Growth hormone-releasing peptides Proteins 0.000 description 6
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 6
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 6
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical compound CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VJLLEKDQJSMHRU-STQMWFEESA-N Phe-Gly-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O VJLLEKDQJSMHRU-STQMWFEESA-N 0.000 description 5
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical class [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- -1 e.g. Substances 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 102100022831 Somatoliberin Human genes 0.000 description 4
- 101710142969 Somatoliberin Proteins 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 4
- 239000002876 beta blocker Substances 0.000 description 4
- 229940097320 beta blocking agent Drugs 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical group NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 4
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 4
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 3
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 3
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 3
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- NWQWNCILOXTTHF-HLCSKTDOSA-N (2s)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-aminopropanoyl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-naphthalen-2-ylpropanoyl]amino]propanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]hexanamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@H](CC=1C=C2C=CC=CC2=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CNC=N1 NWQWNCILOXTTHF-HLCSKTDOSA-N 0.000 description 2
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 2
- 208000033962 Fontaine progeroid syndrome Diseases 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000095 Growth Hormone-Releasing Hormone Substances 0.000 description 2
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 2
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N L-Dopa Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- HKXLAGBDJVHRQG-YFKPBYRVSA-N L-lysinamide Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(N)=O HKXLAGBDJVHRQG-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 2
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 239000012445 acidic reagent Substances 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 2
- 108010083553 alanyl-histidyl-(2-naphthyl)alanyl-tryptophyl-phenylalanyl-lysinamide Proteins 0.000 description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 description 2
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 125000004218 chloromethyl group Chemical group [H]C([H])(Cl)* 0.000 description 2
- 239000000544 cholinesterase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 150000004662 dithiols Chemical class 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 2
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 2
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 2
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 2
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 2
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 229960000208 pralmorelin Drugs 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000001012 protector Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical group C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 2
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 2
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- USMNOWBWPHYOEA-XKSSXDPKSA-N (+)-beta-thujone Chemical compound O=C([C@H]1C)C[C@@]2(C(C)C)[C@@H]1C2 USMNOWBWPHYOEA-XKSSXDPKSA-N 0.000 description 1
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TYRGLVWXHJRKMT-MRVPVSSYSA-N (2r)-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](C)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 TYRGLVWXHJRKMT-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- DFZVZEMNPGABKO-SSDOTTSWSA-N (2r)-2-amino-3-pyridin-3-ylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CN=C1 DFZVZEMNPGABKO-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- OFYAYGJCPXRNBL-GFCCVEGCSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-naphthalen-1-ylpropanoate Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H]([NH3+])C([O-])=O)=CC=CC2=C1 OFYAYGJCPXRNBL-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- RRONHWAVOYADJL-OAHLLOKOSA-N (2r)-3-phenyl-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)O)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RRONHWAVOYADJL-OAHLLOKOSA-N 0.000 description 1
- MGOGKPMIZGEGOZ-REOHCLBHSA-N (2s)-2-amino-3-hydroxypropanamide Chemical compound OC[C@H](N)C(N)=O MGOGKPMIZGEGOZ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N (2s)-2-amino-3-phenylpropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N 0.000 description 1
- DQUHYEDEGRNAFO-QMMMGPOBSA-N (2s)-6-amino-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN DQUHYEDEGRNAFO-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- HRNLPPBUBKMZMT-SSSXJSFTSA-N (2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-aminopropanoyl]amino]-3-naphthalen-2-ylpropanoyl]amino]propanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]hexanamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](CC=1C=C2C=CC=CC2=CC=1)NC(=O)[C@H](N)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 HRNLPPBUBKMZMT-SSSXJSFTSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 1,2-ethanedithiol Chemical compound SCCS VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 2-aminopentanoic acid Chemical compound CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 2-heptylcyclohex-2-en-1-one Chemical compound CCCCCCCC1=CCCCC1=O HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- XZWXFWBHYRFLEF-FSPLSTOPSA-N Ala-His Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 XZWXFWBHYRFLEF-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- JDIQCVUDDFENPU-ZKWXMUAHSA-N Ala-His-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CNC=N1 JDIQCVUDDFENPU-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- WUGMRIBZSVSJNP-UFBFGSQYSA-N Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UFBFGSQYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101100314150 Caenorhabditis elegans tank-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N Carbamic acid Chemical compound NC(O)=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical group 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102100039256 Growth hormone secretagogue receptor type 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710202385 Growth hormone secretagogue receptor type 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710198286 Growth hormone-releasing hormone receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100033365 Growth hormone-releasing hormone receptor Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010053317 Hydrophobia Diseases 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N L-DOPA Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N L-Homoarginine Natural products OC(=O)C(N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 125000003338 L-glutaminyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N L-homoarginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- 125000002061 L-isoleucyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003440 L-leucyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QEFRNWWLZKMPFJ-YGVKFDHGSA-N L-methionine S-oxide Chemical compound CS(=O)CC[C@H](N)C(O)=O QEFRNWWLZKMPFJ-YGVKFDHGSA-N 0.000 description 1
- OBSIQMZKFXFYLV-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine amide Chemical compound NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 OBSIQMZKFXFYLV-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 1
- 125000002842 L-seryl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- 125000003798 L-tyrosyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C(O[H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 206010024769 Local reaction Diseases 0.000 description 1
- 229920001367 Merrifield resin Polymers 0.000 description 1
- 101100270435 Mus musculus Arhgef12 gene Proteins 0.000 description 1
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241001674048 Phthiraptera Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 1
- 101000633010 Rattus norvegicus Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101710128967 Somatotropin-1 Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 238000004887 air purification Methods 0.000 description 1
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 1
- 239000000956 alloy Substances 0.000 description 1
- 229910045601 alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 229940124277 aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000002942 anti-growth Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- RXQNHIDQIJXKTK-UHFFFAOYSA-N azane;pentanoic acid Chemical compound [NH4+].CCCCC([O-])=O RXQNHIDQIJXKTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012455 biphasic mixture Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- ORQXBVXKBGUSBA-UHFFFAOYSA-N cyclohexyl D-alanine Natural products OC(=O)C(N)CC1CCCCC1 ORQXBVXKBGUSBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 125000005265 dialkylamine group Chemical group 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- KJOZJSGOIJQCGA-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound ClCCl.OC(=O)C(F)(F)F KJOZJSGOIJQCGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- MHUWZNTUIIFHAS-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MHUWZNTUIIFHAS-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 1
- MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M dodecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCC([O-])=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012156 elution solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 description 1
- 238000009505 enteric coating Methods 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 108010077689 gamma-aminobutyryl-2-methyltryptophyl-2-methyltryptophyl-2-methyltryptophyl-lysinamide Proteins 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 108010085742 growth hormone-releasing peptide-2 Proteins 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hcl hcl Chemical compound Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 108091008039 hormone receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- DWKPPFQULDPWHX-VKHMYHEASA-N l-alanyl ester Chemical compound COC(=O)[C@H](C)N DWKPPFQULDPWHX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229940070765 laurate Drugs 0.000 description 1
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 1
- 229960004502 levodopa Drugs 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZZDPGZAZMFNUBC-BTQNPOSSSA-N methyl (2r)-2-amino-3-naphthalen-1-ylpropanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(=O)OC)=CC=CC2=C1 ZZDPGZAZMFNUBC-BTQNPOSSSA-N 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- XCVNDBIXFPGMIW-UHFFFAOYSA-N n-ethylpropan-1-amine Chemical compound CCCNCC XCVNDBIXFPGMIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005487 naphthalate group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000069 nitrogen hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 239000012038 nucleophile Substances 0.000 description 1
- 239000008041 oiling agent Substances 0.000 description 1
- 229940049964 oleate Drugs 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 229940039748 oxalate Drugs 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- KJOMYNHMBRNCNY-UHFFFAOYSA-N pentane-1,1-diamine Chemical group CCCCC(N)N KJOMYNHMBRNCNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 235000008001 rakum palm Nutrition 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- JXKPEJDQGNYQSM-UHFFFAOYSA-M sodium propionate Chemical compound [Na+].CCC([O-])=O JXKPEJDQGNYQSM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004324 sodium propionate Substances 0.000 description 1
- 229960003212 sodium propionate Drugs 0.000 description 1
- 235000010334 sodium propionate Nutrition 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000013223 sprague-dawley female rat Methods 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-UHFFFAOYSA-N srif Chemical compound N1C(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)NC(=O)C(CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)C(CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(NC(=O)CNC(=O)C(C)N)CSSCC(C(O)=O)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(O)C)NC(=O)C1CC1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 239000003206 sterilizing agent Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000005737 synergistic response Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940070710 valerate Drugs 0.000 description 1
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical compound CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 210000002268 wool Anatomy 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- ORQXBVXKBGUSBA-QMMMGPOBSA-N β-cyclohexyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1CCCCC1 ORQXBVXKBGUSBA-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
- A61P5/08—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH for decreasing, blocking or antagonising the activity of the anterior pituitary hormones
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
Ei-terapeuttinen menetelmä kasvuhormonin vapautumisen edistämiseksi eläimessä
Keksintö koskee ei-terapeuttisia menetelmiä, joilla 5 voidaan edistää kasvuhormonitäsojen vapautumista ja nousua eläimillä, siten että niille annetaan erityisiä kasvuhormonia vapauttavia polypeptidiyhdisteitä,
Keksinnön tausta
Kasvuhormonin (GHj tasojen nostaminen eläimissä, 10 esimerkiksi, nisäkkäissä ihmistä lukuun ottamatta, antamalla GH:ta vapauttavia yhdisteitä, voi johtaa painon nousuun ja maidontuotannon tehostumiseen, jos antamisen jälkeen ilmenee riittävän kohonneita Gk-tasoja. lisäksi tiedetään, että kasvuhormonitasojen nousu nisäkkäissä voidaan saada aikaan 15 käyttämällä tunnettuja kasvuhormonia vapauttavia aineita, kuten luonnossa ilmeneviä kasvuhormonia vapauttavia hormone j a.
Kasvuhormonitasojen nousu nisäkkäissä voidaan myös | saada aikaan käyttämällä kasvuhormonia vapauttavia peptide- j 20 jä, joista jotkin on kuvattu aikaisemmin, esimerkiksi patenteissa US 4 223: 019, US 4 223 020, US 4 223 021, US 4 224 316, US 4 226 857, US 4 228 155, US 4 228 156, US 4 228 157, US 4 228 158, US 4 410 512, US 4 410 513.
j
Kohonneiden GH-tasojen aikaansaamiseksi on myös j 25 käytetty vasta-aineita, jotka on suunnattu endogeenista j kasvuhormonin vapautumisen inhihlittoria, somatostatilnia | (SRIF) vastaan. Tässä jälkimmäisessä esimerkissä kasvuhormonit asoj a kohotetaan poistamalla endogeeninen GH:n vapau- | humisen inhibiittori (SRXF) ennen kuin se pääsee axvolisäk- | 30 keeseen, jossa se estää GH:n vapautumista. i
Kuhunkin näistä menetelmistä, joilla voidaan edis- ! | tää kasvuhormonitasojen kohoamista, sisältyy materiaaleja, j jotka ovat kalliita syntetisoida ja/tai eristää riittävän j j puhtaana kohde-eläimelle antamista varten. Lyhytketjuiset, | 35 molekyylipainoltäan pienet, suhteellisen yksinkertaiset po- j lypeptidit, jotka ovat suhteellisen halpoja valmistaa ja j 2 joilla on kyky edistää kasvuhormonin vapautumista, olisivat suotavia, koska niiden pitäisi olla helposti ja halvalla valmistettavissa, helposti modifioitavissa kemiallisesti ja/tai fysikaalisesti, samoin kuin helposti puhdistettavis-5 sa ja formuloitavissa, ja niillä pitäisi olla erinomaiset kuljetus omi naisuudet.
Vaikka tunnetaankin, joitakin lyhyt ket juisia polypeptide jä jotka voivat edistää kasvuhormonitasojen vapautumista ja nousua veressä, kuten tyis-DTrp-Ma-Trp-DPhe-Lys·-· 10 ΜΗχ, kuten pohditaan patentissa: US 4 410 512, on tärkeää kyetä tarkoin muuttamaan polypeptideja eri syistä, kuten vapautuminen, biologinen imeytyminen, lisääntynyt retentio-aika jne. Äminohappomuutoksilla tietyissä kohdissa voi kuitenkin olla dramaattisia vaikutuksia lyhyt ke tj ui sen pepti-15 din kykyyn edistää kasvuhormonin vapautumista. j
Olisi suotavaa, jos olisi olemassa erilaisia lyhyt- j
ketjuisia polypeptidejä, jotka voivat edistää kasvuhormo- I
nitasojen vapautumista ja nousua eläinten veressä. Olisi j myös edullista, jos sellaisia polypeptidejä voitaisiin käyt-20 tää edistämään kasvuhormonitasojen vapautumista ja/tai nou- j sua eläinten veressä;.
Olisi myös suotavaa tarjota menetelmiä, joilla voi- | •j täisiin edistää kasvuhormonitasojen vapautumista ja/tai nou- j
sua eläinten veressä sellaisia lyhytketjuisia polypeptidejä I
25 käyttämällä. ΐ
Keksinnön yhteenveto j
Keksintö koskee menetelmää kasvuhormonin vapautunut— j sen edistämiseksi eläimessä, ihmistä lukuun ottamatta, ja | lukuun ottamatta terapeuttista menetelmää, joka kohdiste- | 30 taan eläimeen, jolle on tunnusomaista, että eläimelle anne- 1 taan tehokas määrä ainakin yhtä seuraavalla menetelmällä j valmistettua peptidiä,: jolla on kaava j ^-Äi*“Äla-G2”C3-Ä5',. 1 ] i ] j 3 jossa Ai on Gly, DAla, β-Äla, Sar, Äva, Äib, ABU, NH2(GH2)5CO tai XMÄ, Ä2 on DTrp, D^Nal, Ag on A2—A4—Ag>, A3—Äg>, A4—Ag tai A51, jossa a) ä3 on Ala, Gly, DAla tai Pro, 5 b) A4 on Ala, Gly, DAla, Pro tai Ci-Cic-suoraket- juinen aikyytiaminokarboksyylihappo, ja c) As- on Lys (s-Ri, R2)-Z, Orn (5-Rt, R2)-Z, N H (CH2)XN-(R3, R4) , Lys-Z, Orn-Z tai Arg-Z, joissa Ri on suora ket j uinen C2~Cio~a 1 kyytiryhmä tai H-atorni, R2 on suoraketjuinen C2-Ci0-10 alkyyliryhmä tai H-atomi, mutta Rj ja ,R2 eivät samanaikaisesti ole H, R3 on suoraket j uinen C2-Cio-alkyyliryhmä tai Ί H-atomi, R4 on suoraketjuinen C2-Ci0-alkyyliryhmä tai H-ato- .] mi, Z on NH (suoraketjuinen Cg-Gio-alkyyliryhmä), N (suoraket- | juinen C2~Ciö~alkyyliryhmä) 2, O-{suoraketjuinen C2-Cio-alkyy- j 15 liryhmä), NHs tai OH, x on 2 - 15, | C2 on Trp, Phe tai ChxAla, C3 on DPhe, DPal tai DChxAla, j
jolloin (i) edellä kuvatut aminohapot tai aminohappojoh— I
dännaiset liitetään yhteen peptidin muodostamiseksi käyttä- ] 20 en kiinteän faasin menetelmää, tai (ii) suoritetaan edellä | kuvattujen aminohappojen tai aminohappojohdannaisten tai |
A
näiden peptidifragmanttien syntetisointi liuosvaihemenetel- | mällä, joka sisältää ainakin kahden fragmentin konden- j saatioreäktion, peptidin muodostamiseksi, j
25 Kuvioiden lyhyt kuvaus I
Kuvio 1 on sarja kuvaajia, joista käy ilmi ihmisen j kasvuhormonin tasot seerumissa ajan funktiona. j
Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus j
Olemme keksineet menetelmän, jossa eläimille anne- J
30 taan useita uusia lyhytketjuisia polypeptidejä, jotka saa- j vat aikaan kasvuhormonitasojen vapautumisen ja nousun eläin- j ten veressä. Menetelmässä eläimelle annetaan ainakin yhtä ] seuraavalla menetelmällä valmistettua peptidiä, jolla on j kaava: j 35
Äl Co~C3 —Ä5y I
4 jossa Ai on Gly, DAla, β-Ala, Sar, Äva, Aib, ABU, NH2 (¢.¾). gCQ tai IMA, Ä2 on DTrp, DBNal, As on A3-A4--A5., A3-Ä51, ä4~A5· tai Ä5't jossa a) A3 on Ala, Gly, DAla tai Pro, 5 b} A4 on Ala, Gly, DAla, Pro tai C2~C10-suoraket“ juinen alkyyliaminokarboksyylihappo, ja c) A5. on Lvs { ε-Ri, R2} -Z, Orn (δ-Ri, R?) -Z, NH (CH2) XN (R3i Ra) , Lys-Z, Orn-Z tai Arg-Z, joissa Ri on suoraketj uinen C2-Cip-alkyyliryhinä tai H-atomi, R2 on suoraketjui-10 nen C2-Cio/-alkyyliryhmä tai H~atomi, mutta Ri ja R2 eivät samanaikaisesti ole H, R3 on suoraketj uinen C2-Cio-alkyyIiryh-mä tai H-atomi, R4 on suoraketjuinen Gs-Cio-alkyyliryhmä tai H-atomi, Z on NH (suoraketjuinen C2~Ci0-alkyyliryhmä), N (suoraketj uinen C2-Ci0-alkyyliryhmä) 2, O- (suoraket juinen C2-Giö-15 alkyyliryhmä), NH2 tai OH, x on 2 - 15, C2 on Trp, Phe tai ChxÄla, C3 on DPhe, DPal tai DChxAla, jolloin (i) edellä kuvatut aminohapot tai aminohappojohdan-naiset liitetään yhteen peptidin muodostamiseksi käyttäen 20 kiinteän faasin menetelmää, tai (ii) suoritetaan edellä kuvattujen aminohappojen tai aminohappojohdannaisten tai näiden peptidlfragmanttien syntetisointi liuosvaihemenetelmäl-lä, joka sisältää ainakin kahden fragmentin kondensaätiore-aktion, peptidin muodostamiseksi.
2.5 Käytetyt aminohappotähteiden lyhenteet ovat standard | dinomaisen peptidinimistön mukaisia: |
Gly = Glysiini |
Tyr = L-tyrosiini ]
Ile = L-isoleusiini | 30 Glu = L-glutamiinihappo ;]
Thr = L-treeniini :|
Phe = L-fenylaläniirii j
Ala = L-alaniini |
Lys = L-lysiini | 35 Asp = L-asparagiinihappo |
Cys = L-kysteiini | ! 5
Arg ~ L-arginiini
Ava = aminovaleriaanahappo
Aib = aminoisovoihappo
Gin = L-glutamiini 5 Pro = L-proliini
Leu = L-leusiini
Met = L-met ioniini
Ser = L-seriini
Asn - L-asparagiini 10 His - L~hiskidiini
Trp = L-t.ryptofaani
Val = L-valiini DOPA = 3, 4-dih.ydroksifenylalaniini ;
Met(O) = metioniinisulfoksidi | 15 Abu - of-amino voihappo iLys = NE-isopropyyli“L-lysiini 4-Abu = 4-aminovoihappo
Orn = L-ornitiini j D“Nal = cf-naftyyli-D-alaniini \ 20 D%al = β-naftyyli-D-alaniini \
Sar = sarkosiini j LArg = homoarginiini |
Chx = sykloheksyyli j
ChxAla = L-sykloheksyylialaniini | .25 DCHxAla = D-sykloheksyylialaniini f IMA = Na~imidatsolietikkahappo ?|
Tcc = 1,2,3,4-tetra.hydro-7“karoliini-3- j karboksyylihappo j
Tic = 1, 2,3,4-tetrahydrois.okinoliini-3- ] 30 karboksyylihappo ]
Tip = 4,5,6,7-tetrahydro-lH-imidatsQ[e]-6- | karboksyylihappo j a,gamma-ABU = alfa,gamma-aminovoihappo j DPal = D-3-pyridyylialaniini j 35 Kaikki kolmikirjaimiset aminohappolyhenteet, joita j edeltää "D", viittaavat aminohappotähteen D-konfiguraati- j 5 ] j 6 oon, ja glysiinin. ajatellaan sisältyvän termiin "luonnossa .ilmene vät L-amlnohapot", Näissä lyhyt ket jäisissä: polypeptideissä tietyt; 'kohdat sietävät enemmän muutoksia kuin toiset, ilman että ne 5 vaikuttaisivat haitallisesti peptidin kykyyn, edistää kasvu-* hormonitasojen vapautumista ja/tai nousua eläinten veressä.
Esimerkiksi A5-kohta, Toiset kohdat sietävät vähemmän sellaisia muutoksia:. Esimerkiksi keskellä sijäitseyat aminohappotähteet Ala, Trp, DPhe, jotka on esitetty vastaavasti 10 merkein G*, 'Cz ja G3. Aikaisemmin uskottiin esimerkiksi, että Ai ja As pitäisi olla L~ ja vastaavasti D-muodossa, ja että Trp ja DPhe pitäisi olla myös L- ja D-muodossa, mikä -f muodostaa Lp LD -sarjan. Havaitsimme kuitenkin, että LD LD -sarja voi olla DD LD -sarja. Täten havaittiin yllättäen, j j 15 että polypeptidi jolla on kaava Ai-As-Gi-Gj-Cs-As, jossa Ai, hz, A5 ovat edellä kuvatun kaltaisia ja Ci on Ala, Cz on
Trp, Phe ja ChxAla ja C3 on DPhe, DPal tai DChxAla, edistää kasvuhormonitasojen vapautumista ja/tai nousua eläimissä., f C2 on edullisesti Trp tai Phe, edullisemmin C? on i
20 Trp, I
C3 on edullisesti DPhe, Kun ¢2 on ChxAla, C3 on edullisesti DPhe. Kun C3 on DPal, Z on edullisesti OH.
Lisääntynyt taipuisuus, joka: liittyy siihen että valitaan emäksisiä, neutraaleja tai happamia aminohappotäh- 2!5 teitä ja L- ja D-muotoja, joita voidaan käyttää aminohappo- | jen Ai, A?, A3, A4, A5, C2 ja C3 tapauksessa, tarjoaa suuren j hallittavuuden halutun peptidin fysikaalis-kemiailisia omi- | naisuuksia silmälläpitäen:, |
Vaikka peptideillä DÄla-DpNal-Äla-Trp-DPhe-Lys-NHa j 30 ja DAla-DpNal-Ala-Phe-DPhe-Lys-NHj on samanlaista GH:ta va- j pauttavaa aktiivisuutta, Trp:n substituointi Phe:llä voi | lisätä peptidin DÄla-DPNal-Ala-Phe-DPhe-Lys-NIb kemiallista | stabiiliutta, koska Trp hapettuu herkemmin kuin Phe. Samoin j
Trp:n substituointi Phe:llä antaa peptidille enemmän hydro- 1 35 fobisuutta ja tämä jäljempänä kuvattu fysikaalis-kemialli- j ή en ominaisuus voi olla edullinen ajateltaessa suun kautta, f \ ! 7 ihon läpi ja/tai nenän kautta imeytymisen tehostamista samoin kun peptidin formulointia. Lisäksi DAla-DPNal-Ala-Trp-DPhe-Lys-NHs: n ja DAla-LpNal-Älä-Phe-DPhe-Lys-NH2 :n ED5Q (50-prosenttisesti tehokas annos) rotan solun histamiini-5 määrityksessä on samanlainen, se on: 30,5 ± 0,5 ja 30,8 + 0,3 pg/ml ja molemmat ovat parannus verrattuna Ala-His-D£Nal-Äla-Trp-DPhe-Lys-NH2tn histamiiniaktiivisuuteen, joka oli 11,0 ± 1,.:0. pg/ml, Peptidit, joilla on vähemmän histamiinia vapauttavaa aktiivisuutta (korkeampi ED50} voivat olla 10 kliinisesti tehokkaampia, koska ne voisivat tuottaa vähemmän haitallisen paikallisreaktion peptidin injektiokohtaan ja/tai voivat vähemmän todennäköisesti tuottaa systeemisiä antigeenisiä haitallisia kliinisiä vaikutuksia,
Taipuisuus tarjoaa myös tärkeitä etuja halutun pep- i 15 tidin formuloinnissa ja antamisessa mille tahansa lajille.
Nämä muutokset voivat myös parantaa suun kautta tapahtuvaa imeytymistä, samoin kuin peptidien metaboliaa. ja erittymistä. Äia-His-D^Nal-Ala-Trp-DPhe-Lys-NHs (GHRP-1) on esimerkiksi kasvuhormonia vapauttavalta kyvyltään ihmisessä te- \ 20 hokkaampi kuin Äla-His-DTrp-Ala-Trp-Dhe-Lys-NHa. DÄla-D^Nal-- | Äia-Trp-DP:he-Lys-NH2 (GHRP-2) on kuitenkin tehokkaampi kuin | GHRP-1 suun kautta annettuna. \
Odotetaan myös, että koska näissä peptideissä aro- j
maattiset sivuketjut voidaan poistaa tietyistä kohdista, I
,\ 25 joissa niiden aikaisemmin ajateltiin olevan välttämättömiä, \ ja että D-aminohappotähteen pitäisi olla biologisesti suo- 'j jatumpi kuin L-muodon, voidaan käyttää joillekin peptideil- | le suurempaa suojatista ja pienempiä painoja, jotta polypep- ]
tidiä saadaan edelleen tarkoin muuteltua jotta saadaan mah- I
\ 30 dölii.seksi sellaiset ominaisuudet kuten imeytyminen nenän | kautta, suun kautta:, ihon läpi, stabiilisuus in vivo jne. j
Ri:n, Ra:n, Rs:n, R4: n ja Z :n osia voidaan myös :j vaihdella, mikä: tarjoaa näin ollen lisäkontrollin halutun j yhdisteen fysikaalis-kemiallisten ominaisuuksien suhteen. | 35 Vastaavasti voidaan saada aikaan peptidin tehostunut vapaa- j tuminen tiettyyn reseptoriin ja tietyssä lajissa. j 8
Edullisia kasvuhormonia vapauttavia yhdisteitä, joita käytetään tätä keksintöä harjoitettaessa, ovat: Äx-Ä2-Äla -Trp- DPhe-Ag, 5 tai minkä tahansa sellaisen polypeptidin orgaaniset tai epäorgaaniset additiosuolat, joissa Αχ, A2 ja Ag ovat edellä olevan määritelmän mukaisia.
Edullisesti kasvuhormonia vapauttavalla, peptidillä, 10 jota käytetään tätä keksintöä harjoitettaessa, on kaava: DÄla-Aa-Ala-Trp-DPhe-Äg, ja sen orgaaniset tai epäorgaaniset additiosuolat.
15 Tämän yhdisteryhmän edullisilla jäsenillä on kaava: DAla-D%ä 1 - AI a - T r p- DPhe - L:y's:NH2, DÄla-D%al-Ala-Trp-DPhe-Lys (ε-iPr} NH2, DAl a - DT f p - AI a - T r p - D Ph e-L y s (ε - i Pr)N H2, DAla-DTrp-Äla-Trp-DPhe-LysNHs, 20 DAla-DsNal-Ala-Trp-DPhe-NH (CH2) 5NH2, NH2 (CH2) 5CO-Dp-Nal-Ala-Trp-D-Phe-MH (CH2) 5NH2, samoin kuin näiden orgaaniset tai epäorgaaniset ad- f ditiosuolat. j
Rämä yhdisteet ovat tällä hetkellä edullisimpia, I
25 koska nämä lyhytketjuisemmat poiypeptidit ovat halvempia j syntetisoida, ja näiden spesifisten yhdisteiden on osoitet- j tu edistävän hyvin tehokkaasti seerumin kasvuhormonitasojen ] nousua. |
Muilla edullisilla kasvua vapauttavilla peptideillä j 30 on kaava Äx-Ä^Ala-Phe-DPhe-Ag. Edullisiin jäseniin tässä j yhdisteryhmässä kuuluvat ne, joissa Αχ on Nai MA·,· a, gamma, ABU, 1 DÄla, Ris, Ala, Hi s tai a, gamma, ABU, A2 on D%al tai DPhe, | ja Ä5 on LysNH2, LysNH2, Arg NH2, NH-CI-Ix-NHz (1,4-Chx- | diamiini) tai Lys EÄ. Esimerkiksi NalMA-D^Nal-Ala-Phe-DFhe- | 35 LysNH2, a, gamma, ABU - DPN a 1 -AI a-Phe- DPhe-L y s NH2, DAla-DPhe-Ala- j
Phe-DPhe-LysNH2, pAla-His-D%al^Ala-Phe-DPhe-LysNH2, ΝαΙΜΑ- j i 9 D^al-Ala-Pfce-DPhe-NH-CHx--NH2, a, gamma, ABU-D^Nal-Ala- Phe-DPhe-KH-Ghx-NH2, DAI a - D% a 1 - A la - Phe-DPhe-Lys EA, DAla-DpNal-Ala~ Phe-DPhe-ArgKHa, samoin kuin näiden orgaaniset tai epäorgaaniset a dditiosuolat.
5 Tähän keksintöön kuuluvat polypeptidit, joilla on kaava Ai-A2-Ci-C2-C3-A5, jossa C-. on Ala, C2 on Trp, Phe tai ChxAla, C3 on DPhe tai DChxAla, Ai on edullisesti DÄla. Ä2 on edullisesti D%al. Esimerkiksi DAla-D^Nal-Ala-ChxAia-DPhe-LysNH2, DAla-DpWal-Äla-Phe-DChxAla-LysNH2 ja DAla-Dpftal-10 Ala-GhxÄla-DChxAla-L>ysNH2, samoin kuin näiden orgaaniset tai epäorgaaniset additiosuolat. \ Tässä kuvatut yhdisteet ovat tyypillisesti helppoja j syntetisoida, ne edistävät tehokkaasti seerumin hormonita- \
sojen nousemista, ja ne ovat suotavia kaupallisen mittakaa- I
15 van tuotannossa ja hyötykäytössä. Lisäksi nämä yhdisteet I
voivat olla edullisia sikäli että niillä on fysikaalis-kerni- j ailisiä ominaisuuksia, jotka ovat suotavia silmälläpitäen f sellaisten polypeptidiyhdisteiden tehokasta antamista mo~ f
nille erilaisille eläinlajeille, mikä johtuu taipuisuudesta I
20 jonka ovat mahdollistaneet erilaiset substituutiot polypep- 1 tidiyhdisteiden monissa eri kohdissa, ja siitä että on va- | littu näiden polypeptidiyhdisteiden C-terminaalisen osan ja j keskiosan polaarinen, neutraali tai ei-polaarinen luonne, ] niin että se olisi yhteensopiva halutun antotavan kanssa, \ 25 on suun kautta, nenän kautta, jatkuva antaminen, jossa käy- j
; I
tetään erityisiä kemiallisiä/mefcaanisia antomenetelmiä:. :j Tämän keksinnön mukaisesti valmistettavia yhdistei- ] tä voidaan myös käyttää kohottamaan veren GH-tasoja eläi- . \ missä, lisäämään maidon tuotantoa naudoissa, lisäämään ruu- ] 30 mlin kasvua sellaisissa eläimissä kuten nisäkkäät (esim. j lampaat, naudat ja siat) samoin kuin kaloissa, siipikarjas- | sa, muissa selkärankaisissa ja äyriäisissä, ja lisäämään j villan ja/tai turkin tuotantoa: nisäkkäissä, Puumiin kasvun j määrä riippuu eläinlajin sukupuolesta ja iästä, annettavan j 35 kasvuhormonia vapauttavan yhdisteen määrästä ja identitee- ] tistä, antoreitistä ja vastaavasta. \ :¾ i 10 Tämän keksinnön mukaisesti valmistettavat uudet po-lypeptidiyhdisteet voidaan syntetisoida tavanomaisten liu-osfaasin ja: kiinteän faasin peptidikemian menetelmien mukaisesti, tai sinänsä tunnetuilla tavoilla.
5 Peptidiami de j;a varten kiinteän faasin synteesi aloi tetaan edullisesti peptidin C-terminaalisesta päästä. Sovelias lähtömateriaali voidaan valmistaa esimerkiksi kiinnittämällä tarvittava suojattu alfa-aminohappo kloorimetyloi-tuun hartsiin,: hydroksimetyylihartsiin, bentshydryyliamiini 10 (BHA) -hartsiin tai parametyylihentsyylihydryyliamiini (p-Me- BHÄ) -hartsiin. Bio-Rad Laboratories {Richmond, California) myy yhtä sellaista kloorimetyylihartsia kauppanimellä BIO-BEADS SX-1. Hydroksimetyylihartsin valmistus kuvataan Bo-danskyn ym, artikkelissa:, Chem. Ind. (Lontoo) 38, i 597 j 15 ¢1966), BBA-hartsin ovat kuvanneet Piettä ja Marshall,
Chem. Comm,, 650 (1970) ja se on kaupallisesti saatavilla j
; J
(Peninsula Laboratories, Inc., Belmont, California), f Älkukiinnityksen jälkeen älfa-aminon suojaryhmä voi- | da an... poistaa valikoimalla happamia reagensseja, mukaan lu- | 20 kien trifluorietikkahapon (TFA) tai suolahapon (HC1) iiuok- j set orgaanisissa liuottimissa huoneenlämmössä. Alfa-aminon | SUojaryhmän poistamisen jälkeen jäljellä olevat suojatut | aminohapot voidaan liittää vaiheittain halutussa järjestyksessä . Kukin suojattu aminohappo voidaan saattaa yleensä 25 reagoimaan, noin kolminkertaisena ylimääränä käyttämällä soveliasta karboksyyliryhmäaktivaattoria, kuten disyklpheksyy-likarbodi-imidi (DCC) tai di-isopropyylikarbodi-imidi (DIG) liuoksessa, esimerkiksi metyleenikloridissa {CH2C'1$) tai di-metyyliformamidissa (DMF) ja näiden seoksissa.
30 Sen jälkeen kun haluttu aminohappOsekvenssi on saa- | tu valmiiksi, haluttu peptidi voidaan lohkaista irti bents- j hybryyliamiinihartsikantajasta käsittelemällä sellaisella | reagenssilla kuten fluorivety (HF), joka ei pelkästään loh- j kaise peptidiä irti hartsista vaan lohkaisee irti yleisiin·-· j 35 min käytetyt sivuketjun suojaryhmät... Kun käytetään kloori- j metyylihartsia tai hydroksimetyylihartsia, HF-käsittely joh- j 11 taa vapaan peptidihapon muodostumiseen. Peptidialkyyliami-deja ja -estereitä voidaan kuitenkin valmistaa näistä pep-tidihartseista lohkaisemalla soveliaalla alkyyliamilnilla, dialkyyiiamiinilla: tai diaminoalkaanilla tai transesteröi-5 mällä alkoholilla korkeissa pH-arvoissa.
Edellä kuvattu kiinteän faasin menetelmä on sinänsä tunnettu ja sen ovat kuvanneet Stewart ja Young, Solid Phase Peptide Synthesis;; toinen laitos (Pierce Chemical Co., .Rockford, IL 1984), 10 Bodänsky ym. esittävät teoksessa Peptide Synthesis, töinen laitos, John Wiley S Sons, New York, N.Y. 1976, joitakin. hyvin tunnettuja iiuosmenetelmiä, joita voidaan käyttää syfltetoitaessa: tämän keksinnön pept.idiosat,
Uskotaan, että peptidit on edullisempi syntetisoida 15 liuosvaihemenetelmällä, joka sisältää ainakin kahden peptidi fragment in kondensointireaktion.
Tämä menetelmä käsittää sen, että peptidifragmentti Χ-Αχ-Υ kondensoidaan peptidifragmentin u-V-W kanssa, jolloin kaikki aminohapposivuketjut paitsi Αχ: n sivuketjut 20 ovat neutraaleja tai suojattuja, ja jossa X on suoj. jossa | suoj. on N-pään suojaryhmä: Y on Aa~Q, Ala-A2-Q, .Ä2-&la-Q, !
Ala-Aa-Äla-Q, A2-Ala-Trp-Q, Ala-A2-Ala-Trp~Q, Ala-Q tai -Q, \ jossa kun Y on Q, U on J-Ä2-Äla-Trp tai J-Ala-A2-Ala-Trp. |
Kun Y on Ala-Q, U on J-A2-Äla-Trp. Kun Y on A2-Q tai Alä-Ä?- I
25 Q, U on J-Ala-Trp, Kun ¥ on Ä2-Ala-Q tai Ala-A2~A3-Q, U on J-Trp. Kun Y on Äs-Äla-irp-Q tai Ala-Aj-Ala-Trp-Q, U on J.
V on As tai Z. Kun V on A5, W on Z. Kun V on Z, W ei ole läsnä. Αχ, Ä2, A5 ja Z ovat kuten tässä on määritelty, Q on peptidifragmentin karbOksipää ja se on -OR3 j 30 tai -M, jossa M on osa jonka typpeä sisältävä nukleofiili j kykenee syrjäyttämään, ja R3 on H, älkyyliryhmä joka sisäl- j tää yksi - noin 10 hiiliatomia, aryyliryhmä jossa on 6 - noin j 12 hiiliatomia, tai aryylialkyyliryhmä jossa on 7 - noin 12 hiiliatomia, J edustaa osoitetun fragmentin amiinipäätä ja 35 on H tai suojaryhmä, joka ei estä kytkentäreaktlota, esimerkiksi bentsyyli.
12 Tämän jälkeen suojaryhmat poistetaan. Vaihtoehtoisesti näin muodostunutta suojattua peptidiä voidaan käyttää jatkökondensaatioissa isomman peptidin valmistamiseksi.
Tämä edullinen menetelmä kuvataan täydellisemmin 5: US-patenttihakemuksessa nro 558 121, jonka John C. Hubbs ja S.W. Parker ovat panneet vireille 24. heinäkuut3 1990: otsikolla "Process for Synthesizing Peptides”, joka liitetään tähän viitteenä ja julkaistaan numerolla ¢¢09201709, Tämän keksinnön suoritusmuodon mukaisesti tarjotaan 10 menetelmä, jolla voidaan edistää kasvuhormonitäsojen vapautumista ja/tai kohoamista eläimen veressä. Mainittuihin menetelmiin kuuluu se, että eläimelle annetaan tehokas annos ainakin yhtä edellä kuvattua polypeptidiä. Tätä menetelmää käytetään Muissa eläimissä kuin ihmisessä.
15 Tämän keksinnön mukaisella menetelmällä valmistet tavaa polypeptidiä yoidäan antaa suun kautta, parenteraali-sesti (lihaksensisäinen (i.m.), vatsaontelon sisäinen (.1.p.), laskimonsisäinen (i.v,:} tai ihonalainen (s.c.) injektio), j nenän kautta, vaginan kautta, peräsuolen kautta tai kielen \
20'· alle, samoin kuin keuhkojen sisäisenä inhalaationa ja ne J
voidaan formuloida annosmuodoiksi, jotka soveltuvat kulle- ] kin antoreitille. Parenteraaiinen antaminen on edullista. j
Kiinteisiin annosmuotoihin suun kautta antamista j varten kuuluvat kapselit, tabletit, pillerit, jauheet ja | 25 rakeet. Sellaisissa kiinteissä annosmuodoi ssa vaikuttava | aine sekoitetaan ainakin yhden inertin kantajan kanssa, ku- j ten sakkaroosi, laktoosi tai tärkkelys. Sellaiset annosmuo- j dot voivat myös sisältää, normaalin käytännön mukaisesti, j muitakin lisäaineita kuin inerttejä laimennusaineita, esim. j 30 liukuaineita kuten magnesiumstearaatti. Kapseleiden, tab- | j lettien ja pillereiden tapauksessa annosinuodot voivat myös sisältää puskuroivia aineita. Tabletit ja pillerit voidaan lisäksi valmistaa enteröpääliysteillä.
Nestemäisiin annosmuotoihin suun kautta tapahtuvaa 35 antamista varten kuuluvat emulsiot, liuokset, suspensiot, siirapit, eliksiirit jotka sisältävät sinänsä tunnettuja m 13 inerttejä laimennusaineita, kuten vettä. Sellaisten inert-tien laimennusaineiden lisäksi koostumuksiin voi lisäksi sisältyä apuaineita, kuten kostutusaineita, eöitilgointi- ja suspensointiaineita ja makeutus-, maku- ja hajuaineita.
5 Tämän keksinnön mukaisiin valmisteisiin parenteraa- lista antamista varten kuuluvat steriilit vesipohjaiset tai ei-vesipohjäiset liuokset, suspensiot tai emulsiot. Esimerkkejä ei-vesipohjaisista liuottimista tai yehikkeleistä ovat propyleeniglykoli, polyetyleeniglykoli, kasviöljyt, 10 kuten oliiviöljy ja maissiöljy, liivate ja injektoitavissa olevat orgaaniset esterit kuten etyylioleaatti. Sellaiset annosmuodot voivat myös sisältää apuaineita kuten säilytys-, .] kostutus-, emulgointi- ja dispergointiaineita. Ne voidaan | steriloida esimerkiksi suodattamalla bakteereja pidättävän } 1,5 suodattimen läpi, sisällyttämällä koösturnuksiin steriloivia ] aineita, säteriyttämällä koostumuksia tai kuumentamalla koostumuksia.·.. Ne voidaan myös valmistaa, steriiliin veslliu- 1 okseen, täi johonkin muuhun steriiliin injektoitavissa; ole- f
vaan liuokseen välittömästi ennen käyttöä. I
20 Tämän keksinnön mukaisella menetelmällä valmistat- j tavat uudet koostumukset ovat myös hyödyllisinä annettuna j yhdessä kasvuhormonia vapauttavan hormonin kanssa (se on: j luonnossa ilmenevä kasvuhormonia vapauttava hormoni, sen j analogit ja funktionaaliset ekvivalentit) samoin kuin yh-25 distelmänä muiden sellaisten yhdisteiden kanssa, jotka edistävät kasvuhormonin vapautumista, esimerkiksi kasvuhor- ; monia vapauttavat peptidit (katso US-patentti nro 4 880 778, johon viitataan täten viitteenä), esimerkiksi asetyyliko-liiniesteraasin inhibiittorit, β-salpaajat, a-?-salpaajat 30 jne. Sellaiset yhdistelmät edustavat erityisen edullista keinoa antaa tämän keksinnön mukaisia kasvuhormonia vapauttavia peptidejä, koska yhdistelmä edistää paljon suuremman kasvuhormonimäärän vapautumista kuin yhdistelmän kunkin komponentin aiheuttajan vasteen summan perusteella ennuste-35 taan, se on: yhdistelmä tarjoaa synergistisen responssin yksilöllisen komponentin suhteen. Edellä siteeratussa pa- 14 tentissä kuvataan lisää yksityiskohtia kasvuhormonia vapauttavien peptidien, yhdistelmien antamisesta* Sellaiset sy-nergistiset yhdisteet ovat edullisesti yhdisteitä:, jotka toimivat agonistina kasvuhormonia vapauttavan hormonin re~ 5 septorissa: tai inhiboivat somatostatiinih vaikutusta. Sy-hergismi voi olla binääristä., se oh: tämä: yhdiste ja yksi synergistisistä yhdisteistä, tai sisältää useamman kuin yhden synergistisen yhdisteen.
Yhdistelmät, jotka aiheuttavat tehokkaasti kasvu-10 hormonitason vapautumisen ja nousun eläimen veressä, sisältävät tehokkaan määrän polypeptidejä, jotka on valittu tässä patenttivaatimukseen 1 kuuluvista polypeptideistä ja ainakin yhdestä seuraajista ryhmistä: ryhmän 1 polypeptidit, tai yhdiste joka edistää kasvuhormonien vapautumista esim., 15 ryhmän 2 polypeptidit, jossa ryhmän 1 polypeptidit voivat olla mitä tahansa luonnossa ilmeneviä kasvuhormonia vapauttavia hormoneja ja niiden funktionaalisia ekvivalentteja, missä mainitut polypeptidit vaikuttavat nisäkkäiden, ja muiden selkärankaisten ja äyriäisten kasvuhormonia vapauttavan | 20 hormonin reseptoriin, f ryhmän 2 polypeptidit voivat olla mitä tahansa po- j lypeptidejä, joilla on rakenne: j
Tyr-DArg-Phe-NHs, I
Tyr-DAla-Phe-NH?, 25 Tyr-DÄrg (N02) -Phe-NH2/ ί
Tyr-DMet (0}-Phe-NH2, |
Tyr-DAla-Phe-Gly-NHa,:
Tyr-DArg-Phe-Gly-NHs,
Tyr-DThr-Phe-Gly-NHs, 1
30 Phe-DArg-Phe-Gly-NHa, I
Tyr-DArg-Phe-Sar-NH2, j
Tyr-DÄla-Gly-Phe-NH2, |
Tyr-DÄrg-Gly-Trp-NH2, |
Tyr-DÄrg {N02) “Phe-Gly-NHa, j 35 Tyr-DMet (Öj-Phe-Gly~NH2, 1 (NMe)Tyr-DArg-Phe-Sar~NH2, | 15
Tyr-DAr g -Phe-Gly-oLi,
Tyr-DArg-GIy-(NMe)Phe-NH2,
Tyr - DAr g -Phe- S ar - o 11,
Tyr-DAIa-Phe - S a r - o 11, 5 Tyr-DAla-Phe-Gly-Tyr-NH?.,
Tyr-DAla-(NMe)Phe-Gly-Met(0)-oli,
Tyr-DArg-(NMe)Phe-Gly-Met(O)-oli, G1y-Tyr-DArg-Phe-G1y-NH2,
Tyr-DThr-Gly-Phe-Thz-NH2, ID Gly-Tyr-DAla-Phe-Gly-NHs,
Tyr-DAla-Phe-Gly-Dli,
Tyr-DAla-Giy-{NMe}Phe-Gly-oli,
Tyr-DArg-Phe-Sar-NH?, }
Tyr-DA Ia-Ph e- S a r -N H 2, | 15 Tyr-DAla-Gly- (NMe)Phe-NHy, j
Sar-Tyr-DArg-Phe-Sar-NH2, |
Tyr-DCys-Phe-Gly-DCys-NHs (syklinen disulfidi), j
Tyr-DCys-Phe-Gly-DCys-NHa (vapaa ditioli), }
Tyr-DCys-Giy-Phe-DCys-NH2 (syklinen disulfidi), | 20 Tyr-DCys-Gly-Phe~DCys-NH2 (vapaa ditioli), (
Tyr-DAla-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NHL, f
Tyr-DAla-Phe-3ar-Tyr-Pro-Ser~NH2/ I
Tyr-DAIa-Phe-S a r -Phe-Pro-Ser-NH2, |
Tyr-DAla-Phe-Gly-Tyr-Hyp-Ser-NHaf | 25 Tyr-DAla-Phe-Sar-Tyr-Hyp-Ser-NHs, j T y r - DAI a - Ph e - S ar-Phe-Hyp~S e r-NH2,
Tyr-DArg-Phe-Gly-Ty r-Hyp-Ser-NH2, j
Tyr-DArg-Phe-Sar-Tyr-Pro“Ser-NH2, ]
Tyr-DArg-Phe-Sar-Tyr-Hyp-Ser-NHs, } 30 Tyr-DArg-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser~NH2, ja | mainittujen ryhmän 2 polypeptidien orgaaniset tai ( epäorgaaniset additiosuolat, jossa mainittu yhdistelmä an- j hetaan sellaisena suhteena että mainittu yhdistelmä aiheut- \ taa tehokkaasti kasvuhormonin synergistisen vapautumisen ja 1 i 35 kohoamisen sellaisen eläimen veressä.
Muut yhdisteet, jotka edistävät kasvuhormonien va- j j il 16 pautumista, ovat ammattimiehen tieolossa ja niihin kuuluvat asetyyliköliiniesterassin inhibiittorit, β-salpaajat ja a2-agonistit.
Yhdessä edullisessa suoritusmuodossa käytetään luon-5 nossa ilmeneviä kasvuhormonia vapauttavia hormoneja ja näiden funktioekvivalentteja yhdessä yhdisteiden kanssa, jotka edistävät kasvuhormonien vapauttamista, yhdessä näiden peptidien kanssa. Esimerkiksi ryhmän 1 ja ryhmän 2 yhdisteitä näiden peptidien kanssa, toinen esimerkki on ryhmän 1 yh-10 disteet tai β-salpaajat näiden peptidien kanssa.
Tämän keksinnön mukaisen polypeptidin määrä tai po-lypeptidieh yhdistelmän määrä, joka annetaan, vaihtelee ] riippuen monista tekijöistä, esim. tietty eläin, sen ikä ja j
sukupuoli, haluttu vaikutus, antoreitti ja mitä polypepti- I
15 dia tai poTypeptidien yhdistelmää käytetään. Kaikissa tapa- j uksissa käytetään kuitenkin annosta, joka tehokkaasti edis- ] tää kasvuhorraonitason vapautumista ja nousua vastaanottavan j eläimen veressä. Tavallisesti tämä annostaso on välillä -| noin 0,1 ug - 10 mg polypeptidin kokonaismääränä painokiloa j 20 kohti. Ammattimies voi määrittää helposti kokeellisesti |
edullisen määrän tämän paljastuksen perusteella. J
Kun käytetään kasvuhormonia vapauttavien peptidien | yhdistelmiä, voidaan käyttää alhaisempia määriä tässä ku- j vattua peptidiä. j 25 Kun esimerkiksi yhdistetään tässä kuvattu peptidi j esimerkiksi US-patentin nro 4 880 788 ryhmän I synergisti- :]
sen yhdisteen kanssa, kuten GHRH, edullinen alue on noin I
0,1 pg - noin 5 pg tässä kuvattua yhdistettä painokiloa \ kohti ja noin 0,5 pg ·- noin 15,0 pg synergististä yhdistet- j
30 ta (esim. GHRH) ja edullisemmin noin 0,1 pg - noin 3 pg tätä yhdistettä noin 1,0 pg:n - noin 3 pg:n kanssa synergia- I
tistä yhdistettä painokiloa kohti. 1
Kun antotapa on suun kautta antaminen, tarvitaan j tyypillisesti suurempia määriä. Esimerkiksi ihmisillä suun j 35 kautta antamista varten annostaso on tyypillisesti noin j
30 pg - noin 1 200 pg polypeptidiä painokiloa kohti, edul- I
5 !
: I
17 lisemmin noin 70 pg - noin 600 pg polypeptidiä painokiloa kohti, vielä edullisemmin noin 200 μ g - noin 600 pg poly-peptidin kokonaismääränä painokiloa kohti. Lehmät ja siat tarvitsevat noin saman annostason kuin ihmiset, kun taas 5 rotat tarvitsevat tyypillisesti korkeampia annostasoja. Tarkka taso voidaan päätellä helposti kokeellisesti tämän pal-j astuksen nojalla.
Kuten edellä on sanottu, yleensä kasvuhormonia vapauttavien peptidien yhdistelmien antaminen mahdollistaa 10 sen, että käytetään alempia annoksia yksilöllisiä kasvuhor monia vapauttavia yhdisteitä suhteessa niihin annos-tasoihin, joita vaadittaisiin yksittäisten kasvuhormonia vapauttavien. yhdisteiden tapauksessa, jotta saataisiin aikaan samanlainen vaste, mikä johtuu yhdistelmän synergistisestä 15 vaikutuksesta.
Tässä keksinnössä kuvataan myös koostumukset, jotka sisältävät vaikuttavana aineenaan edellä kuvattujen poly-pepiidien ja niiden yhdistelmien Orgaanisia ja epäorgaanisia additiosuoloja, mahdollisesti liittyneenä kantajaan, lai-20 mennusaineeseen, ainetta hitaasti vapauttävaän matriisiin | täi päällysteeseen.
Kasvuhormonia vapauttavien yhdisteiden tai näiden | yhdistelmien, joiden ajatellaan kuuluvan tämän keksinnön | suojapiiriin, orgaanisiin tai epäorgaanisiin additiosuoloi- | 25 hin kuuluvat sellaisten orgaanisten osien suolat kuten ase- |
taatti, trifluoriasetäatti, oksalaatti, valeraatti, oleaat- I
ti, lauraatti, bentsoaatti, laktaatti, tosylaatti, sitraat- I
ti, maleaatti, fumaraatti, sukkinaatti, tartaraatti, nafta-laatti ja vastaavat, ja sellaisten epäorgaanisten osien 30 suolat kuten ryhmän I (se on: alkalimetailisuolat), ryhmän j
II (se on: maa-alkalimetallisuolat), ammonium- ja prota- I
miinisuolat, sinkki, rauta ja vastaavat sellaisten vastaio-· ] nien kanssa kuten kloridi, bromidi, sulfaatti, fosfaatti ja vastaavat, samoin kuin orgaanisten osien suolat joihin 35 edellä viitataan.
Keksintöä havainnollistavat lisäksi seuraavat, ei-
J
18 raj oittavat esimerkit.
Esimerkki 1
Kasvuhormonia vapauttavien peptidien synteesi
Parametyyliben t s hydryy1iamiin i hydrok1ori di f pMe-5 BHS*HC1) -hartsi sijoitetaan reaktioastiaan kaupallisesti saatavilla olevassa automatisoidussa peptidisyritetisaattoris-sa. Hartsi substituoidaan vapaalla amiinilla aina subs-tituutioasteeseen 5 mmol/g. Yhdisteet valmistetaan liittämällä yhteen yksittäisiä aminohappoja peptidisekvenssin kar-10 boksipäästä alkaen, siten että käytetään soveliasta akti voivaa ainetta, kuten N,Nr-disyklQheksyylikarbödi-imidi (DCC). Yksittäisten aminohappojen alfa-amiini suojataan esimerkiksi t-butyylioksikarbon.yylijohdannaisena (t-Boc) ja reaktiivisen puolen ketjun funktionaaliset ryhmät suojataan 15 kuten taulukossa 1 pääpiirteittäin esitetään. j
Taulukko 1
Sivuketjun suojaryhmät, jotka ovat soveliaita kiinteän faasin peptidisynteesissä i Ärginiini: N9-tosyyli 20 Äsparagiinihappo: O-bentsyyli
Kysteiini: S-para-metyylibentsyyli
Glutamiinihappo: O-bentsyyli f
Histidiini: Nim-to5yyli |
Lysiini: Me-2,4-diklooribentsyylioksikarbonyyli 25 Metioniini: S-sulfoksidi 1
Seriini: O-bentsyyli !
Treoniini: O-bentsyyli -j
Tryptofaani: Nln-formyyli
Tyrosiini: 0-2,6-diklöoribentsyyli | 30 Ennen ensimmäisen aminohapon inkorporastiota hart- | siä ravistellaan kolme kertaa (noin yksi minuutti kerral- j laa n) di kloorimetaanin kanssa (CH2CI2, noin 10 ml/'hartsi” \ gramma), neutraloidaan ravistelemalla kolmasti (noin kaksi j minuuttia kerrallaan) dlkioprimetaanissa olevan NfN-di-isö- : | 35 propyylietyyliamiinin (DIEÄ) kanssa (10:90, noin ID mi/hart- 1 sigrammaj ja ravistellaan kolmasti (noin yksi minuutti ker- 19 rallaan) dikloorimetaanin kanssa (noin 10 ml/ hartsigrämmä) . Ensimmäinen aminohappo ja kukin seuraavista aminohapoista liitetään hartsiin käyttäen esimupdostettua symmetristä anhydridiä, niin että käytetään soveliaalla tavalla 5 suojatun aminohapon hartsin reäktiokapasiteetin noin 6,0-ker-taista .kokonaismäärää ja DIC:n .hartsin sitomiskapäsiteetin noin 2,0-kertäista kokonaismäärää soveliaassa määrässä di-kloorimetaania. Sellaisille aminohapoille, jotka ovat huo-noliukoisia dikloorimetaanissa:, lisätään N, N-dimetyyliforma-10 midia (DMF) homogeenisen liuoksen aikaansaamiseksi. Yleensä symmetrinen anhydridi valmistetaan jopa 30 minuuttia ennen kuin se pannaan reaktioastiaan huoneehlämpötilassa tai sitä -j alemmassa lämpötilassa. Symmetrisen anhydridin valmistulcses- | sa muodostuva disykloheksyyliurea poistetaan suodattamalla j 15 liuos omalla painollaan reaktioastiaan. Aminohapon hartsiin \ liittämisen edistymistä seurataan yleensä väritestillä käyt- | tämällä sellaista reagenssia kuten ninhydriini (joka reagoi | \ primääristen ja sekundääristen amiinien kanssa). Sen jäi- | keen kun suojattu aminohappo on liitetty täydellisesti | 20 hartsiin (> 99 S')> alfa-aminon suojaryhmä poistetaan kasit- | telemällä happamalla reagenssilla (happamilla reagensseil- 1 la)« Yleisesti käytetty reagenssi koostuu trifluorietikka- 1 hapon (TFA) liuoksesta dikloorimetaanissa (33:66) . s s
Sen jälkeen kun haluttu aminohapposekvenssi on saa- \ 25 tu valmiiksi, haluttu peptidi voidaan lohkaista irti hart- j sikantajasta käsittelemällä sellaisella reagenssilla kuten f fluorivety (KF), joka ei pelkästään lohkaise peptidiä hart- j sista vaan lohkaisee irti useimmin käytetyt sivuketjun suo- j jarynmät. Kun käytetään BHA- tai p-Me-BHA-hartsia, HF-kä- j 30 sittely tuottaa suoraan vapaat peptidiamidit. Kun käytetään aminohappo-Merrifield-hartsia, vapaat peptidialkyyliamidit lohkaistaan irti käsittelemällä soveliaalla amiinilla (tässä tapauksessa Boc-Ne-FMÖG-Lys:n käyttö tekisi mahdolliseksi FMOC-.ryhmän sarnanaikaisen poistamisen) .
35 Täydellinen menetelmä, jolla kukin yksittäinen aminohappotähde voidaan inkorporoida hartsiin, esitetään pää- | 20 piirteittäin taulukossa 2,
Taulukko 2
Menetelmä, jolla yksittäiset aminohapot voidaan in-korporoida hartsiin 5 Reagenssi Ravistelut
Aika/Ravistelu 1. Dikloorimetaani 3 1 mill 2. TTA-dikloorimetaani 1 2 min (33:66} 10; 3. TFA-dikloorimetaani 1 20 min (33:66) 4. Dikloorimetaani 3 1 min 5. DIEA, DMF 2 2 min (10:90) 15 6. Dikloorimetaani 3 1 min 7. Boc-aminohappo/DIC 1 15-120 min* 8. Dikloorimetaani 3 1 min 10, Tarkkaile liittämis- reaktion edistymistä*’' 20 11. Toista vaiheet 1-12 kullekin yksittäiselle aminohapolle
Liittämisaika riippuu yksittäisestä aminohaposta. Liittymisastetta voidaan yleensä seurata väri-25 testillä. Jos liittyminen on epätäydellistä, sama aminohap- ] po voidaan liittää uudelleen eri menetelmäin, esim. HOBt- f aktiivisella esterillä. Jos liittyminen on mennyt loppuun, ;j voidaan sitten liittää seuraava aminohappo. :j
Tätä menetelmää käyttäen valmistettiin yhdisteet, J
30 jotka on kuvattu taulukoissa 3, 4, 5 ja 6. j
Esimerkki 2 j GH:n vapautuminen rotissa in vivo j
Hankittiin kypsymättömiä Sprague-Dawley-naarasrot- j tia (Charles River Laboratories, Wilmington, MA). Saapumi- j 35 sen jälkeen niitä pidettiin 25 °C:n lämpötilassa 14:10 tunnin valo:pimeys-jaksolla. Vettä ja Purina-rotanrehua oli 21 saatavilla mielin määrin. Poikaset pidettiin emojensa luona 21 päivän: vanhoiksi.
Käksikymmentäkuusi päivää vanhoja: rottia, kuusi rottaa per käsittelyryhmä, nukutettiin: vatsaontelon sisäi-5 sesti pentobarbitaalilla (50 mg/kg) 20 minuuttia ennen i.V.-käsittelyä peptidillä·. Normaali suolaliuos, joka oli 0:.,.1-prosenttinen liivatteen suhteen, oli vehikkeli peptidien laskimonsisäisille (i.v.) injektioille. Nukutetut rotat, jotka painoivat 55 - 65 grammaa, injektoitiin i.v. taulu-10 kossa 3 osoitetulla määrällä kasvuhormonia vapauttavia yhdisteitä. Injektio tehtiin 0,1 mi:n liuoksena kaulalaski- j moon, j
Kaikki eläimet uhrattiin giljotiinilla 10 minuuttia ! viimeisen testi-injektion jälkeen (katso taulukko 3). Pään 15 irrottamisen jälkeen kerättiin vartaiosta tulevaa verta veren GH-tasojen määrittämiseksi. Sen jälkeen kun veren oli annettu hyytyä, se sentrifugoitiin ja seerumi erotettiin hyytymästä. Seerumi pidettiin pakastettuna siihen päivään saakka, jolloin kerättiin näyte: radioimmunologiseen määri-20 tykseen :(RIA) kasvuhormonitasöjen määritystä varten: seuraa- | van menetelmän mukaisesti, jonka kehitti National Institute f of Arthritis, Diabetes and Digestive and Kidney Diseases |
( N I A DDK ) , J
Reagenssit lisätään yleensä RIA-analyysiputkiin yh- | 25 della Istumalla jääkaappilämpötilassa ( + 4 °C) seuraavassa | järj es tykses s ä: | jij a) puskuri, ::] b) "kylmä" (se on: ei-radioaktiivinen) standardi :;| tai tuntematon analysoitava s:eeruminäyte:, ij 30 c) radiojodeerattu kasvuhormoniantigeeni, ja j d) kasvuhormonia vastaan suunnattu antiseerumi. j
Reagenssin lisäys suoritetaan yleensä niin, että saadaan aikaan lopullinen RIÄ-putken laimennos noin j 1:30 000 (antiseerumin suhde nesteen kokonaistilavuuteen, 35 tilavuus/tilavuus)
Sekoitettuja reagensseja inkuboidaan sitten tyypil- ! | s.
22 lisesti huoneenlämpötilassa (noin 25 °Cj noin 24 tuntia ennen toisen vasta-aineen lisäystä (esim. apinan gammaglobuliinia vastaan suunnattu vuohen tai kanin antiseerumi) joka sitoutuu kasvuhormonia vastaan suunnattuun, korripieksoitu-5 neeseen antiseerumiin ja aiheuttaa sen suostumisen, R.IA-putkien saostuneet sisällöt analysoidaan sitten silmälläpitäen laskentatapahtumien lukumääriä tietyssä aikajaksossa gammatuikelaskurissa.. Valmistetaan standardikäyrä piirtämällä kuvaajaan radioaktiivisten laskentatapahtumien luku-10 määrä kasvuhormoni (GM) -tason funktiona;. Tuntemattomien j GH-tasot määritetään sitten standardi käyrän referenssinä. j
Seerumin GH mitattiin BIAilla reagensseilla, jotka j saätiin National Hormone and Mtuitary Program, -ohjelmalta. \
Taulukossa 3: olevat seerumitasot mitataan yksikössä ( 15 ng/ml lähtien rotan GH:n standardiarvosta 0,61 kansainvä- j lista ykslfcköä/mg (lö/mg). Tulokset mitataan keskiarvona \ +7- keskiarvon keskivirhe (SEM). Tilastollinen analyysi \ suoritettiin Studentin t-testillä. Taulukossa 3 esitetyt tulokset ovat keskiarvoja kuudella rotalla tehdyistä tutki- { 20 muksista. j
Taulukko 3
In vivo GH-vapautuminen, jonka kasvuhormonia vapa- | uitavat yhdisteet saivat aikaan pentöbarbitaatilia nukute- j tuissa rotissa, ]
25 {Eläimet uhrattiin 10 minuuttia viimeisen injektion jäi- I
; |
keen) ; I
Sarake A Kokonais- Kontrolli- Vapautunut GH j GH:ta vapaat- annos9 seerumi Seerumin GH ng/ml j 30 tava peptidi (pg/iv) GH ng/ml + SEM (N=6) j + SEM (N=6) | ! | j 23
Ala-His-D/JNal~ o,L 337 + 51 610 ± 90
Ala-Trp-DPhe-Lys-NH2b 0,3 337 + 51 1140 + 18? 1.0 337 + 51 2909 ± 257 3.0 337 + 51 3686 + 436
His DTrp-Ala-Trp- ο/ϊ 131 + A3 560 + 148 DPhe-Lys-NH2b 0,3 131 ± 43 751 ± 88 1.0 131 ± 43 1790 + 252 3.0 131 + 43 2481 + 209 DA la-D0Na1-Ala- ÖJl 337 + 51 1381 ±222 ~
Trp-DPhe-Lys-NH2 0,3 33? ± 51 2831 + 304 1.0 337 + 51 2886 + 179 3.0 337 + 51 3678 + 287
Ala-DONal .-Ala» ;
Trp-DPhe*Lys-HHj 0,3 167 + 46 363 + 73 1.0 167+46 1450 + 294 3.0 167 + 46 2072 ± 208 10,0 167 ± 46 2698 + 369 DAla-LONal-Ala- \
Trp-DPhe-Lys-NH, 0,1 263 + 45 1 0,3 160 + 151 315 + 85 1.0 160+151 426+ 41 j ä ] 24 DAla-DTrp-Ala-Trp- DPhs-Lys-KHj 0,1 111 ± 24 526 + 86 0,3 111 ± 24 1608 + 204 1.0 111 £ 24 2820 + 346 3.0 111 + 24 2437 + 214
Ala-D0Nal-Aia-
RtieTrp-DPhe·Lys»'NHj 0,1 167 ± 46 144 + 20 0,3 167 ± 46 258 + 28 1.0 167 + 46 261 + 24 3.0 167 ± 46 277 ± 85 D-Leu-DjSNal- ” ™ " ~~
Ala-Trp-DPhe-Lys-RH2 0,1 160 + 51 256 + 94 0,3 160 + 51 452 + 49 L?0 160+51 355 + 94 D-Trp-D^Nal-Ala-
Trp-DPhe-Lys-NH2 0,1 160+51 226+ 61 0,3 160 + 51 245 + 27 1,0 160 + 51 437 + 62
Trp-DPhe-Lys-NH2b 0,3 160 + 51 1418 + 302 j 1.0 160 + 51 2201 + 269 j \
His-DTrp-Ala-Trp j DPhe-Lys-NH2b 0,1 140 + 10 200 + 40 | 0,3 140 + 10 505 + 50 | 1.0 140 + 10 1640 ± 215 f DAsn-DiJNal-Aia- |
Trp-DPhe-Lys-BH- 0,1 228 + 23 122 + 38 I
0,3 228 ± 23 195 + 21 \ lf0 228 + 23 197 + 47 j j DHls-D^Nai-Ala- ]
Trp-DPhe-Lys-NH-j 0,1 228 + 23 386 ± 81 1 0^3 228 ± 23 605 + 82 j 1.0 228 ± 23 930 ± 96 | j .] j 25 DLys-D/?Nal-Ala-
Trp-DPhe-Lvs-NH2 0,1 228 ± 23 262 + 31 0,3 228 + 23 360 + 86 1.0 228 + 23 335 ± 56 DSet-DjSNai-Ala-
Trp-DPhe-Lys-NH2 Or 1 228 + 23 226 + 11 0,3 228 + 23 171 ± 68 1.0 228 + 23 212 ± 63
Ala-His-D0Nal-Alg-
Trp-DPhe-Lys-NH2b 0,3 228 + 23 1766 + 318 1.0 228 + 23 2610 ± 176 G1 y - D/3N a 1 -Al a -Tr p- DPhe-Lys-NH2 A3 ISO + 36 1237 + 269 1.0 160 + 36 2325+ 66 j 3.0 160 + 36 2696 + 370
10 f0 160 + 36 3656 + 159 I
Ser-D0Nai-Ala" ~ )
Trp-DPhe-Lys-NH2 0,3 160 + 36 227 + 39 ] 1.0 160 + 36 595 + 112 1 3.0 160 + 36 1303 + 281 \ 10.0 160 + 36 2919 ± 320 fiec-D^Nal-Ala- f
Trp-DPhe-Aye-BH, 0r3 160 + 36 181 + 68 1 1.0 160 + 36 226 ± 58 j 3.0 160+36 316+ 66 1 10.0 160 + 36 1010 + 236 \
Ala-His-D^Ral-Ala- :j
Trp-DPhe-Lys-HH2b 0,1 160 ± 36 822 ± 263 I
0,3 160+36 1596+292 | 1.0 160 ± 36 2180 + 286 |
J
......-.......... ....... ^
Gln-D^Nal-Ala-Trp- j DPhe-Lys-NH2 0,3 131 + 63 126 + 15 | 1.0 131 + 63 360 + 66 \ 3.0 131 + 63 676 + 109 1 10.0 131 + 63 673 + 228 | _ . _ .. . . --. , ...... \ "" “_r'r .......:: ' ' .........} \ ] j 2 6
Pro-D^Nal-Ala-Trp- DPhe-Lys-NH2 0,3 135 ± 32 264 ± 31 1.0 135 ± 32 513 ± 123 3.0 135 ± 32 1690 + 103 G ly - DjSNal - Al a- Trp - ' ” DPhe-Lys-NH2 0,3 215 ± 33 1301 + 260 1.0 215 ± 33 2211 ± 146 3.0 215 ± 33 2364 ± 365 N, alfa,asetyyli-Gly-D^Nal-Ala-Trp-DPhe-
Lys-NH2 0,3 262 + S3* 268 ± 21* 1.0 262 ± 53 599 + 219* 3.0 262 ± 53 626 + 210*
Sar-D^Nal-Ala-Trp- DPhe*Lys-NH2 0,3 262 + 53* 908 + 264* 1(0 262 t 53* 1681 ± 262* 3.0 262 + 53 2600 ± 316* D/3tial -Ala * Trp-DPhe-
Lys-NK2 0,3 215 ± 33 436 ± 98 1.0 215 ± 33 660 + 151 ] 3.0 215 + 33 776 ± 274 | N~alfa-asetyyli“D-beta--Nal~AIa- |
Trp-DPhe-Lys-NH2 0,3 262 ± 53* 339 ± 17* j 1.0 262 + 53 430 ± 136 ί
3.0 262 + 53* 634 + 118* I
N-alfa-isopiropyyli-D-beta-Mal-Ala- ;j
Irp-DPhe-Lys*NHfl 0,3 262 + 53* 541 + 179* 1 2 l[o 262 ± 53* 972 ± 247* ] 3.0 262 ± 53* 1636 + 371* j
J
N-alfa-<3ietyyli~D~beta-Nal-Ala- |
Trp-DPhe-Lys-NH2 0,3 127 + 32t 462 + 132. j 1.0 127 + 32Λ B99 ± 160 j 3.0 127+32* 1786 ± 373* | ~—--——-— -———— 1 $ -¾ j j 27 N-alfa-etyyli-D-beta-Nal-Ala-
Trp-DPhe-Lys-NH2 0,3 133 ± 32 531 + 80 1.0 135 + 32 1156 + 250 3.0 135 + 32 2664 + 225
Gly-D^Nal-Ala-Trp- DPhe-Lys-NH2 0,3 135 ± 32 1387 ± 352 1.0 135 + 32 1958 ± 353 3.0 135 + 32 2605 ± 97 $Ala-D/3Nal-Aia-Trp- DPhe-Lys-KHj 0,3 135 + 32 1937 + 343 1.0 135 + 32 3603 + 645 3.0 135 + 32 4000 ± 500
Ava^" - D/9Nal - Ala -
Trp-DPhe-Lys*NH2 0,3 135 + 32 2469 + 185 1.0 135 + 32 4034 + 680 3.0 135 + 32 3142 ± 392
Ala-D0Nal-Ala-Trp- | DPhe-NHCH2CH2NH2 0,3 208+148' 211+ 27 ! 1.0 208 + 148* 468 + 127* j 3.0 208 ± 148* 877 + 325* 30.0 208 + 148* 2325 + 477* | $ 5
Ala - DjSNal -Ala~Trp-DPhe» " ~~~ ~~™ \ NHCH,CH,CH0CH,CHnNH, L ^ 1 0,3 208 + 148t 284 + 132 ] 1.0 208 ± 148* 527 ± 166* | 3.0 208 + 148* 816 + 289* 1 30jΟ 208 ± 148* 3650 + 772* | ;3 D-Ala - D0Nal-Ala-Trp - DPhe - | NHCHnCH?CH,CH?CH?NH? | 0,3 Hi + 24 180 ± 37 | 10 111 ± 24 686 ± 135 j 3.0 111 ± 24 1490 ± 179 \ 10.0 111 + 24 2248 + 70 j ........... ....... ...... - - .......—............ ............... ' .....-..... .......... ] } 3 \ 3 ] 28
Ala-D0Na1Ά L a - Trp· DPhe-GMe 0,3 208 + 1*8* 211 ± 68* 1.0 208 + 168* 157 ± 35* 3.0 208 + 168* 692 + 147 30t0 2QS + 148* 554 + 127* D-Ala-DTrp-Ala* T rp * D Phe- Ly s -ΝΉ 2 0,1 m + 26 526 + 86 0,3 lii + 26 1608 + 206 1.0 111+ 26 2820+366 3.0 111+26 2637+216
Aib-D0Nal - Ala - Tr;JJ:·''' ~ “ 1 DFhe-Lys~NH2 0;1 208 + 168* 26* + 58* 0,3 208 + 148* 331 + 108* [ 1.0 208 + 148* 368 + 133 j 3.0 208 + 168* 1090 + 176* | D -Ala- OjSN ai ^ A1 a · t rp - D Ph® * ~~ ' ~ 1
Lys(iPr)-NH2 0,1 215 + 49 608 + 115 0,3 215 + 49 1753 + 419 1.0 215 + 49 1817 + 297 3.0 215 + 49 2336 + 196 | *;) Liuotettu DMSO:hön, | **) Liuotettu aminovaleriaanatiappoori (Ava) j a} Näin merkityt annokset annettiin 29 päivää vanhoil- | 5 ie naaraspuolisille rotille
b) Kontrolli - GHRP:t I
Taulukossa 3 keksinnön mukaisia yhdisteitä verra- I
taan yhdisteisiin, jotka eivät ole tämän yleisen kaavani mu- 1 kaisia, ja niiden osoitetaan edistävän ylivertaisesti kas-10 vuhormonitasojen vapautumista ja nousua sellaisten rottien veressä, joille sellaisia yhdisteitä pn annettu. Edullisten j yhdisteiden yllättävät kasvuhormonia vapauttavat aktiivi- j
suudet ovat varsin arvokkaita, koska lyhyempiketjuisen, no- I
lekyyllpainoltaan pienemmän polypeptidin, jossa on sulit eel- | 15 linen stabiili ja halpa aminohappo D-alaniini aminopäässä j ja pentaanidiamiini Lys:n paikalla C—päässä·, pitäisi osoit- \ taut.ua olevan kustannuksiltaan alhainen keino lisätä kasvu- j .s j 29 hormonitasoja eläimissä.
Esimerkki 3 - GH: n vapautuminen rotissa in vivo suun kautta tapahtuvan antamisen jälkeen
Esimerkin 2 menettely toistettiin, paitsi että ro-5 tille annettiin ilmaistut yhdisteannokset mahansisäisillä putkilla. Annetut yhdisteet, käytetyt ännostäsot ja tulök-set esitetään taulukossa 4.
Taulukko 4
In vivo GH-vapaatominen, jota kasvuhormonia vapaut-10 tavat yhdisteet edistivät pentobarbitaatilla nukutetuissa rotissa.
{Rotat uhrattu eri aikoina peptidin mahansisäisen antamisen jälkeen)
Sarake A Kokonais- Seerumin Seerumin 15 GH:ta vapaut- annos GH ng/ml GH ng/mi tava peptidi (mg/kg) ± SEM (N=6) ± sEM (N=6) vikapisteessä (15') (20’) 20 (30 *) |
Alä-His«D0Nal-Ala- ]
Trp*DPhe*Lys-NH2a 10 247 ± 32 786 ± 244 1 30 247 + 32 1914 + 294 1 DAla-D^Näl-Ala- t
Trp-OPhe-Lys^Hj 10* 247 * 32 116 + 298 i| 30** 247 + 32 2038 + 446 ij | j 30
Ava-D/3Nal-Ala-
Trp-DPhe-tys-NH2 30 322+145* 2135+586*
Gly - DjSHa 1 * A l a -
Trp-DPhe-Lys-NHj 30 267 + 32 1072 + 137
His-DTrp-Ala-
Ttp-PPhs-Lys-NHg3 30 247 + 32 1810 + 437
Ala-His-D0Nal-Ala-
Trp-DPhe-Lys«NH2a 10 1?S + 49(15':) 1621 + 363 147+30(20} 1605+621(20') 133 + 18(30’) 752 + 81 (30') DAla - 0/@Nal - Ala *
Trp-DFhe-lys-t5H2 10 196 + 49(15') 706 + 133 (15') 147 + 30(20') 1062 ± 254 (20')
Gly-D0Nal-Ala- t rp - D Ph e - Ly s - NH 5 10 196 + 49(1.5;') 957 ± 188 (15·) 11 167 + 30(20') 1685 + 526 (20«) HIs-DTrp-Ala-
Trp-DPhe-Lysa 10 196 + 69(15') 1131 ± 189 (15'} 147 + 30(20') 686 + 169 (20') SAla - DjSNal - Ala
Trp-DPhe-Lys-NH-> 10 196 + 49(15') 1202 + 429 (15') * 147 + 30(20') 1217 + 239 (20-)
Ava-D#Na1-Ala-
Trp-DPhe-Lys-NH, 10 196 + 69(15' } 1407 + 204 (15' > 147 + 30(20') 1251 + 351 (20') *) Suspensio (kevyt* tai raskas**) etikkahappo lisätty a) Kontroliipeptidit GH:ta vapauttava aktiivisuus säilyy tämän keksinnön 5 mukaisilla yhdisteillä hyödyllisillä tasoilla sen jälkeen kun ne on annettu rotille suun kautta. Tämä on arvokasta, koska tämä antomenetelmä lisää peptidien terapeuttista hyödyllisyyttä. j
Esimerkki 4 - GH:n vapautuminen rotissa in vivo 10 Esimerkin 2 menettely toistettiin. Annetut yhdis- \ } teet, käytetyt annostasot ja tulokset esitetään taulukoissa 5 ja 6. j
Taulukko S I
|
In vivo GH-vapäutuitiio.en:, jota kasvuhormonia vapaut- j
15 tavat synteettiset peptidit edistivät pentobarbitaätilla I
nukutetuissa rotissa. j (Eläimet uhrattiin 10 minuuttia viimeisen injektion jälkeen) j 31
Kontrolli-
Sarake A Kokonais- seerumin Vapautunut GH
GH:ta vap.aut- annos GH ng/ml Seerumin GH ng/ml tava peptidi (pg/iv) ± SEM (N=6) ± SEM (K=6) 'DAla-D/SKal- 0,30 216 + 27 340 + 38
Ala«Trp-DPhe-NH2 1,00 216 + 27 1205 ± 335 3.00 216 + 27 1703 ± 182 10f00 216 ± 27 2741 + 484 DAla-D£Nal-Ala*Trp* DPhe-Äla-NH, 0,30 216 + 27 611 ± 68 1.00 216 + 27 929 ± 209 3.00 216 + 27 1765 + 320 10.00 216+27 2644+358 g ~ ~
Lys -DAla^D/SNal-Ala-
Trp-DPhe-Lys-NHo 0,10 216 + 27 216 ± 40 0.30 216 ±27 269 + 31 1f 00 216 ± 27 432 ± 143 3.'00 216 + 27 771 + 134 f — DAla-Dj3Nal-Aia- "
Trp-DPhe-NH-Chx-NHj 0,03 216 + 27 517 ± 135 1 0,10 216 ± 27 1078 + 174 1 0,30 216 + 27 1831 + 436 | 1.00 216 ± 27 3120 + 761 j DAla-D/9Nal-Ala- :
Trp-DAla-Lys-NH, 0,10 187 ± 36 220 + 34 0,30 187 ± 36 167 + 48 j i 00 187 + 36 339 + 61 | 3.00 18? + 36 778 + 174 1 10.00 187 ± 36 1676 ± 470 f 30.00 187 + 36 1791 ± 384 j - ..... |
Ij | § \ li 32 DAla-D%al-Ala- 0,03 153 + 27 409 + 97
Tr ρ-DPhe- Lys.HH 2 0,10 153 + 27 1469 + 152 0,30 153 ± 27 2322 ± 265 1.00 153 + 27 2765 ± 352 DAla - DySNal - Ala -Trp*DPhe-Ala- NH(CH2)5NH2 0,03 177 ± 45 542 ± 98 0,10 177 ± 45 932 + 84 0,30 177 ± 45 1121 + 212 1.00 177 ± 45 2599 + 144 ΝαIMA- DjSNa 1 - Al a -
Trp-DPhe-LysNH2 0,03 192 ± 41 696 + 108 0.10 192 ± 41 1049 + 198 0,30 192 + 41 2567 ± 419 1.00 192 ± 41 2001 + 341 DAla - D/SNa 1 - Ala - Trp - ” —- DPhe-NH-Chx-NH2 0,10 192 + 41 846 ± 105 0,30 192 + 41 1886 + 493 1.00 192 + 41 2209 + 187 3.00 192 ± 41 3359 ± 433 DAla-Tcc-Ala-Trp- DPhe -Lys-NH2 0,30 93 + 22 149 + 20 3.00 93 + 22 142 + 35 DAla-Gly-Gly-Trp-DPhe-
Lys-NH2 0,30 93 + 22 107 + 14 3.00 93 ± 22 89 + 15 DAla-D^Nal-Ala-
Trp-DPhe-Lys-NHn 0,03 93 ± 22 230 ± 23 ! 0,10 93+22 1006 ± 204 0,30 93 + 22 2110 + 260 00 93 + 22 1825 ± 328 \ ::1 j 33 DAla-D/3Nal-Ala-Trp- DTic-Lys-NHj 0,03 93 + 22 141 + 26 0,10' 93 ± 22 156 ± 62 0,30 93 + 22 124 + 31 1,00 93 + 22 151 + 24 DAla-D/9Nal -Ala*
Trp-DPhe-Lys-OH 0,10 93 ± 22 558 + 162 0,30 93 ± 22 1730 + 306 DAla-DjSNal-Aia-
Tcc-DPhe-Lys-NH^ 3,00 145 + 17 537 + 43 10.00 145 + 17 746 + 92
DjSNal-Gly-Gly-Trp- DPhe-Lys-NH, 3,00 145 + 17 417 + 37 10.00 145 + 17 397 + 114 DAla-D/SNal-Ala-Trp- DPal - Lys -NH-, 0,.10 145 + 17 365 + 42 Ä 0,30 145 + 17 584 + 148 DA 1 a - D/9N a 1 - A1 a - Trp - " ~ ’ j DPal-lys-OH 0,10 145+17 928+184 0,30 145 + 17 1782 + 241 3Ma - His - DjSNal - Ala »Trp* ~~ DPhe-Lys-NH, 0,03 87 + 11 122 + 11 0,10 87 + 11 185 + 27 \ 0,30 87 + 11 101 + 12 0,10 87 ± 11 112 ± 13 | 3He-His-D0Nal-Ala-Trp* i
DPhe-Lvs-NH2 0,03 87 + 11 134 + 28 I
0,10 87 + 11 159 + 30 j 0,30 87 + 11 78+19 | 1.00 87 + 11 134 + 27 ) tip-Aia-DjONal-Ala-Trp- 1 DPhe-Lys-NH, 0,10 87 ± 11 168 ± 27 ] 0,30 87 + 11 167 + 28 ' j 1.00 87 + 11 152 + 74 j 3.00 87 ± 11 272 + 63 j ύ 34 DAla-D^Nal-Ala-Trp- DPhe*Lys-NH2 0,03 247 ± 53 870 + 136 0,10 247 ± 53 1440 + 267 0,30 247 + 53 2420 + 456 1.00 247 ± 53 2855 ± 347 3.00 247 ± 53 3421 + 377 DAla*DTcc-Ala Trp- "™ DPhe-Lys-NH2 0,10 247 ± 53 165 + 26 0,30 247 + 53 183 + 9 1.00 247 + 53 207 + 38 3.00 247 + 53 153 ± 22 10.00 247 + 53 269 ± 47
Ava-Trp-DTrp-Lys-NH2 0,10 247 + 53 153+ 3(Γ 0,30 247 + 53 144 +- 14 1.00 247 .+ 53 11.7 + 9 3.00 247 + 53 205 ± 59 10.00 247 + 53 214 + 48 DA'la-D#Nal-Ala-Trp * DPal-Lys-NH2 0,03 228 + 48 203 + 20 0,10 228 ± 48 772 + 142 0,30 228 + 48 979 ± 182 1.00 228+48 1691+139 3.00 228 + 48 3249 ± 526
Tyr- DAla-D^tial - Ala-Trp- DPhe-Lys-NH, 0,03 228 + 48 164 + 52 0,10 228 + 48 247 + 51 0,30 228 + 48 196 + 39 1.00 228 + 48 329 + 57 3.00 228 + 48 878 + 170
Ala-His-D/SNal-Ala-Trp - DPhe-Lys-NH2 0,10 228 + 48 894 + 112 | 0,30 228 + 48 1128 + 274 j
1..00 228 + 48 1362 + 198 I
* S
DAla-D^Nal-Ala-Trp- | OPhe-Lys-OH 0,03 228 + 48 300 + 82 \ 0,10 228 + 48 585 + 141 ] 0,30 228 + 48 1202 + 236 |
1.00 228 + 48 2610 + 355 I
ä j :¾ 35 DAla -DjSNal -Ala-Trp* NHe-DPhe-Lys-NH2 0,03 167 ± 29 123 + 17 0f10 167 + 29 132 + 30 0,30 167 + 29 232 + 49 l;0O 167 + 29 233 ± 41
His-Trp-Ala-Trp-Phe-
Lys-.NH* 1,00 167 ± 29 125 + 24 3.00 167 ± 29 201 ± 19 10.00 167 +.29 130 + 25 30.00 167 + 29 182+ 36
Ava-DAla-D^Nal*
Ala-Trp-DPhe-Lys-NH2 0,03 167 ±29 209 ± 33 0 10 167 + 29 144 + 42 0*30 167 + .29 185 + 47 1.00 167 + 29 499 ± 110 ^Ala-D^Nal-
Ala-Trp-DPhe-Ly$-NH2 0,03 L67 + 29 489 ± 71 0,10 167 + 29 1112 + 194 1
0,30 167 + 29 1993 ± 259 I
1/00 167 + 29 3061 ± 238
DA la * D/9Na 1 - G ly - Tr p - ~ " " ~ I
DPhe-Lys-NH2 0,10 121 + 14 226 + 26 I
0,30 121 ± 14 170 + 31 \
1.00 121 + 14 414 + 101 J
3.00 121 + 14 713 + 126 |
DA la - D0Nal - G1 y - G ly · ™ ~ I
Trp-DPhe-Lys-NHo 0,10 121 + 14 95 + 15 j 0,30 121 + 14 82+16 | 1.00 121 + 14 177 + 43 1 3.00 121 ± 14 223 + 58 )
Asp-DAla-D/?Nal-Ala- \
Trp-DPhe-Lys*NH2 0,03 121 ± 14 210 ± 53 | 0,10 121 ± 14 322 + 48 1 0,30 121 + 14 557 + 181 j 1.00 III ± 14 821 .+ 173 ' j j
........................····-·-·.·.·.·.·. v.;.J
36 DÄla - DjSNaT-AIa -Trp' - ~ “ ‘ DPhe-NH-Chx-NHj 0,03 121 + 14 335 + 106 0,10 121 ± 14 652 + 129 0,30 121 + 14 1528 + 252 1/00 121 + 14 2410 + 370 DAI a - D/SNa 1 * DA l a - T rp * DPhe-Lys-NHj 0,10 200 + 45 166 + 36 0,30 200 ± 45 19? + 33 1.00 200 + 45 343 + 73 3.00 200 ± 45 531 + 121 DAla-D^SNal-Ala-Ala-
Trp-DPhe-Lys-NH2 0,10 200 + 45 147+21 0,30 200 + 45 184 + 45 1.. 00 200 + 45 206 + 66 3.00 200 +.45 143 + 9 DAla-D8Nal-Ala-Trp- DPhe-NH * Chx- NH* 0.10 200 + 45 1246 + 189 0,30 200 + 45 1616 + 250 1.00 200 + 45 2574 + 467 3.00 200.+ 45 2789 + 130 DAla - aϊ Ά1 a - ” 0 ,03 200 + 45 608 + 140
Trp-DPhe-Lys-NHo 0,30 200 + 45 920 + 225 1 00 200 + 45 1755 ± 291 3.00 200 + 45 2527 + 196 DAia-D/SNal-Ala-Trp-
Pro-Lys-Ntto 0,03 157 + 40 113 + 14 1 00 157 + 40 136 + 40 | 3.00 157 + 40 195 + 35 | 10^00 157 ± 40 226 + 42 | Ί DAla-D$Nal-Ala-Trp- :j DPro-Lys-NH? 0,30 157+40 234 + 36 j 1 00 15? ± 40 358 ± 48 \ 3.00. 157 + 40 576 + 77 j 10,00 157 + 40 1624 + 241 j ξ 5 $ i ! 37 DAla-D#Nal-Ala-Trp- DLeu-Lys-NH2 0;30 157 + 40 202 + 27 1.00 157 ± 40 165:+. 12 3 .,00 157 + 40 307 + 51 10.00 157 ±40 1591 ±568
Ava-DjflNal-Ala-Trp" 0Pbe-Lys-NH2 0,03 15? ± 40 768 + 191 0,10 157 ± 40 1277 + 61 0,30 157 ± 40 1733 + 254 1.00 157 ± 40 2418 + 162
Taulukko 6
In vivo GH-vapautuminen, jota kasvuhormonia vapauttavat synteettiset peptidit edistivät pentobarhitaatilla nu-5 kutetuissa rotissa, (Eläimet uhrattiin. 10 minuuttia yiimeisen injektion jälkeen)
Sarake Ä Kokonais- Kontrolli-- Vapautunut GH
GH:ta vapaut- annos'" seerumi Seerumin GH n g/ml tava peptidi (pg/iv) GH ng/ml + SEM (N=6) 10 ± SEM (N-6) DAla-D^Nal-Ala * 0,03 186· + 34 612 + 84 2rp-DFhe-iLysHH2 0,10 186 ± 34 630 ± 124 0,30 186 + 34 1877 + 195 Ϊ 1.00 186 + 34 3008 ± 417 | DAla-D^Nal- Ala-homo 1
Phe-DPhe * LysKHo 0,03 93 ± 13 214 + 71 j 0,10 93+13 214+ 58 \ 0,30 93 + 13 406+121 \ 1.00 93+13 1189+120 j 38 DAla-D0Nal-Ala -Trp-DPhe-Ala- Ir 3 - diaminopropaqrii 0,03 93 + 13 444 + 60 0,10 93 ± 13 517 ± 109 0,30 93 + 13 2341 + 479 1.00 93 + 13 2468 + 276 DAla-D/?Nal-Ala* Trp- DPhe*LysNH2 0,03 93 ± 13 362 + 64 0,10 93 + 13 800 + 192 0,30 93 £ 13 2674 + 486 1.00 93 ± 13 3658 ± 610 DAla-D/8'Nal- Ala-Trp - DPhe-Ala-1,6, 0,03 85 + 16 395 ± 91 heksyylidiamiini 0,10 85 £ 16 905 + 113 0,30 85 £ 16 735 £ 166 1.00 85 £ 16 2708 + 310 m^DjSHal-Ala-Trp- DPhe-Ala-1.3, 0,03 85 ± 16 566 + 157 dlaminopropaini 0,10 85 £ 16 645 + 167 0,30 85 £ 16 1428 + 271 1.00 85 £ 16 2972 ± 365 DAla-D/JNal-Ala-Trp- DPhe-AxgHHp 0,03 125 ± 12 252 £ 29 0.,10 125 ± 12 645 ± 90 0 30 125 £ 12 1180 ± 318 1.00 125 + 12 2197 + 285
Arg-DAla-D#Nal-Ala-Trp- DPhe-ArgNH, 0,10 125 ± 12 155 ± 43
0. 30 125+12 247+ 70 I
1, QQ 125 £ 12 276 £ 16 | 3 IMA-Djfltlal-Ala.-Trp- 1 DPhe-Ala-1,6 0,03 125+12 332 ± 59 j heksyylidiamiini 0,10 125 + 12 609 + 165 |
0.30 125 ± 12 1139 + 232 I
1.00 125 + 12 1996 + 372 j :| 5 $ ] 39 DAla - D/?Na 1 * Ala - Trp -
LysNH2 0,30 160 + 33 187 ± 44 lf00 160 ± 33 237 ± 18 3.00 160 + 33 198 + 31 10.00 160 + 33 193 + 33 30.00 160 + 33 236 + 23 DAla* D/9Nal r Ala-
TrpNH2 0,30 160 ± 33 115 ± 22 1.00 160 ± 33 107 ± 23 3.00 160 + 33 101 + 13
10.00 160 + 33 199 + 6Q
30.00 160 + 33 232 + 69 DAla-DjSNal- Ala * Trp - DPhe-Ala-NH(CH2)5 ! NH2 0,03 160 ± 33 517 4 89 ! 0,10 160 ± 33 USA + 255 | 0,30 160 + 33 2023 ± 262 ! 1.00 160 ± 33 3661 + 635 DAla-DjSNal-Ala-lrp
Pro * LysNHn 0,30 157 ± 40 113 ±16 \ 1.00 157 + 60 136 + 60 f 3.00 157 + 60 195 + 35 10.00 157 ± 60 226 + 62 f DAla-D^Nal-Ala- =:
Trp-DPro-LysNH, 0,30 157 + 60 2*6 + 36 I
1 00 157 + 60 353 ± 48 1 3.00 157 ± 40 576 + 77 j 10.00 157 + 60 1626 ± 261 | DAla-D0Nal-Ala*Trp- ) DLeu-LysNH, 0,30 157 ± 60 202 ± 27 | 1.00 157 ± 60 16.5 ± 12 1 3.00 157 ± 40 307 ± 51 10.00 157-± 60 1591 + 568 1
" I
Ava-B^Nal-Ala-Trp \ DPhe-LysNHj 0,03 157 + 40- 768 ± 191 | 0,10 157 + 40 1277 ± 61 | 0,30 157 ± 40 1733 ± 254 j 1.00 157 + 40 2418 + 162 j 1 j ! 40 a.^ABU-OjflNal-Ala-
Trp-DPhe - LysfJHj O', 0,3 108 + 20 621 + 85 0,10 108 + 20 1230 + 317 0 f30 108 + 20 2385 + 182 1.00 108 ± 20 3011 ± 380 DAta-D^Nal -Ala-Trp- " ~~ “ DPhs-HisMH^ 0^03 108 + 20 246 + 22 0,10 108 + 20 199 + 34 0,30 108 + 20 370 + 67 1.00 108 + 20 1419 ± 230 pAla-D^Nal-Ala-Phe· DPhe-LysNHj 0,03 108 + 20 366 + 81 0,10 108 ± 20 1011 ± 175 0,30 108 + 20 2361 + 233 :1,0.0 108 + 20 3057 ± 472 DAla * D/SNa l - Ala-Trp * NH-Ghx-NHg 0,10 108 +20 151+35 0t3O 108 + 20 251 + 43 1.00 108 + 20 227 + 55 3.00 108+20 349+ 72 DAla - DiSNal -Ala- Trp- DPhe-OrnNH, 0,03 200 + 33 515 + 92 0,10 200 i 33 787 + 71 0,30 200 + 33 1288 + 365 1.00 200+33 1888+615 DA1a -D^Na1-A1a -T rp- DHis-LysNH, 0,03 200 + 33 287 ± 48 ? 0,10 200 + 33 131 + 37 | 0,30 200 + 33 337 + 78 j 1.00 200 + 33 457 + 124 |
Taulukoista 5 ja 6 käy ilmi, että tämän kaavan mu- | kaiset yhdisteet edistävät kasvuhormonitasojen vapautumista j ja nousua veressä suuremmassa määrin kuin yhdisteet, jotka ]
5 eivät ole kaavan mukaisia. I
J
:3 i 41
Esimerkki 5 GE:n vapautuminen rotissa in vivo
Noudatettiin esimerkin 2 mukaista yleistä menetelmää, paitsi että peptidit injektoitiin ihonalaisesti pikem-5 min kuin laskimonsisäisesti, ja uhrausäika oli +15 minuuttia pikemminkin kuin +10 minuuttia. Annetut yhdisteet, käytetyt annostasot ja tulokset esitetään taulukossa 7.
i i | '3
II
] 5 42
Taulukko 7
Kontrolli-
Sarake A Kokonais- seerumin Vapautunut GH
GH:.ta vapaut- annos GH ng/ml Seerumin GH ng/ml 5 tava peptidi (pg/iv) ± SEM (N=6) ± SEM (N=6) XMA- D/SNa l - Ala * ?he-DFhe-Lys-ttH2 0,03 147 + 21 181 ± 36 0,10 147 + 21 399 + - 40 q3Q 147 ± 21 808 + 187 1.00 147 + 21 2394+475 QTASU· D^Nal-Ala-Phe- DPhe-Lys-NH2 o,03 147 ± 21 192 ± 29 0,10 147 ± 21 288 + 62 0,30 147 + 21 461 + 90 1.00 147 + 21 1441 + 203 XHA-D^Nal-Ala-
Trp-DPhe-Ala-1,5- pencadlamine 0}03 147 +21 475 + 96 0,10 147 + 21 916 ± 169 0,30 147 + 21 1118 + 243 1.00 147 + 21 2660 + 599
His -D/JNal-Ala- Fhe DPhe-Lys-NH, 0,03 217 + 33 317 ± 55 0,10 21? ± 33 348 + 65 0?30 217 ± 33 1283 ± 258 1.00 217 + 33 1374 + 107
Ala-His*D$Nal-Ala-Fhe-DFhe-Lys- NH2 0,03 217 + 33 341 + 35 0,10 217 + 33 516 ± 118 O?30 217 ± 33 1060 ± 151 1.00 217+33 1467 + 208 3 :¾
7ABU- D/9Nal* I
Ala-Fhe-DFha-Lys- | ΝΗτ 0,-03 217 + 33 197 + 31 :| o 10 217 + 33 182 ± 20 ] 0,30 217 + 33- 524 + 116 .} 1'00 217 + 33 1127 + 110 j §
:J
43 DAla-D0Nal-Ala-
Fhe-DPhe-Lys- 0,03 217+33 287+ 62 m2 0,10 217 + 33 1084 + 162 0,30 217 + 33 1982 + 345 1.00 217+33 2887+275 DAia-DPhe-Ala-Phe-0,03 132 + 18 167 + 29 DPhe-Lys-NH, 0.10 132 + 18 499 + 62 oj30 132+18 1132+145 1.00 132 + 18 '2147 + 268 DAla * D/9Na 1 -Ala -
Fbe-OPhe-Lys-NH, 0 03 132 + 18 356 + 77
OfIO 132 + 18 798+132 0,30 112+18 156A + 224 1.00 132 + 18 2272 + 406
Esimerkki 6
Peptidifragroenttien kondensaatioreaktio peptidin muodostamiseksi 5 Yleiset menetelmät
Sulamispisteet voidaan määrittää käyttämällä Thomas Hoover “kapillaarisulami.splstei.aitetta.. Infrapuna (IR) spektrit voidaan, mitata .Perkin-Elmer Model 137 tai Nicolet Model 5DX -spektrofotometrillä ja raportoida aaltolukuina 10 -{piti"·1·) . Massaspaktrit (MS) voidaan hankkia käyttämällä VG
Analytical Ltd.:n Model 2ÄB-1F massaspektrometria EI (elektroni-impakti}, FD (kenttädesorptio) tai FAB (nopea-atomipommitus) -tiloissa. GCMS yöidäan hankkia käyttämällä Finnigan. 4023 GCMS-laitetta, joka on varustettu 30 m DB5-ka-15 pillaaripylväällä (J & W Scientific), käyttäen heliumia
kantajakaasuna. Optiset rotaatiot voidaan mitata käyttämällä Autopol III -polarimetria, jota valmistaa Rudolph Research, I
1H-NMR-spektri voidaan hankkia JEOL GX-400 -NMR- 1 j 20 instrumentilla, joka toimii 400 MHz:n taajuudella, tai JEOL | GX-270 -NMR-instrumentilla, joka toimii 270 MHz:n taajuu- ij della. Nämä instrumentit kykenevät rutiininomaisesti alle j 0,7 Hz: n digitaaliseen resoluutioon. Kemialliset siirtymät j ilmaistaan miljoonasosina suhteessa sisäiseen 3-(trimetyy-25 lisilyyli)-tetradeuteronatriumpropionaattiin (TSP). j 4 4
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (HPLC) voidaan saada aikaan käyttämällä Ritachi-järjestelmää, joka koostuu L-5000-gradientinsäätelijäätä ja 655Ä-pumpusta, joka on kiinnitetty Vydac 201TP1010 tai 218TP1010 semiprepa-5 ratiiviseen pylvääseen. Veden, joka on 0,2-prosenttinen trifiuorietikkahapon suhteen, ja metanolin yhdistelmiä voidaan käyttää eluointiliuottimena. Mielenkiintoiset yhdisteet eluoituvat tyypillisesti virtausnopeudella kuusi ml minuutissa, jolloin gradientti kasvattaa orgaanisen kom-10 ponentin osuutta nopeudella noin 1-2 % minuutissa. Sitten yhdisteet havaitaan soveliailla aallonpituuksilla käyttämällä LKB 2140 -UV~diodirividetektoria. Integroinnit voidaan sitten suorittaa käyttämällä Nelson ..analytical -ohjelmistoa (versio 3.6).
15 Reaktiot suoritetaan inertissä typpi- tai argon- kaasukehässä ellei toisin spesifioida- Vedetön tetrahydro- i furaani (THF, U.V. grade) ja dimetyyliformamidi (DMF) voidaan ostaa Burdick and Jackson -yhtiöitä ja käyttää suoraan pullosta.
20 A. Tr ipeptidif ragmen tin - 2HN-Trp-DPhe-Lys (Boc) -NH2 valmistus l^-bentsyylioksikarbonyyli-N-t-hutoksikarbonyyli}-lysiiniamidi, 4 10 DC:n lämpötilassa olevaan karbonyylidi-imidatso-25 Iin (GDI, 2, 88,24 g, 0,544 mol) ja kuivan tetrahydroFuraanin (THF, 1500 ml) muodostamaan liuokseen lisätään hitaasti Na-bentsyyliaksikarbonyyii-(N ^-t-butoksikarbonyyli)lysiini (1, 180 g, 0,474 mol). Kaasun kehittymistä tarkkaillaan tämän lisäyksen aikana, Samalla kun N 5-bentsyylioksikarbo-30 nyyli-(N ^-t-butoksikarbonyyli)lysiihi-imidätsöli-välituote 3_ on. muodostumassa, lisätään kyllästetty ammoniakin ja THF:n (2000 ml) liuos (vedetön ;NH3-kaasu viedään THF:n läpi ] 5 - 10 °C::n lämpötilassa) . Sen jälkeen kun välituotteen 3 | muodostumisen arvioidaan: olevan lopussa (kun kaasun kehit- | 35 tyminen on loppunut, noin 2 tuntia), puolet 3:n sisaltäväs- ;| tä THF-liuoksesta lisätään ammoniakkiliuokseen 3:n sisäl- jf | 45 tavan liuoksen loppuosa lisätään 30 minuuttia myöhemmin.
Jatkuva ammoniakkikaasun virtaus pidetään yllä koko additi-oiden ajan ja vielä 45 minuuttia sen jälkeen. Kun kaksi 3;n sisältävää liuosta on lisätty, muodostuu valkoinen sakka.
5 Reaktion annetaan lämmetä huoneenlämpötilaan ja sekoittua 15 tuntia. Liuotin poistetaan lietteestä in vacuo. Jäännös lietetään veteen, ja tuloksena oleva kiinteä aine kerätään i mus u o d a t u ks.e 11a, N^-t-butoksikarbonyylilysiiniairtidi, 5 10 Lysliniamidin _4 {181,48 g, 0, 479 mol) liuos me- tanolissa (MeOH, 1000 ml) lisätään katalysaattoriliettee-seen (5-prosenttinen Pd/C (5 g) metanolissa (250 ml) ) argonissa. Vetyä kuplit et a an reaktio seoksen läpi. (noin 15 minuuttia) ja reaktiota sekoitetaan; sitten vetykaasukehän ai- \ 15 la, kunnes HPLC-analyysl osoittaa että reaktio on täydellinen (36 tuntia). Vetykaasukehä syrjäytetään sitten argonilla. Reaktioliuos selkeytetään CeiiteR -kerroksen läpi ja liuotin poistetaan in vacuo, jolloin saadaan kiinteä aine.
N^-benfcsyylioks ikarbonyyli-D-fany1aianyyli-(Nξ -1-2 0 butoksikarbonyyli)lysiiniamidi, 8 N^-bentsyyl io ks i karbonyyli-D-f enylalaniihi (_6, 126,39 g, 0,423 mol) lisätään hitaasti 10 °C:n lämpötilassa olevaan CDI-liuokseen (2, 66,03 g, 0,409 mol) THF:ssä (500 ml) , Kaasun kehittymistä tarkkaillaan addition aika-25 na. Kun kaasun kehittyminen lakkaa, lysiiniamidi _5 (110,75 g, 0,452 mol) lisätään THF-liuoksena (500 ml). Noin 48 tunnin kuluttua seos suodatetaan kiinteiden aineiden poistamiseksi. Suodos konsentroidaan in vacuo. |
Tuloksena oleva jäännös pannaan etyyliasetaattiin | 30 (EtQÄc, 500 ml) ja pestään sitten seuraavasti erotussuppi- | lossa: ]
1. HCl:n vesiliuos (1 N, 3 x 50:0 ml), pesun 1 pH I
noin 8, seuraavien pesujen pH:t 1, | 2. vesi (500 ml), : ] 35 3. Na2C03 (puolikyllästetty, 2 x 500 mi) suodate- j taan muodostuneiden kiteisten kiinteiden aineiden keräämi- ] ; | 46 seksi .(. _8 }, 4. vesi (3 x 500 ml).
Orgaaninen kerros: kuivataan MgSG^cllä. Selkeyttämisen jälkeen liuotin poistetaan in vacuo. Tuloksena oleva 5 jäännös voidaan jälleenkiteyttää kuumasta EtÖÄcistä, jolloin saadaan toinen 8_:n näyte.
D - f eny 1 alanyy 1 i - (N*-t-butoksikarbonyyli)lysiiniamidi, 9.
Ämidin _8 (120, 53 g, 0,229 mol) metanoliliuos 10 (1 500 ml) lisätään katalysaattorilietteeseen (50 g 5-pro senttista Pd/C:tä 200 ml:ssa MeQH:ta), Ärgonkaasukehä syrjäytetään vedyllä.. Kun HPLC-analyysi viittaa siihen, että reaktio on mennyt loppuun (noin 4 tuntia), vetykaasukehä syrjäytetään argonilla. Reaktioliuos selkeytetään sitten 15 Celiie**· -kerroksen läpi ja suodos saatetaan jäännökseksi in vacuo. Tämä dipeptidituote voidaan käyttää suoraan tx.ip.ep-tidin 12 valmistuksessa.
N“-foenfcsyylioksikarbon.yyli-t:ryptofyyli-D-fenyyl±ala-nyyli- {N^-t-butoksikarbonyyli} lysiiniamidi, 12 20 Na-bentsyylioksikarbonyylitryptofäänin (10, 67,60 g, 0,200 mol), THF:n (500 ml) ja CDI:n (2, 33,05 g, 0,204 mol) 10 °C:n lämpötilassa olevaa liuosta sekoitetaan kunnes kaasun kehittyminen lakkaa. j>:n liuos (40,8 g, 0,103 mol) THF*ssä (noin 200 ml) lisätään sitten reaktioseokseen. Tu-25 1oksana olevan liuoksen annetaan reagoida 15 tunnin ajan samalla kun se lämpenee huoneenlämpötilaan. Muodostuva kiinteä aine: kerätään sitten irausuodatuksella. Suodos saatetaan jäännökseksi konsentroimalla in vacuo. Tuloksena oleva jäännös ja kiinteä aine yhdistetään jälleen ja otetaan EtO-30 Ac:hen (4 000 ml) hiukan lämmittäen. Kun liuos jäähdytetään huoneenlämpötilaan, muodostuu kiinteä aine. Kiinteä aine kerätään imusuodatuksella. Tämä kiinteä aine jälleenkitey-tetään kuumasta MeOH: s.ta, jolloin saadaan puhdistettu tri-peptidi 12. EtOAc-suodos (ensimmäisestä kiteytyksestä) pes-35 tään seuraavasti erotussuppilossa: 1. HCl:n vesiliuos (i N, 2 x 500 ml), 47 2. vesi (1 x 500 ml), 3. Ha2CÖ3:n vesiliuos (puolikyllästetty, 2 x 500 ml), 4. MaCl:n vesiliuos {I χ 500 ml).
Orgaaninen kerros kuivataan MgSQ^llä ja selkeyte-5 tään sitten imusuodatuksella... Suodoksen liuotin poistetaan in vaeuo. Tuloksena oleva jäännös otetaan uudestaan EtO-Ac:hen, jolloin saadaan kuiva kiinteä aine. Kiinteä aine voidaan panna jälleenkiteytykseen kuumassa MeGH:ssa, jolloin saadaan toinen 12:n saanto valkoisena kiinteänä ainee-10 na.
Tryptofyyli-D-fenylalanyyli- {N^-t-foutyylioksikar-bonyyli)lysixniamidi, 13
Tripeptidin 12 (6:4,59 g, 0,091 mol) metanoliliuos (1 500 ml) lisätään ka t a lysaattPri lietteeseen- (5 g 5-pro-15 senttistä Bd/C:tä 250 ml:ssa MeOHita) argonkaasukehässä.
Lisätään vielä tilavuus MeÖHvta: (2250 ml) . Argonkaasukehä syrjäytetään vedyllä ja annetaan reagoida (noin 24 tuntia). |
Kun reaktio on mennyt loppuun, vetykaasukehä syrjäytetään argonilla. Liuos selkeytetään Celite* -kerroksen läpi ja 20 suodos konsentroidaan in vaouo, jolloin saadaan tripeptidi 13 valkoisena kiinteänä aineena.
B, Tripeptidifragmentin -K-DAla-DpHal-Ala-OMe val mistus N“-bentsyylioksikarbonyyli-D-alanyyli-D-beta-naf-25 tyylialaniinin metyyliästeri, 25
EtOAc:n (400 ml) ja D-beta-naftyylialaniinimetyy-liesterihydrokloridin {'22, 0, 62 mol) liuos pestään kyllästetyllä natriumkarbonaatilla (400 ml) ja 0,8 N natriumhyd-roksidin vesiliuoksella (noin 500 ml). Tuloksena oleva ve-30 sifaasi poistetaan (pH 8,5) ja orgaaninen faasi pestään perätysten puolikyllästetyllä Ka2C03-vesiliuoksella (150 ml) | ja sitten vedellä (50 ml). 22:n vapaa emäsmuoto eristetään | konsentroimalla etyyllasetaattikerros in vacuo. |
Disykloheksyylikarbodi-imidi (DCC, noin ,95 g, | 35 0,46 mol) lisätään -5 °C:n lämpötilassa olevaan (jää-etano- i| lihaude) Ma-bentsyylioksikarbonyyli-D-aIaniinin (19, 143,5 g, j 4 8 0,50 mol) , N-hydroksisukkinimidin (HONSu, 23, 0,62 mol) ja vasta valmistetun 2_2:n vapaan emäsmuodon (noin 0,52 mol) liuokseen DMF:ssä (noin 3 1). Tuloksena olevan reaktioliu-oksen annetaan .sekoittua 24 tunnin ajan samalla kun sitä 5 lämmitetään huoneenlämpötilaan, HPLC-analyysiä pitäisi käyttää; tarkkailemaan meneekö reaktio loppuun. Jos se ei ole mennyt, xeaktioseos jäähdytetään sitten noin -5 °C:n lämpötilaan ja reaktioon lisätään lisäosa disykloheksyylikarho-di-imidiä (noin 0,17 mol). Reakiloseoksen annetaan sitten 10 sekoittua vielä 24 tuntia: samalla kun se lämmitetään huoneenlämpötilaan.: Seos suodatetaan: sitten disykloheksyy- liurean (SCO) poistamiseksi. Vesi (1 1) lisätään suodokseen ja tuloksena oleva liuos konsentroidaan in vacuo. Tuloksena oleva jäännös otetaan HCi:n 1-normaaliseen vesiliuokseen 15 (noin 1 X kunnes vesi f. aasin pH saavuttaa pH: n 1). Vesifaasi i uutetaan sitten kahdella annoksella etyyliasetaattia. (1 1 kumpikin), Etyyliasetaattikerrokset heitetään pois. Vesi-faasin pH säädetään sitten lisäämällä kylmää 2-normaalista, natriumhydroksidiä (500 ml) ja natriumhydroksidinappeja.
2Q Tämän neutraloinnin aikana liuos pidetään kylmänä lisäämällä kylmää etyyliasetaattia (1 1). Kun vesifaasin pH saavuttaa noin arvon 7, tuloksena on yleensä valkoisen sakan tai öljyn runsas saostuminen. Tämä sakka kerätään imusuodatuk-sella tai dekantoimalla ja pestään peräjälkeen puolikylläs-25 tetyllä natriumkarbonaatilla (2 x 1500 ml) , vedellä (6 x 1500 ml) ja etyyliasetaatilla (3 x 1500 ml), Tuloksena oleva materiaali kuivataan voimakkaassa alipaineessa vakiopai-noon. Tämä materiaali voidaan hydrolysoida suoraan ilman jät kopuhd i s tu s ta. i 30 N-benfcsyylioksikarbonyyli-D-alanyyli-^-naftyyli- 1 D-alaniini, 26 |
Natriumhydroksidin vesiliuos (192 ml, liuoksessa 0,08 g/ml, 0,38 mol) lisätään dipeptidin 25 (noin 0,38 mol), | veden (360 ml) ja MeOHrn (noin 6 1) liuokseen. Liuosta se- j 35 koitetaan huoneeniämpöt.liassa kunnes hydrolyysi on täydellinen (noin 24 tuntia}. Lähtöpeptidin katoaminen varmiste- 49 taan HPLC-analyysiliä, Liuos konsentroidaan in vacuo jäännökseksi,. joka liuotetaan veteen (noin 1 1). Vesikerros (pH noin 10) uutetaan sitten EtOÄc:lla (2 x 500 ml) ero-tussuppilossa. Etyyliasetaattikerrokset heitetään pois. Tu-5 loksena olevan vesifaasin pH säädetään noin 5: kai väkevällä HCl:Uä, jolloin tapahtuu yleensä valkoisen kiinteän aineen tai öljyn saastuminen. ‘Tuote kerätään ja kuivataan in vacuo.
N“-ben tsyy1ioksikarbonyyli-D~alanyy1i-D-beta-naf-10 tyylialanyyli-alaniinin metyyliesteri, 20
Qipeptidi N^-bentsyylioksikarbonyyli-D-älanyyli-D-beta-naftyyliä!aniini (26, 0,253 mol) lisätään HÖNSu-liu-okseen (23, 0,505 mol) DMFissä (800 ml) argonkaasukehässä.
Tähän liuokseen lisätään alaniinimetyyliesterihydroklofidin 15 (15, 0, 303 mol) , N-metyyl.imöTfoiiinin (16, 0,303 mol) ja DMF:n (200: ml) seos. Tuloksena oleva liuos jäähdytetään i 10 °C lämpötilaan, jossa vaiheessa lisätään disykloheksyy-likarbödi-imidi (24, 0,265 mol) metyleeniklaridissa (273 ml).
Reaktiota seurataan HPLC:lla samalla kun reaktiolämpötila 20 pidetään 10 °C:ssa kunnes reaktio on mennyt loppuun. Jos useiden päivienkään päästä (noin 4) reaktio ei ole edennyt loppuun, lisätään vielä annos 24_:ää (0,080 mol) ja reak- tioseoksen annetaan sekoittua vielä päivä 10 °C:n lämpötilassa, Reaktiota monitoroidaan taas HPLC-analyysillä kunnes 25 se on mennyt loppuun (tyypillisesti noin 5 päivää). Reaktion aikana muodostuvat kiinteät aineet kerätään Imusuodatuk- : sella. Suodos konsentroidaan sitten jäännökseksi in vacuo. |
Tuloksena oleva jäännös otetaan etyyliasetaattiin ja uute- I
taan puolikyllästetyllä NaaCQ^n vesiliuoksella (2 x 500 ml) . j :ä 30 Etyyliasetaatti f:a.ä:Si kuivataan MgSGdullä. Tuloksena oleva .] liuos selkeytetään ja konsentroidaan jäännökseksi in vacuo.
2-normaalinen natriumhydroksidin vesiliuos (7,5 ml, j 15 mmol) lisätään metanolln (500 ml) ja veden (200 ml) liu- j okseen, joka sisältää Na-be;ntsyylioksikarbonyyli-DÄla-DpNal- ] 35 Ala-Ome::a (13,7 mmol) . Sen jäikeen kun reaktion on annettu 1 sekoittua yli yön huoneenlämpötilassa, HPLC-analyysi osoit- ] $ 50 taa jäljellä olevan lähtömateriaalin määrän. Kun reaktio on oleellisesti mennyt loppuun (noin yli yön), tuloksena oleva liuos konsentroidaan in vacuo noin 200 mi:n tilavuuteen.
Vesi (100 ml) lisätään ja pH säädetään noin 12;:ksi lisää-5 maila '2-normaalista natriumhydroksidia (1 ral) . Tuloksena oleva liuos uutetaan etyyliasetaatilla {2 x 500 ml) . Etyy-liasetaattikertökset heitetään pois. Vesifaasin pH säädetään sitten noin 5:ksi lisäämällä HC1 ·:n vesiliuosta:, mikä johtaa yleensä tuotteen saostumiseen. On tärkeää minimoida 10 vesifaasin tilavuus tämän sapstumisen edistämiseksi. Vesi- faasi dekantoidaan pois tuotteesta ja tuotetta huuhdellaan sitten vedellä (2 x 50 ml) . Eristetty tuote kuivataan va-kiopainoon in vaouo.
C. Peptidifragmanttien kondensaatioreaktiö hejcsa-15 peptidin tuottamiseksi
Kaksi peptidiä DAla-DpNal-Ala-GH (33, 2,6 mmol) ja i
Trp-D^Phe-Lys(Boc)-NH2 (13, 2,8 mmol) liuotetaan vedettö mään 'DMFiään ja tuloksena oleva liuos konsentroidaan in vaouo . Tämä alustava konsentrointi suoritetaan yrityksenä 20 poistaa mahdolliset läsnä; kenties olevat metanolijäännökset. Tuloksena oleva peptidiseos liuotetaan uudelleen DMF:ään ja sitten lisätään N-hydroksisukkinimidi (5,1 mmol) .
Tuloksena oleva liuos jäähdytetään sitten .-2 DC:n liuos-lämpötilaan ja sitten lisätään disykloheksyylikarbodi-lmidi 25 (3,4 mmol) liuoksena metyleenikloridissa (3,5 ml). Tulokse na olevan reaktioseoksen annetaan sekoittua -2 °C:n liuos-lämpötilassa kolmen päivän ajan. HPLC-analyysiä käytetään määrittämään, onko reaktio mennyt oleellisesti loppuun. Tämän ajanjakson jälkeen, jos se ei ole mennyt, voidaan sit-30 ten lisätä vielä disykloheksyylikardodi-iinidiä ja tuloksena |
olevan reaktioseoksen annetaan.. sekoittua vielä päivä I
-2 °C:n lämpötilassa..,. Jos seuraävana päivänä (neljä päivää 1 kaikkiaan) HPLC-analyysi viittaa jälleen epätäydelliseen | reaktioon, reaktiQsepksen jäähdytys pitäisi lopettaa, Reak- 1 35 tion liuoslämpötilan voidaan antaa kohota hitaasti huoneen- j lämpötilaan (25 °C) tuntien aikana (noin 8) , Tuloksena ole- j 5 i 51 van reaktioseoksen annetaan sekoittua yli yön huoneenlämpö-tilassa. Menettely toistetaan kunnes reaktio on mennyt loppuun. Sitten lisätään vettä f SO ml) ja tuloksena olevan seoksen annetaan sekoittua vielä päivän. Reaktioliuos suo-5 datetaan sitten disykloheksyyliurean poistamiseksi ja tuloksena oleva suodos konsentroidaan in vacuo viskoosiksi öljyksi. Tuloksena olevaan jäännökseen lisätään etyyliasetaatti ja puolikyllästetty natriumkarbonaatin vesiliuos (200 ml) . Kaksifaasista seosta pyöritetään voimakkaasti 10 pyörphaihduttimessa noin yhden tunnin ajan. Mitkä tahansa muodostuneet kiinteät aineet kerätään, jolloin tuote saadaan suodattairialla lasisintterisuppilossa. Orgaaninen kerros pestään vedellä ja kuivataan sitten vakiopainoon in va- } cuo, jolloin saadaan tuote. j 15 DA1 a-D-^Nal -Äla-Trp-D-Phe-Lys-NH2, 35 |
Heksapeptidi bentsyy1ioksikärbonyyli-DAla-D-%a 1 - Ala- |
Trp-D-Phe-Lys-(Boc)-NH2 .(34., 1, 02 mmolj lisätään trifluo- j
rietikkahapon (30 ml), dimetyylisulfidin {14 ml), J
1,2-etaaniditiolin {7 ml) ja anisolin (2,2 ml) huoneenläm- | 20 paiseen: liuokseen metyleeniklöridissa {15 ml). Homogeenisen | reaktioseoksen annetaan sekoittua 15 minuutin ajan. Tämän f ajanjakson jälkeen lisätään vedetön eetteri (450 ml}, jotta } saadaan aikaan epäpuhtaan, biologisesti aktiivisen peptidi- | tuotteen 3_5 saostuminen. Tämä tuote eristetään suodattamal- | 25 la lasisintterisuppilossa tai dekantöimaila. Tuloksena ole- j va tuote liuotetaan veteen ja lyöfilisoidaan. Lyofilisoitu | tuote voidaan edelleen puhdistaa keskipainekromatografiässä | 26 x 460 mm lasipylväässä, joka sisältää Lichroprep™ R-18 | -pylväspakkausmateriaalia {C-18, 25 - 40 nm, epäsäännöili- j 30 nen mesh). Sen jälkeen kun peptidi on injektoitu liuoksena vedessä, pylväs eluoidaan virtausnopeudella 9 ml minuutissa 0 - 25-prGsenttisen metanolin ioivalla gradientilla 5 - 20 ] tunnin ajan, ja sitten gradientilla 25 - 55-prosenttinen j metanoli noin 48 tunnin ajan. Gradientin metanolikönsent- \ 35 raatiota nostetaan sitten nopeudella 2 % tunnissa. Eluution 1
aikana jäljellä oleva liuötinkoostumus tehdään veteen, joka I
.¾ 52 on 0,2-prosenttinen trifluorietikkahapon suhteen. Tuote (35) tunnistetaan HPLC:llä ja eristetään konsentroimalla soveliaat eluutiotilavuudet.
Keksintöä on: kuvattu yksityiskohtaisesti viitaten 5 erityisesti sen edullisiin suoritusmuotoihin. Ymmärretään kuitenkin, että ammattimiehet voivat tätä paljastusta pohdittuaan tehdä variaatioita ja modifikaatioita keksinnön hengen ja suojapiirin sisällä.
: | : j : | | , :j il j % |
Claims (4)
1. Menetelmä kasvuhormonin vapautumisen edistämiseksi eläimessä, ihmistä lukuun ottamatta, ja lukuun otta-5 matta terapeuttista menetelmää, joka kohdistetaan eläimeen, t annettu siitä, että eläimelle annetaan tehokas määrä ainakin yhtä seuraavalla menetelmällä valmistettua peptidiä, jolla on kaava 10 Äi-Ä2-Äla-Ca-C3-Ä5, jossa on Glv, DAla, β-Ala, Sar, Ava, Aib, ABU, j NHa (GH2) 5CO' tai IMÄ, Ä2 P.ii DTrp, D%al:, Ä5 on A3-A4-&5'* Ä3- j Ä5., A4~Ä5< tai A5-, jossa j 15 a) A3 on Ala, Gly, DAla tai Pro, \ b) A4 on: Ala, Gly, 'DAla, Pro tai C2-C10- suoraketjuinen alkyyliaminokarboksyylihappo, ja c) Ä5< on. Lys ( ε-Ri, Ra) -2, Orn (δ-Ri, R?) -Z, NH (CH2) xN {RsyR,}) , Lys-Z, Örn-Z tai Ärg-Z, joissa Ri on suora- 20 ketjuinen Cs-Cio-alkyyliryhmä tai H-atomi, R2 on suoraketj uinen G2-Cio-alkyyliryhmä tai H-atomi, mutta Ri ja Rs eivät samanaikaisesti ole H, :R3 on suoraketj uinen C2-C10- al kyy li ryhmä tai H-atomi, R4 on suoraketj uinen C2-C10- alkyyliryhmä tai H-atomi, Z on NH(suoraketjuinen C2-C10-25 aikyyliryhmä), N (suoraketjuinen Cs-Cio-alkyyliryhmä)2, O- (suoraketjuinen C2-Gio-alkyylirylTmä), NH? tai OH, x on 2 - 15, I G.2 on Top, Puhe tai ChxAla, C3 on DPhe, DPal tai DChxAla, i 30 jolloin (i) edellä kuvatut aminohapot tai aminohappojohdan- ; naiset liitetään yhteen peptidin muodostamiseksi käyttäen kiinteän faasin menetelmää, tai (il) suoritetaan edellä kuvattujen aminohappojen tai aminohappojohdannaisten tai nai- i den peptidifragmanttien syntetisointi liuosvaihemenetel” 35 millä, joka sisältää ainakin kahden fragmentin kondensaa-tioreaktion, peptidin muodostamiseksi.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että eläin on nisäkäs.
3. Menetelmä, eläimen lihaksiston kasvattamiseksi ja/tai sen ruumiin rasvapitoisuuden alentamiseksi, jolloin 5 ihminen ei ole eläin, tunnettu siitä, että annetaan tehokas määrä patenttivaatimuksen 1 mukaista peptidiä.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että tehokas peptidin kokonaismäärä vaihtelee välillä noin 0,1 pg - 10' mg painokiloa kohti.
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US07/748,350 US5663146A (en) | 1991-08-22 | 1991-08-22 | Polypeptide analogues having growth hormone releasing activity |
US74835091 | 1991-08-22 | ||
PCT/US1992/007026 WO1993004081A1 (en) | 1991-08-22 | 1992-08-20 | Peptides having growth hormone releasing activity |
US9207026 | 1992-08-20 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI20050467A FI20050467A (fi) | 2005-05-02 |
FI120691B true FI120691B (fi) | 2010-01-29 |
Family
ID=25009088
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI940807A FI120095B (fi) | 1991-08-22 | 1994-02-21 | Menetelmä peptidien valmistamiseksi, joilla on kasvuhormonia vapauttavaa aktiivisuutta |
FI20050467A FI120691B (fi) | 1991-08-22 | 2005-05-02 | Ei-terapeuttinen menetelmä kasvuhormonin vapautumisen edistämiseksi eläimessä |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI940807A FI120095B (fi) | 1991-08-22 | 1994-02-21 | Menetelmä peptidien valmistamiseksi, joilla on kasvuhormonia vapauttavaa aktiivisuutta |
Country Status (26)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US5663146A (fi) |
EP (1) | EP0605484B1 (fi) |
JP (1) | JP3179489B2 (fi) |
KR (1) | KR100247212B1 (fi) |
CN (1) | CN1035256C (fi) |
AT (1) | ATE172742T1 (fi) |
AU (1) | AU666673B2 (fi) |
BG (1) | BG62655B1 (fi) |
BR (2) | BR9206398A (fi) |
CA (1) | CA2116120C (fi) |
CZ (1) | CZ293281B6 (fi) |
DE (1) | DE69227462T2 (fi) |
DK (1) | DK0605484T3 (fi) |
ES (1) | ES2124263T3 (fi) |
FI (2) | FI120095B (fi) |
HU (1) | HU223664B1 (fi) |
IL (1) | IL102848A (fi) |
MX (1) | MX9204861A (fi) |
NO (1) | NO314695B1 (fi) |
NZ (1) | NZ244034A (fi) |
PL (1) | PL169562B1 (fi) |
RO (1) | RO112507B1 (fi) |
RU (1) | RU2126014C1 (fi) |
SK (1) | SK282895B6 (fi) |
WO (1) | WO1993004081A1 (fi) |
ZA (1) | ZA926337B (fi) |
Families Citing this family (105)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2160786A1 (en) | 1993-05-14 | 1994-11-24 | James C. Marsters, Jr. | Ras farnesyl transferase inhibitors |
HU221092B1 (en) * | 1993-12-23 | 2002-08-28 | Novo Nordisk As | Compounds with growth hormone releasing properties |
HU224345B1 (hu) * | 1993-12-23 | 2005-08-29 | Novo Nordisk A/S. | Növekedési hormont felszabadító tulajdonságú peptidek, ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk |
US5798337A (en) * | 1994-11-16 | 1998-08-25 | Genentech, Inc. | Low molecular weight peptidomimetic growth hormone secretagogues |
US20020111461A1 (en) * | 1999-05-21 | 2002-08-15 | Todd C. Somers | Low molecular weight peptidomimetic growth hormone secretagogues |
BR9608909A (pt) * | 1995-06-22 | 1999-03-02 | Novo Nordisk As | Composto composição farmacêutica processos para estimular a liberação do hormônio do crescimento da patuitária e aumentar a velocidade e extensão do crescimento dos animais para aumentar a produção de leite ou lã de animais ou para para doenças e uso do composto |
ATE231131T1 (de) * | 1996-04-24 | 2003-02-15 | Novo Nordisk As | Verbindungen mit wachtumshormon freisetzenden eigenschaften |
EP1005484A1 (en) | 1997-06-20 | 2000-06-07 | Novo Nordisk A/S | Compounds with growth hormone releasing properties |
US6127341A (en) * | 1997-06-20 | 2000-10-03 | Novo Nordisk A/S | Compounds with growth hormone releasing properties |
ZA987383B (en) * | 1997-08-19 | 2000-02-17 | Lilly Co Eli | Treatment of congestive heart failure with growth hormone secretagogues. |
US6329342B1 (en) | 1997-08-19 | 2001-12-11 | Eli Lilly And Company | Treatment of congestive heart failure with growth hormone secretagogues |
AU766305B2 (en) | 1998-01-16 | 2003-10-16 | Novo Nordisk A/S | Compounds with growth hormone releasing properties |
WO1999039730A1 (fr) * | 1998-02-09 | 1999-08-12 | Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. | Preparation a administration orale contenant des peptides favorisant la secretion d'hormone de croissance |
US6919315B1 (en) | 1998-06-30 | 2005-07-19 | Novo Nordisk A/S | Compounds with growth hormone releasing properties |
US6682908B1 (en) | 1998-07-10 | 2004-01-27 | Merck & Co., Inc. | Mouse growth hormone secretagogue receptor |
JP2002520011A (ja) | 1998-07-13 | 2002-07-09 | メルク・アンド・カンパニー・インコーポレーテッド | 成長ホルモン分泌促進物質関連受容体および核酸 |
JP2002522058A (ja) | 1998-08-10 | 2002-07-23 | メルク・アンド・カンパニー・インコーポレーテッド | イヌ成長ホルモン分泌促進物質受容体 |
US6468974B1 (en) | 1998-08-14 | 2002-10-22 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Compounds having growth hormone releasing activity |
US6639076B1 (en) | 1998-08-18 | 2003-10-28 | Eli Lilly And Company | Growth hormone secretagogues |
US6696063B1 (en) | 1998-12-30 | 2004-02-24 | Applied Research Systems Ars Holding N.V. | Treatment of HIV-associated dysmorphia/dysmetabolic syndrome (HADDS) with or without lipodystrophy |
US7022677B1 (en) | 1999-02-18 | 2006-04-04 | Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. | Amide derivatives as growth hormone secretagogues |
AU759022B2 (en) * | 1999-02-18 | 2003-04-03 | Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. | Novel amide derivatives as growth hormone secretagogues |
US6828331B1 (en) * | 1999-02-19 | 2004-12-07 | Eli Lilly And Company | Growth hormone secretagogues |
US20040192593A1 (en) * | 1999-07-26 | 2004-09-30 | Baylor College Of Medicine | Protease resistant ti-growth hormone releasing hormone |
KR20020047096A (ko) * | 1999-07-26 | 2002-06-21 | 크로커 사무엘 에스 | 초활성 돼지 성장 호르몬 분비 호르몬 유사체 |
JP4691298B2 (ja) * | 1999-10-12 | 2011-06-01 | 科研製薬株式会社 | 粉末吸入用製剤及びその製造方法 |
UA73530C2 (uk) | 1999-11-10 | 2005-08-15 | Ново Нордіск А/С | Сполука з властивостями вивільнювати гормон росту |
JP3498041B2 (ja) * | 2000-05-29 | 2004-02-16 | 科研製薬株式会社 | プラルモレリン含有点鼻用製剤 |
ATE446758T1 (de) | 2000-05-31 | 2009-11-15 | Pfizer Prod Inc | Verwendung von wachstumshormonsekretagoga zur förderung der beweglichkeit des verdauungstrakts |
US7622503B2 (en) | 2000-08-24 | 2009-11-24 | University Of Tennessee Research Foundation | Selective androgen receptor modulators and methods of use thereof |
US7855229B2 (en) | 2000-08-24 | 2010-12-21 | University Of Tennessee Research Foundation | Treating wasting disorders with selective androgen receptor modulators |
US7645898B2 (en) | 2000-08-24 | 2010-01-12 | University Of Tennessee Research Foundation | Selective androgen receptor modulators and method of use thereof |
US7919647B2 (en) | 2000-08-24 | 2011-04-05 | University Of Tennessee Research Foundation | Selective androgen receptor modulators and methods of use thereof |
EA006484B1 (ru) | 2001-02-02 | 2005-12-29 | Конджачем, Инк. | Долгоживущие производные рилизинг-фактора гормона роста |
US7125840B2 (en) * | 2001-10-09 | 2006-10-24 | Eli Lilly And Company | Substituted dipeptides as growth hormone secretagogues |
EP1450605B1 (en) * | 2001-10-26 | 2011-12-07 | Baylor College Of Medicine | Composition to alter bone properties in a subject |
US8853266B2 (en) | 2001-12-06 | 2014-10-07 | University Of Tennessee Research Foundation | Selective androgen receptor modulators for treating diabetes |
US6831102B2 (en) | 2001-12-07 | 2004-12-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Phenyl naphthol ligands for thyroid hormone receptor |
MY142457A (en) * | 2001-12-11 | 2010-11-30 | Advisys Inc | Plasmid mediated supplementation for treating chronically ill subjects |
US7015219B2 (en) | 2001-12-19 | 2006-03-21 | Bristol-Myers Squibb Company | 3-aryl-hydroxybenzoxazines and 3, 4-dihydro-3-aryl-hydroxybenzoxazines as selective estrogen receptor beta modulators |
TW200307749A (en) * | 2002-02-07 | 2003-12-16 | Baylor College Medicine | Modified pituitary gland development in offspring from expectant mother animals treated with growth hormone releasing hormone therapy |
US7772433B2 (en) | 2002-02-28 | 2010-08-10 | University Of Tennessee Research Foundation | SARMS and method of use thereof |
US7381730B2 (en) | 2002-03-15 | 2008-06-03 | Bristol-Myers Squibb Company | 3-arylquinazoline derivatives as selective estrogen receptor beta modulators |
US20060167268A1 (en) * | 2002-04-09 | 2006-07-27 | Eli Lilly And Company, Patent Division, | Growth hormone secretagogues |
ES2271557T3 (es) * | 2002-04-09 | 2007-04-16 | Eli Lilly And Company | Secretagogos dipeptidicos de la hormona del crecimiento. |
AU2003225305A1 (en) | 2002-05-08 | 2003-11-11 | Bristol-Myers Squibb Company | Pyridine-based thyroid receptor ligands |
US7405234B2 (en) | 2002-05-17 | 2008-07-29 | Bristol-Myers Squibb Company | Bicyclic modulators of androgen receptor function |
AU2003259340A1 (en) | 2002-08-23 | 2004-03-11 | Gestion Univalor Societe En Commandite | Growth hormone-releasing peptides in the treatment of prevention of atherosclerosis and hypercholesterolemia |
WO2004045518A2 (en) | 2002-11-15 | 2004-06-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Open chain prolyl urea-related modulators of androgen receptor function |
US8309603B2 (en) | 2004-06-07 | 2012-11-13 | University Of Tennessee Research Foundation | SARMs and method of use thereof |
TW200504021A (en) | 2003-01-24 | 2005-02-01 | Bristol Myers Squibb Co | Substituted anilide ligands for the thyroid receptor |
US7105537B2 (en) | 2003-01-28 | 2006-09-12 | Bristol-Myers Squibb Company | 2-substituted cyclic amines as calcium sensing receptor modulators |
WO2004067719A2 (en) * | 2003-01-28 | 2004-08-12 | Advisys, Inc. | Growth hormone releasing hormone (ghrh) for use in reducing culling in herd animals |
US7205322B2 (en) | 2003-02-12 | 2007-04-17 | Bristol-Myers Squibb Company | Thiazolidine compounds as calcium sensing receptor modulators |
US7557143B2 (en) | 2003-04-18 | 2009-07-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Thyroid receptor ligands |
TW200424214A (en) * | 2003-04-21 | 2004-11-16 | Advisys Inc | Plasmid mediated GHRH supplementation for renal failures |
US7459460B2 (en) | 2003-05-28 | 2008-12-02 | Bristol-Myers Squibb Company | Trisubstituted heteroaromatic compounds as calcium sensing receptor modulators |
US7265145B2 (en) | 2003-05-28 | 2007-09-04 | Bristol-Myers Squibb Company | Substituted piperidines and pyrrolidines as calcium sensing receptor modulators and method |
US7476653B2 (en) | 2003-06-18 | 2009-01-13 | Tranzyme Pharma, Inc. | Macrocyclic modulators of the ghrelin receptor |
WO2005016964A2 (en) * | 2003-08-04 | 2005-02-24 | Advisys, Inc. | Canine specific growth hormone releasing hormone |
WO2005041998A1 (en) | 2003-10-02 | 2005-05-12 | Ali Sadat M | Peptide for promoting healing of fractures |
ATE467417T1 (de) * | 2003-12-31 | 2010-05-15 | VGX Pharmaceuticals LLC | Reduzierung von arthritis und lahmheit bei personen unter supllement von wachstumshormon freisetzendem hormon (ghrh) |
EP1713828B1 (en) * | 2004-01-20 | 2011-04-27 | VGX Pharmaceuticals, LLC | Enhanced secretion/retention of growth hormone releasing hormone (ghrh) from muscle cells by species-specific signal peptide |
US20050164952A1 (en) * | 2004-01-23 | 2005-07-28 | Vital Pharmaceuticals, Inc. | Delivery system for growth hormone releasing peptides |
US7820702B2 (en) | 2004-02-04 | 2010-10-26 | Bristol-Myers Squibb Company | Sulfonylpyrrolidine modulators of androgen receptor function and method |
US7378426B2 (en) | 2004-03-01 | 2008-05-27 | Bristol-Myers Squibb Company | Fused heterotricyclic compounds as inhibitors of 17β-hydroxysteroid dehydrogenase 3 |
US7696241B2 (en) | 2004-03-04 | 2010-04-13 | Bristol-Myers Squibb Company | Bicyclic compounds as modulators of androgen receptor function and method |
US7625923B2 (en) | 2004-03-04 | 2009-12-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Bicyclic modulators of androgen receptor function |
US9884038B2 (en) | 2004-06-07 | 2018-02-06 | University Of Tennessee Research Foundation | Selective androgen receptor modulator and methods of use thereof |
US9889110B2 (en) | 2004-06-07 | 2018-02-13 | University Of Tennessee Research Foundation | Selective androgen receptor modulator for treating hormone-related conditions |
ATE413890T1 (de) * | 2004-07-23 | 2008-11-15 | Advisys Inc | Wachstumshormon-freisetzendes hormon verstärkt die vakzin-induzierte immunantwort |
CA2576915A1 (en) | 2004-08-18 | 2006-03-02 | Elixir Pharmaceuticals, Inc. | Growth-hormone secretagogues |
WO2006116401A1 (en) | 2005-04-28 | 2006-11-02 | Bristol-Myers Squibb Company | C-5 substituted quinazolinone derivatives as selective estrogen receptor beta modulators |
KR101388087B1 (ko) | 2005-08-31 | 2014-04-25 | 유니버시티 오브 테네시 리서치 파운데이션 | 선택적 안드로겐 수용체 조절제를 이용한 신장 질환, 화상,부상 및 척수 손상의 치료 방법 |
CU23558A1 (es) | 2006-02-28 | 2010-07-20 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | Compuestos análogos a los secretagogos peptidicos de la hormona de crecimiento |
WO2008006019A2 (en) * | 2006-07-06 | 2008-01-10 | Advisys Inc. | Growth hormone releasing hormone treatment to decrease cholesterol levels |
WO2008008433A2 (en) | 2006-07-12 | 2008-01-17 | University Of Tennessee Research Foundation | Substituted acylanilides and methods of use thereof |
KR101410453B1 (ko) | 2006-08-02 | 2014-06-27 | 싸이토키네틱스, 인코포레이티드 | 소정의 화학 물질, 조성물 및 방법 |
US8299248B2 (en) | 2006-08-02 | 2012-10-30 | Cytokinetics, Incorporated | Certain 1H-imidazo[4,5-b]pyrazin-2(3H)-ones and 1H-imidazo[4,5-b]pyrazin-2-ols and methods for their use |
US9730908B2 (en) | 2006-08-24 | 2017-08-15 | University Of Tennessee Research Foundation | SARMs and method of use thereof |
US10010521B2 (en) | 2006-08-24 | 2018-07-03 | University Of Tennessee Research Foundation | SARMs and method of use thereof |
US9844528B2 (en) | 2006-08-24 | 2017-12-19 | University Of Tennessee Research Foundation | SARMs and method of use thereof |
CN107007581A (zh) | 2006-08-24 | 2017-08-04 | 田纳西大学研究基金会 | 取代的n‑酰基苯胺及其使用方法 |
ES2604943T3 (es) | 2007-02-09 | 2017-03-10 | Ocera Therapeutics, Inc. | Moduladores macrocíclicos del receptor de la grelina y procedimientos de uso de los mismos |
EP2155769B1 (en) | 2007-05-04 | 2012-06-27 | Katholieke Universiteit Leuven KU Leuven Research & Development | Tissue degeneration protection |
US7968603B2 (en) | 2007-09-11 | 2011-06-28 | University Of Tennessee Research Foundation | Solid forms of selective androgen receptor modulators |
US8003689B2 (en) | 2008-06-20 | 2011-08-23 | Gtx, Inc. | Metabolites of selective androgen receptor modulators and methods of use thereof |
WO2011133920A1 (en) | 2010-04-23 | 2011-10-27 | Cytokinetics, Inc. | Certain amino-pyridines and amino-triazines, compositions thereof, and methods for their use |
AR081626A1 (es) | 2010-04-23 | 2012-10-10 | Cytokinetics Inc | Compuestos amino-piridazinicos, composiciones farmaceuticas que los contienen y uso de los mismos para tratar trastornos musculares cardiacos y esqueleticos |
AR081331A1 (es) | 2010-04-23 | 2012-08-08 | Cytokinetics Inc | Amino- pirimidinas composiciones de las mismas y metodos para el uso de los mismos |
WO2013190520A2 (en) | 2012-06-22 | 2013-12-27 | The General Hospital Corporation | Gh-releasing agents in the treatment of vascular stenosis and associated conditions |
US9622992B2 (en) | 2012-07-13 | 2017-04-18 | Gtx, Inc. | Method of treating androgen receptor (AR)-positive breast cancers with selective androgen receptor modulator (SARMs) |
US10314807B2 (en) | 2012-07-13 | 2019-06-11 | Gtx, Inc. | Method of treating HER2-positive breast cancers with selective androgen receptor modulators (SARMS) |
US9744149B2 (en) | 2012-07-13 | 2017-08-29 | Gtx, Inc. | Method of treating androgen receptor (AR)-positive breast cancers with selective androgen receptor modulator (SARMs) |
US10987334B2 (en) | 2012-07-13 | 2021-04-27 | University Of Tennessee Research Foundation | Method of treating ER mutant expressing breast cancers with selective androgen receptor modulators (SARMs) |
AU2013203600C1 (en) | 2012-07-13 | 2016-11-24 | University Of Tennessee Research Foundation | A method of treating androgen receptor (AR)-positive breast cancers with selective androgen receptor modulator (SARMS) |
US10258596B2 (en) | 2012-07-13 | 2019-04-16 | Gtx, Inc. | Method of treating HER2-positive breast cancers with selective androgen receptor modulators (SARMS) |
US9969683B2 (en) | 2012-07-13 | 2018-05-15 | Gtx, Inc. | Method of treating estrogen receptor (ER)-positive breast cancers with selective androgen receptor modulator (SARMS) |
CA2889499C (en) | 2012-10-24 | 2019-09-10 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Growth hormone secretagogue receptor agonists for treating amyotrophic lateral sclerosis |
WO2014168973A2 (en) | 2013-04-08 | 2014-10-16 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and compositions for rejuvenating skeletal muscle stem cells |
US9119832B2 (en) | 2014-02-05 | 2015-09-01 | The Regents Of The University Of California | Methods of treating mild brain injury |
EP3148587B1 (en) | 2014-05-30 | 2021-02-24 | Pfizer Inc | Carbonitrile derivatives as selective androgen receptor modulators |
US20170121385A1 (en) | 2015-10-28 | 2017-05-04 | Oxeia Biopharmaceuticals, Inc. | Methods of treating neurodegenerative conditions |
EP3990447A1 (en) | 2019-06-27 | 2022-05-04 | Cytokinetics, Inc. | Polymorphs of 1-(2-((((trans)-3-fluoro-1-(3-fluoropyridin-2-yl)cyclobutyl)methyl)amino)pyrimidin-5-yl)-1h-pyrrole-3-carboxamide |
WO2023275715A1 (en) | 2021-06-30 | 2023-01-05 | Pfizer Inc. | Metabolites of selective androgen receptor modulators |
Family Cites Families (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4223020A (en) * | 1979-03-30 | 1980-09-16 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4228155A (en) * | 1979-03-30 | 1980-10-14 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4228157A (en) * | 1979-03-30 | 1980-10-14 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4228158A (en) * | 1979-03-30 | 1980-10-14 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4226857A (en) * | 1979-03-30 | 1980-10-07 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4228156A (en) * | 1979-03-30 | 1980-10-14 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
CA1175810A (en) * | 1979-03-30 | 1984-10-09 | Frank A. Momany | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4224316A (en) * | 1979-03-30 | 1980-09-23 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4223021A (en) * | 1979-03-30 | 1980-09-16 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4223019A (en) * | 1979-03-30 | 1980-09-16 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
WO1983002272A1 (en) * | 1981-12-28 | 1983-07-07 | Beckman Instruments Inc | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4410512A (en) * | 1981-12-28 | 1983-10-18 | Beckman Instruments, Inc. | Combinations having synergistic pituitary growth hormone releasing activity |
US4410513A (en) * | 1981-12-28 | 1983-10-18 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4880778A (en) * | 1986-05-12 | 1989-11-14 | Eastman Kodak Company | Combinations having synergistic growth hormone releasing activity and methods for use thereof |
US4839344A (en) * | 1987-06-12 | 1989-06-13 | Eastman Kodak Company | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity |
US4880777A (en) * | 1987-09-01 | 1989-11-14 | Eastman Kodak Company | Synthetic peptides having growth hormone releasing activity |
ATE113607T1 (de) * | 1988-01-28 | 1994-11-15 | Polygen Holding Corp | Polypeptidverbindungen mit wachstumshormonfreisetzender aktivität. |
JPH03502329A (ja) * | 1988-01-28 | 1991-05-30 | ポリゲン ホールディング コーポレイション | 成長ホルモン放出活性を有するポリペプチド化合物類 |
WO1989010933A1 (en) * | 1988-05-11 | 1989-11-16 | Eastman Kodak Company | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity |
IL98910A0 (en) * | 1990-07-24 | 1992-07-15 | Polygen Holding Corp | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity and pharmaceutical compositions containing them |
US5486505A (en) * | 1990-07-24 | 1996-01-23 | Polygen Holding Corporation | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity |
WO1992001709A1 (en) | 1990-07-24 | 1992-02-06 | Eastman Kodak Company | Process for synthesizing peptides |
-
1991
- 1991-08-22 US US07/748,350 patent/US5663146A/en not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-08-18 IL IL102848A patent/IL102848A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-08-20 RU RU94016393A patent/RU2126014C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1992-08-20 SK SK204-94A patent/SK282895B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1992-08-20 HU HU9400495A patent/HU223664B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-08-20 WO PCT/US1992/007026 patent/WO1993004081A1/en active Application Filing
- 1992-08-20 CZ CZ1994400A patent/CZ293281B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-08-20 BR BR9206398A patent/BR9206398A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-08-20 NZ NZ244034A patent/NZ244034A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-08-20 JP JP50458593A patent/JP3179489B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-20 DK DK92919262T patent/DK0605484T3/da active
- 1992-08-20 RO RO94-00256A patent/RO112507B1/ro unknown
- 1992-08-20 EP EP92919262A patent/EP0605484B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-20 CA CA002116120A patent/CA2116120C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-20 KR KR1019940700542A patent/KR100247212B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-08-20 ES ES92919262T patent/ES2124263T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-20 PL PL92302434A patent/PL169562B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1992-08-20 AT AT92919262T patent/ATE172742T1/de active
- 1992-08-20 DE DE69227462T patent/DE69227462T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-20 US US07/932,494 patent/US5776901A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-20 AU AU25416/92A patent/AU666673B2/en not_active Ceased
- 1992-08-21 MX MX9204861A patent/MX9204861A/es unknown
- 1992-08-21 ZA ZA926337A patent/ZA926337B/xx unknown
- 1992-08-22 CN CN92110868A patent/CN1035256C/zh not_active Expired - Fee Related
-
1994
- 1994-02-18 BG BG98489A patent/BG62655B1/bg unknown
- 1994-02-21 NO NO19940592A patent/NO314695B1/no not_active IP Right Cessation
- 1994-02-21 FI FI940807A patent/FI120095B/fi not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-04-22 BR BR1100309-0A patent/BR1100309A/pt active IP Right Grant
-
2005
- 2005-05-02 FI FI20050467A patent/FI120691B/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI120691B (fi) | Ei-terapeuttinen menetelmä kasvuhormonin vapautumisen edistämiseksi eläimessä | |
AU637316B2 (en) | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity | |
US5486505A (en) | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity | |
EP0647656B1 (en) | Motilin-like polypeptides that inhibit gastrointestinal motor activity | |
EP0417165B1 (en) | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity | |
EP0540676B1 (en) | Peptide compounds having growth hormone releasing activity | |
US6468974B1 (en) | Compounds having growth hormone releasing activity | |
FI111462B (fi) | Menetelmä motiliinityyppisten polypeptidien valmistamiseksi, joilla on ruoansulatuskanavan motiliteettia stimuloivaa aktiivisuutta |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FG | Patent granted |
Ref document number: 120691 Country of ref document: FI |
|
MM | Patent lapsed |